EP1570272A2 - Bestimmung agonistischer autoantikörper - Google Patents

Bestimmung agonistischer autoantikörper

Info

Publication number
EP1570272A2
EP1570272A2 EP03788849A EP03788849A EP1570272A2 EP 1570272 A2 EP1570272 A2 EP 1570272A2 EP 03788849 A EP03788849 A EP 03788849A EP 03788849 A EP03788849 A EP 03788849A EP 1570272 A2 EP1570272 A2 EP 1570272A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
peptide
sequence
autoantibodies
loop
hypertension
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
EP03788849A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Gerd Wallukat
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Original Assignee
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE10327066A external-priority patent/DE10327066A1/de
Application filed by Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft filed Critical Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Priority to EP07075708A priority Critical patent/EP1890150A1/de
Publication of EP1570272A2 publication Critical patent/EP1570272A2/de
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/564—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for pre-existing immune complex or autoimmune disease, i.e. systemic lupus erythematosus, rheumatoid arthritis, multiple sclerosis, rheumatoid factors or complement components C1-C9
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2869—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61M—DEVICES FOR INTRODUCING MEDIA INTO, OR ONTO, THE BODY; DEVICES FOR TRANSDUCING BODY MEDIA OR FOR TAKING MEDIA FROM THE BODY; DEVICES FOR PRODUCING OR ENDING SLEEP OR STUPOR
    • A61M1/00—Suction or pumping devices for medical purposes; Devices for carrying-off, for treatment of, or for carrying-over, body-liquids; Drainage systems
    • A61M1/36—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits
    • A61M1/3679—Other treatment of blood in a by-pass of the natural circulatory system, e.g. temperature adaptation, irradiation ; Extra-corporeal blood circuits by absorption
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/24—Immunology or allergic disorders
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/971—Capture of complex after antigen-antibody reaction

