NL2000291C2 - 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H- pyrazool(4,3-d)pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en zouten daarvan. - Google Patents

1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H- pyrazool(4,3-d)pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en zouten daarvan. Download PDF

Info

Publication number
NL2000291C2
NL2000291C2 NL2000291A NL2000291A NL2000291C2 NL 2000291 C2 NL2000291 C2 NL 2000291C2 NL 2000291 A NL2000291 A NL 2000291A NL 2000291 A NL2000291 A NL 2000291A NL 2000291 C2 NL2000291 C2 NL 2000291C2
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
compound
disorder
pharmaceutically acceptable
carboxypiperidine
condition
Prior art date
Application number
NL2000291A
Other languages
English (en)
Other versions
NL2000291A1 (nl
Inventor
Michael Brent Tollefson
Original Assignee
Pfizer Prod Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Prod Inc filed Critical Pfizer Prod Inc
Publication of NL2000291A1 publication Critical patent/NL2000291A1/nl
Application granted granted Critical
Publication of NL2000291C2 publication Critical patent/NL2000291C2/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/06—Antiabortive agents; Labour repressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A61P25/10—Antiepileptics; Anticonvulsants for petit-mal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A61P25/12—Antiepileptics; Anticonvulsants for grand-mal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/20—Hypnotics; Sedatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Addiction (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)

