NL1017117C2 - Werkwijze voor de versterking van de antitumoractiviteit van een amygdalinebevattend materiaal, preparaat dat versterkt amygdalinebevattend materiaal bevat, werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van een behandeling van amygdalinebevattend materiaal, en werkwijze ter beoordeling van amygdalinebevattend antitumormateriaal. - Google Patents

Description

- 1 -5

WERKWIJZE VOOR DE VERSTERKING VAN DE ANTITUMORACTIVITEIT VAN EEN AMYGDALINEBEVATTEND MATERIAAL, PREPARAAT DAT VERSTERKT AMYGDALINEBEVATTEND MATERIAAL BEVAT. WERKWIJZE TER BEOORDELING VAN DE ANTITUMOREFFECTIVITEIT VAN EEN BEHANDE-10 LING VAN AMYGDALINEBEVATTEND MATERIAAL. EN WERKWIJZE TER BEOORDELING VAN AMYGDALINEBEVATTEND ANTITUMORMATERIAAL

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

15 Deze uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het versterken van de antitumoractiviteit van amygdaline, dat behoort tot de in plantenzaden voorkomende glucosiden, een beoordelingswerkwijze etc., in het bijzonder ter vergroting van de expressie van het antitumoreffect 20 na orale toediening, of op het voorspellen van de effectiviteit als antitumormiddel na orale toediening.

Momenteel is bekend dat loquatzaad een antitumoref fect heeft, en het wordt gebruikt op het gebied van Kampo (Chinese geneesmiddelen) en gezondheidsvoedsel. Er zijn 25 veel artikelen verschenen met betrekking tot onderzoek naar het zogenoemde antitumoreffect van loquatzaad. Algemeen wordt aangenomen dat het belangrijkste antikankerbestand-deel daarin amygdaline is, een glucoside. In het kort wordt loquatzaad als gedroogd poeder oraal toegediend wanneer het 30 voor een antitumorbehandeling wordt gebruikt.

Of van planten afkomstige stoffen al of niet een antitumoreffect bezitten, wordt onderzocht met een test op muizen. Groepen muizen worden op diëten gezet die al of niet de uit de plant geëxtraheerde oplossing bevatten. Een 35 vergelijkend onderzoek van beide groepen wordt uitgevoerd op bepaalde punten, bijvoorbeeld: uitroeiing van de tumor, verkleining van de tumorgrootte of metastasetoestand, of 1017117 - 2 - het overlevingspercentage van muizen, om bewijs te verkrijgen dat het antitumoreffeet wordt gevonden bij een dergelijke dierproef. Verder wordt in dierproeven de toxiciteit onderzocht en worden tests op effectiviteit en veiligheid 5 voor de mens uitgevoerd. Nadat deze gegevens zijn verkregen, wordt in een medische instelling een klinische proef uitgevoerd. De effectiviteit van een antitumormiddel voor gebruik bij de mens wordt dus uiteindelijk bevestigd met een klinische proef.

10

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING

Momenteel is algemeen bekend dat loquatzaad carci-nostatische activiteit, antitumoractiviteit en antimeta-statische activiteit heeft en de effectiviteit wordt alom 15 gepropageerd. Gedroogd loquatzaadmateriaal wordt verpoederd en oraal toegediend of het alcoholische extract van loquatzaad wordt samen met andere bestanddelen zoals vitaminen verwerkt in producten zoals gezondheidsdranken en gezond-heidsvoedsel of gebruikt bij geneeswijzen met kruidenver-20 branding.

Het zaad en het blad van loquat bevatten een betrekkelijk hoog gehalte amygdaline en worden geacht antikankereffecten, hoestonderdrukkende effecten, analgeti-sche effecten enzovoorts te hebben.

25 Wat betreft het antitumoref f eet is tegen de ver wachting in in slechts zeer weinig gevallen het poeder van gedroogd zaad effectief gebleken bij orale toediening. Hoewel een antikankereffect niet kon worden uitgesloten, werd slechts in zeer weinig gevallen een effectieve antitu-30 moractiviteit gezien.

De onderhavige uitvinders bestudeerden de oorzaken voor de verschillen van persoon tot persoon die zich voordoen in het antitumoreffect dat wordt gevonden bij gebruik van een loquatzaadpoeder, en bestudeerden ook het carcino-35 statische mechanisme bij de mens. De onderhavige uitvinders beschouwden ook effectieve maatregelen die moeten worden 1017117 - 3 - genomen om alle patiënten de effectiviteit van loquatzaad te laten ontvangen.

Bovendien moeten dergelijke effectieve maatregelen worden genomen gebruikmakend van een kruidengeneesmiddel 5 dat amygdaline bevat. Een vroege beoordeling van de effectiviteit als antitumormiddel van deze amygdalinebevattende materialen bij patiënten die het oraal krijgen toegediend, zal ertoe leiden dat dit geneesmiddel eerder overal in de wereld op de markt kan worden gebracht. Dit is een dringen-10 de noodzaak voor de patiënten die veel pijn lijden.

Het komt echter vaak voor dat een gedroogd poeder van een natuurproduct antitumoractiviteit blijkt te hebben bij proefdieren, maar dat de verwachte effectiviteit niet kan worden verkregen in het geval van toediening aan de 15 mens. De proef ter bepaling van de effectiviteit is geen gestandaardiseerde klinische proef, en gedurende deze proef wordt een toedieningssysteem opgesteld onder welomschreven omstandigheden en gedurende de periode van toediening gecontroleerd. Voor deze proef is een follow-up noodzakelijk. 20 Er is dus een zeer lange tijd nodig voordat uit de verkregen resultaten kan worden besloten of de orale toediening bij de mens al dan niet effectief is.

Als zich bij de patiënten die de proefpersonen in de klinische proef zijn, een complicatie voordoet, moeten 25 ze uit de proef worden genomen voor spoedbehandeling, zodat ze geen bijdrage meer leveren aan het onderzoek naar de effectiviteit. Dit is de reden waarom het in veel gevallen onmogelijk is in een langdurig klinisch onderzoek de an-titumoreffectiviteit te vinden.

30 Het is niet eenvoudig om langdurig klinisch onder zoek uit te voeren en steeds in staat te blijven de effectiviteit te bepalen. In een klinische proef wordt de effectiviteit van een antikankerproduct exact gevonden. Het duurt lang voordat uit de gebruikte doel-natuurproducten 35 antitumoractiviteit wordt verkregen. Het is noodzakelijk een werkwijze vast te stellen ondersteund door technologie, 1017117 - 4 - waarmee het mogelijk is de antitumoractiviteit in kortere tijd te bepalen.

De onderhavige uitvinders beschouwden de noodzaak een werkwijze te ontwikkelen voor het voorspellen van an-5 titumoractiviteit van amygdalinebevattende materialen uit loquatzaad zonder klinische proef door middel van toediening bij de mens. Bovendien werd de antitumoractiviteit van loquatzaad vergeleken met die van het materiaal uit Kampo (Chinese geneesmiddelen) om objectief bewijs te krijgen 10 voor de antitumoreffectiviteit.

Behalve loquatzaad zijn veel andere antitumor-bronnen zoals Chinese geneesmiddelen bekend die amygdaline bevatten. Gezien dit feit is het aan te bevelen de amygda-linebevattende bron uit te breiden tot natuurproducten zo-15 als Chinese geneesmiddelen etc.

Het doel van de onderhavige uitvinding is een snelle expressie van effectiviteit te verkrijgen voor amyg-dalinebevattende antitumormaterialen.

Een ander doel van de onderhavige uitvinding is 20 het antitumoreffeet van amygdalinebevattende materialen uit loquatzaad te voorspellen bij orale toediening aan de mens.

Een ander doel van de onderhavige uitvinding is te voorzien in preparaten die amygdaline bevatten en die in staat zijn antitumoractiviteit tot expressie te brengen.

25 De onderstaande gedetailleerde beschrijving dient om de boven beschreven doelen, andere doelen en kenmerken van deze uitvinding toe te lichten.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze ter versterking die toepasbaar is op amygdalinebevattende 30 materialen, omvattende de kenmerken: een roosterwerkwijze onder gebruik van ver-infraroodstraling, fermentatiewerk-wijze onder toevoeging van micro-organismen waarbij het materiaal na het roosteren wordt gefermenteerd. De antitumoractiviteit van het geroosterde en gefermenteerde amygda-35 linebevattende materiaal is versterkt ten opzichte van het geval dat de materialen niet zijn geroosterd en gefermenteerd.

1017117 - 5 -

Na de voornoemde fermentatiewerkwijze werd een oliebekledingswerkwijze uitgevoerd door toevoeging van sesamolie aan het geroosterde gefermenteerde materiaal om het antitumormateriaal te bekleden. Dit vormt een verder aspect 5 van deze uitvinding. Het voornoemde amygdalinebevattende materiaal is bij voorkeur amygdalinebevattend plantenzaad. Als dit zaad het voornoemde loquatzaad is, dan wordt de roosterwerkwijze bij voorkeur uitgevoerd met ver-infrarood-straling op rauw zaad.

10 De uitvinding heeft verder betrekking op een werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van behandeling van de amygdalinebevattende materialen. De behandelde amygdalinebevattende materialen werden toegevoegd aan een systeem dat lipideperoxide produceert door 15 bestraling van een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeen-zuur met ultraviolet licht. Hoe hoger de concentratie amygdalinebevattend materiaal, hoe sterker de behandeling ter verhoging van hoeveelheid lipideperoxide.

