MXPA01007659A - Transporte/inmunizacion transnasal con transportadores altamente adaptables. - Google Patents

Abstract

La presente invencion trata del transporte de moleculas preferentemente grandes a traves de la mucosa nasal, por medio de transportadores altamente adaptables diseñados de manera especial cargados con dichas moleculas. Uno de los propositos de elaborar dichas formulaciones es lograr el suministro sistemico no-invasivo de polipeptidos proteinas y otras macromoleculas terapeuticas; el otro objetivo es superar de manera circunstancial la barrera sangre-cerebro aprovechando la cavidad nasal para entrar al cuerpo y posteriormente tener acceso al cerebro. Un tercer objetivo es lograr una inmunizacion protectora o tolerogenica exitosa a traves de la administracion nasal de antigenos o alergenicos.

Description

TRANSPORTE/INMUNIZACIÓN TRANSNASAL CON TRANSPORTADORES ALTAMENTE ADAPTABLES Campo del Invento La presente invención trata del transporte de moléculas preferentemente g randes a través de la mucosa nasal, por medio de transportadores altamente adaptables designados de manera especial cargados con dichas moléculas. Uno de los propósitos de elaborar tales formulaciones, es lograr el suministro sistémico no invasivo de polipéptidos terapéuticos, proteínas y otras macromoléculas; el otro propósito es superar de manera circunstancial la barrera de sangre-cerebro explotando ia cavidad nasal para entrar al cuerpo, y posteriormente tener acceso al cerebro. U n tercer propósito, es lograr la inmunización protectora o tolerogénica exitosa a través de una administración nasal de antígeno o alergénico. Antecedentes del Invento Se mencionan algunos documentos a través del texto de la presente especificación . Cada uno de los documentos aquí mencionados (incluyendo cualesquiera especificaciones, instrucciones, etc. , del fabricante), están incorporadas a la presente invención como referencia; sin embargo, no hay lugar de que cualquier documento citado sea de hecho un arte previo de la presente invención. Se encuentra incorporado de manera adicional como referencia , el contenido completo de la descripción de la solicitud también pendiente presentada con el nombre de IDEA AG, y que lleva por título "Vacunación no invasiva a través de la piel" ("Noninvasive vaccination through skin"). El suministro nasal se ha explorado de manera extensa durante las últimas décadas, y se ha mencionado de manera repetida como una alternativa para el suministro sistémico de medicamentos, especialmente péptidos y proteínas, los cuales normalmente deben ser inyectados. El suministro nasal también atrae el interés debido ai hecho de que evita el efecto hepático de la primera pasada, el problema de la degradación en la cavidad nasal el cual crea un efecto de pseudo primera pasada (Sarkar, 1992). La última dificultad, estimula las modificaciones químicas o estructurales recombinantes del péptido o proteína, para mejorar la estabilidad y minimizar la disasociación enzimática de las macromoléculas en la nariz (Wearley, 1991 ). Anteriormente, algunos críticos (l l lum, 1991 ; Wearley, 1991 ) esperaron que el suministro transnasal de péptidos, soportado por los aumentadores de absorción, proporcionará un medio conveniente y eficiente para la administración de terapéuticos de proteína y péptidos. Sin embargo, más recientemente los peritos tomaron una postura menos optimista (Harris, 1993). Los farmacocinéticos no lineales y de metabolismo rápido de los péptidos suministrados en forma nasal (Wearley, 1991 ) son en parte los responsables de esto. Las otras razones son las barreras anatómicas y temporales presentadas a través de la mucosa nasal (Sarkar, 1992), y especialmente los efectos secundarios intolerables, de la mayoría si no es que todos los métodos que actualmente se utilizan para el suministro nasal. Esto mantiene también unos verdaderos esfuerzos para suministrar compuestos, con el objeto de generar una respuesta inmunológica protectora en forma transnasal, la cual podría representar una forma más natural de presentación de antígenos que la que se encuentra por medio de la inyección convencional . Los efectos secundarios adversos observados con los experimentos de inmunización transnasal , se deben principalmente a la presencia de inmunoadyuvantes (tales como por ejemplo toxina de Cólera (CT) o su fragmento B, proteína lábil por calor de E. coli, hemocianina de penetración magnética , u otras substancias con actividad de ribocilación de ADP) , y/o moléculas con una actividad aumentadora de permeabilidad , además del antígeno en la formulación para el suministro nasal. Además, la selectividad de la respuesta inmunológica , no se puede lograr con agentes estimulantes no específicos. Además, existe una variabilidad substancial en la respuesta inmunológica resultante después de la administración nasal del antígeno, debido probablemente a la dificultad de depositar el inmunogén en los sitios en la cavidad nasal, con la resistencia más baja del transporte de transbarrera. Las cavidades nasales humanas, con un volumen total de 15 mL y un área de superficie total de 1 50 cm2 - la cual asciende a más de 1 m2 si se dejan para las corrugaciones de la superficie - están cubiertas por mocos y una mucosa de 2 mm a 4 mm de espesor. La mayor parte de la superficie de la cavidad está delineada por un epitelio respiratorio, comprendido de células columnares, células de globo y células cuboidales ciliares. La permeabilidad de la barrera resultante, se relaciona con la de la cavidad oral, con la cual se comu nica y la cual está cubierta por un tejido de barrera queratinizado. En cualquier caso, las células en la barrera están empacadas en forma apretada y con frecuencias selladas con las distribuciones especializadas del lípido intercelular. Además, en cualquier caso, la permeabilidad de la barrera es disminuida por el uso tópico de substancias que comprometen la calidad y empaque de dichos sellos lipidíeos y/o, que incrementa la probabilidad de división molecular en la barrera. Desviándose de la situación encontrada en la boca, las substancias extrañas de la nariz son aclaradas en la nasofaringe por medio de la cilia, con una velocidad promedio de 5 mm/min. Una excepción es la región superior de la cavidad nasal, la cual no contiene cilia pero está cubierta por un neuroepitelio olfactorio pseudo estratificado. El subepitelio nasal contiene una red vascular densa, y la sangre de las venas de la nariz pasa directamente en la circulación sistémica . La ruta de administración nasal, no ha tenido relativamente éxito hasta la fecha, cuando se ha utilizado para substancias de alto peso molecular. El uso de aumentadores de permeabilidad , no ha mejorado lo suficiente la situación debido al hecho de que tales substancias generalmente son toleradas de manera deficiente y a su utilidad limitada. Las farmacodinámicas resultantes del suministro nasal de medicamentos, también es altamente variable. Las razones principales para esto, son la inconsistencia en el sitio de depósito o en los detalles de suministro, así como los cambios en la secreción de mucosa y el despeje mucociliar; estando compuestos los últimos especialmente por la presencia de alergias, alergias al polen y el resfriado común en sujetos tratados (Harris, 1993). La degradación de proteína en la mucosa, también es importante, (Sarkar, 1992). A pesar de esto, se han realizado numerosos estudios con buserelin , vasopressin, colecistoquinin , calcítonin, hormona de crecimiento y substancias relacionadas (por ejemplo GHRH), eritropoietin, G-CSF, interferon, insulin, hormonas de liberación de hormona de gonadotropina (GnRH), y análogos de vasopressin, cuyos resultados se revisan de manera breve a continuación. Suministro sistémico de medicamentos grandes a través de la nariz Hexarelin (análogo GH; MW » 800). La respuesta GH a la administración intranasal de hexarelin (aproximadamente 18 µg/kg), no fue significativamente superior a la de la inducida por una inyección de 1 µg GHRH/kg (Ghigo et al. , 1996). Por otra parte, el tipo de formador de tratamiento no modificó de manera significativa IGF-I aunque incrementó los niveles de IGFBP-3. Los niveles tanto de IGF-I como de IGFBP-3, fueron ligeramente aunque también significativamente incrementados mediante el tratamiento oral con los medicamentos (Ghigo et al. , 1996). El tratamiento intranasal con polvo nasal de octreotido, un análogo de somatostatin, (hasta 2 mg TID, correspondiente a un valor GH promedio de bajo de 5 µg/L durante 8 horas al día), también fue tolerado, únicamente con efectos secundarios leves y sin cambios significativos en la mucosa nasal. Se registró una mejoría del aspecto clínico en todos los pacientes después de algunos días de administración de polvo nasal de octreotide. Se encontró una correlación positiva entre GH e IGF-I , GH e IGFBP-3, IGF-I e IGFBP-3, insulina e IGFBP-3 e insulina e IGF-I durante el tratamiento crónico (de 3 a 6 meses) (Invitti et al. , 1996).

Colecistoquinin (MW « 1050). El octapéptido de terminal carboxi de colecistoquinin (CCK-8), tuvo funciones similares a las de colecistoquinin nativo (CCK), aunque carece de selectividad del receptor y estabilidad metabólica. La transmisión de saciedad a través del subtipo de receptor-A, se puede utilizar para la gestión de obesidad. Esto también se mostró después de la administración intranasal de Hpa(SO3H)-Nle-Gly-Trp-Nle-MeAsp-Phe-N H2, el resultado del movimiento del grupo N-metilo de Phe a Asp, el cual inhibió la alimentación en perros de raza beagle (Pierson et al. , 1997). Después de la administración intranasal (10 µg) e intravenosa (0.25 µg y 2.5 µg) de un derivado octapéptido de colecistoquinin, las substancias CCK-8 mostró afectar el evento de auditoria relacionado con el potencial (AERP) en 20 sujetos saludables. El efecto fue mayor en mujeres que en hombres (Pietrowsky et al. , 1996). Las concentraciones de plasma CCK-8 después de la administración intranasal de 10 µg de CCK-8, fueron comparables con los de 0.25 µg de CCK-8 proporcionados i.v. , aunque fueron substancialmente inferiores a los provocados por 2.5 µg de CCK-8 (Pietrowsky et al., 1996). Vasopressin (MW = 1054). Se administró en forma intranasal y oral a sujetos saludables durante 1 semana vasopressin DGAVP (2 mg). Los niveles pico siempre fueron observados a los 15 minutos. La vida media de la absorción y eliminación promedio (alrededor de 8 minutos y de 35 a 38 minutos, respectivamente), fueron similares a las de las dos rutas de administración probadas, aunque la última únicamente tuvo 0.7% de biodisponibilidad relativa (Westenberg et al. , 1994).

En un estudio cruzado doble ciego, los sujetos recibieron en tres diferentes ocasiones 20 IU de (arginina)vasopressin (AVP) en forma intranasal (IN), ó 1 .5 I U de AVP y solución salina i.v. Los potenciales evocados (ERPs), fueron registrados durante el desempeño de los sujetos en una tarea de atención al auditorio. Las concentraciones de plasma de vasopressin durante el desempeño de la tarea, fueron aumentadas después de AVP, con el incremento después de la administración i.v. de AVP excede en 2000 dobleces al de después de la administración i.v. AVP de AVP, que incrementó de manera substancial el componente P3 del ERP en contraste con la inyección (Pietrowsky et al. , 1996). El tratamiento agudo (2 mg) y crónico de 2 semanas (1 mg/día) con DGAVP nasal, reveló una memoria a corto plazo mejorada para palabras abstractas en hombres, aunque no en mujeres, sin efecto positivo en palabras de aprendizaje concretas. El tratamiento con DGAVP crónico, pero no agudo, redujo el tiempo de reacción para la exploración de dígitos en una tarea de comparación de memoria (paradigma Sternberg) en ambos sexos (Bruins et al., 1995). En un estudio humano diferente, la arginina-vasopressin (AVP: 3x10 I U) aumentó el desempeño de la memoria después de la administración nasal. El último complejo positivo (LPC), provocado por un estímulo excéntrico, no fue afectado mientras que la tarea de codificación estructural reveló un efecto en el medicamento. En ambos estudios, la ingestión de AVP dio como resultado un cambio marcado de la distribución del cuero cabelludo del componente P3, el cual es una parte prominente del LPC. Por lo tanto, el vasopressin fue concluido para influenciar el procesamiento nervioso central del contenido emocional del estímulo (Naumann et al. , 1991 ). El tratamiento subcrónico con vasopressin (40 lU/día), mostró aumentar el sueño nocturno en 2 sujetos ancianos (Perras et al. , 1996). Sin embargo, la administración intranasal de vasopressin (DDAVP: 30 ó 60 microgramos) no tuvo efecto general en la percepción de dolor en humanos, aunque se observaron algunos otros efectos (Pohl et al. , 1996).

Buserelin (MW =1239). El tratamiento de 40 mujeres con endometriosis y 10 mujeres con leiomioma uterino utilizando buserelin agonista de GnRH (200 µg , 3x diarias, 6 meses, en forma intranasal) redujo la marca pélvica promedio de AFS de 24 a 7 y el tamaño de los fibroides disminuyó en un 69% (Biberoglu et al. , 1991 ). Calcitonin (MW = 3432). Ichikawa et al. (1994), concluyó que la administración nasal (5, 10, 20 y 40 U/rat) y subcutánea (5, 10 y 20 U/kg) de Salmón calcitonin en días alternos durante 3 semanas, comenzando una semana después de la ovarectomía, evitó los cambios osteopénicos, siendo el método invasivo aproximadamente 2 veces más efectivo. En una prueba doble ciego, se investigó el efecto de la administración intranasal de Salmón calcitonin en parámetros bioquímicos de huesos registrados en 32 pacientes inmovilizados por un prolapso del disco ¡ntervertebral (van der Wiel et al. , 1993). El calcitonin en una dosis de dos veces 200 lU/día inhibió en un 40% el incremento en la aceleración de la proporción hidroxiprolina/creatinina urinaria de 2 h (OHPr/Cr) y disminuyó en un 80% el incremento en la proporción de calcio/creatinina (Ca/Cr). La disminución en suero 1 ,25-dihidroxivitamina D después de 10 días de inmovilización , fue significativamente menor en el grupo tratado con calcitonin que en el grupo de placebo (14 versus 29%, respectivamente; P < 0.05) . Sin embargo, el calcitonin intranasal, el cual fue bien tolerado, no tuvo influencia en los registros de dolor, según fue medido con una escala análoga visual (van der Wiel et al. , 1 993). Factor/s de liberación de hormona de crecimiento (GH) (MW = 5040) . El modo actual de terapia de reemplazo de hormona de crecim iento, es una inyección subcutánea (s .c.) d iaria administrada en la noche. Este programa no tiene la capacidad de mimetizar el patrón pulsátil endógeno de la secreción de GH, el cual debe ser de importancia para la inducción de crecimiento y otras acciones de GH (Laursen et al. , 1 996) . Para estimular la producción endógena de hormona de crecimiento, la proteína se administro en tres ocasiones en forma intranasal en dosis de 0.05, 0.1 0 y 0.20 l U/kg , utilizando didecanoil-L-a -fosfatidilcolina como un aumentador (Laursen et al. , 1 996). En las otras dos ocasiones los pacientes recibieron una inyección s.c. (0.1 0 l U/kg) y u na inyección i.v. (0.01 5 l U/kg) de GH , respectivamente. Las dosis nasales y de inyecciones s.c. fueron administradas en orden aleatorio en un diseño cruzado. La administración intravenosa produjo un valor pico de suero GH de vida corta de 128 µg/L. Los niveles pico fueron de alrededor de 14 µg/L después de la inyección s.c. (50% de biodisponibilidad) y entre 3 µg/L y 8µg/L, respectivamente, después de las tres dosis nasales (biodisponibilidad entre 4% y 9%) . Los niveles de suero del factor I de crecimiento similar a insulina (IGF-I), incrementaron de manera significativa únicamente después de la administración s.c. Sin embargo, los datos revelaron que se logró una imitación más parecida de las pulsaciones GH fisiológicas a través de la nariz. A pesar de esto, los autores del estudio, concluyeron que la administración de GH es de importancia limitada para la inducción de una respuesta metabólica a GH (Laursen et al. , 1996). GHRP-2 es uno de los miembros más potentes de la familia de GHRP, el cual ejerce su actividad biológica después de la administración oral, ¡ntranasal e i.v. Por ejemplo, los niños que tienen una respuesta robusta a los factores inyectados de liberación de GH, también recibieron GHRP-2 intranasal, con una respuesta significativa, no cuantificada en un rango de dosis de 5-20 µg/kg por dosis (Pihoker et al. , 1995). I nsulina (MW = 5808). El problema de la baja biodisponibilidad de las soluciones de insulina suministradas a través de la mucosa nasal, se mejoró utilizando aumentadores de absorción o microesferas bioadhesivas (Gizurarson & Bechgaard, 1991 ; l l lum & Davis, 1992). Se midió una biodisponibilidad mayor al 10%, aunque hasta la fecha no se ha encontrado una formulación correspondiente en las últimas pruebas clínicas. La razón principal para esto, parece ser el severo daño a la mucosa nasal causado por los aumentadores de permeabilidad comúnmente utilizados. Por ejemplo, después de la administración de formulaciones en polvo que comprenden insulina y el aumentador de permeabilidad tauro-24,25-dihidrofusidato de sodio (STDHF), la respuesta hipoglicaemica y los niveles de insulina de suero en ovejas, se incrementó con la proporción molar de STDHF/insulina dentro del rango de 0 a 16.8 (Lee et al. , 1991 ). La razón de esto, incrementa la permeabilidad de la mucosa así como reduce el tamaño del agregado de insulina. La biodisponibilidad fluctúa desde 2.9% a 37.8% para el polvo, y se reportó ser de 15.7% y 37.4%, respectivamente, para las gotas o rociadores que contienen una mezcla de STDH F/insulina = 8.4/1 , y rigurosamente proporcional para la concentración del aumentador (Lee et al. , 1991 ). Sin embargo, para lograr una alta biodisponibilidad, se tienen que tolerar cambios importantes en la mucosa nasal. En humanos, la formulación de 200 U insulina/mL que contiene una mezcla de aumentadores (didecanoil-fosfatidilcolina (2%p), glicerol (1 .6%p), 0.4%p de aceite de coco fraccionado) y 0.2%p de colesterol, resultó en aproximadamente el 8% de biodisponibilidad, los valores más altos que se han medido para la dosis alta (2x3 rociadores de 50 µL cada uno), el cual también fue el más irritante (Drejer et al. , 1991 ). Los hexámeros de insulina con disasociaciones de ciclodextrina en agregados más pequeños, dependen de la estructura y concentración. Por lo tanto, se especuló que la disasociación de hexámeros es la razón de la absorción nasal superior del polipéptido (Shao et al. , 1992). Se reportó que la efectividad relativa de diversas ciclodextrinas para este propósito, disminuye del dimetil-ß-ciclodextrin (DM-ß-CD) > a-ciclodextrin (a-CD) > ß-ciclodextrin (ß-CD), hidroxipropil-ß-ciclodextrin (HP-ß-CD) > ?-ciclodextrin (gamma-CD). Se invocó una relación directa entre la promoción de absorción y la liberación de proteína y lípidos de la membrana nasal, para explicar dicha secuencia (Shao et al. , 1992).

