CN101948841A - 表位序列 - Google Patents
表位序列 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101948841A CN101948841A CN201010267145XA CN201010267145A CN101948841A CN 101948841 A CN101948841 A CN 101948841A CN 201010267145X A CN201010267145X A CN 201010267145XA CN 201010267145 A CN201010267145 A CN 201010267145A CN 101948841 A CN101948841 A CN 101948841A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- epi
- cell
- peptide
- sequence
- mage
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 197
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 88
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 87
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 61
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 54
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 38
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 75
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 61
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 52
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 44
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 44
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 claims description 22
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 claims description 22
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 18
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 68
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 137
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 79
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 75
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 72
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 71
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 65
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 52
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 46
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 46
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 46
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 45
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 44
- 101100462972 Mus musculus Pcdh8 gene Proteins 0.000 description 41
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 37
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 35
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 33
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 30
- 102100038358 Prostate-specific antigen Human genes 0.000 description 29
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 28
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 27
- 108010072866 Prostate-Specific Antigen Proteins 0.000 description 26
- 238000013461 design Methods 0.000 description 26
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 22
- 230000004044 response Effects 0.000 description 21
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 20
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 19
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 19
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 19
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 19
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 17
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 17
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 17
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 16
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 16
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 16
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 108010088729 HLA-A*02:01 antigen Proteins 0.000 description 15
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 14
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 14
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 13
- 108091008147 housekeeping proteins Proteins 0.000 description 13
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 13
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 13
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 13
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 12
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 12
- 102100039510 Cancer/testis antigen 2 Human genes 0.000 description 11
- 101000889345 Homo sapiens Cancer/testis antigen 2 Proteins 0.000 description 11
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 11
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 11
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 10
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 10
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 10
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 10
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 9
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 9
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 9
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 8
- 101800001466 Envelope glycoprotein E1 Proteins 0.000 description 8
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 8
- 102000000440 Melanoma-associated antigen Human genes 0.000 description 8
- 108050008953 Melanoma-associated antigen Proteins 0.000 description 8
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 8
- -1 BCG Proteins 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 7
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 7
- 101001005719 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 3 Proteins 0.000 description 7
- 102100025082 Melanoma-associated antigen 3 Human genes 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 102000057032 Tissue Kallikreins Human genes 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 7
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 6
- 101710176219 Kallikrein-1 Proteins 0.000 description 6
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 6
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 6
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 6
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010035452 HLA-A1 Antigen Proteins 0.000 description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 5
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 5
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 5
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 5
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 5
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 5
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 238000012737 microarray-based gene expression Methods 0.000 description 5
- 238000012243 multiplex automated genomic engineering Methods 0.000 description 5
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 5
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 4
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 102100037020 Melanoma antigen preferentially expressed in tumors Human genes 0.000 description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 4
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 4
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 101001095088 Homo sapiens Melanoma antigen preferentially expressed in tumors Proteins 0.000 description 3
- 101000605534 Homo sapiens Prostate-specific antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 3
- 108010010995 MART-1 Antigen Proteins 0.000 description 3
- 102100028389 Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Human genes 0.000 description 3
- 206010027480 Metastatic malignant melanoma Diseases 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 3
- 206010053613 Type IV hypersensitivity reaction Diseases 0.000 description 3
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 3
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 3
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 3
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 3
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 3
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000007798 limiting dilution analysis Methods 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 208000021039 metastatic melanoma Diseases 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 3
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000005951 type IV hypersensitivity Effects 0.000 description 3
- 208000027930 type IV hypersensitivity disease Diseases 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150029707 ERBB2 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010070245 Foreign body Diseases 0.000 description 2
- 241000294743 Gamochaeta Species 0.000 description 2
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 2
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 2
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 101000735376 Homo sapiens Protocadherin-8 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- ICTPRLMOGAKCOZ-HWVMREAWSA-N NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C(C)C)CC1=CC=C(O)C=C1 Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C(C)C)CC1=CC=C(O)C=C1 ICTPRLMOGAKCOZ-HWVMREAWSA-N 0.000 description 2
- 229940124867 Poliovirus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 101710120463 Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 2
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 2
- 102100034958 Protocadherin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042330 SSX family Human genes 0.000 description 2
- 108091077753 SSX family Proteins 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100036234 Synaptonemal complex protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 201000003740 cowpox Diseases 0.000 description 2
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 238000011207 functional examination Methods 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108091005020 human MAGE-A1 protein (278-286) Proteins 0.000 description 2
- 102000028650 human MAGE-A1 protein (278-286) Human genes 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 244000000056 intracellular parasite Species 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N melanochrome Natural products CC1(C)Oc2cc3OC(=CC(=O)c3c(O)c2C[C@H]1O)CO HVGQWHMSVYODLJ-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000002433 mononuclear leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 2
- 125000001500 prolyl group Chemical group [H]N1C([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 230000006916 protein interaction Effects 0.000 description 2
- 238000013138 pruning Methods 0.000 description 2
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000002133 sample digestion Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 206010042863 synovial sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N (3e)-3-(1h-imidazol-5-ylmethylidene)-1h-indol-2-one Chemical compound O=C1NC2=CC=CC=C2\C1=C/C1=CN=CN1 VEEGZPWAAPPXRB-BJMVGYQFSA-N 0.000 description 1
- POVNCJSPYFCWJR-USZUGGBUSA-N (4s)-4-[[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-[(2s)-2-[[2-[(2s)-2-[[(2s)-1-[[(2s,3r)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-methylpropyl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1- Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 POVNCJSPYFCWJR-USZUGGBUSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical class OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102210012669 B*08 Human genes 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710134395 Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 description 1
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010057248 Cell death Diseases 0.000 description 1
- 102100023338 Chymotrypsin-like elastase family member 2B Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- 101710181478 Envelope glycoprotein GP350 Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010091443 Exopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000018389 Exopeptidases Human genes 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108090000369 Glutamate Carboxypeptidase II Proteins 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102220391613 HLA-B*2702 Human genes 0.000 description 1
- 108010087017 HLA-B14 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010014597 HLA-B44 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010075326 HLA-B51 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010039075 HLA-B8 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940124870 Hepatitis A virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000907961 Homo sapiens Chymotrypsin-like elastase family member 2B Proteins 0.000 description 1
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 1
- 101000578784 Homo sapiens Melanoma antigen recognized by T-cells 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001005728 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001005718 Homo sapiens Melanoma-associated antigen 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000613820 Homo sapiens Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 101100137533 Homo sapiens PRAME gene Proteins 0.000 description 1
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000643620 Homo sapiens Synaptonemal complex protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124873 Influenza virus vaccine Drugs 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101710176220 Kallikrein-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100034872 Kallikrein-4 Human genes 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 102000016200 MART-1 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 108010071463 Melanoma-Specific Antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000007557 Melanoma-Specific Antigens Human genes 0.000 description 1
- 102100025050 Melanoma-associated antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025081 Melanoma-associated antigen 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000012901 Milli-Q water Substances 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101100096028 Mus musculus Smok1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 102100040557 Osteopontin Human genes 0.000 description 1
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 229940121369 angiogenesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 229940034982 antineoplastic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000003570 biosynthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 230000036770 blood supply Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000739 chaotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006757 chemical reactions by type Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000002074 deregulated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000763 evoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 229940047127 fiore Drugs 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000007236 host immunity Effects 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001524 infective effect Effects 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 108010024383 kallikrein 4 Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000001254 matrix assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001906 matrix-assisted laser desorption--ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000003574 melanophore Anatomy 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 210000003360 nephrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004412 neuroendocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 230000012223 nuclear import Effects 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 229960001539 poliomyelitis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000064 prostate epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000023958 prostate neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- JFINOWIINSTUNY-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-3-ylmethanesulfonamide Chemical compound NS(=O)(=O)CC1CCNC1 JFINOWIINSTUNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 238000013515 script Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 239000003579 shift reagent Substances 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N sodium chromate Chemical class [Na+].[Na+].[O-][Cr]([O-])(=O)=O PXLIDIMHPNPGMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Natural products CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 210000004217 synaptonemal complex Anatomy 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000004222 uncontrolled growth Effects 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 description 1
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229960004854 viral vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N α-cyano-4-hydroxycinnamic acid Chemical compound OC(=O)C(C#N)=CC1=CC=C(O)C=C1 AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0055—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10)
- C12N9/0057—Oxidoreductases (1.) acting on diphenols and related substances as donors (1.10) with oxygen as acceptor (1.10.3)
- C12N9/0059—Catechol oxidase (1.10.3.1), i.e. tyrosinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464499—Undefined tumor antigens, e.g. tumor lysate or antigens targeted by cells isolated from tumor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本文公开的是多肽,包括表位,聚簇,和抗原。还公开包括所述多肽的组合物和它们的使用方法。
Description
本申请是申请日为2002年4月4日,申请号为02811398.5,名称为“表位序列”的发明专利申请的分案申请。
发明领域
本发明通常涉及肽,和编码肽的核酸,所述肽是靶相关抗原的有效表位。更具体地,本发明涉及具有对I类MHC高亲和力和由靶特异性蛋白酶体产生的表位。
相关技术的描述
瘤形成与免疫系统
通常称为癌的肿瘤性疾病状态被认为是通常由一个生长不受控制的单细胞引起。不受控制的生长状态典型地由一个多级过程引起,其中一系列细胞系统衰竭,导致赘生性细胞的发生。产生的赘生性细胞迅速繁殖它自身,形成一种或多种肿瘤,最终可导致宿主的死亡。
由于赘生性细胞的先祖共享宿主的遗传物质,赘生性细胞大多不受宿主免疫系统攻击。在免疫监视期间,该过程中宿主免疫系统监视和定位外源物质,在宿主免疫监视机器看来赘生性细胞为“自身”细胞。
病毒与免疫系统
与癌细胞相反,病毒感染涉及明显非自身抗原的表达。结果,免疫系统以最小的临床后遗症成功对付了许多病毒感染。此外,对于导致严重疾病的那些感染中的许多已经可以开发有效疫苗。已经成功使用多种疫苗方法来抗击各种疾病。这些方法包括亚单位疫苗,其由通过重组DNA技术生产的单独蛋白质组成。尽管有了这些进展,用作病毒疫苗的最小表位的选择和有效给药仍然有问题。
除与表位选择有关的困难之外,存在已经进化逃避宿主免疫系统能力 的病毒的问题。许多病毒,特别是建立持久感染的病毒,如疱疹和痘病毒家族的成员,产生免疫调制分子,其允许病毒逃避宿主免疫系统。这些免疫调制分子对抗原呈递的作用可以通过将用于给药的选择表位作为免疫原性组合物的目标来克服。为了更好理解赘生性细胞和病毒感染细胞与宿主免疫系统的相互作用,下面接着讨论系统组分。
免疫系统起将对于一种生物内源的分子(“自身”分子)从对于该生物外源或异质的物质(“非自身”分子)区别开来的作用。基于介导应答的组分,免疫系统具有两类针对外物的适应性应答:体液应答和细胞介导应答。体液应答是由抗体介导的,而细胞介导的应答涉及归类为淋巴细胞的细胞。近来的抗癌和抗病毒策略已集中在调动宿主免疫系统作为一种抗癌或抗病毒治疗或疗法的方法。
免疫系统在三个阶段中起作用来保护宿主免受外物伤害:识别阶段,活化阶段和效应阶段。在识别阶段,免疫系统识别并发出信号体内存在外源抗原或侵入物。外源抗原可以是例如来源于赘生性细胞的细胞表面标记或病毒蛋白。一旦系统察觉到侵入物,响应于侵入物触发的信号,免疫系统的抗原特异性细胞增殖并分化。最后阶段是效应阶段,其中免疫系统的效应细胞应答并中和检测的侵入物。
一系列效应细胞实施对侵入物的免疫应答。一类效应细胞,B细胞产生靶向宿主遇到的外源抗原的抗体。与补体系统结合,抗体指导携带靶抗原的细胞或生物的破坏。另一类效应细胞是天然杀伤细胞(NK细胞),一类淋巴细胞,其具有同时识别和破坏多种病毒感染的细胞以及恶性细胞类型的能力。不大理解NK细胞识别靶细胞所使用的方法。
另一类效应细胞,T细胞,具有分类为三亚类的成员,每亚类在免疫应答中发挥不同作用。辅助T细胞分泌细胞因子,其刺激产生有效免疫应答所必需的其它细胞的增殖,而抑制性T细胞下调免疫应答。第三类T细胞,细胞毒性T细胞(CTL),能够直接溶解在它表面呈递外源抗原的靶细胞。
主要组织相容性复合体和T细胞目标识别
T细胞是在对特异性抗原信号的应答中发挥作用的抗原特异性免疫细 胞。B淋巴细胞和它们产生的抗体也是抗原特异性的实体。然而,不同于B淋巴细胞,T细胞对游离或可溶形式的抗原不应答。为了T细胞对抗原应答,需要将抗原加工成肽,其然后与主要组织相容性复合体(MHC)中编码的呈递结构结合。该要求称为“MHC限制性”并且这是T细胞从“非自身”细胞区分“自身”的机制。如果一种抗原不为可识别的MHC分子所展示,T细胞将不识别和作用于该抗原信号。与可识别MHC分子结合的肽的特异性T细胞与这些MHC-肽复合体结合,并进入免疫应答的下一阶段。
存在两类MHC,I类MHC和II类MHC。T辅助细胞(CD4+)主要与II类MHC蛋白质相互作用,而溶细胞的T细胞(CD8+)主要与I类MHC蛋白质相互作用。两类MHC蛋白质都是跨膜蛋白质,它们大部分结构在细胞外表面。此外,两类MHC蛋白质在它们的外部都具有肽结合裂缝(binding cleft)。内源或外源蛋白质的小片段被结合在该裂缝中并呈递于胞外环境中。
称为“专职抗原呈递细胞”(pAPCs)的细胞利用MHC蛋白质将抗原展示给T细胞,但另外表达各种共同刺激分子,其取决于pAPC的分化/激活的具体状态。当与可识别MHC蛋白质结合的肽的特异性T细胞与pAPCs上的这些MHC-肽复合体结合时,作用于T细胞的特异性共刺激分子指导T细胞所采取的分化/激活途径。即,共刺激分子影响在未来遭遇中当它进入免疫应答的下一阶段时T细胞将如何作用于抗原信号。
如上讨论,大多赘生性细胞被免疫系统忽略。大量努力正花在努力控制宿主免疫系统以帮助对抗宿主中赘生性细胞的存在。一个该研究领域涉及配制抗癌疫苗。
抗癌疫苗
患者的免疫系统是肿瘤学家抗癌的战斗中可利用的各种武器之一。在各种努力中已经进行工作以使免疫系统抗击癌症或肿瘤性疾病。不幸地,到此为止的结果大多是令人失望的。特别感兴趣的一个领域涉及生产和使用抗癌疫苗。
为了生产疫苗或其它免疫原性组合物,必需将针对其可产生免疫应答 的抗原或表位引入受试者。尽管赘生性细胞是来源于正常细胞并因此在遗传水平上与正常细胞基本上相同,但已知许多赘生性细胞呈递肿瘤相关抗原(TuAAs)。理论上,受试者的免疫系统可以利用这些抗原来识别这些抗原并攻击赘生性细胞。然而,实际上赘生性细胞通常看来似乎为宿主的免疫系统所忽略。
已经开发许多不同策略试图生产具有抗赘生性细胞活性的疫苗。这些策略包括使用肿瘤相关抗原作为免疫原。例如,美国专利号5,993,828描述了一种通过对受试者给药有效剂量的一种组合物来产生针对尿肿瘤相关抗原(Urinary Tumor Associated Antigen)特定亚基的免疫应答的方法,所述组合物包含在细胞表面具有尿肿瘤相关抗原的灭活肿瘤细胞和至少一种选自GM-2,GD-2,胎儿抗原和黑素瘤相关抗原的肿瘤相关抗原。因此,本专利描述将完整的灭活肿瘤细胞用作抗癌疫苗中的免疫原。
使用抗癌疫苗的另一种策略涉及给药一种含有单独肿瘤抗原的组合物。在一种方法中,将MAGE-A1抗原性肽用作免疫原(参见Chaux,P.,等,“Identification of Five MAGE-A 1Epitopes Recognized by Cytolytic TLymphocytes Obtained by In Vitro Stimulation with Dendritic Cells Transduced with MAGE-A1,”J.Immunol.,163(5):2928-2936(1999))。已经有几个将MAGE-A1肽用于接种的治疗实验,尽管该接种疗法的效力有限。在Vose,J.M.,“Tumor Antigens Recognized by T Lymphocytes,”10thEuropean Cancer Conference,Day 2,Sept.14,1999中讨论了这些试验中的一些的结果。
在另一个用作疫苗的肿瘤相关抗原的实例中,Scheinberg等使用5次注射I类相关的bcr-abl肽和辅助肽加上佐剂QS-21来治疗12位已经接受干扰素(IFN)或羟脲的慢性髓细胞性白血病(CML)患者。Scheinberg,D.A.,等,“BCR-ABL Breakpoint Derived Oncogene Fusion Peptide Vaccines Generate Specific Immune Responses in Patients with Chronic Myelogenous Leukemia(CML)[摘要1665],American Society of Clinical Oncology 35thAnnual Meeting,亚特兰大(1999)。引发了表示T-辅助细胞活性的增殖和迟发型超敏反应(DTH)T细胞应答,但在新鲜血样中未观测到溶细胞的杀伤T细胞活性。
在Cebon等和Scheibenbogen等的近来工作中看到尝试鉴定用作疫苗的TuAAs的另外实例。Cebon等使用皮内给药的MART-126-35肽和以增大剂量皮下或静脉内给予的IL-12免疫具有转移性黑素瘤的患者。最初的15位患者中,注意到1位完全缓解,1位部分缓解,和1位混合应答。对于T细胞产生的免疫测定包括DTH,其在使用或不使用IL-12的患者中发现。在有临床益处(clinical benefit)迹象的患者中发现阳性CTL测定,但在没有肿瘤退化的患者中未发现。Cebon等,“Phase I Studies of Immunization with Melan-A and IL-12in HLA A2+Positive Patients with Stage III and IV Malignant Melanoma,”[摘要1671],American Society of Clinical Oncology 35th Annual Meeting,亚特兰大1999)。
