PT1551370E - Agregado com capacidade de deformação aumentada, que compreende pelo menos três anfipáticos, para o transporte melhorado através de barreiras semi-permeáveis e para a aplicação de fármaco não invasiva in vivo, especialmente através da pele - Google Patents

Description

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DESCRIÇÃO "AGREGADO COM CAPACIDADE DE DEFORMAÇÃO AUMENTADA, QUE COMPREENDE PELO MENOS TRÊS ANFIPÁTICOS, PARA O TRANSPORTE MELHORADO ATRAVÉS DE BARREIRAS SEMI-PERMEÁVEIS E PARA A APLICAÇÃO DE FÁRMACO NÃO INVASIVA IN VIVO, ESPECIALMENTE ATRAVÉS DA PELE"

Campo da Invenção A presente especificação descreve agregados com superfície extensa (agregados de superfície extensa, ESAs) com capacidade de deformação aumentada e capacidade de penetração de barreira melhorada, sendo os referidos ESAs suspensos em um meio líquido conveniente e que compreendem pelo menos três anfipáticos (componentes anfipáticos) e sendo capazes de melhorar o transporte de activos através de barreiras semi-permeáveis, tais como a pele, especialmente para a aplicação de fármaco não invasivo in vivo por meio da penetração de barreira por tais agregados. Os. três anfipáticos incluem pelo menos uma membrana que forma o composto (MFC) , a qual pode formar a membrana dos referidos ESAs, e pelo menos duas membranas que desestabilizam os compostos (MDC1 e MDC2) diferenciadas pela sua capacidade de formar agregados mais pequenos (sem superfícies extensas) quer por elas próprias ou em combinação uma com a outra e/ou caracterizadas pela sua solubilidade relativamente elevada no referido meio líquido conveniente. Os ESAs são carregados com pelo menos um composto biologicamente activo, o qual pode ser pelo menos um dos três anfipáticos.

Adicionalmente descritas são as preparações que compreendem os agregados de superfície extensos (ESAs), que podem penetrar as barreiras mesmo quando o raio de ESAs típico (quando se considera 2 que um ESA é esférico) é pelo menos 40 % (e de um modo preferido pelo menos 50 % ou até mais) maior do que o raio médio de um poro na barreira antes e depois dos ESAs terem penetrado a barreira.

Esta descrição lida também, .com as novas formulações de fármacos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAIDs) baseadas em agregados de superfície complexos, extensos que compreendem pelo menos três componentes anfípáticos. Um destes componentes é capaz de formar por si próprio, membranas de bi-camada grandes, estáveis. O outro pelo menos dois componentes anfípáticos, incluindo um NSAID, tende a desestabilizar tais membranas. Os referidos agregados são normalmente suspensos por exemplo, em um meio líquido polar, farmaceuticamente aceitável, conveniente, o qual também afecta a ionização de NSAID. A selecção da segunda membrana anfipática que desestabiliza o componente, o qual é tipicamente um (co)agente tensioactivo, pode impulsionar a capacidade de deformação dos agregados de superfície extensos misturados resultantes. Este efeito pode ser apoiado pela escolha judiciosa dos outros componentes de sistema. A descrição permite uma melhoria da penetração da barreira e da libertação do fármaco por tais agregados. A descrição também ensina como seleccionar a concentração de NSAID mais apropriada, a concentração anfipática total correcta e, no caso, a ionização anfipática na suspensão do agregado misturado resultante. A descrição refere-se adicionalmente à preparação e à aplicação da suspensão resultante em formulações farmacêuticas, com um foco na aplicação epicutânea em, ou menos frequentemente em, criaturas de sangue quente.

Informação Antecedente à A administração dos ingredientes activos é frequentemente limitada por barreiras naturais, tal como a pele, as quais previnem a absorção adequada das moléculas activas devido à baixa 3 permeabilidade da barreira para tais ingredientes. A disponibilidade e a utilização de preparações que podem superar este problema de impermeabilidade da barreira e permitir a .administração do ingrediente activo não invasivo seria vantajoso em muitos casos. Em seres humanos e animais, por exemplo, uma administração percutânea de tais preparações vai proteger os ingredientes activos contra a decomposição no tracto gastrintestinal e possivelmente vai resultar em uma distribuição terapeuticamente atractiva, modificada, do agente no corpo; tal administração não invasiva também pode afectar os .farmacocinéticos do ingrediente activo e permitir o tratamento da doença menos frequente e/ou mais simples (G. Ceve. Exp. Cpin. Invest. Drugs (1997) 6: 1887-1937.). Em caso das plantas, a penetração melhorada através ou na cutícula pode baixar a concentração do ingrediente activo que é necessário para o efeito desejado e, além do mais, pode reduzir significativamente a contaminação do ambiente (Price, C.E. (1981) em: The Plant Cuticle (D.F. Cutler, K.L. Alvin, C.E. Price, ' Editor), Académico, Nova Iorque, página 237252).

Muitos métodos para aumentar a permeabilidade da pele foram discutidos (ver, por exemplo, G. Ceve, 1997, op. cit.).. Os mais proeminentes são a injecção de jacto (para uma revista clássica ver Siddiqui & Chien Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier Syst. (1987) 3: 195-208), a utilização da perturbação da pele eléctrica (Bumette & Ongpipattanakul, J. Pharm. Sei. (1987) 76: 765-773) ou acústica (Vyas et al. , J. Microencapsul (1995) 12: 149-54) ou também a utilização de aditivos químicos, tais como certos solventes ou agentes tensioactivos. Tais produtos químicos actuam geralmente como os intensificadores de permeação da pele aumentando a divisão e/ou a capacidade de difusão do ingrediente activo nos lípidos da pele. · " 4

Muitas vezes os intensificadores de permeação usados são álcoois não iónicos curtos ou de cadeia longa e agentes tensioactivos não carregados etc., materiais aniónicos (particularmente ácidos gordos), aminas catiónicas de cadeia longa, sulfóxidos, bem como vários derivados de amino, e glicinatos e betainas anfotéricas. Nenhum destes, no entanto, resolve o problema do transporte do ingrediente activo através da pele ou da barreira mucosa para satisfação geral.

Uma visão geral das medidas, as quais foram usadas para o objectivo de aumentar a penetração do ingrediente activo através das cutículas de plantas, é sumariado no trabalho de Price (1981, op. cit.) . A utilização epidérmica de uma òu várias substâncias anfipáticas na forma de uma suspensão ou de uma emulsão de 0/A ou de A/O, também ocasionou uma melhoria demasiado pequena. Uma pesquisa extensa escrita por G. Ceve (1997, op. cit.) explica por que os lipossomas, na melhor das hipóteses, podem modificar o período' de retenção do fármaco ou a estabilidade na pele e ou melhorar o transporte do fármaco transcutâneo em parte por se obstruir a superfície da pele. 0 pedido de patente japonesa JP 61/271204 A2 (86/27 1204) fornece um exemplo para um efeito de estabilização de lipossomas na pele, contando com a hidroquinona glucosidal como material de estabilização. A utilização de vesículas de lípidos carregadas com um ingrediente activo combinadas com um agente que forma um gel na forma de "emplastros transdérmicos" foi proposta no documento WO 87/1938 Al. No entanto, a capacidade do ingrediente activo para penetrar a pele não foi aumentada de forma apreciativa. A utilização massiva de polietileno glicol de permeação - promoção e de ácidos gordos, em- 5 conjunto cora as vesículas de lípidos, foi solicitada por Gesztes e Mezei (1988, Anesth. Analg. 67,1079-1081) para alcançar só uma analgesia local moderada com formulações que contêm lidocaína aplicadas durante várias horas sob a oclusão na pele. A Patente norte-americana 6,193,996 descreve um adesivo para a pele sensível à pressão que usa intensificadores de permeação da pele. Os pedidos de patentes europeias EPA 102 324 e EPA 0 088 046 e a patente norte-americana US 4,619,794, todas· por H. Hauser, descrevem métodos para preparar vesículas unilamelares, usando um componente de destabilização de membrana única. As vesículas podem .ser usadas como portadoras para fármacos diferentes. No entanto, tais vesículas não são usadas na pele ou para o transporte através de barreiras semi-permeáveis. O pedido de patente europeia EPA 0 152 379 por Muntwyler e Hauser descrevem do mesmo modo a preparação de vesículas unilamelares. No entanto, essas vesículas necessitam muitas vezes de serem separadas dos lipossomas multílamelares residuais, facilitado pela presença de fármacos carregados, para a utilização final da matriz para tratar o corpo dos animais ou do ser humano. Os autores também apontam para a necessidade potencial de neutralizar o fármaco durante a preparação da vesícula para se obterem os lipossomas unilamelares desejados. Adicionalmente, tais vesículas não são usadas para o transporte de fármacos através de uma barreira semi-permeável. A patente europeia EP 0 475160, que corresponde à patente norte-americana US 6,165,500 e à patente canadense 2,067,754, todas com o título " Preparatíon for the application of agents in mini-droplets"f descrevem as preparações especiais relacionadas às suspensões descritas nesta aplicação. Estes documentos informam a utilização de agentes diferentes associados com gotinhas minúsculas ou,·· em particular, com as vesículas que consistem ·de uma ou algumas 6 ligações anfifilicas semelhantes a uma membrana para superar as barreiras semi-permeáveis incluindo a pele. Estas referências descrevem as preparações que têm um componente de destabilização de membrana única. Os documentos WO 98/17255 e AU 724218, do mesmo modo, descrevem vesículas para o transporte de uma variedade de fármacos através da pele.

Em dois relatórios relativamente precoces sobre tetracaína lipossómica dérmica (Gesztes A, Mezei M. "Topical anesthesia of the skin by liposome-encapsulated tetracaine." Anesth. Analg. (1988), 67:10791081) e a lidocaína (Foldvari M, Gesztes A, Mezei M. "Dermal. drug delivery by liposome encapsulation: clinicai and electron microscopic studies." J. Microencapsul (1990), 7:479-489), o grupo de Mezei informou o desempenho anestésico de tais fármacos usados localmente e dos dados autoradiográficos correspondentes. O fármaco foi encontrado na epiderme e na derme de seres humanos e porcos da Guiné quando a pele foi tratada sob um revestimento impermeável (oclusivo) com os anestésicos encapsulados de lipossoma. As formulações sempre contiveram as vesículas de fosfatidilcolina de soja multilamelares. No entanto, os relatórios não demonstram nenhum transporte de fármaco mediado por lipossoma através da pele, (Foldvari. M. "In vitro cutaneous and percutaneous delivery and in vive efficacy of tetracaine from liposomal and conventional vehicles." Pharm Res (1994) 11: 1593-1598) e com um. ingrediente oleoso adicional (Foldvari M. "Effect of vehicle on topical liposomal drug delivery: petrolatum bases." J. Microencapsul (1996), 13:589-600). Esta conclusão é apoiada pelo facto de que a dose de fármaco transportada máxima informada (5,3 %) foi mais do que 20 vezes mais elevada do que a dose de lípido transportada informada (0,2 %) (Foldvari, 1994). Adicionalmente, as formulações de Foldvari evidentemente não foram optimizadas para a adaptabilidade - mas..... :'partic-ularmente para · a melhor- c 7 retenção/libertação de fármaco. P. Gonzalez, Μ. E. Planas, L. Rodriguez, S. Sanchez, e G. Ceve em um artigo de "Noninvasive, percutaneous induction of topical analgesia by a new type of drug carriers and prolongation of the local pain-insensitivity by analgesic liposomes" (Anesth. Analg. (1992), 95: 615-621) informam os. resultados de investigações com formulações que contêm agentes tensioactivos, tipicamente carregados com lidocaina (2 %, como uma base livre) em uma suspensão de 4-8 % de lipido misturada (p/v) . Os agregados de lipido foram preparados a partir de 4/1 mol/mol de uma mistura.de fosfatidilcolina/colato de sódio, começando com uma solução de lipido etanólico (7-3 % em peso de EtOH no produto final) para a fabricação mais fácil. No entanto, todas as suspensões testadas foram informadas por Planas et al. como sendo instáveis. Adicionalmente, Planas et al. não conseguiram revelar como uma formulação de fármaco estável pode ser preparada, a qual seria conveniente para a libertação de fármaco transdérmica.

Peters e Moll (1995)("Pharmacodynamics of a liposomal preparation for local anaesthesia". Arzneimittelforschung (1995), 45:1253-6, descrevem a permeação de um fármaco aplicado topicamente através da pele. A permeação é realçada pelo etanol, é baseada na difusão, e é realizada sob oclusão.

Carafa e os colegas descrevem a utilização de vesículas livres de fosfolípidos, baseadas em agentes tensioactivos, (Carafa et al., 2002 ("Lidocaine-loaded non-ionic surfactant vesicles: characterisation and in vitro permeation studies." Int J Pharm (2002), 231:21-32). No entanto, tais vesículas não incluem simultaneamente tanto um MFC como um MDC, e são insatisfatórias. 8 0 estado actual da técnica em particular na libertação de NSAID através da pele é a difusão de fármaco transdérmica, a qual é proporcional à concentração de fármaco na pele e inversamente proporcional a resistência da barreira da pele, a qual é equivalente a - dizer-se que a difusão é proporcional .à permeabilidade da pele. A solubilidade dos· NSAIDs típicos está na variação de 1 ~g/mL a entre 0,5 mg/mL e a 10 mg/mL para a variação de pH entre 1 e 7,5. Isto corresponde a algum μΜ e até algumas dezenas de mM, sendo os valores elevados sempre medidos nas soluções menos acídicas (pH » pKa) em que os NSAIDs são parcialmente ou completamente ionizados, a solubilidade a pH « pKa sendo sempre muito baixa. Para maximizar o transporte de NSAID difusivo através da pele, deve-se conseguinte, utilizar sempre o pH tolerável mais elevado, o qual pode exceder o valor de 9.

Tomando as limitações da solubilidade de NSAID máxima, foram feitas tentativas para melhorar a permeação de NSAID (difusão) através da pele por se utilizarem intensif icadores de permeabilidade ou de permeação. Os intensificadores de permeabilidade aumentam o fluxo de-NSAID através da.barreira para uma dada concentração de fármaco, mas não afecta muito a profundidade da distribuição de fármaco. Adicionalmente, a utilização de formulações de lipidos convencionais na pele não afecta esta limitação.

Por exemplo, Henmi et al. 1994 (Chem. Pharm Buli 42:651-655) utilizaram três NSAIDs diferentes (cetoprofeno, flurbiprofeno e ibuprofeno) em um gel oleoso, formado por fosfolípidos de soja hidrogenados (os quais formam membranas muito rijas) e aplicado a preparação na pele. A conclusão foi que tais lipidos não têm nenhuma permeação que aumenta o efeito para a- pele- 'mas 9 particularmente solubilisa o fármaco de teste.

Burnham et al. 1998 (Clin J Sport Med 8:78-81) utilizaram um co-polímero de bloqueio de polietileno e um polipropileno glicol não especificado (plurónico), o qual geralmente é um . anfipático de destabilização de membrana pobre, para aplicar um NSAID na pele. Um organo-gel lipossómico baseado em lecitina não especificada (PLO) foi além disso usado três vezes diariamente durante uma semana, seguido por um periodo de "lavagem" semanal sem usar o gel. Os autores observaram que só uma camada de tecido fina sob a pele foi tratada, implicando assim que qualquer resultado aparentemente positivo pode ser devido à difusão livre de fármaco de PLO através da pele. 0 organo-gel consequentemente serviu simplesmente como um reservatório superficial.

Vyas et al. {J. Microencapsul 12:149-54, 1995) incorporaram diclofenac em lipossomas de 1-5 um de tamanho, multilamelares a pH = 7,4 que foram aplicados na pele sob condições diferentes. A disponibilidade sistémica resultante do fármaco foi depois estudada. As vesículas de lípidos misturadas resultantes foram incorporadas em uma base de unguento e foram aplicadas na pele de ratos. No entanto, a poração da - pele por ultra-som foi .necessária para se realizar qualquer libertação de fármaco transdérmica substancial, e a. maior parte dos NSAID testados foi tipicamente verificada no local da aplicação.

Schramlova et al. (Folia Biol (Praha) 43:195-199,1997) associaram o ibuprofeno com lipossomas preparados a partir de fosfolípidos·'-.tie soja complementados com 10 % de libertação de colesterol, sendo o conhecimento na técnica a que a última é um agente de reforço da membrana. A formulação com um pH = 7,4 foi injectada intramuscularmente ou aplicada-sob " oclusão na pele. 0- NSAID-· das 10 vesículas de lípidos ocasionalmente reduziu ligeiramente o edema da perna do rato, mas não significativamente, melhor do que o fármaco de um creme convencional mas menos do que uma injecção de NSAID. Este papel, por isso, ensina a utilização de um componente de estabilização da membrana (colesterol) e não de um componente de destabilização da membrana.

Saunders et al. (J Pharm Pharm Sei 2:99-107,1999), ao estudarem o aumento de permeação na pele, também utilizaram as estruturas lipossómicas da composição e da morfologia não especificadas, as quais foram reivindicadas como estando presentes na loção de MZL e em um gel de comparação (ambos preparados por Meyer Zall Laboratories (MZL)), e carregados com diclofenac de sódio. A presença de óleo na base dê óleo/água na formulação de MZL, o qual diminui a capacidade de deformação do agregado do lípido, e obstrui a pele, se nada mais impedir a libertação eficiente do fármaco pela vesícula através da pele.

Calpena et al. (Arzneimittelforschung 49:1012-1017,1999) estudaram a permeação de diclofenac através da pele humana de 6 formulações semi-sólidas que contêm 1 % de fármaco em uma mistura complexa de materiais que formam gel combinados com lecitina (2,5 % de qualidade não especificada) e de colesterol (0,5 %}. No entanto, os resultados dos estudos sugerem que a utilização de vesículas de lípidos não é benéfica (Calpena et al., 1999).

Os dados de permeabilidade na pele para o lisinato de ibuprofeno foram estudados, mostrando taxas de permeabilidade praticamente iguais para o fármaco em solução ou em micelas misturadas (fosfatidileolina contendo soja) e taxas mais baixa em quase 3 vezes para a dispersão lipossómica correspondente (Stoye et al., •1998 (Eur J -Pharm Biopharm 46-:191-200) . Os lipossomas··, por isso, 11 foram concluídos como sendo inúteis em termos de transporte de fármaco.transdérmico de apoio no sistema descrito. G. Ceve et al., relataram em Biochimica et Biophysica Acta, Biomembranes, volume 1368,. n°. 2, 1998, páginas 201-215, vesículas ultra-flexíveis, transferosomas, que têm uma extrema resistência de penetração ao poro e transportam quantidades terapêuticas de insulina através da pele intacta dos mamíferos. 0 documento EP 0 475 160 refere-se a uma preparação para a aplicação de agentes activos na forma de pequenas gotículas de líquido, em particular de pequenas gotículas de líquido que têm um invólucro semelhante a uma membrana de uma ou mais - camadas de moléculas anfifílicas, ou pequenas gotículas de líquido que têm uma substância portadora anfifílica.

Além disso, o documento EP 0 031 347 lida com o transporte de grandes moléculas através da mucosa nasal por meio de portadores especiais altamente adaptáveis carregados com as referidas moléculas.

Sumário da Invenção. .....

Os requerentes descobriram que a incorporação de um agente tensioactivo em uma membrana de bi-camada gue é construída a partir de um outro anfipático menos solúvel, tal como um fosfolípido, pode aumentar a flexibilidade da membrana complexa resultante. Isto promove -a capacidade de agregados, complexos na forma de gotículas. cobertas pelas membranas de bi-componente para atravessar os poros em uma barreira semi-permeável que de outra maneira impediria agregados comparativamente maiores de atravessamento. Além disso, a utilização de agregados‘com o revestimento de membrana altamente 12 deformável pode mediar o transporte do agente em e/ou através da pele do mamífero. Isto pode ser realizado por se seleccionar um agente tensioactivo, o qual é um componente de destabilização da membrana (= MDC) , e um anfipático menos solúvel, o qual é o componente que forma a membrana {= MFC), para. maximizar a flexibilidade da membrana misturada e a estabilidade do agregado misturado. Além disso o agente tensioactivo pode ser seleccionado para aumentar a adaptabilidade da membrana de bi-camada. Os pedidos de patente pelo requerente, especialmente o WO 92/03122 e o WO 98/172550 descrevem exigências básicas para a utilização de misturas de lípido/agente tensioactivo para o transporte de trans-barreira. É um objectivo da invenção o de fornecer preparações que podem transportar ingredientes actívos através de uma barreira na forma de vesículas ou de outros agregados superficiais extensos (ESAs) que compreendem os referidos activos, as referidas preparações que melhoraram a capacidade de permeação através de barreiras semi-permeáveis. A presente invenção refere-se a uma preparação farmacêutica que compreende, vesículas de membrana de bi-camada suspensas .era um meio líquido, compreendendo as referidas vesículas um líquido que forma uma bi-camada, um fármaco analgésico anfipático e um agente tensioactivo capaz de auto-agregação no meio de suspensão, em que a massa seca total de todas as substâncias anfipáticas está entre 0,01 % em peso e 50 % em peso, e o conteúdo de fármaco está entre 0,1 % e 60 % baseada na referida massa seca total.

As formas de realização adicionais da presente invenção são descritas nas reivindicações em anexo. 13 A presente descrição descreve adicionalmente a preparação baseada em uma combinação de pelo menos um primeiro (MFC do componente que forma membrana), pelo menos um segundo (MDC do componente de destabilização da membrana), e pelo menos um terceiro (MDC do componente de destabilização da membrana) componente anfipático suspenso em um meio liquido conveniente na forma de agregados superficiais estendidos anfipáticos misturados correspondentes (ESAs) com um ou alguns revestimento(s) anfipáticos misturados, semelhantes a bi-camada, em que os referidos ESAs formados por uma combinação dos referidos três componentes têm superfícies em contacto com o referido meio liquido, que são pelo menos 50 % mais extensas, em média, do que as superfícies típicas de agregados que compreendem pelo menos o referido acima citado segundo e pelo menos um terceiro componente anfipático sozinho, nas mesmas concentrações e, no caso, depois de se ajustar para os efeitos físico-químicos da ausência do referido primeiro composto anfipático (MFC). A presente especificação descreve adicionalmente suspensões de agregados superficiais extensos em um meio líquido que compreende: pelo menos um primeiro componente que forma membrana (MFC); pelo menos um segundo componente de destabilização da membrana. (MDC); pelo menos um . tercei.ro'. componente de destabilização da membrana (MDC), sendo o terceiro componente tipicamente um fármaco, tal que os referidos agregados superficiais estendidos complexos (ESAs) podem penetrar a pele do mamífero intacta e assim aumentar a concentração de fármaco na .pele e/ou aumentar o alcance da distribuição de fármaco abaixo da pele, em comparação com o resultado da mesma aplicação de fármaco em uma solução na·pele. Em uma versão especial das referidas suspensões, os referidos agregados superficiais extensos são vesículas cheias por líquido, cexcadas pela membrana, o referido primeiro componente é um lípido que forma· membrana,' e· os referidos segundo e terceiro-componentes 14 são componentes que desestabilizam a membrana. A presente especificação descreve adicionalmente uma combinação de pelo menos um primeiro (MFC de componente que forma membrana), pelo menos um segundo (MDC de componente que desestabiliza a membrana) , e pelo menos um terceiro (MDC de componente, que desestabiliza a membrana) componente anfipático suspenso em um meio liquido conveniente na forma de agregados superficiais estendidos anfipáticos misturados (ESAs) com um ou alguns revestimento(s) anfipáticos misturados semelhantes a bi-camada, em que pelo menos uma referida primeira substância tem uma tendência para se auto-agregar e é pelo· menos 10 vezes menos solúvel no referido meio liquido do qué pelo menos uma referida segunda e uma referida terceira substância, permitindo a primeiro de formar superfícies extensas, pelo menos uma referida segunda substância é pelo menos 10 vezes mais solúvel do que pelo menos uma referida primeira substância no referido meio líquido e, por si próprio, tende a formar ou apoiar a formação de superfícies, que são pelo menos 2 vezes menos extensas do que as superfícies que contêm pelo menos uma primeira substância sozinha, pelo menos uma referida terceira substância sendo também pelo menos 10 vezes mais solúvel no referido meio liquido do que a primeira substância e opcionalmente forma auto-agregados com números de agregação pelo menos 10 vezes mais pequenos do que aqueles dos auto-agregados da referida primeira substância; e as referidas superfícies extensas compreendem pelo menos uma referida primeira, pelo menos uma segunda e pelo menos uma terceira', substâncià,' em equilíbrio', têm pelo menos 50 % mais de 15 superfícies mais extensas do que as superfícies formadas pelo menos por uma segunda ou uma terceira substância sozinha, na mesma concentração e, no caso, depois do ajustamento para os efeitos físico-químicos da ausência do referido primeiro composto anfipático (MFC). A especificação descreve adicionalmente uma preparação baseada em uma combinação de pelo menos um primeiro (MFC de componente que forma a membrana) , pelo menos um segundo (MDC de componente que desestabiliza a membrana), e pelo menos um terceiro (MDC de componente que desestabiliza a membrana) componente anfipático suspenso em um meio líquido conveniente na forma de agregados misturados correspondentes com uma superfície extensa (ESAs) com um ou alguns, revestimento(s)· anfipáticos misturados, preferivelmente semelhantes a bi-camadas, em- que o referido MFC sozinho forma agregados de superfície estendida com o número de agregação de pelo menos 5000, e preferivelmente mais do que 10.000, e ambos os MDCs sozinhos e a combinação de ambos os MDCs formam agregados mais pequenos sem superfície realmente estendida e o número de agregação abaixo de 5000, e preferivelmente abaixo de 1000 em contacto com o referido meio liquido conveniente.

Todas as composições de acordo com a presente invenção compreendem três compostos anfipáticos os quais em conjunto formam agregados de superfície estendida .quer tenham um ponto de solubilização definido, ou realmente compreendam mais do que 0,1 % em mol da quantidade de solubilização daqueles componentes os quais concentrações em mais elevadas vão solubílizar os agregados de superfície estendida.

Todas as formas de realização da invenção são úteis em preparações para a aplicação, administração ou transporte de; pelo menos um 16 ingrediente activo o qual pode estar entre as três substâncias referidas, especialmente para objectivos medicinais ou biológicos, em e através de barreiras e constrições, tais como a pele de criaturas de sangue quente ou de semelhantes.

Preferivelmente a adaptabilidade da superfície estendida que compreende todos os referidos três componentes anfipáticos a pressão ambiental excede em pelo menos 20 % ou em pelo menos duas vezes o desvio padrão de uma medição típica (qualquer que seja mais pequeno) a adaptabilidade da superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro . e pelo menos um segundo componente anfipático usado nas concentrações correspondentes ou a adaptabilidade da superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro e pelo menos um terceiro componente anfipático em concentrações correspondentes, qualquer que seja mais pequeno. A adaptabilidade pode ser expressa como o valor inverso do valor de p*. Este valor .de p* específico é tipicamente mais elevado do que 50 %,· muitas vezes é aproximadâmente de 60 % e preferivelmente é de 57 % do valor de Pmax,

Verificámos adicionalmente, inesperadamente, que várias combinações de pelo menos dois componentes anfipáticos um dos quais é um NSAID, o qual pode desestabilizar substancialmente um agregado de superfície estendida de alguma maneira estável, baseado em lípido, tipicamente na forma de uma membrana de bi-camada, podem sinergisticamente aumentar pelo menos a adaptabilidade de três agregados de componente resultantes. Em paralelo, a capacidade de deformação da forma do agregado (membrana) é sinergisticamente aumentada. Consequentemente, o fluxo de tal suspensão de agregado através dos poros estreitos é aumentado e/ou a pressão característica que dirige certo fluxo ^'através da barreira· porosa 17 correspondente é diminuída. A capacidade dos referidos pelo menos três agregados de componentes para se moverem através de uma barreira semi-permeável é assim facilitada. Esta descoberta é surpreendente dado que as gotícuias revestidas por uma membrana de bi-camada de bi-componente já têm uma barreira apreciável que atravessa a capacidade em comparação com as goticulas cercadas por uma simples bi-camada de lípido. 0 aumento da adaptabilidade dos referidos agregados de superfície estendida . com pelo menos três componentes anfipáticos e/ou a diminuição da pressão que é necessária para fazer tais agregados moverem-se através de uma barreira biológica tem consequências importantes, e inesperadas, práticas. Especificamente, quando os referidos agregados são aplicados na pele, como um exemplo para uma barreira semi-permeável biológica, o transporte dos NSAIDs associados ao agregado através de tal barreira é além disso aumentado e alcançado. A última observação é explicável em termos de clarificação diferencial nas camadas superficiais da pele, onde reside a drenagem do sangue cutâneo, do fármaco, o qual pode entrar directamente nos tubos capilares sanguíneos, e de agregados carregados com fármaco, os quais são demasiado. grandes para se introduzirem em tais tubos capilares. Isto significa que os portadores de NSAID se movem mais adiante do que a solução em forma de fármaco, permitindo que os tecidos mais profundos sejam tratados com os NSAIDs sob o local de aplicação do fármaco na pele. Evidência convincente para isto é dada em um dos Exemplos Práticos. Tal descoberta não é esperada tendo em conta que as combinações de fosfolípidos de NSAID simples já asseguram o melhor e mais profundo transporte do fármaco através da pele do que as preparações convencionais baseadas em soluções de NSAID. 18

Os objectivos e as vantagens adicionais da presente invenção tornar-se-ão evidentes a partir da descrição seguinte de formas de realização preferidas, as quais incluem uma melhor forma de preparação.

Na presente descrição, os termos gerais empregues mais acima e a partir daqui têm os significados seguintes. 0 termo "agregado" denota um grupo de mais do que somente alguns anfipáticos de espécie semelhante ou diferente. Um .agregado pequeno, como usado no contexto desta invenção, tem um número de agregação de na > 3, isto é, contém pelo menos 3 moléculas, mas não excede na < 5000 ou mais preferivelmente na < 1000, isto é, contém não mais do que 500 0 ou 1000 moléculas. "O agregado de superfície estendida (ESA)", "um agregado com a superfície estendida", uma ."vesícula" ou "uma superfície estendida" como usado no contexto desta invenção, têm todos números de agregação de 5000, isto é,. contêm um mínimo de 5000 moléculas, e muitas vezes são caracterizados por um número de agregação mesmo mais elevado, isto é, que contêm um número mesmo mais elevado de moléculas, os ESAs preferidos têm números de agregação de na > 10000 e mesmo mais preferivelmente de na > 50000. Para uma preparação que contém agregados, será sempre feita referência ao- número de agregação médio ou ao número, médio de moléculas por agregado, excepto se indicado de outra maneira. O termo "número de agregação" iguala o número de moléculas as quais em conjunto formam um agregado. Os métodos correspondentes da determinação de na são bem conhecidos na técnica.