Definitions

  • the invention relates to a method of detecting disease-associated autoantibodies that bind loops of G protein-coupled receptors and to the use of peptides comprising these loops or fragments thereof for the treatment of autoimmune diseases.
  • the immune system of multicellular organisms is based on the distinction between “self” and “not self”. Due to its great diversity, the "self” and “not self” differentiating immune system has a large repertoire of specificities expressed particularly by T and B cells. By means of complicated mechanisms, the immune system is able to distinguish between “self” and “not self”, with which the body can protect itself, in particular, against the consequences of so-called autoimmunity. That is, the humoral and cellular components of the immune system of an organism are so pronounced that they are not directed against the organism itself. Within the immune system, however, it can lead to a variety of disorders, especially the mechanisms of self-detection can be limited or completely eliminated.
  • organ-specific and non-organ-specific autoimmune diseases can be distinguished.
  • Typical organ-specific autoimmune diseases include, for example, premature menopause, juvenile diabetes, male infertility, pernicious anemia, or Addison's disease.
  • Non-organ specific autoimmune diseases include, for example, rheumatoid arthritis, dermatomyositis, scleroderma or mixed connective tissue diseases and others.
  • the target organs of the organ-specific disease are often the thyroid, the adrenals, the stomach and the pancreas.
  • the non-organ-specific diseases are summarized under the term of the so-called rheumatic type and concern the skin, the kidneys, the joints and the muscles.
  • a depot of vitamin B 12 may be administered parenterally, and in myasthenia gravis cholinesterase inhibitors may be given. If a complete loss of function of the organ has occurred, for example, an organ transfer or an implantation of a prosthesis are possible.
  • Such therapy methods are not suitable for organ-specific autoimmune diseases, since, for example, a whole group of organs, such as the skin, kidney, joints and muscles, would have to be substituted in a patient, whereby only the substitution of the joints, the muscles and / or or the skin is nearly impossible.
  • Another way of treating autoimmune diseases is the ability to bind, complex and subsequently eliminate the disease-inducing autoantibodies.
  • the object of the invention was therefore to provide means, devices and Nerfahren for the diagnosis of autoantibodies and therapies of autoimmune diseases, which allow a simple, efficient and safe detection or treatment and do not have the disadvantages mentioned.
  • the invention solves this technical problem by providing a method for detecting disease-associated autoantibodies directed against G protein-coupled receptors, the method comprising the steps of:
  • the invention thus relates to the surprising teaching that it is possible with the aid of an enzyme or color reaction, for example in an ELISA common in laboratory routines, to detect disease-associated autoantibodies which are directed in particular against G protein-coupled receptors.
  • the antibodies of agonistic autoantibodies are preferred, with the aid of an enzyme-linked immunoassay according to the invention being particularly simple, safe and effectively detectable
  • Such diseases, in particular the antibodies associated with them, have hitherto been possible only with complicated indirect tests, such as For example, angiotensin II ATI receptor autoantibodies associated with, for example, preeclampsia have been safely cultured by only contacting the respective sera Cardiomyocytes, especially newborn rats
  • the method according to the invention provides an immunoassay with which numerous autoantibodies directed against G protein-coupled receptors can be detected.
  • These autoantibodies are preferably an anti-beta-adrenergic receptor autoantibody, an anti-muscarinic M2 receptor autoantibody, an angiotensin II ATI receptor autoantibody, an alpha adrenergic receptor autoantibody, and autoantibodies are directed against endothelin IA, PAR-1, PAR-2 and / or PAR-3.
  • the autoantibodies can be in particular agonistic autoantibodies.
  • the antibodies may also be inhibitory antibodies, for example in allergic asthma (interaction with the 3rd loop).
  • a particular streptavidin-coated carrier is a carrier which is preferably coated with streptavidin or avidin.
  • a streptavidin in particular Coated carrier is advantageous if associated with this operable structure with biotin or an equivalent. If it is determined by experiments that binding without biotin / streptavidin / avidin association or binding is sufficient for detection, the peptide or the carrier need not be linked to these excipients (biotin and streptavidin / avidin).
  • the peptide is a molecule which consists essentially of amino acids.
  • Peptides within the meaning of the invention are also structures which comprise more than 50 or 100 amino acids and can therefore also be referred to as proteins. Accordingly, peptides and proteins are used synonymously in connection with the invention.
  • the peptides may include other structures such as lipids or carbohydrates but also artificial or natural amino acid or non-amino acid building blocks.
  • biotin-comprising peptide or protein may also be combined with a tag other than biotin.
  • a tag within the meaning of the invention is a protein tag or a peptide or another structure which combines with the peptide or protein, for example, is fused.
  • the peptide can - as already stated - for example, be biotinylated and thus have biotin as a tag.
  • the person skilled in the art is familiar with further tag structures or tags from catalogs and standard works in biochemistry.
  • Preferred tags are His tag, Flag tag, Strep tag, T7 tag (11 N-terminal amino acids of the T7GenlO protein), S tag, CBP (calmodulin-binding peptide), MBP (maltose-binding-peptide), Neb, protein A, GST-tag, PinPoint-tag, thioredoxin, PET (cellulose-binding-domain), PMal (maltose-binding-domain) and / or biotin tag.
  • This tag has a high affinity for an anti-tag substance or an anti-tag on or on the carrier.
  • Preferred anti-tags are streptavidin, glutathione, biotin, nickel-NTA, cellulose, amylose, thiobond, avidin, and / or immunoglobulin.
  • Day / anti-tag pairs are known to the person skilled in the art, ie the selection of the tag determines the structure of the anti-tag, without the need for an inventive selection by a person skilled in the art, or if he first has to solve a technical problem when carrying out the teaching according to the invention.
  • the anti-tag structure is streptavidin, ie a streptavidin-coated carrier.
  • Tag / anti-tag pairs are: Protein A / immunoglobulin, GST
  • Biotinylation / avidin, thioredoxin / thiobond, PET (cellulose-binding domain) / cellulose and / or PMal (maltose-binding domain) / amylose and others.
  • Preferred anti-tag-coated carriers are selected from the group comprising streptavidin, glutathione, biotin, nickel-NTA, cellulose, amylose, thiobond, avidin and / or immunoglobulin coated carriers.
  • the loops in the sense of the invention may be extracellular structures with which functional, agonistic or antagonistic autoantibodies interact, recognize or bind them.
  • the denaturing agent is ammonium sulfate.
  • any less structurally-altering denaturant can be used, such as alcohol in the alcohol precipitation.
  • ammonium sulfate or alcohol it is possible with ammonium sulfate or alcohol to precipitate body fluids, such as serum, in particular to precipitate fractionated.
  • body fluids such as serum, in particular to precipitate fractionated.
  • antibodies, in particular autoantibodies can be separated from other constituents of the body fluid.
  • the denaturing of the body fluid is carried out in particular so that the separated components can be returned by means of methods known in the art again in a substantially native state or in a state that allows their detection.
  • any denaturant known to those skilled in the art other than ammonium sulfate, or any other structurally non-modifying denaturant will be suitable for the precipitation of body fluids.
  • the carrier is a magnetic particle or ELISA plate or other structure suitable for incubation of the mixture.
  • Magnetic particles allow in particular the separation of the bound mixture by means of current or a magnetic charge.
  • ELISA plates preferably allows the use of laboratory routines or standardized equipment, since ELISA plates, in particular 96-well microtiter plates, in Clinical and basic research can be used as a standard.
  • the autoantibody is against a betal adrenergic receptor, a muscarinic M2 receptor, an angiotensin II ATI receptor, an alpha adrenergic receptor, an endothelin IA receptor, a PAR-1, PAR -2 and / or PAR-3.
  • the receptors are G protein-coupled receptors.
  • the autoantibodies directed against the betal adrenergic receptor are associated with dilated cardiomyopathy, Chagas 'cardiomyopathy or myocarditis, the autoantibodies directed against the M2 muscarinic receptor with dilated cardiomyopathy or Chagas' cardiomyopathy, the autoantibodies directed against the angiotensin II AT1 receptor with preeclampsia, humoral renal rejection or malignant hypertension, the autoantibodies directed against the alpha adrenergic receptor with essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension or psoriasis and / or autoantibodies directed against endothelin IA, PAR-1, PAR-2 and / or PAR-3 are associated with Raynaud's syndrome.
  • Such autoimmune diseases are difficult with previous means of laboratory routine they can not be diagnosed at all and, furthermore, they can only be treated with considerable, partly surgical effort - for example heart transplantation or implantation of cardiac support systems - in particular by substituting individual tissues, organ areas or complete organs with prostheses or other organs, for example living or dead patients become.
  • the peptide comprising a sequence or partial sequence of the second loop of the receptor is advantageously used or the second loop or only the second loop or peptides comprising portions or fragments of the first and / or second loop or only the second loop, for the detection or therapy of said diseases Disclosure of the relationship between autoantibodies, the loop and the respective autoimmune disease Given various possibilities to diagnose the autoimmune diseases mentioned, predict, treat, post-treat or undergo during the course of treatment of a follow-up of the respective healing process.
  • the loops or the peptides comprising portions of the loops are preferably modified.
  • amino acids have analogous physicochemical properties, which advantageously lead to these amino acids being able to be exchanged with one another.
  • amino acids include, for example, the group of amino acids (a) glycine, alanine, valine, leucine and / or isoleucine; or the amino acids (b) serine and threonine, the amino acids (c) asparagine and glutamine, the amino acids (d) aspartic acid and glutamic acid; the amino acids (e) lysine and arginine and the group of aromatic amino acids (f) phenylalanine, tyrosine and / or tryptophan.
  • amino acids include, for example, the group of amino acids (a) glycine, alanine, valine, leucine and / or isoleucine; or the amino acids (b) serine and threonine, the amino acids (c) asparagine and glutamine, the amino acids (d) aspartic acid and glutamic acid
  • Amino acids within one and the same group (a-f) can be interchanged. Furthermore, it is possible that amino acids are replaced by modified amino acids or specific enantiomers. Further modifications are possible according to the teaching of WO99 / 62933 or WO02 / 38592.
  • the autoantibodies associated with the dilated cardiomyopathy be contacted with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the first or second loop of the betal adrenergic receptor associated with the autoantibodies associated with Chagas' cardiomyopathy contacting the peptide comprising a sequence or partial sequence of the second loop of the betal adrenergic receptor, - the autoantibodies associated with myocarditis are brought into contact with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the first or second loop of the betal adrenergic receptor in that the autoantibody associated with the dilated cardiomyopathy is brought into contact with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the second loop of the muscarinic M2 receptor associated with the Chagas cardiomyopathy associated autoantibody with the peptide comprising a sequence he partial sequence of the second loop of the muscarinic M2 receptor are brought into contact the autoantibodies associated with the pre-e
  • the autoantibodies associated with the humoral kidney rejection are contacted with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the second loop of the angiotensin II ATI receptor, the autoantibodies associated with the malignant hypertension with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the second loop of the Angiotensin II ATI receptor, the autoantibodies associated with essential hypertension are brought into contact with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the first or second loop of the alpha adrenergic receptor,
  • the autoantibodies associated with refractory hypertension are contacted with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the first or second loop of the alpha adrenergic receptor, the autoantibodies associated with the pulmonary hypertension with the peptide comprising a sequence or partial sequence of the autoantibody first and / or second loops of the alpha adrenergic receptor, the psoriasis-associated autoantibody having the peptide comprising a sequence or subsequence of the first and / or second loops of the Alphal-adrenergic receptor are brought into contact and / or brought associated with Raynaud's syndrome
  • Autoanti- body with the peptide comprising a sequence or 'partial sequence of the second loop of the endothelin IA, PAR-1 and / or PAR-2 in contact become.
  • the IgG subclasses IgG1, IgG2, IgG3 and / or IgG4 are subclasses.
  • specific subclasses are used to easily and effectively detect disease-associated autoantibodies.
  • the subclasses can be assigned to certain clinical pictures.
  • essentially no mixture of IG sublases is associated with a disease, which is surprising in that, as subclasses are generated by switch and other biochemical mechanisms, different subclasses are generated.
  • the IgG3 and / or IgG4 subclasses are used when the peptide comprises a sequence or partial sequence of the first loop and the IgG1 subclass, when the peptide is a sequence or partial sequence of the includes second loops, - Chagas' cardiomyopathy uses the IgG1, IgG2, IgG3 and / or IgG4 subclasses,
  • the IgG3 and / or IgG4 subclasses are used if the peptide comprises a sequence or partial sequence of the first loop and the IgG1 subclass if the peptide comprises a sequence or partial sequence of the second loop; the IgG3 subclass is used in preeclampsia, - the IgGl and IgG3 subclasses are used in humoral kidney rejection,
  • the IgG1 and / or IgG3 subclasses are used, in the case of essential hypertension the IgG1 and / or IgG3 subclasses are used if the peptide comprises a sequence or partial sequence of the first loop and the IgG2 subclass is used, if the peptide a sequence or partial sequence of the second loop, - in the case of refractory hypertension, the IgG1 and / or IgG3 subclasses are used, if the peptide comprises a sequence or partial sequence of the first loop and the IgG2 subclass is used, if the peptide comprises a sequence or partial sequence of the includes second loops,
  • IgGl, IgG2 and / or IgG3 subclasses are used in pulmonary hypertension
  • an IgG subclass or subclasses can be provided by this embodiment of the invention for a specific autoimmune disease or for the autoantibodies, with which autoantibodies can be easily and safely. can be detected.
  • the autoantibodies are concentrated or purified before detection using methods known to the person skilled in the art.
  • the method for concentrating or purifying the autoantibodies comprises the following steps: a) obtaining an IgG fraction from body fluid, b) contacting the obtained IgG fraction with a peptide which is a partial sequence of a first or second loops of a G protein-coupled receptor to obtain a mixture, c) incubating the mixture with a carrier which is washed and concentrated, and d) eluting the autoantibodies from the concentrated carrier.
  • the peptide which contains the sequence or a partial sequence of the comprises first and / or second loops selected from the group comprising:
  • these peptides can be assigned as follows (see also Tab. 3):
  • the peptide is immobilized.
  • immobilization means various procedures and techniques for fixing the peptides on certain carriers.
  • the immobilization can serve, for example, to stabilize the peptides, as a result of which their activity is not reduced or adversely modified in particular during storage or in the case of a single batch batch by biological, chemical or physical agents. Immobilization of the peptides allows repeated use under routine technical or clinical conditions; Furthermore, a sample - preferably blood constituents - can be continuously reacted with at least one of the peptides according to the invention.
  • crosslinking In crosslinking, the peptides are fixed with each other without adversely affecting their activity. They are advantageously no longer soluble by the crosslinking.
  • Binding to a Carrier occurs, for example, by adsorption, ionic bonding or covalent bonding. This can also take place within microbial cells or liposomes or other membrane-containing closed or open structures.
  • the peptides are advantageously not affected by the fixation in their activity.
  • the peptides can advantageously be used repeatedly or continuously in the hospital in diagnosis or therapy carrier-bound.
  • inclusion is within the meaning of the invention. in particular to a semipermeable membrane in the form of gels, fibrils or fibers. Encapsulated peptides are separated by a semipermeable membrane by the surrounding sample solution so that they can advantageously interact with the autoantibodies or with fragments of them.
  • various methods are available, such as adsorption to an inert or electrically charged inorganic or organic carrier.
  • Such supports may be, for example, porous gels, alumina, concrete, agarose, starch, nylon or polyacrylamide. The immobilization takes place here by physical binding forces, often involving hydrophobic interactions and ionic bonds.
  • Such methods are advantageously easy to handle and have little effect on the conformation of the peptides.Through electrostatic binding forces between the charged groups of the peptides and the support, the binding can be advantageously improved, for example by the use of ion exchangers, especially Sephadex.
  • the carriers may have reactive groups that undergo homopolar bonds with amino acid side chains. Suitable groups in peptides are carboxy, hydroxy and sulfide groups and especially the terminal amino groups of lysines. Aromatic groups offer the possibility for diazo couplings.
  • the surface of microscopic porous glass particles can be activated by treatment with silanes and then reacted with peptides. For example, hydroxy groups of natural polymers can be activated with bromocyane and then coupled with peptides. With polyacrylamide resins, many peptides can advantageously undergo direct covalent bonds. When included in three-dimensional networks, the peptides are included in ionotropic gels or other structures known to those skilled in the art.
  • the pores of the matrix are particularly so to ensure that the peptides are retained and that interaction with the target molecules is possible.
  • cross-linking the peptides are converted to polymeric aggregates by cross-linking with bifunctional agents.
  • Such structures are gelatinous and easily deformable and particularly suitable for use in various reactors. By adding other inactive components such as gelatin in crosslinking, the mechanical and bonding properties can be advantageously improved.
  • microencapsulation the reaction space of the peptides is limited by means of membranes. The microencapsulation can be carried out, for example, as interfacial polymerization. Immobilization in microencapsulation renders the peptides insoluble and thus reusable.
  • immobilized peptides are all peptides that are in a state that allows their reuse.
  • the limitation of the mobility and the solubility of the peptides by chemical, biological or physical means advantageously leads to low process costs, in particular in the elimination of autoantibodies from blood constituents.
  • the peptide is bound to a solid phase.
  • the binding of the peptide to the solid phase can take place via a spacer.
  • a spacer it is possible to use all chemical compounds which have the appropriate structural and functional requirements for the function of the spacer, as long as they do not modify the bonding behavior in this way, ⁇ that binding of the autoantibody with the peptide is adversely affected.
  • the peptide comprises amino groups, amides, acetyl groups, biotin groups, markers, spacers, linkers, GKK and / or SGKK.
  • Such structures advantageously allow use of the peptides in apheresis therapy.
  • the linker and / or the spacer comprises -aminocarboxylic acids and their homo- and hetero-oligomers; ⁇ , ⁇ -aminocarboxylic acids and their branched homo- or hetero-oligomers; other amino acids and the linear and branched homo- or hetero-oligomers; Amino oligoalkoxyalkylamines; Maleimidocarboxylic acid derivatives; Oligomers of alkylamines; .4-alkylphenyl derivatives; 4-oligoalkoxyphenyl or 4-oligoalkoxyphenoxy derivatives; 4-Oligoalkylmercaptophenyl- or 4-Oligoalkylmercapto- phenoxy derivatives; 4-Oligoalkylaminphenyl- or 4-Oligo- alkylaminyphenoxy derivatives; (Oligoalkylbenzyl) phenyl or 4-oligoalkylbenzyl) phenoxy derivatives and 4-oligoal
  • the invention also relates to a peptide selected from the group comprising EYGSFF and / or SFFCEL (DCM, 1st loop); ARRCYND and / or PKCCDF (DCM, 2nd loop); AESDE (Chagas, 2nd loop), CYIQFF and / or EDGECY (DCM, 2nd loop); VRTVEDGECYIQFFSNAAVTFGTAI (Chagas, 2nd loop), AFHYESQ
  • ITEEAGY and / or ERFCGI essential hypertension, 2nd loop
  • GRIFCD essential hypertension, GRAFCDV (psariasis, 1st loop) and / or ITTCHDVL
  • ITTCHDVL essential hypertension, 2nd loop
  • the statements on essential hypertension apply to the 1st and 2nd loop.
  • the use as a therapeutic agent in the context of the invention means the use of the peptide or peptides in the entire field of medicine, preferably for the diagnosis and therapy of autoimmune diseases.
  • the peptide is bound by autoantibodies of patients with one of the following diseases: dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral renal rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis and Raynaud's Disease
  • diseases dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral renal rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis and Raynaud's Disease
  • the invention also relates to recognition molecules which are directed against the peptide according to the invention.
  • the recognition molecules are antibodies, antisense constructs and / or a chelator.
  • the recognition molecules according to the invention may be antibodies directed against autoantibodies which in particular induce the following diseases: dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral renal rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis and / or Raynaud's syndrome.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the peptides and / or the recognition molecules optionally with a pharmaceutically acceptable carrier.
  • the pharmaceutical composition can be used in particular as a pharmaceutical.
  • the peptides or recognition molecules according to the invention it is possible to neutralize the autoantibodies in or ex vivo or in vitro. In vitro neutralization is advantageous, for example, in the study of autoimmune diseases in tissue or cell cultures.
  • the drugs are administered directly to the patient, for example, in an ex vivo neutralization, the blood is passed out of the body via a loop, for example in the form of a hose circuit, following contact with the drug and after completed neutralization of autoantibodies back into the organism, especially the human patient, attributed.
  • medicaments include both those pharmaceutical compositions which are used for the therapeutic and prophylactic purposes and those pharmaceutical compositions which can be used as a diagnostic.
  • Medicaments or pharmaceutical compositions used interchangeably herein are, according to the invention, substances and preparations of substances which are intended to heal, alleviate or prevent diseases, suffering, bodily injury or pathological complaints by application to or in the human body.
  • medical adjuvants are substances which are used for production as active ingredients of medicaments.
  • Pharmaceutical-technical excipients serve for the suitable formulation of the pharmaceutical or pharmaceutical composition and can even, if needed only during the manufacturing process, are subsequently removed or may be part of the pharmaceutical composition as pharmaceutically acceptable carriers.
  • the drug formulation or formulation of the pharmaceutical composition is optionally in combination with a pharmaceutically acceptable carrier and / or diluent.
  • Suitable pharmaceutically acceptable carriers include, for example, phosphate buffered saline, water, emulsions such as oil / water emulsions, various types of detergents, sterile solutions, etc., pharmaceuticals or pharmaceutical compositions containing them Carriers may be formulated by known conventional methods. These drugs or pharmaceutical compositions may be administered to an individual in a suitable dose, for example in the range of from 1 ⁇ g to 10 g of peptides per day per patient. Doses of 1 mg to 1 g are preferred. Preference is given to administering as few and as low doses as possible, and more preferably a single dose.
  • Administration may be by various routes, for example, intravenous, intraperitoneal, intrarectal, intra gastrointestinal, intranodal, intramuscular, local, but also subcutaneous, intradermal or on the skin or mucous membranes.
  • the administration of nucleic acids coding for the peptide according to the invention can also be carried out in the form of gene therapies, for example via viral vectors.
  • the nature of the dosage and route of administration may be determined by the attending physician according to the clinical factors. It is known to the person skilled in the art that the type of dosage depends on various factors, such as the size, the body surface, the age, the sex or the general health of the patient, but also on the particular agent administered, the duration and mode of administration and of other medications that may be administered in parallel.
  • the pharmaceutical compositions or the medicament comprise a pharmacological substance which contains one or more peptides or recognition molecules according to the invention or / and nucleic acid molecules coding for them in a suitable solution or administration form.
  • a pharmacological substance which contains one or more peptides or recognition molecules according to the invention or / and nucleic acid molecules coding for them in a suitable solution or administration form.
  • adjuvants for example QS-21, GPI-OlOO or other saponins, water-oil emulsions such as montanides, adjuvants, polylysine, polyarginine compounds , DNA compounds such as CpG, detox, bacterial vaccines such as typhoid or BCG vaccines, salts such as calcium phosphates and / or other suitable agent for enhancing the effect of administration; preferably immune stimulatory molecules, such as interleukins, for example IL-2, IL-12, IL-4 and / or growth factors, for example GM-CSF.
  • the pharmaceutical composition or the medicament may, of course, also be a combination of two or more of the pharmaceutical compositions or medicaments according to the invention, as well as a combination with other medicaments, such as antibody therapies, chemotherapies or radiotherapies, administered in a suitable manner together or separately; be applied.
  • the preparation of the pharmaceutical or pharmaceutical compositions is carried out according to known methods.
  • the invention also relates to a kit comprising the peptide according to the invention, the recognition molecules according to the invention and / or the pharmaceutical composition according to the invention, optionally with an instruction for combining the contents of the kit and / or for providing a formulation for a recipient and an algorithm of administering the Formulation, that is, in which dose or at which time intervals a single component of the kit is administered to a patient.
  • the recipient according to the invention may also be a cell or tissue in vivo, ex vivo or in vitro.
  • the information may be, for example, a Leaflets, but also to act on information that the user can call by phone or via the Internet.
  • the algorithm of administering the formulation includes instructions for the diagnostic and / or therapeutic method of treating a patient. These can be one-stage as well as multi-stage Nerfahren, as well as those that are performed in the absence or presence of a doctor. That is, the therapy schema or information about it is preferably a component of the kit.
  • the invention also relates to a chromatographic apparatus comprising the peptides of the invention.
  • the peptides within the chromatography system are bound, for example, to a solid phase.
  • the device according to the invention can be used in particular to eliminate the autoantibodies from the fluids of a patient or to neutralize the autoantibodies.
  • This method is known to the person skilled in the art by the term immunoadsorption or apheresis therapy.
  • Immunoadsorption removes immunoglobulins from the patient's blood.
  • this immunoadsorbent treatment can be performed inpatient and outpatient.
  • the device, in particular the so-called adsorber is part of an extracorporeal blood circulation.
  • An essential component of the blood that is thereby obtained is, in particular, blood plasma.
  • the blood plasma can advantageously be passed through the device according to the invention and returned to the patient after adsorption of the autoantibodies together with the previously separated blood constituents, in particular the cellular constituents, in particular by another arm or leg vein.
  • the peptides are immobilized on a Sepharose matrix. This matrix can be placed in a container having a volume of 10 to 400 ml. The patient's blood plasma can then be passed through this matrix, whereby the autoantibodies can bind and thus be eliminated from the blood plasma.
  • Myopathy myocarditis, preeclampsia, humoral kidney rejection, malignant hypertension, essential Hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis, and / or Raynaud's syndrome.
  • the person skilled in further embodiments of WO 02/38592, EP 1 214, 350 and WO 99/56126 are known, which are included in the disclosure of the teaching of the invention.
  • the invention also relates to the use of the peptides according to the invention, the pharmaceutical composition according to the invention, the kit according to the invention and / or the device according to the invention for the prophylaxis, diagnosis, therapy, follow-up and / or after-treatment of autoimmune diseases selected from the group comprising dilated cardiomyopathy Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral kidney rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis, and / or Raynaud's syndrome.
  • autoimmune diseases selected from the group comprising dilated cardiomyopathy Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral kidney rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis, and / or Raynaud's syndrome.
  • the invention also relates to the use of the peptides according to the invention, the pharmaceutical composition according to the invention, the kit according to the invention and / or the device according to the invention for the production of a medicament for the treatment of autoimmune diseases selected from the group comprising dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, preeclampsia, humoral kidney rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, psoriasis, and / or Raynaud's syndrome.
  • the invention also relates to the use of the peptides according to the invention, the pharmaceutical composition according to the invention, the kit according to the invention and / or the device according to the invention for the screening of medicinal products.
  • the screening of drugs may, for example, include the identification of substances, in particular peptides, proteins, carbohydrates and / or lipids, which interact with the peptides.
  • An interaction may for example be a binding to these peptides or else an activation or inhibition of or by the mentioned peptides.
  • a drug could, for example, be a structure which binds to the peptides in the body of a patient and accordingly to the corresponding loops and thus competes for a binding site with the autoantibodies present there.
  • the invention also relates to a method of treating an autoimmune disease selected from the group comprising dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, pre-eclampsia, humoral renal rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, Psoriasis, Raynaud's syndrome Binding and / or removal of autoantibodies by means of peptides bound to a solid phase according to the invention. By bound to the solid phase peptides, the autoantibodies are bound, complexed and / or neutralized on the solid phase.
  • an autoimmune disease selected from the group comprising dilated cardiomyopathy, Chagas' cardiomyopathy, myocarditis, pre-eclampsia, humoral renal rejection, malignant hypertension, essential hypertension, refractory hypertension, pulmonary hypertension, Psoriasis, Raynaud's syndrome Binding and / or removal of autoantibodies by means of
  • the autoantibodies in the dilated cardiomyopathy against betal adrenergic receptors in Chagas' cardiomyopathy against beta-adrenergic receptors, in myocarditis against beta-adrenergic receptors, in dilated cardiomyopathy against muscarinerge M2 receptors, in Chagas' cardiomyopathy against muscarinic M2 receptors, in preeclampsia for angiotensin II ATI receptors, in humoral renal rejection against angiotensin II AT1 receptors, in malignant hypertension to angiotensin II ATI receptors, in the essential Hypertension to alpha adrenergic receptors, to refractory hypertension to alpha adrenergic receptors, to pulmonary hypertension to alpha adrenergic receptors, to psoriasis to alpha adrenergic receptors, autoantibodies to endothelin IA in Raynau
  • Pre-eclampsia is a disorder characterized by an increase in blood pressure that can lead to the death of mother and fetus. Dechend et al. , 2000, were able to demonstrate the manifestation of agonistic antibodies against angiotensin AT x receptors, which are common in preeclamptic women. Activation of the AT ⁇ receptor by agonistic autoantibodies accounts for many of the pathophysiological features of preeclampsia.
  • Anti-AT- L -AABs were prepared by ammonium sulfate precipitation from waste fluids at birth (blood and isotonic saline). These samples were more concentrated than serum samples.
  • this mixture was incubated with washed streptavidin-coated magnetic particles for 1 hour at 4 ° C.
  • the magnetic particles were washed three times with washing buffer (20 M potassium phosphate buffer, 0.15 M NaCl, pH 7.5). The separation or washing can be carried out easily with a magnetic onzentrationsapparat (Dynal). Unspecific binding sites were blocked with 1% bovine serum albumin in wash buffer.
  • the magnetic particles were incubated with a solution of horseradish peroxidase-labeled antibodies to human IgG3 (1: 200, 1 hour, room temperature).
  • the particles were treated with a standardized ready to use solution of TMB (tetramethylbenzidine) for 30 minutes at room temperature in the dark.
  • the color reactions blue-green
  • the optical densities were measured in a microplate reader (Anthos HTII) at 492 nm (reference filter 620 nm). The results are summarized in Table 1.
  • the same peptide of the human AT ⁇ receptor (Sm 1986/1) was used for purifying anti-AT- L -AABs.
  • IgG solutions were mixed with peptide solution (100 ⁇ g / ml, 1: 1, v / v) and incubated for one hour at 4 ° C.
  • the three times washed streptavidin-coated magnetic particles were added (300 ⁇ l).
  • the particles were collected with the magnetic concentrator.
  • the supernatants were carefully separated and stored in ice.
  • the magnetic particles were washed three times and eluted with 3M potassium thiocyanate solution for 15 minutes at room temperature.
  • the process of coimmunoprecipitation of the A ⁇ receptor was similar to that of the (Wallukat, 2001). The differences are: lysed membranes of transfected CHO cells (Couchon, 1997) were used for coimmunoprecipitation. The lysed membranes should be freshly prepared. The proteins were identified by means of an antibody to a peptide having the sequence of the N-terminal portion of the AT ⁇ receptor produced in rabbits (N10, 1: 100, Santa Cruz), and Western blot and ECL. System with anti-rabbit IgG peroxidase conjugates (1: 10,000, Sigma) detected.
  • Figure 1 shows the results of the Western blot.
  • the results show the usefulness of the IMAGOQUANT computer imaging system in demonstrating the increase in Beats per minute due to AT ⁇ AABs in patients with preeclampsia.
  • the enzyme-linked immunoassay should be tested with sera from pre-eclampsia patients and healthy donors.
  • the purified AT ⁇ AABs can be used to further study the pathogenesis of preeclampsia.
  • Betal-Adren. dilat. Cardiomyopathy 1. loop IgG3 u. IgG4
  • Alphal Adren. refractory hypertension 1. loop IgGl u. IgG3
  • Alphal Adren. pulmonary hypertension 1. loop IgG 1 u. IgG3 alpha adrenes. Psoriasis 1. loop IgG 2
  • Figure 1 Western blot of coimmunoprecipitation of the angiotensin AT ⁇ receptor
  • Lane 1 Protein A / Sepharose 2 pre-eclamptic patient D. without cleaning; 3 KSCN eluate; 4 supernatant; 5 lysed CHO membranes; 6 lysed placental tissue.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Rehabilitation Therapy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion von krankheitsassoziierten Autoantikörpern, die extrazelluläre Strukturen von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren erkennen, und die Verwendung von Peptiden, die diese Loops oder Fragmente dieser umfassen, zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten.