Queda menos claro, porqué el citosan catión ico mejora la absorción de la insulina a través de la mucosa nasal de rata y borrego en una concentración que depende del modo, con concentraciones óptimas superiores al 0.2% y del 0.5% en ratas y borregos, respectivamente, aunque la eficiencia general de este proceso es de ú nicamente alrededor del 10% (l l lum et al. , 1994). Utilizando didecanoil-L-a-fosfatidilcolina como un aumentador, se obtiene como resultado del 4% al 9% de biodisponibilidad nasal de insulina (Laursen et al. , 1 996) . G-CSF (MW = 1 9600). La biodisponibilidad relativa de rhG-CSF administrada en forma nasal en la rata, fue de aproximadamente el 2%, comparada con una inyección s.c. , tal como se evaluó a partir de la concentración rhG-CSF inmunológicamente activa en el plasma de rata , y el área bajo la curva (AUC) en t=8 h . Los conteos de estimulación de leucocitos sugirieron del 5 al 10% de biodisponibilidad en t=48 h. Se incrementaron la biodisponibilidad relativa y la disponibilidad farmacológica 23 y 3 veces, respectivamente, a través de éter 9-laurílico de polioxietileno (Laureth-9) , aunque no se incrementa en la biodisponibilidad ocurrida con glicocolato de sodio (Machida et al. , 1993). La absorción de los factores recombinantes disueltos de estimulación de colonia de granulocito humano (rhG-CSF en pH 4) a través de la nariz de conejos, se investigó con dimetil-ß-ciclodextrin agregado o sin dicho excipiente, el cual actúa como un aumentador de permeabilidad de la barrera. Las proteínas fueron absorbidas y los números totales de leucocitos en la sangre periférica aumentaron en cualquier caso, aunque los excipientes mejoraron de manera apreciable la absorción de rhG-CSF (Watanabe et al. , 1 993). Un estudio farmacocinético y farmacodinámico subsecuente (Watanabe et al. , 1 995) , reveló que la proteína es absorbida a través de la cavidad nasal de una solución , especialmente en la presencia de alfa-ciclodextrin (a-CyD), la cual puede actuar como un transportador en la membrana. Se encontró una buena correlación entre el logaritmo del área bajo la concentración-tiempo curva de G-CSF del suero (AUC) y el área bajo el conteo-tiempo curva total de leucocitos de la sang re (Watanabe et al. , 1995). Interferon (MW = 23000). El tratamiento de resfriados de rinovirus experimentales en 38 adultos mediante la administración intranasal de serina beta de interferon recombinante (MW = 18500), no tuvo efectos en el rango o severidad de la enfermedad , aunque disminuyó la frecuencia de arrojar el virus por el factor de 2 (en el d ía 4) a 3 (en el día 6) . El curso de la disfu nción del oído medio asociado con resfriados experimentales, también se vio afectado de manera positiva por el medicamento (Sperber et al. , 1 992). Eritropoietina (MW = 30400) . La disponibilidad farmacológica de rh-EPO después de la administración intranasal sin aumentadores se comparó con la de las inyecciones intravenosas. Se aumentó la actividad farmacológica en pH bajo y la solución de mannitol hipotónico, los cuales ambos comprometen la calidad de la barrera. Esto dio como resultado una biodisponibilidad relativa del medicamento aplicado en forma nasal entre el 7% y el 4%, cuando se calculó a través de diferentes métodos de conteo de reticulocitos (Shimoda et al. , 1995).

Se observó que el dextrano marcado (MW = 4100, 9000, 17500), aplicado en una forma nasal en una dosis de 6.5 mg, pasa mucosa en la presencia de glicocolato (3 mg) y se encuentra en la sangre en un rango de concentración de entre 6 ng/mL y 21 ng/mL, el cual corresponde a una aplicación del 0.05%, 0.02%, y 0.01 % para los tres tamaños moleculares, respectivamente (Maitani et al. , 1989). En resumen, las enseñanzas combinadas de la técnica anterior demostraron que la probabilidad de que pasen moléculas grandes de la mucosa nasal, disminuye fuertemente con el incremento del peso molecular. Hasta la fecha, el tamaño de las moléculas administradas de manera exitosa a través de la nariz, normalmente es < 1300 Da, y siempre de bajo de 3500 Da. Se logra un transporte significativo únicamente con promotores que soportan la permeabilidad, y es, por lo menos en un cierto rango de concentración proporcional a la concentración del aumentador. La concentración del aumentador dentro del rango de porcentaje puede asegurar hasta el 30% de biodisponibilidad del medicamento (o marca), aunque valores de bajo del 10% y normalmente de un porcentaje menor. La alta eficiencia de transferencia, está acompañada de un fuerte daño al tejido local. Esto causa desagradables efectos secundarios agudos y puede, en primer lugar, derogar la permeabilidad de la barrera nasal, y con un uso repetido provocar la queratinización extensiva del epitelio, que finalmente reduce la eficiencia del transporte transnasal. Se considera que el éxito del transporte transnasal depende de la pérdida de contactos de célula ciliada-de globo, globo-globo, o ciliada-ciliada, las cuales también abren pasajes para el movimiento del agua (McMartin et al. , 1 987) . Los procedimientos o substancias que apoyan el proceso ya sea en forma osmótica (como en el caso de la adición de polisacáridos), físico/química (como en el caso de la adición de tensoactivos) o biológica (como en el caso de moléculas que afectan la bioqu ímica celular, incluyendo muchos medicamentos, adhesión celular o transporte trans- y epicelular) , pueden por lo tanto mejorar el suministro de medicamentos a través de la mucosa nasal. La translocasión a través de las células es posible, aunque probablemente rara, excepto, puede ser, en los casos de algunas infecciones o aplicaciones virales. Los materiales, tales como polímeros de polietrolitos, los cuales prolongan el tiempo de retención e incrementan la proximidad entre las moléculas que serán transportadas y las membranas celulares, son útiles también para el propósito. El límite para este último efecto se ajusta mediante el movim iento ciliar, el cual tiende a aclarar la superficie mucosa aproximadamente cada 30 minutos y transporta el material de la superficie en la garganta , y por lo tanto hacia el tracto gastrointestinal. El transporte transmitido por ciertas partículas, fue considerado como dependiente de este efecto. Sumi nistro de partícula a través de la nariz Las partículas finas in haladas (polvo de mantillo o Kanto, ceniza, negro de carbono, partículas de expulsión de diesel (DEP) , e hidróxido de aluminio (alum)), parecen actuar como adyuvantes y aceleran la producción del anticuerpo IgE contra el polen, en ratones hembra BDF1 ; sin embargo, la naturaleza de las partículas su capacidad de adsorción de antígenos y/o su tamaño, parecen jugar únicamente un papel menor dentro del proceso (Maejima et al. , 1997). Las esferas huecas, de acuerdo con Ting et al. , (1992), no son adecuadas para el suministro nasal, debido a su rápido despeje y patrón de deposición variable. Las micropartículas de alcohol polivinílico en la forma de esferas sólidas colapsadas con el tamaño deseado para la deposición nasal (10-200 µm), por lo tanto fueron producidas por medio de rocío-secado y rocío-disolución (Ting et al. , 1992). No obstante la observación anterior, varios tipos de suspensiones de particulado se utilizaron en la nariz, normalmente para provocar anticuerpos contra los antígenos asociados con la partícula. Esto incluye los llamados proteosomas que comprenden gp160 (Lowell et al. , 1997) o proteínas del virus influenza. Otro ejemplo, son las partículas elaboradas de carbohidratos polimérizados cubiertos con una (bi)capa de lípidos. Sin embargo, es importante considerar, que en cualquier estudio de asimilación nasal, se debe considerar y permitir una redestribución secundaria. Por ejemplo, la biodistribución de radioactividad es similar a la del alergénico Parietaria judaica mayor purificado después de la administración sublingual, oral, e intranasal en voluntarios humanos saludables. Esto es indicativo del material de prueba tragado y absorbido en el tracto gastrointestinal (Bagnasco et al. , 1997). En el caso intranasal, el transporte a la faringe mediante el espacio mucociliar, juega también un papel importante, aunque se retiene una fracción relevante del trazo en la mucosa nasal durante hasta 48 horas después de la administración (Bagnasco et al. , 1997). Derramamientos orales y el peligro de resultados positivos y falsos Las proteínas son absorbidas en el trato gastrointestinal, aunque en pequeñas cantidades. Por ejemplo, la ovalbumina (OVA) es absorbida en el estómago así como a partir del trato Gl en la sangre y la circulación linfática en niveles de 0.007-0.008% y 0.0007-0.002% de la dosis aplicada; una dosis superior en el último caso, conduce a una absorción relativamente superior (Tsume et al. , 1996). La absorción estomacal suministra casi de manera exclusiva a la sangre, sugiriendo diferentes mecanismo y/o rutas de absorción entre el estómago y el intestino delgado. La asociación OVA, con liposomas, puede mejorar la asimilación en aproximadamente de 2 a 3 dobleces, posiblemente debido a la degradación enzimática inferior de OVA. Con frecuencia, los resultados de la inmunización nasal y oral son muy similares, sugiriendo que parte del efecto del formador se puede deber al derrame del antígeno en el trato gastrointestinal. Los datos obtenidos con el adenovirus humano tipo 5, utilizado como un vector para secuencias de ADN heterólogas, ilustra este caso (Flanagan et al. , 1997). Suministro transnasal en el tejido nervioso central (CNS) El acceso de substancias al cerebro, es de una importancia primordial para el tratamiento de enfermedades psiquiátricas y neurológicas. La ruta de administración transnasal en el CNS, se probó por lo tanto para algunas moléculas bioactivas seleccionadas.

Hasta la fecha, el suministro de medicamentos en el tejido CNS por medio de administración nasal, ha recibido muy poca atención (Pesechnik 6 Price , 1 996). El aglutinin de germen de trigo acoplado a la peroxidasa de rábano silvestre, demostró ser recogido por las células del nervio olfatorio, dando como resultado la concentración en el bulbo olfatorio de alrededor de 0.1 % de la concentración aplicada; el principio subyacente probablemente es la endocitosis transmitida por receptor de WGA y la transferencia retrog rada trans-sináptica subsecuente hacia el cerebro. También es posible un mecanismo similar en el caso de infecciones virales en la nariz. Por ejemplo, una instalación intranasal del virus de estomatitis vesicular (VSV) , un virus de ARN de sentido negativo, puede dar como resultado una infección letal del cerebro de múridos y ratas (H uneycutt et al. , 1994). Dentro de las 12 horas siguientes a la inoculación intranasal de VSV, este antígeno puede ser detectado en la capa del nervio olfatorio del bulbo olfatorio ipsilateral. Dentro de los 3 a 4 d ías posteriores a la inoculación (p. i.), el VSV se ha diseminado en el glomeruli del bulbo olfatorio, así como en el núcleo olfatorio anterior, ipsilateral a la instalación VSV. Dentro del glomeruli, el antígeno VSV es más prevalente en las células g ranulares que en las células mitrales. De manera correspondiente, el tracto olfatorio lateral, en donde cursan los axons de las células mitrales, permanece el VSV negativo durante 7 días p. i. A los 7 días p. i. , se detectan las proteínas virales en varias regiones adicionales que se extienden al tronco cerebral. El patrón de inmunoreactividad VSV, soporta la idea de la infección inicial del glomeruli del bulbo olfatorio, con la subsecuente difusión a través tanto de las superficies ventriculares como de transporte retrogrado dentro de los axons de los sistemas transmisores neuromoduladores, que nervan el bulbo olfatorio (H u neycutt et al. , 1 994). Draghia et al. , (1995) ha demostrado que es posible transferir el gen de Escherichia coli lacz in vivo en las estructuras del sistema nervioso central de ratas, después de la instalación nasal de beta galactosidasa del vector adenoviral de replica defectuosa AdRSV. Las células mitrales procedentes del bulbo olfatorio, neuronas procedentes del núcleo olfatorio anterior, loccus coeruleus y el área postrema, expresada beta-galactosidasa durante por lo menos 12 d ías (Draghia et al. , 1 995) . El virus de la vacuna de parainfluenza tipo 1 , también tiene acceso directamente al sistema nervioso central , infectando las neu ronas olfatorias (Mori et al. , 1 996). Sin embargo, sería altamente deseable tener un sistema de transporte transnasal conveniente y confiable para los compuestos que tienen la capacidad y pretenden generar una respuesta inmunológica protectora , sin la generación simultánea de una variedad de efectos secundarios adversos. Los tipos comunes de aplicaciones no invasivas, incluyendo la inmunización oral, a menudo no provocan la respuesta inmunológica deseada. Muchas vacunas inyectables tampoco proporcionan un patrón óptimo del isotipo del anticuerpo, debido principalmente a la ruta no natural de entrada del antígeno en el cuerpo. La inmunización transnasal permanece problemática debido al gran tamaño del inmunogén típico, el cual está sujeto a restricciones similares a la del transporte de compuestos farmacéuticamente activos a través de la mucosa nasal. En conclusión, aunque de la técnica anterior ha probado varios métodos para el suministro transnasal, ha fallado en proporcionar un principio convincente para una transferencia de compuestos convincente y bien tolerada, tal como substancias farmacéuticamente activas, inmunogenes/antígenos o alergénicos, a través de la barrera nasal, en particular si dichos compuestos son grandes. La solución ha dicho problema técnico, por ejemplo, la provisión de un sistema adecuado, se proporciona a través de las modalidades caracterizadas en las reivindicaciones. Sumario del Invento Por lo tanto, la presente invención se relaciona con uso de un penetrante, suspendido o dispersado en un solvente, en la forma de una gota diminuta de fluido rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos dos diferentes substancias o dos diferentes formas de una substancia con la tendencia a agregar, diferenciándose dichas substancias o formas de una substancia mediante por lo menos el factor de 10 en solubilidad en un medio líquido preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma más soluble de la substancia o el diámetro promedio de los hetero-agregados que consiste de ambas de dichas substancias o formas de dicha substancia, es menor al diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma menos soluble de la substancia y/o en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración, en donde el contenido de dicho componente alcanza hasta el 99% mol de la concentración requerida para solubilizar la gota o de lo contrario corresponda al 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada, refiriendo la mayor, y/o en donde la energía de deformación elástica de la gota que rodea el recubrimiento similar a una membrana es de por lo menos 5x inferior, más preferentemente de por lo menos 10x inferior e idealmente es más de 10x inferior a la de las células de sangre rojas o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifátícas de fluido, actuando posteriormente dichas gotas como transportadores para la administración transnasal de compuestos farmacéuticamente activos, antígenos, alergénicos, mezclas de antígenos y/o mezcla de alergénicos. Estos compuestos, antígenos o alergénicos no atraviesan la mucosa nasal en una cantidad prácticamente significativa por si mismas, sin causar efectos laterales inaceptables. Con respecto a los valores mencionados anteriormente de hasta el 99%, se debe observar que los valores de bajo del 50% del formador con relación a la concentración, son particularmente útiles, siendo incluso más convenientes los valores de bajo de 40% reí o de aún de alrededor de y de bajo de 30% reí, en tanto que las más preferidas son en el caso de las gotas que no pueden ser solubilizadas por las concentraciones relativas del componente más soluble las cuales exceden las concentraciones relativas antes mencionadas por el factor de hasta 2. Las formulaciones que incluyen los penetrantes antes descritos, se describen en detalle en las patentes DE 41 07 152, PCT/EP91/01596, PCT/EP96/04526, y DE 44 47 287, las cuales están incorporadas a la presente invención como referencia. La información relevante útil para la fabricación de penetrantes y la carga con varios macromoleculares activos, los cuales son demasiados grandes para impregnarse a través de la barrera, se proporciona en la solicitud de patente PCT/EP98/06750, también incorporado a la presente invención como referencia. Se puede encontrar una información más general con respecto a las suspensiones de lípidos en el manual que trata con 'liposomas' (Gregoriadis, G. , ed . , CRC Press, Boca Ratón, Fl . , Vols 1 -3, 1987), en el libro 'Liposomas como transportadores de medicamento' ('Liposomes as drug carriers') (Gregoriadis, G. , ed . , John Wiley & Sons, N ueva York, 1 988) , o en el manual de laboratorio 'Liposomas. Un Método Práctico' ('Liposomes. A Practical Approach') (New, R. , Oxford-Press, 1 989). Las propiedades de los fosfolípidos, los cuales pueden ser utilizados de manera conveniente para preparar inm unopenetrantes bio-compatibles, se revisan en la publicación 'Manual de fosfolípidos' ('Phospholipids Handbook'), (Cevc, G. , ed. , Dekker, Nueva York, 1995). La temperatura de fabricación para d ichos penetrantes, normalmente se elige dentro del rango de 0°C a 95°C . Preferentemente, se opera dentro del rango de temperatura de 1 0 a 70°C, con más frecuencia a temperaturas de entre 1 5°C y 45°C, bajo todas las circunstancias debajo de la temperatura en la cual cualquier ingrediente de form ulación importante sufriría un cambio irreversible en la composición o estado físico. Estas temperaturas pueden ser determinadas por el experto en la materia, utilizando su conocimiento general y las enseñanzas de los diferentes documentos mencionados en esta especificación . (Como referencia: la temperatura del cuerpo normalmente es de alrededor de 32°C). Son posibles otros rangos de temperatura, los más notables para los sistemas que contienen componentes que se pueden congelar no volátiles, formulaciones estabilizadas por crio o calor, etc. Si se requiere mantener la integridad y las propiedades deseadas de los componentes del sistema individual, las form ulaciones del transportador pueden ser almacenadas en frío (por ejemplo a 4CC), con o sin agentes activos asociados. También es posible, y alg unas veces sensible, fabricar y almacenar la preparación bajo una atmósfera inerte, por ejemplo bajo nitrógeno. La vida en el anaquel de la formulación del transportador, puede ser extendida además, utilizando substancias con un pequeño número de enlaces dobles, esto es, por medio de un bajo grado de no saturación , elig iendo ingredientes de ram ificación de peróxido, incluyendo antioxidantes, quelatores y otros agentes de estabilización , o preparando los penetrantes cargados con agentes ad hoc o in situ, por ejemplo a partir de una mezcla seca o secada por congelación . El término "dos formas de una substancia" en relación con la presente invención , significa dos estados de ionización o formas de sal de la misma substancia, dos diferentes complejos de dicha substancia, etc. Los términos "administración no invasiva" o "suministro no invasivo" en la presente especificación , denota la aplicación o el transporte a través de la mucosa nasal.

