JP2922017B2 - 経口用脂質膜構造体 - Google Patents
経口用脂質膜構造体Info
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Description
【産業上の利用分野】本発明は、経口投与後効率的に消
化管内パイエル板に送達せしめる脂質膜構造体に関す
る。本発明により製された脂質膜構造体は、保持した薬
物を効率的に消化管内パイエル板に送達できるものであ
る。
化管内パイエル板に送達せしめる脂質膜構造体に関す
る。本発明により製された脂質膜構造体は、保持した薬
物を効率的に消化管内パイエル板に送達できるものであ
る。
【従来の技術】近年、薬物の有効性向上、安全性の向
上、使用性の向上を目的としたドラッグ・デリバリー・
システム（Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍ，ＤＤＳ）の研究が盛んである。このＤＤＳは、現在
学問的には、放出制御型ＤＤＳ（第一世代ＤＤＳ）と標
的指向型ＤＤＳ（第二世代ＤＤＳ）に区分されている。
経口剤に限って論ずれば、現在までのところ前者の放出
制御型ＤＤＳの研究が中心であり、後者の標的指向型Ｄ
ＤＳの検討は一部を除いてはそれほどなされてこなかっ
た現状にあると言える。ところで、本発明にかかわる消
化管内パイエル板は、小腸粘膜内の隆起でありリンパ小
節の集合体で構成されており、近年その免疫学的な役割
の解明など学問的にも注目されている組織であり、ラテ
ックスビーズのパイエル板からの取り込み機構の解明
（クリニカル・イクスペリメンタル・イムノロジー、７
６巻、１４４頁、１９８９年）や生分解性ポリマーに封
入した薬物のパイエル板からの取り込み（欧州特許出願
番号第８７３０９２８６．０号）などが検討されてきて
いる。しかしながら、これら従来技術においては、経口
投与後消化管内パイエル板に薬物を選択的に取り込ませ
ることまではできなかったと言える。リポソームを経口
剤として用いた検討も過去なされてきてはいる。例示す
れば、インシュリン（バイオキミカ・エト・バイオフィ
ジカ・アクタ、７１６巻、１８８頁、１９８２年）、血
液凝固第ＶＩＩ因子（ランセット、ｉ、７０頁、１９８
０年）、ヘパリン（ケミカル・アンド・ファーマシュー
ティカル・ブレタン、３０巻、２２４５頁、１９８２
年）等の高分子薬物、ビタミンＫ１（ジャーナル・オブ
・ファーマシイ・アンド・ファーマコロジー、３６巻、
５２７頁、１９８４年）、グリセオフルビン（ジャーナ
ル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンスィズ、
７３巻、７５７頁、１９８４年）などの水難溶性薬物な
どの他、腸管免疫を指向した（ＩｇＡ抗体産生を目的と
した）連鎖球菌細胞壁抗原をリポソームに封入したもの
が検討されてきた。しかしながら、いずれの場合にも、
特にリポソームの膜を他の添加物により修飾することに
より、消化管内パイエル板に選択性を持たせたというも
のではなかった。一方、注射剤としてのリポソームにお
いては、その膜をホスファチジルセリン（キャンサー・
リサーチ、４０巻、４４６０頁、１９８０年）で修飾す
ることにより、静脈内投与後、肺胞マクロファージが活
性化された抗腫瘍効果が高まったとするものや、マンノ
ース誘導体（バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・ア
クタ、６３２巻、５６２頁、１９８０年）あるいはマン
ナン誘導体（病態生理、６巻、７７１頁、１９８５年）
で修飾することにより、肝臓や肺臓に対して集積性が認
められたとするものがある。いずれにしても、従来技術
においては、経口投与後効率的に消化管内パイエル板に
薬物を送達せしめるものはなかったといえる。
上、使用性の向上を目的としたドラッグ・デリバリー・
システム（Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅ
ｍ，ＤＤＳ）の研究が盛んである。このＤＤＳは、現在
学問的には、放出制御型ＤＤＳ（第一世代ＤＤＳ）と標
的指向型ＤＤＳ（第二世代ＤＤＳ）に区分されている。
経口剤に限って論ずれば、現在までのところ前者の放出
制御型ＤＤＳの研究が中心であり、後者の標的指向型Ｄ
ＤＳの検討は一部を除いてはそれほどなされてこなかっ
た現状にあると言える。ところで、本発明にかかわる消
化管内パイエル板は、小腸粘膜内の隆起でありリンパ小
節の集合体で構成されており、近年その免疫学的な役割
の解明など学問的にも注目されている組織であり、ラテ
ックスビーズのパイエル板からの取り込み機構の解明
（クリニカル・イクスペリメンタル・イムノロジー、７
６巻、１４４頁、１９８９年）や生分解性ポリマーに封
入した薬物のパイエル板からの取り込み（欧州特許出願
番号第８７３０９２８６．０号）などが検討されてきて
いる。しかしながら、これら従来技術においては、経口
投与後消化管内パイエル板に薬物を選択的に取り込ませ