Description

Bestimmung agonistischer Autoantikörper
Beschreibung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Detektion von krankheitsassoziierten Autoantikδrpern, die Loops von G-Protein-gekoppelten Rezeptoren binden, und die Verwendung von Peptiden, die diese Loops oder Fragmente dieser umfassen, zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten.
Das Immunsystem mehrzelliger Organismen beruht auf der Unterscheidung zwischen "selbst" und "nicht selbst". Auf- grund seiner großen Diversität verfügt das "selbst" und "nicht selbst" unterscheidende Immunsystem über ein großes Repertoire von Spezifitäten, die insbesondere von T- und B-Zellen exprimiert werden. Mittels komplizierter Mechanismen ist das Immunsystem zur Unterscheidung zwischen "selbst" und "nicht selbst" befähigt, mit denen sich der Körper insbesondere vor den Folgen der so genannten Autoimmunität schützen kann. Das heißt, die humoralen und zellulären Bestandteile des Immunsystems eines Organismus sind so ausgeprägt, dass sie sich nicht gegen den Organismus selbst richten. Innerhalb des Immunsystems kann es jedoch zu vielfältigen Störungen kommen, besonders können die Mechanismen der Selbstkennung eingeschränkt oder völlig ausgeschaltet werden. Daher gibt es eine Reihe von Erkrankungen, die durch Autoantikörper oder autoreaktive T-Zellen ausgelöst werden können. Eine der ersten Krankheiten, bei denen Autoantikörper gegen ein bestimmtes Organ gefunden wurden, ist die Thyreoiditis Hashimoto. Es handelt sich hierbei um eine Schilddrüsenerkrankung, die hauptsächlich bei Frauen mittleren Alters auftritt und zur Ausbildung eines Kropfes und zur Unterfunktion der Schilddrüse führt. Sofern die Krankheit nicht behandelt wird, kommt es zur vollkommenen Zerstörung und Schrumpfung des Organs . Neben Autoantikörpern, die ausschließlich gegen ein Organ gerichtet sind, gibt es zahlreiche Autoantikörper, die gegen mehrere Organe bzw. Gewebetypen gerichtet sein können.
Entsprechend der Ausrichtung der Autoantikörper können organspezifische und nichtorganspezifische Autoimmunerkrankungen unterschieden werden. Typische organspezifische Autoimmunerkrankungen sind beispielsweise die vorzeitige Menopause, der juvenile Diabetes, männliche Unfruchtbarkeit, perniziöse Anämie oder Morbus Addison. Zu den nicht- organspezifischen Autoimmunerkrankungen gehören beispielsweise die rheumatoide Arthritis, die Dermatomyositis, die Sklerodermie oder gemischte Bindegewebserkrankungen und andere. Als Zielorgane der organspezifischen Erkrankung sind häufig die Schilddrüse, die Nebenniere, der Magen und das Pankreas befallen, die nichtorganspezifischen Erkrankungen werden unter dem Begriff des so genannten rheu- matischen Formenkreises zusammengefasst und betreffen die Haut, die Niere, die Gelenke und die Muskeln. Für die Diagnose und die Behandlung von Autoimmunerkrankungen sind bisher nur wenige, unzureichende Nerfahren bekannt. Mit den bekannten Laborroutinen, wie beispielsweise ELISA oder anderen gut eingeführten diagnostischen Nerfahren, die sich beispielsweise im Massenscreening unter den Labor- bedingungen einer Klinik bewährt haben, ist es nicht möglich, die oft nur in geringen Konzentrationen vorhandenen Autoantikörper im Serum eines Patienten nachzuweisen. Die Behandlung erfolgt bei organspezifischen Erkrankungen meistens durch Herstellung des metabolischen Gleichgewichtes; zum Beispiel wird bei einer Schilddrüsenunterfunktion das fehlende Schilddrüsenhormon mit Thyroxin substituiert, und bei der Thyreotoxikose können Anti- metaboliten des Hormons gegeben werden. Bei der perniziösen Anämie kann ein Depot von Vitamin B12 parenteral verabreicht werden und bei der Myasthenia gravis können Cholinesterase-Inhibitoren gegeben werden. Sofern ein kompletter Funktionsverlust des Organs eingetreten ist, sind beispielsweise eine Organübertragung oder eine Implan- tation einer Prothese möglich. Derartige Therapieverfahren sind bei organunspezifischen Autoimmunerkrankungen nicht geeignet, da hierzu beispielsweise eine ganze Gruppe von Organen, wie beispielsweise die Haut, die Niere, die Gelenke und die Muskeln, in einem Patienten substituiert werden müsste, wobei alleine die Substitution der Gelenke, der Muskeln und/oder der Haut nahezu unmöglich ist. Eine weitere Möglichkeit der Behandlung von Autoimmunkrankheiten ist die Möglichkeit, die die Krankheit induzierenden Autoantikörper zu binden, zu komplexieren und folgend aus dem Serum zu eliminieren. Derartige Verfahren, können jedoch nur dann erfolgreich in Diagnose oder Therapie eingesetzt werden, wenn ein Target, ein Agens oder eine Struktur bekannt sind, mit denen die Autoantikörper so wechselwirken, dass sie mit Hilfe des Agens oder des Targets detektiert oder eliminiert werden können. Für zahlreiche Autoimmunerkrankungen, wie zum Beispiel die Autoantikörper assoziierte Hypertonie, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung oder die Chagas" Kardiomyopathie, sind derartige Agenzien nicht bekannt. Bisherige Diagnoseverfahren, wie beispielsweise Bioassays, sind schwer zu handhaben und daher für die Laborroutine ungeeignet. Bekannte Bioassays sind z. B. Herzmyozyten-Kulturen zum Nachweis von Angiotensin II ATI-Rezeptor-Autoantikörpern.
Aufgabe der Erfindung war es daher, Mittel, Vorrichtungen und Nerfahren zur Diagnose von Autoantikörpern und Therapien von Autoimmunerkrankungen bereitzustellen, die eine einfache, effiziente und sichere Detektion oder Behandlung erlauben und die genannten Nachteile nicht aufweisen.
Die Erfindung löst dieses technische Problem durch die Bereitstellung eines Verfahrens zur Detektion von krankheitsassoziierten Autoantikörpern, die gegen G-Protein- gekoppelte Rezeptoren gerichtet sind, wobei das Verfahren folgende Schritte umfasst:
a) In-Kontakt-Bringen von Körperflüssigkeit mit einem denaturierenden Agens,
b) In-Kontakt-Bringen der gefällten Fraktion mit einem insbesondere Biotin umfassenden Peptid, welches eine Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Rezeptors umfasst, wobei eine Mixtur entsteht,
c) Inkubation der Mixtur mit einem insbesondere Avidin oder Streptavidin-beschichteten Träger, d) Waschen der Materialien des Trägers,
e) Inkubation der Träger mit anti-IgG-Subklassen, wobei der anti-IgG- ntikörper markiert ist und
f) Durchführung einer' Detektions-, insbesondere einer Enzym- oder Farbreaktion.
Die Erfindung betrifft also die überraschende Lehre, dass es möglich ist, mit Hilfe einer Enzym- oder Farbreaktion, beispielsweise in einem in Laborroutinen üblichen ELISA, krankheitsassoziierte Autoantikδrper, die insbesondere gegen G-Protein-gekoppelte Rezeptoren gerichtet sind, zu detektieren. Dies betrifft insbesondere Autoantikörper, die mit den Krankheiten der dilatativen Kardiomyopathie, der Chagas" Kardiomyopathie, der Myokarditis, der Präeklampsie, der humoralen Nierenabstoßung, der alignen Hypertonie, der essentiellen Hypertonie, der refraktären Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie, der Psoriasis und/oder dem Raynaud-Syndrom in Verbindung stehen, bevorzugt sind die Antikörper agonistischer Autoantikörper. Bevorzugt diese Krankheiten sind mit Hilfe eines erfindungsgemäßen enzymgekoppelten Immuntests einfach, sicherer und effektiv detektierbar. Derartige Krankheiten, insbesondere die mit ihnen assoziierten Antikörper, konnten bisher nur mit komplizierten indirekten Tests, wie. zum Beispiel Bioassays, nachgewiesen werden. So wurden beispielsweise Angiotensin II-ATI-Rezeptor-Autoantikörper, die beispielsweise mit der Präeklampsie assoziiert sind, bisher sicher nur durch das In-Kontakt-Bringen der jeweiligen Seren mit kultivierten Kardiomyozyten, insbesondere neugeborener Ratten, über die Modifikation der Schlagfrequenz detektiert. Hierzu war es erforderlich, die Kardiomyozyten neugeborener Ratten zu kultivieren und diese mit dem Serum der Patienten in Kon- takt zu bringen, wobei durch den Nachweis der Zunahme der Schläge pro Minute Antikörper gegen den ATI-Rezeptor bei Patienten mit Präeklampsie detektierbar waren. Mit dem erfindungsgemäßen Verfahren ist ein Immuntest zur Verfügung gestellt, mit dem zahlreiche Autoantikörper, die gegen G- Protein-gekoppelte Rezeptoren gerichtet sind, detektiert werden können. Bei diesen Autoantikörpern handelt es sich bevorzugt um einen gegen Betal-adrenergen-Rezeptor gerichteten Autoantikδrper, einen gegen muskarinergen M2 -Rezeptor gerichteten Autoantikörper, einen Angiotensin II ATl-Rezeptor-Autoantikδrper, einen Alphal-adrenergen-Rezep- tor-Autoantikörper und Autoantikörper, die gegen Endothelin IA, PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtet sind. Die Autoantikörper können insbesondere agonistisch wirkende Autoantikörper sein. Selbstverständlich können die Antikörper auch inhibitorische Antikörper sein, z.B. beim allergischen Asthma (Interaktion mit dem 3. Loop) . Ein insbesondere Streptavidin-beschichteter Träger ist ein Träger der bevorzugt mit Streptavidin oder Avidin beschichtet ist. Besonders bevorzugt sind aus 6 bis 2, insbesondere 4 Untereinheiten bestehende Proteine MR ca. 40000 bis 80000, insbesondere 60000 oder 66000, isoelektrischen Punkt nahe dem Neutralpunkt, wie z.B. Streptavidin oder Avidin, welche eine hohe Affinität (z.B. KD = 10"15 M"1) zu anderen, insbesondere durch Cholin inaktivierende Verbindungen, bevorzugt Biotin, zeigen. Dem Fachmann ist bekannt, dass ein insbesondere Streptavidin- beschichteter Träger vorteilhaft ist, wenn eine mit diesem wirkverbindbare Struktur mit Biotin oder einem Äquivalent assoziiert ist. Wird durch Versuche ermittelt, dass die Bindung auch ohne eine Biotin/Streptavidin/Avidin Assoziierung oder Bindung für den Nachweis ausreichend ist, muss das Peptid oder der Träger nicht mit diesen Hilfsstoffen (Biotin und Streptavidin/Avidin) verbunden werden.
Das Peptid ist im Sinne der Erfindung ein Molekül, welches im Wesentlichen aus Aminosäuren besteht. Peptide im Sinne der Erfindung sind auch Strukturen, die mehr als 50 bzw. 100 Aminosäuren umfassen und somit auch als Proteine bezeichnet werden können. Peptide und Proteine werden demgemäss im Zusammenhang mit der Erfindung synonym verwendet. Selbstverständlich können die Peptide andere Strukturen wie Lipide oder Kohlenhydrate aber auch artifizielle oder natürliche Aminosäure- oder nicht- Aminosäurebausteine umfassen.
Das Biotin-umfassende Peptid oder Protein kann auch mit einem anderen Tag als Biotin kombiniert werden. Ein Tag im Sinne der Erfindung ist ein Protein-Anhängsel oder ein Peptid bzw. eine andere Struktur, die mit dem Peptid oder Protein kombiniert, beispielsweise fusioniert, wird. Das Peptid kann - wie bereits ausgeführt - beispielsweise biotinyliert vorliegen und somit Biotin als Tag aufweisen. Dem Fachmann sind weitere Tag-Strukturen oder Tags aus Katalogen und Standardwerken der Biochemie bekannt . Bevorzugte Tags sind His-Tag, Flag-Tag, Strep-Tag, T7-Tag (11 N-terminale Aminosäuren desT7GenlO-Proteins) , S-Tag, CBP (Calmodulin-Binde-Peptid) , MBP (Maltose-Binde-Peptid) , Neb, Protein A, GST-Tag, PinPoint-Tag, Thioredoxin, PET (Cellulose-Binde-Domäne) , PMal (Maltose-Binde-Domäne) und/oder Biotin-Tag. Dieses Tag besitzt eine hohe Affinität zu einer anti-Tag Substanz oder einem anti-Tag an oder auf dem Träger. Bevorzugte anti-Tags sind Streptavidin-, Glutathion-, Biotin-, Nickel-NTA-, Cellulose-, Amylose-, Thiobond-, Avidin-, und/oder Immunglobulin. Dem Fachmann sind Tag/anti-Tag Paare bekannt, d.h. die Auswahl des Tags bestimmt die Struktur des anti-Tags, ohne dass eine erfinderische Auswahl durch einen Fachmann erforderlich ist oder das dieser bei der Ausführung der erfindungsgemässen Lehre zunächst eine technische Aufgabe lösen muss. Wenn das Peptid biotinyliert vorliegt und somit Biotin als Tag aufweist, ist die anti-Tag-Struktur Streptavidin, d.h. ein mit Streptavidin beschichteter Träger. Weitere bevorzugte
Tag/anti-Tag Paare sind: Protein A/ Immunglobulin, GST
(Glutathion-S-Transferase) / Glutathion, Pin-Point (in vivo
Biotinylierung) / Avidin, Thioredoxin/ Thiobond, PET (Cellulose-Binde-Domäne) / Cellulose und/oder PMal (Maltose- Binde-Domäne) / Amylose und andere. Bevorzugte anti-Tag-beschichtete Träger sind ausgewählt aus der Gruppe umfassend Streptavidin-, Glutathion-, Biotin-, Nickel-NTA-, Cellulose-, Amylose-, Thiobond-, Avidin- und/oder Immunglobulin-beschichtete Träger.
Die loops im Sinne der Erfindung können extrazelluläre Strukturen sein, mit denen funktioneile, agonistische oder antagonistische Autoantikörper wechselwirken, diese erkennen oder binden . In einer besonderen Ausführungsform der Erfindung ist das denaturierende Agens Ammoniumsulfat. Selbstverständlich kann aber jedes wenig strukturverändernde Denaturierungsmittel verwendet werden, wie z.B. Alkohol bei der Alkoholfällung. Vorteilhafterweise ist es mit Ammoniumsulfat oder Alkohol möglich, Körperflüssigkeiten, wie beispielsweise Serum, zu fällen, insbesondere fraktioniert zu fällen. So können beispielsweise Antikörper, insbesondere Autoantikörper, von anderen Bestandteilen der Kδrperflüssigkeit separiert werden. Die Denaturierung der Körperflüssigeit erfolgt hierbei insbesondere so, dass die abgetrennten Bestandteile mittels dem Fachmann bekannter Methoden wieder in einen im Wesentlichen nativen Zustand zurückgeführt werden können oder in einen Zustand, der ihre Detektion ermöglicht. Selbstverständlich ist jedes dem Fachmann bekannte denaturierende Agens, das von Ammoniumsulfat verschieden ist, oder ein anderes, die Struktur wenig veränderndes Denaturierungsmittel, zur Fällung von Körperflüssigkeiten geeignet .
