MXPA01004340A - Composiciones farmaceuticas que contienen inhibidores de poli(adp-ribosa)glucohidrolasa y metodos para usar las mismas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que contienen inhibidores de poli(ADP- ribosa)glucohidrolasa, tambien conocidos como inhibidores de PARG, y metodos para usarlos para inhibir o disminuir el agotamiento de la energia celular inducida por radicales libres, daño celular o muerte celular. Mas particularmente, la presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas que contienen inhibidores de poli(ADP-ribosa) glucohidrolasa, tal como derivados de glucosa; glucosidos de lignina; taninos hidrolizables que incluyen galotaninos y elagitaninos; derivados de adenosida, derivados de acridina que incluyen lactato de 6,9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado: analogos de tilorona que incluyen tilorona R10.556, daunomicina o clorhidrato de daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG; y su metodo de uso en el tratamiento o prevencion de enfermedades o condiciones debidas al agotamiento de la energia celular inducido por radicales libres y/o daño de tejido que resulta de daño o muerte celular, debida a necrosis, apoptosis o combinaciones de las mismas.

Description

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS QUE CONTIENEN INHIBIDORES DE POLI (ADP-RIBOSA) G UCOHIDROLASA Y MÉTODOS PARA USAR LAS MISMAS ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Campo de la invención La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas que contienen inhibidores de poli (ADP-ribosa ) glucohidrolasa , también conocidos como inhibidores de PARG, y métodos para usar las mismas para inhibir o disminuir el agotamiento de la energía celular inducido por radicales libres, daño o muerte celular. Más particularmente, la invención se refiere a composiciones farmacéu icas que contienen inhibidores de pol i (ADP-ribosa) glucohidrolasa tal como derivados de glucosa; glucósidos de lignina; taninos hidrolizables que incluyen galotaninos y elagi taninos ; derivados de adenosida; derivados de acridina que incluyen lactato de 6 , 9 -diamino - 2 - etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.555, clorhidrato de daunomicina o daunorubicina ; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG; y su método de uso para tratar o prevenir enfermedades o condiciones debidas al agotamiento de la energía celular inducido por radicales libres y/o daño de tejido que resulta del REF: 128996 daño o muerte celular debido a necrosis, apoptosis, o combinaciones de las mismas.

Descripción del Arte Anterior Un enfoque principal de la investigación biomédica actual está en los mecanismos de muerte celular como en nuevos agentes terapéuticos específicos que modulan estos procesos, de desarrollo continuo. La muerte celular se separa en general en dos categorías : apoptosis y necrosis. La apoptosis, llamada comúnmente muerte celular programada, se ha caracterizado bien particularmente en el desarrollo, mientras que la necrosis es más prominente como la respuesta inicial a la lesión nociva preponderante. La muerte celular programada es un proceso controlado genéticamente que sigue el estímulo fisiológico en células individuales, e involucra típicamente la ondulación de la membrana celular, condensación nuclear y citoplásmica, corte de ADN int ranucleosomal , y fagocitosis eventual de la célula sin inflamación significativa. La necrosis es un proceso más rápido y severo que se presenta en grupos de células en respuesta a lesión patológica. Este modo de muerte celular se caracteriza por hinchamiento de la mitocondria y el retículo endoplásmico, seguido por una pérdida de la integridad de la membrana y destrucción aleatoria de ADN y otras macromoléculas, que culmina en aleatoria de ADN y otras macromoléculas, que culmina en respuesta inflamatoria sustancial. Aunque la extensa mayoría de literatura de muerte celular sugiere que todos los casos de muerte celular pueden clasificarse ya sea como apoptosis o necrosis, aspectos de ambos mecanismos existen en una variedad de paradigmas de muerte celular. Un ejemplo es la excitotoxicidad después del ataque y algunos padecimientos neurodegenerativos, en los que la muerte neuronal resulta al menos en parte por la acumulación de concentraciones locales altas del glutamato neurotransmisor exitatorio. Mientras que la fase inmediata de la muerte celular después de la hipoxia se parece más estrechamente a la necrosis, la propagación de la lesión produce una lesión secundaria con muchas características de apoptosis clásica. Para diseñar métodos terapéuticas racionales de la muerte celular neuronal en el futuro, los investigadores deberían considerar probablemente paradigmas de enfermedades individuales que se ocupen de posiciones únicas en alguna parte en un continuo entre los extremos de la apoptosis y la necrosis. La enzima que repara el ADN poli (ADP-ribosa) polimerasa (PARP) (EC 2.4.2.30), también conocida como poli (ADP-ribosa) sintetasa o poli (ADP-ribosa ) transferasa (PADRT), ha surgido como un actor principal a lo largo del continuo de la muerte celular. El corte de la PARP por caspasa-3 es una característica definida de la apoptosis, y la PARP también juega un papel de punto de partida en muerte celular necrótica clásica. La PARP nuclear se activa selectivamente por las hebras de ADN rotas para catalizar la adición de cadenas largas y ramificadas de poli (ADP-ribosa) (PAR) de su sustrato nicotinamida adenín dinucleótido (NAD) a una variedad de proteínas nucleares, más notablemente la misma PARP. El daño masivo de ADN, tal como el que resulta típicamente de los estímulos necróticos, produce un aumento mayor de actividad de PARP que agota rápidamente los niveles celulares de NAD. El agotamiento de NAD, una co-enzima importante en el metabolismo de energía, resulta en la producción más baja de ATP. Además, la célula consume ATP con esfuerzo para re-sintetizar NAD, y esta crisis de energía culmina en la muerte celular. El concepto de muerte celular mediada por PARP, después del daño excesivo de ADN se soporta por un número de estudios que muestran la prevención de la muerte celular por inhibidores de PARP selectivos y la protección en ratones con eliminación dirigida del gen de PARP. La protección dramática proporcionada por la inhibición de PARP en una variedad de modelos animales de enfermedad podrían conducir a nuevas entidades terapéuticas. La poli (ADP-ribosil ) ación se involucra en una variedad de eventos fisiológicos, tal como descondensación de cromato, replicación de ADN, reparación de ADN, expresión de los genes, transformación maligna, diferenciación celular, y apoptosis. La actividad nuclear de PARP es abundante en todo el cuerpo, particularmente en el cerebro, en el sistema inmune y en las células de línea germinal. La enzima PARP puede agruparse en tres dominios principales. Una porción N-terminal de 46 kD comprende el dominio de enlace del ADN que contiene dos radicales de identificación de zinc y una señal de localización nuclear. Esta región reconoce rompimientos de ADN tanto de una hebra como de dos de una forma que no depende de la secuencia a través de primero y segundo zinc de identificación, respectivamente. Un dominio de automodificación central de 22 kD contiene 15 residuos de glutamato altamente conservados aunque para ser receptores de la auto-poli (ADP-ribosil ) ación, y la región C-terminal de 54 kD contiene tanto el sitio de enlace de NAD como el dominio catalítico que sintetiza PAR. En el enlace para romper en el ADN, la actividad de PARP se aumenta tanto como 500 veces conforme se cataliza la transferencia y polimerización de unidades de ADP-ribosa tanto en sí misma como en otras proteínas nucleares, que incluyen histonas y ADN topoisomerasas I y II. La misma PARP es la principal proteína poli (ADP-ribosil ) ada in vivo . No es claro como el enlace a la hebra rota de ADN por la porción N-terminal de la PARP activa alostéricamente el dominio catalítico, pero la iniciación y el alargamiento subsecuente del polímero de PAR prosigue probablemente por un mecanismo intermolecular, tal como la dimerización de proteínas. Después de la iniciación, la PARP cataliza las reacciones de alargamiento y ramificación para sintetizar estructuras altamente ramificadas y complejas, de aproximadamente 200 residuos de ADP-ribosa en un homopolímero grande que es estructuralmente similar a los ácidos nucleicos. La poli (ADP-ribosil ) ación de proteínas conduce en general en su inhibición y puede disociar proteínas de cromatina del ADN. La poli (ADP-ribosil ) ación de histonas, por ejemplo, descondensa la estructura de cromatina, mientras que la degradación subsecuente del polímero restaura la cromatina a su forma condensada. La relajación de la cromatina podría mediar eventos de ADN en sitios dañados, así como orígenes de sitios de iniciación de replicación y transcripción. Una hipótesis es que la PARP ayuda a mantener la integridad cromosomal protegiendo el ADN roto de la recombinación homologa inapropiada. El enlace PARP a extremos de ADN podría impedir su asociación con la maquinaria de recombinación genética, y la PAR cargada negativamente podría repeler electrostáticamente otras moléculas de ADN. La auto-poli (ADP-ribosil ) ación inactiva la PARP a través de repulsión electrostática entre los polímeros de ADP-ribosa unidos a la enzima cargada negativamente y el ADN, y la liberación de la PARP de ADN permite el acceso de las enzimas que reparan el ADN a la lesión (Fig.l). El PAR que se sintetiza en respuesta al daño masivo tiene una vida media corta cercana a un minuto, ya que se hidroliza rápidamente en los enlaces ribosa-ribosa y se convierte a ADP-ribosa libre por medio de la enzima poli (ADP-ribosa ) glucohidrolasa (PARG). La respuesta rápida de PARG a la síntesis de PAR, indica que la degradación de PAR también es una respuesta nuclear importante al daño de ADN. Por lo tanto, los resultados mostrados aquí sugieren que la conversión de PAR a ADP-ribosa libre por medio de PARG puede promover además actividad de PARP proporcionando sustrato adicional (ADP-ribosa) para PARP y receptores adicionales para la poli (ADP-ribosil ) ación (sitios donde la PARG ha cortado las unidades de ADP-ribosa). La activación de PARG promueve así el agotamiento de la energía celular, daño celular aumentado y muerte celular inducido por PARP, asociado con las enfermedades y padecimientos ligados a la actividad de PARP como se describe aquí. Aunque esto se cree que es el modo de acción, otros mecanismos de acción podrían ser responsables de, o contribuir con, las utilidades de los inhibidores de PARG descritos aquí que incluyen métodos para tratar o prevenir padecimientos o enfermedades descritas aquí. Recientemente, se clonó ADNc de bovino que codifica la PARG. Mientras que la PARG es de aproximadamente 13-50 veces menos abundante que la PARP, su actividad específica es de 50 a 70 veces más alta. La célula gasta energía considerable en la síntesis y degradación rápida del polímero PAR, sugiriendo que como la PARP, la PARG podría ser un receptor útil para la invención farmacológica. La activación PARP es un indicador extremadamente sensible al daño del ADN, que aparece mucho más temprano y que excede en magnitud el aumento de puntos críticos de ADN monitoreados por la terminal-desoxinucleotidil transferasa. Ya que un arreglo grande de proteínas nucleares se modifica covalentemente con PAR, inmediatamente después del rompimiento del ADN, la poli(ADP-ribosil)ación se considera un actor principal en la respuesta celular al daño del ADN. Las líneas celulares mutantes con expresión reducida de PARP exhiben reparación de ADN comprometida, y los inhibidores de PARP vuelven a las células hipersensibles a agentes que dañan el ADN. Además, el agotamiento de PARP a través de la expresión de ARNm de PARP antisentido inhibe el rompimiento de la hebra que se reúne en el ADN dañado. El desarrollo con dos grupos independientes de ratones con eliminación dirigida de la PARP ha proporcionado una oportunidad para evaluar más definitivamente el papel de esta enzima en la reparación del ADN. Wang et al. han generado ratones golpeados rompiendo el exón 2, mientras que Menissier de Murcia et al. han interrumpido el exón 4. Ambas cepas de ratones mutantes son saludables y fértiles, y los fibroblastos de los ratones PARP -/- de Wang muestran reparación normal de ADN después del daño de ADN por irradiación UV o agentes de alquilación, que representan respectivamente la eficiencia de reparar la escisión de nucleótidos y sistemas de reparación de escisión de bases. Mientras que la proliferación de fibroblastos primarios PARP -/- o timocitos in vi vo después de la irradiación-? se deterioran un poco, el único defecto significativo observado por Wang et al. en sus ratones golpeados es susceptibilidad incrementada de hiperplasia epidérmica. Wang et al. han propuesto que una falta de actividad PARP en queratinocitos podría prevenir la eliminación de células que contienen cantidades grandes de ADN dañado, así estas células se vuelven más susceptibles a la hiperproliferación . No se observaron enfermedades epidérmicas en la otra cepa de ratones PARP -/-, sin embargo, se sugiere que la hiperplasia epidérmica podría ser secundaría de antecedentes genéticos. Los ratones PARP -/- del grupo de Mennisier de Murcia, por otro lado, muestran respuestas anormales al daño de ADN. Estas células PARP -/- son extremadamente sensibles a la apoptosis después del tratamiento con el agente de alquilación N-metil-N-nitrosourea (MNU) . También exhiben acumulación de p53 elevada, debido probablemente a la falta de o retardo en la reparación de ADN. Esto indica que estos ratones, la falta de PARP acelera las respuestas de p53 al daño de ADN. Esto es en contraste a lo que se ha observado con los ratones PARP -/- de Wang, cuyos fibroblastos manifiestan la disminución sana en p53 que daña el ADN tipo silvestre. Otros han demostrado que la poli (ADP-ribosil ) ación juega un papel modulador en la señalización de p53 en cédulas tipo silvestre. Parece que mientras los niveles de p53 podrían determinarse parcialmente por la actividad de la PARP, la activación p53 es altamente independiente de la PARP. La tasa de cambio de la cromátida hermana en los ratones PARP -/- de de Murcia es 4-5 veces más alta que la tasa en ratones WT (tipo silvestre, siglas en inglés) tanto en niveles básales como después del daño del ADN. Esto confirma resultados in si t u más temprano con un mutante dominante-negativo de PARP de humano que sugiere un papel de la PARP en la limitación del intercambio de la cromátida hermana después del daño del ADN. Ambos tipos de ratones golpeados mueren más rápidamente que los ratones tipo silvestre después del tratamiento con el agente de metilación MNU o la irradiación-? de todo el cuerpo. La activación rápida de la PARG en respuesta a la síntesis de PAR y activación de la PARP indica que la degradación de PAR por vía de la PARG debería promover los padecimientos y enfermedades asociadas con la actividad PARP. Por lo tanto, los inhibidores de PARG deberían ser útiles en la sub-regulación de PARG disminuyendo el sustrato y los receptores de la actividad PARP, y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar padecimientos y enfermedades asociados con actividad PARP, especialmente los padecimientos y enfermedades sugeridos aquí. Los inhibidores de PARG deberían ser útiles para cualquier método y terapia donde el uso de inhibidores de PARP son útiles. Se ha reportado que la activación de PARP juega un papel clave en la neurotoxicidad inducida tanto por NMDA- como por NO-, como se muestra por el uso de inhibidores de PARP para prevenir tal toxicidad en cultivos corticales en proporción a sus potencias como inhibidores de esta enzima (Zhang et al., " Nitric Oxide Activation of Poly (ADP-Ribose ) Synthetase in Neurotoxicity" , Sci ence , 263:687-89 (1994)); y en rebanadas del hipocampo (Wallis et al., " Neuroprotection Against Nitric Oxide Injury with Inhibitors of ADP-Ribosylation" , NeuroReport , 5:3, 245-48 (1993)). Se ha conocido así el papel potencial de inhibidores de PARP en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas y de trauma de cabeza. Sin embargo, la investigación continua a apuntar los mecanismos exactos de su efecto saludable en isquemia cerebral, (Endres et al., " Ischemic Brain Injury is Mediated by the Activation of Poly (ADP-Ribose ) Polymerase" , J. Cereb . Blood Flow Metabol . , 17:1143-51 (1997)) y en lesión cerebral traumática (Wallis et al., " Traumatic Neuroprotection with Inhibitors of Nitric Oxide and ADP-Riboylation, Brain Res . , 710:169-77 (1996)). Los inhibidores de PARG deberían influenciar neurotoxicidad inducida por NMDA- y NO- asociada a PARP por subregulación de actividad PARP, y de este modo los inhibidores de PARP son útiles para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, trauma de cabeza e isquemia cerebral. Se ha demostrado que inyecciones simples de inhibidores de PARP han reducido el tamaño del infarto causado por la isquemia y reperfusión del corazón o músculo esquelético en conejos. En estos estudios, una inyección simple del inhibidor de PARP, 3-amino-benzamida (10 mg/kg), ya sea un minuto antes de la oclusión o un minuto antes de la reperfusión, reducciones similares causadas en el tamaño del infarto en el corazón (32-42%). Otro inhibidor de PARP, 1,5-dihidroxiisoquinolina (1 mg/kg), redujo el tamaño del infarto a un grado comparable (38-48%). Thiemermann et al., " Inhibition of the Activity of Poly(ADP Ribose) Synthetase Reduces Ischemia-Reperfusion Injury in the Heart and Skeletal Muscle" , Proc. Na t l . Acad . Sci . USA , 94:679-83 (1997). Este hallazgo ha sugerido que los inhibidores de PARP podrían ser capaces de salvar previamente el corazón isquémico o el tejido muscular esquelético. Igualmente, los inhibidores de PARP deberían influenciar el corazón isquémico o daño del tejido del músculo esquelético asociados con PARP, subregulando la actividad PARP, y de este modo los inhibidores de PARG son útiles para salvar previamente el corazón isquémico o el tejido muscular esquelético. La activación de PARP también se ha mostrado que proporciona un índice de daños después de lesiones neurotóxicas por glutamato (por vía de estimulación del receptor de NMDA), intermediarios de oxígeno reactivos, proteína ß amiloide, n-metil-4-fenil-1 , 2 , 6-tetrahidropiridina (MPTP) y su metabolito activo N-metil-4-fenilpiridina (MPP'), que participa en condiciones patológicas tal como ataque cerebral, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Zhang et al., " Poly (ADP-Ribose ) Synthetase Activation: An Early Indicator of Neurotoxic DNA Damage" , J. Neuroch em . , 65 : 3 , 1411-14 (1995). Se han continuado otros estudios para explorar el papel de la activación de PARP en células de granulo del cerebelo in vitro y en la neurotoxicidad de MPTP. Cosi et al., "Poly(ADP-Ribose) Poly (ADP-Ribose) Polymerase (PARP) Revisited. A New Role for an Oíd Enzyme: PARP Involvement in Neurodegeneration and PARP Inhibitors as Possible Neuroprotective Agents", Ann . N . Y . Acad . Sci . f 825:366-79 (1997); y Cosi et al., "Poly (ADP-Ribose) Polymerase Inhibitors Protect Against MPTP-induced Depletions of Striatal Dopamine and Cortical Noradrenaline in C57B1/6 Mice", Brain Res . , 729 : 264 -69 (1996). Los inhibidores de PARG deberían influenciar lesiones neurotóxicas asociadas con PARP por glutamato (por vía de la estimulación del receptor de NMDA), intermediarios de oxígeno reactivos, proteína ß amiloide, n-metil-4-fenil- 1 ,2,3, 6-tetrahidropiridina (MPTP) y su metabolito activo N-metil-4-fenilpiridina (MPP'), que participan en condiciones patológicas tal como ataque cerebral, enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson subregulando la actividad PARP, y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir tales condiciones patológicas. El daño neural después de ataques y otros procesos neurodegenerativos se cree que resulta de una liberación masiva del glutamato neurotransmisor exitatorio, que actúa en los receptores de N-metil-D-aspartato (NMDA) y otros receptores subtipo. El glutamato sirve como el neurotransmisor exitatorio predominante en el sistema nervioso central (SNC). Las neuronas liberan glutamato en grandes cantidades cuando se privan de oxígeno, como podría presentarse durante una lesión cerebral isquémica, tal como un ataque cerebral o ataque al corazón. Esta liberación en exceso de glutamato a su vez causa sobre-estimulación ( excitotoxicidad) de N-metil-D-aspartato (NMDA), AMPA, Cainato y receptores de MGR. Cuando el glutamato se enlaza a estos receptores, los canales iónicos en los receptores abiertos, permiten el flujo de iones a través de sus membranas celulares, e.g., Ca2+ y Na+ en las células y K+ fuera de las células. Estos flujos de iones, especialmente el influjo de Ca2+, causan sobre estimulación de las neuronas. Las neuronas sobre estimuladas secretan más glutamato, creando un ciclo de retroalimentación o efecto dominó que finalmente resulta en daño o muerte celular por vía de la producción de proteasas, lipasas y radicales libres. La activación excesiva de receptores de glutamato se ha implicado en varias enfermedades y condiciones neurológicas que incluyen epilepsia, ataque cerebral, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, Esclerosis Lateral Amiotrófica (ALS), enfermedad de Huntington, esquizofrenia, dolor crónico, isquemia y pérdida neuronal después de la hipoxia, hipoglucemia, isquemia, trauma y lesión nerviosa. Estudios recientes también han avanzado en una base glutamatérgica para padecimientos compulsivos, particularmente dependencia a fármacos. La evidencia incluye hallazgos en muchas especies animales, así como, en cultivos corticales cerebrales tratados con glutamato o NMDA, el antagonista del receptor de glutamato bloquea el daño neural después del ataque cerebral vascular. Dawson et al., "Protection of the Brain from Ischemia", Cerebrovascular Disease , 319-25 (H. Hunt Batjer ed., 1997). Intentos para prevenir la excitotoxicidad bloqueando la NMDA, AMPA, Cainato y receptores de MGR han probado la dificultad debido a que cada receptor tiene múltiples sitios a los que podría enlazarse el glutamato. Muchas de las composiciones que son efectivas para bloquear los receptores también son tóxicas a los animales. Como tal, no hay tratamiento efectivo conocido para anormalidades de glutamato. La simulación de receptores de NMDA, a su vez, activa la enzima neuronal óxido nítrico sintasa (NNOS), que causa la formación de óxido nítrico (NO), que media más directamente la neurotoxicidad. La protección contra la neurotoxicidad se ha presentado después del tratamiento con inhibidores de NOS. Ver Dawson et al., "Nitric Oxide Mediates Glutamate Neurotoxicity in Primary Cortical Cultures", Proc. Natl . Acad . Sci . USA , 89:6368-71 (1991); and Dawson et al., "Mechanisms of Nitric Oxide-mediated Neurotoxicity in Primary Brain Cultures", ". Neurosci . , 13:6, 2651-61 (1993). La protección contra neurotoxicidad de NMDA puede presentarse también en cultivos corticales de ratones con rompimiento dirigido de NNOS. Ver Dawson et al., "Resistance to Neurotoxicity in Cortical Cultures from Neuronal Nitric Oxide Synthase-Deficient Mice", J. Neurosci . , 16:8, 2479-87 (1996). Se sabe que el daño neural después del ataque cerebral vascular se disminuye marcadamente en animales tratados con inhibidores de NOS o en ratones con rompimiento del gen de NNOS. ladecola, "Bright and Dark Sides of Nitric Oxide in Ischemic Brain Injury", Trends Neurosci . , 20:3, 132-39 (1997); y Huang et al., "Effects of Cerebral Ischemia in Mice Deficient in Neuronal Nitric Oxide Synthase", Sci ence , 265:1883-85 (1994). Ver también, Beckman et al., "Pathological Implications of Nitric Oxide, Superoxide and Peroxynitrite Formation", Biochem . Soc . Trans . , 21:330-34 (1993). Ya sea NO o peroxinitrito pueden causar daño al ADN, el cual activa la PARP. Soporte adicional para esto se proporciona en Szabó et al., "DNA Strand Breakage, Activation of Poly (ADP-Ribose ) Synthetase, and Cellular Energy Depletion are Involved in the Cytotoxicity in Macrophages and Smooth Muscle Cells Exposed to Peroxynitrite", Proc . Na t l . Acad . Sci . USA , 93:1753-58 (1996).

