NL1019705C2 - Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een behandeling van een ruw geneesmiddel ter versterking van de antitumoractiviteit, en werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van een ruw geneesmiddel. - Google Patents

Description

I»

WERKWIJZE TER BEOORDELING VAN DE EFFECTIVITEIT VAN EEN BEHANDELING VAN EEN RUW GENEESMIDDEL TER VERSTERKING VAN DE ANTITUMORACTIVITEIT, EN WERKWIJZE TER BEOORDELING VAN DE 5 ANTITUMOREFFECTIVITEIT VAN EEN RUW GENEESMIDDEL

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

Deze uitvinding heeft betrekking op technieken zoals een werkwijze ter beoordeling en dergelijke van de antitumoractiviteit van ruwe geneesmiddelen zoals padde-10 stoelen die polysacchariden met antitumoractiviteit bevatten, in het bijzonder op technieken voor het versterken van het tot uiting komen van antitumoreffecten bij inwendige toediening, of voor het voorspellen van de effectiviteit van de antitumoractiviteit bij inwendige toediening en 15 dergelijke.

Tot nu toe zijn diverse soorten paddestoelen gebruikt op het gebied van de Chinese geneesmiddelen, gezondheidsvoedsel of dergelijke. Zo is bijvoorbeeld bekend dat paddestoelen zoals Ganoderma (Fomes), Poria, maitake 20 (Grifola frondosu Dickson) en dergelijke antitumoractiviteit hebben zoals carcinostatische activiteit etc. Veel onderzoeken hebben zich bezig gehouden met effectieve bestanddelen van paddestoelen die antitumoractiviteit vertonen, en algemeen wordt gesteld dat in paddestoelen 25 aanwezige polysacchariden effectieve antitumoractiviteit laten zien.

Op het gebied van Chinese geneesmiddelen worden gedroogde paddestoelen afgekookt en inwendig gebruikt door het afkooksel te drinken.

' ·.’ v 2

Tot nu toe zijn diverse soorten Chinese geneesmiddelen als natuurlijke geneesmiddelen gebruikt omdat ze minder bijwerkingen hebben dan synthetische geneesmiddelen. In de Japanse farmacopee is een aantal Chinese genees-5 middelen beschreven als ruwe geneesmiddelen.

Wat de antitumoractiviteiten van dergelijke paddestoelen betreft worden afkooksels of extracten daarvan aan proefdieren zoals muizen toegediend door ze te verwerken in het voer, en muizen van een controlegroep waaraan 10 geen Chinees geneesmiddel wordt toegediend en muizen van een groep waaraan het wel wordt toegediend worden vergeleken en geobserveerd om bijvoorbeeld de verdwijning, de uitzaaiing van kanker, of het levensvatbaarheidspercentage van de muizen te onderzoeken en zo de effectiviteit van het 15 geneesmiddel te onderzoeken.

Bovendien wordt bij dergelijke proefdieren ook de toxiciteit en de effectiviteit onderzocht, en nadat bevestigd is dat deze geneesmiddelen voldoende veilig zijn voor toepassing bij de mens, worden ze daadwerkelijk inwendig 20 toegediend en wordt de effectiviteit van de antitumoracti-viteit bij de mens uiteindelijk bevestigd met klinische tests.

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING

Zoals boven vermeld zijn de antitumoractiviteiten 25 zoals carcinostatisch effect, kankeruitzaaiingsremmend effect etc. van paddestoelen reeds bekend. Paddestoelen worden gebruikt door een gedroogd product ervan af te koken en het afkooksel te drinken, of een met een alcohol etc. geëxtraheerd effectief bestanddeel te mengen met andere 3 0 componenten zoals een vitaminepreparaat om een vorm zoals een gezondheidsdrank, gezondheidsvoedsel of geneeskrachtig middel te maken.

Bij de inwendige toediening zoals het doorgaans uitgevoerde drinken van een afkooksel is het aantal geval-35 len waarin zodanige geneeskrachtige effecten worden verkre- 3 gen dat de therapeutische effecten duidelijk tot uiting komen, onverwacht gering. Bij de agaricus, die onlangs de aandacht heeft getrokken door het bezit van een groot geneeskrachtig effect, kan dezelfde tendens worden waarge-5 nomen. Ook bij de maitake (Grifola frondosu Dickson) die onlangs de aandacht heeft getrokken, zijn weinig voorbeelden als bewijs van zijn geneeskrachtige effecten.

Weliswaar worden hierbij nooit geneeskrachtige effecten gevonden, maar er is een geval waarin een duide-10 lijk effectieve antitumoractiviteit wordt getoond, zij het in een uiterst beperkt aantal voorbeelden.

De uitvinder overwoog dus of er een effectieve manier is om de antitumoractiviteiten van paddestoelen voor iedereen beschikbaar te krijgen door opheldering van het 15 mechanisme waardoor verschillen in uiting van de door de paddestoelen verschafte antitumoreffecten ontstaan.

Zelfs wanneer de effectiviteit van paddestoelen met antitumoractiviteit worden bevestigd bij proefdieren zoals boven vermeld, kunnen de verwachte effecten in 20 vrijwel geen enkel geval worden aangetoond wanneer de paddestoelen feitelijk inwendig aan de mens worden toegediend. Om die effecten te bevestigen door feitelijke en inwendige toediening in klinische experimenten is het nodig de inwendige toediening een bepaalde tijd voort te zetten 25 met een gecontroleerd toedieningssysteem onder constante omstandigheden en de effecten voortdurend te observeren. Er is dus een aanzienlijke tijd nodig om vast te stellen of de effecten van de paddestoelen al of niet tot uiting komen bij inwendige toediening aan een patiënt.

30 Een dergelijke werkwijze is zeker effectief, maar om bijvoorbeeld een stof met een effectieve antitumoractiviteit te zoeken door het screenen van een aantal natuurlijke producten is een uitzonderlijk groot aantal dagen nodig zodat het nodig is een techniek te ontwikkelen 35 waarmee antitumoractiviteit binnen kortere tijd kan worden beoordeeld.

4

Wanneer zich. bovendien bij een patiënt die aan een klinische test deelneemt plotseling een complicatie voordoet en er inderhaast een buiten de controle vallende behandeling op de patiënt wordt toegepast, kan met betrek-5 king tot deze patiënt geen bevestiging van effectiviteit worden verkregen. In een klinische test die een lange tijd in beslag neemt, komt een groot aantal gevallen voor waarin bevestiging van effectiviteit niet kan worden verkregen, zodat het niet altijd gemakkelijk is een klinische test 10 lange tijd uit te voeren onder behoud van effectiviteit van de test zelf.

De uitvinder overwoog dus dat het noodzakelijk is een werkwijze te ontwikkelen waarmee bij toediening van een monster aan de mens de uiting van een antitumoreffeet tot 15 op zekere hoogte kan worden voorspeld zonder een dergelijke klinische test uit te voeren.

Bovendien zijn als stoffen met antitumoractiviteit in de Chinese geneeskunde behalve paddestoelen een groot aantal materialen bekend als ruwe geneesmiddelen, en het 2 0 heeft meer voorkeur als de oplossing van de bovengenoemde problemen met betrekking tot paddestoelen zich zou kunnen uitstrekken tot alle ruwe geneesmiddelen.

Een doel van de onderhavige uitvinding is de antitumoractiviteiten van ruwe geneesmiddelen zoals padde-25 stoelen en dergelijke bij toediening aan de mens te kunnen voorspellen zonder klinische tests te hoeven uitvoeren.

De bovengenoemde en andere doelen en nieuwe kenmerken van de onderhavige uitvinding worden in detail beschreven in de volgende beschrijving.

30 De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op een ruw< geneesmiddel dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat, toe te passen behandeling op de antitumoractiviteit, waarbij men het ruwe geneesmiddel waarop de 3 5 behandeling is toegepast, toevoegt aan een systeem dat lipideperoxiden vormt door bestraling van een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur met ultraviolet licht, en 4' 5 het effect van de behandeling ter versterking van de antitumoractiviteit van het bovengenoemde ruwe geneesmiddel als groot beoordeelt als de stijging van de gevormde hoeveelheid van het bovengenoemde lipideperoxide gebaseerd 5 op de stijging van de concentratie van het bovengenoemde ruwe geneesmiddel als gevolg van de behandeling groot is.

De werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit die wordt toegepast op een ruw geneesmiddel dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat is met name 10 een werkwijze, omvattende een roosterstap waarbij het bovengenoemde ruwe geneesmiddel wordt geroosterd met ver-infraroodstralen, en een fermentatiestap waarbij fermentatie plaatsvindt door toevoeging van micro-organismen, ter versterking van de antitumoractiviteit van het bovengenoem-15 de ruwe geneesmiddel ten opzichte van het geval waarin het roosteren en de fermentatie niet worden uitgevoerd.

Volgend op de bovengenoemde fermentatiestap omvat bovengenoemde werkwijze eventueel een stap waarbij een olieachtig middel wordt gemaakt, waarbij de bovengenoemde 20 gefermenteerde ruwe geneesmiddelen worden omsloten met een oliecomponent verkregen uit planten zoals met ver-infra-roodstralen geroosterde sesam of iets dergelijks.

Bij voorkeur wordt bij bovengenoemde werkwijze gebruik gemaakt van een paddestoel die /3-glucan bevat, in 25 het bijzonder ten minste één paddestoel gekozen uit de groep bestaande uit agaricus (Agaricus blazei), maitake (Grifola frondosu), shi-itake (Cortinellus shiitake), matsutake (Tricholoma matsutake), shimejitake (Lyophyllum decastes) en enokitake (Flammulina velutipes).

30 Wanneer de bovengenoemde agaricus wordt gebruikt, omvat bovengenoemde werkwijze het met ver-infraroordstralen roosteren van de rauwe agaricus.

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de 35 antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat, zonder klinische tests uit te voeren, waarbij men het ruwe geneesmiddel 6 toevoegt aan het systeem dat lipideperoxiden vormt door bestraling van een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeen-zuur met ultraviolet licht, en het effect van de antitumor-activiteit door inwendige toediening van het bovengenoemde 5 ruwe geneesmiddel als groot beoordeelt en voorspelt als de stijging van de gevormde hoeveelheid van het bovengenoemde lipideperoxide gebaseerd op de stijging van de concentratie van het bovengenoemde ruwe geneesmiddel groot is.

De uitvinder heeft diverse onderzoeken uitgevoerd 10 aan een remmende stof tegen actieve zuurstof in Chinese geneesmiddelen en via dergelijke onderzoeken heeft hij bevestigd dat actieve zuurstof of lipideperoxiden opmerkelijke effecten hebben op het menselijk lichaam en dat deze stoffen verband houden met afbraak van weefsels in het 15 menselijk lichaam waardoor ze de oorzaak worden van het optreden van verschillende infectieziekten.

In de weefsels van het menselijk lichaam komt een enzym genaamd SOD (superoxidedismutase) voor dat de weefsels van het menselijk lichaam beschermt tegen dergelijke 20 actieve zuurstof en dat de actieve zuurstof verwijdert. De hoeveelheid SOD neemt af met de leeftijd waardoor verwijdering van de actieve zuurstof in het lichaam niet langer kan worden uitgevoerd. Het afnemen van SOD is met name aanzienlijk bij een leeftijd van 40 jaar of ouder, waardoor 25 verwijdering van de actieve zuurstof in het lichaam niet langer in voldoende mate kan worden uitgevoerd. In de afgelopen jaren is opgehelderd dat dit de oorzaak is van diverse ziekten bij volwassenen.

Wanneer bovendien een overmatige hoeveelheid 30 actieve zuurstof in het lichaam wordt gevormd door chronische of acute stimulering of als gevolg van een chemische stof etc., kan de actieve zuurstof met de vanaf het begin in het lichaam voorkomende hoeveelheid SOD niet in voldoende mate worden verwijderd, zodat de persoon in kwestie aan 35 verschillende ziekten lijdt.