De uitvinding heeft ook betrekking op een werkwij-20 ze ter beoordeling van de effectiviteit van een amygdalinebevattend antitumormateriaal zonder klinische proeven uit te voeren. De uitvinding heeft als kenmerken dat de antitu-moractiviteit van orale toediening als sterker wordt voorspeld door de amygdalinebevattende materialen toe te voegen 25 aan een systeem waarin lipideperoxide wordt geproduceerd door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht ter verhoging van de lipideverhoudingen in de antitumormaterialen. De werkwijze heeft betrekking op het voorspellen van de antitumoreffec-30 tiviteit bij orale toediening voor de amygdalinebevattende producten.

Het amygdalinebevattende materiaal kan materiaal zijn waarop een roosterwerkwijze met ver-infraroodstraling is uitgevoerd gevolgd door een fermentatiewerkwijze onder 35 toevoeging van micro-organismen.

Volgens een aspect van deze uitvinding wordt na de fermentatiewerkwijze aan het gefermenteerde materiaal olie 1017117 - 6 - verkregen uit met ver-infraroodstraling geroosterde sesam toegevoegd om de antitumorpreparaten te bekleden.

De onderhavige uitvinders bevestigden via studies naar de remmende effecten van stoffen tegen actieve zuur-5 stof in Kampo-geneesmiddelen (Chinese geneesmiddelen) dat verschillende infectieziekten worden veroorzaakt en beïnvloed door actieve zuurstof en lipideperoxide als gevolg van hun vernietigende effect op de weefsels in het menselijk lichaam.

10 Een enzym met de naam superoxidedismutase (SOD) dat voorkomt in het menselijk lichaam, kan de actieve zuurstof verwijderen en het lichaam beschermen tegen vernietiging van cellen door actieve zuurstof. Het SOD-gehalte neemt geleidelijk af met toenemende leeftijd en bij een 15 bepaald SOD-gehalte, in het bijzonder het gehalte SOD-gehalte op een leeftijd boven 40 jaar, is het in het lichaam aanwezige SOD niet langer in staat al het actieve zuurstof te verwijderen. Het niet meer te verwijderen actieve zuurstof in het lichaam veroorzaakt ouderdomsziekten.

20 In sommige gevallen hoopt zich door chronische en acute stimulaties en door in het menselijk lichaam gevormde chemische stoffen zo veel actieve zuurstof op dat de in het lichaam voorkomende hoeveelheid SOD de actieve zuurstof niet volledig kan verwijderen, waardoor verschillende ziek-25 ten ontstaan.

Voor die ziekten die worden veroorzaakt door een tekort aan SOD en een niet-volledige verwijdering van actieve zuurstof is toediening van exogeen SOD een therapie om het tekort aan te vullen als maatregel voor een derge-30 lijk geval. Deze behandeling blijkt alleen effectief bij toediening door middel van injectie en niet bij orale toediening. De reden waarom oraal toegediend SOD niet effectief is, is nog niet opgehelderd.

De onderhavige uitvinders stelden vast dat SOD 35 niet effectief is bij orale toediening, omdat het niet bestand is tegen maagsap en omdat het molecuulgewicht van SOD meer dan 30.00 is en SOD daarom niet wordt geabsorbeerd uit 1017117 - 7 - het spijsverteringsstelsel. Er is een beperking aan SOD. Van de vier soorten actieve zuurstof verwijdert het alleen het superoxideradicaal (02") .

De onderhavige uitvinders bestudeerden de materia-5 len die het vermogen bezitten reactieve zuurstof te verwijderen en die oraal kunnen worden toegediend, en vonden dat granen zoals rijst, tarwe etc., peulvruchten zoals sojabonen, rode bonen en spruiten daarvan kunnen worden bewerkt met rooster- en fermentatiewerkwijzen en dat daarna daaraan 10 uit geroosterde planten verkregen plantaardige oliën kunnen worden toegevoegd en dat zo een effectief preparaat kan worden geformuleerd waarmee langs orale weg actieve zuurstof kan worden verwijderd (referentie: Japans octrooi- schrift 2125887).

15 De plantenzaden en hun spruiten bevatten oorspron kelijk ook de volgende tegen actieve zuurstof werkzame laagmoleculaire verbindingen: flavonoïden, polyfenolen, tanninen, tocoferolen, vitaminen zoals B2, etc. Deze tegen actieve zuurstof werkzame laagmoleculaire verbindingen zijn 20 aan elkaar gebonden tot hoogmoleculaire verbindingen of zijn door absorptie en insluiting gevormd tot meer complexe en hoogmoleculaire verbindingen. De onderhavige uitvinders vonden dat bij het innemen van de hoogmoleculaire verbindingen de activiteit tegen actieve zuurstof zoals die te 25 verwachten is van de laagmoleculaire verbindingen, niet kan worden verkregen.

Het maagsap van de mens is namelijk niet in staat de actieve zuurstof remmende hoogmoleculaire stoffen na inname af te breken tot kleine moleculen, waardoor patiënten 30 niet kunnen profiteren van het effect van actieve zuurstof remmende stoffen. De onderhavige uitvinders beschreven dit punt in het tijdschrift "Food Industry" vol. 35, nr. 14, getiteld "Development, Improvement of DDS, SOD-like acting Foods for Natural Plant Seeds and Their Pharmacological 35 Biochemical Discussions".

De onderhavige uitvinders bestudeerden hoe de tegen actieve zuurstof werkende stoffen in hun toestand zoals 1017117 - 8 - ze voorkomen in granen en peulvruchten en zaden en spruiten, kunnen worden geactiveerd en gebruikt voor de behandeling en preventie van ziekten.

Als resultaat vonden ze dat onder milde verwarming 5 van de actieve zuurstof remmende stoffen in de plantenzaden en hun spruiten een laagmoleculaire deelverbinding kan worden vrijgemaakt uit de complexe toestand of een deel van het complexe molecuul kan worden geactiveerd door middel van een chemische verandering waarmee een functionele groep 10 wordt gegenereerd. Zo wordt door middel van deze warmtebehandeling de activiteit tegen actieve zuurstof in het bij zonder versterkt.

Anderzijds is men van mening dat de carcinostati-sche activiteit, antitumoractiviteit of antimetastaseac-15 tiviteit van loquatzaad hoofdzakelijk moet worden toegeschreven aan amygdaline. Amygdaline verschilt in zijn chemische structuur van de laagmoleculaire moleculen met remmende activiteit tegen actieve zuurstof. Amygdaline was dus niet de doelverbinding voor de reeks studies met betrekking 20 tot actieve zuurstof.

De onderhavige uitvinders vonden echter dat lo-quatzaadpoeder bij sommige patiënten antitumoractiviteit had, maar bij andere patiënten niet, terwijl bij beide groepen patiënten de toediening langs orale weg plaats 25 vond. Deze vondst kan niet worden verklaard als het resultaat van afbraak van de stoffen tot laagmoleculaire verbindingen met activiteit tegen actieve zuurstof.

Zoals boven beschreven, is het mechanisme van de antitumoractiviteit van loquatzaad nog niet opgehelderd. De 30 uiting van de antitumoractiviteit van loquatzaadpoeder blijkt verschillen te vertonen tussen patiënten waaraan het oraal wordt toegediend. Dit verschil in uiting van antitumoractiviteit bij patiënten kan suggereren dat er twee typen patiënten voorkomen: patiënten waarbij de activiteit 35 van antitumorcomponenten gemakkelijk tot uiting komt en andere patiënten waarbij dit moeizaam geschiedt.

1017117 - 9 -

Na orale inname komt loquatzaadpoeder vroeger of later in contact met maagsap. Of de antitumoractiviteit gemakkelijk of moeizaam bij patiënten tot uiting komt, hangt sterk af van de werking van het maagsap. Er is namelijk een 5 individueel verschil in werking van het maagsap, en dit kan worden gezien als een factor die bijdraagt aan het verschil in uiting van antitumoractiviteit.

Gebaseerd op het klinische feit dat een verschil in uiting van antitumoractiviteit moet worden toegeschreven 10 aan individuele verschillen in de sterkte van het maagsap, hebben de onderhavige uitvinders de volgende hypothese opgesteld over het verband tussen antitumoractiviteit en sterkte van het maagsap.

De in het loquatzaadpoeder voorkomende antitumor-15 component amygdaline ondergaat hierbij de werking van het maagsap. Het amygdaline komt voor in een toestand waarbij de antitumoractiviteit moeilijk tot uiting komt en kan worden omgezet in een toestand waarbij de antitumoractiviteit gemakkelijk tot uiting komt door contact met maagsap. 20 Hierbij komen individuele verschillen voor.

Wanneer loquatzaadpoeder met daarin de antitumor-component amygdaline werd toegediend aan patiënten met een van nature sterk maagsap, kwam de antitumoractiviteit tot uiting. Hiermee was de uiting van antitumoractiviteit bewe-25 zen.

Bij patiënten met een aangeboren zwak maagsap kwam de activiteit moeilijker tot uiting dan bij patiënten met een sterk maagsap.

Als verklaring wordt aangenomen dat heden ten dage 30 bij veel personen het maagsap niet sterk genoeg is om de in loquatzaadpoeder voorkomende antitumorcomponent amygdaline af te breken, zodat na inname van natief poeder de gevonden effectiviteit zeer klein is.

