FR2574621A1 - Procede pour la production d'une nouvelle camomille tetraploide et riche en bisabolole, dotee de caracteristiques ameliorees, la camomille ainsi obtenue, son materiel de reproduction, ses derives et leurs utilisations - Google Patents

Abstract

PROCEDE POUR LA PRODUCTION D'UNE NOUVELLE CAMOMILLE TETRAPLOIDE ET RICHE EN BISABOLOLE DONT LES FLEURS, SECHEES A 40C, CONTIENNENT AU MOINS 100MG DE CHAMAZULENE ET AU MOINS 200MG DE (-)-A-BISABOLOLE, LA TENEUR EN LES AUTRES BISABOLOIDES SE SITUANT AU-DESSOUS DE 50MG, EN SOUMETTANT UNE CAMOMILLE DIPLOIDE, TOUT D'ABORD TETRAPLOIDISEE, OU UNE CAMOMILLE TETRAPLOIDE, DANS LAQUELLE LE (-)-A-BISABOLOLE REPRESENTE LE COMPOSANT PRINCIPAL DE L'HUILE ESSENTIELLE, A DIFFERENTES OPERATIONS SUCCESSIVES DE SELECTION ET DE MULTIPLICATION. L'INVENTION CONCERNE AUSSI LA CAMOMILLE AINSI OBTENUE, SON MATERIEL DE REPRODUCTION ET SES DERIVES ET LEURS APPLICATIONS.

Description

Les préparations des capitules de la camomille vraie (Chamo-

milla recutica (L.) Rauschert, synonyme de Matricaria chamomilla

L.) trouvent, en raison de leur action antiphlogistique et spas-

molytique, une large utilisation thérapeutique et constituent un élément important de l'arsenal de la Dhytothérapie. Il convient

d'attribuer à cet égard une importance particulière aux consti-

tuants actifs (-)-" -bisabolole et chamazulène. Pour cette raison, une bonne drogue tirée de la camomille doit présenter une teneur

aussi élevée que possible en ces deux substances.

Les camomilles diploïdes qui poussent naturellement sont très hétérogènes en ce qui concerne leur teneur en substances actives. En particulier, elles ne contiennent qu'une seule des substances actives les plus importantes que sont le chamazulène et le (-)-o-bisabolole, ou bien ces deux substances actives manquent complètement ou encore elles sont présentes ensemble en très petite quantité, le composant principal de l'huile

essentielle étant constitué, dans de tels cas, par les bisabo-

loides qui sont moins actifs (oxyde de bisabolone A ou B,

oxyde de bisabololeA).

Sous la désignation DEGUMILL (il s'agit là de l'espèce de camomille mentionnée dans la revendication du brevet allemand

24 02 802; propriété industrielle des espèces en République démo-

cratique allemande, Degumill; brevet italien 1 035 096), on con-

nait une espèce de camomille qui présente à la fois une forte teneur en ()- "-bisabolole et en chamazulène. Toutefois, la

teneur en chamazulène et en bisabolole de cette espède de camo-

mille DEGUMILL n'est stable que si l'on empêche tout croisement ou fécondation étrangère avec d'autres espèces de camomille dont la teneur en bisabolole et en camomille est nettement plus faible ou avec la camomille sauvage, Dauvre en substances actives, qui est présente partout. Ce risque de croisement par fécondation étrangère est presque toujours existant, car la camomille sauvage

pousse pratiquement en tout lieu.

On connalt par ailleurs différentes espèces de camomille tétraploldes (par exemple BODEGOLD, RDA; POHORELICKY, URSS; ZLOTY LAN, Pologne; BK-2, Hongrie). Certes, ces espèces de camomille tétraplo!des présentent une teneur en chamazulène satisfaisante, mais la substance active importante qu'est le

(-)-e -bisabolole n'est présente que dans des quantités extr$-

mement faibles dans ces espèces de camomille tétraploldes

connues et, à sa place, la prédominance est aux autres bisabo-

loides (oxyde de bisabolole A et B, ainsi qu'oxyde de bisabolo-

ne) qui constituent ensemble plus de la moitié des huiles essen-

tielles dans les espèces de camomille tétraploldes connues.

Or, il a été découvert que, d'une manière très générale, à partir de populations de camomille poussant naturellement ou à partir de camomilles de culture diploïdes ou tétraploides, il est possible, par des phases opératoires ou de traitement déterminées, d'obtenir des plantes camomille tétraplo!des riches en bisabolole qui, d'une part, ne sont plus sujettes

à la fécondation étrangère par des camomilles poussant natu-

rellement et, d'autre part, présentent une teneur simultanément élevée en chamazulène et en (-)- e-bisabolole, la teneur en

(-)-"-bisabolole surpassant nettement la teneur en chamazu-

lène et, en même temps, les autres bisaboloides étant pratique-

ment absents ou n'étant présents qu'en très petites quantités.

Ce qui est donc d'une{.ii portance essentielle ici, c'est que la

forte teneur en substances actives principales, le (-)-Y-

bisabolole et le chamazulène, est stable dans la camomille

de l'invention, c'est-à-dire qu'elle persiste à chaque multi-

plication.

L'invention concerne donc une camomille tétraplolde, riche en bisabolole, du genre de plantes de culture camomille vraie (Chamomilla recutica (L.) Rauschert, synonyme de Matricaria chamomilla L., astéracées), dont les fleurs, séchées à 400C, contiennent av moins 100 mg % de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-o-bisabolole et moins de 50 mg %? d'autres bisaboloides, sur la base de la substance sèche; elle concerne également un procédé pour la production d'une telle camomille, consistant à sélectionner, dans une espèce de camomille tétraplolde connue, dans laquelle le (-)-oi-bisabolole représente le composant principal de l'huile essentielle, les plantes dont les fleurs, séchées à 400C, contiennent au moins 100 mg % de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-o- bisabolole et moins de 50 mg % d'au- tres bisabololdes, à soumettre éventuellement ces plantes à de nouvelles phases de sélection et de multiplication et, le cas

échéant, à tirer, de plantes de camomille des espèces de camo-

mille ainsi obtenues, un matériel de multiplication et/ou une

drogue à base de camomille. D'autres caractéristiques et avan-

tages de l'invention apparattront dans la description qui suit.

La nouvelle camomille tétraplolde produite par ce procédé se distingue de manière surprenante des camomilles ou espèces de camomille jusqu'ici connues par une série de propriétés nouvelles et avantageuses. En particulier, elle n'est plus

sujette à la fécondation étrangère par les populations de camo-

mille qui poussent naturellement (camomille sauvage), à la différence de l'espèce de camomille connue DEGUMILL. Par rapport

aux autres camomilles diploïdes et espèces de camomille tétra-

ploldes connues, la camomille selon l'invention se distingue de façon surprenante par une teneur plus élevée en la substance active importante qu'est le (-)-6<-bisabolole (au moins 200 mg %), tandis que la teneur en autres bisaboloides (par exemple en oxydes de bisabolole) est très faible et s'élève à moins de 50 mg %. C'est ainsi par exemple que les espèces de camomille connues et décrites dans la littérature présentent toutes une très forte teneur en oxydes de bisabolole et, pour certaines d'entre elles, en oxyde de bisabolone, teneur qui représente en règle générale 50 ce environ de l'huile essentielle de la drogue (c'est-à-dire, pour une teneur en huile essentielle de

1 %, environ 500 mg pour 100 g de drogue).

De plus, la camomille selon l'invention est homogène en ce qui concerne ses constituants en comparaison des espèces de camomille tétraploldes jusqu'ici connues, ses caractéristiques de teneur en chamazulène et en (-) -o(-bisabolole (c'est-à-dire son homozygotie) étant stables. Par contre, les essais de plantation individuelle des espèces de camomille tétraplo!des connues montrent qu'on doit attribuer des types de constituants variables aux différents individus, c'est-à-dire que chaque échantillon pris au hasard d'une drogue préparée à partir d'eux donne un résultat non homogène, différent aussi bien

qualitativement que quantitativement.

En outre, la camomille selon l'invention se distingue de façon surprenante des espèces de camomille tétraplo!des connues,

par exemple par une ou plusieurs des caractéristiques suivan-

tes: pouvoir germinatif amélioré des graines, moindre produc-

tion de tiges feuillues non utilisables (c'est-à-dire rendement plus élevé en fleurs, moindre teneur en eau des fleurs (ce qui se traduit par un meilleur rendement en fleurs séchées et par des temps de séchage plus courts), meilleure aptitude à la récolte mécanisée, du fait que les fleurs sont situées dans une large mesure dans un même plan et que la plupart d'entre elles fleurissent en même temps (une seule date de récolte est ainsi

possible), meilleure conservabilité de la drogue (moindre ten-

dance à la décomposition et à la formation de poussière), odeur de camomille particulièrement aromatique et typique. Les avantages mentionnés en dernier lieu se manifestent par exemple lorsqu'en dehors de la sélection portant sur la teneur en substances actives, on effectue encore une sélection portant sur une ou plusieurs des caractéristiques mentionnées, qu'on tire des plantes sélectionnées un matériel d'ensemencement, qu'on procède à une nouvelle sélection parmi les descendants

qui en proviennent et qu'on répète ces opérations 3 à 5 fois.

Le but de l'invention est la production d'une nouvelle camomille tétraplo!de ayant des propriétés améliorées, en

particulier une plus forte teneur en (-)- "-bisabolole.

Pour produire la nouvelle camomille selon l'invention, on procède de la manière suivante: a) on tétraploldise (mutation des gènes) des camomilles

diploides connues, dans lesquelles le (-)-oC-bisabolole re-

présente le composant principal de l'huile essentielle, on sélectionne les plantes tétraploldes ainsi obtenues et parmi ces plantes tétraploldes choisies, on sélectionne de nouveau les plantes dont les fleurs, séchées A 40 C, présentent une teneur minimale en chamazulène de 100 mg %,, une teneur minimale en (-)-àO-bisabolole de 200 mg % et une teneur en autres bisabololdes de 50 mg au maximum (cueillette des fleurs au

moment o 30 à 70 ?e des fleurs sessiles d'un capitule sont éclo-

ses), cette opération étant suivie éventuellement d'autres phases usuelles de sélection et de multiplication (par exemple, culture de lignée pedigree pour fécondateur étranger multiplia- ble végétativement), ou b) parmi des camomilles tétraploldes connues, dans lesquelles le (-)-o- bisabolole représente le composant principal des huiles essentielles, on sélectionne les plantes dont les fleurs, séchées à 40 C, présentent une teneur minimale en chamazulène de mg c, une teneur minimale en (-)- "- bisabolole de 200 mg % et une teneur en autres bisaboloides de 50 mg t au maximum (cueillette des fleurs au moment o 30 à 70 %9 des fleurs sessiles

d'un capitule sont écloses), cette opération étant suivie éven-

tuellement d'autres phases usuelles de sélection et de multipli-

cation (par exemple, culture de lignée pedigree pour fécànda-

teur étranger multipl-able végétativement).

Entrent par exemple en ligne de compte, en tant que camo-

milles diploïdes de départ: "Camomille de provenance argenti-

ne" (cf. L.Z. Padula, R.D.V. Rondina et J.D. Coussio, Quantita-

tive Determination of Essential Oil, Total Azulenes and Chamazu-

lene in German Chamomile, Matrica chamomilla, Cultivated in Argentina; Planta med. 30, pp. 273-280, 1976), ainsi que toutes les camomilles qui présentent, dans l'huile essentielle, des concentrations nettement mesurables de (-)-t-bisabolole (en règle générale, plus de 5 %. de l'huile essentielle). Il s'agit par exemple des camomilles diploïdes qui sont décrites dans les publications suivantes: Schilcher, H. "Neuere Erkenntnisse bei der Qualitâtbeurteilung von Kamillen5l beziehungsweise KamillenblUlten", Planta med. 23, 132-144 (1973); Motl, 0.,

M. Felklovà, V. Lukes et M. Jasicovà, "Zur gaschromatogra-

phischen Analyse und zu chemischen Typen von KamillenZ51", Arch. Pharm. 310, 210-215 (1977); Franz, Ch., J. HZlzl et A.

Vbmel, "Preliminary Morphological and Chemical Characteriza-

tion of some Populations and Varieties of Matricaria chamonilla

L.", Acta Hort. 73, 109-114 (1978).