Voor verschillende ziekten die worden veroorzaakt door onvoldoende verwijdering van de actieve zuurstof als ' V..'· : j) 7 gevolg van een gebrek aan SOD is een behandeling door toediening van SOD óverwogen om het gebrek aan SOD aan te vullen. Bij een dergelijke behandelingsmethode kunnen echter effecten worden verwacht in het geval van een 5 geneesmiddel voor injectie, maar kunnen geen aanzienlijke effecten worden verwacht in het geval van een inwendig geneesmiddel, zodat de huidige toestand is dat de effecten nog niet zijn bewezen.

Met betrekking tot het punt dat de effecten als 10 inwendig geneesmiddel niet tot uiting komen, heeft de uitvinder gevonden dat SOD niet bestand is tegen maagsap en dat het molecuulgewicht van SOD 30.000 of meer is en dat het daarom als zodanig niet uit de spijsverteringsorganen kan worden geabsorbeerd. Ook heeft hij gevonden dat de 15 werking aan beperkingen onderhevig is en dat SOD van de bestaande vier soorten actieve zuurstof alleen werkt op superoxide (02') .

De uitvinder heeft onderzoek verricht naar een stof die een overmaat actieve zuurstof in het menselijk 20 lichaam kan verwijderen en die inwendig kan worden toegediend, en als resultaat heeft hij gevonden dat een preparaat dat plantaardige olie bevat die is verkregen van een geroosterde plant en die wordt toegevoegd aan een stof verkregen door plantenzaden of hun kiemen onder geschikte 25 omstandigheden te roosteren en daarna te fermenteren door het toevoegen van micro-organismen, kan worden gebruikt als een middel ter verwijdering van actieve zuurstof dat effectief is bij inwendig gebruik (zie Japans octrooischrift 2135887) .

30 In de bovengenoemde plantenzaden of hun kiemen komen inherent laagmoleculaire stoffen tegen actieve zuurstof voor zoals flavonoïden, polyfenolen, tannine, tocoferol, vitamine B2, etc. De uitvinder heeft gevonden dat dergelijke laagmoleculaire stoffen tegen actieve 35 zuurstof chemisch onderling of met de andere componenten binden, een moleculaire verbinding genereren of een ingewikkeld complex of een macromoleculaire verbinding vormen 8 door adsorptie of insluiting, en dat wanneer ze in een dergelijke toestand worden ingenomen geen actieve-zuurstof onderdrukkende werking kan worden verkregen die te verwachten is van een laagmoleculaire stof tegen actieve zuurstof.

5 Dat betekent dat wanneer een stof tegen actieve zuurstof in een dergelijke toestand wordt ingenomen, de meeste mensen heden ten dage niet in staat zijn die met behulp van het maagsap af te breken tot een laagmoleculaire stof, zodat de actieve-zuurstof onderdrukkende werking niet 10 kan worden verkregen. De uitvinder heeft dit uiteengezet in "Food Industry", vol. 35, no. 14, "Development and Improvement of DDS, SOD-like Function Foods from Natural Plants and Seeds and Their Pharmacological and Biochemical Consideration" .

15 De uitvinder heeft onderzoek verricht naar de effectieve toepassing van de bovengenoemde in plantenzaden of hun kiemen voorkomende stof tegen actieve zuurstof voor de behandeling of preventie van ziekten, en hoe de stoffen tegen actieve zuurstof in de bovengenoemde toestand kunnen 20 worden geactiveerd.

Als resultaat heeft hij gevonden dat door het verwarmen en roosteren van plantenzaden of kiemen onder milde omstandigheden de in de plantenzaden of hun kiemen voorkomende stof tegen actieve zuurstof gedeeltelijk uit 25 het bovengenoemde complex wordt vrijgemaakt en een oorspronkelijke laag moleculaire stof wordt gevormd, of gedeeltelijk wordt geactiveerd door als gevolg van een chemische verandering een actieve functionele groep te genereren. Door dergelijke behandelingen uit te voeren 30 wordt de werking tegen actieve zuurstof aanzienlijk versterkt vergeleken met de toestand voorafgaand aan het roosteren.

Anderzijds worden veel van de actieve antitumor-functies van paddestoelen zoals carcinostatische werking of 35 remming van uitzaaiingen beschouwd als in het algemeen gebaseerd op polysacchariden zoals β-glucan etc., maar dit /3-glucan verschilt van de bovengenoemde in de plantenzaden . ' J If' ·,·;

'J

9 of kiemen voorkomende laagmoleculaire stof tegen actieve zuurstof en valt buiten het doel van de bovengenoemde reeks onderzoeken aan actieve zuurstof door de uitvinder.

De uitvinder overwoog of het feit dat paddestoelen 5 bij inwendige toediening door het drinken van het afkooksel zoals boven vermeld, bij de ene persoon opmerkelijke antitumoreffecten lieten zien terwijl die effecten bij veel anderen nooit konden worden verkregen, zou kunnen worden verklaard uit eenzelfde gedachte als de laagmoleculaire 10 toestand van de bovengenoemde stof tegen actieve zuurstof.

Dat betekent dat, hoewel de werking en het mechanisme van de antitumoractiviteit van /3-glucan nog niet voldoende zijn opgehelderd zoals boven vermeld, het feit dat er verschillen zijn in het tot uiting komen van antitu-15 moreffecten bij inwendige inname van paddestoelen, betekent dat er patiënten zijn bij wie het effectieve bestanddeel dat de antitumoractiviteit van paddestoelen teweegbrengt, gemakkelijk zijn werking uitoefent en dat er patiënten zijn bij wie dit nauwelijks werkt.

20 Bij inwendige toediening worden de ingenomen paddestoelen vroeg of laat behandeld met maagsap. De overweging was nu dat de vraag of het effectieve bestanddeel dat de antitumoractiviteit van de bovengenoemde paddestoelen teweegbrengt, effectief werkt of niet, nauw 25 verband houdt met een dergelijke maagsapbehandeling. Dat wil zeggen dat de uitvinder van mening is dat er individuele verschillen zijn in maagsapbehandeling en dat deze individuele verschillen veranderingen zouden kunnen veroorzaken in het tot uiting komen van de antitumoreffecten.

30 Zo heeft de uitvinder de volgende hypothese opgesteld over het verband tussen het gemak waarmee de antitumorwerking bij inwendig gebruik tot uiting komt en de maagsapbehandeling, gezien het klinische feit dat er individuele verschillen in sterkte van het maagsap zijn.

35 Het in paddestoelen voorkomende effectieve be standdeel dat de antitumoractiviteit teweegbrengt en dat het voorwerp van de maagsapbehandeling wordt, bevindt zich 10 in een toestand waarin de effecten moeilijk tot uiting komen, en wordt zoals boven vermeld als gevolg van de maagsapbehandeling overgebracht in de toestand waarin de effecten gemakkelijk tot uiting komen. Hierin bestaan 5 individuele verschillen. Als dus iemand van nature een sterk maagsap heeft, komt het in ingenomen paddestoelen aanwezige bestanddeel met effecten op de antitumoractivi-teit in de toestand waarin de werking gemakkelijk aan te tonen is, zodat de antitumoreffecten tot uiting komen.

10 Bij iemand die echter van nature een zwak maagsap heeft, komt het bestanddeel met effecten op de antitumorac-tiviteit niet in de toestand waarin de werking gemakkelijk aan te tonen is, zodat de antitumoreffecten niet zo duidelijk tot uiting komen.

15 Veel personen hebben heden ten dage geen sterk maagsap dat het effectieve bestanddeel dat de antitumorac-tiviteit van paddestoelen vertoont in zodanige mate kan veranderen dat de werking daarvan gemakkelijk tot uiting komt, en als gevolg daarvan kan worden gezegd dat het 20 aantal voorbeelden dat tot op zekere hoogte kan dienen als bevestiging van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van paddestoelen bij inwendige toediening uiterst klein is.

Een mogelijke verklaring hiervoor is dat de componenten die effectief zijn voor de in paddestoelen aanwezige 25 antitumoractiviteit als een keten aan elkaar zitten door middel van bijvoorbeeld polymerisatie en voorkomen in een onbeweeglijke toestand, dat wil zeggen in de niet-actieve toestand waarin ze niet kunnen worden geactiveerd. In het geval van iemand die van nature een sterk maagsap heeft 30 worden de componenten door het maagsap losgeknipt en veranderen in effectieve componenten in vrije geactiveerde toestand, waardoor de antitumoractiviteit in het lichaam zichtbaar wordt.

Men kan stellen dat veel personen heden ten dage 35 niet in staat zijn de keten in de geïnactiveerde toestand waarin de effectieve bestanddelen die effectief zijn tegen kanker als een keten met elkaar verbonden zijn, zoals boven 11 vermeld met maagsap te knippen. Als gevolg daarvan worden de voor kanker effectieve bestanddelen door de darmen in een zodanige niet-geactiveerde toestand geabsorbeerd dat ze aan elkaar gebonden zijn zodat ze hun effecten in het 5 lichaam niet kunnen laten zien.

De uitvinder overwoog daarom dat als een behandeling die de effectieve bestanddelen die zich in de niet-geactiveerde toestand bevinden vooraf kan activeren, gemakkelijk op paddestoelen zou kunnen worden toegepast, de 10 bovengenoemde problemen opgelost zouden zijn.

De uitvinder heeft verschillende technieken geprobeerd voor het activeren van de effectieve bestanddelen van dergelijke paddestoelen in een niet-actieve toestand, maar was niet in staat een effectieve techniek te 15 vinden. Dit komt doordat er niet voldoende kennis beschikbaar is omtrent de toestand van de effectieve bestanddelen en hoe ze zich in de niet-actieve toestand bevinden, omdat het feitelijke systeem te complex is om te onderzoeken.

De uitvinder heeft verschillende experimenten 20 uitgevoerd zoals boven vermeld, en als laatste experiment trachtte hij de bovengenoemde methode toe te passen die door hem zelf was uitgevonden als manier voor het activeren van actieve zuurstofonderdrukkende stoffen zoals flavono-iden, polyfenolen etc., hoewel de samenstelling daarvan 25 aanzienlijk verschilt van die van /3-glucan.

Wanneer die werkwijze wordt toegepast, wordt een techniek gebruikt die is bedoeld voor het activeren van flavonoïden en waarvan het te activeren doel aanzienlijk verschilt van /3-glucan, zodat de niet-geactiveerde toestand 30 daarvan natuurlijk ook sterk verschilt van die van β-glucan, zodat aanpassing van de werkwijze voor het activeren van /3-glucan aanvankelijk als moeilijk werd beschouwd.

De experimentele resultaten verschilden echter aanzienlijk van de verwachtingen van de uitvinder en lieten 35 zien dat de activeringstechniek voor de actieve zuurstof onderdrukkende stof ook effectief is voor het veranderen van /3-glucan met een andere structuur dan die van de > y i y 12 actieve zuurstof onderdrukkende stoffen zoals flavonoïden, etc., en dat /3-glucan zo gemakkelijk kan worden geactiveerd.

Dat wil zeggen dat de uitvinder heeft gevonden dat 5 wanneer paddestoelen die vooraf met ver-infraroodstralen zijn geroosterd, in het experiment worden gebruikt, de antitumoreffecten bij inwendige toediening zijn verbeterd vergeleken met het geval waarin paddestoelen worden gebruikt die niet met ver-infraroodstralen zijn geroosterd. 10 Bovendien is gevonden dat wanneer de met ver-infraroodstralen geroosterde paddestoelen worden gefermenteerd door toevoeging van micro-organismen, in het bijzonder "Koji" (Aspergillus oryzae) of gist, de antitumoreffecten nog meer worden verbeterd.