Quando um agregado de lípido é cheio com água e rodeado pelo menos com uma membrana é chamado de uma vesícula de lípido. A membrana como definida nesta descrição é uma mistura de pelo 1 menos- três- 19 anfipãtlcos (MFC+MDC1+MDC2) preferivelmente na forma de uma bi-camada; um componente de destabilização da membrana por esse meio é potencialmente uma combinação de MFC-MDC (isto é um associado anfipático misturado).

Os agregados da invenção são revestidos com uma metade, uma, ou várias bi-camadas. Estes também podem ser chamados de revestimento (s) anfipáticos misturados, e correspondem a uma mono-camada, bi-camada ou oligo-camadas de lípidos respectivamente.

Para. um agregado sólido com a superfície que compreende somente uma camada de moléculas (uma mono-camada) a superfície do agregado Segregado é dada pelo. produto do número do agregado e da molécula singular exposta à superfície Smoiécuia^ 3 agregado = Ua Smolécula A Smoiécuia pode ser medida quer directamente, por exemplo em um canal de Langmuir ou com um método difractométrico ou reflectométrico, ou também, pode ser calculada com qualquer modelo de computador conveniente (por exemplo um HyperChem).

Um agregado com um revestimento de bi-camada tem uma área de superfície só de metade da grandeza:

Sagregado (bi-camada, na) = 0,5 de Smolécuia (mono-camada, na) . "0 raio do agregado" rÊ para um agregado esférico é proporcional à raiz quadrada da superfície do agregado: r agre gado — (r agregado / 4 Π) 0,5 20 outras geometrias de agregados necessitam de adaptação apropriada de fórmula.

Uma "barreira" no contexto desta invenção é (como, por exemplo, nos documentos EP 0 475 160 e WO.98/17255) um corpo com poros estreitos estendidos de lado a lado’, tendo tais poros estreitos um raio que é pelo menos 25 % mais pequeno do que o raio de ESAs (considerado como esférico) antes dos referidos ESAs penetrarem através de tais poros. O termo "estreito" usado em conexão com um poroimplica que o raio de poro é significativamente, tipicamente de pelo menos 25 %, preferivelmente pelo menos de 30 % mais pequeno do que o raio da entidade testada no que se refere à sua capacidade de atravessar o poro. A diferença necessária tipicamente deve ser maior para os poros mais estreitos. A utilização do limite de 25 % é, por conseguinte, bastante conveniente para um diâmetro > 150 nm ao passo que a exigência da diferença de > 100 % é mais apropriada para os sistemas mais pequenos, por exemplo com um diâmetro < 50 nm. Para diâmetros aproximadamente de 20 nm, a diferença do diâmetro do agregado de pelo menos 200 % é muitas vezes necessária. O termo "semi-permeável" usado em conexão com uma barreira implica que uma solução pode atravessar aberturas de trans-barreira. ao passo que uma suspensão de agregados não adaptáveis (bastante grande para a definição acima mencionada de poros "estreitos" para se aplicar, tipicamente 150-200 % maior do que o diâmetro de tais aberturas) não pode. As vesículas de lípidos convencionais (lipossomas) feitas de qualquer fosfatidilcolina comum na fase lamelar de gel ou então de qualquer fosfatidilcolina biológica/mistura de 1/1 mol/mol de colesterol ou então goticulas de óleo comparativamente grandes, tendo todos o -diâmetro relativo 21 especificado, sao três exemplos de tais agregados nao adaptáveis. O termo "estável” significa que os agregados testados não modificam o seu diâmetro espontaneamente ou pela pressão mecânica relacionada com. o transporte (por exemplo durante a passagem através de uma barreira somente a um grau farmaceuticamente aceitável. * Uma modificação de 20-40 % é normalmente considerada aceitável; a divisão em duas partes ou a duplicação do diâmetro do agregado são a fronteira e uma maior modificação no diâmetro é tipicamente inaceitável. Alternativamente e muito convenientemente, a modificação no diâmetro do agregado que resulta do atravessamento do poro sob pressão é usada para avaliar a estabilidade do sistema; os mesmos critérios são depois aplicados no que se refere aos poros "estreitos", por analogia. Para se obter o valor correcto para a modificação do diâmetro do agregado, uma correcção para os efeitos de fluxo/vórtice pode ser necessária. Estes procedimentos são descritos em maior detalhe na publicação do requerente em Ceve G., Schátzlein A., Richardsen H. (2002) Ultradeformable Lipid Vesicles Can Penetrate the Skin and other SemiPermeable Barriers Intact. Evidence from Double Label CLSM Experiments and Direct Size Measurements. Biochim. Biophys. Acta 1564:21-30. O termo "resistência ao· transporte de barreira" descreve a resistência de uma dada barreira ao transporte de um dado fluido com ou sem agregados suspensos. Matematicamente falando, esta resistência é dada pela proporção da pressão que dirige o transporte e da taxa de transporte (=fluxo): resistência = delta p / ja. Em termos mais qualitativos, usado em alguns exemplos neste documento, a resistência da barreira é identificada com o volume de fluido total que pode ser filtrado através de uma dada barreira por uma certa pressão dentro de um dado período. Alternativamente a pressão necessária para se conseguir um certo fluxa~-pode ser -u-sada 22 para descrever funcionalmente a resistência da barreira. A resistência ao transporte da barreira geralmente diminui linearmente com o número e a área total de poros no dado obstáculo de transporte. Para . os -poros relativamente pequenos o valor da resistência também pode depender do diâmetro do poro médio, principalmente devido aos efeitos de fricção/viscosidade. Em adição a isto, a resistência ao transporte da barreira é sensível ao fluido transportado / características da suspensão e assim depende fortemente da adaptabilidade da partícula suspensa e algumas vezes da concentração. Na primeira aproximação, esta última sensibilidade é devida à perda elástica e viscosa durante o transporte. 0 termo "adaptabilidade" do agregado que governa a "curvatura superficial tolerável" é definido como a capacidade de um dado agregado de modificar-se facilmente, e essencialmente reversivelmente, as suas propriedades, tais como a forma, a proporção de alongamento, e a superfície à proporção de volume.. Essencial para esta invenção é o ajustamento da forma do agregado e as propriedades para a pressão anisotrópica causada pelo atravessamento do poro. A adaptabilidade suficiente implica que um agregado é capaz de sustentar forças ou pressões unidireccionais diferentes, tais como a pressão, sem fragmentação significativa, a qual define um agregado "estável". Se um agregado passar através de uma barreira cumprindo esta condição os termos "adaptabilidade" e "capacidade de. deformação" (forma) mais a "permeabilidade" são essencialmente equivalentes. A passagem não destrutiva de agregados de lípidos misturados ultra-deformáveis, através dos poros estreitos em uma barreira semi-permeável é assim o diagnóstico da elevada adaptabilidade do agregado.· Se o· raio de poro for duas vezes mais pequeno do que o- 23 raio do agregado médio, o agregado deve modificar a sua forma e a proporção de superfície-para-volume de pelo menos 100 % para passar sem fragmentação através da barreira. Uma modificação fácil e reversível na forma do agregado implica inevitavelmente a elevada capacidade de deformação do agregado e necessita de uma grande adaptação da proporção de superfície-para-volume. Uma modificação na proporção de superfície-para-volume por si implica: a) uma elevada compressibilidade de volume, por exemplo no caso de gotícuias compactas que contêm material diferente, e imiscível com, o fluído de suspensão; b) a elevada permeabilidade da membrana do agregado,' por exemplo no caso de vesículas que são livres para' trocar o fluido entre o volume da vesícula interior e exterior. A capacidade de medição da dada suspensão do agregado para atravessar uma barreira semi-permeável com poros estreitos oferece assim'meios simples para testar funcionalmente a adaptabilidade do agregado, como é descrito nos Exemplos Práticos. Esta capacidade para as suspensões de agregados suficientemente estáveis é inversamente proporcional à resistência do transporte de barreira eficaz e, na primeira aproximação, à adaptabilidade da vesícula av = aa (subscritos v e uma vesícula de denotação e agregado, respectivamente). Se nenhum outro valor de adaptabilidade estiver disponível, o valor inverso da resistência de transporte de barreira ou o valor de 1/p*, os quais são definidos adicionalmente no texto, pode ser usado para caracterizar a adaptabilidade dos agregados em uma suspensão. A adaptabilidade de um agregado semelhante a uma vesícula depende da permeabilidade e da capacidade de deformação da membrana da vesícula reversível. A permeabilidade do lípido de bi-camada pode ser avaliada pelos métodos bem estabelecidos, tal como o método de inchação osmótieo que · é descrito em muitos documentos· científicos e 24 no Phospholipids Handbook, editado por G. Ceve para Mareei Dekker Publishers (Nova Iorque, 1993). Menos directamente e quantitativamente, mas ainda dizendo, a permeabilidade da vesicula de bi-camada pode ser verificada por se comparar o diâmetro do agregado médio antes e depois do cruzamento do poro: o rompimento e a fragmentação da vesicula são indicativos da impermeabilidade da membrana do agregado. No caso de vesículas de lípidos, a última é idêntica à impermeabilidade de lípidos de bi-camada. A capacidade de deformação da membrana aberta é governada pela flexibilidade de lípidos de bi-camada. Esta quantidade é proporcional à elasticidade da curva da bi-camada e é por conseguinte determinada pelo módulo da curva da membrana.elástica = a o módulo de curvatura elástico de uma bi-camada = B. 0 último parâmetro pode ser medido com vários métodos conhecidos na técnica, incluindo medições de aspiração por pipeta, análise de flutuação ou de forma de vesícula, deformação de bi-camada sob pressão em um microscópio de força atómica, etc.. A densidade de energia elástica da curvatura de bi-camada de uma vesícula com o raio rvea é dada por B/2rves2, que mostra que a maioria das bi-camadas elásticas/flexíveis, com valores de B mais pequenos, são mais deformáveis. Para as bi-camadas de fosfatidilcolina na fase lamelar do fluido o valor de B é tipicamente da ordem .de 10”19 J. Este valor é pelo menos de . uma ordem de magnitude mais elevada do que o valor correspondente determinado para uma mistura de MDC-MFC ou MDC-MDC-MFC conveniente, o qual é B ~ 5 IO-17 J. Isto explica por que é que as misturas anfipáticas de três componentes descritas formam, bi-camadas muito flexíveis e vesículas altamente deformáveis. É importante realizar que qualquer propriedade de sistema que tende a abaixar a adaptabilidade da forma do agregado também abaixa a probabilidade do movimento do agregado através dos poros com um raio mais pequeno do que - o raio do ^agregado médio ν· A incorporação 25 de grandes corpos incompressíveis {por exemplo, goticulas de óleo) em ou entre os agregados deformáveis em forma, por conseguinte, abaixa, se não bloqueia, o transporte de trans-barreira. A incompressibilidade do núcleo do agregado tem um efeito negativo semelhante. Os agregados na forma de vesículas (lípidos) suspensos em e cheios com água quase incompressível, por conseguinte, devem expelir um pouco de água a partir do interior da vesícula durante a deformação do agregado para alcançar a adaptabilidade elevada/máxima·. A introdução de agentes de estabilização da membrana (incluindo o colesterol e outro esteróis, pequenos lípidos de cadeia longa polar,, etc., como quase o MFC) em bi-camadas também abaixa a adaptabilidade dos agregados misturados resultantes. Os agregados semelhantes a uma vesícula com muitos revestimentos de bi-camada (= membranas) são também relativamente não adaptáveis (isto é têm um valor de aa mais baixo, como definido adicionalmente no texto) e devem ser empurrados com uma força mais elevada (isto é têm um valor de p* mais elevado, como definido adicionalmente no texto) através de poros estreitos do que os agregados somente com alguns ou só um tal revestimento (s) . As razões para isto são óbvias: na aproximação mais simples, a adaptabilidade do agregado é inversamente proporcional, ao número de bi-camadas que consagram o cuidado do líquido de. um . agregado. As modificações .do sistema adicionais que impactam negativamente na adaptabilidade do agregado podem ser analisadas de forma semelhante. Γ

Se uma vesícula puder passar através de um poro estreito sem ajustar irreversivelmente o seu diâmetro ao diâmetro do poro dentro de uma variação de incerteza de 50 % ou mesmo de 100 %, a membrana de bi-camada da vesícula nos termos deste documento é declarada como sendo permeável bem como flexível. Para avaliar a adaptabilidade do agregado do lípido é, por conseguinte, útil empregar um outro aspecto da invenção, ' usando o método seguinte:· - 26 1) medir o fluxo ja da suspensão do agregado através de uma barreira semi-permeável (por exemplo gravimetricamente) para diferentes pressões de delta p do transporte que dirige a trans-barreira; 2) calcular a dependência de pressão da penetrabilidade da barreira P para a dada suspensão por se dividir cada valor de fluxo medido com o valor de pressão de direcção correspondente: P (delta p} = ja (delta p)/ delta p; 3) controlar a proporção do diâmetro 2rves (delta p) /2rves,o· final e inicial da vesícula (por exemplo com a disseminação da luz dinâmica) , em que 2rves (delta p) / é o diâmetro, da vesícula depois da passagem da barreira semi-permeável dirigida por delta p e 2rVeS,o ser o diâmetro da vesícula inicial, e se necessário fazer correcções aos efeitos de fluxo; 4) alinhar ambos os conjuntos de dados P (delta p) contra rves (delta p) /rVea,0/ para determinar a variação da coexistência para a elevada adaptabilidade e estabilidade do agregado; é também útil, mas não absolutamente essencial, parametrizar . os dados .de penetrabilidade experimentais dentro do sistema de aproximação de Maxwell em termos da pressão necessária do valor de p* e da máxima penetrabilidade do valor P máximo, os quais são definidos graficamente nos esquemas ilustrativos seguintes.

As figuras 1 a 4 ilustram esquematicamente os princípios físicos e moleculares que são a base de aproximação supracitada e o modelo matemático usado para analisar os dados experimentais correspondentes. 27 É plausível somar todas as contribuições para uma movimentação da energia do agregado (energia/s de deformação, energia térmica, o trabalho de corte, etc.) em uma energia total, singular. A densidade da população de equilíbrio de níveis energéticos dos agregados pode depois ser tomada . para corresponder, à distribuição de Maxwell. Todos os agregados com uma energia total maior do que a energia de activação, E > EA, são finalmente concluídos para penetrar a barreira. A probabilidade de atravessar o poro para tais agregados é depois dada por: l\ Γ ^ +> . e. P(e) — 1 — erf | e sendo a energia do agregado sem dimensão em unidades de energia de activação Ea. É, por conseguinte, plausível escrever a penetrabilidade da barreira a uma dada suspensão como uma função da pressão que dirige o transporte (= diferença da pressão de direcção) p (= delta p) como: P(-HfW=sí,P tl*) " -íwws

o

Pmax é a penetrabilidade possível máxima de uma dada barreira. (Para os agregados com resistência ao transporte nula esta penetrabilidade é idêntica à penetrabilidade do fluxo do meio de suspensão). p* é um parâmetro ajustável que descreve a sensibilidade de pressão, e assim a resistência ao transporte, do .sistema testado. (Para as barreiras, com um raio de,. poro fixo esta 28 sensibilidade é somente uma função das propriedades do agregado. Para as partículas de não interacção a sensibilidade é dominada pela adaptabilidade do agregado, permitindo fazer a suposição: aa proporcional a 1/p*.)

Em uma forma de realização presentemente preferível da invenção, a abordagem experimental à determinação da adaptabilidade do agregado quantitativa é a de identificar o valor de adaptabilidade da vesícula com a diferença de pressão inversa necessária para alcançar uma certa fracção praticamente relevante, predefinida da proporção da pressão de fluxo realizável máxima com a suspensão da vesícula; utilizando o critério de penetrabilidade máxima de 50-60 % (Pmax) dá resultados razoáveis. Especificamente, todos os valores de p* dados neste documento correspondem a 57 % do valor de ΡΜβχ· 0 valor de adaptabilidade, até uma constante desinteressante, é depois dado pelo valor inverso do valor de p* que corresponde a 57 % do valor de ΡΜΧ.

Fazendo algumas suposições mais razoáveis cada um pode usar o valor de p* determinado experimentalmente para calcular a energia de activação EA para o transporte de trans-barreira de agregados de vesículas adaptáveis. A contribuição energética dominante para o trabalho de deformação da bi-camada - energia elástica da bi-camada; energia de permeabilização da bi-camada, conforme o caso -pode ser depois deduzida do valor de EA. Finaliciente, a energia elástica da bi-camada pode ser traduzida na densidade da energia elástica de curvatura da bi-camada, a qual depende do módulo de curvatura elástico da bi-camada, B, como é explicado anteriormente no texto. A energia de permeabilização da bi-camada pode independentemente estar relacionada ao trabalho' necessário para fracturar uma membrana da bi-camada, e assim à tensão da lise da bi-camada, assumindo que a· energia elástica é muito -mai-s -pequena do 29 que a energia de permeabilização da membrana. Para as vesículas de lípidos simples isto foi feito pelo grupo de B. Frisken (cf. Biophys. J. 74: 2996-3002 (1998) e langmuir 16: 928 - 933 (2000)), entre outros. Tal análise detalhada não é necessária para optimizar as suspensões do agregado para o transporte de trans-barreiras, no entanto, e por conseguinte não é usado na presente aplicação. 0 '"meio de suspensão líquido" ou "meio líquido " ou "meio líquido conveniente" é definido nos documentos EP 0 475 160 e em WO 98/17255.

Um "anfipático" (ou um componente anfipático) é qualquer substância capaz de formar um ESA ou de modificar a adaptabilidade de um ESA, quando colocado em contacto com o meio de suspensão líquido.

Para a definição mais larga, os anfipáticos são divididos em dois sub-grupos, os "compostos . que formam a membrana" (MFCs) ou substâncias de "construção de superfície" ou de "formação de superfície estendida ou de "suporte de superfície", as quais são capazes de formar agregados superficiais estendidos (ESAs), e "os compostos que desestabilizam a membrana" (MDCs). Os últimos dão tipicamente.os. ESAs formados pelos MFCs mais adaptáveis. .

Em alguns aspectos os três compostos anfipáticos, um MFC e dois MDCs que formam os ESAs são depois definidos como o MFC sozinho forma os ESAs, um MDC sozinho forma pequenos agregados, o outro MDC sozinho forma opcionalmente pequenos agregados e a combinação de ambos os MDCs formam pequenos agregados, em contacto com o referido meio de suspensão líquido. Sendo os ESAs e os agregados pequenos definidos em termos de números de agregação como afirmado em cima.

Em- alguns - aspectos os três compostos anfipáticos>- um MFC e dois - 30 MDCs que formam os ESAs são depois caracterizados pela sua solubilidade no meio de suspensão liquido. Os MFCs são depois definidos como sendo menos solúveis do que os MDCs pelo menos por um factor de 2. Em formas de realização mais preferidas os MFCs são -depois definidos como sendo menos solúveis do ..que os MDCs pelo menos por um factor de 10 e em formas de realização preferidas as solubilidades dos dois MDCs diferencia-se pelo menos por um factor de 2. Alternativamente ou simultaneamente os MFCs são definidos como sendo menos solúveis do que os MDCs pelo menos por um factor de 10, um MDC que forma agregados com superfícies que .são pelo menos 2 vezes menos extensas do que as superfícies de agregados formados .pelo MFC e o outro MDC forma agregados com números de agregação pelo menos de 10 vezes mais pequenos do que os números de agregação de agregados formados pelo MFC. Ainda uma outra possibilidade é a de definir o MDC como moléculas, as quais são tipicamente caracterizadas pela proporção de hidrofilicidade-lipofilicidade (HLB) entre 10 e 20, mesmo melhor entre 12 e 18 e mais preferido entre 13 e 17.

Em alguns aspectos o MFC e os MDCs são definidos para se formarem na combinação de um MFC e dois MDCs diferentes de agregados superficiais estendidos com superfícies que são pelo menos 50 % mais extensas, extensa significando maior, na média do que superfícies de agregados que compreendem só os dois MDCs diferentes sozinhos, nas mesmas concentrações e, no caso, depois do ajustamento dos efeitos físico-químicos da ausência do referido MFC.

Para alguns aspectos uma selecçao ou todas as definições aplicam-se ao mesmo tempo.

Dentro do significado da presente invenção o MFC é preferivelmente um lípído- e mais preferivelmente um -fosfolípido ;-eomo -definido -em- 31 baixo.

Os antipáticos dentro do significado da presente invenção compreendem as substâncias que formam, a membrana e as substâncias "activas de extremidade (activa de superfície)" também conhecidas a partir dos documentos EP 0 475 160 e WO 98/17255, mas dentro das limitações definidas nas reivindicações em anexo. 0 termo "fármaco" significa um ingrediente biologicamente ou terapeuticamente activo, por exemplo um medicamento. A menos que indicado de outra maneira, os nomes genéricos propostos pela Organização Mundial de Saúde (WHC)) (Nomes Não Proprietários Internacionais Recomendados),· tal como pode ser verificado por exemplo no índice de Merck, são usados para os fármacos, os quais são especificados em maior detalhe adícionalmente no texto. 0 termo "baixo" usado com relação ao peso molecular de um polipéptido significa a massa molar abaixo de 1500 e o termo "intermediário" no contexto semelhante implica a massa molar entre 1500 e 5000. O termo, ."mais baixo" usado com relação a radicais orgânicos, por exemplo alquilo mais baixo, alquileno mais baixo, alcoxilo mais baixo, alcanoílo mais baixo, etc., significa que tais radicais orgânicos, a menos que expressamente definidos de outra maneira, contêm até e incluindo 7, preferivelmente até e incluindo 4, átomos de carbono. 0 termo "longo" usado com relação a um resíduo gordo ligado a um lípido, um agente tensioactivo ou um fármaco implica a presença de 10 a 24 átomos de carbono em cadeias de alquilo, alcenilo, alcoxilo, alceniloxilo ou aciloxilo, os quais individualmente·ou em· 32 conjunto, conforme for o caso, usam o nome de classe de "cadeias gordas". Implicitamente incluído neste termo, mas não especificado adicionalmente em detalhe, são as "cadeias gordas" com pelo menos um segmento ramificado ou um cíclico, mas não polar ou pouco polar. A utilização de parêntesis quadrados no texto refere-se a concentrações molares da substância colocada entre os parêntesis, excepto se indicado de outra maneira.

Os termos "activo de superfície" e "activo de extremidade" referem-se à capacidade de um certo terceiro- composto de modificar a tensão superficial e/ou a tensão de interface em sistemas que compreendem pelo menos dois compostos que formam uma superfície ou interface.

Nesta especificação os termos "composto", "substância" e "componente" geralmente indicam uma espécie química singular, a qual necessita, no entanto, de não ser totalmente uniforme. 0 termo "constante dissociação evidente" refere-se. à constante dissociação medida (isto é a ionização) de um fármaco. Esta constante para muitos fármacos, incluindo os NSAIDs, é diferente no volume e nos homo- ou hetero-agregados. Para o cetoprofeno, o pKa no volume é de aproximadamente 4,4 ao passo que o valor de pKa medido acima da concentração da associação de fármaco é aproximadamente de 5, e diminui aproximadamente línearmente com a força iónica inversa da solução de volume. 0 pKa do cetoprofeno ligado às bi-camadas de lípidos aumenta também com a concentração do lípido total, e é aproximadamente de 6 e de 6,45 em suspensões com 5 % em peso e 16 % em peso do lípido total em 50 mM de tampão mono-valente, respectivamente. Para o diclofenac, o pKa no volume é aproximadamente de 4, ao passo que para este fármaco nas bi-camadas de lípidos o-pKa ~ 6,1 foi determinado. G pKa do volume relatado- na- 33 literatura para o meloxicam, piroxicam, naproxen, indometacina e ibuprofeno é de 4,2 (e 1,9), 5,3, 4,2-4,7, 4,5, e 4,3 (ou em alguns relatórios 5,3), respectivamente. 0 termo "deformabilidade" do agregado está estreitamente relacionado ao termo "adaptabilidade". Qualquer modificação principal na forma do agregado que não resulta em uma fragmentação do agregado significativa é indicativa da capacidade de deformação do agregado suficiente, e também implica uma grande modificação na proporção de superfície-para-volume do agregado deformado. A capacidade de deformação, por conseguinte, pode ser medida na mesma espécie de experiências que é proposto para determinar a adaptabilidade do agregado, ou também pode ser avaliada por medições ópticas que revelam modificações de forma reversíveis. 0 termo "NSAID" (farmaco anti-inflamatório não esteroidal) tipicamente indica uma entidade química a qual actua como antagonista da lipoxigenase, da ciclo-oxigenase-1 ou da ciclo-oxigenase-2.

Os exemplos incluem sais de ácidos fenilacéticos substituídos ou ácidos 2-fenilpropiónicos, tais como alclofenac, ibufenac, ibuprofeno, clindanac, fenclorac, cetoprofeno, fenoprofeno, .indoprofeno, fenclofenac, diclofenac, flurbiprofeno, pirprofeno, naproxeno, benoxaprofeno, carprofeno ou cicloprofeno; ácidos hetero-arilacéticos analgesicamente activos ou ácidos 2-heteroaryipropiónicos que têm um radical de 2-indol-3-il ou pirrol-2-il, por exemplo a indometacina, oxmetacina, intrazol, acemetazina, cinmetacina, zomepirac, tolmetina, colpirac ou o ácido tiaprofénico; os ácidos indenilacéticos analgesicamente activos, por exemplo o sulindac; os ácidos heteroariloxiacéticos •analgesicamente' --·activos, por- exemplo - o benzadac; os- NSAIDS da- 34 família do oxicame incluem o piroxicam, droxicam, meloxicam, tenoxicam; os fármacos de interesse adicionais da classe dos NSAID são, o meclofenamato, etc.

Uma lista dos NSAIDs habitualmente usados é dada na tabela seguinte:

NSAID

Acetaminofeno Cimicifuga

Salicilato de Salicilato-Mg de Colina Diclofenac

Diflunisal Etodolac Cálcio de Fenoprofeno

Floctafenina

Flurbiprofeno

Ibuprofeno

Indometacina

Alguns nomes comerciais comuns

Tilenol

Artrol

Trilisato

Como sal de Na: Apo-Diclo, Apo-Diclo SR, Artrotec, Diclofenac Ect, Novo-Difenac, Novo-Difenac SR, Nu-Diclo, Taro-Diclofenac, Voltaren, Voltaren SR; Como sal de K: Voltaren Rápido Apo-Diflunisal, Dolobid, Novo-Diflunisal, Nu-Diflunisal Ultradol Nalfon ldarac

Ansaid,. Apo-Flurbiprofeno FC, Frobeno, Frobeno SR, Novo-Flurprofeno, Nu-Flurbiprofeno Actiprofeno, Advil, Advil Cold & Sinus, Amersol, Apo-lbuprofeno, Excedrina IB, Medipreno, Motrina, Motrina IB, Novo-Profeno, Nuprina, Nu-Ibufrofeno

Apo-Indometacina, Indocida, Indocida SR, Indolec, Novo-Metacina, Nu-Indo, Pro-Indo, Rcdacina . ...... . 35 Cetoprofeno

Trometamina de Cetorolac Salicilato de Magnésio Ácido Mefenâmico Nabumetona Naproxeno

Oxifenbutazona . Fenilbutazona

Piroxicam

Salsalato Salicilato de Sódio

Tenoxicam Ácido Tiaprofénico Sódio de Tolmetina

Apo-Ceto, Apo-Ceto-E, Novo-Ceto, Novo-Ceto-Ec, Nu-Cetoprofeno, Nu- Cetoprofeno-E, Orudis, Orudis E, Orudis SR/' Oruvailo, PMS- Cetoprofeno, PMS- Cetoprofeno-E, Rodis, Rodis-EC Acular, Toradol Back-Ese-M, Pílulas de Doan's Backache, Herbogesico Ponstan Relafeno Apo-Naproxeno, Naprosino, aprosino-E, Naxeno, Novo-Naprox, Nu-Naprox, PMS-Naproxeno; ou na forma de sódio: Anaprox, Anaprox DS-, Apo-Napro-Na, Naproxina-Na, Novo-Naprox de Sódio, Sinflex,. Sinflex DS Oxibutazona Alca Fenilo, Alca Fenilbutazona, Apo-Fenilbutazona, Butazolidina, Nova-Butazona, Fénilona Plus Apo-Piroxicam, Feldeno, Quenral-Piroxicam, Novo-Pirocam, Nu~Piròx, PMS-Piroxicam, Pro-Piroxicam, Ro-Piroxicam Disalcido Apo-Sulina, Dodd's, Dodd's Extra-Forye, Sulindac, Clinoril, Novo-Sundac, Nu-Sulindac, Sulindac Mobiflex Albert Tiafeno, Apo-Tiaprofánico, Surgam, Surgam SR Nova-Tolmetína, Tolectina 36 0 termo "fosfolípido" tem, por exemplo, a fórmula 36

na qual um dos radicais,R1 e R2 representa hidrogénio, hidroxilo ou alquilo C1-C4, e o outro radical representa uma cadeia gorda longa, especialmente um alquilo, alcenilo, alcoxilo, aqueniloxilo ou aciloxilo, tendo cada um de 10 a 24 átomos de carbono, ou ambos os radicais R1 e R2 representam uma cadeia gorda longa, especialmente um alquilo, alcenilo, alcoxilo, aqueniloxilo ou aciloxilo, tendo cada um de 10 a 24 átomos de carbono, R3 representa hidrogénio ou alquilo C1-C4, e R4 representa hidrogénio, alquilo C1-C7 opcionalmente substituído ou um radical de carboidrato que tem de 5 a 12 átomos de carbono ou, se ambos os radicais R1 e R2 representarem hidrogénio ou hidroxilo, R4 representa um radical de esteróide, ou é um seu sal. Os radicais R1, R2, R3, e R4 são tipicamente seleccionados para assegurar que a membrana de bi-camada de lípido está na fase lamelar do fluido durante a aplicação prática e é uma boa correspondência para o fármaco de escolha.