Patiënten met een aangeboren sterk maagsap zijn in 35 staat de (figuurlijk gesproken) gesloten keten van de inactieve toestand van de antitumorcomponent van het in het lo-quatzaad voorkomende materiaal te verbreken. Dat wil zeggen 1017117 - 10 - dat die component voorkomt in een inactieve vorm en dat het maagsap deze inactieve vorm kan afbreken tot een actieve en vrije vorm. Het gevolg is dat de antitumoractiviteit duidelijk tot uiting komt.

5 Men is van mening dat bij de moderne mens het maagsap niet in staat is het materiaal af te breken tot een toestand waarbij de antitumoractiviteit gemakkelijk tot uiting komt. Bij de effectieve antitumorcomponenten zijn hun actieve plaatsen aan elkaar gebonden, zodat ze in inac-10 tieve toestand door de darmen worden geabsorbeerd. Dit is de verklaring waarom bij de patiënten geen antitumoractiviteit werd gevonden.

In verband hiermee overwogen de onderhavige uitvinders dat wanneer er één of andere behandeling zou kunnen 15 worden uitgevoerd op het loquatzaad om de inactieve vorm om te zetten in de actieve vorm, het bovengenoemde probleem opgelost zou zijn.

Ondanks meerdere pogingen de inactieve vorm om te zetten in de actieve vorm, waren de onderhavige uitvinders 20 echter niet in staat een effectieve behandelingswerkwijze te verkrijgen. Eén reden waarom het beoogde resultaat niet werd verkregen, is omdat het gebruikte systeem zo gecompliceerd was.

Na het uitvoeren van verschillende experimenten 25 pasten de onderhavige uitvinders ten slotte de werkwijze voor activering van stoffen tegen actieve zuurstof zoals flavonoïden, polyfenolen etc., die aanzienlijk verschillen van amygdaline, toe op amygdaline, en vonden onverwacht dat amygdaline met succes werd omgezet in zijn actieve vorm.

30 Deze activeringswerkwijze wordt toegepast op fla vonoïden, die aanzienlijk verschillen van amygdaline en waarvan de inactieve toestand dus ook verschilt van die van amygdaline. Aanvankelijk werd dan ook verwacht dat de toepassing van de activeringswerkwijze voor stoffen tegen ac-35 tieve zuurstof op amygdaline problematisch zou zijn.

Als resultaat werd onverwacht gevonden dat de activeringswerkwi j ze voor stoffen tegen actieve zuurstof ef- 1017117 - 11 - fectief is wanneer die wordt toegepast om amygdaline, waarvan de structuur verschilt van die van stoffen tegen actieve zuurstof, om te zetten in zijn actieve toestand.

In de experimenten gebruikten de onderhavige uit-5 vinders poeder van geroosterd loquatzaad, bereid door bestraling met ver-infraroodstralen, en toonden aan dat de antitumoreffectiviteit bij orale toediening was verhoogd vergeleken met die van poeder van niet-geroosterd loquatzaad. Verder werd het geroosterde loquatzaadpoeder geïnocu-10 leerd met micro-organismen, in het bijzonder Koji, waarna hiermee een fermentatie werd uitgevoerd. De antitumoracti-viteit bleek groter te worden.

Het is bekend dat behalve loquatzaad ook andere plantenzaden amygdaline bevatten en antitumoractiviteit 15 vertonen, bijvoorbeeld zaden van abrikoos, perzik, pruim, Japanse abrikoos, Chinese perzik, Amygdala amara. Verder bevatten ook loquatblad, alfalfa, bamboescheuten etc. vergelijkbare hoeveelheden antikankermaterialen. De amygda-linebevattende materialen hiervan kunnen ook in deze 20 uitvinding worden gebruikt.

Er wordt geen duidelijk effect verkregen met gedroogd loquatzaad dat wordt behandeld door middel van roosteren met ver-infraroodstralen en fermentatie onder verschillende omstandigheden. Het is dus beter gebruik te ma-25 ken van zaad in rauwe toestand.

Bekleding met olie na roosteren met ver-infraroodstralen en fermentatie draagt bij tot verhoging van de antitumoractiviteit. Hiervoor wordt olie gebruikt die is verkregen uit met ver-infraroodstralen geroosterde sesam. 30 Bekleding met olie wordt uitgevoerd door omsluiting van het materiaal na fermentatie.

Zoals boven beschreven, kan de effectieve werkwijze voor het afbreken van stoffen tegen actieve zuurstof tot laagmoleculaire verbindingen voor expressie van antitumor-35 activiteit worden toegepast voor het geval van amygdaline, dat is een nitrylglucoside dat verschilt van de stoffen te- 1017117 - 12 - gen actieve zuurstof. Dit werd aanvankelijk niet door de onderhavige uitvinders verwacht.

Na behandeling van het loquatzaad met de voorgaande behandelingsprocedures ter verkrijging van het antikan-5 kereffect, verkreeg het materiaal een antitumoreffeet met een grootte die vergelijkbaar is met het antitumoreffeet van Agaricus blazei, een paddestoel die de aandacht heeft getrokken wegens zijn antitumoreffeet.

Als de werkwijze ter versterking van de antitu-10 moractiviteit kan worden toegepast, behoeven dure zeldzame ruwe geneesmiddelen zoals paddestoelen etc. niet te worden gebruikt, maar kunnen goedkope en veel voorkomende vruchtenzaden worden gebruikt als materialen voor de ontwikkeling van geneesmiddelen, gezondheidsvoedsel etc. Zo kan 15 de economische belasting van patiënten worden verminderd doordat ze geen dure zeldzame ruwe geneesmiddelen behoeven te gebruiken, maar gebruik kunnen maken van gemakkelijk te verkrijgen materialen. Gezien vanuit het standpunt van de patiënt is de onderhavige uitvinding van grote betekenis.

20 Het antitumoreffeet van de amygdalinebevattende materialen uit loquatzaad etc. waarop de werkwijze ter versterking van antitumoractiviteit was toegepast, bleek bijzonder hoog.

Gedurende de uitgevoerde reeks onderzoeken met het 25 systeem voor de productie van lipideperoxide uit docosa-hexaeenzuur etc. door bestraling met ultraviolet licht werd de concentratie loquatzaadpoeder dat was behandeld met verschillende werkwijzen, geleidelijk verhoogd. Afhankelijk van de concentratie loquatzaadpoeder bleek de geproduceerde 30 hoeveelheid lipideperoxide te worden vergroot en de antitumoractiviteit sterker te zijn.

Aan het systeem voor productie van lipideperoxide werden zaadpoeders die met verschillende werkwijzen waren behandeld, in dezelfde concentratie toegevoegd. Met het 35 product dat bij bepaling van het lipideperoxidegehalte een grote hoeveelheid lipideperoxide produceerde, kon langs orale weg met succes een antitumoreffeet worden verkregen.

1017117 - 13 -

Verder werd een beoordeling uitgevoerd met onverzadigde vetzuren zoals docosahexaeenzuur die door middel van bestraling met ultraviolet licht kunnen worden omgezet in lipideperoxiden. Aan dit systeem werden amygdalinebevat-5 tende materialen in geleidelijk toenemende concentraties toegevoegd en het geproduceerde lipideperoxide werd gemeten. Hoe sterker de antitumoractiviteit langs orale weg, hoe groter de stijging van het lipideperoxide bij toevoeging van amygdaline. Zelfs zonder klinische proeven uit 10 te voeren kon de antitumoractiviteit van amygdalinebevattende materialen gemakkelijk worden vergeleken.

Verder werden aan het systeem voor de productie van lipideperoxide door bestraling van onverzadigde vetzuren zoals docosahexaeenzuur bijvoorbeeld amygdalinebevat-15 tende materialen met antitumoractiviteit zoals paddestoelen etc. en andere soorten Chinese geneesmiddelen, onder geleidelijke verhoging van de concentratie van het toegevoegde materiaal, afzonderlijk toegevoegd. Door het gehalte gevormd lipideperoxide te vergelijken en het gehalte 20 lipideperoxide in volgorde te plaatsen, kon de versterking van de antitumoractiviteit bij orale toediening van de diverse materialen gemakkelijk met elkaar worden vergeleken.

Als amygdalinebevattende materialen kunnen aller-25 lei plantaardige en dierlijke bronnen worden gebruikt. Ruwe geneesmiddelen (Chinese geneesmiddelen) waarbij in het wild groeiende amygdalinebevattende planten worden gebruikt, en amygdalinebevattende materialen geoogst uit waterbemes-tingskweek of kunstmatige kweek kunnen ook worden gebruikt. 30 Door deze uitvinding toe te passen op natuurproducten of gekweekte producten, kan succesvolle expressie van antitumoractiviteit worden verkregen. Deze kan worden gebruikt voor de in deze uitvinding beschreven materialen als amygdalinebevattende preparaten.

35 1017117 - 14 -

BESCHRIJVING VAN DE VOORKEURSUITVOERINGSVORMEN

Hierna worden uitvoeringsvormen van deze uitvinding uitgelegd aan de hand van verscheidene voorbeelden.

De werkwijze voor de versterking van de antitu-5 moractiviteit van amygdalinebevattende materialen, preparaten die versterkt amygdalinebevattend materiaal bevatten, de werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van de behandeling van amygdalinebevattende materialen en de werkwijze ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit 10 van amygdalinebevattende materialen onder gebruik van loquatzaad als het amygdalinebevattende materiaal worden hierna beschreven.

(UITVOERINGSVORM 1) 15 De uitvoeringsvorm bestaat uit een werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van amygdalinebevattend materiaal en het product met versterkte antikan-keractiviteit dat amygdalinebevattend materiaal bevat.