15 Als de paddestoelen kunnen paddestoelen worden gebruikt die polysacchariden met antitumoractiviteit bevatten, bijvoorbeeld paddestoelen zoals de agaricus die onlangs in bijzonder de aandacht heeft getrokken wegens zijn geneeskrachtige effecten. Bovendien kunnen zonder 20 probleem paddestoelen worden gebruikt waarvan tot nog toe werd gesteld dat ze krachtige antitumoractiviteit hebben, zoals Forties, Poria etc.

Overigens kan met betrekking tot de agaricus worden gevonden dat zelfs wanneer het roosteren met ver-25 infraroodstralen en de fermentatiebehandeling onder diverse omstandigheden na oogsten en drogen worden uitgevoerd, er geen voldoende effect kan worden verkregen. Daarom wordt deze behandeling bij voorkeur onder niet-gedroogde omstandigheden uitgevoerd, dat wil zeggen in rauwe toestand, 30 bijvoorbeeld zonder de paddestoel na de oogst lang te laten liggen.

Bovendien bederft de agaricus snel, en als het lang duurt voordat de roosterbehandeling met ver-infraroodstralen wordt uitgevoerd, moet men hem niet lange tijd in 35 rauwe toestand laten liggen. In een dergelijk geval heeft het daarom de voorkeur de paddestoel bij lage temperatuur in een koelkast te bewaren en de behandeling zoals het 13 roosteren met ver-infraroodstralen etc. binnen 3 dagen na de oogst uit te voeren.

Bovendien wordt na het bovengenoemde roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatiebehandeling gevonden 5 dat de antitumoreffecten sterker verbeterd zijn wanneer het verkregen materiaal wordt behandeld met een olie. Er wordt bijvoorbeeld een oliecomponent verkregen uit met ver-infraroodstralen geroosterde planten zoals sesam etc. aan toegevoegd om het na fermentatie verkregen materiaal te 10 bedekken met de oliecomponent.

Zoals boven beschreven werd aanvankelijk niet verwacht dat de techniek voor het overbrengen van de in plantenzaden of kiemen aanwezige stof tegen actieve zuurstof in een laagmoleculair verbinding, ook effectief zou 15 kunnen worden toegepast op het tot uiting komen van de antitumoractiviteit van paddestoelen die polysacchariden met antitumoractiviteit bevatten die een geheel andere structuur hebben dan de stof tegen actieve zuurstof. Significante effecten kunnen echter worden verkregen door 20 het materiaal de beschreven experimenten te laten ondergaan, waarmee de onderhavige uitvinding is verwezenlijkt.

De uitvinder heeft ook gevonden dat. er zelfs een vermeldenswaardig antitumoreffeet kan worden verkregen door de bovengenoemde behandeling uit te voeren met paddestoelen 25 die tot nog toe geen specifieke aandacht hadden getrokken wegens hun antitumoractiviteit. Zo werd bijvoorbeeld gevonden dat wanneer de maitake (Grifola frondosu Dickson) e.a. werden geroosterd met ver-infraroodstralen en werden gefermenteerd door micro-organismen, een antitumoreffeet 30 kon worden verkregen dat vergelijkbaar was met of beter was dan dat van de agaricus.

Het antitumoreffeet van paddestoelen zoals de maitake (Grifola frondosu Dickson) was reeds bekend, maar in het algemeen werd niet gedacht dat dit effect vergelijk-3 5 baar zou zijn met dat van de agaricus die nu de aandacht heeft getrokken. Door de bovengenoemde behandelingen van de onderhavige uitvinding toe te passen op paddestoelen, komen 14 de met paddestoelen zoals de maitake (Grifola frondosu Dickson) inherent verbonden antitumoreffecten in voldoende mate tot uiting, waarbij de antitumoractiviteit vergelijkbaar is met die van de agaricus.

5 Tot op heden kon de potentiële antitumoractiviteit van paddestoelen niet in voldoende mate tot uiting worden gebracht en kon de effectiviteit ervan niet duidelijk worden bevestigd. Door echter de bovengenoemde behandeling ter versterking van de antitumoractiviteit op paddestoelen 10 toe te passen wordt hun antitumoractiviteit duidelijk aangetoond en kan de antitumoractiviteit tot uiting worden gebracht in een mate die niet te verwachten was.

In alle paddestoelen is meer of minder jS-glucan aanwezig en de bovenstaande behandeling wordt beschouwd als 15 een werkwijze waarmee de werking en manifestatie daarvan sterk kan worden bevorderd. Zo wordt de bovengenoemde behandeling ter versterking van de antitumoractiviteit behalve op de maitake (Grifola frondosu Dickson) toegepast op paddestoelen die doorgaans worden gebruikt als pitgangs-20 materialen voor maaltijden zoals shi-itake (Lentinus edodes), matsutake (Tricholoma matsutake), shimejitake (Lyophyllum decastes), enokitake (Flammulina velutipes), etc. Zo werd gevonden dat met de werkwijze de aanwezige potentiële antitumoractiviteit sterk kan worden ontwikkeld. 25 Wanneer de bovengenoemde werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van paddestoelen wordt toegepast, kan het /3-glucan van paddestoelen die gewoonlijk eenvoudig en goedkoop te verkrijgen zijn in plaats van dat van dure en zeldzame paddestoelen worden geactiveerd, en 3 0 zelfs wanneer de hoeveelheid jS-glucan minder is dan in zeldzame paddestoelen, kan een significant effectieve antitumoractiviteit worden ontwikkeld vergeleken met het geval waarin zeldzame paddestoelen worden gebruikt met de werkwijze uit de stand der techniek. Dit leidt tot een 35 kostenbesparing voor de patiënt.

Ook het preparaat dat paddestoelen bevat waarop de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit is

'V

15 toegepast, heeft een significant sterkere antitumoractivi-teit dan het gebruikelijke preparaat waarin paddestoelen waarvan wordt gesteld dat ze antitumoractiviteit hebben, worden gedroogd en verpoederd en eenvoudig gemengd.

5 Bij het uitvoeren van de bovengenoemde reeks onderzoeken aan paddestoelen werden paddestoelen in stapsgewijs toenemende concentratie toegevoegd aan een systeem waarin lipideperoxiden werden gevormd door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur etc te bestralen met 10 ultraviolet licht. Hierbij werd de gevormde hoeveelheid lipideperoxiden onderzocht met de respectieve paddestoelen in allerlei concentraties. Als resultaat kon worden gevonden dat hoe sterker de stijging van de door de paddestoelen gevormde hoeveelheid lipideperoxide is, hoe sterker de 15 antitumorwerking bij inwendige toediening tot uiting komt.

Zo werden verschillende soorten paddestoelen in dezelfde concentratie toegevoegd aan het systeem dat het bovengenoemde lipideperoxide vormt, en de gevormde hoeveelheden van de respectieve lipideperoxiden werden gemeten. 20 Wanneer de gevormde hoeveelheid lipideperoxide groter is, dan kunnen de antitumoreffecten krachtiger tot uiting komen bij daadwerkelijke inwendige toediening.

Bij gebruik van een dergelijke werkwijze kan zonder daadwerkelijke inwendige toediening worden nagegaan 2 5 of er wel of geen antitumoref f ecten te verwachten zijn wanneer de paddestoelen inwendig worden gebruikt. Zelfs zonder klinische test op een patiënt voor experimentele inwendige toediening, kan de werkwijze worden gebruikt als een werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit 30 bij inwendige toediening.

Bovendien worden allerlei behandelingen op de paddestoelen toegepast en worden de hoeveelheden lipideperoxide vergeleken die worden gevormd door toevoeging van de paddestoelen waarop de respectieve behandelingen zijn 3 5 uitgevoerd. Zo kan de effectiviteit van de respectieve behandelingen worden beoordeeld.

) 16

Hoewel bij de bovengenoemde verklaring wordt uitgegaan van paddestoelen, kan de werkwijze worden toegepast op een ander ruw geneesmiddel dan paddestoelen dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat. Althans 5 wanneer het ruwe geneesmiddel /3-glucan bevat, is de toepassing effectief.

De werkwij ze kan worden toegepast op andere ruwe geneesmiddelen dan paddestoelen zoals natuurlijke ruwe geneesmiddelen waaronder ruwe geneesmiddelen afgeleid van 10 planten, ruwe geneesmiddelen afgeleid van dieren en ruwe geneesmiddelen afgeleid van mineralen. In veel Chinese geneesmiddelen worden op natuurlijke wijze gegroeide ruwe geneesmiddelen gebruikt, dit kunnen onder geschikte omstandigheden op een boerderij geoogste ruwe geneesmiddelen zijn 15 of ze kunnen met een kunstmatige kweek gekweekt zijn zoals een waterkweek etc.

Behalve de in bijvoorbeeld de Japanse farmacopee etc. beschreven ruwe geneesmiddelen kunnen dergelijke natuurlijke producten of kweekgewassen, wanneer ze bij 20 toepassing van de onderhavige uitvinding effectieve antitumoractiviteit vertonen, worden gebruikt als in de onderhavige beschrijving genoemde ruwe geneesmiddelen.

BESCHRIJVING VAN DE VOORKEURSUITVOERINGSVORMEN

Hierna worden uitvoeringsvormen van de onderhavige 25 uitvinding in detail beschreven aan de hand van voorbeelden .

Met betrekking tot de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van ruwe geneesmiddelen, het preparaat dat ruwe geneesmiddelen met versterkte antitumor-30 activiteit bevat, de werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van de behandeling van ruwe geneesmiddelen, en de werkwijze ter beoordeling van de antitumoref f ectiviteit van ruwe geneesmiddelen, zal de uitvinding worden toegelicht aan de hand van paddestoelen die algemeen 17 bekend zijn als ruwe geneesmiddelen die β-glucan bevatten, een polysaccharide met antitumoractiviteit.

VERSTERKING VAN DE ANTITUMORACTIVITEIT

Hieronder worden een werkwij ze ter versterking van 5 de antitumoractiviteit van ruwe geneesmiddelen en een preparaat dat een ruw geneesmiddel met versterkte antitumoractiviteit bevat, beschreven.

In de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van ruwe geneesmiddelen worden paddestoelen die 10 /3-glucan bevatten, eerst geroosterd met ver-infraroodstra-len, waarna er micro-organismen zoals "Koji" etc. aan worden toegevoegd en een fermentatie wordt uitgevoerd bij een vooraf bepaalde vochtigheidsgraad en een vooraf bepaalde temperatuur. Na afloop van de fermentatiestap wordt het 15 verkregen materiaal tot een geschikt fijn poeder gevormd, en het fijne poeder wordt ter bereiding van een olieachtig middel bekleed met een oliecomponent die is verkregen door het uitpersen van sesam dat met ver-infraroodstralen is geroosterd.

2 0 Zo wordt uit het materiaal dat is verkregen door paddestoelen die /3-glucan bevatten de bovengenoemde roos-terstap met ver-infraroodstralen, de fermentatiestap met micro-organismen en de stap voor het maken van een olieachtig middel te laten ondergaan, een preparaat verkregen dat 25 bij inwendige toediening een effectieve antitumoractiviteit vertoont en dat paddestoelen bevat waarop de werkwij ze ter versterking van de antitumoractiviteit is toegepast.

VOORBEELDEN

Als te gebruiken paddestoelen werden paddestoelen 30 gebruikt die /3-glucan bevatten. In het bijzonder bij gebruik van paddestoelen die grote hoeveelheden /3-glucan bevatten en die in het algemeen antitumoreffecten hebben.

18 komen de antitumoreffecten sterk tot uiting, zodat die de voorkeur hebben.

Hier werden de paddestoelen Poria, agaricus, Polyporus, (Polyporus umbellatus Fries), maitake (zwart, 5 Grifola frondosu Dickson), matsutake (Tricholoma matsutake) en shi-itake (Cortinellus Shiitake) gebruikt. Met betrekking tot de agaricus werd bij de experimenten van de uitvinder gevonden dat deze een krachtiger antitumoractivi-teit vertoont bij gebruik in rauwe toestand dan bij gebruik 10 na drogen, zodat hij na de oogst bij lage temperatuur (4°C) in een koelkast werd opgeslagen en binnen 3 dagen na de oogst werd gebruikt.

