FR2783426A1 - Methode de renforcement de l'activite anti-tumorale de remedes bruts, composition contenant un remede brut renforcant l'activite anti-tumorale, methode d'evaluation d'une efficacite anti-tumorale - Google Patents

Abstract

Cette invention concerne une méthode pour renforcer l'activité anti-tumorale en grillant un champignon contenant beta-glucane par des rayons dans l'infrarouge lointain, en effectuant ensuite une fermentation par addition de "Koji", et en préparant ensuite un agent huileux, une composition contenant un remède brut auquel est appliquée une telle méthode, une méthode permettant d'évaluer que l'activité anti-tumorale lors d'une administration interne est plus grande lorsque l'augmentation de la quantité de peroxyde de lipide formée est plus grande, et une méthode d'évaluation de l'efficacité anti-tumorale du traitement appliqué au remède brut en utilisant ces méthodes.

Description

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Cette invention concerne des techniques telles qu'une méthode de renforcement, une méthode d'évaluation et l'analogue de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts tels que des champignons contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale ; concerne particulièrement des techniques pour augmenter la manifestation des effets anti-tumoraux dans une administration interne ou pour attendre l'efficacité d'une activité anti-tumorale dans une administration interne ou l'analogue.

Divers types de champignons ont jusqu'ici été utilisés dans le domaine des remèdes chinois, des aliments reconstituants ou l'analogue. Par exemple, on sait que des champignons tels que GANODERMA (REISBI) (Fomes (SARUNOKOSHIKAKE)), PORIA (BUKURYO), champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson), et l'ana-

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logue ont une activité anti-tumorale telle qu'une activité carcinostatique, etc. De nombreuses recherches ont été conduites pour déterminer les composants efficaces de champignons présentant une activité anti-tumorale et on a généralement constaté que les polysaccharides contenus dans les champignons présentent des activités anti-tumorales efficaces.

En fait, dans le domaine de la médecine chinoise, on fait une décoction de champignons séchés et on utilise cette décoction de manière interne en la buvant.

Divers types de remèdes chinois ont jusqu'ici été utilisés comme médicaments naturels, car ils ont moins d'effets secondaires que les médicaments synthétisés. Dans la pharmacopée japonaise, un certain nombre de remèdes chinois ont été décrits comme remèdes bruts.

D'autre part, en ce qui concerne les activités anti-tumorales de ces champignons, leurs décoctions ou extraits sont ingérés dans des animaux expérimentaux tels que des souris, etc., en les mélangeant avec la nourriture, et des souris d'un groupe témoin auxquelles aucun remède chinois n'a été ingéré et des souris d'un groupe auxquelles on a ingéré un tel remède sont comparées et observées pour examiner, par exemple, un état de disparition, un état de cancer transféré, ou un pourcentage de survie des souris ou l'analogue, d'où il résulte un contrôle de leur efficacité.

En outre, dans ces animaux expérimentaux, on examine également la toxicité et l'efficacité et, après confirmation, on peut les appliquer à l'homme avec une sécurité suffisante, ces médicaments sont administrés réellement par voie interne et l'efficacité des activités anti-tumorales chez l'homme est finalement confirmée par des tests cliniques.

Les activités anti-tumorales des champignons,

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telles que des propriétés carcinostatiques, des propriétés d'inhibition de transfert de cancer, etc., étaient déjà connues comme mentionné ci-dessus, et leur efficacité est largement connue. Ils sont utilisés en faisant une décoction d'un produit séché de champignons et en buvant la décoction, ou en mélangeant un composant efficace extrait avec un alcool, etc., avec d'autres composants tels que des préparations vitaminées, pour préparer une composition telle que des boissons reconstituantes, des aliments reconstituants ou des agents médicaux.

En considérant l'administration par des moyens internes, tels que l'absorption d'une décoction, conventionnellement mise en oeuvre, les cas dans lesquels ces effets médicaux peuvent être obtenus de manière à observer apparemment les effets thérapeutiques, sont, de façon inattendue, peu nombreux. Dans le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE, qui est également appelé "Agaricus"), qui a récemment attiré l'attention comme ayant un effet médical important, on peut observer la même tendance. En outre, dans le champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson) qui a récemment attiré l'attention, il y a également peu d'exemples pour prouver ses effets médicaux.

Toutefois, ils ne présentent jamais d'effets médicaux, mais il existe un cas dans lequel une activité anti-tumorale nettement efficace est présentée, tandis que ce cas se rencontre dans un nombre extrêmement limité d'exemples.

Ainsi, le présent inventeur a recherché s'il existait une manière efficace d'obtenir les activités anti-tumorales de champignons pour une personne quelconque en déterminant le mécanisme par lequel apparaissaient des différences dans la manifestation d'effets anti-tumoraux procurés par des champignons.

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Même dans le cas où l'efficacité de champignons ayant une activité anti-tumorale est confirmée chez des animaux expérimentaux, comme mentionné ci-dessus, les effets attendus peuvent ne pas se présenter dans presque tous les cas dans lesquels il y a réellement une administration interne à l'homme. Pour confirmer ses effets par une administration réelle interne dans des expériences cliniques, il est nécessaire de continuer l'administration interne pendant un certain temps en contrôlant le système d'administration dans des conditions constantes et en continuant les observations. Ainsi, un temps important est nécessaire pour déterminer si oui ou non les effets des champignons sont présentés par une administration interne à un patient.

Une telle méthode est certainement efficace, mais, par exemple, pour contrôler une substance ayant une activité anti-tumorale efficace en analysant un certain nombre de produits naturels, il faut un nombre de jours énorme de telle sorte qu'il est nécessaire de développer une technique pouvant évaluer une activité anti-tumorale en un temps nettement plus court.

Par ailleurs, lorsque des complications apparaissent soudainement chez un patient soumis à un test clinique et qu'on applique en toute hâte à ce patient un traitement étranger au test, l'efficacité du traitement ne peut pas être confirmée en ce qui concerne le patient. Ainsi, dans un test clinique s'étendant sur une longue période de temps, il se présente un grand nombre de cas dans lesquels l'efficacité ne peut pas être confirmée de telle sorte qu'il n'est pas nécessairement facile de conduire le test clinique sur une longue période de temps tout en maintenant l'efficacité du test lui-même.

Ainsi, le présent inventeur a considéré qu'il

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était nécessaire de développer une méthode permettant d'espérer dans une certaine mesure la manifestation d'un effet anti-tumoral lorsqu'un échantillon est administré à une personne sans avoir à conduire un tel test clinique. Par ailleurs, comme substance ayant une activité anti-tumorale, on connaît, en tant que remèdes bruts dans la médecine chinoise, un grand nombre de substances autres que des champignons et on préférerait beaucoup que les problèmes mentionnés ci-dessus concernant l'échantillon puissent être résolus afin d'appliquer les conclusions à tous les remèdes bruts.

Un but de la présente invention est de développer efficacement les activités anti-tumorales de remèdes bruts, tels que des champignons et l'analogue, contenant des polysaccharides ayant des activités antitumorales.

Un autre but de la présente invention est d'attendre des activités anti-tumorales de remèdes bruts, tels que des champignons et l'analogue, lorsqu'ils sont administrés à des personnes sans avoir à conduire des tests cliniques.

Un autre but de la présente invention est de procurer une composition contenant des remèdes bruts, tels que des champignons et l'analogue, contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale de façon à manifester efficacement leurs activités antitumorales.

Les buts mentionnés ci-dessus ainsi que d'autres et de nouvelles caractéristiques de la présente invention vont être décrites en détail dans la présente spécification suivante.

La présente invention concerne une méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale qui est appliquée à un remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale ; cette méthode

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comprend une étape de grillage dans laquelle on grille le remède brut mentionné ci-dessus par des rayons situés dans l'infrarouge lointain et une étape de fermentation dans laquelle on ajoute des micro- organismes pour renforcer l'activité anti-tumorale du remède brut mentionné ci-dessus par rapport au cas où l'on effectue pas le grillage et la fermentation.

Après l'étape de fermentation mentionnée ci- dessus, la présente invention comprend une étape dans laquelle on prépare un agent huileux dans lequel les remèdes bruts fermentés mentionnés ci-dessus sont enfermés dans une composition huileuse obtenue de plantes, telles que du sésame grillé ou l'analogue par des rayons situés dans l'infrarouge lointain.

La présente invention comprend en outre l'utilisation d'un champignon qui contient P-glucane.

La présente invention comprend également l'utilisation d'au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus(AGARIKUSUTAKE, Agaricus blazei), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

Lorsqu'on utilise le champignon agaricus mentionné ci-dessus (AGARIKUSUTAKE), la présente invention comprend un grillage de l'agaricus brut par des rayons situés dans l'infrarouge lointain.

La composition contenant le remède brut à activité anti-tumorale renforcée de la présente invention comprend un remède brut auquel est appliqué le procédé de renforcement de l'activité anti-tumorale du remède brut par l'une quelconque des compositions mentionnés ci-dessus.

La présente invention est une méthode d'évalua-

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tion de l'efficacité de l'activité anti-tumorale du traitement à appliquer au remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, cette méthode consistant à ajouter le remède brut auquel le raitement mentionné ci-dessus est appliqué à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets d'un acide gras insaturé, tel que l'acide docosahexaénoïque, et à évaluer que l'effet du traitement de renforcement de l'activité anti-tumorale du remède brut mentionné ci-dessus est important lorsque l'augmentation de la quantité du peroxyde de lipide mentionné ci-dessus ainsi formé basée par l'augmentation par le traitement du rapport de la concentration du remède brut mentionné ci-dessus, est importante.

La présente invention comprend des champignons qui contiennent -glucane utilisés pour le remède brut mentionné ci-dessus.

La présente invention est une méthode d'évaluation de l'efficacité du remède brut pour évaluer l'efficacité de l'effet anti-tumoral présenté par le remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale sans effectuer de test clinique, cette méthode consistant à ajouter le remède brut à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets d'un acide gras insaturé, tel que l'acide docosahexaénoïque, et à évaluer et espérer que l'effet du traitement de renforcement de l'activité anti-tumorale par administration interne du remède brut mentionné ci-dessus soit important, lorsque l'augmentation de la quantité du peroxyde de lipide mentionné ci-dessus ainsi formé, basée sur une importante augmentation de la concentration du remède brut mentionné ci-dessus, est importante.

La présente invention comprend l'une ou l'autre

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des méthodes de renforcement de l'activité anti-tumorale mentionnée ci-dessus appliquée au remède brut mentionné ci-dessus.

Le présent inventeur a conduit diverses études sur une substance inhibitrice anti-oxygène actif dans les remèdes chinois et, à travers ces études, il a confirmé que l'oxygène actif ou les peroxydes de lipides procurent des effets remarquables sur un corps humain et que ces substances participent à la rupture de tissus dans le corps humain, d'où il résulte qu'elles deviennent la cause de l'apparition de diverses maladies infectieuses.