Entre par ailleurs en ligne de compte, en tant que camo-

mille de départ, l'espèce de camomille diplolde DEGUMILL (brevet allemand 24 02 802). Dans ce cas également, on obtient par

exemple une camomille tétraplolde ayant une teneur en chamazu-

lène d'au moins 150 mg % et une teneur en bisabolole d'au moins mg 54 lorsque la cueillette des capitules de cette camomille est faite au stade de végétation o 30 à 70 % seulement des fleurs sessiles d'un capitule sont ouvertes et lorsque le

séchage s'effectue à une température de l'air de 500C au maxi-

mum. Par des phases consécutives de sélection et de multiplica-

tion, on peut, d'après cette demande de brevet, augmenter

encore les taux indiqués de bisabolole et d'azulène.

L'huile essentielle de la camomille se compose en règle

générale des constituants principaux farnésène, spa-

thulénol, chamazulène, l'un des 4 bisaboloides ((-)-" -

bisabolole, oxyde de bisabolole A, oxyde de bisabolole B ou oxyde de bisabolone, lorsqu'il s'agit de plantes diplo!des individuelles; dans l'échantillon composite de la population,

ainsi que chez des individus tétraploides, plusieurs bisabo-

loIdes peuvent être contenus simultanément), ainsi que les spiro-éthers. Le plus souvent, ces substances constituent au total 70 à 80 % de l'huile essentielle. Conviennent donc particulièrement des camomilles de départ diploldes, o le (-)- o-bisabolole représente le constituant prépondérant (plus de la moitié de la somme des substances précitées). Entrent en particulier en ligne de compte, en tant que camomilles de

départ, des camomilles diploïdes dans lesquelles le (-)-C-

bisabolole représente par exemple au moins 40 % de l'huile

essentielle ou au moins 90 % des bisabololdes.

Entrent par exemple en ligne de compte, en tant que camomilles de départ tétraploldes, les espèces de camomille Bodegold (RDA), Pohorelicky (URSS), Zloty Lan (Pologne), BK-2 (Hongrie). Ces espèces sont décrites dans les publications suivantes: M. Chladek et V. Kosova, Pharmazie 1, 712-713 (1958); W. Czabajska, Diss. Poznên (1963); W. Poethke et P.

Bulin, Pharm. ZHalle 108, 813-823 (1969); I. Sérk4ny, Herb.

Hungar. 4 (1), 125-169 (1965). D'ailleurs, en ce qui concerne la teneur en (-)- Q-bisabolole, la même chose que pour les camomilles de départ diploïdes s'applique aux camomilles de

départ tétraploldes.

Entrent en particulier en ligne de compte les poDulations de camomille diploides et tétraploÂdes qui contiennent en règle générale, dans l'échantillon composite de drogues, au moins mg c, de chamazulène et 50 à 100 mg c de (-)-o<-bisabolole (sur la base de la substance sèche des fleurs séchées a 4000),

c'est-à-dire que, dans le cas d'une camomille de départ diplol-

de, on tire un matériel d'ensemencement de ces populations de camomille et qu'on tétraploidise ce matériel d'ensemencement (sans prendre en considération et/ou sans connaître la teneur en bisabolole des plantes parents). Dans le cas d'une camomille de départ tétraploïde, le matériel d'ensemencement tel que

défini ci-dessus est alors soumis directement aux phases sui-

vantes de sélection et de multiplication.

Les camomilles de départ diploldes et tétraplo!des qui conviennent sont sélectionnées par des examens de plantes individuelles. En général, il est nécessaire d'examiner par exemple, dans une population de départ, 1000 à 10 000 individus pour trouver quelques individus qui présentent une teneur

élevée en (-)-o-bisabolole suivant les critères indiqués ci-

dessus et qui conviennent comme camomille de départ. De ces individus choisis, on tire alors, par les techniques usuelles,

un matériel d'ensemencement et on tétraploldise celui-ci.

Après que la tétraploldisation a été achevée, les plantes tétraplo!des sont séparées des plantes restantes qui sont

toujours diploïdes. Parmi les plantes tétraploides ainsi obte-

nues, on sélectionne alors, le cas échéant après une multipli-

cation préliminaire, toutes les plantes dont les fleurs, séchées à 400C, contiennent au moins 100 mg % de chamazulène, au moins mg 5 de (-)-"bisabolole et moins de 50 mg % d'autres bisabololdes. La cueillette de ces fleurs est effectuée au

stade de développement o 30 à 70 %e de toutes les fleurs sessi-

les du capitule sont ouvertes Le cas échéant, ces opérations

peuvent être suivies d'autres phases de sélection et de multi-

plication qui produisent par exemple une amélioration en ce qui concerne les caractéristiques ou propriétés suivantes: date de floraison simultanée, ramification fondamentale uniforme et zone de floraison étroite (c'est-à-dire meilleure aptitude à la récolte mécanisée), gros capitules, meilleure stabilité de

la drogue, odeur particulièrement aromatique.

Dans le cas o l'on part dès le début d'une camomille tétra-

ploide, on procède simplement à la sélection précitée des plantes dont les fleurs, séchées à 40oC, contiennent au moins 100 mg %y de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-a -bisabolole et moins de 50 mg t d'autres bisaboloTdes, la cueillette de ces fleurs étant également effectuée au stade de développement o 30 à

c' de toutes les fleurs sessiles d'un capitule sont ouvertes.

Dans ce cas aussi, cette opération peut être éventuellement suivie d'autres phases de sélection et de multiplication, d'o

résultent des améliorations supplémentaires (comme indiqué ci-

dessus). On obtient une camomille particulièrement avantageuse

lorsqu'on sélectionne, lors de la sélection portant sur la-

teneur en chamazulène et en (-)-d(-bisabolole, les plantes (connues ou produites par le procédé de l'invention) dont la teneur en chamazulène s'élève au moins à 200 mg %, de préférence à 250 mg %, et dont la teneur en (-)-* -bisabolole atteint au moins 300 mg 9, de préférence 400 mg % (la teneur en autres

bisabololdes étant toujours inférieure à 50 mg %).

La tétraploidisation peut 8tre effectuée par exemple de façon connue en soi par traitement d'éléments de la plante

(graines, racines, pointes de rejetons, germes, bourgeons axil-

laires) ou de tissus des plantes camomille diploïdes de départ par des produits chimiques, des rayons X, des rayons gamma ou des rayons UV. Elle peut être effectuée en outre par la méthode

du cal de décapitation, par culture d'anthères ou par l'appli-

cation de températures élevées ou même basses aux plantes camo-

mille ou à des parties ou tissus des plantes camomille. On se référera à cet égard à l'ouvrage de Werner Gottschalk, "Die Bedeutung der Polyploidie fUr die Evolution der Pflanzen", Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1976, en particulier aux pages

13 à 22.

Tétraploldisation par produits chimiques.

Entrent par exemple en ligne de compte, en tant que produits chimiques pour la tétraploidisation, les substances suivantes: colchicine, acénaphtène, alcaloïdes tels que l'atropine, la vératrine, la nicotine, la sanguinarine, dérivés du benzène, du o

diDhényle et du phénanthrène, naphtaline et dérivés du naphtalè-

ne, diphénylamine, tribromaniline, paradichlorobenzène, méthyl-

naphtoquinone, méthylnaphtohydroquinone, acide salicylique et

substances apparentées, hexachlorhexane, méthamohénamine (chlor-

hydrate), alkylcarbamates alcalins tels que l'isopropyl carbamate de sodium, phényluréthane, sels de l'acide cacodylique (par exemple sel sodique), glucosides de la convallaria tels que la convallarine, la convallatoxine et la convallamarine, hétéro-auxine, germisan (phénylmercuripyrocatéchine), composés organiques du mercure tels que le phosphate d'éthyl-mercure, le chlorure d'éthyl-mercure, l'hydroxyde de phényl-mercure, le dinaphtylméthanedisulfonate de phényl-mercure, chloroforme, gaz

hilarant (N20), ainsi que des mélanges de ces substances.

Entrent aussi en ligne de compte des tourteaux de graines oléa-

gineuses, des composts et des fumiers de vaches.

Le traitement par les substances ici mentionnées est effectué par exemple à des températures comprises entre 0 et 350C, de préférence entre 12 et 300C, en particulier entre 15 et 250C. L'application s'effectue par exemple par traitement de graines, de pointes de rejetons, de racines (en particulier de pointes de racines ou de racines de plantules), d'ovaires, de surfaces de coupe sur des feuilles ou des tiges, de suspensions

de cellules du méristème, de cultures de cal, ou même par injec-

tion dans la région de base de la tige ou dans la région des bourgeons axillaires. Les produits chimiques sont utilisés en général sous la forme de solutions dans l'eau, de solutions faiblement alcooliques (teneur en alcool inférieure à 5 % en règle générale) ou de solutions faiblement acides. Le pH des solutions faiblement acides se situe par exemple dans la région de 5,5 à 6,5, l'acidification étant effectuée par exemple au moyen d'acides organiques aliphatiques inférieurs, tels que

l'acide acétique. Au cas o l'on utilise des solutions alcooli-

ques, celles-ci peuvent être également faiblement acides. La concentration des produits chimiques dans ces solutions peut par exemple s'élever à 0,01 - 0,5 5', de préférence 0,02 à 0,2 c< et en particulier à 0,05 - 0,1. Des substances gazeuses peuvent être utilisées telles quelles, le cas échéant sous pression (par exemple de 1 à 10 bar). La durée de traitement est par exemple de I à 36 h. de préférence de 2 à 12 h et en particulier de 4 à 6 h. Les concentrations les olus actives, ainsi que la durée d'action seront opportunément déterminées chaque fois par des essais préalables.

On obtient par exemple des résultats particulièrement favo-

rables en traitant par la colchicine à des températures comprises entre O et 35oC, de préférence entre 12 et 300C, notamment entre et 250C. On peut y procéder par exemple en faisant gonfler des graines de la camomille diplo!de de départ dans une solution de colchicine à 0,01 - 0,2 %, notamment à 0,02 - 0,1 % et, de préférence, à 0,05 t%, ou en plongeant des plantules germées et bien développées de la camomille diploïde de départ, âgées de 5 à 7 jours (avec les cotylédons vers le bas) dans une solution de colchicine à 0,01 - 0,2,, en particulier à 0,02 - 0,1 % et, de préférence, à.0,05 c. Lorsqu'on opère de cette dernière manière, l'atmosphère ambiante doit présenter une humidité relative de l'air de presque 100 ". La durée du traitement par la colchicine

est par exemple de 3 à 36 h, et en particulier de 4 à 10 heures.

En cas d'utilisation de plantules, une durée d'action de 10 h au maximum est suffisante en général. Lorsqu'on utilise des graines, la durée d'action peut se prolonger jusqu'à 36 h le

cas échéant.

A la suite du traitement par les produits chimiques, les graines gonflées, les plantules ou les autres éléments de la plante sont rincés à l'eau à plusieurs reprises. Les graines gonflées sont par exemple découpées à la scie. Les plantes dont les racines ou autres-éléments ont été traités ou les plantules traitées sont par exemple repiquées dans des bacs à plantes. A partir des graines ou plantules ainsi traitées, on fait pousser les plantes (par exemple en serre: température entre 18 et 250C le jour et entre 10 et 160C la nuit) et on sélectionne celles dont les grains de pollen sont environ 1 1/2 fois plus

gros que ceux du matériel de départ, c'est-à-dire qu'ils pré-

sentent un nombre de chromosomes des cellules somatiques de 36.

Au cas o l'on soumet d'autres éléments de la plante (parties

aériennes ou souterraines) au traitement par des produits chi-

miques, ce sont exclusivement les pousses, racines ou fleurs/

2574621-

graines provenant des éléments traités qui seront soumises au contr8le ultérieur de tétraploidisation réussie. Lorsqu'il a été procédé Dar exemple à un traitement des rejetons ou à un traitement des bourgeons axillaires, on n'examine ensuite que le nombre de chromosomes des nouvelles pousses formées à partir de ces bourgeons axillaires ou de ces rejetons et des fleurs

ou graines formées sur ces pousses.

Les mesures de grosseur du pollen et le comptage chromoso-

mique peuvent être effectués par exemple de la manière indiquée

dans l'exemple 1.

Tétraploidisation par irradiation.