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der Träger ein magnetisches Partikel oder eine ELISA-Platte bzw. eine andere Struktur, die zur Inkubation der Mixtur geeignet ist. Magnetische Partikel erlauben insbesondere die Abtrennung der gebundenen Mixtur mit Hilfe von Strom oder einer magnetischen Ladung. Eine Verwendung von ELISA-Platten ermöglicht bevorzugt den Einsatz von Laborroutinen oder standardisierten Geräten, da ELISA-Platten, insbesondere 96-well-Mikrotiterplatten, in Klinik- und Grundlagenforschung als ein Standard eingesetzt werden.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der Autoantikörper gegen einen Betal-adrenergen-Rezeptor, einen muskarinergen M2-Rezeptor, einen Angiotensin II ATI-Rezeptor, einen Alphal-adrenergen-Rezeptor, einen Endothelin IA-Rezeptor, einen PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtet. Bevorzugt handelt es sich bei den Rezeptoren um G-Protein-gekoppelte Rezeptoren.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die gegen den Betal-adrenergen Rezeptor gerichteten Autoantikδrper mit der dilatativen Kardiomyopathie, der Chagas" Kardiomyopathie oder der Myokarditis assoziiert, die gegen den muskarinergen M2-Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der dilatativen Kardiomyopathie oder der Chagas" Kardiomyopathie, die gegen den Angiotensin II AT1- Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der Präeklampsie, der humoralen Nierenabstoßung oder der malignen Hypertonie, die gegen den Alphal-adrenergen-Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der essentiellen Hypertonie, der refraktären Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie oder der Psoriasis und/oder die gegen Endothelin IA, PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichteten Autoantikörper sind mit dem Raynaud- Syndrom assoziiert. Vorteilhafterweise handelt es sich hierbei um Autoimmunerkrankungen, bei denen die krankheitsassoziierten Autoantikörper gegen bestimmte extrazelluläre Strukturen des G-Protein-gekoppelten Rezeptors gerichtet sind. Derartige Autoimmunerkrankungen sind mit bisherigen Mitteln der Laborroutine schwer oder gar nicht diagnostizierbar und weiterhin können sie nur mit erheblichem, teils chirurgischem Aufwand - z.B. Herztransplantation oder Implantation von Herzunterstützungssystemen - behandelt werden, insbesondere dadurch, dass einzelne Gewebe, Organbereiche oder vollständige Organe durch Prothesen oder andere Organe, beispielsweise von lebenden oder toten Patienten, substituiert werden.
In einer ganz besonderen Ausführungsform der Erfindung wird bei der Detektion der dilatativen Kardiomyopathie, der Myokarditis, der essentiellen Hypertonie, der refraktären Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie oder der Psoriasis eine Sequenz, bevorzugt das Peptid eingesetzt, welches eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Rezeptors umfasst und bei der Chagas" Kardiomyopathie, der dilatativen Kardiomyopathie, der humoralen Nierenabstoßung und beim Raynaud-Syndrom wird das Peptid eingesetzt, das eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Rezeptors umfasst. Mit Vorteil ist es möglich, den ersten und/oder zweiten Loop bzw. nur den zweiten Loop bzw. Peptide, die Anteile bzw. Fragmente des ersten und/oder zweiten Loops bzw. nur des zweiten Loops umfassen, zur Detektion oder Therapie der genannten Krankheiten einzusetzen. Mit Vorteil sind dem Fachmann durch die Offen- barung des Zusammenhangs von Autoantikörper, Loop und der jeweiligen Autoimmunkrankheit verschiedene Möglichkeiten gegeben, die genannten Autoimmunkrankheiten zu diagnostizieren, prognostizieren, therapieren, sie nachzubehandeln bzw. im Verlauf einer Behandlung einer Verlaufskontrolle des jeweiligen Heilverfahrens zu unterziehen. Die Loops bzw. die Peptide, die Teilbereiche der Loops umfassen, sind bevorzugt modifiziert.
Dem Fachmann ist bekannt, dass einzelne Aminosäuren analoge physikochemische Eigenschaften aufweisen, die mit Vorteil dazu führen, dass diese Aminosäuren untereinander ausgetauscht werden können. Hierzu gehören beispielsweise die Gruppe der Aminosäuren (a) Glycin, Alanin, Valin, Leucin und/oder Isoleucin; bzw. die Aminosäuren (b) Serin und Threonin, die Aminosäuren (c) Asparagin und Glutamin, die Aminosäuren (d) Asparaginsäure und Glutaminsäure; die Aminosäuren (e) Lysin und Arginin sowie die Gruppe der aromatischen Aminosäuren (f) Phenylalanin, Tyrosin und/oder Tryptophan. Aminosäuren innerhalb ein und derselben Gruppe (a-f) können untereinander ausgetauscht werden. Weiterhin ist es möglich, dass Aminosäuren durch modifizierte Aminosäuren oder spezifische Enantiomere ausgetauscht werden. Weitere Modifikationen sind gemäß der Lehre nach der W099/62933 oder WO02/38592 möglich.
Im Stand der Technik sind verschiedene Möglichkeiten zur Herstellung von Peptiden offenbart. Peptide, die von den erfindungsgemäßen Peptiden ausgehend mit solchen Verfahren designt werden, sind von der erfindungemäßen Lehre mit erfasst . Eine Möglichkeit des Generierens von funktionsanalogen Peptiden ist beispielsweise in PNAS USA 1998, Oct . 13; 9521:12179-84, WO 99/6293 und/oder WO 02/38592 beschrieben; diese Lehren sind in den Offenbarungsgehalt der Erfindung mit aufgenommen. Das heißt, sämtliche Peptide, Peptidfragmente oder Strukturen, die Peptide umfassen, die mit dem genannten Verfahren - von den erfindungsgemäßen Peptiden ausgehend - generiert wurden, sind Peptide im Sinne der Erfindung, sofern sie die erfindungsgemäße Aufgabe lösen, insbesondere mit den krankheitsverursachenden Autoantikörpern Wechselwirken. Bei diesen Autoantikörpern kann es sich beispielsweise um agonistische Autoantikörper handeln, die Rezeptoren aktivieren oder um inhibitorische Antikörper. -
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist es bevorzugt, dass die mit der dilatativen Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten oder zweiten Loops des Betal-adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Chagas" Kardiomyopathie assoziierten Autoantikδrper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Betal-adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden, - die mit der Myokarditis assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten oder zweiten Loops des Betal- adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der dilatativen Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des muskarinergen M2-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Chagas" Kardiomyopathie assoziierten Autoantikδrper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des muskarinergen M2-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, - die mit der Präeklampsie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teil- sequenz des zweiten Loops des Angiotensin II ATI-Rezeptors in Kontakt gebracht werden,
- die mit der humoralen Nierenabstoßung assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Angiotensin II ATI-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, - die mit der malignen Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Angiotensin II ATI-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der essentiellen Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden,
- die mit der refraktaren Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der pulmonaren Hypertonie assoziierten Auto- antikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Psoriasis assoziierten Autoantikδrper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teil- sequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden und/oder die mit dem Raynaud-Syndrom assoziierten Autoanti- körper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder ' Teilsequenz des zweiten Loops des Endothelin IA, PAR-1 und/oder PAR-2 in Kontakt gebracht werden. •
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die IgG-Subklassen IgGl, IgG2, IgG3 und/oder IgG4 Subklassen. Vorteilhafterweise werden spezifische Subklassen eingesetzt, um krankheitsassoziierte Autoantikörper einfach und effektiv zu detektieren. Hierdurch ist im Gegensatz zu den Verfahren ohne die Verwendung von spezifischen Subklassen eine einfache und sichere Detektion von Autoantikδrpern durchführbar. Die Subklassen können überraschenderweise bestimmten Krankheitsbildern zugeordnet werden. Es ist demgemäß im Wesentlichen kein Gemisch von IG-Sublassen mit einem Krankheitsbild assoziiert, was dahingehend überraschend ist, da im Laufe der Generierung von Subklassen durch Switch und andere biochemische Mechanismen verschiedene Subklassen generiert werden.
In einer weiteren vorteilhaften Ausführungsform ist es bevorzugt, dass - bei der dilatativen Kardiomyopathie die IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst, und die IgGl Subklasse, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst, - bei der Chagas" Kardiomyopathie die IgGl, IgG2, IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden,
- bei der Myokarditis die IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst und die IgGl Subklasse, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst; bei der Präeklampsie die IgG3 Subklasse verwendet wird, - bei der humoralen Nierenabstoßung die IgGl und IgG3 Subklassen verwendet werden,
- bei der malignen Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden, bei der essentiellen Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst und die IgG2 Subklasse verwendet wird, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst, - bei der refraktaren Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst und die IgG2 Subklasse verwendet wird, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst,
- bei der pulmonaren Hypertonie die IgGl, IgG2 und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden,
- bei der Psoriasis die IgGl, IgG2 , IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden und/oder - bei dem Raynaud-Syndrom die IgGl Subklasse verwendet wird. Mit Vorteil kann durch diese Ausgestaltungsform der Erfindung für eine spezifische Autoimmunkrankheit bzw. für die Autoantikörper eine IgG-Subklasse bzw. -Subklassen bereit- gestellt • werden, mit denen Autoantikörper einfach und sicher. detektiert werden können.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die Autoantikörper vor dem Nachweis mit dem Fachmann bekannten Methoden aufkonzentriert oder gereinigt.
In einer besonderen Ausführungsform der Erfindung umfasst das Verfahren zum Aufkonzentrieren oder Reinigen der Autoantikörper die folgenden Schritte: a) Gewinnung einer IgG-Fraktion aus Körperflüssigkeit, b) In-Kontakt-Bringen der gewonnenen IgG-Fraktion mit einem Peptid, welches eine Teilsequenz eines ersten oder zweiten Loops eines G-Protein-gekoppelten Rezeptors umfasst, wobei eine Mixtur gewonnen wird, c) Inkubation der Mixtur mit einem Träger, der gewaschen und konzentriert wird und d) Eluieren der Autoantikörper von dem aufkonzentrierten Träger.
Zweckmäßigerweise wird durch die Reinigung oder Aufkonzentrierung eine sehr sichere Diagnose oder Detektion der Autoantikörper möglich.
In einer besonderen Ausführungsform der Erfindung ist das Peptid, welches die Sequenz bzw. eine Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops umfasst, ausgewählt aus der Gruppe umfassend:
EYGSFF, SFFCEL, ARRCYND, PKCCDF, AESDE, CYIQFF, EDGECY, VRTVEDGECYIQFFSNAAVTFGTAI , AFHYESQ, ENTNIT, FWAFGR, GRAFCDV, ITEEAGY, ERFCGI , GRIFCD und/oder ITTCHDVL .
Insbesondere können diese Peptide wie folgt zugeordnet werden (siehe auch Tab. 3) :
ßl DCM I loop EYGSFF, SFFCEL ßl DCM II loop ARRCYND, PKCCDF ßl Myokard. I loop ARRCYND, PKCCDF ßl Myokard. II loop ARRCYND, PKCCDF ßl Chagas II loop AESDE musc . M2 DCM II loop CYIQFF, EDGECY musc. M2 Chagas II loop VRTVEDGECYIQFFSNAAVTFGTAI
ATI Praekl . II loop AFHYESQ ATI humor.
Nierenabst . II loop ENTNIT, AFHYESQ ATI malign. Hyp II loop ENTNIT, AFHYESQ αlA essent. Hyp I loop FWAFGR, GRAFCDV αlA essent. Hyp II loop ITEEAGY und ERFCGI αlA pulm. Hyp I loop FWAFGR, GRAFCDV αlA pulm. Hyp II loop ITEEAGY und ERFCGI αlA refrakt. Hyp I loop FWAFGR, GRAFCDV αlA refrakt. Hyp II loop ITEEAGY und ERFCGI αlB Psoriasis I loop GRIFCD αlA Psoriasis I loop GRAFCDV
PAR-1 und PAR-2 II loop ITTCHDVL Endothelin IA; Raynaud's Syn.
Es ist dem Fachmann selbstverständlich bekannt, dass er aufgrund der Offenbarung bestimmter Sequenzabschnitte des Loopes auch Sequenzen verwenden kann, die die genannten Sequenzen im natürlich vorkommenden loop flankieren. Weiterhin ist dem Fachmann bekannt, dass er die Sequenzen durch Deletionen, Substitutionen, Additionen, Insertionen oder andere biochemische bzw. biophysikalische Vorgänge so verändern kann, dass einzelne Parameter von ihnen - wie beispielsweise ihre Wirkung als diagnostisches oder therapeutisches Mittel - verbessert werden können.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist insbesondere das Peptid immobilisiert. Im Sinne der Erfindung werden unter Immobilisierung verschiedene Nerfahren und Techniken zum Fixieren der Peptide auf bestimmten Trägern verstanden. Die Immobilisierung kann beispielsweise der Stabilisierung der Peptide dienen, wodurch diese ins- besondere bei Lagerung oder bei einmaligem Batch-Ansatz durch biologische, chemische oder physikalische Einwirkungen in ihrer Aktivität nicht reduziert oder nachteilig modifiziert werden. Durch die Immobilisierung der Peptide ist ein wiederholter Einsatz unter technischen oder klinischen Routine-Bedingungen möglich; weiterhin kann eine Probe - bevorzugt Blutbestandteile - mit mindestens einem der erfindungsgemäßen Peptide kontinuierlich umgesetzt werden. Dies kann insbesondere durch verschiedene Immobilisierungstechniken erreicht werden, wobei die Bindung der Peptide an andere Peptide oder Moleküle bzw. an einen Träger so erfolgt, dass die dreidimensionale Struktur, insbesondere an dem Zentrum, das die Wechselwirkung mit den Autoantikörpern vermittelt, der entsprechenden Moleküle, insbesondere der Peptide, nicht verändert wird. Vorteilhafterweise geht die Spezifität zu den Autoantikörpern der Patienten durch die Immobilisierung nicht verloren. Im Sinne der Erfindung können drei grundsätzliche Methoden zur Immobilisierung verwendet werden:
(i) Quervernetzung: Bei der Quervernetzung werden die Peptide miteinander fixiert, ohne dass ihre Aktivität nachteilig beeinflusst wird. Sie sind vorteilhafterweise durch die Quervernetzung nicht mehr löslich.
(ii) Bindung an einen Träger: Die Bindung an einen Träger erfolgt zum Beispiel durch Adsorption, Ionenbindung oder kovalente Bindung. Dies kann auch innerhalb von mikro- biellen Zellen bzw. Liposomen oder anderen membranhaltigen geschlossenen bzw. offenen Strukturen erfolgen. Die Peptide werden durch die Fixierung vorteilhafterweise nicht in ihrer Aktivität beeinflusst. Die Peptide können mit Vorteil zum Beispiel in der Klinik in Diagnose oder Therapie trägergebunden mehrfach oder kontinuierlich eingesetzt werden.
