NL7907892A - Werkwijze voor de bereiding van een selectief beschermd n-geacyleerd derivaat van een aminoglycosidisch antibioticum. - Google Patents

Description

9 , « Werkwijze voor de bereiding van een selectief beschermd N—geacyleerd derivaat van een -aminoglycasidisch antibioticum.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor de bereiding van een selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van een ami-noglycosidisch antibioticum, waarin enkele amino of alkylaminogroe-pen op bepaalde plaatsen in het aminoglycosidemolecuul selectief be-5 schermd of geblokkeerd zijn met een acylgroep.Derhalve heeft de uitvinding betrekking op nieuwe werkwijzen voor het selectief bescherm men van enkele amino of alkylamincgroepen op bepaalde plaatsen in het aminoglycosidische antibioticum.De voornaamste toepassing van de uitvinding ligt bij de bereiding van een selectief beschermd N-gea-10 cyleerd derivaat van het aminoglycosidische antibioticum, dat een desoxystreptaminegroep, met een 3"-aminaglycosylgroep, die aan de * 6-hydroxygroep van de desoxystreptaminegroep in het aminoglycoside molecuul gebonden zit.Het aminoglycosidische antibioticum, waarop de uitvinding kan worden toegepast, kan nader worden omschreven als een , 15 arainoglycosidisch antibioticum bestaande uit een 6-0-(3M-amino- of 3lt-alkylamino-3,f-desoxyglycosyl)-2-desoxystreptamine, dat desgewenst een 4-0-(6'-aminoglycosyl} substituent kan bevatten, en karakteristieke voorbeelden daarvan zijn kanamycinen, gentamicinen, siscmicine, netilmicine en verdamicine.De uitvinding heeft verder betrekking op 2D een toepassing van deze nieuwe werkwijzen voor de bereiding van een 1-N-(i£-hydroxy-<w-aminoalkanoyl)-amino-glycosydisch antibioticum, waarvan bekend is dat deze bruikbaar zijn als semi-synthetisch antibacterieel middel, dat werkzaam is tegen voor geneesmiddelen resistente bacteriën.

25 Aminoglycosidische antibiotica, zoals kanamycinen, zijn stoffen die verscheidene aminogroepen en hydroxygroepen bevatten met een betrekkelijk hoge en verschillende mate van reactiviteit,Vele soorten semi-synthetische antibiotica, die zijn afgeleid van de moeder aminoglycosidische antibiotica, zijn gesynthetiseerd.Bij de semi-3G synthese van deze derivaten is het dikwijls noodzakelijk of aan te bevelen om er voor te zorgen, dat enkele aminogroepen en/of enkele hydroxygroepen in het uitgangs aminoglycosidisch antibioticum selectief beschermd of geblokkeerd zijn met êên of meer geschikte beschermende groepen.

35 Voer selectieve bescherming van aminogroepen en/of hydroxygroe pen in het aminoglycosidische antibioticum zijn verschillende succes- 790 7 8 9-2 •f

- 2--'V

volle methoden ontwikkeld en beschikbaar voorzover het de selectieve bescherming van hydroxygroepen betreft.Voorzover het echter de selectieve bescherming betreft van enige bepaalde aminogroepen onder de vele aanwezige aminogroepen in het aminoglycosidische antibioticum, 5 kunnen de tegenwoordig beschikbare methoden voor dit doel ofwel met moeite worden uitgevoerd of ze vergen ingewikkelde bewerkingen.Dit komt omdat er niet veel verschil bestaat tussen de reactiviteiten van de verschillende aminogroepen in het aminoglycosidische antibioticum. Bij wijze van voorbeeld wordt de S'-aminogroep van kanamycine A 10 genomen.Een dergelijke amino- of methylaminagroep, die gebonden is aan een bepaald koolstofatoom, dat op.zijn beurt aan slechts één kool stofatoom in het aminoglycosidemolecuul gebonden is, vertoont een hogere reactiviteit dan het geval is wanneer de amino- of methylamino-groep gebonden is aan èen koolstofatoom, dat op zijn beurt gebonden 15 is aan twee of meer koolstofatomen in dit aminoglycosidemolecuul.Om deze reden is het eerstgenoemde type amino- of methylaminograep in staat met veel meer voorkeur te reageren met een acyleringsmiddel, dat een acylgroep bevat, die moet worden ingevoerd als de amino-be-schermingsgrcep, vergeleken, met bet laatstgenoemde type amino- of 20 methylaminogroep, waardoor het eerstgenoemde type amino- of methyl-aminogroep , dat preferentieel geblokkeerd is door de acylgrceo, in het N-beschermde derivaat in een hogere opbrengst wordt verkregen dan de op andere wijze N-beschermde derivaten.Verscheidene jaren geleden hebben wij gevonden, dat, wanneer aan aminogroep en een hydro-25 xygroep naast elkaar liggen als een paar in de sterische configuratie van het molecuul van het aminoglycosidische antibioticum, deze amino-en hydroxygroepen selectief met elkaar kunnen worden gecombineerd tot een cyclisch carbamaat, door behandeling met natriumhydride, zodat het paar bestaande uit aminogroep en hydroxygroep gelijktijdig kan 30 worden geblokkeerd in het cyclische carbamaat zonder dat de andere aminogroepen, die in hetzelfde molecuul aanwezig zijn, geblokkeerd worden(zie J.of Antibiotics,25, no.12,741-742(1972); Amerikaanse octrooischriften 3.925,354 en 3.965.089).

Kortelings hebben Nagabhushan c.s. gevonden, dat een zout van 35 een tweewaardig overgangsmetaal (M**}, zoals koper(ll), nikkel(n), cobalt(lï) en cadmium(lï) bij reactie in een inert organisch oplos-.middel met een aminoglycosidisch antibioticum, dat behoort tot de klasse van 4-0-(aminoglycosyl)-6-0-(aminoglycosyl)-2-desoxystrepta-minen, zoals kanamycinen, gentamicinen en sisomicine, dit tweewaar- 7907892 - 3 - dige overgangsmetaal kation een complex vormt met een paar amino- en * hydroxygroepen, die voorkomen op vicinale plaatsen in het aminoglycoside molecuul, waardoor het arainoglycosidisch antibioticum-overgangsmetaal kation complex wordt gevormd(zie Jap.O.S. 52-153944 • 5 en Amerikaans octrooischrift 4,136.254) .In dit aminoglycosidisch antibioticum- overgangsmetaal kation complex wordt de gecomplexeerde aminogroep geblokkeerd door het tweewaardige overgangsmetaal kation.

Wanneer men vervolgens dit complex laat reageren met een acylerings-middel dat een acylgroep bevat, kunnen alleen maar de niet-gecomplex-10 eerde aminogroepen in het metaalcomplex, die niet geblokkeerd zijn door het tweewaardige metaal kation, in hoofdzaak worden geacyleerd, zodat met de acylgroep een selectieve N-bescherming wordt verkregen.

Dit wordt hieronder aan de hand van kanamycine A als voorbeeld, toegelicht.Zo treedt er, wanneer men een tweewaardig overgangsmetaal 15 kation(M++), zoals koper(ll), nikkel(ll), cobalt(H) of cadmium(ll) kation, laat reageren met kanamycine A, een complexvormende reactie op van het tweewaardige metaal kation (M J tussen de 1-aminogroep en de 2M-hydroxygroep en tussen de 3"-arainogroep en de 4"-hydroxy-groep van het kanamycine A molecuul, zoals blijkt uit formule 1.

20 In de bovenvermelde complexvormingsreaotie ziet men derhalve, dat tenminste 2 mol van het overgangsmetaalzout nodig zijn per 1 mol kanamycine A.In het verkregen metaalcomplex worden de 1-aminogroep en de S'^aminogroep tegelijkertijd geblokkeerd.Wanneer dit complex met formule^ 1 wordt behandeld met een acyleringsmiddel, dat een acyl-25 groep bevat, die beschikbaar is als een amino-beschermingsgroep, zoals bekend uit de gebruikelijke synthese van polypeptiden, worden alleen de niet gecomplexeerde 3-amino en 6*-amino groepen in hoofdzaak geacyleerd waardoor het 3,6*-di-N-geacyleerde derivaat wordt verkregen (zie J.A.C.S. 100, 5253-5254(1978)).

30 Nadat we het bovenvermelde feit hadden onderkend, hebben we ons onderzoek voartgezet aangaande de wisselwerking tussen verschillende metaal kationen en aminoglycosidische antibiotica, zoals kanamycine A en kanamycine 8 alsmede semi-synthetische derivaten van de aminc-glycosidische antibiotica.Als gevdg daarvan hebben.we nu gevonden, 35 dat, ofschoon tweewaardig zink kationen duidelijk afwijkende gedragingen vertoont in vergelijking met de eerdergenoemde tweewaardige nikkel, cobalt, koper en cadmium kationen, het zink kation uiteindelijk in staat is om zowel met de 1-amino(of 1-alkylamino) groep als met de 3'*-amino(of 3"-alkylamino) groep een complex te vormen en deze 7907892 $ - 4 - te blokkeren, wanneer deze groepen behoren tot een aminoglycoside verbinding, zoals kanamycine A, B of C), die een desoxystreptamine groep bevat, waarin een S'^aminoglycosyl- of 3M-alkylaminoglycosyl-groep gebonden is aan de 6-hydroxygroep van deze desoxystreptamine 5 groep.

Volgens Nagabhushan c.s. zou men mogen verwachten, dat wanneer men tweewaardig nikkel, cobalt, koper of cadmium kationen zou laten reageren met b.v. kanamycine B, er een kanamycine B- metaalzout complex zou worden gevormd met formule 2.

10 Deze veronderstelling wordt gesteund door de publicatie van

Nagabhushan c.s. in J.A.C.S.(zie boven], volgens welke vicinale amino-hydroxy groep paren reversibele complexen moeten vormen met de tweewaardige overgangsmetaal kationen, gezien het feit, dat kanamycine B drie paar vicinale amino-hydroxy groepen bevat op respectieve-15 lijk de 1- en 2''-plaats, de 2*- en 3'-plaats en op de 2"- en 3H-plaats van het kanamycine 8 molecuul.Er is nu echter gevonden, dat, wanneer men kanamycine laat reageren met een tweewaardig metaal kat-ion, zink kation, het werkelijk gevormde kanamycine B-zinkzout com-., plex vrije 2'-amine- en 3*-hydroxy groepen bevat, die niet door het 20 zink kation geblokkeerd zijn, hetgeen in tegenstelling is met het voorstel van Nagabhushan c.s.Zelfs indien een complexvormende reactie optreedt tussen de 2*-amirtogroep en de 3’-hydroxygroep, is de complexvormende kracht zeer gering, zodat in de praktijk in wezen geen 2'-amino- en 3'-hydroxy groepen geblokkeerd zijn.Daarom wordt, 25 wanneer men het kanamycine B-zink kation complex dan acyleert door het te laten reageren met b.v. N-benzyloxycarbonyloxysuccinimido om de benzyloxycarbonylgroep in tb voeren als de amino-beschermingsgroep, het tri-3,2’,6'-N-geacyleerde derivaat, waarin drie aminogroepen, en wel 3-, 2'- en 6‘-, geacyleerd zijn, gevormd en dat in een hogere 30 opbrengst dan op andere wijze N-geacyleerde derivaten, maar daartegenover kan het 3,6'-di-N-geacyleerde derivaat in feite niet worden verkregen(zie in dit verband voorbeeld XIX ),Dit proefondervindelijke feit doet veronderstellen, dat het zink kation een ander gedrag vertoont dan de eerdergenoemde vier overgangsmetaal kationen, in het 35 bijzonder omdat het zink kation geen complex vormt met het vicinale 2·-amino- en 3'-hydroxy groepen paar.

Als een verder voorbeeld moge dienen, dat wanneer men kanarnyci-ne A laat reageren met zink kationen, gevolgd door acyleren met ben-zyloxyoarbonylgroepen (zie ook formule 1), het feit wordt waargenomen, 7907892 * - 5 - Λ dat 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine Α wordt gevormd als voornaamste acyleringsproduct in het geval dat zink kationen worden toegevoegd in een hoeveelheid van iets meer dan 1 mol per mol kanamyci-ne A.In dat geval dient te worden .opgemerkt dat deze acyleringsreac-5 tie leidt tot de vorming van 1,3,6',3*-tetra-N-benzyloxycarbonyl derivaat van kanamycine A en de vorming van niet-geacyleerd, oorspronkelijk kanamycine A en wel ongeveer gelijktijdig, maar in feite wordt het tri-N-benzyloxycarbonylderivaat van kanamycine A slechts in geringe opbrengfet verkregen ondanks dat men volgens de toelichting van 10 Nagabhushan c.x. van het reactiemechanisme zou mogen verwachten, dat het tri-N-benzyloxycarbonylderivaat in een hogere opbrengst zou worden gevormd dan de andere N-geacyleerde derivaten(zie voorbeeld VEE).

ÏEn de beschrijving en in het bijzonder in conclusie 4 van Amerikaans octrooischrift 4,136.254 wordt vermeld, dat men een zout van een 15 tweewaardig overgangsmetaal, zoals koper(il), nikkel(ll), cobalt(ll) e.d, noodzakelijk moet gebruiken in een totale hoeveelheid van tenminste 2 mol per mol kanamycine A voor de vorming van kanamycine A-overgangsmetaal zout complex, zoals te zien is in formule I.Uit onze proeven is gebleken, dat het zink kation, in tegenstelling tot de 20 vier overgangsmetaal kationen, in staat is te voeren tot de blokkering van de 1-aminogroep en de 3"-aminogroep van kanamycine A, wan- i neer het zink kation wordt gebruikt in een totale hoeveelheid van tenminste 1 mol per mol kanamycine A.Volgens onze proeven is ook gebleken, dat, wanneer men een nikkelzout laat reageren in een hoe-25 veelheid van iets meer dan 1 mol per mol kanamycine A, gevolgd door acyleren van het verkregen kanamycine A- nikkelzout complex met ben-zyloxycarbonylgroepen, er slechts in een veel lagere opbrengst 3,6*-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A wordt verkregen, dan kan warden verkregen in aanzienlijke opbrengst wanneer men kanamycine A- zink 30 zout complex acyleert( zie voorbeeld VIl).Met het oog op de bovengenoemde feiten wordt de gevolgtrekking gemaakt, dat het zink (lij kation een complexvormingsmechanisme met een aminoglycoside vertoont, dat anders is dan het complexvormende mechanisme van nikkel(ïl), cobalt (il}, koper(ll) en cadmium(ll) kationen, en dat het aminoglycoside-35 zink kation complex een complexerende stabiliteit bezit die anders is dan die van het complex van het aminoglycoside met nikkel(ll), cobalt (ll), kcper(ll) en cadmium(H) kationen.Voor de complexvorming van zink kationen met het amincglycosidische antibioticum kan het zink-kation worden verschaft in de vorm van een zinkzout, dat liefst goed- 7907892 - 6’ - r koop is επ gsen verontreiniger van het milieu kan worden geacht.

Er is derhalve gevonden, dat wanneer men zink kationen laat reageren in een inert organisch oplosmiddel met een aminoglycosi-disch antibioticum, dat een desoxystreptaminegroep bevat, met een 5 3-aminoglycosyl of 3-alkylaminoglycosylgroep gebonden aan de 6-hydro-xy groep van de desoxystreptaminegroep en mogelijk met een aminogly-cosylgroep gebonden aan de 4-hydroxygroep van de desoxystreptaminegroep, de zinkkationen een complex vormen met op bepaalde plaatsen gelegen amino-hydroxy paren en deze blokkeren, waarbij de bepaalde 10 plaatsen kunnen variëren, afhankelijk van de aard van het aminogly-cosidische antibioticum; en dat wanneer men het aldus gevormde aminoglycosidisch antibioticum- zink kation complex laat reageren met een acyleringsraiddel, dat een acylgroep bevat, die gewoonlijk gebruikt wordt het invoeren van een aminobeschermingsgroep bij de 15 synthese van polypeptiden, dit acyleringsmiddel tenminste één van de amincgroepen acyleert, die in het aminoglycosidisch antibioticum aanwezig zijn, die niet gecomplexeerd zijn met en derhalve niet geblokkeerd zijn door zink kation, zodat de aldus geacyleerde amino-groep beschermd wordt; en ook dat wanneer het verkregen acylerings-20 product ( d.w.z. het aminoglycosidisch antibioticum-zink kation complex met de geacyleerde aminogroep(en)) behandeld wordt met een zodanig geschikt reagens, dat zink kation verwijdert uit dat acyle-ringsproduct, het zink complex wordt, afgebroken, waardoor een selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van het aminoglycosidische 25 antibioticum wordt verkregen, waarvan de oorspronkelijk niet met zink in complex omgezette aminogroep(en) selectief met de acylgroep beschermd is(zijn).

Derhalve verschaft de uitvinding een werkwijze voor de bereiding van een selectief geacyleerd N-beschermd derivaat van een amino-30 glycosidisch antibioticum, dat een desoxystreptaminegroep bevat, met een 3-aminoglycosyl of 3-alkylaminoglycosylgroep gebonden aan de 6-hydraxygroep van de desoxystreptaminegroep, en enige aminogroepen in het selectief geacyleerde N-beschermde derivaat selectief beschermd zijn met een acylgroep, doordat men: 35 a} een acyleringsmiddel, dat een acylgroep bevat, die als de aminobeschermingsgroep moet worden ingevoerd, laat reageren met een aminoglycosidisch antibiaticum-zink kation complex, dat gevormd is door reactie van het aminoglycosidisch antibioticum met een zinkzout in een inert organisch oplosmiddel om een complex te vormen van 7907892 - 7 - zink kationen met het selectief N-geacyleerde derivaat van het araino-glycosidische antibioticum, waarvan de oorspronkelijk niet tot complex omgezette aminogroepen geacyleerd zijn, en b) het complex van zink kationen met het selectief N-geacyleer-5 de derivaat van het aminoglycosidische antibioticum laat reageren met een reagens, dat zink kationen verwijdert uit dat complex, waardoor het gewenste selectief geacyleerde N-beschermde derivaat van het aminoglycosidische antibioticum wordt gevormd.

De werkwijze volgens de uitvinding is bruikbaar voor het berei-10 den van een dergelijk selectief geacyleerd N-beschermd derivaat van een aminoglycosidisch antibioticum door acyleren van enige aminogroepen behalve de 1-aminogroep en de 3"-aminogroep in het als uitgangsmateriaal gebruikte aminoglycosidische antibioticum, en een dergelijk selectief N-beschermd derivaat is bruikbaar voor de che-15 mische synthese van 1-N-aminogeacyleerde derivaten van aminoglycosidische antibiotica, zoals kanamycinen, met inbegrip van araika-cineQ.of Antibiotics, 25, 695-708(1972)}, waarvan de laatste jaren gebleken is, dat het een doelmatig antibacteriëel geneesmiddel is.

Tot deze 1-N-aminogeacyleerde derivaten van de aminoglycidische 20 antibiotica behoren de verbindingen, die zijn afgeleid van een ruime groep aminoglycosiden, zoals kanamycine A, kanamycine B, « kanamycine C, gentamicinen, sisomicine en anderen, alsmede verscheidene desoxyderivaten daarvan, maar ze hebben allen gemeen, dat hun 1-aminogroep geacyleerd is door een ά-hydroxy-ω-aminoalkancylgroep 25 (zie Amerikaanse octrooischriften 3.781.268; 3.939.143; 3.940.382 en 4.001,208).Door deze 1-N-aminaacylering wordt aan de amincglycosidi-sche antibiotica een antib acteriële werking verleend tegen die resistente bacteriën, waartegen de moeder aminoglycosidische antibiotica niet werkzaam zijn, en ook wordt aan de aminoglycosidische 30 antibiotica een verbeterde antibacteriële werking verleend tegen een grotere verscheidenheid bacteriestammen in vergelijking met de moeder aminoglycosidische antibiotica.

In het onderstaande wordt nader beschreven hoe deze werkwijze volgens de uitvinding moet worden uitgevoerd.

35 Het aminoglycosidische antibioticum, dat overeenkomstig de uitvinding tct reactie moet worden gebracht met zink kation cm het zink complex te vormen (dat ook als een complex zinkzout kan worden aangeduid} kan zijn: een aminoglycosidisch antibioticum dat een des-oxystreptamine groep bevat waarvan de 6-hydroxygrGep gesubstitueerd 7907892 - a - is door een 3-aminoglycosyl- of 3-alkylamincglycosylgroep en waarvan de 4-hydroxygroep soms gesubstitueerd kan zijn door aan aminoglyco-sylgroep.Meer in het bijzonder kan het aminoglycosidische antibioticum dat bij de uitvinding kan worden gebruikt voor de vorming van 5 het zink kation complex worden gedefinieerd als een verbinding met een 6-0-(3"-amino- of 3"-alkylamino-3"-desoxyglycosyl)-2-desoxystrep-tamine, desgewenst met een 4-0-(aminoglycosyl}-groep.Bovendien kan . het aminoglycosidische antibioticum een 1-N-alkylaminoglycoside zijn zoals netilmicine.Voorbeelden van de aminoglycosidische antibiotica 10 van de voor de uitvinding geschikte klasse, zijn kanamycine A-groep antibiotica, zoals kanamycine A zelf, 6*-N-alkylkanamycine A, in het bijzonder ö'-N-methylkanamycine A, 3'-desoxykanamycine A, 6*-N-me-thyl-3'-desoxykanamycine A, 4'-desoxykanamycine A, S'-M-methyl^'-desoxykanamycine A, 3',4r-didesoxykanamycine A (zie Japanse octrooi-15 aanvrage 11402/79} en 6"-desaxy- of 4",6"-didesoxykanamycine A (zie Japanse octrooiaanvrage 54733/79); kanamycine B-groep antibiptica, waartoe behoren kanamycine B zelf, S'-desoxykanamycine B(d,w.z. tobramycine), 4'-desoxykanamycine B, 3',4'-didesoxykanamycine B (d.w.z. dibekacine), 3*^'-didesoxy-S'-eno-kanamycine B, S'-methyl-20 3*,4'-didesoxykanamycine B; kanamycine G-groep antibiotica, zoals kanamycine G zelf, 3*-desoxykanamycine C, 3' .^-dftfesoxykanamycine C| gentamicinen A, B en C; verdamicine; sisomicine en netilmicine (d.w. z« 1-N-ethylsisomicine) alsmede de andere bekende aminoglycodiden. Natuurlijk kan de werkwijze volgens de uitvinding niet alleen worden 25 toegepast op een nieuw aminoglycosidisch antibioticum, dat op het ogenblik nog niet bekend is, maar in de toekomst zal worden gevonden, maar ook op nieuwe semi-synthetische aminoglycosidische antibiotische derivaten, die in de toekomst bereid zullen worden door chemische omzetting van bekende aminoglycosidische antibiotica.

30 Karakteristieke voorbeelden van de aminoglycosidische antibio tica waarop de uitvinding kan worden toegepast zijn kanamycine A, kanamycine B, kanamycine C en desoxyderivaten van deze kanamycinen, alsmede 6*-N-alkyl derivaten daarvan, die allen worden weergegeven 1 2 3

door formule 3, waarin R een hydroxy of amino groep is, R en R

35 ieder waterstof of een hydroxygroep zijn en een hydroxygroeo of een aminogroep of een alkylaminogroep met 1-4 koolstofatcmen in de alkylgroep, in het bijzonder de methylaminogroep, is.

Om het aminoglycosidische antibiotxcum-zink kation complex te vormen door reactie van het aminoglycosidische antibioticum met zink 7907892 - 9 - kation overeenkomstig de uitvinding, kan men een bepaald aminoglyco-sidisch antibioticum, hetzij als vrije base, of in de vorm van een zuuradditiezout daarvan, oplossen of suspenderen in een geschikt organisch oplosmiddel of waterig organisch oplosmiddel, en aan de ver-S kregen oplossing of suspensie een geschikt zinkzout toevoegen in een hoeveelheid van tenminste 1 mol per mol van het aminoglycosidische antibioticum dat gebruikt wordt.Ieder gebruikelijk organisch oplosmiddel kan worden benut voor dit doel, voorzover het zinkcomplex, dat wordt gevormd na de toevoeging van het zinkzout daarin maar tenminste 10 gedeeltelijk oplosbaar is.Het gebruik van een groot volume van een polair organisch oplosmiddel en in het bijzonder een groot volume water, dient te worden vermeden, omdat de aanwezigheid van polair organisch oplosmiddel en water veelal de stabiliteit van het gevormde aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex verlaagt, zo-: 15 dat de daaropvolgende acylerings reactie voor het invoeren van de amino-beschermende groep veelal onbevredigende resultaten geeft.

Het is derhalve wenselijk cm een organisch oplosmiddel met hoog oplossend vermogen te gebruiken, zoals dimethylsulfoxyde als oplosmiddel waarin het zinkcomplex moet worden gevormd, maar het is denk-20 baar om waterig dimethylsulfoxyde, dimethylformamide, waterig dime-thylformamide, een mengsel van dimethylsulfoxyde en dimethylformemi- t de, tetrahydrofuran, waterig tetrahydrofuran en zelfs een korte keten alkanol, zoals methanol, ethanol en waterige methanol te gebruiken.

25 Zink kation kan worden toegevoegd in de vorm van een zinkzout aan het reactiesysteem waarin het zink complex wordt gevormd .Ieder zinkzout, dat gevormd is door reactie van een zink kation met een gewoon anorganisch of organisch zuur, kan voor het doel van de uitvinding worden gebruikt.Het is in het algemeen echter gewenst om een 30 zinkzout van een zwak zuur te gebruiken, zoals zinkacetaat, omdat het gebruikelijk is dat onder de metaalcomplexen met een aminogrcep een complex van een niet-quaternaire arainogroep met een metaalzout stabieler is dan een complex van een ammonium-type amine met een metaalzout, en dat het gebruik van het zinkzout van een zwak zuur gewoon-35 lijk niet leidt tot de vorming van het betrekkelijk onstabiele me-taalcomplex dat ammonium-type amine bevat.Wanneer het zinkzout van een sterk zuur, b.v. zinkchloride, wordt gebruikt, kan gewenst zinkcomplex eveneens worden gevormd, maar het verdient de voorkeur om een zwak alkalisch zout, zoals natriumacetaat, naast het zinkzout 790 7.8 92 ’ -10-.

toe te voegen om het medium te neutraliseren.Het is eveneens gewenst een hoeveelheid natriumacetaat of natriumhydroxyde als neutralise-ringsmiddel toe te voegen wanneer het uitgangs amincglycosidische antibioticum gebruikt wordt in de vorm van zijn zuuradditie zout met 5 een sterk zuur, zoals zoutzuur.In dat geval moet men er echter op letten, om geen onnodige overmaat van het neutral!satiemiddel te gebruiken, omdat anders zinkhydroxyde zou neerslaan waardoor de vorming van het complex wordt gestoord.Wanneer b.v. een aminoglycosi-disch antibioticum tetrahydrochloride wordt gebruikt voor de complex 10 vorming, moeten bij voorkeur 4 mol natriumhydroxyde worden toege* voegd om het reactiemengsel te neutraliseren.

