MXPA03009042A

MXPA03009042A - Secuencias de epitopes.

Info

Publication number: MXPA03009042A
Application number: MXPA03009042A
Authority: MX
Inventors: Xie Zhidong
Original assignee: Mannkind Corp
Priority date: 2001-04-06
Filing date: 2002-04-04
Publication date: 2004-10-15
Also published as: US20050221440A1; CA2442386A1; JP4874508B2; WO2002081646A3; WO2003008537A9; CN101948841A; AU2002254570A1; EP2394655A2; US20050142144A1; JP5135150B2; CN1512891A; EP2465520A2; JP2005509404A; EP2465520A3; WO2002081646A2; EP2394655A3; WO2003008537A2; EP1383528A4; JP2009060910A; US20030220239A1

Abstract

Descritos en la presente se encuentran polipeptidos, que incluyen epitopes, grupos y antigenos. Tambien se encuentran descritas composiciones que incluyen dichos polipeptidos y metodos para su uso.

Description

SECUENCIAS DE EPÍTOPES Antecedentes de la Invención Campo de la Invención La presente invención se refiere en general a peptidos y a péptidos que codifican ácidos nucleicos, que son epítopes útiles de antígenos asociados al objetivo. Más específicamente, la invención se refiere a epítopes que tienen una alta afinidad para la clase I de MHC y que se producen mediante proteasomas específicos del objetivo. Descripción de la Técnica Relacionada Neoplasia y el Sistema Inmune El estado de enfermedad neoplásico comúnmente conocido como cáncer se cree que resulta generalmente a partir de un crecimiento celular único fuera de control. El estado de crecimiento no controlado típicamente ' resulta a partir de un proceso de etapas múltiples en el cual una serie de fallas de los sistemas celulares, dan como resultado la génesis de una célula neoplásica. La célula neoplásica resultante se reproduce rápidamente por sí misma, forma uno o más tumores y eventualmente puede causar la muerte del huésped . Debido a que la progenitora de la célula neoplásicas comparte el material genético del huésped, las células neoplásicas son grandemente inexpugnables . por el sistema inmune del huésped. Durante la inspección inmune, el proceso en el cual el sistema inmune del huésped examina y localiza los materiales extraños, aparecerá una célula neoplásica al sistema de inspección inmune del huésped como una célula "independiente" . Virus y el Sistema Inmune En contraste con las células cancerosas, la infección por virus involucra la expresión de antígenos claramente no independientes. Como un resultado, muchas infecciones de virus tratan exitosamente con el sistema inmune con secuela clínica mínima. Además, ha sido posible desarrollar vacunas efectivas para muchas de estas infecciones que provocan enfermedades serias . Una variedad de procedimientos de vacunas se han utilizado exitosamente para combatir varias enfermedades . Estos procedimientos incluyen vacunas de sub-unidades que consisten de proteínas individuales producidas a través de la tecnología de ADN recombinante . No obstante, estos avances, la selección y administración efectiva de epítopes mínimos para utilizarse como vacunas virales ha permanecido en la problemática. Además de las dificultades involucradas en la selección de epítope permanece el problema de los virus involucrados en la capacidad de evadir el sistema inmune del huésped. Muchos virus, especialmente virus que establecen infecciones persistentes, tales como miembros de las familias de los virus de herpes y enfermedades eruptivas, producen moléculas inmunomoduladoras que permiten que el virus evada al sistema inmune del huésped. Los efectos de estas moléculas inmunomoduladoras en la presentación del antígeno pueden superarse mediante objetivar la selección de epítopes para la administración como composiciones inmunogénicas . Para mejor entendimiento, la interacción de las células neoplásicas y de las células infectadas viralmente con el sistema inmune del huésped, se tratan más adelante los componentes del sistema. El sistema inmune funciona para discriminar moléculas endógenas en un organismo (moléculas "independientes") a partir del material exógeno o extraño al organismo (moléculas "no independientes"). El sistema inmune tiene dos tipos de respuestas adaptables a cuerpos extraños en base a los componentes que median la respuesta : una respuesta humoral y una respuesta mediada por la célula. La respuesta humoral se media por los anticuerpos, mientras que la respuesta mediada por la célula involucra células clasificadas como linfocitos. Recientes estrategias anticáncer y anti-virales se han enfocado a movilizar el sistema inmune del huésped como un medio de tratamiento o terapia anti-cancerígeno o antiviral. El sistema inmune funciona en tres fases para proteger el huésped de cuerpos extraños: la fase cognocitiva, la fase de activación y la fase efectora. En la fase cognocitiva, el sistema inmune reconoce y señala la presencia de un antígeno o invasor extraño en el cuerpo. El antígeno extraño puede ser, por ejemplo, un" marcador de superficie celular de una célula neoplásica o una proteína viral . Una vez que el sistema es conciente de un cuerpo invasor, las células específicas del antígeno del sistema inmune proliferan y distinguen en respuesta a las señales activadas del invasor. La última etapa es la etapa efectora en la cual las células efectoras del sistema inmune responden y neutralizan al invasor detectado. Un ordenamiento de las células efectoras implementa una respuesta inmune para un invasor. Un tipo de células efectoras, la célula B, genera anticuerpos objetivados contra antígenos extraños encontrados por el huésped. En combinación con el sistema complementario, los anticuerpos dirigen la destrucción de las células o de los organismos que portan el antígeno objetivado. Otro tipo de célula efectora es el linfocito citotóxico natural (célula NK) , un tipo de linfocito que tiene la capacidad de reconocer espontáneamente y destruir una variedad de células infectadas de virus así como tipos de células malignas. El método utilizado por las células NK para reconocer las células objetivo se entiende pobremente . Otro tipo de célula efectora, la célula T, tiene miembros clasificados en tres sub-categorías , cada uno juega un papel diferente en la respuesta inmune. La célula T cooperadora secreta citocinas que estimulan la proliferación de otras células necesaria para instalar una respuesta inmune efectiva, mientras que el supresor de las células T sub-regula la respuesta inmune. Una tercer categoría de las células T, la célula T citotóxica (CTL) , es capaz de lisar directamente una célula objetivo que presenta un antígeno extraño en su superficie. El Complejo Principal de Histocompatibilidad y. el Reconocimiento Objetivo de la Célula T Las células T son células inmunes al antígeno específico que' funcionan en respuesta a señales del antígeno específico. Los linfocitos B y los anticuerpos producen también entidades de antígeno específico. Sin embargo, a diferencia de los linfocitos B, las células T no responden a los antígenos en una forma libre o soluble. Para que una célula T responda a un antígeno, se requiere que el antígeno a procesarse a péptidos que se unen después a una estructura presente se codifique en el complejo principal de histocompatibilidad (MHC) . Este requerimiento se llama "restricción MHC" y es el mecanismo mediante el cual las células T diferencian las "independientes" de las "no independientes" . Si un antígeno no se despliega por una molécula MHC reconocible, la célula T no reconocerá y actuará a la señal del antígeno. Las células T específicas para una unión péptida a una molécula MHC reconocible se enlazan a estos complejos MHC-péptido y proceden a las siguientes etapas de la respuesta inmune. Existen dos tipos de MHC, MHC clase I y MHC clase II. Las células T cooperadoras (CD4+) predominantemente interactúan con las proteínas de MHC clase II, mientras que las células T citoliticas (CD8+) predominantemente interactúan con las proteínas de MHC clase I. Ambas clases de proteínas MHC son proteínas de transmembrana con una mayoría de su estructura en la superficie externa de la célula. Adicionalmente, ambas clases de proteínas MHC tienen un péptido que se une a la hendidura en sus porciones externas . Es en esta hendidura que los fragmentos pequeños de las proteínas, endógenos o extraños se unen y presentan al ambiente extracelular . Las células llamadas "células que presentan antígeno profesional" (pAPCs) despliegan antígenos para las células T utilizando las proteínas MHC pero adicionalmente expresan varias moléculas co-estimuladoras que dependen del estado particular de la diferenciación/activación de las pAPCs . Cuando las células T, específicas para la unión del péptido a una proteína MHC reconocible, se unen a estos complejos MHC-péptido en las pAPCs, las moléculas específicas co-estimulatorias que actúan en la célula T dirige la trayectoria de la diferenciación/activación tomada por la célula T. Es decir, las moléculas de co-estimulación afectan cómo la célula T actuará en las señales antigénicas en encuentros futuros como procederá para las siguientes etapas de la respuesta inmune. Como se trató arriba, las células neoplásicas son ampliamente ignoradas por el sistema inmune. Ahora se emplea un gran acuerdo de esfuerzos en un intento de utilizar el sistema inmune del huésped para ayudar a combatir la presencia de las células neoplásicas en el huésped. Tal área de investigación involucra la formulación de vacunas anti-cáncer . Vacunas Anti-cáncer Entre las diversas armas disponibles para un oncologista en la batalla contra el cáncer se encuentra el sistema inmune del paciente. Se ha trabajo en varios intentos para provocar que el sistema inmune combata las enfermedades de cáncer o neoplásicas. Desafortunadamente, los resultados hasta la fecha se han frustrado grandemente. Un área de interés particular involucra la generación y el uso de vacunas anti-cáncer. Para generar una vacuna u otra composición inmunogénica, es necesario introducir a un sujeto un antígeno o epítope contra el cual pueda instalarse una respuesta inmune. Aunque las células neoplásicas se derivan y por lo tanto son substancialmente idénticas a las células normales a un nivel genético, se conocen muchas células neoplásicas que presentan antigenos asociados con el tumor (TuAAs) . En teoría, estos antígenos pueden utilizarse por el sistema inmune del sujeto para reconocer estos antígenos y atacar a las células neoplásicas. Sin embargo, en realidad, las células neoplásicas generalmente parecen ser ignoradas por el sistema inmune del huésped. Se han desarrollado un número de diferentes estrategias en un intento de generar vacunas con actividad contra las células neoplásicas . Estas estrategias incluyen el uso de antígenos asociados con el tumor como inmunógenos. Por ejemplo, la Patente de E.U. No. 5,993,828, describe un método para producir una respuesta inmune contra una sub-unidad particular del Antígeno Asociado con el Tumor Urinario mediante la administración a un sujeto de una dosis efectiva de una composición que comprende células de tumor inactivadas que tienen el Antígeno Asociado con el Tumor Urinario en la superficie celular y al menos un antígeno asociado con el tumor seleccionado a partir del grupo que consiste de GM-2, GD-2, Antígeno Fetal y Antígeno Asociado con el Melanoma. De acuerdo con lo anterior, esta patente describe uso, de células completas de tumor inactivadas como el inmunógeno en una vacuna anti-cáncer. Otra estrategia utilizada con las vacunas anti-cáncer involucra la administración de una composición que contiene antígenos de tumor aislados. En un procedimiento, los péptidos antigénicos MAGE-Al se utilizaron como un inmunógeno. (Ver Chaux, P., et al., "Identification of Five MAGE-Al Epitopes Recongnized by Cytolitic T Lymphocytes Obtained by In Vitro Stimulation with Dendritic Cells Transduced with MAGE-Al" ("Identificación de Cinco Epitopes MAGE-Al Reconocidos por los Linfocitos T Citolíticos Obtenidos Mediante la Estimulación In Vitro con Células Dendríticas Transducidas con MAGE-Al") J. Immunol . , 163(5): 2928-2936 (1999) ) . Han existen varias pruebas terapéuticas utilizando péptidos MAGE-Al para vacunación, aunque se limitó la efectividad de los regímenes de vacunación. Los resultados de algunas de estas pruebas se tratan en Vose, J.M. , "Tumor Antigens Recognized by T Limphocytes" ("Antígenos del Tumor Reconocidos por los Linfocitos T") 10a Conferencia de Cáncer Europea, Día 2, Septiembre 14 de 1999. En otro ejemplo de los antígenos asociados con el tumor utilizados como vacunas, Scheinberg, et al., trató 12 pacientes con leucemia mielógena crónica (CML) ya recibiendo interferon (IFN) o hidroxiurea con 5 inyecciones de péptidos bcr-abl asociados con la clase I con un péptido cooperador más los adyuvantes QS-21. Scheinberg, D.A. , et al., "BCR-ABL Breakpoint Derived Oncogene Fusión Peptide Vaccines Genérate Specific Immune Responses in Patients with Chronic Myelogenous Leukemia (CML)" ("Punto de Interrupción de BCR-ABL Derivado de las Vacunas del Peptido de Fusión del Oncogen que Generan Respuestas Inmune Específicas en Pacientes con Leucemia Mielógena Crónica (CML) ") [Sumario 1665], American Society of Clinical Oncology 35ava Reunión Anual, Atlanta (1999) . Las células T hipersensibles tipo proliferativas y de retardo (DTH) indicativas de la actividad T-coperadora se produjeron pero no se observó actividad de la célula T citotóxica, en las muestras de sangre fresca. Ejemplos adicionales de intentos para identificar TuAAs para utilizarse como vacunas se observan en el reciente trabajo de Cebón et al. y Scheibenbogen, et al. Cebón et al., inmunizaron pacientes con melanoma metastásica utilizando el péptido MART-126~35 administrado intradérmicamenté con IL-12 en dosis incrementadas dadas ya sea subcutánea o intravenosamente. De los primeros 15 pacientes, se anotó 1 remisión completa, 1 remisión parcial y una respuesta mixta. Los inmuno ensayos para la generación de la célula T incluyeron DTH, que se observó en pacientes con o sin IL-12. Los ensayos de CTL positivos se observaron en pacientes con la evidencia del beneficio clínico, pero no en pacientes sin la regresión del tumor. Cebón et al., "Phase I Studies of Immunization with Melan-A and IL-12 in HLA A2+ Positive Patientes with Stage III and IV Malignant Melanoma" ("Estudios de la Fase I de la Inmunización con Melean-A e IL-12 en Pacientes Positivos HLA A2+ con Melanoma Maligno Etapa II y IV") [Sumario 1671], American Society of Clinical Oncology 35ava Reunión Anual, Atlanta (1999) . Scheibenbogen et al., inmunizaron 18 pacientes con péptidos de tirosinasa restringidos 4 HLA clase I , 16 con raelanoma metastásica y 2 pacientes auxiliares. Scheibenbogen et al., "Vaccination with Tyrosinase peptides and GM-CSF in Metastatic Melanoma: a Phase II Trial" ("Vacunación con Péptidos de Tirosinasa y GM-CSF en Melanoma Metast sico: una Prueba de Fase II") [Sumario 1680], American Society of Clinical Oncology 35ava Reunión Anual, Atlanta (1999) . Se observó actividad CTL incrementada en 4/15 pacientes, 2 pacientes auxiliares y 2 pacientes con evidencia de regresión del tumor. Como en la prueba por Cebón et al., los pacientes con enfermedad progresiva no mostraron inmunidad incrementada. A pesar de los diversos esfuerzos empleados hasta la fecha para generar vacunas anti-cáncer eficaces, ninguna de tales composiciones se han desarrollado todavía. Vacunas Antivirales Las estrategias de vacunas para la protección contra las enfermedades virales han tenido muchos éxitos. Tal vez el más notable de estos es el progreso que se ha hecho contra la enfermedad de la viruela, que se ha dirigido a su extinción. El éxito de la vacuna de la polio es de una magnitud similar. Las vacunas virales pueden agruparse en tres clasificaciones: vacunas de virus vivos atenuados, tales como la vacuna para la viruela, la vacuna antipoliomelítica de Sabin y vacuna triple vírica; las vacunas de virus completos muertos o inactivados, tales como la vacuna del virus de la poliomietitis de Salk, la vacuna del virus de la hepatitis A y las vacunas del virus de la influenza típica; y sub-unidades de vacunas, tales como la hepatitis B. Debido a su falta de un genoma viral completo, las vacunas de sub-unidades ofrecen un mayor grado de seguridad al de las basadas en virus completos. El paradigma de una vacuna de sub-unidad exitosa es la vacuna de la hepatitis B recombinante en base a la proteína que envuelve a los virus . No obstante del mucho interés académico en impulsar el concepto de sub-unidad reduccionista mas allá de las proteínas sencillas para epítopes individuales, los esfuerzos tienen todavía que rendir más frutos . La investigación de la vacuna viral también se ha concentrado en la inducción de una respuesta del anticuerpo aunque también ocurren respuestas celulares . Sin embargo, muchas de las formulaciones de sub-unidades son particularmente pobres para generar una respuesta de CTL. SUMARIO DE LA INVENCIÓN Los métodos previos de preparar células que presentan antígeno profesional (pAPCs) para desplegar epítopes de célula objetivo, simplemente han dependido de ocasionar que las pAPCs expresen antígenos asociados al objetivo (TAAs) o epítopes de esos antigenos que se considera tienen una alta afinidad para las moléculas MHC I. Sin embargo, el procesamiento proteasomal de tales antígenos da como resultado la presentación de epítopes en las pAPC que no corresponden a los epitopes presentes en las células obj etivo . Utilizando el conocimiento de que una respuesta inmune celular efectiva requiere que las pAPCs presenten el mismo epítope que se presenta por las células objetivo, la presente invención proporciona epítopes que tienen una alta afinidad para MHC I y que corresponden a la especificidad del procesamiento del proteasoma de mantenimiento (housekeeping proteasome) , que es activo en células periféricas. De este modo, éstos epítopes corresponden a aquellos presentados en las células objetivo. El uso de tales epítopes en vacunas puede activar la respuesta inmune celular para reconocer la TAA correctamente procesada y puede dar como resultado el retiro de las células objetivo que presentan tales epítopes. En algunas modalidades, los epítopes de mantenimiento proporcionados en la presente pueden utilizarse en combinación con epítopes inmunes, generado una respuesta inmune celular que es competente para atacar las células objetivo tanto antes como después de la inducción del interferón. En otras modalidades, los epítopes son útiles en el diagnóstico y monitoreo de las enfermedades asociadas al objetivo y en la generación de reactivos inmunológicos para tales propósitos. Las modalidades de la invención se refieren a epítopes aislados y antígenos o polipéptidos que comprenden los epítopes. Las modalidades preferidas incluyen un epitope o antígeno que tiene la secuencia como se describe en la Tabla 1. Otras modalidades pueden incluir un grupo de epítopes que comprende un polipéptido de la Tabla 1. Además, las modalidades incluyen un polipéptido que tiene similitud substancial a los epítopes, polipéptidos, antígenos o grupos ya mencionados . Otras modalidades preferidas incluyen un polipéptido que tiene similitud funcional con cualquiera de los anteriores. Modalidades aún adicionales se refieren a un ácido nucleico que codifica el polipéptido de cualquiera de los epítopes, grupos, antígenos y polipéptidos de la Tabla 1 y mencionados en la presente . Para propósitos del siguiente sumario, las exposiciones de otras modalidades de la invención cuando hacen referencia a ,vel epitope" o "los epítopes" pueden referirse sin limitación a todas las formas anteriores del epitope . El epitope puede ser inmunológicamente activo. Por ejemplo, el polipéptido que comprende el epitope puede ser menor de aproximadamente 30 aminoácidos de longitud, más preferentemente, el polipéptido es de 8 hasta 10 aminoácidos de longitud. La similitud substancial o funcional puede incluir la adición de por ejemplo al menos un aminoácido, y al menos un aminoácido adicional puede estar en una N-terminal del polipéptido. La similitud substancial o funcional puede incluir una substitución de al menos un aminoácido . El epítope, grupo o polipéptido que comprende el mismo puede tener afinidad para la molécula HLA-A2. La afinidad puede determinarse mediante un análisis de unión, mediante un análisis de restricción de reconocimiento del epítope, mediante un algoritmo de predicción y lo similar. El epítope, grupo o polipéptido que comprende el mismo puede tener afinidad para una molécula HLA-B7, HLA-B51 y lo similar . En las modalidades preferidas, el polipéptido puede ser un epítope de mantenimiento. El epítope o polipéptido puede corresponder a un epítope desplegado en una célula tumoral, a un epítope desplegado en una célula neo-vascular y lo similar. El epítope o polipéptido puede ser un epítope inmune. El epítope, grupo y/o polipéptido puede ser un ácido nucleico . Otras modalidades se refieren a composiciones farmacéuticas que comprenden los polipéptidos que incluyen un epítope de la Tabla 1, un grupo o un polipéptido que comprende el mismo y un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. El adyuvante puede ser un polinucleótido . El polinucleótido puede incluir un dinucleótido, que puede ser por ejemplo, CpG. El adyuvante puede codificarse mediante un polinucleótido. El adyuvante puede ser una citocina y la citocina puede ser por ejemplo, GM-CSF. Las composiciones farmacéuticas pueden incluir además una célula que presenta antigeno profesional (pAPC) . La pAPC puede ser por ejemplo, una célula dendrítica. La composición farmacéutica puede incluir además un segundo epítope. El segundo epítope puede ser un polipéptido, un ácido nucleico, un epítope de mantenimiento, un epítope inmune y lo similar. Modalidades aún adicionales se refieren a composiciones farmacéuticas que incluyen cualquiera de los ácidos nucleicos tratados en la presente, incluyendo aquellos que codifican los polipeptidos que comprenden epítopes o antígenos de la Tabla 1. Tales composiciones pueden incluir un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. Otras modalidades se refieren a construcciones recombinantes que incluyen tal ácido nucleico como se describe en la presente, incluyendo aquellos que codifican polipeptidos que comprenden epítopes o antígenos de la Tabla 1. Las construcciones pueden incluir además un plásmido, un vector viral, un cromosoma artificial y lo similar. La construcción puede incluir además una secuencia que codifica al menos una característica, tal como por ejemplo, un segundo epítope, un IRES, un ISS, un NIS, una ubiquitina y lo similar. Modalidades adicionales se refieren a anticuerpos purificados que se unen específicamente a al menos uno de los epítopes de la Tabla 1. Otras modalidades se refieren a anticuerpos purificados que se unen específicamente a un complejo de proteína péptido-MHC que comprende un epítope descrito en la Tabla 1 o cualquier otro epítope adecuado. El anticuerpo de cualquier modalidad puede ser un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal. Aún otras modalidades se refieren a complejos MHC-péptido multiméricos que incluyen un epítope, tal como por ejemplo, un epítope descrito en la Tabla 1. También se contemplan los anticuerpos específicos para los complejos. Las modalidades se refieren a células T aisladas que expresan un receptor de célula T específico para un complejo MHC-péptido. El complejo puede incluir un epítope, tal como por ejemplo, un epítope descrito en la Tabla 1. La célula T puede producirse mediante una inmunización in vitro y puede aislarse a partir de un animal inmunizado. Las modalidades se refieren a clones de célula T, incluyendo células T clonadas, tales como aquellas descritas arriba.

Las modalidades también se refieren a poblaciones policlonales de células T. Tales poblaciones pueden incluir por ejemplo, una célula T como se describió anteriormente. Aún modalidades adicionales se refieren a composiciones farmacéuticas que incluyen una célula T, tal como por ejemplo aquella descrita arriba y un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. Las modalidades de la invención se refieren a moléculas de proteínas aisladas que comprenden el dominio de unión de un receptor de la célula T especifico para un complejo MHC-péptido . El complejo puede incluir un epítope como se describe en la Tabla 1. La proteína puede ser multivalente . Otras modalidades se refieren a ácidos nucleicos aislados que codifican tales proteínas. Aún modalidades adicionales se refieren a construcciones recombinantes que incluyen tales ácidos nucleicos . Otras modalidades de la invención se refieren a células huésped que expresan una construcción recombinante como se describe en la presente, incluyendo construcciones que codifican por ejemplo, un epítope, grupo o polipéptido que comprende al mismo, descrito en la Tabla 1. La célula huésped puede ser una célula dendrí ica, macrófago, célula tumoral, célula derivada del tumor, una bacteria, hongo, protozoario y lo similar. Las modalidades también se refieren a composiciones farmacéuticas que incluyen una célula huésped, tal como aquella descrita en la presente y un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. Aún otras modalidades se refieren a vacunas o composiciones inmunoterapéuticas que incluyen al menos un componente, tal como por ejemplo, un epitope descrito en la Tabla 1 o de otro modo, descrito en la presente; un grupo que incluye tal epitope, antígeno o polipéptido que incluye tal epitope; una composición como se describió arriba y en la presente; una construcción como se describió arriba y en la presente, una célula T o una célula huésped como se describió arriba y en la presente . Modalidades adicionales se refieren a métodos para tratar un animal. Los métodos pueden incluir administrar a un animal una composición farmacéutica, tal como una vacuna o composición inmunoterapéutica, incluyendo aquella descrita arriba y en la presente . La etapa de administración puede incluir un modo de suministro, tal como por ejemplo, transdérmico, intranodal, perinodal, oral, intravenoso, intradérmico, intramuscular, intraperitoneal , mucosal, inhalación por aerosol, instilación y lo similar. El método puede incluir además una etapa de análisis para determinar una característica indicativa de un estado de una célula objetivo o células objetivo. El método puede incluir una primera etapa de análisis y una segunda etapa de análisis, en donde la primera etapa de análisis precede la etapa de administración y en donde la segunda etapa de análisis sigue a la etapa de administración. El método puede incluir además una etapa de comparar la característica determinada en la primer etapa de análisis con la característica determinada en la segunda etapa de análisis para obtener un resultado. El resultado puede ser por ejemplo, la evidencia de una respuesta inmune, una disminución en el número de células objetivo, una pérdida de masa o tamaño de un tumor que comprende células objetivo, una disminución en el número o concentración de un parásito intracelular que infecta a las células objetivo y lo similar. Las modalidades se refieren a métodos para evaluar la inmunogenicidad de una vacuna o composición inmunoterapéutica. Los métodos pueden incluir administrar a un animal una vacuna o inmunoterapéutico, tal como los descritos arriba y en otra parte en la presente y evaluar la inmunogenicidad en base a una característica del animal. El animal puede ser HLA-transgénico . Otras modalidades se refieren a métodos para evaluar la inmunogenicidad que incluye la estimulación in vi tro de una célula T con la vacuna o composición inmunoterapéutica, tal como aquella descrita arriba y en otra parte en la presente y evaluar la inmunogenicidad en base a una característica de la célula T. La estimulación puede ser una estimulación primaria. Aún modalidades adicionales se refieren a métodos para elaborar un inmunoterapéutico pasi o/adopti o . Los métodos pueden incluir combinar una célula T o una célula huésped, tal como aquella descrita arriba o en otra parte en la presente, con un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. Otras modalidades se refieren a métodos para determinar la frecuencia de la célula T específica y puede incluir la etapa de poner en contacto las células T con un complejo MHC-péptido- que comprende un epítope descrito en la Tabla 1 o un complejo que comprende un grupo o un antígeno que comprende tal epítope . La etapa de poner en contacto puede incluir al menos una característica, tal como por ejemplo, inmunización, re-estimulación, detección, enumeración y lo similar. El método puede incluir además el análisis ELISPOT, limitando el análisis de dilución, la citometría de flujo, la hibridización in situ, la reacción en cadena de la polimerasa, cualquier combinación de los mismos y lo similar. Las modalidades se refieren a métodos para evaluar la respuesta inmunológica . Los métodos pueden incluir los métodos anteriormente descritos para determinar la frecuencia de la célula T específica llevada a cabo antes y subsecuente a una etapa de inmunización. Otras modalidades se refieren a los métodos de evaluar la respuesta inmunológica . Los métodos pueden incluir determinar la frecuencia, producción de citocina o actividad citolitica de las células T antes y subsecuente a una etapa de estimulación con los complejos MHC-péptido que comprenden un epítope, tal como por ejemplo un epítope de la Tabla 1, un grupo o un polipéptido que comprende tal epitope. Modalidades adicionales se refieren a métodos para diagnosticar una enfermedad. Los métodos pueden incluir poner en contacto un tejido objetivo con al menos un componente que incluye por ejemplo, una célula T, una célula huésped, un anticuerpo, una proteína, que incluyen aquellos descritos arriba y en otra parte en la presente; y diagnosticar la enfermedad en base a una característica del tejido o del componente. La etapa de poner en contacto puede tener lugar por ejemplo in vivo o in vi tro. Aún otras modalidades se refieren a métodos para elaborar una vacuna. Los métodos pueden incluir combinar al menos un componente, un epítope, una composición, una construcción, una célula T, una célula huésped; incluyendo cualquiera de aquellos descritos arriba y en otra parte en la presente con un adyuvante, vehículo, diluyente, excipiente y lo similar farmacéuticamente aceptable. Las modalidades se refieren a un medio legible por computadora que tiene registrado en el mismo la secuencia de cualquiera de las SEQ ID NOS: 1-602, en una máquina que tiene un hardware o software que calcula las propiedades genéticas físicas, bioquímicas, inmunológicas , moleculares de una molécula que incorporan dicha secuencia y lo similar. Aún otras modalidades se refieren a métodos para tratar un animal . Los métodos pueden incluir combinar el método de tratar un animal que incluye administrar al animal una vacuna o composición inmunoterapéutica, tal como se describió arriba o en otra parte de la presente, combinada con al menos un modo de tratamiento, incluyendo por ejemplo, terapia por radiación, quimoterapia, bioquimoterapia, cirugía y lo similar. Modalidades adicionales se refieren a polipéptidos aislados que incluyen un grupo de epítopes . En las modalidades preferidas el grupo puede ser desde un antígeno asociado al objetivo que tiene la secuencia como se describe en cualquiera de las Tablas 25-44, en donde la secuencia de aminoácidos incluye no más de aproximadamente 80% de la secuencia de aminoácidos del antígeno. Otras modalidades se refieren a vacunas o productos inmunoterapéuticos que incluyen un péptido aislado como se describe arriba y en otra parte de la presente. Aún otras modalidades se refieren a polinucleótidos aislados que codifican un polipéptido como se describe arriba -y en otra parte en la presente. Otras modalidades se refieren a vacunas o productos inmunoterapéuticos que incluyen estos polinucleótidos . El polinucleótido puede ser ADN, AR y lo similar . Aún modalidades adicionales se refieren a equipos que comprenden un dispositivo de suministro y cualquiera de las modalidades mencionadas arriba y en otra parte en la presente. El dispositivo de suministro puede ser un catéter, una jeringa, una bomba interna o externa, un depósito, un inhalador, un microinyector, un parche y cualquier otro dispositivo similar adecuado para cualquier ruta de suministro. Como se mencionó, el equipo, además del dispositivo de suministro, también incluye cualquiera de las modalidades descritas en la presente. Por ejemplo, sin limitaciones, el equipo puede incluir un epitope aislado, un polipéptido, un grupo, un ácido nucleico, un antígeno, una composición farmacéutica que incluye cualquiera de lo anterior, un anticuerpo, una célula T, un receptor de célula T, un complejo epítope-MHC, una vacuna, un inmunoterapéutico y lo similar. El equipo puede también incluir elementos tales como las instrucciones detalladas para uso y cualquier otro elemento similar. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un alineamiento de secuencia de NY-ESO-1 y varias secuencias de proteina similares.

La Figura 2 representa gráficamente la estructura de la vacuna de plásmido útil para suministrar epítopes codificados con el ácido nucleico. Las Figuras 3A y 3B son perfiles FACS que muestran los resultados de los análisis de unión de HLA-A2 para la tirosinasa207-2i5 Y a tirosinasa2os-2is · La Figura 3C muestra la actividad citolítica contra un epítope de tirosinasa mediante CTL humano inducido por inmunización in vitro. La Figura 4 es un espectro de masa de punto de tiempo de T=120 minutos de los fragmentos producidos por el desdoblamiento proteasomal de SSX-231_68. La Figura 5 muestra una curva de unión para HLA-A2 : SSX-241-49 con controles. La Figura 6 muestra la lisis específica de los objetivos pulsados SS -24i_43 mediante CTL de ratones transgénicos HLA-A2 inmunizados con SSX-21.49. La Figura 7A, B y C muestran los resultados de la secuenciación del grupo N-terminal de una alícuota de punto de tiempo de T=60 min. de la digestión proteasomal PSMAi63_132. La Figura 8 muestra las curvas de unión para HLA-A2 : PSMA1S8-i77 y HLA-A2 : PSMA288-297 con los controles. La Figura 9 muestra los resultados de la secuenciación de grupo N-terminal de una alícuota de punto de tiempo de T=60 min. de la digestión proteasomal PSMA2si-3io - La Figura 10 muestra las curvas de unión para HLA-A2 :PSMA4S1_469, HLA-A2 : PSMA46o-469 , Y HLA-A2 : PSMA663-67i, con los controles . La Figura 11 muestra los resultados de un análisis ELISPOT en base a ?-IFN que detecta las células T HLA-A1+CD8 reactivas con PSMA463-471. La Figura 12 muestra el bloqueo de la reactividad de las células T utilizada en la Figura 10 mediante anti-HLA-Al mAb que demuestran el reconocimiento restringido por HLA-Al . La Figura 13 muestra una curva de unión para HLA-A2 : PSMA663_S7i, con los controles. La Figura 14 muestra una curva de unión para HLA-A2 : PSMAS62-e7i7 con los controles. La Figura 15 es la comparación de las respuestas de GTL al anti-péptido seguidas por la inmunización con varias dosis de ADM por diferentes rutas de inyección. La Figura 16 es el crecimiento del tumor que expresa el gp33 transplantado en el ratón inmunizado por inyección i.ln. de la expresión del epítope gp33 o del plásmido de control . La Figura 17 es la cantidad de ADN de plásmido detectada mediante PCR de tiempo real en ganglios linfáticos inyectados o drenados en diferentes tiempos después de la inyección i.ln., de i.m., respectivamente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Definiciones A menos que sea claro de otro modo a partir del contexto del uso de un término en la presente, los siguientes términos listados generalmente tendrán los significados indicados para los propósitos de esta descripción. CÉLULA QUE PRESENTA ANTÍGENO PROFESIONAL (pAPC) -una célula que posee moléculas co-estimulatorias de la célula T y es capaz de inducir una respuesta de la célula T. Las pAPCs bien caracterizadas incluyen células dendriticas, células B y macrófagos . CÉLULA PERIFÉRICA - una célula que no es una pAPC. PROTEASOMA DE MANTENIMIENTO - un proteasoma normalmente activo en células periféricas y generalmente no presente o no se activa fuertemente en las pAPCs . PROTEASOMA INMUNE - un proteasoma normalmente activo en las pAPCs; el proteasoma inmune también es activo en algunas células periféricas en tejidos infectados. EPÍTOPE - una molécula o sustancia capaz de estimular una respuesta inmune. En las modalidades preferidas, los epítopes de acuerdo con esta definición incluyen pero no necesariamente se limitan a un polipéptido y un ácido nucleico que codifica a un polipéptido, en donde el polipéptido es capaz de estimular una respuesta inmune. En otras modalidades preferidas, los epitopes de acuerdo con esta definición incluyen pero no necesariamente se limitan a péptidos presentes en las superficies de las células, no estando los péptidos unidos covalentemente a la hendidura de unión de la MHC clase I, de manera que pueden interactuar con los receptores de la célula T. EPÍTOPE MHC - un polipéptido que tiene una afinidad de unión conocida o predicha para una molécula del complejo principal de histocompatibilidad de MHC clase I o clase II. de mamífero. EPÍTOPE DE MANTENIMIENTO - En una modalidad preferida, un epxtope de mantenimiento se define como un fragmento de polipéptido que es un epitope MHC y que se despliega en una célula en la cual los proteasomas de mantenimiento son predominantemente activos. En otra modalidad preferida, un epitope de mantenimiento se define como un polipéptido que contiene un epxtope de mantenimiento de acuerdo con la definición anterior, que se flanquea por uno de varios aminoácidos adicionales. En otra modalidad preferida, un epxtope de mantenimiento se define como un ácido nucleico que codifica un epxtope de mantenimiento de acuerdo con las definiciones anteriores. EPÍTOPE INMUNE - En una modalidad preferida, un ep tope inmune se define como un fragmento de polipéptido que es un epxtope MHC y que se despliega en una célula en la cual los proteasomas inmunes son predominantemente activos . En otra modalidad preferida, un epítope inmune se define como un polipeptido que contiene un epítope inmune de acuerdo con la definición anterior, que se flanquea mediante uno de varios aminoácidos adicionales. En otra modalidad preferida, un epítope inmune se define como un polipeptido que incluye una secuencia del grupo de epítopes, que tiene al menos dos secuencias de polipéptidos que tienen una afinidad conocida o predicha para una MHC clase I . En aún otra modalidad preferida, un epítope inmune se define como un ácido nucleico que codifica un epítope inmune de acuerdo con cualquiera de las definiciones anteriores. CÉLULA OBJETIVO - es una célula objetivo para las vacunas y métodos de la invención. Ejemplos de células objetivo de acuerdo con esta definición incluyen pero no se limitan necesariamente a: una célula neoplásica y una celular que alberga un parásito intracelular, tal como por ejemplo, un virus, una bacteria o un protozoario. A TÍGENO ASOCIADO AL OBJETIVO (TAA) - en una proteína o polipéptido presente en una célula objetivo. ANTÍGENOS ASOCIADOS AL TUMOR (TuAA) -el TAA en donde la célula objetivo es una célula neoplásica. EPÍTOPE HLA - es un polipéptido que tiene una afinidad de unión conocida o predicha para una de la molécula compleja HLA de clase I o clase II humana. ANTICUERPO - es una inmunoglobulina (Ig) natural, poli o monoclonal o cualquier molécula compuesta en su totalidad o en parte de un dominio de unión Ig, ya sea derivado bioquímicamente o mediante el uso de ADN recombinante . Los ejemplos incluyen inter alia, F(ab), Fv de cadena sencilla y fusiones de proteína cubierta de fago de la región variable de Ig. CODIFICACIÓN - un término de extremo abierto de tal manera que el ácido nucleico que codifica una secuencia de aminoácidos particular puede consistir de codones que especifican ese (poli) éptido, pero también pueden comprender secuencias adicionales ya sea traducibles o para el control de la transcripción, traducción o duplicación o para facilitar la manipulación de algunas construcciones de ácido nucleico huésped. SIMILITUD SUBSTANCIAL - este término se utiliza para referirse a secuencias que difieren de una secuencia de referencia en una forma inconsecuencia! como se juzgó mediante el examen de la secuencia. Las secuencias de ácido nucleico que codifican la misma secuencia de aminoácidos son substancialmente similares no obstante las diferencias en las posiciones degeneradas o las modestas diferencias en longitud o composición de cualquiera de las regiones no codificadas. Las secuencias de aminoácidos difieren solamente por la substitución conservadora o las variaciones menores de longitud que son substancialmente similares. Adicionalmente , las secuencias de aminoácidos que comprenden epitopes de mantenimiento que difieren en el número de residuos que flanquean la N-terminal o los epitopes inmunes y los grupos de epitopes que difieren en el número de residuos que flanquean en ya sea la terminal , son substancialmente similares. Los ácidos nucleicos que codifican secuencias de aminoácidos substancialmente similares también son en si mismas substancialmente similares. SIMILITUD FUNCIONAL - este término se utiliza para referirse a secuencias que difieren de una secuencia de referencia en una forma inconsecuencia! como se juzgó por el examen de una propiedad biológica o bioquímica, aunque las secuencias pueden no ser substancialmente similares . Por ejemplo, dos ácidos nucleicos pueden ser útiles como sondas de hibridación para la misma secuencia pero codifican diferentes secuencias de aminoácidos. Dos péptidos que inducen respuestas CTL de reacción cruzada son funcionalmente similares aún si difieren por substituciones de aminoácidos no conservadoras (y así no cumplen la definición de similitud substancial) . Los pares de anticuerpos o TCRs, que reconocen el mismo epítope pueden ser funcionalmente similares entre si, a pesar que existan cualquier diferencia estructural. Al probar la similitud funcional de la inmunogenicidad, generalmente se inmuniza con el antígeno "alterado" y se prueba, la capacidad de la respuesta producida (Ab CTL, , producción de citosina, etc.) para reconocer el antígeno objetivo. De acuerdo con lo anterior, pueden diseñarse dos secuencias para diferir en ciertos aspectos mientras retienen la misma función. Tales variantes de secuencia diseñadas se encuentran entre las modalidades de la presente invención.