Zhang et al., Patente U.S. No. 5,587,384 publicada en Diciembre 24, 1996, discute el uso de ciertos inhibidores de PARP, tal como benzamida y 1,5-dihidroxi-isoquinolina, para prevenir la neurotoxicidad mediada por NMDA y, así, tratar ataque cerebral, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington. Sin embargo se ha descubierto ahora que Zhang et al. podrían haber estado en error al clasificar la neurotoxicidad como neurotoxicidad mediada por NMDA. Además, podría haber sido más apropiado clasificar la neurotoxicidad in vivo presente como neurotoxicidad de glutamato. Ver Zhang et al. "Nitric Oxide Activation of Poly(ADP-Ribose) Synthetase in Neurotoxicity", Sci ence , 263:687-89 (1994). Ver también, Cosi et al., Poly (ADP-Ribose ) Polymerase Inhibitors Protect Against MPTP-induced Depletions of Striatal Dopamine and Cortical Noradrenaline in C57B1/6 Mice", Brain Res . , 729:264-69 (1996). Los inhibidores de PARG deberían influenciar la neurotoxicidad de glutamato asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir los padecimientos y enfermedades asociadas con neurotoxicidad de glutamato discutidas aquí . Se sabe también que los inhibidores de PARP afectan en general la reparación del DNA. Cristovao et al., "Effect of a Poly (ADP-Ribose) Polymerase Inhibitors on DNA Breakage and Cytotoxicity Induced by Hydrogen Peroxide and ?-Radiation, " Tera to . , Carcino . , and Muta . , 16:219-27 (1996), discute el efecto del peróxido de hidrógeno y la radiación-? en hebras rotas de ADN en presencia de y en ausencia de 3-aminobenzamida, un inhibidor potente de PARP. Cristovao et al. observó una recuperación dependiente de PARP de las hebras rotas de ADN en leucocitos tratados con peróxido de hidrógeno. Los inhibidores de PARG deberían influenciar la reparación de ADN asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir los padecimientos y enfermedades discutidas aquí asociadas con daño de ADN y reparación de ADN. Los inhibidores de PARP se ha reportado que son efectivos en la radiosensibilización de células tumorales hipóxicas y efectivos en la prevención de células tumorales de la recuperación del daño potencialmente letal de ADN después de la terapia de radiación, presumiblemente por su capacidad para prevenir la reparación de ADN. Ver Patentes U.S. Nos. 5,032,617; 5,215,738; y 5,041,653. Los inhibidores de PARG deberían influenciar la radiosensibilización asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles como radiosensibilizadores o agentes asociados con la radiosensibilización. También existe la evidencia de que los inhibidores de PARP son útiles para tratar padecimientos intestinales inflamatorios. Salzman et al., "Role of Peroxynitrite and Poly (ADP-Ribose ) Synthase Activation Experimental Colitis," Japanese J . Pharm . , 75, Supp. 1:15 (1997), discute la capacidad de los inhibidores de PARP para prevenir o tratar colitis. La colitis se indujo en ratas por administración intraluminal del ácido hapten trinitobenzen sulfónico en etanol al 50%. Las ratas tratadas recibieron 3-aminobenzamida, un inhibidor específico de la actividad PARP. La inhibición de la actividad PARP redujo la respuesta inflamatoria y restauró la morfología y el estatus energético del colon distal. Ver también, Southan et al., "Spontaneous Rearrangement of Aminoalkylithioureas into Mercaptoalkylguanidines , a Novel Class of Nitric Oxide Synthase Inhibitors with Selectivity Towards the Inducible Isoform", Br . J . Pharm . , 117:619-32 (1996); y Szabó et al., "Mercaptoethylguanidine and Guanidine Inhibitors of Nitric Oxide Synthase React with Peroxynitrite and Protect Against Peroxynitrite-induced Oxidative Damage", J. Biol . Chem . , 272:9030-36 (1997). Los inhibidores de PARG deberían influenciar la colitis asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir los síntomas, padecimientos o enfermedades asociadas con colitis como se discute aquí . También existe la evidencia de que los inhibidores de PARP son útiles para tratar artritis. Szabó et al., "Protective Effects of an Inhibitor of Poly(ADP-Ribose) Synthetase in Collagen-Induced Arthritis," Japanese J. Pharm . , 75, Supp. 1:102 (1997), discute la capacidad de los inhibidores de PARP para prevenir o tratar artritis inducida por colágeno. Ver también Szabó et al., "DNA Strand Breakage, Activation of Poly (ADP-Ribose ) Synthetase, and Cellular Energy Depletion are Involved in the Cytotoxicity in Macrophage and Smooth Muscle Cells Exposed to Peroxynitrite," Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 93:1753-58 (Marzo 1996); Bauer et al., "Modification of Growth Related Enzymatic Pathways and Apparent Loss of Tumorigenicity of a ras-transformed Bovine Endothelial Cell Line by Treatment with 5-Iodo-6-amino-l , 2-benzopyrone (INH2BP)", In tl . J . Oncol . , 8:239-52 (1996); y Hughes et al., "Induction of T Helper Cell Hyporesponsiveness in an Experimental Model of Autoimmunity by Using Nonmitogenic Anti-CD3 Monoclonal Antibody", ". Immuno . , 153:3319-25 (1994). Los inhibidores de PARG deberían influenciar en artritis asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir artritis y los padecimientos y enfermedades asociados con artritis discutidos aquí. Además, los inhibidores de PARP parecen ser útiles para tratar diabetes. Heller et al., "Inactivation of the Poly (ADP-Ribose )Polymerase Gene Affects Oxygen Radical and Nitric Oxide Toxicity in Islet Cells", J. Biol . Chem . , 270:19, 11176-80 (Mayo 1995), discute la tendencia de PARP para agotar NAD+ celular e inducir la muerte de células islote que producen insulina. Heller et al., usaron células de ratones con genes de PARP inactivados y encontraron que estas células mutantes no mostraban agotamiento de NAD+ después de exponer radicales que dañan el ADN. Las células mutantes también se encontraron que eran más resistentes a la toxicidad de NO. Los inhibidores de PARG deberían influenciar la diabetes asociada con PARP subregulando la actividad PARP y así inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir diabetes y padecimientos o enfermedades asociados con la diabetes discutidos aquí. Todavía además, los inhibidores de PARG se ha mostrado que son útiles para tratar choque endotóxico o choque séptico. Zingarelli et al., "Protective Effects of Nicotinamide Against Nitric Oxide-Mediated Delayed Vascular Failure in Endotoxic Shock: Potential Involvement of PolyADP Ribosyl Synthetase," Shock, 5:258-64 (1996), sugiere que la inhibición del ciclo de reparación de ADN desencadenado por poli (ADP-ribosa ) sintetasa tiene efectos protectores contra falla vascular en choque endotóxico. Zingarelli et al. encontraron que la nicotinamida protege contra retardo, falla vascular mediada por NO en choque endotóxico. Zingarelli et al. también encontraron que las acciones de la nicotinamida podrían relacionarse con la inhibición de la activación mediada por NO del ciclo de reparación de ADN que consume energía, desencadenada por poli (ADP-ribosa ) sintetasa. Ver también, Cuzzocrea, "Role of Peroxynitrite and Activation of Poly(ADP-Ribose) Synthetase in the Vascular Failure Induced by Zymosan-áctivated Plasma", Bri t . J. Pharm . , 122:493-503 (1997). Los inhibidores de PARG deberían influenciar el choque endotóxico asociado con PARP subregulando de actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir el choque endotóxico o choque séptico y padecimientos o enfermedades asociados como se discute aquí.

Aún otro uso conocido para los inhibidores de PARP es el tratamiento de cáncer. Suto et al., "Dihydroisoquinolinones : The Design and Synthesis of a New Series of Patent Inhibitors of Poly (ADP-Ribose ) Polymerase", An ti cancer Drug Des . , 7:107-17 (1991), describe procesos para sintetizar un número de inhibidores de PARP diferentes. Además Suto et al., Patente U.S. No. 5,177,075, discute varias isoquinolinas usadas para aumentar los efectos letales de la radiación ionizante o agentes quimioterapéuticos en células tumorales. Weltin et al., "Effect of 6(5H)-Phenanthridinone, and Inhibitor of Poly ( ADP-ribose ) Polymerase, on Cultured Tumor Cells", Oncol . Res . , 6:9, 399-403 (1994), discute la inhibición de la actividad PARP, la proliferación reducida de células tumorales y un efecto sinergístico marcado cuando las células tumorales se co-tratan con un fármaco de alquilación. Los inhibidores de PARG se sabe que son efectivos para tratar cáncer como se describe por las Patentes Japonesas de Tanuma. Sin embargo, en contraste directo con la presente invención, la evidencia en la literatura sugiere que el mecanismo de acción para tratar cáncer por medio de inhibidores de PARG es que los inhibidores de PARG prevengan la degradación asociada con PARG de PAR que bloquea normalmente la transcripción y activación de oncogenes. Los métodos y compuestos para inhibir la PARG se discuten en Tanuma et al., JP 042-75223-A2 , "Poly (ADP-ribose)glycohydrolase Inhibitors Containing Glucose Derivatives", 9/30/92; Tanuma et al., JP 042-75296-A2 , "Adenosine Derivatives and their use in Cáncer Inmunotherapy", 3/4/91; Tanuma, JP 032-05402-A2 , "Lignin Glycoside and Use", 9/6/91; Tanuma, JP 04-013684-A2, "Lignin glycoside and Use" 1/17/92; Slama et al.,J. Med. Chem. 38; 389-393 (1995); Slama et al.,J. Med. Chem. 38; 4332-4336 (1995); Maruta et al., Biochemistry 30:5907-5912 (1991); Aoki et al., Biochim. Biophys. Acta 1158:251-256 (1993); Aoki et al; Biochem. Biophys. Res. Comm. 210:329-337 (1995); Tsai et al., Biochemistry Intl. 24:889-897 (1991); y Concha et al., Biochemistry Intl. 24:889-897 (1991). El uso del ácido tánico inhibidor de PARG para tratar la infección de VIH se discute en Uchiumi et al., "Iñhibitory Effect of Tannic Acid on Human Inmunodeficiency Virus Promoter Activity Induced by 12-O-Tetra Decanoylphorbol- 13-acetate in Jurkat T-cells", Biochem. Biophys. Res. Comm. 220:411-427 (1996). Aún otro uso para los inhibidores de PARP es el tratamiento de las lesiones del nervio periférico, y el síndrome de dolor patológico resultante conocido como dolor neuropático, tal como el que se induce por la lesión por constricción crónica (CCI) del nervio ciático común y en cual ocurre la alteración trans-sináptica del cuerno dorsal de la médula espinal, que se caracteriza por una hipercromatosis del citoplasma y del nucleoplasma (llamadas "neuronas obscuras"). Ver Jianren Mao et al., 72:355-366 (1997). Los inhibidores de PARG deberían influenciar el dolor neuropático asociado con PARP subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para tratar o prevenir lesiones del nervio periférico, y el síndrome de dolor patológico resultante conocido como dolor neuropático y padecimientos o enfermedades asociados, como se discuten aquí. Los inhibidores de PARP también se han usado para extender la duración máxima de vida y la capacidad proliferativa de las células, incluyendo el tratamiento de enfermedades como envejecimiento de la piel, enfermedad de Alzheimer, ateroesclerosis, osteoartritis, osteoporosis, distrofia muscular, enfermedades degenerativas del músculo esquelético que involucran senescencia por replicación, degeneración macular relacionada con la edad, inmuno senescencia, SIDA, y otras enfermedades de inmuno senescencia; y para alterar la expresión de los genes de las células senescentes. Ver WO 28/27975. Los inhibidores de PARG deberían influenciar la extensión de la duración máxima de vida y la capacidad proliferativa de las células asociadas con PARP, subregulando la actividad PARP y así los inhibidores de PARG son útiles para extender la duración de vida y la capacidad proliferativa de las células en una variedad de circunstancias que incluyen las enfermedades y padecimientos discutidos aquí. Grandes números de inhibidores de PARP conocidos se han descrito en Banasik et al., "Specific Inhibitors of Poly (ADP-Ribose)Synthetase and Mono ( ADP-Ribosyl ) -Transferase" , J . Biol . Chem . , 267 : 3 , 1569-75 (1992), y en Banasik et al., "Inhibitors and Activators of ADP-Ribosylation Reactions", Mol ec . Cel l . Biochem . , 138 : 185-197 (1994). Varios inhibidores de PARG se han descrito en Tavassoli et al., "Effect of DNA intercalators on poly (ADP-Ribose ) glycohydrolase activity", Biochim. Biophys. Acta 827:228-234 (1985).