Zolang de totale molaire hoeveelheid van het gebruikte zinkzout tenminste gelijk is aan de molaire hoeveelheid van het aminoglycosi-dische antibioticum, kan de complexvormingsreactie voortgaan.Het ver-15 dient echter de voorkeur om het zinkzout te gebruiken in een hoeveelheid van aanzienlijk meer dan 1 mol per mol aminoglycosidisch antibioticum, zodat het evenwicht can de complexvormingsreactie wordt verschoven ten gunste van de vorming van het complex.

Een gunstige opbrengst van het zinkcomplex kan worden verkregen, wan-20 neer het zinkzout wordt gebruikt in een hoeveelheid van 2,3-6 mol per mol aminoglycoside, maar in de praktijk is het zeer aan te bevelen om het zinkzout te gebruiken in een hoeveelheid van 4-5-mol per mol aminoglycoside.De tijd die nodig is voor voltooiing van de com-plexvormingsreactie na het toevoegen van het zinkzout kan variëren, 25 afhankelijk van de aard van het gebruikte organische oplosmiddel, en deze kan lopen van "direct" (bij gebruik van een waterig organisch oplosmiddel) tot 20 uur.De complexvormingsreactie verloopt gewoonlijk bij de temperatuur van de omgeving, maar men kan verwarmen of koelen.

30 Op deze manier wordt een oplossing of suspensie bereid, die het zink complex van het aminoglycidische antibioticum bevat, en daaraan wordt dan een acyleringsmiddel toegevoegd, dat de acylgroep bevat, die als de aminobe-schermende groep moet werden ingevoerd.

Het volgens de uitvinding gebruikte acyleringsmiddel kan een ge-35 bruikelijk amino-beschermend middel zijn, en dit wordt gebruikt om er voor te zorgen dat vrije, niet tot complex gevormde aminogroepen in het verkregen aminoglycidische antibioticum- zink kation complex worden geacyleerd met en geblokkeerd door de acylgroep van het acyleringsmiddel. De acylgroep kan een alkanoylgroep, .een aroylgroep, een 7907892 - 11 - alkoxycarbonylgroep, een aralkyloxycarbonylgroep, een aralkylsulfo- nylgroep of een arylsulfonylgroep, zijn, hetgeen allen gebruikelijke amino-beschermingsgroepen zijn.Het voor dit doel beschikbare acyle- 2 ringsmiddel kan ofwel een carbonzuur met formule 4a zijn, waarin R 5 waterstof, een alkylgroep, in het bijzonder een alkylgroep met 1-6 koolstofatomen, een arylgroep, in het bijzonder fenyl, of een ar-alkylgroep, in het bijzonder benzyl, is en deze groepen kunnen deels verder gesubstitueerd zijn, of ook een zuurhalogenide, zuuranhydride of actieve ester van het zuur met formule 4aj of een chloorformiaat 10 met formule 4b, of een p-nitrofenylcarbonaat met formule 4c, of een actieve N-hydroxysuccinimide ester met formule 4d, of eem azidofor- 5 miaat met formule 4e, waarin R de bovenvermelde betekenis heeftj of 6 een sulfonzuur met formule 4f, waarin R waterstof, een alkylgroep, in het bijzonder een alkylgroep met 1-6 koolstofatomen, een aryl-15 groep, in het bijzonder fenyl, af een aralkylgraep, in het bijzonder een fenylalkylgroep, zoals benzyl, waarbij deze groepen deels verder gesubstitueerd zijn,fof een zuurhalogenide, zuuranhydride of actieve ester van dat sulfonzuur.Het zal derhalve duidelijk zijn, dat de a-cyleringsreactie voor het beschermen van arcincgroepen volgens de uit-20 vinding betrekking heeft op een acylering in ruime zin, met inbegrip van b.v. formylering, acetylering, propionylering, trifluoracetyle-ring, benzyloxycarbonylering, p-methoxybenzyloxycarbonylering, tert. butoxycarbonylering, fenoxycarbonylering, tosylering, mesylering. Specifieke voorbeelden van het beschikbare acyleringsmiddel 25 zijn acetoxyformyl, p-nitrofenylformiaat, azijnzuuranhydride, acetyl-chloride, propionzuuranhydride, p-nitrofenolester van trifluorazijn-zuur, trifluorazijnzure estër, N-benzyloxycarbonylsuccinimide (als voorbeeld van een actieve ester), N-benzyloxycarbonyloxyftaalimide, benzyloxycarbonylchloride, p-methoxybenzyloxycarbonyloxy-p-nitrofe-30 nyl, tert.butoxycarbonylazide, fenoxycarbonylchloid.de, tosylchloride, en msylchloride.

Het acyleringsmiddel kan ofwel als zodanig, olfels een oplossing in een oplosmiddel, zoals tetrahydrofuran of dimethylsulfoxyde, of in een mengsel van deze oplosmiddelen, worden toegevoegd aan de oplos-35 sing of suspensie, die het aminoglycosidische antibioticum-zink complex bevat.Qe molaire hoeveelheid van het toegevoegde acyleringsmiddel is gewoonlijk gelijk aan of een geringe overmaat tot het aantal niet gecomplexeerde aminogroepen, waarmee het acyleringsmiddel moet reageren.In sommige gevallen kan de molaire hoeveelheid van het acyl- 7907892 - 12 -' eringsmiddel echter worden toegevoegd tot drie keer zoveel bedragen als het aantal niet-gecomplexeerde aminogroepen.Het acyleringsmiddel kan ofwel in één keer of in gedeelten langzaam.in een tijdsbestek van 2-3 uur, warden toegevoegd, ofschoon het gewoonlijk wordt toegevaegd 5 in een tijdbestek van 30 min tot 1 uur,De acylering kan worden uitgevoerd bij een temperatuur van -20°G tot 100oC, maar kan gewoonlijk worden uitgevoerd bij een temperatuur in het traject van 0°C tot kamertemperatuur.In sommige gevallen kan de reactietempsratuur laag worden gehouden ten tijde van de toevoeging van het acyleringsmiddel 10 en dan geleidelijk worden verhoogd naarmate de acylering verloopt. Gewoonlijk kan de acyleringsreactie in situ worden uitgevoerd in het organische oplosmiddel, waarin het aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex is gevormd.Deze acylering van het zink complex voert tot het N-geacyleerde zink complex, d.w.z. het complex van 15 zink kationen met het selectief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat.

Overeenkomstig de hierboven beschreven werkwijze volgens de uitvinding wordt de aoyleringstrap van het aminoglycosidische antibio-ticum-zink kation complex gevolgd de trap waarin het zink kation ver-20 wijderd wordt uit het N-geacyleerde zink complex(n.l. afbraak van het zink complex}, waardoor het selectief beschermde N-geacyleerde derivaat van het aminoglycosidische antibioticum, vrij van zink kationen, wordt verkregen.

Voor het verwijderen van zink kationen uit het N-geacyleerde 25 zink complex is het noodzakelijk om het N-geacyleerde zink complex te behandelen met een geschikt middel, dat zink kationen uit dat N-ge-acyleerde zink complex verwijdert.Voor dit doel bestaan vele bruikbare methoden.De eerste methode bestaat eruit, dat men een zink neerslaand middel, dat in staat is zink kation om te zetten in een watsr-30 onoplosbare verbinding, zoals zinksulfide, zinkhydroxyde of zinkcar-bonaat, te laten reageren, terwijl het N-geacyleerde zink complex nog in oplossing is in het acylerings reactiemengsel, waarin het aminoglycosidische antibioticum-zink kation comolex geacyleerd is, of nadat het is overgebracht in een nieuwe oplossing in een vers volume 35 organisch oplosmiddel uit het acylerings reactiemengsel.

Tot de zink neerslaande middelen voor deze methode behoren zwavelwaterstof, een alkalimetaalsulfide, zoals natriumsulfide, ammonium-sulfide, een aardalkalimetaalsulfide, zoals calciumsulfitie, en een al-kalimetaalcarbonaat, zoals natriumcarbonaat, of ammoniumhydroxyde.

7907892 - 13 -

In sommige gevallen kan het verwijderen van zink kationen uit het N-geacyleerde zink complex geschieden door eenvoudig water toe te voegen. Volgens deze werkwijze veroorzaakt het toevoegen van het zink-neerslaande middel aan de oplossing van het N-geacyleerde zink com-5 plex een betrekkelijk snel neerslaan van uit de zink kationen gevormde onoplosbare zinkverbinding, en het neerslag kan door filtreren worden verwijderd.Het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat dan in de filtraat oplossing achterblijft, kan worden teruggewonnen door concentreren van de oplossing of door extraheren van de 1G oplossing, en kan zonodig naderhand worden gezuiverd.Voor het zuiveren kan b.v. kolomchromatografie met siliciumdicxydegel worden benut. Een andere methode bestaat eruit dat men (i) door verdampen van het oplosmiddel, concentreert of tot droeg indampt, of (ii) het bovengenoemde acylerings reactiemengsel of de nieuwe oplossing van het voor-15 noemde N-geacyleerde zink complex, overgebracht in het verse volume van het organische oplosmiddel verdunt met een vloeibaar verdunnings-middel waardoor een olieachtig of vast neerslag, concentraat ef residu wordt verkregen, waarna men het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum uit dat neerslag, concentraat of residu op eni-2G gerlei wijze terugwint.Het voor deze methode beschikbare vloeibare verdunningsmiddel is water of een zodanige organische vloeistof, waarin het N-geacyleerde zink complex in zijn geheel of het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat gedeelte van het N-geacyleerde zink complex niet of weinig oplosbaar is.

25 Vclgens voornoemde methode wordt het acylerings reactiemengsel, dat het N-geacyleerde zink complex bevat( of de nieuwe oplossing van het N-geacyleerde zink complex, overgebracht in éen organisch oplosmiddel), geconcentreerd of to droog ingedampt, waardoor de olieachtige of vaste afzetting of residu wordt verkregen.ïïanneer een moeilijk 30 verdampbaar organisch oplosmiddel, zoals b.v. dimethylsulfoxyde, gebruikt is als reactiemediura voor de N-acylering van het zink complex is het mogelijk dat het acylerings reactiemengsel, dat het N-geacy-leerde zink complex wordt vermengd met een verdunnende organische . vloeistof, zoals ethylether, zodat het nauwelijks verdampende orga-35 nische oplosmiddel medium wordt opgelost in (of verdund met) het verdunningsmiddel, waardoor een vasts stof of een olie, bestaande uit het N-geacyleerde zink coraolex, daaruit wordt afgezet.Op deze manier wordt een olieachtige of vaste afzetting of residu verkregen, die gewoonlijk bestaat uit een mengsel van (i) het N-geacyleerde zink 7907892 -14-.

complex, d.w.z, het complex van zink kationen met het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, (ii) het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat vrijgekomen is bij de afbraak van de complexe binding in een deel van het N-geacyleerde 5 zink complex tengevolge van vrijwel volledige afwezigheid van het organische oplosmiddelmedium, (iii) een hoeveelheid van het anorganische zinkzout dat gevormd wordt bij het afbreken van de complexe binding in het deel van het N-geacyleerde zink complex, (iv) een hoeveelheid van het zinkzout, dat oorspronkelijk is toegevoegd als een 10 overmaat en tijdens de complexvormingsreactie ongereageerd is gebleven, en mogelijk (v) een resterende hoeveelheid van het organische oplosmiddel, dat gebruikt is in de voorafgaande behandelingen.

Het bovengenoemde olieachtige of vaste neerslag of residu (het voornoemde mengsel) kan vervolgens worden behandeld volgens één 15 van de hieronder vermelde methoden (a), (b) en (c).

(a) Het olieachtige of vaste neerslag of residu (het voornoemde mengsel) wordt vermengd met water of een zodanig polair organisch oplosmiddel, een waterig polair organisch oplosmiddel of gemengde polaire organische oplosmiddelen, d.i. polaire organische vloeistof 20 (fen) die als werking hebben, dat ze de complexvormende associatie van zink kationen in het N-geacyleerde zink complex, dat in het neer-elag of residu aanwezig is, vernietigen en waarin hoeveelheden van het vrijgemaakte zinkzout en oorspronkelijk aanwezig zinkzout, dat niet gereageerd heeft, oplosbaar zijn, maar het gewenste N-geacyleer-25 de aminoglycosidische antibioticum derivaat onoplosbaar is.Op deze manier wordt het N-geacyleerde zink afgebroken waardoor de zink kationen daaruit worden vrijgemaakt zodat de zink kationen in oplossing kunnen gaan en geextraheerd worden als het zinkzout met het water of (waterig) organisch oplosmiddel(en) en het- gewenste N-geacyleerde 30 aminoglycosidische antibioticum derivaat achterblijft als een onoplosbaar residu, dat moet worden teruggewonnen.Dit residu kan desgewenst worden gezuiverd door weer oplossen in een organisch oplosmiddel.Het polaire organische oplosmiddel dat voor deze behandeling (a) gebruikt wordt, kan b.v. methanol, ethanol, vloeibare ammoniak, ethyl-35 amine of triethylamine zijn.Deze polaire organische oplosmiddelen en water dienen derhalve als het zink katian verwijderende reagens.

(b) In plaats daarvan wordt het'olieachtige of vaste neerslag of residu (het voornoemde mengsel) vermengd met een zodanig ander type polair organisch oplosmiddel, hetzij watervrij of waterig, dat als 7907892 - 15 - uitwerking heeft, dat de complexvormende associatie van zink katio-nen in het N-geacyleerde zink complex dat in dat neerslag of residu aanwezig is, wordt verbroken, en waarin het vrijgekomen zinkzout niet oplosbaar is maar het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische anti-5 bioticum derivaat oplosbaar is, waardoor het N-geacyleerde zink complex wordt afgebróken teneinde het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat daaruit vrij te maken zodat dit laatste kan oplossen in en geextraheerd wordt met het polaire organische oplosmiddel en derhalve wordt afgescheiden van het zinkzout, dat vrijkomt, 10 maar niet in oplossing blijft in het polaire organische oplosmiddel.

Op deze manier wordt de oplossing van het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat in het polaire organische oplosmiddel teruggewonnen en desgewenst kan dit worden gezuiverd, b.v. chromatografisch, gevolgd door concentreren van de gezuiverde oplos-15 sing om het gewenste N-geacyleerde product te isoleren.

(c) Volgens een andere mogelijkheid wordt het plieachtige of vaste neerslag of residu (het bovengenoemde mengsel) zoals verkregen in voornoemde tweede methode opnieuw in zijn geheel opgelost in een geschikt organisch oplosmiddel, dat wat water bevat, wanneer het ge-20 hele neerslag of residu oplosbaar is of grotendeels oplosbaar is in water.De aldus verkregen oplossing wordt dan onderworpen aan een chro-matografische behandeling waarbij het vrijgemaakte zinkzout en het vrijgemaakte N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat afzonderlijk uit de oplossing kunnen worden teruggewonnen.Er is ge-25 vonden, dat voor deze chromatografische behandeling verschillende soorten kationenuitwiselende harsen, anionenuitwisselende harsen, chelaatuitwisselende harsen en wateronoplosbare hoge polymeren, die functionele groepen bevatten, die in staat zijn met een metaal te combineren, zoals chitine of chitosan, gebruikt kunnen worden.De be-30 schikbare kwaliteiten kationenuitwisselende harsen voor dit doel zijn o.m. harsen, die carboxygroepen(-COOH) als de uitwisselende groepen bevatten en harsen die sulfonyl groepen (-SO^Hj als de uitwisselende groepen bevatten.Bij gebruik van een kationenuitwisselende hars met carboxygroapen bij de-bovengenoemde chromatografische netho-35 de, wordt het eerdergenoemde olieachtige neerslag of residu(cf vaste] (het voornoemde mengsel) opgelost in een geschikt waterig organisch oplosmiddel, b.v. een mengsel van water en methanol, dat desgewenst 10-90 vol.^ water/of een mengsel van water en dioxan, dat desgewenst 10-90 vol./3 water bevat, en de verkregen oplossing wordt op een kolom 790 7 8 92 - 16 - van de kationenuitwisselingshars aangebracht.De kolom wordt dan goed gewassen met een aanvullende hoeveelheid van het bovengenoemde waterige organische^oplosmiddel, en daarna vindt de ontwikkeling plaats met als elutiemiddel een hoeveelheid van het bovengenoemde waterige 5 organische oplosmiddel dat ook nog een hoeveelheid zuur of base bevat.Als zuur kan een zwak organisch zuur, zoals azijnzuur, of een verdund anorganisch zuur, zoals verdund zoutzuur, worden gebruikt.Als base kan in vrijwel alle gevallen ammoniumhydroxyde worden gebruikt.

De concentratie van het zuur of de base in het ontwikkelingsoplosmid-10 del( het elutiemiddel) bedraagt geschikt 0,01 - 5 gew.fa, betrokken op het ontwikkelingsoplosmiddel.Het gewenste N-geacyleerde aminoglycasi-dische antibioticum derivaat kan van de complexvormende zink kationen worden gescheiden tijdens het ontwikkelingsproces, omdat de gebruikte kationenuitwisselingshars verschillende absorberende affiniteit heeft 15 voor het gewenste N-gsacyleerde aminoglycoside enerzijds en de zink kationen anderzijds, zodat de kracht waarmee de eerstgenoemde aan de hars gebonden zit anders is dan de kracht waarmee de laatstgenoemde aan de hars gebonden zit.Op deze manier kan het eluaat in fracties worden verzameld, zodat fracties worden verkregen die het gewenste 20 N-geacyleerde aminoglycoside, vrij van het zinkzout, bevatten, die dan geconcentreerd kunnen worden waardoor het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat wordt verkregen.

Bij gebruik van een kationenuitwisselingshars,die sulfonylgroe-pen bevat, voor de bovenvermelde chromatografische methode, kan de 25 scheiding en terugwinning van het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat op dezelfde wijze als in het voorgaand geval warden tot stand gebracht, omdat het om volkomen hetzelfde mechanisme gaat bij de scheiding van het N-geacyleerde aminoglyecsi-de van de complexvormende zink kationen.Anderzijds wordt bij gebruik 30 van een zwak of sterk basische anionenuitwisselingshars voor de chromatografische methode, het gedeelte van het N-geacyleerde aminoglycoside in het N-geacyleerde zink complex, dat één of meer niet-geacyl-eerde aminogroep(en) bevat, gewoonlijk niet geadsorbeerd door de zwak of sterk basische anionenuitwisselingshars wegens de ionenafstoting 35 daartussen, zodat de ontwikkeling van de anionenuitwisselingshars kolom met een geschikt waterig organisch oplosmiddel het mogelijk maakt het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat te elueren uit de kolom, terwijl de zink kationen in de kolom blijven.

Wanneer de chromatografische methode wordt uitgevoerd met ge- 7907892 - 17 - bruikmaking van een chelaat uitwisselingshars, die in staat is te combineren met de zink kationen door het metaal-chelerend vermogen van deze hars, wordt een oplossing van het voornoemde olieachtige of vaste neerslag of residu (het voornoemde mengsel) in een waterig or-5 ganisch oplosmiddel op een kolom van chelaat uitwisselingshars gebracht, die dan wordt ontwikkeld met een geschikt ontwikkelingsoplos-middel on het gewenste N-geacyleerde aminoglycoside bij voorkeur uit de kolom te elueren, terwijl de zink kationen gebonden blijven aan de chelaat uitwisselingshars.Het wateronoplosbare hoge polymeer, dat 10 groepen bevat die in staat zijn met een metaal te combineren, zoals b.v. chitine en chitosan, kan op dezelfde manier worden gebruikt als de chelaat uitwisselingshars.

(d) Bovendien is een derde methode mogelijk, waarbij het voornoemde acylerings reactiemengsel, waarin de acylering van het zink 15 complex ter bescherming van de aminogroepen werd uitgevoerd, direct op een kolom van een kationen of anionen uitwisselingshars, een chelaat. uitwisselingshars of een wateronoplosbaar hoog polymeer, dat metaalcambinerende groepen bevat, wordt gebracht, zodat het N-geacyleerde zink complex door de hars of het hoog polymeer wordt geadsor-20 beerd.De kolom kan dan zo nodig worden gewassen met een waterig organisch oplosmiddel, en kan vervolgens worden ontwikkeld met een waterig organisch oplosmiddel, dat al dan niet een zuur of base, als vermeld in bovenstaande methode (c), bevat, gevolgd door overeenkomstige bewerkingen als in methode (o), waardoor de verwijdering van 25 zink kationen uit het N-geacyleerde zink complex als ook het terugwinnen van het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat wordt tot stand gebracht.

(e) Ode is een vierde methode mogelijk voor het terugwinnen van het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, 30 waarbij het voornoemde geacyleerde reactiemengsel, dat het N-geacyleerde zink complex bevat, direct met water wordt behandeld, door vermengen met water, in het geval dat het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat zelf onoplosbaar of nagenoeg onoplosbaar is in water.Als voorbeeld van een N-geacy-leerd aminoglyco-35 sidisch antibioticum derivaat, dat nagenoeg onoplosbaar is in water, kan 3,2*,6'-tri-N-benzyloxycarbonyldibekacine worden genoemd,In dit geval, wanneer het acyleringsreactiemengsel, dat het N-geacyleerde zink complex, waarin een nagenoeg wateronoplosbaar N-geacyleerd aminoglycoside derivaat, direct vermengd wordt met water, wordt de zink- 7907892 - 18 - complexvormende associatie in het N-geacyleerde zink complex verbroken waardoor het N-geacyleerde aminoglycoside derivaat kan neerslaan als een vaste stof, terwijl het uit de vrijgekomen zink kationen gevormde zinkzout in oplossing blijft, waardoor het gewenste N-geacyl-5 eerde aminoglycosidische antibioticum derivaat als een vrijwel zuiver product, gescheiden van het zinkzout, kan worden teruggewonnen.

Zoals hierboven vermeld wordt de N-acylering, n.l. de amino-beschermende reactie, uitgevoerd met het zink complex van het aminoglycosidische antibioticum overeenkomstig de in de aanhef beschreven 10 werkwijze volgens de uitvinding, en het aldus gevormde complex van zink kationen met het mono-, di-, tri- of pdy-N-geacyleerde aminoglycoside derivaat is er een, waarin de gebruikte zink kationen complex geassocieerd zijn met de structuur van het N-geacyleerde aminoglycoside derivaat.Daarom veroorzaakt, wanneer het gewenste N-geacyl-15 eerde aminoglycoside onoplosbaar of slecht oplosbaar is in water, een eenvoudige bewerking, toevoegen van water, aan het acyleringsreactie-mengsel, dat het N-geacyleerde zink complex bevat, dat het wateronop-losbare N-geacyleerde aminoglycoside derivaat wordt neergeslagen als een vaste stof, terwijl de vrijgekomen zink kationen daaruit verwij-20 derd worden doordat ze in oplossing gaan in het water(zoals in het geval van de vierde methode, beschreven in de voorgaande paragraaf (e),Het aldus verkregen wateronoplosbare neerslag kan direct worden gebruikt als een uitgangsmateriaal voor opvolgende reacties voor semi-synthetische bereiding van een gewenst eindproduct. Ril eer in het 25 algemeen is het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat zelf echter dikwijls oplosbaar of gedeeltelijk oplosbaar in water, en derhalve kan het gewenste N-geacyleerde aminoglycoside derivaat slechts in een aanzienlijk verlaagde opbrengst worden verkregen wanneer de eenvoudige behandeling van direct vermengen van water met 3D het acylerings reactiemengsel wordt gebruikt.Om deze redenen kunnen betere resultaten veeleer worden verkregen door één van de hierboven genoemde methoden (b) of (c) toe te passen, waarbij het N-geacyleerde zink complex(d.w.z. het complex van zink kationen met het N-gea-cyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat verkregen is 35 met de N-acylerings reactie) eerst uit het acylerings reactiemengsel wordt afgescheiden, het aldus afgescheiden N-geacyleerde zink complex dan wordt opgelast in water of een waterig organisch oplosmiddel, en de verkregen oplossing verder verwerkt wordt ter verwijdering van zink kationen daaruit .Intussen is één van de eenvoudige methoden voor 790 78 92 - 19 - het verwijderen van zink kationen, die in het algemeen voor de hand liggen, een methode waarbij men zwavelwaterstof of aen alkalisulfide als neerslagmiddel gebruikt voor zink kationen, cm deze laatsten als zinksulfide te laten neerslaan( als een uitvoeringsvorm van de eerste 5 methode, beschreven in bovenstaande paragraaf (a)).Zinksulfide slaat echter dikwijls neer als een colloidaal neerslag, dat moeilijk kan worden afgefiltreerd en afgezien daarvan hebben zwavelwaterstof en alkalisulfide een onaangename geur en zijn niet geschikt voor industriële uitvoering van de werkwijze.Daarom hebben we een uitgebreid 10 onderzoek ingesteld in een poging om een practische methode te vinden voor het verwijderen van zink kationen uit het zink complex zonder toevlucht te moeten nemen tot het gebruik van een sulfide, en we zijn er nu in geslaagd doelmatige en gemakkelijke methoden te ontwikkelen vcor het verwijderen van zink kationen door de bovengenoemde 15 uitwisselingsharsen af ander polymeer materiaal te gebruiken( zoals in het geval van de methoden (c) en (d)}.Deze methoden (c) en (d) zijn industrieel veel gunstiger en nuttig omdat ze gemakkelijk kunnen werden uitgevoerd, een hoge doelmatigheid van de scheiding van zink kationen verschaffen en een hoge opbrengst geven van het gewenste 20 N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat.

Tenslotte kunnen de hierboven beschreven verschillende methoden en werkwijzen voor het behandelen van het N-geacyleerde zink complex met het zink kation verwijderende reagens als volgt worden samengevat (i) Het complex van zink kationen met het selectief N-geacyleer-25 de aminoglycosidische antibioticum derivaat wordt eerst afgescheiden uit het acylerings reactiemengsel alvorens het tot reactie wordt gebracht met een reagens voor het verwijderen van zink kationen uit dit complex.

(ii) Het complex van zink kationen met het selectief N-geacyl-30 eerde aminoglycosidische antibioticum derivaat wordt uit het acylerings reactiemengsel afgescheiden door extraheren met een organisch oplosmiddel, door verdampen van het organische oplosmiddel medium uit het acylerings reactiemengsel of door het acylerings reactiemeng-sel te verdunnen met een organisch oplosmiddel als verdunningsmiddel, 35 alvorens het tot reactie wordt gebracht met een reagens vcor het verwijderen van zink kationen.

(iiij Het complex van zink kationen met het selectief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat wordt, na afscheiding, vermengd met water of een polair organisch oplosmiddel, dat al dan 7907892 - 20 - niet watervrij is, en dient als het zink kationen verwijderend middel.Dit polaire organische oplosmiddel is ofwel een oplosmiddel, waarin het zinkzout oplosbaar is maar het N-geacyleerde aminoglyco-sidische antibioticum derivaat onoplosbaar is, of een oplosmiddel 5 waarin het zinkzout onoplosbaar is maar waarin het Ν-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat oplosbaar is.