Dans les tissus du corps humain, une enzyme appelée SOD (superoxyde dismutase) existe pour protéger les tissus du corps humain d'un tel oxygène actif et pour éliminer l'oxygène actif. La quantité de la SOD diminue avec l'âge et l'oxygène actif ne peut plus être enlevé du corps. Sa diminution est particulièrement remarquable à partir de l'âge de 40 ans, l'oxygène actif prélevé dans le corps ne peut plus être suffisamment éliminé et on a démontré ces dernières années qu'il devient la cause de divers types de maladies chez les adultes.

Par ailleurs, lorsqu'une quantité excessive d'oxygène actif est formée dans le corps par une stimulation chronique ou aiguë ou par une substance chimique, etc., l'oxygène actif ne peut pas être suffisamment éliminé par la quantité de SOD existant dans le corps depuis le commencement, de telle sorte que la personne souffre de diverses maladies.

Ainsi, en ce qui concerne les diverses maladies causées par un enlèvement insuffisant de l'oxygène actif dû à un manque de SOD, on a considéré que l'on pouvait résoudre ce manque de SOD par un traitement d'administration de SOD. Toutefois, dans un tel traite-

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ment, on peut constater les effets dans le cas d'une médecine d'injection, mais on ne peut constater aucun effet remarquable dans le cas d'une médecine interne de telle sorte que les effets d'un tel traitement n'ont pas encore été prouvés.

En ce qui concerne le fait que les effets d'une médecine interne ne sont pas manifestés, le présent inventeur a constaté que la SOD était instable dans le suc gastrique et que le poids moléculaire de SOD est égal ou supérieur à 30 000 ; la raison en est qu'elle n'est pas absorbée telle quelle par les organes de la digestion. Par ailleurs, il a constaté qu'il existait une limite en ce que la SOD agit seulement sur les peroxydes (02-) parmi les quatre types d'oxygène actif existants.

Le présent inventeur a recherché une substance pouvant enlever un excès d'oxygène actif dans le corps humain et qui soit capable d'être administré par voie interne ; comme résultat, il a trouvé une composition qui contient une huile végétale obtenue à partir de plantes grillées, laquelle huile est ajoutée à une substance obtenue en grillant des graines de plantes ou leurs germes dans des conditions appropriées, laquelle composition est ensuite soumise à fermentation en ajoutant des micro-organismes, cette composition pouvant être ensuite utilisée comme agent d'enlèvement de l'oxygène actif efficace en usage interne (voir brevet japonais n 2 125 887).

Dans les graines de plantes et leurs germes mentionnés ci-dessus, il existe intrinsèquement des substances anti-oxygène actif de faible poids moléculaire, telles que flavonoïdes, polyphénols, tannin, tocophérol, vitamine B2, etc. Le présent inventeur a trouvé que de telles substances anti-oxygène actif de faible poids moléculaire se lient chimiquement mutuel-

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lement ou avec un autre composant, génèrent un composé moléculaire ou forment un complexe compliqué ou un composé macromoléculaire par adsorption ou inclusion ; lorsqu'elles sont ingérées dans un tel état, on ne peut pas obtenir l'action de suppression anti-oxygène actif attendue d'une substance anti-oxygène actif en l'état d'un faible poids moléculaire.

Même lorsqu'il y a ingestion dans un tel état, beaucoup de personnes ne peuvent actuellement pas digérer une substance anti-oxygène actif de faible poids moléculaire par le suc gastrique, de telle sorte qu'on ne peut pas obtenir l'action de suppression anti-oxygène actif. Le présent inventeur a développé ce point dans "Food Industry", volume 35, n 14, "Development and Improvement of DDS, SOD-like Function Foods from Natural Plants and Seeds and Their Pharmacological and Biochemical Consideration".

Le présent inventeur a étudié l'utilisation effective de la substance anti-oxygène actif mentionnée ci-dessus contenue dans les graines de plantes ou leurs germes pour traiter ou prévenir des maladies et la manière d'activer les substances anti-oxygène actif dans l'état ci-dessus.

Il a ainsi trouvé que, en chauffant et en grillant des graines ou germes de plantes dans des conditions moyennes, la substance anti-oxygène actif contenue dans les graines de plantes ou leurs germes est partiellement libérée du complexe mentionné cidessus pour former une substance originale de faible poids moléculaire ou est partiellement activée en générant un groupe fonctionnel actif dû à un changement chimique. En effectuant ces traitements, l'action antioxygène actif est renforcée de façon significative par rapport à cette action avant grillage.

D'autre part, la plupart des fonctions actives

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anti-tumorales, telles que les propriétés carcinostatiques ou la propriété d'inhibition de transfert de cancer des champignons sont considérées comme étant généralement basées sur des polysaccharides tels que ssglucane, etc., mais un tel P-glucane diffère de la substance anti-oxygène actif de faible poids moléculaire mentionnée ci-dessus contenue dans les graines ou germes de plantes, et il est hors de l'objet de la série mentionnée ci-dessus d'études sur l'oxygène actif par le présent inventeur.

Toutefois, le présent inventeur a considéré si le fait que, pour manifester les effets anti-tumoraux des champignons lorsqu'elle est administrée par voie interne par l'absorption d'une décoction comme mentionné ci-dessus, elle présentait des effets remarquables pour certaines personnes, mais qu'on ne pouvait jamais obtenir ces effets pour les nombreuses autres personnes, pouvait être expliqué par le fait du faible poids moléculaire de la substance anti-oxygène actif mentionnée ci-dessus.

Autrement dit, tandis que l'action et le mécanisme de l'activité anti-tumorale du p-glucane n'ont pas été encore suffisamment élucidés, comme mentionné ci-dessus, le fait qu'il y a des différences apparentes dans les effets anti-tumoraux lorsque les champignons sont ingérés par voie interne signifie qu'il y a des patients sur lesquels un ingrédient efficace qui manifeste l'activité anti-tumorale des champignons agit aisément et des patients sur lesquels cet ingrédient agit à peine.

Dans la forme d'administration interne, des champignons ingérés intérieurement sont traités par le suc gastrique plus tôt ou plus tard. En conséquence, le présent inventeur a considéré que le fait que l'ingrédient actif qui manifeste l'activité anti-tumorale des

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champignons mentionnés ci-dessus agit effectivement ou non est étroitement relié à un tel traitement par le suc gastrique. Autrement dit, le présent inventeur a considéré qu'il existait des différences individuelles dans le traitement du suc gastrique et ces différences individuelles provoqueraient des différences dans la manifestation des effets anti-tumoraux.

Ainsi, le présent inventeur a proposé l'hypothèse suivante concernant la facilité de la manifestation de l'action anti-tumorale en usage interne et un traitement par le suc gastrique compte tenu du fait clinique qu'il existe des différences individuelles dans la force des sucs gastriques.

Autrement dit, l'ingrédient efficace présentant une activité anti-tumorale contenu dans les champignons, qui devient l'objet du traitement par le suc gastrique, existe en l'état dans lequel les effets se manifestent difficilement ; mentionné ci-dessus, il est transformé en l'état dans lequel les effets se manifestent aisément du fait du traitement par le suc gastrique avec des différences chez les individus.

Ainsi, si une personne a un suc gastrique de nature forte, un ingrédient ayant des effets sur l'activité anti-tumorale contenue dans les champignons ingérés passe dans un état dans lequel cette action peut aisément apparaître, les effets anti-tumoraux se manifestant alors.

Toutefois, dans une personne qui a un suc gastrique de nature faible, l'ingrédient ayant des effets sur les activités anti-tumorales ne passe pas dans un état dans lequel l'action peut aisément être présentée, et, de ce fait, les effets anti-tumoraux ne se manifestent pas.

Beaucoup de personnes n'ont pas à ce jour un suc gastrique fort qui peut changer l'ingrédient

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efficace présentant l'activité anti-tumorale des champignons à un degré tel que son action puisse aisément se manifester ; en résulte que l'on peut considérer que le nombre d'exemples pouvant confirmer l'efficacité de l'activité anti-tumorale des champignons dans une certaine mesure peut rarement être observée par administration par voie interne.

On peut expliquer que, dans le cas d'une personne dont le suc gastrique est fort de nature, tandis que les composants qui sont efficaces pour l'activité anti-tumorale contenus dans les champignons se tiennent ensemble comme une chaîne (ceci est une simple comparaison) par, par exemple, polymérisation, et existent ainsi à l'état immobilisé, c'est-à-dire dans l'état non actif dans lequel ils ne peuvent pas avoir une action d'activation, les composants sont coupés par le suc gastrique et deviennent des composants efficaces à l'état activé libre, d'où il résulte qu'ils peuvent présenter dans le corps une activité anti-tumorale.

On peut considérer qu'à ce jour de nombreuses personnes ne peuvent pas couper la chaîne dans l'état inactivé dans lequel les ingrédients effectifs qui sont efficaces pour le cancer sont reliés les uns aux autres sous forme d'une chaîne dans le cas d'un suc gastrique tel que mentionné ci-dessus. On peut ainsi expliquer que les ingrédients efficaces contre le cancer sont absorbés par les intestins dans un tel état non activé de telle sorte qu'ils ne peuvent pas manifester leurs effets dans le corps.

Ainsi, le présent inventeur a considéré que, si un traitement qui pouvait préalablement activer l'ingrédient efficace qui est dans l'état non activé pouvait aisément être appliqué à des champignons, les problèmes mentionnés ci-dessus seraient résolus.

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Le présent inventeur a essayé divers moyens pour activer les ingrédients efficaces de ces champignons qui se trouvent à l'état non actif, mais il n'a pas pu obtenir aisément un moyen efficace. La raison en est qu'on ne peut pas obtenir une connaissance suffisante concernant la raison pour laquelle les ingrédients efficaces se trouvent dans l'état non activé, car le système réel est trop complexe à évaluer.

Comme mentionné ci-dessus, le présent inventeur a effectué diverses expériences et il a finalement essayé d'appliquer la méthode mentionnée ci-dessus inventée par lui-même comme moyen d'activation de substances supprimant l'oxygène actif telles que flavonoïdes, polyphénols, etc., tandis que leur composition est totalement différente de celle du P-glucane.

Lorsqu'on doit appliquer une telle méthode, le moyen d'activation concerne des flavonoïdes et l'objectif visé diffère du P-glucane de telle sorte que l'état non activé doit être considéré comme étant tout à fait différent, bien entendu ; ce fait, le détournement de la méthode d'activation des -glucanes a été considéré au début comme étant difficile.

Toutefois, les résultats expérimentaux étaient tout à fait différents des attentes du présent inventeur et ont montré que les moyens d'activation de la substance supprimant l'oxygène actif devaient être efficaces pour changer le -glucane ayant une structure différente de celle des substances supprimant l'oxygène actif telles que des flavonoïdes, etc. à activer aisément.

Autrement dit, le présent inventeur a trouvé que, si on utilise dans l'expérience des champignons qui ont été précédemment grillés par exposition à des rayons dans l'infrarouge lointain, les effets antitumoraux sont améliorés lorsque l'on procède à une

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administration par voie interne par comparaison avec le cas où l'on utilise les champignons qui n'ont pas été grillés par des rayons dans l'infrarouge lointain. En outre, on a trouvé que, lorsque les champignons qui ont été grillés par des rayons dans l'infrarouge lointain sont soumis à une fermentation par addition de microorganismes, en particulier "Kogi" (aspergillus oryzae) ou une levure, les effets anti-tumoraux sont davantage améliorés.