ることまではできなかったと言える。リポソームを経口
剤として用いた検討も過去なされてきてはいる。例示す
れば、インシュリン（バイオキミカ・エト・バイオフィ
ジカ・アクタ、７１６巻、１８８頁、１９８２年）、血
液凝固第ＶＩＩ因子（ランセット、ｉ、７０頁、１９８
０年）、ヘパリン（ケミカル・アンド・ファーマシュー
ティカル・ブレタン、３０巻、２２４５頁、１９８２
年）等の高分子薬物、ビタミンＫ１（ジャーナル・オブ
・ファーマシイ・アンド・ファーマコロジー、３６巻、
５２７頁、１９８４年）、グリセオフルビン（ジャーナ
ル・オブ・ファーマシューティカル・サイエンスィズ、
７３巻、７５７頁、１９８４年）などの水難溶性薬物な
どの他、腸管免疫を指向した（ＩｇＡ抗体産生を目的と
した）連鎖球菌細胞壁抗原をリポソームに封入したもの
が検討されてきた。しかしながら、いずれの場合にも、
特にリポソームの膜を他の添加物により修飾することに
より、消化管内パイエル板に選択性を持たせたというも
のではなかった。一方、注射剤としてのリポソームにお
いては、その膜をホスファチジルセリン（キャンサー・
リサーチ、４０巻、４４６０頁、１９８０年）で修飾す
ることにより、静脈内投与後、肺胞マクロファージが活
性化された抗腫瘍効果が高まったとするものや、マンノ
ース誘導体（バイオキミカ・エト・バイオフィジカ・ア
クタ、６３２巻、５６２頁、１９８０年）あるいはマン
ナン誘導体（病態生理、６巻、７７１頁、１９８５年）
で修飾することにより、肝臓や肺臓に対して集積性が認
められたとするものがある。いずれにしても、従来技術
においては、経口投与後効率的に消化管内パイエル板に
薬物を送達せしめるものはなかったといえる。
【発明が解決しようとする課題】本発明は、経口投与後
効率的に消化管内パイエル板に薬物を送達させることが
できる脂質膜構造体を提供することを目的とする。
効率的に消化管内パイエル板に薬物を送達させることが
できる脂質膜構造体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】本発明は、脂質膜構造体
の膜成分としてホスファチジルセリン、マンノース誘導
体及びマンナン誘導体から選ばれる少なくとも１種を使
用すると上記課題を解決できるとの知見に基づいてなさ
れたのである。すなわち、本発明にかかわる脂質膜構造
体とは、両親媒性脂質の極性基が界面の水相側に向かっ
て配列した膜構造を有する粒子を意味し、具体的にはリ
ポソーム、エマルジョンあるいは水溶性ミセル等が例示
される。本脂質膜構造体は、経口投与後効率的に消化管
内パイエル板に送達されるために、その膜成分としてホ
スファチジルセリン及び／またはマンノース誘導体及び
／またはマンナン誘導体が添加されていることを特徴と
する。本発明にかかわるホスファチジルセリンとして
は、天然由来の大豆または卵黄ホスファチジルセリン、
これらを水素添加した水素添加ホスファチジルセリン、
もしくは半合成のジミリストイルホスファチジルセリ
ン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロ
イルホスファチジルセリンなどが挙げられるが、好まし
くは水素添加ホスファチジルセリン、ジパルミトイルホ
スファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセ
リンが良い。本発明にかかわるマンノース誘導体として
は、マンノース残基を有するホスファチジルエタノール
アミンの誘導体（バイオキミカ・エト・バイオフィジカ
・アクタ、６３２巻、５６２頁、１９８０年）やコレス
テロールの誘導体（プロシーディング・オブ・ナショナ
ル・アカデミック・サイエンスィズ・ユー・エス・エイ
・７７巻、４４３０頁、１９８０年）、ジマンノシルジ
グリセリド（バイオケミカル・アンド・バイオフィジカ
ル・リサーチ・コミュニケーションズ、１１０巻、１４
０頁、１９８３年）、マンノビオース脂肪酸エステル及
びアミド（特開平１−１０４０８８号）、ホスファチジ
ルマンノースなどが挙げられる。また本発明のマンナン
誘導体としては、多糖であるマンナンに脂肪酸やコレス
テロールが部分的に置換された誘導体（病態生理、６
巻、７７１頁、１９８５年）などが挙げられる。これら
膜成分としての添加物は、単品もしくは混合物として、
レシチン等の他の膜成分を主体とした脂質膜構造体に添
加されれば良いが、これら添加物単独で脂質膜構造体を
形成しても良い。即ち、ホスファチジルセリン類はこれ
単独でもリポソームやエマルジョンを形成することは可
能であるし、マンノビオース脂肪酸エステルやアミドの
如きマンノース誘導体はこれ単独でエマルジョンやミセ
ルを形成することは可能である。したがって、本発明に
おいては、本脂質膜構造体に膜成分として用いられるホ
スファチジルセリン、マンノース誘導体、マンナン誘導
体の添加比率は上限においては何ら限定されるものでは
ない。下限については、全脂質膜成分に対しモル分率で
