MX2014003492A - Modulacion antisentido de la expresion de gcgr. - Google Patents
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Abstract
Se proporcionan métodos, compuestos, y composiciones para reducir la expresión de GCGR ARNm y proteína en un animal. Dichos métodos, compuestos, y composiciones son útiles para tratar, prevenir, retrasar, o mejorar enfermedad metabólica, por ejemplo, diabetes, o un síntoma de la misma.
Description
MODULACIÓN ANTISENTIDO DE LA EXPRESIÓN DE GCGR
Listado de secuencias
La presente solicitud se presenta junto con un Listado de Secuencias en formato electrónico. El listado de secuencias se proporciona como un archivo titulado BIOL0161USSEQ.txt, creado el 19 de setiembre de 2012, con un tamaño de 60 Kb . La información en formato electrónico del listado de secuencias se incorpora a la presente en su totalidad mediante esta referencia.
Campo de la invención
En la presente se proporcionan métodos, compuestos y composiciones para reducir la expresión de proteina y ARNm de GCGR en un animal. Dichos métodos, compuestos y composiciones son útiles, por ejemplo, para tratar, prevenir, retrasar o mejorar enfermedades asociadas con trastornos metabólicos, particularmente trastornos asociados con la diabetes.
Antecedentes
La insulina y el glucagón son dos hormonas pancreáticas involucradas en regular la homeostasis y el metabolismo de glucosa. El glucagón es secretado a partir de células a de los islotes pancreáticos y regula
la homeostasis de glucosa a través de la modulación de la producción de glucosa hepática (Quesada et ál., J. Endocrinol. 2008. 199: 5-19) . La función principal del glucagón es contrarrestar las acciones de la insulina.
La desregulación del metabolismo de glucosa puede deberse ya sea a una secreción y/o acción de insulina deficiente, o a una suspensión disminuida del glucagón postprandial (Shah et ál., Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 1999. 277: E283-E290). Se ha demostrado que la inhibición de la secreción de glucagón postprandial en sujetos diabéticos reduce sustancialmente la glucosa en sangre, lo cual sugiere que el glucagón contribuye significativamente a la hiperglucemia observada en sujetos con diabetes mellitus tipo 2 (Shah et ál., J. Clin. Endocrinol. Metab. 2000. 85: 4053-4059) .
La diabetes tipo 2 se caracteriza por la disminución de la secreción y/o acción de la insulina, y en muchos sujetos también se observan niveles inadecuados de glucagón circulante en estado de ayunas y postprandial. Un aumento en la proporción de glucagón/insulina probablemente sea un determinante importante de la hiperglucemia observada en pacientes con diabetes tipo 2 (Barón et ál., Diabetes. 1987. 36: 274-283). La falta de supresión de secreción de glucagón postprandial en sujetos con T2DM también tiene un papel
importante en la patogénesis de hiperglucemia postprandial (Henkel et ál., Metabolism. 2005. 54: 1168-1173) .
El glucagón ejerce su acción en tejidos objetivo por medio de la activación de su receptor, GCGR. El receptor de glucagón es una proteina de 62 kDa que es miembro de la familia de receptores acoplados a proteína G clase B (Brubaker et ál., Recept. Channels. 2002. 8: 179-88) . La activación de GCGR lleva a la transducción de señal por medio de proteínas G (Gso¡ y Gq) , donde GSOÍ activa la adenilato ciclasa, que causa la producción de cAMP, lo cual da como resultado un aumento en los niveles de proteína cinasa A . La señalización de GCGR en el hígado da como resultado un aumento de la producción de glucosa hepática por medio de la inducción de glucogenól i s i s y gluconeogéne s i s junto con la inhibición de glucogénesis (Jiang y Zhang. Am . J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2003. 284: E671-E678) . GCGR también se expresa en tejidos extrahepáticos , que incluyen el corazón, músculo liso intestinal, riñon, cerebro y tejido adiposo (Hansen et ál., Peptides. 1995. 16: 1163-1166) .
La inhibición antisentido de GCGR proporciona una ventaja única sobre los inhibidores tradicionales de molécula pequeña dado que los inhibidores antisentido no
dependen de la unión competitiva del compuesto a la proteína e inhiben la actividad directamente mediante la reducción de la expresión de GCGR. Una patente estadounidense representativa que describe inhibidores antisentido de GCGR incluye la patente estadounidense n.° 7,750,142, que se incorpora en su totalidad mediante esta referencia. La tecnología antisentido surge como un medio efectivo para reducir la expresión de productos génicos específicos y se puede probar, por lo tanto, que es útil de una manera única en una cantidad de aplicaciones terapéuticas, diagnósticas y de investigación para la modulación de GCGR.
Existe al momento una falta de opciones aceptables para el tratamiento de trastornos metabólicos. Por lo tanto, es objetivo de la presente proporcionar compuestos y métodos para el tratamiento de dichas enfermedades y trastornos. Esta invención se refiere al descubrimiento de inhibidores novedosos y altamente potentes de la expresión génica de GCGR.
Todos los documentos o partes de documentos citados en esta solicitud, incluidos, de modo no taxativo, patentes, solicitudes de patente, artículos, libros y tratados, se incorporan a la presente de manera expresa mediante esta referencia, respecto a las partes del documento discutidos en la presente asi como en su
totalidad .
Breve descripción de la invención
Se proporcionan en la presente métodos, compuestos y composiciones para modular la expresión de GCGR y tratar, prevenir, retrasar o mejorar enfermedades asociadas con trastornos metabólicos, particularmente trastornos asociados con la diabetes y/o un síntoma de es ta .
Descripción detallada
Se debe entender que tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son únicamente ejemplos y explicaciones y no restringen la presente descripción, tal como se reivindica. En la presente, el uso del singular incluye el plural a menos que se establezca específicamente lo contrario. Tal como se usa en la presente, el uso de "o" significa "y/o" a menos que se especifique lo contrario. Asimismo, el uso del término "que incluye" así como también otras formas, tales como "incluye" e "incluido", no es limitativo. Asimismo, términos tales como "elemento" o "componente" comprenden tanto elementos y componentes que comprenden una unidad como elementos y componentes con más de una subunidad, a menos que se especifique lo contrario.
Los títulos de las secciones usados en la presente tienen únicamente fines de organización y no se debe interpretar que limitan la materia descrita. Todos los documentos o partes de documentos citados en esta solicitud, incluidos, de modo no taxativo, patentes, solicitudes de patente, artículos, libros y tratados, se incorporan a la presente de manera expresa mediante esta referencia, respecto a las partes del documento discutidos en la presente así como en su totalidad.
Definiciones
A menos que se proporcionen definiciones específicas, la nomenclatura utilizada en relación con los procedimientos y técnicas de laboratorio, de química analítica, de química sintética orgánica y de química medicinal y farmacéutica descritos en la presente son aquellos conocidos y de uso común en la técnica. Pueden utilizarse técnicas estándar para la síntesis química y el análisis químico. Donde esté permitido, todos los documentos o partes de documentos citadas en esta solicitud, incluyendo, de modo no taxativo, todas las patentes, solicitudes, solicitudes publicadas y otras publicaciones, números de registro GENBANK e información de secuencia asociada que se puede obtener a través de bases de datos tales como el Centro Nacional para la
Información Biotecnológica (NCBI) y otra información referida a lo largo de la descripción en la presente están incorporadas mediante referencia, respecto a las partes del documento discutidos en la presente, asi como en su totalidad.
A menos que se indique lo contrario, los siguientes términos tienen los siguientes significados:
"2' -O-metoxietilo" (también 2'-MOE y 2'-0(CH2)2-OCH3) se refiere a una modificación a un O-metoxi-etilo de la posición 2' de un anillo de furosilo. Un azúcar modificado 2' -O-metoxietilo es un azúcar modificado.
Un "nucleótido 2 ' -O-metoxietilo" significa un nucleótido que comprende un resto de azúcar modificado 2 ' -O-metoxieti lo .
Un "sitio objetivo 3'" se refiere al nucleótido de un ácido nucleico objetivo que es complementario al nucleótido más cercano a 3' de un compuesto antisentido particular .
Un "sitio objetivo 5'" se refiere al nucleótido de un ácido nucleico objetivo que es complementario al nucleótido más cercano a 5' de un compuesto antisentido particular .
"5-metilcitosina" significa una citosina modificada con un grupo metilo unida a la posición 5' . Una 5-metilcitosina es una nucleobase modificada.
"Alrededor de" significa dentro de +10 % de un valor. Por ejemplo, si se establece que "un marcador puede aumentarse en alrededor de 50 %", se implica que el marcador puede aumentarse entre 45 %-55 %.
Un "agente farmacéuticamente activo" significa la sustancia o sustancias en una composición farmacéutica que proporcionan un beneficio terapéutico cuando se administran a un individuo. Por ejemplo, en determinadas modalidades un oligonucleótido antisentido dirigido a un GCGR es un agente farmacéuticamente activo.
Una "región objetivo activa" o "región objetivo" significa una región a la cual se dirigen uno o más compuestos activos antisentido. "Compuestos activos antisentido" significa compuestos antisentido que reducen los niveles de proteina o los niveles de ácido nucleico objetivo.
"Adiposidad" u "obesidad" se refiere al estado de ser obeso o tener una cantidad excesiva de grasa corporal o tejido adiposo en relación con la masa corporal magra. La cantidad de grasa corporal incluye la referencia tanto a la distribución de la grasa a lo largo del cuerpo, como al tamaño y la masa de los depósitos de tejido adiposo. La distribución de grasa corporal puede estimarse mediante la medición de pliegues en la piel, la relación entra la circunferencia
de la cintura y la cadera, o técnicas tales como imaginologia de ultrasonido, tomografia computada o de resonancia magnética. De acuerdo con el Centro para el Control y la Prevención de Enfermedades, los individuos con un índice de masa corporal (BMI) de 30 o más se consideran obesos. El término "obesidad" tal como se usa en la presente incluye afecciones donde hay un aumento de la grasa corporal por encima del requerimiento físico como resultado de una acumulación excesiva de tejido adiposo en el cuerpo. El término "obesidad" incluye, de modo no taxativo, las siguientes afecciones: obesidad que surge en la edad adulta,; obesidad alimenticia; obesidad endógena o inflamatoria; obesidad endocrina; obesidad familiar; obesidad hiperinsulinaria; obesidad hiperplásica-hipertrófica; obesidad hipogonadal; obesidad hipotiroidea; obesidad de por vida; obesidad mórbida y obesidad exógena.
"Administrado de forma concomitante" se refiere a la administración conjunta de dos agentes en cualquier manera en que los efectos farmacológicos de ambos se manifiestan en el paciente al mismo tiempo. La administración concomitante no requiere que ambos agentes sean administrados en una sola composición farmacéutica, en la misma forma de dosificación o por la misma vía de administración. Los efectos de ambos
agentes no necesitan manifestarse por sí mismos al mismo tiempo. Los efectos necesitan superponerse solamente durante un período de tiempo y no necesitan ser coextens ivos .
"Administrar" significa proporcionar un agente a un animal e incluye, de modo no taxativo, la administración por medio de un profesional médico y la autoadmini stración.
"Agente" significa una sustancia activa que puede proporcionar un beneficio terapéutico cuando se administra a un animal. "Primer agente" significa un compuesto terapéutico proporcionado en la presente. Por ejemplo, un primer agente puede ser un oligonucleótido antisentido que se dirige al GCGR. Un "segundo agente" significa un segundo compuesto terapéutico descrito en la presente (por ejemplo, un segundo oligonucleótido antisentido que se dirige a GCGR) y/o un compuesto terapéutico diferente a GCGR.
"Mejora" se refiere a una disminución de al menos un indicador, señal o síntoma de una enfermedad, trastorno o afección asociada. La gravedad de los indicadores puede determinarse a través de medidas subjetivas u objetivas que son conocidas por los expertos en la técnica.
Un "animal" se refiere a un ser humano o a un
animal no humano que incluye, de modo no taxativo, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, cerdos y primates no humanos, que incluyen, de modo no taxativo, monos y chimpancés.
La "actividad antisentido" significa cualquier actividad detectable o medible que se puede atribuir a la hibridación de un compuesto antisentido a su ácido nucleico objetivo. En determinadas modalidades, la actividad antisentido es una disminución en la cantidad o expresión de un ácido nucleico o proteína objetivo codificada por dicho ácido nucleico objetivo.
"Compuesto antisentido" significa un compuesto oligomérico que es capaz de ser sometido a hibridación de un ácido nucleico objetivo a través de la unión de hidrógeno.
"Inhibición antisentido" significa una reducción de los niveles de ácido nucleico objetivo o los niveles de proteína objetivo en presencia de un compuesto antisentido complementario a un ácido nucleico objetivo, en comparación con los niveles de ácido nucleico objetivo o los niveles de proteína objetivo en ausencia del compuesto antisentido.
"Oligonucleótido antisentido" significa un oligonucleótido monocatenario que tiene una secuencia de nucleobase que permite la hibridación a una región o
segmento correspondiente de un ácido nucleico objetivo.
"Azúcar bicíclico" significa un anillo de furosilo modificado mediante la unión a través de un puente de dos átomos del anillo no germinales. Un azúcar bicíclico es un azúcar modificado.
Un "ácido nucleico bicíclico" o "BNA" se refiere a un nucleósido o nucleótido donde la parte de furanosa del nucleósido o nucleótido incluye un puente que conecta ambos átomos de carbono en el anillo furanosa, lo cual forma de esta manera un sistema de anillo bicíclico .
"Estructura de casquete" o "resto de casquete terminal" significa modificaciones químicas, que han sido incorporadas en cada terminal de un compuesto antisentido.
"Región químicamente distinta" se refiere a una región de un compuesto antisentido que es de alguna manera químicamente diferente a cualquier otra región del mismo compuesto antisentido. Por ejemplo, una región que tiene nucleótidos de 2 ' -O-metoxietilo es químicamente diferente de la región que tiene nucleótidos sin modificaciones en 2 ' -O-metoxetilo .
Un "compuesto antisentido quimérico" significa un compuesto antisentido que tiene al menos dos regiones químicamente distintas.
"Administración conjunta" significa la administración de dos o más agentes a un individuo. Los dos o más agentes pueden estar en una sola composición farmacéutica, o pueden estar en composiciones farmacéuticas separadas. Cada uno de los dos o más agentes puede administrarse a través de la misma o de diferentes vías de administración. La co-administración comprende administración paralela o secuencial.
El "colesterol" es una molécula de esterol que se encuentra en las membranas celulares de tejidos animales. El colesterol también puede transportarse en el plasma sanguíneo de un animal por medio de lipoproteí ñas que incluyen la lipoproteína de densidad muy baja (VLDL) , lipoproteína de densidad intermedia (IDL), lipoproteína de densidad baja (LDL) y lipoproteína de densidad muy alta (HDL) . El "colesterol en plasma" se refiere a la suma de todas las lipoproteínas (VDL, IDL, LDL, HDL) de colesterol esterificado o no esterificado presentes en el plasma o suero.
"Complementariedad" significa la capacidad de emparejamiento entre nucleobases de un primer ácido nucleico y un segundo ácido nucleico.
"Nucleobases contiguas" significa nucleobases inmediatamente adyacentes entre sí.
"Desoxirribonucleótido" significa un nucleótido que tiene un hidrógeno en la posición 2' de la parte de azúcar del nucleótido. Los desoxirribonucleótidos pueden modificarse con cualquiera de una variedad de sustituyentes .
"Diabetes mellitus" o "diabetes" es un síndrome caracterizado por un trastorno en el metabolismo y un nivel anormalmente alto de azúcar en sangre ( hiperg lucemia ) que surge de niveles insuficientes de insulina o sensibilidad reducida a la insulina. Los síntomas característicos son producción excesiva de orina (poliuria) debida a niveles de glucosa en sangre elevados, sed excesiva y absorción de líquidos aumentada (polidipsia) para intentar compensar el aumento de micción, visión borrosa debido a los efectos de los niveles altos de glucosa en sangre en la óptica del ojo, pérdida de peso sin explicación y letargo.
La "di si ipidemia diabética" o "diabetes tipo 2 con dislipidemia" significa una afección caracterizada por diabetes tipo 2, HDL-C reducido, triglicéridos elevados, y niveles elevados de partículas pequeñas densas de LDL.
"Diluyente" significa un ingrediente en una composición que no posee actividad farmacológica pero es farmacéuticamente necesaria o deseable. Por ejemplo, en diluyentes en una composición inyectable puede ser un
liquido, por ejemplo, una solución salina.
" Di s 1 ip idemi a " se refiere a un trastorno del metabolismo de lipidos y/o lipoproteinas , incluyendo sobreproducción o deficiencia de lipidos y/o lipoproteinas. Las dislipidemias se pueden manifestar por la elevación de lipidos, tal como colesterol y tr iglicéridos , asi como lipoproteinas, tal como colesterol de lipoproteina de baja densidad (LDL) .
"Unidad de dosificación" significa una forma en la que se proporciona el agente farmacéutico, por ejemplo, pildora, comprimido y otra unidad de dosificación conocida en la técnica. En determinadas modalidades, una unidad de dosificación es un vial que contiene oligonucleótidos antisentido liof ilizados . En determinadas modalidades, una unidad de dosificación es un vial que contiene oligonucleótidos antisentido reconstituidos .
"Dosis" significa una cantidad especifica de un agente farmacéutico proporcionado en una sola administración, o en un periodo de tiempo especificado. En determinadas modalidades, una dosis se puede administrar en uno, dos o más bolos, pildoras o inyecciones. Por ejemplo, en determinadas modalidades, donde se desea la administración subcutánea, la dosis deseada necesita un volumen que no se ajusta fácilmente
a una única inyección, por lo tanto, se pueden usar dos o más inyecciones para lograr la dosis deseada. En determinadas modalidades, el agente farmacéutico se administra mediante infusión durante un periodo de tiempo prolongado o de forma continua. Las dosis pueden ser establecidas como la cantidad de agente farmacéutico por hora, día, semana o mes.
Una "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" significa la cantidad de agente farmacéutico activo suficiente para lograr el efecto fisiológico en un individuo que necesita el agente. La cantidad eficaz variará entre individuos dependiendo de la salud y condición física del individuo que se va a tratar, el grupo de sujetos taxonómicos que se van a tratar, el grupo taxonómico de sujetos que se va a tratar, la formulación de la composición, la evaluación de la condición médica del individuo y otros factores relevantes .
"Totalmente complementaria" o "100 % de complementaria " significa que cada nucleobase de una secuencia de nucleobases de un primer ácido nucleico tiene una nucleobase complementaria en una segunda secuencia de nucleobases de un segundo ácido nucleico. En determinadas modalidades, un primer ácido nucleico es un compuesto antisentido y un ácido nucleico objetivo es
un segundo ácido nucleico.
"Gapmer" significa un compuesto antisentido quimérico en el que una región interna que tiene una pluralidad de nucleósidos que apoyan la escisión H de ARNasa se encuentra posicionada entre las regiones externas que tienen uno o más nucleósidos, donde los nucleósidos que comprenden la región interna son químicamente diferentes del nucleósido o nucleósidos que comprenden las regiones externas. La región interna puede referirse como un "segmento de hueco" y las regiones externas pueden referirse como "segmentos de ala" .
Un "hueco más amplio" significa un compuesto antisentido que tiene un segmento de hueco de 12 o más 2 ' -desoxirribonucleósidos contiguos ubicados entre e inmediatamente adyacentes a los segmentos de ala 5' y 3' que tienen de uno a seis nucleósidos.
"Receptor de glucagón" o "GCGR" significa cualquier ácido nucleico o proteína de GCGR.
"La expresión de GCGR" significa el nivel de ARNm transcripto a partir del gen que codifica GCGR o el nivel de proteína traducida a partir del ARNm. La expresión de GCGR se puede determinar mediante métodos conocidos en la técnica, tal como análisis de transferencia Northern o Western.
"Ácido nucleico de GCGR" significa cualquier ácido nucleico que codifique GCGR. Por ejemplo, en determinadas modalidades, un ácido nucleico de GCGR incluye una secuencia de ADN que codifica GCGR, una secuencia de ARN transcripta a partir de un ADN que codifica GCGR (incluyendo ADN genómico que comprende intrones y exones) , y una secuencia de ARNm que codifica GCGR. "ARNm de GCGR" significa un ARNm que codifica una proteina de GCGR.
"Glucosa" es un monosacárido usado por las células como fuente de energía y un intermediario inflamatorio. "Glucosa en plasma" se refiere a glucosa presente en el plasma .
La "hibridación" significa la hibridación de moléculas de ácido nucleico complementarias. En determinadas modalidades, las moléculas de ácido nucleico complementarias incluyen un compuesto antisentido y un ácido nucleico objetivo.
"Hiperlipidemia" o "hiperlipemia" es una afección caracterizada por un nivel elevado de lípidos en suero o lípidos circulantes (en plasma) . Esta afección se manifiesta como una concentración anormalmente alta de grasas. Las fracciones de lípidos en la sangre en circulación son colesterol, lipoproteínas de baja densidad, lipoproteínas de densidad muy baja y
triglicéridos .
"Hipertrigliceridemia" significa una afección caracterizada por niveles elevados de triglicéridos.
"Identificar" o "seleccionar un animal con un estado metabólico" significa identificar o seleccionar un sujeto al que se le diagnosticó una enfermedad metabólica, o un trastorno metabólico; o identificar, o seleccionar un sujeto que tiene cualquier síntoma de una enfermedad metabólica, incluyendo, de modo no taxativo, síndrome metabólico, hiperglucemia , hipertrigliceridemia, resistencia a la insulina aumentada por hipertensión, sensibilidad a la insulina reducida, peso corporal por encima de lo normal, y/o grasa corporal por encima de lo normal, o cualquier combinación de estas. Dicha identificación puede estar acompañada por cualquier método, incluyendo, de modo no taxativo, pruebas o evaluaciones clínicas estándar, tal como medir la glucosa sanguínea circulante (en plasma) o en suero, medición de triglicéridos circulantes (en plasma) o en suero, medición de la presión sanguínea, medición de la grasa corporal, medición del peso corporal, y similares.
"Inmediatamente adyacente" significa que no hay elementos intermedios entre los elementos inmediatamente adyacente s .
Un "individuo" o "sujeto" o "animal" significa un animal humano o no humano seleccionada para el tratamiento o terapia.
La "inhibición de la expresión o actividad" se refiere a una reducción o bloqueo de la expresión o actividad de ARN o proteína, y no necesariamente indica una eliminación total de expresión o actividad.
La resistencia a la insulina se define como la afección en la cual cantidades normales de insulina no son adecuadas para producir una respuesta a la insulina normal por parte de células de grasa, musculares y hepáticas. La resistencia a la insulina en células de grasa da como resultado la hidrólisis de tr iglicéridos almacenados, lo cual eleva los ácidos grasos libres en el plasma sanguíneo. La resistencia a la insulina en los músculos reduce la absorción de glucosa, mientras que la resistencia a la insulina en el hígado reduce el almacenamiento de glucosa, ambos efectos elevan la glucosa en sangre. Los niveles altos de insulina y glucosa en plasma debido a la resistencia a la insulina a menudo llevan al síndrome metabólico y a la diabetes tipo 2.
La "sensibilidad a la insulina" es una medición de cuán efectivamente un individuo procesa la glucosa. Un individuo con una sensibilidad alta a la insulina
procesa eficazmente la glucosa, mientras que un individuo con sensibilidad baja a la insulina no procesa eficazmente la glucosa.
"Enlace entre nucleósidos" se refiere al enlace químico entre nucleósidos.
"Administración intravenosa" significa la administración en una vena.
"Nucleósidos unidos" significa nucleósidos adyacentes que están unidos entre si.
La "terapia de reducción de lipidos" o "agente reductor de lipidos" significa un régimen terapéutico proporcionado a un sujeto para reducir uno o más lipidos en el sujeto. En determinadas modalidades, una terapia de reducción de lipidos se proporciona para reducir uno o más de ????, colesterol total, LDL-C, VLDL-C, IDL-C, no HDL-C, triglicéridos , partículas pequeñas densas de LDL, y Lp(a) en un sujeto. Los ejemplos de terapia reductora de lipidos incluyen inhibidores de MTP, estatinas y fibratos.
Los "factores de riesgo importantes" se refieren a factores que contribuyen a un alto riesgo de padecer una enfermedad o afección. En determinadas modalidades, los factores de riesgo importantes de padecer una enfermedad cardíaca incluyen, de modo no taxativo, fumar cigarrillos, hipertensión, HDL-C bajo, historia familiar
de enfermedad cardíaca coronaria, la edad, y otros factores descritos en la presente.
"Enfermedad metabólica" o "trastorno metabólico" se refiere a una afección caracterizada por una alteración o perturbación de la función metabólica. "Metabólica" y "metabolismo" son términos conocidos en la técnica y generalmente incluyen el rango completo de procesos bioquímicos que ocurren dentro de un organismo vivo. Las enfermedades o trastornos metabólicos incluyen, de modo no taxativo, obesidad, diabetes, hiperglucemia , prediabetes, enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD) , síndrome metabólico, resistencia a la insulina, dislipidemia diabética o hipertrigliceridemia, o una combinación de estos.
"Síndrome metabólico" significa una afección caracterizada por la acumulación de factores de riesgo cardiovascular lipidíeos y no lipidíeos de origen metabólico. En determinadas modalidades, el síndrome metabólico se identifica mediante la presencia de cualquiera de 3 factores: circunferencia de cintura mayor que 102 cm en hombres o mayor que 88 cm en mujeres; triglicéridos en suero de al menos 150 mg/dL; HDL-C menor que 40 mg/dL en hombres o menor que 50 mg/dL en mujeres; presión sanguínea de al menos 130/85 mmHg; y glucosa en ayunas de al menos 110 mg/dL. Estos
determinantes pueden medirse fácilmente en la práctica clínica (JAMA, 2001, 285: 2486-2497) .
Una "nucleobase no complementaria" o "mal apareada" se refiere al caso cuando una nucleobase de un primer ácido nucleico no es capaz de aparearse con la nucleobase correspondiente de un segundo ácido nucleico o un ácido nucleico objetivo.
" Di s 1 ipidemia mixta" significa una afección caracterizada por colesterol elevado y triglicéridos elevados .
"Enlace internucleósido modificado" se refiere a una sustitución o cualquier cambio de un enlace internucleósido de origen natural (es decir, un enlace internucleósido fos fodiéster ) .
"Nucleobase modificada" se refiere a cualquier nucleobase distinta a adenina, citosina, guanina, timidina o uracilo. Un "nucleobase no modificada" significa las bases de purina adenina (A) y guanina (G) y las bases de pirimidina timina (T), citosina (C) y uracilo (U) .
"Nucleósido modificado" significa un nucleósido que tiene, independientemente, un resto azúcar modificado o una nucleobase modificada.
"Nucleótido modificado" significa un nucleótido que tiene, independientemente, un resto azúcar modificado,
un enlace internucleós ido modificado o una nucleobase modificada. Un "nucleósido modificado" significa un nucleósido que tiene, independientemente, un resto azúcar modificado o una nucleobase modificada.
"Oligonucleótido modificado" significa un oligonucleótido que comprende al menos un nucleótido modi ficado .
"Azúcar modificado" se refiere a una sustitución o cambio a un azúcar natural.
"Motivo" significa un patrón de regiones químicamente diferentes en un compuesto antisentido.
"Enlace internucleósido de origen natural" significa un enlace fosfodiéster 3' a 5' .
"Resto azúcar natural" significa un azúcar que se encuentra en ADN ( (2'-H) o ARN (2'-OH) .
"Enfermedad hepática grasa no alcohólica" o "NAFLD" significa una afección caracterizada por inflamación grasa del hígado que no se debe al uso excesivo de alcohol (por ejemplo, consumo de alcohol de más de 20 g/día) . En determinadas modalidades, NAFLD se relaciona con la resistencia a la insulina y al síndrome metabólico. NAFLD comprende un espectro de enfermedades en el intervalo desde acumulación simpe de triglicéridos en hepatocitos (esteatosis hepática) a esteatosis hepática con inflamación (esteatohepatitis), fibrosis, y
cirrosis .
La "esteatohepatitis no alcohólica" (NASH) ocurre debida a la evolución de la NAFLD más allá de la deposición de t riglicéridos . Es necesario un "segundo impacto" capaz de inducir la necrosis, inflamación y fibrosis para desarrollar NASH. Los candidatos para el segundo impacto pueden agruparse en categorías amplias: factores que provocan un aumento del estrés oxidativo y factores que promueven la expresión de citocinas proinf lamator ias .
"Ácido nucleico" se refiere a moléculas compuestas de nucleótidos monoméricos. Un ácido nucleico incluye ácidos ribonucleicos (ARN) , ácidos desoxirribonucleicos (ADN) , ácidos nucleicos de cadena simple, ácidos nucleicos de cadena doble, ácido ribonucleico pequeño interferente (ARNip) , y micro ARN (ARNmi) . Un ácido nucleico también puede comprender una combinación de estos elementos en una molécula individual.
"Nucleobase" significa un resto heterocí clico capaz de aparearse con una base de otro ácido nucleico.
"Secuencia de nucleobase" significa el orden de nucleobases contiguas independientes de cualquier azúcar, enlace o modificación de nucleobase.
"Nucleósido" significa una nucleobase unida a un azúcar.
"Mimético de nucleósido" incluye aquellas estructuras usadas para reemplazar el azúcar o el azúcar y la base, y no necesariamente el enlace en una o más posiciones de un compuesto oligomérico, tal como, por ejemplo, miméticos de nucleósidos que tienen miméticos de azúcar de morfolino, ciclohexenilo, ciclohexilo, tetrahidropiranilo, biciclo y triciclo, por ejemplo, unidades de azúcar diferentes a furanosa.
"Nucleótido" significa un nucleósido que tiene un grupo fosfato unido covalentemente a la parte de azúcar del nucleósido.
"Mimético de nucleótido" incluye aquellas estructuras usadas para reemplazar el nucleósido y el enlace en una o más posiciones de un compuesto oligomérico tal como, por ejemplo, ácidos nucleicos o morfolinos (morfolinos unidos por -N ( H ) -C ( =0 ) -O- u otro enlace distinto a fosfodiéster) .
