MX2013006343A - Derivados de hidantoina utiles como inhibidores de kv3. - Google Patents

Derivados de hidantoina utiles como inhibidores de kv3.

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Abstract

La invención proporciona compuestos de fórmula (I): (Ver Formula) dichos compuestos son inhibidores de canales Kv3 y de uso en la profilaxis o el tratamiento de trastornos relacionados.

Description

DERIVADOS DE HIDANTOÍNA ÚTILES COMO INHIBIDORES DE KV3 CAMPO TÉCNICO Esta invención se relaciona a compuestos novedosos, composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia, en particular en la profilaxis o tratamiento de trastornos de la audición, incluyendo pérdida auditiva y zumbido, así como esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia y trastornos del sueño.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La familia del canal del potasio de compuerta de voltaje Kv3 incluye a cuatro miembros, Kv3.1 , Kv3.2, Kv3.3, y Kv3.4. Los genes para cada uno de estos subtipos puede generar múltiples isoformas por empalme alternado, produciendo versiones con dominios diferentes de C-terminal. Trece isoformas han sido identificadas en mamíferos a la fecha, pero las corrientes expresadas por esas variantes parecen ser similares (Rudy and McBain, 2001 , Trends in Neurosciences 24, 517-526). Los canales de Kv3 son activados por despolarización de la membrana de plasma a voltajes más positivos que -20mV; además, los canales se desactivan rápidamente con la repolarización de la membrana. Estas propiedades biofísicas aseguran que los canales se abran hacia el pico de la fase de despolarización del potencial neuronal de acción para iniciar la repolarización. La terminación rápida del potencial de acción mediado por los canales Kv3 permite a la neurona recuperarse más instantáneamente para alcanzar los potenciales de membrana sub-umbrales a partir de los cuales potenciales de acción adicionales pueden ser activados. Como resultado, la presencia de canales Kv3 en ciertas neuronas contribuye a su capacidad de dar corriente a altas frencuencias (Rudy and McBain, 2001 , Trends in Neurosci. 24, 517-526). Los subtipos Kv3.1-3 son predominantes en el CNS (por sus siglas en inglés), mientras que los canales Kv3.4 son encontrados predominantemente en el músculo esquelético y las neuronas simpáticas (Weiser et al., 1994, J. Neurosci. 14, 949-972). Los subtipos del canal Kv3.1-3 son expresados diferencialmente por subclase de interneuronas en áreas del cerebro cortical e hipotalámica (por ejemplo Chow et al., 1999, J. eurosci. 19, 9332-9345; Martina et al., 1998, J. Neurosci. 18, 81 1 1-8125; McDonald y Mascagni, 2006, Neurosci. 138, 537-547, Chang et al., 2007, J. Comp. Neurol. 502, 953-972), en el tálamo (e.g. Kasten et al., 2007, J.Physiol. 584, 565-582), cerebelo (por ejemplo Sacco et al., 2006, Mol. Cell. Neurosci. 33, 170-179), y núcleos del auditorio del tallo cerebral (Li et al., 2001 , J. Comp. Neurol. 437, 196-218).
La caracterización de ratones en los que uno o más de los subtipos Kv3 ha sido borrado muestra que la ausencia de Kv3.1 ocasiona un aumento en la actividad locomotriz, una alteración en la actividad electroencefalográfica, y un patrón fragmentado del sueño (Joho et al., 1999, J.Neurophysiol. 82, 1855-1864). La deleción de Kv3.2 lleva a una reducción en el umbral de la convulsión y la alteración de la actividad electroencefalográfica cortical (Lau et al., 2000, J.Neurosci. 20, 9071-9085). La deleción de Kv3.3 está asociada con ataxia media y déficits motrices (McMahon et al., 2004, Eur. J.Neurosci. 19, 3317-3327). La doble deleción de Kv3.1 y Kv3.3 ocasiona un fenotipo grave caracterizado por convulsiones espontáneas, ataxia, y una aumento en la sensibilidad a los efectos de etanol (Espinosa et al., 2001 , J.Neurosci. 21 , 6657-6665; Espinosa et al., 2008, J.Neurosci. 28, 5570-5581 ).
La farmacología conocida de canales Kv3 es limitada. El tetraetilamonio (TE) ha sido mostrado inhibir los canales a concentraciones millimolares bajas (Rudy and McBain, 2001 , Trends in Neurosci. 24, 517-526), y las toxinas de sustancias depresoras de la sangre (BDS, por sus siglas en inglés) de la anémona de mar, Anemonia sulcata (Diochot et al., 1998, J. Biol. Chem. 273, 6744-6749), ha mostrado inhibir selectivamente los canales Kv3 con alta afinidad (Yeung et al., 2005, J.Neurosci. 25, 8735-8745). Además de los compuestos que actúan directamente en canales Kv3, los agonistas de los receptores que activan la proteína cinasa A (PKA) y la proteína cinasa C (PKC) han demostrado modular las corrientes mediadas por Kv3 en áreas específicas del cerebro, llevando a una reducción en la capacidad de las neuronas para pasar corriente a alta frecuencia (Atzori et al., 2000, Nat. Neurosci. 3, 791-798; Song et al., 2005, Nat Neurosci. 8, 1335-1342); estos estudios sugieren que la PKA y la PKC pueden específicamente fosforilar canales Kv3 en una manera específica de neuronas, causando una reducción en las corrientes mediadas por Kv3.
El trastorno bipolar, la esquizofrenia, la ansiedad, y la epilepsia son trastornos graves del sistema nervioso central que han sido asociados con una disminución en la función de las interneuronas inhibitorias y transmisión del ácido butírico gama-amino (GABA, por sus siglas en inglés) (Reynolds et al., 2004, Neurotox. Res. 6, 57-61 ; Benes et al., 2008, PNAS, 105, 20935-20940; Brambilla et al., 2003, Mol. Psychiatry. 8, 721 -37, 715; Aroniadou-Anderjaska et al., 2007, Amino Acids 32, 305-315; Ben-Ari, 2006, Crit. Rev. Neurobiol. 18, 135-144). Las células en cesta positivas de parvalbúmina que expresan canales Kv3 en la corteza y el hipocampo juegan un papel clave a generar una inhibición de retroalimentación dentro de los circuitos locales (Markram et al., 2004, Nat. Rev. Neurosci. 5, 793-807). Dada la dominancia relativa de la entrada sináptica excitante sobre la entrada inhibitoria a las neuronas piramidales glutamatérgicas en estos circuitos, el paso rápido de corriente de las interneuronas que suministran la entrada inhibitoria es esencial para asegurar una inhibición equilibrada. Además, la planeación precisa de la entrada inhibitoria es necesaria para sostener la sincronización de red, por ejemplo, en la generación de oscilaciones potenciales de campo de frecuencia gama que han sido asociadas con la función cognoscitiva (Fisahn et al., 2005, J.Physiol 562, 65-72; Engel et al., 2001 , Nat. Rev. Neurosci. 2, 704-716). En particular, una reducción en las oscilaciones gama ha sido observada en pacientes con esquizofrenia (Spencer et al., 2004, PNAS 101 , 17288-17293). Por consiguiente, quizá se espere que los moduladores positivos de canales Kv3 aumenten las capacidades de dar corriente de grupos específicos de neuronas de paso rápido de corriente en el cerebro. Estos efectos pueden ser beneficiosos en trastornos asociados con la actividad anormal de estos grupos neuronales.
Además, los canales Kv3.2 han han demostrado ser expresados por neuronas del núcleo supraquiasmático (SCN, por sus siglas en inglés) el principal marcapasos circadiano en el CNS (Schulz and Steimer, 2009, CNS Drugs 23 Suppl 2, 3-13).
La pérdida auditiva representa una epidemia que afecta aproximadamente 16% de la población en Europa y EEUU (Goldman and Holme, 2010, Drug Discovery Today 15, 253-255), con una prevalencia estimada de 250 millones de personas alrededor del mundo (B.Shield, 2006, EValuation of the Social y economic costs of hearing impariment. Un reporte para Hear-lt-AISBL: www.hear-it.org/multimedia/Hear_lt_Report_October_2006.pdf). Ya que la esperanza de vida continúa aumentando, así también lo hace el número de personas que sufren de trastornos de audición. Además, se cree que los los de vida modernos pueden exacerbar este carga a medida que la generación más joven envejece. Las condiciones de la audición, incluyendo el zumbido tienen un efecto profundo en la calidad de la vida, causando aislamiento social, depresión, dificultades de trabajo y relaciones, baja auto-estima, y prejuicios. Los canales iónicos de compuerta de voltaje de la familia Kv3 son expresados en niveles altos en los núcleos auditivos del tronco encefálico (Long Island et al., 2001 , J. Comp. Neurol. 437, 196-218) donde permiten el rápido paso de corriente de las neuronas que transmiten información auditiva de la cóclea a regiones más altas del cerebro. La pérdida de expresión de canal Kv3.1 en las neuronas auditivas centrales es observada en ratones con problemas de audición (von Hehn et al., 2004, J. Neurosci. 24, 1936-1940), y un descenso en la expresión Kv3.1 puede ser asociado con la pérdida del oído en ratones viejos (Jung et al. 2005 Neurol. Res. 27, 436-440). Además, la plasticidad patológica de las redes auditivas del tallo encefálico probablemente contribuye a síntomas que son experimentados por muchas personas que sufren de la pérdida auditiva de tipos diferentes. Estudios recientes han mostrado que la regulación de la función del canal Kv3.1 y la expresión juegan un papel principal en el control de la excitabilidad auditiva neuronal (Kaczmarek et al., 2005, Hearing Res. 206, 133-145), sugiriendo que este mecanismo podría justificar parte de los cambios plásticos que ocasionan el zumbido. Más específicamente, una reducción en las corrientes de potasio similares a Kv3 en las neuronas del núcleo de la cóclea dorsal ahora ha sido observada después de trauma acústico en ratas, sugiriendo que la disminución en la función de Kv3 podría contribuir al proceso patológico que es provocado por el ruido dañino (Pilati et al., 201 1 , Hearing Res., doi: 10.1016/j.hearingres.201 .10.008), y apoyar la hipótesis de que la modulación positiva de los canales Kv3 en los núcleos auditivos del tallo encefálico podrían tener un beneficio terapéutico en pacientes que sufren de la pérdida auditiva inducida por ruido. Por último, el síndrome de X Frágil y el autismo están asociados con frecuencia a la ultrasensibilidad de la entrada sensoria, incluyendo los estímulos auditivos. Conclusiones recientes sugieren que la proteína codificada por el gen FMR-I, cuya mutación o ausencia ocasionan el síndrome de X Frágil, puede regular directamente la expresión de los canales Kv3.1 en los núcleos auditivos del tallo encefálico (Strumbos et al., 2010, J.Neuroscience, in press), sugiriendo que la falta de regulación de los canales Kv3.1 podría ocasionar hiperacusia en pacientes que sufren de X Frágil X o de autismo. Por consiguiente, proponemos que los moduladores de moléculas pequeñas de los canales Kv3 en los núcleos auditivos del tallo encefálico podrían tener un beneficio en el tratamiento de trastornos del oído, incluyendo zumbido e hiperacusia auditiva asociada con el síndrome de X y Frágil y autismo.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I): en donde: Ri es H, o alquilo de Ci-4, halo, halo alquilo de Ci-4, CN, alcoxi de C-i-4, haloalcoxi de C- ; R2 es H, alquilo de C- , espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de Ci-4 o halo; R3 es H, alquilo de C -4, halo alquilo de Ci.4l halo; o R3 está ausente; R-13 es H, alquilo de C-i-4, halo alquilo de C1-4, halo; o R 3 está ausente; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo; X es C o N; Y es C o N; R4 es alquilo de C1.4; R5 es H, Deuterio, alquilo de C1-4; o R y R5 pueden ser fusionados para formar espiro carbocíclico de C3-4; en donde R2 y R3 pueden estar unidos al mismo o diferente átomo del anillo; y en donde R2 puede estar conectado a un átomo de anillo fusionado.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser proporcionados en forma de una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable. En una modalidad de la invención un compuesto de fórmula (I) es proporcionado en forma de una sal farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser utilizado como medicamentos, en particular para la profilaxis o tratamiento de trastornos de audición, incluyendo pérdida auditiva y zumbido, así como la esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia y trastornos del sueño.
Además, allí es proporcionado un método para la profilaxis o el tratamiento de trastornos de audición, incluyendo pérdida auditiva y zumbido, así como la esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia y trastornos del sueño administrando a un sujeto un compuesto de fórmula (I).
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser utilizados en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de trastornos de audición, incluyendo pérdida auditiva y zumbido, así como la esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia y trastornos del sueño.
También se proporcionan composiciones farmacéuticas de un compuesto de fórmula (I) y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptables.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La presente invención proporciona compuestos de fórmula (I): en donde: Ri es H, o alquilo de C1- l halo, halo alquilo de C^, CN, alcoxi de C1-4, haloalcoxi de C- ; R2 es H, alquilo de C -4, espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de Ci-4 o halo; R3 es H, alquilo de Ci-4> halo alquilo de Ci-4, halo; R 3 es H, alquilo de C- , halo alquilo de C-u, halo; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo; X es C o N; Y es C o N; R4 es alquilo de C1-4; R5 es H, Deuterio, alquilo de C1-4¡ o R4 y R5 pueden ser fusionados para formar espiro carbocíclico de C3-4; en donde R2 y R3 pueden estar unidos al mismo o diferente átomo del anillo; y en donde R2 puede estar conectado a un átomo de anillo fusionado.
Convenientemente R-? es H o metilo. En una modalidad de la invención Ri es H. En una segunda modalidad de la invención R-\ es alquilo de Ci-4, en particular R! es metilo.
Convenientemente R2 es H, F, metilo, etilo, isopropilo o un grupo escpiro de C3. En una modalidad de la invención R2 es H. En una segunda modalidad de la invención R2 es alquilo de C1-4, en un ejemplo particular de esta modalidad R2 es metilo, en un ejemplo adicional de esta modalidad R 2 es etilo y en otro ejemplo de esta modalidad R2 es propilo (por ejemplo isopropilo). En una tercera modalidad de la invención R2 es un grupo espiro de C3. En una cuarta modalidad de la invención R2 es un grupo espiro de C4. En una quinta modalidad de la invención R2 es halo, en particular fluoro.
Convenientemente R3 es H, F, metilo o etilo. En una modalidad de la invención R3 es H. En una segunda modalidad de la invención R3 es alquilo de C^, en un ejemplo particular de esta modalidad R3 es metilo, en un ejemplo adicional de esta modalidad R3 es etilo. En una tercera modalidad de la invención R3 es halo, en particular fluoro. El experto apreciará que, dependiendo del tamaño, la presencia de los heteroatomos y el grado de insaturación del anillo A, R3 puede estar ausente. En consecuencia, en otra modalidad de la invención R3 está ausente.
Convenientemente, R3 puede ser H, F, metilo o etilo y R2 puede ser H, F, metilo, etilo, isopropilo o un espiro carbocíclico C3-4- En particular, R3 puede ser H, F, metilo o etilo y R2 puede ser H, F, metilo, etilo, isopropilo o espiro carbocíclico de C3. En ciertas modalidades R3 es H y R2 es H, metilo, etilo, isopropilo o espiro carbocíclico de C3-4. En otras modalidades, R3 es metilo o etilo y R2 es metilo o etilo, en un ejemplo de esta modalidad R3 y R2 son ambos metilo (tal como unidos al mismo átomo de carbono del anillo), en un segundo ejemplo de esta modalidad R3 y R2 son ambos etilo (tal como unidos al mismo átomo de carbono del anillo). En modalidades adicionales R3 y R2 son ambos fluoro (tal como unidos al mismo átomo de carbono del anillo).
Convenientemente R13 es puede ser H, F o metilo. En una modalidad de la invención R-|3 es H. En una segunda modalidad de la invención Ri3 es alquilo de C- , en un ejemplo particular de esta modalidad Ri3 es metilo. En una tercera modalidad de la invención R-13 es halo, en particular fluoro. El experto apreciará que, dependiendo del tamaño, la presencia de heteroátomos y el grado de insaturación del anillo A, R13 puede estar ausente. Por consiguiente, en otra modalidad de la invención R13 está ausente.
En una modalidad de la invención A es un heterociclo de 5 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando considerados junto con el fenilo. En una segunda modalidad de la invención A es un heterociclo de 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo.
En ciertas modalidades el anillo A contiene un heteroátomo. En otras modalidades el anillo A contiene dos heteroátomos (por ejemplo dos átomos de oxígeno, alternativamente un átomo de oxigeno y un átomo de nitrógeno).
Convenientemente, A es dihidrofurano, isoxazol, dihidropiran, 1 ,3-dioxolano, 1 ,3-oxazina o dihidropirano fusionado con un grupo ciclopropilo. En una modalidad de la invención A es dihidrofurano. En una segunda modalidad de la invención A es dihidropirano. En una tercera modalidad de la invención A es dihidrofuran fusionado con un grupo ciclopropilo. En una cuarta modalidad la invención A es dihidropirano fusionado con un grupo ciclopropilo. En una quinta modalidad de la invención A es dihidrofuran, isoxazol o dihidropirano. En una sexta modalidad de la invención A es dihidrofurano, isoxazol o dihidropirano, fusionado con un grupo ciclopropilo. En una séptima modalidad de la invención A es 1 ,3-oxazina. En una octava modalidad de la invención A es 1 ,3-dioxolano.
Cuando A contiene un heterociclo de 5 miembros conteniendo un heteroátomo, convenientemente el átomo de oxígeno es situado en la posición meta con respecto al anillo fenilo.
Cuando A contiene un 5 heterociclo de miembros conteniendo un heteroátomo, convenientemente el heterociclo es dihidrofurano.
Cuando A contiene un heterociclo de 6 miembros conteniendo un heteroátomo, convenientemente el átomo de oxígeno es situado en la posición meta con respecto al anillo fenilo.
Cuando A contiene un heterociclo de 6 miembros conteniendo un heteroátomo, convenientemente el heterociclo es dihidropirano.
Cuando A es un anillo de cinco miembros, en modalidades particulares de la invención uno de R2, R3 y R13 es H y los otros son ambos metilo, por ejemplo uno de R2, R3 y R13 es H y los otros son ambos metilo unidos al mismo átomo de carbono. Alternativamente, cuando A es un anillo de cinco miembros, R2 es un grupo espiro de C3 y R3 y R13 son ambos H.
Cuando A es un anillo de cinco miembros fusionado con un grupo ciclopropilo, convenientemente R2, R3 y R13 son todos H.
Cuando A es un anillo de seis miembros, en modalidades particulares de la invención uno de R2, R3 y R13 es metilo y los otros son ambos H. Alternativamente cuando A es un anillo de seis miembros, R2 es un grupo espiro de C3 y R3 y R13 son ambos H.
Cuando A es un anillo de cinco miembros fusionado con un grupo ciclopropilo, convenientemente R2, R3 y R13 son todos H.
Cuando A es un anillo de seis miembros fusionado con un grupo ciclopropilo, convenientemente R2, R3 y R13 son todos H.
En una modalidad de la invención X es C y Y es C. En una segunda modalidad de la invención X es N y Y es C. En una tercera modalidad de la invención X es N y Y es N.
Convenientemente, R4 es metilo, etilo, isopropilo o t-butilo. En una modalidad de la invención R4 es metilo. En otra modalidad de la invención R4 es etilo. En una modalidad adicional de la invención R4 es propilo, tal como isopropilo. En una modalidad todavía adicional de la invención R4 es butilo, tal como t-butilo.
Convenientemente, R5 es H o metilo. En una modalidad de la invención R5 es H. En una segunda modalidad de la invención R5 es alquilo de Ci-4, en particular R5 es metilo.
En una modalidad de la invención R4 y R5 forman juntos un espiro carbocíclico de C3. En una segunda modalidad de la invención R4 y R5 forman juntos un espiro carbocíclico de C4. En una modalidad adicional de la invención R4 es metilo y R5 es metilo. En una modalidad de interés particular, R es etilo y R5 es metilo.
Convenientemente, R4 y R5 tienen el arreglo estereoquímico: En una modalidad de la invención, R5 es H y el sustituyente R4 está en la configuración S.
En una modalidad de la invención R4 es metilo, R5 es metilo, X es N y Y es C, tal como donde A es dihidrofurano, en particular donde A es dihidrofuranano Ri es H, especialmente donde A es dihidrofurano, R es H y R2 es un espiro de C3.
Los compuestos de fórmula (I), o cualquier subconjunto del mismo incluyendo compuestos de fórmula (Ib) y los compuestos de fórmula (le) pueden ser proporcionados opcionalmente en forma de una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable. En una modalidad de la invención un compuesto de fórmula (I) es proporcionado en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. En una segunda modalidad de la invención un compuesto de fórmula (I) es proporcionado en forma de un solvato farmacéuticamente aceptable. En una tercera modalidad de la invención un compuesto de fórmula (I) no está en forma de una sal ni solvato.
En un aspecto adicional, la invención proporciona un compuesto de fórmula (Ib); en donde: R es H, o alquilo de C1-4, halo, halo alquilo de Ci-4, CN, alcoxi de C^, haloalcoxi de C -4; R2 es H, alquilo de C1-4, espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de C-i-4 o halo; R3 es H, alquilo de C-M, halo alquilo de Ci-4, halo; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo; X es C o ; Y es C o N; R4 es alquilo de C- ; R5 es H, Deuterio, alquilo de Ci-4; o R4 y R5 pueden ser fusionados para formar espiro carbocíclico de C3-4; en donde R2 y R3 pueden estar unidos al mismo o un diferente átomo del anillo; y en donde R2 puede estar conectado a un átomo fusionado del anillo; O una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
También se proporciona un compuesto de fórmula (le) en donde: Ri es H, o alquilo de Ci-4; R2 es H, alquilo de C1.4, espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de C-M o halo; R3 es H, alquilo de Ci^, halo alquilo de C- , halo; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo; X es C o N; Y es C o N; R4 es alquilo de C- ; R5 es H, Deuterio, alquilo de Ci-4; o R4 y R5 pueden ser fusionados para formar espiro carbocíclico de C3-4; en donde R2 y R3 pueden estar conectados al mismo o un diferente átomo del anillo; y en donde R2 puede estar conectado a un átomo fusionado del anillo; O una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Con respecto a los compuestos de fórmula (Ib) y (le) : En una modalidad de la invención R1 es H.
En una modalidad de la invención R-\ es alquilo de C^. En otra modalidad de la invención R-? es metilo.
En una modalidad de la invención R2 es H.
En una modalidad de la invención R2 es alquilo de C1-4. En otra modalidad R2 es metilo. En una modalidad adicional R2 es etilo. En otra modalidad adicional R2 es propilo.
En una modalidad de la invención R2 es un grupo espiro de C3.
En una modalidad de la invención R3 es H.
En una modalidad de la invención R3 es alquilo de C1-4. En otra modalidad de la invención R3 es metilo.
En una modalidad de la invención A es tetrahidrofurano, isoxazol o tetrahidropirano.
En una modalidad de la invención A es tetrahidrofurano isoxazol o tetrahidropirano, fusionado con un grupo ciclopropilo.
En una modalidad de la invención X es C y Y es C.
En una modalidad de la invención X es N y Y es C.
En una modalidad de la invención X es N y Y es N.
En una modalidad de la invención R es metilo. En otra modalidad de la invención R4 es etilo. En una modalidad adicional de la invención R4 es propilo. En otra modalidad adicional de la invención R4 es butilo.
En una modalidad de la invención R5 es H.
En una modalidad de la invención R5 es alquilo de d-4. En otra modalidad de la invención R5 es metilo.
En una modalidad de la invención R4 y R5 forman juntos un espiro carbocíclico de C3.
En una modalidad de la invención R4 y R5 forman juntos un espiro carbocíclico de C4.
