MXPA06004723A

MXPA06004723A - Combinacion para el tratamiento del hcv.

Info

Publication number: MXPA06004723A
Application number: MXPA06004723A
Authority: MX
Inventors: Gurudatt Chandorkar
Original assignee: Vertex Pharma
Priority date: 2003-10-27
Filing date: 2004-10-27
Publication date: 2006-07-05
Also published as: ES2319775T3; BRPI0415935A; KR20060120162A; NO20062428L; ATE416789T1; CN1893978A; WO2005042020A2; RU2006118359A; CA2543696A1; AU2004285503A1; EP1677827A2; US20060003942A1; JP2007509950A; PT1677827E; IL175211A0; DK1677827T3; US20100015090A1; PL1677827T3; CY1110176T1; ZA200603863B

Abstract

La presente invencion se relaciona con la co-administracion de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de Hepatitis C y un inhibidor de la monooxigenasa del citocromo P450. La combinacion actua interfiriendo con el ciclo vital del virus de Hepatitis C y por lo tanto es util como una terapia antiviral. Como tal, la combinacion se puede utilizar para tratar o prevenir infecciones de Hepatitis C en pacientes. La invencion tambien se relaciona con composiciones que comprenden la combinacion de inhibidores. La invencion tambien se relaciona con equipos y paquetes farmaceuticos que comprenden un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de Hepatitis C y un inhibidor de la monooxigenasa del citocromo P450. La invencion tambien se relaciona con los procesos para la preparacion de esas composiciones, combinaciones, equipos y paquetes.

Description

COMBINACIONES PARA EL TRATAMIENTO DEL HCV CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con combinaciones de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C el y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa . Las combinaciones interfieren con el ciclo vital del virus de la hepatitis C y por lo tanto son útiles como terapias antivirales. Como tal, la combinación se puede utilizar para tratar o prevenir las infecciones de la hepatitis C en pacientes. La invención también se relaciona con las composiciones, equipos, y paquetes farmacéuticos que comprenden las combinaciones. La invención también se relaciona con los procesos para preparar estas combinaciones, composiciones, equipos, y paquetes .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La infección por el virus de la hepatitis C ("HCV", por sus siglas en inglés) es un problema médico humano serio. Se reconoce que el HCV como el agente causante de la mayoría de los casos de hepatitis que no es A, ni B, con una sero-prevalencia humana estimada globalmente del 3% [A. Alberti et al., "Natural History of Hepatitis C" J. Hepatology, 31., (Suplemento 1), páginas 17-24 (1999)]. Tan solo en los Estados Unidos casi cuatro millones de personas pueden estar infectadas [M.J. Alter et al., "The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States", Gastroenterol . Clin. North Am. , 23, páginas 437-455 (1994); M.J. Alter "Hepatitis C Virus Infection in the United States", J. Hepatology, 31., (suplemento 1), páginas 88-91 (1999)]. En una primera exposición al HCV, sólo aproximadamente el 20% de los individuos infectados desarrollan hepatitis clínica aguda, mientras que los demás parecen resolver la infección en forma espontánea. Sin embargo, en casi el 70% de los casos, el virus establece una infección crónica que persiste durante décadas [S. Iwarson, "The Natural Course of Chronic Hepatitis", FEMS Microbiology Reviews, 14, páginas 201-204 (1994); D. Lavanchy, "Global Surveillance and Control of Hepatitis C", J . Viral Hepatitis, 6, páginas 35-47 (1999)]. Esto resulta habitualment e en una inflamación hepática recurrente y con empeoramiento progresivo, que provoca frecuentemente estados de enfermedades más severas tales como por ejemplo, cirrosis y carcinoma hepatocelular [M.C. Kew, "Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma", FEMS Mlcrobiology Reviews, 14, páginas 211-220 (1994); I. Saito et al., "Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma", Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 87, páginas 6547-6549 (1990)]. Desafortunadamente, no hay tratamientos generalmente eficaces para la progresión debilitante del HCV crónico. El genoma del HCV codifica para una poliproteina de 3010-3033 aminoácidos [Q.L. Choo, et al., "Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus". Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 88, páginas 2451-2455 (1991); N. Kato et al., "Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome Frora Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis", Proc . Nati. Acad. Sci. USA, 87, páginas 9524-9528 (1990); A. Takamizawa et al., "Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers", J. Virol., 65, páginas 1105-1113 (1991)]. Se supone que las proteínas no estructurales (NS) del HCV proporcionan la maquinaria catalítica esencial para la replicación viral. Las proteínas NS se derivan mediante la disociación proteolítica de la poliproteina [R. Bartenschlager et al., "Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions", J. Virol . , 67, páginas 3835-3844 (1993); A. Grakoui et al., "Characteri zation of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites", J . Virol . , 67, páginas 2832-2843 (1993) ; A. Grakoui et al., "Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products", J . Virol . , 67, páginas 1385-1395 (1993); L. Tomei et al., ¾NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein", J . Virol . , 67, páginas 4017-4026 (1993) ] . La proteina NS 3 (NS3) del HCV contiene una actividad serina proteasa que ayuda a procesar la mayoría de las enzimas virales, y de esta forma se considera esencial para la replicación e infectividad viral. Se sabe que las mutaciones en la proteasa NS3 del virus de la fiebre amarilla disminuyen la infectividad viral [Chambers, T.J. et al., "Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein", Proc ¦ Nati. Acad. Sci. USA, 87, páginas 8898-8902 (1999)]. Los primeros 181 aminoácidos de la NS3 (residuos 1027-1207 de la poliproteina viral) han mostrado que contienen el dominio de serina proteasa de la NS3 que procesa los cuatro sitios en dirección 3' de la poliproteina del HCV [C. Lin et al., "Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirement s and Processing Kinetics", J . Virol . , 68, páginas 8147-8157 (1994)]. Actualmente no existe ningún agente ni ningún tratamiento anti-HCV satisfactorio. Apenas recientemente, la única terapia establecida para la enfermedad por el HCV es el tratamiento con interferón. Sin embargo, los interferones tienen efectos secundarios significativos [ . A. Wlaker et al., "Hepatitis C Virus: An Overview of Current Approaches and Progress", DD , 4 páginas 518-29 (1999), D. Moradpour et al., "Current and Evolving Therapies for Hepatitis C", Eur . J. Gas troent erol . Hepatol . , 11, páginas 1199-1202 (1999); H. L. A. Jenssen et al., "Suicide Associated with Alfa-Interferón Therapy for Chronic Viral Hepatitis", J . Hepatol . , 21, páginas 241-243 (1994); P.F. Renault et al., "Side Effects of Alpha Interferón", Seminars in Liver Disease, 9, páginas 273-277. (1989)] e inducen la remisión a largo plazo solamente en una fracción (~25%) de los casos [O. Weiland, "Interferón Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection", FEMS Microbiol . Rev . , 14, páginas 279-288 (1994)]. Las recientes introducciones de las formas pegiladas de interferón (PEG-INTRON® y PEGASYS®) y la terapia de vacunación de ribavirina e interferón pegilado ( REBETROL®) han resultado únicamente en modestas mejoras en las proporciones de remisión y sólo reducciones parciales de los efectos secundarios. Además, las perspectivas de las vacunas anti-HCV eficaces permanecen inciertas. La serina proteasa NS3 del HCV y su cofactor asociado, NS4A, ayuda a procesar la totalidad de las enzimas virales y de esta forma se considera esencial para la replicación viral. Este procesamiento parece ser análogo al procesamiento llevado a cabo por la aspartil proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, que también está implicado en el procesamiento de la enzima viral de los inhibidores de la proteasa del VIH, que inhiben el procesamiento de las proteínas virales son potentes agentes antivirales en el hombre, lo que indica que la interrupción de esta etapa del ciclo de vida viral da por resultado en agentes terapéuticamente activos. Por consiguiente, es un blanco atractivo para el descubrimiento farmacológico.