(iv) Het complex van zink kationen met het N-geacyleerde araino-glycosidische antibioticum derivaat wordt na afscheiding weer volledig opgelost in een organisch oplosmiddel, dat wat water bevat, en de 10 verkregen, oplossing wordt onderworpen aan een chromatografische behandeling met behulp van een kationen uitwisselingshars, een anionen uitwisselingshars, een chelaat uitwisselingshars of een wateronop-losbaar polymeer, dat functionele groepen bevat die kunnen combineren met een metaal, en die dienen als het zink kation verwijderende 15 middel.

(v) Het acylerings reactiemengsel wordt direct door een kolom van een kationen uitwisselingskolom, een anionen uitwisselingskolom, een chelaat uitwisselingshars of een wateronoplosbaar polymeer, dat de metaalcombinerende groepen voor adsorptie van het complex van 20 zink kationen met het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat bevat, gevoerd, en de kolom wordt daarna ontwikkeld met een waterig organisch oplosmiddel dat al dan niet een hoeveelheid base of zuur bevat, en het eluaat wordt in fracties verzameld, waarna de fracties, die het gewenste selectief N-geacyleerde aminoglycosidische 25 antibioticum derivaat, maar geen zink kationen bevatten, worden verzameld.

(vi) Indien het gewenste N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat onoplosbaar of vrijwel onoplosbaar is in water, wordt het acylerings reactiemengsel direct vermengd met water, zodat 30 het derivaat gescheiden van het zinkzout v/ordt neergeslagen en het zinkzout in het water opgelost blijft.

(vii) het acylerings reactiemengsel wordt direct behandeld met zwavelwaterstof, een alkalimetaal sulfide of een aardalkalimetaalsul-fide, waardoor zink kationen neerslaan als zinksulfide, of met ammo- 35 niumhydraxyde, waardoor zink kationen neerslaan als zinkhydroxyde.

In het zinkccmplex als beschreven in de aanhef van de beschrijving vormen de zink kationen in hoofdzaak complexen met de 1-aminc-en 3"-aminogroepen van het aminoglycosidische antibioticum, en derhalve verschaft de N-acylering van het aminoglycosidische antibioti- 7907892 - 21 - cum zink kation complex, gevolgd doer de verwijdering van de zink kationen gewoonlijk het N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat waarin amino- en/of alkylamino groepen behoudens de 1-aminc- en 3"-aminograepen, door acylgrcepen beschermd zijn.Wanneer 5 het aldus verkregen N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat uit de werkwijze volgens de uitvinding vervolgens 1-N-geacyl-eerd wordt met een dC-hydroxy-^-aminoalkaencarbonzuur op op zichzelf bekende wijze, zoals beschreven in Amerikaanse octrooischriften 3.781,268 en 3.939.143, en vervolgens de resterende aminobeschermen-10 de groepen uit het verkregen 1-N-geacyleerde product worden verwijderd, verkrijgt men een semi-synthetisch 1-N-geacyleerd aminoglycosi-disch antibioticum, waarvan bekend is dat het een bruikbaar antibac-terieel middel is. .

Synthese van de 1-N-geacyleerde aminoglycosidische antibiotica 15 wordt nu bij wijze van voorbeeld beschreven uitgaande van kanamycine A als uitgangsmateriaal.'.Vanneer kanamycine A wordt gebruikt als het uitgangsmateriaal bij de werkwijze volgens de uitvinding, worden in eerste instantie de l-amino** en 3"-amino-groepen van kanamycine A geblokkeerd door complexvorming met zink kationen bij de vorming van' 20 het zink ccmplex.Derhalve kunnen, wanneer het kanamycine A- zink kation complex geacyleerd wordt met een geschikt acyleringsmiddel volgens de uitvinding of met een ander soort amino-blokkerend middel, de niet-gecomplexeerde 3-amino- en 6*-aminagroepen van het kanamycine A molecuul worden beschermd door de acylgroep van het acyleringsmid-25 del dat gebruikt wordt of door het andere soort amino-beschermende groep.Na daaropvolgende verwijdering van de complexvormende zink kationen uit het N-geacyleerde kanamycine A-zink kationen complex, laat men het verkregen N-geacyleerde kanamycine A derivaat reageren met een acyleringsmiddel met een acylgroep, die moet worden ingevoerd in 30 de 1-aminogroep van het kanamycine A molecuul.Deze acylgroep reageert dan alleen maar met de niet-geblnkkeerde 1-amino- en 3H-aminogroepen van kanamycine A.Op dat tijdstip is de 1-amincgroep gewoonlijk iets actiever dan de 3"-aminogroep, zodat het gewenste N-geacyleerde kanamycine A derivaat in een iets hogere opbrengst kan worden verkregen, 35 dan het 3"-N-geacyleerde kanamycine A derivaat,Latere verwijdering van de beschermende groep uit hst 1-N-geacyleerde kanamycinederivaat, dat aldus is verkregen, levert het 1-^N-geacyleerde kanamycine A als het gewenste eindproduct.Daarom zal bij gebruikmaking van de werkwijze volgens de uitvinding het duidelijk zijn, dat het gewenste 1-N- 7907892 - 22 - acylkanamycine A in een hogere opbrengst kan worden verkregen vergeleken met wanneer men onbeschermd kanamycine A of 6'-N-beschermd ka-namycine A direct laat reageren met een acyleringsmiddel voor de 1-N-acylering van kanamycine A.Wanneer men een kanamycine zonder 5 enigerlei bescherming van de stikstof laat reageren met een 1-N-acyleringsmiddél blijkt dat er gemengde N-geacyleerde orcriucten worden gevormd, die een zeer geringe hoeveelheid (gewoonlijk 1a/o tot enkele procenten] van het gewenste 1-N-geacyleerde product bevatten. Wanneer de in de aanhef beschreven werkwijze volgens de uitvin-10 ding wordt toegepast op een kanamycine met formule 3, worden enkele of alle aminogroepen, behalve de 1- amino- en 3"-aminogroeoen van dat kanamycine beschermd waardoor een N-geacyleerd kanamycine deri- vaat wordt verkregen met formule 5, waarin R a een hydroxygroeo, ami- 5 5 nogroep(-NHp], een groep -NHC0R , of een groep -NHCO.OR of een ^64 5 15 groep -NHS0„R is; R a een hydroxygroeo, een groep -NHG0R , een c c o c groep -N(Ro)C0R , een groep -NHCO.OR , een groep -N(R JCO.OR , een 6 S 6 2 3 groep -NH50?R of een groep -N(R )S0 R is; R en R ieder de boven- ^ 7^5 5 vermelde betekenis hebben; R een groep -C0R , een groep -CO.OR of

5 5 G

een groep -S0_R is ; R en R de bovenvermelde betekenis hebben en Q ^ 20 R een alkylgroep, in het bijzonder met 1-4 koolstofatomen, is.

Wanneer derhalve de in de aanhef genoemde werkwijze volgens de uitvinding wordt toegepast op een kanamycine, wordt gewoonlijk een N-beschermd kanamycine derivaat met formule 5 verkregen, waarin alle aminogroepen met uitzondering van de amino- en/of alkylaminogroepen 25 op de 1- en 3"-plaatsen van het kanamycine molecuul geblokkeerd zijn. Desondanks wordt, wanneer de als de amina-blokkerende groep in te voeren acylgroep betrekkelijk groot is in zijn sterische afmetingen, b.v. een tert.butoxycarbonylgroep, of wanneer de malaire hoeveelheid van het gebruikte acyleringsmiddel minder bedraagt dan de stoichio-30 metrisch benodigde hoeveelheid voor het acyleren van alle niet-ge-complexeerde aminogroepen van het kanamycine molecuul, zelfs wanneer de acylgroep van het 'gebruikte acyleringsmiddel van een gewone afmeting is, of wanneer de acyleringsreactie in een tussentijds stadium wordt gestaakt, een dergelijk N-beschermd kanamycine derivaat ver-35 kregen, waarin het aantal geacyleerde aminogroepen in het kanamycine molecuul minder bedraagt dan in hst bovengenoemde geval, en dan wordt in bepaalde gevallen een zodanig beperkt N-geacyleerd kanamycine derivaat verkregen, dat daarin alleen de 6'-amino- of 6'-alkyl-aminogroep geacyleerd is, omdat die 6'-amino- of S'-alkylaminogrcep 7907892 - 23 - reactiever is dan de andere aminogroepen in het kanamycine molecuul. Het N-geacyleerde kanamycine derivaat met formule 5 is een belangrijk tussenproduct, dat gebruikt kan worden bij de semi-synthe-tische bereiding van verschillende soorten kanamycine derivaten.De S verbinding met formule 5 heeft een verhoogde waarde als tussenproduct materiaal voor chemische synthese, b.v, in het bijzonder bij gebruik in een werkwijze voor de semi-synthetische bereiding van 1-N-geacyleerde aminoglycosidische antibiotica, die werkzaam zijn tegen de kanamycine-bestendige bacteriën, door de 1-araincgraep van 10 een verbinding met formule 5 te acyleren met een ^.-hydroxy-ö>-ami-noalkaancarbonzuur en daarna de beschermende groepen te verwijderen van de geblokkeerde amino- en/of alkylaminogroepen van het gevormde 1-N-acyleringsproduct.

Als voorbeeld kan, wanneer de tussenverbinding met formule 5 15 geacyleerd moet worden met een acylgroep, b.v. met (s)-4-benzyloxy-carbonylamino-2-hydroxybutyrylgroep, de verbinding met formule 5 in een geschikt organisch oplosmiddel, zoals waterig tetrahydrofuran, tot reactie worden gebracht met een overeenkomstig gesubstitueerd boterzuur of een gelijkwaardig reactief derivaat daarvan, zoals een 20 actieve ester, b.v. N-hydroxysucciniraide ester, N-hydroxyftaalimide ester of p-nitrofenol ester, waardoor het 1-N-acylerings product wordt gevormd.Vervolgens kan verwijdering van de benzyloxycarbonyl-groep en de beschermende groep (R } in de verbinding met formule 5 uit het 1-N-acyleringsproduct tot stand"worden gebracht met een ge-25 bruikelijke techniek voor het verwijderen van N-beschermende groepen, b.v. hetzij door hydrolyse met zuur of base, of door reductie met reducerend metaal, of door katalytische hydrógenolyse met waterstof, of door radicaal reductie met natrium in vloeibare ammoniak, waardoor een sami-synthetisch kanamycine derivaat wordt verkregen met een 30 (s)-4-amino-2-hydroxybutyrylgroep gebonden aan de 1-aminogroep van het kanamycine, dat werkzaam is tegen de resistente bacteriën en 12 3 4 wordt weergegeven door formule 6, waarin R , R ,-R en R ieder de bovenstaande betekenis hebben.In de bovengenoemde werkwijze kan in . het algemeen een N-beschermd derivaat van een si-hydroxy-ω-aminoal- 35 kaancarbonzuur met formule 7 worden gebruikt, waarin n een geheel getal is en wel 1, 2 of 3, in plaats van het (S}-4-benzylnxycarba-nylamino-2-hydroxyboterzuur, waardoor een 1-N-( (s)-e*·-hydroxy-uj-ami-noalkanoylj-kanamycine derivaat wordt verkregen.

□e uitvinding heeft verder betrekking op een werkwijze voor de 7907892 - 24 - bereiding van een selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van een aminaglycosidisch antibioticum, dat een 6-0-(3”-amino- of 3"-alf<yl-amino-3"-desoxyglycosyl}-2-desoxystreptaminegroep, desgewenst met een 4-0-(aminoglycosylgroep, bevat, waarbij in dit derivaat alle 5 aminogroepen (met inbegrip van de 3rt-arainogroep), met uitzondering van de 1-aminogroep van het aminoglycoside molecuul geblokkeerd of beschermd zijn door dezelfde of verschillende acylgroepen.

Volgens de eerstgenoemde werkwijze volgens de uitvinding (verder soms aangeduid als zink-complexerende werkwijze] is het mogelijk een 10 dergelijk selectief maar partieel beschermd N-geacyleerd derivaat van het aminoglycosidische antibioticum te bereiden, waarin alle aminogroepen behoudens twee, de 1-aminc- en 3"-amino-(of 3,r-alkylamino-' ] groepen van het aminoglycoside molecuul beschermd zijn door een acylgroep en derhalve de 1-amino- en 3"-amino (of 3"-alkylamina) 15 groepen onbeschermd blijven.Zelfs wanneer men dit gedeeltelijk beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat laat reageren met een «t-hydroxy-w-aminoalkaancarbonzuur of een reactief equivalent daarvan teneinde de bovengenoemde 1-N.acylering te bewerkstelligen, warden in de practijk gemengde acyleringsproducten verkre-20 gen, die gevormd worden door (i) het 1-N-geacyleerde product waarin alleen de 1-aminogroep van het aminoglycoside molecuul geacyleerd is door het gfc-hydraxy-w-aminoalkaancarbonzuur, (ii) het 3"-N-geacy-leerde product waarin alleen maar de 3"-amina(cf 3"-alkylamino)groep geacyleerd is, (iii) zowel de 1-amina- als 3"-amino-(of 3"-alkylami-25 no] groepen geacyleerd zijn, en (iv) het niet-gereageerde materiaal, waarin geen van de 1-amino- en 3"-amino-(of 3"-alkylamina-) groepen geacyleerd zijn.Om het uiteindelijk gewenste 1-N-geacyleerde product te verkrijgen uit de bovengenoemde gemengde acyleringsproducten is het daarom altijd noodzakelijk om een aanvullende trap uit te voeren, 30 waarin het 1-N-acylerings product daaruit wordt geïsoleerd door chro-matografie of volgens een andere isolatiemethode.Daar gelukkigerwijze de 1-aminogroep reactiever is dan de 3n-amino(of 3"-alkylamino)grosp, bedraagt de werkelijke opbrengst van het gewenste 1-N-acylerings product gewocnlijk 40-60$ en is meer dan een theoretische maximumop-35 brengst van 25$, die wordt berekend onder aanname dat de reactiviteit van de 1-amino- en 3”-amino-(of 3"-alkylamino-) groepen volkomen aan elkaar gelijk is.Desondanks is het, zelfs wanneer de reactieomstandig-heden voor de 1-N-acylering zo gunstig mogelijk worden genomen, onvermijdelijk, dat ongewenste N-geacyleerde producten als bijproducten 7907892 - 25 - ontstaan, en er is altijd een aanvullende trap nodig om de ongewenste N-geacyleerde bijproducten te verwijderen door de gemengde geacyleer-de producten te onderwerpen aan een zorgvuldige kolcmchromatografie.

Teneinde dit nadeel te vermijden is het duidelijk nocdzakelijk 5 een zodanig selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van het amino-glycosidische antibioticum te bereiden, dat daarin alle aminogroepen met uitzondering ven -de 1-aminogroep beschermd zijn.Om aan dit vereiste te voldoen zijn nadere onderzoekingen gedaan in een poging een werkwijze te verschaffen, waarmee het mogelijk is de 3n-amino- (of 10 3w-alkylamino-] groep van het selectief maar gedeeltelijk beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat vrije 1- en 3"-aminogroepen bevat, zoals verkregen met het bovenbeschreven zink-complexerende proces,, te beschermen, terwijl de 1-aminogroeo ongeblokkeerd blijft.

15 Als gevolg daarvan zijn wij er nu in geslaagd te vinden, dat, wanneer men het partieel beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, zoals verkregen met het zink-complexerende proces, laat reageren roet een acyleringsraiddel, dat bestaat uit een mierezure ester, een dihalogeen- of trihalcgeenalkaancarbonzure es-20 ter, N-formylimidazol, de 3"-amino- of 3l,-alkylamino-groep preferentieel kan worden geacyleerd voor het blokkeringsdoel zonder dat de 1-aminogroep wordt geacyleerd.Deze selectieve 3w-N-beschermende werkwijze kan werden gecombineerd met de hierboven beschreven zink-complexerende werkwijze (d.w.z. het in de aanhef beschreven proces vol-25 gens de uitvinding}, zodat op een gemakkelijke en doelmatige wijze een dergelijk selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van het aminoglycosidische antibioticum, dat een 6-0-C3,,-aminc- of 3”-alkylarai-no-3'kiesoxyglycosyl]-2-desaxystreptamine groep bevat, wordt verkregen, waarin alle aminogroepen met uitzondering van de 1-amlnogroep van het 30 aminoglycoside molecuul selectief beschermd zijn met dezelfde of verschillende acylgroepen.Ooor de combinatie van de zink-complexerende werkwijze met de selectieve 3"-N-beschermende werkwijze wordt het voordeel verkregen, dat het uiteindelijk gewenste 1-N-onbeschermde, maar op andere N-volledig beschermde derivaat van het aminoglycosi-35 dische antibioticum kan worden bereid uit het moedermateriaal amino-glycosidische antibioticum in een totale opbrengst van 70Ρ.ί of meer. '.Vanneer dit 1-N-onbeschermde maar overigens N-volledig beschermde derivaat wordt gebruikt voor de 1-N-acylering van het aminoglycosi-disohe antibioticum een verder voordeel wordt verkregen, doordat de ongewenste- N-geacyleerde producten vrijwel niet als bijproducten 7907892 - as - worden gevormd, zodat het terugwinnen en zuiveren van het gewenste 1-N-acyleringsproduct zeer vergemakkelijkt wordt.

Derhalve verschaft de uitvinding ook een werkwijze voor de bereiding van een selectief beschermd N-geacyleerd derivaat van een 5 aminoglycosidisch antibioticum, dat een 6-0-(3"-amino- of 3"-alkylamino-3"-desoxyglycosyl)-2-desoxystreptamine groep bevat, die desgewenst een 4-0-(aminoglycosyl) groep bevat, waarin de 1-emi-nogroep van het desoxystreptamine onbeschermd is, maar alle andere aminogroepen in het aminoglycoside molecuul beschermd zijn met de-10 zelfde of verschillende acylgroepenjdeze werkwijze bestaat uit de volgende trappen: a) men laat een alkaancarbonzure ester met formule 8, waarin R waterstof of een dihalogeenalkyl- of trihalogeenalkylgroep met 1-6 koolstofatomen is, en Rb een alkoxygroep met 1-6 koolstofatomen, 15 een aralkoxygroep, in het bijzonder een benzyloxygroep, eegferyl-oxygroep, in het bijzonder een fenyloxygroep, of een N-formylimida-zol is, als acyleringsmiddel reageren met een gedeeltelijk beschermd N-geacyleerd derivaat van het aminoglycosidische antibioticum, waarin de 1-amino- en 3"-amino- of S'^alkylamino-groepen onbeschermd zijn en. 20 alle overige aminogroepen beschermd zijn door een acylgrcep als de aminobeschermingsgroep, in een inert organisch oplosmiddel, teneinde selectieve acylering van de 3"-amino- af 3"-alkylamino-groep· van het partieel beschermde N-geacyleerde derivaat tot stand te brengen met de acylgroep RaC0- van het acyleringsmiddel en daardoor het gewenste 25 1-N-beschermde en overigens volledig l\i-beschermde derivaat van het aminoglycosidische antibioticum te verschaffen.

De aminoglycosidische antibiotica, die bij deze werkwijze volgens de uitvinding gebruikt kunnen worden, zijn dezelfden als ge-• bruikt kunnen worden bij de eerder genoemde werkwijze volgens de 30 uitvinding.

Uitvoeringsvormen van de laatstbehandelde werkwijze volgens de uitvinding warden nu nader beschreven.

Het gedeeltelijk beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat tot reactie moet worden gebracht met hst 35 acyleringsmiddel met formule 8 overeenkomstig de tweede methode volgens de uitvinding, en waarvan alle aminogroepen, behalve de 1-ami-na- en 3"-emino-(of 3"-alkylamino-]groepen in het aminoglycoside molecuul beschermd zijn, kunnen derivaten zijn die bereid zijn met dg bovengenoemde zink-complexerende werkwijze volgens de uitvin^- o 7907892 - 27 - ding.Derhalve is de acylgroeD die oorspronkelijk aanwezif is in het partieel beschermde N-geacyleerde amincglycosidische antibioticum derivaat dat gébruikt wordt in de tweede variant volgens de uit-vinding dezelfde als de acylgroep (R CO-, R 0C0- of R SO^- groep in 5 de formules 4 a-e)van het acyleringsreagens dat gebruikt wordt in de eerste variant volgens de uitvinding en kan in Het algemeen een alka-noylgroep, een aroylgroeo, een alkoxycarbonylgroep, een aralkoxycar-bonylgroep, een aryloxycarbonylgroep,-een alkylsulfonylgroep, een ar-alkylsulfonylgroep of een arylsulfonylgroep zijn, die bekend staan 10 als de gebruikelijke beschermingsgroepen-.Bovendien kan het partieel beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat, dat als uitgangsmateriaal wordt gebruikt, ook bereid zijn volgens de methode van Nagabhushan c.s.(zie Amerikaans octrooischrift 4.136.254) Bij het uitvoeren van de werkwijze volgens de tweede variant 15 van de uitvinding wordt het gedeeltelijk beschermde N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum derivaat met de onbeschermde 1-amino-- en 3”-amina-(of 3n-alkylamino-) groepen, gebruikt als het uitgangsmateriaal, en wordt opgelGst of gesuspendeerd in een geschikt inert organisch oplosmiddel.Aan de verkregen oolos-ing of susoensie wordt 20 een alkaancarbonzure ester met formule 8 of N-formylimidazol toegevoegd als acyleringsmiddel in een hoeveelheid die tenminste equimo-lair is met het gebruikte uitgangsmateriaal.Het inerte organische oplosmiddel is bij voorkeur een oplosmiddel met een hoog oplossend vermogen voor het uitgangsmateriaal, b.v. dimethylsulfoxyde, dimethyl·*· 25 formamide, cf hexamethylfosforzuurtriamide, maar men kan ook tetra-hydrcfuran, dioxan, acetonitrile, nitromathaan, sulfolan, dimethyl-aceetamide, chloroform, dichloormethaan, methanol, ethanol, n-bute-nol of tert.butanol gebruiken, alsmede waterige oplossingen daarvan. Benzeen, tolueen en ethylether kunnen worden gebruikt als oplosmid-30 del medium voor de reactie, ofschoon deze niet erg geschikt zijn omdat ze leiden tot een geringere opbrengst van het gewenste product.

In het acyleringsmiddel met formule 8 is Ra bij voorkeur een dihalo-geenalkyl of trihalcgeenalkylgroep, in het bijzonder dichloormethyl, trifluorraethyl of trichloorraethyl, en R° is b'ij voorkeur een alkoxy-35 groep, zoals methoxy of ethoxy.Wanneer R een aryloxygroep is, kan dat fenoxy zijn.Specifieke voorbeelden van het acyleringsmiddel met formule 8 zijn methylformiaat, ethylformiaat, butylformiaat, benzyl-formiaat, fenylformiaat, methyl dichlooracetaat, methyl trichloorace-taat, fenyl trichlooracetaat, methyl trifluoracetaat, ethyl trifluor- 790 78 92 - 28 - acetaat en fenyl trifluoracetaat.Bij gebruik van deze klasse van het acyleringsmiddel kan de 3"-aminogroep van het uitgangsmateriaal preferentieel worden geformyleerd, gedichlooracetyleerd, getrichloorace-tyleerd of getrifluoracetyleerd.Trifluorazijnzure ester, in het bij-5 zonder ethyl trifluoracetaat, verdient· .het meest de voorkeur.Deze klasse van de acylgroep is gunstig omdat hij heel gemakkelijk verwijderd kan worden in de opvolgende N-verwi jdering van beschermende ... groepen trap met een gebruikelijke methode voor ‘het verwijderen van beschermende groepen.Wanneer de· alkaancarbonzure alkylester met for-. 10 mule 8 niet wordt gebruikt als het acyleringsmiddel, maar_in plaats daarvan een overeenkomstig alkaancarbonzuuranhydride of een actieve ester daarvan, zoals de N-hydroxysuccinimide ester, gebruikt wordt voor de acylering (niet overeenkomstig de tweede variant volgens de uitvinding], dan kan de selectieve acylering van de 3"-aminogroep « 15 niet worden verkregen, maar treedt er nevenvorming op van 1-N-geacy-leerd product en/of vorming van gemengcfe acyleringsproducten, die in hoofdzaak het 1-N-geacyleerde product bevatten.Er dient de aandacht op te worden gevestigd’, dat de beoogde selectieve acylering van de 3"-aminogroep niet tot stand kan worden gebracht bij gebruik van een 20 zuuranhydride of een actieve ester van het zelfde alkaancarbonzuur als het acyleringsmiddel.

De acyleringsmiddelen met formule 8 die gebruikt kunnen worden bij de tweede variant volgens de uitvinding bezitten verschillende reactiviteit en hun reactiviteit bestrijkt een breed gebied van 25 "sterk" tot "zwak".Wanneer een acyleringsmiddel met sterke reactiviteit wordt gebruikt, kan de acyleringsreactie worden uitgsvoerd in een korte tijdsduur onder koelen.wanneer echter een acyleringsmiddel met een zwakke reactiviteit wordt gebruikt, kan de acyleringsreactie ofwel ander verwarmen of over een lange reactieduur -worden uitgeveerd. 30 In het algemeen ligt de réactietemperatuur echter in het traject van -30°C tot +120°C en de reactieduur ligt geschikt in een traject van 30 min tot 24 uur of zelfs 48 uur,

Het gewenste selectief 3"-N-geacyleerde product, dat aldus is verkregen, kan op als zodanig bekende wijze uit het reactiemengsel 35 worden teruggewonnen, b.v. door verdampen van het oplosmiddel of door neerslaan door toevoeging van water, zo nodig gevolgd door verdere zuivering van het product.