El término "administración nasal", dentro del contexto del presente documento, se refiere a aplicaciones del material de prueba, ya sea mediante entubación intranasal directa, respiración espontánea de una gota del fluido de prueba o una inhalación del fluido de prueba rociado dentro de la nariz, de manera independiente del sitio preciso de impacto o deposición . El término "penetración" en la presente solicitud, describe el movimiento no difusivo de entidades grandes a través de una barrera. Se considera que este proceso, involucra la adaptación del penetrante a la confinación de poros en la barrera de otra manera, quizás en la asociación con una disminución temporal selectiva y reversible en la resistencia de la barrera. El término "permeabilidad" se refiere a una difusión a través de la barrera semipermeable, y normalmente es conducida por medio del gradiente de concentración permeable a través de la barrera. De manera consecuente, un penetrante es una entidad que comprende una sola molécula o una distribución de moléculas demasiado grandes para impregnar a través de una barrera, pero que tienen la capacidad de atravesar la barrera debido a la capacidad que tienen los penetrantes a adaptarse a la forma y/o diámetro de los pasajes confinados de otra manera (poros) de una barrera. Esta capacidad de adaptación, se ve a partir del hecho de que, por ejemplo, los penetrantes mayores más de dos veces que el diámetro del poro, atravesaran la bicapa sin ser fragmentados de bajo del tamaño del poro. Por otra parte, un impregnador es una entidad que puede impregnar a través de la barrera semipermeable, tal como la piel. Un penetrante en un campo externo experimenta una fuerza de transmisión proporcional al tamaño nominal del penetrante y al campo aplicado, lo cual puede ocurrir de manera natural. Dicha fuerza, la cual en la piel no ocluida intacta se considera que se orig ina a partir del g radiente de concentración de agua a través del stratum corneum, puede dar como resultado un movimiento del penetrante a través de la barrera, incluyendo la piel , si la fuerza es lo suficientemente fuerte ya sea para deformar el penetrante o de lo contrario para ensanchar los pasajes en la barrera lo suficiente para eludir el problema de la exclusión por tamaño, o ambos. U n impregnador, por otra parte, es una molécula de difusión , que tiene por lo menos la capacidad de difusión a través de la barrera semipermeable. El penetrante antes descrito, normalmente es una entidad ultra-adaptable que comprende varios componentes. Dicho penetrante, en el sentido más amplio de la palabra, es un cuerpo supra-macromolecular que puede pasar de manera espontánea a través de la permeabilidad de la barrera con poros mucho más pequeños que el diámetro del penetrante, y por lo tanto transporta el material de la aplicación al sitio de destino en cualq uier lado de la barrera. Con el objeto de alcanzar esta meta , el penetrante debe ajustar sus propiedades, de manera más notable su capacidad de deformación , a la forma y tamaño de los poros en una barrera. Esto ocurre normalmente bajo la influencia de una fuerza o una presión de transmisión fuerte que actúan en todas las moléculas en el penetrante. Para este propósito, se mostraron gradientes que no dependen de la concentración del penetrante, tal como la hidratación o la diferencia del potencial eléctrico externo a través de la barrera. Los ag regados lípidos en estado (casi) metaestable, y de la naturaleza descrita anteriormente en relación con la presente invención, a men udo se comportan como penetrantes altamente adaptables, especialmente cuando tienen la forma de una gota delgada rodeada por una o varias membranas (bicapas) (Cevc et al. , 1 997; Cevc et al. , 1998). Debido a la capacidad de metástasis de la membrana , inusualmente la cu rvatu ra de la bicapa local superior puede desarrollase en los sitios de la desestabilización de la membrana local temporal, sin comprometer la integridad general del agregado. Desde el punto de vista de la composición , dichas vesículas ultra-adaptables y de autorregulación , normalmente consisten de una mezcla de lípidos elegida de manera adecuada. Con el objeto de cambiar las vesícu las de lípidos convencionales , liposomas, en las vesículas optimizadas (Transfersomas), se puede agregar, por ejemplo activadores de borde adecuados en la membrana del ag regado (Cevc et al. , 1 998) . De manera alternativa, se pueden utilizar moléculas que cambian la capacidad de deformación del sistema después de la elaboración del complejo con o que enlazan al ingrediente del agregado básico. Con frecuencia, aunque no de manera necesaria, los activadores pertenecen a la clase de tensoactivos que tienen una concentración debajo de la desaturación o solubilización , las cuales en el último caso dan surgimiento a la formación de micelas mezcladas . Esto es importante como lípidos solubilizados, en la forma de m icelas de lípidos mezcladas, que pueden atravesar los poros con un ancho mayor al del diámetro de la micela, aunque no tienen la capacidad de forzar la abertura del canal en los tejidos biológicos, los cuales pueden , sin embargo, ser ensanchados y traspasados por las vesículas de lípidos mezcladas. La razón postulada para esto — a lo cual el solicitante no desea involucrarse — es la agregación mucho mayor de un número del último tipo de agregados, que se traducen en una sensibilidad mayor a los gradientes externos de transporte-transmisión , tal como el gradiente de la actividad de agua , y el cual posteriormente tiene la capacidad de pagar el precio energético por la abertura del poro o canal en la barrera . La presente invención , en virtud de la técnica anterior, particularmente sorprendente ya que las vesículas de lípidos ultradeformables podrían parecer no adecuadas para el propósito de suministro transnasal, ya que fueron reportados hasta la fecha para atravesar barreras, tales como la piel, ún icamente bajo condiciones no oclusivas, esto es la presencia de un fuerte gradiente de concentración de agua trans-barrera (Cevc et al. , 1 985; y Paul y Cevc, 1 995) , lo cual consideramos que no existe en la mucosa nasal fuertemente hidratada. Se encontró de manera inesperada que las macromoléculas en asociación con los penetrantes altamente adaptables, normalmente en la forma de vesículas de lípidos mezcladas, son transportadas a través de la mucosa nasal, a pesar del alto contenido de agua en esta mucosa y en el aire exhalado saturado con humedad . En conclusión , a partir del hecho de que varias formulaciones probadas de manera exitosa de tales transportadores, no causaron irritación en la nariz, se deduce que el transporte antes mencionado no depende del daño en la barrera, siendo dicho daño la razón para el transporte de macromoléculas más convencional de una solución a través de la mucosa nasal. En lugar de esto, se considera (en donde el solicitante no desea estar involucrado con la teoría), que dicho transporte depende de la penetración del transportador a través de la barrera, lo cual no debe ocurrir en alrededores muy húmedos. Se considera adicionalmente de acuerdo con la presente invención , que aumentando la concentración de las moléculas activas de la superficie, las cuales pueden actuar, como aumentadores de permeabilidad , se disminuye la eficiencia del transporte de proteína correspondiente a través de la mucosa nasal, por lo menos cuando el punto de solubilización de los transportadores se ha alcanzado. Este descubrimiento es inesperado, en vista del hecho de que la técnica enseña que la biodisponibilidad de las macromoléculas administradas en forma nasal, normalmente es mayor, incrementando la concentración de permeabilidad del aumentador. U n tercer descubrimiento no esperado, es que el suministro de macromoléculas transmitidas por el transportador a través de la mucosa nasal, puede transmitir un transporte relativamente eficiente de moléculas grandes en el sistema nervioso central (CNS) . Se observa el influjo relativamente rápido después de la administración del medicamento en la cavidad nasal, cuando las moléculas grandes están asociadas con los transportadores. Esto puede deberse a que el transporte de los medicamentos asociados con el transportador a través de la mucosa nasal y la asimilación subsecuente de los transportadores cargados con medicamento en el nervio olfatorio, a través del cual el medicamento podría ser llevado hacia y dentro del CNS mediante el transporte retrógrado; habiendo sido postulado dicho transporte y probado con moléculas individuales (Pasechnik-V; Príce-J Exp. Opin . Invest. Medicamentos; 5: 1 255-1 276) ; el método no fue utilizado, debido al mejor conocimiento del solicitante, en combinación con los particulados actuales. Una explicación alternativa , podría involucrar el suministro macromolecular transm itido por el transportador en el sistema linfático peri-nasal, el cual ha sido reportado por comunicarse con el sistema nervioso central (Kida-S; Pantazis-A; Weller-RO. Neu ropatol. Appl. Neurobiol. 1993; 19: 480-448). U n cuarto resultado sorprendente log rado de acuerdo con la presente invención, es que los penetrantes descritos permiten una inmunización transnasal exitosa y preferentemente protectora con inmunogenes grandes. Se espera que el uso de transportadores de inm unogén o de antígenos altamente adaptables para los propósitos de inmunoterapia , o el uso que se ha mostrado de acuerdo con la presente invención , proporcione todos los beneficios de las vacu naciones nasales más convencionales, además de la seguridad y robustez de la administración . La seguridad mejorada podría reflejar la elección de los ingredientes transportadores no tóxicos y no irritantes. Pod ría resultar una mejor capacidad de reproducción a partir de la mayor capacidad de los transportadores diseñados de manera especial, comparada con la de los antígenos o inmu noadyuvantes que se utilizan solos, para superar la barrera de la nariz. Teniendo la expectación de que las poblaciones de transportadores diferentes cargadas con los antígenos individuales podrían ser combinadas en una formulación de vacuna muti-valente final, se proporciona la capacidad de la tecnología inventada para cumplir la tendencia en inmunoterapia. Estamos consientes de que las formulaciones no tóxicas y "suaves" que contienen ingredientes similares a los corporales meramente biocompatibles o naturales, que protegen más rápido y/o mejor al cuerpo que las inyecciones de antígenos correspondientes, podrían ser preferidas a estas últimas, y podrían tener un valor comercial substancial. De acuerdo con la presente invención, se recomienda elegir las características del penetrante, especialmente en cuanto a capacidad de deformación, concentración o composición de los agregados de lípidos mezclados, para controlar el rango o eficiencia del transporte transmitido por el penetrante. En el proceso de optimización de la formulación y/o administración, puede ser conveniente determinar el flujo de los penetrantes cargados con medicamento o agentes a través de los poros en una barrera bien definida, como a una función de una fuerza o presión de transmisión adecuada, la cual actúa a través de la barrera, y posteriormente describir los datos a través de una curva característica conveniente, la cual a su vez, se emplea para optimizar la formulación o aplicación posterior. La forma farmacéuticamente aceptable del agente, puede ser proporcionada en una variedad de formulaciones finales, opcionalmente, y dependiendo del propósito de la administración, en combinación con diversos agentes secundarios. Tales agentes serán explicados con mayor detalle más adelante, dentro del texto y pueden ser, por ejemplo, compuestos bacterianos u otras inmunomodulaciones. Además, la presente invención se refiere al uso de un penetrante, suspendido o dispersado en un solvente, en la forma de una diminuta gota de fluido rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos dos diferentes substancias o dos diferentes formas de una substancia con la tendencia a agregar, diferenciándose dichas formas de una substancia mediante por lo menos el factor de 1 0 en solubilidad en un medio líquido preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma más soluble de la substancia, o el diámetro promedio de los hetero-agregados que consiste de ambas de dichas substancias o formas de dichas substancias, sea menor al diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma menos soluble de la substancia y/o en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración en donde el contenido de dicho componente alcanza hasta el 99% mol de la concentración requerida para solubilizar la gota o de lo contrario corresponde al 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada , prefiriendo que sea superior, y/o en donde la energ ía de deformación elástica de la gota que rodea el recubrimiento similar a una membrana, sea de por lo menos 5x menos, más preferentemente de por lo menos 10x menos e idealmente sea más de 10x menos que la de la célula de sangre roja o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido como un transportador para la preparación de un farmacéutico, preferentemente una composición de vacuna para administración transnasal. Se prefiere que estas moléculas utilizadas por si mismas, no atraviesen la mucosa nasal en una cantidad prácticamente útil, sin originar efectos secundarios inaceptables. El transportador es combinado con el ingrediente farmacéuticamente activo antes de la administración, por ejemplo, cuando se formula dicha composición farmacéutica. Con respecto a explicaciones, descripciones de ventajas, etc. , adicionales de esto, y a las modalidades que se encuentran a continuación, se hace referencia a la descripción respectiva en relación con la primera modalidad descrita anteriormente. Quedará claro de manera adicional de acuerdo con la presente invención, que se puede formular un tipo de antígeno, alergénico o ingrediente farmacéuticamente activo o combinaciones de los mismos, dentro de dicha composición farmacéutica. Adicionalmente, la presente invención se refiere, al uso de un penetrante, suspendido o dispersado en un solvente, en la forma de una gotita líquida disminuida rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos 2 substancias diferentes o 2 formas diferentes de una substancia con tendencia a agregarse, difiriendo dichas substancias o forma de una substancia en al menos en el factor de 10, en la solubilidad en un medio líquido, preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de homo-agregados de la substancia o forma de la substancia más soluble o el diámetro promedio de los hetero-agregados, consistentemente de ambas de dichas substancias o forma de dicha substancia sea menor que diámetro promedio de homo agregados de la substancias o forma de la substancia menos soluble, y/o donde el componente más soluble tiende a subilizar la gotita penetrante y donde el contenido de dicho componente es hasta de 99% mol. , de la concentración requerida para solubilizar la gotita o corresponde además hasta el 99% mol. , de concentración en la saturación en la gotita sin solubilizar, lo que sea mayor, y/o donde la energ ía de deformación elástica del recubrimiento similar a una membrana q ue rodea a la gotita , sea por lo menos 5x inferior, más preferentemente por lo menos 1 0x inferior y de manera ideal sea más de 1 0x inferior, que la de las células sang uíneas rojas o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido en combinación con un ingrediente farmacéuticamente activo o un alergénico o antígeno para la preparación de una composición farmacéutica que se puede administrar en forma transnasal para el tratamiento de enfermedades infecciosas, desordenes endocrinos, preferentemente h ipopituitarismo, diabetes, hipertiroidismo, tiroiditis, más preferentemente tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis subaguda; desórdenes adrenales, preferentemente enfermedad de Addison , insuficiencia adrenal secundaria, síndrome de Cushing ; desórdenes gastrointestinales, preferentemente enfermedad de Crohn, colitis; enfermedades de hemorragia , preferentemente hemofilia, leucopenia, síndrome hipereosinofílico; desórdenes mucoesq ueletales y relacionados con los tejidos, preferentemente artritis reumatoide, síndrome de Sjogren , síndrome de Bechet, lupus, escleroderma, polimiositis/dermatomiositis, y artritis reumática de polimialgia temporal, nodosa poliarteriosis, granulomatosis de Wegener, desorden de tejido conectivo mezclado, espondilitis de anq uilosación , artritis soriática, osteoartritis, enfermedad de Paget, ciática, bursitis, tendonitis o tenosinovitis, epicondilitis, fibromialgia , faciitis eosinofílica; desórdenes neurológicos, preferentemente dolor, singultus, vértigo, desórdenes de ataques, desórdenes del sueño, ataques isquémicos temporales, lesión del cordón espinal, enfermedades de demielinación , desórdenes de las raíces nerviosas, miastenia gravis; desórdenes psiq uiátricos, preferentemente dependencia a las drogas, neurosis, desórdenes del humor, desórdenes esq uizofrén icos, desórdenes delusionales; para propósitos oncológicos y/o para tratamiento en el campo de la ginecolog ía , preferentemente para el tratamiento de dismenorrea, menopausia, anovulación crónica, deficiencia de ovario prematura, endometriosis, infertilidad ; y/o para tratamiento en el campo de la inmunología, preferentemente rechazo a trasplantes, hiposensibilización , inmunoterapia de alergias o vacunación profiláctica. El término "alergénicos", se utiliza en la presente invención para describir materiales endógenos o xenogénicos, por ejemplo, de origen animal o de planta , que dan como resultado una respuesta inmunológica no deseada en el cuerpo expuesto a dicho alergénico, dando como resu ltado con frecuencia una reacción de hipersensibilidad aguda. Los microbios que provocan alergias o partes de los mismos (por ejemplo de acaro) , partes de plantas (por ejemplo polen) o de animal (por ejemplo restos de cabello y piel), aunque también substancias elaboradas por el hombre e inorgánicas pertenecen a éste grupo. Por otra parte, casi cualquier parte del cuerpo humano, si es procesada de manera incorrecta por el sistema inmunológico o es expuesto al sistema inmunológico del cuerpo, puede dar como resultado una respuesta auto-inmune que conduce a la reacción alérgica a dicha substancia. En la interpretación más estrecha, utilizada cuando se manifestó, una alergénico es una substancia, un grupo o una distribución de substancias que causan reacciones inmediatas de hipersensibilidad en el cuerpo que podrían ser disminuidas, o incluso eliminadas, mediante inmunoterapia, ya sea que se lleve a cabo o no en forma no invasiba a través de la mucosa nasal. Un "antígeno" es una parte de un patógeno o de un alergénico en su forma natural, o después de su fragmentación o derivatizacíón. Más generalmente, la palabra antígeno denota una macromolécula o un fragmento de la misma, cualquier porción hapténica (por ejemplo, un carbohidrato simple, un carbohidrato complejo, un polisacárido o ácido deoxiribonucléico), de hecho, cualquier molécula reconocida por un repertorio de anticuerpo del cuerpo y que tiene posiblemente la capacidad de inducción de anticuerpos cuando se administra en el sistema. Un antígeno macromolecular se define como un antígeno que es conocido por o que se considera que atraviesa de manera espontánea la barrera nasal únicamente en una cantidad demasiado pequeña para el propósito práctico deseado. Por lo tanto, las macromoléculas son moléculas que, por si mismas no atraviesan la mucosa nasal en una cantidad prácticamente útil, sin causar efectos secundarios inaceptables. El término "una mezcla de antígenos" o "una mezcla de alergénícos", significa, de acuerdo con la presente invención, la combinación de por lo menos dos antígenos y/o alergénicos. Se puede conceptuar que todas las muestras de antígenos o alergénicos se pueden usar de acuerdo con la presente invención . Adicionalmente la presente invención se refiere a una composición farmacéutica para administración transnasal que comprende un transportador que es un penetrante, suspend ido o dispersado en un solvente, en la forma de una diminuta gota de fluido rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos dos diferentes substancias o dos diferentes formas de una substancia con la tendencia a agregar, diferenciándose dichas formas de una substancia mediante por lo menos el factor de 1 0 en solubilidad en un medio líquido preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma más soluble de la substancia, o el diámetro promedio de los hetero-ag regados que consiste de ambas de dichas substancias o formas de dichas substancias, sea menor al diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma menos soluble de la substancia y/o en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración en donde el contenido de dicho componente alcanza hasta el 99% mol de la concentración req uerida para solubilizar la gota o de lo contrario corresponde al 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada, prefiriendo que sea superior, y/o en donde la energ ía de deformación elástica de la gota que rodea el recubrimiento similar a una membrana, sea de por lo menos 5x menos, más preferentemente de por lo menos 1 0x menos e idealmente sea más de 1 0x menos que la de la célula de sangre roja o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido y un ingrediente farmacéuticamente activo. En una modalidad preferida del uso o la composición farmacéutica de la presente invención, el ingrediente farmacéuticamente activo es un adrenocorticostático, un adrenolítíco, un andrógeno o antiandrógeno, un antiparasítico, un anabólico, un anestésico o analgésico, un analéptico, un antialérgico, un antiarrítmico, antíarterosclerótico, antíasmático y/o broncopasmolítico, un antibiótico, un agente anti-infeccioso, un antidepresivo y/o antipsicótico, un antidiabético, un antídoto, un antiemético, un antiepiléptico, antifibrinolítico, anticonvulsivo o anticolinérgico, una enzima, una coenzima o el inhibidor de enzima correspondiente, un antihistamínico (y combinaciones de los mismos)o antihipertónico, un antihipotónico, un anticoagulante, antimicótico, antimiasténico, un agente contra Morbus Alzheimer o Morbus Parkinson, un agente para terapia ACS, un antiflogístico, antipirético, antirreumático, antiséptico, un analéptico respiratorio o un estimulante respiratorio, un broncolítico, cardiotónico, quimioterapéutico, un dilatador de coronaria, un citoestático, un diurético, un bloqueador de ganglio, un glucocorticoide, un agente anti-moscas, un haemostático, hipnótico, una inmunoglobulina o su fragmento cualquier otra substancia inmunológícamente activa, tal como un inmunomodulador, un carbohidrato bioactivo (derivado), un contraceptivo, un agente anti-migraña, un corticosteroide, un relajante muscular, un narcótico, un neuroterapéutico, un (poli)nucleótido, un neuroléptico, un neurotransmisor, un (poli)péptido (derivado) un opiato, un oftálmico, (para)simpaticomimético o (para)simpaticolítico, una (derivado)proteína, un medicamento de psoriasis/neurodermitis, un midriático, un psicoestimulante, rinológico, un agente que induce al sueño, un agente sedativo, un espasmolítico, tuberculostático, un urológico, un vasoconstrictor o vasodilatador, un virustático, una substancia para curar heridas, una preparación para abuso de alcohol, un anticonvulcionante, un antineoplástico, un antirreumático, un supresor de apetito, un modificador de respuesta biológica, un modificador de sangre, un regulador del metabolismo óseo, un agente cardioprotector, un agente cardiovascular, un estimulante del sistema nervioso central, una enzima, un agente para terapia de disfunción eréctil, un agente de fertilidad, un agente gastrointestinal, una preparación para gota, una hormona, un agente para tratar hipercalcemia, un agente para tratar hipocalcemia, un inmunosupresor, una preparación para migraña, un producto para enfermedad del movimiento, un agente para tratar esclerosis múltiple, un relajante muscular, un nutricional, una preparación oftálmica, una preparación de osteoporosis, una preparación ótica, un parasímpatolítico, un parasimpatomimético, un prostaglandín, un agente psicoterapéutico, un agente respiratorio, un sedante e hipnótico, un agente de la membrana de la piel y mucosa, un auxiliar para dejar de fumar, un simpatolítico, una preparación para la temblorina, un agente para el trato urinario, una preparación vaginal, un agente para el vértigo, un inhibidor (antagonista), o cualquier otra substancia inmunológicamente activa (tal como un ¡nmunomodulador, por ejemplo, extractos bacterianos o componentes de la pared celular similares a la toxina del cólera, toxina lábil con calor, monofosforilípido A, o agentes u hormonas similares a timosín , timopoietín , o fitoinmunoestimulantes similares a extractos de raíces Echinacea que ind ucen a citoquina , raíces de índigo silvestre, puntas de hojas de cedro blanco, o ¡nmunomoduladores sintéticos como derivados de quinolina, péptidos sintéticos, pirimidina , lipopéptidos o citoquinas o inmunosupresores, e inhibidores de transducción de señal como ciclosporín A, FK506, FTY720, rapamícín), o un promotor (agonista) o la actividad de cualesqu iera de los agentes antes mencionados, o cualquier combinación de dichas substancias. Se prefiere que dicho ingrediente activo no atraviese por si mismo la mucosa nasal en cantidades prácticamente significativas, sin efectos secundarios inaceptables. En otra modalidad preferida del uso de la composición farmacéutica de la presente invención , el antígeno se deriva de un patógeno. Dentro del contexto de la presente invención, el término "patógeno" se refiere a una entidad que a través de su presencia dentro o en el cuerpo, cond uce o promueve un estado patológico el cual, en principio, es manejable o podría beneficiarse de una inmunoterapia preventiva, curativa o adyuvante. En la modalidad más preferida del uso de la composición farmacéutica de la presente invención , dicho patógeno pertenece a la clase de bacterias extracelulares, incluyendo el cocci, que forma pus, tal como Estafilococos y Estreptococos, bacteria gram negativa tal como especies meningococos y gonococos, especies de Neisseria, bacteria gram negativa , incluyendo organismos entéricos tales como E. coli, Salmonella, Shigella, Pseudomonas, Diptheria, Bordetella Pertussis, y bacteria gram positiva (por ejemplo, Basillus pestis, BCG) , particularmente anaerobius, tales como las especies Clostridium (por ejemplo Clostridium tetani, Clostridium perfringens, Clostridium novyi, Clostridium septicum) , bacterias y víruses, las cuales sobreviven y se mu ltiplican dentro de las célu las huésped , comprendiendo micobacterias (por ejemplo M . tubercu losis) y Listeria monocitogénes, retro y adenoviruses, incluyendo virus de hepatitis, virus de inmunodeficiencia (humana) , víruses de herpes, sífilis pequeña (sífilis de pollo), víruses de influenza, sarampión , paperas y polio, citomegalovirus, rinovirus, etc. , y hongos que prosperan dentro de las células huésped, parásitos que incluyen parásitos animales, tales como protozoarios, y helmintos, y ectoparásitos, tales como garrapatas y ácaros, o especies de Brucella (por ejemplo, B . melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis, B. neotomae, B. ovis), el agente que causa el cólera (por ejemplo Vibrio cholerae), especies de Haemofilus como H . actinomycentemcomitans, H . pleuropneumoniae, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, de plaga , rabias, tétanos y rubéola; células eucarióticas o sus partes que causan varias enfermedades de neoplasia, auto inm unológ icas y otros estados patológicos del cuerpo animal o humano, que no resultan necesariamente de infecciones microbianas, también pertenecen a este grupo. Lo más preferido es que el antígeno, preferentemente el patógeno, se utilice en una forma purificada o incluso mejor en una forma pura. Los patógenos que causan mayores enfermedades inefectivas, tales, como virus de hepatitis, virus de inmu nodeficiencia (humana) , víruses de herpes, sífilis pequeña (sífilis de pollo) , víruses de influenza, sarampión , paperas y polio, citomegalovirus, rinovirus, etc. , y los hongos que prosperan dentro de las células huésped, un parásito que incluye parásitos animales, tales como protozoarios y helmintos y ectoparásitos tales como garrapatas y ácaros, o especies Brucella o el agente que causa el cólera, especies de Haemofilus, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, plagas, rabias, tétanos y rubéola, son particularmente preferidas ya que son células eucarióticas o sus partes que causan varias enfermedades de neoplasia, auto inmunológicas y otros estados patológicos del cuerpo animal ó humano, las cuales no resultan necesariamente de infecciones microbianas. En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el alergénico es de origen xenogénico o endogénico, derivado de un microorganismo, un animal o una planta, o que pertenece al grupo de substancias inorgánicas elaboradas por el hombre y/o irritantes, o a partes o componentes del cuerpo humano las cuales fueron incorrectamente procesadas por el sistema inmunológico o expuestas al sistema inmunológico del cuerpo. En una modalidad adicionalmente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el alergénico pertenece a la clase de alergénicos de inhalación, incluyendo pero sin limitarse a polen, esporas, restos de cabello, piel y plumas de animal, textiles naturales y sintéticos, trigo, polvo (doméstico), que incluye ácaros; además, alergénicos de alimentos y medicamentos; alergénicos de contacto; inyección, invasión o depósito de alergénicos, tales como varios gusanos (que residen en el sistema gastrointestinal), equinococci, triquinas, etc., o una parte del material de implantación. En una modalidad preferida adicional del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención dicha composición farmacéutica comprende un compuesto el cual libera o induce una actividad de citoquina o anti-citoquina o ejerce dicha actividad por si misma. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "citoquinas", denota citoquinas, tales como IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, con todos los subtipos, tales como IL-1a e IL-1ß, factor de necrosis de tumor (TNF), factor de transformación de crecimiento (TGF-ß y -a), interferones tipo I y II (IFN-a1, IFN-a2, (IFN-?), IFN-ß, IFN-?), factor de inhibición de migración, MIF, ligante de equipo-c, factor de estimulación de colonia de macrófago de granulocito (GM-CSF), factor de estimulación de colonia de macrófago de monocito (M-CSF), factor de estimulación de colonia de granulocito (G-CSF), quimocinas, etc., así como todos los derivados funcionales y cualesquiera de estas moléculas. Las citoquinas que transmiten la inmunidad natural particularmente bien, incluyen interferones tipo I (IFN-a y IFN-ß), factor de necrosis de tumor (TNF), interleuquín-1 (IL-1a, IFN-1 ß), interleuquín-6 (IL-6) y leucocitos que atraen y activan quimocinas. La acción antiproliferativa (por ejemplo con IFN-s), pro-inflamatoria (por ejemplo con TNF, IL-1) o co-estimulador (por ejemplo con IL-6), entre otras, se pueden generar a través de administración transnasal de la composición farmacéutica descrita de acuerdo con la presente invención. Las citoquinas que transmiten mejor la activación de linfocitos, crecimiento y diferenciación incluyen interleuquín 2 ( IL-2), interleuquín-4 (IL-4) y factor de transformación de crecimiento (TGF). Dichas citoquinas, de manera consecuente, no afectan únicamente el crecimiento objetivo, sino que además, tienen influencia en la activación de, y por lo tanto en la producción de otras citoquinas por medio de las células que finalmente pueden jugar un papel importante en la acción terapéutica o profiláctica. Las citoquinas que transmiten la inflamación transmitida inmunológicamente la cual depende fuertemente de la respuesta transmitida por la célula, son interferón-gamma (IFN-?), limfotoxín (TNF-ß), interleuquín-10 (IL-10), interleuquín-5 (IL-5), interleuquín-12 (IL-12) y, probablemente, factor de migración de inhibición. El crecimiento y diferenciación de leucocitos, son los más afectados por interleuquín-3 (IL-3), ligande de equipo-c, factor de estimulación de colonia de macrófago de granulocito (GM-CSF), factor de estimulación de colonia de granulocito o macrófago (M-CSF o G-CSF) e interleuquín-7 (IL-7). Es preferible seleccionar el compuesto que exhibe actividad de citoquina entre IL-4, IL-2, TGF, I L-6, TNF, IL-1a y IL-1ß, un interferón tipo I, entre los cuales IFN-alfa o IFN-ß son los más preferidos, IL-12, IFN-?, TNF-ß, IL-5 o IL-10. En otra modalidad preferida, dicho compuesto con actividad de anti-citoquina, es un anticuerpo de anti-citoquina o el fragmento activo correspondiente, un derivado o un análogo del mismo. En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el compuesto que exhibe o induce la actividad de citoquina o anti-citoquina y el ingrediente farmacéuticamente activo o antígeno o alergénico, están asociados con el penetrante, por ejemplo, en la forma de un complejo, hetero-agregado, por medio de encapsulación , etc. En una modalidad adicional preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, la molécula de auto-agregación menos soluble, es un lípído, preferentemente un lípido polar, y el componente más soluble es un tensoactivo o alguna forma del lípido polar/básico más soluble. El ingrediente formador, normalmente, viene de una fuente biológica o es un lípido sintético correspondiente a cualquiera de sus modificaciones. Con frecuencia, dicho lípido pertenece a la clase de fosfolípidos con la fórmula química 1CH2 - O - R, I R, - O - 2CH O 3CH2 - O - P - R3 en dónde Rn y R2 es una cadena alifática, normalmente un acilo de C10.2o o alquilo o un residuo de ácido graso parcialmente no saturado, en particular, una cadena de oleoilo, palmitoeloilo, elaidoilo, linoleilo, linolenilo, linolenoilo, araquidoilo, vaccinílo, lauroilo, miristoilo, palmitoilo, 0 estearoilo, y en donde R3 es hidrógeno, 2-trimetilamino-1 -etilo, 2-amino- 1 -etilo, alquilo de C-|. , alquilo de CL5 substituido con carboxi, alquilo de C2_5 substituido con hidroxi, alquilo de C2.5 substituido con carboxi e hidroxi, o alquilo de C2.5 substituido con carboxi y amino, inositol, esfingosina o sales de dichas substancias, comprendiendo dicho lípido también glicéridos, lípidos isoprenoides, esteroides, esterinas o esteróles, o lípidos que contienen sulfuro o carboh idratos, o cualesquiera otros lípidos que forman bicapas, y preferentemente seleccionado del grupo de fosfatidilcolinas, fosfatidiletanolam inas, fosfatidigliceroles, fosfatid ilinositoles, ácidos fosfatídicos, fosfatidilserinas, esfingomielinas u otros esfingofosfolípidos, glicosfingolípidos (incluyendo cerebrosidas, ceram idepolihexosidas, sulfatidas, esfingoplasmalógenos) , gangliosidas u otros glicolípidos o lípidos sintéticos, en particu lar con derivados de esfingosina correspondientes, o cualesquiera otros glicolípidos, por lo que dos cadenas similares o diferentes se pueden esterificar al esqueleto (como en el compuesto diacilo y dialquenoilo) o pueden ser adheridas al esqueleto con enlaces de éter, como en lípidos dialquilo, o pertenecer al esqueleto como en esfingolípidos. El tensoactivo utilizado, normalmente, es no iónico, suiteriónico, an iónico o catiónico, especialmente un ácido o alcohol g raso, una sal de alqu il-tri/di/metil-amonio, una sal de alquilsu lfato, una sal monovalente de colato, deoxicolato, glicocolato, glicodeoxicolato, taurodeoxicolato, taurocolato, etc. , u n acil o alcanoil-dimetil-aminóxido, especialmente un dodecil-d imetil-aminóxido, un alquil o alcanoil-N-metilglucaminda , N-alqu il-N , N-dimet ilg licina, 3-(acildimetilamonio)-alcanesulfonato, N-acil-sulfobetaina , u n éter de polietilén-glicol-octilfenilo, especialmente un éter de nonaetilén-g licol-octifenil, un éter de polietilén-acilo, especialmente un éter de nonaetilén-dodecilo, un éter de polietilén-glicol-isoacilo, especialmente u n éter de octaetilén-glicol-isotridecilo , un éter polietílén-acilo, especialmente un éter octaetiléndodecil, un éster de polietilénglicol-sorbitano-acilo, tal como polietilénglicol-20-monolaurato (Tween 20) o polietiléng licol-20-sorbitán-monooleato (Tween 80) , un éter de polihidroxietilén-acilo, especialmente un éter de polihidroxietilén-laurilo, miristoilo, cetilestearilo, o oleoilo, como en u n éster de polihidroxietilén-4 ó 6 ó 8 ó 1 0 ó 1 2, etc. , -laurilo (como en las series Brij) , o en el éster correspondiente, por ejemplo de polihidroietilén-8-estearato (Myrj 45) , tipo miristato, laurato, linoleato, linolenato, palmitoleato u oleato, o en aceite de castor polietoxilado 40, un sorbitano-monoalquilato (por ejemplo en Arlacel o Span), especialmente sorbitano-monolaurato, miristato, linoleato, linolenato, palm itoleato u oleato, un acii o alcanoil-N-metilglucaminda, especialmente en o decanoil o dodecanoil-N-metilg lucamida, un alquil-sulfato (sal), por ejemplo en lauril, miristoil, palmitoil, oleoil, palmitoleoil, linolenil, linoleoil, vaccinil, o elaidoil-sulfato, deoxicolato de sodio, glicodeoxicolato de sodio, oleato de sodio, taurato de sodio, una sal de ácido graso, con preferencia similar para cadenas alifáticas como las proporcionadas anteriormente, un lisofosfolípido, tal como ácido n-octadecilén(oleoil)-glicerofosfatídico, -fosforilglicerol, o fosforilserín , n-acil, por ejemplo, ácido lauril, miristoil, palmitoil, oleoil, palmitoleoil, ela id il , vaccinil, linoleil, linolen il-g licero-fosfatídico, fosforilglicerol , o fosforilserina, o u n lípido de cadena corta doble correspond iente, tal como dodecil-fosfatid ilcolina, o de lo contrario es un polipéptido de superficie activa. Es importante considerar, sin embargo, q ue los complejos de lípidos polares con otros amfipatos a menudo pueden tomar el papel de tensoactivos en el recubrimiento de un transportador, y que la ionización diferente o formas de sal de los lípidos polares, pueden diferir ampliamente en sus propiedades. Por lo tanto, se tiene la conciencia de que dos estados fisioquímicos diferentes del mismo lípido (polar) mezclados en conjunto en una membrana, pueden producir un transportador altamente deformable que satisface las condiciones de la presente invención. En una modalidad adicionalmente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el componente más soluble es un agente que será transportado a través de la barrera, teniendo dicho agente una tendencia a formar estructuras grandes comunes con el componente(s) menos soluble del penetrante, normalmente en la forma de un complejo físico o químico. En un uso preferido adicional o la composición farmacéutica de la presente invención, el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración y está presente en una concentración que no excede de 99% mol de la concentración requerida para desintegrar la gota, o de manera alternativa, no excede de 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada, prefiriendo que sea más alta, siendo particularmente útiles los valores debajo del 50% de la concentración relativa del formador, siendo incluso más convenientes valores debajo de 40% reí o incluso de alrededor de y debajo del 30% reí, en tanto que en el caso de las gotas que no pueden ser solubilizadas mediante las concentraciones relativas del componente más soluble las cuales exceden las concentraciones relativas antes mencionadas por el factor de hasta 2 , son las más preferidas. En una modalidad preferida diferente del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , el componente penetrante menos soluble es un lípido, preferentemente un lípido polar, y el componente más soluble es un tensoactivo a una molécula similar a un tensoactivo, o de lo contrario d icha forma de lípido polar la cual es lo suficientemente soluble para el propósito de la presente invención . En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el diámetro promedio del penetrante es de entre 25nm y 500 nm , preferentemente, entre 30 nm y 250 nm , incluso más preferentemente entre 35 nm y 200 nm y particularmente preferida entre 40 nm y 1 50 nm . En una modalidad diferente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , la concentración penetrante en la formulación para el uso en la nariz humana o de animal, es de 0.001 %-peso (% p) hasta 20% p de la masa total seca en la formulación, en particular entre 0.01 % p y 1 5% p, más preferentemente entre o.1 % p y 12.5% p, y lo más preferido entre 0.5% p y 1 0% p. En una modalidad adicionalmente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , el medio de soporte, por ejemplo, u n amortiguador, es seleccionado para ser una solución biocompatible con una actividad osmótica sim ilar a la de un electrolito monovalente con un rango de concentración de entre 1 mM y 500 mM, más preferentemente entre 1 0 mM y 400 mM , incluso más preferente entre 50 mM y 300 mM , y lo más preferible entre 1 00 mM y 200 mM , o una solución que produzca un estabilidad penetrante prácticamente suficiente combinada con el rango de transporte prácticamente suficiente a través de la barrera. El término "estabilidad penetrante prácticamente suficiente" sig nifica q ue la estabilidad del penetrante cumple con los criterios de calidad del producto considerados. El término "rango de transporte prácticamente suficiente" sign ifica que se transporta suficiente med icamento a través de la barrera sin utilizar un volumen o tiempo de aplicación y razonablemente grande. Dicha estabilidad del penetrante suficiente combinada con el rango de transporte suficiente a través de la barrera, pueden ser determinados por el experto en la materia sin una experimentación indebida . En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de acuerdo con la presente invención , el medicamento o concentración de agente relativo es de entre 0.001 % p y 40% p de la masa penetrante total, en particular entre 0.01 % p y 30% p incluso mejor entre 0.1 % p y 25% p y lo más preferente entre 0.5% p y 1 5% p. En una modalidad adicionalmente preferida del uso de la composición farmacéutica de la presente invención , el medio que soporta a los medicamentos y transportadores, es un amortiguador biocompatible con valor pH de entre 4 y 1 0, más frecuentemente de entre 5 y 9 y lo más frecuente de entre 6 y 8. En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , los aditivos se incluyen en dicha composición para reducir la sensibilidad del sistema a agentes químicos, biológicos o de tensión ambiental, incluyendo antioxidantes, antagonistas de acción enzimática no deseada, crio-conservadores, microbicidas, etc. , o demás mod uladores con propiedades del sistema físicamente importante, tales como viscosidad de formulación , etc. En una modalidad preferida diferente del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, la dosis del medicamento o agente relativo q ue será administrada en forma no invasiva a través de la nariz por medio de transportadores altamente adaptables, se eligen para ser entre 0.1 x y 500x, más frecuentemente entre 0.5x y 250x, e incluso más preferentemente entre 1 x y 1 00x d iferentes a la dosis de medicamento o agente correspondiente, que tendría que ser inyectada para lograr los efectos biológicos deseados. N uevamente, la última dosis puede ser determinada por el experto en la materia, sin la experimentación indebida y sobre las bases de su conocimiento general. En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , la dosis del penetrante aplicada es de entre 0.01 mg y 1 5 mg por fosa nasal, aún más frecuentemente está dentro del rango de 0.1 mg y 1 0 mg por fosa nasal, y preferentemente de entre 0.5 mg y 5 mg por fosa nasal. La eficiencia de administración en los efectos biológicos del agente o medicamento elegido, de manera consecuente, se pueden controlar utilizando d iferentes volúmenes de aplicación . Se pueden utilizar para el propósito, varios dispositivos de suministro con medición .