Se sabe que algunos fármacos se metaboli zan por las enzimas de citocromo p450. Este metabolismo típicamente da por resultado en el fármaco que tiene características farmacocinéticas desfavorables (por ejemplo, niveles sanguíneos disminuidos, vida media disminuida). Por contraste, la inhibición del metabolismo de fármacos puede conducir a mejoras en el perfil farmacocinéti co del fármaco. Este enfoque ha conducido a los reportes de métodos para mejorar la farmacocinética de ciertos fármacos [véase, por ejemplo, la patente de los Estados Unidos 6,037,157; D.E. Kempf et al. Antimicrob. Agents Chemother . , 41, páginas 654-660 (1997) ] . Sin embargo, no existen reportes de métodos para mejorar la farmacocinét ica de los inhibidores de la proteasa NS3/4A de hepatitis C . De esta forma, existe una necesidad por combinaciones terapéuticas para mejorar la farmacocinética de los inhibidores de la proteasa del virus NS3/4A de hepatitis C. Estas composiciones, combinaciones, y métodos podrían serían útiles en terapias anti-HCV.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con combinaciones de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa . La invención también se relaciona con los métodos para el tratamiento de una infección por el HCV en un paciente al administrar una combinación de acuerdo con esta invención. La invención proporciona las composiciones, equipos, y paquetes farmacéuticos que comprenden un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa. La invención también proporciona los procesos para preparar estas combinaciones, equipos, y paquetes .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Esta invención proporciona los métodos para mejorar la farraacocinética de los inhibidores de la proteasa NS3/4A de hepatitis C. Las ventajas de mejorar la farmacocinética de los fármacos se reconocen en la técnica (US 2004/009152 ; US 2004/0152625; US 2004/0091527). Esta mejora puede conducir a niveles sanguíneos aumentados del fármaco.

De manera más importante para las terapias del HCV, la mejora puede conducir a concentraciones aumentadas del inhibidor de proteasa en el hígado.

En una modalidad, esta invención proporciona los métodos para mejorar la farmacocinética de los inhibidores de la proteasa NS3/4A de hepatitis C al co-admini strar una combinación del inhibidor de proteasa y un inhibidor de citocromo P450 ("CYP") . Los solicitantes han demostrado que los inhibidores de la proteasa NS3/4A de hepatitis C se metabolizan por las enzimas de citocromo P450 , en particular la isoenzima 3A4. Los solicitantes también han demostrado que este metabolismo se disminuye en presencia de un inhibidor de citocromo P450. Al combinar un inhibidor de la proteasa NS3/4A y un inhibidor de CYP, esta invención proporciona el metabolismo disminuido de los inhibidores de proteasa. Con esto se mejoran la farmacocinética del inhibidor de proteasa. Por consiguiente, esta invención proporciona las combinaciones terapéuticas de un inhibidor de citocromo P450 monooxigenas a ("inhibidor de CYP") y un inhibidor de la proteasa NS3/4A de hepatitis C. En un aspecto, la invención incluye la co-administración del inhibidor de la proteasa NS3/4A y el inhibidor de CYP. Una modalidad de esta invención proporciona un método para aumentar la biodisponibilidad de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C en un paciente que comprende administrar al paciente una combinación del inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa . Otra modalidad de esta invención proporciona un método para aumentar los niveles sanguíneos o aumentar las concentraciones en el hígado en un paciente de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C que comprende administrar al paciente el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monoo igenasa . Otra modalidad de esta invención proporciona un método para tratar a un paciente infectado con un virus de la hepatitis C que comprende administrar al paciente a) un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C ; y b) un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa. Se espera que el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa utilizado en esta invención inhiba el metabolismo del compuesto del inhibidor de la proteasa NS3/4A. Por lo tanto, el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa podría estar en una cantidad eficaz para inhibir el metabolismo del inhibidor de proteasa. Por consiguiente, el inhibidor de CYP se administra en una cantidad tal que la biodisponibilidad del inhibidor de proteasa se aumente en comparación con la biodisponibilidad en ausencia del inhibidor de CYP. En estas modalidades, los inhibidores se administran de preferencia en cantidades terapéuticamente eficaces. Se espera que los compuestos utilizados en esta invención inhiban el HCV al inhibir la proteasa NS3/4A. Como tal, una combinación del inhibidor de CYP y el inhibidor de proteasa se co-admini stran de preferencia en una cantidad suficiente para tener actividad antiviral. Se debe entender que cuando esta invención incluya una combinación de compuestos, las cantidades específicas de cada compuesto pueden depender de las cantidades específicas de cada compuesto distinto en la combinación. Por ejemplo, la administración del inhibidor de CYP y un inhibidor de proteasa en un método de esta invención, conduce a un farmacocinética mejorada del inhibidor de proteasa en comparación con la farmacocinética del inhibidor de la proteasa administrada en ausencia del inhibidor de CYP. De esta forma, una cantidad menor del inhibidor de proteasa podria proporcionar un efecto equivalente in vivo en presencia de un inhibidor de CYP que en ausencia del inhibidor de CYP. En un método de esta invención, la cantidad del inhibidor de CYP administrada es suficiente para mejorar la farmacocinética del inhibidor de proteasa en comparación con la farmacocinética del inhibidor de proteasa en ausencia de un inhibidor de CYP. En ciertas modalidades, la cantidad del inhibidor de CYP administrada es suficiente para aumentar los niveles sanguíneos del inhibidor de proteasa o para aumentar las concentraciones en el hígado del inhibidor de proteasa. Ventajosamente, en un método de esta invención, por consiguiente se utiliza una dosis menor del inhibidor de proteasa (con relación a la administración de un inhibidor de proteasa solo) . Además del tratamiento de pacientes infectados con la hepatitis C, los métodos de esta invención se pueden utilizar para prevenir que un paciente se infecte con la Hepatitis C. Por consiguiente, una modalidad de esta invención proporciona un método para prevenir una infección por el virus de la Hepatiticas C en un paciente que comprende administrar al paciente a) un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C; y b) un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa . Como se comprenderla por los practicantes experimentados, si un método de esta invención se utilizará para tratar a un paciente profilácticamente, y ese paciente se infecta con el virus de la hepatitis C, el método entonces se puede utilizar para tratar la infección. De esta forma, una modalidad de esta invención proporciona un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa en donde la combinación de los inhibidores se realiza en cantidades terapéuticamente eficaces para tratar o prevenir una infección de hepatitis C en un paciente. Un método de esta invención puede emplear cualquier inhibidor de la proteasa NS3/4A de hepatitis C. Un compuesto se puede analizar por su capacidad para inhibir la proteasa de la hepatitis C mediante los métodos conocidos en la técnica y/o mediante los métodos proporcionados en la presente. Los ejemplos de estos inhibidores incluyen de manera enunciativa: los compuestos iden ificados como inhibidores en estos análisis y los inhibidores de las WO 03/087092, WO 03/006490, WO 03/064456, WO 03/064416, WO 03/035060, WO 02/060926, WO 02/079234, WO 02/48116, WO 02/48157, WO 00/31129, WO 02/18369, WO 02/08256, WO 02/08244, WO 02/08198 , WO 02/08187 , WO 01/81325, WO 01/77113, WO 01/74768 , WO 01/64678 , WO 01/07407 , WO 00/59929, WO 00/09588 , WO 00/09543, WO 99/64442, WO 99/50230, WO 99/38888, WO 99/07734 , WO 99/07733, WO 98/46630, WO 98/46630, WO 98/22496, WO 98/17679, O 97/43310, US 6, 018, 020, US 5,990, 276, US 5,866,684, US20030008828 , US 20020177725 , US20020016442, US 2002001629 , M. Llinas -Brunet et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. , 8, páginas 1713-18 (1998); W. Han et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 711-13 (2000); R. Dunsdon et al., Bioorg. Med. Chem. Lett . , 10, páginas 1571-79 (2000); M. Llinas-Brunet et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, páginas 2267-70 (2000); y S. LaPlante et al., Bioorg. Med. Chem. Lett . , 10, páginas 2271-74 (2000)] (los cuales según se establece más adelante, se incorporan en la presente como referencia) . En ciertas modalidades, el inhibidor se selecciona de los compuestos de WO 03/087092, WO 02/18369, o W098/17679. En una modalidad especifica, el inhibidor es VX-950.