Scheibenbogen等用4种I类HLA限制性酪氨酸酶肽免疫18位患者,其中16位患者用转移性黑素瘤免疫和用佐剂免疫2位患者。Scheibenbogen等“Vaccination with Tyrosinase peptides and GM-CSF in Metastatic Melanoma:a Phase II Trial,”[摘要1680],American Society of Clinical Oncology 35th Annual Meeting,亚特兰大(1999)。在4/15患者中,其中2位用佐剂免疫和2位有肿瘤退化迹象的患者中观测到增强的CTL活性。如在Cebon等的试验中,患有进行性疾病(progressive disease)的患者未显示增强的免疫性。尽管到此为止花了各种努力来产生有效的抗癌疫苗,仍未开发出该组合物。
抗病毒疫苗
保护免患病毒病的疫苗策略已经取得许多成功。或许这些中最显著的是对抗疾病天花已取得的进步,天花已经被灭绝。脊髓灰质炎疫苗的成功具有类似的重要性。
可将病毒疫苗分为三类:活减毒病毒疫苗,如对于天花的牛痘,萨宾脊髓灰质炎病毒疫苗,和麻疹流行性腮腺炎和风疹;完全杀死或灭活的病毒疫苗,如索尔克脊髓灰质炎病毒疫苗,甲型肝炎病毒疫苗和典型流感病毒疫苗;和亚单位疫苗,如乙型肝炎。由于它们缺乏完整的病毒基因组,亚单位疫苗比基于完整病毒的那些提供更大程度的安全性。
成功的亚单位疫苗的范例是基于病毒包膜蛋白的重组乙型肝炎疫苗。 尽管许多学术者对将超越单个蛋白质的还原论者亚单位概念推至单独表位感兴趣,但该努力尚未产生许多成果。病毒疫苗研究也已集中在诱导抗体应答,尽管也发生细胞应答。然而,许多亚单位制剂在产生CTL应答方面特别差。
发明概述
引发专职抗原呈递细胞(pAPCs)展示靶细胞表位的先前方法已经简单依赖于使pAPCs表达靶相关抗原(TAAs),或那些被认为具有对MHC I类分子高亲和力的抗原的表位。然而,这类抗原的蛋白酶体加工导致在pAPC上呈递的表位与靶细胞上的表位不相对应。
利用有效的细胞免疫应答要求pAPCs呈递相同的由靶细胞呈递的表位的知识,本发明提供具有对MHC I高亲和力,并且与在周围细胞中活跃的管家蛋白酶体的加工特异性相对应的表位。这些表位因此与在靶细胞上呈递的那些相对应。将这类表位用于疫苗中可以激活细胞免疫应答来识别正确加工的TAA并可导致去除呈递这类表位的靶细胞。在一些实施方案中,这里提供的管家表位可与免疫表位结合使用,产生细胞免疫应答,其在干扰素诱导之前和之后都能够攻击靶细胞。在其它实施方案中将该表位用于诊断和监测靶相关疾病和用于生产针对这类目的的免疫试剂。
本发明的实施方案涉及分离的(isolated)表位和包含表位的抗原或多肽。优选的实施方案包括含有表1中公开序列的表位或抗原。其它实施方案可包括一种包含源于表1的多肽的表位聚簇。此外,多个实施方案包括一种与已经提及的表位,多肽,抗原或聚簇基本类似的多肽。其它优选的实施方案包括一种与上述的任何一种功能相似的多肽。还有另外的实施方案涉及一种编码来自表1和这里提及的所述表位,聚簇,抗原和多肽中任何一种的多肽的核酸。为了下列总结的目的,当提到“表位”或“多种表位”时,本发明其它实施方案的讨论无限制地指的是所有前述形式的表位。
表位可以是免疫活性的。包含表位的多肽长度可以小于大约30个氨基酸,更优选地,例如,多肽长度为8-10个氨基酸。物质(substantial)或功能的相似性可包括例如增加至少一个氨基酸,和至少一个附加的氨基酸 可以是在多肽的N-末端。物质或功能的相似性可以包括替代至少一个氨基酸。
表位,聚簇或包含它的多肽可具有对HLA-A2分子的亲和力。该亲和力可以通过结合试验,表位识别限制性试验,预测算法等测定。表位,聚簇或包含它的多肽可具有对HLA-B7,HLA-B51分子等的亲和力。
在优选的实施方案中,多肽可以是一种管家表位。该表位或多肽可对应于在肿瘤细胞上展示的表位,对应于在新脉管系统(neovasculature)细胞上展示的表位等。该表位或多肽可以是免疫表位。该表位,聚簇和/或多肽可以是核酸。
其它实施方案涉及药物组合物,其包含包括来源于表1的表位,聚簇,或包含它的多肽的多种多肽,和药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等。所述佐剂可以是多核苷酸。该多核苷酸可包括二核苷酸,其例如可以是CpG。所述佐剂可以为一种多核苷酸所编码。该佐剂可以是一种细胞因子,所述细胞因子例如可以是GM-CSF。
药物组合物可另外包括一种专职抗原呈递细胞(pAPC)。pAPC例如可以是树突细胞。药物组合物可另外包括第二表位。第二表位可以是多肽,核酸,管家表位,免疫表位等。
还有另外的实施方案涉及药物组合物,其包括这里讨论的任何核酸,包括编码包含来自表1的表位或抗原的多肽的那些核酸。这类组合物可包括药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等。
其它实施方案涉及包括如这里所描述的这种核酸的重组构建体,其包括编码包含来自表1的表位或抗原的多肽的那些核酸。构建体可另外包括质粒,病毒载体,人工染色体等。构建体可另外包括一种序列,其编码至少一种特征(feature),例如,第二表位,IRES,ISS,NIS,遍在蛋白质等。
另外的实施方案涉及纯化的抗体,其与至少一种表1中的表位特异性结合。其它实施方案涉及与一种肽-MHC蛋白质复合体特异性结合的纯化抗体,所述肽-MHC蛋白质复合体包含一种表1中公开的表位或任何其它适当的表位。来源于任何实施方案的抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。
还有其它实施方案涉及多聚体MHC-肽复合体,其包括一种表位,如,例如一种表1中公开的表位。同样,考虑对复合体特异性的抗体。
多种实施方案涉及表达对MHC-肽复合体特异性的T细胞受体的分离的T细胞。所述复合体可包括一种表位,如,例如表1中公开的表位。T细胞可以通过体外免疫生产并且可以从免疫动物中分离。多种实施方案涉及T细胞克隆,包括克隆的T细胞,如上面讨论的那些。多种实施方案还涉及T细胞的多克隆群体。该群体可包括例如如上所述的T细胞。
还有另外的实施方案涉及药物组合物,其包括例如如上所述的那些的T细胞和药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等。
本发明的多种实施方案涉及分离的蛋白质分子,其包含对MHC-肽复合体特异性的T细胞受体的结合域。复合体可包括表1公开的表位。蛋白质可以是多价体。其它实施方案涉及编码该蛋白质的分离的核酸。还有另外的实施方案涉及包括该核酸的重组构建体。
本发明的其它实施方案涉及表达如在这里描述的重组构建体的宿主细胞,所述重组构建体包括编码例如在表1公开的表位,聚簇或包含它的多肽的构建体。宿主细胞可以是树突细胞,巨噬细胞,肿瘤细胞,肿瘤衍生的细胞,细菌,真菌,原生动物等。多种实施方案还涉及药物组合物,其包括一种宿主细胞,如在这里讨论的那些,和一种药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等。
还有其它实施方案涉及疫苗或免疫治疗组合物,其包括至少一种组分,例如表1中公开或在这里另外描述的表位;包括该表位的聚簇,包括该表位的抗原或多肽;如上面和在这里描述的组合物;如上面和在这里描述的构建体,T细胞,或如上面和在这里描述的宿主细胞。
另外的实施方案涉及治疗动物的方法。方法可包括对动物给药一种药物组合物,例如一种疫苗或免疫治疗组合物,其包括如上面和在这里公开的那些。给药步骤可包括一种送递方式,如,例如,经皮的,结节内的(intranodal),结节周围的(perinodal),口服的,静脉内的,皮内的,肌内的,腹膜内的,粘膜的,气溶胶吸入,滴注等。该方法可另外包括一测定步骤以测定一种靶细胞或多种靶细胞状态的特征表现。方法可包括第一测定步骤和第二测定步骤,其中第一测定步骤在给药步骤之前,并且其中 第二测定步骤在给药步骤之后。方法可另外包括一个比较第一测定步骤中测定的特性与第二测定步骤中测定的特性以获得一个结果的步骤。该结果可以是例如免疫应答的迹象,靶细胞数量的减小,包含靶细胞的肿瘤的质量或尺寸的减小,感染靶细胞的胞内寄生物数量和浓度的减小等。
多种实施方案涉及评估疫苗或免疫治疗组合物的免疫原性的方法。该方法可包括对动物给药一种疫苗或免疫治疗,如上面和在这里别处描述的那些,和基于动物一种特性评估免疫原性。动物可以是HLA-转基因的动物。
其它实施方案涉及评估免疫原性的方法,其包括用疫苗或免疫治疗组合物,如上面和在这里别处描述的那些,体外刺激T细胞,和基于T细胞的一种特性评估免疫原性。刺激可以是原发刺激(primary stimulation)。
还有另外的实施方案涉及进行被动/过继免疫治疗的方法。该方法可以包括将T细胞或宿主细胞,如上面和在这里别处描述的那些,与药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等结合。
其它实施方案涉及测定特异性T细胞频率的方法,并可以包括将T细胞与MHC-肽复合体或包含含有这样一种表位的聚簇或抗原的复合体接触的步骤,所述MHC-肽复合体包含表1中公开的表位。接触步骤可包含至少一种特征,例如,免疫,再刺激(restimulation),检测,计数等。该方法可另外包括ELISPOT分析,有限稀释分析,流式细胞计量术,原位杂交,聚合酶链反应,它们的任何组合等。
多种实施方案涉及评估免疫应答的方法。该方法可包括在免疫步骤之前和之后实行的测定特异性T细胞频率的上述方法。
其它实施方案涉及评估免疫应答的方法。该方法可包括在用MHC-肽复合体刺激之前和之后测定T细胞的频率,细胞因子产生量或溶细胞活性,所述MHC-肽复合体包含一种表位,例如来自表1的表位,包含该表位的聚簇或多肽。
另外的实施方案涉及诊断疾病的方法。方法包括将受试者组织与至少一种组分接触,所述组分包括,例如T细胞,宿主细胞,抗体,蛋白质,其包括上面和在这里别处描述的那些;和基于组织或组分的一种特征诊断疾病。接触步骤可以例如在体内或体外发生。
还有其它实施方案涉及生产疫苗的方法。方法可以包括将至少一种组分,表位,组合物,构建体,T细胞,宿主细胞;其包括上面和在这里别处描述的那些中的任何一种,与药用佐剂,载体,稀释剂,赋形剂等结合。
多种实施方案涉及其上已经记录SEQ ID NOS:1-602中任何一种序列的计算机可读介质,其是在一种具有计算含有所述序列的分子的物理,生物化学,免疫学,分子遗传特性的硬件或软件等的机器中。
还有其它实施方案涉及治疗动物的方法。方法可以包括结合治疗动物的方法,其包括对动物给药一种疫苗或免疫治疗组合物,例如上面和在这里别处所描述的,与至少一种治疗方式结合,所述治疗方式包括例如放射治疗,化学疗法,生物化学疗法(biochemotherapy),外科手术等。
另外的实施方案涉及包括一种表位聚簇的分离的多肽。在优选的实施方案中,该聚簇可以是来自含有如表25-44任何一个中所公开的序列的靶相关抗原,其中氨基酸序列包括至多约80%的抗原氨基酸序列。
其它实施方案涉及疫苗或免疫治疗产品,其包括如上面和在这里别处描述的分离的肽。还有其它实施方案涉及一种分离的的多核苷酸,其编码如上面和在这里别处描述的多肽。其它实施方案涉及包括这些多核苷酸的疫苗或免疫治疗产品。该多核苷酸可以是DNA,RNA等。
还有其它的实施方案涉及包含一种递送装置的试剂盒和任何在上面和在这里别处提及的实施方案。所述递送装置可以是导管,注射器,内泵或外泵,贮器,吸入器,微量注射器,膜片(patch)和适合任何递送途径的任何其它类似装置。如上所述,除了递送装置之外试剂盒还包括在这里公开的实施方案中的任一种。例如,无限制地,试剂盒可以包括分离的表位,多肽,聚簇,核酸,抗原,包括前述任何一种的药用组合物,抗体,T细胞,T细胞受体,表位-MHC复合体,疫苗,免疫治疗剂等。试剂盒还可包括物品如详细的使用说明书和其它任何类似的物品。
附图简述
图1是NY-ESO-1与几个相似蛋白质序列的序列对比。
图2图示用于递送核酸编码的表位的质粒疫苗主链。
图3A和3B是显示酪氨酸酶207-215和酪氨酸酶208-216HLA-A2结合试验 结果的FACS曲线。
图3C显示通过体外免疫诱导的人CTL针对酪氨酸酶表位的溶细胞活性。
图4是由蛋白酶体切割SSX-231-68产生片段T=120min时刻的质谱。
图5显示HLA-A2:SSX-241-49与对照的结合曲线。
图6显示来源于SSX-241-49免疫的HLA-A2转基因小鼠的CTL对SSX-241-49-脉冲目标的特异性溶解。
图7A,B和C显示T=60min时刻PSMA163-192蛋白酶体消化的等分部分N-末端池测序(pool sequencing)的结果。
图8显示HLA-A2:PSMA168-177和HLA-A2:PSMA288-297与对照的结合曲线。
图9显示T=60min时刻PSMA281-310蛋白酶体消化的等分部分N-末端池测序的结果。
图10显示HLA-A2:PSMA461-469,HLA-A2:PSMA460-469和HLA-A2:PSMA663-671与对照的结合曲线。
图11显示检测PSMA463-471-反应性HLA-A1+CD8+T细胞的基于γ-IFN的ELISPOT试验结果。
图12显示用抗-HLA-A1mAb封闭在图10中使用的T细胞的活性,其显示HLA-A1-限制性识别。
图13显示HLA-A2:PSMA663-671与对照的结合曲线。
图14显示HLA-A2:PSMA662-671与对照的结合曲线。
图15.比较在用不同剂量DNA通过不同注射途径免疫后的抗-肽CTL应答(图显示未脉冲的EL4细胞<空心圆>和用gp33肽脉冲的EL4细胞(实三角)的裂解,符号表示单独的小鼠和显示三个类似实验中的一个)。
图16.移植的gp33表达肿瘤在通过淋巴结内注射表达gp33表位的或对照,质粒而免疫的小鼠中的生长(对于用pEFGPL33A DNA(实圆)或对照pEGFP-N3 DNA(空心三角)免疫的小鼠显示平均肿瘤体积±1SD,括号的数字表示具有肿瘤的小鼠数/组中的小鼠总数,显示2个相似试验中的1个)。
图17.分别在淋巴结内和肌内注射后的不同时间通过实时PCR检测的在注射或引流(draining)淋巴节中质粒DNA的量。
优选实施方案的详述
定义
除非另外从使用这里的术语的上下文中清楚得知,为了本描述的目的下面列出的术语应该通常具有指明的含义。
专职抗原呈递细胞(pAPC)——具有T细胞共刺激分子并能够诱导T细胞应答的细胞。完全表征的pAPCs包括树突细胞,B细胞和巨噬细胞。
周围细胞——不是pAPC的细胞。
管家蛋白酶体——通常在周围细胞中活跃的蛋白酶体,通常在pAPCs中不存在或没有强活性。
免疫蛋白酶体——通常在pAPCs中活跃的蛋白酶体;免疫蛋白酶体在感染组织的一些周围细胞中也是活跃的。
表位——能够刺激免疫应答的分子或物质。在优选的实施方案中,按照本定义的表位包括但不一定限于一种多肽和一种编码多肽的核酸,其中所述多肽能够刺激免疫应答。在其它优选的实施方案中,按照本定义的表位包括但不一定限于存在细胞表面的肽,所述肽非共价键地与I类MHC的结合裂缝结合,这样它们可以与T细胞受体相互作用。
MHC表位——对哺乳动物I类或II类主要组织相容性复合体(MHC)分子具有已知或预测结合亲和力的多肽。
管家表位——在一个优选的实施方案中,将管家表位定义为一种多肽片段,其是一种MHC表位,并且展示在其中管家蛋白酶体活性突出的细胞上。在另一个优选实施方案中,将管家表位定义为一种含有按照前述定义的管家表位的多肽,其侧邻一个至几个附加的氨基酸。在另一个优选实施方案中,将管家表位定义为一种编码按照前述定义的管家表位的核酸。
免疫表位——在一个优选实施方案中,将免疫表位定义为一种多肽片段,其是一种MHC表位,并且展示在其中管家蛋白酶体活性突出的细胞上。在另一个优选实施方案中,将免疫表位定义为一种含有按照前述定义的免疫表位的多肽,其侧邻一个至几个附加的氨基酸。在另一个优选实施方案中,将免疫表位定义为一种包括一个表位聚簇序列,含有至少两个对I类MHC具有已知或预测亲和力的多肽序列的多肽。在还有的另一个优选实施方案中,将免疫表位定义为一种编码按照上述定义中任何一种的免疫表位的核酸。
靶细胞——被疫苗和本发明方法所靶向的细胞。按照本定义的靶细胞 的实例包括但不一定限于:赘生性细胞和含有胞内寄生物的细胞,例如病毒,细菌或原生动物。
靶相关抗原(TAA)——在靶细胞中存在的蛋白质或多肽。
肿瘤相关抗原(TuAA)——TAA,其中靶细胞是赘生性细胞。
HLA表位——对人I类或II类HLA复合体分子具有已知或预测结合亲和力的多肽。
抗体——多克隆或单克隆天然免疫球蛋白(Ig),或任何完全或部分由Ig结合域组成的分子,不管生物化学衍生的或通过使用重组DNA得到。实施例包括,尤其是F(ab),单链Fv和Ig可变区-噬菌体外被蛋白融合。
编码——可扩充的(open-ended)术语以致编码特定氨基酸序列的核酸可由确定那个(多)肽的密码子组成,但还可包含附加的序列,其是可译的或用于控制转录,翻译或复制,或便于操作一些宿主的核酸构建体。
物质相似性——该术语用来指如通过检查序列判断以间接的方式不同于参考序列的序列。尽管在简并位置的差异或在长度或任何非编码区组成上的适度差异,编码相同氨基酸序列的核酸序列基本上相似。只是通过保守置换或小的长度变化而相异的氨基酸序列基本上是相似的。另外,包含在N-末端侧翼残基数量不同的管家表位,或在任一末端侧翼残基数量不同的免疫表位和表位聚簇的氨基酸序列基本上是相似的。编码基本上相似的氨基酸序列的核酸它们自己也基本上相似。
功能相似性——该术语用于指如通过检测生物或生物化学特性判断以间接的方式不同于参考序列的序列,尽管序列可能不是基本上相似。例如,可将两种核酸用作针对相同序列但编码不同氨基酸序列的杂交探针。即使它们通过非保守氨基酸置换而相异(因此不符合物质相似性的定义),诱导交叉反应性CTL应答的两种肽在功能上相似。识别相同表位的成对抗体或TCRs可以是在功能上彼此相似,尽管存在任何结构差异。在检验免疫原性的功能相似性中,通常用“改变的”抗原免疫个体并检 验引发应答(Ab,CTL,细胞因子产生等)识别靶抗原的能力。因此,可以设计在某些方面不同而保持相同功能的两种序列。该设计的序列变体在本发明的实施方案中。
表1A.包括实施例1-7,13中的表位的SEQ ID NOS.*
表1B.包括实施例14和15中的表位的SEQ ID NOS.*
SEQIDNO | 身份 | 序列 |
70 | GP100蛋白 | **登记号:P40967 |
71 | MAGE-1蛋白 | 登记号:P43355 |
72 | MAGE-2蛋白 | 登记号:P43356 |
73 | MAGE-3蛋白 | 登记号:P43357 |
74 | NY-ESO-1蛋白 | 登记号:P78358 |
75 | LAGE-1a蛋白 | 登记号:CAA11116 |
76 | LAGE-1b蛋白 | 登记号:CAA11117 |
77 | PRAME蛋白 | 登记号:NP 006106 |
78 | PSA蛋白 | 登记号:P07288 |
79 | PSCA蛋白 | 登记号:O43653 |
80 | GP100cds | 登记号:U20093 |
81 | MAGE-1cds | 登记号:M77481 |
82 | MAGE-2cds | 登记号:L18920 |
83 | MAGE-3cds | 登记号:U03735 |
84 | NY-ESO-1cDNA | 登记号:U87459 |
85 | PRAME cDNA | 登记号:NM_006115 |
86 | PSAcDNA | 登记号:NM_001648 |
87 | PSCA cDNA | 登记号:AF043498 |
88 | GP100630-638 | LPHSSSHWL |
89 | GP100629-638 | QLPHSSSHWL |
[0106]
90 | GP100614-622 | LIYRRRLMK |
91 | GP100613-622 | SLIYRRRLMK |
92 | GP100615-622 | IYRRRLMK |
93 | GP100630-638 | LPHSSSHWL |
94 | GP100629-638 | QLPHSSSHWL |
95 | MAGE-195-102 | ESLFRAVI |
96 | MAGE-193-102 | ILESLFRAVI |
97 | MAGE-193-101 | ILESLFRAV |
98 | MAGE-192-101 | CILESLFRAV |
99 | MAGE-192-100 | CILESLFRA |
100 | MAGE-1263-271 | EFLWGPRAL |
101 | MAGE-1264-271 | FLWGPRAL |
102 | MAGE-1264-273 | FLWGPRALAE |
103 | MAGE-1265-274 | LWGPRALAET |
104 | MAGE-1268-276 | PRALAETSY |
105 | MAGE-1267-276 | GPRALAETSY |
106 | MAGE-1269-277 | RALAETSYV |
107 | MAGE-1271-279 | LAETSYVKV |
108 | MAGE-1270-279 | ALAETSYVKV |
109 | MAGE-1272-280 | AETSYVKVL |
110 | MAGE-1271-280 | LAETSYVKVL |
111 | MAGE-1274-282 | TSYVKVLEY |
112 | MAGE-1273-282 | ETSYVKVLEY |
113 | MAGE-1278-286 | KVLEYVIKV |
114 | MAGE-1168-177 | SYVLVTCLGL |
115 | MAGE-1169-177 | YVLVTCLGL |
116 | MAGE-1170-177 | VLVTCLGL |
117 | MAGE-1240-248 | TQDLVQEKY |
118 | MAGE-1239-248 | LTQDLVQEKY |
119 | MAGE-1232-240 | YGEPRKLLT |
120 | MAGE-1243-251 | LVQEKYLEY |
121 | MAGE-1242-251 | DLVQEKYLEY |
122 | MAGE-1230-238 | SAYGEPRKL |
123 | MAGE-1278-286 | KVLEYVIKV |
124 | MAGE-1277-286 | VKVLEYVIKV |
125 | MAGE-1276-284 | YVKVLEYVI |
126 | MAGE-1274-282 | TSYVKVLEY |
127 | MAGE-1273-282 | ETSYVKVLEY |
128 | MAGE-1283-291 | VIKVSARVR |
129 | MAGE-1282-291 | YVIKVSARVR |
130 | MAGE-2115-122 | ELVHFLLL |
131 | MAGE-2113-122 | MVELVHFLLL |
[0107]
132 | MAGE-2109-116 | ISRKMVEL |
133 | MAGE-2108-116 | AISRKMVEL |
134 | MAGE-2107-116 | AAISRKMVEL |
135 | MAGE-2112-120 | KMVELVHFL |
136 | MAGE-2109-117 | ISRKMVELV |
137 | MAGE-2108-117 | AISRKMVELV |
138 | MAGE-2116-124 | LVHFLLLKY |
139 | MAGE-2115-124 | ELVHFLLLKY |
140 | MAGE-2111-119 | RKMVELVHF |
141 | MAGE-2158-166 | LQLVFGIEV |
142 | MAGE-2157-166 | YLQLVFGIEV |
143 | MAGE-2159-167 | QLVFGIEVV |
144 | MAGE-2158-167 | LQLVFGIEVV |
145 | MAGE-2164-172 | IEVVEVVPI |
146 | MAGE-2163-172 | GIEVVEVVPI |
147 | MAGE-2162-170 | FGIEVVEVV |
148 | MAGE-2154-162 | ASEYLQLVF |
149 | MAGE-2153-162 | KASEYLQLVF |
150 | MAGE-2218-225 | EEKIWEEL |
151 | MAGE-2216-225 | APEEKIWEEL |
152 | MAGE-2216-223 | APEEKIWE |
153 | MAGE-2220-228 | KIWEELSML |
154 | MAGE-2219-228 | EKIWEELSML |
155 | MAGE-2271-278 | FLWGPRAL |
156 | MAGE-2271-279 | FLWGPRALI |
157 | MAGE-2278-286 | LIETSYVKV |
158 | MAGE-2277-286 | ALIETSYVKV |
159 | MAGE-2276-284 | RALIETSYV |
160 | MAGE-2279-287 | IETSYVKVL |
161 | MAGE-2278-287 | LIETSYVKVL |
162 | MAGE-3271-278 | FLWGPRAL |
163 | MAGE-3270-278 | EFLWGPRAL |
164 | MAGE-3271-279 | FLWGPRALV |
165 | MAGE-3276-284 | RALVETSYV |
166 | MAGE-3272-280 | LWGPRALVE |
167 | MAGE-3271-280 | FLWGPRALVE |
168 | MAGE-3272-281 | LWGPRALVET |
169 | NY-ESO-182-90 | GPESRLLEF |
170 | NY-ESO-183-91 | PESRLLEFY |
171 | NY-ESO-182-91 | GPESRLLEFY |
172 | NY-ESO-184-92 | ESRLLEFYL |
173 | NY-ESO-186-94 | RLLEFYLAM |
[0108]
174 | NY-ESO-188-96 | LEFYLAMPF |
175 | NY-ESO-187-96 | LLEFYLAMPF |
176 | NY-ESO-193-102 | AMPFATPMEA |
177 | NY-ESO-194-102 | MPFATPMEA |
178 | NY-ESO-1115-123 | PLPVPGVLL |
179 | NY-ESO-1114-123 | PPLPVPGVLL |
180 | NY-ESO-1116-123 | LPVPGVLL |
181 | NY-ESO-1103-112 | ELARRSLAQD |
182 | NY-ESO-1118-126 | VPGVLLKEF |
183 | NY-ESO-1117-126 | PVPGVLLKEF |
184 | NY-ESO-1116-123 | LPVPGVLL |
185 | NY-ESO-1127-135 | TVSGNILTI |
186 | NY-ESO-1126-135 | FTVSGNILTI |
187 | NY-ESO-1120-128 | GVLLKEFTV |
188 | NY-ESO-1121-130 | VLLKEFTVSG |
189 | NY-ESO-1122-130 | LLKEFTVSG |
190 | NY-ESO-1118-126 | VPGVLLKEF |
191 | NY-ESO-1117-126 | PVPGVLLKEF |
192 | NY-ESO-1139-147 | AADHRQLQL |
193 | NY-ESO-1148-156 | SISSCLQQL |
194 | NY-ESO-1147-156 | LSISSCLQQL |
195 | NY-ESO-1138-147 | TAADHRQLQL |
196 | NY-ESO-1161-169 | WITQCFLPV |
197 | NY-ESO-1157-165 | SLLMWITQC |
198 | NY-ESO-1150-158 | SSCLQQLSL |
199 | NY-ESO-1154-162 | QQLSLLMWI |
200 | NY-ESO-1151-159 | SCLQQLSLL |
201 | NY-ESO-1150-159 | SSCLQQLSLL |
202 | NY-ESO-1163-171 | TQCFLPVFL |
203 | NY-ESO-1162-171 | ITQCFLPVFL |
204 | PRAME 219-227 | PMQDIKMIL |
205 | PRAME 218-227 | MPMQDIKMIL |
206 | PRAME 428-436 | QHLIGLSNL |
207 | PRAME 427-436 | LQHLIGLSNL |
208 | PRAME 429-436 | HLIGLSNL |
209 | PRAME 431-439 | IGLSNLTHV |
210 | PRAME 430-439 | LIGLSNLTHV |
211 | PSA 53-61 | VLVHPQWVL |
212 | PSA 52-61 | GVLVHPQWVL |
213 | PSA 52-60 | GVLVHPQWV |
214 | PSA 59-67 | WVLTAAHCI |
215 | PSA 54-63 | LVHPQWVLTA |
[0109]
216 | PSA 53-62 | VLVHPQWVLT |
217 | PSA 54-62 | LVHPQWVLT |
218 | PSA 66-73 | CIRNKSVI |
219 | PSA 65-73 | HCIRNKSVI |
220 | PSA56-64 | HPQWVLTAA |
221 | PSA 63-72 | AAHCIRNKSV |
222 | PSCA 116-123 | LLWGPGQL |
223 | PSCA 115-123 | LLLWGPGQL |
224 | PSCA 114-123 | GLLLWGPGQL |
225 | PSCA 99-107 | ALQPAAAIL |
226 | PSCA 98-107 | HALQPAAAIL |
227 | Tyr128-137 | APEKDKFFAY |
228 | Tyr129-137 | PEKDKFFAY |
229 | Tyr 130-138 | EKDKFFAYL |
230 | Tyr 131-138 | KDKFFAYL |
231 | Tyr205-213 | PAFLPWHRL |
232 | Tyr 204-213 | APAFLPWHRL |
233 | Tyr214-223 | FLLRWEQEIQ |
234 | TyR212-220 | RLFLLRWEQ |
235 | Tyr191-200 | GSEIWRDIDF |
236 | Tyr192-200 | SEIWRDIDF |
237 | Tyr 473-481 | RIWSWLLGA |
238 | Tyr 476-484 | SWLLGAAMV |
239 | Tyr 477-486 | WLLGAAMVGA |
240 | Tyr478-486 | LLGAAMVGA |
241 | PSMA 4-12 | LLHETDSAV |
242 | PSMA 13-21 | ATARRPRWL |
243 | PSMA53-61 | TPKHNMKAF |
244 | PSMA 64-73 | ELKAENIKKF |
245 | PSMA69-77 | NIKKFLH1NF |
246 | PSMA 68-77 | ENIKKFLH1NF |
247 | PSMA 220-228 | AGAKGVILY |
248 | PSMA468-477 | PLMYSLVHNL |
249 | PSMA 469-477 | LMYSLVHNL |
250 | PSMA 463-471 | RVDCTPLMY |
251 | PSMA 465-473 | DCTPLMYSL |
252 | PSMA 507-515 | SGMPRISKL |
253 | PSMA 506-515 | FSGMPRISKL |
254 | NY-ESO-1136-163R | LTAADHRQLQLSISSCLQQLSLLMWIT |
255 | NY-ESO-1150-177 | SSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSG |
[0110] 1在SWISSPROT数据库中该H被报道为Y。
2取决于数据库,位点274的氨基酸可以是Pro或Leu。这里展示的具体分析使用Pro。
表1C.包括实施例14中的表位的SEQ ID NOS.*
*在本发明的各种实施方案的任一个中可将SEQ ID NOS.1,8,9,11-23,26-29,32-44,47-54,56-63,66-68,88-253,和256-588中的任一个用作表位。如在本发明的各种实施方案中所描述,可将SEQ ID NOS.10,30,31,45,46,55,64,65,69,254,和255用作含有表位或表位聚簇的序列。
**这里和从头到尾使用的所有登记号可以通过NCBI数据库访问,例如通过万维网上的Entrez搜索和检索系统。
注意下列讨论阐明发明人对本发明操作的理解。然而,不意图用本讨论将本专利限制于在后附权利要求中未阐明的任何具体操作理论。
在进行表位疫苗开发中,其他人已经产生基于MHC结合基序的预测表位列表。这类肽可以是免疫原性的,但可能不对应任何天然产生的抗原片段。因此,整个抗原将不引发类似的应答或使靶细胞对通过CTL的细胞溶解敏感。因此该列表不区分可以用作疫苗的那些序列和不可以用作疫苗的那些序列。测定这些预测表位中的哪些实际上是天然产生的努力已经经常依赖于筛选它们与肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的反应性。然而,尽管肿瘤(和慢性感染细胞)将通常呈递管家表位,但TIL强烈偏向于识别免疫表位。因此,除非表位是由管家和免疫蛋白酶体两者生产,靶细胞将通常不为用TIL-鉴定的表位诱导的CTL所识别。相反,本发明的表位是通过特定蛋白酶体的作用产生,表明可以天然生产它们,并赋予它们适当的用途。在PCT出版物WO 01/82963A2中更充分地阐明了管家和免疫表位之间的差别对于疫苗设计的重要意义。
本发明的表位包括或编码TAAs的多肽片段,其是通过管家或免疫 蛋白酶体进行蛋白酶体切割的前体或产物,并含有或包括对至少一个MHC I等位基因具有已知或预测亲和力的序列。在一些实施方案中,所述表位包括或编码长度约为6-25个氨基酸的多肽,其优选长度约为7-20个氨基酸,更优选长度约为8-15个氨基酸,还更优选长度约为9或10个氨基酸。然而,应当理解只要N-末端修剪可以产生MHC表位或它们不含有导致多肽被引导远离蛋白酶体或被蛋白酶体破坏的序列,所述多肽可以更大。对于免疫表位,如果更大的肽不含有这类序列,它们可以在pAPC中为免疫蛋白酶体所加工。如果通过免疫蛋白酶体作用序列适合于促进表位C-末端的释放,也可将管家表位内嵌于更长的序列中。上述讨论已经假定更长表位的加工通过pAPC免疫蛋白酶体的作用进行。然而,加工还可以通过设计一些其它机制来完成,如提供外源蛋白酶活性和适应的序列结果蛋白酶的作用释放MHC表位。可以对这些表位序列进行计算机分析以计算物理,生物化学,免疫学或分子遗传特性,如质量,等电点,预测电泳迁移率,预测与其它MHC分子的结合,核酸探针的解链温度,反向翻译,与其它序列的相似性或同源性等。
在构建编码本发明多肽表位的多核苷酸中,可以使用相关TAA的基因序列,或者多核苷酸可以由任何对应的密码子组装。对于10个氨基酸的表位,这可以组成大约106种不同序列,其取决于具体的氨基酸组成。尽管大,这是一种相异(distinct)的和容易定义的集合,其表示>1018该长度可能的多核苷酸中的一个很小部分,因此在一些实施方案中,在这里公开的具体序列的等价物包括在列表序列上的这类相异的和容易定义的变异。在选择这些序列中的具体一个用于疫苗过程中,如对于本领域技术人员将是明显的,可以利用条件如密码子使用,自身互补性,限制位点,化学稳定性等。
本发明意图生产肽表位。具体地,这些表位来源于TAA序列,并对至少一个MHC I等位基因具有已知或预测的亲和力。这类表位典型地与在靶细胞或pAPCs上产生的那些相同。
包含活性表位的组合物
本发明的实施方案提供多肽组合物,其包括疫苗,治疗法,诊断学, 药理学和药物组合物。各种组合物包括新鉴定的TAAs的表位以及这些表位的变体。本发明的其它实施方案提供编码本发明多肽表位的多核苷酸。本发明另外提供用于表达适于纯化的多肽表位的载体。另外,本发明提供用作抗肿瘤疫苗的在APC中表达多肽表位的载体。可以使用来源于表1的任何表位或抗原,或编码它的核酸。其它实施方案涉及生产和使用各种组合物的方法。
可以描述I类MHC-结合表位的总体结构,其在Madden,D.R.Annu.Rev.Immunol.13:587-622,1995中已经被更全面地综述。许多结合能产生于MHC分子中的保守残基与肽的N-和C-末端之间的主链接触。产生另外的主链接触但在MHC等位基因中不同。序列特异性是由所谓的锚定残基的侧链与又在MHC等位基因中变化的口袋接触所赋予的。可以将锚定残基分为主要的(primary)和次要的(secondary)。主要锚定位点显示强烈优选相对严格定义的氨基酸残基组。次要位点显示较弱和/或较少严格定义的优选残基,所述严格定义的优选可经常根据较少优选而不是较多优选来更好地描述。另外,一些次要锚定位点中的残基根本不是总被定位与MHC分子上的口袋接触。因此,存在一种肽亚型,其与特定的MHC分子结合并在正在讨论中的位点处存在侧链-口袋接触,并且存在另一种亚型,其显示与相同MHC分子的结合,所述结合不依赖于肽在MHC分子肽-结合沟中呈现的构象。C-末端残基(P;ω)优选是主要锚定残基。对于许多研究更好的HLA分子(例如A2,A68,B27,B7,B35和B53)第二位置(P2)也是一个锚定残基。然而,也已经观察到中央锚定残基,其包括HLA-B8中的P3和P5,以及分别在鼠MHC分子H-2Db和H-2Kb中的P5和P(ω)-3。因为更稳定的结合通常将改善免疫原性,不管它们的位置,在设计变体中优选锚定残基是保守的或最优化的。
由于锚定残基通常是位于表位末端附近,肽向上弯曲而到肽-结合沟以外,其允许长度上的一些变化。对于HLA-A68已经发现8-11个氨基酸的表位,对于HLA A2高达13个氨基酸。除锚定位置之间的长度变化之外,已经报道单个残基平截和延伸并且分别在N-和C-末端。在非锚定残基中,一些突出到沟以外,不与MHC分子发生接触但可以用来与TCR接触,对于HLA-A2最经常是P1,P4和P(ω)-1。其它非锚定残基可 以变成插入肽结合沟上边缘和TCR之间,与两者接触。这些侧链残基的精确定位,和如此它们对结合,MHC精细构象和最终免疫原性的影响是高度依赖序列的。对于高度免疫原性的表位,它必须不仅促进对于发生激活稳定的足够的TCR结合,而且TCR还必须具有足够高的脱离速率(off-rate)以便多个TCR分子可以顺序与相同的肽-MHC复合体相互作用(Kalergis,A.M.等,Nature Immunol.2:229-234,2001)。因此,在没有关于三元复合体另外信息的情况下,当设计变体时,在这些位置的保守和非保守置换都值得考虑。
例如使用任何用于保守和非保守突变的技术和指南可以产生多肽表位变体。变体可以衍生于与天然序列比较的一个或多个氨基酸的置换,缺失或插入。氨基酸置换可以是用另一个具有相似结构和/或化学特性的氨基酸置换一个氨基酸的结果,例如用丝氨酸置换苏氨酸。该置换被称为保守氨基酸置换,并且所有适当的保守氨基酸置换被认为是一种发明的实施方案。插入或缺失可以任选为大约1-4,优选1-2个氨基酸。通常优选保持肽的“锚定位点”,其负责与正在讨论中的MHC分子结合。确实,在许多情形中通过在锚定位点置换更多的优选残基可以改善肽的免疫原性(Franco,等,Nature Immunology,1(2):145-150,2000)。在保持与原表位充分的交叉反应性以构成有效疫苗的同时,通过用更大体积的氨基酸取代在非锚定位点发现的小氨基酸也经常可以改善肽的免疫原性。通过常规插入,缺失或置换序列中的氨基酸和检验产生的变体通过多肽表位显示的活性可以测定允许的变异。由于多肽表位经常是9个氨基酸,优选对最短的活性表位进行置换,例如9个氨基酸的表位。
还可以通过将任何序列加至多肽表位变体的N末端产生变体。这类N-末端增加可以是从1个氨基酸直至至少25个氨基酸。因为肽表位经常被pAPC中活泼的N-末端外肽酶修剪,必须理解所增加序列中的变异可以对表位活性没有影响。在优选实施方案中,末尾的上游蛋白酶体切割位点与MHC表位N-末端之间的氨基酸残基不包括脯氨酸残基。Serwold,T.等,Nature Immunol.2:644-651,2001。因此,可以从比优选9-链节(9-mer)I类基序更大的前体产生有效表位。
通常,就它们对应于在靶细胞或pACP表面上由MHC I实际展示的 表位而言肽是有效的。单个的肽对不同MHC分子可具有不同亲和力,与一些结合良好,有些适当结合,还有些一点也不结合(表2)。传统上已将MHC等位基因按照血清学反应性分类,所述血清学反应性不反映在相同类型的等位基因中可以不同的肽-结合沟的结构。类似地,跨越类型(across type)可以共享结合特性;已经将基于共享结合特性的类群称为超类型(supertype)。在人种群中存在许多MHC I等位基因;基于患者的基因型可以选择对某些等位基因特异性的表位。
表2
酪氨酸酶
207-216
(SEQ ID NO.1)与各种MHC类型的预测结合
MHC I类型 | *解离半衰期(min) |
A1 | 0.05 |
A*0201 | 1311. |
A*0205 | 50.4 |
A3 | 2.7 |
A*1101(部分A3超类型) | 0.012 |
A24 | 6.0 |
B7 | 4.0 |
B8 | 8.0 |
B14(部分B27超类型) | 60.0 |
B*2702 | 0.9 |
B*2705 | 30.0 |
B*3501(部分B7超类型) | 2.0 |
B*4403 | 0.1 |
B*5101(部分B7超类型) | 26.0 |
B*5102 | 55.0 |
B*5801 | 0.20 |
B60 | 0.40 |
B62 | 2.0 |
*HLA肽结合预测(万维网超文本传输协议“访问bimas.dcrt. nih.gov/molbio/hla_bin”)。
在本发明的另外实施方案中,可以将作为肽或编码多核苷酸的所述表位作为药物组合物给药,例如,疫苗或免疫原性组合物,单独或与各种佐剂,载体或赋形剂结合。应当指出,尽管术语疫苗可以贯穿这里的讨论中使用,该概念可以与包括在这里提及的那些的任何其它药物组合物一起施用或使用。特别有利的佐剂包括各种细胞因子和包含免疫刺激序列的寡核苷酸(如在这里参考的同时待审的申请中所更详细地阐明)。另外,可将编码表位的多核苷酸包含于病毒(例如牛痘或腺病毒)中或微生物宿主细胞(例如沙门氏菌属(Salmonella)或单核细胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes))中,其随后被用作多核苷酸的载体(Dietrich,G.等Nat.Biotech.16:181-185,1998)。备选地,可以离体转化pAPC以表达所述表位,或用肽表位脉冲以其自身作为疫苗给药。为了提高这些方法的效率,可以用病毒或细菌载体携带编码的表位,或者与pAPC上发现的受体的配体络合。类似地,肽表位可以与pAPC配体络合或偶联。一种疫苗可以包括多于一个单个表位。
在2000年4月28号提交的题为“EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS,”的美国专利申请号09/560,465中公开了对于将表位和/或表位聚簇结合至疫苗或药物组合物中的特别有利的策略。在2000年4月28号提交的题为“EPITOPE CLUSTERS”的美国专利申请号09/561,571中公开了与本发明共同使用的表位聚簇。
本发明的优选实施方案是以使pAPC或pAPCs群体呈递对应于在特定靶细胞上展示的表位的管家表位的疫苗和方法为目标。例如可使用表1中的任何表位或抗原。在一个实施方案中,管家表位是由特定肿瘤类型的管家蛋白酶体加工的TuAA表位。在另一个实施方案中,管家表位是由感染病毒的细胞的管家蛋白酶体加工的病毒相关表位。这促进对靶细胞的特异性T细胞应答。因为它们展示管家表位或免疫表位,对应于不同诱导状态(攻击前或攻击后)pAPCs同时表达多种表位可以激发有效对抗靶细胞的CTL应答。
通过含有在pAPC上呈递的管家和免疫表位,本实施方案可以最优化对靶细胞的细胞毒性T细胞应答。通过双重表位表达,当肿瘤细胞在由IFN 的诱导下从管家蛋白酶体转换至免疫蛋白酶体时,pAPCs可以继续维持对免疫类型表位的CTL应答,所述IFN例如可以通过肿瘤浸润CTLs产生。
在一个优选实施方案中,使用包括管家表位的疫苗免疫患者。许多优选的TAAs专门与一种靶细胞相关,特别是在感染细胞的情形中。在另一个实施方案中,许多优选的TAAs是在转化细胞中解除控制(deregulated)的基因表达的结果,但在睾丸,卵巢组织和胎儿中也发现。在另一个实施方案中,有效的TAAs在靶细胞中比在其它细胞中更高水平地表达。在其它实施方案中,与其它细胞相比TAAs在靶细胞中不差异表达,但还是有效的,因为它们与细胞的一种特定功能有关并将靶细胞从大多数其它周围细胞区别开来;在这些实施方案中,也显示TAA的健康细胞可能被诱导的T细胞应答并联攻击,但该附带损害被认为远比靶细胞导致的情形优选。
疫苗以导致pAPC或pAPCs群体展示管家表位的有效浓度包含一种管家表位。有利地,疫苗可包括多种管家表位或任选与一种或多种免疫表位结合的一种或多种管家表位。疫苗制剂以足以导致pAPCs呈递表位的浓度包含肽和/或核酸。制剂优选以大约1μg-1mg/100μl疫苗制剂的总浓度包含表位。本发明可使用适于肽疫苗和/或核酸疫苗的常规剂量和定量给药,该给药方法在本领域是被很好理解的。在一个实施方案中,对于成人的单剂量可便利地为大约1μl至大约5000μl的该组合物,一次或多次给药,例如间隔1周,2周,一个月或更长的2,3,4或更多剂量。参照结节内方法专利胰岛素泵(insulin pump)每小时送递1μl(最低频率)。
这里公开的本发明的组合物和方法还意图将佐剂结合至制剂中以增强疫苗的性能。具体地,设计将佐剂加入制剂以增强pAPCs的表位送递或摄取。本发明考虑的佐剂为本领域中的技术人员已知并包括例如GMCSF,GCSF,IL-2,IL-12,BCG,破伤风毒素,骨桥蛋白和ETA-1。
在本发明的一些实施方案中,疫苗可包括一种重组生物,如被遗传改造以在宿主中表达表位的病毒,细菌或寄生物。例如,单核细胞增生利斯特氏菌,一种革兰氏阳性,兼性胞内细菌,是一种将TuAAs靶向免疫系统的有效载体。在一个优选的实施方案中,可以改造该载体来表达一种管家表位以诱导治疗应答。该生物感染的正常途径是通过肠并且可以口服递 送。在另一个实施方案中,可以使用一种编码针对TuAA的管家表位的腺病毒(Ad)载体来诱导抗病毒或抗肿瘤应答。可以使用病毒构建体转导衍生于骨髓的树突细胞并随后注射,或者可以直接通过皮下注射将病毒递送至动物中以诱导有效的T-细胞应答。另一个实施方案使用一种重组牛痘病毒,其被改造来编码相应于针对TAA的管家表位的氨基酸序列。携带小基因构建体形式的含有适当核苷酸置换的构建体的牛痘病毒可以指导管家表位的表达,导致针对表位的治疗性T细胞应答。
使用DNA免疫要求APCs摄取DNA并且表达编码的蛋白质或肽。可以在DNA上编码离散的I类肽。通过用该构建体免疫,可使APCs表达管家表位,其然后在细胞表面I类MHC上展示以刺激适当的CTL应答。在2000年4月28提交的题为EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-AS SOCIATED ANTIGENS的美国专利申请号09/561,572中已经描述了通常依赖于翻译终止或非蛋白酶体蛋白酶以产生适当的管家表位末端的构建体。