Comme champignons, on peut utiliser des champignons contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, par exemple des champignons tels qu'agaricus (AGARIKUSUTAKE) qui a récemment attiré particulièrement l'attention en ce qui concerne ses effets médicaux. En outre, on peut utiliser sans problème des champignons dont on avait dit jusqu'ici qu'ils avaient une activité anti-tumorale puissante, tels que Fomes (SARUNOKOSHIKAKE), PORIA (BUKURYO), etc.

Incidemment, en ce qui concerne le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), on a trouvé que, même lorsqu'on effectuait un grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et une fermentation dans des conditions variées après récolte et séchage, on ne pouvait pas obtenir un effet suffisant. Ainsi, il est préférable que le traitement ait lieu dans des conditions non séchées, c'est-à-dire à l'état cru, par exemple rapidement après la récolte.

En outre, le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE)est aisément avarié ; le traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain s'effectue longtemps après la récolte, ce champignon ne restera pas pendant ce temps à l'état cru. Ainsi, dans ce cas, on préfère le stocker dans un réfrigérateur à basse température et effectuer le traitement, tel que le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain,

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etc., dans les trois jours après récolte.

En outre, après le traitement mentionné cidessus de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de fermentation, on a trouvé que les effets anti-tumoraux pouvaient être davantage améliorés lorsque les matériaux résultants étaient soumis à un traitement huileux. Par exemple, on peut ajouter un composant huileux obtenu à partir de plantes telles que le sésame, etc. soumises à un grillage par des rayons dans l'infrarouge lointain pour recouvrir par le composant huileux le matériau résultant après le traitement de fermentation.

Comme décrit ci-dessus, on ne s'attendait initialement pas du tout à ce que les moyens pour fabriquer la substance anti-oxygène actif contenue dans des graines ou germes de plantes, à savoir un composé de faible poids moléculaire, pouvaient être également efficacement appliqués à la manifestation de l'activité anti-tumorale de champignons contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, qui ont une structure tout à fait différente, etc., de la substance anti-oxygène actif. Toutefois, il est clair qu'on peut obtenir des effets significatifs par application réelle au matériau des expériences, d'où la présente invention.

Le présent inventeur a également trouvé qu'une activité anti-tumorale attirant l'attention peut être manifestée par la mise en oeuvre du traitement mentionné ci-dessus, même lorsque les champignons n'ont pas attiré une attention spéciale du point de vue de l'activité anti-tumorale. Par exemple, on a trouvé que, lorsque les champignons maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson), etc. sont soumis à un grillage par des rayons dans l'infrarouge lointain et à un traitement de fermentation par des micro-organismes, on peut

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obtenir un effet anti-tumoral comparable, voire supérieur à celui du champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE).

L'effet anti-tumoral de champignons, tels que le champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson) était jusqu'ici connu, mais on n'a généralement pas considéré que son effet était comparable à celui du champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE) qui a maintenant attiré l'attention. En appliquant aux champignons les traitements avec les compositions mentionnées ci-dessus de la présente invention, les effets anti-tumoraux de champignons tels que le champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson) qu'ils possèdent intrinsèquement sont suffisamment manifestés et on constate une activité anti-tumorale comparable à celle du champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE).

Autrement dit, l'activité anti-tumorale potentielle possédée par les champignons n'a pas pu être mise suffisamment en valeur et son efficacité n'a pas pu être clairement confirmée à ce jour. Cependant, en appliquant le traitement de la présente invention a des champignons, leurs activités anti-tumorales apparaissent clairement et l'activité anti-tumorale peut être manifestée avec un degré auquel on n'avait jamais pu s'attendre.

P-glucane est plus ou moins contenu dans un champignon, quel qu'il soit, et on considère que le traitement ci-dessus est une méthode susceptible de promouvoir fortement son action et sa manifestation.

Ainsi, en plus du champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson), le traitement de la présente invention peut être appliqué à des champignons qui sont habituellement utilisés comme ingrédients pour les repas, tels que les champignons suivants : shiitake (SHIITAKE, Lentinus edodes), matsutake (MATSUTAKE,

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Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), enokitake (ENOKITAKE, Flammulina velutipes), etc. On a ainsi trouvé que la méthode de l'invention pouvait développer fortement l'activité anti-tumorale potentielle contenue dans ces champignons.

Lorsqu'on applique la méthode mentionnée cidessus de l'invention de renforcement de l'activité anti-tumorale de champignons, le ss-glucane de champignons dont on peut habituellement et simplement disposer à bon marché peut être activé sans utiliser des champignons coûteux et rares ; lorsque la quantité de ss-glucane est inférieure à celle des champignons rares, on peut développer une activité anti-tumorale efficace de façon significative par comparaison au cas où on utilise les champignons rares avec la méthode conventionnelle. Ceci conduit à une réduction de la charge économique pour un patient.

Par ailleurs, l'activité anti-tumorale de la composition contenant des champignons auxquels on applique une telle méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale est accrue de façon significative par comparaison à la composition conventionnelle dans laquelle les champignons réputés pour avoir une activité anti-tumorale sont séchés et pulvérisés, et simplement mélangés.

En outre, au cours de la série de recherches mentionnées ci-dessus sur les champignons, les champignons sont ajoutés, en augmentant par paliers leur concentration, au système dans lequel un peroxyde de lipide est formé en irradiant aux rayons ultraviolets un acide gras insaturé tel que l'acide docosahexaénoïque, etc., et l'on examine les quantités de peroxyde lipide formé avec les diverses concentrations des champignons respectifs. Comme résultat, on a pu trouver

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que, plus l'augmentation de la quantité de peroxyde de lipide formé par les champignons est importante, plus l'action anti-tumorale obtenue par l'administration interne est forte.

Autrement dit, on ajoute divers types de champignons au système qui forme le peroxyde de lipide mentionné précédemment avec la même concentration, et on mesure les quantités des peroxydes de lipide respectifs formés. Lorsque la quantité du peroxyde de lipide formé est plus grande, alors les effets anti-tumoraux sont puissants lorsqu'ils sont en fait procurés par administration interne.

Si on emploie une telle méthode, le fait que les effets anti-tumoraux se manifestent ou non lorsqu'on utilise les champignons par voie interne peut se déterminer sans recourir réellement à une administration interne. Même lorsqu'un test clinique n'est pas effectué sur un patient pour le soumettre à une administration interne expérimentale, on peut utiliser la méthode comme méthode pour évaluer l'efficacité antitumorale par administration interne.

En outre, par exemple, on applique divers types de traitement à des champignons et on compare les quantités de peroxyde de lipide formé par l'addition des champignons sur lesquels on a effectué les traitements respectifs, et on peut alors évaluer l'efficacité antitumorale des traitements respectifs.

Par ailleurs, l'explication mentionnée cidessus est faite en ce qui concerne des champignons ; mais la méthode peut être appliquée à un remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité antitumorale autres que des champignons. L'application à au moins un remède brut contenant (3-glucane est efficace.

La méthode peut être appliquée à des remèdes bruts autres que des champignons, tels que des remèdes

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bruts naturels contenant des remèdes bruts dérivés de plantes, des remèdes bruts dérivés d'animaux et des remèdes bruts dérivés de minéraux. Par ailleurs, la plupart des médecines chinoises utilisent les remèdes bruts poussés dans la nature, mais on peut utiliser des remèdes bruts récoltés dans une ferme dans des conditions appropriées ou des remèdes bruts obtenus par une culture artificielle telle qu'une culture hydroponique, etc.

En outre, comme remèdes bruts autres que les remèdes bruts décrits dans, par exemple, la pharmacopée japonaise, etc., si ils présentent une activité antitumorale efficace lorsqu'on applique la présente invention, ce produit naturel ou cette récolte de culture peut être utilisé comme remède brut mentionné dans la présente spécification.

DESCRIPTION DES RÉALISATIONS PRÉFÉRÉES
Dans ce qui suit, on va décrire en détail des réalisations de la présente invention en se reportant à des exemples.

En ce qui concerne une méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts, une composition contenant des remèdes bruts à activité anti-tumorale renforcée, une méthode d'évaluation de l'efficacité anti-tumorale d'un traitement par des remèdes bruts et une méthode d'évaluation de l'efficacité anti-tumorale de remèdes bruts, l'explication sera donnée par l'utilisation de champignons qui sont bien connus comme remèdes bruts contenant -glucane, qui est un polysaccharide ayant une activité anti-tumorale.

RÉALISATION 1
Dans la réalisation 1 de la présente invention, on décrira une méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts et une composition

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contenant des remèdes bruts à activité anti-tumorale renforcée.

Dans la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts, on grille tout d'abord par des rayons dans l'infrarouge lointain des champignons contenant -glucane, on leur ajoute ensuite des micro-organismes tels que "Koji", etc. et on les soumet à fermentation dans des conditions prédéterminées d'humidité et de température. Lorsque l'étape de fermentation est terminée, le produit résultant est transformé de façon appropriée en une fine poudre et cette fine poudre est revêtue d'un composant huileux obtenu en comprimant et en pressant du sésame qui a été grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain pour préparer un agent huileux.

Par ailleurs, le produit obtenu en soumettant successivement des champignons contenant P-glucane aux étapes mentionnées ci-dessus de grillage par des rayons dans l'infrarouge lointain, de fermentation par des micro-organismes et de revêtement par un agent huileux devient une composition qui présente une activité antitumorale efficace par une administration interne contenant des champignons auxquels a été appliquée la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale.

Dans ce qui suit, la présente invention va être expliquée plus en détail en se référant à des exemples.

EXEMPLES
Comme champignons à utiliser dans le présent exemple, on utilise des champignons contenant ssglucane. En particulier, lorsqu'on utilise des champignons qui contiennent des quantités importantes de ssglucane et qui ont généralement des effets anti-tumoraux, ces effets anti-tumoraux se manifestent fortement, et de ce fait, on les préfère.

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Dans le présent exemple, on utilise comme tels champignons les champignons suivants : PORIA (BUKURYO), agaricus (AGARIKUSUTAKE), POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES), maitake (noir, MAITAKE, Grifola frondosu Dickson), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake) et shiitake (SHIITAKE, Cortinellus Shiitake). En ce qui concerne le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), le présent inventeur a trouvé par expérience que ce champignon présente une activité anti-tumorale plus puissante lorsqu'il est utilisé à l'état cru que dans le cas où il est utilisé après séchage, de sorte qu'il est stocké dans un réfrigérateur à basse température (4 C) après récolte et utilisé dans les trois jours après la récolte.

