DE10311106B4

DE10311106B4 - Peptide gegen Kälteunverträglichkeit hervorrufende Autoantikörper, dafür kodierende Nukleinsäuren, ihre Verwendung und diese umfassende pharmazeutische Zusammensetzungen

Info

Publication number: DE10311106B4
Application number: DE10311106A
Authority: DE
Inventors: Gerd Dr. Wallukat; Thomas Prof. Harrer
Original assignee: Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Current assignee: Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Priority date: 2003-01-31
Filing date: 2003-03-06
Publication date: 2011-05-05
Anticipated expiration: 2023-03-07
Also published as: DE10311106A1

Abstract

Isoliertes Nukleinsäuremolekül ausgewählt aus der Gruppe umfassend:
a) ein Nukleinsäuremolekül bestehend aus einer Nukleotidsequenz, die für ein Peptid codiert, das aus folgenden Aminosäuresequenzen besteht: ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD,
b) ein Nukleinsäuremolekül, welches zu einer Nukleotidsequenz gemäß a) komplementär ist,
c) ein Nukleinsäuremolekül, welches mit einer Nukleotidsequenz gemäß a) oder b) unter stringenten Bedingungen hybridisiert,
d) ein Nukleinsäuremolekül, das infolge des genetischen Codes zu einer Nukleotidsequenz gemäß a) bis c) degeneriert ist.

Description

Die Erfindung betrifft Nucleinsäuremoleküle, die für Peptide codieren, die mit Autoantikörper wechselwirken, die mit der Kälteallergie assoziiert sind, die Peptide selbst, eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend die Nucleinsäuremoleküle und die Peptide sowie die Verwendung der Peptide – insbesondere in der Apherese – zur Behandlung von mit Kälteexpositionen bzw. Kälteunverträglichkeit in Zusammenhang stehenden Durchblutungsstörungen, besonders von Kälteallergien, gemäß den Patentansprüchen.
Mehrzellige Organismen, insbesondere Säugetiere, und vor allem der Mensch, setzen sich mit ihrer Umwelt über verschiedene biochemische und/oder immunologische Regelmechanismen auseinander. Ein wichtiger biochemischer Regelmechanismus ist beispielsweise der, der für das Konstanthalten einer bestimmten inneren Temperatur im Organismus verantwortlich ist. Ein weiterer wichtiger Regelmechanismus stellt zelluläre und humorale Substanzen, wie zum Beispiel Antikörper, zur Verfügung, die dem Organismus die Möglichkeit geben, sich mit Mikroorganismen, Parasiten, aber auch Tumoren bzw. andere Erkrankungen erfolgreich auseinander zu setzen. Die Funktion der Antikörper beruht vor allem darauf, dass diese ”fremd” und ”selbst” unterscheiden können. Das heißt, der Organismus produziert selbst Antikörper, die so ausgebildet sind, dass sie körpereigene Strukturen, wie Gewebe oder Organe, nicht attackieren, aber an Bakterien, Parasiten oder andere körperfremde Bestandteile binden und so immunologische Reaktionen initiieren bzw. unterstützen.
Bei der biochemischen Entstehung der Antikörperantwort im Organismus kommt es zu somatischen Hypermutationen von Antikörper produzierenden B-Zellen während einer T-Zellen-abhängigen Immunantwort. Diese Mutationen betreffen selektiv die Immunglobulingene und sind wesentlich für die Bildung von Vorläuferzellen für Antikörper bildende Zellen mit hoher Affinität. In diesem Zusammenhang handelt es sich bei der Mutation um einen normalen und im wesentlichen nicht pathogeneii Vorgang. Mutationen können aber auch zur Bildung von hochaffinen Autoantikörpern führen und somit den Organismus schädigen.
Autoantikörper sind mit der Ausprägung von Autoimmunkrankheiten eng assoziiert oder für diese ursächlich verantwortlich. Autoimmunkrankheiten sind Allergiekrankheiten, bei denen Autoantikörper und/oder Autoimmunzellen detektiert werden können, wobei derzeit nicht bekannt ist, wie es zur Entstehung der Autoimmunkrankheiten kommt und ob die Autoantikörper die alleinige Ursache, ein Ergebnis oder nur eine Begleiterscheinung der Erkrankung sind. Bei zahlreichen Autoimmunkrankheiten, wie zum Beispiel der Kälteallergie, ist jedoch bekannt, dass Autoantikörper für das Entstehungsbild der Erkrankung verantwortlich sind.
Auch Krankheiten wie Rheuma oder Lupus erythematodes werden zu den Antikörper vermittelten Autoimmunkrankheiten gezählt. Zahlreiche – und für die Betroffenen sehr nachteilige Autoimmunkrankheiten –, betreffen wichtige biochemische Kreisläufe im Organismus, beispielsweise die Wärmeregulation. Das heißt, durch das Auftreten von Autoantikörpern kommt es zu örtlichen oder allgemeinen Schädigungen des Wärmehaushaltes des Organismus, was zu Erfrierungen, zur Kälteunverträglichkeit, zur kältebedingten Endothelschädigung, zur Quellung, zur Thrombenbildung, Nervendegeneration bzw. zu Muskel-, Fettgewebs-, und/oder Knochennekrosen führen kann. Zahlreichen dieser Erkrankungen ist gemeinsam, dass es zu Durchblutungsstörungen an Körperenden, wie beispielsweise den Füßen, den Händen oder auch den Ohren bzw. sekundären Geschlechtsmerkmalen kommt. Beispiele für derartige Erkrankungen sind die Akrozyanose, die Kältehämagglutinationskrankheit, das Hyperviskositätssyndrom, das Ischämiesyndrom, die Akrotrophoneurose, die Sklerodermie, das Kälteerythem, die Kältepurpura, die Kälteurtikaria, die Kryopathie, die Kryoglobulinämie und besonders die Kälteallergie und insbesondere das Raynaud-Syndrom. Derartige Krankheiten treten mit hoher Häufigkeit in der Bevölkerung auf. Allein das Raynaud-Syndrom tritt bei 3 bis 16% der Bevölkerung auf, wobei Frauen 5 bis 10-mal häufiger davon betroffen sind als Männer. Die ersten Symptome beginnen sich typischerweise im Alter von 14 bis 40 Jahren bemerkbar zu machen, wobei Männer in späteren Lebensabschnitten betroffen sind. Das Fehlen einer effektiven Therapie ist unter anderem auch deshalb nachteilig, da bereits das Hineinfassen in einen Kühlschrank oder in eine Tiefkühltruhe, ein Griff an ein kaltes Lenkrad oder auch Händewaschen mit kaltem Wasser ausreicht, um beispielsweise eine solche Durchblutungsstörung, insbesondere das Raynaud-Syndrom, auszulösen. In vielen derartigen Lebensabläufen ist es den handelnden Personen nur bedingt möglich, die Kälte zu meiden.
