LU81881A1 - Procede de preparation d'un derive n-acyle selectivement protege d'un antibiotique aminoglycosidique - Google Patents

Description

V

La présente invontion concerne un procédé nouveau di préparalion d’un dérivé N-acylé sélectivement protégé d'un antibiotique aminoglycosidique, dans lequel certains aupes amino ou alkylamino, en des positions particuliè-P r.:.s de la molécule de 1 'aminoglycoside ont été sélective-tp-'.nt protégés ou bloqués par un groupe acyle. Elle concer-i>o donc un procédé nouveau de protection sélective de g,oupes amino ou alkylamino qui occupent des positions Particulières dans l'antibiotique aminoglycosidique. Son 10 application principale réside dans la préparation d'un dc-rivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique a!«inoglycosidique qui comprend une fraction désoxystrep-jarnine ayant un groupe 3"-aminoglycosylé lié à un groupe d -hydroxyle qu'elle contient dans la molécule d'aminogiv-c.-?ide. L'antibiotique aminoglycosidique auquel l'inven- y.on est applicable peut être défini de façon plus spéci~ ftque comme étant un antibiotique aminoglycosidique cons-i-, tué par une 5-0-*' 3!‘ -amino ou 3** -alkylamino -3" -dé soxvçiv-c,»syl) -2-ciésoxystreptamine, qui peut avoir facultativement v.·.: substituant 4-0-( 6 ' -aminoglycosyl ) , et l’or, peut cite-hr c.-mme exemples typiques les kanaroyc-ines, gentamycines, la ewsomycine, la nétiiœycine et la vero&myeine. L’invention ? ..brasse en outre une application de ce procédé nouveau la préparation d’antibiotiques i -N - Λ -hy cr a xy no - g.- fd.kanoyl ' -aninoglycosidiques , qui sont connus comme a-J · -r.ts sntib&c téri en ser.i -synthétiques utiles, actifs ,· ;>ntr? je? bacilles résistants, " Les antibiotiques aminoglycosidiques comme les i;e- ·· suive me s sont une substance contenant plusieurs îoneti^r.* , - * rinc· et r 1 u Sieur s font t:: or s hydrexyi e ayant 6 ? s décris - ? a c T i v i x. e relativement élevée et divers. Or. £ synthéti ?ό - nombreuses sortes d'antibiotiques amino glycosiôicues * ^îTsi-syntbéticuas dérivés c ’antic iotiques amnoglvcos^ r-- -.r, . St sruv;-· t nécessaire ou ‘rvérc df dc faire en =.wvr

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, -rts.ins groupes amine et/ou certains groupes hydroxy de' 'sut iri·: ; ique « r 1 η o e 1 ;» c o ? i ^ *· ς ιι e de départ a:, art été s-ί * * / « 2 lectivement protégés ou bloqués par un ou plxjsieurs groupes protecteurs appropriés.

On a mis «tu point diverses méthodes efficaces pour ‘ protéger sélectivement des groupes amino et/ou des grou- 5 Pes bydroxyle de la molécule d'antibiotique aminoglycosi-dique et elles ne posent pas de problème en ce qui concerne la protection sélective des groupes hydroxyle. Par contre, pour la protection sélective de certains groupes | amino particuliers dans le grand nombre de ceux que com- ji iO porte l'antibiotique aminoglycosidique, les procédés dont (( on dispose actuellement sont d'une mise en oeuvre diffi cile ou nécessitant des opérations compliquées. La raison en est que tous les groupes amino de l'antibiotique ami-noglycosidique ne présentent entre eux que peu de diffé-15 rences en ce qui concerne leur- réactivité. Une illustration de ce problème est fournie par le groupe ό'-amino de la kanamycine A. Ce groupe amino ou méthvlamino, qui est lié a un certain atome de carbone lui-même lié à un seul atome de carbone dans la molécule d'aminoglycoside 20 possède une réac\ivité supérieure à celle d'un groupe amino ou méthyla:.-.ino lié à un certain atome de carbone lui-même lie à deux atomes de carbone ou plus dans la même molécule. Pour cette raison, le groupe amino ou tné-thylaramo premier cité peut réagir de façon beaucoup plus 25 préférentielle a\ec un agent d'acylation,comportant un * groupe acyie à introduire comme groupe amino-protecteur, que ne peut le foire le groupe amino ou tnéthylatnino der-^ nier cité, d'où .·,! résulte que le dérivé N-protégé dans I lequel le groupe premier cité est blooué préférentiel1e- 30 ment par le gfot e acyle· peut être obtenu avec un rendement bien supérieur à celui qu*ii est possible d'obtenir ; t * j. pour ces dérivés N-protégés en d'autres positions. Il y ;1 .

jj a plusieurs années, plusieurs des auteurs de la présente invention ont tr.-uvé que lorsqu’un groupe amino et un 35 groupe hydroxyle sont voisins dans une paire dans la configuration stérique de la molécule de l'antibiotique ami- / ! noglycosidique, tes deux groupes, amino et hvdroxvle* neu-./

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% 3 vent être sélectivement combinés l'un à l'autre sous la forme d'un carbaraate cyclique, sans bloquer les autres groupes amino présents dans la même molécule /cf. "Journal of Antibiotics ", 25, N° 12, 7^1-7^2; brevets U.S.

5 N°s 3 925 35k et 3 965 0897.

Nagabhushan et col. ont découvert récemment que r . ++ , lorsqu'un sel d'un métal de transition bivalent (M ), choisi dans le groupe comprenant le cuivre (II), le nickel (II) le -cobalt (II) et le cadmium (II) est mis à réa-10 gir, dans un solvant organique inerte, avec un antibiotique qui appartient à la catégorie des 4-0-(aminoglysosyl)- 6-0(aminoglycosyl)-2-désoxystreptamines, représentée par les kanamycines, les gentamycines et la sisomycine, ce cation de métal de transition bivalent est complexé avec lp une paire de groupes, l'un amino, l'autre hydroxyle, qui existent dans les positions particulières de relation "vicinale" dans la molécule d'aminoglycoside, formant ainsi le complexe antibiotique aminoglycosidique-cation de métal de transition (ci. demande de brevet japonais en 20 1ère publication sous le n° Sho-52-1539^ et la demande de brevet U.S. N° b97 297» pour laquelle un brevet a été délivré le 23 janvier Î979 sous le K° h. 136 25¾) · Dans ce complexe antibiotique arninoglycosidique-cation de métal de transition, le groupe amino complexé est bloqué par 25 le cation du métal de transition bivalent. Lorsqu'on fait w ensuite réagir ce complexe avec un réactif acyîant ayant un groupe acyle, seuls les groupes amino non complexés du complexe, qui ne sont pas bloqués par le cation de métal bivalent, peuvent être acylés en grande partie, de 30 sorte qu'on obtient une N-protectien sélective par le groupe acyle. Ceci est illustré plus loin en prenant la kanamycine A comme exemple.

En effet, lorsqu'on fait réagir avec la kanamycine t - * ·*. * A un cation ce métal de transition bivalent l,ll } choisi 35 dans le groupe comprenant le cuivre (II), le nickel (il), le cobalt (II) et le cadmium (II), la réaction eomplexan- - f - f \ ("f T I . ^ ^ 16? Cïtî Cation OÇ II:? ta i OlVSi ΘΓίΐ ( ju i SG prOOilI t ΘΓίνΓ? JL G j

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I " <4* i - I ' t * i j groupe 1-amino et le groupe. 2”-hydroxy et entre le groupe 3"-amino et le groupe zi"-hydroxy de la kanamycine A, comme le montre la formule (I) ci-dessous.

, 6' 5 Wa Ψ* < I ‘2 NH- • / °\ y k'I \ λ

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j 'u V'" j >r+ 1 . (I) 1 20

Dans la réaction complexant© ci-dessus, on peut 25f donc voir qu'il faut au moins 2 moles du sel de métal de ) ' transition pour 1 mole de kanamycine A. nés groupes 1- f amino et 3“arriino sont bloqués en même temps dans le com- j. plexe métallique qui en résulte. Lorsqu'on traite le corn- . i plexe de formule (l) avec un réactif d’acylation ayant un 30 groupe acyle disponible comme groupe amino-protecteur connu dans la synthèse traditionnelle des polypeptides, seuls les groupes 3-amino et 6'-amino non complexés sont f acyïés en grande partie oour donner le dérivé 3s6’-di-N- aeylé / cf. "Journal cf American Chemical Society" 100, j 35 5253-525¾ (197ßj/·

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j Des auteurs de la présente invention ont reconnu le fait qui vient d * être rapporté, mais ils ont effectué / fi 5 4 d'autres recherches sur l'interaction de divers autres cations de métal avec des antibiotiqxies aminoglycosidiqxies, comme la kanamycine A et la kanamycine 3, ainsi qu'avec des dérivés semi-synthétiq\ies des antibiotiques aminogly-5 cosidiques. Comme résultat de ces recherches, ils ont constaté que bien que le cation de zinc bivalent ait des comportements nettement différents de ceux des cations bivalents des métaux énumérés plus haut, nickel, cobalt, cuivre et cadmium, il est finalement capable de complexer 10 fortement avec le groupe 1-amino (ou 1-alkylamino) et le groupe 3Uamino (ou 3"_alkylamino) et de bloquer ces groupes dans un composé aminogiycosidique (comme la kanamycine A, B ou C) qui comporte une fraction désoxystreptamine dans laquelle un groupe 3”-aminoglycosyle ou 3”-alkvlami-15 noglycosvle est lié au groupe 6-hydroxyle qu'elle contient.

Selon Nagabhushan et col., on peut s'attendre à ce que lorsqu'un cation de nickel, cobalt, cuivre ou cadmium bivalent est mis à réagir avec la kanamycine 3, par exem-20 pie, il se forme un complexe de kanamycine B et de sel métallique ayant la formule (il) ci-après: 6’ 3 h2nçh2 KH2 / “q ,r~' ?Ha • 25 4’i\PH ) „ V >* 7Vi>· 0 W '

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Cette prévision peut se justifier par les révela- j tions faites par Nagabhusban et col. dans le "Journal of ί American Chemical Society" précité, selon lesquelles les paires de groupes amino et hydroxyle vicinaux formeraient 5 des complexes réversibles avec les cations de métaux de ( | transition bivalents, compte tenu de ce que la kanamycine ! D contient trois de ces paires, à savoir entre les positions 1- et 2"-, entre les positions 2*- et 3'~ et entre les positions 2”- et 3,,_ de la molécule de kanamycine B.

10 Toutefois, contrairement à ce que suggère Nagabhusban, on

Sa constaté que lorsqu'on fait réagir la kanamycine B avec un cation de métal bivalent, le cation de zinc, le complexe de kanamycine B et de sel de zinc qui se forme en réalité contient le groupe 2 *-amino et le groupe 3'-hydroxy-15 le libres, non bloqués par le cation de zinc. Meme si la réaction complexante du cation de zinc avec les groupes 2'-amino et 3'hydroxyle se produit, la force complexante !' est extrêmement réduite, de sorte que dans la pratique les groupes 2'-amino et 3'-hydroxyle ne sont sensiblement pas 20 bloqués. C'est pourquoi, lorsqu'on acyle ensuite le complexe kanamycine B-cation de zinc en le faisant réagir, par exemple, avec N-benzyloxycarbonyloxysuccimide pour introduire le groupe benzyloxvcarbonyle comme groupe acyle amino-protecteur, il se produit un dérivé tri-3,2',6'-! 25 N-acylé, dans lequel les trois groupes amino 3-i 2' et 6' | ont été acylês, avec un rendement plus important que les autres dérivés N-acy]és, mais on ne peut alors obtenir | réellement le dérivé 3 , 6 ' -di-N-acylé (cf. Exemple 19 du » présent mémoire). Ce fait expérimental suggère que le i 30 cation de zinc a un comportement différent ce ceux des

Scations des quatre métaux précités et de comportement diffère notamment en ce que le cation de zinc ne forme pas de complexe avec la paire de groupes vicinaux 2'-amino et > ...

!| 3'-hydroxy1e.

35 Comme autre exemple, lorsqu'on fait réagir la ka- | nauiycine A avec le cation de zinc et qu’on acyle ensuite ί avec le troupe benzyloxycarbonyie fcf* formule (i) ci-des- / * 7 4 » « sus), on observe qudde la 3 » 61-di-N-benzyloxycarbonylkana-mycine A se forme comme produit d'acylation principal dans le cas où l'on prévoit comme proportion de cation de zinc légèrement plus de 1 mole par mole de kanamycine A. Dans 5 ce cas, il convient de noter que cette réaction d'acylation donne lieu simultanément, dans une certaine mesure, à la formation du dérivé 1,3 » 6',3u-tétra-N-benzyloxycar-bonyle de la kanamycine A et à celle de kanamycine ini-tiale, non açylée, mais qu'elle ne provoque en réalité la 10 formation du dérivé tri-N-benzyloxycarbonyle de la kanamycine A qu'avec un faible rendement, en dépit de l'explication fournie par Nagabhushan et col. du mécanisme réactionnel, selon laquelle on devait s'attendre à ce que le dérivé tri-N-benzyloxycarbonyle se forme dans une plus 15 forte proportion que les autres dérivés N-acylés (cf.

Exemple 7 du présent mémoire). Dans le mémoire descriptif et notamment la revendication 4 du brevet U.S. N° 4 136 254, Nagabhushan et col. indiquent à cet égard qu'il est nécessaire d'employer un sel d'un métal de transition bi-20 valent comme le cuivre (I), nickel (II), CObalt (II), etc., dans une proportion totale d'au moins 2 moles par mole de kanamycine A pour obtenir la formation d'un complexe de kanamycine A et de sel de métal de transition, comme le montre la formule (I) ci-dessus. Les expériences 25 des auteurs de l'im-ention ont montré au contraire qu'à la différence des cations des quatre métaux de transition précités, le cation de zinc est capable de bloquer les groupes 1-amino et 3"-amino de la kanamycine A lorsqu'on l'utilise dans une proportion totale d'au moins 1 mole 30 par mole de kanamycine- A. Leurs essais ont permis de constater que lorsqu'on fait réagir un sel de nickel dans une proportion légèrement supérieure à 1 mole par mole de kanamycine A, puis qu'on acyle avec le groupe benzyloxycar-bonyle le complexe kanamycine Λ-sel de nickel qui en. rl-35 suite, on n'obtient la 3,6' -di-N-benzyloxycarbonylkanarny-cine A qu'avec un rendement très faible, alors qu’on obtiendrait un rendement considérable de ce dérivé en acy» t ί , ί !« ;ί 8 î; lant un complexe de kanamycine A et de sel de zinc (cf.

i' Exemple 7 du présent mémoire). Compte tenu de ce qui vient

I

j d'être exposé, on peut conclure que la cation de zinc (IX) présente un mécanisme de réaction complexante avec un ami-5 noglycoside qui diffère de celui du cation de nickel (II), | de cobalt (II), de cuivre (II) et de cadmium (II) et que ί le complexe aminoglvcoside-cation de zinc a une stabilité propre qui est différente de celle du complexe de 1'amino-^ glycoside avec le cation de nickel (II), de cobalt (II), 10 de cuivre (il) ou de cadmium (II). Pour complexer le cation de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique, on

Ipeut prévoir le dit cation sous la forme d'un sel de zinc, qui est avantageusement d'un coût modique et qui présente peu de risques de pollution pour l'environnement.

!| 15 En conséquence, les auteurs de la présente inven- j, tion ont constaté que lorsqu'un cation de zinc est mis a ' réagir dans un solvant organique inerte avec un antibio tique aminoglycosidique contenant une fraction désoxy-streptamine dans laquelle le groupe 6-hydroxyle est lié ; 20 à un groxipe 3-aminoglycosylé ou un groupe 3 -alkylarnino- glycosyle et éventuellement le groupe 4-hydroxyle est lié à un groupe aminoglycosyle, le cation de zinc est complexé avec des paires amino-hvdroxyle qu'il bloque et dont la position peut varier suivant la nature de l'anti-! 25 biotique aminoglycosidique, et que lorsqu'on met à réagir le complexe antibiotique aminoglycosidique-cation de zinc ainsi formé avec un réactif d'acylation ayant un groupe acyle qui est utilisé traditionnellement pour introduire > un groupe amino-protecteur lors de la synthèse des poly- ! 30 peptides, ce réactif acyle au moins un des groupes amino É de l'antibiotique qui ne sont pas complexés avec le ca tion de zinc et par conséquent pas bloques par ce cation, de sorte que le groupe amino ainsi acvlé est protégé, et enfin que lorsque le produit résultant de 1'acyiation (c’ ; 35 est-à-dire le complexe antibiotique aminoglycosidique— cation de zinc ayant au moins un groupe amino acylé) est traité avec un réactif convenable qui élimine du dit pro- 9 duit lo cation de zinc, le dit complexe est détruit et 1' on obtient un dérivé X-acylé sélectivement protégé de 1' antibiotique aminoglycosidique dont le ou les groupes amino initialement non complexé (s) avec le zinc a ou ont.

5 été sélectivement protégé(s) par le groupe acyle.

Sous un premier aspect, l'invention fournit donc un procédé de préparation d'un dérivé X-protégé, sélectivement acylé, d'un antibiotique aminoglycosidique, le dit antibiotique comprenant une fraction désoxystreptamine 10 dans laquelle le groupe 6-hydroxyle est lié à un groupe 3-aminoglycosylé ou 3-alkylaminoglycosylé et le dit dérivé N-protégé sélectivement acylé ayant certains de ses groupes amino sélectivement protégés par un groupe acyle, qui consiste à: 15 (a) faire réagir un réactif d'acylation possédant un grou pe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur avec un complexe antibiotique aminoglycosidique-cation de zinc qui a été formé par réaction du dit antibiotique aminoglycosidique avec un sel de zinc dans un solvant organique i-= 20 nerte pour produire un complexe de cations de zinc avec le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique ayant les groupes amino initialement non complexés acylés, ex (b) à faire réagir le complexe des cations de zinc avec le 25 dérivé sélectivement N-acylé de 1'antibiotique aminoglycosidique avec un réactif qui élimine les cations de zinc du dit complexe pour produire le dérivé N-protégé sélectivement acylé de l'antibiotique aminoglycosidique.

Le procédé selon ce premier aspect de l'invention 50 est utile pour préparer ce dérivé N-protégé sélectivement acylé d’un antibiotique aminoglycosidique par acylation de certains groupes amino autres que les groupes 1- et 3,?-amino de 1'antibiotique aminoglycosidique de départ, et ce dérivé N-protégé sélectivement acylé est utile dans la 35 synthèse chimique ce dérivés I-N-aminoacylés d'antibiotiques aminoglycosidiques comme les kanamycines, y compris l'amykacine ^Journal of Antibiotics'* 2^, 6Ç5-70Ê {1972J)/, I " : 1 10 qui, au cours des dernières années, s'est avérée un médicament antibactérien efficace. Ces dérivés 1-N-aminoacy-lés des antibiotiques aminoglycosidiques comprennent ceux issus d'une large gamme d'aminoglycosides, comme la kana-5 mycine A, la kanamycine B, la kanamycine C, les gentamy-cines, la sî’somycine et d'autres, ainsi que de leurs dé-! rivés désoxy, mais tous ayant en commun le fait que leur . groupe 1-amino est acylé avec un groupe (X-hydroxy-i-J-amino- alcanoyle (cf. brevets U.S. N°s 3 781 268, 3 939 143» 10 3 9ko 3&2 et k 001 208). Par cette 1-N-aminoacylation, on donne aux antibiotiques aminoglycosidiques une activité antibactérienne vis-à-vis des bacilles résistants contre lesquels les antibiotiques aminoglycosidiques parents n' agissent pas, et l'on améliore en outre leur aotivité Γ| 15 antibactérienne contre une plus large variété de souches de bacilles par rapport aux dits antibiotiques parents.

I La mise en oeuvre du procédé selon ce premier as-

tï r N

; ? pect de l'invention est décrite plus en détail ci-apres.

\t ;| L'antibiotique aminoglycosidique qui doit être mis . I 20 à réagir avec le cation de zinc pour former le complexe de zinc (qu'on pourrait aussi appeler sel de complexe de zinc) selon l'invention peut être tout antibiotique com- i I portant une fraction désoxystreptamine dont le groupe 6-

5 I

* hydroxyle est substitué par un groupe 3”aminoglycosyie ou ; 25 3“alkylaminoglycosyie et dont le groupe 4-hydroxyle peut I être occasionnellement substitué par un groupe aminogly- |! cosyle. Plus particulièrement, l'antibiotique aminogiyco- I sidique dont on peut disposer dans la présente invention ; pour la formation du complexe de cations de zinc peut ê- 30 tre défini comme élan* un antibiotique constitué par r la 6-0-(3,!“amina- ou 3!'-alkylarriino-3T'-ôésoxyglycosyij-2- ï désoxystr-eptamine ayant facultativement un groupe 4-0- ! (aminoglvcosyle}. En outre, l'antibiotique aminoglycosi- t clique peut être un i - N* -a Iky 1 amino gi yc o si d e, comme la né- r 35 tilmycins. Comme exemples des antibiotique arainogLycosidi que s de la catégorie dont on peut disposer dans le procé-\\ clé selon 1 'invention, on peut citer les antibiotiques eu *

Il groupe de la kanamycine A, qui comprend la kanamycine A elle-même, les 6'-N-alkylkanamycinesA, notamment la 6'-X-méthylkanamycine A, la 3'-désoxykanamycine A, la 6'-X-mé-thyl-3*-désoxykanamycine A, la 4 1-désoxykanamycine A, la 5 6'-N-mêthyl-4'-désoxykanamycine A, la 3’»4'-didésoxykana- mycine A (cf. demande de brevet japonais Xe 11402/79) et la 6”-désoxy- ou 4”,6”-didésoxykanamycine A (cf. demande de brevet japonais N9 54733/79)» les antibiotiques du groupe de la kanamycine B, comprenant la kanamycine B elle-10 même, la 3’-désoxykanamycine B (c’est-à-dire la tobramy-cine), la 41-désoxykanamicine B, la 3'»^1-didésoxykanamy-cine B (c’est-à-dire la dibékacine), la 3 ' » 4'-didésoxy-3 '-éno-kanamycine B, la 6'-N-méthyl-3’,4'-didésoxykanamy-cine 3, les antibiotiques du groupe kanamycine C, compre-15 nant la kanamycine C elle-même, la 3'»4’-didésoxykanamyci-ne C, les gentamycines A, B et C, la verdamycine, la siso-mycine et la nétilmycine (c'est-à-dire la 1-X-éthylsiso-mycine), ainsi que les autres aminoglycosides connus. Il va de soi que le procédé selon ce premier aspect de l’in-20 vention est applicable non seulement à un antibiotique aminoglycosidique nouveau, qui n'est pas encore connu actuellement et sera découvert plus tard, mais aussi aux dérivés semi-synthétiques nouveaux d’antibiotiques amino-glycosidiques, qui seront produits dans l’avenir par trans-25 formation chimique d’antibiotiques aminoglycosidiques connus.

Comme exemples typiques des antibiotiques aminogly-cosidiques auxquels la présente invention est applicable, on peut citer la kanamycine A, la kanamycine B. la kanamy-30 eine C et les dérit'és désoxy de ces kanamycine s, ainsi que leurs dérivés 6*-X-alkyles, tous représentés par la formule générale (III) ci-après;

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t 12 4 6' R -ch2 mu

' i—2·. NK

4j\R1 /-0_)t ! 3« 2'; ^-/ 3 ' 1 5 6 R** R > 1 10 H0CHo )--O /° / H ν' 1 NT·// H0 ri

I 15 OH

i; il ! 1 1 dans laquelle R est un groupe hydroxyle ou un groupe a- 3 i ’ 20 mino, R et R sont chacun un atome d'hydrogène ou un i 1 ; .

| ;, groupe hydroxyle, et R est un groupe hydroxyle, un grou- i ; pe amino ou un groupe alkylamino dans lequel le groupe j alkvle a de 1 n h atomes de carbone, en particulier le groupe méthylamino.

; 25 Pour former le complexe antibiotique aminoglycosi- dique-cations de zinc selon l'invention en faisant réa-• gir l'antibiotique aminoglycosidique avec les cations de j zinc, on peut faire dissoudre ou mettre en suspension I dans un solvant organique approprié, mélangé ou non à de i 30 l'eau, un antibiotique aminoglycosidique particulier sous j. la forme de sa base libre ou celle d'un sel d'addition f d'acide du dit antibiotique et ajouter à la solution ou suspension ainsi obtenue un sel de zinc approprié dans u-t ne proportion c'au moins 1 mole par mole de l'antibiot-i-

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I* 35 que aminoglycosidique employé. On peur utiliser à cor ef fet n'impjorte quel solvant organique ordinaire, dans la mesure où le complexe de zinc formé après l'addition du’ i î 13 • , sel de zinc y est au moins partiellement soluble. On évitera cependant d'utiliser un grand volume d'un solvant organique polaire et en particulier un plus grand volume d'eau, car la présence du solvant organique polaire et de 5 l'eau est susceptible de diminuer la stabilité du complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc qui en . résulte, ne permettant pas à la réaction d'acvlation ulté rieure pour l’introduction du groupe araino-protecteur de donner des résultats satisfaisants.

10 II est donc désirable, pour le solvant dans lequel le complexe de zinc doit se former, de choisir un solvant organique puissant, comme le diméthvl-sulfoxyde, mais on peut aussi utiliser le diméthylsulfoxyde aqueux, le dimé-thylformamide» le diméthylformamide aqueux, un mélange de 15 dimathylsulfoxyde et de diméthylformamide, le tétrahydro-furanne, le tétrahydrofuranne aqueux et même un alcanol inférieur comme le méthanol, l’éthanol et le mêtnanol a-queux.