En ce qui concerne les champignons autres que l'agaricus, on n'observe pas de différence aussi significative dans l'efficacité, qu'ils soient utilisés à l'état brut ou à l'état séché qui était jusqu'ici prévu dans la médecine chinoise, lorsqu'on leur applique la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de la présente invention ; ce fait, dans le présent exemple, on utilise des produits séchés en ce qui concerne PORIA (BUKURYO), POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES), champignon maitake (noir, MAITAKE, Grifola frondosu Dickson), champignon matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake) et champignon shiitake (SHIITAKE, Cortinellus Shiitake).

Incidemment, dans la présente invention, on utilise deux types de champignons maitake. Ceux produits au Japon sont ceux principalement cultivés dans la préfecture de Niigata, qui est une contrée neigeuse et qui sont appelés champignons maitake de région neigeuse (Yukiguni maitake) ou champignon noir maitake (Kuromaitake) ; dans la présente spécification, il est mentionné en tant que champignon maitake (noir).

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D'autre part, le champignon maitake (MAITAKE, Grifola frondosu Dickson) obtenu en Chine est mentionné comme POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES) dans la présente spécification et il est distingué du champignoii maitake mentionné ci-dessus (noir) lorsque c'est nécessaire. En particulier, on utilise principalement une racine dans POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES).

La première étape de la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale du présent exemple est une étape de grillage par rayons dans l'infrarouge lointain, étape dans laquelle les divers types de champignons mentionnés ci-dessus sont grillés en étant soumis à des rayons dans l'infrarouge lointain. Les rayons dans l'infrarouge lointain utilisés dans cette étape de grillage sont de préférence des rayons dans l'infrarouge lointain ayant une longueur d'onde d'environ 4 à 14 m. Les champignons sont grillés en utilisant un appareil tel qu'une poêle, un four, etc. sur la surface intérieure duquel est appliqué un revêtement céramique qui rayonne dans l'infrarouge lointain avec une longueur d'onde dans cette plage ; tel appareil, tel qu'une poêle, un four, etc. peut être préparé en mélangeant de la poudre céramique rayonnant dans l'infrarouge lointain avec du gravier, du sable, etc. d'oxydes métalliques.

Pour effectuer un tel grillage, on utilise comme champignons, autres que l'agaricus (AGARIKUSUTAKE), ceux qui, une fois séchés, sont utilisés dans les médecines chinoises habituelles. En ce qui concerne l'agaricus (AGARIKUSUTAKE), il est utilisé à l'état brut tel que mentionné ci-dessus.

Les champignons mentionnés ci-dessus sont grillés dans l'appareil mentionné ci-dessus, par exemple, dans un pot en terre préparé à partir de substan-

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ces rayonnant dans l'infrarouge telles que le granit, des céramiques, la pierre Tenshouseki, etc. et en les exposant à des rayons dans l'infrarouge lointain ayant une longueur d'onde de 4 à 14 m jusqu'au point où ils ne sont pas brûlés pendant 30 à 90 minutes, tout en agitant progressivement et bien.

Comme méthode de grillage, celle-ci n'est pas limitée à la méthode mentionnée ci-dessus et on peut utiliser toute méthode pour autant qu'elle facilite la libération du P-glucane des champignons. Par exemple, comme source de rayons dans l'infrarouge lointain à utiliser pour le grillage, outre les appareils mentionnés ci-dessus, on peut utiliser d'autres appareils pour autant qu'ils comprennent un matériau qui rayonne des rayons dans l'infrarouge lointain avec une longueur d'onde de 4 à 14 m, tel que la fibre d'onde électromagnétique de platine, etc.

Après une telle étape de grillage aux infrarouges lointains, on prévoit une deuxième étape, à savoir une étape de fermentation. Après application comme mentionné ci-dessus du traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, en utilisant une bactérie de fermentation telle que "Koji" ou une levure, on effectue une fermentation dans un local humide à 30 à 36 C pendant 48 à 72 heures. Cette fermentation peut être conduite en utilisant un appareil de fermentation pour raccourcir le temps de fermentation.

Comme micro-organismes à utiliser pour la fermentation, on peut utiliser des micro-organismes autres que "Koji".

Ainsi, pour effectuer la fermentation, outre "Koji", on peut utiliser une substance ayant un pouvoir de fermentation tel que papaye mûre, jus d'ananas, peau de figue, peau de raisin, écorce de jeune bambou, etc.

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En outre, on peut utiliser pour la fermentation des enzymes digestives telles que diastase, pancréatine, etc., des enzymes protéolytiques dérivées de microorganismes telles que protéase, pepsine, trypsine, etc., des enzymes lytiques de polysaccharides telles qu'hémicellulase ou une substance précurseur qui forme les enzymes digestives ou les enzymes protéolytiques mentionnées ci-dessus, etc.

Toutefois, compte tenu des expériences effectuées par le présent inventeur, on peut obtenir les meilleurs résultats lorsque la fermentation est conduite en utilisant des micro-organismes et notamment avec "Koji", du point de vue du renforcement de l'activité anti-tumorale. Lorsque l'étape de fermentation est terminée, les produits de départ sont pulvérisés.

Pour la pulvérisation, on peut utiliser des pulvérisateurs du commerce, mais on préfère éviter une machine qui dégage une température élevée au moment de la pulvérisation. Celle-ci peut être effectuée en utilisant une méthode de pulvérisation qui ne dégage pas une température élevée, telle qu'une meule de pierre.

Les champignons de départ auxquels sont appliqués les étapes de grillage par des rayons dans l'infrarouge lointain et l'étape de fermentation sont ensuite soumis à une étape de préparation d'un agent huileux. Cette procédure de préparation d'un agent huileux consiste à enfermer la fine poudre des produits de départ après fermentation avec un composant huileux en provenance du sésame auquel est appliqué un grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain.

Comme composant huileux à utiliser pour préparer un agent huileux, on peut utiliser une huile (ciaprès désignée comme huile de pâte de sésame) recueillie du sésame grillé. L'huile de pâte de sésame

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est une huile obtenue en soumettant du sésame brut à un grillage par rayons dans l'infrarouge lointain à une température n'excédant pas 100 C, lentement et longtemps, et en broyant et en comprimant le sésame après grillage. Dans une telle huile de pâte de sésame, de fins matériaux solides formés par le broyage du sésame subsistent tels quels de telle sorte que le produit final prend une apparence de pâte.

On ajoute à ladite huile de pâte de sésame les champignons pulvérisés mentionnés ci-dessus après fermentation de manière à recouvrir les champignons finement pulvérisés du composant huileux du sésame. En recouvrant ainsi les champignons, on augmente leur force de pénétration dans les cellules de la partie malade par comparaison au cas où on n'effectue aucune application de cette huile de pâte. Cette étape de préparation d'un agent huileux est une étape importante pour procurer un pouvoir directif efficace sur une cible du point de vue du système de délivrance du remède qui a attiré l'attention ces dernières années.

Par parenthèse, l'étape de préparation d'un agent huileux est une étape importante comme mentionné ci-dessus et on préfère intrinsèquement procurer une telle étape, mais, s'il existe quelques difficultés à préparer de façon appropriée cet agent huileux, on peut omettre cette étape. La raison en est que, comme mentionné ci-après, les tests ont montré que, si l'étape de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et l'étape de fermentation sont certainement effectuées, l'efficacité du renforcement de l'activité anti-tumorale devient très nette, même si on omet, comme mentionné ci-après, l'étape de préparation d'un agent huileux.

Par ailleurs, pour préparer un agent huileux, on obtient de meilleurs résultats lorsqu'on utilise une

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huile mixte dans laquelle sont mélangés en un rapport approprié l'huile de pâte de sésame mentionnée cidessus et une huile provenant du sésame brut.

En mélangeant l'huile provenant du sésame brut, on peut réduire la dimension d'une gouttelette d'huile, d'où il résulte qu'on peut augmenter de façon notable le pouvoir de pénétration dans les cellules cibles par comparaison au cas où les champignons sont recouverts de l'huile de pâte de sésame ayant une viscosité élevée et une dimension de gouttelettes d'huile importante.

L'huile en provenance du sésame brut désigne une huile obtenue en broyant du sésame brut tel quel, en comprimant le produit résultant et en enlevant ensuite le produit solide qui correspond à une huile de sésame du commerce.

Le rapport de mélange de l'huile de pâte de sésame et de l'huile de sésame mentionnée ci-dessus obtenu à partir de sésame brut peut varier en fonction de la quantité de la fine poudre de départ ajoutée, de sorte qu'on ne peut pas donner de règle générale, mais habituellement 1 à 3 parties en poids de l'huile de sésame pour 1 partie en poids de l'huile de pâte de sésame est un rapport convenable. Par ailleurs, un rapport de mélange de l'huile mixte ainsi obtenue et de la fine poudre de départ peut être, par exemple, environ 4 à 5 parties en poids de la fine poudre de départ pour une partie en poids de l'huile mixte.

Les champignons dans lesquels les activités anti-tumorales ont été renforcées de la manière mentionnée ci-dessus sont ajoutés à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets de l'acide docosahexaénoïque et on examine la quantité du peroxyde de lipide formé. En outre, on mesure également par des tests cliniques les effets anti-tumoraux par administration interne.

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Par ailleurs, pour comparer la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de l'explication mentionnée ci-dessus, la quantité formée du peroxyde de lipide mentionné ci-dessus et l'efficacité des tests cliniques sont examinés dans les cas respectifs suivants : cas où on applique aux champignons mentionnés ci-dessus le seul grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, cas où on applique à ces champignons la seule fermentation par les enzymes lytiques de polysaccharides, cas où on applique à ces mêmes champignons la seule fermentation par "Koji", cas où on leur applique à la fois le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji", et cas témoin où aucun traitement n'est appliqué.

Pour effectuer la fermentation mentionnée cidessus par enzymes lytiques de polysaccharides, on peut utiliser diverses enzymes lytiques de polysaccharides, mais, dans le présent exemple, on utilise l'hémicellulase qui est une enzyme représentative parmi les autres.

Par parenthèse, dans le cas où on applique seulement aux champignons le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, dans le cas où on leur applique la seule fermentation par des enzymes lytiques de polysaccharides, dans le cas où on leur applique la seule fermentation par "Koji", et dans le cas où on leur applique à la fois le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji", au moment où les traitements respectifs sont effectués, le produit est pulvérisé en fine poudre avec la procédure mentionnée ci-dessus et utilisé dans les expériences suivantes.

Le degré de pulvérisation des échantillons respectifs est réglé de façon que la dimension moyenne

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des particules pulvérisées soit la même pour tous les échantillons afin d'éliminer l'effet de la dimension des particules pulvérisées. Dans le cas témoin, on utilise l'agaricus (AGARIKUSUTAKE) à l'état brut et finement découpé, et en ce qui concerne les autres champignons que celui-ci, ils sont utilisés en les réduisant en fine poudre après séchage.

La mesure de la quantité formée du peroxyde de lipide mentionné ci-dessus est effectuée comme mentionné ci-après. On place une quantité prédéterminée d'acide docosahexaénoïque dans plusieurs tubes à essai et les champignons mentionnés ci-dessus précédemment pesés en différentes quantités sont ajoutés à l'acide docosahexaénoïque et on procède à leur mélange. En outre, on expose aux rayons ultraviolets le contenu des tubes à essai respectifs et on mesure les quantités des peroxydes de lipides formés.