Tabla 1A. SEQ ID NOS.* incluyen epítopes en los Ejemplos 1-7, 13 SEQ ID NO IDENTIDAD SECUENCIA 1 Tyr207-216 FLPWRLFLL 2 Proteína tirosinasa Número de acceso **: P14679 3 Proteína SSX-2 Número de acceso : NP_003138 4 Proteína PSMA Número de acceso : NP_004467 5 ADNc tirosinasa Número de acceso : NM_000372 6 ADNc SSX-2 Número de acceso : NM_003147 7 ADNc PSMA Número de acceso : NM_004476 8 Tyr 207-215 FLPWHRLFL 9 Tyr 208-216 LPWHRLFLL 10 YFSKEEWEK KASE IFYVYMKRKYEAMTKLG SSX-2 31-68 FKATLP 11 SSX-2 32-40 FSKEEWEKM 12 SSX-2 39-47 KMKASEKIF 13 SSX-2 40-48 MKASEKIFY 14 SSX-2 39-48 KMKASEKIFY 15 SSX-2 41-49 KASEKIFYV 16 SSX-2 40-49 M ASEKIFYV 17 SSX-2 41-50 KASEKIFYVY 18 SSX-2 42-49 ASEKIFYVY 19 SSX-2 53-61 RKYEAMTKL 20 SSX-2 52-61 KRKYEAMTKL 21 SSX-2 54-63 KYEAMTKLGF SSX-2 55-63 YEAMTKLGF SSX-2 56-63 EA TKLGF HBV18-27 FLPSDYFPSV Enlazador HLA-B44 AEMGKYSFY SSX-1 41-49 KYSEKISYV SSX-3 41-49 KVSEKIVYV SSX-4 41-49 KSSEKIVYV SSX-5 41-49 KASEKIIYV PSMA 163-192 AFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERD PSMA 168-190 GMPEGDLVYVNYARTEDFFKLER PSMA 169-177 MPEGDLVYV PSMA 168-177 GMPEGDLVYV PSMA 168-176 GMPEGDLVY PSMA 167-176 QGMPEGDLVY PSMA 169-176 MPEGDLVY PSMA 171-179 EGDLVYVNY PSMA 170-179 PEGDLVYVNY PSMA 174-183 LVYVNYARTE PSMA 177-185 VNYARTEDF PSMA 176-185 YVNYARTEDF PSMA 178-186 NYARTEDFF PS A 179-186 YARTEDFF PSMA 181-189 RTEDFF LE PSMA 281-310 RGIAEAVGLPSI VHPIGYYDAQKLLE MG PSMA 283-307 IAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLE PS A 289-297 LPSIPVHPI PSMA 288-297 GLPSIPVHPI PSMA 297-305 IGYYDAQKL PSMA 296-305 PIGYYDAQKL PS A 291-299 SIPVHPIGY PS A 290-299 PSIPVHPIGY PSMA 292-299 IPVHPIGY 54 PSMA 299-307 YYDAQKLLE 55 PSMA 454-481 SSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHLTKEL 56 PSMA 456-464 IEGNYTLRV 57 PSMA 455-464 SIEGNYTLRV 58 PSMA 457-464 EGNYTLRV 59 PSMA 461-469 TLRVDCTPL 60 PSMA 460-469 YTLRVDCTPL 61 PSMA 462-470 LRVDCTPLM 62 PSMA 463-471 RVDCTPLMY 63 PSMA 462-471 LRVDCTPLMY 64 PSMA 653-687 FDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDR PFY 65 PSMA 660-681 VLRMMNDQLMFLERAFIDPLGL 66 PSMA 663-671 MMNDQLMFL 67 PSMA 662-671 RMMNDQLMFL 68 PSMA 662-670 RMMNDQLMF 69 Tyr 1-17 MLLAVLYCLL SFQTSA Tabla IB. SEQ ID NOS.* incluyen peptidos en los Ejemplos 14 y 15 SEQ IN NO. IDENTIDAD SECUENCIA 70 Proteína 2 GP100 **Número de acceso: P409-67 71 Proteína MAGE-1 Número de acceso: P43355 72 Proteína MAGE-2 Número de acceso: P43356 73 Proteína MAGE-3 Número de acceso: P43357 74 Proteína NY-ESO-1 Número de acceso: P78358 75 Proteína LAGE-la Número de acceso: CAA11116 76 Proteína LAGE-lb Número de acceso: CAA11117 77 Proteína PRAME Número de acceso: NP 006106 78 Protelna PSA Número de acceso: P07288 79 Proteína PSCA Número de acceso: 043653 80 cds GP100 Número de acceso: U20093 81 cds MAGE-1 Número de acceso: M77481 82 cds MAGE-2 Número de acceso: L18920 83 cds MAGE-3 Número de acceso: U03735 84 ADNc NY-ESO-1 Número de acceso: U87459 85 ADNc PRAE Número de acceso: NM_006115 85 ADNc PSA Número de acceso: NM_0016 8 87 ADNc PSCA Número de acceso: AF043498 88 G 100 630-638 LPHSSSHWL 89 G 100 639-638 QLPHSSSHWL 90 GP100 614-622 LIYRRRLMK 91 GP100 613-622 SLIYRRRLMK 92 GP100 615-622 IYRRRLMK 93 P100 630-638 LPHSSSHWL 94 GP100 629-638 QLPHSSSHWL 95 MAGE-1 95-102 ESLFRAVI 96 MAGE-1 93-102 ILESLFRAVI 97 MAGE-1 93-101 1LESLFRAV 98 MAGE-1 92-101 CILESLFRAV 99 MAGE-1 92-100 CILESLFRA 100 MAGE-1 263-271 EFLWGPRAL 101 MAGE-1 264-271 FLWGPRAL 102 MAGE-1 264-273 FLWGPRALAE 103 AGE-1 265-274 LWGPRALAET 104 MAGE-1 268-276 PRALAETSY 105 MAGE-1 267-276 GPRALAETSY 106 MAGE-1 269-277 RALAETSYV 107 MAGE-1 271-279 LAETSYVKV 108 MAGE-1 270-279 ALAETSYVKV 109 MAGE-1 272-280 AETSYVKVL 110 MAGE-1 271-280 LAETSYVKVL 111 MAGE-1 274-282 TSYVKVLEY 112 MAGE-l 273-282 ETSYVKVLEY 113 MAGE-1 278-286 KVLEYVIKV 114 MAGE-1 168-177 SYVLVTCLGL 115 MAGE-1 169-177 YVLVTCLGL 116 MAGE-1 170-177 VLVTCLGL 117 MAGE-1 240-248 TQDLVQEKY 118 MAGE-1 239-248 LTQDLVQE Y 119 MAGE-1 232-240 YGEPRKLLT 120 MAGE-1 243-251 LVQEKYLEY 121 MAGE-1 242-251 DLVQEKYLEY 122 MAGE-l 230-238 SAYGEPRKL 123 MAGE-l ' 278-286 KVLEYVIKV 124 AGE-1 277-286 VKVLEYVIKV 125 MAGE-1 276-284 YVKVLEYVI 126 MAGE-l 274-282 TSYVKVLEY 127 MAGE-1 273-282 ETSYVKVLEY 128 MAGE-1 283-291 VIKVSARVR 129 MAGE-1 282-291 YVIKVSARVR 130 MAGE-2 115-122 ELVHFLLL 131 MAGE-2 113-122 MVELVHFLLL 132 MAGE-2 109-116 ISR MVEL 133 MAGE-2 108-116 AISRK VEL 134 MAGE-2 107-116 AAISRKMVEL 135 MAGE-2 112-120 KMVELVHFL 136 MAGE-2 109-117 ISRKMVELV 137 MAGE-2 108-117 AISRKMVELV 138 MAGE-2 116-124 LVHFLLLY 139 MAGE-2 115-124 ELVHFLLLKY 140 MAGE-2 111-119 RKMVELVHF 141 MAGE-2 158-166 LQLVFGIEV 1.42 MAGE-2 157-166 YLQLVFGIEV 143 MAGE-2 159-167 QLVFGIEW 144 MAGE-2 158-167 LQLVFGIEW 145 MAGE-2 164-172 IEWEWPI 146 MAGE-2 163-172 GIEWEWPI 147 MAGE-2 162-170 FGIEWEW 148 MAGE-2 154-162 ASEYLQLVF 149 MAGE-2 153-162 KASEYLQLVF 150 MAGE-2 218-225 EEKIWEEL 151 MAGE-2 216-225 APEEKIWEEL 152 AGE-2 216-223 APEEKIWE 153 MAGE-2 220-228 KI EELSML 154 MAGE-2 219-228 EKI EELSML 155 MAGE-2 271-278 FLWGP AL 156 MAGE-2 271-279 FL GPRALI 157 MAGE-2 278-286 LIETSYVKV 158 MAGE-2 277-286 ALIETSYVKV 159 AGE-2 276-284 RALIETSYV 160 MAGE-2 279-287 IETSYV VL 161 MAGE-2 278-287 LIETSYVKVL 162 MAGE-3 271-278 FLWGPRAL 163 AGE-3 270-278 EFLWGPRAL 164 MAGE-3 271-279 FLWGPRALV 165 MAGE-3 276-284 RALVETSYV 166 MAGE-3 272-280 LWGPRALVE 167 MAGE-3 271-280 FLWGPRALVE 168 MAGE-3 272-281 LWGPRALVET 169 Y-ESO-1 82-90 GPESRLLEF 170 NY-ESO-1 83-91 PESRLLEFY 171 .NY-ESO-1 82-91 GPESRLLEFY 172 NY-ESO-1 84-92 ESRLLEFYL 173 NY-ESO-1 86-94 RLLEFYLAM 174 NY-ESO-1 88-96 LEFYLAMPF 175 NY-ESO-1 87-96 LLEFYLAMPF 176 Y-ESO-l 93-102 AMPFATPMEA 177 NY-ESO-1 94-102 MPFATPMEA 178 NY-ESO-1 115-123 PLPVPGVLL 179 NY-ESO-1 114-123 PPLPVPGVLL 180 NY-ESO-1 116-123 LPVPGVLL 181 Y-ESO-1 103-112 ELARRSLAQD 182 NY-ESO-1 118-126 VPGVLLKEF 183 NY-ESO-1 117-126 PVPGVLLKEF 184 NY-ESO-1 116-123 LPVPGVLL 185 NY-ESO-1 127-135 TVSGNILTI 186 NY-ESO-1 126-135 FTVSGNILTI 187 NY-ESO-1 120-128 GVLLKEFTV 188 Y-ESO-1 121-130 VLLKEFTVSG 189 NY-ESO-1 122-130 LLKEFTVSG 190 NY-ESO-1 118-126 VPGVLLKEF 191 NY-ESO-1 117-126 PVPGVLLKEF 192 NY-ESO-1 139-147 AADHRQLQL 193 NY-ESO-1 148-156 SISSCLQQL 194 NY-ESO-1 147-156 LSISSCLQQL 195 NY-ESO- 1 138-147 TAADHRQLQL 196 NY-ESO-1 161-169 WITQCFLPV 197 NY-ESO-1 157-165 SLLMWITQC 198 NY-ESO-1 150-158 SSCLQQLSL 199 Y-ESO-1 154-162 QQLSLLMWI 200 NY-ESO-1 151-159 SCLQQLSLL 201 NY-ESO-1 150-159 SSCLQQLSLL 202 NY-ESO-1 163-171 TQCFLPVFL 203 NY-ESO-1 162-171 ITQCFLPVFL 204 PRAME 219-227 P QDI MIL 205 PRAME 218-227 MPMQDIKMIL 206 PRAME 428-436 QHLIGLSNL 207 PRAME 427-436 LQHLIGLSNL 208 PRAME 429-436 HLIGLSNL 209 PRA E 431-439 IGLSNLTHV 210 PRAME 430-439 LIGLSNLTHV 211 PSA 53-61 VLVHPQWVL 212 PSA 52-61 GVLVHPQWVL 213 PSA 52-60 GVLVHPQWV 214 PSA 59-67 WVLTAAHCI 215 PSA 54-63 LVHPQWVLTA 216 PSA 53-62 VLVHPQWVLT 217 PSA 54-62 LVHPQWVLT 218 PSA 66-73 CIR KSVI 219 PSA 65-73 HCIRNKSVI 220 PSA 56-64 HPQWVLTAA 221 PSA 63-72 AAHCIRNKSV 222 PSCA 116-123 LLWGPGQL 223 PSCA 115-123 LLL GPGQL 24 PSCA 114-123 GLLLWGPGQL 225 PSCA 99-107 ALQPAAAIL 226 PSCA 98-107 HALQPAAAIL 227 Tyr 128-137 APEKDKFFAY 253 PSMA 506-515 FSGMP ISKL 254 NY-ESO-1 136-163 RLTAADHRQLQLSISSCLQQLSLLMWI 255 NY-ESO-1 150-177 SSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSG 1 Esta H se reportó como Y en la base de datos SWISSPROT. 2 El aminoácido en la posición 274 puede ser Pro o Leu dependiendo de la base de datos. El Análisis particular presentado en la presente utilizó el Pro .

Tabla 1C. SEQ ID NOS.* incluyen epxtopes en el Ejemplo 14.

SEQ IN.NO. IDENTIDAD SECUENCIA 256 Mage-1 125-132 KAEMLESV 257 Mage-1 124-132 TKAEMLESV 258 Mage-1 123-132 VTKAEMLESV 259 Mage-1 128-136 MLESVI NY 260 Mage-1 127-136 EMLESVI MY 261 Mage-1 125-133 KAEMLESVI 262 Mage-1 146-153 KASESLQL 263 Mage-1 145-153 GKASESLQL 264 Mage-1 147-155 ASESLQLVF 265 Mage-1 153-161 LVFGIDVKE 266 Mage-1 114-121 LLKYRARE 267 Mage-1 106-113 VADLVGFL 268 Mage-1 105-113 KVADLVGFL 269 Mage-1 107-115 ADLVGFLLL 270 Mage-1 106-115 VADLVGFLLL 271 Mage-1 114-123 LLKYRAREPV 272 Mage-3 278-286 LVETSYVKV 273 Mage-3 277-286 ALVETSYVKV 274' Mage-3 285-293 KVLHHMVKI 275 Mage-3 283-291 YVKVLHHMV 276 Mage-3 275-283 PRALVETSY 277 Mage-3 274-283 GPRALVETSY 278 Mage-3 278-287 LVETSYVKVL 279 ED-B '-5 TIIPEVPQL 280 ED-B 5 '-5 DTIIPEVPQL 281 ED-B 1-10 EVPQLTDLSF 282 ED—B 23-30 TPLNSSTI 283 ED-B 18-25 IGLRWTPL 284 ED-B 17-25 SIGLRWTPL 285 ED-B 25-33 LNSSTIIGY 286 ED-B 24-33 PLNSSTIIGY 287 ED-B 23-31 TPLNSSTII 288 ED-B 31-38 IGYRITW 289 ED-B 30-38 IIGYRITW 290 ED-B 29-38 TIIGYRITW 291 ED-B 31-39 IGYRITWA 292 ED-B 30-39 IIGYRITWA 293 CEA 184-191 SLPVSPRL 294 CEA 183-191 QSLPVSPRL 295 CEA 186-193 PVSPRLQL 296 CEA 185-193 LPVSPRLQL 297 CEA 184-193 SLPVSPRLQL 298 CEA 185-192 LPVSPRLQ 299 CEA 192-200 QLSNGNRTL 300 CEA 191-200 LQLSNGNRTL 301 CEA 179-187 WVNNQSLPV 302 CEA 186-194 PVSPRLQLS 303 CEA 362-369 SLPVSPRL 304 CEA 361-369 SLPVSPRL 305 CEA 364-371 PVSPRLQL 306 CEA 363-371 LPVSPRLQL 307 CEA 362-371 SLPVSPRLQL 308 CEA 363-370 LPVSPRLQ 309 CEA 370-378 QLSNDNRTL 310 CEA 369-378 LQLSNDNRTL 311 CEA 357-365 WVNNQSLPV 312 CEA 360-368 NQSLPVSPR 313 CEA 540-547 SLPVSPRL 314 CEA 539-547 QSLPVSPRL 315 CEA 542-549 PVSPRLQL 316 CEA 541-549 LPVSPRLQL 317 CEA 540-549 SLPVSPRLQL 318 CEA 541-548 LPVSPRLQ 319 CE, 548-556 QLSNGNRTL 320 CE, 547-556 LQLSNGNRTL 321 CEA 535-543 V GQSLPV 322 CEA 533-541 LWWVNGQSL 323 CEA 532-541 YLWWVNGQSL 324 CEA 538-546 GQSLPVSPR 325 Her-2 30-37 DMKLRLPA 326 Her-2 28-37 GTDMKLRLPA 327 Her-2 42-49 HLDMLRHL 328 Her-2 41-49 THLDMLRHL 329 Her-2 40-49 ETHLDMLRHL 330 Her-2 36-43 PASPETHL 331 Her-2 35-43 LPASPETHL 332 Her-2 34-43 RLPASPETHL 333 Her-2 38-46 SPETHLDML 334 Her-2 37-46 ASPETHLDML 335 Her-2 42-50 HLDMLRHLY 336 Her-2 41-50 THLDMLRHLY 337 Her-2 719-726 ELRKVKVL 338 Her-2 718-726 TELRKVKVL 339 Her-2 717-726 ETELR VKVL 340 Her-2 715-723 LKETELRKV 341 Her-2 714-723 ILKETELRKV 342 Her-2 712-720 MRILKETEL 343 Her-2 711-720 QMRILKETEL 344 Her-2 717-725 ETELRKVKV 345 Her-2 716-725 KETELRKVKV 346 Her-2 706-714 , MPNQAQMRI 347 Her-2 705-714 AMPNQAQ RI 348 Her-2 706-715 MPNQAQMRIL 349 HER-2 966-973 RPRFRELV 350 HER-2 965-973 CRPRFRELV 351 HER 2 968-976 RFRELVSEF 352 HER 2 967-976 PRFRELVSEF 353 HER-2 964-972 ECRPRFREL 354 NY-ESO-1 67-75 GAASGLNGC 355 NY-ESO-1 52-60 RASGPGGGA 356 NY-ESO-l 64-72 PHGGAASGL 357 NY-ESO-1 63-72 GPHGGAASGL 358 NY-ESO-1 60-69 APRGPHGGAA 359 PRAME 112-119 VRPRRWKL 360 PR7AME 111-119 EVRPRRWKL 361 PRA E 113-121 RPRRWKLQV 362 PRA E 114-122 PRRWKLQVL 363 PRAME 113-122 RPRRWKLQVL 364 PRAME 116-124 R KLQVLDL 365 PRAME 115-124 RRWKLQVLDL 366 PRAME 174-182 PVEVLVDLF 367 PRAME 199-206 VKRKKNVL 368 PRAME 198-206 KVKRKKNVL 369 PRAME 197-206 EKVKRKKNVL 370 PRAME 198-205 KVKRKKV 371 PRAME 201-208 RKK VLRL 372 PRAME 200-208 KRKK VLRL 373 PRAME 199-208 VKRKKNVLRL 374 PRAME 189-196 DELFSYLI 375 PRAME 205-213 VLRLCCKKL 376 PRAME204-213 WVLRLCCKKL 377 PRAME 194-202 YLIEKVKR 378 PRAME 74-81 QAWPFTCL 379 PRAME 73-81 VQAWPFTCL 380 PRAME 72-81 MVQAWPFTCL 381 PRAME 81-88 LPLGVLMK 382 PRAME 80-88 CLPLGVLMK 383 PRAME 79-88 TCLPLGVLMK 384 PRAME 84-92 GVLMKGQHL 385 PRAME 81-89 LPLGVLMKG 386 PRAME 80-89 CLPLGVLMKG 387 PRAME 76-85 PFTCLPLGV 388 PRAME 51-59 ELFPPLFMA 389 PRAME 49-57 PRELFPPLF 390 PRAME 48-57 LPRELFPPLF 391 PRAME 50-58 RELFPPLFM 392 PRAME 49-58 PRELFPPLFM 393 PSA 239-246 RPSLYTKV 394 PSA 38-246 ERPSLYTKV 395 PSA 236-243 LPERPSLY 396 PSA 235-243 ALPERPSLY 397 PSA 241-249 SLYT WHY 398 PSA 240-249 PSLYTKWHY 399 PSA239-247 RPSLYTKW 400 PSMA 211-218 GNKVK AQ 401 PS A 202-209 IARYGKVF 402 PSMA 217-225 AQLAGAKGV 403 PSMA 207-215 KVFRGNKVK 404 PSMA 211-219 GNKVKNAQL 405 PSMA 269-277 TPGYPA EY 406 PSMA 268-277 LTPGYPA EY 407 PSMA 271-279 GYPA EYAY 408 PSMA 270-279 PGYPA EYAY 409 PSMA 266-274 DPLTPGYPA 410 PSMA 492-500 SLYESWTKK 411 PSMA 491-500 KSLYESWTKK 412 PSMA 486-494 EGFEGKSLY 413 PSMA 485-494 DEGFEGKSLY 414 PSMA 498-506 TKKSPSPEF 415 PSMA 497-506 WTKKSPSPEF 416 PSMA 492-501 SLYESWTKKS 417 PSMA 725-732 WGEVKRQI 418 PSMA 724-732 AWGEVKRQI 419 PSMA 723-732 KAWGEVKRQI 420 PSMA 723-730 KA GEV R 421 PSMA 722-730 SKAWGEVK 422 PSMA 731-739 QIYVAAFTV 423 PSMA 733-741 YVAAFTVQA 424 PSMA 725-733 WGEVKRQIY 425 PSMA 727-735 EVKRQIYVA 426 PSMA 738-746 TVQAAAETL 427 PSMA 737-746 FTQAAAETL 428 PSMA 729-737 KRQIYVAAF 429 PSMA 721-729 PSKA GEVK 430 PSMA 723-731 KAWGEVKRQ 431 PSMA 100-108 WKEFGLDSV 432 PSMA 99-108 QWKEFGLDSV 433 PSMA 102-111 EFGLDSVELA 434 SCP-1 126-134 ELRQKESKL 435 SCP-1 125-134 AELRQKESKL 436 SCP-1 133-141 KLQENRKII 437 SCP-1 298-305 QLEEKTKL 438 SCP-1 297-305 NQLEEKTKL 439 SCP-1 288-296 LLEESRDKV 440 SCP-1 287-296 FLLEESRDKV 441 SCP-1 291-299 ESRDKVNQL 442 SCP-1 290-299 EESRDKVNQL 443 SCP-1 475-483 EKEVHDLEY 444 SCP-1 474-483 REKEVHDLEY 445 SCP-1 480-488 DLEYSYCHY 446 SCP-1 477-485 EVHDLEYSY 447 SCP-1 477-486 EVHDLEYSYC 448 SCP-1 502-509 KLSSKREL 44S SCP-1 508-515 ELK TEYF 450 SCP-1 507-515 RELKNTEYF 451 SCP-1 496-503 KRGQRPKL 452 SCP-1 494-503 LPKRGQRPKL 453 SCP-1 509-517 LKNTEYFTL 454 SCP-1 508-517 ELKNTEYFTL 455 SCP-1 506-514 KRELKNTEY 456 SCP-1 502-510 LSSKRELK 457 SCP-1 498-506 GQRPKLSSK 458 SCP-1 497-506 RGQRPKLSSK 459 SCP-1 500-508 RPKLSSKRE 460 SCP-1 573-580 LEYVREEL 461 SCP-1 572-580 ELEYVREEL 462 SCP-1 571-580 NELEYVREEL 463 SCP-1 579-587 ELKQKREDEV 464 SCP-1 575-583 YVREELKQK 465 SCP-1 632-640 QLNVYEIKV 466 SCP-1 630-638 SKQLNVYEI 467 SCP-1 628-636 AESKQLNVY 468 SCP-1 627-636 TAESKQLNVY 469 SCP-1 638-645 IKVNKLEL 470 SCP-1 637-645 EIKV KLEL 471 SCP-1 636-645 YEI V KLEL 472 SCP-1 642-650 KLELELESA 473 SCP-1 635-643 VYEIKV KL 474 SCP-1 634-643 VYEIKVNKL 475 SCP-1 646-654 ELESAKQKF 476 SCP- 1 642-650 KLELELESA 477 SCP-1 646-654 ELESAKQKF 478 SCP-1 771-778 KEKLKREA 479 SCP-1 777-785 EAKENTATL 480 SCP-1 776-785 REAKENTATL 481 SCP-1 773-782 KLKREAKENT 482 SCP-1 112-119 EAEKIKKW 483 SCP-1 101-109 GLSRVYSKL 484 SCP-1 100-109 EGLSRVYSKL 485 SCP-1 108-116 KLYKEAEKI 486 SCP-1 98-106 NSEGLSRVY 487 SCP-1 97-106 ENSEGLSRVY 488 SCP-1 102-110 LSRVYSKLY 489 SCP-1 101-110 GLSRVYSKLY 490 SCP-1 96-105 LENSEGLSRV 491 SCP-1 108-117 KLYKEAEKIK 492 SCP-1 949-956 REDRWAVI 493 SCP-1 948-956 MREDRWAVI 494 SCP-1 947-956 KMREDR AVI 495 SCP-1 947-955 KMREDRWAV 496 SCP-1 934-942 TTPGSTLKF 497 SCP-1 933-942 LTTPGSTLKF 498 SCP-1 937-945 GSTLKGAI 499 SCP-1 945-953 IRKMREDRW 500 SCP-1 236-243 RLEMHFKL 501 SCP-1 235-343 SRLE HKL 502 SCP-1 242-250 KLKEDYEKI 503 SCP-1 249-257 KIQHLEQEY 504 SCP-1 248-257 EKIQHLEQEY 505 SCP-1 233-242 ENSRLEMHF 506 SCP-1 236-245 RLEMHFKLKE 507 SCP-1 324-331 LEDIKVSL 508 SCP-1 323-331 ELEDIKVSL 509 SCP-1 322-331 KELEDIKVSL 510 SCP-1 320-327 LTKELED1 511 SCP-1 319-327 HLTKELED1 512 SCP-1 330-338 SLQRSVSTQ 513 SCP-1 321-329 TKELEDIKV 514 SCP-1 320-329 LTKELEDIKV 515 SCP-1 326-335 DIKVSLQRSV 516 SCP-1 281-288 KMKDLTFL 517 SCP-1 280-288 NK KDLTFL 518 SCP-1 279-288 ENKMKDLTFL 519 SCP-1 288-296 LLEESRDKV 520 SCP-1 287-296 FLLEESRDKV 521 SCP-1 291-299 ESRDKVNQL 522 SCP-1 290-299 EESRDKV QL 523 SCP-1 277-285 EKENKMKDL 524 SCP-1 276-285 TEKENKMKDL 525 SCP-1 279-287 ENKMKDLTF 526 SCP-1 218-225 IEK ITAF 527 SCP-1 217-225 NIEKMITAF 528 SCP-1 216-225 SNIEKMITAF 529 SCP-1 223-230 TAFEELRV 530 SCP-1 222-230 ITAFEELRV 531 SCP-1 221-230 MITAFEELRV 532 SCP-1 220-228 KMITAFEEL 533 SCP-1 219-228 EKMITAFEEL 534 SCP-1 227-235 ELRVQAENS 535 SCP-1 213-222 DLNSNIEK I 536 SCP-1 837-844 WTSAKNTL 537 SCP-1 846-854 TPLPKAYTV 538 SCP-1 845-854 STPLPKAYTV 539 SCP-1 844-852 LSTPLPKAY 540 SCP-1 843-852 TLSTPLPKAY 541 SCP-1 842-850 NTLSTPLPK 542 SCP-1 841-850 KNTLSTPLPK 543 SCP-1 828-835 ISKDKRDY 544 SCP-1 826-835 HGISKDKRDY 545 SCP-1 832-840 KRDYLWTSA 546 SCP-1 829-838 SKDKRDYLWT 547 SCP-1 279-286 ENKMKDLT 548 SCP-1 260-268 EINDKEKQV 549 SCP-1 274-282 QITEKENK 550 SCP-1 269-277 SLLLIQITE 551 SCP-1 453-460 FEKIAEEL 552 SCP-1 452-460 QFEKIAEEL 553 SCP-1 451-460 KQFEKIAEEL 554 SCP-1 449-456 DNKQFEKI 555 SCP-1 448-456 YDNKQFEKI 556 SCP-1 447-456 LYDNKQFEKI 557 SCP-1 440-447 LGEKETLL 558 SCP-1 439-447 VLGEKETLL 559 SCP-1 438-447 KVLGEKETLL 560 SCP-1 390-398 LLRTEQQRL 561 SCP-1 389-398 ELLRTEQQRL 562 SCP-1 393-401 TEQQRLENY 563 SCP-1 392-401 RTEQQRLENY 564 SCP-1 402-410 EDQLIILTM 565 SCP-1 397-406 RLENYEDQLI 566 SCP- 1 368-375 KARAAHSF 567 SCP-1 376-384 WTEFETTV 568 SCP-1 375-384 FWTEFETTV 569 SCP-1 377-385 VTEFETTVC 570 SCP-1 376-385 WTEFETTVC 571 SCP-1 344-352 DLQIATNTI 572 SCP-1 347-355 IATNTICQL 573 SCP-1 346-355 QIATNTICQL 574 SSX4 57-65 VMTKLGFKY 575 SSX4 53-61 LNYEVMTKL 576 SSX4 52-61 KLNYEVMTKL 577 SSX4 66-74 TLPPFMRSK 578 SSX4 110-118 KIMP KPAE 579 SSX4 103-112 SLQRIFPKIM 580 Try 463-471 YIKSYLEQA 581 Tyr 459-467 SFQDYIKSY 582 Tyr 458-467 DSFQDYIKSY 583 Tyr 507-514 LPEEKQPL 584 Tyr 506-514 QLPEEKQPL 585 Tyr 505-514 KQLPEEKQPL 586 Tyr 507-515 LPEEKQPLL 587 Tyr 506-515 QLPEEKQPLL 588 Tyr 497-505 SLLCRHKRK 589 ED-B Dominio de EVPQLTDLSFVDITDSSIGLRWTPLNSSTIIGYRITV Fibronectina VAAGEGIPIFEDFVDSSVGYYTVTGLEPGIDYDISVI TLINGGESAPTTLTQQT 590 ED-B Dominio de CTFDNLSPGLEY VSVYTV DDKESVPISDTIIPEVP Fibronectina con QLTDLSFVDITDSSIGLRWTPLNSSTIIGYRI secuencia de TWAAGEGIPIFEDFVDSS GYYTVTGLEPGID * Cualquiera de las SEQ ID NOS. 1, 8, 9, 11-23, 26-29, 32-44, 47-54, 56- 63, 66-68, 88-253 y 256-588 pueden ser útiles como epítopes en cualquiera de las diversas modalidades de la invención. Cualquiera de las SEQ ID NOS. 10, 30, 31, 45, 46, 55, 64, 65, 69, 254 y 255 pueden ser útiles como secuencias que contienen epítopes o grupos de epítopes, como se describe en las diversas modalidades de la invención.

** Todos los números de acceso utilizados en la presente y a través de todo pueden accesarse a través de la base de datos NCBI, por ejemplo, a través del sistema de búsqueda y recuperación Entrez en la world ide web (red mundial) .

Nótese que la siguiente exposición establece la interpretación de los inventores de la operación de la invención. Sin embargo, no se pretende que esta exposición limite la patente a cualquier teoría de operación particular no establecida en las reivindicaciones. De acuerdo al desarrollo de las vacunas de epítope, otros han generado listas de epitopes predichas en base a los motifs que se unen a MHC . Tales péptidos pueden ser inmunogénicos , pero- pueden no corresponder a ningún fragmento antigénico producido de manera natural. Por lo tanto, el antigeno completo no producirá una respuesta similar o sensibilizará una célula objetivo para la citolisis por CTL. Por lo tanto tales listas no diferencian entre aquellas secuencias que pueden ser útiles como vacunas y aquellas que no pueden ser. Los esfuerzos para determinar cuales de esos epitopes predichos se producen de hecho de manera natural, han dependido con frecuencia de la selección de su reactividad con linfocitos que se infiltran en el tumor (TIL) . Sin embargo, los TIL se predisponen fuertemente para reconocer los epitopes inmunes considerando que los tumores presentarán generalmente epitopes de mantenimien o. Así, a menos que el epítope se produzca tanto por los de proteasomas de mantenimiento como los inmuno, la célula objetivo no se reconocerá generalmente por CTL inducida con los epitopes identi icados como TIL. En contraste, los epitopes de la presente invención se generan por la acción de un proteasoma especifico, indicando que pueden producirse de manera natural y que permiten su uso adecuado. La importancia de distinguir entre los epítopes de mantenimiento y los inmunes para el diseño de vacunas se establece más completamente en la publicación del PCT WO 01/82963A2. Los epitopes de la invención incluyen o codifican fragmentos de polipéptido de TAAs que son precursores o productos del desdoblamiento proteasomal mediante un proteasoma de mantenimiento o inmune, y que contiene o consiste de una secuencia que tiene una afinidad conocida o predicha por al menos un alelo de MHC I . En algunas modalidades, el epitope incluye o codifica un polipéptido de aproximadamente 6 a 25 aminoácidos de longitud, preferentemente de aproximadamente 7 a 20 aminoácidos de longitud, más preferentemente de aproximadamente 8 a 15 aminoácidos de longitud, y aún más preferentemente de 9 a 10 aminoácidos de longitud. Sin embargo, se entiende que los polipéptidos pueden ser más grandes tan grandes como la compensación N-terminal puede producir el epitope MFC o que ellos no contengan secuencias que causen que los polipéptidos se dirijan lejos del proteasoma o se destruyan por el proteasoma. Para los epítopes inmunes, si los polipéptidos mayores no contienen tales secuencias, pueden procesarse en el pAPC mediante el proteasoma inmune. Los epítopes de mantenimiento también pueden incluirse en secuencias mayores siempre que la secuencia se adapte para facilitar la liberación de la C-terminal del epitope por la acción del inmunoproteasoma . La explicación anterior ha supuesto que el procesamiento de epítopes más grandes procede a través de la acción del inmunoproteasoma del pAPC. Sin embargo, el procesamiento también puede realizarse a través de la invención de algún otro mecanismo, tal como proporcionar una actividad de proteasa exógena y una secuencia adaptada de manera que la acción de la proteasa libere al epitope MHC. Las secuencias de estos epitopes puede someterse al análisis de computadora a fin de calcular las propiedades genéticas, físicas, bioquímicas, inmunológicas o moleculares tal como la masa, el punto isoeléctrico, la movilidad predicha en la electroforesis , la unión predicha a otras moléculas MHC, la temperatura de fusión de las sondas de ácido nucleico, las translaciones inversas, la similitud u homología a otras secuencias y lo similar. Al construir los polinucleótidos que codifican los epítopes de polipéptido de la invención, puede utilizarse la secuencia genética de la TAA asociada, o puede ensamblarse el polipéptido a partir de cualquiera de los codones correspondientes. Para un epitope de 10 aminoácidos, este puede constituirse en el orden de 106 de secuencias diferentes, dependiendo de la composición del aminoácido particular. Aunque grande, este es un conjunto distinto y fácilmente definible que representa una fracción minúscula de los >108 posibles polipéptidos de esta longitud, y así en algunas modalidades, los equivalentes de una secuencia particular descritos en la presente comprenden tales distintas y fácilmente definibles variaciones de la secuencia listada. Al seleccionar una particular de estas secuencias para utilizarse en una vacuna, pueden utilizarse consideraciones tales como uso del codón, auto-complementar!edad, sitios de restricción, estabilidad química, etc. como será aparente para aquellos de experiencia en la materia. La invención contempla la producción de epítopes de péptidos. Específicamente aquellos epítopes que se derivan de la secuencia de un TAA, y tienen afinidad conocida o predicha para al menos un alelo de MHC I . Tales epítopes son típicamente idénticos a aquellos producidos en las células objetivo o pAPCs . Composiciones que Contienen Epítopes Activos las modalidades de la presente invención proporciona composiciones de polipéptidos, incluyendo composiciones de vacunas, terapéuticas, diagnósticas, farmacológicas y farmacéuticas . Estas diversas composiciones incluyen los epítopes recientemente identificados de TAAs, así como las variantes de estos epítopes. Otras modalidades de la invención proporcionan polinucleótidos que codifican los epitopes de polipéptido de la invención. Esta invención proporciona además los vectores para la expresión de los epitopes de polipéptido para la purificación. Además, la invención proporciona vectores para la expresión de los epitopes de polipéptido en un APC para utilizarse como una vacuna anti-tumoral . Puede utilizarse cualquiera de los epitopes o antígenos o ácidos nucleicos que codifican el mismo, a partir de la Tabla 1. Otras modalidades se refieren a los métodos para elaborar y utilizar diversas composiciones . Puede describirse una arquitectura general para una clase de epítope que se une a MHC clase I, y se ha revisado más extensamente en Madden, D.R. Annu, . Rev. Immunol. 13:587-622, 1995. Mucha de la energía de unión surge de los contactos de la cadena principal entre los residuos conservados en la molécula MHC y las terminales N y C del polipéptido. Los contactos adicionales de la cadena principal se hacen pero varían entre los alelos de MHC . La especificidad de la secuencia se confiere por los contactos de la cadena lateral de los así llamados residuos ancla con cavidades que de nuevo, varían entre los alelos de MHC. Los residuos de ancla pueden dividirse en primarios y secundarios. Las posiciones de ancla primarias exhiben fuertes preferencias para los conjuntos relativamente bien definidos de residuos de aminoácido . Las posiciones secundarias muestran preferencias más débiles y/o menos bien definidas que con frecuencia pueden describirse mejor en términos de residuos menos favorecidos, en lugar de más favorecidas. Adicionalmente , los residuos en algunas posiciones de ancla secundarias no siempre se encuentran colocados en contacto con la cavidad sobre la molécula MHC en todo. Así, existe un subconjunto de péptidos que se une a una molécula MHC particular y que tiene una cavidad de la cadena lateral en contacto en la posición en cuestión y existe otro subconjunto que muestra la unión a la misma molécula MHC que no depende de la conformación que asume el péptido en la ranura de unión al péptido de la molécula MHC. El residuo de la C-terminal (P ; omega) es preferentemente, un residuo primario. Para muchas de las moléculas HLA mejor estudiadas (e.g. ?2 , A68, B27, B7, B35 y B53) la segunda posición (P2) también es un residuo de ancla. Sin embargo, el residuo de ancla central también se ha observado que incluye P3 y P5 en HLA-B8, asi como P5 y P (omega) -3 en las moléculas MHC murinas H-2D y H-2Kb, respectivamente. Ya que la mayoría de las uniones estables mejorarán en general la inmunogenicidad, los residuos ancla se conservan u optimizan preferentemente, en el diseño de variantes, con respecto a su posición. Debido a que los residuos ancla se localizan generalmente cerca de los extremos del epltope, el péptido puede combarse hacia arriba fuera de la ranura que une al péptido permitiendo alguna variación en la longitud. Los epítopes que varían de 8-11 aminoácidos se han encontrado para HLA-A68, y hasta 13 aminoácidos para HLA-A2. Además de la variación de longitud entre las posiciones ancla, se han reportado truncaciones y extensiones de un solo residuo y las terminales N y C, respectivamente. De los residuos no ancla, algunos puntos ascienden fuera de la ranura, no haciendo contacto con la molécula MHC pero estando disponibles para hacer contacto con TCR, con mucha frecuencia Pl, P4 y P (omega)-l para HLA-A2. Otros de los residuos no ancla pueden interponerse entre los bordes más superiores de la ranura que se une al péptido y el TCR, que pone en contacto a ambos. La colocación exacta de estos residuos de cadena lateral, y por lo tanto su efecto sobre la unión, conformación fina de MHC y finalmente la inmunogenicidad, dependen altamente de la secuencia. Para que un epítope sea altamente inmunogénico no solo debe promover la unión TCR suficientemente estable para que ocurra la activación sino el TCR también debe tener una clasificación suficientemente alta que las múltiples moléculas TCR puedan interactuar de manera secuencial con el mismo complejo péptido-MHC (Kalergis, A.M. et al., Nature Immunol, 2:229-234, 2001. Así, sin información adicional acerca del complejo ternario, ambas substituciones conservadoras y no conservadoras en estas posiciones merecen consideración cuando se designan variantes . Pueden hacerse las variantes de epitope de polipéptido, por ejemplo, utilizando cualquiera de las técnicas y guias para las mutaciones conservadoras y no conservadoras . Las variantes pueden derivarse de la sustitución, cancelación o inserción de uno o más aminoácidos según se compara con la secuencia nativa. Las sustituciones de aminoácido pueden se el resultado de reemplazar un aminoácido con otro aminoácido que tiene propiedades estructurales y/o químicas similares, por ejemplo, tal como el reemplazo de una treonina con una serina. Tales reemplazos se refieren como reemplazos de aminoácido conservadores y todos los reemplazo de aminoácido conservadores apropiados se consideran ser modalidades de una invención. Las inserciones o cancelaciones pueden estar opcionalmente en el rango de aproximadamente 1 a 4, preferentemente de 1 a 2 aminoácidos. Se prefiere en general mantener las "posiciones ancla" del péptido las cuales son responsables de la unión a la molécula MHC en cuestión. Ciertamente, la inmunogenicidad de los péptidos puede mejorarse en muchos casos al sustituir los residuos más preferidos en las posiciones ancla (Franco, et al., Nature Immunology, (12) : 145-150, 2000. La inmunogenicidad de un péptido con frecuencia también puede mejorarse al sustituir los aminoácidos más voluminosos por aminoácidos más pequeños encontrados en las posiciones de no ancla mientras se mantiene suficiente reactividad cruzada con el epítope original para constituir una vacuna útil . La variación permitida puede determinarse por inserciones, cancelaciones o sustituciones de rutina de aminoácidos en la secuencia y probar las variantes resultantes para la actividad exhibida por el epítope del polipéptido. Debido a que con frecuencia el epítope del polipéptido es de 9 aminoácidos, las sustituciones se hacen preferentemente para el epítope activo más corto, por ejemplo, un epítope de 9 aminoácidos. Las variantes también pueden elaborarse al agregar cualquier secuencia en la N-terminal de la variante de epítope de polipéptido. Tales adiciones de la N-terminal puede ser de 1 aminoácido hasta al menos 25 aminoácidos. Debido a que los epítopes de péptido con frecuencia se ajustan por las exopeptidasas de la N-terminal activas en el pAPC, se entiende que las variaciones en la secuencia agregada no pueden tener efecto sobre la actividad del epítope. En las modalidades preferidas, los residuos de aminoácidos entre el último sitio de desdoblamiento proteasomal corriente arriba y la N-terminal del epítope MHC no incluyen un residuo de prolina. Serwold, T. et al., Nature Immunol . 2:644-651, 2001. De acuerdo con lo anterior, los epítopes efectivos pueden generarse desde los precursores más grandes que el motif de clase I 9-mer preferido. En general, los péptidos son útiles hasta el grado en que corresponden a los epxtopes desplegados actualmente por MHC I sobre la superficie de una célula objetivo o un pACP. Un solo péptido puede tener afinidades variables para diferentes moléculas MHC, que unen algunos bien, otros adecuadamente y aún otros de manera no apreciable (Tabla 2) . Los alelos MHC se han agrupado tradicionalmente de acuerdo con la reactividad serologica que no refleja la estructura de la ranura que se une al péptido, que puede diferir entre alelos diferentes del mismo tipo. De manera similar, las propiedades de unión pueden compartirse a través de los tipos; los grupos a base de propiedades de unión compartida se han llamado supertipos. Existen numerosos alelos de MHC I en la población humana; los epítopes específicos para ciertos alelos pueden seleccionarse sobre la base del genotipo del paciente . Tabla 2. Union Predicha de Tirosinasa2Q7-2i6 (SEQ ID NO. 1) a Varios tipos de MHC MHC tipo I * Tiempo Medio de disociación (min) Al 0.05 A*0201 1311.

A*0205 50.4 A3 2.7 A*1101 (parte del supertipo A3) 0.012 A24 6.0 B7 4.0 B8 8.0 B14 (parte del supertipo B27) 60.0 B*2702 0.9 B*2705 30.0 B*3501 (parte del supertipo B7) 2.0 B*4403 0.1 B*5101 (parte del supertipo B7) 26.0 B*5102 55.0 B*5801 0.20 B60 0.40 B62 2.0 *Predicciones de la Unión de Péptido HLA (protocolo de transferencia hipertexto world ide web "acceso en bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bin") .