Le cation de zinc peut être introduit sous la for-20 me d'un sel de zinc dans le système réactionnel où se forme le complexe. On peut utiliser pour les effets de la présente invention tout sel de zinc formé par la réaction d'un cation de zinc avec un acide inorganique ou organique ordinaire. Il est toutefois désirable, en général, d'uti-25 liser un sel de zinc d'un acide faible, comme l'acétate de zinc, car il est courant que parmi les complexes métalliques contenant un groupe amino, un complexe de groupe amino non quaternaire avec un sel métallique soit plus stable qu'un complexe d'une amine de type ammonium 30 avec un sel de métal et parce que 1'utilisation du sel de zinc d'un acide faible ne conduit normalement pas à la formation du complexe de métal relativement instable qui contient une amine de type ammonium. Lorsqu'on emploie le sel de zinc d’un acide fort, par exemple cru chlorure de 35 zinc, on peut aussi former le complexe de zinc désiré, mais il est alors préférable d’ajouter un sel faiblement alcalin, comme l'acétate de sodium, en plus du sel de zir.c »J; % s » 1 14 : pour neutraliser le.milieu. De même, il est désirable d'

Il ajouter une quantité d'acétate de sodium ou d'hydroxyde i de sodium comme agent neutralisant lorsque l'antibiotique aminoglycosidique de départ est utilisé sous la forme de

If i \ 5 son sel d'addition avec un acide fort, tel que l'acide chlorhydrique. Dans ce cas, il faut cependant veiller à ne pas utiliser une quantité inutilement excessive de 1' agent neutralisant, sinon il peut se produire une préci- I pitation d'hydroxyde de zinc qui perturbera la formation 10 du complexe. Par exemple, lorsqu’on utilise pour la formation du complexe un tétrachlorhydrate de l'antibiotique aminoglycosidique, il faut ajouter de préférence 4 moles d'hvdroxyde de sodium pour neutraliser le mélange réactionnel .

15 La réaction complexante peut se poursuivre aussi longtemps que la quantité molaire totale du sel de zinc qui est utilisée est au moins égale à la quantité molaire totale de l'antibiotique aminoglycosidique. Il est toutefois préférable d'utiliser le sel de zinc dans une propor-20 tion sensiblement supérieure à 1 mole par mole de l'antibiotique aminoglycosidique, de façon que l'équilibre de la réaction complexante soit déplacé en faveur de la formation du complexe. On peut obtenir un rendement intéressant de complexe de zinc en utilisant le sel de zinc dans 125 une proportion de 2,3 à 6 moles par mole de 1'aminogiyco-side, mais il est bien préférable dans la pratique d'utiliser le sel de zinc dans une proportion comprise entre 4 et 5 moles par mole d'aminoglycoside. Le temps nécessai-| re pour une réaction complexante complète après l'addition 30 du sel de zinc peut varier en fonction de la nature du sol-$ vant organique utilisé et il peut être compris entre "ins- * tantariement" (lorsqu'on utilise un solvant organique a- I , queux) et 20 heures. La réaction complexante peut s'effec- tuer normalement a la température ambiante, mais on neut I, q 35 aussi réchauffer ou refroidir.

I On prépare de cette manière une solution ou suspen- | sion contenant le complexe de zinc de l'antibiotique ami- t *

«I

15 noglycosidique, à laquelle on ajoute ensuite un réactif d’acylation qui possède le groupe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur.

Le réactif d'acylation employé dans le procédé se-5 Ion l'invention peut être un réactif amino-protecteur courant, et il est utilisé pour faire en sorte que les groupes amino libres, non complexés, dans le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc obtenu soient acvlês et bloqués par le groupe acyle du réactif précité.

10 Le groupe acyle peut être un groupe alcanoyle, un groupe aroyle, un groupe alcoxycarbonyle, un groupe aralkyloxy-carbonyle, un groupe aralkylsulfonyle ou un groupe aryl-sulfonyle, qui sont tous des groupes amino-protecteurs classiques. Le réactif acylant dont on peut disposer à 15 cet effet peut être, soit un acide carboxylique ayant la formule générale (iVa) suivante: R5C00H (IVa) 5 dans laquelle R est 1'hydrogéné, un groupe alkyle, en particulier un groupe alkyle contenant de 1 à 6 atomes 20 de carbone, un groupe arvle, en particulier le phényle, ou un groupe aralkyle, spécialement le benzyle, ces groupes étant occasionnellement encore substitués, ou un ha-logénure d'acide, un anhydride d'acide ou un ester actif du dit acide carboxylique (IVa), soit un cnloroformiate 25 d’e formule générale (iVb): R50-C0-C1 (IVb) soit un p-nitrophénylcarbonate de formule générale (iVc): R50-C0-0-C.H_-p-N0o (IVc) o p 2 soit un ester actif de N-hydroxysuccinimide ayant la for- 30 mule générale suivante: 0

K

R50-C0-0-N<^ ] . (iVd)

T

0 soit encore un azidoformiate de formule (iVe): 25 R50-CÖ-Xä (iVe) 5 > R' ayant dans les formules qui précèdent les mêmes de- / -finitions que dans la formule (IVa), soit enfin un acide

J

V * i · i î sulfonique de formule générale (IVf): l r6so.h (IVf)

I Z J

i dans laquelle R est l'hydrogène, un groupe alkyle, spé- | cialement un groupe alkyle contenant de 1 à 6 atomes de j 5 carbone, un groupe aryle, en particulier le phenyle, ou | un groupe aralkyle, spécialement un groupe phénylalkyle ; îl ' J.

î! comme le benzyle, ces groupes étant occasionnellement en- ; I core substitués, ou un halogénure d'acide, un anhydride d'acide ou un ester actif du dit acide sulfonique. Il est 10 évident, en conséquence, que la réaction d'acylation pour la protection des groupes amino dans le procédé selon 1' invention est une acylation dans un sens étendu, qui em-J brasse, par exemple, la formylation, l'acétylation, la propionylation, la trifluoracétylation, la benzyloxycarbo-J 15 nylation, la p-méthoxybenzuloxycarbonylation, la t-butoxy- i ,> carbonylation, la ohénoxvcarbonylation, la tosvlation, la i ' : mésylation et autres acylations équivalentes.

Comme exemples particuliers de réactifs d’acylation dont on dispose, on peut citer 1’acétoxyformyle, le p-ni-20 trophénylformiate, l'anhydride acétique, le chlorure d'acé-! ! tyle, l’anhydride propionique, 1^. ester de l'acide trifluoi— i acétique et du p-nitrophénol, l'ester d'acide trifluoracé- tique, le N-benzyloxycarbonyloxyphtaiirnide, le chlorure de benzylcarbonvle, le p-méthoxybenzyloxycarbonyloxy-p-nitro-25 phényle, le t-butoxycarbonylazide, le chlorure de phénpxy-carbonyle, le chlorure de tosyle, le chlorure de mésyle et I cï’autres.

i

Le réactif d'acylation peut être ajouté, soit tel qu'il est, soit dissous dans un solvant comme le tétrahv-30 drofuranne et le diméthylsulfoxyde ou ur. mélange de ces (solvants, à la solution ou suspension qui contient le complexe antibiotique aminoglycosidique-zinc. La quantité molaire du réactif d'acvlation ajouté neut être habituelle- ment égale ou légèrement supérieure au norr.bre de groupes 35 «mino non complexés avec lesquels le produit acyl&nt doit i: , ; i reagir. Dans certains cas, toutefois, la quantité molaire / j| du réactif d'acylation ajouté puut atteindre jusqu'à trois ** l’ 17 fois le nombre des groupes amino non complexés. Le réactif d’acylation peut être ajouté, soit en une seule fois, soit lentement, par fractions, pendant une période de 2 à 3 heures, bien qu'il puisse être habituellement ajouté sur 5 un laps de temps compris entre 30 minutes et 1 heure. L' acylation peut être conduite à une température comprise entre -20°C et 100°C, mais elle peut normalement s'effectuer à une température comprise entre 0°C et la température ambiante. Dans quelques cas, la température de la 10 réaction peut être maintenue basse au moment de l’addition ! de l'agent acylant, puis élevée progressivement au fur et à mesure que l'acylation progresse. Normalement, la réaction d'acylation peut s'effectuer in situ dans le solvant organique dans lequel le complexe antibiotique aminogly-15 cosidique-cations de zinc a été formé. Cette acylation du complexe de zinc produit le complexe de zinc N-acylé, c' est-à-dire le complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique.

Dans le procédé selon le premier aspect de l'in-20 vention, l'étape de l'acylation du complexe de l'antibiotique aminoglycosidique et des cations de zinc est suivie de celle de l'élimination de ces derniers du complexe N-acyié (notamment la destruction du complexe de zinc) pour donner le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'an-25 tibiotique aminoglycosidique, qui est libéré de ses cations de zinc.

Pour éliminer les cations de zinc du complexe de zinc N-acylé, il est nécessaire de traiter le dit complexe avec un réactif approprié qui enlève les cations. Pour 30 cela, on dispose d’un grand nombre de méthodes. La première consiste à faire réagir un agent de précipitation du zinc, qui est capable de convertir les cations de zinc en un composé de zinc insoluble dans l'eau, comme le sulfure de zinc, 1'hydroxyde de zinc ou le carbonate de zinc, tan-35 dis que le complexe de zinc N-acylé reste toujours dissous dans le mélange réactionnel d’acylation, où le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc a été' « 18 acylé, ou après qu'il a été transféré du dit mélange réactionnel à une solution obtenue avec un volume de solvant organique frais.

Parmi les agents de précipitation du zinc dont on 5 dispose pour la mise en oeuvre de cette première méthode, | on peut citer l'hydrogène sulfuré, un sulfure de métal al- 1 s câlin, comme le sulfure de sodium, le sulfure d'ammonium, un sulfure de métal alcalino-terreux, comme le sulfure de I calcium, un carbonate de métal alcalin, comme le carbona- 10 te de sodium, ou 1'hydroxyde d'ammonium. Dans certains cas, l'élimination des cations de zinc du complexe de zinc N-acylé peut s'effectuer en ajoutant simplement de l'eau. Dans cette première méthode, l'addition de l'agent de précipitation du zinc à la solution du complexe de zinc N-15 acylé provoque une précipitation comparativement rapide du composé de zinc insoluble formé avec les cations de !‘ zinc, et le précipité peut être enlevé par filtration. Le dérivé N-acyié d'antibiotique aminoglycosidique qui reste i ' alors dans la solution filtrée peut être récupéré par con-I, 20 centration de la solution ou par extraction hors de cette ||: solution et, si cela est nécessaire, il peut être purifié ultérieurement. Pour cette purification, on peut avoir re- i , cours, par exemple, à la chromatographie sur colonne de gel de silice. Une deuxième méthode consiste (a) à concen- j|i 25 trer, à siccité ou non, par évaporation du solvant ou (b) à diluer avec un diluant liquide, le mélange de réaction [ d'acylation précité ou la nouvelle solution obtenue en I’. transférant le complexe de zinc N-acylé dans un volume de ! (! solvant organique frais, de façon à obtenir un dépôt, con- i} £ 30 centré ou résidu huileux ou solide, après quoi on récupè- |. re d'une quelconque manière le dérivé N-acylé désiré de (l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé présent dans le dépôt, le concentré ou le résidu. Le diluant liquide qui | peut être utilisé dans cette deuxième méthode est l'eau I 35 ou un liquide organique dans lequel la solubilité du corn- plexe de zinc N-acylé pris dans son ensemble ou celle de f r t r / * sa fraction constituée par le dérivé N-acylé d'antibioti- l // { A' <· \ * 19 que aminoglycosidique est faible ou nulle»

Selon cette deuxième méthode, on concentre tout d' abord, à siccité ou non, le mélange de la réaction d'acylation contenant le complexe de zinc N-acylê (ou la nou-5 velle solution obtenue en transférant le dit complexe dans du solvant organique frais) pour obtenir le dépôt ou rési-„ du huileux ou solide» Lorsqu’on a utilisé comme milieu ré actionnel pour la N-acylation du complexe de zinc un solvant organique difficilement évaporable, comme le diméthyl-10 sulfoxyde, etc», il est possible d’incorporer le mélange de réaction d'acylation contenant le complexe de zinc N-acylé à un liquide organique diluant tel que l'éther ordinaire de façon que le dit solvant organique difficilement évaporable choisi comme milieu se dissolve dans le 15 diluant ou soit dilué par celui-ci, ce qui provoque le dépôt d'une substance solide ou huileuse contenant le complexe de zinc N-acylé. On obtient de ces diverses manières un dépôt ou résidu huileux ou solide qui est normalement un mélange compose: (a) du complexe de zinc N-acy- 20 lé, c'est-à-dire le complexe des cations de zinc avec le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, (b) du dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique libéré par la destruction de l'association complexante dans une partie du complexe de zinc N-acylé par suite de 1 * 25 absence substantielle du milieu solvant organique, (c) d' une quantité du sel de zinc inorganique formé par la destruction de l'association complexante dans la partie du complexe de zinc N-acylé, (d) d'une quantité du sel de zinc qui a été ajoutée initialement en excès et qui n'a 30 pas réagi au cours de la réaction complexante, et éventuellement (e) d'ur» certain reste du solvant organique u-tilisé au cours des opérations précédentes.

Le dépôt ou résidu huileux ou solide précité (c' I est-à-dire le mélange ci-dessusi peut être traité ulté- ! 35 rieurement en utilisant l’une ou l'autre des trois procér· ! dures (a), (b) et (c) ci-dessous.

l·' r t / 20 I : ' (a) On mélange le dépôt ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) à de l'eau ou à un solvant organique polaire, aqueux ou non, seul ou mélangé à d'autres, du type des liquides organiques polaires qui ont pour ef-5 fet détruire l'association complexante des cations de I zinc dans le complexe N-acylé présent dans le dit dépôt ou résidu et dans lesquels les quantités de sel de zinc ’* ’ libérées et celles initialement présentes et qui n'ont pas (réagi sont solubles,1 mais qui ne dissolvent pas le dérivé 10 N-acylé désiré de l'antibiotique aminoglycosidique. De cette manière, le complexe de zinc N-acylé est détruit pour libérer les cations de ce métal et leur permettre de se dissoudre sous la forme de sel de zinc dans l’eau ou le(s) solvant(s) organique(s), aqueux ou non, préci-15 té(s) en laissant le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique sous la forme d'un résidu insoluble à * récupérer. Ce résidu peut être facultativement purifié i en le faisant dissoudre de nouveau dans un solvant orga nique. Les solvants organiques polaires dont on peut dis -20 poser dans cette procédure (a) sont, par exemple, le mé-thanol, l'éthanol, l'ammoniaque, l'éthylamine et la tri-éthylamine. En conséquence, ces solvants organiques polaires et l'eau servent de réactif d'élimination des cations de zinc.

125 (b) Comme variante, on peut mélanger le dépôt ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) à un autre * type de solvant organique polaire, soit anhydre, soit a-queux, qui a pour effet de détruire l'association comple-l Xante des cations de zinc dans le complexe N-acylé de ce * 30 métal qui est présent dans le dit dépôt ou résidu, et dans ] lequel le sel de zinc libéré n'est pas soluble, tandis que | le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique peut s'y dissoudre, de sorte que le complexe de zinc N-acylê est détruit pour libérer le dérivé précité et lui ! 35 permettre de se dissoudre dans le dit solvant organique .

(polaire et d'en être extrait et, par conséquent, d'être.·" y séparé du sel de zinc, lequel est libéré, mais reste j

i I

« ^ 21 non dissous dans le dit solvant organique polaire. On récupère de cette manière la solution du dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique dans le solvant organique polaire et, si on le désire, on peut le purifier, 5 par exemple, par chromatographie, puis concentrer la solution purifiée pour isoler le dérivé en question.

(c) Comme autre variante, on peut faire dissoudre le déposé ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) obtenu par la deuxième méthode décrite plus haut, tel quel, 10 dans un solvant organique approprié contenant une proportion d'eau, si l'ensemble du dépôt ou du résidu est soluble dans l'eau, au moins dans une mesure substantielle.

On peut soumettre la solution ainsi obtenue à un traitement chromatographique au cours duquel le sel de zinc li-15 béré et le dérivé N-acylé libéré peuvent être extraits séparément de la solution. Les auteurs de la présente invention ont constaté qu'on peut utiliser pour ce traitement chromatographique diverses sortes de résines cationiques, de résines anioniques, de résines échangeuses de chélates 20 et de hauts-polymères insolubles dans l'eau et qui contiennent des groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal, comme la chitine ou le chitosan. Parmi les sortes de résines cationiques qui peuvent être utilisées dans ce but on peut citer celles qui contiennent des groupes 25 carboxyliques (-C00H) comme groupes actifs et celles dans lesquelles les fonctions d'échange sont assurées par des groupes sulfoniques (-SO^H). Lorsqu'on utilise pour le traitement chromatographique précité une résine échangeu-se de cations contenant des groupes carboxyliques comme 30 groupes actifs, on fait dissoudre le dépôt ou résidu huileux ou solide (le mélange précité) dans un solvant organique aqueux approprié, par exemple un mélange d'eau et de méthanol contenant au choix de 10% à 90% (en volume) d'eau ou un mélange d'eau ez de eioxanne contenant, au 35 choix, de 10% à 90% (en volume) d'eau, puis on place la solution ainsi obtenue dans une colonne de la dite résine cationique, La colonne est ensuite bien lavée avec une jt ·* * r- , Γ < d ςτ*3η'. x tè svppl ¢1-,-1¾ cftirç de ce ?·-» y-·'.··? '•t. or'.-'1 nique 2- ' . » f _ -.. .

uceü'·:, oprc-s quoi on o&ve .».oppe en uï \ 3 :t c--nv eo.r.se ej.u3nt une autre quantité de ce f*o’vaut cour en outre une proportion c’en atcide «ou d ’ane tare. Dans- le cas d'un &-5 eide, en petit eîr.plever ur. ar ide orpeece faille , co-c.ie l'acide acétique, ou un acide inorganieuf cilué, eotrse l'aride ehlcrhyoricpe étendu. Hans le cas d'or,-3 base, x* hydroxyde d'arci:.!-livrn peut être utilisé è_-r.h la plupart des ?2s. La contentration de l'acide ou de la base dans ‘10 le solvant de développement (l*éiu&nt) peut être comprise entre 0,0i"t et 5'*· en poids du solvau·-:, le dérivé S-ftcylé désire d ' an tri. bi ot 5. qu e or cl y "c ^idi y: s ;uiu ê ;re répare cîî c&' ions de »ÿ sî coupler·^ u *.& p,; ;-!.·, 1t pro·'·c- ssus de développement, car la ris: ns ca tioniqne uvili o·'e pré s eut g / ~i C - a- ta 7 1 " Γ» \ t · & 5 ta. C 3 -y-1' p 1 » “· fr O r j. 'r '; * · ‘ " 'a -S -y i £ '2 ? - * 7 fr'i 3 X ta -e tsi iioplycc side K-acylé dheir-l- et do s . i; i on s de ?inc, de sorte que la force qui pousse le yre.-'i «·.;* â s'associer à le. re sine est à.fft de celle ?ui vend à associ er ces derri ers à cette rér?? résine. L'élv.v. ,.·.~.:ι d ·.-.·: î ,/e rc·.

; PC< c-n e a . .· r:- rar j rac·'*. » on& . o e i a c or. & oc venir ers ra c ’Cj 00s qui cor. ti eunerit 1 ’feu'-unc-.plycoi-ide I·' -a-^ylé dé#r.r è ej,i;rt ce ««-1 dç rinr $ et ou'- u v ;-···» * i c ;r :-;.v:u* pour ob- v s;V'.r ie cîertvé i-rî'.·'! c 1 * : j 4 d ' -¾ r : V - v : . ·-... ·.. nc»£l · £5 leriqu'on utili s e cour le ira ' ·. 0 oc-ne c oiii.fc.u- estions ce ri ne cc-r ί ;θϋ· c ? v er.-, u ,u ··.- v le roue, lu;-C c· n \ rt, 1 oru- xy 'or. oeil:se pour le ί .· a i ·. - -_·.·; f !.. : ;v. q. ;-ü '·* * ” ’· ·· * ; - » ~ ~..... . - = : ! " 23 que faiblement ou fortement basique à cause de la répulsion ionique entre elles, de sorte que le développement de la colonne de résine anionique avec un solvant organique aqueux approprié permet d'éluer hors de la colonne le 5 dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique, tandis que les cations de zinc restent dans cette dernière.

Lorsque le processus chromatographique a lieu en utilisant une résine échangeuse de chélates, qui peut se combiner aux cations de zinc grâce à la faculté qu'elle 10 a de former un chélate avec les métaux, on place une solution du dépôt ou résidu huileux ou solide (mélange précité) dans un solvant organique aqueux dans une colonne de la résine échangeuse de chélates et l'on développe ensuite ! avec un solvant de développement approprié pour que 1' I 15 aminoglycoside N-acylé désiré soit élue préférentielle- I ment au bas de la colonne, tandis que les cations de zinc restent fixés à la résine. Le haut-polymère insoluble dans l'eau, qui contient des groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal, comme la chitine et le ehitosan 20 par exemple, peut être employé de la même manière que lorsqu'on utilise la résine échangeuse de chélates.

(d) On peut, en outre, utiliser une troisième méthode, dans laquelle on place directement dans une colonne de résine cationique, de résine anionique, de résine 25 échangeuse de chélates ou d'un haut-polymère insoluble ! dans l'eau et contenant des groupes fonctionnels aptes à se combiner avec les métaux le mélange de la réaction d* acylation conduite pour protéger les groupes amino, de sorte que le complexe de zinc N-acylé est adsorbé par la 30 résine ou le haut-polymère. On peut ensuite laver la colonne avec un solvant organique aqueux, si cela est nécessaire, puis développer avec un solvant organique aqueux 1 contenant ou non un acide ou une hase, comme dans la mé thode (c), et l'on obtient ainsi l'élimination des cations 33 de zinc du complexe N-acylé ainsi que la récupération du dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique* f · (e) Il existe aussi une quatrième méthode pour ré-

J

I * « î i.

! ' " 24 cupérer le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminogly-cosidique, méthode dans laquelle on traitement immédiatement avec de l'eau le mélange réactionnel contenant le complexe de zinc N-acyle en l'incorporant a l'eau dans le 5 cas où le dit dérivé désiré lui-même est insoluble, au moins substantiellement, dans cette dernière. On peut citer comme exemple de dérivé N-acylé insoluble dans l'eau d'un antibiotique aminoglycosidique la 3»2',6'-tri-N-ben-zyloxycarbonyldibékacine. Dans ce cas, lorsque le mélange i 10 de réaction d'acylation contenant le complexe de zinc N- acylé comprent un dérivé N-acylé substantiellement insoluble dans l'eau d'un antibiotique aminoglycosidique est immédiatement incorporé à de l'eau, l'association comple-xante du zinc dans le complexe N-acylé est détruite pour 15 permettre au dérivé N-acylé insoluble de se précipiter «i sous la forme d'un solide, tandis que le sel de zinc for- jj mé par les cations libérés de ce métal restent en solu- ' jj jjt tion, de sorte que le dérivé N-acylé désiré d’antibiotique aminoglycosidique peut être recueilli séparément du sel 20 de zinc sous la forme d'un produit pratiquement pur.

Comme il a été expliqué plus haut, la N-acylation, c'est-à-dire la réaction de protection de groupes amino, est conduite avec le complexe de zinc de l'antibiotique aminoglycosidique selon le procédé du premier aspect de 25 l'invention, et le complexe des cations de zinc avec le dérivé mono-, di-, tri- ou poly-N-acylé ainsi formé est f, j, un complexe dans lequel les cations de zinc utilisés sont ! associés sous la forme d'un complexe à la structure du I dérivé N-acylé d'aminoglycoside. C'est pourquoi, lorsque | 30 ce désiré N'acylé d'aminoglycoside est insoluble ou fai blement soluble dans l'eau, une opération simple, qui consiste à incorporer de l'eau au mélange de la réaction d* acylation contenant le complexe de zinc N-acylé provoque ! la précipitation du dérivé N-acylé insoluble o^ns l'eau.

.35 sous la forme d'un solide, tandis que les cations de zinc libérés en sont éliminés par dissolution dans l’eau (com- / me dans le cas de la quatrième méthode décrite à l'alinéa,/ ♦ V* 25 précédent (e)). Le précipité insoluble dans l'eau ainsi obtenu peut être employé immédiatement comme matière de départ pour des réactions ultérieures en vue de la préparation semi-synthétique d'un produit final désiré. Tou-5 tefois, d’une manière plus générale, le dérivé N-acylé d' antibiotique aminoglycosidique est souvent totalement ou partiellement soluble dans l’eau et l’on ne peut donc le recueillir qu'avec un rendement considérablement réduit si l'on adopte le traitement simple qui consiste à incor-lO porer immédiatement de l'eau au mélange de la réaction d' acylat ion. Pour ces raisons, on obtient de meilleurs résultats lorsqu'on applique l'une ou l'autre des procédures (b) et (c), dans lesquelles le complexe de zinc N-acylé (c'est-à-dire le complexe de cations de zinc avec 15 le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique résultant de la réaction d'acylation) est tout d'abord séparé du mélange réactionnel, puis mis à dissoudre dans de 1' eau ou dans un solvant organique aqueux, après quoi la solution ainsi obtenue est traitée pour éliminer les cations ; 20 de zinc qu'elle contient. Une des méthodes simples d'éli mination des cations de zinc qui tombent sous le sens pour l'instant est celle dans laquelle de l’hydrogène sulfuré ou un sulfure alcalin est mis à réagir comme agent de précipitation avec les cations de zinc pour précipiter ces 25 derniers sous la forme de sulfure de zinc (forme de mise ^ en oeuvre de la première méthode décrite à l’alinéa (a)).

Toutefois, le sulfure de zinc se précipite souvent sous la forme d'un dépôt colloïdal qu’il est difficile de séparer par filtration et l'hydrogène sulfuré ou le sulfure 30 alcalin ont par ailleurs une odeur désagréable et se conviennent pas à une application du procédé à l'échelle industrielle. Les auteurs de l'invention ont donc effectué des recherches poussées en vue de fournir une méthode pratique d'élimination des cations de zinc du complexe sans 35 recourir à l’intervention d'un sulfure et ils sont donc parvenus à mettre au point les méthodes efficales et faciles d'élimination qui consistent à utiliser les résine?/ 26 j, échangeuses ou le polymère cités plus haut (comme dans le cas des procedures (c) et (d)). Ces procédures (c) et (d) : 1 sont industriellement très avantageuses et intéressantes, , i -3 car elles sont d'une mise en oeuvre facile, présentent u- 5 ne grande efficacité du point de vue de la séparation des cations de zinc et fournissent un rendement élevé du dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique.

*

Les diverses méthodes et procédures de traitement du complexe de zinc N-acylé par le réactif d'élimination 10 qui ont été décrites ci-dessus peuvent être résumées comme suit: (a) Le complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé d'un antibiotique aminoglycosidique est séparé du mélange de la réaction d'acylation avant d' 15 être mis à réagir avec un réactif d'élimination des cations de zinc qu'il contient.