L'acide docosahexaénoïque est utilisé en préparant préalablement une solution diluée dans laquelle le liquide brut est dilué 10 fois avec de l'éthanol et la solution diluée est à nouveau diluée pour devenir une solution diluée 200 fois, comme concentration de dilution finale.

Les échantillons des champignons auxquels sont appliqués les traitements mentionnés ci-dessus (y compris l'échantillon témoin) sont ajoutés à la solution d'éthanol prédéterminée de façon que la concentration de champignons soit 60 mg/ml, et on laisse reposer l'éthanol à la température normale pendant environ 2 à 6 semaines, après quoi on procède à une extraction à l'éthanol. Pour utiliser l'échantillon dans le test, on utilise l'extrait en diluant la concentration finale à 0,6 mg/ml.

En mélangeant 0,05 ml de la solution diluée d'acide docosahexaénoïque préparée de la manière

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mentionnée ci-dessus, 0,1 ml d'un échantillon de champignon et 0,85 ml d'éthanol dans un tube à essai, la quantité totale est 1 ml. Ce tube à essai est exposé aux rayons ultraviolets pendant 3 heures pour former un peroxyde de lipide. Le peroxyde de lipide formé est mesuré par la réaction TBA (réaction à l'acide thiobarbiturique).

En chauffant dans des conditions acides le peroxyde de lipide formé, on fait réagir le malondialdéhyde (MDA) libéré avec l'acide thiobarbiturique (TBA) et on détermine la substance maximale d'absorption formée pour obtenir indirectement la quantité formée de peroxyde de lipide.

Pour effectuer la réaction TBA, on ajoute 0,2 ml de dodécylsulfate de sodium à 7 %, 2 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N, 0,3 ml d'acide phosphotungstite et 1 ml du réactif préparé en mélangeant 0,67 % de TBA et de l'acide acétique selon un rapport de 1:1 dans les aux tubes à essai respectifs qui ont été exposés aux rayons ultraviolets, et on effectue la réaction TBA en maintenant à 95 C pendant 12 minutes après addition.

Ensuite, le mélange est refroidi à la température ambiante, la couche de réaction TBA est extraite avec de l'alcool n-butylique et on applique la méthode fluorospectrophotométrique à la couche d'alcool n-butylique pour mesurer la quantité de MDA mentionnée cidessus. Pour effectuer la mesure, on utilise une lumière avec une longueur d'onde de 515 nm comme lumière d'excitation et on conduit la fluorométrie à une longueur d'onde de 535 nm. Le fluorospectrophotomètre utilisé est le F2000 fabriqué par Hitachi Ltd. en utilisant un photomultiplicateur de 400 V, et la mesure est effectuée en faisant le passe-bande pour une exposition à la lumière excitée de 20 nm et le passe-bande pour la mesure de fluorescence de 20 nm.

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En ce qui concerne les effets de l'acide docosahexaénoïque sur les champignons auxquels sont appliqués les traitements respectifs mentionnés ci-dessus par exposition aux rayons ultraviolets dans le système de formation du peroxyde de lipide, ils sont examinés en relation avec la valeur MDA (qui est la même que dans la quantité de MDA, vue par absorbance) mesurée de la manière mentionnée ci-dessus. Les résultats sont indiqués dans le tableau 1.

D'autre part, parmi les champignons mentionnés ci-dessus, on utilise PORIA (BUKURYO) et les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, respectivement maitake noir (Kuromaitake) (maitake de région neigeuse (Yukiguni maitake)) et POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES) ; on effectue avec ces champignons des tests cliniques relatifs au cancer du sein, au cancer de l'estomac et au cancer du poumon dans les cas respectifs suivants : témoin (pas de traitement), traitement de fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides, traitement par fermentation par "Koji", traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + traitement de fermentation par "Koji", traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + fermentation par "Koji" + préparation d'un agent huileux. Les résultats sont indiqués dans les tableaux 2,3 et 4.

Le tableau 2 montre les effets des traitements des champignons mentionnés ci-dessus auxquels sont appliqués divers types de méthodes sur les malades du cancer du sein. Les tableaux 3 et 4 montrent les effets du traitement sur les malades du cancer de l'estomac et les malades du cancer des poumons des divers types de champignons auxquels les mêmes traitements que dans le tableau 2 ont été appliqués. Par parenthèse, les tableaux 2 à 4 montrent également les taux d'efficacité

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calculés à partir de la formule suivante : Taux d'efficacité = (nombre efficace + nombre légèrement efficace) x 100/(nombre efficace + nombre légèrement efficace + nombre non efficace).

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Tableau 1 Effets de divers champignons sur la production de MDA

<tb>
<tb> Type <SEP> de <SEP> Substance <SEP> à <SEP> contrôler <SEP> et <SEP> Valeur <SEP> de <SEP> ordre
<tb> traitement <SEP> spécimen <SEP> MDA <SEP> (moy.)
<tb> Témoin <SEP> 115-
<tb> (aucun <SEP> champignon <SEP> ajouté)
<tb> Aucun <SEP> Poria <SEP> 269 <SEP> 4
<tb> traitement <SEP> Agaricus <SEP> 283 <SEP> 3
<tb> Polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 439 <SEP> 1
<tb> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 398 <SEP> 2
<tb> Matsutake <SEP> 218 <SEP> 5
<tb> Siitake <SEP> 189 <SEP> 6
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 288 <SEP> 4
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> Agaricus <SEP> 341 <SEP> 3
<tb> l'infrarouge <SEP> Polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 536 <SEP> 1
<tb> lointain <SEP> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 490 <SEP> 2
<tb> Matsutake <SEP> 271 <SEP> 5
<tb> Siitake <SEP> 233 <SEP> 6
<tb> Fermentation <SEP> Poria <SEP> 284 <SEP> 5
<tb> par <SEP> enzymes <SEP> Agaricus <SEP> 375 <SEP> 3
<tb> lytiques <SEP> de <SEP> Polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 551 <SEP> 1
<tb> polysaccharides <SEP> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 525 <SEP> 2
<tb> Matsutake <SEP> 304 <SEP> 4
<tb> Siitake <SEP> 265 <SEP> 6
<tb> Fermentation <SEP> Poria <SEP> 296 <SEP> 5
<tb> par <SEP> "Koji" <SEP> Agaricus <SEP> 399 <SEP> 3
<tb> Polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 594 <SEP> 1
<tb> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 528 <SEP> 2
<tb> Matsutake <SEP> 302 <SEP> 4
<tb> Siitake <SEP> 280 <SEP> 6
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 334 <SEP> 6
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> Agaricus <SEP> 489 <SEP> 3
<tb> l'infrarouge <SEP> Polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 799 <SEP> 1
<tb> lointain <SEP> + <SEP> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 768 <SEP> 2
<tb> fermentation <SEP> Matsutake <SEP> 412 <SEP> 4
<tb> par <SEP> "Koji" <SEP> Siitake <SEP> 381 <SEP> 5
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 362 <SEP> 6
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> l'in- <SEP> Agaricus <SEP> 509 <SEP> 3
<tb> frarouge <SEP> lointain <SEP> polyporus <SEP> umbellatus <SEP> Fries <SEP> 827 <SEP> 1
<tb> + <SEP> fermentation <SEP> Maitake <SEP> (noir) <SEP> 792 <SEP> 2
<tb> par <SEP> "Koji" <SEP> + <SEP> pré- <SEP> Matsutake <SEP> 430 <SEP> 4
<tb> paration <SEP> d'un.. <SEP> 397
<tb> agent <SEP> huileux <SEP> Siitake <SEP> 397 <SEP> 5
<tb>
Les champignons respectifs sont ajoutés au taux de 6 mg/ml.

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Tableau 2 Effets du traitement par divers champignons sur des malades atteints d'un cancer du sein

<tb>
<tb> Type <SEP> de <SEP> traitement <SEP> Spécimen <SEP> Cancer <SEP> du <SEP> sein <SEP> Taux
<tb> (200 <SEP> personnes) <SEP> d'effiEffi- <SEP> Légère- <SEP> Pas <SEP> cacité
<tb> cace <SEP> ment <SEP> effi- <SEP> (%)
<tb> efficace <SEP> cace
<tb> Aucun <SEP> traitement <SEP> Poria <SEP> 0 <SEP> 3 <SEP> 37 <SEP> 7,5
<tb> Agaricus <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 37 <SEP> 7,5
<tb> Maitake <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 36 <SEP> 10,0
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 4 <SEP> 35 <SEP> 12,5
<tb> enzymes <SEP> lytiques <SEP> Agaricus <SEP> 2 <SEP> 6 <SEP> 32 <SEP> 20,0
<tb> de <SEP> polysaccharides <SEP> Maitake <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 31 <SEP> 22,5
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 5 <SEP> 34 <SEP> 15,0
<tb> "Koji" <SEP> Agaricus <SEP> 3 <SEP> 7 <SEP> 30 <SEP> 25,0
<tb> Maitake <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> 30 <SEP> 25,0
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 34 <SEP> 15,0
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> Agaricus <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> 30 <SEP> 25,0
<tb> l'infrarouge <SEP> Maitake <SEP> 12 <SEP> 7 <SEP> 31 <SEP> 47,5
<tb> lointain <SEP> +
<tb> fermentation <SEP> par
<tb> "Koji"
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> rayons <SEP> Poria <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 32 <SEP> 20,0
<tb> dans <SEP> l'infrarouge <SEP> Agaricus <SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 26 <SEP> 35,0
<tb> lointain <SEP> + <SEP> fermenta- <SEP> Maitake <SEP> 14 <SEP> 9 <SEP> 17 <SEP> 57,5
<tb> tion <SEP> par <SEP> "Koji" <SEP> +
<tb> préparation <SEP> d'un
<tb> agent <SEP> huileux
<tb>
Le nombre dans la parenthèse indique le nombre total des personnes soumises au test.

Nombre de résultats (efficaces + légèrement efficaces) Taux d'efficacité = -------------------------------- xlOO (%)
Nombre total de résultats Cette formule est valable pour les tableaux 3 et 4.