１％以上とするのがよく、好ましくは５〜５０％添加す
ることが望ましい。本発明の脂質膜構造体が保持しうる
薬物は脂質膜構造体の種類によって異なる。例えばリポ
ソームが保持しうるものとしては特に制限がなくインシ
ュリン、ホルモンや多糖類の如き高分子化合物、免疫賦
活剤、免疫抑制剤等の水溶性薬物及び脂溶性薬物を挙げ
ることができる。またエマルジョンの場合には脂溶性薬
物を、更にミセルの場合には水難溶性薬物を保持可能な
ものとして挙げることができる。これらは、以下に述べ
る脂質膜構造体の製造法において、通常の方法で製され
る脂質膜構造体中に保持させることができる。次に本発
明のホスファチジルセリン及び／またはマンノース誘導
体及び／またはマンナン誘導体が添加された脂質膜構造
体の製造法を説明する。 ａ）リポソームの製造法 レシチン、スフィンゴミエリン等の膜成分物質とホスフ
ァチジルセリン及び／またはマンノース誘導体及び／ま
たはマンナン誘導体の添加物質とを用いて、公知の方法
（アニュアル・レビュー・オブ・バイオフィジックス・
アンド・バイオエンジニアリング、９巻、４６７頁、１
９８０年）に従いリポソームの水分散液を調製する。か
かるリポソームは安定化剤としてコレステロール等のス
テロール類、ジアルキルホスフェート、ジアシルホスフ
ァチジン酸、ステアリルアミン等の荷電脂質及びα−ト
コフェロール等の酸化防止剤を含んでいても良い。 ｂ）エマルジョンの製造法 レシチン、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル（Ｔｗｅｅｎ）等の両親媒性物質とホスファチジルセ
リン及び／またはマンノース誘導体及び／またはマンナ
ン誘導体の添加物質と大豆油等の油脂とを用い、公知の
エマルジョン調製方法に従ってエマルジョンを調製する
ことができる。 ｃ）ミセルの製造法 ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅ
ｅｎ）、脂肪酸ナトリウム及びポリオキシエチレン硬化
ヒマシ油等のミセル形成界面活性物質（ミセル形成臨界
濃度以上の濃度で水性溶媒に加える）とホスファチジル
セリン及び／またはマンノース誘導体及び／またはマン
ナン誘導体の添加物質とを用い、公知のミセル調製方法
に従ってミセルの水分散液を調製することができる。
の膜成分としてホスファチジルセリン、マンノース誘導
体及びマンナン誘導体から選ばれる少なくとも１種を使
用すると上記課題を解決できるとの知見に基づいてなさ
れたのである。すなわち、本発明にかかわる脂質膜構造
体とは、両親媒性脂質の極性基が界面の水相側に向かっ
て配列した膜構造を有する粒子を意味し、具体的にはリ
ポソーム、エマルジョンあるいは水溶性ミセル等が例示
される。本脂質膜構造体は、経口投与後効率的に消化管
内パイエル板に送達されるために、その膜成分としてホ
スファチジルセリン及び／またはマンノース誘導体及び
／またはマンナン誘導体が添加されていることを特徴と
する。本発明にかかわるホスファチジルセリンとして
は、天然由来の大豆または卵黄ホスファチジルセリン、
これらを水素添加した水素添加ホスファチジルセリン、
もしくは半合成のジミリストイルホスファチジルセリ
ン、ジパルミトイルホスファチジルセリン、ジステアロ
イルホスファチジルセリンなどが挙げられるが、好まし
くは水素添加ホスファチジルセリン、ジパルミトイルホ
スファチジルセリン、ジステアロイルホスファチジルセ
リンが良い。本発明にかかわるマンノース誘導体として
は、マンノース残基を有するホスファチジルエタノール
アミンの誘導体（バイオキミカ・エト・バイオフィジカ
・アクタ、６３２巻、５６２頁、１９８０年）やコレス
テロールの誘導体（プロシーディング・オブ・ナショナ
ル・アカデミック・サイエンスィズ・ユー・エス・エイ
・７７巻、４４３０頁、１９８０年）、ジマンノシルジ
グリセリド（バイオケミカル・アンド・バイオフィジカ
ル・リサーチ・コミュニケーションズ、１１０巻、１４
０頁、１９８３年）、マンノビオース脂肪酸エステル及
びアミド（特開平１−１０４０８８号）、ホスファチジ
ルマンノースなどが挙げられる。また本発明のマンナン
誘導体としては、多糖であるマンナンに脂肪酸やコレス
テロールが部分的に置換された誘導体（病態生理、６
巻、７７１頁、１９８５年）などが挙げられる。これら
膜成分としての添加物は、単品もしくは混合物として、
レシチン等の他の膜成分を主体とした脂質膜構造体に添
加されれば良いが、これら添加物単独で脂質膜構造体を
形成しても良い。即ち、ホスファチジルセリン類はこれ
単独でもリポソームやエマルジョンを形成することは可
能であるし、マンノビオース脂肪酸エステルやアミドの
如きマンノース誘導体はこれ単独でエマルジョンやミセ
ルを形成することは可能である。したがって、本発明に
おいては、本脂質膜構造体に膜成分として用いられるホ
スファチジルセリン、マンノース誘導体、マンナン誘導
体の添加比率は上限においては何ら限定されるものでは
ない。下限については、全脂質膜成分に対しモル分率で