如所提及的,理想的是在更大的蛋白质前后序列中表达管家肽。即使当少量的氨基酸存在表位末端以外也能检测到加工。小肽激素是通常从经常尺寸大小约为60-120个氨基酸的较长的翻译产物蛋白水解加工而来。该事实导致一些人设想这是可以有效翻译的最小尺寸。在一些实施方案中,可将管家肽内嵌在至少约60个氨基酸的翻译产物中。在其它实施方案中可将管家肽内嵌在至少约50,30或15个氨基酸的翻译产物中。
由于有差别的蛋白酶体加工,pAPC的免疫蛋白酶体产生与由周围体细胞中的管家蛋白酶体产生的那些不同的肽。因此,在较大蛋白质的前后序列中表达管家肽过程中,优选在APC中在不同于它全长天然序列的前后序列中表达它,因为,作为管家表位,通常只能通过管家蛋白酶体从天然蛋白质有效加工,所述管家蛋白酶体在APC中不活跃。为了在编码较大蛋白质的DNA序列中编码管家表位,在编码表位的序列的任意一侧找到允许免疫蛋白酶体适当切割以释放管家表位的侧翼区域是有用的。改变所需管家表位N-末端和C-末端的侧翼氨基酸残基可以促进在APC中适当切割和产生管家表位。可以从新设计并筛选内嵌管家表位的序列以确定哪个可以被免疫蛋白酶体成功加工来释放管家表位。
备选地,另一种策略对于鉴定允许在APC中产生管家表位的序列是非常有效的。一种邻接氨基酸序列可以从一种或多种管家表位从头至尾的排列产生。使用表达该序列的构建体免疫动物,并评估产生的T细胞应答以确定它对排列中一种或多种表位的特异性。由定义,这些免疫应答显示在pAPC中被有效加工的管家表位。由此确定了该表位周围的必需的侧翼区域。使用期望肽任意一侧约4-6个氨基酸的侧翼区域可以提供促进通过免疫蛋白酶体的管家表位的蛋白酶体加工所必需的信息。因此,可以将保证表位同步化的约16-22个氨基酸的序列有效插入或融合至任何蛋白质序列以导致在APC中产生管家表位。在备选实施方案中,可以将整个头尾排列的表位,或只是紧邻着正确加工管家表位的表位类似地从测试构建体转移至疫苗载体。
在一个优选实施方案中,可以将管家表位内嵌在已知的免疫表位,或这样的区段之间,从而提供适于加工的前后序列。管家和免疫表位的接合点可以产生使免疫蛋白酶体释放管家表位所必需的前后序列,或优选包括正确C-末端的更大片段。筛选构建体以证实产生了所需表位是有用的。管家表位的结合点可以产生可以被免疫蛋白酶体切割的位点。本发明的一些实施方案使用已知表位侧邻测试底物中的管家表位;在其它实施方案中,使用如下所述的筛选来确定侧翼区域是任意序列还是天然侧翼序列的突变体,在设计底物中是否使用蛋白酶体切割优选的知识。
尽管有利,在成熟表位N-末端的切割是不必需的,因为在细胞中存在多种N-末端修剪活性,其能够在蛋白酶体加工之后产生成熟的表位N末端。优选该N-末端延伸小于大约25个氨基酸长度,并进一步优选该延伸含有很少或没有脯氨酸残基。优选地,在筛选中,不仅对在表位末端(或至少在它的C-末端)的切割给予考虑,而且对确保在表位内部的有限切割给予考虑。
可以将鸟枪法用于设计测试底物并可提高筛选效率。在一个实施方案中可以依次组合多种表位,单个表位可出现多次。可以筛选底物以确定可以产生哪种表位。在其中一种特定表位是所关心的情形中,可以设计其中它在多种不同前后序列中出现的底物。当将在多于一种前后序列中出现的单个表位从底物释放时,可以使用附加的第二测试底物来确定哪个是被释 放和真正构成保证表位同时化的序列,所述第二测试底物中表位的特殊实例(individual instances)被去除,禁止或是唯一的。
存在几种容易实行的筛选。一种优选的体外筛选利用蛋白酶体消化分析,其使用纯化的免疫蛋白酶体,来确定所需的管家表位是否能从包含正在讨论中的该序列的合成肽中释放出来。可以通过技术如质谱,HPLC和N-末端池测序来测定获得切割的位置;如在题为METHOD OF EPITOPE DISCOVERY,EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGENPRESENTING CELLS的美国专利申请,题为EPITOPE SEQUENCES的两项临时美国专利申请中更详细地描述。
备选地,可以使用体内筛选如免疫或目标敏化(target sensitization)。对于免疫使用可以表达正在讨论中的序列的核酸构建体。可以检验收获的CTL识别呈递正在讨论中的管家表位的靶细胞的能力。通过用含成熟管家表位的合成肽脉冲表达适当MHC分子的细胞极其容易获得这类靶细胞。备选地,可以使用已知表达管家蛋白酶体的细胞和抗原,从所述抗原可内源地或通过遗传工程衍生管家表位。为了将目标敏化用作筛子,可以使用识别管家表位的CTL,或优选CTL克隆。在该情形中,它是表达内嵌的管家表位的靶细胞(而不是在免疫期间的pAPC)并且它必须表达免疫蛋白酶体。通常,可以使用一种适当的核酸构建体转化靶细胞以赋予内嵌管家表位的表达。使用装载肽的脂质体或蛋白质转移试剂如BIOPORTERTM(Gene Therapy Systems,San Diego,CA)装载一种包含内嵌表位的合成肽代表一种备选方案。
在2000年4月28日提交的题为“EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-AS SOCIATED ANTIGENS”的美国专利申请号No.09/561,572中公开了关于用作依照本发明疫苗的核酸构建体的另外指导。此外,在11/7/2001提交的题为“EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF TARGET-ASSOCIATED ANTIGENS AND METHODS FOR THEIR DESIGN”的美国专利申请号60/336,968(律师备案号(attorney docket number)CTLIMM.022PR)中公开了依照本发明有用的表达载体和关于它们设计的方法。
本发明的一个优选实施方案包括给药包括一种表位(或多种表位)的 疫苗以诱导治疗性免疫应答的方法。将疫苗以与本领域已知的标准疫苗递送方案一致的方法对患者给药。给药TAAs表位的方法包括,不限于经皮的,结节内的,结节周围的,口服的,静脉内的,皮内的,肌内的,腹膜内的和粘膜给药,包括通过注射,滴注或吸入递送。在2002年1月17日颁发的澳大利亚专利号739189;标题都为“A METHOD OF INDUCING A CTL RESPONSE,”的1999年9月1日提交的美国专利申请号09/380,534;和在2001年2月2日提交的其部分继续申请美国专利申请号09/776,232中公开了一种递送疫苗以引发CTL应答的特别有用的方法。
试剂识别表位
在本发明的另一方面,考虑对表位和/或表位-MHC分子复合体具有结合特异性的蛋白质,以及通过其可以表达它们的分离的细胞。在一组实施方案中,这些试剂采取免疫球蛋白的方式:多克隆血清或单克隆抗体(mAb),生产其的方法在本领域是众所周知的。产生对肽-MHC分子复合体具有特异性的mAb在本领域是已知的。参见例如Aharoni等,Nature351:147-150,1991;Andersen等Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:1820-1824,1996;Dadaglio等Immunity 6:727-738,1997;Duc等Int.Immunol.5:427-431,1993;Eastman等Eur.J.Immunol.26:385-393,1996;Engberg等Immunotechnology 4:273-278,1999;Porgdor等Immunity 6:715-726,1997;Puri等J.Immunol.158:2471-2476,1997;和Polakova,K.,等J.Immunol.165342-348,2000。
在其它实施方案中,可将所述组合物用来体内和体外诱导和产生对任何表位和/或表位-MHC复合体特异的T-细胞。在优选实施方案中,表位可以是例如在表1中列出的那些中的任何一种或多种。因此,实施方案还涉及和包括分离的T细胞,T细胞克隆,T细胞杂交瘤或含有衍生于克隆基因的T细胞受体(TCR)结合域的蛋白质,以及表达该蛋白质的重组细胞。该TCR衍生的蛋白质可以仅仅是TCR的胞外域,或与另外一种蛋白质的部分的融合以赋予所需的性质或功能。该融合的一个实例是将TCR结合域附着在抗体分子的恒定区以便产生二价分子。已经报道按照该常规模式的分子的构建和活性,例如Plaksin,D.等J.Immunol.158:2218-2227,1997 和Lebowitz,M.S.等Cell Immunol.192:175-184,1999。在题为T CELL RECEPTORS AND THEIR USE IN THERAPEUTIC AND DIAGNOSTIC METHODS的美国专利5,830,755中也讨论了这类分子更多的常规构建和使用。
通过标准免疫实验室动物可以容易地实现这类T细胞的生产,并且通过用人靶细胞免疫或通过用抗原/表位免疫HLA-转基因动物可以获得对人靶细胞的反应性。对于一些治疗方法,衍生于相同物种的T细胞是理想的。尽管该细胞可以通过例如将鼠TCR克隆于如上所考虑的人T细胞中产生,但体外免疫人细胞提供一种潜在地更快的选择。即使使用首次用于实验的供体(naive donors),用于体外免疫的技术在本领域也是已知的,例如Stauss等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:7871-7875,1992;Salgaller等Cancer Res.55:4972-4979,1995;Tsai等,J.Immunol.158:1796-1802,1997;和Chung等,J Immunother.22:279-287,1999。
可以将这些分子的任一种与酶,放射化学试剂,荧光标签和毒素偶联,以便用于诊断(成象或其它检测),监测和治疗与表位相关的致病疾病。因此可以给药毒素偶联物以杀死肿瘤细胞,放射化学试剂可以促进表位阳性肿瘤的成象,可将酶偶联物用于类似ELISA的试验来诊断癌症和证实在活体解剖组织中的表位表达。在另一个实施方案中,在通过用表位和/或细胞因子刺激完成扩增后,作为一种过继免疫治疗可以对患者给药如上阐明的这样的T细胞。
包含表位的试剂
本发明的另一方面提供分离的表位-MHC复合体。在本发明这方面的特别有利的实施方案中,复合体可以是可溶的,多亚基蛋白如在美国专利号5,635,363(四聚体)或美国专利号6,015,884(Ig-二聚体)中描述的那些。该试剂可用于检测和监测特异性的T细胞应答,和纯化这类T细胞。
还可将与表位肽络合的分离的MHC分子结合至平面脂双层或脂质体中。这类组合物可用来体外或在脂质体的情形中,体内刺激T细胞。可将共同刺激分子(例如B7,CD40,LFA-3)结合于相同组合物中,或者特别是对于体外操作,可以通过抗-共同-受体的抗体(例如抗-CD28,抗-CD154, 抗-CD2)或细胞因子(例如IL-2,IL-12)来提供共同刺激。这样的T细胞刺激可以在免疫治疗中构成接种,驱动T细胞体外扩增以接下来融合,或构成T细胞功能测定中的一步。
表位,或更直接地它与MHC分子的复合体可以是在激活或读出步骤或两者中抗原特异性T细胞的功能测定的重要组分。在当前本领域中T细胞功能的许多种测定中(详细的方法可以在标准免疫学参考如Current Protocols in Immunology 1999 John Wiley & Sons Inc.,N.Y中发现)可以定义两大类,测量许多细胞应答的那些和测量单独细胞应答的那些。尽管前者传达应答强度的总体测量,但后者允许测定应答细胞的相对频率。测量总体应答的试验的实例是细胞毒性测定,ELISA和检测细胞因子分泌的增殖测定。测量单独细胞(或衍生于它们的小克隆)应答的测定包括有限稀释分析(LDA),ELISPOT,未分泌细胞因子的流式细胞仪检测(在题为“METHOD FOR ASSESSMENT OF THE MONONUCLEAR LEUKOCYTE IMMUNE SYSTEM”的美国专利号5,445,939和标题都为“METHOD FOR THE ASSESSMENT OF THE MONONUCLEAR LEUKOCYTE IMMUNE SYSTEM,”的美国专利号5,656,446;和5,843,689中描述,试剂是由Becton,Dickinson & Company以商品名‘FASTIMMUNE’出售并且用如上说明和提及的四聚体或Ig-二聚体检测特异性的TCR。在Yee,C.等Current Opinion in Immunology,13:141-146,2001中综述这些技术的相对优点。如对于本领域的一名技术人员将是明显的,通过多种建立的基于核酸的技术,特别是原位和单细胞PCR技术可以完成另外的检测特异性TCR的重排或表达。
这些功能测定可用来评估免疫的内源水平,对免疫刺激(例如疫苗)的应答和监测贯穿疾病和治疗期间的免疫状态。除当测量免疫的内源水平时,这些测定的任何一种假定预先的免疫步骤,不管体内或体外,其取决于所论述问题的性质。使用上述本发明的各种实施方案或可以激发相似免疫的其它形式的免疫原(例如pAPC-肿瘤细胞融合)可以进行该免疫。除了能够检测关联TCR(cognate TCR)表达的PCR和四聚体/Ig-二聚体类型的分析以外,这些测定通常受益于一步体外抗原刺激,其可以方便地使用上述本发明的各种实施方案以便检测特定的功能活性(有时可以直接检测 高度溶细胞应答)。最后,检测溶细胞活性需要展示表位的靶细胞,其可以使用本发明的各种实施方案产生。对于任何具体步骤选择的具体实施方案取决于所论述的问题,使用的简易,成本等,但对于任何具体一组情形一个实施方案对另一种的优势对于本领域的一名技术人员来说将是明显的。
在传统上已将在该部分描述的肽MHC复合体理解为是非共价结合。然而产生一个共价键是可能并且可以是有益的,例如通过编码作为单个蛋白的表位和MHC重链或表位,β2-微球蛋白,和MHC重链(Yu,Y.L.Y.,等,J.Immunol.168:3145-3149,2002;Mottez,E.,等,J.Exp.Med.181:493,1995;Dela Cruz,C.S.,等,Int.Immunol.12:1293,2000;Mage,M.G.,等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10658,1992;Toshitani,K.,等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:236,1996;Lee,L.,等,Eur.J.Immunol.24:2633,1994;Chung,D.H.,等,J.Immunol.163:3699,1999;Uger,R.A.和B.H.Barber,J.Immunol.160:1598,1998;Uger,R.A.,等,J.Immunol.162:6024,1999;和White,J.,等,J.Immunol.162:2671,1999。这类构建体可具有优越的稳定性并且克服了在加工-呈递途径中的困难。它们可用于已经描述的疫苗,试剂和类似方式的测定中。
肿瘤相关抗原
本发明的表位是衍生于TuAAs酪氨酸酶(SEQ ID NO.2),SSX-2,(SEQ ID NO.3),PSMA(前列腺-特异性膜抗原)(SEQ ID NO.4),GP100,(SEQ ID NO.70),MAGE-1,(SEQ ID NO.71),MAGE-2,(SEQ ID NO.72),MAGE-3,(SEQ ID NO.73),NY-ESO-1,(SEQ ID NO.74),PRAME,(SEQ IDNO.77),PSA,(SEQ ID NO.78),PSCA,(SEQ ID NO.79),纤连蛋白ED-B结构域(SEQ ID NOS 589和590),CEA(癌胚抗原)(SEQ ID NO.592),Her2/Neu(SEQ ID NO.594),SCP-1(SEQ ID NO.596)和SSX-4(SEQ IDNO.598)。从它们的cDNA或完全编码(cds)序列,分别为SEQ ID NOS.5-7,80-87,591,593,595,597,和599可以确定这十一种蛋白质的天然编码序列,或它们内部的任何区段。
酪氨酸酶是一种黑色素生物合成酶,其被认为是黑色素细胞分化的最 特异性的标记之一。酪氨酸酶在很少的几种细胞类型中表达,主要在黑色素细胞中表达,并且经常在黑素瘤中发现高水平。在题为“METHOD FOR IDENTIFYING INDIVIDUALS SUFFERING FROM A CELLULAR ABNORMALITY SOME OF WHOSE ABNORMAL CELLS PRESENT COMPLEXES OF HLA-A2/TYROSINASE DERIVED PEPTIDES,ANDMETHODS FOR TREATING SAID INDIVIDUALS”的美国专利5,747,271中教导了将酪氨酸酶用作TuAA。
GP100,也称为PMe117,也是一种在黑素瘤中高水平表达的黑色素生物合成蛋白质。在题为“MELANOMAANTIGENS AND THEIR USE IN DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC METHODS,”的美国专利5,844,075中公开了作为一种TuAA的GP100。
SSX-2,也称为Hom-Mel-40,是高度保守的癌-睾丸抗原家族的成员(Gure,A.O.等Int.J.Cancer 72:965-971,1997)。在题为“ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULES WHICH ENCODE A MELANOMA SPECIFIC ANTIGEN AND USES THEREOF,”的美国专利6,025,191中教导了将其鉴定为一种TuAA。在多种肿瘤中发现癌-睾丸抗原,但通常在除睾丸以外的正常成人组织中不存在。已经发现在肿瘤细胞系中SSX家族的不同成员的表达不同。由于在SSX家族成员之间高度的序列同一性,将产生来自多于一个家族成员的相似表位并且其可以与MHC分子结合,因此指向该家族一个成员的一些疫苗可以交叉反应和对该家族的其它成员有效(参见下面实施例3)。
MAGE-1,MAGE-2,和MAGE-3是最初在黑素瘤(MAGE是黑素瘤相关抗原的缩写)中发现但在许多肿瘤中发现的的另一个癌-睾丸抗原家族的成员。在题为NUCLEOTIDE SEQUENCE ENCODING THE TUMOR REJECTION ANTIGEN PRECURSOR,MAGE-1的美国专利5,342,774和许多后来专利中教导了将MAGE蛋白鉴定为TuAAs。当前在SWISS蛋白质数据库中存在17条关于(人)MAGE的记录。在这些蛋白质中存在广泛的相似性因此在许多情形中,来源于一种的表位可诱导针对其它家族成员的交叉反应性应答。还未在肿瘤中观测到这些中的一些,最显著地MAGE-H1和MAGE-D1,其分别在睾丸和脑,和骨髓基质细胞中表达。 由它们是在对其它MAGE蛋白质最小相似性之中的事实改善了在正常组织上交叉反应性的可能性。
NY-ESO-1,是一种在各种各样的肿瘤中发现的癌-睾丸抗原,也称为CTAG-1(癌-睾丸抗原-1)和CAG-3(癌抗原-3)。在题为ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULE ENCODING AN ESOPHAGEAL CANCERASSOCIATED ANTIGEN,THE ANTIGEN ITSELF,AND USES THEREOF的美国专利5,804,381中公开了作为一种TuAA的NY-ESO-1。编码具有广泛序列同一性的抗原的共生同源基因座(paralogous locus),LAGE-1a/s(SEQ ID NO.75)和LAGE-1b/L(SEQ ID NO.76)已经在公众可利用的人基因组集群(assemblies)中公开,并且已经被推断是通过可变剪接(alternate splicing)产生的。另外,CT-2(或CTAG-2,癌-睾丸抗原-2)似乎是LAGE-1b/L的等位基因,突变体或测序差异。由于广泛的序列同一性,许多来源于NY-ESO-1的表位也可以诱导针对表达这些其它抗原的肿瘤的免疫性。参见图1。蛋白质直至氨基酸70实际上是相同的。从71-134NY-ESO-1和LAGE之间相同的最长长度是6个残基,但存在潜在交叉反应序列。从135-180,NY-ESO和LAGE-1a/s除单个残基以外是相同的,但由于可变剪接LAGE-1b/L是不相关的。CAMEL和LAGE-2抗原似乎是来源于LAGE-1mRNA,但是源于可变的读框(alternate reading frame),因此产生不相关的蛋白质序列。新近,GenBank登记号AF277315.5,人染色体X克隆RP5-865E18,RP5-1087L19,完全序列,报道了在该区域中的三个独立的基因座,其标记为LAGE1(对应于基因组集群的CTAG-2),加上LAGE2-A和LAGE2-B(两者对应于基因组集群的CTAG-1)。
PSMA(前列腺特异性膜抗原),在题为“PROSTATE-SPECIFICMEMBRANES ANTIGEN”的美国专利5,538,866中描述的一种TuAA,是由正常前列腺上皮细胞表达,并且在前列腺癌中高水平表达。也已经发现它存在于非前列腺肿瘤的新脉管系统中。PSMA因此可以形成指向前列腺癌和其它肿瘤的新脉管系统两者的疫苗的基础。在2001年3月7日提交的题为“ANTI-NEOVASCULAR VACCINES FOR CANCER”的临时美国专利申请号60/274,063和在2002年3月7日提交的题为“ANTI-NEOVASCULAR PREPARATIONS FOR CANCER”的美国申请号 10/094,699,律师备案号CTLIMM.015A中更充分地描述这一后者概念。简短地,当肿瘤生长时,它们吸收(recruit)新血管的向内生长物(ingrowth)。这被认为对于维持生长是必需的,因为未血管化的肿瘤中心通常坏死并且已经报道血管发生抑制剂导致肿瘤退化。这些新血管,或新脉管系统,表达在建立的血管中未发现的抗原,因此可以被特异性地瞄准。通过诱导针对新血管抗原的CTL可以使血管破裂,中断养分流向肿瘤(和从肿瘤去除废弃物),导致退化。
如在题为“ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULE ENCODING ALTERNATIVELY SPLICED PROSTATE-SPECIFIC MEMBRANES ANTIGEN AND USES THEREOF”的美国专利5,935,818中所述,PSMAmRNA的可变剪接还导致一种在Met58处含有明显起始的蛋白质,从而删除了假定的PSMA膜锚定区域。一种称为类PSMA蛋白的蛋白质,Genbank登记号AF261715,与PSMA的氨基酸309-750几乎相同并且具有不同的表达图谱(expression profile)。因此最优选的表位是含有位于氨基酸58-308的N-末端的那些。
PRAME,也称为MAPE,DAGE和OIP4,最初是被作为一种黑素瘤抗原观测。后来,它已被认为是一种CT抗原,但不像许多CT抗原(例如MAGE,GAGE,和BAGE)它在急性骨髓白血病中表达。PRAME是MAPE家族的一个成员,所述MAPE家族主要由假想蛋白质组成,PRAME与这些假想蛋白质共有有限的序列相似性。在题为“ISOLATED NUCLEIC ACID MOLECULES CODING FOR TUMOR REJECTION ANTIGEN PRECURSOR DAGE AND USES THEREOF”的美国专利5,830,753中教导了将PRAME用作一种TuAA。
PSA,前列腺特异性抗原,是激肽释放酶家族的一种肽酶和前列腺的一种分化抗原。也已经报道在乳房组织中的表达。替代的名称包括γ-seminoprotein,激肽释放酶3,seminogelase,seminin和P-30抗原。PSA具有与各种可变剪接产物前列腺/腺激肽释放酶-1和-2以及激肽释放酶4的高度序列同一性,其也在前列腺和乳房组织中表达。其它激肽释放酶通常共享更小的序列同一性和具有不同的表达图谱。但是,在设计疫苗时应该考虑可能通过任何特定表位激发的交叉反应性,以及表位将通过在非靶 组织中的加工(最通常由管家蛋白酶体加工)而被释放的可能性。
PSCA,前列腺干细胞抗原,也称为SCAH-2,是一种优选在前列腺上皮细胞中表达和在前列腺癌中过量表达的分化抗原。在包括消化道的神经内分泌细胞和肾的集合管的一些正常组织中发现低水平表达。在题为“HUMAN STEM CELL ANTIGENS”的美国专利5,856,136中描述了PSCA。
联会复合体蛋白1(SCP-1),也称为HOM-TES-14,是一种减数分裂相关蛋白并且也是一种癌-睾丸抗原(Tureci,O.,等Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:5211-5216,1998)。作为一种癌抗原,它的表达不是受细胞周期调节并且经常在神经胶质瘤,乳房,肾细胞和卵巢癌中发现它。它具有与肌球蛋白的一些相似性,但具有足够小的同一性以致交叉反应表位不可直接寻找(immediate prospect)。
纤连蛋白的ED-B结构域也是一种潜在的目标。纤连蛋白进行受发育调节的可变剪接,主要在胎性癌组织中使用的单个外显子编码ED-B结构域(Matsuura,H.和S.Hakomori Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:6517-6521,1985;Carnemolla,B.等J.Cell Biol.108:1139-1148,1989;Loridon Rosa,B.等Cancer Res.50:1608-1612,1990;Nicolo,G.等Cell Differ.Dev.32:401-408,1990;Borsi,L.等Exp.Cell Res.199:98-105,1992;Oyama,F.等Cancer Res.53:2005-2011,1993;Mandel,U.等APMIS 102:695-702,1994;Farnoud,M.R.等Int.J.Cancer 61:27-34,1995;Pujuguet,P.等Am.J.Pathol.148:579-592,1996;Gabler,U.等Heart 75:358-362,1996;Chevalier,X.Br.J.Rheumatol.35:407-415,1996;Midulla,M.Cancer Res.60:164-169,2000)。
ED-B结构域也在新脉管系统的纤连蛋白中表达(Kaczmarek,J.等Int.J.Cancer 59:11-16,1994;Castellani,P.等Int.J.Cancer 59:612-618,1994;Neri,D.等Nat.Biotech.15:1271-1275,1997;Karelina,T.V.和A.Z.EisenCancer Detect.Prev.22:438444,1998;Tarli,L.等Blood 94:192-198;1999;Castellani,P.等Acta Neurochir.(Wien)142:277-282,2000)。作为一种胎性癌结构域,除被新脉管系统表达以外一般在由赘生性细胞表达的纤连蛋白中发现ED-B结构域。因此,靶向ED-B结构域的CTL诱导疫苗可显示两 种作用机制:直接溶解肿瘤细胞和通过破坏肿瘤相关新脉管系统破坏肿瘤的血液供给。因为CTL活性在停用疫苗后迅速衰减,对正常血管发生的干扰可以最小。在题为“ANTI-NEOVASCULATURE VACCINES FOR CANCER”的临时美国专利申请号60/274,063和甚至在日期(2002年3月7日)与本申请一起提交的题为“ANTI-NEOVASCULATURE PREPARATIONS FOR CANCER”的美国专利申请号10/094,699,律师备案号CTLIMM.015A中描述了设计和检验靶向新脉管系统的疫苗。在题为“HLA-TRANSGENIC MURINE TUMOR CELL LINE,”律师备案号CTLIMM.028PR,2002年3月7日提交的临时美国专利申请号60/363,131中公开了一种肿瘤细胞系。
癌胚抗原(CEA)是一种典型的癌胚蛋白,其最初在1965年被首先描述(Gold和Freedman,J.Exp.Med.121:439-462,1965。更全的参考可以在Online Medelian Inheritance in Man;记录*114890中找到)。它已经正式改名为癌胚抗原相关细胞粘着分子5(CEACAM5)。它的表达与消化道和胎结肠中的上皮层(epithelial lining)的腺癌强烈相关。CEA是免疫球蛋白超基因家族的成员并且是CEA亚家族的定义成员(defining member)。
HER2/NEU与表皮生长因子受体相关的癌基因(van de Vijver,等,New Eng.J.Med.319:1239-1245,1988),并且显然与c-ERBB2癌基因相同(Di Fiore,等,Science 237:178-182,1987)。ERBB2的过量表达已经和前列腺癌的致瘤性转化牵连。作为HER2,它在其它肿瘤中的乳腺癌的25-30%中被扩增和过表达,所述其它肿瘤中表达水平与肿瘤的进攻性相关(Slamon,等,New Eng.J.Med.344:783-792,2001)。在Online Medelian Inheritance in Man;记录*164870中可获得更详细的描述。
在2001年11月7日提交的题为“EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS,”的美国专利申请号10/005,905(律师备案号CTLIMM.021CP1)和2000年12月7日提交的其继续申请,美国申请号_/_,律师备案号CTLIMM.21CP1C,标题也为“EPITOPE SYNCHRONIZATION IN ANTIGEN PRESENTING CELLS”中发现与本发明实施方案相关的另外的公开内容。
如下列实施例中所描述鉴定和检验有效表位。然而这些实例是意图只 是用作说明目的,而不应该解释为是以任何方式限制本发明的范围。
实施例
具体的优选表位序列
实施例1
表位的制备
A.表位的人工生产
使用FMOC或tBOC固相合成方法合成含有SEQ ID NO:1,8,9,11-23,26-29,32-44,47-54,56-63,66-68,88-253,或256-588中任一个的氨基酸序列的肽。合成后,在存在适当的保护清除剂的条件下,分别用三氟乙酸或氟化氢将肽从它们的载体上切开。在通过蒸发去除酸后,用醚萃取肽以去除清除剂,然后将粗制的沉淀的肽冻干。通过HPLC,序列分析,氨基酸分析,平衡离子含量分析和其它适当的方法测定粗制肽的纯度。如果粗制肽足够纯(大于或等于约90%纯度),它们可以原样使用。如果要求纯化满足药物规范,使用下列各项的一种或组合来纯化肽:再沉淀;反相,离子交换,尺寸排阻或疏水相互作用色谱法;或逆流分布。
药品制剂
在肠胃外可接受的水,有机或水-有机缓冲液或溶剂系统中配制GMP-级的肽,其中它们保持物理和化学稳定以及生物有效性。通常,缓冲液或缓冲液的组合或缓冲液与有机溶剂的组合是适当的。pH值范围典型地为6-9。可以加入有机改性剂或其它赋形剂来帮助溶解和稳定肽。这些包括去污剂,脂类,共溶剂,抗氧化剂,螯合剂和还原剂。在冻干产品的情形中,可以加入蔗糖或甘露醇或其它冻干的酸类。通过膜过滤于它们最后的容器-密封系统之中将肽溶液灭菌并冻干以备临床中溶解或保存至使用。
B.构建用作核酸疫苗的表达载体
下面介绍三类表位表达载体的构建。在题为“EXPRESSION VECTORS ENCODING EPITOPES OF ARGET-ASSOCIATED ANTIGENS,”的美国专利申请号09/561,572中阐明了这些设计的具体优 势。
于是用质粒转染适当的大肠杆菌菌株并涂布在选择性培养基上。几个克隆在悬浮培养中生长并且通过限制酶图谱鉴定阳性克隆。然后培养阳性克隆,等分于储存小瓶中并储存在-70℃。
然后由这些细胞的样品进行质粒的小量制备(QIAprep Spin Mini-prep:Qiagen,Valencia,CA)并且使用自动荧光双脱氧测序分析证实构建体含有所需序列。
B.1构建pVAX-EP1-IRES-EP2
综述:
该构建体的起始质粒是购自Invitrogen(Carlsbad,CA)的pVAX1。表位EP1和EP2是由GIBCO BRL(Rockville,MD)合成。IRES是从购自Clontech(Palo Alto,CA)的pIRES切断的。
步骤:
1用EcoRI和NotI消化pIRES。通过琼脂糖凝胶电泳分离消化片段,并且从切断条带纯化IRES片段。
2用EcoRI和NotI消化pVAX1,并凝胶纯化pVAX1片段。
3然后将纯化的pVAX1和IRES片段连接在一起。
4用连接混合物转化感受态的大肠杆菌菌株DH5α。
5从产生的4个菌落进行小量制备。
6对小量制备的DNA进行限制酶消化分析。将一个含有IRES插入片段的重组菌落用于进一步的EP1和EP2的插入。该中间构建体称为pVAX-IRES。
7合成编码EP1和EP2的寡核苷酸。
8将EP1亚克隆至pVAX-IRES的AfIII和EcoRI位点之间,以构造pVAX-EP1-IRES;
9将EP2亚克隆至pVAX-EP1-IRES的SalI和NotI位点之间,以构造最后的构建体pVAX-EP1-IRES-EP2。
10通过DNA测序证实EP1-IRES-EP2插入片段的序列。
B2.构建pVAX-EP 1-IRES-EP2-ISS-NIS
综述:
该构建体的起始质粒是pVAX-EP1-IRES-EP2(实施例1)。引入该构建体的ISS(免疫刺激序列)是AACGTT,并且使用的NIS(代表核输入序列(nuclear import sequence))是SV4072bp重复序列。ISS-NIS是由GIBCO BRL合成。参见图2。
步骤:
1用NruI消化pVAX-EP1-IRES-EP2;凝胶纯化线性化的质粒。
2合成ISS-NIS寡核苷酸。
3将纯化的线性化pVAX-EP1-IRES-EP2和合成的ISS-NIS连接在一起。
4用连接产物转化感受态的大肠杆菌菌株DH5α。
5从产生的菌落进行小量制备。
6进行小量制备的限制酶消化。
7将含有插入片段的质粒测序
B3.构建pVAX-EP2-UB-EP1
综述:
该构建体的起始质粒是pVAX1(Invitrogen)。EP2和EP1是由GIBCOBRL合成。从酵母克隆在构建体中编码76个氨基酸的野生型遍在蛋白质。
步骤:
1使用酵母mRNA进行RT-PCR。设计引物来扩增酵母遍在蛋白质的完整编码序列。
2使用琼脂糖凝胶电泳分析RT-PCR产物。凝胶纯化具有预测大小的条带。
3将纯化的DNA条带在EcoRV位点亚克隆至pZERO1。将得到的克隆命名为pZERO-UB。
4在进一步操作之前将几个pZERO-UB克隆测序以证实遍在蛋白质序列。
5合成EP1和EP2。
6将EP2,遍在蛋白质和EP1连接并且将插入克隆至pVAX1的BamHI和EcoRI位点中间,使它在CMV启动子的控制之下。
7通过DNA测序证实插入片段EP2-UB-EP 1的序列。
实施例2
鉴定有效的表位变体
10-链节的FLPWHRLFLL(SEQ ID NO.1)被鉴定为一种有效表位。基于该序列,制备许多变体。将在HLA结合试验(参见实施例3,部分6)中显示活性的变体鉴定为有效,并随后结合于疫苗中。
已经评估FLPWHRLFLL长度变体的HLA-A2结合。蛋白酶体消化分析说明也产生9-链节FLPWHRLFL(SEQ ID NO.8)的C-末端。另外,9-链节LPWHRLFLL(SEQ ID NO.9)也可由10-链节的N-末端修剪产生。两者都被预测与HLA-A*0201分子结合,然而在这两个9-链节中,FLPWHRLFL显示更显著的结合并是优选的(参见图3A和B)。
体外蛋白酶体消化和N-末端池测序说明酪氨酸酶207-216(SEQ ID NO.1)比酪氨酸酶207-215(SEQ ID NO.8)被更普遍地生产,然而较后的肽显示优越的免疫原性,其在实现最佳疫苗设计中可能关注。将FLPWHRLFL,酪氨酸酶207-215(SEQID NO.8)用于HLA-A2+血液的体外免疫以产生CTL(参见下面CTL诱导培养)。在标准铬释放测定中将肽脉冲的T2细胞用作目标,发现由酪氨酸酶207-215(SEQ ID NO.8)诱导的CTL同样很好地识别酪氨酸酶207-216(SEQ ID NO.1)的目标(参见图3C)。这些CTL还识别HLA-A2 +,酪氨酸酶+肿瘤细胞系624.38和HTB64,但不识别624.28,624.38的HLA-A2-衍生物(图3C)。因此体内产生的这两种表位的相对数量在疫苗设计中不成为一个问题。
CTL诱导培养
通过在Ficoll-Hypaque中离心从血沉棕黄层(buffy coat)纯化来源于正常供体的PBMCs。使用自身血浆(AP)进行所有的培养以避免暴露于可能的异源病原体和FBS肽的识别。为了促进体外产生肽-特异性的CTL,我们使用自身树突细胞(DC)作为APCs。如同所描述,产生DC并且用 DC和来源于PBMCs的肽诱导CTL(Keogh等,2001)。简短地,用GM-CSF和IL-4培养富集单核细胞的细胞组分5天,并在含有2μg/ml CD40配体的培养基中另外培养2天以诱导成熟。在24孔平板中2ml补充有10%AP,10ng/ml IL-7和20IU/ml IL-2的RPMI中共培养2X106富集CD8+的T淋巴细胞/孔和2x105肽脉冲的DC/孔。在第7和第14天用自身辐射的肽脉冲的DC再刺激培养物。
如下构建FLPWHRLFL的序列变体。与来源于NIH/BIMAS MHC结合预测程序(参见下面实施例3中的参考)的结合系数表(参见表3)一致,通过将位置9的L,一个锚定位置改变成V可以改善结合。尽管通常在更小程度上,通过在非锚定位置的改变也可改变结合。通常参照表3,通过使用具有相对较大系数的残基可以提高结合。与它们对结合MHC的影响无关,序列的改变还可改变免疫原性。因此如下可以改善结合和/或免疫原性:
通过用F,L,M,W,或Y替换位置3的P;这些都是体积较大的残基,其也可以改善免疫原性而与对结合的影响无关。具有胺和羟基的残基,分别为Q和N,S和T,也可激发较强的交叉反应性应答。
通过用D或E替换位置4的W以改善结合,这加入负电也可使表位更有免疫原性,而在一些情形中减小与天然表位的交叉反应性。备选地保守替换F或Y可以激发交叉反应性应答。
通过用F替换位置5的H改善结合。可以将H视为部分带电,因此在一些情形中电荷的损失可阻碍交叉反应性。替换在该位置充分带电残基R或K可增强免疫原性而不破坏依赖电荷的交叉反应性。
通过用I,L,M,V,F,W,或Y替换位置6的R。如位置5的相同告诫 (caveats)和备选适用于这里。
通过用W或F替换位置7的L以改善结合。通过该模型(NIH算法)通常不预测在该位置V,I,S,T,Q,或N替换减少结合亲和力,然而如上所讨论可以是有利的。
Y和W,其是同等优选为位置1和8的Fs,可以激发有效的交叉反应性。最后虽然朝体积大的方向的替换通常是偏向于改善免疫原性,按照尺寸的对比,而不是本身体积大,是免疫原性的重要因素的理论,替换较小残基如位置3-7的A,S和C可以是有效的。C中巯基的反应性可以引入如在Chen,J.-L.,等J.Immunol.165:948-955,2000中所讨论的其它特性中。
表3.对于HLA-A*0201*的9-链节系数表
*将该表和公众可利用的其它可比较数据用于设计表位变体和确定一种特定变体是否是在物质上相似,或是在功能上相似。
实施例3
聚簇分析(SSX-231-68)
1.表位聚簇区域预测:
计算机算法:基于H.G.Rammensee,J.Bachmann和S.Stevanovic的书“MHC Ligands and Peptide Motifs”SYFPEITHI(因特网访问http://syfpeithi.bmi-heidelberg.com/Scripts/MHCServer.dll/EpPredict.htm);和在Parker,K.C.,等,J.Immunol.152:163,1994中描述的HLA肽结合预测(NIH)(因特网访问http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bin);用来分析SSX-2(GI:10337583)的蛋白质序列。如在2000年4月28日提交的题为“EPITOPE CLUSTERS,”的美国专利号09/561,571中所充分描述的那样定义表位聚簇(含有比具有高预测MHC亲和力的肽片段的平均密度高的区域)。使用表位密度比率的截止值(cutoff)为2,分别使用SYFPETHI和NIH算法定义5个和2个聚簇,并且肽记分截止值为16(SYFPETHI)和5(NIH)。使用NIH算法得分最高的肽,SSX-241-49,具有估计>1000min的解离半衰期,在NIH分析中不重叠任何其它预测的表位但确实与SSX-257-65聚簇。
2.肽合成和表征:
通过MPS(Multiple Peptide Systems,San Diego,CA 92121)使用标准固相化学合成SSX-231-68,YFSKEEWEKMKASEKIFYVYMKRKYEAMT KLGFKATLP(SEQID NO.10)。按照提供的“分析证明书”,该肽的纯度为95%。
3.蛋白酶体消化:
使用在2000年4月28日提交的题为“METHOD OF EPITOPEDISCOVERY,”的美国专利申请号09/561,074中描述的蛋白酶体分离方案从人红细胞分离蛋白酶体。将SDS-PAGE,蛋白质印迹,和ELISA用作质量控制测定。蛋白酶体的最终浓度为4mg/ml,其是通过无干扰蛋白质测定法(Geno Technologies Inc.)测定的。将蛋白酶体-70℃保存在25μl等分试样中。
将SSX-231-68溶解在Milli-Q水中,制备2mM母液,并将20μl等分试样保存在-20℃。
从-70℃存储器取出1管蛋白酶体(25μl)并在冰上解冻。然后通过反复吸取(将样品保持在冰上)将它与12.5μL 2mM的肽彻底混合。在混合后立即取5μL样品并转移至含有1.25μL 10%TFA的试管中(TFA的终浓度为2%);T=0min样品。然后开始并在37℃程控热控制器中进行蛋白酶体消化反应。分别在15,30,60,120,180和240min取出另外的5μL样品,如以前通过将样品加入1.25μL 10%TFA中终止反应。将样品保持在冰上或冷冻直至通过MALDI-MS分析。为了HPLC分析和N-末端测序所有的样品被保留和储存在-20℃。将单独的肽(没有蛋白酶体)用作空白对照:2μL肽+4μL Tris缓冲液(20mM,pH 7.6)+1.5μL TFA。
4.MALDI-TOF MS测量:
对于每个时间点首先将0.3μL基质溶液(10mg/mlα-氰基-4-羟基肉桂酸的AcCN/H2O溶液(70∶30))施加于样品载玻片上,然后在载玻片上将等体积的消化样品与基质溶液轻轻混合。在获得质谱前使载玻片室温空气干燥3-5分钟。在用肽/蛋白质标样校准的Lasermat 2000MALDI-TOF质谱仪上进行MS。为了改善测量的准确度,将肽底物的分子离子量(MH +)用作内校准标准物。在图4中显示T=120min.消化样品的质谱。
5.MS数据分析和表位鉴定:
为了指定测量的质量峰,使用计算机程序MS-Product,一种来源于UCSF Mass Spectrometry Facility(可访问http://prospector.ucsf.edu/ucsfhtml3.4/msprod.htm)的工具来产生所有可能的片段(N-和C-末端离子,和内部片段)和它们对应的分子量。由于质谱仪的灵敏度,使用平均分子量。如表4中总结,鉴定了在消化期间观测到的质量峰。
选择通过SYFPEITHI或NIH算法预测与HLA结合的具有8-10个氨基酸长序列的共C末端片段来进一步研究。方法的消化和预测步骤可以以任何顺序有效实行。尽管在此描述的蛋白酶体消化中使用的底物肽 是特别设计来包括预测的HLA-A2.1结合序列,但是可事后检测实际的消化产物对其它MHC分子的实际或预测的结合。选择的结果在表5中显示。
表4.SSX-231-68质量峰鉴定
黑体序列对应于预测与MHC结合的肽。
*仅仅基于质量该峰也可指定为肽32-50,然而,蛋白酶体只去除N-末端氨基酸是不大可能的。N-末端测序(下面)证实确定为31-49。
**基于质量该片段也可能表示33-68。下面的N-末端测序与确定为31-65一致。
表5.预测通过蛋白酶体产生片段的HLA结合
如表5所示,将真实序列(authentic sequence)附加在表位N-末端可产生针对相同或不同MHC限制性元件的表位。特别注意(K)RKYEAMTKL(SEQ ID NOS 19和(20))与HLA-B14的配对,其中10-链节具有比共-C-末端9-链节更长的预测解离半衰期。还注意10-链节KYEAMTKLGF(SEQ ID NO.21)的情形,通过依赖于N-末端修剪以产生针对HLA-B*4403和-B*08的表位其可用作对几种MHC类别有效的疫苗。
6.HLA-A0201结合测定:
使用Stauss等的方法(Proc Natl Acad Sci USA 89(17):7871-5(1992))的变体测定候选表位KASEKIFYYV,SSX-241-49,(SEQ ID NO.15)与HLA-A2.1的结合。具体地,在它们表面表达空的或不稳定MHC分子的T2细胞用Iscove的改进Dulbecco′s培养基(IMDM)洗涤两次,并于96孔平底平板中以3x105细胞/200μl/孔的浓度在补充有3μg/ml人β2-微球蛋白的无血清AIM-V培养基(Life Technologies,Inc.,Rockville,MD)中培养过夜,并加入800,400,200,100,50,25,12.5和6.25μg/ml的肽。在分配至平板前通过反复吸取将肽与细胞混合(备选地可将肽加入单独孔),轻轻摇动平板2分钟。在37℃5%CO2的培养箱中温育。次日通过用无血清RPMI培养基洗涤两次去除未结合的肽并加入饱和量的抗-I类HLA单克隆抗体,异硫氰酸荧光素(FITC)-偶联的抗-HLAA2,A28(One Lambda,Canoga Park,CA)。在4℃温育30分钟后,用补充有0.5%BSA,0.05%(w/v)叠氮化钠,pH 7.4-7.6(染色缓冲液)的PBS洗涤细胞3次。(备选地可以将W6/32(Sigma)用作抗-I类HLA单克隆抗体,用染色缓冲液洗涤细胞,与偶联异硫氰酸荧光素(FITC)的羊F(ab’)抗鼠-IgG(Sigma)4℃温育30min并如上洗涤3次)。将细胞再悬浮于0.5ml染色缓冲液中。通过使用FACScan(Becton Dickinson,San Jose,CA)的流式细胞仪进行通过肽结合稳定的表面HLA-A2.1分子的分析。如果流式细胞计量术不是立即实行,可以通过加入四分之一体积的2%低聚甲醛并暗处保存在4℃来固定细胞。
实验的结果在图5中显示。发现SSX-241-49(SEQ ID NO.15)与HLA-A2.1结合,其结合程度与用作阳性对照的已知A2.1结合物FLPSDYFPSV(HBV18-27;SEQ ID NO:24)类似。将HLA-B44结合肽, AEMGKYSFY(SEQ ID NO:25)用作阴性对照。从阴性对照获得的荧光与当在测定中不使用肽时获得的信号类似。阳性和阴性对照肽是选自Current Protocols in Immunology p.18.3.2,John Wiley和Sons,New York,1998的表18.3.1。
7.免疫原性:
A.小鼠体内免疫
麻醉并在尾底避开侧尾静脉,使用100μl含有100nmol的SSX-241-49(SEQ ID NO.15)和20μg用50μl IFA(不完全弗氏佐剂)乳化的PBS中的HTL表位肽皮下注射HHD1转基因A*0201小鼠(Pascolo,S.,等,J.Exp.Med.185:2043-2051,1997)。
B.制备刺激细胞(LPS胚细胞)