Sin embargo, el método para usar estos inhibidores de PARG para reducir la estimulación del receptor d NMDA, o para tratar o prevenir el daño de tejido resultante del daño o muerte celular debidas . a necrosis o apoptosis, o para tratar o prevenir daño de tejido neural causados por NO; isquemia y reperfusión del corazón o del músculo esquelético; daño de tejido neural resultante de isquemia y lesión por reperfusión; padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas; para prevenir o tratar ataque cerebral vascular; para tratar o prevenir padecimientos cardiovasculares; para tratar otras condiciones y/o padecimientos tal como la degeneración macular relacionada con la edad, enfermedades de inmuno senescencia, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético que involucran la senescencia por replicación, diabetes, trauma de cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios del intestino (como colitis y la enfermedad de Crohn), distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor (tal como dolor neuropático), insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico (tal como choque endotóxico), y envejecimiento de la piel; para extender la duración de vida y la capacidad proliferativa de las células; para alterar la expresión de los genes de las células senescentes; o para radiosensibilizar células tumorales hipóxicas, se ha limitado en efecto. Por ejemplo, se han observado efectos colaterales con algunos de los inhibidores de PARP más conocidos, como se discute en Milam et al., "Inhibitors of Poly (Adenosine Diphosphate-Ribose) Synthesis: Effect on Other Metabolic Processes", Science, 223 : 589 - 91 (1984). Específicamente, los inhibidores de PARP 3-aminobenzamida y benzamida no inhibieron solamente la acción de PARP, sino que también se mostró que afectan la viabilidad celular, el metabolismo de glucosa, y la síntesis del ADN. Así, se concluyó que la utilidad de estos inhibidores de PARP podría restringirse severamente, por la dificultad de encontrar una dosis lo suficientemente pequeña para inhibir la enzima sin producir efectos metabólicos adicionales. También podrían concluirse consideraciones de dosis similares acerca de los inhibidores de PARG. Por lo tanto, permanece una necesidad de compuestos que inhiban la actividad de PARG, composiciones que contengan los compuestos y métodos que utilicen los compuestos, en donde los compuestos producen efectos más potentes y seguros con menores efectos colaterales, con respecto a la inhibición de la actividad PARG, y tratar las enfermedades y condiciones discutidas aquí.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se dirige a una composición farmacéutica que contiene un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero del mismo farmacéuticamente aceptable, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; en donde el inhibidor de PARG está presente en una cantidad que es efectiva para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular, daño celular, o muerte celular inducidos por un radical libre y/o para el tratamiento o prevención de una enfermedad o condición que resulta del daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis; y métodos para usar el mismo. En una modalidad preferida, enfermedades y condiciones específicas adecuadas para el tratamiento usando las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención incluyen dolor agudo, artritis, ateroesclerosis, caquexia, padecimientos cardiovasculares, dolor crónico, enfermedades degenerativas, diabetes, enfermedades o padecimientos relacionados con la duración de vida o con la capacidad proliferativa de las células, enfermedades o condiciones de enfermedad inducidas o exacerbadas por la senescencia celular, trauma de cabeza, inmuno senescencia, infección de HIV, SIDA (síndrome de inmunodeficiencia adquirida), ARDS, inflamación, padecimientos inflamatorios intestinales, isquemia, degeneración macular, distrofia muscular, daño de tejido neural resultante de isquemia y lesiones por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, daño o enfermedad de tejido mediado por neuronas, dolor neuropático, lesión nerviosa, osteoartritis, osteoporosis, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico, envejecimiento de la piel, y ataque cerebral vascular. En modalidades preferidas de la invención, el inhibidor de PARG podría ser derivados de glucosa; glucósidos de lignina; taninos hidrolizables que incluyen galotaninos y elagitaninos ; derivados de adenosida; derivados de acridina que incluyen lactato de 6 , 9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.556, clorhidratos de daunomicina o daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG. En una modalidad preferida, el inhibidor de PARG es un derivado de glucosa, más particularmente un compuesto de fórmula I: en donde: Rl R2, R3, R4, R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o X, X representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi C^C con la condición de que R1-R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. Aún en otra modalidad preferida;, el inhibidor de PARG es un glucósido de lignina, en particular un glucósido de lignina que tiene la siguiente estructura: En otra modalidad preferida, el inhibidor de PARG es un tanino hidrolizable, particularmente un tanino hidrolizable que tiene las siguientes propiedades: (i) se unen el tanino y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de tanino a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra. Los taninos hidrolizables particularmente preferidos incluyen galotaninos y elagitaninos , especialmente aquellos que tienen las siguientes propiedades : (i) formación de multiéster de ácidos gálicos y/o ácidos egálicos y glucosa; y (ii) un peso molecular de aproximadamente 700 a 8000. Aún en otra modalidad preferida, el inhibidor de PARG comprende un derivado de adenosina, y más particularmente un derivado de adenosina. En una modalidad más preferida, el derivado de adenosina es adenosín difosfato-hidroxi-metil-pirrolidin-diol (también referido como (ADP-HPD) o un compuesto que tenga la fórmula II: II donde : Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III: III o X, en donde X es el compuesto de fórmula IV: IV donde Z es un enlace, alquilo Ci-Cg, o alquenilo C2-C8; R7, R8, R9, R10 y Ru se seleccionan independientemente de hidrógeno, hidroxilo, o alcoxi Cj-Cg, con la condición de que R7-Rn no sean simultáneamente cuatro o cinco átomos de hidrógeno, y que R2 , R3 , R4 , R5 y R6 representen independientemente un átomo de hidrógeno o X, X representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que Rlf R2 , y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2 , R3 , R4 , Rs y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. En modalidades preferidas adicionales de la presenté invención, los inhibidores de PARG podrían incluir derivados de acridina que incluyen lactato de 6 , 9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.556, clorhidrato de daunomicina o daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG. La invención comprende además métodos para inhibir o reducir el agotamiento de energía celular, daño celular, o muerte celular inducidos por radicales libres y/o tratar o prevenir una enfermedad o condición que resulta del daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, administrando una cantidad efectiva de un inhibidor de PARG. En una modalidad preferida, enfermedades y condiciones específicas adecuadas para el tratamiento usando las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención incluyen dolor agudo, artritis, ateroesclerosis, caquexia, padecimientos cardiovasculares, dolor crónico, enfermedades degenerativas, diabetes, enfermedades o padecimientos relacionados con la duración de vida o la capacidad proliferativa de las células, enfermedades o condiciones de enfermedades inducidas o exacerbadas por la senescencia celular, trauma de cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios intestinales, isquemia, degeneración macular, distrofia muscular, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, daño o enfermedad de tejido mediado por neuronas, dolor neuropático, lesión nerviosa, osteoartritis, osteoporosis, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico, envejecimiento de la piel, y ataque cerebral vascular. En una modalidad particularmente preferida, las composiciones descritas antes como inhibidores de PARG se usan en los métodos de la presente invención.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La figura 1 es una gráfica que muestra el efecto protector de las composiciones farmacéuticas de la presente invención contra la citotoxicidad del peróxido de hidrógeno. La figura 2 muestra la EC50 que se determina a partir de una curva de citotoxicidad de dosis respuesta . La figura 3 es una representación esquemática simplificada del ciclo PARP/PARG para mantenimiento de poli (ADP-ribosil ) ación y su relación con el metabolismo de energía celular y varios usos, enfermedades y padecimientos descritos aquí.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Se ha descubierto inesperadamente que los inhibidores de PARG pueden usarse para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular, daño celular , o muerte celular inducidos por radicales libres y/o tratar o prevenir una enfermedad o condición que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis. En particular, los inhibidores de PARG pueden administrarse en cantidades efectivas para tratar o prevenir enfermedades y condiciones específicas que incluyen dolor agudo, artritis, ateroesclerosis, caquexia, padecimientos cardiovasculares, dolor crónico, enfermedades degenerativas, diabetes, enfermedades o padecimientos relacionados con la duración de vida o capacidad proliferativa de las células, enfermedades o condiciones de enfermedad inducidas o exacerbadas por senescencia celular, trauma de cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios intestinales, isquemia, degeneración macular, distrofia muscular, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, daño de tejido mediado por neuronas, dolor neuropático, lesión nerviosa, osteoartritis, osteoporosis, lesión del nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico, envejecimiento de la piel, y ataque cerebral vascular. Por ejemplo, se ha descubierto que los inhibidores de PARG pueden usarse para tratar o prevenir el daño de tejido cardiovascular que resulta de isquemia cardíaca o lesión por reperfusión. La lesión por reperfusión, de hecho, se presenta en la terminación de los procedimientos de desviación cardíaca o durante el paro cardíaco cuando el corazón, una vez se le evitó recibir sangre, comienza a presentar reperfusión. Los inhibidores de PARG de la presente invención también pueden usarse para extender o incrementar la duración de vida o la capacidad proliferativa de las células y así para tratar o prevenir las enfermedades asociadas con las mismas, e inducidas o exacerbadas por la senescencia celular que incluye el envejecimiento de la piel, ateroesclerosis, osteoartritis, osteoporosis, distrofia muscular, enfermedades degenerativas del músculo esquelético que involucran senescencia por replicación, degeneración macular relacionada con la edad, inmuno senescencia y otras enfermedades asociadas con la senescencia celular y el envejecimiento, así como para alterar la expresión de los genes de las células senescentes. Preferentemente, los inhibidores de PARG se usan en la presente invención para tratar o prevenir el daño del tejido que resulta de la muerte o daño celular debido a necrosis o apoptosis; para tratar o prevenir el daño de tejido neural que resulta de la isquemia cerebral y lesión por reperfusión o enfermedades neurodegenerativas en un mamífero; para extender e incrementar la duración de vida y la capacidad proliferativa de las células; y para alterar la expresión de los genes de las células senescentes. La sobrecarga de calcio y la activación de poli (ADP-ribosa) polimerasa juega un papel en el corte de homeostasis de energía que conduce a la muerte celular, el calcio (Ca2+) intracelular elevado produce citotoxicidad a través de la generación corriente abajo especies de nitrógeno y de oxígeno reactivas que rompen la homeostasis de energía a través de varios modos de daño celular. Ca2+ puede entrar al citoplasma a través de canales iónicos de voltaje o puenteados con ligandos, tal como el receptor de glutamato subtipo NMDA. El ATP se requiere para la remoción de calcio del citoplasma por vía de ATP-asas ión-radical, que ya sea que bombeen el Ca+ hacia afuera ,de la célula o dentro del retículo endoplásmico (ER). La mitocondria también ayuda a amortiguar el calcio citoplásmico. La acumulación excesiva de Ca2+ por la mitocondria deteriora la fosforilación oxidativa, mientras que también promueve la producción de especies de oxígeno reactivas, tal como superóxido (O2-) y peróxido de hidrógeno (H202), por vía de la cadena de transporte de electrones. La acumulación alta de Ca2+ en la mitocondria también altera la permeabilidad de la membrana de la mitocondria, que inhibe la producción de ATP en la mitocondria y promueve la necrosis. Además, la permeabilidad selectiva de la membrana externa libera citocromo C (Cyt C) que activa las caspasas109. Las caspasas, a su vez, cortan substratos específicos de proteínas citoplásmicas y nucleares para coordinar la apoptosis (ver el texto). El Ca2+ también activa directamente varias enzimas celulares que inician las cascadas citotóxicas. Estas incluyen la endonucleasa activada con Ca2+/Mg2" (ADNasa) así como fosfolipasas y proteasas sensibles al Ca2+. Además varias enzimas activadas con Ca2+ se involucran en la producción de radicales libres. Las proteasas activadas con Ca2+ conocidas como calpaínas convierten la xantina deshidrogenasa a xantina oxidasa (XO) que promueve la generación enzimática de superóxido. Las ciclooxigenasas son otra fuente de superóxido. El peróxido de hidrógeno (H202) puede formarse a partir de superóxido y puede convertirse por sí mismo al radical hidroxilo altamente reactivo (OH) por vía de reacciones de catalizadas con hierro. Estas especies de oxígeno reactivas dañan lípidos, proteínas y ácidos nucleicos. El Ca2+ también activa la enzima regulada por calmodulina, óxido nítrico sintetasa (NOS) para producir grandes cantidades de óxido nítrico (NO). El superóxido y el óxido nítrico se combinan para formar el anión peroxinitrito (00N0-) mucho más reactivo. El peroxinitrito daña la membrana celular y conduce a la oxidación y nitración de las proteínas que contienen aminoácidos aromáticos tal como tirosina. El peroxinitrito también proporciona otra ruta para la formación de radicales hidroxilo, más probablemente a través de un intermediario de ácido peroxinitroso. El daño producido al DNA ya sea por la endonucleasa activada por Ca2"/Mg2", OONO-, o por los radicales hidroxilo resulta en la activación robusta de PARP con agotamiento subsecuente de los niveles de NAD. Dado que el NAD se requiere para la producción de ATP y dado que el ATP se requiere, a su vez, para la síntesis de NAD, la activación excesiva de PARP agota la reserva de energía celular y resulta en la muerte celular. La evidencia en la literatura sugiere que los inhibidores de PARG inhiben el PARG, por interactuar directamente con la enzima PARG, el polímero PAR, o ambos. Los inhibidores de PARG también podrían ser útiles para los métodos descritos aquí por un mecanismo de acción independiente de una interacción directa entre el inhibidor y la PARG. En una modalidad preferida de la presente invención, los inhibidores de poli (ADP-ribosa) glucohidrolasa, contienen como ingredientes activos derivados de glucosa; glucósidos de lignina; taninos hidrolizables que incluyen galotaninos y elagitaninos ; derivados de adenosida; derivados de acridina que incluye lactato de 6 , 9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.556, clorhidrato de daunomicina o daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG. Otras modalidades preferidas de la presente invención se dirigen al uso de los inhibidores de PARG, particularmente los descritos aquí y otros bien conocidos en el arte, y su método de uso para tratar o prevenir enfermedades o condiciones debidas al agotamiento de energía celular inducido por radicales libres y/o daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis, apoptosis, o combinación de las mismas. Los inhibidores de PARG particularmente preferidos incluyen derivados de glucosa, especialmente los derivados de glucosa del tipo representado por la fórmula general (I): en donde Ri-R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o X, X representa un carbonilo que tiene un fenilo sustituido por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi inferiores, con la condición de que R!-R5 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente . En otra modalidad preferida de la presente invención, el alcoxi inferior representado por X contiene preferentemente de uno a cuatro carbonos e incluye específicamente metoxi, etoxi, própoxi, isopropoxi,. butoxi, iso-butoxi, sec-butoxi, terbutoxi y similares. En particular, metoxi es el preferido. Como X, se prefieren particularmente aquellos en los que un fenilo se enlaza a un carbonilo por vía alquileno o alquenileno y aquellos en los que un fenilo se enlaza directamente a un carbonilo. Como alquílenos, son ejemplos aquellos que contienen de uno a cuatro carbonos, como metileno, etileno, trimetileno y tetrametileno, se prefieren particularmente metileno y etileno. Como alquenilenos, son ejemplos aquellos que contienen de uno a cuatro carbonos y se prefiere particularmente el vinileno. Ejemplos preferidos de X son los grupos representados por la siguiente fórmula general: en donde Z representa un enlace directo, alquileno o alquenileno, R7-R?a representan individualmente un átomo de hidrógeno, un grupo hidroxilo o un alcoxi inferior, con la condición de que R^R^ no representen 4 o 5 átomos de hidrógeno simultáneamente. Ejemplos específicos de X que se prefieren particularmente son galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3,4,5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxi-cinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo , 3,4, 5-trimetoxi-cinamoilo, 3 , 4 , 5-trihidroxibencilcarbonilo, y 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo .

Una modalidad preferida de los derivados de glucosa es 1 ,2 , 3 , 4 , 6-Penta-O-Galoil-Glucosa y tiene la siguiente estructura: Estos derivados de glucosa, útiles como inhibidores de PARG en la presente invención, se pueden preparar de cualquier forma adecuada conocida por un experto en el arte a partir de materiales fácilmente disponibles. En particular, pueden prepararse de la siguiente forma: en donde X es igual que los descritos antes. La reacción anterior se lleva a cabo por medio de una reacción ordinaria de éster. El compuesto (i) y el compuesto (ii) como materiales de inicio son muy conocidos en el arte y se disponen fácilmente. El compuesto anterior (i) es glucosa, y el compuesto (ii) es un ácido carboxílico. Los glucósidos de taninos hidrolizables y de lignina adecuados para usar en la invención podrían prepararse de cualquier forma conocida en el arte y podrían prepararse de la siguiente forma. Como material inicial, cualquier materia orgánica adecuada, tal como, pinas de pino, hojas de té, pasto de cornejo, raíz de trisacárido, y similares, pueden tratarse en un disolvente adecuado, tal como agua caliente, etanol, acetona durante aproximadamente 1 a 15 horas. El material tratado se extrae en una solución alcalina (hidróxido de sodio 0.1 a 1 N, amonio, y similares). El líquido extraído se ajusta a pH de 4 a 6, y se adiciona una cantidad equivalente de etanol, y se recupera la fracción sobrenadante. La fracción sobrenadante se refina por filtración en gel, y se recupera la porción activa. El glucósido de tanino hidrolizable o de lignina obtenido puede tratarse después por diálisis, separación centrífuga, secado por congelación, etc. Los glucósidos de taninos hidrolizables y de lignina adecuados tienen acción inhibidora en la poli-(ADPribosa) glucohidrolasa, y presentan actividad inhibidora en la poli- (ADP-ribosa) glucohidrolasa en mamíferos, y son útiles para inhibir o disminuir el agotamiento de la energía celular, el daño celular o la muerte celular inducidos por radicales libres. Los glucósidos de taninos hidrolizables y de lignina útiles en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención podrían administrarse ya sea oral o parenteralmente, preferentemente con un vehículo adecuado en la forma de una composición farmacéutica. Tales glucósidos de taninos hidrolizables y de lignina podrían administrarse, por ejemplo, por ruta oral, usualmente a aproximadamente 0.1 a 100 mg/kg de peso corporal por día, ya sea una vez o en varias porciones divididas, pero la dosis podría variarse dependiendo de la edad, peso corporal y/o severidad de la enfermedad que se va a tratar y la reacción al tratamiento. Se ha investigado la toxicidad de estos glucósidos de tanino hidrolizables, y, por administración oral, el valor LD50 fue de 100 mg/kg o más, que es extremadamente alto resultando en una región de seguridad amplia. Los derivados de acridina adecuados incluyen compuestos que tienen la fórmula que tiene la siguiente estructura: en donde R se selecciona independientemente de hidrógeno, halo, alquilhalo, hidroxi, alquilo de cadena lineal o ramificada, grupo alquenilo C2-C6 de cadena -lineal o ramificada, alcoxi C1-Ce de cadena lineal o ramificada, grupo alquenoxi C2-C6 de cadena lineal o ramificada, amino, alquilamino C^Cj, alquiltio Cj-Cg, tio, nitro, nitroso, carboxi; en donde los grupos alquilo, alquenilo, alcoxi, alquenoxi, alquilamino, alquilhalo y alquiltio se sustituyen independientemente con uno o más sustituyentes seleccionados de halo, hidroxi, amino, tio, nitro, alcoxi C^C,,, o alqueniloxi C2-C4. Otros inhibidores de PARG adecuados incluyen derivados de adenosida; derivados de acridina que incluyen lactato de 6 , 9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.556, clorhidrato de daunomicina o daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG conocidos en el arte. Los inhibidores de PARG, particularmente como se describieron antes, poseen una actividad poli (ADP-ribosa) glucohidrolasa como se muestra por los ejemplos experimentales dados después, y son específicamente útiles como inhibidores de la poli (ADP-ribosa) glucohidrolasa, para inhibir o disminuir el agotamiento de la energía celular, daño celular o muerte celular inducidos por radicales libres y/o tratar o prevenir una enfermedad o condición que resulta del daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis. En particular, los inhibidores de PARG pueden administrarse en cantidades efectivas para tratar o prevenir enfermedades y condiciones específicas que incluyen dolor agudo, artritis, arterosclerosis , caquexia, padecimientos cardiovasculares, dolor crónico, enfermedades degenerativas, diabetes, enfermedades o padecimientos que se relacionan con la duración de vida o capacidad proliferativa de las células, enfermedades o condiciones de enfermedades inducidas o exacerbadas por senescencia celular, trauma de cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios intestinales, isquemia, degeneración macular, distrofia muscular, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, daño o enfermedad de tejido mediado por neuronas, dolor neuropático, lesión nerviosa, osteoartritis, osteoporosis, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico, envejecimiento de la piel y ataque cerebral vascular. Los inhibidores de PARG adecuados para usar en la presente invención incluyen derivados de glucosa; glucósidos de lignina; taninos hidrolizables que incluyen galotaninos y elagitaninos ; derivados de adenosida; derivados de acridina que incluyen lactato de 6 , 9-diamino-2-etoxiacridina monohidratado; análogos de tilorona que incluyen tilorona RIO.556, clorhidrato de daunomicina o daunorubicina; elipticina; proflavina; y otros inhibidores de PARG. La invención incluye composiciones farmacéuticas que contienen inhibidores de PARG y su método de uso en el tratamiento o prevención de enfermedades debidas al agotamiento de la energía celular inducida por radicales libres y/o daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis, apoptosis o combinaciones de las mismas. Los inhibidores de PARG adecuados para usar en la presente invención podrían ser útiles en una forma de base libre, en la forma de sales farmacéuticamente aceptables, hidratos farmacéuticamente aceptables, esteres farmacéuticamente aceptables, solvatos farmacéuticamente aceptables, profármacos farmacéuticamente aceptables, metabolitos farmacéuticamente aceptables, y en la forma de estereoisómeros farmacéuticamente aceptables. Estas formas están todas dentro del alcance de la invención. En la práctica, el uso de estas formas asciende al uso del compuesto neutro. " Sal" , " hidrato" , " éster" o " solvato farmacéuticamente aceptable" se refiere a una sal, hidrato, éster o solvato de los inhibidores de PARG inventivos que poseen la actividad farmacológica deseada y que no es biológica ni de otra forma indeseable. Los ácidos orgánicos pueden usarse para producir sales tal como acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencensulfonato, p-toluensulfonato, bisulfato, sulfamato, sulfato, naftilato, butirato, citrato, alcanforato, alcanforsulfonato, ciclopentan-propionato, digluconato, dodecilsulfato, etansulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, heptanoato de hemisulfato, hexanoato, 2-hidroxietansulfonato, lactato, maleato, metansulfonato, 2-naftalensulfonato, nicotinato, oxalato, tosilato y undecanoato. Los ácidos inorgánicos pueden usarse para producir sales tal como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato y tiocianato. Ejemplos de sales de base adecuadas incluyen hidróxidos, carbonatos, y bicarbonatos de amoníaco, sales de metales alcalinos tal como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalino térreos tal como sales de calcio y magnesio, sales de aluminio, y sales de zinc. Las sales también podrían formarse con bases orgánicas. Las bases orgánicas adecuadas para la formación de sales por adición de bases farmacéuticamente adecuadas de los inhibidores de PARG de la presente invención incluyen las que son no tóxicas y suficientemente fuertes para formar tales sales. Con fines de ilustración, las clases de tales bases orgánicas podrían incluir mono-, di- y trialquilaminas, tal como metilamina, dimetilamina, trimetilamina y diciclohexilamina; mono-, di- o trihidroxialquilaminas , tal como mono-, di- y trietanolamina; aminoácidos, tal como arginina y lisina; guanidina; N-metil-glucosamina; N-metil-glucamina; L-glutamina; N-metil-piperazina; morfolina; etilendiamina; N-bencil-fenetilamina; (trihidroxi-metil ) aminoetano; y similares. Ver, por ejemplo, " Pharmaceuticals Salts" , J . Pharm . Sci . , 66:1, 1-19 (1997). Por lo tanto, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden volverse cuaternarios con agentes que incluyen: haluros de alquilo inferior tal como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo tal como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo; haluros de cadena larga tal como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; y haluros de aralquilo tal como bromuros de bencilo y fenetilo . Las sales por adición de ácido de las inhibidores básicos de PARG básicos podrían prepararse ya sea disolviendo la base libre de un inhibidor de PARG en una solución acuosa o una alcohólica acuosa u otro disolvente adecuado que contiene el ácido o base apropiado, y aislando la sal por evaporación de la solución. Alternativamente, la base libre del inhibidor de PARG podría hacerse reaccionar con un ácido, así como hacer reaccionar el inhibidor de PARG que tiene un grupo ácido en el mismo con una base, de tal forma que las reacciones están en un disolvente orgánico, en este caso la sal se separa directamente o puede obtenerse concentrando la solución. " Profármaco farmacéuticamente aceptable" se refiere a un derivado de los inhibidores de PARG inventivos que se someten a biotransformación antes de que exhiban su(s) efecto(s) farmacológico ( s ) . El profármaco se formula con los objetivos de estabilidad química mejorada, aceptación y complacencia mejoradas del paciente, biodisponibilidad mejorada, duración de acción prolongada, selectividad de órgano mejorada, formulación mejorada (e.g., hidrosolubilidad incrementada), y/o efectos colaterales disminuidos (e.g., toxicidad). El profármaco puede prepararse fácilmente a partir de los inhibidores de PARG inventivos usando métodos conocidos en el arte, tal como los descritos en Burger ' s Medi cinal Chemis try and Dru g Ch emi s try , Quinta Ed., Vol. 1, pp . 172-178, 949-982 (1995). Por ejemplo, los inhibidores de PARG inventivos pueden transformarse en profármacos convirtiendo uno o más de los grupos hidroxi o carboxi en esteres.