１％以上とするのがよく、好ましくは５〜５０％添加す
ることが望ましい。本発明の脂質膜構造体が保持しうる
薬物は脂質膜構造体の種類によって異なる。例えばリポ
ソームが保持しうるものとしては特に制限がなくインシ
ュリン、ホルモンや多糖類の如き高分子化合物、免疫賦
活剤、免疫抑制剤等の水溶性薬物及び脂溶性薬物を挙げ
ることができる。またエマルジョンの場合には脂溶性薬
物を、更にミセルの場合には水難溶性薬物を保持可能な
ものとして挙げることができる。これらは、以下に述べ
る脂質膜構造体の製造法において、通常の方法で製され
る脂質膜構造体中に保持させることができる。次に本発
明のホスファチジルセリン及び／またはマンノース誘導
体及び／またはマンナン誘導体が添加された脂質膜構造
体の製造法を説明する。 ａ）リポソームの製造法 レシチン、スフィンゴミエリン等の膜成分物質とホスフ
ァチジルセリン及び／またはマンノース誘導体及び／ま
たはマンナン誘導体の添加物質とを用いて、公知の方法
（アニュアル・レビュー・オブ・バイオフィジックス・
アンド・バイオエンジニアリング、９巻、４６７頁、１
９８０年）に従いリポソームの水分散液を調製する。か
かるリポソームは安定化剤としてコレステロール等のス
テロール類、ジアルキルホスフェート、ジアシルホスフ
ァチジン酸、ステアリルアミン等の荷電脂質及びα−ト
コフェロール等の酸化防止剤を含んでいても良い。 ｂ）エマルジョンの製造法 レシチン、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステ
ル（Ｔｗｅｅｎ）等の両親媒性物質とホスファチジルセ
リン及び／またはマンノース誘導体及び／またはマンナ
ン誘導体の添加物質と大豆油等の油脂とを用い、公知の
エマルジョン調製方法に従ってエマルジョンを調製する
ことができる。 ｃ）ミセルの製造法 ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（Ｔｗｅ
ｅｎ）、脂肪酸ナトリウム及びポリオキシエチレン硬化
ヒマシ油等のミセル形成界面活性物質（ミセル形成臨界
濃度以上の濃度で水性溶媒に加える）とホスファチジル
セリン及び／またはマンノース誘導体及び／またはマン
ナン誘導体の添加物質とを用い、公知のミセル調製方法
に従ってミセルの水分散液を調製することができる。
【発明の効果】本発明の脂質膜構造体は、経口投与後、
保持した薬物を効率的に消化管内パイエル板に送達でき
るものである。パイエル板は、小腸粘膜に存在するリン
パ１節の集合体であり、薬剤の吸収にかかわる組織の一
つであり、特に、高分子の薬物や、免疫活性の調節にか
かわる薬物あるいは吸収の観点から極めて重要な組織で
ある。従って、従来、経口投与での吸収性が良くなかっ
た薬物を本発明の脂質膜構造体に保持させることによ
り、その吸収性を改善することができる。
保持した薬物を効率的に消化管内パイエル板に送達でき
るものである。パイエル板は、小腸粘膜に存在するリン
パ１節の集合体であり、薬剤の吸収にかかわる組織の一
つであり、特に、高分子の薬物や、免疫活性の調節にか
かわる薬物あるいは吸収の観点から極めて重要な組織で
ある。従って、従来、経口投与での吸収性が良くなかっ
た薬物を本発明の脂質膜構造体に保持させることによ
り、その吸収性を改善することができる。
【実施例】本発明を実施例及び試験例により説明する
が、本発明はこれによって限定されるものではない。な
お、ここで説明するリポソームの基本的な調製方法、及
びリポソームのパイエル板への移行性の実験は共通なの
で、始めにまとめて例示しておく。リポソームの調製方法 （実施例１〜４、対照例３〜４） 下に示すモル比の脂質を、ナス型コルベンに全脂質量と
して５０μモルとり、いったんクロロホルム−メタノー
ル混液で完全に溶解させた後、減圧下のエバポレーター
にて有機溶媒を留去した。更に減圧下のデシケーター中
で有機溶媒を完全に除去して脂質混合物を乾燥させた。
次に、内水相マーカーである６−カルボキシフルオレセ
イン（６−ＣＦ）１０ｍｇ／ｍｌまたはフェノールレッ
ド１０ｍｇ／ｍｌを含有するトリス−塩酸緩衝化生理食
塩液（ｐＨ７．４）を２ｍｌ加え、５０℃にてポルテッ
クス・ミキサーで攪拌振盪した。次いで、０．４μｍの
孔径を有するポリカーボネート製メンブランフィルター
を５０℃にて通過させ、粒子径０．４μｍ以下のリポソ
ーム分散液とした。リポソームに封入されなかった内水
相マーカーは、上で得られたリポソーム分散液をセファ
デックスＧ−１００カラム（３ｃｍφ×４５ｃｍ、溶離
液：トリス−塩酸緩衝化生理食塩液、ｐＨ７．４）に通
すことにより除去した。内水相マーカーが封入されたリ
ポソーム分画は、最終的にトリス−塩酸緩衝化生理食塩
液（ｐＨ７．４）で希釈し、６−ＣＦの濃度として４．
０μｇ／ｍｌあいはフェノールレッドとして４００μｇ
／ｍｌ（最終全脂質濃度は約１ｍＭ＝１μモル／ｍｌ）
となるように調整した。なお、実施例４のマンナン修飾