"Compuesto oligomérico" u "oligómero" se refiere a una estructura polimérica que comprende dos o más subestructuras y es capaz de hibridarse a una región de una molécula de ácido nucleico. En determinadas modalidades, los compuestos oligoméricos son oligonucleósidos . En determinadas modalidades, los compuestos oligoméricos son ol igonucleótidos . En determinadas modalidades, los compuestos oligoméricos
son compuestos antisentido. En determinadas modalidades, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos antisentido. En determinadas modalidades, los compuestos oligoméricos son oligonucleótidos quiméricos.
"Oligonucleótido" significa un polímero de nucleósidos unidos, cada uno de los cuales puede ser modificado o no modificado, independiente uno del otro.
"Administración parenteral" significa la administración a través de inyección o infusión. La administración parenteral incluye administración subcutánea, administración intravenosa, administración intramuscular, administración intraarterial , administración intraper i toneal o administración intracraneal, por ejemplo, administración intratecal o intracerebroventricular. La administración puede ser continua, o crónica, o corta o intermitente.
"Péptido" significa una molécula formada mediante el enlace de al menos dos aminoácidos por uniones amida. Péptido se refiere a polipéptidos y proteínas.
"Agente farmacéutico" significa una sustancia que proporciona un beneficio terapéutico cuando se administra a un individuo. Por ejemplo, en determinadas modalidades un oligonucleótido antisentido dirigido a un GCGR es un agente farmacéutico.
"Composición farmacéutica" significa una mezcla de
sustancias adecuadas para su administración a un individuo. Por ejemplo, una composición farmacéutica puede comprender uno o más agentes activos y una solución acuosa estéril .
"Portador farmacéuticamente aceptable" significa un medio o diluyente que no interfiere con la estructura del oligonucleótido . Algunos de dichos portadores permiten que las composiciones farmacéuticas sean formuladas como, por ejemplo, comprimidos, pildoras, pastillas, cápsulas, líquidos, geles, jarabes, lechadas, suspensiones y tabletas para la ingestión oral por un sujeto. Por ejemplo, un portador farmacéuticamente aceptable puede ser una solución acuosa estéril.
"Derivado farmacéuticamente aceptable" comprende sales, conjugados, profármacos o isómeros farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en la presente.
"Sales farmacéuticamente aceptables" significa sales fisiológica y farmacéuticamente aceptable de compuestos antisentido, es decir, sales que conservan la actividad biológica deseada del oligonucleótido original y no provoca efectos toxicológicos no deseados a este.
"Enlace fosforotioato" significa un enlace entre nucleósidos donde la unión fosfodiéster se modifica mediante el reemplazo de uno de los átomos de oxígeno
sin puentes con un átomo de azufre. Un enlace fos f orotioato es un enlace internucleósido modificado.
"Parte" significa una cantidad definida de nucleobases contiguas (es decir unidas) de un ácido nucleico. En determinadas modalidades, una parte es una cantidad definida de nucleobases contiguas de un ácido nucleico objetivo. En determinadas modalidades, una parte es una cantidad definida de nucleobases contiguas de un compuesto antisentido.
"Prevenir" se refiere a retrasar o impedir la aparición o desarrollo de una enfermedad, trastorno o afección durante un periodo de tiempo desde minutos hasta indefinidamente. Prevenir también significa reducir el riesgo de desarrollar una enfermedad, trastorno o afección.
"Profármaco" significa un agente terapéutico que se prepara en una forma inactiva que se convierte a una forma activa dentro del cuerpo o las células de este mediante la acción de enzimas endógenas u otros químicos o condiciones.
"Efectos secundarios" significa las respuestas fisiológicas atribuibles a un tratamiento, diferentes de los efectos deseados. En determinadas modalidades, los efectos secundarios incluyen reacciones en el sitio de inyección, anormalidades en las pruebas de función
hepáticas, anormalidades en la función renal, toxicidad hepática, toxicidad renal, anormalidades en el sistema nervioso central, miopatias y malestares. Por ejemplo, un aumento en los niveles de aminotrans ferasa en el suero puede indicar una toxicidad hepática o una anormalidad de la función hepática. Por ejemplo, un aumento en los niveles de bilirrubina en el suero puede indicar una toxicidad hepática o una anormalidad de la función hepática.
"Oligonucleótido de cadena simple" significa un ol igonucleót ido que no está hibridado a una cadena complementaria .
"Hibridable específicamente" se refiere a un compuesto antisentido que tiene un grado suficiente de complementariedad entre un oligonucleótido antisentido y un ácido nucleico objetivo para inducir un efecto deseado, a la vez que presenta efectos mínimos o ninguno en ácidos nucleicos que no son objetivo bajo condiciones en las cuales se desea una unión específica, es decir, bajo condiciones fisiológicas en el caso de ensayos in vivo y tratamientos terapéuticos.
"Estatina" significa un agente que inhibe la actividad de HMG-CoA reductasa.
"Administración subcutánea" significa la administración justo debajo de la piel.
"Dirigir" o "dirigido" significa el proceso de diseñar y seleccionar un compuesto antisentido que se híbrida específicamente a un ácido nucleico objetivo e induce un efecto deseado.
"Ácido nucleico objetivo", "ARN objetivo" y
"transcripto de ARN objetivo", todos se refieren a un ácido nucleico capaz de ser objetivo de compuestos anti sentido .
"Segmento objetivo" significa la secuencia de nucleótidos de un ácido nucleico objetivo al cual se dirige un compuesto antisentido. "Sitio objetivo 5'" se refiere al nucleótido más cercano a 5' de un segmento objetivo. "Sitio objetivo 3'" se refiere al nucleótido más cercano a 3' de un segmento objetivo.
"Cantidad terapéuticamente eficaz" significa una cantidad de un agente que proporciona un beneficio terapéutico a un individuo.
"Cambio de estilo de vida terapéutico" significa cambios en la alimentación y el estilo de vida para bajar la masa de grasa/tejido adiposo y/o el colesterol. Dicho cambio puede reducir el riesgo de desarrollar una enfermedad cardiaca y puede incluir recomendaciones para la ingesta alimenticia del total de calorías diarias, grasas totales, grasas saturadas, grasas poliinsaturadas, grasas monosaturadas , carbohidratos,
proteínas, colesterol, fibra insoluble, asi como recomendaciones respecto a la actividad física.
"Triglicérido" o "TG" significa un lípido o grasa neutra que consiste en glicerol combinado con tres moléculas de ácido graso.
"Diabetes tipo 2" (también conocida como "diabetes mellitus tipo 2" o "diabetes mellitus del tipo 2", y anteriormente llamada "tipo 2 de la diabetes mellitus", "diabetes no insul inodependiente (NIDDM)", "diabetes relacionada con la obesidad", o "diabetes que surge en la edad adulta") es un trastorno metabólico que se caracteriza principalmente por la resistencia a la insulina, deficiencia relativa de la insulina e hiperglucemia.
"Tratar" se refiere a la administración de una composición farmacéutica a un animal para provocar una alteración o mejora de una enfermedad, trastorno o afección .
"Nucleótido no modificado" significa un nucleótido compuesto de restos de azúcar, enlaces internucleósido y nucleobases de origen natural. En determinadas modalidades, un nucleótido no modificado es un nucleótido de ARN (es decir ß-D-ribonucleósidos ) o un nucleótido de ADN (es decir ß-D-desoxirribonucleósido) .
Determinadas modalidades
Determinadas modalidades proporcionan métodos, compuestos, y composiciones para inhibir la expresión de GCGR.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR. En determinadas modalidades, el ácido nucleico de GCGR es cualquiera de las secuencias que se establecen en el N.° de Registro de GENBANK NM_000160.3 (incorporado a la presente como la SEQ ID NO: 1) o el Número de Registro GENBANK: NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 hasta 16885000 (incorporado en la presente como SEQ ID NO: 2) . En determinadas modalidades, GCGR presenta la secuencia de mono rhesus tal como se establece en la SEQ ID NO: 3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 12 a 30 nucleósidos que tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 12 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13,
14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 12 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, el compuesto o composición proporcionada en la presente es o comprende los ISIS N.°: 449884, 459014, 398471, 448766 o 459157.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 12 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 12 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, el compuesto o composición es o comprende ISIS N.°: 449884.
En determinadas modalidades, el compuesto o composición es o comprende ISIS N.°: 459014.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 15 a 30 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 15 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 15 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, el compuesto o composición proporcionado en la presente es o comprende los ISIS N.°: 449884, 459014, 398471, 448766 o 459157.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en
15 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente consisten en 15 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de la SEQ ID NO: 80
En determinadas modalidades, el compuesto o composición proporcionado en la presente es o comprende ISIS . ° : 449884.
En determinadas modalidades, el compuesto o composición proporcionado en la presente es o comprende ISIS N . ° : 459014.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 16 a 21 nucleósidos que tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 16 a 21
nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 16 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de cualquiera de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 16 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 16 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 35 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 a 35 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente pueden consistir en 17 a 35 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de
la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente pueden consistir en 17 a 35 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado de 17 a 30 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,
17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31 , 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 30 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 25 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25
nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones descritas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 24 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 24 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 24 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 24 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,
17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 24 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 23 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 23 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 23
nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 23 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 23 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 22 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o
composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 22 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 22 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 22 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 22 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,
17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 a 21 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 17, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 21
nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 21 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 20 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o
composiciones proporcionadas en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 17 nucleósidos que tiene tiene una secuencia de nucleobase complementaria a una parte de igual longitud de
cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un ol igonucleót ido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 17 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4-115.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 17 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 o 85.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 o 17 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16
o 17 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionadas en la presente comprenden una sal de un ol igonucleótido modificado.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionados en la presente comprenden adicionalmente un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable .
En determinadas modalidades, la secuencia de nucleobase del oligonucleótido modificado es al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % complementaria a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, tal como se midió en la totalidad del oligonucleótido modi f icado .
En determinadas modalidades, la secuencia de nucleobase del oligonucleótido modificado tiene al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad con cualquiera de las SEQ ID NO: 4-115, tal como se midió en la totalidad del oligonucleótido modificado.
En determinadas modalidades, la secuencia de nucleobase del oligonucleótido modificado tiene al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad con cualquiera de las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85, tal como se midió en la
totalidad del oligonucleótido modificado.
En determinadas modalidades, la secuencia de nucleobase del oligonucleótido modificado tiene al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 96 %, 97 I, 98 %, 99 % o 100 % de identidad con la SEQ ID NO: 11, tal como se midió en la totalidad del oligonucleótido modificado.
En determinadas modalidades, la secuencia de nucleobase del oligonucleótido modificado tiene al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % , 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % de identidad con la SEQ ID NO: 80, tal como se midió en la totalidad del oligonucleótido modificado.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido u oligonucleótidos modificados se dirigen a una región de un ácido nucleico de GCGR. En determinadas modalidades, dichos compuestos u oligonucleótidos dirigidos a la región de un ácido nucleico de GCGR tienen una parte de nucleobase contigua que es complementaria a una parte de la nucleobase de la región de igual longitud. Por ejemplo, la parte puede ser al menos una parte de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas complementarias a una parte de una región de igual longitud descrita en la presente. En determinadas modalidades, tales compuestos u oligonucleótidos se dirigen a las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2: 6691-6707, 7267-7280,
7267-7283, 7267- 7284, 7267- 7285, 7267- 7286, 7267- 7287, 7267-7457, 7268- 7284, 7268- 7285, 7268- 7286, 7268- 7287,
7269- 7285, 7269- 7286, 7269- 7287, 7270-7285, 7270-7286,
7270- 7287 , 7271-7287, 7291- 7312, 7292- 7308 , 7292- 7309,
7292- 7310, 7292- 7311, 7292- 7312 , 7293- 7309, 7293- 7310,
7293- 7311, 7293- 7312, 7294- 7310, 7294- 7311, 7294- 7312, 7295-7310, 7295-7311, 7295- 7312, 7296-7312 , 7316- 7332,
7316- 7333, 7316- 7334, 7316- 7335, 7316-7336, 7317- 7333,
7317- 7334, 7317- 7335, 7317- 7336, 7318- 7334 , 7318- 7335,
7318- 7336, 7319-7334, 7319-7335, 7319- 7336, 7320-7336, 7339-7405, 7339-7406, 7339-7407, 7339-7408 , 7339-7409, 7341-7354 , 7341- 7357, 7341- 7358 , 7341- 7359, 7341- 7360, 7341-7361, 7342- 7358, 7342- 7359, 7342- 7360, 7342- 7361 , 7343-7359, 7343- 7360, 7343- 7361, 7344-7360, 7344-7361 , 7345-7361 , 7347-7456, 7365- 7381, 7365- 7382, 7365- 7383,
7365- 7384 , 7365-7385, 7366- 7382 , 7366- 7383 , 7366- 7384 ,
7366- 7385, 7367- 7383, 7367- 738 , 7367- 7385, 7368-7383, 7368-738 , 7368- 7385, 7369-7385, 7388-7382, 7389- 7407 ,
7389- 7408, 7389-7409, 7390- 7406, 7390- 7407, 7390- 7408 ,
7390- 7409, 7391- 7407, 7391- 7408, 7391- 7409, 7392-7407, 7392-7408, 7392- 7409, 7393-7409, 7413-7433, 7414- 7430,
7414- 7431, 7414-7432, 7414-7433, 7415-7431 , 7415- 7432,
7415- 7433, 7416-7432, 7416-7433, 7417-7433, 7437- 7453,
7437- 7454, 7437- 7455, 7437- 7456, 7437-7457 , 7438- 7454 ,
7438- 7455, 7438- 7456, 7438- 7457, 7439-7455, 7439- 7456,
7439- 7457, 7440-7455, 7440- 7456, 7440-7457 , 7441 -7457,
7740- 7756, 7782-7798, 7782- 7801 , 7782-7913, 7783 -7799,
7785- 7801 , 7785-7913, 7897- 7913, 8030-8049, 8132 -8151,
8133- 8152, 8133-8155, 8133- 8156, 8133-8157 , 8133 -8159,
8139- 8155, 8139-8156, 8139- 8157 , 8139-8159, 8140 -8156,
8140- 8157 , 8140-8159, 8141- 8157, 8141-8159, 8141 -8160,
8143- 8159, 8144-8160, 8386- 8402 , 8448-8464 , 8454 -8473,
9002- 9019, 9002-9020, 9002- 9021 , 9002-9026, 9003 -9019,
9003- 9020, 9003-9021, 9003- 9026, 9004-9020 , 9004 -9021,
9004- 9026, 9008-9027, 9010- 9026, 9130-9146, 9245 -9264,
9246- 9262, 9249-9265, 9592- 9611 , 9804-9823, 9808 -9824 ,
10667 -10683, 10667-10684 , 10667 -10695, 10668- 10684,
10668 -10695, 10676-10683, 10676 -10684 , 10676- 10695,
10718 -10734 , 10772-10788 , 11667 -11686, 11667- 11691,
11667 -11695, 11675-11691, 11675 -11695, 11676- 11695,
11724 -11741, 11724-11743, 11725 -11741, 11725- 11743,
11818 -11834 , 11819-11835, 11819 -11838 , 11819- 11842,
11826 -11842 , 11962-11978 , 12025 -1204 , 12025- 12046,
12025 -12049, 12025-12051 , 12025 -12052, 12026- 12042,
12026 -12044, 12026-12046, 12026 -12047, 12026- 12048,
12026 -12049, 12026-12050, 12026 -12051 , 12026- 12055,
12027 -12046, 12027-12049, 12027 -12051, 12027- 12052,
12028 -12044, 12028-12046, 12028 -12047, 12028- 12048,
12028 -12049, 12028-12050, 12028 -12051 , 12028- 12055,
12029 -12045, 12029-12046, 12029 -12047, 12029- 12048,
12029- 12049, 12029 -12050 , 12029- 12051, 12029- 12055,
12030- 12046, 12030 -12047, 12030- 12048, 12030- 12049,
12030- 12050 , 12030 -12051 , 12030- 12055, 12031- 12045,
12031- 12048 , 12031 -12049, 12031- 12050, 12031- 12051,
12031- 12055, 12032 -12048 , 12032- 12049, 12032- 12050,
12032- 12051 , 12032 -12052 , 12032- 12055, 12033- 12049,
12033- 12050, 12033 -12051, 12033- 12052, 12033- 12055,
12035- 12051, 12035 -12055, 12036- 12055, 12175- 12091,
12175- 12094, 12178 -12194, 13003- 13022, 13034- 13050,
13303- 13022 , 13314 -13333, 13366- 13382, 13490- 13509,
13515- 13534 , 14138 -14157, 14779- 14795, 15007- 1502 ,
15075- 15094 , 15075 -15113, 15075- 15121, 15075- 15127 ,
15075- 15133, 15094 -15113, 15094- 15121, 15094- 15127 ,
15094- 15133, 15102 -15121 , 15102- 15127, 15102- 15133,
15108- 15127, 15108 -15133, 15114- 15133, 15374- 15390,
15716- 15735, 15742 -15761 , 15742- 15762, 15743- 15762,
15744- 15760, 15744 -15762, 15744- 15763, 15744- 15764 ,
15744- 15765, 15745 -15764, 15745- 15765, 15746- 15760,
15746- 15762, 15746 -15763, 15746- 15764 , 15746- 15765,
15747- 15763, 15747 -15764 , 15747- 15765, 15748- 15764 ,
15748- 15765 y 15749- 15765.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido u oligonucleótidos modificados se dirigen a una región de un ácido nucleico de GCGR. En determinadas modalidades, dichos compuestos u oligonucleótidos
dirigidos a la región de un ácido nucleico de GCGR tienen una parte de nucleobase contigua que es complementaria a una parte de la nucleobase de la región de igual longitud. Por ejemplo, la parte puede ser al menos una parte de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas complementarias a una parte de una región de igual longitud descrita en la presente. En determinadas modalidades, tales compuestos u oligonucleótidos se dirigen a las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2: 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, y 15743-15762.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido u oligonucleótidos modificados se dirigen a una región de un ácido nucleico de GCGR. En determinadas modalidades, dichos compuestos u oligonucleótidos dirigidos a la región de un ácido nucleico de GCGR tienen una parte de nucleobase contigua que es complementaria a una parte de la nucleobase de la región de igual longitud. Por ejemplo, la parte puede ser al menos una parte de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases contiguas complementarias a una parte de una región de igual longitud descrita en la
presente. En determinadas modalidades, tales compuestos u oligonucleótidos se dirigen a las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2: 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456 y 10716-10734.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran una inhibición de al menos 70 % de una secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 325568, 310457,
449823, 450035 , 449881, 449882, 398457, 449883, 449884 ,
449885, 450039, 449894 , 449895, 450040, 398471 , 449905,
449906, 449907 , 449908 , 449910, 449912, 398486, 449916,
449917, 449922 , 450049, 450050, 448762, 448766, 450054,
449759, 449760, 436034 , 450059, 448799, 449938, 448802,
398585, 449944 , 449945, 448806, 450061, 449948, 449949,
449951, 398504 , 449952, 449953, 449954, 448817, 449955,
449956, 449958 , 448818, 449960, 448819, 449797, 448840,
449967, 448848 , 448850, 449819, 448860, 449836, 450074 ,
448890, 448897 , 448901, 448903, 448905, 449851, 449856,
449858, 449859, 449860, 449861, 315163, 459032, 459046,
459076, 459157 , 459010, 459011 , 459058, 459088, 459087,
459086, 459083, 459082 , 459158 , 448754, 448718, 448730,
448738 , 436140 , 398455, 398470, 398491, 398501, 398503,
398506, 398507 , 398508, 304535, 304538 , 304539, 436141 y
436164.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCG humano y muestran una inhibición de al menos 75 % de una secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 325568 , 310457,
449823, 450035, 449881, 449882, 398457, 449883, 449884,
449885, 450039, 449894 , 449895, 450040, 398471 , 449905,
449906, 449907, 449908 , 449910, 449912, 398486, 449916,
449917 , 449922, 450049, 450050, 448762, 448766, 450054 ,
449759, 449760, 450059, 448799, 449938, 448802, 398585,
449944, 449945, 448806, 450061 , 449948, 449949, 449951,
39850 , 449952, 449953, 449954 , 448817, 449955, 449956,
449958 , 448818, 449960, 448819, 449797, 448840, 449967,
448848, 448850, 449819, 448860, 449836, 450074 , 448890,
448897, 448901, 448903, 448905, 449851, 449856, 449858,
449859, 449860, 449861, 459032, 459076, 459157, 459010,
459011, 459058 , 459088 , 459087 , 459086, 459083, 459082,
459158 , 44875 , 448718, 448738 , 436140, 398455, 398470,
398491, 398501, 398503, 398506, 398507, 398508 , 304535,
304538 , 304539, 436141 y 436164.
En determinadas modalidades , los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran una inhibición de al menos 80 % de una
secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 310457, 449823,
450035, 449881, 449882 , 398457 , 449883, 449884, 449885,
450039, 449894, 449895, 450040 , 398471, 449905, 449906,
449907, 449908, 449910, 449912, 398486, 449916, 449917,
449922, 450049, 450050 , 448762, 448766, 450054 , 449759,
449760, 450059, 448799, 449938, 448802, 398585, 449944,
449945, 448806, 450061, 449948 , 449949, 449951, 398504,
449952, 449953, 449954, 448817 , 449955, 449956, 449958,
448818 , 449960, 448819, 449797 , 448840, 449967, 448848,
448850, 449819, 449836, 450074 , 448890, 448897, 448901,
448903, 448905, 449851, 449856, 449858, 449859, 449860,
449861, 459032, 459076, 459157, 459010, 459011, 459088,
459087, 459086, 459083, 459082 , 459158, 448718, 436140,
398455, 398470, 398491, 398501 , 398503, 398506, 398507,
398508, 304535, 304538 , 304539, 436141 y 436164.
En determinadas modalidades , los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran una inhibición de al menos 85 % de una secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 310457, 449823,
449881, 449882, 398457, 449883, 449884, 449885, 450039,
449894, 449895, 449905, 449906, 449907, 449910, 398486,
449916, 449917, 449922, 450049, 448766, 449760, 450059,
449938, 448802, 398585, 449945, 448806, 450061, 449948, 449949, 449951, 398504, 449952, 449953, 449954, 448817,
449955, 449956, 449958 , 449960 , 448819, 449967, 448848,
449836, 450074, 448890, 448903, 449851, 449856, 449858,
449859, 449860, 459157, 459010, 459011 , 459088 , 459087,
459086, 459083, 459082 , 459158 , 436140, 398455, 398470,
398503, 398506, 398507 , 398508 , 304535 , 304538, 304539,
436141 y 436164.
determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran una inhibición de al menos 90 % de una secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 449823, 398457, 449883, 449884, 449885, 449894, 449895, 449906, 398486, 449917, 449938, 449945, 448806, 450061, 449951, 398504, 449952, 449953, 449954, 448817, 449955, 449958, 449960, 448819, 448848, 450074, 449859, 459157, 459010, 459087, 459086, 459083, 459082, 459158, 436140, 398503, 398507, 304535, 304538, 304539, 436141 y 436164.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran una inhibición de al menos 90 % de una secuencia génica de GCGR: ISIS N.°: 398457, 449883, 398486, 448806, 448817, 448819, 459010, 459087, 459086, 398507, 304535 y 304538.
En determinadas modalidades, los siguientes
compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 3 µ? : ISIS N . ° :
304535, 304538, 304539, 398455, 398457, 398470, 398471,
398486, 398491, 398501, 398503, 398504, 398506, 398507,
398508, 398585, 436034, 436140, 436141, 436164 , 448718,
448730, 448738, 448754, 448762 , 448766, 448799, 448802,
448806, 448817, 448818 , 448819, 448840, 448848 , 448850,
448860, 448890, 448897, 448901, 448903, 448905, 449884,
459009, 459010, 459011, 459014 , 459024 , 459032, 459040,
459046, 459058, 459063, 459076, 459082 , 459083, 459086,
459087 , 459088, 459157 y 459158.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 1 µ?: ISIS N.0 :
304535, 304538, 304539, 398455, 398457, 398470, 398471,
398486, 398491, 398501, 398503, 39850 , 398506, 398507,
398508 , 398585, 436034, 436140, 436141, 436164, 448718,
448730, 448738, 448754 , 448762 , 448766, 448799, 448802,
448806, 448817, 448818 , 448819, 448840, 448848 , 448850,
448860, 448890, 448897 , 448901 , 448903, 448905, 449884,
459009, 459010, 459011, 459024 , 459032 , 459040, 459046,
459058 , 459063, 459076, 459082, 459083, 459086, 459087,
459088, 459157 y 459158.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 0,5 µ? : ISIS N.°:
304535, 304538 , 304539, 398455, 398457 , 398470, 398471,
398486, 398491, 398501, 398503, 398504 , 398506, 398507,
398508 , 398585, 43603 , 436140, 436141 , 436164 , 448718,
448730, 448738 , 448754 , 448762, 448799, 448802, 448806,
448817 , 448818, 448819, 448840 , 448848 , 448850, 448860,
448890, 448897, 448901, 448903, 448905, 449884 , 459009,
459010, 459011, 459024, 459040, 459046, 459058, 459063,
459076, 459082, 459083, 459086, 459087, 459088 , 459157 y
459158.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 0,3 µ : ISIS N.°:
304535, 304538 , 398455, 398457 , 398470 , 398471 , 398486,
398504, 398506, 398507, 43616 , 448718, 448730, 448762,
446766, 448799, 448802, 448806, 448817 , 448819, 448848,
448850, 448860, 448890, 448897, 448905, 449884, 459010,
459011 , 459040 , 459046, 459076, 459082 , 459083, 459086,
459087, 459088, 459157 y 459158.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ
ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 0,2 µ? : ISIS N.°: 304538, 398457, 398486, 398504, 398506, 398507, 448730, 448802, 448819, 448848, 448850, 448890, 449884, 459010, 459011, 459040, 459076, 459082, 459083, 459157 y 459158.
En determinadas modalidades, los siguientes compuestos antisentido se dirigen a una región de la SEQ ID NO: 2, un ácido nucleico que codifica GCGR humano y muestran un valor de IC50 menor de 0,1 µ?: ISIS N.°: 398457, 398507, 448819, 448848, 448850, 459010, 459011, 459083, 459157 y 459158.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos, donde los nucleósidos unidos comprenden una parte de 8 nucleobases contiguas que es complementaria a una parte de nucleobase de igual longitud en la región, seleccionada de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456 o 10716-10734 de la SEQ ID NO: 2.
En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado tiene una parte de al menos 9, al menos 10, al menos 11, al menos 12, al menos 13, al menos 14, al menos 15 o al menos 16 nucleobases contiguas, que es complementaria a una parte de igual longitud dentro de
la región, seleccionada de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456 o 10716-10734 de la SEQ ID NO: 2. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado es 90 %, 95 %, 99 % o 100 % complementario a un ácido nucleico que codifica GCGR humano, por ejemplo, la SEQ ID NO: 2
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 60 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 70 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 80 % complementarios dentro de la región, seleccionados de 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 90 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 95 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-
7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 99 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en al menos 17 nucleósidos modificados, 100 % complementarios dentro de la región, seleccionados de los nucleótidos 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 60 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408,
7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 70 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 80 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 90 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 95 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un o 1 i gonucleót ido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 99 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 100 % complementarios dentro de los nucleótidos 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432 y 7440-7456 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 60 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 70 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 80 %
complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 90 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 95 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 99 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
Determinadas modalidades proporcionan compuestos que comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos modificados, 100 % complementarios dentro de los nucleótidos 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
En determinadas modalidades, dichos compuestos u ol igonucleótidos dirigidos a una región de un ácido nucleico de GCGR tienen una parte de nucleobase que es
complementaria a una parte de nucleobase de igual longitud de la región 7270-7286, 7295-7311, 7319-7335, 7344-7360, 7368-7384, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456 o 10718-10734 de la SEQ ID NO: 2.
En determinadas modalidades, las siguientes regiones de nucleótidos de la SEQ ID NO: 2, cuando los compuestos u oligonucleótidos antisentido se dirigen a ellas, demuestran una inhibición de al menos un 65 %: 7267-7287, 7270-7286, 7292-7312, 7295-7311, 7316-7336, 7319-7335, 7341-7361, 7344-7360, 7365-7385, 7368-7384, 7389-7409, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7457, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734 o 15743-15762.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 70 % de un ácido nucleico GCGR: 4, 5, 6, 7 , 8, 9, 10, 11, 12, 13,
14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27,
28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,
42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55,
56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69,
70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 81, 83, 84, 85,
86, 87, 88 , 90, - 91, 92, 93 , 95 , 96, 98 , 99, 100, 101,
102 , 103 , 104 , 105, 106, 107 , 108 , 109, 110 , 111 , 112 , 113, 114 y 115.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 75 % de un ácido nucleico GCGR: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32 , 33, 34, 36, 37 , 38 , 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47 , 48, 49, 50 , 51 , 52, 53, 54 , 55, 56, 57, 58 , 59, 60, 61 , 62, 63, 64 , 65, 66, 67, 68 , 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 81, 84, 85, 86, 87, 88, 90, 91 , 92, 93, 95, 96, 98 , 99, 101, 102 , 103, 104 , 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114 y 115.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 80 % de un ácido nucleico GCGR: 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 , 29, 30, 31, 32, 33, 34 , 36, 37 , 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 , 59, 60, 61, 62, 63, 64 , 66, 67, 68 , 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 81, 84, 85, 86, 87, 90, 91, 92, 93, 95, 96, 99, 102 , 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 85 % de un
ácido nucleico GCGR: 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 18, 19, 20, 22, 24, 25, 26, 27, 28, 31, 34, 36, 38, 39, 40, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 57, 58, 61, 62, 66, 67 , 68 , 71, 73, 74 , 75, 76, 77 , 85, 86, 87 , 90, 91 , 92, 93, 95, 96, 102 , 103, 104 , 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 90 % de un ácido nucleico GCGR: 5, 9, 10, 11, 12, 14, 15, 19, 24, 26, 38 , 42 , 43, 44 , 47 , 48 , 49, 50 , 51, 52 , 53, 55, 57 , 58, 62, 67, 76, 85, 86, 91, 92, 93, 95, 96, 102, 107, 109, 111, 112, 113, 114 y 115.