Después de entrar en el cuerpo, los fármacos deben ser sustratos para las reacciones químicas que podrían cambiar sus propiedades físicas y efectos biológicos. Estas conversiones metabólicas, que afectan usualmente la polaridad del inhibidor de PARG, alteran la forma en que se distribuyen y se excretan los fármacos del cuerpo. Sin embargo, en algunos casos, se requiere el metabolismo de un fármaco para efecto terapéutico. Por ejemplo, fármacos anticáncer de la clase metabolito deben convertirse a sus formas activas después de que se han transportado dentro de una célula cancerosa. Ya que los fármacos deben someterse a transformación metabólica de algún tipo, las reacciones bioquímicas que juegan un papel importante en el metabolismo del fármaco podrían ser numerosas y diversas. El principal sitio de metabolismo del fármaco es el hígado, aunque también podrían participar otros tejidos . Una característica distintiva de muchas de estas transformaciones es que los productos metabólicos, o " metabolitos" , son más polares que los fármacos de origen, aunque un fármaco polar algunas veces produce un producto menos polar. Las sustancias con coeficientes de reparto lípido/agua altos, que pasan fácilmente a través de las membranas, también se difunden fácilmente en sentido inverso en la orina tubular a través de las células tubulares renales en el plasma. De este modo, tales sustancias tienden a tener una separación renal baja y una persistencia grande en el cuerpo. Si un fármaco se metaboliza a un compuesto más polar, uno con un coeficiente de reparto más bajo, su reabsorción tubular se reducirá grandemente. Además, los mecanismos secretores específicos de aniones y cationes en los túbulos renales próximos y en las células parénquima de hígado operan en sustancias altamente polares. Como un ejemplo específico, fenacetina ( acetofenetidina ) y acetanilida son agentes tanto analgésicos moderados como antipiréticos, pero se transforman dentro del cuerpo a un metabolito más polar y más efectivo, p-hidroxiacetanilida (acetaminofén), el cual se usa ahora ampliamente. Cuando se da una dosis de acetanilida a una persona, los metabolitos sucesivos llegan a un pico y decaen secuencialmente en el plasma. Durante la primera hora, la acetanilida es el componente principal del plasma. En la segunda hora, conforme cae el nivel de acetanilida, la concentración del metabolito acetaminofén llega a un pico. Finalmente, después de pocas horas, el componente principal del plasma es un metabolito adicional que es inerte y puede excretarse del cuerpo. De esta forma, las concentraciones de plasma de uno o más metabolitos, así como el mismo fármaco, pueden ser farmacológicamente importantes. Las reacciones involucradas en el metabolismo del fármaco se clasifican a menudo en dos grupos, como se muestra en la Tabla II. Las reacciones de fase I son reacciones de funcionalización y consisten en general de (1) reacciones de oxidación y reductoras que alteran y crean nuevos grupos funcionales y (2) reacciones hidrolíticas que cortan esteres y amidas para liberar grupos funcionales enmascarados. Estos cambios son usualmente en la dirección de polaridad aumentada. Las reacciones de fase II son reacciones de conjugación en las que el fármaco, o a menudo un metabolito del fármaco, se acopla a un sustrato endógeno, tal como ácido glucurónico, ácido acético o ácido sulfúrico.

TABLA II Reacciones de Fase I (reacciones de funcionalización) : (1) Oxidación por vía del sistema hepático microsomal P450: Oxidación alifática Hidroxilación aromática N-Desalquilación O-Desalquilación S- Desalquilación Epoxidación Desaminación oxidante Formación de sulfóxido Desulfuración N-Oxidación y N-hidroxilación Deshalogenación (2) Oxidación por vía de mecanismos no microsomales: Oxidación de alcohol y aldehido Oxidación de purina Desaminación oxidante (monoamina oxidasa y diamina oxidasa) (3) Reducción: Reducción azo y nitro (4) Hidrólisis: Hidrólisis de éster y amida Hidrólisis de enlace peptídico Hidratación de epóxido Reacciones de Fase II (reacciones de conjugación): (1) Glucuronidación (2) Acetilación (3) Formación de ácido mercaptúrico (4) Conjugación de sulfato (5) N-, 0-, y S-metilación (6) Trans-sulfuración Cuando un inhibidor de PARG posee uno o más centros asimétricos y de este modo pueden producirse como mezclas (racémicas y no racémicas) de estereoisómeros, o como R- y S-estereoisómeros individuales. Los estereoisómeros individuales podrían obtenerse usando un material de inicio ópticamente activo, separando una mezcla racémica o no racémica de un intermediario en alguna etapa apropiada de la síntesis, o separando un compuesto inhibidor de PARG deseado. El término " isómeros" se refiere a compuestos que tienen el mismo número y tipo de átomos, y por lo tanto, el mismo peso molecular, pero que difieren en respecto al arreglo o configuración de los átomos. " Estereoisómeros" son isómeros que difieren solo en el arreglo de los átomos en el espacio. " Enantiómeros" son un par de estereoisómeros que son imágenes en el espejo que no se sobreponen una a otra. " Diastereoisómeros" son isómeros que no son imágenes en el espejo una de la otra. " Mezcla racémica" significa una mezcla que contiene partes iguales, o casi iguales, de enantiómeros individuales. Una " mezcla no racémica" es una mezcla que contiene partes desiguales, o sustancialmente desiguales, de enantiómeros o estereoisómeros individuales.

Síntesis de Compuestos Los inhibidores de PARG adecuados para usar en las composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención podría sintetizarse por medio de métodos conocidos, a partir de materiales iniciales que se conocen, los mismos están comercialmente disponibles, o que podrían prepararse por medio de métodos usados para preparar los compuestos correspondientes en la literatura. Los compuestos de la presente invención también pueden prepararse fácilmente por técnicas estándar de química orgánica, usando las rutas sintéticas generales descritas después. Los compuestos precursores pueden prepararse por métodos conocidos en el arte. Los siguientes esquemas se destinan como ilustraciones de la preparación de inhibidores de PARG adecuados, útiles en las modalidades preferidas de la invención, y no se implica limitación de la invención.

E emplo 1 1. Síntesis de 1-O-Bencil-D-Glucopiranosa (Compuesto 1) D-glucosa (15.0 g) se adicionó a alcohol bencílico (100 ml) y la suspensión así obtenida se enfrió a 0°C. Cloruro de hidrógeno gas se inyectó en la suspensión durante 30 minutos. Después la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 días, se adicionó éter (500 ml ) y se decantó el líquido sobrenadante. Este proceso se repitió 3 veces. La sustancia aceitosa así obtenida se sometió a cromatografía de columna en gel de sílice (gel de sílice, disolvente: cloroformo:metanol = 8/1, 5/1) para obtener el Compuesto 1 (11.7 g, 52%). 2. Síntesis de Ácido 3 , 4 , 5-Tribenciloxibenzoico (Compuesto 2) Una solución obtenida mezclando dimetilformamida (50 ml ) , ácido gálico (10 g), carbonato de potasio anhidro (44 g), y cloruro de bencilo (27 ml ) en atmósfera de nitrógeno se diluyó con acetato de etilo (1 litro). Después, la mezcla se agitó a 140°C durante toda la noche. La capa de acetato de etilo se lavó con agua y una solución salina saturada, y se secó con sulfato de magnesio. Después de que el disolvente se destiló a presión reducida, se obtuvo un producto crudo. Etanol (200 ml ) y una solución de hidróxido de sodio agua 1.6 N (50 ml) se adicionaron al producto crudo así obtenido, y la mezcla se reflujo con calentamiento durante 2 horas. Después de la reacción, se destiló aproximadamente 50% de etanol. El sedimento resultante se enfrió a 0°C y se ajustó a pH 2 con ácido clorhídrico 0.5 N. Los sólidos así depositados se filtraron y se secaron para obtener el Compuesto 2 (15.6 g, 64%) . 3. Síntesis de l-Q-Bencil-2 , 3 , 4 , 6-Tetracis- ( 3 , 4 , 5-Tribenciloxibenzoil ) -D-Glucopiranosa (Compuesto 3) El Compuesto 2 (7.0 g), cloruro de tionilo (40 ml ) , y dimetilformamida (1 ml ) se mezclaron con enfriamiento con hielo. Después la solución resultante se reflujo con calentamiento toda la noche, el exceso de cloruro de tionilo se destiló a presión ordinaria y presión reducida para preparar un cloruro ácido del Compuesto 2. En atmósfera de nitrógeno, el Compuesto 1 (0.83 g) se adicionó a piridina (10 ml ) y se agitó la mezcla. A la solución, se adicionó gota a gota una solución del cloruro ácido del Compuesto 2 (un producto crudo obtenido cuando se emplearon 7.0 g del Compuesto 2) en piridina (30 ml ) . La mezcla se agitó a temperatura ambiente toda la noche y se diluyó con acetato de etilo (0.6 litros). Se filtró la suspensión así obtenida. La capa de acetato de etilo se lavó con agua, ácido clorhídrico 0.05 N, una solución saturada de bicarbonato de sodio en agua, y una solución salina saturada, y después, se secó con sulfato de magnesio. Después de que se destilaron los disolventes a presión reducida, se obtuvo un producto crudo. El producto crudo así obtenido se sometió a cromatografía de columna en gel de sílice (gel de sílice, disolventes: acetato de etilo:hexano = 1/4, 1/3, 1/2) para obtener el Compuesto 3 (2.85 g, 49%). ^-RMN (CDC13) d: 4.2-4.8 (m, 3H), 4.8-5.1 (m, 24H), 5.1-5.7 (m, 3H), 6.1-6.3 (m, ÍH), y 7.1-7.6 (m, 72H) . IR (KBr, cm"1): 1,718 y 1,580. 4. Síntesis de 2,3,4, 6-Te racis-O-Galoil-D- Glucopiranosa (Compuesto 4) Después de mezclar el Compuesto 3 (2.85 g), acetato de etilo/metanol (3/1, 150 ml ) , y negro de paladio (3.0 g), se inició la sustitución de hidrógeno. Después de que la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante aproximadamente 1 hora, se retiró el negro de paladio. El filtrado resultante se concentró y se sometió a cromatografía de columna en gel de sílice (gel de sílice, disolvente: hexano: tetrahidrourano :metanol = 60/30/10, 50/37.5/12.5, 40/45/15) para obtener el Compuesto 4 (0.94 g, 86%) . ^-RMN (DMSO-d6) d: 4.3-4.5 (m, 2H), 5.0-5.2 (m, 2H), 5.3-5.5 (m, 2H), 5.8-6.2 (m, ÍH, H1), 6.7-7.1 (m, 8H) , y 9.19 (brs, 12H) . IR (KBr, cm_1): 3,300, 1,700, y 1,610. 13C-RMN (DMSO-d6) d: 62.0, 66.2, 67.0, 68.4, 69.4, 89.5, 104.2, 108.8, 116.2, 116.3, 116.5, 116.6, 119.1, 138.6, 138.7, 139.0, 142.8, 143.0, 145.3, 145.5, 145.6, 164.5, 164.7, 165.0, 165.2, y 165.5 (mezcla de a y ß).

E emplo 2 Síntesis de 1 , 2 , 3 , 4 , 5-Penta-O-Galoil-ß-D-Glucopiranosa (Compuesto 5) Ácido tánico (25 g), metanol (200 ml ) y ácido acético-acetato de sodio 0.1 M (pH 6.0, 200 ml ) se mezclaron y la reacción se dejó proseguir en un termostato a 37°C durante 7 días con agitación ocasional. Después de la reacción, la solución se concentró para reducir el volumen a aproximadamente 50% y la solución concentrada resultante se extrajo con acetato de etilo. El extracto resultante se lavó con agua y una solución salina saturada, y después, se secó con sulfato de magnesio. Después de que se destiló el disolvente, se obtuvo un producto crudo (aproximadamente 20 g). El producto crudo resultante (10 g) se sometió a cromatografía de columna en gel de sílice (gel de sílice, (gel de sílice, disolventes: hexano: tetrahidrofurano:metanol = 6/3/1, 50/37.5/12.5, 4/4.5/1.5) para obtener el Compuesto 5 (1.39 g). ^-RMN (DMSO-d6) d: 4.3 (brs), 4.5-4.6 (m), 5.95 (d, d, J=9.7), 6.35 (d, J=8.3 Hz, ÍH), 6.77 (s, 2H), 6.82 (s, 2H), 6.85 (s, 2H), 6.92 (s, 2H), 6.98 (s, 2H), encontrado 9.11 (brs, 15H). IR (KBr, cm"1): 3,350, 1,700, y 1,610. 13C-RMN (DMS0-d6) d: 61.3, 67.6, 70.5, 71.9, 72.2, 91.7, 108.8, 117.4, 118.0, 118.1, 118.9, 138.6, 138.8, 139.0, 139.5, 145.3, 145.3, 145.4, 145.6, 163.9, 164.4, 164.6, 164.8, y 165.4.

Ejemplos 3 a 5 Los siguientes tres ejemplos se sintetizaron de acuerdo al Ejemplo 1.

Eiemplo 3 1,2,3,4, 6-Pen a-O- ( 3 , 5 -Dimetoxi-4-Hidroxicinamoil ) -D- Glucopiranosa ^-RMN (CDC13) d: 3.78-4.01 (m, 30H), 4.27-6.90 (m, 7H), 6.13-6.55 (m, 5H), 6.60-6.90 (m, 10H), y 7.46-7.80 (m, 5H) . IR (KBr, cm"1): 2,950, 2,850, 1,710, 1,630, 1,600, 1,510, 1,460, 1,280 y 1,220.

Eiemplo 4 1,2,3,4, 6-Penta-Q-(3 ,4, 5-Trime oxibenzoil ) -D- Glucopiranosa :H-RMN (CDC13) d: 3.8-4.1 (m, 45H), 4.3-4.9 (m, 3H), 5.57 (dd, 0.4H), 5.7-5.9 (m, 1.6H), 5.9-6.2 (m, 0.6H), 6.2-6.4 (m, ÍH), 6.81 (d, 0.4H), y 7.1-7.5 (m, 10H) . IR (KBr, cpT1): 1,720, 1,580, 1,330, 1,210 y 1,125, pf 85-90°C.

Ejemplo 5 1,2,3,4, 6-Pe a-O- (3,4, 5 -Trimetoxicinamoi1 ) -D-Glucosa ^-RMN (CDC13) d: 3.60-4.05 (m, 45H), 4.30-6.97 (m, 7H), 6.19-6.55 (m, 5H), y 6.60-6.97 (m, 10H). IR (KBr, cm"1): 2,930, 1,720, 1,630, 1,580, 1,500, 1,270, 1,240 y 1,130.

Ejemplo 6 Preparación de Taninos Hidrolizables a partir de Pinas de Pino Las pinas de pino se extraen en agua caliente hirviendo, con el tiempo de ebullición que varía con la cantidad de pinas de pino y/o la cantidad de agua, pero es usualmente de 2 horas x 3 veces. Después de que se extraen las pinas de pino en agua caliente, se medio secan, y se sumergen en etanol, y se dejan reposar toda la noche a temperatura ambiente. Después de la extracción de las pinas de pino en etanol, las pinas de pino se medio secan, y el glucósido de tanino hidrolizable o de lignina resultante se extrae por inmersión en acetona, y se dejan reposar toda la noche a temperatura ambiente, se secan con lámpara, y se extraen en solución de hidróxido de sodio 1 N mientras se agita durante 6 horas (o toda la noche). El ácido acético se adiciona a esta solución extraída, y el pH se regresa a 5.0. El precipitado se retira por medio de operación centrífuga a alta velocidad. Una cantidad equivalente de etanol se adiciona a la solución extraída, y se deja reposar toda la noche en un cuarto frío. El precipitado se retira por medio de operación de centrífuga de alta velocidad, y el sobrenadante se dializa con agua. La solución dializada se seca por congelamiento, y se obtiene polvo. El polvo secado por congelamiento se refina por Sepharose CL-4B (el lecho móvil es NaOH 0.1 N). Las fracciones activas se colectan y se dializan en agua, y se secan por congelamiento, y se obtiene polvo. Este polvo secado por congelamiento se disuelve en etanol al 10%, y se refina más por Toyopearl HW-40F (el lecho móvil es etanol al 10%). Las fracciones activas se colectan, se dializan en agua y se secan por congelamiento, y se obtiene el polvo final.

Ejemplo de prueba 1 Efecto inhibidor en poli- (ADP-ribosa) qlucohidrolasa A un amortiguador para prueba (0.01% de albúmina de suero de bovino, mercaptoetanol 10 mM, fosfato de potasio 50 mM, pH 7.0), se adicionó 3H- (ADP-ribosa ) n=15, y a 27 pl del mismo, además de, la sustancia que se iba a probar y la solución de poli- (ADP-ribosa ) glucohidrolasa de derivado nuclear, preparada a partir de placenta de humano, se adicionaron para hacer 30 pl en total, que se incubaron durante 1 hora a 37°C. Después, la solución de reacción se absorbió en papel filtro DE81, y el papel filtro se lavó en agua, etanol y acetona, y se secó, y el sustrato sin reaccionar 3H(ADP-ribosa) se midió por medio de contador de centelleo líquido, y se investigó la acción inhibidora de la sustancia de prueba en esta enzima. Los resultados se muestran en la Tabla 1, que muestra todas las sustancias probadas que inhibieron poli- (ADP-ribosa) glucohidrolasa en forma dependiente de la dosis .