Bei dem Raynaud-Syndrom ist die Blutversorgung der Gliedmaßen, meistens der Finger und der Zehen, aber manchmal auch der Ohren und der Nase, vorübergehend unterbrochen.
Während eines Anfalls werden die betroffenen Gliedmaßen zuerst weiß, und werden optisch in der Regel als bereits abgestorben wahrgenommen, dann werden sie blau und schließlich rot, verbunden mit einem brennenden Gefühl. Diese Autoimmunreaktion ist von beträchtlichem Schmerz und wird von Taubheitsgefühl und Kribbeln begleitet. Eine effektive und sichere Diagnose oder Therapie kann für diese Kälteassoziierten pathogenen Veränderungen derzeit für die Betroffenen nur sehr bedingt angeboten werden. Im Allgemeinen wird den betroffenen Personen empfohlen, Kälteexpositionen der Extremitäten zu vermeiden bzw. ein sofortiges Aufwärmen einzuleiten, sofern Vasospasmen bereits eingetreten sind. Weiterhin ist es möglich, durch lokales Aufsprühen von Glyceroltrinitrat einige Phänomene der Krankheit zu behandeln. Zum Teil wurden auch Erfolge durch die Gabe von Calciumantagonisten berichtet. Als ultima ratio wird das Ausschalten von Ganglien durch Sympathektomie empfohlen. Diese gezielte Nervendurchtrennung führt dazu, dass der Patient vorübergehend zumindest für einige Monate oder auch Jahre beschwerdefrei ist. Seit kurzem ist es möglich, mit einem bestimmten Rotlicht-Laser das Raynaud-Syndrom positiv zu beeinflussen. Nachteilig ist jedoch, dass aus Kapazitätsgründen ein routinemäßiger Einsatz dieser neuen Therapiemethode nicht möglich ist.
In der WO 03/049723 A2 sind pharmazeutische Zusammensetzungen offenbart, die zur Behandlung von sogenannten verzögerten Hypersensibilitäts-Erkrankungen verwendet werden können. Aus dieser Druckschrift ist auch eine Sequenz No. 1 mit der Aminosäureposition 223–233 bekannt, welche aus den PAR-2-Protein abgeleitet ist. Die in der WO 03/049723 A2 offenbarten Strukturen gestatten es aber nicht, Mittel zur Behandlung von Durchblutungsstörungen bereitzustellen, die effektiv und sicher eingesetzt werden können.
In CELL, 1991, 64, 1057–1068 wird eine Peptidsequenz offenbart, die die Sequenzen ITTCHDVL und LNITTCHD enthält. Erfindungsgemäß werden demgegenüber Peptide für bestimmte Verwendungen beansprucht, die die Nachteile der Moleküle gemäß CELL (1991) nicht aufweisen.
Aufgabe der Erfindung war es daher, Verbindungen bereitzustellen, mit denen die mit Kälte assoziierten Durchblutungsstörungen, insbesondere das Raynaud-Syndrom, einfach, sicher und effektiv diagnostiziert und therapiert werden können.
Die Erfindung löst dieses technische Problem durch die Bereitstellung eines isolierten Nucleinsäuremoleküls – und der durch dieses codierten Peptides – ausgewählt aus der Gruppe umfassend

a) ein Nucleinsäuremolekül bestehend eine Nucleotidsequenz, die für Peptid codiert, das aus folgenden Aminosäuresequenzen besteht: ITTCHDVL, ITTCHDAL oder LNITTCHD,
b) ein Nucleinsäuremolekül, welches zu einer Nucleotidsequenz gemäß a) komplementär ist,
c) ein Nucleinsäuremolekül, welches mit einer Nucleotidsequenz gemäß a) oder b) unter stringenten Bedingungen hybridisiert,
d) ein Nucleinsäuremolekül, das infolge des genetisches Codes zu einer Nucleotidsequenz gemäß a) bis c) degeneriert ist.

Die Erfindung betrifft demgemäß die überraschende Lehre, dass die erfindungsgemäßen Nucleinsäuremoleküle sowie die sie codierenden Peptide bei Missfunktionen der Wärmeregulation und von Durchblutungsstörungen, insbesondere von kleinen Blutgefäßen, die vor allem Hände, Füße, Ohren, Wangen, Nase und Brustwarzen mit Blut versorgen, zur Diagnose und Therapie eingesetzt werden können. Insbesondere die von den Nucleinsäuremolekülen codierenden biologischen Strukturen – bevorzugt Peptide – sind in der Prophylaxe, Diagnose, Therapie, Verlaufskontrolle und/oder Nachbehandlung von Durchblutungsstörungen, insbesondere der Kälteallergie und besonders bevorzugt dem Raynaud-Syndrom, in verschiedenen Formen einsetzbar.
In einer vorteilhaften Ausführungsform der Erfindung weist das Nukleinsäuremolekül mindestens 60%, vorzugsweise 70%, bevorzugt 80%, ganz besonders bevorzugt 90%, Homologie zu einem Nukleinsäuremolekül gemäß den Punkten a) bis c) auf.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Nukleinsäuremolekül eine genomische DNA, eine cDNA und/oder eine RNA.
Die Erfindung betrifft auch einen Vektor umfassend ein erfindungsgemäßes Nucleinsäuremolekül und weiterhin auch eine Wirtszelle, die den Vektor umfasst.
Die Erfindung betrifft bevorzugt auch ein Peptid, das durch ein erfindungsgemäßes Nucleinsäuremolekül codiert wird. Das erfindungsgemäße Peptid kann überraschenderweise bei der Diagnose und/oder Therapie von mit Kälteunverträglichkeit im Zusammenhang stehenden Erkrankungen eingesetzt werden. Die erfindungsgemäßen Peptide werden insbesondere von Autoantikörpern von Patienten gebunden, die an der Akrozyanose, der Kältehämagglutinationskrankheit, dem Hyperviskositätssyndrom, dem Ischämiesyndrom, der Akrotrophoneurose, der Sklerodermie, dem Kälteerythem, der Kältepurpura, der Kälteurtikaria, der Kryopathie und/oder der Kryoglobulinämie, insbesondere der Kälteallergie und besonders bevorzugt dem Raynaud-Syndrom, erkrankt sind.
Das heißt, die Erfindung betrifft sämtliche Peptide, die durch die erfindungsgemäßen Nucleinsäuremoleküle, bevorzugt die, die mindestens 60%, vorzugsweise 70%, bevorzugt 80% und ganz besonders bevorzugt 90% Homologie zu einem Nucleinsäuremolekül gemäß der Punkte a) bis c) aufweisen.
