NL8503481A - Werkwijze voor het produceren van een nieuwe tetraploide en bisabololrijke kamille met verbeterde eigenschappen. - Google Patents

Description

* *·· Τ' - V.Ο.7444

Werkwijze voor het produceren van een nieuwe tetraploide en bisabolol-rijke kamille met verbeterde eigenschappen.

Preparaten van de bloemkopjes van de echte kamille (Chamomilla recutita (L) Rauschert, synoniem met Matricaria chamomilla L) worden vanwege hun antiflogistische en spasmolytische werking op brede schaal therapeutisch toegepast en vormen een belangrijk bestanddeel van de 5 plantaardige geneesmiddelschat. Bijzondere therapeutische betekenis komt daarbij toe aan de werkzame stoffen (-)-α-bisabolol en chamazulen. Een goede kamilledrogerij heeft daarom liefst een zo hoog mogelijk gehalte aan deze twee stoffen.

De in de natuur voorkomende diploide kamilles zijn voor wat betreft 10 hun gehalte aan werkzame stoffen zeer heterogeen. In het bijzonder is van de belangrijkste werkzame stoffen chamazulen en (-)α-bisabolol er slechts één aanwezig,of ontbreken deze twee werkzame stoffen volledig respectievelijk treden ze tezamen slechts in een zeer geringe hoeveelheid op, waarbij in dergelijke gevallen de hoofdcomponent van de etherische 15 olie uit de minder werkzame bisaboloiden(bisabolonoxyde A of B, bisabolol-oxyde A) bestaat.

Onder de naam DEGüMILL (het gaat hierbij om de kamillesoort die vermeld is in de conclusie van het Duitse octrooischrift 24.02.802; het DDR-kwekersrecht Degumill; het Italiaanse octrooi 1.035.096) is een 20 kamillesoort bekend, die tegelijkertijd een hoog gehalte aan (-)a-bisabo-lol en een hoog gehalte aan chamazulen bezit. Het chamazulen- en bisabolol-gehalte van deze kamillesoort DEGÜMILL is echter alleen dan bestendig, wanneer elke inkruising respectievelijk vreemde bestuiving met andere kamillesoorten, waarvan het bisabolol- en chamazulengehalte aanzienlijk 25 lager is, respectievelijk met de overal aanwezige wilde kamille die arm is aan werkzame stoffen, wordt verhinderd. Dit inkruisingsgevaar door vreemde bestuiving is vrijwel steeds aanwezig, omdat de wilde kamille praktisch overal voorkomt.

Verder zijn verschillende tetraploide kamillesoorten bekend (bij-30 voorbeeld BODEGOLD; DDR; POHORELICKY; CSSR; ZLOTY LAN; Polen; BK-2,

Hongarije). Deze tetraploide kamillesoorten hebben weliswaar een bevredigend chamazulengehalte, maar in deze bekende tetraploide kamillesoorten is de belangrijke werkzame stof (-)-α-bisabolol slechts in een uiterst geringe hoeveelheid aanwezig en overheersen in plaats daarvan de overige - i λ -4 ' «-- '-1- V> T w Ί ν i * -2- bisaboloïden (bisabololoxyde A en B alsmede bisabolonoxyde); die samen meer dan de helft van de etherische olie bij de bekende tetraploïde kamillesoorten uitmaken.

Thans werd gevonden dat heel algemeen uit natuurlijk voorkomende 5 kamillepopulaties of diploide of tetraploïde kweekkamilles door bepaalde behandelings- respectievelijk procestrappen bisabololrijke tetraploïde kamilleplanten kunnen worden verkregen, die enerzijds 'niet meer onderhevig zijn aan vreemde bestuiving met in de natuur voorkomende kamilles en anderzijds een tegelijkertijd hoog gehalte aan chamazulen en (-)-a-10 bisabolol bezitten, waarbij het gehalte aan (-)-α-bisabolol in aanzienlijke mate het chamazulengehalte overtreft en tegelijkertijd de overige bisaboloïde praktisch niet of slechts in zeer geringe hoeveelheid optreden. Van wezenlijke betekenis is hierbij derhalve dat het hoge gehalte aan de werkzame hoofdstoffen (-)-α-bisabolol en chamazulen bij de kamille 15 volgens de uitvinding bestendig is, dat wil zeggen bij elke vermenigvuldiging behouden blijft.

De uitvinding betreft de door de conclusies gedefinieerde produkten respectievelijk onderwerpen, in het bijzonder een werkwijze voor het produceren van een nieuwe tetraploïde kamille met voordelige en verbeterde 20 eigenschappen.

De nieuwe tetraploïde kamille onderscheidt zich verrassenderwijze van de bekende kamilles respectievelijk kamillesoorten door een reeks van nieuwe en voordelige eigenschappen.

In het bijzonder is hij niet meer onderhevig aan de vreemde bestui-25 ving met de in de natuur voorkomende kamille-populaties (wilde kamille) zoals de bekende kamillesoort DEGUMILL.

Ten opzichte van de overige bekende diploide kamilles en tetraploïde kamillesoorten onderscheidt de onderhavige kamille zich verrassenderwijze door een hoger gehalte aan de belangrijke werkzame stof (-)-a-30 bisabolol (ten minste 200 mg%), terwijl het gehalte aan de overige bisa-boloïden (bijvoorbeeld bisabololoxyden) zeer gering is en minder dan 50 mg% bedraagt. Zo vertonen bijvoorbeeld de bekende en in de literatuur beschreven kamillesoorten alle een zeer hoog gehalte aan bisabololoxyden en deels bisabolonoxyden, dat gewoonlijk ongeveer 50% van de etherische 35 olie van de drogerij uitmaakt (dat wil zeggen bij een gehalte aan etherische olie van 1% ongeveer 500 ml per 100 g drogerij).

β s n \ ^ i ·& W V ·* m ' * -3-

Verder is de onderhavige kamille in tegenstelling tot de tot op heden bekende tetraplolde kamillesoorten homogeen wat de daarin aanwezige stoffen betreft, waarbij de eigenschappen chamazulen- en (-)-a-bisabololhoudend bestendig (dat wil zeggen homozygotisch) zijn.

5 Daarentegen toont een ander onderzoek van de individuele planten van de bekende tetraplolde kamillesoorten, dat de afzonderlijke individuen aan verschillende typen wat daarin aanwezige stoffen betreft moeten worden toegerekend, dat wil zeggen dat elke steekproef van een hieruit vervaardigde drogerij een zowel kwalitatief als ook kwantitatief ver-10 schillend inhomogeen resultaat levert.

Bovendien onderscheidt de onderhavige kamille zich van de bekende tetraplolde kamillesoorten verrassenderwijze nog door één of meer van de volgende eigenschappen: een verbeterd kiemvermogen van de zaden; geringere produktie van niet bruikbare kruidenmassa (dat wil zeggen hogere 15 bloemenoogst); lager watergehalte van de bloemen (dat wil zeggen een betere opbrengst aan gedroogde bloemen en kortere drogingstijden); een grotere geschiktheid voor machinaal oogsten, omdat de bloemen verregaand in een vlak gelocaliseerd zijn en de meeste bloemen tegelijkertijd bloeien (daardoor wordt ook een uniforme oogsttermijn mogelijk); betere 20 houdbaarheid van de drogerij (geringere neiging tot uiteenvallen en gruisvorming; bijzonder aromatische en'typische kamillegeur.

De laatstgenoemde voordelen treden bijvoorbeeld op wanneer behalve op het werkzame stoffengehalte nog een selectie op een of meerdere van de eerdergenoemde kenmerken plaatsvindt, van de uitgekozen planten zaad-25 goed wordt gewonnen, uit de daaruit gekweekte nakomelingen opnieuw geselecteerd wordt en deze maatregelen 3-5 keer herhaald worden.

Doel van de uitvinding is de produktei van een nieuwe tetraplolde kamille met verbeterde eigenschappen, in het bijzonder een verhoogd gehalte aan (-)-a-bisabolol.

30 De bereiding van de nieuwe kamille volgens de uitvinding geschiedt aldus, dat men a) bekende diplolde kamilles, waarbij (-)-α-bisabolol de hoofdcomponent van de etherische olie vormt, tetraploldiseert (mutatie van het gnoom), de aldus verkregen tetraplolde planten uitselecteert 35 en van deze uitgekozen tetraplolde planten weer die planten uit selecteert, waarvan de bij 40°C gedroogde bloemen een gehalte aan 3 3 0 o 1 :;· i 4 v »

V

-4- chamazulen van ten minste 100 mg%, de gehalte aan (-)-α-bisabolol van ten minste 200 mg% en een gehalte aan overige bisaboloide van ten hoogste 50 mg% bezitten (oogsten van de bloemen op het tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen van een bloemkopje is openge-5 bloeid), en eventueel hierop verdere gebruikelijke selectie- en vermenigvuldigingsstappen aansluit (bijvoorbeeld moederstamboom-kweek voor vegatatief vermenigvuldigbare vreemde bevruchters) of b) van bekende tetraploïde kamilles, waarbij (-)-α-bisabolol de hoofd-component van de etherische olie vormt, die planten uitselecteert, 10 waarvan de bij 40°C gedroogde bloemen een gehalte aan chamazulen van ten minste 100 mg%, een gehalte aan (-)-α-bisabolol van ten minste 200 mg% en een gehalte aan overige bisaboloiden van ten minste 50 mg% bezitten (oogsten van de bloemen op het tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen van een bloemkopje is opengebloeid) , en 15 eventueel hierop verdere gebruikelijke selectie- en vermenigvuldi- gingstrappen aansluit (bijvoorbeeld moederstamboomkweek voor vegetatief vermenigvuldigbare vreemde bevruchters).

Als diploide uitgangskamilles komen bijvoorbeeld in aanmerking: "Kamille argentinischer Provenienz" (zie L.Z.Padula, R.V.D. Rondina en 20 J.D.Coussio, Quantitative Determination of Essential Oil, Total

Azulenes and Chamzulene in German Chamomile, Matricaria chamomilla, Cultivated in Argentina; Planta med. 30, biz. 273-280, 1976) alsmede alle kamilles, die in de etherische olie duidelijk meetbare concentraties aan (-)-a-bisabolol (gewoonlijk meer dan 5% van de etherische olie) 25 vertonen. Bijvoorbeeld komen dergelijke diploide kamilles in aanmerking, die in de volgende literatuurplaatsen zijn beschreven: Schilcher, H. "Neuere Erkentnisse bei der Qualitatsbeurteilung von Kamillenöl beziehungsweise Kamillenblüten", Planta med. 23, 132-144 (1973); Motl, 0., M. Felklova, V. Lukes & M. Jasicova "Zur gaschromatographischen 30 Analyse und zu chemischen Typen von Kamillenöl", Arch. Pharm. 310, 210-215 (1977); Franz, Ch., J.Hölzl & A.Vömel "Preliminary Morphological and Chemical Characterization of some Populations and Varieties of Matri-cara chamomilla L.", Acta Hort. Ί2_, 109-114 (1978).

Verder komt als uitgangskamille de diploide kamillesoort DEGÜMXLL 35 (Duits octrooischrift 24 02 802) in aanmerking. Ook in dit geval verkrijgt men bijvoorbeeld een tetraploïde kamille met een chamazulengehalte .-30 3 4 8 1 ' · Ά -5- van ten minste 150 mg% en een bisabololgehalte van ten minste 200 mg%, indien het oogsten van de kamillebloemkopjes van deze kamille in het vegetatiestadium plaatsvindt, waarin pas 30-70% van de buisbloeraen van -het kopjeis geopend, en het drogen bij een luchttemperatuur van ten 5 hoogste 50eC wordt uitgevoerd. Door daarachter geschakelde selectie-en vermenigvuldigingstrappen volgens deze aanvrage kunnen de aangegeven bisabolol- en azalenwaarden ook hier nog verder worden verhoogd.

De etherische olie vande kamille bestaat gewoonlijk uit de hoofdcomponenten farnesen, spatulenol, chamazulen, een van de vier bisabololden 10 ( (-)-α-bisabolol, bisabololoxyde A, bisabololoxyde B of bisabolonoxyde, voorzover het diploïde individuele planten betreft,· in het gemengde monster van de populatie alsmede in tetraplolde individuen kunnen meerdere bisabololden naast elkaar aanwezig zijn) alsmede uit de spiroethers.

De genoemde stoffen maken samen meestal 70-80% van de etherische olie 15 uit. Bijzonder geschikt zijn derhalve diploxdeuitgangskamilles waarin (-)-a-bisabolol de overheersende component (meer dan de helft van de som van de eerder genoemde stoffen) voorstelt. In het bijzonder komen als uitgangskamilles diploïdekamilles in aanmerking, waarbij bijvoorbeeld het (-)- α-bisabolol ten minste 40% van de etherische olie of ten minste 20 90% van de bisabololde voorstelt.