Met betrekking tot de andere paddestoelen werden niet zulke significante verschillen in effectiviteit 15 waargenomen tussen het gebruik in rauwe toestand en het gebruik in gedroogde toestand, de toestand waarin ze tot nu toe werden gebruikt in Chinese geneesmiddelen waarop de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van de onderhavige uitvinding werd toegepast, zodat in het onder-20 havige voorbeeld gedroogde materialen werden gebruikt van Poria, Polyporus, (Polyporus umbellatus Fries), maitake (zwart, Grifola frondosu Dickson), matsutake (Tricholoma matsutake) en shi-itake (Cortinellus Shiitake).

Overigens werden twee soorten maitake gebruikt. De 25 in Japan geproduceerde variant wordt hoofdzakelijk gekweekt in de Niigata prefectuur, een sneeuwlandschap. Deze variëteit wordt formeel de sneeuwlandschap-maitake of zwarte maitake genoemd, en in de onderhavige beschrijving wordt deze variëteit aangeduid als maitake (zwart).

30 Anderzijds wordt de in China verkregen maitake (Grifola frondosu Dickson) in de onderhavige beschrijving aangeduid als Polyporus (Polyporus umbellatus Fries) en zonodig van de bovengenoemde maitake (zwart) onderscheiden. In het bijzonder wordt van Polyporus (Polyporus umbellatus 35 Fries) hoofdzakelijk de wortel gebruikt.

De eerste stap van de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit is een roosterstap met ver- Λ ~"i) 19 infraroodstralen, waarbij de bovengenoemde soorten paddestoelen worden geroosterd met ver-infraroodstralen. De bij een dergelijke roosterstap te gebruiken ver-infraroodstralen hebben bij voorkeur een golflengte van ongeveer 4 tot 5 14 μπι. De paddestoelen worden geroosterd onder gebruik van een inrichting zoals een pan, een oven etc., waarvan het binnenoppervlak is bekleed met een keramiek dat ver-infraroodstralen uit zendt met een golflengte in dit bereik. De inrichting zoals een pan, een oven etc. wordt vervaardigd 10 door keramiekpoeder dat ver-infraroodstralen uitzendt te mengen met steen, grind, zand etc. of metaaloxiden.

Voor dit roosteren worden, afgezien van de agari-cus, paddestoelen gebruikt die gedroogd zijn zoals ze in de gebruikelijke Chinese geneesmiddelen worden gebruikt. De 15 agaricus wordt zoals boven vermeld in de rauwe toestand gebruikt.

De bovengenoemde paddestoelen worden in de bovengenoemde inrichting, bijvoorbeeld in een aarden pot gemaakt uit stoffen die ver-infraroodstralen uitzenden zoals 20 graniet, keramiek, Tenshouseki steen etc. en die ver- infraroodstralen uitzenden met een golflengte van 4 tot 14 μτη, gedurende 3 0 tot 9 0 minuten onder langzaam en goed roeren geroosterd, zodanig dat ze niet verbranden.

De roostermethode is niet beperkt tot de bovenge-25 noemde methode en kan elke methode zijn, zo lang die het vrijkomen van /S-glucan van paddestoelen bevordert. Zo kunnen bijvoorbeeld als voor het roosteren te gebruiken bron van ver-infraroodstralen, in aanvulling op de bovengenoemde inrichtingen, andere worden gebruikt zo lang ze een 30 materiaal omvatten dat ver-infraroodstralen met een golflengte van 4 tot 14 μτη uitzendt, zoals platinavezel voor elektromagnetische golven etc.

Na deze roosterstap met ver-infraroodstralen volgt als tweede stap een fermentatiestap. Na de bovengenoemde 35 roosterbehandeling met ver-infraroodstralen wordt met fermentatiebacteriën zoals "Koji" of gist 48 tot 72 uur een fermentatie uitgevoerd in een vochtige kamer van 30 tot 20 36°C. Om de fermentatietijd te bekorten kan hiervoor een fermentatie-inrichting worden gebruikt.

Als de voor de fermentatie te gebruiken micro-organismen kunnen ook andere micro-organismen dan "Koji" 5 worden gebruikt.

Ook kunnen voor het uitvoeren van de fermentatie behalve "Koji" stoffen met fermenterend vermogen zoals rijpe papaya, ananassap, vijgenschillen, druivenschillen, jonge bamboebast etc. gebruikt worden. Ook kunnen spijsver-10 teringsenzymen zoals diastase, pancreatine etc., van micro-organismen afkomstige proteolytische enzymen zoals protease, pepsine, trypsine, etc., lytische enzymen voor polysac-chariden zoals hemicellulase of een voorloper waaruit de bovengenoemde spijsverteringsenzymen of proteolytische 15 enzymen etc. worden gevormd, voor de fermentatie gebruikt worden.

Blijkens de experimenten van de uitvinder echter kunnen betere resultaten worden verkregen wanneer de fermentatie wordt uitgevöerd met behulp van micro-organis-20 men, en met name met "Koji", ter versterking van de antitu-moractiviteit Na afloop van deze fermentatiestap worden de uitgangsmaterialen verpoederd.

Voor het verpoederen kan een commercieel verkrijgbare verpoederaar worden gebruikt, maar een machine die bij 25 het verpoederen een hoge temperatuur genereert, dient bij voorkeur te worden vermeden. De verpoedering kan worden uitgevoerd met een verpoedermethode die geen hoge temperatuur genereert zoals een maalgang.

Het uitgangspaddestoelmateriaal waarop de rooster-30 stap met ver-infraroodstralen en fermentatiestap zijn toegepast, wordt verder onderworpen aan een stap voor het maken van een olieachtig middel. Deze procedure voor het maken van een olieachtig middel dient om het bovengenoemde fijne poeder van het uitgangsmateriaal na fermentatie te 35 omsluiten met een oliecomponent afkomstig van sesam dat is geroosterd met ver-infraroodstralen.

21

Als de voor het maken van een olieachtig middel te gebruiken oliecomponent kan gebruik worden gemaakt van een olie (hierna aangeduid als sesampastaolie) verzameld uit geroosterde sesam. De sesampastaolie is een olie verkregen 5 door rauwe sesam bij een temperatuur niet hoger dan 100°C langzaam en gedurende lange tijd te roosteren, en de sesam na het roosteren te malen en uit te persen. In een dergelijke sesampastaolie blijven door het malen van de sesam gevormde fijne vaste materialen aanwezig, zodat deze olie 10 een pasta-achtig uiterlijk heeft.

Aan een dergelijke sesampastaolie worden de bovengenoemde verpoederde paddestoelen na fermentatie toegevoegd om de fijn verpoederde paddestoelen te omsluiten met de oliecomponent uit de sesam. Door de paddestoelen zo 15 te omsluiten kan het doordringensvermogen daarvan naar de cellen van het aangetaste lichaamsdeel worden versterkt vergeleken met het geval waarin een dergelijke omsluiting met pastaolie niet wordt uitgevoerd. Een dergelijke stap voor het maken van een olieachtig middel is een belangrijke 2 0 stap om te voorzien in de effectieve doelgerichtheid van geneesmiddelafgiftesystemen ("drug delivery systems", DDS) waarvoor de laatste jaren veel belangstelling bestaat.

Weliswaar is de stap voor het maken van een olieachtig middel zoals boven genoemd een belangrijke stap 25 en heeft het zeker de voorkeur een dergelijke stap uit te voeren, maar als het door één of ander probleem niet goed mogelijk is een olieachtig middel te maken, kan een dergelijke stap worden weggelaten. De reden waarom dit mogelijk is, is dat zoals hierna vermeld uit de test blijkt dat als 30 de roosterstap met ver-infraroodstralen en de fermentatie-stap worden uitgevoerd, de antitumoractiviteit al aanzienlijk wordt versterkt ook als de stap voor het maken van een olieachtig middel niet wordt uitgevoerd.

Bovendien kunnen voor het maken, van een olieachtig 35 middel betere resultaten worden verkregen wanneer een gemengde olie wordt gebruikt waarin de bovengenoemde <. f · · H ; ' » 22 sesampastaolie en een uit rauwe sesam verzamelde olie in een geschikte verhouding worden gemengd.

Door de uit rauwe sesam verzamelde olie bij te mengen kan de druppelgrootte van de olie klein gemaakt 5 worden, waardoor het penetrerend vermogen naar de doelcel-len aanzienlijk groter kan worden dan wanneer de paddestoelen worden omsloten met de sesampastaolie, die een hoge viscositeit en een grote druppelgrootte heeft.

Uit rauwe sesam verzamelde olie betekent een olie 10 die is verkregen door rauwe sesam als zodanig te malen en het verkregen materiaal uit te persen en daarna het vaste materiaal te verwijderen, overeenkomend met een commercieel verkrijgbare sesamolie.

De verhouding waarin de sesampastaolie en de 15 bovengenoemde uit rauwe sesam verkregen sesamolie worden gemengd, kan variëren afhankelijk van de toe te voegen hoeveelheid van het fijne uitgangspoeder, en kan goed variëren van 1 tot 3 gewichtsdelen sesamolie op 1 deel sesampastaolie. De mengverhouding van de gemengde olie en 20 het fijne uitgangspoeder kan bijvoorbeeld ongeveer 4 tot 5 gewichtsdelen fijn uitgangspoeder op ongeveer 1 gewichts-deel gemengde olie zijn.

De paddestoelen waarvan de antitumoractiviteiten op de bovengenoemde wijze waren versterkt, werden toege-25 voegd aan het systeem dat lipideperoxide vormt door docosa-hexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht en de hoeveelheid gevormd lipideperoxide werd onderzocht. Daarnaast werden hun antitumoreffecten bij inwendige toediening ook gemeten met klinische tests.

30 Om de werkwijze ter versterking van de antitumor- activiteit met de bovengenoemde uitleg te vergelijken, werden de gevormde hoeveelheid van het bovengenoemde lipideperoxide en de effectiviteit in de klinische tests onderzocht voor respectievelijk het geval dat alleen het 35 roosteren met ver-infraroodstralen op de bovengenoemde paddestoelen werd toegepast, het geval dat alleen een fermentatie met het voor polysacchariden lytisch enzym 23 daarop werd toegepast, het geval dat alleen de fermentatie met "Koji" daarop werd toegepast, het geval dat zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als de fermentatie met "Koji" daarop werd toegepast, en het onbehandelde geval 5 waarin geen behandeling werd toegepast.

Voor het uitvoeren van de bovengenoemde fermentatie met een voor polysacchariden lytisch enzym kunnen diverse voor polysacchariden lytische enzymen worden gebruikt, maar in het onderhavige voorbeeld werd hemicellu-10 lase gebruikt dat een vertegenwoordiger daarvan is.

In het geval dat alleen het roosteren met ver-inf raroodstralen op de paddestoelen werd toegepast, het geval dat alleen de fermentatie met het voor polysaccharide lytisch enzym daarop werd toegepast, het geval waarin 15 alleen de fermentatie met "Koji" daarop werd toegepast, en het geval waarin zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als de fermentatie met "Koji" daarop werd toegepast, werd op het tijdstip dat de respectieve behandelingen werden uitgevoerd het materiaal met de bovengenoemde 2 0 werkwijze tot een fijn poeder gemaakt en in de volgende experimenten gebruikt.

De verpoederingsgraad van de respectieve monsters werd zo ingesteld dat de gemiddelde deeltjesgrootte van de poeders bij alle monsters gelijk was om een effect van de 25 deeltjesgrootte van het poeder uit te sluiten. In het geval zonder behandeling werd de agaricus in rauwe toestand en fijngehakt gebruikt, en werden de andere paddestoelen gebruikt door ze na drogen te verpoederen.