(b) Le complexe des cations de zinc avec le dérivé i sélectivement N-acylé d'un antibiotique aminoglycosidique î est séparé du mélange de la réaction d'acylation par ex- l 20 traction avec un solvant organique, par évaporation du 1· (milieu solvant organique contenu dans le mélange réactionnel ou par dilution de ce mélange avec un solvant organi- ,, que diluant, avant d'être ÏÏÎl s « réagir avec un réactif ! , .

Id'élimination des cations de zinc.

j 25 (c) Le complexe des cations de zinc avec le dérivé I sélectivement N-acylé d'un antibiotique aminoglycosidique $ est, une fois séparé, mélangé à de l'eau ou à un solvant organique polaire, anhydre ou aqueux, qui sert de réactif j d'élimination des cations de zinc. Ce solvant organique ?' 30 polaire est, soit un solvant dans lequel le sel de zinc ? est soluble mais qui ne dissout pas le dérivé K-acylé d' antibiotique aminoglycosidique, soit un solvant dans lequel le sel de zinc est insoluble, mais qui dissout le

T

dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique.

35 (d) Le complexe de cations de zinc avec le dérivé f j N'acylé d'antibiotique aminoglycosidique est, une fois j I séparé, mis de nouveau à dissoudre entièrement dans un / h 27 * *♦ I ‘ ' solvant inorganique contenant une proportion d'eau et la solution qui en résulte est soumise à un traitement chroma tographique en utilisant une résine cationique, une résine anionique, une résine échangeuse de chélates ou un 5 haut-polymère insoluble dans l'eau contenant des groupes j fonctionnels capables de se combiner avec un métal, qui * servent de réactif d’élimination des cations de zinc.

(e) On fait passer directement le mélange de la réaction d'acylation à travers une colonne d'une résine 10 cationique, d'une résine anionique, d'une résine échangeuse de chélates ou d'un haut-polymère insoluble dans l'eau i et contenant des groupes fonctionnels capables de se combiner avec un métal pour obtenir l'adsorption du complexe de cations de zinc avec le dérivé N-acylé d'antibiotique 15 aminoglycosidique, puis on développe la colonne avec un solvant organique aqueux contenant ou non une proportion d'un acide et d'une base, et l'on recueille l’éluat par fractions, opération suivie de la récupération des fractions qui contiennent le dérivé sélectivement N-acylé 20 désiré d'antibiotique aminoglycosidique, isais ne contiennent pas de cations de zinc.

(f) Lorsque le dérivé N-acylé désiré d'antibiotique aminoglycosidique est tout à fait ou substantiellement insoluble dans l'eau, on incorpore immédiatement le mélange 25 de la réaction d'acylation à de l'eau, de façon que le dit dérivé soit précipité séparément, le sel de zinc restant dissous dans l'eau.

(g) On traite immédiatement le mélange de la réaction d'acylation avec de l'hydrogène sulfuré, un sulfure JO de métal alcalin ou alcaline-terreux qui précipite les cations de zinc sous la forme du sulfure de ce métal, ou avec 1'hydroxyde d'ammonium, qui les précipite sous la forme d'hydroxyde de zinc.

Dans le complexe ce zinc formé dans le procédé se -35 Ion le premier aspect de l'invention, les cations de zinc / complexent principalement avec les groupes 1-amino et 3n- / ' ( amino de l'antibiotique aminoglycosidique, et il en résul- ; 28 te que la N-acylation du complexe antibiotique aminoglyco-li sidique-cations de zinc, suivie de l'élimination des dits cations, produit normalement le dérivé N-acylé dans lequel des groupes amino et/ou alkylamino autres que ceux occupant 5 les positions 1 et 3" sont protégés par le groupe acyle.

Lorsque le dérivé N-acylé d'antibiotique aminoglycosidique ί ainsi obtenu par le procédé selon le premier aspect de 1' invention est ensuite 1-N-acylé avec un acide Ct-hydroxy-ίύ 1 -aminoalcanoïque d'une manière connue et décrite dans les ! 10 ‘brevets U.S. N°s 3 781 268 et 3 939 1(*3 déjà cités, par f exemple, opération suivie de l'élimination des groupes ! amino-protecteurs résiduels du produit N-acylé qui en ré sulte, on obtient un antibiotique aminoglycosidique semi-synthétique 1-N-acylé, qui est connu comme étant un agent ; 15 antibactérien utile.

’ La synthèse des antibiotiques aminoglycosidiques [j 1-N-acylés est maintenant décrite par référence à l’uti- \ lisation (non limitative) de la kanamycine A comme matière I de départ. Lorsque, dans le procédé selon le premier as- I " 20 pect de l'invention, on utilise la kanamycine A comme ma-

Itière première, les groupes 1-amino et 3n~aniino de cette kanamycine sont initialement bloqués par formation d’un i complexe avec les cations de zinc. En conséquence, lors- I qu'on acyle le complexe kanamycine A-cations de zinc avec I 25 un réactif d'acylation approprié selon l’invention ou avec I un autre type d'agent de blocage des groupes amino, les I groupes non complexés 3“aniino et 6'-amino de la molécule de kanamycine A peuvent être protégés par le groupe acyle du réactif d'acylation employé ou par l'autre type d'agent • jq bloquant. Apres élimination des cations de zinc comple xants du complexe N-acylé de la kanamycine A avec les ca-L tions de zinc, le dérivé N-acylé de kanamvcine A oui en P r ^ résulte est mis à réagir avec un agent acyiant possédant un groupe acyle à introduire dans le groupe i-amino de la 1 35 molécule de kanamycine À. Ce groupe acyle ne réagit alors \ qu'avec les groupes non bloqués 1-amino et 3r,-amino de la/ £ ' k ? kanamycine A. A ce stade, le groupe 1-amino est normale- ,/ f r 4 29 ment un peu plus réactif que le groupe 3"-araino, de sorte qu’on peut obtenir le dérivé 1-N-acylé de la kanamycine A avec un rendement légèrement supérieur à celui du dérivé 3"-N-acylé de cette même kanamycine» L'élimination ulté — 5 rieure des groupes amino-protecteurs du dérivé 1-N-acylé ainsi obtenu donne la kanamycine A 1-N-acylée comme produit final désiré. On comprend donc aisément que lorsqu' on utilise le procédé selon le premier aspect de l’invention, la kanamycine A 1-N-acylée désirée peut être obte-10 nue avec un rendement plus élevé que si l’on fait réagir la kanamycine A non protégée ou la kanamycine A protégée en 6' immédiatement avec un agent acylant pour réaliser la 1-N-acylation de la kanamycine A. Si l'on fait réagir une kanamycine non amino-protégée avec un agent 1-N-15 acylant, on constate qu’il se forme un mélange de produits N-acylés qui contient une très faible proportion (habituellement de 1% à quelques %) du produit 1-N-acylé dési-re.

Dans le cas où le procédé selon le premier aspect 20 de l'invention est appliqué à une kanamycine de formule générale (III), une partie ou la totalité des groupes a-tnino autres que les groupes 1- et 3””aniino de cette kanamycine sont protégés pour donner un dérivé de kanamycir ne N-acylé représenté par la formule générale (V).ï ; -j, 25 fj 30 : 35 4 I* * 30 CH0-R a 7 | 2 ψΆ* / 3>----\ψ2 ’ Jt)-.-<cJ* R a

K0CHo X

! 2 0

10 i X

/-\ / ... JVl/' * 7»!

* OH

15 I 1 I dans laquelle R a est un groupe hyüroxyle, un groupe ami — f 20 no (-NH2), un groupe -NHCOR^, un groupe -NHCO.OR'* ou un {: Ä 6 4 I groupe -NHSO^R ; R a est un groupe hydroxyle, un groupe !' 8

I R

(; J» | -NHC0R , un groupe -N" , un groupe -NHC0.0R , un ί \ ς I COR* j 25 R8 f 6 i groupe -N ' , un groupe -KHSQ0R ou un groupe * \ r ® i · x CO-OR'1 ! h8 j: -N' ; K et R; ont les mêmes définitions que dans f 30 \ 6 f S02R , 5 t la formule générale (II); R* est un groupe -COP. , un grou pe -CO.OR5 ou un groupe -SG2Ré; R5 et R6 ont les mêmes 8

'! définitions que dans les formules (IVa) â (iVf); et R

est un groupe aikyie, spécialement un groupe alkyle con-J 35 tenant de 1 à 4 atomes de carbone. /

Ainsi, dans le cas où le procédé selon le premier/ * aspect de l'invention est appliqué à une kanamycine, on t l % ï 31 obtient habituellement un dérivé N-protégé de la kanamy— eine correspondant à la formule (V), dans lequel tous les groupes amino et alkylamino de la molécule de kanamycine autres que ceux qui occupent les positions 1 et 3"sont 5 bloqués. Néanmoins, si le groupe acyle à introduire comme groupe amino-bloquant a une grandeur stérique relativement importante, par exemple le groupe t-butoxycarbony-le, ou si la quantité molaire du réactif d'acylation utilisée est inférieure à la quantité stoechiométriquement 10 nécessaire pour acyler tous les groupes amino non complexés de la molécule de kanamycine et ce même si le groupe acyle du réactif d'acylation utilisé a une grandeur ordinaire, ou si la réaction d'acylation est arrêtée à un stade intermédiaire, on obtient un dérivé N-protégé de la 15 kanamycine dans lequel le nombre de groupes amino acylés de la molécule de kanamycine est inférieur à ce qu'il est dans le cas ci-dessus, et, dans des cas particuliers, on obtient un dérivé de kanamycine N-acylé dans une mesure limitée, dans lequel le groupe 6'-amino ou 6 '-alkylamino 20 est exclusivement acylé, étant donné que ce groupe 6'-amino ou 6'-alkylamino est plus réactif que les autres groupes amino de la molécule de kanamycine.

Le dérivé de kanamycine N-acylé de formule générale (V) est un produit intermédiaire important, utile dans la 25 préparation serai-synthétique de divers types de dérivés de la kanamycine. Le composé de formule (V) a une valeur plus grande comme substance intermédiaire pour la synthèse chimique, par exemple, en particulier lorsqu’il participe à un procédé de préparation d'antibiotiques amino-30 glycosidiques i-N-acylés semi-synthétiques, actifs contre les bacilles résistants à la kanamycine, par acylation du groupe 1-amino du dit composé (V) au moyen d’un acide CX-hydroxyl-ω- aminoalcanoïque, puis élimination des groupes protecteurs ces groupes amine» et/ou alkylamino bloques du 55 produit de ί-Ν-acylation obtenu.

Par exemple, lorsque le composé intermédiaire de formule (V) doit être acylé avec un groupe acyle, coEsme Γ

J

32 :ι , » * j i le groupe ( S)-*i-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxybutyryle, on peut faire réagir le composé de formule (V) dans un solvant organique approprié, comme le tétrahydrofuranne, avec un acide butyrique substitué en conséquence ou son dérivé 5 réactif équivalent, tel qu'un ester actif, par exemple 1' ii ester de N-hydroxysuccinimide, l'ester de N-hydroxyphta- I limide ou celui de p-nitrophénol, ce qui a pour effet de i former le produit de 1-N-acylation. Ensuite, 1'élimina- ® tion du groupe benzyloxycarbonyle et du groupe protecteur *! 7 i, 10 (Rf ) dans la formule (V) du produit de 1-N-acylation peut * être effectuée en appliquant une technique traditionnelle de^-déprotection", c'est-à-dire, par exemple, soit par J hydrolyse avec un acide ou une base, soit par réduction au moyen d'un métal réducteur, soit encore par hydrogéno-15 lyse catalytique avec de l'hydrogène, soit enfin par réduction de radical avec du sodium dans de l'ammoniac li-quide, pour donner un dérivé semi-synthétique de la kana-mycine ayant un groupe (S)-^-amino-2-hydroxybutyryle lié I au groupe 1-amino de la kanaraycine, dérivé qui est actif I 20 à l'égard des bacilles résistants et est représenté par SI 'la formule générale (VI) ci-dessous: { ! p2 1 25 nhcooh(ch2)2nh2

\r2 /i . K°K / °H

! \_i 0 N_/ R3 R1 / 30 ho-ck2 0 r~0, / (VI) ,1 ' \ X /.' ^ N mr ' y //.

. \ 2 / . . // HO ' * / ; 55 OH / i ; 1 ï f ! 33 12 3¾ daiici laqi**'l^-e R , R , R , R ont chacun la même définition que dans *a formule (III)* Dans la procédure ci-dessus, on peut généralement employer au lieu de l'acide (S)-4-benzyl-°x*! arbomrlamin°-2-hydroxybutyri^ue un dérivé N-protégé d' 5 un acide Λ-hydroxy-t:- aminoalcanoïque de formule (VII): H00CCH(CHo) NH0

j A H M

OH (VXD

dan» laquôlle n est un nombre entier égal à 1, 2 ou 3, poqr don'4«1* un dérivé l-N-( (S)-arhydroxy-U)-aminoalcanoyl) -10 ^a,iamyci,,e· j_‘invention embrasse en outre un procédé de prépa-ration un dérivé N-acylé sélectivement protégé d'un an-tiniotiçvie aminoglycosidique comportant une fraction 6-0-(3"-amir-‘ ou 3,,-alkylamino-3"-désoxyglycosyl ) -2-désoxy-15 st* eptarine aYant éventuellement un groupe 4-0-(aminogly-cosvle), dérivé dans lequel tous les groupes amino (y compris le groupe 3M-amino) autres que le groupe 1-amino de la molé< Ie d'aminoglycoside sont bloqués par des groupes at vies w-entiques ou différents.

20 ~«r le procédé selon le premier aspect de l'inven- tivin (a- *elé parfois procédé "du complexe de zinc" dans la SV;ite c présent mémoire), il est possible de préparer un ; dfcrivé '-acylé, sélectivement mais partiellement protégé ί de i»ar .biotique aminoglycosidique, dérivé dans lequel 25 toUs if, groupes amino autres que les deux groupes 1-amino , ex ^«_fI.no (ou 3M-alRylamino) de la molécule d'aroinogly- c-vside protégés par un groupe acyie, le groupe 1-ami- n.« * groupe 3M“amino (ou 3"-alicylamino) restant donc | s*ns pr section. Même si ce dérivé N-acylé partiellement I 30 P-·.. vitégr l'antibiotique aminoglycosidique est mis à ré- a$ir a’''·* UR acide CX-hydroxy-w-aminoalcanoïque ou son é-i ivalr - réactif pour effectuer la 1-N-acyiation décrite J* p . us h- *« il est de fait qu'on obtient un mélange de pro- o. · ·τε -scylation comportant (a) le produit 1-N-acylé dans 35 .1 v quel ?UI le groupe i-amino de la molécule c'aminoglyco- s >de a acylé par l'acide a-hydroxy-;c-aminoalcanoxque, ' K '· i f r odui t 3"“^”acylé, où seul le groupe 3M“amino (ou \ Ί < * I 3¾ ! 3"“alkylamino) a été acylé, (c) un produit dans lequel les I deux groupes, 1-amino et 3M“a®ino (ou 3"”31^1βπιχηο), ont I acylés et (d) la matière qui n’a pas réagi, dans laquelle | aucun des groupes 1-amino et 3"-amino (ou 3"-alkylamino) 5 n'a été acylé. Pour obtenir le produit de 1-N-acylation final désiré à partir du mélange ci-dessus, il est donc toujours nécessaire d'effectuer une opération supplémentaire, dans laquelle le produit de 1-N-acylation final est isolé du .mélange par chromatographie ou par un autre 10 procédé d'isolation. Comme le groupe 1-amino est heureusement plus réactif que le groupe 3T,-amina (°u 3"”alhylami-no), le rendement réel du produit de 1-N-acylation désiré est habituellement compris entre (10Sé et 60% environ et il est donc supérieur au rendement théoriquement maximal de 15 25e/i obtenu par le calcul en supposant que les groupes 1- ï. amino et 3M“amino (ou 3"-alkylamino) ont une réactivité | identique. Néanmoins, même si la réaction de 1-N-acylation '' est conduite dans des conditions optimales, il est inévi table que des produits N-acylés indésirables se forment 20 aussi et il faut donc toujours une opération supplémentai- ji re pour éliminer ces sous-produits gênants, opération qui i.

consiste le plus souvent à traiter soigneusement le pro- * duit mixte par chromatographie sur colonne.

Pour éliminer cet inconvénient, il est manifeste-25 ment nécessaire de préparer un dérivé N-acylé sélective-I ment protégé de l'antibiotique aminoglycosidique dans le- | quel tous les groupes amino autres que le groupe 1-amino | ont été protégés. Pour que cette condition soit remplie, | les auteurs de l'invention ont effectué d'autres recher- 30 ches en. vue de fournir un procédé qui permette de pro té-l ger sélectivement le groupe 3,r-«niino (ou 3"-alkylainino) ; du dérivé d’antibiotique aminoglycosidique N-acylé et t sélectivement, mais partiellement, protégé, qui, lors- j> qu'il est préparé selon le procédé "du complexe de zincr, 35 a ses groupes 1-amino et 3”-amino libres, et qui permette 1; ï cette protection sans bloquer le groupe 1-amino.

Ces recherches ont conduit les auteurs de l'inven-, ; / . 1 . « * 35 tion à découvrir que lorsque le dérivé N-acylé partiellement protégé d’antibiotique aminoglycosidique obtenu par le procédé du "complexe de zinc" est mis à réagir avec un agent acylant choisi parmi les esters de l'acide formique, 5 les esters des acides dihalo- ou trihaloalcanoïques, le N-formylimidazole, le groupe 3"“amino ou 3n -alkylamino peut être acylé préférentiellement aux fins de blocage sans qu'il y ait acylation du groupe 1-amino. Ce procédé de 3"-N-protection sélective peut être combiné au procédé 10 du "complexe de zinc" décrit plus haut (c'est-à-dire au procédé selon le premier aspect de l'invention), ce qui permet de produire d'une manière commode et efficace le dérivé N-acylé sélectivement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique comprenant une fraction 6-0-(3”-amino 15 ou 3,,-alkylamino~3,,-désoxyglycosyl)-2-désoxystreptamine, dérivé dans lequel tous les groupes amino autres que le groupe 1-amino de la molécule d'aminoglycoside ont été protégés sélectivement par des groupes acyles identiques ou différents. Cette combinaison du procédé du "complexe 20 de zinc" avec le procédé de 3"~N-protection sélective offre l'avantage que le dérivé d'antibiotique aminoglycosidique entièrement N-protégé sauf en position 1 de la molécule peut être préparé à partir de l'antibiotique ami-noglicosidique parent avec un rendement global de 70?®> 25 voire plus. Lorsque le dérivé précité est employé pour la 1-N-acylation de l'antibiotique aminoglycosidique, on bénéficie de l'avantage supplémentaire qu'il ne se forme pratiquement pas de sous-produits N-acylés indésirables, ce qui facilite considérablement la séparation et la pu-50 rification du produit de î-N-acylation désire.

Selon le deuxième aspect de la présente invention, il est donc fourni un procédé de préparation d'un dérivé N-acylé sélectivement protégé d'un antibiotique aminogly-cosicique comprenant une fraction 6-0-(3,!-s.3fino- ou V-55 alkylamino-3"-désoxyglycosyl)-2-désoxystreptanïine qui possède facultativement un groupe 4-0-(aminoglycosylé), dé-rivé dans lequel le groupe 1-amino de la fraction désoxy-/, * i i » . « • a , f· i Λ i ' f t.

i 36 ê - streptamine n'est pas protégé, mais tous les autres grou- ' f I pes amino de la molécule d'aminoglycoside sont protégés ! par des groupes acyles identiques ou différents, procédé qui consiste à faire réagir un ester d'acide alcanoxque 5 de formule (VIII): ii RaC-Rb (VIII)

II

0 a * dans laquelle R est un atome d'hydrogéné ou un groupe I dihaloalkyle ou trihaloalkyle contenant de 1 à o atomes I 10 de carbone et R est un groupe alkyloxy contenant de 1 à ii ’ï 6 atomes de carbone, un groupe aralkyloxv, spécialement jj I le groupe benzyloxy, un groupe aryloxy, spécialement le I groupe phényloxy, ou un N-formylimidazole, comme agent f acylant, dans un solvant organique inerte, avec un dérivé 15 N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminoglv-I cosidique, dans lequel les groupes 1-amino et 3”-amino (ou I 3"“alkylamino) ne sont pas protégés, tous les autres grou- :|· pes amino étant protégés par un groupe acyle comme groupe I amino-protecteur, pour effectuer l'acylation sélective du J1 * e » s 20 groupe 3"“ainino ou 3,,-alkylamino du dérivé N-acyle par- ii f , a J tiellement protégé avec le groupe acyxe R CO- du dit agent f acylant et donner ainsi le dérivé désiré, entièrement N- f # , I protégé sauf en position 1, de 1'antibiotique aminoglyco- Î! I sidxque.

23 Les antibiotiques aminoglycosidiques qui peuvent ? être utilisés dans le procédé selon le deuxième aspect de : i l'invention sont les mêmes que ceux qui ont été cités au cours de la description du procédé selon le premier as pect de l'invention.

30 Des formes de mise en oeuvre du procédé selon le deuxième aspect de l'invention sont maintenant décrites I de façon plus complète.

i Le dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibio tique aminoçlycosidique qui est mis à réagir avec l'agent 35 acylant de formule (VIII) selon le deuxième aspect de 1' f J invention et dans lequel tous les groupes amino autres / que les groupes 1-amino et -amino (ou 3,f ‘ölkylnniino) / f « 37 dans la molécule d'aminogiycoside sont protégés peut être un dérivé préparé par le procédé du "complexe de zinc” selon le premier aspect de l'invention. En conséquence, le groupe acyle initialement présent dans le dérivé N-acylé 5 partiellement protégé d'antibiotique aminoglycosidique u- tilisé dans le procédé selon le deuxième aspect de l'in- 5 5 vention est le même que le groupe acyle (R CO-, R 0C0- ou g R SO,.- dans la formule IV ) du réactif d'acylation eœ- 2 a-e ployé dans le procédé selon le premier aspect de l'inven-10 tion et il peut être, d'une manière générale, un groupe nlcanoyle, un groupe aroyle, un groupe alcoxycarbonyle, un groupe alkylsulfonyle, un groupe aralkylsulfonyle, un groupe aryloxycarbonyle ou un groupe arylsulfonyle connu comme groupe amino-protecteur traditionnel. En outre, le 15 dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibiotique aminoglycosidique employé comme matière de départ peut être aussi un dérivé préparé selon le procédé de Nagabhushan et col. décrit dans le brevet U,S. N" k 136 2p4.

Dans la mise en oeuvre du procédé selon le deuxiè-20 me aspect de l'invention, le dérivé N-acylé partiellement protégé d'antibiotique aminoglycosidique dans lequel les groupes 1-amino et 3"-amino (ou 3u“2ilkylamino) sont sans protection est utilisé comme matière de départ et il est mis à dissoudre ou mis en suspension dans un solvant or-25 ganique inerte approprié. On ajoute ensuite à la solution ou suspension qui en résulte un ester d'acide alcanoxque de formule (VIII)) ou du N-formylimidazole comme agent a-cylant dans une quantité au moins équimolaire à celle du dérivé utilisé. Le solvant organique inerte peut être 30 cle préférence un de ceux qui possèdent un pouvoir dis sol -vant élevé à l'égard de la matière de départ, par exemple le diméthylsulfoxyde, le diméthylformiamide et le triamide hexaméthylphosphorique, friais il est possible d'utiliser le tétrahydrofuranne, le dioxanne, 1'acêtonitriie, le ni-35 trométhane, le sulfolane, le diméthylacétamide, le chloroforme, le dichloromêthane, le inéthanol, l'éthanol, le r-butanoi et le t-butanol, ainsi eue les formes aoueuses * - f 38 , : de ces solvants. On peut utiliser le benzène, le toluène et l'éther sulfurique comme milieu réactionnel dissolvant, bien qu'ils ne soient pas très appropriés, donnant un moins bon rendement du produit désiré. Avec l'agent acy-5 lant de formule (VIII), R peut être de préférence un groupe dihaloalkyle ou trihaloalkyle, en particulier le dichlorométhyle, le trifluoromêthyle ou le trichlorométhy-le, et peut être de préférence un groupe alkyloxy, comme le groupe méthoxy ou éthoxy. Lorsque R est un groupe 10 aryloxy, il peut être le groupe phénoxy. On peut citer jb 1 comme exemples de l'agent acylant de formule (VIII) en particulier le formiate de méthyle, le formiate d'éthyle, le formiate de butyle, le formiate de benzyle, le formiate de phényle, le dichloracétate de méthyle, le trichloracé-I 15 täte de méthyle, le trichloracétate de phényle, le tri- fluoracétate de méthyle, le trifluoracétate d'éthyle et le trifluoracétate de phényle. En utilisant cette catégo-rie d'agent acylant, on peut formyler, dichloracétyler, j! trichloracétyler ou trifluoracétyler préférentiellement f; I 20 le groupe 3”-amino du produit de départ. Un ester de 1' ί . acide trifluoracétique, spécialement le trifluoracétate d'éthyle, est préférable à tous autres. Cette catégorie ; de groupe acyle présente l'avantage qu'elle est très fa- t eile à éliminer au cours de la phase ultérieure de N- I 25 déprotection par une méthode classique d'élimination des «j ({ groupes protecteurs. Si l’on n'utilise pas comme agent acylant un ester d'acide alcanoïque et d'alcanol de formule (VIII), mais à sa place un anhydride d’acide alcanoïque ou un ester actif de celui-ci, comme l'ester de N-30 hydroxysuccinimide (ce qui n'est pas conforme au second aspect de l'invention), on ne peut obtenir l'acylation ! sélective du groupe 3n”ainino 1 mais il se forme simulta- : nément un produit 1-N-acylé et/ou un produit d'acylation * mixte qui contient le produit 1-N-acylé. II est remarqua- i . .

f 35 ble qu'on ne peut obtenir l'acylation sélective recher- / i ! ’f chée du groupe 3"-aroino lorsqu'on utilise comme agent a-// : i. f f I cylant un anhydride ou un ester actif du même acide al-'f ' t :l 39 canoïque.

Les agents acylants de formule (VIII) qu'on peut utiliser dans le procédé selon le deuxième aspect de 1' invention ont des réactivités diverses, comprises dans u-5 ne gamme étendue entre "forte" et "faible". Lorsqu’on u-tilise un agent acylant ayant une forte réactivité, la réaction d'acylation peut se dérouler sur une courte période en refroidissant. Par contre, lorsqu'on utilise un agent acylant ayant une faible réactivité, la réaction d' 10 acylation peut être effectuée soit en chauffant, soit sur une période de temps plus longue. D'une manière générale, toutefois, la température de réaction appropriée peut être comprise entre -30°C et + 120°C et le temps de réaction convenable peut être compris entre 30 minutes et 24 15 heures, voire 48 heures.