Por lo tanto, en una modalidad adicional preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, dicha formulación se administra utilizando un dispositivo de suministro medido. En una modalidad adicional preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención , se seleccionan diferentes volúmenes de aplicación para controlar la eficiencia de administración y los efectos biológicos del agente o medicamento elegido. En una modalidad diferente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, los penetrantes en la suspensión están cargados con los medicamentos o agentes dentro de las 24 horas previas a la administración de la formulación, preferentemente 360 minutos, más preferentemente 60 minutos e incluso más preferentemente 30 minutos antes de que la formulación resultante sea administrada dentro de la nariz. Se espera que esta modalidad mejore la estabilidad, eficiencia de carga, la liberación de sinéticos, facilidad de uso, cumplimiento, etc, de la formulación. En otra modalidad preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el dispositivo de suministro está cargado en el sitio de tratamiento. En una modalidad adicionalmente preferida del uso o de la composición farmacéutica de la presente invención, el dispositivo de suministro está cargado por separado con penetrantes y las moléculas, particularmente agentes biológicos que estarán asociados en la misma.

En una modalidad adicional preferida del uso de la presente invención, el ingrediente farmacéuticamente activo es por administración al sistema nervioso. El término "administración" en relación con esta modalidad, significa que la composición farmacéutica se aplica en forma transnasal, aunque el sitio efectivo del ingrediente activo es el sistema nervioso, preferentemente el CNS, y más preferentemente el cerebro. La posibilidad de utilizar una aplicación nasal de los penetrantes cargados con medicamento altamente adaptables en la nariz para transmitir una transferencia prácticamente útil del medicamento a través de la barrera, puede ser por lo tanto explotada para transportar una cantidad significativa del medicamento, y para crear una concentración significativa de dicho medicamento, en el sistema nervioso central o en algún otro tejido adyacente, tal como el ojo. En otra modalidad preferida de la presente invención, la composición farmacéutica de la misma es una vacuna. Dicha vacuna puede ser utilizada para vacunación terapéutica o profiláctica. El término "vacunación (terapéutica)" dentro del contexto de la presente invención , describe cualquier tipo de inmunización terapéutica ya sea realizado después de que la enfermedad se ha establecido, para mejorar una situación clínica, o de lo contrario con el propósito de evitar una enfermedad. Dicha vacunación puede comprender una sola administración o administraciones repetidas de la vacuna de la presente invención. La vacunación terapéutica evitará ya sea una situación patológica y/o mejorará una situación clínica. Cuando se aplica como un agente preventivo, generalmente dará como resultado una respuesta inmu nológica protectora . La inmunización denota cualquier tipo de provocación de una respuesta inmunológ ica, sin importar si d icha respuesta es terapéutica o no terapéutica . El término un "anticuerpo" o una "inmu noglobulina", denota un IgA, IgD, IgE, IgG , ó IgM , incluyendo todos los subtipos, tales como lgA1 y lgA2, lgG 1 , lgG2 , lgG3, lgG4. Sus "derivados" incluyen derivados químicos, bioq u ímicos u obtenibles de otra manera, tales como derivados de anticuerpos construidos en forma genética. Los fragmentos incluyen , por ejemplo, fragmentos de cadena simple, Fc", Fab- F(ab')2- y otras partes de Ig-s, de manera independiente de si son de origen endógeno, xenogénico (sem i)sintéticos o recombinante. También están comprendidos en la presente invención, los complejos de dos o más de los anticuerpos, derivados o fragmentos antes mencionados. El término "inmunogén" denota un haptén acoplado a un transportador inm unológico o un antígeno, libre o asociado con un transportador, el cual tiene una capacidad de inducir una respuesta inmunológica. El término "inmuno-tolerancia" denota la carencia, o más generalmente la reducción de una respuesta inm unológica no deseada a u n antígeno.