De gevormde hoeveelheid van de bovengenoemde 30 lipideperoxiden werd gemeten zoals hierna beschreven. In een aantal reageerbuizen werd een vooraf bepaalde hoeveelheid docosahexaeenzuur gebracht en de bovengenoemde paddestoelen werden vooraf afgewogen en in verschillende hoeveelheden aan het docosahexaeenzuur toegevoegd en gemengd. 35 De inhoud van de respectieve reageerbuizen werd vervolgens bestraald met ultraviolet licht en de gevormde hoeveelheid lipideperoxiden werd gemeten.

24

Docosahexaeenzuur werd gebruikt door eerst een verdunde oplossing te bereiden waarbij de uitgangsvloeistof met ethanol 10 maal werd verdund, waarna de verdunde oplossing· verder tot 200 maal werd verdund, dit was de 5 uiteindelijke verdunde concentratie.

De monsters van de paddestoelen waarop de bovengenoemde behandelingen waren toegepast (inclusief zonder behandeling) werden toegevoegd aan een vooraf bepaalde hoeveelheid ethanol zodat de paddestoelconcentratie 60 10 mg/ml was, waarna men de ethanol 2 tot 6 weken bij normale temperatuur liet staan, zodat een extractie met ethanol werd uitgevoerd. Om het monster in de test te gebruiken werd het extract verdund tot een eindconcentratie van 0,6 mg/ml.

15 0,05 ml van de op de boven beschreven wijze bereide oplossing van docosahexaeenzuur, 0,1 ml van een paddestoelmonster en 0,85 ml ethanol werden in een rea geerbuis gemengd, zodat het totale volume 1 ml was. Deze reageerbuis werd 3 uur bestraald met ultraviolet licht om 20 lipideperoxide te vormen. Het gevormde lipideperoxide werd gemeten met de TBA-reactie (thiobarbituurzuur-reactie).

Door het gevormde lipideperoxide onder zure omstandigheden te verhitten liet men het vrijgekomen malondialdehyde (MDA) reageren met thiobarbituurzuur (TBA) 2 5 en de gevormde stof met absorptiemaximum werd bepaald, waarmee de gevormde hoeveelheid lipideperoxide indirect werd verkregen.

Voor het uitvoeren van de TBA-reactie werd 0,2 ml 7% natriumdodecylsulfaat, 2 ml 0,1 N zoutzuur, 0,3 ml 30 fosfowolfraamzuur en 1 ml van het reagens, bereid door 1:1 mengen van 0,67% TBA en azijnzuur, toegevoegd aan de respectieve reageerbuizen die waren bestraald met ultraviolet licht, en de TBA-reactie werd uitgevoerd door het geheel 12 minuten na toevoeging op 95°C te houden.

35 Daarna werd het mengsel afgekoeld tot kamertempe ratuur, de TBA-reactielaag werd geëxtraheerd met N-butylal-cohol en voor de meting van de bovengenoemde hoeveelheid . . . · 'S k,, "i. V ' ' 25 MDA werd op de n-butylalcohollaag een fluorospectrofotome-trische methode toegepast. Voor het uitvoeren van de meting werd licht met een golflengte van 515 nm als excitatielicht gebruikt en werd fluormetrie uitgevoerd bij een golflengte 5 van 535 nm. De gebruikte f luorospectrof otometer was een F2000 vervaardigd door Hitachi Ltd. onder gebruik van een 40 0 V fotomultiplicator en de meting werd uitgevoerd met een bandbreedte voor de bestraling met excitatielicht van 20 nm en een bandbreedte van de fluorescentiemeting van 20 10 nm.

De effecten van docosahexaeenzuur op de paddestoelen waarop de bovengenoemde respectieve behandelingen waren toegepast door bestraling met ultraviolet licht in het lipideperoxidevormend systeem werden onderzocht in relatie 15 met de MDA-waarde (die hetzelfde is als de hoeveelheid MDA, getoond als absorptie) die op de bovenstaande wijze werd gemeten. De resultaten worden getoond in Tabel 1.

Daarnaast werden met de bovengenoemde paddestoelen, te weten Poria, agaricus, maitake (respectievelijk 20 zwarte maitake en Polyporus (Polyporus umbellatus Fries)), klinische tests uitgevoerd met patiënten met borstkanker, maagkanker en longkanker, respectievelijk zonder behandeling, met fermentatiebehandeling met voor polysacchariden lytisch enzym, met fermentatiebehandeling met "Koji", met 25 roosterbehandeling met ver-infraroodstralen + fermentatiebehandeling met "Koji", met roosterbehandeling met ver-infraroodstralen + fermentatiebehandeling met "Koji" + behandeling voor het maken van een olieachtig middel. De resultaten worden getoond in Tabel 2, 3 en 4.

30 In Tabel 2 worden de behandelingseffecten van de bovengenoemde paddestoelen waarop diverse behandelingen zijn toegepast op borstkankerpatiënten getoond. Tabel 3 en 4 laten behandelingseffecten op maagkankerpatiënten en longkankerpatiënten zien van de diverse paddestoelen waarop 35 dezelfde behandelingen werden uitgevoerd als in Tabel 2. In de Tabellen 2 tot 4 worden ook effectiviteitspercentages getoond berekend met de volgende formule: 26

Effectiviteitspercentage = (effectief aantal + enigszins effectief aantal) x 100/(effectief aantal + enigszins effectief aantal + niet-effectief aantal) 27

Tabel 1 Effectief van verschillende paddestoelen op MDA-productie

Soort Te testen onderwerp en soort MDA-waarde volgor- behandeling (gemiddeld) de

Controle (geen paddestoel toegevoegd) 115 5 Geen behandeling Poria 269 4

Agaricus 283 3

Polyporus umbellatus Fries 439 1

Maitake (zwart) 398 2

Matsutake 218 5

Shi-itake 189 6

Roosteren met Poria 288 4 ver-infrarood- Agaricus 341 3 stralen Polyporus umbellatus Fries 536 1

Haitake (zwart) 490 2

Matsutake 271 5

Shi-itake 233 6

Fermentatie met Poria ' 284 5 10 voor polysaccha- Agaricus 375 3 ride lytisch en- Polyporus umbellatus Fries 551 1 zym Maitake (zwart) 525 2

Matsutake 304 4

Shi-itake 265 6

Fermentatie met Poria 296 5 "Koji" Agaricus 399 3

Polyporus umbellatus Fries 594 1

Maitake (zwart) 528 2

Matsutake 302 4

Shi-itake 280 6 15 Roosteren met Poria 334 6 ver-infrarood- Agaricus 489 3 stralen + fermen- Polyporus umbellatus Fries 799 1 tatie met "Koji" Maitake (zwart) 768 2

Matsutake 412 4

Shi-itake 381 5

Roosteren met Poria 362 6 2 0 ver-infrarood- Agaricus 509 3 stralen + fermen- Polyporus umbellatus Fries 827 1 tatie met "Koji" Maitake (zwart) 792 2 + maken van olie- Matsutake 430 4 achtig middel Shi-itake 397 5 25 Respectieve paddestoelen werden toegevoegd in een hoeveelheid van 6 mg/ml 1 . ’>#· oV> <υ S’ ο .υ ο

<D

υ

* X

ri ω " M Q.

Q) to t! -η C a) :fl) -u •H > (fl

W H

id o <D

Qj <1) O LTIOLD ooo o o in O o Jj Γ* m-i «* - * o csofNj inmui in in h o in

(D a·—' r-r^iH rHCNCN rHCNCN Η (N ^ M mfl C

-M ____:_____ 0

Π B

n3 iw M *h 4J ^ (Ö ω u jj lj J-) D —4 H d) IM »-» Ο λ ·Η 0-4 r-- Γ" vr> lil OJ H Ο O ^OH (N 10 F- g g Ï3<ü m m m m m m m m n co m m n ts H ^

Ï-------- M

ft 0 ω iw · — lH

O “ βΐ (L) *4-1 CL) 53 -π -η ö φ jj C o. 513 ο -η ra 0) o Cn 0) CQ JJ c H ° c ΐ1 M U 0

Φ ü W ai rooirn^vDLrtinr--!D^!Dt~-incocn (D Φ B

0 ______ft M-l

4J ft M-l rH

W Jj i„ Φ Φ id O) a a) jj jj U J* Ü m to ö 'Ö jj o a) G fd rt ÏÏ £ jj -H rd

_ ft o I m-ι oj I ^ II (U N

^ CQ W O H t—I Γ-Ι fsj Η Π Ti og t—( n VD H {yj [ƒ} ,—( 05 a) ------- cn fd 'Ö I—I -Η (d cl rd ö jj <d jj <u o

H Ö H

H rd + *H fd

A >W

υ rH Φ m td ή M fd jj 0) JJ u > O <L>

JJ U-J

^ co to to w co ^ .

(0 Ga>3a>3a)Go)30)jJ pi] P

i> OJJUJJOJJOJJUJJfl) (I) ~ 4-) fd -Η 1¾ π! ·Η (fl n) -ri Πί fl -H ti Λ) ·Η HJ Z1 w U -H J-i aJ ·Η M jj *H MU *h U xJ *H Mi) Ah m 0 OOwii OtJlifl OtJ)(i OOlid ODlid rn

w PM < ε CM fC E CM rtj 2 ft < 2 ft < 2 W

-P_____;__-Η II rH

υ ο) Q) , c = m ai n ΜΗ rt ·Η -H a) IT) (d o o' 0 ι-h 'i~> fO Η 0) υ i « I W ο) Λί jj

m S Ήr 1= ? 5 Ö W

01 >, o jj O J-H (d D O

Ö ri Ma)H(U6_r! Π O

-rH 0 «Ε «Ê H ς Π wp> H -rfli-IUlMD-Mrl (1) fl) M 'n C -Η β -H jj -. λ .

Ό opw irtiiBUCQ CQ Ό

^ CH = MJJM-lJfllrn i\ _I

be 01 N (UfiaJÖCUÏÏ ^ •O-H C 4JÖJJ >D)J»IU-Hp -Η φ r)r4 -H 0)0)0) B grljj fl) fT) bj Ο) ΓΗ B B JJMJJMO-*^ “· U‘

® T3 0) Jj 0)0)0)0) HJ

pq C T) 0)00) E'wp'wfirH -H Q)

(0 Π-ΗΙ0-Η i0_{ L r-H

Λ ns jj-hjj G+C + >t0 F* P

OO 0) GrtJJrtaiO) JJ -Η MH

J3 0) jJNJJ MfiHRGfl) jj -.