En determinadas modalidades, las secuencias de nucleobase que se citan en las siguientes SEQ ID NO demuestran una inhibición de al menos el 95 % de un ácido nucleico GCGR: 9, 10, 24 , 43, 52, 58 , 86, 91, 92, 109, 111 y 112.
En determinadas modalidades, los compuestos proporcionados en la presente tienen mayor potencial terapéutico que ISIS N.°: 315163, 325568 y 310457 (divulgados en la patente estadounidense N.° 7,399,853 y la solicitud de patente estadounidense publicada N.° US2007-0087987 , la cual se incorpora a la presente mediante esta referencia) . En determinadas modalidades,
los compuestos proporcionados en la presente tienen mejor inhibición in vivo que ISIS N.°: 315163, 325568 y 310457. En determinadas modalidades, los compuestos proporcionados en la presente tienen mejor perfil de tolerabilidad que ISIS N.°: 315163, 325568 y 310457.
En determinadas modalidades, el compuesto proporcionado en la presente consiste en un oligonucleótido modificado de cadena simple.
En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 o 35 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 21 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 20 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 19 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 18 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 17 nucleósidos unidos. En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 16 nucleósidos unidos .
En determinadas modalidades, al menos un enlace internucleósido del oligonucleótido modificado es un
enlace internucleósido modificado. En determinadas modalidades, cada enlace internucleósido es un enlace internucleósido de fos forotioato .
En determinadas modalidades, al menos un nucleósido de dicho oligonucleótido modificado comprende una nucleobase modificada. En determinadas modalidades, la nucleobase modificada es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en desoxinucleós idos unidos; b) un segmento de ala 5' que consiste en nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en nucleósidos unidos. El segmento de hueco está ubicado entre el segmento de ala 5' y el segmento de ala 3' y cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado.
En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 20 nucleósidos unidos, el segmento de hueco consiste en diez desoxinucleósidos unidos, el segmento del ala 5' consiste en cinco nucleósidos unidos, el segmento del ala 3' consiste en cinco nucleósidos unidos, cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2'-0-metoxietilo, cada enlace internucleósido es un enlace de fosforotioato y cada citosina es una 5-metilcitosina.
En determinadas modalidades, el oligonucleótido
modificado consiste en 17 nucleósidos unidos, el segmento de hueco consiste en diez desoxinucleósidos unidos, el segmento del ala 5' consiste en tres nucleósidos unidos, el segmento del ala 3' consiste en cuatro nucleósidos unidos. Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2'-0-metoxieti lo . Cada enlace i n t ernuc leós ido es un enlace de fos forotioato y cada citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, el oligonucleótido modificado consiste en 21 nucleósidos unidos, el segmento de hueco consiste en diez desoxinucleósidos unidos, el segmento del ala 5' consiste en cinco nucleósidos unidos, el segmento del ala 3' consiste en seis nucleósidos unidos, cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2'-0-metoxietilo, cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada citosina es una 5-metilcitosina.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado de 20 nucleósidos unidos que tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de cualquiera de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de
hueco de diez desoxinucleós idos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cinco nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo, cada enlace internucleós ido es un enlace de fosforotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de cualquiera de la SEQ ID NO: 2, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleós idos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cinco nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxiet i 1 o ,
cada enlace internucleós ido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 19 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 4, 17, 24, 30, 31, 35, 37, 39, 40, 43, 48 , 52 , 56, 58, 60, 62, 63, 65, 68 , 69, 70, 71, 72, 79, 79, 79, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104 , 105, 106, 107 , 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114 y 115, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cinco nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleós ido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente
comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 19 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 17 o 31, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cinco . nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-meti lci tos ina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 17, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cuatro nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en
cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 31, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o
composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado de 17 nucleósidos unidos que tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3'. Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 8 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de cualquiera de la SEQ ID NO: 2, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de
hueco que consiste en diez desoxinucleós idos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metox i e t i lo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-me t i lci t os ina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 25, 26, 27, 28, 29, 32, 33, 34, 36, 38, 41, 42, 44, 45, 46, 47, 49, 50, 51, 53, 54, 55, 57, 59, 61, 64, 66, 67, 73, 74, 75, 76, 77 , 78 , 80 , 81 , 82, 83 , 84 , 88 , 89, y 97, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se
encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un ol igonucleót ido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 11 u 80, donde el ol igonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fosforotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente
comprenden un o 1 igonucl eót i do modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 11, donde el ol igonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cuatro nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxiet ilo , cada enlace internucleós ido es un enlace de fos forot ioato y cada residuo de citosina es una 5-met i lci to s ina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 16 nucleobases contiguas de la SEQ ID NO: 80, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en
cuatro nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3'. Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace inte rnucí eó s i do es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5 -metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un oligonucleótido modificado que consiste en 21 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 85 y 96, donde el oligonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en seis nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo, cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos o
composiciones que se proporcionan en la presente comprenden un ol igonucleótido modificado que consiste en 21 nucleósidos unidos que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos 20 nucleobases contiguas de las SEQ ID NO: 85, donde el ol igonucleótido modificado comprende: a) un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; b) un segmento del ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; y c) un segmento del ala 3' que consiste en seis nucleósidos unidos. El segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' . Cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-metoxietilo , cada enlace internucleósido es un enlace de fos forotioato y cada residuo de citosina es una 5-metilcitosina .
Determinadas modalidades proporcionan métodos, compuestos, y composiciones para inhibir la expresión de GCGR .
Determinadas modalidades proporcionan un método para reducir la expresión del GCGR en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a
GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un ol igonucleótido modificado con una longitud de 15 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 18 a 21 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 35 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 25 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 24 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 23 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 22 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 a 21 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En
determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 20 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 21 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR.
Determinadas modalidades proporcionan un método para prevenir, mejorar o tratar una enfermedad metabólica en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. Los ejemplos de enfermedades o trastornos metabólicos incluyen, de modo no taxativo, diabetes, hiperglucemia , prediabetes, obesidad, enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD) , síndrome metabólico, resistencia a la insulina, dislipidemia diabética o hipertrigliceridemia o una combinación de estos.
Determinadas modalidades proporcionan un método para prevenir, mejorar o tratar la obesidad en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal
como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 20 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 21 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto de los ISIS N.°: 449884, 459014, 398471, 448766, o 459157. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto del ISIS N.°: 449884. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto del ISIS N.°: 459014.
Determinadas modalidades proporcionan un método para prevenir, mejorar o tratar la diabetes en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el
compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 20 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 21 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto de los ISIS N.°: 449884, 459014, 398471, 448766, o 459157. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto del ISIS N.°: 449884. En determinadas modalidades, el compuesto o composición comprende el compuesto del ISIS N.°: 459014.
Determinadas modalidades proporcionan un método para reducir el peso corporal en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata una enfermedad
metabólica. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la diabetes. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la obesidad. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata el síndrome metabólico. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la resistencia a la insulina. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la hiperglucemia. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la NAFLD. En determinadas modalidades, la reducción del peso corporal en un animal previene, mejora o trata la dislipidemia diabética. En determinadas modalidades, los niveles de glucosa se reducen en al menos 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 55 %, 60 , 65 , 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 % o 100 %.
Determinadas modalidades proporcionan un método para reducir los niveles de glucosa en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 12 a 30 nucleósidos unidos dirigidos a
GCGR. En determinadas modalidades, el compuesto comprende un oligonucleótido modificado con una longitud de 17 nucleósidos unidos dirigidos a GCGR. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata una enfermedad metabólica. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la diabetes. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la obesidad. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata el síndrome metabólico. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la resistencia a la insulina. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la hiperglucemia . En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la NAFLD. En determinadas modalidades, la reducción de los niveles de glucosa en un animal previene, mejora o trata la dislipidemia diabética. En determinadas modalidades, el nivel de glucosa se reduce en al menos 5 %, 10 %, 20 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 , 50 %, 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %
o 100 % .
En determinadas modalidades, GCGR presenta la secuencia humana como se establece en cualquiera de los Números de Registro en GENBANK: Número de Registro GENBANK NM_000160.3 (incorporado en la presente como SEQ ID NO: 1) o el Número de Registro GENBANK: NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 hasta 16885000 (incorporado en la presente como SEQ ID NO: 2) . En determinadas modalidades, GCGR presenta la secuencia de mono rhesus tal como se establece en la SEQ ID NO: 3.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionados en la presente comprenden una sal de estos, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85 o una sal de estos y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 20 a 25 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 20 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en
las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85 o una sal de estos y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 20 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 20 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80 u 85 o una sal de estos y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionados en la presente comprenden una sal de estos, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 11 o una sal de este y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 16 o una sal de este y un portador o diluyente
farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 16 o una sal de este y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
En determinadas modalidades, los compuestos o composiciones proporcionados en la presente comprenden una sal de estos, y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 80 o una sal de este y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 25 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 45 o una sal de este y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la composición comprende un oligonucleótido
modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en la SEQ ID NO: 45 o una sal de este y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Determinadas modalidades proporcionan un método para tratar un animal con una enfermedad o afección relacionada con GCGR, que comprende: a) identificar dicho animal con la enfermedad o afección relacionada con el GCGR, y b) administrarle a dicho animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que comprende un ol igonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase al menos 90 % complementaria a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, tal como se midió en la totalidad de dicho oligonucleótido modificado. En determinadas modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto administrado al animal trata o reduce la enfermedad o afección relacionada con GCGR, o un síntoma de esta, en el animal. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección relacionada con el GCGR es la obesidad. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección relacionada con el GCGR es la diabetes.
Determinadas modalidades proporcionan un método para tratar un animal con una enfermedad o afección
relacionada con GCGR, que comprende: a) identificar dicho animal con la enfermedad o afección relacionada con el GCGR, y b) administrarle a dicho animal una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase al menos 100 % complementaria a cualquiera de las SEQ ID NO: 1-3, tal como se midió en la totalidad de dicho oligonucleótido modificado. En determinadas modalidades, la cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto administrado al animal trata o reduce la enfermedad o afección relacionada con GCGR, o un síntoma de esta, en el animal. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección relacionada con el GCGR es la obesidad. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección relacionada con el GCGR es la diabetes.
Determinadas modalidades proporcionan métodos para tratar, prevenir o mejorar una enfermedad metabólica. En determinadas modalidades, la enfermedad metabólica es obesidad, diabetes, hiperglucemia, prediabetes, enfermedad del hígado graso no alcohólico (NAFLD) , síndrome metabólico, resistencia a la insulina, dislipidemia diabética o hipertrigliceridemia o una combinación de estas.
Determinadas modalidades proporcionan métodos que
comprenden administrar un compuesto tal como se describe en la presente a un animal. En determinadas modalidades, el método comprende administrarle a un animal un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 20 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en las SEQ ID NO: 11, 17, 31, 80, u 85.
Determinadas modalidades proporcionan métodos que comprenden administrar un compuesto tal como se describe en la presente a un animal. En determinadas modalidades, el método comprende administrarle a un animal un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase que figura en las SEQ ID NO: 1, 17, 31, 80, u 85.
Determinadas modalidades proporcionan métodos que comprenden administrar un compuesto tal como se describe en la presente a un animal. En determinadas modalidades, el método comprende administrarle a un animal un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase seleccionada de entre las
secuencias de nucleobase que figuran en la SEQ ID NO: 11.
Determinadas modalidades proporcionan métodos que comprenden administrar un compuesto tal como se describe en la presente a un animal. En determinadas modalidades, el método comprende administrarle a un animal un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos y tiene una secuencia de nucleobase que comprende al menos 17 nucleobases contiguas de una secuencia de nucleobase seleccionada de entre las secuencias de nucleobase que figuran en la SEQ ID NO: 80.
En determinadas modalidades, el animal es un ser humano .
En determinadas modalidades, la administración previene, trata, mejora o enlentece el avance de una enfermedad metabólica como se describe en la presente.
En determinadas modalidades, la administración previene, trata, mejora o enlentece el avance de la obesidad como se describe en la presente.
En determinadas modalidades, la administración previene, trata, mejora o enlentece el avance de la diabetes como se describe en la presente.
En determinadas modalidades, el compuesto se administra simultáneamente con un segundo agente.
En determinadas modalidades, el compuesto y el segundo agente se administran de forma concomitante.
En determinadas modalidades, la administración es por administración parenteral.
Determinadas modalidades proporcionan además un método para reducir la expresión de proteina o ARNm de GCG en un animal que comprende administrarle al animal un compuesto o composición tal como se describe en la presente para reducir la expresión de proteina o ARNm de GCGR en el animal. En determinadas modalidades, el animal es un ser humano. En determinadas modalidades, la reducción de la expresión de proteina o ARNm de GCGR previene, trata, mejora o enlentece el avance de la enfermedad metabólica. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección metabólica es diabetes. En determinadas modalidades, la enfermedad o afección metabólica es obesidad.
Determinadas modalidades proporcionan un método para tratar a un humano con una enfermedad metabólica que comprende identificar al humano con la enfermedad y administrarle al humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el tratamiento reduce un síntoma que se selecciona del grupo que consiste en síndrome metabólico,
hiperglucemia , hipertrigliceridemia, hipertensión, mayores niveles de glucosa, mayor resistencia a la insulina, menor sensibilidad a la insulina, peso corporal por encima de lo normal, y/o grasa corporal por encima de lo normal o cualquier combinación de estos.
Determinadas modalidades proporcionan un método para tratar a un humano con obesidad, el cual comprende identificar al humano con la enfermedad y administrarle al humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el tratamiento reduce un síntoma que se selecciona del grupo que consiste en síndrome metabólico, hiperglucemia, hipertrigliceridemia, hipertensión, mayores niveles de glucosa, mayor resistencia a la insulina, menor sensibilidad a la insulina, peso corporal por encima de lo normal, y/o grasa corporal por encima de lo normal o cualquier combinación de estos.
Determinadas modalidades proporcionan un método para tratar a un humano con diabetes, el cual comprende identificar al humano con la enfermedad y administrarle al humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, el tratamiento reduce un síntoma que se selecciona del grupo que
consiste en síndrome metabólico, hiperglucemia , hipertrigliceridemia , hipertensión, mayores niveles de glucosa, mayor resistencia a la insulina, menor sensibilidad a la insulina, peso corporal por encima de lo normal, y/o grasa corporal por encima de lo normal o cualquier combinación de estos.
Además se proporciona un método para reducir o prevenir la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a un humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente, de esta manera se reduce o previene la enfermedad metabólica.
Además se proporciona un método para reducir o prevenir la obesidad, el cual comprende administrarle a un humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente, de esta manera se reduce o previene la diabete s .
Además se proporciona un método para reducir o prevenir la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o composición tal como se describe en la presente, de esta manera se reduce o previene la diabetes .
Además se proporciona un método para mejorar un
síntoma de la enfermedad me t abó 1 i ca , el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la enfermedad metabólica en el humano.
Además se proporciona un método para mejorar un síntoma de la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la diabetes en el humano.
Además se proporciona un método para mejorar un síntoma de la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la enfermedad metabólica en el humano.
Además se proporciona un método para mejorar un síntoma de la diabetes, el cual comprende administrarle
a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la diabetes en el humano.
Además se proporciona un método para mejorar un síntoma de la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la enfermedad metabólica en el humano.
Además se proporciona un método para mejorar un síntoma de la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se mejora un síntoma de la diabetes en el humano.
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a
un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la enfermedad metabólica en el humano .
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 a 35 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la diabetes en el humano.
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la enfermedad metabólica en el
humano .
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la diabetes en el humano.
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la enfermedad metabólica, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17 nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se híbrida específicamente a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la enfermedad metabólica en el humao.
Además se proporciona un método para reducir la velocidad con que avanza un síntoma asociado a la diabetes, el cual comprende administrarle a un humano que lo necesite un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 17
nucleósidos unidos, donde dicho oligonucleósido modificado se hibrida específicamen e a las SEQ ID NO: 1, 2 o 3, de esta manera se reduce la velocidad con que avanza un síntoma de la diabetes en el humano.
También se proporcionan métodos y compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención o mejora de una enfermedad metabólica.
También se proporcionan métodos y compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención o mejora de la obesidad.
También se proporcionan métodos y compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes.
También se proporcionan métodos y compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento, la prevención o mejora de un síndrome metabólico
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un medicamento para tratar, mejorar o prevenir una enfermedad metabólica.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un medicamento para tratar, mejorar o prevenir la obesidad.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un
compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un medicamento para tratar, mejorar o prevenir la diabetes.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un medicamento para tratar, mejorar o prevenir un síndrome metabólico.
Determinadas modalidades proporcionan un compuesto tal como se describe en la presente para su uso en el tratamiento, la prevención o mejora de la enfermedad metabólica tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomitante.
Determinadas modalidades proporcionan un compuesto tal como se describe en la presente para su uso en el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomitante .
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la
elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la enfermedad metabólica tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomí tante .
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la obesidad tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomitante.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomitante.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la
elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes tal como se describe en la presente mediante terapia de combinación con un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente. Los agentes o terapias se pueden administrar simultáneamente o de forma concomitante.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la enfermedad metabólica, tal como se describe en la presente, en un paciente al que posteriormente se le administra un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la obesidad, tal como se describe en la presente, en un paciente al que posteriormente se le administra un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes, tal como se describe en la presente, en un paciente al que posteriormente se
le administra un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan el uso de un compuesto tal como se describe en la presente en la elaboración de un médicamente para el tratamiento, la prevención o mejora del síndrome metabólico, tal como se describe en la presente, en un paciente al que posteriormente se le administra un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan un kit para el tratamiento, la prevención o mejora de la enfermedad metabólica, tal como se describe en la presente, donde el kit comprende:
(i) un compuesto tal como se describe en la presente; y de manera alternativa
(ii) un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan un kit para el tratamiento, la prevención o mejora de la obesidad, tal como se describe en la presente, donde el kit comprende:
(i) un compuesto tal como se describe en la presente; y de manera alternativa
(ii) un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan un kit para el tratamiento, la prevención o mejora de la diabetes, tal como se describe en la presente, donde el kit comprende :
(i) un compuesto tal como se describe en la presente; y de manera alternativa
(ii) un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Determinadas modalidades proporcionan un kit para el tratamiento, la prevención o mejora del síndrome metabólico, tal como se describe en la presente, donde el kit comprende:
(i) un compuesto tal como se describe en la presente; y de manera alternativa
(ii) un agente o una terapia adicional tal como se describe en la presente.
Un kit, tal como se describe en la presente, puede incluir adicionalmente instrucciones para usar el kit en el tratamiento, la prevención o mejora de la enfermedad metabólica, tal como se describe en la presente, mediante terapia de combinación, tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, la enfermedad metabólica es obesidad. En determinadas modalidades, la enfermedad metabólica es diabetes.
Compuestos antisentido
Los compuestos oligoméricos incluyen, de modo no taxativo, oligonucleótidos , ol igonucleós idos , análogos de oligonucleótidos, miméticos de oligonucleótidos, compuestos antisentido, oligonucleótidos antisentido, y ARNip. Un compuesto oligomérico puede ser "antisentido" con respecto a un ácido nucleico objetivo, lo que significa que es capaz experimentar hibridación con respecto a un ácido nucleico objetivo a través de una unión de hidrógeno.
En determinadas modalidades, el compuesto antisentido tiene una secuencia de nucleobase que, cuando se escribe en la dirección 5' a 3', comprende el complemento inverso del segmento objetivo de un ácido nucleico objetivo al que está dirigido. En determinadas de dichas modalidades, el oligonucleótido antisentido tiene una secuencia de nucleobase que, cuando se escribe en la dirección 5' a 3', comprende el complemento inverso del segmento objetivo de un ácido nucleico objetivo al que está dirigido.
En determinadas modalidades, un compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico de GCGR tiene una longitud de 10 a 30 nucleótidos. En otras palabras, los compuestos antisentido son de 10 a 30 nucleobases unidas. En otras modalidades, el compuesto antisentido
comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 8 a 80, 10 a 50, 15 a 30, 18 a 21, 20 a 80, 20 a 35, 20 a 30, 20 a 29, 20 a 28, 20 a 27, 20 a 26, 20 a 25, 20 a 24, 20 a 23, 20 a 22, 20 a 21 o 20 nucleobases unidas. En determinadas de dichas modalidades, el compuesto antisentido comprende un oligonucleótido modificado que consiste en una longitud de 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 , 62, 63, 64 , 65, 66, 67, 68 , 69, 70, 71, 72, 73, 74 , 75, 76, 77, 78 , 79 u 80 nucleobases unidas, o un intervalo definido por cualesquiera dos de los valores que anteceden.
En determinadas modalidades, el compuesto antisentido comprende un oligonucleótido modificado acortado o truncado. El oligonucleótido modificado acortado o truncado puede presentar un único nucleósido eliminado del extremo 5' (truncamiento 5') , o de manera alternativa del el extremo 3' (truncamiento 3') · Un oligonucleótido acortado o truncado puede presentar dos nucleósidos eliminados del extremo 5' o de manera alternativa puede presentar dos subunidades eliminadas del extremo 3' . De manera alternativa, los nucleósidos eliminados se pueden dispersar a lo largo del
oligonucleótido modificado, por ejemplo, en un compuesto antisentido que presenta un nucleósido eliminado del extremo 5' y un nucleósido eliminado del extremo 3'.
Cuando un único nucleósido adicional está presente en un oligonucleótido alargado, el nucleósido adicional puede ubicarse en el extremo 5' o 3' del oligonucleótido. Cuando dos o más nucleósidos adicionales están presentes, los nucleósidos agregados pueden ser adyacentes entre si, por ejemplo, en un oligonucleótido que presenta dos nucleósidos agregados al extremo 5' (adición 5') o de manera alternativa al extremo 3' (adición 3') del oligonucleótido. De manera alternativa, los nucleósidos agregados se pueden dispersar a lo largo del compuesto antisentido, por ejemplo, en un oligonucleótido que presenta un nucleósido agregado al extremo 5' y una subunidad agregada al extremo 3'.
Es posible aumentar o disminuir la longitud de un compuesto antisentido, tal como un oligonucleótido antisentido, y/o introducir bases mal apareadas sin eliminar la actividad. Por ejemplo, en Woolf et ál . (Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89:7305-7309, 1992), se evaluó una serie de oligonucleótidos antisentido con una longitud de 13-25 nucleobases para determinar su capacidad de inducir la escisión de un ARN objetivo en
un modelo de inyección de ovocitos. Los oligonucleótidos antisentido de 25 nucleobases de longitud con 8 u 11 bases mal apareadas cercanas a los extremos del oligonucleót ido antisentido fueron capaces de dirigir la escisión específica del ARNm objetivo, aunque en menor medida que los oligonucleótidos antisentido que no contenían ningún mal apareamiento. De manera similar, la escisión específica del objetivo se logró usando oligonucleótidos antisentido de 13 nucleobases, que incluye aquellos con 1 o 3 mal apareamientos.
Gautschi et ál (J. Nati. Cáncer Inst. 93:463-471, marzo de 2001) demostraron la capacidad de un oligonucleótido que tiene 100 % de complementariedad con el ARNm de bcl-2 y presenta 3 mal apareamientos con el ARNm de bcl-xL para reducir la expresión tanto de bcl-2 como de bcl-xL in vitro e in vivo. Además, este oligonucleótido demostró tener una potente actividad antitumoral in vivo.
Maher y Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16:3341-3358,1988) analizaron una serie de oligonucleótidos antisentido de 14 nucleobases simultáneos, y oligonucleótidos antisentido de 28 y 42 nucleobases conformados por la secuencia de dos o tres de los oligonucleótidos antisentido simultáneos, respectivamente, para determinar su capacidad de detener la traducción de DHFR
humano en un ensayo de reticulocito de conejo. Cada uno de los tres oligonucleótidos antisentido de 14 nucleobases por si mismo pudo inhibir la traducción, aunque a un nivel más modesto que los oligonucleótidos antisentido de 28 o 42 nucleobases.
Motivos del compuesto antisentido
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tienen subunidades químicamente modificadas dispuestas en patrones, o motivos, para conferir propiedades a los compuestos antisentido tales como mejor actividad inhibidora, mayor afinidad de unión para un ácido nucleico objetivo o resistencia a la degradación mediante nucleasas in vivo.
Los compuestos antisentido quiméricos contienen normalmente al menos una región modificada a modo de conferir mayor resistencia a la degradación de nucleasas, mayor absorción celular, mayor afinidad de unión para el ácido nucleico objetivo, y/o mayor actividad inhibidora. Una segunda región de un compuesto antisentido quimérico puede servir opcionalmente como un sustrato para la endonucleasa celular RNasa H, que escinde la hebra de ARN de un dúplex de AR : ADN .
Los compuestos antisentido que presentan un motivo
gapmer son considerados como compuestos antisentido quiméricos. En un gapmer, una región interna que presenta una multiplicidad de nucleótidos que sustentan la escisión de RNasaH está ubicada entre las regiones externas que presentan una multiplicidad de nucleótidos que son químicamente distintos a los nucleósidos de la región interna. En el caso de un ol igonucleót ido antisentido que tiene un motivo gapmer, el segmento de hueco en general sirve como el sustrato para la escisión de endonucleasas , mientras que los segmentos del ala comprenden nucleósidos modificados. En determinadas modalidades, las regiones de un gapmer se diferencian por los tipos de restos de azúcar que comprende cada región diferenciada. Los tipos de restos de azúcar que son utilizados para diferenciar las regiones de un gapmer pueden, en algunas modalidades, incluir ß-D-ribonucleósidos , ß-D-desoxirribonucleósidos , nucleósidos modificados con 2' (dichos nucleósidos modificados con 2' pueden incluir 2'-MOE y 2'-0-CH3, entre otros) , y nucleósidos modificados con azúcar bicíclica (dichos nucleósidos modificados con azúcar bicíclica pueden incluir aquellos que tienen un etilo limitado) . En determinadas modalidades, las alas pueden incluir varios restos de azúcar modificados, lo cual incluye, por ejemplo, 2'-M0E y etilo limitado. En determinadas
modalidades, las alas pueden incluir varios restos de azúcar modificados y sin modificar. En determinadas modalidades, las alas pueden incluir varias combinaciones de nucleósidos 2'- 0E, nucleósidos de etilo limitado, y 2 ' -desoxinucleósidos .
Cada región diferenciada puede comprender restos de azúcar uniformes, variantes o alternantes. El motivo ala-hueco-ala con frecuencia se describe como "X-Y-Z", donde "X" representa la longitud del ala 5', "Y" representa la longitud del hueco, y "Z" representa la longitud del ala 3' . "X" y "Z" pueden comprender restos de azúcar uniformes, variantes o alternantes. En determinadas modalidades, "X" e "Y" pueden incluir uno o más 2 ' -desoxinucleósidos . "Y" puede comprender 2'-desoxinucleósidos. Tal como se usa en la presente, un gapmer descrito como "X-Y-Z" tiene una configuración tal que el hueco está ubicado de forma inmediatamente adyacente a cada una de las alas 5' y 3' . Por lo tanto, no existen nucleótidos intervinientes entre el ala 5' y el hueco, o el hueco y el ala 3' . Cualquiera de los compuestos antisentido descritos en la presente pueden tener un motivo gapmer. En determinadas modalidades, "X" y "Z" son iguales, en otras modalidades son diferentes. En determinadas modalidades, "Y" está entre 8 y 15 nucleósidos. X, Y o Z puede ser cualquiera de 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30 o más nucleósidos.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 3-10-4.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 5-10-5.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 5-10-6.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 3-10-3.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 4-10-4.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR tiene un motivo gapmer 4-10-5.
Ácidos nucleicos objetivo, regiones objetivo y secuencias de nucleótidos
En determinadas modalidades, el ácido nucleico de GCGR es cualquiera de las secuencias que se establecen
en el N.° de Registro de GENBANK NM_000160.3 (incorporado a la presente como la SEQ ID NO: 1) N.° de Registro de GENBANK NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 hasta 16885000 (incorporado en la presente como SEQ ID NO: 2) y la secuencia del mono rhesus tal como se establece en SEQ ID NO: 3.
Se entiende que la secuencia indicada en cada SEQ ID NO en los Ejemplos contenidos en la presente es independiente de cualquier modificación a un resto de azúcar, un enlace internucleósido o una nucleobase. Como tales, los compuestos antisentido definidos por una SEQ ID NO pueden comprender, independientemente, una o más modificaciones a un resto de azúcar, un enlace internucleósido o una nucleobase. Los compuestos antisentido descritos por el Número Isis (N.° Isis) indican una combinación de secuencia de nucleobase y motivo .
En determinadas modalidades, una región objetivo es una región estructuralmente definida del ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, una región objetivo puede comprender un 3' UTR, un 5' UTR, un exón, un intrón, una unión exón/intrón, una región de codificación, una región de inicio de la traducción, región de fin de la traducción u otra región de ácido nucleico definida. Las regiones estructuralmente
definidas para GCGR se pueden obtener mediante el número de registro de las bases de datos de secuencias tales como NCBI y dicha información se incorpora a la presente mediante esta referencia. En determinadas modalidades, una región objetivo puede comprender la secuencia desde un sitio objetivo 5' de un segmento objetivo dentro de la región objetivo hasta un sitio objetivo 3' de otro segmento objetivo dentro de la misma región objetivo.
El direccionamiento incluye la determinación de al menos un segmento objetivo al que se híbrida un compuesto antisentido, de modo que suceda un efecto deseado. En determinadas modalidades, el efecto deseado es una reducción en los niveles de ácido nucleico del ARNm objetivo. En determinadas modalidades, el efecto deseado es la reducción de niveles de proteina codificada por el ácido nucleico o un cambio fenotipico asociado al ácido nucleico objetivo.
