FR2493318A1 - Nouveaux derives de nitrosouree - Google Patents

Abstract

DERIVES DE NITROSOUREE. CES DERIVES CORRESPONDENT A LA FORMULE I GENERALE SUIVANTE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE LE RADICAL R REPRESENTE -OH OU -OCH2M1, M ETANT UN NOMBRE ENTIER DE 1 A 3 ET L'UN DES RADICAUX R, R, R ET R REPRESENTE LE RADICAL (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LEQUEL X EST -CH- OU UN GROUPE ALKYLENE DE 1 A 3 ATOMES DE CARBONE, N EST UN NOMBRE ENTIER DE 1 A 3 ET Y EST UN GROUPE PRESENT SUR L'ATOME DE CARBONE A D'UN A-AMINO ACIDE ET CHACUN DES TROIS GROUPES R RESTANTS REPRESENTE -OH; OU DANS LAQUELLE R REPRESENTE LE RADICAL (CF DESSIN DANS BOPI) ET CHACUN DES RADICAUX R, R, R ET R REPRESENTE -OH. APPLICATION DANS LE TRAITEMENT DE LA LEUCEMIE ET DES TUMEURS.

Description

-1- La présente invention a pour objet des nouveaux dérivés de nitrosourée

présentant une très importante activité inhibitrice à l'égard de la leucémie et des tumeurs, ainsi qu'un procédé pour la préparation de ces dérivés, et leur utilisation dans le domaine pharmaceutique. Un grand nombre de composés ont déjà été proposés comme étant actifs en vue d'inhiber la leucémie et les tumeurs, et parmi

ceux-ci des dérivés de nitrosourée.

Parmi les dérivés de nitrosourée, la streptozotocine LN-(N'-méthyl-N'nitrosocarbamoyl)-D-glucosamine/et ses dérivés tels que les méthyl glucosaminides sont représentatifs des composés déjà proposés (voir brevet U.S. n 3.577.406 et 3.767.640 par exemple), mais ils ne sont pas totalement satisfaisants du fait d'une activité insuffisante à l'égard de la leucémie et des tumeurs et/ou à cause d'effets secondaires. Une autre classe de dérivés de nitrosourée, est la série des dérivés glycosyl de nitrosourée qui ont été récemment proposés et parmi lesquels le composé le plus

intéressant est le 1-(2-chloroéthyl)-3-(e-D-glucopyranosyl)-l-

nitrosourée (en abrégé GANU) qui a un large spectre d'activité antitumorale à l'égard d'une grande variété de leucémies et de tumeurs expérimentales avec une bonne probabilité d'activité dans la chimiothérapie du cancer chez l'homme (voir T. Suami et al., brevets U.S. n 4.086.415, 4.157.439 et 4.220.643). Une autre classe de dérivés de nitrosourée qui ont été également proposés

sont les 1-(2-chloroéthyl)-3-(mono-ou poly- hydroxv-cyclohexvl)-l-

nitrosourées, parmi lesquels le composé préféré est le 1-(2-chloro-

éthyl)-3-(1,3/2N-dihydroxycyclohexyl)-l-nitrosourée (en abrégé DONU) qui a également un large spectre d'activité antitumorale

à l'égard d'une grande variété de leucémies et de tumeurs exmérimen-

tales avec une très faible toxicité (voir T. Suami et al. brevet

U.S. n 4.180.655).

En poursuivant ces recherches, on a maintenant trouvé une nouvelle série de dérivés de nitrosourée qui possède également une activité inhibitrice élevée à l'égard de la leucémie et des tumeurs avec une faible toxicité comme ceci a été démontré par des tests in vivo. Selon un premier aspect de la présente invention il est proposé comme nouveaux dérivés de nitrosourée ceux correspondant à la formule (I): -2-

CH2-R4

2a4 R3 Ro (I)

R2 R1

dans laquelle RO représente -OH ou -OCmH2m+l, m étant un nombre entier de 1 à 3 et l'un des radicaux R1, R2, R3 et R4 représente y -(NH- -X)n-NH-91-CH2CH2C%, X étant -CH- ou un groupe alkylène de 1

à 3 atomes de carbone, n étant un nombre entier de 1 à 3 et Y re-

présente un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide et chacun des trois radicaux R restants représente -OH; ou dans laquelle R. représente -(NH--X)n-NH- - -CH2CH2CZ et R1,, R2 R3 et R4 représentent chacun -OH. Dans la formule (I), le squelette monostccharidique peut prendre la configuration glucose, mannose, galactose, talose,

idose, gulose, altrose ou allose. Dans la définition de Y ci-

dessus, les mots "un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un

a-amino acide" signifie un groupe qui forme un a-amino acide lors-

qu'il est relié à un atome de carbone, auquel un groupe amino, un groupe cgrboxyle et un atome d'hydrogène ont été fixes. Ainsi le groupe _CH signifie un groupement résiduel d'un a-amino acide qui

est formé ou dérive lorsque le groupe a-amino et le groupe a-

carboxyle sont éliminés de la molécule d'un a-amino acide. Par exemple le groupe -H peut être de formule: CH i

-CH-

et dérive de l'alanine par élimination des groupes amino et carbo-

xyle de la molécule d'alanine, ou de formule:

CH

-CH-ç et dérive de façon similaire de la phénylalanine, ou de formule -3CH2OH -CH- et dérive de la sérine, ou de la formule:

CH2CONH2

I. -CH- et dérive de l'asparagine, etc. Des exemples représentatifs de tels groupes résiduels Y sont ceux présents sur l'atome de carbone-a de l'alanine, de la phénylalanine, de la sérine, du tryptophane, de la méthionine, de la cystéine, de la tyrosine, de la valine, de la leucine, de l'isoleucine, de la thréonine, de l'acide aspartique, de l'asparagine, de l'acide glutamique, de la glutamine, de la lysine, de l'hydroxylysine, de l'histidine et de l'arginine et d'un di- ou polypeptide dérivé de toute combinaison possible d'a-amino acides. On a par ailleurs constaté que les homologues cyclohexyl mono- et poly-hydroxy substitués des dérivés de nitrosourée de formule (I), qui sont également des composés nouveaux, présentent de façon similaire une activité inhibitrice élevée vis-à-vis de la leucémie et des tumeurs avec une faible toxicité comme ceci a été

démontré par des tests in vivo.

Selon un autre aspect de la présente invention il est proposé comme nouveaux dérivés de nitrosourée ceux correspondant à la formule (II): /--k\O O NO Il il -- (Nl-c-X) NHC-N-CH2CH2C2 (IC) OH)p dans laquelle X représente -H- ou un groupe alkylène de 1 à 3 atomes de carbone dans lequel Y est un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide; n est un nombre entier de 1 à 3;

et p est un nombre entier de 1 à 5.

Dans la définition de Y ci-dessus, les mots "un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide" a la même

signification que donnée ci-dessus pour la formule (I).

Les dérivés de nitrosourée des formules (I) et (II) selon

la présente invention possèdent de façon inhérente deux, c'est-à-

-4- dire a et B, anomères. On a constaté que ces deux anomères et leurs mélanges présentaient une activité inhibitrice élevée à l'égard de

la leucémie et des tumeurs.

Parmi les dérivés de nitrosourée de formule (I) on peut en particulier citer:

methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-r.itroso-carbamoyl)- -

alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 2' -(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)amino-

n-butyryl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-L-

alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 3' -(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-3'-deoxy-a-D-mannopyranoside;

methyl 3'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-3'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-L-

seryl)amino-2' -deoxy-a-D-glucopyranoside;

1,-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-glycyl)amino-

1'-deoxy-0-D-glucopyranose;

methyl 2'-((N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)-glycyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

methyl 2 -(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-D-

alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside;

2' -(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-glyCyl)amino-

2'-deoxy-D-glucopyranose;

methyl 6'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-6'-deoxy-a-D-glucopyranoside; l' -(N-(N-(2-chloroethyl)-Nnitroso-carbamoyl)--alanyl) amino-l'-deoxy- -D-glucopyranose; and

l'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)amino-n-

butyryl)amino-l'-deoxy- -D-glucopyranose. -5- Parmi les dérivés de nitrosourée de formule (II) on peut en particulier citer:

(1'/2',6')-1'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-2',6'-cyclohexanediol;

(1'/2',6')-1'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

amino-n-butyryl)amino-2',6'-cyclohexanediol;

(1'/2',6')-1'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

1 0 0-alanyl)amino-2',6'-cyclohexanediol; and

(1'/2',6')-1'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

asparaginyl)-amino-2',6'-cyclohexanediol.

L'activité antileucémique de certains dérivés caracté-

ristiques de nitrosourée de formule (I) et (II) selon la présente invention a été testée chez la souris sur la souche Leukemia L 1210

dont les détails seront donnés ci-après.

Composés

No. 1 Methyl 2'-(N-(N-(N2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-2't-deoxy-a-D-glucopyranoside ( formule (I), R0=a-OCH3, R =aNHnCH2NHCNCH2CH2C2, R2= -OH,

39I 1 1- 2 2=PO'

O ONO

R3=a-OH, R4=OH)

No. 2 Methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

1-alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside (formule (I), R0=a-OCH3, R1=aNHCCH2CH2NHCNICH2CH2C,

O ONO

R2=P-OH, R3=a-OH, R4=OH) No. 3 Meth;yl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitrosocarbamoyl) amino-n-butyryl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside (formule (I) , R0=a-OCH3, R1=cc-NHC(CH2)3NHCNCH2CH2Ct,

0 ONO

R2=O-OH, R3=a-OH, R4=OH) - -6-

No. 4 Methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

L-alanyl)amino-2 ' -deoxy-a-D-glucopyranoside (formule (I), R0=a-OCH3, R 1=a-NHCCH-CH3

ONHCNCH2CH2C,

ONO R2==-OH, R3=a-OH, R4=OH)

No. 5 Methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

D-alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-glucopyranoside (formule (I), Ro=C-OCH3, R,=aNHCCHCH Ili 3

ONHCNCH2CH2C,

Il i

R2=:-OH, R3=_-OH, R4=OH) ONO

No. 6 1'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-1' -deoxy---D-glucopyranose (formule (I), RO= PNHCCH2NHCNCH2CH2C2, Ri=a-OH, R2=P-OH,

2.0 O ONO

R3=a-OH, R4=OH)

No. 7 2'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-2'-deoxy-D-glucopyranose ( formule (I), R0= OH, Ri=aNiHCCH2NHCNICH2CH2C2, R2= -OH, l2I _2 2

0 ONO

R3=a-OH, R4=OH)

No. 8 Methyl 6'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

glycyl)amino-6' -deoxy-a-D-glucopyranoside (formule (1), R0=a-OCH3, Ri=aOH, R2=P-OH, R3=a-OH, R4=

-NHCCH2NHCNCH2CH2CI)

il Il i

O ONO

No. 9 1' -(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-P-

alanyl)amino-l' -deoxy-3-D-glucopyranose (formule

(I), RO=O-NHC(CH2)NHCNCH2CH2CI, R, 2=-OH,

0 ONO

R3=a-OH, R4=OH)

No. 10 1'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-carbamoyl)-

amino-n-butyryl)amino-1' -deoxy-p-D-glucopyranose ( formule (I), RO=PNHC(CH)NHCNCH(CH c R1=a-OH, Il H2)3NHCNCH2CH2C

0 ONO

R2=3-OH, R3=a-OH, R4=OH)

No. il (1'/2',6')-l'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-

carbamoyl)-glycyl)amino-2',6'-cyclohexanediol (formule (II), l'=PNHCCH2NHCNCH2CH2C2, 2' and Il 2 l I1

O ONO

6'=a-OH)

No. 12 (1'/2',6')-l'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-

carbamoyl)-asparaginyl)amino-2', 6'-cyclohexanediol (formule (II), l'=0NHCCHCH2CONH2

ON0HCNCH2CH2C2,

ONO 2' and 6' = a-OH)

No. 13 (1'/2',6')-l'-(N-(N-(2-Chloroethyl)-N-nitroso-

carbamoyl)-amino-n-butyryl)amino-2',6'-cyclohexanediol (formule (II), 1' = P-NHC(CH2)3NHCNCH2CH2C., 2' and 6' = a-OH) 0 ONO

No. 14 (1'/2',6')-1'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-

carbamoyl)-f-alanyl)amino-2', 6' -cyclohexanediol (formule (II), 1' -= NHC(CH2)2NHCNCH2CH2C2,

O NO

2' and 6' = a-OH) -8- Animaux Des souris mâles BDF1, âgées d'environ 7 semaines et pesant 22 + 1 g ont été utilisées par groupes de cinq animaux pour

chaque test.

Cellules tumorales Des cellules Leukemia L 1210 ont été inoculées par voie intrapéritonéale à une concentration de 1 x 106 cellules/0,05mL/ souris. Procédé Le composé à tester est dissous dans une solution saline

physiologique pour donner une série de solutions à des concentra-

tions prédéterminées et 0,1 m9 de chaque solution a été administrée par voie intrapéritonéale à chaque souris une fois par jour à partir de la 24ème heure après l'inoculation de la cellule tumorale et ceci pendant 3 jours consécutifs. L'activité antileucémique des

composés testés a été déterminée par la moyenne des jours de sur-

vie, le pourcentage d'augmentation de la durée de vie et le volume des ascites. Le pourcentage d'augmentation de la durée de vie (ADV) a été calculée de la façon suivante T-C ADV ( T- C x 100

T: Moyenne des jours de survie des animaux traités.

C: Moyenne des jours de survie des animaux non traités.

Le test de contrôle a été réalisé de la même manière que celui utilisé pour chaque composé à tester sauf que 0,1 mk de la solution saline physiologique a été administrée à la place de la

solution du composé à tester.