Als tetraplolde uitgangskamilles komen bijvoorbeeld in aanmerking: de kamillesoorten Bodegold (DDR), Pohorelicky (CCSR), Zloty Lan (Polen), BK-2 (Hongarije). Deze soorten zijn in de volgende literatuurplaatsen beschreven: M.Chladel en V. Kosova. Pharmazie JL3_, 712-713 (1958) ? 25 W.Czabajska, Diss. Poznaii (1963); W. Poethke en P.Bulin, Pharm. ZHalle 108, 813-823 (1969); I.Sdrkany, Herb. Hungar, 4 (1), 125-169 (1965).

Voor het overige geldt voor de tetraplolde uitgangskamilles voor wat betreft het (-)-a-bisabololgehalte hetzelfde als voor de diploïde uitgangskamilles. In het bijzonder komen dergelijke diploïde en tetraplolde 30 kamillepopulaties in aanmerking, die in het gemengde drogerijmonster gewoonlijk ten minste 100 mg% chamazulen en 50-100 mg% (-)-α-bisabolol vertonen (betrokken op de droogstof van de bij 40°C gedroogde bloemen), dat wil zeggen uit dergelijke kamillepopulaties wordt in het geval van een diploïde uitgangskamille zaadgoed gewonnen en dit zaadgoed wordt ge-35 tetraploïdiseerd (zonder rekening te houden met en/of kennis van het bisabololgehalte van de ouderplanten). In het geval van een tetraplolde Η Λ il ij i V ** V ·* / - 3 -6- « uitgangskamille wordt het als bovenstaand beschreven zaadgoed daarna onmiddellijk aan de volgende selectie- en vermenigvuldigingstrappen onderworpen.

De geschikte diploide en tetraploide uitgangskamilles worden door 5 onderzoekingen aan individuele planten uitgeselecteerd. In het algemeen is vereist dat van een uitgangspopulatie bijvoorbeeld 1000-10.000 individuen worden onderzocht om enkele individuen te vinden die een hoog (-) -α-bisabololgehalte volgens.ctebovenstaand vermelde criteria bezitten en als uitgangskamille geschikt zijn. Van dergelijke 10 uitgezóchte individuen wordt dan op gebruikelijke wijze zaadgoed gewonnen en dit getetraploïdiseerd. Na voltooide tetraploldisatie worden de tetraploïdeplanten uit de andere diploïed gebleven planten uitgeselecteerd. Van de aldus verkregen tetraploide planten, eventueel na voorafgaande vermenigvuldiging,worden nu alle planten uitgeselecteerd, waarvan 15 de bij 40°C gedroogde bloemen ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-) -α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisabololden bevatten. Het oogsten van deze bloemen geschiedt daarbij in het ontwikkelingsstadium, waarin 30-70% van alle buisbloemen van het bloemkopje geopend zijn. Eventueel kunnen hierop verdere selecties- en vermenig-20 vuldigingstrappen aansluiten, die bijvoorbeeld een verbetering met betrekking tot de volgende kenmerken respectievelijk eigenschappen bewerken: gelijktijdige bloeitijd, gelijktijdige bodemstandige vertakking en smalle bloeizone (dat wil zeggen een beter geschikt zijn voor machinaal oogsten), grote bloemkopjes, betere houdbaarheid van de drogerij, bij-25 zonder aromatische geur.

Wanneer men van meet af aan uitgaat van een tetraploide kamille, vindt alleen de eerder vermelde selectie van dergelijke planten plaats, waarvan de bij 40°C gedroogde bloemen ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige 30 bisabololden bevatten, waarbij eventueel het oogsten van deze bloemen in het ontwikkelingsstadium plaatsvindt, waarin 30-70% van alle buisbloemen van een bloemkopje geopend is. Ook in dit geval kunnen eventueel verdere selectie- en vermenigvuldigingstrappen aansluiten, waaruit verdere verbeteringen (zoals bovenstaand aangegeven) resulteren.

35 Een bijzonder voordelige kamille verkrijgt men wanneer bij de selectie volgens het chamazulen- en (-)-α-bisabololgehalte die planten 85ÖÖ4G: -7- (bekende of volgens de werkwijze geproduceerde) worden uitgeselecteerd, waarvan het chamazuleengehalte ten minste 200 mg%, bijvoorkeur 50 mg% en waarvan het (-)-α-bisabololgehalte ten minste 300 mg%, bijvoorkeur 400 mg% bedraagt {gehalte aan overige bisaboloiden steeds beneden 50 mg%) .

5 De tetraploldisatie kan bijvoorbeeld op een op zichzelf bekende wijze door behandeling van plantendelen (zaden, wortels, spruitpunten, kiemen, okselknoppen) of weefsels van de diploxde uitgangs kamilleplantmet chemicaliën, röntgenstralen, gammastralen of OV-stralen plaatsvinden.

Hij kan verder volgens de dekapiterings-Kallus-methode, door antheren-10 cultuur of door gebruik van hoge of ook lage temperaturen bij de ka-milleplanten respectievelijk plantendelen of weefsels van de kamiileplanten plaatsvinden. Hiertoe wordt bijvoorbeeld ver wezen naar het boek van Werner Gottschalk "Die Bedeutung der Poly-ploidie für die Evolution der Pflanzen", Gustav Fischer Verlag, Stutt-15 gart, 1976, in het bijzonder blz. 13 - 22.

De tetraploldisatie door chemicaliën.

Als chemicaliën voor de tetraploldisatie komen bijvoorbeeld in aanmerking: colchicine, acenafteen, alkaloïden zoals atropine, vera-trine, nicotine, sanguinarine, derivaten van benzeen, difenyl en 20 fenanthreen, naftaline en naftaline-derivaten, difenylamine, tribroom-aniline, paradichloorbenzeen, methylnaftochinon, methylnafthohydro-chinon, salicylzuur en verwante stoffen, hexachloorhexaan,metham£etamlne (hydrochloride), alkyl-alkali-carbamaten,zoals isopropyl-natrium-car-bamaat, fenylurethan, zouten van kakodylzuur (bijvoorbeeld natriumzout), 25 glycosiden van convallaria zoals convallarine, convallatoxine en con-vallamarine, heteroauxine,germisan (fenyl-mercuripyrokatechine), organische kwikverbindingen zoals ethyl-kwik-fosfaat, ethyl-kwik-chloride, fenyl-kwik-hydroxyde, fenyl-kwik-dinaftylmethaandisulfonaat,chloroform, lachgas (N^O) en mengsels van deze stoffen. Verder komen ook oliekoek, 50 compost en koeiemest in aanmerking.

De behandeling met de hier bovengenoemde stoffen geschiedt bijvoorbeeld bij temperaturen tussen 0 en 35°C, bij voorkeur tussen 12 en 30°C, in het bijzonder 15 en 25°C.

Het aanbrengen geschiedt bijvoorbeeld door behandelen van zacer, $ 7 ' -8- spruitpunten, wortels (in het bijzonder wortelpunten of wortels van zaadkiemen), vruchtknopen, van snijvlakken aan bladeren of stengels, van celsuspensies uit meristeem-weefsel, van kallusculturen of ook door injectie in het basale stengelgebied of in het gebied van de okselknop-5 pen. De chemicaliën worden in het algemeen in de vorm van oplossingen in water, zwak alcoholische (alcoholgehalte gewoonlijk beneden 5 %) of zwak zure oplossingen gebruikt. De pH-waarde van de zwak zure oplossingen ligt bijvoorbeeld bij 5,5 - 6,5, waarbij het aanzuren bijvoorbeeld met behulp van lage organische alifatische zuren zoals azijnzuur 10 plaatsvindt. Indien men alcoholische oplossingen gebruikt, kunnen deze eveneens zwak zuur zijn. De concentraties van de chemicaliën in deze oplossingen kan bijvoorbeeld 0,01 tot 0,5 %, bij voorkeur 0,02 tot 0,2 %, in het bijzonder 0,05 tot 0,1 % bedragen. Gasvormige stoffen komen als zodanig,eventueel onder druk (bijvoorbeeld 1 tot 10 bar) in aanmerking. 15 De behandelingsduur bedraagt bijvoorbeeld 1 tot 36, bij voorkeur 2 tot 12, in het bijzonder 4 tot 6 uur.

De werkzaamste concentraties en de inwerkingsduur worden bij voorkeur telkens in voorproeven getest.

Bijzonder gunstig is bijvoorbeeld de behandeling met colchicine 20 bij temperaturen tussen 0 en 35°C, bij voorkeur 12 tot 30°C, in het bijzonder 15 tot 25 eC. Dit kan bijvoorbeeld geschieden doordat zaden vande deploïdeuitgangskamille in een 0,01 tot 0,2 %'s, in het bijzonder 0,02 tot 0,1 %'s, bij voorkeur 0,05 %'s colchicine-oplossing tot zwellen worden gebracht qt dat uitgekiemde, 5 tot 7 dagen oude goed 25 ontwikkelde zaadkiemen van de deplöldeuitgangskamille (met de kiem- bladeren naar beneden) in een 0,01 tot 0,2 %'s, in het bijzonder 0,02 tot 0,1 %'s, bij voorkeur 0,05 %'s colchicine-oplossing worden gedompeld. Bij de laatste methode heeft de omringende atmosfeer bij voorkeur een relatieve luchtvochtigheid van nagenoeg 100 %. De duur van de 30 colchicine-behandeling bedraagt bijvoorbeeld 3 tot 36 uur, in het bijzonder 4 tot 10 uur. Bij gebruik van zaadkiemen is in het algemeen een inwerkingsduur tot 10 uur voldoende. Bij gebruik van zaden kan de inwerkingsduur zich eventueel tot 36 uur uitstrekken.

Na de behandeling met de chemicaliën worden de gezwollen zaden, 35 zaadkiemen, respectievelijk andere plantendelen meerdere malen met water gespoeld.gezwollen zaden worden bijvoorbeeld uitgezaaid. De planten met behandelde wortels of andere plantendelen of de behandelde zaad-v ?: *7 /. ex *' V' -w ':.7 ~J> Li V' - kiemen worden bijvoorbeeld in plantkisten uitgepoot. Uit: de aldus behandelde zaden respectievelijk zaadkiemen worden de planten opgekweekt (bijvcorbeeld—in een kas: temperatuur tussen 13 tot 25°C overdag en 1G tot io°C 's nachts) en de planten uitgekozen, waarvan het stuifmeel 5 ongeveer li keer zo groot is als het stuifmeel van het uitgangsmateriaal respectievelijk een chromosomenaantal van de somatische cellen van 36 bezitten. Wanneer men andere plantendelen (boven- of onderaardse delen) aan de chemicaliën-behandeling onderwerpt, worden uitsluitend de uit de behandelde delen ontsproten loten, wortels of bloemen/zaden aan een 10 later onderzoek naar opgetreden tetraploïdisatie onderworpen. Wanneer bijvoorbeeld een spruit-behandeling of een oksel-behandeling werd uitgevoerd, wordt aansluitend alleen de uit deze oksel respectievelijk uit deze spruit ontstane nieuwe loot en de daarop gevormde bloemen respectievelijk zaden op chromosomenaantal onderzocht.

15 De metingen van de stuifmeelgrootte en de telling van het aantal chromosomen kunnen bij voorbeeld op de in voorbeeld Illaangegeven wijze worden uitgevoerd.

De tetraploïdisatie door stralen.

De inwerking vindt bijvoorbeeld plaats op zaden of wortelpunten 20 bij temperaturen tussen 0 en 35°C, bij voorkeur 10 en 30°C, in het bijzonder 15 en 25°C. Bestralingstotaal: 5 tot 50 Krad. Bij voorkeur worden gamma- of röntgenstralen gebruikt.

Ais UV-stralen komen bijvoorbeeld die in aanmerking met een golflengte van 400 tot 30 nm, bij voorkeur van 350 nm. De aldus be-25 straalde planten respectievelijk plantendelen worden daarna op dezelfde wijze verder behandeld als na de behandeling met chemicaliën.

Gebruik van hoge en lage temperaturen.

Als hoge temperaturen komen bijvoorbeeld temperaturen tussen 33 en 50°C, bij voorkeur 42 tot 45°C in aanmerking. Aan deze temperaturen 30 worden bijvoorbeeld blootgesteld: gezwollen zaden, zaadkiemen, loot-punten en meristematisch weefsel. Duur van de behandeling: bijvoor- . beeld 1 tot 48, bij voorkeur 12 tot 24 uren.