VX-950 es un inhibidor de la proteasa NS3/4A peptidomimética , reversible, competitiva, con una constante de unión en estado estable ( ki* ) de 3nM [WO 02/018369] .

VX-950 Por consiguiente, además de los inhibidores de la proteasa NS3/4A descritos ante iormente, el inhibidor de la proteasa NS3/4A para utilizarse en los métodos, procesos, combinaciones, composiciones, paquetes, y equipos de la presente invención es VX-950. Los compuestos preferidos para utilizarse junto con esta invención son aquellos en donde el compuesto es suficientemente estable para permitir la fabricación y administración a un mamífero mediante los métodos conocido en la técnica. Típicamente, estos compuestos están estables a una temperatura de 40 ° C o menos, en ausencia de humedad u otra condición químicamente reactiva, durante al menos una semana.

VX-950 (y otros compuestos empleados de acuerdo con esta invención) puede contener uno o más átomos de carbono asimétricos y de esta forma se puede presentar como racematos y mezclas racémicas, enantiómeros, mezclas diast oméricas y diastómeros individuales. Todas estas formas isoméricas de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención. Cada carbono est ereogénico puede tener la configuración R o S. Los D- y L-isómeros en la cadena lateral de N-propilo de VX-950 se incluyen expresamente en esta invención. Cualquier inhibidor de CYP que mejore la farmacocinética de la proteasa NS3/4A relevante se puede utilizar en un método de esta invención. Estos inhibidores de CYP incluyen de manera enunciativa: ritonavir ( O 94/14436), ketoconazol, troleandomicina, 4-metil pirazol, cíclosporina, clometiazol, cimetidina, itraconazol, fluconazol, miconazol, fluvoxamina, fluoxetina, nefazodona, sertralina, indinavir, nelfinavír, amprenavir, fosamprenavir , saquinavir, lopinavir, delavirdina, eritromicina , VX-944, y VX-497. Los inhibidoreses de CYP preferidos incluyen ritonavir, ketoconazol, troleandomicina, 4-metil pirazol, ciclosporina , y clometiazol.

Se conocen los métodos para medir la capacidad de un compuesto para inhibir la actividad de citocromo P50 monooxi gena s a (véase, US 6,037,157 y Yun, et al. Drug Metabolism & Disposition, vol. , 21, páginas 403-407 (1993)) . Por ejemplo, el compuesto A que será evaluado se puede incubar con 0.1, 0.5, y 1.0 mg de proteina/ml, u otra concentración adecuada de microsomas hepáticos humanos (por ejemplo, los microsomas hepáticos caracterizados, agrupados, disponibles comercialmente ) para 0, 5, 10, 20, y 30 minutos, u otros momentos adecuados, en presencia de un sistema generador de NADPH. Las incubaciones control se pueden realizar en ausencia de microsomas hepáticos durante 0 y 30 minutos (por triplicado) . Las muestras se pueden analizar para la presencia del compuesto. Las condiciones de incubación que producen una proporción lineal de metabolismo del compuesto se utilizarán como una guia para estudios adicionales . Los experimentos típicos podrían determinar la cinética del metabolismo del compuesto (Km y Vmáx) . Se puede determinar la proporción de desaparición del compuesto y los datos analizados de acuerdo con la cinética Michaelis-Menten utilizando análisis de regresión Lineweaver-Burk , Eadie-Hof stee , o no lineales . Entonces se pueden realizar los experimentos para la inhibición del metabolismo. Por ejemplo, un compuesto (una concentración, <Km) se puede incubar con microsomas hepáticos humanos agrupados en ausencia o presencia de un inhibidor de CYP (tal como por ejemplo, ritonavir) bajo las condiciones determinadas anteriormente. Como se podría reconocer, las incubaciones control deben contener la misma concentración de solvente orgánico al igual que las incubaciones con el inhibidor de CYP. Las concentraciones del compuesto en las muestras se pueden cuantificar, y se puede determinar la proporción de desaparición del compuesto precursor, con proporciones que serán expresadas como un porcentaje de la actividad control. También se conocen los métodos para evaluar la influencia de la co-administración de un inhibidor de la proteasa NS3/4A y un inhibidor de CYP en un sujeto (ÜS2004/0028755) . Cualquiera de estos métodos se podría utilizar junto con esta invención para determinar el impacto farmacocinét ico de una combinación. Entonces se pueden seleccionar los sujetos que se podrían beneficiar del tratamiento de acuerdo con esta invención. Específicamente, de acuerdo con esta invención, se podrían seleccionar para el tratamiento los sujetos que metabolizan los inhibidores de la proteasa NS3/4A. Los sujetos que metabolizan los inhibidores de la proteasa NS3/4A extensivamente o al menos a un grado mayor que otros sujetos, podrían ser los sujetos preferidos para el tratamiento de acuerdo con esta invención. Un inhibidor de CYP empleado en esta invención puede ser un inhibidor de únicamente una isoenzima o más de una isoenzima. Si el inhibidor de CYP inhibe más isoenzimas, el inhibidor no obstante puede inhibir una isoenzima más selectivamente que otra isoenzima. Cualquiera de estos inhibidores de CYP se puede utilizar en un método de esta invención. Por consiguiente, una modalidad de esta invención proporciona un método para administrar un inhibidor de CYP3A4 y un inhibidor de la proteasa NS3/4A. Otra modalidad de esta invención proporciona un método para administrar un inhibidor de la isoenzima 3A4 ("CYP3A4"), isoenzima 2C19 ( "CYP2C19" ) , isoenzima 2D6 ("CYP2D6") , isoenzima 1A2 ("CYP1A2") , isoenzima 2C9 ("CYP2C9"), o la isoenzima 2E1 ( "CYP2E1" ) . En las modalidades donde el inhibidor de proteasa es VX-950 (o un e sterereoi somero del mismo) , el inhibidor de CYP de preferencia inhibe CYP3A4. Como se podría apreciar, la actividad de CYP3A4 se observa ampliamente en seres humanos. Por consiguiente, se podría esperar que las modalidades de esta invención que incluyen la inhibición de la isoenzima 3A4 se podrían aplicar a una amplia gama de pacientes . Los métodos de la presente incluyen la administración de las combinaciones de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxi gena s a . Esta administración se puede denominar como coadministración. La co-administración incluye administrar cada inhibidor en la misma forma de dosificación o en diferentes formas de dosificación. Cuando se administra en diferentes formas de dosificación, los inhibidores se pueden administrar en momentos diferentes y en cualquier orden. Por consiguiente, esta invención proporciona los métodos en donde se administra el inhibidor de CYP junto con el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C en la misma forma de dosificación o en formas de dosificación por separado.