En modalidades adicionales de la invención, el epítope, como péptido o codificación de polinucleótido, puede administrarse como una composición farmacéutica, tal como por ejemplo, una vacuna o una composición inmunogénica, sola o en combinación con varios adyuvantes, vehículos o excipientes. Debe notarse que aunque el término vacuna puede utilizarse a través de presente exposición, los conceptos pueden aplicarse y utilizarse con cualquier otra composición farmacéutica, incluyendo aquellas mencionadas en la presente. Los adyuvantes particularmente ventajosos incluyen varias citocinas y oligonucleótidos que contienen secuencias inmunoestimulatorias (como se establece en mayor detalle en las solicitudes copendientes referidas en la presente) . De manera adicional el epítope codificado por el polinucleótido puede esta contenido en un virus (e.g. vaccinia o adenovirus) o en una célula huésped microbial (e.g. Salmonella o Listeria monocytogenes) que se utiliza entonces como un vector para el polinucleótido (Dietrich, G. et al., al Nat . Biotech. 16 : 181-185, 1998) . Alternativamente un pAPC puede transformarse, ex vivo, para expresar el epítope, o pulsado con el epítope del péptido, o administrarse por si mismo como una vacuna. Para incrementar la eficiencia de estos procesos, el epítope codificado puede transportarse por un vector viral o bacterial, o hacer un complejo con el ligando de un receptor encontrado en pAPC. de manera similar el epítope del péptido puede formar un complejo con un conjugado para un ligando pAPC. Una vacuna puede estar compuesta de más de un solo epítope. Se describen estrategias particularmente ventajosas para incorporar los epítopes y/o grupos de epítopes, en vacunas o composiciones farmacéuticas, en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/560,465 titulada "EPITOPE SYNCHRONI ATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS " , presentada el 28 de Abril de 2000. Los grupos de epítopes para utilizarse en relación con esta invención se describen en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,571 titulada "EPITOPE CLUSTER" , presentada el 28 de abril de 2000. Las modalidades preferidas de la presente invención se dirigen a vacunas y métodos para ocasionar un pAPC o una población de pAPCs para los epitopes de mantenimiento presentes que corresponden a los epítopes desplegados en una célula objetivo particular. Por ejemplo, puede utilizarse cualquiera de los epítopes o antígenos de la Tabla 1. En una modalidad, el epítope de mantenimiento es un epítope TuAA procesado por el proteasoma de mantenimiento de un tipo de tumor particular. En otra modalidad, el epítope de mantenimiento es un epítope asociado a virus procesado por el proteasoma de mantenimiento de una célula infectada con un virus. Esto facilita una respuesta de la célula T específica hacia la célula objetivo. La expresión concurrente por el pAPC de los múltiples epítopes, que corresponden a diferentes estados de inducción (pre y post-ataque) , puede dirigir una respuesta CTL efectiva contra células objetivo a medida que se despliegan los epítopes de mantenimiento o epítopes inmunes . Al tener ambos epítopes de mantenimiento e inmunes presentes en el pAPC, esta modalidad puede optimizar la respuesta de las células T citotóxicas hacia una célula objetivo. Con la expresión dual de epítope, el pAPC puede continuar para sostener una respuesta de CTL para el epítope tipo inmune cuando la célula tumoral cambia del proteasoma de mantenimiento al proteasoma inmune con inducción por IFN, el cual, por ejemplo, puede producirse por los CTL infiltrados en el tumor . En una modalidad preferida, la inmunización de un paciente es con una -vacuna que incluye un epítope de mantenimiento. Muchos TAAs preferidos se asocian exclusivamente con una célula objetivo, particularmente en el caso de células infectadas. En otra modalidad, muchos TAAs preferidos son el resultado de la expresión genética desrregulada en células transformadas, pero se encuentran también en el tejido del testículo, ovario y fetos. En otra modalidad, los TAAs útiles se expresan a niveles más elevados en la célula objetivo que en otras células. Aún en otras modalidades, los TAAs no se expresan de manera diferencial en las células comparadas a otras células, pero aún son útiles ya que se encuentran incluidas en una función particular de la célula y diferencia la célula objetivo de la mayoría de otras células periféricas; en tales modalidades, las células sanas que también despliegan el TAA pueden atacarse de manera colateral por la respuesta inducida de la célula T, pero tal daño colateral se considera estar preferentemente lejos de la condición causada por la célula objetivo. La vacuna contiene un epítope de mantenimiento en una concentración efectiva para causar un pAPC o poblaciones de pAPCs para desplegar epitopes de mantenimiento. De manera adversa, la vacuna puede incluir una pluralidad de epitopes de mantenimiento o uno o más epitopes de mantenimiento opcionalmente en combinación con uno o más epitopes inmunes . Las formulaciones de la vacuna contienen péptidos y/o ácidos nucleicos en una concentración suficiente para causar que pAPCs se encuentren presentes en los epitopes. Las formulaciones contienen preferentemente epitopes en una concentración total de aproximadamente 3^g-lmg/lOC^l de la preparación de vacuna. Las dosis convencionales y dosis para las vacunas de péptido y/o vacunas de ácidos nucleicos pueden utilizarse con la presente invención, y tales regímenes de dosis se entienden bien en la técnica. En una modalidad, una sola dosis para un humano adulto puede formarse aproximadamente de 1 a aproximadamente 5000 µ? de tal composición, administrada de una vez o múltiples veces, e.g., en 2, 3, 4 o más dosis separadas por 1 semana, 2 semanas, 1 mes o más. la bomba de insulina suministra 1 ul por hora (frecuencia más baja) referencia a la patente del método intranodal . Las composiciones y métodos de la invención descritos en la presente contemplan además adyuvantes de incorporación en las formulaciones a fin de mejorar el desempaño de las vacunas. Específicamente, la adición de adyuvantes a las formulaciones se diseña para mejorar el suministro o absorción de los epítopes por los pAPCs. Los adyuvantes contemplados por la presente invención se conocen por aquellos de experiencia en la técnica e incluyen, por ejemplo, GMCSF, GCSF, IL-2, IL-12, BCG, toxoide de tétano, osteopontina y ETA-1. En algunas modalidades de la invención, las vacunas pueden incluir un organismo recombinante, tal como un virus, bacteria o parásito, diseñado genéticamente para expresar un epítope en el huésped. Por ejemplo, Listeria monocytogenes , una bacteria intracelular facultativa, gram-positiva, es un potente vector para dirigir TuAAs hacia el sistema inmune . En una modalidad preferida, este vector puede diseñarse para expresar un epítope de mantenimiento para inducir las respuestas terapéuticas . La ruta normal de infección de este organismo es a través de los intestinos y puede suministrarse oralmente. En otra modalidad, un vector de adenovirus (Ad) que codifica un epítope de mantenimiento para un TuAA puede utilizarse para inducir respuestas anti-virus o anti-tumor. Las células dentríticas derivadas de médula ósea pueden transducirse con el virus construido y después inyectarse, o el virus puede suministrarse directamente a través de inyección subcutánea en un animal para inducir potentes repuestas de las células T. Otra modalidad emplea un virus de vacuna recombinante diseñado para codificar las secuencias de aminoácidos que corresponden al epitope de mantenimiento para un TAA. Los virus de vacuna que portan construcciones con las substituciones de nucleótidos adecuadas en la forma de una construcción de minigen, pueden dirigir la expresión de un epitope de mantenimiento, que conduce hacia una respuesta terapéutica de células T contra el epitope. La inmunización con ADN requiere que las APCs absorban el ADN y expresen las proteínas o péptidos codificados. Es posible codificar un péptido separado de clase I en el ADN. Mediante la inmunización con esta construcción, los APCs pueden originar la expresión de un epitope de mantenimiento, que se despliega entonces en el MHC clase I sobre la superficie de la célula para estimular una respuesta CTL apropiada. Las construcciones generalmente subyacen en la terminación de las proteasas de translación o no proteasomales para la generación de terminales apropiadas de epítopes de mantenimiento se han descrito en la solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,572 titulada EXPRESIÓN VECTORS ENCODING EPITOPES OF T RGET-ASSOCIATED ANTIGENS, presentada el 28 de Abril de 2000. Como se mencionó, puede ser deseable expresar los péptidos de mantenimiento en el contexto de una proteína más grande. El procesamiento puede detectarse aún cuando un número pequeño de aminoácidos se encuentre presente por abajo de la terminal de un epítope . Las pequeñas hormonas de péptido se procesan usualmente de manera proteolítica a partir de productos de translación más grandes, con frecuencia de tamaño que varía de aproximadamente 60-120 aminoácidos . Este hecho ha conducido algo para resumir que este es el tamaño mínimo que puede trasladarse de manera eficiente. En algunas modalidades, el péptido de mantenimiento puede incluirse en un producto de translación de al menos 60 aminoácidos. En otras modalidades el péptido de mantenimiento puede incluirse en un producto de translación de al menos aproximadamente 50, 30 o 15 aminoácidos . Debido al procesamiento diferencial proteasomal, el proteasoma inmune del pAPC produce péptidos que son diferentes de aquellos producidos por el proteasoma de mantenimiento en las células corporales periféricas. Así, al expresar un péptido de mantenimiento en el contexto de una proteína más grande, se expresan preferentemente en el APC en un contexto diferente a sus secuencia natural de longitud completa, debido a que, como un epítope de mantenimiento, en general sólo se procesa eficientemente a partir de la proteína natural por el proteasoma de mantenimiento, el cual no es activo en el APC. A fin de codificar el epítope de mantenimiento en una secuencia de ADN que codifica una proteina grande, es útil encontrar áreas de flanco en cualquiera de los lados de la secuencia que codifica el epitope que permite el desdoblamiento apropiado por el proteasoma inmune a fin de liberar ese epitope de mantenimiento. Alterar los residuos de aminoácido de los flancos en la N-terminal y la C-terminal del epitope de mantenimiento deseado puede facilitar el desdoblamiento apropiado y la generación del epitope de mantenimiento en el APC . Las secuencias que incluyen los epítopes de mantenimiento pueden diseñarse de novo y seleccionarse para determinarse el cual puede procesarse exitosamente por proteasomas inmunes para liberar los epítopes de mantenimiento . Alternativamente, otra estrategia es muy efectiva para identificar secuencias que permiten la producción de epítopes de mantenimiento en APC. Una secuencia contigua de aminoácidos puede generarse del ordenamiento de cabeza a cola de uno o más epítopes de mantenimiento. Una construcción que expresa esta secuencia se utiliza para inmunizar un animal y se evalúa la , respuesta resultante de las células T para determinar sus especificidad a uno o más de los epítopes en el sistema. Por definición, estas respuestas inmunes indican los epítopes de mantenimiento que se procesan en el pAPC de manera efectiva. La áreas de los flancos alrededor de este epítope se definen mediante esto. El uso de regiones de los flancos de aproximadamente 4-6 aminoácidos en cualquiera de los lados del péptido deseado pueden proporcionar la información necesaria para facilitar el procesamiento del proteasoma del epítope de mantenimiento mediante el proteasoma inmune. Por lo tanto, una secuencia que asegura la sincronización del epitope de aproximadamente 16-22 aminoácidos puede insertarse o fusionarse a cualquier secuencia de proteína de manera efectiva para dar como resultado ese epítope que se esta produciendo en un APC. En modalidades alternativas el sistema completo de cabeza a cola de los epitopes, o solo los epítopes inmediatamente adyacentes al epítope de mantenimiento correctamente procesado pueden transferirse de manera similar desde una construcción de prueba hacia un vector de vacuna. En una modalidad preferida, loe epitopes de mantenimiento pueden incluirse entre los epitopes inmunes conocidos o segmentos de tales, proporcionando mediante esto un contexto apropiado para el procesamiento. La colindancia de epitopes de mantenimiento e inmunes puede generar el contexto necesario para permitir que el proteasoma inmune libere el epítope de mantenimiento, o un fragmento grande, que incluya preferentemente una C-terminal correcta. Puede ser útil seleccionar construcciones para verificar que se produzca el epítope deseado. La colindancia de los epitopes de mantenimiento puede generar un sitio desdoblable por el proteasoma inmune. Algunas modalidades de la invención emplean epítopes conocidos para flanquear los epitopes de mantenimiento en el sustrato de prueba; en otros, seleccionar como se describió arriba se utiliza si las regiones flanqueadas son secuencias arbitrarias o mutantes de la secuencia natural que flanquea, y si o no se utiliza el conocimiento de las preferencias de desdoblamiento proteasomales en el diseño de los sustratos. El desdobl miento de la N-terminal madura del epítope, aunque ventajoso, no se requiere, ya que en la célula existe una variedad de actividades de sincronización N-terminal que pueden generar la N-terminal madura del epítope subsecuente al procesamiento proteasomal . Se prefiere que tal extensión de N-terminal sea menor de aproximadamente 25 aminoácidos de longitud y se prefiere además que la extensión tenga pocos residuos de prolina no ninguno. Preferentemente, en la selección, el desdoblamiento no se da sólo en los extremos del epítope (o al menos en su C-terminal) , sino también puede darse la consideración para asegurar el desdoblamiento limitado dentro del epítope. Pueden utilizarse procedimientos de pistola para diseñar sustratos de prueba y pueden incrementar la eficiencia de la selección. En una modalidad pueden incluirse múltiples epítopes uno después de otro, apareciendo posiblemente epítopes individuales más de una vez. El sustrato puede seleccionarse para determinar cuales epítopes pueden producirse. En el caso en donde un epitope particular es de concerní un sustrato que puede diseñarse el cual aparece en múltiples contextos diferentes . Cuando un solo epitope que aparece en más de un contexto se libera del sustrato adicional al sustrato de prueba secundario, en el cual los casos individuales del epitope se retiran, inhabilitan, o son únicos, pueden utilizarse para determinar cuales están siendo liberados y constituyen verdaderamente secuencias que aseguran la sincronización del epitope. Existen varias selecciones fácilmente practicables. Una selección preferida in vi tro utiliza los análisis de digestión proteasomal, utilizando proteasomas inmunes purificados, para determinar si el epitope de mantenimiento deseado puede liberarse de un péptido sintético que incorpora la secuencia en cuestión. La posición del desdoblamiento obtenido puede determinarse por técnicas tales como espectroscopia de masas, HPLC y secuenciación de grupo N-terminal; como se describe en mayor detalle en las Solicitudes de Patente de E.U. titulada METED OF EPITOPE DESCOVERY, EPITOPE SYNCHRONIZATIOW IN ANTIGEN PRESENTING CELLS , DOS Solicitudes de Patente de E.U. Profesionales tituladas EPITOPE SEQUENCES . Alternativamente, pueden emplearse las selecciones in vivo tal como inmunización o sensibilización del objetivo. Para la inmunización se utiliza una construcción de ácido nucleico capaz de expresar la secuencia en cuestión. El CTL cosechado puede probarse por su capacidad para reconocer las células objetivo que presentan el epítope de mantenimiento en cuestión. Tales células objetivo se obtienen más fácilmente al pulsar las células que expresan la molécula MHC apropiada con el péptido sintético que incorpora el epítope de mantenimiento maduro. Alternativamente, las células conocidas para expresar el proteasoma de mantenimiento y el antígeno del cual se deriva el epítope de mantenimiento, pueden utilizarse ya sea de manera endógena o a través de ingeniería genética. Para utilizar sensibilización del objetivo como una selección, puede utilizarse CTL, o preferentemente un clon de CTL, que reconoce el epítope de mantenimiento. En este caso, es la célula objetivo la que expresa el epítope de mantenimiento incluido (en lugar del pAPC durante la inmunización) y debe expresar el proteasoma inmune. En general, la célula objetivo, puede transformarse con una construcción de ácido nucleico apropiada para conferir expresión al epítope de mantenimiento incluido. Cargar con un péptido sintético que incorpora el epítope incluido utilizando liposomas cargados del péptido o un reactivo de transferencia de péptido tal como BIOPORTER™ (Gen Therapy Systems (Sistemas de terapia genética) , San Diego, CA) representa una alternativa. La guía adicional sobre construcciones de ácidos nucleicos útiles como vacunas de acuerdo con la presente invención se describen en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,572 titulada "EXPRESIÓN VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS" ("VECTORES DE EXPRESIÓN QUE CODIFICAN LOS EPÍTOPES DE LOS ANTÍGENOS ASOCIADOS AL OBJETIVO") presentada el 28 de Abril de 2000. Además, los vectores de expresión y los métodos para su diseño, que son útiles de acuerdo con la presente invención se describen en la Solicitud de Patente de E.U. No. 60/336,968 (número de caso de abogado CTLIMM.022PR) titulada "EXPRESIÓN VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS AND METHODS FOR THEIR DESIGN" ("VECTORES DE EXPRESIÓN QUE CODIFICAN LOS EPÍTOPES DE LOS ANTÍGENOS ASOCIADOS AL OBJETIVO Y MÉTODOS PARA SU DISEÑO") presentada el 11/7/2001. Una modalidad preferida de la presente invención incluye un método para administrar una vacuna que incluye un epítope (o epítopes) para inducir una respuesta inmune terapéutica. Esta vacuna se administra a un paciente de la manera consistente con el protocolo de administración estándar de vacunas que se conoce en la materia. Los métodos para administrar epítopes de TAAs incluyendo, sin limitación, administración transdermal, intranodal, perinodal, oral, intravenosa, intradermal, intramuscular, intraperitoneal y mucosal, incluyendo la administración por inyección, instilación o inhalación. Un método particularmente útil para la administración de vacunas para producir una respuesta de CTL se describe en la Patente Australiana No. 739189 expedida el 17 de Enero, de 2002; la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/380,524, presentada el 1 de Septiembre, de 1999; y una Continuación en Parte de la misma la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/776,232 ambas tituladas "A METHOD OF INDUCING A CTL RESPONSE" , (UN MÉTODO PARA INDUCIR LA REPUESTA DE CTL" presentada el 2 de Febrero, de 2001. Reactivos que Reconocen los Epítopes En otro aspecto de la invención, se contemplan las proteínas con especificidad de unión para el epitope y/o el complejo molecular epítope-MHC, así como las células aisladas por las que pueden expresarse. En un conjunto de modalidades, estos reactivos toman la forma de inmunoglobulinas : suero policlonal o anticuerpos monoclonales (mAb) , los métodos para la generación de los cuales se conocen bien en la materia. Ver, por ejemplo, Aharoni et al., Nature 351: 147-150, 1991; Anderson et al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 93:1820-1824, 1996; Dadaglio et al., Immunlty 6:727-738, 1997; Due et al., Int. I munol . 5:427-431, 1993; Eastman et al., Eur. J. Immunol. 26:385-393, 1996; Engberg et al., Immunotechnology 4:273-278, 1999; Porgdor et al., Im unity 6: 715-726, 1997; Puri et al . , J. Immunol. 158:2471-2476, 1997; y Polakova K. , et al . , J. Immunol. 165:342-348, 2000. En otras modalidades, las composiciones pueden utilizarse para inducir y generar, in vivo e in vitro, células T específicas para cualquiera de los epítopes y/o los complejos epítope-MHC. En . modalidades preferidas el epitope puede ser cualquiera de uno o más de aquellos listados en la TABLA 1, por ejemplo. Así, las modalidades también se refieren e incluyen células T aisladas , clones de células T, hibridomas de células T o una proteina que contiene el receptor de células T (TCR) que se unen al dominio derivado del gen clonado, así como una célula recombinante que expresa tal proteína. Tal proteína derivada de TCR puede ser simplemente los dominios extracelulares del TCR, o una fusión con porciones de otras proteínas para conferir una propiedad o función deseada. Un ejemplo de tal fusión es el anexo de los dominios de unión TCR a las regiones constantes de una molécula de anticuerpo a fin de crear una molécula divalente. La construcción y actividad de las moléculas que siguen este patrón general se han reportado, por ejemplo en Plaksin D. et al., J. Immunol. 158:2218-2227, 1997 y Lebo itz, M.S. et al., Cell Immunol. 192:175-184, 1999. La construcción más general y uso de tales moléculas se trata también en la patente de E.U. 5,830,755 titulada T CELL RECEPTORS AND THEIR USE IN THERAPEUTIC AND DIAGNOSTIC METHODS (RECEPTORES DE CÉLULAS T Y SU USO EN MÉTODOS TERAPÉUTICOS Y DE DIAGNÓSTICO) . La generación de tales células T puede realizarse fácilmente por inmunización estándar de animales de laboratorio, y la reactividad para células objetivo humanas puede obtenerse por inmunización con células objetivo humanas o por inmunización de animales HLA-transgénicos con el antígeno/epitope . Para algunos procedimientos terapéuticos son deseables las células T derivadas de las mismas especies. Aunque tal célula puede crearse al clonar, por ejemplo, un TCR murino en una célula T humana como se contemplo arriba, la inmunización in vi tro de células humanas ofrece una opción potencialmente más rápida. Las técnicas para la inmunización in vitro, que utilizan aún donadores naturales, se conocen en el campo, por ejemplo, Stauss et al., Proc. Nati. Acad. Sci USA 89:7871-7875, 1992; Salgaller et al., Cáncer Res. 55:4972-4979. 1995; Tsai et al., J. Immunol . 158:1796-1802, 1997; y Chung et al., J. Immunother. 22:279-287, 1999. Cualquiera de estas moléculas puede conjugarse a enzimas, radioquímicos, etiquetas fluorescentes y toxinas, a fin de utilizarse en el diagnóstico (formación de imagen de otra detección) , monitoreo y tratamiento de las condiciones patogénicas asociadas con el epítope . Así, un conjugado de toxina puede administrarse a células muertas de tumor, radioetiquetar puede facilitar la formación de imagen del tumor positivo al epitope, un conjugado de enzima puede utilizarse en un análisis similar a ELISA para diagnosticar cáncer y confirmar la expresión del epítope en tejidos de biopsia. En una modalidad alternativa, tales células T como se estableció arriba, después de realizar la expresión a. través de la estimulación con el epítope y/o citocinas, puede administrarse a un paciente como una inmunoterapia adoptiva. Reactivos que Comprenden Epítope Un aspecto adicional de la invención proporciona complejos epítope-MHC aislados. En una modalidad particularmente ventajosa de esta aspecto de la invención, los complejos pueden ser solubles, proteínas multiméricas tales como aquellas descritas en la Patente de E.U. No. 5,635,363 (tetramétros) o la Patente de E.U. No. 6,015,884 (Ig-dímeros) . Tales reactivos son útiles para detectar y monitorear respuestas específicas de células T y para purificar tales células T. Los complejos de moléculas MHC aislados con péptidos epitópicos también pueden incorporarse en lípidos planos bilaminares o liposomas. Tales composiciones pueden utilizarse para estimular células T in vitro o en el caso de los liposomas, in vivo. . La moléculas co-estimulatorias (e.g., B7, CD40, LFA-3) pueden incorporarse en las mismas composiciones o, especialmente para trabajo in vitro, la co-estimulación puede proporcionarse por anticuerpos anti-co-receptor (e.gr., anti-CD28, anti-CD154, anti-CD12) o citocinas (e.g., IL-2, IL-12) . Tal estimulación de células T puede constituir vacunación, expansión de conducción de células T in vitro para la infusión subsecuente en una inmunoterapia, o constituir una etapa en un análisis de función de células T. El epitope, o más directamente su complejo con una molécula MHC, puede ser un importante constituyente de ensayos funcionales de células T de antigeno específico en una etapa de ya sea activación o cancelación o ambas . De los muchos ensayos de la función de células T actuales en la técnica (pueden encontrarse procedimientos detallados en referencia inmunológicas estándar tales como Current Protocols in Immunology 1999 John Wiley & Sons Inc., N.Y. pueden definirse dos amplias clases , aquellos que miden la respuesta de una prueba de células y aquellos que miden la respuesta de las células individuales. Considerando que el primero porta una medición global de la fuerza de una respuesta, el último permite la determinación de la frecuencia relativa de las células que responden. Los ejemplos de ensayos que miden la respuesta global son los ensayos de citotoxicidad, ELISA y ensayos de proliferación que detectan la secreción de citosina. Los ensayos que miden la respuesta de las células individuales (o pequeños clones derivados de estas) incluyen limitar el análisis de dilución (LDA) , ELISPOT, detección citométrica de flujo de la citocina no secretada (descrita en la Patente de E.U. No. 5, 445,939, titulada METHOD POR ASSESMENT OF THE MONONUCLEAR LEUKOCYTE IMMUNE SYSTEM" ("MÉTODO PARA LA VALORACIÓN DEL SISTEMA INMUNE DE LEUCOCITO MONONUCLEAR") y las Patentes de E.U. Nos. 5,656,446; y 5,843,689, ambas tituladas "METHOD POR ASSESMENT OF THE MONONUCLEAR LEUKOCYTE IMMUNE SYSTEM" ("MÉTODO PARA LA VALORACIÓN DEL SISTEMA INMUNE DE LEUCOCITO MONONUCLEAR") los reactivos para las cuales se venden por Becton, Dickinson & Company bajo el nombre comercial 'FASTIMMUNE' y la detección de TCR específica con tetrámeros o IG-dímeros como se establece y se hace referencia arriba. Las virtudes comparativas de estas técnicas se han revisado en Yee, C. et al., Current Opinión in Immunology, 13:141-146, 2001. Adicionalmente, la detección de un reordenamiento o expresión TCR específica puede realizarse a través de una variedad de técnicas establecidas a base de ácidos nucleicos, particularmente técnicas in sí tu y PCR de una sola célula, como será aparente para alguien de experiencia en la materia. Estos ensayos funcionales se utilizan para valorar los niveles endógenos de inmunidad, la respuesta a un estímulo inmunológico (e.g., una vacuna), y para monitorear el status inmune a través del curso de una enfermedad y tratamiento. Excepto cuando se miden los niveles endógenos de inmunidad, cualquiera de estos ensayos presume una etapa preliminar de inmunización, ya sea in vivo o in vi tro dependiendo de la naturaleza de la emisión que se esta dirigiendo. Tal inmunización puede llevarse a cabo con las diversas modalidades de la invención arriba descritas o con otras formas de inmunógeno (e.g. , fusiones pAPC-célula de tumor) que pueden provocar inmunidad similar. Con la excepción ce PCR y análisis de tipo tetrámero/lg-dimero que pueden detectar la expresión del TCR conocido, estos ensayos se benefician en general de una etapa de estimulación antigénica ín vitro que puede utilizar ventajosamente varias modalidades de la invención como se describió arriba a fin de detectar la actividad funcional particular (las repuestas citolíticas elevadas algunas veces pueden detectarse directamente) . Finalmente, la detección de la actividad citolí ica requiere las células objetivo que despliegan el epítope, que pueden generarse utilizando varias modalidades de la invención. La modalidad particular seleccionada por cualquier etapa particular depende de la cuestión a la cual dirigirse, fácil de utilizar, costo, y lo similar, pero la ventaja de una modalidad sobre la otra para cualquier conjunto particular de circunstancias será aparente para alguien de experiencia en la materia. Los complejos de MHC de péptido descritos en esta sección se han entendido tradicionalmente por ser asociaciones no covalentes. Sin embargo, es posible, y puede ser ventajoso, crear enlaces covalentes, por ejemplo al codificar el epitope y la cadena pesada de MHC o el epítope, P2-microglobulina y la cadena pesada MHC como una sola proteína (Yu, Y.L.Y., et al., J. Immunol. 168:3145-3149. 2002; Mottez, E. et al., J. Exp. Med. 181:493, 1995; Déla Cruz, C.S. et al., Int. Immunol . 12 : 1293 ,.2000 ; Mage, M.G., et al., Proc. Nati. Acad. Sci USA 93:236, 1996; Lee, L., ' et al., Eur. J. Immunol. 24:2633, 1994; Chung, D.H. et al., J. Immunol. 163:3699, 1999; Uger, R.A. y B.H. Barber, J. Immunol. 160:1598, 1998; Uger R.A. , et al., J". Immunol 162:6024, 1999; y hite, J. et al., J. Immunol. 162:2671, 1999. Tales construcciones pueden tener estabilidad superior y superar el control en la trayectoria de procesamiento y presentación. Pueden utilizarse en las vacunas, reactivos y análisis de manera similar. Antígenos Asociados al Tumor Los epítopes de la presente invención se describen a partir de la tirosinasa TuAAs (SEQ ID NO. 2) , SSX-2 (SEQ ID NO. 3), PSMA (antígeno de membrana especifico de próstata) (SEQ ID NO. 4), GP100, (SEQ ID NO. 70), MAGE-1 , (SEQ ID NO. 72), MAGE-3 , (SEQ ID NO. 73), NY-ESO-1, (SEQ ID NO. 74), PRAME, (SEQ ID NO. 77), PSA, (SEQ ID NO. 78), PSCA, (SEQ ID NO. 79) , el dominio de fibronectina ED-B (SEQ ID NOS. 589 y 590) , CEA (antígeno carcinoembriónico) (SEQ ID NO. 592) , Her2/Neu (SEQ ID NO. 594), SCP-1 (SEQ ID NO. 596) y SSX-4 (SEQ ID NO. 598). Las secuencias de codificación natural para estas once proteínas, o cualquier segmento dentro de ellas, puede determinarse a partir de su ADNc o secuencias de codificación completas (cds) , SEQ ID NOS. 5-7, 80-87, 591, 593, 595, 597 y 599 respectivamente. La tirosinasa es una enzima biosintética de melanina que se considera uno de los marcadores más específicos de la diferenciación melanocítica . La tirosinasa se expresa en pocos tipos de células , principalmente en melanocitos, y con frecuencia se encuentran altos niveles en melanomas. La utilidad de la tirosinasa como un TuAA se enseña en la Patente de E.U. 5,747,271 titulada "METHOD FOR IDENTIFYING INDIVIDUAL SUFFERING FROM A CELLULAR ABNORMALITY SOME OF WHOSE ABNORMAL CELLS PRESENT COMPLEXES OF HLA-A2/TYROSINASE DERIBED PEPTIDES, AND METHODS FOR TREATING SAID INDIVIDUALS" ("MÉTODO PARA IDENTIFICAR INDIVIDUOS QUE SUFREN DE UNA ANORMALIDAD CELULAR ALGUNAS' DE CUYAS ANORMALIDADES PRESENTAN CÉLULAS PÉPTIDOS DERIVADOS DE COMPLEJOS DE HLA-A2/TIROSINASA, Y MÉTODOS PARA TRATAR A DICHOS INDIVIDUOS") . GP100, también conocido como PMell7, también es una proteína biosintética de melanina expresada a niveles elevados en melanomas. GP100 como un TuAA se describe en la Patente de E.U. 5,844,075 titulada "MELANOMA ANTIGENS AND THEIR USE IN DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC METHODS" ( "ANTÍGENOS DE MELANOMA Y SU USO EN MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO Y TERAPÉUTICOS") .

SSX-2, también conocido como Hom-Mel-40, es un miembro de una familia de antígenos conservados de cáncer de testículo (Gure, A. O. et al., Int. J. Cáncer 72:965-971, 1997. Su identificación como un TuAA se enseña en la Patente de E.U. 6,025,191 titulada "ISOLATED NUCLEIC ACIDS MOLECULES WHICH ENCODE A MELONOMA SPECIFIC ANTIGEN AND USES THEREOF" , ( "MOLÉCULAS AISLADAS DE ÁCIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN UN ANTÍGENO ESPECÍFICO DE MELANOMA Y USOS DEL MISMO") . El antlgeno de cáncer de testículo se encuentra en una variedad de tumores, pero generalmente se encuentra ausente de tejidos normales de adulto excepto en testículo, La expresión de diferentes miembros de la familia SSX se ha encontrado de manera variada en lineas de células de tumor. Debido al elevado grado de identidad de secuencia entre los miembros de la familia SSX, se generarán epítopes similares a partir de más de un mimbro- de la familia, y serán capaces de unirse a , una molécula MHC de manera que algunas vacunas dirigidas contra un miembro de esta familia pueda reaccionar en forma cruzada y sea efectiva contra otros miembros de esta familia (ver ejemplo 3 de abajo) . MAGE-1, MAGE-2 y MAGE-3 son miembros de otra familia de antígenos de cáncer de testículo descubiertos originalmente en melanoma (MAGE es una contracción de antígeno asociado a melanoma) pero se encuentra en una variedad de tumores. La identificación de las proteínas MAGE como TuAAs se enseña en la Patente de E.U. 5,342,774 titulada NUCLEOTIDE SEQUENCE ENCODING THE TUMOR REJECTION ANTIGEN PRECURSOR, MAGE-1, (SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS QUE CODIFICAN EL PRECURSOR DEL ANTIGENO DE RECHAZO DE TUMOR, MAGE -1) , y en numerosas patentes subsecuentes. Actualmente existen 17 entradas para MAGE (humano) en la base de datos de Proteína SWISS. Existe similitud extensiva entre estas proteínas así como en muchos casos, un epí ope de uno puede inducir una respuesta de reacción cruzada para otro miembro de la familia. Unos pocos de estos no se han observado en tumores, notablemente, la mayoría de MAGE-H1 y MAGE-D1, los cuales se expresan en testículos y cerebro, y células estromales de médula ósea respectivamente. La posibilidad de reactividad cruzada en tejido normal se disminuye por el hecho de que ellos se encuentran entre las últimas proteínas similares a otros MAGE. NY-ESO-1 es un antígeno de cáncer de testículo encontrado en una amplia variedad de tumores, también conocido como CTAG-1 (Antígeno 1 de Cáncer de Testículo) y CAG-3 (Antígeno-3 de Cáncer) . NY-ESO-1 como un TuAA se describe en la Patente de E.U. 5,804,381 titulada ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULE ENCODING AN ESOPHAGEAL CANCER ASSOCIATED ANTIGEN, THE ANTIGEN ITSELF AND USES THEREOF (MOLÉCULA AISLADA DE ÁCIDO NUCLEICO QUE CODIFICA UN ANTÍGENO ASOCIADO AL CÁNCER ESOFÁGICO, EL ANTIGENO POR SI MISMO Y USOS DE ESTE) . Un sitio paranálogo que codifica los antígenos con la identidad de secuencia extensiva LAGE-la/s (SEQ ID NO. 75) y LAGE-lb/L (SEQ ID NO. 76) , se han descrito en ordenamientos públicamente disponibles del genoma humano, y se ha concluido que se elevan a través del empalme alternado. Adicionalmente, CT-2 (o CTAG-2, Antígeno 2 de Cáncer de testículo) parece ser de cualquiera de un alelo, mutante o una discrepancia de secuenciación de LAGE-lb/L. Debido a la identidad de secuencia extensiva, muchos epítopes de NY-ESO-1 también pueden inducir inmunidad a tumores que expresan estos otros antígenos . Ver la figura 1. Las proteínas son virtualmente idénticas hasta el aminoácido 70. A partir del 71-134 el curso más largo de identidades entre NY-ESO-1 y LAGE es de 6 residuos, pero potencialmente las secuencias de reacción cruzada se encuentran presentes. Y a partir del 135-180 NY-ESO y LAGE-la/s son idénticas excepto por un solo residuo,- pero LAGE-lb/L no se relaciona debido al empalme alternado. Los antígenos CAMEL y LAGE-2 parecen derivarse del ARNm de LAGE-1, pero de estructuras de lectura alternas dando así elevación para secuencias de proteína no relacionadas. Más recientemente, la secuencia completa del clón RP5-865 El8, RP5-1087L19 del cromosoma X de Homo sapiens con el Acceso del Genbank AF277315.5, reporta tres sitios independientes en esta región que se etiquetan como LAGE1 (correspondiendo a CTAG-2 en los ordenamientos del genoma) , más LAGE" -A y LAGE2-B (correspondiendo ambos a CTAG-1 en los ordenamientos del genoma) . PSMA (antígeno de membrana específico de próstata) , un TuAA descrito en la patente de E.U. 5,538,866 titulada "PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANES ANTIGEN" , ( "ANTÍGENO DE MEMBRANAS ESPECÍFICO DE PRÓSTATA" ) , se expresa por el epitelio de la próstata normal y, a un mayor nivel, en cáncer de próstata. También se ha encontrado en los tumores neovasculares no prostáticos, PSMA puede formar así la base para las vacunas dirigidas tanto a cáncer de próstata como a la neovasculatura de otros tumores . Este último concepto se describe · más completamente en la solicitud provisional de patente de E.U. No. 60/274,063 titulada ANTI-NEOVASCULAR VACCINES FOR CANCER (VACUNAS ANTI-NEOVASCULARES PARA CÁNCER) presentada el 7 de Marzo, de 2001, y la Solicitud de E.U. No. 10/094/699, número de caso de abogado CTLIMM.015A, presentada el 7 de Marzo, de 2002, titulada "ANTI-NEOVASCULAR PREPARATIONS FOR CANCER (PREPARACIONES ANTI-NEOVASCULARES PARA CÁNCER) . En resumen, a medida que los tumores crecen reclutan el crecimiento interno de nuevos vasos sanguíneos . Esto se entiende que es necesario sostener el crecimiento a medida que los centros de los tumores no vascularizados generalmente se encuentran necróticos y se ha reportado que los inhibidores de la angiogénesis causan la regresión del tumor. Tales nuevos vasos sanguíneos o neovasculatura, expresa antígenos no encontrados en vasos establecidos, y así puede dirigirse específicamente. Al introducir CTL contra antigenos neovasculares ' los vasos pueden romperse, interrumpiendo el flujo de nutrientes a los tumores (y la renovación de la forma de desgaste) , conduciendo a la regresión. El empalme alternado del ARNm de PSMA también conduce a una proteína con un inicio aparente en Met58, cancelando mediante esto la región de ancla de la membrana putativa de PSMA como se describe en la Patente de E.U. 5,935,818 titulada "ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULE ENCODING ALTERNATIVELY SPLICED PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANES ANTIGEN AND USES THEREOF" ("MOLÉCULA AISLADA DE ÁCIDO NUCLEICO QUE CODIFICA EL ANTIGENO DE LAS MEMBRANAS ESPECÍFICAS DE PRÓSTATA ALTERNATIVAMENTE EMPALMADAS Y USOS DE ESTA") . Una proteína llamada protelna similar a PSMA, número de acceso del Genbank AF261715, es cercanamente idéntica a los aminoácidos 309-750 del PSMA y tiene un perfil de expresión diferente. Así, los epítopes más preferidos son aquellos con una N-terminal localizada a partir del aminoácido 58 al 308 PRAME, también conocido como ????, DAGE y OIP4, se observó originalmente como un antígeno de melanoma. Subsecuentemente, se ha reconocido como un antígeno CT, pero diferente a muchos antígenos CT (e.gr., MAGE, GAGE y BAGE) se expresa en leucemias mieloides agudas. PRAME es un miembro de la familia MAPE que consiste grandemente de proteínas hipotéticas con las cuales se comparte la secuencia similarmente limitada. La utilidad de PRAME como un TuAA se enseña en la Patente de E.U. 5,830,753 titulada "ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULES CODING FOR TUMOR REJECTION ANTIGEN PRECURSOR DAGE AND USES THEREOF" ("MOLÉCULAS AISLADAS DE ÁCIDOS NUCLEICOS QUE CODIFICAN PARA DAGE DEL PRECURSOR DEL ANTIGENO DE RECHAZO DEL TUMOR Y USOS DE ESTAS") . PSA, antígeno especifico de próstata, es una peptidasa de la familia calicreina y un antigeno de diferenciación de la próstata. también se ha reportado la expresión en tejido de pecho. Los nombres alternos incluyen semiproteína-gamma, calicreina 3, seminogelasa, seminina y antígeno P-30. PSA tiene un alto grado de identidad de secuencia con los diversos productos de empalme alternos calicreina 1 y 2 prostática/glándular, así como calicreina 4, que también se expresa en tejido de próstata y pecho. Otras calicreínas comparten en general menos identidad de secuencia y tienen diferentes perfiles de expresión. No obstante, la reactividad cruzada que puede provocarse en tejidos no objetivo (en general la mayoría por los proteasomas de mantenimiento) , deben considerarse en el diseño de una vacuna . PSCA, un antígeno de célula de tallo de próstata, y también conocido como SCAH-2, es un antígeno de diferenciación que se expresa preferentemente en células de epitelio de próstata, y se sobreexpresa en cánceres de próstata. La expresión de nivel más bajo se observa en algunos tejidos normales incluyendo células neuroendocrinas del tracto digestivo y se recolectan en conductos del riñon. PSCA se describe en la Patente de E.U. 5,856,136 titulada "HUMAN STEM CELL ANTÍGENS" ( "ANTÍGENOS DE CÉLULAS GERMINALES HUMANAS") . La proteína 1 del complejo sinaptonemal (SCP-1) , también conocida como HOM-TES-14, es una proteína asociada a la meiosis y también un antígeno de cáncer de testículo (Tureci, O., et al., Proc. Nati. Acad. Sci . USA 95:5211-5216, 1998) . Como un antígeno de cáncer su expresión no se regula por el ciclo celular y se encuentra frecuentemente en gliomas, carcinomas de pecho, célula renal y ovario. Tiene alguna similitud a las miosinas, pero con identidades poco suficientes, que los epítopes de reacción cruzada no son un prospecto inmediato. El dominio ED-B de la fibronectina también es un objetivo potencial. La fibronectina se somete a empalme alterno desarrolladamente regulado, codificándose el dominio ED-B con un solo exón que se utiliza principalmente en el tejido oncofetal (Matsuura, H. y S. Hakomori Proc. Nati. Acad. Sci. USA 82:6517-6521, 1985; Carnemolla, B . et al., J". Cell Biol. 108:1139-1148, 1989; Loridon-Rosa, B. et al., Cáncer Res. 50:1608-1812, 1990; Nicolo, G. , et al., Cell Differ. Dev. 32:401-408, 1990; Boris, L. , et al., Exp. Cell Res. 199:98-105, 1992; Oyama, F. et al., Cáncer Res . 53:2005-2011, 1993; Mandel, U. et al., APMIS 102:695-702, 1994; Farnoud, M.R. et al., Int. J. Cáncer 61:27-34, 199-5; Pujuguet, P. et al., Am. J. Pathol. 148:579-592, 1996; Gabler, U. et al., Heart 75:358-362, 1996; Chevalier, X. Br. J. Rheu atol. 35:407-415, 1996; Midulla, M. Cáncer Res. 60:164-169, 2000) . El dominio ED-B también se expresa en fibronectina de la neovasculatura (Kaczmarek J. et al., Int. J. Cáncer 59:11-16, 1994; Castellani, P. et al., Int. J. Cáncer 59:612-618, 1994; Weri, D. et al., Nat. Biotech. 15:1271-1275 , 1997; Karelina, T.V. y Eisen Cáncer Detect. Prev. 22:438-444, 1998; Tarli,.L. et al., Blood 94:192-198, 1999; Castellani, P. et al.. Acta Neurochir. (Viena) 142:277-282, 2000). Como un dominio oncofetal, el dominio ED-B se encuentra comúnmente en la fibronectina expresada por células neoplásicas además de expresarse por la neovasculatura. Asi, las vacunas que inducen CTL que se dirigen al dominio ED-B pueden exhibir dos mecanismos de acción: lisis directa de las células tumorales y disrupcion del suministro de sangre del tumor a través de la destrucción de la neovasculatura asociada al tumor. Como la actividad de CTL puede decaer rápidamente después del retiro de la vacuna, la interferencia con la angiogénesis puede ser mínima. El diseño y prueba de las vacunas dirigidas a la neovasculatura se describe en la Solicitud de Patente Provisional de E.U. No. 60/274,063 titulada "ANTI-NEOVASCULATURE VACCINES FOR CANCER" ( "VACUNAS ANTI-NEOVASCULATURA PARA CANCER") y la Solicitud de Patente de E.U. No. 10/094,699, número de caso de abogado CTLIMM.015A, titulada "ANTI -NEOVASCULATURE PREPARATIONS FOR CANCER" ("PREPARACIONES ANTI-NEOVASCULATURA PARA CANCER") , presentada en la misma fecha que esta solicitud (7 de Marzo, de 2002) . Una línea celular de tumor se describe en la Solicitud Provisional de E.U. No. 60/363,131, presentada el 7 de Marzo, de 2002, número de caso de abogado CTLIMM .028PR, titulada "HLA-TRANSGENIC MURINE TUMOR CELL LINE" , ("LÍNEA CELULAR DE TUMOR MURINO HLA-TRANSGÉNICA" ) . El antígeno carcinoembriónico (CEA) es una proteína oncofetal paradigmática descrita primero en 1965 (Gold and Freedman, J. Exp. Med. 121:439-462, 1965. Referencias más completas pueden encontrarse en el Online Medelian Inheritance in Man; registro *114890) . Su expresión se asocia más fuertemente con adenocarcinomas del recubrimiento epitelial del tracto digestivo y en el colon fetal . CEA es un miembro de la familia de supergenes de inmunoglobulina y el miembro de definición de la subfamilia CEA. HER2/NEU es un oncogen relacionado al receptor del factor de crecimiento epidermal (van de Vijver, et al., New Eng J. Med. 319:1239-1245, 1988), y aparentemente idéntico al oncogen C-ERBB2 (Di Fiore, et al., Science 237:178-182, 1987) . La sobreexpresión de ERBB2 se ha implicado en la transformación neoplásica del cáncer de próstata. Como HER2 se amplifica y sobreexpresa en el 25-30% de los cánceres de pecho entre otros tumores en donde el nivel de expresión se correlaciona con la agresividad del tumor (Salmón, et al., New Eng. J. Med. 344:783-792, 2001). Una descripción más detallada se encuentra disponible en el Online Medelian Inheritance in Man registro *164870. La descriopción adicional relacionada a las modalidades de la presente invención se encuentra en la Solicitud de patente de E.U. No. 10/005,905 (número de caso de abogado CTLIMM.021CP1) titulada "EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS" ("SINCRONIZACIÓN DE EPÍTOPE EN CÉLULAS QUE PRESENTAN ANTÍGENO" ) , presentada el 7 de Noviembre de 2001 y una continuación de la misma, Solicitud de E.U. No. / , presentada el 7 de Diciembre, de 2000, número de caso de abogado CTLIMM .21CP1C, también titulada "EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS" ("SINCRONIZACIÓN DE EPÍTOPE EN CÉLULAS QUE PRESENTAN ANTÍGENO") . Se identificaron epítopes útiles y se probaron como se describe en los siguientes ejemplos. Sin embargo, estos ejemplos se proponen únicamente para propósitos de ilustración, y no deben considerarse de ninguna manera como limitación al alcance de la invención. EJEMPLOS Secuencias de Epltopes Preferidos Específicos Ejemplo 1 Elaboración de Epítopes A. Producción sintética de epítopes Los péptidos que tienen una secuencia de aminoácidos de alguna de las SEQ ID NO. 1, 8, 9, 11-23, 26-29, 32-44, 47-54, 56-63, 66-68, 88-253 o 256-588 se sintetizan utilizando cualquiera de las metodologías de síntesis en fase sólida FMOC o tBOC. Después de la síntesis, los péptidos se desdoblan a partir de su soportes con cualquiera de ácido trifluoroacético o floruro de hidrógeno, respectivamente, en la presencia de eliminadores protectores apropiados. Después de retirar el ácido por evaporación, los péptidos se extraen con éter para retirar los eliminadores y se liofiliza entonces el péptido precipitado crudo. La pureza del péptido crudo se determina por HPLC, análisis de secuencia, análisis de aminoácidos, análisis de contenido del contra-ion y otros medios adecuados. Si el péptido crudo es suficientemente puro (mayor o igual a aproximadamente 90% puro), puede utilizarse tal cual. Si se requiere purificación para cumplir las especificaciones de la substancia de la droga, los péptidos se purifican utilizando una o más combinaciones de lo siguiente: re-precipitación; fase inversa, intercambio iónico, cromatografía de exclusión de tamaño o interacción hidrofóbica; o distribución de la cuenta actual . Formulación del producto de droga El péptido grado GMP se formula en un amortiguador o sistema solvente acuoso, orgánico o acuoso-orgánico parenteralmente aceptable en el cual permanece tanto física y químicamente estable como biológicamente potente. En general, los amortiguadores o combinaciones de amortiguadores o combinaciones de amortiguadores y solventes orgánicos son apropiados. El rango de pH se encuentra típicamente entre 6 y 9. Los modificadores orgánicos u otros excipientes pueden agregarse . para ayudar a solubiliza y estabilizar a los péptidos. Estos incluyen detergentes, lípidos, co-solventes , antioxidantes, guelantes y agentes de reducción. En este caso de un producto liofilizado, puede agregarse sacarosa o manitol u otros adyuvantes de la liofilización. La soluciones de péptidos se esterilizan por filtración de membrana en su sistema final de recipiente cerrado y ya sea que se liofilice por disolución en la clínica o se almacene hasta su uso. B. Construcción de vectores de expresión para uso como vacunas de ácidos nucleicos La construcción de estos vectores de expresión de epítopes genéricos se presenta a continuación. Las ventajas particulares de estos diseños se establecen en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,572 titulada "EXPRESIÓN VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS" ("VECTORES DE EXPRESIÓN QUE CODIFICAN EPITOPES DE ANTÍGENOS ASOCIADOS AL OBJETIVO" ) . Una cepa de E. coli adecuada se transfectó entonces con el plásmido y se puso en placa en un medio selectivo. Se desarrollaron varias colonias en cultivo de suspensión y se identificaron los clones positivos mediante mapeo de restricción. Los clones positivos se desarrollaron y se hicieron alícuotas en viales de almacenamiento y se almacenaron a -70 °C. La mini-prep (QIAprep Spin Mini-prep; Qiagen, Valencia, CA) del plásmido se elaboró entonces a partir de una muestra de estas células y se utilizó análisis de secuencia de dioxi fluorescente automatizado para confirmar que la construcción tuvo la secuencia deseada. B.l Construcción de pVAX-EPl-IRES-EP2 Vista general : El plásmido de inicio para esta construcción es pVAXl adquirido de Invitrogen (Carlsbad, CA) . Los epítopes EPl y EP2 se sintetizaron mediante GIBCO BRL (Rockville, MD) . El IRES se excitó a partir de pIRES adquirido de Clontech (Palo Alto, CA) .

Procedimiento : 1. pIRES se digirió con EcoRI y Notl. Los fragmentos digeridos se separaron por electroforesis de gel de agarosa, y el fragmento IRES se purificó a partir de la banda excitada. 2. pVAXl se digirió con EcoRI y Notl, y el fragmento pVAXl se purificó. 3. Los fragmentos pVAXl e IRES purificados entonces se ligaron juntos. 4. E. coli competente de la cepa DH5a se transformó con la mezcla de ligación. 5. Las minipreps se elaboraron a partir de 4 de las colonias resultantes. 6. Se realizó el análisis de digestión de la enzima de restricción en el ADN de la miniprep . se utilizó una colonia recombinante que tenía el inserto IRES para la inserción adicional de EPl y EP2. Estas construcciones intermediarias se llamaron pVAX-IRES . Se sintetizaron los oligonucleotidos EPl y EP2. EPl se subclonó en VAX-IRES entre los sitios AF1II y EcoRI, para elaborar pVAX-EPl-IRES . EP2 se subclonó en pVAX-EPl-IRES entre los sitios Salí y Notl, para elaborar la construcción final pVAX- EP1-IRES-EP2.