Les résultats des tests sont rassemblés dans le tableau suivant. -9Moyenne des Volume des Coroosé Dose jours de survie ADV ascites (mú) No. (mg/kg) Traité/Contrôle (%) Traité/Contrôle

32 >39.0/7.0 >457.1 0 /0.7

16 >28.2/7.0 >302.9 0.3/0.7

8 13.6/7.0 94.3 0.3/0.7

1 4 9.6/7.0 37.1 0.2/0.7

2 10.0/7.0 42.9 0.2/0.7

1 9.2/7.0 31.4 0.3/0.7

0.5 7.6/7.0 8.6 0.2/0.7

32 17.8/7.0 154.3 0 /0.7

8 11.7/7.0 67.1 0.9/0.7

2 8.6/7.0 22.9 0.1/0.7

0.5 7.0/7.0 0 0.3/0.7

32 17.3/7.0 147.1 0.3/0.7

8 10.8/7.0 54.3 0.9/0.7

2 7.8/7.0 11.4 0 /0.7

0.5 7.2/7.0 2.9 0.6/0.7

32 >24.3/7.0 >247.1 0.9/0.7

8 13.5/7.0 92.9 1.0/0.7

2 9.4/7.0 34.3 0 /0.7

0.5 7.2/7.0 2.9 0.4/0.7

- -10- 0.5

12.6/7.6

>50.8/7.6

>42.8/7.6

14.4/7.6

9.8/7.6

65.8

>568.4

>463.2

89.5 28.9

0 /0.6

0 /0.6

0.2/0.6

1.0/0.6

0.8/0.6

24 >26.2/7.0 >274.3 0.1/0.6

6 16 15.6/7.0 122.9 0.5/0.6

4 10.0/7.0 42.9 0.3/0.6

96 10.0/7.6 51.6 O /0.6

64 >43.4/7.6 >471.0 o /0.6

48 >26.2/7.6 >244.7 0.6/0.6

7 32 15.2/7.6 100.0 1.0/0.6

8 8.8/7.6 15.8 0.8/0.6

2 7.8/7,.6 2.6 0.4/0.6

0.5 7.4/7.6 -2.6 0.7/0.6

48 18.7/7.2 >159.7- O /0.6

32 >50À8/7.2 >605.6 O /0.6

8 8 15.0/7.2 108.3 0.9/0.6

2 9.8/7.2 36.1 0.2/0.6

0.5 8.0/7.2 11.1 0. 3/0.6

i -11-

48 > 29.7/7.0 > 324.3 0 /0.8

32 >51.0/7.0 >628.6 0 /0.8

9 8 ll.0/7.0 57.1 0.7/0.8

2 9.6/7.0 37.1 0.1/0.8

0.5 7.4/7.0 5.7 0.6/0.8

32 >25.6/7.0 >265.7 0 /0.8

8 11.8/7.0 68.6 0.4/0.8

2 9.0/7.0 28.6 0.3/0.8

0.5 7.0/7.0 0 0.8/0.8

24 > 60.0/7.0 >757.1 o /0.6 16 > 36.0 o/7. o > 414.3 o /0.6

32 9.0/7.0 28.6 0 /1.1

16 18.8/7.0 168.6 1.1/1.1

12 8 14.0/7.0 100.0 0.7/1.1

2 9.4/7.0 34.3 0.1/1.1

0.5 7.8/7.0 11.4 0.7/1.1

48 > 45.4/7.7 >489.6 0 /0.8

32 >33.4/7.7 >345.3 0 /0.8

13 8 12.8/7.7 66.2 0.6/0.8

2 10.0/7.7 29.9 0 /0.8

0.5 8.0/7.7 2.6 0.7/0.8

-12- On peut se rendre compte à partir des résultats des tests ci-dessus que les nouveaux dérivés de nitrosourée des formules (I) et (II) selon l'invention présentent une valeur élevée de ADV à des doses très faibles et par conséquent peuvent être considérés comme

utiles en chimiothérapie humaine des maladies leucémiques et tumo-

rales. Les dérivés de nitrosourée des formules (I) et (II) selon la présente invention sont par ailleurs caractérisés par leur très faible toxicité. Ainsi, la toxicité aigae LD50 de certains composés

5

caractéristiques des formules (I) et (II) déterminée après une période de 21 jours, est de l'ordre de 50 à 150 mg/kg lorsqu'ils sont administrés par voie intrapéritonéale à des souris mâles BDF1

âgées d'environ 5 semaines.

Selon un autre aspect de la présente invention, il est proposé une composition pharmaceutique comprenant une quantité thérapeutiquement active d'un dérivé de nitrosourée de formule (I) ou (II) en association avec un excipient pharmaceutique acceptable,

un véhicule ou un diluant.

Les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous forme connue et appropriée pour une administration par voie orale ou par injection chez l'homme ou par voie orale, injection ou

administration intrapéritonéale chez l'animal.

En général, les compositions pharmaceutiques peuvent se présenter sous forme d'ampoules, de capsules, de tablettes, d'une poudre, de granulés ou sous toute autre forme.appropriée pour une

administration orale ou par injection.

L'invention a également pour objet un procédé de traitement thérapeutique des maladies leucémiques et tumorales chez l'homme et

48 > 60.0/7.6 > 689.5 0 /0.6

32 >60.0/7.6 >689.5 0 /0.6

14 8 15.2/7.6 100.0 0.8/0.6

2 10.6/7.6 39.5 0.4/0.6

0.5 8.2/7.6 7.9 o0.1/o.6 chez l'animal qui comprend l'administration à un patient d'une quantité thérapeutiquement active à intervalle approprié, d'un

dérivé de nitrosourée de formule (I) ou (II) tel que défini ci-

dessus. On comprendra que la quantité du dérivé de nitrosourée à administrer variera selon le composé particulier utilisé, le type

de composition formulé, le mode d'application et la voie d'adminis-

tration ainsi que d'autres variables.

De nombreux facteurs qui modifient l'action d'un médica-

ment seront à prendre en considération par les spécialistes par exemple, l'âge, le poids corporel, le sexe, l'alimentation, le temps d'administration, la voie d'administration, la vitesse du métabolisme ou de l'excrétion, les combinaisons de médicaments, la

sensibilité et la sévérité ou la condition de la maladie.

L'application d'une dose appropriée en fonction de cer-

taines conditions peut être déterminée par les spécialistes en utilisant des méthodes conventionnelles pour la détermination des

doses en vue des indications données ci-dessus.

* Selon un autre aspect de la présente invention, il est proposé un procédé pour la préparation des dérivés de nitrosourée de formule (I) et (II) cidessus qui comprend la réaction (1) d'un composé soit de formule (III) soit de formule (IV)

CH2-R9

O

R R5 (III)

R7 R6

dans laquelle R5 représente -OH ou -OCmH2m+l m étant un nombre entier de 1 à 3 et un des radicaux R6, R7, R8 et R9 représente

O Y

-(NH-C-X) n-NH2 X étant -CH- ou un radical alkylêne de 1 à 3 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 3 et Y est un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide et chacun des trois radicaux R restants représente -OH; ou lorsque R5 représente O - (NH-C-X) n-NH2et R 6,R8 et Rg représentent chacun -OH; -131- -14- II (NH-C-X)n-NH2 (IV) OH)p

dans laquelie X et n ont les mêmes significations que données ci-

dessus et p est un nombre entier de I à 5,

avec (2) du p-nit-rophenyl N- {2-cloro thyl)^ N-nitroso-

carbamnate.

Le procédé selon la présente inventión se rapporte à une rúaction de peptidation entre le composé de for.maule (IIl) ou (IV) et le p-nr. itrophénàl N- (2chliloroéthyl)-"N-nitroso-carbamate et est

généralement réalise dans un solvant, par exemple le tétrahydro-

furanne, en présence d'une baea, par exemp!e la triéthylamine Cà une temperature de 0<-50 C. Le composé de formule (i) ou (Il) ainsi form.é peut être isolé facilement de la solution réactionnelle et purifié par les techniques de purification connues telles qu'un traitement avec une résine échangeuse d'ion ou par passage sur une

colonne de chromatographie.

Le composé de départ de formule (III) ou (IV) peut être

préparé de manière connue par réaction d'un glucose monoamino-

substitué ou d'un mono- ou polyhydroxycyclohexane monoamino-substi-

tué avec un a-amino acide N-protégé. -

Le schéma réactionnel suivant est un exemple cara2téris-

tique du procédé dans lequel un dérivé de nitrosourée de formule (I) peut être obtenu à partir de méthyl D-glycosaminide de formule (v). -15- OCH3 (v) OH lère étape 2ème étape I NH2 a-amino acide N- protégé agent de condensation H

HO \ ", CH3

OH NHcO-X) n-NH-Z Elimination du groupe N-protei (vI) octeur Z. OH /0-

HO OCH3

OH (NHCO-X)n-NH2 3ème étape 1e NOj- OCONCH2CH2C NO

base -

OH r) \l

HO -)-OCH3 (

OH (NHCO-X) n-NHCON-CH2CH2C2 NO A (III) -16-

-16- 2493318

La première étape est une réaction de peptidation entre un méthyl Dglycosaminide, par exemple le méthyl D-glucosaminide et

un a-amino acide N-protegé. L'a-amino acide N-protégé est de prefé-

rence utilisé sous la forme d'un ester actif qui est préparé en faisant réagir l'a-amino acide N-protégé avec la N-hydroxysuccini- mide et la dicyciohexylcarbodiimide dans un solvant approprié à une température relativement basse, de préférence sous refroidissement à la glace. La réaction du composé de départ de formule (V) (méthyl D-glycosaminide) avec l'ester actif peut être effectuée dans un solvant approprié tel que le diméthylformamide, le méthanol et l'éthanol en présence d'une base telle que la triéthylamine, la

N,N-diméthylamine et la monoéthylamine à une température de 0 -

OC. La deuxième étape est une réaction d'élimination du

groupe protecteur et peut être réalisée par toute méthode conven-

tionnelle. Pour l'élimination d'un groupe benzyloxycarbonyle comme groupe amino-protecteur, une hydrogénation catalytique en présence

par exemple de catalyseur au noir de palladium est préférée.

Le composé de départ de formule (III) dans lequel le

groupe hydroxyle en 1,3,4 ou 6 est substitué par un groupe -(NHCO-

X) n-NH2 peut être préparé de la même façon qu'indiqué ci-dessus.

Les exemples suivants illustrent la préparation des dérivés de nitrosourée selon la présente invention ainsi que la

préparation des composés de départ et des intermédiaires.

Exemple 1

(1) Préparation du p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)carba-

mate Il

-^ç2 Q) OC-C +CúCCF2CH N2. H2]

2 -2 20 2.

0

'N0T 2 0 C< - t",H0.2 O 2 C FIl

--- >NO2 OC-NHCH2CH2C2ú

-17- Du chlorhydrate de 2-chloroéthylamine (2,0 g, 17,24 mmol.) est dissous dans de l'eau (2 mú) et à la solution est ajoutée du bicarbonate de sodium (3,62 g, 43,09 mmol) qui a été

substantiellement dissous dans de l'eau (25 mZ).

La solution résultante est ajoutée goutte à goutte pen-

dant une période de 15 minutes à une solution de p-nitrophényl-

chloroformate (3,65 g, 18,11 mmol) dans l'acétone (50 mZ) sous refroidissement à la glace et agitation. Apres avoir poursuivi l'agitation pendant 5 minutes, de l'eau (80 mi) est ajoutée au mélange ce qui provoque le dépôt immédiat de cristaux. Apres avoir à nouveau poursuivi l'agitation pendant 10 minutes, les cristaux

sont filtrés par essorage, lavés avec de l'eau et séchés sous vide.

Les cristaux bruts ainsi obtenus sont lavés avec un mélange de benzène et de cyclohexane (1:1 en volume) et séchés sous vide pour

conduire au composé attendu (1,8 g).

Rendement: 42,7%; Pt de F: 97-98 C (95 C selon la littérature); Analyse élémentaire Calculé tour C9H9N204Ct, PM = 244.635: C 44,18, H 3;71, N 11, 45, C2 14e49% ITrouvé C 44,34, H 5,76, N 11j34, CI 14,73%

(2) Préparation du p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-

nitroso-carbamate.

0

N02 X 0C-Ir -CH2CH2C' NO - 1TO y)0 C-NCR2CLH2C2 Le composé obtenu en (1) ci-dessus (2,0 g, 8,18 mmol) est dissous dans de l'acide nitrique concentré (densité 1,38) (30 mZ) a la

température ambiante.

-1 R- Du nitrite de sodium (900 mg, 13,0 mol) est ajouté par petites fractions à la solution à 5-100C sous agitation. L'addition du nitrite de sodium est effectuée de façon régulière sans tenir

compte du dépôt des cristaux qui se produit par refroidissement.

Après la fin de l'addition du nitrite de sodium, l'agiatior. du mélange est poursuivie sous refroidissement à la glace pendant 1 heure. De l'eau glacée (40 mit) est ensuite ajcutde au mélange réactionnel et les cristaux, formes sont filtrés, lavés avec une quantité importante d 'eau et séchés sous -inde. Le r sidu est repris

dans l'éthanol et chauff a environ 40 C, laissé ure nuit au réfrigq-

rateur filtré et lavé avec de V1thanol pour donner le composé

recherché (2,08 g).

Rendement: 92,7%, Pt de F: 117-!13 C {1!6 C selon

la littérature).