Em um fosfolípido da fórmula 1, R1, R2, ou R3 que têm o significado de alquilo C1-C4 é preferivelmente o metilo, mas também pode ser etílo, n-propílo, ou n-butílo.

Os termos alquilo, alcenilo, alcoxilo, aqueniloxilo ou aciloxilo têm o seu significado habitual. As cadeias gordas longas ligadas a um fosfolípido também podem ser substituídas em qualquer das formas 37 habituais, 0 alquilo R1 ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 10 a 24 átomos de carbono, por exemplo n-decilo, n-dodecilo (laurilo), n-tetradecilo (miristilo), n-hexadecilo (cetilo), n-octadecilo (estearilo), n-eicosilo (araquinilo), n-docosilo (be-enilo) ou n-tetracosilo (lignocerilo) . Nesta e em todas as definições seguintes relacionadas, os derivados ímpares intermediários são úteis, mas são menos preferidos. O alcenilo R1e/ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 12 a 24 átomos de carbono e uma ligação dupla, por exemplo 9-cis-dodecenilo (lauroleílo), 9-cis-tetradecenilo (miristoleilo), 9-cis-hexadecenilo {palmitoleinilo), 9-cis-octa-decenilo (petroselinilo), 6-trans-octadecenilo (petroselaidinilo), 9-cis-octadecenilo (oleílo), 9-trans-octadecenilo (elaidinilo), 9-cis-eicosenilo (gadoleinilo), 9-cis-docosenilo (cetoleinilo) ou 9-cis-tetracosoílo (nervonilo). Nesta e em todas as definições seguintes relacionadas, os outros trans-derivados correspondentes são potencialmente úteis também mas são menos preferidos. · O alcoxilo R1 e/ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 10 a 24 átomos de carbono, por exemplo n-deciloxilo, n-dodeciloxilo (lauriloxilo), n-tetradeciloxilo (miristiloxilo), n-hexadeciloxilo (cetiloxilo), n-octadeciloxilo (esteariloxilo), n-eicosiloxilo (araquiniloxilo), n-docosoiloxilo (be~eniloxilo) ou n-tetracosoiloxilo (lignoceriloxilo). O Alceniloxilo R1 e/ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 12 a 24 átomos de carbono, por exemplo 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleiloxilo), 9-cis-tetradeceniloxilo (miristoleiloxilo), 9-cis-hexadeceniloxilo (palmitoleiniloxilo), 6-cis-oetadecenil-oxilo,· (petrosel-iniloxilo), 6-trans^oetadeceniloxilo 38 (petroselaidiniloxilo), 9-cis-octadeceniloxilo (oleiloxilo), 9-trans-octadeceniloxilo (elaidiniloxilo), e 9-cis-eicosenilo (gadoleiniloxilo) , 9-cis-docosenilo (cetoleiniloxilo) ou 9-cis-tetracosoilo (nervoniloxilo). 0 aciloxilo R1 e/ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 10 a 24 átomos de carbono, por exemplo alcanoiloxilo n-decanoiloxilo, n- n-tetradecanoiloxilo (palmitoiloxilo), n- n-eicosanoiloxilo (be~enoiloxilo) e n- ou alcenoiloxilo, preferivelmente dodecanoiloxilo (lauroiloxilo), (miristoiloxilo) , n-hexadecanoiloxilo octadecanoiloxilo (estearoiloxilo) (araquinoiloxilo), n-n-docosoaniloxilo tetracosanoiloxilo (lignoceroiloxilo). 0 alcenoiloxilo.R1 e/ou R2 é preferivelmente de cadeia linear mesmo com um número de 10 a 2 0 átomos de carbono, por exemplo 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleoiloxilo), 9-cis-tetradecenoiloxilo (miristoleoiloxilo), 9-cis-hexadecenoiloxilo (palmitoleinoiloxilo), 6-cis-octadecenoiloxild (petroselinoiloxilo), 6-trans-octadecenoiloxilo (petroselaidinoiloxilo), 9-cis-octadecenoiloxilo (oleoiloxilo), 9-trans-octadecenoiloxielaidinoiloxilo), e 9-cis-eicosenoiloxilo (gadoleinoiloxilo), . 9-cis-docosenoiloxilo (cetoleinoiloxilo) e 9-cis-tetracosenoiloxilo (nervonoiloxilo). O R4 de alquilo Ci~Cη opcionalmente substituído êr por exemplo, metilo, etilo, isopropilo, n-propilo, isobutilo ou n-butilo, o qual pode ser substituído por grupos acídicos, por exemplo, carboxilo ou sulfonilo, por grupos acídicos e básicos, por exemplo, carboxilo e amino, estando o grupo amino na posição de alfa para o grupo de carboxilo, por grupos de hidroxilo eterifiçados livres, sendo possível que dois grupos de hidroxilo eterificados sejam ligados um ao outro- por um radicab-de hidrocarboneto bivalente-, por exemplo 39 metileno, etileno, etilideno, 1,2-propileno ou 2,2-propileno; ou por halogéneo, por exemplo cloro ou bromo, por alcoxicarbonilo mais baixo, por exemplo metoxi- ou etoxi-carbonilo, ou por alcanossulfonilo mais baixo, por exemplo metanossulfonilo. 0 R4 de alquilo C1-C7 substituído é, por exemplo, alquilo mais baixo de carboxilo, por exemplo carboximetilo, 2-carboxietilo ou 3-carboxi-n-propilo, (alquilo mais baixo de omega-amino-omega-carboxilo, por exemplo 2-amino-2-carboxietilo ou 3-amíno-3-carboxi-n-propilo, . alquilo mais baixo de" hidroxilo, por exemplo 2-hidroxietilo ou 2,3-di-hidroxipropilo, alquilo mais baixo de alcoxilo mais baixo, por exemplo metoxi- ou etoximetilo, 2-metoxietilo ou 3-metoxi-n-propilo, alquilo mais ' baixo de alquilenodíoxilo mais baixo, por exemplo 2,3-etilenodioxipropílo ou 2,3-(2,2-propileno)-dioxipropilo,. ou alquilo mais baixo de halo, por exemplo cloro- ou bromo-metilo, 2-cloro- ou 2-bromo-etilo, 2-ou 3-cloro- ou 2- ou 3-bromo-n-propilo. 0 R4 de alquilo C1-C7 substituído é preferivelmente o etilo substituído por alquilamónio três vezes mais baixo, por exemplo trimetil- ou trietil-amónio, por exemplo 2-trimetilamónio-etilo ou 2^amónio-etilo, ou é, por exemplo .alquilo . mais baixo de omega-amino-omega-carboxilo, por exemplo 2-amino-2-carboxietilo.

Um radical de carboidrato R4 que tem de 5 a 12 átomos de carbono é, por exemplo, um radical de mono-sacárido natural que é derivado de uma pentose ou hexose presente na forma de aldose ou cetose. As definições detalhadas da maior parte de radicais de carboidrato relevantes (pentoses, hexoses, dissacáridos, etc.) são dadas no documento EP 0 475 160 pelo mesmo requerente.

Um radical de esteróíde R4 é·,·· por exemplo, um radical de esterol 40 que é esterificado pelo grupo de fosfatidilo por meio do grupo de hidroxilo localizado na posição 3 do núcleo de esteróide.

Um radical de esteróide é, por exemplo, o lanosterol, o sitosterol, o coprostanol, o colestanol, o ácido glicocólico, o radical de ergosterol ou de estigmasterol, preferivelmente o radical de colesterol.

Se R4 representar um radical de esteróide, R1 e R2 são preferivelmente hidroxilo e R3 é hidrogénio.

Os fosfolipidos da fórmula 1 podem estar na forma de ácidos livres ou na forma de sais. Os sais são formados pela reacção do ácido livre da fórmula II com uma base, por exemplo uma solução diluída, aquosa de hidróxido de metal de álcali, por exemplo lítio, hidróxido de sódio ou de potássio, magnésio ou hidróxido de cálcio, uma solução de amónia aquosa diluída ou uma solução aquosa de uma amina, por exemplo uma mono-, di- ou tri-alquilamina mais baixa, por exemplo etil-, dietil- ou trietil-amina, 2-hidroxietil-tri-Ci-C^-alquil-amina, por exemplo colina, e um amino ácido básico, por exemplo a lisina ou a arginina.

Um fosfolípido da fórmula 1 tem especialmente dois radicais de aciloxilo R1 e R2, por exemplo alcanoiloxilo ou alcenoiloxilo, por exemplo lauroiloxilo, miristoiloxilo, palmítoiloxilo, estearoiloxilo, araquinoiloxilo, oleoiloxilo, linoiloxilo ou linoleoiloxilo, e é, por exemplo, lecitina natural (R3 hidrogénio, R4 = etilo de 2-trimetilamónio) ou cefalina (R3 = hidrogénio, R4 = etilo de 2-amónio) que tem radicais de aciloxilo diferentes R1 e R2, por exemplo a lecitina do ovo ou a cefalina do ovo ou a lecitina ou a cefalina de soja, a lecitina sintética ( = fosfatidilcolina) ou· a- cefalina (= -fosfatidiletanolamina) · que tem 41 radicais de aciloxilo diferentes ou idênticos R1 e R2, por exemplo fosfatidilcolina de l-palmitoil-2-oleoilo ou fosfatidiletanolamina ou dipalmitoilo, distearoilo, diaraquinoilo, dioleoilo, dilinoilo ou fosfatidilcolina de dilinoleoilo ou fosfatidiletanolamina, serina de fosfatidilo natural (R3 = hidrogénio, R4 = 2-amino-2-carboxietilo) que tem radicais de aciloxilo diferentes R1 e R2, por exemplo serina de fosfatidilo de cérebro de bovino, fosfatidilserina sintética que tem radicais de aciloxilo diferentes ou idênticos R1 e R2, por exemplo serina de fosfatidilo de dioleoilo, dimiristoilo ou dipalmitoilo, ou ácido fosfatidico natural (R3 e R4 = hidrogénio) que tem radicais de aciloxilo diferentes R1 e R2.

Um fosfolípido da fórmula 1 é também um fosfolipido no qual R1 e R2 representam dois radicais de alcoxilo idênticos, por exemplo n-tetradeciloxilo ou n-hexadeciloxilo (ditetradecilo sintético ou fosfatidilcolina de di-hexadecilo ou fosfatidiletanolamina), R1 representa alcenilo e R2 representa aciloxilo, por exemplo miristoiloxilo ou palmitoiloxilo {plasmalogénio, R3 = hidrogénio, R4 = etilo de 2-trimetilamónio), RI representa aciloxilo e R2 representa hidroxilo(lisofosfatidilcolina ou lisofosfatidil-etanolamína natural ou sintética, por exemplo 1-miristo.ilo- ou 1-palmitoil-lisofosfatidilcolina ou - fosfatidiletanolamina; serina de lisofosfatidilo natural ou sintética, R3 = hidrogénio, R4 = 2-amino-2-carboxietilo, por exemplo serina ' de lisofosfatidilo de cérebro de bovino ou serina de lisofosfatidilo de 1-miristoil- ou de 1-palmitoilo, glicerina de lisofosfatidilo sintética, R3 = hidrogénio, R4 = CH2OH-CHOH-CH2-, ácido lisofosfatidico natural ou sintético, R3 = hidrogénio, R4 = hidrogénio, por exemplo ácido lisofosfatidico do ovo . ou ácido 1-auroil-, 1-miristoil- ou 1-palmitoil-lisofosfatídico). 42

Um lípido que é análogo ao fosfolípido acima mencionado e que pode substituir o último é, por exemplo, um análogo de lisofosfatidilcolina, por exemplo 1-lauroil-l,3-propanodiol-3-fosforilcolina, um monoglicérido, por exemplo uma mono-oleína ou monomiristina, um cerebrósido, um gangliósido, ou um glicérido, que não contém um grupo.de fosfonilo ou de fosforilo esterificado ou livre na posição 3, por exemplo um diacilglicérido ou 1-alcenil-l-hidroxi-2-acilglicérido, que tem os grupos de acilo ou de alcenilo mencionados nos quais o grupo de 3-hidroxilo é eterificado por um dos radicais de carboidrato mencionados, por exemplo um radical de galactosilo, por exemplo a glicerina de monogalactosilo.

Os lipidos e certos agentes tensioactivos mencionados mais acima e a partir daqui que têm um átomo de carbono quiral podem estar presentes ambos na forma de misturas racémicas e na forma de enantiómeros opticamente puros nas composições farmacêuticas que podem ser preparadas e usadas de acordo, com a invenção. 0 termo "radical de esteróide" significa, por exemplo, que o .lanosterol, o sitosterol, o coprostanol, o colestanol, o ácido glicocólico, o ergosterol ou o radical . de estigmasterol, é preferivelmente o radical de colesterol, mas .também pode ser qualquer outro radical de esteróide conhecido na.técnica. . . 0 termo "agente tensioactivo" também tem o seu significado habitual. Uma lista longa de agentes tensioactivos relevantes e de definições relacionadas com agentes tensioactivos é dada nos documentos EP 0 47 5 160 e USP 6 165 500 os quais estão com isto explicitamente incluídos por referência e em agentes tensioactivos apropriados ou nos Manuais farmacêuticos, tais como Handbook of Industrial Surfactants or US Pharmacopoeiar Pharm. Eu., etc.. A lista seguinte, por conseguinte, só, oferece uma selecção, a qual não é de modo nenhum completa ou exclusiva, de várias classes -de 43 agentes tensioactivos que são especialmente comuns ou úteis em conjunção com o presente pedido de patente. Isto inclui ácidos gordos de cadeia longa ionizados ou álcoois gordos de cadeia longa, sais de amónio gordos de cadeia longa, tais como sais de alquilo-ou de alcenoil-trimetilo-, de dimetilo- e de metíl-amónio, sais de alquilo- ou de alcenoil-sulfato, dimetil-aminoxidas gordas de cadeia longa, tais como alquil- ou alcenoil-dimetil-aminoxidas, cadeia gorda longa, por exemplo de alcanoil, dimetil-aminoxidas e especialmente dimetil-aminoxida de dodecilo, cadeia gorda longa, por exemplo alquil-N-metilglucamidas e alcanoil-N-metilglucamidas, tais como MEGA-8, MEGA-9 e MEGA-10, Ν,Ν-dimetilglicinas de cadeia gorda N-longa, por exemplo N-alquil-N,N-dimetilglicinas, 3-{dimetilamónio de cadeia gorda longa)-alcanossulfonatos, por exemplo . 3-(acildimetilamónlo)-alcanossulfonatos, derivados de cadeia gorda longa de sais de sulfosuccinato, tais como sais de sulfosuccinato de bis(2-etilalquilo), sulfobetaxnas de cadeia gorda longa, por exemplo acil-sulfobetainas, betaínas de cadeia gorda longa, tais como EMPIGEN BB ou ZWITTERGENT-3-Ιβ, -3-14, -3-12, -3-10, ou -3-8, ou éteres de polietilen-glicol-acilfenilo, especialmente o éter de nonaetilen-glicol-octilfenilo, éteres de cadeia gorda longa, de polietileno, especialmente os éteres de polietileno-acilo, tais como o éter de nonaetileno-decilo, o éter de nonae.tileno-dodecilo ou o éter de octaetileno-dodecilo, os éteres de polietilenoglicol-isoacilo, tais como o éter de octaetilenoglicol-isotridecilo, os ésteres de cadeia gorda longa de polietilenoglicol-sorbitano, por exemplo os ésteres de polietilenoglicol-sorbitano-acilo e especialmente o polietileno-glicol-monolaurato{por exemplo Tween 20), polietilenoglicol-sorbitano-mono-oleato ·(por exemplo Tween 80), polietilenoglicol-sorbitano-monolauroleilato, polietilenoglicol-sorbitano-· monopetroselinato, polietilenoglicol-sorbitano-monoelaidato, polietileirogl-icol-so-rbit-ano-inixist-oleilato, pol-ietilenoglicol- 44 sorbitano-palmitoleinilato, polietilenoglicol-sorbitano- petroselinilato, éteres de cadeia gorda longa de poli-hidroxietileno, por exemplo os éteres de poli-hidroxietileno-acilo, tais como os éteres de poli-hidroxietileno-laurilo, os éteres de poli-hidroxietileno-miristoilo, poli-hidroxietileno-cetilstearilo, os éteres de poli-hidroxietileno-palmitilo, os éteres de poli-hidroxietileno-oleoilo, os éteres de poli-hidroxietileno-palmitoleoilo, poli-hidroxietileno-linoleilo, poli-hidroxietileno-4, ou 6, ou 8, ou 10, ou 12-laurilo, os éteres de miristoilo, palmitoilo, palmitoleilo, oleoilo ou de linoeilo (série de Brij), ou nos ésteres correspondentes, poli-hidroxietileno-laurato, miristato, -palmitato, -estearato ou -oleato, especialmente poli-hidroxietileno-8-estearato (Myrj 45) e poli-hidroxietileno-8-oleato, óleo de rícino polietoxilado 40 (Cremophor EL) , cadeia gorda longa de mono-sorbitano, por exemplo alquilato (série de Arlacel ou de Span), ou mono-oleato, cadeia gorda longa, por exemplo acil-N-metilglucamidas, alcanoil-N-metilglucamidas, especialmente decanoil-N-metilglucamida, dodecanoil-N-metil-glucamida ou octadecanoil-N-metilglucamida, sulfatos de cadeia gorda longa, por exemplo alquil-sulfatos, sais de sulfato de alquilo, tais como lauril-sulfato (SDS), oleoil-sulfato; tioglucósidos de cadeia gorda longa, tais como os alquiltioglucósidos e especialmente o heptil-, octil-, nonil e decil-beta-D-tioglucopiranósido; derivados de cadeia gorda longa de vários carboidratos, tais como pentoses, hexoses e dissacáridos, especialmente alquíl-glucósidos e maltósidos, tais como o hexil-, heptil-, octil-, nonil- e decil-beta-D-glucopiranósido ou o D-maltopiranósido; adicionalmente um sal, especialmente um sal de sódio, de colato, desoxicolato, glicocolato, glicodesoxicolato, taurodesoxicolato, taurocolato, um sal de ácido gordo, especialmente oleato, elaidato, linoleao, laurato, ou miristato, na maioria das vezes na forma de sódio, lisofosfolípidos, ácido n- 45 octadecileno-glicerofosfatídico, octadecileno-fosforilglicerol, octadecileno-fosforilserina ou fosfatidilcolina, ácidos de cadeia gorda n-longa glicero-fosfatídicos, tais como os ácidos n-acil-glicero- fosfatídicos, especialmente os ácidos de laurilo glicero-fosfatídicos, o ácido oleoil-glicero-fosfatídico, fosforilglicerol de cadeia gorda n-longa, tal como n-acil-fosforilglicerol, especialmente lauril-, miristoil-, oleoil- ou palmitoeloil-fosforilglicerol, fosforilserina de cadeia gorda n-longa, tal como n-acil-fosforilserina, especialmente lauril-, miristoil-, oleoil-ou palmitoeloil-fosforilserina, ácido n-tetradecil-glicero-fosfatídico, n-tetradecil-fosforilglicerol, n-tetradecil-fosforilserina, os correspondentes lisofosfolipidos de elaidoilo, vacenilo, os correspondentes fosfolipidos de cadeia curta, bem como todos os polipéptidos activos de superfície e assim de destabilização da membrana. As cadeias de agentes tensioactivos são tipicamente escolhidas para estarem em um estado fluido ou pelo menos serem compatíveis com a manutenção do estado de cadeia fluida em agregados portadores. 0 termo "fosfolípido semelhante a agente tensioactivo" significa um fosfolípido com solubilidade, e outras propriedades relevantes, semelhantes àquelas dos agentes tensioactivos correspondentes mencionados nesta aplicação, especialmente nas Reivindicações 104 e 105. Um fosfolípido semelhante a um agente tensioactivo não iónico, por conseguinte, deve ter solubilidade em água, e de maneira ideal também difusão em água / taxas de troca, etc., semelhantes àquelas de um agente tensioactivo não iónico relevante.

Os lípidos e certos agentes tensioactivos mencionados mais acima e a partir daqui que têm um. átomo de carbono quiral podem estar presentes tanto na forma de misturas racémicas como na forma de •enantiómeros opticamente puros nas composições farmacêuticas que 46 podem ser preparadas e usadas de acordo com a invenção.

Descrição das Figuras

Figura 1: deformação da forma: representação . esquemática da deformação da forma do agregado durante o atravessamento do poro.

Figura 2: deformação do custo de energia: nível de energia associado com estados diferentes da deformação do agregado que resulta de um agregado forçado que passa através de um poro estreito em uma barreira semi-permeável.

Figura 3: Deformação e Penetrabilidade: penetrabilidade de uma barreira porosa semi-permeável à suspensão de vesículas mais pequenas do que o diâmetro do poro médio na barreira como uma função da pressão de trans-barreira que dirige a suspensão através da barreira.

Figura 4: redistribuição molecular em uma bi-camada de lípido que resguarda o agregado durante a deformação do agregado e o atravessamento do poro, o qual baixa a energia de activação para o transporte da trans-barreira.

Figura 5: ilustração esquemática do papel desempenhado pelos componente(s) que destabilizam a membrana na adaptabilidade da bi-camada de lipido. 0 efeito da concentração relativa do segundo componente que destabiliza membrana é mostrado na inserção. A adaptabilidade da vesícula de bi-camada como uma função de concentração absoluta de componentes que destabilizam a membrana (agentes activos; MDCi+MDC2) e da concentração relativa' de tais bi-camadas de três componentes, misturadas, sendo as bi-camadas de três componentes baseadas--em um lipido (MFC), como- o -componente que 47 forma a membrana. A presença do segundo componente que destabiliza a membrana pode aumentar a desproporção da adaptabilidade da bi-camada, discutivelmente aumentando a capacidade de deformação e a permeabilidade da bi-camada do lípido. Isto é presumivelmente devido à ligação/interacção de MDC1-MDC2, que aqui é proporcional ao parâmetro de m; embora não representado, a ligação/interacção de MFC-MDCi ou MFC-MDC2 pode ser do mesmo modo importante. Os valores de adaptabilidade absoluta e a forma de curva exacta dependem da escolha especifica dos parâmetros de modelo e por conseguinte podem ser diferentes dos mostrados.

Figura 6: Efeito do segundo antipático que destabiliza a membrana (SDS; MDC2) nas bi-camadas de fosfolípido misturado (SPC, MFS) Tween 80 (primeiro anfipático que destabiliza a membrana, MDCi) com aumento da concentração relativa do último em Resistência ao Transporte de Barreira, medido com um método experimental simples (SEM). As curvas são desenhadas simplesmente para guiar o olho. O efeito da proporção molar de modificação do segundo (Tween 80 =) e do terceiro (agente tensioactivo; SDS) componente de sistema anfipático, relativamente ao primeiro componente de sistema anfipático (fosfolípido; SPC), na resistência da suspensão de lípido misturada resultante à filtração através de uma barreira com 0,2 micrómetros de diâmetro de poro (painel esquerdo) é mostrado. O diâmetro inicial e final, da vesícula foi significativamente maior do que o diâmetro médio do poro.

Figura 7: capacidade de penetração da barreira em dependência da pressão a três suspensões diferentes de vesículas de bi-camada misturadas, pressionado através de poros estreitos, como uma função da segunda concentração de agente tensioactivo. Exemplificado é o efeito de um agente bio-tensioactivo carregado, colato de sódio, em misturas com um outro agente tensioactivo (Tweén 80) contendo -bi- 48 camadas de fosfolipidos na capacidade das suspensões de vesícula de lípido resultante para penetrar através de uma barreira semi-permeável sob a influência da pressão hidrostática da trans-barreira. A capacidade de penetração da barreira em dependência da pressão a . três suspensões diferentes de vesículas de bi-camada misturadas, pressionada através de poros estreitos, como uma função da segunda concentração de agente tensioactivo.

Figura 8: ilustra a capacidade de penetração das suspensões preparadas como descrito nos exemplos 143 {.) e 144 (o). As curvas foram calculadas dentro do sistema do modelo de distribuição de energia de Maxwell, usando a fórmula (*).

Figura 9: as curvas de penetração para misturas de SPC/KT diferentes: Δ=2,5/1 SPC/KT, 3/1 ♦ SPC/KT, ξ^Ι SPC/KT, □ SPC/Tween 1/1 Transfersoraas® como uma suspensão de Referência. As curvas foram calculadas dentro do sistema do modelo de ajustamento dos dados descrito neste aqui antes, usando eq. (*).

Figura 10: as curvas de penetração para a formulação de SPC/KT 3/1 mol/mol sem (o) e com (.) 10 % rel-mol de Tween 80. Referência de Tween- Transfersomas® *. As curvas foram ajustadas aos dados usando eq. (*) .

Figura 11: a Área sob a curva (AUC), a qual reflecte a libertação cumulativa do fármaco, calculada a partir dos resultados de farmacocinéticos medidos com formulações de cetoprofeno diferentes (KT) testadas em porcos (n = 4) .

Descrição detalhada da Invenção • Ά invenção descreve as suspensões de ESAs complexos com pelo menos·-- 49 três componentes antipáticos, um dos quais é de formação da membrana e pelo menos dois dos quais são de destabilização da membrana, as quais podem ser suspensas por exemplo em um meio liquido polar farmaceuticamente aceitável conveniente, e carregadas com pelo menos um composto biologicamente activo, o qual pode corresponder a um dos antipáticos. Uma característica essencial de tais agregados, relativamente grandes, são a capacidade de penetrar os poros em barreiras semi-permeáveis mesmo quando o raio do poro é significativamente, isto é pelo menos de 25 % e muitas vezes é maior do que 40 % ou melhor, mais de 50 % e mesmo mais preferivelmente mais do que 70 % mais pequeno do que o raio do agregado médio antes do atravessamento de barreira. Uma outra característica importante dos agregados introduzida neste documento é a concentração relativamente baixa de um dos dois componentes que destabilizam a membrana, a qual é abaixo da concentração necessária para se conseguir a mais elevada capacidade de deformação da forma do agregado quando este componente é usado para o objectivo por si só. A elevada capacidade de deformação do agregado é um pré-requisito para se conseguir um fluxo de suspensão suficientemente elevado, isto é, praticamente útil através de uma barreira, tal que se aproxime da ordem de magnitude do meio do fluxo de suspensão. A outra condição necessária é a estabilidade suficiente do agregado, a qual assegura que o raio do agregado médio depois do atravessamento da barreira é ainda pelo menos de 4 0 %, mais frequentemente é pelo menos de 50 % e o mais tipicamente é pelo menos de 100 % maior do que o raio do poro. A elevada capacidade de deformação e a estabilidade suficiente de agregados que podem atravessar as barreiras semi-permeáveis são sub-sumarisados em termos da adaptabilidade do agregado, a qual é parametrizada como aa. Os agregados complexos altamente adaptáveis sobressaem na sua capacidade de transportar os ingredientes activos através das :barreiras semi^permeáveis, tal como a pele dos mamíferos.......- · 50 A presente descrição refere-se especialmente à selecção de um componente anfipático que destabiliza a membrana do sistema tal que possa impulsionar a capacidade de deformação de agregados misturados apoiados pela escolha judiciosa dos outros componentes do sistema para o efeito de melhorar a penetração da barreira por tais agregados. A especificação também ensina como seleccionar a concentração de anfipáticos total correcta e, no caso de ionização dos anfipáticos em suspensões do agregado misturadas. A descrição refere-se adicionalmente à preparação e a aplicação de suspensões resultantes em formulações farmacêuticas, com um foco na aplicação epicutânea sobre, ou menos frequentemente em, criaturas de sangue quente.

Descobrimos inesperadamente que a incorporação de um componente adicional que destabiliza a membrana anfipática, conveniente (MDC2) nos agregados de bi-componente acima mencionados (MFC+MDCi) pode aumentar a adaptabilidade do agregado de três componente resultante aa (MFC+MDC1+MDC2) (MFC+MDC1+MDC2} > aa (MFC+MDCi) e assim aumentar a capacidade de deformação da forma dos agregados resultantes. Isto baixa a pressão p* necessária para dirigir o fluxo substancial da suspensão através de .uma . barreira: p* (MFCh-MDCi+MDC2) < p* (MFC+MDCi) . A capacidade de pelo menos os referidos agregados de três componentes para se mover através de uma barreira semi-permeável, é por conseguinte, aumentada. Esta descoberta mostra surpreendentemente que as goticulas revestidas por uma membrana de bi-camada de bi-componente já têm uma capacidade bastante elevada de atravessar a barreira em comparação com as goticulas resguardadas por uma bi-camada de lipido simples: aa (MFC+MDCi)» aa(MFC).

Aparente-mente, o terceiro componente -do agregado, o qual -actua como 51 um segundo componente que destabiliza a membrana, pode aumentar ou apoiar a adaptabilidade do agregado que permite o transporte além da expectativa normal: aa (MFC+MDCi+MDC2) > aa (MFC+MDCi) e aa(MFC+MDC1+ MDC2)> aa (MFC+MDC2) . Isto é ilustrado na inserção à figura 5. A membrana de bi-camada de três componentes que compreende um lipido (MFC), um primeiro agente tensioactivo conveniente / fármaco anfipático (MDCi) e um segundo agente tensioactivo conveniente / fármaco anfipático (MDC2) também pode necessitar de uma pressão de direcção mais baixa para realizar o transporte da trans-barreira: p* (MFC+MDC1+MDC2) <p* (MFC+MDC2) . Adicionalmente ou alternativamenté, uma quantidade total mais baixa do segundo anfipático de destabilização da bi-camada pode ser suficiente para se obterem agregados suficientemente adaptáveis, de tal forma que possam atravessar uma barreira semi-permeável. 0 papel de ambos os compostos que destabilizam a membrana é potencialmente, mas não necessariamente quantitativamente, intermutável (conferir a figura 5) .