Le produit sélectivement 3"-N-acylé désiré peut être isolé du mélange réactionnel d'une manière connue, par exemple par évaporation du solvant ou par précipitation avec addition d'eau, si nécessaire, opérations sui-20 vies d'une purification du produit.

Le mécanisme réactionnel permettant la 3,,-N-acyla-tion sélective dans le procédé selon ce deuxième aspect de l'invention n'est pas encore complètement expliqué.

Une interprétation possible est que l'agent acylant de 25 formule (VIII) acyle tout d'abord un groupe hydroxyle du produit de départ pour former un ester comme produit intermédiaire et qu'ensuite ce groupe acyle 0-estérifiant est déplacé ou émigre vers un groupe amino (en l'occurrence le groupe 3"-amino ou y*-alkylamino ) lorsque ce dernier 30 est voison de 1'hydroxyle estérifié au stade intermédiaire, ce qui entraîne l'acylation de ce groupe amino. Si l'on adopte cette hypothèse, il est possible de comprendre pourquoi le groupe 1-amino, qui ne voisine avec aucun groupe hydroxyle, ne peut être acylé dans le procédé se-35 Ion le deuxième aspect de l'invention. D'ailleurs, il est / un fait que cet ester intermédiaire ne peut être obtenu -/ lorsque la tri.fluoracétylation ou la formylation est con- // Ί .

* ko duite conformément au procédé selon ce deuxième aspect de l'invention. La raison pour laquelle cet ester ne peut ê-j tre isolé lors de la trifluoracétylation ou de la formyla tion est probablement que le groupe O-trifluoracétyle ou 5 O-formyle est instable et qu'une quantité de ce groupe 0-» acyle instable qui n'a pas subi la migration vers le grou- ! . pe amino (la migration connue de 1'acyle de 0 vers N) est éliminée du groupe hydroxyle acylé au cours de la séparation et de la purification du produit de la 3"“N-acylation 10 de façon à restituer le groupe hydroxyle libre. L'invention n’est toutefois pas limité à cette interprétation du mécanisme réactionnel qui entre en jeu dans le dit procédé. De toute façon, il semble que parmi les composés qui peuvent être utilisés comme agent acylant de formule (VIliO 13 dans le procédé selon le deuxième aspect de l'invention, 1 ceux qxii conviennent le mieux sont ceux qui possèdent un ! groupe acyle susceptible de donner un ester plus instable I lorsqu'il est transformé en groupe 0-acyle par réaction avec le groupe hydroxyle et donne ainsi un produit ester.

20 II est en attendant très intéressant de noter que lorsque le procédé selon le deuxième aspect de l'invention est mis en oeuvre en utilisant à la place du N-formylimidazo-le un N-alcanoylimidazole, comme le N-acétylimidazole, le N-propionylimidazole et le N-butyroylimidazole, le groupe 25 3*'“amino ou 3"-alkylamino du dérivé N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminoglycosidique n'est pas a-cylé, mais un groupe hydroxyle voisin du dit groupe 3"-! amino ou 3"-alkylamino peut être estérifié par le groupe ? alcanoyle du N-alcanoylimidazole employé pour donner un I 30 produit intermédiaire d’G-estérification. Lorsque ce pro- I duit d'O-esterification ou l'ensemble du mélange réaction- i J nel contenant ce produit est ensuite traité avec un réac- ! tif alcalin, comme l'hydroxyde d'ammonium, à la températu- ; re ambiante, le groupe alcanoyle 0-estérifian.t est amené j 35 à glisser ou migrer vers le groupe 3"-amino ou 3M“aiKyi- I amino voisin, d'où il résulte une acylation et donc une J* f/ I protection sélective de ce groupe 3"-eroino ou 3"-aIfcylanii~j' w' i kl . % no. Ainsi, on ne constate pas la présence du produit 3"-N-acylé désiré dans le mélange de la réaction du dérivé N-acylé partiellement protégé de l'antibiotique aminogly-(Dsidique avec un N-alcanoylimidazole, mais on ne peut en 5 séparer le dit produit 3"-N-acylé désiré qu'après l'avoir rendu alcalin en le traitant avec un réactif alcalin tel que l'ammoniaque (cf. Exemple 7i).

Comme application intéressante des procédés selon le premier et le deuxième aspect de l'invention, il est 10 possible de fournir un procédé d'un rendement élevé pour la préparation de l'antibiotique aminoglycosidique 1-N-acylé, qui est un agent antibactérien semi-synthétique connu. La présente invention embrasse donc aussi un procédé de préparation d'un antibiotique l-N-(a-hydroxy-to-anii-15 noalcanoyl) aminoglycosidique en partant de l'antibiotique aminoglycosidique parent, procédé qui consiste en une combinaison de la préparation, par le procédé selon le premier aspect de l'invention, dit procédé du "complexe de zinc, un dérivé N-acylé partiellement protégé de l'anti-20 biotique aminoglycosidique de départ, dans lequel les groupes 1-amino et 3u-amino ou 3n-alkyla®ino ne sont pas protégés et tous les autres groupes amino sont protégés, de la préparation, par le procédé de 3"-N-acylation sélective selon le deuxième aspect de l'invention, du dérivé 25 dont tous les groupes amino sont protégés à l'exception du groupe 1-amino, de l'acylation du groupe 1-amino de ce dernier dérivé avec un acide CC-hydroxy—--aminoalcanoï-que, spécialement l'acide 3-amino-2-hydroxypropionique (isosérine) ou l'acide 4-amino-2-hydroxybutyrique, et 30 enfin de l'élimination des groupes protecteurs dans le produit de 1-N-acyiation ainsi obtenu.

Plus particulièrement, sous un troisième aspect, 1' invention fournit un procédé meilleur de préparation d'un dérivé l-N-(cx-hydroxy-^-aminoalcanoyle) d'un antibiotique 35 aminoglycosidique comportant une fraction o-G-( 3,f-amxno- ou 3"-alkylamino-3"-dé soxyglycosyl)-2-dé soxys treptamine f / ayant facultativement un groupe 4-0-(ansinoglycosylé), le .../

J

* • * * 9 « f k2 dit procédé consistant à: (a) faire réagir des cations de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique de départ dans un solvant organique inerte pour produire le complexe de ces cations 5 de zinc avec cet antibiotique aminoglycosidique; (b) faire réagir un réactif d'acylation possédant un groupe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur avec le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc formé au cours de l'étape précédente (a), in situ 10 dans le solvant organique inerte, pour produire un complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé dans lequel les groupes amino initialement non complexés sont acylés; ' (c) faire réagir le complexe dérivé sélectivement 15 N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc obtenu au cours de l'étape (b) précédente avec un réactif qui élimine les cations de zinc du complexe de !· zinc N-acylé, pour obtenir un dérivé N-acylé, partielle- f | ment et sélectivement protégé, de l'antibiotique amino- f 20 glycosidique, qui est exempt de cations de zinc et dans lequel les groupes 1-amino et 3n“anri.n° ou 3"-alkylamino ne sont pas protégés, tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside étant protégés par le groupe acyle; 25 (d) faire réagir le dérivé N-acylé, partiellement et sélectivement protégé, de l'antibiotique aminoglycosidique obtenu au cours de l'étape (c) ci-dessus avec un ester d'acide alcanoxque de formule (VIIl)ï RÔC-Rb (VIII)) 30 0 dans laquelle R est un atome d'hydrogéné ou un groupe dihaloalkyie ou trihaloalkyle contenant de i à 6 atomes b de carbone et R est un groupe alkyloxy contenant de 1 à é atomes de carbone, un groupe aralkyioxy contenant de 1 35 à 6 atomes de carbone dans sa fraction alkyle, en particulier le groupe benzyloxy, ou un groupe aryloxy, en particulier le groupe phénoxy, ou le N-formyliraidazole, comme j ‘ // . i j' * 43 » • » agent acylant, dans un solvant organique inerte pour acy-1er sélectivement le groupe 3"**amino ou le groupe 3"-*al“ kylamino avec le groupe acyle R CO- du dit agent acylant et donner ainsi le dérivé de l'antibiotique aminoglycosi-' 5 dique dans lequel tous les groupes amino autres que le groupe 1-amino sont protégés par le groupe acyle, (e) faire réagir le dérivé entièrement N-protêgê sauf en position 1 obtenu au cours de l'étape (d) précédente avec tin acide a-hydroxy-<j-aminoalcanoïque de for- 10 mule (IX) ci-dessous: H00C-CH(CH_) NHL (IX) ά m ά dans laquelle m est 1 ou 2, ou un dérivé réactif équivalent, dans lequel le groupe amino est protégé ou non, pour acyler le groupe 1-amino du dérivé d'antibiotique précité, 15 et (f) éliminer les groupes amino-protecteurs résiduels du produit de 1-N-acylation obtenu au cours de 1' étape (e) précédente par une méthode d'élimination traditionnelle.

20 II est décrit maintenant de façon plus complète comment mettre en oeuvre le procédé selon ce troisième aspect de l'invention.

Les antibiotiques aminoglycosidiques qui peuvent ê-tre utilisés comme antibiotique de départ dans la première 25 étape de ce procédé sont les mêmes que ceux indiqués dans la description du procédé selon le premier aspect de l’invention et la réaction qui produit le complexe des cations de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique s'effectue de la même manière que celle déjà décrite. L'acylation 30 du complexe antibiotique aminaglycosidique-cations de zinc ainsi obtenu en (a) peut s'effectuer, dans la seconde é-tape (b) du présent procédé de la manière que celle décrite pour le procédé selon le premier aspect de l'invention. L'élimination des cations de zinc du complexe antibiotique 35 aminoglycosidique sélectivement N-acylé-cations de zinc ainsi obtenu peut s'effectuer, au cours de la troisième f! étape (c) du présent procédé, ce diverses manières déjà / j-v :/ I« » 44 I décrites et permet d'obtenir un dérivé N-acylé, partielle- 4i ment et sélectivement protégé, de l'antibiotique aminogly-cosidique, qui est exempt de cations de zinc et dans lequel les groupes 1-amino et 3*' -amino ou 3n-alkylamino ne 5 sont pas protégés, mais tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside sont bloqués par le groupe acyle du réactif d'acylation employé dans l'étape (b) du présent procédé. Ce dérivé N-acylé, partiellement et sélectivement protégé, de l’antibiotique aminoglycosidique 10 est ensuite mis à réagir avec un ester d'acide alcanoïque de formule (VIII) ou le N-formylimidazole au cours de 1' j; étape (d) du présent procédé de la même manière que celle p | déjà décrite à propos du procédé selon le deuxieme aspect de l'invention, pour obtenir la 3M-N-acylation sélective il 15 du dérivé partiellement N-protégê de l'antibiotique ami- !' noglycosidique sans acylation du groupe 1-amino qu'il contient.

1 Au cours de la cinquième étape (e) du présent pro cédé, le dérivé entièrement protégé sauf en position 1 20 obtenu au cours de l'étape précédente (d) est mis à réagir avec un acide d-hydroxy-^-aminoalcanoïque de formule (IX), en particulier l'acide 3-amino-2-hydroxypropionique (comme la DL-isosérine, la D-isosérine ou la L-isosérine) ou 1' , acide L-4-amino-2-hydroxybutyrique, pour acyler le groupe

' »I

i' 25 1-amino de l'antibiotique aminoglycosidique avec le grou- Ψ, I pe 3-amino-2-hydroxypropionyle ou le groupe 4-amino-2-hy- £ droxybutyryle. Cette 1-N-acylation peut être effectuée d' jj jj une manière générale comme celle décrite dans le brevet britannique N° 1 42o ou le brevet U.S. 4 001 208, sui-Ί 30 vant n'importe quelle méthode connue de synthèse des ami- I des, par réaction du dérivé protégé de l'antibiotique a- minoglycosidique avec une isosérine ou l'acide L-4-amino- k * 2-hydroxybutyrique, soit sous sa forme d'acide libre, soit sous celle de son équivalent réactif, telle qu’un ester * 35 actif, par exemple l’ester de dicyclohexylcarbodiimide, f de son anhydride mixte, de son azide, dans un solvant or- f f j. , , , ' / * ganique inerte, comme le dioxanne, le diméthoxyétbane, le ✓ 45 diméthylforraiamide, le tétrahydrofuranne, ou les formes aqueuses de ces solvants. L'isosérine et l'acide L-4-ami-no-2-hydroxybutyrique peuvent avoir leur groupe amino bloqué par un groupe araino-protecteur. Le groupe amino-pro-5 tecteur convenable à cet effet peut être identique ou différent de celui utilisé dans le dérivé entièrement N-protégé sauf en position 1 qui doit être acylé en l*a-raino. Le groupe t-butoxycarbonyle est un groupe amino-protecteur préféré, car on peut facilement l'éliminer en 10 traitant avec un acide dilué comme l'acide trifluoracétique aqueux, l'acide acétique aqueux et l’acide chlorhydrique dilué. Le groupe benzyloxycarbonyle, qu'on élimine par hydrogénolyse catalytique traditionnelle en utilisant de l'oxyde de palladium ou de platine comme catalyseur, 15 ainsi que le groupe phtaloyle, qui est facilement éliminé par hydrolyse avec l'hydrazine, conviennent parfaitement comme groupe amino-protecteur à cet effet.

La réaction d'acylation dans l'étape de 1-N-acyla-tion (e) du procédé selon le troisième aspect de l'inven-20 tion peut être conduite de préférence dans un solvant organique aqueux en utilisant un ester actif de l'acide a-hydroxy-Q-aminoalcanoïque de formule (IX). L'ester actif convenable peut être l'ester de N-hydroxysuccinimide de l'isosérine ou de l'acide L-4-benzyloxycarbonylamino-2-25 hydroxybutyrique et cet ester actif peut être employé dans une quantité de 1 à 2 moles, de préférence de là 1,5 mole par mole de 1'aminoglycoside à Î-N-acyler. Le solvant organique miscible avec l'eau à utiliser dans le milieu réactionnel peut être de préférence le dioxanne, le dimé-30 thoxyéthane, le diméthylformiamide, le tétrahydrofuranne.

âpres l'étape (e), l'étape (f) d'élimination des groupes amino-protecteurs résiduels a pour but de débarrasser le produit de i-K-acylation obtenu à l'étape (e) de tous ses groupes amino-protecteurs. Cette élimination 35 peut s'effectuer en appliquant une méthode traditionnelle. Un groupe amino-protecteur de type alcoxycarbonyle peut / / t être éliminé par hydrolyse avec une solution aqueuse d' ,y * % Μ . 46 .

acide trifluoracétique ou d'acide acétique, ou avec une solution acide diluée, comme l'acide chlorhydrique dilué.

Un groupe amino-protecteur résiduel de type aralkyloxycar-bonyle, par exemple le benzyloxycarbonyle, est facilement 5 éliminé par hydrogénolyse catalytique traditionnelle. Lorsque tous les groupes amino-protecteurs résiduels sont é-liminés du produit de 1-N-acylation obtenu à l'étape (e) du présent procédé, on obtient l'antibiotique l-N-(2-hy-droxy-3-arainopropionyl)- ou l-N-(2-hydroxy-4-aminobutyryl) 10 -aminoglycosidique désiré avec un rendement élevé.

Des exemples de l'antibiotique l~N-(a-hydroxy-ü~a-minoalcanoyl)-aminoglycosidique préparé par le procédé selon ce troisième aspect de l'invention sont énumérés ci-dessous:

15 (l) l-N-(L-4-amino-2hydroxybutyryl)-kanamycine A

* (2) l-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-3'-désoxy-

kanamycine A

ü (3) l-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-3',4'-di-

désoxvkanamycine A

20 (4) l-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-tobramycine (5) 1-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-dibékacine (6) 1-N-(3-amino-2-hydroxypropionyl)-dibékacine.

I Une autre application des procédés selon le premier et le deuxième aspect de l'invention consiste à pré- 25 parer l'antibiotique 1-N-alkylaminoglycosidique à partir de tous les dérivés N-acylês aminoglycosidiques dans lesquels le groupe 1-amino n'est pas protégé, et comme exemple de cette application, on peut citer la préparation de la nétylmycine ou de ses analogues 1-N-alkyles à par- • 30 tir de la sisomycine par alkylation avec ur. aldéhyde et

Ile cyanoborohydrure d'un hydrocarbure aliphatique inférieur.

L'invention sera maintenant illustrée à l'aide des exemples suivants, qui n'en constituent en aucune façon 35 une limitation.

1 Exemple 1 /

Prénaration de la 3*6'-di-N-benzvloxvcarbonvikanamvcir e A

i L * kl , - « • * (i) On met en suspension 2,0 g (4,13 m moles) de kanamycine A (base libre) dans un mélange de dimétbylsulfoxyde (50 ml) et de tétrahydrofurane (20 ml) ; on ajoute à la suspension 4 g (18,lm moles) d’acétate de zinc (II) dihydrate ; 5 on agite ensuite à température ambiante jusqu’à ce que le mélange réactionnel forme une solution homogène. Il faut environ 4-5 heures pour qu’un complexe de zinc de kanamycine A soit formé et se dissolve. La solution résultante est ensuite refroidie à 0°C ; on y ajoute lentement pendant 10 environ une heure une solution refroidie (à 0°C) de 2,37 g (9,5m moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide (CgH^CHgOCOO-N^^I ) dissous dans 40 ml d’un mélange lîl en volume de o tétrahydrofurane-diméthylsulfoxyde. La 15 solution réactionnelle est maintenue à température ambiante pendant 4 heures, pendant lesquelles le complexe de zinc de kanamycine A subit une benzyloxycarbonylation. (l'acylation conformément au premier aspect de l’invention) .

20 Un échantillon prélevé de la solution réaction nelle ainsi obtenue est soumis à une chromatographie en couche mince sur gel de silice en utilisant, comme solvant de développement la phase liquide inférieure d’un mélange chloroforme-méthanol-ammoniaque à 28 % (1:1:1 en 25 volume) qui donne une tache principale du produit désiré à = O» 23 et deux ou trois taches mineures attribuées aux sous-produits à des points supérieurs.

(ii) La solution réactionnelle ci-dessus est versée dans 5OO ml d’éther éthylique et l'huile séparée est lavée à 30 plusieurs reprises avec d’autres quantités d’éther éthylique pour donner 8,8 g d’une matière sirupeuse épaisse.

(iii) On effectue l'élimination du cation zinc du matériau sirupeux (comprenant essentiellement le complexe de zinc» selon l'un ou l’autre des procédés suivants : 35 A - Procédé utilisant une résine échangeuse de cations faiblement acide porteuse d'un groupe carboxyl (-CG0H) comme groupe fonctionnel vendu sous le nom d”'Amberlite i.

» , ' + • 48 , CG 50» (forme H+) par Rohm & Haas Ce U.S.A.).

; On sature tout d’abord soigneusement 60 ml de j résine Amberlite CG 50 (forme H+) avec un mélange eau- dioxanne(2 :1) puis on en garnit une colonne. On fait | 5 passer dans la colonne une solution de 1 g de substance ,j sirupeuse dans 20 ml d’eau-dioxanne(1:1) puis on dévelop- j pe avec de 11eau-dioxanne(2:1) contenant 1 % d’acide acé- | tique. L’éluat est rassemblé en fractions. La 3»6’-di-N- benzyloxycarbonylkanamycine A, positive à la réaction à * 10 la ninhydrine, est d’abord éliminée de la colonne par élution et l’acétate de zinc, sensible à la coloration j par le diphénylcarbazide, est ensuite éliminé par élution.

Les fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité. Le résidu est lavé à l’éther 15 éthylique pour donner 3^0 mg (8l ?») de 3 ,6 * -di-N-benzy-loxycarbonyllcanamvcine A sous forme de solide incolore. (·)?=·*· «· *· eau-diméthylformamide 1:2).

Analyse élémentaire

Calculé pour C^H^N^O^.aCH COgH-HgO ; 20 C 51,23 ; H 6,56 ; N 6,29 %

Trouvé C 51,02 ; H 6,71 î N 6,22 % B - Procédés utilisant une résine écnangeuse de cations I faible portant un groupe carboxylate comme groupe fonc- tionnel (vendu sous le nom d* "Amberlite CG 50" (forme i + i( 25 NH. ) par Rohm & Haas C°).

4 * lg du matériau sirupeux obtenu dans l’exemple 1 I ci-dessus (ii) est dissous dans 20 ml d'eau-dioxanne(1: 1) j I on fait passer la solution dans une colonne de 60 ml de ^ résine Amberlite CG 50 (forme ) ; on la soumet à une 3O élution par gradients linéaires avec de 1 *eau-dioxanne / (1:1) avec des concentrations en ammoniaque allant de 0 à 0,1 N. On n’élue pas de cation zinc mais on élue la 3,6’-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A. Les fractions de l’éluat contenant le produit de benzyloxycarbonvlation 35 désiré sont concentrées à siccité pour donner 328 mg " ^89 /0 du produit désiré sous forme de solide incolore. / ' 1, eau-cîiméthylformamide, 1:2). . /

F

• *

Analyse élémentaire

Calculé pour VWw; »2C03 · C 52,87 Î H 6,30 ; N 7,15 %

Trouvé C 52,50 ; H 6,59 ; N 7,00 % 5 C - Procédé utilisant une résine échangeuse de cations portant un groupe fonctionnel fortement acide -SO^H (vendu sous le nom de "Dowex 50W X 2" par Dow Chemical C*·).

On garnit une colonne avec 30 ml de résine Dowex 50W X 2 (forme H+) qui a été immergée dans l'eau-10 dioxanne(2:1) ; on y fait alors passer une solution de lg de la matière sirupeuse obtenue dans l’exemple 1 (ii) dans 20 ml d'eau-dioxanne(2:1). La colonne est lavée avec de l'eau-dioxanne(2:1) jusqu'à neutralité de l’effluent, puis on fait une élution par gradients linéaires avec de 15 l’eau-dioxanne(2:1) avec des concentrations en ammoniaque allant de 0 à IN. Les fractions de l’éluat contenant la 3,6’-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A sont concentrées à siccité sous pression réduite pour donner $11 mg (84 %j d’un solide blanc identique à celui obtenu dans l'exemple 20 1 (iii) (B).

D - Autre procédé utilisant le Dowex 50W X 2.

On fait passer dans une colonne de 30 ml de Dowex 50W X 2 (forme H+) préalablement mouillée avec de l'eau-méthanol (3:1) une solution de lg de la matière sirupeuse 25 obtenue dans l’exemple I (ii) dans 20 ml d’eau-méthanol (3:1)· La colonne est bien lavée avec de 1'eau-méthanol (3:1) puis on fait une élution par gradients avec de 1’eau-méthanol avec des concentrations en C1H de O à 6 N· Les fractions actives contenant la 3,6’-di-N-benzyloxy-30 c arbonylkanamyc in e A désirée sont rassemblées et mélangées à une résine échangeuse d'anions fortement basique (forme 0H) en quantité suffisante polir rendre le mélange légèrement acide»

Le mélange est filtré, et le filtrat concentré 35 à siccité pour donner 285 mg (72 %) du produit désiré Γ ^25 f // sous forme de dichlorhydrate· J et ; = + 79* (c 1, eau / L · // diméthvlformamide 1:2). /' 50 • * E — Procédé utilisant une résine échangeuse d'anions portant un groupe fonctionnel ammonium quaternaire fortement basique (vendu sous le nom de "DOWEX 1 X 2" par Dow Chemical).

5 Une solution de lg de la matière sirupeuse, ob tenue dans l'exemple 1 (ii), dans 1'eau-dioxanneest placée dans une colonne de 30 ml de résine Dowex 1X2 (forme OH) préalablement imprégnée avec de 1'eau-dioxanne (1:1) puis la colonne est développée a. vitesse relative— 10 ment élevée avec de 1'eau-dioxanne(1:1). Les fractions de l'éluat contenant le produit désiré sont rassemblées et concentrées à siccité pour donner 305 mg (84 %) d'un solide incolore identique à celui de l'exemple 1 (iii) B.

! F - Procédé utilisant une résine échangeuse d'anions por- 15 tant un groupe fonctionnel faiblement basique (vendu sous le nom de "Dowex WGR" par Dow Chemical C°).

I 1 g de la matière sirupeuse obtenue dans l'exemple 1 (ii) est dissous dans 20 ml d'eau-dioxane (2:1) et on I fait passer la solution dans une colonne de 50 ml de I 20 Dowex WGR (forme base) préalablement saturée à l'eau dioxanne(2:1) puis on élue à 1'eau-dioxanne(2:1). La 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A est éliminée par élution en quelques fractions, avec entraînement d'une trace de zinc. Ces fractions sont combinées et concen-25 trées à siccité pour donner 450 mg d'un solide incolore.

Le solide peut être directement utilisé comme matériau de départ pour la production de la 1-N((S)-4~amino-2-hy-droxybutyryl)kanamycine A selon la méthode d'acylation 1-N de l'exemple 31 ci-aprèst dans laquelle les traces 30 de cation zinc restant dans le solide de départ n'exercent pas d'influence adverse sur la réaction d'acylation [i mise en jeu dans ledit exemple 31· G - Procédé utilisant une résine d'échange-chélate portant un groupe fonctionnel faiblement acide (vendu sons le nom j 33 de "Dowex A 1" par Dow Chemical C* Ü.S.A.).

On introduit une solution de 1 g de la matière./ / sirupeuse, obtenu dans l'exemple 1 (ii), dans l'eau- / .y . l· a « • i 51 dioxanne (1:1) dans une colonne de 50 ml de résine Dowsx A 1 qui a été saturée avec de 1'eau-dioxanne (1:1) contenant 1 % d'ammoniaque puis on fait une élution par gradients avec des mélanges eau-dioxanne (1:1) avec des conc.

5 en NH^OH de 0 à IN. Les fractions d'éluat contenant la 3,6' -di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A qui ne sont élu-ées que dans une phase postérieure comme effluent de la colonne sont combinées et concentrées à siccitê pour donner 272 mg (7^ %) du produit désiré sous forme de 10 solide blanc.

H - Procédé utilisant le Qiitosan (polymère insoluble dans l'eau contenant des groupes fonctionnels susceptibles de se combiner avec un métal, vendu par Tokyo Kasei Koyo C*, Japon).