Tabla 1 - Actividad inhibidora de glucósido de tanino en poli- (ADP-ribosa) glucohidrolasa Concentración de tanino Actividad de PARG (%) 100 0.3 86 1.0 24 3.0 Otras variaciones y modificaciones de esta invención que usa, entre otras, las rutas sintéticas descritas antes serán evidentes para los expertos en el arte . La Figura 1 muestra células P388D1 (ATCC, #CCL-46), derivadas de tumor tipo macrófago de murino, se mantuvieron en Medio Eagle Modificado de Dulbeco (DMEM) con 10% de suero de caballo, L-glutamina 2 mM. La prueba de citotoxicidad se produjo en una placa de 96 pozos. En cada pozo, 190 ul de células se sembraron con densidad de 2xl0°/ml. Se realizó un experimento de dosis respuesta. Varias concentraciones de un inhibidor de PARG se adicionaron a las células. Un experimento típico consistió de dosis con una concentración final de 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30, 100, 300 uM. Cada dato puntual se promedio a partir de un cuadruplicado. Después de 15 min de incubación, 5 ul de peróxido de hidrógeno preparado fresco se adicionaron a las células para una concentración final de 2 mM. Un grupo de pozos sin compuesto no se expuso al peróxido de hidrógeno para la última determinación. Las células se regresaron a la incubadora a 37°C durante 4 horas. Al final de la incubación, se tomaron muestras de 25 ul de sobrenadante del medio celular para determinar el nivel de lactato deshidrogenasa (LDH) liberado de las células muertas. Se usó una prueba de LDH adaptada de Sigma Co. y se siguió con el procedimiento experimental de acuerdo a la manufactura. La actividad LDH se determinó monitoreando la velocidad de decrecimiento de la absorbancia de NADH a 340 nm. Se restó la actividad LDH final. El grupo sin tratamiento de fármaco se usó para calcular la muerte celular total debida a tratamiento de peróxido de hidrógeno. Los efectos protectores de los inhibidores de PARG se expresaron como un porcentaje de la sobrevivencia celular.

La Figura 2 muestra el EC50 que se determinó de una curva de dosis respuesta de citotoxicidad. Para determinar ECS0, la concentración de un compuesto requerido para alcanzar 50% de reducción de muerte celular se derivó de la curva de dosis respuesta. Valores de por ciento de actividad de PARG son equivalentes a por ciento de reducción de muerte celular debida a una concentración final de peróxido de hidrógeno 2 mM en la prueba de citotoxicidad. Todos los métodos son los mismos que los descritos para la Figura 1. La Figura 3 muestra una representación simplificada del ciclo PARP/PARG para mantenimiento de poli (ADP-robosil ) ación y su relación al metabolismo de energía celular y varios usos, enfermedades y padecimientos descritos aquí. El diagrama sugiere dos mecanismos generales de como la inhibición de PARG debería ser útil para la variedad de usos descritos aquí, incluyendo para el tratamiento o prevención de varias enfermedades o padecimientos sugeridos aquí. La presente invención también contempla otros modos de acción para inhibidores de PARG no descritos aquí, para los métodos útiles descritos aquí, tal como inhibidores de PARG que actúan en un mecanismo de la enfermedad o padecimiento independientes del metabolismo de PARG.

Abreviaciones: NAD, nicotinamida adenosín dinucleótido; NAM, nicotinamida; ATP, adenosín trifosfato; ROS, especias de oxígeno reactivas; NOS, óxido nítrico sintetasa.

Composiciones Farmacéuticas Un aspecto adicional de la presente invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable, y una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito o estereoisómero farmacéuticamente aceptable . Los inhibidores de PARG son útiles en la manufactura de formulaciones farmacéuticas que comprenden una cantidad efectiva de los mismos en conjunción con o como una mezcla con excipientes o vehículos adecuados para aplicación ya sea enteral o parenteral. Como tal, las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral podrían estar en la forma de unidades discretas tal como cápsulas, pastillas, tabletas, trocisco o comprimidos, cada uno conteniendo una cantidad predeterminada del ingrediente activo; en la forma de un polvo o granulos; en la forma de una solución o una suspensión en un líquido acuoso o líquido no acuoso; o en la forma de una emulsión aceite en agua o una emulsión agua en aceite. El ingrediente activo también podría estar en la forma de un bolo, electuario, o pasta. La composición se formulará usualmente en una forma de dosificación unitaria, tal como una tableta, cápsula, suspensión o solución acuosa. Tales formulaciones incluyen típicamente un vehículo sólido, semisólido o líquido. Ejemplos de vehículos incluyen lactosa, dextrosa, sacarosa, sorbitol, manitol, almidones, goma de acacia, fosfato de calcio, aceite mineral, manteca de cacao, aceite de teobroma, alginatos, tragacanto, gelatina, jarabe, metil celulosa, monolaurato de polioxietilén sorbitán, hidroxibenzoato de metilo, hidroxibenzoato de propilo, talco, estearato de magnesio, y similares. Las formulaciones particularmente preferidas incluyen tabletas y cápsulas de gelatina que contienen el ingrediente activo junto con (a) diluyentes, tal como lactosa, dextrosa, sacarosa, manitol, sorbitol, celulosa, almidón seco de maíz, y glicina; y/o (b) lubricantes, tal como sílice, talco, ácido esteárico, su sal de magnesio o calcio, y polietilén glicol. Las tabletas también podrían contener aglutinantes, tal como silicato de magnesio aluminio, pasta de almidón, gelatina, tragacanto, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio y polivinilpirrolidona; vehículos, tal como lactosa y almidón de maíz; desintegradores, tal como almidones, agar, ácido algínico o su sal de sodio, y mezclas efervescentes; y/o absorbentes, colorantes, saborizantes y edulcorantes. Las composiciones de la invención podrían ser esterilizadas y/o contener adyuvantes, tal como agentes de preservación, estabilización, hinchamiento o emulsificación, promotores de solución, sales para regular la presión osmótica, y/o amortiguadores. Además, la composición también podría contener otras sustancias terapéuticamente valiosas. Las suspensiones acuosas podrían contener agentes de emulsificación y suspensión combinados con el ingrediente activo. Todas las formas de dosificación oral podrían contener además agentes edulcorantes y/o saborizantes y/o de coloración. Estas composiciones se preparan de acuerdo a métodos convencionales de mezclado, granulación o recubrimiento/ respectivamente, y contienen aproximadamente de 0.1 a 75% del ingrediente activo, de preferencia de aproximadamente 1 a 50% del mismo. Una tableta podría hacerse comprimiendo o moldeando el ingrediente activo opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Las tabletas comprimidas también podrían prepararse comprimiendo, en una máquina adecuada, el ingrediente activo en una forma de flujo libre tal como un polvo o granulos, mezclado opcionalmente con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, agente de superficie activa o dispersión. Las tabletas moldeadas podrían hacerse moldeando, en una máquina adecuada, una mezcla del ingrediente activo en polvo y un vehículo adecuado humedecido con un diluyente líquido inerte. Cuando se administra parenteralmente, la composición estará normalmente en una forma de dosificación unitaria, inyectable estéril (solución isotónica acuosa, suspensión o emulsión) con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Tales vehículos son preferentemente no tóxicos, parenteralmente aceptables y contienen diluyentes o disolventes no terapéuticos. Ejemplos de tales vehículos incluyen agua; soluciones acuosas, tal como solución salina (solución isotónica de cloruro de sodio), solución de Ringer, solución de dextrosa, y solución de Hank; y vehículos no acuosos, tal como 1 , 3-butandiol , aceites compuestos (e.g., aceite de maíz, de semilla de algodón, de cacahuate, de ajonjolí, y mono- o di-glicérido sintéticos), oleato de etilo, y miristato de isopropilo. Las suspensiones oleaginosas pueden formularse de acuerdo a técnicas conocidas en el arte, usando agentes de dispersión o humectación adecuados y agentes de suspensión. Entre los disolventes aceptables o medios de suspensión están los aceites compuestos estériles. Para este fin, podría usarse cualquier aceite compuesto blando. Ácidos grasos tal como ácido oleico y sus derivados glicéridos, incluyendo aceite de oliva y aceite de ricino, especialmente en sus formas polioxietiladas , también son útiles en la preparación de inyectables. Estas soluciones o suspensiones aceitosas también podrían contener diluyentes o dispersantes de alcohol de cadena larga. La solución salina estéril es un vehículo preferido, y los compuestos son a menudo suficientemente solubles en agua para hacerlos como una solución para todas las necesidades previsibles. El vehículo podría contener cantidades menores de aditivos, tal como sustancias que aumentan la solubilidad, isotonicidad y estabilidad química, e.g., antioxidantes, amortiguadores y preservativos. Cuando se administra de forma rectal, la composición se formulará usualmente en una forma de dosificación unitaria tal como un supositorio o pastilla. Estas composiciones pueden prepararse mezclando el compuesto con excipientes no irritantes adecuados, que son sólidos a temperatura ambiente, pero líquidos a la temperatura rectal, de tal forma que se fundirán en el recto para liberar el compuesto. Excipientes comunes incluyen manteca de cacao, cera de abeja y polietilén glicoles u otras emulsiones o suspensiones grasas. Además, los compuestos podrían administrarse tópicamente, especialmente cuando las condiciones indicadas para tratamiento involucran áreas u órganos fácilmente accesibles por medio de aplicación tópica, incluyendo padecimientos neurológicos del ojo, la piel o el tracto intestinal inferior. Para aplicación tópica al ojo, o uso oftálmico, los compuestos pueden formularse como suspensiones micronizadas en solución salina estéril isotónica, de pH ajustado o, preferentemente, como una solución en solución salina estéril isotónica, de pH ajustado, ya sea con o sin un preservativo tal como cloruro de bencilalconio. Alternativamente, los compuestos podrían formularse en ungüentos, tal como petrolato. Para aplicación tópica para la piel, los compuestos pueden formularse en ungüentos adecuados que contienen los compuestos suspendidos o disueltos en, por ejemplo, mezclas con uno o más de los siguientes: aceite mineral, petrolato líquido, petrolato blanco, propilén glicol, compuesto de polioxietileno, compuesto de polioxipropileno, cera emulsificante y agua. Alternativamente, los compuestos pueden formularse en lociones o cremas adecuadas que contienen el compuesto activo suspendido o disuelto en, por ejemplo, una mezcla de uno o más de los siguientes: aceite mineral, monoestearato de sorbitán, polisorbato 60, cera de éster de cetilo, alcohol cetearílico, 2-octildodecanol , alcohol bencílico y agua. La aplicación tópica para el tracto intestinal inferior puede efectuarse en formulaciones de supositorio rectal (ver anteriores) o en formulaciones de enema adecuadas. Las formulaciones adecuadas para administración nasal o bucal (tal como formulaciones de surtido de polvo auto propulsado), podrían contener de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 5% peso/peso del ingrediente activo o, por ejemplo, aproximadamente 1% peso/peso del mismo. Además, algunas formulaciones pueden contenerse en un trocisco o comprimido sublingual . Las formulaciones podrían presentarse convenientemente en forma de dosificación unitaria y podrían prepararse por medio de cualquiera de los métodos bien conocidos en el arte de farmacia. Todos los métodos incluyen el paso de portar el ingrediente activo en asociación con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan uniformemente y portan íntimamente al ingrediente activo en asociación con un vehículo líquido o un vehículo sólido finamente dividido o ambos, y después si es necesario, dar forma al producto en la formulación deseada. En una modalidad preferida, el vehículo es un polímero biodegradable sólido o una mezcla de polímeros biodegradables con características de tiempo de liberación y cinética de liberación apropiadas. La composición de la invención podría moldearse después en un implante sólido adecuado para proporcionar concentraciones eficaces de los compuestos de la invención durante un período de tiempo prolongado son la necesidad de redosificación frecuente. La composición de la presente invención puede incorporarse en el polímero biodegradable o mezcla de polímero en cualquier forma adecuada conocida por un experto en el arte, y podría formar una matriz homogénea con el polímero biodegradable, o podría encapsularse de alguna forma dentro del polímero, o podría moldearse en un implante sólido. En una modalidad, el polímero biodegradable o mezcla de polímero se usa para formar un " depósito" suave que contiene la composición farmacéutica de la presente invención que puede administrarse como un líquido que fluye, por ejemplo, por medio de inyección, pero que permanece suficientemente viscoso para mantener la composición farmacéutica dentro del área localizada alrededor del sitio de inyección. El tiempo de degradación del depósito así formado puede variarse de varios días a pocos años, dependiendo del polímero seleccionado y su peso molecular. Usando una composición de polímero en forma inyectable, podría eliminarse aún la necesidad de hacer una incisión. En cualquier evento, un " depósito" flexible o fluido se ajustará a la forma del espacio que ocupa dentro del cuerpo con un mínimo de trauma para los tejidos de los alrededores. La composición farmacéutica de la presente invención se usa en cantidades que son terapéuticamente efectivas y las cantidades usadas podrían depender del perfil de liberación deseado, la concentración de la composición farmacéutica requerida para el efecto de sensibilización, y la duración del tiempo en el que la composición farmacéutica tiene que liberarse para el tratamiento.

Los inhibidores de PARG de la invención se administran preferentemente como una cápsula o tableta que contiene una dosis única o dividida del compuesto, o como una solución, suspensión o emulsión estéril, para administración parenteral en una dosis única o dividida. En otra modalidad preferida, los inhibidores de PARG de la invención pueden prepararse en forma liofilizada. En este caso, 1 a 100 mg de un inhibidor de PARG podrían liofilizarse en ampolletas individuales, junto con un vehículo y un amortiguador, tal como manitol y fosfato de sodio. La composición podría reconstituirse entonces en las ampolletas con agua bacteriostática antes de la administración. Los compuestos de la invención se usan en la invención en cantidades que son terapéuticamente efectivas. Mientras que la cantidad efectiva del inhibidor de PARG dependerá del compuesto particular que se usa, cantidades de estos compuestos que varían de aproximadamente 1% a aproximadamente 65% se han incorporado fácilmente en los sistemas de liberación de vehículo líquido o sólido. Composiciones y Métodos para Inhibir o Disminuir el Agotamiento de Energía Celular, Daño Celular o Muerte Celular Inducidos por Radicales Libres Preferentemente, de acuerdo a la invención, una cantidad terapéutica efectiva de los compuestos y composiciones descritos antes se administran a animales para inhibir o disminuir el agotamiento de la energía celular, daño celular o muerte celular inducidos por radicales libres. En otra modalidad de la invención, las composiciones farmacéuticas y método de la presente invención que usan inhibidores de PARG efectúan una actividad neuronal, que podría o no podría mediarse por la neurotoxicidad de NMDA o neurotoxicidad de glutamato. Tal actividad neuronal podría consistir de la estimulación de neuronas dañadas, promoción de regeneración neuronal, prevención de neurodegeneración y tratamiento de un padecimiento neurológico. Por lo tanto, la presente invención se refiere además a un método para efectuar una actividad neuronal en un animal, que comprende administrar una cantidad efectiva de las composiciones farmacéuticas de la presente invención al animal para tratar el daño de tejido neural, particularmente el daño que resulta de isquemia cerebral y lesión por reperfusión o enfermedades neurodegenerativas en mamíferos. El término " tejido nervioso" se refiere a varios componentes que forman al sistema nervioso incluyendo, sin limitación, neuronas, células de soporte neural, glia, células de Schwan, vasculatura contenida dentro y que suministra estas estructuras, el sistema nervioso central, el tallo cerebral, la médula espinal, la unión del sistema nervioso central con el sistema nervioso periférico, el sistema nervioso periférico, y estructuras afines. El término " daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión y enfermedades neurodegenerativas" incluye neurotoxicidad, tal como se ve en ataque cerebral vascular, isquemia global y focal, e isquemia retinal. El término " isquemia" se refiere a anemia de tejido localizado debida a la obstrucción del influjo de la sangre arterial. La isquemia global se presenta cuando la sangre que fluye a todo el cerebro cesa durante un período de tiempo. La isquemia global podría resultar de paro cardíaco. La isquemia focal se presenta cuando una porción del cerebro se priva de su suministro normal de sangre. La isquemia focal podría resultar de oclusión tromboembolítica de un vaso cerebral, lesión traumática de la cabeza, edema o tumor cerebral. Aún si es transiente, la isquemia tanto global como focal puede causar daño neuronal generalizado. Aunque el daño de tejido nervioso se presenta en horas o aún en días después del ataque de isquemia, algo de daño permanente de tejido nervioso podría desarrollarse en los minutos iniciales después de que cesa el flujo de sangre al cerebro. Mucho de este daño se ha atribuido a la toxicidad de glutamato y a las consecuencias secundarias de la reperfusión de tejido, tal como la liberación de productos vasoactivos por endotelio dañado y la liberación de productos citotóxicos, tal como radicales libres y leucotrinas, por el tejido dañado. La isquemia también puede presentarse en el corazón en infarto del miocardio y otros padecimientos cardiovasculares en los que las arterias coronarias se han obstruido como resultado de aterosclerosis, trombos o espasmo. El término " enfermedades neurodegenerativas" incluye la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington. El término " lesión nerviosa" se refiere a cualquier daño al tejido nervioso y cualquier discapacidad o muerte que resulta del mismo. La causa de lesión nerviosa podría ser metabólica, tóxica, neurotóxica, iatrogénica, térmica o química, e incluye sin limitación, isquemia, hipoxia, accidente cerebrovascular, trauma, cirugía, presión, efecto másico, hemorragia, radiación, vasoespasmo, enfermedad neurodegenerativa, infección, enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica (ALS), proceso de mielinización/desmielinizáción, epilepsia, padecimiento de cognición, anormalidad de glutamato y efectos secundarios de los mismos. Ejemplos de padecimientos neurológicos que son tratables por el método que usa la presente invención incluyen, sin limitación, neuralgia trigeminal; neuralgia glosofaríngea; parálisis de Bell; miastenia grave; distrofia muscular; esclerosis lateral amiotrófica; atrofia muscular progresiva; atrofia muscular hereditaria bulbar progresiva; síndromes de discos intervertebrales herniados, rotos o prolapsados; espondilosis cervical; padecimientos del plexo; síndromes de destrucción del estrecho inferior torácico; neuropatías periféricas; tal como las causadas por plomo, dapsona, garrapatas, porfiria, o síndrome de Guillain Barré; enfermedad de Alzheimer; enfermedad de Huntington y enfermedad de Parkinson. El método de la presente invención es particularmente útil para tratar un padecimiento neurológico seleccionado del grupo que consiste de: neuropatía periférica causada por lesión física o estado de la enfermedad; trauma de la cabeza, tal como lesión cerebral traumática; daño físico a la médula espinal; ataque asociado con daño cerebral, tal como ataque cerebral vascular asociado con hipoxia y daño cerebral, isquemia cerebral focal, isquemia cerebral global, y lesión por reperfusión cerebral; enfermedades de desmielinación, tal como esclerosis múltiple; y padecimientos neurológicos relacionados con neurodegeneración, tal como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y esclerosis lateral amiotrófica (ALS). El término " neuroprotector" se refiere al efecto de reducir, detener o mejorar la lesión nerviosa, y proteger, resucitar o revivir el tejido nervioso que ha sufrido lesión nerviosa. El término " prevenir la neurodegeneración" incluye la capacidad de prevenir la neurodegeneración en pacientes diagnosticados como que tienen una enfermedad neurodegenerativa o quienes están en riesgo de desarrollar una enfermedad neurodegenerativa. El término también abarca prevenir neurodegeneración adicional en pacientes que ya están padeciendo de o que tienen síntomas de una enfermedad neurodegenerativa. El término " tratar" se refiere a: (i) prevenir que se presente una enfermedad, padecimiento o condición en un animal que podría estar predispuesto a la enfermedad, padecimiento y/o condición, pero no se ha diagnosticado como que la tiene; (ii) inhibir la enfermedad, padecimiento o condición, i.e., detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, padecimiento o condición, i.e., causar regresión de la enfermedad, padecimiento y/o condición.