. La secuencia del inserto EP1-IRES-EP2 se confirmó al secuenciar el ADN. B2. Construcción de pVAX-EPl-IRES-EP2-ISS-NIS Vista general : El plásmido de inicio para esta construcción fue pVAX-EPl-IRES-EP2 (Ejemplo 1) . El ISS (secuencia inmunoestimuladora) introducida en esta construcción es AACGTT, y el NIS (establecido para la secuencia de importación nuclear) utilizado en la secuencia de repetición SV40 72 pb. ISS-NIS se sintetizaron por GIBCO BRL. Ver Figura 2. Procedimiento : 1. pV7AX-EPl-IRES-EP2 se digirieron con NruI ; el plásmido linearizado se purificó en gel. 2. El oligonucleótido ISS-NIS se sintetizó. 3. El pVAX-EPl~IRES-EP2 purificado linearizado y el ISS-NIS sintetizado se ligaron juntos. 4. E. coli competente de la cepa DH5a se transformó con el producto de ligación. 5. Las minipreps se elaboraron a partir de las colonias resultantes. 6. Se llevaron a cabo las digestiones de la enzima de restricción de las minipreps . 7. El plásmido con el inserto se secuenciaron. B3. construcción de pV7AX-EP2-UB-EPl Vista general : El plásmido de inicio de esta construcción fue pVAXl (Invitrogen) , EP2 y EP1 se sintetizaron por GIBCO BRL . El ADNc de ubiquitina que codifica el aminoácido 76 en la construcción se clonó a partir de levadura. Procedimiento : 1. RT-PCR se realizó utilizando ARNm de levadura. Los iniciadores se diseñaron para amplificar la secuencia de codificación competente de ubiquitina de levadura. 2. Los productos de RT-PCR se analizaron utilizando electroforesis en gel de agarosa. Una banda con el tamaño predicho se purificó en gel. 3. La banda de ADN purificada se subclonó en pZEROl en el sitio EcoRV. el clon resultante se nombró pZERO-UB. 4. Se secuenciaron varios clones pZERO-UB para confirmar la secuencia de ubiquitina antes de manipulaciones adicionales. 5. EP1 y EP" se sintetizaron. 6. EP2, Ubiquitina y EP1 se ligaron y el inserto clonado en pVAXl entre BamHI y EcoRI , poniéndolo bajo el control del promotor CMV. 7. La secuencia del inserto EP2-UB-EP1 se confirmó al secuenciar el ADN. Ejemplo 2 Identificación de variantes de epxtope útiles El 10-mer FLPWHRLFLL (SEQ ID NO. 1) se identificó como un epitope útil. En base a esta secuencia, se elaboraron numerosas variantes. Las variantes que exhibieron actividad en el análisis de unión HLA (ver Ejemplo 3, sección 6) se identificaron como útiles, y se incorporaron subsecuentemente en las vacunas. La unión HLA-A2 de variantes grandes de FLPWHRLFLL se han evaluado. El análisis de digestión proteasomal indica que la C-terminal del 9-mer FLPWHRLFL (SEQ ID NO. 8) también se produce. Adicionalmente el 9-mer LPWHRLFLL (SEQ ID NO. 9) puede resultar se la sincronización de la N-terminal del 10-mer. Sin embargo, ambos se predicen para unirse a la molécula HLA-A*0201, de estos dos 9-mer, FLPWHRLFL despliega la unión más significativa y se prefiere (ver las Figuras 3A y B) . La digestión de proteasoma in vítro y la secuenciación del grupo de N-terminal indican que la tirosinasa207-2i6 (SEQ ID NO. 1) se produce más comúnmente que la tirosinasa207-2i5 (SEQ ID NO. 8) , sin embargo este último péptido despliega inmunidad superior, un problema potencial para llegar al diseño de una vacuna óptima. FLPWHRLFL, tirosina 207-215 (SEQ ID NO. 8) se utilizó en una inmunización in vitro de sangre HLA-A2 para generar CTL (ver Cultivos de Inducción CTL abajo) . Utilizando las células T2 del péptido pulsado como objetivos en un análisis de liberación de cromo estándar se encontró que el CTL inducido por la tirosinasa 207-215 (SEQ ID NO. 8) reconoció los objetivos de la tirosinasa 207-2XS (SEQ ID NO. 1) igualmente bien (ver Fig. 3C) . Este CTL también reconoce el HLA-A2*, las líneas celulares de tumor de tirosinasa"1" 624.38 y HTB64 , pero no 624.28 en HLA-A2 " derivado de 624.38 (Fig. 3G) . Así, las cantidades relativas de estos dos epítopes producidos in vivo, no se vuelven un problema en el diseño de vacunas . Cultivos de inducción de CTL PBMCs de los donadores normales se purificaron por centrifugación en Ficoll-Hypaque de buffy coats. Todos los cultivos se llevaron a cabo utilizando el plasma autólogo (AP) para evitar la exposición a patógenos xenogénicos potenciales y el reconocimiento de péptidos FBS . Para favorecer la generación in vitro de CTL específico de péptidos, empleamos células dentríticas autólogas (DC) como APCs. Se generó DC y se indujo CTL con DC y el péptido a partir de PBMCs como se describió (Keogh et al., 2001) . En resumen, las fracciones celulares enriquecidas con monocitos se cultivaron durante 5 días con GM-CSF e IL-4 y se cultivaron durante 2 días adicionales en medio de cultivo con 2 µg/ml de ligando CD40 para inducir la maduración. Se co-cultivaron 2 x 10s linfocitos T enriquecidos +CD8/pozo y 2 x 105 DC pulsado con péptido/pozo en placas de 24 pozos en 2 mi de RP I suplementado con 10% de AP, 10 ng/ml IL-7 y 20 Ul/ml de IL-2. Los cultivos se reestimularon en los días 7 y 14 con DC pulsado con péptido irradiado autólogo. Las variantes de secuencia de FLPWHRLFL se construyen como sigue. Consistente con la tabla de coeficiente de unión (ver Tabla 3) del programa de predicción de unión de MHC NIH/BIMAS (ver referencia en el ejemplo 3 de abajo) , la unión puede mejorarse al cambiar la L en la posición 9, una posición de ancla, para V. También puede alterarse la unión, aunque generalmente hasta un grado menor, mediante cambios en las posiciones de ancla. Refiriéndose en general a la Tabla 3, la unión puede incrementarse al emplear residuos con coeficientes relativamente más grande. Los cambios . en la secuencia también pueden alterar la inmunogenicidad independientemente de su efecto en la unión a MHC. Así, la unión y/o inmunogenicidad puede mejorarse como sigue : Al sustituir F,L,M,W o Y por P en la posición 3 estos son los residuos más voluminosos que también pueden mejorar la inmunogenicidad independiente del efecto sobre la unión. La amina y los residuos que llevan idroxilo, Q y M; y S y T; respectivamente, también pueden provocar una fuerte respuesta de reacción cruzada. Al sustituir D o E por W en la posición 4 para mejorar la unión; esta adición de un cambio negativo también puede hacer al epítope más inmunogénico, aunque en algunos casos reduciendo la reactividad cruzada con el epítope natural . De manera alternativa las sustituciones conservadoras de F o Y pueden provocar una respuesta de reacción cruzada. Al sustituir F por H en la posición 5 para mejorar la unión. H puede verse como parcialmente cargado, asi en algunos casos la pérdida de la carga puede ocultar la reactividad cruzada. La sustitución de los residuos totalmente cargados R o K en esta posición pueden mejorar la inmunogenicidad sin romper la reactividad cruzada dependiente de la carga. Al sustituir I, L, M, V, F, W o Y por R en la posición 6. Las mismas advertencias y alternativas se •aplican aquí como en la posición 5. Al sustituir W o F por L en la posición 7 para mejorar la unión. Las sustituciones de V, I, S, T, Q o N en esta posición que no se predicen generalmente para reducir la afinidad de unión mediante este modelo (el algoritmo NIH) , aún pueden ser ventajosas como se describió arriba. Y y W, las cuales son igualmente preferidas como las Fs en las posiciones 1 a 8, pueden provocar una útil reactividad cruzada. Finalmente, aunque las sustituciones en la dirección de voluminosidad se favorecen generalmente para mejorar la inmunogenicidad, la sustitución de residuos más pequeños tales como A, S y C, en las posiciones 3-7 pueden ser útiles de acuerdo con la teoría que contrasta el tamaño en lugar de la voluminosidad per se, es un factor important en la inmunogenicidad. La reactividad del grupo tiol en puede introducir otras propiedades como se trato en Chen, J. L . , et al., J. Immunol. 165:948-955, 2000.

Tabla 3. Tabla de Coeficiente 9-mer para HLA-A*0201* *Esta tabla y otros datos comparables que se encuentran públicamente disponibles son útiles para diseñar variantes de epítopes y para determinar si una variante particular es substancialmente similar, o es funeionalmente similar. Ejemplo 3 Análisis del grupo (SSX-231_68) . 1. Predicción de región del grupo de epítopes : Los algoritmos de computadora : SYFPEITHI (internet http:// acceso a syfpeithi .bimi-heidelberg.com/Scripts/MHCServer.dll/EpPredict.htm>, en base al libro "MHC Ligands and Peptide Motifs" (Motivos de los ligandos y Péptidos MHC) de H.G. Rammensee, J. Bachmann y S. Stevanovic; y HLA Peptide binding Predictions (NIH) (Predicciones de unión de péptidos HLA) (internet http:// acceso a bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bin), descrito por Paeker, K. C, et al.,.3. Immunol . 152:163, 1994; se utilizaron para analizar la secuencia de proteínas de SSX-2 (GI : 10337583) . El grupo de epítopes (regiones con densidad mayor que la promedio de los fragmentos de péptido con alta afinidad MHC predicha) se definieron como se describe completamente en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,571 titulada "EPIT0PE CLUSTERS", (GRUPOS DE EPITOPES) , PRESENTADA EL 28 DE ABRIL DE 2000. Utilizando un corte de proporción de densidad de epítope de 2, cinco y dos grupos se definieron utilizando los algoritmos SYFPETHI y NIH, respectivamente, y los cortes de puntuación de péptidos de 16 (SYFPETHI) y 5 ( IH) . El péptido de puntuación más alta con el algoritmo NIH, SSX-241_49, con un tiempo medio de disociación estimado de >1000 min. , no se sobrepone a ningún otro epitope predicho pero no se agrupa con SSX-2S7_65 en el análisis de NIH. 2. Síntesis y caracterización del péptido: SSX-231_68. YFSKEEWEKMKASEKIFYWMKRKYEAMTKLGFKATLP (SEQ ID NO. 10) se sintetizó mediante MPS (Sistemas Múltiples de Péptidos, San Diego, CA 92121) utilizando química de fase sólida estándar. DE acuerdo a lo provisto ¾ Certificado de Análisis' la pureza de este péptido fue de 95%. ' 3. Digestión de proteasoma: Se aisló la proteasoma a partir de células sanguíneas rojas humanas utilizando el protocolo de aislamiento de proteasoma descrito en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,074, titulada "ME HOD OF EPITOPE DISCOVERY" ( "MÉTODO PARA DESCUBRIR EPÍTOPES") presentada el 28 de abril de 2000. Se utilizaron SDS-PAGE, inmunotransferencia Western, y ELISA como los análisis de control de calidad. La concentración final del proteasoma fue 4 mg/ml, la cual se determinó mediante el análisis de la proteína no-interférente (Geno Technologies Inc.). Los proteasomas se almacenaron a -70°C en 25 µ? de alícuotas. SSX-231_68 se disolvió en agua de Milli-Q y una solución de almacén de 2mM preparada y 20 µ? de alícuotas almacenadas a -20 °C. Se retiró un tubo de proteasoma (25 µ?) del almacenamiento a -70 °C y se descongeló en hielo. Después se mezcló completamente con 12.5 µ? de 2mM de péptido mediante re-pipetar (las muestras se mantuvieron en hielo) . Se retiró inmediatamente una muestra de 5 µ? después del mezclado y se transfirió a un tubo conteniendo 1.25 µ? 10%TFA (la concentración final de TFA fue 2%) ; la muestra T=0 min. La reacción de digestión de proteasoma se inició entonces y se llevó a cabo a 37 °C en un controlador térmico programable. Se tomaron muestras adicionales de 5 µ? a los 15, 30, 60, 120, 180 y 240 min. Respectivamente, la reacción se detuvo al agregar la muestra a 1.25 µ? 10% TFA como anteriormente. Las muestras se mantuvieron sobre hielo o se congelaron hasta analizarse mediante MALDI-MS. Todas las muestras se preservaron y se almacenaron a -20 °C para el análisis de HPLC y la secuenciación de N-terminal . Se utilizó péptido solo (sin proteasoma) como un control puro: 2 µ? de péptido + 4 µ? de regulador Tris (20 mM, pH 7.6) + 1.5 µ? TFA. 4. Mediciones MALDI-TOF MS : Para cada punto de tiempo se aplicó primero 0.3 µ? de solución de matriz (10 mg/ml ácido a-ciano-4-hidroxicinámico en AcCN/H20 (70:30)) en un portaobjetos de muestras y después se mezcló lentamente un volumen igual de la muestra digerida con la solución de matriz sobre el portaobjetos. El portaobjetos se dejó secar al aire ambiente durante 3-5 min. Antes de adquirir el espectro de masa. Se realizo MS en un espectrómetro de masas Lasermat 2000 MA.LDI-TOF que se calibró con estándares de péptido/ proteína. Para mejorar la exactitud de la medición, el peso del ion molecular (MH+) del substrato péptido se utilizó como un estándar de calibración interna. El espectro de masa de la muestra digerida T=120 min. Se muestra en la Figura 4. 5. Análisis de datos MS e identificación de epítope: Para asignar los picos de masa medidos, se utilizó el programa de computadora MS-Product, una herramienta de la UCSF Mass Spectrometry Facility (Instalación de Espectrometría de Masas de UCSF) (http:// accesible en prospector. ucsf . edu/ucsfhtml3.4/msprod.htm) , para generar todos los fragmentos posibles (iones N- y C-terminal y los fragmentos internos) y sus pesos moleculares correspondientes. Debido a la sensibilidad del espectrómetro de masas, se utilizó el peso molecular promedio. Se identificaron los picos de masa observados durante el curso de la digestión como se resume en la Tabla . Se seleccionaron para un estudio adicional los fragmentos co-C-terminal con secuencias largas de aminoácidos de 8-10 predichas para unir HLA mediante los algoritmos SYFPETHI y NIH. Las etapas de predicción y digestión del procedimiento pueden practicarse útilmente en cualquier orden. Aunque el péptido substrato utilizado en la digestión proteasomal descrita en la presente se diseñó específicamente para incluir las secuencias de unión HLA-A2.1 predichas, los productos de digestión actuales pueden verificarse después del hecho para la unión real o predicha a otras moléculas HC. Los resultados seleccionados se muestran en la Tabla 5. Tabla 4. Identificación del Pico de Masa de SSX-231-68 · PICO MS PEPTIDO SECUENCIA MASA (MH+) (medido) CAICOLADA 988.23 31.37 YSFKEEW 989.08 1377.68+2.3 8 31.40 YFSKEEWEKM 1377.68 1662.45+1.3 0 31-43 YFSKEEWEKMKAS 1663.90 2181.72+0.8 5 31-47 YFSKEEWEKMKASEKIF 2181.52 2346.6 31-48 YFSKEEWEKMKASEKIFY 2344.71 1472.16+1.5 4 38-49 EKMKASE IFYV 1473.77 2445.78±1.1 8 31-49* YFSKEEWEKMKASEKIFYV 2443.84 2607 31-50 YFSKEEWEKMKASEKIFYVY 2607.02 1563.3 50-61 YM RKYEAMTKL 1562.93 3989.9 31-61 YFSKEEWEKMKASEKIFYVYMKR YEAMT L 3987.77 1603.74+1.5 3 51-63 MKRKYEAMTKLGF 1603.98 1766.45+1.5 50-63 YMKRKYEAMTKLGF 1767.16 1866.32±1.2 2 49-63 VYMKRKYEA TKLGF 1866.29 4192.6 31-63 YFSKEEWEKMKASEKIFYVYMKRKYEAMT LGF 4192.00 43.92.1 31-65** YFSKEEWEKMKASEKIFYVYMKRKYEAMTKLGFKA 4391.25 La secuencia en letras negrillas corresponde a los péptidos predichos para unirse a MHC. * Sobre la base de masa sola este pico puede también haberse asignado al péptido 32-50, sin embargo el retiro proteasomal de solamente los aminoácidos de N-terminal es diferente. La secuenciación de N-terminal (abajo) verifica la asignación a 31-49. ** Sobre la base de masa este fragmento también puede representar 33-68. La secuenciación de N-terminal de abajo es consistente con la asignación a 31-65.

Tabla 5. Union HLA predicha por fragmentos proteasomalmente generados .

SEQ ID NO. PÉPTIDO HLA SYFPEITHI NIH 11 FS EEWEKM B*3501 NP† 90 12 K KASEKIF B*08 17 <5 13 & 14 (K)MKASEKIFY Al 19 (19) <5 & 16 (M) KASEKIFYV A/0201 22 (16) 1017 B*08 17 <5 B*5101 22 (13) 60 B*5102 NP 133 B*5103 NP 121 17 & (18) (K) ASEKIFYVY Al 34 (19) 14 19 & (20) (K) RKYEAMTKL A*0201 15 <5 A26 15 NP B14 NP 45 (60) B*2705 21 15 B*2709 16 NP B*5101 15 <5 21 KYEAMTKLGF Al 16 <5 A24 NP 300 22 YEAMTKLGF B*4403 NP 80 23 EA TKLGF B*08 22 <5 † Sin predicción Como se observa en la Tabla 5, la adición de N-terminal de la secuencia auténtica a los epitopes puede generar epítopes para los mismos o diferentes elementos de restricción HC. Nótense en particular los pares de (K) RKYEAMTKL (SEQ ID NOS 19 Y (20)) CON hla-bl4, en donde el 10-mer. tiene un tiempo medio de disociación predicho más grande que el co-C-terminal 9 mer. Nótese también el caso del KYEAMTKLGF (SEQ ID NO. 21) que puede utilizarse como una vacuna útil con varios tipos de MHC al depender del ajuste de N-terminal para crear los epítopes para HLA~B*4403 y -B*08. 6. Análisis de unión de HLA-A0201: La unión del epítope candidato KASEKIFYV, SSX-24i-49 (SEQ ID NO. 15) a HLA-A2.1 se analizó utilizando una modificación del método de Stauss et al., (Proc Nati Acad Sci USA 89 (17) : 7871-5 (1992)) . Específicamente, las células T2, que expresan moléculas MHC vacías o inestables en su superficie, se lavaron dos veces con medio de Dulbecco modificado de Iscove (IMDM) y se cultivaron durante la noche en medio de AIM-V libre de suero (Life Technologies, Inc., Rockville, MD) complementado con microglobulina ß2 a 3 µ9/p?1 (sigma, St .

Louis, MO) y se agregó péptido a 800, 400, 200, 100, 50, 25, 12.5, y 6.25 µg/ml. en una placa de fondo plano de 96 pozos a 3xl05 células/200 µ?/????. El péptido se mezcló con las células al re-pipetar antes de distribuir en la placa (alternativamente el péptido puede agregarse a los pozos individuales) , y la placa se balanceó lentamente durante 2 minutos. La incubación fue en un incubador de C02 al 5% a 37 °C. Al siguiente día el péptido no unido se retiró al lavar dos veces con medio de RPMI libre de suero y se agregó una cantidad de saturación de anticuerpo monoclonal de HLA anti-clase I, anti-HLA A2 , ?28 conjugado de isotiocianato de fluoresceina (FITC) (Uno Lambda, Canoga Park, CA) . Después de la incubación durante 30 minutos a 4°C, las células se lavaron 3 veces con PBS complementado con BSA al 0.5%, 0.05% (peso/volumen) de azida de sodio, pH 7.4-7.6 (amortiguador de coloración) . (Alternativamente puede utilizarse W6/32 (Sigma) como el anticuerpo monoclonal HLA anti-clase I, las células se lavaron con regulador de coloración y después se incubaron con IgG de antiratón de P(ab' ) de cabra conjugado de isotiocianato de fluoresceina (FITC) (Sigma) durante 30 min. a 4aC y se lavaron 3 veces como antes) . Las células se resuspendieron en 0.5 mi de amortiguador de coloración. El análisis de las moléculas HLA-A2.1 de superficie estabilizadas por la unión peptídica se realizó mediante citometría de flujo utilizando un FACScan (Becton Dickinson, San José, CA) . Si la citoraetría de flujo no se va a realizar inmediatamente las células pueden fijarse al agregar un cuarto del volumen de 2% de paraformaldehido y almacenarlo en la oscuridad a 4C. Los resultados del experimento se muestran en la Figura . Se encontró que SSX-24i-49 (SEQ ID NO: 15) se une a HLA-A2.1 hasta un grado similar como el conocido ligante A2.1 FLPSDYFPSV (HBVi8-27-, (SEQ ID NO: 24) utilizado como un control positivo. Un péptido de unión HLA-B44, AEMGKYSFY (SEQ ID NO: 25), se utilizó como control negativo. La fluorescencia obtenida a partir del control negativo fue similar a la señal obtenida cuando no se utilizó péptido en el análisis. Se seleccionaron los péptidos de control positivo y negativo de la Tabla 18.3.1 en Current protocole in Immunology p. 18.3.2, John Wiley and Sons, New York, 1998. 7. Inmunogenicidad: A. Inmunización in vivo de ratones. Ratones A*0201 transgénicos HHDl (Pascólo, S., et al., J. Exp. Med. 185:2045-2051, 1997) se anestesiaron e inyectaron subsecuentemente en la base de la cola, evitando venas laterales de la cola, utilizando 100 µ? conteniendo 100 nmol de SXX-24a..49 (SEQ ID NO. 15) Y 20 pg de péptido epítope de HTL en PBS emulsificado con 50 µ? de IFA (adyuvante de Freund incompleto) . B . Preparación de células estimulanates (cargas LPS) . Utilizando bazos de 2 ratones naturales para cada grupo de ratones inmunizados, se sacrificaron ratones no-inmunizados y los cadáveres se colocaron en alcohol . Utilizando instrumentos estériles, la capa dérmica superior de la piel en el lado izquierdo del ratón (sección media inferior) se corto completamente exponiendo el peritoneo. El peritoneo se saturó con alcohol y el bazo se extrajo asépticamente. El bazo se colocó en un caja de petri con medio libre de suero. Se aislaron los esplenocitos al utilizar émbolos estériles de jeringas de 3 mi para reducir a pasta los bazos . Las células se recolectaron en tubos cónicos de 50 mi en medio libre de suero, enjuagando los posos de la caja. Las células se centrifugaron (12000rpm, 7 min) y se lavaron una vez con RPMI . Las células de bazo frescas se resuspendieron a una concentración de lxlO6 células por mi en RPMI-10%FCS (suero de cabra fetal) . Se agregaron 25g/ml de lipopolisacárido y 7 µg/ml de Dextran Sulfate. Las células se incubaron durante 3 días en matraces T-75 a 37°C, con 5% de C02. Las cargas esplénicas se recolectaron en tubos de 50 mi se nodulizaron (12000 rpm, 7 min) y se resuspendieron a 3xl07/ml en PMI . Las cargas se pulsaron con el péptido iniciador a 50 µg/ml, RT 4 hr. Tratado con mitomicina C a 25 µg/ml, 37aC, 20 min. y se lavaron tres veces con DMEM.

C. Estimulación in vi tro. 3 días después de la estimulación LPS de las células de carga y el mismo día de cargar el péptido, los ratones cargados se sacrificaron (a 14 días después de la inmunización) para retirar el bazo como anteriormente. 3xl05 esplenocitos se co-cultivaron con lxl06 de cargas de LPS/pozo en placas de 24 posos a 37°C, con 5% de C02 en medio de DMEM complementado con 10% de FCS, 5xl0~5 M ß-mercaptoetanol , 100 µ9/t?1 de estreptomicina y 100 iu/ml de penicilina. Los cultivos se alimentaron con 5% /vol/vol) sobrenadante de ConA en el día 3 y se analizó para la actividad citolítica en el día 7 en un análisis de liberación de 51Cr. D. Análisis de liberación de cromo que mide la Actividad de CTL. Para valorar la lisis específica de péptido, 2xl06 células T2 se incubaron con 100 µ<2? de cromato de sodio junto con 50 µg/ml de péptido a 37°C durante 1 hora. Durante la incubación se agitaron lentamente cada 15 minutos. Después de etiquetar y cargar , las células se lavaron tres veces con 10 mi de DMEM-10% FCS, limpiando cada tubo con Kimwipe fresco después de decantar el sobrenadante. Las células objetivo se resuspendieron en DMEM-10% FBS lxl05/ml. Las células efectoras se ajustaron a lxl07/ml en DMEM-10% FCS y se prepararon 100 µ? de diluciones seriales de 3 veces de las efectoras en placas de 96 posos inferiores en U. Se agregaron 100 µ? de las células objetivo por poso. A fin de determinar la liberación espontánea y la liberación máxima, se prepararon seis posos adicionales conteniendo 100 µ? de las células objetivo para cada objetivo. Se reveló la liberación espontánea al incubar las células objetivo con 100 µ? de medio; la liberación máxima se reveló al incubar las células objetivo con 100 µ? de 2% de SDS . Las placas se centrifugaron entonces durante 5 min. a 600 rpm y se incubaron durante 4 horas a 37°C en 5% de C02 y 80% de humedad. Después de la incubación, las placas se centrifugaron entonces durante 5 min. a 1200 rpm. El sobrenadante se recolectó y contó utilizando un contador gama. Se determinó la lisis específica como sigue: % de liberación específica = [(liberación experimental -liberación espontánea) / (liberación máxima - liberación espontánea)] x 100. Los resultados del análisis de la liberación del cromo demostrando la lisis específica de las células objetivo pulsadas por péptido se muestran en la Figura 6. 8. Reactividad cruzada con otras proteínas SS : SSX-241_49 (SEQ ID NO. 15) comparte un alto grado de identidad de secuencia con la misma región de las otras proteínas SSX. Las regiones circundantes también han sido generalmente bien conservadas. Así, el proteasoma de mantenimiento puede desdoblarse después de V4S en todas las cinco secuencias. Además SSX-24i_49 se predice para unir HLA-A*0201 (ver Tabla 6) . CLT generó mediante la inmunización con SSX-241_49, reacción cruzada con células tumorales que expresan otras proteínas. Tabla 6. Union predicha de SSX-24i.9 A*0201 Ejemplo 4 Análisis del grupo (PSMA163-192) · Un péptido AFSPQGMPEGBLVYWYARTEDFFKLERDM, PSMA163- 192 (SEQ ID NO. 30), conteniendo un grupo de epítopes Al del antígeno de membrana específica de próstata PSMAie8-igo (SEQ ID NO. 31) se analizó utilizando química de F-moc de fase sólida estándar en un Sintetizador de Péptidos 433A ABI. Después de la desprotección y desdoblamiento de la cadena lateral déla resina, se disolvió primero el péptido en ácido fórmico y después se diluyó en 30% de Ácido Acético, se corrió en una columna C4 de HPLC preparativa de fase inversa a las siguientes condiciones: gradiente AB lineal (5% B/min) a una velocidad de flujo de 4 ml/min, en donde el eluyente A es 0.1% de TFA acuoso y el eluyente B es 0.1% de TPA en acetonitrilo . Se agrupó una fracción en el momento 16.642 min. conteniendo el péptido esperado, como se juzgó mediante la espectrometría de masas y se liofilizó. El péptido se sometió entonces a la digestión de proteasoma y al análisis de espectro de masas esencialmente como se describió anteriormente. Los picos prominentes del espectro de masas se resumieron en la Tabla 7. Tabla 7. Identif cación de Picos de Masa de PSMA3.63-192 · Las secuencias en letras negrillas corresponden a los péptidos predichos para unirse a HC, ver Tabla 8.

Análisis de Secuencia del Grupo N-terminal Una alícuota en una hora de la digestión proteasomal (ver Ejemplo 3 parte 3 anterior) se sometió al análisis de secuencia de aminoácidos de N-terminal mediante un Secuenciador de Proteínas ABI 473a (Applied Biosystems, Foster City, CA) . La determinación de los sitios y eficiencias de desdoblamiento se basó en la consideración del ciclo de secuencias, el rendimiento repetitivo del secuenciador de proteína y los rendimientos relativos de aminoácidos únicos en la secuencia analizada. Es decir, si el residuo único X (en la secuencia analizada) aparece solamente en el nesimo ciclo, existe un sitio de desdoblamiento de n-1 residuos anterior a este en la dirección de N-terminal. Además para ayudar a resolver cualquier ambigüedad en la asignación de masa a las secuencias, estos datos también proporcionan una indicación más confiable del rendimiento relativo de los diversos fragmentos que hacen espectrometría de masas . Para ?3???63-?92 (SEQ ID NO. 30) esta secuenciación de grupo soporta un solo sitio de desdoblamiento principal después de ?1?? y varios sitios de desdoblamiento menores, particularmente uno después de Yn9. Revisar los resultados presentados en las Figuras 7A-C revela lo siguiente: S en el 3 o ciclo indicando la presencia de la N-terminal del substrato . Q en el 5° ciclo indicando la presencia de la N-terminal del substrato . N en el Io ciclo indicando el desdoblamiento después de V1T1. N en el 3° ciclo indicando desdoblamiento después de V175. Nótese el fragmento 176-192 en la Tabla 7. T en el 5o ciclo indicando el desdoblamiento después de V177. T en los Io y 3° ciclos, indicando los desdoblamientos incrementadámente comunes después de R18i, A180 Y Yl79- Solamente el último de estos corresponde a los picos detectados mediante espectrometría de masas; 163-179 y 180-192, ver Tabla 7. La ausencia de los otros puede indicar que se encuentran en fragmentos más pequeños que los que se examinaron en la espectrometría de masas. K en los 4°, 8o y 10° ciclos indicando los desdoblamientos después de ??83, Y3.79, y V177; respectivamente, todos los cuales corresponden a los fragmentos observados por la espectrometría de masas. Ver Tabla 7. A en el Io y 3° ciclos indicando la presencia de la N-terminal del substrato y el desdoblamiento después de V177, respectivamente . P en el 4° y 8° ciclos indicando la presencia de la N-terminal del substrato. G en el 6 o y 10° ciclos indicando la presencia de la N-terminal del substrato. M en el 7° ciclo indicando la presencia de la N-terminal del substrato y/o el desdoblamiento después de F18s . M en el 15° ciclo indicando el desdoblamiento después de Vi77. El 1° ciclo puede indicar el desdoblamiento después de Dxsz, ver Tabla 7. R en el 4° y 13° ciclo indicando el desdoblamiento después de V177. R en el 2° y 11° ciclo indicando el desdoblamiento después de ??79. V en el 2°, 6° y 13° ciclos indicando el desdoblamiento después de Vi75, ??ß9 y la presencia de la N-terminal del substrato, respectivamente. Nótense los fragmentos que empiezan en 176 y 170 en la Tabla 7. Y en el 1°, 2° y 14° ciclos indicando el desdoblamiento después de V175, VX77 y la presencia de la N-terminal del substrato, respectivamente. L en el 11° y 12° ciclos indicando el desdoblamiento después de V177 y la presencia de la N-terminal del substrato, respectivamente es la interpretación más consistente con el otro dato. En comparación a los resultados de la espectrometría de masas observamos que L en el 2° 5o y 9° ciclos es consistente con el desdoblamiento después de F186 , E133, o M169, y Yi79, respectivamente. Ver Tabla 7. Identificación de Epítope Los fragmentos co-C-terminal con secuencias de 8-10 aminoácidos de longitud predichas para unirse a HLA mediante los algoritmos SYFPEITHI o NIH se seleccionaron para análisis adicional . Las etapas de digestión y predicción del procedimiento pueden practicarse útilmente en cualquier orden. Aunque el péptido substrato utilizado en la digestión proteasomal descrita en la presente se diseñó específicamente para incluir una secuencia de unión HLA-Al, los productos reales de la digestión pueden verificarse después del hecho para la unión real o predicha a otras moléculas MHC. Los resultados seleccionados se muestran en la Tabla 8. Tabla 8. Unión HLA predicha mediante fragmentos generados proteasornalmente SEQ ID NO. PEPTIDO HLA SYFPEITHI NIH 32 & (33) (G) MPEGDLVY A*0201 17 (27) (2605) V B*0702 20 <5 B*5101 22 314 34 & (35) (Q) GMPEGDLV Al 24 (26) <5 Y A3 16 (18) 36 B*2705 17 25 36 MPEGDLVY B*5101 15 NP† 37& (38) (P) EGDLVYVW Al 27 (15) 12 Y A26 23 (17) NP 39 LVYV YARTE A3 21 <5 40 & (41) (Y) VNYARTED A26 (20) NP F B*08 15 <5 B'*2705 12 50 42 NYARTEDFF A24 NP † 100 Cw*0401 NP 120 43 YARTEDFF B*08 16 <5 44 RTEDFFKLE Al 21 <5 A26 15 NP † Sin predicción Análisis de unión de HLA-A*0201: Se realizaron estudios de unión de HLA-A*0201 con SMAie8^177, G PEGDLVY , (SEC ID NO . 33) esencialmente como se describe en el Ejemplo 3 anterior. Como se observa en la Figura 8, este epítope exhibe significativa unión a aún inferiores concentraciones que los péptidos de control positivo. El péptido Melan-A utilizado como control en este análisis (y a través de toda esta exposición) , ELAGIGILTV, es realmente una variante de la secuencia natural (EAAGIGILTV) y exhibe una alta afinidad en este análisis. Ejemplo 5 Análisis de Grupo (PSMA2si-3io) · Otro péptido RGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMG, PSMA28i-3io (SEQ ID NO. 45), conteniendo un grupo de epitopes Al del antigeno de membrana específica de próstata, PSMA283-307 (SEC ID NO. 46), se sintetizó utilizando química de F-moc de fase sólida estándar en un Sintetizador de Péptidos 433a ABI . Después de la desprotección y desdoblamiento de la cadena lateral de la resina, el péptido en ddH20 se corrió en una columna C18 de la HPLC preparativa de fase inversa a las siguientes condiciones: gradiente lineal AB (5% B/min) a una tasa de flujo de 4 ml/min, en donde el eluyente A es 0.1% de TFA acuoso y el eluyente B es 0.1% de TFA en acetonitrilo . Una fracción en el tiempo 17.061 min. conteniendo el péptido esperado según se juzgó mediante espectrometría de masa, se agrupó y se liofilizó. El péptido se sometió entonces a la digestión de proteasoma y al análisis de espectro de masa esencialmente como se describió anteriormente . Los picos prominentes del espectro de masa se resumen en la Tabla 9. Tabla 9 Identificación de los Picos de Masa de PSMA28i-3io · PEPTIDO SECUENCIA MASA CALCULADA (MH+) 281-297 RGIAEAVGLPSIPVHPI* 1727.07 286-297 AVGLPSIPVHPI** 1200.46 287-297 VGLPSIPVHPI 1129.38 288-297 GLPSIPVHPI* 1030.25 298-310 GYYDAQKLLEKMG* 1516.5 298-305 GYYDAQKLi 958.05 281-305 GIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKL 2666.12 281-307 RGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLE 2908.39 286-307 AVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLE 2381.78 287-307 VGLPSI VHPIGYYDAQKLLE 2310.70 288-307 GLPSIPVHPIGYYDAQKLLE# 2211.57 281-299 RGIAEAVGLPSIPVHPIG 1947 286-299 AVGLPSIPVHPIGY 1420.69 287-299 VGLPSIPVHPIGY 1349.61 288-299 GLPSIPVHPIGY 1250.48 287-310 VGLPSIPVH IGYYDAQKLLEKMG 2627.14 288-310 GLPSI VHPIGY DAQKLLEK G 2528.01 Las secuencias en letras negrillas corresponden a los péptidos predichos para unirse a HC, ver la Tabla 10. *Por masa sola, este pico pudo también haber sido 296-310 o 288-303. **Por masa sola este pico pudo también haber sido 298-307. La combinación de HPLC y la espectrometría de masas muestra que en algunos puntos de tiempo posteriores este pico es una mezcla de ambas especies. † Por masa sola este pico pudo también haber sido 289-298. Por masa sola este pico pudo también haber sido 281-295 o 294-306. § Por masa sola este pico pudo también haber sido 297-303. Por masa sola este pico pudo también haber sido 285-306. # Por masa sola este pico pudo también haber sido 288-303. Ninguna de estas asignaciones alternativas son análisis soportados de secuencias del grupo N-terminal.

Análisis de Secuencia del Grupo N-terminal Una alícuota a una hora de la digestión proteasomal (ver Ejemplo 3 parte 3 anterior) se sometió a análisis de secuencia de aminoácidos de N-Terminal mediante un Secuenciador de proteínas ABI 473A (Applied Biosystems, Foster City, CA) . La determinación de los sitios y eficiencias del desdoblamiento se basó en la consideración del ciclo de secuencia, el rendimiento repetitivo del secuenciador de proteínas y los rendimientos relativos de aminoácidos únicos en la secuencia analizada. Es decir, si el único residuo X (en la secuencia analizada) aparece solamente en el nesimo ciclo, existe un sitio de desdoblamiento de n-1 residuos anterior a este en la dirección de N-terminal . Además de ayudar a resolver cualquier ambigüedad en la asignación de masa a las secuencias, estos datos también proporcionan una indicación más confiable del rendimiento relativo de los diversos fragmentos que, hacen espectrometría de masas . Para PSMA28i-3io (SEQ ID NO. 45) esta secuenciación de grupo soporta dos sitio de desdoblamiento principales después de V2S7 e I297 entre otros sitios de desdobl miento menor. Revisar los resultados presentados en la Figura 9 revela lo siguiente: S en el 4o y 11° ciclo indicando el desdoblamiento después de ?"287 y la presencia de la N-terminal del substrato respectivamente . H en el 8° ciclo indicando el desdoblamiento después de 287 - La falta de disminución en la altura pico en las posiciones 9 y 10 versus la caída en la presente altura que va desde 10 hasta 11 puede sugerir también el desdoblamiento después de A286 y E2S5Í en lugar de que los picos representen latencia en la reacción de secuenciación. D en el 2°, 4 o y 7o ciclos indicando el desdoblamiento después de Y2 s, lisi y V294. respectivamente . Este último desdoblamiento no se observa en ninguno de los fragmentos en la Tabla 10 o en las asignaciones alternativas en las notas de más adelante. Q en el 6o ciclo indicando desdoblamiento después M en el 10° y 12° ciclo indicando el desdoblamiento después de Y299 e I297 respectivamente. Identificación de Epítope Los fragmentos co-C-terminal con secuencias de 8-10 aminoácidos de longitud predichas para unirse a HLA mediante los algoritmos SYFPEITHI o NIH se seleccionaron para estudio adicional . Las etapas de digestión y predicción del procedimiento pueden practicarse útilmente en cualquier orden. Aunque el péptido substrato utilizado en la digestión proteasomal descrita en la presente se diseñó específicamente para incluir una secuencia de unión HLA-A1 predicha, los productos reales de la digestión pueden verificarse después del hecho para la unión real o predicha a otras moléculas MHC. Los resultados seleccionados se muestran en la Tabla 10. Tabla 10. Unión HLA predicha mediante f agmentos generados proteasomalmente : PSMA28i-3io † Sin predicción Como Se observa en la Tabla 10, la adición de la N-terminal de secuencia auténtica a epítopes puede con frecuencia generar epítopes todavía útiles, aún mejores, para el mismo o diferentes elementos de restricción MHC. Nótese por ejemplo el par de (G) LPSIPVHPI con HLA-A*0201, en donde el 10-mer puede utilizarse como una vacuna útil con varios tipos de MHC al depender del ajuste de la N-terminal para crear los epítopes para HLA-B7, -B*5101 y Cw*0401. Análisis de unión de HLA-A*0201: Se realizaron estudios de unión de HLA-A*020l con PSMA288-237, GLPSIPVHPI, (SEC ID NO. 48) esencialmente como se describe en los Ejemplos 3 y 4 anterior. Como se observa en la Figura 8, este epítope exhibe significativa unión a aún inferiores concentraciones que los péptidos de control positivo . Ejemplo 6 Análisis de Grupo (PS A454_48i) . Otro péptido, SSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHLTKEL, PSMA454. 48i, (SEQ ID NO. 55) , conteniendo un grupo de epítopes del antígeno de membrana especifica de próstata, se sintetizó mediante MPS (pureza >95%) y se sometió a la digestión de proteasoma y al análisis de espectro de masa como se describió anteriormente . Los picos prominentes del espectro de masa se resumen en la Tabla 11. Tabla 11 Identificación de los Picos de Masa de PSMA454_48i .

PICO MS PEPTIDO SECUENCIA MASA (MH+) (medido) CALCULADA 1238.5 454-464 SSIEG YTLRV 1239.78 1768.38±0 154-469 SSIEGNYTLRVDCTPL 1768.99 .60 1899.8 454-470 SSIEGNYTLRVDCTPLM 1900.19 1097.63±0 463-471 RVDCTPLMY 1098.32 .91 2062.87+0 454- SSIEGNYTLRVDCTPLMY 2063.36 .68 471* 1153 472- SLVHNLTKEL 115 .36 481** 1449.93±1 470-481 MYSLVHNLTKEL 1448.73 .79 Las secuencias en letras negrillas corresponden a los péptidos predichos para unirse a MHC, ver la Tabla 12. * Sobre la base de masa sola este pico pudo igualmente también asignarse al péptido 455-472, sin embargo el retiro proteasomal de justo los aminoácidos de N-terminal se considera improbable. Si la cuestión fuera importante se puede resolver por la secuenciación de N-terminal. ** Sobre la base de masa este fragmento puede también representar 455-464.

Identificación de Epxtope Los fragmentos co-C-terminal con secuencias de 8-10 aminoácidos de longitud predichas para unirse a HLA mediante los algoritmos SYFPEITHI o NIH se seleccionaron para estudio adicional . Las etapas de digestión y predicción del procedimiento pueden practicarse útilmente en cualquier orden. Aunque el péptido substrato utilizado en la digestión proteasomal descrita en la presente se diseñó específicamente para incluir las secuencias de unión HLA-A2.1 predichas, los productos reales de la digestión pueden verificarse después del hecho para la unión real o predicha a otras moléculas MHC. Los resultados seleccionados se muestran en la Tabla 12.

Tabla 12. Unión HLA predicha mediante fragmentos generados proteasomalmente † Sin predicción Como Se observa en la Tabla 12, la adición de N-terminal de secuencia auténtica a epítopes puede con frecuencia generar epítopes todavía útiles, aún mejores, para el mismo o diferentes elementos de restricción MHC. Nótese por ejemplo el par de (L) RVDCTPLMY (SEQ ID NOS. 62 Y (63))) con HLA-B*2702/5, en donde el 10-mer tiene medios tiempos de disociación predichos substanciales y el co-C-terminal 9-mer no. También nótese el caso de SIEGNYTLRV (SEQ ID NO. 57) un epítope HLA-A*0201 predicho que puede utilizarse como una vacuna útil con HLA-B*5101 al depender del ajuste de N-terminal para crear el epítope . Análisis de unión de HLA-A*0201: Se realizaron estudios de unión de HLA-A*0201 esencialmente como se describe en el Ejemplo 3 anterior, con PSMA460-469, TLRVDCTPL, (SEC ID NO. 60) . Como se observa en la Figura 10, este epítope se encontró que une HLA-A2.1 hasta un grado similar al ligante A2.1 conocido FLPSDYFPSV (HBVla_27, SEQ ID NO: 24) utilizado como un control positivo. Adicionalmente . PSMA46i-469, (SEQ ID NO. 59) se une también cercanamente . Análisis de ELISPOT: PSMA463_47a (SEQ ID NO. 62) Los pozos de una placa de microtitulación reforzada con nitrocelulosa se cubrieron con anticuerpo de captura al incubar durante la noche a 4o C utilizando 50 µ?/???? de 4 µ9/p?1 de anticuerpo monoclonal de ?-IFN anti-humano de murino en amortiguador de recubrimiento (35mM bicarbonato de sodio, 15 mM carbonato de sodio, pH 9.5) . El anticuerpo no unido se retiró al lavar 4 veces 5 min. Con PBS . Los sitios no unidos en la membrana se bloquearon entonces al agregar 200 µg/ ozo de medio RPMI con 10% de suero e incubar 1 h. a temperatura ambiente. Las células T CD8+ estimuladas con antígeno, en diluciones seriales 1:3, se sembraron en los pozos de la placa de tnicrotitulación utilizando 100 µ?/????, iniciando a 2xl05 células/pozo. Se agregó (la estimulación con antígeno previa fue como se describió esencialmente en Scheibenbogen, C. Et al., Int. J. Cáncer 71:932-936 , 1997. PSMA462-47i (SEQ ID NO. 62) se agregó a una concentración final de 10 µg/ml y IL-2 a 100 U/ml y las células se cultivaron a 37 °C en una atmósfera de C02 al 5%, saturada con agua durante 40 hrs. Después de esta incubación las placas se lavaron 6 veces con 200 µ?/???? de PBS conteniendo 0.05% de Tween-20 (PBS-Tween) . El anticuerpo de detección, 50 µ?/???? de 2g/ml de anticuerpo monoclonal de ?-IFN antihumano de murino en suero de cabra fetal de PBS+10%, se agregó y la placa se incubó a temperatura ambiente durante 2 hrs. El anticuerpo de detección no unido, se retiró al lavar 4 veces con 200 µ? de PBS-Tween. Se agregaron 100 µ? de peroxidasa de rábano picante conjugada con avidina (Pharmingen, San Diego, CA) a cada pozo y se incubó a temperatura ambiente durante 1 hr. La enzima no unida se retiró al lavar 6 veces con 200 µ? de PBS-Tween. El substrato se preparó al disolver una tableta de 20 mg de 3-amino 9-etilcoarbasol en 2.5 mi de N, N-dimetilformamida y agregar esa solución a 47,5 mi de 0.05 M amortiguador de fosfato-citrato (pH 5.0) . Se agregaron 25 µ? de H202 al 30% a la solución del substrato inmediatamente antes de distribuir el substrato a 100 µ?/???? e incubar la placa a temperatura ambiente. Después del revelado del color (generalmente 15-30 min.), la reacción se detuvo al lavar la placa con agua. La placa se secó con aire y se contaron las marcas luminosas utilizando un estereomicroscopio . La Figura 11 muestra la detección de las células T CD8+ de HLA-A1+ reactivas a PSMA463-47i (SEQ IN NO. 62) previamente generadas en cultivos de células T CD8+ de HLA-A1+ con células dendríticas autólogas más el péptido. No se detectó reactividad de los cultivos sin el péptido (datos no mostrados) . En este caso puede observarse que las células T reactivas al péptido se encuentran presentes en el cultivo a una frecuencia entre 1 en 2.2xl04 y 1 en 6.7xl04. Se demostró que esta es verdaderamente una respuesta restringida de HLA-Al, por la capacidad del anticuerpo monoclonal anti HLA-A1 para bloquear la producción de ?-IFN; ver Figura 12. Ejemplo 7 Análisis de Grupo (PS A653-687) · Otro péptido FDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFY PSMASS3_687, (SEQ ID NO. 64) conteniendo un grupo de epítopes A2 del antigeno de membrana especifica de próstata, PSMAS6o-6si (SEQ ID NO. 65), se sintetizó mediante MPS (pureza >95%) y se sometió a digestión de proteasoma y al análisis de espectro de masa como se describió anteriormente . Los picos prominentes del espectro de masa se resumen en la Tabla 13.