L'intervention est effectuée par exemple sur des graines ou des pointes de racines à une température de O à 350C, de préférence de 10 à 300C et notamment de 15 à 25 C. Dose totale d'irradiation: 5 à 50 krad. On utilisera de préférence les rayons gamma ou X. En tant que rayons UV, on pourra utiliser par exemple ceux dont la longueur d'onde est de 400 à 30 nm,

de préférence de 350 nm.

Les plantes ou parties de plantes ainsi irradiées sont

ensuite soumises au même traitement ultérieur qu'en cas d'uti-

lisation de produits chimiques.

Application de hautes et de basses températures.

Entrent par exemple en ligne de compte, en tant que hautes températures, des températures comprises entre 33 et 50 C, de préférence entre 42 et 450C. A ces températures sont par exemple exposés: des graines gonflées, des plantules, des pointes de pousses et des tissus mristématiques. Durée du traitement: par exemple 1 à 48 h, de préférence 12 à 24 h. Entrent par exemple en ligne de compte, en tant que basses températures, des températures de 0 à 50C, de préférence de 0,5 à 40C et notamment de 2 C. A ces températures sont par exemple exposés: des graines gonflées, des plantules, des pousses et des tissus méristématiques. Durée du traitement: par exemple 1 à 100 et, de préférence, 20 à 40 jours. Les plantes ou parties de plantes ainsi traitées sont soumises au m8me traitement

ultérieur qu'à la suite du traitement par des produits chimiques.

Méthode du cal de décapitation (décapitation = étêtage, époin-

tage ou coupe arrière).

La décapitation est effectuée nar exemple-sur de jeunes plantes au niveau de la tige, de préférence au niveau du c8ne végétatif apical, après la formation de 4 à 6 feuilles ou même au niveau de pétioles ou de pousses latérales. Les bourgeons ou rejetons qui se forment à partir du tissu blessé (tissu de cal) sont coupés, mis à prendre racine, élevés dans des pots et les plantes tétraploidisées sont sélectionnées de la même manière

que dans le cas du traitement par des produits chimiques.

Culture d'anthères (production de plantes à simple garniture chromosomique à partir des anthères, suivie de tétraploidisation

spontanée ou artificielle).

Sur des plantes en fleurs, on récolte des fleurs tubulées fermées dont les anthères (sacs de pollen) en sont au stade

précédant la première mitose pollinique. Au moyen d'un micro-

manipulateur, les anthères sont prélevées dans les boutons de fleurs et transférées dans des bottes de Petri qui sont remplies

par exemple d'un milieu nutritif de Nitsch et Nitsch (tableau 1).

Puis les bottes de Petri sont conservées dans une chambre de

culture à la lumière pendant 16 heures par jour, à une tempéra-

ture diurne de 280C et nocturne de 20OC. Au bout de quatre semaines environ, les anthères commencent à s'ouvrir et des

plantules commencent à pousser. Celles-ci sont haploïdes lors-

que l'élément parent est diploïde et elles sont dihaploldes avec un élément parent tétraplolde; après formation de racines, elles sont mises en pot, par exemple dans de la terre de jardin, et amenées à la floraison en serre. Des plantes (di)haploldes sont stériles, mais elles peuvent être polyploldisées par traitement

des pointes de rejetons, des racines ou des tiges par des pro-

duits chimiques, comme par exemple la colchicine, auquel cas il

se forme des plantes homozygotes qui peuvent être ensuite multi-

pliées par l'intermédiaire de graines. Pour le reste du mode opératoire, on se référera aux indications données à propos du traitement par des produits chimiques (par exemple le traitement

par la colchicine).

ab-'eau 1

iieu e cul- veur- e sc- et ',iszh (Scierce,..).

mg/i iKs C - 950

5....?03 720

gS0x 7 H-20 1 5 v Ol. 166KHPO. 68

i 2i 6 !<nSC x - H2C 25

-_E30B 1 0

ZnS@C x 7 H2O 10 :,;.oo, x 2 H.0 0,25 CuSC- x 52C CQ025 mi d'une solution de 7,45 g de sel disodique 1 d'acide éthyiène-diamine-tétraacétique et de ,57 g de FeSC4 x 7 d20 dans 1000 mi myo-inosite 1CC Glycocolle Acide nicotinique 5 ?C-ridoxine-HCl C,, Tnlam ine-HCl C,, Acide folique 0,5 Biotine O,05 Saccharose 20 g Base de milieu nutritif (Bacto-Agar DIFOO) 8 g Acide indole-acétique 0, 1 pH du milieu réglé à 5,5 Parmi les plantes de camomille tétraplo!des sélectionnées par mesure de grandeur du pollen et/ou comptage chromosomique, qui peuvent être obtenues suivant les différentes possibilités décrites, on sélectionne ensuite celles qui présentent une teneur en chamazulène de 100 mg %' et une teneur minimale en bisabolole de 200 mg %s, tandis que la teneur en autres bisaboloides (en particulier en oxydes de bisabolole) doit se situer au-dessous

de 50 mg; (sur la base des fleurs séchées, cf. exemple 1).

Après élimination de tous les groupes de fleurs déjà éclos, on laisse faner les plantes ainsi sélectionnées en serre, à une température diurne de 18 à 240C et nocturne de 12 à 140C et avec une durée du jour d'au moins 14 heures, tous les capitules qui sont fanés ou sur le point de tomber étant cueillis en une

période de 4 semaines pour la récupération d'un matériel d'ense-

mencement. Après séchage à une température de l'air comprise

entre 20 et 350C, on obtient par exemple le matériel de multipli-

cation de la camomille de l'invention.

Comme autres critères pour cette sélection, on peut en outre appliquer les critères suivants: a) Floraison à peu près simultanée,

b) Ramification fondamentale régulière et zone de fleurs étroi-

te, de 5 cm environ.

c) Gros capitules, d'un diamètre extérieur d'environ 30 mm (20 à 40 mm), en particulier de 25 à 35 min. L'application des critères supplémentaires a), b) et/ou c) se traduit par exemple par des rendements élevés en fleurs et

en drogue et par une meilleure adaptation à la récolte mécanisée.

Dans le cas o l'on part de camomilles tétraplo!des déjà connues, la sélection décrite ci-dessus et, le cas échéant, les autres phases de sélection et de multiplication sont effectuées

de la même manière.

Si l'on veut obtenir une camomille qui présente, outre une teneur d'au moins 100 mg % en chamazulène et d'au moins 200 mg % en (-)-oc-bisabolole (sur la base des capitules séchés), un rendement élevé en fleurs et qui se pr8te mieux à la récolte

mécanisée, il est à conseiller de procéder de la manière sui-

vante. Les plantes sélectionnées (comme décrit ci-dessus) sont multipliées végétativement par bouturage et triées sur 3 à 5 générations, la sélection s'effectuant toujours d'après le critère indiqué ci-dessus et, le cas échéant, d'aDrès les critères supplémentaires a) à c). Les plantes sélectionnées d'après ces critères sont clonées, des semences sont récupérées sur les plantes clonées, les olantes qui en résultent sont de nouveau sélectionnées d'après la teneur indiquée ci-dessus en chamazulène et en bisabolole et, le cas échéant, d'après les critères supplémentaires a) à c) et des semences sont de nouveau

prélevées sur ces dernières.

La séquence[ensemencement - sélection suivant la teneur minimale indiquée ci-dessus en chamazulène, de 100 mg %, et

en (-)-b?-bisabolole, d'au moins 200 kig % (les autres bisabo-

loldes étant au-dessous de 50 mg ) et, le cas échéant, suitrant les critères supplémentaires a) à c) - récupération des semences]

peut être répétée 3 à 5 fois.

A cela fait suite encore une fois une séquence [ensemen-

cement - sélection telle qu'indiquée ci-dessus (éventuellement clonage) récupération des semences]. Les semences obtenues en dernier lieu constituent alors le matériel de multiplication

de la camomille selon l'invention.

La multiplication par bouturage s'effectue de la manière suivante. Pour la multiplication par bouture, les plantes de départ (plantes-mères clonées) doivent former des pousses courtes dépourvues de boutons à fleurs, dans des Conditions de jour court. Pour cela, on opère dans le semestre d'hiver en serre sans éclairage supplémentaire, ou dans des chambres climatisées avec une durée de jour de 6 à 10, de préférence de 8 heures et à des températures de 10 à 15, de préférence 12C00. Conviennent, pour le clonage ou multiplication, des boutures de feuilles, de

pousses et en particulier de pousses courtes (pousses latérales).

On leur fait prendre racine à une température de 12 à 180C, de

préférence 150C et avec des durées de jour de 12 à 16, de pré-

- férence 14 heures, en atmosphère fermée (100 ce environ d'humi-

dité relative de l'air). En tant que substrat, on peut utiliser par exemple un mélange de tourbe et de sable dans le rapport 1: 1; mais du sable siliceux pur, des cubes de bouturage en

laine minérale ou similaires conviennent également.

Pour l'ensemencement, on utilisera par exemple les sols suivants: terres de jardin; terres argileuses de poids moyen humiques; terres argileuses ou humiques. On peut ensemencer en

serre ou même en plein champ. Les températures pour la germina-

tion et la croissance des plantes se situent par exemple entre 12 et 240C, en particulier entre 18 et 200C. Au cas o l'ense- mencement est effectué en plein champ, on sème de préférence à l'automne (septembre/octobre) ou au printemps (mars/avril). Ces

péricdes conviennent pour toutes les régions de culture envisa-

geables (Dar exemple l'hémisphère Nord, les régions de climat

tempéré à subtropical).

La nouvelle camomille obtenue d'après l'invention appartient au genre de plantes de culture de la camomille vraie, portant la dénomination botanique Matricaria chamomilla L. (synonyme de Chamomilla recutica (L.), Rauschert) et elle est définie Dar les données de substances actives déjà indiquées. Les valeurs indiquées pour les teneurs en substances actives chamazulène, (-)-&e-bisabolole et oxydes de bisabolole se rapportent au stade de développement des fleurs qui est atteint lorsque 30 à 70 Q,

en particulier 40 à 60 5, de toutes les fleurs en tube d'un capi-

tule sont ouvertes (ce qui veut dire que les fleurs utilisées pour le dosage des substances actives ont été cueillies à ce moment, puis ont été séchées pendant 72 h à 400C dans l'armoire séchoir). Dans l cas o la récolte des fleurs de camomille est effectuée à une époque à laquelle le stade de développement de ces fleurs est plus avancé, c'est-à-dire à laquelle 100 " ou près de 100 5 de toutes les fleurs en tube d'un capitule sont

par exemple ouvertes (par exemple au stade de la pleine florai-

son) et/ou dans le cas o le séchage des fleurs récoltées est effectué à une température plus élevée que 400C, la teneur en les substances actives (-)-Oc-bisabolole et chamazulène peut être plus faible, car une dégradation plus marquée de l'azulène et du bisabolole peut se produire sous l'effet de températures

de séchage plus élevées et/ou en cas de cueillette plus tardive.

Par le terme "autres bisabololdes", on entend en narticu-

* lier: l'oxyde de (-)-cd-bisabolole A et B; l'oxyde de (-)-" -

bisabolone A. L'huile essentielle de l'espèce de camomille en question a pour autres constituants des en-in-dicycloéthers, le farnésène, le spathulénol et, en moindres concentrations, différents hydrocarbures terpéniques très volatils. Par exemple, les fleurs de la camomille de l'invention, séchées à 400C dans l'armoire séchoir (récoltées comme indiqué ci-dessus) contiennent entre 100 et 200 mg c de chamazulène, entre 200 et 450 mg c}0 de (-)- "-bisabolole et seulement peu, c'est-à- dire entre 5 et 50 mg %, d'autres bisabololdes sur la base de la substance sèche (c'est-à-dire sur la base du poids sec absolu des fleurs). -Ce -poids sec absolu est déterminé par séchage d'un échantillon

séparé de fleurs de la camomille selon l'invention, dans l'ar-

moire séchoir à 1050C jusqu'à ce que le poids soit constant (72 à 96 heures). La teneur en substances actives des fleurs séchées par exemple entre 55 et 500C (drogue) est alors calculée par

rapport au poids à sec des fleurs, déterminé à 1050C.

Dans son phénotype, la camomille selon l'invention est semblable aux espèces de camomille tétraploTdes déjà connues (par exemple Bodegold, Zloty Lan, BK-2, Pohorelicky Velkokvety): elle s'en différencie en particulier par le fait que dans le cas de la camomille selon l'invention, le (-)- o-bisabolole est le constituant principal de l'huile essentielle des fleurs et que la teneur en autres bisaboloides (oxydes de bisabolole A et B;

oxyde de bisabolone) est beaucoup plus faible. L'huile essen-

tielle de la camomille a pour autres constituants du farnésène,

du spathulénol et des en-in-dicyclo-éthers.