Als lage temperaturen komen bijvoorbeeld in aanmerking: 0 tot 5°C, bij voorkeur 0,5 tot 4°C, in het bijzonder 2°C. Aan deze temperatu-35 ren worden b.v.blootgesteld;gezwollen zaden, zaadkiemen, loten en meristematisch weefsel. Duur van de behandeling: bijvoorbeeld 1 tot 100, bij voorkeur 20 tot 40 dagen. De aldus behandelde planten respectievelijk plantendelen worden op dezelfde wijze verder behandeld als na de Λ --¾ * öv',·.: - j : -10- behandeling met chemicaliën.

De dekapiterings-Kallus-methode (dekapitering = toppen of ont-punten of terugsnijden) .____

De dekapitering wordt bijvoorbeeld uitgevoerd aan jonge planten aan de stengel, bij voorkeur aan de puntvegetatiekegel, na de vorming 5 van 4 tot 6 bladeren of ook aan bladstelen of zijscheuten. De knoppen respectievelijk spruiten die uit het wondweefsel (Kallus-weefsel) ontstaan, worden afgesneden tot wortelvorming gebracht, in potten verder gecultiveerd en de getetraploldiseerde planten op dezelfde wijze als bij de chemicaliên-behandeling uitgeselecteerd 10 Antherencultuur (produktie van planten met eenvoudige chromo somenset uit de helmknopjes met aansluitende spontane of kunstmatige tetraploidisatiej ._______

Van bloeiende planten worden gesloten buisbloemen geoogst, waarvan de antheren (helmknopjes) zich in het stadium van de eerste stuif-meelmitose bevinden. De antheren worden door middel van een micromani-15 pulator uit de bloemknoppen verwijderd en in petrischalen gebracht, die bijvoorbeeld met het voedingsmedium volgens Nitsch en Nitsch (Tabel A) zijn gevuld. Aansluitend worden de petrischalen in een cul- . · . tuurkamer in een 16-uren durende dag bij 2S'JC dag- en 20°C nachttempe-ratuur bewaard. Na ongeveer vier weken beginnen de antheren open te 20 breken en groeien daaruit de plantjes. Deze zijn bij een diploid ouderdeel haploid, bij een tetraploid ouderdeel dihaploïd; ze worden na de vorming van wortels bijvoorbeeld in tuinaarde gepot en in een kas tot bloei gebracht. Deze (di)haplolde planten zijn steriel, maar kunnen door behandeling van de spruitpunten , wortels of stengels met chemi-25 caliën, bijvoorbeeld colchicine, gepolyploidiseerd worden, waarbij homozygote planten ontstaan, die zich daarna via zaden verder laten vermenigvuldigen. Voor de verdere behandeling wordt verwezen naar de behandeling met chemicaliën (bijvoorbeeld colchicine-behandeling).

(ft » Λ r ^ öO U ύ ü ! -11- T A 3 Ξ L A.

Cultuurmedium volgens Nitsch en Nitsch 'Science, 1969) mg/1 KN03 950 NH .NO, 720 4 3

MgSO x 7 H.0 185

4 Z

CaCl2 166 ΚΗ,ΡΟ„ 68 2 4

MnSO, x 4 H,0 25 4 2 h3bo3 10

ZnSQ. x 7 H.0 10 4 2

Na.McO, x 2 H.0 0,25 2 4 2

CuS04 x 5 H20 0,025 5 tnl van een oplossing ait 7,45 g

Ethyleendiaminetetraazijnzuur dinatriumzou-

en 5,57 g FeSO x 7 HO op 1000 ml 4 Z

myo-Inosiet 100

Glycine 2

Nicotinezuur 3 ?yridoxine-HCl 0,5

Thiamine-HCl 0,5

Folzuur 0,5

Biotine 0,05

Saccharose 20 g gerede voedingsbodem (DIFCO-Bacto-Agar) 3 g

Indcolazijnzuur 0,1 pH van het medium ingesteld op 5,5 S 'J ~‘-i ‘ *! -12-

Van de door meting van de stuifmeelgrootte en/of telling van het aantal chromosomen uitgeselecteerde tetraploïde kamilleplanten, die volgens de eerder beschreven mogelijkheden kunnen worden verkregen, worden daarna die planten uitgeselecteerd die een gehalte aan chamazulen 5 van ten minste 100 mg% en een gehalte aan bisabolol van ten minste .200 mg% bezitten, terwijl het gehalte aan overige bisabololden ( in het bijzonder bisabololoxyde) beneden 50 mg% (betrokken op de gedroogde bloemen, zie voorbeeld I) dient te liggen.

De aldus uitgeselecteerde planten worden na verwijdering van alle 10 reeds opengebloeide bloemkorfjes in een kas bij 18-24°C dag-en 12-14°C-nachttemperatuur en een daglengte van ten minste 14 uur de gelegenheid gegeven om uit te bloeien, waarbij in een tijdsperiode van vier weken alle bloemkopjes die uitgebloeid of vlak voor het verwelken staan, voor het winnen van zaadgoed worden geoogst. Na drogen bij een lucht tempera-15 tuur tussen 20 en 35°C verkrijgt men bijvoorbeeld het vermenigvuldigings-materiaal van de onderhavige kamille.

Als verdere criteria voor deze selectie kunnen bovendien nog de volgende worden toegepast: a) ongeveer tegelijkertijd bloeien; 20 b) een gelijkmatige, bodemstandige vertakking en een smalle bloeizone van ongeveer 10, in het bijzonder 5 cm, c) grote bloemkoppen met een uitwendige diameter van ongeveer 30 mm (20 tot 40 mm), in het bijzonder 25-35 mm).

Het gebruik van de extra criteria a), b) en/of c) leidt bijvoor-25 beeld tot hoge bloem- en drogerij opbrengsten en een beter geschikt zijn voor machinaal oogsten.

Wanneer men van reeds bekende tetraploïde kamilles uitgaat, vinden de beschreven selectie alsmede eventueel verdere selecties- en vermenig-vuldigingstrappen op dezelfde wijze plaats.

30 Om een kamille te verkrijgen die behalve een gehalte van ten minste 100 mg% chamazulen en ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol (betrokken op de gedroogde bloemkopjes) ook nog een hoge bloemenopbrengst bezit en voor machinaal oogsten beter geschikt is, verdient het aanbeveling om als volgt te.werk te gaan: de uitgeselecteerde planten (zoals bovenstaand 35 beschreven) worden vegetatief door stekken vermenigvuldigd en na drie tot vijf generaties uitgekozen, waarbij de keuze steeds volgens het Λ *** i '*

3U 0 4 ö J

-13- bovenstaand aangegeven criterium alsmede eventueel de extra criteria A-C plaatsvindt .De -volgens deze criteria uitgezóchte planten worden ver-kloond, uit de verkloonde planten wordt zaadgoed gewonnen, de hieruit verkregen planten weer volgens de bovenstaand vermelde minimale gehalten 5 aan chamazulen en bisabolol alsmede eventueel de extra criteria A-C uitgeselecteerd en uit laatstgenoemde weer zaadgoed gewonnen.

De opeenvolging uitzaaiing—selectie volgens het bovenstaande aangegeven gehalte aan chamazulen van ten minste 100 mg% en (-)-a-bisabolol van ten minste 200 mg% (andere bisabololdenbeneden 50 mg%) alsmede even-10 tueel de extra criteria A-C-winning van zaadgoed, kan 3-5 keer worden herhaald. Daarop sluit nogmaals een opeenvolging uitzaaien-selectie als eerder aangegeven (eventueel verkloning)-winning van zaadgoed aan. Het tenslotte verkregen zaadgoed is dan het vermenigvuldigingsmateriaal van de kamille volgens de uitvinding.

15 De stekvermenigvuldiging geschiedt daarbij op de volgende wijze:

Voor de stekvermenigvuldiging moeten de uitgangsplanten (kloonmoeder-planten) onder omstandigheden van korte dagen bloemknoppenvrije korte loten vormen. Dit vindt in het winterhalfjaar plaats in een kas zonder extra belichting of in klimaatkamers bij een daglengte van 6-10, bij 20 voorkeur 8 uur en temperaturen van 10-15°C, bij voorkeur 12°C. Voor de verkloning respectievelijk vermenigvuldiging zijn blad-, loot- en in het bijzonder korteloct-(zijloot-)stekken geschikt. Hun wortelvorming geschiedt bij 12 - 1S°C, bij voorkeur 15°C en daglengten van 12-16, bij voorkeur 14 uur in een gespannen atmosfeer (ongeveer 100% relatieve lucht-25 vochtigheid). Als substraat kan bijvoorbeeld een turfzand-mengsel in een verhouding van 1 : 1 worden gebruikt; ook geschikt zijn echter zuiver kwartszand, steenwol-stekblokjes, turf-stekblokjes en dergelijke.

Voor het uitzaaien komen hierbij bijvoorbeeld de volgende bodems in aanmerking: tuinaarde, humeuze, middelzware leembodems, lemige of 30 humeuze zandbodems.

Men kan in een kas of ook in het open land uitzaaien. De temperaturen voor ontkieming en groei van de planten liggen bijvoorbeeld tussen 12 tot 24°C, in het bijzonder 18 tot 20°C. Indien in open gebied is uitgezaaid, wordt bij voorkeur in de herfst (september/oktober) of in het 35 voorjaar (maart/april) gezaaid. Deze termijnen gelden voor alle in aanmerking komende teeltgebieden (bijvoorbeeld het Noordelijke halfrond, gematigde tot subtropische klimaatgebieden).

^ < 1 "s L· M J

-14-

De nieuwe onderhavige kamille behoort tot de cultuurplantensoort van de echte kamille met de botanische naam Matricaria Chamomilla L. (synoniem chamomilla recutita (L.), Rauschert) en wordt door de in conclusie 1 verstrekte gegevens wat de werkzame stoffen betreft gedefini-5 eerd. De aangegeven waarden voor het werkzame stoffengehalte aan chamazuleen, (-)-α-bisabolol en bisaboloxyden hebben telkens betrekking op het bloei-ontwikkelingsstadium, dat bereikt is, wanneer 30 tot 70%, in het bijzonder 40 tot 60% van alle buisbloemen van een bloemkopje geopend is (dat wil zeggen de voor de werkzame stoffenbepaling toegepaste bloemen 10 werden op dit tijdpunt geplukt en daarna 72 uren bij 40°C in een droog-kast gedroogd.

Wanneer het oogsten van de kamillebloemen geschiedt op een tijdstip, dat het bloemontwikkelingsstadium verder is gevorderd, dat wil zeggen waarin bijvoorbeeld 100% of tot 100% van alle buisbloemen van een bloem-15 kopje is geopend (bijvoorbeeld het stadium van volle bloei) en/of wanneer het drogen van de geoogste bloemen bij hogere temperatuur dan 40°C plaats vindt, kan het gehalte aan de werkzame stoffen (-)-a-bisabolol en chamazuleen lager zijn, omdat door hogere droogtemperaturen en/of bij later oogsten een sterkere afbraak van het azulen en bisabolol kan 20 optreden.

Onder aanduiding "overige bisaboloiden" in conclusie 1 worden in het bijzonder verstaan: (-)-α-bisabololoxyde A en B, (-)-α-bisabolonoxyde A. Verdere bestanddelen van de etherische olie van de onderhavige kamillesoort zijn 25 En-In-dicycloethers, famesen, spathulenol en in geringe concentraties verschillende vluchtige terpeenkoolwaterstoffen. Bijvoorbeeld bevatten de in een droogkas bij 40 °C gedroogde bloemen (geoogst zoals bovenstaand aangegeven) van de onderhavige kamille tussen Γ00 tot 200 mg% chamazuleen, tussen 200 tot 450 mg% (-)-α-bisabolol en slechts weinig, dat wil zeggen 30 tussen 5 tot 50 mg% andere bisaboloiden betrokken op de droge stof (dat wil zeggen betrokken op het absolute drooggewicht van de bloemen). Dit absolute drooggewicht wordt door drogen van een separaat monster van kamillebloemen van de onderhavige kamille in een droogkast bij 105°C tot constant gewicht (72 tot 96 uren) bepaald. Het werkzame stoffengehalte 35 van de bij bijvoorrbeeld 35 tot 50°C gedroogde bloemen (drogerij) wordt vervolgens berekend op de bij 105°C bepaalde droge massa van de bloemen.

6 5 j ·:: * 3 1 -15-

In zijn fenotype komt de onderhavige kamille overeen met de tot op heden bekende tetraplolde kamillesoorten (bijvoorbeeld Bodegold, Zloty Lan, 3K-2, Pohorelicky Velkokvety); hij onderscheidt zich van deze in het bijzonder hierdoor dat bij de onderhavige kamille (-}-α-bisabolol de 5 hoofdcomponent van de etherische olie van de bloemen is, en bovendien het gehalte aan de overige bisaboloiden (bisabololoxyden A en B; bis-abolonoxyde) zeer aanzienlijk lager is. Andere bestanddelen vein de etherische olie van de kamille zijn famesen, spathulenol en En-In-di-cycloethers.