(iii) Einschluss: Der Einschluss erfolgt im Sinne der Erfindung . insbesondere an eine semipermeable Membran in Form von Gelen, Fibrillen oder Fasern. Gekapselte Peptide sind durch eine semipermeable Membran so durch die umgebende Probenlösung getrennt, dass sie vorteilhafterweise noch mit den Autoantikörpern oder mit Fragmenten dieser inter- agieren können. Für die Immobilisierung stehen verschiedene Verfahren zur Verfügung, wie beispielsweise die Adsorption an einen inerten oder elektrisch geladenen anorganischen oder organischen Träger. Solche Träger können beispielsweise poröse Gele, Aluminiumoxid, Betonid, Agarose, Stärke, Nylon oder Polyacrylamid sein. Die Immobilisierung erfolgt hierbei durch physikalische Bindungskräfte, oft unter Beteiligung von hydrophoben Wechselwirkungen und ionischen Bindungen. Derartige Methoden sind vorteilhafterweise einfach zu handhaben und sie beeinflussen" die Konformation der Peptide nur in geringem Umfang. Durch elektrostatische Bindungskräfte zwischen den geladenen Gruppen der Peptide und dem Träger kann die Bindung vorteilhafterweise verbessert werden, zum Beispiel durch die Verwendung von Ionenaustauschern, insbesondere Sephadex.
Ein weiteres Verfahren ist die kovalente Bindung an Trägermaterialien. Die Träger können dazu reaktive Gruppen aufweisen, die mit Aminosäure-Seitenketten homöopolare Bindungen eingehen. Geeignete Gruppen in Peptiden sind Carboxy- , Hydroxy- und Sulfidgruppen und insbesondere die endständigen Aminogruppen von Lysinen. Aromatische Gruppen bieten die Möglichkeit für Diazo-Kopplungen. Die Oberfläche von mikroskopischen porösen Glaspartikeln kann durch Behandlung mit Silanen aktiviert und anschließend mit Peptiden umgesetzt werden. Hydroxy-Gruppen natürlicher Poly- mere können zum Beispiel mit Bromzyan aktiviert und anschließend mit Peptiden gekoppelt werden. Mit Polyacryl- amid-Harzen können zahlreiche Peptide vorteilhafterweise direkte kovalente Bindungen eingehen. Bei dem Einschluss in dreidimensionale Netzwerke werden die Peptide in ionotrophe Gele oder andere dem Fachmann bekannte Strukturen eingeschlossen. Die Poren der Matrix sind insbesondere so be- schaffen, dass die Peptide zurückgehalten werden und eine Interaktion mit den Ziel-Molekülen möglich ist. Bei der QuerVernetzung werden die Peptide durch Vernetzung mit bifunktionellen Agenzien in polymere Aggregate umgewandelt. Derartige Strukturen sind gelatinös und leicht verformbar und insbesondere für den Einsatz in verschiedenen Reaktoren geeignet. Durch Zugabe anderer inaktiver Komponenten, wie zum Beispiel Gelatine, bei der Vernetzung können die mechanischen und Bindungseigenschaften vorteilhafterweise verbessert werden. Bei der Mikroverkapselung wird der Reaktionsraum der Peptide mit Hilfe von Membranen eingegrenzt. Die Mikroverkapselung kann zum Beispiel als Grenzflächen-Polymerisation durchgeführt werden. Durch die Immobilisierung bei der Mikroverkapselung werden die Peptide unlöslich und dadurch wieder verwendbar. Im Sinne der Erfindung sind immobilisierte Peptide alle Peptide, die sich in einem Zustand befinden, der ihre Wiederverwendung erlaubt. Die Einschränkung der Beweglichkeit und der Löslichkeit der Peptide auf chemischem, biologischem oder physikalischem Wege führt vorteilhafterweise zu niedrigen Verfahrenskosten, insbesondere bei der Eliminierung von Autoantikörpern aus Blutbestandteilen.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Peptid an eine Festphase gebunden. Die Bindung des Peptides an die Festphase kann über einen Spacer erfolgen. Als Spacer können alle chemischen Verbindungen eingesetzt werden, die für die Funktion des Spacers die geeigneten strukturellen und funktionellen Voraussetzungen aufweisen, solange sie nicht das Bindeverhalten derart modifizieren, ■ dass eine Bindung des Autoantikδrpers mit dem Peptid nach- teilhafterweise beeinträchtigt wird.
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfin- düng umfasst das Peptid Aminogruppen, Amide, Acetylgruppen, Biotingruppen, Marker, Spacer, Linker, GKK und/oder SGKK. Derartige Strukturen erlauben vorteilhafterweise eine Verwendung der Peptide in der Apheresetherapie .
In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung umfasst der Linker und/oder der Spacer -Aminocarbonsäuren sowie deren Homo- und Heterooligomere; α, ω-Aminocarbonsäuren sowie deren verzweigte Homo- oder Heterooligomere; sonstige Aminosäuren sowie die linearen und verzweigten Homo- oder Heterooligomere; Amino- oligoalkoxy-alkylamine; Maleinimidocarbonsäure-Derivate; Oligomere von Alkylaminen; .4-Alkylphenyl-Derivate; 4-Oligoalkoxyphenyl- oder 4-Oligoalkoxyphenoxy-Derivate; 4-Oligoalkylmercaptophenyl- oder 4-Oligoalkylmercapto- phenoxy-Derivate; 4-Oligoalkylaminphenyl- oder 4-Oligo- alkylaminyphenoxy-Derivate; (Oligoalkylbenzyl) -phenyl- oder 4-Oligoalkylbenzyl) -phenoxy-Derivate sowie 4-Oligoalkoxy- benzyl) -phenyl- oder 4-Oligoalkoxybenzyl) -phenoxy-Derivate; Trityl-Derivate; Benzyloxyaryl- oder Benzyloxyalkyl-Deri- vate; Xanthen-3-yl-oxyalkyl-Derivate; (4-Alkylphenyl) - oder ω- (4-Alkylphenoxy) -alkansäure-Derivate; Oligoalkyl-Pheno- xyalkyl- oder Oligoalkoxy-phenoxyalkyl-Derivate; Carbamat- Derivate; Amine; Trialkylsilyl- oder Dialkyl-alkoxysilyl- Derivate; Alkyl- oder Aryl-Derivate und/oder Kombinationen davon. In einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die immobilisierten Peptide durch Deletion, Addition, Substitution, Translokation, Inversion und/oder Insertion modifiziert.
Die Erfindung betrifft auch ein Peptid ausgewählt aus der Gruppe umfassend EYGSFF und/oder SFFCEL (DCM, 1. loop); ARRCYND und/oder PKCCDF (DCM, 2. loop); AESDE (Chagas, 2. loop) , CYIQFF und/oder EDGECY (DCM, 2. loop) ; VRTVEDGECYIQFFSNAAVTFGTAI (Chagas, 2. loop), AFHYESQ
(Präeklampsie, 2. loop), ENTNIT und/oder AFHYESQ (humorale
Nienabstossung, maligne Hypertonie, 2. loop); FWAFGR und/oder GRAFCDV (essentielle Hypertonie, 1. loop),
ITEEAGY und/oder ERFCGI (essentielle Hypertonie, 2. loop), GRIFCD, GRAFCDV (Psariasis, 1. loop) und/oder ITTCHDVL zur Verwendung als medizinischer Wirkstoff. Bei der pulmonaren und refraktaren Hypertonie gelten zum 1. und 2. loop die Ausführungen zur essentiellen Hypertonie. Die Verwendung als therapeutischer Wirkstoff meint im Sinne der Erfindung die Anwendung des Peptids bzw. der Peptide auf dem gesamten Gebiet der Medizin, bevorzugt zur Diagnose und Therapie von Autoimmunkrankheiten.
Dem Fachmann ist bekannt, dass er aufgrund der offenbarten Peptide als Diagnose- und/oder Therapiemittel weitere funktionsanaloge Peptide generieren kann. Diese funktionsanalogen Peptide sind durch die erfindungsgemäße Lehre mit erfasst. Insbesondere ist auf die Dissertationen PNAS USA 1998, Oct . 13; 9521:12179-84, WO 99/6293 und/oder WO 02/38592 hingewiesen, die in den Offenbarungsgehalt der erfindungsgemäßen Lehre mit aufgenommen sind. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das Peptid von Autoantikörpern von Patienten mit einer der folgenden Krankheiten gebunden: dilatative Kardiomyo- pathie, Chagas" Kardiomyopathie, Myokarditis, Präeklampsie, humorale Nierenabstoßung, maligne Hypertonie, essentielle Hypertonie, refraktäre Hypertonie, pulmonare Hypertonie, Psoriasis und/oder Raynaud-Syndrom. Der Fachmann kann aus dieser Offenbarung durch Routineversuche Diagnose- und Therapieverfahren bereitstellen.
Die Erfindung betrifft auch Erkennungsmoleküle, die gegen das erfindungsgemäße Peptid gerichtet sind. Bevorzugt sind die Erkennungsmoleküle Antikörper, Antisense-Konstrukte und/oder ein Chelatoren. Die erfindungsgemäßen Erkennungsmoleküle können Antikörper sein, die gegen Autoantikörper gerichtet sind, die insbesondere folgende Krankheiten induzieren: die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis und/oder das Raynaud-Syndrom.
Die Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammen- setzung, die die Peptide und/oder die Erkennungsmoleküle gegebenenfalls mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann insbesondere als Arzneimittel eingesetzt werden. Hierzu ist es beispielsweise möglich, die Peptide durch Zyklisierung oder andere dem Fachmann bekannte Verfahren so zu modifizieren, dass sie durch körpereigene peptidabbauende Strukturen, wie zum Beispiel nicht zerstört werden können. Durch Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide oder Erkennungsmoleküle ist es möglich, die Autoantikδrper in oder ex vivo bzw. in vitro zu neutralisieren. Eine in-vitro Neutralisation ist beispielsweise bei der Untersuchung von Autoimmunerkrankungen in Gewebe- oder Zellkulturen vorteilhaft . Bei einer in vivo Neutralisation werden die Arzneimittel dem Patienten direkt verabreicht, bei einer ex vivo Neutralisation wird beispielsweise das Blut über eine Schleife - zum Beispiel in Form eines Schlauch-Kreislaufes - aus dem Körper geleitet, folgend mit dem Arzneimittel in Kontakt gebracht und nach der erfolgten Neutralisation der Autoantikörper wieder in den Organismus, insbesondere dem humanen Patienten, zurückgeführt. Im Sinne der Erfindung gelten als Arzneimittel sowohl solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die für die therapeutischen und prophylaktischen Zwecke verwendet werden als auch solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die als Diagnosti- kum eingesetzt werden können.
Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die vorliegend synonym verwendet werden, sind erfindungsgemäß Stoffe und Zubereitungen aus Stoffen, die dazu bestimmt sind, durch Anwendung am oder im menschlichen Körper Krankheiten, Leiden, Körperschäden oder krankhafte Beschwerden zu heilen, zu lindern oder zu verhüten. Medizinische Hilfsstoffe sind erfindungsgemäß solche Stoffe, die zur Produktion als aktive Ingredienzien von Arzneimitteln eingesetzt werden. Pharmazeutisch-technische Hilfsstoffe dienen der geeigneten Formulierung des Arzneimittels oder der pharmazeutischen Zusammensetzung und können sogar, sofern sie nur während des Herstellungsverfahrens benötigt werden, anschließend entfernt werden oder können als pharmazeutisch verträgliche Träger Teil der pharmazeutischen Zusammensetzung sein. Die Arzneimittelformulierung oder Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzung erfolgt gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Verdünnungsmittel . Beispiele für geeignete pharmazeutisch verträgliche Träger sind dem Fachmann bekannt und umfassen zum Beispiel Phosphat- gepufferte Kochsalzlösungen, Wasser, Emulsionen wie zum Beispiel Öl/Wasser-Emulsionen, verschiedene Arten von De- tergenzien, sterile Lösungen etc., Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die solche Träger umfassen, können mittels bekannter konventioneller Methoden formuliert werden. Diese Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen können einem Individuum in einer geeigneten Dosis verabreicht werden, beispielsweise in einem Bereich von 1 μg bis 10 g an Peptiden pro Tag und Patient. Bevorzugt werden dabei Dosen von 1 mg bis 1 g. Bevorzugt wird eine Verabreichung von möglichst wenigen und niedrigen Dosen und weiter bevorzugt eine einmalige Dosis . Die Verabreichung kann auf verschiedenen Wegen erfolgen, beispielsweise intravenös, intraperitoneal, intrarektal, intra- gastrointestinal, intranodal, intramuskulär, lokal, aber auch subkutan, intradermal oder auf der Haut oder über die Schleimhäute. Die Verabreichung von Nukleinsäuren, die für das erfindungsgemäße Peptid codieren, kann auch in Form von Gen-Therapien geschehen, beispielsweise über virale Vektoren. Die Art der Dosierung und des Nerabreichungsweges kann vom behandelnden Arzt entsprechend den klinischen Faktoren bestimmt werden. Es ist dem Fachmann bekannt, dass die Art der Dosierung von verschiedenen Faktoren abhängig ist, wie zum Beispiel der Größe, der Körperoberfläche, dem Alter, dem Geschlecht oder der allgemeinen Gesundheit des Patienten, aber auch von dem speziellen Mittel, welches verabreicht wird, der Dauer und Art der Verabreichung und von anderen Medikamenten, die möglicherweise parallel verabreicht werden. Der Fachmann kann sich hierbei an den üblichen Standardwerten sowie an speziellen Lehren orientieren, zum Beispiel an der Lehre der EP 1 085 955, die in den Offenbarungsgehalt der Erfindung mit aufgenommen ist . Weiterhin ist dem Fachmann bekannt, dass er die Konzentration der Autoantikδrper mit den erfindungsgemäßen Peptiden zunächst diagnostizieren kann, um die notwendige Konzentration des Arzneimittels zu bestimmen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder das Arzneimittel umfassen insbesondere eine pharmakologische Substanz, die ein oder mehrere erfindungsgemäße Peptide oder Erkennungsmoleküle oder/und diese codierende Nukleinsäuremole- küle in einer geeigneten Lösung oder Verabreichungsform enthält. Diese können entweder alleine mit den entsprechenden unter Arzneimitteln oder pharmazeutischen Zusammensetzungen beschriebenen Hilfsstoffen oder in Kombination mit einem oder mehreren Adjuvantien, beispielsweise QS-21, GPI-OlOO oder andere Saponine, Wasser-Öl Emulsionen wie beispielsweise Montanide, Adjuvantien, Polylysin, Poly- argininverbindungen, DNA-Verbindungen wie beispielsweise CpG, Detox, bakterielle Vakzine wie beispielsweise Thyphus- vakzine oder BCG-Vakzine, Salze wie beispielsweise Kalzium- phosphate und/oder einem anderen geeigneten Stoff zur Wirkungsverstärkung verabreicht werden; vorzugsweise immun- stimulatorische Moleküle, wie Interleukine, beispielsweise IL-2, IL-12, IL-4 und/oder Wachstumsfaktoren, beispielsweise GM-CSF. Diese werden in bekannten Methoden mit den erfindungsgemäßen Peptiden oder Erkennungsmolekülen ge- mischt und in einer geeigneten Formulierung und Dosierung verabreicht. Formulierungen, Dosierungen und geeignete Komponenten sind dem Fachmann bekannt.
Die pharmazeutische Zusammensetzung oder das Arzneimittel können selbstverständlich auch eine Kombination von zwei oder mehreren der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Arzneimittel sein, sowie eine Kombination mit anderen Arzneimitteln, wie beispielsweise Antikörpertherapien, Chemotherapien oder Radiotherapien, die auf eine geeignete Weise zeitlich gemeinsam oder getrennt verabreicht bzw. angewandt werden. Die Herstellung der Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden.
Die Erfindung betrifft auch einen Kit, der das erfindungsgemäße Peptid, die erfindungsgemäßen Erkennungsmoleküle und/oder die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung umfasst, gegebenenfalls mit einer Anweisung zum Kombinieren der Inhalte des Kits und/oder zum Bereitstellen einer Formulierung für einen Empfänger und einem Algorithmus der Gabe der Formulierung, das heißt in welcher Dosis oder in welchen Zeitintervallen einem Patienten einzelne Bestandteile des Kits verabreicht werden. Der Empfänger im Sinne der Erfindung kann jedoch auch eine Zelle oder ein Gewebe in vivo, ex vivo oder in vitro sein. Bei der Information kann es sich beispielsweise um einen Beipackzettel, aber auch um eine Information handeln, die der Anwender fernmündlich oder über Internet abrufen kann. Der Algorithmus der Gabe der Formulierung beinhaltet insbesondere eine Anleitung zum diagnostischen und/oder thera- peutischen Verfahren zur Behandlung eines Patienten. Hierbei kann es sich um einstufige als auch mehrstufige Nerfahren handeln, als auch um solche, die in Ab- oder Anwesenheit eines Arztes durchgeführt werden. Das heißt, das TherapieSchema bzw. die Information über dieses sind bevorzugt ein Bestandteil des Kits .