Tabla 13. Identificación de Picos de la Masa de PSMA6S3_687.

PICO MS PEPTIDO SECUENCIA MASA (MH+) (medido) CALCULADA 906.17±0.65 681-687** LPDRPFY 908.05 1287.73+0.76 677-687** DPLGLPDRPFY 1290.47 1400.3±1.79 676-687 IDPLGLPDRPFY 1403.63 1548.0+1.37 675-687 FIDPLGLPDRPFY 1550.80 1619.5+1.51 674-687** AFIDPLGLPDRPFY 1621.88 1775.48±1.32 673-687* RAFIDPLGLPDRPFY 1778.07 2440.2+1.3 653-672 FDKSNPIVLRMMNDQLMFLE 2442.93 1904.63+1.56 672-687* ERAFIDPLGLPDRPFY 1907.19 2310+2.5 653-671 FDKSNPIVLRMMNDQL FL 2313.82 2017.4±1.94 671-687 LERAFIDPLGLPDRPFY 2020.35 21.97.43+1.78 653-670 FDKSNPIVLRMMNDQLMF 2200.66 Las secuencias en letras negrillas corresponden a los péptidos predichos para unirse a MHC, ver la Tabla 13. * Sobre la base de masa sola este pico pudo igualmente también asignarse a un péptido que empieza en 654, sin , embargo el retiro proteasomal de justo los aminoácidos de N-terminal se considera improbable. Si la cuestión fuera importante se puede resolver por la secuenciación de N-terminal . ** Sobre la base de masa sola estos picos pueden asignarse a fragmentos internos, pero dado- el patrón general de digestión se considera improbable .

Identificación de epítope Los fragmentos co-C-terminal con secuencias de 8-10 aminoácidos de longitud predichas para unirse a HLA mediante los algoritmos SYFPEITHI o NIH se seleccionaron para estudio adicional . Las etapas de digestión y de predicción del procedimiento pueden ser útilmente practicadas en cualquier orden. Aunque el péptido substrato utilizado en la digestión proteasomal descrita en la presente se diseñó específicamente para incluir secuencias de unión de HLA-A2.1 predichas, los productos reales de la digestión pueden verificarse después del hecho para la unión real o predicha a otras moléculas MHC. Los resultados seleccionados se muestran en la Tabla 14. Tabla 1 . Unión HLA predicha mediante fragmentos proteasomalmente generados † Sin predicción Como Se observa en la Tabla 14 la adición de la N-terminal de secuencia auténtica a epítopes puede generar epítopes todavía útiles, aún mejores, para el mismo o diferentes elementos de restricción MHC. Nótese por ejemplo el par de (R) MM DQLMFL (SEQ ID NOS. 66 Y (67))) con HLA-A*02, en donde el 10-mer retiene el potencial de unión predicho substancial . Análisis de unión de HLA-A*0201 Se realizaron estudios de unión de HLA-A*0201 esencialmente como se describe en el Ejemplo 3 anterior, con PSMAS63-S7i, (SEC ID NO. 66) y PSMA662-67i, RMMNDQLMFL (SEQ ID NO. 67) . Como se observa en las Figuras 10, 13 y 14, este epítope exhibe unión significante a aún inferiores concentraciones que el peptido de control positivo (FLPSDYFPSV (HBV18-27) ; SEQ ID NO : 24). Aunque corrió en paralelo, la comparación a los controles sugiere que PSMA662-S71, (el cual se aproxima al peptido Melan A en afinidad) tiene la actividad de unión superior de estos dos péptidos PSMA. Ejemplo 8 Vacunación con vacunas de ep tope. 1. Vacunación con vacunas de epítope: A. Suministro intranodal Una formulación conteniendo peptido en amortiguador acuoso con un agente antimicrobial , un antioxidante y una citocina de inmunomodulación, se inyectó continuamente a través de varios días en el nodo linfático inguinal utilizando un sistema de bombeo en miniatura desarrollado para el suministro de insulina (MiniMed; Northridge, CA) . Este ciclo de infusión se seleccionó a fin de imitar la cinética de la presentación del antígeno durante una infección natural . B . Liberación controlada Se suministró una formulación de péptido utilizando microesferas de PLGA controladas como se conoce en la técnica, las cuales alteran la farmacocinética del péptido y mejoran la inmunogenicidad. Esta formulación se inyectó o se tomó oralmente . C . Abastecimiento de la pistola de genes Se preparó una formulación de péptido en donde el péptido se adhiere a micropartículas de oro como se conoce en la técnica. Las partículas se abastecen en una pistola de genes, que se acelera a alta velocidad a fin de penetrar la piel, llevando las partículas hacia los tejidos dermales que contienen pAPCs . D . Suministro en aerosol Se inhala una formulación de péptido como un aerosol como se conoce en la técnica, para su absorción en el tejido linfático o vascular apropiado en los pulmones. 2. Vacunación con vacunas de ácido nucleico: Se inyectó una vacuna de ácido nucleico en un nodo linfático utilizando un sistema de bombeo en miniatura tal como la bomba de insulina de MiniMed. Se suministró una construcción de ácido nucleico formulada en una solución amortiguada acuosa conteniendo un agente antimicrobial, un antioxidante y una citocina de inmunomodulación, a través de un ciclo de infusión de varios dias a fin de imitar la cinética de la presentación del antigeno durante una infección natural . Opcionalmente, se suministró la construcción de ácido nucleico utilizando substancias de liberación controlada, tales como las microesferas PLGA u otras substancias biodegradables . Estas substancias se inyectaron o se tomaron oralmente . Las vacunas de ácido nucleico se dieron utilizando el suministro oral, iniciando la respuesta inmune a través a través de la absorción en los tejidos GALT. Alternativamente, las vacunas de ácido nucleico se suministraron utilizando una pistola de genes, en donde la vacuna de ácido nucleico se adhirió a las minúsculas partículas de oro. Las construcciones de ácido nucleico también pueden inhalarse como un aerosol, para la absorción en el tejido linfático o vascular apropiado en los pulmones. Ej emplo 9 Análisis para la efectividad de las vacunas de epítope. 1. Análisis de tetrámero : Se utilizó el análisis de tetrámero Clase I para determinar la frecuencia de las células T en un animal antes y después de la administración de un epítope de mantenimiento . La expansión clonal de las células T en respuesta a un epítope indica que el epítope se presenta en las células T mediante pAPCs . La frecuencia de las células T específicas se mide contra el epítope de mantenimiento antes y después de la administración del epítope a un animal, para determinar si el epítope se encuentra presente en pAPCs . Un incremento en la frecuencia de las células T específicas para el epítope después de la administración indica que el epítope se presentó en pAPC. 2. Análisis de proliferación: Aproximadamente 24 horas después de la vacunación de un animal con el epítope de mantenimiento, se recolectaron los pAPCs a partir de PBBMCs, esplenocitos o células de nodo linfático, utilizando anticuerpos monoclonales contra los marcadores específicos presentes en pAPCs utilizando esta técnica. Los pAPCs enriquecidos se utilizaron entonces en un análisis de proliferación contra un clon de células T que se había generado y es específico para el epítope de mantenimiento de interés. Los pAPCs se co-incubaron con el clon de las células T y las células T se monxtorearon para la actividad de proliferación al medir la incorporación de timidina radioetiquetada por células T. La proliferación indica que las células T específicas para el epítope de mantenimiento se encuentran siendo estimuladas por ese epítope en el pAPCs . 3. Análisis de liberación de cromo: Un paciente humano, o animal no humano diseñado genéticamente para expresar MHC humano Clase I, se inmuniza utilizando un epítope de mantenimiento. Las células T del sujeto inmunizado se utilizan en un análisis de liberación de cromo estándar utilizando objetivos de tumor humano u objetivos diseñados para expresar el mismo MHC Clase I. Las células T que eliminan los objetivos indican que la estimulación d las células T en un paciente podría ser efectiva para eliminar un tumor que expresa un TuAA similar. Ejemplo 10 La Inducción de la respuesta de CTL con ADN puro es eficiente mediante la inmunización de nodo Intra-linfático . A fin de comparar cuantitativamente las respuestas de CD8+ CTL inducidas mediante diferentes rutas de inmunización, se utilizó una vacuna de ADN de plásmido (pEGFPL33A) conteniendo un epítope de CTL inmunodominante bien caracterizado de la glicoproteína LCMV (G) (gp33; aminoácidos 33-41) (Oehen, S, et al., Im unology 99, 163-169 2000) , puesto que este sistema permite una valoración completa délas respuestas de CTL antivirales. Los grupos de 2 C57BL/6 ratones se inmunizaron una vez con dosis de titulación (200-0.02 µg) de pEGFPL33A ADN o del plásmido control pEGFP-M3 , administrado, i.m. (intramuscular), i.d. (intradermal) , i.spl. (intraesplénico) , o i.ln. (ganglio intra-linfático) . Los ratones de control positivo recibieron 500 pfu de LCMV i.v. (intravenosa) . Diez días después de la inmunización las células del bazo se aislaron y se determinó la actividad de CTL específica de gp33 después de la estimulación secundaria in vi tro. Como se muestra en la Figura 15, la inmunización i.m. o i.d. indujo las respuestas de CTL débilmente detectables cuando se administraron altas dosis de ADN de pEFGPL33A (200 µg) . En contraste, se produjeron potentes respuestas de CTL de go33-específico mediante la inmunización con solamente 2 µg de ADN de pEFGPL33A i . spl . y con tan poco como 0.2 µg de ADN de pEFGPL33A dado i.ln. (Figura 15; se muestran símbolos que representan ratones individuales y uno de tres experimentos similares) . La inmunización con el control pEGFP-N3 ADN no produjo ninguna respuesta de CTL especifica de gp33 detectable (datos no mostrados) . Ejemplo 11 La inmunización de ADN de ganglio Intra Linfático produce inmunidad anti- umor . Para examinar si las potentes respuestas de CTL producidas después de la inmunización i.ln. fueron capaces de conferir protección contra tumores periféricos, los grupos de 6 C57BL/6 ratones se inmunizaron tres veces a intervalos de 6 días con 10 µg de ADN de pEFGPL33A o pEGFP-N3 ADN. Cinco DÍAS después de la última inmunización, se transplantaron s.c. pequeñas piezas de tumores sólidos expresando el epitope gp33 (EL4-33) en ambos matraces y se midió el crecimiento del tumor cada 3-4d. Aunque el tumor EL4-33 creció bien en ratones que se habían inmunizado repetidamente con el control pEGFP-N3 ADN (Figura 16) , los ratones que se inmunizaron con ADN de pEFGPL33A i.ln. rápidamente erradicaron los tumores periféricos EL4-33 (Figura 16) . Ejemplo 12 Las diferencias en contenido de ADN del ganglio linfático representan las diferencias en la respuesta de CTL después de la inyección de ganglio intra-linf tico e intramuscular. Se inyectó ADN de pEFGPL33A i.ln. o i.m. y el contenido de plásmido del ganglio linfático inyectado o drenado se valoró mediante PCR de tiempo real después de 6, 12, 24, 48 horas y 4 y 30 días. A 6, 12 y 24 horas el contenido de ADN de plásmido de los ganglios linfáticos inyectados fue de aproximadamente tres ordenes de magnitud mayor que la de los ganglios linfáticos drenados después de la inyección i.m. El ADN de plásmido no fue detectable en el ganglio linfático drenado en puntos de tiempo subsecuentes (Fig. 17) . Esto es consonante con los tres ordenes de dosis de mayor magnitud necesarias utilizando i.m. en comparación a inyecciones i.ln. para lograr los niveles similares de actividad CTL. Los ratones Knockout D8~^~ , que no desarrollan una respuesta a este epítope, también se inyectaron i.ln. mostrando que la eliminación de ADN del ganglio linfático no se debe a la eliminación de CTL de CD8+ de células en el ganglio linfático. Esta observación también soporta la conclusión de que la administración i.ln. no provocará daño inmunopatológico al ganglio linfático. Ejemplo 13 Administración de una formulación de plásmido de ADN de una vacuna terapéutica para melanoma en humanos . SY CHROTOPE TA2M, una vacuna para melanoma, que codifica el epitope de tirosina restringido por HLA-A2 SEQ ID NO. 1 y el grupo de epitope SEQ ID NO. 69, se formuló en Bencil alcohol al 1%, etil alcohol al 1%, EDTA 0.5mM, pH 7.6. Se prepararon alícuotas de 80, 160 y 320 µg de ADN/ml para cargarse en bombas de infusión MINIMED 407C. El catéter de un equipo de infusión SILHOUETTE se colocó en un ganglio linfático inguinal visualizado mediante representación de imágenes de ultrasonido. La instalación de la bomba y el equipo de infusión se diseñó inicialmente para el suministro de insulina a diabéticos y el catéter de 17 mm común se substituyó con un catéter de 31 mm para esta aplicación. El equipo de infusión se mantuvo abierto durante 4 días (aproximadamente 96 horas) con una velocidad de infusión de aproximadamente 25 µ?/hora dando como resultado un volumen infundido total de aproximadamente 2.4 mi. Así, la dosis total administrada por infusión fue de aproximadamente 200 y 400 µg; y puede ser de 800 µg, respectivamente, para las tres concentraciones anteriormente descritas. Después de la infusión a los sujetos se les dio un periodo de descanso antes de iniciar una infusión subsecuente. Dada la residencia continua del ADN de plásmido en el ganglio linfático después de la administración (como en el Ejemplo 12) y la cinética usual de la respuesta de CTL después de la desaparición del antígeno, esta programación será suficiente para mantener la respuesta inmunologica de CTL. Ej emplo 14 Epítopes Adicionales Las metodologías anteriormente descritas, y en particular en los Ejemplos 3-7, se han aplicado a substratos de péptido sintéticos adicionales, que conducen a la identificación de epítopes adicionales como se establece para las Tablas 15-36 siguientes. Los substratos utilizados en la presente se diseñaron para identificar productos del procesamiento proteasomal de mantenimiento que origina epítopes de unión HLA-A*0201, pero pueden predecirse reactividades de unión a MHC adicionales, como se trató anteriormente. Sin embargo, muchas de tales reactividades se describen, listándose éstas para ser ejemplificativas, no exhaustivas o limitativas. También como se describió anteriormente, los componentes individuales de los análisis pueden utilizarse en varias combinaciones y ordenes. Las digestiones de los substratos NY-ESO-1 136-163 y 150-177 (SEQ ID NOS. 254 y 255 respectivamente) produjeron fragmentos que no se precipitan bien en espectrometría de masa MALDI-TOF.

Sin embargo, fueron bastante tratables para secuenciar el grupo de péptido de N-terminal, permitiendo así la identificación de los sitios de desdoblamiento. No todos los substratos necesariamente cumplen la definición formal de un grupo de péptidos referida en el Ejemplo 3. Algunos grupos son bastante grandes , e.g. Y-ESO-i86-i7i, es decir fue más conveniente utilizar substratos que se extienden solamente una porción de este grupo. En otros casos, los substratos se extendieron más allá de los grupos que cumplen la definición formal para incluir a los epitopes predichos vecinos . En algunos casos, la actividad de unión real puede haber dictado que substrato se elaboró, como por ejemplo con los epitopes MAGE reportados en la presente, en donde la actividad de unión de HLA se determinó para una selección de péptidos con afinidad predicha, antes de que los substratos sintéticos se diseñaran .

Tabla 15 GP100: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión referidos anteriormente (ver ejemplo 3) .

SEQ ID Predicciones de Unión HLA NO (SYFPEITHI/NIH) † Substrato Epítope Secuencia A*0201 Al A3 B7 B8 Comentarios 609-644 630-638* LPHSSSHWL 88 20/80 16/<5 *La digestión 629-638* QLPHSSSHWL 89 21-117 de 609-644 y 614-622* LIYRRRLMK 90 32/20 622-650 ha 613-622 SLIYRRRLMK 91 14/<5 29/60 generado los 615-622 IYRRRL K 92 15/<5 mismos 622-650 630-638* LPHSSSHWL 93 20/80 16/<5 epítopes 629-638* QLPHSSSHWL 94 21/117 Tabla 16 A MAGE-1; Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento SEQ ID Predicciones de Unión HLA (SYFPBITHI/NIH) † NO Subs rato Epítope Secuencia A*201 Al A3 B7 B8 Otros 85-109 95-102 ESLFRAVI 95 16/<5 93-102 ILESLFRAVI 96 2l/<5 20/<5 93-101 ILESLFRAV 97 23/<5 92-101 CILESLFRAV 98 23/55 92-100 CILESLFRA 99 20/138 263-292 263-271 EFLWGPRAL 100 A26 (R21) , A2 (NIH30) 264-271 FLWGPRAL 101 17/<5 264-273 FLWGPRAL 102 16/<5 19/<5 265-274 LWGPRALAET 103 16/<5 268-276 PRALAETSY 104 15/<5 267-276 GPRAIAETSY 105 15/<5 <15/<5 B4403 (NIH 7) ; B3501 (NIH 120) 269-277 RALAETSYV 106 18/20 271-279 LAETSYV V 107 19/<5 270-279 ALAETSYVKV 108 30/427 19/<5<5 272-280 AETSYVKVL 109 15/<5 B4403 (NIH 36) 271-280 LAETSYV VL 110 18/<5 <15/<5 274-282 TSYVKVLEY 111 26/<5 B4403 (NIH 14) 273-282 ETSYVKVLEY 112 28/6 A26 (R31) , B4403 (NIH 14) 278-286 KVLEYVIKV 113 26/743 16/<5 Tabla 16 B MAGE-l: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 17 A MAGE-2: Epxtopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 17 B MAGE-2: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 18 MAGE-3: Epitopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 19 A NY-ESO-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) Tabla 19 B NY-ESO: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestió de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 20 PRAME: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 21 PSA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento arriba referidos (ver ejemplo 3) . R indica una puntuación de SYFPEITHI Tabla 22 PSCA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento *L123 es la C-terminal de la proteína natural † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo 3) .

Tabla 23 Tirosinasa: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver ejemplo Tabla 24 PSMA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento 1Esta H se reportó como Y en la base de datos SWISSPROT. † Las puntuaciones se dan a partir de los dos programas de predicción de unión arriba referidos (ver e emplo 3) .

Tabla 25 A MAGE-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 125-132 KAEMLESV 256 B5101 19 n.a. 124-132 TKAEMLESV 257 A0201 20 <5 123-132 VTKAEMLESV 258 A0201 20 <5 ' Al 28 45 128-136 MLESVIKNY 259 A26 24 n.a. Mage-1 119-146 A3 17 5 Al 15 <1.0 127-136 EMLESVIK Y 260 A26 23 <1.0 B5101 23 100 125-133 AEMLESVI 261 A2 N.A. 4 B08 16 <1.0 146-153 KASESLQL 262 B5101 17 N.A. B2705 17 1 145-153 GKASESLQL 263 Mage-1 143-170 B2709 16 N.A. 147-155 ASESLQLVF 264 Al 22 68 A26 16 N.A. 153-161 LVFGIDVKE 265 A3 16 <1.0 Tabla 25B MAGE 1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Subs rato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYPPEITHI NIH 114-121 LLKY A E 266 B8 25 <1.0 B8 16 <1.0 106-113 VADLVGFL 267 B5101 21 N.A. A0201 23 44 A26 25 N.A. 105-113 KVADLVGFL 268 A3 16 <5 B0702 14 20 Mage-1 99-125 B2705 14 30 A0201 17 <5 107-115 ADLVGFLLL 269 B0702 15 <5 B2705 16 1 A0201 16 <5 106-115 VADLVGFLLL 270 Al 22 3 114-123 LLKYRAREPV 271 A0201 20 2 Tabla 26 MAGE-3: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 271-278 FL GPRAL 162 B08 17 <5 A2S 21 N.A. 270-278 EFLWGPRAL 163 A2 N.A. 30 B1510 16 N.A. A0201 27 2655 271-279 FLWGPRALV 164 A3 16 2 A0201 19 1.0 278-286 LVETSYVKV 272 A26 17 N.A. A0201 28 428 277-286 ALVETSYVKV 273 A26 16 <5 age-3 267-295 A3 18 <5 A0201 19 27 285-293 KVLHHMVKI 274 A3 19 <5 276-284 RALVETSYV 165 AQ201 18 20 283-291 YVKVLHHMV 275 A0201 17 <1.0 275-283 PRALVETSY 276 Al 17 <1.0 274-283 GPRALVETSY 277 Al 15 <1.0 278-287 LVETSYVKVL 278 A0201 18 <1.0 272-281 LWGPRALVET 168 A0201 16 <1.0 271-280 FLWGP ALVE 167 A3 22 <5 Tabla 27 A Fibronectina ED-B: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento *Este substrato contiene los 14 aminoácidos de fibronectina que flanquean ED-B en el lado N-terminal **Estos péptidos abarcan la unión entre la N-terminal del dominio ED-B y el resto de la fibronectina. † Los letreros en cursiva indican secuencias fuera del dominio ED-B 10 Tabla 27 B Fibronectina ED-B: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 23-30 TPLNSSTI 282 B5101 22 N.A. 18-25 IGLRWTPL 283 B5101 18 N.A. A0201 20 5 17-25 SIGLRWTPL 284 A26 18 N.A. B08 25 <5 Al 19 <5 ED-B 8-35 25-33 LNSSTIIGY 285 A26 16 <5 Al 20 <5 24-33 PLNSSTIIGY • 286 A26 24 N.A. A3 16 <5 B0702 17 8 23-31 TPIJNSSTII 287 B5101 25 440 Tabla 27 C Fibronectina ED-B: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 31-80 IGYRITW 288 B5101 25 N.A. A0201 23 15 A3 17 <1.0 30-80 IIGYRITW 289 B08 15 <1.0 B5101 15 3 A0201 26 9 29-38 TIIGYRITW 290 A2S 18 N.A. A3 18 <5 23-30 TPLNSSTI 282 B5101 22 N.A. ED-B 20-49 Al 19 <5 25-33 LNSSTIIGY 285 A2S 16 N.A. A26 24 N.A. 24-33 PLNSSTIIGY 286 A3 16 <5 31-39 IGYRITWA 291 A3 17 <5 A0201 15 <5 30-39 IIGYRITWA 292 A3 18 <5 B0702 17 8 23-31 TPLNSSTII 287 B5101 25 440 Tabla 28A CEA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 184-191 SLPVSPRL 293 B08 19 <5 A0201 15 <5 B1510 15 183-191 QSLPVSPRL 294 B2705 18 10 B2709 15 186-193 PVSPRLQL 295 B08 18 <5 B0702 26 180 185-193 LPVSPRLQL 296 B08 16 <5 B5101 19 130 A0201 23 21 184-193 SLPVSPRLQL 297 A26 18 N.A. CEA 176-202 A3 18 <5 185-192 LPVSPRLQ 298 B5101 17 N.A. A0201 21 4 A26 16 N.A. 192-200 QLSNGNRTL 299 A3 19 <5 B08 17 <5 B1510 15 191-200 LQLSNGNRTL 300 A0201 16 3 179-187 V NQSLPV 301 A0201 16 28 A26 17 N.A. 186-194 PVSPRLQLS 302 A3 15 <5 Tabla 28 B CEA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 362-359 SLPVSPRL 303 B08 19 <1.0 A0201 15 <1.0 361-369 QSLPVSPRL 304 B2705 18 10 B2705 15 364-371 PVSPRLQL 305 B08 18 <1.0 B0702 26 180 363-371 LPVSPRLQL 306 B08 16 <1.0 B5101 19 130 A0201 23 21 A26 18 N.A CEA 354-380 362-371 SLPVSPRLQL 307 A24 N.A. 6 A3 18 <5 363-370 LPVSPRLQ 308 B5101 17 N.A A0201 22 4 A26 16 N.A 370-378 QLSNDNRTL 309 A3 17 <1.0 B08 17 <1.0 369-378 LQLSNDNRTL 310 A0201 16 3 357-365 WVNNQSLPV 311 A0201 16 28 360-368 NQSLPVSPR 312 B2705 14 100 Tabla 28 C CEA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Unión Substrato Epitope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 540-547 SLPVSPRL 313 B08 1S <5 A0201 15 <5 B1510 15 <5 539-547 QSLPVSP L 314 B2705 18 10 B2709 15 542-549 PVSPRLQL 315 B08 18 <5 B0702 26 180 541-549 LPVSPRLQL 316 B08 16 <1.0 B5101 19 130 A0201 23 21 540-549 SLPVSPRLQL 317 Á26 18 N.A CEA 532-558 A3 18 <5 541-548 LPVSPRLQ 318 B5101 17 N.A AO201 24 4 A26 16 N.A 548-556 QLSNGNRTL 319 A3 19 <1.0 B08 17 <1.0 B1510 15 547-556 LQLSNGNRTL 320 A0201 16 3 A0201 18 28 535-543 WVNGQSLPV 321 A3 15 <1.0 533-541 LWWVNGQSL 322 AO201 15 <5 Tabla 28 D CEA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYPPEITHI NIH A0201 25 816 CEA 532-558 532-541 YLWWVNGQSL 323 A26 18 N.A (continúa) 538-546 GQSLPVSPR 324 B2705 17 100 Tabla 29 A HER2/NEU: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Substrato Predicción de Unión Epitope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 30-37 DMKLRLPA 325 B08 19 8 28-37 GTD KLRLPA 326 Al 23 6 42-49 HLDMLRHL 327 B08 17 <5 A0201 17 <5 41-49 THLD LRHL 328 B1510 24 N.A 40-49 ETHLDMLRHL 329 A26 29 N.A 36-43 PASPETHL 330 B5101 17 N.A A0201 15 <5 35-43 LPASPETHL 331 B5101 20 130 B5102 N.A 100 Her-2 25-52 34-43 RLPASPETHL 332 A0201 20 21 A0201 15 <5 B0702 20 24 38-46 SPETHLDML 333 B08 18 <5 B5101 18 110 37-46 ASPETHLDML 334 A0201 18 <5 Al 29 25 42-50 HLDMLRHLY 335 A26 20 N.A A3 17 4 41-50 THLDMLRHLY 336 Al 18 <1 , 0 Tabla 29B HER2/NEU: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimie to . Seq. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 719-726 ELR VKVL 337 B8 24 16 A0201 16 1 718-726 TELR V VL 338 B08 22 <5 B5101 16 <5 Al 18 2 717-726 ETELRKV VL 339 A26 28 6 A0201 17 <5 715-723 LKETELR V 340 .B5101 15 <5 714-723 ILKETELRKV 341 A0201 29 8 A0201 15 <5 B08 22 <5 Her-2 705-732 712-720 MRILKETEL 342 B2705 27 2000 B2709 21 N.A A0201 20 2 711-720 QMR1L ETEL 343 B0702 13 40 Al 18 5 717-725 ETELRKVKV 344 A26 18 N.A 716-725 KETELRKV V 345 A0201 16 19 B0702 16 8 706-714 MPMQAQ RI 346 B5101 22 629 705-714 AMPNQAQMRI 347 A0201 18 8 706-715 MPNQAQ RIL 348 B 0702 20 80 Tabla 29C HER/2NEU: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Tabla 30 NY-ESO-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Unión Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 67-75 GAASGLNGC 354 A0201 15 <5 52-60 RASGPGGGA 355 B0702 15 <5 NY-ESO-1 51 -77 64-72 PHGGAASGL 356 B1510 21 N.A. 63-72 GPHGGAASGL 357 B0702 22 80 60-69 APRGPHGGAA 358 B0702 23 60 Tabla 31A PRAME: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIE 112-119 VRPRRW L 359 B08 19 A26 27 N.A A24 N.A. 5 111-119 EVRPRRWKL 360 A3 19 N.A B0702 15 (B7) 300.00 B08 26 160 B0702 21 (B7)40.00 113-121 RPRRWKLQV 361 B5101 19 110 B08 26 <5 PRAME 103-135 114-122 PRRWKLQVL 362 B2705 23 200 B0702 24 (B7) 800.00 B8 N.A 160 133-122 RPRR LQVL 363 B5101 N.A 61 B5102 N.A 61 A24 N.A 10 B08 22 <5 116-124 RWKLQVLDL 364 B2705 17 3 115-124 RRWKLQVLDL 365 A0201 16 <5 PRAME 161-187 174-182 PVEVLVDLF 366 A26 25 N.A Tabla 3 IB PRA E: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epí ope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 199-206 VKRKKNVL 367 B08 27 8 A0201 16 <1.0 A26 20 N.A. 198-206 KVKRKKNVL 368 A3 22 <1.0 B08 30 40 B2705 16 197-206 EKVKRKK VLi 369 A26 15 N.A. 198-205 VKRKK V 370 B08 20 6 201-208 RKKNVLRL 371 B08 20 <5 A0201 15 <1.0 A26 15 N.A. PRAME 185-215 B0702 15 <1.0 200-208 KRKK VLRL 372 B08 21 <1.0 B2705 28 B2709 25 A0201 16 <1.0 199-208 VKRKKNVLRL 373 B0702 16 4 189-196 DELFSYLI 374 B5101 15 N.A. A0201 22 3 205-213 VLRLCCKKL 375 A26 17 N.A. B08 25 8 A0201 17 7 204-213 NVLRLCCKKL 376 A26 19 N.A.

Tabla 31C PRAME: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epí ope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH A0201 20 el.0 A26 18 N.A. PRAME 185-215 194-202 YLIEKVKRK 377 A3 25 68 (continúa) B08 20 <1.0 B2705 17 74-81 QAWPFTCL 378 B5101 17 n. a . A0201 14 7 73-81 VQAWPFTCL 379 A24 n.a. 5 B0702 16 6 ?26 22 n. a. 72-81 MVQAWPFTCL 380 A2 n.a. 7 B0702 13 30 81-88 LPLGVLMK 381 B5101 18 n. a . A0201 17 <1.0 PRAME 71-98 80-88 CLPLGVLMK 382 A3 27 120 Al 12 10 79-88 TCLPLGVLMK 383 A3 19 3 A0201 18 7 84-92 GVLMKGQHL 384 A26 21 n.a. B08 21 4 81-89 LPLGVLMKG 385 B5101 20 2 80-89 CLPLGVLMKG 386 A0201 16 <1.0 76-85 WPFTCLPLGV 387 B0702 18 4 Tabla 3 ID PRAME: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epí ope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH A0201 19 18 51-59 ELFPPLFMA 388 A26 23 N.A. B2705 22 49-57 PRELFPPLF 389 B2709 19 PRAME 39-65 48-57 LPRELFPPLF 390 B0702 19 4 B2705 16 50-58 RELFPPLFM 391 B2705 15 49-58 PRELFPPLFM 392 Al 16 <1.0 Tabla 32 PSA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Tabla 33A PSMA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HÍiA SYFPEITHI NIH 211-218 GNKVKNAQ 400 B08 22 <5 202-209 IA YG VF 401 B08 18 <5 217-225 AQLAGAKGV 402 AO201 16 26 PSMA 202-228 207-215 KVFRGNKVK 403 A3 32 15 B8 33 80 211-219 GNKVKNAQL 404 B2705 17 20 269-277 TPGYPANEY 405 Al 16 <5 Al 21 1 268-277 LTPGYPANEY 406 A26 24 N.A. PSMA 255-282 271-279 GYPANEYAY 407 Al 15 <5 270-279 PGYPA EYAY 408 Al 19 <5 BO702 21 3 266-274 DPLTPGYPA 409 B5101 17 20 A0201 17 <5 492-500 SLYESWTK 410 A3 27 150 B2705 18 150 491-500 KSLYESWTKK 411 A3 16 <5 Al 19 <5 PSMA 483-509 486-494 EGFEGKSLY 412 A26 21 N.A. B2705 16 <5 Al 17 <5 485-494 DEGFEGKSLY 413 A26 17 N.A. 498-506 TKKSPSPEF 414 B08 17 <5 Tabla 33b PSMA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 497-506 WTKKSPSPEF 415 A26 24 N.A. PSMA 483-509 A0201 16 <5 (continúa) 492-501 SLYESWTKKS 416 A3 16 <5 B08 17 <5 725-732 WGEVKRQI 417 B5101 17 N.A. 724-732 AWGEVKRQI 418 B5101 15 6 723-732 KAWGEVKRQI 419 A0201 16 <1.0 723-730 KAWGEV R 420 B5101 15 N.A. 722-730 SKAWGEVKR 421 B2705 15 <5 AO201 21 177 731-739 QIYVAAFTV 422 A3 21 <1.0 B5101 15 5 PSMA 721-749 A0201 17 6 733-741 YVAAFTVQA 423 A3 20 <1.0 725-733 WGEVKRQIY 424 Al 26 11 A26 22 N.A. 727-735 EVKRQIYVA 425 A3 18 <1.0 A26 18 N.A. 738-746 TVQAAAETL 426 A3 19 <1.0 A0201 17 <1.0 737-746 FTVQAAAETL 427 A26 19 N.A.

Tabla 33C PSMA: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLÁ SYFPEITHI NIH A26 16 N.A. 729-737 KRQIYVAAF 428 B2705 24 3000 PSMA 721-749 B2709 21 N.A. (continúa) 721-729 PSKAWGEVK 429 A3 20 <1.0 723-731 KAWGEVKRQ 430 BS101 16 <1.0 100-108 WKEFGLDSV 431 A0201 16 <5 PSMA 95-122 99-108 QWKEFGLDSV 432 AO201 17 <S 102-111 EFGLDSVELA 433 A26 16 N.A.

Tabla 34A SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Tabla 34B SCP-1 Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH A26 29 N.A, SCP-1 471-498 477-485 EVHDLEYSY A3 19 <1.0 (continúa) 477-486 EVHDLEYSYC 447 A26 22 N.A. 502-509 KLSSKREL 448 B08 26 4 508-515 EL NTEYF 449 B08 24 <1.0 B2705 18 45 507-515 RELK TEYF 450 B4403 N.A. 120 496-503 RGQRPKL 451 BQ8 18 <i.0 B0702 22 120 B8 N.A. 16 494-503 LPKRGQRPKL 452 B5101 N.A. 130 B3501 N.A. 60 509-517 LKNTEYFTL 453 A0201 15 <5 SCP-1 493-520 A0201 18 <1.0 508-517 ELKNTEYFTL 454 A2S 27 N.A. A3 16 <1.0 Al 26 2 506-514 KRELKNTEY 455 B2705 26 3000 502-510 KLSS RELK 456 A3 25 60 A3 22 4 498-506 GQRPKLSSK 457 B2705 18 200 497-506 RGQRPKLSSK 458 A3 22 <1.0 500-508 RPKLSSKRE 459 B08 18 <1.0 Tabla 34C SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Tabla 34D SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 638-645 IKVNKLEL 469 B08 21 <1.0 A0201 17 <1.0 A26 26 N.A. 637-645 EIKVNKLEL 470 B08 28 8 B1510 15 N.A. 636-645 YEIKVNKLEL 471 A0201 17 2 A0201 20 1 642-650 KLELELESA 472 A3 16 <1.0 A0201 18 <1.0 SCP-1 633-650 635-643 VYEI VNKL 473 A24 N.A. 396 B08 22 <1.0 A0201 24 55 A26 25 N.A. A24 N.A. 6 634-643 NVYEI V KL 474 A3 15 <5 B0702 11 (B7) 20 B08 N.A. 6 646-654 ELESA QKF 475 A26 27 N.A. A0201 20 1 642-650 KLELELESA 476 A3 16 <1.0 SCP-1 640-668 646-654 ELESAKQKF 477 A26 27 N.A.

Tabla 34E SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento 5 Tabla 34F SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH Al 18 <1.0 101-110 GLSRVYS LY 489 A26 18 N.A. A3 19 18 SCP-1 92-125 (continúa) 96-105 LENSEGLSRV 490 A0201 17 5 108-117 KLYKEAEKIK 491 A3 27 150 949-956 REDRWAVI 492 B5101 15 N.A. B2705 18 600 948-956 MREDRWAVI 493 2709 18 N.A. B5101 15 1 A0201 21 6 947-956 KMREDRWAVI 494 SCP-1 931-958 B08 N.A. 15 947-955 K REDR AV 495 A0201 22 411 934-942 TTPGSTLKF 496 A26 25 N.A. 933-942 LTTPGSTLKF 497 A26 23 N.A. 937-945 GSTLKFGAI 498 B08 19 1 945-953 I KMREDRW 499 B08 19 <s 236-243 RLEMHF L 500 B08' 16 <5 A0201 18 <5 SCP-1 232-259 235-243 SRLEMHFKL 501 B2705 25 2000 B2709 22 242-250 LKEDYEKI 502 A0201 22 4 Tabla 34 G SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH A26 16 N.A. A3 15 3 B08 24 <5 B5101 14 2 Al 15 <5 SCP-1 232-259 249-257 KIQHLEQEY 503 A26 23 N.A. (continúa) A3 17 <5 Al 15 <5 248-257 EKIQHLEQEY 504 A26 21 N.A. 233-242 ENS LE HF 505 A26 19 N.A. Al 19 <5 236-245 RLEMHFKL E 505 A3 17 <5 324-331 LEDIKVSL 507 B08 20 <1.0 A0201 21 <1.0 A26 25 N.A. A24 N.A. 10 323-331 ELEDIKVSL 508 A3 17 <1.0 SCP-1 310-340 B08 19 <1.0 B1510 16 N.A. 322-331 ELEDIKVSL 509 A0201 19 22 320-327 LTKELEDI 500 B08 18 <5 319-327 HLT ELEDI 511 A0201 21 <1.0 330-338 SLQRSVSTQ 512 A0201 18 <1.0 Tabla 34H SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 321-329 TKELEDIKV 513 Al 16 <1.0 SCP-1 310-340 320-329 LTKELEDIKV 514 A0201 19 continúa <1.0 326-335 DI VSLQRSV 515 A2S 18 M.A. 281-288 KMKDLTFL 516 B08 20 3 280-288 NKMKDLTFL 517 A0201 15 1 279-288 ENKMKDLTFL 518 A26 19 N.A. A0201 25 15 288-296 LLEESRDKV 519 B5101 15 3 287-296 FLLEESRDKV 520 A0201 27 2378 A2S 21 N.A. SCP-1 272-305 291-299 ESRD V QL 521 B08 29 240 290-299 EESRDKVNQLi 522 A26 19 N.A. A26 19 N.A. 277-285 EKENKMDL 523 B08 23 <1.0 276-285 TEKENK KDL 524 A26 15 N.A. A26 18 N.A. 279-287 ENKMKDLTF 525 B08 28 4 218-225 IEKMITAF 526 B08 17 <5 217-225 NIEKMITAF 527 A26 26 N.A. 216-225 SNIEKMITAF 528 A S 19 N.A. SCP-1 211-239 223-230 TAFEELiRV 529 B05101 23 N.A. 222-230 ITAFEELRV 530 A0201 18 2 221-230 MITAFEELRV 531 A0201 18 16 Tabla 341 SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH A0201 23 51 220-28 KMITAFEEL 532 A26 15 N.A. A24 N.A. 16 SCP-1 211-239 219-228 EKMITAFEEL 533 A26 19 N.A. (continúa) A3 16 <1.0 227-235 ELRVQAENS 534 B08 15 <1.0 A0201 17 <1.0 213-222 DLNSNIEKMI 535 A26 16 N.A. 837-844 WTSAKNTL 536 B08 20 4 A0201 18 2 B0702 17 4 846-854 TPLPKAYTV 537 B08 16 2 B5101 25 220 845-854 STPLPKAYTV 538 A0201 19 <5 SCP-1 836-863 844-852 LSTPLPKAY 539 Al 23 8 Al 16 <1.0 843-852 TLSTPLPKAY . 540 A26 19 N.A. A3 18 2 842-850 NTLSTPLP 541 A3 16 3 841-850 KNTLSTPLPK 542 A3 18 <1.0 Tabla 34J SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HIi SYFPEITHI NIH B08 21 3 828-835 IS DKRDY 543 A26 21 N.A. SCP-1-819-845 826-835 HGISKDKRDY 544 Al 15 <5 832-840 KRDYLWTSA 545 B2705 16 600 829-838 SKD RDYLWT 546 Al 18 <5 279-286 EN MKDLT 547 B08 22 8 A0201 17 3 260-268 EIND E QV 548 A26 19 N.A. B08 17 <5 SCP-1 260-288 A0201 17 3 274-282 QITEKENKM 549 A26 22 N.A. B08 16 <5 A0201 16 <1.0 269-277 SLLLIQITE 550 A3 18 <1.0 453-460 FE IAEEIJ 551 B08 21 <1.0 452-460 QFE IAEEL 552 B2705 15 451-460 KQFEKIAEEL 553 A0201 16 56 SCP-1 437-464 B08 16 2 449-456 DN QFEKI 554 B5101 16 N.A. 448-456 YDN QFEKI 555 B5101 16 1 447-456 LYDNKQFEKI 556 Al 15 <1.0 Tabla 34K SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 440-447 LGE ETLL 557 B5101 16 N.A. A0201 24 149 439-447 VLGE ETLL 558 A26 19 N.A. B08 29 12 SCP-1 437-464 A0201 19 24 (continúa) A26 20 N.A. 438-447 KVLGEKETLL 559 A24 N.A. 12 A3 18 <1.0 B0702 14 20 A0201 22 3 A26 18 N.A. 390-398 LLRTEQQRL 560 B08 22 1.6 B2705 15 30 A0201 19 6 389-398 ELLRTEQQRL 561 A26 24 N.A. A3 15 SCP-1 383-412 <1.0 Al 15 <5 393-401 TEQQRLENY 562 A26 16 · N.A. Al 31 113 392-401 RTEQQRLENY 563 A26 26 N.A. 402-410 EDQLIILTM 564 A26 18 N.A. A0201 17 397-406 <1.0 RLENYEDQLI 565 A3 15 <1.0 Tabla 34L SCP-1: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epí ope Secuencia No. tipo HLA SYFPEITHI IH 368-375 KARAAHSF 566 B08 16 <1.0 AO201 19 161 376-384 WTEFETTV 567 A3 16 <1.0 SCP-1 366-394 375-384 FWTEFETTV 568 A0201 17 106 377-385 VTEPETTVC 569 Al 18 2 376-385 WTEPETTVC • 570 A3 16 <5 AO201 22 <5 344-352 DLQIATNTI 571 A3 15 <1.0 B5101 17 11 AO201 19 1 SCP-1 331-357 347-355 IATNTICQL 572 B08 16 <1.0 B5101 20 79 AO201 24 7 346-355 QIATNTICQL 573 A26 24 N.A.