De versterkingswerkwijze voor amygdalinebevattend 20 materiaal bestaat uit eerst het roosteren van het amygdalinebevattende loquatzaad met ver-infraroodstralen gevolgd door fermentatie onder toevoeging van een micro-organisme zoals Koji (Aspergillus Oryzae) onder welomschreven omstandigheden van vochtigheid en temperatuur. Na afloop van de 25 fermentatie werd het materiaal tot poeder vermalen. Het mi-cropoeder werd verder met olie bekleed met de olie verkregen door het uitpersen van met ver-infraroodstralen geroosterde sesam.

Het amygdalinebevattende loquatzaad werd dus ach-30 tereenvolgens bewerkt door middel van roosteren met ver-in-fraroodstralen, fermentatie met een micro-organisme en oliebekleding. Het uiteindelijk verkregen materiaal was het materiaal dat antitumoractiviteit vertoont bij orale toediening .

35 Aan de hand van de onderstaande voorbeelden wordt de uitvinding gedetailleerd uitgelegd. Het amygdalinebevattende materiaal dat in deze uitvinding werd gebruikt, is 1017117 - 15 - loquatzaad. In het experiment werd het zaad in rauwe toestand gebruikt. In rauwe toestand vertoont het zaad een sterkere antitumoractiviteit dan in gedroogde toestand.

De eerste stap in de werkwijze ter versterking van 5 de antitumoractiviteit in het voorbeeld is de werkwijze van roosteren door middel van bestraling met ver-infrarood-stralen, waarbij ver-infraroodstraling met een golflengte van 4-14 μτα wordt gebruikt. Voor het roosteren wordt gebruik gemaakt van een vat zoals een pan, ketel etc. 10 waarvan de binnenzijde is bekleed met keramiek dat ver-in-fraroodstralen met deze golflengte uitzendt, of van een vat gemaakt van metaaloxiden zoals steen, keramiekpoeder, grind en zand gemengd met keramiekpoeder dat ver-infraroodstralen uitzendt.

15 Het boven beschreven loquatzaad werd gebracht in het vat gemaakt van bijvoorbeeld ver-infraroodstralen uitzendende materialen zoals graniet, keramiek, celestiet (TENSYOUSEKI) etc., en onder langzaam roeren geroosterd door 30-90 minuten te bestralen, zodanig dat het materiaal 20 niet werd verkoold.

De roosterwerkwijze is niet noodzakelijkerwijs tot de bovenstaande werkwijze beperkt. Elke roosterwerkwijze kan worden toegepast mits die het vrijmaken van amygdaline uit loquatzaad stimuleert.

25 Na de roosterwerkwijze met ver-infraroodstralen volgt als tweede stap de fermentatiewerkwijze. Hierbij wordt het materiaal na behandeling met ver-infraroodstralen 48-72 uur bij 30-36°C in een vochtige atmosfeer gefermenteerd met micro-organismen zoals Koji. Om de fermentatie-30 tijd te bekorten kan hiervoor een fermentatie-inrichting worden gebruikt.

Ook andere micro-organismen dan Koji kunnen worden gebruikt bij de fermentatie. Bij de fermentatie kan in plaats van Koji gebruik worden gemaakt van rijpe papaja, 35 ananassap, vijgenschillen, druivenschillen of jonge bamboe.

Verder kan in de fermentatiewerkwijze gebruik worden gemaakt van spijsverteringsenzymen zoals diastase, 1017117 - 16 - pancreatine, protease, pepsine, trypsine, etc., van mi-cro-organismen afkomstig protease, glucosidasen voor de afbraak van polysacchariden, zoals hemicellulase etc. of voorlopers etc. van de spijsverteringsenzymen en proteasen.

5 De onderhavige uitvinders hebben gevonden dat van de fermentaties met micro-organismen fermentatie met Koji de beste versterking van de antitumoractiviteit vertoonde. Na de fermentatie werd het product tot poeder vermalen.

Als inrichting voor het tot poeder vermalen van 10 het materiaal wordt een commercieel verkrijgbare verbrijze-laar gebruikt; vermeden dient te worden dat er tijdens het malen warmte wordt gegenereerd. Ter vermijding van warmte wordt een maalgang gebruikt in plaats van een verbrij-zelinrichting.

15 Na het roosteren met ver-infraroodstralen en de fermentatiewekwijze werd het loquatzaadmateriaal onderworpen aan een oliebekledingswerkwijze. Bij de oliebekleding wordt het micropoedermateriaal na fermentatie omsloten met olie verkregen uit met ver-infraroodstralen geroosterde se-20 sam.

De bij de oliebekledingswerkwijze gebruikte olie was de olie verkregen uit geroosterde sesam (hierna afgekort als "sesampastaolie"). Sesampastaolie werd bereid door uitpersen van geroosterde sesam die langzaam was geroosterd 25 met ver-infraroodstralen bij een temperatuur niet hoger dan 100°C. Een dergelijke sesamolie heeft een pasta-achtig uiterlijk omdat er tijdens het verbrijzelen fijne vaste materialen aanwezig blijven.

Na fermentatie en vermaling tot micropoeder werd 30 het loquatzaadmateriaal aan de sesampastaolie toegevoegd om het loquatzaadmicropoeder te omsluiten met sesamolie. Bekleding met sesamolie zorgt voor een sterker doordringend vermogen in de cellen van het aangetaste lichaamsdeel dan wanneer er geen oliebekleding zou worden toegepast. Een 35 dergelijke oliebekleding heeft onlangs de aandacht getrokken met het oog op geneesmiddelafgiftesystemen ("drug 1017117 - 17 - delivery systems", DDS). Dit is een belangrijke stap om te voorzien in een effectieve doelgerichtheid.

Carcinogenen en virussen etc. hechten eerst aan de celmembraan en vernietigen de celmembraan. De celmembraan 5 is een lipiderijke structuur. Geneesmiddelen omvattende in water opgeloste chemische reagentia worden door de membraan afgestoten en kunnen die niet oversteken. Door deze oliebe-kleding kan het loquatzaadmateriaal de membraan gemakkelijk oversteken, wat een factor kan zijn die bij draagt aan het 10 antitumoreffeet.

Zoals boven beschreven, is oliebekleding een belangrijke werkwijze. Hoewel het beter is deze werkwijze uit te voeren, kan in gevallen dat een oliebekleding niet met succes kan worden uitgevoerd, de oliebekledingswerkwijze 15 worden weggelaten, omdat zoals hierna beschreven, als de bestraling met ver-infraroodstralen en de fermentatie op de juiste wijze zijn uitgevoerd, de versterking van de antitumoref fectiviteit groot was zelfs als de oliebekledingswerkwi j ze werd weggelaten. Dit is uit experimenten ge-20 bleken.

Bij de oliebekleding worden betere resultaten verkregen wanneer gebruik wordt gemaakt van een gemengde olie bestaande uit de boven beschreven sesampastaolie en een uit rauwe sesam verzamelde olie in de juiste verhouding.

25 Om de druppelgrootte van de olie te verkleinen wordt uit rauwe sesam verkregen olie gemengd met de sesampastaolie waardoor de viscositeit van het oliemengsel wordt verhoogd. Dit leidt tot verhoging van het doordringend vermogen in de doelcel vergeleken met het geval van een bekle-30 ding met alleen sesampastaolie die een grotere druppelgrootte heeft.

De uit rauwe sesam verzamelde olie wordt verkregen door sesam te verbrijzelen en na mechanisch uitpersen het vaste materiaal te verwijderen; wat overblijft is de olie 35 overeenkomend met commercieel verkrijgbare olie.

De verhouding waarin de boven beschreven sesampastaolie en de rauwe sesamolie worden gemengd, is bijvoor 1017117 - 18 - beeld geschikt 1:1 tot 3. De verhouding van de gemengde olie tot het micropoedermateriaal kan bijvoorbeeld goed 1:4 tot 5 zijn.

Het loquatzaad waarvan de antitumoractiviteit op 5 de boven beschreven wijze was versterkt, werd toegevoegd aan het systeem voor productie van lipideperoxide door bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht, en de gevormde hoeveelheid lipideperoxide werd gemeten. Daarnaast werd de effectiviteit van het antitumoref f eet bij orale 10 toediening van dit product met klinische proeven onderzocht .

Ter vergelijking van de boven beschreven verster-kingswerkwijzen werden loquatzaad dat alleen was behandeld door middel van roosteren met ver-infraroodstraling, 15 loquatzaad dat alleen was behandeld door middel van fermentatie met Koji, loquatzaad dat zowel was behandeld met ver-infraroodstraling als was gefermenteerd met Koji, loquatzaad dat was behandeld met bestraling, fermentatie met Koji en oliebekleding, en onbehandeld loquatzaad 20 onderzocht op de gevormde hoeveelheid lipideperoxide en effectiviteit in klinische proeven bij orale toediening. Bij de behandelingen werd rauw loquatzaad gebruikt en ter vergelijking van roosteren met ver-infraroodstraling, fermentatie met Koji en oliebekleding werd ook gedroogd 25 loquatzaad gebruikt.

Voor de afzonderlijke gevallen van loquatzaad dat alleen was behandeld door middel van roosteren van ver-infraroodstraling, dat alleen was behandeld door middel van fermentatie met Koji, en dat zowel was behandeld met roos-30 teren als met fermentatie, werd het materiaal na afloop van de behandeling met de voorgaande werkwijzen tot een micro-poeder gemaakt voor gebruik als monsters in de volgende experimenten. De maling werd tot eenzelfde gemiddelde deeltjesgrootte uitgevoerd om effecten van de deeltjesgrootte 35 uit te sluiten.