Th1 (célula auxiliar-T tipo I) se relaciona con los anticuerpos que incluyen lgG2a, lgG2b e lgG3. Th2 (célula auxiliar-T tipo II) se relaciona con anticuerpos que comprenden las clases de lgG1 , lgG4 e IgE. Como ya se ha indicado anteriormente, la inmunización exitosa con la vacuna de la presente invención a través de la nariz, es un paso significativo hacia el diseño de vacunas administrables de manera conveniente que (a) son altamente eficientes en un amplio rango de inmunogenes de tamaño y propiedades variantes; (b) pueden ser formuladas juntas con ciertas citoquinas, compuestos que transmiten la actividad de citoquina, compuestos que antagonisan con la actividad de citoquina con el objeto de dirigir de manera específica la respuesta inmunológica correspondiente o aumentar o suprimir la misma, según se desee; (c) no dependen de la perturbación de la inyección a través de una aguja; y (d) no causan efectos secundarios de irritación. Además, con la vacuna de la presente invención se puede lograr una tolerogenización exitosa. De igual manera se ha descubierto de acuerdo con la presente invención, lo siguiente • Las micelas Tween-SPC proporcionan una protección significativamente inferior a la de la vacuna de la presente invención, sugiriendo que el tamaño pequeño del transportador o la presencia de tensioactivos solos, no son suficientes para una inmunización exitosa; • Administrados en forma oral los inm uno-transportadores, crean tituladores específicos de anticuerpo inferiores a los de la vacuna administrada en forma transnasal de la presente invención , según se determina con base en las medidas de absorbancia; « La vacuna transnasal de la presente invención , da surgimiento a tituladores lgG 1 e lgG2 específicos superiores en la sangre y comparables con los tituladores lgG2a e IgM , en las micelas mezcladas; todos los tituladores fueron , superiores a los generados mediante inmun ización con liposomas de SPC:colesterol (1 : 1 ) . Cuando la vacuna transnasal de la presente invención es formulada j unto con una citoq uina o u n inmunoadyuvante, es conveniente utilizar (mezclas de) extractos bacterianos. Los ejemplos específicos proporcionados en la presente solicitud, incluyen lípido A de monofosforilo (M PL) e I L-1 2 ó GM-CSF e I L-4. Sin embargo, en principio la vacuna de la presente invención puede ser formulada o aplicada junto con cualesquiera de los compuestos que transmiten , inducen o muestran una actividad de citoquina o con antagonistas de los mismos, que han sido mencionados anteriormente en la presente especificación . Se prefiere que la vacuna de la presente invención , comprenda adicionalmente un extracto de patógeno o un compuesto de patógeno o un fragmento o un derivado del mismo. Lo más preferentemente, es que dicho extracto de patógeno compuesto sea seleccionado del virus de hepatitis, virus de inm unodeficiencia (h umana) , virus de herpes, sífilis-pequeño (sífilis de pollo) , víruses de influenza, sarampión , paperas o polio, citomegalovirus, rinovirus, etc, u hongos q ue prosperan dentro de las células huésped , un parásito incluyendo parásitos animales, tales como protozoarios y helmintos, y ectoparásitos, tales como garrapatas y ácaros o especies Brucella incluyendo el agente que causa el cólera (por ejemplo Vibrio cholerae) , especies de Haemophilus, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, de plaga , rabia, tétanos o rubéola. Es adicionalmente preferido, que dicha vacuna comprenda adicionalmente u n adyuvante . El término "adyuvante" se utiliza en la presente invención , para describir cualquier substancia que soporta, aumenta , estimula, activa, potencia o modula la respuesta inmunológica deseada de cualquier tipo celular o humoral, específicamente en el caso de un tratamiento profiláctico incrementando la respuesta inmunológica específica del antígeno y en el caso de tratamiento terapéutico, soportando con frecuencia la inmunidad transmitida por la célu la . Esto se puede lograr mediante la ad ición de citoquinas adecuadas , sus mezclas o agonistas y antagonistas adecuados. La clase de inmunoadyuvantes que contribuyen de manera indirecta al conjunto de citoquina útil, incluye pequeñas entidades q u ím icas con un potencial alergénico, tal como ciertos iones(metal) alergénicos, incluyendo pero sin limitarse a LiCl, HgCI2, molibdeno, ácidos, bases y otros compuestos irritantes, tal como diciclohexilmetano-4,4'-diisosianato, (dietilditíocarbamato) ditrocarb, 2,4-dinitroclorobenzeno, isoprinosina, ¡soforona-diisocianato, levamisole, (fenil)oxasolona, y similares, Swansonina, sizofrán , anh ídrido ftálico, timopentin , alcoholes(grasos), aminas (grasas) , éteres(grasos) , ricino, u otros amfifilos adecuados , muchos tensoactivos y aumentadores de permeabilidad qu ímica , así como derivados o combinaciones de los mismos; además, fragmentos (de bajo peso molecular) o derivados de microbios, incluyendo lipopolisácaridos ( tales como LPS), factor-cord (trialosa-dimicolato) y otros (poli)sacáridos o (poli)péptidos adheridos a membranas, utilizados en cantidad suficiente, acetilmuramil-alanil-isoglutamin , y fragmentos de microbios más grandes, incluyendo exo y endotoxinas bacterianas, o enterotoxinas, tales como toxina de cólera y la toxina labile con calor de E. coli, y sus fragmentos macromoleculares, tales como derivados de la cadena-A, la mayoría , si no es que todos de los cuales, parecen poseer actividad de ribosilación de ADP , holotoxina LT inmu noadyuvante de alta potencia , etc, esqueleto de pared celular, bacteria atenuada, tal como BCG, etc. Los ejemplos menos establecidos incluyen toxina clostridial, derivado de proteína purificada de M . Tuberculosis, LT-R1 92G, proteína I enlazada por Fibronectin de Streptococcus pyrogenes, proteína de membrana exterior, de Neisseria meniongitidis (G BOMP) , otros varios peptidog licanos, etc. En otras palabras , los inmunoadyuvantes, incluyen moléculas que alteran la asimilación o presentación de antígenos, activan o incrementan la proliferación de linfocitos específicos de antígenos o interfieren con el mecanismo de control dominante en la respuesta inmunológica, no solo en la nariz sino también en los otros tejidos inm unocompetentes. (la actividad adyuvante de mucosa de las enterotoxinas bacterianas de ribosilación de ADP , es u n ejemplo bien establecido y conocido para este caso. Por otra parte, las moléculas que cambian las concentraciones (relativas) de las citoquinas y otros inmunoadyuvantes, tales como los anticuerpos anti-inmuadyuvantes u otros agonistas o antagonistas de inmu noadyuvantes, también son inm unoadyuvantes en el sentido de la presente invención. Lo mismo es cierto para moléculas que afectan el establecimiento de linfocitos, tales como varias selectinas (LECAMS , varios CD62-s) , GlyCAM-1 , MadCAM-1 , VCAM-1 , ICAM-1 , hialuronato, etc. , u otras q uimocinas, tales como RANTES ó MCP-1 . El grupo endógeno de inmunoadyuvantes comprende adicionalmente histaminas, factor de transferencia, tuftsin , etc. Ya que m uchos de los inmunoadyuvantes anteriormente mencionados no tienen suficiente potencia para asegurar el efecto deseado después de la inmunización no invasiva en una concentración demasiado baja, y algunas veces demasiado alta o por si misma, la definición funcional de un adyuvante utilizada en este trabajo, incluye un fortiori suficiente y dicha modulación de concentración de citoquina y patrón de distribución en el cuerpo q ue da como resultado el montaje de la respuesta inmunológica, terapéutica o profiláctica deseada. Si se requ iere ganar claridad , dicha modulación y su extensión debe ser determinada en un experimento dedicado, en el cual se determinen los niveles de citoquina específicos, utilizando métodos conocidos para los expertos en el campo. En una modalidad adicionalmente preferida de la vacuna de la presente invención , dicho adyuvante es lipopolisacárido, tal como lípido A o un derivado o modificación del mismo, tal como lípido A de monofosforilo, o su análogo, tal como un derivado graso de sacarosa , factor-cord (trehalosa-dimicolato) dipéptido de mu ramilo, u otro (poli)sacárido o (poli) péptido idéntico o que se asemeja a una parte inmunológicamente activa de una membrana de un microorganismo; un extracto de un microorganismo, incluyendo exo y endotoxinas bacterianas, preferentemente toxina de cólera o la toxina labile de E. coli, un derivado de la cadena-A, un componente con una actividad de ribosilación de ADP, un peptidoglicano, una toxina clostridial, una halotoxina LT, derivado de proteína purificado de M. Tuberculosis, LT-R192G, proteína I enlazada por Fibronectin de Streptococcus pyrogenes, o una proteína de membrana exterior de Neisseria meningitidis grupo B (GBOMP), ácidos nucleicos bacterianos o virales tales como oligonucleótidos que comprenden dinucleótidos CpG no metilados. Lo más preferible es que la vacuna de la presente invención, comprenda una mezcal de MPL e IL-12 ó GM-CSF e I L-4, cuando se utilizan citoquinas puras y sus inductores. En una modalidad preferida diferente de la vacuna de la presente invención, la dosis relativa de inmunogén/antígeno que será administrada en forma no invasiva a través de la nariz por medio de transportadores altamente adaptables, se elige para ser de entre 0.01 x y 100x, con más frecuencia entre 0.05x y 75x, e incluso lo más preferente entre 0.1 x y 50x diferente al inmunogén/antígeno correspondiente que podría haber sido inyectado para lograr el efecto biológico deseado. Nuevamente, la última dosis puede ser determinada por el experto en la materia, sin una experimentación indebida y con base en su conocimiento general. Se prefiere adicionalmente de acuerdo con la presente invención, que en dicha vacuna la concentración de adyuvante administrado en forma transnasal sea de entre 10x inferior y hasta 100x superior que el utilizado con las formulaciones inyectadas en forma subcutánea correspondientes que emplean antígenos similares, diferenciándose con más frecuencia en la concentración inmunoadyuvante administrada en forma transnasal, de la concentración inmunoadyuvante inyectada, por el factor de entre 0.5 y 100, aún mejor mediante el factor de 1 y 50 y lo mejor de entre 2 y 25. La presente invención, también se refiere a un contenedor que comprende la composición farmacéutica mencionada anteriormente en la presente especificación. La unidad de dosificación puede ser determinada de acuerdo con la aplicación deseada. Además, la presente invención se refiere adicionalmente a un paquete que comprende por lo menos un contenedor que comprende la composición farmacéutica tal como se describe anteriormente. El paquete de la presente invención puede comprender uno, dos, tres, cuatro ó más frasco/unidades de la composición farmacéutica de la presente invención.

Finalmente, la presente invención se relaciona con métodos de tratamiento a un paciente que tiene la necesidad de los mismos, en donde los métodos comprenden la administración en forma transnasal de cualesquiera de las composiciones farmacéuticas mencionadas anteriormente. La presente invención se relaciona adicionalmente con un método para generar una respuesta inmunológica protectora o tolerogénica en un mamífero, vacunando dicho mamífero con una vacuna como se describe anteriormente.

En una modalidad preferida de acuerdo con la presente invención , se seleccionan volúmenes de administración diferentes para controlar la dosis de inm unogén aplicada y el resultado de la vacunación . Se pueden utilizar para el propósito varios dispositivos medidos. En una modalidad más preferida del método de acuerdo con la presente invención , se carga una suspensión de penetrantes libres de antígenos con el antígeno que estará asociado en la m isma, durante el d ía anterior a una administración , preferentemente 360 minutos, más preferentemente 60 minutos e incluso más preferentemente 30 minutos antes de admin istrar la formulación resultante en la nariz. En otra modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención , se administra por lo menos una dosis de la vacuna. Esta modalidad del método de la presente invención , incluye la adm in istración repetida de la vacuna de la misma. La administración repetida incluye la administración repetida en la nariz o una o más administraciones en la nariz, en combinación con administraciones convencionales, por ejemplo, administraciones parentedales. A este respecto, el equipo de la presente invención puede elaborarse de manera conveniente para comprender uno o más contenedores, ampolletas u otro tipo de u nidades que contengan la vacuna de la presente invención . En una modalidad particularmente preferida del método de acuerdo con la presente invención , el intervalo de tiempo entre las vacunaciones subsecuentes se elige para ser de entre 2 semanas y 5 años con frecuencia de entre 1 mes y hasta 3 años y más frecuentemente de entre 2 meses y 1 .5 años.

En una modalidad adicional preferida, la administración inmunogénica repetida se avoca a maximizar el efecto final de una vacu nación terapéutica . Se propone utilizar entre 2 y 1 0, con frecuencia entre 2 y 7, más normalmente hasta 5, y los más preferido hasta 3 inmunizaciones, cuando se utiliza un antígeno no alergénico, o un número de veces, en el caso de alergénicos, que se ha requerido ya sea para lograr la inmu no-tolerancia deseada , determinada como se describe anteriormente, o mediante algún otro método de evaluación adecuado, o de lo contrario para considerar si el esfuerzo ha fallado. El intervalo de tiempo entre vacu naciones subsecuentes debe ser preferentemente de entre 2 semanas y 5 años, con frecuencia de entre 1 mes y hasta 3 años, más frecuentemente entre 2 meses y 1 .5 años, cuando un sujeto está siendo inm un izado por primera vez. Los roedores, tales como ratones y conejos son inmunizados de manera conveniente en intervalos de dos semanas , los primates, por ejemplo monos y con frecuencia humanos, necesitan una vacunación de refuerzo en un intervalos de 3 a 6 meses. En otra modalidad preferida del método de acuerdo con la presente invención , el flujo de penetrantes que lleva un inmunogén a través de varios poros en u na barrera bien definida, se determina como una función de una fuerza o presión de transmisión adecuada que actúa a través de la barrera, y posteriormente los datos se describen de manera conveniente a través de una cu rva característica , la cual a su vez, se emplea para optim izar la formu lación o aplicación . El conten ido de la descripción de los documentos citados a lo largo de esta especificación , están incorporados a la misma como referencia.

I ncorporado adicionalmente como referencia , se encuentra el contenido completo de la descripción de la solicitud también pendiente presentado con el nombre de I DEA AG y que lleva por título "vacunación no invasiva a través de la piel" (Noninvasive vaccination th rough the skin). Breve Descripción de las Figuras La fig ura 1 ilustra el efecto de la administración nasal de insulina por med io de transportadores en un paciente de diabetes mellitus que depende de insulina , con el resu ltado de una inyección i.v. de insulina de rápida acción (Actrapid , Novo-Nordisk), mostrada en el recuadro de referencia. La fig ura 2, ilustra las glucodinámicas en un voluntario humano saludable, después de la administración intranasal de insulina por medio de Transfersomas. El recuadro proporciona el resultado de la inyección intravenosa de una formulación similar para el propósito de referencia. Las figuras 3a y 3b, proporcionan ejemplos adicionales medidos con u n voluntario saludable después de la administración intranasal de formulaciones de insulina con características inferiores, consideradas debido a la liberación demasiado lenta del medicamento por parte del transportador. La fig ura 4, ilustra la capacidad de las citoquinas en forma nasal, asociadas con Transfersomas, para afectar el resultado de la inm unización transnasal con anatoxina de tétanos. La figura 5, ilustra la biodistribución de radioactividad derivada de insulina en ratones después de la administración nasal del agente en Transfersomas.

La figu ra 6, proporciona los resultados correspondientes para interferón , medidos en ratones. Las figu ras 7, ilustra el efecto del cambio del tamaño y/o capacidad de deformación del agregado en respuesta inmunológica específica de TT en ratones tratados con varias micelas mezcladas, Transfersomas o liposomas cargadas con TT. Los paneles a y b muestran patrones de isotipo del anticuerpo y en el panel c la titulación del anticuerpo total se proporciona expresada en cambio de absorbencia. Las figuras 8 señalan el efecto (pequeño) del cambio de la dosis de antígeno (en el rango alto de dosificación) o inm unización transnasal de ratones con TT, por med io de Transfersomas con o sin un derivado de lípido A, como un inm unoadyuvante. En el panel A, se proporcionan los resultados de las medidas de absorbancia total , el panel b muestra las curvas de titulación correspondientes, y el panel c proporciona los isotipos del anticuerpo relevantes. La figura 9, está organizada de manera similar para comparar el resultado de la administración de TT intranasal, oral o subcutánea, utilizando diferentes dosis y pureza del antígeno. Figura 1 0: Para comparación , se proporcionan datos de la protección animal (supervivencia para los experimentos en los cuales fueron comparados varias dosis y rutas de adm in istración) . La figura 1 1 , presenta u n conjunto de datos con respecto al efecto de varias citoquinas , o su combinación , en la respuesta inmunológica de múridos al TT administrado en la nariz por medio de Transfersomas, con datos s.c. proporcionados para comparación. El panel A, proporciona los datos de absorbancia y titulación y el panel b contiene los resultados de distribución del isotipo. La figura 12, trata de los efectos de combinar inmuno-adyuvantes de bajo y alto peso molecular (análogo lípido A e interleuquin-12). La figura 13, ilustra el efecto de inductores de citoquina específicos de origen microbiano. La toxina de cólera (CT) se utiliza para el propósito.

La figura 14, muestra un efecto de la toxina labile con calor E. coli como inmuno-adyuvante. La figura 15, ilustra los resultados obtenidos con una combinación de dos antígenos, anatoxina de tétanos y anatoxina de cólera. Descripción Detallada del Invento Los ejemplos ilustran la presente invención Ejemplos Establecimiento de la experimentación general y preparación de la muestra Las vesículas y liposomas convencionales comprendieron fosfatidilcolina de soya (SPC; Nattermann Phospholipids, Rhone-Poulenc Rorer Cologne, Germany). Se preparó la suspensión conteniendo 10%-p de lípido en forma de vesículas multilamelares, suspendiendo el lípido en un regulador y posteriormente extruyendo la suspensión a través de varias membranas de policarbonato (con 800 nm , 400 nm, 200 nm y 100 nm poros, respectivamente), para estrechar la distribución final del tamaño de la vesícula. Si era requerido, como se evaluaba con base en la inspección óptica de la exploración de luz dinámica realizada después de los últimos pasos, se repitieron las extrusiones varias veces (hasta 5) . En algunos casos , las vesícu las primero fueron extruidas hasta u n diámetro de aproximadamente 50 nm y posteriormente congeladas y descongeladas 3 veces para estirar nuevamente las vesículas, debido a la fusión I nter-vesícula. De manera subsecuente, la formulación se pasó a través de un filtro microporoso (1 00 nm ; Poretics, CA), bajo presión , para preparar la suspensión final de vesículas de oligo o unilamelares. Los penetrantes altamente adaptables utilizados en los ejemplos descrito , normalmente ten ían la forma de vesícu las ultradeformables (Transfersomas™) con una o algunas bicapas. Estos comprendían una mezcla de fosfatidilcolina y (bio)tensoactivos (colato o polisorbato (Tween 80)), y varios ingredientes biológicamente activos, tales como insulina, interferón , interleuquin, ó GC-SF. Los penetrantes antes mencionados fueron preparados mezclando el fosfolípido (s) con un agente suavizante de membrana adecuado, tal como colato o polisorbato, según fuera el caso, ya sea en un amortiguador acuoso o en etanol; ocasionalmente se utilizó cloroformo. En los dos ú ltimos casos, los cuales proporcionaron resultados similares, el solvente fue evaporado bajo vacío (1 0 Pa , durante la noche) . La película del lípido resultante, posteriormente fue hidratada con u n amortiguador (pH alrededor de 7) para obtener u na suspensión de lípido al 1 0%-p y grande. Las vesícu las fueron llevadas hasta el tamaño final deseado, mediante extrusión secuencial tal como se describió para los liposomas, utilizando principalmente filtros con tamaños de poros más pequeños. El tamaño final de las Transfersomas, fue similar al de las liposomas.