Im Stand der Technik sind verschiedene Möglichkeiten zur Herstellung von Peptiden offenbart. Peptide, die von den erfindungsgemäßen Peptiden ausgehend mit solchen Verfahren designt werden, sind von der erfindungemäßen Lehre mit erfasst. Eine Möglichkeit des Generierens von funktionsanalogen Peptiden ist beispielsweise in PNAS USA 1998, Oct. 13; 9521: 12179–84, WO 99/6293 und/oder WO 02/38592 beschrieben; diese Lehren sind in den Offenbarungsgehalt der Erfindung mit aufgenommen. Das heißt, sämtliche Peptide, Peptidfragmente oder Strukturen, die Peptide umfassen, die mit den genannten Verfahren – von den erfindungsgemäßen Peptiden ausgehend – generiert wurden, sind Peptide im Sinne der Erfindung, sofern sie die erfindungsgemäße Aufgabe lösen, insbesondere mit den krankheitsverursachenden Autoantikörpern Wechselwirken. Bei diesen Autoantikörpern kann es sich beispielsweise um agonistische Autoantikörper handeln, die Rezeptoren aktivieren. Im Folgenden sind bevorzugte dieser Rezeptoren beschrieben.
Die Peptidsequenzen können beispielsweise ein natürlicher Bestandteil der zweiten extrazellulären Schleife des Thrombin-Rezeptors (PAR-1), dem Trypsin- und Tryptase-Rezeptor (PAR-2) und/oder des Thrombin-Rezeptors bzw. Rezeptor unbekannter Proteasen (PAR-3) sein. Überraschenderweise wechselwirken die Autoantikörper spezifisch mit dem zweiten extrazellulären Loop bzw. der Schleife des jeweiligen Protease-aktivierten Rezeptors (PAR). Die Erfindung betrifft demgemäß auch die überraschende Lehre, dass das Hauptepitop der Autoantikörper, die mit Kälte-induzierten Krankheiten assoziiert sind, insbesondere der Kälteallergie und besonders bevorzugt dem Raynaud-Syndrom, Peptide mit der Aminosäuresequenz ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD sind. Diese Sequenz ist auf dem PAR-1 und PAR-2 vorzugsweise völlig identisch. Bei PAR-3 ist das nahe dem C-terminalen Ende gelegene Valin (V) durch Alanin (A) ersetzt. Bei den Autoantikörpern kann es sich demgemäß um Antikörper handeln, die als agonistische Autoantikörper fungieren, d. h. diese Autoantikörper sind in der Lage, durch die Bindung an die entsprechenden Rezeptoren diese zu aktivieren. Durch diese Aktivierung des Rezeptors können verschiedene Krankheiten bzw. pathogene Veränderungen induziert und/oder begleitet werden. Beispielsweise ist es möglich, dass durch die Aktivierung der Rezeptoren die Produktion von Messenger-Molekülen moduliert wird. Es ist jedoch auch möglich, dass die Autoantikörper die Rezeptoren der Zellen schädigen, die für eine im Wesentlichen normale Durchblutung der Gliedmaßen verantwortlich sind. Im Gegensatz zu der Wirkung der agonistischen Autoantikörper steht bei nicht-agonistischen Autoantikörpern die üblicherweise bei Antikörpern beobachtete Funktion des Attackierens und Schädigens durch chronische Beanspruchung des entsprechenden Targets im Vordergrund; dies schließt jedoch eine Aktivierung oder Deaktivierung der Rezeptoren nicht aus.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung umfasst das Peptid zusätzlich Aminogruppen, Acetylgruppen, Biotingruppen, Spacer und/oder Linker.
Vorteilhafterweise ist es möglich, das Peptid durch derartige Strukturen in verschiedenen Bereichen der Diagnose und Therapie von Autoimmunkrankheiten einzusetzen. Dem Fachmann sind verschiedene Möglichkeiten bekannt, Peptide für verschiedene Verwendungen zu modifizieren. Wenn beispielsweise vorgesehen ist, die Peptide als Arzneimittel, beispielsweise oral zu geben, sind bestimmte Veränderungen an der Struktur der Peptide vorzunehmen, die dem Fachmann bekannt sind. Es ist jedoch auch möglich, dass die Peptide an das Trägermaterial von Affinitätssäulen gebunden werden, um zur Reinigung von Körperflüssigkeiten, insbesondere von Blut, verwendet zu werden, die Bindung der Peptide an eine Matrix erfordert bestimmte strukturelle Modifikationen der erfindungsgemäßen Peptide, die dem Fachmann ebenfalls bekannt oder durch Routineversuche zu ermitteln sind.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform weist das Peptid die AminosäureSequenz X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10 auf, wobei
XI = Aminogruppe, Acetylgruppe, Biotingruppe, Spacer, Linker, GKK, SGKK oder Deletion,
X2 = I, L, V, A,
X3 = T, N, D, R
X4 = T, I, L, A,
X5 = C, T, A, S,
X6 = H, T, S, A,
X7 = D, C, G, E,
X8 = V, H, A, L,
X9 = L, D, Y, F,
X10 = Aminogruppe, Acetylgruppe, Biotingruppe, Spacer, Linker, GKK, SGKK oder eine Deletion ist.
Dem Fachmann ist bekannt, dass einzelne Aminosäuren analoge physikochemische Eigenschaften aufweisen, die mit Vorteil dazu führen, dass diese Aminosäuren untereinander ausgetauscht werden können. Hierzu gehören beispielsweise die Gruppe der Aminosäuren (a) Glycin, Alanin, Valin, Leuccin und/oder Isoleucin; bzw. die Aminosäuren (b) Serin und Threonin, die Aminosäuren (c) Asparagin und Glutamin, die Aminosäuren (d) Asparaginsäure und Glutaminsäure; die Aminosäuren (e) Lysin und Arginin sowie die Gruppe der aromatischen Aminosäuren (f) Phenylalanin, Tyrosin und/oder Tryptophan. Aminosäuren innerhalb ein und derselben Gruppe (a–f) können untereinander ausgetauscht werden. Weiterhin ist es möglich, dass Aminosäuren durch modifizierte Aminosäuren oder spezifische Enantiomere ausgetauscht werden. Weitere Modifikationen sind gemäß der Lehre nach der WO99/62933 oder WO02/38592 möglich.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform umfasst das Peptid einen Linker und/oder einen Spacer, der ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend: Maleinimidocarbonsäure-Derivate; 4-Alkylphenyl-Derivate; Trityl-Derivate; Benzyloxyaryl- oder Benzyloxyalkyl-Derivate; Xanthen-3-yl-oxyalkyl-Derivate; (4-Alkylphenyl)- oder ω-(4-Alkylphenoxy)-alkansäure-Derivate; Carbamat-Derivate; Amine; Trialkyl-silyl- oder Dialkyl-alkoxysilyl-Derivate.