Si el inhibidor de CYP y el inhibidor de proteasa se administran en formas de dosificación por separado, cada inhibidor se puede administrar casi simultáneamente. Alternati amente, el inhibidor de CYP se puede administrar en cualquier lapso alrededor de la administración del inhibidor de proteasa. Es decir, el inhibidor de CYP se puede administrar antes de, junto con, o después del inhibidor de la proteasa NS3/4A. El lapso de tiempo de administración debe ser tal que el inhibidor de CYP afecte el metabolismo del inhibidor de proteasa. Por ejemplo, si el inhibidor de proteasa se administra primero, el inhibidor de CYP se debe administrar antes de que el inhibidor de proteasa se metabolice y/o excrete (por ejemplo, dentro de la vida media del inhibidor de proteasa) . Los métodos de esta invención también pueden incluir la administración de otro componente que comprenda un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador ; un agente antiviral; un inhibidor de la proteasa del HCV; un inhibidor de otro blanco en el ciclo vital del HCV; un inhibidor de cítocromo P-450; o combinaciones de los mismos. Por consiguiente, en otra modalidad, esta invención proporciona un método que comprende administrar un inhibidor de la proteasa NS3/4A, un inhibidor de CYP, y otro agente anti-viral, de preferencia un agente anti-HCV. Estos agentes antivirales incluyen de manera enunciativa: agentes inmunomoduladores, tales como por ejemplo, OÍ-, ß-, y ?-int erferones , compuestos de interferón-a, derivados pegilados, y timosina; otros agentes anti-virales , tales como por ejemplo, ribavirina, amantadina, y telbivudina; otros inhibidores de las proteasas de hepatitis C (inhibidores de NS2-NS3 e inhibidores de NS3-NS4A); los inhibidores de otros blancos en el ciclo vital del HCV, incluyen helicasa, polimerasa, e inhibidores de metaloproteasa; inhibidores de entrada de ribosoma interno; inhibidores virales de amplio espectro, tales como por ejemplo inhibidores IMPDH (por ejemplo, los compuestos de las patentes de los Estados Unidos 5,807,876, 6,498,178, 6,344,465, 6,054,472, WO 97/40028, WO 98/40381, WO 00/56331, y ácido micofenólico y derivados del mismo, incluyendo de manera enunciativa: VX-497, VX-148 y/o VX-944); o combinaciones de cualquiera de los anteriores. Otros agentes (por ejemplo, compuestos no inmunomoduladores o inmunomoduladores) que se pueden utilizar en combinación con un compuesto de esta invención incluyen de manera enunciativa; aquellos especificados en la WO 02/18369, que se incorpora en la presente como referencia (véase, por ejemplo, página 273, líneas 9-22 y página 274 , línea 4 hasta página 276, línea 11) . Todavía otros agentes incluyen de manera enunciativa: PEG-INTRON® (peginteferón alfa-2b, disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ) ; INTRON-A, (interferón alfa-2b disponible de Schering Corporation, Kenilworth, NJ) ; ribavirina (1-beta-D-ribofuranosilo-lH-1,2, 4 -tria zol- 3 - carboxamida , disponible de ICN Pharmaceutical s , Inc., Costa Mesa, CA; descrito en Merck Index, entrada 8365, Duodécima Edición) ; REBETROL® (Schering Corporation, Kenilworth, NJ) , COPEGASÜS® (Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ) ; PEGASY® ( pegint erferón alfa-2a disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ) ; ROYERON® (interferón alfa-2a recombinante disponible de Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ) ; BEREFOR® (interferón alfa 2 disponible de Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT); SUMI FERON® (una mezcla purificada de alfa interferones naturales tales como por ejemplo, Sumiferon disponible de Sumitomo, Japón); WELLFERON® (alfa interferón ni disponible de Glaxo Wellcome Ltd., Gran Bretaña); ALFERON® (una mezcla de alfa interferones naturales producida por Interferon Sciences, y disponible de Purdue Frederick Co. , CT); a-interferón ; alfa interferon 2a natural; alfa interferon 2b natural; alfa interferon 2a o 2b pegilado; alfa interferon consensual (Amgen, Inc., Newbury Park, CA) ; VIRAFERON®; INFERGEN®; REBETRON® (Schering Plough, Interferon-alfa 2B + Rivabirina); interferon alfa pegilado (Reddy, K.R. et al. "Efficacy and Safety of Pegilated (40-kd) Interferon alpha-2a Compared with Interfepha-2a in Noncirrhotic Patients with Chronic Hepatitis C (Hepato, 33, páginas 433-438 (2001); interferon consensual ( ao, J.H., et al., "Efficacy of Consensus Interferon in the Treatment of Chronic Hepatitis" J. Gastroenterol , Hepatol . 15, páginas 1418-1423 (2000)); interferon linfoblastoideo o "natural"; interferon tau (Clayette, P. et al., "IFN-tau, A New Interferon Type I with Ant iretroviral activiry" Phatol . Biol ¦ (París) 47, páginas 553-559 (1999)); interleucina 2 (Davis, G.L. et al., "Future Options for the Management of Hepatitis C." Seminars in Liver Disease, 19 , páginas 103-112 (1999); Interleucina 6 (Davis et al. "Future Options for the Management of Hepatitis C . " Seminars in Liver Disease 19, páginas 103-112 (1999); interleucina 12 (Davis, G.L. et al., "Future Options for the Management of Hepatitis C" , Semináis in Liver Disease, 19, páginas 103-112 (1999) ; y los compuestos que mejoran el desarrollo de la respuesta de linfocitos T auxiliares de tipo 1 (Davis et al., "Future Options for the Management of Hepatitis C" Seminars in Liver Disease, 19, páginas 103-112 (1999) . También se incluyen los compuestos que estimulan la síntesis de interferón en células (Tazulakhova, E.B. et al. , "Russian Experience in Screening, analysis, and Clinical Application of Novel Interferón Inducers" J . Interferón Cytokine Res. , 21 páginas 65-73) incluyend de manera enunciativa: ARN de cadena doble, solo o en combinación con tobramicina, e Imiquimod (3M Pharmaceutical s ; Sauder D.N. " Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod" J. Am. Acad. Dermatol . , 43 páginas S6-11 (2000) . Como se reconoce por los practicantes experimentados, un inhibidor de proteasa y un inhibidor de CYP se podrían administrar de preferencia oralmente. El interferón que no se administra típicamente de forma' oral. No obstante, nada en la presente limita los métodos o combinaciones de esta invención a ninguna de las formas o régimen de dosificación específicos. De esta forma, cada componente de una combinación de acuerdo con esta invención, se puede administrar por separado, conjuntamente, o en cualquier combinación de los mismos. Como se reconoce por los practicantes expertos, las dosificaciones de interferón se miden típicamente en ÜI (por ejemplo, de aproximadamente 4 millones de ÜI hasta aproximadamente 13 millones de UI) . Si se selecciona un agente adicional de otro inhibidor de CYP, el método podría, por lo tanto, emplear dos o más inhibidores de CYP. Cada componente se puede administrar en uno o más formas de dosificación. Cada forma de dosificación se puede administrar al paciente en cualquier orden. El inhibidor de la proteasa NS3/4A, el inhibidor de CYP, y cualquier agente adicional se pueden formular en formas de dosificación por separado. Alternativamente, para disminuir el número de formas de dosificación administradas a un paciente, el inhibidor de la proteasa NS3/4A, el inhibidor de CYP, y cualquier agente adicional se pueden formular juntos en cualquier combinación. Por ejemplo, el inhibidor de la proteasa NS3/4A se puede formular en forma de dosificación única y el inhibidor de CYP y el agente adicional se pueden formular juntos en otra forma de dosificación. Se pueden administrar cualesquiera formas de dosificación por separado al mismo tiempo o en momentos diferentes. Se debe entender que el inhibidor de CYP se podría administrar dentro de un lapso de tiempo de tal forma que el inhibidor de CYP pudiera disminuir el metabolismo del inhibidor de la proteasa NS3/4A (o el agente o agentes adicionales) . Por consiguiente, otra modalidad de esta invención proporciona una composición que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de CYP, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos. De acuerdo con una modalidad preferida, el inhibidor de la proteasa NS3/4A está presente en una cantidad eficaz para disminuir la carga viral en una muestra o en un paciente, en donde el virus codifica para una serina proteasa NS3/4A necesaria para el ciclo vital viral, y un portador farmacéuticamente aceptable. Alternativamente, una composición de esta invención comprende un agente adicional como se describe en la presente. Cada componente puede estar presente en composiciones individuales, en composiciones de combinación, o en una composición individual .