リポソームは、実施例２と同じＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝
７／３／２（モル比）のリポソームを調製した後、砂本
らの方法に従い、リポソームとマンナン−コレステロー
ル誘導体とを（リポソーム中のリン脂質１μモルに対
し、マンナン−コレステロール誘導体の添加量はマンナ
ンとして５３．１μｇ）、４℃で２時間反応させて調製
した。 対照例３：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／０／２（モル
比） 実施例１：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／１／２（モル
比） 実施例２：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／３／２（モル
比） 実施例３：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／５／２（モル
比） 実施例４：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ／Ｍａｎ−ＣＨＯＬ 対照例４：ＰＣ／ＳＡ／ＣＨＯＬ：７／３／２（モル
比） 〔略号〕ＰＣ：卵黄ホスファチジルコリン ＰＳ：水素添加大豆ホスファチジルセリン ＣＨＯＬ：コレステロール Ｍａｎ−ＣＨＯＬ：マンナン−コレステロール誘導体
〔Ｎ−（２−Ｎ−コレステリルカルボキシアミノエチ
ル）カルバミルマンナン、商品名：Ｃｈｏｌ−ＡＥＣＭ
−Ｍａｎｎａｎ（和光純薬社製）〕 ＳＡ：ステアリルアミンリポソームのパイエル板への移行性実験 （試験例１〜
６） リポソームのパイエル板への移行は、ｉｎ ｓｉｔｕル
ープ法により検討した。ウィスター系雄性ラット（２５
０ｇ前後）を１８時間絶食し、ウレタン麻酔下開腹し小
腸を約１５ｃｍごとに４つの区分に結紮してループで作
成した。次いでこのループ内に種々の試験液１．０ｍｌ
（６−ＣＦとして４．０μｇ、フェノールレッドとして
４００μｇ、全脂質として約１μモル）を注入し、一定
時間後腸管を摘出し、生理食塩液で洗浄した。次にパイ
エル板及びパイエル板近傍の組織（非パイエル板）２０
ｍｍ２を切除し、両組織に移行した内水相マーカーをイ
ソアミルアルコールで抽出し定量した。 試験例１ 試験液として、対照例１（遊離の６−ＣＦ４．０μｇ／
ｍｌ）、対照例３（ＰＣ−リポソーム）及び実施例２
（ＰＳ−リポソーム）を用いて、パイエル板への移行性
実験を行った。試験液投与後２時間の結果を図１左及び
表１に示すが、遊離の６−ＣＦに比べ、ＰＣ−リポソー
ム及びＰＳ−リポソームに封入した６−ＣＦのパイエル
板及び非パイエル板への移行は増加することがわかっ
た。更に、ＰＳ−リポソームにおいては、非パイエル板
に比べパイエル板への移行が有意に高くなることもわか
った。
が、本発明はこれによって限定されるものではない。な
お、ここで説明するリポソームの基本的な調製方法、及
びリポソームのパイエル板への移行性の実験は共通なの
で、始めにまとめて例示しておく。リポソームの調製方法 （実施例１〜４、対照例３〜４） 下に示すモル比の脂質を、ナス型コルベンに全脂質量と
して５０μモルとり、いったんクロロホルム−メタノー
ル混液で完全に溶解させた後、減圧下のエバポレーター
にて有機溶媒を留去した。更に減圧下のデシケーター中
で有機溶媒を完全に除去して脂質混合物を乾燥させた。
次に、内水相マーカーである６−カルボキシフルオレセ
イン（６−ＣＦ）１０ｍｇ／ｍｌまたはフェノールレッ
ド１０ｍｇ／ｍｌを含有するトリス−塩酸緩衝化生理食
塩液（ｐＨ７．４）を２ｍｌ加え、５０℃にてポルテッ
クス・ミキサーで攪拌振盪した。次いで、０．４μｍの
孔径を有するポリカーボネート製メンブランフィルター
を５０℃にて通過させ、粒子径０．４μｍ以下のリポソ
ーム分散液とした。リポソームに封入されなかった内水
相マーカーは、上で得られたリポソーム分散液をセファ
デックスＧ−１００カラム（３ｃｍφ×４５ｃｍ、溶離
液：トリス−塩酸緩衝化生理食塩液、ｐＨ７．４）に通
すことにより除去した。内水相マーカーが封入されたリ
ポソーム分画は、最終的にトリス−塩酸緩衝化生理食塩
液（ｐＨ７．４）で希釈し、６−ＣＦの濃度として４．
０μｇ／ｍｌあいはフェノールレッドとして４００μｇ
／ｍｌ（最終全脂質濃度は約１ｍＭ＝１μモル／ｍｌ）
となるように調整した。なお、実施例４のマンナン修飾
リポソームは、実施例２と同じＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝
７／３／２（モル比）のリポソームを調製した後、砂本
らの方法に従い、リポソームとマンナン−コレステロー
ル誘導体とを（リポソーム中のリン脂質１μモルに対
し、マンナン−コレステロール誘導体の添加量はマンナ
ンとして５３．１μｇ）、４℃で２時間反応させて調製