Nach einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Peptid ausgewählt aus der Gruppe umfassend ein Peptid umfassend die Aminosäuresequenz ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD.
In einer besonderen Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Peptid dessen Aminosäuresequenzen mindestens 60%, vorzugsweise 70%, bevorzugt 80%, ganz besonders bevorzugt 90%, homolog zu einer der folgenden Aminosäuresequenzen: ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD.
In einer ganz besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung, besteht das Peptid im Wesentlichen aus der Aminosäuresequenz ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD. Insbesondere besteht das Peptid aus Abwandlungen dieser Sequenzen, die nach der WO99/62933 und der WO02/38592 gewonnen wurden, wobei diese Peptide selbstverständlich Autoantikörper im Sinne der Erfindung binden.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das Peptid als therapeutischer Wirkstoff eingesetzt oder verwendet. Die Verwendung als therapeutischer Wirkstoff meint im Sinne der Erfindung die Anwendung des Peptides auf dem gesamten Gebiet der Medizin.
In einer weiteren besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung wird das Peptid von spezifischen Antikörpern von Patienten mit einer Kälteallergie gebunden, insbesondere von Autoantikörpern. Bei einem definierten, dem Fachmann bekannten Mengenverhältnis von Peptid und Autoantikörper kommt es zur Ausbildung von Autoantikörper-Peptid-Komplexen, die beispielsweise ausfallen, oder spezifisches Reaktionsverhalten dergestalt zeigen, dass sie zur Eliminierung der Autoantikörper genutzt werden können.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist insbesondere das Peptid immobilisiert. Im Sinne der Erfindung werden unter Immobilisierung verschiedene Verfahren und Techniken zum Fixieren der Peptide auf bestimmten Trägern beispielsweise gemäß der WO99/56126 oder der WO02/26292 verstanden. Die Immobilisierung kann beispielsweise der Stabilisierung der Peptide dienen, wodurch diese insbesondere bei Lagerung oder bei einmaligem Batch-Ansatz durch biologische, chemische oder physikalische Einwirkungen in ihrer Aktivität nicht reduziert oder nachteilig modifiziert werden. Durch die Immobilisierung der Peptide ist ein wiederholter Einsatz unter technischen oder klinischen Routine-Bedingungen möglich; weiterhin kann eine Probe – bevorzugt Blutbestandteile – mit mindestens einem der erfindungsgemäßen Peptide kontinuierlich umgesetzt werden. Dies kann insbesondere durch verschiedene Immobilisierungstechniken erreicht werden, wobei die Bindung der Peptide an andere Peptide oder Moleküle bzw. an einen Träger so erfolgt, dass die dreidimensionale Struktur, insbesondere an dem Zentrum, das die Wechselwirkung mit den Autoantikörpern vermittelt, der entsprechenden Moleküle, insbesondere der Peptide, nicht verändert wird. Vorteilhafterweise geht die Spezifität zu den Autoantikörpern der Patienten durch die Immobilisierung nicht verloren. Im Sinne der Erfindung können drei grundsätzliche Methoden zur Immobilisierung verwendet werden:

(i) Quervernetzung: Bei der Quervernetzung werden die Peptide miteinander fixiert, ohne dass ihre Aktivität nachteilig beeinflusst wird. Sie sind vorteilhafterweise durch die Quervernetzung nicht mehr löslich.
(ii) Bindung an einen Träger: Die Bindung an einen Träger erfolgt zum Beispiel durch Adsorption, Ionenbindung oder kovalente Bindung. Dies kann auch innerhalb von mikrobiellen Zellen bzw. Liposomen oder anderen membranhaltigen geschlossenen bzw. offenen Strukturen erfolgen. Die Peptide werden durch die Fixierung vorteilhafterweise nicht in ihrer Aktivität beeinflusst. Die Peptide können mit Vorteil zum Beispiel in der Klinik in Diagnose oder Therapie trägergebunden mehrfach oder kontinuierlich eingesetzt werden.
(iii) Einschluss: Der Einschluss erfolgt im Sinne der Erfindung insbesondere an eine semipermeable Membran in Form von Gelen, Fibrillen oder Fasern. Gekapselte Peptide sind durch eine semipermeable Membran so durch die umgebende Probenlösung getrennt, dass sie vorteilhafterweise noch mit den Autoantikörpern oder mit Fragmenten dieser interagieren können. Für die Immobilisierung stehen verschiedene Verfahren zur Verfügung, wie beispielsweise die Adsorption an einen inerten oder elektrisch geladenen anorganischen oder organischen Träger. Solche Träger können beispielsweise poröse Gele, Aluminiumoxid, Betonid, Agarose, Stärke, Nylon oder Polyacrylamid sein. Die Immobilisierung erfolgt hierbei durch physikalische Bindungskräfte, oft unter Beteiligung von hydrophoben Wechselwirkungen und ionischen Bindungen. Derartige Methoden sind vorteilhafterweise einfach zu handhaben und sie beeinflussen die Konformation der Peptide nur in geringem Umfang. Durch elektrostatische Bindungskräfte zwischen den geladenen Gruppen der Peptide und dem Träger kann die Bindung vorteilhafterweise verbessert werden, zum Beispiel durch die Verwendung von Ionenaustauschern, insbesondere Sephadex.

Ein weiteres Verfahren ist die kovalente Bindung an Trägermaterialien. Die Träger können dazu reaktive Gruppen aufweisen, die mit Aminosäure-Seitenketten homöopolare Bindungen eingehen. Geeignete Gruppen in Peptiden sind Carboxy-, Hydroxy- und Sulfidgruppen und insbesondere die endständigen Aminogruppen von Lysinen. Aromatische Gruppen bieten die Möglichkeit für Diazo-Kopplungen. Die Oberfläche von mikroskopischen porösen Glaspartikeln kann durch Behandlung mit Silanen aktiviert und anschließend mit Peptiden umgesetzt werden. Hydroxy-Gruppen natürlicher Polymere können zum Beispiel mit Bromzyan aktiviert und anschließend mit Peptiden gekoppelt werden. Mit Polyacrylamid-Harzen können zahlreiche Peptide vorteilhafterweise direkte kovalente Bindungen eingehen. Bei dem Einschluss in dreidimensionale Netzwerke werden die Peptide in ionotrophe Gele oder andere dem Fachmann bekannte Strukturen eingeschlossen. Die Poren der Matrix sind insbesondere so beschaffen, dass die Peptide zurückgehalten werden und eine Interaktion mit den Ziel-Molekülen möglich ist. Bei der Quervernetzung werden die Peptide durch Vernetzung mit bifunktionellen Agenzien in polymere Aggregate umgewandelt. Derartige Strukturen sind gelatinös und leicht verformbar und insbesondere für den Einsatz in verschiedenen Reaktoren geeignet. Durch Zugabe anderer inaktiver Komponenten, wie zum Beispiel Gelatine, bei der Vernetzung können die mechanischen und Bindungseigenschaften vorteilhafterweise verbessert werden. Bei der Mikroverkapselung wird der Reaktionsraum der Peptide mit Hilfe von Membranen eingegrenzt. Die Mikroverkapselung kann zum Beispiel als Grenzflächen-Polymerisation durchgeführt werden. Durch die Immobilisierung bei der Mikroverkapselung werden die Peptide unlöslich und dadurch wieder verwendbar. Im Sinne der Erfindung sind immobilisierte Peptide alle Peptide, die sich in einem Zustand befinden, der ihre Wiederverwendung erlaubt. Die Einschränkung der Beweglichkeit und der Löslichkeit der Peptide auf chemischem, biologischem oder physikalischem Wege führt vorteilhafterweise zu niedrigen Verfahrenskosten, insbesondere bei der Eliminierung von Autoantikörpern aus Blutbestandteilen.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist das Peptid an eine Festphase gebunden. Die Bindung des Peptides an die Festphase kann über einen Spacer erfolgen. Als Spacer können alle chemischen Verbindungen eingesetzt werden, die für die Funktion des Spacers die geeigneten strukturellen und funktionellen Voraussetzungen aufweisen, solange sie nicht das Bindeverhalten derart modifizieren, dass eine Bindung des Autoantikörpers mit dem Peptid nachteilhafterweise beeinträchtigt wird.