En una modalidad de la invención, R5 es H y el sustituyente R4 está en la configuración S.
En una modalidad de la invención R4 es metilo y R5 es metilo.
En una modalidad de la invención R4 es metilo, R5 es metilo, X es N y Y es C.
En una modalidad de la invención R4 es metilo, R5 es metilo, X es N, Y es C y A es tetrahidrofurano.
En una modalidad de la invención R4 es metilo, R5 es metilo, X es N, Y es C, A es tetrahidrofurano y R1 es H.
En una modalidad de la invención R4 es metilo, R5 es metilo, X es N, Y es C, A es tetrahidrofurano, R1 es H y R2 es un grupo espiro de C3.
En una modalidad de la invención el compuesto se selecciona del grupo que consiste de: (5R)-3-[4-(1 ,3-d¡hidro-2-benzofuran-4-¡loxi)fenil]-5-metil-2,4-¡midazolidinadiona; (5R)-5-metil-3-{4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-¡l)ox¡]fen¡l}-2,4-imidazolidinadiona; (5R)-3-{4-[(3,6-dimet¡l-1 ,2-benc¡soxazol-4-il)oxi]fenil}-5-met¡l-2,4-imidazolidinadiona; 5,5-d¡met¡l-3-{4-[(3-met¡l-1,2-bencisoxazol-4-il)ox¡]fen¡l}-2,4-¡midazolidinadiona; (5R)-5-et¡l-3-{6-[(3-etil-1,2-benc¡soxazol-4-¡l)ox¡]-3-pir¡d¡n¡l}-2,4-imidazolidinadiona; (5f?)-5-et¡l-3-(6-{[3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-il]ox¡}-3-piridinil)-2,4-im¡dazol¡dinadiona; (5/?)-3-{4-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]fenil}-5-metil-2,4-¡m¡dazolidinad¡ona; (5f?)-3-{6-[(3,3-d¡met¡l-2,3-d¡hidro-1-benzofuran-4-il)ox¡]-3-piridinil}-5-metil-2,4-imidazolidinadiona; (5f?)-3-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-¡l)oxi]-3-p¡r¡dinil}-5-etil-2,4-imidazolidinad¡ona; (5 ?)-3-{2-[(3,3-d¡metil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)oxi]-5-p¡r¡m¡d¡n¡l}-5-etil-2,4-¡m¡dazolid¡nadiona; 7-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)ox¡]-3-pirid¡n¡l}-5,7-diazasp¡ro[3.4]octano-6,8-d¡ona; 6-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)oxi]-3-pir¡d¡n¡l}-4,6- diazasp¡ro[2.4]heptano-5,7-diona; 3-{6-[(3,3-d¡met¡l-2,3-d¡hidro-1-benzofuran-4-¡l)ox¡]-3-p¡r¡din¡l}-5,5-d¡metil-2,4-imidazol¡dinad¡ona; (5R)-3-{2-[(3,3-d¡met¡l-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-il)ox¡]-5-p¡rim¡din¡l}-5-(1 ,1-dimet¡let¡l)-2,4-¡m¡dazolidinad¡ona; (5 )-5-etil-3-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-p¡rid¡nil]-2,4-¡midazol¡d¡nad¡ona; 5,5-dimet¡l-3-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-c¡clopropan]-4-¡loxi)-3-p¡rid¡nil]-2,4-¡m¡dazolidinadiona; (5f?)-5-etil-5-met¡l-3-[6-(espiro[1 -benzofuran-3, 1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-pir¡dinil]-2,4-¡midazol¡d¡nad¡ona; (5f?)-5-et¡l-3-(6-{[(3S/ )-3-metil-1 ,3-dih¡dro-2-benzofuran-4-¡l]oxi}-3-pirid¡n¡l)-2,4-¡m¡dazolid¡nad¡ona (mezcla diastereomérica); (5R)-5-et¡l-3-{6-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-¡l)ox¡]-3-pirid¡nil}-2,4-imidazolidinad¡ona (diastereoisómeros 1 y 2); (5R)-5-etil-3-{6-[(3-etil-1,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)ox¡]-3-p¡rid¡nil}-2,4-¡m¡dazol¡dinad¡ona (mezcla diastereomérica); (5f?)-5-etil-3-{6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona (diastereoisómeros 1 y 2); 5,5-dimetil-3-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona (mezcla racemato); 5,5-dimetil-3-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona (enantiómero 1 y enantiómero 2); 5,5-dimetil-3-{6-[(1 a-metil-1 , 1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona; 5,5-dimetil-3-{6-[(1a-metil-1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolid¡nad¡ona(enantiómero 1 y enantiómero 2); (5f?)-5-etil-5-metil-3-[6-(1/-/-espiro[2-benzopiran-4,1'-ciclopropan]-5-iloxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidinadiona; 3-{2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-5,5-dimetil-2,4-imidazolidinadiona; (5f?)-3-{2-[(3,3-d¡met¡l-2,3-dih¡dro-1 -benzofuran-4-il)ox¡]-5-pirimidinil}-5-(1-metiletil)-2,4-imidazolidinadiona; (5f?)-3-{6-[(2,2-dimetil-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-il)ox¡]-3-pir¡din¡l}-5-et¡l-2,4-¡m¡dazolid¡nad¡ona; 5,5-dimet¡l-3-[6-(1 -/-espiro[2-benzop¡ran-4,1'-c¡clopropan]-5-ilox¡)-3-p¡ridinil]-2,4-im¡dazol¡dinadiona; (5 )-3-[2-(2,3-dih¡drosp¡ro[cromeno-4,1'-ciclopropan)-5-ilox¡)-5-pirimidinil]-5-etil-5-metil-2,4-imidazolidinadiona¡ 5,5-dimetil-3-{6-[(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona (mezcla racemato, enantiómero 1 , enantiómero 2); (5R)-5-etil-5-metil-3-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazol¡dinad¡ona (mezcla diastereomérica, diastereoisómero 1 , diastereoisómero 2); (5R)-5-etil-5-metil-3-[6-(1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-iloxi)-3-piridinil]-2,4-imidazolidinadiona (mezcla diastereoisomérica, diastereoisómero 1, diastereoisómero 2); 3-{6-[(3-et¡l-1 ,3-dih¡dro-2-benzofuran-4-¡l)oxi]-3-pirid¡n¡l}-5,5-dimetil-2,4-im¡dazol¡d¡nad¡ona (mezcla racemato, enantiómero 1 , enantiómero 2); o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
En otra modalidad de la invención el compuesto es seleccionado del grupo que consiste de: (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-(4-metilcroman-5-il)oxipirimidin-5-il]¡midazolidina-2,4-diona (mezcla diastereoisomérica, diastereoisómero 1 , diastereoisómero 2); (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,r-ciclopropano]-4-il)oxip¡rimidin-5-il]imidazolidina-2,4-d¡ona; (5R)-3-[2-(3,3-dimetilisocroman-5-il)oxipirimidin-5-il]-5-etil-5-metil-imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-(7-metilespiro[1 H-isobenzofuran-3, 1 '-ciclobutano]-4-il)oxipirimidin-5-il]imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-etil-5-metil-3-{2-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-2,4-imidazolidinadiona; (5R)-3-{2-[(2,2-difluoro-7-metil-1 ,3-benzodioxol-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-5-etil-5-metil-2,4-im¡dazolidinadiona; (5R)-3-{2-[(2,2-difluoro-1 ,3-benzodioxol-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-5- et¡l-5-metil-2,4-im¡dazol¡d¡nad¡ona¡ (5R)-5-etil-5-metil-3-{2-[(2,4,4-trimetil-4H-3,1-benzoxazin-5-il)oxi]-5-pirimidinil}-2,4-imidazolidinadiona; 5,5-dimetil-3-[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-il)oxipirimidin-5-il]imidazolidina-2>4-diona; 3-[2-(3,3-dimetilisocroman-5-il)oxipirimidin-5-il]-5,5-dimetil-imidazolidina-2,4-diona; 5,5-dimetil-3-[2-(7-metilespiro[1 H-isobenzofuran-3, 1 '-ciclobutano]-4-il)oxipirimidin-5-il]imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-etil-3-[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-il)oxipirimidin-5-il]imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-etil-3-[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]- 4- il)oxi-3-piridil]imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-etil-3-{6-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona; (5R)-5-etil-3-{2-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]- 5- pirimidinil}-2,4-imidazolidinadiona; (5R)-5-etil-5-metil-3-[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,r-ciclopropano]-4-il)oxi-3-piridil]imidazolidina-2,4-diona; (5R)-3-[6-(3,3-dimetilisocroman-5-il)oxi-3-piridil]-5-etil-5-metil-imidazolidina-2,4-diona; (5R)-3-[6-[(3,3-dietil-1 H-isobenzofuran-4-il)oxi]-3-piridil]-5-etil-5-metil-imidazolidina-2,4-diona; (5R)-5-et¡l-5-metil-3-[6-[(2,4,4-tr¡met¡l-3,1-benzoxaz¡n-5-¡l)ox¡]-3-p¡rid¡l]¡m¡dazol¡d¡na-2,4-d¡ona; (5R)-3-{6-[(3,3-dimetil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-H)oxi]-3-pirid¡n¡l}-5-et¡l-5-met¡l-2,4-imidazolid¡nad¡ona; 5,5-dimetil-3-[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-c¡clopropano]-4-¡l)oxi-3-piridil]¡m¡dazol¡d¡na-2,4-diona; O una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Para evitar dudas, las modalidades de cualquier característica de los compuestos de la invención pueden ser combinadaa con cualquier modalidad de otra característica de compuestos de la invención para crear una modalidad adicional.
El término "halo" o "halógeno" como es utilizado en la presente, se refiere a un átomo de flúor, cloro, bromo o yodo. Ejemplos particulares de halo son flúor y cloro, especialmente flúor.
Cuando el compuesto contiene un grupo alquilo de Ci-4, ya sea solo o formando parte de un grupo más grande, por ejemplo alcoxi de C- , el grupo alquilo puede ser de cadena recta, ramificada, cíclica, o una combinación de los mismos. Ejemplos de alquilo de C -4 son metilo, etilo, n-propilo, isopropili, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, ciclopropilo y ciclobutilo. Un grupo particular de grupos alquilo de C-i^de ejemplo son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo. Un ejemplo de alcoxi de d-4 es metoxi.
El término 'haloalquilo de C^' como es utilizado en la presente, incluye grupos alquilo de cadena recta, cadena ramificada o cíclicos que contienen 1 a 4 átomos de carbono sustituidos por uno o más átomos de halo, por ejemplo fluorometilo, difluorometilo y trifluorometilo. Un grupo particular de halo alquilo de C -4 de ejemplo incluye los grupos metilo y etilo sustituidos con uno a tres átomos de halo, en particular uno a tres átomos de fluoro.
El término 'haloalcoxi de Ci-4" como es utilizado en la presente, incluye grupos alcoxi de cadena recta, cadena ramificada o grupos cíclicos que contienen 1 a 4 átomos de carbono sustituidos por uno o más átomos de halo, por ejemplo fluorometoxi, difluorometoxi y trifluorometoxi. Un grupo particular de halo alquilo de Ci_4 de ejemplo incluye los grupos metoxí y etoxi sustituidos con uno a tres átomos de halo, en particular uno a tres átomos de fluoro.
El término heterociclo de '5 o 6 miembros saturado o ¡nsaturado, con por lo menos un átomo de O' incluye por ejemplo furano, oxazol, isoxzol, oxadiazol, terahidrofurano, pirano, tetrahidropirano, dioxolano, dioxano, morfolina, y oxazolina.
Será apreciado que para uso en mediciona, las sales de los compuestos de fórmula (I) deben ser farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables convenientes serán aparentes para los expertos en la técnica. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen esas descritas por Berge, Bighley and Monkhouse J. Pharm. Sci. (1977) 66, pp 1-19. Tales sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales ácídas de adición formadas con ácidos inorgánicos por ejemplo ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico o fosfórico, y ácidos orgánicos por ejemplo succínico, maleico, acético, fumárico, cítrico, tartárico, benzoico, p-toluensulfónico, metanosulfónico o naftalensulfónico. Otras sales por ejemplo oxalatos o formatos, pueden ser utilizados, por ejemplo en el aislamiento de compuestos de fórmula (I) y están incluidos dentro del alcance de esta invención.
Ciertos compuestos de fórmula (I) pueden formar sales acidas de adición con uno o más equivalentes del ácido. La invención presente incluye dentro de su alcance todas las formas posibles estequiométricas y no estequiométricas.
Los compuestos de fórmula (I) pueden ser preparados en la forma cristalina o no cristalina y, si es cristalina, puede estar solvatada opcionalmente, por ejemplo como el hidrato. Esta invención incluye dentro de su ámbito solvatos estequiométricos (por ejemplo hidratos) así como de los compuestos que contienen cantidades variables de solvente (por ejemplo, agua).
Será comprendido que la invención incluye derivados farmacéuticamente aceptables de compuestos de fórmula (I) y que éstos son incluidos dentro del alcance de la invención.
Como es utilizado en la presente "derivado farmacéuticamente aceptable" incluye cualquier éster o sal farmacéuticamente aceptable de tal éster de un compuesto de fórmula (I) que, con la administración al recipiente es capaz de proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de fórmula (I) o un metabolito o residuo activo del mismo.
Será comprendido que la invención presente abarca todos los isómeros de fórmula (I) y sus derivados farmacéuticamente aceptables, incluyendo todas las formas geométricas, tautoméricas y ópticas, y las mezclas de los mismos (por ejemplo mezclas racémicas). Dónde se presenten centros quirales adicionales en los compuestos de fórmula (I), la invención presente incluye dentro de su alcance todos los diastereoisómeros posibles, incluyendo mezclas de los mismos. Las formas isómeras diferentes pueden ser separadas o pueden ser resueltas una de la otra por métodos convencionales, o algún isómero dado puede ser obtenido por métodos de síntesis convencionales o por síntesis esteroespecíficas o asimétricas.
Esta invención también incluye compuestos isotópicamente marcados que son idénticos a esos recitados en la fórmula (I) pero por el hecho de que uno o más átomos son reemplazados por un átomo que tiene una masa atómica o número de masa diferente del número atómico o número de masa encontrado más comúnmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden ser incorporados en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, flúor, yodo y cloro tal como 3H, 1C, 14C, 8F, 123l o 125l. Otro isótopo de interés es 13C.
Los compuestos de la invención presente y sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos que contienen los isótopos antes mencionados y/o otros isótopos de otros átomos están dentro del alcance de la invención presente. Los compuestos isotópicamente marcados de la Invención presente, por ejemplo ésos en que los isótopos radioactivos tales como 3H o 1 C han sido incorporados, son útiles en análisis de distribución en tejido de fármacos y/o sustratos. Los isótopos tritiados, es decir 3H, y carbono-14, es decir 14C, son preferidos especialmente por su facilidad de preparación y detectabilidad. Los isótopos C y 18F son particularmente útiles en PET (tomografía de emisión de positrón).
Ya que los compuestos de fórmula (I) son pensados para el uso en composiciones farmacéuticas será entendido perfectamente que son cada uno proporcionado preferiblemente en la forma substancialmente pura, por ejemplo por lo menos 60% puro, más convenientemente por lo menos 75% puro y preferiblemente por lo menos 85%, especialmente por lo menos 98% puro (% están en una base de peso por peso). Las preparaciones impuras de los compuestos pueden ser utilizadas para preparar las formas más puras utilizadas en las composiciones farmacéuticas.
Según un aspecto adicional de la invención presente allí es proporcionado un procedimiento para la preparación de compuestos de fórmula (I) y los derivados del mismo. Los esquemas siguientes detallan algunas rutas de síntesis para los compuestos de la invención. En los esquemas siguientes los grupos reactivos pueden ser protegidos con grupos protectores y deprotegidos según técnicas bien establecidas.
En general, los compuestos de fórmula (I) pueden ser formados según las técnicas orgánicas de síntesis conocidas por los expertos en este campo, así como por los métodos representativos expuestos abajo, ésos en los Ejemplos y modificaciones de los mismos.
Los compuestos de fórmula (I), y las sales y solvatos del mismo, pueden ser preparados por los métodos generales resumidos más adelante. En la siguiente descripción, los grupos A, R-i , R2, X, Y, R3,R y R5 tienen los significados previamente definidos para los compuestos de fórmula (I) a menos que se establezca de otro modo.
ESQUEMA 1A (III) (ii) (i) Paso (ii): Los compuestos de fórmula (I) pueden ser preparados por ciclización de compuestos de fórmula (II) en un solvente por ejemplo diclorometano con un agente de carbonilación por ejemplo trifósgeno de manera preferencialmente prediluida en el mismo solvente y agregado en un segundo tiempo a 0°C en la presencia de una base por ejemplo trietilamina. A veces, acetato de etilo podría ser utilizado como un solvente. Opcionalmente una cantidad catalítica de DMAP puede ser agregada.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (II) pueden ser preparados de compuestos de fórmula (III) por eliminación del grupo protector BOC en condiciones ácidas por ejemplo TFA en un solvente por ejemplo diclorometano a aproximadamente 0°C o TA.
ESQUEMA 1 B Los compuestos de fórmula (I), en donde X = Y = N o (X = C, Y = N) o (X = N, Y = C) y R4 y R5 no son H, pueden ser preparados por sustitución nucleofilica aromática. En esta reacción un derivado de halo-piridilo o halo- pirimidilo de fórmula (VII) en donde típicamente Z = Cl y un fenol de fórmula (IX) son reaccionados en la presencia de una base tal como carbonato de potasio en un solvente conveniente, por ejemplo en ?,?-dimetilformamida o en acetonitrilo, con calentamiento convencional o calentamiento por microondas.
ESQUEMA 1C Paso (iii): Los compuestos de fórmula (I) en donde R4 y R5 no son H pueden ser preparados por reacción de una urea del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes y una base tal como metóxido de sodio en un solvente tal como Metanol a una temperatura que varía de 0°C a 60° C.
Paso (¡i): El producto de urea del paso (ii) como fue antes indicado puede ser preparado por reacción de anilinas de fórmula (IV) y amino ésteres (sal de clorhidrato) de fórmula (XII) en un solvente conveniente, por ejemplo diclorometano o acetato de etilo, con un agente de carbonilación por ejemplo trifósgeno, de manera preferencial prediluido en el mismo solvente en la presencia de una base, por ejemplo trietilamina o diisopropiletilamina, a una temperatura que varia de 0°C a 60° C, agregando opcionalmente una cantidad catalítica o estequiométrica de DMAP.
Paso (i): Amino ésteres (sal de clorhidrato) de fórmula (XII) (si no está disponible comercialmente) puede ser preparado de aminoácidos disponibles comercialmente (sal de clorhidrato) de fórmula (XIII) por reacción con metanol en la presencia de una cantidad catalítica o estequiométrica de cloruro de tionilo a una temperatura que varía de R.T. a reflujo.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (II) pueden ser preparados de anilinas de fórmula (IV) y amino ácidos (como la base libre de la sal de clorhidrato) de fórmula (VI) por acoplamiento amídico en la presencia de un agente de acoplamiento, por ejemplo T3P en un solvente tal como acetato de etilo, acetonitrilo o una mezcla de ellos.
ESQUEMA 2B Paso (ii): Los compuestos de fórmula (III) pueden ser preparados de anilinas de fórmula (IV) y aminoácidos N-protegidos de fórmula (V) por acoplamiento amidico en la presencia de una base por ejemplo DIPEA y de un agente de acoplamiento por ejemplo HATU, TBTU en un solvente tal como ?,?-dimetilformamida.
Paso (i): Algunos aminoácidos protegidos N-Boc de fórmula (V) están disponibles comercialmente por ejemplo, ?/-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina de por ejemplo Aldrich, A -{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina de por ejemplo Aldrich, ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanóico de por ejemplo Bachem UK Ltd, N-{[(1 , 1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isovalina de por ejemplo Nagase & Co Ltd.
Los aminoácidos N-protegidos de fórmula (V) también pueden ser preparados de la fórmula (VI) por ejemplo con anhídrido Boc en presencia de una base por ejemplo NaHC03 acuoso, hidróxido de sodio acuoso en un solvente tal como THF, metanol, dioxano. Muchas descripciones están disponibles en la literatura (por ejemplo Tetrahedron, 2006, 62(42), 9966 -9972) ESQUEMA 3 Las anilinas de fórmula (IV) pueden ser preparadas de compuestos nitro (VII). Las condiciones convenientes de reacción para transformar (VII) en (IV) son por ejemplo: - reducción en la presencia de polvo de Fe y cloruro amónico en un solvente tal como una mezcla de THF/agua por ejemplo a temperatura ambiente - Reducción con cloruro de estaño hidratado en un solvente tal como etanol con el calentamiento por ejemplo a reflujo.
ESQUEMA 4 Las anilinas de fórmula (IVa), en donde R2 es H, alquilo de Ci-4, espiro carbocíclico de C3-C4 y R3 es H, alquilo de C1.4 y (X,Y) no es (N,N) puede ser preparado a partir de los compuestos nitro (Vlla) con las condiciones descritas en el Esquema 3 o también dentro de las condiciones siguientes: - Reducción con hidrato de hidrazina y una cantidad catalítica de Pd/C en un solvente tal como etanol con calentamiento por ejemplo a reflujo.
ESQUEMA 5 (IX) (Vlllb) (VI Ib) (Vlllc) (Vllc) (Vllb), (Vlllb): X=Y=C o (X=C, Y=N) 0 (X=N, Y=C) (Vllc), (Vllc): X=Y=N Los compuestos de fórmula (Vllb) en donde X = Y = C o (X = C, Y = N) o (X = N, Y = C) pueden ser preparados por sustitución nucleofílica aromática. En esta reacción son utilizados un derivado nitro de fórmula (Vlllb) en donde Z = F (generalmente cuando [X = C, Y=C]) o Z = Cl (generalmente cuando [X = N, Y = C] o [X = C, Y=N]) y un fenol de fórmula (IX) en la presencia de una base tal como carbonato de potasio en un solvente por ejemplo ?,?-dimetilformamida o en acetonitrilo con calentamiento regular o calentamiento por microondas.
Los compuestos de fórmula (Vllc) en donde X = Y = N pueden ser preparados por sustitución nucleofílica aromática del fenol (IX) y compuesto nitro (Vlllc) en donde generalmente Z = Cl a temperatura ambiente utilizando una base tal como carbonato de potasio en un solvente tal como ?,?-dimetilformamida. Un solvente conveniente adicional es acetonitrilo.
ESQUEMA 6 Paso (iii): El fenol de fórmula (IXa) que corresponde a los compuestos de la fórmula (IX) en donde Ri está en el lado A es el heteroclclo representado en el Esquema 6, puede ser preparado por una reacción intramolecular de compuestos de fórmula (X) en la presencia de una cantidad catalítica de AuC en acetonitrilo a temperatura ambiente o una cantidad catalítica de PtCl2 en acetona con calentamiento (como fue descrito para ése en el Journal of the American Chemical Society (Diario de la Sociedad Química norteamericana) 2003, 125, 5757-5766) Paso (ii): El compuesto de fórmula (X) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XI) con un método semejante al descrito en el Journal of the American Chemical Society 2003, 125, 5757-5766 por sustitución nucleofílica en la presencia de una base tal como hidruro de sodio en un solvente por ejemplo DMF, con adición en un segundo tiempo de un electrófilo por ejemplo 3-bromo-1 -propino.