Het gewenste selectief 3"-N-geacyleerde product wordt met de werkwijze volgens de tweede variant van de uitvinding, waarvan het 7907892 -29- reactiemechanisme nog niet geheel duidelijk is,Een magelijke verklaring is, dat het acyleringsmiddel met formule 8 eerst een hydroxy-groep van het uitgangsmateriaal acyleert onder vorming van een ester als tussenpraduct, en deze O-veresterende aoylgraep wordt dan ver-5 plaatst cf gemigreerd naar een aminogroep (overeenkomende met de 3"-amino- of 3M-alkylaminogroep volgens het onderhavige proces], wanneer deze aminogroep de buurgroep is van de tussentijds gevormde veresterde hydroxygroep, waardoor de acylering van deze aminogroep tot stand komt .Wanneer we deze veronderstelling aanhouden, is het mo-10 gelijk om de reden te verklaren, waarom de 1-aminogroep, die geen hydroxygroep als buurgroep heeft, niet kan worden geacyleerd met het werkwijze volgens de tweede variant van de uitvinding.Bovendien is er het feit dat de tussenprcduct ester niet kan worden verkregen bij uitvoering van de trifluoracetylering of formylering wordt uitge-15 voerd volgens de werkwijze volgens de tweede variant van de uitvinding.De reden, waarom het esterproduct niet kan warden teruggewonnen na trifluoracetylering of formylering is waarschijnlijk, dat de 0-tri-fluoracetylgroep of 0-formylgroep onstabiel is en dat een hoeveelheid van de onstabiele 0-acylgroep, die geen verplaatsing naar de amino-20 groep heeft ondergaan(n.l. de bekende 0 ->’N acylmigratie] wordt uit de geacyleerde hydroxygroep verwijderd gedurende het‘terugwinnen en het zuiveren van het 3"-N-acyleringsproduct waardoor de vrije hydro-xygroep wordt hersteld.De uitvinding is echter niet beperkt tot dë bovenstaande verklaring van het reactiemechanisme van de betreffende 25 werkwijze.Het blijkt echter, dat onder de verbindingen die beschikbaar zijn als acyleringsmiddel met formule 8, sommigen geschikter zijn voor de doeleinden van de tweede variant van de uitvinding, wanneer ze een acylgroep bevatten, diegemakkelijk leidt tot een onstabieler esterproduct, wanneer deze acylgroep wordt omgezet in 30 een 0-acylgroep door reactie met een hydroxygroep, waardoor het ester product wordt verkregen.Intussen is het heel interessant op te merken, dat wanneer de werkwijze volgens de tweede variant van de uitvinding wordt uitgevoerd met in plaats tfan het N-formylimidazol een N-alkanoylimidazol, zoals N-acetylimidazol, N-propionylimidazol 35 of N-butyroylimiriazol, de 3"-amino- of S'^alkylaminogroep van het partieel beschermde N-geacyleerde amincglycosidische antibioticum derivaat niet geacyleerd wordt, maar een hydroxygroep die een buurgroep is van deze 3"-amino- of 3M-alkylaminögroep kan worden veres-terd daar de alkanoylgroep van het gebruikte N-alkanoylimidazol, 7907892 - 30 - vvaardoar een O-veresteringsproduct als tussenproduct wordt verkregen. '.Vanneer dit O-veresteringsproduct of het gehele reactiemengsel dat dit O-veresteringsproduct bevat, vervolgens behandeld wordt met een alkalisch reagens, zoals ammoniumhydroxyde, bij kamertemperatuur, 5 wordt de O-veresterende alkanoylgroep gedwongen zich te verplaatsen of te migreren naar de naburige 3"-amino- of S^-alkylaminogroep, hetgeen leidt tot een selectieve acylering sn derhalve bescherming van de 3"-aminc- of S'^alkylaminogroep.Zo blijkt het reactiemengsel van de reactie van het partieel beschermde N-geacyleerde aminoglycosidi-10 sche antibioticum derivaat met een N-alkanoylimidazol in het begin geen gewenst 3"-N~geacyleerd product te bevatten, maar uit dar reactiemengsel kan het gewenste 3"-N-geacyleerde product alleen maar worden verkregen, nadat het reactiemengsel alkalisch is gemaakt door behandeling met een alkalisch reagens, zoals waterige ammoniak( zie 15 voorbeeld LXXl).

Als een nuttige toepassing van de werkwijzen volgens de uitvinding is het mogslijk een werkwijze met hoge opbrengst te verschaffen voor de bereiding van het 1-N-geacyleerde antibioticum, dat een bekend semi-synthetisch antibacterieel middel is.De uitvinding heeft derhal-20 ve verder betrekking op een werkwijze voor de bereiding van een 1-N-(cC-hydroxy-u>-aminoalkanoyl) aminoglycosidisch antibioticum uitgaande van het moeder aminoglycosidische antibioticum, waarbij de werkwijze bestaat uit een combinatie van de trap van het bereiden met de voornoemde zink-complexerende werkwijze een zodanig partieel 25 beschermd N-geacyleerd aminoglycosidisch antibioticum derivaat, waarin de 1-amino- en 3"-amino- of 3"-alkylamino-groepen onbeschermd zijn en alle andere aminögroepen beschermd zijn;de trap voor het bereiden van het 1-N-onbeschermde en alle andere N-volledig beschermde derivaat met het selectieve 3"-N-acyleringsproces volgens de tweede vari-‘ 30 ant van de uitvindingj de trap van het acyleren van de 1-aminogroep van het 1-N-onbeschermde en alle andere N-volledig beschermde deri*-' · ' vaat, verkregen uit de voorafgaande 3"-N-acyleringstrao, met een ^-rhydroxy-Cü-aminoalkaancerbonzuur, in het bijzonder 3-aminc-2-hy-draxypropionzuur(isoserine) of 4-emino-2-hydroxyboterzuur; en ten-35 slotte de trap van het verwijderen van de beschermende groep uit het aldus verkregen 1-N-acyleringsDroduct.

Meer in het bijzonder verschaft de uitvinding volgens een derde variant een verbeterde werkwijze voor de bereiding van een 1-N-(-«c-hydroxy-üjHaminoalkanoyl)-derivaat van een aminoglycosidisch antibic- 7907892 - 31 - cum, dat een 6-0-(3"-amino- of 3,,-alkylamino~3"-desoxyglycosyl)-2-desoxystreptamine groep met desgewenst een 4-0-(aminoglycosyl]groep, bevat, waarbij de werkwijze bestaat uit de volgende opeenvolgende trappen: 5 a) men laat zink kationen reageren met het aminoglycosidische antibioticum in een inert organisch oplosmiddel waardoor het complex van zink kationen met het aminoglycosidische antibioticum wordt gevormd} b) men laat een acyleringsmiddel, dat de in te voeren acylgroep 10 bevat, reageren met het aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex, in situ gevormd in voorgaande trap a) in het inerte organische oplosmiddel, waardoor een complex-.wordt gevormd van zink kationen met het selectief N-geacyleerde derivaat van het aminoglycosidische antibioticum, waarin de oorspronkelijk niet gecomplexeerde ami-15 nogroepen ook geacyleerd zijn, c} men het in trap b) verkregen selectief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex laat reageren met een reagens, dat zink kationen uit het N-geacyleerde zink complex verwijdert, waardoor een partieel en selectief beschermd N-geacyleerd ami-20 noglycosidisch antibioticum derivaat wordt verkregen, dat vrij is van zink kationen en waarin de 1-amino- en 3M-amino- of 3"-alkylamino-f v groepen onbeschermd zijn, maar alle andere aminogrcepen in het aminoglycoside molecuul beschermd zijn door de acylgroep, d] men het partieel en selectief beschermde N-geacyleerde deri-25 vaat, dat in trap c$ is verkregen, laat reageren met een alkaancar- a bonzure ester met*formule 8, waarin R waterstof of een dihalogeen-alkyl of trihalogeenalkylgroep met 1-6 koolstofatcmen is en R*3 een alkoxygroep met 1-6 koolstofatomen, een aralkoxygroep met 1-6 koolstofatcmen, in het bijzonder een benzyloxygroep, of een aryloxygroep 30 in het bijzonder een fenoxygroep, of N-formylimidazol als acyleringsmiddel in een inert organisch oplosmiddel om de 3M-amino- af 3"-alk-ylaminogroep selectief te acyleren mat de acylgroep R CO- van het alkyleringsmiddel waardoor het 1-N-onbeschermde en alle andere N-volledig geacyleerd beschermde derivaat van het amincglycosidische 35 antibioticum wordt verkregen, waarin alle aminogroeoen behoudens de 1-amincgroeo beschermd zijn door een acylgroep, e} men het 1-N-onbeschermde en overigens volledig N-beschermde derivaat als verkregen in trap dl laat reageren met een «t-hydroxy-w -aminoalkaancarbonzuur met formule 9, waarin m gelijk is aan 1 of 2, 7907892 - 32 - of een gelijkwaardig reactief derivaat daarvan, waarvan de amino-graep al dan niet beschermd is, om de 1-amincgroep van het 1-N~on-beschermde derivaat te acyleren, f) en men daarna de resterende aminobeschermende groepen ver-5 wijdert uit het in trap e) verkregen 1-N-acyleringsproduct met een gebruikelijke methode .daarvoor.

Hieronder wordt nader beschreven hoe deze laatste werkwijze kan worden uitgevoerd,

De aminoglycosidische antibiotica, die als uitgangsmateriaal in 10 de eerste trap a) van deze werkwijze kunnen worden gebruikt, zijn dezelfde als beschreven voor de werkwijze volgens de eerste variant van de uitvinding, en de reactie van de complexvorm!ng van de zink kationen met het aminoglycosidische antibioticum wordt op dezelfde wijze tot stand gebracht als hierboven is beschreven,De acylering 1S van het aldus verkregen aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex uit trap a} kan in de tweede trap b) van de onderhavige werkwijze op dezelfde manier tot stand worden gebracht als eerder is beschreven voor de werkwijze volgens de eerste variant van de uitvinding,De verwijdering van zink kationen uit het aldus verkregen selec-20 tief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum-zink kation complex kan in de derde trap c} van de onderhavige werkwijze geschieden op verschillende manieren, zoals eerder beschreven is, waardoor een partieel en selectief beschermd N-geacyleerd aminoglycosidisch antibioticum derivaat wordt verkregen, dat vrij is van zink kationen en 25 waarin de 1-amino- en 3"-amino- of 3"-alkylamino-grcepen onbeschermd zijn, maar alle andere amincgrcepen in het aminoglycoside molecuul geblokkeerd zijn door de acylgroep van het in trap b) gebruikte acyl-eringsmiddel in de onderhavige werkwijze,Dit partieel en selectief beschermde N-geacyleerde derivaat van het aminoglycosidische antibio-\ 30 ticum laat men dan reageren met een alkaancarbonzure ester met formu le 8 of N-formylimidazol in trap d) van de onderhavige werlwijze op dezelfde manier als hierboven beschreven voer de werkwijze volgens de tweede variant van de uitvinding, waardoor de selectieve 3"-N-acyl-ering van het partieel N-beschermde aminoglycosidische antibioticum 35 derivaat wordt verkregen zonder acylering van de 1-aminogroep ervan.

In de vijfde trap e) van de onderhavige werkwijze laat men het in de voorgaande trap d) verkregen 1-N-onbeschermde en overigens N-volledig beschermde derivaat van het aminoglycosidische antibioticum reageren met een sd-hydroxy—w-aminoalkaancarbonzuur met formule 7907892 - 33 - 9, in het bijzonder 3-amino-2-hydroxypropionzuur (als DL-isoserine, D-isoserins of L-isoserine) of L-4-amino-2-hydroxyboterzuur om de 1-aminogroep van het arainoglycosidisohe antibioticum te acyleren met de 3-amino-2-hydroxypropionyl- of 4-amino-2-hydroxybutyrylgroep,Deze 5 1-N-acylering kan in het algemeen worden uitgevoerd op de wijze als beschreven in Brits octrooischrift 1.426.908 of Amerikaans octrooi-schrift 4.001.208, volgens iedere bekende methode voor de synthese van amidem door het beschermde aminoglycosidische antibioticum derivaat te laten reageren met een isoserine of L-4-amino-2-hydraxyboter-10 zuur, hetzij in de vrije zuurvorm of in de vorm van een reactief equivalent, zoals een actieve ester, b.v. de dicyclohexylcarbodiimide ester, gemengd zuuranhydride, zuurazide in een inert organisch oplosmiddel, zoals dioxan, dimethoxyethaan, dimethylformamide, tetrahydro-furan of waterige mengsels van deze oplosmiddelen.Isoserine an L.-4-15 amino-2-hydroxyboterzuur kunnen zodanig zijn, dat de eminc-groep geblokkeerd is door een aminobeschermende groep.Geschikts araino-be-schermende groepen voor dit doel kunnen dezelfde zijn of een andere als degene die gebruikt is voor het 1-N-onbeschermde maar verder volledig N-beschermde aminoglycosidische antibioticum derivaat om 20 dat te 1-N-acyleren.Als aminobeschermende groep wordt de voorkeur gegeven aan de tert.butoxycarbonylgroep, omdat deze gemakkelijk verwijderd kan worden door behandeling met een verdund zuur zoals waterig trifluorazijnzuur, waterig azijnzuur en verdund zoutzuur,De benzyl-oxycarbonylgroep die verwijderd wordt met gebruikelijke katalytische 25 hydrogenolyse over palladium of platinaoxyde katalysator, alsmede de ftaloylgroep, die gemakkelijk verwijderd wordt door hydrolyse met hydrazine zijn voor dit doel heel geschikt als de aminobeschermende groep.

De acyleringsreactie in de 1-N-acyleringstrap e) van deze werk-30 wijze wordt bij voorkeur uitgevoerd in een waterig organisch oplosmiddel met gebruikmaking van een actieve ester van het bi-hydroxy-ïö-arainoalkaancarbonzuur met formule 9.De geschikte actieve ester kan de N-hydroxysuccinimide ester zijn van isoserine of 1-4-benzoyloxy-carbonylamino-2-hydroxyboterzuur, en deze actieve ester kan werden 35 gebruikt in een hoeveelheid van 1-2 mol , bij voorkeur 1-1,5 mol oer mol van het aminoglycoside, dat 1-N-geacyleerd moet worden.Het water-mengbare organische oplosmiddel ten gebruike als het reactiemedium is bij voorkeur dioxan, dimethoxyethaan, dimethylformamide of tetrahy-drofuran.

7907892 - 34 -

Na de bovenbeschreven trap e] wordt de verwijdering van de N-beschermende groep in trap f) van de onderhavige werkwijze uitgevoerd om alle resterende aminobeschermende groepen te verwijderen uit het in de voorgaande trap e) verkregen 1-N-acyleringsproduct.De 5 verwijdering van de resterende aminobeschermende groepen kan geschieden met een gebruikelijke daartoe geëigende techniek.Een dergelijke aminobeschermende groep die van een alkoxycarbonyltype is, kan worden verwijderd door hydrolyse met een waterige oplossing van triflu-orazijnzuur of azijnzuur of met een verdunde zuuroplossing, zoals ver-10 dund zoutzuur.Een dergelijke resterende aminobeschermende groep, die van een aralkoxycarbonyltype is, b.v. benzyloxycarbonyl, wordt gemakkelijk verwijderd door gebruikelijke katalytische hydrogenolyse.Wanneer alle resterende aminobeschermende groepen verwijderd zijn uit het 1-N-acyleringsproduct van trap e) van de onderhavige werkwijze, 15 wordt het gewenste 1-N-(2-hydroxy-3-aminopropionyl}- öf 1-N-(2-hydro-xy-4-aminobutyryl)-aminoglycosidische antibioticum in hoge opbrengst verkregen.

Voorbeelden van van de 1-N-(«C-hydroxy-co-aminaalkanoyl)-amino-glycosidische antibiotica, die gevormd werden met de werkwijze vol-20 gens de vierde variant van de uitvinding zijn: (1) 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycine A, (2) 1-N-(L-4-amino-2-hydraxybutyryl)-3,-desoxykanamycine A, (3) 1-N-(L-4-aminG-2-hydroxybutyryl)-3,^'-didesoxykanamycine A, ' (4) 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-tcbramycine, 25 (δ] 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl}-dibekacine, (ö) 1-N-(3-amino-2-hydroxypropionyl)-dibekacine.

Een andere toepassing van de werkwijzen volgens de eerste en tweede variant van de uitvinding is de bereiding van 1-N-alkyl aminoglycosidische antibiotica uit de volledig N-geacyleerde amino-30 glycosidische derivaten, die een onbeschermde 1-aminogroep bevatten, en een voorbeeld van deze toepassing bestaat uit de bereiding van netilmicine of de 1-N-alkyl-derivaten daarvan, uit sisomicine door alkylering met een korte keten alifatisch aldehyde en cyaanboorhydri-de.

35 De onderstaande voorbeelden dienen ter nadere toelichting van de uitvinding.

Voorbeeld I.

Bereiding van SjS'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A.

(i) 2,0 g(4,13 mmol) kanamycine A (vrije base) werden gesuspen- 7907892 - 35 - deerd in een mengsel van dimethylsulfoxyde (50 ml) en tetrahydrofu-ran(20 ml) en aan de suspensie werden 4 g(18,1 mmol) zink(ll)acetaat dihydraat toegevoegd, waarna bij kamertemperatuur werd geroerd tot het reactiemengsel een homogene oplossing vormde.Het vergde 4-5 uur 5 om een zink complex van kanamycine A te vormen en te laten oplossen. De verkregen oplossing werd daarna gekoeld tot 0°C, en daaraan werd langzaam in het verloop van 1 uur een gekoelde oplossing (op 0°C) van 2,37 g (9,5 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide opgelost in een mengsel (40 ml) van tetrahydrofuran-dimethylsulfoxyde (1:1 vol). 10 De reaotieoplossing liet men 4 uur staan bij kamertemperatuur, in welke periode het zink complex van kanamycine A gebenzyloxycarbony-leerd was (de acylering volgens de eerste variant van de uitvinding).

Een uit de reaotieoplossing getrokken manster werd onderworpen aan siliciumdioxyde dunne laag chroraatografie met als ontwikkelings-15 oplosmiddel de onderste vloeibare fase van een mengsel van chloroform methanol en 2S$-ige waterige ammoniak (1:1:1 vol), dat een hoofdvlek van het gewenste product gaf bij 0,23 en twee of drie kleinere vlekken die werden toegeschreven aan nevenproducten op hogere punten.

(ii) Het bovengenoemde reactiemengsel werd uitgegoten in 500 ml 20 ethylether en de afgescheiden olie werd verscheidene keren gewassen met aanvullende volumina ethylether waardoor 8,8 g dik stroperig materiaal werden verkregen.

(iii) Verwijdering van zink kationen uit het stroperige materiaal (dat in hoofdzaak bestaat uit het zink complex) geschiedde met één 25 van de twee volgende methoden: (a) Een methode waarin gebruik wordt gemaakt van een zwak zuur katio-nenuitwisselingshars, die carboxygroepen (-C00H) als functionele groepen bevat( verkrijgbaar als Amberlite GG 50 (H+vorm)(handelsnaam)).

60 ml Amberlite CG 50 (H+ vorm) hars werden vooraf grondig verza-30 digd met een mengsel van water-dioxan (2 : 1) en daarna in een kolom gepakt.Een oplossing van 1 g van de stroperige stof, opgelost in 20 ml water- dioxan (1:1) werd door de kolom gevoerd, die daarna werd ontwikkeld met water:dioxan(2 : 1j dat 1$ azijnzuur bevat.Het eluaat werd verzameld in fracties.Het gewenste SjS'-di-N-benzyloxycarbonyl— 35 kanamycine A, dat positief was op ninhydrinereactie, werd eerst uit de kolom geëlueerd, en daarna werd zinkacetaat, dat gevoelig wac voor kleuren met difenylcarbazide, uitgeëlueerd.De fracties, die het gewenste product bevatten werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd.Het residu werd gewassen met ethylether waardoor 340 7907892 - 36 - mg(81 3,6'-di-N-benzyloxycarbanylkanamycine A werden verkregen als een kleurloze .vaste stof,+76 ( c 1, wter-dimethylformami- de, 1:2),

Elementair analyse: 5 Ber. voor C^H^N^g. 2 CHgCO^-I-HgO: C 51,23 j H 6,56 ; N 6,29 Gev. C 51,02 ; H 6,71 ; N 6,22 $ (b) Methode met gebruikmaking van een zwakke kationenuitwisse-lingshars die carboxylaat groepen als functionele groepen bevat (ver-10 krijgbaar als Amberlite CG 50 (NH^* vorm)(handelsnaam)), 1 g van het in bovenstaand Voorbeeld l(ii) verkregen stroperige materiaal werd opgelost in 20 ml water-dioxan (1 : 1) en de oplossing werd door een kolom van 60 ml Amberlite GG 5θ(ΝΗ^+ vorm) hars gevoerd en onderworpen aan lineaire gradient elutie met ivater-dioxan 15 (1 : 1) waarin 0-0,1 n ammoniak-Er werden geen zinkkationen geëlu- eerd, maar het gewenste product, 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamyci-ne A werd geelueerd.Oe fracties van het eluaat die het gewenste benz-yloxycarbonylerings product bevatten werden tot droog ingedampt waardoor 328 mg (89 $) van het gewenste product werden verkregen als een 22 j-j 20 kleurloze vaste stof, /öU/q = +86 (c 1, water-dimethylformamids,1:2) Elementair analyse:

Ber. voor C 52,87 ; H 6,30 ; N 7,15 $

Gev. G 52,50 ; H 6,59 ; N 7,00 25 (c) Methode met gebruikmaking van een kationen uitwisselingshars met sterk zure functionele groepen -SO^H (verkrijgbaar als Oowex 50W X 2 hars, handelsnaam), 30 ml Dowex 5QW X 2 hars (H+ vorm) die ondergedompeld waren in water-dioxan (2 : 1) werden in een kolom gepakt, waardoor daarna een 30 oplossing werd gevoerd van 1 g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld l(ii) in 20 ml water-dioxan (2 : l).De kolom werd gewassen met water-dioxan(2 : 1) tot de uitstromende vloeistof neutraal van aard was, en daarna werd lineaire gradient elutie uit-gsvoerd met water-dioxan (2 : 1), dat 0-1n ammoniak bevatte.De elu-35 aatfracties die het gewenste Sjö'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A bevatten werden tot droog geconcentreerd onder verlaagde druk waardoor 311 mg (84 iï) witte vaste stof werden verkregen, identiek met hetgeen werd verkregen in Voorbeeld ï(iii)(b).

(d) Andere methode met gebruikmaking van Dowex SOW X 2.

7907892 - 37 -

Een oplossing van 1 g van het stroperige materiaal als verkre-- gen in Voorbeeld* l(ii) in 20 ml water-methanol (3 : 1) werd op een kolom van 30 ml Dowex 5QW X 2 (H+ vorm], die van tevoren bevochtigd was met water-methanol (3:1), gebracht.De kolom werd goed gewassen 5 met water-methanol (3 : 1), waarna gradient elutie werd uitgevoerd met water-methanol (3 : 1) dat 0-Sn zoutzuur bevat,De actieve fracties die het gewenste 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A bevatten, werden verzameld en vermengd met een sterk basische anionen-uitwisselingshars, Dowex 1 X 2(GH vorm](handelsnaam], in een hoeveel-10 heid die voldoende is om het mengsel iets zuur te maken.

Het mengsel werd gefiltreerd en het filtraat werd tot droog geconcentreerd waardoor 285 mg (72 $] van het gewenste product in de 25 o vorm van het dihydrochloride. /A/^ = +79 (c 1 r water-dimethyrform-amide, 1 ï 2). . ·. · 15 (e) Methode met’gebruikmaking van eèn anionen uitwisselingshars die sterk basische functionele groepen' bevat(verkrijgbaar als Dowex 1 X 2 hars(handelsnaam) J.

Een oplossing van 1 g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld l(ii) in v/ater-dioxan (1 : 1) werd op een kolcm van 30 20 ml Dowex 1X2 hars (OH vorm) gebracht, die vooraf geïmpregneerd"was met water-dioxan (1 : 1) en daarna werd de kolom ontwikkeld met wa-ter-dioxan(l : 1) met een betrekkelijk hoge snelheid.De eluaat fracties die het gewenste product bevatten, werden verzameld en tot droog geconcentreerd waardoor 305 mg (84 #) werden verkregen van een kleur-25 loze vaste stof, die identiek was met die van Voorbeeld l(iii)(b).

(f)Methode met gebruikmaking van een anionen uitwisselingshars die zwak basische functionele groepen bevat (verkrijgbaar als Dowex '/'GR hars, handelsnaam).

1 g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld I 30 (ii) werd opgelost in 20 ml water-dioxan (2 : 1) en de oplossing werd door een kolom van 50 ml Dowex WGR hars (base vorm) gevoerd, die vooraf verzadigd was met water-dioxan (2 : 1), gevolgd door elutie met water-dioxan (2 : l).Het gewenste 3,6l-di-N-benzyloxycarbonylka-namycine A werd in sommige fracties geêlueerd samen met een spoor 35 zink kationen die .'werden meegesleept.Deze fracties werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd waardotr 450 mg kleurloze vaste stof werden verkregen.De vaste stof kon direct ’worden gebruikt als uitgangsmateriaal voor de bereiding van 1-N-((S)-4-amino-2-hydro-xybutyryl)-kanamycine A volgens de 1-N-acylerings methode als hieron- 7907892 - 36 - dsr in Voorbeeld XXXI beschreven, waarin het spoor zink kationen . dat in het vaste uitgangsmateriaal achterblijft, geen nadelige invloed heeft op de acyleringsrsactie waarom.het in Voorbeeld XXXI gaat.

5 (g) Methode met gebruikmaking van een chelaat uitwisselingshars met zwak zure functionele groepen(verkrijgbaar als Dowex A 1 hars, handelsnaam).

Een oplossing van 1g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld l(ii) in water-dioxan(l : 1) werd op een kolom van 50 10 ml Dowex A 1 hars gebracht, die vooraf verzadigd was met water-diox-an(l : 1), waarin 1 % ammoniak, gevolgd door gradient elutie met water-dioxan (1 : 1) mengsels waarin 0-1n ammoniak.De eluaat fracties die het gewenste SjS’-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A bevatten, en die pas in een latere fase als uitstromende vloeistof uit de 15 kolom werden geelueerd, werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd waardoor 272 mg (74 °4) van het gewenste product werden verkregen als een witte vaste stof.

(h) Methode met gebruikmaking van chitosan (een wateronoDlos-baar polymeer, dat functionele groepen bevat die in staat zijn met 20 metaal te combineren).

100 ml chitosan werden grondig geïmpregneerd met water-methanol (3 : 1) en in een kolom gepakt, waardoor dan een oplossing wordt gevoerd van 1 g van het stroperige materiaal, verkregen in Voorbeeld . l(ii) in water-methanol(3 : 1).

25 De kolom werd ontwikkeld met water-methanol (3 : 1) en daarbij

werd het gewenste 3,6’-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A eerste geelueerd en het zinkacetaat werd veel later geelueerd.De eluaat fracties, die het eerstgenoemde product bevatten, werden gecombineerd en tot droog geconcentreerd, waardoor een residu achterbleef, dat werd 30 opgelost in water-dioxan (1 : 1) en de oplossing werd op een kolom Amberlite CG 50 hars (NH^+ vorm) gebracht, die voorbehandeld was met water-dioxan ('1 : 1) en daarna werd onderworpen aan gradient ' elutie met water-dioxan (1 : 1) waarin 0-0,1n ammoniak.De fracties die gevoelig waren voor voor ninhydrinereactis werden gecombineerd en 35 tot droog geconcentreerd waardoor 301 mg (62 ®-a) werden verkregen van een kleurloze vaste stof, die identiek was met wat in Voorbeeld I

(iii)(b) wordt verkregen.

(i) Een methode met gebruikmaking van sen hoog polymeer dat carboxygroepen als functionele groepen bevat(verkrijgbaar onder de ’ 7907892 - 39 - handelsnaam CM-Sephadex C-25, een ionen uitwisselend gel-filtratie middel dat bestaat uit een carboxymethy-lgesubstitueerd dextran gel).