Especificamente, verificamos que a concentração relativa do referido terceiro componente, o qual actua como anfipático que destabiliza membrana pelo menos na suspensão quaternária (meio de suspensão liquido + MFC + MDCi + MDC2 preferivelmente água + lipido + fármaco + agente tensioactivo) que contém agregados com uma elevada adaptabilidade, pode ser mantida abaixo do MDC2 necessário, preferivelmente o agente tensioactivo, a concentração em uma suspensão ternária (meio de suspensão liquido + MFC + MDC2 preferivelmente água + lipido + agente tensioactivo) que contém os agregados de adaptabilidade semelhante: aa(MFC+MDCi+MDC2) a aa (MFC+ MDC2) e [MDC2] três-componentes ^ [MDC2 ] bi-componente OU aa (MFC+MDC1+MDC2) ** aa (MFC+MDCi) e [MDCi] três-componentes ^ [MDC5.] bi-componente/ VâlolSS entre parêntesis quadrados que denotam concentrações do componente da- 52 membrana molar. Os Exemplos Práticos fornecem várias ilustrações para isto. Na nossa opinião, este fenómeno reflecte uma sinergia entre a acção de dois componentes de bi-camada, por exemplo entre ambos os constituintes que destabilizam a membrana (preferivelmente o(s) fármaco(s) antipáticos, o(s) agente(s) tensioactivo(s); MDCi, MDC2) . A dependência da curva de adaptabilidade na magnitude do parâmetro m de ligação, documentado na inserção à figura 5, suporta tal noção. Além do mais sugerimos que a interacção dos dois componentes que destabilizam a membrana em conjunto torna as referidas bi-camadas de lípidos de três componentes- mais permeáveis e/ou mais flexíveis do que . as membranas de bi-camada de dois componentes nas quais falta um desses MDC. Isto significa que: aa ( [MFC] +‘[MDCi] + [MDC2] ) > aa ( [MFC] + [MDCi] )' e aa ( [MFC ' ] + [MDCi' ] + [MDC2']) > aa ([MFC’] + [MDC2' ] ) , os símbolos de concentração semelhantes.que significam a concentração do componente de membrana idêntica. Os correspondentes valores de p* apresentam tipicamente o comportamento inverso dos valores de aa.

Preferivelmente, a adaptabilidade do agregado cumpre a condição de aa ( [MFC] + [MDCx] + [MDC2] ) > aa ( [MFC] + [MDC!] , ) e/ou aa ( [MFC ] + [MDCi] + [MDC2] > aa( [MFC] + [MDC2] ) , em que a concentração molar combinada de ambos os compostos que destabilizam a membrana [MDCi] + [MDC2] em agregados que compreendem três anfipáticos (MFC+MDC1+MDC2) é igual ou menor do que a concentração molar de [MDCi] nos agregados que. compreendem somente dois anfipáticos (MFC+MDCi) e/ou é menor do que a concentração molar de [MDC2] nos agregados que compreendem somente dois anfipáticos (MFC+MDC2) , na mesma concentração molar de MFC, ou a adaptabilidade do agregado cumpre a condição de aa([MFC]+ [MDC!] + [MDC2] ) » aa([MFC] + [MDCi],) e/ou aa ( [MFC] + [MDCi] + [MDC2] ) * aa ([MFC] + [MDC2] ) , em que a concentração molar combinada de [MDCi] + [MDC2] em agregados que compreendem três anfipáticos (MFC+MDC1+MDC2) é menor do que- a concentração molar de [MDCi] nos agregados que 53 compreendem somente dois antipáticos (MFC+MDCi) e/ou é menor do que a concentração molar de [MDC2] nos agregados que compreendem somente dois antipáticos (MFC+MDC2,), na mesma concentração molar de MFC. Os valores correspondentes de p* apresentam tipicamente o comportamento inverso, dos valores de aa.

Por conseguinte, um segundo composto que destabiliza a membrana pode ser usado para formar os agregados que compreendem três antipáticos (MFC+2 MDCs diferentes) e assim conseguir-se a adaptabilidade do agregado aa a qual é mais elevada do que aquela de um agregado que compreende somente dois antipáticos (MFC+MDC). Consequentemente o MDCi pode ser usado para aumentar a adaptabilidade aa de um agregado que compreende MFC e MDC2, e o MDC2 pode ser usado para aumentar a adaptabilidade aa de um agregado que compreende MFC e MDCi por formar um agregado que compreende três antipáticos (MFC+2 MDCs diferentes). Da mesma maneira o segundo composto que destabiliza a membrana pode ser usado para reduzir a quantidade do primeiro composto que destabiliza a membrana o qual seria necessário para se conseguir uma certa adaptabilidade aa quando usado sozinho em um agregado que compreende dois antipáticos. Consequentemente o MDCi pode ser usado para formar um agregado que compreende três antipáticos (MFC+MDCi e MDC2) para. diminuir a quantidade de MDC2 necessário quando usado sozinho em um agregado que compreende MFC e MDC2 para se conseguir uma certa adaptabilidade aa e/ou o MDC2 pode ser usado para formar um agregado que compreende três antipáticos (MFC+MDCi e MDC2) para diminuir a quantidade de MDCi necessário quando usado sozinho em um agregado que compreende MFC e MDCi para se conseguir uma certa adaptabilidade. Preferivelmente o segundo composto MDCi ou MDC2 que destabiliza a membrana é usado para formar um agregado que compreende três anfipáticos (MFC+MDC1+MDC2) pelo qual a quantidade molar -total do composto de destabilização necessária para se- 54 conseguir uma certa adaptabilidade de um agregado que compreende dois antipáticos, um composto que forma a membrana e o respectivo outro composto que destabiliza a membrana (MFC+MDCi) ou (MFC+ MDC2) , é reduzido, portanto [MDCi] + [MDC2] em anfipáticos que compreendem [MFC] + [MDCi] + [MDC2] é menor do que o [MDCi] em anfipáticos que compreendem [MFC] + [MDCiJ e/ou [MDC2] em anfipáticos que compreendem [MFC] + [MDC2] .

Observamos que as características enumeradas no parágrafo anterior afectam favoravelmente o transporte das referidas vesículas de lípidos misturadas de pluri-componentes através da pele. A presença simultânea de pelo menos dois anfipáticos de destabilízação de bi-camada em suspensão do agregado baseada no lípido que forma as bi-camadas estáveis é, por conseguinte, benéfica para a aplicação de formulações farmacêuticas correspondentes em barreiras semi-permeáveis, tal como a pele.

Assim desvelamos um fenómeno anteriormente desconhecido, regularmente geral, com grande potencial prático e comercial. Um exemplo é o transporte de fármacos através de várias barreiras biológicas mediado pelos agregados de três componentes (tipicamente as vesículas que compreendem dois anfipáticos de destabilização da membrana) pelo menos na referida mistura quaternária. A exigência para isto é a capacidade dos agregados complexos de atravessarem os poros com um raio pelo menos de 25 % mais pequeno do que o raio do agregado médio antes da passagem através dos poros. Os poros também podem ser parte do caminho através da pele, o que torna pelo menos as referidas misturas quaternárias convenientes para a libertação do fármaco de forma transdérmica. As misturas quaternárias que contêm pelo menos um lípido polar, mas pobremente solúvel (o qual por si só forma agregados estendidos) e pelo menos dois anfipáticos relativamente altamente solúveis (agentes tensioactivos / fármacos,· 55 os quais tendem a destabilizar a bi-camada de lípido acima mencionada), podem consequentemente melhorar o transporte do fármaco no corpo de criaturas de sangue quente. A maior parte dos fármacos são antipáticos. Muitas de tais moléculas, especialmente na forma ionizada, também são de extremidade activa e são assim atraídas para os limites hidrofilico-hidrofóbico. Alguns fármacos podem auto-agregar-se ou pelo menos tender a adsorver-se a uma interface de água-ar ou de água-lípido; isto é principalmente devido às interacções de ligação H, hidrofóbícas ou iónicas entre os fármacos e o lípido (agregados) , os quais podem levar à criação de associados débeis de lípidos de fármacos. A solubilidade e/ou anfipatia de tais associados são tipicamente maiores do que aquelas do lípido envolvido ou do fármaco sozinho. Esta é a razão pela qual os fármacos de anfipáticos sob certas condições podem destabilizar ou mesmo penetrar e solubilizar as membranas de bi-camada de lípidos. Tais fármacos actuam depois como componentes que destabilizam a membrana (MDC) no sentido da presente invenção, mas isto não é necessariamente o caso sob todas as condições. Tipicamente, a solubilidade do fármaco suficientemente elevada e o coeficiente de partição do fármaco suficientemente elevado ou a - constante de ligação a uma membrana de bi-camada são ambos necessários para o efeito. 0 valor específico, conveniente para estes dois parâmetros depende da escolha de outras características do sistema (pH, sal e a sua concentração, concentração do lípido, actividade da água, etc.). A regra de ouro é a de que a concentração mais elevada da membrana da maioria das formas de fármacos solúvel em água normalmente trabalhará melhor, permitindo considerações de estabilidade. Estas condições também são cumpridas para os fármacos com uma capacidade de solubilização usada para preparar mini-gotículas de acordo-com o documento EP 0 475 160. . 56

Para resolver os problemas acima mencionados, esta invenção descreve preparações baseadas em uma combinação de pelo menos um primeiro, pelo menos um segundo, e pelo menos um terceiro componente antipático suspenso em um meio liquido conveniente na forma dos agregados antipáticos misturados correspondentes com um ou alguns revestimento(s) antipáticos misturados semelhantes a bi-camadas, no qual a combinação de todos os referidos três componentes forma superfícies estendidas em contacto com o referido meio liquido que são pelo menos 50 % mais extensas, em média, do que a superfície típica dos agregados que compreendem pelo menos um referido segundo e pelo menos um terceiro componente anfipático sozinho e a adaptabilidade dos agregados de superfície estendidos que compreendem todos os referidos três componentes antipáticos para a pressão do ambiente excedem em pelo menos 20 % ou em pelo menos duas vezes o desvio padrão de uma medição típica, o qual é mais pequeno, a adaptabilidade dos agregados com a superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro e pelo menos um segundo componente anfipático · usado nas concentrações correspondentes ou a adaptabilidade da superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro e pelo menos um terceiro componente anfipático em concentrações correspondentes, o. qual é mais pequeno, para a aplicação, administração ou transporte de um ingrediente activo, o qual pode ser um dos três componentes antipáticos, especialmente para objectivos biológicos, médicos, imunológicos, ou cosméticos, em e através dos poros em barreiras semi-permeáveis ou outras constrições, tal como através da pele de criaturas de sangue quente ou em semelhantes.

Em uma definição alternativa da solução de problemas descrita, uma combinação de pelo menos um primeiro, pelo menos um segundo, e pelo menos um -terceiro componente anfipático suspenso em um meio líquido 57 conveniente na forma de agregados anfipáticos misturados com um ou alguns revestimento(s) anfipáticos misturados semelhantes a bi-camadas, e assim com uma superfície estendida, é usada, no qual pelo menos um referido primeiro componente anfipático, por um lado, e pelo menos um referido segundo e um terceiro componentes anfipáticos, por outro lado, têm solubilidades diferentes pelo menos em 2 vezes no referido meio líquido, e pelo menos uma referida primeira substância tem uma tendência para se auto-agregar e é pelo menos 10 vezes menos solúvel no referido meio líquido do que pelo menos, uma referida segunda e uma referida terceira substância, permitindo à primeira formar superfícies estendidas; além disso, pelo menos uma referida segunda substância é pelo menos 10 vezes mais solúvel no referido meio líquido e, sozinha, tende a formar ou a suportar a formação de superfícies que são pelo menos 2 vezes menos estendidas do que as superfícies que contêm pelo menos uma primeira substância sozinha e pelo menos uma referida terceira substância é também pelo menos 10 vezes mais solúvel no referido meio líquido do que a primeira substância e pode, mas não necessita, de formar auto-agregados com números de agregação pelo menos de 10 vezes mais pequenos do que aqueles de auto-agregados da referida primeira substância; e as referidas superfícies estendidas que compreendem pelo menos, uma referida primeira, pelo menos uma segunda e por último uma terceira substância, em equilíbrio, têm pelo menos 50 % de superfícies estendidas maiores do que as superfícies formadas pelo menos por uma segunda ou uma terceira substância sozinha e/ou ambas em conjunto, e preferivelmente os agregados com uma superfície estendida que compreende todos os três referidos componentes anfipáticos que têm a adaptabilidade à pressão do ambiente que excede em pelo menos 20 % ou em pelo menos duas vezes o desvio padrão de uma medição típica, a qual é mais pequena, contanto que a adaptabilidade da superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro e pelo· menos - um segundo 58 componente antipático usado nas concentrações correspondentes ou a adaptabilidade da superfície estendida que compreende pelo menos um primeiro e pelo menos um terceiro componente antipático nas concentrações correspondentes, o qual é mais pequeno, todos os quais servem o objectivo da aplicação, administração ou transporte de pelo menos um ingrediente activo, o qual pode estar entre as referidas três substâncias, especialmente para objectivos medicinais ou biológicos, em e através de barreiras e constrições, tal como a pele de criaturas de sangue quente ou em sémelhantes.

Uma solução favorável do problema conta com a utilização das referidas superfícies estendidas na forma de superfícies de membrana.

As combinações convenientes também cumprem as exigências como afirmado em parágrafos anteriores, simultaneamente assegurando que pelo menos uma referida segunda substância aumenta a flexibilidade das superfícies estendidas. que compreendem pelo menos uma referida primeira, pelo menos uma segunda, e pelo menos uma terceira substância em comparação com as superfícies formadas simplesmente pelo menos por uma primeira substância ou também com as superfícies formadas . pelo menos por uma primeira e pelo menos, uma terceira substância.

As combinações convenientes adicionais cumprem as exigências assegurando que pelo menos uma referida segunda e uma terceira substância em conjunto aumentam a permeabilidade de superfícies estendidas que contêm pelo menos uma referida primeira, pelo menos uma segunda, e pelo menos uma terceira substância, em comparação com as superfícies formadas simplesmente pelo menos por uma primeira substância ou com as superfícies formadas pelo menos por uma primeira e pelo menos uma terceira substância................. 59

As combinações, as quais também cumprem as referidas exigências contêm pelo menos uma referida segunda substância tal que aumenta a capacidade de tolerar a elevada curvatura, como avaliado pela estabilidade relativa dos referidos agregados com uma superfície estendida que compreende uma referida primeira, uma referida segunda e uma referida terceira substância contra a mais elevada curvatura forçada durante a passagem através de uma constrição com o diâmetro máximo pelo menos de 1,4 vezes mais pequeno do que o diâmetro médio de uma superfície estendida formada pelo menos por uma primeira substância sozinha.

Quando expresso em termos de solubilidade relativa de componentes diferentes, as combinações como ensinado por esta aplicação compreendem preferivelmente pelo menos uma primeira substância e pelo menos uma segunda substância que se diferenciam na solubilidade no meio de suspensão na média pelo menos de 10 vezes. Preferivelmente e/ou alternativamente, pelo menos uma segunda substância e pelo menos uma terceira substância diferenciam-se na solubilidade no meio de suspensão na média pelo menos de 2 vezes. É além disso recomendável usar combinações, como descrito nos parágrafos anteriores, caracterizado pelo facto de que a concentração pelo menos das referidas uma segunda substância usada na combinação com a referida uma primeira e a referida uma terceira substância é abaixo de 80 % da concentração que seria necessária para produzir os agregados que compreendem somente uma referida primeira e uma referida segunda substância tão adaptável à pressão do ambiente como a combinação seleccionada de pelo menos todas as três substâncias. Em combinações preferidas de acordo com a descrição no penúltimo parágrafo, a concentração pelo menos da referida segunda substância sobe para pelo menos 0,1 % da concentração declarada relativa. Na combinação preferida adicional,- 60 a concentração de pelo menos uma referida segunda substância sobe para 1 - 80 % da concentração declarada relativa. É também possível definir a combinação conveniente para resolver os problemas descritos nesta aplicação seleccionando a concentração relativa de pelo menos uma referida terceira substância, usada em combinação com uma referida primeira e uma referida segunda substância, como estando acima de 0,1 % da concentração possível máxima de pelo menos uma referida terceira substância no sistema, a) como definido em termos da solubilidade da referida terceira substância no sistema ou pelo menos nos referidos agregados de três componentes, ou também b) como determinado pela acção negativa pelo menos da referida uma terceira substância na estabilidade pelo menos dos referidos agregados de três componentes. Isto significa que mais do que 0,1 % de concentração saturada da referida terceira substância pelo menos em agregados de três componentes são preferivelmente usados ou também, que o limite de 0,1 % a qual resulta pelo menos em agregados de três componentes ao deixar de cumprir o critério de estabilidade do agregado necessária definido anteriormente no texto.

Além disso, é possível definir uma combinação conveniente solicitando uma concentração relativa de pelo menos uma referida terceira substância usada em combinação com uma referida primeira e com uma referida segunda substância como estando entre 1 % e 99 %, mais favoravelmente como estando entre 10 % e 95 %, e o mais preferivelmente como estando entre 25 % e 90 % da concentração possível máxima de pelo menos uma referida terceira substância, a) como· definido em termos da solubilidade da referida terceira substância no sistema ou pelo menos nos referidos agregados de três componentes, ou b) como determinado pelo efeito prejudicial de pelo menos uma -referida terceira substância na estabilidade -pelo menos- 61 dos referidos agregados de três componentes, cujo significado qualitativo destas definições a ser descrito em parágrafos anteriores. 0 problema que resolve a combinação de anfipático contém preferivelmente entre 0,01 % em peso e 50 % em peso da massa seca como a massa total de todas pelo menos de três substâncias anfipáticas, as quais em conjunto formam agregados altamente adaptáveis com uma superfície estendida. Em formulações mais preferidas, esta massa é seleccionada para estar entre 0,1 % em peso e 40 % em peso, mesmo mais preferivelmente entre 0,5 % em peso e 30 % em peso e o mais preferivelmente entre 1 % em peso e 15 % em peso. '

As combinações anfipáticas designadas de acordo com esta aplicação formam superfícies estendidas com uma elevada adaptabilidade, contendo pelo menos as referidas três substâncias, preferivelmente com uma curvatura de superfície média correspondente a um raio médio entre 15 nm e 5000 nm. Uma escolha particularmente favorecida é a dos sistemas com superfícies estendidas altamente adaptáveis, as quais contêm pelo menos as referidas três substâncias, com uma curvatura média correspondente a um raio médio entre 30 nm e .1000 nm, mais preferivelmente entre 40 nm e 300 nm e o mais preferivelmente entre 50 nm e 150 nm. A composição de electrólito e a concentração afectam as propriedades desejáveis das referidas combinações anfipáticas. Por conseguinte, é preferido seleccionar essas características do electrólito no qual as superfícies estendidas pelo menos com uma primeira, pelo menos uma segunda, e pelo menos uma terceira substância são suspensas, e o qual compreende iões mono e/ou ol-igovalentes, para alcançar a-força iónica entre I = 0/001-e I ·= 62 1. Uma escolha mais preferida produz a força iónica entre I = 0,02 e I = 0,5 o qual mesmo mais preferivelmente é seleccionada para estar entre I = 0,1 e I = 0,3. A concentração de protões no electrólito seleccionado é um parâmetro importante em caso de sistemas ionizáveis. 0 valor de pH do electrólito de suspensão, por conseguinte, preferivelmente deve ser escolhido: a) na proximidade do logaritmo da constante de ionização evidente (pKa) pelo menos de uma referida segunda substância, se a última for mono-ionizável, ou na proximidade de tal valor de pKa que maximize a solubilidade pelo menos de uma referida segunda substância, se a última tiver vários grupos ionizáveis, ou também b) na proximidade da condição favorável de pH para o mais rapidamente declínio ou de outra maneira o mais sensível entre pelo menos as referidas três substâncias, se pelo menos uma referida segunda substância não for ionizável. Mais especificamente, o valor de pH do meio polar no qual as superfícies estendidas compreendem pelo menos uma primeira, pelo menos uma segunda, e pelo menos uma terceira substância são suspensas deve estar entre pH = pKa - 3 e pH = pKa + 3, sendo a selecção de pH final também afectada pelas referidas considerações de estabilidade. Quando uma escolha mais estreita é desejável, fixando o electrólito a) entre pH = pKa - 1,5 e pH = pKa + 2, se menos uma referida terceira substância for mais solúvel em elevado pH, e b) entre pH = pKa - 2 e pH - pKa + 1,5, se pelo menos uma referida terceira substância for mais solúvel em baixo pH, é recomendável, sendo a selecção de pH final novamente sujeita a considerações de estabilidade.

Uma solução para problemas delineados é a utilização das referidas combinações caracterizadas pelo facto de pelo menos uma primeira substância, a qual é menos solúvel no meio líquido e/ou é a substância que constrói- a superfície no sistema, - for- um lípido, 63 preferivelmente um fosfolípido(por exemplo como descrito aqui antes na secção da definição), pelo facto de pelo menos uma segunda substância, a qual é mais solúvel no meio liquido e/ou aumenta a curvatura superficial tolerável ou a adaptabilidade da referida superfície estendida, é um anfipático que destabiliza a membrana e tipicamente um agente tensioactivo, e pelo facto for pelo menos uma referida terceira substância ser qualquer um ingrediente anfipático biologicamente activo, o qual tem uma capacidade por si só de aumentar a curvatura superficial tolerável ou a adaptabilidade da referida superfície estendida, ou também é um diferente agente tensioactivo, diferente de pelo menos uma referida segunda substância. A segunda e a terceira substância podem ser inter-permutadas.

Algumas combinações anfipáticas preferidas que podem ser convenientemente usadas para resolver os problemas delineados são favoravelmente dispostas na forma de gotículas de fluido pequenas suspensas ou dispersas em um líquido, e rodeadas de um revestimento de uma ou várias camadas de pelo menos uma primeira substância, a qual é capaz de auto-agregação, e de pelo menos uma segunda substância e de pelo menos uma terceira substância, as quais são ambas anfipáticas, ' contanto que a) a primeira substância e as últimas duas substâncias se diferenciam em solubilidade em um meio de suspensão líquido conveniente pelo menos de 10 vezes, ou contanto que b) o raio médio dos homo-agregados dos mais solúveis entre pelo menos uma segunda e uma terceira substância ou de hetero-agregados de pelo menos uma primeira, pelo menos uma segunda e pelo menos uma terceira substância é mais pequeno do que o raio médio dos homo-agregados pelo menos da referida uma primeira substância, a qual é a menos solúvel entre as três.

Uma· escolha prat-icamente-- muito útil de pelo menos uma primeira·· 64 substância, como definido aqui, é um lipido polar ou não polar, que forma superfície. Este lipídio é muitas vezes mais capaz de formar membranas de bi-camada e preferivelmente forma bi-camadas por si só. Quando considerado do ponto de vista da solubilidade, tal -lipido que forma superfície pode ser dissolvido no meio de suspensão líquido por exemplo em meio polar que suporta a suspensão preferivelmente em uma concentração que varia de entre IO-12 M e 10' 7 M.

Para aplicações biológicas é recomendável seleccionar pelo menos uma primeira substância que forma superfícies estendidas como descrito neste documento a partir do grupo de lípidos, lipóides, a partir de uma fonte biológica, de lípidos sintéticos correspondentes e de modificações bioquímicas ou químicas, isto é os seus derivados.

Particularmente preferido e atractivo no tocante ao parágrafo anterior é o grupo que compreende os glicéridos, os glicolípidos, glicerofosfolipidos, isoprenoidlípidos, esfingolipidos, os esteróides, esterinas ou esteróis, os lípidos que contêm enxofre, os lípidos que contêm pelo menos um resíduo de carboidrato, ou outros derivados gordos polares, os quais são, por conseguinte, todos os candidatos convenientes pelo menos para uma referida primeira substância que forma as. referidas superfícies estendidas. Mais especificamente, a selecção é feita entre fosfatidilcolinas, fosfatidil-etanolaminas, fosfatidilgliceróis, fosfatidilinositóis, ácidos fosfatídicos, fosfatidilserinas, esfingomielinas, esfingofosfolipidos, glicosfingolipidos, cerebrósidos, ceramidpoli-hexósidos, sulfatidas, esfingoplasmalogenes, ou gangliósidos. A referida substância que forma a superfície estendida, a qual -resolve os problemas- delineados na aplicação, é --preferivelmente 65 seleccionada a partir do grupo de lipóides ou de lípidos, com uma ou duas, muitas vezes diferentes, cadeias gordas, especialmente com acil-, alcanoil-, alquil-, alquileno-, alcenoil-, alcoxilo, ou cadeias com segmentos de omega-ciclo-hexil-, ciclo-propano-, iso-ou anteiso-ramifiçados, ou qualquer outra cadeia alifática praticamente útil. Há alguma preferência para usar lipidos com n-decilo, n-dodecilo (laurilo), n-tetradecilo (miristilo), n-hexa-decilo (cetilo), n-octadecilo (estearilo), n-eicosilo (araquinilo), n-docosilo (be-henilo) ou n-tetracosilo (lignocerilo), 9-cis-dodecenilo (lauroleilo), 9-cis-tetradecenilo (miristoleilo), 9-cis-hexadecenilo (palmitoleinilo), 9-cis-octadecenilo (petroselinilo)., 6-trans-octadecenilo (petroselaidinilo), 9-cis-octadecenilo (oleílo), 9-trans-octadecenilo (elaidinilo), 9-cis-eicosenilo (gadoleinilo), 9-cis-docosenilo (cetoleinilo) ou 9-cis-tetracosoílo (nervonilo), n-deciloxilo, n-dodeciloxilo (lauriloxilo), n-tetradeciloxilo (miristiloxilo), n-hexadeciloxilo (cetiloxilo), n-octadeciloxilo (esteariloxilo), n~eicosiloxilo (araquiniloxilo), n-docosoiloxilo (be-heniloxilo) ou n-tetracosoiloxilo (lignoceriloxilo), 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleiloxilo), 9-cis-tetradeceniloxilo (miristoleiloxilo) , 9-cis-hexadeceniloxilo (palmitoleiniloxilo), 6-cis-octadeceniloxilo, (petroseliniloxilo), 6-trans-octadeceniloxilo (petroselaidiniloxilo), 9-cis- . octadeceniloxilo (oleiloxilo), 9-trans-octadeceniloxilo, (elaidiniloxilo), e 9-cis-eicosenilo (gadoleiniloxilo), 9-cis- docosenilo (cetoleiniloxilo) ou 9-cis-tetracosoílo (nervoniloxilo), n-decanoiloxilo, n-dodecanoiloxilo (lauroiloxilo), n-tetra- decanoiloxilo (miristoiloxilo) , n-hexadecanoiloxilo (palmito-iloxilo) n-octadecanoiloxilo (estearoiloxilo), n-eicosanoiloxilo (araquinoiloxilo), n-n-docosoaniloxilo (be-henoiloxilo) e n-tetra-cosanoiloxilo (lignoceroiloxilo), 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleoiloxilo), 9-cis-tetradecenoiloxilo (miristoleoiloxilo), 9-cis-hexadecenoiloxilo (palmitoleinoiloxilo), ---- β-cis-octa-^ 66 decenoiloxilo (petroselinoiloxilo), 6-trans-octadecenoiloxilo (petroselaidinoiloxilo), 9-cis-octadecenoiloxilo (oleoiloxilo), 9-trans-octadecenoiloxielaidinoiloxilo) , e 9-cis-eicosenoiloxilo (gadoleinoiloxilo), 9-cis-docosenoiloxilo (cetoleinoiloxilo) e 9-cis-tetracosenoiloxilo (nervonoiloxilo) ou as cadeias do derivado de esfingosina correspondentes.

Uma solução conveniente para os problemas delineados aqui são as combinações antipáticas nas quais pelo menos uma referida segunda substância é uma substância activa de superfície tal como um agente tensioactivo / detergente. A última é. preferivelmente seleccionada a partir do grupo que compreende agentes tensioactivos não iónicos, híbridos.iónicos, aniónicos e catiónicos. É preferido utilizar um agente tensioactivo com a solubilidade em um meio de suspensão líquido tal como um líquido polar, no qual as superfícies estendidas são preparadas, na variação de 5 xlO”7 M a IO”2 M.

Uma lista longa de agentes tensioactivos que se qualificam para a utilização nas referidas suspensões quaternárias é dada aqui antes na secção da definição.

Para a solução de problemas abordados pela aplicação, as interacções de grupos principais de carga-carga ou de carga polar de entre os anfipáticos envolvidos podem ser importantes. Nesse caso a consideração seguinte pode ser feita: se pelo menos uma segunda substância for carregada pelo menos com uma terceira substância pode ser não carregada e se pelo menos uma segunda substância for não carregada pelo menos uma terceira substância de maneira ideal deve ser carregada; a preferência semelhante de combinações é também possível pelo menos para uma referida primeira e uma segunda ou pelo menos para uma referida primeira e uma terceira substância, respectivamente. Quando pelo menos -· um· 67 anfipático carregado é usado para preparar agregados com pelo menos três componentes diferentes, a superfície do agregado estendida, formada pelo menos por uma primeira, uma segunda e uma terceira substância, pelo menos uma das quais é carregada, é preferivelmente escolhido para .conter entre 1 % e 75 % do componente carregado. Uma. escolha mesmo mais favorável é a de utilizar combinações de pelo menos uma primeira, uma segunda e uma terceira substância, pelo menos uma das quais é carregada, que contém entre 5 % e 50 % do componente carregado e o mais preferivelmente entre 10 % e 30 % do componente carregado.

Em alguns casos é preferido utilizar combinações de acordo com as reivindicações desta aplicação tal que contêm uma fosfatidilcolina, uma fosfatidiletanolamina-N-mono- ou N-di-metilo, ácido fosfatidico ou o seu éster de metilo, fosfatidilserina e/ou fosfatidilglicerol como o suporte de superfície pelo menos uma primeira substância e um lisofosfolípido, especialmente um ácido lisofosfatidico, um ácido lisometilfosfatídico, lisofosfatidilglicerol, lisofosfatidil-colina, uma lisofosfatidiletanolamina parcialmente N-metilada, ou também um sal monovalente de colato, desoxicolato, glicocolato, glicodesoxicolato, ou um derivado de esterol suficientemente polar, ou uma forma de sal conveniente de laurato, miristato, palmitato, oleato, palmitoleato, elaidato ou algum outro sal de ácido gordo de cadeia longa farmaceuticamente aceitável e/ou um Tween-, um Myrj-, ou um Brij-agente tensioactivo com as referidas cadeias alifáticas, ou um Triton, um agente tensioactivo gordo de cadeia longa de sulfonato, sulfobetaina, -N-glucamido ou -sorbitano (Arlacel ou Span) , qualquer um dos quais pode ter o papel de pelo menos uma segunda ou de pelo menos uma terceira substância, conforme for o caso, formando tal segunda/terceira substância por si só menos superfícies estendidas do que pelo menos uma primeira substância por si só. - - - . ... 68

As combinações preferidas que convenientemente resolvem os problemas delineados podem conter alternativamente um antipático biologicamente activo, o qual pode destabilizar as membranas de lípidos, como pelo menos uma segunda e uma terceira substância, conforme for o caso, a menos que um.diferente agente tensioactivo de pelo menos uma segunda substância ou de uma terceira substância, mas de outra maneira seleccionado de classes de agentes tensioactivos semelhantes, seja seleccionado para a finalidade.