_i Λ GrHG 0)0)0)0)0)>ii 7; 'Z!

rH -u 0) 0) JJ rH JJ rH JJ tJ) O <U

fl)M G B id B mrttnratd A) kj Ο0 Ο) ΜΌΜ Ο Μ 0 Μ E , . .* ,,

rMO 0) 0)-M0) 04J04-) HJ ft A

(dw U h u h Kmploi+Q) M-J Q) Η ιί------- » -_- .....I__________ 1 1 'I ÏU ω trj

ID O LD

rH H

<υ tn m

XJ

G

d) Ü k <u _ ft C w 0) Ü *P d> d ü =<u > Η -η X> o CÖ 0) or'O oor- mt^o o» t- r- **, 4-t — r- r- r- ^ - - - - - - - *. * ·>

Mi 4-1 éf ^ . V O VD O OOVO n U3 O VDVDVD

H W'-' VDVDVD Η Η N H 05 05 H OJ rf Hm** 0) ________

M

G Ή nt 2 Μ ΐ 01 o

zi U (I

>0 0)0-1

f(J ·Η 4-1 DO CX) CD r- ΙΛ ^ > ** OJ VO (N CO LOiTiVD

g ___ 2d) (N 05 05 OJ 05 05 05 05 05 05 05 H 05 Η H

P* S m ^ Ö ° 8 |ï g ö « 3¾ o

Φ Dl « CQ

H o 'c tj U

O) 2 WO) Μ π H Hnn co ut route·* -j* r* co (15 O -______α

4J

W s M-, 05 Q) X (U 4-) s S ï ® Ό Ji ü 05 nj σι o; μ Z ra <w m (¾ ra iw 05 u* 2 ω O O r-i 05 05 m H 05 η Η Π l/) H ** V£) fy» ™ <d _______

Ό H

G nJ

05 4-> H ö H (0

H (C

A

O i-5

W (O

M (Ö

05 4J

> O

4-> P ω ra ra m ω (U 30) DO) 30) 30 3 0) 4-5 >> 0Λ UJi ÜJd OX U 40 fl) r JJ fÖ-HrO nJ-H ni fÖ -Η (0 Πί ·Η (O (Τί·Ηίΰ Zl μ ·η μ jj -η μ jj -η μ jj -μ μ jj -η μ *j Λ η ο μ ίο ·η μ ra -η μ π! -μ μ π! -η μ ra -η Ε; ο obtra oenra oenra ο σι ra o m ra rn 0) tn CUiiSftrtEOirtEftrtEftfïE ω

4-)______-H

U

05 | C E (O

H4 ra -η ·μ 05 ui Λ ·η ·π ^ υ o om f-t 0) o i Ui i Μ ο) Λί rn <o Oe'Oe'dfrt zL ra o o tj 2 ü) >1 O J-> O J-> *H (ü H H k Φ k d> E r! 5 O rt 6 πί E ^ a « u k en _ r—I *<H 4-5 d) 4-5 d) Ή Ö

m U ·η Ö -H G -H 4J

O o -H JJ ·Η 1) i ^ Τί OEM i<öinJUC/3 h en >>ιε k j-> k xJ cd rn 2 G tj) n <υ G d) G d) Ij

flj *r4 C JJÖ X) > Q) >d)*H iJ

rjr-5 -H 0)0)0) E E rH I)

't? <U Η E 6 JJM0JMO

0)¾ <u x 0) 0) 0) 0)

m C T3 0) ü 0) E 4-1 £ 4-5 e rH

Π3 C *H (0 *H fi «4 Λ rö xJ *H 4-J CJ+ fi + > lü

ΓΛΦ rC rtJ4Jrt 0) 0) 4-J

Λ 0) jj>,4J kö k ö ö Al , 43 C rH C Q)<ü0)d)0)zi

rH XJ 0) Φ XJ rH xl H Ai UI

ni k C Ed) E tore mnJrt Z. O 4) kTJ k Ok 0 k £ . .

rM O d) d)*H(U O J-l 0 X-> 4-J

ffl ü) LD Ci4 k t, ΟίΜ ftJW+ (1) η IL 11 ..... 1 1 -J -_-^=J w m o

rH

0) cn fÖ

4J

C

0) u μ 4) w ft ü w « η JJ 0) Ö £ :Q) >

-H -H

4J t; (ri OJ oo ooo ooo o o o o o o 0 OH O - - - - - - - - - > - ---

Mi «w <*» -OO OLTlin LD O O LD O LD O ΙΓ! O

Η W »— Lil Η Η Η Η n rH CN rH CN ΓΝ r> Ifi 0) ________

M

Ö «Η rt « Λ! ί tn υ

ίί 4J <U

Μ 0) ΙΜ Ο -η u-ι chcooo οογ-γλ r* u> cn r- ιΗ vd η ο ^ I ^ 3d) Η Η Η Η Η Η rH rH W Η Η Η Η ι—I Η (¾ ο raiH Ö 0 8 |ΐ g G gSS Ο Ü) Ρ< tn ω ω Η ο ’25 Μ Φ ο Η 0) I Η (Ν η Η Ν (ΝΠΙ/Ί Η Π ID CN*J»tn 0 Ο ~______ft 4J .

W 5 ΙΗ <υ

ω λ a 4-J

S S υ “ 'Ö Λί υ 0 Φ S1 ίί -υ p4 0 iï 0 ω Ο Ο rH Η Η η Η Η Μ CN ΓΟ ^ Μ η 1/1 \J) (1) _I______ »0 τΗ d rö

Φ -U

η d γΗ I rd •Η rd Λ ϋ Η w fd Μ td Φ 4-> ϊ> ο 4-) ^ ω w w ra w (0 ί <υ ία) ί <υ ία) ί «) ϋ »> U Λί L) Λί OM VX Λ) ^ JJ nj-rlnj f0 -Η Π3 Γΰ·Ηί0 (Ö *Η lö (Ö ·Η Π3 Ζ, μ ·Η k D ·Η kjj -Η μ 4-) ‘Η Μ 4-1 ·Η Μ 4-) Λ rj ο μ ra -η μ « -η μ <α ·η μ γο ·η μ <α ·η Ρ ο ο m ns ο σι ra odifc ocnai ο cn cö rn

O' co ft < S ft < S ft S ft < Σ ft rtj Σ W

4J______-H

υ

Φ , s * W

m m *H -H QJ

Ml Λ *n -m .

^ u o o h «7 Φ U i ^ 0) ^ m Λ Ό c Ό c Ό μ J2. W O O T3 2 ö) >i 04J0JJ-r4fd rj rH μ qj μ a) E r< 5 o ra e re ε •π a = u μ cn _ r-i -η M-4 o «μ a) -η ö sit μ T~» ö *H ö -H 4J Λ» _5 O O -H 4J Ή 4J Λ ^

Td OÊ!a4 i fd ι m u CO

Öcn >Sc μ u μυ (ö Γλ q cd n a> q <υ q a) zi

Π3 *h q 4jq 4_) >a) ><d*h P

rH -H Q)0)<D É 6 H ij

Pia> »h £ e-μμ-μμο Φτ3 a> Λ a)a)a)a) pQ q O <uu φ £ ^ E UH q h ai q -μ ω -η rt ^ Λ m 4J*h ij q+ q + > ίυ 0) Λ ra U aj 0) <ü 4-) Λ o; jj>,4_) μβ μ q q λι , Λ β ιΗ β φφ 0)0)0) 2i

Hj-J 0) 0) 4J H 4-) ι—1 Ο» ηιμ q ë o) e was wrarc J:o o) μό μ ομ ome ,, Λο 0) 0) Ή 0) Ο 4J Ο 4J 4-) (dw ü fe μ tfw ccjw+ ο; Η 1L··· ·· Π 1 . 1 ,___ !„ 1 -JI Κ , ιη ο I—i 31

Uit voorgaande Tabel 1 blijkt dat bij dezelfde soort paddestoelen de MDA-waarde, een index voor de gevormde hoeveelheid lipideperoxide, wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen wordt toegepast groter wordt dan bij 5 het geval zonder behandeling, wanneer de fermentatie met voor polysaccharide lytisch enzym wordt toegepast groter wordt dan wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen wordt toegepast, wanneer de fermentatie met "Koji" wordt toegepast groter wordt dan bij de fermentatie met voor 10 polysaccharide lytisch enzym, wanneer zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als de fermentatie met "Koji" wordt toegepast groter wordt dan wanneer de fermentatie met "Koji" wordt toegepast, en wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen, de fermentatie met "Koji" en het maken 15 van een olieachtig middel alle drie worden toegepast groter wordt dan wanneer zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als de fermentatie met "Koji" wordt toegepast.

Deze tendens geldt algemeen, ongeacht de voor de tests gebruikte soort paddestoelen, behalve voor Poria bij 20 de vergelijking tussen het roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatie met voor polysaccharide lytisch enzym, en voor de matsutake (Tricholoma matsutake) bij de vergelijking tussen de fermentatie met voor polysaccharide lytische enzym en de fermentatie met "Koji".

25 Vrijwel dezelfde MDA-waarde (om precies te zijn is de waarde van de ene behandeling ongeveer 1% groter dan die van de andere behandeling) kan worden verkregen wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen wordt toegepast en wanneer de fermentatie met voor polysaccharide lytisch 30 enzym wordt toegepast op Poria, en wanneer de fermentatie met voor polysaccharide lytisch enzym wordt toegepast en wanneer de fermentatie met "Koji" wordt toegepast op de matsutake (Tricholoma matsutake).

Uit de Tabellen 2 tot 4, waarin de resultaten 35 worden getoond van de klinische test met het toedienen van Poria, agaricus, maitake (zwarte maitake, Polyporus (Poly-porus umbellatus Fries)) waarop de bovengenoemde respectie- 32 ve behandelingen werden toegepast, aan borstkankerpati-enten, maagkankerpatiënten en longkankerpatiënten, blijkt dat de effectiviteitspercentages in de respectieve gevallen van borstkankerpatiënten, maagkankerpatiënten en longkan-5 kerpatiënten, bij dezelfde soort paddestoelen, wanneer de fermentatie met voor polysaccharide lytisch enzym wordt toegepast hoger worden dan in het geval zonder behandeling, wanneer fermentatie met "Koji" wordt toegepast hoger worden dan wanneer de fermentatie met voor polysaccharide lytisch 10 enzym wordt toegepast, wanneer zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als de fermentatie met "Koji" worden toegepast groter wordt. dan wanneer de fermentatie met "Koji" wordt toegepast, en wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen, de fermentatie met "Koji" en het maken 15 van een olieachtig middel alle drie worden toegepast hoger wordt dan wanneer zowel het roosteren met ver-infraroodstralen als fermentatie met "Koji" worden toegepast.

Uit Tabel 2 blijkt voor bijvoorbeeld Poria dat het effectiviteitspercentage bij toepassing van het roosteren 20 met ver-infraroodstralen + fermentatie met "Koji" + het maken van een olieachtig middel in vergelijking met het onbehandelde geval stijgt van 7,5 tot 20,0%, ofwel ongeveer driemaal. Bij de agaricus stijgt het effectiviteitspercentage van 7,5 tot 35%, ofwel 4,9 maal. Bij de maitake stijgt 25 het effectiviteitspercentage wat betreft het tot uiting komen van een antitumoreffeet verbazingwekkend van 10,0 tot 57,5%, ofwel 5,75 maal. Deze tendens is hetzelfde in Tabel 3 en 4 .

Uit de bovenstaande resultaten blijkt dat de 30 behandelingsmethode waarbij de roosterstap met ver-infraroodstralen, de fermentatiestap met "Koji" en de stap voor het maken van olieachtig middel achtereenvolgens worden gecombineerd, effectief kan worden gebruikt als werkwijze voor het vergroten van het tot uiting komen van de antitu-35 moractiviteit van paddestoelen, ofwel als de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit.

33

Tabel 5 Hoeveelheid vrij /3-glucan in de respectieve soorten onbehandelde paddestoelen en paddestoelen waarop de roos-terbehandeling met ver-infraroodstralen en de fermenta-tiebehandeling met "Koji" zijn toegepast 5 Soort behandeling Soort Hoeveelheid β- glucan

Onbehandeld Agaricus 9,0 g/100 g

Maitake (zwart) 24,4 g/100 g

Roosterstap met ver- Agaricus 14,2 g/100 g infraroodstralen + Maitake (zwart) fermentatiestap met 30,4 g/100 g 10 "Koji"

Ook werd de hoeveelheid /3-glucan als effectief bestanddeel met antitumoractiviteit gemeten in het geval van de behandeling ter vergroting van het tot uiting komen van het bovengenoemde antitumoreffeet en het geval zonder 15 behandeling. De gebruikte paddestoelen waren de agaricus en maitake (zwart) die in Tabel 2 tot 4 hoge effectiviteits-percentages lieten zien. De analyses werden overigens uitgevoerd op het Food Analysis Center in Suita, Osaka, Japan. De resultaten worden getoond in Tabel 5.