Meting van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide werd uitgevoerd zoals hierna beschreven. Aan reageerbuizen 1017117 - 19 - werd een hoeveelheid docosahexaeenzuur toegevoegd en verschillende hoeveelheden poeder van als boven beschreven behandeld loquatzaad werden toegevoegd waarna werd geschud. Het mengsel in elke buis werd bestraald met ultraviolet 5 licht en de gevormde hoeveelheid lipideperoxide werd gemeten.

De uitgangsoplossing van docosahexaeenzuur werd met ethanol tien maal verdund en verder verdund tot 200 maal. Een monsteroplossing van behandeld loquatzaad (er 10 werd ook een onbehandelde oplossing bereid) werd in een concentratie van 60 mg/ml bereid door toevoeging van ethanol, waarna men het geheel 2-6 weken bij kamertemperatuur liet staan voor ethanolextractie. Voor meting werd de eindconcentratie van de geëxtraheerde oplossing gebracht op 15 0,6 mg/ml.

Aan een portie van 0,05 ml van een op de boven beschreven wijze verdunde docosahexaeenzuuroplossing werd 0,1 ml monster en 0,85 ml ethanol toegevoegd en gemengd, zodat een totaal volume van 1 ml ontstond. Het mengsel werd 20 drie uur bestraald met ultraviolet licht om het lipide peroxide te vormen. Het gevormde lipideperoxide werd gemeten met de TBA-werkwijze (Thiobarbituurzuurreactie).

Het verkregen lipideperoxide werd onder zure omstandigheden verhit, waarna men het vrijgekomen malondial-25 dehyde (MDA) liet reageren met thiobarbituurzuur (TBA). De stof die een absorptiemaximum vertoonde, werd gekwantificeerd en gebruikt om de hoeveelheid lipideperoxide indirect te bereken.

Aan het TBA-reactiemengsel werd 0,2 ml 7% natrium-3 0 dodecylsulfaat, 2 ml 0,1 N zoutzuur, 0,3 ml fosfowolfraam-zuur en 1 ml van een gemengde oplossing van 0,67% TBA en azijnzuur (volumeverhouding 1:1) toegevoegd, waarna men het geheel 12 minuten bij 95°C liet staan om de TBA-reactie uit te voeren.

35 Na afkoelen tot kamertemperatuur werd de TBA-reac- tielaag geëxtraheerd met n-butylalcohol en de n-butylalco-hollaag werd op het MDA-gehalte doorgemeten met fluorescen- 1017117 - 20 - tiespectrometrie. Voor de meting werd een Hitachi fluores-centiespectrofotometer type F 2000 voorzien van een 400 volt fotomultiplicator gebruikt, en fluorometrie werd uitgevoerd bij 553 nm met een bron van excitatielicht met 5 een golflengte van 515 nm.

Het effect van de verschillende behandelingen op het lipideperoxideproductiesysteem door bestraling van do-cosahexaeenzuur met ultraviolet licht wordt in tabel 1 getoond aan de met de boven beschreven werkwijze gemeten 10 MDA-waarde (gelijk aan de absorptiedichtheid).

Daarnaast werden de afzonderlijke producten gebruikt in klinische proeven waarbij drie maal per dag 3 gram werd toegediend aan patiënten met respectievelijk borstkanker, maagkanker en longkanker. De producten waren: 15 onbehandeld loquatzaad, loquatzaad behandeld met Koji-fer-mentatie, loquatzaad behandeld met ver-infrarood-roosteren + Koji-fermentatie, loquatzaad behandeld met ver-infra-rood-roosteren + Koji-fermentatie + oliebekleding. De resultaten worden getoond in de tabellen 2, 3 en 4.

20 Tabel 2 toont de effectiviteit van loquatzaad be handeld met de verschillende boven beschreven werkwijzen bij patiënten met borstkanker. Tabel 3 en 4 tonen de effectiviteit van loquatzaad behandeld met dezelfde werkwijzen bij patiënten met maagkanker en longkanker. Het effectivi-25 teitspercentage werd berekend met de formule: effective- teitspercentage (%) = aantal (effectief + redelijk effec tief) x 100/totaal aantal (effectief + redelijk effectief + niet-effectief).

De beoordeling van gevallen in de tabellen 2-4 3 0 werd gedaan aan de hand van vergelijking van tumormarkers en schaduwgrootte bij fotodiagnose in het stadium voor en drie maanden na orale toediening aan patiënten met kanker. Verandering van de marker of de schaduwgrootte tot 40% van de oorspronkelijke grootte wordt beoordeeld als "effec-35 tief", verandering tot een grootte tussen 20 en 40% wordt beoordeeld als "redelijk effectief".

1017117 - 21 -

TABEL 1. EFFECT VAN VERSCHILLENDE BEHANDELINGEN OP

MDA-WAARDE

Behandeling Monsters Gemiddelde MDA-waarde

Controle (zonder 115 loquatzaad)

Geen behandeling Rauw loquatzaad 209 5 Roosteren met " 320 ver-infraroodstraling

Fermentatie met Koji " 334

Roosteren met ver-infrarood- " 621 straling + Koji-fermentatie 10 Roosteren met ver-infrarood- " 678 straling + Koji-fermentatie -----—--- oliebekleding Gedroogd loquat- 572 zaad

Monsterconcentratie: 6 mg/ml loquatzaad behandeld met 15 verschillende werkwijzen toegevoegd.

1017117

TABEL 2. EFFECTIVITEIT VAN VERSCHILLENDE BEHANDELINGEN BIJ

PATIËNTEN MET BORSTKANKER

- 22 -

Behandeling Mon- Patiënten met borstkanker Effectivi- sters (75) teitsper- centage

Effec- Redelijk Niet-ef- (%) tief effec- fectief tief

Geen behande- Rauw l 1 13 13,3 ^ ling loquat- zaad

Koji-fermen- " 2 2 11 26,6 tatie

Roosteren met " 3 2 10 33,3 ver-infrarood-10 straling +

Koj i-fermentatie

Roosteren met " 4 3 8 46,6 ver-infrarood-15 straling +

Koji-fermen- Ge_ 2 1 12 20,0 tatie + olie- droogd bekleding loquat- zaad 1 1017111 ( ) = Het totale aantal patiënten

Effectiviteitspercentage = aantal (Effectief + Redelijk effectief) x 100 (%)

Totaal aantal gevallen

TABEL 3. EFFECTIVITEIT VAN VERSCHILLENDE BEHANDELINGEN BIJ

PATIËNTEN MET MAAGKANKER

- 23 -

Behandeling Mon- Patiënten met maagkanker (40) Effectivi- sters__ teitsper-

Effec- Redelijk Niet-ef- centage tief effec- fectief tief

Geen behande- Rauw 0 1 7 12,5 5 ling loquat- zaad

Koji-fermen- " 1 0 7 12,5 tatie

Roosteren met " 2 0 6 25,0 ver-infrarood-10 straling +

Koj i-fermentatie

Roosteren met " 2 2 4 50,0 ver-infrarood-15 straling +

Koji-fermen- Ge_ 1 ± 6 25Q

tatie + olie- droogd bekleding ioquat- zaad 1 1017117 ( ) = Het totale aantal patiënten

TABEL 4. EFFECTIVITEIT VAN VERSCHILLENDE BEHANDELINGEN BIJ

PATIËNTEN MET LONGKANKER

- 24 -

Behandeling Mon- Patiënten met longkanker (60) Effectivi- sters _ teitsper-

Effec- Redelijk Niet-e£- centage tief effec- fectief tief

Geen behande- Rauw 0 2 10 16,6 5 ling loquat- zaad

Koji-fermen- " 1 2 9 25,0 tatie

Roosteren met " 2 2 8 33,3 ver-infrarood-10 straling +

Koji-fermentatie

Roosteren met "32 7 41,6 ver-infrarood-15 straling +

Koji-fermen- Ge- 2 1 9 25,0 tatie + olie- droogd bekleding loquat- zaad 20 ( ) = Het totale aantal patiënten

Zoals blijkt uit tabel 1 is de MDA-waarde, de parameter voor de productie van lipideperoxide, voor monsters behandeld met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en 25 oliebekleding hoger dan voor monsters behandeld met roosteren met ver-infraroodstraling en Koji-fermentatie. De MDA-waarde voor monsters behandeld met ver-infraroodstraling en Koji-fermentatie is hoger dan voor monsters alleen behandeld met Koji-fermentatie. MDA-waarden voor monsters 30 behandeld met Koji-fermentatie zijn hoger dan voor monsters behandeld met ver-infraroodstraling. MDA-waarden voor mon- 1 0 1 7 1 1 7 - 25 - sters behandeld met ver-infraroodstraling zijn hoger dan voor onbehandelde monsters.

Dit betekent dat de hoogste MDA-waarden worden verkregen voor monsters behandeld met ver-infraroodstra-5 ling, Koji-fermentatie en oliebekleding. Wanneer gedroogd zaad als monster wordt gebruikt, is de MDA-waarde kleiner dan bij rauw zaad behandeld met ver-inf raroodstraling en Koji-fermentatie. Zelfs als de zelfde behandelingen worden toegepast, is de MDA-waarde voor rauw zaad hoger dan voor 10 gedroogd zaad.