Description

l-Π-ί 2-ethQxvethvlV3-ethvl-7-(4-methvlpvridine-2-vlaminoV 1 H-pvrazooli4.3-d1pvrimidine-5-vnDiperidine-4-carbonzuur en zouten daarvan
Gebied van de uitvinding 5
De onderhavige uitvinding heeft in het algemeen betrekking op 1 -(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en de zouten daarvan. De onderhavige uitvinding heeft verder betrekking op farmaceutische samenstellingen die deze verbinding of de zouten 10 daarvan bevat, op behandelwijzen onder toepassing van deze verbinding of de zouten daarvan en op werkwijzen voor de bereiding van deze verbinding of de zouten daarvan. In het algemeen remmen de verbinding en de zouten daarvan het voor cyclisch guanylaat-monofosfaat specifieke fosfodiesterase-type 5 ("PDE5") enzym.
15 Achtergrond van de uitvinding
Hypertensie is een aandoening die is geassocieerd met, naast andere fysiologische problemen, een vergroot risico van beroerte, hartinfarct, atriale fibrillatie, hartfalen, perifer vasculaire ziekte en nierstoorinis. Ondanks de talrijke medicamenten die 20 verkrijgbaar zijn in verschillende farmacologische categorieën voor het behandelen van hypertensie en verwante fysiologische problemen reageren niet alle patiënten zo effectief of zo veilig mogelijk als wordt gewenst op dergelijke medicamenten. Er zijn nog steeds extra therapeutische middelen nodig voor de behandeling van hypertensie en/of verwante aandoeningen.
25 Een klasse van therapeutische middelen waarvan in de literatuur wordt vermeld dat deze bruikbaar zijn voor de behandeling van hypertensie zijn inhibitoren van het PDE5-enzym ("PDE5-inhibitoren"). In het algemeen scheiden vasculaire endotheelcellen stikstofoxide af, dat werkzaam is op vasculaire gladde spiercellen en leidt tot de activering van guanylaat-cyclase en de accumulatie van cyclisch guanosine-30 monofosfaat ("cGMP"). De accumulatie van cGMP zorgt ervoor dat de spieren zich ontspannen en de bloedvaten zich verwijden, hetgeen leidt tot een verlaging van de bloeddruk. cGMP wordt geïnactiveerd door hydrolyse tot guanosine-5'-monofosfaat ("GMP") door voor cGMP specifieke fosfodiesterasen. Een cGMP-fosfodiesterase dat 200Q291 2 betrokken is bij de inactivering van cGMP is het PDE5-enzym. Inhibitoren van het PDE5-enzym verlagen de mate van cGMP-hydrolyse. Deze afname van de cGMP-hydrolyse potentieert de werkingen van stikstofoxide, hetgeen leidt tot een verlaging van de bloeddruk.
5 Verbindingen die PDE5-inhibitoren zijn, zijn vermeld in de literatuur. In W02005049616 wordt bijvoorbeeld een klasse van pyrazool[4,3-d]pyrimidinyl-verbindingen vermeld. In W02005049617 wordt een andere klasse van pyrazool[4,3-djpyrimidinyl-verbindingen vermeld. In W02004096810 wordt een andere klasse van pyrazool[4,3-d]pyrimidinyl-verbindingen vermeld. In EP 1348707 wordt een andere 10 klasse van pyrazool[4,3-d]pyrimidinyl-verbindingen vermeld.
De identificatie van extra verbindingen welke PDE5-inhibitoren zijn wordt gewenst. Dergelijke verbindingen kunnen worden toegepast voor het behandelen van personen die lijden aan of gevoelig zijn voor hypertensie en/of verwante fysiologische problemen en vergroot verder het traject van behandelingsmogelijkheden welke 15 beschikbaar zijn voor dergelijke personen.
Samenvatting van de uitvinding
In een uitvoeringsvorm omvat de uitvinding l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-20 methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en de farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de uitvinding een farmaceutische samenstelling die 1 -(1 -(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-1H-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur, of een farmaceutisch 25 aanvaardbaar zout daarvan, en een farmaceutisch aanvaardbare drager omvat.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de uitvinding een farmaceutische samenstelling die 1 -(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, een of meer extra therapeutische middelen en een 30 farmaceutisch aanvaardbare drager omvat.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de uitvinding manieren voor het behandelen van een aandoening bij een individu door het toedienen aan een individu van een therapeutisch werkzame hoeveelheid l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4- 3 methylpyridine-2-ylamino)-1 H-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan. Aandoeningen die behandeld kunnen worden volgens de onderhavige uitvinding omvatten cardiovasculaire aandoeningen, metabolische aandoeningen, aandoeningen van het 5 centrale zenuwstelsel, pulmonaire aandoeningen, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de uitvinding manieren voor het behandelen van een aandoening bij een individu door het toedienen aan een individu van een therapeutisch werkzame hoeveelheid 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-10 carbonzuur, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, een of meer extra therapeutische middelen en een farmaceutisch aanvaardbare drager. Aandoeningen die behandeld kunnen worden volgens de onderhavige uitvinding omvatten cardiovasculaire aandoeningen, metabolische aandoeningen, aandoeningen van het centrale zenuwstelsel, pulmonaire aandoeningen, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis. 15 In een andere uitvoeringsvorm omvat de uitvinding de toepassing van 1-(1-(2- ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, voor de bereiding van een medicament voor de behandeling van een aandoening bij een individu. Dergelijke omstandigheden omvatten cardiovasculaire aandoeningen, 20 metabolische aandoeningen, aandoeningen van het centrale zenuwstelsel, pulmonaire aandoeningen, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
In ee andere uitvoeringsvorm omvat de uitvnding werkwijzen voor het bereiden van l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3- d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout 25 daarvan.
Korte beschrijving van de tekeningen
Figuur 1 toont een grafiek waarin het effect op de bloeddruk wordt getoond van 30 de herhaalde orale toediening van l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur (1 mg/kg dagelijkse orale dosis), alleen en in combinatie met enalapril, bij een bewust spontaan hypertensie rat-model.
4
Figuur 2 toont een grafiek waarin het effect op de 24-uur urinaire cGMP wordt getoond van herhaalde orale toediening van l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur (1 mg/kg dagelijkse orale dosis), alleen en in combinatie met enalapril, bij 5 een bewust spontaan hypertensie rat-model.
Gedetailleerde beschrijving van de uitvinding
Deze gedetailleerde beschrijving van uitvoeringsvormen is alleen bedoeld om 10 andere deskundigen bekend te maken met de uitvinding van aanvrager, de principes daarvan en de praktische toepassing daarvan, zodat andere dekundigen de uitvinding in zijn talrijke vormen kan aanpassen en toepassen, zoals deze het beste geschikt is voor de eisen van een bepaalde toepassing. Deze uitvinding is derhalve niet beperkt tot de uitvoeringsvormen die zijn beschreven in deze beschrijving en kan op verschillende 15 manieren worden emodificeerd.
A. Afkortingen en definities
Zoals wordt toegepast met betrekking tot 'H-NMR heeft het symbool "δ" 20 betrekking op een ‘H-NMR-chemische verschuiving.
Zoals wordt toegepast met betrekking tot 'H-NMR heeft de afkorting "br" betrekking op een breed 'H-NMR-signaal.
Zoals wordt toegepast met betrekking tot ‘H-NMR heeft de afkorting "d" betrekking op een doublet 'H-NMR-piek.
25 Zoals wordt toegepast met betrekking tot ‘H-NMR heeft de afkorting "m" betrekking op een multiplet 'H-NMR-piek.
Zoals wordt toegepast met betrekking tot 'H-NMR heeft de afkorting "q" betrekking op een quartet ‘H-NMR-piek.
Zoals wordt toegepast met betrekking tot 'H-NMR heeft de afkorting "s" 30 betrekking op een singlet ‘H-NMR-piek.
Zoals wordt toegepast met betrekking tot 'H-NMR heeft de afkorting "t" betrekking op een triplet 'H-NMR-piek.
De afkorting "BSA" heeft betrekking op runderserum-albumine.
5
De afkorting "CDI" heeft betrekking op carbodiimide.
De afkorting "DMSO" heeft betrekking op dimethylsulfoxide.
De afkorting "DBAD" heeft betrekking op dibenzylazodicarboxylaat.
De afkorting "EDTA" heeft betrekking op ethyleendiaminetetra-azijnzuur.
5 De afkorting "HEPES" heeft betrekking op 4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazine- ethaansulfonzuur.
De afkorting "HRMS" heeft betrekking op hoge-resolutie-massaspectroscopie (elektrospray ionisatie positieve scan).
De afkorting "iPrOAc" heeft betrekking op isopropylacetaat.
10 De afkorting "LCMS" heeft betrekking op vloeistofchromatografie- massaspectroscopie.
De afkorting "m/z" heeft betrekking op een massaspectrumpiek.
De afkorting "NaN(TMS)2" heeft betrekking op natriumhexamethyldisilazide.
De afkorting "pfii" heeft betrekking op plaque-vormende eenheden.
15 De afkorting "Pt/C" heeft betrekking op platina-op-koolstof.
De afkorting "PMSF" heeft betrekking op fenylmethylsulfonylfluoride.
De afkorting "SPA" heeft betrekking op scintillatie-nabijheid-assay.
De afkorting "THF" heeft betrekking op tetrahydrofuran.
De afkorting "Tris-HCl" heeft betrekking op tris(hydroxymethyl)aminomethaan-20 hydrochloride.
De uitdrukking "door cGMP teweeggebrachte aandoening" heeft betrekking op iedere aandoening die teweeg wordt gebracht door cGMP, ofwel via een directe regulering door cGMP, ofwel via indiecte regulering door cGMP als een component van een signaalroute.
25 De uitdrukking "door PDE5 teweeggebrachte aandoening" heeft betrekking op iedere aandoening die teweeg wordt gebracht door het PDE5-enzym.
De uitdrukking "hypertensief individu" heeft betrekking op een individu met hypertensie, lijdend aan de effecten van hypertensie of gevoelig voor een hypertensie-aandoening als deze niet wordt behandeld voor het voorkomen of bestrijden van 30 hypertensie.
De uitdrukking "farmaceutisch aanvaardbare drager" heeft betrekking op een drager die verenigbaar is met de andere bestanddelen van de samenstelling en niet schadelijk is voor de individu. Dergelijke dragers kunnen een farmaceutisch 6 aanvaardbaar materiaal, samenstelling of medium zijn, zoals een vloeibaar of vast vulmiddel, verdunningsmiddel, excipiëns, oplosmiddel of inkapselingsmateriaal, betrokken bij het dragen of transporteren van een chemisch middel. De voorkeurssamenstelling hangt af van de wijze van toediening.
5 De uitdrukking "therapeutisch werkzame hoeveelheid" heeft betrekking op die hoeveelheid van het medicament of het farmaceutische middel, die de biologische of medische respons van een weefsel, systeem of dier dat wordt onderzocht door een onderzoeker of arts vermindert.
De uitdrukking "behandeling" (en overeenkomende uitdrukkingen "behandel" en 10 "behandelen") omvat de palliatieve, restoratieve en preventieve behandeling van een individu. De uitdrukking "palliatieve behandeling" heeft betrekking op een behandeling die het effect of de intensiteit van een aandoening bij een individu verlicht of vermindert zonder de aandoening te genezen. De uitdrukking "preventieve behandeling" (en de overeenkomende uitdrukking "profylactische behandeling") heeft 15 betrekking op ofwel het voorkomen van het begin van een preklinisch duidelijke aandoening in zijn geheel ofwel het voorkomen van het begin van een preklinisch duidelijk stadium van een aandoening bij een individu. De uitdrukking "restoratieve behandeling" heeft betrekking op een behandeling die de progressie van een aandoening bij een individu stopt, de pathologische manifestaties van een aandoening 20 bij een individu vermindert of een aandoening bij een individu in zijn geheel elimineert.
B. Carboxvpiperidine-verbinding 25 In een uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding de verbinding met de structuur: v-o
HttAr
ΌΓ X
V'VV''·'! 0 7 en de zouten (in het bijzonder de farmaceutisch aanvaardbare zouten) van de verbinding. De overeenkomende naam van deze verbinding is l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-5 4-carbonzuur. Tenzij anders vermeld worden deze verbinding, alle tautomere vormen van de verbinding en de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbinding en de tautomere vormen daarvan in deze aanvrage gezamenlijk aangeduid als de "carboxypiperidine-verbinding". De carboxypiperidine-verbinding is bijvoorbeeld bruikbaar als een inhibitor van het PDE5-enzym.
10 In een uitvoeringsvorm heeft de onderhavige uitvinding betrekking op de vrije zuurvorm van de carboxypiperidine-verbinding.
In een andere uitvoeringsvorm heeft de onderhavige uitvinding betrekking op de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de carboxypiperidine-verbinding.
In W02004096810 wordt een genus van verbindingen vermeld welke de 15 caboxypiperidine-verbinding generisch omvat. Hoewel W02004096810 voorbeelden verschaft van specifieke verbindingen binnen de genus, wordt de carboxypiperidine-verbinding zelf niet beschreven. De carboxypiperidine-verbinding bezit echter ten minste een of meer verschillende eigenschappen met betrekking tot de specifieke verbindingen die zijn beschreven in W02004096810. Deze eigenschappen omvatten 20 bijvoorbeeld werkzaamheid (b.v. grotere in vitro, ex vivo en/of in vivo potentie), veiligheid (b.v. grotere selectiviteit en/of lagere toxiciteit), farmacokinetische eigenschappen (b.v. Cmax, langere halfwaardetijd en/of lagere klaring) en bereidingseigenchappen (b.v. gemak van synthese en/of beschikbaarheid van uitgangsmaterialen).
25 C. Zouten
Zoals hiervoor is vermeld kan de carboxypiperidine-verbinding ofwel de vorm van het vrije zuur ofwel de vorm van een zout hebben. Verschillende zoutvormen van 30 de carboxypiperidine-verbinding kunnen verschillende fysieke eigenschappen hebben ten opzichte van elkaar. Dienovereenkomstig kan een keuze van de specifieke zoutvorm van de carboxypiperidine-verbinding mogelijk invloed hebben op bijvoorbeeld de stabiliteit van de verbinding (zoals over een traject van temperaturen 8 en/of vochtigheidsgraden), de oplosbaarheid van de verbinding en andere fysieke eigenschappen van de verbinding welke een medicamentproduct kunnen beïnvloeden. Daarnaast hebben zouten van de carboxypiperidine-verbinding in het algemeen een grotere oplosbaarheid in water dan de overeenkomende vrije zuurvorm.
5 Als het zout van de carboxypiperidine-verbinding wordt toegediend aan een menselijk of dierlijk individu (in tegenstelling tot bijvoorbeeld toepassing voor in vitro testen) is het zout bij voorkeur een farmaceutisch aanvaardbaar zout. De uitdrukking "farmaceutisch aanvaardbaar zout" heeft betrekking op een zout dat in het algemeen als geschikt wordt beschouwd voor menselijke consumptie (in het bijzonder een niet-10 toxisch zout). Farmaceutisch aanvaardbare zouten omvatten base-additiezouten en zuur-additiezouten van het overeenkomende vrije zuur. Deze zouten kunnen gewoonlijk op gebruikelijke wijze uit het vrije zuur van de carboxypiperidine-verbinding worden bereid.
Illustratieve base-additiezouten van de carboxypiperidine-verbinding omvatten 15 metallieke zouten en organische zouten. Metallieke zouten omvatten alkalimetaal-(groep Ia) zouten (zoals lithium-, natrium- en kaliumzouten), aardalkalimetaal- (groep Ila) zouten (zoals calcium- en magnesiumzouten) en andere fysiologisch aanvaardbare metaalzouten (zoals aluminium- en zinkzouten). Organische zouten omvatten zouten die zijn bereid uit secundaire, tertiaire en quatemaire aminen (zoals tromethamine, 20 diethylamine, triethylamine, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, ethyleendiamine, Ν,Ν'-dibenzylethyleendiamine, meglumine (N-methylglucamine), procaine, chloorprocaine en choline) en zouten die zijn bereid uit kationische aminozuren (zoals arginine, lysine en histidine).
Voorbeelden van geschikte zuur-additiezouten omvatten hydrochloride, 25 hydrobromide, hydrofluoride, hydrojodide, boraat, fluorboraat, fosfaat, waterstoffosfaat, diwaterstoffosfaat, glycerofosfaat, hexafluorfosfaat, metafosfaat, nitraat, waterstofcarbonaat, carbonaat, waterstofsulfaat, sulfaat, dodecylsulfaat, sulfonaat, methaansulfonaat, ethaansulfonaat, benzeensulfonaat, tolueensulfonaat, trifluormethaansulfonaat, tolueensulfonaat, 2-hydroxyethaansulfonaat, 30 cyclohexylaminosulfonaat, 2-naftaleensulfonaat, kamfersulfonaat, acetaat, adipaat, anthranilaat, aspartaat, ascorbaat, algenaat, trifluoracetaat, fenylacetaat, benzoaat, p-hydroxybenzoaat, besylaat, butyraat, β-hydroxybutyraat, kamforaat, camsylaat, citraat, embonaat, edisylaat, esylaat, formiaat, fumaraat, gluconaat, digluconaat, glycolaat, 9 glucamaat, glucuronaat, gluceptaat, heptanoaat, glycoheptanoaat, hexanoaat, hibenzaat, isethionaat, isothionaat, lactaat, lactobionaat, malaat, maleaat, mandelaat, mesylaat, nicotinaat, orotaat, oxalaat, palmitaat, pamoaat, panthothenaat, pectinaat, picraat, pivalaat, propionaat, cyclopentaanpropionaat, 3-fenylpropionaat, pyruvaat, sacharaat, 5 salicylaat, stearaat, succinaat, sulfhilaat, tartraat, galactaraat, tosylaat, uronaat, galacturonaat, thiocynaat en undecanoaat.
Voor een overzicht van geschikte zouten zie "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" van Stahl en Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Duitsland, 2002).
10 D. Tautomeren
Zoals gebruikt in deze aanvrage is het de bedoeling dat de uitdrukking carboxypiperidine-verbinding (alsook de overeenkomende structuur) alle tautomere 15 isomeren van l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur omvat. Representatieve tautomere isomeren van de carboxypiperidine-verbinding worden hierna getoond: ^ jÓ
-^tV
o
Tautomeer (1) 10
A
Αγ
Tautomeer (2) S/ί) y^rxf
Tautomeer (3) E. Manieren van behandelen
De onderhavige uitvinding omvat verder werkwijzen voor het behandelen van 5 een aandoening bij een individu met of gevoelig voor het hebben van een dergelijke aandoening, door het aan het individu toedienen van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van de carboxypiperidine-verbinding. In een uitvoeringsvorm is de behandeling een preventieve behandeling. In een andere itvoeringsvorm is de behandeling een palliatieve behandeling. In nog een andere uitvoeringsvorm is de 10 behandeling een restoratieve behandeling.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een door PDE5 teweeggebrachte aandoening.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een door cGMP teweeggebrachte aandoening. Een aandoening waarbij bijvoorbeeld onvoldoende cGMP een belangrijke 15 component is, en waarvan de productie of werking wordt gemoduleerd in respons op 11 het PDE5-enzym, wordt derhalve beschouwd als een aandoening die teweeg wordt gebracht door cGMP.
In een andere uitvoeringsvorm wordt de aandoening gekozen uit de groep die bestaat uit cardiovasculaire aandoeningen, metabolische aandoeningen, aandoeningen 5 van het centrale zenuwstelsel, pulmonaire aandoeningen, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een cardiovasculaire aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit hypertensie (waaronder essentiële hypertensie, pulmonaire hypertensie, pulmonaire arteriële hypertensie, secundaire 10 hypertensie, geïsoleerde systolische hypertensie, hypertensie die is geassocieerd met diabetes, hypertensie die is geassocieerd met atherosclerose en renovasculaire hypertensie); complicaties die zijn geassocieerd met hypertensie (waaronder vasculaire orgaanbeschadiging, congestief hartfalen, angina, beroerte, glaucoom en verslechterde nierfunctie); valvulaire insufficiëntie; stabiele, instabiele en variant (Prinzmetal) 15 angina; periferale vasculaire ziekte; hartinfarct; beroerte (waaronder herstel van een beroerte); thrombo-embolische ziekte; restenose; arteriosclerose; atherosclerose; angiostenose na een omlegging; angioplastie (waaronder percutane transluminale angioplastie en percutane transluminale coronaire angioplastie); hyperlipidemie; hypoxische vasoconstrictie; vasculitis (waaronder syndroom van Kawasaki); hartfalen 20 (waaronder congestief hartfalen, gedecompenseerd hartfalen, systolisch hartfalen, diastolisch hartfalen, linker ventriculair hartfalen, rechter ventriculair hartfalen en linker ventriculaire hypertrofie); fenomeen van Raynaud; preeclampsie; door zwangerschap geïnduceerde hoge bloeddruk; cardiomyopatie; en ateriële occlusie-aandoeningen.
25 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening hypertensie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening pulmonaire hypertensie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening pulmonaire arteriële hypertensie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening hartfalen.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening diastolisch hartfalen.
30 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening systolisch hartfalen.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening angina.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening trombose.
12
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een beroerte (waaronder herstel van een beroerte).
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een aandoening die is geassocieerd met endotheelstoomis (waaronder aandoeningen die worden gekozen uit 5 de groep die bestaat uit atherosclerose-laesies, myocardiale ischemie, periferale ischemie, valvulaire insufficiëntie, pulmonaire arteriële hypertensie, angina, stolsels, vasculaire complicaties na een vasculaire omlegging, vasculaire verwijding, vasculaire repermeabilisatie en harttransplantatie).
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een metabolische aandoening die 10 wordt gekozen uit de groep die bestaat uit SyndroomX; diabetes (waaronder type I en type II diabetes); insuline-resistentie; syndromen van insuline-resistentie (waaronder insuline-receptor-aandoeningen, syndroom van Rabson-Mendenhall, leprechaunisme, syndroom van Kobberling-Dunnigan, syndroom van Seip, syndroom van Lawrence, syndroom van Cushing, acromegalie, feochomocytoma, glucagonoma, primair 15 aldosteronisme, somatostatinoma, Lipoatrofe diabetes, door β-cel-toxine geïnduceerde diabetes, ziekte van Grave, thyroiditis van Hashimoto en idiopatische ziekte van Addison); verslechterde glucose-tolerantie; diabetische complicaties (waaronder diabetische gangreen, diabetische arthropatie, diabetische nefropatie, diabetische glomerulosclerose, diabetische deramatopatie, diabetische neuropatie, periferale 20 diabetische neuropatie, diabetische cataract en diabetische retinopatie); hyperglycemie; en zwaarlijvigheid.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening insuline-resistentie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening nefropathie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een aandoening van het centrale 25 zenuwstelsel die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit vasculaire dementie; craniocerebraal trauma; cerebraal infarct; cerebrovasculair ongeluk, dementie; concentratiestoomissen; ziekte van Alzheimer; ziekte van Parkinson; amyólaterale sclerose; ziekt van Huntington; ziekte van Creutzfeld-Jacob; angst; depressie; slaapstoornissen; en migraine.
30 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening de ziekte van Alzheimer.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening de ziekte van Parkinson.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening amyólaterale sclerose.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een concentratiestoomis 13
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een pulmonaire aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit astma; acute ademhalingsnood; cystische fibrose; chronische obstructieve pulmonaire ziekte; bronchitis; en chronische reversibele pulmonaire obstructie.
5 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening pijn. In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening acute pijn. Voorbeelden van acute pijn omvatten acute pijn die is geassocieerd me een verwonding of operatie. In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening chronische pijn. Voorbeelden van chronische pijn omvatten neuropatische pijn (waaronder postherpetische neuralgie en pijn die is 10 geassocieerd met perifer, kanker- of diabetische neuropathie), handwortelkanaalsyndroom, rugpijn (waaronder pijn die is geassocieerd met hernia of gescheurde tussenwervelschijven of afwijkingen van de zadelfacetgewirchten, heiligbeenheupbeengewrichten, paraspinale spieren of het uitwendige longitudinale ligemant), hoofdpijn, kankerpijn (waaronder pijn die verband houdt met een tumor 15 zoals botpijn, hoofdpijn, gezichtspijn of viscerale pijn) of pijn die is geassocieerd met een kankerbehandeling (waaronder postchemotherapie-syndroom, chronisch postchirurgisch pijnsyndroom, post-stralingssyndroom, pijn die is geassocieerd met immunotherapie of pijn die is geassocieerd met een hormmonbehandeling), artritische pijn (waaronder osteoartritis en rheumatoide artritispijn), chronische post-chirurgische 20 pijn, post-herpetische neuralgie, trigeminale neuralgie, HIV-neuropatie, fantoompijn van de ledematen, centrale post-beroerte pijn en pijn die is geassocieerd met chronisch alcoholisme, hypothyroidisme, uremie, multiple sclerose, verwonding van het ruggemerg, ziekte van Parkinson, epilepsie en vitaminegebrek. In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening nociceptieve pijn (waaronder pijn van een trauma 25 van het centrale zenuwstelsel, verrekkingen/verstuikingen, brandwonden, hartinfarct en acute pancreatitis, post-operatieve pijn (pijn na iedere soort chirurgische procedure), posttraumatische pijn, nierkolie, kankerpijn en rugpijn). In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening pijn die is geassocieerd met een ontsteking (waaronder artritische pijn (zoals osteoartritis en pijn als gevolg van een rheumatoide ziekte), spondylosis 30 ankylopoietica, viscerale pijn (waaronder maagontsteking, functionele maagaandoening, gastro-esofageale reflux, dyspepsie, geïrriteerde maag, functioneel abdominaal pijnsyndroom, ziekte van Crohn, iletitis, ulceratieve colitis, dysmenorrhoea, cystitis, pancreatitis en bekkenpijn). In een andere uitvoeringsvorm is 14 de aandoening pijn die het gevolg is van musculo-skelet-aandoeningen (waaronder mylagie, fibromyalgie, spondylitis, sero-negatieve (non-rheumatoide) artropatieën, non-articulair rheumatisme, dystrofinopatie, glycogenolyse, polymyositis en pyomyositis). In een andere uitvoeringsvorm wordt de aandoening gekozen uit de 5 groep die bestaat uit hart- en vasculaire pijn (waaronder pijn die wordt veroorzaakt door angina, hartinfarct, mitrale stenose, pericarditis, fenomeen van aynaud, scleredoma en skeletspier-ischemie). In een andere uitvoeringsvorm wordt de aandoening gekozen uit de groep die bestaat uit hoofdpijn (waaronder migraine, zoals migraine met aura en migraine zonder aura), cluster-hoofpijn, hoofdpijn van het 10 spanningstype, gemengde hoofdpijn en hoofdpijn die is geassocieerd met vasculaire aandoeningen; orofaciale pijn, waaronder tandpijn, otische pijn, brandende-mond-syndroom en temporomandibulaire myofasciale pijn).