Een oplossing van 1 g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld l(ii) in water-dioxan (1 : 1) werd door een kolom 5 van 40 ml CM-Sephadex C-25 (NH^+ vorm) gevoerd, die goed verzadigd was roet water-dioxan (1 : l).De kolom werd gewassen met 200 ral water-dioxan (l : 1) en daarna onderworpen aan gradient elutie met gebruikmaking van water^-dioxan (1 : 1), waarin 0-0,1n ammoniak.Er werden geen zink kationen gsëlueerd uit de kolom, maar alleen maar het ge-10 wenste 3,6 '-di-N-benzyloxycarbanylkanamycine A geëlueerd.Het eluaat werd geconcentreerd tot droog waardoor 303 mg (82 $) werden verkregen van een kleurloze vaste stof, die identiek is met die van Voorbeeld l(iii)(b).

( j) Een methode met gebruikmaking van zwavelwaterstof als zink 15 neerslaand middel.

1 g van het stroperige materiaal als verkregen in Voorbeeld I

(ii) werd opgelGst in 20 ml water-methanol (1 : 1), waaraan daarna waterige ammoniak werd toegevoegd, gevolgd door het inleiden van. een voldoende hoeveelheid zwavelwaterstof.Het reactiemengsel, dat het 20 gevormde zinksulfide neerslag bevat, werd afgefiltreerd op een glasfilter, dat gevuld was met Celite(handelsnaam) filterhulpmiddel, en het filtraat werd ander verlaagde druk geconcentreerd waardoor een stroperig materiaal achterbleef, dat goed werd gewassen met ethyl-ether, waardoor een vast residu achterbleef.Dit residu werd opgeno-25 men in een volume water-dioxan(1 : 1) en de oplossing werd gechrcma-tcgrafeerd op een kolom van 30 ml Amberlite IRA 900(öH vorm, sterk basische hars), met gebruikmaking van water-dioxan (1 : 1) als ont-wikkelingsoplasmiddel.Het eluaat werd verzameld in fracties, en de fracties die 3,6*-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A bevatten werden 30 met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd waardoor 235 mg (64 $) werden verkregen van een kleurloze vaste stof, die identiek was met die uit Voorbeeld l(iii)(b).

Voorbeeld U

Bereiding van 3,6f-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A.

35 500 mg(l,03 mmcl) kanamycine A(vrije base) werden gesuspendeerd in 15 ml dimethylsulfoxyde, waaraan dan 420 mg (3,09 mmol) zinkchloride en S40 rag (6,10 ranol) natriumacetaat trihydraat werden toege-r vcegd.Nadat het mengsel 10 uur bij kamertemoeratuur was geroerd werd het gevormde het kanamycine A-zink complex bevattende mengsel lang 7907892 - 40 - zaam vermengd met een in 1 uur toegevoegde oplossing van 675 mg (2,27 mmol) N-benzyloxycarbonyloxyftaalimide, opgalost in 10 ml dimethylsulfoxyde.Het verkregen mengsel liet men 4 uur bij kamertemperatuur staan.

5 Vervolgens werd het reactiemengsel behandeld op dezelfde wijze als is beschreven in Voorbeeld l(ii) en (iii)(i), waardoor SOS mg (74 %) 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A werden verkregen in de vorm van kleurloze vaste-stof.

Voorbeeld III

10 Bereiding van 3,6r-di-N-benzyloxycarbanylkanarnycine A.

600 mg(0,95 mmol·} kanamycine A tetrahydrochloride en 150 mg (3,8 mmol) natriumhydroxyde in 15 ml dimethylsulfoxyde werden een uur geroerd, waarna dan 1 g(4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd toegevoegd, waarna het roeren nog 5 uur werd voortgezet.Aan' het 15 mengsel, dat het gevormde kanamycine A-zink complex bevat, werd in 30 min een oplossing toegevoegd van 545 mg(2,2 mmol) N-benzyloxycar-bonyloxysuccinimide, opgelost in 5 ml dimethylsulfoxyds-tetrahydro-furan (1 : l).Na roeren van het gevormde mengsel bij kamertemperatuur gedurende de nacht werd ethylether daaraan toegevcefd om het N-gea-20 cyleerde zink complex als een neerslag af te zetten.Het neerslag werd 1 daarna behandeld volgens dezelfde methode als beschreven is in

Voorbeeld l(iii)(h), waardoor 581 mg (78 f#) werden verkregen van een kleurloze vaste stof van de in de aanhef genoemde verbinding.

Voorbeeld IV

25 Bereiding van 3,6'-di-N-benzylaxycarbGnylkanamycine A.

(i) 500 mg(l,03 mmol) kanamycine A(vrije base) werden opgelost in 20 ml van een mengsel van water-dimethylsulfoxyde (1 : 9),waaraan dan 1 g(4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd toegevoegd en daarna 590 mg(2,4 mmol) N-benzyloxycarbcnyloxysuccinimide.Nadat men het 30 mengsel een nacht lang bij kamertemperatuur had laten staan werd een grote hoeveelheid ethylether aan het mengsel toegevoegd, waardoor een waterige strooplaag werd afgescheiden, die verscheidene keren werd gewassen met ethylether, zodat een dikke strooolaag werd verkregen, (ii) Het aldus verkregen stroperige materiaal werd opgelost in water-35 methanol (3 : 1) en de oplossing werd door een kolcm van 200 ml chi-tosan geveerd.De kolom werd geëlueerd met water-methancl (3 ; l) en het elueaat werd verzameld in fracties.De fracties dis positief waren op ninhydrinereactis werden met elkaar gecombineerd en tot een klein volume geconcentreerd.Het concentraat werd op een, kolom van 7907892 - 41 -

Amberlite GS 50 hars (MH4+ vorm) gebracht en de kolom werd goed gewassen met een mengsel van water-dioxan [Ί : 1) en vervolgens onderworpen aan gradient .elutie met water-dioxan (1 : 1), waarin 0-0,1 n ammoniak.De eluaatfracties die het gewenste product bevatten werden 5 met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd, waardoor 494 mg (61 *p) kleurloze vaste stof 'werden verkregen, die identiek was met de stof als verkregen in Voorbeeld l(iii)(b).

V ajo r b e e 1 d V

Bereiding van 3,6*-di-N-benzyloxycarbanylkanamycine A.

10 500 mg 1,03 mmol) kanamycine A(vrije base) werden opgelast in 20 ml van een mengsel van water-tetrahydrofuran (1 : 3), waaraan dan 1 g(4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd toegeveegd, gevolgd door toevoegen van 590 mg (2,4 mmol) N-benzyloxycarbonylóxysuccinimide.Het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan en de al-15 dus verkregen reactieoplossing werd onder verlaagde druk geconcentreerd.Het residu werd door een kolom van 200 ml chitosan gevoerd en de uit de kolom stromende vloeistof werd vervolgens net zo behandeld als in Voorbeeld IV(ii), waardoor 414 mg(51 $) werden verkregen van een kleurloze vaste stof van de in de aanhef vermelde verbinding.

20 Voorbeeld Π

Bereiding van 3,6*-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A.

(i) 500 mg (1,03 mmol) kanamycine A(vrije base) werden opgelost in 15 ml van een mengsel van water-methanol (1 ï ?), waaraan dan 1,5 g (6,8 mmol) zinkacetaat dihydraat werden toegevoegd, gevolgd door tce-25 voeging van 590 mg (2,4 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide in 7 ml tetrahydrofuran.Het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan en de zo verkregen reactieoplossing werd onder verlaagde druk geconcentreerd.Het residu werd door een kolom van 200 ml chitosan gevoerd en de uit de kolom stromende vloeistof werd vervol-30 gens behandeld op dezelfde wijze als in Voorbeeld IV(ii) waardoor 442 mg (55 c;j) van een kleurloze vaste stof van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen.

Voorbeeld VU

Bereiding van 3,6f-di-N—benzyloxycarbonylkanamycine A.

35 500 mg (1,03 mmol) kanamycine A(vrije base) 'werden gesuspendeerd in 20 ml dimethylsulfoxyde en 272 mg (1,24 mmol) zinkacetaat dihydraat werden aan de suspensie tcegevoegd.Het mengsel werd 10 uur bi.i kamertemperatuur geroerd waarbij een nagenoeg doorzichtige onlossing werd gevormd, waaraan dan in kleine hoeveelheden in een tijdsbestek 7907892 - 42 - van 2 uur 540 mg (2,17 mmol)N-benzyloxycarbonylaxysuccinimide worden toegeveegd.Nadat men het verkregen· mengsel een nacht lang bij kamer-. temepratuur heeft laten staan, wordt een groot volume ethylether toegevoegd en wordt het olieachtige materiaal', dat zich afscheidt, ver-5 scheidene keren gewassen met ethylether waardoor een dik stroperig materiaal wordt verkregen.

Siliciumdioxyde gel dunne laag chromatografie van een monster, dat werd genomen van het stroperige materiaal met behulp van chloro-farm-methanol-29)a-ige waterige ammoniak (1 : 1 : 1 vol, onderste 10 fase] als ontwikkelings oplosmiddel gaf de volgende vlekken: - kleine vlek bij R^ 0,4 van 1,3,6’,3"-tetra-N-benzyloxycarbo-nylkanamysine A(dat een kleur ontwikkelde bij besproeien met zwavelzuur en daarna verwarmen); - zwakke vlek bij R^ 0,2B; 15 - hoofd vlek bij 0,23 van het gewenste product, SjS'-di-N- benzyloxycarbonylkanamycine A; - kleine vlek bij R^. 0,12 van 6’-N—benzyloxycarbanylkanamycine A; en - zeer zwakke vlek bij R^. 0 van niet gereageerd kanamycine A.

20 Er werd geen vlek waargenomen die overeenkomt met tri-N-benzyl- oxycarbonylkanamycine A, en die zou kunnen verschijnen bij R.p 0,28 tot 0,4.

Het bovenvermelde dik stroperige materiaal werd opgelcst in water-dioxan (1 : 1) en de oplossing werd door een kolom van 100 ml 25 CM-Sephadex C-25 hars (NH^* vorm),die vooraf bevochtigd is met water-dioxan (1 : 1).Vervolgens wordt de kolom onderworpen aan het elutie proces op dezelfde wijze als is beschreven in Voorbeeld 1 (iii)(i), waardoor zink kationen werden verwijderd en het gewenste product werd afgescheiden van de andere producten waardoor 412 mg 30 (51 van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als kleurloze vaste stof.

Ter vergelijking werd de laatstgenoemde methods herhaald, maar het zinkacetaat dihydraat werd vervangen door 308 mg (1,24 mmol) nikkel(II]acetaat tetrahydraat, met als resultaat dat het gewenste 35 Sjö’-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A slechts in een slechte opbrengst van 59 mg (7,3 werd verkregen als een kleurloze vasts stof.

Voorbeeld VUT

Bereiding van 3,S,-di-N-(p-methoxybenzyloxycarbonyl)kanamycine A 500 mg (1,03 mmol) kanamycine A(vrije base) werden gesuspen- 7907892 - 43 - deerd in 12 ml dimethylsulfoxyde an 1 g (4,55 mmol] zinkacetaat di-hydraat werd -aan de suspensie taegevcegd.Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was ontstaan, waaraan dan in ongeveer 3G min een oplossing werd tcegevoegd van 789 mg (2,6 5 mmolj p-methoxycarbobenzoxy p-nitrofenyl ester (p-CH^OCgH^CH^OCOGCgH^ p-N02) opgelost in 10 ml dimethylsulfoxyde.Het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan en behandelde het verder op dezelfde manier als in Voorbeeld l(ii} en (iii}(b}, waardoor 722 mg (83 $} werden verkregen van de in de aanhef vermelde verbind- ' 25 o 1G ing als eenkLeurloze vaste stof./sC/q = +87 (c 1, water-dimethylform- amide, 1:2}.

Elementair analyse:

Ber. voor C 51,95 } U 6,33 j N 6,S4ji 15 Gev.: C 51,56 ; H 6,41 j N 6,53$

Voorbeeld IX

Bereiding van 6'-N-(tert.butoxycarbonyl}kanamycine A.

Met gebruikmaking van dezelfde methode als beschreven in Voorbeeld VIII, behoudens dat de p-methoxycarbobenzoxy p-nitrofenyl ester 20 werd vervangen door 220 mg (1,54 mmol) tert.butoxycarbonylazide, werd de in de aanhef vermelde verbinding verkregen in de vorm van een 25 o kleurloze vaste stof,Opbrengst 627 mg./cC/^ = +96 (c 1, water-dime-thylformamide, 1:2}.

Voorbeeld X

25 Bereiding van Sjfi'-di-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

500 mg (1,03 mmol} kanamycine A (vrijde base} werden gesuspendeerd in 12 ml dimethylsulfoxyde en 1 g (4,55 mmol} zinkacetaat dihy-draat werd aan de suspensie toegevoegd.Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waaraan 30 dan een oplossing werd toegevoegd van 1,2 g (5,1 mmol} p-nitrofencl ester van trifluorazijnzuur, opgelost in 10 ml dimethylsulfoxyde.Het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan waarna het behandeld werd met ethylether zoals beschreven in Voorbeeld l(ii}.Het ether-onoplosbare stroperige materiaal werd verder 35 behandeld op dezelfde wijze als beschreven in Voorbeeld l(iii](aj, waardoor 590 mg (70 -¾} van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen in de vorm van een kleurloze vaste stof./ = +81 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2}.

7907892 - 44 -

Elementair analyse

Ber, voor c22H34N40i3F6*2CH3Ca2H*H20: C 38,33 ; H 5,44 ; N 6,88 ; F 13,99¾

Gev.: C 38^03 ; H 5,48 ; N 6,54¾

5 Voorbeeld XI

Bereiding van Sjö'-di-N-fenoxycarbonyl-kanamycine A.

5G0 mg (1,03 mmol) kanamycine Afvrije base) werden gesuspendeerd in een mengsel van dimethylsulfoxyde(15 ml) en tetrahydrofuran (5 ml), en 1 g (4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd-aan de suspen-10 sie toegevoegd, waarna bij kamertemperatuur werd geroerd tot het re-actiemengsel een homohene oplossing vormde.De verkregen oplossing werd daarna afgekoeld tot Q°C, waarna langzaam een gekoelde(op 0°c) oplossing van 400 mg (2,55 mmol) fenoxycarbonylchloride(GgHgOCOCl) in 3 ml tetrahydrofuran werd toegevoegd.Oe reactieoplossing werd in 15 één uur op kamertemperatuur gebracht waarna men deze 3 uur bij die temperatuur liet staan.Vervolgens werd het reactiemengsel behandeld met ethylether volgens dezelfde methode als in Voorbeeld l(i) en het ether-onoplosbare materiaal werd verder behandeld volgens dezelfde methode als beschreven in Voorbeeld l(ii-i)(a) waardoor 625 mg (70 fa) 20 van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een 25 o · kleurloze vaste stof./«t/g = +73 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2)

Elementair analyse:

Ber. voor CggH^N^O^g.ECHgCO^H.HgO: C 50,11 ; H 6,31 ; N 6,49fa 25 Gev.: C 49,77 ; H 6,60 ; N 6,1lf>

Voorbeeld XII

Bereiding van S^'-di-N-acetyl-kanamycine A.

Het reactiemengsel, dat werd verkregen met dezelfde methode als in Voorbeeld VEU, behoudens dat 260 mg (2,6 mmol) azijnzuuranhydri-30 de werden gebruikt in plaats van de p-methoxycarbobenzoxy p-nitrofe-nyl ester, werd op dezelfde wijze behandeld als beschreven in Voorbeeld l(iii)(a),Aldus werden 525 mg (72 f>) van de in de aanhsf genoemde verbinding bereid als een kleurloze vaste stof ./$i,/25- +93° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

35 Analyse:

Ber. veer G22H40W4°^3.2CH3C02H.HgO: C 44,19 ; H 7,13 ; N 7,33/.

Gev. C 44,20 ; H 7,07 ; N 7,85fa 7907892 - 45 -

Voorbeeld XHI Bereiding van 3,6'-di-N-formyl-kanamycine A.

500 mg (1,03 mmol) kanamycine A (vrije base} werden gesuspendeerd in 12 ml dirnethylsulfoxyde en 1 g (4,55 mmol} zinkacetaat dihy-5 draat werd aan de suspensie toegevoegd.Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waaraan dan 690 mg (4,12 mmol} p-nitrofenylfarmiaat(0HC0C^4-p-N02} werden toegevoegd.Het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan en behandelde het vervolgens op dezelfde wijze als 10 in Voorbeeld l(iii}(h}.De fracties, die positief waren op ninhydrine reactie, werden met elkaar gecombineerd, gasvormig kooldioxyde werd doorgeborreld, waarna tot droog werd geconcentreerd.Aldus werden 430 mg (67$} van de in de aanhef genoemde verbinding verkregen als 25 o een kleurloze vaste stof./ct/^ = +101 (c 1, water}.

15 Analyse:

Ber. voor C^gN^.H^Og.H^: C 40,54 ; H 6,50 j N 9,03$

Gev.: C 40,43 ; H 6,47 J N 8,83$

Voorbeeld XIV

20 Bereiding van 3,6'-di-N-tosy1-kanamycine A.

500 mg (1,03 mmol} kanamycine A (vrije base) werden gesuspendeerd in 15 ml dirnethylsulfoxyde en 1 g (4,55 mmol) zinkacetaat dihy-draat werd aan de suspensie toegevoegd.Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregenm waaraan 25 dan langzaam een oplossing werd toegevoegd van 400 mg (2,1 mmol) tosylchloride in 7 ml tetrahydrofuran.Het verkregen mengsel liet men één uur bij kamertemperatuur staan, waarna nog 200 mg tosylchloride, cpgelost in 3,5 ml tetrahydrofuran, werden toegevoegd.Het reactie-mengsel liet men nog twee uur staan en behandelde het dan net als 30 beschreven in Voorbeeld l(ii) en (iii)(a), waardoor 270 mg (28 $) van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een 25 o kleurloze vaste stof./c^Jq 3 +68 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2). Analyse:

Beri voor ^H48N4015S2.2CH3C02H.H20: 35 C 46,44 ί H 6,28 } N 6,02 ; S 6,89=¾

Gev.: G 46,31 ; H 5,98 ; N 6,31 ; S 6,55$

Bij herhaling van het bovenstaande reactieverloop maar met ach-terwegelating van het zinkacetaat, werd geen aanmerkelijke hoeveelheid van de kleurloze vaste stof verkregen.

7907892 ' - 46 -

Voorbeeld XV

Bereiding van SjS’-di-N-benzyloxycarbonyl-S'-N-rae-thyl-kanamyci- ne A.

500 mg (1,0 mmol) 6’-N-methyl-kanamycine A (vrije base) werden 5 gesuspendeerd in 12 ml dimethylsulfoxyde en aan de suspensie werd 1 g (4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat toegevoegd.Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waaraan dan in 30 min een oplossing werd toegevoegd van 550 rag ( 2,2 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide, opgelost in 5 ml 10 dimethylsulfoxyde-tetrahydrofuran (1 : l).Het verkregen mengsel list men een nacht lang bij kamertemperatuur staan waarna verder werd bewerkt op dezelfde wijze als in Voorbeeld l(ii) en (iii)(a) ,waardoor 720 mg (73 #) van de in de aanhef genoemde .verbinding werden verkre-

2* Q

gen als een kleurloze vaste stof./ol/g= +74°(c 1, water-dimethyl-15 formamide, 1 : ^2),

De daarop volgende behandeling van de in de aanhef genoemde verbinding volgens de methode overeenkomstig die beschreven in Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((s)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-6,-N-methyl-kanamy-cine A.

20 Voorbeeld XVÏ

Bereiding van 3,6*-di-N-benzyloxycarbonyl-3’-desoxykanamycine A.

De in de aanhef genoemde verbinding werd als een kleurloze vasts stof verkregen in een opbrengst van 765 mg (82 $) door dezelfde methode als in Voorbeeld XV te gebruiken, maar uit te gaan van 500 25 mg (1,07 mmol) 3'-desoxykanamycine A(vrije base) en door 610 mg (2,45 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide te gebruiken./«t/g = +76°(c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Analyse:

Ber. voor C^H^gN^O^^CHgCOgH.HgO: 30 C 52,16 ; H 6,63 j N 6,40;/,

Gev.: C 51,99 ; H 6,75 ; N 6,2($

De daarpvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde verbinding overeenkomstig de methode als beschreven in Voorbeeld XXXI leverde 1-N-( (S i^-amino-G-hy.droxybutyryl)^'-desoxykanamycine A.

35 Voorbeeld XVH

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycsrbonyl-3,-desoxy-6,-J'J-methyl-' kanamycine A.

De in de aanhef genoemde verbinding werd verkregen in een opbrengst van 737 mg (80 -3), door dezelfde methode 'als in Voorbeeld XV

7907892 - 47 - te herhalen, maar daarbij uit te gaan van 500 mg (1,04 ramol) 3'-des- oxy-6'-N-methylkanamycine A(vrije base) en 595 mg (2,4 mmol) N-benz- 25 o yloxycarbanyloxysuccinimide te gebruiken./o^/q = +73 (c 1, water·*· dimethylformamide, 1:2).

5 0e daaropvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde verbinding met de methode overeenkomstig Voorbeeld XXXI leverde 1-N-( (S J-^amino-^-hydroxybutyrylj-S1 -desoxy-S* -N-methyl-kanamycine.

Voorbeeld XVIII

Bereiding van BjS'-di-N-benzyloxycarbonyl-^'-desoxykanamycine A. 10 Uitgaande van 500 mg (1,07 mmol) 4*-desoxykanamycine A (vrije base) (zie J.of Antibiotics, vol.27, biz.838-849( 1974);Bull-.Chem.Soe. Japan,50, biz.2362-2368(1977)) werd de in de aanhef genoemde verbinding verkregen als een kleurloze vaste stof in een opbrengst van 666 mg (71 $) met dezelfde methode als in Voorbeeld XV, behoudens 15 dat 560 mg (2,3 mmol) N-benzy1oxycarbonyloxysuccinimide, cpgelcst in 4 ml dimethylsulfoxyde, langzaam werden toegevoegd aan de homogene oplossing in één uur./c(/q^= +77°(c 1, water-dimethylformamide, 1:2). Analyse:

Ber. voor 20 C 52,16 ; H 6,63 ; N 6,40$

Gev.: C 51,77 j H 6,79 ; N 6,31$

Voorbeeld XIX

Bereiding van 3,2*je'-tri-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine B.

500 mg (1,03 mmol) kanamycine B (vrije base) werden gesuspen-25 deerd in een mengsel van 12 ml dimethylsulfoxyde en 4 ml tetrahydro-furan en aan de susoensie werd 1 g zinkacetaat dihydraat toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waarna werd afgekoeld tot 0DC.Aan de gekoelde oplossing werd in het verloop van één uur een koude oplossing toege-30 voegd van B25 mg (3,3 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide, opgelost in 10 ml tetrahydrofuran-dimethylsulfoxyde (1 : Ij.Het verkregen mengsel liet men 2 uur staan bij 0°C en daarna een nacht lang bij kamertemperatuur, waarna het mengsel op dezelfde manier werd behandeld als vermeld in Voorbeeld l(ii) en (iü)(a) waardoor 740 mg (70$) 35 van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen vals een kleurloze vaste stof./d/q = +63° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2)

Analyse: Ber. voor C42H55n5O16^3CQ2H-H20i C 53,95 j H 6,40 ; M 6,84$

Gev. G 53,66 ; H 6,67 ; N 6,63$ 7907892 " ' - 48 -

De daaropvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde verbinding met de methode overeenkomstig Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((s}-4-amino-2-hydroxybutyryl}-kanamycine B.

Voorbeeld XX

5 Bereiding van 3,2’jB'-tri-N-benzyloxycarbonyl-tobramycine.

480 mg (1,03 mmol) tobramycine (vrijs base} werden gesuspendeerd in 12 ml dimethylsulfoxyde en 1 g (4,55 mmol} zinkacetaat di-hydraat werd aan de suspensie toegevoegd.Het mengsel werd één uur bij kamertemperatuur geroerd om een homogene oplossing te vormen, waaraan 10 dan in één uur een oplossing werd toegevoegd van 850 mg (3,4 mmol} N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide, opgelast in 10 ml tetrahydrofuran-dimethylsulfoxyde (1 : 1},Nadat men het mengsel een nacht lang bij kamertemperatuur heeft laten staan, werd de verkregen reactieoplcs-sing behandeld met een groot volume ethylether zoals vermeld in Voor-15 beeld l(ii} waardoor een dik stroperig materiaal werd verkregen.

Het stroperige materiaal werd verder behandeld op dezelfde manier als in Voorbeeld l(iii}(a}, maar met gebruikmaking van water— dioxan (1 : 2 inplaats van 2 : 1}, waardoor S10 mg (78$} van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een kleurloze vas- nc — 20 te stof./ct/p = +65° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2}.

Analyse:

Ber. voor C42H55N5Qi5*2CH3C02H‘H20: C 54,81 ; H 6,50 ; N 6,95$

Gev.: C 54,77 ; H 6,71 ; N 6,88°$ 25 De daaropvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde ver binding met de methode overeenkomstig Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((s}-4-amino-2-hydroxybutyryl}-tobramycins.

Voorbeeld XXI

Bereiding, van 3,2’^’-tri-N-benzyloxycarbonyl-e'-N-methyl-30 tobramycine.

De in de aanhef genoemde verbinding werd in een opbrengst van 690 mg (64$} verkregen als een kleurloze vaste stof, door dezelfde methode als in Voorbeeld XX. te herhalen, maar uitgaande van 500 mg (1,04 mmol) 6·-N-methyltobramycine (vrije base},_ *53°^ ^ 35 water-dimethylformamide, 1:2}.

Voorbeeld XXII

Bereiding van 3,2',6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-4,-desoxykanamy- cine B.

7907892 - 49 -

Uitgaande van 480 mg (1,03 mmol) 4*-desoxykanamycine B (vrije base)(zie Bull.Ghent.Sec.Japan, 50, biz.2362-2368( 1977)) werd de in de aanhef genoemde verbinding verkregen als een kleurloze vaste stof in een opbrengst van 815 mg (79fj) volgens dezelfde ra.ethorie als in nc _ 5 Voorbeeld XX./ * +63°(c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Voorbeeld XXEH

Bereiding van 3,2^61 -tri-N-benzylaxycarbcnyl-dibekacine.