Como uma regra de ouro útil, que pode ser aplicada para seleccionar pelo menos uma terceira ou uma segunda substância conveniente, é seleccionar preferivelmente a solubilidade de tal substância no meio de suspensão líquido, como um líquido polar, estando entre 10“ 5 M e 1 M.

Para algumas formas de realização é preferido procurar tal molécula que tem o papel de pelo menos um terceiro ou um segundo antipático que adsorve à superfície das bi-camadas de lípidos mas é também bem miscível com ou razoavelmente solúvel no líquido·polar no qual as referidas superfícies de bi-camada de lípido estendidas são formadas. É adicionalmente preferido, e praticamente útil, usar tal fármaco ou forma de fármaco que pode ter o papel de como pelo menos uma terceira ou uma segunda substância, conforme for o caso, especialmente quando este papel não é tido pelo menos por uma primeira e/ou pelo menos por uma segunda ou terceira substância, respectivamente. Nesse caso tal forma de sal ou de ionização do fármaco é escolhida o que serve melhor ao objectivo. Para o efeito, o volume de pH, a composição de electrólito e o valor da concentração, e em caso de necessidade também os co-solventes incluindo os álcoois de cadeia curtos diferentes ou outros anfipáticos polares de cadeia curta são seleccionados- 69 apropriadamente.

Os fármacos convenientes para resolver os problemas esboçados neste trabalho podem pertencer à classe de compostos de amónio substituídos da fórmula

Ra

Rc 0) na qual a) Ra representa um grupo hidrofóbico, e Rb, Rc, e Rd, um independentemente um do outro, representa cada um hidrogénio, alquilo C1-C4, 2-hidroxietilo, alilo ou ciclo-C3-C6-alquilo-Cl-C3-alquilo, ou dois dos radicais Rb, Rc e Rd em conjunto representam alquileno C4 ou C5 opcionalmente interrompido por -HN-, -N(alquilo C1-C4)-, -N (2-hidroxietilo) - ou por oxigénio, ou; b) Ra e Rb são dois grupos hidrofóbicos ou em conjunto representam um grupo hidrofóbico, e Rc e Rd, um independentemente um do outro, representam cada um hidrogénio, alquilo C1-C4, alilo ou ciclo-C3-C6-alquilo-Cl-C3-alquilo, ou c) Ra, Rb e Rc em conjunto representam um grupo hidrofóbico, e Rd representa hidrogénio ou alquilo C1-C4, e A” representa o anião de um ácido farmaceuticamente aceitável, como um sal ácido carboxílico da fórmula

Ra-COO' Y+ (2)

Ra que representa um grupo hidrofóbico e Y+ que representa o catião de uma base farmaceuticamente aceitável, como um composto de amino ácido alfa da fórmula 70

N—CH Jj^· CGGH

Na fórmula 3 acima, Ra representa um grupo hidrofóbico e Rb e Rc, um independentemente um do outro, representam cada um hidrogénio ou alquilo C1-C4, como um mono-éster de ácido fosfórico da fórmula ...... ......- - em que Ra representa um grupo hidrofóbico e Y+ representa o catião de uma base farmaceuticamente aceitável, ou como um sal de adição ácido de um composto que tem um grupo hidrofóbico Ra e uma imidazolina, imidasolidina ou um grupo de hidrasino como um grupo hidrofilico.

Em um composto de amónio substituído da fórmula 1 que pode ser usado como um medicamento, no caso de a) o grupo hidrofóbico Ra é um radical de hidrocarboneto alifático que pode ser interrompido por um átomo de oxigénio ou de enxofre, pode conter os grupos -C0(=0)-, -0-C(=0)-, -C(=0)-NH-, -0-C(=0)-NH- ou hidroxilo, e pode ser substituído por de 1 a 3 radicais de hidrocarboneto aromáticos ou alifáticos, monocíclicos, opcionalmente substituídos, por um radical de hidrocarboneto parcialmente saturado ou aromático, bi-ou tri-cíclico, opcionalmente substituído, por um heterociclo saturado ou parcialmente saturado, aromático, monocíclico, 71 opcionalmente substituído, ou por um heterociclo benzo-fundido ou parcialmente saturado, aromático, bi- ou tri-cíclico, opcionalmente substituído. 0 grupo hidrofóbico Ra também pode ser um radical de hidrocarboneto. aromático ou alifático, monocíclico, opcionalmente substituído, ou um radical de hidrocarboneto benzo-fundido, alifático ou bicíclico. 0 grupo hidrofílico é, por exemplo, um grupo da fórmula N+

RC em que Rb, Rc, e Rd, independentemente um do outro, representam cada um hidrogénio, alquilo C1-C4, por exemplo metilo, etilo, isopropilo ou n-propilo, ou 2-hidroxietilo, ou no qual dois dos radicais Rb, Rc, e Rd em conjunto representam piperidino, piperazinilo, 1-metilpiperazinilo, 1-(2-hidroxietil)-piperazinilo ou morfolino, e o outro radical representa hidrogénio.

Em um composto de amónio substituído da fórmula 1 que pode ser usado como um medicamento, no caso de b) Ra e Rb são dois grupos hidrofóbicos, por exemplo dois radicais de hidrocarboneto alifáticos, o qual pode ser substituído por um ou dois radicais de hidrocarboneto aromáticos ou alifáticos, monocíclicos, opcionalmente substituídos, ou por um heterociclo saturado ou parcialmente saturado aromático, monocíclico, opcionalmente substituído, ou Ra e Rb em conjunto representam um heterociclo benzo-fundido, saturado, ou parcialmente saturado, aromático, monociclico, opcionalmente substituído. 0 grupo hidrofílico é um 12 grupo da fórmula

na qual Rc e Rd, independentemente um do outro representam cada um hidrogénio ou alquilo C1-C4, preferivelmente metilo.

Em um composto de amónio substituído da fórmula 1, que pode ser usado como um medicamento, no caso de c) Ra, Rb, e Rc formam o grupo hidrofóbico e em conjunto representam um heterociclo benzo-fundido, aromático, ou parcialmente saturado, opcionalmente substituído. 0 grupo hidrofílico é um grupo da fórmula

Rd

na qual Rd representa hidrogénio ou alquilo C1-C4, preferivelmente metilo. A- é o anião de um ácido farmaceuticamente aceitável, por exemplo um ácido mineral, por exemplo o cloreto, sulfato de hidrogénio ou o ião de fosfato de di-hidrogénio, o ião de brometo ou de iodeto, ou o anião de um ácido orgânico, por exemplo um ácido alcanocarboxílico mais baixo, por exemplo o ião de acetato, de um ácido carboxílico não saturado, por exemplo o ião de fumarato ou de maleato, de um ácido de hidroxílo, por exemplo o .ião de lactato, tartarato ou de citrato, ou de um ácido aromático, por exemplo o ião de salicilato. 73

Em um sal de ácido carboxilico da fórmula 2, que pode ser usado como um medicamento, o grupo hidrofóbico Ra é um radical de hidrocarboneto alifático que pode ser substituído por um radical de hidrocarboneto aromático, monocíclico, opcionalmente substituído ou por um radical de hidrocarboneto, opcionalmente substituído, bi-ou tri-cíclico, aromático ou parcialmente saturado, por um heterociclo opcionalmente substituído, monocíclico, aromático ou parcialmente saturado ou por um heterociclo benzo-fundido, opcionalmente Substituído, bi-ou tri-cíclico, aromático ou parcialmente saturado ou por um radical de esteróide, ou Ra é um radical de hidrocarboneto opcionalmente substituído, monocíclico, aromático, um radical de hidrocarboneto opcionalmente substituído, bi-ou tri-cíclico, aromático ou parcialmente saturado, um heterociclo opcionalmente substituído, monocíclico, aromático ou parcialmente saturado ou um heterociclo saturado ou benzo-fundido. 0 catião Y+ de uma base farmaceuticamente aceitável é, por exemplo, um ião de metal de álcali, por exemplo um ião de lítio, de sódio ou de potássio, um ião de metal alcalino terroso, por exemplo um ião de cálcio ou de magnésio, ou um ião de amónio ou mono-, di -ou tri-Cl-C4-alquilamónio, por exemplo um ião de trimetil-, etil-, dietil-ou de trietil-amónio, um ião de 2-hidroxietil-tri-Cl-C4-alquilamónio, por exemplo colinila, ou o catião de um amino ácido básico, por exemplo a lisina ou a arginina. .

Os sais de ácido carboxilico da fórmula 2 que têm actividade biológica ou os ácidos carboxílicos que podem ser convertidos neles pela formação de sal são, por exemplo, os sais dos glucocorticoides que são esterifiçados na posição 21 por um ácido dicarboílico, por exemplo o succinato de metilprednisolona de sódio, o succinato d prednisolona de sódio; os narcóticos de curto prazo do tipo 3,20-dioxo-5p-pregnano que podem ser esterif içados pelo ácido succínieo·, 74 por exemplo a hidroxidiona de succinato de sódio ou 11,20-dioxo-3alfa-hidroxi-5alfa-pregnano, por exemplo a alfaxolona, ou o composto 21, por exemplo a alfadolona; sais de coleríticos, por exemplo os sais do ácido eólico ou os sais do ácido desoxicólico; os analgésicos, por exemplo os sais de ácidos fenilacéticos substituídos ou os ácidos 2-fenilpropiónícos, por exemplo o alclofenac, ibufenac, íbuprofeno, clindanac,, fenclorac, cetoprofeno, fenoprofeno, indoprofeno, fenclofenac, díclofenac, flurbiprofeno, pirprofeno, naproxeno, benoxaprofeno, carprofeno ou cicloprofeno; os derivados do ácido antranílico analgesicamente activos, por exemplo da fórmula opcionalmente substituída, bi-ou tri-cíclica, aromática,

. <2-1) na qual Rl, R2 e R3 independentemente um do outro, representam cada um hidrogénio, metilo, cloro ou trifluorometilo, por exemplo o ácido mefenâmico, o ácido flufenâmico, o ácido tolfenâmico ou o ácido meclofenâmico; derivados do ácido nicotínico anilino-substituído analgesicamente activo, por exemplo o ácido miflúmico, a clonixina ou a flunixina; os ácidos heteroarilacéticos analgesicamente activos ou os ácidos 2-heteroarilpropiónicos que têm um. radical de 2-indol-3-il ou de pirrol-2-il, por exemplo a indometacina, oxmetacina, intrazol, acemetazina, cinmetacina, zomepirac, tolmetina, colpirac ou o ácido tiaprofénico; os ácidos 75 indenilacéticos analgesicamente activos, por exemplo o sulindac; os ácidos heteroariloxiacéticos analgesicamente activos, por exemplo o benzadac, os ácidos prostanóicos que estimulam a musculatura lisa, por exemplo o PGE2 (dinoprostona), PGF2alfa (dinoprosto), 15 (S)-15-metil“PGE2, 15 (S)-15-metil-PGF2alfa, (carboprosto).,. (±) 15 (Xi) — 15-metil-13,14-di-hidro-ll-desoxi-PGEl (deprostilo), 15(S)-15-metil-ll-desoxi-PGEl (doxaprosto), 16,16-dimetil-PGE2, 17-fenil-18,19,20-trinor-PGF2alfa, 16-fenoxi-17,18,19,20-tetranor-PGF2alfa, por exemplo o cloprostenol ou o fluprostenol, ou o N-metilsulfonil-15-fenoxi-17,18,19,20-tetranor-PGF2alfa (sulprostona); bacteriostáticos, por exemplo os .sais de derivados do ácido nalixidico, por exemplo os sais do ácido nalixidico, a cinoxacina, o ácido oxolinico, o ácido pironídico ou o ácido pipenídico, o ácido penicilânico e os derivados do ácido cefalosporânico que têm actividade de antibiótico com grupos de 6β- ou 7p-acilamino, os quais estão presentes no ácido 6p-acílamino-penicilânico fermentativamente, semi-sinteticamente ou totalmente sinteticamente conseguivel ou derivados do ácido 7p-acilaminocefalosporânico ou os derivados do ácido 7p-acilaminocefalosporânico modificados na posição 3, por exemplo os derivados do ácido penicilânico que se tornaram conhecidos sob os da nomes de penicilina G ou V, feneticilina, propicilina, nafcilina, oxacilina, .cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, ciclacilina, epicilina, meciliname, meticilina, azlocilina, . sulbenicilina, ticarcilina, mézlocilina, piperacilina, carindacilina, azidocilina ou ciclazilina, ou os derivados de cefalosporina que se tornaram conhecidos sob os nomes cefaclor, cefuroxima, cefazlure, cefacetrila, cefazolina, cefalexina, cefadroxilo, cefaloglicina, cefoxitina, cefaloridina, cepsulodina, cefotiame, ceftazidina, cefonicida, cefotaxima, cefmenoxima, ceftizoxima, cefalotina, cefradina, cefamandol, cefanona, cefapirina, cefroxadina, cefatrizina, cefazedona, ceftrixona ou ceforanida, e outros antibióticos de β-lactame-, por 76 exemplo o moxalactame, o ácido clavulânico, a nocardicine A, sulbactame, aztreoname ou tienamicina; ou os antineoplásticos que têm uma estrutura do ácido 4-[bis-{2-cloroetil)-amino-fenil]-butírico, por exemplo o clorambucilo, ou os antineoplásticos que têm dois crescimentos de carboxilo, por exemplo o metotrexato..

Os compostos da fórmula 3 que têm uma actividade biológica são, por exemplo, os neurotransmissores nos quais o grupo hidrofóbico é de metilo substituído por hidroxifenilo, por exemplo a L-tirosina, a L-dopa, alfa-metildopa ou metirosina; as hormonas da tireoide que têm radicais de fenilo substituídos por iodo, por exemplo a levo-tirosina, a di-iodotirosina ou a liotironina; ou os antineoplásticos que têm uma estrutura de amino ácido, por exemplo o melfaleno.

Em um composto da fórmula 4 que tem actividade biológica o grupo hidrofóbico Ra não polar, é um radical de glucocorticoide e A+ é sódio, por exemplo o fosfato de di-sódio de betametasona, o fosfato de di-sódio de dexametasona, o fosfato de cortisona, o fosfato de hidrocortisona, o fosfato de di-sódio de prednisolona ou o fosfato de di-sódio de parametasona-21. Os compostos de tipo sal que têm um grupo hidrofóbico e um grupo de imidazolina, imidazolidina ou de hidrazino como o grupo hidrofílico são, por exemplo, os sais dos derivados de hidrazina antidepressivamente activos, por exemplo a iproniazida, a nialamida, a isocarboxazida, a fenelzina, a feniprazina, a mebanazina ou a fenoxipropazina; a-simpatomiméticos que têm uma estrutura de imidazolina, por exemplo a nafazolina, a tetrizolina, a tramazolina, a xilo-metazolina ou a oxi-inetazolina; n-simpatolíticos que têm uma estrutura de imidazolina, por exemplo a fentolamina ou a tolazolina, ou anti-hipertensivos centralmente activos que têm uma estrutura de imidazolina, por exemplo a clonidina,- a tolonidina ou a flutonidina; ou vasodilatadores que 77 têm um grupo de hidrazino, por exemplo a di-hidralazina, a hidralazina ou a picodralazina.

Pelo menos uma referida terceira substância anfipática na referida combinação, a qual actua como um fármaco é um analgésico. 0 conteúdo do fármaco que é usado pelo menos como um referido segundo ou terceiro componente, é escolhido como estando entre 0,1 % relativa e 60 % relativa comparado à massa total de todas as referidas três substâncias que formam as referidas superfícies estendidas. De certa forma rnais estreita, e mais preferida, a escolha é para utilizar entre 0,5 % relativa e 50 % relativa e o mais favoravelmente entre 1 % relativa e 40 % relativa em comparação com a massa total das referidas três substâncias que formam as referidas superfícies estendidas.

Pelo menos uma referida terceira substância na combinação de anfipático, que resolve os problemas delineados, pode ser um imunomodulador de baixo peso molecular, um bio-catalisador, uma co-enzima, uma hormona, ou um agonista ou antagonista de baixo peso molecular de alguma acção de substância biologicamente importante.

Qualquer baixa para o polipéptido de peso intermediário com propriedades que destabilizam a membrana é também útil no contexto desta invenção, se incluído nas referidas combinações em conveniente forma e concentração.

Em um aspecto importante da presente invenção como descrito em cima, um de pelo menos um segundo ou de pelo menos no terceiro componente anfipático é um fármaco não esteroidal anti inflamatório (NSAID). 78

Em um aspecto importante da.presente invenção, a invenção fornece preparações, baseadas em uma suspensão de agregados de superfície estendida em um meio líquido que compreende pelo menos um primeiro componente anfipático; pelo menos um segundo componente anfipático; pelo menos um terceiro componente anfipático, sendo -o primeiro componente anfipático é um componente de lipido que forma a membrana da vesícula, sendo o segundo e o terceiro componentes, componentes que destabilizam a membrana, em que o terceiro componente é um fármaco anti-inflamatório não esteroidal (NSAID) tal que os referidos agregados são capazes de penetrar nas barreiras semi-permeáveis com poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes da penetração sem modificar o seu diâmetro em mais de 25 %.

Adicionalmente são fornecidas suspensões de agregados de superfície estendida em um meio líquido, que compreendem: pelo menos um primeiro componente anfipático; pelo menos um segundo componente anfipático; pelo menos um terceiro componente anfipático; sendo o primeiro componente anfipático um agregado, tipicamente um componente de lipido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente agregado, tipicamente os componentes que destabilizam a membrana; em que o terceiro, componente é um NSAID, tal que as superfícies estendidas formadas pelo primeiro e segundo componente sozinho ou também pelo primeiro e terceiro componente sozinho, o segundo ou o terceiro componente, respectivamente, estando presentes em uma concentração relativa X, têm uma propensão mais baixa para superar as barreiras com poros que têm um diâmetro pelo menos 50 % mais pequeno do que o diâmetro do agregado médio, antes do atravessamento de poro, do que as superfícies estendidas formadas pelo primeiro, segundo e terceiro componentes em conjunto, se o segundo e o terceiro componentes estiverem presentes em ou abaixo- da concentração relativa combinada - de X.; Mais 79 especificamente, isto por exemplo significa que: a) as referidas superfícies estendidas formadas pelo primeiro e segundo componente sozinho, estando o segundo componente presente em uma concentração relativa de X, tenha uma propensão mais baixa para superar as barreiras com os poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes do atravessamento do poro do que as superfícies estendidas formadas pelo primeiro, segundo e terceiro componente, se o segundo e terceiro componentes estiverem presentes em ou abaixo de uma concentração combinada de X em comparação com a concentração do primeiro componente; ou também b) tais superfícies estendidas formadas pelo primeiro e terceiro componente sozinho, estando o terceiro componente presente em uma concentração relativa de X, tem uma propensão mais baixa para superar as barreiras com os poros pelo menos 50 % mais pequeno do que o diâmetro do agregado médio antes do atravessamento do poro r do que as superfícies estendidas formadas pelo primeiro, segundo e terceiro componente, estando o segundo e o terceiro componentes em conjunto presentes em ou abaixo de uma concentração de X em comparação com a concentração do primeiro componente.

Em adição os agregados de superfície estendida suspensos em um meio líquido são fornecidos, que compreendem: pelo menos um primeiro componente anfipático; pelo menos um segundo componente anfipático; pelo menos .um terceiro componente anfipático; sendo o primeiro componente anfipático um componente de lípido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente, componentes que destabilizam a membrana, tal que o terceiro componente é um NSAID; e a inclusão do segundo ou do terceiro componente de uma outra maneira de duas misturas de componente anfipático aumenta o fluxo da suspensão{em uma dada pressão de trans-barreira, delta p) através dos poros pelo menos 50 % mais pequeno do que o diâmetro do agr-egado- -médio antes da penetração em comparação com- o fluxo dos- 80 agregados que contêm a suspensão que compreendem simplesmente o primeiro e o segundo ou o primeiro e o terceiro componentes, respectivamente. Mais especificamente, a inclusão do terceiro componente aumenta o fluxo da .referida suspensão comparada com o fluxo da suspensão que contém agregados mais simples que compreendem simplesmente o primeiro e o segundo componente ou também a inclusão do segundo componente aumenta o fluxo da referida suspensão comparada com o' fluxo da suspensão que contém agregados mais simples que compreendem simplesmente o primeiro e o terceiro componente.

Além disso, os agregados de superfície estendida suspensos em um meio líquido compreendem: pelo menos um primeiro componente anfipático; pelo menos um segundo componente anfipático; pelo menos um terceiro componente anfipático,· sendo o primeiro componente anfipático um componente de lipido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente, componentes destabilizam a membrana, tal que o terceiro componente é um NSAID e que a adição do segundo ou do terceiro componente a uma mistura originalmente de dois componentes aumenta a adaptabilidade do agregado dos agregados de superfície estendida resultantes com pelo menos três componentes em comparação com os agregados- que contêm as respectivas combinações do primeiro e do terceiro ou do primeiro e do segundo componentes sozinhos. Mais especificamente, a inclusão do terceiro componente aumenta a adaptabilidade do agregado de um agregado de superfície estendida que compreende o primeiros e o segundo componentes sozinhos; ou também, a inclusão do segundo componente aumenta a adaptabilidade do agregado de um agregado de superfície estendida que compreende o primeiro e o terceiro componentes sozinhos. A' especificação descreve adicionalmente os agregados· de superfície- 81 estendida suspensos em um meio liquido, que compreendem: pelo menos um primeiro componente antipático; pelo menos um segundo componente antipático; pelo menos um terceiro componente antipático; sendo o primeiro componente antipático um componente de lípido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente, componentes. de destabilização dos agregados,' tal que o terceiro componente é um NSAID; e a inclusão do segundo ou do terceiro componente a uma mistura de outra maneira diferente de dois componentes antipáticos baixa a pressão de direcção necessária para a penetração no agregada de poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes da penetração em comparação com os agregados que compreendem simplesmente o primeiro e o segundo ou o primeiro e o terceiro componentes, respectivamente. Mais especificamente, a inclusão do segundo componente baixa a pressão de direcção necessária para a penetração do agregado de poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes da penetração em comparação com os agregados que compreendem simplesmente o primeiro e o terceiro componentes; alternativamente, a inclusão do terceiro componente baixa a pressão de direcção necessária para a penetração do agregado de poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes da penetração em comparação com os agregados que. - compreendem simplesmente o primeiros e o segundo componentes. É um aspecto adicional desta invenção o de fornecer agregados dè superfície estendida suspensos em um meio liquido, que compreendem: pelo menos um primeiro componente antipático; pelo menos um segundo componente antipático; pelo menos um terceiro componente antipático; sendo o primeiro componente antipático um componente de lípido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente componentes que destabilizam a membrana, tal que o terce-íro componente’·' é um NSAID- e a -inclusão· do· segunde ou do· 82 terceiro componente a uma mistura de outra maneira diferente de dois componentes anfipáticos aumenta a capacidade de deformação de agregados de superfície estendida comparados cornos agregados que compreendem simplesmente o primeiro e o segundo ou o primeiro e o terceiro .componente, respectivamente.. Mais especificamen.te, a. inclusão do terceiro componente aumenta a capacidade de deformação dos agregados de superfície estendida comparados com os agregados que compreendem simplesmente o primeiro e o segundo componente; alternativamente, a inclusão do segundo componente aumenta a capacidade de deformação do agregado de superfície estendida comparado com os agregados que compreendem simplesmente o primeiro e o terceiro componente. A invenção ensina a preparação e a utilização dos referidos agregados de superfície estendida na forma de vesículas cheias de líquido fechadas na membrana, pelo qual o referido primeiro componente é um lípido que forma a membrana, e o referido segundo e terceiro componentes são componentes que destabilizam a membrana. A descrição descreve suspensões de agregados de superfície estendida em um meio líquido que compreendem: pelo menos um primeiro . componente anfipático-; pelo menos um . segundo componente anfipático; pelo menos um terceiro componente anfipático; sendo o primeiro componente anfipático um componente de lípido que forma a membrana; sendo o segundo e o terceiro componente, componentes que destabilizam a membrana, tal que o terceiro componente é um fármaco anti-inflamatório não esteroidal (NSAID) e tal que os referidos agregados de superfície estendida podem penetrar a pele de um mamífero Intacta, aumentando assim a concentração de NSAID na pele e/ou aumentando o alcance da distribuição NSAID abaixo da pele, em comparação com o resultado da mesma aplicação de NSAID em uma solução sobre--a -pele. Em·-uma' versão especial- da das referidas- 83 suspensões, os referidos agregados de superfície estendida são vesículas cheias de líquido, fechadas na membrana, o referido primeiro componente é um lipido que· forma membrana, e o referido segundo e terceiro componentes são componentes que destabilizam a membrana. ...... É também um aspecto desta invenção o de fornecer as referidas suspensões em que o terceiro componente é um NSAID, como definido em cima, o mais preferivelmente é um cetoprofeno, ibuprofeno, diclofenac, indometacina, naproxeno ou piroxicam. Para preparar as referidas suspensões com estes ou outros ingredientes de NSAID, o primeiro componente que forma membranas, estável, é seleccionado a partir do grupo que consiste de lípidos, lipóides, de uma fonte biológica, os lípidos ou os lipóides sintéticos correspondentes, ou as suas modificações. Neste contexto é preferível seleccionar entre glicéridos, glicolípidos, glicerofosfolípidos, isoprenoidlípidos, esfingolípidos, esteróides, esterinas ou esteróis, lípidos que contêm enxofre, lípidos que contêm pelo menos um. resíduo de carboidrato, ou outros derivados gordos polares. Especificamente, a escolha preferencial são os grupos de fosfatidilcolinas, fosf atidiletanolaminas, f osf atidilgliceróis, fosf a.tidil-inositóis, ácidos- fosfatídicos, . fosfatidilserinas,..........:esf-íngomie.linas, esfingofosfolípidos, glicosfingolípidos, cerebrósidos, ceramidpoli-hexósidos, sulfatidas, esfingoplasmalógenos, ou gangliísidos.

Para fabricar uma:formulação farmacêutica, pode ser aconselhável ou necessário preparar o produto em vários passos, modificando a temperatura, o pH, a força do ião, o componente individual (por exemplo o destabilizador da membrana, o' estabilizador de formulação ou o microbicida) ou a concentração de lipido total, ou a viscosidade da suspensão durante o processo. 84

As recomendações bastante detalhadas na preparação das referidas combinações são dadas nos documentos EP 0 475 160 e USP 6 165 500, os quais são aqui . incluídos por referência, usando material de filtração com diâmetros de· poro entre 0,01 μιη e 0,1 pm, mais preferivelmente com diâmetros de poro entre 0,02 pm e- 0,3 pm e mesmo mais aconselhável filtros com diâmetros de poro entre .0,05 pm e 0,15 pm para homogeneizar a .suspensão de vesícula final, quando a filtração é usada para o objectivo. Outros métodos ' de homogeneização mecânica ou para a preparação de vesícula de lípido conhecidos na técnica também são úteis.

Uma lista de agentes de engrossamento relevantes e praticamente úteis é dada por exemplo no documento PCT/EP98/08421, o qual também sugere numerosos mícrobicidas e antioxidantes interessantes; as secções correspondentes do documento PCT/EP98/08421, por conseguinte, estão incluídas na presente aplicação por referência. As experiências práticas confirmaram que os sulfitos, tais como o sulfito de sódio, o sulfito de potássio, o bissulfito e o metassulfito; e potencialmente outros antioxidantes solúveis em água, os quais também contêm um átomo de enxofre ou também de fósforo(por exemplo em pirosulfato, pirofosfato, polifosfato), eritorbato, tartarato, glutamato., .etc. ou mesmo L-triptofano), de maneira ideal com um espectro de actividade semelhante àquele dos sulfitos) oferecem alguma protecção anti-oxidativa às referidas formulações, sendo a selecção final sujeita a constrangimentos reguladores. Qualquer antioxidante hidrofílico deve sempre ser combinado com um antioxidante. lipofílico, no entanto, tal como o BHT (hidroxitolueno butilado·) ou- o BHA (hidroxianisole butilado). É um aspecto adicional desta' invenção o de ensinar que o primeiro componente de suspensão é preferivelmente seleccionado entre os -lípidos, com uma . ou· duas, não neces-sar-iamente -idênticas -cadeias, 85 gordas, especialmente com acilo, alcanoilo, alquilo, alquileno, alcenoilo, alcoxilo, ou cadeias com segmentos ramificados de omega-ciclo-hexilo, ciclo-propano, isso ou anteiso, ou as misturas de cadeias correspondentes. As cadeias úteis incluem n-decilo, n-. dodecilo · (laurilo), n-tetradecilo (miristilo), n-hexadecilo (palmitilo), n-octadecilo (estearilo), n-eicosilo (araquinilo), n-docosilo (be-henilo) ou n-tetracosilo (lignocerilo), 9-cis-dodecenilo (lauroleilo), 9-cis-tetradecenilo (miristoleilo), 9-cis-hexadecenilo (palmitoleinilo), 9-cis-octadecenilo (petroselinilo), 6-trans-octadecenilo (petroselaldinilo) , 9-cis-octadecenilo (oleilo), 9-trans-octadecenilo (elaidinilo), 9-ci.s-eicosenilo (gadoleinilo), 9-cis-docosenilo (cetoleinilo) ou 9-cis-tetracosoilo (nervonilo), n-deciloxilo, n-dodeciloxilo (lauriloxilo), n-tetradeciloxilo (miristiloxilo), n-hexadeciloxilo (cetiloxilo), n-octadeciloxilo (esteariloxilo), n-eicosiloxilo (araquiniloxilo), n-docosoiloxilo (be-heniloxilo) ou ri-tetracosoiloxilo (lignoceriloxilo) , 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleiloxilo), 9-cis-tetradeceniloxilo (miristoleiloxilo) , 9-cis-hexadeceniloxilo (palmitoleiniloxilo), -6-cis-octadeceniloxilo, (petroseliniloxilo), 6-trans-octadeceniloxilo (petroselaidiniloxilo) , 9-cis- octadeceniloxilo (oleiloxilo), 9-trans-octadeceniloxilo (elaidiniloxilo), e 9-cis-eicosenilo . (gadoleiniloxilo), 9-cis-docosenilo (cetoleiniloxilo), ou 9-cis-tetracosoilo (nervoniloxilo) , n-decanoiloxilo, n-dodecanoiloxilo . (lauroiloxilo), n- tetradecanoiloxilo (miristoiloxilo), n-hexadecanoiloxilo (palmitoiloxilo),. n-octadecanoiloxilo (estearoiloxilo), n-eicosanoiloxilo (araquinoiloxilo), n-n-docosoaniloxilo (be-henoiloxilo) e n-tetracosanoiloxilo (lignoceroiloxilo), 9-cis-dodeceniloxilo (lauroleoiloxilo), 9-cis-tetradecenoiloxilo (miristoleoiloxilo), 9-cis-hexadecenoiloxilo (palmitoleinoiloxilo), 6-cis-octadecenoiloxilo (petroselinoíloxilo), 6-trans- octadecenoiloxilo (petroselaidinoiloxilo)·, 9-cis-ioctadecenoiloxilo 86 (oleoiloxilo), 9-trans-octadecenoiloxielaidinoiloxilo), e 9-cis-eicosenoiloxilo (gadoleinoiloxilo), 9-cis-docosenoiloxilo (cetoleinoiloxilo) e 9-cis-tetracosenoiloxilo (nervonoiloxilo) ou as cadeias de derivado de esfingosina correspondentes, ou as combinações de ligações duplas, correspondentes, especialmente na sequência 6,9-cis, 9,12-cis ou, no caso, 12,15-cis ou também as combinações das três ligações duplas relacionadas, especialmente na sequência, 6,9,12-cis, ou 9,12,15-cis são preferíveis. Uma escolha preferida no caso de fosfatidilcolinas de origem biológica, e preferivelmente de plantas, é a de utilizar os lípidós extraídos da soja (feijão), coco, azeitona, cártamo ou girassol, linhaça, onagra, prímula, ou óleo de castor, e os semelhantes, outras fontes biológicas de disponibilidade geral, tais como os ovos, sendo também uma opção.