10 De onderhavige kamille kan op alle bodems met uitzondering van bodems met een gehalte van meer dan 20% aan organische stof (humusstoffen en bodemorganisrnen) met succes worden geteeld; er zijn geen bijzondere agrotechnische werkwijzen of cultuurmaatregelen vereist; voor de teelt is alleen en lange dag met meer dan 13 uren maximale daglengte nodig, 15 dat wil zeggen voor de teelt komen in het bijzonder de gematigde zones en de subtropen in aanmerking.

De onderhavige kamille heeft vaak bovendien nog de volgende voordelen: een hoge opbrengst, een middellate oogsttijd, een uniforme groei-hoogte met smalle bloeizone en grote bloemkopjes en is derhalve bijzonder 20 geschikt voor mechanisch oogsten. Daarbij komt dat tegelijkertijd uitgezaaide planten in het algemeen praktisch tegelijkertijd gemeenschappelijk uitbloeien, zodat ook hierdoor het oogsten zeer vereenvoudigd en vergemakkelijkt wordt.

De laatstgenoemde voordelen treden ook op wanneer de volgende pro-25 cesomstandigheden worden toegepast: van de tetraplolde kamilleplanten, die een gehalte aan chamazulen van ten minste 100 mg% en aan (-)-a-bisabolol van ten minste 200 mg% bezitten, terwijl het gehalte aan overige bisaboloiden (in het bijzonder bisabololoxyde) beneden 50 mg% ligt (al waarden betrokken op de gedroogde bloemkopjes), worden alleen die 30 uitgeselecteerd, die - ongeveer tegelijkertijd bloeien, - een gelijkmatige bodemstandige vertakking en een smalle bloeizone van ongeveer 10 cm alsmede - grote bloemkopjes met een buitendiameter van ongeveer 30 mm vertonen.

35 De uitgeselecteerde planten worden vegetatief via stekken vermenig vuldigd en na 3-5 generaties uitgekozen, waarbij de keuze steeds volgens

*“ Λ 3 j* A

T-i * 1 .V 1 * J

J y v* -ί j - -16- de bovenstaand genoemde criteria plaats vindt. De uitgezóchte planten worden vegetatief vermenigvuldigd (verkloond), samen de gelegenheid gegeven om uit te bloeien, en hiervan wordt het zaadgoed gewonnen .De uit het zaadgoed verkregen planten worden weer volgens de bovenstaand aangegeven 5 kriteria geselecteerd en de opeenvolging uitzaaien-selectie-zaadgoed-winning-uitzaaien wordt 3-5 keer herhaald.

Een uit de onderhavige kamille geproduceerde drogerij bezit het maximale gehalte aan de werkzame stoffen chamazulen en (-)-a-bisabolol, wanneer het oogsten van de kamillebloemkopjes in het vegetatiestadium 10 plaatsvindt, waarin bijvoorbeeld 30 tot 70%, bij voorkeur 40 tot 60%, dat wil zeggen in het algemeen 50% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en het drogen bij een luchttemperatuur van ten hoogste 50°C, bijvoorbeeld 35 tot 50°C, in het bijzonder 40°C plaatsvindt. Het drogen kan hetzij door kunstmatige luchttoevoer hetzij ook door drogen in de 15 schaduiw, eventueel ook in de zon plaatsvinden, waarbij er echter op moet worden gelet, dat de warmtetoevoer niet uitgaat boven de voor een volledige droging vereiste maat. Het is ook voordelig dat men zich door controlebewegingen overtuigt van het bereiken van een constant gewicht. Het drogen kan spontaan of kunstmatig (bijvoorbeeld met kunstmatige 20 warme lucht) plaatsvinden. De opbrengst van werkzame stoffen is het grootst bij spontaan drogen onder uitsluiting van zonlicht, bijvoorkeur bij 40-60eC, in het bijzonder 40-50°C. Het droogproces heeft bij voorkeur zo spoedig mogelijk respectievelijk onmiddellijk na het oogsten plaats. Het drogen wordt bij voorkeur uitgevoerd in dunne lagen, bij-25 voorbeeld met een dikte van 5 tot 20 cm, bij voorkeur 10 cm. Het drogen is bijvoorbeeld ook mogelijk in goed beluchte hallen bij een luchttemperatuur tuseen 20 en 30°C. In het algemeen is de luchttemperatuur voor het drogen bij voorkeur niet hoger dan 60°C. Gunstig is bijvoorbeeld een luchttemperatuur tussen 35 en 50°C.

30 Het werkzame stoffengehalte van een uit de kamille volgens de uit vinding bereid drogerij, in het bijzonder aan de werkzame hoofdstoffen chamazulen en (-)-α-bisabolol is afhankelijk van het vegetatiestadium, waarin zich de bloemen ten tijde van het oogsten bevinden en van de droging van de geoogste bloemen. Hoe hoger de drogingstemperatuur is, 35 des te sterker is de afbraak van de werkzame stoffen, dat wil zeggen des te lager is het gehalte van de gedroogde bloemen aan de werkzame 8503431 % -17- stoffen. Om dezelfde reden heeft direct zonlicht bij het drogen een nadelige invloed en dient dit zo mogelijk vermedai te worden. Het vegetatie-stadium van een bloem wordt gekarakteriseerd door het percentage van de buisbloemen van een bloemkopje dat op een bepaald tijdstip (hier het 5 tijdstip van het oogsten} is geopend. Er kunnen derhalve bloemen worden geoogst, waarin bijvoorbeeld tussen 30-50%, 30-70%, 40-60%, 60-100% of 90-100% van de buisbloemen van het kopje is geopend; het werkzame stoffengehalte is er van afhankelijk in welk stadium zich de bloemen telkens bevinden en is bij de kamille volgens de uitvinding 10 het grootst, waneer 40-60% van alle buisbloemen is geopend en is zowel bij minder alsook bij meer geopende buisbloemen van een bloemkopje lager. Het is derhalve juist een groot voordeel van de kamille volgens de uitvinding, dat bij deze het uitbloeien van de individuele planten gelijkmatig verloopt, dat wil zeggen dat van een uitgezaaide hoeveelheid de 15 meerderheid van de planten telkens hetzelfde bloeistadium bezitten, dat wil zeggen dat bijvoorbeeld bij de veruit meeste planten 40-60% van alle buisbloemen van een bloemkopje op hetzelfde tijdstip is geopend. Daardoor is juist bij de kamelle volgens de uitvinding een volledige verzameling van de bloemkopjes op het optimale tijdstip mogelijk en is de kamille 20 volgens de uitvinding daardoor bijzonder geschikt voor mechanisch oogsten.

De samenhang van het gehalte aan chamazulen en (-)-a-bisabolol enerzijds met het bloeistadium ten tijde van het oogsten en anderzijds met de drogingstemperatuur bij de drogerijwinning is bij wijze van voorbeeld in de hiernavolgende tabel aangegeven (het gehalte aan overige 25 bisaboloïden is in alle gevallen kleiner dan 50%}.

- 8 1 -18-

Drogings- Vegetatiestadium van de bloemen op het tijdstip van oogsten temperatuur 3§-70% van alle buisbloemen 70-100% van alle buis- " van een bloemkopje geopend bloemen van een bloem- ratuur) kopje geopend werkzame stoffengehalte in werkzame stoffengehalte het gedroogde materiaal: in het gedroogde materiaal: niet hoger chamazulen: ten minste chamazulen: ten minste dan 50°C 100 mg% 40 mg% (-)-α-bisabolol: tenminste (-)-α-bisabolol: ten 200 mg% minste 120 mg% werkzame stoffen in een werkzame stoffen in een alkoholisch extract: alkoholisch extract: niet hoger chamazulen: ten minste chamazulen; ten minste dan δΟ'Ό 5,0 mg% 2,0 mg% (-)-α-bisabolol: tenminste (-)-α-bisabolol: ten ------ . 10,0 mg% minste 6,0 mg% werkzame stoffengehalte werkzame stoffengehalte in het gedroogde materiaal in het gedroogde materiaal tussen chamazulen: ten minste chamazulen: ten minste 50-70°C 50 mg% 30 mg% (-)-α-bisabolol: ten minste (-)-a-bisabolol: ten 150 mg% minste 100 mg% werkzame stoffen in een werkzame stoffen in een alkoholisch extract alkoholisch extract: tussen chamazulen: ten minste chamazulen: ten minste 50-70°C 2,5 mg% 1/5 mg% (-)-α-bisabolol: tenminste (-)-α-bisabolol: ten 7,5 mg% minste 10,0 mg% ._. ___ » 8 3 0 S 4 31 -19-

Hieruit volgt, dat uit de kamille die voor het bereiden van het middel volgens de uitvinding wordt toegepast, bijvoorbeeld bij een oogst, die plaatsvindt in het vegetatiestadium, waarin tussen 30-100% van de buisbloemen van de bloemkopjes is geopend en het drogen bij luchttempera-5 turen tot 70°C kan plaatsvinden, een droog materiaal wordt verkregen, waarvan het chamazulengehalte in elk geval ten minste 30 mg% en het (-)-a-bisabololgehalte ten minste 100 mg% bedraagt, terwijl het gehalte aan overige bisaboloïden steeds lager dan 50 mg% is.

In de alkoholische extracten is het gehalte aan overige bisaboloïden 10 steeds lager dan 10 mg%.

Het gehalte van de etherische olie, die volgens de voorwaarden vein de bovenstaand vermelde tabel uit een gedroogd materiaal wordt bereid, aan chamazulen en bisabolol is steeds ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-a-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden.

15 De bepaling van het chamazulen geschiedt spectraalfotometrisch overeenkomstig de bij kamille-extracten gebruikelijke wijze. De bepaling van het (-)-a-bisabolol en de overige stoffen in de kamille-olie vindt plaats volgens de hiervoor gebruikelijke gaschromatograsiche methode.

Een nauwkeurige beschrijving van de analytische bepalingsmethoden volgt 20 aan het einde van de beschrijving.

De werkzame stof chamazulen komt in de kamillebloem niet als zodanig, maar in de vorm van het sesquiterpeenlacton matricine voor. Het matricine bezit een farmacologische werking, die overeenkomt met die van chamazulen. Uit deze voortrap matricine ontstaat bijvoorbeeld bij 25 verhitting (bijvoorbeeld stoomdestillatie, thee-aftreksel) direct het chamazulen. Het is derhalve gebruikelijk om bij de kamille niet het gehalte aan matricine, maar het gehalte vein het zich hieruit vormende chamazulen aan te geven.

Toepassingsmogelijkheden van de kamille volgens de uitvinding zijn 30 bijvoorbeeld: het winnen van kamilledrogerij, kamilleölie, kamilleëxtrac-ten alsmede (-)-α-bisabolol, chamazulen en andere in kamille aanwezige stoffen. Zo kunnen uit de drogerij, die uit de kamille volgens de uitvinding wordt verkregen, bijvoorbeeld door extractie met alkoholen respectievelijk waterige alkoholmengsels af doorextractie met overkritische 35 gassen kamilleëxtracten respectievelijk kamilleuittreksels worden verkregen. Verder kunnen uit de drogerij kamilleölie, (-)-a-bisabolol, .;.

-20- chamazulen en andere in kamille aanwezige stoffen worden verkregen.

Alkoholische extracten van de drogerij bevatten bijvoorbeeld tenminste 1,5 rag%, bij voorkeur 5,0 mg% chamazulen en ten minste 5,0 mg%, bij voorkeur ten minste 10 mg% (-)-α-bisabolol in een alkoholisch droge-5 rij extract enmin&er dan 8 mg% aan overige bisaboloiden. De bereiding van dergelijke extracten geschiedt op de hiervoor gebruikelijke wijze. Voor de extractie kunnen bijvoorbeeld mengapparaten, bijvoorbeeld zogenaamde trogmengmachines, percolatoren en andere geschikte extractieapparaten worden gebruikt. De temperatuur tijdens de extractie bedraagt bij voor-10 beeld 10 tot 50°C. Een koeling is niet vereist.

Als oplosmiddel komen in het bijzonder rechte of vertakte alifatische, één- of meerwaardige alkoholen met 1-6 koolstofatomen zoals bijvoorbeeld methanol, ethanol, propanol-(2), butanol, glycerine, isopropylideen-glycerol en dergelijke in aanmerking, evenals mengsels van deze oplosmidde-15 len met water.

Er kunnen ook mengsels van deze oplosmiddelen worden gebruikt. De minimale hoeveelheid aan oplosmiddelen bedraagt twee delen oplosmiddel op één deel van het gedroogde materiaal. In het algemeen gebruikt men 2-20 delen oplosmiddel op 1 deel van het gedroogde materiaal, in het 20 bijzonder 3-10 delen oplosmiddel' op 1 deel van het gedroogde materiaal.