La camomille selon l'invention peut être cultivée avec succès sur tous les sols, à l'exception de sols ayant une teneur de plus de 20 %. en substances organiques (matières humiques et micro-organismes de la terre); elle ne nécessite pas de procédés agrotechniques spéciaux, ni de mesures de culture particulières; il suffit simplement pour la culture d'un jour prolongé d'une durée maximale de plus de 13 heures, ce qui veut dire que les zones tempérées et les régions subtropicales conviennent en

particulier pour sa culture.

En plus, la camomille selon l'invention présente encore, dans bien des cas, les avantages suivants: haut rendement, date de récolte mi-tardive, hauteur uniforme de croissance avec zone de fleurs étroite et gros capitules; elle se prête donc particulièrement bien à une récolte mécanisée. A cela s'ajoute que les plantes semées en même temps fanent en général ensemble, pratiquement en même temps, ce qui fait que la

récolte s'en trouve également très simplifiée et facilitée.

Les avantages cités en dernier lieu se manifestent lorsqu'on applique les conditions opératoires suivantes. Parmi les plantes de camomille tétraploldes qui présentent une teneur minimale en chamazulène de 100 mg % et en (-)- "-bisabolole de

mg % , tandis que la teneur en autres bisabololdes (en parti-

culier en oxydes de bisabolole) se situe au-dessous de 50 mg c9 (toutes ces valeurs sur la pase des capitules séchés), on ne sélectionne que celles qui - fleurissent à peu près en même temps, - présentent une ramification de base uniforme et une étroite zone de fleurs d'environ 10 cm, ainsi que

- de gros capitules d'un diamètre extérieur d'environ 30 mm.

Les plantes sélectionnées sont multipliées végétativement par bouturage et triées sur 3 à 5 générations, la sélection

étant toujours effectuée d'après les critères indiqués ci-

dessus. Les plantes sélectionnées sont multipliées végétati-

vement (clonées), on les laisse se faner ensemble et on en tire le matériel d'ensemencement. Les plantes obtenues à partir du matériel d'ensemencement sont de nouveau sélectionnées d'après

les critères indiqués ci-dessus et la séquence /ensemencement -

sélection - récupération du matériel d'ensemencement - ensemen-

cement 7 est répétée 3 à 5 fois.

Une drogue préparée à partir de la camomille selon l'inven-

tion a la teneur maximale en les substances actives chamazulène et (-)-"cbisabolole lorsque la cueillette des capitules de camomille est effectuée au stade de végétation o par exemple 30 à 70 %4, de préférence 40 à 60 %, c'est-à-dire en général 50 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et lorsque le

séchage est effectué à une température de l'air de 50 C au maxi-

mum, par exemple de 35 à 500 C, notament de 400C.

Le séchage peut s'effectuer, soit par apport artificiel d'air, soit par séchage à l'ombre et même, le cas échéant, au soleil, en veillant toutefois à ce que l'apport de chaleur ne dépasse pas la mesure nécessaire pour le séchage complet. Il est donc avantageux que l'on s'assure, par des pesées de contr8le, du moment o est atteinte la constance de poids. Le séchage peut s'effectuer spontanément ou artificiellement (par exemple avec de l'air chaud artificiel). Le rendement en substances actives atteint un maximum en cas de séchage spontané à l'abri de la lumière solaire, de préférence à une tempénture de 40 à 600C, en particulier de 40 à 50 C. L'opération de séchage doit avoir lieu aussi t8t que possible après la récolte. Le séchage doit être effectué en couches minces, par exemple de 5 à 20 cm, de préférence de 10 cm d'épaisseur. Le séchage est par exemple possible aussi dans des hangars bien aérés, à une température de l'air comprise entre 20 et 300C-. D'une manière générale, la

température de l'air pour le séchage ne doit pas dépasser 600C.

Par exemple, une température de l'air comprise entre 35 et 50 C

est favorable.

La teneur en substances actives d'une drogue préparée à partir de la camomille suivant l'invention, en particulier sa

teneur en les substances actives principales chamazulène et (-)-

ct-bisabolole, dépend du stade de végétation dans lequel se trouvent les fleurs au moment de la récolte et du séchage des fleurs récoltées. Plus la température de séchage est élevée,

plus est marquée la dégradation des substances actives, c'est-

à-dire plus est faible la teneur des fleurs séchées en substan-

ces actives. Pour la même raison, la lumière directe du soleil lors du séchage a une influence nuisible et doit 9tre évitée dans toute la mesure du possible. Le stade de végétation d'une fleur est caractérisé par le pourcentage des fleurs en tube d'un capitule qui sont ouvertes à un moment déterminé (ici, le moment de la récolte). On peut donc cueillir des fleurs là o par exemple 30 à 50 c<, 30 à 70 %, 40 à 60 %, 60 à 100 r ou 90 à 100 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes. La teneur en matières actives dépend du stade dans lequel se trouvent respectivement les fleurs et, avec la camomille selon

l'invention, elle atteint un maximum lorsque 40 à 60 es de tou-

tes les fleurs en tube sont ouvertes, tandis qu'elle est plus faible, aussi bien quand le pourcentage de fleurs en tube d'un capitule est plus élevé que quand il est plus bas. Pour cette raison précisément, la camomille selon l'invention offre le grand avantage que la défleuraison des différentes plantes se produit en m8me temps, ce qui veut dire que dans un semis, la majorité des plantes présentent chaque fois le même stade de floraison, c'est-à-dire par exemple que pour la grande majorité

des plantes, 40 à 60 - de toutes les fleurs en tube d'un capi-

tule sont ouvertes en même temps. De ce fait, avec la camomille selon l'invention, une récolte complète des capitules est possible au meilleur moment et la camomille selon l'invention

se prête donc particulièrement bien à la récolte mécanisée.

La relation entre la teneur en chamazulène et en (-)- "-

bisabolole et, d'une part, le stade de floraison au moment de la

récolte et, d'autre part, la température de séchage pour l'obten-

tion de la drogue est mise en évidence à titre d'exemple dans le tableau qui suit (dans tous les cas, la teneur en autres

bisabololdes est inférieure à 50 %).

Température Stade de végétation des fleurs lors de la récolte de séchage de séchage 30 - 70 a de toutes les 70 - 100 % de toutes les tmp d; fleurs en tube d'un fleurs en tube d'un l'air) capitule ouvertes capitule ouvertes Teneur en substances Teneur en substances actives du matériel actives du matériel séché séché ne Chamazulène: Chamazulène: dépassant au moins 100 mg-%5 au moins 40 mg % pas 500C (-)- "-bisabolole: (-)-O(bisabolole: au moins 200 mg % au moins 120 mg % Teneur en substances Teneur en substances actives de l'extrait actives de l'extrait alcoolique alcoolique ne Chamazulène: Chamazulène: dépassant au moins 5,0 mg au moins 2,0 mg % pas 500C (-)-o<-bisabolole: (-)- o-bisabolole: au moins 10, 0 mg % au moins. 6,0 mg %e Teneur en substances Teneur en substances actives du matériel actives du matériel séché séché entre 50 Chamazulène: Chamazulène: et 700C au moins 50 mg ? au moins 30 mg '' (-)- obisabolole: (-)- -bisabolole: au moins 150 mg % au moins 100 mg % Température Stade de végétaticn des fleurs lors de la récolte de séchage de séchage 30 - 70 c de toutes 70 - 100 0% de toutes les fleurs en tube les fleurs en tube l'air) d'un capitule ouvertes d'un capitule ouvertes Teneur en substances Teneur en substances actives de l'extrait actives de l'extrait alcoolique alcoolique entre 50 Chamazulène: Chamazulène: et 700C au moins 2,5 mg 5 au moins 1,5 mg 5% (-)- -bisabolole: (-)-"-bisabolole: au moins 7,5 mg % au moins 10,0 mg % Il en ressort qu'à partir de la camomille qui est utilisée pour la préparation de l'agent selon l'invention, dans le cas par exemple d'une récolte qui a lieu au stade de végétation o 30 à 100 % des fleurs en tube des capitules sont ouvertes et dans le cas du séchage à des températures de l'air allant jusqu'à 700C, on obtient un matériel séché dont la teneur en chamazulène

s'élève dans chaque cas à 30 mg % au moins et la teneur en (-)-

"-bisabolole est au moins de 100 mg 5{, tandis que la teneur en

autres bisabololdes est toujours inférieure à 50 mg 9 .

Dans lbs extraits alcooliques, la teneur en autres bisabo-

loldes est toujours inférieure à 10 mg %.

La teneur de l'huile essentielle qui peut être préparée à partir d'un matériel séché, dans les conditions du tableau ci-dessus, en chamazulène et en bisabolole est toujours de 3,5 % au moins en chamazulène, de 10 % au moins en (-)-o<-bisabolole

et de moins de 10 % en autres bisaboloides.

Le dosage du chamazulène est effectué par spectrophotomé-

trie, de manière analogue à la procédure suivie d'habitude avec des extraits de camomille. Le dosage du (-)-oc-bisabolole et des autres constituants de l'essence de camomille s'effectue

suivant les méthodes de chromatographie en phase gazeuse appli-

quées ordinairement à cet effet. On trouvera dans l'Annexe A une

description précise des méthodes analytiques de dosage.

La substance active chamazulène est présente, dans les fleurs de camomille, non pas en tant que telle, mais sous la forme de sa sesquiterpène-lactone, la matricine. La matricine possède une activité pharmacologique qui est analogue à celle ?4621 du chamazulène. A partir de ce progéniteur, la matricine, le chamazulène se forme aussit8t, par exemple au chauffage (par exemple par entraînement à la vapeur, par infusion de type thé C'est pourquoi on a l'habitude, pour la camomille, d'indiquer non pas la teneur en matricine, mais la teneur en chamazulè-

ne qui se forme à partir de celle-ci.

Les possibilités d'utilisation de la camomille selon l'in-

vention sont par exemple les suivantes: préparation de drogue de camomille, d'essence de camomille, d'extraits de camomille, ainsi que de (-)-aZ-bisabolole, de chamazulène et d'autres constituants de la camomille. C'est ainsi qu'à partir de la drogue qui est tirée de la camomille selon l'invention, on obtient, par exemple par extraction avec des alcools ou des mélanges aqueux-alcooliques ou par extraction avec des gaz surcritiques, des extraits de camomille. D'autre part, de l'essence de camomille, du (-)-" o(-bisabolole, du chamazulène et d'autres constituants de la camomille peuvent être obtenus

à partir de la drogue.

Les extraits alcooliques de la drogue contiennent par

exemple au moins 1,5 mg %, de préférence 5,0 mg % de chamazu-

lène et au moins 5,0 mg %, de préférence au moins 10 mg de (-)-O bisabolole et moins de 8 mg % d'autres bisabololdes. La

préparation de ces extraits s'effectue suivant le mode opéra-

toire appliqué ordinairement à cet effet. Pour l'extraction, on peut utiliser par exemple des dispositifs mélangeurs, notamment

des malaxeurs dits à cuve, des percolateurs et d'autres appa-

reils appropriés d'extraction. La température pendant l'ex-

traction est par exemple comprise entre 10 et 500C. Un refroi-

dissement n'est pas nécessaire.

Entrent en particulier en ligne de compte, en tant que solvants, des monoou polyalcools aliphatiques à chatne droite ou ramifiée à 1 - 6 atomes de carbone, comme par exemple le méthanol, l'éthanol, le propanol-(2), le butanol, la glycérine, l'isopropylidène-glycérol ou similaires, ainsi que des mélanges

de ces alcools avec l'eau.

On peut aussi utiliser des mélanges de ces solvants. La quantité minimale de solvant s'élève à 2 parties de solvant pour 1 partie du matériel séché. En général, on utilise 2 à 20

- 2574621

parties de solvant oour 1 oartie du matériel séché, en Darti-

culier 5 à 10 parties de solvant pour 1 partie du matériel séché. Pour la préparation d'extraits, en particulier d'extraits alcooliques, on peut aussi utiliser des fleurs fraîches de camomille ou des fleurs congelées de camomille (dans le cas o

des fleurs fraîches ont été congelées).