Tabla 35 SSX-4: Epítopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seg. ID Predicción de Enlace Substrato Epí ope Secuencia . No. tipo HLA SYFPEITHI NIH 57-65 VMTKLGFKV 574 A0201 21 495 53-61 LNYEVMTKL 575 A0201 17 1 A0201 23 172 A26 21 N.A. SSX4 45-76 52-61 ICLNYEVMTKL 576 A24 N.A. 18 A3 14 4 B7 N.A. 4 A26 16 N.A. 66-74 TLPPF RSK 577 A3 25 14 A0201 15 <5 110-118 KIMPKKPAE 578 A26 15 N.A. SSX4 98-124 A3 16 <5 A0201 15 8 103-112 SLQRIFPKIM 579 A26 16 N.A. •A3 15 <5 Tabla 36 Tirosinasa: Epxtopes Preferidos Revelados por la Digestión de Proteasoma de Mantenimiento Seq. ID Predicción de Enlace Substrato Epítope Secuencia No. tipo HLA SYPP ITHI NIH A0201 18 <5 463-471 YIKSYLEQA 580 A26 17 N.A. Al 18 <5 Tyr 445-474 459-467 SFQDYIKSY 581 A26 22 N.A. Al 13 <5 458-467 DSFQDYI SY 582 A26 24 N.A. B08 28 5 507-514 LPEE QPL 583 B5101 18 N.A. A0201 22 88 A26 20 N.A. 506-514 QLPEEKQPL 584 A2 N.A. 9 B08 18 <5 AO201 15 28 505-514 KQLPEEKQPL 585 A24 N.A. 17 Tyr 490-518 AO201 15 <5 BO702 21 24 507-515 LPEEKQPLL 586 B08 28 5 B5101 21 157 A0201 23 88 506-515 QLPEEKQPLL 587 A26 20 N.A. A24 N.A. 7 497-505 SLLCRHKRK 588 A3 25 15 Ejemplo 15 Probabilidad de Evaluación de la Actividad Cruzada del Epítope en Tejidos Sin Objetivo El PSA como se anotó anteriormente, es un miembro de la familia de calicreína de las proteasas, que es por sí mismo un subconjunto de la familia serina proteasa. Aunque que los miembros de esta familia comparten el mayor grado de identidad de secuencia con PSA también comparten perfiles de expresiones similares, permanece posible que las secuencias de epitope individuales pueden compartirse con las proteínas que tienen perfiles de expresión claramente diferentes . Una primera etapa para evaluar la probabilidad de la reactividad cruzada no deseable es la identificación de secuencias compartidas . Una forma de llevar a cabo esto es conducir una búsqueda BLAST de una secuencia epítope contra las bases de datos de secuencia de péptidos no redundantes de SWISSP OT o Entrez utilizando la opción "Búsqueda para comparaciones cortas casi exactas" ; el protocolo de transferencia de hipertexto accesible en la red mundial (http://www) en "ncbi.nlm.nih.gov/blast/index.html". Así, buscando la SEQ ID NO. 214, WVLTAAHCI, contra SWISSPROT (limitado a entradas para homo sapiens) se encuentran cuatro comparaciones exactas, incluyendo PSA. Las otras tres son de calicreína 1 (tejido de calicreína) y elastasa 2A y 2B. Mientras que estos nueve segmentos de aminoácido son idénticos, las secuencias de flanqueo son bastante distintas, particularmente en el lado C-terminal, sugiriendo que el procesamiento puede proceder de manera diferente y que así el mismo epitope no puede liberarse de estas otras proteínas. (Favor de notar que el nombre calicreína es confuso. Así, la calicreína 1 [número de acceso P06870] es una proteína diferente a la mencionada [número de acceso AAD13817] en el párrafo de PSA anterior en la sección de antígenos asociados al tumor) . Es posible probar esta posibilidad en varias formas . Los péptidos sintéticos que contienen la secuencia de epítopes incluida en el contexto de cada una de esta proteínas pueden someterse a la digestión y análisis proteasomal in vitro como se describió anteriormente. De manera alternativa, las células que expresan estas otras proteínas, ya sea mediante expresión natural o recombinante, pueden utilizarse como objetivos en un análisis de citotoxicidad (o similar) utilizando células T CD8+ que reconocen al epitope, a fin de determinar si el epitope se procesa y se presenta. Ejemplo 16 Grupos de Epítopes Los epítopes conocidos y predichos generalmente no se distribuyen uniformemente a través de las secuencias de los antígenos de proteína. Como se refirió anteriormente, hemos definido los segmentos de la secuencia que contiene una densidad mayor a la promedio (conocida o predicha) de epítopes como grupos de epltopes . Entre los usos de los grupos de epítopes se encuentra la incorporación de su secuencia en los péptidos del substrato utilizados en el análisis de digestión proteasomal como se describe en la presente. Los grupos de epítopes pueden ser también útiles como componentes de vacunas . Una exposición más completa de la definición y usos de los grupos de epítopes se encuentra en la Solicitud de Patente de E.U. No. 09/561,571 titulada EPITOPE CLUSTERS (GRUPOS DE EPÍTOPES) . Las siguientes tablas (37-60) presentan epítopes 9-mer predichos por la unión HLA-A2 utilizando ambos algoritmos el SYFPEITHI y el NIH y la densidad del epítope de las regiones de epítopes de sobreposicion y de los epítopes en la proteína completa y la proporción de estas dos densidades . (La proporción debe exceder de uno para que exista un grupo, por la definición anterior; requiriendo mayores valores de esta proporción las modalidades preferidas reflejada) . Los 9 -mer individuales se clasifican por la puntuación y se identifican por la posición de su primer amino en la secuencia de proteína completa. Cada grupo potencial de la proteína se numera. El rango de posiciones de aminoácidos dentro de la secuencia completa que cubre el grupo, indica como son las clasificaciones de los epítopes individuales predichos de los que se compone . Tabla 37 Resultados del algoritmo BIMAS-NIH/Parker para gplOO Clasif . Inicio Puntuación Clasif . Inicio Puntuación 1 619 1493 21 416 19 2 602 413 22 25 18 3 162 226 23 566 17 4 18 118 24 603 15 5 178 118 25 384 14 6 273 117 26 13 14 7 601 81 27 290 12 8 243 63 28 637 10 9 606 60 29 639 9 10 373 50 30 485 9 11 544 36 31 453 8 12 291 29 32 102 8 13 592 29 33 399 8 14 268 . 29 34 456 7 15 47 27 35 113 7 16 585 26 36 622 7 17 576 21 37 69 7 18 465 21 38 604 6 19 570 20 39 350 6 . 20 9 19 40 583 5 Tabla 38 Resultados de SYFPEITHI (algoritmo Rammensee) para gplOO Clasif . Inicio Puntuación Clasif . Inicio Puntuación Clasif. Inicio Puntuación 1 606 30 37 291 20 73 60 18 2 152 29 38 2S9 20 74 17 18 3 456 28 39 2 20 75 613 17 4 18 28 40 610 19 76 599 17 5 602 27 41 594 19 77 572 17 6 598 27 42 591 19 78 557 17 7 601 26 43 583 19 79 556 17 8 597 26 44 570 19 80 512 17 9 13 26 45 488 19 81 406 17 584 25 46 446 19 82 324 17 11 449 25 47 322 19 83 290 17 12 4 25 48 267 19 84 101 17 13 603 24 49 250 19 85 95 17 14 576 24 50 205 19 86 635 16 453 24 51 180 19 87 588 16 16 178 24 52 169 19 88 584 16 17 171 . 24 53 88 19 89 577 16 18 11 24 54 47 19 90 559 16 19 619 23 55 10 19 . 91 539 16 280 23 56 648 18 92 494 16 21 268 23 57 605 18 93 482 16 22 592 22 58 604 18 94 468 16 23 544 22 59 595 18 95 442 16 24 465 22 60 571 18 96 413 16 399 22 61 569 . 18 97 408 16 26 373 22 62 450 18 98 402 16 27 273 22 63 409 18 99 286 16 28 243 22 64 400 18 100 234 16 29 566 21 65 371 18 101 217 16 563 21 66 343 18 102 211 16 31 485 21 67 298 18 103 176 16 32 384 21 68 209 18 104 107 16 33 350 21 69 102 18 105 96 16 34 9 21 70 97 18 106 80 16 463 20 71 76 18 107 16 16 36 397 20 72 69 18 108 14 16 109 7 16 Tabla 39 Predicción de grupos para gplOO AAS Total: 661 9-mers Total: 653 SYFPEITHI 16: 109 9-mers NIH 5: 40 9-mers Epítopes/AA # de Pr Propor¬ Grupo AAs Epítopes (por Clasif.) Grupo Completo ción SYFPEITHI 1 2 a 26 39, 12, 109, 34, 55, 11, 9, 0 .440 0.165 2.668 108, 107, 74, 4 2 59-115 72, 71, 106, 53, 85, 105, 0 .213 0.165 1.290 70, 84, 69, 104 3 95-115 85, 105, 70, 84, 69 0 .238 0.165 1.444 4 162-188 2, 52, 17, 103, 16, 51 0 .222 0.165 1.348 205-225 50, 68, 102, 101 0 .190 0.165 1.155 6 243-258 28, 49 0 .125 0.165 0.758 7 267-306 48, 21, 38, 27, 20, 99, 83, 0 .225 0.165 1.364 37, 67 8 322-332 47, 82 0 .182 0.165 1.103 9 343-358 66, 33 0 .125 0.165 0.758 371-381 65, 26 0 .182 0.165 1.103 11 397-421 36, 25, 64, 98, 81, 97, 63, 0 .320 0.1S5 1.941 96 12 442-476 95, 46, 11, 62, 15, 3, 35, 0 .257 0.165 1.559 24, 94 13 482-502 93, 31, 45, 93 0 .190 0.165 1.155 14 539-552 91, 23 0 .143 0.165 0.866 556-627 79, 78, 90, 30, 29, 61, 44, 0 .431 0.165 2.611 60, 77, 14, 89, 43, 88, 10, 87, 42, 22, 41, 59, 8, 6, 76, 7, 5, 13, 58, 57, 1, 40, 75, 19 HIH 1 9 a 33 20, 26, 4, 22 0 160 0.061 2.644 2 268-281 14, 6 0 143 0.061 2.361 3 290-299 27, 12 0 200 0.061 3.305 4* 102-121 32, 35 0 100 0.061 1.653 * 373-392 10, 25 0 100 0.061 1.653 6 453-473 31, 34, 18 0 143 0.061 2.361 7 566-600 23, 19, 17, 40, 16, 13 0 171 0.061 2.833 8 601-614 7, 1, 24, 38, 9 0 357 0.061 5.902 9 619-630 1, 36 0 17 0.061 2.754 637-647 28, 29 0 18 0.061 3.005 *Cerca pero sin sobreposición de epítopes Tabla 40 Resultados del algoritmo BIMAS-NIH/Parker para PSMA Clasif. Inicio Puntuación 1 663 1360 2 711 1055 3 4 485 4 27 400 5 26 375 6 668 261 7 707 251 8 469 193 9 731 177 10 35 67 11 33 64 12 554 59 13 427 50 14 115 47 15 20 40 16 217 26 17 583 24 18 415 19 19 193 14 20 240 12 21 627 11 22 260 10 23 130 10 24 741 9. 25 3 9 26 733 8 27 726 7 28 286 6 29 174 5 30 700 5 Tabla 41 Resultados de SYFPEITHI (algoritmo Rammensee) para PSMA Clasif . Inicio Puntuación Clasif. Inicio Puntuación Clasif. Inicio Puntuación 1 469 27 31 26 20 61 305 17 2 27 27 32' 3 20 62 304 17 3 741 26 33 583 19 63 286 17 4 711 26 34 579 19 64 282 17 354 25 35 554 19 65 169 I7 6 4 25 36 550 19 66 142 17 7 663 24 37 547 19 67 122 17 8 130 24 38 390 19 68 738 16 9 57 24 39 219- 19 69 634 16 707 23 40 193 19 70 631 16 11 260 23 41 700 18 71 515 16 12 ' 20 23 42 472 18 72 456 16 13 603 22 43 364 18 73 440 16 14 218 22 44 317 18 74 385 16 109 22 45 253 18 75 373 16 16 731 21 46 91 18 76 365 16 17 668 21 47 61 18 77 361 16 18 650 21 48 13 18 78 289 16 19 507 21 49 733 17 79 278 16 454 21 50 673 17 80 258 16 21 427 21 51 671 17 81 247 16 22 358 21 52 642 17 82 217 16 23 284 21 53 571 17 83 107 16 24 115 21 54 492 17 84 100 16 33 21 55 442 17 85 75 16 26 606 20 56 441 17 86 37 16 27 568 20 57 397 17 87 30 16 28 473 20 58 391 17 88 21 16 29 451 20 59 357 17 16 200 20 60 344 17 Tabla 42 Predicción de grupos para el antígeno de membrana específica de la próstata (PSMA) AAS Total : 750 9-mers Total: 742 SYFPEITHI 16: 88 9-mers NIH 5: 30 9-mers Epífcopes/ AA # de Pr Propor- Grupo AAs Epítopes (por Clas f.) Grupo Completo ción SYFPEITHI 1 3 a 12 32, 6 0 .200 0 .117 1 705 2 13-45 13, 12, 88, 31, 2, 87, 25, 0 .242 0 .117 2 066 86 3 57-69 9, 47 0 154 0 .117 1 311 4 100-138 84, 83, 15, 24, 67, 8 0 154 0 .117 1 311 193-208 40, 30 0 .111 0 .117 0 947 6 217-227 82, 14, 39 0 273 0 .117 2 324 7 247-268 81, 45, 80, 11 0 182 0 .117 1 550 8. 278-297 79, 64, 23, 63, 78 0 250 0 .117 2 131 9 354-381 5, 59, 22, 77, 43, 76, 75 0 250 0 .117 2. 131 385-405 74, 38, 58, 57 0 190 0 .117 1 623 11 440-450 73, 56, 55 0 273 0 .117 2 324 12 454-481 20, 72, 29, 1, 42, 28 0 214 0 .117 1 826 13 507-523 17, 71 0 118 0 .117 1 003 14 547-562 ' 37, 36, 35 0 188 0 .117 1 598 568-591 27, 53, 34, 33 0 167 0 .117 1 420 16 603-614 13, 26 0 167 0 .117 1 420 17 631-650 70, 69, 52 0 150 0 .117 1 278 18 660-681 18, 7, 17, 51, 50 0 227 0 .117 1 937 19 700-719 41, 10, 4 0 150 0 .117 1 278 731-749 16, 49, 68, 3 0 211 0 .117 1 794 NIH 1 3 a 12 25, 3 0 200 0 .040 5 000 2 20-43 15, 5, 4, 11, 10 0 208 0 .040 5 208 3* 415-435 18, 13 0 095 0 .040 2 381 4 S63-676 1, 6 0 143 0 040 3 571 700-715 30, 7, 3 0 188 0 040 4 688 6 726-749 27, 9, 26, 24 0 167 0 040 4 167 *Cerca pero sin sobreposición de epítopes Tabla 43 Resultados del algoritmo BIMAS-NIH/Parker para PSA Clasif . Inicio Puntuación 1 7 607 2 170 243 3 52 124 4 53 112 5 195 101 6 165 23 7 72 18 8 245 18 9 2 16 10 59 16 11 122 15 12 125 15 13 191 13 14 9 8 15 14 6 16 175 5 17 130 5 Tabla 44 Resultados de SYFPEITHI (algoritmo Rammensee) para PSA Clasif. Inicio Puntuación 1 72 26 2 170 22 3 53 22 4 7 22 234 21 6 166 21 7 140 21 8 66 21 9 241 20 175 20 11 12 20 12 41 19 13 20 19 14 14· 19 130 18 16 124 18 17 121 18 18 47 18 19 17 18 218 17 21 133 17 22 125 17 23 122 17 24 118 17 110 17 26 67 17 27 52 17 28 21 17 29 16 17 2 17 31 184 16 32 179 16 33 158 16 34 79 16 35 73 16 36 4 16 Tabla 45 Predicción de grupos para el antígeno específico de próstata (PSA) AAS Total: 261 9-mers Total: 253 SYFPEITHI 16: 36 9-mers NIH 5: 17 9-mers Epítopes /AA # de Pr ProporGrupo AAs Epxtopes (por Clasif.) Grupo Completo ción SYFPEITHI 1 2 a 29 30, 36, 4, 11, 14, 29, 19, 0 321 0 .138 2 330 13, 28 2 41-61 12, 18, 27, 3 0 190 0 .138 1 381 3 66-87 8, 26, 1, 35, 34 0 227 0 .138 1 648 4 110-148 25, 24, 17, 23, 16, 22, 0 184 0 .138 1 332 15, 21, 7 5 158-192 33, 6, 2, 10, 32, 31 0 171 0 .138 1 243 G 234-249 5, 9 0 125 0 .138 0 906 7* 118-133 24, 17, 23, 16, 22 0 313 0 .138 2 266 8* 118-138 24, 17, 23, 16, 22, 15 0 286 0 .138 2 071 NIH 1 2-22 9, 1, 14, 15 0 190 0 .065 2 924 2 52-57 3, 4, 10 0 188 0 .065 2 879 3 122-138 11, 12, 17 0 176 0 .065 2 709 4 165-183 6, 2, 16 0 158 0 .065 2 424 191-203 13, 5 0 154 0 .065 2 362 6** 52-80 3, 4, 10, 7 0 138 0 .065 2 118 * Estos grupos son internos al grupo #4 menos preferido **Incluye una cercanía pero no sobreposición de epxtopes Tabla 46 Resultados del algoritmo BIMAS-NIH/Parker para PSCA Clasif . Inicio Puntuación 1 43 153 2 5 84 3 7 79 4 109 36 5 105 25 6 108 24 7 14 21 8 20 18 9 115 17 10 42 15 11 36 15 12 99 9 13 58 8 Tabla 47 Resultados de SYFPEITHI (algoritmo Rammensee) para PSCA Clasif. Inicio Puntuación Clasif . Inicio Puntuación 1 108 30 17 54 19 2 14 30 18 12 19 3 105 29 19 4 19 4 5 28 20 1 19 5 115 26 21 112 18 6 99 26 22 101 18 7 7 26 23 98 18 8 109 24 24 51 18 9 53 23 25 43 18 10 107 21 26 106 17 11 20 21 27 104 17 12 8 21 28 83 17 13 13 20 29 63 17 14 102 19 30 50 17 15 60 19 31 3 17 16 57 19 32 9 16 33 92 16 Tabla 48 Predicción de grupos para antígeno de célula germinal de próstata (PSCA) AAS Total : 123 9-mers Total: 115 SYFPEITHI 16: 33; SYFPEITHI 20: 13 NIH 5: 13 Epxtopes/AA # de Pr Propor¬ Grupo AAS Epítopes (por Clasif.) Grupo Completo ción SYFPEITHI>16 1 1 a 28 20,31,19,4,7,12,33,18,13,2, 0 393 0 .268 1 .464 11 2 43-71 25,30,24,9,17,16,15,29 0 276 0 .268 1 028 3 92-123 32,23,6,27,14, 22,3,26,10 0 406 0 .268 1 514 1, 8,21,5 SYFPEITHI>20 1 5 a 28 4,7,12,13,2,11 0 250 0 .106 2 365 2 '99-123 6,3,10,1, 8,5 0 240 0 .106 2 271 NIH 1 5 a 28 2,3,7,8 0 167 0 .106 1 577 2 36-51 11,10,1 0 188 0 .106 1 774 3 99-123 12,5,6,4,9 0 200 0 .106 1 892 4* 105-116 5,6,4 0 250 0 .106 2 365 * Este grupo es interno para el grupo #5 menos preferido En las Tablas 49-60 la predicción de epitope y los datos de análisis de grupo para cada algoritmo se presentan juntos en una sola tabla.

Tabla 49 Predicción de los grupos para MAGE-1 (algoritmo NIH) ??.? Total: 309 9-mers Total : 301 NIH 5: 19 9-mers # de AAs Clasif. Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio NIH Grupo Pr Completo Proporción Epxtope 1 18-32 16 18 9 0.133 0.063 2.112 19 24 7 2 101-113 14 101 11 0.154 0.063 2.442 7 105 44 3 146-159 9 146 32 0.143 0.063 2.263 3 151 169 4 169-202 10 169 32 0.176 0.063 2.796 13 174 16 18 181 8 17 187 8 6 188 74 5 194 110 5 264-277 2 264 190 0.143 0.063 2.263 12 269 20 6 278-290 1 278 743 0.154 0.063 2.437 11 282 28 Tabla 50 Predicción de los grupos para MAGE-1 (algoritmo SYFPEITHI) AAs Total: 309 9-mers Total: 301 SYFPEITHI 16: 46 9-mers # de AAs Clasif. Posición Puntuación Epi opes/AA Grupo de De Inicio SYFPEITHI Grupo Pr Completo Proporción Epítope 7-49 22 7 19 0.233 0.153 1.522 9 15 22 27 18 18 16 20 20 28 22 18 29 24 18 33 31 17 30 35 18 2 38 26 17 41 20 89-132 10 89 22 0 273 0 .153 1 .783 18 92 20 7 93 23 23 96 19 43 98 16 4 101 25 8 105 23 34 107 17 35 108 17 36 113 17 37 118 17 19 124 20 167-203 44 167 16 0 270 0 153 1 766 169 20 12 174 21 24 181 19 6 187 24 31 188 18 25 191 19 38 192 17 1 194 27 13 195 21 230-246 14 230 21 0 118 0 153 0 769 39 238 17 264-297 15 264 21 0 235 0 153 1 538 32 269 18 40 270 17 26 271 19 46 275 16 3 278 26 Tabla 51 Predicción de los grupos para MAGE-2 (algoritmo NIH) AAs Total: 314 9-mers Total: 308 NIH >=5 : 20 9-mers # de AAS Clasif . Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio NIH Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 101-120 18 101 5.373 0 150 0.065 2.310 16 108 6.756 1 112 2800.697 2 153-167 8 153 31.883 0 200 0.065 3.080 4 158 168.552 7 159 32.138 3 169-211 14 169 8.535 0 209 0.065 3.223 19 174 5.346 6 176 49.993 11 181 15.701 15 188 7.536 12 195 12.809 5 200 88.783 10 201 16.725 17 203 5.609 4 271-284 3 271 398.324 0 143 0.065 2.200 9 276 19.658 Tabla 52 Predicción de los grupos para MAGE-2 (algoritmo SYFPEITHI) AAs Total: 314 9-mers Total: 308 SYFPEITHI 16: 52 9-mers # de AAs Clasif. Posición Puntuáción Epitopes/AA Grupo de De Inicio SYFPEITHI Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 15-32 13 15 21 0.278 0.169 1.645 29 18 18 43 20 16 30 22 18 21 24 19 37-55 31 37 18 0 250 0 169 1 481 16 40 20 44 44 16 14 45 21 22 48 19 96-133 36 96 17 0 211 0 169 1 .247 46 101 16 6 108 25 47 109 16 2 112 27 37 120 17 38 125 17 17 131 20 153-216 12 153 22 0 344 0 169 2 .036 39 158 17 7 159 25 23 161 19 24 162 19 48 164 16 49 167 16 32 170 18 50 171 16 4 174 26 9 176 24 51 177 16 15 181 21 25 188 19 18 194 20 33 195 18 19 198 20 3 200 27 1 201 28 40 202 17 10 203 23 52 208 16 237-254 26 237 19 0 167 0 169 0 987 27 245 19 34 24S 18 6 271-299 8 271 25 0.241 0.169 1.430 35 276 18 41 277 17 11 278 23 28 283 19 20 285 20 42 291 17 Tabla 53 Predicción de los grupos para MAGE-3 (algoritmo NIH) AAs Total: 314 9-mers Total : 308 NIH 5: 22 9-mers # de A&s Clasif . Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio NIH Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 101-120 15 101 11.002 0.200 0.071 2.800 21 105 6.488 8 108 49.134 2 112 339.313 2 153-167 18 153 7.776 0.200 0.071 2.800 6 158 51.77 22 159 5.599 3 174-209 17 174 8.832 0.194 0.071 2.722 7 176 49.993 13 181 15.701 19 188 7.536 14 195 12.809 5 200 88.783 12 201 16.725 4 237-251 16 237 10.868 0.200 0.071 2.800 4 238 148.896 20 243 6.88 5 271-284 1 271 2655.495 0.143 0.071 2.000 11 276 19.658 Tabla 54 Predicción de los grupos para MAGE-3 (algoritmo SYFPEITHI) AAs Total: 314 9-mers Total: 308 SYFPEITHI 16: 47 9-mers # de AAS Clasif. Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio SYFPEITHI Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 15-32 12 15 21 0.278 0.153 1.820 26 18 18 37 20 16 27 22 18 18 24 19 2 38-5S 38 38 16 0.263 0.153 1.725 15 40 20 39 44 16 13 45 21 19 48 19 3 101-142 28 101 18 0.190 0.153 1.248 40 105 16 1 108 31 6 112 25 31 120 17 32 125 17 16 131 20 41 134 16 4 153-216 20 153 19 0.313 0.153 2.048 29 156 18 33 158 17 21 159 19 34 161 17 42 164 16 43 167 16 10 174 22 8 176 23 14 181 21 44 193 16 11 194 22 23 195 19 45 197 16 17 198 20 3 200 27 2 201 28 35 202 17 46 208 16 5 220-230 5 220 26 0 .182 0 153 1 191 47 222 16 6 237-246 7 237 25 0 200 0 153 1 311 9 238 23 7 271-293 4 271 27 0 .217 0 153 1 425 30 276 18 24 278 19 36 283 17 25 285 19 Tabla 55 Predicción de los grupos para PRAME (algoritmo NIH) AAs Total: 509 9-mers Total: 501 NIH 5: 40 9-mers # de Clasif . Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio NIH Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 33-47 20 33 18 0.133 0.080 1.670 17 39 21 2 71-81 9 71 50 0.2 0.07984 2.505 32 73 7 3 99-108 23 100 15 0.2 0.07984 2.505 24 99 13 4 126-135 38 126 5 0.2 0.07984 2.505 35 127 6 5 224-246 5 224 124 0.130 0.080 1.634 8 230 63 39 238 5 6 290-303 18 290 18 0 .214 0 080 2 684 14 292 23 7 295 66 7 305-324 28 305 10 0 200 0 080 2 505 30 308 8 25 312 13 36 315 6 8 394-409 2 394 182 0 188 0 080 2 348 12 397 42 31 401 7 9 422-443 10 422 49 0 227 0 080 2 847 3 425 182 34 431 7 29 432 9 4 435 160 10 459-487 15 459 21 0 172 0 080 2 159 11 462 45 22 465 15 40 472 5 37 479 6 Tabla 56 Predicción de los grupos para PRAME (algoritmo SYFPEITHI) AAs Total: 509 9-mers Total: 501 SYFPEITHI 17: 80 9-mers # de AAs Clasif. Posición Puntuación Epitopes/AA Grupo de De Inicio SYFPEITHI Grupo Pr Completo Proporción Epítope 1 18-59 65 18 17 0.238 0.160 1.491 50 21 18 66 26 17 35 33 20 22 34 22 51 37 18 5 39 27 23 40 22 13 44 24 46 51 19 78-115 36 78 20 0 263 0 150 1 648 67 80 17 52 84 18 24 86 22 53 91 18 25 93 22 9 99 25 8 100 26 54 103 18 55 107 18 191-202 56 191 18 0 167 0 160 1 044 38 194 20 205-215 26 205 22 0 182 0 160 1 139 27 207 22 222-238 47 222 19 0 235 0 160 1 474 14 224 24 69 227 17 57 230 18 241-273 70 241 17 0 212 0 160 1 328 248 24 71 255 17 30 258 21 39 259 20 58 261 18 40 265 20 290-342 72 290 17 0 208 0 160 1 300 48 293 19 31 298 21 73 301 17 18 305 23 6 308 27 10 312 25 19 316 23 28 319 22 41 326 20 74 334 17 343-363 59 343 18 0 238 0 160 1 491 60 348 18 75 351 17 20 353 23 76 355 17 9 364-447 49 364 19 0 250 0 160 1 566 32 371 21 11 372 25 61 375 18 77 382 17 21 390 23 78 391 17 1 394 30 42 397 20 62 403 18 33 410 21 43 418 20 34 419 21 7 422 27 2 425 29 79 426 17 63 428 18 64 431 18 12 432 25 16 435 24 80 439 17 10 455-474 29 455 22 0 200 0 160 1 253 17 459 24 4 462 28 3 466 29 Tabla 57 Predicción de los grupos para CEA (algoritmo NIH) AAs Total: 702 9-mers Total: 694 NIH 5: 30 9-mers # de AA Clasif. Posición Puntuación Péptido/AAs Grupo de de Inicio Grupo Pr Completo Proporción Péptidos 1 17-32 5 17 79.041 0 188 0 043 4 388 7 18 46.873 20 24 12.668 2 113- 2 113 167.991 0 118 0 043 2 753 129 15 121 21.362 3 172- 25 172 9.165 0 125 0 043 2 925 187 14 179 27.995 4 278- 30 278 5.818 0 143 0 043 3 343 291 17 283 19.301 5 350- 9 350 43.075 0 125 0 043 2 925 365 12 357 27.995 6 528- 8 528 43.075 0 125 0 043 2 9-25 543 13 535 27.995 7 631- 23 631 9.563 0 200 0 043 4 680 645 19 634 13.381 24 637 3.245 8 691- 1 691 196.407 0 167 0 043 3 900 702 27 694 7.769 Tabla 58 Predicción de los grupos para CEA (algoritmo SYFPEITHI) AAs Total: 702 9-mers Total: 694 SYFPEITHI 16: 81 9-mers # de AA Clasif . Posición Puntuación Péptido/AAs Grupo de de Inicio Grupo Pr Completo Proporción Pépt dos 1 5-36 67 5 16 0.250 0.177 2.140 23 12 19 24 16 19 9 17 22 25 18 19 32 19 18 68 23 16 33 28 18 37-62 41 47 17 0.269 0 177 2 305 44 20 26 45 19 42 46 17 27 50 19 43 53 17 44 54 17 99-115 14 99 21 0.235 0 .177 2 014 100 23 45 104 17 34 107 18 116-129 69 116 16 0.143 0 .177 1 223 21 121 20 172-187 46 172 17 0.125 0 177 1 070 70 179 16 192-202 3 192 24 0.182 0 177 1 557 47 194 17 226-241 48 226 17 0.188 0 177 1 605 49 229 17 15 233 21 307-318 11 307 22 0.250 0 177 2 140 71 308 16 51 310 17 319-349 52 319 17 0.129 0 177 1 105 53 327 17 72 335 16 35 341 18 370-388 12 370 22 0.211 0 177 1 802 54 372 17 74 375 16 6 380 23 403-419 56 403 17 0.235 0 177 2 014 57 404 17 58 407 17 28 411 19 427-442 59 427 17 0.188 0 177 1 605 75 432 1S 76 434 16 13 450-462 77 450 15 0 154 0 177 1 317 13 454 22 14 488-505 36 488 18 0 157 0 177 1 427 18 492 21 60 497 17 15 548-558 4 548 24 0 182 0 177 1 557 61 550 17 16 565-577 62 555 17 0 154 0 177 1 317 19 569 21 17 579-597 78 579 15 0 143 0 177 1 223 79 582 16 7 589 23 18 605-618 2 605 25 0 143 0 177 1 223 38 610 18 19 631-669 29 631 19 0 154 0 177 1 317 63 637 17 80 644 16 64 652 17 39 660 18 81 651 16 20 675-702 22 675 20 0 286 0 177 2 446 30 683 19 31 687 19 40 688 18 65 690 17 1 691 31 66 692 17 8 694 23 Tabla 59 Predicción de los grupos para SCP-1 (algoritmo NIH) AAs Total: 976 9-mers Total: 968 NIH 5: 37 9-mers # de AA Clasxf. Posición Puntuación Péptido/AA Grupo de de Inicio Grupo Pr Completo Proporción Péptidos 1 101-116 15 101 40 .589 0.125 0.038 3.270 13 108 57 .255 2* 281-305 14 281 44 .944 0.12 0.038 3.139 24 288 15 .203 17 297 32 .857 3 431-447 8 431 80 .217 0.073 0.038 1.914 26 438 11 .861 4 439 148 .896 4 557-579 11 557 64 .335 0.174 0.038 4.550 19 560 ' 24 .937 6 564 87 .586 18 571 32 .765 5 535-650 10 635 69 .552 0.125 0.038 3.270 34 642 6. 542 6 755-767 36 755 5. 599 0.154 0.038 4.025 35 759 5. 928 7 838-854 2 838 284 .517 0.118 0.038 3.078 28 846 11 .426 Tabla 60 Predicción de los grupos para SCP-1 AAs Total : 976 9-mers Total: 968 Rammensee 16: 118 9-mers # de AA Clasif . Posición Puntuación Péptido/AA Grupo de de Inicio Grupo Pr Completo Proporción Péptidos 1 8-28 99 8 16 0.143 0.121 1.182 77 15 17 100 20 16 2 63-80 78 63 17 0.222 0.121 1.838 50 66 19 102 69 16 60 72 18 3 94-123 79 94 17 0.133 0.121 1.103 12 101 23 17 108 22 103 115 16 126 - 158 35 126 20 0 182 0 121 1 504 36 133 20 51 139 19 80 140 17 61 143 18 37 150 20 161-189 38 161 20 0 207 0 121 1 . 711 52 165 19 81 171 17 82 177 17 52 178 18 39 181 20 213 - 230 40 213 20 0 167 0 121 1 379 13 220 23 28 222 21 235-250 63 235 18 0 125 0 121 1 034 18 242 22 260- 296 83 260 17 0 243 0 121 2 012 105 262 16 84 267 17 106 269 16 41 270 20 64 271 18 85 274 17 19 281 22 3 288 25 312 -338 108 312 16 0 148 0 121 1 225 29 319 21 30 323 21 65 330 18 339-355 56 339 18 0 235 0 121 1 946 31 340 21 42 344 20 53 347 19 376-447 54 376 19 0 194 0 121 1 608 43 382 20 44 386 20 20 390 22 55 397 19 6 404 24 86 407 17 45 411 20 67 417 18 21 425 22 46 431 20 68 432 18 32 438 21 7 439 24 455-488 33 455 21 0 .235 0 121 1 946 47 459 20 56 462 19 87 463 17 88 466 17 14 470 23 109 473 16 34 480 21 515-530 57 515 19 0 .125 0 121 1 304 22 522 22 557-590 8 557 24 0 .147 0 121 1 216 23 564 22 9 571 24 90 575 17 58 582 19 610-625 69 610 18 0 125 0 121 1 034 91 617 17 633-668 92 633 17 0 .222 0 121 10 635 24 70 638 18 93 640 17 48 642 20 49 645 20 111 652 16 112 560 16 674-685 71 674 18 0 .167 0 121 1 379 11 677 24 687-702 1 687 26 0 .125 0 121 1 034 94 694 17 744-757 113 744 16 0 .250 0 121 2 068 95 745 17 4 745 . 25 24 752 22 2 755 26 72 759 18 20 812-827 97 812 17 0 125 0.121 1 034 115 819 16 21 838-857 11S 838 15 0 150 0.121 1 241 25 846 22 74 849 18 22 896-913 117 896 16 0 222 0.121 1 838 98 899 17 26 902 22 76 905 18 Las modalidades de la invención son aplicables y contemplan las variaciones en las secuencias de los antígenos objetivo proporcionados en la presente, incluyendo aquellos descritos en las diversas bases de datos que se encuentran accesibles por la red mundial . Específicamente para las secuencias específicas descritas en la presente, la variación en las secuencias puede encontrarse utilizando los números de acceso proporcionados para acceder a la información para cada antígeno.