Una región objetivo puede contener uno o más segmentos objetivo. Dentro de la región objetivo se puede superponer una multiplicidad de segmentos objetivo. De manera alternativa, pueden no superponerse. En determinadas modalidades, los segmentos objetivo dentro de una región objetivo están separados por no más de alrededor de 300 nucleótidos. En determinadas modalidades, los segmentos objetivo dentro de una región
objetivo están separados por un número de nucleótidos que es, es alrededor de, es no más de, es no más de alrededor de, 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 o 10 nucleótidos en el ácido nucleico objetivo, o es un intervalo definido por cualesquiera dos de los valores anteriores. En determinadas modalidades, los segmentos objetivo dentro de una región objetivo están separados por no más o no más de alrededor de 5 nucleótidos en el ácido nucleico objetivo. En determinadas modalidades, los segmentos objetivo son contiguos. Se contemplan regiones objetivo definidas por un intervalo que tiene un ácido nucleico de partida que se encuentra en cualquiera de los sitios objetivo 5' o sitios objetivo 3' indicados en la presente .
Los segmentos objetivo adecuados se pueden encontrar en una 5' UTR, una región codificante, una 3' UTR, un intrón, un exón, una unión exón/intrón. Los segmentos objetivo que contienen un codón de inicio o un codón de terminación también son segmentos objetivo adecuados. Un segmento objetivo adecuado puede excluir específicamente una región determinada es t ructuralmente definida tal como el codón de inicio o codón de terminación .
La determinación de segmentos objetivo adecuados
puede incluir una comparación de la secuencia de un ácido nucleico objetivo con respecto a otras secuencias a lo largo del genoma. Por ejemplo, se puede usar el algoritmo BLAST para identificar regiones de similitud entre diferentes ácidos nucleicos. Esta comparación puede evitar la selección de secuencias de compuesto antisentido que se pueden hibridar de manera no especifica a secuencias diferentes de un ácido nucleico seleccionado (es decir, secuencias no objetivo o no e spe ci f i cas ) .
Puede haber una variación en la actividad (por ejemplo, como se definió por el porcentaje de reducción de los niveles de ácidos nucleicos objetivo) de los compuestos antisentido dentro de una región objetivo activa. En determinadas modalidades, las reducciones en los niveles de ARNm de GCGR son indicativas de la inhibición de la expresión de GCGR. Las reducciones en los niveles de una proteina de GCGR también son indicativas de la inhibición de la expresión de ARNm objetivo. Adicionalmente , los cambios fenotipicos son indicativos de la inhibición de la expresión de GCGR. En determinadas modalidades, los niveles reducidos de glucosa, los niveles reducidos de lipidos y el peso corporal reducido pueden ser indicativos de la inhibición de la expresión de GCGR. En determinadas
modalidades, la mejora de los síntomas asociados con la enfermedad metabólica puede ser indicativa de la inhibición de la expresión de GCGR. En determinadas modalidades, la mejora de los síntomas asociados con la diabetes puede ser indicativa de la inhibición de la expresión de GCGR. En determinadas modalidades, la reducción de la resistencia a la insulina es indicativa de la inhibición de la expresión de GCGR. En determinadas modalidades, la reducción de biomarcadores de diabetes puede ser indicativa de la inhibición de la expresión de GCGR.
Hibridación
En algunas modalidades, la hibridación ocurre entre un compuesto antisentido descrito en la presente y un ácido nucleico de GCGR. El mecanismo más común de hibridación implica enlaces de hidrógeno (por ejemplo, enlaces de hidrógeno Watson-Crick, Hoogsteen o Hoogsteen inverso) entre las nucleobases complementarias con las moléculas de ácido nucleico.
La hibridación puede ocurrir en condiciones variables. Las condiciones rigurosas dependen de las secuencia y se determinan por la naturaleza y composición de las moléculas de ácido nucleico que van a hibridarse.
Los métodos para determinar si una secuencia se híbrida específicamente a un ácido nucleico objetivo se conocen en la técnica. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido proporcionados en la presente se hibridan de manera específica con un ácido nucleico de GCGR.
Complementari edad
Un compuesto antisentido y un ácido nucleico objetivo son complementarios el uno del otro cuando un número suficiente de nucleobases del compuesto antisentido puede unirse con un enlace de hidrógeno con las nucleobases correspondientes del cido nucleico objetivo, de manera que ocurra el efecto deseado (por ejemplo, la inhibición antisentido de un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico de GCGR) .
Un compuesto antisentido puede hibridarse en uno o más segmentos de un ácido nucleico de GCGR, de manera que los segmentos interviniente s o adyacentes no se vean implicados en el evento de hibridación (por ejemplo, una estructura de bucle, mal apareamiento o estructura de horqui 1 la ) .
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido proporcionados en la presente o una porción especifica de estos son o son al menos 70 %, 8? %, 85 %,
86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % complementarios a un ácido nucleico de GCGR, una región objetivo, un segmento objetivo o una parte especifica de estos. El porcentaje de complementariedad de un compuesto antisentido con un ácido nucleico objetivo se puede determinar mediante el uso de métodos de rutina.
Por ejemplo, un compuesto antisentido en el que 18 de 20 nucleobases del compuesto antisentido son complementarias a una región objetivo y que, por lo tanto, se hibridarian de manera especifica, representarían el 90 por ciento de complementar iedad . En este ejemplo, las nucleobases no complementarias restantes pueden ser agrupadas o intercaladas con nucleobases complementarias y no necesitan ser contiguas las unas de las otras o a nucleobases complementarias. Como tal, un compuesto antisentido que tiene 18 nucleobases de longitud, que posee 4 (cuatro) nucleobases no complementarias que están flanqueadas por dos regiones de complementariedad completa con el ácido nucleico objetivo tendría 77,8 % de complementariedad global con el ácido nucleico objetivo y, por lo tanto, sería comprendido por el alcance de la presente invención. El porcentaje de complementariedad de un compuesto antisentido con una región de un ácido
nucleico objetivo puede ser determinado de forma rutinaria utilizando programas BLAST (herramientas de búsqueda de alineación local básica) y programas PowerBLAST conocidos en la técnica (Altschul et ál., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 10; Zhang y Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656) . El porcentaje de homología, la identidad de secuencia o complementar iedad pueden ser determinados por, por ejemplo, el programa Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Versión 8 para Unix, Genetics Computer Group, University Research Park, Madison Wis.) con ajustes por defecto, que utiliza el algoritmo de Smith y aterman (Adv. Appl. Math., 1981, 2, 482 489) .
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido proporcionados en la presente, o partes específicas de estos, son totalmente complementarios (es decir, 100 % complementarios) con un ácido nucleico objetivo o una parte específica de este. Por ejemplo, el compuesto antisentido puede ser completamente complementario con un ácido nucleico de GCGR o una región objetivo o un segmento objetivo o secuencia objetivo de este. Tal como se usa en la presente, "complementariedad completa" significa que cada nucleobase de un compuesto antisentido tiene la capacidad de realizar un emparejamiento de bases preciso
con las nucleobases correspondientes de un ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, un compuesto antisentido de 20 nucleobases es completamente complementario con una secuencia objetivo que tiene 400 nucleobases de longitud, siempre que haya una porción de 20 nucleobases del ácido nucleico objetivo que sea completamente complementaria con el compuesto antisentido. La complementariedad completa también puede utilizarse en referencia a una parte especifica del primer y/o el segundo ácido nucleico. Por ejemplo, una porción de 20 nucleobases de un compuesto antisentido de 30 nucleobases puede ser "completamente complementaria" de una secuencia objetivo que tiene 400 nucleobases de longitud. La porción de 20 nucleobases del oligonucleótido de 30 nucleobases es completamente complementaria con la secuencia objetivo si la secuencia objetivo tiene una porción de 20 nucleobases correspondiente donde cada nucleobase es complementaria con la poción de 20 nucleobases d.el compuesto antisentido. Al mismo tiempo, el compuesto antisentido de 30 nucleobases puede ser o no ser completamente complementario con la secuencia objetivo, según si las 10 nucleobases restantes del compuesto antisentido son complementarias con la secuencia objetivo.
La ubicación de una nucleobase no complementaria
puede estar en el extremo 5' o el extremo 3' del compuesto antisentido. De manera alternativa, la nucleobase o nucleobases no complementarias pueden estar en una posición interna del compuesto antisentido. Cuando dos o más nucleobases no complementarias están presentes, pueden ser contiguas (es decir, estar unidas)
0 no contiguas. En una modalidad, una nucleobase no complementaria se ubica en el segmento ala de un oligonucleótido antisentido gapmer.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido que son o son de hasta 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 nucleobases de longitud comprenden no más de 4, no más de 3, no más de 2 o no más de 1 nucleobase no complementaria en relación con un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico de GCGR o una parte especifica de este.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido que son o son de hasta 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 nucleobases de longitud comprenden no más de 6, no más de 5, no más de 4, no más de 3, no más de 2 o no más de
1 nucleobase no complementaria en relación con un ácido nucleico objetivo, como un ácido nucleico de GCGR o una parte específica de este.
Los compuestos antisentido proporcionados en la
presente también incluyen los que son complementarios con una parte de un ácido nucleico objetivo. Como se usa en la presente, "parte" se refiere a un número definido de nucleobases contiguas (es decir, unidas) dentro de una región o segmento de un ácido nucleico objetivo. Una "parte" también puede referirse a un número definido de nucleobases contiguas de un compuesto antisentido. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 8 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 12 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 13 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 14 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 15 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 16 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 17 nucleobases
de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 18 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 19 nucleobases de un segmento objetivo. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido son complementarios con al menos una parte de 20 nucleobases de un segmento objetivo. También se contemplan compuestos antisentido que son complementarios con al menos una parte de 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, o más nucleobases de un segmento objetivo o un intervalo definido por dos cualesquiera de estos valores .
Identidad
Los compuestos antisentido proporcionados en la presente también tienen un porcentaje de identidad definido con respecto a una secuencia de nucleótidos en particular, SEQ ID NO o compuesto representado por un número Isis especifico o parte de este. Como se usa en la presente, un compuesto antisentido es idéntico a la secuencia descrita en la presente si tiene la misma capacidad de emparejamiento de nucleobases. Por ejemplo, un ARN que contiene uracilo en lugar de timidina en una
secuencia de ADN descrita seria considerado idéntico a la secuencia de ADN ya que tanto el uracilo como la timidina se emparejan con la adenina. También se contemplan las versiones reducidas o aumentadas de los compuestos antisentido descritos en la presente así como los compuestos que tienen bases no idénticas en relación con los compuestos antisentido proporcionados en la presente. Las bases no idénticas pueden ser adyacentes las unas a las otras o estar dispersas por todo el compuesto antisentido. El porcentaje de identidad de un compuesto antisentido se calcula según el número de bases que tienen emparejamientos de bases idénticos en relación con la secuencia a la que se están comparando.
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido o partes de estos son al menos 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, 99 % o 100 % idénticos a uno o más de los compuestos antisentido o las SEQ ID NO, o una parte de estos, descritos en la presente.
Modificaciones
Un nucleósido es una combinación de base y azúcar. La parte de nucleobase (también conocida como "base") del nucleósido es comúnmente un resto de base heterocí clica . Los nucleótidos son nucleósidos que
incluyen además un grupo fosfato unido covalentemente a la parte de azúcar del nucleósido. Para aquellos nucleósidos que incluyen un azúcar pentofuranosilo, el grupo fosfato puede unirse al resto hidroxilo 2', 3' o 5' del azúcar. Se forman oligonucleótidos a través del enlace covalente de los nucleósidos adyacentes los unos de los otros, para formar un oligonucleótido polimérico lineal. Dentro de la estructura del oligonucleótido, por lo general se hace referencia a los grupos de fosfato como los formadores de los enlaces internucleósidos del oligonucleótido.
Las modificaciones a los compuestos antisentido abarcan las sustituciones o cambios a los enlaces internucleósidos, restos de azúcar o nucleobases. A menudo se prefieren los compuestos antisentido modificados en vez de las formas naturales por propiedades deseables como, por ejemplo, absorción celular mejorada, afinidad mejorada para dirigirse hacia el ácido nucleico y estabilidad aumentada en presencia de nucleasas o actividad de inhibición aumentada.
Los nucleósidos modificados químicamente también pueden emplearse para aumentar la afinidad de unión de un oligonucleótido antisentido reducido o trunco con su ácido nucleico objetivo. Por consiguiente, se pueden obtener resultados comparables con compuestos
antisentido más cortos que poseen dichos nucleósidos modificados químicamente.
Enlaces internucleósidos modificados
El enlace internucleósido de origen natural de ARN y ADN es un enlace de fosfodiéster de 3' a 5' . A menudo se seleccionan compuestos antisentido que tienen uno o más enlaces internucleósidos modificados, es decir, de origen no natural en vez de compuestos antisentido que poseen enlaces internucleósidos de origen natural debido a que poseen propiedades deseables como, por ejemplo, una mejor absorción celular, mejor afinidad con los ácidos nucleicos objetivo y un aumento de la estabilidad en presencia de nucleasas.
Los oligonucleótidos que tienen enlaces internucleósidos modificados incluyen enlaces internucleósidos que conservan un átomo de fósforo así como enlaces internucleósidos que no tienen un átomo de fósforo. Los ejemplos de enlaces internucleósidos que contienen fósforo incluyen, de modo no taxativo, fosfodiésteres , fos fotr i é s tere s , metil fosfonatos , fos foramidato y fos forotioatos . Los métodos de preparación de enlaces que contienen fósforo y los que no contienen fósforo son ampliamente conocidos.
En determinadas modalidades, los compuestos
antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden uno o más enlaces internucleósidos modificados. En determinadas modalidades, los enlaces internucleósidos modificados son enlaces de fosforotioato . En determinadas modalidades, cada enlace internucleósido de un compuesto antisentido es un enlace internucleósido de fosforotioato .
Restos con azúcar modificado
Los compuestos antisentido proporcionados en la presente pueden contener de manera opcional uno o más nucleósidos donde el grupo de azúcar ha sido modificado. Tales nucleósidos con azúcar modificado pueden impartir una mejor estabilidad de nucleasas, un aumento en la afinidad de unión o alguna otra propiedad biológica beneficiosa para los compuestos antisentido. En determinadas modalidades, los nucleósidos comprenden un resto de anillo de ribofuranosa modificado químicamente. Los ejemplos de anillos de ribofuranosa modificados químicamente incluyen, de modo no taxativo, la adición de grupos sustituyentes (que incluyen a los grupos sustituyentes de 5' y 2') ; la formación de puentes de átomos de anillo no gemínales para formar ácidos nucleicos bicíclicos (BNA); el reemplazo del átomo de oxígeno del anillo ribosilo con S, N(R) , o C(R1) (R)2 (R
H, alquilo C 1 - C 12 o un grupo protector); y combinaciones de estos. Los ejemplos de azúcares modificados químicamente incluyen nucleósido sustituido con 2 ' -F-51 -metilo (véase, Solicitud Internacional PCT WO 2008/101157, publicada el 21/8/08 para otros nucleósidos 5', 2'-bis sustituidos descritos), reemplazo del átomo de oxígeno del anillo ribosilo con S con una sustitución adicional en la posición 2' (véase, Solicitud de Patente estadounidense publicada US2005/0130923, publicada el 16 de junio de 2005) o, alternativamente, sustitución en 5' de un BNA (véase, Solicitud Internacional PCT WO 2007/134181, publicada el 22/11/07, donde el LNA se sustituye con, por ejemplo, un grupo 5'-metilo o 5'-vinilo) .
Los ejemplos de nucleósidos que tienen restos de azúcar modificados incluyen, de modo no taxativo, nucleósidos que comprenden grupos sustituyentes 5'-vinilo, 5' -metilo ( R o S), 4'-S, 2 ' -F , 2 · -OCH3 y 2'-0( CH 2)20CH3. El sustituyente en la posición 2' puede también seleccionarse de alilo, amino, azido, tio, 0-alilo, O-alquilo C 1 - C 10 , 0CF3, 0(CH2)2SCH3, 0(CH2)2-0-N ( Rm ) ( Rn ) , y 0-CH2-C (=0) -N ( Rm) ( Rn) , dónde cada Rm y Rn es, independientemente, H o alquilo C 1 - C 10 sustituido o no sustituido.
Tal como se usa en la presente, "nucleósidos
biciclicos" hace referencia a nucleósidos modificados que comprenden un resto de azúcar biciclico. Los ejemplos de nucleósidos biciclicos incluyen, de modo no taxativo, nucleósidos que comprenden un puente entre los átomos del anillo ribosilo 4' y 2'. En determinadas modalidades, los compuestos antisentido proporcionados en la presente incluyen uno o más nucleósidos biciclicos donde el puente comprende un nucleósido biciclico de 4' a 2'. Los ejemplos de dichos nucleósidos biciclicos de 4' a 2' incluyen, de modo no taxativo, uno de las fórmulas: 41 - ( CH2 ) -0-2 ' (LNA); 4 ' - ( CH2 ) -S-2 ' ; 4'-(CH2)2-0-2' (ENA) ; ' -CH ( CH3 ) -0- 2 ' y 4 ' -CH ( CH2OCH3 ) -0-2 ' , y sus análogos (véase, la patente estadounidense 7,399,845, emitida el 15 de julio de 2008); 4 ' -C ( CH3 ) ( CH3 ) -0-2 ' , y sus análogos (véase, la Solicitud Internacional PCT publicada W0200 / 006478 , publicada el 8 de enero de 2009); ' -CH2-N (0CH3) -2 ' , y sus análogos (véase, la Solicitud Internacional PCT publicada W02008 / 15072 , publicada el 11 de diciembre de 2008); 4 ' -CH2-0-N ( CH3 ) -2' (véase, la Solicitud de patente estadounidense publicada US2004 / 0171570 , publicada el 2 de setiembre de 2004); 4 ' -CH2-N (R) -0-2 ' , donde R es H, alquilo C1-C12, o un grupo protector (véase, la patente estadounidense 7,427,672, emitida el 23 de setiembre de 2008); 4 ' -CH2-C(H) (CH3)-2' (véase, Chattopadhyaya , et ál . , J. Org.
Chem., 2009, 74, 118-134); y 41 -CH2-C (=CH2) -2 · , y sus análogos (véase, la Solicitud Internacional PCT publicada WO 2008/154401, publicada el 8 de diciembre de 2008) . Véase también, por ejemplo: Singh et ál., Chem. Commun., 1998 , 4, 455-456; Koshkin et ál . , Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et ál., Proc. Nati. Acad. Sci. U. S. A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et ál., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et ál., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et ál., J. Am. Chem. Soc, 129 (26) 8362-8379 (4 de julio de 2007); Elayadi et ál., Curr. Opinión Invens . Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et ál., Chem. Biol., 2001, 8, 1-7; Orum et ál., Curr. Opinión Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; patentes estadounidenses N.° U.S. 6,670,461, 7,053,207, 6,268,490, 6,770,748, 6,794,499, 7,034,133, 6,525,191, 7,399,845; solicitudes internacionales PCT publicadas WO 2004/106356, WO 94/14226, WO 2005/021570, y WO 2007/134181; publicaciones de patentes estadounidenses N.° US2004 / 0171570 , US2007 /0287831 y US2008/0039618 ; y patentes estadounidenses N.° de serie 12/129,154, 60/989,574, 61/026,995, 61/026,998,
61/056,564, 61/086,231, 61/097,787 y 61/099,844; y solicitudes internacionales PCT N.° PCT /US 2008 / 064591 , PCT/US2008/066154 y PCT /US2008 / 068922. Cada uno de los nucleósidos biciclicos antecedentes se pueden preparar
con una o más configuraciones estereoquímicas de azúcar que incluye por ejemplo oí-L-ribofuranosa y ß-D-ribofuranosa (véase la solicitud internacional PCT PCT/DK98/00393, publicada el 25 de marzo de 1999 como WO 99/14226) .
En determinadas modalidades, los restos de azúcar bicíclicos de los nucleósidos BNA incluyen, de modo no taxativo, compuestos que tienen al menos un puente entre las posiciones 4' y 2' del resto de azúcar de pento furanos i lo donde dichos puentes comprenden independientemente 1 o de 2 a 4 grupos unidos independientemente seleccionados de -[C(Ra) (Rb)ln-, -C ( „) =C( b) -, -C(Ra)=N-, -C(=NRa)-, -C(=0)-, -C(=S)-, -O-, -Si(Ra) 2-, -S(=0)x-, y -N ( Ra ) - ;
donde :
x es 0 , 1 o 2 ;
n es 1, 2, 3 o 4;
cada Ra y R es, independientemente, H, un grupo protector, hidroxilo, alquilo C1-C12 , alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12 , alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12 , alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20 , arilo C5-C20 sustituido, radical de heterociclo , radical de heterociclo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, radical de alicíclico CS-CT ,
radical de alicíclico C5-C7 sustituido, halógeno, OJi, NJ1J2, SJi, N3, COOJi, acilo (C(=0) -H) , acilo sustituido, CN, sulfonilo (S(=0) 2~Ji) / o sulfoxilo (S(=0) -Ji) ; y
cada Ji y J2 es, independientemente, H, alquilo Ci-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, arilo C5-C20, arilo C5-C20 sustituido, acilo (C(=0)-H), acilo sustituido, un radical de heterociclo, un radical de heterociclo sustituido, aminoalquilo C1-C12, aminoalquilo C1-C12 sustituido, o un grupo protector.
En determinadas modalidades, el puente de un resto de azúcar biciclico es - [ C (Ra ) ( Rb ) ] n~ , - [ C (Ra) (Rb) ] n-0-, -C (RaRb) -N (R) -O- o -C (RaRb) -0-N (R) - . En determinadas modalidades, el puente es 4'-CH2-2', 41 - ( CH2 ) 2-2 ' , 4'-(CH2 ) 3-2', 4' -CH2-0-2', 4 ' - (CH2) 2-0-2 ' , ' -CH2-0- ( R) -2 ' , y 4 ' -CH2- (R) -0-2 ' -, donde cada R es, independientemente, H, un grupo protector o alquilo Ci-C12.
En determinadas modalidades, los nucleósidos biciclicos se definen adicionalmente mediante una configuración isomérica. Por ejemplo, un nucleósido que comprende un puente 4'-2' metilenoxi, puede encontrarse en la configuración a-L O en la configuración ß-D. Previamente, los BNA a-L-meti lenoxi ( ' -CH2-0-2 ' ) se
habían incorporado a los oligonucleótidos antisentido que mostraban actividad antisentido (Frieden et ál . , Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372) .
En determinadas modalidades, los nucleósidos biciclicos incluyen, de modo no taxativo, (A) BNA a-L-Metilenoxi ( 4 ' -CH2-0-2 ' ) , (B) BNA ß-D- etilenoxi (4'-CH2-0-2') , (C) BNA Etilenoxi ( ' - (CH2) 2-0-2' ) , (D) BNA Aminooxi ( 4 ' -CH2-0-N ( R) -2 ' ) , (E) BNA Oxiamino (4'-CH2-N(R)-0-2' ) , (F) BNA Me t i 1 ( me t i 1 enoxi ) ( 4 ' -CH ( CH3 ) -0-2 ' ) , (G) BNA metilentio ( 4 ' -CH2-S-2 ' ) , (H) BNA metilenamino (4' -CH2-N (R) -2' ) , (I) BNA de metilo carbociclico (4'-CH2-CH (CH3) -2' ) , y (J) BNA de propileno carbociclico ( 4 ' - ( CH2 ) 3 - 2 ' ) tal como se ilustra más adelante.
donde Bx es el resto base y R es, independientemente, H, un grupo protector o alquilo C1-C12.
En determinadas modalidades, el nucleósido biciclico tiene la Fórmula I:
donde :
Bx es un resto base heterocí clico;
-Qa-Qb-Qc- es -CH2-N (Rc) -CH2-, -C ( =0) -N (Rc) -CH2- , -CH2-O-N (Rc) -, -CH2-N (Rc) -0-, o -N (Rc) -O-CH2;
Rc es alquilo C1-C12 o un grupo protector amino; y
Ta y T son cada uno, independientemente, H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente a un medio de soporte.
En determinadas modalidades, el nucleósido biciclico tiene la Fórmula II:
donde :
Bx es un resto base heterocíclico;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente con respecto a un medio de soporte.
Za es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 sustituido, acilo, acilo sustituido, amida sustituida, tiol, o tio sustituido.
En una modalidad, cada uno de los grupos
sustituidos es, independientemente, mono o poli sustituido con grupos sustituyentes independientemente seleccionados de halógeno, oxo, hidroxilo, 0JC, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, y JeC (=X) N JcJd, donde cada Jc, J<¡, Y Je es, independientemente, H, alquilo C1-C6 , o alquilo Ci-C6 sustituido y X es 0 o NJC.
En determinadas modalidades, el nucleósido biciclico tiene la Fórmula III:
donde :
Bx es un resto base heterociclico ;
Ta y b son cada uno, independientemente, H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente a un medio de soporte.
Zb es alquilo C1-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2- C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6 sustituido o acilo (C(=0)-) sustituido.
En determinadas modalidades, el nucleósido biciclico tiene la Fórmula IV:
donde :
Bx es un resto base heteroci el i co ;
Ta y b son cada uno, independientemente, H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente con un medio de soporte.
Ra es alquilo C 1-C6, alquilo C 1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C 2-C6 sustituido, alquinilo C 2-C6, o alquinilo C2-C6 sustituido;
cada qa, qt>, qc y qd es, independientemente, H, halógeno, alquilo C 1-C6, alquilo C 1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C 2-C6 sustituido, alquinilo C 2-C6, o alquinilo C 2-C6 sustituido, alcoxilo C 1-C6, alcoxilo C 1-C6 sustituido, acilo, acilo sustituido, aminoalquilo C 1-C6, o aminoalquilo C 1-C6 sustituido;
En determinadas modalidades, el nucleósido biciclico tiene la Fórmula V:
donde :
Bx es un resto base heterociclico;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente con un medio de soporte.
qa, qb, qe y qf son cada uno, independientemente, hidrógeno, halógeno, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12, alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, alcoxi Ci-C12, alcoxi C1-C12 sustituido, OJj, SJj, SOJj, S02Jj, NJjJk, N3, CN, C(=0)OJj, C(=0)NJjJk, C(=0)Jj, 0-C (=0) NJj Jk, N (H) C (=NH) NJjJk, N (H) C (=0) NJj Jk o N (H) C (=S ) NJj Jk;
0 qe y f en conjunto son =C(qg) (qh) ;
qg y qh son cada uno, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12, o alquilo C1-C12 sustituido.
Se ha descrito la síntesis y preparación de los monómeros de BNA de metilenoxi ( 4 ' -CH2-O-2 ' ) adenina, citosina, guanina, 5-metil-citosina, timina y uracilo, junto con su ol i gomer i zaci ón y propiedades de reconocimiento de ácido nucleico (véase, por ejemplo, Koshkin et ál., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). Los ABN y su preparación se describen en los documentos O 98/39352 y WO 99/14226.
También se han preparado análogos de BNA
metilenoxi ( 4 ' -CH2 -0- 2 ' ) , BNA metilenoxi ( 4 ' -CH2 -0-2 ' ) y 2'-tio-BNA (véase, por ejemplo, Kumar et ál., Bioorg. Med. Chem. Lett . , 1998, 8, 2219-2222). También se ha descrito la preparación de análogos de nucleósidos bloqueados que comprenden dúplexes de oligodesoxinucleótidos como sustratos para las polimerasas de ácido nucleico (véase, por ejemplo, Wengel et ál., WO 99/14226). Además, en la técnica se ha descrito la síntesis de 2 ' -amino-BNA, un análogo de oligonucleótido de alta afinidad restringido de manera conformacional (véase, por ejemplo, Singh et ál., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Además, los BNA 2'- amino y 2 ' -meti lamino han sido preparados y la estabilidad térmica de sus dúplexes con hebras de ARN y ADN complementario ya se había constatado.
En determinadas modalidades, el nucleósido bicíclico tiene la Fórmula VI:
Bx es un resto base heterociclico;
Ta y Tb son cada uno, independientemente, H, un
grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado, un grupo de fósforo reactivo, un resto de fósforo, o un enlace covalente con un medio de soporte.
cada qi, qj, qk y qi es, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12, alquilo C1-C12 sustituido, alquenilo C2-C12 , alquenilo C2-C12 sustituido, alquinilo C2-C12, alquinilo C2-C12 sustituido, alcoxilo C1-C12 , alcoxilo C1-C12 sustituido, 0Jj , SJj, SOJj, SChJj, NJjJk, N3, CN, C(=0)OJj, C(=0)NJjJk, C(=0)Jj, 0-C ( =0 ) NJj Jk , N (H) C (=NH) NJjJk, N (H) C (=0) NJ3 Jk o N (H) C (=S ) Jj Jk; y
qi y qj o qi y qk en conjunto son =C(qg) (qh) , donde qg y qh son cada uno, independientemente, H, halógeno, alquilo C1-C12, o alquilo C1-C12 sustituido.
Se han descrito un nucleósido biciclico carbociclico tiene un puente ' - {CH2) 3-2' y el análogo alquenilo, el puente 4 ' -CH=CH-CH2-2 ' (véase, por ejemplo, Freier et ál., Nucleic Acids Research, 1997 , 25(22), 4429-4443 y Albaek et ál., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740) . También se han descrito la síntesis y preparación de nucleósidos bicíclicos carbocí el i eos junto con su ol i gomer i zac ión y estudios bioquímicos (véase, por ejemplo, Srivastava et ál., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379) .
Como se usa en la presente, "nucleósido biciclico 4' -2'" o "nucleósido biciclico 4' a 2'" se refiere a un
nucleósido bicíclico que comprende un anillo de furanosa que comprende un puente que conecta el átomo 2' y el átomo de carbono 4 ' .
Como se usa en la presente, "nucleósidos monoci el i co s " se refiere a nucleósidos que comprenden restos de azúcar modificados que no son restos de azúcar biciclicos. En determinadas modalidades, el resto de azúcar o análogo del resto de azúcar de un nucleósido puede ser modificado o sustituido en cualquier posición.