Tratamiento de Otros Padecimientos Relacionados con PARG Los compuestos, composiciones y métodos de la invención también pueden usarse para tratar un padecimiento cardiovascular en un animal, administrando una cantidad efectiva de las composiciones farmacéuticas de la. presente invención al animal. Como se usa aquí, el término " padecimientos cardiovasculares" se refiere ya sea a los padecimientos que pueden causar isquemia o que se causan por reperfusión del corazón. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, enfermedad de la arteria coronaria, angina de pecho, infarto del miocardio, daño de tejido cardiovascular causado por paro cardíaco, daño de tejido cardiovascular causado por desviación cardíaca, choque cardiógeno, y condiciones relacionadas que se conocerían por los expertos en el arte, o que involucran la disfunción de o dañan el tejido del corazón o vasculatura, especialmente, pero sin limitarse a, daño de tejido relacionado con activación de PARP. Por ejemplo, los métodos de la invención se cree que son útiles para tratar el daño de tejido cardíaco, particularmente el daño que resulta de isquemia cardíaca o causado por lesión por reperfusión en mamíferos. Los métodos de la invención son particularmente útiles para tratar padecimientos cardiovasculares seleccionados del grupo que consiste de: enfermedad de la arteria coronaria, tal como aterosclerosis; angina de pecho; infarto del miocardio, isquemia miocárdica y paro cardíaco; desviación cardíaca; y choque cardiógeno. Los métodos de la invención son particularmente auxiliares en el tratamiento de las formas agudas de los padecimientos cardíacos anteriores. Además, los métodos de la invención pueden usarse para tratar el daño de tejido que resulta del daño o muerte celular debido a necrosis o apoptosis, daño de tejido neural que resulta de lesión por isquemia y reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas; para prevenir o tratar ataque cerebral vascular; para tratar o prevenir padecimientos cardiovasculares; para tratar otras condiciones y/o padecimientos tal como degeneración macular relacionada con la edad, enfermedades de inmuno senescencia, artritis, aterosclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético que involucra senescencia por replicación, diabetes, trauma de la cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios intestinales (tal como colitis y enfermedad de Crohn), distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor (tal como dolor neuropático), insuficiencia renal, isquemia, choque séptico (tal como choque endotóxico), y envejecimiento de la piel; para extender la duración de vida y capacidad de proliferación de las células; para alterar la expresión de los genes de las células senescentes; o radiosensibilizar las células tumorales. El término " tratar" se refiere a: (i) prevenir que se presente una enfermedad, padecimiento o condición en un animal que podría estar predispuesto a la enfermedad, padecimiento y/o condición, pero no se ha diagnosticado como que la tiene; (ii) inhibir la enfermedad, padecimiento o condición, i.e., detener su desarrollo; y (iii) aliviar la enfermedad, padecimiento o condición, i.e., causar regresión de la enfermedad, padecimiento y/o condición.

Administración Para uso médico, la cantidad requerida de un inhibidor de PARG para obtener un efecto terapéutico variará de acuerdo al compuesto particular administrado, la ruta de administración, el mamífero bajo tratamiento, y el padecimiento particular o enfermedad de interés. Una dosis sistémica adecuada de un inhibidor de PARG para un mamífero que padece de, o probablemente padece de, cualquier condición que se describe aquí, está típicamente en el intervalo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 100 mg de base por kilogramo de peso corporal, preferentemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 10 mg/kg del peso corporal del mamífero. Se entiende que el médico o veterinario experto por lo común será capaz de determinar y prescribir fácilmente la cantidad del compuesto efectivo para el tratamiento profiláctico o terapéutico deseado. Procediendo así, el médico o veterinario podría emplear un bolo intravenoso seguido de una infusión intravenosa y administraciones repetidas, según se considere, apropiado. En los métodos de la presente invención, los compuestos podrían administrarse, por ejemplo, oralmente, parenteralmente, por inhalación de atomizado, tópicamente, rectalmente, nasalmente, bucalmente, sublingualmente , vaginalmente, intraventricularmente, o por vía de un depósito implantado en formulaciones de dosificación que contienen excipientes, adyuvantes y vehículos convencionales no tóxicos farmacéuticamente aceptables. Parenteral incluye, pero no se limita a, los siguientes ejemplos de administración: inyección intravenosa, subcutánea, intramuscular, intrespinal, intraósea, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intraesternal o intracraneal y técnicas de infusión, tal como por medio de bomba subdural. Se prefieren las técnicas invasoras, particularmente la administración directa al tejido neuronal dañado. Mientras es posible que el inhibidor de PARG se administre solo, es preferible proporcionarlo como parte de una formulación farmacéutica . Para ser terapéuticamente efectivo como receptores del sistema nervioso central, los compuestos usados en los métodos de la presente invención deberían penetrar fácilmente la barrera sangre-cerebro cuando se administran perimetralmente . Sin embargo, los compuestos que no pueden penetrar la barrera sangre-cerebro aún pueden administrarse efectivamente por una ruta intraventricular.

Los compuestos usados en los métodos de la presente invención podrían administrarse por una sola dosis, dosis discretas múltiples o infusión continua. Dado que los compuestos son pequeños, se difunden fácilmente y relativamente estables, son muy adecuados para infusión continua. Bomba significa, particularmente medios de bombeo subcutáneo o subdural, se prefieren para infusión continua. Para los métodos de la presente invención, podría usarse cualquier régimen de administración efectivo que regule la sincronización y secuencia de las dosis. Las dosis de los compuestos incluyen preferentemente dosificaciones unitarias que contienen una cantidad eficaz del compuesto activo. Por una cantidad eficaz se indica una cantidad suficiente para inhibir la actividad PARP y/o derivar los efectos benéficos deseados de la misma mediante la administración de una o más de las dosificaciones farmacéuticas unitarias. En una modalidad particularmente preferida, la dosis es suficiente para prevenir o reducir los efectos de ataque cerebral vascular u otras enfermedades neurodegenerativas . Un ejemplo de dosificación unitaria diaria para un huésped vertebrado comprende una cantidad de aproximadamente 0.001 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg.

Típicamente, niveles de dosificación en el orden de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 10,000 mg del compuesto de ingrediente activo son útiles en el tratamiento de las condiciones anteriores, con los niveles preferidos que son de aproximadamente 0.1 mg a aproximadamente 1,000 mg . El nivel de dosis específico para cualquier paciente particular variará dependiendo de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado; la edad, el peso corporal, salud general, sexo, y dieta del paciente; el tiempo de administración; la velocidad de excreción; cualquier combinación del compuesto con otros fármacos; la severidad de la enfermedad particular que se trata; y la forma y ruta de administración. Típicamente, los resultados dosificación-efecto in vitro proporcionan guías útiles de las dosis apropiadas para la administración del paciente. Estudios en modelos de animales también pueden ser útiles. Las consideraciones para determinar los niveles de dosis apropiados son bien conocidos en el arte. En métodos para tratar lesión nerviosa (particularmente ataque de isquemia agudo e isquemia global causada por ahogo o trauma de la cabeza), los compuestos de la invención pueden co-administrarse con uno o más agentes terapéuticos diferentes, preferentemente agentes que pueden reducir el riesgo de ataque (tal como aspirina) y, más preferentemente, agentes que pueden reducir el riesgo de un segundo evento de isquemia (tal como ticlopidina ) . Los compuestos y composiciones pueden coadministrarse con uno o más agentes terapéuticos ya sea (i) juntos en una sola formulación, o (ii) de forma separada en formulaciones individuales diseñadas para tasas de liberación óptimas de su agente activo respectivo. Cada formulación podría contener de aproximadamente 0.01% a aproximadamente 99.99% en peso, de preferencia de aproximadamente 3.5% a aproximadamente 60% en peso, del compuesto de la invención, así como uno o más excipientes farmacéuticos, tal como agentes humectantes, emulsificadores y de pH . Cuando los compuestos usados en los métodos de la invención se administran en combinación con uno o más agentes terapéuticos diferentes, los niveles de dosis específicos de los agentes dependerán de las consideraciones, tal como las identificadas antes para las composiciones y métodos de la invención en general. Para los métodos de la presente invención, cualquier régimen de administración que regula la medida de intervalos de tiempo y la secuencia de la liberación del compuesto puede usarse y repetirse, según sea necesario, para efectuar el tratamiento. Tal régimen podría incluir pretratamiento y/o coadministración con agentes terapéuticos adicionales. Para maximizar la protección del tejido nervioso de lesión nerviosa, los compuestos de la invención deberían administrarse a las células afectadas tan pronto como sea posible. En situaciones donde se anticipa la lesión nerviosa, los compuestos se administran ventajosamente antes de la lesión nerviosa esperada. Tales situaciones de probabilidad incrementada de lesión nerviosa incluyen cirugía, tal como endarterectomía de carótida, cirugía cardíaca, vascular, aórtica, ortopédica; procedimientos endovasculares , tal como cateterización arterial (carótida, vertebral, aórtica, cardial, renal, espinal, Adamkiewicz); inyecciones de agentes embólicos; el uso de carretes o balones para hemóstasis; interrupciones de vascularidad para tratamiento de lesiones cerebrales; y predisposición de condiciones médicas tal como ataques isquémicos transientes de crescendo, émbolos y ataques cerebrales secuenciales. Cuando el pre-tratamiento para ataque cerebral o isquemia es imposible o impracticable, es importante poner los compuestos d la invención en contacto con las células afectadas tan pronto como sea posible, ya sea durante o después del evento. Sin embargo, en el período de tiempo entre ataques los procedimientos de diagnóstico y tratamiento debería minimizarse para salvar las células de daño y muerte adicional. Por lo tanto, un modo particularmente ventajoso de administración con un paciente diagnosticado con ataques cerebrales vasculares múltiples agudos es por implementación de una bomba subdural para liberar el compuesto(s) de la invención directamente a la área de infarto del cerebro. Aún si está comatoso, se espera que el paciente se recuperaría más rápidamente que como lo haría el o ella sin este tratamiento. Además, en cualquier estado consciente del paciente, se espera que se reduzca cualquier síntoma neurológico residual, así como la re-ocurrencia de ataque cerebral. Como para los pacientes diagnosticados con otros padecimientos agudos que se cree se relaciona con actividad PARP, tal como diabetes, artritis y enfermedad de Crohn, el compuesto de la invención también debería administrarse tan pronto como sea posible en una sola dosis o dividida. Dependiendo de los síntomas que presenta el paciente y el grado de respuesta a la administración inicial del compuesto de la invención, el paciente podría recibir además dosis adicionales de los mismos o diferentes compuestos de la invención, por una de las siguientes rutas: parenteralmente, tal como por inyección o por administración intravenosa; oralmente, tal como por cápsula o tableta; por implantación de un sistema de liberación de matriz polimérica bicompatible y biodegradable que contiene el compuesto; o por administración directa al área de infarto por inserción de una bomba subdural o una línea central. Se espera que el tratamiento alivie el padecimiento, ya sea en parte o en su integridad y que se desarrollen muchas menos ocurrencias del padecimiento. También se espera que el paciente padezca menos síntomas residuales. Cuando un paciente se diagnostica con un padecimiento agudo antes de la disponibilidad de los inhibidores de PARG de la invención, la condición del paciente podría deteriorarse debido al padecimiento agudo y llegar a ser un padecimiento crónico para el tiempo que los inhibidores de PARG están disponibles. Aún cuando un paciente recibe una composición farmacéutica que contiene un inhibidor PARG para el padecimiento crónico, también se espera que la condición del paciente se estabilice y mejore realmente como resultado de recibir el inhibidor de PARG. Los inhibidores de PARG también podrían usarse para radiosensibilizar las células tumorales. El término " radiosensibilizador" , como se usa aquí, se define como una molécula, preferentemente una molécula de peso molecular bajo, administrada a animales en cantidades terapéuticamente efectivas para aumentar la sensibilidad de las células que se van a radiosensibilizar con radiación electromagnética y/o promover el tratamiento de enfermedades que son tratables con radiación electromagnética. Las enfermedades que son tratables con radiación electromagnética incluyen enfermedades neoplásticas, tumores benignos y malignos, y células cancerosas. El tratamiento con radiación electromagnética de otras enfermedades no listadas aquí también se contempla por la presente invención. Los términos " radiación electromagnética" y " radiación" como se usan aquí incluyen, pero no se limitan a, radiación que tiene la longitud de onda de 10"20 a 10° metros. Las modalidades preferidas de la presente invención emplean la radiación electromagnética de: radiación gamma (10~20 a 10"13 m) , radiación de rayos x (10"11 a 10"9 m) , luz ultravioleta (10 nm a 400 nm) , luz visible (400 nm a 700 nm) , radiación de infrarrojo (700 nm a 1.0 mm) , y radiación de microondas (1 mm a 30 cm) . Se sabe que los radiosensibilizadores aumentan la sensibilidad de las células cancerosas a los efectos tóxicos de la radiación electromagnética. Varios mecanismos para el modo de acción de los radiosensibilizadores se ha sugerido en la literatura incluyendo: los radiosensibilizadores de células hipóxicas (e.g., compuestos 2-nitroimidazol , y compuestos de dióxido de benzotriazina) promueven la reoxigenación del tejido hipóxico y/o catalizan la generación de radicales de oxígeno dañados; los radiosensibilizadores dé células no hipóxicas (e.g., pirimidinas halogenadas) pueden ser análogos de bases de ADN e incorporarse preferentemente en el ADN de células de cáncer y promover así el rompimiento de moléculas de ADN inducido por radiación y/o prevenir los mecanismos normales de reparación de ADN; y varios mecanismos potenciales de acción se han hipotetizado para los radiosensibilizadores en el tratamiento de la enfermedad. Muchos protocolos de tratamiento de cáncer emplean recurrentemente radiosensibilizadores activados por la radiación electromagnética de los rayos x. ejemplos de radiosensibilizadores activados por rayos x incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: metronidazol, misonidazol, desmetilmisonidazol , pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomicina C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, nicotinamida, 5-bromodesoxiuridina (BUdR), 5-yododesoxiuridina (IUdR), bromodesoxicitidina, fluorodesoxiuridina (FudR), hidroxiurea, cisplatina, y análogos y derivados terapéuticamente efectivos de los mismos. La terapia fotodinámica (PDT) de cánceres emplea luz visible como el activador de radiación del agente de sensibilización. Ejemplos de radiosensibilizadores fotodinámicos incluyen los siguientes, pero sin limitarse a: derivados de hematoporfirina , Fotofrina, derivados de benzoporfirina, NPee, etioporfirina de estaño SnET2, feoborbida-a, bacterioclorofila-a, naftalocianinas , ftalocianinas, ftalocianina de zinc, y análogos y derivados terapéuticamente efectivos de los mismos. Los radiosensibilizadores podrían administrarse en conjunción con una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de otros compuestos, incluyendo pero sin limitarse a: compuestos que promueven la incorporación de radiosensibilizadores a las células receptoras; compuestos que controlan el flujo de terapéuticos, nutrientes y/u oxígeno a las células receptoras; agentes quimioterapéuticos que actúan en el tumor con o sin radiación adicional; u otros compuestos terapéuticamente efectivos para tratar cáncer u otras enfermedades. Ejemplos de agentes terapéuticos adicionales que podrían usarse en conjunción con radiosensibilizadores incluyen, pero no se limitan a: 5-fluorouracilo, leucovorina, 5 ' -amino-5 ' desoxitimidina, oxígeno, carbógeno, transfusiones de glóbulos rojos, perfluorocarbonos (e.g., Fluosol-DA) , 2,3-DPG, BW12C, bloqueadores de canal de calcio, pentoxifilina, compuestos antiangiogénesis , hidralazina, y L-BSO. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos que podrían usarse en conjunción con radiosensibilizadores incluyen, pero no se limitan a: adriamicina, camptotecina, carboplatina, cisplatina, daunorubicina, docetaxel, doxorubicina, interferón (alfa, beta, gama), interleucina 2, irinotecan, paclitaxel, topotecan, y análogos y derivados terapéuticamente efectivos de los mismos.

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos son ilustrativos de las modalidades preferidas de las invenciones relacionadas y no se construyen para limitar a la presente invención. Todos los pesos moleculares de polímero son pesos moleculares promedio. Todos los porcentajes se basan en el por ciento en peso del sistema de liberación final o formulación preparada, a menos que se indique lo contrario, y todos los totales so iguales a 100% en peso.

Ejemplo 1 - Prueba para Efectos Neuroprotectores en Isquemia Cerebral Focal en Ratas Los experimentos de isquemia cerebral focal se realizan usando ratas Wistar machos que pesan 250 - 300 g, las cuales se anestesian con 4% de halotano. La anestesia se mantiene con 1.0-1.5% de halotano hasta el final de la cirugía. Los animales se instalan en un ambiente cálido para evitar una disminución en la temperatura corporal durante la cirugía. Se hace una incisión cervical de la línea media anterior. La arteria carótida común derecha (CCA) se expone y se aisla del nervio vago. Se coloca una sutura de seda y se sujeta alrededor de la CCA en proximidad al corazón. La arteria carótida externa (ECA) se expone después y se liga con una sutura de seda. Se hace una punción en la CCA y un catéter pequeño (PE 10, Ulrich & Co., St-Gallen, Suiza) se avanza suavemente al lumen de la arteria carótida interna (ICA). La arteria pterigopalatina no se ocluye. El catéter se sujeta en el sitio con una sutura de seda. Después, una sutura de 4-0 nylon (Braun Medical, Crissier, Suiza) se introduce en el lumen del catéter y se empuja hasta que la punta bloquea la arteria cerebral anterior. La longitud del catéter en la ICA es de aproximadamente 19 mm desde el origen de la ECA. La sutura se mantiene en esta posición por medio de la oclusión del catéter con calor. Un cm de catéter y sutura de nylon se dejar sobresalir para que la sutura pueda retirarse para permitir la reperfusión. La incisión en la piel se cierra después con presillas para herida. Los animales se mantienen en un medio caliente durante la recuperación de la anestesia. Dos horas más tarde, los animales se re-anestesian, las presillas se desechan, y la herida se re-abre. El catéter se corta, y la sutura se saca. El catéter se obtura después otra vez con calentamiento, y las presillas para herida se colocan en la herida. Los animales se dejan sobrevivir durante 24 horas con acceso libre a comida y agua. Las ratas se sacrifican después con C02 y se decapitan. Los cerebros se retiran inmediatamente, se congelan con hielo seco y se almacenan a -80°C. Los cerebros se cortan después en secciones de 0.02 mm de espesor en una criocortadora a -19°C, seleccionando una de cada 20 secciones para examinación posterior. Las secciones seleccionadas se tiñen con violeta de cresilo, de acuerdo al procedimiento de Nissl. Cada sección teñida se examina en un microscopio de luz, y el área de infarto regional se determina de acuerdo a la presencia de células con cambios morfológicos. Varias dosis de inhibidores de PARG se prueban en este modelo. Los compuestos se administran en ya sea una dosis sola o una serie de dosis múltiples, i.p. o i.v., en diferentes tiempos, tanto antes como después del ataque de isquemia. Los inhibidores de PARG administrados de acuerdo con los métodos de la presente invención se encuentra que proporcionan protección de isquemia en el intervalo de aproximadamente 20% a 80%.