De acordo com a invenção o segundo componente de suspensão, o qual tende a destabilizar as membranas do lípido, é preferivelmente um agente tensioactivo. 0 agente tensioactivo seleccionado pode pertencer ao grupo de agentes tensioactivos catiónicos e aniónicos, híbridos iónicos e não iónicos. Preferencialmente, qualquer tal agente tensioactivo é escolhido para ter a solubilidade no meio líquido na .variação de . aproximadamente 5 x IO-7 M a aproximadamente. 10~2 M. .Uma definição alternativa de agente tensioactivos úteis para a utilização nas referidas suspensões de agregados de superfície estendida refere-se à proporção de hidr.of ilicidade-lipofilicidade (HLB) , a qual deve estar entre 10 . e 20, preferivelmente entre 12 e 18 e o mais preferencial entre 13 e 17. Uma boa escolha de agentes tensioactivos não iónicos de· acordo com esta invenção são os ésteres de cadeia gorda longa de polietilenoglicol-sorbitano, de ésteres ou de éteres de cadeia gorda longa de polietilenoglicol. e de ésteres ou de éteres de eadeia- gorda- longa -de poli-hidroxietileno; preferivelmente, o 87 número de unidades de etilenoglicol ou de hidroxietíleno por tal molécula de agente tensioactivo é seleccionado para estar na variação de 6 a 30, mais çonvenientemente para estar entre 8 e 25 e o mais e tipicamente estar entre 12 a 20. Alternativamente, os fosfolípidos não iónicos .com . a solubilidade em ág.ua . semelhante àquela dos referidos agentes tensioactivos não iónicos, podem ser usados para o mesmo efeito. Os exemplos incluem liso-fosfolípidos, certos fosfatidilgliceróis, fosfolípidos com uma cadeia (C1-C6) longa e uma curta, etc. Para assegurar a fluidez suficiente dos agregados de superfície estendida complexos resultantes, a cadeia .hidrofóbica ligada a tais grupos polares é preferençialmente escolhida para ser sufi.cientemente curta ou para ser não saturada; o polietilenoglicol-sorbitano^monolaurato e o polietilenoglicol-sorbitano-mono-oleato, o polietilenoglicol-monolaurato e o polietilenoglicol-mono-oleato ou o polietilenoglicol-monolaurato-éter e o polietilenoglicol-mono-oleato-éter são boas escolhas neste aspecto. Mais especificamente, é preferível no contexto desta invenção, usar um agente tensioactivo o qual é o polietilenoglicol-sorbítano-mono-oleato ou monolaurato (por exemplo Tween 80 ou Tween 20) ou também é o pplietilenoglicol-oleato ou laurato(isto é o POE-oleato ou o POE-laurato) ou também é o polietilenoglicol-oleilo-éter ou. o laurilo-éter, com 6 a .30, mais preferivelmente .8 a 15 e o mais preferido 12 a 20 unidades de etilenoglicol (isto é oxietileno ou OE) por molécula de agente tensioactivo. É um outro aspecto desta invenção o de combinar, na referida suspensão,, uma fosfatidilcolina, como o primeiro componente, e o cetoprofeno, diclofenac,. ibuprofeno, indometacina, naproxeno, ou piroxicam, como o terceiro, componente, NSAID. Uma escolha preferida é a combinação de fosfatidilcolina de soja, como o primeiro, e de cetoprofeno, diclofenac, ibuprofeno, indometacina, naproxeno ou pi-roxicam-como o terceiro componente." - · · · ; - 88

Em uma forma de realização preferida da invenção, o. segundo componente é um agente tensioactivo não ióníco, tal como um éster de cadeia gorda longa de polietilenoglicol-sorbitano, um éster de cadeia gorda longa de. polietilenoglicol ou um éter de. cadeia, gorda, longa de polietilenoglicol ou o agente tensioactivo correspondente com um grupo polar de poli-hidroxietileno. Uma escolha preferida é a- utilização de polietilenoglicol-sorbitano-mono-oleato ou laurato, de polietilenoglicol-mono-oleato ou -laurato, ou de pò.lietilenoglicol-oleilo-éter ou -laurilo-éter como o segundo componente. Na suspensão resultante, o segundo componente é preferivelmente escolhido para transportar um polietilenoglicol (’PEG ou POE) de cabeça polar com 6 a 30, mais preferivelmente 8 a 15 e o mais preferivelmente 12 a 20 unidades de etilenoglicol (isto. é oxietileneo ou OE) por . molécula de agente tensioactivo. Alternativamente, os fosfolípidos não iónicos, com a solubilidade em água semelhante àquela dos referidos agentes tensioactivos não iónicos, podem ser usados para o objectivo semelhante. Além disso, as cadeias hidrofóbícas são sempre escolhidas para estarem em um estado fluido ou pelo menos serem compatíveis com tal estado de um agregado portador.

Em uma outra forma de realização preferida desta invenção é a de fornecer as referidas suspensões tal que contenham agregados com um diâmetro médio antes dos agregados penetrarem os poros de pelo menos 40 % maior do que o diâmetro de poro médio na barreira de interesse. Em uma forma de realização preferida da invenção, os agregados de superfície estendida são propostos .para terem . um diâmetro do agregado médio que é pelo menos de 50 % maior antes da penetração no poro do que o diâmetro de poro médio.

Preferivelmente, o diâmetro do agregado médio antes dos agregados penetrarem os poros- é pelo menos de 70 -'%,.....mesmo- mais 89 preferivelmente é pelo menos de 100 % e o mais preferivelmente é pelo menos de ' 150 % maior do que o diâmetro de poro médio.

Um outro aspecto da invenção é ode fornecer suspensões nas quais o primeiro componente e o segundo, componente . se diferenciam na solubilidade no meio liquido pelo menos em 10 vezes, em média. A diferença preferida na solubilidade entre o segundo e o terceiro componente é, em média, pelo menos de 2 vezes. A referida suspensão compreende uma massa.seca total de pelo menos três componentes anfipáticos entre 0,01 % em peso e 50 % em peso. Uma escolha mais preferida é a de conservar esta massa seca total entre 0,1 % em peso e'40 % em peso, melhor conservá-la mesmo entre 0,5 % em peso e 30 % em peso e melhor é· seleccionar a massa seca total de três componentes anfipáticos entre 1 % em peso e 15 % em peso, no momento da preparação da formulação e/ou da aplicação.

Ainda um outro aspecto da invenção deve fornecer suspensões de agregados de superfície estendida, formados pelos três componentes, com uma curvatura média correspondente ao diâmetro do agregado médio entre 15 nm e 5000 nm, preferivelmente entre 30 nm e 1000 nm, mais preferido entre 40 nm e 300. .nm e o mais preferido entre 50 nm e 150 nm.

Um aspecto diferente da invenção deve defender a utilização de suspensões de agregados de superfície estendida que contêm um álcool alifático mais baixo com um coeficiente de partição de membrana e polaridade tal que o álcool, como pelo menos um segundo componente adicional, tem o papel de um componente que destabiliza a membrana. Os álcoois que se qualificam potencialmente para tal utilização incluem os mono-álcoois, dióis, ou até certo ponto po-lióis, de baixo número -de-carbono ;(G1-C6},’ e os seus éteres; os 90 exemplos preferidos são o etanol, o isopropanol, o 1,2-propanediol, o propileno glicol, o glicerol, o etilenoglicol, o éter de monobutilo ou de monoetilo de etilenoglicol, o monometilo de propilenoglicol, o éter de monoetilo ou de monobutilo, o éter de monometilo ou de -monoetilo de dietilenoglicol e os produtos, análogos. A escolha preferida são os álcoois simples, os dióis de cadeia curta ou os trióis de cadeia curta, preferivelmente com os resíduos de OH agrupados em conjunto, os derivados de metilo, etilo, ou butilo correspondentes sendo também uma possibilidade. Isto inclui especialmente n-propanol, iso-propanol, ou 2-propanol, n-butanol, ou 2-butanol, 1,2-propanodiol, 1,2-butanodiol; se o etanol for usado, o álcool total e a concentração de lipido são seleccionados tal que a associação de etanol praticamente útil com um agregado que penetra no poro é assegurada. Especificamente, se usado individualmente para aumentar a adaptabilidade do agregado de superfície estendida, o etanol, n-propanol, 2-propanol, butanol, e o álcool de benzílo são preferivelmente usados em concentrações de até 15 % em peso, 10 % em peso, 8 % em peso, 4 % em peso e 2 % em peso, respectivamente, no caso de uma suspensão de lipido total inicialmente de 10 % em peso. Os coeficientes, de partição da membrana de água publicados para outros álcoois podem ser usados em conjunto com estas recomendações para selecciona.r. . a. .concentração preferida de outros álcoois, ou das combinações de álcool. A invenção fornece preparações farmacêuticas que compreendem suspensões de acordo com a invenção. Uma forma muito conveniente e preferida de agregados em tal suspensão é a das vesículas enchidas por líquido em um meio aquoso, sendo as vesículas cercadas por membranas formadas de pelo menos um 'componente de lipido e compreendem pelo menos dois componentes que desestabilizam a membrana, um dos quais é um NSAID, pelo qual as superfícies -estendidas formadas pelo -primeiro e --segundo componente' so-zinho cu 91 também pelo primeiro e terceiro componente sozinho, o segundo ou o terceiro componente, respectivamente, estando presentes em uma concentração relativa de X, têm uma propensão mais baixa para superar as barreiras com poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes do atravessamento do poro do que as superfícies estendidas formadas pelo primeiro, segundo e terceiro componente em conjunto, se o segundo e o terceiro componentes estiverem presentes em ou abaixo da concentração relativa combinada de X. É também um aspecto importante da invenção, ensinar as preparações farmacêuticas que compreendem uma suspensão de vesículas enchidas por líquido em um meio aquoso, sendo as vesículas cercadas por membranas formadas pelo menos por um componente de lípido e que compreendem pelo menos três componentes que destabilizam a membrana, pelo qual os componentes que destabilizam a membrana compreendem pelo menos um agente tensioactivo, pelo menos um álcool alifático mais baixo e pelo menos um fármaco anti-inflamatório não esteroidal; tal que os componentes que destabilizam a membrana aumentam a adaptabilidade dos agregados de superfície, estendida resultantes com pelo menos três componentes em comparação com os agregados que contêm as respec.ti.vas . combinações do primeiro e do terceiro ou do primeiro e do segundo componentes sozinhos. É- um aspecto adicional da invenção o de fornecer preparações farmacêuticas que compreendem uma suspensão de vesículas enchidas com líquido- num meio aquoso, sendo as vesículas cercadas por membranas formadas pelo menos por um componente de lípido é que compreendem pelo menos três componentes que destabilizam a membrana, pelo qual os componentes que destabilizam a membrana compreendem pelo menos um agente tensioactivo, pelo menos um álcool alifático mais baixo e -peio menos -um fármaco an-ti-ínf lamatório- não 92 esteroidal, tal que os componentes que destabilizam a membrana aumentam a capacidade de deformação das vesículas e as vesículas são capazes de penetrar nas barreiras com poros pelo menos 50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio antes da penetração sem-modificar o seu diâmetro em mais de 25 %. . É um aspecto diferente da invenção o de fornecer preparações farmacêuticas que compreendem uma suspensão de vesículas enchidas, por líquido em um meio aquoso, sendo a vesícula cercada por membranas formadas pelo menos por um componente de lípido e que compreende pelo menos três componentes que destabilizam a membrana, pelo qual os componentes que destabilizam a membrana compreendem um agente tensioactivo, um álcool alifático mais baixo e um fármaco anti-inflamatório não esteroidal, pelo qual os componentes que destabilizam a membrana aumentam a capacidade da vesícula de penetrar na pele de um mamífero e assim aumentarem o alcance da distribuição do NSAID na pele, e por outro lado, em comparação com o resultado de uma aplicação de NSAID em uma solução na pele.

Uma forma de realização preferida da invenção fornece preparações farmacêuticas que contêm as vesícula nas quais uma fosfatidilcolina ...tem. o. papel do, primeiro componente e um NSAID, ..tal., como o cetoprofeno, diclofenac, ibuprofeno, indometacina, naproxeno, ou piroxicam é o terceiro componente.

Em uma outra forma de realização preferida da invenção as preparações .farmacêuticas contêm um agente tensioactivo não iónico, preferivelmente um éster de cadeia gorda longa de polietilenoglicol-sorbitano,. m éster de cadeia gorda longa de polietilenoglicol ou um éter de cadeia gorda longa de polietilenoglicol, sendo a cadeia de polietilenoglicol potencialmente substituída por um grupo polar de poli-hidroxietilen©; Especificamente·-preferidos são o polietilenoglicol 93 -sorbitano-mono-oleato (por exemplo Tween 80) ou -laurato (por exemplo Tween 20) , ou também o polioxietileno-mono-oleato (por exemplo Cithrol 10MO / Chemax E-1000) ou -laurato (por exemplo Cithrol 10ML) ou também o polioxietileno-oleilo-éter (por exemplo Brij· 98) ou -laurilo-éter (por exemplo Brij 35). Alternativamente, os fosfolipidos não iónicos, com a solubilidade em água semelhante àquela dos referidos agentes tensioactivos não iónicos, são usados como um agente tensioactivo não iónico preferido.

Em uma forma de realização relacionada da invenção, as referidas preparações farmacêuticas contêm um álcool, o qual preferivelmente é seleccionado a partir de n-propanol, isopropanol, 2-propanol, n-butanol ou' 2-butanol, 1,2-propanodiol, ou 1,2-butanodiol, um seu derivado de metilo ou de etilo, ou etanol. Quando o etanol é usado, o álcool total e a concentração de lipido é escolhida para assegurar uma associação de etanol praticamente útil com um agregado que penetra no poro. É também um aspecto da invenção o de fornecer tais preparações farmacêuticas que são caracterizadas pelo volume do valor de .pH acima do logaritmo da constante (pKa) evidente de dissociação do NSAID em uma solução e.nos agregados de superfície estendida, sendo o último ' pKa mais elevado do que o anterior. Preferivelmente, o volume do valor de pH é seleccionado para estar entre unidades de pH de 0,2 e de pH de 2,2 acima do pKa do NSAID em um agregado de superfície estendida, mais preferivelmente está entre unidades de pH de 0,5 e de pH de 1,9 acima deste pKa e de maneira ideal está entre unidades de pH de 0,8 e de pH de 1,6 acima de tal pKa. Especificamente, para o NSAIDs especialmente interessantes, o cetoprofeno ou o ibuprofeno, o volume de pH seleccionado está entre 6,4 e 8,3, mais preferivelmente está entre 6,7 e 8 e o mais preferivelmente -está entr-e 7 e· =7,-7-,- - para o dielofenac-·-o-rvolume- 94 preferido de pH está entre 6,2 e 8,1, mais preferivelmente está entre 6,5 e 7,8 e o mais preferivelmente está entre 6,8 e 7,5; para o naproxeno o valor de pH preferido correspondente está entre 6,3 e 8,2, mais preferivelmente está entre 6,6 e 7,9 e o mais preferivelmente está entre 6,9 e 7,6; para o piroxicam a escolha do volume do pH da suspensão deve estar entre 7,2 e 9, mais preferivelmente entre 7,3 e 8,5 e o mais preferivelmente entre 7,4 e 8,2 . É um outro aspecto da invenção o de seleccionar a força iónica do volume da referida preparação farmacêutica para estar entre 0,005 e 0,3, mesmo melhor entre 0,01 e 0,2 e o melhor entre 0,05 e 0,15.

Na forma de realização preferida da invenção a referida formulação farmacêutica tem a viscosidade entre 50 mPa s e 30,000 mPa s. Preferivelmente, a viscosidade da formulação é escolhida para estar entre 100 mPa s e 10.000 mPa s, mesmo melhor entre 200 mPa s e 5000 mPa s, e o mais preferido entre 400 mPa s e 2000 mPa s. Para se conseguir tal viscosidade, pelo menos um agente de espessamento pode ser adicionado à referida formulação farmacêutica, dependendo a escolha e a concentração exactas de tal agente da temperatura do ambiente, do pH, da. força, de ião,, da presença, de outros modificadores de viscosidade (tal o como glicerol), etc..

Os agentes de espessamento que são úteis no contexto da presente invenção são tipicamente polímeros hidrofílicos farmaceuticamente aceitáveis, incluindo os derivados de celulose parcialmente eterifiçados, tais como carboxímetil-, hidroxietil-, hidroxipropil, hidroxipropilmetil- ou metil-celulose; os polímeros hidrofílicos completamente sintéticos, incluindo os poliacrilatos, poli-metacrilatos, poli(hidroxietil)-, poli(hidroxipropil)-, poli (-hidroxipropilmetil)metacrilato,— - poliacriloni-trilos/· metalil- 95 sulfonatos, polietilenos, polioxietilenos, polietilenoglicóis, polietilenosglicol-lactidos, polietilenoglicol-diacrilatos, poli-vinilpirrolidonas, álcoois de polivinilo, poli(propil-meta-crilamida), poli (propileno fumarato-co-etilenoglicol), poloxâmeros, poliaspartamidas, (hidrazina- . de ligação transversal) ácidos hialurónicos, silicone; gomas naturais, tais como os alginatos, carraginato, goma de guar, gelatina, tragacante, pectina (amidada), xantano, colagéneo de chitosano, agarose; misturas e derivados adicionais ou os seus copolímeros e/ou outros polímeros biologicamente aceitáveis. A maior parte de tais agentes de espessamento na referida preparação farmacêutica são empregues na concentração de peso entre 0,1 % em peso e 10 % em peso.

Para a utilização de formulações farmacêuticas da invenção, o polímero hidrofílico seguinte é preferido, entre outros: os derivados de celulose parcialmente eterifiçados, tais como carboxímetil-, hidroxietil-, hidroxipropilcelulose ou entre os polímeros hidrofílicos completamente sintéticos da classe . dos poliacrilatos, tais como os polimetacrilatos, poli(hidroxietil) poli (hidroxiprop.il)poli (hídroxipropilmetil)metacrilato, especialmente os carbopóis.

Mais preferivelmente, tais espessantes de formulação .são escolhidos a partir do grupo de polissacáridos e dos seus derivados que são habitualmente usados na pele, incluindo por exemplo o ácido hialurónico ou hidroxipropilmetilcelulose; as escolhas particularmente preferidas· do grupo de poliacrilatos incluem o grupo de carbopóis, tais como os graus de carbopóis 974, 98 0, 981, 1382, 2 984, 5 984, em cada caso individualmente ou em combinação. No caso de carbopóis (po-r·" exemplo o Carbopol- 974), · usados para .96 tornar espessas as formulações de multi-componentes baseadas na suspensão para melhorar a libertação de NSAID através de barreiras de . permeabilidade e a pele, a concentração de polímero preferivelmente é seleccionada para estar entre 0,3 % em peso e 5 % em-peso, melhor entre 0,5 % em peso e 3 % em peso - e melhor entre 0,7 5 % em peso e 1,75 % em peso. As recomendações do fabricante para se obter uma certa viscosidade podem ser combinadas com essas concentrações de direcção para utilizar outros polímeros ou combinações de polímero em uma formulação para o objectivo semelhante. É uma outra forma de realização preferida da invenção a de utilizar pelo menos um anti-oxidante nas referidas formulações farmacêuticas, a qual é tipicamente seleccionado entre os compostos fenólicos sintéticos e os seus derivados, as substâncias que contêm ,o grupo de quinona, as aminas aromáticas, os derivados de etilenodiamina, vários ácidos fenólicos, tocoferóis e os seus derivados, incluindo os análogos da amida e da tiocarboxamida correspondentes; o .ácido ascórbico e os seus sais; primaquina, quinacrina, cloroquina, hidroxicloroquina, azatioprina, fenobarbital, acetaminofeno) ; os ácidos e derivados aminossalicílicos; metotrexato,. .. prob.ucol, os anti.oxidantes que contêm o átomo de fosfato ou de enxofre, a tio-ureia; os agentes de quelação, os sistemas de defesa endógenos diversos, e os antioxidantes enzimáticos, etc.. Preferidas são as combinações de pelo menos dois antioxidantes, sendo ura sendo lipofílico, tal como o hidroxianisol butilado (BHA), o hidroxitolueno butilado (BHT), o di-terc-butilfenol, ou butil-hídroquinona terciária (TBHQ), e sendo, o outro hidrofílico, tal como um agente de quelação, especialmente o EDTA, o GDTA, ou o desferrai, e/ou é um sulfito, tal como um metabissulfito de sódio ou de potássio, um •pirossulfato, pirofo-sfato - ou - polifosfato. =· -O— hidroxianisol 97 butilado(BHA) ou o hidroxitolueno (BHT) são tipicamente. usados em concentrações entre 0,001 % em peso e 2 % em peso, mais preferivelmente entre 0,0025 % em peso e 0,2 % em peso, e o mais preferivelmente está entre 0,005 % em peso e 0,02 % em peso; a concentração do EDTA ou do GDTA é, tipicamente escolhida entre, 0,001 % em peso e 5 % em peso, preferivelmente entre 0,005 % em peso. e 0,5 % em peso, mais preferivelmente entre 0,01 % em peso e 0,2 % em peso e o mais preferivelmente entre 0,05 e 0,975 % em peso; um sulfito, tal como o metabissulfito de sódio ou de potássio é usado preferivelmente ria variação de concentração entre 0,001 % em peso e 5 % em peso,· mais preferivelmente entre 0,005 % em peso e 0,5 % em peso, e o mais preferivelmente entre 0,01 % em peso e 0,15 % em peso.

Em formas de' realização preferidas da invenção as preparações farmacêuticas 'contêm pelo menos um microbicida na variação de' concentração entre 0,1 % em peso e 5 % em peso, como é necessário para a acção apropriada e como é aceitável por um corpo regulador.

Da mesma maneira, é preferido de acordo com a invenção que a proporção de concentração molar do componente de fosfolipido, o qual. forma .membranas de lípido estáveis, e do terceiro, .componente semelhante a um agente tensioactivo, o qual destabiliza tais membranas, nas referidas preparações farmacêuticas deve estar entre 40/1 e 4/1. Mais preferivelmente tal proporção molar está entre 30/1 e 7,5/1, as proporções entre 20/1 e 10/1 sendo as mais preferidas.

Adicionalmente descrito é um conjunto, que compreende , em um tubo ou uma forma empacotada de outra maneira, pelo menos uma dose da preparação farmacêutica que contém um NSAID associado com os agregados convenientes' para· -superarem · as barreiras^ biológicas - tal- 98 como a pele. A presente especificação descreve um método para tratar a dor periférica e/ou a inflamação aplicando a referida preparação farmacêutica, na pele de um mamífero de sangue quente.

Um aspecto adicional da invenção é o de seleccionar doses de formulação diferentes por área para controlar a profundidade da libertação do NSAID, utilizando se desejável um emplastro não oclusivo para o objectivo.

Em uma forma de realização especial da invenção pelo menos uma dose de um NSAID na referida formulação farmacêutica é aplicada, e a aplicação é repetida várias, por exemplo até cinco vezes por dia, se' necessário, sendo a escolha preferida de duas aplicações por dia.

Em preparações farmacêuticas presentemente preferidas o primeiro, isto é componente fosfolipido, e o terceiro, isto é os componentes de- NSAID, estão presentes na variação molar entre 10/1 e 1/1. Uma variação molar de variedade mais preferida destes dois componentes está entre .5/1 e 2/1, ou mesmo... .entre... 4/1 e 2,5/1 e a composição mais preferida tem uma proporção molar de fosfolípido/NSAID próximo de 3/1.

Por último mas não menos importante, é contemplado pela invenção a utilização de portadores transdérmicos, tipicamente na forma de agregados, de superfície estendida de penetração da barreira/ para libertarem os NSAIDs abaixo da pele e no tecido de músculo subjacente ou nas uniões adjacentes. -Uma - lista de- ingredientes - potenciais que podem ser usados -para 99 preparar formulações farmacêuticas de acordo com a presente invenção é dada na Cosmetic Ingredient Review {Compêndio de CIR), a qual é regularmente publicada em Washington, DC, e na apropriada Food and Drug Administration ou outras publicações de agências reguladoras nacionais, .incluindo a lista de compostos .de GRAS (Geralmente Reconhecida Como Segura). É além disso um objectivo explicito do documento, ensinar a utilização de combinações anfipáticas, como aqui descritas, como os portadores de fármacos, depósitos de fármacos, ou para outra espécie de aplicação medicinal ou biológica. Para o objectivo .as superficies estendidas necessárias são vantajosamente fornecidas na forma de membranas formadas por pelo menos uma primeira substância, pelo menos, uma segunda e pelo menos uma terceira substância, as quais em conjunto rodeiam as goticulas em miniatura. A substância com uma actividade biológica, tal como um fármaco, é depois principalmente associada com as referidas goticulas na superfície ou é principalmente incorporada na gotícula a ser transportada pela goticula ao local onde é suposto que a substância biologicamente activa actue.

As.........recomendações relativamente detalhadas .para ..preparar composições, como defendido nesta aplicação, são dadas nos documentos EP 0 475 160 e US 6 165 500, os quais são.aqui incluídos por referência. Quando a filtração é usada para preparar as suspensões de agregados, o material de filtração com diâmetros de poro entre 0,01 pm e 0,1 pm, mais preferivelmente com diâmetros de poro entre 0,02 pm e 0,3 pm e mesmo mais aconselhável com diâmetros de poro entre 0,05 pm e 0,15 pm são usados para homogeneização. O presente pedido de patente além disso ensina os métodos convenientes para - preparar as combinações tal que - resolvem os 100 problemas delineados fornecendo formulações convenientes de agentes biologicamente, cosmeticamente e/ou farmaceuticamente activos, compreendendo os passos de: a) seleccionar pelo menos uma primeira e pelo menos uma segunda substância as quais em conjunto formam superfícies estendidas, quando em contacto com o referido meio., de suspensão líquido, tal que as referidas superfícies estendidas formadas pelo .menos por uma primeira e pelo menos por uma segunda substância são mais adaptáveis do que pelo menos uma primeira substância sozinha e as superfícies formadas pelo menos por uma segunda substância sozinha não é estendida; alternativamente; b) seleccionar pelo menos uma primeira e pelo menos uma terceira substância as quais em conjunto formam superfícies estendidas, quando em contacto com o referido meio, tal que as referidas superfícies estendidas.formadas pelo menos por uma primeira e pelo menos por uma terceira substância são mais adaptáveis do que pelo menos uma primeira substância sozinha e as superfícies formadas pelo menos por uma terceira substância sozinha não são estendidas, se esta substância se auto-agregar; e c) gerar a referida combinação de pelo menos uma primeira, pelo menos uma segunda, e pelo menos uma terceira substância, tal que a superfície de pelo menos a combinação de três componentes resultante é mesmo mais adaptável do que a superfície preparada de pelo menos uma primeira e uma segunda substância sozinha ou das superfícies formadas pelo menos por uma primeira e por uma terceira substância sozinha, trazendo a combinação de pelo menos das referidas duas ou das três substâncias em suspensão por meio- da fragmentação mecânica controlada, preferivelmente na presença de ou antes de serem misturadas com pelo menos- uma terceira substância, tal que a referida terceira substância é incorporada pelo menos em parte na referida superfície estendida formada pela fragmentação mecânica controlada para se obter a preparação final. 101 É particularmente preferido usar a filtração, a modificação de pressão ou a homogeneização mecânica, ou também a agitação, a movimentação, ou a mistura como os referidos meios da fragmentação mecânica controlada. As características intermediárias ou finais desejáveis do meio liquido usado para preparar, a suspensão do agregado são definidas em parágrafos anteriores desta secção. 0 presente'pedido de patente além disso ensina os métodos baseados na utilização 'pelo menos das referidas misturas quaternárias que contêm pelo menos um agente activo seleccionado a.partir do grupo que compreende agentes anti-diabéticos, factores de crescimento, imunomoduladores, enzimas, .moléculas de .reconhecimento, adrenocorticostáticos, adrenolíticos, andrógenos, anti-andrógenos, anti-parasíticos, anabólicos, anestésicos, analgésicos, análépticos, anti-alérgicos, anti-arrítmicos, anti-artero.scleróticos, anti-asmáticos, broncospasmoliticos, antibióticos, anti-drepressivos, anti-psicóticos,. antídotos, anti-eméticos, anti~epil.epticos, anti-fibrinolíticos, anti-convulsivos, anti-colinergicos, enzimas, coenzimas ou inibidores correspondentes, anti-histamínicos, anti-hipertónicos, inibidores biológicos da actividade de fármaco, anti-hipotónicos, anti-coagulantes, anti-micóticos ,. anti-miasténicos,. agentes . contra a Doença de Parkinson congénita ou a Doença de Alzheimer congénita, anti-flogísticos, anti-piréticos, anti-reumáticos, anti-sépticos, analépticos respiratórios ou estimulantes respiratórios, broncolíticos, cardiotónicos, . quimioterapêuticos, dilatadores coronários, citostáticos, diuréticos, bloqueadores de gânglios, glucocorticóides, agentes anti-gripais, hemostáticos, hipnóticos, substâncias imunologicamente activas, contraceptivos, agentes anti-enxaqueca, mineralo-corticóides, morfina-antagonistas, relaxantes musculares, narcóticos, neuroterapêuticos, neurolépticos, neurotransmissores ou os seus antagonistas, péptidos, derivado-s de

I 102 péptidos, oftálmicos, simpaticomiméticos ou simpaticolíticos, para-simpaticomiméticos ou para-simpaticolíticos, fármacos anti-psoríase, fármacos neurodérmicos,. midriáticos, psicostimulantes, rinológicos, agentes de indução do sono ou os seus antagonistas, agentes de sedação, espasmolíticos,. tuberculostáticos, urológicos, vasoconstrictores ou vasodilatadores, virustáticos, substâncias de cura de feridas, ou uma combinação dos agentes acima mencionados. 0 método acima mencionado pode contar com a utilização pelo menos das três substâncias anfifílicas recomendadas como tal, ou também em dissolvidas em um fluido .polar fisiologicamente^ compatível, compreendendo fluidos em água ou misciveis em água, ou em um agente de mediação de solvação, em conjunto com uma solução polar. A utilização de co-solventes é também possível.