600 mg (l,33 mmolj dibekacine (3*,4,-didesoxykanamycine B) (vrije base) werden gesuspendeerd in 15 ml dimethylsulfoxyde en de 10 suspensie werd geroerd teneinde een oplossing te vormen, waaraan 1,4 g(s,4 mmol) zinkacetaat dihydraat werden toegevoegd, gevolgd door verder roeren.Aan de verkregen oplossing werd langzaam in één uur een oplossing van 1,1 g (4,4 mmol) N-benzylaxycarbonyloxysuccinimids in 12 ml dimethylsulfoxyde toegevoegd, en het mengsel liet men een 15 nacht lang bij kamertemperatuur staan.Daarna werd een groot volume ethylether vermengd met de react!eoplossing om een olieachtig neerslag af te scheiden (dat in hoofdzaak bestaat uit het N-benzyloxycar-bonyleerde dibekacine-zink complex als het gewenste product en een hoeveelheid dimethylsulfoxyde), dat werd gewassen met ethylether, 20 waardoor een dik stroperig materiaal werd verkregen.

Dit stroperige materiaal werd herhaalde malen gewassen met water, waardoor het N-geacyleerde zink comalex werd afgebroken met water en de vrijgekomen zink kationen werden verwijderd tezamen met de oorspronkelijk bestaande overmaat zinkacetaat.Op deze manier werden 25 1,1g verkregen van een wateronoplosbare vaste stof, die het N-geacyl- eerde dibekacine bevat.De vaste stof werd onderworpen aan silicium-dioxyde gel dunne laag chromatografie met chloroform-ethanol-18$-ig waterig ammoniak (1:1:1, onderste fase) als ontwikkelingsoplos-middel waardoor een enkele vlek wordt verkregen bij R^, 0,3, hetgeen 30 erop ’.vijst, dat de vaste stof in wezen bestond uit 3,2’,6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-dibekacine en een spoor zink.

De daaropvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde verbinding met de methode overeenkomstig Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((S)-4-aminc-2-hydroxybutyryl)-dibekacine.

35 Voor verdere zuivering werd het ruwe product als hierboven ver kregen gewassen met 3 molaire ammoniak oplossing waardoor product

OC

zonder vercntreini-ging door zink kationen werd verkregen./<£/^ = + 71° (c 1, water-dimethylfarmamide, 1:2], 7907892 - so -

Voorbeeld XXIV

Bereiding van 3,2'jS'-tri-N-benzyloxycarbonyl-e'-N-methyl-dibekacine.

500 mg (1,07 mmol) S'-N-methyl-dibekacine (vrije base) en 1*2 g 5 (5,45 mmol) zinkacetaat dihydraat werden opgelost in 20 ml dimethyl- sulfoxyde'·, waaraan langzaam in 30 min 910 mg (3,5 mmol) N-benzyloxy-carbonyloxysucciniraide werden toegevoegd.De reactieoplossing liet men een nacht lang bij kamertemperatuur tsaan en behandelde deze vervolgens op dezelfde wijze als beschreven in Voorbeeld XXIII, waar-10 door 910 mg van de in de aanhef vermelde verbinding werden verkregen, die nagenoeg zuiver was.

De daaropvolgende behandeling van de in de aanhef genoemde ver-. binding met de methode volgens Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((s)-4— amino-2-hydroxybutyryl)-6,-N-methyl-dibekacine.

15 Voorbeeld XXV

Bereiding van 3,2'-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine C.

De in de aanhef genoemde verbinding werd in de vorm van een gekleurde vaste stof verkregen in een opbrengst van 730 mg (79 $) door dezelfde methoden te volgen als beschreven in Voorbeeld l(i),

20 (ii) en (iii)(a), maar uitgaande van 500 mg (1,03 mmol) kanamycine C

25 o (vrije base)./ck/D = +75°(c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).

De daaropvolgende behandeling van de in de aanhsf genoemde verbinding met de methode overeenkomstig Voorbeeld XXXI leverde 1-N-((s)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycine G.

25 Voorbeeld XXVI

Bereiding van S'-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A.

500 mg (1,03 mmol) kanamycine A (vrije base) werden gesuspendeerd in 20 ml dimethylsulfoxyde en 0,5 g (2,3 mmol) zinkacetaat dihydraat werden aan de suspensie toegevoegd.Het mengsel werd bij ka-30 mertemperatuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waaraan dan 293 mg (1,13 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide werden toegevoegd.Het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan, waarna het verder werd behandeld op dezelfde wijze als in Voorbeeld l(ii) en (iii)(i) waardoor 556 mg van het in 35 de sanhef genoemde verbinding werden verkregen als een kleurloze vaste stof./öC/^= +92° (c 1, water).

Voorbeeld XXVII Bereiding van S'-N-benzyloxycarbonyl-dibekacine.

7907892 - 51 -

Overeenkomstig de methode als beschreven in Voorbeeld XXVI werden 332 mg van de in de aanhef genoemde verbinding verkregen, uitgaande van 500 mg dibekacine (vrije base), 12 ml dimethylsulfoxyde, 0,7 g zinkacetaat dihydraat en 305 mg N-benzyloxycarbonyloxysuccin-5 iraide./ok/g5= +105° (c 0,5, water).

Voorbeeld XX Vin

Bereiding van 3,2*,6*-tri-N-benzyloxycarbonyl-3’,4'-didesoxy- 3*-eno-kanamycine B.

500 mg (1,11 mmol) 3',4,-didesoxy-3,-eno-kanamycine B (vrije 10 base)(zie Buil.Chem.Soc.Japan, 50, blz.1580-1583(1977)) werden opgelost in 12 ml dimethylsulfoxyde, en 1 g(4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd aan de oplossing toegevaegd, waarna éê uur werd geroerd. Aan de verkregen oplossing werden langzaam in 30 min 670 mg (3,49 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide toegevoegd.Nadat men het 15 mengsel een nacht lang had laten staan bij kamertemperatuur werd het verkregen reactiemengsel behandeld met een groot volume ethylether, zoals vermeld in Voorbeeld l(ii), waardoor een dik stroperig materiaal werd verkregen.

Het stroperige materiaal werd verder behandeld op dezelfde na- 20 nier als in Voorbeeld l(iii)(b) maar met gebruikmaking van water- dioxan (1 : 2 inplaats van 2 : 1), waardoor 784 mg van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een kleurloze vaste 25 o stof./cC/^ = +30 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Voorbeeld XXIX

25 Bereiding van 3,2'jS'-tri-N-benzyloxycarbonyl-sisomicine.

De in de aanhef genoemde verbinding werd in de vorm van een kleurloze vaste stof verkregen in een oobrengst van 780 mg met gebruikmaking van dezelfde methode als beschreven in Voorbeeld XXVIII, maar uitgaande van 500 mg (1,12 mmol) sisomicine (vrije baseJ./fiC/^ 30 =+110° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Voorbeeld XXX

1 f

Bereiding van 3,2 ,6 -tri-N-benzyloxycarbonylgentamicinen.

7B7 mg van de in de aanhef genoemde verbindingen werden verkregen in de vorm van een kleurloze vaste stof door dezelfde methode 35 te gebruiken als in Voorbeeld XXVIII, maar uit te gaan van 5QQ mg gemengde gentamicinen (C, C. , C„ enz.).

i Q. dm

Voorbeeld XXXI (als verwijzing)

Bereiding van 1-N-((s)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-kanamycine A

(amikacine).

7907892 - 52 - 55 mg(0,062 mmol) 3,6’-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A acetaat, bereid op de wijze als beschreven in Voorbeeld I, werden opgelast in 1,5 ml water-tetrahydrofuran [z : 5], waaraan 13 mg (0,12 mmol) watervrij natriumcarbonaat en vervolgens 23 mg (0,06S mmol) 5 N-hydroxysuccinimide ester van (s)-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydr-oxyboterzuur werden toegevoegd.Het mengsel liet men 10 uur bij kamertemperatuur staan.De verkregen reactieoplcssing werd geconcentreerd tot een klein volume en het concentraat werd cpgenomen in 4 ml water-dioxan (1 : l).Een kleine hoeveelheid azijnzuur werd aan de oplossing 10 toegevoegd om de oplossing zwak zuur in te stellen, en de oplossing werd onderworpen aan hydrogenolyse door gedurende een uur waterstof onder atmosferische druk door te leiden in aanwezigheid van palladium zwart(ter verwijdering van benzyloxycarbonylgroepen).De verkregen reactieoplossing werd gefiltreerd en geconcentreerd en het concen-15 traat werd door een kolom CM-Sephadex C-25 (NH^* vorm) gevoerd,De kolom werd onderworpen aan gradient elutis met 0-0,5n waterige ammoniak, De eluaat fracties, die het gewenste product bevatten, werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd, waardoor 24 mg (opbrengst 60$) van de in de aanhef genoemde verbinding werden ver- r 20 kregen als het monocarbonaat, waarvan ds fysische eigenschappen en antibacteriele sterkte identiek waren met die van een autentiek monster.

Voorbeeld XXXII (als verwijzing)

Bereiding van 1-N—(DL-isoseryl)-dibekacine.

25 58 mg (0,05 mmol) 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-dibekacine, bereid zoals in Voorbeeld XXIII werden opgelost in 1,5 ml water-tetrahydrofuran (2 : 5), waaraan 13 mg (0,12 mmol) watervrij natrium carbonaat en daarna 21 mg (0,063 mmol) N-hydroxysuccinimide ester van N-benzyloxycarbonyl-QL-isoserine werden toegevoegd.Het mengsel 30 liet men staan bij kamertemperatuur en behandelde het vervolgens'met de methode als beschreven in Voorbeeld XXXI, waardoor 21 mg (opbrengst 59$) van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als het monocarbonaat daarvan, waarvan de fysische eigenschaopen en antibacteriele sterkte identiek waren met die van een autentiek mon- » 35 ster.

Voorbeeld XXXJII

Bereiding van 3,5,-di-N-benzyloxycarbonyl-3"-N-trifluoracetyl-kanaroycine A.

Een oplcssing van 504 mg Sjö’-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine 790 7 8-9-2 - 53 - A (zie Voorbeeld l) in 4 ml dinethylsulfoxyde werd vermengd met 220 mg ethyl trifluaracetaat, en het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.Nadat een klein volume trifluorazijn-zuur aan het reactiemengsel was toegevoegd, werd de reactieoplossing 5 uitgegoten in een groot volume ethylether en het verkregen olieachtige materiaal, dat zich had afgescheiden, werd goed gewassen met ethylether, waardoor het vast geworden materiaal werd verkregen.Dit materiaal werd goed gedroogd,· waarbij 640 mg van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een vaste stof.Opbrengst 99$, 10 /ci./g5= +98° (c 1, pyridine).

Elementair analyse:

Ber. voor Cg^^O^.CFgCOOH: C 47,40 ; H 5,02 j N 5,82$

Gev.: G 47,13 ; H 5,15 ; N 5,79$

15 Voorbeeld XXXIV

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

Een oplossing van 20 mg 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A in 0,4 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 6 mg fenyl trifluor-20 acetaat, en het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.Vervolgens werd het reactiemengsel verwerkt op dezelfde wijze als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 24,8 mg van het in de aanhef genoemde product werden verkregen, identiek met het product van Voorbeeld XXXIII.Opbrengst 97$.

25 Voorbeeld XXXV

Bereiding van 3,S'-di-N—benzyloxycarbonyl—3'*-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

Een oplossing van 10 mg 3,6*-di-N-benzyloxycarb onyl-kanamycine A in 0,3 ml hexamethylfosforzuurtriamide werd vermengd met 7 mg ethyl 30 trifluoracetaat, en het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan,De reactieoplossing werd vermengd met een klein volume triflucrazijnzuur en daarna uitgegoten in een groot volume ethylether.Het afgezette olieachtige materiaal werd goed gewassen met ethylether en de verkregen vaste stof werd gedroogd, waardoor 35 11,7 mg (opbrengst 91¾} werden verkregen van het in de aanhef genoem de product, als zijn monc-trifluoracetaat in de vorm van een vaste stof.

7907892 - 54 -

Voorbeeld XXXVI

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-3"-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

Een suspensie van 10 mg SjB'-di-IM-benzylcxycarbonyl-kanamycine 5 A in 0,3 ml dimethylformamide werd vermengd met 7 mg ethyl trifluor-acetaat, en het verkregen mengse: liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De aldus verkregen homogene reactieoplossing werd vermengd met een klein volume trifluorazijnzuur en daarna uitgegoten in een groot volume ethylether,Hetafgezette olieachtige materiaal 10 werd goed gewassen met ethylether om het vast te maken, en de verkregen vaste stof werd gedroogd, waardoor 11,5 mg(opbrengst 90$) van het in de aanhef genoemde product werden verkregen als zijn monc-trifluoracetaat in de vorm van een vaste staf.

Voorbeeld XXXVII

15 Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-3"-M-trifluoracetyl- kanamycine A.

Een suspensie van 10 mg S.S’-di-N-benzylaxycarbanyl-kanamycine A in 0,35 ml sulfolan werd vermengd met 7 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd een nacht lang bij kamertemperatuur geroerd.Ver-20 volgens werd het reactiemengsel verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 12,0 mg(opbrengst 94$) van het in de aanhef genoemde product werden verkregen als zijn mono-trifluoracetaat in de vorm van een vaste stof.

Voorbeeld XXXVIII

25 Bereiding van 3,S,-di-N-benzyloxycarbonyl-3',-N-trifluoracetyl- kanamycine A.

Een suspensie van 22 mg 3,6*-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A in 0,8 ml tetrahydrofuran werd vermengd met 10 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd twee dagen geroerd.De verkregen homoge-30 ne reactieoplossing werd vermengd met 15 mg ethyl trifluoracetaat en 8 mg watervrij natriumcarbonaat, een nacht lang geroerd, waarna men het 2 dagen liet staan.De verkregen reactie oplossing werd tot een klein volume geconcentreerd, en het concentraat werd gewassen met water en daarna gedroogd, waardoor een vast materiaal werd verkregen. 35 Het vaste materiaal werd gesuspendeerd in een klein volume tetrahydrofuran, samen met een kleine hoeveelheid trifluorazijnzuur,Het zo verkregen mengsel werd geroerd, 'waarna ethylether werd toegevoegd.De neergeslagen vaste stof werd afgefiltreerd, gewassen met ether en gedroogd, waardoor 21 mg(opbrengst 74$) werden verkregen van het mono- 7907892 - 55 - . triflu oracetaat van het in de aanhef genoemde product als een vaste stof./öC/g5= +98° (c 1, pyridine).

Voorbeeld XXXIX

Bereiding van 3, 6,-di-i''-benzyloxycarbonyl-3"-N-trif luoracetyl-5 kanamycine A.

Een oplossing van 10 mg 3,6*-öi-N-benzylcxycarbonyl-kanamycine A in water-tetrahydrofuran (1 : 1, 0,3 ml) werd vermengd met een oo-lossing van 5 mg ethyl trifluaracetaat in 0,1 ml tetrahydrofuranen het verkregen mengsel liet men een dag bij kamertemperatuur staan..

10 Daarna werd een mengsel van ethyl trifluoracetaat (10 mg), watervrij natriuracarbonaat (4,4 mg) en tetrahydrofuran (0,1 ml) aan de verkregen oplossing tcegevoegd met tussenpozen van 5 uur (in totaal vier keer) on de 3w-N-trifluoracetylering tot stand te brengen.De reactis-oplossing werd geconcentreerd en daarna cp dezelfde wijze als in 15 Voorbeeld XXXVHI behandeld, 'waardoor 5,5 mg(opbrengst 43Fa) werden verkregen van het mono-trifluo'racetaat van het in de aanhef genoemde product, als een vaste stof.

Voorbeeld XL

Bereiding van 3,6,-di-M-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluoracetyl-20 kanamycine A.

Een oplossing van 10 mg 3,6’-di-N-benzyloxycarbanyl-kanamycine A in water-ethanol (2 : 3, 0,6 ml) werd vermengd met een oplossing van 5 mg ethyl trifluoracetaat in 0,1 ml tetrahydrofuran, en het mengsel liet men een dag bij kamertemperatuur staan.De reactieoplossing 25 werd daarna verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXVIII, waardoor 2,3 mg(opbrengst 18$) mono-trifluoracetaat van het in de aanhef genoemde product werden verkregen als een vaste stof.

Voorbeeld XLI

Bereiding van 3,6'-di-N-tert.butoxucarbonyl-3"-N-trifluoracetyΙ-ΒΟ kanamycine A.

ajBereiding van 3,6'-di-N-tert.butoxycarbonyl-kanamycine A, 500 mg (1,Q3 mmol) kanamycine A (vrije base) werden gesuspendeerd in 12 -ml dimethylsulfoxyde, en 1 g (4,55 mmol) zinkacetaat dihydraat werd aan de verkregen suspensie toegevoegd.Het mengsel 35 werd bij kamertemoeratuur geroerd tot een homogene oplossing was verkregen, waarna daaraan dan 370 mg (2,59 mmol) tsrt.butoxycarbonyl-azids werden tcegevoegd,Het verkregen mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur -staan, waarna het verder werd behandeld op de- 7907892 - 56 - zelfde manier als beschreven in Voorbeeld ï(ïl}en (iii}(b}, waardoor 590 mg (80 ia) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbin-

pg O

ding als een kleurloze vaste stof./cC/~ = +89 (c 1,water-dimethyl-formamide, 1:2}.

5 (b) 3ereiding van 3,S,-di-N-tert-.butoxycarbonyl-3"-N-trifluor- acetyl-kanamycine A.

Sjfi’-di-N-tert.butoxycarbonyl-kanamycine A(60 mg} werd opgelost in 0,5 ml dimethylsulfoxyde, en de verkregen oplossing werd vermengd met 25 mg ethyl trifluoracetaat, waarna men het verkregen mengsel 10 een nacht lang bij kamertemperatuur liet staan.Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt op dezelfde manier als beschreven in Voorbeeld XXXIH, waardoor 76,8 mg (opbrengst 98#} van het trifluorace- taat van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als 25 o een vaste stof./oC/^ = +72 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2}.

15 Elementair analyse:

Ber. voor Ο^Η^Ν^Ο^^Ο^ΟΟΟΗ: C 42,95 ; H 5,86 ; N 6,2656 Gev.: C 42,77 ; H 5,92 ; N 6,38)6

' Voorbeeld XLII

20 Bereiding van 3,6'-di-N-(p-methoxybenzyloxycarbonyl}-3"-N-tri- fluoracetyl-kanamycine A.

Een oplossing van 40 mg 3,6'-di-N-(o-methoxybenzyloxycarbonyl}-kanamycine A (zie Voorbeeld VIII} in o,4 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 18 mg ethyl trifluoracetaat, en men liet het mengsel 25 een nacht lang staan bij kamertemperatuur.Vervolgens werd de reactie-oplcssing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 49,3 mg (opbrengst 98)6} van de in de aanhef genoemde verbinding 25 o werden verkregen als een vaste stof./öC/^ = +78 (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2}.

30 Elementair analyse:

Bei·, voor C38Hs1Na018F3.CF3C00H: G 46,97 ; H 5,12 j N 5,48#

Gev.: C 47,18 ; H 5,03 ; N 5,31#

Voorbeeld XLUÏ 35 Bereiding van 3,6*,3"-tri-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

75 mg S^'-di-N-trifluoracetyl-kanamycine A (zie Voorbeeld X} en triethylamine (12 mg} werden vermengd met 0,6 ml dimethylsulfox-yde en daarna met 35 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd een nacht lang geroerd om de gewenste 3”-N-trifluoracetylering tot 7907892 -57-.

stand te brengen.De reactieoplassing werd daarna verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 94,2 mg(opbrengst 96$} van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een vaste stof. +76° (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).

5 Elementair analyse: 3er. voor C^H^N^Q^Fg.CF^OOH: C 35,22 ; H 3,87 ; N 6,32=.5 Gev.: C 35,09 ; H 3,99 ; N 6,0755

Voorbeeld XLIV

10 Bereiding van 3,6'-di-PJ-f enoxycarbanyl-3,,-PJ-trif lu oracetyl- kanamycine A.

Een oplossing van 53 mg S^’-di-PJ-fenoxycarbonyl-kanamycine A (zie Voorbeeld XI) en triethylamine (9mg) in 0,5 ml dimethylsulf-oxyde, werd vermengd met 23 mg methyl trifluoracetaat, en het meng-15 sel werd daarna verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 65 mg (opbrengst 95$) van de in de aanhef genoemde verbin-

2* Q

ding werden verkregen als een vast materiaal./oi id - +7° (C 1· water-dimethylformamide, 1 : 2}

Elementair analyse:

• 20 Ber’ Voor C34H43N4°l/r,CF3GQ0H

C 46,26 j H 4,74 ; N 5,99$

Gev.: C 45,Θ8 } H 4,95 ; PJ 5,77$

Voorbeeld XLV

Bereiding van 3,6', 3n-tri-PJ-f ormyl-kanamycine A 25 Een mengsel van 62 mg 3,6'-di-N-formyl-kanamycine A (zie Voor beeld XIIl), 90 mg ethylformiaat en 1 ml dimethylsulfoxyde werd 12 · uur op 100°G verwarmd in een afgesloten buis om de gewenste 3"-N-formylering tot stand te brengen.De reactieoplossing werd vermengd met een kleine hoeveelheid mierezuur, daarna uitgegoten in een groot 30 volume ethylether, en verwerkt cd dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 69 mg (opbrengst 98)5} van de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen als een vast materiaal, dat positief is 25 o op ninhydrine./eC/g s +109° (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2). Elementair analyse:

35 3er. voor C^a^CJ^.HCOOH

G 43,30 ; H 6,23 j Γ1 9,12$

Gev.: C 42,63 j H 6,19 ; PJ 9,10$

Voorbeeld XL VI

7907892 - 58 -

Bereiding van 3,6'-di-N-benzyloxycarbony1-6'-N-methyl-3"-N-trifluoracetyl-kanamycine A.

Een mengsel van 68 mg Sjö'-di-N-benzyloxycarbonyl-e'-N-methyl- kanamycine A (zie Voorbeeld XV) en triethylamine (11 mg), 30 mg 5 ethyl trifluoracetaat en 0,7 ml dimethylsulfoxyde werd behandeld op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 86 mg (opbrengst 99}4) werden verkregen van het mono-trifluoracetaat van de in de aan- 25 o hef genoemde verbinding, als een vaste stof,/oL/q = +65° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

10 Voorbeeld XLVÏI

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-3,-desoxy-3"-N-tri-fluoracetyl-kanamycine A.

Een oplossing van 52 mg SjS'-di-N-benzyloxycarbonyl-S'-desoxy-kanamycine A (zie Voorbeeld XVI) en triethylamine- (11 mg) in 0,4 ml 15 dimethylsulfoxyde werd vermengd met 21 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXUI, waardoor 64,8 mg (opbrengst 97jfi) van de in de aanhef, genoemde verbinding werden verkregen als een vast materiaal.

20 /sK/q5= -5-70° (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).

Elementair analyse:

Ber. voor C^H^N^^.CFgCOOH

G 48,21 ; H 5,11 ; N 5,9254 Gev.: C 47,94; H 5,35 ; N 5,77}«

25 Voorbeeld XLVIII

Bereiding van 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3,-desoxy-3,,-N-formyl-kanamycine A.

Een oplossing van 76 mg Sje'-di-N-benzyloxycarbonyl-S'-desoxy-N-formyl-kanamycine A in 0,7 ml dimethylsulfoxyde werd. vermengd met 30 65 mg fenylformiaat, en het mengsel werd een nacht lang verwarmd oo 50°C om de 3"-M-formylering tot stand te brengen.De reactieoplossing werd vermengd met een kleine hoeveelheid mierezuur, en verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 83 mg(opbrengst 97 54) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbinding als 35 monoformiaat, als een vaste stof,/c(/^-5= +34° (c 1, water-dimethyl-formaldehyde, 1 : 2J.

Voorbeeld XLIX

Bereiding van 3,6'-di-N—benzyloxycarbonyl-3"—N-dichlocracetyl- 7907892 -59- -3*-desoxy-kanamycine A.

Een oplossing van 35 mg 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl—3'-desoxy— kanamycine A in a, 5 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 12 mg methyl dichlooracetaat en het mengsel liet men een nacht lang bij 5 kamertemperatuur staan.De reactieoplossing werd vermengd met een klein volume dichloorazijnzuur en daarna op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII behandeld, waardoor 44,5 mg (opbrengst 96 $) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbinding als een vaste stof.

25 q /&/D* = +65 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2}.

10 Elementair analyse:

Ber. voor CggH^gN^O^Clg.CHCl^COOH

C 46,73 j H 5,16 ; N 5,74 ; 01 T4,52#

Gev.: C 46,58 ; H 5,33 ; N 5,62 ; Cl 14,28#

Voorbeeld L

15 Bereiding van 3,S,-di-N-benzyloxycarbanyl-3"-N-trichlooracetyl— 3*-besoxy-kanamycine A,

Een oplossing van 58 mg S^-di-N-benzyloxycarbonyl-S'-desoxy-kanamycine A in 0,7 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 25 mg methyl trichlooracetaat en het mengsel liet men een nacht lang bij 20 50°C staan.De reactieoplossing werd vermengd met een klein volume trichloorazijnzuur en daarna verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXHI, waardoor 80,5 mg (opbrengst 98$) werden verkregen van 25 q de in de aanhef genoemde verbinding als een vaste sto= + 65 ( o 1, water-dimethylformamide, 1:2).

25 Elementair analyse:

Ber. voer C^H^^O^Clg.CClgCO^ C 43,65 ; H 4,63; N 5,36 ; Cl 20,34#

Gev.: C 43,44 ; H 4,77 ; N 5,30 ; Cl 20,19#

Voorbeeld LI

30 Bereiding van 3,6,-di-M-benzyloxycarbonyl-3’-desoxy-3"-M-trifl’j~ oracetyl-5’-M-methyl-kanamycine A,

Een oplossing van 72 mg Sje'-di-N-benzylaxycarbcnyl-S'-desoxy-6,-N-methyl-kanamycine A in 1 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 30 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel liet men een nacht lang 35 bij kansrtsmoeratuur staan.Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt oo dezelfde manier èls in Voorbeeld XXXIII, waardoor 89,5 mg (opbrengst 97 #} werden verkregen van het mcnotrfluoracstaat van de

25 «-I

in de aanhef genoemde verbinding, als een vaste stof./eC/ o- +70‘ 7907892 ' - 60 - (c 1, water-dimethylformamide, 1 :2).

Voorbeeld LU

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbonyl-4,-desoxy-3,,-N-tri-fluoracetyl-kanamycine A.

5 Een oplossing van 71 mg 3>6,-di-N~benzyloxycarbanyl-4,-desoxy- kanamycine A (zie Voorbeeld XVUl), triethylamine (12 rag} en 30 mg ethyl trifluoracetaat in 1 ral diraethylsulfoxyde werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 90 mg (opbrengst 99$) werden verkregen van het mono-trifluoracetaat van de in de aanhef 10 genoemde verbinding, als een vaste stof./ /-^=+72° (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).

Voorbeeld LUI

Bereiding van 3,6' -di-N-benzyloxycarbonyl-31,4*-didesoxy-3*'-M-trifluoracetyl-kanamycine A.