Analyse élémentaire Calculé pour C9HiiN305C,.Pm = 273.655:

C 39,50, H 2,95, N 15,36, C( 12,96%

Trouvé C 39,73, H 3157 N 15,39, CI 13,13%

Exemple 2

Préparation du méthyl a-D-glucosam.inide

OH OH

HO X -- i0e HO l0Me Z: benzyloxycarbonyl Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-aD-glucosaminide (1,0 g) préparé selon le procédé de Neuberger et col. (voir A. Neuberger et

R.T. Rivens, Jo Chem. Soc., 122 (1939)) est dissous dans de l'étha-

nol (15 mZ) de la solution est soumise à une hydrogénation catalytique en présence de noir de palladium (100 mg) comme catalyseur sous une

pression d'hydrogène initial de 3,5 Kg/cm2 pendant 6 heures.

Apres élimination du catalyseur par filtration, la solution de réaction est concentrée et séchée sous vide en vue d'obtenir le composé recherché sous forme d'un résidu huileux avec un rendement

quantitatif.

-19-

Le produit a été utilisé tel quel dans l'étape réaction-

nelle ultérieure.

Exemple 3

Préparation d'un ester actif de N-carbobenzoxyglycine ZrECH2COOH -4 ZlNTiCH2C-N il De la N-Carbobenzoxyglycine (produit commercial) (2,0 g, 9, 56 mmol) et du N-hydroxysuccinimide (1,12 g, 9,75 mmol; 1,02 moles par mole du premier réactif) sont dissous dans du dioxane (20 mk) et du dicyclohexylcarbodiimide (ci-après désigné par DCC) (2,01 g, 9,75 mmol; 1, 02 moles par mole du premier réactif) est ajouté à

la solution sous refroidissement à la glace et agitation.

L'agitation est poursuivie pendant une heure sous les

mêmes conditions et on laisse alors reposer une nuit au réfrigéra-

teur.

Le mélange réactionnel est filtré en vue d'éliminer

l'urée déposée et le filtrat est concentré sous vide en vue d'ob-

tenir un résidu huileux. Le résidu est dissous dans du chloroforme et de l'éther éthylique est ajouté à la solution en une quantité telle que la solution ne soit pas trouble. La solution est mise au

repos au réfrigérateur lorsque l'ester actif commence à cristal-

liser.

Apres lavage avec de l'éther éthylique, le composé at-

tendu est obtenu (2,32 g).

Rendement: 83,6%, Pt de F: 112-113 C (113-114 C

selon la littérature).

Exemple 4

Préparation du chlorhydrate de méthyl 3-amino-a-D-manno-

pyranoside. -20-

OH OH - OH

H OH H CEO

H0 HO Oe CHO OMe

OH OH

-OH OH

-z HO

HT

e HO Me

N02 OH

Ce composé a été synthétisé selon le schéma réactionnel ci-dessus en fonction du procédé proposé par A.C. Richardson

f-J. Chem. Soc. 373 (1962)-7.

Pt de F: 212-215 C (avec décomposition et coloration); (o)0 - +59_60 (c 0, 4, H20) Analyse élémentaire Trouvé C 36;63, H 6,82, N 6 02% Calculé pour C7 H16N05CPM = 229647

C 36,61, H 7,02, N 6,10%

Exemple 5

(1) Préparation du méthyl 4,6-O-benzylidene-3-deoxy-3-

phénylazo-a-D-glucopyranoside

OH 0 -

r0

OH - O

HO C H Ne 0 01Me

OH OH OH

/0 Ph Ph OH CH ONeDIe i I

_ O OH OH

-zi- 2493318

Ce composé est préparé selon le schéma réactionnel ci-

dessus d'après le procédé proposé par R.D. Guthrie et G.J.F. Chittenden

Z-J. Chem. Soc. 3658-3665 (1963)7.

Pt de F: 187,5-188 C (182-183 C selon la littérature); S (a)23 + 9 8 (c o 94, chloroformn ((")20 + 8.6

(c 1.81, chloroform selon la littéra-1.

- ture __alyse élémentaire Trouvé C 64>96, H 601, N 7,61% Calculé pour C20H 22N205 p 37392:

C20H22N205,-39

C 64,85, H 5,99, N 756%

(2) Préparation du méthyl 4,6-O-benzylidene-3-(benzyloxy-

carbonyl) amino-3-deoxy-a-D-glucopyranoside.

O X

2O0 Ph p o OMe 0e o01Oe OH Le composé préparé en (1) ci-dessus (1,0 g, 2,70 mmol) est dissous dans du méthanol (10 m9) sous chauffage et de l'acide acétique (2 gouttes) y est ajouté. La solution est soumise à une hydrogénation catalytique en présence de nickel de Raney T-4 (1 spatule) à 50 C sous une pression initiale d'hydrogène de 3,15

Kg/cm2 pendant 21 heures.

La chromatographie sur couche mince (CCM) du mélange réactionnel avec un système révélateur de 5: 1 (en volume) de benzene et d'acétate d'éthyle donne une seule tache au point de départ qui est positive à la réaction à la ninhydrine, après quoi le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est concentré

An sous vide à un volume d'environ 10 mt.

eu -22-

_.. _....................._A_*__ * ________ _- _ _2 4 93 3 18

Au concentr.et- on ajoute une solution aqueuse de bicarbonate de sodium (600 mg, 2 moles par mole du produit de départ) dans l'eau (8 mQ) et l'on ajoute ensuite goutte à goutte une solution à % de chlorure de benzvloxycarbonyl dans du toluene (2073 mp, 1,5 mo-es par mole du compose de déearq) la température ambiante sous

forte agitation.

Irmédiatem.ent, se produit un dépCt de matières solid-es mais l'agitation s poursuaivie pendant enrcore 30 minutes avarnt filtration. Le produit de filtration est lavëe. l'eau puis seche 0;;sus vidô conduisant airsi à des cristaux b-ruts du cc.mpos rec.erchê qui. recristallise du chloroformne pour donner des cristaux sous

forme d'aiguilles (365 mg).

Rendement: 86,0%; Pt de F: 252-254 o2; Analyse élLmentaire Trouvé C 63,35, H 5W91, N 35446 Calc-ulé pur C22H25N07 PM = 415,428' |j C 63560, H 6,07, N 3, 37%

Exemple 6

(1) Préparation du méthyl 2-/Z7benzylxoycarbonyl)glycyl7 amino-2-deoxy-aD-glucopyranoside (A-1)

H OH

OH -OH -

OH

HO OCHI

IMCCH NHZZ

-O

(A - 1

-23- Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,82 g, ,56 mmol) est traité de la même manière que celle utilisée dans

l'exemple 2 en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl, condui-

sant ainsi au méthyl a-D-glucosaminide sous forme d'un résidu

huileux en un rendement quantitatif.

Le résidu huileux est dissous dans du diméthyl formamide

(5 mM) et de la triéthylamine (1,54 mZ, 2 moles par mole du pro-

duit de départ) est ajoutée à la solution. A cette solution on

ajoute goutte à goutte une solution de l'ester actif N-hydroxysuc-

cinimide de la N-carbobenzoxy-glycine dans du dioxane (5mt) sous

agitation et refroidissement à la glace. Après la fin de l'addi-

tion, la réaction est poursuivie pendant encore une heure sous les mêmes conditions que ci-dessus et ensuite 2 heures à la température ambiante. La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroforme-méthanol donne essentiellement une seule tâche au Rf 0,44 avec une légère tâche au point de départ. La solution réactionnelle est alors concentrée sous vide pour conduire à un solide résiduel blanc qui est ensuite lavé avec de l'acétone et

recristallisé dans l'alcool isopropylique conduisant ainsi au compo-

sé (A-1) sous forme de cristaux (1,625 g).

Rendement: 76%, Pt de F: 195-195,50C;f(î)23 = +87.2 | (c 1, methanol); Analyse élémentaire Calculé pour.-C17H24N208, PM = 384 378: C 53,12, H 6, 29, N 7j29% Trouvé C 53;37, H 6,52, N 7,18%

(2) Preparation dumethy. 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-

nitroso-carbamoyl)-glycylamino-2'-deoxy-a-D-

glucopyranoside (AN - 1) -24- 0 OH

O OCH ( - (- 1)

NHCCHffNHZ il Le coeiposé (A-1) (220 mag, 0,572 mmnl) est dissou dans du réthanol (20 mt). La solution est hydtrogénée en présence de noir de palladium (30'ra) amuu O catalyseur sous une pression d'h!&xne initiale de 3,5 Kg/cm2 poendant 26 heures en vue d'é laiminer le grcupe benzylcxcrcyl. la fin de la réaction est oonfimé par OCM, après quoi le catalyseur est filtré et le filtrat est concentré à mi volume d'environ 5 mú avec cristallisation partielle. Au cocitrat, on ajoute de la triéthylamine (29 ng, 0,5 moles par mole de coeposé de départ) et ensuite on

ajoute goutte à goutte en 15 minutes une solution de p-ni-trophényl N-(2chloroéthyl)-

N-nitroso-carbamate (313 mag, 2 nioles par mole de produit de départ) dans du têtrahydrofuranne (ci-après désigné par THF; 5 mt) à l'abri de la lumière. La réaction est poursuîvie penDant encore 2 heures à la tefpéature ambiante sous agitation. Ensuite la CCM du mélange réactionnel avec un systm révélateur 4: 1 (en volume) de chloroform=-méthanol donne_ une tâche principale au R f 0,40 pour le produit principal presentant une absorption UV et une tâche seondIa/re au Rf 0,18 pour une faible quantité d'un sous-produit ne présentant pas d'absorption UV et ayant une structure inconnue, mais aucune tâcuhe n'est décelable au point de départ. Le mélange réactionnel est alors concentré- sous vide à la temperature

ambiante pour conduixe à un résidu huileux jaune foncé.

Le- résidu est dissous clans la quantité miio requise de mthanol auquel de l'éther isopropy-lique est ajouté pour précipiter une huile. On laisse alors reposer pendant une nuit au réfrigérateur, après quoi le liquide surnageant est éliminé et l'huile est lavée plusieurs fois avec de l'éther isopropylique et dissous dans de l'aloool isoprcpylique. La solution est concentré-e sous vide pour laisser déposer une matière sol/de qui est récupérée par filtration, bien larée avec du THF et ensuite avec une faible quantité d'alcool iscpropyique pour donner le composé (A-1) (138 mag) ce qui a été confixmé par une seule tâche par

C10 H.

O O0TO

(ArN-1) Le cXzTpOséi (A-1) (220 mng, 0,572 imD) est d3issous dans du méthaini (20 mi). La solution est hyd3rogénée en Etrsen & noir de palladur (30 I^) oenne catalyseur sous une pressionl; d'hydrgène intiale de 3,5 Kg/an2 pern3ant 26 heures en vue d'éliminer le groupe benzylexyoerbony1. La f.n de la réaction est confiaé par <D4, après quoi le catalyseur est filtré et le filtrat est concentré àun volumoe d'environ 5 mi. avec cristallisation partielle. au concentrat, on ajoute de la triéthylamine (29 mîi, 0,5 moles par DKole de oepose de départ) et enute on

ajoute goutte à goutte en 15 minutes une solution de p-nitrcphényl N- (2chloroe'thyl) -

N-nitroso-carbemate (313 mng, 2 moles-par nsole de produit de départ) dans du tétrahydrofuranne (ci-après désigné paro!le; 5 mZ) à l'abri de la lumière. La réaction est poursuivie pendant encore 2 heures a la toeçéerature ambiante sous agitation. Etnsuite ba coC du mélange réactionnel avec un s ystéme révélateuor 4:1 (en volume) de chloroforn(niéthanol donne une tâche principale au Rf 0,40 pour le produit principal présentant une absorption UV et une tâche seonndaire au Rf 0,18 pour une faible quantité d'un sous-produit ne présentant pas d'absorption UV et ayant une structure inconnue, mais aucune tâche n'est décelable au point de départ. Le mélange réactionnel est alors concentré-sous vide a la température

amibiante pour conduire à un résidu huileux jaune foncé.

Le résidu est dissous dans la quantité niininun requise de métharK>l auquel de l'éther isoprcpylique est ajouté pour précipiter une huile. On laisse alors reposer pendant une nuit au réfrigérateur, après quoi le liquide surnageant est éliminé et l'huile est lavée plusieurs fois avec de l'éther iscçQrcpylique et dissous dans de l'alcool isoprcpylique. la solution est concentrée sous vide pour laisser déposer une matière solide qui est récupérée par filtration, bien lavée avec du THF et ensuite avec une faible quantité d' alcool iscprqpylique pour donner le coaiposé (A-1) (138 mg) oe qui a été confirme par une seule tâche par éCa. -25Rendement: 62,7%; Pt de F: 163-165 C (avec - - 23 = + 93,1 (c 0,6 miéthanol); Analyse élémentaire Calculé pour C12H21 N408C, PM = 384,777:

C 37,46, H 5,50, N 14,56, C2 9,21%

Trouvé C 37,38, H 5,39, N 14,84, CQ 9,04% formation de bulles);

Exemple 7

(1) Préparation du mnthyl 2-, (benzyloxycarbonyl)-a-alanyi7 amLno-2 deoxya-D-glucopyranoside (A-2) 1 01-le HO Il

(A - 2)

(A -2)

)CH2NM

Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,466 g, 4,48 mmol) est traité en vue de l'élimination du groupe benzyloxycarbonyl de la même

manière que celle utilisée à l'exemple 2 conduisant ainsi au méthyl a-Dglucosa-

minide sous forme d'un résidu huileux en un rendement quantitatif.

De la N-Carbobenzoxy-6-alamine (1,00 g, 4,48 mmol) (produit commercial vendu par la Société Tokyo Kaisei K.K.) et du N-hydroxysuccinimide (516 mg, 4,48 mmol) sont dissous dans du dioxane (5 mr). Du DCC (924 mg, 4,48 mol) est ajouté à la solution sous refroidissement à la glace et agitation, et le mélange est maintenu à la température ambiante pendant 2 heures en vue de poursuivre la

réaction de formation de l'ester actif recherché.