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Tableau 3
Effets du traitement par divers champignons sur des malades atteints d'un cancer de l'estomac

<tb>
<tb> Type <SEP> de <SEP> traitement <SEP> Spécimen <SEP> Cancer <SEP> de <SEP> l'estomac <SEP> Taux
<tb> (150 <SEP> personnes) <SEP> d'effiEffi- <SEP> Légère- <SEP> Pas <SEP> cacité
<tb> cace <SEP> ment <SEP> effi- <SEP> (%)
<tb> efficace <SEP> cace
<tb> Aucun <SEP> traitement <SEP> Poria <SEP> 0 <SEP> 2 <SEP> 28 <SEP> 6,7
<tb> Agaricus <SEP> 0 <SEP> 2 <SEP> 28 <SEP> 6,7
<tb> Maitake <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 28 <SEP> 6,7
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 27 <SEP> 10,0
<tb> enzymes <SEP> lytiques <SEP> Agaricus <SEP> 2 <SEP> 3 <SEP> 25 <SEP> 16,7
<tb> de <SEP> polysaccharides <SEP> Maitake <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 24 <SEP> 20,0
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 27 <SEP> 10,0
<tb> "Koji" <SEP> Agaricus <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 24 <SEP> 20,0
<tb> Maitake <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 22 <SEP> 26,7
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 26 <SEP> 13,3
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> Agaricus <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 22 <SEP> 26,7
<tb> l'infrarouge <SEP> Maitake <SEP> 5 <SEP> 7 <SEP> 18 <SEP> 40,0
<tb> lointain <SEP> +
<tb> fermentation <SEP> par
<tb> "Koji"
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> rayons <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 4 <SEP> 25 <SEP> 16,7
<tb> dans <SEP> l'infrarouge <SEP> Agaricus <SEP> 4 <SEP> 7 <SEP> 19 <SEP> 36,7
<tb> lointain <SEP> + <SEP> fermenta- <SEP> Maitake <SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 16 <SEP> 46,7
<tb> tion <SEP> par <SEP> "Koji" <SEP> +
<tb> préparation <SEP> d'un
<tb> agent <SEP> huileux <SEP> ~~~~~~~~~~~~
<tb>
Le nombre dans la parenthèse indique le nombre total des personnes soumises au test.

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Tableau 4
Effets du traitement par divers champignons sur des malades atteints d'un cancer du poumon

<tb>
<tb> Type <SEP> de <SEP> traitement <SEP> Spécimen <SEP> Cancer <SEP> du <SEP> poumon <SEP> Taux
<tb> (100 <SEP> personnes) <SEP> d'effiEffi- <SEP> Légère- <SEP> Pas <SEP> cacité
<tb> cace <SEP> ment <SEP> effi- <SEP> (%)
<tb> efficace- <SEP> cace
<tb> Aucun <SEP> traitement <SEP> Poria <SEP> 0 <SEP> 1 <SEP> 19 <SEP> 5,0
<tb> Agaricus <SEP> 0 <SEP> 2 <SEP> 18 <SEP> 10,0
<tb> Maitake <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 18 <SEP> 10,0
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 1 <SEP> 18 <SEP> 10,0
<tb> enzymes <SEP> lytiques <SEP> Agaricus <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 17 <SEP> 15,0
<tb> de <SEP> polysaccharides <SEP> Maitake <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 13 <SEP> 35,0
<tb> Fermentation <SEP> par <SEP> Poria <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 17 <SEP> 15,0
<tb> "Koji" <SEP> Agaricus <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 16 <SEP> 20,0
<tb> Maitake <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 12 <SEP> 40,0
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Poria <SEP> 2 <SEP> 1 <SEP> 17 <SEP> 15,0
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> Agaricus <SEP> 3 <SEP> 3 <SEP> 14 <SEP> 20,0
<tb> l'infrarouge <SEP> Maitake <SEP> 4 <SEP> 5 <SEP> 11 <SEP> 45,0
<tb> lointain <SEP> +
<tb> fermentation <SEP> par
<tb> "Koji"
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> rayons <SEP> Poria <SEP> 2 <SEP> 2 <SEP> 16 <SEP> 20,0
<tb> dans <SEP> l'infrarouge <SEP> Agaricus <SEP> 3 <SEP> 4 <SEP> 13 <SEP> 35,0
<tb> lointain <SEP> + <SEP> fermenta- <SEP> Maitake <SEP> 5 <SEP> 5 <SEP> 10 <SEP> 50,0
<tb> tion <SEP> par <SEP> "Koji" <SEP> +
<tb> préparation <SEP> d'un
<tb> agent <SEP> huileux
<tb>
Le nombre dans la parenthèse indique le nombre total des personnes soumises au test.

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A partir du tableau 1 mentionné ci-dessus, on peut comprendre que la valeur de MDA, qui est un indice de la quantité formée de peroxyde de lipide, devient plus grande, pour le même type de champignon, lorsqu'on applique le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain par rapport au cas témoin non traité, lorsqu'on applique la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides par rapport au cas où on applique le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, lorsqu'on applique la fermentation par "Koji" par rapport à la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides, lorsqu'on applique à la fois le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji" par rapport au cas où on applique la fermentation par "Koji" et lorsqu'on applique les trois traitements, à savoir : grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, fermentation par "Koji" et préparation d'un agent huileux par rapport au cas où on applique seulement les deux traitements de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de fermentation par "Koji", respectivement.

On constate une telle tendance quels que soient les types de champignons utilisés dans les tests, sauf dans le cas de PORIA (BUKURYO) entre le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides et par rapport au cas du champignon matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake) entre la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides et la fermentation par "Koji".

On peut obtenir pratiquement la même valeur de MDA (de façon plus précise, la valeur de l'une des méthodes de traitement est supérieure d'environ 1 % à celle de l'autre méthode de traitement), lorsqu'on applique le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et lorsqu'on applique la fermentation par

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enzyme lytique de polysaccharides en ce qui concerne PORIA (BUKYRYO) et lorsqu'on applique la fermentation par enzyme lytique de polysaccharides et qu'on applique la fermentation par "Koji" en ce qui concerne le champignon matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake).

D'autre part, les tableaux 2 et 4 montrent les résultats des tests cliniques de l'administration de PORIA (BUKURYO), agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE), maitake noir (Kuromaitake) (maitake de région neigeuse (Yukiguni maitake)), POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES) auxquels ont été appliqués les traitements respectifs mentionnés ci-dessus, à des malades du cancer du sein, des malades du cancer de l'estomac et des malades du cancer des poumons ; d'après ces résultats, on peut comprendre que les taux d'efficacité dans les cas respectifs des malades du cancer du sein, des malades du cancer de l'estomac et les malades du cancer des poumons deviennent plus élevés, pour le même type de champignons, lorsqu'on applique la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides par rapport au cas témoin non traité, lorsqu'on applique la fermentation par "Koji" par rapport au cas où l'on applique la fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides, lorsqu'on applique à la fois le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji" par rapport au cas où on applique la seule fermentation par "Koji", et lorsqu'on applique les trois, à savoir grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, fermentation par "Koji" et préparation d'un agent huileux par rapport au cas où on applique seulement à la fois le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji".

Par exemple, sur le tableau 2, dans le cas de PORIA (BUKURYO), on peut comprendre que le taux

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d'efficacité est augmenté lorsqu'on applique le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + la fermentation par "Koji" + la préparation d'un agent huileux par comparaison au cas non traité de 7,5 % à 20,0 %, c'est-à-dire trois fois. Dans le cas de l'agaricus (AGARIKUSUTAKE), le taux d'efficacité est augmenté de 7,5 % à 35 %, c'est-à-dire environ 4,9 fois. Dans le cas du maitake (MAITAKE), le taux d'efficacité est augmenté dans la manifestation de la propriété de l'effet anti-tumoral de 10,0 % à 57,5 %, c'est-à-dire 5,75 fois. Une telle tendance se retrouve dans les tableaux 3 et 4.

Les résultats ci-dessus montrent que la méthode de traitement combinant successivement l'étape de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, l'étape de fermentation par "Koji" et l'étape de préparation d'un agent huileux peut être efficacement utilisée pour augmenter l'activité anti-tumorale de champignons, c'est-à-dire comme méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale.

Tableau 5
Quantité de -glucane libre dans les types respectifs de champignons, respectivement non traités et traités par grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et par fermentation par "Koji"

<tb>
<tb> Type <SEP> de <SEP> Spécimen <SEP> Quantité <SEP> de
<tb> traitement <SEP> -glucane
<tb> Aucun <SEP> Agaricus <SEP> (AGARIKUSUTAKE) <SEP> 9,0 <SEP> g/100 <SEP> g
<tb> traitement <SEP> Maitake <SEP> (MAITAKE, <SEP> noir) <SEP> 24,4 <SEP> g/100 <SEP> g
<tb> Grillage <SEP> aux <SEP> Agaricus <SEP> (AGARIKUSUTAKE) <SEP> 14,2 <SEP> g/100 <SEP> g
<tb> rayons <SEP> dans <SEP> l'infrarouge <SEP> lointain <SEP> Maitake <SEP> (MAITAKE, <SEP> noir) <SEP> 30,4 <SEP> g/100 <SEP> g
<tb> + <SEP> fermentation
<tb> par <SEP> "Koji"
<tb>

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D'autre part, des quantités de -glucane libre, en tant qu'ingrédient efficace présentant une activité anti-tumorale, furent mesurées dans le cas du traitement pour renforcer la manifestation de l'effet antitumoral mentionné ci-dessus et dans le cas où on n'applique aucun traitement. Les champignons utilisés étaient agaricus (AGARIKUSUTAKE) et le champignon maitake (MAITAKE, champignon maitake noir (Kuromaitake)) qui présentaient des taux d'efficacité importants dans les tableaux 2 à 4. Par parenthèse, les analyses furent effectuées au Food Analysis Center, à Suita, Osaka, Japon. Les résultats sont indiqués dans le tableau 5.

Les résultats du tableau 5 montrent que les quantités de -glucane libre augmentent lorsqu'on applique le traitement mixte de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de fermentation par "Koji" à la fois au champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE) et au champignon maitake (MAITAKE). En ce qui concerne un champignon maitake (MAITAKE) autre que le champignon maitake noir (Kuromaitake), on peut également obtenir les mêmes effets dans POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Polyporus umbellatus FRIES). D'autre part, les résultats des tests cliniques des tableaux 2 à 4 montrent que les effets anti-tumoraux sont plus élevés dans le cas où on applique le traitement mixte de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de fermentation par "Koji" par rapport au cas où on n'applique aucun traitement.

Ainsi, en examinant en combinaison les résultats des tableaux 2 à 4 et ceux du tableau 5, on peut considérer que, parmi les -glucanes efficaces en ce qui concerne l'activité anti-tumorale des champignons, notamment lorsque la quantité de P-glucane libre est importante, les effets anti-tumoraux se manifestent de

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façon remarquable.

Le présent inventeur a terminé la série mentionnée ci-dessus d'études en émettant l'hypothèse mentionnée ci-dessus que, dans le cas des champignons non traités, les -glucanes ayant une action antitumorale sont dans un état immobile en se liant les uns aux autres pour former une chaîne (à titre de simple comparaison), qui est ce qu'il est convenu d'appeler un état non activé, et que, lorsque les champignons sont administrés par voie interne, la chaîne ne peut pas être coupée par le suc gastrique d'une personne normale, d'où il résulte que l'action anti-tumorale ne se présente pas comme on pouvait s'y attendre. Toutefois, comme mentionné ci-dessus, on a trouvé que l'augmentation de la quantité de -glucane libre augmente notablement la manifestation de l'action antitumorale et qu'on pouvait obtenir les résultats attendus par l'hypothèse des présents inventeurs.