Tal como se usa en la presente "azúcar modificada en 2'" significa un azúcar de furanosilo modificada en la posición 2'. En determinadas modalidades, tales modificadores incluyen sus tituyentes seleccionados de: un haluro, incluyendo, de modo no taxativo alcoxi sustituido y no sustituido, tioalquilosustituido y no sustituido, aminoalquilo sustituido y no sustituido, alquilo sustituido y no sustituido, alilo sustituido y no sustituido, y alquinilo sustituido y no sustituido. En determinadas modalidades, las modificaciones en 21 se seleccionan de sustituyentes que incluyen, de modo no taxativo: O [ ( CH2 ) nO] mCH3 , 0(CH2)nNH2, 0(CH2)nCH3,
0(CH2)nONH2, 0CH2C (=0) N (H) CH3 y 0 ( CH2 ) nO [ ( CH2 ) nCH3 ] 2 , donde n y m son de 1 a alrededor de 10. Otros grupos sustituyentes en 2' también pueden seleccionarse de: alquilo C1-C12, alquilo sustituido, alquenilo, alquinilo,
alcarilo, aralquilo, O-alcarilo u O-aralquilo, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ON02, N02, N3, NH2, heterocicloalquilo, heterocicloalcarilo, aminoalquilamino , pol ia 1 qui lamino , sililo sustituido, un grupo de escisión de ARN, un grupo informante, un intercalador, un grupo para mejorar las propiedades farmacocinéticas y un grupo para mejorar las propiedades farmacodinámicas de un compuesto antisentido y otros sust ituyentes que tengan propiedades similares. En determinadas modalidades, los nucleósidos modificados comprenden una cadena lateral 2 ' -MOE (véase, por ejemplo, Baker et ál., J. Biol.) Chem., 1997, 272, 11944-12000). Dicha sustitución en 2 ' -MOE ha sido descrita como una que mejora la afinidad de unión en comparación con nucleósidos no modificados y con otros nucleósidos modificados, como 2 ' -O-metilo , 0-propilo y O-aminopropilo . Los oligonucleótidos que tienen el sustituyente de 2 ' -MOE también han demostrado se inhibidores antisentido de la expresión génica con características prometedores para su uso in vivo (véase, por ejemplo, Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et ál., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et ál., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; y Altmann et ál., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926) .
Tal como se usa en la presente, un "nucleósido de tetrahidropirano modificado" o "nucleósido de THP modificado" significa un nucleósido que tiene un "azúcar" de tetrahidropirano de seis miembros sustituido con el residuo de pento furanos i lo en nucleósidos normales (un sustituto de azúcar) . Los nucleósidos de THP modificado incluyen, de modo no taxativo, lo que se hace referencia en la técnica como ácido nucleico de hexitol (HNA) , ácido nucleico de anitol (ANA) , ácido nucleico de manitol (MNA) (véase Leumann, CJ. Bioorg. & Med. Chem. (2002) 10:841-854), flúor HNA (F-HNA), o aquellos compuestos con la Fórmula X:
Fórmula X:
donde independientemente para cada uno de dicho al menos un análogo de nucleósido de tetrahidropirano de la Fórmula X:
Bx es un resto base heterociclico;
T3 y T4 son cada uno, independientemente, un grupo de unión a internucleósidos que unen el análogo de
nucleósido de tetrahidropirano al compuesto antisentido o uno de T3 y 4 es un grupo de unión a internucleósidos que une el análogo de nucleósido de tetrahidropirano con el compuesto antisentido y el otro de T3 y T es H, un grupo protector hidroxilo, un grupo conjugado unido o un grupo del extremo 5 ' o 3 ' ;
qi, q2, q3, q4, qs , qe y q? son cada uno, independientemente, H, alquilo C1-C6, alquilo C1-C6 sustituido, alquenilo C2-C6, alquenilo C2-C6 sustituido, alquinilo C2-C6, o alquinilo C2-C6 sustituido; y
uno de Ri y R2 es hidrógeno y el otro se selecciona de halógeno, alcoxi sustituido o no sustituido, NJ1J2, SJi, N3, OC(=X)Ji, OC(=X)NJiJ2, NJ3C ( =X ) N Jx J2 , y CN, donde X es O, S, o NJi, y cada Ji, J2, y J3 es, independientemente, H o alquilo C1-C6.
En determinadas modalidades, se proporcionan los nucleósidos THP modificados de Fórmula X donde qm, qn, qp, qr, qs, qt, and qu son cada uno H. En determinadas modalidades, al menos uno de qm, n , C[p/ Pir, ¾s / qt, y ¾u es distinto a H. En determinadas modalidades, al menos uno de qm, qn, qP, qr, qs, qt y qu es metilo. En determinadas modalidades, se proporcionan nucleósidos de THP de Fórmula X donde uno de Ri y R2 es F. En determinadas modalidades Ri es flúor y R2 es H, Ri es metoxi y R2 es H y Ri es metoxietoxi y R2 es H.
Como se utiliza en la presente, "modificado en 2'" o "sustituido en 2'" hace referencia a un nucleósido que comprende un azúcar que comprende un sustituyente en la posición 2' diferente de H u OH. Los nucleósidos modificados en 2' incluyen, de modo no taxativo, nucleósidos biciclicos donde el puente que conecta dos átomos de carbono del anillo de azúcar conecta al carbono en 2' con otro carbono del anillo de azúcar y los nucleósidos con sustituyentes en 2' no puenteados, como alilo, amino, azida, tio, O-alilo, O-alquilo Ci-Cio, -OCF3, 0- (CH2) 2-O-CH3, 2 ' -0 (CH2) 2SCH3, 0-(CH2)2-0- N(Rra) (Rn) , o 0-CH2-C (=0) -N (Rm) (Rn) , donde cada Rm y Rn es, independientemente, H o alquilo C1-C10 sustituido o no sustituido. Los nucleósidos modificados en 2' pueden comprender adi cionalmente otras modificaciones, por ejemplo, en otras posiciones del azúcar y/o en la nucleobase .
Tal como se usa en la presente, "2'-F" se refiere a un azúcar que comprende un grupo fluoro en la posición 2 ' .
Como se usa en la presente, "2'-0Me" o "2'-OCH3" o "2 ' -0-metilo" cada uno hace referencia a un azúcar que comprende un grupo -OCH3 en la posición 2' del anillo de azúcar.
Como se usa en la presente, "oligonucleótido" se refiere
a un compuesto que comprende una pluralidad de nucleósidos enlazados. En determinadas modalidades, se modifica uno o más de la pluralidad de nucleósidos. En determinadas modalidades, un oligonucleót ido comprende uno o más ribonucleósidos (ARN) y/o desoxirribonucleósidos (ADN) .
En la técnica se conocen muchos otros sistemas de anillos de azúcar sustitutos biciclicos y triciclicos que pueden utilizarse para modificar los nucleósidos para su incorporación en los compuestos antisentido (véase, por ejemplo, el articulo de reseña: Leumann, J. C, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2002, 10, 841-854) . Tales sistemas de anillo pueden atravesar varias sustituciones adicionales para mejorar la actividad.
Los expertos en la técnica conocen métodos para la preparación de azúcares modificados.
En los nucleótidos que tienen restos de azúcar modificados, los restos nucleobase (naturales, modificados o una combinación de estos) se mantienen para la hibridación con un ácido nucleico objetivo adecuado .
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido comprenden uno o más nucleótidos que tienen restos de azúcar modificados. En determinadas modalidades, el resto de azúcar modificado es 2 ' -MOE . En
determinadas modalidades, los nucleótidos modificados con 2 ' - OE se disponen en un motivo de gapmer. En determinadas modalidades, el resto de azúcar modificado es un cEt. En determinadas modalidades, los nucleótidos modificados cEt están dispuestos a través de las alas de un motivo gapmer.
Nucleobases modificadas
Las modificaciones o sustituciones de nucleobase (o base) se pueden diferenciar estructuralmente , de todas formas son funcionalmente intercambiables, de nucleobases de origen natural o sintéticas sin modificar. Tanto las nucleobases naturales y modificadas son capaces de participar en la unión de hidrógeno. Tales modificaciones de nucleobases pueden impartir la estabilidad de las nucleasas, la afinidad de unión o alguna otra propiedad biológica beneficiosa para los compuestos antisentido. Las nucleobases modificadas incluyen nucleobases sintéticas y naturales como, por ejemplo, 5-metilcitosina (5-me-C). Determinadas sustituciones de nucleobases, que incluyen sustituciones de 5-metilcitosina, son particularmente útiles para aumentar la afinidad de unión de un compuesto antisentido con respecto a un ácido nucleico objetivo. Por ejemplo, las sustituciones de 5-metilcitosina han
demostrado que aumentan la estabilidad del dúplex de ácido nucleico en 0,6-1,2 °C (Sanghvi, Y.S., Crooke, S.T. y Lebleu, B., eds . , Antisense Research and Applications, CRC Press, Boca Ratón, 1993, pp . 276-278) .
Las nucleobases adicionales no modificadas incluyen
5-hidroxime t i 1 citosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina , 6-metilo y otros derivados de alquilo de adenina y guanina, 2-propilo y otros derivados de alquilo de adenina y guanina, 2 - ti ouraci lo , 2-tiotimina y 2-tiocitosina , 5-halouracilo y citosina, 5-propinilo ( -C=C-CH3 ) uracilo y citosina y otros derivados de alquinilo de bases de pirimidina, 6-azo uracilo, citosina y timina, 5-uracilo (pseudouracilo) , 4-tiouracilo, 8-halo, 8-amino, 8-tiol, 8 - 1 ioalqui 1 o , 8-hidroxilo y otras adeninas y guaninas 8 -s us t i t ui das , 5-halo particularmente 5-bromo, 5- 1 r i fluoromet i 1 o y otros uracilos y citosinas 5-sustituidos , 7-metilguanina y 7-meti ladenina , 2-F-adenina, 2-amino-adenina, 8-azaguanina y 8 -a zaadenina , 7 -dea zaguanina y 7 -dea zaadenina y 3-deazaguanina y 3-deazaadenina .
Los restos de bases heterocí clicas también pueden incluir aquellas en las cuales la base de purina o pirimidina es reemplazada con otros he te roe i c lo s , por ejemplo 7-deaza-adenina, 7 -dea zaguanos ina , 2-aminopi r idina y 2-piridona. Las nucleobases que son
particularmente útiles para aumentar la afinidad de unión de los compuestos antisentido incluyen pirimidinas 5-sustituidas , 6-azapirimidinas y purinas N-2, N-6 y 0-6 sustituidas, que incluyen 2 aminopropi ladenina , 5-prop ini luraci lo y 5-propinilcitosina .
En determinadas modalidades, los compuestos antisentido dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden una o más nucleobases modificadas. En determinadas modalidades, los oligonucleótidos antisentido de espacio más amplio dirigidos a un ácido nucleico de GCGR comprenden una o más nucleobases modificadas. En determinadas modalidades, la nucleobase modificada es 5-metilcitosina . En determinadas modalidades, cada citosina es una 5-metilcitosina.
Composiciones y métodos para formular las composiciones farmacéuticas
Los oligonucleótidos antisentido pueden mezclarse con una sustancia inerte o activa farmacéuticamente aceptable para la preparación de composiciones farmacéuticas o formulaciones. Las composiciones y métodos para la formulación de composiciones farmacéuticas dependen de varios criterios, que incluyen, de modo no taxativo la vía de administración, la extensión de la enfermedad o la dosis que se va a
administrar .
El compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico de GCGR puede utilizarse en las composiciones farmacéuticas mediante la combinación del compuesto antisentido con un diluyente o portador farmacéuticamente aceptable. Un diluyente farmacéuticamente aceptable incluye solución salina tamponada con fosfato (PBS) . PBS es un diluyente adecuado para utilizarse en composiciones que se administran parenteralmente . Por consiguiente, en una modalidad, en los métodos descritos en la presente se emplea una composición farmacéutica que comprende un compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico del GCGR y un diluyente farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, el diluyente farmacéuticamente aceptable es PBS. En determinadas modalidades, el compuesto antisentido es un oligonucleótido antisentido.
Las composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos antisentido abarcan cualquier sal, éster farmacéuticamente aceptables o sales de tales ésteres o cualquier otro oligonucleótido que, tras la administración a un animal, incluido un humano, tiene la capacidad de proporcionan (directa o indirectamente) el metabolito activo biológicamente o residuo de este. Por consiguiente, por ejemplo, la descripción también se
refiere a sales farmacéuticamente aceptables de compuestos antisentido, profármacos, sales farmacéuticamente aceptables de dichos profármacos y otros bioequivalentes . Las sales farmacéuticamente aceptables adecuadas incluyen, de modo no taxativo, sales de sodio y potasio.
Las sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos descritos en la presente se pueden preparar mediante métodos conocidos en la técnica. Por una reseña de sales farmacéuticamente aceptables, véase Stahl y Wermuth, Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use (Wiley-VCH, Weinheim, Alemania, 2002) . Las sales de sodio de oligonucleótidos antisentido son útiles y aceptadas para su administración terapéutica a humanos. Por consiguiente, en una modalidad los compuestos descritos en la presente se hallan en forma de una sal de sodio.
Un profármaco puede incluir la incorporación de nucleósidos adicionales en uno ambos extremos del compuesto antisentido que son escindidos por nucleasas endógenas dentro del cuerpo, para formar el compuesto antisentido activo.
Compuestos antisentido conjugados
Los compuestos antisentido pueden estar enlazados
de forma covalente a uno o más restos o conjugados que mejoran la actividad, la distribución celular o absorción celular de los oligonucleótidos antisentido resultantes. Los grupos conjugados típicos incluyen restos de colesterol y restos lípidos. Los grupos conjugados adicionales incluyen carbohidratos, fosfolípidos , biotina, fenazina, folato, fenantr idina , antraquinona , acridina, f luoresceínas , rodaminas, cumarinas y tintes.
Los compuestos antisentido pueden también ser modificados para que tengan uno o más grupos estabilizadores que se encuentran unidos por lo general con uno o ambos extremos de compuestos antisentido para mejorar las propiedades como, por ejemplo, la estabilidad de la nucleasa. En los grupos estabilizadores se incluyen estructuras de casquete. Estas modificaciones en el extremo protegen al compuesto antisentido, que tiene un ácido nucleico en el extremo, de la degradación de exonucleasas , y puede colaborar en la administración y/o localización dentro de una célula. El casquete puede estar presente en el extremo 5' (casquete 5') o en el extremo 3' (casquete 3') o puede estar en ambos términos. Las estructuras de casquete son conocidas en la técnica e incluyen, por ejemplo, casquetes abásicos desoxi invertidos. Otros grupos
estabilizadores de 3' y 5' que pueden utilizarse para poner un casquete en uno o ambos extremos de un compuesto antisentido para impartir estabilidad de nucleasas incluyen los descritos en WO 03/004602 publicado el 16 de enero de 2003.
Cultivo celular y tratamiento con compuestos antisentido Los efectos de los compuestos antisentido en el nivel, actividad o expresión de los ácidos nucleicos de GCGR pueden ser analizados in vitro en una variedad de tipos celulares. Los tipos celulares utilizados para dichos análisis se encuentran disponibles por parte de los vendedores comerciales (por ejemplo, American Type Culture Collection, anassus, VA; Zen-Bio, Inc., Research Triangle Park, NC; Clonetics Corporation, Walkersville, MD) y las células se cultivan de acuerdo con las instrucciones del vendedor utilizando reactivos disponibles en el mercado (por ejemplo, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA) . Los ejemplos de tipos celulares incluyen, de modo no taxativo, células HepG2 y hepatocitos primarios.
Análisis in vitro de oligonucleótidos antisentido
En la presente se describen métodos para el tratamiento de células con oligonucleótidos antisentido,
que pueden ser modificadas de manera adecuada para el tratamiento con otros compuestos antisentido.
Por lo general, las células son tratadas con oligonucleótidos antisentido cuando las células alcanzan aproximadamente 60-80 % de confluencia en el cultivo.
Un reactivo comúnmente utilizado para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye el reactivo de transfección de lípidos catiónicos LI POFECTIN® (Invitrogen, Carlsbad, CA) . Los oligonucleótidos antisentido se mezclan con LIPOFECTIN® en OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para lograr la concentración final deseada de oligonucleótido antisentido y una concentración de LIPOFECTIN® que normalmente varia de 2 a 12 ug/mL por 100 nM de oligonucleótido antisentido.
Otro reactivo utilizado para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye LI OFECTA INE 2000® (Invitrogen, Carlsbad, CA) . El oligonucleótido antisentido se mezcla con LI POFECTAMINE 2000® en un medio reducido en suero OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para lograr la concentración deseada de oligonucleótido antisentido y una concentración de LI POFECTAMINE® que normalmente varia de 2 a 12 ug/mL por 100 nM de oligonucleótido antisentido.
Otro reactivo utilizado para introducir oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye Cytofectin® (Invitrogen, Carlsbad, CA) . El ol igonucleó t ido antisetido se mezcla con Cytofectin® en un medio reducido en suero OPTI-MEM® 1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) para lograr la concentración deseada de oligonucleótido antisentido y una concentración de Cytofectin® que normalmente varia de 2 a 12 ug/mL por 100 nM de oligonucleótido antisentido.
Otra técnica utilizada para introducir los oligonucleótidos antisentido en células cultivadas incluye la elect roporación .
Las células se tratan con oligonucleótidos antisentido mediante métodos de rutina. En general, las células se cosechan luego de 16-24 horas del tratamiento con oligonucleótidos antisentido, momento en el cual se miden los niveles de ARN o proteínas de los ácidos nucleicos objetivo mediante métodos conocidos en la técnica y descritos en la presente. En general, cuando los tratamientos se llevan a cabo repetidas veces, los datos se presentan como el promedio de los tratamientos repetidos .
La concentración de oligonucleótido antisentido utilizada varía según la línea celular. Los métodos para determinar la concentración de oligonucleótido
antisentido óptima para una linea celular en particular se conocen en la técnica. Los oligonucleótidos antisentido se utilizan comúnmente en concentraciones que varían de 1 nM a 300 nM cuando se transfectan con LIPOFECTAMINE 2000®, Lipofectin o Cytofectin. Los oligonucleótidos antisentido se utilizan en concentraciones más altas que varían de 625 a 20.000 nM cuando se transfectan utilizando electroporación .
Aislamiento de ARN
El análisis de ARN se puede llevar a cabo en ARN celular total o poli (A) + ARNm . Los métodos de aislamiento de ARN se conocen en la técnica. El ARN se prepara mediante el uso de métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, usando el Reactivo TRIZOL® (Invitrogen, Carlsbad, CA) de acuerdo con los protocolos recomendados por el fabricante.
Análisis de la inhibición de niveles o expresión establecidos como objetivo
Los niveles de inhibición o expresión de un ácido nucleico de GCGR pueden ser analizados de una variedad de formas conocidas en la técnica. Por ejemplo, los niveles de ácido nucleico establecidos como objetivo pueden cuantificarse mediante, por ejemplo, análisis de
transferencia Northern, reacción en cadena de la polimerasa competitiva (PCR) o PCR en tiempo real cuantitati a. El análisis de ARN se puede llevar a cabo en ARN celular total o poli (A) + ARNm. Los métodos de aislamiento de ARN se conocen en la técnica. El análisis de transferencia Northern también es rutinario en la técnica. El PCR en tiempo real cuantitativa puede lograrse de manera conveniente usando el Sistema de Detección de Secuencia ABI PRISM® 7600, 7700, o 7900 disponible en el mercado, de PE-Applied Biosystems, Foster City, CA y se utiliza de conformidad con las instrucciones del fabricante.
Análisis PCR en tiempo real cuantitativo de niveles de ARN objetivo
La cuanti f icación de los niveles de ARN objetivo puede lograrse mediante PCR en tiempo real cuantitativa mediante el uso del Sistema de Detección de Secuencias
ABI PRISM® 7600, 7700 o 7900 (PE-Applied Biosystems, Foster City, CA) de acuerdo con las instrucciones de fabricante. Los métodos de PCR en tiempo real cuantitativa se conocen en la técnica.
Previamente a la PCR en tiempo real, el ARN aislado se somete a una reacción con transcriptasa inversa (RT), que produce ADN complementario (ADNc) que posteriormente
se utiliza como el sustrato para la amplificación por PCR en tiempo real. La las reacciones con RT y PCR en tiempo real se llevan a cabo de manera secuencial en el mismo pocilio de muestras. Los reactivos de RT y PCR en tiempo real se obtienen de Invitrogen (Carlsbad, CA) . Las reacciones de RT y PCR en tiempo real se llevan a cabo mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica .
Las cantidades de gen (o ARN) establecidas como objetivo y obtenidas mediante PCR en tiempo real se normalizan mediante el uso del nivel de expresión de un gen cuya expresión sea constante, como la ciclofilina A o mediante la cuanti ficación de ARN total mediante el uso de RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Carlsbad, CA) . La expresión de la ciclofilina A se cuantifica mediante PCR en tiempo real, que se puede ejecutar simultáneamente con el objetivo, por multiplexación o por separado. El ARN total se cuantifica usando el reactivo de cuantificación de ARN RIBOGREEN® (Invitrogen, Inc. Eugene, OR) . Los métodos para cuantificar ARN mediante RIBOGREEN® se describen en Jones, L.J., et ál, (Analytical Biochemistry , 1998, 265, 368-374). Se utiliza un instrumento CYTOFLUOR® 4000 (PE Applied Biosystems) para medir la fluorescencia de RIBOGREEN®.
Las sondas y cebadores se diseñan para que se
hibriden con un ácido nucleico de GCGR. Los métodos para diseñar sondas y cebadores para la PCR en tiempo real se conocen en la técnica y pueden incluir el uso de software como PRIMER EXPRESS® Software (Applied Biosystems, Foster City, CA) .
Análisis de los niveles de proteina
La inhibición antisentido de los ácidos nucleicos de GCGR puede ser evaluada mediante la medición de los niveles de proteina de GCGR. Los niveles de proteina de CGCR pueden ser evaluados o cuant i f i cado s de diferentes formas conocidas en la técnica, como la inmunoprecipitación , el análisis de transferencia Western ( inmunot rans ferencia ) , el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), ensayos cuantitativos de proteínas, ensayos de la actividad de las proteínas (por ejemplo, ensayos de la actividad de la caspasa) , inmunohi s toquími ca , cl sificación de células activadas por fluorescencia o por inmunocitoquímica (FACS) . Los anticuerpos dirigidos a un objetivo se pueden identificar y obtener a partir de varias fuentes, como el catálogo de anticuerpos de MSRS (Aerie Corporation, Birmingham, MI) o pueden prepararse mediante métodos convencionales de generación de anticuerpos monoclonales o policlonales conocidos en la
técnica. Los anticuerpos útiles para la detección GCGR humano y de rata están come rci a lmente disponible
Pruebas in vivo de compuestos antisentido
Los compuestos antisentido, por ejemplo, los oligonucleótidos antisentido, se someten a prueba en animales para evaluar su capacidad para inhibir la expresión del GCGR y producir cambios fenotipicos. Las pruebas pueden llevarse a cabo en animales normales o en modelos experimentales de enfermedades. Para la administración en animales, los oligonucleótidos antisentido se formulan en un diluyente farmacéuticamente aceptable, como solución salina tamponada con fosfato. La administración incluye las vías de administración parenteral. Luego de un periodo de tratamiento con oligonucleótidos antisentido, se aisla ARN del tejido hepático y se miden los cambios en la expresión de ácidos nucleicos de GCGR. También se miden los cambios en los niveles de proteínas de GCGR.
Algunas indicaciones
En determinadas modalidades, en la presente se proporcionan métodos para tratar a un individuo que comprenden administrar una o más composiciones farmacéuticas tal como se describen en la presente. En
determinadas modalidades, el individuo tiene una enfermedad relacionada con el metabolismo.
Tal como se muestra en los ejemplos más adelante, se ha demostrado que los compuestos dirigidos a GCGR, tal como se describe en la presente, reducen la gravedad de los síntomas fisiológicos de enfermedades relacionadas con el metabolismo, las cuales incluyen el síndrome metabólico, diabetes mellitus, resistencia a la insulina, dislipidemia diabética, hipertrigliceridemia, obesidad y aumento de peso. En algunos de los experimentos, los compuestos redujeron los niveles de glucosa en sangre, por ejemplo, los animales siguieron experimentando síntomas, pero los síntomas eran menos graves en comparación con los animales sin tratar. En otros experimentos, sin embargo, los compuestos parecen reducir los síntomas de la diabetes, por ejemplo, los animales tratados durante un período de tiempo más prolongado experimentaron síntomas menos graves que a los que se le administraron los compuestos durante un período de tiempo más corto. En otros experimentos, sin embargo, los compuestos parecen inhibir el aumento de peso, por ejemplo, los animales tratados durante un período de tiempo más prolongado experimentaron síntomas menos graves que a los que se les administraron los compuestos durante un período de tiempo más corto. En
otros experimentos, sin embargo, los compuestos parecen inhibir la hipertrigliceridemia, por ejemplo, los animales tratados durante un período de tiempo más prolongado experimentaron signos y/o síntomas menos graves que a los que se les administraron los compuestos durante un período de tiempo más corto. La capacidad de los compuestos que se utilizan como ejemplo más adelante para restablecer el funcionamiento demuestra por lo tanto que los síntomas de la enfermedad se pueden revertir mediante el tratamiento con un compuesto como se describe en la presente.
La diabetes mellitus está caracterizada por varios signos y/o síntomas físicos y fisiológicos. Cualquier síntoma que un experto en la técnica sepa que está asociado a la diabetes de Tipo 2 se puede mejorar o de otra manera modular tal como se establece anteriormente en los métodos descritos en lo que antecede. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es un síntoma o signo físico como el aumento de los niveles de glucosa, aumento de peso, micción frecuente, sed inusual, hambre extrema, fatiga extrema, visión borrosa, infecciones frecuentes, hormigueo y entumecimiento de las e tremidades, piel seca e irritada, pérdida de peso, lesiones de curación lenta y encías inflamadas. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es un
síntoma o signo fisiológico seleccionado del grupo que consiste en el aumento de resistencia a la insulina, aumento de los niveles de glucosa, aumento de la masa grasa, disminución del ritmo metabólico, disminución de la depuración de glucosa, disminución de la tolerancia a la glucosa, disminución de la sensibilidad a la insulina, disminución de la sensibilidad a la insulina hepática, aumento del peso y tamaño del tejido adiposo, aumento de la grasa corporal y aumento del peso corporal .
En determinadas modalidades, el síntoma o signo físico es el aumento de los niveles de glucosa. En determinadas modalidades, el signo o síntoma es el aumento de peso. En determinadas modalidades, el síntoma es micción frecuente. En determinadas modalidades, el síntoma es sed inusual. En determinadas modalidades, el síntoma es hambre extrema. En determinadas modalidades, el síntoma es fatiga extrema. En determinadas modalidades, el síntoma es visión borrosa. En determinadas modalidades, el síntoma es infecciones frecuentes. En determinadas modalidades, el síntoma es hormigueo o entumecimiento de las extremidades. En determinadas modalidades, el síntoma es piel seca e irritada. En determinadas modalidades, el signo o síntoma es la pérdida de peso. En determinadas
modalidades, el síntoma es lesiones de curación lenta. En determinadas modalidades, el síntoma es encías inflamadas. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento de resistencia a la insulina En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento de los niveles de glucosa. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento de masa grasa. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es la disminución del ritmo metabólico. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es la disminución de la depuración de glucosa. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es la disminución de la tolerancia a la glucosa. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es la disminución de la sensibilidad a la insulina En determinadas modalidades, el síntoma o signo es la disminución de la sensibilidad a la insulina hepática. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento de peso y tamaño del tejido adiposo. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento de la grasa corporal. En determinadas modalidades, el síntoma o signo es el aumento del peso corporal .
En determinadas modalidades, se proporcionan métodos para tratar a un individuo que comprenden administrar una o más composiciones farmacéuticas tal
como se describen en la presente. En determinadas modalidades, el individuo tiene una enfermedad relacionada con el metabolismo.
En determinadas modalidades, la administración de un compuesto antisentido dirigido a un ácido nucleico del GCGR resulta en la reducción de los niveles de expresión del GCGR en al menos alrededor de 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 o 99 % o en un intervalo definido por dos cualquiera de estos valores.
En determinadas modalidades, las composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto antisentido dirigido al GCGR se utilizan para la preparación de un medicamento para tratar a un paciente que sufre o es susceptible a una enfermedad relacionada con el metabol i smo .
En determinadas modalidades, los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un compuesto que comprenden un oligonucleótido modificado que presenta una parte de nucleobases contigua tal como se describe en la presente de una secuencia que figura en la SEQ ID NO: 11 (ISIS 449884) .
En determinadas modalidades, los métodos descritos en la presente incluyen la administración de un compuesto que comprenden un oligonucleótido modificado
que presenta una parte de nucleobases contigua tal como se describe en la presente de una secuencia que figura en la SEQ ID NO: 80 (ISIS 459014) .
Algunas terapias combinadas
En determinadas modalidades, una o más composiciones farmacéuticas descritas en la presente se administran junto con uno o más agentes farmacéuticos adicionales. En determinadas modalidades, dichos uno o más agentes farmacéuticos adicionales se diseñan para tratar la misma enfermedad, trastorno o afección como la una o más composiciones farmacéuticas descritas en la presente. En determinadas modalidades, dichos uno o más agentes farmacéuticos adicionales se diseñan para tratar una enfermedad, trastorno o afección diferente como la una o más composiciones farmacéuticas descritas en la presente. En determinadas modalidades, dichos uno o más agentes farmacéuticos adicionales se diseñan para tratar un efecto secundario no deseado de una o más composiciones farmacéuticas tal como se describen en la presente. En determinadas modalidades, una o más de las composiciones farmacéuticas se administran junto con otro agente farmacéutico para tratar un efecto no deseado de este otro agente farmacéutico. En determinadas modalidades, una o más de las composiciones
farmacéuticas se administran junto con otro agente farmacéutico para producir un efecto combinado. En determinadas modalidades, una o más de las composiciones farmacéuticas se administran junto con otro agente farmacéutico para producir un efecto sinérgico.