Le premier produit mentionné, le méthyl a-D-glucosaminide sous la

forme d'un résidu huileux est dissous dans du diméthylformamide anhydre (ci-

après désigné DMF) (5 mZ) et de la triéthylamine (1,24 mZ, 2 moles par mole de

produit de départ).

Au mélange on ajoute goutte à goutte sous refroidissement à la glace

et agitation, le second produit mentionné, l'ester actif de Ncarbobenzoxy-e-

-26- alanine qui a été filtré en vue d'éliminer la dicyclohexylurée déposée. Le mélange réactionnel est meintenu sous les mrines conditions que ci-dessus pendant encore 1 heure et ensuite à la température ambiante pendant 2 heures en vue de terminer la réaction. La CC4 du mélange réactionnel résultant avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chlorofoym T-mèhbanol rontre essentielleant une seule tâche au Rf- 0,60 avec un. faible tâche au point de départ. La solution réactionnelle est concentrée sous vide pour cond'ire à un résiadu huileux jaune qui est purifié par cdorn-tographie sur colonne de gel de silice (gel de silice : 100 g de Waako gel C-300, un produit de la Société Wako Jumyaku KK.K; éluant: chl roforme-mtéthanol = 9: a en volume). Les fractions correspondantes au cmlposé (A-2) sont recueillies et concentrées sous vide pour coLnduire à des cris?:aux blancs. La recristallisation dans de l'alcool isoprpryliyue sui7vie par un lavage

avec de l'acetone condluit au cOmposé (A-2) se présentant sous Lforme de fines ai-

guilles cristallines (1,244 g).

Rendement: 69,7%; Pt de F: 181,5-182,5 C;(a)23 = +86.40 (c 0.5, methanol); Analyse élietaire Calculé.po C18H26N208,- PM = 3981404

C 54,26; H 6,58; N 7,03%

Trouvé C 54,27; H 6;60; N 6,87%

(2) Preparation du methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-

nitroso-carbamoyl)-p-alanyl)amino-2' -deoxy-a-D-gluco-

pyranoside (AN - 2)

IHCH2CH2INI{Z

ro

O (- 2)

r0 OH 0 OOCH

}IHC CHCE21NHCNCH2CH2C 2

0 A 2

17HCn-H C 1e nI^ECHHC5A2 il 1IT o UT

(AT - 2) _..

-27- Le composé (A-2) (200 mg, 0,502 mmol) est dissous dans du méthanol (10 mt) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (30 mg) comme catalyseur sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/cm2 pendant 6 heures en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl. Après la fin de la réaction confirmée par la CCM le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est

concentré à un volume d'environ 5 mR avec cristallisation partielle.

Au concentrat on ajoute de la triéthylamine (25 mg, 0,5 moles par mole de composé de départ) et on ajoute ensuite goutte à goutte

pendant 15 minutes une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroethyl)-

N-nitroso-carbamate (275 mg, 2 moles par mole de produit de départ)

dans du THF (5 mi) à l'abri de la lumière.

La réaction est poursuivie pendant 2 heures à la tempéra-

ture ambiante sous agitation, après quoi la CCM de la solution réactionnelle avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroformeméthanol montre une seule tâche au Rf 0,42 pour le produit recherché ayant une absorption UV et aucune tâche au point de départ. La solution réactionnelle est concentrée sous vide à la température ambiante pour laisser une huile jaune foncé qui cst ensuite dissoute dans la quantité minimum requise d'acétone. On ajoute ensuite une certaine quantité d'éther éthylique à la solution d'acétone pour précipiter une huile. Après l'élimination du liquide surnageant, l'huile est dissoute dans la quantité minimum requise d'alcool isopropylique à laquelle une quantité d'éther isopropylique est ajouté pour précipiter une huile. A nouveau après élimination du

liquide surnageant, l'huile est dissoute dans de l'alcool isopro-

pylique et la solution est concentrée de façon suffisante à laisser déposer une masse solide qui est alors filtrée et lavée avec de l'alcool isopropylique pour conduire au composé (AN-2) (143 mg) ce

qui a été confirmé par une seule tâche à la CCM.

Rendement: 71,4%; Pt de F: 98-100 C (avec formation de bulles); []3 + 79, 4' (c 0,64, methanol); Analyse élémentaire Calculé pour t13H23NI408Cl,,Pr = 398%803: C 39,15, H 5,81, N 14,05, C0 8,89yo i Trouvé C 58,83, H 5,82, N 14>07, C2 8,52,

-28- 2493318

Exemple 8

Preparation du methyl 2-[4'-(benzyloxycarbonyl) anino-nr.-butyryl] amino2-de oxy-j-D-glucoDyanoside t(-3)

OH OH

I1

yB 0I*.ïeH-O O;te ITE -g}I2 OH

*O

OH

HO 00H

1MIC I C2CF-2 nITIL

O

(A -3)

Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,0 g,

3,06 mmol) est traité en vue de l'élimination du groupe benzyloxy-

carbonyl selon le même procédé que celui décrit à l'exemple 2,

conduisant au méthyl a-D-glucosaminide.

De l'acide N-Carbobenzoxy-4-aminobutyrique (726 mg, 3,06

mmol) est traité en vue de la formation d'un ester actif avec la N-

hydroxysuccinimide (352 mg, 3,06 mmol) et du DCC (631 mg, 3,06 mmol)

selon le même procédé que celui utilisé à l'exemple 7 (1).

Le méthyl c-D-glucosaminide préparé comme ci-dessus est mis à réagir avec l'ester actif obtenu ci-dessus selon la même méthode que celle décrite à l'exemple 7 (1). La CCM du mélange réactionnel résultant avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroforme-méthanol montre essentiellement une seule tâche au Rf 0,62 et aucune tâche au point de départ. Apres que le traitement du mélange réactionnel ait été réalisé comme dans l'exemple 7 (1), on

obtient le composé (A-3) (846 mg) sous forme de fines plaques cris-

tallines après recristallisation dans du n-propanol.

-' fr Rendement: 67,1%; Pt de F: 160-161 C; [a]23 + 84.4 (c 0.77, methanol); Analyse élémentaire Calculé pour C1IH28' 28, PM = 41243

C 55/33, H 6184, N 6179%

Trouvé C 55,26, H 6, 68, IN 6 58%

(2) Preparation du methyl 2 -[i'T-[iT-(2-chloroethyl)-.T-

nitroso-carbamoyl] amino-n-butyryl] amino-2'-deoxy-

a-D-glucopyranoside (ANJ-3) rOH' o

Y'ECCH2F.-T2CE2 NH

0 (A- 3)

2

OH

NHCC CH CHC. C.C

I5 CC2CH2CH2'ECNCH2CFRZ-

OH

0 0N0

(AN- 3)

Le composé (A-3) (300 mg, 0,727 rmmol) est dissous dans du méthanol (10 mi) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (30 mg) comme catalyseur sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm pendant 6 heures en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl. Apres que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM, le catalyseur est filtré et le filtrat est concentré à un volume d'environ 5 mt. Au concentrat on ajoute de la triéthylamine (37 mg, 0,5 moles par mole de produit de départ), puis on ajoute une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-Nnitroso-carbamate (398 mg, 2 moles par mole de composé de départ) dans du THF (5 mi) goutte à goutte pendant environ 15 minutes à l'abri de la lumière et le mélange est maintenu à la température ambiante pendant encore 2

heures sous agitation en vue de terminer la réaction.

La CCM du -nélange réactionnel avec un système révélateur 4: i (en volume) &e. ch-loroforme-mt hanol donne une seule tâche au Rf 0,44 pour le produit recherché ayant une absorption UV et aucune

tâche au point de départ. Le mélange réactionnel est ensuite concen-

tré à la température ambiante sous vide, conduisant à une huile jaune foncé. L'huile est dissoute dans la quantité minimum requise de méthanol à laquelle on ajoute une antité d'éther isopropylique en vue de précipiter une huile L'ensemble est alors laissé au repos une nuit dans un refrignrateur en vue de crhstauliser ihuile et o10 l'on filtre aiors pour récuprer les cristaux qui sont lav7és avec de l'alcool isopropyliqc; e conduisant au compose (AN-3) (214 mg) ce qui

a été confirmé par une seule tâche à la CCM.

Rendement:71g,3%; Pt de F: 146-148 C *avec formation de bulles);

(

(a)23 = +92.3 (c 0.65, methanol); Analyse -élémentaire Calculé pour C14H25N408C2, PM = 412,E29:

C 40,73, H 6,10, N 13,57, CI 8,59%

Trouvé C 40,93, H 6,02, N 13,22, Cl 8,31%

Exemple 9

(1) Preparation du methyl 2-((benzyloxycarbonyl)-L-

alanyl)amino-2-deoxy-a-D-glucopyra-oside (A- 4) OH r OFe uO

EHCCHCH3

HO HO, s -0 4e 0liZ

40. .

oe

/ \

IqICCHCH.-. 111 Z ,

(A - 4)

_-n_ -31- Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,0 g,

3,06 mmol) est traité en vue de l'élimination du groupe benzyloxy-

carbonyl selon le même procédé que celui décrit dans les exemples précédents conduisant au méthyl a-D-glucosaminide. Le composé est alors mis à réagir avec un ester actif de N-carbobenzoxy-L-alanine préparé à partir de N-carbobenzoxy-L-alanine (683 mg, 3,06 mmol), de Nhydroxysuccinimide (352 mg, 3,06 mmol) et de DCC (631 mg, 3,06

mmol) comme dans les exemples précédents.

Apres que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroforme-méthanol qui a donné essentiellement une seule tache au Rf 0,62 avec aucune tache au point de départ, le mélange réactionnel est traité comme dans les exemples précédents, conduisant au composé (A-4) (863 mg)

sous forme de fines tiges cristallines.

Rendement:70,9%; Pt de F: 173,5-174 C;()23 + 67.10 (c 0.54, methanol); Analyse élémentaire Calculé pour C18H26N208 PM = 398,404:

' C 54,26, H 6,58, N 7,03%

Trouvé C 54,53, H 6,65, N 6 98%

(2) Preparation du methyl 2'-(N-(N-(2-chloroethyl)-N-

nitroso-carbamoyl)-L-alanyl)amino-2'-deoxy-a-D-gluco-

pyranoside (AN - 4) -32- LH / 0 OH t>

HO 0 CH3

EZ (A - 4)

OH OH i H 0\ A

HO 0 CR

NHCCH-CH

11i OIOECluH 2CH2Cú Ili ONO S

(AN - 4)

Le composé (A-4) (150 mg, 0,377 mmol) est dissous dans du méthanol (10 mû) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (20 mg) comme catalyseur sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm pendant 6 heures en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl. Apres que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM, le catalyseur est élimine par filtration et le filtrat est

concentré à un volume d'environ 5 mt avec cristallisation partielle.

Au concentre, on ajoute de 1 triéthylamine (19 mg, 0,5 moles par mole de produit de départ), et l'on ajoute ensuite goutte

à goutte à l'abri de la lumière une solution de p-nitrophényl N-(2-

chloroethyl)-N-nitroso-carbamate (412 mg, 4 moles par mole de pro-

duit de départ) dans du THF (5 mZ) sur une période d'environ 15 minutes et le mélange est maintenu à la température ambiante pendant

encore 3 heures sous agitation en vue de terminer la réaction.

La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroforme-méthanol donne une seule tâche au Rf 0,58 pour le produit recherché ayant une absorption UV et aucune tache au point de départ. La solution réactionnelle est ensuite concentrée sous vide à la température ambiante, laissant une huile jaune foncé. L'huile est dissoute dans la quantité minimum requise de méthanol, à laquelle une quantité d'éther isopropylique est ajouté en vue de précipiter une huile. L'ensemble est alors laissé au réfrigérateur pendant une nuit, après quoi le liquide surnageant -33- est éliminé et l'huile est lavée plusieurs fois avec de l'éther

isopropylique. L'huile est ensuite dissoute dans de l'alcool iso-

propylique, et la solution est concentrée de façon à laisser déposer une masse solide qui est filtrée et bien lavée avec de l'alcool isopropylique, conduisant au composé (AN-4) (143 mg) ce qui a été

confirmé par une seule tâche à la CCM.

Rendement: 95,2%; Pt de F: 154-156 C (avec formation de bulles); (D)3 = + 1047o (c 0.5, methanol); Analyse élémentaire Calculé pour -C13H23N408C, PM = 3981803:

C 39,15, H 5,81, N 14,05, CI 8,89%

Trouvé C 38,98, H 5194, N 14,02, CI 8,91% _

Exemple 10

(1) Preparation du methyl 3-[ (benzyloxycarbonyl)-glycyl] amino-3-deoxy-aD-marmnnopyranoside (A-5)

OH OH

HO OC3 HO CH3

CCFH2TZ

O

(A - 5)

Du chlorhydrate de méthyl 3-amino-3-deoxy-a-D-mannopyra-

noside (500 mg, 2,18 mmol) préparé selon le procédé de A.C. Richardson est dissout dans du DMF (4 mú). L'ester N-hydroxysuccinimide de la Ncarbobenzoxy-glycine (664 mg, 1,05 moles par mole de produit de départ) et de la triéthylamine (0,91 mt, 3 moles par mole de produit

de départ) sont ajoutés à la solution sous agitation et sous re-

froidissement à la glace. Le mélange réactionnel est agité sous refroidissement pendant une heure et ensuite à la température ordinaire pendant une nuit en vue de terminer la réaction. La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 7:1 (en volume) de chloroformeméthanol montre essentiellement une seule tâche au Rf

0,36 avec aucune tâche au point de départ, après quoi le chlorhy-

drate de triéthylamine précipité est éliminé par filtration et le -34filtrat est concentrU sous vide pour conduire à une huile. L'huile est purifiée par chrc-:atographie sur gel de silice (gel de silice: g de Wako gel C-300; éluant: chloroforme-méthanol = 9:1 par

volume). Les fractions correspondant au composé (A-5) sont recueil-

lies et concentrëes sous vide pour conduire à une huile. On laisse

reposer l'huile pendant une nuit et les cristaux obtenus son- ensui-

te filtrés et séchés avec addition d'une faibl uantité d'acétone pour conduire au composé (A-5) sous forme de fins cristaux en forme

de bâtonnets (613 mg).