Si se utilizan en estas composiciones sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos, aquellas sales, de preferencia se derivan de ácidos y bases inorgánicos u orgánicos. Se incluyen entre estas sales ácidas las siguientes: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato , bisulfato, butirato, citrato, canforato, canfor sulfonato, ciclopentan-propionato, digluconato, dodecil sulfato , etansulfonato , fumarato, glucoheptanoato , glicerofosfato , hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietansulfonato , lactato, maleato, metansulfonato , 2-naftalensulfonato , nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenil-propionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Las sales de bases incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como por ejemplo, sales de sodio y potasio, sales de metal alcalinotérreo tales como por ejemplo, sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas, tales como por ejemplo, sales de diciclohe ilamina, N-met i 1-D-glucamina , y sales con aminoácidos tales como por ejemplo, arginina, lisina, etc .

También, los grupos básicos que contienen nitrógeno se pueden cuaterni zados con agentes tales como por ejemplo, haluros de alquilo inferior, tales como por ejemplo, metilo, etilo, propilo y cloruro de butilo, bromuros y yoduros; sulfatos de dialquilo tales como por ejemplo, sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga tales como por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo , miristilo y estearilo, haluros de aralquilo, tales como por ejemplo, bromuros de bencilo y fenetilo y otros. Se obtienen de esta forma productos solubles en agua o aceite o dispersables en agua o aceite. Los compuestos utilizados en las composiciones y métodos de esta invención también se pueden modificar adjuntando grupos funcionales adecuados para incrementar las propiedades biológicas selectivas . Estas modificaciones se conocen en la técnica e incluyen aquellas que aumentan la penetración biológica en un sistema biológico determinado (por ejemplo, sangre, sistema linfático, sistema nervioso central), aumentan la disponibilidad oral, aumentan la solubilidad para permitir la administración mediante inyección, alteran el metabolismo y alteran la velocidad de excreción.

Los portadores farmacéuticamente aceptables que se pueden utilizar en estas composiciones incluyen de manera enunciativa intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, proteínas séricas, tales como por ejemplo, albúmina sérica humana, sustancias amortiguadoras tales como por ejemplo, fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrólitos, tales como por ejemplo, sulfato de protamina, fosfato ácido disódico, fosfato ácido de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona , sustancias basadas en celulosa, polietilenglicol , carboximetil celulosa de sodio, poliacrilatos , ceras, polímeros en bloque de polietileno-polioxip opileno , polietilenglicol y grasa de lana. De acuerdo con una modalidad preferida, las composiciones de esta invención se formulan para administración farmacéutica a un mamífero, en particular un ser humano. Estas composiciones farmacéuticas de la presente invención (así como también la composición para utilizarse en los métodos, combinaciones, equipos, y paquetes de estas invenciones) se pueden administrar de manera oral, parenteral, sublingual, mediante rocío para inhalación, de manera tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o a través de un depósito implantado. El término "parenteral", en el sentido en que se incluye en. la presente, incluye técnicas de inyección o infusión subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticula , intrasinovial , intraesternal , intratecal, interhepática, intraiesional , e intracraneal. De preferencia, las composiciones se administran oral o intravenos amenté . Las formas inyectables estériles de las composiciones de acuerdo con esta invención pueden ser suspensión acuosa o suspensión oleaginosa. Estas suspensiones se pueden formular de acuerdo con técnicas conocidas en este campo utilizando agentes de dispersión o agentes humectantes adecuados así como agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede también ser una solución o suspensión inyectable en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo como solución en 1 , 3-butandiol . Entre los portadores y solventes aceptables que se pueden emplear se encuentran agua, solución de Ringer, y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, se emplean convencionalmente aceites fijos, estériles como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito, se puede emplear cualquier aceite fijo insípido incluyendo monogli cé ido s o diglicéridos sintéticos. Los ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados de glicéridos son útiles en la preparación de inyectables, como son aceites naturales farmacéuticamente aceptables tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas . Estas soluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante alcohólico de cadena larga, tal como por ejemplo, carboximetilcelulosa o agentes de dispersión similares comúnmente utilizados en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables incluyendo emulsiones y suspensiones. Otros surfactantes comúnmente utilizados, tales como Tweens, Spans, y otros agentes emulsificantes o intensificadores de biodisponibilidad comúnmente utilizados en la fabricación de formas de dosificación sólidas, liquidas farmacéuticamente aceptables o de otras formas de dosificación farmacéuticamente aceptables también se pueden emplear para los propósitos de la formulación . En las composiciones de esta invención, y de acuerdo con esta invención (es decir, las composiciones utilizadas en los métodos, equipos, combinaciones, o paquetes de esta invención), tanto el inhibidor de la proteasa NS3/4A como el inhibidor de CYP, y cualquier agente adicional, opcional, deberá estar presente a niveles de dosificación entre aproximadamente 10% y 100%, y de mayor preferencia entre aproximadamente 10% y 80% de la dosificación normalmente administrada en un régimen de monoterapia . Las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar oralmente en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable, incluyendo de manera enunciativa: cápsulas, tabletas, pildoras, polvos, gránulos, suspensiones o soluciones acuosas. En el caso de tabletas para uso oral, los portadores que se utilizan comúnmente incluyen lactosa y almidón de maiz. También se agregan típicamente lubricantes tales como estearato de magnesio. Para administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa y almidón de maíz deshidratado. Cuando se requieren suspensiones acuosas para uso oral, el ingrediente activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, también se pueden agregar agentes edulcorantes, saborizantes o colorantes. Las formas de dosificación liquida aceptables incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes, y elixires. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas de esta invención se pueden administrar en la forma de supositorios para administración rectal. Estos se pueden preparar al mezclar el agente con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperatura ambiente, pero liquido a la temperatura rectal y por lo tanto se derretirá en el recto para liberar el fármaco. Estos materiales incluyen manteca de cacao, cera de abejas y polietilenglicoles . Las composiciones farmacéuticas de esta invención también se pueden administrar tópicamente, en especial cuando el blanco del tratamiento incluye áreas u órganos a los que se tenga fácil acceso para la aplicación tópica, incluyendo las enfermedades oculares, tópicas o del tracto intestinal inferior. Las formulaciones tópicas adecuadas se preparan fácilmente para cada una de estas áreas u órganos .