15 On imprègne soigneusement 100 ml de Chitosan avec de 1 *eau-méthanol (3:1) et on en garnit une colonne dans laquelle on fait passer une solution de 1 g de la matière sirupeuse, obtenue dans l'exemple 1 (ii), dans 1'eau-méthanol (3:1)· La colonne est soumise à un déve-20 loppement avec de 1'eau-méthanol (3:1), la 3 »6*-di-N-ben-zyloxycarbonylkanamycine A étant éluée en premier et l’acétate de zinc l'étant beaucoq>plus tard. Les fractions d'éluat contenant la première matière sont combinées et concentrées à siccité pour laisser un résidu 25 qui est dissous dans 1'eau-dioxanne (i:l) et la solution est placée dans une colonne de résine Amberlite CG 50 (forme NH^+) prétraitée à 1 *eau-dioxanne 1:1 . La colonne est bien lavée à 1'eau-dioxanne (1:1) puis soumise à une élution par gradients à 1'eau-dioxanne (1:1) avec des 30 concentrations en ammoniaque allant de 0 â 0,1 K. Les fractions sensibles à la réaction à la ninhydrine sont combinées et concentrées à siccité pour donner 301 mg (82 %) d'un solide incolore identique à celui obtenu dans l'exemple 1 (iii) (B).

/ 35 I - Procédé utilisant un polymère élevé portant des groupes fonctionnels carboxyl (vendu sous le nom de "CM-Sepha·* j dex" C-25, agent de filtration-gel échangeur d'ions qui / ^ // « * 52 est un gel de dextrane carboxymétnyl substitué, vendu par Pharmacia Fine Chemical C°, Suède).

On fait passer une solution de 1 g de la matière sirupeuse, obtenue dans l'exemple 1 (xi), dans l'eau-dio-5 xanne (1:1) au travers d'une colonne de kO ml de CM Sepha-dex C 25 (forme NH^+) qui a été saturée avec de l'eau-dioxane (1:1). La colonne est lavée avec 200 ml d'eau-dio- I xanne (1:1) puis soumise à une élution par gradients en utilisant 1'eau-dioxanne (1:1) avec des concentrations en 10 ammoniaque allant de 0 à 0,1 N. On n'élimine pas de ca- »! ‘i tion zinc mais seulement la 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl- !! kanamycine A. L'éluat est concentré à siccité pour donner 1 3Ο3 mS (82 %) d'un solide incolore identique à celui de , l'exemple 1 (iii) (B).

15 J - Procédé utilisant l'hydrogène sulfuré pour précipiter le zinc.

On dissout 1 g de la matière sirupeuse obtenue ,, dans l'exemple 1 (ii) dans 20 ml d' eau-méthanol (1:1), j on y ajoute de l'ammoniaque aqueux, puis l'on introduit j 20 une quantité suffisante d'hydrogène sulfuré. Le mélange réactionnel contenant le précipité de sulfure de zinc est filtré sur filtre de verre rempli de l'adjuvant de filtration "Celite" et le filtrat est concentré sous pression réduite pour donner une matière sirupeuse qui est bien f 25 lavée à l'éther éthylique pour obtenir un résidu solide.

Ce résidu est repris dans un volume d'eau-dioxanne (l:l) et la solution est chromatographiée sur une colonne de « 30 ml d'Amberlite IRA 900 (forme OK, résine fortement ba sique de Rohm & Haas C°) avec 1'eau-dioxanne (1:1) comme 30 solvant de développement. L'éluat est rassemblé en fractions et les fractions contenant la 3»6’-di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A sont combinées et concentrées à siccité pour donner 235 mg (6½ %) d'un solide incolore identique à ce-: lui de l'exemple 1 (iii) (B).

[ 35 Exemple_2 I Préparation de la 3«6'-di-X-benzyloxycarbonylkanainycine A , /

On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de ka- i ir ! · / • ♦ 53 namycine A (base libre) dans 15 roi de diméthylsulfoxyde, puis on ajoute 420 mg (3,09m mole^ de chlorure de zinc et 840 mg (6,18 m moles) d’acétate de sodium trihydrate.

Après agitation du mélange à température ambiante pen- i j 5 dant 4 heures, on ajoute lentement en environ une heure ! au mélange contenant le complexe de kanamycine A-zinc formé, une solution de 675 mg (2,27 m moles) de N-benzyl-oxycarbonyloxyphtalimide 0 10 C^H-CILOCOON' dissous dans 10 ml 05 2 's.

: o de diméthylsulfoxyde. Le. mélange obtenu est laissé reposer à température ambiante pendant 4 heures.

15 On traite ensuite le mélange réactionnel de la ma nière décrite dans l’exemple 1 (ii) et (iii) (I) pour ob-! tenir 598 mg (74 %) de 3,8’-di-N-benzyloxycarbonylkanamy- cine A sous forme de solide incolore.

Exemple 3 20 Préparation de la 3,8»-di-N-benzyloxycarbonylkanamycinc A On agite pendant une heure 600 mg (0,95 ni mole) de tétra-chlorhydrate de kanamycine A et 150 mg (3,8 m moles) d’hydroxyde de sodium dans 15 ml de diméthylsulfoxyde, puis on ajoute 1 g (4,55 m moles) d’acétate de zinc dihydrate, 25 opération suivie d’une agitation continue pendant 5 heures supplémentaires. On ajoute en 30 minutes au mélange contenant le complexe kanamycine A-zinc formé une solution de 545 mg (2,2 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxy-succinimide dissous dans 5 roi de diméthylsulfoxyde-iétra-30 hydrofuranne (1:1). Après avoir agité toute une nuit à température ambiante le mélange obtenu, on y ajoute de l’éther éthylique pour déposer le complexe de zinc-N-acé-tylé sous forme de précipité. Le précipité est alors traité selon le processus décrit dans l’exemple 1 (iii) (H) pour 35 donner 5,8î mg (78 %) d’un solide incolore du composé en question. / y

Exemple 4 / ί I · J 5¾

Préparation de la 3 * 6 *-di-N-benzyloxycarbonylkanamvcine A

(i) On dissout 500 mg (1,03 m moles) de kanamycine A (base libre) dans 20 ml d'un mélange eau-diméthylsulfoxyde (1:2) auquel on ajoute alors 1 g(4,55 ra moles) d'acétate 5 de zinc dihydrate puis 590 mg (2,¾ m moles) de N-benzyl-oxycarbonyloxysuccinimide. Après avoir laissé le mélange reposer toute une nuit à température ambiante, on ajoute au mélange une grande quantité d'éther éthylique, ce qui conduit à la séparation d'une couche de sirop aqueux 10 que l'on lave plusieurs fois à l'éther éthylique pour obtenir une couche sirupeuse épaisse.

(ii) La matière sirupeuse ainsi obtenue est dissoute dans l'eau-méthanol (3:1) et on fait passer la solution dans une colonne de 200 ml de Chitosan. La colonne est éluée 15 à l'eau-méthanol (3:1) et l'éluat rassemblé en fractions.

Les fractions positives à la ninhydrine sont combinées | et concentrées à faible volume. Le concentrât est placé 1 dans une colonne d'Amberlite CG 50 (forme NH^+) et la colonne est bien lavée avec un mélange eau-dioxanne(1:1) 20 puis soumise à une élution par gradients à 1'eau-dioxanne (1:1)avec des conc. en NH^OH de 0 à 0,1 N. Les fractions d'é-luat contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 49¾ mg (6l 9») d'un solide incolore identique à celui obtenu dans l'exemple 1 (iii)(B). j 25 Exemple 5

Préparation de 3 » 61-di-N-benzyloxycarbonylkanamvcine A

On dissout 500 mg (1,03 m mole) de kanamycine A (base libre) dans 20 ml d'un mélange eau-tétrahydrofuranne 1 (1:3) auquel on ajoute alors 1 g (4,55 m moles) d'acétate i 30 de zinc dihydrate, puis 590 mg (2,4 in moles) de N-benzyi- ! oxycarbonyloxysuccinimide. On laisse le mélange reposer à température ambiante toute une nuit et on concentre la solution réactionnelle obtenue sous pression réduite.

I On fait passer le résidu dans une colonne de 200 ml de 135 Chitosan et on traite ensuite 1'efflueii venant de la colonne comme mentionné dans l'exemple 4 (ii) pour obtenir / • 414 mg (51 %) d'un solide incolore du composé ci-dessus' / 55 mentionné.

Exemple 6

Préparation de la 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A

(i) On dissout 500 mg (1,03 ro mole) de kanamycine A

5 (base libre) dans 15 ml d'un mélange eau-méthanol (1:7) auquel on ajoute ensuite 1,5 g (6,8 m moles) d'acétate de zinc dihydrate puis 590 mg (2,4 m mole# de N-benzyl-oxycarbonyloxysuccinimide dans 7 ml de têtrahydrofuranne·

On laisse le mélange reposer à température ambiante toute 10 une nuit et on concentre sous pression réduite la solution réactionnelle ainsi obtenue. On fait passer le résidu dans une colonne de 200 ml de Chitosan et on traite ensuite l'effluent sortant de la colonne comme dans l'exemple 4 (ii) pour obtenir 442 mg (55 S0 d'un solide incolore du 15 composé mentionné.

Exemple 7

Préparation de la 3,6'-dj-N- benzyloxycarbonylkanamycine A On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de kanamycine A (base libre) dans 20 ml de diméthylsulfoxyde 20 et on ajoute à la suspension 272 mg (1,24 n» mole) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante pendant 10 heures pour former une solution pratiquement transparente à laquelle on ajoute ensuite, en petites parties, pendant environ 2 heures, 540 mg (2,27 m 25 moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide. Après avoir laissé le mélange obtenu reposer à température ambiante toute une nuit, on ajoute une grande quantité d'éther éthylique, on enlève le matériau huileux séparé et on le lave plusieurs fois à l'éther éthylique pour obtenir une ma-30 tière sirupeuse épaisse.

Une chromatographie en couche mince sur gel de silice d'un échantillon prélevé dans la matière sirupeuse, en utilisant, comme solvant de développement, le chloroforme -rnéthanol-ammonlaque aqueux 2o % (1:1:1 en volume, 35 phase inférieure) montre les taches suivantes, t - tache mineure à R 0,4 de l,3,6^3M"tetra-K- f

benzyloxycarbortylkanamycine A ( qui se colore J

56 i « · ' I * par pulvérisation avec de 1*acide sulfurique suivie de chauffage) ; - tache faible à Rf 0,28 ; - tache principale à R^ 0,23 du produit désiré, 5 la 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A ; - tache mineure à R^. 0,12 de 6· —N-benzyloxycar-bonylkanamycine A ; et - tache extrêmement faible à 0 de kanamycine A n'ayant pas réagi.

10 On n‘observe pratiquement aucune tache corres- ! pondant à la tri-N-benzyloxycarbonylkanamycine A, tache | qui devrait apparaître à R^. 0,28 à 0,4.

I La matière sirupeuse épaisse ci-dessus est dis- fl | soute dans 1 *eau-dioxanne(1ï1) et on fait passer la solu- 115 tion dans une colonne de 100 ml de résine CM Sephadex C-25 (forme NH^ ) préalablement mouillée avec de l'eau dioxanne (1:1). On soumet ensuite la colonne au processus d'élution comme décrit dans l'exemple I (iii) (I), dans lequel on enlève le cation zinc et le produit désiré se I 20 sépare des autres pour donner 412 mg (51 9») du composé mentionné, sous forme de solide incolore.

Il ^ , y. t m f; A titre de comparaison, on répète le procédé I mentionné ci-dessus mais en remplaçant l'acétate de zinc : dihydrate par 308 mg (1,24 m mole) d'acétate de nickel (IX) Î25 tétrahydrate, avec comme résultat l'obtention de la 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A sous forme de solide incolore, mais avec un faible rendement de 59 mg (7 »3 ?£) · i Exemple 8 i Préparation de la 3 < β *-di-N-(p-méthoxybenzyloxycarbonyl)

30 kanamycine A

I On met en suspension 500 mg (1,03 m moles) de ka namycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxyde et on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de j zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambian- i 35 te jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on (ajoute alors pendant environ 30 minutes -une solution de 789 mg (2,6 ir, moles) d'ester de p-méthoxycarbcbenzoxy-p- i _ j ·. ·*> * % * 57 nitrophényl (p-CH^OC^H^CHgOCOOC^H^p-NOg) dissous dans 10 ml de diméthylsulfoxyde. Le mélange obtenu est laissé au repos toute une nuit à température ambiante puis traitée de la même façon que dans l'exemple 1 (ii) et (iii) 5 (B) pour donner 722 mg (83 %) du composé mentionné, sous forme de solide incolore· = + 87* (c 1, eau-dimé- thylformamide 1:2)

Analyse élémentaire

Calculé Pour C36H52N40i7*lH2C°3 10 C 51,95 ; H 6,33 ; N 6,6¾ % trouvé C 5l»56 ; K 6ykl ; N 6,53

Exemple 9

Préparation de la 6*-N-(t-butoxycarbonyl)kanamycine A

En suivant le processus décrit dans l'exemple 8, 15 mais en remplaçant l’ester de p-méthoxycarbobenzoxy-p- nitrophênyl par 220 mg (1,5¾ m mole) de t-butoxycarbonyl-azide, on obtient le composé ci-dessus sous forme de so- / \ oc lide incolore. Rendement 627 mg, I <xjD ~ + 96e (c 1, eau-diméthylformamide 1:2) 20 Exemple 10

Préparation de la 3.6'-di-y-trifluoroacétylkanamycine A

On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de ka-namycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylsulf oxyde et 1 S (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate sont ajou-25 tés à la suspension. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors une solution de 1,2 g (5*1 m moles) de l'ester p-nitrophénol de l’acide trifluoracétique dissous dans 10 ml de diméthvlsulfoxyde. Le mélange obtenu 30 est maintenu toute une nuit à température ambiante puis traité avec l'éther éthylique comme mentionné dans l'exemple 1 (ii). La matière sirupeuse insoluble dans l’éther est ensuite traitée comme dans l'exemple 1 (iii) (A) pour donner 590 mg (70 %) du composé mentionné sous forme de 35 solide incolore. = + 8l* (c 1, eau-diméthylforraami- de 1:2).

A

ΐ fr i ί 1 58

Analyse élémentaire I Calculé pour C22H34N4°13F6’2CH3C02H*H2° ’ I c 38,33 ; H 5,¾¾ ; N 6,88 ; F 13,99 % trouvé C 38»03 * H 5*^8 ; N 6,54 % 5 Exemple 11

Préparation de la 3,6'-di-If-phénoxycarbonylkanamycine A

On met en suspension 500 rag (1,03 m mole) de ka-namycine A (base libre) dans un mélange de diméthylsulfoxyde I (15 ml) et de tétrahydrofurane (5 ml) et on ajoute à la 10 suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate, on agite ensuite à température ambiante jusqu'à ce que le mélange réactionnel forme une solution homogène. La I solution obtenue est ensuite refroidie à 0®C, puis on y ajoute lentement une solution refroidie (à 0°C) de 400 mg 15 (2,55 m moles) de chlorure de phénoxycarbonyl (CgH^-OCOCl) ! dans 3 ml de tétrahydrofuranne. La solution rêactionnel- ( les est portée en une heure à température ambiante puis maintenue à cette température pendant 3 heures. On traite ii' I ensuite le mélange réactionnel à l'éther éthylique comme I 20 dans l'exemple 1 (ii) et on traite ensuite la matière sirupeuse insoluble dans l'éther par le procédé de l'exem- . 1 j: pie 1 (iii) (A) pour obtenir 625 mg (70 #) du composé I mentionné, sous forme de solide incolore.

^3 j = + 73* (c 1, eau-diméthylformamide 1:2) 125 Analyse élémentaire

Calculé pour C^H^N^O^. 20^00^.^0 C 50,11 ; K 6,31 ; N 6,49 % trouvé C 49,77 ï K 6,60 ; N 6,11 %

Exemple 12

30 Préparation de la 3 * 6'-di-N-acétvlkanamycine A

Le mélange réactionnel obtenu par le procédé de ! l'exemple 8 mais en utilisant 260 mg (2,6 m moles) d'anhy dride acétique à la place de l'ester p— méthoxycarbobenzoxy-i| p-nitro-phényl est traité comme décrit dans l'exemple 1 S 35 (iii) (A). On prépare ainsi 525 mg (72 9») du composé men- ' Ï tionné sous forme de solide incolore. [ = * 93* (c l/y L 3ώ ' / 1/ 59 eau-diméthylformamide 1:2).

Analyse élémentaire

Calculé pour C00H.nN,0 _.2CH^C0 H.Ho0 22 ^0 4; 13 3 2 2 C 44,19 ; H 7,13 ; N 7,93 % 5 trouvé C 44,20 ; H 7,07 i N 7,85 %

Exemple 13

Préparation de la 3,6'-di-N-formylkanamycine a

On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de ka-namycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxyde et 10 on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène, à laquelle on ajoute alors 690 mg (4,12 m moles) de formiate de p-nitrophényl (OHC0CgH^_p_N0,,) · Le mélange obtenu est 15 maintenu toute une nuit à température ambiante puis traité comme dans l'exemple 1 (iii) (H). Les fractions positives à la ninhydrine sont combinées, on y insufle du bioxyde de carbone gazeux puis on concentre à siccité. On obtient ainsi 430 mg (67 %) du composé mentionné sous for-20 me de solide incolore. | aJj) ~ + ^1* (c 1, eau).

Analyse élémentaire

Calculé poirr C H Ö.HC0.H0 * 20 36 4 13 2 3 2 c 4o,64 ï H 6,50 i N 9,03 % trouvé C 40,43 ; H 6,4? ; N 8,83 % 25 Exemple 14

Préparation de la 3,6'-di-N-tosylkanamycine A

On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de ka-namycine A (base libre) dans 15 ml de diméthylsulfoxyde et on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate 30 de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors lentement une solution de 400 mg (2,1 m moles) de chlorure de tosyl dans 7 ml de tétra-hydrofuran ne.Le mélange obtenu est maintenu à température 35 ambiante pendant une heure puis on y ajoute 200 mg de chlorure de tosyl dissous dans 3,5 ml de tétrahydrofuranne. / 4 .

60 «

Le mélange réactionnel est maintenu au repos pendant deux heures puis traité selon le procédé de l’exemple 1 (ii) et (iii) (A), ce qui donne 270 mg (28 %) du composé men- C Ί 25 tionné sous forme de solide incolore. I α J jj =* + 68· 5 (cl, eau-diméthylformamide, 1:2).

Analyse élémentaire

Calculé pour C32H48N40i5S2‘2CH3C02H,H2° C 46,44 ; H 6,28 î N 6,02 ; S 6,89 % trouvé C 46,31 *, H 5,98 *, N 6,31 ; S 6,55 % 10 Si l'on répète le processus réactionnel ci-dessus mais en omettant l'acétate de zinc, on ne récupère pratiquement pas de solide incolore.

I Exemple 15 ; Préparation de la 316'-di-N-benzyloxycarbonyl-6'-N-méthyl-

15 kanamycine A

On met en suspension 500 mg (1,0 m mole) de 6'-N-^ méthylkanamycine A (base libre) dans 12 ml de diméthylsul- foxyde et 1 g (4,55 m moles) d’acétate de zinc dihydrate est ajouté à la suspension. Le mélange est agité à tempé-I 20 rature ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène î; s à laquelle on ajoute alors, en 30 minutes, une solution : de 550 mg (2,2 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide dissous dans 5ml de dimêthylsulfoxyde-tétrahydrofuranne (1:1). Le mélange obtenu est maintenu toute une nuit à 25 température ambiante puis traité comme dans l'exemple 1 (ii) et (iii) (A) pour donner 720 mg (79 ?») du composé ï , ^ Ί 25 I mentionné sous forme de composé incolore. = + 74* I (cl, eau -diméthylformamide, 1:2).

Le traitement subséquent du composé mentionné 30 selon un procédé similaire à celui décrit dans l'exemple 31 ci-après donne la 1-N ((Sî-4-amino-2-hydroxybutyryl)-6'- N-méthylkanamycine A.

I Exemple 16 ji préparation de la 3 » 6 ' -di-N-benzyIoxTcarbonyl-3 ' -dégoxv-

! 35 kanamycine A J

il On obtient ce composé, sous forme d'un solide in- / ; colore, avec un rendement de 765 mg (82 %} en répétant le // *' / i ' 61 procédé de l'exemple 15, mais en partant de 500 mg (1,07 m mole) de 3’-désoxykanamyeine A (base libre) et en uti-i lisant 610 mg (2,45 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuc- cinimide. = + 76* (c i» eau-diméthylformamide, 1:2).

5 Analyse élémentaire i Calculé pour C34H48N4°i4,2CH3C02H'H2° | C 52,16 ; H 6,68 ; N 6,40 % trouvé C 51,99 î H 6,75 ; N 6,20 %

Le traitement subséquent du composé mentionné se-10 Ion un procédé similaire à celui décrit dans l’exemple 31 donne la 1-N ((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-3’-déoxykana-mycine A.

Exemple 17

Préparation de la 3 ,6’ -di-N-benzyloxycarbonyl-3’ -déoxv-6’ -15 N-méthylkanamycine A

Ce composé est obtenu avec un rendement de 737 mg (80 %) en répétant le processus de l’exemple 15, mais en partant de 5°0 mg (l,04mmole) de 3,-désoxy-6’-N-méthylka-nameyine A (base libre) et en utilisant 595 mg (2,¾ m 20 moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide. = + 73* (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2).

Le traitement subséquent du composé mentionné selon un procédé similaire à celui indiqué dans l’exemple 31 donne la 1-N ((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-3*-désoxy-25 6·-N-méthyl-kanamycine A.

Exemple 18 > Préparation de la 3161 —di—N—benzyloxycarbonyl—4’—désoxy-

kanamycine A

En partant de $00 mg (1,07 m mole) de 4'-désoxv-30 kanamycine A (base libre) (Cf "Jal of Antibiotics", vol 27 p. 838-849 (197^) î "Bulletin of Chemical Society of Japan", vol: 50» p. 2362-2368 (1977))» le composé mentionné est obtenu sous forme d’un solide incolore, avec un rendement de 666 mg (71 %) selon le procédé de l’exemple 35 15, excepté que l’on ajoute lentement, en une heure, à ,/ la solution homogène, 58Ο mg (2,3 m moles) de N-benzyloxy-^

J

A

62 carbonyloxysuccinimide dissous dans 4 ml de diméthyisulfo-xyde.

Analyse élémentaire

Calculé pour C^H^gN/^g.COgH.Hj^O

5 C 52,16 ; H 6,68 ; N 6,40 % trouvé C 51,77 i H 6,79 î N 6,31 %

Exemple 19

Préparation de la 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-kanamy-eine B

10 On met en suspension 500 mg (1,03 ni mole) de ka- namycine B (base libre) dans un mélange de 12 ml de dimé-thylsulfoxyde et de 4 ml de tétrahydrofuranne et on ajoute à la suspension 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à * 15 formation d'une solution homogène puis refroidi à 0eC. On ajoute lentement, en une heure, à la solution refroidie, j une solution froide de 825 mg (3,3 m moles) de N-benzylo- 14 xycarbonyloxysuccinimide dissoute dans 10 ml de tétrahy- drofuranne-diméthylsulfoxyde (1:1). Le mélange obtenu est j 20 maintenu à 0eC pendant deux heures puis toute une nuit à température ambiante, après quoi le mélange est traité comme indiqué dans l'exemple 1 (ii) et (iii) (A) pour donner 740 mg (70 %) du composé mentionné sous forme de solide f Ί25 incolore, j^ct = + 63e (c 1, eau-diméthylformamide 1:2).

25 Analyse c Calculé pour C, H K 0 £.2CHrCônH.Hn0 j 42 55 5 16 3 2 2 j C 53,95 Ï H 6,40 -, N 6,84 % J trouvé C 53,66 ; H 6,67 î N 6,63 % ï Le traitement subséquent du composé mentionné se- I 30 Ion un processus similaire à celui décrit dans l’exemple 31 donne la 1-N((S)-4«amino-2-hydroxybutyryX) kanamycine B. Exemple 20

Préparation de la 3» -tri-N-benzyloxycarbonyltobrarsy- j eine i / 35 On met en suspension 480 mg (1,03 ® mole) de to— / bramycine (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxyde et//- f )/ ' j 63 on ajoute 1 g (4,55 m moles) d'acétate de zinc dihydrate à la suspension. Le mélange est agité à température ambiante pendant une heure pour former une solution homogène à laquelle on ajoute alors pendant environ une heure une solu-5 tion de 850 mg (3,4 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxy- succinimide dissous dans 10 ml de tétrahydrofuranne-dunéthyl-sulfoxyde (l:l).Après maintien du mélange une nuit à température ambiante,la solution réactionnelle obtenue est traitée avec un grand volume d'éther éthylique comme 10 mentionné dans l'exemple i (ii) pour donner une matière sirupeuse épaisse.

La matière sirupeuse est ensuite traitée de la même façon que dans l'exemple 1 (iii) (A) mais en utilisant de 1'eau-dioxanne (1:2 au lieu de 2:1) pour donner 8l0 mg 15 (78 f°) du composé mentionné sous forme de solide incolore.

= + 65e (c 1, eau-diméthylformamide 1:2)·

Analyse élémentaire

Calculé pour C/tOH__N_0.,_. 2CHoC0oH.Hn0 **2 55 5 15 3 2 <£.

C 54,8l ; H 6,50; N 6,95 % 20 trouvé C 54»77 ; H 6,71; N 6,88 %

Le traitement subséquent du composé mentionné selon un procédé similaire à celui décrit dans l'exemple $1 donne la l-N-((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-tobramycine.

Exemple 21 - Préparation de la 3 « 2',61-tri-N-benzyloxy-25 carbonyl-6'-N-méthyltobramycine

On obtient ce composé sous forme d'un solide incolore avec un rendement de 890 mg (84 %) en répétant le procédé de l'exemple 20 mais en partant de 500 mg (1,04 mole) de ^ r) c 6'-N-raéthyltobramycine (base libre). / ά. = + 63* (c î, 30 eau-diméthylformamide 1:2).