Die Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung, die die erfindungsgemäßen Nucleinsäuremoleküle, die Vektoren, die Wirtszellen und/oder die Peptide gegebenenfalls mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann insbesondere als Arzneimittel eingesetzt werden. Hierzu ist es beispielsweise möglich, die Peptide durch Zyklisierung oder andere dem Fachmann bekannte Verfahren so zu modifizieren, dass sie durch körpereigene peptidabbauende Strukturen, wie zum Beispiel Serumproteasen, nicht zerstört werden können. Durch Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide ist es möglich, die Autoantikörper in oder ex vivo zu neutralisieren. Bei einer in vivo Neutralisation werden die Arzneimittel dem Patienten direkt verabreicht, bei einer ex vivo Neutralisation wird beispielsweise das Blut über eine Schleife – zum Beispiel in Form eines Schlauch-Kreislaufes – aus dem Körper geleitet, folgend mit dem Arzneimittel in Kontakt gebracht und nach der erfolgten Neutralisation der Autoantikörper wieder in den Organismus, insbesondere dem Patienten, zurückgeführt. Im Sinne der Erfindung gelten als Arzneimittel sowohl solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die für die therapeutischen und prophylaktischen Zwecke verwendet werden als auch solche pharmazeutischen Zusammensetzungen, die als Diagnostikum eingesetzt werden können. Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die vorliegend synonym verwendet werden, sind erfindungsgemäß Stoffe und Zubereitungen aus Stoffen, die dazu bestimmt sind durch Anwendung am oder im menschlichen Körper Krankheiten, Leiden, Körperschäden oder krankhafte Beschwerden zu heilen, zu lindern oder zu verhüten. Medizinische Hilfsstoffe sind erfindungsgemäß solche Stoffe, die zur Produktion als aktive Ingredienzien von Arzneimitteln eingesetzt werden. Pharmazeutisch-technische Hilfsstoffe dienen der geeigneten Formulierung des Arzneimittels oder der pharmazeutischen Zusammensetzung und können sogar, sofern sie nur während des Herstellungsverfahrens benötigt werden, anschließend entfernt werden oder können als pharmazeutisch verträgliche Träger Teil der pharmazeutischen Zusammensetzung sein. Beispiele für pharmazeutisch verträgliche Träger sind nachstehend aufgeführt. Die Arzneimittelformulierung oder Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzung erfolgt gegebenenfalls in Kombination mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Verdünnungsmittel. Beispiele für geeignete pharmazeutisch verträgliche Träger sind dem Fachmann bekannt und umfassen zum Beispiel Phosphat-gepufferte Kochsalzlösungen, Wasser, Emulsionen wie zum Beispiel Öl/Wasser-Emulsionen, verschiedene Arten von Detergenzien, sterile Lösungen, etc. Arzneimittel oder pharmazeutische Zusammensetzungen, die solche Träger umfassen, können mittels bekannter konventioneller Methoden formuliert werden. Diese Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen können einem Individuum in einer geeigneten Dosis verabreicht werden, beispielsweise in einem Bereich von 1 μg bis 10 g an Peptiden pro Tag und Patient. Bevorzugt werden dabei Dosen von 1 mg bis 1 g. Bevorzugt wird eine Verabreichung von möglichst wenigen und niedrigen Dosen und weiter bevorzugt eine einmalige Dosis. Die Verabreichung kann auf verschiedenen Wegen erfolgen, beispielsweise intravenös, intraperitoneal, intrarektal, intragastrointestinal, intranodal, intramuskulär, lokal, beispielsweise in den Tumor, aber auch subkutan, intradermal oder auf der Haut oder über die Schleimhäute. Die Verabreichung von Nukleinsäuren, die für das erfindungsgemäße Peptid codieren, kann auch in Form von Gen-Therapie geschehen, beispielsweise über virale Vektoren. Die Art der Dosierung und des Verabreichungsweges kann vom behandelnden Arzt entsprechend den klinischen Faktoren bestimmt werden. Es ist dem Fachmann bekannt, dass die Art der Dosierung von verschiedenen Faktoren abhängig ist, wie zum Beispiel der Größe, der Körperoberfläche, dem Alter, dem Geschlecht oder der allgemeinen Gesundheit des Patienten, – aber auch von dem speziellen Mittel, welches verabreicht wird, der Dauer und Art der Verabreichung und von anderen Medikamenten, die möglicherweise parallel verabreicht werden. Weiterhin ist dem Fachmann bekannt, dass er die Konzentration der Autoantikörper mit den erfindungsgemäßen Peptiden zunächst diagnostizieren kann, um die notwendige Konzentration des Arzneimittels zu bestimmen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen oder das Arzneimittel umfassen insbesondere eine pharmakologische Substanz, die ein oder mehrere erfindungsgemäße Peptide oder/und diese codierende Nukleinsäuremoleküle in einer geeigneten Lösung oder Verabreichungsform enthält. Diese können entweder alleine mit den entsprechenden unter Arzneimitteln oder pharmazeutischen Zusammensetzungen beschriebenen Hilfsstoffen oder in Kombination mit einem oder mehreren Adjuvantien, beispielsweise QS-21, GPI-0100 oder andere Saponine, Wasser-Öl Emulsionen wie beispielsweise Montanide, Adjuvantien, Polylysin, Polyargininverbindungen, DNA-Verbindungen wie beispielsweise CpG, Detox, bakterielle Vakzine wie beispielsweise Thyphusvakzine oder BCG-Vakzine, Salze wie beispielsweise Kalziumphosphate und/oder einem anderen geeigneten Stoff zur Wirkungsverstärkung verabreicht werden; vorzugsweise immunstimulatorische Moleküle, wie Interleukine, beispielsweise IL-2, IL-12, IL-4 und/oder Wachstumsfaktoren, beispielsweise GM-CSF. Diese werden in bekannten Methoden mit den erfindungsgemäßen Peptiden gemischt und in einer geeigneten Formulierung und Dosierung verabreicht. Formulierungen, Dosierungen und geeignete Komponenten sind dem Fachmann bekannt.