15 Een oplossing van 75 mg Sje'-di-N-benzyloxycarbonyl-S’,4f-di- desoxy-kanamycine A en 30 mg ethyl trifluoracetaat in 1 ml dimethyl- sulfoxyde werd behandeld op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXUI, waardoor 96 mg (opbrengst 99 $} werden verkregen van de in de aanhef 25 o genoemde verbinding als een vaste stof. /oC/q = +72 (c 1, water-20 dimethylsulfoxyde, 1 : 2).

Elementair analyse: Bèr. voor Cg^^O^Fg.CFgCODH: C 49,03 ; H 5,20 ; N 6,02$

Gev.: C 48,83 ; H 5,46 ; N 5,87$

25 V o o r b e e 1 d LIV

Bereiding van Sje'-di-N-benzyloxycarbonyl-S',4'-didesoxy-3"-N-formyl-kanamycine A.

75 mg SjG'-di-N-benzylcxycarbonyl-S',4'-didesoxy-kanamycine A en 65 mg fenyl formiaat werden opgelost in 1 ral dimethylsulfoxyde en 30 de verkregen oplossing werd verwerkt oo dezelfde manier als in Voorbeeld XLVIII, waardoor 80 mg (opbrengst 97 °/o) werden verkregen van het mono-formiaat van de in de aanhsf genoemde verbinding, als een vaste stof. /c£/^5= +80° (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).

Voorbeeld LV

35 Bereiding van SjS'-di-N-benzyloxycarbonyl-S*,4,-didesoxy-3"~K- dichlaoracetyl-kanamycine A.

Een oplossing van 63 mg Sje’-di-N-benzyloxycarbonyl-S’,4'-di-riesoxy-kanamycine A in 0,9 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd 790 7 8 92 - 61 - met 25 mg methyl dichlaoracetaat en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De reactieoplessing werd vermengd met een kleine hoeveelheid dichloorazijnzuur en daarna verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, weardoor 88 mg (opbrengst 5 97 werden verkregen van het mono-dichlooracetaat van de in de aanhef genoemde verbinding als een vaste stof./fit= +67° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Voorbeeld LVI

Bereiding van 3,2*,6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluarace-10 tyl-kanamycine B.

Een oplossing van 78 mg 3,2*,6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-kanamy~ cine B (zie Voorbeeld XIX) en triethylamine ( 11 mg) in 1 ral dirae-thylsulfoxyde werd vermengd met 35 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXHI, 15 waardoor 92 mg (opbrengst 95 fa) werden verkregen van he£r]€rifluor-acetaat van de in de aanhef genoemde verbinding, als een vaste stof.

2P Q

1*1 a '= +60 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Voorbeeld LVH

Bereiding van 3,2',6'—tri—N-benzylcxycarbonyl—3”-*N-formyl-tcbra-20 mycine.

Een oplossing van 82 rag 3,2’,6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-tobra-raycine (zie Voorbeeld XX) en triethylamine (12 mg) in 1,2 ml dimethyl sulfoxyde werd vermengd met 60 mg fenylformiaat en het mengsel werd ’ verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XLVIII, waardoor 86 mg 25 (opbrengst 97 fa) werden verkregen van de in de aanhef genoemde ver- nr _ binding als een vasts stof./C^/D = +71° (c 1, water-dimethylformamide , 1 ! 2).

Elementair analyse:

Ber. voor C^HggNgO^g.HCOOH 30 C 55,98 ; H 6,09 ; N 7,42$

Sev.: C 55,50 ; H 6,22 ; N 7,2¾¾

Voorbeeld LVIII

Bereiding van 3,2* ,S,-tri-N-benzylcxycarbonyl-6,-N-methyl-3,,-N- trifluoracetyl-tobramycine.

35 Een oplossing van 80 mg S^'jS'-tri-N-benzyloxycarbanyl-S'—N- nethyl-tobramycine (zie Voorbeeld XXI) en triethylamine (12 mgj in 1,2 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 30 mg ethyl trifluorace-taat, en hst mengsel werd daarna verwerkt op dezelfde manier als in 7907892 - 62 -

Voorbeeld XXXIII, waardoor 97 mg (opbrengst 98 $) werden verkregen van het mono-trifluoracetaat van de in de aanhef genoemde verbinding als een waste stof./oC/g^= +60° (c 1, water-dimethylformamide,. 1 : 2).

Voorbeeld LIX

5 Bereiding van 3,2’ ,6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluorace- tyl-dibekacine.

Een oplossing van 82 mg 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbanyl-dibeka- cine (zie Voorbeeld XXUl) in 1 ml dimethylsulfoxyds werd vermengd met 3G mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd verwerkt oo de- 10 zelfde manier als in Voorbeeld XXXJJLL, waardoor 100 mg (opbrengst 98 fa) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbinding als · 25 o een vaste stof. /öC/q = +61 (c 1, water-dimethylformamids, 1:2), Elementair analyse:

Ber. voor C^Hg^NgO^gF^.CFgCOOH 15 C 51,93 ; H 5,21 ; N 6,58$

Gev.: C 51,84 ; H 5,38 ; N 7,47$

VoorbeeldLX

Bereiding van 3,2',6’,3"-tetra-N-trifluoracetyl-dibekacine.

Een mengsel van 71 mg 3,2'jö’-tri-N-trifluoracetyl-dibekacine 20 en 30 mg ethyl trifluoracetaat in 1 ml dimethylsulfoxyde liet men een nacht lang bij 40 G staan.Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 90 mg (opbrengst 99 fa) werden verkregen van de in de aanhef genoemde ver- 25 o binding als een vaste stof./ = +70 (c 1, water-dimethylformamide 25 ,1:2).

Elementair analyse: 3sr. voor C26H33M501aF12.CF3C00H: C 35,42 j.H 3,61 ; N 7,38$

Gev,: C 35,40.; H 3,89 ; N 7,17$

30 Voorbeeld LXI

3ereiding van 3,2’,6r-tri-N—benzyloxycarbcnyl-3”-N-formyl-dibskacine.

Een mengsel van 79 mg 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbcnyl-dibekacine en 60 mg fenylformiaat in 1,1 ml dimethylsulfoxyde werd verwerkt op 35 dezelfde manier als in Voorbeeld XLVIJJL, waardoor 84 mg (opbrengst 98 $j werden verkregen van hst mcno-formiaat van de in de aanhef genoemde verbinding, als een vaste stof./ /g^- +70° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

7907892 - 63 -

Voorbeeld LXU

Bereiding van 3,2',6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-3,,-fC-dichlccr-acetyl-dibekacine.

Een oplossing van 84 mg 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-dibeka-5 cine in 1,2 ml dimethylsulfoxyde werd tot reactie gebracht met 25 mg methyl dichlooracetaat op dezelfde manier als in Voorbeeld XLLX, waardoor 104 mg (opbrengst 97 $) worden verkregen van het in de aanhef genoemde mono-dichlaoracetaat als een vaste stof,/p</g = +59° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

10 Voorbeeld LXUI

Bereiding van 3,2' ,6f-tri-M-benzyloxycarbonyl-6,-N-methyl-3"-!'J-trifluoracetyl-dibekacine.

Een oplossing van 85 mg 3,2,,S,-tri-N-benzyloxycarbonyl-5,-iM- methyl-dibekacine (zie Voorbeeld XXIV] in 1 ml dimethylsulfoxyde 15 werd vermengd met 30 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 103,5 mg (opbrengst 98 $) werden verkregen van de in de aanhef genoemde 25 o mono-trifluoracetaat verbinding als een vaste stof= +60 (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

20 Voorbeeld LXIV

Bereiding- van 3,2,-di-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-f ormyl-kanamy-cine G.

Een oplossing van 81 mg 3,2'-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine C (zie Voorbeeld XXV) en triethylamine (14 mg) in 1,5 ml dimethyl-25 sulfoxyde werd vermengd met 90 mg ethylformiaat, en het verkregen mengsel werd behandeld op dezelfde manier als in Voorbeeld XLVIII, waardoor 85,5 mg (opbrengst 95 $J werden verkregen van de in de nc aanhef genoemde monoformiaat verbinding als een vaste stof. /ec/i = +81° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

30 Voorbeeld LXV

Bereiding van 3,2' ,6*-tri-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluorace-tyl-sisomicine.

Een oplossing van 82 mg 3,2',6’—tri-N-benzylaxycarbonyl-siso-micine (zie Voorbeeld XXIX) in 1,5 ml dimethylsulfoxyde werd ver— 35 mengd met 30 mg ethyl trifluoracetaat, en het mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXÏII, waardoor 99 mg(opbrengst 97 $) werden verkregen van de in de aanhef genoemde mono-trifluor-acetaatverbinding als een vaste stof./Ct/^ = +151° (c 1, water-di- 790 78 92 4 -64- methylformamide, 1:2),

Voorbeeld LX VI

Bereiding van 3,2* }6,-tri-t\I-benzyloxycarbonyl-3,,-N-trifluor-acetyl-netilmicine.

5 Een oplossing van 85 mg 3,2'jS'-tri-N-benzyloxycarbonyl-netil- micine in 1,3 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 30 mg ethyl tri- fluoracetaat, en bet mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in

Voorbeeld XXXIH, waardoor 103 mg (opbrengst 98 Ββ>) werden verkregen van de in de aanhef genoemde .mono-trifluoracetaatverbinding als een 25 o 10 vaste stof, /p(/q = +145° (c 1, water-dimethylfarmamide, 1 : 2),

Voorbeeld LXVII

Bereiding van 3,S,-di-N-benz-yl0xycarbonyl-3"-N-trifluoracetyl-* gentamicine B.

Een oplossing van 72 mg SjS’-di-K'-benzyloxycarbonyl-gentamicine 15 B in 1*2 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 30 mg ethyl trifluor-acetaat en het mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld ΧΧΧΠΙ, waardoor 91 mg (opbrengst 99 °/a) werden verkregen van de in de aanhef genoemde monortrifluoracetaatverbinding als een vas- 25 o te stof, /öC/q - +92° (c 1, water-d'imethylformamide, 1:2).

20 Voorbeeld LXVIII

Bereiding van 3,2' ,6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-3"-4lj-trifluor-acetyl-gentamicina en mengsel.

Een oplossing van 3,2'jS’-tri-W-benzyloxycarbonyl-gentamicine en mengsel in 1,5 ml dimethylsufoxyde werd vermengd met 30 mg 25 ethyl trifluoracetaat, en het verkregen mengsel werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIII, waardoor 101 mg werden'verkregen van de in de aanhef genoemde mono-trifluoracetaatverbinding als 25 o ** een vaste stof./0(/^ = +87 (c 1, water-diraethylfomamide, 1 : 2).

Voorbeeld LXIX

30 Bereiding van 3,2*jS’-tri-M-benzyloxycarbonyl-S'^’-didesoxy- 3' -eno-3”-N-trifluoracetyl-kanamycine 9.

Een mengsel van S3 mg 3,2'je'-tri-M-benzyloxycarbonyl-S’,4'-di-desoxy-3'-eno-kanamycine B (zie Voorbeeld XXVHI) en 35 mg ethyl trifluoracetaat in 1,2 ml dimethylsulfoxyde liet men een nacht lang 35 bij kamertemperatuur staan.Vervolgens werd de reactieoplcssing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIU, waardoor 99,5 mg (opbrengst 96 °4) werden verkregen van de in de aanhef genoemde mono-trifluoracetaatverbinding als een vaste stof./cC/^s +25“' (c 1, ' 790 7 8 92 water—dimetbylformaldehyde, 1 : 2).

- 65-

Voorbeeld LXX

Bereiding van 3,6,-di-N-benzyloxycarbanyl-3‘,-desoxy-3"-N-farmyl-kanamycine A.

5 Een oplossing van 90 mg 3,6'-di-N-benzylcxycarbonyl-3'-desoxy- kanamycine A in 0,8 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 13 mg N-formylimidazol, en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De reactieoplossing werd vermengd met een kleine hoeveelheid mierezuur en daarna behandeld met ethylether, zoals in 10 Voorbeeld XXXHI, waardoor 94 mg (opbrengst 95$) werden verkregen van de in de aanhef genoemde raonc-formiaat verbinding als een vaste stof.

Voorbeeld LXXI

Bereiding van 3,6* ,3,,-tri-N-acetyl-kanamycine A.

15 Een mengsel van 3,5*-di-N-acetyl-kanamycine A en 20 mg (1,03 molaire hoeveelheid per mol van het uitgangsmateriaal) N-acetyl-imidazol in 1 ml dimethylsulfoxyde werd 3 uur onder koelen geroerd, waarna men het een nacht lang bij kamertemperatuur liet staan.De - · reactieoplossing werd alkalisch ingesteld door vermengen met 0,3 ml 20 23$-ige waterige ammoniak, waarna men hem 3 dagen bij kamertempera tuur liet staan.Het verkregen reactiemengsel werd behandeld met-ether 'waardoor een in ether onoplosbare stroop werd verkregen.De stroop werd opgenomen in water en daarna door een kolom Cf«-Sephadex C-25 (fJH^-vorm) gevoerd.De harskolcm werd ontwikkeld met 0,Q5n waterige 25 ammoniak.De fracties met het gewenste product, die geëlueerd werden, werden met elkaar gecombineerd cn tot droog geconcentreerd.Hst concentraat werd opgenomen in water, en de waterige oplossing werd ge-? neutraliseerd met azijnzuur en weer tot droog geconcentreerd, waardoor 109 mg (opbrengst 90 $} werden verkregen van de in de aanhef 30 genoemde verbinding als een vast product./csC/^s +98° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).

Elementair analyse:

5er. voor G^H^N^O^.CHgCOOH.HgO

C 45,34 } H 7,02 ; N 8,14¾¾ 35 Gev.: C 45,22 ; H 7,20 j N 3,11$

Voorbeeld LXXII

Synthese van 1-M-(l_-4-amine-2-hydroxybutyryl)-kanamycine A (amikacine).

7907892 -Beta) Bereiding van SjS'-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A, (i) Een suspensie van 2,0 g (4,13 mmol)kanamycine A(vrije base) in een gemengd oplosmiddel van dimethylsulfoxyde (50 ml) en tetrahy-drofuran (20 ml) werd vermengd met 4 g(l8,1 mmol) zink(U|acetaat 5 dihydraat en het* verkregen mengsel werd bij kamertemperatuur geroerd tot het reactiemengsel een homogene oplossing vormde.Het gesuspendeerde kanamycine A had 4-5 uur nodig om on te lossen onder vorming van een kanamycine A-zink kation complex.De verkregen oplossing werd dan gekoeld tot 0°C en aan deze oplossing werd druppelsgewijze in 10 een uur een koude oplossing ( van 0°C) toegevoegd van 2,37 g (9,5 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide in 40 ml van een gemengd oplosmiddel van tertahydrofuran-dimethylsulfoxyde (1:1 vol),Daarna liet men de reactieoolnssing 4 uur staan bij kamertemperatuur.Geduren de deze periode werd het zink complex van kanamycine A gebenzyloxy-15 carbonyleerd.De verkregen reactieoplossing werd onderworpen aan sili-ciumdioxyde gel dunne laag chromatografie met gebruikmaking van een ondersts laag van chlaroform-methanol-28l}3-ig8 waterige ammoniak (1:1:1 vol) als het ontwikkelings oplosmiddel, en daarbij werd waargenomen j dat de siliciumdioxyde gel olaat een hocfdvlek vertoonde 20 bij Rf 0,23 en twee of drie nauwelijks waarneembare nevenvlekken, die boven de hoofdvlek gelegen zijn en toegeschreven worden aan ande « re nevenproducten.

(ü) de reactieoplossing, die het R-benzyloxycarbonyl derivaat van kanamycine A-zink kation complex, als verkregen in de voorgaande 25 trap (i), bevat, werd uitgegoten in 500 ml ethylether en het neergeslagen olie-achtige product werd daarna gewassen met ethylether en wel een aantal keren, waardoor 8,8 g dik stroperig product werden verkregen, bestaande uit het N-benzyloxycarbonyl bevattende complex, (iii) Verwijdering van het zink kation uit het stroperige ccm-30 plex product geschiedde op de onderstaande wijze met gebruikmaking van een zwak zure kationenuitwisselingshars die carboxy-functies (-C00HJ bevat (Amberlite CG-50 hars (H+-vorm).

63 ml Amberlite CG-50 (H+-vorm) hars waren vooraf goed verzadigd met water-dioxan (2 : 1 vol).Een kolom werd met deze hars gs-35 vuld en daarna werd een oplossing van 1 g van het stroperige complex product in wster-dioxan(l:1 vol) door de kolom gevoerd, dis daarna werd ontwikkeld met water-dioxan (2:1 vol), waarin 1$ azijnzuur.3e geëluesrde fracties, die het gewenste product, 3,6'-di-N-benzyloxy-carbanyl-kanamycine A, bevatten, positief op ninhydrine, liepen het 7907892 - 67 - eerst uit de kolom, en daarna werden de fracties die zinkacetaat bevatten, en positief waren oo kleuren met difenylcarbazide, verzameld en tot droeg geconcentreerd, en het concentraat werd gewassen met ethylether, waardoor 340 mg (opbrengst S1$J werden verkregen aan 5 3,5’-di-M-benzylocycarbonyl-kansmycine A in de vorm van een kleurlc- pc; μ ze vaste stof ./ctd/ip= +73 (c 1, water-dimethylformanide, 1 : 2;. Elementair analyse:

3er. voor C^H^^O^.SCHgGa^.HgO

G 51,23 ; H S,56 ; N 6,29$ 10 Gev.: C 51,32 ; H 6,71 ; N 6,22$ (b) Bereiding van 3,5,-di-N-benzyloxyccrbonyl-3"-N-trifluor-acetyl-kanamycins A trifluoracetaat.

Het in de bovenstaande methode (a) verkregen product werd ver- werkt co dezelfde manier als in Voorbeeld XXXIU, maar met tosvee-15 ging van 1,5 molairs hoeveelheid triethylamins, waardoor da in ds aanhef genoemde verbinding werd verkregen.

(cj Bereiding van 1-f!-(L-4-amino-2—hydrcxybutyrylj-ksnamycins A. Een oplossing van 60 mg 3,6’-di-N-benzyloxycarbonyl-3"-H-trif l'j nr ace ty 1-kan amyci ne A trifluor acetaat, als verkregen in de 20 voorgaande methode (bj in 1,5 ml water-tetrahydrefuran (l: 1 vol) werd vermengd met 7 mg watervrij natriumcarbonaat, gevolg door toevoeging van 23 mg N-hydroxysuccinimide ester van L-4-bsnzyloxycarbc-nylamino-2-hydroxyboterzuur, en het mengsel liet men 10 uur bij kamertemperatuur staan.

25 De aldus verkregen reactieoplossing werd tot een klein volume geconcentreerd en vermengd met water, waardoor een vast neerslag werd verkregen.De vaste stof werd oogenomen in 3 ml 2n waterig amno-niak-tetrahvdrofuran (5:3 vol} en de oplr-ssing liet men een nacht lang bij kamertemoeratuur staan om de verwijdering van de 3"-M-30 trifluoracatylgroep tot stand te brengen.Het reactiemengsel werd tot droog geconcentreerd waardoor een vast residu werd verkregen.Dit vaste residu werd cogelost in 4 ml water-dioxan (1:1} en de oolossing werd zwak zuur ingestsld dorr toevoegen van een heel kleine hoeveelheid azijnzuur, en onderworpen ‘aan katalytische hyrirogenolyse met 25 waterstof bij atmosferische druk gedurende sén uur in aanv.ezicheirf van palladium zwart katalysator cm ds verwijdering van de benzyloxy— carbcnylgrcsosn tot stand te brengen«Dg verkregen reactisomlrosing werd gefiltreerd en geconcentreerd en het concentraat werd door een kolom van Cf.!—3sohsdsx C-25 (‘JH^1"—vormj gevoerd, die daarna gradient 7907892 - 68 - ontwikkeld wordt met 0-5>0,5n waterige ammoniak.De fracties, die het gewenste product bevatten, werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd waardoor 36 mg (opbrengst 89 $) werden verkregen van het monacarbonaat van het in de aanhef genoemde product.De > 5 fysisch-chemische eigenschappen en de sntibacteriële werkingen van dit product bleken volkomen identiek te zijn met die van een 'auten-tiek monster.

Voorbeeld LXXUI

Synthese van 1-N-((L)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-3,-descxy-10 kanamycine A.

(a) Bereiding van 3,6,-‘di~N~benzylaxycarbanyl-3,-desoxy-kanamycine A.

Een suspensie van 500 mg (1,07 mmol) 3*-desoxy-kanamycine A (vrije base) in 12 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 1 g (4,55 15 mmol) zinkacetaat dihydraat, en het verkregen mengsel werd geroerd tot het een homogene oplossing had gevormd.Aan deze oplossing werd een oplossing toegevoegd van 610 mg (2,45 mmol) N-benzyloxycarbony1-oxysuccinimide in 5 ml dimethylsulfoxyde-tetrahydrofuran (l:1 vol), en de reactiecplossing liet men daarna een nacht lang bij kamertem-20 peratuur staan,Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt op nagenoeg dezelfde manier als in Voorbeeld LXXII (a)( (iii), waardoor 765 mg (opbrengst 82$) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbinding in de vorm van een kleurloze vaste stof. /ci/jf- +76° (c 1, water-dimethylformamide, 1:2).’ 25 Elementair analyse: 8er. voer C34H4SN4ai4*2CH3G02H*H20 G 52,16 j H 6,60 j N 6,40$

Gev.: G 51,99 ; H 6,75 ; N 6,20$ (b) Bereiding van 3,6,-di-N-benzylaxycarbonyl-3,-desoxy-3"-N- 30 'trifluoracetylkanamycine A triflucracetaat.

Het in de voorgaande methode (a) verkregen product werd verder verwerkt zoals in Voorbeeld XLVII, waardoor de in de aanhef genoemde verbinding werd verkregen.

(c) Bereiding van l-N-fL-i-amino-E-hydroxybutyrylJ-S^-desoxy- 35 -kanamycins A.

Een oplossing van 50 mg S^’-di-N-benzyloxycarbonyl-S'-desoxy-3l,-N-trifluoracetyl-kanamycine A triflucracetaat als verkregen met de methode van voorgaande trap (b) in 1,5 ml water-tetrahydrofuran (l : 2 vol) werd vermengd met 5 mg watervrij natriumoarbonaat, ge- 7907892 - 59 - valgd dc~r toevoegen van 23 mg N-hydrcxysuccinimide ester van L-4-cninc-2-hydroxyboterz'Jur.Het mengsel liet men 2 uur bij kamertemperatuur staan.3e reactiecplassing werd tot een klein volume geconcentreerd en vermengd met water, '.veerdoor een vast neerslag v.-erd ver-5 kregen.

De vaste stof -werd vermengd met 3 ml 2n waterig aomoniak-tetra-hydrofuran (1:1 volj en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan er? ds verwijdering van de 3"-r.'-trifluorac9tyl-groep tot stand te brengen.De reactieoolossing werd tot droog gecon-10 centreerri waardoor een vast residu werd verkregen, en dit residu werd vermengd met 4 ml water-dioxan [1:1 vol].De oplossing werd zwak zuur ingesteld door toevoegen van een heel klein volume azijnzuur en onderworpen aan hydrogenolyse met waterstof onder atmosferische druk gedurende één uur met palladium zwart katalysator cm de verwijdering 15 van öenzyloxycarbonylgroeoen tot stand te brengen.Vervolgens werd de hydrcgelolyse rsactieoplossing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXH (c), waardoor 30 mg [opbrengst 57 pj werden verkregen van de in de aanhef genoemds verbinding als zijn monocarbonaat monehydrast.+89J [c 1, water).

20 Voorbeeld LXXIV

Synthese van 1-N-(L-4-aminα-2-hydroxybutyrylJ-3,,4’-didesoxy-kanamycine A.

Een oplossing van 70 mg Sjö'-di-N-benzyloxycarbanyl-S’,4*-di-desoxy-S^-ri-trifluoracetyl-kanamycine A trifluoracetaat, als verkrs-25 gen in Voorbeeld Lil, in 2 ml water-tetrslbydrcfuran (l:2j werd vermengd met 9 mg watervrij natriumcarbonaat, gevolgd door toevoegen van 22 mg h'-hydroxysuccinimide ester van L-4-emino-2-hyriroxyboter-zuur.Het mengsel liet men 10 uur bij kamertemperatuur staan.De reac-tiecplossing werd geconcentreerd tot een klein volume en met water 33 vermengd waardoor een vast neerslag werd verkregen.

De vaste stof werd vermeng met 4 nl van een gemengd oplosmiddel van 3n waterig ammoniak—tetrahydrcfuran (l:2j en het mengsel list men een nacht lang bij kamertemperatuur staan,De rcactiecplossing were tot droog geconcentreerd waardoor een vast residu werd verkregen 35 Hat residu word vermengd met S ml v;atsr-dicxan( 1:3j en de oplossing werd z"’a:x zuur ingesteld door toevoegen van een heel klein volume azijnzuur en vervolgens onderworpen aan hydregsnolyse met waterstof bij atmosferische druk gedurende 1,5 uur met palladium zwart katalysator. Vervolgens werd de rsactieoplossing verwerkt op dezelfde wijze 7907892 - 70 - ‘ . als in Voorbeeld LXXII (c), waardoor 42 mg (opbrengst 91 %) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbinding als zijn monacar- nc n bonaat. /öC/0 = +9Ί (c 1, water).

Voorbeeld LXXV

5 Synthese van 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-tobramycine.

(a) Bereiding van 3,2'jS’-tri-N-benzyloxycarbcnyl-tobramycine.

Een suspensie van 430 mg (1,03 mmol) tobramycine (vrije base) in 12 ml dimethylsulfoxyde werd'vermengd met 1 g(4,55 mmol) zinkace-taat dihydraat, en het mengsel werd één uur geroerd.Aan de reactie-10 oplossing, die het tobramycine-zink kation Gomplex bevatte, werd druppelsgewijze in ongeveer êên uur een oplossing toegevoegd van. 850 mg (3,4 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide in 10 ml tetrahydro-furan-dimethylsulfoxyde (1:1 vol), en het zo gevormds reactiemengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De verkregen reac-15 tieaplossing werd behandeld met een groot volume ethylether op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXII (a) (ii), waardoor een dik stroperig product werd verkregen, dat bestaat uit het N-benzyloxycarbo-nyleerde tobramycine-zink complex.Vervolgens werd het stroperige complex product verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXII (a) 20 (iii), behoudens dat de verhouding van water-dioxan(2:1) gewijzigd werd in 1:2 vol.810 mg (opbrengst 78 %} van het in de aanhef genoem- i de product in de vorm van een kleurloze vaste stof werden verkregen. /öl/D = +65 (c 1, water-dimethylformamide, 1 ::2).

Elementair analyse: 25 Ber. voor Ο^Η^^Ν^Ο^^ΟΗ^ΟΟρΗ.Η^Ο C 54,81 ; H 6,50 ; N 6,95 %

Gev.: C 54,77 ; H 6,71 } N 6,88% (b) Bereiding van 3,2',6,-tri-N-benzyloxycarbcnyl-3"-N-formyl-tobramycine monoformiaat.