Exemple 22 - Préparation de la 3»2',6'-tri-N-benzyloxy-carbonyl-4'-désoxvkanamvcine B

En partant de 480 mg (1,03 m mole) de 4'-désoxy-kanamycine B, base libre, (Cf "Bulletin of ihe Chemical 35 Society of Japan", vol. 50, p. 2362-2368(1977) )» on ob-/"/

/F

J

! » · 64 tient ce composé sous forme de solide incolore avec un rendement de 815 mg (79 ?») selon le procédé décrit dans 1* exemple 20. b + 63· (c 1, eau-diméthylformamide 5 lî 2). Ud

Exemple 23

Préparation de la 3t2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyldibéka-eine I 600 mg (1,33 m mole) de dibékacine (3'j4'-didésoxy- 10 kanatayeine B), (base libre) sont mis en suspension dans 15 ml de dimêthylsulfoxyde et la suspension est agitée • pour former une solution à laquelle on ajoute 1,4 g (6,4 m moles) d'acétate de zinc dihydrate, ce que l'on fait suivre par une autre agitation. On ajoute lentement, 15 en environ une heure, à la solution résultante, une solution de 1,1 g (4,4 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxy-succinimide dans 12 ml de dimêthyl-sulfoxyde, et on laisse le mélange reposer toute une nuit à température ambiante.

> On mélange alors à la solution réactionnelle un volume 1; 20 important d'éther éthylique, afin de séparer un dépôt hui leux (comprenant principalement le complexe dibékacine N-benzyloxycarbonylée-zïnc et une certaine quantité de dimêthylsulfoxyde) qui est lavée à l'éther éthylique pour donner une matière sirupeuse épaisse.

25 Cette matière sirupeuse est lavée plusieurs fois à l'eau, le complexe de zinc N-acétylé éteint détruit par l'eau et le cation de zinc libéré éliminé en même temps que l'excès d'acétate de zinc existant initialement. On obtient ainsi 1,1 g d'un solide insoluble dans l'eau 30 contenant la dibékacine N-acétvlée. Le solide est soumis à f une chromatographie en couche mince sur gel de silice en f I utilisant comme solvant de développement le chloroforme- ! éthanol-ammoniaque aqueux 18 % (1:1:1, phase inférieure) et l'on obtient une tache unique à R^, 0,3 indiquant que le 35 solide se compose essentiellement de 3',6'-tri-N-benzyl- oxycarbonyl-dibékacine avec une trace de zinc. / I Le traitement subséquent du composé mentionné selon/ ' ; . / / / * le procédé similaire a celui décrit dans l'exemple

J

t · 65 31 donne la 1-N ((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl)-dibékacine.

Pour purification ultérieure, on lave le produit ' brut, tel qu'obtenu ci-dessus avec une solution d'ammo niaque 3 N pour obtenir un produit non contaminé par 5 l'ion zinc. faj^ « + 71* (c 1, eau-diméthylformamide,

1:2). J

Exemple 2k

Préparation de la 3«2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-6*-N-méthyldibékacine 10 On dissout 500 mg (1,07 ni moles) de 6*-N-méthyl- dibékacine (base libre) et 1,2 g (5i^5 m moles) d'acétate de zinc dihydrate dans 20 ml de diméthylsulfoxyde auquel on ajoute lentement, en environ 30 minutes, 910 mg (3,6 m moles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide. On laisse 15 la solution réactionnelle reposer une nuit à température ambiante et on la traite ensuite comme indiqué dans l'exemple 23, obtenant ainsi 910 mg du composé mentionné pratiquement pur.

Le traitement subséquent du composé mentionné se-20 Ion un processus similaire à celui décrit dans l'exemple 31 donne la 1-N((S)-^-amino-2-hydroxybutyryl)-6*-N-méthyl-dibékacine.

Exemple 25

Préparation de la 3,2'-di-N-benzyloxycarbonvlkanamycine C 25 On obtient ce composé, sous forme d'un solide coloré, avec un rendement de 730 mg (79 %) en suivant les processus décrits dans l'exemple 1 (i), (ii) et (iii) A, mais en partant de 500 mg (1,03 m mole) de kanamycine C (base libre), f= + 75e (c 1, eau-diméthylformamide, 30 1:2).

Le traitement subséquent du composé selon un processus similaire à celui décrit dans l'exemple 31 donne la 1-N ( (S) -(t-amino-2-hydroxybutyryl) -kanamycine C.

Exemple 26

Pt.'' » wn'VifirgÎCTga.rji.'awMjiijH·.

35 Préparation de la 6 ' -N-benzyloxycarbonylkanaraycixie A j 500 mg (1,03 m mole) de kanamycine A (base libre), / / /

Si..nt mis en suspension dans 20 ml de diméthvlsulfoxvde et // / 66 0,5 g (2,3 m moles) d’acétate de zinc dihydrate sont ajoutés à la suspension. Le mélange est agité à température ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène I à laquelle on ajoute alors 2Ö3 mg (1,13 m mole) de ΓΓ- 15 benzyloxycarbonyloxysuccinimide. On laisse reposer le mélange obtenu une nuit à température ambiante et on le traite ensuite comme dans l’exemple 1 (ii) et .(iii) (I) jj pour obtenir 55& mg du composé mentionné sous forme de J solide incolore. = + 92e (c 1, eau).

10 Exemple 27

Préparation de la 6'-N-benzyloxycarbonyldibékacine

Selon le processus décrit dans l'exemple 26, on obtient 382 mg du composé mentionné en utilisant 500 mg de dibékacine (base libre), 12 ml de diméthylsulfoxyde, 15 0,7 g d'acétate de zinc dihydrate et 305 mg de N-ben- zyloxycarbonyloxysuccinimide. = + 105* (c 0,5» eau)·

Exemple 28 I Préparation de la 3t2',6'-tri-?<-benzyioxycarbonvl-3'«4* -

didésoxy-3 *-énokanamycine B

I 20 On dissout dans 12 ml de diméthylsulfoxydej500 mg I (1,11 m mole) de 3* »4* -didésoxy-3' -énokanamycine B, base t libre (Cf "Bulletin of tne Chemical Society of Japan", I vol. 50, p. 1500-1583 (1977))» on ajoute à la solution ji

Il 1g (4,55 m moles d'acétate de zinc dihydrate, puis on I 25 agite pendant une heure. On ajoute lentement en 30 minu- i tes, à la solution résultante, 870 mg (3»49 m moles) de I N-benzyioxycarbonyloxysuccinimide. Après avoir laissé le I mélange reposer une nuit à température ambiante, on traite j! j la solution réactionnelle obtenue avec un grand volume 30 d'éther éthylique, comme mentionné dans l’exemple 1 (ii) pour obtenir une matière sirupeuse épaisse.

La matière sirupeuse est ensuite traitée comme dans I l'exemple 1 (iii) (B) mais en utilisant 1'eau-dicxanne (1:2 au lieu de 2:1) pour obtenir 784 mg du composé men- 1- Γ v 2 *5 / / 35 tionné sous forme de solide incolore I es \ = + 30* (c 1, /

L pD //V

eaurdiméthylformamide 1:2). / Jj

J

67

Exemple 29

Préparation de la 3 » 2*-tri-N-ben zy 1oxycarbonyls isomicine

Le composé mentionné, sous forme de solide incolore, est obtenu avec un rendement de 780 mg en suivant le pro-5 cessus de l'exemple 28 mais en partant de 500 mg (1,12 m mole) de sisomicine (base libre)· = + HO* (c 1, eau· diméthylformamide, 1:2)·

Exemple 30

Préparation de la 3 » 2'» 6'-tri-y-benzYloxvcarbonvlgentami-10 eine

On obtient 7^7 mg de ce composé, sous forme de solide incolore en suivant le processus de l'exemple 28 mais en partant de 500 mg de gentamicines mélangés (C, C^a, C 2 etc···) 15 Exemple 31 (référence)

Préparation de la l-N-((S)-4-amino-2-hydroxybutyryl) kana-mycine A (amikacine) · .................. III Mm m 55 mg (0,062 m mole) d'acétate de 3 »6'-di-N-benzylo-- xycarbonylkanamycine A préparé comme décrit dans l'exemple 20 1 sont dissous dans 1,5 ml d'eau-tétrahydrofuranne (2:5) auquel on ajoute 13 mg (0,12 m mole) de carbonate de sodium anhydre, puis 23 mg (0,066 m mole) de N-hydroxy-suc-cinimide ester de l'acide (S)-4-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxy-butyrique. On laisse le mélange reposer à tempé-25 rature ambiante pendant 10 heures. La solution réactionnelle obtenue est concentrée à faible volume, et le concentrât est repris dans 4 ml d'eau-dioxanne (1:1)· On ajoute à la solution une petite quantité d'acide acétique pour la rendre faiblement acide,puis on la soumet à une 30 hydrogènelyse en y faisant passer de l'hydrogène gazeux v sous pression atmosphérique pendant une heure en présence de noir de palladium (pour éliminer le groupe benzyloxy-carbonyl). La solution réactionnelle obtenue est filtrée et concentrée et on fait passer le concentrât dans une 35 colonne de CM-Séphadex C-25 (forme NH^+) (produit par

Pharmacia Fine Chemical Ce, Suède). La colonne est soi nise / à une élution par gradients avec des concentrations er, am- ' ;! · i! ' !i 68

Il moniaque allant de 0 à 0,5 N. Les fractions d'éluat con- ! tenant le produit désiré sont combinées et concentrées à î siccité pour donner 24 mg (rendement 60 ?6) du composé | ; mentionné, sous forme de monocarbonate dont les proprié- 5 tés physiques et l’activité antibactérienne sont identiques à celle d’un échantillon authentique.

Exemple (Référence) if Préparation de la l-N-( DL-isoséryl) dibékacine 158 mg (0,06 m mole) de 3.2’,6'-tri-N-benzyloxycarbo-10 nyl-dibékacine préparés comme dans l'exemple 23, sont dissous dans 1,5 ml d'eau-tétrahydrofuranne (2:5) auquel on : 1 ajoute 13 mg (0,12 m mole) de N-hydroxysuccinimide ester ! de N-benzyloxycarbonyl-DL-isosérine. On laisse le mélange i ! reposer à température ambiante et on le traite ensuite com- ! 15 me décrit dans l’exemple pour obtenir 21 mg (rendement 59 %) du composé mentionné sous forme de monocarbonate dont g les propriétés physiques et l’activité antibactérienne sont identiques à celles d'un échantillon authentique.

Exemple 33 i .

20 Production du 3 , 6 * -di-N-henzyloxycarbonyl-3',-N-trifluoro- i-i

acétylkanamycine A

On mélange une solution de 504 mg de 3»6*-di-N-benzy-loxycarbonyl-kanamycine A (cf exemple 1) dans 4 ml de di- méthylsulfoxyde avec 220 mg de trifluoracétate d'éthyl ; on j w 25 laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante. Après addition au mélange réactionnel d'un faible volume d’acide trifluoracétique, on verse la solu-;· txon réactionnelle dans un grand volume d’éther éthyli- que et la matière huileuse déposée obtenue est bien lavée 30 à l’alcool éthylique pour donner la matière solidifiée.

Cette matière est bien séchée pour donner 640 mg du compo-H sé mentionné sous forme de substance solide. Rendement 99 9* (a|2** = + 98e (C i, pvridine).

1 } D

Analyse élémentaire , / 35 Calculé pour C36H47**4°16F3*CF3C00H j/ C 47,40 ; H 5,02 ; K 5,82 ?£ 69

Exemple 34

Production de 3,6*-di-N-benzYloxvcarbonyl-3n-N-trifluora-pétyA -kanamvcine A

On mélange une solution de 20 mg de 3 » 6'-di-N-benzylo-5 xycarbonylkanamycine A dans 0,4 ml de diméthylsulfoxyde avec 6 mg de phênyl trifluoracétate et on laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite le mélange réactionnel comme dans l’exemple 33 ce qui donne 24,0 mg du composé mentionné qui s’est 10 révélé identique à celui de l'exemple 33· Rendement 97 Exemple 35

Production de 3.6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3H-N-trifluora-cétyl-kanamycine A

Une solution de 10 mg de 3»6'-di-N-benzylocarbonyl-15 kanamycine A dans 0,3 ml de triamide hexaméthylphosphori-que est mélangée à 7 mg de trifluoracétate d’éthyl et on laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à tempé-, rature ambiante. La solution réactionnelle est mélangée à un petit volume d’acide trifluoracétique puis versée 20 dans un grand volume d'éther éthylique. La matière huileuse déposée est bien lavée à l'éther éthylique et la substance solide séchée pour donner 11,7 mg (rendement 91 %) du produit mentionné sous forme de son mono-trifluo-racétate, solide.

25 Exemple 36

Production de 3 * 6 1-di-X-benzyloxycarbonyl-3,t-N-trifluora-cétyl-kanamycine A

On mélange à 7 mS trifluoracétate d'éthyl une suspension de 10 mg de 3 » 6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine 30 A dans 0,3 ml de diméthyiformamide, et on laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle homogène ainsi obtenue est mélangée à un petit volume d'acide trifluoracétique puis versée dans un grand volume d'éther éthylique. La ma-35 tière huileuse déposée est bien lavée à l'éther éthylique j pour la solidifier ; on sèche le solide obtenu ce qui à.ory~! ne 11,5 mg (rendement 90 du produit mentionné solide / // ; // :r J· ψ · 70 sous forme de monotrifluoracétate.

Exemple 37

Production de 3 . & '-di-N-benzyloxycarbonyl^'^N-trifluora-cétylkanamycine A

5 On mélange à 7 mg de trifluoracétate d'éthyl une sus pension de 10 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamycine A dans 0,35 ml de sulfolane et on agite le mélange toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite le mélange réactionnel comme dans l’exemple 33 ce qui donne 10 12,0 mg (rendement 9¾ %) du composé mentionné sous forme | de mono-trifluoracétate solide.

| Exemple 38 ! Production de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3t,-y-trifluora-

cétylkanamycine A

15 On mélange à 10 mg de trifluoracétate d'éthyl une 1 suspension de 22 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonylkanamy- I eine A dans 0,8 ml de tétrahydrofuranne et on agite le me» 1' lange pendant 2 jours. La solution réactionnelle homogène ! I . obtenue est mélangée à 15 mg de trifluoracétate d'éthyl jji .¾ 20 et 8 mg de carbonate anhydre de sodium, agitée toute une I nuit puis laissée reposer pendant 2 jours. La solution J réactionnelle obtenue est concentrée et le concentrât lavé j| à l'eau puis séché pour donner une matière solide. Ce so- • lide est mis en suspension dans un petit volume de têtra- i 25 hydrofuranne en même temps qu'une petite quantité d'acide l trifluoracétique. Le mélange ainsi obtenu est agité, puis t on ajoute de l'éther éthylique. Le solide ,qui précipite r I est filtré, lavé à l'éther et séché ce qui donne 21 mg (rendement 7^ %) du produit mentionné sous forme de mono- " f 12 5 30 trifluoracétate solide. | a | = τ (C 1, pyridine)·

\ i /D

i ! Exemple 39 ‘ Production de 3,6* -di-N-benzyloxvcarbonyl-3,,-y-trif‘luorg- —1—1 ·ΐιι· ι^ιι m.iii ι ιι i i imtimmimm m—m·—— —nr mu— wi iw mramrtfî τπι mi n a ι rimrTniiimirrwi thiihiimi mm Ja TTMHnrn —fri· μμιμιμμίγμ mnim r 1 iriwn » mihi» 1 iuprr

cétvl-kanamvcine A

35 On mélange une solution de 10 mg de 3 * 6'-di-Jt'-benzy» y i r / loxycarbonyl-kanamycine A dans X'eau-tétrahydrofuranne / ! 1 (1:1 , 0,3 ml) à une solution de 5 mg de trifluoracétate // « * · 71 d’éthyl dans 0,1 mg de tétrahydrofuranne ; le mélange obtenu est maintenu à température ambiante pendant un jour· On ajoute ensuite à la solution un mélange de trifluoracé-tate d'éthyl (10 mg), de carbonate de sodium anhydre (4,4 5 mg) et de tétrahydrofuranne (0,1 ml), à des intervalles de 5 heures (4 fois en tout) afin d'effectuer la 3H-N-trifluo-racétylation. La solution réactionnelle est concentrée puis traitée comme dans l'exemple 38 pour donner 5,5 mg (rendement 43 %) du monotrifluoracétate solide du produit meti-10 tionné.

Exemple 40

Production de la 3 6 *-di-îv-benzvloxy carbonyl-3"~N-tr if luorac étvlkanamy eine A

On mélange une solution de 10 mg de 3,6'-di-N-benzylo-13 xycarbonyl-kanamycine A dans l'eau-éthanol (2:3, 0,6 ml) avec une solution de 5 mg de trifluoracétate d'éthyl dans 0,1 ml de tétrahydrofuranne, et on laisse le mélange à tera-« pérature ambiante pendant un jour. La solution réaction nelle est ensuite traitée comme dans l'exemple 38 ce qui 20 donne 2,3 mg (rendement 18 %) du produit mentionné sous forme de monotrifluoracétate solide.

Exemple 41

Production de 3,^,-di-N-t-butoxvcarbonvl-3t>-N-trifluoracé-tyl-kanamycine A

23 a) Préparation de la 3,6'-di-N-t-butoxycarbonvlkana-

mycine A

On met en suspension 500 mg (1,03 m mole) de kanarr.y-cine A (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxyde et on ajoute à la suspension obtenue 1 g (4,55 m moles) d'acéta-30 te de zinc dihydrate. Le mélange est agité à températnre ambiante jusqu'à formation d'une solution homogène à laquelle on ajoute alors 370 mg (2,59 m moles) de t-butoxy-carbonylazide. On laisse le mélange obtenu toute une nuit à température ambiante puis on le traite comme décrit 35 dans l'exemple 1 (ii) et (iii) (B) pour obtenir 590 mg (80 %)du composé mentionné sous forme de solide incolore./ f ^25 / /

[ajD * + ^9* (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2). j V

j t 72

b) Production de 3,6*-di-N-t-butoxycarbonyl-3”-N,-tri-fluoracétylkanamycine A

On dissout 60 mg de 3 » 61-di-N-t-butoxycarbonylkana-. mycine A dans 0,5 ml de diméthylsulfoxyde et on mélange . 5 la solution obtenue à 25 mg de trifluoracétate d*éthyl ! et on laisse le mélange obtenu reposer toute une nuit à température ambiante.

! La solution réactionnelle est ensuite traitée comme décrit dans l’exemple 33 ce qui donne 76,8 mg (Rendement 10 98 %) du trifluoracétate solide du composé mentionné» = + 72° (cl, eau-diméthylformamide, 1:2).

Analyse élémentaire

j Calculé pour C^H^N^O^F^.CF^COOH

I C 42,95 ; H 5,86 ; N 6,26 % J 15 trouvé C 42,77 ; H 5,92 ; N 6,38 % I Exemple 42 I Production de 3,8'-di-N-(p-méthoxybenzvloxycarbonyl)-3^- ;j t II» ·ιιι n— mmtmm——n— 1 „Γ———1 ~ nnmm J7 *· η ι·ι·ι mm·.· -ιι·ι·ιιιι·

: N-trifluoracétylkanamycine A

! Une solution de 40 mg de 3,8 *-di-N-(p-méthoxybenzylo- :| 20 xycarbonyl)kanamycine A (voir exemple 8 ci-avantj dans * 0,4 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 18 mg de tri- I fluoracétate d’éthyl et le mélange maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 33, ce qui donne 25 49,3 mg (rendement 98 %) du composé mentionné, solide, laJ = + 78° (c 1, eau-diméthyiformamide 1:2).

Analyse élémentaire

Calculé pour C^gH^^N^O^gF^.CF^COOH

C 46,97 . H 5,12 ; N 5,48 t 30 trouvé C 47,18 ; H 5,C3 ; N 5,31 /» î Exemple 43 m

Production de 3,8'.3"-tri-N-trifluoracétvlkanamvcins A

Emm—— *wr «Wiiiwii rtairtMnwïWrfflfctirimiTm'wiwi—'Wmiiw m »m »n 11 irr iihkii 1 »ninaiii—» miin m 11· 1 an m »Inn ^ni^n—fci—f.j.mi-iJmuMB

75 mg de 3,6’-di-N-trifluoracetylkanamycine A (cf exemple 10) et 12 mg de triétnylamine sont mélangés à \ t , / 35 0,6 ml de dimethyl sulfoxyde puis avec 35 mg de trifluora-// cétate d’éthyl et le mélange agité toute une nuit pour ef-/ 73 fectuer la 3,,”N-trifluoracétylation. La solution réactionnelle est alors traitée comme dans l'exemple 33» ce qui donne 94,2 mg (rendement 96 %) du composé mentionné, ΙΊ 25 aJD s + 76* (c 1, eau- 5 diméthylformamide, 1:2).

Analyse élémentaire

Calculé pour c24H33N4°jAF9*CF3COOH

C 35,22 ; H 3,87 i N 6,32 % trouvé C 35,09 ; H 3,99 ; N 6,07 # 10 Exemple 44

Production de 3,6 '-di-N-pbênoxycarbonyl-3,,“N-trii‘luora-cétylkanamycine A

Une solution de 53 mg de 3,6'-di~N-phénoxycarbonyl-3n-N-trifluoracêtylkanamycine A (cf exemple 11) et de trié-15 thylamine (9 mg) dans 0,5 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 23 mg de trifluoracétate de méthyl et le mélange est ensuite traité comme dans l'exemple 33 ce qui donne 65 mg (rendement 95 %) du composé mentionné sous forme solide. [«g*. + 70e (c 1, eau-dimethylformamide, 1:2).

20 Analyse élémentaire

Calculé pour c3Zt\3N4°16F3«cF COOH

C 46,26 ; H 4,74 ; N 5,99 % trouvé C 45,88 ; H 4,96 ; N 5,77 %

Exemple 45

25 Production de 3 » 6',3n~tri-N-formvlkanamycine A

Un mélange de 62 mg de 3,6'-di-N-formylkanamycine A (Cf exemple 13), de 90 mg de formiate d'éthyl et d'I ml de dimethyl sulfoxyde est chauffé à 100eC pendant 12 heures en tube scellé pour effectuer la 3"“N-formylation» La 30 solution réactionnelle est mélangée avec une faible quantité d'acide formique puis versée dans un grand volume d'ether ethylique et traitée comme dans l'exemple 33* ce qui donne 69 mg (rendement 98 %) du composé mentionné sous forme de solide à réaction positive à la ninhydrine· 35 L = + 109· (c 1, eau-diméthylformamide 1:2).

L " * // Analyse élémentaire / 1 *" 1 ·μ·ιιιιι<ι»·.>.ι.'eram 74 i

V

Calculé pour C^H^gN^O^.HCOOH

C 43,00 ; H 6,23 ; N 9,12 % trouvé C 42,83 ; H 6,19 ; N 9,10 ?i

Exemple 46

5 Production de la 3.6'-di-.N-benzvloxvcarbonvl-6'-N-méthyl-3*'-N-trifluoracétylkanamycine A

Un mélange de 68 mg de 3,6,-di-h*-benzyloxycarbonyl-6'-N-méthylkanamycine A (cf exemple 15) et de triéthylamine (11 mg), 30 mg de trifTuoracétate d'éthyl et 0,7 ml de 10 diméthylsulfoxyde est traité comme dans l'exemple 33, ce qui donne 86 mg (rendement 99 %) du mono-trifluoracétate du composé mentionné, sous forme de substance solide.

(.“)? + 65> (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2).

Exemple 47

15 Production de 3.6,-di-N-’benzyloxycarbonyl-3t-désoxy-3,,-N-trifluoracétylkanamycine A

Une solution de 52 mg de 3»6'-di-N-benzyloxycarbonyl-ji 3f -désoxy-kanamycine A (cf exemple 16) et de triéthyla- I mine (11 mg) dans 0,¾ ml de diméthylsulfoxyde est mélangée 120 à 21 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite 1/ la solution réactionnelle comme dans l'exemple 33, ce qui donne 64,8 mg (rendement 97 9») du composé mentionné, sous I forme solide. + 70“ (c 1, eau-diméthylformamide, J 25 1:2).

I Analyse élémentaire

I Calculé pour C^H^O^ .CF^OQH

I C 48,21 ; H 5,11 ; N 5,92 %

trouvé C 47,94 î H 5,35 ; N 5,77 K

30 Exemple 48

Production de 3,6' -di-N-benzyloxycarbonyl-3 ' -désoxy-3,,-N-formyl-kanamycine A

S Une solution de ?8 mg de 3,6'-di-N-benzyloxyearbonyl- I 3**"désoxy kanamycine A dans 0,7 ml de diméthylsulfoxyde est I 35 mélangée à 65 mg de formiate de phénvl et le mélange chaufγ / ί / / I fé toute une nuit à 50*C pour la 3"-N-formylation. / i '/ ; ià' * 75

La solution réactionnelle est mélangée avec de petites quantités d’acide formique et traitée comme dans l’exemple 331 en donnant 83 mg (Rendement 97 5») du monofor-miate du composé mentionné, sous forme solide. + 5 (cl, eau-diméthylformamide lî2).

Exemple 49

Production de la 3,6’-di-N-benzyloxycarbonyl-3"-N-dichlo-racétyl-3*-désoxykanamycine A

Une solution de 35 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl-10 3'-désoxy-kanamycine A dans 0,5 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 12 mg de dichloracétate de méthyl et le mélange est maintenu une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle est mélangée à un petit volume d’acide dichloracétique puis traitée comme dans l'exemple 15 33, ce qui donne 44,5 mg (rendement 96 %) du composé mentionné, sous forme solide. = + 65* (cl, eau-dimé- thylformamide 1:2). ^

Analyse élémentaire

Calculé pour C_/-H, DN.O Cl .CHC1 COOH c 30 4o 4 15 2 2 20 c 46,73 ; H 5,16 ; N 5,74 ; Cl 14,52 °/o trouvé C 46,58 ; H 5,33 ï N 5,62 ; Cl 14,28 %

Exemple 50

Production de la 3,6 *-di-N~benzyloxycarbonyl-3u-N-trichlo-racétyl-31-désoxykanamycine A

25 Une solution de 58 mg de 3 * 6’-di-N-benzyloxycarbonyl- 3’-désoxykanamycine A dans 0,7 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 25 mg de trichloracétate de méthyl et le mélange est maintenu une nuit à 50eC. La solution réactionnelle est mélangée à un petit volume d’acide trichloracê-30 tique puis traitée comme dans l'exemple 33, ce qui donne 80,5 mg (rendement 98 %) du composé mentionné, sous forme solide. = + 65e (c 1, eau-diméthylformamide 1:2).