对于每组免疫小鼠使用来源于2只稚鼠(naive mice)的脾,处死未免疫小鼠并将尸体放置于酒精中。使用无菌工具,刺穿小鼠左侧(较低的中间部分)皮肤的上皮层,暴露腹膜。用乙醇饱和腹膜,无菌取出脾。将脾放置于含有无血清培养基的培养皿中。通过使用来自3ml注射器的无菌柱塞捣碎脾来分离脾细胞。漂洗皿孔,将脾细胞收集在50ml锥形管中的无血清培养基中。将细胞离心(12000rpm,7min)并用RPMI洗涤一次。在RPMI-10%FCS(胎牛血清)中再悬浮新鲜脾细胞至浓度为每ml1x106细胞。加入25g/ml脂多糖和7μg/ml葡聚糖硫酸酯。在含有5%CO2的37℃T-75烧瓶中将细胞温育3天。将脾胚细胞收集在50ml试管中,离心(pellet)(12000rpm,7min),并在RPMI中再悬浮至3X107/ml。用50μg/ml引发肽(priming peptide)室温脉冲胚细胞4小时,25μg/ml丝裂霉素C 37℃处理20min,并用DMEM洗涤三次。
C.体外刺激
在LPS刺激胚细胞3天后和肽加样的同一天,如上处死接触过抗原的小鼠(免疫后14天)以取出脾。将3x106脾细胞与1x106LPS胚细胞/孔在DMEM培养基的24孔平板中在5%CO2的条件下37℃共培养,所述 DMEM培养基补充有10%FCS,5x10-5M β-巯基乙醇,100μg/ml链霉素和100IU/ml青霉素。在第3天向培养物加入5%(vol/vol)ConA上清液并在第7天在51Cr-释放测定中测定溶细胞活性。
D.测量CTL活性的铬释放测定
为了评估肽特异性溶解,将2x106T2细胞与100μCi铬酸钠加上50μg/ml肽一起37℃温育1小时。在温育期间,每15分钟将它们轻轻振荡。在标记和加样后,用10ml DMEM-10%FCS将细胞洗涤3次,在流出上清液后用新鲜的Kimwipe擦拭每个试管。将靶细胞再悬浮于DMEM-10%FBS浓度为1x105/ml。在DMEM-10%FCS中将效应细胞调整至1x 107/ml并在U-底96孔平板中制备100μl系列3倍稀释度的效应物。每孔加100μl靶细胞。为了测定自发释放和最大释放,对于每个靶子准备含有100μl靶细胞的6个附加孔。通过将靶细胞与100μl培养基温育来显示自发释放;通过将靶细胞与100μl 2%SDS温育来显示最大释放。然后将平板600rpm离心5分钟并在5%CO2和80%湿度条件下37℃温育4小时。在温育后,然后将平板1200rpm离心5min。收获上清液并用γ计数器计数。如下测定特异性裂解:%特异性释放=[(实验释放-自发释放)/(最大释放-自发释放)]x100。
在图6中显示证明肽脉冲的靶细胞特异性裂解的铬释放测定的结果。
8.与其它SSX蛋白质的交叉反应性:
SSX-241-49(SEQ ID NO.15)与其它SSX蛋白质的相同区域共享高度序列同一性。周围区域也通常已经十分保守。因此在所有5个序列中管家蛋白酶体可以在V49之后切割。此外,预测SSX-241-49与HLA-A*0201结合(参见表6)。通过用SSX-241-49免疫产生的CTL与表达其它SSX蛋白质的肿瘤细胞交叉反应。
表6.SSX
41-49
-A*0201预测结合
实施例4
聚簇分析(PSMA163-192)
在433A ABI肽合成仪上使用标准固相F-moc化学合成一种肽,AFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDM,PSMA163-192,(SEQ ID NO.30),其含有来源于前列腺特异性膜抗原的A1表位聚簇,PSMA168-190(SEQID NO.31)。在侧链脱保护和从树脂切割后,在反相制备HPLC C4柱上以下列条件:流速为4ml/min的线性AB梯度(5%B/min),其中洗脱剂A是0.1%TFA水溶液并且洗脱剂B是0.1%TFA的乙腈溶液,运行首先溶解在甲酸中,然后稀释在30%乙酸中的肽。将根据质谱分析,在时间16.642min处的含有期望肽的组分汇集和冻干。然后基本上如上所述将该肽进行蛋白酶体消化和质谱分析。在表7中总结来源于质谱的显著峰。
表7.PMSA
163-192
质量峰鉴定
黑体序列对应于预测与MHC结合的肽,参见表8。
N-末端池测序(pool sequence)分析
通过ABI 473A蛋白质测序仪(Applied Biosystems,Foster City,CA)将蛋白酶体消化一小时的一个等分试样(参见上述实施例3部分3)进行N-末端氨基酸序列分析。切割位点和效率的测定是基于测序循环(sequence cycle),蛋白质测序仪的重复产率和在分析序列中唯一的氨基酸的相对产率的考虑。即如果唯一的(在分析序列中)残基X只出现在第n个循环中,在它N-末端方向n-1个残基之前存在一个切割位点。除帮助解析在将质量指定为序列中的任何错读,这些数据还提供一种比质谱更可靠的各种片段相对产率的指示法。
对于PSMA163-192(SEQ ID NO.30)该池测序支持在V177后单一的主要切割位点和几个次要切割位点,特别是在Y179后的一个。综述在图7A-C中表示的结果显示下列各项:
第3循环的S表明底物N-末端的存在。
第5循环的Q表明底物N-末端的存在。
第1循环的N表明在V177后的切割。
第3循环的N表明在V175后的切割。注意表7中的片段176-192。
第5循环的T表明在V177后的切割。
第1至第3循环的T表明在R181,A180和Y179后愈加普通的切割。
只有这些的最后一项对应通过质谱检测的峰;163-179和180-192,参见表7。缺少其它可表明它们是在比质谱中检测更小的片段上。
第4,第8,和第10循环的K表明分别在E183,Y179和V177后的切割,
所有这些对应通过质谱观测到的片段。参见表7。
第1和第3循环的A分别表明底物N-末端的存在和在V177后的切割。
在第4和第8循环的P表明底物N-末端的存在。
第6和第10循环的G表明底物N-末端的存在。
第7循环的M表明底物N-末端的存在和/或在F185后的切割。
第15循环的M表明在V177后的切割。
第1循环可以表明在D191后的切割,参见表7。
第4和第13循环的R表明在V177后的切割。
第2和第11循环的R表明在Y179后的切割。
第2,第6和第13循环的V分别表明在V175,M169后的切割和底物N-末端的存在。注意表7中在176和170开始的片段。
第1,第2和第14循环的Y分别表明在V175,V177后的切割和底物N-末端的存在。
第11和第12循环的L分别表明在V177后的切割和底物N-末端的存在,是与其它数据最一致的解释。
与质谱结果相比我们发现第2,第5和第9循环的L分别与在F186,E183或M169,和Y179后的切割一致。参见表7。
表位鉴定
选择通过SYFPEITHI或NIH算法预测与HLA结合的具有8-10个氨基酸长序列的共C-末端片段进一步分析。方法的消化和预测步骤可以以任何顺序有效实行。尽管在此描述的蛋白酶体消化中使用的底物肽是特别设计来包括预测的HLA-A1结合序列,但是可事后检测实际的消化产物对其它MHC分子的实际或预测的结合。选择的结果在表8中显示。
表8.通过蛋白酶体产生的片段预测HLA结合
未预测
HLA-A*0201结合测定:
基本上如实施例3中所述使用PSMA168-177,GMPEGDLVYV,(SEQID NO.33)进行HLA-A*0201结合研究。如图8所示,在即使比阳性对照肽更低的浓度下该表位也显示显著的结合。在该测定中(并贯穿本公开内容)用作对照的Melan-A肽,ELAGIGILTV实际上是天然序列(EAAGIGILTV)的一种变体并且在该测定中显示高亲和力。
实施例5
聚簇分析(PSMA281-310)
在433A ABI肽合成仪上使用标准固相F-moc化学合成另一种肽,RGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMG,PSMA281-310,(SEQ ID NO.45),其含有来源于前列腺特异性膜抗原A1表位,PSMA283-307(SEQ ID NO.46)。在侧链脱保护和从树脂切割后,在反相制备HPLC C18柱上以下列 条件:流速为4ml/min的线性AB梯度(5%B/min),其中洗脱剂A是0.1%TFA水溶液并且洗脱剂B是0.1%TFA的乙腈溶液,运行去离子水(ddH2O)中的肽。将根据质谱分析,在时间17.061min处的含有期望肽的组分汇集和冻干。然后基本上如上所述将肽进行蛋白酶体消化和质谱分析。在表9中总结来源于质谱的显著峰。
表9.PSMA
281-310
质量峰鉴定
黑体序列对应于预测与MHC结合的肽,参见表10。
*只根据质量该峰也可以是296-310或288-303。
**只根据质量该峰也可以是298-307。HPLC与质谱的结合显示在一些较后的时间点该峰是两种物质的混合物。
只根据质量该峰也可以是289-298。
只根据质量该峰也可以是281-295或294-306。
§只根据质量该峰也可以是297-303。
#只根据质量该峰也可以是288-303。
N-末端池测序分析不支持任何这些备选的指定。
N-末端池测序分析
通过ABI 473A蛋白质测序仪(Applied Biosystems,Foster City,CA)将蛋白酶体消化一小时的一个等分试样(参见上述实施例3部分3)进行N-末端氨基酸序列分析。切割位点和效率的测定是基于测序循环(sequence cycle),蛋白质测序仪的重复产率和在分析序列中唯一的氨基酸的相对产率的考虑。即如果唯一的(在分析序列中)残基X只出现在第n个循环中,在它N-末端方向n-1个残基之前存在一个切割位点。除帮助解析在将质量指定为序列中的任何错读,这些数据还提供一种比质谱更可靠的各种片段相对产率的指示法。
对于PSMA 281-310 (SEQ ID NO.45)该池测序支持在其它次要切割位点中的V287和I297后的两个主要切割位点。综述图9中表示的结果显示下列各项:
第4和第11循环的S分别表明在V287后的切割和底物N-末端的存在。
第8循环的H表明在V287后的切割。相对于在10至11存在的高度下降,在位置9和10处缺乏峰高的下降,而不是表示测序反应中潜伏状态的峰可提示在A286和E285后也切割。
第2,第4和第7循环的D分别表明在Y299,I297和V294后的切割。
在表10中的任何片段中或在下面注释的备选指定中未观测到这最后 的切割。
第6循环的Q表明在I297后的切割。
第10和第12循环的M分别表明在Y299和I297后的切割。
表位鉴定
选择通过SYFPEITHI或NIH算法预测与HLA结合的具有8-10个氨基酸长序列的共C-末端片段进一步分析。方法的消化和预测步骤可以以任何顺序有效实行。尽管在此描述的蛋白酶体消化中使用的底物肽是特别设计来包括预测的HLA-A1结合序列,但是可事后检测实际的消化产物对其它MHC分子的实际或预测的结合。选择的结果在表10中显示。
表10.
通过蛋白酶体产生的片段:PSMA
281-310
预测HLA结合
如表10所示,将真实序列附加在表位N-末端经常可以产生对相同或不同MHC限制性元件仍然有效,甚至更好的表位。注意例如(G)LPSIPVHPI与HLA-A*0201的配对,其中通过依赖于N-末端修剪以产生针对HLA-B7,-B*5101,和Cw*0401的表位,可以将10-链节用作对几种MHC类型有效的疫苗。
HLA-A*0201结合测定:
基本上如上面实施例3和4中所述使用PSMA288-297,GLPSIPVHPI,(SEQ ID NO.48)进行HLA-A*0201结合研究。如图8所示,在即使比阳性对照肽更低的浓度下该表位也显示显著的结合。
实施例6
聚簇分析(PSMA454-481)
通过MPS(纯度>95%)合成另一种肽,SSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHLTKEL,PSMA454-481,(SEQ ID NO.55),其含有来源于前列腺特异性膜抗原的表位聚簇,如上所述将其进行蛋白酶体消化和质谱分析。在表11中总结来源于质谱的显著峰。
表11.PSMA
454-481
质量峰鉴定
黑体序列对应于预测与MHC结合的肽,参见表12。
*只基于质量该峰同样可以充分指定为肽455-472,然而蛋白酶体只去除N-末端氨基酸是不大可能的。如果问题重要可以通过N-末端测序解决它。
**基于质量该片段也可表示455-464。
表位鉴定
选择通过SYFPEITHI或NIH算法预测与HLA结合的具有8-10个氨基酸长序列的共C-末端片段进一步分析。方法的消化和预测步骤可以以任何顺序有效实行。尽管在此描述的蛋白酶体消化中使用的底物肽是特别设计来包括预测的HLA-A2.1结合序列,但是可事后检测实际的消化产物对其它MHC分子的实际或预测的结合。选择的结果在表12中显示。
表12.通过蛋白酶体产生的片段预测HLA结合
如表12所示,将真实序列附加在表位N-末端经常可以产生对相同或不同MHC限制性元件仍然有效,甚至更好的表位。注意例如(L)RVDCTPLMY(SEQ ID NOS 62和(63))与HLA-B*2702/5的配对,其中10-链节具有具体的(substantial)预测解离半衰期而共-C-末端9-链节没有。还注意SIEGNYTLRV(SEQ ID NO 57),一种预测的HLA-A*0201表位的情形, 通过依赖于N-末端修剪产生表位可以将其用作对HLA-B*5101有效的疫苗。
HLA-A*0201结合测定
基本上如上面实施例3中所述使用PSMA460-469,TLRVDCTPL,(SEQID NO.60)进行HLA-A*0201结合研究。如图10所示,发现该表位和HLA-A2.1以与用作阳性对照的已知A2.1结合物FLPSDYFPSV(HBV18-27;SEQ ID NO:24)类似程度的结合。此外,PSMA461-469,(SEQ ID NO.59)几乎也结合。
ELISPOT分析:PSMA 463-471 ,(SEQ ID NO.62)
通过使用50μl/孔的4μg/ml在包被缓冲液(35mM碳酸氢钠,15mM碳酸钠,pH9.5)中的鼠抗人γ-IFN单克隆抗体在4℃温育过夜,用捕捉抗体将硝化纤维基底(nitrocellulose-backed)的微量滴定板的孔包被。通过用PBS洗涤4次5min去除未结合抗体。然后通过加入200μl/孔含有10%血清的RPMI培养基并在室温温育1小时封闭膜上的未结合位点。将抗原刺激的CD8+T细胞,以1∶3的系列稀释接种于微量滴定板的孔中,使用100μl/孔,从2x105细胞/孔开始。(先前的抗原刺激基本上是如Scheibenbogen,C.等Int.J.Cancer 71:932-936,1997中所述)。将PSMA462-471(SEQ ID NO.62)加至终浓度为10μg/ml,IL-2至100U/ml,并且在5%CO2,水饱和空气中37℃培养细胞40小时。在该温育后,用200μl/孔的含有0.05%吐温-20的PBS(PBS-吐温)洗涤6次。加入检测抗体,50μl/孔的2g/ml在PBS+10%胎牛血清中的生物素化的鼠抗人γ-IFN单克隆抗体,并将平板在室温温育2小时。通过用200μl PBS-吐温洗涤4次除去未结合的检测抗体。将100μl抗生物素蛋白偶联的辣根过氧化物酶(Pharmingen,San Diego,CA)加至每个孔,并在室温温育1小时。通过用200μl PBS-吐温洗涤6次去除未结合酶。通过将20mg 3-amino9-ethylcoarbasole药片溶解在2.5ml N,N-二甲基甲酰胺并将那个溶液加至47.5ml 0.05M磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液(pH 5.0)来制备底物。在将以100μl/孔分配底物并于室温温育平板之前立即将25μl 30%H2O2加入底物溶 液中。在显色后(通常15-30min),通过用水洗涤平板终止反应。风干平板并使用立体显微镜对斑点计数。
图11显示检测PSMA463-471(SEQ ID NO.62)-反应性HLA-A1+CD8+T细胞,其是先前在HLA-A1+CD8+T细胞与自身树突细胞加上肽的培养物中产生。从不含肽的培养物中未检测到反应性(数据未显示)。在该情形中可以看到肽反应性T细胞是以2.2x104分之一至6.7x104分之一的频率存在于培养物中。由抗-HLA-A1单克隆抗体阻断γ-IFN产生的能力证明这确实是一种HLA-A1-限制性应答;参见图12。
实施例7
聚簇分析(PSMA653-687)
通过MPS(纯度>95%)合成另一种肽,FDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFY PSMA653-687,(SEQ ID NO.64),其含有来源于前列腺特异性膜抗原的A2表位聚簇,PSMA660-681(SEQ ID NO 65),并如上所述进行蛋白酶体消化和质谱分析。在表13中总结来源于质谱的显著峰。
表13.PSMA653-687质量峰鉴定
黑体序列对应于预测与MHC结合的肽,参见表13。
*仅仅基于质量该峰同样可以充分指定为在654开始的肽,然而蛋白酶体只去除N-末端氨基酸被认为不大可能。如果问题重要,可以通过N-末端测序解决它。
**仅仅基于质量这些峰可以已指定为内部片段,但考虑到消化的总体模式认为它不大可能。
表位鉴定
选择通过SYFPEITHI或NIH算法预测与HLA结合的具有8-10个氨基酸长序列的共C-末端片段进一步分析。方法的消化和预测步骤可以以任何顺序有效实行。尽管在此描述的蛋白酶体消化中使用的底物肽是特别设计来包括预测的HLA-A2.1结合序列,但是可事后检测实际的消化产物对其它MHC分子的实际或预测的结合。选择的结果在表12中显示。
表14.通过蛋白酶体产生的片段预测HLA结合
如表14所示,将真实序列附加在表位N-末端经常可以产生对相同或不同MHC限制性元件仍然有效,甚至更好的表位。注意例如(R)MMNDQLMFL(SEQ ID NOS.66和(67))与HLA-A*02的配对,其中10- 链节保持显著的(substantial)预测结合潜力。
HLA-A*0201结合测定
基本上如上面实施例3所述,使用PSMA663-671(SEQ ID NO.66)和PSMA662-671,RMMNDQLMFL(SEQ NO.67)进行HLA-A*0201结合研究。如图10,13和14所示,在即使比阳性对照肽(FLPSDYFPSV(HBV18-27);SEQ ID NO:24)低的浓度下该表位也显示显著的结合。尽管不是平行进行,与对照的比较提示PSMA662-671(其在亲和力方面接近MelanA肽)具有这两种PSMA肽的优越结合活性。
实施例8
用表位疫苗接种。
1.用肽疫苗接种:
A.结节内递送
使用为胰岛素递送开发的微型泵系统(MiniMed;Northridge,CA)将一种制剂,其包含在含有抗菌剂,抗氧化剂和免疫调制细胞因子的水性缓冲剂中的肽,连续几天注射于腹股沟淋巴结。为了模拟在自然感染中抗原呈递的动力学选择该灌输周期。
B.控释
使用本领域已知的可控PLGA微球体递送肽制剂,所述PLGA微球体改变肽的药物动力学和改善免疫原性。将该制剂注射或口服。
C.基因枪送递
制备一种肽制剂,其中将肽粘附在本领域已知的金微粒上。在基因枪中递送颗粒,其被高速加速以便穿透皮肤,将颗粒携带至包含pAPCs的皮肤组织中。
D.气溶胶送递
为了吸收于肺中适当的血管或淋巴组织之中将肽制剂作为一种本领 域已知的气溶胶吸入。
2.用核酸疫苗接种
使用微型泵系统,如MiniMed胰岛素泵将核酸疫苗注射于淋巴结中。为了模拟在自然感染中抗原呈递的动力学,经几天的灌输周期递送一种核酸构建体,其是在含有抗菌剂,抗氧化剂和免疫调制细胞因子的水性缓冲剂中配制。
任选地,使用控释物质,如PLGA微球体或其它生物可降解物质递送核酸构建体。将这些物质注射或口服。使用口服送递给予核酸疫苗,通过吸收于GALT组织中引发免疫应答。备选地,使用基因枪递送核酸疫苗,其中将核酸疫苗粘附在微细金颗粒上。为了吸收于肺中适当的血管或淋巴组织之中,还可以将核酸构建体作为气溶胶吸入
实施例9
测定表位疫苗的效力
1.四聚体分析:
使用I类四聚体分析来测定给药管家表位之前和之后动物中的T细胞频率。对表位应答的T细胞克隆扩增表明表位由pAPCs呈递至T细胞。在对动物给药表位之前和之后测量针对管家表位的特异性T细胞频率,以确定表位是否呈递在pAPCs上。给药后表位特异性T细胞频率的增大表明表位是在pAPC上呈递。
2.增殖测定:
在用管家表位接种动物大约24小时后,使用为亲和纯化而固定在磁珠上的针对pAPCs上存在的特异性标记的单克隆抗体从PBMCs,脾细胞或淋巴结细胞收获pAPCs。使用该技术从粗血液或脾细胞制剂富集pAPCs。然后将富集的pAPCs用于针对T细胞克隆的增殖测定,所述T细胞克隆是已经产生并且对所关心管家表位是特异性的。将pAPCs与T细胞克隆共温育并通过测量T细胞放射性标记胸苷的掺入监测T细胞增殖活性。增殖表明对管家表位特异性的T细胞正被pAPCs上的表位所刺 激。
3.铬释放测定:
使用管家表位免疫人类患者或被遗传改造而表达人I类MHC的非人类动物。将来源于免疫受试者的T细胞用于标准铬释放测定,其使用人肿瘤目标或改造来表达相同I类MHC的目标。T细胞杀死目标表明患者中T细胞的刺激将有效杀死表达相似TuAA的肿瘤。
实施例10
通过淋巴结内免疫用裸DNA诱导CTL应答是有效的。
为了定量比较由不同途径免疫诱导的CD8+CTL应答使用一种质粒DNA疫苗(pEGFPL33A),其含有完全表征(well-characterized)的来源于LCMV-糖蛋白(G)(gp33;氨基酸33-41)(Oehen,S.,等.Immunology99,163-1692000)的免疫显性CTL表位,因为该系统允许广泛评估抗病毒CTL应答。用滴定剂量(200-0.02μg)的pEGFPL33A DNA或对照质粒pEGFP-N3免疫几组2只C57BL/6小鼠,其被i.m.(肌内),i.d.(皮内),i.spl.(脾内),或i.ln.(淋巴结内)给药。阳性对照小鼠i.v.(静脉内)接收500pfuLCMV。免疫10天后,分离脾细胞并在体外第二次再刺激之后测定gp33特异性CTL活性。如图15所示,当给药高剂量的pEFGPL33A DNA(200μg)时,i.m.或i.d.免疫诱导微弱的可检测的CTL应答。相反,仅使用2μgpEFGPL33A DNA i.spl.和使用少至0.2μg pEFGPL33A DNA i.ln.给予来免疫引发有效的gp33特异性CTL应答(图15;符号表示个体小鼠,并且显示了三个类似实验中的一个)。使用对照pEGFP-N3DNA免疫未引发任何可检测的gp33特异性CTL应答(数据未显示)。
实施例11
淋巴结内DNA免疫引发抗肿瘤免疫性
为了检验在i.ln.免疫后引发的有效CTL应答是否能够赋予针对外周肿瘤的保护,使用10μg pEFGPL33A DNA或对照pEGFP-N3DNA以6天的间隔免疫几组6只C57BL/6小鼠3次。在最后一次免疫5天后,将 小块表达gp33表位(EL4-33)的实体瘤s.c.转移至两胁腹并且每3-4天测量肿瘤的生长。尽管在已经反复用对照pEGFP-N3DNA免疫的小鼠中EL4-33肿瘤生长良好(图16),用pEFGPL33A DNAi.ln.免疫的小鼠迅速铲除外周EL4-33肿瘤(图16)。
实施例12
淋巴结中DNA含量的差异反映在淋巴结内和肌内注射后CTL应答中的差异。
i.ln.或i.m.注射pEFGPL33A DNA,并在6,12,24,48小时和4和30天后通过实时PCR评估注射或引流淋巴结的质粒含量。i.m.注射后,在6,12和24小时,注射淋巴结的质粒DNA含量大约比引流淋巴结的质粒DNA含量大3个数量级。在随后的时间点在引流淋巴结中未检测到质粒DNA(图17)。这与i.ln.注射相比使用i.m.以取得相似水平的CTL活性需要大3个数量级的剂量一致。同样i.ln.注射CD8-/-剔除小鼠,其不发展针对该表位的CTL应答,显示从淋巴结清除DNA不是因为CD8+CTL在淋巴结中杀死细胞。该观察也支持i.ln.给药将不激发对淋巴结的免疫病理损伤的结论。
实施例13
对人给药针对黑素瘤的治疗疫苗DNA质粒制剂
在1%苯甲醇,1%乙醇,0.5mM EDTA,柠檬酸盐-磷酸盐,pH 7.6中配制SYNCHROTOPE TA2M,一种黑素瘤疫苗,其编码HLA-A2-限制性酪氨酸酶表位SEQ ID NO.1和表位聚簇SEQ ID NO.69。为了装载至MINIMED 407C灌输泵中,制备80,160和320μg DNA/ml的等分试样。将SILHOUETTE灌输装置的导管置于通过超声成像显现的腹股沟淋巴结中。泵和灌输装置装配最初是设计用于将胰岛素递送至糖尿病患者,对于本申请用31mm导管替换通常的17mm导管。将灌输装置保持开放4天(约96小时),灌输速率为大约25μl/小时,导致大约2.4ml的总灌输体积。因此对于上述的3种浓度,每种灌输的总给药剂量分别是约200和400μg;并可以为800μg。开始后来的灌输之前给灌输的受试者10天 的休息期。假定在给药后质粒DNA在淋巴结中持续滞留(如在实施例12中)和在抗原消失后CTL通常的应答动力学,该时间表将足以保持免疫CTL应答。
实施例14
附加表位
已经将上述,特别是实施例3-7中的方法用于另外的合成肽底物,其导致鉴定如在下面表15-36中更多的表位。这里使用的底物是设计来鉴定管家蛋白酶体加工的产物,其产生HLA-A*0201结合表位,但是,如上所述,可以预测另外的MHC-结合反应性。然而公开了许多这样的反应性,这些列表意欲是示范的,而不是详尽的和限制性的。也如上讨论的,可将分析物的单独组分以变化的组合和顺序使用。消化NY-ESO-1底物136-163和150-177(分别为SEQ ID NOS.254和255)产生在MALDI-TOF质谱中飞行不好的片段。然而它们非常适合于N-末端肽池测序,由此允许鉴定切割位点。并不是所有底物必定满足实施例3中引用的表位聚簇的正式定义。一些聚簇如此大,例如NY-ESO-186-171,以致使用只跨越该聚簇一部分的底物更方便。在其它情形中,底物延伸至满足正式定义的聚簇以外以包括相邻的预测表位。在一些情形中,在设计合成底物之前实际结合活性可能已经确定制备什么底物,例如这里报道的MAGE表位,其中测定HLA结合活性来选择具有预测亲和力的肽。
实施例15
评估表位对非靶组织的交叉反应性
如上所提及,PSA是蛋白酶的激肽释放酶家族的一个成员,其自身是丝氨酸蛋白酶家族的一个亚型。虽然与PSA共享最大程度序列同一性的该家族成员也共享相似的表达图谱,但仍然可能具有显著不同表达图谱的蛋白质共享单独的表位序列。评估不希望有的交叉反应性的第一步是鉴定共享序列。完成这个的一种方法是使用“Search for short nearly exact matches”选项对SWISSPROT或Entrez非冗余肽序列数据库进行BLAST搜索表位序列;可在万维网(http://www)“ncbi.nlm.nih.gov/blast/index.html”上访问超文本传输协议。因此对SWISSPROT搜索SEQ ID NO.214,WVLTAAHCI(局限于人的记录),发现四个精确匹配,包括PSA。其它3个是来源于激肽释放酶1(组织激肽释放酶),和弹性蛋白酶2A和2B。虽然这9个氨基酸区段是相同的,但侧翼序列完全不同,特别是C-末端一侧,提示可进行不同加工并因此从这些其它的蛋白质可能不释放相同的表位。(请注意激肽释放酶命名是混乱的)。因此激肽释放酶1[登记号P06870]是与在关于肿瘤-相关抗原部分中上面关于PSA段落中提及的那种[登记号AAD13817]不同的一种蛋白质)。
可以以几种方法检验该可能性。可以将含有内嵌在这些蛋白质每一种的前后序列中的表位序列的合成肽进行如上所述的体外蛋白酶体消化和分析。备选地,为了确定表位是否被加工和呈递,在利用识别该表位的CD8+T细胞的细胞毒性(或类似的)测定中可以将通过天然或重组表达来表达这些其它蛋白质的细胞用作目标。
实施例16
表位聚簇
已知和预测的表位通常在蛋白质抗原序列中不均匀分布。如上所述,我们已经将含有比(已知或预测)表位平均密度更高的序列区段定义为表位聚簇。在表位聚簇的使用中是将它们的序列结合至在这里描述的蛋白酶体消化分析中使用的底物肽中。还可将表位聚簇用作疫苗组分。在题为EPITOPE CLUSTERS的美国专利申请No.09/561,571中发现表位聚 簇定义和使用的更详尽的讨论。
下列各表(37-60)表示使用SYFPEITHI和NIH算法预测HLA-A2结合的9-链节表位和重叠表位区域的表位密度,以及表位在整个蛋白中的表位密度,和这两个密度的比率。(由上述定义该比率必须超过1以成为簇;要求更高的这个比率值反映优选实施方案)。通过得分排列和通过它们在完整蛋白序列中的第一个氨基位置鉴定单独的9-链节。编号来源于蛋白质的每个可能的簇。将簇包含的完整序列内氨基酸位置范围表示为组成它的单独预测表位的等级。
表37
gp 100的BIMAS-NIH/Parker算法结果
表38
gp100的SYFPEITHI(Rammensee算法)结果
表39
gp100的聚簇预测
总AAs:661
总9-链节:653
SYFPEITHI 16:1099-链节
NIH 5:409-链节
*邻近但不重叠的表位
表40
PSMA的BIMAS-NIH/Parker算法结果
表41
PSMA的SYFPEITHI(Rammensee算法)结果
表42
前列腺特异性膜抗原(PSMA)的聚簇预测
总AAs:750
总9-链节:742
SYFPEITHI 16:889-链节
NIH 5:309-链节
*邻近但不重叠的表位
表43
PSA的BIMAS-NIH/Parker算法结果
表44
PSA的SYFPEITHI(Rammensee算法)结果
表45
前列腺特异性抗原(PSA)的聚簇预测
总AAs:261
总9-链节:253
SYFPEITHI 16:369-链节
NIH 5:179-链节
*这些聚簇在较不优选的聚簇#4的内部。
**包含一个邻近但不重叠的表位。
表46
PSCA的BIMAS-NIH/Parker算法结果
表47
PSCA的SYFPEITHI(Rammensee算法)结果
表48
前列腺干细胞抗原(PSCA)的聚簇预测
总AAs:123
总9-链节:115
SYFPEITHI 16:33;
SYFPEITHI 20:13
NIH 5:13
*该聚簇是较不优选的聚簇#3的内部。
在表49-60中将对于每种算法的表位预测和聚簇分析数据一起展示在单个表中。
表49
MAGE-1聚簇预测(NIH算法)
总AAs:309
总9-链节:301
NIH 5:199-链节
表50
MAGE-1的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:309
总9-链节:301
SYFPEITHI 16:469-链节
表51
MAGE-2的聚簇预测(NIH算法)
总AAs:314
总9-链节:308
NIH>=5:209-链节
表52
MAGE-2的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:314
总9-链节:308
SYFPEITHI 16:529-链节
表53
MAGE-3的聚簇预测(NIH算法)
总AAs:314
总9-链节:308
NIH 5:229-链节
表54
MAGE-3的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:314
总9-链节:308
SYFPEITHI 16:479-链节
表55
PRAME的聚簇预测(NIH算法)
总AAs:509
总9-链节:501
NIH 5:409-链节
表56
PRAME的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:509
总9-链节:501
SYFPEITHI 17:809-链节
PRAME的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:509
总9-链节:501
SYFPEITHI 17:809-链节
表57
CEA的聚簇预测(NIH算法)
总AAs:702
总9-链节:694
NIH 5:309-链节
表58
CEA的聚簇预测(SYFPEITHI算法)
总AAs:702
总9-链节:694
SYFPEITHI 16:819-链节
表59
SCP-1的聚簇预测(NIH算法)
总AAs:976
总9-链节:968
NIH 5:379-链节
表60
SCP-1的聚簇预测
总AAs:976
总9-链节:968
Rammensee 16:1189-链节
本发明的实施方案适用于并且考虑在这里提供的靶抗原序列中的变异,其包括在可以通过万维网访问的各种数据库中公开的那些。具体地对于在这里公开的具体序列,通过使用提供的登记号访问关于每种抗原的信息可以发现序列中的变异。
酪氨酸酶蛋白;SEQ ID NO 2
1 MLLAVLYCLL WSFQTSAGHF PRACVSSKNL MEKECCPPWS GDRSPCGQLSGRGSCQNILL
61 SNAPLGPQFP FTGVDDRESW PSVFYNRTCQ CSGNFMGFNC GNCKFGFWGPNCTERRLLVR
121RNIFDLSAPE KDKFFAYLTL AKHTISSDYV IPIGTYGQMK NGSTPMFNDINIYDLFVWMH
181YYVSMDALLG GSEIWRDIDF AHEAPAFLPW HRLFLLRWEQ EIQKLTGDENFTIPYWDWRD
241AEKCDICTDE YMGGQHPTNP NLLSPASFFS SWQIVCSRLE EYNSHQSLCNGTPEGPLRRN
301PGNHDKSRTP RLPSSADVEF CLSLTQYESG SMDKAANFSF RNTLEGFASPLTGIADASQS
361SMHNALHIYM NGTMSQVQGS ANDPIFLLHH AFVDSIFEQW LRRHRPLQEVYPEANAPIGH
421NRESYMVPFI PLYRNGDFFI SSKDLGYDYS YLQDSDPDSF QDYIKSYLEQASRIWSWLLG
481AAMVGAVLTA LLAGLVSLLC RHKRKQLPEE KQPLLMEKED YHSLYQSHLSSX-2蛋白;SEQ ID NO 3
1 MNGDDAFARR PTVGAQIPEK IQKAFDDIAK YFSKEEWEKM KASEKIFYVYMKRKYEAMTK
61 LGFKATLPPF MCNKRAEDFQ GNDLDNDPNR GNQVERPQMT FGRLQGISPKIMPKKPAEEG
121 NDSEEVPEAS GPQNDGKELC PPGKPTTSEK IHERSGPKRG EHAWTHRLRERKQLVIYEEI
181 SDPEEDDEPSMA蛋白;SEQ ID NO 4
1 MWNLLHETDS AVATARRPRW LCAGALVLAG GFFLLGFLFG WFIKSSNEATNITPKHNMKA
61 FLDELKAENI KKFLYNFTQI PHLAGTEQNF QLAKQIQSQW KEFGLDSVELAHYDVLLSYP
121 NKTHPNYISI INEDGNEIFN TSLFEPPPPG YENVSDIVPP FSAFSPQGMPEGDLVYVNYA
181 RTEDFFKLER DMKINCSGKI VIARYGKVFR GNKVKNAQLA GAKGVILYSDPADYFAPGVK
241 SYPDGWNLPG GGVQRGNILN LNGAGDPLTP GYPANEYAYR RGIAEAVGLPSIPVHPIGYY
301 DAQKLLEKMG GSAPPDSSWR GSLKVPYNVG PGFTGNFSTQ KVKMHIHSTNEVTRIYNVIG
361 TLRGAVEPDR YVILGGHRDS WVFGGIDPQS GAAVVHEIVR SFGTLKKEGWRPRRTILFAS
421 WDAEEFGLLG STEWAEENSR LLQERGVAYI NADSSIEGNY TLRVDCTPLMYSLVHNLTKE
481 LKSPDEGFEG KSLYESWTKK SPSPEFSGMP RISKLGSGND FEVFFQRLGIASGRARYTKN
541 WETNKFSGYP LYHSVYETYE LVEKFYDPMF KYHLTVAQVR GGMVFELANSIVLPFDCRDY
601 AVVLRKYADK IYSISMKHPQ EMKTYSVSFD SLFSAVKNFT EIASKFSERLQDFDKSNPIV
661 LRMMNDQLMF LERAFIDPLG LPDRPFYRHV IYAPSSHNKY AGESFPGIYDALFDIESKVD
721 PSKAWGEVKR QIYVAAFTVQ AAAETLSEVA
(R),mRNA;
Homo sapiens
ACCESSION NM_000372
VERSION NM_000372.1 GI:4507752
SEQ ID NO 2
/翻译=″MLLAVLYCLLWSFQTSAGHFPRACVSSKNLMEKECCPPWSGDRSPCGQLSGRGSCQNILLSNAPLGPQFPFTGVDDRESWPSVFYNRTCQCSGNFMGFNCGNCKFGFWGPNCTERRLLVRRNIFDLSAPEKDKFFAYLTLAKHTISSDYVIPIGTYGQMKNGSTPMFNDINIYDLFVWMHYYVSMDALLGGSEIWRDIDFAHEAPAFLPWHRLFLLRWEQEIQKLTGDENFTIPYWDWRDAEKCDICTDEYMGGQHPTNPNLLSPASFFSSWQIVCSRLEEYNSHQSLCNGTPEGPLRRNPGNHDKSRTPRLPSSADVEFCLSLTQYESGSMDKAANFSFRNTLEGFASPLTGIADASQSSMHNALHIYMNGTMSQVQGSANDPIFLLHHAFVDSIFEQWLRRHRPLQEVYPEANAPIGHNRESYMVPFIPLYRNGDFFISSKDLGYDYSYLQDSDPDSFQDYIKSYLEQASRIWSWLLGAAMVGAVLTALLAGLVSLLCRHKRKQLPEEKQPLLMEKEDYHSLYQSHL″
SEQ ID NO 5
起始1 atcactgtag tagtagctgg aaagagaaat ctgtgactcc aattagccagttcctgcaga
61 ccttgtgagg actagaggaa gaatgctcct ggctgttttg tactgcctgctgtggagttt
121 ccagacctcc gctggccatt tccctagagc ctgtgtctcc tctaagaacctgatggagaa
181 ggaatgctgt ccaccgtgga gcggggacag gagtccctgt ggccagctttcaggcagagg
241 ttcctgtcag aatatccttc tgtccaatgc accacttggg cctcaatttcccttcacagg
301 ggtggatgac cgggagtcgt ggccttccgt cttttataat aggacctgccagtgctctgg
361 caacttcatg ggattcaact gtggaaactg caagtttggc ttttggggaccaaactgcac
421 agagagacga ctcttggtga gaagaaacat cttcgatttg agtgccccagagaaggacaa
481 attttttgcc tacctcactt tagcaaagca taccatcagc tcagactatgtcatccccat
541 agggacctat ggccaaatga aaaatggatc aacacccatg tttaacgacatcaatattta
601 tgacctcttt gtctggatgc attattatgt gtcaatggat gcactgcttgggggatctga
661 aatctggaga gacattgatt ttgcccatga agcaccagct tttctgccttggcatagact
721 cttcttgttg cggtgggaac aagaaatcca gaagctgaca ggagatgaaaacttcactat
781 tccatattgg gactggcggg atgcagaaaa gtgtgacatt tgcacagatgagtacatggg
841 aggtcagcac cccacaaatc ctaacttact cagcccagca tcattcttctcctcttggca
901 gattgtctgt agccgattgg aggagtacaa cagccatcag tctttatgcaatggaacgcc
961 cgagggacct ttacggcgta atcctggaaa ccatgacaaa tccagaaccccaaggctccc
1021ctcttcagct gatgtagaat tttgcctgag tttgacccaa tatgaatctggttccatgga
1081taaagctgcc aatttcagct ttagaaatac actggaagga tttgctagtccacttactgg
1141gatagcggat gcctctcaaa gcagcatgca caatgccttg cacatctatatgaatggaac
1201aatgtcccag gtacagggat ctgccaacga tcctatcttc cttcttcaccatgcatttgt
1261tgacagtatt tttgagcagt ggctccgaag gcaccgtcct cttcaagaagtttatccaga
1321agccaatgca cccattggac ataaccggga atcctacatg gttccttttataccactgta
1381cagaaatggt gatttcttta tttcatccaa agatctgggc tatgactatagctatctaca
1441agattcagac ccagactctt ttcaagacta cattaagtcc tatttggaacaagcgagtcg
1501gatctggtca tggctccttg gggcggcgat ggtaggggcc gtcctcactgccctgctggc
1561agggcttgtg agcttgctgt gtcgtcacaa gagaaagcag cttcctgaagaaaagcagcc
1621actcctcatg gagaaagagg attaccacag cttgtatcag agccatttataaaaggctta
1681ggcaatagag tagggccaaa aagcctgacc tcactctaac tcaaagtaatgtccaggttc
1741ccagagaata tctgctggta tttttctgta aagaccattt gcaaaattgtaacctaatac
1801aaagtgtagc cttcttccaa ctcaggtaga acacacctgt ctttgtcttgctgttttcac
1861tcagcccttt taacattttc ccctaagccc atatgtctaa ggaaaggatgctatttggta
1921atgaggaact gttatttgta tgtgaattaa agtgctctta tttt
人滑膜肉瘤,X断裂点2(SSX2),mRNA。
ACCESSION NM_003147
VERSION NM_003147.1 GI:10337582
SEQ ID NO 3
/翻译=″MNGDDAFARRPTVGAQIPEKIQKAFDDIAKYFSKEEWEKMKASEKIFYVYMKRKYEAMTKLGFKATLPPFMCNKRAEDFQGNDLDNDPNRGNQVERPQMTFGRLQGISPKIMPKKPAEEGNDSEEVPEASGPQNDGKELCPPGKPTTSEKIHERSGPKRGEHAWTHRLRERKQLVIYEEISDPEEDDE″
SEQ ID NO 6
起始1 ctctctttcg attcttccat actcagagta cgcacggtct gattttctctttggattctt
61 ccaaaatcag agtcagactg ctcccggtgc catgaacgga gacgacgcctttgcaaggag
121 acccacggtt ggtgctcaaa taccagagaa gatccaaaag gccttcgatgatattgccaa
181 atacttctct aaggaagagt gggaaaagat gaaagcctcg gagaaaatcttctatgtgta
241 tatgaagaga aagtatgagg ctatgactaa actaggtttc aaggccaccctcccaccttt
301 catgtgtaat aaacgggccg aagacttcca ggggaatgat ttggataatgaccctaaccg
361 tgggaatcag gttgaacgtc ctcagatgac tttcggcagg ctccagggaatctccccgaa
421 gatcatgccc aagaagccag cagaggaagg aaatgattcg gaggaagtgccagaagcatc
481 tggcccacaa aatgatggga aagagctgtg ccccccggga aaaccaactacctctgagaa
541 gattcacgag agatctggac ccaaaagggg ggaacatgcc tggacccacagactgcgtga
601 gagaaaacag ctggtgattt atgaagagat cagcgaccct gaggaagatgacgagtaact
661 cccctcaggg atacgacaca tgcccatgat gagaagcaga acgtggtgacctttcacgaa
721 catgggcatg gctgcggacc cctcgtcatc aggtgcatag caagtg
人叶酸水解酶(前列腺特异性膜抗原)1(FOLH1),mRNA。
ACCESSION NM_004476
VERSION NM_004476.1 GI:4758397
/翻译=″MWNLLHETDSAVATARRPRWLCAGALVLAGGFFLLGFLFGWFIKSSNEATNITPKHNMKAFLDELKAENIKKFLYNFTQIPHLAGTEQNFQLAKQIQSQWKEFGLDSVELAHYDVLLSYPNKTHPNYISIINEDGNEIFNTSLFEPPPPGYENVSDIVPPFSAFSPQGMPEGDLVYVNYARTEDFFKLERDMKINCSGKIVIARYGKVFRGNKVKNAQ LAGAKGVILYSDPADYFAPGVKSYPDGWNLPGGGVQRGNILNLNGAGDPLTPGYPANEYAYRRGIAEAVGLPSIPVHPIGYYDAQKLLEKMGGSAPPDSSWRGSLKVPYNVGPGFTGNFSTOKVKMHIHSTNEVTRIYNVIGTLRGAVEPDRYVILGGHRDSWVFGGIDPQSGAAVVHEIVRSFGTLKKEGWRPRRTILFASWDAEEFGLLGSTEWAEENSRLLQERGVAYINADSSIEGNYTLRVDCTPLMYSLVHNLTKELKSPDEGFEGKSLYESWTKKSPSPEFSGMPRISKLGSGNDFEVFFQRLGIASGRARYTKNWETNKFSGYPLYHSVYETYELVEKFYDPMFKYHLTVAQVRGGMVFELANSIVLPFDCRDYAVVLRKYADKIYSISMKHPQEMKT YSVSFDSLFSAVKNFTEIASKFSERLQDFDKSNPIVLRMMNDQLMFLERAFIDPLGLPDRPFYRHVIYAPSSHNKYAGESFPGIYDALFDIESKVDPSKAWGEVKRQIYVAAFTVQAAAETLSEVA″
SEQ ID NO 7
起始 1 ctcaaaaggg gccggatttc cttctcctgg aggcagatgt tgcctctctctctcgctcgg
61 attggttcag tgcactctag aaacact gctgtggtggaga aactggaccccaggtctgga
121 gcgaattcca gcctgcaggg ctgataagcg aggcattagt gagattgagagagactttac
181 cccgccgtgg tggttggagg gcgcgcagta gagcagcagc acaggcgcgggtcccgggag