Eiemplo 2: Efectos en Lesión del Corazón por Isquemia/Reperfusión en Ratas Ratas Sprague-Dawley hembras, cada una con peso de aproximadamente 300-350 g, se anestesian con cetamina intraperitoneal a una dosis de 150 mg/kg. Las ratas se intuban endotraquealmente y se ventilan con aire del cuarto enriquecido con oxígeno usando un ventilador de roedor Harvard. Catéteres de polietileno insertados en la arteria carótida y la vena femoral se usan para monitorear la presión sanguínea arterial y la administración del fluido respectivamente. El pC02 arterial se mantiene entre 35 y 45 mm de Hg ajustando la tasa respiratoria. Los pechos de las ratas se abren por esternotomía mediana, se hace una incisión en el pericardio, y los corazones se cubren con una membrana de látex de tienda de campaña. Los datos hemodinámicos se obtienen en línea base después de al menos un período de estabilización de 15 minutos, seguido por el final de la operación quirúrgica. La arteria coronaria LAD (descendente anterior izquierda) se liga durante 40 minutos, y después se produce reperfusión durante 120 minutos. Después de 120 minutos de reperfusión, la arteria LAD se re-ocluye, y un bolo de 0.1 ml de tinte azul monasterio se inyecta en el atrium izquierdo para determinar la región de riesgo de isquemia. Los corazones se detienen entonces con cloruro de potasio y se cortan en cinco rebanadas transversales de 2-3 mm de espesor. Cada rebanada se pesa y se incuba en una solución al 2% de cloruro de trimetiltetrazolio para visualizar el miocardio infartado dentro de la región de riesgo. El tamaño del infarto se calcula sumando los valores de cada rebanada ventricular izquierda y se expresa además como una fracción de la región de riesgo del ventrículo izquierdo. Varias dosis de inhibidores de PARG se prueban en este modelo. Los compuestos se dan ya sea en una sola dosis o una serie de dosis múltiples, i.p. o i.v., a diferentes tiempos, ya sea antes o después del ataque de isquemia. Los inhibidores de PARG se encuentra que tienen protección a la lesión por isquemia/reperfusión en el intervalo de 10 a 40 por ciento. Por lo tanto, se protegen contra la degeneración inducida por isquemia de neuronas del hipocampo in vitro.

Eiemplo 3: Protección de Isquemia Retinal Un paciente sólo diagnosticado con isquemia retinal aguda se administra de forma inmediata parenteralmente, ya sea por administración intravenosa intermitente o continua, un inhibidor de PARG, ya sea como una dosis simple o una serie de dosis divididas del compuesto. Después de este tratamiento inicial, y dependiendo de los síntomas neurológicos que presenta el paciente, opcionalmente el paciente podría recibir el mismo o un diferente inhibidor de PARG en la forma de otra dosis parenteral. Se espera por los inventores que resultaría la prevención significativa del daño del tejido neural y que los síntomas neurológicos del paciente disminuirían considerablemente debido a la administración del compuesto, conduciendo a menores efectos neurológicos residuales post-ataque. Además, se espera que la re-ocurrencia de la isquemia retinal sería prevenida o reducida.

Eiemplo 4: Tratamiento de Isquemia Retinal Un paciente solo se ha diagnosticado con isquemia retinal aguda. Inmediatamente, un médico o una enfermera administra parenteralmente un inhibidor de PARG, ya sea como una dosis simple o como una serie de dosis divididas. El paciente también recibe el mismo o un inhibidor de PARG diferente por administración intermitente o continua por vía de implantación de un sistema de liberación de matriz polimérica biocompatible, biodegradable, que comprende un inhibidor de PARG, o por vía de una bomba subdural insertada para administrar el compuesto directamente al área de infarto del cerebro. Se espera por los inventores que el paciente despertaría del coma más rápidamente que si el compuesto de la invención no se administrara. El tratamiento también se espera que reduzca la severidad de los síntomas neurológicos residuales del paciente. Además, se espera que sería reducida la re-ocurrencia de la isquemia retinal.

Eiemplo 5: Protección al Ataque Vascular Un paciente que solo se ha diagnosticado con ataque vascular agudo se administra inmediatamente parenteralmente, ya sea por la administración intravenosa intermitente o continua, un inhibidor de PARG, ya sea como una dosis simple o una serie de dosis divididas del compuesto. Después de este tratamiento inicial, y dependiendo de los síntomas neurológicos que presenta el paciente, el paciente podría recibir opcionalmente el mismo o un compuesto diferente de la invención, en la forma de otra dosis parenteral. Se espera por los inventores que resultaría la prevención significativa del daño de tejido neural y que los síntomas neurológicos del paciente disminuirían considerablemente debido a la administración del compuesto, conduciendo a menores efectos neurológicos residuales post-ataque. Además, se espera que la reocurrencia del ataque vascular sería prevenida o reducida .

Eiemplo 6: Tratamiento de Ataque Vascular Un paciente solo se ha diagnosticado con ataques vasculares múltiples agudos y es comatoso. Inmediatamente, un médico o una enfermera administra parenteralmente un inhibidor de PARG, ya sea como una dosis simple o como una serie de dosis divididas. Debido al estado comatoso del paciente, el paciente también recibe el mismo o un inhibidor de PARG diferente por administración intermitente o continua por vía de implantación de un sistema de liberación de matriz polimérica biocompatible, biodegradable, que comprende un inhibidor de PARG, o por vía de una bomba subdural insertada para administrar el compuesto directamente al área de infarto del cerebro. Se espera por los inventores que el paciente despertaría del coma más rápidamente que si el compuesto de la invención no se administrara. El tratamiento también se espera que reduzca la severidad de los síntomas neurológicos residuales del paciente. Además, se espera que sería reducida la re-ocurrencia del ataque vascular.

Eiemplo 7: Prevención del Daño por Reperfusión Cardiaca . Un paciente se diagnostica con cardiomiopatía que amenaza la vida y que requiere un transplante de corazón. Hasta que se encuentre un donador, el paciente se mantiene sobre Monitoreo de Oxigenación Extracorporal (ECMO). Después se localiza un donador de corazón, y el paciente se somete a un procedimiento de transplante quirúrgico, durante el cual el paciente se coloca en una bomba de corazón-pulmón. El paciente recibe un inhibidor de PARG intracardiaco dentro de un período de tiempo especificado antes de volver a dirigir su circulación de la bomba de corazón-pulmón a su nuevo corazón, de esta manera, se previene el daño por reperfusión cardiaca conforme el nuevo corazón comienza a latir independientemente de la bomba de corazón-pulmón externa.

Eiemplo 8: Prueba de Choque Séptico Grupos de 10 ratones macho C57/BL que pesan 18 a 20 g, se administran un inhibidor de PARG a las dosis de 60, 20, 6 y 2 mg/kg diariamente, por inyección intraperitoneal (IP) durante tres días consecutivos. Cada animal se estimula primero con lipopolisacárido (LPS, de E. coli, LD100 de 20 mg/animal IV) más galactosamina (20 mg/animal IV). La primera dosis del compuesto de prueba en un vehículo apropiado se da 30 minutos después de la estimulación, y la segunda y tercera dosis se dan 24 horas después en el día 2 y el día 3, respectivamente, con sólo los animales que sobreviven recibiendo la segunda o tercera dosis del compuesto de prueba. La mortalidad se registró cada 12 horas después de la estimulación durante el período de prueba de tres días. Los inhibidores de PARG proporcionan una protección contra la mortalidad del choque séptico.

Eiemplo 9: Radiosensibilización Jn vi tro La línea celular de cáncer de próstata de humano, PC-3s, se colocan en placas de 6 pozos y se crecen en los cultivos monocapa en RPMI1640 suplementado con 10% de FCS. Las células se mantienen a 37°C en 5% de C02 y 95% de aire. Las células se exponen a una respuesta de dosis (0.1 mM a 0.1 µM) de 3 diferentes inhibidores de PARG antes de la irradiación a un nivel de dosis subletal. Para todos los grupos de tratamiento, las placas de seis pozos se exponen a temperatura ambiente en un irradiador Seifert de 250 kV/15 mA con un 0.5 mm Cu/1 mm. La viabilidad celular se examina por exclusión de azul tripano al 0.4%. La exclusión del colorante se verifica visualmente por el microscopio y el número de células viables se calcula sustrayendo el número de células del número de células viables y dividiendo entre el número total de células. Las velocidades de proliferación celular se calculan por la cantidad de incorporación de ^-timidina post-irradiación. Los inhibidores de PARG muestran radiosensibilización de las células.

Eiemplo 10: Radiosensibilización in vi vo Antes del sometimiento a terapia de radiación para tratar el cáncer, se administra a un paciente una cantidad efectiva de una composición farmacéutica que contiene un inhibidor de PARG. El compuesto o la composición farmacéutica actúa como un radiosensibilizador y hace al tumor más susceptible a la terapia de radiación.

Eiemplo 11: Medición de la Expresión Génica Alterada en Células Senescentes de ARNm Las células BJ de fibroblasto de humano, a Doble Población (PDL) 94, se colocan en placas en medio de crecimiento regular y después se cambian a medio de suero bajo para reflejar las condiciones fisiológicas descritas en Linskens, et al., Nucl eic Acids Res . 23:16:3244-3251 (1995). Se usa un medio de DMEM/199 suplementado con 0.5% de suero de ternero de bovino. Las células se tratan diariamente durante 13 días con un inhibidor de PARG como se describe aquí. Las células control se tratan con y sin el disolvente usado para administrar el inhibidor de PARG. Las células de control maduras y jóvenes sin tratar se prueban por comparación. El ARN se prepara de las células tratadas y control de acuerdo a las técnicas descritas en la Publicación PCT No. 96/13610 y se lleva a cabo Northern blotting. Se analizan las sondas específicas para los genes relacionados con la senescencia, y se comparan las células tratadas y de control. Analizando los resultados, el nivel más bajo de la expresión génica se establece arbitrariamente a 1 para proporcionar una base de comparación. Tres genes particularmente relevantes a los cambios relacionados con la edad en la piel son colágena, colagenasa y elastina, West, Arch. Derm . 130:87-95 (1994). La expresión de elastina de las células tratadas con un inhibidor de PARG se aumenta significativamente en comparación con las células control. La expresión de elastina es significativamente mayor en las células jóvenes comparado con células senescentes, y de esta manera, el tratamiento con un inhibidor de PARG causa que los niveles de expresión de elastina en las células senescentes cambien a niveles similares a los encontrados en muchas células más jóvenes. Similarmente, se observa un efecto benéfico en la expresión de colagenasa y colágena con el tratamiento con inhibidores de PARG.

Eiemplo 12: Medición de la Proteina de Expresión Génica Alterada en Células Senescentes. Aproximadamente 105 células BJ, a PDL 95-100 se colocan en placas y se crecen en placas de 15 cm. El medio de crecimiento es DMEM/199 suplementado con 10% de suero de ternero de bovino. Las células se tratan diariamente durante 24 horas con un inhibidor de PARG (100 µg/1 mL de medio). Las células se lavan con solución amortiguada con fosfato (PBS), después se permeabilizan con paraformaldehído al 4% durante 5 minutos, después se lavan con PBS y se tratan con metanol frío al 100% durante 10 minutos. El metanol se retira y las células se lavan con PBS, y después se tratan con 10% de suero para bloquear la unión del anticuerpo no específico. Aproximadamente 1 mL de las soluciones de anticuerpos comercialmente disponibles apropiadas (dilución 1:500, Vector) se adiciona a las células y la mezcla se incuba durante 1 hora. Las células se enjuagan y se lavan tres veces con PBS. Un anticuerpo secundario, IgG anti-ratón de cabra (1 mL) con una marca de biotina se adiciona junto con 1 mL de una solución que contiene estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina y 1 mL del reactivo NBT (Vector). Las células se lavan y se observan colorimétricamente los cambios en las expresión génica. Cuatro genes específicos de senescencia - colágena I, colágena III, colagenasa e interferón gama - en células senescentes tratadas con un inhibidor de PARG se monitorean, y los resultados muestran una disminución en la expresión de interferón gama sin cambio observable en los niveles de expresión de los otros tres genes, demostrando que los inhibidores de PARG pueden alterar la expresión génica específica de la senescencia.

Eiemplo 13: Capacidad Proliferativa Extendida o Aumentada y Vida de las Células. Para demostrar la efectividad del presente método para extender la capacidad proliferativa y la vida de las células, las líneas celulares de fibroblasto de humano (ya sea W138 a Doble Población (PDL) 23 o células BJ a PDL 71) se descongelan y colocan en placas en matraces T75 y se dejan crecer en medio normal (DMEM/M199 más 10% de suero de ternero de bovino) durante aproximadamente una semana, tiempo en el cual las células son confluentes, y los cultivos, por lo tanto, están listos para ser subdivididos. En el tiempo de la subdivisión, el medio se aspira, y las células se enjuagan con solución salina amortiguada con fosfato (PBS) y después se someten a tripsina. Las células se cuentan con un contador Coulter y se colocan en placas a una densidad de 105 células por cm2 en placas de cultivo de tejido de 6 pozos en medio DMEM/199 suplementado con 10% de suero de ternero de bovino y variando las cantidades (0.10 µM, y 1 mM: de una solución de reserva 100X en medio DMEM/M199), de un inhibidor de PARG. Este proceso se repite cada 7 días hasta que las células parecen detener la división. Las células sin tratar (control) alcanzan la senescencia y detienen la división después de aproximadamente 40 días en el cultivo. El tratamiento de las células con 3-AB 10 µM parece que tiene poco o no tiene efecto, en contraste con el tratamiento con 3-AB 100 µM que parece que alarga la vida de la células y el tratamiento con 3-AB 1 mM, el cual aumenta dramáticamente la vida y la capacidad proliferativa de las células. Las células tratadas con 3-AB 1 mM aún se dividen después de 60 días en el cultivo.

Ei emplo 14: Efectos Neuroprotectores de la Fórmula I sobre el Daño por Constricción Crónica (CCI) en Ratas Ratas Sprague-Dawley macho adultas, 300-350 g, se anestesian con 50 mg/kg de pentobarbital sódico intraperitoneal. La ligación nerviosa se realiza exponiendo un lado de los nervios ciáticos de la rata y disecando un segmento del nervio de 5-7 mm de longitud y cerrando con cuatro ligaduras sin apretar a 1.0-1.5 mm, seguido por implantación de un catéter intratecal e insertando un tubo de polietileno (PE-10) limpiado con sulfato de gentamicina en el espacio subaracnoideo, por medio de una incisión en la cisterna magna. El extremo del caudal del catéter se enrosca suavemente en el alargamiento lumbar y el extremo rostral se asegura con el cemento dental a un tornillo acoplado en el cráneo y la herida de la piel se cierra con sujetadores de heridas. La hiperalgesia termal al calor radiante se verifica usando una prueba de retiro de la pata. La rata se coloca en un cilindro de plástico sobre una placa de vidrio de espesor de 3 mm, con una fuente de calor radiante desde un bulbo de proyección colocado directamente bajo la superficie plantar de la pata trasera de la rata. La latencia de retiro de la pata se define como el tiempo transcurrido desde el inicio de la estimulación por calor radiante hasta el retiro de la pata trasera de la rata. La hiperalgesia mecánica se verifica colocando la rata en una caja con una base hecha de lámina metálica perforada con muchos orificios cuadrados pequeños. La duración del retiro de la pata se registra después de pinchar la superficie plantar media de la pata trasera de la rata con la punta de un alfiler de seguridad, insertado a través de la base la caja. La mecano-alodinia se verifica colocando una rata en una caja similar a la prueba previa, y aplicando filamentos de von Frey en orden ascendente a la fuerza de flexión que se encuentra en el rango de 0.07 a 76 g, con respecto a la superficie plantar media de la pata trasera de la rata. Un filamento de von Frey se aplica perpendicular a la piel y se inclina lentamente hasta que se flexione. Una fuerza de umbral de la respuesta se define como el primer filamento en la serie para evocar al menos un retiro de la pata evidente fuera de las cinco aplicaciones. Las neuronas obscuras se observan bilateralmente dentro de las astas dorsales de la médula espinal, particularmente en las láminas I-II, de las ratas 8 días después de la ligación del nervio ciático unilateral, comparado con las ratas operadas simuladas. Se prueban varias dosis de diferentes compuestos de la fórmula I en este modelo y muestran que los compuestos de la Fórmula I reducen la incidencia de las neuronas obscuras y el comportamiento de dolor neuropático en ratas CCI.

Eiemplo 15: Un paciente 'se diagnostica con un padecimiento que requiere la administración de un inhibidor de PARG.

Después podría administrarse al paciente un inhibidor de PARG, tal como se establece en los ejemplos 1 a 10, en la forma de una cápsula o tableta que contenga una dosis del inhibidor simple o dividida. Después de este tratamiento inicial, podría administrarse opcionalmente al paciente el mismo o diferente inhibidor de PARG por cápsula o tableta, inyección directa, bomba subdural o implantación de un sistema de liberación de matriz polimérica, biocompatible. Se esperaría que el tratamiento aliviaría el padecimiento, ya sea en parte o en su totalidad y que no se desarrollarían ocurrencias adicionales del padecimiento.

Eiemplo 16 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con una neuropatía periférica causada por daño físico.

Eiemplo 17 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con una neuropatía periférica causada por estado de enfermedad.

Eiemplo 18 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con síndrome de Guillain-Barre .

Eiemplo 19 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con daño cerebral traumático.

Eiemplo 20 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con daño físico a la médula espinal.

Eiemplo 21 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con ataque asociado con daño cerebral.

Eiemplo 22 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con isquemia focal.

Eiemplo 23 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con isquemia global .

Eiemplo 2 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con lesión por reperfusión. .

Eiemplo 25 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con una enfermedad de desmielinación.

Eiemplo 26 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con esclerosis múltiple .

Ei emplo 27 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con un padecimiento neurológico que se relaciona a neurodegeneración.

Eiemplo 28 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con Enfermedad de Alzheimer .

Eiemplo 29 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con Enfermedad de Parkinson.

Ei emplo 30 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con esclerosis lateral amiotrófica.

Eiemplo 31 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con una enfermedad cardiovascular.

Eiemplo 32 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con angina de pecho .

Ei emplo 33 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con infarto del miocardio.

Eiemplo 34 Un tratamiento tal como el descrito en Ejemplo 15, en donde el paciente se diagnostica con daño del tejido cardiovascular relacionado con activación de PARG.