Rendement: 73,2%; Pt de F: 152-153,5-c; =a22 +39.5e (c 0.8, methanol); Analyse élémentaire Trouvé C 53,15, H 6,23, LT 7,03% Calculé pour C17H24N208,PM =384j387:

C 53,12, H 6,29, N 7 29%

(2) Preparation du methyl 3 '-[NT-[N--(2-chloroethyl)-N.-

nitroso-cerbamoyl -glycyl] amino-3 '-deoxy-a-D-

mannopyranoside (A-5) OH ai Ho - H HO 00KH3 HO oo CCH2I1hZ CCH1h TCH2CX 2CF2

0 O 010

(A- 5) (.T- 5)

Le composé (A-5) (150 mg, 0,30 mmol) est dissous dans du méthanol (5 mZ) et hydrogéné en présence de noir de palladium (20 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 pendant 8 heures en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl. La fin de la réaction est confirmée par CCM, après quoi le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est concentré à un volume d'environ 5 mt. Au concentrat on ajoute de la triéthylamine (20 mZ, 0,5 moles par mole de composé de départ), puis une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate (227 mg, 2,2 moles par mole de produit de départ) dans du THF (5 mi), goutte à goutte sur une

période de 15 minutes et à l'abri de la lumière. Le mélange réac-

tionnel est alors maintenu à la température ambiante pendant 3 heures sous agitation en vue de terminer la réaction. La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 4: 1 (en volume) de chloroforme- méthanol conduit à une tâche principale au Rf 0,47 pour le produit principal ayant une absorption UV et une tâche secondaire

au Rf 0,22 pour une faible quantité d'un sous-produit, mais essen-

tiellement aucune tâche au point de départ. Le mélange réactionnel est concentré sous vide à la température ambiante pour conduire à

une huile jaune foncé. Le résidu huileux est dissous dans la quan-

tité minimum requise de méthanol auquel on ajoute de l'éther iso-

propylique en vue de précipiter une huile. Apres l'élimination du liquide surnageant, l'huile est lavée avec de l'éther isopropylique plusieurs fois et ensuite purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice (gel de silice:10 g de Wako gel C-300; éluant: chloroforme-méthanol = 9:1 en volume). Les fractions correspondantes au composé (AN-5) sont recueillies et concentrées sous vide pour conduire à une huile, à laquelle on ajoute une faible quantité de méthanol et d'éther isopropylique et le mélange est concentré sous

vide et séché par addition d'une faible quantité d'acétone condui-

sant à des cristaux de couleur jaune pâle (80 mg) la CCM confirmant

qu'il s'agit d'une seule substance ayant une grande hygroscopicité.

Rendement: 53,3%; Pt de F: 145,5 C (avec formation de bulles).

22 + 444 (c 0.5, me thanol).

Exemple 11

-36-

-36- 2493318

(1) Preparation du methyl 3-[ (benzrloxycarbory3)-glycyl] amino--deox--Duco oside (A-)

O- OIHI

Ph 0 0oyi

OH OH

OH

OO HO OI0e

CCH2OEHZ

(A - 6)

Du méthyl 3-(benzyloxycarbonyl)amino-4,6-O-benzylidene-3-

deoxy-a-D-glucopyranoside (800 mg, 1,93 mmol) est dissous dans un mélange de méthyl cellosolve (20 mZ) et du dioxane (40 mZ), auquel on ajoute de l'acide chlorhydrique IN (4 mR) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (50 mg) comme catalyseur sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/cm2 pendant 48

heures.

La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 4:1 (en volume) du mélange chloroforme-méthanol donne une seule tâche au Rf 0,07 positive à la réaction à la ninhydrine, après quoi le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est concentré sous vide pour conduire à une huile. Le résidu huileux est dissous

dans du DMF (4 mR), auquel on ajoute goutte à goutte du N-hydroxy-

succinimide de N-carbobenzoxyglycine (587 mg, 1,05 moles par mole de produit de départ) et de la triéthylamine (0,54 mk, 2 moles par mole

de produit de départ) à la température ambiante sous agitation.

Apres la fin de l'addition, le mélange réactionnel est maintenu sous les mêmes conditions que mentionné ci-dessus pendant une nuit de

façon à terminer la réaction.

_w27_ La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 7:1 (en volume) de chloroforme-méthanol donne essentiellement une seule tâche au Rf 0,25 avec aucune tâche au point de départ, après

quoi la solution réactionnelle est concentrée sous vide pour condui-

re à une huile. Le résidu huileux est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (gel de silice: 30 g de Wako gel C-300;

éluant: chloroforme-méthanol = 9:1 en volume).

Les fractions correspondant au composé (A-6) sont recueil-

lies et concentrées sous vide en vue du dépôt des cristaux qui sont lavés à l'acétone, conduisant au composé (A-6) sous forme de fines

aiguilles cristallines (552 mg).

Rendement: 74,6%; Pt de F: 192,5-193,5 C; []2 = + 106.4 (c 0.75, methanol) ; Analyse élérmentaire Trouvé C 53,73, H 6,30, N 6 94% Calculé pour 17H2428 PM = 384 378:

C 53>12, H 6 29, N 729%

(2) Preparation du methyl 3' -[-[il-(2-chlcroethyl)- N-

nitroso-carbamoyl]-glycyl] amino-3'-deoxy-a-D-glucopyranoside (AN-6)

OO

O OH

OH H u

CH2NHZ CCHC

CCNCH2CH, Cú

V 0 0 N0

(A - 6) (i - 6) Le composé (A-6) (220 mg, 0,572 mmol) est dissous dans du méthanol (15 mM) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (20 mg) comme catalyseur sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 pendant 6 heures en vue d'éliminer le groupe benzyloxyarbnyl. benzyloxycarbonyl. -38-

- 2493318

La CCM du -m!lange réactionnel avec un système révélateur 7:1 (en volume) de c: oroformleméthano montre une seule tâche au

point de départ qui s:est avérée positive à la réaction à la ninhy-

drine avec aucune tâche au Rf 0,25 pour le composé (A-6), après quoi le catalyseur est élimin -par filtration et le filtrat est concentré

sous vide à un volume d&environ 5 mQ. avec cristallisation partie1le.

De la triéthylamine (29 iag, 0,5 moles par mole de produit de départ) est ajoutée au concentrat, auquel est ensuite a=oute goutte à

goutte une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)N-nitroso-

caibamate (313 mg, 2 moles par mole de produit de départ) dans du THF (5 mú) sur une période d'environ 15 minutes d l'abri de la lumière et l. mélange réactionnel est alors maintenu sous les mêmes

conditions pendant 90 minutes en vue de terminer la réaction.

La CCM du mélange réactionnel avec le même système révé-

lateur que ci-dessus mentionné montre une seule tâche au Rf 0,21 pour le produit principal présentant une absorption IUV et une tâche

secondaire pour une faible quantité d'un sous-produit, mais essen-

tiellement aucune tâche au point de départ, apres quoi la solution réactionnelle est concentrée sous vide à la température ambiante pour laisser une huile jaune foncé. Le résidu huileux est dissous dans la quantité minimum requise de méthanol auquel est ensuite

ajouté une quantité d'éther isopropylique pour précipiter une huile.

L'ensemble est maintenu pendant une nuit dans un réfrigérateur, après quoi le surnageant liquide est éliminé et le résidu huileux

est lavé avec de l'éther isopropylique plusieurs fois et recris-

tallisé dans l'alcool isopropylique pour conduire au composé (AN-6)

(155 mg).

Rendement: 70,4%; Pt de F: 166-168 C (avec formation de bulles);

a]D' = + 109 1 (c 0,5, methanol).

Exemple 12

(1) Preparation du methyl 2-[(benzy!oxycarbony!)-L-

seryl]amino-2-deoxy-a-D-glucopDyranoside (A-7)

Z493318

-OH (oH H0 HO Ie HO ONe H O I2

O

OH HO \ Ile

NHCCHCH2OH

15.Ili III 0OEZ

(A - 7)

Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,37 g, 4,18 mmol) est traité en vue d'éliminer le groupe benzyloxycarbonyl de la même manière que celle utilisée dans les exemples précédents pour conduire au méthyl aD-glucosaminide sous forme d'une huile

résiduelle en un rendement quantitatif.

De la N-Carbobenzoxy-L-serine (produit commercial) (1,00 g, 4,18 mmol) et de l'H-hydroxysuccinimide (481 mg, 4,18 mmol) sont dissous dans du dioxane (5 mZ) et du DCC (862 mg, 4,18 mmol) est

ajouté à la solution sous agitation et refroidissement à la glace.

La réaction est poursuivie dans les mêmes conditions pendant 1 heure et ensuite à la température ambiante pendant 2 heures conduisant à

une solution de l'ester actif recherché.

Le méthyl a-D-glucosaminide préparé ci-dessus est dissous dans du DMF (4 mZ) et de la triéthylamine (1,15 mt, 8,30 mmol) est ajoutée à la solution, après quoi on ajoute goutte à goutte, sous agitation et refroidissement, la solution de l'ester actif de N- hydroxysuccinimide avec la Ncarbobenzoxy-L-serine préparé ci-dessus et qui a été filtré pour éliminer la dicyclohexylurée déposée. La réaction est poursuivie sous refroidissement a la glace pendant

encore 1 heure et ensuite à la température ambiante pendant 2 heures.

-19- -40- La CCM du mélange réactionnel avec un système révélateur 4:1 (en volume) de chloroforme-méthanol montre une seule tâche au Rf 0,44 avec une faible tâche résiduelle au point de départ, après quoi la solution réactionnelle est concentrées sous vide avec dépôt d'une quantité complémentaire de dicyclohexylurée. Cette dernière est éliminée par filtration et le filtrat est à nouveau concentré sous vide pour conduire une huile jaune pâle. Le résidu huileux est isolé et purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice

(gel de silice: 60 g de Wako gel C-300; éluant: chloroforme-métha-

nol = 7:1 en volume). Les fractions contenant le composé sont re-

cueillies et concentrées sous vide pour conduire à un résidu cris-

tallin blanc qui est recristallisé dans l'alcool isopropylique conduisant au composé (A-7) sous forme de fines aiguilles blanches

(1,255 g).

Rendement: 72,4%; Pt de F: 179,5-180,5 C; [a]D23 = + 76.5'C (c 0.5, methanol); analyse élémentaire Calculé pour -C 8H26 2099 PM= 414 404: 2O

C 52,17, H 6,32, N 6,765%

Trouvé C 51,94, H 6,11, 6950%

(2) Preparation du methyl 2 '[H-[i-(2-chloroethyl)-H-

| nitroso-carbamoyl] --seryl] amino-2 '-de o:y-a-D-

glucopyranoside (AHT-7) H ro EUi^EC20E>SrvéOHO o

OH OH- OH- 7)

HO [0ONe H O ' C [ H OH.

Ili I 1 l OHTHZ 7OhaucoCR2CU2C Ili I 0i0

(A- 7) (AN-7)

-41- Le composé (A-7) (250 mg, 0,60 mmol) est dissous dans du méthanol (12 mú) et la solution est hydrogénée en présence de noir de palladium (20 mg) comme catalyseur sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 pendant 4 heures pour éliminer le groupe benzyloxycarbonyl. Après que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM, le catalyseur est éliminé par filtration et le filtrat est concentré

sous vide à un volume d'environ 5 mi avec une cristallisation par-

tielle. De la triéthylamine (30 mg, 0,5 moles par mole de produit de départ) est ajoutée au concentrat, après quoi on ajoute ensuite

goutte à goutte sur une période de 15 minutes une solution de p-

nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate (821 mg, 5 moles par mole de produit de départ) dans du THF (10 mi) et la réaction

est poursuivie pendant 3 heures.

La CCM du mélange réactionnel montre une tâche principale au Rf 0,50 pour le produit principal ayant une absorption UV et une tâche secondaire au Rf 0,19 pour une faible quantité de sous-produit avec une légère tâche au Rf 0,04 pour le produit de départ. La solution réactionnelle est ensuite concentrée sous vide avec dépôt d'un excès de p-nitrophényl N-(2chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate n'ayant pas réagi que l'on filtre pour éliminer le produit de départ déposé. Ce traitement est répété une fois. Ensuite la concentration finale du filtrat sous vide donne un résidu huileux jaune pâle. Le résidu est dissous dans la quantité minimum requise de méthanol et une quantité d'éther isopropylique est ajouté à la solution pour

précipiter une huile. L'ensemble est alors laissé une nuit au réfri-

gérateur, après quoi le surnageant liquide est éliminé et l'huile solidifiée est dissoute dans du méthanol. La solution est concentrée

sous vide pour conduire à une huile qui est purifiée par chromato-

graphie sur colonne de gel de silice (gel de silice: 10 g de Wako

gel C-300; éluant; chloroforme-méthanol = 3:1 en volume). Les frac-

tions correspondant au produit principal sont recueillies et con-

centrées sous vide pour conduire à une huile qui est recristallisée

dans du méthanol, conduisant au composé (AN-7) sous forme d'aiguil-

les blanches (132 mg).

Rendement: 52,7%; Pt de F: 150-152oC (avec formation

de bulles).