Se considera que cambiando la proporción de tensoactivo a lípido se afecta la capacidad de deformación de las bicapas de lípidos mezclados: entre más alta es la concentración del tensoactivo más adaptable es el agregado resu ltante, hasta la concentración en la cual las membranas de lípido mezclados se vuelven inestables, debido a la alta concentración de tensoactivo. Hasta tal punto, los agregados mezclados se revierten en micelas que ya no cambian fácilmente su forma debido a la baja capacidad de compresión de la micela interior. Las vesículas sin un tensoactivo de borde activo, los cuales com únmente son conocidos como liposomas y tienen por lo menos membranas 1 0x menos flexibles que las vesícu las de lípidos mezcladas más deformables son un control negativo conveniente para las últimas. Los otros controles obvios son: Micelas de Lípidos mezclados que contienen ing redientes similares a los de los penetrantes altamente adaptables correspondientes, pero en diferente proporción , de modo que la concentración del componente de borde activo (normalmente, au nque no de manera necesaria , el tensoactivo), es superior al valor de concentración de solubilización. Para preparar dichas micelas, se mezclaron componentes individuales en la fase acuosa y se les dejó interactuar hasta que la mezcla se volvió ópticamente clara , esto es, solubilizida , seg ún se evaluó mediante inspección óptica o medición de absorción de 400 nm a 600 nm . Experimentos llevados a cabo en voluntarios humanos Para probar la actividad biológica de los transportadores de insulina en humanos, se utilizó una formulación de prueba preparada en el momento en la nariz de dos sujetos de prueba. En el primero fue un normoglicaémico (hombre de 74 Kg, 173 cm, 45 años); el segundo fue un paciente I DDM negativo de péptido-C (mujer de 62 kG, 167 cm, 26 años). Las personas de prueba se sensibilizaron entre 6 horas y 12 horas antes de la administración de insulina. Para seguir la variación temporal de la concentración de la glucosa en la sangre, se tomaron muestras de 5 µL a 30 µL de los dedos o de ambos brazos, de cada 10 minutos a 15 minutos. Después de un periodo de prueba inicial, durante el cual se determinó la concentración de glucosa en la sangre "normal" y/o subcambio, se rocío en cada fosa nasal una suspensión de trasportadores cargados con insulina (Transfersulin) utilizando un rociador convencional no medido, en una serie de bocanadas de 150 µL. Se tuvo cuidado en minimizar el derramamiento de la formulación de prueba en la garganta o el goteo de dicha formulación de la nariz. Se empleó un glucómetro comercial (Accutrend™, Boehring-Mannheim) para determinar la concentración de azúcar en la sangre. En cada punto de tiempo, se llevaron a cabo tres lecturas individuales independientes, excepto cuando la desviación estándar fue tan alta que se requirieron medidas repetidas. Las formulaciones de prueba fueron elaboradas esencialmente tal como se describió en la solicitud de patente PCT/EP98/06750. En breve, se cargó con el medicamento una suspensión de penetrantes altamente adaptables con la composición anteriormente mencionada y un diámetro promedio del orden de 100 nm a 150 nm, con base en la adsorción interfacial, y se utilizó dentro de 24 horas posteriores a la preparación. La asociación del medicamento-transportador en la formulación , se determinó de entre el 60% y el 70% . Para administrar la suspensión cargada con medicamento dentro de la nariz, la preparación se llenó en u n nebulizador comercial (con una bomba operada manualmente, una boquilla de rocío orientada en forma vertical y un volumen de bocanada de 1 50µL en el promedio). Se proporcionó una bocanada en cada fosa nasal a un tiempo, en tanto que el sujeto de prueba fue sonado suavemente. El n úmero total de bocanadas, fue una función de la aplicación de la dosis (en este caso: 2). Se reportó inmediatamente el derramamiento en la garganta o la filtración parcial del fluido de la nariz, en 1 0-20% de los casos. No se observaron efectos secundarios, tales como irritación local, estorn udos, etc. Ejemplo 1 : 28.4 mg/m L de fosfatidilcolina de fríjol soya 9.5 mg/mL de fosfatidilglicerol de fríjol soya 62.1 mg/m L de amortiguador de fosfato Tween 80, pH 7.4 insulina recombinante humana (hr), 50 lU/mL (de Actrapid 100 HM™, Novo-Nordisk) Dosis Aplicada: ~ 5 I U por fosa nasal En la figu ra 1 , se muestran los resultados medidos con un sujeto saludable. Estos revelan una disminución temporal en la concentración de glucosa en la sangre sistémica después de 2 administraciones del medicamento en transportadores (símbolos cerrados) con u n máximo de entre 20 y 30 min utos y u n regreso al valor previo al tratamiento después de aproximadamente 1 hora en cada caso . El cambio observado en el nivel de g lucosa corresponde a aproximadamente el 8.5% de la disminución medida en un experimento independ iente después de inyección intravenosa del medicamento (recuadro: símbolos abiertos). La capacidad de reproducción permanece mejorada, sin embargo, la primera aplicación , influida por la carencia de un experto en administración fue menos exitosa que la segunda administración. No se reportó irritación u otra sensación desagradable por parte de la persona de prueba , después de la administración nasal de insulina en penetrantes altamente adaptables. Ejemplo 2: Transportadores altamente adaptables cargados con insulina en un paciente I DDM Penetrantes altamente adaptables: Tal como se proporcionó en el ejemplo 1 Dosis aplicada : 25 I U por fosa nasal La preparación y el experimento de prueba se llevó a cabo como se describió con el ejemplo anterior. La última administración de insulina convencional (Monotard™, Novo-Nordisk) , en la dosis de 22 I U a las 1 0 p. m . en el d ía anterior. El sujeto de prueba además, fue estabilizado utilizando insulina de acción prolongada en el día de prueba antes de la administración nasal de la insulina asociada con transportadores de medicamento altamente adaptables. En la fig ura 2 , se ilustran los resultados de u n experimento llevado a cabo con dicho paciente I DDM . Debido a la carencia de producción de insulina endogénica en este sujeto de prueba , la concentración de glucosa en la sangre antes del tratamiento fue ligeramente arriba de lo normal, aunq ue relativamente constante. El cambio resultante de la administración nasal del medicamento con transportadores ultra rápidos, tuvo una forma similar a un escalón en lugar de a un pico (símbolos cerrados), el cual fue completado en 75 minutos. Esto es precisamente lo que se debe esperar de un paciente I DDM . El resultado de una inyección í.v. de insulina de acción rápida (Actrapid™ , Novo-Nordisk) en la misma persona de prueba en una ocasión diferente (recuad ro: símbolos abiertos) , corrobora la conclusión . U n estimado de biodisponibilidad aparente de insulina nasal con base en estos datos es de alrededor del 4%, y consecuentemente, un poco inferior al reportado en el ejemplo 1 . Esto puede tener que hacerse con la variabilidad presumida en la liberación del medicamento entre diferentes form ulaciones, lo cual se ilustra en los ejemplos que se encuentran a continuación . La admin istración nasal de insulina asociada al transportador, de acuerdo con la persona de prueba , no causó efectos secundarios adversos, en forma local o sistémica. Ejemplo 3-5: I nsu lina asociada con transportadores subóptimos Transportadores Como en los ejemplos anteriores, pero se considera que no liberan rápidamente el medicamento debido a la afinidad superior del lote de insulina seleccionado para el transportador, lo cual hace la adsorción de medicamento irreversible. Dosis aplicada : 50I U , 50 I U En la fig ura 3, se ilustran los resultados de las medidas de la prueba llevadas a cabo con diferentes suspensiones de vesícula , sin señal de acción para la insulina administrada en forma nasal con tales transportadores. La concentración de glucosa en la sangre en la persona de prueba normoglicaemica investigada permanece igual que antes du rante y después de la administración del medicamento, d urante por lo menos algu nas horas. Esto sug iere que la mera presencia de transportadores, o sus ingredientes, no es suficiente para mejorar la biodisponibilidad de las macromoléculas aplicadas en forma nasal, tal como insu lina . Para lograr el efecto biológico deseado, el rango de liberación del medicamento del transportador también debe ser adecuado, siendo determinado dicho rango en experimentos dedicados ex vivo, utilizando técnicas convencionales de disasociación de enlace de proteína. Experimentos en animales Ejemplos 6-9 : Suministro de insulina marcada a través de la mucosa nasal de ratones de prueba Penetrantes altamente adaptables: 87.4 mg/m L de fosfatidilcolina de fríjol soya (SPC) 1 2.6 mg/mL de un ácido cólico ionizado al 50% amortiguador de fosfato, 50 m M , pH 6.5 hr-l nsu lin (Actrapid™, Novo-Nordisk) Insulina marcada de Amersham (345 µL contienen 1 .08 µg de insulina y 1 .725 mg BSA) La insulina marcada I 125 (21 0 µL), se mezcló con 21 0 µ L de hr-insulina (Actrapid™ Novo-Nordisk, 1 00 H M) y se pu rificó 2 veces mediante centrifugación , para eliminar la marca no enlazada , la cual se difunde a través de la barrera mucho más rápido y mejor que las moléculas de med icamento completas. Se mezclaron 1 00 µ L de la solución resultante con 1 50 µ L de amortiguador de fosfato para producir u n pH de alrededor de 7. La solución de proteína en los lípidos se procesaron juntos, dando el tamaño final a la vesícula mediante extrusión repetida a través de filtros con poros de 100 nm para obtener valores de alrededor de 150 nm . Los ratones de la deformación NMRI (36 g a 51 g) de un proveedor local, se mantuvieron en jaulas de suspensión en grupos de 4 a 6. Los animales tuvieron acceso libre a papilla y agua estándar. Cada ratón recibió, por fosa nasal, 2.5 µL de suspensión penetrante marcada que contiene insulina . Posteriormente, se evaluó la disminución en radioactividad total por medio de una cámara de cuerpo completo por lo menos 2 veces. En diferentes momentos, los ratones fueron sacrificados y los órganos principales se tomaron y se midieron por separado. Los restos fueron medidos en dos pasos, después de la eliminación de órganos y posteriormente después de la separación de la cabeza. También se determinó la radioactividad en el excremento y en la jau la . En la figura 4 se proporcionan los resultados q ue pertenecen a diferentes puntos de tiempo. Estos m uestran que la cantidad substancial de radioactividad administrada en forma nasal, es recuperada por el cuerpo, incluso después de la exclusión del tracto gastro-intestinal, especialmente durante las primera horas posteriores a la administración de la suspensión . Los valores en la sangre están en el rango de 9% en 0.5 horas y 2% , la concentración específica cayo desde 3%/mL al comienzo hasta 0.7%/m L al final. La actividad en la nariz disminuyó de 1 0.4% en 0.5 horas a 0.3% en 8 horas. Los valores del h ígado son de entre 2.3% después de 0.5 horas, el máximo alrededor de 2.8 en 1 hora y los valores superiores al 1 % después de 4 horas. Después de 8 horas, el residuo en el h ígado es de alrededor de 0.4% . Los valores hepáticos relativamente altos, sug ieren el pasaje de partículas, esto es, penetrantes, a través de la barrera y la asimilación subsecuente en el sistema retículo-endotelial. Los valores CNS correspondientes son 0.1 % y 0.03%. El máximo en el cerebro es medido entre la primera y la segunda hora con app 0.1 1 % y 0.14% , respectivamente, lo cual asciende a un órgano de alrededor de 0.3%/g. Estos, valores aparentemente bajos se comparan de manera favorable con el resultado de un suministro de medicamento más convencional en C NS, lo cual produce valores debajo del 0.5% de la dosis inyectada o de u n órgano de alrededor de 0.1 5%/g , por ejemplo, cuando se utilizó receptor de transferin para sumin istrar el medicamento (Pasech ník & Price, 1 996) . En el caso de aglutinin de germen blanco, se encontró el 0.1 % en el bulbo olfatorio. Ejemplos 10-1 1 : Penetrantes altamente adaptables 87.4 mg/m L de fosfatid ilcolina de fríjol soya (SPC) 1 2.6 mg/mL de u n ácido cólico ionizado al 50% Amortig uador de fosfato, 50 mM , pH 6.5 I nsulina recombinante humana (Actrapid™ , Novo-Nordisk) I nsulina marcada de Amersham En un experimento relacionado, se mezclaron 345 µ L de insulina marcada I 125 con 345 µ L de Actrapid™ frío (Novo-Nordisk) y se purificaron 2 veces en u n experimento previo. Después de la adición de 200 µ L de amortiguador de fosfato 1 50 µ L de la solución resu ltante se mezcló con los lípidos y se extruyeron hasta obtener un tamaño de vesícula final. La dosis aplicada fue de 3 µL por fosa nasal. Los ratones fueron sacrificados después de 1 hora, fijados y cortados en secciones delgadas e inspeccionados por la radiografía de cuerpo completo. Se utilizó insulina libre en solución para comparación . Los resultados de los experimentos antes mencionados (no mostrados) , revelaron una alta acumulación de marca en la región nasal, como se podría esperar un derramamiento substancial en el tracto gl una densidad muy alta en la vejiga, aunque también alg una radioactividad en el hígado, la cual parece ser ligeramente superior para el derivado del transportador que para la insulina libre. Ejemplos 12-13: Suministro de interferón-gama marcado a través de la mucosa nasal de ratones de prueba penetrantes altamente adaptables 86.6 mg/mL de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 1 3.4 mg/m L de colato Na amortig uador de fosfato, 1 0 mM , pH 7.2 (nom inal) 1 mg I FN-gama/mL suspensión 1 00 µC/m L suspensión , como 3-125l-tirosyl-I FNIgama) Dosis aplicada: 5 µL por fosa nasal Se g uardaron ratones de la deformación NM RI (36±0.6 g), y se tomó el cuidado que se describe en los ejemplos anteriores. Antes de la aplicación de la formu lación de prueba, los an imales fueron sedados tal como se describió anteriormente. Posteriormente, se administro la formulación de prueba a través de un catéter fino en dos gotas de 5 µ L, dando como resultado la dosis total de 1 mg de lípido. Después de esto, los animales se mantuvieron en jaulas separadas para evitar contam inación mutua. La rad ioactividad medida en la sangre, se encontró q ue corresponde aproximadamente 2.5% de la dosis aplicada , estando la concentración en el hígado en aproximadamente en 2% y la concentración en el colon de aproximadamente el 2.5% , todo después de 2 horas. La cantidad más alta de rad ioactividad , posteriormente fue recuperada del estómago (37%) y de la jaula además del excremento (32%). En el sistema nervioso central (CNS) 0.06% de la dosis total aplicada en la nariz, tal como se evaluó por la radioactividad derivada, estuvo presente 1 hora después de la administración del medicamento por medio de vesículas de lípido-tensoactivo mezclados cargadas con proteína altamente adaptables. Ejemplos 14-19: Suministro de citoquina a través de la mucosa nasal de ratones de prueba penetrantes altamente adaptables 37.7 mg/m L de fosfatid ilcolina de frijol soya (SPC) 62.3 mg/mL de polisorbato (Tween 80) Amortiguador de fosfato, 10 mM, pH 6.5 Anatoxina de tétanos, como antígeno, (2 mg/m L) I nterferón-? (I FG-?) Factor de estimu lación de colonia de monosito-granulosito (GM¬ CSF) I nterleuquin 4 (I L-4) I nterleuquin 1 2 (I L-1 2) Dosis aplicada : 3 µ L por fosa nasal Los ratones de la deformación Swiss albino ( 1 8-20 g) se obtuvieron de El I nstituto Nacional de N utrición (Hyderabad , I ndia). Estos tenían de 8 a 1 2 semanas de edad al momento de la primera inm unización. El antígeno solo o en combinación con varias citoquinas, ambos para ser considerados para estar por lo menos parcialmente asociados con los transportadores, se colocó con una secuenciación enfrente de la nariz del animal y se dejó succionar por el animal. Las muestras de sangre fueron recolectadas en forma retro-orbital y probadas con anticuerpos específicos dirigidos contra el antígeno empleado, midiendo la absorbancia a 492 nm , después del substrato de la m uestras en blanco con ELI SA. Los resultados de las medidas antes mencionadas, ilustradas en la Fig ura 6, sug ieren que la presencia de todas las citoquinas probadas en la formulación de vacunación , con base en los transportadores de antígeno altamente adaptables, incrementa la absorbancia de suero comparada con la característica del valor no-modulado, determinado después de una administración de inmunotransportador siempre. Las diferencias relativas probablemente son más consecuencias de la diversa biopotencia de los inmuno-modulantes probados empleados en el sistema experimental específico de la presente invención, que indicativos del rango de transporte macromolecular variable a través de la mucosa nasal. El incremento del 100% observado en la absorbancia de suero medida para la combinación GM-CSF/IL-4 es remarcable, ya que se sabe que ni el polisorbato ni el fosfatidilcolina de frijol soya, pueden mejorar de manera marcada la capacidad de permeabilidad por sí mismos. Por lo tanto, es razonable asumir que el efecto observado no se debe simplemente al suministro de moléculas del antígeno (con la masa molecular de 150 kDa) a través de la mucosa nasal, sino que además, testifica que por lo menos una proporción de citoquinas co-administrativas a pasado la barrera en una forma biológicamente activa. Ejemplos 20-21 : Penetrantes altamente adaptables como en los ejemplos 14-19, excepto por la ausencia de citoquinas Antígeno de anatoxina de tétanos (2 mg/mL) Micelas de lípidos mezclados 14.8 mg/mL de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 85.2 mg/mL de polisorbato (Tween 80) amortiguador de fosfato, 10 mM, pH 6.5 Antígeno de anatoxina de tétanos (2 mg/mL) Dosis aplicada: 3 µL por fosa nasal Los experimentos se llevaron a cabo como se describe con los ejemplos anteriores (14-1 9) La respuesta inmu nológ ica en los animales tratados con las micelas de lípidos mezclados como en los ejemplos 14-1 9, fue claramente inferior a la medida después de la aplicación nasal del antígeno en las vesículas de lípidos altamente adaptables, a pesar del hecho de que las últimas conten ían u na cantidad menor de Tween 80 q ue el formador. Si el tensoactivo fue responsable del transporte de macromoléculas a través de la mucosa nasal, se debe a su acción como aumentador de la permeabilidad de la piel, precisamente se habría esperado lo opuesto en el resultado experimental. Esto sugiere que los transportadores altamente adaptables (vesículas de lípidos mezclados) , transportan macromolécu las a través de la mucosa nasal a través de un mecanismo diferente a la permeabilidad del medicamento. Ejemplos 22-29: Efecto del tamaño de ag regado (estabilidad) Vesícu las altamente deformables con NaCh (Transfersomes ™) 86.3 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 1 0.7 mg de colato de sodio (NaCh) 0.9 m L de amortig uador de fosfato, pH 6.5 Micelas (lípídos mezclados) con NaCh, tipo 1 65 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 35 mg de colato de sodio 0.9 m L de amortig uador de fosfato, pH 6.5 Micelas (lípidos mezclados) con NaCh , tipo 2 31 .6 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 68.5 mg de colato de sodio 0.9 m L de amortiguador de fosfato, pH 6.5 Vesículas altamente deformables con Tw, Transfersomas ™ tipo 1 37.7 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 62.3 mg de Tween 80 (Tw) 0.9 mL de amortig uador de fosfato, pH 6.5 Vesículas altamente deformables con Tw, Transfersomas™ , tipo 2 64.5 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 35.5 mg de Tween 80 0.9 m L de amortig uador de fosfato, pH 6.5 Micelas (lípídos mezclados) con Tw, tipo 1 1 3.2 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 86.8 mg de Tween 80 0.9 mL de amortiguador de fosfato, pH 6.5 Micelas (lípidos mezclados) con Tw, tipo 2 7 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 93 mg de Tween 80 0.9 m L de amortiguador de fosfato, pH 6.5 0.1 0 Vesículas de lípidos (liposomas) 65 mg de fosfatidilcolina de frijol soya 35 mg de colesterol 0.9 mL de amortiguador de fosfato, pH 6.5 Se utilizó anatoxina de tétanos (2 mg/mL; elaborado en el hogar) en la dosis de 40 µg (20 µL) de TT por ratón e inmunización Se utilizó el filtrado del medio procedente de un cultivo de Clostridium tetani crecido in vitro como un antígeno purificado. El anatoxina puro se compró en Accurate Antibodies, NY, EUA. Para probar el efecto de las propiedades del agregado en la formulación , se prepararon tres tipos de agregados: vesículas relativamente grandes (diámetro de entre 100 nm y 200 nm), comprendiendo ya sea una membrana flexible (Transfersomas) o una membrana relativamente rígida (liposomas), y micelas mucho más pequeñas (diámetro menor a 50 nm). Las últimas se eligieron para mimetizar el método más convencional de utilización de detergentes como aumentadores de la permeabilidad mucosa nasal. Entre las ocho formulaciones probadas, las Transfersomas, en el promedio, proporcionaron mejores resultados, aunque los tituladores absolutos siempre fueron más bajos, probablemente debido a la impureza del antígeno. Las micelas de lípidos mezclados, son más eficientes en la creación de IgA, aunque no realmente diferentes a otros agregados en el caso de lgG2a e IgM , mientras que en el caso de Ig2b son comparables a las Transfersomas. El nivel lgG1 , el cual es decisivo para la protección animal, es evaluado únicamente de manera significativa cuando se utilizan Transfersomas para suministrar TT a través de la nariz (ver Figura 7a). Las micelas mezcladas que contienen detergentes menos potentes (con menor capacidad de aumento de permeabilidad de la piel), son hablando en forma relativa , "inmu no-transportadores" menos eficientes (ver Figura 7b), que las Transfersomas más deformables con un contenido de Tw superior quedando claramente afuera en el caso de lgG2a e IgM , que son similares a las Transfersomas menos deformables con un conten ido de Tw inferior en el caso de lgG 1 e lgG3, y son tan eficientes como las micelas mezcladas con Tw en el caso de IgA e lgG2b. La pequenez de los valores medidos, es motivo de preocupación , sin embargo, puede ser mejor utilizando un antígeno más puro. Observando la titulación acumulativa de todos los anticuerpos anti-TT específicos en el suero, las liposomas son "inmu no-transportadores" relativamente eficientes en la respuesta primaria y madura (posiblemente debido a la acción del TT no asociado) , m ientras que las micelas mezcladas enriquecidas con Tw son las peores. Las Transfersomas NaCh, son los q ue tienen mayor capacidad en la última respuesta inmunológica (ver fig ura 7c) . Ejemplos 30-35: Dosis de antígeno y efecto de pu reza Vesículas altamente deformables (Transfersomas): 86.3 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 1 3.7 de colato de sodio (NaChol) +/-0.04 %-mol de Lípido A monofosforilo (LA) relativo a SPC 0.9 m L de amortig uador de fosfato, 1 0 mM , pH 6.5 Anatoxina de tétanos (TT, de fuente local , purificado mediante ultrafiltración) 0 µg , 40 µg u 80 µg TT/ ratón/ inmunización Para obtener un antígeno parcialmente purificado, dicho filtrado se pasó a través de una membrana de corte de 1 0 kDa y se lavó con amortiguador de fosfato, pH 6.5; en el proceso, el filtrado del cultivo se concentró 1 5 veces. En la Figura 8a, se ilustran los resultados de la dependencia de dosificación . El incremento específico de TT en la absorbancia de suero después de la administración de TT a través de la nariz por medio de Transfersomas , revela u na dependencia de dosis positiva en la primera y última respuesta inmunológica en la ausencia de LA, revirtiendo la presencia de LA esta tendencia. En cuanto a la titulación y con respecto a la distribución del isótopo del anticuerpo específico, se obtiene u na ilustración similar aunque no idéntica (cf. Figu ras 8b y 8c). Los datos de supervivencia son indicativos y una buena protección en cada caso. Tomado en conjunto, esto sugiere que la dosis requerida para u na inmunización nasal no invasiva por medio de trasportadores altamente deformables, es mucho más pequeña que la requerida para una administración TT no invasiva exitosa a través de la piel. Efecto de pureza de antígeno. La comparación de los datos mostrados en las figuras 8c y 7a y 7b, muestran que la pureza del antígeno afecta fuertemente el nivel de respuesta inmu nológ ica del múrido contra la toxina del ténanos, cuando el anatoxina a sido aplicado en forma no invasiva. Ejemplos 36-46: Ruta de adm inistración Vesículas altamente deformables, Transfersomas ™ , NaCaCh tal como se describió en los ejemplos 1 -8 Anatoxina de tétanos mezclados con suspensión NaCh 20 mg/mL de colato de sodio en amortiguador de fosfato, pH 7 Dosis de anatoxina de tétanos: 40 µg de TT por inmunización; 5 µg TT, 10 µg TT, 20 µg TT, 40µg TT por inmunización. Utilizando los mismos procedimientos experimentales que se describieron en los ejemplos anteriores, se determinó la absorbancia del suero específico de anticuerpo, y la titulación del anticuerpo correspondiente y distribución del isótopo, y el nivel de protección del animal contra la toxina del tétano, después de la administración del antígeno en forma nasal, oral y subcutánea. Los resultados se proporcionan en las Figura 9. Estos revelaron que el incremento en la absorbancía de suero, al final, es comparable después de la administración del antígeno en forma invasiva y no invasiva (Figura 9a). Sin embargo, la titulación en el último caso es significativamente inferior excepto en la respuesta primaria. De manera interesante, la inyección s.c. produce únicamente resultados superiores después del segundo refuerzo, mientras que la combinación con TT y colato, en la cual posteriormente actúa como aumentador de la permeabilidad nasal en el titulador del anticuerpo total, es mejor todas las veces. La razón probable para esto, es la alta concentración de lgG2b, tal como se observa en la Figura 9b. Las inyecciones provocan de manera más eficiente el tipo lgG1 e IgM de anticuerpos.