Eiemplo 35: Prueba Enzimática de PARG La potencia de la inhibición de PARG se determinó en una prueba enzimática de PARG. Para cada compuesto, se usaron varias dosis para inhibir la reacción de PARG. Se generó una curva sensible a la dosis para determinar el valor IC50, la concentración, en uM, requerida para alcanzar el 50% de inhibición de la reacción . El término "inhibición", en el contexto de la inhibición enzimática, se refiere a la inhibición enzimática reversible, tal como inhibición competitiva, incompetitiva y no competitiva. Esto puede distinguirse experimentalmente por los efectos del inhibidor sobre la cinética de reacción de la enzima, que podría analizarse en términos de la ecuación básica de velocidad de Michaelis-Menten . La inhibición competitiva se presenta cuando el inhibidor puede combinarse con la enzima libre, de tal manera que compita con el sustrato normal para la unión en el sitio activo. Un inhibidor competitivo reacciona reversiblemente con la enzima para formar un complejo enzima-inhibidor (El), análogo al complejo enzima-sustrato: E + I == El Después del formalismo de Michaelis-Menten, se puede definir la constante del inhibidor, Ki, como la constante de disociación del complejo enzima-inhibidor: De esta manera, de acuerdo con lo anterior y como se usa aquí, K£ es esencialmente una medida de la afinidad entre una molécula, y su receptor, o en relación con la presente invención, entre los presentes compuestos inventivos y la enzima que va a inhibirse. Debería "observarse que IC50 es un término relacionado usado cuando se define la concentración o cantidad de un compuesto que se requiere para provocar una inhibición de 50% de la enzima blanco. La prueba total consistió de: 1) preparación de PARG radioactiva marcada 32P, 2) purificación de PARG recombinante, 3) incubación del compuesto con la reacción de PARG, 4) separación del producto ADP-ribosa por cromatografía de capa fina (TL) y 5) cuantificar la radioactividad de ADP-ribosa por conteo por centelleo. 1) Preparación de 32P-poli (ADP-ribosa) : Se estableció una reacción de 0.1 ml . Consistió de TrisHCl 20 mM ( pH 8.0), MgCl2 10 mM, 5 ug/ml de ADN activado (Sigma), NAD radioactivo 1 uM (nicotinamida adenina [adenilato-32P] dinucleótido [32P]NAD (Amersham) con una actividad específica de 100 Ci/mmol). Se adiciona 20 ug/ml de un inhibidor de PARG para finalmente iniciar la reacción. La reacción se mezcla completamente y se incuba a 25°C durante 30 min. La reacción se detiene mediante la adición de EDTA 90 mM. Al final de la reacción, el polímero 32P-poli [ADP-ribosa] se separó de [32P]NAD por una columna de dimensionamiento. La mezcla de reacción de 0.1 ml se cargó directamente a una columna sephdax-G25 de 6 ml pre-empacada (BAKERBOND, Spe. J.T. Baker), que se pre-equilibró con amortiguador lxTE pH 7.5. 32P-poli (ADP-ribosa) se eluyó con amortiguador lxTE. Las eluciones se colectaron en fracciones de 250 uL. La muestra de 32P-poli [ADP-ribosa ] estuvo en un pico previo: como se determinó por conteo por centelleo. 2. Expresión y purificación de PARG recombinante Un fragmento de ADNc que codifica la parte carboxi terminal de PARG de humano, del aminoácido 378 al 976 se amplificó por reacción en cadena de polimerasa con ADNc de timo de humano (Clontech, Palo Alto, California) como el molde y un par de cebadores con las secuencias de 5 '-GGGAATTCATGAATGATTTAAATGCTAAA-3 ' y 5'-CCCTCGAGTCAGGTCCCTGTCCTTTGCCC-3 ' . Los cebadores contuvieron los sitios de la enzima de restricción EcoRI y Xhol. El fragmento de ADN de PARG amplificado por PCR se digirió con EcoRI y Xhol, y después se ligó a los mismos sitios en el plásmido pGEX-4Tl (Pharmacia) para crear pGEX-PARG usando el procedimiento estándar de la biología molecular. El pGEX-PARG se transformó en la cepa de E. coli BL21 para la expresión de la proteína recombinante que tiene una glutatión-S-transferasa en el término amino y se fusiona en el marco con PARG en el término carboxilo. Se continuaron los procedimientos estándares para la expresión y purificación de la proteína recombinante usando las cuentas glutatión-sephadex 4B de acuerdo a la fabricación, Pharmacia. 3) Reacción de PARG: Se estableció una reacción de 30 uL . Contuvo 0.3 ng (200,000 cpm) de 32P-poli (ADP-ribosa ) , el inhibidor de PARG y aproximadamente 0.1 ng/ml de PARG. Para determinar el IC50, un experimento típico consistió de dosis del compuesto a concentraciones finales de 0.2, 2, 6, 20, 60 uM. Cada dosis se probó en duplicados. La solución de reserva de los inhibidores de PARG se prepararon en DMSO al 100%. La concentración final de DMSO en la reacción fue menor de 7%. La enzima PARG se adicionó para iniciar por último la reacción. La reacción se llevó a cabo a 37°C durante 10 min. y después se detuvo adicionando 2 ul de dodecil sulfato de sodio al 3% (p/v) . 4). Separación por TLC de 3 P-ADP-ribosa hidrolizada La mezcla de reacción detenida totalmente se manchó cuidadosamente sobre un papel de celulosa PEI-F de 20 cm x 20 cm (Darmstadt, Alemania) a aproximadamente 3 cm de la base con 2 cm de espacio entre cada muestra. El papel PEI-F se reveló en un tanque de TLC, pre-equilibrado con LiCl 0.3 M/ácido acético 0.9 M en una profundidad de 2 cm, durante 1 h hasta que el revelador alcanzó el frente del papel. El papel PEI-F se secó en aire y se cubrió con un envolvente de plástico y se expuso a la película X-OMAT de Kodak durante 3 h. 5). Cuantificar las actividades de PARG La película se reveló y se usó como un molde para localizar las posiciones de poli (ADP-ribosa ) y ADP-ribosa en el papel de celulosa PEI-F. La mancha superior contuvo ADP-ribosa y la inferior contuvo poli(ADP-ribosa) . Típicamente, se hidrolizó 10-20% de poli (ADP-ribosa) a ADP-ribosa. Las manchas correspondientes se cortaron y las radioactividades se determinaron por conteo por centelleo. La actividad de PARG se expresó como un porcentaje de la poli(ADP-ribosa) convertida a ADP-ribosa, i.e. los conteos de la mancha superior divididos por los conteos totales combinados de las manchas superiores e inferiores. Una curva típica sensible a la dosis se ilustró en la figura 1, usando un inhibidor de PARG de acuerdo con la presente invención.

Eiemplo 36: Prueba de citotoxicidad de peróxido de hidrógeno Se usó un modelo de citotoxicidad de peróxido de hidrógeno para evaluar la eficacia de un inhibidor de PARG para prevenir la muerte celular. El cambio de poli (ADP-ribosa) se mostró que era un mecanismo que reguló la muerte celular causada por el tratamiento de peróxido de hidrógeno en células P338D1, de acuerdo a Schraustatter et al (Proc. Natl. Acad Sci. USA, 83, 4908-4192, 1986). Las células P388D1 (ATCC, #CCL-46), derivadas del tumor similar a macrofago de murino, se mantuvieron en Medio Eagle Modificado de Dulbeco (DMEM) con 10% de suero de caballo, L-glutamina 2 mM. La prueba de citotoxicidad se estableció en una placa de 96 pozos. En cada pozo, 190 ul de células se sembraron a densidad de 2 x 106/ml. Para determinar el EC50, la concentración de un compuesto requerido para alcanzar 50% de reducción de la muerte celular, se llevó a cabo un experimento sensible a la dosis. Se adicionaron varias concentraciones de un inhibidor de PARG a las células. Un experimento típico consistió de dosis con concentraciones finales de 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10, 30 uM. Cada punto resultante se promedió de un cuadruplicado. Después de 15 min de incubación, se adicionaron 5 ul de peróxido de hidrógeno preparado frescamente a las células hasta una concentración final de 2 mM. Un grupo de pozos sin el compuesto no se expuso a peróxido de hidrógeno para la determinación antecedente. Las células se regresaron al incubador a 37°C durante 4 h. Al final de la incubación, se muestrearon 25 ul del sobrenadante del medio celular para determinar el nivel de lactato deshidrogenasa (LDH) liberada de las células muertas. Se usó una prueba de LDH adaptada de Sigma Co. y se continuó el procedimiento experimental de acuerdo a la fabricación. La actividad de LDH se determinó monitoreando la velocidad de disminución de la absorbencia de NADH a 340 nM. Se sustrajo la actividad de LDH antecedente. El grupo sin tratamiento del fármaco se usó para calcular la muerte celular total debida al tratamiento de peróxido de hidrógeno. Los efectos protectores de los inhibidores de PARG se expresaron como un porcentaje de la supervivencia celular. El EC50 se determinó a partir de una curva sensible a la dosis. Como un ejemplo, la curva sensible a la dosis para un inhibidor de PARG se muestra en la Fig. 1. La invención que se describe de esta manera, será obvio que la misma podría variarse de muchas maneras. Tales variaciones no se consideran como una salida del espíritu y alcance de la invención y, todas las modificaciones se pretende que se incluyan dentro del alcance de las siguientes reivindicaciones.

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (41)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones:

1. Una composición farmacéutica que contiene un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; en donde el inhibidor de PARG está presente en una cantidad que es efectiva para tratamiento o prevención de una enfermedad o condición que resulta de daño o muerte celular.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, caracterizada porque el daño o muerte celular se debe a necrosis o apoptosis, o combinaciones de las mismas .

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, caracterizada porque la enfermedad o condición se selecciona del grupo que consiste de dolor agudo, artritis, ateroesclerosis, caquexia, padecimientos cardiovasculares, dolor crónico, enfermedades degenerativas, diabetes, enfermedades o padecimientos relacionados con la duración de vida o con la capacidad proliferativa de las células, enfermedades o condiciones de enfermedad inducidas o exacerbadas por la senescencia celular, trauma de cabeza, inmuno senescencia, padecimientos inflamatorios intestinales, isquemia, degeneración macular, distrofia muscular, daño de tejido neural resultante de isquemia y lesiones por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, daño o enfermedad de tejido mediado por neuronas, dolor neuropático, lesión nerviosa, osteoartritis, osteoporosis, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico, envejecimiento de la piel, y ataque cerebral vascular.

4. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, caracterizada porque el inhibidor de PARG se selecciona del grupo que consiste de derivados de glucosa; glucósidos de lignina; taninos hidrolizables; derivados de adenosida; derivados de acridina; análogos de tilorona; daunomicina; elipticina; y proflavina.

5. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, caracterizada porque el inhibidor de PARG es un compuesto de fórmula I: en donde: Rlf R2 , R3, R4, R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o X, X representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi C!-C4 con la condición de que R?~R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno.

6. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, caracterizada porque X es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3,4,5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxi-cinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3,4, 5-trimetoxi-cinamoilo, 3 , 4 , 5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetilcarbonilo.

7. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, caracterizada porque el compuesto de fórmula I es 1,2,3,4, 6-penta-o-gaoloil-d-glucopiranosa, 1,2,3,4,6-penta-o- ( 3 , 5-dimetoxi-4-hidroxicinamoil ) -d-glucopiranosa, o 1 , 2 , 3 , 4 , 6-penta-o- ( 3 , 4 , 5-trimetoxicinamoil ) -d-glucopiranosa.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, caracterizada porque el inhibidor de PARG es un tanino hidrolizable.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 8, caracterizada porque el tanino hidrolizable se selecciona del grupo que consiste de galotaninos y elagitaninos .

10. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, caracterizada porque el inhibidor de PARG es un glucósido de lignina.

11. La composición farmacéutica de la reivindicación 10, caracterizada porque el glucósido de lignina tiene las siguientes propiedades: (i) se unen el tanino y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de lignina a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra.

12. La composición farmacéutica de la reivindicación 11, caracterizada porque el glucósido de lignina comprende la siguiente estructura:

13. La composición farmacéutica de la reivindicación 3, caracterizada porque el inhibidor de PARG comprende un compuesto de fórmula II:

II donde :

Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III:

III o X, en donde X es el compuesto de fórmula IV:

IV en donde Z es un enlace, alquilo o alquenilo C2-C8; R7., R8 , R9, R10 y R^ se seleccionan independientemente de hidrógeno, hidroxilo, o alcoxi Cj-Cg, con la condición de que no sean simultáneamente cuatro o cinco átomos de hidrógeno, y que R2, R3 , R4 , R5 y R6 representen independientemente un átomo de hidrógeno o X, X representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que R?r R2, y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2 , R3, R4, R5 y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 14. La composición farmacéutica de la reivindicación 13, caracterizada porque X es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3 , 4 , 5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxi-cinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3 , 4 , 5-trimetoxi-cinamoilo, 3,4,5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo. 15. Una composición farmacéutica que contiene un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el inhibidor de PARG está presente en una cantidad que es efectiva para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres. 16. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula I: o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el compuesto de fórmula I está presente en una cantidad que es efectiva para tratamiento o prevención de enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel, en donde: Rj , R2 , R3, R4, Rs representan individualmente un átomo de hidrógeno o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi Ci-Cß, con la condición de que R?~R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 17. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, caracterizada porque A es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3 , 4 , 5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxiciñamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3 , 4 , 5-trimetoxicinamoilo, 3,4,5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo.

18. La composición farmacéutica de la reivindicación 16, caracterizada porque el compuesto de fórmula I es 1, 2 , 3 , 4 , 6-penta-o-gaoloil-d-glucopiranosa, l,2,3,4,6-penta-o-(3, 5-dimetoxi-4-hidroxicinamoil ) -d-glucopiranosa, o 1 , 2 , 3 , 4 , 6-penta-o- ( 3 , 4 , 5-trimetoxicinamoil )-d-glucopiranosa.

19. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula I: o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; en donde el compuesto de fórmula I está presente en una cantidad que es efectiva para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres ; y en donde: Rj , R2 , R3, R4, R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi con la condición de que R?-R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno.

20. Una composición farmacéutica que comprende un glucósido de lignina o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el glucósido de lignina está presente en una cantidad que es efectiva para tratamiento o prevención de enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel, y en donde: el glucósido de lignina tiene las siguientes propiedades: (i) se unen la lignina y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de lignina a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra.

21. La composición farmacéutica de la reivindicación 20, caracterizada porque el glucósido de lignina comprende la siguiente estructura:

22. Una composición farmacéutica que comprende un glucósido de lignina o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el glucósido de lignina está presente en una cantidad que es efectiva para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres; y en donde: el glucósido de lignina tiene las siguientes propiedades: (i) se unen la lignina y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de lignina a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra. 23. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula II:

II o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el compuesto de fórmula II está presente en una cantidad que es efectiva para tratamiento o prevención de enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel; y en donde: Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III:

III o A, en donde A es el compuesto de fórmula IV:

IV en donde Z es un enlace, alquilo o alquenilo C2-C8; R7, R8, R9, R10 y R1S se seleccionan independientemente de hidrógeno, hidroxilo, o alcoxi Ci-Cg, con la condición de que R,-Rn no sean simultáneamente cuatro o cinco átomos de hidrógeno, y que R2, R3, R4 , R5 y R6 representen independientemente un átomo de hidrógeno o A, A representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que Rl R2 , y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2 , R3 , R4 , R5 y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 24. La composición farmacéutica de la reivindicación 23, caracterizada porque A es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3 , 4, 5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxicinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3 , 4 , 5-trimetoxicinamoilo, 3,4,5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo. 25. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto de fórmula II:

II o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo, y un vehículo farmacéuticamente aceptable; caracterizada porque el compuesto de fórmula II está presente en una cantidad que es efectiva para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres; y en donde: Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III:

I I I o A, en donde A es el compuesto de fórmula IV:

IV en donde Z es un enlace, alquilo C1-C8 , o alquenilo C2-C8; R7, R8, R9, R10 y R1X se seleccionan independientemente de hidrógeno, hidroxilo, o alcoxi

Ci-Cg, con la condición de que no sean simultáneamente cuatro o cinco átomos de hidrógeno, y que R2, R3, R4, R5 y R6 representen independientemente un átomo de hidrógeno o A, A representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que Rlf R2 , y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2 , R3, R4, R5 y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 26. Un método para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo. 27. Un método para inhibir o prevenir la muerte celular o daño celular inducidos por radicales libres, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo. 28. Un método para tratar o prevenir enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, radiosensibilización de células tumorales, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel; caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I: o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: Rl R2 , R3, R4, R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por uno o más sustituyentes de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi Cj-C8, con la condición de que Rx-R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 29. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque A es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3,4,5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxicinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3,4, 5-trimetoxi-cinamoilo, 3 , 4 , 5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo.

30. El método de la reivindicación 28, caracterizado porque el compuesto de fórmula I es 1,2,3,4,6-Penta-O-Gaoloil-D-Glucopiranosa, 1,2,3,4,6-Penta-0-(3, 5-Dimetoxi-4-Hidroxicinamoil ) -D- Glucopiranosa, o 1 , 2 , 3 , 4 , 6-Penta-O- ( 3 , 4 , 5-Trimetoxicinamoil )-D-Glucopiranosa.

31. Un método para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula I: o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; y en donde: R R2 , R3, R4, R5 representan individualmente un átomo de hidrógeno o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido individualmente por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi CÍ-CB, con la condición de que ?-R5 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno.

32. Un método para tratar o prevenir enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel; caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un glucósido de lignina o una sal , hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: el glucósido de lignina tiene las siguientes propiedades : (i) se unen la lignina y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de lignina a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra.

33. La composición farmacéutica de la reivindicación 32, caracterizada porque el glucósido de lignina comprende la siguiente estructura:

34. Un método para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un glucósido de lignina o una sal , hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: (i) se unen la lignina y el polisacárido; (ii) El peso molecular es de 500 a 140,000; (iii) la relación de enlace de lignina a polisacárido es 1:1 a 20:1, como relación molecular; (iv) el polisacárido se compone de 60 a 70 % de ácido urónico, y de 30 a 40 % de azúcar neutra.

35. Un método para tratar o prevenir enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel; caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula II:

II o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III:

I I I o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi Ci-Cg, con la condición de que R2 , R3, R4, R5 y R6 representen independientemente un átomo de hidrógeno o A, A representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que .1 , R2 , y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2 , R3, R4 , R5 y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 36. El método de la reivindicación 35, caracterizado porque A es galoilo, 4-hidroxi-3-metoxibenzoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxibenzoilo, 3,4,5-trimetoxibenzoilo, 4-hidroxi-3-metoxicinamoilo, 4-hidroxi-3 , 5-dimetoxicinamoilo, 3,4, 5-trimetoxi-cinamoilo, 3 , 4 , 5-trihidroxibencilcarbonilo o 3,4,5-trihidroxifenetiIcarbonilo. 37. Un método para inhibir o disminuir el agotamiento de energía celular inducido por radicales libres, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de fórmula II:

II o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: Rj representa un átomo de hidrógeno, un grupo representado por la fórmula III:

III o A, A representa un carbonilo que tiene un fenilo substituido por una pluralidad de grupos seleccionados de un grupo que consiste de un grupo hidroxilo y grupos alcoxi Cj-Cg, y R2 , R3 , R4 , Rs y R6 representan independientemente un átomo de hidrógeno o A, A representa lo mismo que se describió antes; con la condición de que Rl t R2 , y R3 no representen un átomo de hidrógeno simultáneamente; y además con la condición de que R2, R3 , R4 , R5 y R6 no representen simultáneamente un átomo de hidrógeno. 38. Un método para tratar o prevenir enfermedades o condiciones seleccionadas del grupo que consiste de daño de tejido que resulta de daño o muerte celular debida a necrosis o apoptosis, daño de tejido o enfermedades mediadas por neuronas, daño de tejido neural que resulta de isquemia y lesión por reperfusión, padecimientos neurológicos y enfermedades neurodegenerativas, ataque cerebral vascular, padecimientos cardiovasculares, degeneración macular, artritis, ateroesclerosis, caquexia, enfermedades degenerativas del músculo esquelético, diabetes, trauma de cabeza, padecimientos inflamatorios intestinales, distrofia muscular, osteoartritis, osteoporosis, dolor neuropático, lesión nerviosa, lesión de nervio periférico, insuficiencia renal, isquemia retinal, choque séptico y envejecimiento de la piel; caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG. 39. La composición farmacéutica de la reivindicación 2, caracterizada porque el daño o muerte celular se debe a necrosis.

40. Un método para tratar o prevenir muerte celular oxidativa causada por una especie reactiva de oxígeno, nitrógeno, o hidroxilo, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo.

41. Un método para inhibir o prevenir muerte celular o daño celular necrótico, caracterizado porque comprende administrar a un animal una cantidad terapéuticamente efectiva de un inhibidor de PARG o una sal, hidrato, éster, solvato, profármaco, metabolito, o estereoisómero farmacéuticamente aceptable del mismo.