241 gccggctctg ctcgcgccga gatgtggaat ctccttcacg aaaccgactcggctgtggcc
301 accgcgcgcc gcccgcgctg gctgtgcgct ggggcgctgg tgctggcgggtggcttcttt
361 ctcctcggct tcctcttcgg gtggtttata aaatcctcca atgaagctactaacattact
421 ccaaagcata atatgaaagc atttttggat gaattgaaag ctgagaacatcaagaagttc
481 ttatataatt ttacacagat accacattta gcaggaacag aacaaaactttcagcttgca
541 aagcaaattc aatcccagtg gaaagaattt ggcctggatt ctgttgagctagcacattat
601 gatgtcctgt tgtcctaccc aaataagact catcccaact acatctcaataattaatgaa
661 gatggaaatg agattttcaa cacatcatta tttgaaccac ctcctccaggatatgaaaat
721 gtttcggata ttgtaccacc tttcagtgct ttctctcctc aaggaatgccagagggcgat
781 ctagtgtatg ttaactatgc acgaactgaa gacttcttta aattggaacgggacatgaaa
841 atcaattgct ctgggaaaat tgtaattgcc agatatggga aagttttcagaggaaataag
901 gttaaaaatg cccagctggc aggggccaaa ggagtcattc tctactccgaccctgctgac
961 tactttgctc ctggggtgaa gtcctatcca gatggttgga atcttcctggaggtggtgtc
1021cagcgtggaa atatcctaaa tctgaatggt gcaggagacc ctctcacaccaggttaccca
1081gcaaatgaat atgcttatag gcgtggaatt gcagaggctg ttggtcttccaagtattcct
1141gttcatccaa ttggatacta tgatgcacag aagctcctag aaaaaatgggtggctcagca
1201ccaccagata gcagctggag aggaagtctc aaagtgccct acaatgttggacctggcttt
1261actggaaact tttctacacaa aaagtcaag atgcacatcc actctaccaatgaagtgaca
1321agaatttaca atgtgatagg tactctcaga ggagcagtgg aaccagacagatatgtcatt
1381ctgggaggtc accgggactc atgggtgttt ggtggtattg accctcagagtggagcagct
1441gttgttcatg aaattgtgag gagctttgga acactgaaaa aggaagggtggagacctaga
1501agaacaattt tgtttgcaag ctgggatgca gaagaatttg gtcttcttggttctactgag
1561tgggcagagg agaattcaag actccttcaa gagcgtggcg tggcttatattaatgctgac
1621tcatctatag aaggaaacta cactctgaga gttgattgta caccgctgatgtacagcttg
1681gtacacaacc taacaaaaga gctgaaaagc cctgatgaag gctttgaaggcaaatctctt
1741tatgaaagtt ggactaaaaa aagtccttcc ccagagttca gtggcatgcccaggataagc
1801aaattgggat ctggaaatga ttttgaggtg ttcttccaac gacttggaattgcttcaggc
1861agagcacggt atactaaaaa ttgggaaaca aacaaattca gcggctatccactgtatcac
1921agtgtctatg aaacatatga gttggtggaa aagttttatg atccaatgtttaaatatcac
1981ctcactgtgg cccaggttcg aggagggatg gtgtttgagc tagccaattccatagtgctc
2041ccttttgatt gtcgagatta tgctgtagtt ttaagaaagt atgctgacaaaatctacagt
2101atttctatga aacatccaca ggaaatgaag acatacagtg tatcatttgattcacttttt
2161tctgcagtaa agaattttac agaaattgct tccaagttca gtgagagactccaggacttt
2221gacaaaagca acccaatagt attaagaatg atgaatgatc aactcatgtttctggaaaga
2281gcatttattg atccattagg gttaccagac aggccttttt ataggcatgtcatctatgct
2341ccaagcagcc acaacaagta tgcaggggag tcattcccag gaatttatgatgctctgttt
2401gatattgaaa gcaaagtgga cccttccaag gcctggggag aagtgaagagacagatttat
2461gttgcagcct tcacagtgca ggcagctgca gagactttga gtgaagtagcctaagaggat
2521tctttagaga atccgtattg aatttgtgtg gtatgtcact cagaaagaatcgtaatgggt
2581atattgataa attttaaaat tggtatattt gaaataaagt tgaatattatatataaaaaa
2641aaaaaaaaaa aaa
人黑素细胞特异性(pmel 17)基因,外显子2-5,和全cds。
ACCESSION U20093
VERSION U20093.1GI:1142634
SEQ ID NO 70
/翻译=″MDLVLKRCLLHLAVIGALLAVGATKVPRNQDWLGVSRQLRTKAWNRQLYPEWTEAQRLDCWRGGQVSLKVSNDGPTLIGANASFSIALNFPGSQKVLPDGQVIWVNNTIINGSQVWGGQPVYPQETDDACIFPDGGPCPSGSWSQKRSFVYVWKTWGQYWQVLGGPVSGLSIGTGRAMLGTHTMEVTVYHRRGSRSYVPLAHSSSAFTITDQVPFSVSVSQLRALDGGNKHFLRNQPLTFALQLHDPSGYLAEADLSYTWDFGDSSGTLISRAPVVTHTYLEPGPVTAQVVLQAAIPLTSCGSSPVPGTTDGHRPTAEAPNTTAGQVPTTEVVGTTPGQAPTAEPSGTTSVQVPTTEVISTAPVQMPTAESTGMTPEKVPVSEVMGTTLAEMSTPEATGMTPAEVSIVVLSGTTAAQVTTTEWVETTARELPIPEPEGPDASSIMSTESITGSLGPLLDGTATLRLVKRQVPLDCVLYRYGSFSVTLDIVQGIESAEILQAVPSGEGDAFELTVSCQGGLPKEACMEISSPGCQPPAQRLCQPVLPSPACQLVLHQILKGGSGTYCLNVSLADTNSLAVVSTQLIMPGQEAGLGQVPLIVGILLVLMAVVLASLIYRRRLMKQDFSVPQLPHSSSHWLRLPRIFCSCPIGENSPLLSGQQV″
SEQ ID NO 80
ORIGIN
1 gtgctaaaaa gatgccttct tcatttggct gtgataggtg ctttgtggctgtgggggcta
61 caaaagtacc cagaaaccag gactggcttg gtgtctcaag gcaactcagaaccaaagcct
121 ggaacaggca gctgtatcca gagtggacag aagcccagag acttgactgctggagaggtg
181 gtcaagtgtc cctcaaggtc agtaatgatg ggcctacact gattggtgcaaatgcctcct
241 tctctattgc cttgaacttc cctggaagcc aaaaggtatt gccagatgggcaggttatct
301 gggtcaacaa taccatcatc aatgggagcc aggtgtgggg aggacagccagtgtatcccc
361 aggaaactga cgatgcctgc atcttccctg atggtggacc ttgcccatctggctcttggt
421 ctcagaagag aagctttgtt tatgtctgga agacctgggg tgagggactcccttctcagc
481 ctatcatcca cacttgtgtt tacttctttc tacctgatca cctttcttttggccgcccct
541 tccaccttaa cttctgtgat tttctctaat cttcattttc ctcttagatcttttctcttt
601 cttagcacct agcccccttc aagctctatc ataattcttt ctggcaactcttggcctcaa
661 ttgtagtcct accccatgga atgcctcatt aggacccctt ccctgtccccccatatcaca
721 gccttccaaa caccctcaga agtaatcata cttcctgacc tcccatctccagtgccgttt
781 cgaagcctgt ccctcagtcc cctttgacca gtaatctctt cttccttgcttttcattcca
841 aaaatgcttc aggccaatac tggcaagttc tagggggccc agtgtctgggctgagcattg
901 ggacaggcag ggcaatgctg ggcacacaca ccatggaagt gactgtctaccatcgccggg
961 gatcccggag ctatgtgcct cttgctcatt ccagctcagc cttcaccattactggtaagg
1021gttcaggaag ggcaaggcca gttgtagggc aaagagaagg cagggaggcttggatggact
1081gcaaaggaga aaggtgaaat gctgtgcaaa cttaaagtag aagggccaggaagacctagg
1141cagagaaatg tgaggcttag tgccagtgaa gggccagcca gtcagcttggagttggaggg
1201tgtggctgtg aaaggagaag ctgtggctca ggcctggttc tcaccttttctggctccaat
1261cccagaccag gtgcctttct ccgtgagcgt gtcccagttg cgggccttggatggagggaa
1321caagcacttc ctgagaaatc agcctctgac ctttgccctc cagctccatgaccccagtgg
1381ctatctggct gaagctgacc tctcctacac ctgggacttt ggagacagtagtggaaccct
1441gatctctcgg gcacctgtgg tcactcatac ttacctggag cctggcccagtcactgccca
1501ggtggtcctg caggctgcca ttcctctcac ctcctgtggc tcctccccagttccaggcac
1561cacagatggg cacaggccaa ctgcagaggc ccctaacacc acagctggccaagtgcctac
1621tacagaagtt gtgggtacta cacctggtca ggcgccaact gcagagccctctggaaccac
1681atctgtgcag gtgccaacca ctgaagtcat aagcactgca cctgtgcagatgccaactgc
1741agagagcaca ggtatgacac ctgagaaggt gccagtttca gaggtcatgggtaccacact
1801ggcagagatg tcaactccag aggctacagg tatgacacct gcagaggtatcaattgtggt
1861gctttctgga accacagctg cacaggtaac aactacagag tgggtggagaccacagctag
1921agagctacct atccctgagc ctgaaggtcc agatgccagc tcaatcatgtctacggaaag
1981tattacaggt tccctgggcc ccctgctgga tggtacagcc accttaaggctggtgaagag
2041acaagtcccc ctggattgtg ttctgtatcg atatggttcc ttttccgtcaccctggacat
2101tgtccagggt attgaaagtg ccgagatcct gcaggctgtg ccgtccggtgagggggatgc
2161atttgagctg actgtgtcct gccaaggcgg gctgcccaag gaagcctgcatggagatctc
2221atcgccaggg tgccagcccc ctgcccagcg gctgtgccag cctgtgctacccagcccagc
2281ctgccagctg gttctgcacc agatactgaa gggtggctcg gggacatactgcctcaatgt
2341gtctctggct gataccaaca gcctggcagt ggtcagcacc cagcttatcatgcctggtag
2401gtccttggac agagactaag tgaggaggga agtggataga ggggacagctggcaagcagc
2461agacatgagt gaagcagtgc ctgggattct tctcacaggt caagaagcaggccttgggca
2521ggttccgctg atcgtgggca tcttgctggt gttgatggct gtggtccttgcatctctgat
2581atataggcgc agacttatga agcaagactt ctccgtaccc cagttgccacatagcagcag
2641tcactggctg cgtctacccc gcatcttctg ctcttgtccc attggtgagaatagccccct
2701cctcagtggg cagcaggtct gagtactctc atatgatgct gtgattttcctggagttgac
2761agaaacacct atatttcccc cagtcttccc tgggagacta ctattaactgaaataaa
//
人激肽释放酶3,(前列腺特异性抗原)(KLK3),mRNA。
ACCESSION NM_001648
VERSION NM_001648.1 GI:4502172
SEQ ID NO 78
/翻译=″MWVPVVFLTLSVTWIGAAPLILSRIVGGWECEKHSQPWQVLVASRGRAVCGGVLVHPQWVLTAAHCIRNKSVILLGRHSLFHPEDTGQVFQVSHSFPHPLYDMSLLKNRFLRPGDDSSHDLMLLRLSEPAELTDAVKVMDLPTQEPALGTTCYASGWGSIEPEEFLTPKKLQCVDLHVISNDVCAQVHPQKVTKFMLCAGRWTGGKSTCSGDSGGPLVCNGVLQGITSWGSEPCALPERPSLYTKVVHYRKWIKDTIVANP″
SEQ ID NO 86
起始 1 agccccaagc ttaccacctg cacccggaga gctgtgtgtc accatgtgggtcccggttgt
61 cttcctcacc ctgtccgtga cgtggattgg tgctgcaccc ctcatcctgtctcggattgt
121 gggaggctgg gagtgcgaga agcattccca accctggcag gtgcttgtggcctctcgtgg
181 cagggcagtc tgcggcggtg ttctggtgca cccccagtgg gtcctcacagctgcccactg
241 catcaggaac aaaagcgtga tcttgctggg tcggcacagc ctgtttcatcctgaagacac
301 aggccaggta tttcaggtca gccacagctt cccacacccg ctctacgatatgagcctcct
361 gaagaatcga ttcctcaggc caggtgatga ctccagccac gacctcatgctgctccgcct
421 gtcagagcct gccgagctca cggatgctgt gaaggtcatg gacctgcccacccaggagcc
481 agcactgggg accacctgct acgcctcagg ctggggcagc attgaaccag
aggagttctt
541 gaccccaaag aaacttcagt gtgtggacct ccatgttatt tccaatgacgtgtgtgcgca
601 agttcaccct cagaaggtga ccaagttcat gctgtgtgct ggacgctggacagggggcaa
661 aagcacctgc tcgggtgatt ctgggggccc acttgtctgt aatggtgtgcttcaaggtat
721 cacgtcatgg ggcagtgaac catgtgccct gcccgaaagg ccttccctgtacaccaaggt
781 ggtgcattac cggaagtgga tcaaggacac catcgtggcc aacccctgagcacccctatc
841 aaccccctat tgtagtaaac ttggaacctt ggaaatgacc aggccaagactcaagcctcc
901 ccagttctac tgacctttgt ccttaggtgt gaggtccagg gttgctaggaaaagaaatca
961 gcagacacag gtgtagacca gagtgtttct taaatggtgt aattttgtcctctctgtgtc
1021ctggggaata ctggccatgc ctggagacat atcactcaat ttctctgaggacacagatag
1081gatggggtgt ctgtgttatt tgtggggtac agagatgaaa gaggggtgggatccacactg
1141agagagtgga gagtgacatg tgctggacac tgtccatgaa gcactgagcagaagctggag
1201gcacaacgca ccagacactc acagcaagga tggagctgaa aacataacccactctgtcct
1261ggaggcactg ggaagcctag agaaggctgt gagccaagga gggagggtcttcctttggca
1321tgggatgggg atgaagtaag gagagggact ggaccccctg gaagctgattcactatgggg
1381ggaggtgtat tgaagtcctc cagacaaccc tcagatttga tgatttcctagtagaactca
1441cagaaataaa gagctgttat actgtg
//
人自身免疫原性癌/睾丸抗原NY-ESO-1mRNA,全cds
ACCESSION U87459
VERSION U87459.1 GI:1890098
SEQ ID NO 74
/翻译=″MQAEGRGTGGSTGDADGPGGPGIPDGPGGNAGGPGEAGATGGRGPRGAGAARASGPGGGAPRGPHGGAASGLNGCCRCGARGPESRLLEFYLAMPFATPMEAELARRSLAQDAPPLPVPGVLLKEFTVSGNILTIRLTAADHRQLQLSISSCLQQLSLLMWITQCFLPVFLAQPPSGQRR″
SEQ ID NO 84
起始
1 atcctcgtgg gccctgacct tctctctgag agccgggcag aggctccggagccatgcagg
61 ccgaaggccg gggcacaggg ggttcgacgg gcgatgctga tggcccaggaggccctggca
121ttcctgatgg cccagggggc aatgctggcg gcccaggaga ggcgggtgccacgggcggca
181gaggtccccg gggcgcaggg gcagcaaggg cctcggggcc gggaggaggcgccccgcggg
241gtccgcatgg cggcgcggct tcagggctga atggatgctg cagatgcggggccagggggc
301cggagagccg cctgcttgag ttctacctcg ccatgccttt cgcgacacccatggaagcag
361agctggcccg caggagcctg gcccaggatg ccccaccgct tcccgtgccaggggtgcttc
421tgaaggagtt cactgtgtcc ggcaacatac tgactatccg actgactgctgcagaccacc
481gccaactgca gctctccatc agctcctgtc tccagcagct ttccctgttgatgtggatca
541cgcagtgctt tctgcccgtg tttttggctc agcctccctc agggcagaggcgctaagccc
601agcctggcgc cccttcctag gtcatgcctc ctcccctagg gaatggtcccagcacgagtg
661gccagttcat tgtgggggcc tgattgtttg tcgctggagg aggacggcttacatgtttgt
721ttctgtagaa aataaaactg agctacgaaa aa
//
LAGE-1a蛋白(人)
ACCESSION CAA11116
PID g3255959
VERSION CAA11116.1 GI:3255959
SEQ ID NO 75
起始1 mqaegrgtgg stgdadgpgg pgipdgpggn aggpgeagat ggrgprgagaarasgprgga
61 prgphggaas aqdgrcpcga rrpdsrllel hitmpfsspm eaelvrrilsrdaaplprpg
121 avlkdftvsg nllfirltaa dhrqlqlsis sclqqlsllm witqcflpvflaqapsgqrr
181
//
LAGE-1b蛋白(人)
ACCESSION CAA11117
PID g3255960
VERSION CAA11117.1 GI:3255960
SEQ ID NO 76
起始
1 mqaegrgtgg stgdadgpgg pgipdgpggn aggpgeagat ggrgprgagaarasgprgga
61 prgphggaas aqdgrcpcga rrpdsrllel hitmpfsspm eaelvrrilsrdaaplprpg
121avlkdftvsg nllfmsvwdq dregagrmrv vgwglgsasp egqkardlrtpkhkvseqrp
181gtpgppppeg aqgdgcrgva fnvmfsaphi
//
人抗原(MAGE-1)基因,全cds,
ACCESSION M77481
VERSION M77481.1 GI:416114
SEQ ID NO 71
/翻译=″MSLEQRSLHCKPEEALEAQQEALGLVCVQAATSSSSPLVLGTLEEVPTAGSTDPPQSPQGASAFPTTINFTRQRQPSEGSSSREEEGPSTSCILESLFRAVITKKVADLVGFLLLKYRAREPVTKAEMLESVIKNYKHCFPEIFGKASESLQLVFGIDVKEADPTGHSYVLVTCLGLSYDGLLGDNQIMPKTGFLIIVLVMIAMEGGHAPEEEIWEELSVMEVYDGREHSAYGEPRKLLTQDLVQEKYLEYRQVPDSDPARYEFLWGPRALAETSYVKVLEYVIKVSARVRFFFPSLREAALREEEEGV″
SEQ ID NO 81
起始 1 ggatccaggc cctgccagga aaaatataag ggccctgcgt gagaacagagggggtcatcc
61 actgcatgag agtggggatg tcacagagtc cagcccaccc tcctggtagcactgagaagc
121 cagggctgtg cttgcggtct gcaccctgag ggcccgtgga ttcctcttcctggagctcca
181 ggaaccaggc agtgaggcct tggtctgaga cagtatcctc aggtcacagagcagaggatg
241 cacagggtgt gccagcagtg aatgtttgcc ctgaatgcac accaagggccccacctgcca
301 caggacacat aggactccac agagtctggc ctcacctccc tactgtcagtcctgtagaat
361 cgacctctgc tggccggctg taccctgagt accctctcac ttcctccttcaggttttcag
421 gggacaggcc aacccagagg acaggattcc ctggaggcca cagaggagcaccaaggagaa
481 gatctgtaag taggcctttg ttagagtctc caaggttcag ttctcagctgaggcctctca
541 cacactccct ctctccccag gcctgtgggt cttcattgcc cagctcctgcccacactcct
601 gcctgctgcc ctgacgagag tcatcatgtc tcttgagcag aggagtctgcactgcaagcc
661 tgaggaagcc cttgaggccc aacaagaggc cctgggcctg gtgtgtgtgcaggctgccac
721 ctcctcctcc tctcctctgg tcctgggcac cctggaggag gtgcccactgctgggtcaac
781 agatcctccc cagagtcctc agggagcctc cgcctttccc actaccatcaacttcactcg
841 acagaggcaa cccagtgagg gttccagcag ccgtgaagag gaggggccaagcacctcttg
901 tatcctggag tccttgttcc gagcagtaat cactaagaag gtggctgatttggttggttt
961 tctgctcctc aaatatcgag ccagggagcc agtcacaaag gcagaaatgctggagagtgt
1021catcaaaaat tacaagcact gttttcctga gatcttcggc aaagcctctgagtccttgca
1081gctggtcttt ggcattgacg tgaaggaagc agaccccacc ggccactcctatgtccttgt
1141cacctgccta ggtctctcct atgatggcct gctgggtgat aatcagatcatgcccaagac
1201aggcttcctg ataattgtcc tggtcatgat tgcaatggag ggcggccatgctcctgagga
1261ggaaatctgg gaggagctga gtgtgatgga ggtgtatgat gggagggagcacagtgccta
1321tggggagccc aggaagctgc tcacccaaga tttggtgcag gaaaagtacctggagtaccg
1381gcaggtgccg gacagtgatc ccgcacgcta tgagttcctg tggggtccaagggccctcgc
1441tgaaaccagc tatgtgaaag tccttgagta tgtgatcaag gtcagtgcaagagttcgctt
1501tttcttccca tccctgcgtg aagcagcttt gagagaggag gaagagggagtctgagcatg
1561agttgcagcc aaggccagtg ggagggggac tgggccagtg caccttccagggccgcgtcc
1621agcagcttcc cctgcctcgt gtgacatgag gcccattctt cactctgaagagagcggtca
1681gtgttctcag tagtaggttt ctgttctatt gggtgacttg gagatttatctttgttctct
1741tttggaattg ttcaaatgtt tttttttaag ggatggttga atgaacttcagcatccaagt
1801ttatgaatga cagcagtcac acagttctgt gtatatagtt taagggtaagagtcttgtgt
1861tttattcaga ttgggaaatc cattctattt tgtgaattgg gataataacagcagtggaat
1921aagtacttag aaatgtgaaa aatgagcagt aaaatagatg agataaagaactaaagaaat
1981taagagatag tcaattcttg ccttatacct cagtctattc tgtaaaatttttaaagatat
2041atgcatacct ggatttcctt ggcttctttg agaatgtaag agaaattaaatctgaataaa
2101gaattcttcc tgttcactgg ctcttttctt ctccatgcac tgagcatctgctttttggaa
2161ggccctgggt tagtagtgga gatgctaagg taagccagac tcatacccacccatagggtc
2221gtagagtcta ggagctgcag tcacgtaatc gaggtggcaa gatgtcctctaaagatgtag
2281ggaaaagtga gagaggggtg agggtgtggg gctccgggtg agagtggtggagtgtcaatg
2341ccctgagctg gggcattttg ggctttggga aactgcagtt ccttctgggggagctgattg
2401taatgatctt gggtggatcc
//
人MAGE-2基因外显子14,全cds
ACCESSION L18920
VERSION L18920.1 GI:436180
SEQ ID NO 72
/翻译=″MPLEQRSQHCKPEEGLEARGEALGLVGAQAPATEEQQTASSSSTLVEVTLGEVPAADSPSPPHSPQGASSFSTTINYTLWRQSDEGSSNQEEEGPRMFPDLESEFQAAISRKMVELVHFLLLKYRAREPVTKAEMLESVLRNCQDFFPVIFSKASEYLQLVFGIEVVEVVPISHLYILVTCLGLSYDGLLGDNQVMPKTGLLIIVLAIIAIEGDCAPEEKIWEELSMLEVFEGREDSVFAHPRKLLMQDLVQENYLEYRQVPGSDPACYEFLWGPRALIETSYVKVLHHTLKIGGEPHISYPPLHERALREGEE″
SEQ ID NO 82
起始 1 attccttcat caaacagcca ggagtgagga agaggaccct cctgagtgaggactgaggat
61 ccaccctcac cacatagtgg gaccacagaa tccagctcag cccctcttgtcagccctggt
121 acacactggc aatgatctca ccccgagcac acccctcccc ccaatgccacttcgggccga
181 ctcagagtca gagacttggt ctgaggggag cagacacaat cggcagaggatggcggtcca
241 ggctcagtct ggcatccaag tcaggacctt gagggatgac caaaggcccctcccaccccc
301 aactcccccg accccaccag gatctacagc ctcaggatcc ccgtcccaatccctacccct
361 acaccaacac catcttcatg cttaccccca cccccccatc cagatccccatccgggcaga
421 atccggttcc acccttgccg tgaacccagg gaagtcacgg gcccggatgtgacgccactg
481 acttgcacat tggaggtcag aggacagcga gattctcgcc ctgagcaacggcctgacgtc
541 ggcggaggga agcaggcgca ggctccgtga ggaggcaagg taagacgccgagggaggact
601 gaggcgggcc tcaccccaga cagagggccc ccaataatcc agcgctgcctctgctgccgg
661 gcctggacca ccctgcaggg gaagacttct caggctcagt cgccaccacctcaccccgcc
721 accccccgcc gctttaaccg cagggaactc tggcgtaaga gctttgtgtgaccagggcag
781 ggctggttag aagtgctcag ggcccagact cagccaggaa tcaaggtcaggaccccaaga
841 ggggactgag ggcaacccac cccctaccct cactaccaat cccatcccccaacaccaacc
901 ccacccccat ccctcaaaca ccaaccccac ccccaaaccc cattcccatctcctccccca
961 ccaccatcct ggcagaatcc ggctttgccc ctgcaatcaa cccacggaagctccgggaat
1021ggcggccaag cacgcggatc ctgacgttca catgtacggc taagggagggaaggggttgg
1081gtctcgtgag tatggccttt gggatgcaga ggaagggccc aggcctcctggaagacagtg
1141gagtccttag gggacccagc atgccaggac agggggccca ctgtacccctgtctcaaact
1201gagccacctt ttcattcagc cgagggaatc ctagggatgc agacccacttcagcaggggg
1261ttggggccca gcctgcgagg agtcaagggg aggaagaaga gggaggactgaggggacctt
1321ggagtccaga tcagtggcaa ccttgggctg ggggatcctg ggcacagtggccgaatgtgc
1381cccgtgctca ttgcaccttc agggtgacag agagttgagg gctgtggtctgagggctggg
1441acttcaggtc agcagaggga ggaatcccag gatctgccgg acccaaggtgtgcccccttc
1501atgaggactg gggatacccc cggcccagaa agaagggatg ccacagagtctggaagtccc
1561ttgttcttag ctctggggga acctgatcag ggatggccct aagtgacaatctcatttgta
1621ccacaggcag gaggttgggg aaccctcagg gagataaggt gttggtgtaaagaggagctg
1681tctgctcatt tcagggggtt gggggttgag aaagggcagt ccctggcaggagtaaagatg
1741agtaacccac aggaggccat cataacgttc accctagaac caaaggggtcagccctggac
1801aacgcacgtg ggggtaacag gatgtggccc ctcctcactt gtctttccagatctcaggga
1861gttgatgacc ttgttttcag aaggtgactc aggtcaacac aggggccccatctggtcgac
1921agatgcagtg gttctaggat ctgccaagca tccaggtgga gagcctgaggtaggattgag
1981ggtacccctg ggccagaatg cagcaagggg gccccataga aatctgccctgcccctgcgg
2041ttacttcaga gaccctgggc agggctgtca gctgaagtcc ctccattatcctgggatctt
2101tgatgtcagg gaaggggagg ccttggtctg aaggggctgg agtcaggtcagtagagggag
2161ggtctcaggc cctgccagga gtggacgtga ggaccaagcg gactcgtcacccaggacacc
2221tggactccaa tgaatttgga catctctcgt tgtccttcgc gggaggacctggtcacgtat
2281ggccagatgt gggtcccctc atatccttct gtaccatatc agggatgtgagttcttgaca
2341tgagagattc tcaagccagc aaaagggtgg gattaggccc tacaaggagaaaggtgaggg
2401ccctgagtga gcacagaggg gaccctccac ccaagtagag tggggacctcacggagtctg
2461gccaaccctg ctgagacttc tgggaatccg tggctgtgct tgcagtctgcacactgaagg
2521cccgtgcatt cctctcccag gaatcaggag ctccaggaac caggcagtgaggccttggtc
2581tgagtcagtg tcctcaggtc acagagcaga ggggacgcag acagtgccaacactgaaggt
2641ttgcctggaa tgcacaccaa gggccccacc cgcccagaac aaatgggactccagagggcc
2701tggcctcacc ctccctattc tcagtcctgc agcctgagca tgtgctggccggctgtaccc
2761tgaggtgccc tcccacttcc tccttcaggt tctgaggggg acaggctgacaagtaggacc
2821cgaggcactg gaggagcatt gaaggagaag atctgtaagt aagcctttgtcagagcctcc
2881aaggttcagt tcagttctca cctaaggcct cacacacgct ccttctctccccaggcctgt
2941gggtcttcat tgcccagctc ctgcccgcac tcctgcctgc tgccctgaccagagtcatca
3001tgcctcttga gcagaggagt cagcactgca agcctgaaga aggccttgaggcccgaggag
3061aggccctggg cctggtgggt gcgcaggctc ctgctactga ggagcagcagaccgcttctt
3121cctcttctac tctagtggaa gttaccctgg gggaggtgcc tgctgccgactcaccgagtc
3181ctccccacag tcctcaggga gcctccagct tctcgactac catcaactacactctttgga
3241gacaatccga tgagggctcc agcaaccaag aagaggaggg gccaagaatgtttcccgacc
3301tggagtccga gttccaagca gcaatcagta ggaagatggt tgagttggttcattttctgc
3361tcctcaagta tcgagccagg gagccggtca caaaggcaga aatgctggagagtgtcctca
3421gaaattgcca ggacttcttt cccgtgatct tcagcaaagc ctccgagtacttgcagctgg
3481tctttggcat cgaggtggtg gaagtggtcc ccatcagcca cttgtacatccttgtcacct
3541gcctgggcct ctcctacgat ggcctgctgg gcgacaatca ggtcatgcccaagacaggcc
3601tcctgataat cgtcctggcc ataatcgcaa tagagggcga ctgtgcccctgaggagaaaa
3661tctgggagga gctgagtatg ttggaggtgt ttgaggggag ggaggacagtgtcttcgcac
3721atcccaggaa gctgctcatg caagatctgg tgcaggaaaa ctacctggagtaccggcagg
3781tgcccggcag tgatcctgca tgctacgagt tcctgtgggg tccaagggccctcattgaaa
3841ccagctatgt gaaagtcctg caccatacac taaagatcgg tggagaacctcacatttcct
3901acccacccct gcatgaacgg gctttgagag agggagaaga gtgagtctcagcacatgttg
3961cagccagggc cagtgggagg gggtctgggc cagtgcacct tccagggccccatccattag
4021cttccactgc ctcgtgtgat atgaggccca ttcctgcctc tttgaagagagcagtcagca
4081ttcttagcag tgagtttctg ttctgttgga tgactttgag atttatctttctttcctgtt
4141ggaattgttc aaatgttcct tttaacaaat ggttggatga acttcagcatccaagtttat
4201gaatgacagt agtcacacat agtgctgttt atatagttta ggggtaagagtcctgttttt
4261tattcagatt gggaaatcca ttccattttg tgagttgtca cataataacagcagtggaat
4321atgtatttgc ctatattgtg aacgaattag cagtaaaata catgatacaaggaactcaaa
4381agatagttaa ttcttgcctt atacctcagt ctattatgta aaattaaaaatatgtgtatg
4441tttttgcttc tttgagaatg caaaagaaat taaatctgaa taaattcttcctgttcactg
4501gctcatttct ttaccattca ctcagcatct gctctgtgga aggccctggtagtagtggg
//
人MAGE-3抗原(MAGE-3)基因,全cds
ACCESSION U03735
VERSION U03735.1 GI:468825
SEQ ID NO 73
/翻译=″MPLEQRSQHCKPEEGLEARGEALGLVGAQAPATEEQEAASSSSTLVEVTLGEVPAAESPDPPQSPQGASSLPTTMNYPLWSQSYEDSSNQEEEGPSTFPDLESEFQAALSRKVAELVHFLLLKYRAREPVTKAEMLGSVVGNWQYFFPVIFSKASSSLQLVFGIELMEVDPIGHLYIFATCLGLSYDGLLGDNQIMPKAGLLIIVLAIIAREGDCAPEEKIWEELSVLEVFEGREDSILGDPKKLLTQHFVQENYLEYRQVPGSDPAcYEFLWGPRALVETSYVKVLHHMVKISGGPHISYPPLHEWVLREGEE″
SEQ ID NO 83
起始 1 acgcaggcag tgatgtcacc cagaccacac cccttccccc aatgccacttcagggggtac
61 tcagagtcag agacttggtc tgaggggagc agaagcaatc tgcagaggatggcggtccag
121 gctcagccag gcatcaactt caggaccctg agggatgacc gaaggccccgcccacccacc
181 cccaactccc ccgaccccac caggatctac agcctcagga cccccgtcccaatccttacc
241 ccttgcccca tcaccatctt catgcttacc tccaccccca tccgatccccatccaggcag
301 aatccagttc cacccctgcc cggaacccag ggtagtaccg ttgccaggatgtgacgccac
361 tgacttgcgc attggaggtc agaagaccgc gagattctcg ccctgagcaacgagcgacgg
421 cctgacgtcg gcggagggaa gccggcccag gctcggtgag gaggcaaggtaagacgctga
481 gggaggactg aggcgggcct cacctcagac agagggcctc aaataatccagtgctgcctc
541 tgctgccggg cctgggccac cccgcagggg aagacttcca ggctgggtcgccactacctc
601 accccgccga cccccgccgc tttagccacg gggaactctg gggacagagcttaatgtggc
661 cagggcaggg ctggttagaa gaggtcaggg cccacgctgt ggcaggaatcaaggtcagga
721 ccccgagagg gaactgaggg cagcctaacc accaccctca ccaccattcccgtcccccaa
781 cacccaaccc cacccccatc ccccattccc atccccaccc ccacccctatcctggcagaa
841 tccgggcttt gcccctggta tcaagtcacg gaagctccgg gaatggcggccaggcacgtg