した。 対照例３：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／０／２（モル
比） 実施例１：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／１／２（モル
比） 実施例２：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／３／２（モル
比） 実施例３：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ＝７／５／２（モル
比） 実施例４：ＰＣ／ＰＳ／ＣＨＯＬ／Ｍａｎ−ＣＨＯＬ 対照例４：ＰＣ／ＳＡ／ＣＨＯＬ：７／３／２（モル
比） 〔略号〕ＰＣ：卵黄ホスファチジルコリン ＰＳ：水素添加大豆ホスファチジルセリン ＣＨＯＬ：コレステロール Ｍａｎ−ＣＨＯＬ：マンナン−コレステロール誘導体
〔Ｎ−（２−Ｎ−コレステリルカルボキシアミノエチ
ル）カルバミルマンナン、商品名：Ｃｈｏｌ−ＡＥＣＭ
−Ｍａｎｎａｎ（和光純薬社製）〕 ＳＡ：ステアリルアミンリポソームのパイエル板への移行性実験 （試験例１〜
６） リポソームのパイエル板への移行は、ｉｎ ｓｉｔｕル
ープ法により検討した。ウィスター系雄性ラット（２５
０ｇ前後）を１８時間絶食し、ウレタン麻酔下開腹し小
腸を約１５ｃｍごとに４つの区分に結紮してループで作
成した。次いでこのループ内に種々の試験液１．０ｍｌ
（６−ＣＦとして４．０μｇ、フェノールレッドとして
４００μｇ、全脂質として約１μモル）を注入し、一定
時間後腸管を摘出し、生理食塩液で洗浄した。次にパイ
エル板及びパイエル板近傍の組織（非パイエル板）２０
ｍｍ２を切除し、両組織に移行した内水相マーカーをイ
ソアミルアルコールで抽出し定量した。 試験例１ 試験液として、対照例１（遊離の６−ＣＦ４．０μｇ／
ｍｌ）、対照例３（ＰＣ−リポソーム）及び実施例２
（ＰＳ−リポソーム）を用いて、パイエル板への移行性
実験を行った。試験液投与後２時間の結果を図１左及び
表１に示すが、遊離の６−ＣＦに比べ、ＰＣ−リポソー
ム及びＰＳ−リポソームに封入した６−ＣＦのパイエル
板及び非パイエル板への移行は増加することがわかっ
た。更に、ＰＳ−リポソームにおいては、非パイエル板
に比べパイエル板への移行が有意に高くなることもわか
った。
【表１】 試験例２ 試験液として、対照例２（遊離のフェノールレッド４０
０μｇ／ｍｌ）及び対照例４（ＳＡ−リポソーム）を用
いて、パイエル板への移行性実験を行った。試験液投与
後２時間の結果を図１右及び表２に示すが、パイエル板
及び非パイエル板いずれの移行も遊離のフェノールレッ
ドを投与した時の値と等しく、有意な差は認められなか
った。
０μｇ／ｍｌ）及び対照例４（ＳＡ−リポソーム）を用
いて、パイエル板への移行性実験を行った。試験液投与
後２時間の結果を図１右及び表２に示すが、パイエル板
及び非パイエル板いずれの移行も遊離のフェノールレッ
ドを投与した時の値と等しく、有意な差は認められなか
った。
【表２】 試験例３ 次に、６−ＣＦのパイエル板への移行性に及ぼすＰＳの
添加量の影響について検討した。即ち、試験液として、
対照例３（ＰＣ−リポソーム）と実施例１、実施例２及
び実施例３のＰＳ−リポソームを用いて、パイエル板へ
の移行性実験を行った。試験液投与後２時間の結果を図
２及び表３に示すが、ＰＣ−リポソームに比べＰＳ−リ
ポソームでは、ＰＳ含量の増加にともない内封した６−
ＣＦのパイエル板への移行は増加する傾向が認められ
た。なお、ＰＳ含量のことなる３種のＰＳ−リポソーム
（実施例１、実施例２及び実施例３）の間での有意な差
は認められなかった。
添加量の影響について検討した。即ち、試験液として、
対照例３（ＰＣ−リポソーム）と実施例１、実施例２及
び実施例３のＰＳ−リポソームを用いて、パイエル板へ
の移行性実験を行った。試験液投与後２時間の結果を図
２及び表３に示すが、ＰＣ−リポソームに比べＰＳ−リ
ポソームでは、ＰＳ含量の増加にともない内封した６−
ＣＦのパイエル板への移行は増加する傾向が認められ
た。なお、ＰＳ含量のことなる３種のＰＳ−リポソーム
（実施例１、実施例２及び実施例３）の間での有意な差
は認められなかった。
【表３】 試験例４ ＰＳ−リポソームのパイエル板及び非パイエル板への移
行に及ぼすインキュベーション時間の検討を行った。即
ち、試験液として実施例２（ＰＳ−リポソーム）を用い
て、パイエル板への移行性実験を行った。試験液投与後
の経時変化を図３及び表４に示すが、パイエル板への移
行はインキュベーション時間とともに増加し約２時間で
飽和に達することがわかった。また非パイエル板への移
行は低くほぼ一定の値であった。
行に及ぼすインキュベーション時間の検討を行った。即
ち、試験液として実施例２（ＰＳ−リポソーム）を用い
て、パイエル板への移行性実験を行った。試験液投与後
の経時変化を図３及び表４に示すが、パイエル板への移
行はインキュベーション時間とともに増加し約２時間で
飽和に達することがわかった。また非パイエル板への移