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een sexuele stoornis (waaronder een sexuele stoornis die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit impotentie 15 (organisch of psychisch); mannelijke erectiestoomis; clitorale stoornis; sexuele stoornis na een verwonding van het ruggemerg; vrouwelijke sexuele opwindingsstoomis; vrouwelijke sexuele orgasmestoomis; vrouwelijke sexuele pijnaandoening; en vrouwelijke hypoactieve sexuele wens-aandoening).
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een mannelijke erectiestoomis.
20 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een nierstoomis (waaronder een nierstoomis die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit acuut nierfalen, chronisch nierfalen; nefropatie (zoals diabetische nefropatie); tubulointerstitiële aandoeningen; glomerulopatie; en nefritis. In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een kanker-aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit kankercachexie; 25 tumormetastase en neoplasie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening osteoporose.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een maag-darm-aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit notenkraker-oesophagus; anale kloof; aandoeningen van maag-motiliteit; geïrriteerde maag en aambeien. In een andere 30 uitvoeringsvorm is de aandoening een urologische aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit afsluiting van de afVoer uit de blaas; incontinentie en goedaardige prostaat-hyperplasie.
15
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een huidaandoening, gekozen uit psoriase; urticaria en huidnecrose.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een ofthalmische aandoening die wordt gekozen uit een retinale ziekte; maculaire afbraak en glaucoom.
5 In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening nitraat-intolerantie.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening kaalheid.
In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening een gynaecologische aandoening die wordt gekozen uit de groep die bestaat uit dysmenorrhoea (primair en secundair); onvruchtbaarheid en vroeggeboorte. In een andere uitvoeringsvorm is de aandoening 10 secundaire dysmenorrhoea.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding verder werkwijzen voor het induceren van gewichtsverlies of het in stand houden van gewichtsverlies bij een object door het aan het object toedienen van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van de carboxypiperidine-verbinding.
15 F. Individuen
De carboxypiperidine-verbinding (inclusief de overeenkomende behandelwijzen en farmaceutische samenstellingen) zijn geschikt voor toepassing bij, bijvoorbeeld, 20 zoogdier-individuen zoals mensen, andere primaten (b.v. apen, chimpansees), gezelschapsdieren (b.v. honden, katten, paarden), boerderijdieren (b.v. geiten, schapen, varkens, vee), laboratoriumdieren (b.v. muizen, ratten) en wilde en dierentuindieren (b.v. wolven, beren, herten). In een uitvoeringsvorm is het individu een zoogdier-object. n een andere uitvoeringsvorm is het individu een mens.
25 G. Hypothetisch mechanisme
Zonder dat men gebonden wenst te zijn aan een bepaalde theorie wordt aangenomen dat de carboxypiperidine-verbinding een inhibitor van het PDE5-enzym 30 is. Er wordt verder aangenomen dat de carboxypiperidine-verbinding de werking van het PDE5-enzym remt, hetgeen leidt tot een toename van de intracelluliare cGMP-gehaltes. Door deze toename van intracelluliare cGMP-gehaltes wordt de intracellulaire 16 calcium-signalering verminderd, hetgeen vervolgens resulteert in een ontspanning van de vasculaire gladde spier en een verlaging van de bloeddruk.
H. Toediening en dosering 5
De carboxypiperidine-verbinding wordt in het algemeen toegediend in een therapeutisch werkzame hoeveelheid. In een uitvoeringsvorm wordt de carboxypiperidine-verbinding toegediend in een PDE5-enzym remmende hoeveelheid. De carboxypiperidine-verbinding kan worden toegediend vogens iedere geschikte 10 route, in de vorm van een famaceutische samenstelling die geschikt is voor een dergelijke route en in een dosis die werkzaam is voor de beoogde behandeling. Therapeutisch werkzame doses van de carboxypiperidine-verbinding die vereist zijn voor het voorkomen of stoppen van de voortgang van, of voor het behandelen van de medische aandoening, kunnen eenvoudig worden bepaald door de deskundige met 15 behulp van preklinische en klinische benaderingen die bekend zijn in het medische beroep.
Het dosisregime voor de verbindingen en/of samenstellingen die de verbindingen bevatten is gebaseerd op een verscheidenheid van factoren, waaronder het type, de leeftijd, het gewicht, het geslacht en de medische toestand van de patiënt; de ernst van 20 de aandoening; de route van toediening; en de werkzaamheid van de desbetreffende verbinding die wordt toegepast. Aldus kan het dosisregime variëren op basis van de specifieke situatie. Dosisgehaltes van ongeveer 0,001 mg tot ongeveer 100 mg carboxypiperidine-verbinding per kilogram lichaamsgewicht per dag zijn bruikbaar bij de behandeling van de hiervoor weergegeven aandoeningen. In een uitvoeringsvorm 25 bedraagt de totale dagelijkse dosis van de carboxypiperidine-verbinding (toegediend in een enkele of opgedeelde doses) gewoonlijk ongeveer 0,001 mg/kg tot ongeveer 20 mg/kg (d.w.z. mg verbinding/kg lichaamsgewicht). In een andere uitvoeringsvorm bedraagt de totale dagelijkse dosis van de carboxypiperidine-verbinding ongeveer 0,005 mg/kg tot ongeveer 10 mg/kg. In een andere uitvoeringsvorm bedraagt de totale 30 dagelijkse dosis ongeveer 0,005 mg/kg tot ongeveer 5 mg/kg. In een andere uitvoeringsvorm bedraagt de totale dagelijkse dosis ongeveer 0,01 mg/kg tot ongeveer 1 mg/kg. Deze doses zijn gebaseerd op een gemiddeld menselijk object met een gewicht van ongeveer 65 kg tot ongeveer 75 kg. Een arts is eenvoudig in staat om de 17 dosis te bepalen voor objecten waarvan het gewicht buiten dit traject valt, zoals zuigelingen. De toediening van de carboxypiperidine-verbinding kan meerdere keren per dag (gewoonlijk niet meer dan 4 keer ) worden herhaald voor het bereiken van de gewenste dagelijkse dosis.
5 Voor het gemak kan de carboxypiperidine-verbinding worden toegediend in een eenheidstoedieningsvorm. Desgewenst kunnen meerdere doses per dag van de eenheidstoedieningsvorm worden gebruikt voor het vergroten van de totale dagelijkse dosis. De eenheidstoedieningsvorm kan bijvoorbeeld een tablet of capsule zijn welke ongeveer 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35,40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 10 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 175, 200, 250 of 500 mg van de carboxypiperidine- verbinding bevat. In een uitvoeringsvorm bevat de eenheidstoedieningsvorm ongeveer 0,01 mg tot ongeveer 500 mg van de carboxypiperidine-verbinding. In een andere uitvoeringsvorm bevat de eenheidstoedieningsvorm ongeveer 0,05 mg tot ongeveer 250 mg van de carboxypiperidine-verbinding. In een andere uitvoeringsvorm bevat de 15 eenheidstoedieningsvorm ongeveer 0,1 mg tot ongeveer 100 mg van de carboxypiperidine verbinding. In ccn andere uitvoeringsvorm bevai de eenheidstoedieningsvorm ongeveer 0,5 mg tot ongeveer 50 mg van de carboxypiperidine-verbinding.
20 I, Toepassing bii de bereiding van een medicament
In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding de carboxypiperidine-verbinding voor toepassing als een medicament (zoals een eenheidstoedieningstablet of eenheidstoedieningscapsule).
25 De onderhavige uitvinding omvat verder de toepassing van de carboxypiperidine- verbinding voor de bereiding van een medicament (zoals een eenheidstoedieningstablet of eenheidstoedieningcapsule) voor het behandelen van een of meer van de aandoeningen die hiervoor zijn geïdentificeerd in de voorgaande secties waarin wijzen van behandeling worden besproken. In een uitvoeringsvorm is de aandoening 30 hypertensie.
J. Farmaceutische samenstellingen 18
Voor de behandeling van de hiervoor beschreven aandoeningen kan de carboxypiperidine-verbinding als zodanig als de vrije zuur-verbinding worden toegediend. In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding als zodanig worden toegediend als een of meer farmaceutisch aanvaardbare zouten van de 5 vrije zuur-verbinding. In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding als zodanig worden toegediend als een mengsel van de vrije zuur-verbinding en een of meer farmaceutisch aanvaardbare zouten van de vrije zuur-verbinding.
De onderhavige uitvinding omvat verder farmaceutische samenstellingen die de 10 carboxypiperidine-verbinding omvatten. In een uitvoeringsvorm omvat de farmaceutische samenstelling de carboxypiperidine-verbinding in de vrije zuurvorm. In een andere uitvoeringsvorm omvat de farmaceutische samenstelling een of meer farmaceutisch aanvaardbare zouten van de carboxypiperidine-verbinding. In een andere uitvoeringsvorm omvat de farmaceutische samenselling een mengsel van de 15 carboxypiperidine-verbinding in de vrije zuurvorm en een of meer farmaceutisch aanvaardbare zouten van dc carboxypiperidine-verbiiiding. In een uitvoeringsvorm omvat de farmaceutische samenstelling de carboxypiperidine-verbinding en ten minste een farmaceutisch aanvaardbare drager. De drager kan een vaste stof, een vloeistof of beide zijn en kan met de carboxypiperidine-verbinding als een 20 eenheidstoedieningsvorm, bijvoorbeeld een tablet, welke 0,05 gew.% tot 95 gew.% van de carboxypiperidine-verbinding kan bevatten, worden geformuleerd. Andere farmacologisch werkzame stoffen kunnen eveneens aanwezig zijn.
De carboxypiperidine-verbinding kan worden toegediend volgens iedere geschikte route, bij voorkeur in de vorm van een farmaceutische samenstelling die is 25 aangepast voor een dergelijke route en in een dosis die werkzaam is voor de beoogde behandeling. De carboxypiperidine-verbinding en de overeenkomende samenstellingen kunnen bijvoorbeeld oraal, rectaal, parenteraal of topikaal worden toegediend.
Orale toediening van een vaste toedieningsvorm kan bijvoorbeeld worden gepresenteerd in discrete eenheden, zoals harde of zachte capsules, pillen, ouwels, 30 zuigtabletten of tabletten, die ieder een vooraf bepaalde hoeveelheid van ten minste een verbinding volgens de onderhavige uitvinding bevatten. In een andere uitvoeringsvorm kan de orale toediening in poeder- of granule-vorm plaatsvinden. In een andere uitvoeringsvorm is de orale toedieningsvorm sublinguaal, zoals bijvoorbeeld een 19 zuigtablet. Bij dergelijke vaste toedieningsvormen is de carboxypiperidine-verbinding gewoonlijk gecombineerd met een of meer adjuvantia. In het geval van capsules, tabletten en pillen kan de toedieningsvorm tevens buffermiddelen omvatten of kan deze worden bereid met enterische bekledingen.
5 In een andere uitvoeringsvorm kan orale toediening plaatsvinden in een vloeibare toedieningsvorm. Vloeibare toedieningsvormen voor orale toediening omvatten bijvoorbeeld farmaceutisch aanvaardbare emulsies, oplossingen, suspensies, siropen en elixers die inerte verdunningsmiddelen bevatten die gewoonlijk worden toegepast op dat gebied (b.v. water). Dergelijke samenstellingen kunnen tevens adjuvantia omvatten, 10 zoals emulgatoren, suspendeermiddelen, smaakstoffen (b.v. zoetstoffen) en/of geurstoffen.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding een parenterale toedieningsvorm. "Parenterale toediening" omvat bijvoorbeeld subcutane injecties, intraveneuze injecties, intraperitoneale, intramusculaire injecties, intrastemale injecties 15 en infusie. Injecteerbare preparaten (b.v. steriele injecteerbare waterige of oliehoudende suspensies) kunnen worden geformuleerd volgens de bekende stand der techniek, onder toepassing van geschikte dispergeermiddelen, bevochtigingsmiddelen en/of suspendeermiddelen.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding een topikale 20 toedieningsvorm. "Topikale toediening" omvat bijvoorbeeld transdermale toediening, zoals via transdermale pleisters of iontoforese-inrichtingen, intraoculaire toediening, of intranasale of inhalatie-toediening. Samenstellingen voor topikale toediening omvatten tevens bijvoorbeeld topikale gels, sprays, zelven en crèmes. Een topikale formulering kan een verbinding omvatten die de absorptie of penetratie van het werkzame 25 bestanddeel door de huid of andere aangetaste gebieden bevordert. Als de verbindingen volgens deze uitvinding worden toegediend met een transdermale inrichting wordt de toediening tot stand gebracht onder toepassing van een pleister, ofwel van het reservoir en poreuze membraan-type ofwel van een vaste matrix-variëteit. Formuleringen die geschikt zijn voor topikale toediening aan het oog omvatten bijvoorbeeld oogdruppels, 30 waarbij de verbinding volgens deze uitvinding is opgelost of gesuspendeerd in een geschikte drager. Voor intranasale toediening of toediening door inhalering worden de werkzame verbindingen volgens de uitvinding geschikt afgegeven in de vorm van een oplossing of suspensie uit een pompsprayhouder die wordt geknepen of gepompt door 20 de patiënt of als een aerosolsprypresentatie uit een onder druk staande houder of een verstuiver, onder toepassing van een geschikt stuwmiddel.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding een rectale toedieningsvorm. Een dergelijke rectale toedieningsvorm kan de vorm hebben van 5 bijvoorbeeld een zetpil.
Andere dragermaterialen en wijzen van toediening die bekend zijn op farmaceutisch gebied kunnen eveneens worden toegepast. Farmaceutische samenstellingen volgens de uitvinding kunnen worden bereid volgens een vande bekende farmaceutische technieken, zoals werkzame formulerings- en 10 toedieningswerkwijzen.
De voorgaande overwegingen met betrekking tot werkzame formuleringen en toedieningswerkwijzen zijn bekend uit de stand der techniek en worden beschreven in standaard tekstboeken. De formulering van medicamenten wordt bijvoorbeeld besproken in Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing 15 Co., Easton, Pennsylvania, 1975; Liberman, et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; en Kibbe, ct al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (derde druk), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.
20 K. Combinaties en combinatiebehandeling
De carboxypiperidine-verbinding kan ook worden toegediend in combinatie met andere therapeutische middelen voor het behandelen van de verschillende aandoeningen die hiervoor zijn besproken. De carboxypiperidine-verbinding en het (de) 25 andere therapeutische middel(en) kunnen tegelijkertijd (ofwel in dezelfde toedieningsvorm ofwel in afzonderlijke toedieningsvormen) of achtereenvolgens worden toegediend. Derhalve omvat, in een uitvoeringsvorm, de onderhavige uitvinding werkwijzen voor het behandelen van een aandoening bij een object met of gevoelig voor het hebben van een dergelijke aandoening door het toedienen aan het 30 object van een therapeutisch werkzame hoeveelheid van de carboxypiperidine-verbinding en een of meer extra therapeutische middelen. In een andere uitvoeringsvorm omvat de onderhavige uitvinding een farmaceutische samenstelling 21 welke de carboxypiperidine-verbinding, een of meer extra therapeutische middelen en een farmaceutisch aanvaardbare drager omvat.
In een uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding worden toegediend met aspirine.
5 In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer diuretica worden toegediend. Voorbeelden van geschikte diuretica omvatten hydroclorothiazide (zoals MICROZIDE™ en ORETIC™), hydroflumethiazide (zoals SALURON™), bemetanide (zoals BUMEX™), torsemide (zoals DEMADEX™), metolazon (zoals ZAROXOLYN™), chloorthiazide (zoals 10 DIURIL™, ESIDRIX™ en HYDRODIURIL™), triamtereen (zoals DYRENIUM™), ethacrynzuur (zoals EDECRIN™), chloorthalidon (zoals HYGROTON™), furosemide (zoals LASIX™), indapamide (zoals LOZOL™) en amiliride (zoals MIDAMOR™ en MODURETIC™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 15 een of meer inhibitoren van het angiotensine omzettende enzym worden toegediend. Voorbeelden van geschikte inhibitoren van het aiigunensine omzettende enzym omvatten chinapril (zoals ACCUPRIL™), perindopril (zoals ACEON™), captopril (zoals CAPOTEN™), enalapril (zoals VASOTEC™), ENALAPRILAT™, ramipril (zoals ALTACE™), cilazapril, delapril, fosenopril (zoals MONOPRIL™), zofenopril, 20 indolapril, benazepril (zoals LOTENSIN™), lisinopril (zoals PRINIVIL™ en ZESTRIL™), spirapril, trandolapril (zoals MAVIK™), perindep, pentopril, moexipril (zoals UNIVASC™), fasidotril, S-allylmercaptocaptopril en pivopril.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer angiotensine-II-receptor-blokkers worden toegedend. Voorbeelden van 25 geschikte angiotensine-II-receptor-blokkers omvatten candesartan (zoals ATACAND™), eprosartan (zoals TEVETEN™), irbesartan (zoals AVEPRO™), losartan (zoals COZAAR ), olmesartan, olmesartan medoxomil (zoals BENICAR ), tasosartan, telmisartan (zoals MICARDIS™), valsartan (zoals DIOVAN™), zolasartan, FI-6828K, RNH-6270, UR-7198, Way-126227, KRH-594, TAK-536, BRA-657 en TA-30 606.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer calciumkanaal-blokkers worden toegediend. Voorbeelden van geschikte calciumkanaal-blokkers omvatten nifedipine (zoals ADALAT™, ADALAT CC™ en 22 PROCARDIA™), verapamil (zoals CALAN™, COVERA-HS™,, ISOPTIN SR™, en VERELAN™), diltiazem (zoals CARDIZEM™, CARDIZEM CD™, CARDIZEM LA™, CARDIZEM SR™, DILACOR™, TIAMATE™ en TLAZAC™), isradipine (zoals DYNACIRC™ en DYNACIRC CR™), amlodipine (zoals NORVASC™), 5 felodipine (zoals PLENDIL™), nisoldipine (zoals SULAR™), bepridil (zoals VASCOR™), vatanidipine, clevidipine, lercanidipine, dilitiazem en NNC-55-0396.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer beta-blokkers worden toegediend. Voorbeelden van geschikte beta-blokkers omvatten timolol (zoals BLOCARDEN™), carteolol (zoals CARTROL™), 10 carvedilol (zoals COREG™), nadolol (zoals CORGARD™), propranolol (zoals INNOPRAN XL™), betaxolol (zoals KERLONE™), penbutolol (zoals LEV ATOL™), metoprolol (zoals LOPRESSOR™ en TOPROL-XL™), atenolol (zoals TENORMIN™), pindolol (zoals VISKEN™) en bisoprolol.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 15 een of meer alfa-blokkers worden toegediend. Voorbeelden van geschikte alfa-blokkers omvatten prazosin, doxazosin (zoals CARDURA™), fenoxybenzamlne (zoals DIBENZYLINE™), terazosine (zoals HYTRIN™), CDRI-93/478 en CR-2991.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer alfa-beta-blokkers worden toegediend. Een voorbeeld van een geschikte 20 alfa-beta-blokker is labetalol (zoals NORMODYNE™ of TRANDATE™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer aldosteron-receptor-antagonisten worden toegediend. Voorbeelden van geschikte aldosteron-receptor-antagonisten omvatten eplerenon (zoals INSPRA™) en spironolacton (zoals ALDACTONE™).
25 In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer renine-inhibitoren worden toegediend. Voorbeelden van geschikte renine-inhibitoren omvatten aliskiren (SPP 100), SPP-500/600 en YS-004-39.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer centrale antiadrenerge middelen worden toegediend. Voorbeelden van 30 geschikte centrale antiadrenerge middelen omvatten methyldopa (zoals ALDOMET™), clonidine (zoals CATAPRES™ of CATAPRES-TTS™), guanfacine (zoals TENEX™) en guanabenz (zoals WYTENSIN™).
23
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer glycosiden/inotrope middelen worden toegediend. Een voorbeeld van een geschikt glycoside/inotroop middel is digoxin (zoals LANOXIN™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 5 een of meer menselijke B-type natriuretische peptiden. Een voorbeeld van een geschikt menselijk B-type natriuretish peptide is nesiritide (zoals NATRECOR™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer organische nitraten of stkstofoxide-donoren worden toegediend. "Stikstofoxide-donor" heeft betrekking op een verbinding welke een stikstofmonoxide-10 species doneert, afgeeft en/of direct of indirect overdraagt, en/of de endogene productie van stikstofoxide of uit endotheel verkregen ontspanningsfactor (EDRF) in vivo stimuleert en/of endogene gehaltes van stikstofoxide of EDRF in vivo verhoogt. Deze omvat tevens verbindingen die substraten zijn voor stikstofoxide-synthase. Voorbeelden van geschikte stikstofoxide-donoren omvatten S-nitrosothiolen, nitrieten, 15 nitraten, N-oxo-N-nitrosaminen, SPM 3672, SPM 5185, SPM 5186 en analogen daarvan, natriumnitroprusside, nitroglycerine, isosorbidedinitraai, isosorbidemononitraat, molsidomine, SIN-1 en substraten van de verschillende isozymen van stikstofoxide-synthase.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 20 een of meer bradykinine-agonisten worden toegediend.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer oplosbare guanylaat-cyclase-activatoren worden toegediend. Een voorbeeld van een geschikte oplosbare guanylaat-cyclase-activator is BAY-41-8543.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 25 een of meer neutrale endopeptidase-inhibitoren worden toegediend. Voorbeelden van geschikte neutrale endopeptidase-inhibitoren omvatten omapatrilat, fasidotril, mixanpril, sampatrilat, Z13752A, BMS-189921 30 en 24
^VS'r^^^OH
^ O s H
yS
, MDL-100240
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 5 een of meer endotheel-antagonisten worden toegediend. Voorbeelden van geschikte endotheel-antagonisten omvatten ambrisentan, darusentan, J-104132, SPP-301, TBC-3711, YM-62899, YM-91746 en BMS-193884.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzym-A-reductase-inhibitoren worden 10 toegediend. Voorbeelden van geschikte 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzym-A-reductase-inhibitoren omvatten fluvastatine (zoals LESCOL™), atorvastatine (zoals LIPITOR™), iovastatine (zoals ALTOCOR“vl of MEVACOR1™), pravastatine (zoals PRAVACHOL™), rosuvaststine (zoals CRESTOR™) en simvastatine (zoals ZOCOR™).
15 In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met niacine- of een of meer nicotinezuur-derivaten worden toegediend. Voorbeelden van geschikte niacine- of nicotinezuur-derivaten omvatten NIACOR™, NIASPAN™, NICOLAR™, en SLO-NIACIN™.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 20 een of meer fibrinezuur-deri vaten. Voorbeelden van geschikte fibrinezuur-derivaten omvatten clofibraat (zoals ATROMID-S™), gemfibrozil (zoals LOPID™) en fenofibraat (zoals TRICOR™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer galzuur-sekwestreermiddelen worden toegediend. Voorbeelden van •rw 25 geschikte galzuur-sekwestreermiddelen omvatten colestipol (zoals COLESTID ), cholestyramine (zoals LOCHOLEST™, PREVALITE™, QUESTRAN™ en QUESTRAN LIGHT™), colesevelam (zoals (WELCHOL™).
25
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer cholesterol-absorptie-inhibitoren worden toegediend. Een voorbeeld van een geschikte cholesterol-absorptie-inhibitor is ezetimibe (zoals ZETIA ).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 5 een of meer cholesterylester-transport-eiwit-inhibitoren worden toegediend. Een voorbeeld van een geschikte cholesterylester-transport-eiwit-inhibitor is torcetrapib.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer apikale, van natrium afhankelijke galzuur-cotransport-inhibitoren worden toegediend. Voorbeelden van geschikte apikale, van natrium afhankelijke galzuur-10 cotransport-inhibitoren omvatten SD-5613, AZD706 en 264W94,
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer alfa-glucosidase-inhibitoren worden toegediend. Voorbeelden van geschikte alfa-glucosidase-inhibitoren omvatten miglitol (zoals GLYSET™) en acarbose (zoals PRECOSE™).
15 In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een cf meer biguanidcn werden toegediend. Voorbeelden van geschiRie biguamaen omvatten rosiglitazon (zoals AVANDAMET™) en metformine (zoals GLUCOPHAGE™ en GLUCOPHAGE XR™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 20 een of meer insulinen worden toegediend. Voorbeelden van geschikte insulinen omvatten HUMALOG™, HUMALOG 50/50™, IIUMALOG 75/25™, HUMULIN 50/50™, HUMALIN 75/25™, HUMALIN L™, HUMALIN N™, HUMALIN R™, HUMALIN R U-500™, HUMALIN U™, ILETIN II LENTE™, ILETIN II NPH™, ILETIN II REGULAR™, LANTUS™, NOVOLIN 70/30™, NOVOLIN N™, 25 NOVOLIN R™, NOVOLOG™, VELOSULIN BR™ en EXUBERA™.
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer meglitniden worden toegediend. Voorbeelden van geschikte meglitniden omvatten repaglinide (zoals PRANDIN™) en nateglinide (zoals STARLIX™).
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met 30 een of meer sulfonylurea worden toegediend. Voorbeelden van geschikte sulfonylurea omvatten glimepiride (zoals AMARYL™), glyburide (zoals DLABETA™, GLYNASE PRESTAB™ of MICRONASE™) en glipizide (zoals GLUCOTROL™ en GLUCOTROL XL™).
26
In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer thiazolidinedionen worden toegediend. Voorbeelden van geschikte thiazolidinedionen omvatten pioglitazon (zoals ACTOS™) en rosiglitazon (zoals A VANDIA™).
5 In een andere uitvoeringsvorm kan de carboxypiperidine-verbinding samen met een of meer alfa-2-delta-liganden worden toegediend. Voorbeelden van geschikte alfa- 2-delta-liganden omvatten gabapentine, pregabaline (zoals LYRICA™), [(1R,5R,6S)- 6-(aminomethyl)bicyclo[3.2.0]hept-6-yl]azijnzuur, 3-(l- aminomethylcyclohexylmethyl)-4H-[l,2,4]oxadiazool-5-on, C-[l-(lH-tetrazool-5-10 ylmethyl)cycloheptyl]methylamine, (3S,4S)-(l-aminomethyl-3,4- dimethylcyclopentyl)azijnzuur, (la,3a,5a)-(3-aminomethylbicyclo[3.2.0]hept-3-yl)azijnzuur, (3S,5R)-3-aminomethyl-5-methyloctaanzuur, (3S,5R)-3-amino-5-methylheptaanzuur, (3S,5R)-3-amino-5-methylnonaanzuur en (3S,5R)-3-amino-5-methyloctaanzuur), (2S,4S)-4-(3-chloorfenoxy)praline en (2S,4S)-4-(3-15 fluorbenzyl)praline.