901 agtcctgagg ttcacatcta cggctaaggg agggaagggg ttcggtatcgcgagtatggc
961 cgttgggagg cagcgaaagg gcccaggcct cctggaagac agtggagtcctgaggggacc
1021cagcatgcca ggacaggggg cccactgtac ccctgtctca aaccgaggcaccttttcatt
1081cggctacggg aatcctaggg atgcagaccc acttcagcag ggggttggggcccagccctg
1141cgaggagtca tggggaggaa gaagagggag gactgagggg accttggagtccagatcagt
1201ggcaaccttg ggctggggga tgctgggcac agtggccaaa tgtgctctgtgctcattgcg
1261ccttcagggt gaccagagag ttgagggctg tggtctgaag agtgggacttcaggtcagca
1321gagggaggaa tcccaggatc tgcagggccc aaggtgtacc cccaaggggcccctatgtgg
1381tggacagatg cagtggtcct aggatctgcc aagcatccag gtgaagagactgagggagga
1441ttgagggtac ccctgggaca gaatgcggac tgggggcccc ataaaaatctgccctgctcc
1501tgctgttacc tcagagagcc tgggcagggc tgtcagctga ggtccctccattatcctagg
1561atcactgatg tcagggaagg ggaagccttg gtctgagggg gctgcactcagggcagtaga
1621gggaggctct cagaccctac taggagtgga ggtgaggacc aagcagtctcctcacccagg
1681gtacatggac ttcaataaat ttggacatct ctcgttgtcc tttccgggaggacctgggaa
1741tgtatggcca gatgtgggtc ccctcatgtt tttctgtacc atatcaggtatgtgagttct
1801tgacatgaga gattctcagg ccagcagaag ggagggatta ggccctataaggagaaaggt
1861gagggccctg agtgagcaca gaggggatcc tccaccccag tagagtggggacctcacaga
1921gtctggccaa ccctcctgac agttctggga atccgtggct gcgtttgctgtctgcacatt
1981gggggcccgt ggattcctct cccaggaatc aggagctcca ggaacaaggcagtgaggact
2041tggtctgagg cagtgtcctc aggtcacaga gtagaggggg ctcagatagtgccaacggtg
2101aaggtttgcc ttggattcaa accaagggcc ccacctgccc cagaacacatggactccaga
2161gcgcctggcc tcaccctcaa tactttcagt cctgcagcct cagcatgcgctggccggatg
2221taccctgagg tgccctctca cttcctcctt caggttctga ggggacaggctgacctggag
2281gaccagaggc ccccggagga gcactgaagg agaagatctg taagtaagcctttgttagag
2341cctccaaggt tccattcagt actcagctga ggtctctcac atgctccctctctccccagg
2401ccagtgggtc tccattgccc agctcctgcc cacactcccg cctgttgccctgaccagagt
2461catcatgcct cttgagcaga ggagtcagca ctgcaagcct gaagaaggccttgaggcccg
2521aggagaggcc ctgggcctgg tgggtgcgca ggctcctgct actgaggagcaggaggctgc
2581ctcctcctct tctactctag ttgaagtcac cctgggggag gtgcctgctgccgagtcacc
2641agatcctccc cagagtcctc agggagcctc cagcctcccc actaccatgaactaccctct
2701ctggagccaa tcctatgagg actccagcaa ccaagaagag gaggggccaagcaccttccc
2761tgacctggag tccgagttcc aagcagcact cagtaggaag gtggccgagttggttcattt
2821tctgctcctc aagtatcgag ccagggagcc ggtcacaaag gcagaaatgctggggagtgt
2881cgtcggaaat tggcagtatt tctttcctgt gatcttcagc aaagcttccagttccttgca
2941gctggtcttt ggcatcgagc tgatggaagt ggaccccatc ggccacttgtacatctttgc
3001cacctgcctg ggcctctcct acgatggcct gctgggtgac aatcagatcatgcccaaggc
3061aggcctcctg ataatcgtcc tggccataat cgcaagagag ggcgactgtgcccctgagga
3121gaaaatctgg gaggagctga gtgtgttaga ggtgtttgag gggagggaagacagtatctt
3181gggggatccc aagaagctgc tcacccaaca tttcgtgcag gaaaactacctggagtaccg
3241gcaggtcccc ggcagtgatc ctgcatgtta tgaattcctg tggggtccaagggccctcgt
3301tgaaaccagc tatgtgaaag tcctgcacca tatggtaaag atcagtggaggacctcacat
3361ttcctaccca cccctgcatg agtgggtttt gagagagggg gaagagtgagtctgagcacg
3421agttgcagcc agggccagtg ggagggggtc tgggccagtg caccttccggggccgcatcc
3481cttagtttcc actgcctcct gtgacgtgag gcccattctt cactctttgaagcgagcagt
3541cagcattctt agtagtgggt ttctgttctg ttggatgact ttgagattattctttgtttc
3601ctgttggagt tgttcaaatg ttccttttaa cggatggttg aatgagcgtcagcatccagg
3661tttatgaatg acagtagtca cacatagtgc tgtttatata gtttaggagtaagagtcttg
3721ttttttactc aaattgggaa atccattcca ttttgtgaat tgtgacataataatagcagt
3781ggtaaaagta tttgcttaaa attgtgagcg aattagcaat aacatacatgagataactca
3841agaaatcaaa agatagttga ttcttgcctt gtacctcaat ctattctgtaaaattaaaca
3901aatatgcaaa ccaggatttc cttgacttct ttgagaatgc aagcgaaattaaatctgaat
3961aaataattct tcctcttcac tggctcgttt cttttccgtt cactcagcatctgctctgtg
4021ggaggccctg ggttagtagt ggggatgcta aggtaagcca gactcacgcctacccatagg
4081gctgtagagc ctaggacctg cagtcatata attaaggtgg tgagaagtcctgtaagatgt
4141agaggaaatg taagagaggg gtgagggtgt ggcgctccgg gtgagagtagtggagtgtca
4201gtgc
//
人前列腺干细胞抗原(PSCA)mRNA,全cds
ACCESSION AF043498
VERSION AF043498.1 GI:2909843
SEQ ID NO 79
/翻译=″MKAVLLALLMAGLALQPGTALLCYSCKAQVSNEDCLQVENCTQLGEQCWTARIRAVGLLTVISKGCSLNCVDDSQDYYVGKKNITCCDTDLCNASGAHALQPAAAILALLPALGLLLWGPGQL″
SEQ ID NO 87
起始 1 agggagaggc agtgaccatg aaggctgtgc tgcttgccct gttgatggcaggcttggccc
61 tgcagccagg cactgccctg ctgtgctact cctgcaaagc ccaggtgagcaacgaggact
121 gcctgcaggt ggagaactgc acccagctgg gggagcagtg ctggaccgcgcgcatccgcg
181 cagttggcct cctgaccgtc atcagcaaag gctgcagctt gaactgcgtggatgactcac
241 aggactacta cgtgggcaag aagaacatca cgtgctgtga caccgacttgtgcaacgcca
301 gcggggccca tgccctgcag ccggctgccg ccatccttgc gctgctccctgcactcggcc
361 tgctgctctg gggacccggc cagctatagg ctctgggggg ccccgctgcagcccacactg
421 ggtgtggtgc cccaggcctt tgtgccactc ctcacagaac ctggcccagtgggagcctgt
481 cctggttcct gaggcacatc ctaacgcaag tttgaccatg tatgtttgcaccccttttcc
541 ccnaaccctg accttcccat gggccttttc caggattccn accnggcagatcagttttag
601tganacanat ccgcntgcag atggcccctc caaccntttn tgttgntgtttccatggccc
661agcattttcc acccttaacc ctgtgttcag gcacttnttc ccccaggaagccttccctgc
721ccaccccatt tatgaattga gccaggtttg gtccgtggtg tcccccgcacccagcagggg
781acaggcaatc aggagggccc agtaaaggct gagatgaagt ggactgagtagaactggagg
841acaagagttg acgtgagttc ctgggagttt ccagagatgg ggcctggaggcctggaggaa
901ggggccaggc ctcacatttg tggggntccc gaatggcagc ctgagcacagcgtaggccct
961taataaacac ctgttggata agccaaaaaa
//
腺激肽释放酶1前体(组织激肽释放酶)(肾/胰腺/唾液腺激肽释放酶)
ACCESSION P06870
PID g125170
VERSION P06870 GI:125170
SEQ ID NO 600
起始
1 mwflvlclal slggtgaapp iqsrivggwe ceqhsqpwqa alyhfstfqcggilvhrqwv
61 ltaahcisdn yqlwlgrhnl fddentaqfv hvsesfphpg fnmsllenhtrqadedyshd
121lmllrltepa dtitdavkvv elptqepevg stclasgwgs iepenfsfpddlqcvdlkil
181pndecekahv qkvtdfmlcv ghleggkdtc vgdsggplmc dgvlqgvtswgyvpcgtpnk
241psvavrvlsy vkwiedtiae ns
//
弹性蛋白酶2A前体
ACCESSION P08217
PID g119255
VERSION P08217 GI:119255
SEQ ID NO 601
起始 1 mirtlllstl vagalscgdp typpyvtrvv ggeearpnsw pwqvslqyssngkwyhtcgg
61 slianswvlt aahcisssrt yrvglgrhnl yvaesgslav svskivvhkdwnsnqiskgn
121 diallklanp vsltdkiqla clppagtilp nnypcyvtgw grlqtngavpdvlqqgrllv
181 vdyatcsssa wwgssvktsm icaggdgvis scngdsggpl ncqasdgrwqvhgivsfgsr
241 lgcnyyhkps vftrvsnyid winsviann
//
胰弹性蛋白酶IIB[人]
ACCESSION NP_056933
PID g7705648
VERSION NP_056933.1GI:7705648
SEQ ID NO 602
起始1 mirtlllstl vagalscgvs tyapdmsrml ggeearpnsw pwqvslqyssngqwyhtcgg
61 slianswvlt aahcisssri yrvmlgqhnl yvaesgslav svskivvhkdwnsnqvskgn
121diallklanp vsltdkiqla clppagtilp nnypcyvtgw grlqtngalpddlkqgrllv
181vdyatcsssg wwgstvktnm icaggdgvic tcngdsggpl ncqasdgrwevhgigsltsv
241lgcnyyykps iftrvsnynd winsviann
//
PRAME人黑素瘤中优选表达的抗原
ACCESSION NM_006115
VERSION NM_006115.1 GI:5174640
SEQ ID NO 77
/翻译=″MERRRLWGSIQSRYISMSVWTSPRRLVELAGQSLLKDEALAIAALELLPRELFPPLFMAAFDGRHSQTLKAMVQAWPFTCLPLGVLMKGQHLHLETFKAVLDGLDVLLAQEVRPRRWKLQVLDLRKNSHQDFWTVWSGNRASLYSFPEPEAAQPMTKKRKVDGLSTEAEQPFIPVEVLVDLFLKEGACDELFSYLIEKVKRKKNVLRLCCKKLKIFAMPMQDIKMILKMVQLDSIEDLEVTCTWKLPTLAKFSPYLGQMINLRRLLLSHIHASSYISPEKEEQYIAQFTSQFLSLQCLQALYVDSLFFLRGRLDQLLRHVMNPLETLSITNCRLSEGDVMHLSQSPSVSQLSVLSLSGVMLTDVSPEPLQALLERASATLQDLVFDECGITDDQLLALLPSLSHCSQLTTLSFYGNSISISALQSLLQHLIGLSNLTHVLYPVPLESYEDIHGTLHLERLAYLHARLRELLCELGRPSMVWLSANPCPHCGDRTFYDPEPILCPCFMPN″
SEQ ID NO 85
起始1 gcttcagggt acagctcccc cgcagccaga agccgggcct gcagcccctcagcaccgctc
61 cgggacaccc cacccgcttc ccaggcgtga cctgtcaaca gcaacttcgcggtgtggtga
121actctctgag gaaaaaccat tttgattatt actctcagac gtgcgtggcaacaagtgact
181gagacctaga aatccaagcg ttggaggtcc tgaggccagc ctaagtcgcttcaaaatgga
241acgaaggcgt ttgtggggtt ccattcagag ccgatacatc agcatgagtgtgtggacaag
301cccacggaga cttgtggagc tggcagggca gagcctgctg aaggatgaggccctggccat
361tgccgccctg gagttgctgc ccagggagct cttcccgcca ctcttcatggcagcctttga
421 cgggagacac agccagaccc tgaaggcaat ggtgcaggcc tggcccttcacctgcctccc
481 tctgggagtg ctgatgaagg gacaacatct tcacctggag accttcaaagctgtgcttga
541 tggacttgat gtgctccttg cccaggaggt tcgccccagg aggtggaaacttcaagtgct
601 ggatttacgg aagaactctc atcaggactt ctggactgta tggtctggaaacagggccag
661 tctgtactca tttccagagc cagaagcagc tcagcccatg acaaagaagcgaaaagtaga
721 tggtttgagc acagaggcag agcagccctt cattccagta gaggtgctcgtagacctgtt
781 cctcaaggaa ggtgcctgtg atgaattgtt ctcctacctc attgagaaagtgaagcgaaa
841 gaaaaatgta ctacgcctgt gctgtaagaa gctgaagatt tttgcaatgcccatgcagga
901 tatcaagatg atcctgaaaa tggtgcagct ggactctatt gaagatttggaagtgacttg
961 tacctggaag ctacccacct tggcgaaatt ttctccttac ctgggccagatgattaatct
1021gcgtagactc ctcctctccc acatccatgc atcttcctac atttccccggagaaggaaga
1081gcagtatatc gcccagttca cctctcagtt cctcagtctg cagtgcctgcaggctctcta
1141tgtggactct ttatttttcc ttagaggccg cctggatcag ttgctcaggcacgtgatgaa
1201ccccttggaa accctctcaa taactaactg ccggctttcg gaaggggatgtgatgcatct
1261gtcccagagt cccagcgtca gtcagctaag tgtcctgagt ctaagtggggtcatgctgac
1321cgatgtaagt cccgagcccc tccaagctct gctggagaga gcctctgccaccctccagga
1381cctggtcttt gatgagtgtg ggatcacgga tgatcagctc cttgccctcctgccttccct
1441gagccactgc tcccagctta caaccttaag cttctacggg aattccatctccatatctgc
1501cttgcagagt ctcctgcagc acctcatcgg gctgagcaat ctgacccacgtgctgtatcc
1561tgtccccctg gagagttatg aggacatcca tggtaccctc cacctggaga ggcttgccta
1621tctgcatgcc aggctcaggg agttgctgtg tgagttgggg cggcccagcatggtctggct
1681tagtgccaac ccctgtcctc actgtgggga cagaaccttc tatgacccggagcccatcct
1741gtgcccctgt ttcatgccta actagctggg tgcacatatc aaatgcttcattctgcatac
1801ttggacacta aagccaggat gtgcatgcat cttgaagcaa caaagcagccacagtttcag
1861acaaatgttc agtgtgagtg aggaaaacat gttcagtgag gaaaaaacattcagacaaat
1921gttcagtgag gaaaaaaagg ggaagttggg gataggcagatgttgacttgaggagttaat
1981gtgatctttg gggagataca tcttatagag ttagaaatag aatctgaatttctaaaggga
2041gattctggct tgggaagtac atgtaggagt taatccctgt gtagactgttgtaaagaaac
2101tgttgaaaat aaagagaagc aatgtgaagc aaaaaaaaaa aaaaaaaa
纤连蛋白的ED-B结构域
1纤连蛋白基因ED-B结构域
ACCESSION X07717
VERSION X07717.1 GI:31406
SEQID NO 590
/翻译=″CTFDNLSPGLEYNVSVYTVKDDKESVPISDTIIPEVPQLTDLSFVDITDSSIGLRWTPLNSSTIIGYRITVVAAGEGIPIFEDFVDSSVGYYTVTGLEPGIDYDISVITLINGGESAPTTLTQQTAVPPPTDLRFTNIGPDTMRVTW″SEQ ID NO 591
起始
1 ctgcactttt gataacctga gtcccggcct ggagtacaat gtcagtgtttacactgtcaa
61 ggatgacaag gaaagtgtcc ctatctctga taccatcatc ccaggtaatagaaaataagc
121tgctatcctg agagtgacat tccaataaga gtggggatta gcatcttaatccccagatgc
181ttaagggtgt caactatatt tgggatttaa ttccgatctc ccagctgcactttccaaaac
241caagaagtca aagcagcgat ttggacaaaa tgcttgctgt taacactgctttactgtctg
301tgcttcactg ggatgctgtg tgttgcagcg agtatgtaat ggagtggcagccatggcttt
361aactctgtat tgtctgctca catggaagta tgactaaaac actgtcacgtgtctgtactc
421agtactgata ggctcaaagt aatatggtaa atgcatccca tcagtacatttctgcccgat
481 tttacaatcc atatcaattt ccaacagctg cctatttcat cttgcagtttcaaatccttc
541 tttttgaaaa ttggatttta aaaaaaagtt aagtaaaagt cacaccttcagggttgttct
601 ttcttgtggc cttgaaagac aacattgcaa aggcctgtcc taaggataggcttgtttgtc
661 cattgggtta taacataatg aaagcattgg acagatcgtg tccccctttggactcttcag
721 tagaatgctt ttactaacgc taattacatg ttttgattat gaatgaacctaaaatagtgg
781 caatggcctt aacctaggcc tgtctttcct cagcctgaat gtgcttttgaatggcacatt
841 tcacaccata cattcataat gcattagcgt tatggccatg atgttgtcatgagttttgta
901 tgggagaaaa aaaatcaatt tatcacccat ttattatttt ttccggttgttcatgcaagc
961 ttattttcta ctaaaacagt tttggaatta ttaaaagcat tgctgatacttacttcagat
1021attatgtcta ggctctaaga atggtttcga catcctaaac agccatatgatttttaggaa
1081tctgaacagt tcaaattgta ccctttaagg atgttttcaa aatgtaaaaaatatatatat
1141atatatatat tccctaaaag aatattcctg tttattcttc tagggaagcaaactgttcat
1201gatgcttagg aagtcttttc agagaattta aaacagattg catattaccatcattgcttt
1261aacattccac caattttact actagtaacc tgatatacac tgctttattttttcctcttt
1321ttttccctct attttccttt tgcctccccc tccctttgct ttgtaactcaatagaggtgc
1381cccaactcac tgacctaagc tttgttgata taaccgattc aagcatcggcctgaggtgga
1441ccccgctaaa ctcttccacc attattgggt accgcatcac agtagttgcggcaggagaag
1501gtatccctat ttttgaagat tttgtggact cctcagtagg atactacacagtcacagggc
1561tggagccggg cattgactat gatatcagcg ttatcactct cattaatggcggcgagagtg
1621cccctactac actgacacaa caaacgggtg aattttgaaa acttctgcgtttgagacata
1681gatggtgttg catgctgcca ccagttactc cggttaaata tggatgtttcatgggggaag
1741tcagcaattg gccaaagatt cagataggtg gaattggggg gataaggaatcaaatgcatc
1801tgctaaactg attggagaaa aacacatgca atatcttcag tacactctcatttaaaccac
1861aagtagatat aaagcctaga gaaatacaga tgtctgctct gttaaatataaaatagcaaa
1921tgttcattca atttgaagac ctagaatttt tcttcttaaa taccaaacacgaataccaaa
1981ttgcgtaagt accaattgat aagaatatat caccaaaatg taccatcatgctcttccttc
2041taccctttga taaactctac catgctcctt ctttgtagct aaaaacccatcaaaatttag
2101ggtagagtgg atgggcattg ttttgaggta ggagaaaagt aaacttgggaccattctagg
2161ttttgttgct gtcactaggt aaagaaacac ctctttaacc acagtctggggacaagcatg
2221caacatttta aaggttctct gctgtgcatg ggaaaagaaa catgctgagaaccaatttgc
2281atgaacatgt tcacttgtaa gtagaattca ctgaatggaa ctgtagctctagatatctca
2341catgggggga agtttaggac cctcttgtct ttttgtctgt gtgcatgtatttctttgtaa
2401agtactgcta tgtttctctt tgctgtgtgg caacttaagc ctcttcggcctgggataaaa
2461taatctgcag tggtattaat aatgtacata aagtcaacat atttgaaagtagattaaaat
2521cttttttaaa tatatcaatg atggcaaaaa ggttaaaggg ggcctaacagtactgtgtgt
2581agtgttttat ttttaacagt agtacactat aacttaaaat agacttagattagactgttt
2641gcatgattat gattctgttt cctttatgca tgaaatattg attttacctttccagctact
2701tcgttagctt taattttaaa atacattaac tgagtcttcc ttcttgttcgaaaccagctg
2761ttcctcctcc cactgacctg cgattcacca acattggtcc agacaccatgcgtgtcacct
2821ggg
//
CEA人癌胚抗原相关细胞粘附分子5(CEACAM5),mRNA。
ACCESSION NM_004363
VERSION NM_004363.1 GI:11386170
SEQ ID NO 592
/翻译=″MESPSAPPHRWCIPWQRLLLTASLLTFWNPPTTAKLTIESTPFNVAEGKEVLLLVHNLPQHLFGYSWYKGERVDGNRQIIGYVIGTQQATPGPAYSGREIIYPNASLLIQNIIQNDTGFYTLHVIKSDLVNEEATGQFRVYPELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPETQDATYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDTASYKCETQNPVSARRSDSVILNVLYGPDAPTISPLNTSYRSGENLNLSCHAASNPPAQYSWFVNGTFQQSTQELFIPNITVNNSGSYTCQAHNSDTGLNRTTVTTITVYAEPPKPFITSNNSNPVEDEDAVALTCEPEIQNTTYLWWVNNQSLPVSPRLQLSNDNRTLTLLSVTRNDVGPYECGIQNELSVDHSDPVILNVLYGPDDPTISPSYTYYRPGVNLSLSCHAASNPPAQYSWLIDGNIQQHTQELFISNITEKNSGLYTCQANNSASGHSRTTVKTITVSAELPKPSISSNNSKPVEDKDAVAFTCEPEAQNTTYLWWVNGQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLFNVTRNDARAYVCGIQNSVSANRSDPVTLDVLYGPDTPIISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTQVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSASGTSPGLSAGATVGIMIGVLVGVALI″
SEQ ID NO 593
起始
1 ctcagggcag agggaggaag gacagcagac cagacagtca cagcagccttgacaaaacgt
61 tcctggaact caagctcttc tccacagagg aggacagagc agacagcagagaccatggag
121tctccctcgg cccctcccca cagatggtgc atcccctggc agaggctcctgctcacagcc
181tcacttctaa ccttctggaa cccgcccacc actgccaagc tcactattgaatccacgccg
241ttcaatgtcg cagaggggaa ggaggtgctt ctacttgtcc acaatctgccccagcatctt
301tttggctaca gctggtacaa aggtgaaaga gtggatggca accgtcaaattataggatat
361gtaataggaa ctcaacaagc taccccaggg cccgcataca gtggtcgagagataatatac
421cccaatgcat ccctgctgat ccagaacatc atccagaatg acacaggattctacacccta
481cacgtcataa agtcagatct tgtgaatgaa gaagcaactg gccagttccgggtatacccg
541gagctgccca agccctccat ctccagcaac aactccaaac ccgtggaggacaaggatgct
601gtggccttca cctgtgaacc tgagactcag gacgcaacct acctgtggtgggtaaacaat
661cagagcctcc cggtcagtcc caggctgcag ctgtccaatg gcaacaggaccctcactcta
721ttcaatgtca caagaaatga cacagcaagc tacaaatgtg aaacccagaacccagtgagt
781gccaggcgca gtgattcagt catcctgaat gtcctctatg gcccggatgcccccaccatt
841tcccctctaa acacatctta cagatcaggg gaaaatctga acctctcctgccacgcagcc
901tctaacccac ctgcacagta ctcttggttt gtcaatggga ctttccagcaatccacccaa
961gagctcttta tccccaacat cactgtgaat aatagtggat cctatacgtgccaagcccat
1021aactcagaca ctggcctcaa taggaccaca gtcacgacga tcacagtctatgcagagcca
1081cccaaaccct tcatcaccag caacaactcc aaccccgtgg aggatgaggatgctgtagcc
1141ttaacctgtg aacctgagat tcagaacaca acctacctgt ggtgggtaaataatcagagc
1201ctcccggtca gtcccaggct gcagctgtcc aatgacaaca ggaccctcactctactcagt
1261gtcacaagga atgatgtagg accctatgag tgtggaatcc agaacgaattaagtgttgac
1321cacagcgacc cagtcatcct gaatgtcctc tatggcccag acgaccccaccatttccccc
1381tcatacacct attaccgtcc aggggtgaac ctcagcctct cctgccatgcagcctctaac
1441ccacctgcac agtattcttg gctgattgat gggaacatcc agcaacacacacaagagctc
1501tttatctcca acatcactga gaagaacagc ggactctata cctgccaggccaataactca
1561gccagtggcc acagcaggac tacagtcaag acaatcacag tctctgcggagctgcccaag
1621ccctccatct ccagcaacaa ctccaaaccc gtggaggaca aggatgctgtggccttcacc
1681tgtgaacctg aggctcagaa cacaacctac ctgtggtggg taaatggtcagagcctccca
1741gtcagtccca ggctgcagct gtccaatggc aacaggaccc tcactctattcaatgtcaca
1801agaaatgacg caagagccta tgtatgtgga atccagaact cagtgagtgcaaaccgcagt
1861gacccagtca ccctggatgt cctctatggg ccggacaccc ccatcatttcccccccagac
1921tcgtcttacc tttcgggagc gaacctcaac ctctcctgcc actcggcctctaacccatcc
1981ccgcagtatt cttggcgtat caatgggata ccgcagcaac acacacaagttctctttatc
2041gccaaaatca cgccaaataa taacgggacc tatgcctgtt ttgtctctaacttggctact
2101ggccgcaata attccatagt caagagcatc acagtctctg catctggaacttctcctggt
2161ctctcagctg gggccactgt cggcatcatg attggagtgc tggttggggttgctctgata
2221tagcagccct ggtgtagttt cttcatttca ggaagactga cagttgttttgcttcttcct
2281taaagcattt gcaacagcta cagtctaaaa ttgcttcttt accaaggatatttacagaaa
2341agactctgac cagagatcga gaccatccta gccaacatcg tgaaaccccatctctactaa
2401aaatacaaaa atgagctggg cttggtggcg cgcacctgta gtcccagttactcgggaggc
2461tgaggcagga gaatcgcttg aacccgggag gtggagattg cagtgagcccagatcgcacc
2521actgcactcc agtctggcaa cagagcaaga ctccatctca aaaagaaaagaaaagaagac
2581tctgacctgt actcttgaat acaagtttct gataccactg cactgtctgagaatttccaa
2641aactttaatg aactaactga cagcttcatg aaactgtcca ccaagatcaagcagagaaaa
2701taattaattt catgggacta aatgaactaa tgaggattgc tgattctttaaatgtcttgt
2761ttcccagatt tcaggaaact ttttttcttt taagctatcc actcttacagcaatttgata
2821aaatatactt ttgtgaacaa aaattgagac atttacattt tctccctatgtggtcgctcc
2881agacttggga aactattcat gaatatttat attgtatggt aatatagttattgcacaagt
2941tcaataaaaa tctgctctttgtataacag aaaaa
//
Her2/Neu人酪氨酸激酶型受体(HER2)mRNA,全cds
ACCESSION M11730
VERSION M11730.1 GI:183986
SEQ ID NO 594
/翻译=″MELAALCRWGLLLALLPPGAASTQVCTGTDMKLRLPASPETHLDMLRHLYQGCQVVQGNLELTYLPTNASLSFLQDIQEVQGYVLIAHNQVRQVPLQRLRIVRGTQLFEDNYALAVLDNGDPLNNTTPVTGASPGGLRELQLRSLTEILKGGVLIQRNPQLCYQDTILWKDIFHKNNQLALTLIDTNRSRACHPCSPMCKGSRCWGESSEDCQSLTRTVCAGGCARCKGPLPTDCCHEQCAAGCTGPKHSDCLACLHFNHSGICELHCPALVTYNTDTFESMPNPEGRYTFGASCVTACPYNYLSTDVGSCTLVCPLHNQEVTAEDGTQRCEKC SKPCARVCYGLGMEHLREVRAVTSANIQEFAGCKKIFGSLAFLPESFDGDPASNTAPLQPEQLQVFETLEEITGYLYISAWPDSLPDLSVFQNLQVIRGRILHNGAYSLTLQGLGISWLGLRSLRELGSGLALIHHNTHLCFVHTVPWDQLFRNPHQALLHTANRPEDECVGEGLACHQLCARGHCWGPGPTQCVNCSQFLRGQECVEECRVLQGLPREYVNARHCLPCHPECQPQNGSVTCFGPEADQCVACAHYKDPPFCVARCPSGVKPDLSYMPIWKFPDEEGACQPCPINCTHSCVDLDDKGCPAEQRASPLTSIVSAVVGILLVVVLGVVFGILIKRRQQKIRKYTMRRLLQETELVEPLTPSGAMPNQAQMRILKETELRKVKVLGSGAFGTVYKGIWIPDGENVKIPVAIKVLRENTSPKANKEILDEAYVMAGVGSPYVSRLLGICLTSTVQLVTQLMPYGCLLDHVRENRGRLGSQDLLNWCMQIAKGMSYLEDVRLVHRDLAARNVLVKSPNHVKITDFGLARLLDIDETEYHADGGKVPIKWMALESILRRRFTHQSDVWSYGVTVWELMTFGAKPYDGIPAREIPDLLEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDSECRPRFRELVSEFSRMARDPQRFVVIQNEDLGPASPLDSTFYRSLLEDDDMGDLVDAEEYLVPQQGFFCPDPAPGAGGMVHHRHRSSSTRSGGGDLTLGLEPSEEEAPRSPLAPSEGAGSDVFDGDLGMGAAKGLQSLPTHDPSPLQRYSEDPTVPLPSETDGYVAPLTCSPQPEYVNQPDVRPQPPSPREGPLPAARPAGATLERAKTLSPGKNGVVKDVFAFGGAVENPEYLTPQGGAAPQPHPPPAFSPAFDNLYYWDQDPPERGAPPSTFKGTPTAENPEYLGLDVPV″
SEQ ID NO 595
来源染色体17q21-q22。
1 aattctcgag ctcgtcgacc ggtcgacgag ctcgagggtc gacgagctcgagggcgcgcg
61 cccggccccc acccctcgca gcaccccgcg ccccgcgccc tcccagccgggtccagccgg
121 agccatgggg ccggagccgc agtgagcacc atggagctgg cggccttgtgccgctggggg
181 ctcctcctcg ccctcttgcc ccccggagcc gcgagcaccc aagtgtgcaccggcacagac
241 atgaagctgc ggctccctgc cagtcccgag acccacctgg acatgctccgccacctctac
301 cagggctgcc aggtggtgca gggaaacctg gaactcacct acctgcccaccaatgccagc
361 ctgtccttcc tgcaggatat ccaggaggtg cagggctacg tgctcatcgctcacaaccaa
421 gtgaggcagg tcccactgca gaggctgcgg attgtgcgag gcacccagctctttgaggac
481 aactatgccc tggccgtgct agacaatgga gacccgctga acaataccacccctgtcaca
541 ggggcctccc caggaggcct gcgggagctg cagcttcgaa gcctcacagagatcttgaaa
601 ggaggggtct tgatccagcg gaacccccag ctctgctacc aggacacgattttgtggaag
661 gacatcttcc acaagaacaa ccagctggct ctcacactga tagacaccaaccgctctcgg
721 gcctgccacc cctgttctcc gatgtgtaag ggctcccgct gctggggagagagttctgag
781 gattgtcaga gcctgacgcg cactgtctgt gccggtggct gtgcccgctgcaaggggcca
841 ctgcccactg actgctgcca tgagcagtgt gctgccggct gcacgggccccaagcactct
901 gactgcctgg cctgcctcca cttcaaccac agtggcatct gtgagctgcactgcccagcc
961 ctggtcacct acaacacaga cacgtttgag tccatgccca atcccgagggccggtataca
1021ttcggcgcca gctgtgtgac tgcctgtccc tacaactacc tttctacggacgtgggatcc
1081tgcaccctcg tctgccccct gcacaaccaa gaggtgacag cagaggatggaacacagcgg
1141tgtgagaagt gcagcaagcc ctgtgcccga gtgtgctatg gtctgggcatggagcacttg
1201cgagaggtga gggcagttac cagtgccaat atccaggagt ttgctggctgcaagaagatc
1261tttgggagcc tggcatttct gccggagagc tttgatgggg acccagcctccaacactgcc
1321ccgctccagc cagagcagct ccaagtgttt gagactctgg aagagatcacaggttaccta
1381tacatctcag catggccgga cagcctgcct gacctcagcg tcttccagaacctgcaagta
1441atccggggac gaattctgca caatggcgcc tactcgctga ccctgcaagggctgggcatc
1501agctggctgg ggctgcgctc actgagggaa ctgggcagtg gactggccctcatccaccat
1561aacacccacc tctgcttcgt gcacacggtg ccctgggacc agctctttcggaacccgcac
1621caagctctgc tccacactgc caaccggcca gaggacgagt gtgtgggcgagggcctggcc
1681tgccaccagc tgtgcgcccg agggcactgc tggggtccag ggcccacccagtgtgtcaac
1741tgcagccagt tccttcgggg ccaggagtgc gtggaggaat gccgagtactgcaggggctc
1801cccagggagt atgtgaatgc caggcactgt ttgccgtgcc accctgagtgtcagccccag
1861aatggctcag tgacctgttt tggaccggag gctgaccagt gtgtggcctgtgcccactat