Une huile essentielle obtenue à partir de la drogue con-

tient au moins 3,5 r' de chamazulène, de préférence au moins 5

de chamazulène et au moins 10 de (-)-at-bisabolole, de préfé-

rence au moins 15 c' de (-)-ae-bisabolole et moins de 10 c

d'autres bisabololdes.

D'une manière générale, pour préparer une telle huile essentielle, on chauffe à l'ébullition la drogue avec de l'eau, par exemple en présence d'acide ascorbique (par exemple sous forme de sel, en particulier de sel sodique) à un pH compris entre 4 et 6, de préférence entre 5 et 5,5. Le pH est réglé par exemple au moyen d'un acide, tel que l'acide chlorhydrique. Pour i partie en poids du matériel séché, on utilise par exemple 10 à 50 parties en poids d'eau et, le cas échéant, 0,1 à I partie en poids d'acide ascorbique. On chauffe en général pendant 2 à

8 heures.

Le distillat aqueux obtenu est énuisé plusieurs fois avec un hydrocarbure aliphatique inférieur liquide (par exemple de l'éther de pétrole d'un point d'ébullition de 35 à 60 C par exemple, du Dentane, du xylène, de la Décaline), la phase organique est séchée (par exemple au moyen de sulfate de sodium) et le solvant organique est éliminée avec ménagement (par exemple par distillation dans l'évaporateur rotatif ou Dar distillation à 40 - 70 C, de préférence à 50 - 600C). Dans le cas de solvants de point d'ébullition plus élevé, cette

distillation est effectuée sous vide.

Le dosage des constituants s'effectue de la manière déjà indiquée. Si les fleurs de la camomille selon l'invention sont récoltées à un stade de végétation o 30 à 100 c.% des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et si les fleurs sont séchées à une température de l'air de 700C au maximum, une drogue ainsi obtenue contient par exemple au moins 100 mg % de (-)-.o-bisabolole, au moins 30 mg,, de chamazulène et moins de 50 mg c d'autres bisabololdes et une huile essentielle préparée à partir de cette drogue par distillation en présence d'eau contient au moins 3,5 ?' de chamazulène, au moins 10 % de (-)-oi-bisabolole et moins de 10 mg e' d'autres bisabololdes; un extrait alcoolique de camomille, préparé par épuisement avec

des alcools inférieurs, contient au moins 1,5 mg 9t de chamazu-

lène, au moins 5,0 mg e, de (-)-oi-bisabolole et moins de 10

mg % d'autres bisaboloides.

Si les fleurs de la camomille selon l'invention sont récol-

tées dans le stade de végétation o 30 à 70 o des fleurs en tube d'un caDitule sont ouvertes et si les fleurs sont séchées à une température de l'air qui ne dépasse pas 500C, une drogue

ainsi obtenue contient par exemple au moins 100 mg oc de chama-

zulène, au moins 200 mg -' de (-)-"-bisabolole et moins de 50 mg %s d'autres bisaboloïdes, une huile essentielle préparée éventuellement à partir de cette drogue contient au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 % de (-)-ot-bisabolole et moins de 10 %, d'autres bisaboloides et un extrait alcoolique préparé à

partir de cette drogue contient au moins 5,0 mg % de chamazu-

lène, au moins 10,0 mg %. de (-)- -bisabolole et moins de 10,0

mg,' d'autres bisaboloides.

Si les fleurs de la camomille selon l'invention sont récol-

tées dans le stade de végétation o 30 à 70 "' des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et si les fleurs sont séchées à une température de l'air comprise entre 50 et 700C, la drogue ainsi obtenue contient par exemple au moins 50 mg % de chamazulène, au moins 150 mg ' de (-)-o(bisabolole et moins de 50 mg % d'autres bisaboloides, une huile essentielle éventuellement préparée à partir de cette drogue contient au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 % de (-)-od-bisabolole et moins de m d'autres bisabololdes et un extrait alcoolique préparé à

partir d'une telle drogue contient au moins 2,5 mg " de chama-

zulène, au moins 7,5 mg n, de (-)-oc-bisabolole et moins de 10

mg c6 d'autres bisabololdes.

Si les fleurs sont récoltées dans le stade de végétation o 70 à 100 ' des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et si les fleurs sont séchées à une température de l'air qui ne dépasse pas 50 C, la drogue ainsi obtenue contient par exemple

au moins 40 mg t' de chamazulène, au moins 120 mg % de (-)-&-

bisabolole et moins de 50 mg ' d'autres bisabololdes, une huile essentielle préparée éventuellement à partir de cette drogue

contient au moins 3,5 9' de chamazulène, au moins 10 ' de (-)-

cx-bisabolole et moins de 10 c' d'autres bisabololdes et un extrait alcoolique préparé à partir de cette drogue contient au

moins 2,0 mg %' de chamazulène, au moins 6,0 mg % de (-)-a(-

bisabolole et moins de 10,0 mg %' d'autres bisabololdes.

Si les fleurs de la camomille selon l'invention sont récol-

tées dans le stade de végétation o 70 à 100 5' des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et si les fleurs sont séchées à une température de l'air comprise entre 50 et 700C, la drogue

ainsi obtenue contient par exemple au moins 30 mg 9% de chamazu-

lène, au moins 100 mg % de (-)- "-bisabolole et moins de 50 mg % d'autres bisabololdes, une huile essentielle préparée éventuellement à partir de cette drogue contient au moins 3,5 c de chamazulène, au moins 10 ' de (-)"-bisabolole et moins de 10 0% d'autres bisabololdes et un extrait alcoolique préparé

à partir de cette drogue contient au moins 1,5 mg %' de chamazu-

lène, au moins 10 mg 0% de (-)-aL-bisabolole et moins de 10,0

mg d'autres bisabololdes.

Exemple 1

(La camomille de départ est tétraploîde) Par des tests de variabilité individuelle portant sur 000 plantes de l'espèce de camomille tétraplo!de qui a été décrite par I. Sarkàny (Herba Hungar. A(1), 125 - 169 (1965), on a trouvé que sur 1000 individus environ, il existe une plante qui présente, dans l'huile essentielle, une forte teneur en chamazulène de 20 %' en poids, ainsi qu'une forte teneur en

(-)-"-bisabolole de 50 % en poids, la teneur en autres bisabo-

loides (en particulier en oxyde de (-)-oC-bisabolone) étant en même temps très faible (moins de 5 ' en poids). Ces individus

ont été sélectionnés et soumis aux opérations suivantes.

1. Dans la descendance des plantes de camomille tétraDloïdes

sélectionnées (comme décrit ci-dessus), on a choisi les indivi- dus qui: A) fleurissaient à peu près en même temps, B) présentaient-une

ramification de base uniforme et une zone étroite de fleurs d'environ 10 cm, de préférence 5 cm, C) présentaient de gros capitules d'un diamètre extérieur d'environ 30 mm, de préférence de 25 à 35 mm,

D) atteignaient ou dépassaient une teneur minimale en chama-

zulène de 150 mg % et en bisabolole de 300 mg %, leur teneur en autres bisaboloides (en particulier en oxydes de bisabolole) se situant nettement au-dessous de 50 mg % (toutes les valeurs se rapportant à des capitules qui avaient été séchés à 40 C et dont la cueillette avait été effectuée dans le stade o 30 à 70 e' de toutes les fleurs

en tube d'un capitule étaient ouvertes.

Ces plantes ont été clonées. A cette fin, les plantes (plantes-mères de clonage) ont été tout d'abord recoupées à cm environ de longueur de pousse, puis mises à repousser (courtes pousses latérales) avec une durée de jour de 8 à 10 heures et à une température de 12 à 140C. Les courtes pousses ont été coupées et plantées dans un mélange de tourbe et de sable. Avec une humidité relative de l'air d'environ 100 e, une température de l'air de 150G et une durée de jour de 14 heures,

l'enracinement des boutures prend 7 à 14 jours.

A la place du clonage classique indiqué (multiplication par bouture), on peut aussi pratiquer la multiplication in

vitro de parties tissulaires divisibles de la plante (multipli-

cation dite méristématique). Différentes parties de la plante,

de préférence les pointes des rejetons ou les bourgeons axillai-

res, contiennent pour l'établissement d'une culture de camomille.

Après rinçage des plantes avec H20, on prélève dans des

conditions aseptiques, au "Laminar Flow" (filtre à haute capaci-

té pour matières suspendues dans l'air, à écoulement de refou-

lement sans turbulence), des pointes de pousses de bourgeons axillaires des feuilles et on les transfère dans des tubes à essais qui sont remplis d'un milieu nutritif, par exemple un

milieu de Murashige et Skoog (Physiol. Plant. 15, 473-497, 1962).

Les tubes à essais sont placés dans une chambre climatique o la durée du jour est de 12 à 18 h, de préférence 16 h (obtenue par des tubes fluorescents), l'intensité de la lumière est de

500 à 10 000 lux, de préférence de 1000 à 30C0 lux, et la temné-

rature est de 15 à 30 C, de Dréférence de 22 à 2oC0 Dès que les exulants manifestent un bon dévelotoement, ils sont transférés sur le milieu nutritif défini ci-dessus, mais ayant une plus forte concentration de cytokinine* (Dar exemple mg/l de 6-isopentenyladénine) et moins ou même pas du tout d'auxine (0 - 0,3 mg/1 d'acide indole-acétique). Par la suite,

les axes s'étendent et il est formé des organes adventifs, ain-

si que des bourgeons axillaires multipliés. Ceux-ci peuvent être

recueillis et mis à pousser de la manière indiquée précédemment.

Les explants destinés en plus grand nombre à la multipli-

cation des plantes (3ème passage = 3ème génération de multipli-

cation) sont transférés, après avoir pris racine et avoir formé des feuilles sur le milieu nutritif mentionné en premier, sur

une couche nourricière qui contient 10 mg/1 d'acide indole-

acétique ou d'acide 3-indole-butyrique ou 0,1 à 0,3 mg/il d'acide ônaphtylacétique. Dans ces conditions, les plantes prennent racine et peuvent être plantées, au bout d'environ 4 semaines, dans des pots remplis de terre de jardin stérilisée (traitée à la vapeur à 1200C pendant 12 heures), pour 8tre cultivées ultérieurement en serre (dans des conditions semblables à celles qui sont appliquées d'habitude pour la multiplication par

bouture classique).

Milieu nutritif de Murashige et Skoog NH 4NO3 400 (mg/l) Acide indoleacétique 2,0 (mg/l) Ca(N03)2.4H20 144 Furfuryladénine 0,1 KNO3 80 Thiamine 0,1 KH2PO4 12,5 Acide nicotinique 0,5 MgSO4.71R20 72 Pyridoxine 0,5 KC1 65 Glycocolle - 2,0 NaFe-EDTA 25 Myo-inosite 100 H3B03 1,6 Hydrolysat de caséine1000 nSO4. 4H20 6,5 Saccharose 2 ? ZnSO4. 7H20 2,7 Poudre d'agar-agar KI 0,75 purifiée 1 *Les cytokinines sont des phyto- hormones qui accélèrent la division cellulaire Phase 2 Les plantes obtenues dans la phase 1 se sont fanées ensemble dans des conditions isolées en serre. Les plantes étaient dans des pots de 11 cm, remplis de terre de Jardin, à une température diurne de 18 à 240C et nocturne de 12 à 140C. La durée de Jour était d'au moins 14 heures et a été atteinte dans le semestre

d'hiver par éclairement supplémentaire (200 W/m2). L'alimenta-

tion en eau se faisait selon- les besoins.

Sur la totalité des individus sélectionnés, on a récolté, pour la récupération des semences, au cours d'une période de 4 semaines, les capitules qui avaient fleuri et étaient près de tomber. Le séchage a été effectué dans un hangar bien aéré, à une température de l'air comprise entre 20 et 30c00; puis les semences ont été séparées au moyen d'un tamis à rentes (5 x

0,4 mm) et nettoyées au moyen d'un séparateur à air ascendant.

Phase 3 Sur les semences obtenues dans la phase 2, or. a prélevé un échantillon pris au hasard, à partir duquel environ 2000

descendants ont été cultivés (conditions écologiques sembla-

bles à celles de la phase 2) et soumis à une sélection suivant les mêmes critères A) à D) que ceux de la phase 1. Avec les individus sélectionnés, on a alors procédé de la même manière

que dans la phase 2.