30 Het in de voorgaande methode (a) verkregen product werd verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LVXI, waardoor de hierboven genoemde verbinding werd verkregen.

(c) Bereiding van 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-tobramycine.

Een oplossing van 100 mg 3,2’ ,6,-tri-N-benzylaxycarbonyl-3,,-N- 35 formyl-tobramycine monoformiaat, verkregen in de voorgaande trap (b) in 3 ml water-tetrahydrofuran(1:3), werd vermengd met 12 mg watsrvrij natriumcarbonaat, gevolgd door toevoegen van 40 mg N-hydroxysuccinim-ide ester van (L)-4-henzyloxycarbonylaminc-2-hydroxyboterzuur.Het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.Oe zo gs- 7907892 - 71 - vormde reactisoplossing werd tct sen klein volume geconcentreerd en vermengd met water, waardoor zich een vast neerslag vormde,

De vaste stof werd gesuspendeerd in 2 ml 101-ig waterig waterstof peroxyde, en ds suspensie werd krachtig geroerd bij 50¾ gedursn·*· 5 de 3 uur en dan gefiltreerd waardeer een vast residu werd verkregen dat het de-M-farnyl derivaat bevatte.Hst vaste residu werd osgenomen in 3 nl water—dioxanf1:3) en de oplossing werd zwak zuur ingesteld door toevoegen van een heel klein volume azijnzuur en onderwerpen aan hydrcgenolyse bij atmosferische druk gedurende 1,5 uur met palladium 10 zwart katalysater.Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt co dezelfde manier als in Voorbeeld LXXEI (c) en door de C”-Seohadex C-25 kolom gevoerd, die daarna gradient ontwikkeld werd met Π -^1n waterige ammoniak.3e fracties, die het gewenste product bevatten, werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd, waardoor 15 57 mg (opbrengst S7jJ van het in de aanhef genoemds product als zijn dicarbonsat dihydrsat worden verkregen.fo(fr^= +78 (c 1, water).

Voorbeeld LXXVI

Synthese van 1-i\'-(L-4-.arainc—2-hydroxybutyryl]-dibekacine.

(aj Bereiding van 3,2* jS’-tri-N-fcenzyloxycarbonyl-dibekacine.

20 600 mg (1,33 mnol} dibekacine (vrije base) werden vermengd met 15 ml dimsthylsulfoxyds onder roeren.0e oolossing werd vermengd met 1,4 g (5,4 nmolj zinkscstaat dihydraat onder roeren.Aan de oplossing werden onder'roeren druppelsgewijze in één uur 1,1 g (4,4 mnol] N-benzyloxycsrbonyloxysuccinimide in 12 ml dimsthylsulfoxyde toegs-25 voegd en men liet het mengeel een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De verkregen reactiecolossing werd daarna vermengd met een groot velume ethylether, waardoor een olieachtige afzetting werd verkregen, die in hoofdzaak bestond uit het gewenste -product en een hoeveelheid diraethylsulfcxyde.Oe verkregen oiie-achtige afzetting 30 werd afgescheiden van de bovenstaands vloeibare fase en verder gewassen met ethylether, waardoor een dik stroperig product werd verkregen Het streperoge product werd herhaalde malen met water gewassen. Door deze behandeling met water werd de oorspronkelijk aanwezige o-vermaat zinkacetaat verwijderd en ock werd het N-gsbenzyloxyca'rhonyl-35 eerde zink complex afgebroken, waardoor 1,1 g wateranoplosbasr vast residu '"srdsn verkregen,Deze vasts stof leverde een enkele vlek bij Hf 3,13 in een'siliciumdicxyde gel dunne laag chrcratogrsfie, ontwikkeld met de onderste fase van chlorzforw-riethsnal-ISu-dg waterig em;.:snick( 1:1:1 vel) als hst ontwikkslings oplosmiddel sn bestond uit 7907892 - 72 - vrijwel zuiver 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-dibekacine samen met een spoor zink dat daarin zat opgenomen./o^/jT = +71 (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2).Wanneer de vaste stof echter werd gewassen met een 3 molaire waterige ammoniak oolossing, werd zuiver 5 product zonder verontreiniging door zink 'kationen verkregen.

(b) Bereiding van 3,2' ,6,-tri-N-benzyloxycarbonyl-3"-^!-tri-.', fluoracetyl-dibekacine trifluoracetaat.

Het product van de bovenstaande methode (a) werd verwerkt zoals in Voorbeeld LIX, waardoor de in de aanhef genoemde verbinding werd 10 verkregen.

(c) Bereiding van 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-dibekacine.

Een oplossing van 170 mg 3,2',6'-tri-l\l-benzyloxycarbanyl-3"-N- trifluoracetyl-dibekacine trifluoracetaat, verkregen volgens de voorgaande trap (b] in 5 ml water-tetrahydrofuran (l:3j werd ver-15 mengd met 18 mg watervrij natriumcarbanaat', gevolgd door toevoegen van 60 mg N-hydroxysuccinimide ester van (s)-4-banzylaxycarbonylami-no-2-hydroxybaterzuur, en het mengsel liet men 9 uur bij kamertemperatuur 5taan.De reactieoplossing werd tot een klein volume geconcentreerd en met water vermengd waardeer een vast neerslag ontstond.

20 De vaste stof werd vermengd met 12 ml 4n waterig ammoniak-tetra- hydrofuran (1:3) en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De reactieoplossing werd daarna tet droog geoon-j centreerd waardoor een vast residu werd verkregen.De verkregen vaste stof werd,opgelost in 12 ml water-dioxan (1:3) en de-oplossing 25 werd zwak zuur ingesteld door toevoegen van een heel kleine hoeveelheid azijnzuur en onderworpen aan hydrogenolyse bij atmosferische druk gedurende 1,5 uur met palladium zwart als katalysator,Vervolgens werd de reactieoplossing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXV (cj, waardoor 96 mg (opbrengst 89 ia) werden verkre-30 gen van de in de aanhef genoemde verbinding als zijn dicarbonaat.

+86° (o 1, IV ater).Er werd waargenomen, dat de fysisch-che-mische eigenschapnen en de antibacteriële werkingen van dit product semenvielen met die van een autentiek monster(ü.of Antibiotica, 25, blz.412(1973)).

35 Voorbeeld LXXVTT

Synthese van 1-N-(0L-3-amino-2-hydroxypropionyl}-dibskacine, d.w.z. 1-N-DL-iso sery1-di bekaci ne,

Een oplossing van 150 mg 3l2%6,-tri-N-benzyloxycarbcnyl-3,,-f!-trifluaracetyl-dibekacine trifluoracetaat uit Yoorbeeld LIX in 5 ml 7907892 - 73 - water-tetrahydrcfuran (1:3] -werd vermengd met 1S mg watervrij nstri-umcarbonaat, gevnlgd dorr toevoegen van 51 mg fl-hydroxysuccinimide ester van DL-3-benzyloxycarbonylaminQ~2-hydraxyprcpionzuur(d.w. z. DL-3-benzylaxycarbanyl-isaserinej.Het mengsel liet men 10 uur bij 5 kamsrtemeratuur staan.Vervolgens werd ris rsactiscplossing verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXVI (c}} waardoor 82 mg (opbrengst 88 werden verkregen van de in de aanhaf genoemde verbinding als zijn dicarbonaat./^/q5= +82j (c 0,32, water}.

De fysisch-chenische sigenschaooen en de antibacterisle wer-10 kingen van dit product bleken identiek te zijn met dis van een auten-tiek monster.

Voorbeeld LXXVIH

Synthese van 1-?'-(L-4-eminc-2-hyriroxyhutyryl}—dibekaoine. fa] Bereiding van 3,2* ,Sf-tri-‘.!-p-osthoxybsnzylcxycarbcnyl-15 dibekaoine.

500 mg (1,11 mmolj dibekaoine (vrije basej werden gesuspendeerd in 15 nl dimethylsulfoxyde en de suspensie werd geroerd cm een oplossing te vormen, waaraan 1,2 g (5,5 mmoll zinkacataat dihydraat onder roeren werden toegevcegd.Aan de verkregen rsactieoolossing werd'in * 20 30 min onder roeren een oplossing tcegsvoegd van 1,17 g (3,86 mmolj p—methaxy—carbobenzcxy p—nitrcfenylester, oogelost in 10 ml dimethyl— sulfoxyde, en het mengsel liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan.De verkregen oplossing werd dan verwerkt op dezelfde manier als in Voorbeeld LXXVI (a] -waardoor 883 mg (opbrengst 65$) van 25 de in de aanhef genoemde verbinding werden verkregen.Ις/ίΙ{^= +69' (c 1, water-dimethylformamide, 1:2], (bj Bereiding van 3,2’,S’-tri-ri-p-methcxybenzyloxycarbonyl-S"--N-trifluoracety1-dibekaci ne triflu oracetaat.

Een oplossing van 160 mg 3,2*,6*-tri-M-p-methoxybenzyloxycarbc-30 nyl-dibekacine in 2 ml dimethylsulfoxyde werd vermengd met 48 mg ethyl triflu er acetaat, en hst mengsel werd verwerkt op dezelfde, manier als beschreven in Voorbeeld XXXIII, waardoor 133 mg (cobrsngst 96$) van de in de aanhsf genoemde verbinding -werden verkregen als een vasts stof·/pL/rjW= +53 (c 1, water-dimethylformamide, 1 : 2;.

35 (cj Bereiding ven 1— M— fi__,ii—anino—2— hydroxybutyryl}—dibekac'ne.

Een colosoing van 3,2* ,3* —tri—ïi—o-msthcxybonzyloxycarbcoyl—3"'--2-trifluorccotyl-riibekacins triflucracetae.t, verkregen in de voorgaande trap (bj, oogelost in 5 ml watsr-tetrr.hydrcfurzn (''·:3j -"rd vermengd met 14 mg -.stervri i natriumcarbonaat, gevolgd door teevee— 7907892 - 7A - g8n van 54 mg N-hydroxysuccinimide ester van (s)-4-(p-methoxybenzyl-oxycarbonyl)-amino-2-hydroxyboterzuur, en hst mengsel liet men 8 uur bij kamertemperatuur staan.De reactieoplossing werd geconcentreerd tot een klein volume en werd vermeng met water, waardoor een vast 5 neerslag ontstond, ·

Aan de vaste stof werd een oplossing toegevoegd van 1n HC1 in waterige methanol (1:3, 6ml) en het mengsel werd verwarmd op 60°C gedurende 4 uur om de p-methoxybenzyloxycarbonylgroep te verwijderen. De oplossing werd geconcentreerd tot een klein volume, waaraan 5n 10 waterige ammoniak werd toegevoegd tot de oplossing een pH had van 10.

De oplossing liet men een nacht lang bij kamertemperatuur staan en de oplossing werd geconcentreerd, waardoor een residu werd verkregen. Het residu werd apgelost in water en de oplossing werd op een kolom van CM-Ssphadex G-25 (NH4+ vorm} gebracht, die grondig 'werd'gewassen 15 met water en daarna gradisrit werd ontwikkeld met 1n waterige ammoniak.De fracties, die het gewenste product bevatten, werden met elkaar gecombineerd en tot droog geconcentreerd, waardoor 7? mg (opbrengst 87$) werden verkregen van de in de aanhef genoemde verbin-r oe _ ding als zijn dicarbonaat./o(/j = +85° (c 1, water).

7907892

Claims (14)

1. 2. Vsrkwljze volgens conclusie 1,met het kenmerk, dat men als net zink kationen te ccmplexeren aminoglycosidisch antibioti- 25 cum gebruikt een 5-0-(2"-aninc- of 3,,-alkylanino-31,-dssoxyglycQsylJ--2-desoxystreptamine, desgewenst met esn 4-0-(aminoglycosylj-groeo. 3. '“erkwijze volgens conclusie 1 of 2, m e t het kenmerk, dat men als aminoglycosidisch antibioticum gebruikt: kanamycine A, S'-M-alkylkanamycine A, 31-risscxykanamy cins A, 6'-N-30 methyl-S'-desoxykanamycina A, 4'-deccxykanamycine A, 6*-?!-nethyl-4'— —desoxykanamycine A, 3’,4.,-didescxykanamycine A, 6"-desoxy,ksn"iycine A, 4." ,5',-diriesoxy!ianamycine A, kanamycine 0, 3 * -de soxykanenycir» 0, ^-riascxykanamycine 3, 3' j^'-didecoxykanamycine 3, 3’,4'-did300xy-S’-snc-kanamycina 3, £'-k'-oethyl-S1,4'-riidsspxykansmycins 3, kanamy-23 cine 0, S’-doscxyk-nanycine 0, 3*,4*-didasoxykananycin3 3, gsntanl-cine Λ, gontanioine 3, genamicine C, verdanicino, siscricins of netilmioine. 4« Werkwijze volgens êên of meer van de vergaands conclusion,' 7907892 - 76 - met het kenmerk, dat men de vorming van het aminoglyco-sidische antibioticum-zink kation complex uitvoert, door zinkacetaat of zinkchloride in een hoeveelheid van 2,3-6. mol per mol van het aminoglycosidische antibioticum in een inert organisch oplosmiddel 5- te laten reageren, waarbij het oplosmiddel bestaat uit dimethylsulf-oxyde, waterig dimethylsulfoxyde, dimethylformamide, waterig dimethyl formamide, mengsels van dimethylsulfide en dimethylformamide, tetra-hydrofuran, waterig tetrahydrofuran, methanol, waterige methanol, ethanol of waterige ethanol, al dan niet met toegevoegd natriumace-10 taat.
2. 5. Werkwijze volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men een acyleringsmiddel gebruikt, waarin de acylgroeo bestaat uit een alkanoyl, aroyl, alkoxycarbonyl, aralkoxycarbonyl, aryloxycarbonyl, alkylsulfonyl, aralkylsulfonyl, 15 of arylsulfonylgroep, die bekend is als de amino-beschermende groep. 6. "'erkwijze volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men het acyleringsmiddel gebruikt in een molaire hoeveelheid, die gelijk is aan of iets groter is dan het aantal te acyleren aminogroepen in het aminoglycosidische anti— 20 bioticum- zink kation complex.
3. 7. Werkwijze volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men het complex van zink kationen met het selectief N-gsacylearde aminoglycosidische antibioticum derivaat één keer afscheidt uit het acyleringsreactiemengsel alvorens 25 men het laat reageren met een reagens voor het verwijderen van zink kationen uit dat complex.
4. 8. Werkwijze volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men het complex van zink kationen met het selectief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum deri- 30 vaat uit het acylerings reactiemengsel afscheidt door extraheren met een organisch oplosmiddel, verdampen van het organische oplosmiddel medium uit het acyleringsreactiemengsel of door verdunnen van het acylerings reactiemengsel met een verdunnend organisch oolosmiddel, vocrdat men het laat reageren met een reagens voor het verwijderen 35 van zink kationen.
5. 9. Werkwijze volgens één of meer van de vóórgaands conclusies·, met het kenmerk, dat men het comolsx van zink kationen met het selectief N-geacyleerde aminoglycosidische antibioticum dsri- 790 7 8 92 - 77 - vaat na het afscheiden vermengt met '.veter of een polair organisch oplosmiddel, al dan niet '.vat er vrij, dat dient als het zink kationen verwijderende reagens.
6. 10. Werkwijze volgens conclusie 9, m e t hst kenmerk, 5 dat men een polair organisch oolosmiddsl gebruikt, waarin ofwel hst zinkzout oplosbaar is maar waarin hst H-gescyleerde amincglycisidi-sche antibioticum derivaat onoplosbaar is, ofwel het zinkzout onoplosbaar is, maar hst N-geacyleerde smincglyccsidische antibioticum derivaat oplosbaar is. 10 11, Werkwijze volgens één cf meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men het complex- van zink kationen met het f.’-geacyleerde aminoglycosidischs antibioticum derivaat na de afscheiding opnieuw volledig oplest in een organisch oplosmiddel, dat een hoeveelheid water bevat, en de verkregen oplossing onder·--, sgxt 15 aan een chromstografische behandeling met een kationen uitwisselings hars, een anionsn uitwissalings hars, een chelaat uitwisselings hars of een wateronoplcsbaar polymeer met functionele groepen, die in staat zijn met een metaal te combineren, en dient als het zink kationen verwijderende reagens. 23 12, Werkwijze volgens één of meer van de voorgaande conclusies, met het kenmerk, dat men het acylerings rsactiomongsel direct voert door een kolom van een kationen uitwisselings hare, een anienen uitwisselings hars, een chelaat uitwisselings hars of een wateronoplcsbaar polymeer met mstaal-ccmbineren.de groepen, ter ad— 25 sorptia van het complex van zink kationen met hst M-gsacylssrds smi-noglycosidische antibioticum derivaat, en da kolom daarna ontwikkelt met een waterig organisch oplosmiddel, dat al dan niet ccn hoeveelheid zuur of base bevat, en het eluaat verzamelt in fracties en daarna de fracties, die het gewenste selectief N-geacyleerde aminoglycc-37! sidischs antibioticum derivaat bevatten, maar vrij zijn van zink-kat-ier.en, opwerkt,
7. 13. Werkwijze volgens één of meer ven de voorgaande conclusies, met hst k s n m s r k , dat men, -wanneer het ge-ensts M-geacyl-esrde aminoglycoeiriiscna antibioticum derivaat onoplosbaar of vrwj- 25 wel onoplosbaar is in -sier, Het acvlarinco rce.ciiomenm'ssl dirzoo met water vermengt, zodat het derivaat wordt neergeslagen vrij van hst zinkzout, dat in water cogslost blijft.
8. 14. Werkwijze volgens één of meer van da voorgaande conclusies, 7907892 - 78 - met het kenmerk, dat men het reactiemengsel behandelt met zwavelwaterstof, een alkalimetaalsulfide of een aardalkalimetaal sulfide, dat zinkkationen neerslaat als zinksulfide, of met ammonium hydroxyde, waardoor zink kationen worden neergeslagen als zinkhy-5 droxyde.
9. 15. Werkwijze voor de bereiding van een selectief beschermd N-gea-cyleerd derivaat van een aminoglycosidisch antibioticum, dat een 6-0-( 3"-amino- of 3,,-alkylamino-3"-desoxyglycosyl)-2-desoxystrept-aminegroep bevat, desgwenst een 4-0-(aminoglycosyljjroep, waarbij in 10 het derivaat de 1—amino groep van de desoxystreptamine groep onbeschermd is, maar alle andere aminogroepen in hst aminoglycoside molecuul beschermd zijn door dezelfde of verschillende acylgroeoen, met het kenmerk, dat men (a) een alkaancarbonzure ester met formule S, waarin Ra water- 15 stof of een dihalogeenalkyl- of trihalcgeenalkylgroep met 1-6 kool- b stofatomen is, en R een .alkoxygroeo met 1-6 koolstofatomen, een ar-alkoxygroep of een arylaxygroep, of een N-formylimidazal als het acy-leringsmiddel laat reageren in een inert organisch oolosmiddel met een partieel beschermd N-geacyleerd derivaat van het aminoglycosidi-20 sche antibioticum, waarin de 1-amino- en 3"-amino of 3"-alkylamino groepen onbeschermd zijn en alle andere aminogroepen beschermd zijn door een acylgroep als de amino-beschermende groen, waardoor de 3"-amino- of 3"-alkylaminogroep van het partieel beschermde N-geacyl-eerde derivaat selectief wordt geacyleerd met de acylgroep R'CO-25 van het acyleringsmiddel en daardoor het gewenste 1-N-onbeschermde en andere N-volledig beschermde derivaat van hst aminoglyccsidische antibioticum verkrijgt.
10. 16. Werkwijze volgens conclusie 15, met het kenmerk, dat men de alkaancarbonzure ester met formule S laat reageren met 30 het partieel beschermds N-geacyleerde derivaat van kanamycine A, 6*-N-alkyl-kanamycine A, 3'-desoxykanamycine A, 61-N-methyl-3'-des-oxykanamycine A, 4'-descxykanamycine A, S,-H-methyl-4,-descxykananiy-cine A, 3',4'-didesoxykanamycine A, 6”-desoxykansmycine A, 4^,61^ didesoxykanamycine A, kanamycine 3, S'-riesoxykanamycins B, 4'-des-35 oxykanamycine B, 3',4'-didesoxykanamycine B, 3'^'-didssoxy-S'-eno-kansmycine B, 6'-N-methyl-3',4'-riiriesoxykanamycins B, kanamycine C, 3'-desoxykanamycine C, 3',4'-didesoxykanamycine C, gentamicine A, gentamicine B, gentamicine C, verdamicins, siscmicine cf netilmicine. 7907892 - 79 -
11. 17. V/erkwijze volgens conclusie 15, m e t hst kenmerk, dat men als alkaancarbonzure ester met formule 8 gebruikt: msthylformiaat, sthylformiaat, butylformiaat, benzylfarmxaat, fenyl-formlaat, methyldichlooracetaat, ethyldichlooracataat, nsthyltri-5 chlooracetaat, fenyltrichlooracetaat, methyltriflunracetaat, ethyl- trifluoracetaat af fenyltrifluoracetaat. 13. 'Verkwi jze volgens conclusie 15, mat het kenmerk, dat men N-fcrmylimidazcl als acyleringsmiddel gebruikt.
12. 19. Merkwijze volgens één of meer van de conclusies 15-18, met 10 het kenme'rk, dat men het acyleringsmiddel laat reageren bij een temperatuur van -30°C tot +120°C gedurende 30 min tct 48 uur -in een inert organisch oplosmiddel dat bestaat uit dimsthylsulfoxyöe ,dimsthvlfermamide, hexamethylfcsforzuurtriamida, tetrahydrofuran, dioxan, acetonitrile, nitromethsan, sulfolan, dinethylacastsmids, 15 chloroform, dichlocrmethaan, methanol, ethanol, n-butancl, tert.butend, benzeen, tolueen of ethylether·, al dan niet watervrij.
13. 20, Verbeterde werkwijze voor de bereiding van een 1-fl-(cC-hydrcxy-Cü-amincalkancylj derivaat van een aminoglycosidisch antibioticum, dat een S-O-tS^-amino- of 3,,-alkylanina-3,,-desoxyglycosyl]-2-d3sexy- 20 etreotamins grcao bevat, met desgewenst een 4-0-(aminGglycosylJg~°ep, met het kenmerk, dat men [a] zink kstinnen last reageren met het aninoglycosidischs antibioticum in een inert organisch oplosmiddel, waardoor een complex wordt gevormd van zink katlenen met het amincglycoaidischs antz— 25 bioticum, (bj een acyleringsmiddel met een acylgrceq, die als amino-^--schermende groep moet worden ingevoerd, bevat, laat reageren met he-aminoglycosidische antibioticum-zink kationen ccmlex, dat in de voorgaande trap (a) is gevormd, en wel in situ in een inert orge-30 nisch oplosmiddel, waardeer een complex wordt gevormd van zink kationen met het selectief Π—geacylesrde derivaat van hst smincglycc dieche antibioticum, waarvan de oorspronkelijk niet-cscomolekssrde aminogroepan gsacylesrd zijn, t a «1··? —I irt (c) hat selectief FJ-geacylesrds aminoglycosidische antzozo>- -c^. > 25 derivaat—zink katlenen complex als verkregen in trap (bj leao ren met een reagens dat zink katlenen verwijdert uit het ΓJ-gsasylser-de zink complex, waardeer een partieel en selectief beschermd Γ·-3~"-eyleerd aminoglycosidisch antibioticum derivaat wordt verkregen, dat 7907892 - 80 - vrij is van zink kationen en waarin 1-amino- en 3"-amina- af 3"-al-kylaminogroepen onbeschermd zijn maar alle andere aminogroepen in het aminoglycosidemolecuul beschermd zijn door de acylgroep, (d) het in de voorgaande trap (c) verkregen partieel en selec-5 tief N-geacyleerde derivaat laat reageren met een alkaancarbonzure ester met formule 8, waarin Ra waterstof of een dihalogeenalkyl of trihalogeenalkylgroep met 1-6 koolstofatomen is en R° een alkoxy- groep met 1-6 koolstofatomen of een aralkoxygroep met 1-6 koolstof- atomen of een aryloxygroep is", of N-formylimidazol als acylerings- 10 middel in een inert organisch oplosmiddel waardoor de 3"-amino- of s 3"-alkylaminogroep selectief acyleert met de groep R CO- van het acyleringsmiddel waardoor het 1-N-onbeschermde en andere N-volledig geacyleerd beschermde derivaat wordt verkregen van het amincglyco-sidische antibioticum, waarin alle aminogroepen behoudens de 1-15 aminogrosp beschermd zijn door acylgroepen, (e) het 1-N-onbeschermde en overige N-volledig beschermde derivaat als verkregen in de voorgaande trap (d] laat reageren met een öt-hydroxy-fid-aminoalkaancarbcnzuur met formule 9, waarin m gelijk is aan 1 of 2, of een gelijkwaardig reactief derivaat daarvan, waar- 20 van de aminogroep al dan niet beschermd is, om de 1-aminograep van het 1-N-onbeschermde derivaat te acyleren, Cf) en dan de resterende amino—beschermende groepen uit het in - de voorgaande trap (e}. verkregen 1-N-acyleringspraduct verwijdert meb een gebruikelijke methode daarvoor. 790 7 8 92 • · I 6' H2NCH2 3' f 5 6| ' HO OH ' ' HOCHp / j—° / „Λ" . k"Uz Y s’ Η?Υά",-·' I / * I ' OH /++ 1 M++ 6' 3 H2NCH2 NH2 I-n j·-V NH, / \ / V *JiW—0—X/\ /¾¾ M \ m++ / M / hoch2 0 J— 0 / ' / \ / ^M++ 4" / \ / hoN^ //7 ^ ι/J ÖH - M++ 2 ZAIDAN HOJIN BISEIBUTSU KAGAKU KENKYU ΚΛΙ, Shinagawa-ku, Tokyo, Japan. 7907892 6* II r4-ch2 nh2 Ί»--- 3' 2' |, 5 I6 R? R y HOCH 0 Y\/ , 3» 1 D OH R5COOH 4a R^O-CO-Cl 4b r5o-co-o-c6h5-p-no2 4c 0
14. 5 As R^O-CO-O-N 4d r R50-C0-N3 4e R6SO,H ' 4f o ZAIDAN HOJIN BISEIBUTSU KAGAKU KENKYU ΚΛΙ, Shinagawa-ku, Tokyo, Japan. 7907892 CH?-R4a · NHR7 HI * . Jr \ Vf $-£- - -Ay H0CHo n7 tv NH„ /V . H0\|2 / , 3"“h r4-ch2 nh2 I Q j . NHCOOH(CH„)„Nh' H0-CH2 q ////// / ^ ^ IV HOOCCH(CH_) NH, I 2 n 2 7 OH Rac-Rb „ J HOOC-CH(CH~) NH_ I · ώ m 2 g OH ZAIDAN HOJIN BISEIBUTSU KAGAKU KENKYU KAI, Shinagawa-ku, Tokyo, Japan. 7907892