En determinadas modalidades, un primer agente y uno o más segundos agentes se administran al mismo tiempo. En determinadas modalidades, el primer agente y uno o más segundos agentes se administran en distintos momentos. En determinadas modalidades, el primer agente y uno o más segundos agentes se preparan juntos en una única formulación farmacéutica. En determinadas modalidades, el primer agente y uno o más segundos agentes se preparan por separado.
En determinadas modalidades, el segundo compuesto se administra antes de la administración de la composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas modalidades, el segundo compuesto se administra luego de la administración de la composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas modalidades, el segundo compuesto se administra al mismo tiempo que la composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas modalidades, la dosis de un segundo compuesto administrado simultáneamente es la misma que la dosis que se administraría si el segundo
compuesto se administrara solo. En determinadas modalidades, la dosis de un segundo compuesto administrado simultáneamente es más baja que la dosis que se administraría si el segundo compuesto se administrara solo. En determinadas modalidades, la dosis de un segundo compuesto administrado simultáneamente es mayor que la dosis que se administraría si el segundo compuesto se administrara solo.
En determinadas modalidades, la administración en simultáneo de un segundo compuesto mejora el efecto de un primer compuesto, de modo que la administración simultánea de los compuestos tiene como resultado un efecto que es mayor que el efecto de administrar el primer compuesto solo. En determinadas modalidades, la administración en simultáneo tiene como resultado efectos que son aditivos a los efectos de los compuestos cuando se administran solos. En determinadas modalidades, la administración en simultáneo tiene como resultado efectos que son supra aditivos a los efectos de los compuestos cuando se administran solos. En determinadas modalidades, el primer compuesto es un compuesto antisentido. En determinadas modalidades, el segundo compuesto es un compuesto antisentido.
En determinadas modalidades, los segundos agentes incluyen, de modo no taxativo, un agente reductor de
glucosa. Los agentes reductores de glucosa pueden incluir, de modo no taxativo, un cambio de estilo de vida terapéutico, agonista de PPAR, un inhibidor de dipeptidil peptidasa (IV), un análogo de GLP-1, insulina o un análogo de insulina, secretagogo de la insulina, inhibidor de SGLT2, análogo de amilina humana, biguanida, inhibidor de al fa-glucosidasa , o una combinación de estos. El agente reductor de glucosa puede incluir, de modo no taxativo, metformina, sulfonilurea, rosiglitazona, meglitinida, tiazolidinediona, inhibidor de alfa-glucosidasa o una combinación de estos. La sulfonilurea puede ser acetohexamida, clorpropamida , tolbutamida, tolazamida, glimepirida, una glipizida, un gliburido, o una gliclazida. La meglitinida puede ser nateglinida o repaglinida. La tiazolidindiona puede ser pioglitazona o rosiglitazona. La al fa-glucos idasa puede ser acarbosa o miglitol .
En algunas modalidades, el producto terapéutico reductor de la glucosa es un análogo de GLP-1. En algunas modalidades, el análogo de GLP-1 es exendin-4 o liraglutida .
En otras modalidades, el producto terapéutico reductor de la glucosa es una sulfonilurea. En algunas modalidades, la sulfonilurea es acetohexamida,
clorpropamida, tolbutamida, tolazamida, glimepirida, una glipizida, un gliburida, o una gliclazida.
En algunas modalidades, el fármaco reductor de glucosa es una biguanida. En algunas modalidades, la biguanida es metformina, y en algunas modalidades, los niveles de glucosa en sangre disminuyen sin aumentar la acidosis láctica según se compara con la acidosis láctica observada después del tratamiento con metformina únicamente .
En algunas modalidades, el fármaco reductor de glucosa es una meglitinida. En algunas modalidades, la meglitinida es nateglinida o repaglinida.
En algunas modalidades, el fármaco reductor de glucosa es una tiazolidindiona. En algunas modalidades, la tiazolidindiona es pioglitazona, rosiglitazona o troglitazona . En algunas modalidades, los niveles de glucosa en sangre disminuyen sin mayor aumento de peso que el observado en el tratamiento con rosiglitazona únicamente .
En algunas modalidades, el fármaco reductor de glucosa es un inhibidor de al fa-glucosidasa . En algunas modalidades, el inhibidor de alfa-glucosidasa es acarbosa o miglitol.
En una modalidad determinada, un agente reductor de glucosa que se administra en simultáneo es ISIS
113715.
En una modalidad determinada, la terapia reductora de glucosa es un cambio de estilo de vida terapéutico.
En determinadas modalidades, los segundos agentes incluyen, de modo no taxativo, agentes reductores de lipidos. El agente reductor de lipidos puede incluir, de modo no taxativo, atorvastatina , simvastatina, ro suvas tat ina , y ezetimiba. En determinadas de estas modalidades, el agente reductor de lipidos se administra antes de la administración de una composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas de estas modalidades, el agente reductor de lipidos se administra luego de la administración de una composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas de estas modalidades, el agente reductor de lipidos se administra al mismo tiempo que una composición farmacéutica descrita en la presente. En determinadas de estas modalidades, la dosis de un agente reductor de lipido administrado simultáneamente es la misma que la dosis que se administraría si el agente reductor de lipidos se administrara solo. En determinadas de estas modalidades, la dosis de un agente reductor de lipido administrado simultáneamente es más baja que la dosis que se administraría si el agente reductor de lipidos se administrara solo. En determinadas de estas modalidades,
la dosis de un agente reductor de lípido administrado simultáneamente es mayor que la dosis que se administraría si el agente reductor de lípidos se administrara solo.
En determinadas modalidades, un agente reductor de lípidos administrado simultáneamente es un inhibidor de HMG-CoA reductasa. En determinadas de estas modalidades el inhibidor de HMG-CoA reductasa es una estatina. En determinadas de estas modalidades, la estatina se selecciona de atorvastatina , simvastatina, pravastatina , fluvastatina , y rosuvastatina .
En determinadas modalidades, un agente reductor de lípidos administrado simultáneamente es un inhibidor de la absorción del colesterol. En determinadas de estas modalidades, el inhibidor de la absorción del colesterol es ezetimiba.
En determinadas modalidades, un agente reductor de lípidos administrado simultáneamente es un inhibidor de HMG-CoA reductasa y un inhibidor de la absorción del colesterol formulados conjuntamente. En determinadas de estas modalidades el agente reductor de lípidos formulado conjuntamente es ezetimiba/simvastatina .
En determinadas modalidades, un agente reductor de lípidos administrado simultáneamente es un inhibidor de la proteína microsomal de la transferencia de
triglicéridos (inhibidor de MTP) .
En determinadas modalidades, un agente reductor de lipidos administrado simultáneamente es un oligonucleótido dirigido a ApoB.
En determinadas modalidades, los segundos agentes incluyen, de modo no taxativo, un fármaco o agente antiobesidad. Dichos agentes antiobesidad incluyen, de modo no taxativo, Orlistat, Sibutramina o Rimonabant, y se pueden administrar tal como se describe anteriormente como agentes reductores de adiposidad o peso corporal. En determinadas modalidades, el compuesto antisentido se puede administrar en simultáneo con supresores del apetito. Dichos supresores del apetito incluyen, de modo no taxativo, dietilpropión tenuate, mazindol, orlistat, fendimetra z ina , fentermina, y sibutramina y se puede administrar tal como se describe en la presente. En determinadas modalidades, los agentes antiobesidad son con base en CNS como, de modo no taxativo, con base en sibutramina o GLP-1 como, de modo no taxativo, liraglutida.
Formulaciones
Los compuestos proporcionados en la presente también pueden estar mezclados, conjugados o asociados de otra forma con otras moléculas, estructuras
moleculares o mezclas de compuestos, como por ejemplo, liposomas, moléculas dirigidas al receptor, u otras formulaciones, para asistir en la ingesta, distribución y/o absorción. Las patentes estadounidenses representativas que enseñan la preparación de dichas formulaciones que asisten en la ingesta, distribución y/o absorción incluyen, de modo no taxativo, las patente s estadounidenses : 5, 108, 921; 5, 354,844;
5,416,016, 5,459,127; 5, 521, 291 ; 5,543,158; 5, 547,932;
5,583,020, 5,591,721; 4, 426, 330 ; 4,534,899; 5, 013,556;
5,108,921, 5,213,804; 5, 227 , 170 ; 5,264,221; 5, 356,633;
5,395, 619, 5,416,016; 5,417, 978 ; 5,462,854; 5, 469,85 ;
5, 512, 295, 5, 527, 528; 5, 534,259 ; 5,543,152; 5, 556,948;
5, 580,575, y 5,595,756, cada una de las cuales se incorpora a la presente mediante esta referencia
Los compuestos antisentido que se proporcionan en la presente pueden incluirse en una composición o formulación farmacéutica. La composición farmacéutica puede incluir cualquier sal, ásteres farmacéuticamente aceptables o sales de tales ésteres o cualquier otro compuesto que, tras ser administrado a un animal, incluido un humano, tiene la capacidad de proporcionar (directa o indirectamente) el metabolito biológicamente activo o residuo de este.
El término "sales farmacéuticamente aceptables"
hace referencia a sales fisiológica y farmacéuticamente aceptables de los compuestos que se proporcionan en la presente, es decir, sales que conservan la actividad biológica deseada del compuesto original y no provoca efectos toxicológicos no deseados a este. El término "sal farmacéuticamente aceptable" incluye una sal preparada a partir bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo ácidos y bases inorgánicos u orgánicos. Con respecto a los oligonucleótidos , los ejemplos preferidos de sales farmacéuticamente aceptables y sus usos se describen adicionalmente en la patente estadounidense 6,287,860, la cual se incorpora a la presente en su totalidad. Se demuestra que las sales de sodio son formas adecuadas de fármacos oligonucleótidos.
El término "derivado farmacéuticamente aceptable" comprende, de modo no taxativo, sales farmacéuticamente aceptables, solvatos, hidratos, ésteres, profármacos, polimorfos, isómeros, variantes marcadas isotópicamente de los compuestos descritos en la presente.
Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente se pueden administrar en una cantidad de formas en función de si se desea un tratamiento local o sistémico y según el área a ser tratada. La administración puede ser parenteral. La administración
parenteral incluye, de modo no taxativo, la infusión o inyección subcutánea, intravenosa o intramuscular.
Se prefiere la administración parenteral para dirigir la expresión de GCGR en el hígado y el plasma. Se cree que los ol igonucleótidos con al menos una modificación en 2 ' -O-metoxietilo son particularmente útiles para la administración parenteral.
Las formulaciones farmacéuticas descritas en la presente, que pueden presentarse convenientemente en forma de unidades de dosificación, se pueden preparar de acuerdo con técnicas convencionales conocidas en la industria farmacéutica. Dichas técnicas incluyen la etapa de asociar los ingredientes activos con el/los portador/es o el/los excipiente/s farmacéuticos. En general, las formulaciones se preparan mediante una mezcla uniforme y a fondo de ingredientes activos con portadores líquidos o portadores sólidos finamente divididos o ambos.
Las composiciones descritas en la presente también pueden ser formuladas como suspensiones en medios acuosos, no acuosos o mixtos. La suspensión también puede contener estabilizantes.
Las composiciones farmacéuticas descritas en la presente incluyen, de modo no taxativo, formulaciones que contienen soluciones, emulsiones y liposomas. Las
composiciones y formulaciones farmacéuticas descritas en la presente pueden comprender uno o más potenciadores de penetración, portadores, excipientes u otros ingredientes activos o inactivos.
Las formulaciones incluyen formulaciones liposomales. Tal como se usa en la presente invención, el término "liposoma" significa una vesícula compuesta de lípidos anfifílicos dispuestos en una bicapa o bicapas esféricas. Los liposomas son vesículas unilamelares o multilamelares que tienen una membrana formada a partir de un material lipofílico y un interior acuoso que contiene la composición a administrarse. Los liposomas catiónicos son liposomas con carga positiva que se cree que interactúan con moléculas de ADN de carga negativa para formar un complejo estable. Se cree que los liposomas que son sensibles al pH o que tienen carga negativa atrapan al ADN en lugar de formar un complejo con este. Tanto los liposomas catiónicos como no catiónicos han sido utilizados para administrar el ADN a las células.
Los liposomas también incluyen liposomas "estabilizados esféricamente" , un término que, tal como se usa en la presente, hace referencia a liposomas que comprenden uno o más lípidos especializados que, cuando se incorporan a los liposomas, dan como resultado ciclos
de vida mejorados en relación con los liposomas que carecen de dichos lípidos especializados. Los liposomas y sus usos se describen adicionalmente en la patente estadounidense 6,287,860, la cual se incorpora a la presente en su totalidad.
En otra modalidad, las formulaciones incluyen formulaciones de solución salina. En determinadas modalidades, una formulación consiste en los compuestos descritos en la presente y solución salina. En determinadas modalidades, una formulación consiste esencialmente en los compuestos descritos en la presente y solución salina. En determinadas modalidades, la solución salina es una solución salina farmacéuticamente aceptable. En determinadas modalidades, la solución salina es una solución salina amortiguadora. En determinadas modalidades, la solución salina es una solución salina amortiguadora de fosfato (PBS) .
En determinadas modalidades, una formulación excluye a los liposomas. En determinadas modalidades, la formulación excluye a los liposomas estabilizados e s té ri camente . En determinadas modalidades, una formulación excluye a los fos folipidos . En determinadas modalidades, la formulación consiste esencialmente en los compuestos descritos en la presente y solución salina y excluye a los liposomas.
Las formulaciones y composiciones farmacéuticas también pueden incluir tensioactivos . Los tensioactivos y sus usos se describen adi cionalmente en la patente estadounidense 6,287,860, la cual se incorpora a la presente en su totalidad.
En una modalidad, la presente invención emplea varios potenciadores de penetración para provocar la administración eficiente de ácidos nucleicos, en particular oligonucleótidos . Los potenciadores de penetración y sus usos se describen adicionalmente en la patente estadounidense 6,287,860, la cual se incorpora a la presente en su totalidad.
Un experto en la técnica reconocerá que las formulaciones son diseñadas de forma rutinaria de acuerdo con el uso que se les pretende dar, es decir la vía de administración.
Las composiciones y formulaciones para la administración parenteral, incluso las infusiones o inyecciones subcutáneas, intravenosas e intramusculares pueden incluir soluciones acuosas estériles que también pueden contener amortiguadores, diluyentes y otros aditivos adecuados tales como, de modo no taxativo, potenciadores de penetración, compuestos portadores y otros portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables .
En otra modalidad relacionada, las composiciones proporcionadas en la presente pueden contener uno o más compuestos antisentido, en particular oligonucleótidos , dirigidos a un primer ácido nucleico y uno o más compuestos antisentido adicionales dirigidos a un segundo ácido nucleico objetivo. De manera alternativa, las composiciones proporcionadas en la presente pueden contener dos o más compuestos antisentido dirigidos a diferentes regiones del mismo ácido nucleico objetivo. En la técnica se conocen varios ejemplos de compuestos antisentido. Dos o más compuestos combinados se pueden utilizar secuencial o conjuntamente.
Dosi f icación
La dosificación depende de la gravedad y el grado de respuesta del estado de enfermedad a tratarse, en tanto que el curso de tratamiento tiene una duración de varios días a varios meses o hasta que se obtenga una cura o hasta que se logre una disminución del estado de enfermedad. Los programas de dosificación óptimos se pueden calcular a partir de mediciones de la acumulación del fármaco en el cuerpo del paciente. Las dosificaciones óptimas pueden variar en función de la potencia relativa de los oligonucleótidos individuales, y en general se pueden estimar con base en las EC50 que
resultan efectivas en modelos animales in vitro e in vivo. En general, la dosificación es de 0,01 a 100 g por kg de peso corporal, y se puede administrar una o más veces al día, a la semana, al mes o al año, o a intervalos deseados. Luego del tratamiento exitoso, puede ser deseable que el paciente se someta a una terapia de mantenimiento para prevenir la reaparición del estado de enfermedad, donde el oligonucleótido se administra en una dosis de mantenimiento, que oscila entre 0,01 pg y 100 g por kg de peso corporal, o más veces al día .
Mientras que la presente invención se ha descrito con especificidad de acuerdo con determinadas de sus modalidades preferidas, los siguientes ejemplos sirven únicamente para ilustrar la invención y no pretenden limitarla. Cada una de las referencias, los números de registro en GenBank, y similares citados en la presente solicitud se incorpora a la presente mediante esta referencia en su totalidad.
Determinados compuestos
Se sometieron a prueba alrededor de setecientos setenta y siete compuestos antisentido recientemente diseñados y previamente divulgados de varias longitudes, motivos y composición de la estructura para determinar
su efecto en ARNm de GCGR humano in vitro en varios tipos celulares (Ejemplo 1) . Los compuestos nuevos se compararon con compuestos diseñados con anterioridad, incluyendo ISIS 310457, ISIS 315163 e ISIS 325568, los cuales se determinó anteriormente que son algunos de los compuestos antisentido in vitro más potentes (véase, por ejemplo, la patente estadounidense N.° 7,399,853 y la solicitud de patente estadounidense publicada N° US2007-0087987) . De los casi setecientos setenta y siete compuestos antisentido recientemente diseñados o diseñados con anterioridad, se presentan únicamente aquellos compuestos que fueron seleccionados para el estudio adicional en función de la potencia in vitro. Los compuestos seleccionados fueron sometidos a prueba para determinar la inhibición que depende de la dosis en las células HepG2 y los hepatocitos primarios de cynomolgus (Ejemplos 5-13) . De los 120 compuestos sometidos a prueba mediante ensayos de respuesta a la dosis, fueron seleccionados 33 ol igonucleótidos antisentido para los ensayos de tolerabilidad in vivo.
Los últimos 33 oligonucleótidos seleccionados, ISIS 304538 (SEQ ID NO: 112), ISIS 304539 (SEQ ID NO: 113), ISIS 325568 (SEQ ID NO: 4), ISIS 398457 (SEQ ID NO: 9), ISIS 398471 (SEQ ID NO: 17), ISIS 398486 (SEQ ID NO: 24), ISIS 398491 (SEQ ID NO: 105), ISIS 398506 (SEQ ID
NO: 108), ISIS 398507 (SEQ ID NO: 109), ISIS 398508 (SEQ ID NO: 110), ISIS 436034 (SEQ ID NO: 35), ISIS 436140 (SEQ ID NO: 102), ISIS 436141 (SEQ ID NO: 114), ISIS 448718 (SEQ ID NO: 99), ISSI 448730 (SEQ ID NO: 100), ISIS 448754 (SEQ ID NO: 98), ISIS 448766 (SEQ ID NO: 31), ISIS 448817 (SEQ ID NO: 52), ISIS 448818 (SEQ ID NO: 56), ISIS 448819 (SEQ ID NO: 58), ISIS 448848 (SEQ ID NO: 62), ISIS 448860 (SEQ ID NO: 65), ISIS 448890 (SEQ ID NO: 68), ISIS 449884 (SEQ ID NO: 11), ISIS 449954 (SEQ ID NO: 51), ISIS 449956 (SEQ ID NO: 54), ISIS 459014 (SEQ ID NO: 80), ISIS 459024 (SEQ ID NO: 89), ISIS 459032 (SEQ ID NO: 81), ISIS 459040 (SEQ ID NO: 82), ISIS 459046 (SEQ ID NO: 83), ISIS 459076 (SEQ ID NO: 84), e ISIS 459157 (SEQ ID NO: 85), se sometieron a prueba para determinar la tolerabilidad en un modelo de ratón CD1, asi como también un modelo de rata Sprague-Dawley . Los compuestos son complementarios a las regiones 548-567, 2016-2035, y 2018-2037 de la SEQ ID
NO: 1, y 6682-6698, 7267- 7283, 7270-7286, 7292 -7308,
7295-7311, 7316-7332, 7317- 7333, 7319-7335, 7341 -7357,
7344-7360, 7365-7381, 7368- 7384 , 7389-7405, 7392 -7408 ,
7416-7432, 7437-7453, 7440- 7456, 7783-7799, 8030 -8049,
8133-8152, 8141-8160, 8144- 8160, 9002-9021, 9008 -9027,
9245-9264 , 9246-9262, 9804 -9823, 10676-10695, 10718- 10734, 12030-12049, 12031- 12050, 12031-12047, 12032-
12051, 12033-12052, 12033-12049, 12036-12055, 12175-12194, 12178-12194, 13490-13509, 14138-14157, 15075-15094, 15743-15762, 15744-15763, 15745-15764, y 15746-15765 de la SEQ ID NO: 2.
En los modelos in vivo, se midió el peso corporal y el peso de los órganos, los marcadores de funcionamiento hepático (tales como alanina transaminasa , aspartato transaminasa y bilirrubina) , y los marcadores de funcionamiento renal (tales como BUN y creatinina) . En el modelo de ratón, ISIS 304538, ISIS 325568, ISIS 398457, ISIS 398471, ISIS 398491, ISIS 436140, ISIS 448754, ISIS 448766, ISIS 448818, ISIS 449884, ISIS 449956, ISIS 459014, ISIS 459024, ISIS 459032, ISIS 459040, ISIS 459046, ISIS 459076, e ISIS 459157 fueron tolerados en términos de niveles de transaminasa (Ejemplo 11) . En el modelo de rata Sprague-Dawley , ISIS 325568, ISIS 398457, ISIS 398471, ISIS 398491, ISIS 436140, ISIS 448730, ISIS 448754, ISIS 448817, ISSI 448818, ISIS 448848, ISIS 449884, ISIS 449956, ISIS 459014, ISIS 459032, ISIS 459040, ISIS 459046, ISIS 459076, e ISIS 459157 fueron tolerados en términos de niveles tanto de los marcadores de funcionamiento hepático como de funcionamiento renal (Ejemplo 12) .
Nueve compuestos, ISIS 325568 (SEQ ID NO: 4), ISIS 398471 (SEQ ID NO: 17), ISIS 436140 (SEQ ID NO: 102),
ISIS 448766 (SEQ ID NO: 31), ISIS 449884 (SEQ ID NO: 11), ISIS 459014 (SEQ ID NO: 80), ISIS 459032 (SEQ ID NO: 81), ISIS 459040 (SEQ ID NO: 82), e ISIS 459157 ( SEQ ID NO: 85), se seleccionaron de los modelos de tolerabilidad y se sometieron a prueba para determinar los efectos a largo plazo en la tolerabilidad en un modelo de rata CD/1GS durante 13 semanas (Ejemplo 13) . Se midió el peso de los órganos, los marcadores de funcionamiento hepático (tales como alanina transaminasa , aspartato transaminasa y bi li rrubina ) , y los marcadores de funcionamiento renal (tales como BUN y creatinina) . Los nueve compuestos también se sometieron a prueba para determinar su viscosidad, la cual resultó ser óptima para todos los ol igonucleótidos (Ejemplo 14) .
ISIS 449884, que demostraron muy buena tolerabilidad en los tres modelos in vivo, se sometieron a prueba para determinar su semivida en el hígado de ratón CD1 (Ejemplo 15) . Se calculó que la semivida de ISIS 449884 es de 15 días.
La evaluación final de estos estudios (Ejemplo 11- 15) llevaron a la selección de ocho oligonucleótidos que tienen una secuencia de nucleobases de SEQ ID NO: 17 (ISIS 398471), 102 (ISIS 436140), 31 (ISIS 448766), 11 (ISIS 449884), 80 (ISIS 459014), 81 (ISIS 459032), 82 (ISIS 459040) o 85 (ISIS 459157) . Los compuestos son
complementarios a las regiones 7267-7283, 7270-7286, 7292-7308, 7295-7311, 7316-7332, 7319-7335, 7341-7357, 7344-7360, 7437-7453, 7365-7381, 7368-7384, 7389-7405, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2. En determinadas modalidades, los compuestos dirigidos a las regiones enumeradas, como se describe adicionalmente en la presente, comprenden un oligonucleótido modificado que tiene alguna parte de nucleobase de la secuencia que figura en las SEQ ID NO, como se describe adicionalmente en la presente. En determinadas modalidades, los compuestos dirigidos a las regiones enumeradas o que tienen una parte de nucleobase de una secuencia que figura en las SEQ ID NO enumeradas pueden ser de varias longitudes, como se describe adicionalmente en la presente, y puede tener uno de varios motivos, como se describe adicionalmente en la presente. En determinadas modalidades, un compuesto dirigido a una región o que tiene una parte de nucleobase de una secuencia que figura en las SEQ ID NO enumeradas tiene la longitud y el motivo especifico, como se indica mediante los n.° ISIS: 398471, 436140, 448766, 449884, 459014, 459032, 459040 y 459157.
Estos ocho compuestos se sometieron a prueba para determinar la actividad, el perfil farmacocinét ico y la
tolerabilidad en monos cynomolgus (Ejemplo 16) . El tratamiento con algunos de los compuestos provocaron la reducción de la expresión del ARNm de GCGR en el tejido hepático. En especial, el tratamiento con ISIS 449884, ISIS 459157 e ISIS 325568 provocaron la reducción significativa de la expresión del ARNm de GCGR en el tejido hepático, en comparación con el control de PBS . Se observó que ISIS 449884 provocaba la reducción más alta de la expresión del ARNm de GCGR en comparación con el control de PBS. El aumento en los niveles de glucagón es una consecuencia de la inhibición de los niveles del ARNm de GCGR. El tratamiento con ISIS 325568, ISIS 448766, ISIS 459157 e ISIS 449884 provocó aumentos significativos en los niveles de glucagón en plasma, ISIS 449884 es el que provoca el mayor aumento. Por lo tanto, en términos de actividad, ISIS 449884 fue el más eficaz en el estudio de monos. El tratamiento con los compuestos fue bien tolerado en los monos, en particular, el tratamiento con ISIS 449884.
Por consiguiente, en la presente se proporcionan compuestos antisentido con cualesquiera una o más de las características mejoradas. En determinadas modalidades, los compuestos tal como se describen en la presente son eficaces en virtud de que tienen al menos uno de una IC50 in vitro menor que 0,1 µ?, menor que 0,2
µ?, menor que 0,4 µ?, menor que 0,35 µ?, menor que 0,3 µ?, menor que 2,5 µ?, menor que 2,0 µ , menor que 1,5 µ?, menor que 1,0 µ?, cuando se administran a una linea celular HepG2 usando electroporación tal como se describe en los Ejemplos 8-11. En una determinada modalidad de estas, los compuestos son complementarios a una o más de las regiones 548-567, 2016-2035 y 2018-2037 de la SEQ ID NO: 1, y 6682-6698, 7267-7283, 7270-7286, 7292-7308, 7295-7311, 7316-7332, 7317-7333, 7319-7335, 7341-7357, 7344-7360, 7365-7381, 7368-7384, 7389-7405, 7392-7408, 7416-7432, 7437-7453, 7440-7456, 7783-7799, 8030-8049, 8133-8152, 8141-8160, 8144-8160, 9002-9021, 9008-9027, 9245-9264, 9246-9262, 9804-9823, 10676-10695, 10718-10734, 12030-12049, 12031-12050, 12031-12047, 12032-12051, 12033-12052, 12033-12049, 12036-12055, 12175-12194, 12178-12194, 13490-13509, 14138-14157, 15075-15094, 15743-15762, 15744-15763, 15745-15764, y 15746-15765 de la SEQ ID NO: 2.
En determinadas modalidades, los compuestos tal como se describen en la presente son muy tolerables, como se demostró al tener al menos uno de un aumento del valor de ALT o AST de no más que alrededor de 100 veces, alrededor de 60 veces, alrededor de 50 veces, alrededor de 40 veces, alrededor de 30 veces, alrededor de 25 veces, alrededor de 10 veces, alrededor de 5 veces,
alrededor de 4 veces, alrededor de 3 veces, o alrededor de 2 veces en animales tratados con solución salina; o un aumento en el peso del hígado, bazo o riñon de no más que alrededor del 30 %, alrededor del 20 %, alrededor del 15 %, alrededor del 12 %, alrededor del 10 %, alrededor del 5 % o alrededor del 2 % como se describe en los Ejemplos. En determinadas de estas modalidades, los compuestos son complementarios a una o más de las regiones 7267-7283, 7270-7286, 7292-7308, 7295-7311, 7316-7332, 7319-7335, 7341-7357, 7344-7360, 7437-7453, 7365-7381, 7368-7384, 7389-7405, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734, 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2.
Ejemplos
Descripción no limitativa e incorporación mediante referencias
Si bien determinados compuestos, composiciones y métodos descritos en la presente se han descrito con especificidad de acuerdo con determinadas modalidades, los siguientes ejemplos sirven solo para ilustrar los compuestos descritos en la presente y no pretenden limitarla. Cada una de las referencias citadas en la presente solicitud se incorpora a la presente mediante esta referencia en su totalidad.
Ejemplo 1: Inhibición antisentido del receptor de glucagón humano (GCGR) en células HepG2
Los oligonucleótidos antisentido se diseñaron para dirigirse a un ácido nucleico de GCGR y se analizaron para ver sus efectos en el ARNm de GCGR in vitro. También se analizó ISIS 310457, el cual se describió en una publicación anterior (WO 2007/035771) . Las células HepG2 cultivadas a una densidad de 40.000 células por pocilio se trans fectaron utilizando electroporación con 4.000 nM de ol igonucleótido antisentido. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 24 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Set de cebador y sonda humano RTS1508 (secuencia directa GACACCCCCGCCAATACC, designada en la presente como SEQ ID NO: 116; secuencia inversa
CCGCATCTCTTGAACACGAA, designada en la presente como SEQ ID NO: 117; la secuencia de sonda TTGGCACCACAAAG , designada en la presente como SEQ ID NO: 118) fue utilizada para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Se analizó un total de 309 oligonucleótidos.