Um método preferencial, especialmente prático para preparar as referidas as formulações de agregados contêm pelo menos um agente tensioactivo ou um anfipático semelhante a um agente tensioactivo, o qual destabiliza a membrana de bi-camada, e pelo menos mais um ingrediente biologicamente activo que destabiliza a membrana, ou um agente tensioactivo. adicional na referida solução polar.

Em caso de necessidade, o método pode incluir a formação das. referidas superfícies induzidas pela adição de um ou vários componentes de agregado ou de formulação em uma fase fluida, por exemplo usando a evaporação de uma fase inversa, a injec.ção ou a diálise, ou mesmo por pressão mecânica adicional.

Além disso, pode ser preferido utilizar o método de preparação no qual a formação das referidas superfícies é induzida pela filtração, tendo o material de filtração poros entre 0,01 pm e 0,8 pm de largura. A escolha do diâmetro de poro mais conveniente ou favorável -depende- das -dimensões^ do agregado finais desejadas e 103 também do fluxo de suspensão antecipado ou conseguido por um filtro. As taxas de fluxo mais elevadas produzem um corte mais forte e, o diâmetro de vesícula final relativamente mais pequeno, sendo também a viscosidade da suspensão importante.

Quando a filtração é usada para fabricar as suspensões do agregado, pode ser conveniente usar vários filtros em sequência ou em paralelo. No caso anterior, os diâmetros de poro em filtros diferentes podem variar em diâmetro.

Um método vantajoso preferido para preparar suspensões de acordo com a invenção presente é tal que assegura que os referidos agentes e portadores se associam, pelo menos parcialmente, depois da formação das referidas superfícies estendidas.

Para a melhor conveniência, as referidas superfícies estendidas, com as quais as moléculas do agente são feitas para se associarem, podem ser preparadas justamente antes da aplicação da formulação. Se desejado, e possível, isto pode ser feito a partir de um concentrado conveniente ou de um liofilisado. Ê praticamente conveniente usar um recipiente, único que compreende a composição farmacêutica seleccionada baseada na combinação de substâncias como descrito no texto anterior. É também conveniente fazer do referido recipiente uma parte de uma embalagem. O presente pedido de patente além disso ensina um método para gerar um efeito terapêutico em uma criatura de sangue quente aplicando uma composição farmacêutica apropriadamente seleccionada sobre ou dentro do corpo de uma criatura inicial, pelo qual a selecção de uma combinação conveniente de substâncias é feita de acordo com as reivindicações deste documento. .....- 7 - - - - 104 A aplicação especial do método descrito aqui é a de escolher tal volume de administração que assegure o controlo sobre a dose de medicamento aplicada e o resultado da aplicação terapêutica.

Pode ser preferido, e praticamente valioso, carregar uma suspensão de agregados livres de fármaco com o fármaco, através de associação, durante o dia antes de uma administração, preferivelmente dentro de 360 minutos, mais preferivelmente dentro de 60' minutos e o mais preferivelmente dentro de um periodo de 30 minutos antes da administração da formulação resultante em ou no corpo. 0 método do tratamento feito de acordo com a presente invenção envolve tipicamente a' administração de pelo menos uma dose da composição farmacêutica com a actividade terapêutica em ou num animal de sangue quente.

Por último mas não menos importante, a presente invenção ensina um método para encontrar composições convenientes, como descrito aqui. Este método compreende os passos de: a) determinar do fluxo dos agregados em uma suspensão associada com um fármaco através dos poros em uma barreira.bem definida, ou várias barreiras, como. uma função da força motriz ou da pressão de direcção, a qual actua através da barreira; b) descrever os dados dentro do sistema de um modelo conveniente tal que ajuste o fluxo caracteristico contra a pressão ou a capacidade de penetração contra a curva de pressão; c) deduzir os parâmetros de sistema caracteristicos, tal como o p* e o Pmaxf especialmente; d) empregar os referidos parâmetros para optimizar ou caracterizar a formulação para a aplicação. Eq. (*) é recomendado como, e é reivindicado aqui para ser, especialmente conveniente para descrever e analisar tais dados. 105

Exemplos Práticos

Os exemplos seguintes ilustram a invenção· sem estabelecer ou delinear os seus limites. Todas as temperaturas estão em graus Celsius. Os diâmetros dos portadores estão em nanómetros, as pressões em Pascal (Pa.) e as outras unidades correspondem ao sistema de SI padrão. As proporções e as percentagens são dadas em moles, a menos que declarado de outra maneira.

Todas as medições foram feitas à temperatura ambiente, excepto quando especificado de outra maneira. Para a adaptabilidade do agregado / medições de resistência ao transporte de barreira a temperatura de teste foi constante dentro de mais/menos 2 graus. Para as medições do tamanho do agregado a exactidão da temperatura foi mais/menos de 0,1 graus. 0 valor, de pH da suspensão de volume foi determinado com um eléctrodo comercial (gel). Todas as substâncias foram usadas como recebidas e foram de qualidade p.a., a menos que declarado de outra maneira. As massas molares foram tidas como sendo idênticas aos dados de referência publicados'. A viscosidade da suspensão foi medida com um viscosimetro de rotação, tipicamente à temperatura ambiente e utilizando 20 RPM, as. quais corresponderam a 150 1/s.

Determinação da Resistência do Transporte de Barreira e da Adaptabilidade do agregado. A resistência da barreira ao transporte da suspensão de vesícula em pedidos de patentes anteriores pelo mesmo requerente foi chamada de resistência "de permeação". Neste documento, o termo mais preciso de resistência "de penetração" é usado para realçar o facto das vesículas não se- difundirem (=introduzirem) através de mas 106 penetrarem bastante nas barreiras. Numa primeira aproximação conta-se com um método experimental simples (SEM) e toma-se a resistência de transporte da barreira (em unidades arbitrárias) como sendo proporcional à pressão (em unidades arbitrárias) necessárias para dirigir uma suspensão de vesículas relativamente grandes através de um filtro de micrómetro 0,2 com uma boa eficácia. (Na nossa experiência, um filtro poroso actua como uma barreira de permeabilidade quando o diâmetro de poro médio é pelo menos de 40 % a 50 %, para as vesículas maiores e mais pequenas do que 150 nm, respectivamente, e mais preferivelmente é pelo menos de 100 % mais pequeno do que o diâmetro de vesícula médio na suspensão testada), A resistência de transporte da barreira é depois dada em unidades relativas de 1 para 10 em outros documentos (no documento EP 0 475 160 e USP 6 165 500) e neste documento sempre que a referência seja feita a um filtro de micrómetro 0.2. A capacidade de penetração da barreira, a qual em publicações mais antigas é chamada de permeabilidade, é identificada com o valor de resistência de barreira inverso. A adaptabilidade do agregado é uma função directa do antigo valor, como é explicado por exemplo em Criticai Reviews in. Therapeutic Drug Carrier Systems 13:257-388 (1996) ou em Adv. Drug Delivery Rev. 18:349-378 (1996). . A utilização da capacidade de penetração relativa e dos valores de resistência da barreira é também conveniente. Estes valores são dados pela proporção da capacidade de penetração/permeabilidade ou dos valores de resistência da barreira correspondentes medidos com uma dada suspensão e o seu meio de suporte (por exemplo a água) , por exemplo: Penetrabilidade (relativa) rj ' Prei = Psuspensuo /Pmeio- A utilização semelhante dos dados de fluxo de trans-barreira, medidos com a pressão de direcção constante, fornece a medida mais directa mas ainda relativa da capacidade de penetração da barreira ^/permeabilidade para formulações diferentes. A explicação- teórica 107 para tais comparações e cálculos é dada em Revistas Criticas em Criticai Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 13:257-388 (1996).

Para se adquirir uma Resistência de Transporte da Barreira ou dados Penetrabilidade absoluta, e interpretar estes valores em termos moleculares, um método analítico melhorado é necessário, o- qual é descrito em resumo nas secções das Definições, (ver especialmente e.q. (*)).Para se adquirirem os dados de penetrabilidade absoluta -e assim aadaptabilidade do agregado - o fluxo da trans-barreira é primeiro' medido em série. (Isto pode ser feito como é descrito neste documento ou em Biochim. Biophys. Acta 1368: 201-215 (1998)). O valor de resistência .da barreira / capacidade de penetração da suspensão de teste é depois calculadoa partir do fluxo contra os dados de pressão usando e.q. (*} , seguindo a descrição dada nas. secções anteriores. Do valor da resistência calculada / capacidade de penetração, um parâmetro conveniente que descreve a adaptabilidade de agregados misturados é deduzido, por exemplo assumindo: aa = 1/p*. A adaptabilidade do agregado é assim identificada com a diferença de pressão inversa necessária, para. alcançar uma fracção pré-definida, praticamente relevante da proporção da pressão de fluxo realizável máxima; utilizando um máximo de 50-60 % de critério de penetrabilidade dá resultados razoáveis. Especificamente, todos os valores de p* dados neste documento correspondem a 57 % do valor de Pmax * Se a penetrabilidade máxima para uma dada combinação de barreira de suspensão não puder ser medida, a penetrabilidade de uma barreira ao meio no qual os agregados testados são suspensos é usada como representante: Ρ^χ = f x fluxo de meio de Suspensão / pressão de direcção. 0 factor de proporcionalidade é depois tipicamente tomado para- ser a-té 3 vezes (e mais - frequentemente'-a-té· 108 2 vezes) mais pequeno do que 57 %, para permitir os efeitos de fricção triviais.

Os resultados exemplares são dados nas figuras 4 e 5?. A última figura também ilustra graficamente o significado dos .parâmetros "p *" (em unidades de pressão, e proporcional à resistência de transporte da barreira) e “Máxima penetrabilidade" (= P^*; em fluxo por unidades de pressão, e indicativo da porosidade da barreira)). Determinação do Tamanho (diâmetro) do agregado. O diâmetro do agregado médio (a maioria das vezes vesícula) foi medido com a difusão de luz dinâmica (para algumas amostras com um instrumento Malvern Zeta-Sizer. e para a maioria das amostras com o instrumento com um dispositivo de correlação ALV 5000. O método de análise cumulativa e uma implementação do pacote de software "Contin" foram usados para analisar as curvas de correlação obtidas com Zeta-Sizer. Para analisar as medições de ALV o software disponibilizado pelo fabricante (análise cumulativa ou "Contin") foi empregue.

Exemplos 1-120 (exemplos de referência):

Composição; 37,74-84,5 mg Fosfatidilcolina de soja (SPC, ~ 85 % de pureza, MFC) introduzido como uma - solução etanólica SPC/EtOH 1/1 V/V e que contém aproximadamente 10 % de fosfolipido carregado (presumivelmente um. fosfatidilglicerol aniónico) ,187-34,9 mg Polisorbato (Tween 80, grau farmacêutico; MDCi) 5,6-20 % em mol relativo - Dodecilsulfato de sódio (SDS, p.a.; MDC2) que substitui o fosfolip.ido para a quantidade “ dada - - ................ ;...... 1 109 ad .1 ml Tampão de fosfatos isotónico (pH = 7,2)

Objectivo: como com os exemplos 1-120,. para testar a sinergia da acção de diferentes agentes tensioactivos nas propriedades do agregado de superfície estendida. ...

Preparação da suspensão. O método usado para preparar a suspensão de vesícula foi o mesmo como nos exemplos 1-120.. A única diferença notável entre ambas as séries de testes foi a do diâmetro médio de certa forma maior e a poli-dispersão das vesículas usadas nos. exemplos 121-129.

Capacidade de transporte (capacidade de penetração no poro e adaptabilidade) d suspensão do agregado. Para caracterizar a resistência da barreira semi-permeável ao fluxo de suspensão (= fluxo de trans-barreira), foi usado o mesmo método que nos exemplos 1-120. A resistência foi medida como uma função da concentração de SDS relativa em bi-camadas, para determinar a. quantidade mínima deste último agente tensioactivo que é necessário para maximizar o fluxo de suspensão através da barreira e minimizar o valor de resistência do transporte de barreira. Os dados experimentais sugerem que o limite' limiar seja aproximadamente de .6 % em moí, com um pouco de incerteza na região de 2-6 % em mol. Isto é compatível com os resultados . da primeira série de testes (exemplos 1-120) excepto pelo facto dos valores de resistência medidos serem agora um tanto mais elevados. Isto é explicável pelo diâmetro de vesícula inicial diferente e pela poli-dispersão. Os resultados são dados na tabela seguinte.

Tabela 1: 0 efeito de .SDS, como o segundo agente tensioactivo {MDC2) em adição ao Tween 80 (MDCi; 10 % em mol relativamente ao SPC) , na--resistência, da -fosfatidilcolina que- contém membranas- de 110 lipido misturadas (SPC; MFC), como o bloqueio de construção básico, à passagem através de uma barreira semi-permeável com poros, que, foram pelo menos ~50 % mais pequenos do que o diâmetro do agregado médio. SDS/SPC [mol/mol] Resistência de transporte da barreira [unidades relativas, como definido em SEM] 0/100, referência Tween Tfs 10 2/98 4 4/96 10 6/94 1,88 8/92 1,75 10/90 . 1,50 25/175 1,12 15/85 0,75 35/165 0,44

Exemplos 130-131 (exemplos de referência): ,

Composição: [52,1 mg Fosfatidilcolina de do soja (SPC), quantidade real = 52,2 mg - quantidade de colato de Na em mg 45,2 mg Polisorbato (Tween 80) 5,10,15 % em mol de colato de sódio = colato de Na (relativo ao SPC na suspensão) ad 1 mL Tampão de fosfato isotónico (pH = 7,2)

Objectivo: como com os exemplos 1-120, mas utilizando um agente tensioactivo carregado diferente (colato em vez de SDS) .

Preparação da suspensão. A suspensão inicial foi preparada como nos exemplos anteriores. No entanto, para fazer vesículas na formulação 111 de teste mais uniformes antes das medições actuais, a suspensão inicial foi pré-filtrada através de filtros com 80 nm de poro. Isto produziu vesículas com um diâmetro aproximadamente' de 12 0 nm, como determinado com a difusão de luz dinâmica utilizando um dispositivo de correlação ALV 5000 e um computador pessoal.

Capacidade de transporte de vesicula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade). O teste de transporte actual foi feito com filtros de poro relativamente estreito (30 nm), usando pressões diferentes aplicadas no filtro para caracterizar a capacidade de penetração de tal filtro semi-permeável à suspensão de teste. Isto revelou uma capacidade de penetração regularmente comparável para as vesículas com 10 % em mol e 15 % em mol de colato, excedendo a capacidade de penetração de poro, e assim a adaptabilidade, das vesículas simplesmente com 5 .% em mol de colato como o terceiro componente que destabiliza a membrana (conferir a figura 3) . Esses resultados indicam que· a incorporação do segundo agente tensioactivo na bi-camada de lípido misturado não aumenta a adaptabilidade de membrana proporcionalmente, como se esperaria com base em resultados modelares mostrados na figura 7.

Exemplos 132-138:

Composição:

Ver a Tabela 2 Fosfatidilcolina de soja (SPC)

Ver a Tabela 2 Cetoprofeno, sódio (KT) ;

Ver a Tabela 2 Tween 80, ver a Tabela 2

Ad 1 mL Tampão de Fosfato (pH =7,2)

Objectivo: testar o efeito sinérgico de um .fármaco que destabiliza a membrana (KT) combinado com um agente tensioactivo (Tween 80) em uma suspensão de lípido (SPC) em termos da adaptabilidade do 112 agregado misturado e a capacidade relativa de atravessar as barreiras semi-permeáveis.

Preparação de suspensão de teste. As quantidades _de fosfolípido e de fármaco determinadas foram trazidas em suspensão usando homogeneização mecânica. Aquele diâmetro do agregado médio resultante foi aproximadamente de 100 nm.

Capacidade de transporte de vesícula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade). A corrente de jacto da suspensão de teste de um recipiente pressurizado com o gás de azoto foi medida como uma função do tempo para determinar a dependência de pressão do transporte de material através de um filtro com 20 nm de poro em frente de uma abertura no recipiente de medição. Dos dados de fluxo medidos, a "capacidade de penetração da barreira" eficaz , que define a adaptabilidade das vesículas do antipático misturadas testadas, foi calculada como é descrito. na maior parte corpo do texto. As curvas medidas também foram analisadas em termos da pressão p*, necessária para alcançar' 57 % da proporção fluxo de suspensão/pressão. possível máxima. 0 resultado da' série de· testes indica que tanto o cetoprofeno como o Tween podem actuar como um componente que destabiliza a membrana. Consequentemente, qualquer destes dois ingredientes de sistema melhoram a capacidade da suspensão de teste de penetrar as barreiras comparado com a fosfatidilcolina simples, os lipòssomas de referência em uma suspensão sem KT ou Tween 80. Quando uma combinação dos referidos, componentes que destabilizam a membrana é usada, á adaptabilidade do agregado de superfície estendida é aumentada para o valor medido com a suspensão de Transfersome® baseado Tween não iónica apropriada com a concentração de agente tensioactivo muito mais elevada do que aquela usada na mistura quaternária. Os dados, dados na Tabela :2 justificam a conclusão. Eles também são comparados com 113 aqueles que pertencem, ao fluido de tampão simples (fluido de referência) no qual as vesículas de SPC/KT/Tween misturadas foram suspensas.

Tabela 2: resultados experimentais, e próprios para as experiências de penetração de poro feitos com várias suspensões quaternárias de um fosfolipido (SPC; MFC), um fármaco (KT; MDCi) , - e Tween 80 (MDC2) co-suspensos em um. tampão; TL = lípido total

Tween 8 0 ;% em mol de SPC] Cetoprofeno [% em mol de TLI) P* [% em mol de SPC] ^max [10-1½ Pa-bsec-1] Adaptabilidade aa [MPa-1] 0 (Lipossomas) 0 > 3 Não mensurável (< 0,3) 0 25 2,41 + 0,15 Não mensurável 0.415 0 33 1,66 ± 0,07 345 ± 37 0.602 10 33 0,25 ± 0,03 230 ± 17 4.000 50 0 0,20 ± 0,01 227 ± 3 5.000 0(=fluido de referência 0 Não aplicável 613 + 15 Não aplicável

Exemplos 139-142:

Composição: 75.0 mg Fosfatidilcolina de soja (SPC), usado como uma quantidade de solução saturada etanólica de SPC = 75 mg - conteúdo de Brij 98 dado na Tabela 3 25.0 mg cetoprofeno, sódio (KT)

Ver a Tabela 3 Brij 98 ad 1 mL Tampão de Fosfato (pH = 7,2)

Objectivo: testar a adaptabilidade/capacidade de penetração do poro que suporta a actividade de um agente tensioactivo diferente (Brij) combinado com um fármaco que desfabiliza a membrana (KT) nos 114 agregados de superfície estendida de lipidos (SPC). A preparação de suspensão foi essencialmente o mesma como nos exemplos 132-135.

Capacidade de transporte de vesícula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade). Com a finalidade de se testar se a adaptabilidade aumentada das suspensões ternárias de SPC/KT é uma característica única de Tween, como o quarto componente, o efeito de outro agente tensioactivo foi investigado. Com a finalidade de se evitarem interacções electrostáticas indesejadas entre 0 KT aniónico e tal aditivo, o Brij 98 não carregado (cadeia de oleoilo, 20 unidades de oxietilena por molécula) foi escolhido.. A capacidade de penetração das misturas de SPC/KT/Brij3/l/0-0,323 . p/p./p· resultante foi finalmente calculada usando eq. (*).

Os resultados para a série semelhante medida com Brij 98 são dados na Tabela 3.

Tabela 3: resultados adequados, baseados em e. q. (*), para o fluxo de trans-barreira de suspensões que contêm um lípido (SPC; MFC), um fármaco (KT;. MDCi) e Brij 98 (MDC2) em concentrações relativas diferentes, representando SPC e Brij em conjunto o lípido total (TL)

Brij 98 ;% era mol de SPC] KT [% em mol de TL] Λ P [MPa] [10"nm Pa"1. sec'1] Adaptabilidade aa [MPa”1] 0 33 1,66 ± 0,07 345 ± 37 0, 602 2,5 33 0,56 ± 0,07 266 ± 28 1.786 5 33 0,29 ±. 0,07 191 ± 30 3.448 7,5 33 0,32 ± 0,06 171 ± 21 3.125 § 0 erro citado só conta para os dados analíticos e não para os experimentais incertos, os quais para o exemplo 16 excede 80 % . - · 115

Exemplos 143-146:

Composição: 100 mg Lípido Total (TL, incluindo o SPC e o Tween 80)

Ver a Tabela 4 Fosfatidilcolina de soja (SPC) Ver a Tabela 4 Tween 80 Ver a Tabela 4 Diclofênac Ver a Tabela 4 Etanol (EtOH) 5,25 ad 1 g álcool de benzilo 154 mM de Tampão de fosfato, pH =7,2

Objectivo: testar os efeitos de um agente tensioactivo (Tween 80) e um fármaco (diclofênac), como dois anfipáticos que destabilizam a membrana, e de um álcool de cadeia curta (etanol) como potencialmente um segundo antipático que destabilizam a membrana e adicional. .A preparação da vesícula foi feita essencialmente como descrito no exemplo.. 8 do documento WO 98/17255, mas uma versão mais moderna do ensaio de penetração da barreira foi usada para avaliar a adaptabilidade do agregado de vesícula. Para a - comparação histórica, as vesículas com uma composição total semelhante mas à qual falta etanol foram testadas (conferir os exemplos. Os resultados são dados na Figura 8 e na Tabela 4).

Devido a variação de medição limitada do ensaio de penetração de poro, foi só possível obter uma estimativa grosseria para a adaptabilidade de agregados de superfície estendida testados nesta série de testes. 0 valor de p* estimado das preparações que contêm etanol foi baixado de -1,6 MPa para ~ -4,8 MPa medidos na ausência· 116 deste álcool. (Deve ser tido em mente, no entanto, que a variabilidade experimental nestes testes foi pelo menos de 50 %, como os desvios padrão dados na Tabela;4 só se desviam da própria rotina). A direcção da modificação é razoável, mas a diferença absoluta calculada em p* não é significativa.

Tabela 4: Resultados da pressão de direcção e análise da adaptabilidade do agregado para o teste.

Ex Tween 8 0 % em mol de SPp EtOH [% em peso] Diclofenac [% em peso de TL] * P [MPa] Pmax [10-1¼ Pa-1. sec-1] Adaptabilidade aa, [MPa-1] 143 0 0 10 4,8 ± 1,6 Não mensurável 0,208 144 0 9 10 2,4 ± 0,04 402 ± 17 0,417 145 0 9 20 146 10 9 10 5 0 erro citado só conta para os dados analíticos e não para os experimentais incertos, os quais para o exemplo 16 excede 80 %

Os dados, dados na Figura 8 e na Tabela 4. implicam que o etanol torna os agregados de lipido testados mais adaptáveis. O efeito é muito mais pequeno, no entanto, do que em caso da utilização de um agente tensioactivo, tal como o Tween 80 (ver a Tabela 2). A utili.zação simples de um fármaco que destabiliza a membrana (diclofenac) e de um álcool de cadeia curta, como os agentes de amolecimento da membrana revelados na técnica anterior, só assim produz agregados de superfície estendida com uma adaptabilidade significativamente inferior àquela das formulações reveladas na presente invenção.

Especificamente, a formulação descrita no Exemplo 8 do documento WO 98/17255 é capaz de atravessar barreiras semi-permeáveis com poros 117 estreitos, mas deixa espaço para um melhoramento adicional. As vesículas, carregadas diclofenac, que contêm etanol, de facto, são mais adaptáveis do que as vesículas sem etanol'. No entanto, até as vesículas anteriores têm um valor de p* muito, mais elevado, e por conseguinte são muito menos adaptáveis, do que as misturas ternárias de fosfatidílcolina, um agente tensioactivo não iónico (Tween 80) e o cetoprofeno descritos na Tabela 2; o efeito benéfico de um componente que destabiliza a membrana semelhante a um agente tensioactivo, tal como o Tween 80, é. directamente reflectido no valor mais baixo de p* e/ou em um fluxo mais elevado da formulação modificada através d uma barreira. Esta conclusão não é praticamente afectada se. a última formulação contiver o etanol. É, por conseguinte, óbvio que, pelo menos, dois componentes que destabilizam a membrana devem estar presentes em um agregado com superfície estendida em quantidades adequadas para' maximizar a capacidade de adaptação dos agregados de superfície estendida. O mero uso de um lipido, etanol e um fármaco, como é revelado na técnica anterior, é insuficiente para alcançar o objectivo.

Exemplos 147-150

Composição: 80,0-71,4 mg Fosfatidilcolina de soja (SPC) 20-28,6 mg Cetoprofeno, sódio (KT), substituindo o SPC na suspensão para alcançar uma quantidade de anfipático constante ad 1 ml Tampão de Fosfato, pH = 7,2,

se necessário reajustado com NaOH

Objectivo: demonstrar que o cetoprofeno, um NSAID, actua como componente que destabiliza a membrana e pode produzir agregados anfipá-ticos misturados com a superfície estendida bastante- 118 adaptáveis para penetrar os poros estreitos.

Preparação de suspensão de teste. As quantidade de fosfolípido e de fármaco determinadas foram colocados em suspensão usando homogeneização mecânica. Aquele diâmetro do agregado médio resultante foi aproximadamente de 100 nm. Por referência, uma suspensão comparável que contém o SPC e o colato de sódio em 3,75/1 mol/mol em proporção foi usada.

Capacidade de transporte de vesícula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade). O jacto de saída da suspensão de teste de um recipiente pressurizado com o gás de azoto foi medido, como uma função do tempo para determinar a dependência de pressão do transporte do material através de um filtro de 20 nm de poro em frente de uma abertura rio recipiente de medição. A partir dos dados de fluxo medidos, a "capacidade de penetração da barreira", eficaz a qual define a adaptabilidade das vesículas de anfipático testadas misturadas, foi calculada como é descrito na maior parte do corpo de texto. As curvas medidas também foram analisadas em termos da pressão p*, necessária para alcançar 57 % da proporção de fluxo/pressão de suspensão possível máxima. 0 valor de p* calculado diminuiu de 2,41 ± 0,15 MPa (erro padrão do valor médio) a 1,66 ± 0,07 MPa a 1,36 ± 0,10 MPa com um aumento da concentração de fármaco. Isto é indicativo da actividade do fármaco que destabiliza a membrana, que discutivelmente promove a flexibilidade e a permeabilidade de bi-camadas. A informação mais detalhada é dada na Tabela 5, a qual revela valores de p* essencialmente idênticos para a mistura de 3/1 mol/mol do SPC/KT e para a suspensão Transfersome® aniónica de referência. Para deduzir a adaptabilidade de vesícula do valor de p*, a contribuição dos efeitos de viscosidade de suspensão deve ser incluída ou deve ser conhecida como sendo insignificantei Isto não é uma que'Stão, no entanto,· enquanto se 119 puderem fazer comparações com a(s) formulação(ções) de referência convenientes, como é feito na tabela seguinte por inclusão da última linha.

Nesta série de testes, um em todos os outros exemplos práticos aqui relatados, o diâmetro do agregado final depois do atravessamento de poro estreito foi pelo menos de 300 %, e tipicamente foi mais de 400 % maior do que o diâmetro de poro, sendo a proporção do diâmetro do agregado inicial para o final tipicamente > 0,70, implicando a fragmentação de menos de 30 %, e mais frequentemente simplesmente de 10-20 %.

Tabela 5: resultados calculados, baseados em eq. (*) para. as experiências da capacidade de penetração da barreira (proporção de fluxo/pressão) feitas com a suspensão caract.erizada por diferentes proporções de SPC/KT de lipido/fármaco SPC/KT [mol/mol] p* [MPa] [10-1½ Pa-1. sec"1] Adaptabilidade aa, [MPa-*] 10/0 . ~3 Não mensurável ~0, 3 4/1 2,41 ± 0,15§ Não mensurável 0,415 3/1 1,66 ± 0,07§ - 0, 602 2,5/1 1,36 ± 0,10§ 345 ± 37 0,735 Referência aniócica Tfs§§ 1,76 + 0,13§ 318 ±39 0,568 § 0 erro citado só conta para os dados analíticos e não para os experimentais incertos, o último montando frequentemente a 20-30%. §§ Estas vesículas de Tfs foram preparadas a partir de uma mistura de colato de SPC/Na 3,75/1 mol/mol. A representação gráfica dos resultados destas experiências é dada na Figura 9.

Exemplos 151-153:

Composição: 120

120 75.. 0, 75,0, 37,7 mg 25.0, 25,0, 0,0 mg 0,0, 25,4, 62,3 mg 0,0, 0,0, 37,7 mg ad 1 mL

Fosfatidilcolina de soja (SPC) Cetoprofeno, sódio (KT)

Tween 80

Etanol

Tampão de Fosfato (pH = 7,2)

Obj eetivo: testar o efeito sinérgico do segundo e do primeiro anfipático que destabiliza a membrana (Tween 80, cetoprofeno, respectivamente) em termos de uma .adaptabilidade do agregado de superfície estendida. A preparação da suspensão foi essencialmente a mesma como com os exemplos 147-150.