ESQUEMA 7 Paso (i¡): Los fenoles de fórmula (IXb), que corresponden a los compuestos de fórmula (IX) en donde Ri es H y A los heterociclos representados en el Esquema 7 (R6 siendo Me o Et), pueden ser preparados utilizando los correspondientes compuestos de fórmula (XII) en la presencia de condiciones ácidas tal como HCI acuoso en un solvente tal como metanol.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (XII) pueden ser preparados por ciclización de compuestos de fórmula (XIII) utilizando una base tal como nBuLi en un solvente tal como THF por ejemplo a 0o C, agregando un segundo tiempo cloruro de 4-metilbencensulfonilo por ejemplo a 0°C, entonces un segundo equivalente de una base tal como nBuLi por ejemplo de 0°C a temperatura ambiente y detener la reacción con un ácido prótico diluido tal como HCI.
Opcionalmente los dos pasos (I) y (ii) pueden ser llevados a cabo a manera de una sola etapa.
ESQUEMA 8A Paso (i): El compuesto de fórmula (Xllla) en donde R6 = Met puede ser preparado directamente del compuesto de fórmula (XV) - por litiación utilizando por ejemplo nBuLi en un solvente tal como hexano en la presencia de TMEDA de temperatura ambiente a 60°C - Agregando en un segundo tiempo acetaldehído por ejemplo a -78°C y calentándo la mezcla de reacción por ejemplo a temperatura ambiente.
Paso (iii): El compuesto de fórmula (Xlllb) en donde Re = Et puede ser preparado del compuesto protegido (XIV) - por litiación utilizando por ejemplo nBuLi en un solvente tal como hexano a temperatura ambiente - Agregando en un segundo tiempo propanal por ejemplo a 0°C y calentándo la mezcla de reacción por ejemplo a temperatura ambiente.
Paso (ii): El compuesto de fórmula (XIV) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XV) por sililación, utilizando por ejemplo cloro(1 ,1 -dimetiletil)dimetilsilano, 1 H imidazol en un solvente tal como diciorometano a temperatura ambiente.
ESQUEMA 8B Paso (i¡Q: El fenol del tipo producido por el paso (¡ii) como es mostrado antes es obtenido del alcohol del tipo producido por el paso (ii) como es mostrado antes después del tratamiento con un ácido conveniente tal como H2S04 o ácido p-tolilsulfónico en un solvente conveniente tal como acetato de etilo, metanol o etanol.
Paso (ii): El producto del paso (ii) como es mostrado antes puede ser preparado del compuesto, protegido del tipo producido por el paso (ii) antes indicado - por litiación utilizando por ejemplo nBuLi en un solvente tal como hexano a temperatura ambiente (agregando opcionalmente CeCl3 previamente agitado en THF seco a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón o hidrógeno) - Agregando en una segunda etapa ciclobutanona por ejemplo a 0°C y calentándo la mezcla de reacción por ejemplo a temperatura ambiente.
Paso (i): El producto del paso (i) como se muestra antes puede ser preparado del alcohol de partida por sililación, utilizando por ejemplo cloro(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilano, 1 H imidazol en un solvente tal como diclorometano a temperatura ambiente.
ESQUEMA 9A Paso (ii): Los compuestos de fórmula (XV) pueden ser preparados de ésteres de fórmula (XVI) utilizando un agente reductor conveniente típicamente LiAIH4 en un solvente tal como tetrahidrofurano a una temperatura tal como 0°C.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (XVI) pueden ser preparados de fenoles de fórmula (XVII) utilizando cloro(metiloxi)metano, una base tal como DIPEA en un solvente tal como diclorometano por ejemplo de 0°C a temperatura ambiente.
Paso (ii): El producto del paso (ii) como es mostrado arriba es preparado de los ésteres del tipo producido por el paso (I) como fue mostrado antes utilizando un agente reductor conveniente típicamente LiAIH4 en un solvente tal como tetrahidrofurano en una temperatura tal como 0°C o temperatura ambiente.
Paso (i): El producto del paso (I) como fue mostrado antes puede ser preparado del fenol de partida utilizando cloro(metiloxi)metano, una base tal como NaH en un solvente tal como DMF o THF por ejemplo de 0°C a temperatura ambiente.
Opcionalmente los dos pasos (I) y (ii) pueden ser llevados a cabo a manera de una sola etapa.
ESQUEMA 10 (XX) (XIX) (XVIII) (IXc) Paso (iii): Los fenoles de fórmula (IXc), que corresponden a compuestos de fórmula (IX) en donde A es el heterociclo representado en el Esquema 10, Ri es H o metilo, R? es metilo, etilo o isopropilo pueden ser preparados del compuesto (XVIII) por ciclización en presencia de un exceso de una base tal como piridina con calentamiento por ejemplo a reflujo.
Paso (ii): Los compuestos de fórmula (XVIII) pueden ser preparados de compuestos de fórmula (XIX) por acilación por ejemplo con anhídrido acético a temperatura ambiente.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (XIX) pueden ser preparados de compuestos de fórmula (XX) con clorhidrato de hidroxilamina utilizando una base tal como acetato de sodio calentando por ejemplo a reflujo en un solvente tal como una mezcla de etanol/agua o utilizando piridina como un solvente y una base.
ESQUEMA 11 (XXI) (XXa) Entre las acetonas de fórmula (XX), 1-(2,6-dihidroxifenil)etanona está disponible comercialmente por ejemplo de Aldrich. Las cetonas de fórmula (XXa) que corresponden a acetonas de fórmula (XX) en donde R7= Me pueden ser preparadas de compuestos de fórmula (XXI). Los compuestos de fórmula (XXI) son sometidos - primero a una bis-acilación utilizando anhídrido por ejemplo acético en la presencia de una base por ejemplo trietilamina en un solvente por ejemplo diclorometano - Seguido por una acilación de Friedel Crafts con transferencia de acilo intramolecular en la presencia de un ácido de Lewis tal como AJCI3 en un solvente tal como clorobenceno con el calentamiento por ejemplo a 90°C.
ESQUEMA 12 (XXIa) (xxni) (XXII) (XXb) Paso (¡ii): Las cetonas de fórmula (XXb) que corresponden a cetonas de fórmula (XX) en donde R7= Et o iPr y R1 = H pueden ser preparadas de compuestos de fórmula (XXII) por eliminación de los dos grupos protectores bajo condiciones ácidas tales como solución acuosa de HCI, con calentamiento por ejemplo a reflujo, en un solvente tal como metanol.
Paso (ii): Los compuestos de fórmula (XXII) puedes ser preparados de compuestos de fórmula (XXIII) por - litiación con por ejemplo BuLi en un solvente tal como tetrahidrofurano por ejemplo a temperatura ambiente - agregando en un segundo tiempo el cloruro anhídrido o de acilo conveniente por ejemplo a -78°C Paso (i): El compuesto de fórmula (XXIII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXIa) que corresponde al compuesto de fórmula (XXI) en donde R1= H utilizando una base tal como hidruro de sodio en un solvente tal como DMF por ejemplo a 0°C agregando en un segundo tiempo cloro(metiloxi)metano por ejemplo de 0°C a la temperatura ambiente.
ESQUEMA 13A Paso (iii): El fenol de fórmula (IXd) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde Ri es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 13a, puede ser preparado del precursor de O-metoxi (XXIV) utilizando una reacción de desmetilación utilizando por ejemplo BBr3 en un solvente tal como diclorometano a 0°C.
Paso (ii): El compuesto de fórmula (XXIV) puede ser preparado por ciclación del compuesto de fórmula (XXV) utilizando por ejemplo tributilestanano y AIBN en un solvente tal como tolueno por ejemplo, a reflujo.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XXV) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXVI) en la presencia de una base tal como hidruro de sodio en un solvente tal como DMF agregando en una segunda vez el compuesto de fórmula (XXVII) en donde Z = Cl o Br por ejemplo, a temperatura ambiente.
ESQUEMA 13B Paso (iv): El fenol del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes es preparado de compuestos protegidos TiPS del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes removiendo el grupo protector en la presencia de una fuente de Fluoruro tal como fluoruro de tetrabutilamonio en un solvente conveniente tal como THF a temperatura ambiente.
Paso (iii): el compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado por intercambio de metal-halógeno utilizando butilitio o sec-butilitio o ter-butilitio en un solvente conveniente tal como THF o Et20 o como n-hexano a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente y agregando en una segunda etapa un agente de metilación tal como yodometano a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente.
Paso (ii): el compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado de un fenol protegido del tipo producido por el paso (I) como fue mostrado antes utilizando a un agente de brominación tal como NBS en un solvente conveniente tal como DMF o acetonitrilo o como THF a temperatura ambiente.
Paso (i): El compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado del fenol de partida por sililación, utilizando por ejemplo cloro triisopropilsilano en la presencia de una base tal como butillitio en un solvente tal como THF a temperatura que varia de 0°C y la temperatura ambiente.
ESQUEMA 14 Paso (iii): El compuesto de fórmula (XXVI) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXVII) por eliminación del grupo protector bajo condiciones ácidas utilizando por ejemplo gas HCI en un solvente tal como diclorometano.
Paso (¡i): El compuesto de fórmula (XXVII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXVIII) por - litiación con por ejemplo BuLi en un solvente tal como tetrahidrofurano por ejemplo a -78° C - Agregando en un segundo tiempo una solución de yodo por ejemplo a -70°C y la dejando la reacción a temperatura ambiente.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XXVIII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXIX) por protección del fenol utilizando una base por ejemplo, hidruro de sodio, en un solvente por ejemplo, tetrahidrofurano, agregando en un segundo tiempo éter bromometil metílico por ejemplo, a temperatura ambiente.
ESQUEMA 15 (XXXIII) (XXXII) (XXXI) (XXX) (IXd) Paso (iv): Alternativamente el fenol de fórmula (IXd) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde R1 es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 15 puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXX) utilizando una base de hidróxido por ejemplo hidróxido de sodio, en un solvente tal como metanol, por ejemplo, a temperatura ambiente.
Paso (iii): El compuesto de fórmula (XXX) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXI) por cilización con condiciones presentadas en el Esquema 13a en el paso (ii) Paso (i¡): El compuesto de fórmula (XXXI) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXII) utilizando una base tal como carbonato de potasio y un electrófilo tal como 3-bromo-2-metil-1-propeno, en un solvente tal como acetonitrilo por ejemplo, a temperatura ambiente.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XXXII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXIII) por acetilación utilizando anhídrido acético por ejemplo, una base por ejemplo trietilamina en un solvente por ejemplo diclorometano por ejemplo a temperatura ambiente.
ESQUEMA 16 (IXe) (XXXIV) (XXXV) Paso (vi): El fenol de fórmula (IXe) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde Ri es H o metilo y A es el heterociclo representado en el Esquema 16 puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXIV) por eliminación del grupo protector MOM bajo condiciones ácidas utilizando por ejemplo HCI acuoso en un solvente tal como metanol calentando por ejemplo a 50° C.
Paso (v): El compuesto de fórmula (XXXIV) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXV) por una reacción de Mitsonobu utilizando trifenilfosfina en un solvente tal como tetrahidrofurano y agregando azodicarboxilato de diisopropilo a temperatura ambiente.
Paso (iv): El compuesto de fórmula (XXXV) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXVI) en un modo secuencial - desprotección en condiciones acidas tal como HCI 2N en agua en etanol. - evaporación del solvente y el uso de una base fuerte tal como NaH en un solvente tal como THF a 0°C - adición de MOMCI a 0°C - reducción con hidruro de aluminio y litio a 0°C Paso (iii): El compuesto de fórmula (XXXVI) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXVII) utilizando una reacción de ciclopropanación de Corey-Chaykovsky llevada a cabo a temperatura ambiente. Para preformar el metilido de dimetiloxosulfonio, puede ser utilizado yoduro de trimetilsulfoxonio en la presencia de una base tal como NaH en un solvente tal como DMSO, el compuesto de fórmula (XXXVII), (prediluido en DMSO) siendo agregado en un segundo tiempo.
Paso (ii): El compuesto de fórmula (XXXVII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXVIII) utilizando una reacción de Wittig. Para preformar el ilido, una sal de fosfonio tal como bromuro de metiltrifenilfosfonio y una base fuerte tal como KHMDS puede ser utilizada en un solvente tal como THF de 0°C a la temperatura ambiente. El compuesto de fórmula (XXXVIII) prediluido en un solvente tal como THF puede ser agregado en un segundo tiempo en 0o C.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XXXVIII) puede ser preparado del compuesto (XXIII) por litiación utilizando BuLi en un solvente tal como hexano a temperatura ambiente, esta solución para ser agregada en un segundo tiempo a -78°C al electrófilo por ejemplo cloro(oxo)acetato de etilo (prediluido por ejemplo en THF).
Los compuestos de fórmula (XXIII) pueden ser preparados en un modo semejante como fue descrito en el Esquema 12 (paso i).
ESQUEMA 17A Paso (vii): El fenol de fórmula (IXf) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde Ri es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 17a puede ser preparado del compuesto de fórmula (XXXIX) por eliminación del grupo protector MOM bajo condiciones ácidas utilizando por ejemplo HCI acuoso en un solvente tal como metanol calentando por ejemplo a 60° C.
Paso (vi): El compuesto de fórmula (XXXIX) puede ser preparado por ciclización de compuestos de fórmula (XL) utilizando una base tal como trietilamina en un solvente tal como THF por ejemplo a 0o C, agregando en un segundo tiempo cloruro de metanosulfonilo y en un tercer tiempo una base fuerte tal como 2-metil-2-propanolato de potasio.
Paso (v): El compuesto de fórmula (XL) puede ser preparado por hidrogenación de la mezcla de compuestos de fórmula (XLI) y (XL) en la presencia de un catalizador tal como Pdo/C a temperatura ambiente.
Paso (iv): La mezcla de compuestos de fórmula (XLI) y (XL) puede ser preparada del compuesto de fórmula (XLI I) por reacción con un agente reductor tal como hidruro de aluminio y litio en un solvente tal como THF a 0o C.
Paso (iii): El compuesto de fórmula (XLII) puede ser preparado del fenol de fórmula (XLIII) utilizando una base tal como NaH y cloro (metiloxi) metano en un solvente tal como DMF por ejemplo de 0°C a la temperatura ambiente. Alternativamente el solvente utilizado puede ser DCM y con una base tal como DIPEA o TEA.
Paso (ii): El fenol de fórmula (XLIII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XLIV) por demetilación utilizando por ejemplo tribromuro de boro en un solvente tal como diclorometano de 0°C a la temperatura ambiente.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XLIV) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XLV) por reacción con anhídrido propanoico en la presencia de una base tal como carbonato de potasio calentando por ejemplo a 70°C en un solvente tal como DMF seguido por adición de agua y calentando por ejemplo a 120° C.
ESQUEMA 17B Paso (vi¡): El fenol del tipo producido por el paso (vii) antes indicado en donde Ri es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 17b puede ser preparado de un compuesto del tipo producido por el paso (vi) como fue mostrado antes por eliminación del grupo protector MOM bajo condiciones acidas utilizando por ejemplo HCI acuoso en un solvente tal como metanol calentando por ejemplo a 60° C.
Paso (vi): El compuesto del tipo producido por el paso (vi) como fue mostrado antes puede ser preparado por ciclización de compuestos del tipo producido por el paso (V) como fue mostrado antes utilizando una base tal como trietilamina en un solvente tal como THF por ejemplo a 0o C, agregando en un segundo tiempo cloruro de metanosulfonilo y en un tercer tiempo una base fuerte tal como 2-metil-2-propanolato de potasio.
Alternativamente, las condiciones de Mitsunobu pueden ser utilizadas.
Paso (v): El compuesto del tipo producido por el paso (v) como fue mostrado antes puede ser preparado por hidrogenación de la mezcla de compuestos del tipo producido por el paso (iv) como es mostrado antes en la presencia de un catalizador tal como Pd/C a temperatura ambiente.
Paso (iv): La mezcla de compuestos del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes con un agente reductor tal como hidruro de aluminio y litio en un solvente tal como THF a 0o C.
Paso (iii): El compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado de fenol del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes utilizando una base tal como NaH y cloro(metiloxi)metano en un solvente tal como DMF o THF por ejemplo de 0°C a temperatura ambiente.
Paso (¡i): El fenol del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (I) como fue mostrado antes por desmetilación utilizando por ejemplo tribromuro de boro en un solvente tal como diclorometano de 0°C a reflujo.
Paso (i): El compuesto del tipo producido por el paso (I) como fue mostrado antes puede ser preparado del alcohol de partida por reacción con anhídrido acético en la presencia de una base tal como carbonato de potasio calentando por ejemplo a 70°C en un solvente tal como DMF seguido por adición de agua y calentando por ejemplo a 120° C.
ESQUEMA 18A (ixg) Paso (iv): El fenol de fórmula (IXg) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde Ri es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 18a puede ser preparado del compuesto (XLVI) por eliminación de grupo protector MOM como anteriormente fue descrito en el Esquema 16 (paso vi).
Paso (iii): El compuesto de fórmula (XLVI) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XLVII) por una reacción de Mitsonobu utilizando trifenilfosfina en un solvente tal como tetrahidrofurano y agregando bis(1 - metiletil) (E)- ,2-diazenodicarboxilato a temperatura ambiente.
Paso (ii): El compuesto de fórmula (XLVII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XLVIII) por reacción con un agente reductor tal como hidruro de aluminio y litio en un solvente tal como THF a 0o C.
Paso (i): El compuesto de fórmula (XLVIII) puede ser preparado del compuesto de fórmula (XLII) por una reacción de ciclopropanación de Corey-Chaykovsky, llevada a cabo a temperatura ambiente como fue anteriormente descrito en el Esquema 16 (paso (iii)).
ESQUEMA 18B Paso (iv): El fenol del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (iii) antes indicado por eliminación del grupo protector MOM como fue anteriormente descrito en el Esquema 16 (paso vi).
Paso (iii): El compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes por una reacción de Mitsonobu utilizando trifenilfosina en un solvente tal como tetrahidrofurano y agregando bis(1- metiletil) (E)-1 ,2-diazenodicarboxilato a temperatura ambiente.
Paso (ii): El compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes por reacción con un agente reductor tal como hidruro de aluminio y litio en un solvente tal como THF a 0o C.
Paso (i): El compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto de partida por una reacción de ciclopropanación de Corey-Chaykovsky, llevada a cabo a temperatura ambiente como fue antenormente descrito en el Esquema 16 (paso (iii)).
ESQUEMA 19A Paso (vi): El fenol de fórmula (IXh) que corresponde al compuesto de fórmula (IX) en donde Ri es H y A es el heterociclo representado en el Esquema 9a puede ser preparado del compuesto (XLIX) por eliminación del grupo protector MOM como anteriormente fue descrito en el Esquema 16 (paso vi).
Paso (v): El compuesto de fórmula (XLIX) puede ser preparado por ciclización del compuesto de fórmula (L) utilizando una base tal como BuLi en un solvente tal como hexano por ejemplo a 0o C, agregando en un segundo tiempo cloruro de 4 metilbencensulfonilo por ejemplo a 0°C, entonces en un tercer tiempo un segundo equivalente de una base tal como nBuLi por ejemplo a 0°C.
Paso (iv): El compuesto de fórmula (L) puede ser preparado del compuesto de fórmula (Lll) secuencialmente - por adición de un agente reductor tal como hidruro de aluminio y litio en un solvente tal como THF por ejemplo a 0o C - Después de trabajo y adición de solvente de evaporación de un agente de destilación tal como TBAF en un solvente tal como THF.
Paso (iii): El compuesto de fórmula (Ll) puede ser preparado del compuesto de fórmula (Lll) por una reacción de ciclopropanación de Corey-Chaykovsky llevada a cabo a temperatura ambiente como anteriormente fue descrito en el Esquema 16 (paso (iii)).
Paso (¡i): El compuesto de fórmula (Lll) puede ser preparado del compuesto de fórmula (LUI) por olefinación con por ejemplo una solución de titanoceno de dimetilo en un solvente tal como tolueno (por ejemplo 9% p/p) calentando por ejemplo a 90°C en un solvente tal como tolueno. La solución de titanoceno de dimetilo en tolueno puede ser preparada por la reacción de bicloruro de titanoceno con por ejemplo una solución de metillitio a -10° C.
Paso (i): El compuesto de fórmula (LUI) puede ser preparado del compuesto (XIV) por litiación utilizando BuLi en un solvente tal como hexano a temperatura ambiente, esta solución para ser agregada en un segundo tiempo a -78°C al electrófilo por ejemplo cloro(oxo)acetato de etilo (prediluido por ejemplo en THF).
ESQUEMA 19B Paso (iv): El fenol del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes puede ser preparado del alcohol del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes después del tratamiento con un ácido conveniente tal como H2S04 o ácido P-tolilsolfónico en un solvente conveniente tal como acetato de etilo, acetonitrilo, metanol o etanol.
Paso (iii) : el compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado de compuestos del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes reaccionando bromuro de etil magnesio de 2 a 10 equivalentes en un solvente conveniente tal como THF a temperatura que varia de -78 C a temperatura ambiente.
Paso (ii): El fenol del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes por eliminación del grupo protector MOM utilizando TFA en un solvente conveniente tal como DCM a temperatura que varia de 0°C a temperatura ambiente.
Paso (i) : el compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto de partida por litiación utilizando BuLi en un solvente tal como hexano a temperatura ambiente, esta solución es agregada en un segundo tiempo a -78CC al electrófilo por ejemplo cloroformato de etilo (prediluido por ejemplo en THF).
ESQUEMA 20 Paso (iv): El fenol del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes puede ser preparado de un compuesto el tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes por eliminación del grupo protector MOM como fue anteriormente descrito en el Esquema 16 (paso vi).
Paso (iii): el compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado por ciclopropanación (condiciones de Simmons-Smith) del compuesto insaturado del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes utilizando dietilcinc y diyodometano (opcionalmente 2,4,6-triclorofenol es agregado) en un solvente tal como diclorometano a temperatura que varia de -40°C a temperatura ambiente.
Paso (¡i): el compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado utilizando una reacción de tipo wittig como es descrito en el Esquema 16 (paso ii).
Paso (i): El compuesto del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado del fenol de partida utilizando una base tal como NaH y cloro(metilox¡)metano en un solvente tal como DMF o THF por ejemplo de 0°C a la temperatura ambiente.
ESQUEMA 21 Paso (ii): El fenol del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado de lactona del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes utilizando bromuro de metilmagnesio en un solvente conveniente tal como THF o éter dietilico a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente. El compuesto obtenido puede ser tratado con un ácido conveniente tal como H2S04 o TsOH en un solvente conveniente tal como acetato de etilo o acetonitrilo o metanol o etanol.
Paso (i): Lactona del tipo producida por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparada por reacción de anhídrido disponible comercialmente de partida con un agente reductor tal como K-selectrido en un solvente tal como THF a 0o C; seguido por la protección MOM utilizando una base tal como DIPEA y cloro(metiloxi)metano en un solvente tal como DCM por ejemplo de 0°C a temperatura ambiente.
ESQUEMA 22 Paso (iii): El fenol del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado de un ácido borónico del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes utilizando H2O2 y NaOH en un solvente conveniente tal como THF o una combinación de solventes tal como agua/THF a temperatura ambiente.
Paso (ii): el ácido borónico del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado del ácido borónico del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes por litiación utilizando sec-BuLi en un solvente tal como THF a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente, seguido por la adición en un segundo tiempo de un agente de metilación tal como yodometano a temperatura que varia de -78°C a temperatura ambiente.
Paso (i): El ácido Borónico del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado por litiación de 2,2-Difluoro-1 ,3-benzodioxol disponible comercialmente utilizando sec-Buü en un solvente tal como THF a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente, seguido por la adición en un segundo tiempo de trimetilborato.
ESQUEMA 23 Paso (i): El fenol del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado por litiación de 2,2-Difluoro-1 ,3-benzodioxol disponible comercialmente utilizando sec-BuLi en un solvente tal como THF a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente, seguido por la adición en un segundo tiempo de trimetilborato a temperatura que varia de -78°C a la temperatura ambiente y seguido por la adición en un tercer tiempo de H2O2 y NaOH a temperatura ambiente.