Par ailleurs, la composition produite par l'étape de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, l'étape de fermentation et l'étape de préparation d'un agent huileux, qui constituent la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale, comme mentionné ci-dessus, est, comme le montre le tableau 5, etc., une composition dans laquelle la quantité de ssglucane libre est augmentée et qui présente une activité anti-tumorale efficace par administration interne. Par comparaison avec la composition contenant des champignons (champignons non traités) auxquels n'est pas appliquée la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale mentionnée ci-dessus, son activité anti-tumorale est notablement renforcée.

Par ailleurs, le tableau 1 montre que l'ordre de grandeur de la valeur de MDA dans les champignons change avec les divers types de traitement, y compris

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sans aucun traitement. Dans l'ordre présenté dans le tableau 1, en ce qui concerne les trois types de PORIA (BUKURYO), champignon Matsutake (MATSUTAKE) et le champignon Shiitake (SHIITAKE), ils présentent une possibilité de changement de l'ordre, c'est-à-dire de l'efficacité de l'activité anti-tumorale dans les trois méthodes de traitement, à savoir l'absence de traitement, la fermentation par "Koji" et le traitement mixte de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + de fermentation par ''Koji".

On peut par exemple comprendre que, dans le cas de l'absence de traitement, l'activité anti-tumorale augmente dans l'ordre suivant : champignon Shiitake (SHIITAKE), champignon Matsutake (MATSUTAKE) et PORIA (BUKURYO), tandis que, lorsqu'on applique le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et la fermentation par "Koji", l'activité anti-tumorale augmente dans l'ordre suivant : PORIA (BUKURYO), champignon Matsutake (MATSUTAKE) et champignon Shiitake (SHIITAKE). Il est bien entendu que, en appliquant la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale mentionnée ci-dessus selon la présente invention, il est possible d'augmenter l'ordre évalué pour des champignons non traités, qui ont été évalués comme ayant une activité anti-tumorale moindre.

Dans le domaine de la médecine chinoise utilisant un remède brut naturel, il existe une espèce rare dont on ne peut pas garantir de façon constante l'approvisionnement, même lorsque c'est un champignon ayant une activité anti-tumorale élevée. Toutefois, lorsqu'on utilise la méthode précitée de la présente invention, à la place d'une telle espèce rare, il est possible d'utiliser des champignons qui garantissent un approvisionnement suffisant ou qui peuvent être cultivés. Compte tenu de ce fait, on peut stabiliser la

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fourniture et le bon marché du produit, grâce à quoi de nombreuses personnes peuvent efficacement bénéficier des effets anti-tumoraux des champignons.

Par ailleurs, dans l'explication mentionnée cidessus, on n'a considéré comme meilleure réalisation que le traitement dans lequel on applique les trois types de traitement, à savoir le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, le traitement de fermentation et le traitement de préparation d'un agent huileux. Toutefois, même lorsqu'on applique seulement le traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, ou le traitement de fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides, telles qu'hémicellulase, etc., ou seulement le traitement de fermentation par des microorganismes tels que "Koji", etc., ou seulement le traitement mixte de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et le traitement de fermentation, la manifestation des effets anti-tumoraux est renforcée par comparaison au cas où on utilise des champignons non traités.

Ainsi, lorsqu'il existe des raisons pour lesquelles la préparation d'un agent huileux ne peut pas être effectuée du fait des conditions des équipements, les traitements de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de la fermentation par des microorganismes peuvent être effectués en combinaison, et dans ce cas, l'activité anti-tumorale peut se manifester de façon efficace par rapport au cas où l'on n'applique aucun traitement.

En outre, dans le traitement dans lequel on applique aux champignons mentionnés ci-dessus les trois types de traitement, à savoir le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, le traitement de fermentation et la préparation d'un agent huileux, ou dans le traitement dans lequel on applique aux champignons deux

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types de traitement, à savoir le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et le traitement de fermentation, en addition au traitement de fermentation utilisant des microorganismes tels que "Koji" ou des bactéries de levure, on peut utiliser un traitement de fermentation utilisant une enzyme lytique de polysaccharides.

Dans l'étape de préparation d'un agent huileux dans la méthode de renforcement de l'activité antitumorale mentionnée ci-dessus, on utilise une huile de pâte de sésame obtenue à partir de sésame grillé, mais on peut utiliser, à la place du sésame, des huiles végétales obtenues en grillant des fèves de soja, du maïs, du carthame, de l'oenothère, du son de riz, des graines de colza, etc. aux rayons dans l'infrarouge lointain, et ensuite en comprimant et en pressant le produit obtenu.

Par ailleurs, dans la composition contenant des champignons auxquels est appliquée la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale mentionnée cidessus, outre les produits obtenus en traitant les champignons par la méthode précitée, on peut ajouter tout composant qui n'a pas d'effet nocif sur l'activité anti-tumorale, tel que des vitamines, etc.

Comme telle composition, on peut formuler une préparation ayant un effet de suppression de l'oxygène actif, qui a été développée par le présent inventeur.

Le composé contenant un remède brut traité par la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale ayant une telle composition peut être effectivement prévu dans une forme qui peut être administrée aisément par voie interne en les encapsulant dans une capsule de gélatine, etc.

En outre, en utilisant un excipient approprié, un liant, etc., on peut présenter le remède sous forme

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de comprimé ou sous forme d'une préparation telle qu'un granulé ou une pilule sans aucun problème. En outre, tandis que la présente invention est une méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale par administration par voie interne, on peut considérer qu'une préparation injectable préparée en utilisant des champignons auxquels on applique la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de la présente invention peut avoir un effet de renforcement de l'effet antitumoral par comparaison au cas où on n'applique pas la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de la présente invention.

L'explication ci-dessus a été faite en considérant le cas dans lequel on utilise des champignons tels que le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), mais celleci n'est pas limitée aux champignons mentionnés cidessus, et on peut utiliser tout champignon autre que celui-ci pour autant qu'il contient -glucane. Par exemple, ce peut être le champignon shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), champignon enokitake (ENOKITAKE, Flammulina velutipes), etc.

En outre, on peut utiliser un remède brut contenant un polysaccharide ayant une activité antitumorale autre que P-glucane. En outre, on peut utiliser la présente invention comme méthode pour renforcer la manifestation de l'effet anti-tumoral contenant un polysaccharide ayant une activité anti-tumorale tel que P-glucane dans des produits naturels ou cultivés dérivés de plantes, y compris des champignons.

Réalisation 2
Dans la présente réalisation, on va expliquer une méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut et une méthode d'évaluation de l'efficacité anti-tumorale d'un traitement par un remède brut.

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On ajoute au système expérimental dans lequel un peroxyde de lipide formé par exposition aux rayons ultraviolets expliqué dans la réalisation 1 précitée un remède brut pour évaluer l'activité anti-tumorale, par exemple des champignons, et on examine la quantité de peroxyde de lipide formée. Lorsqu'on ajoute les champignons en augmentant leurs quantités, un champignon qui a tendance à augmenter de façon notable la quantité de peroxyde de lipide formée présente une activité anti-tumorale puissante lorsqu'il est administré.

Autrement dit, lorsque l'augmentation de la quantité de peroxyde de lipide formée est largement basée sur l'augmentation de la concentration de champignons ajoutés, le champignon peut être évalué comme présentant un effet anti-tumoral puissant lorsqu'il est administré par voie interne. Ainsi, plusieurs types de champignons sont introduits dans le système expérimental précité et, lorsque les augmentations de la quantité de peroxyde de lipide formée sur la base de la concentration du champignon ajouté, sont comparées les unes aux autres, on peut déterminer l'ordre d'efficacité de l'effet anti-tumoral par administration interne des divers types de champignons.

Dans ce qui suit, les deux méthodes d'évaluation précitées dans la réalisation 2 de l'invention sont expliquées sur la base des exemples mentionnés cidessus. Lorsque les valeurs de MDA correspondant aux méthodes respectives de traitement mentionnées cidessus dans le tableau 1 sont comparées les unes aux autres, on peut déterminer lequel des cas dans lesquels on applique tout autre traitement tel que le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, etc., présente une valeur de MDA plus importante par comparaison au cas où on n'applique aucun traitement.

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Lorsqu'on applique l'un ou l'autre du grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain ou de la fermentation par "Koji", la valeur de MDA est supérieure dans le cas des champignons auxquels on applique la fermentation par "Koji". Lorsqu'on applique en combinaison la fermentation par "Koji" et le grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, la valeur de MDA est plus grande que dans le cas où on applique seulement l'un ou l'autre du grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain ou de la fermentation par "Koji".

En outre, la valeur de MDA lorsqu'on applique les trois traitements, à savoir grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain, fermentation par "Koji" et préparation d'un agent huileux est plus grande que dans le cas où l'on applique seulement les deux traitements de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain et de fermentation par "Koji".

D'autre part, lorsqu'on considère les tableaux 2,3 et 4 mentionnés ci-dessus dans lesquels on effectue des tests cliniques en ce qui concerne le cancer du sein, le cancer de l'estomac et le cancer des poumons dans le cas où on n'applique aucun traitement et dans les cas où on applique le traitement de fermentation par enzymes lytiques de polysaccharides, le traitement de fermentation par "Koji", le traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + le traitement de fermentation par "Koji" et le traitement de grillage aux rayons dans l'infrarouge lointain + le traitement de fermentation par "Koji" + le traitement de préparation d'un agent huileux, et en considérant également les cas où l'on utilise respectivement, parmi les champignons mentionnés ci-dessus, PORIA (BUKURYO), agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, maitake noir (Kuromaitake) (maitake des régions neigeuses (Yukiguni maitake)) et POLYPORUS (CHOREIMAITAKE, Poly-

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porus umbellatus FRIES), on peut voir que, pour le même champignon, l'effet clinique devient plus élevé lorsqu'on applique le traitement présentant une valeur de MDA plus élevée représentée dans le tableau 1.

A partir de ces résultats, on peut évaluer l'importance de l'effet clinique, à savoir l'efficacité de l'effet anti-tumoral, en utilisant la valeur de MDA comme index, et l'on peut dire que le traitement qui fait que la valeur de MDA devient élevée est efficace pour présenter un effet anti-tumoral.

Ainsi, lorsque la valeur de MDA, qui indique la quantité de peroxyde de lipide formée en exposant aux rayons ultraviolets l'acide docosahexaénoïque, est élevée, le traitement peut être évalué comme ayant une grande efficacité dans l'activité anti-tumorale des champignons.

Par ailleurs, lorsqu'on compare les résultats du tableau 1 et ceux des tableaux 2 à 4, dans la même méthode de traitement des champignons, l'ordre des grandeurs de la valeur de MDA correspond à l'ordre des grandeurs du taux d'efficacité dans les effets cliniques. Autrement dit, si l'on ajoute au système qui forme le peroxyde de lipide par exposition aux ultraviolets de l'acide docosahexaénoïque précité un champignon différent auquel est appliqué le même traitement avec la même concentration et si la quantité du peroxyde de lipide formée est présentée avec une valeur de MDA (quantité) de la même manière que dans la réalisation mentionnée ci-dessus, on peut dire que le champignon qui augmente la quantité de MDA formée est efficace dans son effet anti-tumoral.