L. Kits
De onderhavige uitvinding omvat verder kits die geschikt zijn voor toepassing bij 20 het uitvoeren van de hiervoor beschreven behandelwijzen. In een uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de caboxypiperidine-verbinding omvat en een houder voor de eerste toedieningsvorm. In een andere uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de carboxypiperidine-verbinding omvat en een tweede toedieningsvorm welke een tweede therapeutisch middel omvat.
25 In een andere uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de carboxypiperidine-verbinding omvat en een tweede toedieningsvorm welke een inhibitor voor een angiotensine omzettend enzym omvat.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de carboxypiperidine-verbinding omvat en een tweede toedieningsvorm welke een 30 angiotensine-II-receptor-antagonist omvat.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de carboxypiperidine-verbinding omvat en een tweede toedieningsvorm welke een aldosteron-receptor-antagonist omvat.
In een andere uitvoeringsvorm omvat de kit een eerste toedieningsvorm welke de carboxypiperidine-verbinding omvat en een tweede toedieningsvorm welke een stikstofoxide-donor omvat.
27 5 M. Synthese van de verbinding
De carboxypiperidine-verbinding kan worden bereid onder toepassing van de werkwijzen die worden geïllustreerd in de synthese-schema's en de experimentele werkwjzen die hierna worden beschreven. De algemene synthese-schema's worden ter 10 illustratie gegeven en zijn niet bedoeld als een beperking. De uitgangsmaterialen die worden gebruikt voor het bereiden van de carboxypiperidine-verbinding zijn in de handel verkrijgbaar of kunnen worden bereid volgens routinewerkwijzen die bekend zijn bij de deskundige (zoals de werkwijzen die worden beschreven in standaard referentieboeken zoals het COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, 15 deel I-VI (gepubliceerd door Wiley-Interscience)).
Schema 1
Schema 1 geeft de algemene werkwijze weer voor de bereiding van het vrije zuur 20 van de carboxypiperidine-verbinding.
28
\_Q V—Q
o U™. O Λ— o
2-«thoxyathanol. DBAD Ν'Ν,γ^ΝΗ3 Hz, Ft/C
f^NOi Pt^^THF V^NO, IPiOAc V^NHa \ | \ α \ j6 COi . .Νγ^ΝΗ PhPOCi2 μ^Ίι^ fit'll'*1 CH,CN VV^ jT'H^a "^Th t^Ta ^ ΗΝ--0 tmm*J >Λ, 2 ö<(utv CeaC08l DM SO, 125 °C V^n^N-^
20 h L X
Schema 2 5 Schema 2 geeft een alternatieve algemene werkwijze weer voor de bereiding van het vrije zuur van de carboxypiperidine-verbinding.
Ί . \ V, '-o h i >A* «yX'"' "X"· V-HH, J N°2 jr'NQa T * '"O f) J0L HN-0 \X, -** \X ,ττ^Χ 5v° yO^o^ Τ'» Ογ» o 10 29
De volgende voorbeelden illustreren de synthese van het rije zuur van de carboxypiperidine-verbinding: 5 Voorbeeld 1
k. JtS
HN N
Nv I |
O
l-(l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4*methylpyridine-2-ylamino)-lH-pyrazool[4,3-10 d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur
Stap 1: Bereiding van 1 -f2-ethoxvethvlV3-ethvl-4-nitro-1 H-pvrazool-5-carhoxamide V0 0 J/ N°2 15
Een kolf van 11 werd gevuld met 3-ethyl-4-nitropyrazool-5-carboxamide (bereid zoals is beschreven op bladzijde 18 van EP 1176142) (15,0 g, 81 mmol), trifenylfosfïen (25,6 g, 97,8 mmol) en tetrahydrofuran (120 ml). Het verkregen mengsel werd afgekoeld door de kolf in een bad van 0°C te plaatsen en er werd 2-ethoxyethanol (9,5 20 ml, 98 mmol) aan de kolf toegevoegd. Een oplossing van di-tert-butylazodicarboxylaat (22,5 g, 97,8 mmol) in tetrahydrofuran (90 ml) werd vervolgens in een periode van 2,5 uur aan de kolf toegevoegd. Het mengsel werd nog een uur onder koelen geroerd en vervolgens opgewarmd tot kamertemperatuur en nog een uur geroerd. Het mengsel werd opnieuw afgekoeld tot 0°C, behandeld met 6M zoutzuur (40 ml) e een uur op 25 40°C verwarmd. Het mengsel werd gedeeltelijk geconcentreerd en geëxtraheerd tussen 30 ethylacetaat en water. De waterige laag werd teruggeëxtraheerd met ethylacetaat. De samengevoegde organische lagen werden gewassen met water, gewassen met een zoutoplossing, gedroogd boven magnesiumsulfaat, gefiltreerd en vervolgens geconcentreerd. De verkregen viskeuze olie werd behandeld met 2-propanol en dit 5 mengsel werd vervolgens geconcentreerd. Het verkregen materiaal werd behandeld met 2-propanol en verwarmd. Bij afkoelen werden de verkregen kristallen afgefïltreerd, gespoeld met koude 2-propanol en gedroogd, waarbij 16,5 g van de titelverbinding werd verkregen.
10 Stap 2: Bereiding van 4-amino-l-(2-ethoxYethvD-3-ethvl-lH-pvrazool-5-carboxamide S jf \±NH2 l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-4-nitro-lH-pyrazool-5-carboxamide uit stap 1 (15,0 g, 15 58 mmol), 5% platina-op-koolstof (0,75 g) en isopropylacetaat (150 ml) werden samengevoegd en het mengsel werd ongeveer 50 uur onder 80 psi waterstof geroerd. Het mengsel werd vervolgens door celite gefiltreerd, de celite werd gespoeld met acetonitril en het filtraat werd geconcentreerd. Het materiaal kristalliseerde uiteindelijk, waarbij 13,7 g als een hydraat van de titelverbinding werd verkregen.
20
Stap 3: l-('2-ethoxvethvll-3-ethvl-lH-pvrazooir4.3-dlpvrimidine-5.7('4H.6HVdion S ï J^tr0 25 31
Een mengsel van carbonyldiimidazool (12,3 g, 76,1 mmol) in acetonitril (123 ml) werd verwarmd op 50°C. Het 4-amino-1 -(2-ethoxyethyl)-3 -ethyl-1 H-pyrazool-5-carboxamide dat is bereid in stap 2 (13,2 g, 58 mmol) werd in een periode van een uur 5 aan het mengsel toegevoegd en de temperatuur van het mengsel werd tijdens het toevoegen verhoogd tot 75°C. Het mengsel werd vervolgens afgekoeld en een nacht geroerd. Het mengsel werd afgekoeld in een ijsbad en gefiltreerd. De filterkoek werd gespoeld met water en gedroogd, waarbij 12,8 g van de titelverbinding werd verkregen.
10 Stap 4: Bereiding van 5,7-dichloor-l-(2-(ethoxvethvn-3-ethvl-lH-pvrazool[4.3- dlnvrimidine \ - •tót...
J " w 15 Een mengsel van l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine- 5,7(4H,6H)-dion uit stap 3 (25,2 g, 100 mmol) werd behandeld met PhPOCh (195 g, 1000 mmol) en onder N2 onder roeren 20 uur op 135°C verhit. Het mengsel werd afgekoeld en vervolgens nog 20 uur op 140°C verhit, et mengsel werd afgekoeld en langzaam toegevoegd aan een mengsel van ijs (600 g)/water (200 ml). Dit werd 3 uur 20 geroerd en de verkregen vaste stof werd verzameld door filtratie en gespoeld met water (2 x 100 ml). De vaste stof werd gesuspendeerd in ethylacetaat (300 ml). Er werd water (200 ml) toegevoegd e de pH werd ingesteld op 1-2. Vervolgens werd 10% NaHCCb (125 ml) toegevoegd (hetgeen resulteert in een pH ~ 7) en de lagen werden gescheiden. De organische laag werd achtereenvolgens gewassen met water (400 ml) en een 25 verzadigde natriumchloride-oplossing (150 ml). De organische oplossing werd vervolgens gedroogd en geconcentreerd, waarbij 23 g van de titelverbinding werd verschaft.
Stap 5: Bereiding van N-i5-chloor-l-(2-ethoxvethvlV3-ethvl-lH-pvrazoolf4.3- 30 dlpvrimidine-7-vll-4-methvlpvridine-2-vlamine 32 \ jh ·νΎ^ν Nv 1 1
Een mengsel van 2-amino-4-picoline (4,32 g, 40 mmol) en 5,7-dichloor-l(2-5 ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine uit stap 4 (5,78 g, 20 mmol) werd behandeld met THF (25 ml) en afgekoeld tot 0°C. Het mengsel werd geroerd en met een zodanige snelheid met 1 M LiN(TMS)2 in THF (40 ml, 40 mmol) behandeld, dat de temperatuur lager werd gehouden dan 5°C. Het mengsel werd 30 min geroerd en werd vervolgens met een 10% citroenzuur-oplossing behandeld totdat een pH van 6-7 was 10 bereikt. Het mengsel werd gedeeltelijk geconcentreerd onder verlaagde druk. Het mengsel werd vervolgens 1 uur bij 5°C geroerd. De verkregen vaste stof werd verzameld door afzuigingsfiltratie en gewassen met water (40 ml). De vaste stof werd bij een temperatuur lager dan 60°C in een vacuümoven gedroogd, waarbij 7,0 g van de titelverbinding werd verkregen.
15
Stap 6: Bereiding van 1 -(1 -('2-ethoxvethvlV3-ethvl-7-('4-methvlpvridine-2-vlaminol-lH-pvrazoolf4.3-dlpvrimidine-5-vnpiperidine-4-carbonzuur ó J* 1! i ^ ΟγΟ
OH
Een mengsel van N-[5-chloor-l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-
d]pyrimidine-7-yl]-4-methylpyridine-2-ylamine uit stap 5 (5,42 g, 166 mmol), isonipecotinezuur (85,9 g, 665 mmol), cesiumcarbonaat (162 g, 498 mmol) en DMSO
20 33 (55 ml) werd onder roeren op 125°C verhit. Na 20 uur werd het mengsel afgekoeld tot 20°C en werd water (165 ml) toegevoegd. Het mengsel werd 15 min geroerd en werd vervolgens behandeld met ethylacetaat (55 ml). De lagen werden gescheiden en de waterige laag werd behandeld met nog een portie ethylacetaat (55 ml). De lagen 5 werden opnieuw gescheiden en de waterige laag werd met behulp van 6 M HC1 op pH ~ 5 gebracht. Na 1 uur roeren werd de verkregen vaste stof afgefiltreerd, gewassen met water (20 ml) en onder vacuüm gedroogd, waarbij 5,5 g van de titelvebinding werd verkregen. 'H-NMR (400 MHz, DMSO-dö): δ 1,10 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,49-1,60 (m, 2H), 1,84-1,95 (m, 2H), 2,32-2,36 (m, 3H), 2,52-2,57 (m, 1H), 2,78 (q, 2H), 2,99-3,08 10 (m, 2H), 3,52 (q, 2H), 3,78 (t, 2H), 4,45-4,53 (m, 2H), 4,56-4,64 (m, 2H), 6,91 (d, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 9,63 (s, 1H), 12,18 (s, 1H). LCMS m/z 454.
Daarnaast kan een mengsels van N-[5-chloor-l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-7-yl]-4-methylpyridine-2-ylamine uit stap 5 worden samengevoegd met isonipecotinezuur (tussen 1 en 10 equivalent) en een base en 15 worden verhit tussen 100-125°C in een oplosmiddel totdat de reactie is voltooid. Geschikte basen omvatten cesiumcarbonaat, natriumcarbonaat en kaliumcarbonaat. Geschikte oplosmiddelen omvatten DMSO en Ν,Ν-dimethylformamide. Bij afkoelen kan water worden toegevoegd en wordt de basische oplossing geëxtraheerd (tussen 1 tot 3 keer) met een organisch oplosmiddel zoals ethylacetaat. De resterende basische 20 laag wordt met HC1 aangezuurd tot pH 5. Het mengsel wordt ongeveer 1 uur geroerd. De vaste stof wordt afgefiltreerd, gewassen met water en onder vacuüm gedroogd, waarbij de titelverbinding wordt verkregen.
Voorbeeld 2 25 ή
W HN N
Nv\J JL
O
34 1 -(1 -(2-ethoxyethyl)-3 -ethyl-7-(4-methylpyridine-2-ylamino)-1 H-pyrazool[4,3 -d]pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur
Stap 1: Bereiding van l-(2-ethoxvethvlV3-ethvl-4-nitro-lH-pvra2ool-5-carboxaniide 5
Vo S i NO* l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-4-nitro-lH-pyrazool-5-carboxamide werd bereid volgens stap 1, voorbeeld 1.
10
Stap 2: Bereiding van 4-amino-l-(2-ethoxvethvD-3-ethvl-lH-pvrazool-5-carboxamide 15 Een mengsel van l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-4-nitro-lH-pyrazool-5-carboxamide uit stap 1 (5,70 g, 22 mmol) en palladiumhydroxide (1,0 g) in ethanol (110 ml) werd in intervallen van ongeveer 10 minuten in vier ongelijke porties behandeld met ammoniumformiaat (7,01 g, 111 mmol). Het verkregen mengsel werd twee uur onder terugvloeikoeling gekookt en daarna afgekoeld. Het mengsel werd gefiltreerd door 20 celite en geconcentreerd. Het verkregen residu werd gezuiverd door kolomchromatografie over silikagel onder toepassing van een mengsel van ethylacetaat en hexaan als het elutiemiddel, waarbij 2,45 g van de titelverbinding wordt verkregen. 'H-NMR (400 MHz, CDC13): δ 1,17 (t, 3H), 1,21-1,32 (m, 3H), 2,60 (q, 2H), 3,53 (q, 2H), 3,79-3,95 (m, 2H), 4,38-4,52 (m, 2H). MS (ESI) m/z 227.
Stap 3: l-(2-ethoxvethvlV3-ethvl-lH-pvrazool(4.3-dlpvrimidine-5.7(4H.6Hi-dion 25 35 \ 1 •Vn h
Vi Λ
Jij 0
Een mengsel van 4-amino-l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool-5-carboxamide 5 uit stap 2 (2,44 g, 10,8 mmol) in N,N-dimethylformamide (40 ml) werd behandeld met carbonyldiimidazool (1,92 g, 11,9 mmol) en een nacht op 80°C verwarmd. Het mengsel werd onder vacuüm geconcentreerd en het residu werd gezuiverd door kolomchromatografie over silikagel onder toepassing van een mengsel van ethylacetaat en hexaan als het eluens, waarbij 1,04 g van de titelverbinding wordt verkregen. MS 10 (ESI) m/z 253.
Stap 4: Bereiding van 5.7-dichloor-l-(2-ethoxvethviV3-ethvl-lH-pvrazooir4.3- dlpvrimidine
Cl
Nvi A.
15
Een mengsel van de l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine-5,7(4H,6H)-dion die is bereid in stap 3 (7,2 g) en fosforoxychloride (200 ml) met een druppel Ν,Ν-dimethylformamide werd een nacht onder terugvloeikoeling gekookt. Het 20 mengsel werd afgekoeld en het fosforoxychloride werd onder verlaagde druk afgedampt. Er werd ijs aan het verkregen residu toegevoegd en vervolgens werd het mengsel geëxtraheerd met chloroform. De organische lagen werden gedroogd boven magnesiumsulfaat, gefiltreerd en ingedampt, waarbij 2,09 g 5,7-dichloor-l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine ale een olie werd verkregen, die 25 stolde bij bewaren. LCMS m/z 289.
36
Stap 5: Bereiding van l-n-(2-ethoxvethvlV3-ethvl-7-(4-methvlpvridine-2-vlamino')-lH-pvTazooU4.3-dlpvrimidine-5-vllpiperidine-4-carbonzuur
Vo /}
O
5
Het 5,7-dichloor-l-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-lH-pyrazool[4,3-d]pyrimidine dat is bereid in stap 4 (1 mmol), 2-amino-4-picoline (2 mmol), N,N-diisopropylethylamine (3 mmol) en N-methylpyrrolidon (1 ml) werden toegevoegd aan elk van twee reactievaten. Ieder vat werd 15 minuten bij 150°C in een CEM Discover magnetron 10 bestraald. Aan ieder reactievat werd isonipecotinezuur (3 mmol) toegevoegd en het verkregen mengsel werd 15 minuten bij 180°C bestraald, e inhoud van de twee reactievaten werd samengevoegd. Water en ethylacetaat werden toegevoegd aan het mengsel en het mengsel werd geschud. Zoutzuur (1M) werd toegevoegd aan het mengsel en het mengsel werd opnieuw geschud. De lagen werden gescheiden. De 15 organische laag werd gewassen met water, er werd zoutzuur (1M) toegevoegd en de lagen werden gescheiden. De organische laag werd gedroogd boven magnesiumsulfaat, gefiltreerd en ingedampt. De pH van de waterige laag werd verhoogd tot ongeveer zes door het toevoegen van verzadigd natriumcarbonaat en de waterige laag werd vervolgens geëxtraheerd met ethylacetaat. De organische laag werd gedroogd boven 20 magnesiumsulfaat, gefiltreerd, toegevoegd aan het voorgaande organische residu en ingedampt. De oplossing werd gezuiverd door RP-HPLC over een Varian Dynamax ΟΙ 8 kolom (250x41,4 mm) met een gradiënt van 10-95% acetonitril/water (zoutzuur) gedurende 15 minuten in twee charges. De fracties werden samengevoegd en ingedampt, waarbij 0,26 g van de titelverbinding werd verkregen. 'H-NMR (400 MHz, 25 DMSO-dé): 5 1,10 (t, 3H), 1,30 (t, 3H), 1,49-1,60 (m, 2H), 1,84-1,95 (m, 2H), 2,32-2,36 (m, 3H), 2,52-2,57 (m, 1H), 2,78 (q, 2H), 2,99-3,08 (m, 2H), 3,52 (q, 2H), 3,78 (t, 2H), 4,45-4,53 (m, 2H), 4,56-4,64 (m, 2H), 6,91 (d, 1H), 8,05 (s, 1H), 8,18 (d, 1H), 9,63 (s, 1H), 12,18 (s, 1H). LCMS m/z 454.
37
Protocollen N. Potentie- en selectiviteitsassavs 5
Werkwijze 1: Menseliike plaatjes PDE5-enzvm-inhibitie-scintillatie-nabiiheid-assav
Een in vitro assay kan worden toegepast voor het evalueren van de remming van de PDE5-enzym-activiteit door een testverbinding. Zoals hierna meer in het bijzonder 10 wordt beschreven meet deze assay de PDE5-ICso-waarde voor de testverbinding (d.w.z.
de concentratie van de testverbinding die vereist is voor het met 50% remmen van de door PDE5-enzym gekatalyseerde hydrolyse van cGMP tot GMP ten opzichte van de activiteit van niet geremde controles).
Het PDE5-enzym voor toepassing in de assay kan worden verkregen uit 15 menselijke plaatjes door een geschikte modificatie van de werkwijze van Thompson, WJ et al.; Biochemistry 18(23), 5228-5237, 1979, zoals is beschreven door Ballard SA et al.; J. Urology 159(6), 2164-2171, 1998. Het PDE5-enzym dat is geïsoleerd uit menselijke plaatjes kan worden gebruikt voor het katalyseren van de hydrolyse van [3H]cGMP (Amersham Biosciences) tot 5' nucleotide [3H]GMP. Het [3H]GMP bindt 20 aan yttriumsilikaat-SPA-korrels (Amersham Biosciences) en wordt gedetecteerd door scintillatie-tellen. Meer in het bijzonder kan het effect van de testverbinding in verschillende concentraties worden geëvalueerd in de assay door de verbinding in contact te brengen met een vaste hoeveelheid PDE5-enzym bij aanwezigheid van substraat (cGMP of cAMP in een 3:1 verhouding ongemerkt ten opzichte van met [3H] 25 gemerkt). Scintillatie-tellen kan worden toegepast zoals hiervoor is beschreven voor het bepalen van de relatieve PDE5-enzym-activiteit. De remming van PDE5-enzym-activiteit wordt vervolgens berekend ten opzichte van de totale PDE5-enzym-activiteit van niet geremde controles.
30 PDE5 IC50 Assay: microtiterplaat-formaat met 96 putjes Reagentia 38
Buffer A: 20 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl2, pH 7,4
Buffer B: 2 mg/ml BSA in buffer A (enzymbuffer) cGMP-substraat: uiteindelijke concentratie van 500 nM in de assay •j
De hoeveelheid met H gemerkt substraat die wordt toegevoegd hangt af van de 5 specifieke activiteit van [ HjcGMP en het cGMP-substraat wordt verdund met een 10 mM voorraad van koud cGMP in buffer A voor een uiteindelijke substraatconcentratie van 500 nM in de assay.
PDE-enzvm: Bereid in buffer B. De verdunningsfactor wordt bepaald door de enzym-activiteit.
10 SPA-korrels: 20 mg/ml suspensie bereid in dH20.
Positieve controle Negatieve controle Standaard/testverbinding 2 μΐ 100% DMSO 2 μΐ 100% DMSO 2 μΐ standaard/testverbinding
25 μΐ buffer A 25 μΐ buffer A 25 μΐ buffer A
25 μΐ enzym 25 μΐ buffer Β 25 μΐ enzym 50 μ! substraat 50 μ! substraat 50 μ! substraat 50 μΐ SPA voor stoppen 50 μΐ SPA voor stoppen 50 μΐ SPA voor stoppen
Voorraden van standaard- en testverbindingen worden bereid in een hoeveelheid van 5 mM in 100% DMSO. De verbinding wordt serieel verdund in een 15 verdunningsplaat onder toepassing van een 10-punt Vi log verdunningsformaat. 2 μΐ van de verdunning van de verdunning wordt in tweevoud toegevoegd aan de putjes van de assayplaat. 2 μΐ 100% DMSO wordt toegevoegd aan aangewezen controleputjes. 25 μΐ buffer A wordt toegevoegd aan alle putjes. 25 μΐ buffer B wordt toegevoegd aan de putjes met de negatieve controle. 25 μΐ enzym wordt toegevoegd aan de resterende 20 putjes. 50 μΐ substraat wordt toegevoegd aan ieder putje. De platen worden afgesloten en 60 minuten bij 30°C op een plaatschudder geïncubeerd. 50 μΐ SPA-korrels wordt toegevoegd voor het stoppen van de reactie. De platen worden opnieuw afgesloten en 15 minuten geschud zodat de korrels kunnen binden aan het GMP-product. Men laat de korrels 30 minuten bezinken en vervolgens worden ze afgelezen op een NXT 25 TopCount scintillatieteller. De gegevens worden geanalyseerd met een kromme-passing-toepassing voor op een plaat gebaseerd onerzoek. Het percentage remming bij deze assay wordt als volgt berekend: 39
Remming (%) = [(gemiddelde maximum-verbinding-waarde)/(gemiddelde maximum-gemiddelde minimum)] x 100.
5 De ICso-waarde wordt bepaald uit sigmoide dosis-respons-krommen van de enzym-activiteit versus de concentratie van de verbinding.
De carboxypiperidine-verbinding werd getest volgens werkwijze 1. De overeenkomende PDE5-ICso-waarden die zijn gemeten worden vermeld in tabel A.
Tabel A
Test nr. Werkwijze 1: PDE5-ICS0 (nM) Ί 0,050 ~2 0^044
Gemiddeld: 0,047 10
Verbindingen die eerder zijn beschreven in de voorbeelden van W02004096810 werden getest volgens werkwijze 1. De overeenkomende PDE5-IC5o-waarden die zijn gemeten worden vermeld in tabel B.
Tabel B
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) 1 16^2 cx
\_v HH
/yS
VVy «aC·^ 40 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) _ __
X-o O
\ m
Wv * 1 433 V 0 >-A.
vXa ƒ N N—1 K,C ‘ tMj
1 SM
\ XX vu "7 M3 \ JCr
\X^N
41 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 1 6^95
X XX
<XX
\ _ 508 v jcr <xx j Ν-^ν^γ-CM, L uu
Ti ÖÖ9 v o n^An ριΤγγ
k^NH
12 Ü74 v £
r^O
42 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM)
13 19J
V
HN
'‘‘’XX
15 424 v o 1 c Λ ΛΛ 1 j u,uy v 0 a ny
Ww ló 5^98 v o
^ k/NH
43 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ÏÏ7 22^4 v o λ Hiil ~Ï8 25$ v o
HH
19 0,49 S S3
W HM
~2Ï 2^04 \ σ
,NVS
k^*H
"23 Ö39 \ s3
kw MN
yQw
k^-MH
44 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) ~24 37/7
\ hXX
_ __
V N^N
\ hAA
/ïS
~28 47/7 \-X>
>X
VV'llY'· _ __ vXj
/ N^NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) "35 737 45 , jcr λΑ.
Vw-N
"36 1450 /γΚ / ~yj >10.000 vXZjrf
A H
"38 ~ >10.000 , jcr 46 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) "39 456
, JX
/ ~4Ö 334 i ·Ά -ρα __ _
, -XX
"72 177
, JCX
ΛιΛ.
\ΛνΡ,ν^,ο^
r H
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~Ï1 n^N >10.000 47
vO
~8Ö 1940 NPu
Γ N'n-X I
X
Έ ΓΪ8
, H H-KJ
,v»«
\T J
ƒ 'NfcTXy? i “83 134 n^xn
vO
/ N n-x
f \^-HH
48 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5 -IC 50 (nM) ~84 247 out
r^rH
"88 >ÏÖÖ
N'^'S
I ΗΝ''^-J'
r^O
_ __
Q
j HN H
sXX
JT N jw "91 22^6 , JÜ
Out ry>
/ N^-NH
W02004096810 Structuur W erkwij ze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) “92 26^5 49 \
<tS
'OH
__ __ /γS.
/ ” N _ «ν' 'o'' "94 43^2 t n fj yr VA 1 ^n
“95 7M
X XX
n'*SAn VA Λ / 1*Λ*-\ W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) "96 87^9 50 Λ Λ yCi 8^-oh “98 231 r XX ‘'VVk "99 239 V ^
\ XX
N-^ Jx
Or
f « H
___ __
N^N
k a!
/A
^ Ο·..0„ W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM)
TÖ3 7M
51
^ JX
<XX
ΌΗ TÖ8 778 xr
ti' ^/ N
\A A ^ 1Ö9 273 \ hj0
OH
TTÖ 513 X xr /ys.
yv W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) TÏ3 Ï25Ö 52 TÏ4 6Ö£
JL
\ JX
π 1Ï5 22Ö
NV
~TÏ6 1760 i \ «M^O- >°o
V-'NH
53 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 123 248
, JCT
vu
O
124 78^2 j vfi __ _ j Jx <χχ
/ k^-NH
126 2230
, JCT
Qj o
x X^NH
54 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 127 7580 xyl 128 139Ö
H
0<V'Nv' X) j hnX^ 129 139 p
I HM
CO
/^n 13Ö >10.000 , vCr
Vn A -- W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~Ï33 M5 55
f XX
•CCx X
y.
134 6^57
t XX
n' Yt» .
yx^NX, X^nh i __ __ <, J3
u N
X N^X, Χγ-ΝΗ 136 ÜÖ9 ?3 jTi ΗΝ'^Χ>·Χχ ν"ΝΧΓ^Ν
VJ Λ I
X^NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 137 Ü43 56 i JCr
N^NH
ÏÏ38 Ö33
J
S hhAJ
%Ax .1 ' " Γ 1 139 0^5
^ O
^ HN''''^vAs Y^Xx
O
V” W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 14Ö Ë95 57 ^ JCr y&ó 141 0J5 ^ τ° 142 22/7 tT xx \A X ! N^nh "Ï43 8Ë2 / Xr
*QlX JL
/ " fS
58 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 144 534 ^ T° HVl __ __ J ^
t XX
146 32J
J
c rr Ν' ft.
Χ&Λ X^nh 147 2^46
\ HN-JvJ
K'%X .
Χν^Λ N^nh 59 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 148 439
^ XX
u Xf N , -Χ^νΛ 149 343
{ XX
YA Λ X
V MU
__ __
i JO
__ ___ H% jx
'^'Ίι N
\A A
XA-i 60 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) __ _
«XX
UA.- j N j
«A
__ —
^ A
/'yS <p\
R
TS4 Üfi
h3c-o JTjI
%Αλ j w nh
ΗΧ-"' HO^ ,X
• ^ crt, __ _ X O-
Si p, 'ΝΊι N γΛ
yvyO
CH, W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 156 Ü8Ö 61 s 0- i Hj* pt,
CHS
___ __ V σ S 1 !*.
'Η^ί\Ί* rN,
VVs^O
/ I
C»3 158 0/71 ^ fH.
CR, __ __ V σ'
/nV^n r-K
CHj 62 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 16Ö 7^22 x I I f»* CK» lól Ö5Ö V ,o~ Ί l ,<*, %ΛΛΛ> / r ch3 ~L62 Ö]24 S O- S Ί
<XZ ...O
f W H CH, ~Ï64 3^46
V XX
VA
\ J J
h»c o,- νη 63 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 165 KK5
i XX
\ HN CH, \JL j
L^NH
166 Üj
ci XX
>W,
Hsc l mH
167 X95 c\ O-
Mac Χ^,ΝΗ 168 ÖJBÏ
Cl XX
/ΝΟι^ν W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) T7Ö 2ÏÖÖ 64
XX
> Hn CHj ,Ν'Λν J t H,C Ι^,ήΗ 173 396 hnA^XCH5 < \
N I I
HjP Ι^,ΝΗ ~Ï74 432 H3C Χ^ΝΗ "Ï76 274 N^j| ' N j i *^c X^nh 65 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~Ï77 535 0 -XX, Λ,
'-w I I
I79 Ï83
^c\ JJ
,n'-An va a λ T N N ^ 18Ö 341 h<VCHï
HXV V=J
0-^1 ΗΪ'Γ
Nw Jl JL
VSi'V^ «aC"7 ~Ï8Ï Ö39 r-o fk
«3C
UA^ r^N—tjfXHj
HO"' CHS
66 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) "Ï82 4^03 n
H»C
vX j HO"^ C«, 185 ÜÖ
κΓ^ΐί I
H,C.
0-^ CH, ~Ï88 Ö47 /-o n H*C HN*^^CHa UA -oh, h,c-^ Jr^o 3 CH, 19Ï 0^24
\jpB
pO-fO
hjc CH, W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 192 3^06 67 CH, __ __ rP „
CD--O
HjC^ CHj ~Ï94 036
nl ί I
*3° __ __ JCr /~~o V 1
N. I
pA'V”’
X^NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) 1% 0^56 68
o "A
H*c 197 ï/76 Ν<|{ I ^ Λ-Ό \ 1 I H& β'-χΓ^Η 1 N. ]j É j „>Vyy^ j 'V·* 198 jók
/~~o V, 1 HSC /*NT*N
Nx I
Kv’Vv0"· H»c L^nh 199 3J3 ^ joc /~~o \ 1 H,c N' *Ί| ?
H»C k^NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) ~2ÖÖ ' 4/7Ö 69 ó
y—. m NT
s-o I
k,c ,Ν'Ί|Ν
VtAv,‘ H*c "201 25^9 rr° , HN'''*Ï^N'CK| /~~o Λ ï h3c N\ I ]
H»C K^HH
2Ö2 5^46 rr° HN"^N'CM,
/~~o \ JL
H,C , γνγγ.
H/ï I
~2Ö3 0^63 fY° ^ Hhr^-W"CH,
/—•o ' I
OC Mn NJlA^ ƒ N N ^
H,C I
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM)
~2Ö4 24J
70
XX
•v""0 VVvi
«P
8 "205 6^24
s~~0 v I HP N
~2Ö6 6β9
_ JtX
HjC^0 ,Ν·^Χη vl p ^ Γ >1: ir)|
«P
__ __
WW
H,C i "208 Ö/7Ï hn-X^ch, /"O V 1 up
N. 1 I
HP i W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) Ί2Τ0 82/7 71
jO
,- HtjT N
h^° /Np* ΎΓΐ Ë57
S—Q X
Hfi N/*SpN
«* j^Vv"· "2T2 Ö/Π
XX
/~~o I
HsC SXA - ka / ^ ? " o-~^ *
Til Ö42 knXXch, /~-o \ 1
H*c ^OH
^νΛ0 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~2Ï4 (Ü7 72 • Φ __ __
XX
/—.
/~-~o \ 1
HjC -N^Ji N
ha j ^ 'n ~216 60^9
Ij
r— Htf N
r-o \, 1 *Ψ n li ? /
Wk^Ns
H>V CHS
1Π7 2^55
/— MN N
/~~~0 V 1 vu^ f N N Π»° CHa W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM) ~2ÏS TÜ5 73 ^ -O.
f~~o V 1 " iCu •V CM, __ __ /~~ο Y, 1 H»C CHj ~22Ö 3s6Ö
^ H
x~-° \. 1
HjC ' Ί| N
Π*0 ~22Ï 35^4
/“-O i, X
H*C
HsC i^KH
74 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-IC50 (nM)
~222 KU
F*sL-F
Λ-O V JL H.C
MjC L^NH
"225 Ë33
^ JO
/~~o \i JL
HC
"aK / t O CM; ~226 0^83 j6 X * H*c ζχχ hsc, x 0*^ CH, ~227 Ö35 Z~-x MN''^N^
/—O V I
H,c «r! O"^ CH, 75 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~228 3^09
N^N
Va Js, ^ ƒ N'TjT^CH,
HcA CH, __ _
S~~Q Λ, I
H,C
\Jl Jl *<>ΝΗ "231 KÜ _ J0k.
>r QxS
H,C k^.NH
~233 3785
„ JOC
/~-o \ 1
H,C ^"Τι N
\\ J JL
HjC k^NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICSo (nM) ~234 8/79 76
A
/—λ \A A ^
HSC k^NH
~235 >TÖÖ ó S-λ /—o \ 1 H,C κΓï Ί
jrV'V'N
H,C
"236 2^51 jÓ
HN N
/—Q \ 1
HjC 'N^Sl
\A JL
H3C t^NH
"237 0^67 ^ XX.
* iAt,
"»c *s^.NH