2 0 Uit de resultaten van Tabel 5 blijkt dat de hoeveelheid vrij jS-glu.can toenam wanneer de roosterbehande-ling met ver-infraroodstralen + de fermentatie met "Koji" werden toegepast, zowel bij de agaricus als de maitake. Wat de maitake betreft kunnen behalve bij de zwarte maitake 25 dezelfde effecten ook worden verkregen bij de Polyporus (Polyporus umbellatus Fries). Uit de resultaten van de klinische tests in Tabel 2 tot 4 blijkt dat de antitumoref-fecten groter zijn bij toepassing van de roosterbehandeling met ver-infraroodstralen + de fermentatie met "Koji" dan in 30 het geval zonder behandeling.

Door de resultaten van Tabel 2 tot 4 en die van Tabel 5 te combineren kan dus worden gezegd dat de antitu-moreffecten van /3-glucan met name opmerkelijk tot uiting komen wanneer de hoeveelheid vrij /3-glucan groot is.

34

De uitvinder zette de bovengenoemde reeks onderzoeken voort door de bovengenoemde hypothese op te stellen dat bij niet-behandelde paddestoelen β-glucanen met antitu-moractiviteit zich in een onbeweeglijke toestand bevinden 5 doordat ze aan elkaar gebonden zijn tot een keten, wat de niet-geactiveerde toestand kan worden genoemd, en dat bij inwendige toediening van de paddestoelen de keten door het maagsap van een gemiddelde persoon niet kan worden doorgeknipt, waardoor de antitumorwerking niet zoals verwacht tot 10 uiting komt. Zoals echter boven vermeld kan worden gevonden dat een stijging van de hoeveelheid vrij β-glucan een opmerkelijk effect heeft op het tot uiting komen van de antitumorwerking en dat de resultaten die volgens de hypothese van de uitvinder te verwachten zijn, kunnen 15 worden verkregen.

Het preparaat geproduceerd met de roosterstap met ver-infraroodstralen, de fermentatiestap en de stap voor het maken van het olieachtige middel, die de als boven beschreven werkwijze ter versterking van de antitumoracti-20 viteit vormen, is zoals uit Tabel 5 etc. blijkt een preparaat waarin de hoeveelheid vrij /3-glucan is toegenomen en toont bij inwendige toediening effectief de antitumorac-tiviteit. In vergelijking met het preparaat dat onbehandelde paddestoelen bevat waarop de bovengenoemde werkwijze 2 5 ter versterking van de antitumoractiviteit niet is toegepast, is de antitumoractiviteit aanzienlijk versterkt.

Ook blijkt uit Tabel 1 dat de volgorde van de hoogte van de MDA-waarde van de paddestoelen door verschillende behandelingen inclusief het ontbreken van een 30 behandeling, kan veranderen. In de in Tabel 1 getoonde volgorde blijkt met betrekking tot de drie soorten Poria, matsutake en shi-itake dat de volgorde, dat wil zeggen de effectiviteit van de antitumoractiviteit, kan veranderen bij de drie behandelingsmethoden, te weten het ontbreken 35 van behandeling, fermentatie met "Koji" en roosteren met ver-infraroodstraling + fermentatie met "Koji".

0 ? 1 35

Zo blijkt bijvoorbeeld dat in het geval van het ontbreken van een behandeling de antitumoractiviteit in stijgende volgorde is: Shi-itake, Matsutake en Poria, terwijl wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen en 5 de fermentatie met "Koji" worden toegepast, de antitumoractiviteit in stijgende volgorde is: Poria, Matsutake en Shi-itake. Het blijkt dat het bij toepassing van de bovengenoemde werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van de onderhavige uitvinding mogelijk is paddestoelen die 10 in onbehandelde toestand waren beoordeeld als hebbende weinig antitumoractiviteit, in de volgorde te doen stijgen.

Op het gebied van de Chinese geneesmiddelen waarbij een natuurlijk ruw geneesmiddel wordt gebruikt, komen zeldzame soorten voor waarbij geen stabiele opbrengst 15 kan worden gegarandeerd, ook al zijn het paddestoelen met een hoge antitumoractiviteit. Wanneer echter de bovengenoemde werkwijze van de onderhavige uitvinding wordt gebruikt, is het mogelijk in plaats van een dergelijke zeldzame soort paddestoelen te gebruiken of te kweken 20 waarbij een voldoende opbrengst kan worden gegarandeerd. Zo kan een stabiele aanvoer en een lage prijs van het product worden verkregen zodat velen effectief profijt kunnen hebben van de antitumoractiviteit van paddestoelen.

Overigens wordt in de bovenstaande toelichting als 25 beste uitvoeringsvorm alleen de behandeling vermeld waarbij alle drie behandelingen, te weten de roosterbehandeling met ver-infraroodstralen, de fermentatiebehandeling en de behandeling voor het maken van een olieachtig middel, worden toegepast. Wanneer echter alleen de roosterbehande-30 ling met ver-infraroodstralen wordt toegepast, of wanneer alleen de fermentatiebehandeling met een voor polysaccharide lytisch enzym zoals hemicellulase etc. wordt toegepast, of wanneer alleen de fermentatiebehandeling met micro-organismen zoals "Koji" etc. wordt toegepast, of wanneer 35 alleen het roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatiebehandeling worden toegepast, worden de antitumoref- 36 fecten reeds versterkt vergeleken met het geval zonder behandeling.

Wanneer dus om één of andere redenen zoals de toestand van apparatuur het maken van een olieachtig middel 5 niet goed kan worden uitgevoerd, kunnen de roosterbehande-ling met ver-infraroodstralen en de fermentatiebehandeling met micro-organismen gecombineerd uitgevoerd worden, en kan zo de antitumoractiviteit aanzienlijk worden versterkt vergeleken met het geval zonder behandeling.

10 Bovendien kan bij de behandeling waarbij op de bovengenoemde paddestoelen de drie behandelingen worden toegepast, te weten het roosteren met ver-infraroodstralen, de fermentatiebehandeling en de behandeling voor het maken van een olieachtig middel, of wanneer op de paddestoelen 15 het roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatiebehandeling worden toegepast, behalve de fermentatiebehandeling met micro-organismen zoals "Koji" of gisten of bacteriën, een fermentatiebehandeling worden gebruikt waarbij een voor polysaccharide lytisch enzym wordt gebruikt.

2 0 Bij de stap voor het maken van een olieachtig middel in de bovengenoemde werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit wordt een sesampastaolie verkregen uit geroosterde sesam gebruikt, maar behalve sesam kunnen ook plantenoliën gebruikt worden verkregen door het roosteren 25 van soja, maïs, saffloer, teunisbloem, rijstzemelen, raapzaad etc. met ver-infraroodstralen gevolgd door uitpersen .

Ook kan aan het preparaat dat paddestoelen bevat waarop de bovengenoemde werkwijze ter versterking van de 30 antitumoractiviteit is toegepast, in aanvulling op de materialen verkregen door behandeling van paddestoelen met de bovengenoemde werkwijze, elke willekeurige component worden toegevoegd die geen nadelige effecten heeft op de antitumoractiviteit, zoals vitaminen.etc.

35 Met een dergelijke samenstelling kan een door de uitvinder ontwikkeld preparaat worden geformuleerd dat een onderdrukkend effect op actieve zuurstof heeft. Het prepa- 37 raat dat een ruw geneesmiddel met versterkte antitumoracti-viteit bevat en dat een dergelijke samenstelling heeft, kan worden verschaft in de vorm van een middel dat gemakkelijk inwendig kan worden toegediend door het in te kapselen in 5 een gelatinecapsule etc.

Door gebruik van een geschikte excipiënt, een bindmiddel etc. kan door middel van tabletteren een tablet worden gemaakt, of kan goed een preparaatvorm zoals een korrel of een pil worden gemaakt. Hoewel de onderhavige 10 uitvinding een werkwijze ter versterking van de antitumor-activiteit bij inwendige toediening is, kan worden gezegd dat bij een injectiepreparaat dat is bereid onder gebruik van paddestoelen waarop de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit is toegepast, naar verwachting als 15 effect een vergroting van het tot uiting komen van het antitumoreffect zal optreden vergeleken met het geval waarin de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit niet is toegepast.

Overigens werd de bovenstaande toelichting gegeven 20 aan de hand van het gebruik van paddestoelen zoals agari-cus, maar de paddestoelen zijn niet noodzakelijkerwijs beperkt tot de bovengenoemde, en elke andere paddestoel kan worden gebruikt zo lang hij (3-glucan bevat. Dit kunnen bijvoorbeeld shimejitake (Lyophyllum decastes), enokitake 25 (Flammulina velutipes) etc. zijn.

Bovendien kan een ruw geneesmiddel met een ander polysaccharide met antitumoractiviteit dan (3-glucan worden gebruikt. Verder kan de werkwijze worden gebruikt als werkwijze ter versterking van het tot uiting komen van het 30 antitumoreffect van een polysaccharide met antitumoractivi-' teit zoals (3-glucan in natuurlijke of gekweekte producten die afkomstig zijn van allerlei planten waaronder paddestoelen .

< s' i ^ $-v

: J· P

38

UITVOERINGSVORM

In de onderhavige uitvoeringsvorm worden een werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel, en een 5 werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een behandeling van een ruw geneesmiddel op de.antitumoractiviteit uiteengezet.

Aan het hiervoor onder VERSTERKING VAN DE ANTITUMORACTIVITEIT uiteengezette experimentele systeem waarin 10 lipideperoxiden worden gevormd door bestraling met ultraviolet licht, wordt een ruw geneesmiddel toegevoegd ter beoordeling van de antitumoractiviteit, bijvoorbeeld paddestoelen, en de gevormde hoeveelheid lipideperoxide wordt onderzocht. Wanneer de paddestoelen met stijgende 15 hoeveelheden worden toegevoegd, vertoont een paddestoel die een tendens laat zien de gevormde hoeveelheid lipideperoxide aanzienlijk te doen stijgen, bij toediening een krachtige antitumoractiviteit.

Dat wil zeggen, wanneer de stijging van de gevorm-20 de hoeveelheid lipideperoxide groot is op basis van de stijging van de concentratie van de toegevoegde paddestoel, kan de paddestoel worden geacht een krachtig antitumoref-fect te vertonen bij inwendige toediening. Zo worden meerdere soorten paddestoelen in het bovengenoemde experi-25 mentele systeem ingebracht, en wanneer de stijging van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide op basis van de stijging van de concentratie van de toegevoegde paddestoel voor de verschillende paddestoelen wordt vergeleken, kan de volgorde worden vastgesteld van de effectiviteit voor het 30 vertonen van een antitumoreffeet bij inwendige toediening van de meerdere soorten paddestoelen.

Hierna worden de bovengenoemde beoordelingswerk-wijzen van deze uitvoeringsvorm van de uitvinding beide uiteengezet gebaseerd op de bovengenoemde voorbeelden. 35 Wanneer de MDA-waarden met betrekking tot de respectieve behandelingswerkwijzen in bovengenoemde Tabel 1 met elkaar .· ί .

39 worden vergeleken, blijkt dat alle gevallen waarin een behandeling zoals roosteren met ver-infraroodstralen etc. is toegepast, een grotere MDA-waarde vertoonden dan wanneer geen behandeling werd toegepast.

5 Wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen of de fermentatie met "Koji" wordt toegepast, is de MDA-waarde groter bij de paddestoelen waarop de fermentatie met "Koji" is toegepast. Wanneer de fermentatie met "Koji" en het roosteren met ver-infraroodstralen in combinatie worden 10 toegepast, is de MDA-waarde groter dan wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen of de fermentatie met "Koji" alleen wordt toegepast. Bovendien is de MDA-waarde bij toepassing van drie behandelingen, te weten het roosteren met ver-infraroodstralen, de fermentatie met "Koji" en het 15 maken van een olieachtig middel, groter dan wanneer het roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatie met "Koji" worden toegepast.