Voor de bereiding van extracten, in het bijzonder alkoholische extracten, kunnen ook verse kamillebloemen respectievelijk ingevroren kamillebloemen (indien verse bloemen werden ingevroren) worden gebruikt.

Een uit de drogerij verkregen etherische olie bevat ten minste 3,5% 25 chamazulen, bijvoorkeur ten minste 5% chamazulen en ten minste 10% (-)-a-bisabolol, bij voorkeur ten minste 15%(-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloiden.

De bereiding van een dergelijke etherische olie geschiedt in het algemeen doordat men de drogerij met water, bijvoorbeeld in tegenwoordig-30 heid van ascorbinezuur (bijvoorbeeld als zout, in het bijzonder als natriumzout) bij een pH-waarde tussen 4 en 6, bijvoorkeur 5-5,5 tot aan·, het kookpunt verwarmt. De pH-waarde wordt bijvoorbeeld met behulp van een zuur zoals zoutzuur ingesteld. Op één gewichtsdeel van het gedroogde materiaal worden bijvoorbeeld 10-50 gewichtsdelen water en eventueel 35 0,1-1 gewichtsdeel ascorbinezuur toegepast. Er wordt in het algemeen ge durende 2-8 uur verwarmd.

Λ -· Λ .5

ö :j h o 4 ö I

-21-

Het verkregen waterige destillaat wordt meerde keren met een lage aiifatische, vloeibare koolwaterstof (bijvoorbeeld petroleumether b.v. kookpunt 35-60°C) , pentaan, xylol, decaline) meerdere keren uitgeschud, de organische fase gedroogd (bijvoorbeeld met behulp van natriumsulfaat) 5 en het organische oplosmiddel op voorzichtige wijze verwijderd (bijvoorbeeld door afdestilleren in een rotatieverdamper of door destillatie bij 40-70°C, bij voorkeur bij 50-60°C). Bij hoger kokende oplosmiddelen wordt dit afdestilleren onder verminderde druk uitgevoerd.

De bepaling van de ingrediënten geschiedt op de reeds aangegeven 10 wijze.

Wanneer de bloemen van de kamille volgens de uitvinding worden geoogst in een vegetatiestadium, waarin 30-100% van de buisbloemen van een bloemkopje is geopend en de bloemen bij een luchttemperatuur tot 70°C worden gedroogd, bevat een aldus verkregen drogerij bijvoorbeeld ten-15 minste 30 mg% chamazulen, ten minste 100 mg% (-)-o-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden en een uit deze drogerij door destillatie in tegenwoordigheid van water bereide etherische olie bevat tenminste 3,5° chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10 mg% aan overige bisaboloïden, en een door extractie met lage alkoholen 20 bereid alkoholisch kamilleextract bevat ten minste 1,5 mg% chamazulen, ten minste 5,0 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10 mg aan overige bisabo-lolden.

Wanneer de bloemen van kamille volgens de uitvinding worden geoogst in het vegetatiestadium, waarin 30-70% van de buisbloemen van een bloem-25 kopje is geopend en de bloemen bij een luchttemperatuur van niet hoger dan 50°C worden gedroogd, bevat een dergelijke drogerij bijvoorbeeld ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden, bevat een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)a-bisabolol 30 en minder dan 10% aan overige bisaboloïden, en bevat een uit deze drogerij bereid alkoholisch extract ten minste 5,0 mg% chamazulen, ten minste 10,0 mg% (-)α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden. Wanneer de bloemen van de kamille volgens de uitvinding worden geoogst in het vegetatiestadium, waarin 30-70% van de buisbloemen' van een bloem-35 kopje is geopend en de bloemen bij een luchttemperatuur tüssen 50-70eC

8 5 3 3 4 -J i -22- zijn gedroogd, bevat de aldus verkregen drogerij bijvoorbeeld ten minste 50 mg% chamazulen, ten minste 150 mg% (-) -α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden, bevat een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder 5 dan 10% aan overige bisaboloïden en bevat een uit een dergelijke drogerij bereid alkoholisch extract ten minste 2,5 mg% chamazulen, ten minste 7,5 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden. Wanneer de bloemen worden geoogst in het vegetatiestadium, waarin 70-100% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen bij 10 een luchttemperatuur van niet hoger dan 50°C worden gedroogd, bevat de aldus verkregen drogerij bijvoorbeeld ten minste 40 mg% chamazulen, ten minste 120 mg% (-)-o-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisabolo-iden, bevat een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan 15 overige bisaboloïden, en bevat een uit deze drogerij bereid alkoholisch extract ten minste 2,0 mg% chamazulen, ten minste 6,0 mg% (-)-a-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden.

Wanneer de bloemen van de kamille volgens de uitvinding worden geoogst in het vegetatiestadium, waarin 70-100% van de buisbloemen van het 20 bloemkopje is geopend en de bloemen bij een luchttemperatuur tussen 50-70°C worden gedroogd, bevat de aldus verkregen drogerij bijvoorbeeld ten minste 30 mg% chamazulen, ten minste 100 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden, bevat een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-a-25 bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden, en bevat een uit deze drogerij bereid alkoholisch extract ten minste 1,5 mg% chamazulen, ten minste 10 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden.

Voorbeeld I

30 (Uitgangskamille is tetraploïd)

Door individuele plantenvariabiliteitstests van 10.000 planten van de tetraploïde kamillesoort, die beschreven is door I.sérkény (Herba Hungar. 4(1), 125 - 169 (1965) werd gevonden dan op ongeveer 1000 indivi-* duen één plant voorkomt, die in etherische olie een hoog chamazulengehal-35 te van 20 gew.% alsmede een hoog (-)-α-bisabololgehalte van 50 gew.% bezit, waarbij tegelijkertijd het gehalte aan overige bisaboloïden (in ^503 4 8.1 -23- het bijzonder (-)-α-bisabolonoxyde) zeer laag (minder dan 5 gew.%) is. Deze individuen werden uitgeselecteerd en aan de volgende trappen onderworpen : trap 1: 5 Van de nakomelingen van de (als bovenstaand beschreven) uitgeselec teerde tetraplolde kamilleplanten werden die individuen uitgekozen, die A) ongeveer tegelijkertijd bloeien, B) een gelijkmatige, grondstandige vertakking en een smalle bloei-zone van ongeveer 10 cm, bij voorkeur 5 cm bezitten, 10 c) grote bloemkopjes met een uitwendige diameter van ongeveer 30 mm, bij voorkeur 25-35 mm bezitten, D) een minimumgehalte voor chamazulen van 150 mg% en bisabolol van 300 mg% berieken of overschrijden en waarvan het gehalte aan overige bisaboloiden (in het bijzonder bisabololoxyden) duidelijk beneden 15 50 mg% ligt. (Alle waarden hebben betrekking op bloemkopjes, die bij 40°C gedroogd werden en waarvan het oogsten plaats vond in het stadium waarin 30-70% van alle buisbloemen vein een bloemkopje is geppend.

Deze planten werden verkloond. Hiertoe werden de planten (kloon-20 moederplanten) eerst teruggesneden op een spruitiengte van ongeveer 15 cm, onder een daglengte van 8 tot 10 uren en bij een temperatuur van 12 - 14eC tot een nieuw uitlopen gebracht (korte zijscheuten). De korte loten werden gesneden en in een turf-zand-nengsel ges token.3ij een relatieve luchtvochtigheid van ongeveer 100 %, sen luchttemperatuur van 15°C 25 en een daglengte van 14 uren duurde de wortelvorming van de stekken 7 -14 dagen.

In plaats van de vermelde conventionele verkloning (vermenigvuldiging van stekken) kan ook de in-vitro-vermenigvuldiging van tot deling in staat zijnde weefselpartijen van de planten worden gebruikt 30 (de zogenaamde meristeem-vermenigvuldiging).Voor het tot stand brengen van een kamillecultuur zijn verschillende delen van de planten geschikt, bij voorkeur de spruitpunten of de okselknoppen.

Na afspoelen van de planten met werden onder aseptische om standigheden in laminaire strdming (zwevende stoffen filter van hoog 35 vermogen met turbulentie-arme verdringingsstroming)spruitpunten van de bladokselknoppen verwijderd en in reagensglazen overgebracht, die ge- 8503 *?': -24- vuld waren met een voedingsmedium, bijvoorbeeld volgens Murashige en Skoog (Physiol. Plant. _15, 473 - 497, 1962). De reagensglazen werden in een klimaatkamer met een daglengte van 12 - 18, bij voorkeur 16 uren (bereikt door buizen met fluorescerend materiaal), met een lichtinten-5 siteit van 500 - 10.000 lux, bij voorkeur 1.000 - 3.000 lux en een temperatuur van 15-30°C, bij voorkeur 22-27°C geplaatst.

Zodra de explantaten een goede groei vertoonden, werden ze op een bovengenoemd voedingsmedium, echter met een hogere cytokinineconcen-tratie (bijvoorbeeld 30 mg/1 6-isopentenyladenine) en weinig of zelfs 10 geen auxine (0-0,3 mg/1 indoolazijnzuur) overgebracht. Daarna strekten zich de assen en werden adventieforganen en in vermeerdere mate oksel-knoppen gevormd. Deze konden volgens de eerdervermelde wijze verwijderd en geteeld worden. (Cytokinines zijn fytohormonen, die de celdeling bevorderen) .

15 De voor plantenvermenigvuldiging in groter aantal bepaalde explan taten (van de derde passage = derde vermenigvuldigingsgeneratie) werden na opgroeien en vorming van de bladeren op het eerstgenoemde voedingsmedium overgebracht op een voedingsbodem, die 10 mg/1 indoolazijnzuur of 3-indoolboterzuur of 0,1 - 0,3 mg/1 α-naftylazijnzuur bevat. Daarbij 20 vormen de plantjes wortels en konden na ongeveer 4 weken in met gesteriliseerde tuinaarde (12 uren bij 120°C met stoom behandeld) gevulde potten geplant en in de kas (onder omstandigheden als gebruikelijk voor conventionele stekvermenigvuldiging) verder gecultiveerd worden. Voedingsmedium volgens Murashige & Skoog: 25 ____nig/1 mg/1 ^4^3 400 Indoolazijnzuur 2,0

Ca(NO^). 2.411^0 144 Furfuryladenine 0,1 80 Thiamine 0,1 12,5 Nicotinezuur 0,5 30 MgSO^. 7^0 72 Pyridoxine 0,5 KC1 65 Glycine 2,0

NaFe-EDTA 25 myo-inosiet 100 H3B<^ 1,6 Caseïnehvdrolysaat 1000 411^0 6,5 Saccharose 2 % 35 ZnSO^^H^O 2,7 gereinigd KJ 0,75 Agar-poeder 1 % a k λ ί ·; {·· - -25- trap 2:

De na trap 1 verkregen planten bloeiden onder geïsoleerde omstandigheden gezamenlijk in de kas uit. De planten stonden hierbij in 11 cm-potten, gevuld met tuinaarde, bij 18-24eC dagen en 12-14°C nacht- 5 temperatuur. De daglengte bedroeg ten minste 14 uren en werd in het 2 winterhalfjaar door extra belichting (200 Watt/m ) bereikt. De water-verzorging geschiedde naar behoefte.

Van het totaal van de geselecteerde individuen werden in een tijdsbestek van 4 weken continu die kopjes voor het winnen van zaadmateriaal 10 geoogst, die gebloeid hadden en kort voor het verwelken stonden.

Het drogen vond plaats in een goed beluchte hal bij een luchttemperatuur tussen 20-30°C; aansluitend werd het zaadmateriaal met behulp van een spletenzeef (5 x 0,4 mm) af gezeefd en door een oplopende zifter nagezuiverd, trap 3

Uit het na trap 2 verkregen zaadmateriaal werd een steekproef genomen en hieruit ongeveer 2000 nakomelingen genomen (ecologische omstandigheden zoals bij trap 2) en volgens dezelfde kriteria’s a - D van trap 1 geselecteerd. Met de aldus geselecteerde individuen werd 20 daarna volgens trap 2 te werk gegaan. trap 4;

Van het zaadmateriaal volgens trap 3 werd een deel op twee verschillende standplaatsen in de herfst uitgezaaid.

Standplaats I

25 450 m MN,48,5° N / 11,5° 0, 750 mm totaal aan jaarlijkse neerslag,· vochtig-geraatigd klimaat Januari -10 tot 05C, Juli +10 tot +20°C, NN = noordelijk normaalnul = zeepeil °N = noorderbreedte (ngraad) 30 °0 = oosterlengte (ngraad)

Standplaats II

200 m NN, 42° N / 1° 0, 400 mm totaal aan jaarlijkse neerslag,

Middellandse Zee klimaat,

35 Januari 0 tot +10°C Juli +20 tot +30°C

^ WV * ·. I

-26-

Het uitzaaien vond op beide standplaatsen plaats aan het einde van september/begin van oktober.