La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior se puede llevar a cabo en una formulación para supositorio rectal (véase lo anterior) o en una formulación adecuada de enema. Para aplicaciones tópicas, las composiciones farmacéuticas se pueden formular en un ungüento adecuado que contenga el componente activo suspendido o disuelto en uno o más portadores. Los portadores para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen de manera enunciativa: compuesto de aceite mineral, petrolato liquido, petrolato blanco, propilenglicol , polioxietileno , polioxipropileno, cera emulsionante y agua. Alternativamente, las composiciones farmacéuticas se pueden formular en una loción o crema adecuada que contiene los componentes activos suspendidos o disueltos en uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. Los portadores adecuados incluyen de manera enunciativa: aceite mineral, monoestearato de sorbitán, Polisorbate 60, cera de cetil ésteres, alcohol cetearilico, 2 -octildodecanol , alcohol bencílico y agua. Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas se pueden formular como suspensiones microni zadas en solución salina estéril isotónica con H ajustado o, de preferencia, como soluciones en solución salina estéril isotónica, con pH ajustado, ya sea con o sin un conservador como por ejemplo cloruro de bencilalconio . Alternativamente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticas se pueden formular en un ungüento, como por ejemplo petrolato . Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con esta invención también se pueden administrar mediante aerosol nasal o inhalación. Estas composiciones se preparan de acuerdo con técnicas bien conocidas en el campo de la formulación farmacéutica y se pueden preparar como soluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservadores adecuados, promotores de absorción para incrementar la biodisponibilidad, fluorocarburos y/u otros agentes convencionales de solubilización o dispersió . Como se reconoce en la técnica, también se pueden administrar las composiciones farmacéuticas en la forma de liposomas. Se prefieren las composiciones farmacéuticas de acuerdo con esta invención formulada para administración oral.

Los niveles de dosificación entre aproximadamente 0.01 y 100 mg/kg de peso corporal, de preferencia entre aproximadamente 0.5 y aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal por dia del inhibidor de la proteasa NS3/4A son útiles para la prevención y tratamiento de la enfermedad provocada por el HCV . Para el inhibidor de CYP, podrían ser típicos los niveles de dosificación entre aproximadamente 0.001 y 200 mg/kg de peso corporal por ddí . De manera más típica, podrían ser niveles de dosificación entre aproximadamente 0.1 y 50 mg/kg o aproximadamente 1.1 y 25 mg/kg por día. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de acuerdo con esta invención se administrarár entre aproximadamente 1 y 5 veces por día o alternativamente, como una infusión continua. Esta administración se puede utilizar como una terapia crónica o aguda. La cantidad del ingrediente activo que se puede combinar con los materiales portadores para producir una forma de dosificación individual variarán, dependiendo del hospedero tratado y el modo de administ ación particular. Una preparación típica contendrá entre aproximadamente 5% y 95% del compuesto activo (p/p) · De preferencia, estas preparaciones contienen entre aproximadamente 20% y 80% del compuesto activo. Al mejorar la condición de un paciente, se puede administrar una dosis de mantenimiento de un compuesto, composición o combinación de esta invención, en caso necesario. Posteriormente, la dosificación o frecuencia de administración, o ambas, se pueden reducir, como una función de los síntomas, a un nivel en el cual se conserva la condición mejorada cuando los síntomas se han aliviado al nivel deseado, el tratamiento se deberá suspender. Sin embargo, los pacientes pueden requerir de un tratamiento intermitente a largo plazo con base en cualquier recurrencia de los síntomas de la enfermedad. También se debe entender que un régimen de tratamiento y dosificación específicos para cada paciente particular dependerá de diversos factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, estado general de salud, sexo, dieta, tiempo de administración, velocidad de excreción, combinación de fármacos, y el juicio del médico tratante y la gravedad de la enfermedad particular que se está tratando. La cantidad de ingredientes activos también dependerá del compuesto particular descrito y la presencia o ausencia y la naturaleza del agente antiviral adicional en la composición. Para las formas de dosificación preferidas de ritonavir, véase la Patente de los Estados Unidos 6, 037 , 157, y los documentos citados en la misma; la patente de los Estados Unidos 5,484,801, la solicitud de los Estados Unidos 08/402,690, y las solicitudes Internacionales WO 95/07696 y WO 95/09614) . De acuerdo con otra modalidad, la invención proporciona un método para tratar un paciente infectado con un virus caracterizado por una serina proteasa NS3/4A codificada viralmente que es necesaria para el ciclo vital del virus al administrar al paciente una composición farmacéuticamente aceptable de esta invención. De preferencia, los métodos de esta invención se utilizan para tratar un paciente que padece de una infección por el HCV. Este tratamiento puede erradicar completamente la infección viral o reducir la gravedad de la misma. De mayor preferencia, el paciente es un ser humano. Todavía en otra modalidad, la presente invención proporciona un método para pre-tratar una substancia biológica destinada para la administración a un paciente que comprende el paso de poner en contacto la sustancia biológica con una composición farmacéuticamente aceptable que comprende un compuesto de esta invención. Estas sustancias biológicas incluyen de manera enunciativa: sangre y componentes de las mismas tales como por ejemplo, plasma, plaquetas, subpoblaciones de células sanguíneas y lo semejante; órganos tales como por ejemplo, riñon, hígado, corazón, pulmón, etc; esperma y óvulos; médula ósea y componentes de los mismos, y otros fluidos que serán administrados por infusión en un paciente tales como por ejemplo, solución salina, glucosa, etc . Esta invención también proporciona un proceso para preparar una composición que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa, que comprende el paso de combinar el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa. Una modalidad alternativa de esta invención proporciona un proceso en donde la composición comprende uno o más de los agentes adicionales como se describe en la presente.