行は低くほぼ一定の値であった。
【表４】 試験例５ 試験液として実施例２（ＰＳ−リポソーム）を用い、試
験液投与後２時間におけるパイエル板及び非パイエル板
への移行性における腸管部位特異性を検討した。結果を
図４に示すが、部位差は特に認められなかった。 試験例６ 試験液として、実施例２（ＰＳ−リポソーム）及び実施
例４（マンナン修飾ＰＳ−リポソーム）を用いて、パイ
エル板への移行性実験を行った。結果を図５及び表５左
に示すが、ＰＳリポソームを更にマンナンで修飾するこ
とにより、パイエル板への移行性は有意に増加し非パイ
エル板への移行性は有意に低下することがわかった。ま
た、このマンナン修飾ＰＳ−リポソームと共に過剰のマ
ンナン（リポソームに添加した量の１００倍量）を同時
投与した対照例５、並びにマンナン修飾ＰＳ−リポソー
ムと共に内水相マーカーを封入しない空のＰＳ−リポソ
ーム（膜組成は実施例２と同じで、１００倍量の１００
μモルの脂質を投与）を同時投与した対照例６の結果を
図６右及び表５右に示す。これらの併用によりマンナン
修飾ＰＳ−リポソームのパイエル板への移行性は有意に
阻害されたこと、並びに非パイエル板への移行性は特に
影響されなかったことから、本発明によるリポソームは
選択的にパイエル板に移行する性質を有することが証明
された。
験液投与後２時間におけるパイエル板及び非パイエル板
への移行性における腸管部位特異性を検討した。結果を
図４に示すが、部位差は特に認められなかった。 試験例６ 試験液として、実施例２（ＰＳ−リポソーム）及び実施
例４（マンナン修飾ＰＳ−リポソーム）を用いて、パイ
エル板への移行性実験を行った。結果を図５及び表５左
に示すが、ＰＳリポソームを更にマンナンで修飾するこ
とにより、パイエル板への移行性は有意に増加し非パイ
エル板への移行性は有意に低下することがわかった。ま
た、このマンナン修飾ＰＳ−リポソームと共に過剰のマ
ンナン（リポソームに添加した量の１００倍量）を同時
投与した対照例５、並びにマンナン修飾ＰＳ−リポソー
ムと共に内水相マーカーを封入しない空のＰＳ−リポソ
ーム（膜組成は実施例２と同じで、１００倍量の１００
μモルの脂質を投与）を同時投与した対照例６の結果を
図６右及び表５右に示す。これらの併用によりマンナン
修飾ＰＳ−リポソームのパイエル板への移行性は有意に
阻害されたこと、並びに非パイエル板への移行性は特に
影響されなかったことから、本発明によるリポソームは
選択的にパイエル板に移行する性質を有することが証明
された。
【表５】
【図１】本発明のＰＳ−リポソーム及びＳＡ−リポソー
ムを用いたパイエル板への移行結果を示す。
ムを用いたパイエル板への移行結果を示す。
【図２】本発明のＰＳ−リポソームを用いたパイエル板
への移行に対するＰＳ添加量の効果を示す。
への移行に対するＰＳ添加量の効果を示す。
【図３】本発明のＰＳ−リポソームを用いたパイエル板
への移行における、試験液投与後の経時変化を示す。
への移行における、試験液投与後の経時変化を示す。
【図４】本発明のＰＳ−リポソームを用いたパイエル板
及び非パイエル板への移行性における腸管部位特異性を
示す。
及び非パイエル板への移行性における腸管部位特異性を
示す。
【図５】本発明のＰＳ−リポソームをマンナンで修飾す
ることによるパイエル板への移行性の増加を示す。
ることによるパイエル板への移行性の増加を示す。
【図６】本発明のＰＳ−リポリームをマンナンで修飾す
ることによるパイエル板への移行性を増加を示す。
ることによるパイエル板への移行性を増加を示す。
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 9/127 A61K 47/24
Claims (1)
- 【請求項１】 膜成分にホスファチジルセリンおよびマ
ンナン誘導体を含有することを特徴とする経口投与用リ
ポソーム。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3132385A JP2922017B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | 経口用脂質膜構造体 |
| CA 2052164 CA2052164A1 (en) | 1991-03-25 | 1991-09-24 | Lipid membrance structures for oral administration |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3132385A JP2922017B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | 経口用脂質膜構造体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0517344A JPH0517344A (ja) | 1993-01-26 |