De aldus verkregen veldproefbestanden werden met betrekking tot homogene groei, bloemgrootte en oogsttijd getest en beoordeeld (ge-5 waardeerd), bovendien werden steekproeven van de bloemen op het gehalte aan werkzame stoffen onderzocht. Uit het veldbestand werden opnieuw die individuen geselecteerd, die aan de bij trap 1 genoemde parameters beantwoordden. Hiervan werd zaadmateriaal overeenkomstig trap 2, laatste zin, gewonnen.

10 trap 5:

Met het zaadmateriaal volgens trap 4 werden de trappen 3 en 4 in de aangegeven volgorde en wijze herhaald. trap 6;

Uit het na trap 5 gewonnen zaadmateriaal werden ongeveer 1500 indi-15 viduen genomen (ecologische omstandigheden als bij trap 2) en volgens hetzelfde principe als bij trap 1 is aangegeven, geselecteerd. Van de aldus uitgeselecteerde planten werden 34 individuen uitgekozen en volgens trap 1 verkloond. Telkens 10 planten van elke kloon werden in een toevallige verdeling op een afstand van 40 x 30 cm in open land (standplaats 20 I, zie trap 4) op een geïsoleerde plaats geplant. De bodem was löss-leem, pH 7,0; het planten vond plaats in het begin van juni, de'eerste oogst van de zaden midden juli, daarna werden de planten teruggesneden, bloeiden nogmaals en leverden in het midden tot het einde van augustus een tweede oogst aan zaadgoed.

25 De zaadgoedwinning van dit materiaal vond plaats volgens trap 2.

Het na trap 6 verkregen zaadgoed is het vermenigvuldigingsmateriaal van de onderhavige kamille. Bloemen van planten uit dit vermenigvuldigingsmateriaal (uitzaaien september/oktober, oogst begin juni van het daaropvolgende jaar), die geplukt werden op het moment dat 30-70% van de 30 buisbloemen geopend is, en die onmiddellijk aansluitend in een droogkast bij 40°C gedurende 72 uren werden gedroogd, bevatten, betrokken op het gewicht van de gedroogde bloemen (droge materiaal) bijvoorbeeld ten minste 150 mg% chamazulen, 300 mg% (-)-α-bisabolol en ten hoogste 50 mg% overige bisabololden.

35 Verdere als voorbeeld gegeven opgaven over de volgens het voorbeeld verkregen planten van de onderhavige kamille zijn; 1 5 ·:3 w ij ! -27- 1. Groei

Stengels: rechtop, weinig vertakt; 2. 31advorming.

Blad: vindelig, 2- tot 3voudig; 5 Dikte: middelmatig;

Vinblad, middelgroene kleur;

Vinblad (midden van de stengels): vinvormingsmiddelmatige tot sterke vinvorming; 3. 31oemenstand.

10 Bloemkorfjes (bloemkopjes): uitwendige diameter ongeveer 30 mm, inwendige diameter ongeveer 15 mm;

Individueelkorfjesgewicht (droog): ongeveer 45 mg;

Bloeraspruit, lengte (mm): ongeveer 700, maar afhankelijk van de 15 teeltplaats (klimaat)^ de tijd van het uitzaaien, de bodem, de bemesting, de plantenbehandeling, de weersomstandigheden;

Begin van de bloeiperiode (dagen vanaf 1 januari): ongeveer 160e dag (uitzaai in september , standplaats Freising

West Duitsland, overigens afhankelijk van de bovengenoemde factoren).

20 3loei: Midden juni (zie boven); 3loemstanden zonder steel, gehalte aan etherische olie (% van de droge stof): ongeveer 1,0 %; gehalte aan azuleen in de etherische olie: ten minste 15 %;

Verval van de gedroogde bloemstanden, bloemdrogerij: gering, indien 25 geoogst voor het openen van de laatste buisbloemen;

Diameter van het stuifmeel: ongeveer 30 urn;

Lengte van de zaden: ongeveer 1,25 mm;

Aantal chromosomen van de somatische cellen: 4 n = 36; .··1·"· ^ ~T r .·1 «3 O:,- ,v ·; j < -28- 4. Vrucht

Duizendkorrelmassa (TKM) van de zaden: 0,06 tot 0,13 g; 5. Kiemvermogen (KF) ca 57% 5 6. Zuiverheid 94 - 95% ,- 7. Verdere kenmerken

Indroogverhouding vers : droog (bloemen) =5,5-6 : 1, karakteristieke aromatische geur van de drogerij, fijn aromatische, typische 10 smaak van een thee-uittreksel.

Bovendien kunnen de volgende eigenschappen aanwezig zijn: uniforme groeihoogte (evenwichtigheid) met smalle bloeizone, derhalve bijzonder geschikt voor mechanisch oogsten, grote bloemkoppen, middelhoge opbrengst; grondstandig vertakte (3-5-voudig) vorm.

15 Winning van de drogerij:

De volgens dit voorbeeld verkregen kamille werd op gebruikelijke wijze in het veld uitgezaaid. Zodra de planten zich hadden ontwikkeld en de bloemkopjes in het vegetatiestadium verkeerden, waarin ongeveer 50% van de buisbloemen was geopend, werden deze bloemkopjes met behulp 20 van een kamilleplukmachine geoogst, waarbij de kamafstanden van de pluk-machine zodanig waren ingesteld, dat alleen de bloemkopjes waarvan de buisbloemen voor 50% open zijn, werden afgeritst. Het geoogste materiaal werd zo snel mogelijk naar een schaduwrijke plaats getransporteerd en daar tot aan de verdere verwerking in een dunne laag uitgespreid. Ver-25 volgens werden de bloemkopjes in een zeefinrichting van de stengel bevrijd en gedroogd tot constant gewicht. Het gewichtsverlies bedroeg ongeveer 80%. Het drogen vond in de schaduw plaats op een goed beluchte plaats op rekken in een laagdikte van ongeveer 10 cm.

Na ongeveer 2-3 dagen was het drogen beëindigd. Voor het verwijderen 30 van stengeldelen en bloemgruis werd de kamilledrogerij gezeefd en aansluitend tot bollen geperst.

Analyse etherische olie: 960 mg% chamazulen: 162 rag% 35 (-)-α-bisabolol: 330 mg%

85 3 3 4 3 I

-29-

Wanneer het drogen bijvoorbeeld plaats vindt in een stationaire banddroogapparatuur met behulp van kunstmatig verwarmde lucht bij een temperatuur tussen 50 en 7Q°C, is het drogen na ongeveer 4-5 uren beëindigd. Voor het verwijderen van stengeldelen en bloemgruis wordt de 5 drogerij gezeefd en aansluitend tot bollen geperst. De analysewaarden van een dergelijke drogerij zijn bijvoorbeeld: etherische olie s 870 mg% chamazulen: 94 mg% (-)-a-bisabolol: 197 mg%.

10 Voorbeeld II

(Uitgangskamille is tetraplold).

Door individuele plan tenvariabiliteits tests van 10.000 plein ten van de tetraploïde kamillesoort, die beschreven is door I.Sérkany (Herba Hungar. 4_(1) , 125 - 169 (1965), werd gevonden, dat op ongeveer 1000 15 induviduen één plant voorkomt, die in etherische olie een hoog chamazu-lengehalte van 20 gew.% alsmede een hoog (-)-α-bisabololgehalte van 50 gew.% bezit, waarbij tegelijkertijd het gehalte aan overige bisabolo-iden (in het bijzonder (-)-crbisabolonoxyde) zeer laag (minder dan 5 gew.%) is. Deze individuen werden uitgeselecteerd en aan de volgende 20 trappen onderworpen: trap 1s

Van de nakomelingen van de als bovenstaand beschreven uitgeselecteerde tetraploïde kamilleplanten werden die individuen uitgekozen, die een minimumgehalte voor chamazulen van 100 mg% en voor (-)-α-bisabolol van 25 200 mg% bereiken of overschrijden en waarvan het gehalte aan overige bisaboloïden (in het bijzonder bisabololoxyden) beneden 50 mg% ligt.

Alle waarden hebben betrekking op hLoemkopjes,die bij ongeveer 40°C gedroogd zijn en waarvan het oogsten plaats vond in het stadium, waarin ongeveer 30-70% van alle buisbloemen van een kopje was geopend.

30 trap 2:

Van de volgens trap 1 verkregen planten werden alle opengebloeide bloemkorfjes verwijderd, vervolgens kwamen de planten in een kas en bloeiden onder geïsoleerde omstandigheden gezamenlijk uit. De planten stonden hierbij in 11 cm-potten, gevuld met tuinaarde, bij 18-24°C 35 dag- en 12-14°C nachttemperatuur. De daglengte bedroeg ten minste 2 14 uren en werd in het winterhalfjaar door extra belichting (200 Watt/m ) o £ λ " : U V J 1 -30- bereikt. De waterverzorging geschiedde naar behoefte.

Van het totaal van de geselecteerde individuen werden in een tijdsbestek van 4 weken continu die kopjes voor het winnen van zaadgoed geoogst, die gebloeid hadden en kort voor het verwelken stonden. Het dro-5 gen geschiedde in een goed beluchte hal bij een luchttemperatuur tussen 20-30°C; vervolgens werd het zaadgoed met behulp van een spletenzeef (5 x 0,4 mm) afgezeefd en door een oplopende zifter nagezuiverd. Het volgens trap 2 verkregen zaadgoed is het vermenigvuldigingszaadgoed van de onderhavige kamille.

10 Bloemen van planten uit dit vermenigvuldigingsmateriaal (uitzaaien september/oktober, oogsten begin juni van het daaropvolgende jaar) die geplukt werden op het tijdstip dat 30-70% van de buisbloemen was geopend, en die onmiddellijk daarop aansluitend in een droogkast bij 40°C gedurende 72 uren waren gedroogd, bevatten, betrokken op het ge-15 wicht van de gedroogde bloemen, ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en ten hoogste 50 mg% overige bisabololden,

Winning van de drogerij;

De volgens dit voorbeeld verkregen kamille werd op gebruikelijke wijze in het veld uitgezaaid zodra de planten zich ontwikkeld hadden en 20 de bloemkopjes in het vegetatiestadium verkeerden, waarin ongeveer 50% van de buisbloemen was geopend, werden deze bloemkopjes met een kamil-leplukmachine geoogst, waarbij de kamafstanden van de plukmachine zodanig waren ingesteld, dat alleen de bloemkopjes waarvan de buisbloemen voor 50% open zijn, werden afgeritst. Het geoogste materiaal werd zo 25 snel mogelijk naar een schaduwrijke plaats getransporteerd en daar tot aan de verdere verwerking in een dunne laag uitgespreid. Vervolgens werden de bloemkopjes in een zeefinrichting van de stengel bevrijd en gedroogd tot constant gewicht. Het gewichtsverlies bedroeg ongeveer 80%. Het drogen geschiedde in de schaduw op een goed beluchte plaats op rek-30 ken in een laagdikte van ongeveer 10 cm.

Na ongeveer 2-3 dagen was het drogen beëindigd. Voor het verwijderen ^ van stengeldelen en bloemgruis werd de kamilledrogerij gezeefd en aansluitend tot bollen geperst.

Analyse 35 etherische olie: 940 mg% chamazulen: 132 mg% (—) —α—bisabolol 243 mg% 35 0 3 4 8 1 -31-

Wanneer het drogen bijvoorbeeld plaatsvindt in een stationaire band-drooginrichting met behulp van kunstmatig verwarmde lucht bij een temperatuur tussen 50 en 70°C, is het drogen na ongeveer 4-5 uren beëindigd. Voor het verwijderen van stengeldelen en bloemgruis wordt de drogerij ge-5 zeefd en vervolgens tot bollen geperst. De analysewaarden van een dergelijke drogerij zijn bijvoorbeeld: etherische olie : 775 mg% chamazulen; 65 mg% (-)-a-bisabolol: 163 mg%

10 Voorbeeld III

(Uitgangskamille is diploid).