Exemple 13

_-42- _ 2493318

(m) T-epa:aor. du!-[(beryj _o.. i)......é-) 6 -' ]amniio-

1-de oxy-3-Q -geuc opranos e (A-) OAc - OAc

01 X -3

"'I0 AcO I AcO OAc O0c t-OAc o AcO OAc 0O

(A - 8)

De l'azothydrure de 2,3,4,6-Tétra-O-acetyl-B-D-glucopyra-

nosyl (1,56 g, 4,18 mmol) est dissous dans de l'éthanol (50 mi). Le mélange réactionnel est soumis à une hydrogénation catalytique en présence de catalyseur au nickel de Raney T-4 (1,5 mi) sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/cm2 pendant 24 heures pour

réduire le groupe azothydrure en groupe amino. De la solution réac-

tionnelle on effectue un prélèvement que l'on soumet à une CCM sur gel de silice avec un système révélateur benzene-acetone (9:1 en volume). En Éonction de l'analyse par CCM, la fin de la réaction a été confirmée en déterminant si le produit de réaction donne une seule tâche positive à la ninhydrine au Rf 0,18. Après quoi, la solution réactionnelle a été filtrée pour éliminer le catalyseur et le filtrat a été concentre sous pression réduite conduisant au composé 0-acétylglucosylamino sous forme d'un résidu cristallin

blanc. Ce résidu est repris dans du dioxane (10 mi), et à la solu-

* tion résultante est ajouté l'ester actif de N-carbobenzoxy-glycine Nhydroxysuccinimide (1,27 g, 1,05 moles par mole de produit de départ) et de la triéthylamine (0,58 mi, 1 mole par mole de produit

de départ).

An Le mélange est maintenu à la température ambiante pendant v -43- 6 heures en vue d'effectuer la réaction de formation du produit de condensation. La solution réactionnelle ainsi obtenue est analysée par

CCM (avec comme système révélateur le même que celui mentionné ci-

dessus) en vue de déterminer que le produit de condensation formé donne une seule tâche négative à la ninhydrine au Rf 0,15 et qu'une

partie du composé O-acétylglucosylamino reste sous forme non réagie.

A la solution réactionnelle on ajoute ensuite une quantité supplé-

mentaire d'ester actif de N-carbobenzoxy-glycine (365 mg, 0,3 moles par mole de produit de départ) ainsi qu'une quantité supplémentaire de triéthylamine (0,17 mú, 0,3 moles par mole de produit de départ), puis la réaction est poursuivie à la température ambiante pendant 3

heures pour terminer la réaction.

Après que la consommation complète du composé de départ O-

acétylglucosylamino ait été confirmée, la solution réactionnelle est

concentrée sous pression réduite, ce qui conduit à un résidu hui-

leux. Le résidu est ensuite repris dans du chloroforme (150 mM) et la solution est lavée deux fois à l'eau (200 mZ x 2), puis séchée sur du sulfate de sodium anhydre et ensuite concentrée sous pression

réduite pour conduire au composé O-acétylglucosyl-benzyloxycarbonyl-

amino sous forme d'un résidu huileux.

Ce composé est dissous dans un mélange solvant de dioxane-

méthanol (25 mú/25 mú), et à la solution résultante on ajoute goutte à goutte 35 mZ d'une solution 0,1N de méthylate de sodium dans du méthanol sous refroidissement à la glace et sous agitation. Le mélange réactionnel est maintenu à la température ambiante pendant

minutes en vue d'effectuer la déacétylation.

Le mélange réactionnel est analysé par CCM sur gel de silice avec un mélange méthanol-chloroforme (7:1 en volume). Après confirmation par CCM que le produit de départ donnant une seule tâche au Rf 0,8 a disparu et que le produit déacétylé (A-8) donnant

une seule tâche au Rf 0,08 ait été formé dans le mélange réaction-

nel, ce dernier est neutralisé avec une résine Amberlite IR-120 (sous forme H+). La résine est filtrée du mélange réactionnel et le filtrat est concentré sous pression réduite pour donner un résidu huileux sous forme de mousse. La recristallisation du résidu dans

l'acétone donne 1,155 g du composé recherché (A-8).

Rendement: 74,6% (par rapport à l'azothydrure); '2 Pt de F: 162-164 C; [a] 23 12. 9 (c 1, H0) 4O -44- Analyse élémentaire Calculé pour C H2,2o08, PM=t370352: C 51/89, H 5,99, N 7e56% Trouvé C 529179 H 5,99 Y 7î34%

(2) Prepara!tion du 1'-[3-[Z'-(2-chloroethyl)-lrtroso-

carbanoyl]-glycyl]amino1'-deoxy--D-glucopyranose

(3-8)

Z NCCH2:ErZ OH

HO(A-B)

H X:fiCCH.2IÉCeHsCH'S Cú / C J. -C CHl

O OITO

H

HO i.- OH ( - -8) Le composé (A-8) (230 mg, 0,62 mmol) est dissous dans du

méthanol (15 mZ) et la solution est mélangée avec de l'acide chlorhy-

drique 0,1N (0,7 mX), on procède ensuite à l'hydrogénation en présen-

ce de noir de palladium (30 mg) comme catalyseur sous une pression

d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 pendant 4 heures en vue d'élimi-

ner le groupe benzyloxycarbonyl (Z). Apres que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM, le catalyseur est éliminé par filtration du mélange réactionnel et le filtrat est concentré sous pression réduite, alors qu'un peu d'eau reste dans le résidu. Le résidu est mélangé avec de la triéthylamine (0,13 mX), puis on neutralise avec

de l'acide chlorhydrique.

La solution ainsi neutralisée est ensuite concentrée et distillée azéotropiquement avec de l'éthanol conduisant à un résidu cristallin blanc. Le résidu est lavé plusieurs fois avec de petits volumes de chloroforme pour éliminer le chlorhydrate de triéthylamine -45- puis le résidu ainsi lavé est dissous dans du méthanol (5 mZ). A la solution on ajoute goutte à goutte de la triéthylamine (31 mg, 0,5 moles par mole de produit (A-8)) puis également goutte à goutte sur

une période de 15 minutes une solution de p-nitrophényl N-(2-chloro-

éthyl)-N-nitroso-carbamate (340 mg, 2 moles par mole du produit de départ) dans du THF (5 mM) sous agitation à l'obscurité. La réaction

est poursuivie pendant 2 heures à la température ambiante.

La solution réactionnelle est analysée par CCM sur gel de silice avec comme système révélateur du chloroforme-méthanol (4:1 en volume) ce qui permet d'établir que la tâche du produit de départ a substantiellement disparu et qu'une seule tâche apparaît au Rf 0,15 pour le produit recherché ayant une absorption UV, avec des tâches

pour quelques sous-produits non identifiés.

La solution réactionnelle est ensuite concentrée sous pression réduite pour conduire à une huile jaune foncé qui a été

ultérieurement dissoute dans le volume minimum requis de méthanol.

La solution méthanolique est mélangée avec de l'éther isopropylique pour précipiter l'huile. Le mélange est alors laissé au repos une nuit au réfrigérateur. Le liquide surnageant formé est séparé et l'huile restante est lavée avec de l'éther isopropylique plusieurs fois. L'huile est purifiée par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako-Gel C 300, 5 g) avec comme système éluant un mélange chloroforme-méthanol (3:1 en volume). Ensuite l'éluat de la colonne de gel de silice a été collecté en fractions et les fractions contenant le produit recherché qui présente une absorption UV ont

été combinées et concentrées sous vide pour donner un résidu cris-

tallin. Ce résidu est lavé avec du chloroforme pour conduire à 148

mg du composé recherché (AN-8) sous forme de cristaux jaune clair.

Rendement: 64,3% (61,3% sous forme de monohydrate); Pt de F: 110-112 C (avec formation de mousse); la] 3= + 0.7' (c 0.3, H20) Analyse élémentaire Calculé pour CHll19'40S8C-e02, PM = 389767;

C 33/98, H 5,44, N 14,41, Cú 912%

Trouvé C 33.,9, H 5,39, N 14,62, C2 9,26%

Exemple 14

(1) PreDaratior du (1/2,6)-[(-oenzyloxycrbony!)-

glycyl]---mio-2,6-hexanediol (M-9) on

_F.2 1-20

HO

(A- 9)

Du 1,3/2N-Aminocyclohexanediol (1,0 g, 7,62 mmol) est dissous dans DMF (12 mi) et la solution est mélangée avec l'ester actif N- hydroxysuccinimide de N-carbobenzoxy-glycine (2,21 g, 1 mole par mole de produit de départ) et la triéthylamine (1,0 mP, 1 mole par mole de produit de départ) sous refroidissement à la glace, puis

l'on agite pendant 2 heures en vue d'effectuer la réaction de forma-

tion du composé (A-9).

La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur benzène-éthanol (5:1 en volume). Apres que l'on ait confirmé par CCM que la tâche d'origine du produit de départ a disparu et qu'une tâche au Rf 0, 39 pour le produit recherché (A-9) est présente, avec une tache au Rf 0, 53 pour une faible quantité d'un produit non identifié, la solution réactionnelle est concentrée sous pression réduite pour conduire à un résidu blanc cristallin. Le produit cristallin est éliminé par filtration et lavé avec un grand volume d'acétone, conduisant à 1,527 g de cristaux du composé (A-9)

sous forme de fins prismes.

Par ailleurs, le filtrat obtenu à partir de la filtration ci-dessus est concentré sous pression réduite pour donner une huile qui a ensuite été purifiée par chromatographie sur colonne de gel

de silice (Wako gel C-300), 30 g) avec un système solvant benzène-

éthanol (7:1 en volume).

L'éluat de la colonne de gel de silice est recueilli sous forme de fractions et les fractions contenant le composé (A-9) sont combinées et concentrées sous vide pour donner un résidu cristallin blanc. Le résidu est lavé avec de l'acétone pour conduire à 559 mg J

-47- 2493318

du composé (A-9).

Les deux récoltes de cristaux sont combinées et l'on

recristallise dans l'acétone pour obtenir 1,903 g du composé (A-9).

Rendement: 77,5%; Pt de F: 173,0-174,0 C.

Analyse élémentaire Calculé pour C16H22i'205 PM = 332j352:

C 59;61, H 6,87, NT 8,69%

Trouvé C 59;35, H 6,79, IT 8,49

(2) Preoaration du (1'/2',6')-1'-[Nl-[iT-(2-chloroethyl)-

NT-nitroso-carbamoyl] -glycyl] amnino-2',6 '-cyclo-

hexanediol (A-T-9) HMO HO

(A- 9)

I

C- I2III 2 2

HO O 0BJ-O

/} 0 xl No o \\ / HO

(AIT- 9)

-48-

-48- 2493318

Le composé (A-9) (225 mg, 0,83 mmol) est dissous dans du méthanol (15 m.) et la solution est soumise à une hydrogénation catalytique en présence de catalyseur au noir de palladium (20 mg) sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/c2 pendant 4 heures. Apres que la fin de la réaction ait été confirmée par CCM, le mélange réactionnei est filtré pour éliminer le catalyseur et le filtrat est concen sous pression réduite à un volume d'environ 5

m9 avec cristallisation partielle.

Au concentrat on ajoute de la triéthylamine (42 mg, 0,5 o10 mole par mole de produit de départ), puis ensuite goutte à goutte

sur une période de 15 minutes, une solution de p-nitrophényl N-(2-

chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate (455 mg; 2 moles par mole de pro-

duit de départ) dans du THF (6 mt) sous agitation et à l'abri de la lumière, puis l'on poursuit la réaction à la température ambiante

pendant 2 heures.

La solution réactionnelle est analysée par CCM avec un système révélateur benzène-éthanol (5:1 en volume). Apres qu'il ait été confirmé par CCM que la tâche du produit de départ a disparu et qu'une tâche s'est formée au Rf 0,31 ce qui montre la formation d'un seul produit de réaction ayant une absorption UV, la solution réactionnelle est concentrée sous pression réduite pour conduire à un résidu huileux jaune foncé. Cette huile est reprise dans la quantité minimum requise d'éthanol et la solution est mélangée avec de l'éther isopropylique en vue de précipiter l'huile. Le mélange est alors mis à reposer pendant une nuit dans un réfrigérateur et le surnageant liquide formé est séparé, puis le résidu semi-solide est lavé avec de l'éther isopropylique. Le matériau lavé est dissous dans de l'éthanol puis l'on concentre sous pression réduite pour

obtenir un résidu huileux. Cette huile est recristallisée dans du n-

propanol et les cristaux sont lavés avec du chloroforme pour con-

duire à 137 mg du composé (AN-9).

Rendement: 53,7%; Pt de F: 145-1470C (avec mousse).

Analyse élémentaire Calculé pour C11EH19I4 05, PM=322,751: il14

C 40,93, E 5,93, N 17,36, C2 10947

Trouvé C 40,60, H 5,84, 4 1 17J02, Cg 10> 4J -49- z2493318

Exemple 15

(1) Prepare.ioc du (1/2,6)-[ (iT-beuzyloxycarbamoy!)-n-

butyryl]-a-ino-2,6-cyclohezranediol (A-10) 0i

HO H0

(A - 10)

De l'acide N-Carbobenzoxy-4-amino-butyrique (disponible dans le commerce) (904 mg, 3,81 mmol) et du N-hydroxysuccinimide (438 mg, 3,81 mmol) sont dissous dans du dioxane (5 m2), et à la solution résultante on ajoute du dioyclohexylcarbodiimide (DCC) (786 mg, 3,81 mmol) sous refroidissement à la glace et agitation. Le mélange est maintenu pendant 1 heure à cette température et ensuite à la température ambiante pendant 2 heures en vue d'effectuer la

réaction de formation de l'ester actif de l'amino acide N-protégé.