Die Erfindung betrifft auch eine Vorrichtung zur Chromatographie, die die erfindungsgemäßen Peptide umfasst.
In einer bevorzugten Ausführungsform sind die Peptide innerhalb des Chromatographiesystems beispielsweise an einer Festphase gebunden.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann insbesondere dazu verwendet werden, die Autoantikörper aus Flüssigkeiten eines Patienten zu eliminieren bzw. die Autoantikörper zu neutralisieren. Dieses Verfahren ist dem Fachmann unter dem Begriff der Immunadsorption oder Apheresetherapie bekannt . Mit Hilfe der Immunadsorption werden Immunglobuline aus dem Blut des Patienten entfernt. Vorteilhafterweise kann diese Immunadsorptionsbehandlung stationär und ambulant durchgeführt werden. Es kann vorgesehen sein, dass die Vorrichtung, insbesondere der so genannte Adsorber, Bestandteil eines extrakorporalen Blutkreislaufes ist. Hierbei wird dem Patienten aus einem größeren Körpergefäß, insbesondere einer Armvene, kontinuierlich bzw. diskontinuierlich Blut entnommen und mittels Filtration oder Zentrifugation in einzelne Bestandteile, wie beispielsweise die zellulären und die humoralen Bestandteile, separiert. Ein wesentlicher Bestandteil des Blutes, das hierdurch gewonnen wird, ist insbesondere Blutplasma. Das Blutplasma kann vorteilhafterweise durch die erfindungsgemäße Vorrichtung geleitet und nach Adsorption der Autoantikörper zusammen mit den zuvor separierten Blutbestandteilen, insbesondere den zellulären Bestandteilen, dem Patienten zurückgegeben werden, ins- besondere durch eine andere Arm- bzw. Beinvene. Es kann weiterhin vorgesehen sein, dass die Peptide an einer Sepharose-Matrix immobilisiert sind. Diese Matrix kann in einen Behälter gegeben werden, der ein Volumen von 10 bis 400 ml aufweist. Das Blutplasma des Patienten kann dann über diese Matrix geleitet werden, wobei die Autoantikörper binden und so aus dem Blutplasma eliminiert werden können. Dem Fachmann sind verschiedene Möglichkeiten bekannt, derartige festphasenfixierte Peptide bereitzustellen, beispielsweise in Form von (i) regenerationsfähigen Adsorp- tionssäulen, in Form von (ii) Doppelsäulen als auch in Form von (iii) Einmalsäulen. Die verschiedenen Spül- und Elutionslδsungen, die eine hohe Effizienz der Behandlung ermöglichen, können durch den Fachmann problemlos durch Routineversuche ermittelt werden. Durch die Bereitstellung der erfindungsgemäßen Lehre, insbesondere der erfindungs- gemäßen Peptide, sind dem Fachmann verschiedene Möglichkeiten offenbart, diese in vivo, ex vivo und in vitro, zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie als auch zur Nachbehandlung der dilatativen Kardiomyopathie, der Chagas" Kardio- myopathie, der Myokarditis, der Präeklampsie, der humoralen Nierenabstoßung, der malignen Hypertonie, der essentiellen Hypertonie, der refraktaren Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie, der Psoriasis und/oder des Raynaud-Syndroms einzusetzen. Dem Fachmann sind weitere Ausgestaltungen aus der WO 02/38592, der EP 1 214, 350 und der WO 99/56126 bekannt, die in den Offenbarungsgehalt der erfindungsgemäßen Lehre mit aufgenommen sind.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide, der erfindungsgemäßen pharmazeuti- sehen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits und/oder der erfindungsgemäßen Vorrichtung zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie, Verlaufskontrolle und/oder Nachbehandlung von Autoimmunkrankheiten ausgewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardio- myopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis und/oder das Raynaud-Syndrom.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungs- gemäßen Peptide, der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits und/oder der erfindungsgemäßen Vorrichtung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten aus- gewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis und/oder das Raynaud-Syndrom. Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungs- gemäßen Peptide, der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits und/oder der erfindungsgemäßen Vorrichtung zum Screenen von Arznei- mittein. Das Screenen von Arzneimitteln kann beispielsweise die Identifizierung von Substanzen, insbesondere Peptiden, Proteinen, Kohlenhydraten und/oder Lipiden umfassen, die mit den Peptiden wechselwirken. Eine Wechselwirkung kann beispielsweise eine Bindung an diese Peptide sein oder aber auch eine Aktivierung bzw. Inhibierung von oder durch die genannten Peptide . Ein Arzneimittel könnte demgemäß beispielsweise eine Struktur sein, die im Körper eines Patienten an die Peptide, und dementsprechend an die entsprechenden Loops bindet und so mit den dort vor- kommenden Autoantikörpern um eine Bindungsstelle konkurriert. Durch die Offenbarung der erfindungsgemäßen Lehre, insbesondere über die Offenbarung des Zusammenhangs von Krankheit und dem Bindungsort der Autoantikörper, kann der
Fachmann verschiedene Arzneimittel screenen. Das Screenen von Arzneimitteln aufgrund von offenbarten Targets gehört zum allgemeinen Wissen des Fachmanns und erfolgt durch Routineversuche, es sei auf die entsprechenden Standardwerke der Molekularbiologie und Pharmakologie verwiesen.
Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Behandlung einer Autoimmunkrankheit ausgewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis, das Raynaud-Syndrom durch eine Bindung und/oder Entfernung von Autoantikörpern mittels von an eine Festphase gebundenen erfindungsgemäßen Peptiden. Durch die an die Festphase gebundenen Peptide werden die Autoantikörper gebunden, komplexiert und/oder an der Festphase neutralisiert.
In einer besonderen Ausführungsform des Behandlungsverfahrens ist bevorzugt, dass die Autoantikörper bei der dilatativen Kardiomyopathie gegen Betal-adrenerge Rezep- toren, bei der Chagas" Kardiomyopathie gegen Betal- adrenerge Rezeptoren, bei der Myokarditis gegen Betal- adrenerge Rezeptoren, bei der dilatativen Kardiomyopathie gegen muskarinerge M2 -Rezeptoren, bei der Chagas" Kardiomyopathie gegen muskarinerge M2 -Rezeptoren, bei der Präeklampsie gegen Angiotensin II ATI-Rezeptoren, bei der humoralen Nierenabstoßung gegen Angiotensin II AT1- Rezeptoren, bei der malignen Hypertonie gegen Angiotensin II ATI-Rezeptoren, bei der essentiellen Hypertonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der refraktaren Hypertonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der pulmonaren Hypertonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der Psoriasis gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, die Autoantikörper bei dem Raynaud-Syndrom gegen Endothelin IA, PAR-1 und/oder PAR-2 gerichtet sind.
Im Folgenden soll die Erfindung anhand eines Beispiels näher erläutert werden, ohne auf dieses Beispiel beschränkt zu sein. Beispiel
Bestimmung von Angiotensin II-AT-L-Rezeptor-Autoantikörpern
Spontan schlagende, kultivierte Kardiomyozyten neugeborener Ratten sind ein sehr nützliches Modell für die Untersuchung der Wirkung von Autoantikörpern.
Über Forschungen an ßj^-Adrenorezeptor-Autoantikörpern wurde bereits von Wallukat et al . , 2001, berichtet. Dieser Bericht handelt von Angiotensin II-ATx-Rezeptor-Autoanti- körpern bei präeklamptischen Frauen. Präeklampsie ist eine Störung, die sich durch eine Zunahme des Blutdrucks zu erkennen gibt, der zum Tod von Mutter und Fötus führen kann. Dechend et al . , 2000, waren in der Lage, die Manifestation agonistischer Antikörper gegen Angiotensin ATx-Rezeptoren aufzuzeigen, die bei präeklamptischen Frauen häufig auftreten. Mit der Aktivierung des AT^Rezeptors durch agonistische Autoantikörper ließen sich viele der pathophysiologischen Merkmale der Präeklampsie erklären. Die Befunde von Wallukat et al . , 1999, zeigen, dass Immunglobulin-Fraktionen und affinitätsgereinigte Antikörper von präeklamptischen Frauen den AT^Rezeptor von kultivierten Kardiomyozyten stimulieren können. Durch Zu- gäbe von Losartan (1 μM) verringern sich die Schläge pro Minute. Durch Neutralisationsexperimente konnte gezeigt werden, dass die IgG-Unterklasse 3 für die Zunahme der Schlagfrequenz verantwortlich ist. Gemäß diesen Befunden wurde ein enzymgekoppelter Immuntest zur Bestimmung von Angiotensin II-ATj^-Rezeptor-Autoanti- körpern (Anti-ATj^-AAB) entwickelt.
Erstens: Peptid-Lösungen, entsprechend der Aminosäuresequenz der zweiten Schleife des menschlichen A^-Rezeptors (Sm 1986/1, 100 μg/ml) , wurden mit Anti-AT-L-AAB (1:1;
Vol. /Vol.) 1 Stunde lang bei 4 °C inkubiert. Anti-AT-L-AABs wurden hergestellt durch Ammoniumsulfat-Fällung aus Abfall- flüssigkeiten bei der Geburt (Blut und isotonische Salzlösung) . Diese Proben waren stärker konzentriert als Rein- serumproben.
Zweitens: Diese Mischung wurde mit gewaschenen Streptavidin-beschichteten magnetischen Teilchen 1 Stunde lang bei 4 °C inkubiert .
Drittens : Zur Abtrennung der IgG/Peptid-Mischung wurden die magnetischen Teilchen dreimal mit Waschpuffer gewaschen (20 M Kaliumphosphat-Puffer, 0,15 M NaCl, pH 7,5). Das Abtrennen oder Waschen kann ohne weiteres mit einem Magnet- onzentrationsapparat (Dynal) durchgeführt werden. Unspezifische Bindungsstellen wurden mit 1 % Rinderserumalbumin in Waschpuffer blockiert.
Viertens: Die magnetischen Teilchen wurden mit einer Lösung von Meerettichperoxidase-markierten Antikörpern gegen menschliches IgG3 inkubiert (1:200, 1 Stunde, Raumtemperatur) . Fünftens: Die Teilchen wurden mit einer standardisierten gebrauchsfertigen Lösung von TMB (Tetramethylbenzidin) 30 min lang bei Raumtemperatur im Dunkeln behandelt. Die Farbreaktionen (blau-grün) wurden mit 0,1 N HC1 gestoppt (gelb-orange) . Die optischen Dichten wurden in einem Mikroplatten-Lesegerät (Anthos HTII) bei 492 nm (Bezugsfilter 620 nm) gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefasst .
Das gleiche Peptid des menschlichen AT^Rezeptors (Sm 1986/1) wurde zur Reinigung von Anti-AT-L-AABs verwendet. IgG-Lösungen wurden mit Peptid-Lösung (100 μg/ml, 1:1; Vol . /Vol . ) gemischt und eine Stunde lang bei 4 °C inkubiert . Die dreimal gewaschenen, Streptavidin-beschich- teten magnetischen Teilchen wurden zugegeben (300 μl) . Die Teilchen wurden mit dem Magnet-Konzentrationsapparat eingesammelt . Die Überstände wurden vorsichtig abgetrennt und in Eis gelagert. Die magnetischen Teilchen wurden dreimal gewaschen und mit 3 M Kaiiumthiocyanat-Lösung 15 min lang bei Raumtemperatur eluiert . Nach magnetischer Aufkonzentrierung wurden die Lösungen vorsichtig abgetrennt und zusammen mit dem ersten Überstand gegen NaCl (0,9 %) in Phosphat-gepufferter Lösung dialysiert. Nach 5-maligem Austausch innerhalb von 3 Tagen wurde der Proteingehalt anhand der optischen Dichte bestimmt (280 nm) . Die chronotrope Wirkung von Überstand und Eluat auf primäre kultivierte Kardiomyozyten neugeborener Ratten (Bioassay) wurde mit einem bildgebenden Computersystem (IMAGOQANT) aufgezeichnet . Tabelle 2 zeigt die Reproduzierbarkeit des Reinigungsverfahrens. Sechs der sechs gereinigten zeigten die Zunahme der Schlagfrequenz/min (>24,4). Mit Überstand behandelte Kulturen bewirkten dagegen keine oder nur mäßige Änderungen der Schlagfrequenz (<10,0) .
Das Verfahren der Coimmunpräzipitation des A^-Rezeptors war ähnlich der Methode des (Wallukat, 2001) . Die Unterschiede sind: es wurden lysierte Membranen transfizierter CHO-Zellen (Couchon, 1997) für die Coimmunpräzipitation verwendet . Die lysierten Membranen sollten frisch hergestellt werden. Die Proteine wurden identifiziert mit Hilfe eines Antikörpers gegen ein Peptid mit der Sequenz des N-terminalen Teils des AT^-Rezeptors, der in Kaninchen erzeugt worden war (N10, 1 :100, Santa Cruz) , und durch Western-Blot und ECL-System mit Anti-Kaninchen-IgG-Peroxidase-Konjugaten (1 : 10 000, Sigma) nachgewiesen.
Figur 1 zeigt die Ergebnisse des Western-Blots. Eine Bande
(Molekulargewicht >40,0 kDa) konnte mit Hilfe interner positiver Proben (lysierte Membranen transfizierter
CHO-Zellen und menschliches Plazenta-Gewebe) exakt erfasst werden. Bei früheren Experimenten (Neichel, unverδffent- lichte Daten) konnte diese Bande durch die Peptide blockiert werden, die zur Herstellung der N10-Antikörper verwendet wurden. Diese Bande fehlte in reinen Sepharose- Proben und in den Überständen der Reinigungsexperimente .
Die Ergebnisse zeigen die Nützlichkeit des bildgebenden Computersystems IMAGOQUANT beim Nachweisen der Zunahme der Schläge/min durch AT^AABs bei Patientinnen mit Präeklampsie. Der enzymgekoppelte Immuntest sollte mit Seren von Präeklampsie-Patientinnen und gesunden Spendern geprüft werden. Die gereinigten AT^AABs können zur weiteren Untersuchung der Pathogenese der Präeklampsie verwendet werden.
Tabelle 1
Messung der ATj^-Autoantikörper mit Hilfe eines enzymgekoppelten Immuntests
IgG n Optische Dichte (OD, 492 nm) Bereich
Tabelle 2
Einfluss von Überständen und Eluaten der magnetischen Teilchen auf die Schlagfrequenz kultivierter Kardiomyozyten neugeborener Ratten
+ SA vom Mittelwert
Tabelle 3
Autoantikδrper gegen G-Protein-gekoppelte Rezeptoren
Angaben zu den Epitopen und IgG Subklasse
Antikörper Erkrankung Epitop IgGS bklasse gegen Rez .
Betal-adren. dilat . Kardiomyopathie 1. loop IgG3 u. IgG4
2. loop IgGl
Betal-adren. Chagas" Kardiomyopathie 2. loop Betal-adren. Myokarditis 1. loop IgG3 u. IgG4
2. loop igGi muskarin . M2 dilat . Kardiomyopathie 2. loop igGi muscarin . M2 Chagas" Kardiomyopathie 2. loop Ang. II ATI Präeklampsie 2. loop IgG3 Ang. II ATI humorale Nierenabstoßung 2. loop IgGl u. IgG3 Ang. II ATI maligne Hypertonie 2. loop IgGl u. IgG3 Alphal-adren. essentielle Hypertonie 1. loop IgGl u. IgG3
2. loop IgG2
Alphal-adren. refraktäre Hypertonie 1. loop IgGl u. IgG3
2. loop IgG2
Alphal-adren. pulmonare Hypertonie 1. loop IgG 1 u. IgG3 Alphal- adren. Psoriasis 1. loop IgG 2
2. loop
PAR-1 u. PAR-2 Raynaud-Syndrom 2. loop IgGl Endothelin IA Legende
Figur 1: Western-Blot der Coimmunpräzipitation des Angiotensin AT^Rezeptors
Bahn 1 Protein A/Sepharose; 2 präeklamptische Patientin D. ohne Reinigung; 3 KSCN-Eluat; 4 Überstand; 5 lysierte CHO-Membranen; 6 lysiertes Plazenta-Gewebe.