PROTEIMA TIROSIMASA SEQ ID NO . 2 1 LLAVLYCLL SFQTSAGHF PRACVSSIYL MEKECCPPWS GDRSPCGQLS GRGSCQNILL 61. SNAPLGPQFP FTGVDDRESW PSVFYNRTCQ CSGNFMGFNC GNC FGFWGP NCTERRLLVR 121 RNIFDLSAPE KDKFFAYLTL AKHTISSDYV IPIGTYGQMK NGSTPMFNDI NIYDLFVWMH ¦ 181 YYVSMDALLG GSEIWRDIDF AHEAPAFLPW HRLFLLRWEQ EIQKLTGDEN FTIPYWDWRD 241 AEKCDICTDE YMGGQHPTNP NLLSPASFFS SWQIVCSRLE EY SHQSLCN GTPEGPLRRN 301 PG HDKSRTP RLPSSADVEF CLSLTQYESG SMDKAANFSF R TLEGFASP LTGIADASQS 361 SMHNALHIYM NGTMSQVQGS A DPIFLLHH AFVDSIFEQW LRRHRPLQEV YPEANAPIGH 421 NRESYMVPFI PLYRNGDFFI SSKDLGYDYS YLQDSDPDSF QDYIKSYLEQ ASRIWS LLG 481 AAMVGAVLTA LLAGLVSLLC RHKRKQLPEE KQPLLMEKED YHSLYQSHL PROTEINA SSX-2; SEQ ID NO 3 1 MNGDDAFARR PTVGAQIPEK IQKAFDDIAK YFSKEE EKM KASEKIFYVY MKRKYEAMTK 61 LGFKATLPPF MCNKRAEDFQ GNDLDNDPNR GNQVERPQMT FGRLQGISPK IMPKKPAEEG 121 NDSEEVPEAS GPQNDGKELC PPGKPTTSEK IHERSGPKRG EHAWTHRLRE RKQLVIYEEI 181 SDPEEDDE PROTEINA PSMA; SEQ ID NO 4 1 MW LLHETDS AVATARRPRW LCAGALVLAG GFFLLGFLFG WFIKSSNEAT NITPKHNMKA 61 FLDELKAENI KKFLYNFTQI PHLAGTEQNF QLAKQIQSQW KEFGLDSVEL AHYDVLLSYP 121 NKTHPNYISI INEDGNEIFN TSLFEPPPPG YENVSDIVPP FSAFSPQGMP EGDLVIYEEI 181 RTEDFFKLER DMKINCSGKI VIARYGKVFR GNKVKNAQLA GAKGVILYSD PADYFAPGVK 241 SYPDG NLPG GGVQRGNILN LNGAGDPLTP GYPANEYAYR RGIAEAVGLP SIPVHPIGYY 301 DAQKLLEKMG GSAPPDSSWR GSLI PYNVG PGFTGNFSTQ KVKMHIHSTN EVTRIYNVIG 361 TLRGAVEPDR YVILGGHRDS WVFGGIDPQS GAAWHEIVR SFGTLKKEGW RPRRTILFAS 421 WDAEEFGLLG STEWAEENSR LLQERGVAYI NADSSIEGNY TLRVDCTPLM YSLVHNLTKE 481 LKSPDEGFEG KSLYESWTKK SPSPEFSGMP RISKLGSGND FEVFFQRLGI ASGRARYTKN 541 WETNKFSGYP LYHSVYETYE LVEKFYDPMF KYHLTVAQVR GGMVFELANS IVLPFDCRDY 601 AWLRKYADK IYSISMKHPQ EMKTYSVSFD SLFSAVKNFT EIASKFSERL QDFDKSNPIV 661 LRMMNDQLMF LERAFIDPLG LPDRPFYRHV IYAPSSHNKY AGESFPGIYD ALFDIESKVD 721 PSKAWGEVKR QIYVAAFTVQ AAAETLSEVA Tirosinasa de Homo sapiens (albinismo IA oculocutáneo) (TYR) , mRA. ; ACCESO NM_000372 VERSIÓN NM_000372.1 GI:4507752 SEQ ID NO 2 /traducción="MLLAVLYCLLWSFQTSAGHFPRACVSSKNLMEKECCPPWSGDRS PCGQLSGRGSCQNILLSNAPLGPQFPFTGVDDRESWPSVFYNRTCQCSGNFMGFNCGN CKFGFWGPNCTERRLLVRRNIFDLSAPEKD FFAYLTLAKHTISSDYVIPIGTYGQMK NGSTPMFNDINIYDLFVWMHYYVSMDALLGGSEI RDIDFAHEAPAFLPWHRLFLLRW EQEIQKLTGDENFTIPYWDWRDAEKCDICTDEYMGGQHPTNPNLLSPASFFSSWQIVC SRLEEYNSHQSLCNGTPEGPLRRMPGNHDKSRTPRLPSSADVEFCLSLTQYESGSMDK AA FSFRNTLEGFASPLTGIADASQSSMH ALHIYMNGT SQVQGSANDPIFLLHHAF VDSIFEQ LRRHRPLQEVYPEANAPIGHNRESY VPFIPLYR GDFFISSKDLGYDYS YLQDSDPDSFQDYIKSYLEQASRI SWLLGAAMVGAVLTALLAGLVSLLCRHKRKQLP EEKQPLLMEKEDYHSLYQSHL" SEQ ID NO 5 ORIGEN 1 atcactgtag tagtagctgg aaagagaaat ctgtgactcc aattagccag ttcctgcaga 61 ccttgtgagg actagaggaa gaatgctcct ggctgttttg tactgcctgc tgtggagttt 121 ccagacctcc gctggccatt tccctagagc ctgtgtctcc tctaagaacc tgatggagaa 181 ggaatgctgt ccaccgtgga gcggggacag gagtccctgt ggccagcttt caggcagagg 241 ttcctgtcag aatatccttc tgtccaatgc accacttggg cctcaatttc ccttcacagg 301 ggtggatgac cgggagtcgt ggccttccgt cttttataat aggacctgcc agtgctctgg 361 caacttcatg ggattcaact gtggaaactg caagtttggc ttttggggac caaactgcac 421 agagagacga ctcttggtga gaa~qaaacat cttcgatttg agtgccccag agaaggacaa 481 attttttgcc tacctcactt tagcaaagca taccatcagc tcagactatg tcatccccat 541 agggacctat ggccaaatga aaaatggatc aacacccatg tttaacgaca tcaatattta 601 tgacctcttt gtctggatgc attattatgt gtcaatggat gcactgcttg ggggatctga 661 aatctggaga gacattgatt ttgcccatga agcaccagct tttctgcctt ggcatagact 721 cttcttgttg cggtgggaac aagaaatcca gaagctgaca ggagatgaaa acttcactat 781 tccatattgg gactggcggg atgcagaaaa gtgtgacatt tgcacagatg agtacatggg 841 aggtcagcac cccacaaatc ctaacttact cagcccagca tcattcttct cctcttggca 901 gattgtctgt agccgattgg aggagtacaa cagccatcag tctttatgca atggaacgcc 961 cgagggacct ttacggcgta atcctggaaa ccatgacaaa tccagaaccc caaggctccc 1021 ctcttcagct gatgtagaat tttgcctgag tttgacccaa tatgaatctg gttccatgga 1081 taaagctgcc aatttcagct ttagaaatac actggaagga tttgctagtc cacttactgg 1141 gatagcggat gcctctcaaa gcagcatgca caatgccttg cacatctata tgaatggaac 1201 aatgtcccag gtacagggat ctgccaacga tcctatcttc cttcttcacc atgcatttgt 1261 tgacagtatt tttgagcagt ggctccgaag gcaccgtcct cttcaagaag tttatccaga 1321 agccaatgca cccattggac ataaccggga atcctacatg gttcctttta taccactgta 1381 cagaaatggt gatttcttta tttcatccaa agatctgggc tatgactata gctatctaca 1441 agattcagac ccagactctt ttcaagacta cattaagtcc tatttggaac aagcgagtcg 1501 gatctggtca tggctccttg gggcggcgat ggtaggggcc gtcctcactg ccctgctggc 1561 agggcttgtg agcttgctgt gtcgtcacaa gagaaagcag cttcctgaag aaaagcagcc 1621 actcctcatg gagaaagagg attaccacag cttgtatcag agccatttat aaaaggctta 1681 ggcaatagag tagggccaaa aagcctgacc tcactctaac tcaaagtaat gtccaggttc 1741 ccagagaata tctgctggta tttttctgta aagaccattt gcaaaattgt aacctaatac 1801 aaagtgtagc cttcttccaa ctcaggtaga acacacctgt ctttgtcttg ctgttttcac 1861 tcagcccttt taacatttte ccctaagccc atatgtctaa ggaaaggatg ctatttggta 1921 atgaggaact gttatttgta tgtgaattaa agtgctctta tttt Sarcoma cenobial de Homo sapiens, unto de ruptura X 2 (SSX2) , mR A. ACCESO NM_003147 VERSIÓN NM_003147.1 GI: 10337582 SEQ ID NO 3 /traducción="MNGDDAFARRPTVGAQIPEKIQKAFDDIA YFSKEEWEKMKASE KIFYW KRKYEAMTKLGFKATLPPFMCNI lAEDFQGlNrDLDNDPNRGNQVERPQMTFG RLQGISPKIMPKKPAEEGNDSEEVPEASGPQNDGKELCPPGKPTTSEKIHERSGP RG EKA THRLRERKQLVIYEEISDPEEDDE" SEQ ID NO 6 ORIGEN 1 ctctctttcg attcttccat actcagagta cgcacggtct gattttctct ttggattctt 61 ccaaaatcag agtcagactg ctcccggtgc catgaacgga gacgacgcct ttgcaaggag 121 acccacggtt ggtgctcaaa taccagagaa gatccaaaag gccttcgatg atattgccaa 181 atacttctct aaggaagagt gggaaaagat gaaagcctcg gagaaaatct tctatgtgta 241 tatgaagaga aagtatgagg ctatgactaa actaggtttc aaggccaccc tcccaccttt 301 catgtgtaat aaacgggccg aagacttcca ggggaatgat ttggataatg accctaaccg 361 tgggaatcag gttgaacgtc ctcagatgac tttcggcagg ctccagggaa tctccccgaa 421 gatcatgccc aagaagccag cagaggaagg aaatgattcg gaggaagtgc cagaagcatc 481 tggcccacaa aatgatggga aagagctgtg ccccccggga aaaccaacta cctctgagaa 541 gattcacgag agatctggac ccaaaagggg ggaacatgcc tggacccaca gactgcgtga 601 gagaaaacag ctggtgattt atgaagagat cagcgaccct gaggaagatg acgagtaact 661 cccctcaggg atacgacaca tgcccatgat gagaagcaga acgtggtgac ctttcacgaa 721 catgggcatg gctgcggacc cctcgtcatc aggtgcatag caagtg Folato hydrolase de Homo sapiens (antígrno de membrana especifica de próstata) 1 (FOLHI) , mRNA. ACCESO NM_004476 VERSIÓN NM_004476.1 GI ¡4758397 /traducción="M NLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIK SSNEATNITPKH MKAFLDELKAENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKE FGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPPGYENVSDIVPP FSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQ LAGAKGVILYSDPADYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANE YAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGPGFT GNFSTQKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGA A HEI RSFGTLKI2GWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYI NADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHNLTKELKSPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSG MPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYELVEKFY DPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLPFDCRDYAWLRKYADKIYSISMKHPQEMKT YSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLQDFDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLP DRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGEVKRQIYVAAFTVQ AAAETLSEVA" SEQ ID NO 7 ORIGEN 1 ctcaaaaggg gccggatttc cttctcctgg aggcagatgt tgcctctctc tctcgctcgg 61 attggttcag tgcactctag aaacactgct gtggtggaga aactggaccc caggtctgga 121 gcgaattcca gcctgcaggg ctgataagcg aggcattagt gagattgaga gagactttac 181 cccgccgtgg tggttggagg gcgcgcagta gagcagcagc acaggcgcgg gtcccgggag 241 gccggctctg ctcgcgccga gatgtggaat ctccttcacg aaaccgactc ggctgtggcc 301 accgcgcgcc gcccgcgctg gctgtgcgct ggggcgctgg tgctggcggg tggcttcttt 361 ctcctcggct tcctcttcgg gtggtttata aaatcctcca atgaagctac taacattact 421 ccaaagcata atatgaaagc atttttggat gaattgaaag ctgagaacat caagaagttc 481 ttatataatt ttacacagat accacattta gcaggaacag aacaaaactt tcagcttgca 541 aagcaaattc aatcccagtg gaaagaattt ggcctggatt ctgttgagct agcacattat 601 gatgtcctgt tgtcctaccc aaataagact catcccaact acatctcaat aattaatgaa 661 gatggaaatg agattttcaa cacatcatta tttgaaccac ctcctccagg atatgaaaat 721 gtttcggata ttgtaccacc tttcagtgct ttctctcctc aaggaatgcc agagggcgat 781 ctagtgtatg ttaactatgc acgaactgaa gacttcttta aattggaacg ggacatgaaa 841 atcaattgct ctgggaaaat tgtaattgcc agatatggga aagttttcag aggaaataag 901 gttaaaaatg cccagctggc aggggccaaa ggagtcattc tctactccga ccctgctgac 961 tactttgctc ctggggtgaa gtcctatcca gatggttgga atcttcctgg aggtggtgtc 1021 cagcgtggaa atatcctaaa tctgaatggt gcaggagacc ctctcacacc aggttaccca 1081 gcaaatgaat atgcttatag gcgtggaatt gcagaggctg ttggtcttcc aagtattcct 1141 gttcatccaa ttggatacta tgatgcacag aagctcctag aaaaaatggg tggctcagca 1201 ccaccagata gcagctggag aggaagtctc aaagtgccct acaatgttgg acctggcttt 1261 actggaaact tttctacaca aaaagtcaag atgcacatcc actctaccaa tgaagtgaca 1321 agaatttaca atgtgatagg tactctcaga ggagcagtgg aaccagacag atatgtcatt 1381 ctgggaggtc accgggactc atgggtgttt ggtggtattg accctcagag tggagcagct 1441 gttgttcatg aaattgtgag gagctttgga acactgaaaa aggaagggtg gagacctaga 1501 agaacaattt tgtttgcaag ctgggatgca gaagaatttg gtcttcttgg ttctactgag 1561 tgggcagagg agaattcaag actccttcaa gagcgtggcg tggcttatat taatgctgac 1621 tcatctatag aaggaaacta cactctgaga gttgattgta caccgctgat gtacagcttg 1681 gtacacaacc taacaaaaga gctgaaaagc cctgatgaag gctttgaagg caaatctctt 1741 tatgaaagtt ggactaaaaa aagtccttcc ccagagttca gtggcatgcc caggataagc 1801 aaattgggat ctggaaatga ttttgaggtg ttcttccaac gacttggaat tgcttcaggc 1861 agagcacggt atactaaaaa ttgggaaaca aacaaattca gcggctatcc actgtatcac 1921 agtgtctatg aaacatatga gttggtggaa aagttttatg atccaatgtt taaatatcac 1981 ctcactgtgg cccaggttcg aggagggatg gtgtttgagc tagccaattc catagtgctc 2041 ccttttgatt gtcgagatta tgctgtagtt ttaagaaagt atgctgacaa aatctacagt 2101 atttctatga aacatccaca ggaaatgaag acatacagtg tatcatttga ttcacttttt 2161 tctgcagtaa agaattttac agaaattgct tccaagttca gtgagagact ccaggacttt 2221 gacaaaagca acccaatagt attaagaatg atgaatgatc aactcatgtt tctggaaaga 2281 gcatttattg atccattagg gttaccagac aggccttttt ataggcatgt catctatgct 2341 ccaagcagcc acaacaagta tgcaggggag tcattcccag gaatttatga tgctctgttt 2401 gatattgaaa gcaaagtgga cccttccaag gcctggggag aagtgaagag acagatttat 2461 gttgcagcct tcacagtgca ggcagctgca gagactttga gtgaagtagc ctaagaggat 2521 tctttagaga atccgtattg aatttgtgtg gtatgtcact cagaaagaat cgtaatgggt 2581 atattgataa attttaaaat tggtatattt gaaataaagt tgaatattat atataaaaaa 2641 aaaaaaaaaa aaa Melanocito-specíf ico de Humano gene (pmel 17 ) , exons 2-5 , y cds . completos ACCESO U20093 VERSIÓN Ug- 0093 . 1 GI : 1142634 SEQ ID NO 70 QPVYPQF 3DACIFPE GPCPSGSWSQ EVTVYHRRGSRSYVPIAHSSSAF II^ LAFADLSYIWDFGDSSGILISRAPWIHTYLEPGP FA ^TK-AENETPEATGMIPA SI GSmPI-I-DGmi^ SCQGGLPKE-ACI^ISSPGCQPPAORK^ SIQLIMPGQEAGLGQVPLW CPIGENSPLLSGQQV" SEQ ID NO 80 ORIGEN 1 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgtggct gtgggggcta 61 caaaagtacc cagaaaccag gactggcttg gtgtctcaag gcaactcaga accaaagcct 121 ggaacaggca gctgtateca gagtggacag aagcccagag acttgactgc tggagaggtg 181 gtcaagtgtc cctcaaggtc agtaatgatg ggcctacact gattggtgca aatgcctcct 241 tctctattgc cttgaacttc cctggaagcc aaaaggtatt gccagatggg caggttatct 301 gggtcaacaa taccatcatc aatgggagcc aggtgtgggg aggacagcca gtgtatcccc 361 aggaaactga cgatgcctgc atcttccctg atggtggacc ttgcccatct ggctcttggt 421 ctcagaagag aagctttgtt tatgtctgga agacctgggg tgagggactc ccttctcagc 481 ctatcatcca cacttgtgtt tacttctttc tacctgatca cctttctttt ggccgcccct 541 tccacettaa cttctgtgat tttctctaat cttcattttc ctcttagatc ttttctcttt 601 cttagcacct agcccccttc aagctctatc ataattcttt ctggcaactc ttggcctcaa 661 ttgtagtcct accccatgga atgcctcatt aggacccctt ccctgtcccc ccatatcaca 721 gccttccaaa caccctcaga agtaatcata cttcctgacc tcccatctcc agtgccgttt 781 cgaagcctgt ccctcagtcc cctttgacca gtaatctctt cttccttgct tttcattcca 841 aaaatgcttc aggccaatac tggcaagttc tagggggccc agtgtctggg ctgagcattg 901 ggacaggcag ggcaatgctg ggcacacaca ccatggaagt gactgtctac catcgccggg 961 gatcccggag ctatgtgcct cttgctcatt ccagctcagc cttcaccatt actggtaacgg 1021 gttcaggaag ggcaaggcca gttgtagggc aaagagaagg cagggaggct tggatggact 1081 gcaaaggaga aaggtgaaat gctgtgcaaa cttaaagtag aagggccagg aagacctagg 1141 cagagaaatg tgaggcttag tgccagtgaa gggccagcca gtcagcttgg agttggaggg 1201 tgtggctgtg aaaggagaag ctgtggctca ggcctggttc tcaccttttc tggctccaat 1261 cccagaccag gtgcctttct ccgtgagcgt gtcccagttg cgggccttgg atggagggaa 1321 caagcacttc ctgagaaatc agcctctgac ctttgccctc cagctccatg accccagtgg 1381 ctatctggct gaagctgacc tctcctacac ctgggacttt ggagacagta gtggaaccct 1441 gatctctcgg gcacctgtgg tcactcatac ttacctggag cctggcccag tcactgccca 1501 ggtggtcctg caggctgcca ttcctctcac ctcctgtggc tcctccccag ttccaggcac 1561 cacagatggg cacaggccaa ctgcagaggc ccctaacacc acagctggcc aagtgcctac 1621 tacagaagtt gtgggtacta cacctggtca ggcgccaact gcagagccct ctggaaccac 1681 atctgtgcag gtgccaacca ctgaagtcat 1 aagcactgca cctgtgcaga tgccaactgc 1741 agagagcaca ggtatgacac ctgagaaggt gccagtttca gaggtcatgg gtaccacact 1801 ggcagagatg tcaactccag aggctacagg tatgacacct gcagaggtat caattgtggt 1861 gctttctgga accacagctg cacaggtaac aactacagag tgggtggaga ccacagctag 1921 agagctacct atccctgagc ctgaaggtcc agatgccagc tcaatcatgt ctacggaaag 1981 tattacaggt tccctgggcc ccctgctgga tggtacagcc accttaaggc tggtgaagag 2041 acaagtcccc ctggattgtg ttctgtatcg atatggttcc ttttccgtca ccctggacat 2101 tgtccagggt attgaaagtg ccgagatcct gcaggctgtg ccgtccggtg agggggatgc 2161 atttgagctg actgtgtcct gccaaggcgg gctgcccaag gaagcctgca tggagatctc 2221 atcgccaggg tgccagcccc ctgcccagcg gctgtgccag cctgtgctac ccagcccagc 2281 ctgccagctg gttctgcacc agatactgaa gggtggctcg gggacatact gcctcaatgt 2341 gtctctggct gataccaaca gcctggcagt ggtcagcacc cagcttatca tgcctggtag 2401 gtccttggac agagactaag tgaggaggga agtggataga ggggacagct ggcaagcagc 2461 agacatgagt gaagcagtgc ctgggattct tctcacaggt caagaagcag gccttgggca 2521 ggttccgctg atcgtgggca tcttgctggt gttgatggct gtggt catctctgat 2581 atataggcgc agacttatga agcaagactt ctccgtaccc cagttgccac atagcagcag 2641 tcactggctg cgtctacccc gcatcttctg ctcttgtccc attggtgaga atagccccct 2701 cctcagtggg cagcaggtct gagtactctc atatgatgct gtgattttcc tggagttgac 2761 agaaacacct atatttcccc cagtcttccc tgggagacta ctattaactg aaataaa // Calicreína de Homo sapiens 3, (antlgeno especifico de próstata) (KLK3) , raR A. ACCESO NM_001648 VERSIÓN NM_001648.1 GI: 502172 SEQ ID NO 78 /traducción=nMWVPVVELT^^ RGRAVCGGVLVHPQWVLTAffl^ IiRPGDDSSITOIML-LiRLSEPAELTDAVK^ YHVVHYRI< IKIDIAZM!P" SEQ ID NO 86 ORIGEN 1 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtgtc accatgtggg tcccggttgt 61 cttcctcacc ctgtccgtga cgtggattgg tgctgcaccc ctcatcctgt ctcggattgt 121 gggaggctgg gagtgcgaga agcattccca accctggcag gtgcttgtgg cctctcgtgg 181 cagggcagtc tgcggcggtg ttctggtgca cccccagtgg gtcctcacag ctgcccactg 241 catcaggaac aaaagcgtga tcttgctggg tcggcacagc ctgtttcatc ctgaagacac 301 aggccaggta tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacgata tgagcctcct 361 gaagaatcga ttcctcaggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgc tgctccgcct 421 gtcagagcct gccgagctca cggatgctgt gaaggtcatg gacctgccca cccaggagcc 481 agcactgggg accacctgct acgcctcagg ctggggcagc attgaaccag aggagttctt 541 gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacg tgtgtgcgca 601 agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctgga cagggggcaa 661 aagcacctgc tcgggtgatt ctgggggccc acttgtctgt aatggtgtgc ttcaaggtat 721 cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg ccttccctgt acaccaaggt 781 ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc aacccctgag cacccctatc 841 aaccccctat tgtagtaaac ttggaacctt ggaaatgacc aggccaagac tcaagcctcc 901 ccagttctac tgacctttgt ccttaggtgt gaggtccagg gttgctagga aaagaaatca 961 gcagacacag gtgtagacca gagtgtttct taaatggtgt aattttgtcc tctctgtgtc 1021 ctggggaata ctggccatgc ctggagacat atcactcaat ttctctgagg acacagatag 1081 gatggggtgt ctgtgttatt tgtggggtac agagatgaaa gaggggtggg atccacactg 1141 agagagtgga gagtgacatg tgctggacac- tgtccatgaa gcactgagca gaagctggag 1201 gcacaacgca ccagacactc acagcaagga tggagctgaa aacataaccc actctgtcct 1261 ggaggcactg ggaagcctag agaaggctgt gagccaagga gggagggtct tcctttggca 1321 tgggatgggg atgaagtaag gagagggact ggaccccctg gaagctgatt cactatgggg 1381 ggaggtgtat tgaagtcctc cagacaaccc tcagatttga tgatttccta gtagaactca 1441 cagaaataaa gagctgttat actgtg // Antígeno de cáncer/testículos autoimmunogénico Humano NY-ESO 1 mR A, cds . completos ACCESO U87459 VERSIÓN U87459.1 GI :1890098 SEQ ID NO 74 /traducción="IIMQAEGRGTGGSTGDADGPGGPGIPDGPGGNAGGPGEAG ATGGRGPRGAGAARASGPGGGAPRGPHGGAASGLNGCCRCGARGPESRLLEF YLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPLPVPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADH RQLQLSISSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSGQRR" SEQ ID NO 84 ORIGEN 1 atcctcgtgg gccctgacct tctctctgag agccgggcag aggctccgga gccatgcagg 61 ccgaaggccg gggcacaggg ggttcgacgg gcgatgctga tggcccagga ggccctggca 121 ttcctgatgg cccagggggc aatgctggcg gcccaggaga ggcgggtgcc acgggcggca 181 gaggtccccg gggcgcaggg gcagcaaggg cctcggggcc gggaggaggc gccccgcggg 241 gtccgcatgg cggcgcggct tcagggctga atggatgctg cagatgcggg . gccagggggc 301 cggagagccg cctgcttgag ttctacctcg ccatgccttt cgcgacaccc atggaagcag 361 agctggcccg caggagcctg gcccaggatg ccccaccgct tcccgtgcca ggggtgcttc 421 tgaaggagtt cactgtgtcc ggcaacatac tgactatccg actgactgct gcagaccacc 481 gccaactgca gctctccatc agctcctgtc tccagcagct ttccctgttg atgtggatca 541 cgcagtgctt tctgcccgtg tttttggctc agcctccctc agggcagagg cgctaagccc 601 agcctggcgc cccttcctag gtcatgcctc ctcccctagg gaatggtccc agcacgagtg 661 gccagttcat tgtgggggcc tgattgtttg tcgctggagg aggacggctt acatgtttgt 721 ttctgtagaa aataaaactg agctacgaaa aa // LAGE-la protelna [Homo sapiens) . ACCESO CAA11116 PID g3255959 VERSIÓN CAA11116.1 GI: 3255959 SEQ ID NO 75 ORIGEN 1 mqaegrgtgg stgdadgpgg pgipdgpggn aggpgeagat ggrgprgaga arasgprgga 61 prgphggaas aqdgrcpcga rrpdsrllel hitmpfsspm eaelvrrils rdaaplprpg 121 avlkdftvsg nllfirltaa dhrqlqlsis sclqqlsllm witqcflpvf laqapsgqrr 181 // LAGE-lb proteína [Homo sapiens] . ACCESO CAA11117 PID g3255960 VERSIÓN CAA11117.1 GI: 3255960 SEQ ID NO 76 ORIGEN 1 mqaegrgtgg stgdadgpgg pgipd pggn. ag pgea a ggrgprgaga arasgprgga 61 prgp ggaas aqdgrcpcga rrpdsrllel hitmpfsspm eaelvrrils rdaaplprpg 121 avlkdftvsg nllfmsvwdq dregagrmrv vgwglgsasp egqkardlrt pkhkvseqrp 181 gtpgppppeg aqgdgcrgva fnvmfsaphi // Antígeno Humano gene (MAGE-1) , cds . completos ACCESO M77481 VERSIÓN M77481.1 GI: 16114 SEQ ID NO 71 /traduceión="MSLEQRSLHCKPEEALEAQQEALGLVCVQAATSSSSPL VLGTLEEVPTAGSTDPPQSPQGASAFPTTINFTRQRQPSEGSSSREEEGPST SCILESLFRAVITKKVADLVGFLLL YRAREPVTKAEMLESVIKNYKHCFPE IFGKASESLQLVFGIDVKEADPTGHSYVLVTCLGLSYDGLLGDNQIMPKTGF LIIVLVMIAMEGGHAPEEEIWEELSVMEVYDGREHSAYGEPRKLLTQDLVQE KYLEYRQ PDSDPARYEFL GPRALAETSYVKVLEYVI VSARVRFFFPSLR EAALREEEEGV" SEQ ID NO 81 ORIGEN 1 ggatccaggc cctgccagga aaaatataag ggccctgcgt gagaacagag ggggtcatcc 61 actgcatgag agtggggatg tcacagagtc cagcccaccc tcctggtagc actgagaagc 121 cagggctgtg cttgcggtct gcaccctgag ggcccgtgga ttcctcttcc tggagctcca 181 ggaaccaggc agtgaggcct tggtctgaga cagtatcctc aggtcacaga gcagaggatg 241 cacagggtgt gccagcagtg aatgtttgcc ctgaatgcac accaagggcc ccacctgcca 301 caggacacat aggactccac agagtctggc ctcacctccc tactgtcagt cctgtagaat 361 cgacctctgc tggccggctg taccctgagt accctctcac ttcctccttc aggttttcag 421 gggacaggcc aacccagagg acaggattcc ctggaggcca cagaggagca ceaaggagaa 481 gatctgtaag taggcctttg ttagagtctc caaggttcag ttctcagctg aggcctctca 541 cacactccct ctctccccag gcctgtgggt cttcat'tgcc cagctcctgc ccacactcct 601 gcctgctgcc ctgacgagag tcatcatgtc tcttgagcag aggagtctgc actgcaagcc 661 tgaggaagcc cttgaggccc aacaagaggc cctgggcctg gtgtgtgtgc aggctgccac 721 ctcctcctcc tctcctctgg tcctgggcac cctggaggag gtgcccactg ctgggtcaac 781 agatcctccc cagagtcctc agggagcctc cgcctttccc actaccatca acttcactcg 841 acagaggcaa cccagtgagg gttccagcag ccgtgaagag gaggggccaa gcacctcttg 901 tatcctggag tccttgttcc gagcagtaat cactaagaag gtggctgatt tggttggttt 961 tctgctcctc aaatatcgag ccagggagcc agtcacaaag gcagaaatgc tggagagtgt 1021 catcaaaaat tacaagcact gttttcctga gatcttcggc aaagcctctg agtccttgca 1081 gctggtcttt ggcattgacg tgaaggaagc agaccccacc ggccactcct atgtccttgt 1141 cacctgccta ggtctctcct atgatggcct gctgggtgat aatcagatca tgcccaagac 1201 aggcttcctg ataattgtcc tggtcatgat tgcaatggag ggcggccatg ctcctgagga 1261 ggaaatctgg gaggagctga gtgtgatgga ggtgtatgat gggagggagc acagtgccta 1321 tggggagccc aggaagctgc tcacccaaga tttggtgcag gaaaagtacc tggagtaccg 1381 gcaggtgccg gacagtgatc ccgcacgcta tgagttcctg tggggtccaa gggccctcgc 1441 tgaaaccagc tatgtgaaag tccttgagta tgtgatcaag gtcagtgcaa gagttcgctt 1501 tttcttccca tccctgcgtg aagcagcttt gagagaggag gaagagggag tctgagcatg 1561 agttgcagcc aaggccagtg ggagggggac tgggccagtg caccttccag ggccgcgtcc 1621 agcagcttcc cctgcctcgt gtgacatgag gcccattctt cactctgaag agagcggtca 1681 gtgttctcag tagtaggttt ctgttctatt gggtgacttg gagatttatc tttgttctct 1741 tttggaattg ttcaaatgtt tttttttaag ggatggttga atgaacttca gcatccaagt 1801 ttatgaatga cagcagtcac acagttctgt gtatatagtt taagggtaag agtcttgtgt 1861 tttattcaga ttgggaaatc cattctattt tgtgaattgg gataataaca gcagtggaat 1921 aagtacttag aaatgtgaaa aatgagcagt aaaatagatg agataaagaa ctaaagaaat 1981 taagagatag tcaattcttg ccttatacct cagtctattc tgtaaaattt ttaaagatat 2041 atgcatacct ggatttcctt ggcttctttg agaatgtaag agaaattaaa tctgaataaa 2101 gaattcttcc tgttcactgg ctcttttctt ctccatgcac tgagcatctg ctttttggaa 2161 ggccctgggt tagtagtgga gatgctaagg taagccagac tcatacccac ccatagggtc 2221 gtagagtcta ggagctgcag tcacgtaatc gaggtggcaa gatgtcctct aaagatgtag 2281 ggaaaagtga gagaggggtg agggtgtggg gctccgggtg agagtggtgg agtgtcaatg 2341 ccctgagctg gggcattttg ggctttggga aactgcagtt ccttctgggg gagctgattg 2401 taatgatctt gggtggatcc // Gen MAGE-2 Humano exons 1-4, cds. completos ACCESO L18920 VERSIÓN L18920.1 GI:436180 SEQ ID NO 72 /traducción=" PLEQRSQHCKPEEGLEARGEALGLVGAQAPATEEQQTASSSSTLVEV T LGEVPAADSPSPPHSPQGASSFSTTINYTLWRQSDEGSSNQEEEGPRMFPDLE SEFQAAISRMVELVHFLLLKYRAREPVTAEMLESVLRNCQDFFPVIFSEASEYLQLVFG IE WEWPISHLYILVTCLGLSYDGLLGDNQVMPKTGLLIIVLAIIAIEGDCAPEEKIWEELS L EVFEGREDSVFAHPRKLLMQDLVQENYLEYRQVPGSDPACYEFLWGPRALIETSYV VLHH TL KIGGEPHISYPPLHERALREGEE" SEQ ID NO 82 ORIGEN 1 attccttcat caaacagcca ggagtgagga agaggaccct- cctgagtgag gactgaggat 61 ccaccctcac cacatagtgg gaccacagaa tccagctcag cccctcttgt cagccctggt 121 acacactggc aatgatctca ccccgagcac acccctcccc ccaatgccac ttcgggccga 181 ctcagagtca gagacttggt ctgaggggag cagacacaat cggcagagga tggcggtcca 241 ggctcagtct ggcatccaag tcaggacctt gagggatgac caaaggcccc tcccaccccc 301 aactcccccg accccaccag gatctacagc ctcaggatcc ccgtcccaat ccctacccct 361 acaccaacac catcttcatg cttaccccca cccccccatc cagatcccca tccgggcaga 421 atccggttcc acccttgccg tgaacccagg gaagtcacgg gcccggatgt gacgccactg 481 acttgcacat tggaggtcag aggacagcga gattctcgcc ctgagcaacg gcctgacgtc 541 ggcggaggga agcaggcgca ggctccgtga ggaggcaagg taagacgccg agggaggact 601 gaggcgggcc tcaccccaga cagagggccc ccaataatcc agcgctgcct ctgctgccgg 661 gcctggacca ccctgcaggg gaagacttct caggctcagt cgccaccacc tcaccccgcc 721 accccccgcc gctttaaccg cagggaactc tggcgtaaga gctttgtgtg accagggcag 781 ggctggttag aagtgctcag ggcccagact cagccaggaa tcaaggtcag gaccccaaga 841 ggggactgag ggcaacccac cccctaccct cactaccaat cccatccccc aacaccaacc 901 ccacccccat ccctcaaaca ccaaccccac ccccaaaccc cattcccatc tcctccccca 961 ccaccatcct ggcagaatcc ggctttgccc ctgcaatcaa cccacggaag ctccgggaat 1021 ggcggccaag cacgcggatc ctgacgttca catgtacggc taagggaggg aaggggttgg 1081 gtctcgtgag tatggccttt gggatgcaga ggaagggccc aggcctcctg gaagacagtg 1141 gagtccttag gggacccagc atgccaggac agggggccca ctgtacccct gtctcaaact 1201 gagccacctt ttcattcagc cgagggaatc ctagggatgc agacccactt cagcaggggg 1261 ttggggccca gcctgcgagg agtcaagggg aggaagaaga gggaggactg aggggacctt 1321 ggagtccaga tcagtggcaa ccttgggctg ggggatcctg ggcacagtgg ccgaatgtgc 1381 cccgtgctca ttgcaccttc agggtgacag agagttgagg gctgtggtct gagggctggg 1441 acttcaggtc agcagaggga ggaatcccag gatctgccgg acccaaggtg tgcccccttc 1501 atgaggactg gggatacece cggcccagaa agaagggatg ccacagagtc tggaagtccc 1561 ttgttcttag ctctggggga acctgatcag ggatggccct aagtgacaat ctcatttgta 1621 ccacaggcag gaggttgggg aaccctcagg gagataaggt gttggtgtaa agaggagctg 1681 tctgctcatt tcagggggtt gggggttgag aaagggcagt ccctggcagg agtaaagatg 1741 agtaacccac aggaggccat cataacgttc accctagaac caaaggggtc agccctggac 1801 aacgcacgtg ggggtaacag gatgtggccc ctcctcactt gtctttccag atctcaggga 1861 gttgatgacc ttgttttcag aaggtgactc aggtcaacac aggoggcccca tctggtcgac 1921 agatgcagtg gttctaggat ctgccaagca tccaggtgga gagcctgagg taggattgag 1981 ggtacccctg ggccagaatg cagcaagggg gccccataga aatctgccct gcccctgcgg 2041 ttacttcaga gaccctgggc agggctgtca gctgaagtcc ctccattatc ctgggatctt 2101 tgatgtcagg gaaggggagg ccttggtctg aaggggctgg agtcaggtca gtagagggag 2161 ggtctcaggc cctgccagga gtggacgtga ggaccaagcg gactcgtcac ccaggacacc 2221 tggactccaa tgaatttgga catctctcgt tgtccttcgc gggaggacct ggtcacgtat 2281 ggccagatgt gggtcccctc atatccttct gtaccatatc agggatgtga gttcttgaca 2341 tgagagattc tcaagccagc aaaagggtgg gattaggccc tacaaggaga aaggtgaggg 2401 ccctgagtga gcacagaggg gaccctccac ccaagtagag tggggacctc acggagtctg 2461 gccaaccctg ctgagacttc tgggaatccg tggctgtgct tgcagtctgc acactgaagg 2521 cccgtgcatt cctctcccag gaatcaggag ctccaggaac caggcagtga ggccttggtc 2581 tgagtcagtg tcctcaggtc acagagcaga ggggacgcag acagtgccaa cactgaaggt 2641 ttgcctggaa tgcacaccaa gggccccacc cgcccagaac aaatgggact ccagagggcc 2701 tggcctcacc ctccctattc tcagtcctgc agcctgagca tgtgctggcc ggctgtaccc 2761 tgaggtgccc tcccacttcc tccttcaggt tctgaggggg acaggctgac aagtaggacc 2821 cgaggcactg gaggagcatt gaaggagaag atctgtaagt aagcctttgt cagagcctcc 2881 aaggttcagt tcagttctca cctaaggcct cacacacgct ccttctctcc ccaggcctgt 2941 gggtcttcat tgcccagctc ctgcccgcac tcctgcctgc tgccctgacc agagtcatca 3001 tgcctcttga gcagaggagt cagcactgca agcctgaaga aggccttgag gcccgaggag 3061 aggccctggg cctggtgggt gcgcaggctc ctgctactga ggagcagcag accgcttctt 3121 cctcttctac tctagtggaa gttaccctgg gggaggtgcc tgctgccgac tcaccgagtc 3181 ctccccacag tcctcaggga gcctccagct tctcgactac catcaactac actctttgga 3241 gacaatccga tgagggctcc agcaaccaag aagaggaggg gccaagaatg tttcccgacc 3301 tggagtccga gttccaagca gcaatcagta ggaagatggt tgagttggtt cattttctgc 3361 tcctcaagta tcgagccagg gagccggtca caaaggcaga aatgctggag agtgtcctca 3421 gaaattgcca ggacttcttt cccgtgatct tcagcaaagc ctccgagtac ttgcagctgg 3481 tctttggcat cgaggtggtg gaagtggtcc ccatcagcca cttgtacatc cttgtcacct 3541 gcctgggcct ctcctacgat ggcctgctgg gcgacaatca ggtcatgccc aagacaggcc 3601 tcctgataat cgtcctggcc ataatcgcaa tagagggcga ctgtgcccct gaggagaaaa 3661 tctgggagga gctgagtatg ttggaggtgt ttgaggggag ggaggacagt gtcttcgcac 3721 atcccaggaa gctgctcatg caagatctgg tgcaggaaaa ctacctggag taccggcagg 3781 tgcccggcag tgatcctgca tgctacgagt tcctgtgggg tccaagggcc ctcattgaaa 3841 ccagctatgt gaaagtcctg caccatacac taaagatcgg tggagaacct cacatttcct 3901 acccacccct gcatgaacgg gctttgagag agggagaaga gtgagtctca gcacatgttg 3961 cagccagggc cagtgggagg gggtctgggc cagtgcacct tccagggccc catccattag 4021 cttccactgc ctcgtgtgat atgaggccca ttcctgcctc tttgaagaga gcagtcagca 4081 ttcttageag tgagtttctg ttctgttgga tgactttgag atttatcttt ctttcctgtt 4141 ggaattgttc aaatgttcct tttaacaaat ggttggatga acttcagcat ccaagtttat 4201 gaatgacagt agtcacacat agtgctgttt atatagttta ggggtaagag tcctgttttt 4261 tattcagatt gggaaatcca ttccattttg tgagttgtca cataataaca gcagtggaat 4321 atg'Latttgc ctatattgtg aacgaattag cagtaaaata catgatacaaggaactcaaa 4381 agatagttaa ttcttgcctt atacctcagt ctattatgta aaattaaaaatatgtgtatg 4441 tttttgcttc tttgagaatg caaaagaaat taaatctgaa taaattcttc ctgttcactg 4501 gctcatttct ttaccattca ctcagcatct gctctgtgga aggccctqqt agtagtggg // Antigeno MAGE-3 Humano gene (MAGE-3) , cds . completos ACCESO U03735 VERSIÓN U03735.1 GI: 68825 SEQ ID NO 73 /traducción=''MPIjEQR£QHCI PEEGIiEARGEALGLV VPAAESPDPPQSPQGASSLPTT N^ P ,t ,t ,TfVRAT?^ ^m¾ravíT G.q ;GN owT? \ r q ¾.q.q.qr ?t .WGTKT MEVDPTGHT ,?????G? ar , SYDGIJjGDNQIiyEPKAGl-LIIVIAII^ VQE O_EYRQVPGSD^^ SEQ ID NO 83 ORIGEN 1 acgcaggcag tgatgtcacc cagaccacac cccttccccc aatgccactt cagggggtac 61 tcagagtcag agacttggtc tgaggggagc agaagcaatc tgcagaggat ggcggtccag 121 gctcagccag gcatcaactt caggaccctg agggatgacc gaaggccccg cccacccacc 181 cccaactccc ccgaccccac caggatctac agcctcagga cccccgtccc aatccttacc 241 ccttgcccca tcaccatctt catgcttacc tccaccccca tccgatcccc atccaggcag 301 aatccagttc cacccctgcc cggaacccag ggtagtaccg ttgccaggat gtgacgccac 361 tgacttgcgc attggaggtc agaagaccgc gagattctcg ccctgagcaa cgagcgacgg 421 cctgacgtcg gcggagggaa gccggcccag gctcggtgag gaggcaaggt aagacgctga 481 gggaggactg aggcgggcct cacctcagac agagggcctc aaataatcca gtgctgcctc 541 tgctgccggg cctgggccac cccgcagggg aagacttcca ggctgggtcg ccactacctc 601 accccgccga cccccgccgc tttagccacg gggaactctg gggacagagc ttaatgtggc 661 cagggcaggg ctggttagaa gaggtcaggg cccacgctgt ggcaggaatc aaggtcagga 721 ccccgagagg gaactgaggg cagcctaacc accaccctca ccaccattcc cgtcccccaa 781 cacccaaccc cacccccatc ccccattccc atccccaccc ccacccctat cctggcagaa 841 tccgggcttt gcccctggta tcaagtcacg gaagctccgg gaatggcggc caggcacgtg 901 agtcctgagg ttcacatcta cggctaaggg agggaagggg ttcggtatcg cgagtatggc 961 cgttgggagg cagcgaaagg gcccaggcct cctggaagac agtggagtcc tgaggggacc 1021 cagcatgcca ggacaggggg cccactgtac ccctgtctca aaccgaggca ccttttcatt 1081 cggctacggg aatcctaggg atgcagaccc acttcagcag ggggttgggg cccagccctg 1141 cgaggagtca tggggaggaa gaagagggag gactgagggg accttggagt • ccagatcagt 1201 ggcaaccttg ggctggggga tgctgggcac agtggccaaa tgtgctctgt gctcattgcg 1261 ccttcagggt gaccagagag ttgagggctg tggtctgaag agtgggactt caggtcagca 1321 gagggaggaa tcccaggatc tgcagggccc aaggtgtacc cccaaggggc ccctatgtgg 1381 tggacagatg cagtggtcct aggatctgcc aagcatccag gtgaagagac tgagggagga 1441 ttgagggtac ccctgggaca gaatgcggac tgggggcccc ataaaaatct gccctgctcc 1501 tgctgttacc tcagagagcc tgggcagggc tgtcagctga ggtccctcca ttatcctagg 1561 atcactgatg tcagggaagg ggaagccttg gtctgagggg gctgcactca gggcagtaga 1621 gggaggctct cagaccctac taggagtgga ggtgaggacc aagcagtctc ctcacccagg 1681 gtacatggac ttcaataaat ttggacatct ctcgttgtcc tttccgggag gacctgggaa 1741 tgtatggcca gatgtgggtc ccctcatgtt tttctgtacc atatcaggta tgtgagttct 1801 tgacatgaga gattctcagg ccagcagaag ggagggatta ggccctataa ggagaaaggt 1861 gagggccctg agtgagcaca gaggggatcc tccaccccag tagagtgggg acctcacaga 1921 gtctggccaa ccctcctgac agttctggga atccgtggct gcgtttgctg tctgcacatt 1981 gggggcccgt ggattcctct cccaggaatc aggagctcca ggaacaaggc agtgaggact 2041 tggtctgagg cagtgtcctc aggtcacaga gtagaggggg ctcagatagt gccaacggtg 2101 aaggtttgcc ttggattcaa accaagggcc ccacctgccc cagaacacat ggactccaga 2161 gcgcctggcc tcaccctcaa tactttcagt cctgcagcct cagcatgcgc tggccggatg 2221 taccctgagg tgccctctca cttcctcctt caggttctga ggggacaggc tgacctggag 2281 gaccagaggc ccccggagga gcactgaagg agaagatctg taagtaagcc tttgttagag 2341 cctccaaggt tccattcagt actcagctga ggtctctcac atgctccctc tctccccagg 2401 ccagtgggtc tccattgccc agctcctgcc cacactcccg cctgttgccc tgaccagagt 2461 catcatgcct cttgagcaga ggagtcagca ctgcaagcct gaagaaggcc ttgaggcccg 2521 aggagaggcc ctgggcctgg tgggtgcgca ggctcctgct actgaggagc aggaggctgc 2581 ctcctcctct tctactctag ttgaagtcac cctgggggag gtgcctgctg ccgagtcacc 2641 agatcctccc cagagtcctc agggagcctc cagcctcccc actaccatga actaccctct 2701 ctggagccaa tcctatgagg actccagcaa ccaagaagag gaggggccaa gcaccttccc 2761 tgacctggag tccgagttcc aagcagcact cagtaggaag gtggccgagt tggttcattt 2821 tctgctcctc aagtatcgag ccagggagcc ggtcacaaag gcagaaatgc tggggagtgt 2881 cgtcggaaat tggcagtatt tctttcctgt gatcttcagc aaagcttcca gttccttgca 2941 gctggtcttt ggcatcgagc tgatggaagt ggaccccatc ggccacttgt acatctttgc 3001 cacctgcctg ggcctctcct acgatggcct gctgggtgac aatcagatca tgcccaaggc 3061 aggcctcctg ataatcgtcc tggccataat cgcaagagag ggcgactgtg cccctgagga 3121 gaaaatctgg gaggagctga gtgtgttaga ggtgtttgag gggagggaag acagtatctt 3181 gggggatccc aagaagctgc tcacccaaca tttcgtgcag gaaaactacc tggagtaccg 3241 gcaggtcccc ggcagtgatc ctgcatgtta tgaattcctg tgggqtccaa gggccctcgt 3301 tgaaaccagc tatgtgaaag tcctgcacca tatggtaaag atcagtggag gacctcacat 3361 ttcctaccca cccctgcatg agtgggtttt gagagagggg gaagagtgag tctgagcacg 3421 agttgcagcc agggccagtg ggagggggtc tgggccagtg caccttccgg ggccgcatcc 3481 cttagtttcc actgcctcct gtgacgtgag gcccattctt cactctttga agcgagcagt 3541 cagcattctt agtagtgggt ttctgttctg ttggatgact ttgagattat tctttgtttc 3601 ctgttggagt tgttcaaatg ttccttttaa cggatggttg aatgagcgtc agcatccagg 3661 tttatgaatg acagtagtca cacatagtgc tgtttatat.a gtttaggagt aagagtcttg 3721 ttttttactc aaattgggaa atccattcca ttttgtgaat tgtgacataa taatagcagt 3781 ggtaaaagta tttgcttaaa attgtgagcg aattagcaat aacatacatg agataactca 3841 agaaatcaaa agatagttga ttcttgcctt gtacctcaat ctattctgta aaattaaaca 3901 aatatgcaaa ccaggatttc cttgacttct ttgagaatgc aagcgaaatt aaatctgaat 3961 aaataattct tcctcttcac tggctcgttt cttttccgtt cactcagcat ctgctctgtg 4021 ggaggccctg ggttagtagt ggggatgcta aggtaagcca gactcacgcc tacccatagg 4081 gctgtagagc ctaggacctg cagtcatata attaaggtgg tgagaagtcc tgtaagatgt 4141 agaggaaatg taagagaggg gtgagggtgt ggcgctccgg gtgagagtag tggagtgtca 4201 gtgc // Antlgeno de célula germinal de próstata de Homo Sapiens (PSCA) mRNA, cds . completos ACCESO AF043498 VERSIÓN AF043498.1 GI: 2909843 SEQ ID NO 79 /traducción="MKAVLLALiLiMAGIALQ^ TARIRAVGIiLTWS GCSmC DSQDIr GKMTCCDTO LGLIiLGPGQL" SEQ ID NO 87 ORIGEN 1 a<39 a ai3 c agtgaccatg aaggctgtgc tgcttgccct gttgatggca ggcttggccc 61 tgcagccagg cactgccctg ctgtgctact cctgcaaagc ccaggtgagc aacgaggact 121 gcctgcaggt ggagaactgc acccagctgg gggagcagtg ctggaccgcg cgcatccgcg 181 cagttggcct cctgaccgtc atcagcaaag gctgcagctt gaactgcgtg gatgactcac 241 aggactacta cgtgggcaag aagaacatca cgtgctgtga caccgacttg tgcaacgcca 301 gcggggccca tgccctgcag ccggctgccg ccatccttgc gctgctccct gcactcggcc 361 tgctgctctg gggacccggc cagctatagg ctctgggggg ccccgctgca gcccacactg 421 ggtgtggtgc cccaggcctt tgtgccactc ctcacagaac ctggcccagt gggagcctgt 481 cctggttcct gaggcacatc ctaacgcaag tttgaccatg tatgtttgca ccccttttcc 541 ccnaaccctg accttcccat gggccttttc caggattccn accnggcaga tcagttttag 601 tganacanat ccgcntgcag atggcccctc caaccntttn tgttgntgtt tccatggccc 661 agcattttcc acccttaacc ctgtgttcag gcacttnttc ccccaggaag ccttccctgc 721 ccaccccatt tatgaattga gccaggtttg gtccgtggtg tcccccgcac ccagcagggg 781 acaggcaatc aggagggccc agtaaaggct gagatgaagt ggactgagta gaactggagg 841 acaagagttg acgtgagttc ctgggagttt ccagagatgg ggcctggagg cctggaggaa 901 ggggccaggc ctcacatttg tggggntccc gaatggcagc ctgagcacag cgtaggccct 961 taataaacac ctgttggata agccaaaaaa // CALICREINA GLANDULAR PRECURSOR 1 (CALICREINA DE TEJIDQ) (RIÑON/PANCREAS/ CALICREINA DE GLÁNDULA SALIVAL) . ACCESO P06870 "PID gl25l70 VERSIÓN 06870 GI : 125170 SEQ ID- NO ORIGEN 1 mwflvlclal slggtgaapp iqsrivggwe ceqhsqpwqa alyhfstfqc ggilvhrqwv 61 ltaahcisdn yqlwlgrhnl fddentaqfv hvsesfphpg fnrasllenht rqadedyshd 121 Imllrltepa dtitdavkw elptqepevg stclasgwgs iepenfsfpd dlqcvdlkil 181 pndecekahv qkvtdfmlcv ghleggkdtc vgdsggplmc dgvlqgvtsw gyvpcgtpnk 241 psvavrvlsy vkwiedtiae ns // ELASTASA PRECURS0R2A. ACCESO P08217 PID gll9255 VERSIÓN P08217 GI :119255 SEQ ID NO 601 ORIGEN 1 mirtlllstl vagalscgdp typpyvtrw ggeearpnsw pwqvslqyss ngkwyhtcgg 61 slianswvlt aa cisssrt yrvglgrhnl yvaesgslav svskiwhkd wnsnqiskgn 121 diallklanp vsltdkiqla clppagtilp nnypcyvtgw grlqtngavp dvlqqgrllv 181 vdyatcsssa wwgssvktsm icaggdgvis scngdsggpl ncqasdgrwq v givsfgsr 241 lgcnyyhkps vftrvsnyid winsviann // elastasa pancreática IIB [Homo sapiens] ACCESO NP 056933 PID g7705648 VERSIÓN NP 056933.1 GI : 7705648 SEQ ID NO 602 ORIGEN 1 mirtlllstl vagalscgvs tyapdmsrml ggeearpnsw pwqvslqyss ngqwyhtcgg 61 slianswvlt aahcisssri yrvmlgqh.nl yvaesgslav svskiwhkd wnsrlqvskgn 121 diallklanp vsltdkiqla clppagtilp nnypcyvtgw grlqtngalp ddlkqgrllv 181 vdyatcsssg wwgstvktnm icaggdgvic tcngdsggpl ncqasdgrwe vhgigsltsv 241 lgcnyyykps iftrvsnynd winsvia= PRAME Antlgeno in melanoma expresado preferencialmente en Homo sapiens (PRAME) , mRNA. ACCESO NM_006115 VERSIÓN NM_006115.1 GI: 5174640 SEQ ID NO 77 /traducción="MERRRLWGSIQSRYISMSVWTS FPPLF AAFIX3?HSQIIJ AW0AWPFTC^ LQVLDLRKNSHQDFWTVW^ EGACDELFSYLIEK KKN IJRLCCKKL^ KFSPYIJGQMINIJRRLIÍL^^ LVFDECGITDDQIiL^^ SEQ ID NO 85 ORIGEN 1 gcttcagggt acagctcccc cgcagccaga agccgggcct gcagcccctc agcaccgctc 61 cgggacaccc cacccgcttc ccaggcgtga cctgtcaaca gcaacttcgc ggtgtggtga 121 actctctgag gaaaaaccat tttgattatt actctcagac gtgcgtggca acaagtgact 181 gagacctaga aatccaagcg ttggaggtcc tgaggccagc ctaagtcgct tcaaaatgga 24 1 acgaaggcgt ttgtggggtt ccattcagag ccgatacatc agcatgagtg tgtggacaag 3 01 cccacggaga cttgtggagc tggcagggca gagcctgctg aaggatgagg ccctggccat 3 61 tgccgccctg gagttgctgc ccagggagct cttcccgcca ctcttcatgg cagcctttga 421 cgggagacac agccagaccc tgaaggcaat ggtgcaggcc tggcccttca cctgcctccc 4 81 tctgggagtg ctgatgaagg gacaacatct tcacctggag accttcaaag ctgtgcttga 541 tggacttgat gtgctccttg cccaggaggt tcgccccagg aggtggaaac ttcaagtgct 601 ggatttacgg aagaactctc atcaggactt ctggactgta tggtctggaa acagggccag 661 tctgtactca tttccagagc cagaagcagc tcagcccatg acaaagaagc gaaaagtaga 721 tggtttgagc acagaggcag agcagccctt cattccagta gaggtgctcg tagacctgtt 781 cctcaaggaa ggtgcctgtg atgaattgtt ctcctacctc attgagaaag tgaagcgaaa 841 gaaaaatgta ctacgcctgt gctgtaagaa gctgaagatt tttgcaatgc ccatgcagga 901 tatcaagatg atcctgaaaa tggtgcagct ggactctatt gaagatttgg aagtgacttg 961 tacctggaag ctacccacct tggcgaaatt ttctccttac ctgggccaga tgattaatct 1021 gcgtagactc ctcctctccc acatccatgc atcttcctac atttccccgg agaaggaaga 1081 gcagtatatc gcccagttca cctctcagtt cctcagtctg cagtgcctgc aggctctcta 1141 tgtggactct ttatttttcc ttagaggccg cctggatcag ttgctcaggc acgtgatgaa 1201 ccccttggaa accctctcaa taactaactg ccggctttcg gaaggggatg tgatgcatct 1261 gtcccagagt cccagcgtca gtcágctaag tgtcctgagt ctaagtgggg tcatgctgac 1321 cgatgtaagt cccgagcccc tccaagctct gctggagaga gcctctgcca ccctccagga 1381 cctggtcttt gatgagtgtg ggatcacgga tgatcagctc cttgccctcc tgccttccct 1441 gagccactgc tcccagctta caaccttaag cttctacggg aattccatct ccatatctgc 1501 cttgcagagt ctcctgcagc acctcatcgg gctgagcaat ctgacccacg tgctgtatcc 1561 tgtccccctg gagagttatg aggacatcca tggtaccctc cacctggaga ggcttgccta 1621 tctgcatgcc aggctcaggg agttgctgtg tgagttgggg cggcccagca tggtctggct 1681 tagtgccaac ccctgtcctc actgtgggga cagaaccttc tatgacccgg agcccatcct 1741 gtgcccctgt ttcatgccta actagctggg tgcacatatc aaatgcttca ttctgcatac 1801 ttggacacta aagccaggat gtgcatgcat cttgaagcaa caaagcagcc acagtttcag 1861 acaaatgttc agtgtgagtg aggaaaacat gttcagtgag gaaaaaacat tcagacaaat 1921 gttcagtgag gaaaaaaagg ggaagttggg gataggcaga tgttgacttg aggagttaat 1981 gtgatctttg gggagataca tcttatagag ttagaaatag aatctgaatt tctaaaggga 2041 gattctggct tgggaagtac atgtaggagt taatccctgt gtagactgtt gtaaagaaac 2101 tgttgaaaat aaagagaagc aatgtgaagc aaaaaaaaaa aaaaaaaa Dominio de Fibronectina ED-B Gene de fibronectina Humana región ED-B. ACCESO X07717 VERSIÓN X07717.1 GI: 31406 SEQ ID NO 590 /traducción= 11 CTFDNLSPGLEYNVSVYTVKDDKESVPISDTIIPEVPQLTDLSF VDITDSSIGLRWTPLNSSTIIGYRITWAAGEGIPIFEDFVDSSVGYYTVTGLEPGID YDI SVITLINGGESAPTTLTQQTAVPPPTDLRFTNIGPDTMRVTW SEQ ID NO 591 ORIGEN 1 ctgcactttt gataacctga gtcccggcct ggagtacaat gtcagtgttt acactgtcaa 61 ggatgacaag gaaagtgtcc ctatctctga taccatcatc ccaggtaata gaaaataagc 121 tgctatcctg agagtgacat tccaataaga gtggggatta gcatcttaat ccccagatgc 181 ttaagggtgt caactatatt tgggatttaa ttccgatctc ccagctgcac tttccaaaac 241 caagaagtca aagcagcgat ttggacaaaa tgcttgctgt taacactgct ttactgtctg 301 tgcttcactg ggatgctgtg tgttgcagcg agtatgtaat ggagtggcag ccatggcttt 361 aactctgtat tgtctgctca catggaagta tgactaaaac actgtcacgt gtctgtactc 421 agtactgata ggctcaaagt aatatggtaa atgcatccca tcagtacatt tctgcccgat 481 tttacaatcc atatcaattt ccaacagctg cctatttcat cttgcagttt caaatccttc 541 tttttgaaaa ttggatttta aaaaaaagtt aagtaaaagt cacaccttca gggttgttct 601 ttcttgtggc cttgaaagac aacattgcaa aggcctgtcc taaggatagg cttgtttgtc 661 cattgggtta taacataatg aaagcattgg acagatcgtg tccccctttg gactcttcag 721 tagaatgctt ttactaacgc taatt ttttgattat gaatgaacct aaaatagtgg 781 caatggcctt aacctaggcc tgtctttcct cagcctgaat gtgcttttga atggcacatt 841 tcacaccata cattcataat gcattagcgt tatggccatg atgttgtcat gagttttgta 901 tgggagaaaa aaaatcaatt tatcacccat ttattatttt ttccggttgt tcatgcaagc 961 ttattttcta ctaaaacagt tttggaatta ttaaaagcat tgctgatact tacttcagat 1021 attatgtcta ggctctaaga atggtttcga catcctaaac agccatatga tttttaggaa 1081 tctgaacagt tcaaattgta ccctttaagg atgttttcaa aatgtaaaaa atatatatat 1141 atatatatat tccctaaaag aatattcctg tttattcttc tagggaagca aactgttcat 1201 gatgcttagg aagtcttttc agagaattta aaacagattg catattacca tcattgcttt 1261 aacattccac caattttact actagtaacc tgatatacac tgctttattt tttcctcttt 1321 ttttccctct attttccttt tgcctccccc tccctttgct ttgtaactca atagaggtgc 1381 cccaactcac tgacctaagc tttgttgata taaccgattc aagcatcggc ctgaggtgga 1441 ccccgctaaa ctcttccacc attattgggt accgcatcac agtagttgcg gcaggagaag 1501 gtatccctat ttttgaagat tttgtggact cctcagtagg atactacaca gtcacagggc 1561 tggagccggg cattgactat gatatcagcg ttatcactct cattaatggc ggcgagagtg 1621 cccctactac actgacacaa caaacgggtg aattttgaaa acttctgcgt ttgagacata 1681 gatggtgttg catgctgcca ccagttactc cggttaaata tggatgtttc atgggggaag 1741 tcagcaattg gccaaagatt cagataggtg gaattggggg gataaggaat caaatgcatc 1801 tgctaaactg attggagaaa aacacatgca atatcttcag tacactctca tttaaaccac 1861 aagtagatat aaagcctaga gaaatacaga tgtctgctct gttaaatata aaatagcaaa 1921 tgttcattca atttgaagac ctagaatttt tcttcttaaa taccaaacac gaataccaaa 1981 ttgcgtaagt accaattgat aagaatatat caccaaaatg taccatcatg ctcttccttc 2041 taccctttga taaactctac catgctcctt ctttgtagct aaaaacccat caaaatttag 2101 ggtagagtgg atgggcattg ttttgaggta ggagaaaagt aaacttggga ccattctagg 2161 ttttgttgct gtcactaggt aaagaaacac ctctttaacc acagtctggg gacaagcatg 2221 caacatttta aaggttctct gctgtgcatg ggaaaagaaa catgctgaga accaatttgc 2281 atgaacatgt tcacttgtaa gtagaattca ctgaatggaa ctgtagctct agatatctca 2341 catgggggga agtttaggac cctcttgtct ttttgtctgt gtgcatgtat ttctttgtaa 2401 agtactgcta tgtttctctt tgctgtgtgg caacttaagc ctcttcggcc tgggataaaa 2461 taatctgcag tggtattaat aatgtacata aagtcaacat atttgaaagt agattaaaat 2521 cttttttaaa tatatcaatg atggcaaaaa ggttaaaggg ggcctaacag tactgtgtgt 2581 agtgttttat ttttaacagt agtacactat aacttaaaat agacttagat tagactgttt 2641 gcatgattat gattctgttt cctttatgca tgaaatattg attttacctt tccagctact 2701 tcgttagctt taattttaaa atacattaac tgagtcttcc ttcttgttcg aaaccagctg 2761 ttcctcctcc cactgacctg cgattcacca acattggtcc agacaccatg cgtgtcacct 2821 ggg // CEA Molécula 5 de adhesión celular relacionada al antígeno carcinoembriónico de Homo sapiens - (CEACAMS) , mR A. ACCESO NM_004363 VERSIÓN NM 004363.1 GI:11386170 SEQ ID NO 591- /traducción=IIMESPSAPPHRWCIPWQRLLLTASLLTFWNPPTTAKLTIESTPFN VAEG EVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQIIGYVIGTQQATPGPAYSGREIIY PNASLLIQNIIQNDTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPSISSNNSKPVEDK DAVAFTCEPETQDATYLW VNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTASY CETQ NPVSARRSDSVILNVLYGPDAPTISPLNTSYRSGENLNLSCHAASNPPAQYSWFVNGT FQQSTQELFIPNITVNNSGSYTCQAHNSDTGLNRTTVTTITVYAEPPKPFITSNNSNP VEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYE CGIQNELSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGA7NLSLSCHAASNPPAQYSWL IDGWIQQHTQELFISNITEK SGLYTCQANSASGHSRTTVKTITVSAELPKPSISSN NSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWV GQSLPVSPRLQLSMGNRTLTLFNVTRNDA RAYVCGIQNSVSA RSDPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGA LNLSCHSASMPSPQ YSWRINGIPQQHTQVLFIAKITPMTNGTYACFVSNLATGR NSIVKSITVSASGTSPG LSAGATVGIMIGVLVGVALI " SEQ ID WO 593 ORIGEN 1 ctcagggcag agggaggaag gacagcagac cagacagtca cagcagcctt gacaaaacgt 61 tcctggaact caagctcttc tccacagagg aggacagagc agacagcaga gaccatggag 121 tctccctcgg cccctcccca cagatggtgc atcccctggc agaggctcct gctcacagcc 181 tcacttctaa ccttctggaa cccgcccacc actgccaagc tcactattga atccacgccg 241 ttcaatgtcg cagaggggaa ggaggtgctt ctacttgtcc acaatctgcc ccagcatctt 301 tttggctaca gctggtacaa aggtgaaaga gtggatggca accgtcaaat tataggatat 361 gtaataggaa ctcaacaagc taccccaggg cccgcataca gtggtcgaga gataatatac 421 cccaatgcat ccctgctgat ccagaacatc atccagaatg acacaggatt ctacacccta 481 cacgtcataa agtcagatct tgtgaatgaa gaagcaactg gccagttccg ggtatacccg 541 gagctgccca agccctccat ctccagcaac aactccaaac ccgtggagga caaggatgct 601 gtggccttca cctgtgaacc tgagactcag gacgcaacct acctgtggtg ggtaaacaat 661 cagagcctcc cggtcagtcc caggctgcag ctgtccaatg gcaacaggac cctcactcta 721 ttcaatgtca caagaaatga cacagcaagc tacaaatgtg aaacccagaa cccagtgagt 781 gccaggcgca gtgattcagt catcctgaat gtcctctatg gcccggatgc ccccaccatt 841 tcccctctaa acacatctta cagatcaggg gaaaatctga acctctcctg ccacgcagcc 901 tctaacccac ctgcacagta ctcttggttt gtcaatggga ctttccagca atccacccaa 961 gagctcttta tccccaacat cactgtgaat aatagtggat cctatacgtg ccaagcccat 1021 aactcagaca ctggcctcaa taggaccaca gtcacgacga tcacagtcta tgcagagcca 1081 cccaaaccct tcatcaccag caacaactcc aaccccgtgg aggatgagga tgctgtagcc 1141 ttaacctgtg aacctgagat tcagaacaca acctacctgt ggtgggtaaa taatcagagc 1201 ctcccggtca gtcccaggct gcagctgtcc aatgacaaca ggaccctcac tctactcagt 1261 gtcacaagga atgatgtagg accctatgag tgtggaatcc agaacgaatt aagtgttgac 1321 cacagcgacc cagtcatcct gaatgtcctc tatggcccag acgaccccac catttccccc 1381 tcatacacct attaccgtcc aggggtgaac ctcagcctct cctgccatgc agcctctaac 1441 ccacctgcac agtattcttg gctgattgat gggaacatcc agcaacacac acaagagctc 1501 tttatctcca acatcactga gaagaacagc ggactctata cctgccaggc caataactca 1561 gccagtggcc acagcaggac tacagtcaag acaatcacag tctctgcgga gctgcccaag 1621 ccctccatct ccagcaacaa ctccaaaccc gtggaggaca aggatgctgt ggccttcaec 1681 tgtgaacctg aggctcagaa cacaacctac ctgtggtggg taaatggtca gagcctccca 1741 gtcagtccca ggctgcagct gtccaatggc aacaggaccc tcactctatt caatgtcaca 1801 agaaatgacg caagagccta tgtatgtgga atccagaact cagtgagtgc aaaccgcagt 1861 gacccagtca ccctggatgt cctctatggg ccggacaccc ccatcatttc ccccccagac 1921 tcgtcttacc tttcgggagc gaacctcaac ctctcctgcc actcggcctc taacccatcc 1981 ccgcagtatt cttggcgtat caatgggata ccgcagcaac acacacaagt tctctttatc 2041 gccaaaatca' cgccaaataa taacgggacc tatgcctgtt ttgtctctaa cttggctact 2101 ggccgcaata attccatagt caagagcatc acagtctctg catctggaac ttctcctggt 2161 ctctcagctg gggccactgt cggcatcatg attggagtgc tggttggggt tgctctgata 2221 tagcagccct ggtgtagttt cttcatttca ggaagactga cagttgtttt gcttcttcct 2281 taaagcattt gcaacagcta cagtctaaaa ttgcttcttt accaaggata tttacagaaa 2341 agactctgac cagagatcga gaccatccta gccaacatcg tgaaacccca tctctactaa 2401 aaatacaaaa atgagctggg cttggtggcg cgcacctgta gtcccagtta ctcgggaggc 2461 tgaggcagga gaatcgcttg aacccgggag gtggagattg cagtgagccc agatcgcacc 2521 actgcactcc agtctggcaa cagagcaaga ctccatctca aaaagaaaag aaaagaagac 2581 tctgacctgt actcttgaat acaagtttct gataccactg cactgtctga gaatttccaa 2641 aactttaatg aactaactga cagcttcatg aaactgtcca ccaagatcaa gcagagaaaa 2701 taattaattt catgggacta aatgaactaa tgaggattgc tgattcttta aatgtcttgt 2761 ttcccagatt tcaggaaact ttttttcttt taagctatcc actcttacag caatttgata 2821 aaatatactt ttgtgaacaa aaattgagac atttacattt tctccctatg tggtcgctcc 2881 agacttggga aactattcat gaatatttat attgtatggt aatatagtta ttgcacaagt 2941 tcaataaaaa tctgctcttt gtataacaga aaaa // Her2/Neu Receptor humano tipo tirosina cinasa- (HER2) mR A, cds . completos ACCESO M11730 VERSIÓN M11730.1 GI : 183986 SEQ ID NO 594 /1raducción="MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLD MLRHLYQGCQWQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQ QVPLQRLRIV RGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQ LCYQDTILWKDIFH NNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRT VCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNT DTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCE C SKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPL QPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGI S LGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEG LACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPE CQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQ PCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIVSAWGILLVWLGWFGILIKRRQQKI RKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKV VLGSGAFG VYKGIWI PDGEWKIPVAIKVLRENTSPI KEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVT QLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLL1S CMQIAKGMSYLED LVHRDLAARNVLVKSP Is!HVKITDFGIiARLLDIDETEYHADGGKVPIKWiyLALESILRRRFTHQSDVWSY LMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFREL VSEFSRMARDPQRFWIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGF FCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDG DLGMGAA GLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYV QPDVR PQPPSPREGPLPAARPAGATLERAKTLSPGKNGWKDVFAFGGAATENPEYLTPQGGAA PQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV" SEQ ID NO 595 ORIGEN Cromosoma 17q2l-q22. 1 aattctcgag ctcgtcgacc ggtcgacgag ctcgagggtc gacgagctcg agggcgcgcg 61 cccggccccc acccctcgca gcaccccgcg ccccgcgccc tcccagccgg gtccagccgg 121 agccatgggg ccggagccgc agtgagcacc atggagctgg cggccttgtg ccgctggggg 181 ctcctcctcg ccctcttgcc ccccggagcc gcgagcaccc aagtgtgcac cggcacagac 241 atgaagctgc ggctccctgc cagtcccgag acccacctgg acatgctccg ccacctctac 301 cagggctgcc aggtggtgca gggaaacctg gaactcacct acctgcccac caatgccagc 361 ctgtccttcc tgcaggatat ccaggaggtg cagggctacg tgctcatcgctcacaaccaa 421 gtgaggcagg tcccactgca gaggctgcgg attgtgcgag gcacccagct ctttgaggac 481 aactatgccc tggccgtgct agacaatgga gacccgctga acaataccácccctgtcaca 541 ggggcctccc caggaggccl ' gcgggagctg. cagcttcgaa gcctcacaga gatcttgaaa 601 ggaggggtct tgatccagcg gaacccccag ctctgctacc aggacacgat tttgtggaag 661 gacatcttcc acaagaacaa ccagctggct ctcacactga tagacaccaa ccgctctcgg 721 gcctgccacc cctgttctcc gatgtgtaag ggctcccgct gctggggagagagttctgag 781 gattgtcaga gcctgacgcg cactgtctgt gccggtggct gtgcccgctg caaggggcca 841 ctgcccactg actgctgcca tgagcagtgt gctgccggct gcacgggccc caagcactct 901 gactgcctgg cctgcctcca cttcaaccac agtggcatct gtgagctgca ctgcccagcc 961 ctggtcacct acaacacaga cacgtttgag tccatgccca atcccgaggg ccggtataca 1021 ttcggcgcca gctgtgtgac tgcctgtccc tacaactacc tttctacgga cgtgggatcc 1081 tgcaccctcg tctgccccct gcacaaccaa gaggtgacag cagaggatggaacacagcgg 1141 tgtgagaagt gcagcaagcc ctgtgcccga gtgtgctatg gtctgggcat ggagcacttg 1201 cgagaggtga gggcagttac cagtgccaat atccaggagt ttgctggctg caagaagatc 1261 tttgggagcc tggcatttct gccggagagc tttgatgggg acccagcctc caacactgcc 1321 ccgctccagc cagagcagct ccaagtgttt gagactctgg aagagatcac aggttaccta 1381 tacatctcag catggccgga cagcctgcct gacctcagcg tcttccagaa cctgcaagta 1441 atccggggac gaattctgca caatggcgcc tactcgctga ccctgcaagg gctgggcatc 1501 agctggctgg ggctgcgctc actgagggaa ctgggcagtg gactggccct catccaccat 1561 aacacccacc tctgcttcgt gcacacggtg ccctgggacc agctctttcg gaacccgcac 1621 caagctctgc tccacactgc caaccggcca gaggacgagt gtgtgggcga gggcctggcc 1681 tgccaccagc tgtgcgcccg agggcactgc tggggtccag ggcccaccca gtgtgtcaac 1741 tgcagccagt tccttcgggg ccaggagtgc gtggaggaat gccgagtact gcaggggctc 1801 cccagggagt atgtgaatgc caggcactgt ttgccgtgcc ^accctgagtg tcagccccag 1861 aatggctcag tgacctgttt tggaccggag gctgaccagt gtgtggcctg tgcccactat 1921 aaggaccctc ccttctgcgt ggcccgctgc cccagcggtg tgaaacctga cctctcctac 1981 atgcccatct ggaagtttcc agatgaggag ggcgcatgcc agccttgccc catcaactgc 2041 acccactcct gtgtggacct ggatgacaag ggctgccccg ccgagcagag agccagccct 2101 ctgacgtcca tcgtctctgc ggtggttggc attctgctgg tcgtggtctt gggggtggtc 2161 tttgggatcc tcatcaagcg acggcagcag aagatccgga agtacacgat gcggagactg 2221 ctgcaggaaa cggagctggt ggagccgctg acacctagcg gagcgatgcc caaccaggcg 2281 cagatgcgga tcctgaaaga gacggagctg aggaaggtga aggtgcttgg atctggcgct 2341 tttggcacag tctacaaggg catctggatc cctgatgggg agaatgtgaa aattccagtg 2401 gccatcaaag tgttgaggga aaacacatcc cccaaagcca acaaagaaat cttagacgaa 2461 gcatacgtga tggctggtgt gggctcccca tatgtctccc gccttctggg catctgcctg 2521 acatccacgg tgcagctggt gacacagctt atgccctatg gctgcctctt agaccatgtc 2581 cgggaaaacc gcggacgcct gggctcccag gacctgctga actggtgtat gcagattgcc 2641 aaggggatga gctacctgga ggatgtgcgg ctcgtacaca gggacttggc cgctcggaac 2701 gtgctggtca agagtcccaa ccatgtcaaa attacagact tcgggctggc tcggctgctg 2761 gacattgacg agacagagta ccatgcagat gggggcaagg tgcccatcaa gtggatggcg 2821 ctggagtcca ttctccgccg gcggttcacc caccagagtg atgtgtggag ttatggtgtg 2881 actgtgtggg agctgatgac ttttggggcc aaaccttacg atgggatccc agcccgggag 2941 atccctgacc tgctggaaaa gggggagcgg ctgccccágc cccccatctg caccattgat 3001 gtctacatga tcatggtcaa atgttggatg attgactctg aatgtcggcc aagattccgg 3061 gagttggtgt ctgaattctc ccgcatggcc agggaccccc agcgctttgt ggtcatccag 3121 aatgaggact tgggcccagc cagtcccttg gacagcacct tctaccgctc actgctggag 3181 gacgatgaca tgggggacct ggtggatgct gaggagtatc tggtacccca gcagggcttc 3241 ttctgtccag accctgcccc 999cgctggg ggcatggtcc accacaggca ccgcagctca 3301 tctaccagga gtggcggtgg ggacctgaca ctagggctgg agccctctga agaggaggcc 3361 cccaggtctc cactggcacc ctccgaaggg gctggctccg atgtatttga tggtgacctg 3421 ggaatggggg cagccaaggg gctgcaaagc ctccccacac atgaccccag ccctctacag 3481 cggtacagtg aggaccccac agtacccctg ccctctgaga ctgatggcta cgttgccccc 3541 ctgacctgca gcccccagcc tgaatatgtg aaccagccag atgttcggcc ccagccccct 3601 tcgccccgag agggccctct gcctgctgcc cgacctgctg gtgccactct ggaaagggcc 3661 aagactctct ccccagggaa gaatggggtc gtcaaagacg tttttgcctt tgggggtgcc 3721 gtggagaacc ccgagtactt gacaccccag ggaggagctg cccctcagcc ccaccctcct 3781 cctgccttca gcccagcctt cgacaacctc tattactggg accaggaccc accagagcgg 3841 ggggctccac ccagcacctt caaagggaca cctacggcag agaacccaga gtacctgggt 3901 ctggacgtgc cagtgtgaac cagaaggcca agtccgcaga agccctgatg tgtcctcagg 3961 gagcagggaa ggcctgactt ctgctggcat caagaggtgg gagggccctc cgaccacttc 4021 caggggaacc tgccatgcca ggaacctgtc ctaaggaacc ttccttcctg cttgagttcc 4081 cagatggctg gaaggggtcc agcctcgttg gaagaggaac agcactgggg agtctttgtg 4141 gattctgagg ccctgcccaa tgagactcta gggtccagtg gatgccacag cccagcttgg 4201 ccctttcctt ccagatcctg ggtactgaaa gccttaggga agctggcctg agaggggaag 4261 cggccctaag ggagtgtcta agaacaaaag cgacccattc agagactgtc cctgaaacct 4321 agtactgccc cccatgagga aggaacagca atggtgtcag tatccaggct ttgtacagag 4381 tgcttttctg tttagttttt actttttttg ttttgttttt ttaaagacga aataaagacc 4441 caggggagaa tgggtgttgt atggggaggc aagtgtgggg ggtccttctc cacacccact 4501 ttgtccattt gcaaatatat tttggaaaac // RNAm de H. sapiens para la proteína SCPl. ACCESO X95654 VERSIÓN X95654.1 GI: 1212982 SEQ ID NO 596 /traducción="MEKQXPFALFVPPRSSSSQVSAVKPQTLGGDSTFFKSFNKCTED DLEFPFAKTNLSKNGENIDSDPALQ VNFLPVLEQVGNSDCHYQEGLKDSDLENSEGL SRVFSKLYKEAEKI KWKVSTEAELRQKESKLQENR IIEAQRKAIQELQFGNE VSL KLEEGIQENKDLIKEIOTATRHLCNLLKETCARSAEKTKKYEYEREETRQWMDLMN I E MITAHGELRVQAENSRLEMHFKLKEDYEKIQHLEQEYKKEINDKEKQVSLLLIQIT EKENKMKDLTFLLEESRDKV QLEEKTKLQSENLKQSIEKQHHLTKELEDI VSLQRS VSTQKALEEDLQIATKTICQLTEE ETQMEESNKARAAHSFWTEFETTVCSLEELLR TEQQRLEKNEDQLKILTMELQKKSSELEEMTKLTMSTKEVELEELKKVLGE ETLLYEN KQFEKIAEELKGTEQELIGLLQAREKEVHDLEIQLTAITTSEQYYSKEVKDLKTELEN EKLK TELTSHCNKLSLENKELTQETSDMTLELKNQQEDINN KQEERMLKQIENLQ ETETQLR ELEYVREELKQKRDEVKCKLDKSEENC NLR QVENK KYIEELQQENKA L XKGTAESKQLINT^EIK^KLELELESAKQKFGEITDTYQKEIEDKKISEENLLE EKA VIADEAVKLQ EIDKRCQHKIAEMVALMEKHKHQYDKIIEERDSELGLYKSKEQ EQSSLRASLEIELSMLKAELLSVKKQLEIEREE EKL REAKENTATLKEK D KTQT FLLETPEIYW JJDSKAVPSQTVSRJSTFTSVDHGISKDKRDYL TSAKNTLSTPLPKAYT VKTPT PKLQQRENLNIPIEESKK30KMAFEFDINSDSSETTDLLSMVSEEETLKTLY RNISMPPASHLCVKTPKKAPSSLTTPGPT^ KLFV" SEQ ID NO 597 ORIGEN 1 gccctcatag accgtttgtt gtagttcgcg tgggaacagc aacccacggt ttcccgatag 61 ttcttcaaag atatttacaa ccgtaacaga gaaaatggaa aagcaaaagc cctttgcatt 121 gttcgtacca ccgagatcaa gcagcagtca ggtgtctgcg gtgaaacctc agaccctggg 181 aggcgattcc actttcttca agagtttcaa caaatgtact gaagatgatt tggagtttcc 241 atttgcaaag actaatctct ccaaaaatgg ggaaaacatt gattcagatc ctgctttaca 301 aaaagttaat ttcttgcccg tgcttgagca ggttggtaat tctgactgtc actatcagga 361 aggactaaaa gactctgatt tggagaattc agagggattg agcagagtgt tttcaaaact 421 gtataaggag gctgaaaaga taaaaaaatg gaaagtaagt acagaagctg aactgagaca 481 gaaagaaagt aagttgcaag aaaacagaaa gataattgaa gcacagcgaa aagccattca 541 ggaactgcaa tttggaaatg aaaaagtaag tttgaaatta gaagaaggaa tacaagaaaa 601 taaagattta ataaaagaga ataatgccac aaggcattta tgtaatctac tdaaagaaac 661 ctgtgctaga tctgcagaaa agacaaagaa atatgaatat gaacgggaag aaaccaggca 721 agtttatatg gatctaaata ataacattga gaaaatgata acagctcatg gggaacttcg 781 tgtgcaagct gagaattcca gactggaaat gcattttaag ttaaaggaag attatgaaaa 841 aatccaacac cttgaacaag aatacaagaa ggaaataaat gacaaggaaa agcaggtatc 901 actactattg atccaaatca ctgagaaaga aaataaaatg aaagatttaa catttctgct 961 ' agaggaatcc agagataaag ttaatcaatt agaggaaaag acaaaattac agagtgaaaa 1021 cttaaaacaa tcaattgaga aacagcatca tttgactaaa gaactagaag atattaaagt 1081 gtcattacaa agaagtgtga gtactcaaaa ggctttagag gaagatttac agatagcaac 1141 aaaaacaatt tgtcagctaa ctgaagaaaa agaaactcaa atggaagaat ctaataaagc 1201 tagagctgct cattcgtttg tggttactga atttgaaact actgtctgca gcttggaaga 1261 attattgaga acagaacagc aaagattgga aaaaaatgaa gatcaattga aaatacttac 1321 catggagctt caaaagaaat caagtgagct ggaagagatg actaagctta caaataacaa 1381 agaagtagaa cttgaagaat tgaaaaaagt cttgggagaa aaggaaacac ttttatatga 1441 aaataaacaa tttgagaaga ttgctgaaga attaaaagga acagaacaag aactaattgg 1501 tcttctccaa gccagagaga aagaagtaca tgatttggaa atacagttaa ctgccattac 1561 cacaagtgaa cagtattatt caaaagaggt taaagatcta aaaactgagc ttgaaaacga 1621 gaagcttaag aatactgaat taacttcaca ctgcaacaag ctttcactag aaaacaaaga 1681 gctcacacag gaaacaagtg atatgaccct agaactcaag aatcagcaag aagatattaa 1741 taataacaaa aagcaagaag aaaggatgtt gaaacaaata gaaaatcttc aagaaacaga 1801 aacccaatta agaaatgaac tagaatatgt gagagaagag ctaaaacaga aaagagatga 1861 agttaaatgt aaattggaca agagtgaaga aaattgtaac aatttaagga aacaagttga 1921 aaataaaaac aagtatattg aagaacttca gcaggagaat aaggccttga aaaaaaaagg 1981 tacagcagaa agcaagcaac tgaatgttta tgagataaag gtcaataaat tagagttaga 2041 actagaaagt gccaaacaga aatttggaga aatcacagac acctatcaga aagaaattga 2101 ggacaaaaag atatcagaag aaaatctttt ggaagaggtt gagaaagcaa aagtaatagc 2161 tgatgaagca gtaaaattac agaaagaaat tgataagcga tgtcaacata aaatagctga 2221 aatggtagca cttatggaaa aacataagca ccaatatgat aagatcattg aagaaagaga 2281 ctcagaatta ggactttata agagcaaaga. acaagaacag tcatcactga gagcatcttt 2341 ggagattgaa ctatccaatc tcaaagctga acttttgtct gttaagaagc aacttgaaat 2401 agaaagagaa gagaaggaaa aactcaaaag agaggcaaaa gaaaacacag ctactcttaa 2461 agaaaaaaaa gacaagaaaa cacaaacatt tttattggaa acacctgaaa tttattggaa 2521 attggattct aaagcagttc cttcacaaac tgtatctcga aatttcacat cagttgatca 2581 tggcatatcc aaagataaaa gagactatct gtggacatct gccaaaaata ctttatctac 2641 accattgcca aaggcatata cagtgaagac accaacaaaa ccaaaactac agcaaagaga 2701 aaacttgaat atacccattg aagaaagtaa aaaaaagaga aaaatggcct ttgaatttga 2761 tattaattca gatagttcag aaactactga tcttttgagc atggtttcag aagaagagac 2821 attgaaaaca ctgtatagga acaataatcc accagcttct catctttgtg tcaaaacacc 22881 aaaaaaggcc ccttcatctc taacaacccc tggacctaca ctgaagtttg gagctataag 2941 aaaaatgcgg gaggaccgtt gggctgtaat tgctaaaatg gatagaaaaa aaaaactaaa 3001 agaagctgaa aagttatttg tttaatt ca gagaatcagt gtagttaagg agcctaataa 3061 cgtgaaactt atagttaata ttttgttctt atttgccaga gccacatttt atctggaagt 3121 tgagacttaa aaaatacttg catgaatgat ttgtgtttct ttatattttt agcctaaatg 3181 ttaactacat attgtctgga aacctgtcat tgtattcaga taattagatg attatatatt 3241 gttgttactt tttcttgtat tcatgaaaac tgtttttact aagttttcaa atttgtaaag 3301 ttagcctttg aatgctagga atgcattatt gagggtcatt ctttattctt tactattaaa 3361 atattttgga tgcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa // Sarcoma sinovial de Homo sapiens, unto de ruptura X 4 (SSX4) , mRNA. ACCESO NM_005636 VERSIÓN NM_005636.1 GI: 5032122 SEQ ID NO 598 /1raducción= "M GDDAFAKRPRDDAQIS WMKLNYEVMTKLGFIWTLPPFMRSKRAADFHGNDFGNDRlSrHRNQVERPQ TFG SLQRIFPKIMP KPAEEENGL EVPEASGPQNDGKQLCPPGNPSTLEKINKTSGPKRG KHAWTHRLRERKQLWYEEISDPEEDDE " SEQ ID NO 599 ORIGEN 1 atgaacggag acgacgcctt tgcaaggaga cccagggatg atgctcaaat atcagagaag 61 ttacgaaagg ccttcgatga tattgccaaa tacttctcta agaaagagtg ggaaaagatg 121 aaatcctcgg agaaaatcgt ctatgtgtat atgaagctaa actatgaggt catgactaaa 181 ctaggtttca aggtcaccct cccacctttc atgcgtagta aacgggctgc agacttccac 241 gggaatgatt ttggtaacga tcgaaaccac aggaatcagg ttgaacgtcc tcagatgact 301 ttcggcagcc tccagagaat cttcccgaag atcatgccca agaagccagc agaggaagaa 3 6 laatggtttga aggaagtgcc agaggcatct ggcccacaaa atgatgggaa acagctgtgc 421 cccccgggaa atccaagtac cttggagaag attaacaaga catctggacc caaaaggggg 481 aaacatgcct ggacccacag actgcgtgag agaaagcagc tggtggttta tgaagagatc 541 agcgaccctg aggaagatga cgagtaactc ccctcg Todas las patentes y publicaciones mencionadas en la especificación son indicativas de los niveles de aquellos de experiencia en la materia a la cual pertenece la invención.