Du 1,3/2N-aminocyclohexanediol (500 mg, 3,81 mmol) est repris dans du THF ( 6 m2), et la solution résultante est mélangée avec de la triéthylamine (0,53 mZ, 3,81 mmol), puis l'on procède à

l'addition goutte à goutte sous refroidissement à la glace et agi-

tation, d'une solution de l'ester actif amino acide N-protégé après élimination de la dicyclohexylurée. Le mélange est ainsi maintenu pendant 1 heure en vue d'effectuer la réaction, puis celle-ci est

poursuivie à la température ambiante pendant 2 heures sous agita-

tion. Le mélange réactionnel est analysé par CCM avec un système révélateur chloroforme-méthanol (4:1 en volume). La CCM a permis de montrer que la tâche d'origine du produit de départ était encore

légèrement visible et qu'une tâche s'était formée au Rf 0,81 mon-

trant l'obtention d'un seul produit de réaction. Le mélange réac-

-fi -ju- 2493318 tionnel a alors été concentré sous pression réduite pour conduire à un résidu cristallin blanc. Au mélange on a additionné de l'acétone puis l'on a filtré. Le solide ainsi recueilli a été lavé plusieurs

fois à l'acétone pour conduire à des cristaux bruts du composé (A-

10). La recristailisation de ce produit dans l'éthanol donne 830 mg

du composé purifié (A-10).

Rendement: 62,1%; Pt de F: 167,5-168,5 C Znalyse élémentaire Calculé pour Ca L6 r2O5 P-= 350,404:

112-25

C 61,69, i 7;48, iNT 8100% Trouvé C 61 94, H 7t53, H808:

(2) rearion du (1/,6l)l-[T-T-(2-chorethyl)-

T?-nitroso-carTbanoyllar-ino-n-butTyl] a-inro-2',6' -

cyclohexanediol (.-T-10) /- c (CHE) NZ 2)3

HO O

HO

(A - 10)

2 HO (CH2)3 01-T. r

O

(MT,- o10)

-51- 2493318

Le composé (A-10) (200 mg, 0,57 mmol) est dissous dans du méthanol (20 mn) et la solution est soumise à une hydrogénation catalytique en présence de catalyseur au noir de palladium (20 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 à température ambiante pendant 4 heures en vue d'effectuer l'élimination du groupe benzyloxycarbonyl du composé (A-10). Apres que la fin de la réaction d'élimination du groupe protecteur ait été confirmée par CCM, le mélange réactionnel est filtré pour éliminer le catalyseur et le filtrat est concentré sous pression réduite à un volume d'environ 5

mZ. A la solution réactionnelle concentrée, on ajoute de la triéthy-

lamine (29 mg, 0,5 mole par mole de produit de départ) et on ajoute ensuite goutte à goutte sur une période de 15 minutes une solution de pnitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate (312 mg, 2

moles par mole de produit de départ) dans du THF (5 mZ) sous agi-

tation à l'obscurité, puis la réaction a été poursuivie à la tem-

pérature ambiante pendant 1 heure. Le mélange réactionnel est

analysé par CCM sur gel de silice avec un système révélateur chloro-

forme-méthanol (4:1 en volume), ce qui a permis de confirmer que la tâche d'origine du produit de départ avait disparu et qu'un- tâche s'était produite au Rf 0,77 pour un seul produit réactionnel ayant

une absorption UV. Le mélange réactionnel est concentré sous pres-

sion réduite pour conduire à un résidu huileux jaune foncé qui est ensuite dissous dans la quantité minimum requise d'éthanol. La solution résultante est mélangée avec de l'éther isopropylique ce qui précipite une huile, puis le mélange est mis au repos pendant une nuit au réfrigérateur. Le liquide surnageant formé est séparé et l'huile semi- solide restante est lavée avec de l'éther isopropylique

puis dissoute dans de l'éthanol. La solution éthanolique est con-

centrée sous pression réduite avec cristallisation partielle, puis l'on ajoute une quantité d'acétone et l'on procède à une nouvelle concentration sous vide pour terminer la cristallisation. Le produit cristallin ainsi obtenu est lavé avec de l'alcool isopropylique pour

conduire à 124 mg du composé recherché (AN-10).

Rendement: 61,9%; Pt de F: 135-136 C (avec formation

de mousse).

Analyse Élémentaire Calculé pour e135 23N4050C, PM = 350 803:

C 44;51, H 6,61, N 15,97, C2 10, 11%

Trouvé C 44i61, H 6,43, N 15,57, C02 1O 47 -_ m)

- - 2493318

Exemple 16

Prear.t.on- u c".:u me,hyl_ 2 -[ [,, [,. c'__ oo t,.hy1) -i.

nitros -carbtaml oy!] -g!ycy!]-gr!ycy!]-ino-2 '-deoxy-

a -D-Ulco-pyranoside (_.-ll) C (OH O 0: e L-tII1--0 - 0 F-2Â (A- zz) o o OH

O

HO I01Oe

0 0 ONO

( - ll) Du méthyl 2-t Z(benzyloxycarbonyl)-glycyl7-glycyl7 amino-2-deoxya-D-glucopyranoside (A-11) (240 mg, 0,544 mmol) est dissous dans un mélange de dioxane (10 mú) et de méthanol (15 mX),

la solution résultante est alors soumise à une hydrogénation cata-

lytique en présence de catalyseur au noir de palladium (30 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 Kg/cm2 pendant 4 heures en vue d'effectuer l'élimination du groupe benzyloxycarbonyl. Après que la réaction d'élimination du groupe protecteur ait été confirmée par

CCM, le mélange réactionnel est filtré en vue d'éliminer le cata-

lyseur. Le filtrat est concentré sous pression réduite pour conduire à un résidu cristallin qui est ensuite repris dans du méthanol (5 mZ). A la suspension dans le méthanol on ajoute goutte à goutte de la triéthylamine (27,5 mg, 0,5 mole par mole de produit de départ),

puis sur une période de 10 minutes une solution de p-nitrophényl N-

(2-chloroéthyl)-N-nitroso-carbamate (268 mg, 1,8 mole par mole de produit de départ) dans du THF (5 mt) sous agitation à l'obscurité,

et l'on poursuit la réaction pendant 90 minutes.

La solution réactionnelle est analysée par CCM sur gel de silice avec un système révélateur chloroforme-méthanol (3:1 en volume). Après qu'il ait été confirmé par CCM que la tâche d'origine du produit de départ a disparu alors qu'une tâche s'est formée au Rf 0,57 pour le produit recherché, mais également une tâche au Rf 0,15 pour une faible quantité d'un sous-produit, la solution réactionnelle

est concentrée sous pression réduite, conduisant à un résidu semi-

solide.

Ce résidu est dissous dans le minimum requis de méthanol puis mélangé avec un volume d'éther isopropylique, on laisse alors reposer pendant une nuit au réfrigérateur. Le liquide surnageant formé est séparé et le résidu semi-solide est séché sous pression réduite pour conduire à un solide jaune pâle. Le solide est lavé avec de l'alcool isopropylique, puis avec du chloroforme pour conduire à 124 mg du composé recherché (AN- 11) sous forme d'un

solide blanc.

Rendement: 51,6%; Pt de F: 172,5-174,5 C (avec formation de mousse);

[a]24 + 87/4 ( o 0,54, DIF).

Analyse élémentaire Calculé pour C14H24 T5O9C0 PM = 441.829:

C 38,06, H 5,48, IT 15,85, Cú 8,03%

Trouvé C 38J,22, H 5,31, H 16,20, C2 8,17%

Exemple 17

-54- 2493318

Preparation du (1'/2',6')-l'-[N-[:T-(2-chlorcethyl) i--itrosEo-carbamcyl]--nlanyl]an.iro-2,6'-cyclo-

hexanediol (AN-12)o Il HO

(A - 12)

O O

Il Il

H0 11

HO

H (AIT - 12)

Du (1/2,6)-/ (Benzyloxycarbonyl) --alanyl7amino-2,6-

cyclohexanediol (A-12) (310 mg, 0,922 mmol) est dissous dans du méthanol (15 mR) et la solution est soumise à une hydrogénation catalytique en présence de catalyseur au noir de palladium (30 mg) sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/cm2 pendant 4

heures en vue d'effectuer l'élimination du groupe benzyloxycarbonyl.

Apres que la fin de la réaction d'élimination du groupe protecteur ait été confirmée par CCM, le mélange réactionnel est filtré en vue d'éliminer le catalyseur. Le filtrat est concentré sous pression réduite à un volume d'environ 5 mZ avec cristallisation partielle. A la solution concentrée on ajoute goutte à goutte de la triéthylamine (46,6 mg, 0,5 mole par mole de produit de départ) puis également

goutte à goutte une solution de p-nitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-

nitroso-carbamate (454 mg, 1,8 mole par mole de produit de départ) dans du THF (5 mR) sous agitation à l'obscurité, puis on poursuit la

réaction pendant 90 minutes.

La solution réactionnelle est analysée par CCM sur gel de

silice avec un système révélateur benzène-éthanol (5:1 en volume).

Apres qu'il ait été confirmé par CCM que la tâche d'origine du produit de départ a disparu de façon substantielle alors qu'une tâche s'est produite au Rf 0,30 montrant la formation d'un seul -55- produit réactionnel, la solution réactionnelle est concentrée sous pression réduite pour conduire à un résidu huileux jaune foncé qui est ensuite repris dans la quantité minimum requise de méthanol. La solution méthanolique est mélangée avec de l'éther isopropylique pour précipiter une huile puis on laisse refroidir au réfrigérateur pendant une nuit. Le liquide surnageant formé est séparé et l'huile restante a été purifiée par chromatographie sur colonne de gel de

silice (Wako gel C-300, 10g) avec un système solvant chloroforme-

éthanol (8:1 en volume). L'éluat de la colonne de gel de silice a été recueilli sous forme de fractions et les fractions contenant le

produit désiré (AN-12) ont été combinées et concentrées sous pres-

sion réduite pour conduire à un résidu cristallin jaune pâle. Ce résidu a été lavé avec de l'alcool isopropylique et ensuite avec du

chloroforme pour donner 247 mg de composé (AN-12).

Rendement: 79,6%; Pt de F: 137-138 C (avec formation

de mousse).

analyse 4lémentaire Calculé cour C12EH2! N405C2 PMI = 336777

| C 42,79, H 6,29, N 16,64, CI 10;53%

Trouvé C 42,84, H 6,08, N 16,29, Cú 10,86%O

Exemple 18 -

() Preparation du rmethyl 2-[(berzyloxycarDonyi)iD alanyl] mino-2-deo-y-aD-glucDyranoside (A-13) OH F OH OH e * OOHO O0O14e HOOIe NEZ 11H2 >i:Aceci

3

( 13HZ

(A - 13)

-56- Du méthyl N-benzyloxycarbonyl-a-D-glucosaminide (1,47 g, 4,49 mmol) a été soumis à une réaction d'élimination du groupe benzyloxycarbonyl selon le même procédé que celui décrit à l'exemple 17 pour conduire au méthyl a-D-glucosaminide sous forme d'une huile avec un rendement quantitatif.

De la N-carbobenzoxy-D-alanine (disponible dans le commer-

ce) (1,00 g, 4,49 nmo!) et du N-hydroxysuccinimide (516 mg, 4,49

nimol) sont dissous dans du dioxane (5 mú) et à la solution résul-

tante on ajoute du dicyclohexylcarbodiimide (924 mg, 4,49 mmol) sous refroidissement à la glace et agitation0 Le mélange est ainsi

maintenu pendant 1 heure et ensuite pendant 2 heures à la tempéra-

ture ambiante en vue d'effectuer la réaction de formation de l'ester

actif de l'alanine N-protégé.

Le mêthyl a-D-glucosaminide ainsi préparé est alors dissous dans du DMF (4 mt) et à la solution on ajoute goutte à goutte de la triéthylamine (0, 62 mk, 1 mole par mole de méthyl glucosaminide), puis toujours goutte à goutte sous refroidissement à

la glace et agitation, on ajoute une solution de l'ester actif N-

carbobenzoxy-D-alanine tel que préparé ci-dessus dans du dioxane après avoir élimine la dicyclohexylurée. Le mélange est alors maintenu pendant 1 heure sous refroidissement à la glace et ensuite

pendant 2 heures à la température ambiante pour effectuer la réac-

tion. La solution réactionnelle est analysée par CCM sur gel de silice avec un système révélateur chloroforme-méthanol (4:1 en volume) ce qui a permis de confirmer que la tâche d'origine du produit de départ était encore légèrement visible mais qu'une tâche s'était produite au Rf 0,64 pour un seul produit réactionnel. La solution réactionnelle est alors concentrée sous pression réduite et

la solution concentrée est filtrée en vue d'éliminer la dicyclohexyl-

urée à nouveau déposée. On concentre à nouveau sous vide et l'on

obtient un résidu huileux jaune pâle qui a été purifié par chroma-

tographie sur colonne de gel de silice (Wako gel C-300, 60 g) avec un système solvant chloroforme-méthanol (7:1 en volume). L'éluat de la colonne de gel de silice a été collecté sous forme de fractions et les fractions contenant le produit recherché ont été combinées puis concentrées sous vide pour conduire à un résidu cristallin blanc. La recristallisation de ce résidu dans l'alcool isopropylique

donne 1,349 mg du composé (A-13).