Phase 4 Une partie des semences de la phase 3 a été semée en

automne en deux emplacements différents.

EmDplacement I)

Altitude 450 m, 4ú,50 de latitude nord, 11,5 de lonEtude est.

Précipitations annuelles totales, 750 mm Climat tempéré-humide Janvier, 10 à 0 C

Juillet, +10 à +20 00.

Empiacement II)

Altitude 200 m, 42 de latitude nord, 1 de longitude est.

Précipitations annuelles totales, 400 mm.

Climat méditerranéen.

Janvier, 0 à +100C

Juillet, +20 à +300C.

Aux deux emplacements, l'ensemencement a été effectué

fin septembre/début octobre.

Les plantations expérimentales sur le terrain ainsi obte-

nues ont été examinées et évaluées (contrôle de qualité) en ce qui concerne l'homogénéité de croissance, la grosseur des fleurs et la période de récolte; en outre, des échantillons des fleurs

pris au hasard ont été soumis à des dosages de substances acti-

ves. Dans ces plantations sur le terrain, on a de nouveau sélectionné les individus qui correspondaient aux paramètres fixés pour la phase 1. A partir de ceux-ci, on a obtenu des semences de la faç.on indiquée dans le dernier paragraphe de la

phase 2.

Phase 5 Avec les semences de la phase4,. on a répété les phases 3

et 4 dans l'ordre et de la manière indiqués.

Phase 6

A partir des semences obtenues dans la phase 5, on a culti-

vé environ 1500 individus (mêmes conditions écologiques que dans la phase 2) et on les a sélectionnés suivant le même principe que celui qui a été indiqué à propos de la phase 1. Parmi les plantes ainsi sélectionnées, on a choisi 34 individus et on les a clonés en procédant comme dans la phase 1'; ses plantes de chaque clone ont été plantées dix par dix en une distribution aléatoire, à distance de 40x 30 cm en plein champ (emplacement I, voir phase 4), en des points isolés. la terre était un loess, pH 7,0; la plantation a été effectuée début juin, la première récolte des graines a eu lieu au milieu de juillet, puis les plantes ont été recoupées, ont fleuri de nouveau et ont do-mé,

entre le milieu et la fin d'août, une seconde récolte de seme-

ces. La récupération des semences de ce matériel a été effectuée

de la mtme manière que dans la phase 2.

Les semences obtenues dans la phase 6 constituent le matériel de multiplication de la camomille selon l'invention. Les fleurs de plantes provenant de ce matériel de multiplication (ensemencement en septembre/octobre, récolte début juin de l'année suivante), qui sont cueillies au moment o environ 30 &à70 % des fleurs tubulées d'un capitule

sont ouvertes, et qui sont séchées aussit8t après, dans l'armoi-

re séchoir, A 400C pendant 72 heures, contiennent par exemple, sur la base du poids des fleurs séchées (substance sèche), 150 mg % de chamazulène, 300 mg de (-)- "-bisabolole et au maximum 50 mg % d'autres bisaboloides. Autres données, fournies à titre d'exemples, concernant les plantes de la camomille selon l'invention: 1. Croissance

Tige: verticale, peu ramifiée.

2. Feuillage Feuille: pennée, 2 à 3 fois Epaisseur: moyenne Feuille pennée, couleur vert moyen

Feuille pennée (tige médiane); moyennement à fortement pennée.

3. Inflorescence Fleurs disposées en petit panier (capitule): diamètre extérieur, environ 30 mm

diamètre intérieur, environ 15 mm.

Poids des capitules individuels (à sec): 45 mg environ.

Pousse à fleur, longueur (mm): 700 environ, mais dépendant du lieu de culture (climat), de la Dériode d'ensemencement, du

sol, du fumage, du traitement des plantes, du temps.

Début de la floraison (jours à partir du 1er janvier): 160ème

jour (ensemencement en septembre; emplacement, Freising, Répu-

blique fédérale allemande; autrement, dépend des facteurs cités ci-dessus) .

Floraison: mi-juin (voir ci-dessus).

Inflorescence sans tige: Teneur en huiles essentielles (% de la substance sèche): environ 1,0 %; teneur en azulène dans

l'huile essentielle: au moins 15 %.

Désintégration des inflorescences séchées, drogue de fleurs: faible en cas de récolte avant l'ouverture des dernières fleurs

en tube.

Diamètre du pollen: environ 30/um.

Longueur des graines: environ 1,25 mm.

Nombre de chromosomes des cellules somatiques: 4n = 36.

4. Fruit

Poids de mille grains (TKM) des graines: 0,06 à 0,13 g.

5. CaDacité de germination

r environ.

6. Pureté 94 à 95 y' 7. Autres caractéristiques Rapport de séchage état frais/état séché (fleurs) = 5,5 à 6: 1; odeur aromatique caractéristique de la drogue; goût finement

aromatique, typique, de l'infusion de type thé.

En outre, les caractéristiques suivantes peuvent être présentes: hauteur de croissance uniforme (égalité) avec des zones de fleurs étroites, ce aui convient particulièrement bien pour une récolte mécanisée; rendement moyennement élevé; forme

ramifiée à la base (3 à 5 fois).

Obtention de la droue: La camomille obtenue selon l'exemple 1 est semée en plein champ de la manière habituelle. Dès que les plantes se sont développées et que les capitules en sont au stade de végétation o 50 t' environ des fleurs en tube sont ouvertes, ces capitules sont récoltés avec une machine à cueillir la camomille, l'écart entre peignes de la machine à cueillir étant réglé de telle manière que seuls soient cueillis les capitules dont les fleurs en tube sont ouvertes à 50 t'. Le produit récolté est transporté aussi vite que possible en un lieu à l'ombre, o il est étalé en couche mince en attendant son traitement ultérieur. Puis les capitules sont débarrassés des tiges dans une installation de tamisage et ils sont séchés jusqu'à ce que leur poids soit constant. La perte de poids s'élève environ à 80 c. Le séchage s'effectue à l'ombre, en un endroit bien aéré, sur des claies

en une épaisseur de couche d'environ 10 cm.

Au bout de 2 à 3 jours, le séchage est achevé. Afin d'éli-

miner les morceaux de tiges et les petits débris de fleurs, la

drogue de camomille est tamisée, nuis comprimée en balles.

Analyse Huile essentielle: 960 mg % Chamazulène: 162 mg e

(-)-al-bisabolole: 330 mg 5.

Si le séchage est effectué Dar exemple dans une installation fixe de séchage à bande transporteuse au moyen d'air réchauffé artificiellement à une température comprise entre 50 et 700C, le

séchage est achevé au bout d'environ 4 à-5 heures. Pour l'éli-

mination des morceaux de tiges et des petits débris de fleurs,

la drogue est tamisée, puis comprimée en balles.

Les valeurs d'analyse d'une telle drogue sont par exemple: Huile essentielle: 870 mg % Chamazulène: 94 mg,'

(-)-"-bisabolole: 197 mg %.

Exemple 2

(La camomille de départ est tétraplolde) Par des tests de variabilité individuelle portant sur 00C plantes de l'espèce de camomille tétraplolde qui a été décrite par I. Sarkêny (Herba Hungar. j(1), 125 - 169 (1965), on a trouvé que sur 1000 individus environ, il existait une plante présentant, dans l'huile essentielle, une forte teneur en

chamazulène de 20 % en poids, ainsi qu'une forte teneur en (-)-

0(-bisabolole de 50 oi. en poids, la teneur en autres bisaboloides (en particulier en oxyde de (-)-Cr-bisabolone) étant en même temps très faible (moins de 5 % en poids). Ces individus ont

été sélectionnés et soumis aux opérations suivantes.

Phase 1 Dans la descendance des plantes de camomille tétraploldes sélectionnées (de la manière décrite ci-dessus), on a choisi

les individus qui atteignaient ou dépassaient une teneur mini-

* male en chamazulène de 100 mg c! et en (-)-cY-bisabolole de

mg e et dont la teneur en autres bisaboloides (en parti-

culier en oxydes de bisabolole) se situait au-dessous de 50 mg c.

Toutes ces valeurs se rapportent à des capitules qui ont été séchés à 40 C environ et dont la récolte a été effectuée au stade o 30 à 70 c de toutes les fleurs en tube d'un capitule

étaient ouvertes.

Phase 2 Tous les capitules fleuris ont été retirés des plantes obtenues dans la phase 1, puis les plantes ont été transportées

dans une serre et elles se sont fanées ensemble dans des condi-

tions isolées. Les plantes étaient dans des pots de 11 cm, rem- plis de terre de jardin, à une température diurne de 18 à 240C et nocturne de 12 à 140C. La durée de jour était d'au moins 14

heures et a été atteinte, dans le semestre d'hiver, par éclai-

rement supplémentaire (200 W/m2). L'alimentation en eau se

faisait selon les besoins.

Sur la totalité des individus sélectionnés, on a récolté, pour la récupération des semences, au cours d'une période de 4 semaines, les capitules qui avaient fleuri et étaient près de tomber. Le séchage a été effectué dans un hangar bien aéré, à une température de l'air comprise entre 20 et 30oC; puis les semences ont été séparées au moyen d'un tamis à fentes (5 x

0,4 mm) et nettoyées par un séparateur à air ascendant.

Le matériel d'ensemencement obtenu dans la phase 2 cons-

titue les semences de multiplication de la camomille selon

l'invention.

Les fleurs de plantes provenant de ce matériel de multi-

plication (ensemencement en septembre/octobre, récolte au début de juin de l'année suivante), qui sont cueillies au moment o à 70 % des fleurs en tube sont ouvertes et qui sont séchées immédiatement après dans l'armoire séchoir à 400C pendant 72 heures, contiennent, sur la base du poids des fleurs séchées,

au moins 100 mg 9% de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-o-

bisabolole et au maximum 50 mg %' d'autres bisabololdes.

Obtention de la drogue La camomille obtenue selon cet exemple est semée en plein champ de la manière habituelle. Dès que les plantes se sont développées et que les capitules en sont au stade de végétation o 50 ' environ des fleurs en tube sont ouvertes, ces capitules sont récoltés avec une machine à cueillir la camomille, l'écart entre peignes de la machine à cueillir étant réglé de telle manière que seuls soient cueillis les capitules dont les fleurs en tube sont ouvertes à 50 ''. Le produit récolté est transporté aussi vite que possible dans un endroit à l'ombre, o il est étalé en couche mince jusqu'à son traitement ultérieur. Puis les capitules sont débarrassés des tiges dans une installation de tamisage et ils sont séchés jusqu'à ce que leur poids soit constant. Le perte de poids s'élève environ à 80 c. Le séchage s'effectue à l'ombre, en un lieu bien aéré, sur des claies en

une épaisseur de couche d'environ 10 cm.

Au bout de 2 à 3 jours, le séchage est achevé. Afin d'éli-

miner les morceaux de tiges et les petits débris de fleurs, la drogue de camomille est tamisée, puis elle est comprimée en

balles.

Analyse Huile essentielle: 940 mg % Chamazulène: 132 mg %

(-)-ot-bisabolole: 243 mg %.

Si le séchage est effectué par exemple dans une installation fixe de séchage à bande transporteuse au moyen d'air réchauffé artificiellement à une température comprise entre 50 et 700C, le séchage est achevé au bout de 4 à 5 heures. Pour l'élimination des morceaux de tiges et des petits débris de fleurs, la drogue

est tamisée, puis elle est comprimée en balles.

Les valeurs d'analyse d'une telle drogue sont par exemple: Huile essentielle: 775 mg % Chamazulène: 65 mg %

(-)-"-bisabolole: 163 mg %.

Exemple 3

(La camomille de départ est diploide) Par des tests de variabilité individuelle de la camomille diploEde, ne contenant que peu de bisabolole, mais non exempte de bisabolole, qui est décrite par Franz, Ch., J. Hblzl et A. Vbmel dans Acta Horticulturae 73, 109 - 114 (1978), il a été constaté qu'un maximum de 20 c' de tous les individus présentait, dans l'huile essentielle, une teneur en chamazulène d'environ rf en poids et/ou une haute teneur en (-)-Ot-bisabolole de

9 en poids, la teneur en les autres bisabololdes (en particu-

lier en oxyde de (-)-OY-bisabolone) étant en même temps très faible. Ces individus ont été sélectionnés et tétraploldisés

de la manière suivante.