Claims

Patentansprüche
1. Verfahren zur Detektion von krankheitsassoziierten Autoantikörpern, die gegen G-Protein-gekoppelte Rezeptoren gerichtet sind, dadurch gekennzeichnet, dass das Verfahren folgende Schritte umfasst : a) In-Kontakt-Bringen von Körperflüssigkeit mit einem denaturierenden Agens, b) In-Kontakt-Bringen der gefällten Fraktion mit einem Biotin umfassenden Peptid, welches eine Sequenz oder Teilsequenz eines ersten und/oder zweiten Loops des Rezeptors umfasst, wobei eine Mixtur entsteht, c) Inkubation der Mixtur mit einem Avidin oder Streptavidin-beschichteten Träger, d) Waschen der Materialien des Trägers, e) Inkubation der Träger mit anti-IgG-Antikörper- Subklassen, wobei der anti-IgG-Antikörper markiert ist und f) Durchführung einer Enzym- oder Farbreaktion.
2. Nerfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass das denaturierende Agens Ammoniumsulfat und/oder Alkohol ist .
3. Verfahren nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der Träger ein magnetisches Partikel oder eine ELISA-Platte ist.
. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2 , dadurch gekennzeichnet, dass die Autoantikörper gegen einen Betal-adrenergen-Rezep- tor, einen muskarinergen M2-Rezeptor, einen Angiotensin II ATI-Rezeptor, einen Alphal-adrenergen-Rezeptor, einen Endothelin IA-Rezeptor, einen PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtet sind.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass die gegen den Beta-1-adrenergen Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der dilatativen Kardiomyopathie, der Chagas" Kardiomyopathie und/oder der Myokarditis, die gegen den muskarinergen M2-Rezeptor mit der dilatativen Kardiomyopathie gerichteten Autoantikörper und/oder der Chagas" Kardiomyopathie, die gegen den Angiotensin II ATI-Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der Präeklampsie, der humoralen Nierenabstoßung und/oder der malignen Hypertonie, die gegen den Alphal- adrenergen-Rezeptor gerichteten Autoantikörper mit der essentiellen Hypertonie, der refraktaren Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie und/oder der Psoriasis und/oder die gegen den Endothelin IA-Rezeptor, PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichteten Autoantikörper mit dem Raynaud-Syndrom assoziiert sind.
6. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass bei der Detektion der dilatativen Kardiomyopathie, der Myokarditis, der essentiellen Hypertonie, der refraktaren Hypertonie, der pulmonaren Hypertonie und/oder der Psoriasis das Peptid eingesetzt wird, welches eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops umfasst und bei der Chagas" Kardiomyopathie, der dilatativen Kardiomyopathie, der humoralen Nierenabstoßung und/oder beim Raynaud-Syndrom das Peptid ein- gesetzt wird, das eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst.
7. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass - die mit der dilatativen Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem ersten und/oder zweiten Loop des Betal-adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden,
- die mit der Chagas" Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Betal-adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Myokarditis assoziierten Autoantikδrper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Betal-adrenergen Rezeptors in Kontakt gebracht werden,
- die mit der dilatativen Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des muskarinergen M2-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Chagas" Kardiomyopathie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des muskarinergen M2-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Präeklampsie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teil- sequenz des zweiten Loops des Angiotensin II AT1- Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der humoralen Nierenabstoßung assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Angiotensin II ATI-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der malignen Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops des Angiotensin II ATI-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der essentiellen Hypertonie assoziierten Autoantikδrper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der refraktaren Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der pul onaren Hypertonie assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden, die mit der Psoriasis assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teil- sequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Alphal-adrenergen-Rezeptors in Kontakt gebracht werden,
- die mit dem Raynaud-Syndrom assoziierten Autoantikörper mit dem Peptid umfassend eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten und/oder zweiten Loops des Endothelin IA-Rezeptor, PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 in Kontakt gebracht werden.
8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass
die IgG-Subklassen IgGl, IgG2 , IgG3 und/oder IgG4 Sub- klassen sind.
9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass
- bei der dilatativen Kardiomyopathie die IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden, wenn das
Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst, und/oder die IgGl Subklasse, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst, - bei der Chagas" Kardiomyopathie die IgGl, IgG2 , IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden,
- bei der Myokarditis die IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst und/oder die IgGl Subklasse, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst,
- bei der Präeklampsie die IgG3 Subklasse verwendet wird, - bei der humoralen Nierenabstoßung die IgGl und IgG3 Subklasse verwendet wird,
- bei der malignen Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklasse verwendet wird, bei der essentiellen Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz ■ des ersten Loops umfasst und/oder die IgG2 Subklasse verwendet wird, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst, - bei der refraktaren Hypertonie die IgGl und/oder IgG3 Subklassen verwendet werden, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des ersten Loops umfasst und/oder die IgG2 Subklasse verwendet wird, wenn das Peptid eine Sequenz oder Teilsequenz des zweiten Loops umfasst,
- bei der pulmonaren Hypertonie die IgGl, IgG2 , IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden,
- bei der Psoriasis die IgGl, IgG2, IgG3 und/oder IgG4 Subklassen verwendet werden und/oder - bei dem Raynaud-Syndrom die IgGl Subklasse verwendet wird.
10. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Autoantikörper vor dem Nachweis aufkonzentriert oder gereinigt werden.
11. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Aufkonzentration oder Reinigung der Autoantikörper die folgenden Schritte umfasst: a) Gewinnung einer IgG-Fraktion aus Körperflüssigkeit, b) In-Kontakt-Bringen der gewonnenen IgG-Fraktion mit einem Peptid, welches eine Teilsequenz eines ersten oder zweiten Loops eines G-Protein-gekoppelten Rezeptors umfasst, wobei eine Mixtur gewonnen wird, c) Inkubation der Mixtur mit einem Träger, der gewaschen und konzentriert wird und d) Eluieren der Autoantikörper von dem aufkonzentrierten Träger.
12. Nerfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid, welches die Sequenz oder Teilsequenzen des ersten und/oder zweiten Loops umfasst, ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend EYGSFF, SFFCEL, ARRCYND, PKCCDF, AESDE, CYIQFF, EDGECY, NRTVEDGECYIQFFSNAANTFGTAI, AFHYESQ, EΝTΝIT, FWAFGR, GRAFCDN, ITEEAGY, ERFCGI, GRIFCD und/oder ITTCHDVL.
13. Nerfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid Aminogruppen, Amide, Acetylgruppen, Biotin- gruppen, Marker, Spacer, Linker, GKK und/oder SGKK umfasst .
4. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass der Linker und/oder der Spacer ausgewählt sind aus der Gruppe umfassend α-Aminocarbonsäuren sowie deren Homo- und Heterooligomere; et, ω-Aminocarbonsäuren sowie deren verzweigte Homo- oder Heterooligomere; sonstige Aminosäuren sowie die linearen und verzweigten Homo- oder Heterooligomere; Amino-oligoalkoxy-alkylamine;
Maleinimidocarbonsäure-Derivate; Oligomere von Alkyl- aminen; 4-Alkylphenyl-Derivate; 4-Oligoalkoxyphenyl- oder 4-Oligoalkoxyphenoxy-Derivate; 4-Oligoalkyl- mercaptophenyl- oder 4-Oligoalkylmercaptophenoxy- Derivate; 4-Oligoalkylaminphenyl- oder 4-Oligoalkyl- aminyphenoxy-Derivate; (Oligoalkylbenzyl) -phenyl- oder 4-Oligoalkylbenzyl) -phenoxy-Derivate sowie 4-Oligo- alkoxybenzyl) -phenyl- oder 4-Oligoalkoxybenzyl) - phenoxy-Derivate; Trityl-Derivate; Benzyloxyaryl- oder Benzyloxyalkyl-Derivate; Xanthen-3-yl-oxyalkyl- Derivate; (4-Alkylphenyl) - oder ω- (4-Alkylphenoxy) - alkansäure-Derivate; Oligoalkyl-Phenoxyalkyl- oder Oligoalkoxy-phenoxyalkyl-Derivate; Carba at-Derivate; Amine; Trialkylsilyl- oder Dialkyl-alkoxysilyl- Derivate; Alkyl- oder Aryl-Derivate und/oder Kombinationen davon.
15. Nerfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid durch Deletion, Addition, Substitution, Translokation, Inversion und/oder Insertion modifiziert ist.
16. Peptid ausgewählt aus der Gruppe umfassend EYGSFF, SFFCEL, ARRCYND, PKCCDF, AESDE, CYIQFF, EDGECY, VRTVEDGECYIQFFSNAAVTFGTAI, AFHYESQ, ENTNIT, FWAFGR, GRAFCDV, ITEEAGY, ERFCGI, GRIFCD und ITTCHDVL . zur Verwendung als medizinischer Wirkstoff.
17. Peptid nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid von Autoantikörpern von Patienten mit einer der folgenden Krankheiten gebunden wird: dilatative Kardiomyopathie, Chagas" Kardiomyopathie, Myokarditis, Präeklampsie, humorale Nierenabstoßung, maligne Hypertonie, essentielle Hypertonie, refraktäre Hypertonie, pulmonare Hypertonie, Psoriasis und/oder Raynaud-Syndrom.
18. Peptid nach Anspruch 15 oder 16, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid immobilisiert ist.
19. Peptid nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid an eine Festphase gebunden ist.
20. Erkennungsmolekül gerichtet gegen das Peptid gemäß einem der Ansprüche 16 bis 19.
21. Erkennungsmolekül nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass es ein Antikörper, ein Lektin, ein Antisense-Konstrukt und/oder ein Chelator ist .
22. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 16 bis 19 und/oder ein
Erkennungsmolekül nach Anspruch 20 oder 21.
23. Kit, umfassend ein Peptid nach einem der Ansprüche 16 bis 19, ein Erkennungsmolekül nach Anspruch 20 oder 21 und/oder eine pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 22, gegebenenfalls mit einer Anweisung zum Kombinieren der Inhalte des Kits und/oder zum Bereitstellen einer Formulierung.
24. Chromatographievorrichtung, umfassend Peptide gemäß einem der Ansprüche 16 bis 19 und/oder Erkennungsmoleküle nach Anspruch 20 oder 21.
25. Vorrichtung nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Peptide an eine Festphase gebunden sind.
26. Verwendung der Peptide nach einem der Ansprüche 16 bis 19 und/oder Erkennungsmoleküle nach Anspruch 20 oder 21 und/oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 22 und/oder eines Kits nach Anspruch 23 und/oder einer Vorrichtung nach Anspruch 24 bis 25 zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie, Verlaufskontrolle und/oder Nachbehandlung von Autoimmunkrankheiten aus- gewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokardi- tis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis und/oder das Raynaud-Syndrom.
27. Verwendung der Peptide nach einem der Ansprüche 16 bis 19 und/oder Erkennungsmoleküle nach Anspruch 20 oder 21 und/oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 22 und/oder eines Kits nach Anspruch 23 und/oder einer Vorrichtung nach Anspruch 24 bis 25 zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten ausgewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis und/oder das Raynaud-Syndrom.
28. Verwendung der Peptide nach einem der Ansprüche 16 bis 19 und/oder Erkennungsmoleküle nach Anspruch 20 oder 21 und/oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 22 und/oder eines Kits nach Anspruch 23 und/oder einer Vorrichtung nach Anspruch 24 bis 25 zum Screenen von Arzneimitteln.
29. Verwendung der Peptide nach einem der Ansprüche 16 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass gegen Betal-adrenergen-Rezeptor, muskarinergen M2-Rezeptor, Angeotensin II ATI-Rezeptor, Alphal- adrenergen-Rezeptor, Endothelin IA, PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtete Autoantikörper detektiert, gebunden, komplexiert und/oder neutralisiert werden.
30. Verfahren zur Behandlung einer Autoimmunkrankheit, ausgewählt aus der Gruppe umfassend die dilatative Kardiomyopathie, die Chagas" Kardiomyopathie, die Myokarditis, die Präeklampsie, die humorale Nierenabstoßung, die maligne Hypertonie, die essentielle Hypertonie, die refraktäre Hypertonie, die pulmonare Hypertonie, die Psoriasis, das Raynaud-Syndrom durch eine Bindung und/oder Entfernung von Autoantikörpern mittels von an eine Festphase gebundenen Peptiden nach einem der Ansprüche 16 bis 19.
31. Verfahren nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass die Autoantikδrper bei der dilatativen Kardiomyopathie gegen Betal-adrenerge Rezeptoren, bei der Chagas" Kardiomyopathie gegen Beta-1-adrenerge Rezeptoren, bei der Myokarditis gegen Beta-1-adrenerge Rezeptoren, bei der dilatativen Kardiomyopathie gegen muskarinerge M2-Rezeptoren, bei der Chagas" Kardiomyopathie gegen muskarinerge M2-Rezeptoren, bei der Präeklampsie gegen Angiotensin II ATI-Rezeptoren, bei der humoralen Nierenabstoßung gegen Angiotensin II ATI-Rezeptoren, bei der malignen Hypertonie gegen Angiotensin II ATI-Rezeptoren, bei der essentiellen Hypertonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der refraktaren Hyper- tonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der pul- monaren Hypertonie gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, bei der Psoriasis gegen Alphal-adrenerge-Rezeptoren, die Autoantikörper bei dem Raynaud-Syndrom gegen Endothelin IA, PAR-1, PAR 2 und/oder PAR-3 gerichtet sind.
EP03788849A 2002-11-29 2003-11-28 Bestimmung agonistischer autoantikörper Ceased EP1570272A2 (de)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07075708A EP1890150A1 (de) 2002-11-29 2003-11-28 Bestimmung agonistischer, mit der humoralen Nierenabstossung assoziierten Autoantikörper