Analyse élémentaire Calculé pour c^CCx 35 c 43,65 ; H 4,63 ; N 5,36 ; Cl 20,34 % trouvé C 43,44 ; H 4,77 ; K 5,30 ; Cl 20,19 % // t /> 76

Exemple 51

Production de la 3»6’-di~N-benzyloxycarbonyl-3,-désoxy-3M-y-trifluoracétyl«-6 * -N-méthylkanamycine A

Une solution de 72 ms de 3»6*-di-N-benzyloxycarbonyl-5 3 *-dêsoxy-6'-N-méthylkanamycine A dans 1 ml de diméthyl- sulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d'é-thyl et le mélange est maintenu toute une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l’exemple 33» ce qui donne 89»5 mg (ren-10 dement 97 %) du mono-trifluoracétate du composé mentionné, solide. [aj25 _ + 70e (cl, eau-diméthylformamide, ? 1:2).

£

Exemple 52

Production de la 3,6*-di-N-benzyloxycarbonyl-4*-άθ5θχν-3π~ 13 N-trifluoracétylkanamycine A

Une solution de 71 mg de 3,61-di-N-benzyloxycarbonyl-4’-désoxykanamycine A (cf exemple 18), de la triêthylamine (12 mg) et 30 mg de trifluoracétate d’éthyl dans 1 ml de ! diméthylsulfoxyde est traitée comme dans l’exemple 33» « I 20 donnant 90 mg (rendement 99 f») du mono-trifluoracétate du ' composé mentionné, sous forme solide, fotl2^ = + 72· (c 1,

s , ✓D

ί eau-dimethylformamide, 1:2).

I Exemple 53 1 Production de la 3»6*-di-N-benzyloxycarbonyl-3*-4*-didé-

! 25 soxy-3,1-N-trifluoracétylkanamycine A

I Une solution de 75 mg de 3»6’-di-N-benzyloxycarbonyl- 3’,4’-di-désoxykanamycine A et de 30 mg de trifluoracétate d'éthyl dans 1 ml de diméthylsulfoxyde est traitée comme dans l’exemple 33* ce qui donne 96 mg (rendement 99 %) du f *)25 30 composé mentionné sous forme de substance solide. * + 72° (c 1, eau-diméthyl-sulfoxyde, 1:2).

Analyse élémentaire

f Calculé pour .CF,COOK

IC 49,03 i H 5,20 ; N 6,02 % /, 35 trouvé C 48,83 ; H 5,46 ; N 5*&7 % ‘ β

Exemple 54 ]' V n, » Jl-V-T.r i Λ » ...Iin— 77

Production de la 3>6 *-di-N-benzyloxycarbonyl-3'» 4'-didéso-xy-3,>-N~formylkanamycine A

75 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3·,4'-didésoxy-kanamycine A et 65 mg de formiate de phényl sont dissous 5 dans 1 ml de diméthylsulfoxyde et la solution obtenue est traitée comme dans 1*exemple 18. On obtient 80 rag (rendement 97 /·) du monoformiate du composé mentionné, sous forme solide· + eau-diméthylformamide, 1:2).

10 Exemple 55

Production de la 3i6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3',4'-didéso-xy-3w-N-dichloracétylkanamycine A

Une solution de 68 mg de 3»6f~di-N-benzyloxycarbonyl-3,4»-didésoxykanamycine A dans 0,9 ml de diméthylsulfo-15 xyde est mélangée à 25 mg de dichloracétate de méthyl, et le mélange est maintenu toute une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle est mélangée à une petite quantité d'acide dichloracétique puis traitée comme dans l’exemple 33 ï on obtient 88 mg (rendement 97 /») 20 du mono-dichloracétate du composé mentionné, sous forme solide, fGtJ^ = + 67· (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2). Exemple 5b

Production de la 3 »21 ,6 '-tri-N-benzyloxycarbonyl-3,,-N-tri-fluoracétylkanamycine B

23 Une solution de 78 ™g de 3,2',6'-tri-N-benzyloxycar- bonylkanamycine B (cf exemple 19 ci-avant) et de triéthvl-amine (il mg) dans 1 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 35 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 î on obtient 92 mg (rendement 30 95 9») du monotrifluoracétate du composé mentionné, sous forme solide. ^cr^D = + 60° (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2) .

Exemple 57

Production de la 3.2'<6t-tri-N-benzyloxycarbonyl-3',-K-for-35 myltobramvcine

Une solution de 82 mg de 3,2',6'-tri-N-benzyloxycar-^ bonyl-tobramycine Çcf exemple 20) et de triéthylaraine ^ / 78 t · (12 mg) dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à ¢0 rag de formiate de phényl et le mélange est traité comme dans l’exemple 48 î on obtient 86 mg (rendement 97 du composé mentionné, sous forme solide.

5 (_a) ^ = + 71° (c 1, eau -diméthylformamide, 1:2).

Analyse élémentaire

J Calculé pour .HC00H

ij c 55,98 ï H 6,09 i N 7,42 % trouvé C 55,50 ·, H 6,22 -, N 7,28 £ '! 10 Exemple 58 I Production de la 3,2’,6’-tri-y-benzyloxycarbonyl-6’-y- méthyl-3tl-y-trifluoracétyltobramycine

Une solution de 80 mg de 3,2’,6’-tri-N-benzyloxy-carbonyl-6’-N-méthyltobramycine (voir exemple 21) et de ? 15 triéthylamine (12 mg) dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde l est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d’éthyl et le 1 mélange est traité comme dans l’exemple 33 ï on obtient I / , 97 mg (rendement 98 %) du mono-trifluoracétate du compo-ΐ { v 25 | . sé mentionné,sous forme solide. lsajD - + 60° (c 1, eau- 120 diméthylformamide, 1:2).

Exemple 59 I Production de la 3 < 2 ’ , 6 ’-tri-N-benzyloxycarbonyl-3t,-N·· h I trifluoracétyldibékacine ? Une solution de 82 mg de 3,2’6*-tri- N-benzyloxycar- 25 bonyl-dibékacine (cf exemple 23) dans 1 ml de diméthylsul- I foxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d’éthyl, I et le mélange est traité comme dans l’exemple 33 ï on ob- ! tient 100 mg (rendement 98 %) du composé mentionné, sous I ' >25 forme solide. | a} ·” = + 6l° (c 3, eau-diméthylformamide,

\ / D

30 1:2).

Analyse élémentaire

} Calculé pour C^H^O^F^ .CF^COOH

I c 51,93 ; H 5,2i ; N 6,58 % trouvé C 51,84 ; H 5,3δ ; K 6,47 % , 35 Exemple 60 , î Production de la 3,2’,6’3tt-tétra-y-trifluoracétyl-dibékac|lne// ii / ·' f r , / β 79

Un mélange de 71 mg de 3,2',6', tri-N-trifluora-cétyl dibékacine et 30 1;ng de trifluoracétate d’éthyl dans 1 ml de diméthylsulfoxyde est maintenu toute une nuit à 40°C. On traite ensuite la solution réactionnelle comme 5 dans l'exemple 33» ce qui donne 90 mg (rendement 99 /6) du * f Ί25 composé mentionné sous forme solide, jaJp = + 70* (c 1» eau-diméthylformamide, 1:2)

Analyse élémentaire

Calculé pour C26H33N5012F12*CF3C00H

10 C 35,42 ; H 3,61 ; N 7,38 # trouvé C 35,40 ; H 3,89 ; N 7,17 %

Exemple 6l

Production de la 3,2 ' « 6 ' -tri-N-benzyloxycarbonyl-3tl-N-for-myl-dibékacine 13 Un mélange de 79 mg de 3,2 *,61-tri-N-benzyloxycarbonyl- dibêkacine et de 60 mg de formiate de phényl dans 1,1 ml de diméthylsulfoxyde est traité comme dans l’exemple 48.

On obtient 84 mg (rendement 98 %) du monoformiate du coin-posé mentionné sous forme solide, ^ s + 70® (c 1, eau-20 diméthylformamide, 1:2).

Exemple 62

Production de la 3,2* ,6'-tri-K-benzyloxycarbonyl^^-^-di-chlora cétyl» dibékacine

On fait régair une solution de 84 mg de 3,21,6’-tri-N-25 benzyloxycarbonyl dibékacine dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde avec 25 mg de dichloracétate de métnyi comme décrit dans l'exemple 49* On obtient 104 mg (rendement 97 /») du mono-dichloracétate du composé désiré, sous forme solide, s + 59e (c 1, eau-dimêthylformamide, 1:2).

30 Exemple 63

Production de la 3,21,6*-tri-N-benzyloxycarbonyl-S-N-méthyl-3H-N-trifluoracétyldibékacine.

Une solution de 85 mg de 3,2',6'-tri-N-benzyloxycar-bonyl-6*-N-mét'nyl dibékacine (cf exemple 2½) dans 1 ml de 35 diméthylsulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate / d’éthyl et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 î on obtient 103,5 mg (rendement 98 %) du monotrifJuoracétate 1 8ο f ^ 25 S du composé mentionné, sous forme solide. |^aj p = + 60e (c 1 1 eau-diméthylformamide, 1:2).

| Exemple 6¾

Production de la 3»2'-di~y~benzvloxvcarbonvl-3u-N-formyl i!

5 Kanamycme C

Une solution de 8l mg de 3 » 2'—di—N—benzyloxycarbonyl kanamycine C (cf exemple 25) et de triéthylamine (14 mg) dans 1,5 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 90 mg de formiate d'éthyl, et le mélange obtenu est traité com-I 10 me dans l’exemple ; on obtient 85,5 mg (rendement |j 96 %) du monoformiate du composé mentionné sous forme ί solide. JaJ^ = + 81° (c eau-diméthylformamide, 1:2).

Exemple 65 -1 Production de la 3,2 ' , 6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-3"-N-tri- 15 fluoracétylsisomicine I Une solution de 82 mg de 3,2’,6'-tri-N-benzyloxy- I carbonyl-sisomicine (cf exemple 29) dans 1,5 ml de dime- ithylsulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d*éthyl et le mélange est traité comme dans l'exemple 33 î I 20 on obtient 99 mg (rendement 97 9«) du mono-trifluoracétate ! du composé mentionné sous forme solide. ^ = + 151" (cl, eau-dimétbylformamide, 1:2).

f Exemple 66

Production de 3,2 1,61 -tri-N-benzyloxycarbonyl-3,l-N-tri-25 fluoracétvlnétilmicine I ' -S---

Une solution de 85 mg de 3,2',6'-tri-N-benzyloxycar-I bonyl nétilmicine dans 1,3 ml de diméthylsulfoxyde est mé- I langée à 30 mg de trifluoracétate d'éthyl ; le mélange est I ensuite traité comme dans l'exemple 33 î on obtient 103 mg ! 30 (rendement 98 %) du monotrifluoracétate du composé mer,-

* < \ O C

t tionné, sous forme solide. ;a,r7+ + 1^5" (c 1, eau-dimé-

i ^ ✓ U

Ithylformamide, 1:2).

Exemple 67 j. Production de la 3,8'-d i -y-benzyloxycarbonyl-3"-N-trifluc-

~ 35 racétylgentamicine B

t Une solution de 72 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl ./ 4 gentamicine B dans 1,2 ml de diméthylsulfoxyde est mêlait- .y 81 gée à 30 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange est traité comme dans l’exemple 33 ; on obtient 91 mg (rendement 99 %) du mono-tri-fluoracétate du composé mentionné sous forme solide, lai - + 92° (c 1, eau diméthylfor-5 mamide, 1:2),

Exemple 68

Production du mélange des 3 i 2',61-tri-N-benzyloxycarbonyl- 3"-N-trifluoracétylgentamicines C. et C.

1 la

Une solution de 84 mg du mélange des 3,2',6'—tri-N-10 benzyloxycarbonyl-gentamicines C. et C dans 1,5 ml de di-méthylsulfoxyde est mélangée à 30 mg de trifluoracétate d’éthyl et le mélange obtenu traité comme dans l’exemple 33· On obtient 101 mg du monotrifluoracétate du composé mentionné, sous forme solide, [°)2D5= ♦ «7 β (cl, eau-15 diméthylformamide, 1:2),

Exemple 69

Production de la 3.2’,6’-tri-hT-benzyloxycarbonvl-3* ..4*-di-désoxy-3 *-éno-3H-N-trifluoracétylkanamycine B

Un mélange de 83 mg de 3,2',6'-tri-benzyloxy-carbo-20 nyl-3',4·-didésoxy-3'-énokanamycine B (cf exemple 28) et de 35 mg de trifluoracétate d'éthyl dans 1,2 ml de dimé-thylsulfoxyde est maintenu une nuit à température ambiante. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 33 î on obtient 99,5 mg (rendement 96 %) du 25 monotrifluoracétate du composé mentionné, sous forme so-lide, p = + 26° (c 1, eau-dimétnylformamide, 1:2). Exemple 70

Production de la 3i^t~‘di-N*-benzyloxycarbonyl-3'-désoxy-3"-N-formylkanamycine A

30 Une solution de 90 mg de 3,6'-di-N-benzyloxycarbonyl- 3'-désoxykanamvcine A dans 0,8 ml de diméthylsulfoxyde est mélangée à 13 mg de N-formylimidazole et le mélange est maintenu à température ambiante toute une nuit, La solution réactionnelle est mélangée à une petite quantité d'a-35 eide formique puis traitée à l'éther éthylique comme dans l'exemple 33 ï on obtient 94 mg (rendement 95 5«) du mono- ’/ formiate du composé mentionné sous forme solide, 82

Exemple 71

Production de la 3,6*,3"-tri-N -acetylkanamveine A

Un mélange de 100 mg de 3,6'-di-N-acétylkanamycine A et de 20 mg (1,03 en proportion molaire pour 1 mole de la 5 matière de départ) de N-acêtylimidazole dans 1 ml de dimé-thyl sulfoxyde est agité, sous refroidissement à la glace, pendant 3 heures, puis on le laisse reposer à tem-|| pérature ambiante toute une nuit. La solution réactionnel-

Jj le est rendue alcaline par mélange avec 0,3 ml d'ammonia- I 10 que aqueux à 28 % puis on la laisse 3 jours à température ambiante. Le mélange réactionnel résultant est traité à 11'éther éthylique pour obtenir un sirop insoluble dans l'éther. Le sirop est repris à l'eau puis on le fait passer dans une colonne de CM-Séphadex C-25 (forme NH^+) | 15 (produit de la Pharmacia Fine Chemicals Ce, Suède). La I colonne de résine est développée à l'ammoniaque 0,05 N.

Les fractions contenant le produit désiré éliminé par g v élution sont combinées et concentrées à siccité. Le con- (! î! centrât est repris a l’eau, la solution aqueuse neutre- 1 20 lisée à l'acide acétique puis à nouveau concentrée à siccité ; on obtient 109 mS (rendement 90 %) du composé

/ v OC

mentionné sous forme solide, j QtJ q - + 98e (c 1, eau-di-mêthylformamide, 1:2).

Analyse élémentaire

25 Calculé pour C^H^N^O^.CH^COOH.HgO

C 45,3¾ ; h 7,02 ; N 8,14 % trouvé C 45,22 ·, H 7,20 ; N 8,11 % ; Exemple 72

Synthèse de la 1-y-fL- 4-amino-2-hvdroxvbutvrvl)-kanamycine 30 A (amikacine)

a) Préparation de la 3,8'-di-N-benzyioxycarbonyl-kanamycine A

! I (i) Une suspension de 2,0 g (4,13 millimoles) de ka- jj namycine A (base libre) dans un mélange de diméthylsulfo- I 35 xyde (50 ml) et de tétrahydrofuranne (20 ml) est mélangée . / #; / J à 4 g (18,1 millimoles) d'acétate de zinc (II) dihydrate %i \!j

et le mélange obtenu est agité à température ambiante jJ

83 jusqu'à ce que le mélange réactionnel forme une solution homogène.Il faut environ 4-5 heures à la kanamycine A en suspension pour se dissoudre en formant un complexe kanamycine A-cation de zinc. La solution obtenue est en-5 suite refroidie à 0°C et on y ajoute goutte à goutte, en environ une heure, une solution froide (à 0eC) de 2,37 S (9,5 millimoles) de N-benzyloxycarbonyloxysuccinimide dans 40 ml d'un solvant mixte tétrahydrofuranne-diméthyl-sulfoxyde (1:1 en volume). On maintient ensuite la solu-10 tion réactionnelle pendant 4 heures à température ambiante. Pendant cette période, le complexe de zinc de la kanamycine A est soumis à une benzyloxycarbonylation. La solution réactionnelle obtenue est soumise à une chromatographie en couche mince sur gel de silice en utili-15 sant, comme solvant de développement, la couche inférieure de chloroforme-méthanol-ammoniaque à 28 % (1:1:1 en volume) ; on observe alors que la plaque de gel de silice montre une tache principale à Rf 0,23 et deux ou trois taches mineures légèrement perceptibles sont dis-20 posées au-dessus de la tache principale et sont attribuables à d'autres sous-produits.

(ii) La solution réactionnelle contenant le complexe kanamycine A-N-benzyloxy-carbonylée-cation de zinc obtenu dans le stade (i) est versée dans 500 ml 25 d'éther éthylique ; le précipité huileux est ensuite lavé plusieurs fois à l'éther éthylique pour donner 8,8 g d'un produit sirupeux contenant le complexe K-benzyloxv-carbonylé.

(iii) L'élimination du cation de zinc du 30 produit complexe sirupeux est effectuée de la manière décrite ci-après en utilisant une résine échangeuse de cations faiblement acide contenant des fonctions carbo-xyliques (-C0QH) (résine Amberlite CG 50 (forme H ) un produit vendu par Rohm & Haas C“, U.S.A.).

35 On sature complètement 60 ml d'Amberlite CG 50 (forme H+) avec de 1'eau-dioxanne (2:1 en volume). On / remplit une colonne avec cette résine puis on fait passer// " il / « 84 ! dans la colonne une solution de 1 g du produit complexe sirupeux dans 1'eau-dioxanne (1:1 en volume) ; on développe ensuite avec 11eau-dioxanne (2:1 en volume^contenant 1 % . d’acide acétique. Les fractions d’éluat contenant le pro- 5 duit désiré, la 3,6'“di-N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A, positives à la ninhydrine, passent d'abord,puis on rassemble les fractions contenant l'acétate de zinc, positives à la coloration au diphénylcarbazide. Les premières fractions contenant le produit désiré sont combinées et 10 concentrées à siccité ; le concentrât est lavé à l'éther éthylique pour donner 3^0 mg (rendement 8l %) de 3»6'-di-

1N-benzyloxycarbonyl-kanamycine A, sous forme solide incolore. fa= + 76e (c 1, eau-diméthylformamide, 1:2). e fD

:! Analyse élémentaire

] 15 Calculé pour C^H^N^O^.2CH COgH-HgO

I C 51,23 ; H 6,56 ; N 6,29 ; trouvé C 51,02 ; H 6,71 ; N 6,22 % b) Préparation du trifluoracétate de 3,6'-di-N-ben-zyloxycarbonyl-3"-N-trifluoracétylkanamycine A 20 Le produit obtenu dans le processus ci-avant (a) est traité comme dans l’exemple 33, mais avec addition d'un équivalent 1,5 molaire de triéthylamine ce qui donne le ; composé mentionné.

{ c) Préparation de la l-N(L-4-amino—2-hydroxybutyryl)—

!j 25 kanamycine A

:* Une solution de 60 mg de trifluoracétate de 3»6,-di- ï , f N-benzyloxycarbonyl-3n-N-trifluoracetylkanamycine A ob- i ! tenue dans le processus ci-avant (b) dans 1,5 ml d'eau- iétrahydrofuranne (1:1 en volume) est mélangée à 7 mg de .... 30 carbonate de sodium anhydre puis on y ajoute 23 mg de N- hydroxysuccinimide ester de l'acide L-4-benzyloxy-carbonyl-amino-2-hydroxybutyrique, et on maintient le mélange 10 heures à température ambiante.

La solution réactionnelle ainsi obtenue est concen- p 35 trée à faible volume et mélangée à l'eau, donnant un - / !f précipité solide. Le précipité est repris dans 3 ml d'am- // !" moniaque 2N-t étrahydrofuranne (5:3 en volume) et on main - Jj 85 tient la solution toute une nuit à température ambiante pour effectuer l’élimination du groupe 3T,**N-trifluoracétyl. Le mélange réactionnel est concentré à siccité pour donner un résidu solide# Ce résidu est dissous dans 4 ml d’eau-dio-5 xanne (1:1) et la solution rendue faiblement acide par addition d’une très faible quantité d'acide acétique et soumise à une hydrogénolyse catalytique avec de l’hydrogène à pression atmosphérique pendant une heure en présence de catalyseur noir de palladium pour effectuer l’élimination 10 des groupes benzyloxycarbonyl. La solution réactionnelle obtenue est filtrée et concentrée, et on fait passer le concentrât dans une colonne de CM-Séphadex C-25 (forme NH^+) (produit de Pharmacia Fine Chemicals C*, Suède) qui est alors développée par gradients avec une concentration 15 en ammoniaque allant de 0 à 0,5 N. Les fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 36 mg (rendement 89 %) du monocarbonate du , composé mentionné. Les propriétés physicochimiques et les activités anti-bactériennes de ce produit se sont révé-20 lées parfaitement identiques à celles d'un échantillon authentique.

Exemple 73

Synthèse de la 1-N Ç(L)-4 -amino-2-hydroxybutyryIJ-31~ désoxy-kanamycine A

25 a) Préparation de la 3|6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3’-

désoxy -kanamycine A

Une suspension de 500 mg (1,07 millimole ) de 3’-désoxy-kanamycine A (base libre) dans 12 ml de dimétnylsulfoxyde est mélangée à 1 g (4,55 millimoles) d'acétate de zinc 30 dihydrate, et le mélange obtenu est agité jusqu’à formation d'une solution homogène. On ajoute à cette solution une solution de 610 mg (2,45 millimoles) de N-benzyloxycar-bonyioxysuccinimide dans 5 ml de dimêthylsulfoxyde-tétra-hydrofuranne (1:1 en volume) et on maintient la solution 35 réactionnelle toute une nuit à température ambiante. On / traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exem-/ pie 72 (a) (iii) ce qui donne 7^5 mg (rendement 82 %) du t //

J

! i « 86 , composé mentionné sons forme solide incolore, f = + 76e

, *- «'D

(cl, eau-dimethylformamide 1:2).

j Analyse élémentaire

Calculé pour 20^00^.

5 C 52,16 ; H 6,68 ? N 6,AO % j trouvé C 51*99 ; H 6,75 ; N 6,20 % 1 b) Préparation du trifluoracétate de 3,6-di-N-ben- zyloxycarbonyl-3 * -dêsoxy-3"**N-trifluoracêtylkanamycine A.

Le produit obtenu dans l'étape a) est traité comme 10 dans l'exemple k7· î| c) Préparation de la l-N(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)-

i 3 »-désoxykanamycine A

Une solution de 50 mg du trifluoracétate de 3»6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3 '-désoxy-3M-î«-trifluoracétyl kana-15 mycine A obtenu dans l'étape b) ci-dessus dans 1,5 ml d’eau-tétrahydrofuranne (1:2 en volume) est mélangée à j! 6 mg de carbonate anhydre de sodium, puis on y ajoute 20 mg de N-hydroxysuccinimide ester de l’acide L-4-benzyloxy-carbonylamino-2-hydroxybutyrique. Le mélange est mainteil 20 nu 8 heures à température ambiante. La solution réac- . tionnelle est concentrée à faible volume et mélangée à '·[ ; l'eau, ce qui produit un précipité solide.

Le précipité est mélangé à 3 ml d'ammoniaque 2?i-tétra-hydrofuranne (1:1 en volume) et le mélange est maintenu 25 toute une nuit à température ambiante pour effectuer l'élimination du groupe 3M-N-trifluoracétyl.

La solution réactionnelle est concentrée à siccité pour donner un résidu solide, et ce résidu est mélangé à k ml d'eau-dioxanne (1:1 en volume). La solution est ren-30 due faiblement acide par addition d’une petite quantité d'acide acétique et soumise à hydrogénolyse avec de l'hydrogène sous pression atmosphérique pendant une heure sur catalyseur noir de palladium pour effectuer l'élimination des groupes benzyloxycarbonyl. On traite ensuite la so-35 lution réactionnelle d'hydrogénolyse comme dans l'exemple , 72 (c) ce qui donne 30 mg (rendement 87 %) du monocarbonate ί 87 monohydrate du composé mentionné. jjaJ^ = + 89° (c 1, eau).

Exemple

Synthèse de la l-NCL-^-amino^-hydroxybutyryl)-3*,4*-di-5 désoxykanamycine A

Une solution de 70 mg du trifluoracétate de 3»6'-di-N-benzyloxycarbonyl-3 ' ,4' -didésoxy-3,,*-î'*-trif luoracétyl-kanamycine A obtenu dans l'exemple 52 dans 2 ml d*eau-tétrahydrofuranne (1:2) est mélangée à 9 mg de carbo-10 nate de sodium anhydre, puis on y ajoute 28 mg du N-hydro-xy-succinimide ester de l'acide L-4-benzyloxycarbonylamino- 2-hydroxybutyrique. On maintient le mélange pendant 10 heures à température ambiante. On concentre à faible volume et on mélange à l'eau ce qui donne un précipité so-15 lide.

Ce précipité est mélangé à 4 ml d'un solvant mixte ammoniaque 3N-‘fcétrahydrofuranne (1:2) et on maintient le mélange à température ambiante pendant toute une nuit,

La solution réactionnelle est concentrée à siccité pour 20 donner un résidu solide. Le résidu est mélangé à 6 ml d'eau-dioxanne (1:3) et la solution rendue faiblement acide par addition d’une petite quantité d'acide acétique puis soumise à une hydrogénolyse avec de l'hydrogène à pression atmosphérique pendant 1,5 heure sur cataly-25 seur noir de palladium. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 72 (c) ce qui donne 42 mg (rendement 91 %) du monocarbonate du composé men-f v 25 tionné. j^Jj) = + 91e (c 1, eau).

Exemple 75 30 Svnthèse de la l-N(L-(t-amino-2-hvdroxvbutvrvl) tobramycine ~ wmmmmmmmm—————a»—· ' ' » «j p—i » ».«.t a) Préparation de la 3,2',6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-tobramycine.

Une suspension de 480 mg (1,03 millimole) de tobramycine (base libre) dans 12 ml de diméthylsulfoxyde est 35 mélangée à 1 g (4,55 millimoles) d'acétate de zinc dihy-

drate et le mélange est agité pendant une heure. On ajoute. / goutte à goutte, en environ une heure, à la solution U

i , # ’ ! 88 h ^ réactionnelle contenant le complexe tobramycine-cation de zinc, une solution de 850 mg (3,4 millimoles) de N-ben-zyloxycarbonyloxysuccinimide dans 10 ml de tétrahydro-furanne-diméthylsulfoxyde (1:1 en volume) et on laisse 5 le mélange réactionnel reposer une nuit à température ambiante. La solution réactionnelle obtenue est traitée avec un grand volume d’éther éthylique comme dans 1’exem-I pie 72 (a) (ii), ce qui donne un produit sirupeux épais j contenant le complexe tobramyeine-zinc N benzyloxycarbonylé.