Door individuele plantenvariabiliteitstests van de diploide, slechts weinig bisabolol bevattende, maar niet bisabololvrije kamilles, die beschreven zijn in Franz, Ch, J.Hölzl en A. Vömel: Acta Horticulturae 73, 15 109 - 114 (1978) werd gevonden dat ten hoogste 20% van alle individuen in de etherische olie een chamazulengehalte van ongeveer 20 gew.% en/of een hoog (-)-α-bisabololgehalte van 50 gew.% bezitten, waarbij tegelijkertijd het gehalte aan de overige bisaboloiden (in het bijzonder (-)-α-bisabolonoxyde) zeer laag is. Deze individuen werden uitgeselec-20 teerd en als volgt getetraploldiseerd:

Zaden van de aldus uitgeselecteerde kamilleplanten werden op een met 0,05 %-ige waterige colchicineoplossing gedrekt filtreerpapier gebracht en bij kamertemperatuur (20°C) 6 uur de gelegenheid gegeven om op te zwellen. Daarna werden ze van het filtreerpapier verwijderd, meerdere 25 malen met water gespoeld en in zaadkisten (kas) uitgezaaid: aarde: turf-zand-mengsel 1:1, temperatuur: 18-20°C; relatieve luchtvochtigheid: ongeveer 60%; daglengte bij kunstmatige belichting: 14 uren.

De ontkiemende planten werden geobserveerd totdat ze bloeiden, het polyploldisatieresultaat werd door vergelijkende meting van de stuifmeel-30 en zaadgrootte alsmede door het tellen van de chromosomen van de planten (F^-nakomelingen ~ eerste, uit zaden verkregen nakomelingen van de als tetraploïd bevestigde, met colchicine behandelde planten) vastgesteld.

De tetraploidisatie kan ook op de volgende wijze plaats vinden:

Op met water doordrenkt filtreerpapier uitgekiemde 5-7 dagen oude, 35 goed ontwikkelde kamillekiemen werden bij kamertemperatuur (20°C) gedurende 4-6 uren met de kiemblaadjes naar beneden geplaatst in een Q 5 Λ λ ‘1 W J 1 « r \ -32- 0,5%-ige colchicineöplossing. De gevoelige kiemwortels werden daarbij gespaard? om te vermijden datzedoor uitdroging zouden worden beschadigd, moet de omgevende atmosfeer een relatieve luchtvochtigheid van nagenoeg 100% bezitten. Na de behandeling werden de kiemen met water meerdere 5 malen gespoeld en in plantkistjes gepoot. De verdere behandeling geschiedde zoals bij de zaden.

De metingen van de stuifmeelgrootte werden met een Leitz-binoculair-onderzoeksmicroscoop met micrometer-meetoculair en micrometer-object-drager uitgevoerd.

10 Het tellen van de chromosomen vond plaats aan wortelpunten: van de in de kas gekweekte jonge planten of stekplanten werden 1-2 cm lange verse worteluiteinden verzameld, die 5 uur in 0,002 molaire hydroxychino-lineóplossing en aansluitend gedurende 15 minuten in IN HC1 werden geplaatst. Voor het onderzoek werd ongeveer 1 mm van de wortelpunten ge-15 kleurd met 2% orcelne-azijnzuur en ondergedompeld in olie microscopisch onderzocht. Bij de cellen die zich in mitose bevinden, kan aldus de viervoudige chromosomenset van de somatische cellen worden bepaald (4n = 36) .

De planten, waarbij de stuifmeeldiameter met ongeveer 50% groter is 20 dan die van het diplolde uitgangsmateriaal (ongeveer 30 in plaats van ongeveer 20 ^im) en waarbij de chromosomenset van de somatische cellen tot 36 was verdubbeld (bij het diploide uitgangsmateriaal is het overeenkomstige aantal 18) zijn tetraplold. Deze werden uitgeselecteerd. Ongeveer 0,1 tot 0,5% van de zaden respectievelijk van de kiemen werden 25 bij de bovenstaand beschreven methode getetraploïdiseerd en ontwikkelden bloeivermogen bezittende intacte planten. Hierop sluiten nu bijvoorbeeld de trappen 1 en 2 volgens voorbeeld II aan.

De bloemen van de aldus verkregen kamille bevatten bijvoorbeeld ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en 30 ten hoogste 5omg% aan overige bisaboloiden (oogsten op het tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen geopend is en drogen gedurende 72 uur in een droogkast bij 40°C).

Winning van de drogerij;

De volgens dit voorbeeld verkregen kamille werd op gebruikelijke 35 wijze in het veld uitgezaaid. Zodra de planten zich ontwikkeld hadden ij -j ·ν -ï υ i ____ V · J· -33- en de bloemkopjes in het vegetatiestadium verkeerden waarin ongeveer 50% van de buisbloemen geopend was, werden deze bloemkopjes met behulp van een kamilleplukmachine geoogst, waarbij de kamafstanden van de plukma-chine zodanig waren ingesteld dat alleen de bloemkopjes waarvan de buis-5 bloemen voor 50% open waren, werden afgeritst. Het geoogste materiaal werd zo snel mogelijk naar een schaduwrijke plaats getransporteerd en daar tot aan de verdere verwerking in een dunne laag uitgespreid. Vervolgens werden de bloemkopjes in een zeefinrichting van de stengels bevrijd en gedroogd tot constant gewicht. Het gewichtsverlies bedroeg ongeveer 10 80%. Het drogen geschiedde in de schaduw op een goed beluchte plaats op rekken in een laagdikte van ongeveer 10 cm.

Na ongeveer 2-3 dagen was het drogen beëindigd. Voor het verwijderen van stengeldelen en bloemgruis werd de kamilledrogerij gezeefd en vervolgens tot bollen geperst.

15 Analyse: etherische olie 910 mg% chamazulen 117 mg% (-)-a-bisabolol 252 mg%

Voorbeeld IV

20 (Uitgangskamille is diploid).

Door individuele plantenvariabiliteitstests van de diploïde, maar weinig bisabolol bevattende, maar niet bisabolol-vrije kamilles, die beschreven zijn in Franz, Ch„, J. Hölzl en A. Vömel: Acta Horticulturae 73, 109 - 114 (1978) werd gevonden,dat ten hoogste 20% van alle indivi-25 duen in de etherische olie een chamazulengehalte van ongeveer 20 gew.% en/of een hoog (-)-α-bisabololgehalte van 50 gew.% bezitten, waarbij tegelijkertijd het gehalte aan de overige bisaboloïden (in het bijzonder (-)-a-bisabolonoxyde) zeer laag is. Deze individuen werden uitgeselecteerd en precies zoals in voorbeeld III is aangegeven getetraploïdiseerd 30 en de tetraploïde individuen werden uitgeselecteerd.

Ongeveer 0,1 tot 0,5% van de zaden, respectievelijk van de kiemen werden getetraploïdiseerd en ontwikkelde bloemvermogen bezittende, intacte planten.

Hierop sluiten nu bijvoorbeeld de trappen 1-6 volgens voorbeeld I

35 aan.

De bloemen van de aldus verkregen kamille bevatten bijvoorbeeld ten £ o - 1 * t

V

-34- minste ongeveer 150 mg% chamazulen, 300 mg% (-)-α-bisabolol en ten hoogste 50 mg% aan overige bisaboloiden (oogsten op een tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen geopend is en drogen gedurende 72 uur in een droogkast bij 40°C). De overige eigenschappen stemmen overeen met die van de kamille 5 die volgens voorbeeld I werd verkregen.

Winning van de drogerij.

De volgens dit voorbeeld verkregen kamille werd op gebruikelijke wijze in het veld uitgezaaid. Zodra de planten zich hadden ontwikkeld en de bloemkopjes in het vegetatiestadium verkeerden, waarbij ongeveer 50% 10 van de buisbloemen was geopend, werden deze bloemkopjes met een kamille-plukmachine geoogst, waarbij de kamafstanden van de plukmachine zodanig waren ingesteld, dat alleen de bloemkopjes waarvan de buisbloemen voor 50% open waren, werden afgeritst. Het geoogste materiaal werd zo snel mogelijk naar een schaduwrijke5 plaats getransporteerd en daar tot aan de 15 verdere verwerking in een dunne laag uitgespreid. Vervolgens werden de bloemkopjes in een zeefinrichting van de stengels bevrijd en gedroogd tot constant gewicht. Het gewichtsverlies bedroeg ongeveer 80%. Het drogen vond plaats in de schaduw op een goed beluchte plaats op rekken in een laagdikte van ongeveer 10 cm.

20 Na ongeveer 2-3 dagen was het drogen beëindigd. Voor het verwijderen van stengeldelen en bloemgruis werd de kamilledrogerij gezeefd en vervolgens tot bollen geperst.

Analyse; etherische olie 1020 mg% 25 ..chamazulen 173 mg% (-)-a-bisabolol 418 mg%

Winning van de etherische olie.

Uitgangsmateriaal is een drogerij uit de kamille volgens de uitvinding. Voor het produceren van de drogerij worden alleen bloemkopjes 30 gebruikt, waarbij 30 tot 70%, in het bijzonder 40 tot 60% van de buisbloemen geopend is. Het drogen vindt plaats in een droogkast bij 40°C gedurende 72 uren. De etherische olie van de kamillebloemen wordt als hierna beschreven door 2 uren stoomdestillatie van de drogerij gewonnen: 2,0 g niet-verkleinde drogerij wordt in een liter-rondbodem met 35 250 ml ontzout water gemengd en aan een twee uren durende refluxdestilla- tie in een Clevenger-Apparaat (stoomdestillatie-reflux-apparatuur voor λ » .· - ..

-j i -35- kwantitatieve bepaling van kleine hoeveelheden etherische oliën) onderworpen. Tevoren is daarin 1 ml pentaan pro analysi gebracht. De reflux-snelheid bedraagt 40 ± 4 druppelS/minuut. Na afloop van de destillatie wordt de in pentaan opgeloste etherische olie zoveel mogelijk watervrij 5 in reagensglazen gebracht en eventueel resterende in de apparatuur hechtende etherische olie met pentaan nagespoeld. Ter verwijdering van eventuele waterresten wordt aan de' oplossing een spatelpunt gedroogd Na^SO^ toegevoegd en wordt de oplossing vervolgens door een glasfilter-trechter met porositeit D 3 of D 4 in rolrandkolven afgezogen. Na af-IQ dampen van het pentaan bij 40°C in een waterbad en nadrogen in een exsiccator wordt de hoeveelheid olie gravimetrisch bepaald. In de aldus verkregen olie (ongeveer 20 mg) worden aansluitend het chamazulen en. het bisabolol bepaald.

Spectraalfotometrische bepaling van het chamazulen. _ . - - 15 Meetoplossing: De totale, uit 2 g drogerij verkregen etherische olie (ongeveer 20 mg, verkregen op de bovenstaand beschreven wijze) wordt in 25 ml n-hexaan of cyclohexaan opgelost.

20 Meetinstrument: filterfotometer (bijvoorbeeld Eppendorf).

Golflengte: 378 nm cuvet: 1 cm

Specifieke extinctie van chamazulen (1 g/100 ml; 1 cm): 20,3 25 Ccmoensatievloeistof: n-hexaan of cyclohexaan

Gevonden gehalte aan chamazulen in mg/100 g: 120.E.^g 8¾ rt 1 Λ ' A J> «Λ . - i I.

" t -36-

Wanneer voor de meting geen filterfotometer ter beschikking staat, kan de bepaling ook met een spectraalfotometer worden uitgevoerd:

Meetinstrument: spectraalfotometer (bijvoorbeeld ?M Q II / of PM Q III "ZEISS") 5 Golflengte: 605 nm cuvet: . 1 cm

Specifieke extinctie van chamazulen (1 g/100 ml; 1 cm): 24,5

Compensatievloeistof: n-hexaan of cyclohexaan ----------- 10 Gevonden gehalte aan chamazulen in mg/100 g: 102.Eggg

In de meetoplossing wordt aansluitend het bisabolol bepaald.

Gaschromatografische bepaling van het bisabolol en de overige bisabo-lolden ♦___________________

Gaschromatograaf: Hewlett Packard Mödell 5750,

Erba Fractovap 2350 of soortgelijk instrument.

Detector: Vlam-ionisatie-detector

Dragergas: helium 20 Kolom: 1/8 duimj 200 cm? staai

Kolomvulling: 3 % nitrilsilicongummi "XE 60" op kiezelgoer, gesilaniseerd "Chromosorb WAW HP" 125 tot 150 um als dragermateriaal 8503 48) > -37-

Temparatuur:

Detector: 320°C

Inspuitblok: 22Q°C

Kolom: 35 - 22QeC

5 Temperatuurprogrammering: 4e/minuut

Monsteropiossing: Men gebruikte da meetoplossing voor het chamazulen

Vergelijkingsoplossing: ongeveer 15 mg standaard-bisabolol wordt opgelost in cyclohexaan tot 25 ml 10 Inspuithoeveelheid: Van de monsteropiossing en de vergelij- kmgsoplcssing telkens 5 ul

Evaluatie: De evaluatie geschiedt door vergelijking van de piekoppervlakken

Gehalte aan bisabolol in mg 10 x de ingewogen hoeveelheid (verge-15 per 100 g drogerij: lijking) Cmg] x

Oppervlak (monster)/ oppervlak (vergelijking)

De bepaling van de overige bisabololden kan eveneens door gaschro-matografie bijvoorbeeld onder de volgende opname-omstandigheden 20 plaatsvinden:

Apparatuur: Packard, Mode11 7721, Serie 300 res pectievelijk Erba Fractovap Serie 2350

Kolommen: Glaskolommen, 3 m/2 mm in diameter; 2 m/ 2 mm in diameter 25 Vulling: 3 % methylfenylsilicongummi "OV I" op kiezelgoer gesilaniseerd "Gas-chrom Q" 125 tot 150 urn als drager-materiaal.