Esta invención también proporciona una combinación terapéutica que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa . En una modalidad alternativa de esta invención, la combinación terapéutica comprende además uno o más del agente adicional como se describe en la presente. Las composiciones farmacéuticas también se pueden prescribir al paciente en "paquetes para el paciente" que contengan el curso total de tratamiento en un solo paquete, normalmente un paquete con ampolletas . Los paquetes del paciente tienen una ventaja sobre las prescripciones tradicionales donde un farmacéutico divide un suministro para pacientes de un producto farmacéutico a partir de un suministro a granel, ya que el paciente siempre tiene acceso al inserto del paquete contenido en el paquete del paciente, fracasando normalmente en prescripciones tradicionales. La inclusión de un inserto del paquete se ha mostrado que mejora la complacencia del paciente con las instrucciones del médico. Se entenderá que la administración de la combinación de la invención por medio de un paquete para paciente individual, o paquetes para pacientes de cada formulación, que contiene dentro un inserto del paquete con las instrucciones para el paciente para un uso correcto de la invención es una característica adicional conveniente de esta invenci ón . De acuerdo con un aspecto adicional de la invención un paquete comprende al menos un inhibidor de la proteasa NS3/4A y un inhibidor de CYP de la invención y un inserto con información que contiene las indicaciones sobre el uso de la combinación de la invención. En una modalidad alternativa de esta invención, el paquete farmacéutico comprende además uno o más de los agentes adicionales como se describe en la presente. El agente o agentes adicionales se pueden proporcionar en el mismo paquete o en paquetes por separado. Otro aspecto de esto incluye un equipo empaquetado para que un paciente lo utilice en el tratamiento de la infección por el HCV o en la prevención de la infección por el HCV, que comprende: una sola o una pluralidad de formulaciones farmacéuticas de cada componente farmacéutico; un recipiente que contiene la formulación o formulaciones farmacéuticas durante el almacenamiento y antes de la administración; y las instrucciones para llevar a cabo la administración del fármaco de una manera eficaz para tratar o prevenir la infección por el HCV. Por consiguiente, esta invención proporciona los equipos la administración simultánea o secuencial de un inhibidor de la proteasa NS3/4A y un inhibidor de CYP (y opcionalmente un agente adicional) o los derivados de los mismos se preparan de una manera convencional. Típicamente, este equipo comprenderá, por ejemplo, una composición de cada inhibidor y opci onalment e el agente o agentes adicionales en un portador farmacéuticamente aceptable (y en una o en una pluralidad de formulaciones farmacéuticas) y las instrucciones escritas para la administración simultánea o secuencial. En otra modalidad, se proporciona un equipo empaquetado que contiene una o más formas de dosificación para auto-administración; un recipiente, de preferencia sellado, para contener las formas de dosificación durante el almacenamiento y antes de utilizarse; y las instrucciones para que un paciente lleve a cabo la administración del fármaco. Las instrucciones típicamente serán instrucciones escritas en un inserto del paquete, una etiqueta, y/u otros componentes del equipo, y la forma o formas de dosificación son como se describen en la presente.

Cada forma de dosificación se puede contener individualmente, como en una hoja de una laminilla metálica o de plástico con cada forma de dosificación aislada de los otros en celdas o burbujas individuales, o las formas de dosificación pueden estar contenidas en un recipiente individual, como en una botella de plástico. Los equipos de la presente también incluirán típicamente medios para envasar los componentes del equipo individuales, es decir, las formas de dosificación, el recipiente, y las instrucciones escritas para empleo. Estos medios de empaquetamiento pueden tomar la forma de una caja de cartón o papel, una bolsa de plástico o lámina delgada, etc. Aunque ciertas modalidades de ejemplo, se representan y describen más adelante, se apreciará que los compuestos de esta invención se pueden preparar de acuerdo con los métodos descritos en general anteriormente utilizando materiales de partida adecuados, en general disponibles para alguien con experiencia normal en la técnica. Con el fin de que esta invención se entienda de manera más completa, se establecen los siguientes ejemplos preparativos y de prueba. Estos ejemplos tienen la finalidad de ilustración únicamente y no se deben interpretar como limitantes del alcance de la invención de ninguna forma.

EJEMPLO 1 Protocolo de análisis celular con el replicón del HCV Células que contenían el replicón del virus de hepatitis C (HCV) se mantuvieron en suero fetal de bovino (FBS) al 10% que contenía DMEM, 0.25 mg por mi de G418, con los suplementos adecuados (medio A) . En el día 1, la monocapa celular de replicones se trató con una mezcla de tripsina : EDTA, se retiró, y luego el medio A se diluyó en una concentración final de 100,000 células por mi wit 10,000 células en 100 µ? se colocaron en cada cavidad de una placa para cultivo de tejidos de 96 cavidades, y se cultivaron durante la noche en una incubadora para cultivo de tejidos a 37°C. En el día 2, los compuestos (en 100% de DMSO) se diluyeron en serie en DMEM que contenía 2% de FBS, 0.5% de DMSO, con suplementos adecuados (medio B) . La concentración final de DMSO se mantuvo a 0.5% a todo lo largo de la serie de dilución. Los medios sobre la monocapa celular de replicones se retiraron, y luego se agregó el medio B que contenía varias concentraciones de compuestos.

El Medio B sin ningún compuesto se agregó a otras cavidades al igual que los controles sin el compuesto . Las células se incubaron con el compuesto o con 0.5% de DMSO en el medio B durante 48 horas en una incubadora para cultivo de tejidos a 37°C. Al final de la incubación de 48 horas, el medio se retiró, y la monocapa celular de replicones se lavó una vez con PBS y se almacenó a -80°C antes de la extracción del ARN . Las placas de cultivo con las monocapas celulares de replicones tratados se descongelaron, y una cantidad fija de otro virus de ARN, como el Virus de Diarrea Viral Bovina (BVDV) se agregó a las células en cada cavidad. Se agregaron los reactivos para extracción de ARN (tales como por ejemplo, los reactivos de los equipos RNeasy) a las células inmediatamente para evitar la degradación del ARN. El ARN total se extrajo de acuerdo con las instrucciones del fabricante con modificación para mejorar la eficiencia y consistencia de extracción. Finalmente, el ARN celular total, incluyendo el ARN del replicón del HCV, se eluyó y se almacenó a -80°C hasta un procesamiento adicional.

Se llevó a cabo un análisis de cuantificacion RT-PCR de tiempo real Taqman con dos conjuntos de cebadores específicos y solución de ensayo. Uno fue para el HCV y el otro fue para el BVDV. Las extracciones de ARN total proveniente de las células de replicones del HCV tratados se agregaron a las reacciones PCR para la cuantificacion del ARN tanto del HCV como del BVDV en la misma cavidad de PCR. El fracaso experimental se marco y se rechazó con base en el nivel de ARN del BVDV en cada cavidad. El nivel de ARN del HCV en cada cavidad se calculó de acuerdo con una ejecución de curva estándar en la misma placa. El porcentaje de inhibición o disminución del nivel de ARN del HCV debido al compuesto de tratamiento se calculó utilizando el DMSO o el control sin compuesto como 0% de inhibición. El IC50 (concentración a la cual se observa una inhibición del 50% del nivel de ARN del HCV) se calculó a partir de la curva de titulación de cualquier compuesto determinado.