La invención ilustrativamente descrita en la presente puede practicarse adecuadamente en la ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones que no se describan específicamente en la presente. Los términos y expresiones que se han empleado se utilizan como términos de descripción y no de limitación, y no existe intención de que el uso de tales términos y expresiones indique la exclusión de equivalentes de las características mostradas y descritas o porciones de las mismas. Se reconoce que son posibles varias modificaciones dentro del alcance de la invención reivindicada. Así, debe entenderse que aunque la presente invención se ha descrito específicamente por las modalidades preferidas y características opcionales, las modificaciones y variaciones de los conceptos descritos en la presente, pueden ocurrírseles a los expertos en la materia, y que tales modificaciones y variaciones se consideran que se encuentran dentro del alcance de esta invención como se define por las reivindicaciones anexas.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un epítope aislado, que comprende un componente seleccionado del grupo que consiste de : (i) un polipéptido que tiene la secuencia como se describe en la TABLA 1; (ii) un grupo de ep£topes que comprende el polipéptido de (i) ; (iii) un polipéptido que tiene similitud substancial a (i) o (ii) ; (iv) un polipéptido que tiene similitud funcional a cualquiera de (i) a (iii) ; y (v) un ácido nucleico que codifica el polipéptido de cualquiera de (i) a (iv) ;
2. El epítope de la reivindicación 1, en donde el epítope es inmunológicamente activo.
3. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido es de menos de aproximadamente 30 aminoácidos de longitud.
4. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido es de 8 a 10 aminoácidos de longitud.
5. El epítope de la reivindicación 1, en donde la similitud substancial o funcional comprende la adición de al menos un aminoácido.
6. El epítope de la reivindicación 5, en donde al menos un aminoácido adicional se encuentra en una M-terminal del polipéptido.
7. El epítope de la reivindicación 1, en donde la similitud substancial o funcional comprende una sustitución de al menos un aminoácido.
8. El epítope de la reivindicación 1, teniendo el polipéptido afinidad a la molécula de HLA-A2.
9. El epitope de la reivindicación 8 , en donde la afinidad se determina por un análisis de unión.
10. El epítope de la reivindicación 8, en donde la afinidad se determina por un análisis de restricción del reconocimiento de epítope.
11. El epítope de la reivindicación 8, en donde la afinidad se determina por un algoritmo de predicción.
12. El epítope de la reivindicación 1, teniendo el polipéptido afinidad a una molécula de HLA-B7 o HLA-B51.
13. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido es un epítope de mantenimiento.
14. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido corresponde a un epítope desplegado en una célula tumoral .
15. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido corresponde a un epítope desplegado en una célula neovascular.
16. El epítope de la reivindicación 1, en donde el polipéptido es un epítope inmune.
17. El epítope de la reivindicación 1, en donde el epítope es un ácido nucleico .
18. Una composición farmacéutica que comprende el polipeptido de la reivindicación 1 y un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
19. La composición de la reivindicación 18, en donde el adyuvante es un polinucleótido .
20. La composición de la reivindicación 19, en donde el polinucleótido comprende un dinucleótido .
21. La composición de la reivindicación 20, en donde el dinucleótido es GpG.
22. La composición de la reivindicación 18, en donde el adyuvante se codifica por un polinucleótido.
23. La composición de la reivindicación 18, en donde el adyuvante es una citocina.
24. La composición de la reivindicación 23, en donde la citocina es GM-CSF.
25. La composición de la reivindicación 18, que comprende además una célula que presenta antígeno profesional (pAPC) .
26. La composición de la reivindicación 25, en donde la pAPC es una célula dendrítica.
27. La composición de la reivindicación 18, que comprende además un segundo epítope .
28. La composición de la reivindicación 27, en donde el segundo epítope es un polipéptído.
29. La composición de la reivindicación 27, en donde el segundo epitope es un ácido nucleico.
30. La composición de la reivindicación 27, en donde el segundo epitope es un epitope de mantenimiento.
31. La composición de la reivindicación 27, en donde el segundo epítope es un epítope inmune.
32. Una composición farmacéutica que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 1 y un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
33. Una construcción recombinante que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 1.
34. La construcción de la reivindicación 33, que comprende además un plásmido, un vector viral o un cromosoma artificial .
35. La construcción de la reivindicación 33, que comprende además una secuencia que codifica al menos una característica seleccionada del grupo que consiste de un segundo epítope, un IRES, un ISS, un MIS y ubiquitina.
36. Un anticuerpo purificado que se une específicamente al epítope de la reivindicación 1.
37. Un anticuerpo purificado que se une específicamente a un complejo de péptido proteína-MHC que comprende el epítope de la reivindicación 1.
38. El anticuerpo de la reivindicación 36 o reivindicación 37, en donde el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal .
39. Un complejo MHC-péptido multimérico que comprende el epitope de la reivindicación 1.
40. Una célula T aislada que expresa un receptor de célula T especifico para un complejo MHC-péptido, comprendiendo el complejo el epitope de la reivindicación 1.
41. La célula T de la reivindicación 40, producida por una inmunización in vit.ro.
42. La célula T de la reivindicación 40, aislada de un animal inmunizado.
43. Un clón de célula T que comprende la célula T de la reivindicación 40.
44. Una población policlonal de células T que comprende la célula T de la reivindicación 40.
45. Una composición farmacéutica que comprende la célula T de la reivindicación 40 y un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable .
46. Una molécula de proteína aislada que comprende el dominio de unión de un receptor de célula T especifico para el complejo MHC-péptido, comprendiendo el complejo el epitope de la reivindicación 1.
47. La proteína de la reivindicación 46, en donde la proteína es multivalente .
48. Un ácido nucleico aislado que codifica la proteína de la reivindicación 46.
49. Una construcción recombinante que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 48.
50. Una célula huésped que expresa la construcción recombinante, comprendiendo la construcción el ácido nucleico de la reivindicación 1, o la construcción que codifica una molécula de proteína que comprende el dominio de unión de un receptor de célula T específico para un complejo MHC-péptido
51. La célula huésped de la reivindicación 50, en donde la célula huésped es una célula dendrítica, macrófago, célula tumoral, o célula derivada de tumor.
52. La célula huésped de la reivindicación 50, en donde la célula huésped es una bacteria, hongos o protozoario .
53. Una composición farmacéutica que comprende la célula huésped de la reivindicación 50 y un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
54. Una vacuna o composición inmunoterapéutica que comprende al menos un componente seleccionado del grupo que consiste del epítope de la reivindicación 1; la composición de la reivindicación 18, 32 o 45, la construcción de la reivindicación 33; la célula T de la reivindicación 40, una célula huésped que expresa una construcción recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica un receptor de célula T que se une al dominio específico para un complejo MHC-péptido y una composición que comprende el mismo, y una célula huésped que expresa una construcción recombinante que comprende el ácido nucleico de la reivindicación 1 y una composición que comprende el mismo.
55. Un método para tratar un animal, que comprende .- administrar a un animal la vacuna o composición inmunoterapeutica de la reivindicación 54.
56. El método de la reivindicación 55, en donde la etapa de administración comprende un modo de suministro seleccionado del grupo que consiste de transdermal, intranodal, perinodal, oral, intravenosa, intradermal, intramuscular, intraperitoneal , mucosal, inhalación de aerosol e instilación.
57. El método de la reivindicación 55, que comprende además una etapa de análisis para determinar una característica indicativa · del estado de una célula objetivo o ' células objetivo.
58. El método de la reivindicación 57, que comprende una primera etapa de análisis y una segunda etapa de análisis, en donde la primera etapa de análisis precede la etapa de administración, y en donde la segunda etapa de análisis sigue a la etapa de administración.
59. El método de la reivindicación 58, que comprende además la etapa de comparar la característica determinada en la primera etapa de análisis con la característica determinada en la segunda etapa de análisis para obtener un resultado.
60. El método de la reivindicación 59, en donde el resultado se selecciona del grupo que consiste de: evidencia de una respuesta inmune, una disminución en el número de células objetivo, una pérdida de masa o tamaño de un tumor que comprende las células objetivo, una disminución en el número de concentración de un parásito intracelular que infecta las células objetivo.
61. un método para evaluar la inmunogenicidad de una vacuna o composición inmunoterapéutica, que comprende: administrar a un animal la vacuna o composición inmunoterapéutica de la reivindicación 54; y evaluar la inmunogenicidad en base a una característica del animal.
62. El método de la reivindicación 61, en donde el animal es HLA-transgénico.
63. Un método para evaluar la inmunogenicidad, que comprende : la estimulación in vitro de una célula T con la vacuna o composición inmunoterapéutica de la reivindicación 54; y evaluar la inmunogenicidad en base a una característica de la célula T.
64. El método de la reivindicación 63, en donde la estimulación es una estimulación primaria.
65. Un método para hacer un inmunoterapéutico pasivo/adoptivo, que comprende: combinar la célula T de la reivindicación 40, o una célula huésped que exprese una construcción recombinante que comprende un ácido nucleico que codifica un receptor de célula T que se une al dominio especifico para un complejo MHC-péptido, o una célula huésped que exprese una construcción recombinante que comprenda el ácido nucleico de la reivindicación 1 con un adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.
66. Un método para determinar la frecuencia específica de la célula T que comprende la etapa de poner en contacto células T con un complejo MHC-péptido que comprende el epítope de la reivindicación 1.
67. El método de la reivindicación 66, en donde la etapa de contacto comprende al menos una característica seleccionada del grupo que consiste de inmunización, ¦ re-estimulación, detección y enumeración.
68. El método de la reivindicación 66, que comprende además el análisis ELISPOT, el análisis de dilución de limitación, citometría de flujo, hibridación in situ, la reacción en cadena de polimerasa o cualquier combinación de estos.
69. Un método para evaluar la respuesta inmunológica, que comprende el método de la reivindicación 66, llevado a cabo antes y subsecuente a una etapa de inmunización.
70. Un método para evaluar la respuesta inmunológica, que comprende: determinar la frecuencia, la producción de citocina, o la actividad citolítica de las células T, antes y subsecuente a una etapa de estimulación con los complejos MHC-péptido que comprende el epxtope de la reivindicación 1.
71. Un método para diagnosticar una enfermedad que comprende : poner en contacto un tejido del sujeto con al menos un componente seleccionado del grupo que consiste de las células T de la reivindicación 40, las células huéspedes de la reivindicación 50, el anticuerpo de la reivindicación 36 y la proteina de la reivindicación 46; y diagnosticar la enfermedad en base a una característica del tejido o del componente.
72. El método de la reivindicación 71, en donde la etapa de contacto tiene lugar in vivo.
73. El método de la reivindicación 71, en donde la etapa de contacto tiene lugar in vitro.
74. Un método para elaborar una vacuna que comprende : combinar al menos un componente seleccionado del grupo que consiste del epítope de la reivindicación 1; la composición de la reivindicación 18, 32, 45 o 53; la construcción de la reivindicación 33; la célula T de la reivindicación 40 y la célula huésped de la reivindicación 50, con adyuvante, vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable .
75. Un medio legible por computadora que tiene registrado en el mismo la secuencia de cualquiera de las SEQ ID NOS. 1-602, en una máquina que tiene un hardware o software que calcula las propiedades genéticas físicas, bioquímicas, inmunológicas o moleculares de una molécula que incorpora dicha secuencia.
76. Un método para tratar un animal que comprende combinar el método de la reivindicación 55 combinado con al menos un modo de tratamiento seleccionado del grupo de terapia de radiación, quimioterapia, bioquimioterapia y cirugía .
77. Un polipeptido aislado que comprende un grupo de epítopes provenientes de un antígeno asociado al objetivo que tiene la secuencia como se describe en- las Tablas 25-44, en donde la secuencia de aminoácidos consiste de no más de aproximadamente 80% de la secuencia de aminoácidos del antígeno .
78. Una vacuna o producto inmunoterapéutico que comprende el polipeptido de la reivindicación 77. 79 Un polinucleotido aislado que codifica el polipeptido de la reivindicación 78. 80. Una vacuna o producto inmunoterapéutico que comprende el polinucleotido de la reivindicación
79. 81. El polinucleotido de la reivindicación 79 u 80 en donde el polinucleotido es ADN. 82. El polinucleotido de la reivindicación 79 u 80 en donde el polinucleotido es AR .