Anderzijds blijkt uit de bovengenoemde Tabellen 2, 3 en 4, waarin klinische tests werden uitgevoerd met 20 betrekking tot borstkanker, maagkanker, en longkanker, bij het onbehandelde geval, de fermentatiebehandeling met voor polysaccharide lytisch enzym, de fermentatiebehandeling met "Koji", de roosterbehandeling met ver-infraroodstralen + de fermentatiebehandeling met "Koji", en de roosterbehandeling 25 met ver-infraroodstralen + de fermentatiebehandeling met "Koji" + de behandeling voor het maken van een olieachtig middel, met betrekking tot Poria, agaricus, maitake (zwarte maitake en Polyporus (Polyporus umbellatus Fries)), dat bij dezelfde paddestoel het klinische effect groter wordt 30 naarmate een behandeling met een hogere in Tabel 1 getoonde MDA-waarde wordt toegepast.

Uit deze resultaten blijkt dat de omvang van het klinische effect, dus de effectiviteit van het antitumoref-fect, kan worden beoordeeld aan de hand van de MDA-waarde 35 als index, en gesteld kan worden dat de behandeling die de hoogste MDA-waarde tot gevolg heeft, het meest effectieve antitumoreffect vertoont.

40

Dit betekent dat wanneer de MDA-waarde groot is, wat betekent dat er bij bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht een grote hoeveelheid lipideperoxide is gevormd, er kan worden gesteld dat de effectiviteit van 5 de behandeling op de antitumoractiviteit van de paddestoelen groot is.

Wanneer de resultaten van Tabel 1 en die van Tabel 2 tot 4 worden vergeleken bij dezelfde behandelingswerkwij-ze van de paddestoelen, blijkt de volgorde van de hoogte 10 van de MDA-waarde in overeenstemming te zijn met de volgor de van de hoogte van het effectiviteitspercentage bij de klinische effecten. Wanneer dus aan het systeem dat lipideperoxide vormt door bestraling van het bovengenoemde docosahexaeenzuur met ultraviolet licht, een andere padde-15 stoel waarop dezelfde behandeling is toegepast in dezelfde concentratie wordt toegevoegd, en de gevormde hoeveelheid lipideperoxide wordt getoond als de MDA-waarde op dezelfde wijze als in de bovengenoemde uitvoeringsvorm, dan kan worden gezegd dat een paddestoel die een grote hoeveelheid 20 MDA vormt, een effectief antitumoreffect zal vertonen.

Van de respectieve soorten paddestoelen kan dus een antitumoreffect bij inwendige toediening worden verwacht als de paddestoelen een grote MDA-waarde hebben, wijzend op een grote hoeveelheid lipideperoxide gevormd 25 door bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht. Dat betekent dat zonder het uitvoeren van klinische tests de effectiviteit van de antitumoractiviteit van de respectieve soorten paddestoelen bij inwendige toediening kan worden voorspeld.

30 Overigens is de bovenstaande uiteenzetting gegeven aan de hand van het gebruik van paddestoelen zoals de agaricus etc.,· maar de paddestoelen zijn niet alleen beperkt tot de bovengenoemde paddestoelen. De onderhavige uitvinding kan worden toegepast op andere paddestoelen dan 3 5 de bovengenoemde zo lang ze maar /3-glucan bevatten.

Bovendien kan de onderhavige uitvinding worden toegepast op paddestoelen die andere polysacchariden met & > ^·· 41 antitumoractiviteit bevatten dan jS-glucan. Verder kan de onderhavige uitvinding worden toegepast op allerlei ruwe geneesmiddelen zoals natuurlijke of gekweekte producten afkomstig van andere planten dan paddestoelen die polysac-5 chariden met antitumoractiviteit zoals jö-glucan bevatten.

Ook werd in de bovenstaande uiteenzetting docosa-hexaeenzuur gebruikt, maar ook een ander vetzuur dan docosahexaeenzuur kan gebruikt worden, bijvoorbeeld een onverzadigd vetzuur waarbij bij bestraling met ultraviolet 10 licht door toevoeging van de bovengenoemde paddestoelen een hoeveelheid lipideperoxiden wordt gevormd. Verder kunnen deze onverzadigde vetzuren waarbij door bestraling met ultraviolet licht door toevoeging van de bovengenoemde paddestoelen een hoeveelheid lipideperoxide wordt gevormd 15 voor de bovengenoemde beoordelingswerkwijze afkomstig zijn van een levend lichaam, maar ook kan een niet van een levend lichaam afkomstig vetzuur worden gebruikt, dat wil zeggen een synthetisch vetzuur.

Door paddestoelen met een carcinostatisch polysac-20 charide in verschillende concentraties toe te voegen aan het systeem dat lipideperoxiden vormt door bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht zoals boven uiteengezet, en door bij de respectieve concentraties de hoeveelheid gevormde lipideperoxiden te bepalen, kan eenvoudig de 25 gemiddelde geschikte toedieningsdosis in overeenstemming met het stadium van voortschrijding van de kwaadaardige tumor zoals kanker worden voorspeld zonder met de respectieve te 'gebruiken paddestoelen klinische tests uit te voeren.

30 Het verband tussen de concentratie van de padde stoel en de MDA-waarde is namelijk op de boven beschreven wijze vast te stellen, en het verband tussen de MDA-waarde en de effectiviteit daarvan in het desbetreffende voort -schrijdingsstadium van kanker wordt vooraf voor een bepaald 35 soort paddestoel bevestigd met een klinische test. Wanneer door zo te werk te gaan de concentratie van die paddestoel wordt teruggerekend naar een MDA-waarde waarvan was beves- 42 tigd dat die effectief is in het desbetreffende voort-schrijdingsstadium van een tumor zoals kanker etc., dan is eenvoudig een gemiddelde dosis voor inwendige toediening te voorspellen uit de concentratie van de paddestoel.

5 Bovendien kan met de onderhavige uitvinding de antitumoractiviteit van ruwe geneesmiddelen worden vergeleken via een gemeenschappelijke index zoals de MDA-waarde, zodat de antitumoractiviteiten van de verschillende soorten ruwe geneesmiddelen die tot nu toe werden vergeleken door 10 klinische tests uit te voeren, met elkaar kunnen worden vergeleken zonder klinische tests uit te voeren, dat wil zeggen zonder de patiënt aan enig risico bloot te stellen.

De betekenis van de onderhavige uitvinding is dus dat de MDA-waarde is ontdekt als parameter die als gemeen-15 schappelijke maat kan worden gebruikt voor de respectieve soorten ruwe geneesmiddelen, en dat antitumoractiviteiten onderling kunnen worden beoordeeld doordat een hoge MDA-waarde kan worden gecorreleerd aan een hoge antitumoractiviteit, zodat een aantal ruwe geneesmiddelen eenvoudig met 20 elkaar kunnen worden vergeleken.

Volgens de werkwijze ter beoordeling van de antitumoractiviteit van de behandeling van de ruwe geneesmiddelen volgens de onderhavige uitvinding kan de effectiviteit met betrekking tot de antitumoractiviteit van de 25 verschillende soorten op de ruwe geneesmiddelen toegepaste behandelingsmethoden eenvoudig binnen korte tijd worden beoordeeld.

Volgens de werkwij ze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van de ruwe geneesmiddelen volgens 30 de onderhavige uitvinding, kan de effectiviteit van de ruwe geneesmiddelen bij inwendige toediening worden voorspeld zonder klinische tests uit te voeren. In vergelijking met de gebruikelijke werkwijze waarbij de resultaten kunnen worden verkregen door een lange reeks dierexperimenten of 35 klinische tests uit te voeren, is het zoeken van een antitumoreffectieve stof door screening van een uiterst 43 groot aantal natuurlijke producten eenvoudig uit te voeren.

Claims (13)

1. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op een ruw geneesmiddel dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat, toe te passen behandeling op die 5 antitumoractiviteit, waarbij men het ruwe geneesmiddel waarop de behandeling is toegepast, toevoegt aan een systeem dat lipideperoxiden vormt door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht, en het effect van de behandeling ter versterking 10 van de antitumoractiviteit van het ruwe geneesmiddel beoordeelt als groot als de stijging van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide gebaseerd op de stijging van de concentratie van het ruwe geneesmiddel als gevolg van de behandeling groot is.

2. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op een ruw geneesmiddel toe te passen behandeling op de antitumoractiviteit volgens conclusie 1, waarbij een paddestoel die /3-glucan bevat als dat ruwe geneesmiddel wordt gebruikt.

3. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op een ruw geneesmiddel toe te passen behandeling op de antitumoractiviteit volgens conclusie 2, waarbij ten minste één paddestoel gekozen uit de groep bestaande uit agaricus, maitake (Grifola frondosu), shi-25 itake (Cortinellus shiitake), matsutake (Tricholoma matsu-ttake), shimejitake (Lyophyllum decastes) en enokitake (Flammulina velutipes) als de paddestoel wordt gebruikt.

4. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op een ruw geneesmiddel toe te passen behandeling op de antitumoractiviteit volgens conclusie 3, waarbij de agaricus wordt gebruikt en de rauwe agaricus 5 met ver-infraroodstralen wordt geroosterd.

5. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel dat polysacchariden met antitumoractiviteit bevat, zonder klinische tests uit te voeren, waarbij men het ruwe genees- 10 middel toevoegt aan een systeem dat lipideperoxiden vormt door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht, en het effect van de antitumoractiviteit van het ruwe geneesmiddel bij inwendige toediening beoordeelt en als groot voorspelt als de stij-15 ging van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide gebaseerd op de stijging van de concentratie van het ruwe geneesmiddel groot is.

6. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens 20 conclusie 5, waarbij op dat ruwe geneesmiddel de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit omvattende een roosterstap waarbij het ruwe geneesmiddel met ver-infraroodstralen wordt geroosterd en een fermentatiestap waarbij wordt 25 gefermenteerd door toevoeging van micro-organismen is toegepast, waardoor de antitumoractiviteit van dat ruwe geneesmiddel is versterkt in vergelijking met het geval dat het roosteren en de fermentatie niet worden uitgevoerd.

7. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit 30 van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 6, waarbij een paddestoel die /3-glucan bevat als het ruwe geneesmiddel wordt gebruikt.

8. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit 35 van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 7, waarbij ten minste één paddestoel gekozen uit de groep bestaande uit agaricus, maitake (Grifola frondosu), shiitake (Cortinellus shiitake), matsutake (Tricholoma matsu-take), shimejitake (Lyophyllum decastes) en enokitake 5 (Flammulina velutipes) als de paddestoel wordt gebruikt.

9. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 8, waarbij de agaricus wordt gebruikt en de rauwe agaricus 10 met ver-infraroodstralen wordt geroosterd.

10. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 5, waarbij op dat ruwe geneesmiddel de werkwijze ter verster-15 king van de antitumoractiviteit is toegepast, omvattende na de fermentatiestap een stap waarbij een olieachtig middel wordt gemaakt waarbij het gefermenteerde ruwe geneesmiddel wordt omsloten met een oliecomponent verkregen uit met ver-inf raroodstralen geroosterde planten zoals sesam, waardoor 2 0 de antitumoractiviteit van het ruwe geneesmiddel wordt versterkt vergeleken met het geval waarin de roosterstap, de f ermentatiestap en de stap voor het maken van een olieachtig middel niet worden toegepast.

11. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit 25 van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 10, waarbij een paddestoel die /3-glucan bevat als het ruwe geneesmiddel wordt gebruikt.

12. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit 30 van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 11, waarbij ten minste één paddestoel gekozen uit de groep bestaande uit agaricus, maitake (Grifola frondosu), shiitake (Cortinellus shiitake) , matsutake (Tricholoma matsu-35 take), shimejitake (Lyophyllum decastes) en enokitake (Flammulina velutipes) als de paddestoel wordt gebruikt. r i. 1 / :j

13. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van de antitumoractiviteit van een ruw geneesmiddel volgens conclusie 12, waarbij de agaricus wordt gebruikt en de rauwe agaricus 5 met ver-infraroodstralen wordt geroosterd. * * *