1921aaggaccctc ccttctgcgt ggcccgctgc cccagcggtg tgaaacctgacctctcctac
1981atgcccatct ggaagtttcc agatgaggag ggcgcatgcc agccttgccccatcaactgc
2041acccactcct gtgtggacct ggatgacaag ggctgccccg ccgagcagagagccagccct
2101ctgacgtcca tcgtctctgc ggtggttggc attctgctgg tcgtggtcttgggggtggtc
2161tttgggatcc tcatcaagcg acggcagcag aagatccgga agtacacgatgcggagactg
2221ctgcaggaaa cggagctggt ggagccgctg acacctagcg gagcgatgcccaaccaggcg
2281cagatgcgga tcctgaaaga gacggagctg aggaaggtga aggtgcttggatctggcgct
2341tttggcacag tctacaaggg catctggatc cctgatgggg agaatgtgaaaattccagtg
2401gccatcaaag tgttgaggga aaacacatcc cccaaagcca acaaagaaatcttagacgaa
2461gcatacgtga tggctggtgt gggctcccca tatgtctccc gccttctgggcatctgcctg
2521acatccacgg tgcagctggt gacacagctt atgccctatg gctgcctcttagaccatgtc
2581cgggaaaacc gcggacgcct gggctcccag gacctgctga actggtgtatgcagattgcc
2641aaggggatga gctacctgga ggatgtgcgg ctcgtacaca gggacttggccgctcggaac
2701gtgctggtca agagtcccaa ccatgtcaaa attacagact tcgggctggctcggctgctg
2761gacattgacg agacagagta ccatgcagat gggggcaagg tgcccatcaagtggatggcg
2821ctggagtcca ttctccgccg gcggttcacc caccagagtg atgtgtggagttatggtgtg
2881actgtgtggg agctgatgac ttttggggcc aaaccttacg atgggatcccagcccgggag
2941atccctgacc tgctggaaaa gggggagcgg ctgccccagc cccccatctgcaccattgat
3001gtctacatga tcatggtcaa atgttggatg attgactctg aatgtcggccaagattccgg
3061gagttggtgt ctgaattctc ccgcatggcc agggaccccc agcgctttgtggtcatccag
3121aatgaggact tgggcccagc cagtcccttg gacagcacct tctaccgctcactgctggag
3181gacgatgaca tgggggacct ggtggatgct gaggagtatc tggtaccccagcagggcttc
3241ttctgtccag accctgcccc gggcgctggg ggcatggtcc accacaggcaccgcagctca
3301tctaccagga gtggcggtgg ggacctgaca ctagggctgg agccctctgaagaggaggcc
3361cccaggtctc cactggcacc ctccgaaggg gctggctccg atgtatttgatggtgacctg
3421ggaatggggg cagccaaggg gctgcaaagc ctccccacac atgaccccagccctctacag
3481cggtacagtg aggaccccac agtacccctg ccctctgaga ctgatggctacgttgccccc
3541ctgacctgca gcccccagcc tgaatatgtg aaccagccag atgttcggccccagccccct
3601tcgccccgag agggccctct gcctgctgcc cgacctgctg gtgccactctggaaagggcc
3661aagactctct ccccagggaa gaatggggtc gtcaaagacg tttttgcctttgggggtgcc
3721gtggagaacc ccgagtactt gacaccccag ggaggagctg cccctcagccccaccctcct
3781cctgccttca gcccagcctt cgacaacctc tattactggg accaggacccaccagagcgg
3841ggggctccac ccagcacctt caaagggaca cctacggcag agaacccagagtacctgggt
3901ctggacgtgc cagtgtgaac cagaaggcca agtccgcaga agccctgatgtgtcctcagg
3961gagcagggaa ggcctgactt ctgctggcat caagaggtgg gagggccctccgaccacttc
4021caggggaacc tgccatgcca ggaacctgtc ctaaggaacc ttccttcctgcttgagttcc
4081cagatggctg gaaggggtcc agcctcgttg gaagaggaac agcactggggagtctttgtg
4141gattctgagg ccctgcccaa tgagactcta gggtccagtg gatgccacagcccagcttgg
4201ccctttcctt ccagatcctg ggtactgaaa gccttaggga agctggcctgagaggggaag
4261 cggccctaag ggagtgtcta agaacaaaag cgacccattc agagactgtccctgaaacct
4321 agtactgccc cccatgagga aggaacagca atggtgtcag tatccaggctttgtacagag
4381 tgcttttctg tttagttttt actttttttg ttttgttttt ttaaagacga
aataaagacc
4441 caggggagaa tgggtgttgt atggggaggc aagtgtgggg ggtccttctc
cacacccact
4501 ttgtccattt gcaaatatat tttggaaaac
//
人SCP1蛋白mRNA
ACCESSION X9S654
VERSION X95654.1GI:1212982
SEQ ID NO 596
/翻译=″MEKQKPFALFVPPRSSSSQVSAVKPQTLGGDSTFFKSFNKCTEDDLEFPFAKTNLSKNGENIDSDPALQKVNFLPVLEQVGNSDCHYQEGLKDSDLENSEGLSRVFSKLYKEAEKIKKWKVSTEAELRQKESKLQENRKIIEAQRKAIQELQFGNEKVSLKLEEGIQENKDLIKENNATRHLCNLLKETCARSAEKTKKYEYEREETRQVYMDLNNNIEKMITAHGELRVQAENSRLEMHFKLKEDYEKIQHLEQEYKKEINDKEKQVSLLLIQITEKENKMKDLTFLLEESRDKVNQLEEKTKLQSENLKQSIEKQHHLTKELEDIKVSLQRSVSTQKALEEDLQIATKTICQLTEEKETQMEESNKARAAHSFVVTEFETTVCSLEELLRTEQQRLEKNEDQLKILTMELQKKSSELEEMTKLTNNKEVELEELKKVLGEKETLLYENKQFEKIAEELKGTEQELIGLLQAREKEVHDLEIQLTAITTSEQYYSKEVKDLKTELENEKLKNTELTSHCNKLSLENKELTQETSDMTLELKNQQEDINNNKKQEERMLKQIENLQETETQLRNELEYVREELKQKRDEVKCKLDKSEENCNNLRKQVENKNKYIEELQQENKALKKKGTAESKQLNVYEIKVNKLELELESAKQKFGEITDTYQKEIEDKKISEENLLEEVEKAKVIADEAVKLQKEIDKRCQHKIAEMVALMEKHKHQYDKIIEERDSELGLYKSKEQEQSSLRASLEIELSNLKAELLSVKKQLEIEREEKEKLKREAKENTATLKEKKDKKTQTFLLETPEIYWKLDSKAVPSQTVSRNFTSVDHGISKDKRDYLWTSAKNTLSTPLPKAYTVKTPTKPKLQQRENLNIPIEESKKKRKMAFEFDINSDSSETTDLLSMVSEEETLKTLYRNNNPPASHLCVKTPKKAPSSLTTPGPTLKFGAIRKMREDRWAVIAKMDRKKKLKEAEKLFV″
SEQ ID NO 597
起始
1 gccctcatag accgtttgtt gtagttcgcg tgggaacagc aacccacggtttcccgatag
61 ttcttcaaag atatttacaa ccgtaacaga gaaaatggaa aagcaaaagccctttgcatt
121gttcgtacca ccgagatcaa gcagcagtca ggtgtctgcg gtgaaacctcagaccctggg
181aggcgattcc actttcttca agagtttcaa caaatgtact gaagatgatttggagtttcc
241atttgcaaag actaatctct ccaaaaatgg ggaaaacatt gattcagatcctgctttaca
301aaaagttaat ttcttgcccg tgcttgagca ggttggtaat tctgactgtcactatcagga
361aggactaaaa gactctgatt tggagaattc agagggattg agcagagtgttttcaaaact
421gtataaggag gctgaaaaga taaaaaaatg gaaagtaagt acagaagctgaactgagaca
481gaaagaaagt aagttgcaag aaaacagaaa gataattgaa gcacagcgaaaagccattca
541ggaactgcaa tttggaaatg aaaaagtaag tttgaaatta gaagaaggaatacaagaaaa
601taaagattta ataaaagaga ataatgccac aaggcattta tgtaatctactcaaagaaac
661ctgtgctaga tctgcagaaa agacaaagaa atatgaatat gaacgggaagaaaccaggca
721agtttatatg gatctaaata ataacattga gaaaatgata acagctcatggggaacttcg
781tgtgcaagct gagaattcca gactggaaat gcattttaag ttaaaggaagattatgaaaa
841aatccaacac cttgaacaag aatacaagaa ggaaataaat gacaaggaaaagcaggtatc
901actactattg atccaaatca ctgagaaaga aaataaaatg aaagatttaacatttctgct
961 agaggaatcc agagataaag ttaatcaatt agaggaaaag acaaaattacagagtgaaaa
1021cttaaaacaa tcaattgaga aacagcatca tttgactaaa gaactagaagatattaaagt
1081gtcattacaa agaagtgtga gtactcaaaa ggctttagag gaagatttacagatagcaac
1141aaaaacaatt tgtcagctaa ctgaagaaaa agaaactcaa atggaagaatctaataaagc
1201tagagctgct cattcgtttg tggttactga atttgaaact actgtctgcagcttggaaga
1261attattgaga acagaacagc aaagattgga aaaaaatgaa gatcaattgaaaatacttac
1321catggagctt caaaagaaat caagtgagct ggaagagatg actaagcttacaaataacaa
1381agaagtagaa cttgaagaat tgaaaaaagt cttgggagaa aaggaaacacttttatatga
1441aaataaacaa tttgagaaga ttgctgaaga attaaaagga acagaacaagaactaattgg
1501tcttctccaa gccagagaga aagaagtaca tgatttggaa atacagttaactgccattac
1561cacaagtgaa cagtattatt caaaagaggt taaagatcta aaaactgagcttgaaaacga
1621gaagcttaag aatactgaat taacttcaca ctgcaacaag ctttcactagaaaacaaaga
1681gctcacacag gaaacaagtg atatgaccct agaactcaag aatcagcaagaagatattaa
1741taataacaaa aagcaagaag aaaggatgtt gaaacaaata gaaaatcttcaagaaacaga
1801aacccaatta agaaatgaac tagaatatgt gagagaagag ctaaaacagaaaagagatga
1861agttaaatgt aaattggaca agagtgaaga aaattgtaac aatttaaggaaacaagttga
1921aaataaaaac aagtatattg aagaacttca gcaggagaat aaggccttgaaaaaaaaagg
1981 tacagcagaa agcaagcaac tgaatgttta tgagataaag gtcaataaattagagttaga
2041 actagaaagt gccaaacaga aatttggaga aatcacagac acctatcagaaagaaattga
2101 ggacaaaaag atatcagaag aaaatctttt ggaagaggtt gagaaagcaaaagtaatagc
2161 tgatgaagca gtaaaattac agaaagaaat tgataagcga tgtcaacataaaatagctga
2221 aatggtagca cttatggaaa aacataagca ccaatatgat aagatcattgaagaaagaga
2281 ctcagaatta ggactttata agagcaaaga acaagaacag tcatcactgagagcatcttt
2341 ggagattgaa ctatccaatc tcaaagctga acttttgtct gttaagaagcaacttgaaat
2401 agaaagagaa gagaaggaaa aactcaaaag agaggcaaaa gaaaacacagctactcttaa
2461 agaaaaaaaa gacaagaaaa cacaaacatt tttattggaa acacctgaaatttattggaa
2521 attggattct aaagcagttc cttcacaaac tgtatctcga aatttcacatcagttgatca
2581 tggcatatcc aaagataaaa gagactatct gtggacatct gccaaaaatactttatctac
2641 accattgcca aaggcatata cagtgaagac accaacaaaa ccaaaactacagcaaagaga
2701 aaacttgaat atacccattg aagaaagtaa aaaaaagaga aaaatggcctttgaatttga
2761 tattaattca gatagttcag aaactactga tcttttgagc atggtttcagaagaagagac
2821 attgaaaaca ctgtatagga acaataatcc accagcttct catctttgtgtcaaaacacc
2881 aaaaaaggcc ccttcatctc taacaacccc tggacctaca ctgaagtttggagctataag
2941 aaaaatgcgg gaggaccgtt gggctgtaat tgctaaaatg gatagaaaaaaaaaactaaa
3001 agaagctgaa aagttatttg tttaatttca gagaatcagt gtagttaaggagcctaataa
3061 cgtgaaactt atagttaata ttttgttctt atttgccaga gccacattttatctggaagt
3121 tgagacttaa aaaatacttg catgaatgat ttgtgtttct ttatatttttagcctaaatg
3181 ttaactacat attgtctgga aacctgtcat tgtattcaga taattagatgattatatatt
3241 gttgttactt tttcttgtat tcatgaaaac tgtttttact aagttttcaaatttgtaaag
3301 ttagcctttg aatgctagga atgcattatt gagggtcatt ctttattctttactattaaa
3361 atattttgga tgcaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa
//
人滑膜肉瘤,X断裂点4(SSX4),mRNA。
ACCESSION NM_005636
VERSION NM_005636.1 GI:5032122
SEQ ID NO 598
/翻译=″MNGDDAFARRPRDDAQISEKLRKAFDDIAKYFSKKEWEKMKSSEKIVYVYMKLNYEVMTKLGFKVTLPPFMRSKRAADFHGNDFGNDRNHRNQVERPQMTFGSLQRIFPKIMPKKPAEEENGLKEVPEASGPQNDGKQLCPPGNPSTLEKINKTSGPKRGKHAWTHRLRERKQLVVYEEISDPEEDDE″
SEQ ID NO 599
起始
1 atgaacggag acgacgcctt tgcaaggaga cccagggatg atgctcaaatatcagagaag
61 ttacgaaagg ccttcgatga tattgccaaa tacttctcta agaaagagtgggaaaagatg
121aaatcctcgg agaaaatcgt ctatgtgtat atgaagctaa actatgaggtcatgactaaa
181 ctaggtttca aggtcaccct cccacctttc atgcgtagta aacgggctgcagacttccac
241 gggaatgatt ttggtaacga tcgaaaccac aggaatcagg ttgaacgtcctcagatgact
301 ttcggcagcc tccagagaat cttcccgaag atcatgccca agaagccagcagaggaagaa
361 aatggtttga aggaagtgcc agaggcatct ggcccacaaa atgatgggaaacagctgtgc
421 cccccgggaa atccaagtac cttggagaag attaacaaga catctggacccaaaaggggg
481 aaacatgcct ggacccacag actgcgtgag agaaagcagc tggtggtttatgaagagatc
541 agcgaccctg aggaagatga cgagtaactc ccctcg
所有在说明书中提及的专利和出版物表现出本发明所属本领域的那些技术人员的水平。
可以缺乏在这里未具体公开的任何要素或多种要素,限制或多种限制实行在这里例证性适当描述的本发明。已经使用的术语和表述是用作描述术语而不是限制术语,没有打算在使用该术语和表述中表示排除显示和描述的特征的同等物或其部分。应当认识到在要求保护的本发明的范围内各种修饰是可能的。因此,应当理解尽管已经通过优选实施方案和任选的特征具体地公开了本发明,在这里公开的概念的修饰和改变可被本领域那些技术人员所利用,这类修饰和改变被认为是在由后附权利要求所限定的本发明的范围内。
Claims (12)
1.分离的核酸,其编码包含来自肿瘤相关抗原PRAME(SEQ ID NO:77)的表位聚簇的多肽,所述聚簇定义为含有比表位平均密度更高的SEQID NO:77的区段,其中所述表位聚簇的表位密度比率大于1,其中所述多肽不同于PRAME的全长天然序列。
2.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇的表位密度比率大于1.3。
3.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇的表位密度比率大于2。
4.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇小于PRAME的氨基酸序列的80%。
5.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇选自以下组成的组:PRAME的氨基酸18-59,33-47,71-81,78-115,99-108,126-135,222-238,224-246,290-303,305-324,343-363,364-447,394-409,422-443,和459-487。
6.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇的长度小于约30个氨基酸。
7.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇是免疫活性的。
8.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇包含管家表位。
9.权利要求1的分离的核酸,其中所述表位聚簇包含免疫表位。
10.免疫原性组合物,其包含权利要求1的核酸。
11.免疫原性组合物,其包含权利要求1的所编码的多肽。
12.免疫原性组合物,其包含权利要求1的所编码的表位聚簇。
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US28221101P | 2001-04-06 | 2001-04-06 | |
US60/282,211 | 2001-04-06 | ||
US33701701P | 2001-11-07 | 2001-11-07 | |
US60/337,017 | 2001-11-07 | ||
US36321002P | 2002-03-07 | 2002-03-07 | |
US60/363,210 | 2002-03-07 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA028113985A Division CN1512891A (zh) | 2001-04-06 | 2002-04-04 | 表位序列 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101948841A true CN101948841A (zh) | 2011-01-19 |
Family
ID=27403282
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201010267145XA Pending CN101948841A (zh) | 2001-04-06 | 2002-04-04 | 表位序列 |
CNA028113985A Pending CN1512891A (zh) | 2001-04-06 | 2002-04-04 | 表位序列 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA028113985A Pending CN1512891A (zh) | 2001-04-06 | 2002-04-04 | 表位序列 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20030220239A1 (zh) |
EP (3) | EP2394655A3 (zh) |
JP (3) | JP4874508B2 (zh) |
CN (2) | CN101948841A (zh) |
AU (1) | AU2002254570A1 (zh) |
CA (1) | CA2442386A1 (zh) |
MX (1) | MXPA03009042A (zh) |
WO (2) | WO2003008537A2 (zh) |
Families Citing this family (164)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8791237B2 (en) * | 1994-11-08 | 2014-07-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for treatment of non-hodgkins lymphoma |
US8956621B2 (en) | 1994-11-08 | 2015-02-17 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for treatment of cervical dysplasia |
US7794729B2 (en) * | 1994-11-08 | 2010-09-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for immunotherapy of cancer |
US8114414B2 (en) * | 1994-11-08 | 2012-02-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for treatment of cervical cancer |
US7820180B2 (en) * | 2004-09-24 | 2010-10-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Listeria-based and LLO-based vaccines |
US6977074B2 (en) | 1997-07-10 | 2005-12-20 | Mannkind Corporation | Method of inducing a CTL response |
US20030138808A1 (en) * | 1998-02-19 | 2003-07-24 | Simard John J.L. | Expression vectors encoding epitopes of target-associated antigens |
US20030176663A1 (en) * | 1998-05-11 | 2003-09-18 | Eidgenossische Technische Hochscule | Specific binding molecules for scintigraphy |
CA2400622A1 (en) * | 2000-02-24 | 2001-08-30 | Eidgenossische Technische Hochschule Zurich | Antibody specific for the ed-b domain of fibronectin, conjugates comprising said antibody, and their use for the detection and treatment of angiogenesis |
US9012141B2 (en) | 2000-03-27 | 2015-04-21 | Advaxis, Inc. | Compositions and methods comprising KLK3 of FOLH1 antigen |
AU2001255196A1 (en) * | 2000-03-29 | 2001-10-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for enhancing immunogenicity of antigens |
US20030215425A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-11-20 | Simard John J. L. | Epitope synchronization in antigen presenting cells |
RU2280254C2 (ru) * | 2000-09-07 | 2006-07-20 | Шеринг Акциенгезельшафт | РЕЦЕПТОР EDb-ДОМЕНА ФИБРОНЕКТИНА |
US8771702B2 (en) * | 2001-03-26 | 2014-07-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Non-hemolytic LLO fusion proteins and methods of utilizing same |
US7700344B2 (en) * | 2001-03-26 | 2010-04-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for enhancing the immunogenicity of antigens |
WO2003008537A2 (en) * | 2001-04-06 | 2003-01-30 | Mannkind Corporation | Epitope sequences |
US20050215472A1 (en) | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
EP3184539A3 (en) | 2001-10-23 | 2017-09-13 | PSMA Development Company L.L.C. | Psma antibodies |
DE60238864D1 (de) * | 2001-11-07 | 2011-02-17 | Mankind Corp | Für epitope von antigenen kodierende expressionsvektoren und verfahren zu deren konzeption |
AU2003217384A1 (en) * | 2002-02-13 | 2003-09-04 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated peptides which bind to hla molecules and uses thereof |
US20030228308A1 (en) * | 2002-06-05 | 2003-12-11 | Yi Zhang | Isolated peptides which bind to HLA-Cw6 molecules and uses thereof |
MXPA05002455A (es) * | 2002-09-06 | 2005-06-03 | Mannkind Corp | Secuencias de epitopes. |
US7811564B2 (en) | 2003-01-28 | 2010-10-12 | Proscan Rx Pharma | Prostate cancer diagnosis and treatment |
US7178491B2 (en) * | 2003-06-05 | 2007-02-20 | Caterpillar Inc | Control system and method for engine valve actuator |
GB0313132D0 (en) | 2003-06-06 | 2003-07-09 | Ich Productions Ltd | Peptide ligands |
ATE546153T1 (de) * | 2003-06-17 | 2012-03-15 | Mannkind Corp | Kombinationen von tumor-assoziierten antigenen zur behandlung von verschiedenen krebstypen |
MXPA05013973A (es) | 2003-06-17 | 2006-03-02 | Mannkind Corp | Metodos para producir, mejorar y sustentar respuestas inmunes contra epitopes restringidos mhc clase i, para propositos profilacticos o terapeuticos. |
ATE496129T1 (de) | 2003-07-22 | 2011-02-15 | Ludwig Inst Cancer Res | Von hla-klasse-ii-molekülen präsentierte ssx-2- peptide |
KR101438983B1 (ko) | 2003-11-06 | 2014-09-05 | 시애틀 지네틱스, 인크. | 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물 |
AU2005249490B2 (en) | 2004-06-01 | 2010-07-29 | Genentech, Inc. | Antibody drug conjugates and methods |
US20060159689A1 (en) * | 2004-06-17 | 2006-07-20 | Chih-Sheng Chiang | Combinations of tumor-associated antigens in diagnostics for various types of cancers |
US20050287068A1 (en) * | 2004-06-17 | 2005-12-29 | Bot Adrian I | Efficacy of active immunotherapy by integrating diagnostic with therapeutic methods |
WO2006009920A2 (en) * | 2004-06-17 | 2006-01-26 | Mannkind Corporation | Epitope analogs |
US20060008468A1 (en) * | 2004-06-17 | 2006-01-12 | Chih-Sheng Chiang | Combinations of tumor-associated antigens in diagnostics for various types of cancers |
US7858743B2 (en) * | 2004-09-09 | 2010-12-28 | Ludwig Institute For Cancer Research | SSX-4 peptides presented by HLA class II molecules |
PL1791565T3 (pl) | 2004-09-23 | 2016-10-31 | Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty | |
US20100111856A1 (en) | 2004-09-23 | 2010-05-06 | Herman Gill | Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates |
CA2592968A1 (en) * | 2004-12-29 | 2006-07-06 | Mannkind Corporation | Use of compositions comprising various tumor-associated antigens as anti-cancer vaccines |
AU2005321904B2 (en) * | 2004-12-29 | 2012-07-12 | Mannkind Corporation | Methods to elicit, enhance and sustain immune responses against MHC class I-restricted epitopes, for prophylactic or therapeutic purposes |
SG158155A1 (en) * | 2004-12-29 | 2010-01-29 | Mannkind Corp | Methods to bypass cd+4 cells in the induction of an immune response |
US20060153844A1 (en) * | 2004-12-29 | 2006-07-13 | Thomas Kundig | Methods to trigger, maintain and manipulate immune responses by targeted administration of biological response modifiers into lymphoid organs |
JP2008527001A (ja) * | 2005-01-13 | 2008-07-24 | ザ ジョンズ ホプキンス ユニバーシティー | 前立腺幹細胞抗原ワクチンおよびその使用 |
NZ564360A (en) * | 2005-06-17 | 2011-03-31 | Mannkind Corp | Immunogenic product comprising a nucleic acid capable of expressing a PRAME epitope and a PSMA epitope and a peptide composition |
SG162817A1 (en) | 2005-06-17 | 2010-07-29 | Mannkind Corp | Methods and compositions.to elicit multivalent immune responses against dominant and subdominant epitopes, expressed on cancer cells and tumor stroma |
EP2371852A3 (en) | 2005-06-17 | 2012-08-01 | Mannkind Corporation | Epitope analogues |
CA2617222A1 (en) * | 2005-06-29 | 2007-01-04 | Green Peptide Co., Ltd. | Peptide derived from prostate-related protein as cancer vaccine candidate for prostate cancer patient who is positive for hla-a3 super-type allele molecule |
EP1996716B1 (en) | 2006-03-20 | 2011-05-11 | The Regents of the University of California | Engineered anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting |
JP2009544610A (ja) * | 2006-07-14 | 2009-12-17 | マンカインド コーポレイション | 予防又は治療目的のためにmhcクラスi拘束エピトープに対する免疫応答を引き出し、増強し、保持する方法 |
MX2009008620A (es) | 2007-02-15 | 2009-10-22 | Mannkind Corp | Un metodo para mejorar la respuesta de celulas t. |
ES2539812T3 (es) | 2007-03-26 | 2015-07-06 | Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc | Péptidos derivados de PRAME y composiciones inmunogénicas que comprenden los mismos |
US20090131355A1 (en) * | 2007-05-23 | 2009-05-21 | Adrian Ion Bot | Multicistronic vectors and methods for their design |
EP3061462B1 (en) | 2007-07-02 | 2019-02-27 | Etubics Corporation | Methods and compositions for producing an adenovirus vector for use with multiple vaccinations |
WO2009032949A2 (en) | 2007-09-04 | 2009-03-12 | The Regents Of The University Of California | High affinity anti-prostate stem cell antigen (psca) antibodies for cancer targeting and detection |
ES2623447T3 (es) | 2007-12-19 | 2017-07-11 | Rhovac Aps | Inmunoterapia basada en RhoC |
US8253725B2 (en) * | 2007-12-28 | 2012-08-28 | St. Jude Medical, Atrial Fibrillation Division, Inc. | Method and system for generating surface models of geometric structures |
US9650639B2 (en) | 2008-05-19 | 2017-05-16 | Advaxis, Inc. | Dual delivery system for heterologous antigens |
US20110129499A1 (en) | 2008-05-19 | 2011-06-02 | Paulo Maciag | Dual delivery system for heterologous antigens |
US9017660B2 (en) | 2009-11-11 | 2015-04-28 | Advaxis, Inc. | Compositions and methods for prevention of escape mutation in the treatment of Her2/neu over-expressing tumors |
US10024868B2 (en) * | 2009-06-09 | 2018-07-17 | Vaxon Biotech | Identification, optimization and use of shared HLA-B*0702 epitopes for immunotherapy |
US8470980B2 (en) | 2009-09-09 | 2013-06-25 | Centrose, Llc | Extracellular targeted drug conjugates |
WO2011050344A2 (en) | 2009-10-23 | 2011-04-28 | Mannkind Corporation | Cancer immunotherapy and method of treatment |
US10016617B2 (en) | 2009-11-11 | 2018-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Combination immuno therapy and radiotherapy for the treatment of Her-2-positive cancers |
WO2011062634A2 (en) * | 2009-11-18 | 2011-05-26 | Mannkind Corporation | Monoclonal antibodies and diagnostic uses thereof |
AU2010329551B2 (en) | 2009-12-10 | 2016-02-11 | Turnstone Limited Partnership | Oncolytic rhabdovirus |
SE535982C2 (sv) * | 2009-12-15 | 2013-03-19 | Theravac Pharmaceuticals Ab | Ett nytt vaccin som angriper tumörkärl som ett effektivt redskap i tumörterapi |
EP2356998A1 (en) * | 2010-02-17 | 2011-08-17 | Université de Liège | A pharmaceutical composition for treatment of thrombosis-related diseases comprising a fragment of prolactin (PRL)-growth hormone (GH) - placental lactogen (PL)-family protein |
WO2011130598A1 (en) | 2010-04-15 | 2011-10-20 | Spirogen Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
MX336540B (es) | 2010-06-08 | 2016-01-22 | Genentech Inc | Conjugados y anticuerpos manipulados geneticamente con cisteina. |
US9226958B2 (en) | 2010-10-01 | 2016-01-05 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Use of Listeria vaccine vectors to reverse vaccine unresponsiveness in parasitically infected individuals |