Dragergas: 30 ml/minuut V IJ ft ;« ·. - w y %· w - ^ t -38-

Temperatuurprogramma 80 tot 180°C, 2,5 (3)°C/minuut

Injector/detectortemperatuur 200°C

Detector: Vlam-ionisatie-detector

Inspuithoeveelheid ongeveer 2 ul van de ongeveer 5 1 : 50 verdunde etherische olie

De evaluatie geschiedt deels zonder, deels met inwendige standaard.

Als inwendige standaard zijn laurinezuurmethylester of hexadecaan voor chamazulenarme respectievelijk chamazulen'vrije oliën geschikt. Bij oliën met een chamazulengehalte van meer dan 5% heeft deze als inwendige 10 standaard de voorkeur, waarbij de gehaltebepaling fotometrisch (bij 578 nm) plaatsvindt.

Voorbeeld V

Bereiding van een extract uit kamilledrogerij.

De kamillebloemen voor de toegepaste drogerij werden volgens 15 voorbeeld I geoogst op een tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen was geopend en bij een luchttemperatuur van niet hoger dan 50°C gedroogd.

400 g van de aldus verkregen kamilledrogerij met een gehalte van 105 mg% chamazuleeen en 212 mg% (-)-α-bisabolol werden met 2100 g waterige ethanol (40 gew.% ethanol) in een trogmenger bij een toerental 20 van het mengorgaan van 30 omwentelingen per minuut gedurende 3 uur lang geëxtraheerd. Het drogerijmateriaal werd aansluitend afgeperst en het extract gefiltreerd.

In het extract werd op bekend wijze het werkzame stoffengehalte bepaald.

25 · chamazuleen: 3,7 mg% (-)a-bisabolol: 10, 2 mg%

Voorbeeld VI

Bereiding van een extract uit verse kamille.

758 g verse kamillebloemen van een kamille die volgens voorbeeld I 30 was geoogst op een tijdstip waarop 30-70% van de buisbloemen was geopend (watergehalte 74%) werden met 510 g ethanol (84 gew.%) in een trogmenger bij een toerental van het mengorgaan van 75 omwentelingen per minuut gedurende 30 minuten lang geëxtraheerd. Het drogerijmateriaal werd aansluitend afgeperst en het extract gefiltreerd.

35 In het extract werd op bekende wijze het werkzame stoffengehalte bepaald: 85 03 4 & : -38a- V .* chamazuleen: 11,7 mg% (-)-a-bisabolol: 16,3 mg%

Voorbeeld VII

Bereiding van een etherische kamille-olie.

5 200 g volgens voorbeeld X verkregen gedroogde kamillebloemen (het drogen vond bij 50°C plaats onder uitsluiting van zonlicht) werden in een 5 1 rondbodem met 3,6 1 water en 2 g natriumascorbaat gemengd; het mengsel werd met IN HC1 ingesteld op een pH waarde van 5,0. Na toevoeging van kookstenen werd tot het kookpunt verwarmd. Binnen ongeveer 3 uur 10 werd ongeveer 1,2 destillaat opgevangen.

Na afloop van de destillatie werd het destillaat drie keer met telkens 100 ml petroleumether uitgeschud en boven watervrij natriumsul-faat gedroogd. De gedroogde oplossing werd gefiltreerd en het oplosmiddel werd aansluitend in een rotatieverdamper afgedestilleerd.

15 In de verkregen etherische olie werd vervolgens het gehalte aan chamazuleen en (-)-α-bisabolol bepaald.

Opbrengst: 1,44 g etherische olie chamazuleen: 3,6% i.olie (-)-a-bisabolol: 10,2% i.olie.

t * ·*·».

: j U ‘ v· O * ...... >Ν. __ *

Claims (17)

1. Bisabolol-rijke, tetraplolde kamille van de cultuurplantensoort echte kamille (Chamomilla recutita (L) Rauschert, synoniem met Matricaria chamomilla L., Asteraceae), waarvan de bij 40°C gedroogde bloemen betrokken op de droge stof ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% 5 (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloiden bevatten.

2. Vermenigvuldigingsmateriaal van een kamille volgens conclusie 1.

3. Werkwijze voor het bereiden van een nieuwe bisabolol-rijke, tetra-ploide kamille van de cultuurplantensoort echte kamille (Chamomilla recutita CL.), synoniem met Matricaria chamomilla L., Asteraceae), waar- 10 van de bij 40°C gedroogde bloemen betrokken op de droge stof ten minste 100 mg& chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50mg% aan overige bisaboloiden bevatten, met het kenmerk, dat men uit een tetraplolde kamille, waarbij (-)-α-bisabolol de hoofdcomponent van de etherische olie voorstelt, die planten uitselecteert, waarvan de 15 bij 40°C gedroogde bloemen ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloiden bevatten, en eventueel deze planten aan verdere selectie- en vermenig-vuldigingstrappen onderwerpt, en eventueel uit kamilleplanten van de aldus verkregen kamillesoorten 20 vermenigvuldigingsmateriaal en/of een kamilledrogerij wint.

4. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat de tetraplolde kamille uit een diploide kamille, waarbij (-)-α-bisabolol de hoofdcomponent van de etherische olie voorstelt, door tetraploidisatie met behulp van chemicaliën bij temperaturen tussen 0 en 35°C, door middel van 25 gammastralen, röntgenstralen of UV-stralen, bij temperaturen tussen 0 en 35°C, met behulp van hoge temperaturen van 33-50°C, met behulp van lage temperaturen van 0-5°C, met behulp van de decapiterings-kallus-methode of door antherumcultuur met aansluitende tetraploidisatie plaats vindt.

5. Werkwijze volgens een der voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de selectie- en vermenigvuldigingstrappen bestaan uit: a) selectie van ten minste 10 individuen van de tetraploide planten naar werkzame stoffengehalte (ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% bisabolol en minder dan 50 mg% overige bisaboloiden, £ ~ p, ~ Λ r. '> .·: V '<ty j \ -40- alles betrokken op de droge stof), gelijktijdige bloeitijd, gelijkmatige grondstandige vertakking alsmede een bloemkopjesgrootte van 20-40 mm, verkloning van de aldus uitgeselecteerde planten en winnen van zaadgoed uit de door de verkloning verkregen planten, 5 b) kweken van nakomelingen uit het volgens a) verkregen zaadgoed, aansluitende selectie volgens a) en winnen van zaadgoed uit de aldus uitgeselecteerde plein ten, c) 3-5 malige herhaling van de maatregelen volgens b), d) kweken van nakomelingen uit het volgens c) verkregen zaadgoed, 10 selectie van deze nakomelingen volgens a), verkloning van de aldus geselecteerde planten en winnen van zaadgoed uit de door de verkloning verkregen planten.

6. Kamille of kamillevermenigvuldigingsmateriaal, verkregen volgens één of meerdere van de voorgaande conclusies.

7. Toepassing van kamille volgens één of meerdere van de bovenstaande conclusies voor het bereiden van vermenigvuldigingsmateriaal.

8. Werkwijze voor het bereiden van vermenigvuldigingsmateriaal, met het kenmerk, dat uit kamilleplanten volgens een of meerdere van de bovenstaande conclusies op op zichzelf bekende wijze zaden of stekken worden 20 gewonnen.

9. Toepassing van een kamille volgens een of meerdere van de bovenstaande conclusies voor het bereiden van een kamilledrogerij. 10o Werkwijze voor het bereiden van een kamilledrogerij uit bloemen van de kamille volgens een of meerdere van de voorgaande conclusies, met 25 het kenmerk, dat de bloemen in een vegetatiestadium worden geoogst waarin 30-100% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen bij een luchttemperatuur tot 70°C worden gedroogd, waarbij een aldus verkregen drogerij ten minste 30 mg% chamazulen, ten minste 100 mg% (-)-a-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat en 30 eventueel uit de aldus verkregen drogerij door destillatie in tegenwoordigheid van water een etherische olie bereidt, die ten minste 3,5% cha—-mazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden bevat, of door extractie met lage alkoholen een alkoholisch kamilleextract bereid, dat ten minste 1,5 mg% chamazulen, ten minste 35 5,0 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10 mg% aan overige bisaboloïden bevat. Vi -> ··. * ' V- ï ΛΤ \ « t > t i -41-

11. Werkwijze voor het bereiden van een kamilledrogerij uit bloemen van de kamille volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de bloemen worden geoogst in het vegetatiestadium waarin 30-70% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen 5 bij een luchttemperatuur van niet hoger dan 50°C worden gedroogd en deze drogerij ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg (-)-a-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat en een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden bevat 10 en een hieruit bereid alkoholisch extract ten minste 5,0 mg% chamazulen, ten minste 10,0 mg% (-)α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden bevat.

12. Werkwijze voor het bereiden van eenkamile drogerij uit bloemen van de kamille volgens één of meer van de voorgaande conclusies,met het ken- 15 merk, dat de bloemen worden geoogst in het vegetatiestadium waarin 30-70% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen bij een luchttemperatuur tussen 50-70°C worden gedroogd en de aldus verkregen drogerij ten minste 50 mg% chamazulen, ten minste 150 mg% (-)-a-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat en een 20 eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5 % chamazulen, 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden bevat en een hieruit bereid alkoholisch extract ten minste 2,5 mg% chamazulen, ten minste 7,5 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden bevat. '25 13. Werkwijze voor het bereiden van een kamilledrogerij uit bloemen ' van de kamille volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de bloemen worden geoogst in het vegetatiestadium waarin 70-100 % van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen bij een luchttemperatuuur van niet hoger dan 50 °C worden gedroogd en de aldus 30 verkregen drogerij ten minste 40 mg% chamazulen, ten minste 120 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat en een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden bevat en een hieruit bereid alkoholisch extract ten minste 2,0 mg% chama-35 zulen, ten minste 6,0 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10,0 mg% aan overige bisaboloïden bevat. D 0 0 ^ 'b I ...... -42-

14. Werkwijze voor het bereiden van een kamilledrogerij uit bloemen van de kamille volgens een van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat de bloemen worden geoogst in het vegetatiestadium waarin 70-100% van de buisbloemen van een bloemkopje geopend is en de bloemen bij een 5 luchttemperatuur tussen 50-70°C worden gedroogd en de aldus verkregen drogerij ten minste 30 mg% chamazulen, ten minste 100 mg% (-)-a-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat en een eventueel hieruit bereide etherische olie ten minste 3,5% chamazulen, ten minste 10% (-)-α-bisabolol en minder dan 10% aan overige bisaboloïden bevat 10 en een hieruit bereid alkoholisch extract ten minste 1,5 mg% chamazulen, ten minste 10 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan -10,0 mg% aan overige bisaboloïden bevat.

15. Werkwijze voor het bereiden van een kamilledrogerij uit bloemen van de kamille volgens één of meer van de voorgaande conclusies, die 15 ten minste 100 mg% chamazulen en ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol bevat, waarbij het gehalte aan overige bisaboloïden beneden 50 mg% ligt.

16. Kamilledrogerij die ten minste 100 mg% chamazulen, ten minste 200 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 50 mg% aan overige bisaboloïden bevat, met het kenmerk, dat voor de bereiding daarvan bloemen van de 20 kamille volgens een of meer van de voorgaande conclusies worden toegepast..

17. Etherische olie, die onder toepassing van verse, ingevroren of gedroogde bloemen van de tetraplolde kamille volgens de hoofdconclusie wordt verkregen, met het kenmerk, dat hij ten minste 3,5% chamazulen en 25 ten minste 10% {-)-α-bisabolol en minster dan 10% aan overige bisabolo-iden bevat.

18. Alkoholisch kamilleëxtract dat onder toepassing van verse, ingevroren of gedroogde bloemen van de tetraplolde kamille volgens de hoofdconclusie is verkregen, met het kenmerk, dat het ten minste 1,5 mg% chamazulen en ten minste 5,0 mg% (-)-α-bisabolol en minder dan 10 mg% 30 aan overige bisaboloïden bevat.

19. Gebruik van de tetraplolde kamille volgens de hoofdconclusie respectievelijk van de gedroogde bloemen daarvan voor het bereiden vein alkoholische kamilleëxtracten of voor het bereiden van etherische kamilie-olie. * Srr λ * ; - .-¾ , Ονο 4 ï i