Die pharmazeutische Zusammensetzung oder das Arzneimittel kann selbstverständlich auch eine Kombination von zwei oder mehreren der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen oder Arzneimittel sein, sowie eine Kombination mit anderen Arzneimitteln, wie beispielsweise Antikörpertherapien, Chemotherapien oder Radiotherapien, die auf eine geeignete Weise zeitlich gemeinsam oder getrennt verabreicht bzw. angewandt werden. Die Herstellung der Arzneimittel oder pharmazeutischen Zusammensetzungen erfolgt nach an sich bekannten Methoden.
Die Erfindung betrifft auch einen Kit umfassend das Nucleinsäuremolekül, den Vektor, die Wirtszelle und/oder das Peptid, gegebenenfalls mit einer Anleitung oder Information zur pharmazeutischen Bereitstellung bzw. zum therapeutischen Behandlungsverfahren. Die Information kann beispielsweise ein Beipackzettel sein oder ein anderes Medium, was dem Anwender Informationen darüber gibt, in welchem therapeutischen Verfahren die genannten Substanzen einzusetzen sind. Der Beipackzettel enthält insbesondere detaillierte und/oder wesentliche Informationen über das Heilverfahren. Selbstverständlich ist es nicht zwingend erforderlich, dass die Information einen. Beipackzettel darstellt, es ist möglich, dass diese Information beispielsweise über das Internet mitgeteilt wird.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide zur Herstellung einer Vorrichtung zur Chromatographie.
In einer bevorzugten Ausführungsform sind die Peptide innerhalb des Chromatographiesystems an eine Festphase gebunden. Die Vorrichtung kann insbesondere dazu verwendet werden, die Autoantikörper aus Flüssigkeiten eines Patienten zu eliminieren bzw. die Autoantikörper zu neutralisieren. Dieses Verfahren ist dem Fachmann unter dem Begriff der Immunadsorption und der Apheresetherapie bekannt. Mit Hilfe der Immunadsorption werden Immunglobuline aus dem Blut des Patienten entfernt. Vorteilhafterweise kann diese Immunadsorptionsbehandlung stationär und ambulant durchgeführt werden. Es kann vorgesehen sein, dass die Vorrichtung, insbesondere der so genannte Adsorber, Bestandteil eines extrakorporalen Blutkreislaufes ist. Hierbei wird dem Patienten aus einem größeren Körpergefäß, insbesondere einer Armvene, kontinuierlich bzw. diskontinuierlich Blut entnommen und mittels Filtration oder Zentrifugation in einzelne Bestandteile, wie beispielsweise die zellulären und die humoralen Bestandteile, separiert. Ein wesentlicher Bestandteil des Blutes, das hierdurch gewonnen wird, ist insbesondere Blutplasma. Das Blutplasma kann vorteilhafterweise durch die Vorrichtung geleitet und nach Adsorption der Autoantikörper zusammen mit den zuvor separierten Blutbestandteilen, insbesondere den zellulären Bestandteilen, dem Patienten zurückgegeben werden, insbesondere durch eine andere Arm- bzw. Beinvene. Es kann weiterhin vorgesehen sein, dass die Peptide an einer Sepharose-Matrix immobilisiert sind. Diese Matrix kann in einen Behälter gegeben werden, der ein Volumen von 10 bis 400 ml aufweist. Das Blutplasma des Patienten kann dann über diese Matrix geleitet werden, wobei die Autoantikörper binden und so aus dem Blutplasma eliminiert werden können. Dem Fachmann sind verschiedene Möglichkeiten bekannt, derartige festphasenfixierte Peptide bereitzustellen, beispielsweise in Form von (i) regenerationsfähigen Adsorptionssäulen, in Form von (ii) Doppelsäulen als auch in Form von (iii) Einmalsäulen. Die verschiedenen Spül- und Elutionslösungen, die eine hohe Effizienz der Behandlung ermöglichen, können durch den Fachmann problemlos durch Routineversuche ermittelt werden. Durch die Bereitstellung der erfindungsgemäßen Lehre, insbesondere der erfindungsgemäßen Peptide, sind dem Fachmann verschiedene Möglichkeiten offenbart, diese in vivo, ex vivo und in vitro, zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie als auch zur Nachbehandlung von Kälteinduzierten, Autoantikörper-vermittelten Krankheiten einzusetzen.
Mit der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Behandlung einer Kälteallergie durch eine Bindung und/oder eine Entfernung von Autoantikörpern mittels von an eine Festphase gebundener erfindungsgemäßer Peptide, möglich.