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~24Ö " >100 77
jQT
/~-Q \ I
H3C
N χ J| \
H^C ^Ü.MH
~241 48J
^ HN^^1
/~-o JL
HaC
A
"242 Ö62 Λ /~-Q \ i
M-c £fS
w J/N fr") ~244 2^54 HN CH* /-0 \ 1
HjC NDlA
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) "245 Ïj5 78
F VU-O
HjC \ "246 4A6 .
ÏCj-X, F VW^
H;C
~248 ÖJÖ r-ü < 50w
k^NK
"249 ÖJó
, ^ SJ
λ"0·Α
k^NM
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~25Ö 2^37 79
, „ P
~251 (Ü5
Xj
ξ w H
~252 2^81
^ JO
k^NH
HjC
~253 Ë2Ö „ „j5
V~oA\ A
F > H' 'll V
' vvVy·
k^"H
H,C
W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~254 0^59 80 VO. Λ
<QU
? '
HjC
"255 E43 JÓ ~256 3^82 jo ννγγ0* O--' H,C-^ "258 Π99 knX^ch,
*3° k^NH
81 W02004096810 Structuur Werkwijze 1:
Voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) "259 3J4 CH, N v J ! hAqJ' N Qn "26Ï 0^57 Γ* XV hjtV VWn ”262 Ö93 *rri H>c kA^ o ~263 5^27 JM.
x)
pA HN M
/tx
«A UyOH
o 82
Werkwijze IA: Alternatieve menselijke plaatjes PDE5-enzvm-inhibitie-scintillatie-nabiiheid-assav
De PDE5-IC50 van een testverbinding kan ook worden gemeten met een 5 alternatieve in vitro assay die verschilt van werkwijze 1 zoals hierna wordt beschreven: PDE5 ICsn Assay: microtiterplaat-formaat met 96 puties
Reagentia 10 Buffer A: 20 mM Tris-HCl, 5 mM MgCl2, pH 7,4 Buffer B: 2 mg/ml BSA in buffer A (enzymbuffer) cGMP-substraat: uiteindelijke concentratie van 500 nM in de assay
De hoeveelheid met 3H gemerkt substraat die wordt toegevoegd hangt af van de λ specifieke activiteit van [ HjcGMP en deze wordt verdund in buffer A.
15 PDE-enzvm: Bereid in buffer B. De verdunningsfactor wordt bepaald door de enzym-activiteit.
SPA-korrels: 4 mg/ml suspensie bereid in dH20.
Positieve controle Negatieve controle Standaard/testverbinding 3 μΐ 100% DMSO 3 μΐ 100% DMSO 3 μΐ standaard/testverbinding
27 μΐ buffer A 27 μΐ buffer A 27 μΐ buffer A
30 μΐ enzym 30 μΐ buffer Β 30 μΐ enzym 30 μΐ substraat 30 μΐ substraat 30 μΐ substraat 30 μΐ SPA voor stoppen 30 μΐ SPA voor stoppen 30 μΐ SPA voor stoppen 20 Voorraden van standaard- en testverbindingen worden bereid in een hoeveelheid van 2 mM in 100% DMSO. De testverbinding wordt serieel verdund in een verdunningsplaat onder toepassing van een 10-punt 1/5 log verdunningsformaat, zodat de beginconcentratie i de assay 2 μΜ bedraagt voor een aanvankelijke ICso-test; bevestigende IC5o's worden uitgevoerd onder toepassing van een 10-punt 1/3 log 25 verdunning. 27 μΐ buffer A wordt toegevoegd aan de putjes van de assayplaten. Van de verdunningsplaat wordt 3 μΐ verdunde verbinding in tweevoud afgegeven of wordt 3 μΐ 100% DMSO (voor positieve en negatieve controles) toegeoegd. Er wordt 30 μΐ enzym 83 toegevoegd. Voor de putjes met de negatieve controle wordt buffer B gesubstitueerd in plaats van het enzym. Aan alle putjes wordt 30 μΐ gemerkt substraat toegevoegd.
Na 60 minuten incuberen bij kamertemperatuur wordt de reactie gestopt door het toevoegen van 30 μΐ van de yttriumsilikaatkorrels. Deze korrels zijn dicht en vereisen 5 constant roeren terwijl ze worden toegevoegd aan de plaat. De platen worden afgesloten en vijftien minuten geschud op een plaatschudder zodat de korrels kunnen binden aan het GMP-product.
Nadat men de korrels 30 minuten heeft laten bezinken worden de platen afgelezen op een NXT TopCount scintillatieteller en worden de gegevens als volgt 10 geanalyseerd. De waarden van het percentage remming worden berekend onder toepassing van de gemiddelden van de 0% en 100% controles van iedere plaat. De bepalingen van de 4-parameters van het logistische, sigmoide dosis-repons-model worden vervolgens berekend onder toepassing van de waarde van het percentage remming van het putje-niveau voor de verbinding. De formule voor het vier-parameter 15 logistische model kan worden weergegeven als Y = ((a-d)/( 1 +(X/c)Ab)) + d, waarbij Y de respons is, X de concentratie is, a de onderste asymptoot (minimale respons) is, de de bovenste asymptoot (maximale respons) is, c de model-ICso (in dezelfde eenheden als X) is en b de helling is (zoals beschreven in De Lean, A., P.J. Munson en D. Rodbard ("Simultaneous analysis of families of sigmoidal curves: application to 20 bioassay, radioligans assay, and physiological dose-response curves." Am. J. Physiol. 235(2): E97-E102, 1978). Deze bepalingen worden gebruikt voor het berekenen van de concentratie die overeenkomt met 50% remming.
De carboxypiperidine-verbinding werd getest volgens werkwijze la. De overeenkomende PDE5-IC50-waarden die zijn gemeten worden vermeld in tabel C.
25 30 84
Tabel C
Testnr. Werkwijze la: PDE5-IC50 (nM) 1 ÖIÖ51 ~2 ÖjÖ5Ï 1 0,039 1 ÖÖ45 1 ÖIÖ23 ~6 0,026
Gemiddeld: 0,039
Verbindingen die eerder zijn beschreven in de voorbeelden van W02004096810 werden getest volgens werkwijze la. De overeenkomende PDE5-ICso-waarden die zijn 5 gemeten worden vermeld in tabel D.
Tabel D
W02004096810 Werkwijze la: voorbeeld nr. PDE5-ICso (nM) ~26Ï 0,115 ~262 0,0755 ~263 0,0197
Werkwijze 2: Menseliike retina PDE6-enzvm-inhibitie-scintillatie-nabi iheid-assav (SPA) 10
De remming van de PDE6-enzym-activiteit door een testverbinding kan worden gemeten volgens de in vitro assay van werkwijze 1, maar in plaats daarvan onder toepassing van semi-gezuiverd PDE6-enzym dat is geïsoleerd uit menselijk, rund- of hond-retina in plaats van PDE5-enzym. Deze assay meet de PDE6-ICso-waarde voor de 15 testverbinding (d.w.z. de concentratie van de testverbinding die vereist is voor het met 50% remmen van de door PDE6-enzym gekatalyseerde hydrolyse van [3H]cGMP tot het 5' nucleotide [ H]GMP ten opzichte van de activiteit van niet geremde controles).
85 [3H]GMP bindt aan yttriumsilikaat-SPA-korrels en wordt gedetecteerd door scintillatie-tellen.
PDE6-zuivering; PDE6 kan worden geïsoleerd en gezuiverd uit het volgende: Op 5 losbaar staafje-PDE6/staafje-buitensegment-PDE6uit runder-ogen (Charles River Ltd, Frankrijk); kegeltjes-PDE6 uit honden-ogen (LAS); of oplosbare staafjes en kegeltjes PDE6 uit menselijke ogen (I.I.A.M.).
Homo genisatiebuffer 10 20 mM Hepes (Sigma) 2,383 g 1 mM EDTA (Sigma) 0,186 g
Los op in 300 ml HPLC (Acros) of dubbel gedeïoniseerd water.
100 mM PMSF (Sigma) 0,174 g/10 ml ethanol
Voeg 5 ml PMSF-oplossing toe om langzaam te bufferen teneinde precipitatie te 15 voorkomen.
Voeg 250 mM Sucrose (Fisher) toe 42,78 g Stel het volume in op 500 ml, roer tot opgelost.
Stel de pH in op 7,2 met behulp van 1M NaOH.
Bewaar bij 4°C
20
Preparatie van het retina: Laat de ogen ontdooien totdat ze zacht zijn en totdat het hoornvlies en de lens helder zijn. Terwijl het oog wordt ondersteund met het hoornvlies helemaal bovenaan, maak een kleine incisie door het conjunctiva onder het niveau van de iris. De incisie dient voldoende te zijn zodat het vocht kan ontsnappen door de snee. 25 Onder toepassing van een fijne schaar, knip rond de comea zodat deze kan worden opgetild als een flap. Onder toepassing van een kleine haak, grijp de lens en trek deze voorzichtig uit zijn baan, waarbij men ervoor dient te zorgen dat men het retina niet tegelijkertijd uittrekt. Laat het retina uitzichzelf naar de onderkant van de baan zakken. Til het retina voorzicht op en lokaliseer de optische zenuw. Snij de optische 30 zenuw door en breng het retina over naar een klein schaaltje dat enkele ml homogenisatiebuffer bevat. Laat het retina voorzichtig op het oppervlak van de buffer drijven en verwijder al het klaarblijkelijk gepigmenteerde materiaal uit de iris. Plaats het retina in een tweede schaaltje met schone buffer voor het verwijderen van de laatste 86 sporen pigment en breng vervolgens over naar een Coming Costar centrifugebuisje van 50 ml (Sigma) en bewaar op ijs.
PDE6-isolatie en zuivering uit retina: Zorg voor 2 ml van de homogenisatiebuffer per 5 runder-retina en 1 ml per retina voor hond en mens. Homogeniseer met behulp van een manuele homogeniseerinrichting met 3 bursten van 5 seconden, onder koelen met ijs tussen iedere burst. Filter het homogenaat door twee lagen chirurgisch gaas. Spin bij 4°C 60 minuten bij lOO.OOOg. Filter cytosol ofwel door een 0,22 μΜ Steril-D pack als er voldoende volume is ofwel door een 0,22 μΜ spuit-eindfilter (b.v. Millex®-GV). 10 Voor door FPLC (Pharmacia FPLC LKB/FRAC -100, Pharmacia) of verdeel desgewenst in kleine hoeveelheden en bewaar in vloeibare stikstof.
Werkwijze 2A: Alternatieve menseliike retina-PDE6-enzvm-inhibitie-scintillatie-nabiiheid-assav (SPAl 15
De remming van de PDE6-enzym-activiteit door een testverbinding kan eveneens worden gemeten volgens de in vitro assay van werkwijze IA, maar in plaats daarvan onder toepassing van semi-gezuiverd PDE6-enzym dat is geïsoleerd uit menselijk, rund- of hond-retina in plaats van PDE5-enzym. Deze assay meet de PDE6-IC50-20 waarde voor de testverbinding (d.w.z. de concentratie van de testverbinding die vereist is voor het met 50% remmen van de door PDE6-enzym gekatalyseerde hydrolyse van [3H]cGMP tot het 5' nucleotide [3H]GMP ten opzichte van de activiteit van niet geremde controles). [3HJGMP bindt aan yttriumsilikaat-SPA-korrels en wordt gedetecteerd door scintillatie-tellen.
25
Werkwijze 3: Menseliike recombinant-PDEll-enzvm-inhibitie-scintillatie-nabiiheid-assav (SPA)
De remming van de PDE11-enzym-activiteit door een testverbinding kan worden 30 gemeten volgens de in vitro assay van werkwijze 1, maar in plaats daarvan onder toepassing van PDE11-enzym dat tot expressie is gebracht in Sf9-insektencellen in plaats van PDE5-enzym. Deze assay meet de PDE 11-ICso-waarde voor de testverbinding (d.w.z. de concentratie van de testverbinding die vereist is voor het met 87 50% remmen van de door PDE11-enzym gekatalyseerde hydrolyse van [3H]cGMP tot het 5' nucleotide [3H]GMP ten opzichte van de activiteit van niet geremde controles). [3H]GMP bindt aan yttriumsilikaat-SPA-korrels en wordt gedetecteerd door scintillatie-tellen.
5 PDE11-expressie en zuivering: fa) Expressie: Infecteer 200 ml Sf9-insektencellen (Invitrogen, Carlsbad, CA) (lxl06/ml) met een veelheid van infectie van 2 onder toepassing van een baculovirus-10 expressievector welk getransponeerd PDE-11A1 (SEQ ID NO: 1) (pFastBac-systeem, Invitrogen) (4x107 pfu/ml) bevat. Incubeer 48 uur bij 27°C onder schudden bij 220 opm. Oogst de geïnfecteerde cellen door 10 minuten bij 4°C bij 2000 opm te pelletiseren. Bewaar de pellet van de geïnfecteerde cel bij -80°C totdat men gereed is voor zuivering. Hersuspendeer de ontdooide celpellets tot lxlO7 cellen/ml (= 20 ml 15 buffer welke bestaat uit 20 mM Hepes (pH 7,2), 1 mM EDTA, 20 mM sucrose, 150 mM NaCl en protease-inhibitor-cellen). Meng grondig en bewaar iö minuten op ijs. Sonifïceer 5x5 seconden, op ijs. Spin het mengsel 10 minuten bij 4°C bij 12.000 opm in SS34. Bewaar de onoplosbare pellet bij -80°C en ga verder met de zuivering van het oplosbare materiaal.
20 (b) Zuivering: Bereid de kolom (diameter 1,0 cm, Kontes) voor door de lege kolom twee keer met TBS te spoelen. Men vervolgens korrels (Anti-FLAG M2 Agarose, Sigma) met TBS en voeg toe aan de kolom - laat de korrels bezinken. Was de kolom met 3 kolomvolumes 0,1M glycine (pH 3,5). Was de kolom vervolgens met 5 25 kolomvolumes TBS (laat niet opdragen). Voer het extract toe aan de kolom en laat het extract binnengaan door vloeien onder invloed van de zwaartekracht. Voer de doorstroming opnieuw toe. Was de kolom met 15 kolomvolumes TBS. Elueer het eiwit met 5 x 1 ml hoeveelheden FLAG-peptide (Sigma) (d.w.z. 100 ug/ml in TBS). Elueer het resterende eiwit met 1 ml 0,1M glycine en voeg onmiddellijk 25 μΐ 1M Tris pH8 30 toe om te neutraliseren.
Werkwijze 3A: Alternatieve menseliike recombinant-PDEl 1-enzvm-inhibitie- scintillatie-nabijheid-assav (SPA1) 88
De remming van de PDEll-enzym-activiteit door een testverbinding kan ook worden gemeten volgens de in vitro assay van werkwijze IA, maar in plaats daarvan onder toepassing van PDE11-enzym dat tot expressie is gebracht in Sf9-insektencellen 5 in plaats van PDE5-enzym. Deze assay meet de PDE11-IC50-waarde voor de testverbinding (d.w.z. de concentratie van de testverbinding die vereist is voor het met 50% remmen van de door PDE11-enzym gekatalyseerde hydrolyse van [3H]cGMP tot het 5' nucleotide [3H]GMP ten opzichte van de activiteit van niet geremde controles). [3HJGMP bindt aan yttriumsilikaat-SPA-korrels en wordt gedetecteerd door 10 scintillatie-tellen.
De carboxypiperidine-verbinding werd getest volgens werkwijze 2, werkwijze 2A, werkwijze 3 en werkwijze 3A. De overeenkomende PDE6- en PDEII-IC50-waarden die zijn gemeten worden vermeld in tabel E.
Tabel E
Testnr. Werkwijze 2: Werkwijze 2A: Werkwijze 3: Werkwijze 3A: PDE6IC50 PDE6IC50 PDE11 IC50 PDE11 IC50 (nM) (nM) (nM) (nM) 1 4|Ö1 5A2 ï%5 14^3 ~2 p9 2^43 2ÖÖ 16^5
1 4^88 ÏM
_ __ __
~5 5/74 2M
~6 3/72 19^6
Gemiddeld: 3/74 Ï9£ Ï9J
15
Verbindingen die eerder zijn beschreven in de voorbeelden van W02004096810 werden getest volgens werkwijze 2, werkwijze 2A, werkwijze 3 en werkwijze 3A. De overeenkomende PDE6- en PDE11-IC50-waarden die zijn gemeten worden vermeld in tabel F.
20 89
Tabel F
W02004096810 Werkwijze 2: Werkwijze 2A: Werkwijze 3: Werkwijze 3A: voorbeeld nr. PDE6IC50 PDE6IC50 PDE11 IC50 PDE11 IC5o (nM) (nM) (nM) (nM) "245 250 390 ”246 657 4320 ”248 %92 3Ï6 "249 STÏÖ H9Ö ~25Ö 221 3Ï2Ö ”251 9^51 1862 ”252 307 874 ”253 ÏÖÖ 312 ’ ”254 Ï88 2880 ”255 207 937 "256 275 913 "258 198 215 ”259 204 199 "261 5M ÏTÖ 426 585 “262 47/7 663 471 6Ö8 ”263 253 3Öf 316 384
Extra assays die toegepast kunnen worden voor het evalueren van de werkzaamheid van een testverbinding omvatten werkwijze 4, werkwijze 4A, werkwijze 5 5 en werkwijze 6, die hierna worden beschreven:
Werkwijze 4: Aortaring-assav
Een ex vivo assay kan worden toegepast voor het meten van de directe 10 ontspanning van de aortaring van een rat die is blootgesteld aan een testverbinding. Zoals hierna meer in het bijzonder wordt beschreven wekt een testverbinding die de PDE5-activiteit remt een ontspanning op van de aortaring door het versterken van het cGMP-signaal (d.w.z. door het remmen van de door het PDE5-enzym gekatalyseerde 90 hydrolyse van cGMP tot GMP) dat wordt opgewekt als de aortaring wordt blootgesteld aan een stabiele exogene stikstofoxide-donor, zoals diethyltriamine NONOaat (diazen-l-ium-l,2-diolaat, ook bekend als "DETA-NO"). De assay meet de ECso-waarde voor de testverbinding (d.w.z. de concentratie van de testverbinding die 50% van de 5 maximaal mogelijke effectieve respons voor de testverbinding geeft).
Mannelijke Sprague-Dawley-ratten (250-350 g) worden beademd met behulp van CC>2-gas en hun thorax-aorta's worden voorzichtig uitgesneden en in Krebs-buffer geplaatst. De aorta's worden vervolgens voorzichtig vrij gesneden van bindweefsel en verdeeld in 8 secties, ieder met een lengte van 3-4 mm.
10 Aortaringen worden tussen evenwijdige draden van roestvast staal in een weefselbad van 15 ml met watermantel (37°C) onder een rustspanning van 1 gram gesuspendeerd. De spanning wordt gemeten onder toepassing van isometrische spanningsopnemers en opgetekend onder toepassing van een Ponemah-weefselplatfomsysteem. Elk preparaat laat men ten minste 60 minuten equilibreren 15 voordat de verbinding wordt getest. Tijdens deze periode worden de weefsels tevens geïncubeerd met 200 μΜ NG-monomethyl-L-arginine ("L-NMMA") en werd het incubatiemedium iedere 15 tot 20 minuten vervangen (L-NMMA wordt toegevoegd na iedere wasbeurt de uiteindelijke concentratie in ieder weefselbad op 200 μΜ te houden).
20 Na de equilibratieperiode worden de basislijn-spanningen voor ieder weefsel opgetekend. De vasoconstrictor-respons op fenyleferine (1 μΜ) wordt bepaald en als de respons op fenyleferine een maximum bereikt wordt vervolgens de vasculaire reactiviteit bepaald door een uitdaging met acetylcholine (1 μΜ). Na nog een uitspoelperiode wordt een tweede basislijn-waarde opgetekend na het toevoegen van de 25 vasoconstrictor noradrenaline (25 nM) aan ieder bad en het incuberen van de weefsels gedurende een periode (ongeveer 15 minuten) die voldoende is zodat de weefsels een stabiele tint kunnen bereiken. Een exogene stikstofoxide-impuls wordt toegevoerd onder toepassing van de stabiele stikstofoxide-donor, DETA-NO. De concentratie van DETA-NO wordt getitreerd (cumulatief in hoeveelheden van een halve log) voor het 30 bereiken van ongeveer 5 tot 15% ontspanning van de door noradrenaline opgewekte preconstrictie. Cumulatieve concentratie-respons-krommen worden geconstrueerd in een enkele ring, gewoonlijk onder toepassing van 5 doses/ring en 15 minuten wachten tussen iedere toevoeging.
91
Werkwijze 4A: Alternatieve aortaring-assav
Werkwijze 4 kan worden gemodificeerd voor het verschaffen van een alternatief 5 protocol voor het meten van de directe ontspanning van aortaringen van een rat die zijn blootgesteld aan een testverbinding. Deze alternatieve werkwijze varieert van werkwijze 4 zoals hierna wordt beschreven:
Voor de alternatieve werkwijze wordt het endotheel eerst verwijderd door het lumen van het vat tussen de vingers samen te wrijven voordat de ringen worden bereid 10 (kale ringen). De rustspanning wordt ingesteld op 2 gram en de vasoconstrictor-respons op een maximale concentratie van fenyleferine (1 μΜ) wordt bepaald, gevolgd (na een uitspoelperiode) door twee verdere blootstellingen aan 300 nM fenyleferine. Het concentratie-respons-verband op noradrenaline wordt in ieder weefsel over een concentratietraject van 0,1 tot 300 nM geconstrueerd. Na nog een uitspoelperiode laat 15 men de weefsels samentrekken met een EC^-concentratie van noradrenaline voor het testen van de verbinding.
Werkwijze 5: Culex™-assav 20 Het effect van een testverbinding op de systemische arteriële bloeddruk kan worden geëvalueerd in een bewust pre-gecannuleerd spontaan hypertensief rat ("SHR") model. Deze assay wrdt uitgevoerd onder toepassing van een geautomatiseerd bloedmonstemeem ("ABS") systeem. Het Culex™ ABS-systeem (Bioanalytical System, Inc., West Lafayette, IN) omvat een laptop-computer, vier controle-eenheden 25 en metabolische kooien. Dit ABS-systeem maakt het mogelijk dat meerdere bloedmonsters worden enomen bij een enkele rat zonder dat dit onnodige spanning veroorzaakt voor het dier. Verder maakt het ABS-systeem het mogelijk dat urinemonsers worden verzameld, die mogelijk gebruikt kunnen worden voor het identificeren van biomarkeermiddelen. Via deze benadering worden werkzaamheids-30 en standaard farmacokinetische onderzoeken tegelijkertijd uitgevoerd bij de bewuste, niet beperkte SHR-ratten voor het definiëren van het verband tussen de plasma-vrije medicamentconcentratie of (een) mogelijk(e) biomarkeermiddel(en) en het farmacologische effect (afname van de gemiddelde arteriële bloeddruk).
92 SHR-ratten die 12 tot 16 weken oud zijn, die ongeveer 300 g wegen, ondergaan een chirurgische cannulatie van beide vena jugularis en de rechter halsslagader. Na chirurgisch herstel worden de dieren in de Culex™ kooien geplaatst en vastgebonden aan een op beweging reagerende arm met een sensor welke de kooibeweging regelt als 5 het dier beweegt om te voorkomen dat de catheters worden gedraaid. Er worden verbindingen aangebracht tussen de rechter jugulaire catheter en de Culex™ steriele leiding die bedoeld is voor het nemen van bloedmonsters, en de linker jugulaire catheter voor het toedienen van de verbinding, en de catheter in de rechter halsslagader wordt verbonden met een drukopnemen voor het volgen van de bloeddruk. Om de 10 catheters vrij te houden wordt de rechter jugulaire cannule op de "gaan" functie van de Culex gehouden, welke de catheter iedere 12 minuten of tussen de bemonsteringsgebeurtenissen met 20 μΐ heparine-zoutoplossing (10 eenheden/ml) spoelt, en wordt de linker jugulaire cannule gevuld met heparine-zoutoplossing (20 eenheden/ml). Het vrij zijn van de cannule van de rechter halsslagader wordt in stand 15 gehouden door een langzame infusie van hepraine-zoutoplossing, ofwel direct in de uitstekende leiding als de bloeddruk niet wordt opgetekend ofwel via de drukopnemen tijdens het volgen van de bloeddruk. Men laat de dieren ten minste twee uur acclimatiseren voordat de verbinding wordt geëvalueerd. De testverbinding kan intraveneus of via een orale sonde worden toegediend. Bloedbemonsteringsprotocollen 20 (bemonsteringstijd en -volume) worden geprogrammeerd met behulp van de Culex™ software. De totale hoeveelheid bloed die wordt genomen bij ieder dier bedraagt niet meer dan 750 μ1/24 uur en 10 ml/kg binnen twee weken. Hartslag, bloeddruk en medicamentconcentratie worden gevolgd. De systemische arteriële bloeddruk en de hartslag worden opgetekend met PONEMAH (Gould Instrument System, Valley View, 25 OH), een drukopnemer via een gegevensopneemsysteem voor het optekenen van bloeddruk en hartslag, gedurende 6 tto 24 uur gebaseerd op een experimenteel protocol. De gemiddelde arteriële bloeddruk (primair eindpunt) wordt geanalyseerd voor het bepalen van de werkzaamheid van de verbinding.
De bloedmonsters worden geanalyseerd voor het meten van de plasma-30 medicamentconcentratie, onder toepassing van de LC/MS/MS-werkwijze die hierna wordt beschreven, en voor het evalueren van mogelijke biomarkeermiddelen.
LC/MS/MS-werkwiize 93
Monsterbereiding: Plasma-monsters (50 μΐ onbekend, controle of blanco) worden gemengd met 10 μΐ acetonitril:water of een standaardoplossing van de testverbinding en 150 μΐ interne standaardoplossing (100 ng/ml van de testverbinding in acetonitril).
5 Het mengsel wordt 5 min bij 3000 opm gecentrifugeerd en 125 μΐ van de supematans wordt overgebracht naar een plaat met 96 putjes. Het oplosmiddel wordt verdampt onder een stroom stikstof en het residu wordt gereconstitueerd met 80 μΐ acetonitril/0,1% waterig mierenzuur (20:80 v/v).
Een volume van 20 μΐ van ieder bereid monster wordt geïnjecteerd in een 10 Phenomenex Synergi 4 pm MAX-RP 2,0 x 75 mm kolom en bij 0,4 ml/min onder toepassing van gradiënt-elutie van 0,1% waterig mierenzuur (mobiele fase A) tot acetonitril (mobiele fase B) geëlueerd. Het gradiënt-programma bestaat uit een aanvankelijke toevoer van 90% mobiele fase A, gevolgd door een lineaire gradiënt tot 75% mobiele fase B van 0,2 tot 1,15 min na injectie en gehouden op 75% mobiele fase 15 B tot 2,0 min. De mobiele fase werd lineair terug veranderd tot 90% mobiele fase A van 2,00 tot 2,10 minuten en de volgende injectie vond piaats op 3,00 min. De detectie werd uitgevoerd door massaspectrometrie onder toepassing van positieve ion-elektrospray (ESI) met meervoudig reactie-volgen van de overgangen m/z 454,00 (MH+ de testverbinding) —► m/z 408,00, m/z 466,24 (MH+ de testverbinding) —* 20 409,33. De spanning van de ionspray wordt ingesteld op 5000. Een calibratiekromme wordt geconstrueerd door toepassing van piekoppervlakverhoudngen van het analyt ten opzichte van de interne standaard. Object-concentraties worden bepaald door omgekeerde voorspelling uit hun piekoppervlakverhoudingen tegen de calibratikromme.
25
Werkwijze 6: Implantatie van radiozenders en erop volgend onderzoek van de bloeddruk door telemetrie bii spontaan hvpertensieve ratten
Het effect van een testverbinding op de systemische arteriële bloeddruk kan 30 onder toepassing van telemetrie worden geëvalueerd in een sponaan hypertensief rat ("SHR") model. SHR-ratten worden verdoofd met isofluraangas via een isofluraan-verdovingsmachine welke is gecalibreerd voor het afgeven van isofluraan over een traject van percentages terwijl zuurstof door de inwendige kamers van de machine 94 wordt gevoerd. De dieren worden in een inductiekamer geplaatst en krijgen 4-5% isofluraan toegediend voor het bereiken van een chirurgisch verdovingsniveau. Ze worden vervolgens via een neuskap op 1-2% gehouden tijdens de chirurgische procedure, waarbij isofluraan wordt afgegeven via een kleinere isofluraan-5 verdovingsinrichting op de operatietafel.
Na de toediening van de verdoving krijgen de ratten onder toepassing van aseptische werkwijzen zenders geïmplanteerd met in de handel verkrijgbare steriele radiotelemetrie-eenheden (Data Sciences, International, Roseville, MN 55113-1136). Voor de operatie wordt het operatiegebied geschoren, gewassen met een antimicrobiële 10 oplossing van het merk Dial™ (welke 4% chloorhexidinegluconaat en 4% isopropylalcohol bevat) gevolgd door een applicatie van een jood (10%) sproei-oplossing. Er wordt een incisie van 2,5 tot 3,0 cm uitgevoerd en de radiotelemetrie-eenheden worden geïmplanteerd in de maag, met de punt van de catheter ingevoegd in de abdominale aorta. Er worden kleine Weitlaner-wondhaken toegepast voor het 15 vasthouden van zacht weefsel. Een sectie van 1 cm van de abdominale aorta wordt gedeeltelijk opengesneden en die sectie wordt kort afgekiemd, doorboord met een naald van 21 gauge en de catheterpunt van de zender wordt ingevoegd in het vat en bevestigd met een enkele 4.0 zijden hechting die wordt verankerd aan de ernaast gelegen psoas-spier. Het zenderlichaam wordt vervolgens ingevoegd in de buikholte en tegelijkertijd 20 bevestigd aan de abdominale spierwand onder sluiting met een lopende 4.0 zjden hechting. De huidlaag wordt gesloten met een subdermale continue 4.0 absorbeerbare hechting. Een subcutane (s.c.) toediening van macaine gevolgd door een topikale applicatie van jood wordt tijdens het sluiten in respectievelijk rond de hechtlijn toegediend. Alle ratten kregen een post-operatieve injectie van buprenorfine @ 0,05 25 mg/kg s.c. voordat ze weer bij bewustzijn komen. Een gebruikelijk toedieningsvolume voor een rat van 0,300 kg bedraagt 0,050 ml. De ratten moeten volledig hersteld zijn van hun verdoving van de operatie voordat buprenorfine wordt toegediend. Ze krijgen vervolgens dezelfde dosis een keer per dag gedurende 2 opeenvolgende dagen, tenzij het dier laat zien dat het grote post-operatieve pijn heeft.
30 Na de operatie worden de ratten teruggeplaats in hun kooien e individueel gehuisvest in kooien met een vaste bodem met een ondergrond van papier. Men staat een periode van niet minder dan 7 dagen toe voor het herstel voordat wordt begonnen met de experimentele werkwijzen. Er is waargenomen dat de ratten gewoonlijk 95 hypertensief zijn gedurende verscheidene dagen na de operatie en terugkeren naar "normotensieve" niveaus op ongeveer de zevende dag na de operatie. Ze krijgen gedurende de experimentele tijdslijn ad libitum standaard rattenvoer en water.