| JP2922017B2 true JP2922017B2 (ja) | 1999-07-19 |
Family
ID=15080154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3132385A Expired - Fee Related JP2922017B2 (ja) | 1991-03-25 | 1991-03-25 | 経口用脂質膜構造体 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2922017B2 (ja) |
| CA (1) | CA2052164A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9757332B2 (en) | 2013-05-20 | 2017-09-12 | Uha Mikakuto Co., Ltd. | Gel-like composition having high ubiquinol content |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2309633C (en) * | 1998-10-23 | 2010-12-14 | Idea Innovative Dermale Applikationen Gmbh | Method for developing, testing and using associates of macromolecules and complex aggregates for improved payload and controllable de/association rates |
| EP1140021B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-08-04 | Idea Ag | Improved formulation for topical non-invasive application in vivo |
| EP1031347B1 (en) | 1999-01-27 | 2002-04-17 | Idea Ag | Transnasal transport/immunisation with highly adaptable carriers |
| DE69901377T2 (de) | 1999-01-27 | 2003-01-02 | Idea Ag | Nichtinvasive Impfung durch die Haut |
| WO2001001962A1 (en) | 1999-07-05 | 2001-01-11 | Idea Ag. | A method for the improvement of transport across adaptable semi-permeable barriers |
| US20040105881A1 (en) | 2002-10-11 | 2004-06-03 | Gregor Cevc | Aggregates with increased deformability, comprising at least three amphipats, for improved transport through semi-permeable barriers and for the non-invasive drug application in vivo, especially through the skin |
| JP2005119986A (ja) * | 2003-10-15 | 2005-05-12 | Japan Science & Technology Agency | 生理活性物質の投与方法、生理活性物質含有乳化液、及び生理活性物質含有乳化液の製造方法 |
-
1991
- 1991-03-25 JP JP3132385A patent/JP2922017B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-09-24 CA CA 2052164 patent/CA2052164A1/en not_active Abandoned
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9757332B2 (en) | 2013-05-20 | 2017-09-12 | Uha Mikakuto Co., Ltd. | Gel-like composition having high ubiquinol content |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0517344A (ja) | 1993-01-26 |
| CA2052164A1 (en) | 1992-09-26 |
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