In tabel 2-4 worden klinische resultaten getoond voor patiënten met borstkanker, maagkanker en longkanker bij gebruik van afzonderlijke producten bereid uit rauwe en gedroogde loquatzaden. Het effectiviteitspercentage van 15 producten uit rauw zaad behandeld met Koji-fermentatie is hoger dan zonder behandeling. Het effectiviteitspercentage van producten uit zaad behandeld met roosteren met ver-in-fraroodstraling en Koji-fermentatie is hoger dan van producten uit zaad dat alleen is geroosterd met ver-infrarood-20 straling. Het effectiviteitspercentage voor producten van zaad behandeld met roosteren met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en oliebekleding is hoger dan voor producten uit zaad behandeld met roosteren met ver-infraroodstraling en Koji-fermentatie.

25 Zo is bijvoorbeeld het effectiviteitspercentage voor borstkanker van onbehandeld product 13,3% zoals getoond in tabel 3. In tegenstelling hiermee is het effectiviteitspercentage voor het product uit rauw loquatzaad behandeld met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en 30 oliebekleding 46,6%. Hieruit blijkt dat het effectiviteitspercentage tot ongeveer 3,5 maal is toegenomen. Bij gebruik van het product uit gedroogd zaad steeg het slechts ongeveer 1,5 maal.

Het effectiviteitspercentage bij maagkanker wordt 35 getoond in tabel 3. Het effectiviteitspercentage van het monster uit rauw zaad behandeld met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en oliebekleding was gestegen tot vier 1017117 - 26 - maal dat van onbehandeld rauw zaad. Het effectiviteitsper-centage van rauw zaad is twee maal zo hoog als dat van gedroogd zaad.

Het effectiviteitspercentage bij longkanker wordt 5 getoond in tabel 4. Het effeetiviteitspercentage van het monster uit rauw zaad behandeld met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en oliebekleding was gestegen tot ongeveer 2,5 maal dat van onbehandeld rauw zaad, en het effective-teitspercentage van rauw zaad is ongeveer 1,7 maal dat van 10 gedroogd zaad.

Deze resultaten zijn een sterke aanwijzing dat de achtereenvolgens uitgevoerde werkwijzen van roosteren met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en oliebekleding effectief zijn ter vergroting van de antitumoractiviteit 15 bij orale toediening wanneer de werkwijzen worden toegepast op loquatzaad.

Het exacte carcinostatische mechanisme is in dit stadium echter nog niet opgehelderd en voortdurend onderzoek is vereist. De onderhavige uitvinders nemen aan dat 20 onbehandeld loquatzaad amygdaline met antitumoractiviteit bevat dat zich in een gesloten keten (figuurlijk gesproken) in inactieve toestand bevindt. Wanneer dit loquatzaad aan een patiënt wordt toegediend, is het maagsap van de gemiddelde persoon niet in staat de keten te vernietigen waar-25 door de verwachte antitumoractiviteit niet wordt gevonden. De resultaten van de boven beschreven behandeling suggereren daarom dat de behandelingswerkwijze bij draagt aan activering van amygdaline in een actieve toestand waardoor de antitumoreffectiviteit uiteindelijk wordt vergroot.

30 1017117 - 27 -

TABEL 5. VERGELIJKING VAN MDA-WAARDEN VAN LOQUATZAAD MET

PADDESTOELEN

Behande- Rang- Monsters Gemiddelde ling nummer MDA-waarde

Controle (niet toegevoegd) 115 5 Geen be- 1 Grifola umbellate (CHYOREIMAITAKE) 439 handeling 2 Grifola frondosa (MAITAKE(ZWART)) 398 ♦3 Agaricus blazei 283 4 Pachyma hoelen (BUKURYO) 269 5 Tricholoma matsutake (MATSUTAKE) 218 06 Rauw loquatzaad 209 7__Lentinus edodes (SHIITAKE)__189_

Roosteren 1 Grifola umbellate (CHYOREIMAITAKE) 536 met 2 Grifola frondosa (MAITAKE(ZWART)) 490 ver-infra- ^3 Agaricus blazei 341 10 roodstra- 04 Rauw loquatzaad 320 ling 5 Pachyma hoelen (BUKURYO) 288 6 MATSUTAKE 271 7 __Lentinus edodes (SHIITAKE)__233_

Koji-fer- 1 Grifola umbellate (CHYOREIMAITAKE) 594 mentatie 2 Grifola frondosa (MAITAKE(ZWART)) 528 ♦3 Agaricus blazei 399 04 Rauw loquatzaad 334 5 Tricholoma matsutake (MATSUTAKE) 302 6 Pachyma hoelen (BUKURYO) 296 7 Lentinus edodes (SHIITAKE) 280

Roosteren 1 Grifola umbellate (CHYOREIMAITAKE) 799 15 met 2 Grifola frondosa (MAITAKE(ZWART)) 768 ver-infra- 03 Rauw loquatzaad 621 roodstra- ^4 Agaricus blazei 489 ling + 5 Tricholoma matsutake (MATSUTAKE) 412

Koji-fer- 6 Lentinus edodes (SHIITAKE) 381 20 mentatie 7 Pachyma hoelen (BUKURYO) 334

Roosteren 1 Grifola umbellate (CHYOREIMAITAKE) 827 met 2 Grifola frondosa (MAITAKE(ZWART)) 792 ver-infra- 03 Rauw loquatzaad 678 roodstra- 04 Gedroogd loquatzaad 572 25 ling + ♦S Agaricus blazei 509

Koji-fer- 6 Tricholoma matsutake (MATSUTAKE) 430 mentatie + 7 Lentinus edodes (SHIITAKE) 397 oliebekle- 8 Pachyma hoelen (BUKURYO) 362 ding_ 30

Tabel 5 toont de vergelijking van MDA-waarden voor amygdalinebevattend rauw loquatzaad met die van verschillende paddestoelen. De in tabel 5 gebruikte paddestoelen zijn: tuckahoe (Pachyma hoelen), Agaricus blazei, Grifola 35 umellate (CHYOREI MAITAKE), Grifola frondosa (ZWARTE MAITAKE), Tricholoma matsutake (MATSUTAKE) en Leninus 1017117 - 28 - edodes (SHIITAKE). Bij de Agaricus blazei werd gevonden dat de antitumoractiviteit daarvan sterker tot uiting komt bij gebruik van het vruchtlichaam in rauwe toestand dan bij het gedroogd materiaal, en wanneer het vruchtlichaam in rauwe 5 toestand na de oogst in een koelkast (4°C) wordt bewaard en binnen 3 dagen wordt gebruikt.

Bij andere paddestoelen dan Agaricus blazei werd bij de versterkingswerkwijze geen duidelijk effectiviteits-verschil gevonden tussen gebruik in rauwe toestand en ge-10 bruik in gedroogde toestand zoals geleverd in ruwe geneesmiddelen. De in deze uitvinding gebruikte Tuckahoe (Pachyma hoelen), Grifola umbellate (CHYOREI MAITAKE), Grifola frondosa (ZWARTE MAITAKE), Tricholoma matsutake (MATSUTA-KE), Lentinus edodes (SHIITAKE) waren dus gedroogde materi-15 alen.

Er worden twee soorten Grifola frondosa (ZWARTE MAITAKE) gebruikt. De ene soort is een Japans product dat wordt gekweekt in Yukikuni, Niigata Prefectuur, waarvan de formele naam Yukikunij MAITAKE of zwarte MAITAKE is, in 20 deze gedetailleerde beschrijving wordt de aanduiding "Zwarte MAITAKE" gebruikt. De andere soort wordt Chyorei MAITAKE (Grifola umbellate) genoemd, afkomstig uit China. Deze verschilt van de "Zwarte MAITAKE".

De relatieve antitumoractiviteit van loquatzaad 25 kan worden bepaald door vergelijking van zijn antitumoractiviteit met die van antitumorpaddestoelen in tabel 5.

Onlangs heeft de Agaricus blazei de aandacht getrokken wegens zijn antitumoractiviteit. De antitumoractiviteit van Agaricus blazei is hoger dan die van rauw 30 loquatzaad zonder behandeling.

Na behandeling van het loquatzaad met alleen roosteren met ver-infraroodstraling of Koji-fermentatie was de tumoractiviteit versterkt tot het niveau van Agaricus blazei; en boven dat van tuckahoe, een paddestoelensoort 35 die geacht wordt de hoogste antitumoractiviteit te hebben. Bovendien vertoonde het loquatzaad behandeld met roosteren met ver-infraroodstraling + Koji-fermentatie en behandeld 1017117 - 29 - met roosteren met infraroodstraling + Koji-fermentatie + oliebekleding een antitumoractiviteit die hoger was dan die van Agaricus blazei.

In de Kampo-geneesmiddelen worden natuurlijke ruwe 5 geneesmiddelen gebruikt, waaronder verscheidene zeldzame paddestoelen met hoge antitumoractiviteit. De beschikbare voorraad hiervan is echter niet voldoende. Wanneer echter de boven genoemde werkwijzen van deze uitvinding worden gebruikt, is het mogelijk in plaats van dergelijke zeldzame 10 paddestoelen gebruik te maken van amygdalinebevattend materiaal zoals het amygdalinebevattende loquatzaad dat in grote hoeveelheden kan worden gekweekt en waarvan voldoende kan worden geoogst voor gebruik als Kampo-geneesmiddel.

Dit vormt een bijdrage aan een stabiele aanvoer en 15 een lage prijs van antitumormaterialen, zodat veel kankerpatiënten profijt kunnen hebben van effectieve antitumor-producten.