Bevorzugt sind die Autoantikörper gegen PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtet.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungs-gemäßen Nucleinsäuremoleküle, der erfindungsgemäßen Wirts-Zeilen, des erfindungsgemäßen Vektors, der erfindungsgemäßen Peptide, der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits als auch der Vorrichtung zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie, Verlaufskontrolle und/oder Nachbehandlung von Durchblutungsstörungen.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Nucleinsäuremoleküle, der erfindungsgemäßen Wirtszellen, des erfindungsgemäßen Vektors, der erfindungsgemäßen Peptide, der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits als auch der Vorrichtung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Durchblutungsstörungen.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung sind die Durchblutungsstörungen eine Akrozyanose, eine Kältehämagglutinationskrankheit, ein Hyperviskositätssyndrom, ein Ischämiesyndrom, eine Akrotrophoneurose, eine Sklerodermie, ein Kälteerythem, eine Kältepurpura, eine Kälteurtikaria, eine Kryopathie und/oder eine Kryoglobulinämie. Eine Akrozyanose im Sinne der Erfindung ist jede Verfärbung der Akren bei allgemeiner Zyanose infolge örtlicher, venös-kapillärer vasomotorischer Störungen, die verstärkt bei Kälte und Nässe und mit Neigung zu Erfrierungen auftreten. Erfindungsgemäß ist die Akrozyanose insbesondere A. anaesthetica, A.e frigore und/oder A. juvenile. Eine Kältehämagglutinationskrankheit im Sinne der Erfindung ist eine erworbene Krankheit, die auf der Bildung von Kältehämagglutin beruht. Sie kann beispielsweise eine Hämolyse zur Folge haben, insbesondere wenn die Umgebungstemperatur auf unter 20°C fällt. Das Hyperviskositätssyndrom ist erfindungsgemäß eine Krankheit, bei der durch erhöhte Viskosität das Fließvermögen des Blutes herabgesetzt wird. Das Ischämiesyndrom wird im Sinne der Erfindung in das akrale und das intermittierende Ischämiesyndrom unterschieden. Es werden hierunter im Sinne der Erfindung alle funktionellen, organischen und gemischt-funktionell organischen Durchblutungsstörungen der Hände und Füße verstanden. Im engeren Sinne kann es sich beispielsweise auch um das Raynaud-Syndrom handeln. Die Akrotrophoneurose bedeutet die Störung der Durchblutung der Gewebsernährung an den Gliedmaßen, insbesondere an den Gliedmaßenenden. Sklerodermie im Sinne der Erfindung ist ein Oberbegriff für chronisch verlaufende Krankheiten mit bindegewebiger Verhärtung entweder umschriebener Hautareale oder bei generalisiertem Befall der Haut unter Beteiligung innerer Organe. Im Sinne der Erfindung werden zum einen die diffuse oder progressive und zirkumskripte Sklerodermie unterschieden. Das Kälteerythem ist beispielsweise ein akuter Gewebsschaden durch eine Kälteeinwirkung, insbesondere infolge von Mangeldurchblutung, aber auch infolge eines direkten thermischen Angriffs. Hierbei kann es beispielsweise zu diskontinuierlichen Nervendegenerationen, Muskel- und Fettgewebsnekrosen als auch zu Knochenschäden kommen. Die Kältepurpura ist im Sinne der Erfindung eine kleine Blutung im Bereich der Haarfollikel infolge einer Kälteeinwirkung. Unter Kälteurtikaria wird die Quaddelbildung verstanden, nachdem ein Hautareal mit einem kalten Gegenstand, mit kaltem Wasser oder mit kaltem Wind in Kontakt gekommen ist. Eine Kryopathie ist im Sinne der Erfindung eine örtliche oder ein allgemeiner Krankheitszustand nach echter Kälteschädigung bzw. eine Krankheit mit Auftreten von Kälteglobolinen, bei konstitutioneller Kälteunverträglichkeit.
Nach einer weiteren bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist die Durchblutungsstörung eine Kälteallergie.
Besonders bevorzugt ist die Kälteallergie ein Raynaud-Syndrom. Erfindungsgemäß wird zwischen dem Primär- und dem Sekundär-Raynaud-Syndrom unterschieden. Primär ist die Krankheit eine funktionelle Störung der kleinen versorgenden Gefäße der Akren ohne erkennbare Grunderkrankungen. Charakteristisch ist beispielsweise der beidseitige Befall – auch Symmetrie – der Hände bzw. der Zehen. Die Beschwerden der primären Krankheit lassen im Alter nach. Diese Krankheit kommt bei 20% der Raynaud-Patienten vor. Die sekundäre Krankheit ist häufig ein ungleicher Befall beider Hände oder Füße als Ausdruck einer anderen zugrunde liegenden Erkrankung, teils ohne organische Gefäßerkrankungen, wie zum Beispiel Nervenschädigungen, bei bestimmten Medikamenten wie zum Beispiel Migränemitteln. Häufig ist die Krankheit mit einer organischen Gefäßerkrankung, vor allem einer Gefäßentzündung im Rahmen einer Bindegewebserkrankung, einer so genannten Kollagenose, verbunden. Beim Fortschreiten der Erkrankung kann es zu Wachstumsstörungen der Nägel sowie Absterben der Fingerkuppen (verhärtendes Phänomen) kommen.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Peptide sowie Nucleinsäuren oder Wirtszellen, der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzung, des erfindungsgemäßen Kits und/oder der Vorrichtung zum Screenen von Arzneimitteln. Das Screenen von Arzneimitteln kann beispielsweise die Identifizierung von Substanzen, insbesondere Peptiden, Proteinen, Kohlenhydraten und/oder Lipiden umfassen, die mit den Peptiden und demgemäß mit den Loops, insbesondere dem zweiten Loop von PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 Wechselwirken. Eine Wechselwirkung kann beispielsweise eine Bindung an diese Peptide sein oder aber auch eine Aktivierung bzw. eine Inhibierung von oder durch Peptide. Ein Arzneimittel könnte demgemäß beispielsweise eine Struktur sein, die im Körper eines Patienten an die Peptide, und dementsprechend an die Loops bindet und so mit den Autoantikörpern um eine Bindungsstelle konkurriert. Durch die Offenbarung der erfindungsgemäßen Lehre, insbesondere über die Offenbarung des Zusammenhangs von Krankheit und dem Bindungsort der Autoantikörper, kann der Fachmann verschiedene Arzneimittel screenen. Das Screenen von Arzneimitteln aufgrund von offenbarten Targets gehört zum allgemeinen Wissen des Fachmanns und erfolgt durch Routineversuche; es sei auf die entsprechenden Standardwerke der Molekularbiologie und Pharmakologie verwiesen.
Mit der Erfindung ist auch ein Verfahren zur Behandlung einer Autoimmunkrankheit durch eine Bindung und/oder Entfernung von Autoantikörpern mittels von an eine Festphase gebundenen erfindungsgemäßen Peptiden möglich. Durch die an die Festphase gebundenen Peptide werden die Autoantikörper gebunden, komplexiert und/oder an der Festphase neutralisiert.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden mit den genannten erfindungsgemäßen Stoffen und Erzeugnissen sowie den Vorrichtungen, insbesondere der Chromatographievorrichtung und den Peptiden gegen PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtete Autoantikörper detektiert, gebunden, komplexiert und/oder neutralisiert. Beispielsweise können die Peptide dazu eingesetzt werden, mit einem ELISA oder einem anderen einem Fachmann bekannten immunologischen Detektionsverfahren, Autoantikörper in Seren von Patienten nachzuweisen. Für die Detektion kann es beispielsweise vorteilhaft sein, dass die Autoantikörper durch biotinylierte bzw. anderweitig gekoppelte Peptide gebunden und durch Streptavidin-gekoppelte Träger, wie zum Beispiel Magnetpartikel oder -platten, separiert werden. Ein solches Verfahren ist in der DE 102 56 897.9 beschrieben und in den Offenbarungsgehalt der Anmeldung mit aufgenommen. Die separierten Autoantikörper werden insbesondere durch IgG-Subtyp-spezifische markierte Antikörper detektiert. Im Falle des Raynaud-Syndroms werden die Antikörper insbesondere mit IgG₁-Subtyp-spezifischen markierten Antikörpern detektiert.