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10256897 2002-11-29
DE10256897 2002-11-29
DE10303120 2003-01-27
DE10303120 2003-01-27
DE10327066 2003-06-13
DE10327066A DE10327066A1 (de) 2002-11-29 2003-06-13 Bestimmung agonistischer Autoantikörper
PCT/DE2003/003988 WO2004051280A2 (de) 2002-11-29 2003-11-28 Bestimmung agonistischer autoantikörper

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP07075708A Division EP1890150A1 (de) 2002-11-29 2003-11-28 Bestimmung agonistischer, mit der humoralen Nierenabstossung assoziierten Autoantikörper

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP1570272A2 true EP1570272A2 (de) 2005-09-07

Family

ID=32474857

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP03788849A Ceased EP1570272A2 (de) 2002-11-29 2003-11-28 Bestimmung agonistischer autoantikörper

Country Status (4)

Country Link
US (1) US7741050B2 (de)
EP (1) EP1570272A2 (de)
AU (1) AU2003293004A1 (de)
WO (1) WO2004051280A2 (de)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10123929A1 (de) * 2001-05-11 2002-11-21 Celltrend Gmbh Verfahren zur Vorhersage eines Transplantatabstoßungsrisikos und immunologischer Testkit
US8440609B2 (en) * 2003-01-31 2013-05-14 Gerd Wallukat Peptides against autoantibodies causing intolerance to cold and use thereof
EP1832600A1 (de) * 2006-03-09 2007-09-12 Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin Peptide gegen Autoantikörper verbunden mit Glaukom und deren Verwendung
ES2336350T3 (es) 2006-08-04 2010-04-12 Celltrend Gmbh Procedimiento para el diagnostico de una enfermedad que implica un anticuerpo antirreceptor at1.
EP1884776A1 (de) * 2006-08-04 2008-02-06 Celltrend GmbH Verfahren zur diagnose einer krankheit, die auf der gegenwart des anti-endothelin-antikörpers beruht
WO2008151847A1 (en) * 2007-06-13 2008-12-18 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin Autoantibody binding peptides and their use for the treatment of vascular diseases
US20100255606A1 (en) * 2007-10-05 2010-10-07 Nobuhiko Sato Labeled peptide having activity of binding to immunoglobulin and/or immunoglobulin complex and method of detecting or assaying immunoglobulin by using the peptide
EP2080519A1 (de) 2008-01-15 2009-07-22 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Peptide mit Bindungsaffinität an einen Antikörper, der ein Epitop in einer Alpha1-Schleife2 oder einer Beta2-Schleife 1 eines Adrenorezeptors erkennt
EP2199305A1 (de) * 2008-12-18 2010-06-23 Max-Delbrück-Centrum Peptide gegen Autoantikörper, die mit CRPS assoziiert sind, und Verwendung dieser Peptide
TWI546122B (zh) * 2011-02-25 2016-08-21 東麗股份有限公司 血液成分吸附用載體及血液成分吸附管柱
WO2015117956A1 (en) * 2014-02-04 2015-08-13 Celltrend Gmbh Diagnosis of cancer by detecting auto-antibodies against par1
CN109467599B (zh) * 2017-09-08 2021-06-04 武汉华纪元生物技术开发有限公司 短肽atr001以及由短肽制备具有偏向性调节at1r功能的单克隆抗体和应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8102178A (nl) * 1981-05-02 1982-12-01 Stichting Centraal Lab Werkwijze voor het aantonen van tegen bepaalde antigenen gerichte antistoffen, alsmede inrichting en reagentia voor het uitvoeren van deze werkwijze.
DE19826442A1 (de) * 1998-06-02 1999-12-09 Affina Immuntechnik Gmbh Rational designte Peptide, ihre Herstellung und ihre Verwendung
WO2000039154A2 (de) 1998-12-24 2000-07-06 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin Peptide des at1-rezeptors und ihre verwendung bei präeklampsie und maligner hypertonie
JP2003514772A (ja) * 1999-09-21 2003-04-22 アフィーナ イミュンテヒニク ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｄｃｍを引き起こす自己抗体に対するペプチド
JP4541490B2 (ja) * 2000-04-07 2010-09-08 株式会社カネカ 拡張型心筋症用吸着体
DE10041560A1 (de) 2000-08-24 2002-03-07 Max Delbrueck Centrum Peptide des alpha1-adrenergen Rezeptors und ihre Verwendung bei Psoriasis
DE10123929A1 (de) 2001-05-11 2002-11-21 Celltrend Gmbh Verfahren zur Vorhersage eines Transplantatabstoßungsrisikos und immunologischer Testkit
US8440609B2 (en) * 2003-01-31 2013-05-14 Gerd Wallukat Peptides against autoantibodies causing intolerance to cold and use thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
See references of WO2004051280A3 *

Also Published As

Publication number Publication date
US7741050B2 (en) 2010-06-22
WO2004051280A3 (de) 2005-01-06
WO2004051280A2 (de) 2004-06-17
US20060263835A1 (en) 2006-11-23
AU2003293004A1 (en) 2004-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE3686927T2 (de) Neovaskularisierungsinhibitoren und deren herstellung.
EP1163004B1 (de) Immunadsorber zur sepsistherapie
DE4228389C2 (de) Gewinnung und Kultivierung transformierter Zellen
EP1214350B1 (de) Peptide gegen dcm hervorrufende autoantikörper
EP1570272A2 (de) Bestimmung agonistischer autoantikörper
DE69733467T2 (de) Adsorbtionsvorrichtung und absorbens für immunuglobine und deren komplexe
EP0124896B1 (de) Verfahren zur Gewinnung von Viren bzw. Virusantigenen und deren Anwendung in Diagnose und Therapie (Impfstoff)
WO2004067549A2 (de) Peptide gegen kälteunverträglichkeit hervorrufende autoantikörper und ihre verwendung
DE4221836A1 (de) Das biochemisch aufgereinigte Mistel-Lektin (ML-1) als therapeutisch anwendbarer Immunmodulator
JPS62187500A (ja) 新規蛋白質及びその使用
DE3785664T2 (de) Pertussis-toxin-polypeptid und seine applikationen.
JPS62501841A (ja) Ｅｂｚｄ蛋白質
DE3650035T2 (de) THF-Zusammensetzungen.
EP1890150A1 (de) Bestimmung agonistischer, mit der humoralen Nierenabstossung assoziierten Autoantikörper
CN101897961A (zh) B细胞cd22胞外抑制性肽段b2285疫苗的制备
EP2164513A2 (de) Peptide zur behandlung von systemischem lupus erythematodes und verfahren zur behandlung von systemischem lupus erythematodes
CN109369784A (zh) PaTx-1毒素及其应用
DE4029227A1 (de) Arzneimittel enthaltend cd14
WO2001081423A1 (de) Antikörper gegen natives gp96, deren herstellung und verwendung
DE10311106B4 (de) Peptide gegen Kälteunverträglichkeit hervorrufende Autoantikörper, dafür kodierende Nukleinsäuren, ihre Verwendung und diese umfassende pharmazeutische Zusammensetzungen
RU2198893C2 (ru) Пептидные фрагменты основного белка миелина, фармацевтические композиции на их основе и применение данных композиций для лечения рассеянного склероза
DE3633797C2 (de) Verfahren zur Gewinnung von biologisch aktiven Eiweissen (Peptiden) aus menschlichem und tierischem Blut (bzw. anderen Körperflüssigkeiten)
DE102004024674A1 (de) Mittel und Verfahren zur Diagnose, Prophylaxe und Therapie von Bindegewebserkrankungen
Di Cerbo et al. Characterization of insulin autoantibodies in a patient with autoimmune hypoglycemia
EP1950222A1 (de) Verfahren zum Nachweis von Antikörpern aus Körperflüssigkeiten durch eine Immunreaktion mit Glykoprotein 2 (GP2) aus zymogenen Granula des Pankreas zur Differentialdiagnose von entzündlichen Darmerkrankungen und chronischer Pankreatitis

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20050622

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HU IE IT LI LU MC NL PT RO SE SI SK TR

AX Request for extension of the european patent

Extension state: AL LT LV MK

DAX Request for extension of the european patent (deleted)
RIC1 Information provided on ipc code assigned before grant

Ipc: A61K 39/395 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: A61K 38/17 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: A61K 38/04 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: C07K 16/28 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: C07K 7/08 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: C07K 7/04 20060101ALI20070109BHEP

Ipc: G01N 33/564 20060101AFI20040622BHEP

17Q First examination report despatched

Effective date: 20071213

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION HAS BEEN REFUSED

18R Application refused

Effective date: 20100709