De testverbindingen worden intragastricaal (i.g.) via een sonde toegediend, onder 5 toepassing van een 2½ inch lange, 18 gauge sonde-naald van roestvat staal met een rond uiteinde. Voor een enkelvoudige dagelijkse toediening bedraagt het beoogde volume 3,33 ml/kg i.g. Het toedieningsvolume voor de testverbinding bedraagt ongeveer 1 ml/rat. Het medium waarin de testverbinding wordt toegediend is methylcelluloe (0,5%) + Tween 80 (0,1%) in 50 mM citraatbuffer, pH = 5,0.
10 De gegevens van de bloeddruk worden verkregen onder toepassing van het gegevensopneemprogramma (versie 3.0) van Data Sciences International. Bloeddrukmonsters worden met intervallen van 1,5-3 minuten gedurende 5 seconden, 24 uur per dag gedurende het gehele onderzoek opgetekend. Deze gegevens worden met gegevensanalysesoftware van Data Science verwerkt tot gemiddelde van een 15 gewenst tijdsinterval. Alle andere gegevensreductie wordt uitgevoerd in spreadsheets
____* Λ1_____.Cl T7____iTM
vaii ivmausuu ilauci O. Toxiciteitsassavs 20 Werkwijze 7: Micronucleus-assav
Een in vitro micronucleus-assay kan worden toegepast voor het bepalen van het mutagene vermogen van een testverbinding. Deze assay detecteert chromosoom-afwijkingen die het gevolg zijn van blootstelling aan een testverbinding door het meten 25 van de vorming van kleine, aan membraan gebonden DNA-fragmenten zoals micronuclei in het cytoplasma van interfase-cellen.
De assay wordt uitgevoerd onder toepassing van ovariumcellen van een Chinese hamster (CHO-cellen) onder verschillende testomstandigheden bij afwezigheid en aanwezigheid van metabolische activering. De overeenkomst in resultaten tussen deze 30 onderzoeksassay en in vitro cytogenetica bedraagt ongeveer 85%. Direct (-S9) testen wordt uitgevoerd onder toepassing van continue behandelingen van 24 uur of 3 uur, terwijl testen met metabolische activering (+S9) een behandeling van 3 uur omvat. Clastogeniciteit wordt aangegeven door een toename van het aantal microgenucleëerde 96 cellen in de eerste interfase na blootstelling (in door cytokinese geblokkeerde bigenucleëerde cellen). De resultaten worden vergeleken met het niveau van cytotoxiciteit (gemeten door het gehalte van bigenucleëerde cellen) welke wordt geproduceerd door een testverbinding. Om de geldigheid van de test te demonstreren 5 dienen negatieve (met medium behandelde) en positieve (een bekende responder) controles te reageren binnen vastgestelde historische trajecten.
Negatief - Een negatief resultaat identificeert geen genotoxisch gevaar dat wordt gedefinieerd door het specifieke eindpunt van de assay (ex. negatieve in vitro 10 micronucleus). Een testverbinding die een negatieve respons vertoont heeft niet voldaan aan de specifieke evaluatiecriteria voor de assay, welke een of beide van de volgende kan omvatten: 1) een reproduceerbare, van de concentratie afhankelijke toename van het specifieke assay-eindpunt bij vergelijking met een negatieve (medium) controle en/of 2) een of meer testconcentraties die een minimale voudige toename 15 bereiken van het specifieke eindpunt ten opzichte van controles.
Positief - Een positief resultaat identificeert een genotoxisch gevaar dat wordt gedefinieerd door het specifieke eindpunt van de assay (ex. positieve in vitro micronucleus). Een testverbinding die een positieve respons vertoont heeft voldaan aan 20 de specifieke evaluatiecriteria voor de assay, welke een of beide van de volgende kan omvatten: 1) een reproduceerbare, van de concentratie afhankelijke toename van het specifieke assay-eindpunt bij vergelijking met een negatieve (medium) controle en/of 2) een of meer testconcentraties die een minimale voudige toename bereiken van het specifieke eindpunt ten opzichte van controles.
25
Twijfelachtig - Een twijfelachtig resultaat wordt gereserveerd voor situaties waarbij de testverbinding is geëvalueerd in een geldige assay-test of -tests (d.w.z. assay-aanvaardbaarheidscriteria bevredigend), maar geen negatief of positief resultaat vertoont zoals wordt gedefinieerd door vaststaande evaluatiecriteria. Dit kan de 30 aanwezigheid van een zwak positieve respons uidrukken welke van geval tot geval extra herhaald testen of uiteindelijk bevestigend testen vereist.
97
Onbeslist - Een onbeslist resultaat wordt gereserveerd voor situaties waarbij de testverbinding is geëvalueerd in een ongeldige assay-test (d.w.z. assay-aanvaardbaarheidscriteria onbevredigend vanwege technische redenen, ex. negatieve of positieve controles reageren niet geschikt). Herhaald testen wordt aanbevolen voor het 5 vaststellen van een geldig resultaat van de assay-test.
De carboxypiperidine-verbinding werd getest volgens werkwijze 7 en gaf een twijfelachtig resultaat.
Verbindingen die eerder zijn beschreven in de voorbeelden van W02004096810 10 werden getest volgens werkwijze 7. De overeenkomende resultaten van de micronucleus-assay worden vermeld in tabel G.
Tabel G
W02004096810 Werkwijze 7: voorbeeld nr. micronucleus-assay 261 positief 262 twijfelachtig 263 positief
Extra assays die toegepast kunnen worden voor het evalueren van de toxiciteit 15 van een testverbinding (b.v. als de micronuclues-assay een twijfelachtig resultaat geeft) omvatten werkwijze 8, werkwijze 9 en werkwijze 10, die hierna worden beschreven:
Werkwijze 8: In vitro structurele chromosoom-aberratie bii menseliike peiferale lvmfocvten 20
Een in vitro structurele chromosoom-aberratie-assay kan worden toegepast voor het evalueren van een testverbinding op het vermogen daarvan tot het induceren van structurele en numerieke chromosoom-aberraties bij aanwezigheid en afwezigheid van zoogdier-metabolische activering bij menselijke periferale lymfocyten.
25 Concentratieberekeningen zijn gebaseerd op de overeenkomende bestanddeelfactor van 1,000. De testverbinding wordt opgelost en verdund in DMSO, 98 dat dient als de mediumcontrole in een volume dat gelijk is aan het volume dat wordt gebruikt voor het afgeven van de testverbinding (1% uiteindelijke concentratie).
Gehepariniseerd menselijk periferaal veneus bloed van een gezonde mannelijke vrijwilliger wordt toegevoegd aan kweekmedium, gevolgd door de toevoeging van 5 fytohemagglutinine M (Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri) voor het stimuleren van de celdeling van lymfocyten. De primaire kweken worden ten minste 46 uur geïncubeerd voor behandeling met de testverbinding.
De volgende positieve controle wordt toegepast:
Tabel 1. Positieve controles
Positieve Metabolische Testverbinding Concentratie controle activering incubatietijd (uur) (pg/ml)
Cyclofosfamide (CP) + 3 10
Mitomycine C (MMC) - 3 0,4
Mitomycine C (MMC) - 24 0,1 10
De volgende behandelingen worden toegepast:
Tabel 2. Behandelingsomstandigheden
Behandeling Testverbinding Metabolische Oogsttijd incubatietijd (uur) activering (S9) (uur) (1) 3 uur +S9 3 + 24 (2) 3 uur - S9 3 - 24 (3) 24 uur - S9 24 - 24
De volgende toedieningsgehaltes worden gekozen voor de assay: 15
Tabel 3. Toedieningsgehaltes Behandeling Concentraties (pg/ml) (1) 3 uur +S9 100,200,250, 300,400, 500, 600, 700 (2) 3 uur - S9 100,200, 250, 300,400, 500, 600, 700 (3) 24 uur - S9 50,75,100,200,250,300,350,400 99
Enkelvoudige kweken van de cellen voor iedere concentratie en een medium-controle worden toegevoegd. Celkweken worden voor het oogsten gedurende 2 uur blootgesteld aan 0,1 μg/ml Colcemid® (Ciba, Zwitserland). De cellen worden geoogst door centrifugeren, opgezwollen in een hypotone oplossing en vervolgens gefixeerd in 5 een methanol: ij sazij nzuur-fixeeroplossing. De gefixeerde celsuspensie wordt aangebracht op een natte microscoopglaasjes, gedroogd en gekleurd met Giemsa. Voor iedere concentratie van het medicament dat wordt getest worden ten minste 2 glaasjes per kweek bereid.
De cytotoxiciteit wordt gemeten door een bepaling van de chromosoom-10 morfologie en de remming van mitose (mitose-index). Een mitose-index wordt bepaald voor alle behandelingsomstandigheden door het scoren van 1000 cellen per omstandigheid voor het gehalte van de metafase-cellen.
De maximale concentratie die wordt gekozen voor het scoren van chromosoom-aberraties is de hoogste dosis waarbij een voldoende aantal analyseebare metafase-15 cellen wordt verwacht. Indien mogelijk onderdrukt de hoogste dosis die wordt gekozen de mitose-index met ongeveer 50%, maar niet meer dan 70% afname.
Ten minste een concentratie van iedere testomstandigheid wordt gekozen voor analyse, samen met de gelijktijdige medium en positieve controle. De glaasjes worden niet op een blinde wijze geanalyseerd. Op aanwijzing van de leider van het onderzoek 20 kunnen extra testconcentraties worden geëvalueerd nadat de aanvakelijke evaluatie is voltooid, voor het verschaffen van een verdere verduidelijking van een effect (d.w.z. een toename of afwezigheid van aberraties).
De hoogste testconcentratie die wordt gekozen voor analyse dient te voldoen aan 1 van de volgende criteria: geeft ongeveer een 50% afname van de mitose-index, 25 vergeleken met de medium-controles, (2) toont bewijs van onvolledige oplosbaarheid, of (3) is equivalent aan de maximale concentratie van 5000 pg/ml of 10 mM (welke lager is). Indien mogelijk worden aanvaardbare diploide metafase-cellen uit iedere kweek geëvalueerd op chromosoombeschadiging. Een uitzondering hierop is een schijnbare toename van de frequentie van abnormale cellen tijdens het verzamelen van 30 de gegevens (d.w.z. > 10 abnormale cellen worden gescoord in de eerste 50 aanvaardbare cellen), in welk geval de verdere analyse wordt gestopt. Metafase-cellen die worden gekozen voor analyse moeten intact zijn (d.w.z. 46±2 chromosomen hebben) en hebben een minimum aan overlappende chromosomen. Daarnaast dienen de 100 chromosomen verlengd te verschijnen zodat de afzonderlijke armen en centromere gebieden eenvoudig geïdentificeerd kunnen worden. Iedere metafase-cel wordt geclassificeerd als normaal of abnormaal, waarbij het (de) type(s) en het aantal abnormaliteiten dat aanwezig is per cel worden opgetekend. Voor abnormale cellen 5 worden de stadium X en Y vemier-coördinaten van het glaasje opgetekend. Structurele chromosoom-aberraties worden geclassificeerd als chromatide-breuk (Ct brk), chromatide-ftagmenten (Ct Frg), chromatide-beschadiging, waaronder uitwisselingen, ringen, dicentrica en translocaties (R), chromosoom-breuken (CsBrk), chromosoom-fragmenten (Cs Frg) en meervoudige breuken (M). Daarnaast worden cellen met 10 verpulverde chromosomen (PV) verzameld in de totale aberratie-score. Cellen die gaten bevatten worden opgetekend maar niet opgenomen in de totale aberratie-score. Numerrieke chromosoom-aberraties worden bepaald voor iedere behandelingsomstandigheid en de gelijktijdige mediumcontroles door het evalueren van het aantal polyploide en endoregedupliceerde cellen. De polyploide-indices worden 15 verkregen door het scoren, indien mogelijk, van 1000 metafase-cellen/kweek onder het tabelleren van het aantal metafase-ceiien die poiypioide of endoregedupiiceerd zijn.
Een Fischer Exact eenzijdige test van het totale aantal aberrante cellen van iedere behandelgroep vergeleken met het totale aantal aberrante cellen van de negatieve controles wordt toegepast als de statistische analyse.5 Een p-waarde <=0,05 wordt als 20 statistisch significant beschouwd.
Een assay wordt als geldig beschouwd als aan de volgende criteria wordt voldaan: 1. Positieve controle induceert een statistisch significante toename van het percentage cellen met chromosoom-aberraties in vergelijking met de gelijktijdige mediumcontroleen de geïndiceerde frequenties zijn vergelijkbaar met epubliceerde of 25 historische gegevens.
2. Mediumcontrole-kweken hebben ^3% cellen met aberraties of een percentage dat als vergelijkbaar wordt beschouwd met gepubliceerde of historische gegevens.
3. Ongeveer 50% remming van de mitose-index wordt waargenomen bij het hoogste toedieningsniveau. Deze eis geldt niet voor testverbindingen waarvoor geen schijnbare 30 cytotoxiciteit kan worden bereikt bij de maximaal oplosbare concentratie of de hoogst toegestane dosis.
101
Werkwijze 9: Zever dapen durend oraal sondevoeding-toxiciteitsonderzoek bij de mannelijke SD/IGS-rat
De toxiciteit van een testverbinding kan worden geëvalueerd in een ratmodel. Dit 5 onderzoek bepaalt de mogelijke toxiciteit van en systemische blootstelling aan testverbindingen, indien toegediend door orale sondevoeding, een keer per dag, gedurende 7 opeenvolgende dagen, aan 6 tot 8 weken oude mannelijke Charles River SD/IGS-ratten die tussen 175 g en 200 g wegen. Dit onderzoek wordt uitgevoerd onder toepassing van het Xybion Path/Tox-systeem (Xybion Medical Systems Corporation, 10 Cedar Knolls, NJ).
De testverbinding wordt een keer gedurende 7 dagen door sondevoeding in een volume van 10 ml/kg lichaamsgewicht oraal toegediend. De testverbinding wordt toegediend aan 3 groepen ratten (n=5) , die doses van 30 mg/kg/dag, 100 mg/kg/dag respectievelijk 50 mg/kg/dag krijgen. Een controlegroep (n=5) krijgt medium (0,5% 15 methylcellulose (w/v) en 0,1% polysorbaat 80 (v/v) in 50 mM fosfaatbuffer). De orale route wordt toegepast omdat dit de beoogde blootsteUingsroute bij mensen is. De desbetreffende hoeveelheid testverbinding wordt gesuspendeerd in 0,5% methylcellulose (w/v) en 0,1% polysorbaat 80 (v/v) in 50 mM citraatbuffer. De pH van de toedieningssuspensie wordt tussen 3 en 9 gehouden.
20 Bij ieder dier wordt op 1, 3, 8 en 4 uur na het toedienen op dag 1 bloed afgenomen. Urine wordt gedurende ongeveer 24 uur verzameld voor metabolische analyse. Overlevens- en moribunditeitswaamemingen worden een keer per dag gedurende de pre-behandelingsperiode uitgevoerd. Klinische tekens worden dagelijks, 1-3 uur na het toedienen geobserveerd. De dieren worden na 7 dagen geëuthaniseerd 25 via ontbloeden. Dieren die door worden gevonden worden ingevroren en op het vroegst mogelijke moment (binnen werktijd) geautopseerd. Terminale lichaamsgewichten, bloedmonsters en orgaangewichten worden niet genomen bij dieren die dood worden gevonden. Moribunde/niet-geplande/geplande dieren die worden gedood worden onmiddelijk aan een autopsie onderworpen en lichaamsgewichten, bloedmonsters en 30 alle klinisch-pathologische monsters behalve urinemonsters worden genomen.
Verschillende weefsels (adrenaal, femurbot, hersenen, cecum, colon, duodenum, epididymis, hart, ileum, jejunum, nier, lever, pancreas, biceps-femoris-skeletspier, milt, maag, testis, thymus, schildklier, lumbaal ruggemerg en mesenterische lymfekleir) 102 worden gewogen, snel ingevroren, gekleurd en gefixeerd. Na macroscopisch onderzoek worden weefsels die zijn verzameld met uitgesproken abnormaliteiten bewaard in formaline. Alle weefsels die zijn verzameld met uitgesproken abnormaliteiten worden verwerkt en microscopisch onderzocht door de patholoog. Weefsels worden bij geknipt, 5 ingebed, verdeeld en geleurd met hematoxyline en eosine en worden naar inzicht van de patholoog microscopisch onderzocht door de patholoog. Botmerguitstrijkjes worden bereid en gekleurd met Wright-kleurstof. Voor het toelichten van de aard van de weefselverandering van een afzonderlijk dier wordt een extra weefselverzameling, verdeling, kleuring en microscopisch onderzoek uitgevoerd op verzoek van de 10 patholoog.
klinische waarnemingen, lichaamsgewichten, uitgsproken autopsie-waamemingen en histopathologische bevindingen worden direct ingevoerd in het Xybion Path/Tox-systeem.
15 Werkwijze 10: BioLum-Ames-genmutatie-assav
Een iSa/mone/Za-mutageniciteitstest (ook bekend als de Ames-tst) kan worden toegepast voor het bepalen van het mutagene vermogen van een testverbinding. Deze assay meet de mutatiesnelheid van bacteriën die worden blootgesteld aan een testverbinding. Zie 20 bijvoorbeeld Ames, B.N., Durston, W.E., Yamasaki, E. en Lee, F.D. (1973) Carcinogens are mutagens: a simple test system combining liver homogenates for activation and bacteria for detection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 70, 2281-2285). Sommige carcinogenen worden geactiveerd als ze enzymatisch worden omgezet in een elektrofiele species welke covalent kan binden aan DNA. Bij de Ames-assay worden 25 S9 (9000 g supematans) fracties bereid uit de levers van ratten die zijn voorbehandeld met fenobarbital (PB)/5,6-benzoflavon (BF) of Aroclor 1254 voor het induceren van een dergelijke medicament metaboliserende enzym-activiteit.
De BioLum-Ames-assay is een onderzoeksversie met een hoger debiet van de standaard bacteriële (Ames) genmutatie-assay. Om de geldigheid van de test te 30 demonstreren moeten negatieve (met medium behandelde) en positieve (een bekende responder) controles reageren binnen vaststaande historische trajecten.
103
Negatief - Een negatief resultaat identificeert geen genotoxisch gevaar zoals gedefinieerd door het specifieke eindpunt van de assay (ex. negatieve in vitro micronucleus). Een testverbinding welke een negatieve respons vertoont heeft niet voldaan aan specifieke evaluatiecriteria voor de assay, welke een of beide van de 5 volgende kunnen omvatten: 1) een reproduceerbare, van de concentratie afhankelijke toename van het assay-eindpunt in vergelijking met een negatieve (medium) controle en/of 2) een of meer testconcentralies die een minimum voudige toename van het specifieke eindpunt bereiken ten opzichte van controles.
10 Positief - Een positief resultaat identificeert een genotoxisch gevaar zoals gedefinieerd door het specifieke eindpunt van de assay (ex. positieve in vitro micronucleus). Een testverbinding welke een positieve respons vertoont heeft voldaan aan specifieke evaluatiecriteria voor de assay, welke een of beide van de volgende kunnen omvatten: 1) een reproduceerbare, van de concentratie afhankelijke toename van het assay-eindpunt 15 in vergelijking met een negatieve (medium) controle en/of 2) een of meer testconcentraties die een minimum voudige toename van het specifieke eindpunt bereiken ten opzichte van controles.
Twijfelachtig - Een twijfelachtig resultaat wordt gereserveerd voor situaties waarbij de 20 testverbinding is geëvalueerd in een geldige assay-test of -tests (d.w.z. assay- aanvaardbaarheidscriteria bevredigend), maar geen negatief of positief resultaat vertoont zoals wordt gedefinieerd door vaststaande evaluatiecriteria. Dit kan de aanwezigheid van een zwak positieve respons uidrukken welke van geval tot geval extra herhaald testen of uiteindelijk bevestigend testen vereist.
25
Onbeslist - Een onbeslist resultaat wordt gereserveerd voor situaties waarbij de testverbinding is geëvalueerd in een ongeldige assay-test (d.w.z. assay-aanvaardbaarheidscriteria onbevredigend vanwege technische redenen, ex. negatieve of positieve controles reageren niet geschikt). Herhaald testen wordt aanbevolen voor het 30 vaststellen van een geldig resultaat van de assay-test.
P. Farmacokinetisch/farmacodvnamisch onderzoek 104
Werkwijze 11; Enkelvoudige dosis farmacokinetica en orale biologische beschikbaarheid hij een mannelijke Sprague-Dawlev rat na intraveneuze en orale toediening 5 Een in vivo model kan worden toegepast voor het evalueren van de farmacoknetische eigenschappen van een enkele dosis en de absolute orale biologische beschikbaarheid van een testverbinding. Zoals hierna meer in het bijzonder wordt beschreven wordt een testverbinding ofwel intraveneus ofwel oraal in een kruis-onderzoek-ontwerp aan Sprague-Dawley (SD) ratten toegediend en worden de 10 verkregen farmacokinetische eigenschappen en orale biologische beschikbaarheid gemeten.
Mannelijke ratten krijgen een dosis van 2,0 mg/kg oraal (n=2) door sondevoeding als suspensie (0,5% methylcellulose/0,1% Tween 80 in gedestilleerd water) toegediend. Na een uitspoelperiode van 72 uur kregen dezelfde ratten een bolus in een dosis van 2,0 15 mg/kg intraveneus (n=2) als oplossing (70% PEG 400/20% 0,05 M citraatbuffer, pH 3/'lö% ethanol) toegediend. Seriële bloedmonsters (voor plasma) worden gedurende 24 uur na het toedienen voor iedere route bij iedere rat verzameld. Plasmaconcentraties van de testverbinding worden bepaald onder toepassing van een LC/MS/MS-werkwijze met een ondergrens van kwantificering (LLOQ) van 1,2 (voor -534) ng/ml. 20 Farmacokinetische parameters van een testverbinding worden bepaald uit de plasmaconcentratie-tijd-gegevens onder toepassing van niet-compartimentale werkwijzen.
LC/MS/MS: 1) kolom: Hyperso; AQUASIL C-18 2,1x20 mm, 3,0 pm; 2) Mobiele fase: waterig water met 0,1% mierenzuur, Organisch: acetonitril; lonisatie: +ESI (API 4000). 25 MRM: m/z 494,4 -► m/z 394,0 (voorbeeld 261 in W02004096810), m/z 509,44 — m/z 409,80 (voorbeeld 263 in W02004096810), m/z 495,33 —> m/z 395,20 (voorbeeld 262 in W02004096810). De detectiegrenzen zijn 0,12 ng/ml (voorbeeld 261 in W02004096810), 1,3 ng/ml (voorbeeld 263 in W02004096810) en 0,11 ng/ml (voorbeeld 262 in W02004096810).
30 Watson (versie 6.4.0.04) wordt toegepast voor het berekenen van de gemiddelde concentraties van de testverbinding, overeenkomende standaarddeviaties (SD) en het percentage variatiecoëfficiënt (%CV) en voor het bepalen van farmacokinetische parameters (verkregen volgens noncompartimentale werkwijzen) en bijbehorende 105 statistieken (gemiddelde, SD & CV%) indien van toepassing (omdat n=2, geen SD of CV berekend?).
Concentraties lager dan de bepalingsgrens (BLQ) worden vermeld als nul (0) en worden toegepast bij de evaluatie van gemiddelde concentraties en de bepaling van 5 AUC. De piek-plasmaconcentraties (cmax) en de tijd tot het bereiken van de piekconcentratie (tmax) worden direct uit de afzonderlijke plasmaconcentratie-tijd-profïelen opgetekend. De terminale log-lineaire fase van de plasmaconcentratie-tijd-kromme wordt geïdentificeerd door lineaire regressie van de gegevenspunten. De terminale halfwaarde (ti/2) wordt berekend als ln(2) gedeeld door de absolute waarde 10 van de helling van de terminale log-lineaire fase. Het oppervlak onder de plasmaconcentratie-tijd-kromme van tijd nul tot tijd van de laatste kwantificeerbare concentratie (t) [AUC(o-t)] wordt bepaald onder toepassing van de lineaire trapezoidale werkwijze. Het oppervlak onder de plasmaconcentratie-tijd-kromme van tijd nul tot oneindig [AUC(o**>)] wordt bepaald als AUC(0-t) plus het geëxtrapoleerde oppervlak. Het 15 geëxtrapoleerde oppervlak wordt bepaald dor het delen van de laatste waargenomen plasmaconcentraiie door de helling van de temuuaie log-lineaire fase. De systemiscne plasmaklaring (CL) wordt berekend als dosis/AUQo^o), terwijl het verdelingsvolume bij stationaire toestand (V,jss) wordt berekend als CL x MRT, waarbij MRT (gemiddelde verblijftijd) wordt gedefinieerd AUMQo-oo/ AUC(o-®). De absolute PO biologische 20 beschikbaarheid (F) wordt berekend als een verhouding van de voor de dosis genormaliseerde AUC(o-ao) van een afzonderlijk dier na PO-toediening tot de voor de dosis genormaliseerde AUC(o^) van het afzonderlijke dier na IV-toediening volgens het kruisonderzoek-ontwerp. De piek-plasmaconcentratie (cmax), de tijd tot het bereiken van de piekconcentratie (tmax), de terminale halfwaarde (ti/2), het oppervlak onder de 25 plasmaconcentratie-tijd-kromme van tijd nul tot oneindig [AUQo-*,)], het verdelingsvolume bij stationaire toestand (V^), de systemische plasmaklaring (CL) en de absolute PO-biologische beschikbaarheid (F) worden gegeven in tabel C.
De carboxypiperidine-verbinding werd getest volgens werkwijze 11 en de resultaten worden vermeld in tabel H. Verbindingen die eerder zijn beschreven in de 30 voorbeelden van W02004096810 werden getest volgens werkwijze 11. De resultaten voor deze verbindingen worden eveneens vermeld in tabel H.
•N
m «o o . ' o m o
Uh w m ^ \o Ό '6 „ w> cr) ris0'- VO ©“ CJ O — — Γ' vo CS «Λ Ti a g> —' v© «-· -o O «λ »— o > w O O VO «Λ ✓—\ /*-\ o 8 *3 o 3 γλ
2/ CN
X 3 O HH Γ- O
U 3 O O i-i t3- >-> ohuol^OOOO^riON *-L βΓ·-οσ\θτΐ-οοΐΛ(Ν <iw^ON»—'CMTifNmm
CN
_ o'
la -H
Sn 3 rn Tf^ <λ Ti Ln oc > > O v> v© O ι/Ί r^T Ti r»~>
(N
_ O
^ * η -H Γ" r> m o a 3 io o o m
—^ C 3 «N CX «S *N
+5 0 0 O o o o
O <N
T3 -H
* 3 o — _ g cib 'O <n « cn , F ö ro m r- o CJ w SN 00 ιοί --------- ö
"S
*a
CNrr»(N(NCS(NtN(N
ύ
Oh « 00 2 M Jy •o S ™ S o c
•sQwrSfNtN(N<NCNfNfN
I--------- 00 o>
^ V
s I
oi .£ a, .£ S, .£ B. .£ o, •I--,------— c Q> £ I 2 2 2 <u "C oo »—1 oo (N oo rn
C (U VOVOVOOSOO
3 00 0,λλ0ν<Ν^(Ν0ν<Ν «» .S 'p»c?2®2?2 » h § S § SJ § 8
T3 3 ί I § -8 § ΐ § -S
•2ü b 2 O o O o O o H > CJ>:>>:>>!>> 107 O. Biologische protocollen - Gezamenlijke toediening met een inhibitor voor het aneiotensine omzettende enzym
Werkwijze 12: SHR-rat-combinatiebehandeling 5
Er werd een onderzoek uitgevoerd voor het bepalen van het effect van de herhaalde orale toediening van de carboxypiperidine-verbinding op het verlagen van de bloeddruk en of gezamenlijke toediening van de carboxypiperidine-verbinding en de inhibitor voor het angiotensine omzettende enzym enalapril kan resulteren in een 10 verdere verlaging van de bloeddruk. Het onderzoek bestond uit het behandelen van spontaan hypertensieve ratten (SHR) die van telemetrie zijn voorzien zoals is beschreven in werkwijze F met de carboxypiperidine-verbinding (1 mg/kg een keer per dag oraal) en enalapril (0,007% in drinkwater) alleen en in combinatie gedurende 7 dagen (Figuur 1) (n=12/groep). De carboxypiperidine-verbinding verlaagde de 15 bloeddruk van een pre-toediening-basislijnwaarde in vergelijking met een met medium behandelde groep mei 11 ± 1 imnHg op dag 1. De verlaging van de bloeddruk werd in stand gehouden gedurende de periode van 7 dagen en blijft 9 ± 1 mmHg onder de pre-toediening-basislijn op dag 7.
Enalapril velaagde de bloeddruk eveneens van een pre-toediening-20 basislijnwaarde in vergelijking met een met medium behandelde groep met een maximale afname van 22 ± 2 mmHg op dag 7. De combinatie van de carboxypiperidine-verbinding plus enalapril verlaagde de bloeddruk meer dan de bloeddruk werd verlaagd door elk middel afzonderlijk op alle dagen.
Veranderingen in het urine-cGMP-mechanistische biomarkeermiddel werden 25 bepaald over een periode van 24 uur op dag 9. cGMP was verhoogd in een 0-24 uur urine-verzameling bij zowel de carboxypiperidine-verbinding- als de carboxypiperidine-verbinding + enalapril-combinatiegroepen in vergelijking met de met medium behandelde groep (Figuur 2) (n=12/groep).
2000291