ESQUEMA 24 Paso (iv): El fenol del tipo producido por el paso (iv) como fue mostrado antes puede ser preparado de compuestos del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes por tratamiento con un agente de desmetilación tal como BBr3 en un solvente conveniente tal como diclorometano o dicloroetano a temperatura que varia de la temperatura ambiente al reflujo.
Paso (iii): el compuesto del tipo producido por el paso (iii) como fue mostrado antes puede ser preparado del compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes por tratamiento con un ácido conveniente tal como ácido polifosfórico puro a temperatura conveniente tal como 1 10° C.
Paso (ii): el compuesto del tipo producido por el paso (ii) como fue mostrado antes puede ser preparado del aminoalcohol del tipo producido por el paso (I) como fue mostrado antes por tratamiento con un agente de acilación tal como cloruro de acetilo en la presencia de una base tal como trietilamina en un solvente conveniente tal como diclorometano a una temperatura conveniente por ejemplo 0o C.
Paso (i): El alcohol del tipo producido por el paso (i) como fue mostrado antes puede ser preparado de la cetona disponible comercialmente de partida por tratamiento con bromuro de metilmagnesio en un solvente conveniente tal como THF o éter dietílico a temperatura que varia de 0°C a la temperatura ambiente.
ESQUEMA 25 Paso (ii): Alternativamente a la ruta descrita en el Esquema 2b (paso ii), los compuestos de fórmula (III) pueden ser obtenidos por acoplamiento entre la anilina (IV) y el precursor (LIV) con calentamiento por ejemplo a 150°C en un solvente tal como tolueno.
Paso (i): Los compuestos de fórmula (LIV) pueden ser preparados del aminoácido N-protegido (V) y 2,2'-ditiodipiridina (LV) en la presencia de trifenilfosfina a temperatura ambiente en un solvente tal como THF.
ESQUEMA 26 Paso (Ni): Los compuestos de fórmula (VIII) pueden ser preparados por reacción de ureas de fórmula (XI) y una base tal como metóxido de sodio en un solvente tal como Metanol a temperatura que varia de 0°C a 60° C.
Paso (ii): Los compuestos de fórmula (XI) pueden ser preparados por reacción de anilinas disponibles comercialmente de fórmula (IVa), en donde Z es Cl, y amino ésteres (sal de clorhidrato) de fórmula (XII) en un solvente por ejemplo diclorometano o acetato de etilo con un agente de carbonilación por ejemplo trifósgeno de manera preferencial prediluido en el mismo solvente en la presencia de una base por ejemplo trietilamina o diisopropiletilamina a temperatura que varia de 0°C a 60° C, agregando opcionalmente una cantidad catalítica o estequiométrica de DMAP.
Paso (i): Aminoésteres (sal de clorhidrato) de fórmula (XII) puede ser preparado del aminoácidos disponibles comercialmente (sal de clorhidrato) de fórmula (XIII) por reacción con metanol en la presencia de una cantidad catalítica o estequiométrica de cloruro de tionilo a temperatura que varia de t.a. a reflujo.
La invención presente proporciona compuestos de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para uso en terapia.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o trastorno donde un modulador de los canales de Kv3.1 o Kv3.2 o Kv3.1 es requerido. Como es utilizado en la presente, un modulador de Kv3.1 o Kv3.2 o de Kv 3,1 y Kv3.2 es un compuesto que altera las propiedades de estos canales, ya sea positivamente o negativamente. La propiedad alterada del canal puede ser la escala de respuesta observada o el comportamiento temporal del canal.
Los compuestos de la invención pueden ser probados en el ensayo del Ejemplo Biológico 1 para determinar sus propiedades moduladoras.
Las enfermedades o las condiciones que pueden ser mediadas por la modulación de Kv3.1 y/o los canales Kv3.2 pueden ser seleccionados de la lista siguiente. Los números en corchetes después de las enfermedades listadas a continuación se refieren al código de clasificación en el Manual de Diagnósutco y Estadística de los Trastornos Mentales, 4a Edición, publicado por la Asociación Americana de Psiquiatría (DSM-IV) y/o la Clasificación Internacional de Enfermedades, 10a Edición (ICD-10).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser utilizados para el tratamiento o profilaxis de depresión y trastornos del humor incluyendo Episodio Depresivo Mayor, Episodio Maniaco, Episodio Mixto y Episodio Hipomaniaco; Trastornos Depresivos incluyendo Trastornos Depresivos Mayor, Trastorno Distimico (300.4), Trastorno Depresivo no Especificado de otro Modo (311); Trastornos Bipolares incluyendo Trastorno Bipolar I, Trastorno Bipolar II (Episodios Depresivos Mayores Recurrentes con Episodios Hipomaniacos) (296.89), Trastorno ciclotímico (301.13) y Trastorno Bipolar No Especificado de otro Modo (296.80); Otros trastornos del Animo incluyendo Trastorno debido a una Condición Médica General (293.83) que incluye los subtipos con Aspectos Depresivos, Con Episodio del tipo Depresivo Mayor, Con Aspectos Maniacos y Con Aspectos Mixtos), El trastorno del Animo inducido por Sustancias (incluyendo los subtipos con Aspectos Depresivos, Con Aspectos Maniacos y Con Aspectos Mixtos) y Trastorno del Animo No Especificado de otro Modo (296.90); trastorno afectivo estacional.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de esquizofrenia incluyendo los subtipos del Tipo Paranoide (295.30), Tipo Desorganizado (295.10), Tipo Catatónico (295.20), Tipo No Diferenciado (295.90) y Tipo Residual (295.60); Trastorno Esquizofreniforme (295.40); Trastorno Esquizoafectivo (295.70) incluyendo los subtipos de Tipo Bipolar y Tipo Depresivo; Trastorno de Delirio (297.1 ) incluyendo los subtipos del Tipo Erotománico, Tipo Grandioso, Tipo Celoso, Tipo Persecutorio, Tipo Somático, Tipo Mixto y Tipo No Especificado; Breve Trastorno Psicótico (298.8); Trastorno Psicótico Compartido (297.3); Trastorno Psicótico debido a una Condición Médica General incluyendo los subtipos con Delirio y Con Alucinaciones; Trastorno Psicótico Inducido por Sustancias incluyendo los subtipos Con Delirio (293.81 ) y Con Alucionaciones (293.82); y Trastorno Psicótico No Especificado de Otro Modo (298.9).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de trastornos de ansiedad incluyendo Ataque de Pánico; Trastorno de Dolor incluyendo sin Agorafobia (300.01 ) y Trastorno de Pánico Con Agorafobia (300.21 ); Agorafobia, Agorafobia Sin Historia de Trastorno de Pánico (300.22), Fobia Específica (300.29, antes Fobia Simple) incluyendo los subtipos de Tipo Animal, Tipo Ambiente Natural, Tipo de Lesión por Sangre-Inyección, Tipo Situacional y Otro Tipo), Fobia Social (Trastorno de Ansiedad Social, 300.23), Trastorno Obsesivo-Compulsivo (300.3), Trastorno de Estrés Post-traumático (309.81 ), Trastorno de Estrés Agudo (308.3), Trastorno de Ansiedad Generalizada (300.02), Trastorno de Ansiedad Debido a una Condición Médica General (293.84), Trastorno de Ansiedad Inducido por Sustancias, Trastorno de Ansiedad por Separación (309.21), Trastornos de Ajuste con Ansiedad (309.24) y Trastorno de Ansiedad No Especificado de Otro Modo (300.00).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso en el tratamiento o en la profilaxis de trastornos relacionados a sustancias incluyendo Trastornos por el Uso de Sustancias tales como Dependencia a las Sustancias, Anhelo de Sustancias y Abuso de Sustancias; Trastornos Inducidos por Sustancias tales como Intoxicación por Sustancias, Retiro de Sustancias, Delirio Inducido por Sustancias, Demencia Persistente Inducida por Sustancias, Trastorno de Amnesia Persistente Inducido por Sustancias, Trastorno Psic+otico Inducido por Sustancias, Trastorno del Animo Inducido por Sustancias, Trastorno de Ansiedad Inducido por Sustancias, Disfunción Sexual Inducida por Sustancias, Trastorno del Sueño Inducido por Sustancias y Trastorno de la Percepción Persistente Halucinógeno (Regresiones); Trastornos Relacionados con el Alcohol tal como Dependencia al Alcohol (303.90), Abuso del Alcohol (305.00), Intoxicación por Alcohol (303.00), Retiro del Alcohol (291.81 ), Delirio por Intoxicación de Alcohol, Delirio por Retiro del Alcohol, Demencia Perisitente Inducida por Alcohol, Trastorno Amnésico Persistente Inducido por Alcohol, Trastorno Psicótico Inducido por Alcohol, Trastorno del Animo Inducido por Alcohol, Trastorno de Ansiedad Inducido por Alcohol, Disfunción Sexual inducida por Alcohol, Trastorno del Sueño Inducido por Alcohol y Trastorno Relacionado al Alcohol No Especificado de Otro Modo (291.9); Trastornos de Anfetamina (o del tipo Anfetamina) tales como Dependencia a la Anfetamina (304.40), Abuso de Anfetaminas (305.70), Intoxicación por Anfetamina (292.89), Retiro de Anfetamina (292.0), Delirio de Intoxicación por Anfetamina, Trastorno Psicótico Inducido por Anfetamina, Trastorno del Animo Inducido por Anfetaminas, Trastorno de Ansiedad Inducido por Anfetaminas, Disfunción Sexual Inducida por Anfetaminas, Trastorno del Sueño Inducido por Anfetaminas y Trastorno Relacionado con Anfetaminas No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con la Cafeína tales como Intoxicación por Cafeína (305.90), Trastorno de Ansiedad Inducido por Cafeína, Trastorno del Sueño Inducido por Cafeína y Trastorno Relacionado con la Cafeína No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con Cannabis tales como Dependencia a Cannabis (304.30), Abuso de Cannabis (305.20), Intoxicación por Cannabis (292.89), Delirio por Intoxicación de Cannabis, Trastorno Psicótico Inducido por Cannabis, Trastorno de Ansiedad Inducido por Cannabis y Trastorno Relacionado con Cannabis No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con la Cocaína tales como Dependencia a la Cocaína (304.20), Abuso de Cocaína (305.60), Intoxicación de Cocaína (292.89), Retiro de Cocaína (292.0), Delirio de Intoxicación por Cocaína, Trastorno Psicótico Inducido por Cocaína, Trastorno del Anicmo Inducido por Cocaína, Trastorno de Ansiedad Inducido por Cocaína, Disfunción Sexual Inducida por Cocaína, Trastorno del Sueño Inducido por Cocaína y Trastorno Relacionado con la Cocaína No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con Alucinógenos tales como Dependencia a Alucinógenos (304.50), Abuso de Alucinógenos (305.30), Intoxicación por Alucinógenos (292.89), Trastorno de la Percepción Persistente por Alucinógenos (Regresiones) (292.89), Delirio por Intoxicación por Alucinógenos, Trastorno Psicótico Inducido por Alucinógenos, Trastorno del Animo Inducido por Alucinógenos, Trastorno de Ansiedad Inducido por Alucinógenos y Trastorno Relacionado con Alucinógenos No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados a Inhalantes tales como Dependencia a Inhalantes (304.60), Abuso de Inhalantes (305.90), Intoxicación por Inhalantes (292.89), Delirio de Intoxicación por Inhalantes, Demencia Persistente Inducida por Inhalantes, Trastorno Psicótico Inducido por Inhalantes, Trastorno del Animo Inducido por Inhalantes, Trastorno de Ansiedad Inducido por Inhalantes y Trastorno Relacionado con Inhalantes No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con la Nicotina tales como Dependencia a la Nicotina (305.1), Retiro de la Nicotina (292.0) y Trastorno Relacionado con la Nicotina No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con Opioides tales como Dependencia a Opioides (304.00), Abuso a Opioides (305.50), Intoxicación de Opioides (292.89), Retiro de Opioides (292.0), Delirio por Intoxicación de Opioides, Trastorno Psicótico Inducido por Opioides, Trastorno del Animo Inducido por Opioides, Disfunción Sexual Inducida por Opioides, Trastorno del Sueño Inducido por Opioides y Trastorno Relacionado con Opioides No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con Fenciclidina (o del Tipo de Fenciclidina) tales como Dependencia a Fenciclidina (304.60), Abuso de Fenciclidina (305.90), Intoxicación por Fenciclidina (292.89), Delirio de Intoxicación de Fenciclidina, Trastorno Psicótico Inducido por Fenciclidina, Trastorno del Animo Inducido por Fenciclidina, Trastorno de Ansiedad inducido por Fenciclidina y Trastorno Relacionado con Fenciclidina No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastornos Relacionados con Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos tales como Dependencia a Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos (304.10), Abuso de Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos (305.40), Intoxicación por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos (292.89), Retiro de Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos (292.0), Delirio por Intoxicación de Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Delirio por Retiro de Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Demencia Persistente por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Trastorno Amnésico Persistente porSedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Trastorno Psicótico Inducido por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Trastorno del Animo Inducido por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Trastornos de Ansiedad Inducidos por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Disfunción Sexual inducida por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos, Trastornos del Sueño Inducidos por Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos y Trastorno Relacionado con Sedantes, Hipnóticos, o Ansiolíticos No Especificado de Otro Modo (292.9); Trastorno Relacionado a Polisustancias tal como Dependencia a Polisustancias (304.80); y otros trastornos Relacionados a Sustancias (o desconocidos) tales como Esferoides Anabólicos, Inhalantes de Nitrato y Oxido Nitroso.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser del uso para el aumento de la cognición incluyendo el tratamiento de deterioro de cognición en otras enfermedades tal como la esquizofrenia, trastorno bipolar, depresión, otros trastornos psiquiátricos y condiciones psicóticas asociadas con el deterioro cognoscitivo, por ejemplo la enfermedad de Alzheimer.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o en la profilaxis de trastornos del sueño incluyendo trastornos primarios del sueño tales como Disomnios tal como Insomnio Primario (307.42), Hipersominio Primario (307.44), Narcolepsia (347), Trastornos del Sueño Relacionados con la Respiración (780.59), Trastorno del Sueño por el Ciclo Circadiano (307.45) y Disomino No Especificado de Otro Modo (307.47); trastornos primarios del sueño tales como Parasomnios tales como Trastorno de Pesadillas (307.47), Trastorno del Terror del Sueño (307.46), Trastorno de Sonambulismo (307.46) y Parasomnio No Especificado de Otro Modo (307.47); Trastornos del Sueño Relacionados a Otros Trastornos Mentales tales como Trastorno Mental Relacionado a Otros Trastornos Mentales (307.42) y Hipersomnio Relacionado a Otro Trastorno Mental (307.44); Trastorno del Sueño Debido a una Condición Médica General, en particular perturbaciones del sueño asociadas con tales enfermedades tales como trastornos neurológicos, dolor neuropático, síndrome de piernas inquietas, enfermedades de corazón y pulmón; y Trastorno del Sueño Inducido por Sustancias incluyendo los subtipos de insomnio, Tipo de Hipersomnio, Tipo Parasomnio y Tipo Mixto; apnea del sueño y síndrome de cambio de horario.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de trastornos de la alimentación tales como Anorexia Nervosa (307.1 ) incluyendo los subtipos del tipo Restrictivo y Tipo de Alimentación Chatarra/Purga; Bulimia Nervosa (307.51 ) incluyendo los subtipos de Purga y No Purga; Obesidad; Trastorno Compulsivo de Alimentación; Trastorno de Alimentación Chatarra; y Trastorno de Alimentación No Especificado de Otro Modo (307.50).
Los compuestos de la fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de Trastornos en el Espectro de Autismo incluyendo Trastorno Autístico (299.00), Trastorno de Asperger (299.80), Trastorno de Rett (299.80), Trastorno Desintegrante de la Niñez (299.10) y Trastorno Pervasivo No Especificado de Otro Modo (299.80, incluyendo Autismo Atípico).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de Trastorno de Déficit de Atención/Hiperactividad incluyendo los subtipos de Trastornos de Déficit de Atención /Hiperactividad del tipo Combinado (314.01 ), Trastorno de Déficit de Atención /Hiperactividad del Tipo Predominantemente Inatentivo (314.00), Trastorno de Déficit de Atención /Hiperactividad del tipo Impulso Hiperactivo (314.01) y Trastorno de Déficit de Atención/Hiperactividad No Especificado de Otro Modo (314.9); Trastorno Hipercinético; Trastorno de Comportamiento Disruptivo tal como Trastorno de la Conducta los subtipos del tipo de activación en la niñez (321.81), del Tipo de Activ ación en la Adolescencia (312.82) y de Activación No Especificada (312.89), Trastorno Desafiante de Oposición (313.81) y Trastorno de Comportamiento Disruptivo No Especificado de Otro Modo; y Trastornos de Tic tal como Trastorno de Tourette (307.23).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o profilaxis de trastornos de Personalidad incluyendo los subtipos del Trastorno de la Personalidad Paranoide (301.0), Trastorno de la Personalidad Esquizoide (301.20), Trastorno de Personalidad Ezquisotipal (301 ,22), Trastorno de Personalidad Antisocial (301.7), Trastorno de Personalidad Límite (301 ,83), Trastorno de Personalidad Histriónica (301.50), Trastorno de Personalidad Narcisista (301 ,81), Trastorno de Personalidad Evasiva (301.82), Trastorno de Personalidad Dependiente (301.6), Trastorno de Personalidad Obsesiva-Compulsiva (301.4) y Trastorno de Personalidad No Especificado de Otro Modo (301.9).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso en el tratamiento o profilaxis de disfunciones sexuales incluyendo Trastornos del Deseo Sexual tal como Trastorno de Deseo Sexual Hipoactivo (302.71 ), y Trastorno de Aversión Sexual (302.79); trastornos de excitación sexual tales como Trastorno de Excitación Sexual Femenina (302.72) y Trastorno Eréctil Masculino (302.72); trastornos orgásmicos tales comoTrastorno Orgásmico Femenino (302.73), Trastorno Orgásmico Masculino (302.74) y Eyaculación Prematura (302.75); trastorno de dolor sexual tal como Dispareunia (302.76) y Vaginismo (306.51); Disfunción Sexual No Especificada de Otro Modo (302.70); parafilias tales como Exhibicionismo (302.4), Fetichismo (302.81 ), Froteurismo (302.89), Pedofilia (302.2), Masoquismo Sexual (302.83), Sadismo Sexual (302.84), Fetichismo Transvéstico (302.3), Voyeurismo (302.82) y Parafilia No Especificada de Otro Modo (302.9); trastornos de identidad de género tales como Trastornos de Identidad de Género en Niños (302.6) y Trastorno de Identidad de Género en Adolescentes o Adultos (302.85); y Trastorno Sexual No Especificado de Otro Modo (302.9).
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser del uso para el tratamiento o profilaxis de trastorno de control de Impulsos incluyendo: Trastorno Explosivo Intermitente (312.34), Cleptomanía (312.32), Apuestas Patológicas (312.31 ), Piromanía (312.33), Tricotilomania (312.39), Trastornos de Control de Impulsos No Especificados de Otro Modo (312.3), Alimentación Chatarra, Comprador Compulsivo, Comportamiento Sexual Compulsivo y Acumulación Compulsiva.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o en la profilaxis de trastornos de la audición incluyendo neuropatía auditiva, trastorno de procesamiento auditivo, pérdida de la audición, que incluye pérdida súbita de la audición, pérdida de la audición inducida por ruidos, pérdida de la audición inducida por sustancias, y pérdida de la audición en adultos mayores de 60 (presbicusia), y zumbido.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser del uso para el tratamiento o la profilaxis de la enfermedad de Méniére, los trastornos del equilibrio, y de los trastornos del oído interior.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser del uso para el tratamiento o la profilaxis de hiperacusia y perturbaciones de la percepción de la intensidad, incluyendo síndrome de Frágil-X y autismo.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser de uso para el tratamiento o la profilaxis de Epilepsia, (incluyendo, pero no limitado a, epilepsias relacionadas con la localización, epilepsias generalizadas, epilepsias tanto con convulsiones generalizadas como locales, y similares), convulsiones asociadas con el síndrome de Lennox-Gastaut, convulsiones como una complicación de una enfermedad o condición (tal como convulsiones asociadas con encefalopatía, fenilcetonuria, enfermedad juvenil de Gaucher, epilepsia mioclónica progresiva de Lundborg, accidente cerebro-vascular, trauma de cabeza, estrés, cambios hormonales, uso o retiro de fámracos, uso o retiro de alcohol, deprivación de sueño, fiebre, infección, y similares), temblor esencial, síndrome de la pierna inquieta, convulsiones parciales y generalizadas (incluyendo tónica, clónica, tónica-clónica, atónica, mioclónica, ausencia de convulsiones), convulsiones secundarias generalizadas, epilepsia del lóbulo temporal, ausencia de epilepsias (incluyendo de la niñez, juvenil, mioclónica, foto- y patrón inducidas), encefalopatías apilépticas severas (incluyendo relacionadas con hipoxia y síndrome de Rásmussen), convulsiones febriles, epilepsia parcial continua, epilepsia mioclona progresiva (incluyendo la enfermedad de Unverricht-Lundborg y la enfermedad de Lafora), convulsiones post-traumáticas/epilepsia incluyendo esas relacionadas a lesión de cabeza, epilepsia de reflejo simple (incluyendo fotosensible, somatosensoria y proprioceptiva, audiogénica y vestibular), trastornos metabólicos asociados comunmente con epilepsia tal como epilepsia dependiente de piridoxina, enfermedad de cabello torcido de Menkes, enfermedad de Krabbe, epilepsia debido a abuso de alcohol y drogas (por ejemplo cocaína), malformaciones corticales asociadas con epilepsia (por ejemplo síndrome de doble corteza o heterotopia de la banda subcortical), anomalías cromosomales asociadas con convulsiones o epilepsia tales como monosomía Parcial (15Q) / síndrome de Angelman) y similares.
En una modalidad de la invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento o profilaxis de trastornos de depresión y humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia.
En una modalidad de la invención, allí es proporcionado un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para el tratamiento o profilaxis de trastorno bipolar o manías.
El término "tratamiento" o "tratar" como es utilizado en la presente incluye el control, la mitigación, la reducción, o la modulación del estado de la enfermedad o sus síntomas.
El término "profilaxis" es utilizado en la presente para significar síntomas de prevención de una enfermedad o trastorno en un sujeto o para prevenir la reaparición de síntomas de una enfermedad o trastorno en un sujeto afligido y no está limitado a una prevención completa de una aflicción.
La invención también proporciona un método para tratar o prevenir una enfermedad o trastorno donde un modulador de Kv3 es requerido, por ejemplo esas enfermedades y trastornos mencionados anteriormente, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también proporciona un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para el uso en el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o trastorno donde un modulador de Kv3 es requerido, por ejemplo esas enfermedades y trastornos mencionados anteriormente.
La invención también proporciona el uso de un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de una enfermedad o trastorno donde un modulador de Kv3 es requerido, por ejemplo esas enfermedades y trastornos mencionados anteriormente.
La invención también proporciona un método para tratar trastornos de depresión y del humor, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos de sueño o epilepsia, por ejemplo para esas indicaciones mencionadas anteriormente, que comprende administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de un modulador Kv3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Para el uso en la terapia los compuestos de la invención son administrados generalmente como una composición farmacéutica. La invención también proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I), o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser administrados por algún método conveniente, por ejemplo por administración oral, parenteral, bucal, sublingual, nasal, rectal o transdermal, y por consiguiente las composiciones farmacéuticas adaptadas.
Los compuestos de fórmula (I) o sus sales farmacéuticamente aceptables que son activas cuando se dan oralmente pueden ser formuladas como líquidos o sólidos, por ejemplo como jarabes, suspensiones, emulsiones, tabletas, cápsulas o pastillas.