Rendement:75,4%; Pt de F: 162,5-163,0"C; [ la]24 + 97;4 (c 0,95, methanol)

2 2493318

-Analyse élémentaire Ti N 0 P-M= 39S/404: Calculé pour 018-26-208,' C 54] 26, H 6,58, i 7,03% Trouvé C 5445, H 6,54, i 705%

(2) Preparation dumethyl '-[ -[-(2-clooethyl)--

nitroso-carbamoyl]-D-alanyl] aminio-2 '-de cxy-a-D-

t glucopyranoside (A.T-13)

OH -OE

L 0

HOH HO W OI*e HO X Ore CISI C H3f l HCH311l HCH3 Il i I I 0'il 'TI 0%I>,, I-.C YCH2 CH2 C 2 (A- 13) IliT

(A>. - 13)

Le composé (A-13) (330 mg, 0,828 mmol) est dissous dans du méthanol (20 mú) et la solution est soumise à une hydrogénation

catalytique en présence de noir de palladium (30 mg) comme cata-

lyseur sous une pression initiale d'hydrogène de 3,5 Kg/cm pendant

4 heures en vue d'effectuer l'élimination du groupe benzyloxycarbo-

nyl. Apres que la fin de réaction d'élimination du groupe protecteur ait été confirmée par CCM, le mélange réactionnel est filtré en vue d'éliminer le catalyseur. Le filtrat est concentré sous pression

* réduite à un volume d'environ 5 mú avec cristallisation partielle.

Au concentrat résultant on ajoute goutte à goutte de la triéthyla-

mine (41,9 mg) et ensuite sur une période de 10 minutes une solution de pnitrophényl N-(2-chloroéthyl)-N-nitrosocarbamate (1020 mg, 4,5 moles par mole de produit de départ) dans du THF (10 mZ) sous -57- -58- agitation à l'obscurité, et l'on poursuit la réaction pendant 3 heures. La solution réactionnelle est analysée par CCM sur gel de silice avec un système révélateur chloroforme-méthanol (4:1 en volume), ce qui a permis de confirmer que la tâche d'origine du produit de départ était encore légèrement visible mais qu'une tâche s'était produite au Rf 0,65 ce qui montre la formation d'un seul produit réactionnel. Le mélange réactionnel est concentré sous

pression réduite pour donner un résidu huileux jaune foncé partiel-

lement cristallisé. Ce résidu est repris dans la quantité minimum requise de méthanol et la solution est mélangée avec de l'éther isopropylique ce qui précipite une huile. Le mélange est laissé au repos pendant une nuit au réfrigérateur et le liquide surnageant formé est séparé; le résidu partiellement cristallisé est alors lavé avec de l'éther isopropylique plusieurs fois. Le produit ainsi lavé est dissous dans du méthanol et la solution est concentrée sous vide pour conduire à un résidu cristallin jaune pâle qui a été ensuite lavé avec de l'alcool isopropylique et du chloroforme pour

conduire à 197 mg du composé (AN-13).

Rendement:59,4%; Pt de F: 156-158 C (avec formation de mousse); [a]D2 + 51/0 (c 0 4, methanol) D Analyse élémentaire Calculé pour "3H3T4 PM = 398803:

C 39,15, H 5.81, T 14,05, CG 889%

Trouvé C 38,76, H 560, N 14,11, Cú 384%

Exemple 19

(!) Iearait-on du 2-[(enzyloxycarbonyl)-lvcyl]amino-

2-deoxy-D-g!uccpyranose (A-14)

: O, OH

0 0

OX --OH-- f O0H OH HO rO B 2- HCA mC21Z

(A - 14)

-59- Du chlorhydrate de glucosamine (1,00 g, 4,35 mmol) est dissous dans un mélange de DMF (8 mt) et de triéthylamine (2,4 mi, 4 moles par mole de produit de départ) jusqu'à ce que du chlorhydrate de triéthylamine se dépose sous forme solide. Au mélange obtenu on ajoute goutte à goutte une solution de l'ester actif N-hydroxysuc- cinimide de N-carbobenzoxyglycine (1,05 mole par mole de produit de départ) dans du dioxane (5 mi) sous refroidissement à la glace et agitation. Le mélange est alors maintenu pendant 1 heure à cette température et ensuite à la température ambiante pendant 2 heures sous agitation pour terminer la réaction. La solution réactionnelle

est alors analysée par CCM sur gel de silice avec un système révé-

lateur chloroforme-méthanol (3:1 en volume) ce qui a permis de confirmer que la tâche d'origine du produit de départ était encore légèrement visible mais qu'une tache s'était formée au Rf 0,45 pour le produit de réaction recherché avec également une tâche au Rf 0,73 pour une quantité d'un sous-produit non identifié. La solution réactionnelle est alors concentrée sous pression réduite et le résidu huileux jaune pale est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (Wako gel C-300, 60 g) avec un système solvant chloroforme-méthanol (3:1 en volume). En vue d'isoler le produit recherché, l'éluat de la colonne de gel de silice est recueilli sous forme de fractions et les fractions contenant le produit recherché sont combinées puis concentrées sous vide pour conduire à un résidu cristallin blanc. Le résidu est bien lavé à l'acétone pour conduire à des cristaux bruts du composé (A-14) qui ont été-ensuite recristallisés dans de l'alcool isopropylique. Le composé (A-14) (940 mg) est ainsi obtenu sous forme de cristaux

blancs très hygroscopiques.

Rendement: 58,3%; Pt de F: 178-180,5 C; [a]D = + 345' (c 0, 5, H20) Analyse élémentaire Calculé pour c16E.2211208.H20, PM4= 388368: C 49;48, H 6,23, Nt 7,21% Trouvé C 49,77,. 6,06, Ni 7j45%

(2) ^Preparation du 2'-[ii-[îi-2-ch'loroethyl)-1--itroso-

carbamoyl]-glycyl]am-ino-2'-deoxy-D-glucopyranose

(CL-14)

I E-'-PôE2-F--Z- D '!13 2-

zo co-1 O (-. ( ' _ s,) - I Le composé (A-14) (150 mig, 0,386 mmol) est dissous dans du

méthanol (15 mZ) et la solution est hydrogénée en présence de cata-

lyseur au noir de palladium (20 mg) sous une pression d'hydrogène initiale de 3,5 -g/cm pendant une nit. Le catalyseur est éliminé par filtration et la solution réactionnelle est concentrée sous vide

à un volume d'environ 5 ain. Au concentrat on ajoute de la triethy-

lamine (39 mg, 0,5 mole par mole de produit de départ) puis toujours

goutte à goutte une solution de p-nitrophênyl N-(2-chloroethyl)-N-

nitroso-carbamate (232 mg, 2,2 moles par mole de produit de départ) dans du THF (5 mZ) sur une période de 15 minutes sous agitation et à l'abri de la lumière, le mélange réactionnel est ensuite maintenu à la température ambiante pendant 3 heures en vue de terminer la réaction. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide à la température ambiante pour conduire à une huile jaune foncé. Le résidu huileux est dissous dans la quantité minimum requise de méthanol à laquelle on ajoute une quantité d'éther isopropylique en

vue de précipiter une huile. On laisse alors reposer au réfrigéra-

teur après quoi le liquide surnageant est éliminé et l'huile est lavée avec de l'éther isopropylique plusieurs fois et purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (gel de silice: 10 g de Wako gel C-300; éluant: chloroforme-méthanol = 8:1 en volume). Les fractions correspondantes au composé (AN-14) sont recueillies, concentrées puis séchées sous vide ce qui conduit au composé (AN-14)

sous forme d'un solide blanc très hygroscopique (66 mg).

Rendement: 46,1%; Ca 720 + 16,20 (c. 0,5 méthanol).

-D -.-vi -60-

-r j -

Claims (6)

REVENDICATIONS

1. Dérivés de nitrosourée, caractérisés par le fait qu'ils correspondent à la formule générale (I) suivante:

CH2-R4

q X R0 (I)

R2 R1

dans laquelle le radical R représente -OH ou -OCmH2m+l m étant un

nombre entier de 1 à 3 et l'un des radicaux R1, R2, R3 et R4 repré-

sente le radical O O No II Il I I -(3H-cX)n-NH-C-T-CH2CCg Y dans lequel X est - oH- ou un groupe alkylène de 1 à 3 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 3 et Y est un groupe présent sur l'atome de carbone a d'un a-amino acide et chacun des trois groupes R restants représente - OH; ou dans laquelle R représente le radical 0 TO' Il 1 l 1 -( ( -C-X)nrHC-'TC 2CH2Ci

et chacun des radicaux R1, R2, R3 et R4 représente -OH.

2. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 1, carac-

térisés par le fait que le squelette monosaccharidique de la formule

(I) est sous forme d'une configuration prise dans le groupe consti-

tué par le glucose, le mannose, le galactose, le talose, l'idose, le

gulose, l'altrose et l'allose.

3. Dérivés de nitrosourée selon la revendication 1, carac-

térisés par le fait que Y est un groupe présent sur un atome de carbone a d'un a-amino acide pris dans le groupe constitué par

l'alanine, la phénylalanine, la sérine, le tryptophane, la méthio-

nine, la cystéine, la tyrosine, la valine, la leucine, l'isoleucine, la thréonine, l'acide aspartique, l'asparagine, l'acide glutamique, 3 la glutamine, la lysine, l'hydroxylysine, l'histidine et l'arginine et les di et poly-peptides dérivés de la combinaison de ces a-amino acides.

4. Dérivés de nitrosourée, caractérisés par le fait qu'ils sont pris dans le groupe constitué par: -62-

-62- 2493318

methyl 2'-[I-i.(-(2.ch.loetV1)-.-nitroso-carbanoy1]-

&glycyl] aiino-2 '1-eoxy-.-D-g..cony.r- os i. Àe;

methyl 2 -L-[- (2-hlroethyl) -+T-.i.roso-ca -. o1-

$-alarnyl] aino-2 t -d.eoxy-a-D-glucO pani Cs d e; methyl 2'-[T-[(2 hloroe l)- roso-carbaol] amino-n-butr.yl] amino- '-deoxy-ci-gl - ucopyanosid e;

methyl 2 '-[- [T- (2-chloroethyl)-.T-nitros-o aroamoyl]-

IL-alaryl] amino-2 '-de o0y--5D-glucopyranoside;

C

methyl 3 '-[ lT-['T- (2--chloroethyl)-_T-nitroso-.arbanoyl]-

glycyl] amni-no-3 '-deoy-a-D-anoy'ar.oside

methyl 3D' - [N- [ N- (2-chloroe hyl) -i-nitros o-carbamoyl] -

glycyl] amino-3'-deoxy-a-D-glucopmranoside;

methyl 2' -[!T-[N- (2-chloroet'hyl)-I--nitroso-carbamoy] -

L-seryl] _aino-2 ' deoxy-a-D-glucopyranoside;

1 '- [!T- [.T- (2-chlor oethyl)_ -.-nitr oso-carb am oyl] -

glycyl] amino-1l'-deoxy- -D-glucoyr.anose;

m..ethyl 2'-[[TT-2corot)h -,itroso-carbamo?]-

g1.,.c,1] -glycyl] amnino-2 -deozy-a-D- gllcoyranoside;

methyl 2 t [3T[,T- (2-chloroethyl)-.T-nitroso-carbamoyr]-

D-alnyl] amino-2 -deoxy-r--D-glucopyranoside; -63-

2:-[i-[T- (2-chloroet1yl)-:.-niroso-carbaoyvl]-

glycyl] -mirno-2 -de oxcy-D-glucot-ranrose;

methyl 6-T-[- (2-chlooehyl)T- oso-caraol]-

glycyl] 2mino-6 '-deoxy-a-D-glucopyranoside; an alanyl]a"ino-l' -de oy--g1co.... -Àard

n-butyry] amnino-1'-deoxy-?-D-=guconyranose.

5. Composition pharmaceutique, caractérisée par le fait qu'elle contient une quantité thérapeutiquement active d'un dérivé de nitrosourée de formule générale (I):

C-H-2-R4

Rv g?._(I dans laquelle Ro représente -OH ou -OCmH2m+l1 m étant un nombre entier de 1 à 3 et l'un des radicaux R1, R2, R3 et R4 représente le radical Q O TO Il Il i - (:-C-7) n-NH-C-iTI-CHq2C2C dans lequel X est -CHou un groupe alkylène de 1 à 3 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 3 et Y est un groupe présent sur un atome de carbone a d'un aamino acide et chacun des trois groupes R restants représente -OH; ou dans laquelle R représente le radical

O 0 TO

I IlI! - (3-5-'--'..-K-C-:.lC= wn -n.2- 2

BSB/BC/55985

M -64- et chacun des radicaux R1, R2, R3 et R4 représente -OH; en association avec un excipient, un véhicule ou un

diluant pharmaceutiquement acceptable.

6. Procédé de préparation des dérivés de nitrosourée correspondant à la formule générale (1) suivante

R3 R()

R2 R1

dans laquelle Ro représente -OH ou -OC mH2m+, m est un nombre entier de 1 à 3 et l'un des radicaux RZ, R2, R3et R4représentent le radical 0 0 R Rr é e Il Il I on dans lequel X est -CH- ou un groupe alkylène de 1 à 3 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 3 et Y est un groupe présent sur un atome de carbone a d'un a-amino acide et chacun des trois groupes R restants représente -OH; ou dans laquelle Ro représente le radical 00 lIt0 et chacun des radicaux R1, R2, R3 et R4 représente -OH;

ledit procédé constitant à faire réagir un composé de for-

mule générale (III) suivante

CE-2-R9

R7 R6

dans laquelle R5 représente -OH ou -OC mH2m+l m étant un nombre entier de 1 à 3 et l'un d s radicaux R6, R7, R8 et R9 représente le radical (NH-C-X) -NH (NCX nN2

BSB/BC/55985

-65- Y dans lequel X est -AH- ou un groupe alkylène de 1 à 3 atomes de carbone, n est un nombre entier de 1 à 3 et Y est un groupe présent sur un atome de carbone a d'un a-amino acide et chacun des trois radicaux R restants représente -OH; ou dans laquelle R5 représente

-(NH- -X) NH

n 2 et chacun des radicaux R6, R7, R8 et R9 représente -OH;

avec du p-nitrophényl N-(2-chloroethyl)-N-nitroso-carbamate.

M. NONY

BSB/BC/55985