Los animales fueron bien protegidos mediante cuales quiera de las vacunas mencionadas anteriormente con TT, aunque solamente después de 2 refuerzos, en el caso de vacunación nasal. En contraste, un refuerzo es suficiente (datos no mostrados) . Utilizando las dosis inferiores a 4-8x de TT purificado, es suficiente para proteger en el caso de la vacunación nasal , aunque no cuando el antígeno es inyectado (cf. Figura 1 0). Ejemplo 47 Efecto del adyuvante de bajo peso molecular (lípido A) TT-Transfersomas ™ inmuno-moduladas altamente deformables: como en los ejemplos 9-14 Anatoxina de tétanos: 2 mg/m L, con 20 µ L o 40 µL correspondientes a 40 µg u 80 µg de TT por inmunización Se considera que la co-administración de molécu las inmuno-activas, normalmente de inmunopotenciasión , es ventajosa para la presentación de TT asociado con los transportadores al cuerpo. Para substanciar esta conclusión de manera específica, el resultado de la inmunopresentación no invasiva de TT fue comparado por medio de Transfersomas con o sin lípido A de monofosforilo (LA) , el cual es un inmunoestimulante bien conocido, por ejemplo por provocar la generación de TNF. Sin embargo, para las dosis relativamente altas de antígenos utilizadas, no se encontró u na fuerte dependencia. En cualquier caso, se alcanzaron titulaciones substanciales y u na respuesta inmunológica profiláctica , lo cual no fue en el caso con TT purificado de la presencia LA. Ejem plos 48-53: I nmu nomoduladores de alto peso molecu lar (citog uinas) Vesículas altamente deformables, Transfersomas™ Tw: como se describió en los ejemplos 1-8, a demás varias citoquinas (Interferon-?, GM-CSF, II-4, IL-12) (0.5 mg IFN-?; 0.004 mg GM-CSF; 0.004 mg IL-4 por mL-4 por mL, 0.004 mg IL-12 por mL) Anatoxina de tétanos, 2 mg/mL, correspondiente a 40 µg TT (purificado, preparado en el lugar) por ratón/ inmunización El efecto de las citoquinas se estudió en manera individual y en combinación. Los resultados se proporcionan en las Figuras 5. Estas sugieren que la combinación de GM-CSF más y I L-4, puede soportar la generación de anticuerpos anti-TT en ratones, tal como probablemente puede, IFN-? y quizás I L-12,y puede ser IL-4 (cf. Figura 11a). Se observa el efecto más fuerte en el caso de IgM e IgA, excepto en el caso del uso de I L-12, el cual únicamente afecta fuertemente la generación de lgG2b. La protección lgG1 relevante se incrementa fuertemente únicamente a través de la combinación de GM-CSF e I L-4, por lo que no se afecta para nada lgG3. La inyección funciona mejor para lgG1 (cf. Figura 11b). Ejemplos 54-58: Efecto de la combinación de adyuvantes de bajo y alto peso molecular (LA + IL-12) Vesículas altamente deformables, Transfersomas™ NaCh, tal como se describió en los ejemplos 1-8, además 0.4 mg I L-12 por mL de suspensión inmunogénica 0.5 %- mol de lípido A de monofosforilo (LA) relativa a SPC Anatoxina de tétanos (purificado), 2 mg/mL, correspondiente a 40 µg de TT por ratón/ inmunización El efecto mencionado con los ejemplos del 25-31, se confirmó para una mezcla de inmunoadyuvantes de bajo y alto peso molecular. Los resultados se proporcionan en las Figuras 12 y muestran que la inmunopotenciasión a través de dicha combinación, es especialmente fuerte durante la etapa temprana de la respuesta inmunológica, siendo mejor en cualquier caso, la combinación que el LA solo. Ejemplos 59-71: Componente de pared bacteriana, toxina de cólera, como adyuvante: Vesículas altamente deformables, Transfersomas™ (Tfs): TfsC 86.3 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 13.7 mg de colato de sodio (NaChol) 0.9 mL de amortiguador de fosfato, 10 mM, pH 6.5 0.1 mL de etanol TfsT 36 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 64 mg de Tween 80 0.9 mL de amortiguador de fosfato, 10 mM, pH 7 Toxina de cólera (CT; Sigma, Neu-Ulm), 2 µg/ inmunización, si se especifica, Anatoxina de tétanos (TT, puro, Accurate Antibodies), 2 mg/mL. El volumen de dosis correspondiente a 0 µg de TT/ ratón/ inmunización (control negativo), 1 µg TT/ ratón, 5 µg TT/ ratón, 10 µg TT/ ratón , 20 µg TT/ ratón , 40 µg TT/ ratón (en la ausencia de CT) y 0.5 µg TT/ ratón/ inmunización, 1 µg TT/ ratón (cuando se utiliza CT) se utilizó en forma intranasal en las Transfersomas tipo T (TfsT) en ambas fosas nasales, y en una dosis de 0.5 µg TT/ ratón/ inmunización en las Transfersomas tipo C (TfsC) en de 4 a 6 ratones Swiss albino. Además, se inyectaron 20 µg/ ratón/ inm unización en TfsT en forma subcutánea en el sitio correspondiente en el grupo de control positivo. Las inmunizaciones se llevaron al cabo en los d ías 1 , 14, 28. El efecto protector del antígeno aplicado en la nariz, fue bueno cuando la dosis del antígeno excedió 20 µg/ inmunización ; las dosis inferiores produjeron una protección insuficiente aunque detectable (cf, Figu ra 1 3) . Cuando se incluyó la toxina de cólera (CT) en la form ulación de prueba junto con el anatoxina de tétanos, se log ró una excelente protección en la masa inferior de las dosis probadas (0.5 µg/ inmunización), independiente de la composición del transportador ultradeformable. La protección se completó en todos los g rupos de prueba q ue contienen CT en la formulación aplicada en la piel. Ejemplos 72-74: Toxina lábil de calor E.coli (H LT) como inmu no-adyuvante Vesícu las altamente deformables, Transfersomas ™ : TfsC 86.3 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 1 3.7 mg de colato de sodio (NaChol) 0.9 m L de amortiguador de fosfato, 1 0 mM, pH 6.5 Toxina lábil de calor (HLT, SIGMA, Neu-Ulm), < 1 mg/mL además, si se requiere Anatoxina de tétanos (TT, puro, Acurate Antibodies) 2 mg/mL o TfsT 36 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 64 mg de Tween 80 0.9 mL de amortiguador de fosfato, 10 mM, pH7 Toxina lábil de calor (LT, SIGMA, Neu-Ulm), < 1 mg/mL, si se requiere, Toxina de tétanos (TT, puro, Accurate Antibodies) 2 mg/mL Se prepararon los transportadores de antígeno y todos los experimentos (con ratones Swiss albino) y ensayos fueron llevados a cabo como se describió en los ejemplos anteriores. Se utilizó una serie de diferentes dosis de HLT fluctuando desde aproximadamente 50 ng/ aplicación a una cantidad de multi-microogramos por aplicación en combinación con concentraciones TT dentro del rango de aproximadamente 100 ng y hasta 10 µg por aplicación. En la mayoría de los casos, el volumen de las dosis correspondientes a 0.5 µg TT/ ratón/ inmunización i.n. y de 0.1 a 0.5 µg HLT/ ratón/ inmunización i.n. y un control positivo con 0.5 µg TT por inyección s.c, se utilizó para la inmunización de ratones. Tal como se muestra en la Figura 14, las titulaciones anti-TT son mejoradas mediante HLT que actúa como un adyuvante en comparación con el resultado de la inyección s.c. sin un adyuvante. La respuesta humoral es dependiente de la dosis, por ejemplo se logran tituladores anti-TT superiores con la dosis de HLT superior. La correlación no es lineal , aunque muestra más bien un máximo (datos no mostrados) . La protección contra el estím ulo de la toxina de tétanos es igualmente eficiente para la dosis alta y baja del inmu no adyuvante. Esto sugiere que los adyuvantes deben ser utilizados en la nariz ju nto con las Transfersomas al máximo en la dosis que esta en el rango del extremo más bajo de las dosis utilizadas para inmunizaciones (s.c.) invasivas convencionales; la dosis m ínima para el uso de inmuno-Transfersomas en la nariz, también debe ser de 1 a 2 ordenes inferior, para el adyuvante probado en esta serie para la mayoría, si no es que todos los inmunoadyuvantes. Ejemplo 75: Vacunación bivalente con anatoxina de tétanos v toxina de cólera como antígenos Vesícu las altamente deformables, Transfersomas ™ : 86.3 mg de fosfatid ilcolina de frijol soya (SPC) 13.7 mg de colato de sodio (NaChol) 0.9 mL de amortig uador de fosfato, 1 0 mM , pH 6.5 Toxina de cólera (CT, SIGMA, Neu-Ulm) , < 1 mg/m L Anatoxina de Tétanos (TT, puro, Accurate Antibodies) 2 mg/mL o TfsT 36 mg de fosfatidilcolina de frijol soya (SPC) 64 mg de Tween 80 0.9 mL de amortiguador de fosfato, 10 mM, pH7 Toxina de cólera (CT, SIGMA, Neu-Ulm), < 1 mg/mL Anatoxina de Tétanos (TT, puro, Accurate Antibodies) 2 mg/mL En la descripción anterior de los ejemplos relacionados, se proporcionan los detalles con respecto a la formulación y su preparación, en la caracterización de la vesícula y en los experimentos animales, así como en los ensayos que se encuentran a continuación. El resultado principal de esta serie de experimentos fue que la toxina de cólera, agregada a la formulación adyuvante, también puede inducir la formación de anticuerpos anti-CT en una cantidad prácticamente relevante. Este efecto puede aunque no tiene que ser logrado, utilizando concentraciones de CT y TT suficientes para asegurar una buena protección contra el estímulo con toxina de tétanos. La Figura 15 comprara las titulaciones anti-TT y anti-CT procedentes de los mismos ratones inmunizados con TT y CT dentro del mismo transportador. Esto revela el potencial de las Transfersomas™ que contienen más de un antígeno, que sirven como bases para por lo menos vacunas bivalentes.

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Claims (1)