Claims

Isoliertes Nukleinsäuremolekül ausgewählt aus der Gruppe umfassend: a) ein Nukleinsäuremolekül bestehend aus einer Nukleotidsequenz, die für ein Peptid codiert, das aus folgenden Aminosäuresequenzen besteht: ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD, b) ein Nukleinsäuremolekül, welches zu einer Nukleotidsequenz gemäß a) komplementär ist, c) ein Nukleinsäuremolekül, welches mit einer Nukleotidsequenz gemäß a) oder b) unter stringenten Bedingungen hybridisiert, d) ein Nukleinsäuremolekül, das infolge des genetischen Codes zu einer Nukleotidsequenz gemäß a) bis c) degeneriert ist.
Nukleinsäuremolekül gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Nukleotidsequenz mindestens 60%, vorzugsweise 70%, bevorzugt 80%, ganz besonders bevorzugt 90% homolog zu einer der unter a) bis c) angegebenen Nukleotidsequenzen ist.
Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es eine genomische DNA, eine cDNA und/oder eine RNA ist.
Vektor umfassend ein Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3.
Wirtszelle umfassend den Vektor gemäß Anspruch 4.
Peptid, codiert durch ein Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3.
Peptid nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass es zusätzlich Aminogruppen, Acetylgruppen, Biotingruppen, Spacer und/oder Linker umfasst, wobei die Spacer und/oder Linker ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Maleinamidocarbonsäure-Derivate; 4-Alkylphenyl-Derivate; Trityl-Derivate; Benzyloxyaryl- oder Benzyloxyalkyl-Derivate; Xanthen-3-yl-oxyalkyl-Derivate; (4-Alkylphenyl)- oder ω-(4-Alkylphenoxy)-alkansäure-Derivate; Carbamat-Derivate; Amine; Trialkylsilyl- oder Dialkyl-alkoxysilyl-Derivate.
Peptid nach Anspruch 6 oder 7 mit der Aminosäuresequenz X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10, wobei X1 = Aminogruppe, Acetylgruppe, Biotingruppe, Spacer, Linker, GKK, SGKK oder eine Deletion X2 = I, L, V, A, X3 T, N, D, R, X4 = T, I, L, A, X5 = C, T, A, S, X6 = H, T, S, A, X7 = D, C, G, E, X8 = V, H, A, L, X9 = L, D, Y, F, X10 = Aminogruppe, Acetylgruppe, Biotingruppe, Spacer, Linker, GKK, SGKK oder eine Deletion ist, wobei die Spacer und/oder Linker an Position X1 und X2 ausgewählt sind aus der Gruppe bestehend aus Maleinamidocarbonsäure-Derivate; 4-Alkylphenyl-Derivate; Trityl-Derivate; Benzyloxyaryl- oder Benzyloxyalkyl-Derivate; Xanthen-3-yl-oxyalkyl-Derivate; (4-Alkylphenyl)- oder ω-(4-Alkylphenoxy)- alkansäure-Derivate; Carbamat-Derivate; Amine; Trialkylsilyl- oder Dialkyl-alkoxysilyl-Derivate.
Peptid nach einer der Ansprüche 6 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass es ausgewählt ist aus der Gruppe umfassend ein Peptid bestehend aus den Aminosäuresequenzen ITTCHDVL, ITTCHDAL und/oder LNITTCHD.
Peptid nach Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Aminosäuresequenz mindestens 60%, vorzugsweise 70%, bevorzugt 80%, ganz besonders bevorzugt 90% homolog zu einer der angegebenen Aminosäuresequenzen ist.
Peptid nach einem der Ansprüche 6 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid immobilisiert ist.
Peptid nach dem vorhergehenden Anspruch, dadurch gekennzeichnet, dass das Peptid an eine Festphase gebunden ist.
Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, einen Vektor gemäß Anspruch 4, eine Wirtszelle gemäß Anspruch 5 und/oder ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12, gegebenenfalls mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger.
Kit umfassend ein Nukleinsäuremolekül gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, einen Vektor gemäß Anspruch 4, eine Wirtszelle gemäß Anspruch 5, ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12 und/oder einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 13.
Verwendung der Peptide gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12 zur Herstellung einer Vorrichtung zur Chromatographie.
Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass die Peptide an eine Festphase gebunden sind.
Verwendung eines Nukleinsäuremoleküls gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, einen Vektor gemäß Anspruch 4, eine Wirtszelle gemäß Anspruch, ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12, einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 13, eines Kits nach Anspruch 14, einer Vorrichtung, die gemäß eine Verwendung nach Anspruch 15 oder 16 hergestellt ist, zur Prophylaxe, Diagnose, Therapie, Verlaufskontrolle und/oder Nachbehandlung von Durchblutungsstörungen.
Verwendung eines Nukleinsäuremoleküls gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, einen Vektor gemäß Anspruch 4, eine Wirtszelle gemäß Anspruch 5, ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12, einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 13, eines Kits nach Anspruch 14, einer Vorrichtung, die gemäß eine Verwendung nach Anspruch 15 oder 16 hergestellt ist, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Durchblutungsstörungen.
Verwendung nach Anspruch 17 oder 18, dadurch gekennzeichnet, dass die Durchblutungsstörung eine Akrozyanose, eine Kältehämäglutinationskrankheit, ein Hyperviskositätssyndrom, ein Ischämiesyndrom, eine Akrotrophoneurose, eine Sklerodermie, ein Kälteerythem, eine Kältepurpura, eine Kälteurtikaria, eine Kryopathie und/oder eine Kryoglobulinämie ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass die Durchblutungsstörung eine Kälteallergie ist.
Verwendung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass die Kälteallergie ein Raynaud-Syndrom ist.
Verwendung eines Nukleinsäuremoleküls gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, einen Vektor gemäß Anspruch 4, eine Wirtszelle gemäß Anspruch 5, ein Peptid gemäß einem der Ansprüche 6 bis 12, einer pharmazeutischen Zusammensetzung nach Anspruch 13, eines Kits nach Anspruch 14, einer Vorrichtung , die gemäß eine Verwendung nach Anspruch 15 oder 16 hergestellt ist, zum Screenen von Arzneimitteln.
Verwendung nach einem der Ansprüche 17 bis 22, dadurch gekennzeichnet, dass gegen PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtete Autoantikörper detektiert, gebunden, komplexiert und/oder neutralisiert werden.
Verwendung nach Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, dass zur Detektion IgG₁-Subtyp-spezifiche Antikörper eingesetzt werden.
Verwendung von an eine Festphase gebundenen Peptiden nach einem der Ansprüche 6 bis 12 zur Behandlung einer Kälteallergie durch Bindung und/oder Entfernung von Autoantikörpern.
Verwendung eines Verfahrens nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass die Autoantikörper gegen den zweiten Loop von PAR-1, PAR-2 und/oder PAR-3 gerichtet sind.