En conséquence, on peut s'attendre à ce que les champignons ayant une valeur de MDA importante, laquelle valeur indique la quantité de peroxyde de lipide formée en exposant aux rayons ultraviolets

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l'acide docosahexaénoïque, présentent une activité anti-tumorale élevée lors de leur administration interne. Autrement dit, sans effectuer de tests cliniques, on peut déterminer l'efficacité de l'activité anti-tumorale des différents types de champignons par administration interne.

L'explication ci-dessus a été présentée dans le cas où elle s'applique à des champignons tels que le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), etc., mais les champignons à traiter ne sont pas limités seulement à ces champignons précités. La présente invention peut s'appliquer à des champignons autres que ceux précités pour autant qu'ils contiennent -glucane.

En outre, la présente invention peut s'appliquer à des champignons contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale autres que le ssglucane. En outre, la présente invention peut s'appliquer à des remèdes bruts, tels que des produits naturels ou cultivés dérivés de plantes autres que les champignons et qui contiennent des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, tels que -glucane.

Par ailleurs, on a utilisé l'acide docosohexa- énoïque dans l'explication mentionnée ci-dessus, mais on peut utiliser un acide gras autre que l'acide docosahexaénoïque, par exemple un acide gras insaturé contenant une certaine quantité de peroxyde de lipide formée par exposition aux rayons ultraviolets et en l'ajoutant aux champignons ci-dessus. En outre, on peut utiliser un tel acide gras insaturé provenant d'un corps vivant dans lequel une certaine quantité de peroxyde de lipide est formée par exposition aux rayons ultraviolets par addition des champignons mentionnés ci-dessus, dans la mesure où l'on peut appliquer la méthode d'évaluation mentionnée ci-dessus, même s'il n'est pas dérivé d'un corps vivant, c'est-à-dire dans

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le cas où c'est un acide gras synthétique.

Par ailleurs, en ajoutant des champignons contenant un polysaccharide carcinostatique au système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets de l'acide docosahexaénoïque, comme il a été expliqué ci-dessus, avec divers types de concentration et en saisissant les quantités des peroxydes de lipides formées avec les concentrations respectives, on peut aisément atteindre une dose d'administration moyenne et appropriée en correspondance avec l'état de progression de la tumeur maligne, telle qu'un cancer, sans effectuer de tests cliniques concernant les champignons respectifs à utiliser.

Autrement dit, la relation entre la concentration du champignon et la valeur de MDA dans les types respectifs de champignons est saisie de la manière mentionnée ci-dessus, et la valeur de MDA et son efficacité au niveau du stade de progression du cancer sont préalablement confirmées par les tests cliniques dans un certain type de champignon. En effectuant les opérations précédentes, si la concentration dudit champignon est recalculée de façon à obtenir une valeur de MDA qui a été confirmée comme étant efficace au stade de progression de la tumeur, telle qu'un cancer, etc., on peut aisément déterminer une dose d'administration interne moyenne à partir de la concentration du champignon.

Par ailleurs, dans la présente invention, les activités anti-tumorales de remèdes bruts peuvent être comparées grâce à un index commun, tel que la valeur de MDA, de telle sorte que l'on peut comparer l'une à l'autre l'activité anti-tumorale des différents types de remèdes bruts qui ont été comparés en effectuant des tests cliniques sans avoir à effectuer ces tests cliniques, c'est-à-dire sans faire courir de risques au

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patient.

Le fait que le présent inventeur a trouvé que la valeur de MDA pouvait être prise comme paramètre à utiliser comme mesure commune pour les types respectifs de remèdes bruts et le fait que l'évaluation mutuelle de l'activité anti-tumorale soit réalisée en corrélant la valeur de MDA et l'activité anti-tumorale sont très intéressants en ce sens qu'une évaluation mutuelle d'un certain nombre de remèdes bruts peut être effectuée de façon simple et facile.

En appliquant la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts de la présente invention, l'efficacité de l'activité antitumorale des remèdes bruts, tels que des champignons, par administration interne peut être renforcée par comparaison au cas où on n'applique pas une telle méthode.

Selon la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de remèdes bruts selon la présente inven- tion, même des remèdes bruts, tels que des champignons, etc., qui ne sont pas considérés comme étant efficaces lorsqu'on n'applique pas la présente méthode de l'invention, peuvent être utilisés comme agents anti- tumoraux du fait que leur efficacité est augmentée par administration interne.

La composition de remèdes bruts à activité anti-tumorale renforcée contenant des remèdes bruts, tels que des champignons auxquels est appliquée la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale de la présente invention, a une efficacité anti-tumorale élevée par administration interne, par comparaison avec la composition contenant des remèdes bruts auxquels une telle méthode n'est pas appliquée.

Selon la méthode d'évaluation de l'efficacité anti-tumorale d'un traitement par les remèdes bruts

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selon la présente invention, on peut évaluer simplement et rapidement l'efficacité de l'activité anti-tumorale des divers types des méthodes de traitements appliquées aux remèdes bruts.

Selon la méthode d'évaluation de l'activité anti-tumorale des remèdes bruts selon la présente invention, on peut déterminer sans effectuer de tests cliniques l'efficacité de ces remèdes bruts par administration interne. Ainsi, par comparaison avec une méthode conventionnelle dans laquelle les résultats peuvent être obtenus en effectuant des expériences de longue durée sur des animaux ou des tests cliniques, la recherche d'une substance anti-tumorale efficace par analyse d'un nombre effrayant de produits naturels peut être effectuée simplement par comparaison avec la manière conventionnelle.

Claims (29)

REVENDICATIONS

1.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale, appliquée à un remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, caractérisée en ce qu'elle comprend une étape de grillage du remède brut par des rayons dans l'infrarouge lointain et une étape de fermentation par addition de microorganismes pour renforcer l'activité anti-tumorale du remède brut par rapport au cas où on n'effectue pas le grillage et la fermentation.

2. - Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 1, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient P-glucane.

3.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 2, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus(AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

4.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 3, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

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5.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle comprend, après l'étape de fermentation, une étape de préparation d'un agent huileux dans laquelle le remède brut fermenté est recouvert d'un composant huileux obtenu à partir de plantes telles que le sésame grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain, d'où il résulte un renforcement de l'activité anti-tumorale du remède brut par rapport au cas où on n'effectue pas les étapes de grillage, de fermentation et de préparation d'un agent huileux.

6.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 5, dans laquelle on utilise un champignon qui contient P-glucane comme remède brut.

7. - Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 6, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

8.- Méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 7, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant ensuite grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

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9.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée, caractérisée en ce qu'elle contient un remède brut auquel est appliqué la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale comprenant une étape de grillage du remède brut par des rayons dans l'infrarouge lointain et une étape de fermentation par addition de microorganismes, d'où il résulte que l'activité anti-tumorale dudit remède brut est renforcée par rapport au cas où l'on n'effectue pas le grillage et la fermentation.

10.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 9, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient -glucane.

11.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 10, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

12. - Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 11, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE),. ce champignon agaricus cru étant ensuite grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

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13.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 9, caractérisée en ce que, après l'étape de fermentation, on effectue une étape de préparation d'un agent huileux dans laquelle le remède brut est recouvert d'un composant huileux obtenu à partir de plantes, telles que le sésame grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain, d'où il résulte un renforcement de l'activité anti-tumorale du remède brut par rapport au cas où l'on n'effectue pas les étapes de grillage, de fermentation et de préparation d'un agent huileux.

14.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 13, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient -glucane.

15.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 14, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

16.- Composition contenant un remède brut à activité anti-tumorale renforcée selon la revendication 15, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant ensuite grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

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17.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un traitement à appliquer à un remède brut contenant des polysaccharides ayant une activité anti-tumorale, caractérisée en ce qu'on additionne le remède brut auquel est appliqué le traitement à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets d'un acide gras insaturé tel que l'acide docosahexaénoïque et on évalue que l'effet du traitement de renforcement de l'activité anti-tumorale du remède brut est important lorsque l'augmentation de la quantité formée du peroxyde de lipide sur la base d'une augmentation de la concentration du remède brut par le traitement est importante.

18.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un traitement à appliquer à un remède brut selon la revendication 17, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient P-glucane.

19.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un traitement à appliquer à un remède brut selon la revendication 18, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

20. - Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un traitement à appliquer à

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un remède brut selon la revendication 19, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

21.- Méthode d'évaluation de l'efficacité d'un remède brut pour évaluer l'efficacité de l'effet anti-tumoral présenté par le remède brut contenant des saccharides ayant une activité anti-tumorale sans effectuer de tests clinique, cette méthode étant caractérisée en ce qu'on ajoute le remède brut à un système qui forme un peroxyde de lipide par exposition aux rayons ultraviolets d'un acide gras insaturé, tel que l'acide docosahexaénoïque, et qu'on évalue et qu'on espère que l'effet de l'activité anti-tumorale du remède brut par administration interne est important lorsque l'augmentation de la quantité formée du peroxyde de lipide sur la base de la concentration du remède brut est importante.

22.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 21, dans laquelle on applique au remède brut la méthode de renforcement de l'activité antitumorale comprenant une étape de grillage du remède brut par des rayons dans l'infrarouge lointain et une étape de fermentation par addition de microorganismes, grâce à quoi l'activité anti-tumorale dudit remède brut est renforcée par rapport au cas où l'on n'effectue pas le grillage et la fermentation.

23.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 22, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient P-glucane.

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24.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 23, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus(AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SBIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

25.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 24, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.

26.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 21, dans laquelle on applique audit remède brut la méthode de renforcement de l'activité anti-tumorale comprenant une étape de préparation d'un agent huileux dans laquelle le remède brut fermenté est recouvert d'un composant huileux obtenu à partir de plantes telles que le sésame grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain après l'étape de fermentation, d'où il résulte que son activité anti-tumorale est renforcée par rapport au cas où l'on n'effectue pas les étapes de grillage, de fermentation et de préparation d'un agent huileux.

27.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de

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l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 26, dans laquelle on utilise comme remède brut un champignon qui contient (3-glucane.

28.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 27, dans laquelle on utilise comme champignon au moins un champignon sélectionné dans le groupe comprenant les champignons suivants : agaricus (AGARIKUSUTAKE), maitake (MAITAKE, Grifola frondosu), shiitake (SHIITAKE, Cortinellus shiitake), matsutake (MATSUTAKE, Tricholoma matsutake), shimejitake (SHIMEJITAKE, Lyophyllum decastes), et enokitake (ENOKITAKE, Fammulina velutipes).

29.- Méthode d'évaluation de l'efficacité de l'activité anti-tumorale d'un remède brut selon la revendication 28, dans laquelle on utilise le champignon agaricus (AGARIKUSUTAKE), ce champignon agaricus cru étant ensuite grillé par des rayons dans l'infrarouge lointain.