In de bovenstaande beschrijving blijkt de beste uitvoeringsvorm de behandeling van rauw loquatzaad met 20 roosteren, fermentatie en oliebekleding. De antitumoractiviteit van rauw loquatzaad dat alleen is behandeld met roosteren met ver-infraroodstraling of alleen fermentatie met micro-organismen zoals Koji, of met zowel roosteren als fermentatie, kwam echter ook sterker tot uiting dan bij on-25 behandeld loquatzaad. Wanneer oliebekleding als gevolg van faciliteitsomstandigheden niet op de juiste wijze kan worden uitgevoerd, kan door alleen behandeling met roosteren met ver-infraroodstralen en fermentatie met micro-organismen de antitumoractiviteit dus ook specifiek en effectief 30 worden versterkt ten opzichte van onbehandeld loquatzaad.

Bij de behandelingen: (1) roosteren met ver-infraroodstraling + fermentatie + oliebekleding of (2) roosteren met ver-infraroodstraling + fermentatie kan in plaats van fermentatie met micro-organismen zoals Koji ook een behan-35 deling met een polysaccharide-afbrekend enzym worden toegepast .

1017117 - 30 -

In de oliebekledingswerkwijze werd gebruik gemaakt van sesampastaolie verkregen uit geroosterde sesam. Dit draagt bij aan versterking van de antitumoractiviteit.

Ook andere oliebronnen dan sesam, bijvoorbeeld 5 soja, maïs, saffloer (Carthamus tinctorius L.)f teunisbloem, rijstzemelen, raapzaad etc. kunnen als uitgangsmaterialen worden gebruikt en de olie kan worden verkregen door roosteren met ver-infraroodstraling en uitpersen.

Wanneer aan een medisch preparaat en een gezond-10 heidsvoedsel loguatzaad behandeld met een werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit bestaande uit roosteren met ver-infraroodstraling, Koji-fermentatie en oliebekleding wordt toegevoegd, worden deze preparaten effectief voor oraal antitumorgebruik.

15 Aan het product met loquatzaad dat is behandeld met de werkwijze ter versterking van de antitumoreffectivi-teit, kunnen ook componenten worden toegevoegd die geen nadelige invloed hebben op het vermogen tot expressie van het antitumoreffeet, bijvoorbeeld vitaminen etc. Ook kunnen 20 aan de producten de door de onderhavige uitvinders ontwikkelde stoffen tegen actieve zuurstof als bestanddeel worden toegevoegd.

Het preparaat met het amygdalinebevattende materiaal dat is behandeld met de antitumorversterkende werkwij-2 5 ze, kan goed worden geleverd als een gelatinecapsule die gemakkelijk oraal toe te dienen is. Ook kunnen geschikte medische additieven, bindmiddelen etc. worden gebruikt ter bereiding van een tabletproduct, een korrelproduct of een pil.

30 Hoewel deze uitvinding betrekking heeft op een werkwijze voor versterking van de antitumoractiviteit in het geval van orale toediening, is men van mening dat bij een injectiegeneesmiddel bereid door toevoeging van het loquatzaad waarop de antitumorversterkende werkwijze is toe-35 gepast, de antitumoractiviteit sterker tot uiting zal komen dan bij een injectiegeneesmiddel waarbij de versterkings-werkwijze niet is toegepast.

1017117 - 31 -

De bovenstaande toelichting is speciaal gericht op het amygdalinebevattende rauwe loquatzaad, maar is niet noodzakelijkerwijs beperkt tot het loquatzaad. Zaden zoals die van abrikoos, perzik, pruim, Japanse abrikoos, amygda-5 lineperzik, Amygdala amara en loquatblad, alfalfa, bamboescheut etc. kunnen ook in deze uitvinding worden gebruikt.

(UITVOERINGSVORM 2)

In deze uitvoeringsvorm wordt een werkwijze ter 10 beoordeling van de effectiviteit van antikankerproducten zoals amygdalinebevattend loquatzaad en ter beoordeling van de antitumoreffectiviteit van een behandeling van amygdalinebevattend materiaal beschreven.

Zoals beschreven in uitvoeringsvorm l werden aan 15 het experimentele systeem voor vorming van lipideperoxide door middel van ultraviolette straling diverse producten met amygdalinebevattend materiaal toegevoegd ter bepaling van de hoeveelheid lipideperoxide ter beoordeling van de antitumoractiviteit.

2 0 De resultaten laten zien dat bij een sterke antitumoractiviteit bij orale toediening een grote hoeveelheid lipideperoxide wordt gevormd bij verhoging van de concentratie amygdalinebevattend loquatzaad.

Dat wil zeggen dat bij verhoging van de hoeveel-25 heid amygdalinebevattend materiaal een grotere hoeveelheid lipideperoxide kan worden gevormd, wat leidt tot een sterke uiting van antitumoractiviteit bij orale toediening.

Zo kan voor deze complexe producten een volgorde worden opgesteld van het verwachte antitumoreffeet door 30 voor verschillende amygdalinebevattende producten de verhoging van de gevonden hoeveelheid lipideperoxide als respons op de aan het systeem toegevoegde hoeveelheid amygdalinebevattend materiaal met elkaar te vergelijken.

De twee beoordelingswerkwijzen van dit voorbeeld 35 worden hierna toegelicht. Wanneer de MDA-waarden voor de verschillende behandelingen in tabel 1 met elkaar worden vergeleken, blijkt dat de MDA-waarden voor de monsters die 10 1 71 1 7 - 32 - werden geroosterd met ver-infraroodstraling hoger zijn dan die van onbehandelde monsters.

MDA-waarden voor monsters behandeld met Koji-fermentatie zijn hoger dan die voor monsters geroosterd met 5 ver-infraroodstraling. MDA-waarden voor monsters behandeld door zowel roosteren met ver-infraroodstraling als Koji-fermentatie blijken hoger dan die voor monsters behandeld met alleen roosteren of alleen fermentatie.

Verder blijken de waarden voor monsters behandeld 10 met ver-infraroodstralen, Koji-fermentatie en oliebekleding hoger te zijn dan die van monsters behandeld met zowel roosteren als fermentatie.

Anderzijds blijkt het effectiviteitspercentage van de klinische proeven op borstkanker, maagkanker en long-15 kanker zoals getoond in tabel 2, 3 en 4 samen te vallen met hoge MDA-waarden als gevolgen van de uitgevoerde behandelingen. Dit betekent dat een behandeling die een hoge MDA-waarde tot gevolg heeft, een hoog effectiviteitspercentage heeft.

20 Dit betekent dat naarmate de gevormde hoeveelheid lipideperoxide door bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht groter is, er een grotere antitumoracti-viteit zal worden gevonden.

Bij beschouwing van de resultaten met rauw en 25 gedroogd zaad in tabel 2-4 blijkt dat, hoewel een behandeling met "roosteren met ver-infraroodstraling + Koji-fermentatie + oliebekleding" werd toegepast, de MDA-waarden laag zijn voor gedroogd zaad en dat dit blijkt samen te vallen met een laag klinisch effectiviteitspercentage.

3 0 Dit betekent dat wanneer er een hoge MDA-waarde wordt verkregen in het systeem voor vorming van lipidepe-roxiden voor monsters met dezelfde concentratie amygdaline-bevattend materiaal (rauwe en gedroogde loquatzaden) behandeld met dezelfde werkwijzen, er een goede kans bestaat een 35 antitumoractiviteit voor het behandelde zaad te vinden.

Hoe hoger de in het systeem voor lipideperoxide-vorming door bestraling van docosahexaeenzuur gevonden 1017117 - 33 - MDA-waarde, hoe hoger het klinische effectiviteitspercenta-ge, en hoe hoger de bepaalde antitumoractiviteit voor verschillende amygdalinebevattende materialen. Dit betekent dat er een werkwijze is ontwikkeld waarmee de effectiviteit 5 van de antitumoractiviteit voor verschillende amygdalinebevattende materialen kan worden voorspeld zonder klinische proeven uit te voeren.

De bovenstaande uiteenzetting is gegeven voor het geval van het gebruik van loquatzaad als amygdalinebevat-10 tend materiaal. Zaden zoals die van abrikoos, perzik, pruim, Japanse abrikoos, Chinese abrikoos, amygdalineper-zik, Amygdala amara, en loquatblad, alfalfa, bamboescheut etc. kunnen echter ook in deze uitvinding gebruikt worden.

Verder wordt in de bovenstaande uiteenzetting 15 docosahexaeenzuur gebruikt. Ook andere vetzuren dan docosa-hexaeenzuur kunnen echter worden gebruikt, zoals biologische onverzadigde vetzuren, waarvan de gevormde hoeveelheid lipideperoxide wordt beïnvloed door toevoeging van amygda-linebevattend materiaal zoals loquatzaad etc. Ook kan voor 20 de beoordelingswerkwijzen gebruik worden gemaakt van onverzadigde vetzuren afkomstig van een andere dan een biologische bron, mits de gevonden hoeveelheid lipideperoxide door bestraling met ultraviolet licht wordt beïnvloed door toevoeging van amygdalinebevattend materiaal, zoals che-25 misch gesynthetiseerde vetzuren.

Door de hoeveelheid lipideperoxide gevormd door bestraling van docosahexaeenzuur met ultraviolet licht te relateren aan de individuele concentratie amygdalinebevattend materiaal die aan het systeem is toegevoegd, kan de 30 gemiddelde geschikte dosis in overeenstemming met het stadium van voortschrijding van de kwaadaardige tumor mogelijk worden voorspeld zonder klinische proeven uit te voeren.