Des graines des plantes de camomille ainsi sélectionnées ont été placées sur une feuille de paoier-filtre imprégnée de sclution aqueuse à 0,05 5' de colchicine et on les a laissées gonfler à la température ambiante (200C) pendant 6 heures. Puis elles ont été retirées du papier-filtre, rincées plusieurs fois à l'eau et semées dans des caisses d'ensemencement (en serre): terre: mélange de tourbe et de sable 1: 1, température: 18 à 200C, humidité relative de l'air: environ 60 c, durée de jour

el éclairement artificiel: 14 heures.

Les plantes qui poussaient ont été observées jusqu'à la floraison, le succès de la polyploidisation a été constaté par mesure comparative de la grosseur du pollen et des graines, ainsi que par comptage chromosomique des plantes (descendance

F1 première descendance, tirée de graines, des plantes colchi-

nisées à tétraploldie vérifiée).

La tétraploidisation peut être également effectuée de la manière suivante:

Des plantules de camomille germées sur papier-filtre im-

prégné d'eau, vieilles de 5 à 7 jours et bien développées ont été placées, cotylédons vers le bas, dans une solution à 0,05 5 de colchicine, à la température ambiante (200C) pendant 4 à 6 h. Les racines de germination, qui sont fragiles, étaient ainsi

ménagées: pour éviter qu'elles soient endommagées par la séche-

resse, il faut que l'atmosphère ambiante présente une humidité relative de l'air de presque 100,'. Après le traitement, les plantules ont été rincées plusieurs fois à l'eau et repiquées dans des caisses à plantes. La suite du traitement est la même

que pour les graines.

Les mesures de grosseur du pollen sont exécutées avec un microscope de laboratoire à binoculaire Leitz équipé d'un

oculaire-micromètre et d'un Dorte-objets à micromètre.

Le comptage des chromosomes est effectué sur des pointes de racines. Sur des jeunes plantes cultivées en serre ou sur des plantes bouturées, on recueille des extrémités de racines fraîches de 1 à 2 cm de longueur et on les introduit rendant 5 heures dans une solution 0,002 molaire d'hydroxyquinoléine, puis pendant 15 mn dans HCl 1N. Pour l'examen, 1 mm environ des pointes de racines est coloré avec de l'orcéine-acide acétique à 2 % et examiné au microscope en immersion dans l'huile. Sur les cellules qui se trouvent en mitose, on peut ainsi déterminer la garniture chromosomique quadruple des cellules somatiques

(4n = 36).

Les plantes pour lesquelles le diamètre des grains de pol-

len est supérieur d'environ 50 y à celui du matériel de départ diplolde (environ 30/um au lieu de 20/um) et pour lesquelles la garniture chromosomique des cellules somatiques est doublée

à 36 (pour le matériel de départ diploide, le nombre correspon-

dant est de 18)-sont tétraploÂdes. Elles ont été sélectionnées.

Environ 0,1 à 0,5 ' des graines ou des plantules ont été tétra-

ploTdisées par la méthode décrite ci-dessus et ont donné des plantes intactes, capables de floraison. Cette opération a été

suivie par exemple des phases 1 et 2 de l'exemple 2.

Les fleurs de la camomille ainsi obtenue contiennent par

exemple au moins 100 mg %À de chamazulène, 200 mg %% de (-)- "-

bisabolole et au maximum 50 mg 9' d'autres bisaboloides (récolte au moment o 30 à 70 ' des fleurs en tube sont ouvertes et

séchage de 72 h dans l'armoire séchoir à 40 C).

Obtention de la drogue: La camomille obtenue selon cet exemple est semée en plein champ de la manière habituelle. Dès que les plantes se sont développées et que les capitules en sont au stade de végétation o 50 ' environ des fleurs en tube sont ouvertes, ces capitules sont récoltés avec une machine à cueillir la camomille, l'écart entre peignes de la machine à cueillir étant réglé de telle manière que seuls soient cueillis les capitules dont les fleurs

en tube sont ouvertes pour 50 -' d'entre elles. Le produit récol-

té est transporté aussi vite que possible dans un endroit à

l'ombre, o il est étalé en couche mince en attendant son trai-

tement ultérieur. Puis les capitules sont débarrassés des tiges dans une installation de tamisage et ils sont séchés jusqu'à ce que leur poids soit constant. La perte de poids s'élève environ à 80 9'. Le séchage s'effectue à l'ombre, en un lieu bien aéré,

sur des claies en une épaisseur de couche d'environ 10 cm.

Au bout d'environ 2 à 3 jours, le séchage est achevé. Afin d'éliminer les morceaux de tiges et les Detits débris de fleurs, la drogue de camomille est tamisée, nuis elle est comprimée en balles. Analyse Huile essentielle: 910 mg c Chamazulène: 117 mg c

(-)-o -bisabolole: 252 mg '.

Exemple 4

(La camomille de départ est diploïde) Par des tests de variabilité individuelle de la camomille diololde, ne contenant que peu de bisabolole, mais non exempte de bisabolole, qui est décrite par Franz, Ch., J. HBlzl et A. Vbmel dans Acta Horticulturae 73, 109 - 114 (1978), il a été constaté qu'un maximum de 20 ' de tous les individus présentait, dans l'huile essentielle, une teneur en chamazulène d'environ 5 en poids et/ou une haute teneur en (-)-o<-bisabolole de

5 en poids, la teneur en les autres bisaboloides (en parti-

culier en oxyde de (-)-o-bisabolone) étant en même temps très faible. Ces individus ont été sélectionnés et tétraploidisés exactement de la m8me manière que dans l'exemple 3, puis les individus tétraploldisés ont été sélectionnés. Environ 0,1 à 0,5 c' des graines ou des plantules ont été tétraploldisées et ont

donné des plantes intactes, capables de floraison. Cette opéra-

tion a été suivie par exemple des phases 1 à 6 de l'exemple 1.

Les fleurs de la camomille ainsi obtenue contiennent par

exemple au moins 150 mg e de chamazulène, 300 mg de (-)--

bisabolole et au maximum 50 mg %e d'autres bisabololdes (récolte au moment o 30 à 70 " des fleurs en tube sont ouvertes et

séchage de 72 h dans l'armoire séchoir à 400C).

Les autres caractéristiques correspondent à celles de la

camomille obtenue dans l'exemple 1.

Obtention de la drogue: La camomille obtenue selon cet exemple est semée en plein champ de la manière habituelle. Dès que les plantes se sont développées et que les capitules en sont au stade de végétation o 50 cu environ des fleurs en tube sont ouvertes, ces capitules sont récoltés avec une machine à cueillir la camomille, l'écart entre peignes de la machine à cueillir étant réglé de telle manière que seuls soient cueillis les capitules dont les fleurs

en tube sont ouvertes pour 50 d'entre elles. Le produit récol-

té est transporté aussi vite que possible dans un endroit à

l'ombre, o il est étalé en couche mince en attendant son trai-

tement ultérieur. Puis les capitules sont débarrassés des tiges dans une installation de tamisage et ils sont séchés jusqu'à ce que leur poids soit constant. La perte de poids s'élève environ à 80 '. Le séchage s'efectue à l'ombre, en un lieu bien aéré,

sur des claies en une épaisseur de couche d'environ 10 cm.

Au bout d'environ 2 à 3 jours, le séchage est achevé. Afin d'éliminer les morceaux de tiges et les petits débris de fleurs, la drogue de camomille est tamisée, puis elle est comprimée en

balles.

Analyse Huile essentielle: 1020 mg % Chamazulène: 173 mg 5S

(-)-o -bisabolole: 418 mg %.

Exemple 5

Préparation d'un extrait à partir de la drogue de camomille

Les fleurs de camomille pour la drogue utilisée sont récol-

tées, comme indiqué dans l'exemple 1, à un moment o 30 à 70 %' des fleurs en tube sont ouvertes et elles sont séchées à une

température de l'air ne dépassant pas 500C.

400 g de la drogue de camomille ainsi obtenue, ayant une teneur en chamazuléne de 105 mg % et en (-)- "-bisabolole de 212 mg % sont épuisés avec 2100 g d'éthanol aqueux (40, en poids d'téthanol) dans un malaxeur à cuve, à une vitesse de rotation du mélangeur de 30 tr/mn pendant 3 heures. Le matériel de drogue

est ensuite pressé et l'extrait est filtré.

Dans l'extrait, la teneur en matières actives est déterminée de façon connue en soi: Chamazulène: 3,7 mg % (-)-(<-bisabolole: 10,2 mg S.

Exemple 6

Préparation d'un extrait à partir de camomille fratche 758 g de fleurs de camomille fraîches d'une camomille qui est récoltée, comme indiqué dans l'exemple 1, à un moment o 30 70 des fleurs en tube sont ouvertes (teneur en eau: 74 %)

sont épuisés avec 510 g d'éthanol (84 ?' en poids) dans un ma-

laxeur à cuve, à une vitesse de rotation du mélangeur de 65 tr/mn pendant 30 mn. Le matériel de drogue est ensuite pressé

et l'extrait est filtré.

Dans l'extrait, la teneur en matières actives est déterminée de façon connue en soi: Chamazulène: 11,7 mg < (-)- -bisabolole: 16,3 mg c.

Exemple 7

Préparation d'une huile essentielle de camomille

g de fleurs de camomille séchées, obtenues comme indi-

qué dans l'exemple 1 (séchage effectué à 500C à l'abri de la lumière du soleil) sont mélangés, dans un ballon à fond rond de litres, avec 3,6 1 d'eau et 2 g d'ascorbate de sodium; le mélange est réglé avec HC1 1N à un pH de 5,0. Après addition de perles facilitant l'ébullition, on chauffe à l'ébullition. En l'espace de 3 h environ, 1,2 1 de distillat environ sont

recueillis.

Après l'achèvement de la distillation, le distillat est épuisé à trois reprises avec, chaque fois, 100 ml d'éther de pétrole et séché sur le sulfate de sodium anhydre. La solution

séchée est filtrée et le solvant est ensuite éliminé par dis- tillation dans l'évaporateur rotatif.

Dans l'huile essentielle obtenue, on détermine ensuite la

teneur en chamazulène et en (-)-"-bisabolole.

Rendement: 1,44 g d'huile essentielle Chamazulène: 3,6 % de l'huile

(-)-O-bisabolole: 10,2 ce de l'huile.

4o . exe t Production de l'huile essentielle La matière de.depart est une drogue tirée de l'espèce de

camomille Fanzana. Pour la préparation de la drogue, on n'utili-

se que des capitules dans lesquels 30 à- 70 %, et notamment 40 à 60 5 des fleurs tubulées sont ouvertes. le séchage s'effectue

dans une armoire séchoir à 400C pendant 72 heures. -

l'huile essentielle des fleurs de camomille est obtenue, comme décrit ciaprès, par entraînement à la vapeur pendant

deux heures de la drogue. '-

2,0 g de drogue non broyée sont mélangés, dans un ballon à fond rond d'un litre, avec 250 ml d'eau deminéralisée et soumis à une distillation à retour de liquide de deux heures dans un appareil Clevenger (Appareil à reflux d'entralnement à -la vapeur pour le dosage gravimétrique de petites quantités

d'huiles essentielles). En tant que charge préalable, on utili-

se 1 ml de pentane par analyse. Ia vitesse de reflux est de 4C + 4 gouttes/mn. Après l'achèvement de la distillation, l'huile essentielle dissoute dans lepentane est vidée dans des tubes à réactions à l'état aussi anhydre que possible et l'huile essentielle éventuellement résiduelle qui adhère à

l'appareillage est rincée au pentane. Pour l'élimination d'éven-

tuels résidus d'eau, une pointe de spatule de Na2S04 est ajou-

tée à la solution qui est ensuite filtrée à la trompe,.à travers un entonnoir-filtre de verre de porosité D3 ou D4, dans des flacons à collet. Après évaporation du pentane à 40 C au bain-marie et séchage à l'exsiccateur, la quantité d'huile

est déterminée gravimétriquement.

Dans l'huile ainsi obtenue (20 mg environ), on dose ensui-

te le chamazulène et le bisabolole.: Dosae s2 ectrp ho2tométrioue du chamazulène Solution de mesure: Ia totalité de l'huile essentielle, obtenue à partir de 2 g de drogue (20 mg environ) (obtenue de la manière décrite ci-dessus) est dissoute dans 25 ml

de n-hexane ou de cyclohexane.

Appareil de mesure: Photomètre à filtres (par exemple Eppendorf).