EJEMPLO 2 Protocolo de análisis Ki del HCV: Método icrobore de HPLC para la separación del substrato 5AB y productos Substrato : NH2-Glu-Asp-Val-Val- ( alfa ) Abu-Cys-Ser-Met- Ser-Tyr-COOH Una solución madre de 20 mM 5AB (o concentración de su elección) se elaboró en DMSO p/0.2M DT . Esta se almacenó en alícuotas a -20°C. Amorgituador : 50 mM HEPES, pH 7.8; 20% de glicerol; 100 mM NaCl El volumen total del análisis fue 100 El amortiguador, KK4A, DTT, y tNS3 se combinaron; se distribuyeron 79 L de cada uno en las cavidades de la placa de 96 cavidades. Esto se incubó a 30°C durante -5-10 rain. 2.5 pL de la concentración adecuada del compuesto de prueba se disolvieron en DMSO (DMSO sólo para control) y se agregaron a cada cavidad. Esto se incubó a temperatura ambiente durante 15 min. La reacción se inició con la adición de 20 L de 250 µ? 5AB substrato (la concentración 25 µ? es equivalente o ligeramente menor al Km para 5AB) . Incubado durante 20 min a 30°C. La reacción se terminó mediante la adición de 25pL de 10% de TFA Se transfirieron 120 L de alícuotas a viales para HPLC El producto SMSY se separó del substrato y KK4A mediante el siguiente método: Método de separación Microbore: Instrumentación: Agilent 1100 Desgasificador G1322A Bomba binaria G1312A Automuestreador G1313A Cámara con termostado y columnas G1316A Detector con arreglo de diodos G1315A Columna: Phenomenex Júpiter; 5 mieras C18; 300 angstroms; 150x2 mm; P/0 00F-4053-BO Termostato de la columna: 40°C Volumen de inyección: 100 µL Solvente A = agua en grado HPLC + 0.1% de TFA Solvente B = acetonitrilo en grado HPLC + 0.1% de TFA Tiempo de paro: 17 min Tiempo después de la ejecución: 10 min.

EJEMPLO 3 Estabilidad metabolica de los inhibidores de la proteasa NS3/4A Interacción de Ritonavir en el metabolismo de VX-950 El metabolismo de VX-950 y la interacción con ritonavir se investigó utilizando microsomas hepáticos humanos. Se realizaron incubaciones iniciales en un amortiguador de fosfato 0.1 M, pH 7.4, conteniendo EDTA 1 mM, NADPH, VX-950 1 µ , y ya sea 0.1, 0.5, o 1.0 mg de proteina microsómica/mL durante varios puntos de tiempo. Debido a las velocidades no lineales del metabolismo, se realizaron incubaciones adicionales que contuvieron ya sea 0.25 o 0.5 mg de proteína microsómica/mL a dos concentraciones de VX-950 (0.5 y 1 µ?) durante un periodo de hasta 30 minutos. Debido al evidente metabolismo rápido de VX-950 en microsomas hepáticos humanos, se determinó la cinética (Vmáx y Km) del metabolismo de VX-950 utilizando una concentración proteinica determinada de 0.25 mg/mL y un tiempo de incubación de 2 minutos. La interacción de ritonavir sobre el metabolismo de VX-950 se determinó al incubar una concentración individual de VX-950 (0.25 µ?) y los microsomas hepáticos humanos (0.25 mg de proteína microsómica/mL) con diversas concentraciones de ritonavir (0 a 100 µ?) durante 2 minutos. La adición de ritonavir a concentraciones de hasta 3 µ? produjo la inhibición del metabolismo de VX-950. ? concentraciones mayores de ritonavir (10 a 100 µ?) se observó un aumento en el metabolismo de VX-950. En resumen, VX-950 a las concentraciones utilizadas en este estudio se metabolizó rápidamente en los microsomas hepáticos humanos (por ejemplo, 73% @ 2 µ? a 60 min., 7% @ 20 µ?; u 86% @ 2 µ? a 120 min., 21% @ 20 µ?) . Otros inhibidores de la proteasa NS3/4A exhibieron resultados similares.

Se ha demostrado que Ritonavir inhibe el metabolismo de VX-950. Sin embargo, después de la interacción con altas concentraciones de ritonavir, se presenta la activación del metabolismo de VX-950 ocurre. El mecanismo de este aumento en el metabolismo de VX-950 en presencia de ritonavir es incierto. Sin estar vinculados por la teoría, este aumento puede ser el resultado de la unión simultánea de ambos compuestos en el mismo sitio activo, o la supresión de la actividad CYP3A4 por ritonavir puede dar por resultado en VX-950 que se metaboliza por otras enzimas de CYP450 no inhibidas. Todos los documentos citados en la presente, se incorporan en la presente como referencia. Mientras que se han descrito varias de las modalidades de esta invención, resulta evidente que estos ejemplos básicos se pueden alterar para proporcionar otras modalidades que utilicen los compuestos y métodos de esta invención. Por lo tanto, se apreciará que el alcance de esta invención quedará definido por las reivindicaciones anexas en lugar de las modalidades específicas que se han representado a maneja de los ejemplos anteriores.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
2. La composición según la reivindicación 1, en donde el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C se selecciona de un compuesto de la WO 98/17679, la WO 02/18369, o la WO 03/087092.
3. La composición según la reivindicación 2, en donde el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C es VX-950 o un estereoisómero .
4. La composición según la reivindicación 2, en donde el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C es VX-950.
5. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en donde el inhibidor de citocromo de P450 es un inhibidor de la isoenzima 3A4 ("CYP3A4"), la isoenzima 2C19 ( "CYP2 C 19") , la isoenzima 2D6 ("CYP2D6"), la isoenzima 1A2 CYP1A2"), la isoenzima 2C9 ( "CYP2C9" ) , o la isoenzima 2E1 ( "CYP2E1" ) .
6. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el inhibidor de citocromo P450 es xitonavir, ketoconazol, troleandomicina, 4-metil pirazol, ciclosporina , o clometiazol .
7. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el inhibidor de citocromo P450 es un inhibidor de CYP3A4.
8. La composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el inhibidor de citocromo P450 es ritonavir.
9. Un método para aumentar la biodisponibilidad de un inhibidor de la proteasa ??3/4? del virus de hepatitis C en un paciente que comprende administrar al paciente una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1-8.
10. Un método para tratar o prevenir una infección del virus de hepatitis C en un paciente que comprende administrar al paciente un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. Un método para aumentar la biodisponibilidad de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C en un paciente que comprende administrar al paciente un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. Un método para aumentar las concentraciones en el hígado de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C en un paciente que comprende administrar al paciente un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa o una sal farmacéu icamen e aceptable del mismo.
13. Un método para aumentar los niveles sanguíneos en un paciente de un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C que comprende administrar al paciente un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14. El método según cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en donde el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatiticas C y el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa están en formas de dosificación por separado.
15. El método según la reivindicación 14 en donde las formas de dosificación por separado se administran casi simultáneamente.
16. El método según cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en donde el' compuesto y el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa- están en forma de dosificación individual.
17. El método según cualquiera de las reivindicaciones 9-13, en donde el método comprende administrar un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador ; un agente antiviral; otro inhibidor de la proteasa NS3/4A del HCV; un inhibidor de un blanco en el ciclo vital del HCV distinto de la proteasa NS3/4A; un inhibidor de entrada de ribosoma interno; un inhibidor viral de amplio espectro; otro inhibidor de citocromo P-450; o combinaciones de los mismos .
18. El método según la reivindicación 17, en donde el agente inmunomodulador es a-, ß- o ?-interferón o timosina; el agente antiviral es ribavirina, amantadina, o telbivudina; o el inhibidor de otro blanco en el ciclo vital del HCV es un inhibidor de helicasa, polimerasa, o metaloprot easa del HCV.
19. Un proceso para preparar una composición que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxi genas a , que comprende el paso de combinar el inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y el inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa.
20. Una combinación terapéutica que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa .
21. Un paquete farmacéutico que comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C, un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa, y un inserto de información que contiene las indicaciones sobre el uso de los inhibidores .
22. Un equipo qué comprende un inhibidor de la proteasa NS3/4A del virus de hepatitis C y un inhibidor de citocromo P450 monooxigenasa.