Claims (21)

1. Verbinding, en farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbinding, met de structuur: 5 wu o
2. Verbinding volgens conclusie 1, welke een vrij zuur is.
3. Farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbinding volgens conclusie 1.
4. Farmaceutische samenstelling, welke een verbinding, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding, met de sructuur: \ HN-Ó /Ίι^ν N. I 15 0 > en en een farmaceutisch aanvaardbare drager omvat.
5. Farmaceutische samenstelling volgens conclusie 4, welke een vrij zuur van de 20 verbinding omvat. 2000291
6. Farmaceutische samenstelling volgens conclusie 4, welke een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding omvat.
7. Farmaceutische samenstelling volgens conclusie 4, welke verder een inhibitor 5 voor een angiotensine omzettend enzym omvat.
8. Farmaceutische samenstelling volgens conclusie 4, welke verder een angiotensine-II-receptor-antagonist omvat.
9. Verbinding, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, met de structuur: xS Nv I ΓνΛν^ ΟγΟΗ O . voor het behandelen van een aandoening bij een individu, waarbij de aandoening wordt 15 gekozen uit de groep die bestaat uit een cardiovasculaire aandoening, een metabolische aandoening, een aandoening van het centrale zenuwstelsel, een pulmonaire aandoening, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
10. Verbinding of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan volgens 20 conclusie 9, waarbij de aandoening een cardiovasculaire aandoening is.
11. Verbinding of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan volgens conclusie 10, waarbij de cardiovasculaire aandoening hypertensie is.
12. Verbinding of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan volgens conclusie 10, waarbij de cardiovasculaire aandoening hartfalen is. no
13. Verbinding of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan volgens conclusie 10, waarbij de cardiovasculaire aandoening angina is.
14. Combinatie van een verbinding, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout 5 daarvan, met de structuur: V.Q Λ ^ ην-Ήτ n*jT X ^ {^Kjoh o * en een inhibitor voor een angiotensine omzettend enzym voor het behandelen van een 10 aandoening bij een individu, waarbij de aandoening wordt gekozen uit de groep die bestaat uit een cardiovasculaire aandoening, een metabolische aandoening, een aandoening van het centrale zenuwstelsel, een pulmonaire aandoening, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
15. Combinatie van een verbinding, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout daarvan, met de structuur: \ »-<6 «u O i 20 en een angiotensine-II-receptor-antagonist voor het behandelen van een aandoening bij een individu, waarbij de aandoening wordt gekozen uit de groep die bestaat uit een cardiovasculaire aandoening, een metabolische aandoening, een aandoening van het Ill centrale zenuwstelsel, een pulmonaire aandoening, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
16. Toepassing van een verbinding, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout 5 daarvan, met de structuur: \ jó .ν“τΑν O bij de bereiding van een medicament voor de behandeling van een aandoening die 10 wordt gekozen uit de groep die bestaat uit cardiovasculaire aandoeningen, metabolische aandoeningen, aandoeningen van het centrale zenuwstelsel, pulmonaire aandoeningen, sexuele stoornis, pijn en nierstoomis.
17. Toepassing volgens conclusie 16, waarbij de aandoening een cardiovasculaire 15 aandoening is.
18. Toepassing volgens conclusie 17, waarbij de cardiovasculaire aandoening hypertensie is.
19. Toepassing volgens conclusie 17, waarbij de cardiovasculaire aandoening hartfalen is.
20. Toepassing volgens conclusie 18, waarbij de cardiovasculaire aandoening angina is. 25
21. Werkwijze voor het bereiden van een eerste verbinding met de structuur: KN N •crS Ο waarbij de werkwijze het in contact brengen van een tweede verbinding met de structuur: 5 CU „NL J χτ> N yNi „KM fT \ met isonipecotinezuur omvat voor het verschaffen van de eerste verbinding. xxxxx ); n 0 0 29 t 6011883NLSQL.txt SEQUENCE LISTING <110> Pfizer Inc <120> 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyri di ne-2-ylami no)-lH-py razool[4,3-d]pyri mi di ne-5-yl) pi peri di ne-4-carbonzuur en zouten daarvan <130> PC033153A <150> 60/735320 <151> 2005-11-10 <160> 1 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 1518 <212> DNA <213> homo sapiens <400> 1 atggactaca aggacgacga cgacaaggga tcccggtccg agatgtcccc aaagtgcagt 60 gctgatgctg agaacagttt caaagaaagc atggagaaat catcatactc cgactggcta 120 ataaataaca gcattgctga gctggttgct tcaacaggcc ttccagtgaa catcagtgat 180 gcctaccagg atccgcgctt tgatgcagag gcagaccaga tatctggttt tcacataaga 240 tctgttcttt gtgtccctat ttggaatagc aaccaccaaa taattggagt ggctcaagtg 300 ttaaacagac ttgatgggaa accttttgat gatgcagatc aacgactttt tgaggctttt 360 gtcatctttt gtggacttgg catcaacaac acaattatgt atgatcaagt gaagaagtcc 420 tgggccaagc agtctgtggc tcttgatgtg ctatcatacc atgcaacatg ttcaaaagct 480 gaagttgaca agtttaaggc agccaacatc cctctggtgt cagaacttgc catcgatgac 540 attcattttg atgacttttc tctcgacgtt gatgccatga tcacagctgc tctccggatg 600 ttcatggagc tggggatggt acagaaattt aaaattgact atgagacact gtgtaggtgg 660 cttttgacag tgaggaaaaa ctatcggatg gttctatacc acaactggag acatgccttc 720 aacgtgtgtc agctgatgtt cgcgatgtta accactgctg ggtttcaaga cattctgacc 780 gaggtggaaa ttttagcggt gattgtggga tgcctgtgtc atgacctcga ccacagggga 840 accaacaatg ccttccaagc taagagtggc tctgccctgg cccaactcta tggaacctct 900 gctaccttgg agcatcacca tttcaaccac gccgtgatga tccttcaaag tgagggtcac 960 aatatctttg ctaacctgtc ctccaaggaa tatagtgacc ttatgcagct tttgaagcag 1020 tcaatattgg caacagacct cacgctgtac tttgagagga gaactgaatt ctttgaactt 1080 gtcagtaaag gagaatacga ttggaacatc aaaaaccatc gtgatatatt tcgatcaatg 1140 ttaatgacag cctgtgacct tggagccgtg accaaaccgt gggagatctc cagacaggtg 1200 gcagaacttg taaccagtga gttcttcgaa caaggagatc gggagagatt agagctcaaa 1260 ctcactcctt cagcaatttt tgatcggaac cggaaggatg aactgcctcg gttgcaactg 1320 gagtggattg atagcatctg catgcctttg tatcaggcac tggtgaaggt caacgtgaaa 1380 Pagina 1 200 029' ctgaagccga tgctagattc agtagctaca aacagaagta agtgggaaga gctacaccaa 1440 aaacgactgc tggcctcaac tgcctcatcc tcctcccctg ccagtgttat ggtagccaag 1500 gaagacagga actaataa 1518 6011883NLSQL.txt Pagina 2 2 0 0 0 2 9 1
NL2000291A 2005-11-10 2006-10-27 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H- pyrazool(4,3-d)pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en zouten daarvan. NL2000291C2 (nl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US73532005P 2005-11-10 2005-11-10
US73532005 2005-11-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NL2000291A1 NL2000291A1 (nl) 2007-05-11
NL2000291C2 true NL2000291C2 (nl) 2009-02-17