I 10 On traite ensuite le produit complexe sirupeux comme dans l’exemple 72 (a) (iii) mais le rapport eau-dioxanne (2:1) i passe à 1:2 en volume. On obtient 8l0 mg (rendement 78 ?*) I du composé mentionné sous forme de solide incolore.

I [a]25 - + 65® (c eau-diméthylformamide 1:2).

I IS Analyse élémentaire 1 Calculé pour C. H _N 01_.2CH CO H.H 0 § “555*5 J 2 « C 54,81 · H 6,50 5 N 6,95 îi trouvé C 54,77 ; H 6,71 ; N 6,88 % ï b) Préparation du monoformiate de 3 « 2’,6’-tri-N-'\ 20 benzyloxycarbonyl-3n-N-formyltobramycine.

Le produit obtenu en a) est traité comme dans l’exemple 57 pour donner le produit mentionné.

c) Préparation de la l-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)- I tobramycine.

I 25 Une solution de 100 mg de monoformiate de 3,2’,6*-tri- I N-benzyloxycarbonyl-3"-N-formyltobramycine obtenue selon * b) dans 3 ml d’eau-tétrahydrofuranne (1:3) est mélangée à 12 mg de carbonate de sodium anhydre, puis on y ajoute 40 mg du N-hydroxysuccinimide ester de l’acide (L)-4-benzy-30 loxycarbonyl-amino-2-hydroxybutyrique. On maintient le mélange à température ambiante pendant 10 heures. La sc-,t* lution réactionnelle ainsi formée est concentrée à faible « volume et mélangée à l’eau, ce qui conduit au dépôt d’un précipité solide.

35 Le solide est mis en suspension dans 2 ml d’une so lution aqueuse de peroxyde d’hydrogène à 10 ?£, et la suspension est vigoureusement agitée à 6ôeC pendant 3 heures,, 7/ 89 puis filtrée pour donner un résidu solide contenant le dérivé de N-formyl, Le résidu solide est repris dans 8 ml d'eau-dioxanne (1:3), la solution est rendue faiblement acide par addition d'une très petite quantité d'acide acé-cj tique, et soumise à une hydrogênolyse à pression atmosphérique pendant 1,5 heure sur catalyseur noir de palladium. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 72 (c) et on la fait passer dans la colonne CM-Séphadex C-25, qui est alors développée par gradients 10 avec des concentrations d'ammoniaque allant de 0 à 1 N.

Les fractions contenant le composé désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 67 mg (rendement 87 % ) du composé ci-dessus mentionné, sous forme de son dicar-bonate dihydrate. cy ^ = + 78e (c 1, eau).

15 Ce produit coïncide bien avec le produit authentique.

Exemple 76

Synthèse de la l-N-(L-4-amino-2-hydroxvbutyrvl)-dibékacine a) Préparation de la 3 » 2',6'-tri-N-benzyioxycarbonyl = dibékacine.

20 800 mg (1,33 millimole) de dibékacine (base libre) sont mélangés sous agitation à 15 ml de diméthylsulfoxyde.

La solution est mélangée à 1,4 g (6,4 millimoles) d'acétate de zinc dihydrate sous agitation. On ajoute goutte à goutte à la solution, en environ une heure, une solu-25 tion de 1,1 g (4,4 millimoles) de N-benzyloxycarbonyloxy-succinimide dans 12 ml de diméthylsulfoxyde, et on laisse le mélange reposer toute une nuit à température ambiante.

La solution réactionnelle est ensuite mélangée à un grand volume d'éther éthylique pour donner un dépôt huileux con-30 tenant principalement le composé mentionné, et du diméthylsulfoxyde. Le dépôt huileux est séparé de la phase supérieure liquide puis lavé à l'éther éthylique pour donner un produit sirupeux épais.

Le produit sirupeux est lavé plusieurs fois à l'eau, 35 Grâce à ce traitement, l'excès initial d'acétate de zinc est éliminé et le complexe de zinc N-benzyloxycarbonylé est détruit ; on obtient 1,1 g d’un résidu solide insoiu- A'

J

jt ίϊ il 5

N

I 90 j

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ble dans l’eau. Ce solide donne une tache unique à Rf 0*13 ! en chromatographie en couche mince sur gel de silice dé- i j! veloppé avec la phase inférieure du solvant de développe- i ment chloroforme-méthanol-ammoniaque aqueux 18 ?· (l;l:l 5 en volume) et contient de la 3?2',6*-tri-N-benzyloxycarbo-nyl-dibékacine presque pure avec une trace de zinc.

: _ = + (c eau“diméthylf°rmamide, 1:2)·

Si pourtant on lave le produit solide avec une solution d’ammoniaque 3 M, on obtient un produit pur, non 13 contaminé par le cation zinc.

b) Préparation du trifluoracétate de 3»2*,6’-tri-N-! benzyloxycarbonyl-3"~N-trifluoracétyl dibékacine.

j On traite le produit obtenu en a) ci-dessus comme i dans l’exemple 59 pour obtenir le composé mentionné, i 15 c) Préparation de la l-N-(L-4-amino-2-hydroxybutyryl)- | dibékacine.

j Une solution de 170 mg du trifluoracétate de 3*2’,6’- j tri-N-benzyloxy-carbonyl-3 ’’-Ν-trif luoracétyldibékacine , obtenu en b) ci-dessus, dans 5 ml d’eau-tétrahydrofuranne 20 (l?3) est mélangée à 18 mg de carbonate de sodium anhydre, j puis on y ajoute 60 mg de N-hydroxysuccinimide ester de I l’acide (S)-4-benzyloxycarbonyl-an«ino-2-hydroxybutyrique, j et on maintient le mélange à température ambiante pendant 9 heures. La solution réactionnelle est concentrée à i 25 faible volume et mélangée à l’eau pour laisser déposer un précipité solide.

Le précipité est mélangé à 12 ml d’ammoniaque 4 N-té-trahydrofuranne (1:3) et on laisse le mélange reposer toute une nuit à température ambiante. La solution réaction-30 nelle est alors concentrée à siccité pour donner un résidu solide. Le solide obtenu est dissous dans 12 ml d’eau-dioxanne (1:3)» la solution rendue faiblement acide par addition d’un très faible quantité d’acide acétique et soumise à une hvdrogénolyse à pression atmosphérique pendant 35 1,5 heure sur noir de palladium. On traite ensuite la so lution réactionnelle comme dans l’exemple 75 (c) ce qui donne 96 mg (rendement 89 du dicarbonate du composé , /, 1 91 mentionné. £ajj^= + 86e (c 1, eau).

On peut observer que les propriétés physicochimiques et les activités antibactériennes de ce produit coïncident avec celles d'un échantillon authentique (Journal of An-5 tibiotics, vol 26, p. 412 (1973)·

Exemple 77

Synthèse de la 1-N (DL-3-amino-2-hydroxypropionyl)-dibé-kacine^c'est à dire de la 1-N-DL-isoséryldibékacine

Une solution de 150 mg de trifluoracétate de 3»2', 10 6'-tri-N-benzyloxycarbonyl-3n-N-trifluoracétyldibékacine de l'exemple 59 dans 5 ml d'eau-tétrahydrofuranne (1:3) est mélangée à 16 mg de carbonate de sodium anhydre, puis on y ajoute 51 mg de N-hydroxy-succinimide ester de l'acide DL-3-benzyloxycarbonylamino-2-hydroxypropionique 15 (ou DL-3-benzyloxycarbonylisosérine). On maintient le mélange à température ambiante pendant 10 heures. On traite ensuite la solution réactionnelle comme dans l'exemple 76 (c) ce qui donne 82 mg (rendement 88 %) du composé / ^25 mentionné sous forme de dicarbonate. la)D = + 82 ° (c 0,32, 20 eau).

Les propriétés physicochimiques et les activités antibactériennes de ce produit se sont révélées identiques à celles d'un échantillon authentique.

Exemple 78 25 Synthèse de la 3 ,2'6'-tri-N-p-méthoxybenzyloxycarbonyldl-békacine.

a) Préparation de la 3 » 2',6'-tri-N-p-méthoxybenzylo-xycarbonyldibékacine.

On met en suspension 500 mg (11,1 m mot) de dibéka-30 eine (base libre) dans 15 ml de diméthylsulfoxyde et on agite la suspension pour former une solution à laquelle on ajoute, sous agitation, 1,2 g (5,5 m moles) d'acétate de zinc dihydrate. On ajoute goutte à goutte à la solution résultante, en environ 30 minutes, une solution de 1,17 S 35 (3,86 m moles) d'ester p-méthoxy-carbobenzoxy-p-nitrophé- nyl dissous dans 20 ml de diméthylsulfoxyde et on maintient le mélange toute une nuit à température ambiante. La solu- 1 Si 92 i î

Ition obtenue est ensuite traitée comme décrit dans l'exemple 76 (a) pour donner 893 mg (rendement 85 %) du composé mentionné. £aj“·^ + 69° (c 1, eau-diméthylformamide,

1:2). J

5 b) Préparation du trifluoracétate de 3,2',6'-tri- N-p-méthoxybenzyloxycarbonyl-3H-N-trifluoracêtyldibê-kacine.

Une solution de lôO mg de 3 »2',6'-tri-N-p-méthoxy-ben-zyloxycarbonyldibékacine dans 2 ml de diméthylsulfoxyde 10 est mélangée à 48 mg de trifluoracétate d'éthyl et le mélange est traité comme décrit dans l'exemple 33» donnant ii I l88 mg (rendement 96 %) du composé mentionné sous forme * / ^125 I de substance solide. s + 58° (c 1, eau-diméthÿTor- ! mamide 1:2).

ζ ; 15 c) Préparation de la l-N(L-4-amino-2-hydroxybutyryl) I dibékacine 1 Une solution de 150 mg de trifluoracétate de 3*2'f6'- ^ tri-N~p-méthoxybenzyloxycarbonyl-3,,-N-trif luoracétyldibé- * kacine obtenue selon b) ci-dessus, dans 5 ml d'eau-têtra- 20 hydrofuranne (1:3) est mélangée à l4 mg de carbonate de sodium anhydre, puis additionnée de 5^ mg de N-hydroxysucci-nimide ester d'acide (S)-4-(p-méthoxybenzyloxycarbonyl)

Iaminö-2-hydroxybutyrique, et le mélange est maintenu pendant 8 heures à température ambiante. La solution réac-2p tionnelle est concentrée à faible volume et mélangée a l'eau, conduisant au dépôt d'un précipité solide.

On ajoute au solide une solution de HC1N dans le mé-thanol aqueux (1:3» 6ml) et on chauffe le mélange à 60°C pendant 4 heures pour éliminer le groupe p-méthoxybenzyloxy I 30 carbonyl. On concentre la solution à faible volume, puis I on y ajoute de l'ammoniaque 3 N jusqu'à ce que le pH de la I solution soit de 10. On maintient la solution toute une . nuit à température ambiante et on la concentre pour obte- ; nir un résidu. Le résidu est dissous dans l'eau, la solu- 1 35 tion chargée dans une colonne de Οί-Séphadex C-2? (forme I NH^+) qui est lavée soigneusement à l'eau puis développée / . par gradients avec des concentrations d'ammoniacue allant -t * * 93 de 0 à N. Les fractions contenant le produit désiré sont combinées et concentrées à siccité pour donner 77 mg / (rendement 87 *) du composé mentionné sous forme de dicar-/ bonate). / / 5 j = + 83e (c 1, eau).

Claims (13)

1. 94 - REVENDICATIONS - I·- Procédé de préparation, d'un dérivé N-protégé, sélectivement acylé, d'un antibiotique aminoglycosidique, (ledit antibiotique comportant une fraction dêsoxystrepta-5 mine ayant un groupe 3-aminoglycosyle ou 3-alkylaminogly-cosyle lié à son groupe 6-hydroxy et le dérivé N-protégé, ! sélectivement acylé, ayant certains de ses groupes amino sélectivement protégés par un groupe acyle, caractérisé g - en ce qu'il consiste à 10 (a) faire réagir un réactif d'acylation ayant un groupe acyle à introduire comme groupe amino-protecteur avec un complexe antibiotique aminogiycosidique-cations de zinc qui a été formé par réaction de l'antibiotique aminoglyco-sidique avec un sel de zinc dans un solvant organique i-15 nerte, pour produire un complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement N-acylê de l'antibiotique amino-glycosidique, dérivé dans lequel les groupes amino initialement non complexés sont acylés, et (b) faire réagir le complexe de cations de zinc avec le 20 dérivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminogly- jl Icosidique avec un réactif qui élimine les cations de zinc du dit complexe, pour produire le dérivé N-protégé, sélectivement acylé, de l'antibiotique aminoglycosidique.
2. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé -Ü 25 en ce que l'antibiotique aminoglycosidique à complexer a- . i | vec des cations de zinc est· une 6-0-( 3"-&niino ou 3"“al^yl” iamino-3"-désoxyglycosyl)-2-bésocystreptamine ayant facultativement un groupe 4-Q-(aminoglycosyle).
3. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé '1 ,,i 30 en ce que l'antibiotique aminoglycosidique est la kanamy- cine A, une 6'-N-alkylkanamycine A, la 3'-dêsoxykanamycine A, la 6'-N-méthyl-3'-dêsoxykanamycine A, la 4'-désoxykana- lüf mycine A, la 6 ' -N-niéthyl-4 ' -dêsoxykanamycine A, la 3’i4'-f didêsoxykanamycine A, la 6"-dêsoxykanamycine A, la 4^,6^- i 35 didésQxykanamycine A, la kanamycine B, la 3 *-désoxykanamy- ^ eine B, la 4 ' -dêsoxykanamycine B, la 3 ’ » 4 ' -didésoxykana^nô’7 eine B, la 3’ »4'-didésoxy-3'-éno-kanamycine B, la 6'-N- / jf i -V , / 95 méthyl-3'« 4 ' -didésoxvkanamycine B, la kanamycine C, la 3’-désoxykanamycine C, la 3',k'-didésoxykanamycine C, la gen-tamycine A, la gentamycine B, la gentamycine C, la verda-mycine, la sisomycine ou la nétilmycine. 5 k. - Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que la formation du complexe antibiotique aminogly-cosidique-cations de zinc est réalisée en faisant réagir de l'acétate ou du chlorure de zinc en une quantité comprise entre 2,3 et 6 moles par mole de l’antibiotique a-10 minoglycosidique dans un solvant organique inerte choisi parmi le diméthylsulfoxyde, le dimethylsulfoxyde aqueux, le diméthylform_amide, le diméthylform.amide aqueux, un mélange de diméthylsulfoxyde et de dimethylforrn.-araide, le tétrahydrofuranne, le tétrahydrofuranne aqueux, le métha-15 nol, le méthanol aqueux, l'éthanol et l'éthanol aqueux, avec ou sans addition d'acétate de sodium. 5«-- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le groupe acyle du réactif d'acylation employé , est un groupe alcanoyle, un groupe aroyle, un groupe alco- 20 xycarbonyle, un groupe aralkyloxycarbonyle, un groupe a-; ryloxycarbonvle, un groupe alkylsulfonyle, un groupe aral- kylsulfonyle ou un groupe arylsulfonyle connu comme groupe amino-protecteur.
4. 6.- Procédé selon la revendication 1, caractérisé 25 en ce que le réactif d'acylation est employé en une quantité molaire égale ou légèrement supérieure au nombre de groupes amino à acyler dans le complexe antibiotique ami-noglycosidique-cations de zinc.
5. 7·- Procédé selon la revendication 1, caractérisé 30 en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé sélectivement K-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique est d'abord séparé du mélange de la réaction d'acylation avant d'être mis à réagir avec le réactif d'élimination des cations de zinc qu'il contient. 35 8.- Procédé selon la revendication i, caractérisé t en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé / sélectivement N-acyié de 1'antibiotique aminoglycosidiqne / f i / 9b » est séparé du mélange de la réaction d'acylation par extraction avec un solvant organique, par évaporation du milieu solvant organique contenu dans le milieu réactionnel d'acylation ou par dilution du milieu réactionnel d' 5 acylation avec un solvant organique diluant, avant d'être mis à réagir avec un réactif d'élimination des cations de zinc .
6. 9·- Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé 10 sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, une fois séparé, est mélangé à de l'eau ou à un solvant organique polaire, soit anhydre, soit aqueux, qui sert de réactif d'élimination des cations de zinc.
7. 10. Procédé selon la revendication 9» caractérisé 15 en ce que le solvant organique polaire est, soit de ceux dans lesquels le sel de zinc est soluble, mais le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique est insoluble, soit de ceux dans lesquels le sel de zinc est insoluble, mais le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique 20 est soluble.
8. 11. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le complexe de cations de zinc avec le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, une fois séparé, est mis de nouveau à dissoudre entièrement dans un 25 solvant organique contenant une proportion d'eau, après quoi la nouvelle solution ainsi obtenue est soumise à un traitement chromatographique en utilisant une résine é-changeuse de cations, une résine échangeuse d'anions, une résine échangeuse de chélates ou un polymère insoluble 30 dans l'eau et contenant des groupes fonctionnels capable de se combiner avec un métal, qui sert de réactif d'élimination des cations de zinc.
9. 12. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'on fait passer le mélange réactionnel d'acylation 35 directement à travers une colonne d'une résine échangeuse de cations, d'une résine échangeuse d'anions, d'une résine ^ # échangeuse de chélates ou d'un polymère insoluble dans i / 97 \ l’eau et contenant les fonctions de combinaison avec les « métaux pour réaliser l'adsorption du complexe des cations | de zinc avec le dérivé N-acylé de l'antibiotique aminogly- il cosidique, puis on développe la colonne avec un solvant i 5 organique aqueux contenant ou non une proportion d’un a- cide ou d'une base et l'on recueille l'éluat par fractions, après quoi on récupère les fractions qui contiennent le dérivé sélectivement N-acylé désiré de l'antibiotique ami-no glycosidique sans contenir de cations de zinc, jj 10 13·- Procédé selon la revendication 1, caractérisé - j| fi en ce que lorsque le dérivé N-acylé désiré de l'antibioti- il que aminoglycosidique est insoluble ou substantiellement | insoluble dans l'eau, on incorpore immédiatement le mêlan- | ge réactionnel d'acylation à de l'eau, de façon que le dit ! 15 dérivé soit précipité en se séparant du sel de zinc qui j; reste dissous dans l'eau.
10. 14. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le mélange réactionnel d'acylation est traité : j avec de l'hydrogène sulfure, un sulfure de métal alcalin 'jj 20 ou un sulfure de métal alcalino-terreux, qui précipite les cations de zinc sous la forme de sulfure de zinc, ou avec ’* 1'hydroxyde d'ammonium, qui précipite les cations de zinc I sous la forme d'hydroxyde de zinc.
11. 15. Procédé de préparation d'un dérivé N-acylé, ; 25 sélectivement protégé, d'un antibiotique aminoglycosidique comportant une fraction 6-0-(3"-amino-ou 3,,-al'Kylamino-3" -désoxvglycosyl)-2-désoxystreptamine ayant facultativement * un groupe 4-0-(aminoglycosyIe), dérivé dans lequel le groupe 1-amino de la fraction désoxystreptamine n'est pas 30 protégé, mais tous les autres groupes amino de la molécule d'aminoglycoside sont protégés par des groupes acyles identiques ou différents, caractérisé en ce qu'il consis-I« te en une seule opération qui est (a) de faire réagir un ester d'acide alcanoïque de formulé 35 le (Vin); f ; RaC-R^ (VIII) / . ό ./· I* » 98 dans laquelle R est un atome d’hydrogène ou un groupe alkyle di- ou trihalogéné contenant de 1 à 6 atomes de carbone et R est un groupe alkyloxy contenant de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkyloxy, spécialement le 5 groupe benzyloxy ou un groupe aryloxy, spécialement le groupe phényloxy, ou un N-formylimidazole, comme agent acylant, dans un solvant organique inerte, avec un dérivé N-acylé, partiellement protégé, de l'antibiotique amino-glycosidique, dérivé dans lequel le groupe 1-amino et le 10 groupe 3"-amino ou 3"-alkylamino ne sont pas protégés tandis que tous les autres groupes amino sont protégés par un groupe acyle comme groupe amino-protecteur, pour effectuer l'acylation sélective du groupe 3n-a.mino ou 3"-alkylamino du dérivé N-acylé partiellement protégé a-15 vec le groupe acyle R CO- du dit agent acylant et obtenir ainsi le dérivé entièrement amino-protégé à l'exception du groupe 1-amino de l'antibiotique aminoglycosidique. l6.- Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que l'ester d'acide alcanoïque de formule (VIII) 20 est mis à réagir avec le dérivé N-acylé partiellement protégé ci-dessus de la kanamycine A, d’une 6 '-alkylkana-mycine A, de la 3'-désoxykanamycine A, de la 6*-N-méthyl-3'-désocykanamycine A, de la 4'-désoxykanamycine A, de la 6'-N-méthy1-4'-désoxykanamycine A, de la 31 » 4'-didésoxy-25 kanamycine A, de la 6"-désoxykanamycine A, de la 4" ,6"- didésoxykanamycine A, de la kanamycine B, de la 3'-désoxykanamycine B, de la 4 ' -désoxykanamycine B, de la 3'»4’-di-désoxykanamycine B, de la 3'» 4'-didésoxy-éno-kanamycine B, de la 6'-N-méthvl-3',4'-didésoxykanamycine B, de la 30 kanamycine C, de la 3'-désoxykanamycine C, de la 3’»4'- didésoxykanamycine C, de la gentamycine A, de la gentamy-cine B, de la gentamycine C, de la verdamycine, de la si-somycine ou de la nétilmycine.
12. 17·- Procédé selon la revendication Ip» caractéri-35 sé en ce que l'ester d'acide alcanoïque de formule (VIII) est choisi parmi le formiate d'éthyle, le formiate de me-, thyle, le formiate de butyle, le formiate de benzyle, le l/J » ! : ! j 99 I formiate de phényle, le dichloracétate de méthyle, le * dichloracétate d'éthyle, le trichloracétate de méthyle, I le trichloracétate de phényle, le trifluoracétate de mé- | thyle, le trifluoracétate d’éthyle ou le trifluoracétate 5 de phényle.
13. 18. Procédé selon la revendication 15» caractériel sé en ce que le N-formylimidazole est employé comme agent acylant. Ί ri 19·- Procédé selon la revendication 15, caractéri- 10 sé en ce que l'agent acylant est mis à réagir à une température comprise entre -30°C et +120°C pendant une durée de 30 minutes à 24 heures, voire 48 heures, dans un solvant organique inerte choisi parmi le diméthylsulfoxyde, le diméthylformamide, le triamide Hexaméthylphosphorique, 15 le tétrahydrofuraime, le dioxanne, 1’acétonitrile, le nitrométhane, le sulfolanne, le diméthylacétamide, le chloroforme, le dichlorométhane, le méthanol, l'éthanol, le n-butanol, le t-butanol, le benzène, le toluène ou lf1 éther sulfurique, soit anhydre, soit aqueux, t 20 20.- Procédé perfectionné de préparation d'un défi : rivé l-N-(cc-hydroxy-u>-aminoalcanoyle) d'un antibiotique aminoglycosidique comportant une fraction 6-0-(3"-amino-ou 3,,**alhylamino-3"-désoxyglycosyl) -2-désoxystreptamine ayant facultativement un groupe 4-0-(aminoglycosyle), 25 caractérisé en ce qu'il consiste à: (a) faire réagir des cations de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique dans un solvant organique inerte pour * produire le complexe de cations de zinc avec l'antibiotique aminoglycosidique, 30 (b) faire réagir un réactif acylant ayant un groupe acyle a introduire comme groupe amino-protecteur avec le complexe antibiotique aminoglycosidique-cations de zinc for-j: mé en (a), in situ, dans le solvant organique inerte, f pour produire un complexe de cations de zinc avec le dê- 35 rivé sélectivement N-acylé de l'antibiotique aminoglycosidique, dérivé dans lequel les groupes amino initialement ,, non complexés sont acylés, / * . j. 100 / (c) faire réagir le complexe cérivé sélectivement N-acylé d’antibiotique amino glycosidique-cations de zinc obtenu en (b) avec un réactif qui élimine les cations de zinc du dit complexe pour obtenir un dérivé N-acylé, partiellement 5 et sélectivement protégé de l’antibiotique aminoglycosidi- que, qui est exempt de cations de zinc et dans lequel le · groupe 1-amino et le groupe 3'* —amino ou 3n -alkylamino ne sont pas protégés, tous les autres groupes amino de la molécule d 'aminoglycoside étant protégés par le groupe acy-10 le, (d) faire réagir le dérivé N-acylé partiellement et sélectivement protégé obtenu en (ci avec un ester d’acide al-canoïque de formule (VIII): RaC-Rb (VIII) i' 15 0 dans laquelle Ra est un atome d’hydrogène ou un groupe alkyle di- ou trihalogénê contenant de 1 à 6 atomes de carbone, et Rb est un groupe alkyloxy contenant de 1 à 6 atomes de carbone, un groupe aralkyloxy contenant de 1 20 à 6 atomes de carbone ou un groupe aryloxy, ou le N-for-^ mylimidazole, comme agent acylant, dans un solvant orga nique inerte, pour acyler sélectivement le groupe 3"~araino ou 3"-alkylamino avec le groupe acyle RaC0- du dit agent acylant et obtenir ainsi le dérivé entièrement amino-pro-25 tégé à l'exception du groupe 1-amino de l'antibiotique aminoglycosidique, (e) faire réagir le dérivé obtenu en (d) avec un acide α-hydroxy-w-aminoalcanoïque de formule (IX): H00C-CH(CH ) N?:_ (IX) ; 2 m - 30 0K dans laquelle m est égal à 1 eu 2, ou un dérivé réactif équivalent de cet acide, dont le groupe amino est protégé ou non, pour acyler le groupe 1-amino du dérivé obtenu en (d), et 35 (f) éliminer les groupes amine-protecteurs résiduels du produit de 1-N-acylation obtenu en (e) par un procédé traditionnel de ''déprotection-* . pc^.-fe dUmi. ·. A aj. ^γ-λλχχ t £ e'i , » f·'-“'»'-» Jtf f.jjrrs W A*. . y