1. REIVI NDICACION ES El uso de un penetrante, suspendido o dispersado en un solvente, en la forma de una diminuta gota de fluido rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de u na o varias capas de por lo menos dos diferentes substancias o dos d iferentes formas de una substancia con la tendencia a agregar, d iferenciándose dichas formas de una substancia mediante por lo menos el factor de 1 0 en solubilidad en un medio líquido preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma más soluble de la substancia, o el diámetro promedio de los hetero-ag regados que consiste de ambas de dichas substancias o formas de d ichas substancias, sea menor al diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma menos soluble de la substancia y/o en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración en donde el contenido de dicho componente alcanza hasta el 99% mol de la concentración requerida para solubilizar la gota o de lo contrario corresponde al 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada, prefiriendo que sea superior, y/o en donde la energía de deformación elástica de la gota que rodea el recubrimiento similar a una membrana, sea de por lo menos 5x menos, más preferentemente de por lo menos 1 0x menos e idealmente sea más de 1 0x menos que la de la célula de sangre roja o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido como un transportador para la preparación de un farmacéutico, preferentemente una composición de vacuna para administración transnasal. uso de un penetrante, suspendido o dispersado en un solvente, en la forma de una gotita líquida disminuida rodeada por un recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos 2 substancias diferentes o 2 formas diferentes de una substancia con tendencia a agregarse, difiriendo dichas substancias o forma de una substancia en al menos en el factor de 10, en la solubilidad en un medio líquido, preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de homo-agregados de la substancia o forma de la substancia más soluble o el diámetro promedio de los hetero-agregados, consistentemente de ambas de dichas substancias o forma de dicha substancia sea menor que diámetro promedio de homo agregados de la substancias o forma de la substancia menos soluble, y/o donde el componente más soluble tiende a subilizar la gotita penetrante y donde el contenido de dicho componente es hasta de 99% mol. , de la concentración requerida para solubilizar la gotita o corresponde además hasta el 99% mol. , de concentración en la saturación en la gotita sin solubilizar, lo que sea mayor, y/o donde la energía de deformación elástica del recubrimiento similar a una membrana que rodea a la gotita, sea por lo menos 5x inferior, más preferentemente por lo menos 10x inferior y de manera ideal sea más de 10x inferior, que la de las células sanguíneas rojas o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido en combinación con un ingrediente farmacéuticamente activo o un alergénico o antígeno para la preparación de una composición farmacéutica que se puede administrar en forma transnasal para el tratamiento de enfermedades infecciosas , desordenes endocrinos , preferentemente hipopitu itarismo, diabetes, hipertiroid ismo, tiroiditis, más preferentemente tiroiditis de Hashimoto, tiroiditis subaguda; desórdenes adrenales, preferentemente enfermedad de Addison , insuficiencia adrenal secundaria, síndrome de Cushing ; desórdenes gastrointestinales, preferentemente enfermedad de Crohn , colitis; enfermedades de hemorragia, preferentemente hemofilia, leucopen ia , síndrome hipereosinofílico; desórdenes mucoesqueletales y relacionados con los tejidos, preferentemente artritis reumatoíde, síndrome de Sjogren , síndrome de Bechet, lupus, escleroderma, polimiositis/dermatomiositis, y artritis reumática de polimialgia temporal , nodosa poliarteriosis, granulomatosis de Wegener, desorden de tejido conectivo mezclado, espond ilitis de anquilosación , artritis soriática, osteoartritis, enfermedad de Paget, ciática, bursitis, tendonitis o tenosinovitis, epicondilítis, fibromialgia , faciitis eosinofílíca; desórdenes neurológicos, preferentemente dolor, singultus, vértigo, desórdenes de ataques, desórdenes del sueño, ataques isquémicos temporales, lesión del cordón espinal, enfermedades de demielinación, desórdenes de las raíces nerviosas, miastenia g ravis; desórdenes psiquiátricos, preferentemente dependencia a las drogas, neurosis, desórdenes del humor, desórdenes esquizofrénicos , desórdenes delusionales; para propósitos oncológicos y/o para tratamiento en el campo de la ginecología, preferentemente para el tratamiento de dismenorrea, menopausia, anovulación crón ica, deficiencia de ovario prematura, endometriosis, infertilidad ; y/o para tratamiento en el campo de la inm unolog ía , preferentemente rechazo a trasplantes, hiposensibilización , inmunoterapia de alergias o vacunación profiláctica. u na composición farmacéutica para administración transnasal que comprende u n transportador que es u n penetrante, suspendido o dispersado en u n solvente, en la forma de una diminuta gota de fluido rodeada por u n recubrimiento similar a una membrana de una o varias capas de por lo menos dos diferentes substancias o dos diferentes formas de una substancia con la tendencia a agregar, diferenciándose dichas formas de una substancia mediante por lo menos el factor de 1 0 en solubilidad en un medio líquido preferentemente acuoso, de modo que el diámetro promedio de los homo-ag regados de la substancia o forma más soluble de la substancia , o el diámetro promedio de los hetero-agregados que consiste de ambas de dichas substancias o formas de dichas substancias , sea menor al diámetro promedio de los homo-agregados de la substancia o forma menos soluble de la substancia y/o en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración en donde el contenido de dicho componente alcanza hasta el 99% mol de la concentración requerida para solubilizar la gota o de lo contrario corresponde al 99% mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada, prefiriendo que sea superior, y/o en donde la energía de deformación elástica de la gota que rodea el recubrimiento similar a una membrana, sea de por lo menos 5x menos, más preferentemente de por lo menos 10x menos e idealmente sea más de 10x menos que la de la célula de sangre roja o de las bicapas de fosfolípidos con cadenas alifáticas de fluido incluyendo también dicha composición un ingrediente activo una alergénico un antígeno una mezcla de antígenos y/o una mezcla de alergénicos. El uso de conformidad con la reivindicación 2 o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3 en donde el ingrediente farmacéuticamente activo es un adrenocorticostático, un adrenolítico, un andrógeno o antíandrógeno, un antiparasítico, un anabólico, un anestésico o analgésico, un analéptico, un antialérgico, un antiarrítmico, antiarterosclerótico, antiasmático y/o broncopasmolítico, un antibiótico, un agente anti-infeccioso, un antidepresivo y/o antipsicótico, un antidiabético, un antídoto, un antiemético, un antiepiléptico, antifibrinolítico, anticonvulsivo o anticolinérgico, una enzima, una coenzima o el inhibidor de enzima correspondiente, un antihistamínico (y combinaciones de los mismos)o antihipertónico, un antihipotónico, un anticoagulante, antimicótico, antimiasténico, un agente contra Morbus Alzheimer o Morbus Parkinson, un agente para terapia ACS, un antiflogístico, antipirético, antirreumático, antiséptico, un analéptico respiratorio o un estimulante respiratorio, un broncolítico, cardiotónico, quimioterapéutico, un dilatador de coronaria, un citoestático, un diurético, un bloqueador de ganglio, un glucocorticoide, un agente anti-moscas, un haemostático, hipnótico, una inmunoglobulina o su fragmento cualquier otra substancia inmunológicamente activa, tal como u n inmu nomodulador, un carbohid rato bioactivo (derivado), un contraceptivo, un agente anti-migraña, un corticosteroide, un relajante muscular, un narcótico, un neu roterapéutico, un (poli)nucleótido, un neuroléptico, un neurotransmisor, un (poli)péptido (derivado) un opiato, un oftálmico, (para)simpaticomimético o (para)simpaticolítico, una (derivado)proteína, un medicamento de psoriasis/neurodermitis, un m id riático, un psicoestimulante, rinológico, un agente q ue induce al sueño, un agente sedativo, un espasmolítico, tuberculostático, un urológico, un vasoconstrictor o vasodilatador, un virustático, una substancia para curar heridas, una preparación para abuso de alcohol, un anticonvu lcionante, un antineoplástico, un antirreumático, un supresor de apetito, u n modificador de respuesta biológ ica , un modificador de sangre, un regu lador del metabolismo óseo, u n agente cardioprotector, un agente cardiovascular, un estimu lante del sistema nervioso central, una enzima, un agente para terapia de disfunción eréctil, un agente de fertilidad , un agente gastrointestinal, una preparación para gota , una hormona, un agente para tratar hipercalcemia, un agente para tratar hipocalcemia, un ¡nmunosupresor, una preparación para mig raña , un producto para enfermedad del movimiento, un agente para tratar esclerosis múltiple, un relajante muscular, un nutricional, una preparación oftálmica, una preparación de osteoporosis, una preparación ótica, u n parasimpatolítico , u n parasimpatomimético, un prostagland ín , un agente psicoterapéutico, un agente respiratorio, un sedante e hipnótico, u n agente de la membrana de la piel y mucosa, un auxiliar para dejar de fumar, un simpatolítico, una preparación para la temblorina , un agente para el trato urinario, una preparación vaginal, un agente para el vértigo, un inhibidor (antagonista) , o cualq uier otra substancia inmunológicamente activa (tal como un inm unomod ulador, por ejemplo, extractos bacterianos o componentes de la pared celular similares a la toxina del cólera, toxina lábil con calor, monofosforilípido A, o agentes u hormonas similares a timosín , timopoietín , o fitoinm unoestim ulantes similares a extractos de raíces Echínacea que inducen a citoquina, raíces de índigo silvestre, puntas de hojas de cedro blanco, o inmunomoduladores sintéticos como derivados de quinolina, péptidos sintéticos, pirimidina, lipopéptidos o citoquinas o inm unosupresores, e inhibidores de transducción de señal como ciclosporín A, FK506, FTY720, rapamícín) , un inh ibidor (antagonista) o un promotor (agonista) o la actividad de cualesquiera de los agentes antes mencionados, o cualquier combinación de dichas substancias. El uso de conformidad con la reivind icación 2 ó la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el antígeno es derivado de un patógeno. El uso de conformidad con la reivindicación 2 o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3 en donde dicho patógeno pertenece a bacterias extracelulares, incluyendo el cocci, que forma pus , tal como Estafilococos y Estreptococos, bacteria g ram negativa tal como especies meningococos y gonococos, especies de Neissería , bacteria gram negativa, incluyendo organismos entéricos tales como E. coli , Salmonella , Shigella, Pseudomonas, Diptheria , Bordetella Pertussis, y bacteria gram positiva (por ejemplo, Basillus pestis, BCG), particularmente anaerobius, tales como las especies Clostridium (por ejemplo Clostrid ium tetani, Clostridium perfringens, Clostridium novyi, Clostridium septicum) , bacterias y víruses, las cuales sobreviven y se multiplican dentro de las célu las huésped , comprendiendo micobacterias (por ejemplo M. tuberculosis) y Listeria monocitogénes, retro y adenoviruses, incluyendo virus de hepatitis, virus de inmunodeficiencia (humana), víruses de herpes, sífilis pequeña (sífilis de pollo) , víruses de influenza, sarampión , paperas y polio, citomegalovirus, rinovirus, etc. , y hongos que prosperan dentro de las células h uésped , parásitos que incluyen parásitos an imales, tales como protozoarios, y helmintos, y ectoparásitos, tales como garrapatas y ácaros, o especies de Brucella (por ejemplo, B. melitensis, B . abortus, B. suís, B. canis, B. neotomae, B. ovis) , el agente que causa el cólera (por ejemplo Vibrio cholerae), especies de Haemofilus como H . actinomycentemcomitans, H . pleuropneumoniae, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, de plaga, rabias, tétanos y rubéola, o a células eucarióticas o sus partes que causan varias enfermedades de neoplasia, auto inmunológicas y otros estados patológicos del cuerpo animal o humano, que no resultan necesariamente de infecciones microbianas El uso de conformidad con la reivindicación 2 ó la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el antígeno se utiliza en una forma purificada o incluso mejor en una forma pura. El uso de conformidad con la reivindicación 2 ó la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el antígeno es la determinante antigénica de virus de hepatitis, virus de inmunodeficiencia (humana), víruses de herpes, sífilis pequeña (sífilis de pollo), víruses de influenza, sarampión , paperas y polio, citomegalovirus, rinovirus, etc. , y los hongos que prosperan dentro de las células huésped, un parásito que incluye parásitos animales, tales como protozoarios y helmintos y ectoparásitos tales como garrapatas y ácaros, o especies Brucella o el agente que causa el cólera, especies de Haemofilus, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, plagas, rabias, tétanos y rubéola, o células aucarióticas o sus partes que causan varias enfermedades de neoplasia, auto inmunológicas y otros estados patológicos del cuerpo animal ó humano, las cuales no resultan necesariamente de infecciones microbianas. El uso de conformidad con la reivindicación 2 ó la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el alergénico es de origen cenogénico o endogénico, derivado de un microorganismo, un animal o una planta, o que pertenece al grupo de substancias inorgánicas elaboradas por el hombre y/o irritantes, o a partes o componentes del cuerpo humano que fueron procesadas incorrectamente o expuestas al sistema inmunológico del cuerpo. El uso de conformidad con la reivindicación 2 o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el alergénico pertenece a la clase de alergénicos de inhalación, incluyendo pero sin limitarse a polen, esporas, restos de cabello, piel, plumas de animal, textiles naturales y sintéticos, trigo, polvo (doméstico), incluyendo ácaros; además, alergénicos de alimentos y medicamentos; alergénicos de contacto; alergénicos por inyección, invasión o depósito, tales como varios gusanos (residentes en el aparato gastrointestinal), equinococci, triquinas, etc. , una parte de material de implantación. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 2 y de la 4 a la 10 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 8, que comprende adicionalmente un compuesto que libera o induce la actividad de citoquina o anti-citoquina o ejerce por sí mismo dicha actividad. 12. El uso de la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 1 , en donde el compuesto que ejerce la actividad de citoquina es IL-4, IL-3, I L-2, TGF, IL-6, TNF, I L-1 y/o IL-1 , un interferón tipo 1 , preferentemente I FN-alpha o IFN- , I L-12, IFN- , TNF- . IL-5 ó I L-10. 13. El uso o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 1 1 , en donde dicho compuesto con actividad de citoquina es un anticuerpo de anti-citoquina o el fragmento activo correspondiente, un derivado, o un análogo del mismo. 14. El uso o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 3, en donde el compuesto que exhibe o induce la actividad de citoquina o anti-citoquina y el ingrediente farmacéuticamente activo o antígeno o alergéníco, están asociados con el penetrante. 15. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 14 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 14, en donde la molécula de autoagregación menos soluble es un lípido, preferentemente un lípido polar, y el componente más soluble es un tensoactivo o alguna forma más soluble del lípido polar/básico. 16. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 15 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 15, en donde el componente más soluble es un agente que será transportado a través de la barrera, teniendo dicho agente una tendencia de formar estructuras grandes comunes, con el componente(s) menos soluble del penetrante, normalmente en la forma de un complejo físico o químico. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 1 6 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 1 6, en donde el componente más soluble tiende a solubilizar la gota de penetración esta presente en una concentración que no excede del 99%mol de la concentración requerida para desintegrar ia gota, o, de manera alternativa, no excede el 99%mol de la concentración de saturación en la gota no solubilizada , prefiriendo que sea mayor, siendo particularmente útiles los valores debajo del 50% de la concentración relativa del formador, siendo aún más convenientes valores debajo del 40% reí o incluso de alrededor o debajo del 30% reí, por io que son las más preferidas en el caso de gotas que no pueden ser solubilizadas por las concentraciones relativas al componente más soluble, las cuales exceden las concentraciones relativas antes mencionadas por el factor de hasta 2. El uso de conformidad con cualesqu iera de las reivindicaciones de la 1 a la 1 7 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 1 7, en donde el componente penetrante menos soluble es un lípido polar y el componente más soluble es un tensoactivo o una molécula en forma de tensoactivo, o una forma de un lípido, preferentemente un lípido polar el cual es lo suficientemente soluble para el propósito de la presente invención . El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 8 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 18, en donde el diámetro promedio del penetrante es de entre 25 nm y 500 nm , preferentemente entre 30 nm y 250 nm , incluso más preferentemente entre 35 nm y 200 nm y particularmente preferente entre 40 nm y 1 50 nm . El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 1 9 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 1 9 , en donde la concentración del penetrante en la formulación para el uso en la nariz h umana o animal es de 0.001 a 20% peso de la masa seca total en la formulación , en particular entre 0.01 % P y 1 5%P, más preferentemente entre 0.1 %P y 12.5%P y lo más preferible entre 0.5%P y 1 0%P . El uso de conform idad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 20 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 20, en donde el medio de soporte, por ejemplo, un amortiguador es seleccionado para ser una solución biocompatible con una actividad osmótica similar a la de un electrolito monovalente con concentración en el rango de entre 1 nMy 500mM , más preferentemente entre 1 0mM y 400mM, incluso más preferentemente entre 50nM y 300nM, y lo más preferentemente entre 1 00mM y 200m , o dicha solución que produce una estabilidad del penetrante prácticamente suficiente combinada con un rango de transporte prácticamente suficiente a través de la barrera. 22. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 23 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 21 , en donde la concentración del medicamento o agente relativo es de entre 0.001 y 40%peso de la masa del penetrante total, en particular entre 0.01 %P y 30%P, incluso mejor entre 0.1 %P y 25%P, y lo más preferentemente entre 0.5%P y 15%P. 23. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 22 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 22, en donde el medio que soporta los medicamentos y los transportadores es un amortiguador biocompatible con un valor de pH entre 4 y 10, más frecuentemente entre 5 y 9 y lo más frecuente entre 6 y 8. 24. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 23 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 23, en donde los aditivos están incluidos en la preparación para reducir la sensibilidad del sistema efectos químicos, biológicos o tensión ambiental, incluyendo antioxidantes, antagonistas de acción enzimática no deseada, crio-conservadores, microbicidas, etc. , o moduladores de propiedades físicamente importantes para el sistema, tales como biscocidad de formulación, etc.. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 24 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 24, en donde la dosis del medicamento o agente relativo que será administrada en forma no invasiva a través de la nariz por medio de transportadores altamente adaptables, es elegida para ser entre 0.1 x y 500x, con más frecuencia entre 0.5x y 250x, incluso más preferentemente entre 1 x y 1 00x diferente de la dosis de medicamento o agente correspond iente, que habría sido inyectada para lograr los efectos biológ icos deseados. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 25 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesqu iera de las reivindicaciones de la 3 a la 25, en donde la dosis del penetrante aplicado es de entre 0.01 mg 1 5 mg por fosa nasal , incluso con más frecuencia esta dentro del rango de 0.1 mg y 1 0mg por fosa nasal, y preferentemente esta entre 0.5 mg y 5 mg por fosa nasal. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 26 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 26, en donde la eficiencia de administración y los efectos biológicos del agente o medicamento elegidos, son controlados utilizando diferentes volúmenes de aplicación. El uso de conformidad con cualesq uiera de las reivindicaciones de la 1 a la 27 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 27, en donde dicha formulación es administrada utilizando un dispositivo de suministro medido. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 28 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivind icaciones de la 3 a la 28, en donde los diferentes volúmenes de aplicación son seleccionados para controlar la eficiencia de administración y los efectos biológicos del agente o medicamento eleg idos. El uso de conformidad con cualesq uiera de las reivindicaciones de la 1 a la 29 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 29, en donde los penetrantes en la suspención están cargados con los medicamentos o agentes dentro de las 24 horas previas a la administración de la formulación , preferentemente 360 min . , más preferentemente 60 min . e incluso más preferentemente 30 min . antes de la administración de la formulación en la nariz. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 30 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivind icaciones de la 3 a la 30, en donde el dispositivo de suministro es cargado en el sitio de tratamiento. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 31 o la composición farmacéutica de cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 31 , en donde el dispositivo esta cargado por separado con penetrantes y las moléculas, particularmente agentes biológ icos, que estarán asociados en el mismo. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 32 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 32, en donde el ingrediente farmacéuticamente activo es para la administración en el sistema nervioso. El uso o la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 33, en donde el sistema nervioso es el cerebro. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 34 o la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 34, en donde dicha composición farmacéutica es una vacuna. La vacuna de conformidad con la reivindicación 35, la cual comprende adicionalmente un extracto de patógeno o un compuesto procedente de un patógeno o un fragmento o un derivado del mismo. La vacuna de conformidad con la reivindicación 36 en donde dicho estracto de patógeno o compuesto es seleccionado de virus de hepatitis, virus de inmunodeficiencia (humana) , víruses de herpes, sífilis pequeña (sífilis de pollo) , víruses de influenza, sarampión , paperas y polio, citomegalovirus, rinovirus, etc. , y los hongos que prosperan dentro de las células huésped , un parásito q ue incluye parásitos animales, tales como protozoarios y helmintos y ectoparásitos tales como garrapatas y ácaros, o especies Brucella o el agente que causa el cólera, especies de Haemofilus, así como patógenos que activan enfermedades paratipoides, plagas, rabias, tétanos o rubéola La vacuna de conformidad con cualesq uiera de las reivindicaciones de la 35 a la 37, q ue comprende adicionalmente un adyuvante. La vacuna de conformidad con la reivindicación 37 ó 38 en donde dicho adyuvante es lipopolisacárido, tal como lípido A o un derivado o modificación del mismo, tal como lípido A de monofosforilo, o su análogo, tal como u n derivado graso de sacarosa, factor-cord (trehalosa-dimicolato) dipéptido de muramilo, u otro (poli)sacárido o (poli) péptido idéntico o que se asemeja a una parte inmunológicamente activa de una membrana de un microorganismo; un extracto de un microorganismo, incluyendo exo y endotoxinas bacterianas, preferentemente toxina de cólera o la toxina labile de E. coli, un derivado de la cadena-A, un componente con una actividad de ribosilación de ADP, un peptidoglicano, una toxina clostridial, una halotoxina LT, derivado de proteína purificado de M . Tuberculosis, LT-R1 92G, proteína I enlazada por Fibronectin de Streptococcus pyrogenes, o una proteína de membrana exterior de Neisseria meningitidis grupo B (GBOMP), ácidos nucleicos bacterianos o virales tales como oligonucleótidos que comprenden dinucleótidos CpG no metilados . La vacuna de conformidad con cualesq uiera de las reivindicaciones de la 35 a la 39 , q ue comprende una mezcla de M PL e I L-12 ó GM-CSF y I L-4. La vacuna de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 35 a la 40, en donde la dosis de inm unogén/antígeno relativa que será administrada en forma no invasiva a través de la nariz por medio de transportadores altamente adaptables, es elegida para ser entreO.OI x y 100x, con más frecuencia entre 0.05x y 75x, e incluso más preferentemente entre 0.1 x y 50x diferente a la dosis de inm unogén/antígeno correspondiente que habría sido inyectada para log rar el efecto biológico deseado. La vacuna de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 38 a la 41 , en donde la concentración del adyuvante administrado en forma transnasal es entre 1 0x inferior y hasta 1 000x inferior que la utilizada con las formulaciones inyectadas en forma subcutáneas correspondientes que emplean un antígeno similar, diferenciándose con más frecuencia la concentración inmunoadyuvante administrada en forma nasal de la concentración inmunoadyuvante inyectada por el factor de entre 0.5 y 1 00, o mejor, por el factor de entre 1 y 50 y lo mejor entre 2 y 25. U n contenedor que comprende la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 42. U n paquete que comprende por lo menos un contenedor que comprende la composición farmacéutica de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 42. Un método para generar una respuesta inmunoprotéctora en un mamífero, vacunando dicho mamífero con una vacuna de conformidad con cualesqu iera de las reivindicaciones de la 35 a la 42. 46 El método de conformidad con la reivindicación 45, en donde se seleccionan diferentes volúmenes de administración para controlar la dosis del inmunogén aplicado y el resultado de la vacunación. 47 El método de conformidad con la reivindicación 45 o 46, en donde una suspensión de penetrantes libres de antígeno es cargada con el antígeno que estará asociado en la misma durante el día previo a una administración, preferentemente 360min. , más preferentemente 60 min. e incluso más preferente 30 min. antes de administrar la formulación resultante en la nariz. 48 El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 45 a la 47, caracterizado porque se administra por lo menos una dosis de la vacuna. 49 El método de conformidad con la reivindicación 48, en donde dicha vacuna se administra como una vacuna de refuerzo. 50 El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 45 a la 49, en donde la vacuna se aplica entre 2 y 10, preferentemente entre 2 y 7, incluso más preferentemente hasta 5 y lo más preferentemente hasta 3 veces, cuando se utiliza un antígeno no alergénico, o un número de veces, en el caso de los alergénicos, según se requiera ya sea para lograr la inmunotolerancia deseada, determinada de acuerdo con un método de evaluación adecuado, o para considerar si el esfuerzo ha fallado. 51 El método de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 47 a la 50, en donde el intervalo de tiempo entre las vacunaciones subsecuentes se elige para ser de entre 2 semanas y 5 años, con ? > frecuencia entre 1 mes y hasta 3 años, más frecuentemente entre 2 meses y 1 .5 años. 52 El método de conform idad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 45 a la 51 , en donde el flujo de penetrantes que lleva u n inmunogén 5 a través de varios poros en una barrera bien definida, es determinado como una función de una fuerza o u na presión de transmisión adecuada que actúa a través de la barrera, y posteriormente los datos se describen de manera conveniente mediante una curva característica , la cual a su vez, se emplea para optimizar la 10 form ulación o aplicación posterior.