Una formulación líquida consistirá generalmente en una suspensión o solución del ingrediente activo en un portador líquido conveniente por ejemplo un solvente acuoso tal como agua, etanol o glicerína, o como un solvente no acuoso, tal como polietilen glicol o un aceite. La formulación también puede contener un agente de suspensión, conservante, saborizante y/o colorante.
Una composición en la forma de una tableta puede ser preparada utilizando cualquier portador farmacéutico conveniente rutinariamente utilizado para preparar formulaciones sólidas, tal como estearato de magnesio, almidón, lactosa, sacarosa y celulosa.
Una composición en la forma de una cápsula puede ser preparada utilizando procedimientos rutinarios de encapsulación, por ejemplo pastillas que contienen el ingrediente activo pueden ser preparadas utilizando portadores estándar y entonces llenados en una cápsula dura de gelatina; alternativamente una dispersión o suspensión puede ser preparada utilizando algún portador farmacéutico conveniente, por ejemplo gomas acuosas, celulosas, silicatos o aceites y la dispersión o la suspensión entonces llenada en una cápsula suave de gelatina.
Las composiciones parenterales típicas consisten en una solución o suspensión del ingrediente activo en un portador acuoso estéril o aceite parenteralmente aceptable, por ejemplo polietílen glicol, poliviníl pirrolidona, lecitina, aceite de cacahuate o aceite de sésamo. Como alternativa, la solución puede ser liofilizada y reconstituida con un solvente adecuado, justo antes de su administración.
Composiciones para administración nasal se pueden formular convenientemente en forma de aerosoles, gotas, geles y polvos. Las formulaciones en aerosol comprenden típicamente una solución o suspensión fina del ingrediente activo en un solvente farmacéuticamente aceptable, acuoso o no acuoso y son presentados generalmente en cantidades únicas o multidosis en la forma estéril en un contenedor sellado que puede tomar la forma de un cartucho o repuesto para uso con un dispositivo atomizador. Alternativamente el contenedor sellado puede ser un dispositivo de surtido desechable tal como un inhalante nasal de dosis única o un surtidor en aerosol equipado con una válvula de medición. Dónde la forma de dosis comprende a un surtidor en aerosol, contendrá un propelente que puede ser un gas comprimido por ejemplo aire, o un propelente orgánico tal como un fluoroclorohidrocarburo o hidrofluorocarbono. Las formas de dosis en aerosol también pueden tomar la forma de bomba-atomizadora.
Las composiciones propias para la administración bucal o sublingual incluyen tabletas, pildoras y pastillas donde el ingrediente activo es formulado con un portador tal como azúcar y acacia, tragacanto, o gelatina y glicerina.
Las composiciones para la administración rectal están convenientemente en la forma de supositorios que contienen una base convencional de supositorio tal como manteca de cacao.
Composiciones adecuadas para administración transdérmica incluyen ungüentos, geles y parches.
En una modalidad la composición está en la forma de unidad de dosis tal como una tableta, cápsula o ampolla.
La composición puede contener de 0.1 % a 100% por peso, por ejemplo de 10 a 60% por peso, del material activo, dependiendo del método de administración. La composición puede contener de 0% a 99% por peso, por ejemplo 40% a 90% por peso, del portador, dependiendo del método de administración. La composición puede contener de 0.05mg a 1000 mg, por ejemplo de 1.0mg a 500 mg, del material activo, dependiendo del método la administración. La composición puede contener de 50 mg a 1000 mg, por ejemplo de 100 mg a 400 mg del portador, dependiendo del método de administración. La dosis del compuesto utilizado en el tratamiento de los trastornos antes mencionados variará en la manera usual con la seriedad de los trastornos, el peso de la víctima, y de otros factores semejantes. Sin embargo, como una guía general las dosis unitarias convenientes puede ser 0.05 a 1000 mg, más convenientemente 1.0 a 500 mg, y tales unidades de dosis pueden ser administradas más de una vez al día, por ejemplo dos o tres al día. Tal terapia puede extenderse por varias semanas o meses.
La invención proporciona, en un aspecto adicional, una combinación que comprende un compuesto de fórmula (I) o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo junto con un agente o agentes terapéuticos adicionales.
La invención proporciona un compuesto de fórmula (I), para el uso en combinación con un agente o agentes terapéuticos adicionales.
Cuando los compuestos se utilizan en combinación con otros agentes terapéuticos, los compuestos se pueden administrar de manera secuencial o simultánea por cualquier ruta conveniente.
Las combinaciones referidas antes pueden ser presentadas convenientemente para uso en forma de una formulación farmacéutica y así las formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como fue definida antes junto con un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable comprende un aspecto adicional de la invención. Los componentes individuales de tales combinaciones pueden ser administrados ya sea secuencialmente o simultáneamente en formulaciones farmacéuticas separadas o combinadas. Los componentes individuales de combinaciones también pueden ser administradas separadamente, por las mismas o diferentes rutas.
Cuando un compuesto de fórmula (I) o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo es utilizado en combinación con un segundo agente terapéutico activo contra el mismo estado de enfermedad la dosis de cada compuesto puede diferir de esa cuando el compuesto es utilizando solo. Los expertos en la técnica apreciarán fácilmente las dosis apropiadas.
Una composición farmacéutica de la invención, que puede ser preparada por mezcla, convenientemente a temperatura ambiente y presión atmosférica, está usualmente adaptada generalmente para la administración oral, parenteral o rectal y, como tal, puede estar en forma de tabletas, cápsulas, preparaciones líquidas orales, polvos, gránulos, pastillas, polvos reconstitutibles, soluciones o suspensiones inyectables o infundibles o supositorios. Las composiciones administrables oralmente son generalmente preferidas.
La invención presente también proporciona moduladores de Kv3, o sus sales farmacéuticamente aceptables, para el uso en el tratamiento o la profilaxis de trastornos de depresión y humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia.
En particular los moduladores de Kv3 o sus sales farmacéuticamente aceptables pueden ser particularmente útiles en el tratamiento o profilaxis de depresión y trastornos del humor incluyendo Episodio Depresivo Mayor, Episodio Maníaco, Episodio Mixto y Episodio Hipomaníaco; Trastornos Depresivos incluyendo Trastorno Depresivo Mayor, Trastorno Distímico, (300.4), Trastorno Depresivo No Especificado de Otro Modo (31 1); Trastornos Bipolares incluyendo Trastorno Bipolar I, Trastorno Bipolar II (Episodios Depresivos Mayores Recurrentes con Episodios Hipomaníacos) (296.89), Trastorno Ciclotimico (301.13) y Trastorno Bipolar No Especificado de Otro Modo (296.80); Otros Trastornos del Humor incluyendo Trastorno del Humor debido a una condición Médica General (293.83) que incluye los subtipos Con Aspectos Depresivos, Con Episodio del Tipo Depresivo Mayor, Con Aspectos Maníacos y Con Aspectos Mixtos), Trastorno del Humor Inducido por Sustancias (incluyendo los subtipos con Aspectos Depresivos , Con Aspectos Maníacos y Con Aspectos Mixtos) y Trastorno del Humor No Especificado de Otro Modo (296.90),Trastorno Afectivo Estacional.
La invención también proporciona un método para tratar depresión y trastornos del humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastorno de abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia, incluyendo por ejemplo esos trastornos mencionados antes, que comprenden administrar a un sujeto en necesidad del mismo una cantidad efectiva de modulador de Kv3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
La invención también proporciona un modulador de Kv3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para use en el tratamiento o profilaxis de depresión y trastornos del humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos por abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia, incluyendo por ejemplo esos trastornos mencionados anteriormente.
La invención también proporciona el uso de un modulador de Kv3, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento o profilaxis de depresión y trastornos del humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos por el abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia, incluyendo por ejemplo esos trastornos mencionados anteriormente.
Para el uso en terapia los moduladores Kv3 son administrados generalmente como una composición farmacéutica por ejemplo una composición que comprende un modulador de Kv3 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un portador farmacéuticamente aceptable. Ejemplos de tales composiciones, y de los métodos de la administración de las mismas, cuyas composiciones comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, son descritas anteriormente. Tales composiciones y métodos de administración también pueden ser utilizadas para otrs moduladores de Kv3 o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en el tratamiento de depresión y trastornos del humor, trastornos auditivos, esquizofrenia, trastornos de abuso de sustancias, trastornos del sueño o epilepsia, incluyendo por ejemplo esos trastornos mencionados anteriormente.
Además, la invención se relaciona a un método para fabricar compuestos de fórmula I, a los intermediarios novedosos de uso en la fabricación de compuestos de fórmula I y a la fabricación de tales intermediarios.
Intermediatios particulares de interés incluyen: 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol (Intermediario 50) espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-ol (Intermediario 85) 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-ol (Intermediario 156) S.S.y-tnmetil^.S-dihicIro-l-benzofuran^-ol (Intermediario 184) Otros intermediarios de interés son los anilidos de fórmula (IV) .
(IV) Especialmente de interés son los anilidos en donde: X es C o N Y es C o N; y el grupo W es seleccionado de: Todas las publicaciones, incluyendo pero no limitado a patentes y solicitudes de patente, citadas en esta especificación son incorporadas en la presente como si cada referencia publicación individual estuviera específica e individualmente indicada como siendo incorporada como referencia en la presente como completamente expuesta.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La presente invención se ilustra, a manera de ejemplo únicamente, con referencia a los siguientes dibujos, en los cuales: Figura 1A: Corrientes de hKv3.2 registradas utilizando el ensayo descrito en el Ejemplo Biológico 1. Los datos mostrados son las corrientes individuales durante el período del paso de voltaje de despolarización a -15mV registrado para 4 celdas diferentes a dos concentraciones del compuesto del Ejemplo de Referencia RE1. Los datos son ajustados por una curva exponencial única (líneas sólidas) utilizando el procedimiento de ajuste en la versión 5 de Prisma (Graphpad Software Inc.).
Figura 1 B: Corrientes de hKv3.2 registraadas utilizando el ensayo descrito en el Ejemplo Biológico 1. Los datos mostrados son las corrientes individuales durante el período del paso de voltaje de despolarización a -15mV registrado de 2 celdas diferentes a dos concentraciones de compuesto del Ejemplo de Referencia RE3. Los datos son ajustados por una curva exponencial única (líneas sólidas) utilizando el procedimiento de ajuste en la versión 5 de Prisma (Graphpad Software Inc.).
Figura 2: Registros hechos de interneuronas de paso rápido identificadas en la corteza somatosensona del ratón.
Figura 3: La frecuencia de potenciales de acción registrada de interneuronas positivas de parvalbúmina en la corteza somatosensona del ratón, evocada por pasos de corriente de despolarización Figura 4: La mitad del ancho de los potenciales de acción evocados de las interneuronas positivas a parvalbúmina en la corteza somatosensoria del ratón Figura 5: Corrientes de potasio activadas de alto voltaje registradas de neuronas MNTB visualmente identificadas en el ratón, in vitro Figura 6A: Expresión de ARNm de Kv3.1 b en el núcleo supraquiasmático de ratones sacrificados durante tiempos Circadianos diferentes sobre un ciclo de 24 horas de luz-oscuridad.
Figura 6B: Expresión de ARNm de Kv3.2 en el núcleo superquiasmático.
Experimental La invención es ilustrada por los Compuestos descritos abajo. Los Ejemplos siguientes describen la síntesis en el laboratorio de compuestos específicos de la invención y no pretenden limitar el alcance de la invención en ninguna manera con respecto a los compuestos o los procedimientos. Es comprendido que, aunque se utilizan reactivos específicos, solventes, temperaturas y períodos de tiempo, hay muchas alternativas equivalentes posibles que pueden ser utilizadas para producir resultados semejantes. Esta invención pretende incluir tales equivalentes.
Equipo analítico Materiales de Partida, los reactivos y los solventes fueron obtenidos de proveedores comerciales y utilizados sin purificación adicional a menos que de otro modo sea indicado. A menos que de otro modo sea indicado, todos los compuestos con centros quirales son racémicos. Dónde las reacciones son descritas como llevadas a cabo en una manera semejante a reacciones más completamente descritas anteriormente, las condiciones generales de reacción utilizadas fueron en esencia las mismas. Las condiciones de trabajo utilizadas fueron de los tipos estándar en la técnica, pero pueden haber sido adaptadas de una reacción a otra. El material de partida no puede haber sido preparado necesariamente del lote referido. Los compuestos sintetizados pueden tener varias pureza que varían de por ejemplo 85% a 98%. Los cálculos de número de moles y rendimiento son ajustados a veces para la presente.
Los espectros de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) fueron registrados ya sea en instrumentos de Vahan a 300, 400, 500 o 600 MHz, o en instrumentos Bruker a 400 MHz. Los cambios químicos son reportados en ppm (d) utilizando la línea de solvente residual como estándar interno. Los patrones de división son designados como s (singulete), br.s (singulete amplio), d (doblete), t (triplete), q (cuarteto), dd (doblete de dobletes), dt (doblete de tripletes) y m (multiplete). Los espectros de RMN fueron registrados a temperaturas que varían de 25 a 30°C.
Los análisis de HPLC indicados por HPLC (subida): rt = x min, fueron realizados en un instrumento Agilent serie 1 100 utilizando una columna Luna 3u C18(2) 100A (50 x 2.0 mm, tamaño de partícula de 3 pm) [fase móvil, solvente A: (Agua + 0.05% de TFA), solvente B: (acetonitrílo + 0.05% de TFA), Gradiente: 100% de (A) a 95% de (B) en 8 min. Columna T = 40 °C. Velocidad de flujo = 1 ml/min. La longitud de onda de detección de UV = 220 nm]. El uso de esta metodología es indicado por "HPLC" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Los espectros de Masa de infusión directa (MS) fueron corridos en un Espectrómetro de Masa Agilent serie 1100 de LC/MSD, operando en el modo de ionización ES (+) y ES (-) [ES (+): índice de masa: 100-1000 amu. Solvente de infusión: agua + 0.1% de HC02H/CH3CN 50/50. ES (-): índice de masa: 100-1000 amu. Solvente de infusión: agua + 0.05% de NH40H/CH3CN 50/50]. El uso de esta metodología es indicado por "MS 1 (ESI)" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Alternativamente, los espectros de Masa (MS) fueron corridos en un espectrómetro de masa, operando en el modo de ionización ES (+) y ES (-) acoplado con un instrumento de HPLC Agilent serie 1 100 [LC/MS-ESI(+) los análisis fueron realizados en un Supelcosil ABZ+Plus (33x4.6 mm, 3 pm) (fase móvil: de 10%[CH3CN+0.05%TFA] a 90 %[CH3CN+0.05%TFA] y 10% [agua] en 2.2 min, bajo estas condiciones por 2.8 min. T= 45 °C, flujo = 0.9 mL/min)]. El uso de esta metodología es indicado por "MS_2 (ESI)" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Los espectros de HPLC-Masa (HPLC-MS) fueron tomados un Espectrómetro de Masa Agílent serie 1 100 LC/MSD acoplado con un instrumento de HPLC Agilent Serie 1 100, operando en el modo de ionización de eletrorociado positivo o negativo y en ambas condiciones de gradiente ácidas y básicas. Gradiente ácido: Los análisis de LC/MS-ES (+ o -) fueron realizados en una columna Supelcosil ABZ + Plus (33 x 4.6 mm, 3 pm). Fase móvil: A: (Agua + 0.1 % de HC02H)/ B: CH3CN. Gradiente (método estándar): t=0 min 0% (B), de 0% (B) a 95% (B) en 5 min durando por 1.5 min, de 95% (B) a 0% (B) en 0.1 min, tiempo de detención 8.5 min. Columna T = t.a. Velocidad de flujo = 1 ml/min. El uso de esta metodología es indicado por "LC-MS_A" en la caracterización analítica de los compuestos descritos. Gradiente Básico: Los análisis LC/MS-ES (+ o -) fueron realizados en una columna XTerra MS C18 (30 x 4.6 mm, 2.5 µ??). Fase móvil: A: (5 mM NH4HC03 ac. + amoniaco (pH 0)) / B: CH3CN. Gradiente: t = 0 min 0% (B), de 0% (B) a 50% (B) en 0.4 min, de 50% (B) a 95% (B) en 3.6 min durando por 1 min, de 95% (B) a 0% (B) en 0.1 min, tiempo de detención 5.8 min. Columna T = t.a. Velocidad de Flujo = 1.5 mlJmin] Intervalo de masa ES (+ o -) : 100-1000 amu. Intervalo de detección de UV: 220-350 nm. El uso de esta metodología es indicado por "LC-MS B" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Control de calidad: LC/MS-ES+ bajo condiciones ácidas fue realizado en una columna Zorbax SB C18 (1.8 pm 3 x 50 mm). Fase móvil: A: (H20 + 0.05% de TFA por vol). / B: (CH3CN + 0.05% TFA por vol). Gradiente: t = 0 min 0% (B),de 0 a 95% (B) en 2.5 min, 95% (B) por 0.2 min, de 95 a 100% (B) en 0.2 min, 100% (B) por 0.4 min, de 00% a 0% (B) en 0.1 min. tiempo de detención 4 min. Columna T = 60°C. velocidad de flujo: 1.5 ml/min. Intervalo de Masa ES+: (100-1000 amu, F=60 ). Longitudes de onda de detección UV: DAD 1A = 220.8, DAD 1 B = 254.8. El uso de esta metodología es indicado por "LC/MS: QC_3_MIN" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Cromatografía Líquida de Alto Desempeño con un gradiente ácido: Corriente de ion total (TIC) y trazas cromatográficas DAD UV junto con los espectros de MS y UV asociados con los picos fueron tomados en un sistema UPLC/MS AcquityTM equipado con un detector 2996 PDA y acoplado a un espectrómetro de masa Waters Micromass ZQTM operando en un modo de ionización de electrorociado positivo o negativo [LC/MS - ES (+ o -): los análisis fueron realizados utilizando una columna AcquityTM UPLC BEH C18 (50 x 2.1 mm, tamaño de partícula de 1.7 pm). Método general: Fase móvil: A: (Agua + 0,1 % de HC02H)/ B: (CH3CN + 0.06% HC02H). Gradiente :t = 0 min 3% (B), t = 0.05 min 6% (B), t = 0.57 min 70% (B), t = 1.06 min 99% (B) durando por 0.389 min, t = 1.45 min 3% (B), tiempo de detención 1.5 min.
Columna T = 40 °C. Velocidad de Flujo = 1.0 mL/min. índice de masa: E (+) : 100-1000 amu. ES (-): 100-800 amu. Intervalo de detección de UV: 210-350 nm. El uso de esta metodología es indicado por "UPLC" en la caracterización analítica de los compuestos descritos. 1er Método Enfocado: Fase móvil: A: (Agua + 0,1% de HC02H)/ B: (CH3CN + 0.1% HC02H). Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 1.06 min 99% (B), t = 1.45 min 99% (B), t = 1.46 min 3% (B) , tiempo de detención 1.5 min. Columna T = 40 °C. Velocidad de Flujo = 1.0 mL/min. índice de masa: E (+) : 100-1000 amu. ES (-): 100-800 amu. Intervalo de detección de UV: 210-350 nm. El uso de esta metodología es indicado por "UPLC_s" en la caracterización analítica de los compuestos descritos. 2 Método Enfocado: Fase móvil: A: (Agua + 0,1 % de HC02H)/ B: (CH3CN + 0.1 % HC02H). Gradiente: t = 0 mín 3% (B), t = 1.5 min 100% (B), t = 1.9 min 100% (B), t = 2 min 3% (B) , tiempo de detención 2 min. Columna T = 40 °C. Velocidad de Flujo = 1.0 mL/min. índice de masa: E (+) : 100-1000 amu. ES (-): 100-800 amu. Intervalo de detección de UV: 210-350 nm. El uso de esta metodología es indicado por "UPLC_ipqc" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Cromatografía Líquida de Alto Desempeño con un gradiente básico: Corriente de ion total (TIC) y trazas cromatográficas DAD UV junto con los espectros de MS y UV asociados con los picos fueron tomados en un sistema UPLC/MS AcquityTM equipado con un detector PDA y acoplado a un espectrómetro de masa Waters SQD operando en un modo de ionización de electrorociado positivo y negativo alternado [LC/MS - ES+/-: los análisis fueron realizados utilizando una columna AcquityTM UPLC BEH C18 (50 x 2.1 mm, tamaño de partícula 1.7 pm). Fase móvil: A: (solución acuosa 10 mM de NH4HC03 (ajustado a pH 10 con amoníaco)) / B: CH3CN. Gradiente: t = 0 min 3% (B), t = 1.06 min 99% (B) durando por 0.39 min, t = 1.46 min 3% (B), tiempo de detención 1.5 min. Columna T = 40 °C. Velocidad de Flujo = 1.0 mL/min. índice de masa: E (+) : 100-1000 amu. ES (-): 100-1000 amu. Intervalo de detección de UV: 220-350 nm. El uso de esta metodología es indicado por "UPLC_B" en la caracterización analítica de los compuestos descritos.
Para las reacciones que incolucran irradiación de micoondas, un Personal Chemistry Emrys™ Optimizer fue utilizado o un Iniciador Biotage En varias preparaciones, la purificación fue realizada utilizando cromatografía instantánea manual Biotage (Flash+), cromatografía instantánea automática Biotage (Horizon, SP1 y SP4), el Compañero CombiFlash (ISCO) cromatografía instantánea automática, sistemas Flash Master Personal o Vac Master.
Las cromatografías instantáneas fueron realizadas en gel de sílice malla 230-400 (suministrado por Merck AG Darmstadt, Alemania) o en gel de sílice malla 300-400 (suministrado por Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.), cartuchos pre-empacados Varían Mega Be-Si, cartuchos de sílice pre-empacados Biotage (por ejemplo cartucho Biotage SNAP), cartuchos instantáneos pre-empacados KP-NH, cartuchos pre-empacados ISOLUTE NH2 o cartuchos de sílice ISCO RediSep.
Los cartuchos SPE-SCX son columnas de extracción de fase sólida de intercambio iónico suministradas por Varían. El eluyente utilizado con los cartuchos SPE-SCX es DCM y MeOH o sólo MeOH seguido por solución de amoniaco en MeOH. Las fracciones recolectadas son esas eluidas con la solución de amoniaco en MeOH a menos que de otro modo sea indicado.
Los cartuchos de SPE-Si son columnas de extracción de fase sólida de sílice suministradas por Varían.