Capacidade de transporte de vesícula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade). O fluxo da trans-barreira da suspensão de teste que contém 5 % em mol de Tween é muito mais elevado do que para a formulação que contém simplesmente os componentes de fosfolípido (como . o anfipático básico) e de cetoprofeno (como o anfipático semelhante a agente tensioactivo', que destabiliza a membrana de superfície activa). Isto é claramente visto da Figura 10, que ilustra a dependência de pressão do referido fluxo de suspensão dividido pela pressão de direcção.

Exemplos 154-158:

Composição de agregados:. 75,0 mg Fosfatidilcolina de soja (SPC), o valor real é: 75 mg - quantidade· de Tween 80 em 121 mg

25, 0 mg Ver a tabela seguinte ad 1 mL

Cetoprofeno, sódio (KT)

Tween 80.

Tampão de Fosfato (pH =1,2)

Tampão de referência: Tampão de fosfato (pH =7,2)

Objectivo: estudar o efeito da concentração relativa de um agente tensioactivo, como o segundo anfipático que destabiliza a membrana, na adaptabilidade de agregados de anfipáticos misturados, de superfície estendida.

Preparação da suspensão: como com os exemplos 147-150.

Os dados da capacidade de transporte da vesícula (capacidade de penetração de poro / adaptabilidade), como medidos nesta série de testes, confirmam e estendem as descobertas obtidas com os exemplos 147-150. O Tween que. actua como o segundo componente que destabiliza a membrana melhora a capacidade,da suspensão de teste de penetrar as barreiras mesmo quando este agente tensioactivo está presente ' na mistura quaternária simplesmente em uma pequena quantidade, enquanto que a concentração relativa .de Tween é pelo menos aproximadamente de 2,5 % em mol, e mesmo melhor de 5 % em mol. Os dados, dados na Tabela 6 justificam á conclusão. Eles são comparados com a formulação de referência de. Transfersome® baseada em Tween não iónica {Tfs de Referência) e com o fluido.de tampão (fluido de Referência) no qual . as vesículas de anfipático misturadas foram suspensas.

A viscosidade da suspensão para o exemplo157 foi aproximadamente de 730 mPa. s a 20 RPM 122

Tabela 6: resultados colocados para as experiências de penetração do poro feitas com várias suspensões quaternárias de um fosfolípido(SPC; componente que forma membranas estáveis), um fármaco (KT; 1° componente que destabiliza a membrana), e Tween 80 (2o componente que destabiliza a membrana) co-suspensos em um tampão em concentrações relativas diferentes de Tween 80. Número Conteúdo de Tween 80 [% em mol de SPC] * P [MPa] Pmax [10_11m Pa^.sec' x] Adaptabilidade aa [MPa'1] 0 1, 66 ± 0,07 345 ± 37 0, 602 154 1,25 0,51 ± 0,05 293 ± 23 1, 961 155 2,5 0,50 ± 0,04 339 ± 26 2,000 156 5 ' 0,23 ± 0,03 215 ± 19 4,348 157 7,5 0,22 ± 0,02 213 ± 14 4,545 158 Tfs de Referência (Tween) 0,20 + 0,01 227 ± 3 5,000 Não aplicável 613 ± 15 Não aplicável § 0 erro citado só conta para os dados analíticos e não para os experimentais incertos, o último montando frequentemente a 20-30%. As vesículas Tfs de Referência foram preparadas a partir de uma mistura equimolar de Tween 80 (50/50 mol/mol).

Exemplos 159-160:

Composição: 43,65 mg 7 2,0 0 mg 34,35 mg 6,08 mg 5,25 mg 36,51 mg ad 1 g

Fosfatidilcolina de soja (+ 95 % = PC)

Tween 80

Cetoprofeno

Hidróxido de Sódio Álcool de benzilo 96 % de Etanol 154 mM de Tampão de fosfato, pH = 7,4

I i 123 ! Objectivo: a confirmação da descoberta das formulações descritas

I nesta aplicação em geral.

Para o objectivo, os exemplos- mais próximos dados em patentes (pedidos) relevantes anteriores foram reproduzidos combinando todos os ensinamentos explícitos potencialmente relevantes de tais documentos da técnica anterior. Os procedimentos experimentais foram correspondentemente seleccionados, excepto para a utilização | de métodos ana.líticos mais modernos. I - j

Preparação da suspensão: por um lado, a concentração do agente tensioactivo Tween 80, o qual actua como um componente que destabiliza a membrana, foi usada ao nível sugerido pelos exemplos 40-49 do documento USP 6165500 (ou do documento equivalente EP 0475 160 Al) . Uma mistura equimolar de fosfatidilcolina e Tween 80 foi. ! escolhida, como a adaptabilidade de tal mistura, expressa em termos do seu valor inverso o qual é proporcional à resistência de barreira testada, já que tal mistura se aproxima de zero. Por outro lado, o cetoprofeno. parcialmente ionizado, o qual se liga à bi-camada de lípido e torna tais membranas mais flexíveis, foi usado como o segundo componente que destabiliza a membrana. Uma tal utilização do fármaco é ensinada explicitamente no documento WO 98/17255 para dois outros NSAIDs: o diclofenac e o ibuprofeno, por exemplo nos Exemplos Práticos 8-17 e 18-25. A composição da membrana testada correspondeu assim à proporção de SPC/KT óptima sugerida na Tabela 6 para as misturas de SPC/KT/Tween 80 com uma proporção molar aumentada de SPC/Tween 80. A percentagem em peso do cetoprofeno, relativamente à concentração de lípido total, foi assim aproximadamente de 3/1 e por conseguinte .semelhante àquela ensinada nos referidos exemplos no documento WO 98/17255 para o' -diclofenac, os quais cobrem proporções molares, de: 124 4/1 a 1/4. Também de acordo com o documento WO 98/17255, um tampão de fosfato isotónico foi usado para suspender as vesículas de lipido misturadas resultantes. A hidratação dos . componentes misturados em dadas proporções produziu um fluido claro, amarelado. Isto. é indicativo da suspensão micelar e implica que os agregados de lipido misturados testados são coloidalmente não estáveis. A determinação do diâmetro médio dos agregados em tal suspensão com a difusão de luz dinâmica confirmou a conclusão (diâmetro de partícula médio de aproximadamente 22 nm, o qual é incompatível com a existência de vesículas) . A diluição da preparação com o tampão correspondente de 15. % do lipido total para 10 % do lipido total, fazendo essencialmente a mesma observação corroborou adicionalmente o resultado. Baseado na informação existente acerca da solubilização da fosfatidilcolina por Tween 80, mesmo uma redução da concentração relativa do agente tensioactivo por um factor de 2, criando assim uma mistura carregada de SPC/Tween 80 de 2/1 mol/mol com aproximadamente 30 % em mol de cetoprofeno, ainda produziria agregados instáveis. A adição de Tween. 80 muito além da concentração .molar relativa, bastante baixa proposta no exemplo 158 destabiliza assim os agregados de lipido de três componentes ao ponto de solubilização, ou próximo deste ponto. Composições originadas a partir da combinação de ensinamentos experimentais relevantes nas patentes WO 98/17255 e EP 0475 160 Al, por conseguinte, não cumprem o critério de estabilidade necessário para os agregados de superfície estendida e consequentemente não representam a técnica anterior para a presente aplicação.

Exemplos-Comparativos 161-162:. ... . - - - <- 125 Composição: 66,71 mg 11.00 mg 22,21 mg 0,00/66,71 mg 11,56 mg 0. 50 mg 1, 0 0 mg 0,2 0 mg 1,46 mg 1.0 0 mg 5,25 mg ad 1 g

Soja-fosfatidilcolina Tween 80 Cetoprofeno

Etanol (EtOH; para os exemplos 16 e 17, respectivamente)

NaOH (30 %)

Metabissulfito de Na Edetato de dissódio (EDTA) Butil-hidroxitolueno (BHT)

Metilparabeno

Linalool Álcool de benzilo

Tampão de Fosfato de 7,8 mm, pH = 7,2

Objectivos: Primeiro, verificar se o efeito do aumento da adaptabilidade do agregado, e da . destabilização da membrana de etanol estava na variação de concentrações descritas, em invenções prévias (ver o documento USP 6165500 ou o equivalente EP 0475 160 Al) . Os resultados, dados . na Tabela . 7, confirmam que a adaptabilidade dos agregados proposta na técnica anterior está muito inferior àquela das.formulações recentemente propostas.

Em segundo lugar, testar o efeito de estabilizadores de sistema (metabissulfito de Na; EDTA; BHT, álcool de benzilo) em características essenciais de agregados de superfície estendida. Os resultados confirmaram o que os parâmetros chave do sistema, os quais determinam a capacidade da suspensão de atravessar as barreiras semi-permeáveis, isto é a pressão de p* e a adaptabilidade do agregado, não são afectados inaceitavelmen-te- por 126 tais aditivos.

Preparação da suspensão. A preparação do intermediário vesicular com 17,14 % do lípido lipidio total que não contém nenhum etanol e cetoprofeno na concentração idêntica como no Exemplo 157 ,foi misturada com a massa de SPC equivalente de etanol. Isto foi feito para combinar tão estreitamente quanto possível os exemplos 8-17 dados no documento WO 98/17255. Para encontrar as necessidades de formulações farmacêuticas também, vários agentes que estabilizam as suspensões (EDTA, BHA, metilparabeno, e álcool de benzilo) foram incluídos na formulação. A caracterização foi feita como com os exemplos 147-150.

Tabela 7: Resultados da pressão de direcção e análise da adaptabilidade do agregado para os exemplos 15 e 16.

Formulação -3--- P ^max Adaptabilidade.aa. [MPa] [10~6kg (m2.s.Pa) [MPa'1] Exemplo 161 (nenhum EtOH) .0,233 ± 0,013§ 216, 5 + 7,4 4,292 Exemplo 162 (com EtOH) 0,133 ± 0,006§ 254,3 ± 9,7 7,519 § 0 erro citado só conta para os dados analíticos e não para os experimentais incertos-

Especificamente, a pressão necessária para dirigir as vesículas através de poros estreitos, p *, foi verificada como diminuindo na presença de EtOH de 0,233 MPa para 0,133 mPa; isto é uma redução de aproximadamente 40 % e assim perto do limite da insignificância (ver a Tabela 6 para a comparação). A razão é a resolução de ensaio limitada, a qual para o p* na situação estudada é de 20-30 %.

Falando em termos absolutos, e fazendo comparação com a magnitude de 'efeito" positivo na adaptabilidade do agregado causada por Twe'en 127 80 (conferir as tabelas 6 e 7) , o etanol na variação revelada nòs documentos USP 6165500, EP 0475 160 AI e WO 98/17255 só aumenta a adaptabilidade dos agregados testados moderadamente. A conclusão semelhante é alcançada comparando os exemplos 50-61 no documento USP 6 165 500 (ou no equivalente EP 0475 160 Al). . A comparação dos resultados das experiências 161 e 162 e 157, além disso, confirmam que os conservantes de sistema testados (metabissulfito de Na; EDTA; BHT, álcool de benzilo) nem afectam negativamente a adaptabilidade do agregado de superfície estendida desejável nem modificam muito a pressão necessária para dirigir o transporte da suspensão adequado através de uma barreira nano-porosa.

Exemplos 163-165:'

Composição:

Fosfat.idilcolina de soja (SPC), Cetoprofeno, sódio (KT) Tween 80 (% em molque se refere a SPC) Água ou 50 mM de tampão (pH =7,2) 7 5 mg 25 mg

Ver a tabela seguinte Ad 1 mL

Objectivo: testar .a influência da força iónica do .electrólito inorgânico de volume na adaptabilidade de agregados de anfipáticos misturados suspensos em tal electrólito.

Preparação e caracterização da suspensão. A suspensão de teste foi preparada essencialmente como com os exemplos 147-150, excepto no facto do tampão ter sido algumas vezes trocado por água praticamente com o mesmo valor de pH. Isto teve consequências importantes. Quando a força iónica (I) da solução de electrólito de -volume -com" um pH aproximadamente- de 7 se modifica, -a ··distribuição- 128 ; de cetoprofeno·e grau de ionização na suspensão de Transfersome®

I j também se modifica. Isto modifica - o mais provavelmente diminui - adaptabilidade do agregado de superfície estendida, a qual deve ser considerada quando se designam produtos com base na composição de formulação dada. Evidência experimental para isto é dada na Tabela i ! 8' : Tabela 8: os resultados colocados baseados na fórmula (.*) para a j proporção de fluxo de trans-barreira/ pressão de direcção j (capacidade de penetração da barreira), de várias suspensões ! - · quinternárias com KT como o fármaco em diferentes sistemas de tampão.

Formulação *· P [MPa] Pmax [10-1½ (Pa-1, sec'1) Adaptabilidade aa, [MPa"1] 10 % em mol de Tween nenhum tampão 0,49 ± 0,02 212 + 8 2,041 10 % em mol de Tween 50 mM de tampão, I = 117 mM 0,25 ± 0,03 230 ± 17 4,000 7,5 % em mol de Tween, 6,3 % v/v EtOH nenhum tampão 0,31 ±0,06 194 ± 23 3,226 7,5 % em mol de Tween, 6,3 % v/v EtOH 50 mM de tampão, I = 117 mM 0,13 ± 0,01 248 ± 11 7, 692 Tween Tfs de Referência no' tampão 0,20 ± 0,01 227 ± 3 5,000

Exemplos 166-167:

Composição 75,0 mg 25 mg 12,4 mg ad 1 mL

Fosfatidilcolina de soja.-(SPC), Cetoprofeno, sódio (KT)

Tween 80

Tampão pH = 7,2 e pH = 7,7 129

Preparação e caracterização da suspensão: ver a série de testes anterior.

Obj ectivo: testar o efeito' da ionização do cetoprofeno, o qual acima do pKa (KT) 6,4 aumenta com o pH, na adaptabilidade das vesículas de lípido misturadas carregadas com fármaco.

Resultados: a Adaptabilidade de formulações simples que contêm três componentes anfipáticos foi confirmada como dependendo do estado de ionização do seu único componente de titulação, o cetoprofeno. Os resultados detalhados são. dados na seguinte Tabela 9,

Tabela 9: resultados colocados, baseados em eq.{*), para o fluxo de trans-barreira de pressão normalizada de suspensões de KT-T.fs em pH diferente pH * P Adaptabilidade aa, [MPa] [10-1½ (Pa-1, sec"1) [MPa-1] 7,2 ' 0,66 ± 0,07 345 ± 37 0,602 7,7 0,62 ± 0,07 237 ± 28 1,613 Tfs de Referência 0,20 ± 0,01 227 ± 2,9 5,000

Exemplos. 168 — 16'9: Composição: 100 mg/mL Fosfatidilcolina de soja (SPC) como uma suspensão de vesícula unilamelar grande 254 mg/mL Cetoprofeno, sódio (KT) em solução

Tampão de pH = 7,2 e pH = 7,7

Misturado durante as experiências para produzir a proporção relativa aumentada de KT era SPC em suspensão do agregado.

Objectivo: testar a capacidade do cetoprofeno para solubilizar 130 membranas de bi-camada de lípidos.

Resultados: a capacidade do cetoprofeno para solubilizar as membranas de fosfatidilcolina de soja (SPC) foi determinada medindo a -turvaçâo de uma suspensão (10 % em peso) de grandes . vesículas unilarrtelares durante a adição sucessiva de 1 M de solução de cetoprofeno. Na primeira série de testes isto foi feito em 50 mM de tampão de fosfato em pH = 7,4, onde mais de 50 % do fármaco é ionizado e mais de 50 % do fármaco é ligado a vesículas, mas príncipalmente na forma não carregada, a qual não destabiliza significativamente as membranas de lípidos. As vesículas de SPC sob estas condições testadas não foram de modo mensurável solubilizadas, apesar da presença de algum cetoprofeno ionizado, mas foram em parte déstabilizadas, como demonstrado em exemplos anteriores. A segunda experiência foi executada em pH = 11,6, sob cuja condição todas as moléculas de cetoprofeno são desprotonadas e por conseguinte têm uma solubilização máxima isto é capacidade de destabilização da membrana. A sqlubilização de membranas de SPC foi observada agora quando a proporção molar do fármaco nas bi-camadas de vesícula foi acima de -10,8/1 mol/mol de cetoprofeno/SPC. A associação . de SPC-cetoprofeno produz assim complexos fracamente ligados com a capacidade de solubilização da membrana.

Exemplos 170-174: .

Composição: 75,0 mg Fosfatidilcolina de soja (SPC, usado como uma solução etanólica saturada) o número real é: 75 mg - conteúdo de Brij 131

131 2 5,0 mg Ver a tabela seguinte ad .1 mL

Cetoprofeno, sódio (KT)

Brij 98 tampão de Fosfato (pH = 7,2) : ..Objectivo: demonstrar a utilidade de um outro agente tensioactivo, ! ! Brij, diferente de Tween 80, para aumentar o fluxo através dos i ! poros estreitos de agregados de superficie estendida de [ ! cetoprofeno/SPC em uma suspensão. i A preparação da suspensão foi essencialmente a mesma como nos exemplos 147-150.

Determinação do fluxo. O fluxo da suspensão de agregados de superficie estendida que contêm SPC, KT e, no caso, Brij 98 foi medido usando o mesmo dispositivo que é usado para a determinação da adaptabilidade do agregado. A única diferença foi que só uma única pressão de direcção foi usada para a caracterização da suspensão. Para a comparação, a proporção de KT carregado e de Transfersomes® de Brij vazio foi calculada (= Fluxo Relativo).

Os resultados da série de testes medidos com Brij 98, um éter de polioxietileno-oleilo com 20 unidades de OE na cabeça polar são dados na Tabela 10.

Tabela '10: o Fluxo de suspensões de anfipáticos misturados através de poros de 20 nm em uma barreira semi-permeável dirigida pela pressão de trans-barreira de 0,1 MPa.

Conteúdo de Brij 98 [S em mol de SPC] Fluxo [mg cm"2sec"1] Fluxo Relativo 0 < 1 2,5 10 > 10 5, 0 30 > 30 . 7.,5....... ....., 29 > 29

132

Exemplos 175-178:

Composição da Forma(ulaçâo) de KT B (Expt 175): .% em peso . . . 2,857 Cetoprofeno 7,143 Fosfatidilcolina 3.000 Glicerol 2,087 Hidróxido de Sódio, 50% {FCC) 0,120 Sais de Tampão de Fosfato 0,100 Linalool 0,100 Edetato de dissódio EDTA 1,250 Carbómero 974 0,100 Carbómero 1342 1.000 Propileno Gli-col 0,200 Etilparabeno 0,525 Álcool de benzilo 0,020 Hídroxitolueno butilado' 81,499 Água

Composição da KT Forma(ulaçâo) A (Expt 176): % em peso 2,290 Cetoprofeno 6,870 Fosfatidilcolina de soja (SPC) 0,850 Polisorbato (Tween 80) 3,651 Etanol 96% 0,930 NaOH (hidróxido de sódio) 0,235 Sais de Tampão de Fosfato 0,050 Metabissulfito de sódio 0,020 Butil-hidroxitolueno (BHT) 133 0,100 Edetato de dissódio EDTA 0,250 Para-hidroxibenzoato de metilo 0,525 Álcool de benzilo 0,100 Linalool 1,250 Carbómero (Carbopol 980) 3,00 Glicerol 79,879 Água

Formulação tópica comercial de Gabrilen (experiência 177): de acordo com a referência a médicos teóricos, a preparação contém 25 mg de gel de KT/g, complementada com 96 % de etanol, 3-propanol, 10 %de solução de amónia e Carbómero em água purificada.

Formulação oral comercial de Cetoprofeno Ratiofarm (KT Ratiofarm) (experiência 178): de acordo com a referência a médicos teóricos cada pastilha de película contém 50 mg de KT além de celulose microcrístalina, gelatina, Si02, amido de milho, talco, crosscarmelose de sódio, estearato de Mg, hipromelose, macrogol, glicerol, tinturas E 171 e E 172. A preparação das formulações A e B, as quais contiveram ambas .vesículas de superfície estendida, foi feita esse.ncia.lmente como descrito para os exemplos 147-150. Comparadores' comerciais foram comprados em uma farmácia local e usados como obtido.

Metodologia: os porcos de teste foram numerados e os cateteres da veia central foram implantados nos animais. A área de aplicação em um membro traseiro de cada animal foi barbeada com um tosquiador eléctrico e limpa com água quente e sabão. Depois, uma área de aplicação de 10 cm x 10 cm (= 100 cm2) foi marcada.

No tempo zero. do período de amostragem, 2 mL do sangue -foram· 134 experimentados a partir de cada animal de teste em um frasco coberto ' por citrato para gerar o plasma. Os porcos foram anestesiados durante aproximadamente 60 minutos e a dose apropriada da medicação de teste foi aplicada no local de aplicação de um porco ou também dada ao animal oralmente. As novas amostras de plasma (0,5 mL cada uma) foram tomadas 0,5, 1, 2, 3, 5, 8 e 12 horas depois da aplicação. Elas foram guardadas congelados até a análise. A concentração de cetoprofeno foi determinada com HPLC utilizando métodos padrão, em caso de amostras de tecido de músculo depois da homogeneização do espécime. A área abaixo da curva (AUC) foi calculada através da integração de todos os dados de ponto de tempo.

Os resultados das experiências são dados na Tabela 11 e na Figura 11. Ao passo que os conjuntos de dados farmacocinéticos individuais são bastante dispersos, produzindo desvios padrão comparáveis com o meio por causa do pequeno tamanho de grupo, a análise de dados total realmente demonstra a superioridade de pelo menos três preparações de componentes de anfipáticos, em comparação com duas formulações de componentes.de anfipáticos, para libertar um NSAID (cetoprofeno) profundamente sob o local de aplicação na pele. Quanto maior for a profundidade de tecido investigada maior é a vantagem observada (músculo superficial = 0-1,5 cm; músculo profundo > 1,5 cm). >.

Tabela 11a: Área abaixo, da curva (AUCo-8h [ng x mg-1 x h] ) , medida com formulações de KT diferentes em porcos

Gabrilen® Formulação B Formulação Ά KT Ratiopharm® • · - ........ (n=4) - <ín=7). (n=7) . (oral, n=3) 135

Tecido de músculo . superficial 102 209 306 , 7 Tecido de músculo profundo 53 147 301 9

Tabela 11 b: concentração de cetoprofeno (KT) em tecido de músculo superficial (ng/mg)

Tempo (horas) Gabrilen® (n=4) KT-Tfs Formulação B (n=7) KT-Tfs Formulação A <n=7> KT Ratiopharm® (oral) n=3) 0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,1 0,0 ± 0,0 1 5,0 ± 3,3 50,4 ± 48,6 55,5 ± 66,3 1,0 ± 1,2 2 12,8 ± 22,6 75,2 ± 83,8 36,3 ± 32,1 1,6 ± 1,2 3 10,9 ± 11,5 3,0 ± 3,2 25,7 ± 28,5 1,4 + 0,3 5 19,3 ± 18,7 12,9 ± 11,1 45,2 ± 72,9 0,7 ± 0,2 8 3,8 ± 3,8 ' 19, 6 ±- 17, 9 22,0 ± 17,9 0,2 ± 0,1

Tabela 11 c: concentração de cetoprofeno (KT) em tecido de músculo profundo (ng/mg)

Tempo (horas) Gabrilen® (n=4) KT-Tfs Formulação B ' (n=7) KT-Tfs Formulação A (n=7) KT Ratiopharm® (oral) n=3) 0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,1 0,0 ± 0,0 1 2,6 +2,3 53,4 ± 66,5 24,8 ± 19,0 1,5 ± 1,6 2 5,4 ± 9,3 63,0 ± 51,9 18,8 ± 21,5 1,8 ± 1,0 3 9,0 ± 9,3 1,4 ± 0,8 49,8 ± 71,8 1,6 ± 0,5 5 7,9 ± 5,8 5,6 ± 2,2 49,9 ± 65,0 1,0 ± 0,2 8 2,9 ± 2,9 14,1 ± 10,9 30,2 ± 28,7 0,3 ± 0,2

Exemplos 179-180:

Composição para o cetoprofeno em suspensão portadora (KT-Tfs sol): % em peso 3,435 Cetoprofeno (KT) lO,305 Fosfatidilcolina de Soja (SPC) 136 1,275 Polisorbato (Tween 80) 5,477 96% de Etanol 0,533 NaOH (hidróxido de sódio) 0,235 Sais de Tampão de Fosfato 0,050 Metabissulfito de sódio 0,020 Butil-hidroxitolueno (BHT) 0,100 Edetato de dissódio (EDTA) 0.250 Para-hidroxibenzoato de metilo 0,525 Álcool de benzilo 0,100 Linalool 3,00 Glicerol 74,695 Água

Composição para o cetoprofeno em gel portador (gel de KT-Tfs):

Como na experiência 179, excepto no facto dos quatro primeiros componentes serem diluídos 1,5 vezes e o Carbómero (Carbopol 980), tamponado a pH = 7,2, estar incluído na concentração final de 1,25 % em peso.

Objectivo: testar o efeito da viscosidade de formulação, e a presença de um agente de espessamento como o modificador ..de viscosidade, na capacidade de agregados de superfície estendida carregados com NSAID para libertar o fármaco (cetoprofeno) profundamente abaixo do local de aplicação na pele,. A metodologia foi a mesma como nas experiências 175-178, excepto no facto de nenhum comparador oral estar incluído. Um total de .4 porcos foi usado em cada grupo. A área abaixo da curva (AUC) foi calculada integrando todos os dados de PK (farmacocinéticos) medidos em tecido-s diferentes 137 (plasma, não mostrado) e nos músculos abaixo do local de aplicação do fármaco na pele. Os. resultados obtidos para o músculo superficial {0-1,5 cm) e profundo .(> 1,5 cm) são dados nas Tabelas 12, e sugerem nenhum efeito prejudicial dos agentes de espessamento usados no gel de KT-Tfs para alcançar a viscosidade de suspensão desejada de aproximadamente 730 mPa s. Se algo, o agente de espessamento presente no gel testado é benéfico.

Tabela 12a: Área abaixo da curva (AUC0-8h [ng mg-1 h] ) , medida com duas formulações de cetoprofeno (KT) baseadas em tportador em porcos KT-Tfs gel 17 mg (n=4) KT-Tfs sol. 17 mg (n=4) KT-Tfs gel 50 mg (n=4) KT-Tfs gel 50 mg (n=4) Tecido de músculo superficial 147 44 278 186 Tecido de músculo profundo 97 63 266 202

Tabela 12b: concentração de KT em tecido de músculo superficial (ng/mg)

Tempo (horas) KT-Tfs gel' 17 mg (n=*4) KT-Tfs sol. 17 mg (n=4) KT-Tfs gel 50 mg (n=4) KT-Tfs gel 50 mg (n=4) 0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 '0,0 ± 0,1 0,0 ± 0,0 1 83,3 ± 82,9 2,3 ± 1,5 55,5 ± 66,3 23,0 ± 29,3 2 24,1 ± 27,5 0,8 ± 0, 3 36,3 ± 32,1 21,2 + 33,6 3 8,1 ± 8,0 2,8 ± 0,1 25,7 ± 28,5 9,0 ± 2,1 5 14,2 ± 14,2 10, 6 ± 12,5 45,2 ± 72,9 34,8 ± 49,8 8 3,1 ± 2,6 3,5 ± 2,4 22,0 ± 17,9 29,8 ± 50,1

Tabela 12c: concentração de KT em tecido de músculo profundo (ng/mg)

Tempo KT-Tfs gel KT-Tfs sol. KT-Tfs gel KT-Tfs gel (honras) 17 mg (n=4)' 17 m'g"(n=4) ‘ 50 mg (n 4) " 50 mg n=4p 138 0 0, 0 ± o o O o + 0, 0 O o + 1-1 o O o ± O o 1 36, 0 ± 49, 1 14, 7± 1, 5 24, 8 + 19, 0 24,5 ± 44,7 2 19, 4 ± 23,5 0, 8 ± 0, 3 co 00 i 21, 5 4,5 ± 4,0 3 2, 4 ± 2,6 9,2 ± 3, 1 49,8 + 71, 8 25,4 ± 43, 0 5 13 ,5 i 8, 8 9,3 + 12 5 49,9 + 65, o· 46; 6 ±' 85/6 8 2, 4 ± 1,4 6,4 ± 2, 4 30,2 + 28, 7 15,6 ± 23, 4

Lisboa, 28 de Janeiro de 2008

Claims (6)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Preparação farmacêutica que compreende vesículas de membrana de bi-camada suspensas em um -meio líquido, compreendendo as referidas vesículas um lípido que forma bi-càmada, um fármaco analgésico de anfipãtico e um agente tensioactivo capaz de auto-agregação no meio de suspensão; em que a massa seca total de todas as referidas susbstâncias de anfipãtico está entre 0,01 % em peso e 50 % em peso, e o conteúdo do fármaco está entre 0,1 % e 60 % baseado na referida massa seca total.

2. Preparação dê acordo com a reivindicação 1, em que o lípido que forma bi-camada é um fosfolípido, especialmente uma fosfatidilcolina.

3. Preparação de acordo com. a reivindicação 1 ou com a reivindicação 2, em que' o fármaco analgésico é um NSAID, especialmente o cetoprofeno, ibuprofeno, diclofenac, indometacina, naproxeno ou piroxicam.

4. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que o agente tensioactivo é seleccionado a partir do grupo de agentes tensioactivos não iónicos, e preferivelmente é· um éster de cadeia gorda longa de polietilenoglicol-sorbita-no, um éster de cadeia gorda longa de polietilencglicol, um éster ou um éter de cadeia gorda longa de poli-hidroxietileno, ou um fosfolípido não iónico semelhante a um agente tensioactivo.

5. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que a referida massa seca total está entre 0,1 % em peso e 40 % em peso, preferivelmente entre 0,5 % em peso e 30 % em peso, e mais preferivelmente entre 1 % em peso e 15 % em peso. 2

6. Preparação de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o conteúdo de fármaco está entre 0,5 % e 50 %, preferivelmente entre 1 % e 40 %, baseado na referida massa seca total. Lisboa, 28 de Janeiro de 2008