Het verband tussen de verschillende concentraties amygdalinebevattend materiaal en de overeenkomstige 35 MDA-waarden is namelijk op de boven beschreven wijze vast te stellen, en door de effectiviteit voor elk kankerstadium vooraf in een klinische proef te bevestigen kunnen 1017117 - 34 - MDA-waarden worden gerelateerd aan de klinische proef en gebruikt worden als effectiviteitsparameter. De gemiddelde orale dosis kan dan worden voorspeld door terug te rekenen vanuit de concentratie amygdalinebevattend materiaal.

5 In deze uitvinding kan de antitumoractiviteit van amygdalinebevattende materialen worden vergeleken aan de hand van een gemeenschappelijke parameter: de MDA-waarde. Er is dus vastgesteld dat de MDA-waarde een parameter is die als gemeenschappelijke maat kan worden gebruikt voor 10 verschillende amygdalinebevattende materialen. Bovendien is het verband tussen de MDA-waarde en antitumoractiviteit vastgesteld. Antitumoractiviteiten kunnen dus met elkaar worden vergeleken.

Met deze werkwijze kunnen dus vele amygdalinebe-15 vattende materialen in korte tijd worden onderzocht op antitumoreffeet.

Volgens de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit van amygdalinebevattend materiaal van deze uitvinding is het effectiviteitspercentage bij orale 20 toediening voor behandeld amygdalinebevattend loquatzaad hoger dan voor onbehandeld loquatzaad.

Volgens de werkwijze ter versterking van de antitumoractiviteit voor amygdalinebevattend materiaal kan de activiteit worden versterkt tot een niveau gelijk aan of 25 beter dan dat van paddestoelen, materialen die geacht worden geen amygdaline te bevatten en waarvan wordt aangenomen dat ze antitumoractiviteit hebben zonder behandeling met deze werkwijzen.

Het product dat het amygdalinebevattend materiaal 30 bevatte, zoals loquatzaad, behandeld met de antitumorver-sterkingswerkwijze, vertoonde een hoger effectiviteitsper-centage van antitumoractiviteit bij orale toediening dan het onbehandelde product met amygdalinebevattend materiaal.

Volgens de werkwijze ter beoordeling van de 35 antitumoreffectiviteit van de behandeling van amygdalinebevattend materiaal volgens de onderhavige uitvinding kan de effectiviteit met betrekking tot de antitumoractiviteit 1017117 - 35 - van de verschillende soorten op het amygdalinebevattende materiaal toegepaste behandelingswerkwijzen eenvoudig binnen korte tijd worden beoordeeld.

Volgens de werkwijze ter beoordeling van de 5 antitumoreffectiviteit van amygdalinebevattend materiaal kan een voorspelling worden gedaan zonder klinische proeven met orale toediening uit te voeren. In vergelijking met de gebruikelijke werkwijzen waarbij na langdurige dierproeven en klinische proeven uiteindelijk resultaten worden verkre-10 gen, is door gebruik van de werkwijzen volgens de uitvinding het zoeken van een antitumoreffectieve materiaal door screening van een uiterst groot aantal natuurlijke producten eenvoudiger uit te voeren.

1017117

Claims (20)

1. Werkwijze ter versterking van de antitumorac-10 tiviteit van amygdalinebevattende materialen, omvattende een roosterwerkwijze waarbij de amygdalinebevattende materialen worden geroosterd met ver-infraroodstralen, en een fermentatiewerkwijze waarbij een fermentatie met micro-or-ganismen plaatsvindt ter versterking van de antitumoracti-15 viteit van de amygdalinebevattende materialen in vergelijking met het geval dat het roosteren en de fermentatie niet worden uitgevoerd.

2. Werkwijze ter versterking van de antitumorac-tiviteit van amygdalinebevattende materialen volgens con- 20 clusie 1, waarbij na de fermentatiewerkwijze een oliebekledingswerk-wijze wordt uitgevoerd waarbij de materialen na fermentatie in de fermentatiewerkwijze worden onderworpen aan bekleding met olie verkregen uit planten zoals sesam geroosterd met 25 ver-infraroodstraling.

3. Werkwijze ter versterking van de antitumorac-tiviteit van amygdalinebevattende materialen volgens conclusie 1 of 2, waarbij het amygdalinebevattende materiaal een amygdaline-30 bevattend plantenzaad is.

4. Werkwijze ter versterking van de antitumorac-tiviteit van amygdalinebevattende materialen volgens conclusie 3, waarbij het plantenzaad loquatzaad is.

5. Werkwijze ter versterking van de antitumorac- tiviteit van amygdalinebevattende materialen volgens conclusie 4, waarbij 1017117 - 37 - het loquatzaad in rauwe toestand wordt geroosterd met ver-infraroodstraling.

6. Preparaat bevattende amygdalinebevattend materiaal waarop een werkwijze ter versterking van de 5 antitumoractiviteit van amygdalinebevattende materialen is toegepast, waarbij de werkwijze een roosterwerkwijze bestaande uit het roosteren van de amygdalinebevattende materialen met ver-infraroodstraling en een fermentatie-werkwijze bestaande uit het fermenteren met micro-organis-10 men omvat, ter versterking van de antitumoractiviteit van de amygdalinebevattende materialen in vergelijking met het geval dat het roosteren en de fermentatie niet worden toegepast.

7. Preparaat bevattende amygdalinebevattend 15 materiaal met versterkte antitumoractiviteit volgens conclusie 6, waarbij na de fermentatiewerkwijze een oliebekledings-werkwijze wordt uitgevoerd waarbij de materialen na fermentatie in de fermentatiewerkwijze worden onderworpen aan be-20 kleding met olie verkregen uit planten zoals sesam geroosterd met ver-infraroodstraling.

8. Preparaat bevattende amygdalinebevattend materiaal met versterkte antitumoractiviteit volgens conclusie 6 of 7, waarbij 25 het amygdalinebevattende materiaal amygdalinebe vattend plantenzaad is.

9. Preparaat bevattende amygdalinebevattend materiaal met versterkte antitumoractiviteit volgens conclusie 8, waarbij 30 het plantenzaad loquatzaad is.

10. Preparaat bevattende amygdalinebevattend materiaal met versterkte antitumoractiviteit volgens conclusie 9, waarbij het loquatzaad in rauwe toestand wordt geroosterd 35 met ver-infraroodstraling.

11. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op amygdalinebevattende materialen toe te passen 1017117 - 38 - behandeling, waarbij men de amygdalinebevattende materialen waarop de behandeling is toegepast, toevoegt aan een systeem dat lipideperoxiden vormt door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht, 5 en het effect van de behandeling ter versterking van de antitumoractiviteit van het amygdalinebevattende materiaal beoordeelt als groot als de stijging van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide gebaseerd op de stijging van de concentratie amygdalinebevattend materiaal groot is.

12. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op amygdalinebevattende materialen toe te passen behandeling volgens conclusie 11, waarbij het amygdalinebevattende materiaal amygdalinebevattend plantenzaad is.

13. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit van een op amygdalinebevattende materialen toe te passen behandeling volgens conclusie 12, waarbij het plantenzaad loquatzaad is.

14. Werkwijze ter beoordeling van de effectiviteit 20 van een op amygdalinebevattende materialen toe te passen behandeling volgens conclusie 13, waarbij het loquatzaad in rauwe toestand wordt geroosterd met ver-infraroodstraling.

15. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref-25 fectiviteit van amygdalinebevattende materialen zonder klinische proeven, waarbij men het amygdalinebevattende materiaal toevoegt aan een systeem dat lipideperoxiden vormt door een onverzadigd vetzuur zoals docosahexaeenzuur te bestralen met ultraviolet licht, en de antitumoreffectiviteit 30 van amygdalinebevattende materialen bij orale toediening als groot beoordeelt als de stijging van de gevormde hoeveelheid lipideperoxide gebaseerd op de stijging van de concentratie amygdalinebevattende materialen groot is.

16. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref-35 fectiviteit van amygdalinebevattend materiaal volgens conclusie 15, waarbij 1017117 - 39 - op het araygdalinebevattende materiaal een werkwij-ze ter versterking van de antitumoractiviteit van amygdali-nebevattende materialen wordt toegepast, welke werkwijze een roosterwerkwijze bestaande uit het roosteren van de 5 amygdalinebevattende materialen met ver-infraroodstraling en een fermentatie met micro-organismen omvat, ter versterking van de antitumoractiviteit van de amygdalinebevattende materialen in vergelijking met het geval dat het roosteren en fermentatie niet worden uitgevoerd.

17. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref- fectiviteit van amygdalinebevattend materiaal volgens conclusie 16, waarbij na de fermentatiewerkwijze een oliebekledingswerk-wijze wordt uitgevoerd waarbij de materialen na fermentatie 15 in de fermentatiewerkwijze worden onderworpen aan bekleding met olie verkregen uit planten zoals sesam geroosterd met ver-infraroodstraling.

18. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref-fectiviteit van amygdalinebevattend materiaal volgens con- 20 clusie 16 of 17, waarbij het amygdalinebevattende materiaal amygdalinebevattend plantenzaad is.

19. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref-fectiviteit van amygdalinebevattend materiaal volgens con- 25 clusie 18, waarbij het plantenzaad loquatzaad is.

20. Werkwijze ter beoordeling van de antitumoref-fectiviteit van amygdalinebevattend materiaal volgens conclusie 19, waarbij 30 het loquatzaad in rauwe toestand wordt geroosterd met ver-infraroodstraling. 1017 117