Longueur d'onde: 578 nm.

Cuvette: I cm Extinction spécifique du chamazulène (1 g/100 ml; 1 cm): 20, 8

Liquide de compensation: n-hexane ou cyclohexane.

Teneur er. chamazulène trouvée, en mg/100 g: 120.E578 Si l'on ne dispose pas de photomètre à filtres pour la

mesure, on peut aussi effectuer le dosage avec un spectrophoto-

mètre: Appareil de mesure: Spectrophotomètre (par exemple PM Q II ou

PM Q III "ZEISS")

Longueur d'onde: 605 nm Cuvette: 1 cm Extinction spécifique du chamazulène (i g/100 ml; 1 cm): 24,5 Liquide de compensation: n-hexane ou cyclohexane Teneur en chamazulène trouvée, en mg/100 g: 102.E605

On dose ensuite le bisabolole dans la solution de mesure.

Dosage _ar chromatographie en Dhase gazeuse du bisabolole et des autres bisaboloides Obhromatographe pour phase gazeuse: Hewlett Packard Modèle

5750,Erba Fractovap 2350 ou appareil similaire.

Détecteur: Détecteur Aionisation de flamme.

3az porteur: Hélium

Colonne: - 3,2 min-; 200 cm; acier.

Garnissage de colonne: 3 % caoutchouc nitrile-silicone "XE 60" Sur terre d'infusoires silanisée"Chromosorb WAW HP" 125 à

microns servant de support.

Température Détecteur: 320 C Bloc d'injection: 220 C

Colonne: 85 - 220 '.

Programmation de température: 4 /mn Solution échantillon: On a utilisé la solution de mesure pour

le chamazulène.

Solution type: Environ 15 mg dé bisabolole standard ont été

dissous à 25 ml dans le cyclohexane.

Quantité d'injection: 5 pi de chacune des solution échantillon

et solution type.

42- Evaluat!ao: l'évaluation s'effectue par comparaison des

-qurfaces des pics.

Teneur en bisaboloie en mg pour 100 g de drogue: x Quantité pesée (témoin) -mgaJ x Surface Semoni Le dosage des autres bisabololdes peut être effectué égale- ment par chromatographie en phase gazeuse, par exemple dans les conditions opératoires suivantes: Appareil: Packard, Modèle 7721, série 800 ou Erba Fractovap,

série 2350.

Colonnes: Colonnes de verre, 3 m/2 mm de-diamètre; 2 m/2 mm

de diamètre.

Garnissage: 3 % de caoutchouc méthylphénylsilicone "OV 1" sur terre d'infusoires silanisée "Gaschrom QI'", 125 à 150

servant de support.

-az porteur: 30 ml/mn de N2 ?rogramme de température: 80 à 180 C, 2,5 (3) 00/mn/ Température de l'injecteur/détecteur: 2000C Détecteur: Détecteur à ionisation de flamme Quantité injectée: 2 p1 environ de l'huile essentielle diluée

aà I: 50 environ.

L'évaluation s'effectue en partie sans et en partie avec étalon interne. Conviennent, en tant A': éaloJ. interne, l'ester méthylique d'acide laurique ou l'hexadécane pour les huiles pauvres en chamazulène ou exemptes de chamazulène. Dans le cas d'huiles dont la teneur en chamazulène est supérieure à %, l'ester est à préférer comme -s-Jtalr interne, la détermi- nation de la teneur étant effectuée photométriquement

(à 578 rn).

Claims (12)

REVENDICATIONS

1. Camomille tétraploide riche en bisabolole du genre de plan-

tes de culture camomille vraie (Chamomilla recutita (L.) Raus-

chert, synonyle de Matricaria chamomilla L., astéracées), dont les fleurs, séchées à 40 C, contiennent au moins 100 mg c'( de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-oc-bisabolole et moins de

mg ce q'autres bisaboloîdes, sur la base de la substance sèche.

2. Matériel de multiplication d'une camomille selon la reven-

dication 1.

3. Procédé pour la production d'une nouvelle camomille tétra-

plolde, riche en bisabolole, du genre de plantes de culture camomille vraie (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonyme de iatricaria chamomilla L., astéracées), dont les fleurs, séchées à 40eC, contiennent au moins 100 mg c/ de chamazulène, au moins 200 mg r de (-)- "-bisabolole et moins de 50 mg Dû d'autres bisaboloides, sur la base de la substance sèche, caractérisé en ce qu'on sélectionne, dans une camomille tétraploïde dans laquelle le (-)-a -bisabolole représente le composant principal de l'huile essentielle, les plantes dont les fleurs, séchées à 40 C, contiennent au moins 100 mg % de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-od-bisabolole et moins de 50 mg %,' d'autres bisaboloides et, le cas échéant, on soumet ces plantes

à des opérations supplémentaires de sélection et de multiplica-

tion et on prépare éventuellement, à partir de plantes des

espèces de camomille ainsi obtenues, un matériel de multiplica-

tion et/ou une drogue de camomille.

4. Procédé selon la revendication 3; caractérisé en ce que la camomille tétraplolde est obtenue, à partir d'une camomille

diploEde dans laquelle le (-)-a(-bisabolole représente le com-

posant principal de l'huile essentielle, par tétraploldisation au moyen de produits chimiques à des températures comprises entre 0 et 35 C, au moyen de rayons gamma, de rayons X ou de rayons UV à des températures comprises entre 0 et 35ec, au moyen de hautes températures de 33 à 50 C, au moyen de basses températures de 0 à 5 C, au moyen de la méthode du cal de décapitation ou par culture d'anthères suivie de tétraDloldisa- tion. 5. Procédé selon la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce que les opérations de sélection consistent en ce qui suit: a) Sélection d'au moins 10 individus des plantes tétraploides d'après leur teneur en substances actives (au moins 100 mg 5' de chamazulène, au moins 200 mg de bisabolole et moins de 50 mg ô d'autres bisaboloides, tous ces chiffres se rapportant à la substance sèche), la simultanéité de la date de floraison, l'uniformité de la ramification à la base, ainsi qu'une grosseur

des capitules de 20 à 40 mm; clonage des plantes ainsi sélec-

tionnées et préparation de matériel d'ensemencement à partir des plantes obtenues par le clonage; b) Culture de la descendance du matériel d'ensemencement obtenu selon a), suivie de sélection selon a) et de préparation

de matériel d'ensemencement à partir des plantes ainsi sélection-

nées; c) Répétition 3 à 5 fois des opérations selon b); d) Culture de la descendance du matériel d'ensemencement obtenu selon c), sélection de cette descendance selon a),

clonage des plantes ainsi sélectionnées et préparation de maté-

riel d'ensemencement à partir des plantes obtenues par le clo-

nage. 6.. Camomille ou matériel de multiplication de camomille,

obtenu selon l'une quelconque des revendications 3 à 5.

7. Utilisation de camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6 pour la pr6paration de matériel de multi-

plication. 8. Procédé pour la préparation de matériel de multiplication,

caractérisé en ce que des graines ou des plantules sont produi-

tes à partir de plantes de camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6.

Utilisation d'une camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6 pour la préparation d'une drogue de

camomille. 10. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les fleurs sont

récoltées à un stade de végétation o 30 à 100 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et les fleurs sont séchées à une température de l'air jusqu'à 700C, une drogue ainsi obtenue contenant au moins 30 mg % de chamazulène, au moins 100

mg % de (-)-oc-bisabolole et moins de 50 mg e d'autres bisabo-

loldes, et il est éventuellement préparé, à nartir de la drogue ainsi obtenue, par distillation en présence d'eau, une huile essentielle qui contient au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 % de (-)-o(bisabolole et moins de 10 % d'autres bisabololdes ou il est préparé, par épuisement avec des alcools inférieurs, un extrait alcoolique de camomille qui contient au

moins 1,5 mg % de chamazulène, au moins 5,0 mg %, de (-)-c-

bisabolole et moins de 10 mg % d'autres bisaboloides.

11. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la canmille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les fleurs sont

récoltées au stade de végétation o 30 à 70 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et les fleurs sont séchées à une température de l'air qui ne dépasse pas 500C, cette drogue contenant au moins 100 mg % de chamazulène, au moins

mg de (-)-"-bisabolole et moins de 50 mg %s d'autres bisa-

boloides, une huile essentielle préparée éventuellement à partir de cette drogue contient au moins 3,5 5% de chamazulène, au moins 10 % de (-)-"bisabolole et moins de 10 % d'autres bisabololdes et un extrait alcoolique préparé à partir de celle-ci contient au moins 5,0 mg t. de chamazulène, au moins 10,0 mg c. de (-)-oc-bisabolole et moins de 10,0 mg %t d'autres bisaboloides. 12. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les fleurs sont

récoltées au stade de végétation o 30 à 70 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et les fleurs sont séchées à une température de l'air comprise entre 50 et 700C, la drogue ainsi obtenue contenant au moins 50 mg % de chamazulène, au moins 150 mg %ç de (-)-"-bisabolole et moins de 50 mg ' d'autres bisabololdes, et une huile essentielle éventuellement tréparée à partir de cette drogue contient au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 t de (-)-"-bisabolole et moins de 10, d'autres bisaboloides et un extrait alcoolique préparé à partir de celle- ci contient au moins 2,5 mg 5 de chamazulène, au moins 7,5 mg,

de (-)- "-bisabolole et moins de 10,0 mg d'autres bisabololes.

13. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les fleurs sont

récoltées au stade de végétation o 70 à 100 % des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et les fleurs sont séchées à une température de l'air qui ne dépasse pas 50C00, la drogue ainsi obtenue contenant au moins 40 mg % de chamazulène, au moins 120 mg % de (-)- "-bisabolole et moins de 50 mg % d'autres bisaboloides, une huile essentielle éventuellement préparée à partir de cette drogue contenant au moins 3,5 %, de chamazulène, au moins 10 % de (-)-w -bisabolole et moins de 10 % d'autres

bisaboloides et un extrait alcoolique préparé à partir de celle-

ci contenant au moins 2,0 mg % de chamazulène, au moins 6,0 mg %

de (-)- "-bisabolole et moins de 10,0 mg % d'autres bisaboloides.

14. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, caractérisé en ce que les fleurs sont

récoltées au stade de végétation o 70 à 100 ?' des fleurs en tube d'un capitule sont ouvertes et les fleurs sont séchées à une température de l'air comprise entre 50 et 700C, la drogue ainsi obtenue contenant au moins 30 mg e de chamazulène, au moins 100 mg % de (-)-oc-bisabolole et moins de 50 mg % d'autres bisaboloides, une huile essentielle préparée éventuellement à partir de cette drogue contenant au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 % de (-)-o(-bisabolole et moins de 10 % d'autres

bisabololdes et un extrait alcoolique préparé à partir de celle-

ci contenant au moins 1,5 mg % de chamazulène, au moins 10 mg %

de (-)-o(-bisabolole et moins de 10,0 mg ' d'autres bisaboloides.

15. Procédé pour la préparation d'une drogue de camomille à partir de fleurs de la camomille selon l'une quelconque des

revendications 1 à 6, drogue qui contient au moins 100 mg % de

chamazulène et au moins 200 mg ' de (-)-o4-bisabolole, la teneur en autres bisaboloides se situant au-dessous de 50 mg e, 16. Drogue de camomille aui contient au moins 100 mg C de chamazulène, au moins 200 mg % de (-)-oe-bisabolole et moins de 50 mg j d'autres bisabololdes, caractérisée en ce qu'on utili- sé, pour sa préparation, des fleurs de la camomille selon l'une

quelconque des revendications 1 à 6.

17. Huile essentielle qui est obtenue par utilisation de

fleurs fraîches, congelées ou séchées de la camomille tétra-

ploide selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle

contient au moins 3,5 % de chamazulène, au moins 10 " de (-)-

x-bisabolole et moins de 10 C d'autres bisabololdes.

18. Extrait alcoolique de camomille qui est obtenu par utilisa-

tion de fleurs fraîches, congelées ou séchées de la camomille tétraploTde selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il contient au moins 1,5 mg de chamazulène, au moins 5,0 mg %J

de (-)- "-bisabolole et moins de 10 mg c, d'autres bisabololdes.

19. Utilisation de la camomille tétraplolde selon la revendica-

tion 1 ou de ses fleurs séchées pour la préparation d'extraits

alcooliques de camomille ou pour la préparation d'huile essen-

tielle de camomille.