Solo aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para ensayos de respuesta de dosis se muestran en la Tabla 1.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos recientemente diseñados en la Tabla 1 se diseñaron como 3-10-4 gapmers MOE o 5-10-5 gapmers OE . Los 3-10-4 gapmers MOE tienen una longitud de 17 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2'-desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende tres nucleósidos y por un segmento de ala en la dirección 3' que comprenden cuatro nucleósidos. Los 5-10-5 gapmers MOE tienen una longitud de 20 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2'-desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por segmentos ala en la dirección 5' y la dirección 3' que comprenden cinco nucleósidos cada una. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación 21 -MOE . Los enlaces de internucleósidos a través de cada gapmer son enlaces de fos forotioato (P=S) . Todos los residuos de citosina a través de cada gapmer son 5-metilcitosinas . "Sitio de inicio" indica el nucleósido más cercano a 5' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. "Sitio de detención" indica el nucleósido más cercano a 3' al cual el gapmer se dirige en la secuencia
génica humana. Cada gapmer enumerado en la Tabla 1 se dirige ya sea al ARNm de GCGR humano, designado en la presente como SEQ ID NO: 1 (n.° de registro GENBANK NM_000160.3) o a la secuencia genómica de GCGR, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (n.° de registro GENBANK NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 a 16885000) . "N/c" indica que el oligonucleótido antisentido no se dirige a esa secuencia génica particular.
Inhibición de los niveles de ARNra en GCGR humano mediante oligonucleótidos antisentido quiméricos
25
Ejemplo 2: Inhibición antisentido del receptor de glucagón humano (GCGR) en células HepG2
Los oligonucleótidos antisentido adicionales se diseñaron para dirigirse a un ácido nucleico de GCGR y se analizaron para ver sus efectos en el ARNm de GCGR in
vitro. ISIS 315163 (ACCTGGAAGCTGCTGTACAT (SEQ ID NO 79) ; sitio de inicio en la SEQ ID NO: 1 es 702 ; sitio de inicio en la SEQ ID NO: 2 es 13003) , el cual se describió en una publicación anterior (WO 2004/096016), también se analizó. Las células HepG2 cultivadas a una densidad de 40.000 células por pocilio se trans fectaron utilizando electroporación con 1.000 n de oligonucleótido antisentido. Luego de un período de tratamiento de aproximadamente 24 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm del GCGR se midieron por PCR cuantitativa en tiempo real usando un set de sonda y cebador humanos RTS1508. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Se analizó un total de 156 oligonucleótidos antisentido. Solo aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para ensayos de respuesta de dosis se muestran en la Tabla 2.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos recientemente diseñados en la Tabla 2 se diseñaron como gapmers 3-10-3 MOE, 3-10-4 MOE, 4-10-4 MOE, 4-10-5 MOE o 5-10-6 MOE. Los 3-10-3 gapmers MOE tienen una longitud de 16 nucleósidos, donde el segmento de hueco central
comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por segmentos ala en la dirección 5' y la dirección 3' que comprenden tres nucleósidos cada una. Los 3-10-4 gapmers MOE tienen una longitud de 17 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende tres nucleósidos y por un segmento de ala en la dirección 3' que comprenden cuatro nucleósidos. Los 4-10-4 gapmers MOE tienen una longitud de 18 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por segmentos ala en la dirección 5' y la dirección 3' que comprenden cuatro nucleósidos cada una. Los 4-10-5 gapmers MOE tienen una longitud de 19 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende cuatro nucleósidos y por un segmento de ala en la dirección 3' que comprenden cinco nucleósidos. Los 5-10-6 gapmers MOE tienen una longitud de 21 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2'-desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por un segmento de ala en la dirección 5' que comprende cinco nucleósidos y por un segmento de ala en la dirección 3'
que comprenden seis nucleósidos. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación 2'-MOE. Los enlaces de internucleósidos a través de cada gapmer son enlaces de fosforotioato (P=S) . Todos los residuos de citosina a través de cada gapmer son 5' -metilcitosinas . "Sitio de inicio" indica el nucleósido más cercano a 5' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. "Sitio de detención" indica el nucleósido más cercano a 3' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. Cada gapmer enumerado en la Tabla 2 se dirige ya sea al ARNm de GCGR humano, designado en la presente como SEQ ID NO: 1 (n.° de registro GENBANK NM_000160.3) o a la secuencia genómica de GCGR, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (n.° de registro GENBANK NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 a 16885000) . "N/c" indica que el oligonucleótido antisentido no se dirige a esa secuencia génica particular .
Tabla 2
Inhibición de los niveles de ARNm en GCGR humano mediante oligonucleótidos antisentido quiméricos dirigidos a la SEQ ID NO: 1 y a la SEQ ID NO: 2.
25
Ejemplo 3: Inhibición antisentido del receptor de glucagón humano (GCGR) en células HepG2
Los oligonucleótidos antisentido adicionales se diseñaron para dirigirse a un ácido nucleico de GCGR y
se analizaron para ver sus efectos en el ARNm de GCGR in vitro. También se analizó ISIS 315163. También se analizó ISIS 325568, el cual se describió en una publicación anterior (WO 2007/035 71) . Las células HepG2 cultivadas a una densidad de 40.000 células por pocilio se transfectaron utilizando electroporación con 2.000 nM de oligonucleótido antisentido. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 24 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm del GCGR se midieron por PCR cuantitativa en tiempo real usando un set de sonda y cebador humanos RTS1508. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Se analizó un total de 78 ol igonucleótidos antisentido. Solo aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para ensayos de respuesta de dosis se muestran en la Tabla 3.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos recientemente diseñados en la Tabla 3 se diseñaron como 5-10-5 gapmers MOE . Los gapmers tienen una longitud de 20 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por segmentos ala en la dirección 5' y la
dirección 3' que comprenden cinco nucleósidos cada una. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación 2'-M0E. Los enlaces de internucleósidos a través de cada gapmer son enlaces de fos forotioato (P=S). Todos los residuos de citosina a través de cada gapmer son 5-metilcitosinas . "Sitio de inicio" indica el nucleósido más cercano a 5' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. "Sitio de detención" indica el nucleósido más cercano a 3' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. Cada gapmer enumerado en la Tabla 3 se dirige ya sea al ARNm de GCGR humano, designado en la presente como SEQ ID NO: 1 (n.° de registro GENBANK NM_000160.3) o a la secuencia genómica de GCGR, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (n.° de registro GENBANK NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 a 16885000). "N/c" indica que el oligonucleótido antisentido no se dirige a esa secuencia génica particular.
Tabla 3
Inhibición de los niveles de ARNm en GCGR humano mediante oligonucleótidos antisentido quiméricos dirigidos a la SEQ ID NO: 1 y a la SEQ ID NO: 2.
Ejemplo 4: Inhibición antisentido del receptor de glucagón humano (GCGR) en células HepG2
Los oligonucleótidos antisentido adicionales se diseñaron para dirigirse a un ácido nucleico de GCGR y se analizaron para ver sus efectos en el ARNm de GCGR in vitro. ISIS 315163 e ISIS 325568 también se analizaron. Las células HepG2 cultivadas a una densidad de 40.000 células por pocilio se transíectaron utilizando electroporación con 5.000 nM de oligonucleótido antisentido. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 24 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm del GCGR se midieron por PCR cuantitativa en tiempo real usando un set de sonda y
cebador humanos RTS1508. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Se analizó un total de 234 oligonucleótidos antisentido. Solo aquellos oligonucleótidos que se seleccionaron para ensayos de respuesta de dosis se muestran en la Tabla 4.
Los oligonucleótidos antisentido quiméricos recientemente diseñados en la Tabla 4 se diseñaron como 5-10-5 gapmers MOE . Los gapmers tienen una longitud de 20 nucleósidos, donde el segmento de hueco central comprende diez 2 ' -desoxinucleósidos y se encuentra flanqueado por segmentos ala en la dirección 5' y la dirección 3' que comprenden cinco nucleósidos cada una. Cada nucleósido en el segmento de ala 5' y cada nucleósido en el segmento de ala 3' tiene una modificación 2 ' -MOE . Los enlaces de internucleós idos a través de cada gapmer son enlaces de fos forotioato (P=S). Todos los residuos de citosina a través de cada gapmer son 5-metilcitosinas . "Sitio de inicio" indica el nucleósido más cercano a 5' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. "Sitio de detención" indica el nucleósido más cercano a 3' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica humana. Cada gapmer
enumerado en la Tabla 4 se dirige ya sea al ARNm de GCGR humano, designado en la presente como SEQ ID NO: 1 (n.° de registro GENBANK NM_000160.3) o a la secuencia genómica de GCGR, designada en la presente como SEQ ID NO: 2 (n.° de registro GENBANK NW_926918.1 truncado a partir de los nucleótidos 16865000 a 16885000) . "N/c" indica que el oligonucleótido antisentido no se dirige a esa secuencia génica particular.
Tabla 4
Inhibición de los niveles de ARNm en GCGR humano mediante oligonucleótidos antisentido quiméricos dirigidos a la SEQ ID NO: 1 y a la SEQ ID NO: 2
Ejemplo 5: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de cynomolgus
Los gapmers del Ejemplo 1 que mostraban una inhibición in vitro significativa de GCGR humana se evaluaron bajo varias condiciones en hepatocitos primarios de cynomolgus. Las células se colocaron en placas a una densidad de 24.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0,4 µ , 1,1 µ?, 3,3 µ? y 10,0 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 5. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas .
La concentración inhibitoria máxima media (IC50) de cada oligonucleótido también se presenta en la Tabla 5 y se calculó mediante la gráfica de las concentraciones de oligonucleótidos usadas respecto el porcentaje de inhibición de la expresión de ARNm de GCGR lograda con cada concentración, y verificando la concentración de oligonucleótido con la cual se logró una inhibición de
la expresión de ARNm de GCGR del 50 % en comparación con el control. Como se ilustra en la Tabla 5, los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente de una manera dependiente de la dosis en células tratadas con o 1 i gonuc 1 e ót i do antisentido.
Tabla 5
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de cynomolgus usando
Ejemplo 6: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers del Ejemplo 5 que mostraron una inhibición in vitro significativa de ARNm de GCGR fueron
seleccionados y analizados en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0,12 µ?, 0,37 µ?, 1,11 µ?, 3,33 µ y 10,00 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 6. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas.
La concentración inhibitoria máxima media (IC50) de cada oligonucleótido también se presenta en la Tabla 6. Como se ilustra en la Tabla 6, los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente de una manera dependiente de la dosis en células tratadas con oligonucleótido antisentido.
Tabla 6
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2 usando elect roporación .
Ejemplo 7: Inhibición antisentido dependiente dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers del Ejemplo 5 que mostraron una inhibición in vitro significativa de ARNm de GCGR fueron seleccionados y analizados adicionalmente en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 0,04 µ , 0,12 µ?, 0,37 µ?, 1,11 µ?, 3,33 µ? y 10,00 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 7. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508 para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas .
La concentración inhibitoria máxima media (IC50) de cada oligonucleótido también se presenta en la Tabla 7. Los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente de una manera dependiente de la dosis en células tratadas con oligonucleótido antisentido. "N/c" indica que no hay datos es oligonucleótido ISIS para esa concentración particular. ISIS 398457, ISIS
449884 e ISIS 449954, los cuales produjeron una reducción significativa de los niveles de ARNm de GCGR, se seleccionaron para estudios adicionales. De manera significativa, ISIS 449884 mostró una IC50 de diez a cincuenta veces menor que la referencia ISIS 315163 en estudios comparativos presentados en los Ejemplos 5-7.
Tabla 7
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2 usando electroporación .
Ejemplo 8: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de cynomolgus
Los gapmers de los estudios descritos en los Ejemplos 1-7 se analizaron adicionalmente en varias dosis en hepatocitos primarios de cynomolgus. Las células se colocaron en placas a una densidad de 35.000 células por pocilio y se t rans fect aron usando electroporación con concentraciones de 750 nM, 1500 nM, 3000 nM, 6000 nM y 12.000 nM de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 8. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Como se ilustra en la Tabla 8, los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente en células tratadas con ol igonucleót ido antisentido.
Tabla 8
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de cynomolgus usando electroporación.
Ejemplo 9: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de
cynomolgus
Los gapmers del Ejemplo 8 que mostraron una inhibición in vitro significativa de GCGR humano fueron seleccionados y analizados adicionalmente en hepatocitos primarios de cynomolgus. ISIS 325568
(GCACTTTGTGGTGCCAAGGC (SEQ ID NO: 4), sitio de inicio objetivo 548 en la SEQ ID NO: 1), que se describió en una publicación anterior ( B I OLO 66USL ) , también fue analizado. Las células se colocaron en placas a una densidad de 35.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0, 006 µ?, 0, 020 µ?, 0, 063 µ?, 0, 200 µ?, 0, 632 µ?, 2, 000 µ?, 6, 325 µ? y 20, 000 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se específica en la Tabla 9. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas.
La concentración inhibitoria máxima media (IC50) de
cada oligonucleótido también se presenta en la Tabla 9. Los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente de una manera dependiente de la dosis en células tratadas con oligonucleótido antisentido.
Tabla 9
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en hepatocitos primarios de cynomolgus usando electroporacion.
Basándose en los datos de inhibición, ISIS 398471, ISIS 448766, ISIS 449884, ISIS 459014, ISIS 459032 e ISIS 459157 se seleccionaron para pruebas in vivo en un modelo de ratón.
Ejemplo 10: Inhibición antisentido dependiente de la
dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers de los estudios descritos en los Ejemplos 1, 4 y 9 se analizaron adicionalmente en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se transfectaron usando electroporación con concentraciones de 0,12 µ?, 0,37 µ?, 1,11 µ?, 3,33 µ y 10,00 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 10. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm del GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Como se ilustra en la Tabla 10, los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente en células tratadas con oligonucleótido antisentido.
Tabla 10
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2 usando electroporación .
Basándose en los resultados de inhibición, ISIS 98457, ISIS 398471, ISIS 398486, ISIS 398491, ISIS 98506, ISIS 398507, ISIS 398508 e ISIS 436034 se
seleccionaron para pruebas en un modelo de ratón.
Ejemplo 11: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers del estudio descrito en el Ejemplo 4 se analizaron adicionalmente en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0,04 µ?, 0,12 µ?, 0,37 µ , 1,11 µ?, 3,33 µ? y 10,00 µ de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 11. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm de GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente en células tratadas con oligonucleótido antisentido.
Tabla 11
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de
humano en células HepG2 usando electroporación
Basándose en los resultados de inhibición, ISIS 304538, ISIS 304539, ISIS 436140 e ISIS 436141 se seleccionaron para pruebas en un modelo de ratón.
Ejemplo 12: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers del estudio descrito en los Ejemplos 1,
3, 8 y 9 se analizaron adicionalmente en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0,12 µ?, 0,37 µ?, 1,11 µ?, 3,33 µ? y 10,00 µ? de
oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 12. Luego de un periodo de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm de GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente en células tratadas con oligonucleót ido antisentido.
Tabla 12
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de
humano en células HepG2 usando electroporación
Basándose en los resultados de inhibición, ISIS
448718, ISIS 448730, ISIS 448754, ISIS 448766, ISIS
448817, ISIS 448818, ISIS 448819, ISIS 448848, ISIS
448860 e ISIS 448890 se seleccionaron para pruebas en un modelo de ratón.
Ejemplo 13: Inhibición antisentido dependiente de la dosis de GCGR humano en células HepG2
Los gapmers del estudio descrito en los Ejemplos 1, 2, 8 y 9 se analizaron adicionalmente en varias dosis en células HepG2. Las células se colocaron en placas a una densidad de 40.000 células por pocilio y se trans fectaron usando electroporación con concentraciones de 0,12 µ?, 0,37 µ?, 1,11 µ?, 3,33 µ? y 10,00 µ? de oligonucleótidos antisentido, como se especifica en la Tabla 13. Luego de un período de tratamiento de aproximadamente 16 horas, el ARN se aisló de las células y los niveles de ARNm de GCGR se midieron mediante PCR cuantitativa en tiempo real. Se utilizó un set de cebador y sonda de GCGR humano RTS1508para medir los niveles de ARNm. Los niveles de ARNm de GCGR se ajustaron de acuerdo con el contenido de ARN total, tal como se midió con el RIBOGREEN®. Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de GCGR, en relación con las células de control no tratadas. Los niveles de ARNm de GCGR se redujeron significativamente en células tratadas con ol igonucleót ido antisentido.
Tabla 13
Inhibición antisentido dependiente de la dosis de humano en células HepG2 usando electroporación
Basándose en los resultados de inhibición, ISIS 459024, ISIS 459032, ISIS 459040, ISIS 459046, ISIS 459076 e ISIS 459157 se seleccionaron para pruebas en un modelo de ratón.
Ejemplo 14: Tolerabilidad de ol igonucleótido antisentido que se dirigen a GCGR humano en ratones CD1
Los ratones CD1® (Charles River, ??) son un modelo de ratón muít ipropó s i to , utilizados frecuentemente para evaluar seguridad y eficacia. Los ratones fueron tratados con oligonucleótidos antisentido ISIS seleccionados a partir de los estudios descritos anteriormente y se evaluaron para verificar cambios en los niveles de varios marcadores químicos en plasma.
Tratamiento
Se les inyectó por vía subcutánea a grupos de ratones CDl macho de seis semanas, dos veces por semana, durante 6 semanas, 50 mg/kg de ISIS 304538, ISIS 304539, ISIS 325568, ISIS 398457, ISIS 398471, ISIS 398486, ISIS 398491, ISIS 398506, ISIS 398507, ISIS 398508, ISIS 436034, ISIS 436140, ISIS 436141, ISIS 448718, ISSI 448730, ISIS 448754, ISIS 448766, ISIS 448817, ISIS 448818, ISIS 448819, ISIS 448848, ISIS 448860, ISIS 448890, ISIS 449884, ISIS 449954, ISIS 449956, ISIS
459014, ISIS 459024, ISIS 459032, ISIS 459040, ISIS 459046, ISIS 459076 e ISIS 459157. A un grupo de ratones CD1 macho de seis semanas se le inyectó por vía subcutánea PBS dos veces por semana, durante 6 semanas. Los ratones fueron sacrificados 48 horas después de la última dosis, y se les extrajeron los órganos y plasma para analizarlos adicionalmente .
Marcadores químicos en plasma
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función hepática y renal, se midieron los niveles en plasma de transaminasas , bilirrubina, albúmina y BUN usando un analizador químico clínico automático (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY) . Los resultados se presentan en la Tabla 14. Los oligonucleótidos ISIS que provocaron cambios en los niveles de cualquiera de los marcadores de función hepática o renal fuera del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido se excluyeron de los estudios adicionales.
Tabla 14
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en los marcadores químicos en plasma en el plasma de ratones CD1 en la semana 6
Ejemplo 15: Tolerabilidad de oligonucleótido antisentido que se dirigen a GCGR humano en ratas Sprague-Dawley
Las ratas Sprague-Dawley son un modelo multipropósito utilizado para evaluar seguridad y eficacia. Las ratas fueron tratadas con oligonucleótidos antisentido ISIS del estudio descrito en el Ejemplo 14 y se evaluaron para verificar cambios en los niveles de varios marcadores químicos en plasma.
Tratamiento
Se mantuvieron ratas Sprague-Dawley macho de siete semanas en un ciclo de 12 horas de luz /oscuridad y se alimentaron ad libitum con alimento para ratas normal Purina, diet 5001. Se les inyectó por vía subcutánea a grupos de cuatro ratas Sprague-Dawley, dos veces por semana , durante 4 semanas, 50 mg/kg de ISIS 304538, ISIS
304539, ISIS 325568 , ISIS 398457 , ISIS 398471, ISIS
398486, ISIS 398491, ISIS 398506, ISIS 398507 , ISIS
398508, ISIS 436034 , ISIS 436140, ISIS 436141, ISIS
448718, ISSI 448730, ISIS 448754 , ISIS 448766, ISIS
448817, ISIS 448818, ISIS 448819, ISIS 448848, ISIS
448860, ISIS 448890, ISIS 449884 , ISIS 449954 , ISIS
449956, ISIS 45901 , ISIS 459024 , ISIS 459032, ISIS
459040, ISIS 459046, ISIS 459076 e ISIS 459157. Cuarenta y ocho horas después de la última dosis las ratas fueron
sacrificadas y se les extrajeron los órganos y plasma para analizarlos adicionalmente .
Función hepática
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función hepática, se midieron los niveles en plasma de transaminasas usando un analizador químico clínico automático (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY) . Los niveles en plasma de ALT (alanina transaminasa) y AST (aspartato transaminasa) se midieron y los resultados se presentan en la Tabla 16 y se expresan en IU/L. Los niveles en plasma de bilirrubina también se midieron usando el mismo analizador químico clínico y los resultados también se presentan en la Tabla 16. ALT y AST también se expresaron como un aumento de múltiplo por encima del del control con PBS, y se presentan en la Tabla 17. Los oligonucleótidos ISIS que provocaron cambios en los niveles de cualquiera de los marcadores de función hepática fuera del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido se excluyeron de los estudios adicionales.
Tabla 16
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en la función renal en ratas Sprague-Dawley
Tabla 17
Aumento de múltiplo por encima del control con PBS de ALT y AST en los grupos de tratamiento de ratas Sprague- Dawley
5
25
Función renal
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función renal, se midieron los niveles en plasma de nitrógeno ureico sanguíneo (BUN) y creatinina usando un analizador químico clínico automático (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY) . Los resultados se presentan en la Tabla 18, expresados en mg/dL.
Tabla 18
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en los marcadores de función hepática (mg/dL) en ratas
Sprague-Dawley
Ejemplo 16: To 1 e rabí 1 idad de ol igonucleótido antisentido que se dirigen a GCGR humano en ratas CD/IGS
Las ratas CD/IGS son un modelo muí tipropósito utilizado para evaluar seguridad y eficacia. Las ratas fueron tratadas con oligonucleótidos antisentido ISIS del estudio descrito en los Ejemplos 14 y 15 y se evaluaron para verificar cambios en los niveles de varios marcadores químicos en plasma.
Tratamiento
Se mantuvieron ratas CD/IGS macho de diez-doce semanas en un ciclo de 12 horas de luz /oscuridad y se alimentaron ad libitum con alimento para ratas normal Purina, diet 5001. Se le inyectó por vía subcutánea a un
grupo de cuatro ratas CD/IGS, dos veces por semana, durante 13 semanas, 30 mg/kg of ISIS 325568, ISIS 398471, ISIS 436140, ISIS 448766, ISIS 449884, ISIS 459014 , ISIS 459032, ISIS 459040 e ISIS 459157. A un grupo de 6 ratas se le inyectó por vía subcutánea PBS dos veces por semana, durante 13 semanas, y funcionó como grupo de control. Se recogieron muestras de sangre en varios momentos . Cuarenta y ocho horas después de la última dosis se tomaron los pesos corporales, las ratas fueron sacrificadas y se les extrajeron los órganos y plasma para analizarlos adicionalmente.
Peso de los órganos
El peso del hígado, corazón, pulmones, bazo y riñon se midió al final del estudio y se presentan en la Tabla 19. Los oligonucleótidos ISIS que provocaron cualquier cambio en el peso de órganos fuera del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido se excluyeron de los estudios adicionales.
Tabla 19
Peso de los órganos de ratas CD/IGS luego del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en la semana 13 expresado en gramos (g)
Función hepática
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función hepática, se midieron los niveles de varios marcadores químicos en plasma en la semana 8,5 (día 57) y en la semana 13 (día 90) utilizando un analizador químico clínico automático (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY) . Los niveles en plasma de ALT (alanina transaminasa) y AST (aspartato transaminasa) se midieron
y los resultados se presentan en las Tablas 20 y 21, y se expresan en IU/L. Los niveles en plasma de bilirrubina y BUN también se midieron usando el mismo analizador químico clínico y los resultados también se presentan en las Tablas 20 y 21. Los ol igonucleótidos ISIS que provocaron cambios en los niveles de cualquiera de los marcadores de función hepática fuera del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido se excluyeron de los estudios adicionales.
Tabla 20
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en marcadores de la función hepática en ratas CD/IGS el día
Tabla 21
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en los marcadores de la función hepática en ratas CD/IGS en el día 80
Función renal
Para evaluar el efecto de los oligonucleótidos ISIS en la función renal, se midieron los niveles en orina de proteínas totales y de creatinina, y la proporción de proteínas totales en orina y creatinina se evaluó. Los resultados se presentan en la Tabla 22.
Tabla 22
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en la proporción de proteina/creatinina en orina en el riñon de ratas CD/IGS
Ejemplo 17: Medición de la viscosidad de oligonucleótidos antisentido ISIS que se dirigen a GCGR humano
La viscosidad de oligonucleótidos antisentido seleccionados del estudio descrito en el Ejemplo 16 se midió con el objetivo de descartar oligonucleótidos antisentido que tengan una viscosidad mayor que 40 cP.
Los oligonucleótidos que tienen una viscosidad mayor que 40 cP serian demasiado viscosos como para ser administrados a cualquier sujeto.
Se pesaron oligonucleótidos ISIS (32-35 mg) en un vial de vidrio, se agregaron 120 pL de agua y se disolvió el oligonucleótido antisentido en solución al calentar el vial a 50 °C. Parte de la muestra precalentada (75 µ??) se colocó con pipeta en un micro-viscosimetro (Cambridge). La temperatura del micro-viscosimetro se estableció en 25 °C y se midió la viscosidad de la muestra. Se colocó con pipeta otra parte (20 pL) de la muestra precalentada en 10 mL de agua para realizar la lectura UV a 260 nM, a 85 °C (instrumento Cary UV) . Los resultados se presentan en la Tabla 23 e indican que todas las soluciones de oligonucleótidos antisentido tienen una viscosidad óptima según el criterio establecido anteriormente.
Tabla 23
Viscosidad y concentración de ol igonucleótidos antisentido ISIS que se dirigen a GCGR humano
Ejemplo 18: Farmacocinética de oligonucleótidos antisentido en el hígado de ratón CD1
Los ratones CD1 se trataron con ISIS 449884 y se evaluó la semivida del oligonucleótido, así como el tiempo que transcurre hasta la degradación del oligonucleótido y su eliminación del hígado.
Tratamiento
A un grupo de diez ratones CD1 se le inyectó de
forma subcutánea, dos veces por semana, durante 2 semanas 50 mg/kg de ISIS 449884. Se sacrificaron grupos de cinco ratones 3 días y 56 días después de la dosis final, Se extrajeron los hígados para analizarlos.
Medición de la concentración de oligonucleótido
Se midió la concentración del oligonucleótido de longitud completa, así como la concentración total de oligonucleótido (incluyendo la forma degradada). El método usado es una modificación de métodos publicados previamente (Leeds et ál., 1996; Geary et ál., 1999) que consiste en la extracción de fenol -cloroformo (líquido-líquido) seguida de la extracción de la fase sólida. Se agregó un estándar interno (ISIS 355868, un oligonucleótido de fosforotioato modificado con 2 ' -0-metoxietilo de 27 mer, GCGTTTGCTCTTCTTCTTGCGTTTTTT, designado en la presente como SEQ ID NO: 119) antes de la extracción. Las concentraciones de muestra de tejido se calcularon usando curvas de calibración, con un límite inferior de cuantificación (LLOQ) de aproximadamente 1,14 g/g. Las semividas se calcularon usando el software WinNonlin (PHARSIGHT) .
Los resultados se presentan en la Tabla 24, se expresan como ]ig/g de tejido hepático. La semivida de ISIS 449884 se calculó como de 15,1 días.
Tabla 24
Concentración de oligonucleótido de ISIS 449884
hígado de ratones CD1
Ejemplo 19: Efecto de oligonucleótidos antisentido ISIS que se dirigen a GCGR humano en monos cynomolgus
Los monos cynomolgus fueron tratados con oligonucleótidos antisentido ISIS seleccionados de los estudios descritos en los Ejemplos 14-18. Se evaluó la eficacia y tolerabilidad del oligonucleótido antisentido, así como su perfil fa rma co cinét i co en el hígado y riñon. Los oligonucleótidos antisentido humanos analizados también tienen reactividad cruzada con la secuencia genómica de rhesus (designada en la presente como SEQ ID NO: 3) . Cuanto mayor sea la complementar iedad entre el oligonucleótido humano y la secuencia de mono rhesus, será más probable que el oligonucleótido humano tenga reactividad cruzada con la secuencia de mono rhesus. Los sitios de inicio y detención de cada oligonucleótido para la SEQ ID NO: 3
se presentan en la Tabla 25. "Sitio de inicio" indica el nucleótido más cercano a 5' al cual el gapmer se dirige en la secuencia génica de mono rhesus.
Tabla 25
Complementariedad de ol igonucleótido antisentido a la
SEQ ID NO: 3
Tratamiento
Antes del estudio, los monos se mantuvieron en cuarentena durante un periodo de 5 semanas, durante el cual los animales fueron observados a diario para verificar su salud general. Los monos tenían entre 2-3 años y pesaban entre 2 y 5 kg . A nueve grupos de cinco monos cynomolgus asignados aleatoriamente se les inyectó por vía subcutánea oligonucleótido ISIS o PBS, usando una aguja de dosificación de acero inoxidable y una jeringa de tamaño adecuado, en la región intracapsular y la parte externa del muslo de los monos. Se les administró a los monos cuatro veces por semana durante la primera semana (días 1, 3, 5 y 7) como dosis de carga, y luego una vez por semana durante las semanas 2 -13, una dosis de 40 mg/kg de ISIS 325568, ISIS 398471, ISIS 436140, ISIS 448766, ISIS 449884, ISIS 459014, ISIS 459032, ISIS 459040 o ISIS 459157. A un grupo de control de 8 monos cynomolgus se le inyectó PBS por vía subcutánea tres/cuatro veces por semana durante la primera semana (días 1, 3, 5 y 7), y luego una vez por semana durante las semanas 2-13.