En varias preparaciones, la purificación fue realizada en un sistema de Autopurifícación Dirigido a Masa (MDAP) Fractionlynx™ equipado con un detector Waters 2996 PDA y acoplado con un espectrómetro de masa ZQ™ (Waters) operando en modo de ionización de electrorociado positivo y negativo ES+, ES- (intervalo de masa 100-1000 o 100-900) Un conjunto de gradientes semi-preparativos ha sido utilizado: MÉTODO A: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: XTerra Prep MS C18 OBD (150 mm x 30 mm tamaño de partícula de 10 pm) a temperatura ambiente Fase Móvil: A: (agua + solución acuosa de bicarbonato amónico 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco)), B: acetonítrilo Velocidad de flujo: 40 ml/min Gradiente: 10% (B) por 0.5 min, de 10% (B) a 95% (B) en 12.5 min, de 95% (B) a 100%(B) en 3 min MÉTODO B: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: XTerra Prep MS C18 OBD (150 mm x 30 mm tamaño de partícula 10 pm) a temperatura ambiente Fase móvil: A: agua + solución acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustado a pH 10 con amoníaco), B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 40 ml/min Gradiente: de 20% a 25% (B) en 1 min, de 25% (B) a 65% (B) en 12 min, de 65% (B) a100% (B) en 0.5 min MÉTODO C: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: Waters Xbhdge C18 OBD (50 mm x 19 mm 5 pm tamaño de partícula) a temperatura ambiente Fase móvil: A: agua + solución acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustado a pH 10 con amoníaco), B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 17 ml/min Gradiente: de 20% (B) a 25% (B) en 1 min, de 25% (B) a 55% (B) en 9 min, de 55% (B) a 100% (B) en 2 min, retorno a 20% (B) en 0.1 min MÉTODO D: Condiciones Cromatográficas Acidas Columna: Waters Xbridge C18 OBD (50 mm x 19 mm 5 pm tamaño de partícula) a temperatura ambiente Fase móvil: A: (agua + 0.1 % de ácido fórmico en agua); B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 17 ml/min Gradiente: de 20% (B) a 25%B en 1 min, de 25% (B) a 55% (B) en 9 min, de 55% (B) a 100% (B) en 2 min, retorno a 20% (B) en 0.1 min MÉTODO E: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: Waters Xbridge C18 OBD (50 mm x 19 mm 5 pm tamaño de partícula) a temperatura ambiente Fase Móvil: A: (agua + solución acuosa de bicarbonato amónico 10 mM (ajustada a pH 10 con amoniaco)), B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 17 ml/min Gradiente: de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 70% (B) en 7 min, de 70% (B) a 100% (B) en 1 min, 100% (B) por 2 min, retorno a 10% (B) en 0.1 min MÉTODO F: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: Phenomenex Gemini AXIA C18 (50 x 21.2 mm tamaño de partícula 5 pm) Fase móvil: A: agua + solución acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustado a pH 10 con amoníaco), B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 17 ml/min Gradiente: de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 65% (B) en 8 min, de 65% (B) a 100% (B) en 1 min, retorno a 10% (B) en 1 min.
MÉTODO G: Condiciones Cromatográficas Básicas Columna: Phenomenex Gemini AXIA C18 (50 x 21 .2 mm tamaño de partícula 5 pm) Fase móvil: A: agua + solución acuosa de bicarbonato de amonio 10 mM (ajustado a pH 10 con amoníaco), B: acetonitrilo Velocidad de flujo: 17 ml/min Gradiente: de 10% (B) a 15% (B) en 1 min, de 15% (B) a 70% (B) en 7 min, de 70% (B) a 100% (B) en 1 min, 100% (B) durante 2 min, retorno a 10% (B) en 0.1 min.
Abreviaturas CDCI3 cloroformo deutrado cHex ciclohexano CV volumen de columna DCM diclorometano DIPEA ?,?-diísopropiletilamina DMAP 4-dimetilaminopiridina DMF N,N-dimetilformamida DMSO dimetilsulfóxido DMSO-d6 dimetilsulfóxido deuterado EDC.HCI Clorhidrato de N-(3-dimetilam¡nopropil)-N'- etilcarbodiimida Et2Ü éter dietílico EtO Acetato de Acetilo h horas H2 hidrógeno gaseoso HATU (?-7-azabenzotriazol- 1-il)-N,N,N',N'- tetrametiluroniohexafluorofosfato) HBTU O-benzotriazol-1-il-tetrametiluronio hexafluorofosfato HC02H Acido fórmico HCI ácido clorhídrico HNO3 ácido nítrico HOBt.H2O 1-hidroxibenciltriazol hidratado H2SO4 ácido sulfúrico K2CO3 carbonato de potasio KHDMS hexametildisilazido de potasio KOH hidróxido de potasio MeCN /CH3CN acetonitrilo MeOH metanol MeOD metanol deutrado MDAP autopurificación dirigida a masa MOM metoximetilo N2 nitrógeno gaseoso NaBH(OAc)3 triacetoxiborohidruro de sodio NaHC03 carbonato ácido de sodio NaN02 nitrito de sodio Na2C03 carbonato de sodio NaOH hidróxido de sodio NH40H hidróxido dr amonio NH4 HC03H bicarbonato de amonio RMN Resonancia Magnética Nuclear Pd/C paladio en carbón PE éter de petróleo t.a. temperatura ambiente SCRC Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd T3P Anhídrido Propilfosfónico tBuOK ter-butóxido de potasio TBTU o-Benzotriazol-1 -¡?-?,?,?',?'-tetrametiluronio tetrafluoroborato TEA trietilamina TFA ácido trifluoroacático THF tetrahidrofurano TsOH*H20 ácido 4-metilbencensulfónico hidratado, ácido toluensulfónico hidratado Intermediario 1 2-[(2-propin-1-iloxi)metillfuran A una suspensión de hidruro de sodio (1.570 g, 39.2 mmoles) en D F (46 mi) agitada bajo argón a 0°C fue goteada una solución de 2-furanilmetanol (3.5 g, 35.7 mmoles) en DMF (4 mi) en 20 minutos. La mezcla de reacción fue agitada a O'C por 15 minutos. 3-bromo-1 -propino (4.24 g, 35.7 mmoles) 80% en tolueno fue goteado en 10 minutos a 0°C, entonces la mezcla fue dejada agitar a temperatura ambiente por la noche. Fue agregada agua y luego la mezcla fue extraída con éter etílico 3 veces. La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y concentrada bajo vacío. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en sílice (instrumento Biotage SP1 ), eluyendo con un gradiente de ciclohexa no/acetato de etilo 95/5 a 85/15. La evaporación proporcionó el compuesto del título (1.63 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 7.66 (1 H, d), 6.41 - 6.49 (2H, m), 4.46 (2H, s), 4.12 (2H, d), 3.48 (1 H, t); UPLC-MS: 0.66 min Intermediario 2- 3 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol y 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-5-ol A una solución de [2-[(2-propin-1-iloxi)metil]furan] (Intermediario 1 , 1.63 g) en acetonitrilo (60 mi) agitada bajo argón a temperatura ambiente fue agregado tricloruro de oro puro (0.182 g, 0.599 mmoles). La mezcla de la reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El tricloruro de oro entonces fue agregado (120 mg) y después de 2 horas otra adición de tricloruro de oro fue llevada a cabo (226 mg). Después de 1 hora la mezcla fue concentrada y el crudo fue purificado por cromatografía instantánea (Biotage SP1 ), eluyendo con ciclohexano/acetato de etilo 90/10. La evaporación de las dos fracciones dio respectivamente los compuestos del título: 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol (100 mg) y 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-5-ol (356 mg) Intermediario 2 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol:1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.59 (1 H, s), 7.15 - 7.00 (1 H, m), 6.78 - 6.60 (2H, m), 5.03 -4.84 (4H, m); UPLC-MS : 0.41 min, 135 [M-H]- Intermediario 3 1.3-dihidro-2-benzofuran-5-ol: H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.36 (1 H, s), 7.11 - 7.02 (1 H, m), 6.70 - 6.61 (2H, m), 4.89 (4H, m); UPLC-MS : 0.42 min, 135 [M-H]- Intermediario 4 4-[(4-nitrofenil)oxil-1 ,3-dihidro-2-benzofurano Una suspensión de carbonato de potasio (670 mg, 4.85 mmoles), 1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol (Intermediario 2, 1 10 mg) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (114 mg, 0.808 mmoles) en ?,?-dimetilformamida (DMF) (5 mi) fue calentada bajo irradiación de microonda a 100' C por 3 x 30 minutos. La mezcla se concentró. 2 mi de agua fueron agregados y entonces diclorometano. Las fases fueron separadas y la fase acuosa fue extraída dos veces con diclorometano. La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y concentrada bajo vacío para proporcionar el compuesto del título, que fue utilizado directamente en el siguiente paso. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.30 - 8.20 (2H, m), 7.46 -7.36 (1 H, m), 7.32 - 7.22 (m, 1 H), 7.18 - 7.10 (2H, m), 7.09 - 7.04 (1 H, m), 5.14 - 4.79 (4H, m); UPLC-MS: 0.98 min Intermediario 5 4-(1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)anilina Una solución de 4-[(4-nitrofenil)oxi]-1 ,3-dihidro-2-benzofuran (Intermediario 4, 208 mg), hidrato de hidrazina (0.051 mi, 1.618 mmoles) y Pd/C (172 mg, 0.162 mmoles) en etanol (6 mi) fue agitada bajo argón a 90° C. Después de 1.5 horas la mezcla fue enfriada a temperatura ambiente y entonces filtrada sobre celite. El celite fue lavado con metanol. La fase orgánica fue concentrada para proporcionar el compuesto del título (136 mg). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 7.20 (1 H, s), 6.96 (1 H, d), 6.79 - 6.73 (2H, m), 6.62 - 6.55 (3H, m), 5.00 (4H, s), 4.88 (2H, s); UPLC-MS: 0.72 min, 228 [M+1]+ Intermediario 6 ((1 f?)-2-{[4-(1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)fen¡namino)-1-metil- 2-oxoetil)carbamato de 1 ,1 -dimetilo Una suspensión de A/-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (97 mg, 0.515 mmoles), DIPEA (0.138 ml, 0.792 mmoles) y TBTU (191 mg, 0.594 mmoles) en 1 ,2-dicloroetano (3 ml) fue agitada bajo argón a temperatura ambiente por 45 min. 4-(1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)anilina (Intermediario 5, 90 mg) fue agregada y la mezcla fue dejada bajo agitación a temperatura ambiente por la noche. Salmuera fue agregada y la mezcla fue separada en un tubo separador. La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano. La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y concentrada bajo vacio. El residuo fue purificado por cromatografía (Biotage SP1), utilizando como eluyentes un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo 100:0 a 85:15 para proporcionar el compuesto del título (109 mg).
H RMN (400 MHz, DMSO-d6) : d ppm 9.97 (1 H, m), 7.67 - 7.57 (2H, m), 7.32 - 7.23 (1 H, m), 7.1 1 - 7.04 (2H, m), 7.04 - 6.96 (2H, m), 6.79 -6.71 (1 H, m), 5.08 - 4.99 (2H, m), 4.93 - 4.83 (2H, m), 4.15 - 4.05 (1 H, m), 1.39 (9H, s), 1.29 - 1.22 (3H, m); UPLC-MS : 0.85 min, 399 [M+H]+ Intermediario 7 N -[4-(1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)fen¡n-D-alaninamida Una solución de ((1 R)-2-{[4-(1 ,3-díhidro-2-benzofuran-4-ilox¡) fenil]amino}-1-metil-2-oxoetil)carbamato de 1 ,1 -dimetilo (Intermediario 6, 108 mg) y TFA (1 mi) en diclorometano (4 mi) fue agitada bajo argón a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora. La mezcla fue concentrada y el residuo fue purificado por SCX para proporcionar el compuesto del título (81 mg). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm : 7.66 (2H, d), 7.31 - 7.24 (1 H, m), 7.09 - 7.04 (1 H, m), 6.99 (2H, d), 6.71 - 6.77 (1 H, m), 5.03 (2H, s), 4.87 (2H, s), 3.40 - 3.47 (1 H, m), 1.21 (3H, d); UPLC-MS : 0.67 min, 299 [M+H]+ Intermediario 8 1-(2,6-dihidrox¡fenil)etanona oxima Una solución de clorhidrato de hidroxilamina (756 mg, 10.9 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (1.71 g, 12.6 mmoles) disuelta en 23 mi de una mezcla de EtOH/H2O (7/3) fue añadida a una solución de 2',6'-dihidroxiacetofenona (1.5 g, 9.9 mmoles) en 12 mi de una mezcla 7/3 de EtOH/H20. Después de calentar a reflujo y agitar bajo N2 durante 2 horas, clorhidrato de hidroxilamina adicional (340 mg, 4,9 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (570 mg, 4.19 mmoles) disuelto en 7 mi de agua fue agregada y el reflujo fue continuado por otros 30 minutos. Después de enfriarse a temperatura ambiente, los volátiles fueron removidos. Entonces agua fue agregada y el sólido obtenido fue filtrado, lavado con agua y secado. Esto proporcionó 1.3 g del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-c/6): d ppm 10.99 (1 H, br. s), 9.63 (2H, br. s), 7.01 - 6.81 (1 H, m), 6.44 - 6.19 (2H, m), 2.1 1 (3H, s).
Intermediario 9 1 -(2,6-dihidroxifenil)etanona O-acetiloxima A 1-(2,6-dihidroxifenil)etanona oxima (Intermediario 8, 588 mg), anhídrido acético (1.97 mi, 20.8 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 15 minutos. Después de la eliminación de los volátiles, agua fue agregada y el sólido obtenido fue filtrado y fue secado bajo alto vacío proporcionando 437 mg del compuesto del titulo.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.62 (2H, br. s), 7.07 - 6.96 (1 H, m), 6.37 (2H, d), 2.19 (6H, s).
Intermediario 10 3-metil-1.2-bencisoxazol-4-ol A1-(2,6-dihidroxifenil)etanona O-acetiloxima (Intermediario 9, 437 mg) piridina (4.0 mi) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a reflujo durante 2 horas. Después de la adición de HCI (4.0 mi de una solución acuosa 5M), la mezcla fue extraída 3 veces con Et2O y las capas orgánicas recolectadas fueron lavadas con HCI (solución acuosa 1 M). La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y filtrada. La evaporación proporcionó el compuesto del título (137 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.67 (1 H, br. s), 7.48 -7.33 (1 H, m), 7.08 - 6.99 (1 H, m), 6.69 - 6.62 (1 H, m), 2.58 (3H, s).
Intermediario 1 1 3-metil-4-f(4-nitrofenil)oxil-1 ,2-bencisoxazol 3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-ol (Intermediario 10, 137 mg) fue agitado con 1-fluoro-4-nitrobenceno (130 mg, 0.92 mmoles) en DMF (3.0 mi) con carbonato de potasio (381 mg, 2.8 mmoles). La mezcla de la reacción fue calentada a 110°C durante 1 hora bajo irradiación de microondas después de eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con CyHex/EtOAc (100%/0% a 0%/100%) para proporcionar el compuesto del título (100 mg).
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.41 - 8.25 (2H, m), 7.78 -7.57 (2H, m), 7.35 - 7.24 (2H, m), 7.09 - 6.98 (1 H, m), 2.45 (3H, s); UPLC-MS: 0.83 min, 271 [M+H]+.
Intermediario 12 4-í(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-iDoxilanilina 3-metil-4-[(4-nitrofenil)oxi]-1 ,2-bencisoxazol (Intermediario 1 1 , 100 mg) fue disuelto bajo atmósfera de nitrógeno en 5.0 mi de EtOH. Cloruro de estaño (II) dihidratado (417 mg, 1.85 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción entonces fue agitada a 90°C por 5 horas. Después de la remoción de los volátiles, fue agregada agua y la mezcla de reacción fue extraída dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas recolectadas fueron lavadas con una solución acuosa al 5% de NaHC03, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El crudo obtenido fue purificado por una columna de NH y eluido con DCM/MeOH (100/0, entonces un gradiente de 100/0 a 90/10, entonces 90/10) para proporcionar 30 mg del compuesto del título.
UPLC-MS: 0.63 min, 241 [M+H]+ Intermediario 13 f(1 RV1-metil-2-((4-r(3-metil-1,2-bencisoxazol-4-il)oxilfenil)amino)-2-oxoet¡llcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo {4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}amina (Intermediario 12, 982 mg) fue disuelto en 12.0 mi de DMF. DIPEA (1.07 mi, 6.1 mmoles) y HATU (1865 mg, 4.9 mmoles) fueron agregados. Después de agitar durante 15 minutos, N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (928 mg, 4.9 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C durante 2 horas. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con un gradiente de CyHex/EtOAc de 100/0% a 0/100%. Esto proporcionó el compuesto del título (587 mg).
UPLC-MS_B: 0.89 min, 412 [M+H]+.
Intermediario 14 N -{4-f(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-¡noxi1fenil)-D-alaninamida [( R)-1-metil-2-({4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}amino)- 2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 13, 587 mg) fue disuelto en 10.0 mi de DCM y entonces TFA (5.0 mi) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado con un cartucho de SCX y eluido con DCM/MeOH/NH3 (solución 2.0 M en MeOH). La evaporación proporcionó 337 mg del compuesto del título.
UPLC-MS_B: 0.71 min, 312 [M+H]+.
Intermediario 15 Diacetato de 5-metilbenceno-1 ,3-diilo 5-metil-1 ,3-bencenodiol (2.0 g, 16.1 1 mmoles) fue disuelto en 20,0 mi de diclorometano y TEA (1 1.23 mi, 81.0 mmoles) fue agregado.
Luego, a 0°C, anhídrido acético (4.56 mi, 48.30 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 50 horas. Después de la adición de agua (20.0 mi) la mezcla de reacción fuera agitada durante 3 horas. Las fases entonces fueron separadas y la acuosa fue extraída con diclorometano (2 veces). Las fases orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para proporcionar el compuesto del título (3.33 g). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 6.83 (2H, br. s), 6.75 (1 H, br. s), 2.39 (3H, s), 2.31 (6H, s); UPLC-MS: 0.67 min, 209 [M+H]+.
Intermediario 16 1-(2,6-dihidroxi-4-metilfenil)etanona Una solución de diacetato de 5-metilbenceno-1 ,3-diilo (Intermediario 15, 3.33 g) en clorobenceno (5.0 mi) fue agregado por goteo a una suspensión de AICI3 (6.40 g, 48.0 mmoles) en clorobenceno (15.0 mi). La mezcla de reacción fue agitada a 90°C durante 1 hora, entonces fue enfriada a la temperatura ambiente y pipeteada sobre una mezcla de hielo y solución acuosa de HCI 2M (16 mi). Acetato de etilo fue agregado, las dos fases fueron separadas. La orgánica fue lavada 2 veces con salmuera, luego secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con un gradiente de Cy-Hex/EtOAc de 100/0 a 70/30 seguido por un ¡socrático 70/30, otro gradiente de 70/30 a 50/50 y otro ¡socrático 50/50. Esto proporcionó el compuesto del título (940 mg).
H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 1 1 .89 (2H, s), 6.22 (2H, s), 2.63 (3H, s), 2.19 (3H, s)¡ UPLC-MS: 0.62 min, 167 [M+H]+.
Intermediario 17 1 -(2,6-dihidroxi-4-metilfenil)etanona oxima Una solución de clorhidrato de hidroxilamina (470 mg, 6.76 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (590 mg, 4.34 mmoles) disuelta en 20 mi de una mezcla de EtOH/H20 (7/3) fue añadida a una solución de 1 -(2,6- dihidroxi-4-metilfenil)etanona (Intermediario 16, 940 mg) en 15 mi de una mezcla de EtOH/H20 (7/3). Después de calentar a reflujo y agitar bajo N2 durante 2 horas, clorhidrato de hidroxilamina fue añadido (159 mg, 2.29 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (199 mg) disuelto en 5 mi de agua fue agregado. La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante la noche. Después de enfriarse a temperatura ambiente, los volátiles fueron removidos. Agua fue agregada y el sólido proporcionado fue filtrado, lavado con agua y secado dando 829 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-Qe): d ppm 10.96 (1 H, s), 9.80 (2H, s), 6.16 (2H, s), 2.13 (6H, br.s).
Intermediario 18 1 -(2,6-dihidroxi-4-metilfenil)etanona O-acetiloxima A 1-(2,6-dihidroxi-4-metilfenil)etanona oxima (Intermediario 17, 829 mg), anhídrido acético (2.6 mi, 27.5 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fuera lavado con agua, filtrado y secado. Esto proporcionó 1.0 g del compuesto del título.
H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 9.58 (2H, s), 6.20 (2H, s), 2.21 - 2.18 (6H, m), 2.16 (3 H, s); ácido UPLC-MS: 0.58 min, 224 [M+H]+.
Intermediario 19 3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-ol A 1-(2,6-dihidroxi-4-metilfenil)etanona O-acetiloxima (Intermediario 18, 1.0 g) piridina (10 mi) fue agregada y la mezcla de reacción fue agitada a reflujo bajo N2 durante 2 horas. Después de la adición de HCI (10.0 mi de una solución acuosa 5M), la mezcla fue extraída 3 veces con Et20 y las fases orgánicas recolectadas fueron lavadas con HCI (1 M). La fase orgánica separada entonces fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada para proporcionar 345 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d 10.55 (1 H, s), 6.85 (1 H, bs), 6.47 (1 H, bs), 2.53 (3 H, s), 2.35 (3 H, s).
Intermediario 20 3l6-dimetil-4-[(4-n¡trofenil)oxil-1 ,2-bencisoxazol 3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-ol (Intermediario 19, 345 mg) fue disuelto en acetonitrilo (10.0 mi) y entonces 1-fluoro-4-nitrobenceno (298 mg, 2.1 1 mmoles) y carbonato de potasio (877 mg, 6.34 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada y calentada a reflujo durante la noche. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con un gradiente de cHex/EtOAc de 100/0 a 50/50 para proporcionar el compuesto del título (208 mg).
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.36 - 8.26 (2H, m), 7.46 (1 H, s), 7.33 - 7.26 (2H, m), 6.91 (1 H, s), 2.47 (3H, s), 2.39 (3H, s); UPLC-MS: 0.84 min, 285 [M+H]+.
Intermediario 21 {4-[(3,6-dimetil-1 ,2-benrisoxazol-4-il)oxi]fenil)amina 3,6-dimetil-4-[(4-nitrofenil)oxi]-1 ,2-bencisoxazol (Intermediario 20, 208 mg) fue disuelto en etanol (10.0 mi) y cloruro de estaño dihidratado (991 mg, 4.39 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a reflujo por 4 horas. Después de la remoción de los volátiles, fue agregada agua y la mezcla de reacción fue extraída dos veces con acetato de etilo. Los orgánicos recolectados fueron secados sobre sulfato de sodio, filtrados y evaporados para proporcionar 260 mg del compuesto del título.
UPLC-MS: 0.60 min, 255 [M+H]+.
Intermediario 22 f(1 )-2-((4-[(3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi1fenil)amino)-1-metil-2-oxoetillcarbamato) de 1 , -dimetiletilo {4-[(3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}Amina (Intermediario 21 , 260 mg) fue disuelto en 8.0 mi de DMF. DIPEA (0.188 mi, 1.074 mmoles) y HATU (327 mg, 0.86 mmoles) fueron agregados. Después de agitar durante 15 minutos, N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (163 mg, 0.86 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C durante 2 horas. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con un gradiente de cHex/EtOAc de 100/0 a 0/100 para proporcionar el compuesto del título (74 mg).
UPLC-MS_B: 0.93 min, 426 [M+H]+.
Intermediario 23 N -(4-[(3.6-dimetil-1.2-bencisoxazol-4-inoxilfenilVD-alaninamida [(1 R)-2-({4-[(3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato) de 1 ,1-dimetiletil (Intermediario 22, 74 mg) fue disuelto en 3.0 mi de diclorometano. TFA (1.5 mi) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora. Después de eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado con un cartucho de SCX y eluido con DCM/MeOH/NH3 (solución 2.0 M en MeOH). La evaporación de los volátiles, proporcionó 54 mg del compuesto del título.
UPLC-MS_B: 0.76 min, 326 [M+H]+.
Intermediario 24 [1 ,1-dimetil-2-({4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi1fenil)amino)-2-oxoetillcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo {4-[(3-metil-1 ,2-benc¡soxazol-4-¡l)oxi]fenil}am¡na (Intermediario 23, 30 mg) fue disuelto en 5.0 mi de DMF. DIPEA (0.033 mi, 0.19 mmoles) y HATU (57 mg, 0.15 mmoles) fueron agregados. Después de agitar durante 15 minutos, N-{[(1 , 1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (30.5 mg, 0.15 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C durante 2 horas. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice eluyendo con un gradiente de cHex/EtOAc (de 00/0 a 0/100) para proporcionar el compuesto del título (34 mg).
UPLC-MS_B: 0.91 min, 426 [M+H]+.