CA2816426A1 (en) | 2010-11-17 | 2012-06-07 | Genentech, Inc. | Alaninyl maytansinol antibody conjugates |
EP2683400A4 (en) | 2011-03-11 | 2014-09-17 | Advaxis | ADJUVANZIA ON LISTERIA BASE |
CA2833212C (en) | 2011-05-12 | 2020-06-09 | Genentech, Inc. | Multiple reaction monitoring lc-ms/ms method to detect therapeutic antibodies in animal samples using framework signature peptides |
GB201114919D0 (en) * | 2011-08-30 | 2011-10-12 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method |
US11135303B2 (en) | 2011-10-14 | 2021-10-05 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
WO2013130093A1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | Genentech, Inc. | Biomarkers for treatment with anti-tubulin chemotherapeutic compounds |
SG11201405605VA (en) | 2012-03-12 | 2014-10-30 | Advaxis Inc | SUPPRESSOR CELL FUNCTION INHIBITION FOLLOWING <i>LISTERIA</i> VACCINE TREATMENT |
US9254311B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-02-09 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of proteins |
AU2013243951A1 (en) * | 2012-04-02 | 2014-10-30 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of secreted proteins |
US9283287B2 (en) | 2012-04-02 | 2016-03-15 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins |
CN107881183B (zh) | 2012-05-22 | 2021-04-02 | 美国卫生和人力服务部 | 鼠抗-ny-eso-1 t细胞受体 |
WO2013180200A1 (ja) * | 2012-05-30 | 2013-12-05 | 中外製薬株式会社 | 標的組織特異的抗原結合分子 |
WO2014031178A1 (en) * | 2012-08-24 | 2014-02-27 | Etubics Corporation | Replication defective adenovirus vector in vaccination |
CA2887895C (en) | 2012-10-12 | 2019-10-29 | Adc Therapeutics Sarl | Pyrrolobenzodiazepine-anti-cd19 antibody conjugates |
MX364328B (es) | 2012-10-12 | 2019-04-23 | Medimmune Ltd | Conjugados del anticuerpo pirrolobenzodiazepina. |
WO2014057114A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Adc Therapeutics Sàrl | Pyrrolobenzodiazepine-anti-psma antibody conjugates |
JP6392765B2 (ja) | 2012-10-12 | 2018-09-19 | エイディーシー・セラピューティクス・エス・アーAdc Therapeutics Sa | ピロロベンゾジアゼピン−抗体結合体 |
CN105102003B (zh) | 2012-10-12 | 2019-03-05 | Adc疗法责任有限公司 | 吡咯并苯并二氮杂卓-抗psma抗体结合物 |
EP2839860B1 (en) | 2012-10-12 | 2019-05-01 | MedImmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
EP2906297B1 (en) | 2012-10-12 | 2017-12-06 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
WO2014096365A1 (en) | 2012-12-21 | 2014-06-26 | Spirogen Sàrl | Unsymmetrical pyrrolobenzodiazepines-dimers for use in the treatment of proliferative and autoimmune diseases |
AU2013366493B2 (en) | 2012-12-21 | 2017-08-24 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
ES2741147T3 (es) | 2013-02-21 | 2020-02-10 | Turnstone Lp | Composición de vacuna |
BR112015021965B1 (pt) | 2013-03-13 | 2022-05-03 | Medimmune Limited | Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica, uso dos mesmos para o tratamento de uma doença proliferativa e método de síntese dos ditos compostos |
JP6444902B2 (ja) | 2013-03-13 | 2018-12-26 | メドイミューン・リミテッドMedImmune Limited | ピロロベンゾジアゼピン及びその結合体 |
KR102057755B1 (ko) | 2013-03-13 | 2019-12-19 | 메디뮨 리미티드 | 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨쥬게이트 |
US10576144B2 (en) | 2013-06-28 | 2020-03-03 | Auckland Uniservices Limited | Amino acid and peptide conjugates and conjugation process |
AU2014286123B2 (en) * | 2013-07-05 | 2019-02-28 | Arla Foods Amba | Mammalian milk osteopontin for enhancing immune responsiveness |
EA201690195A1 (ru) | 2013-08-12 | 2016-05-31 | Дженентек, Инк. | Конъюгатные соединения антитело-лекарство на основе димера 1-(хлорметил)-2,3-дигидро-1h-бензо[e]индола и способы применения и лечения |
EP3054985B1 (en) | 2013-10-11 | 2018-12-26 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
GB201317982D0 (en) | 2013-10-11 | 2013-11-27 | Spirogen Sarl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
EP3054983B1 (en) | 2013-10-11 | 2019-03-20 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
US9956299B2 (en) | 2013-10-11 | 2018-05-01 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine—antibody conjugates |
TW202043467A (zh) | 2013-12-04 | 2020-12-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 因應化合物濃度使抗原結合能力變化的抗原結合分子及其資料庫 |
CN105828840B (zh) | 2013-12-16 | 2020-08-04 | 基因泰克公司 | 1-(氯甲基)-2,3-二氢-1H-苯并[e]吲哚二聚体抗体-药物缀合物化合物及使用和治疗方法 |
RU2689388C1 (ru) | 2013-12-16 | 2019-05-28 | Дженентек, Инк. | Пептидомиметические соединения и их конъюгаты антител с лекарственными средствами |
CA2933557A1 (en) | 2013-12-16 | 2015-06-25 | Genentech, Inc. | Peptidomimetic compounds and antibody-drug conjugates thereof |
US10188746B2 (en) | 2014-09-10 | 2019-01-29 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
EP3191521A2 (en) | 2014-09-12 | 2017-07-19 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cysteine engineered antibodies and conjugates |
CN106714844B (zh) | 2014-09-12 | 2022-08-05 | 基因泰克公司 | 蒽环类二硫化物中间体、抗体-药物缀合物和方法 |
GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
PE20170905A1 (es) | 2014-09-17 | 2017-07-12 | Genentech Inc | Pirrolobenzodiazepinas y conjugados de anticuerpo-disulfuro de las mismas |
CA2968447A1 (en) | 2014-11-25 | 2016-06-02 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates and their use to treat neoplasms |
CN107206101B (zh) | 2014-12-03 | 2021-06-25 | 基因泰克公司 | 季铵化合物及其抗体-药物缀合物 |
JP2018505152A (ja) | 2014-12-23 | 2018-02-22 | アン ブリンブル マーガレット | アミノ酸複合体及びペプチド複合体ならびにそれらの使用 |
KR102193635B1 (ko) | 2015-01-09 | 2020-12-21 | 이투빅스 코포레이션 | 복합 면역요법을 위한 방법 및 조성물 |
WO2016112188A1 (en) | 2015-01-09 | 2016-07-14 | Etubics Corporation | Methods and compositions for ebola virus vaccination |
GB201506411D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Bergenbio As | Humanized anti-axl antibodies |
GB201506402D0 (en) | 2015-04-15 | 2015-05-27 | Berkel Patricius H C Van And Howard Philip W | Site-specific antibody-drug conjugates |
WO2016172249A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Etubics Corporation | Methods and compositions for combination immunotherapy |
MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
MA43354A (fr) | 2015-10-16 | 2018-08-22 | Genentech Inc | Conjugués médicamenteux à pont disulfure encombré |
MA45326A (fr) | 2015-10-20 | 2018-08-29 | Genentech Inc | Conjugués calichéamicine-anticorps-médicament et procédés d'utilisation |
CN106610423A (zh) * | 2015-10-26 | 2017-05-03 | 复旦大学 | 评价疫苗疗效的细胞免疫学检测试剂盒及其储存方法 |
GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
SG11201807036QA (en) | 2016-02-26 | 2018-09-27 | Auckland Uniservices Ltd | Amino acid and peptide conjugates and conjugation process |
JP6943872B2 (ja) | 2016-03-25 | 2021-10-06 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 多重全抗体及び抗体複合体化薬物定量化アッセイ |
GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
PL3458101T3 (pl) | 2016-05-20 | 2021-05-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Koniugaty PROTAC-przeciwciało i sposoby ich stosowania |
CA3025234A1 (en) * | 2016-05-23 | 2017-11-30 | The Council Of The Queensland Institute Of Medical Research | Cmv epitopes |
CN109313200B (zh) | 2016-05-27 | 2022-10-04 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于表征位点特异性抗体-药物缀合物的生物分析性方法 |
JP7043425B2 (ja) | 2016-06-06 | 2022-03-29 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | シルベストロール抗体-薬物コンジュゲート及び使用方法 |
JP7093767B2 (ja) | 2016-08-11 | 2022-06-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | ピロロベンゾジアゼピンプロドラッグ及びその抗体コンジュゲート |
CN110139674B (zh) | 2016-10-05 | 2023-05-16 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 制备抗体药物缀合物的方法 |
GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
JP6671555B2 (ja) | 2017-02-08 | 2020-03-25 | アーデーセー セラピューティクス ソシエテ アノニム | ピロロベンゾジアゼピン抗体複合体 |
GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
JP2020517609A (ja) | 2017-04-18 | 2020-06-18 | メディミューン リミテッド | ピロロベンゾジアゼピン複合体 |
CA3057748A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy with an anti-axl antibody-drug conjugate |
WO2018229222A1 (en) | 2017-06-14 | 2018-12-20 | Adc Therapeutics Sa | Dosage regimes for the administration of an anti-cd19 adc |
CN108503689B (zh) * | 2017-07-10 | 2019-12-31 | 昆明医科大学第一附属医院 | 一种抗血小板聚集的多肽km6 |
WO2019034764A1 (en) | 2017-08-18 | 2019-02-21 | Medimmune Limited | CONJUGATES OF PYRROLOBENZODIAZEPINE |
JP2020534300A (ja) | 2017-09-20 | 2020-11-26 | ピーエイチ・ファーマ・カンパニー・リミテッドPh Pharma Co., Ltd. | タイランスタチン類似体 |
WO2019062877A1 (zh) * | 2017-09-30 | 2019-04-04 | 合肥立方制药股份有限公司 | 结合至纤维连接蛋白b结构域的蛋白 |
GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
CN110343167B (zh) * | 2018-04-03 | 2022-10-28 | 香雪生命科学技术(广东)有限公司 | 识别ssx2抗原短肽的t细胞受体 |
GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
GB201814281D0 (en) | 2018-09-03 | 2018-10-17 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic agents |
CN110950949B (zh) * | 2018-09-26 | 2022-04-05 | 香雪生命科学技术(广东)有限公司 | 一种识别ssx2抗原的t细胞受体 |
WO2020086858A1 (en) | 2018-10-24 | 2020-04-30 | Genentech, Inc. | Conjugated chemical inducers of degradation and methods of use |
WO2020123275A1 (en) | 2018-12-10 | 2020-06-18 | Genentech, Inc. | Photocrosslinking peptides for site specific conjugation to fc-containing proteins |
TW202039535A (zh) * | 2018-12-18 | 2020-11-01 | 德商英麥提克生物技術股份有限公司 | B*08限制肽和肽組合物抗癌免疫治療和相關方法 |
KR102084912B1 (ko) * | 2019-01-17 | 2020-03-05 | 주식회사 녹십자 | B형 간염 바이러스 표면 항원의 입체 에피토프 및 이에 특이적으로 결합하는 항체 |
GB201901197D0 (en) | 2019-01-29 | 2019-03-20 | Femtogenix Ltd | G-A Crosslinking cytotoxic agents |
CN112442118B (zh) * | 2019-08-30 | 2023-02-14 | 深圳普瑞金生物药业股份有限公司 | 一种tcr及其应用 |
CH717565A1 (fr) | 2020-06-25 | 2021-12-30 | Planair Sa | Installation photovoltaïque et procédé de construction d'une telle installation. |
GB2597532A (en) | 2020-07-28 | 2022-02-02 | Femtogenix Ltd | Cytotoxic compounds |
US11161892B1 (en) | 2020-12-07 | 2021-11-02 | Think Therapeutics, Inc. | Method of compact peptide vaccines using residue optimization |
US11421015B2 (en) | 2020-12-07 | 2022-08-23 | Think Therapeutics, Inc. | Method of compact peptide vaccines using residue optimization |
US11058751B1 (en) | 2020-11-20 | 2021-07-13 | Think Therapeutics, Inc. | Compositions for optimized RAS peptide vaccines |
US11464842B1 (en) | 2021-04-28 | 2022-10-11 | Think Therapeutics, Inc. | Compositions and method for optimized peptide vaccines using residue optimization |
CN116262779A (zh) * | 2021-12-14 | 2023-06-16 | 深圳先进技术研究院 | 一种单细胞筛选鉴定人乳头瘤病毒特异性tcr的方法 |
EP4328239A1 (en) | 2022-08-26 | 2024-02-28 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin in der Helmholtz-Gemeinschaft | Immunotherapeutics based on magea1-derived epitopes |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1296622C (en) * | 1986-08-12 | 1992-03-03 | Jeffrey E. Anderson | Method and apparatus for automated assessment of the immunoregulatory status of the mononuclear leukocyte immune system |
US5030449A (en) * | 1988-07-21 | 1991-07-09 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Synthetic vaccine against AIDS virus |
US5804381A (en) | 1996-10-03 | 1998-09-08 | Cornell Research Foundation | Isolated nucleic acid molecule encoding an esophageal cancer associated antigen, the antigen itself, and uses thereof |
ATE184704T1 (de) | 1989-11-03 | 1999-10-15 | Donald L Morton | Nachweismethode für harnkarzinom-assoziierte antigene |
US5342774A (en) * | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
US5679356A (en) * | 1992-07-08 | 1997-10-21 | Schering Corporation | Use of GM-CSF as a vaccine adjuvant |
DK0668777T3 (da) * | 1992-11-05 | 2007-02-19 | Sloan Kettering Inst Cancer | Prostataspecifikt membran-antigen |
US7070782B1 (en) * | 1992-11-05 | 2006-07-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen |
US5487974A (en) * | 1992-12-22 | 1996-01-30 | Ludwig Institute For Cancer-Research | Method for detecting complexes containing human leukocyte antigen A2 (HLA-A2) molecules and a tyrosinase drived peptide on abnormal cells |
US5747271A (en) | 1992-12-22 | 1998-05-05 | Ludwig Institute For Cancer Research | Method for identifying individuals suffering from a cellular abnormality some of whose abnormal cells present complexes of HLA-A2/tyrosinase derived peptides, and methods for treating said individuals |
US5744316A (en) * | 1992-12-22 | 1998-04-28 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated, tyrosinase derived peptides and uses thereof |
US5935818A (en) | 1995-02-24 | 1999-08-10 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecule encoding alternatively spliced prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
US5874560A (en) | 1994-04-22 | 1999-02-23 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Melanoma antigens and their use in diagnostic and therapeutic methods |
CA2188432C (en) * | 1994-04-22 | 2011-02-01 | Yutaka Kawakami | Melanoma antigens |
DE4423392A1 (de) * | 1994-07-04 | 1996-01-11 | Birsner & Grob Biotech Gmbh | Verfahren zur Identifizierung antigener Peptide |
CA2195642A1 (en) * | 1994-07-27 | 1996-02-08 | Andreas Suhrbier | Polyepitope vaccines |
US5830753A (en) | 1994-09-30 | 1998-11-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules coding for tumor rejection antigen precursor dage and uses thereof. |
AU712714B2 (en) * | 1994-10-03 | 1999-11-11 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | Enhanced immune response by introduction of cytokine gene and/or costimulatory molecule B7 gene in a recombinant virus expressing system |
US5635363A (en) | 1995-02-28 | 1997-06-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Compositions and methods for the detection, quantitation and purification of antigen-specific T cells |
US5830755A (en) | 1995-03-27 | 1998-11-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | T-cell receptors and their use in therapeutic and diagnostic methods |
US6025191A (en) | 1995-06-07 | 2000-02-15 | Ludwig Institute For Cancer Research | Isolated nucleic acid molecules which encode a melanoma specific antigen and uses thereof |
US5788963A (en) * | 1995-07-31 | 1998-08-04 | Pacific Northwest Cancer Foundation | Isolation and/or preservation of dendritic cells for prostate cancer immunotherapy |
US6150508A (en) * | 1996-03-25 | 2000-11-21 | Northwest Biotherapeutics, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
WO1997035991A1 (en) | 1996-03-28 | 1997-10-02 | The Johns Hopkins University | Soluble divalent and multivalent heterodimeric analogs of proteins |
EP0900380B1 (en) * | 1996-04-26 | 2003-07-09 | Rijksuniversiteit te Leiden | Methods for selecting and producing t cell peptide epitopes and vaccines incorporating said selected epitopes |
NZ333431A (en) * | 1996-05-24 | 2000-05-26 | Chiron Corp | Multiple epitope fusion protein selected from HIV or HCV, method of immunoassay and assay device |
US5856136A (en) | 1996-07-03 | 1999-01-05 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human stem cell antigens |
EP2286831A1 (en) | 1997-07-10 | 2011-02-23 | Mannkind Corporation | A method of inducing a CTL response |
US6210886B1 (en) * | 1998-02-04 | 2001-04-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Method for diagnosing multiple myeloma by determining tumor rejection antigen precursors |
JP2002507397A (ja) * | 1998-03-13 | 2002-03-12 | エピミューン,インコーポレイティド | Hla結合ペプチド及びその使用 |
ATE356630T1 (de) * | 1998-04-03 | 2007-04-15 | Univ Iowa Res Found | Verfahren und produkte zur stimulierung des immunsystems mittels immunotherapeutischer oligonukleotide und zytokine |
EP1078092B1 (en) * | 1998-05-13 | 2011-08-03 | Epimmune Inc. | Expression vectors for stimulating an immune response and methods of using the same |
IL125608A0 (en) * | 1998-07-30 | 1999-03-12 | Yeda Res & Dev | Tumor associated antigen peptides and use of same as anti-tumor vaccines |
US6387888B1 (en) * | 1998-09-30 | 2002-05-14 | American Foundation For Biological Research, Inc. | Immunotherapy of cancer through expression of truncated tumor or tumor-associated antigen |
AU774076C (en) * | 1998-12-09 | 2005-04-14 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, The | A recombinant vector expressing multiple costimulatory molecules and uses thereof |
AU3395900A (en) * | 1999-03-12 | 2000-10-04 | Human Genome Sciences, Inc. | Human lung cancer associated gene sequences and polypeptides |
EP1218538A2 (en) * | 1999-06-30 | 2002-07-03 | Ludwig Institute For Cancer Research | Cancer associated antigens and uses therefor |
EP1244465A4 (en) * | 1999-12-21 | 2005-01-12 | Epimmune Inc | INDUCTION OF CELLULAR IMMUNE RESPONSE TO PROSTATE CANCER BY MEANS OF PEPTIDE AND NUCLEIC ACID COMPOUNDS |
EP1118860A1 (en) * | 2000-01-21 | 2001-07-25 | Rijksuniversiteit te Leiden | Methods for selecting and producing T cell peptide epitopes and vaccines incorporating said selected epitopes |
EP2278023A1 (en) * | 2000-04-28 | 2011-01-26 | Mannkind Corporation | Epitope cluster from Melan-A/MART-1 for the induction of anti-tumor immunogenicity |
US20030215425A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-11-20 | Simard John J. L. | Epitope synchronization in antigen presenting cells |
FR2812087B1 (fr) * | 2000-07-21 | 2007-05-11 | Inst Nat Sante Rech Med | Procede de criblage de peptides utilisables en immunotherapie |
EP1911461B1 (en) * | 2000-10-19 | 2011-12-07 | Epimmune Inc. | HLA class I and II binding peptides and their uses |
US20030044813A1 (en) * | 2001-03-30 | 2003-03-06 | Old Lloyd J. | Cancer-testis antigens |
WO2003008537A2 (en) * | 2001-04-06 | 2003-01-30 | Mannkind Corporation | Epitope sequences |
DE60238864D1 (de) * | 2001-11-07 | 2011-02-17 | Mankind Corp | Für epitope von antigenen kodierende expressionsvektoren und verfahren zu deren konzeption |
AU2003253860A1 (en) * | 2002-07-10 | 2004-01-23 | The Regents Of The University Of Michigan | Expression profile of lung cancer |
US9469902B2 (en) | 2014-02-18 | 2016-10-18 | Lam Research Corporation | Electroless deposition of continuous platinum layer |
-
2002
- 2002-03-29 WO PCT/US2002/010189 patent/WO2003008537A2/en unknown
- 2002-04-04 EP EP10183517A patent/EP2394655A3/en not_active Withdrawn
- 2002-04-04 EP EP10183561A patent/EP2465520A3/en not_active Withdrawn
- 2002-04-04 CN CN201010267145XA patent/CN101948841A/zh active Pending
- 2002-04-04 AU AU2002254570A patent/AU2002254570A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-04 WO PCT/US2002/011101 patent/WO2002081646A2/en active Application Filing
- 2002-04-04 JP JP2002580010A patent/JP4874508B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-04 EP EP02723804A patent/EP1383528A4/en not_active Withdrawn
- 2002-04-04 US US10/117,937 patent/US20030220239A1/en not_active Abandoned
- 2002-04-04 CN CNA028113985A patent/CN1512891A/zh active Pending
- 2002-04-04 MX MXPA03009042A patent/MXPA03009042A/es active IP Right Grant
- 2002-04-04 CA CA002442386A patent/CA2442386A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-02-25 US US11/067,159 patent/US20050221440A1/en not_active Abandoned
- 2005-02-25 US US11/067,064 patent/US20050142144A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-09-29 JP JP2008251482A patent/JP5135150B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-01-07 JP JP2010002403A patent/JP2010110330A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20050221440A1 (en) | 2005-10-06 |
EP2394655A2 (en) | 2011-12-14 |
US20030220239A1 (en) | 2003-11-27 |
EP2394655A3 (en) | 2012-05-02 |
WO2003008537A2 (en) | 2003-01-30 |
JP2005509404A (ja) | 2005-04-14 |
JP4874508B2 (ja) | 2012-02-15 |
CN1512891A (zh) | 2004-07-14 |
EP2465520A2 (en) | 2012-06-20 |
CA2442386A1 (en) | 2002-10-17 |
AU2002254570A1 (en) | 2002-10-21 |
US20050142144A1 (en) | 2005-06-30 |
EP1383528A4 (en) | 2005-03-09 |
MXPA03009042A (es) | 2004-10-15 |
JP5135150B2 (ja) | 2013-01-30 |
JP2009060910A (ja) | 2009-03-26 |
EP1383528A2 (en) | 2004-01-28 |
WO2002081646A3 (en) | 2003-07-17 |
JP2010110330A (ja) | 2010-05-20 |
WO2002081646A2 (en) | 2002-10-17 |
WO2003008537A9 (en) | 2004-02-19 |
EP2465520A3 (en) | 2012-09-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5135150B2 (ja) | エピトープ配列 | |
JP2010104370A (ja) | エピトープ配列 | |
CN100589845C (zh) | 用于治疗癌症的抗新血管系统制剂 | |
AU2010227059B2 (en) | Combinations of tumor-associated antigens in compositions for various types of cancers | |
CN104877008B (zh) | 用于hla-a2阳性人群的来自gpc3的癌症排斥抗原肽以及含有该肽的药物 | |
CA2733866C (en) | Human cancer antigen of tyrosinase-related protein 1 and 2 and genes encoding same | |
IL184277A (en) | Use of a psma antigen and a prame antigen for the manufacture of medicaments for treatment of pancreatic cancer and immunogenic compositions comprising a psma antigen and a prame antigen for the treatment of pancreatic cancer | |
CN105648056A (zh) | 鉴定肿瘤特异性新抗原的组合物和方法 | |
EP1444261B1 (en) | Immunogenic alk (anaplastic lymphoma kinase) peptides | |
EP1752160A2 (en) | Epitope sequences |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1152076 Country of ref document: HK |
|
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20110119 |
|
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: WD Ref document number: 1152076 Country of ref document: HK |