Durante el período de estudio, los monos fueron observados dos veces por día para verificar señales de enfermedad o molestia, Cualquier animal que experimentara más que una molestia o dolor momentáneo o
ligero debido al tratamiento, heridas o enfermedad, fue tratado por el equipo veterinario con analgésicos o agentes aprobados para aliviar el dolor después de consultar con el Director del Estudio. Cualquier animal con una salud deficiente o posiblemente moribundo fue identificado para un monitoreo adicional y posible eutanasia. Por ejemplo, un animal del grupo tratado con ISIS 436140 fue sacrificado en el dia 86, y un animal del grupo tratado con ISIS 459040 fue sacrificado en el dia 71. La eutanasia programada de los animales se llevó a cabo en el dia 93 mediante desangrado después de anestesia inducida con ketamina/xilazina y administración de pentobarbital de sodio. Los protocolos descritos en el Ejemplo fueron aprobados por el Comité Institucional para el Cuidado y Uso de Animales (IACUC) .
Reducción hepática objetivo
Análisis de ARN
En el dia 93, se extrajo ARN del tejido hepático para realizar el análisis de PCR en tiempo real de GCGR, usando el set de sonda y cebador humanos RTS1508. También se llevaron a cabo análisis usando el set de sonda y cebador de mono rhesus-humano RTS1479 (secuencia directa ATCTCCTGCCCCTGGTACCT, designada en la presente como SEQ ID NO: 120, secuencia inversa
GGTCCACGCACCCACTGA, designada en la presente como SEQ ID NO: 121, secuencia de sonda ACCGCTTCGTGTTCAAGAGATGCG, designada en la presente como SEQ ID NO: 122) . Los resultados se presentan como porcentaje de inhibición de ARNm de GCGR, en relación con el control con PBS, normalizado al gen constitutivo Ciclofilina, Se obtuvieron resultados similares en la normalización con RIBOGREEN®. Como se muestra en la Tabla 26, el tratamiento con oligonucleótidos antisentido ISIS dio como resultado una reducción significativa de ARNm de GCGR en comparación con el control con PBS. Específicamente, el tratamiento con ISIS 449884 dio como resultado la reducción más significativa de expresión de ARNm de GCGR.
Tabla 26
Porcentaje de inhibición de ARNm de GCGR en el hígado de mono cynomolgus en relación con el control con PBS
Análisis de los niveles de glucagón
Los niveles de glucagón en plasma se midieron antes de la dosificación y en las semanas 3, 6, 7 y 10 de tratamiento, Dado que los niveles de glucagón cambian en base al nivel de estrés del animal, los monos fueron sedados con ketamina administrada por medio de inyección intramuscular antes de tomar la muestra de sangre, Los animales ayunaron durante la noche antes de la extracción. Se extrajeron aproximadamente 1,8-2,0 mL de sangre de la vena femoral y se colocaron en tubos de K2-EDTA que contenían 10 L/mL de inhibidor de DPP-IV y 250 KIU/mL de aprotinina. Los tubos se invirtieron para
mezclar la sangre con las soluciones y se colocaron en agua helada. Se centrifugaron muestras de sangre a 3.000 g durante 15 minutos a 4-8 °C dentro de los 30 minutos posteriores a la extracción de sangre.
Un aumento en los niveles de glucagón es una consecuencia de la inhibición de los niveles de GCGR. Se midieron los niveles de glucagón usando un analizador químico clínico automático (Hitachi Olympus AU400e, Melville, NY) . Los resultados se presentan en la Tabla 27 e indican que la inhibición de los niveles del receptor de glucagón mediante tratamiento con oligonucleótido antisentido da como resultado un aumento significativo en los niveles de glucagón en plasma. Específicamente, el tratamiento con ISIS 449884 dio como resultado un aumento dependiente del tiempo en los niveles de glucagón.
Tabla 27
Niveles de glucagón en el hígado de mono cynomolgus luego de tratamiento antisentido (pg/mL)
Estudios de tolerabilidad
Mediciones de peso corporal y de los órganos
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la salud general de los animales, el peso corporal y de los órganos se midió en el día 93. Los pesos corporales se midieron y se presentan en la Tabla 28. El peso de los órganos se midió y los datos también se presentan en la Tabla 28. Los resultados indican que el efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en el peso corporal y de los órganos estaba dentro del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido.
Específicamente, el tratamiento con ISIS 448994 fue bien tolerado en términos de peso corporal y de los órganos de los monos .
Tabla 28
Peso corporal y de los órganos de mono cynomolgus
comparación con los niveles antes de la dosis
Función hepática
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función hepática, se recogieron muestras de sangre de todos los grupos de estudio. Las muestras de sangre se extrajeron por medio de punción en la vena femoral en el día 95, 48 horas después de la dosis. Los monos ayunaron durante la noche antes de la extracción de sangre. La sangre se recogió en tubos que contenían anticoagulante K2-EDTA, los cuales se centrifugaron para obtener el plasma. Los niveles de varios marcadores de función hepática se midieron usando un analizador químico Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co. , Japón) . Los niveles en plasma de ALT y AST se midieron y los resultados se presentan en la Tabla 29 y se expresan en IU/L. La bilirrubina, un marcador de la función hepática, se midió de manera similar y se presenta en la Tabla 29, expresada en mg/dL. El resultado indica que los oligonucleótidos antisentido no tuvieron efecto en la función hepática fuera del rango esperado para los oligonucleótidos antisentido. Específicamente, el tratamiento con ISIS 448994 fue bien tolerado en términos de la función hepática en monos.
Tabla 29
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en los marcadores de función renal en el plasma de monos cynomol gus
Función renal
Para evaluar el efecto de oligonucleótidos ISIS en la función renal, se recogieron muestras de sangre de todos los grupos de estudio. Las muestras de sangre se extrajeron por medio de punción en la vena femoral en el día 95, 48 horas después de la dosis. Los monos ayunaron durante la noche antes de la extracción de sangre. La sangre se recogió en tubos que contenían anticoagulante K2-EDTA, los cuales se centrifugaron para obtener el plasma. Los niveles de BUN y creatinina se midieron usando un analizador químico Toshiba 200FR NEO (Toshiba Co . , Japón). Los resultados se presentan en la Tabla 30,
expresados en mg/dL.
Los datos de la química de plasma indican que la mayoría de los oligonucleótidos ISIS no tuvo efecto en la función renal fuera del rango esperado para oligonucleótidos antisentido. Específicamente, el tratamiento con ISIS 449884 fue bien tolerado en términos de la función renal de los monos.
Tabla 30
Efecto del tratamiento con oligonucleótido antisentido en los niveles de BUN y creatinina en plasma (mg/dL) en monos cynomolgus
Hematología
Para evaluar cualquier efecto de los oligonucleótidos ISIS en monos cynomolgus en parámetros
hematológicos , se tomaron muestras de sangre de aproximadamente 1,3 mL en la semana 11 de cada uno de los animales de estudio disponibles en tubos que contenían K2-EDTA. Las muestras se analizaron para verificar el conteo de glóbulos rojos (RBC) , conteo de glóbulos blancos (WBC) , conteos de glóbulos blancos individuales, tal como monocitos, neutrófilos, linfocitos, así como conteo de plaquetas, contenido de hemoglobina y hematocritos , usando un analizador hematológico ADVIA120 (Bayer, EUA) . Los datos se presentan en las Tablas 31 y 32.
Los datos indican que los oligonucleótidos no provocaron cambios en los parámetros hematológicos fuera del rango esperado para oligonucleótidos antisentido con esta dosis. Específicamente, el tratamiento con ISIS 448994 fue bien tolerado en términos de los parámetros hematológicos de los monos.
Tabla 31
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en varias células sanguíneas en monos cynomolgus
Tabla 32
Efecto del tratamiento con oligonucleótidos antisentido en parámetros hematológicos en monos cynomolgus
En general, los resultados del estudio indican que ISIS 449884 es el compuesto más potente y bien tolerado de los evaluados para inhibir el receptor de glucagón y es un candidato importante para el tratamiento de enfermedades metabólicas, tal como diabetes, obesidad, resistencia a la insulina y deficiencia de insulina.
Claims (51)
1. Un compuesto que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos y que tiene una secuencia de nucleobase que comprende una parte que consiste en al menos 8 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de los nucleótidos 7267-7283, 7270-7286, 7292-7308, 7295-7311, 7316-7332, 7319-7335, 7341-7357, 7344-7360, 7437-7453, 7365-7381, 7368-7384, 7389-7405, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734 o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2, donde dicho oligonucleótido modificado se dirige a la SEQ ID NO: 2.
2. Un compuesto, que comprende un oligonucleótido modificado que consiste en 12 a 30 nucleósidos unidos y que tienen una secuencia de nucleobase que comprende al menos una parte de 8 nucleobases de las SEQ ID NO: 11, 80, 17, 102, 31, 81, 82 u 85, donde dicho oligonucleótido modificado se dirige a la SEQ ID NO: 2.
3. El compuesto de la reivindicación 1, que consiste en un oligonucleótido modificado de cadena sim le .
4. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado es al menos 96 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
5. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado es al menos 97 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
6. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado es al menos 98 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
7. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado es al menos 99 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
8. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado es 100 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
9. El compuesto de la reivindicación 1, donde al menos un enlace internucleósido es un enlace internucleósido modificado.
10. El compuesto de la reivindicación 9, donde al menos un enlace internucleósido es un enlace internucleósido de fos forotioato .
11. El compuesto de la reivindicación 1, donde al menos un nucleósido del oligonucleótido modificado comprende un azúcar modificado.
12. El compuesto de la reivindicación 10, donde el al menos un azúcar modificado es un azúcar bicíclico.
13. El compuesto de la reivindicación 12, donde cada uno del al menos un azúcar biciclico comprende un puente ' -CH2-N (R) -0-2 ' donde R es, independientemente, H, alquilo C1-C12 o un grupo protector.
14. El compuesto de la reivindicación 12, donde cada uno del al menos un azúcar biciclico comprende un puente 4 ' -CH (CH3 ) -0-2 ' .
15. El compuesto de la reivindicación 11, donde al menos un azúcar modificado comprende un grupo 2'-0-metoxietilo .
16. El compuesto de la reivindicación 1, donde al menos un nucleósido comprende una nucleobase modificada.
17. El compuesto de la reivindicación 16, donde la nucleobase modificada es una 5-metilcitosina .
18. El compuesto de la reivindicación 1, donde el ol igonucleótido modificado comprende: un segmento de hueco que consiste en desoxinucleósidos unidos; un segmento de ala 5' que consiste en nucleósidos unidos; y un segmento de ala 3' que consiste en nucleósidos unidos; donde el segmento de hueco está ubicado entre el segmento de ala 5' y el segmento de ala 3' y donde cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado.
19. El compuesto de la reivindicación 18, donde el o 1 i gonu c 1 eó t i do modificado comprende: un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; u n s e gm e n t o de ala 5' que consiste e n t r e s nucleósidos unidos; y un segmento de ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos; donde el segmento de hueco está ubicado entre el segmento de ala 5' y el segmento de ala 3' y donde cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modi f i cado .
20. El compuesto de la reivindicación 17, donde el ol igonucleótido modificado comprende: un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; un segmento de ala 5' que consiste en tres nucleósidos unidos; y un segmento de ala 3' que consiste en cuatro nucleósidos unidos; donde el segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3' , donde cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado con 2 ' -O-me t ox i e t i 1 o ; y donde cada enlace internucleósido es un enlace de f os f orotioato .
21. El compuesto de la reivindicación 1, donde el oligonucleótido modificado consiste en 17 nucleósidos unido s .
22. El compuesto de la reivindicación 18, donde el oligonucleótido modificado consiste en 17 nucleósidos unidos .
23. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 35 nucleósidos unidos.
24. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 25 nucleósidos unidos.
25. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 24 nucleósidos unidos.
26. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 23 nucleósidos unidos,
27. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 22 nucleósidos unidos.
28. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en de 17 a 21 nucleósidos unidos.
29. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en una secuencia de nucleobases de las SEQ ID NO: 11 u 80.
30. El compuesto de la reivindicación 1, donde dicho oligonucleótido modificado consiste en la secuencia de nucleobases de la SEQ ID NO: 11 u 80 y comprende : un segmento de hueco que consiste en diez desoxinucleósidos unidos; un segmento de ala 5' que consiste en cinco nucleósidos unidos; un segmento de ala 3' que consiste en cinco nucleósidos unidos; donde el segmento de hueco se encuentra ubicado entre el segmento del ala 5' y el segmento del ala 3', donde cada nucleósido de cada segmento de ala comprende un azúcar modificado de 2 ' -O-metoxietilo , donde cada enlace internucleósido de dicho oligonucleótido modificado es un enlace de fos forotioato y donde cada residuo de citidina de dicho oligonucleótido modificado es una 5-metilcitidina .
31. El compuesto de la reivindicación 1, donde el oligonucleótido modificado tiene una secuencia de nucleobases que comprende una parte que consiste en al menos 17 nucleobases contiguas complementarias a una parte de igual longitud de los nucleótidos 7267-7283, 7270-7286, 7292-7308, 7295-7311, 7316-7332, 7319-7335, 7341-7357, 7344-7360, 7437-7453, 7365-7381, 7368-7384, 7389-7405, 7392-7408, 7416-7432, 7440-7456, 7783-7799, 8133-8152, 8144-8160, 9804-9823, 10718-10734 o 15743-15762 de la SEQ ID NO: 2 y donde dicho oligonucleótido modificado es al menos 96 % complementario a la SEQ ID NO: 2.
32. Una composición que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-30 o sal de este y al menos uno de un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable.
33. Un método que comprende administrarle a un animal el compuesto o composición de cualquiera de las reivindicaciones 1-30.
34. El método de la reivindicación 33, donde el animal es un ser humano.
35. El método de la reivindicación 33, donde la administración del compuesto previene, trata, mejora, alivia o enlentece la evolución de la enfermedad o afección metabólica.
36. El método de la reivindicación 35, donde la enfermedad o afección es diabetes.
37. El método de la reivindicación 35, donde la enfermedad o afección es diabetes tipo 2.
38. Un método para reducir los niveles de glucosa en sangre en un animal que comprende administrarle a dicho animal el compuesto de la reivindicación 1.
39. El método de la reivindicación 38, donde el animal es un ser humano.
40. El método de la reivindicación 38, donde los niveles de glucosa en sangre son niveles de glucosa plasma o los niveles de glucosa en suero.
41. El método de la reivindicación 38, donde el animal es un animal diabético.
42. Un método para prevenir o retrasar la aparición de una enfermedad o afección asociada con GCGR en un animal que comprende administrarle al animal una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz del compuesto de la reivindicación 1.
43. El método de la reivindicación 42, donde el animal es un ser humano.
44. El método de la reivindicación 42, donde la enfermedad o afección es diabetes.
45. El método de la reivindicación 42, donde la enfermedad o afección es diabetes tipo 2.
46. Un método para prevenir o retrasar la aparición del aumento en los niveles de glucosa en sangre en un animal que comprende administrarle al animal una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz del compuesto de la reivindicación 1.
47. El método de la reivindicación 46, donde el animal es un ser humano.
48. El método de la reivindicación 46, donde los niveles de glucosa en sangre son niveles de glucosa plasma o los niveles de glucosa en suero.
49. El método de la reivindicación 46, donde el animal es un animal diabético.
50. El método de la reivindicación 31, que comprende administrar conjuntamente el compuesto o composición y un segundo agente.
51. El método de la reivindicación 50, donde el compuesto o composición y el segundo agente se administran concomitantemente .
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US20180036335A1 (en) * | 2015-03-03 | 2018-02-08 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for modulating mecp2 expression |
JP6861641B2 (ja) * | 2015-04-02 | 2021-04-21 | アールイーエムディー バイオセラピューティクス,インコーポレイテッドREMD Biotherapeutics,Inc | グルカゴン受容体アンタゴニスト抗体を用いた肥満症および非アルコール性脂肪性肝疾患または非アルコール性脂肪性肝炎を治療するための方法 |
US10415038B2 (en) | 2015-04-03 | 2019-09-17 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating TMPRSS6 expression |
CN108026529A (zh) * | 2015-09-30 | 2018-05-11 | Ionis制药公司 | 组合疗法 |
MA46089A (fr) | 2016-08-30 | 2019-07-10 | Regeneron Pharma | Procédés de traitement de la résistance à l'insuline grave par interférence avec la signalisation du récepteur du glucagon |
US11400161B2 (en) | 2016-10-06 | 2022-08-02 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Method of conjugating oligomeric compounds |
EP3548005A4 (en) | 2016-11-29 | 2020-06-17 | Puretech Health LLC | EXOSOMES FOR THE ADMINISTRATION OF THERAPEUTIC AGENTS |
CN108174843B (zh) * | 2018-01-24 | 2018-11-13 | 广州市进德生物科技有限公司 | 一种胰高血糖素保护剂及其应用 |
WO2020184700A1 (ja) * | 2019-03-14 | 2020-09-17 | レナセラピューティクス株式会社 | Ihh発現を調節するための核酸複合体 |
Family Cites Families (113)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2699808A (en) | 1944-10-06 | 1955-01-18 | Mark W Lowe | Apparatus for peeling tomatoes |
US2699508A (en) | 1951-12-21 | 1955-01-11 | Selectronics Inc | Method of mounting and construction of mounting for low frequency piezoelectric crystals |
US4426330A (en) | 1981-07-20 | 1984-01-17 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US4534899A (en) | 1981-07-20 | 1985-08-13 | Lipid Specialties, Inc. | Synthetic phospholipid compounds |
US5354844A (en) | 1989-03-16 | 1994-10-11 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Protein-polycation conjugates |
US5108921A (en) | 1989-04-03 | 1992-04-28 | Purdue Research Foundation | Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules |
US5227170A (en) | 1989-06-22 | 1993-07-13 | Vestar, Inc. | Encapsulation process |
US5356633A (en) | 1989-10-20 | 1994-10-18 | Liposome Technology, Inc. | Method of treatment of inflamed tissues |
US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
US5527528A (en) | 1989-10-20 | 1996-06-18 | Sequus Pharmaceuticals, Inc. | Solid-tumor treatment method |
US5580575A (en) | 1989-12-22 | 1996-12-03 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Therapeutic drug delivery systems |
US5469854A (en) | 1989-12-22 | 1995-11-28 | Imarx Pharmaceutical Corp. | Methods of preparing gas-filled liposomes |
US5264618A (en) | 1990-04-19 | 1993-11-23 | Vical, Inc. | Cationic lipids for intracellular delivery of biologically active molecules |
US6582908B2 (en) | 1990-12-06 | 2003-06-24 | Affymetrix, Inc. | Oligonucleotides |
WO1992017611A1 (en) | 1991-03-28 | 1992-10-15 | The University Of Tennessee Research Corporation | Dna silver staining |
JP3220180B2 (ja) | 1991-05-23 | 2001-10-22 | 三菱化学株式会社 | 薬剤含有タンパク質結合リポソーム |
CA2103377A1 (en) | 1991-06-18 | 1992-12-19 | Bruno Calabretta | Selective inhibition of leukemic cell proliferation by bcr-abl antisense oligonucleotides |
DE69225227T2 (de) | 1991-06-27 | 1998-10-29 | Genelabs Tech Inc | Screeningtest für den nachweis von dna-bindenden molekülen |
NZ244306A (en) | 1991-09-30 | 1995-07-26 | Boehringer Ingelheim Int | Composition for introducing nucleic acid complexes into eucaryotic cells, complex containing nucleic acid and endosomolytic agent, peptide with endosomolytic domain and nucleic acid binding domain and preparation |
US5521291A (en) | 1991-09-30 | 1996-05-28 | Boehringer Ingelheim International, Gmbh | Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells |
US5804383A (en) | 1992-08-21 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Method and assay for detection of the expression of allele-specific mutations by allele-specific in situ reverse transcriptase polymerase chain reaction |
JP3515112B2 (ja) | 1992-08-28 | 2004-04-05 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | グルカゴン・レセプタ |
US5776725A (en) | 1992-08-28 | 1998-07-07 | Zymogenetics, Inc. | Recombinant production of glucagon receptors |
US6410324B1 (en) | 2001-04-27 | 2002-06-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of tumor necrosis factor receptor 2 expression |
US5872242A (en) | 1992-10-05 | 1999-02-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide inhibition of ras |
US5985558A (en) | 1997-04-14 | 1999-11-16 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense oligonucleotide compositions and methods for the inibition of c-Jun and c-Fos |
US5583020A (en) | 1992-11-24 | 1996-12-10 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Permeability enhancers for negatively charged polynucleotides |
JPH08504559A (ja) | 1992-12-14 | 1996-05-14 | ハネウエル・インコーポレーテッド | 個別に制御される冗長巻線を有するモータシステム |
JP3351476B2 (ja) | 1993-01-22 | 2002-11-25 | 三菱化学株式会社 | リン脂質誘導体及びそれを含有するリポソーム |
US5395619A (en) | 1993-03-03 | 1995-03-07 | Liposome Technology, Inc. | Lipid-polymer conjugates and liposomes |
US5462854A (en) | 1993-04-19 | 1995-10-31 | Beckman Instruments, Inc. | Inverse linkage oligonucleotides for chemical and enzymatic processes |
US6455689B1 (en) | 1993-04-30 | 2002-09-24 | Biognostik Gesellschaft für Biomolekulare Diagnostik mbH | Antisense-oligonucleotides for transforming growth factor-β (TGF-β) |
US5534259A (en) | 1993-07-08 | 1996-07-09 | Liposome Technology, Inc. | Polymer compound and coated particle composition |
US5543158A (en) | 1993-07-23 | 1996-08-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable injectable nanoparticles |
US5417978A (en) | 1993-07-29 | 1995-05-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Liposomal antisense methyl phosphonate oligonucleotides and methods for their preparation and use |
US5801154A (en) | 1993-10-18 | 1998-09-01 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein |
US5595756A (en) | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
US5563036A (en) | 1994-04-29 | 1996-10-08 | Tularik, Inc. | Transcription factor-DNA binding assay |
US5543152A (en) | 1994-06-20 | 1996-08-06 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Sphingosomes for enhanced drug delivery |
US5612455A (en) | 1994-07-05 | 1997-03-18 | Tularik, Inc. | Nuclear factors and binding assay |
US5734039A (en) | 1994-09-15 | 1998-03-31 | Thomas Jefferson University | Antisense oligonucleotides targeting cooperating oncogenes |
US5591721A (en) | 1994-10-25 | 1997-01-07 | Hybridon, Inc. | Method of down-regulating gene expression |
US5512295A (en) | 1994-11-10 | 1996-04-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Synthetic liposomes for enhanced uptake and delivery |
US5656408A (en) | 1996-04-29 | 1997-08-12 | Xerox Corporation | Coated carrier particles |
US6251873B1 (en) | 1997-03-07 | 2001-06-26 | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | Antisense compounds to CD14 |
JP3756313B2 (ja) | 1997-03-07 | 2006-03-15 | 武 今西 | 新規ビシクロヌクレオシド及びオリゴヌクレオチド類縁体 |
US6770748B2 (en) | 1997-03-07 | 2004-08-03 | Takeshi Imanishi | Bicyclonucleoside and oligonucleotide analogue |
US6133246A (en) | 1997-08-13 | 2000-10-17 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense oligonucleotide compositions and methods for the modulation of JNK proteins |
EP2253639A1 (en) | 1997-09-12 | 2010-11-24 | Exiqon A/S | Bi- and tri-cyclic nucleoside, nucleotide and oligonucleoide analogues |
US6794499B2 (en) | 1997-09-12 | 2004-09-21 | Exiqon A/S | Oligonucleotide analogues |
WO1999015643A2 (en) | 1997-09-25 | 1999-04-01 | University Of Florida | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS TARGETED TO ANGIOTENSI N CONVERTING ENZYME mRNA AND METHODS OF USE |
US6238921B1 (en) | 1998-03-26 | 2001-05-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of human mdm2 expression |
US20030203862A1 (en) | 1998-03-26 | 2003-10-30 | Miraglia Loren J. | Antisense modulation of MDM2 expression |
US20030228597A1 (en) | 1998-04-13 | 2003-12-11 | Cowsert Lex M. | Identification of genetic targets for modulation by oligonucleotides and generation of oligonucleotides for gene modulation |
WO2000005418A1 (en) | 1998-07-23 | 2000-02-03 | Gen-Probe Incorporated | Methods for detecting and measuring spliced nucleic acids |
US6228642B1 (en) | 1998-10-05 | 2001-05-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide modulation of tumor necrosis factor-(α) (TNF-α) expression |
US5962673A (en) * | 1998-11-20 | 1999-10-05 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of inhibitor-kappa B kinase-alpha expression |
US6692959B2 (en) | 1998-11-25 | 2004-02-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of IL-1 receptor-associated kinase-4 expression |
US20030087854A1 (en) | 2001-09-10 | 2003-05-08 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of fibroblast growth factor receptor 3 expression |
DE60037938T2 (de) | 1999-02-26 | 2009-01-29 | The University Of British Columbia, Vancouver | Antisense-therapie für trpm-2 |
US5998148A (en) | 1999-04-08 | 1999-12-07 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of microtubule-associated protein 4 expression |
EP1178999B1 (en) | 1999-05-04 | 2007-03-14 | Santaris Pharma A/S | L-ribo-lna analogues |
US6525191B1 (en) | 1999-05-11 | 2003-02-25 | Kanda S. Ramasamy | Conformationally constrained L-nucleosides |
US6492152B1 (en) | 1999-06-15 | 2002-12-10 | The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Core 1 β3-galactosyl transferases and methods of use thereof |
US6284538B1 (en) * | 1999-07-21 | 2001-09-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibition of PTEN expression |
KR20020064915A (ko) | 1999-11-29 | 2002-08-10 | 에이브이아이 바이오파마 인코포레이티드 | 안티센스 항박테리아 방법 및 조성물 |
US6869762B1 (en) * | 1999-12-10 | 2005-03-22 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Crohn's disease-related polymorphisms |
US6602857B1 (en) * | 2000-01-18 | 2003-08-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US20020055479A1 (en) * | 2000-01-18 | 2002-05-09 | Cowsert Lex M. | Antisense modulation of PTP1B expression |
US6287860B1 (en) | 2000-01-20 | 2001-09-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense inhibition of MEKK2 expression |
US6770486B1 (en) | 2000-02-08 | 2004-08-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Optimization of ligand affinity for RNA targets using mass spectrometry |
AU2001250572A1 (en) | 2000-04-07 | 2001-10-23 | Epigenomics Ag | Detection of single nucleotide polymorphisms (snp's) and cytosine-methylations |
WO2001092524A2 (en) | 2000-05-26 | 2001-12-06 | Aeomica, Inc. | Myosin-like gene expressed in human heart and muscle |
WO2002016553A2 (en) | 2000-08-18 | 2002-02-28 | Proskelia | Regulator gene and system useful for the diagnosis and therapy of osteoporosis |
AU2001296412A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-04-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of mekk4 expression |
US6909031B2 (en) | 2000-12-06 | 2005-06-21 | Deltagen, Inc. | Transgenic mice containing glucagon receptor gene disruptions |
WO2003004602A2 (en) | 2001-07-03 | 2003-01-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Nuclease resistant chimeric oligonucleotides |
US7425545B2 (en) | 2001-07-25 | 2008-09-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of C-reactive protein expression |
BR0311618A (pt) | 2002-06-06 | 2006-06-13 | Monsanto Technology Llc | métodos e composições para produção de linhagens de milho com transformabilidade aumentada |
US20040023384A1 (en) * | 2002-07-31 | 2004-02-05 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of G protein-coupled receptor 12 expression |
AU2003291753B2 (en) | 2002-11-05 | 2010-07-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation |
AU2003291755A1 (en) | 2002-11-05 | 2004-06-07 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligomers comprising modified bases for binding cytosine and uracil or thymine and their use |
ATE517992T1 (de) | 2002-11-14 | 2011-08-15 | Dharmacon Inc | Funktionelle und hyperfunktionelle sirna |
EP1578398A2 (en) * | 2002-12-19 | 2005-09-28 | ALZA Corporation | Stable, non-aqueous, single-phase gels and formulations thereof for delivery from an implantable device |
US7750142B2 (en) | 2003-04-28 | 2010-07-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of glucagon receptor expression |
US7399853B2 (en) | 2003-04-28 | 2008-07-15 | Isis Pharmaceuticals | Modulation of glucagon receptor expression |
WO2004106356A1 (en) | 2003-05-27 | 2004-12-09 | Syddansk Universitet | Functionalized nucleotide derivatives |
US7825235B2 (en) | 2003-08-18 | 2010-11-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression |
US7427672B2 (en) | 2003-08-28 | 2008-09-23 | Takeshi Imanishi | Artificial nucleic acids of n-o bond crosslinkage type |
US20050142581A1 (en) | 2003-09-04 | 2005-06-30 | Griffey Richard H. | Microrna as ligands and target molecules |
US20050053981A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-03-10 | Swayze Eric E. | Gapped oligomeric compounds having linked bicyclic sugar moieties at the termini |
US20050074801A1 (en) | 2003-09-09 | 2005-04-07 | Monia Brett P. | Chimeric oligomeric compounds comprising alternating regions of northern and southern conformational geometry |
AU2004274021B2 (en) | 2003-09-18 | 2009-08-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-thionucleosides and oligomeric compounds |
AU2004303464B2 (en) | 2003-12-23 | 2009-10-01 | Santaris Pharma A/S | Oligomeric compounds for the modulation of BCL-2 |
US7341835B2 (en) * | 2004-01-13 | 2008-03-11 | Affymetrix, Inc. | Methods of analysis of alternative splicing in mouse |
US7943754B2 (en) * | 2004-04-02 | 2011-05-17 | Rosetta-Genomics | Bioinformatically detectable group of novel regulatory bacterial and bacterial associated oligonucleotides and uses thereof |
EP1752536A4 (en) * | 2004-05-11 | 2008-04-16 | Alphagen Co Ltd | POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME |
EP1799859B1 (en) | 2004-09-17 | 2014-07-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Enhanced antisense oligonucleotides |
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ES2386578T3 (es) * | 2006-05-05 | 2012-08-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos y procedimientos para modular la expresión de PCSK9 |
ES2366973T3 (es) * | 2006-05-05 | 2011-10-27 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compuestos y procedimiento para modular la expresión génica. |
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