Intermediario 25 2-metil-A/1-{4-f(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-¡l)oxi]fenil)alaninamida [1 ,1-dimetil-2-({4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}amino)-2-oxoetil]Carbamato de ,1-dimetiletilo (Intermediario 24, 34 mg) fue disuelto en 4.0 mi de diclorometano y entonces TFA (1.0 mi) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora. Después de eliminación de los volátiles, el residuo fue cargado en un cartucho de SCX y eluido sucesivamente con diclorometano, MeOH, NH3 (solución 2.0 M en MeOH). La evaporación proporcionó 18 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 7.84 - 7.70 (2H, m), 7.60 -7.49 (1 H, m), 7.45 - 7.36 (1 H, m), 7.21 - 7.13 (2H, m), 6.61 - 6.51 (1 H, m), 2.60 (3H, s), 1.33 (6H, s); básico UPLC-MS: 0.79 min, 326 [M+H]+.
Intermediario 26 1 ,3-bis(f(metiloxi)metil1oxi}benceno Resorcinol (3.0 g, 27.2 mmoles) fue disuelto en DMF (50.0 mi) y, a 0°C, NaH (4.36 g, 109 mmoles, 60% en peso) fue agregado. Después de agitar a esa temperatura durante 30 minutos, éter clorometil metílico (8.28 mi, 109 mmoles) fue agregado y la reacción fue permitida alcanzar la temperatura ambiente y fue agitada por la noche. La mezcla fue templada con una solución acuosa saturada de NaHC03 y extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas recolectadas fueron entonces lavadas con salmuera, secadas, filtradas y evaporadas. El residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con cicIohexano/EtOAc (de 100/0 a 50/50) para proporcionar el compuesto del título (4.94 g). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 7.26 - 7.15 (1 H, m), 6.71 -6.65 (3H, m), 5.18 (4H, s) 3.39 (6H, s).
Intermediario 27 1-(2,6-bis([(metiloxi)metilloxi)fen¡l)-1-propanona 1 ,3-bis{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 26, 2.02 g) fue disuelto bajo nitrógeno en THF (7.0 mL) y una solución de BuLi (7.64 mi de una solución 1.6 M en hexano, 12.2 mmoles) fue agregada. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora y enfriándose en anhídrido propanoico -78°C, (5.23 mi, 40.8 mmoles) fue agregado y la mezcla fue agitada a esa temperatura durante 15 minutos. Después de templar con agua, la mezcla fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas recolectadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El crudo proporcionado entonces fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con ciclohexano/EtOAc (de 10/0 a 9/1 , entonces 9/1 , entonces de 9/1 a 8/2, entonces 8/2) para proporcionar el compuesto del título (1.706 g). 1H-RMN (400 Hz, DMSO-d6): d ppm 7.32 - 7.23 (1 H, m), 6.81 (2H, d), 5.18 (4H, s) 3.34 (6H, s), 2.71 (2H, q), 1.06 (3H, t).
Intermediario 28 1 -(2, 6-dihidroxifenil)-1 -propanona 1-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-1 -propanona (Intermediario 27, 1.7 g) fue disuelto en metanol (50.0 mi) y una solución acuosa de HCI (26.7 mi, 53.5 mmoles de una solución acuosa 2M) fue agregada. La mezcla de reacción fue calentada a reflujo por 2 horas. Después de templar con agua, la mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para producir el compuesto (1.1 1 g). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 1 1.59 (2H, br. s), 7.25 -7.17 (1 H, m), 6.37 (2H, d), 3.06 (2H, q), 1.07 (3H, t).
Intermediario 29 1 -(2, 6-dihidroxifenil)-1 -propanona oxima Una solución de clorhidrato de hidroxilamina (510 mg, 7.3 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (629 mg, 4.6 mmoles) disuelto en 20 mi de una mezcla EtOH/H20 (7/3) fue añadida a una solución de 1-(2,6- dihidroxifenil)-1-propanona (Intermediario 28, 1.0 g) en 15 mi de una mezcla de EtOH/H20 (7/3). Después de calentar a reflujo y agitar bajo N2 por la noche, clorhidrato de hidroxilamina adicional (510 mg, 7.3 mmoles) y acetato de sodio trihidratado (629 mg, 4.6 mmoles) disuelto en 4.5 mL de agua fue agregado. La mezcla de reacción fue calentada a reflujo otras 3 horas. Después de enfriarse a temperatura ambiente, los volátiles fueron removidos. Luego agua fue agregada y la mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para producir el compuesto (1.05g).
UPLC: 0.41 min, 182 [ +H]+; 0.47 min, 182 [M+H]+.
Intermediario 30 1-(2,6-dihidroxifenil)-1-propanona O-acetiloxima 1-(2,6-dihidroxifenil)-1-propanona oxima (Intermediario 29, 716 mg) fue agitada en anhídrido acético (2.24 mi, 23.7 mmoles) a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la eliminación de los volátiles, el residuo fue lavado con agua, filtrado y secado. El compuesto crudo fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con ciclohexano/EtOAc (de 100/0 a todo 0/100) para proporcionar el compuesto del título (269 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de): d ppm 9.49 (2H, br. s), 7.01 -6.91 (1 H, m), 6.32 (2H, d), 2.54 (2H, q), 1.97 (3H, s), 1 .02 (3H, t).
Intermediario 31 3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-ol y 2-etil-1 ,3-benzoxazol-4-ol 1-(2,6-dihidroxifenil)-1-propanona O-acetiloxima (Intermediario 30, 269 mg) fue disuelto en piridina (10.0 mi) y agitado a reflujo durante 2 días. Después de la adición de una solución acuosa de HCI (5M), la mezcla de reacción fue extraída 3 veces con acetato de etilo y las capas orgánicas recolectadas fueron lavadas con una solución acuosa de HCI (1 M). La fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1) y eluido con ciclohexano/EtOAc (de 1/0 a 1/1 , entonces 1/1 , entonces de 1/1 a 0/1) para proporcionar los compuestos del título como una mezcla de 3-etil-1 ,2-bencísoxazol-4-ol y 2-etil-1 ,3-benzoxazol-4-ol (38 mg) UPLC: 0.59 min, 164 [M+H]+; 0.61 min, 164 [M+H]+.
Intermediario 32 3-etil-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi1-1 ,2-bencisoxazol Una mezcla de 3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-ol y 2-etil-1 ,3-benzoxazol-4-ol (Intermediario 31 , 38 mg), fue disuelto en DMF (3,0 mL) y 2-cloro-5-nitropiridina (36.9 mg, 0.23 mmoles) fue agregado, seguido por carbonato de potasio (97 mg, 0.70 mmoles). La mezcla de reacción fue calentada bajo irradiación de microondas a 1 10°C por 1 hora. Después de eliminación de los volátiles, el crudo fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con ciclohexano/EtOAc (de 1/0 a 1/1 ) para proporcionar el compuesto del título (9.5 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.06 - 9.01 (1 H, m), 8.75 -8.68 (1 H, m), 7.76 - 7.65 (2H, m), 7.47 (1 H, d), 7.27 - 7.22 (1 H, m), 2.73 -2.67 (2H, m), 1.20 (3H, t).UPLC: 0.77 min, 286 [M+H]+.
Intermediario 33 6-f(3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxil-3-piridinamina 3-etil-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]-1 ,2-bencisoxazol (Intermediario 32, 9 mg) fue disuelto en 3.0 mi de etanol. Luego cloruro de estaño(ll) dihidratado (21.4 mg, 0.095 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 80°C por 3 horas. Después de templar con agua y extracción con acetato de etilo, la fase orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título.
UPLC: 0.62 min, 256 [M+H]+ Intermediario 34 (d -í((6-í(3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi1-3-piridinil)amino)carbonillpropil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo 6-[(3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 33) fue disuelto en DMF (0.5 mL) y añadido a una mezcla de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}am¡no)butanoico (7.7 mg, 0.038 mmoles), DIPEA (0.008 mL, 0.047 mmoles) y HATU (14.4 mg, 0.038 mmoles) en 1 mi de DMF. La mezcla de reacción fue entonces agitada a 50°C por 2 horas. Después de la remoción de DMF, agua fue agregada y la mezcla fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo entonces fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con Cyhexano/EtOAc (de todo 10/0 a 7/3, entonces 7/3) para proporcionar el compuesto del título (4.4 mg).
H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.24 - 8.17 (2H, m), 7.55 -7.47 (1 H, m), 7.44 - 7.34 (1 H, m), 7.08 - 7.00 (1 H, m), 6.96 - 6.89 (1 H, m), 5.00 (1 H, br. s), 4.21 - 4.10 (1 H, m), 2.94 (2H, q), 2.08 - 1.97 (1 H, m), 1.80 -1.70 (1 H, m), 1.50 (9H, s), 1.38 (3H, t), 1.07 (3H, t).UPLC: 0.78 min, 441 [M+H]+.
Intermediario 35 (2R)-2-amino-/V-(6-f(3-etil-1.2-bencisoxazol-4-il)oxil-3-piridiniDbutanamida {(1 f?)-1 -[({6-[(3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi)-3-piridinil}amíno)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo(lntermediario 34, 4.4 mg) fue disuelto en diclorometano (1.0 mi) y, a 0°C, TFA (0.100 mi, 1.3 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura por 2 horas. Después de eliminación de los volátiles, el residuo fue cargado en un cartucho de SCX y eluido con DCM/MeOH/NH3 (2.0 M en eOH) para proporcionar el compuesto del título.
UPLC: 0.53 min, 341 [M+H]+.
Intermediario 36 1-(2,6-bis{[(metiloxi)metil1oxi fen¡l)-2-metil-1-propanona 1 ,3-bis{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 35, 2.2 g) fue disuelto bajo nitrógeno en THF (8,0 mL) y una solución de BuLi (8.32 mL de una solución 1.6 M en hexano, 13.3 mmoles) fue agregado. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, enfriándose a -78°C, cloruro de 2 metilpropanoilo (4.65 mi, 44.4 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura durante 1 hora. Después de templar con agua, la mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo obtenido entonces fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con cic hexano/EtOAc (de todo 10/0 a 9/1 , entonces 9/1 , entonces de 9/1 a 8/2, entonces 8/2) para proporcionar el compuesto del título (825 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 7.35 - 7.24 (1 H, m), 6.87 - 6.77 (2H, m), 5.18 (4H, s), 3.36 (6H, s), 3.01 - 2.90 (1 H, m), 1.12 - 1.06 (6H, m).
El compuesto del título también fue preparado por la manera alternativa siguiente: 1 ,3-bis{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 35, 1 ,099 g) fue disuelto bajo nitrógeno en THF (5,0 mL) y una solución de BuLi (4.16 mL de una solución 1.6 M en hexano, 6.65 mmoles) fue agregado. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, enfriándose en anhídrido de isobutírico -78°C, (3.68 mi, 22.2 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura durante 15 minutos. Después de templar con agua, la mezcla fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo obtenido entonces fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con Cyhexano/acetato de etilo (de todo 10/0 a 9/1 entonces 9/1 ) para proporcionar 759 mg del compuesto del título.
Intermediario 37 1-(2,6-dihidroxifenil)-2-metil-1-propanona 1 -(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-2-metil-1 -propanona (Intermediario 36, 1.58 g, 5.89 mmoles) fue disuelto en metanol (40.0 mi) y una solución acuosa de HCI (23.6 mL de una solución acuosa 2M, 47.1 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue calentada a reflujo por 1 hora. Después de templar con agua, la mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para producir el compuesto (916 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 11.01 (2H, br. s), 7.15 (1 H, t), 6.39 - 6.34 (2H, m), 3.64 - 3.55 (1 H, m), 1.09 (6H, d).
Intermediario 38 1-(2,6-dihidrox¡fen¡l)-2-metil-1-propanona oxima 1-(2,6-dihidroxifenil)-2-metil-1-propanona (Intermediario 37, 416 mg) fue disuelto en piridina (2.0 mi) y clorhidrato de hidroxilamina (209 mg, 3.0 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue entonces agitada a temperatura ambiente durante la noche. Después de la noche, clorhidrato de hidroxilamina adicional (64 mg, 0.92 mmoles) fue agregado y la mezcla fue calentada a 100°C durante 3 horas. Después de eliminación de los volátiles, el crudo fue tratado con agua y extraído con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para producir el compuesto (370 mg).
UPLC: 0.47 min, 196 [M+H]+; 0.50 min, 196 [M+H]+.
Intermediario 39 1-(2,6-dihidroxifenil)-2-metil-1-propanona O-acetiloxima 1-(2,6-dihidroxifenil)-2-metil-1-propanona oxima (Intermediario 38, 320 mg) fue agitado en anhídrido acético (0.928 mi, 9.84 mmoles) a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de eliminación de los volátiles, el crudo fuera lavado con agua, filtrado y secado. El residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con Cyhexano/acetato de etilo (de 100/0 a 0/100) para proporcionar el compuesto del título (127 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 9.42 (2H, br. s), 6.95 (1 H t), 6.31 (2H, d), 2.91 - 2.77 (1H, m), 1.97 (3H, s), 1 .11 (6H, d).
Intermediario 40 3-(1-metilet¡l)-1 ,2-benc¡soxazol-4-ol 1 2-(1-metiletil)-1 ,3-benzoxazol-4-ol 1-(2,6-dihidroxifenil)-2-metil-1-propanona O-acetiloxima (Intermediario 39, 100 mg) fue disuelto en piridina (4.0 mi) y agitada a reflujo durante 5 días. Después de la adición de una solución acuosa de HCI (5M), la mezcla de reacción fue extraída 3 veces con acetato de etilo y las capas orgánicas recolectadas fueron lavadas con una solución acuosa de HCI (1 M). La fase orgánica fue entonces secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1) y eluido con Cyhexano/EtOAc (de 1/0 a 1/1 entonces 1/1 , entonces de 1/1 a 0/1) para proporcionar 13 mg de una mezcla de los compuestos del título 3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-ol y de 2-(1-metiletil)-1 ,3-benzoxazol-4-ol.
UPLC: 0.64 min, 178 [M+H]+¡ 0.65 min, 178 [M+H]+.
Intermediario 41 3-(1-metiletil)-4-[(5-nitro-2-p¡ridinil)oxi1-1 ,2-bencisoxazol Una mezcla de 3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-ol y 2-(1-metiletil)-1 ,3-benzoxazol-4-ol (Intermediario 40, 13 mg), fue disuelto en DMF (2.0 mL) y 2-cloro-5-nitropiridina (1 1.6 mg, 0.073 mmoles) fue agregado, seguido por carbonato de potasio (30 mg, 0.22 mmoles). La mezcla de reacción fue calentada bajo irradiación de microondas a 1 10°C por 1 hora. Después de eliminación de los volátiles, el residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con Cyhexano/EtOAc (de 10/0 a 9/1 , entonces 9/1 , entonces de 9/1 a 8/2) para proporcionar el compuesto del título (8.7 mg).
H-RMN (400 MHz, CDCI3) : ppm 9,08 (1 H, D), 8,64 - 8,58 (1 H, M), 7,65 - 7,57 (1 H, M), 7,55 - 7,48 (1 H, M), 7,23 - 7,19 (1 H, M), 7,08 (1 H, D), 3,24 - 3,13 (1 H, M), 1 ,40 (6H, D). UPLC: 0.80 min, 300 [M+H]+.
Intermediario 42 6-(f3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-illoxi)-3-piridinamina 3-(1-metiletil)-4-[(5-nitro-2-piridin¡l)oxi]-1 ,2-bencisoxazole(lntermediario 41 , 8.7 mg) fue disuelto en 3.0 mi de etanol. Cloruro de estaño (II) dihidratado (19.7 mg, 0.087 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 80°C por 3 horas. Después de templar con agua y extracción con acetato de etilo, las capas orgánicas recolectadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para proporcionar el compuesto del título.
UPLC: 0.67 min, 270 [M+H]+.
Intermediario 43 ((1 R)-1-{r(6-(r3-(1-metiletin-1 ,2-bencisoxazol-4-illox¡)-3-piridinil)aminolcarbonil)propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo 6-{[3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-il]oxi}-3-piridinamina (Intermediario 42) fue disuelto en DMF (0.5 mL) y agregado a una mezcla de ácido (2f?)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (7.09 mg, 0.035 mmoles), DIPEA (7.6 µ?_, 0.044 mmoles) y HATU (13.26 mg, 0.035 mmoles) en 1 mi de DMF. La mezcla de reacción fue entonces agitada a 50°C por 1 hora. Después de la remoción de DMF, agua fue agregada y la mezcla fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1) y eluido con Cyhexano/EtOAc (de 10/0 a 7/3, entonces 7/3) para proporcionar el compuesto del título (2 mg).
UPLC: 0.81 min, 455 [M+H]+.
Intermediario 44 (2R)-2-amino-/V-(6-f[ 3-( 1 -metiletil)-1.2-benc¡soxazol-4-illoxi)-3-piridiniDbutanamida ((1f?)-1-{[(6-{[3-(1-metiletil)-1 ,2-bencisoxazol-4-il]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de ,1-dimetiletilo (Intermediario 43, 2.0 mg) fue disuelto en diclorometano (1.0 mL) y, a 0°C, TFA (0.05 mL, 0.65 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura por 2 horas. Después de eliminación de los volátiles, el residuo obtenido fue cargado en un cartucho de SCX y eluido con DCM/MeOH/NH3 (2,0 M en MeOH) para proporcionar el compuesto del título.
UPLC: 0.56 min, 355 [M+H]+.
Intermediario 45 1-(metilox¡)-3-([(metiloxi)met¡noxi)benceno A una solución de 3-(metiloxi)fenol (10.38 g, 84 mmoles) en tetrahidrofurano (100 mi, SCRC) fue agregado NaH (60% en peso, 1.824 g, 76 mmoles, Aldrich) por porciones bajo enfriamiento con hielo. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 1 hora y éter de bromometil metílico (9.5 g, 76 mmoles, SCRC) entonces fue agregado. La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente por 2 horas y agua (50 mi) fue agregado. La mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo (2 veces 50 mi, SCRC) y las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, evaporaradas. El residuo fue purificado por cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc: PE = 1 : 100) para proporcionar el compuesto del título (10.2 g) como un líquido sin color.
Intermediario 46 2-vodo-1-(metiloxi)-3-(f(metiloxi)metinoxi)benceno A una solución de 1-(metiloxi)-3-{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 45, 10 g, 59.5 mmoles) en tetrahidrofurano (100 mi, SCRC) pre-enfriado a -78 °C fue agregado por goteo BuLí (2.5 M en THF, 28.5 mi, 71.3 mmoles, SCRC), manteniendo la temperatura interna inferior a -70 °C. Después de terminar la adición, la mezcla fue agitada a -70 °C por 2 horas y una solución de yodo (15.09 g, 59.5 mmoles, SCRC) en THF (50 mi, SCRC) fue agregada por goteo. La mezcla resultante fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente y templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 mi). La mezcla fue extraída con acetato de etilo (3 veces 300 mi, SCRC) y las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de gel de sílice con eluyentes EtOAc: PE (1/100) para proporcionar el compuesto del título (16.2 g) como un líquido amarillo.
Intermediario 47 2-vodo-3-(metiloxi)fenol A una solución de 2-yodo-1-(metiloxi)-3- {[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 46, 16.2 g, 55.1 mmoles) en diclorometano (100 mi, SCRC) fue burbujeado HCI (g) por 30 min. TLC mostró que la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue vertida en una solución saturada acuosa de NaHCC»3 (200 mi,) y extraída con diclorometano (3 x 200 mi, SCRC). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de columna en el gel de sílice (EtOAc: PE = 1 : 50) para proporcionar el compuesto del titulo como un líquido amarillo (10.3 g).
Intermediario 48 2-yodo-1-(metiloxi)-3-[(2-metil-2-propen-1 -il)oxilbenceno A una solución de 2-yodo-3-(metiloxi)fenol (Intermediario 47, 10.3 g) en DMF (100 mi, SCRC) fue agregado NaH (60%, peso, 1.977 g, 49.4 mmoles) por porciones. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora y 3-cloro-2-met¡l-1-propeno (3.73 g, 41.2 mmoles, Aldrich) fue agregado. La mezcla resultante fue agitada a temperatura ambiente por 2 horas y agua (50 mi) fue agregada. La mezcla de reacción fue extraída con acetato de etilo (3 veces 200 mi, SCRC) y la capa orgánica combinada fue secada, fue evaporada y fue purificada por cromatografía de gel de sílice con eluyentes de EtOAc/PE (1/30) para proporcionar el compuesto del título como un líquido amarillo (1 1.6 g) H-RMN(400 MHz, CDCI3) d ppm: 7.25 (1H, t), 6.52 - 6.47 (2H, m), 5.21 (1 H, s), 5.01 (1 H, s), 4.49 (2H, s), 3.89 (3H, s), 1.87 (3H, s) Intermediario 49 3,3-d¡metil-4-(metiloxi)-2,3-dihidro-1-benzofurano A una solución de 2-yodo-1-(metiloxi)-3-[(2-metil-2-propen-1-il)oxi]benceno (Intermediario 48, 6.08 g) en tolueno (50 mi, SCRC) fue agregado AIBN (3.61 g, 21.99 mmoles, SCRC) y tributilestanano (1 1.60 g, 40.0 mmoles, Aldrich). La mezcla de reacción fue calentada a reflujo por 3 horas y luego enfriada a temperatura ambiente. Agua (100 mi) fue agregada y la mezcla fue extraída con acetato de etilo (3 veces 200 mi, SCRC). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de gel de sílice con eluyentes de EtOAc/PE (1/50) para proporcionar el compuesto del título como un líquido amarillo (2.7g). 1H-RMN(400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 7.05 (1 H, t), 6.50 (1 H, d), 6.39 (1 H, d), 4.14 (2H, s), 3.77 (3H, s), 1.34 (6H, s); Intermediario 50 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol A una solución de 3,3-dimetil-4-(metiloxi)-2,3-dihidro-1-benzofuran (Intermediario 49, 4.0 g) en diclorometano (100 mi, SCRC) fue agregado BBr3 (6.37 mi, 67.3 mmoles, SCRC) por goteo bajo enfriamiento con hielo. Después de que la adición fuera completa, la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente y entonces agua (20 mi) fue agregada. La mezcla resultante fue extraída con acetato de etilo (3 veces 100 mi, SCRC) y las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de gel de sílice con EtOAc/PE como eluyentes (1/20) para proporcionar el compuesto del título (2.8 g). 1H-RMN(400 MHz, CDCI3) d ppm: 6.98 - 6.94 (1 H, t), 6.41 - 6.39 (1 H, dd), 6.25 - 6.23 (1 H, dd), 4.21 (2H, s), 1.45 (6H, s); MS_2: 163 [M-H]-.
Intermediario 51 acetato de 2-bromo-3-hidroxifenilo A una solución de 2-bromo-1 ,3-bencenodiol (3.028 g, 16.02 mmoles) en díclorometano (70 mi), TEA (3.35 mi, 24.03 mmoles) y anhídrido acético (1.512 mi, 16.02 mmoles) fueron agregados bajo agitación. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por la noche. La reacción fue templada con una solución saturada de cloruro de amonio (100 mi), y extraída con acetato de etilo (3 veces 70 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para proporcionar el compuesto del título como un aceite negro que fue utilizado directamente en el próximo paso. (3.028g) UPLC_B: 0.41 min, 229 [M-H]- Intermediario 52 Acetato de 2-bromo-3-[(2-metil-2-propen-1-il)oxilfenilo A una solución de acetato de 2-bromo-3-hidrox¡fenilo (Intermediario 51 , 3028 mg) en acetonitrilo (60 mi) carbonato de potasio (3623 mg, 26.2 mmoles) y 3-bromo-2-metil-1-propeno (2123 mg, 15.73 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por la noche. La mezcla fue lavada con agua (3 veces 60 mi). La fase orgánica fue separada, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 100g-SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 80/20 como eluyente para proporcionar el compuesto del título como un aceite sin color (2.324 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.27 (1 H, t), 6.68 (1 H, dd) 5.19 (1 H, s), 5.04 (1 H, s), 4.53 (2H, s), 2.38 (3H, s), 1.88 (3H, s); UPLC: 0.81 min, 285 [M+H]+ Intermediario 53 Acetato de 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ilo A una solución de acetato de 2-bromo-3-[(2-metil-2-propen-1-il)oxi]fenilo (Intermediario 52, 2.324 g) en tolueno (20 mi) AIBN (1.606 g, 9.78 mmoles) y tributilestanano (4.73 g, 16.30 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada y fue calentada a 100°C durante 2 horas, entonces fue dejada a temperatura ambiente durante 4 horas. La reacción fue templada con agua (60 mi) y extraída con acetato de etilo (3 veces 50 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 100g-SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30 como eluyente para proporcionar el compuesto del título como un aceite sin color (1.290 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.13 (1 H, t), 6.68 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 4.22 (2H, s), 2.33 (3H, s), 1.39 (6H, s). UPLC: 0.72 min, 207 [M+H]+ Intermediario 50 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol Esto es una ruta sintética alternativa a la descrita anteriormente para el Intermediario 50.