Family

ID=37685872

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL2000291A NL2000291C2 (nl) 2005-11-10 2006-10-27 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H- pyrazool(4,3-d)pyrimidine-5-yl)piperidine-4-carbonzuur en zouten daarvan.

Country Status (29)

Country Link
US (2) US20090156618A1 (nl)
EP (1) EP1948661B1 (nl)
JP (1) JP4208959B1 (nl)
KR (1) KR101012592B1 (nl)
CN (1) CN101305007B (nl)
AP (1) AP2008004437A0 (nl)
AR (1) AR057885A1 (nl)
AT (1) ATE435865T1 (nl)
AU (1) AU2006313486B2 (nl)
BR (1) BRPI0618284A2 (nl)
CA (1) CA2629339C (nl)
CR (1) CR9966A (nl)
DE (1) DE602006007728D1 (nl)
DK (1) DK1948661T3 (nl)
DO (1) DOP2006000248A (nl)
EA (1) EA200800920A1 (nl)
EC (1) ECSP088441A (nl)
ES (1) ES2326919T3 (nl)
IL (1) IL190456A (nl)
MA (1) MA29943B1 (nl)
NL (1) NL2000291C2 (nl)
NO (1) NO20082593L (nl)
PE (1) PE20070764A1 (nl)
RS (1) RS20080197A (nl)
TN (1) TNSN08209A1 (nl)
TW (1) TW200738723A (nl)
UY (1) UY29909A1 (nl)
WO (1) WO2007054778A1 (nl)
ZA (1) ZA200803173B (nl)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0916931A2 (pt) * 2008-08-01 2015-11-24 Biocryst Pharm Inc agentes terapêuticos
WO2010043633A1 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Palau Pharma, S. A. 2h-pyrazolo [4,3-d]pyrimidin-5-amine derivatives as h4 histamine receptor antagonists for the treatment of allergic, immunological and inflammatory diseases
JP2013523809A (ja) * 2010-04-05 2013-06-17 エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド Ｐｄｅ５抑制剤を含む皮膚しわ改善用組成物
CN107261119A (zh) * 2011-02-28 2017-10-20 独立行政法人国立循环器病研究中心 恶性肿瘤转移抑制用药物
CA2831634C (en) 2011-04-21 2019-11-12 Origenis Gmbh Pyrazolo [4,3-d] pyrimidines useful as kinase inhibitors
US9637491B2 (en) 2012-10-19 2017-05-02 Origenis Gmbh Pyrazolo[4,3-D]pyrimidines as kinase inhibitors
US20150274735A1 (en) * 2012-10-23 2015-10-01 Pfizer Inc. Use of a tetrasubstituted pyrazolo[4, 3-d]pyrimidine compound for treating diabetic nephropathy
CN118436655A (zh) 2014-08-12 2024-08-06 美智恩制药公司 使用乌地那非组合物改善丰唐术患者的心肌性能的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004096810A1 (en) * 2003-04-29 2004-11-11 Pfizer Limited 5,7-diaminopyrazolo`4,3-d!pyrimidines useful in the treatment of hypertension
WO2005049617A1 (en) * 2003-11-24 2005-06-02 Pfizer Limited Pyrazolopyrimidines
WO2005049616A1 (en) * 2003-11-24 2005-06-02 Pfizer Limited 5,7-DIAMINOPYRAZOLO [4,3-d] PYRIMIDINES WITH PDE-5 INHIBITING ACTIVITY
WO2005097799A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-20 Pfizer Limited Pyrazolo`4,3-d! pyrimidines
WO2006046135A2 (en) * 2004-10-28 2006-05-04 Pharmacia & Upjohn Company Llc Pyrazolo[4,3-d] pyrimidine derivatives useful as pde-5 inhibitors

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998001428A1 (en) 1996-07-08 1998-01-15 Du Pont Pharmaceuticals Company AMIDINOINDOLES, AMIDINOAZOLES, AND ANALOGS THEREOF AS INHIBITORS OF FACTOR Xa AND OF THROMBIN
PT1371647E (pt) 1998-04-20 2005-10-31 Pfizer Derivados do acido piridina-3-carboxilico e sua utilizacao como intermediarios
GB9822238D0 (en) * 1998-10-12 1998-12-09 Pfizer Ltd Process for preparation of pyrazolo[4,3-D]pyrimidin-7-ones and intermediates thereof
JP2002528456A (ja) 1998-10-23 2002-09-03 ファイザー・インク 性的機能障害の処置のためのピラゾロピリミジノン系ｃＧＭＰ阻害薬
DE19942474A1 (de) 1999-09-06 2001-03-15 Merck Patent Gmbh Pyrazolo[4,3-d]pyrimidine
CN1814596A (zh) 2000-04-28 2006-08-09 阿卡蒂亚药品公司 毒蕈碱性激动剂
DE10031584A1 (de) 2000-06-29 2002-01-10 Merck Patent Gmbh 5-Aminoalkyl-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine
WO2002016348A1 (en) 2000-08-09 2002-02-28 Astrazeneca Ab Antiangiogenic bicyclic derivatives
DE60237425D1 (de) 2002-03-28 2010-10-07 Univerzita Palackeho V Olomouc PyrazoloÄ4,3-dÜpyrimidine, Verfahren zu ihrer Herstellung und therapeutische Anwendung
RS52730B (sr) 2003-05-22 2013-08-30 Takeda Gmbh Kompozicija koja sadrži pde4 inhibitor i pde5 inhibitor
CA2545340A1 (en) 2003-11-10 2005-05-26 Synta Pharmaceuticals, Corp. Fused heterocyclic compounds
EP1773826A4 (en) 2004-07-02 2009-06-03 Exelixis Inc MODULATORS OF C-MET AND THEIR METHOD OF USE

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004096810A1 (en) * 2003-04-29 2004-11-11 Pfizer Limited 5,7-diaminopyrazolo`4,3-d!pyrimidines useful in the treatment of hypertension
WO2005049617A1 (en) * 2003-11-24 2005-06-02 Pfizer Limited Pyrazolopyrimidines
WO2005049616A1 (en) * 2003-11-24 2005-06-02 Pfizer Limited 5,7-DIAMINOPYRAZOLO [4,3-d] PYRIMIDINES WITH PDE-5 INHIBITING ACTIVITY
WO2005097799A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-20 Pfizer Limited Pyrazolo`4,3-d! pyrimidines
WO2006046135A2 (en) * 2004-10-28 2006-05-04 Pharmacia & Upjohn Company Llc Pyrazolo[4,3-d] pyrimidine derivatives useful as pde-5 inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
RS20080197A (sr) 2009-05-06
ATE435865T1 (de) 2009-07-15
DK1948661T3 (da) 2009-09-07
AP2008004437A0 (en) 2008-04-30
AU2006313486A1 (en) 2007-05-18
PE20070764A1 (es) 2007-08-13
US20110059993A1 (en) 2011-03-10
AU2006313486B2 (en) 2011-10-27
CA2629339A1 (en) 2007-05-18
EP1948661A1 (en) 2008-07-30
DOP2006000248A (es) 2007-10-15
CN101305007A (zh) 2008-11-12
CN101305007B (zh) 2011-07-20
TNSN08209A1 (fr) 2009-10-30
MA29943B1 (fr) 2008-11-03
DE602006007728D1 (de) 2009-08-20
TW200738723A (en) 2007-10-16
ZA200803173B (en) 2009-01-28
IL190456A0 (en) 2008-11-03
EA200800920A1 (ru) 2008-10-30
ECSP088441A (es) 2008-06-30
BRPI0618284A2 (pt) 2011-08-23
JP2009519215A (ja) 2009-05-14
ES2326919T3 (es) 2009-10-21
UY29909A1 (es) 2007-06-29
EP1948661B1 (en) 2009-07-08
CR9966A (es) 2008-06-16
AR057885A1 (es) 2007-12-26
NL2000291A1 (nl) 2007-05-11
US20090156618A1 (en) 2009-06-18
NO20082593L (no) 2008-07-22
IL190456A (en) 2012-10-31
US8518956B2 (en) 2013-08-27
HK1120803A1 (en) 2009-04-09
KR101012592B1 (ko) 2011-02-07
WO2007054778A1 (en) 2007-05-18
CA2629339C (en) 2010-07-27
JP4208959B1 (ja) 2009-01-14
KR20080063830A (ko) 2008-07-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2022174031A1 (en) Cdk inhibitors and methods of use thereof
JP6054967B2 (ja) 置換アネレート化ピリミジンおよびその使用
JP5575274B2 (ja) 医薬組成物のためのｍｎｋｌ／ｍｎｋ２阻害活性を有する４−［シクロアルキルオキシ（ヘテロ）アリールアミノ］チエノ「２，３−ｄ］ピリミジン
CA3137458A1 (en) Fgfr inhibitors and methods of use thereof
US8518956B2 (en) 1-(1-(2-ethoxyethyl)-3-ethyl-7-(4-methylpyridin-2-ylamino)-1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidin-5-yl) piperidine-4-carboxylic acid and salts thereof
JP6376707B2 (ja) サーチュイン調節剤としての置換架橋尿素類似体
WO2008129152A1 (fr) Composes pyrrolo[2,3-b]pyridine, composes azaindoles utiles dans la synthese de ces composes pyrrolo[2,3-b]pyridine, leurs procedes de fabrication et leurs utilisations
TW200938200A (en) Methyl-substituted piperidine derivative
EA021715B1 (ru) Ингибиторы тирозинкиназы брутона
JP2011006494A (ja) Ｊａｋキナーゼおよびｃｄｋ２プロテインキナーゼのインヒビター
CA2766909C (fr) Nouveaux derives de 1,2,3,4-tetrahydro-pyrimido{1,2-a}pyrimidin-6-one,leur preparation et leur utilisation pharmaceutique
JP2020506940A (ja) Ｏｇａ阻害化合物
KR20170083135A (ko) 시르투인 조정제로서의 치환된 가교된 우레아 유사체
EP4308564A1 (en) Polycyclic inhibitors of plasma kallikrein
US20240226106A1 (en) Inhibitors of plasma kallikrein
US12485123B2 (en) 1H-pyrazolo[4,3-d]pyrimidine compounds as toll-like receptor 7 (TLR7) agonists
EP3186251A1 (de) Substituierte annellierte pyrimidine und ihre verwendung
US20110118269A1 (en) Fused pyrazine compounds as their salts, useful for the treatment of degenerative and inflammatory diseases
US20240199612A1 (en) Imidazopyridinyl inhibitors of plasma kallikrein
WO2023023670A1 (en) Compositions and methods of using the same for treatment of neurodegenerative and mitochondrial disease
HK1120803B (en) Pyrazolo[4,3,-d]pyrimidin-5-yl derivative used as pde5 inhibitors
US20230416261A1 (en) Ethanediamine-heterocycle derivatives as inhibitors of protein arginine methyltransferases

Legal Events

Date Code Title Description
AD1A A request for search or an international type search has been filed
RD2N Patents in respect of which a decision has been taken or a report has been made (novelty report)

Effective date: 20081014

PD2B A search report has been drawn up
V1 Lapsed because of non-payment of the annual fee

Effective date: 20100501