A una solución de acetato de 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ilo (Intermediario 53, 1.290 g) en metanol (50 mi) una solución de hidróxido de sodio (0.375 g, 9.38 mmoles) en agua (25.00 mi) fue agregado. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla entonces fue acidificada con HCI 5 % hasta pH = 5 y extraída con acetato de etilo (3 veces 50 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g-SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 80/20 como eluyente para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (855 mg).
UPLC-MS: 0.65 min, 165 [M+H]+ Intermediario 54 3, 3-dimetil-4-[(4-nitrofenil)oxi1-2,3-dihidro-1 -benzofurano A una solución de 3,3-dimetil-2,3-d¡hidro-1-benzofuran-4-ol (Intermediario 50, 652 mg) y 1-fluoro-4-nitrobenceno (532 mg, 3.77 mmoles) en acetonitrilo (30 mi, SCRC) fue agregado carbonato de potasio (552 mg, 4 mmoles, SCRC). La mezcla fue calentada a reflujo por 3 horas. Después de enfriar, la mezcla de reacción fue filtrada y el filtrado fue evaporado para proporcionar el compuesto del título como un liquido amarillo (0.95 g), que fue utilizado directamente en el próximo paso.
Intermediario 55 A una solución de 3,3-dimetil-4-[(4-nitrofenil)oxi]-2,3-dihidro-1-benzofurano (Intermediario 54, 0.9 g) en tetrahidrofurano (20 mi, SCRC) y agua (10 mi) fueron agregados cloruro amónico (1.687 g, 31.5 mmoles, SCRC) y polvo de cinc (1.031 g, 15.77 mmoles, SCRC). La mezcla fue calentada a 40°C durante 2 horas y entonces filtrada por una almohadilla de celite. El filtrado fue dividido con agua (20 mi) y acetato de etilo (50 mi, SCRC). La capa orgánica fue secada, fue evaporada y fue purificada por cromatografía de columna en gel de sílice (EtOAc/PE = de 1/50 a 1/30) para proporcionar el compuesto del título como un líquido amarillo (0.625 g, 76%).
MS_2 (ESI): 256 [M+H]+ Intermediario 56 [(1 f?)-2-((4-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-¡l)oxi1fenil)amino)-1-metil-2-oxoetillcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de 4-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]anilina (Intermediario 55, 255 mg) y ?/-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (227 mg, 1.199 mmoles, SCRC) en DMF (10 mi, SCRC) fueron agregados HATU (570 mg, 1.498 mmoles, SCRC) y DIPEA (0.523 mi, 3.00 mmoles, SCRC). La mezcla fue calentada a 100°C en microondas por 1 hora. Agua (20 mi) fue añadida a la mezcla y fue extraída con acetato de etilo (3 veces 50 mi, SCRC). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de columna en gel de sílice (EtOAc/PE = de 1/50 a 1/20) para proporcionar el compuesto del título como un sólido amarillo (328 mg).
MS_2 (ESI): 371 [M-55]+ Intermediario 57 A/1-(4-r(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxilfenil)-D-alaninamida A una solución de [(1 R)-2-({4-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]fenil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 56, 325 mg) en acetato de etilo (20 mi, SCRC) fue burbujeado en HCI (gas) por 0.5 horas. La mezcla de reacción fue neutralizada con una solución acuosa saturada de carbonato de sodio pH = 7 y fue extraída con acetato de etilo (3 veces 100 mi, SCRC). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas y fueron evaporadas para proporcionar el compuesto del título como un líquido amarillo (215 mg).
MS_2 (ESI): 327 [M-H]+ Intermediario 58 2-[(3,3-d¡metil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-nitropiridina En un frasco grande de microondas, 2-cloro-5-nitropiridina (386 mg, 2.436 mmoles) fue disuelto en 4 mi de dimetilformamida. 3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol (Intermediario 57, 400 mg) y carbonato de potasio (2.02 g, 14.62 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue calentada bajo irradiación de microondas durante 30 minutos a 1 10C (Iniciador de Biotage). La mezcla de reacción se filtra. El sólido de filtrated fue lavado con diclorometano (30 mi). Los volátiles fueron evaporados bajo vacio. El residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (cartucho de Companion Instrument, 120g) con ciclohexano como eluyente para proporcionar el compuesto del título (470 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 9.00 (1 H, d), 8.59 (1 H, dd), 6.99 - 7.33 (2H, m), 6.66 (1 H, d), 6.57 (1 H, d), 4.20 (2H, s), 1.17 - 1.35 (6H, m); UPLC: 0.88 min, 287 [M+HJ+ Intermediario 59 6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinamina 2-{[3-(1-metiletil)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermediario 58, 465 mg) fue disuelta en etanol (8 mi). Monohidrato de Hidrazina (156 mg, 3.25 mmoles, 2 equiv) y paladio en carbono (121 mg, 0.1 14 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue calentada a reflujo bajo argón durante 3 horas. La reacción fue enfriada y luego filtrada en celite. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío. La evaporación proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo (300 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 7.65 (1 H, d), 7.21 (1 H, dd), 7.03 (1 H, t), 6.73 (1 H, d), 6.51 (1 H, d), 6.26 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 1.40 (6H, s); UPLC: 0.64 min, 257 [M+H]+ Intermediario 60 r(1 ff)-2-((6-ff3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-inoxi1-3-piridinil)amino)-1-metil-2-oxoetillcarbamato de 1 , -dimetiletilo A una solución de N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina (35.4 mg, 0.156 mmoles) en ?,?-dimetilformamida seca (3 mi), DIPEA (0.041 mi, 0.264 mmoles) y entonces HATU (71 mg, 0.187 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos a temperatura ambiente bajo argón. Entonces 6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 59, 40 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada 3 horas a 60°C bajo argón. La mezcla de reacción se evaporó. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (Companion System, cartucho 2x12g=24g) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30. Esto proporcionó el compuesto del titulo (43 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.35 (1 H, d), 8.08 (1 H, dd), 7.1 1 (1 H, t), 6.93 (1 H, d), 6.60 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 4.15 - 4.04 (1 H, m), 1.47 - 1.33 (18H, m); UPLC: 0.78 min, 428 [M+H]+ Intermediario 61 /\/1-(6-[(3,3-dimetil-2.3-dih¡dro-1-benzofuran-4-il)ox¡l-3-p¡ridinil)-D-alaninamida A una solución de [(1 f?)-2-({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 60, 35 mg) en diclorometano seco (3 mi), TFA (0.189 mi, 2.456 mmoles) fue agregado lentamente a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada por 1.5 horas a temperatura ambiente. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue purificado con un cartucho de SCX. El cartucho fue lavado con 3 CV de metanol, entonces el compuesto fue adsorbido en el cartucho, lavado con 5 CV de metanol y desorbido con 2 CV de amoniaco metanólico (1 N). Esto proporcionó el compuesto del título (32 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.41 (1 H, d), 8.14 (1 H, dd), 7.16 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.64 (1H, d), 6.48 (1H, d), 4.24 (2H, s), 3.62 (1 H, m), 1.50 - 1.38 (9H, m); UPLC: 0.55 min, 328 [M+H]+ Intermediario 62 ((1 f?)-1-r((6-[(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)amino)carbonillpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo El compuesto del titulo fue formado en un modo similar a la preparación del Intermediario 60 reemplazando N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-alanina con ácido (2f?)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (66.6 mg). Esto proporcionó 78 mg del compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.37 - 8.32 (1 H, m), 8.07 (1H, dd), 7.11 (1 H, t), 6.93 (1 H, d), 6.60 (1 H, d), 6.44 (1 H, d), 4.21 (2 H, s), 4.12 -4.05 (1 H, m), 1.91 - 1.78 (1 H, m), 1.74 - 1.64 (1 H, m), 1.50 - 1.39 (12 H, m), 1.37 - 1.30 (6 H, s); UPLC: 0.81 min, 442 [M+H]+ Intermediario 63 (2R)-2-amino-A/-(6-[(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)butanamida El compuesto del título fue formado en un modo similar a la preparación del Intermediario 61 reemplazando [(1 f?)-2-({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)-1-metil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo con {(1 f?)-1-[({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 62, 74 mg). Esto proporcionó 60 mg del compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.38 (1 H, d), 8.12 (1 H, dd), 7.11 (1 H, t), 6.95 (1 H, d), 6.61 (1 H, d), 6.46 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 3.41 (1 H, m), 1.81 (1 H, m), 1.70 (1H, m), 1.35 (6H, s), 1.00 (3H, t); UPLC: 0.55 min, 342 [M+H]+ Intermediario 64 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-5-nitropirimidina A una solución de 3,3-dimetil-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-ol (Intermediario 50, 724 mg) en N,N- Dimetilformamida (40 ml_) carbonato de potasio y 2-cloro-5-nitropirimidina (774 mg, 4.85 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por la noche. La reacción fue templada con agua (40 mi) y extraída con acetato de etilo (3x40 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera (2x50 mi), separadas, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna SNAP 50g y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 70/30 para proporcionar el compuesto del título (1.257 g) como un aceite amarillo. 1H RMN (400 Hz, DMSO-d6): d ppm 9.46 (2H, s), 7.22 (1 H, t), 6.73 (2H, dd), 4.23 (2H, s), 1.24 (6H, s); UPLC: 0.75 min, 288 [M+H]+ Intermediario 65 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-5-pirimidinamina A una solución de 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-nitropirimidina (Intermediario 64, 1.257 g) en una mezcla de tetrahidrofurano/agua (30 mi ml/15.00) hierro (1.222 g, 21.88 mmoles) y cloruro de amonio (1.170 g, 21.88 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 48 horas. El catalizador fue filtrado, y el filtrado fue extraído con acetato de etilo (3x 50 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue recristalizado de acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título (768 mg) como un sólido blanco.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 7.97 (2H, s), 6.94 - 7.16 (1 H, m), 6.58 (1 H, d), 6.44 (1 H, d), 4.18 (2H, s), 3.32 (2H, br. s.), 1.25 (6H, s); UPLC: 0.60 min, 258 [M+H]+ Intermediario 66 ((1 R)-1-r 2-f(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-p¡rimidinil)amino)carbonil1propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (20.14 mg, 0.099 mmoles) en N,N-dimetilformamida (1.5 mL) DIPEA (0.029 mL, 0.165 mmoles) y TBTU (33.9 mg, 0.106 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente, entonces 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinamina (Intermediario 65, 17 mg) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada durante 48 horas a temperatura ambiente. La mezcla fue diluida con acetato de etilo (5 ml) y lavada con salmuera (3x5 ml). La capa orgánica fue separada, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea de gel de sílice utilizando una columna 10g -SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 40/60 como eluyente para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (4.4 mg). 1 H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.78 (2H, s), 7.17 (1 H, t), 6.71 (1 H, d), 6.61 (1 H, d), 4.97 (1 H, d), 4.24 (2H, s), 4.18-4.1 1 (1 H, m), 2.05-1.97 (1 H, m), 1.77-1.70 (1 H, m), 1.49 (9H, s), 1.37 (6H, s), 1.05 (3H, t). UPLC- S: 0.78 m'in, 443 [M+H]+ Intermediario 67 (2 )-2-amino-/\/-(2-í(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)ox¡l-5-pirimidinil)butanamida A una solución de {(1 R)-1-[({2-[(3,3-dimetil-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 66, 4.4 mg) en diclorometano (1 mi) enfriado a 0°C TFA (0.019 mi, 0.249 mmoles) fue agregado por goteo. La mezcla de reación fue agitada a 0 °C por 1.5 horas. El solvente y el TFA fueron evaporados. La mezcla fue diluida con diclorometano (5 mi) y neutralizado con una solución saturada acuosa de NaHC03 (5 mi). La capa orgánica fue separada, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (3 mg) que fue utilizado directamente en el próximo paso UPLC-MS: 0.98 min, 343 [M+H]+ Intermediario 68 Ácido de 1-(fí(1.1-dimet¡letil)oxflcarbonil)amino)ciclobutanecarboxilico A una solución de ácido de 1 aminociclobutanecarboxílico (626 mg, 5.44 mmoles) en 5.6 mi de hidróxido de sodio acuoso 1 M y 4 mi de metanol fueron agregados Boc-Anhídrido (1.425 g, 6.53 mmoles) a 0°C. La mezcla de reacción fue calentada a temperatura ambiente y agitada durante 12 horas. Después la mayor parte del metanol fue evaporado, la solución fue acidificada a pH 2 con HCI 1 M y extraída con acetato de etilo. Los extractos orgánicos fueron combinados y fueron lavados con salmuera. La evaporación del solvente proporcionó el compuesto del título (1.09 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 12.21 (1 H, s), 7.44 (1 H, s), 2.29 - 2.47 (2H, m), 2.09 (2H, q), 1.74 - 1.94 (2H, m), 1.36 (9H, s); UPLC: 0.56 min, 216 [M+H]+ Intermediario 69 (1-f((6-f(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran- -il)oxi1-3-piridinil)amino)carbonillciclobutil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de ácido 1-({[(1 ,1-dimetilet¡l)oxi]carbonil}am¡no)ciclobutanecarboxílico (Intermediario 68, 20.16 mg) en N,N- dimetilformamida seca mi), DIPEA (20.44 µ[_, 0.117 mmoles) y entonces HATU (35.6 mmoles mg, 0.094) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argón. Entonces 6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina Intermediario 59, 20 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C bajo argón durante 12 horas. La mezcla de reacción fue enfriada y una solución pre-agitada ( 5 min) de HATU (1 equiv), ácido 1 -({[(1 ,1-dimetilet¡l)oxi]carbonil}amino)ciclobutanecarboxílico (1 equiv) y DIPEA (1 equiv) en 1 mL de DMF seco fue agregado. La mezcla de reacción fue calentada bajo argón otras 12 horas a 60° C. La mezcla de reacción fue evaporada. El residuo obtenido fue purificado en gel de sílice (Companion Instrument) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 70/30. Esto proporcionó el compuesto del título (14 mg) 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.29 (1 H, s), 8.13 - 7.86 (1 H, m), 7.11 (1 H, t), 7.04 - 6.76 (1 H, m), 6.60 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.21 (2H, s) 2.85 - 2.52 (2H, m), 2.26 - 2.09 (2H, m), 2.07 - 1.80 (2H, m), 1.45 (6H, s), 1.35 (9H, s);UPLC: 0.95 min, 454 [M+H]+ Intermediario 70 1 -amino-A/-(6-f(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridiniDciclobutanocarboxamida A una solución de {1-[({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]ciclobutil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 69, 23.5 mg) en diclorometano seco (3.5 mi), TFA (159 pL, 2.07 mmoles) fue agregado lentamente a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue purificado con un cartucho de SCX. El cartucho fue lavado con 3 CV de metanol, entonces el compuesto fue adsorbido en el cartucho, lavado con 5 CV de metanol y desorbido con 2 CV de amoniaco metanólico (1 N). Esto proporcionó el compuesto del título (18 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.43 (1 H, d), 8.1 1 (1 H, dd), 7.11 (1 H, t), 6.94 (1 H, d), 6.61 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.20 (2H, s), 2.75 - 2.70 (2H, m), 2.18 - 2.00 (4H, m), 1.34 (6H, m); UPLC: 0.82 min, 354 [M+H]+ Intermediario 71 Acido 1-((f(1.1-dimetiletil)oxncarbonil)amino)ciclopropanocarboxilico El compuesto del título (998 mg) fue formado en un modo semejante a la preparación del Intermediario 68 reemplazando ácido 1-aminociclobutanocarboxílico con ácido 1- aminociclopropanocarboxilico (550 mg). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 12.26 (1 H, s), 7.40 (1 H, s), 1.38 (9H, s), 1.26 (2H, m), 0.96 (2H, m); UPLC: 0.52 min, 202 [M+HJ+ Intermediario 72 (1-r 6-r(3.3-dimetil-2.3-dihidro-1-b.enzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)am¡no)carbonillciclopropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo El compuesto del título (14 mg) fue formado en un modo semejante a la preparación del Intermediario 69 reemplazando el ácido 1-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)ciclobutanecarboxílico con ácido 1-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)ciclopropanocarboxílico (Intermediario 71.18.84 mg, 0.094 mmoles). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.30 (1H, s), 8.08 - 7.93 (1 H, m), 7.11 (1 H, t) 6.92 (1H, d), 6.60 (1H, d), 6.45 (1 H, d),4.22 (2H, s), 1.58 - 1.51 (2H, m), 1.45 (9H, s), 1.35 (6 H, s), 1.12 (2H, m);UPLC: 0.78 min, 440 [M+H]+ Intermediario 73 1-amino-/ /-(6-r(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)ciclopropanocarboxamida El compuesto del titulo (10 mg) fue formado en un modo semejante a la preparación del Intermediario 70 reemplazando {1-[({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]ciclobutil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo con {1-[({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]ciclopropil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 72.13 mg).
H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.39 (1 H, d), 8.07 (1 H, dd), 7.10 (1 H, t), 6.92 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 6.44 (1 H, d), 4.20 (2H,s), 1.40 - 1.31 (8H, m),1.04 - 0.96 (2H, m); UPLC: 0.51 min, 340 [M+H]+ Intermediario 74 r2-((6-[(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3- piridinil)amino)-1 ,1-dimetil-2-oxoetillcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de (N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (39.0 mg, 0.192 mmoles) en N,N- dimetilformamida seca (3 mL), DIPEA (0.042 mL, 0.240 mmoles) y entonces HATU (73.0 mg, 0.192 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argón. Entonces 6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1- benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 59, 41 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C bajo argón. La reacción fue dejada bajo calentamiento 4 horas y fue detenida antes de la terminación. La mezcla de reacción se evaporó. El residuo obtenido fue purificado en gel de sílice (Companion Instrument) con un gradeinte de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30. Esto proporcionó el compuesto del título (13 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOH): d ppm 9.66 (1 H, s), 8.28 (1 H, s), 8.04 (1 H, s), 7.80 -7.51 (1 H, m), 7.1 1 (1 H, t), 6.92 (1 H, d), 6.60 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 1.48 (6H, s), 1.43 (6H, s), 1.35 (9H, s); UPLC: 0.79 min, 442 [M+H]+ Intermediario 75 A/1-(6-f(3.3-dimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)-2-metilalaninamida A una solución de [2-({6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)-1 ,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 74, 1 mg) en diclorometano seco (2 mi), TFA (0.077 mi, 0.997 mmoles) fue agregado lentamente a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue purificado con un cartucho de SCX. El cartucho fue lavado con 3 CV de metanol y entonces el compuesto fue adsorbido en el cartucho, lavado con 5 CV de metanol y desorbido con 2 CV de amoniaco metanólico (1 N). Esto proporcionó el compuesto del título (8.5 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.39 (1 H, d), 8.07 (1?, dd), 7.1 1 (1 H, t), 6.92 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 6.43 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 1.45 (6H, s), 1.35 (6H, s); UPLC: 0.50 min, 342 [M+H]+ Intermediario 76 /V-(f(1 ,1-dimetiletil)oxi1carbonil)-3-metil-D-valina A una solución de 3-metil-D-valina (900 mg, 6.86 mmoles) en 7 mi de hidróxido de sodio acuoso 1 M y 7 mi de metanol fue agregado Boc-Anhídrido (1.797 g, 8.23 mmoles) a 0° C. La mezcla de la reacción fue calentada a la temperatura ambiente y agitado por la noche. Después la mayor parte del metanol fue evaporada, la solución fue acidificada a pH 2 con una solución acuosa de HCI (1 M) y extraída 3 veces con acetato de etilo (3 X 20 mi). Las capas orgánicas fueron combinadas y fueron lavadas con salmuera (2 X 5ml). La evaporación del solvente proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (1.36 g). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 12.44 (1 H, s), 6.82 (1 H, d), 3.76 (1 H, d), 1.38 (9H, s), 0.93 (9H, s); UPLC: 0.64 min, 232 [ +H]+ Intermediario 77 ((1 R)-1-r((2-r(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidinil)amino)carbonill-2,2-dimetilpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de N-{[(1 ,1 -dimetiletil)oxi]carbonil}-3-metil-D-valina (Intermediario 76, 53.9 mg) en N.N- dimetilformamida seca (1 mi), DIPEA (50.9 µ1_, 0.292 mmoles) y entonces HATU (102 mg, 0.268 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente bajo argón. Entonces 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinamina (Intermediario 65, 30 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 60°C bajo argón durante 12 horas. La reacción fue templada con salmuera (1 ml), diluida con agua (2ml) y extraída con acetato de etilo (2x5ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio y evaporada. El residuo obtenido fue purificado en gel de sílice (Companion Instrument) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30. Esto proporcionó el compuesto del título (17mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.74 (2H, s), 7.14 (1 H, t), 6.67 (1 H, d), 6.57 (1 H, d), 4.53 (1 H, d), 4.20 (2H,s), 1.40 (6H, s) 1.06 (9H, s), 0.98 (9H,s); UPLC: 0.83 min, 371 [M+H]+ Intermediario 78 /S/1-(2-r(3.3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidinil)-3-metil-D-valinamida A una solución de {(1 f?)-1-[({2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}amino)carbonil]-2,2-dimetilpropil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 77, 13 mg) en diclorometano seco (0.5 mi) enfriado a 0 °C, TFA (85 µ?, 1.105 mmoles) fue agregado por goteo y la solución fue agitada por 3 horas a esa temperatura. Los volátiles fueron evaporados. El residuo fue disuelto con diclorometano (2 mi) y una solución acuosa saturada de NaHC03 fue agregada (4 mi). Las capas fueron separadas y la capa acuosa fue extraída dos veces con diclorometano. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio y evaporadas para proporcionar el compuesto del titulo (10.9 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.68 (2H, s), 7.14 (1 H, t), 6.68 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 3.30 (1 H, s), 1.70 (2H, br s), 1.35 (6H, s) 1.07 (9H, s); UPLC: 0.53 min, 377 [M+H]+ Intermediario 79 1 ,3-bis{[(metiloxi)metinoxi)benceno A una solución de 1 ,3-bencenodiol (1.5 g, 13.62 mmoles) en ?,?-Dimetilformamida seca (13.62 mi) a 0°C hidruro de sodio (0.981 g, 40.9 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. MOM-CI (3.10 mi, 40.9 mmoles) fue agregado rápidamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora mientras la temperatura fue permitida alcanzar la temperatura ambiente. La reacción fue templada con salmuera (20ml) y extraída con acetato de etilo (3x50ml). La capa orgánica fue lavada con salmuera (2x30ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 50g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (1.59 g, 8.02 mmoles) como un aceite sin color. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.16-7.23 (1 H,d), 6.69-6.64 (3H, m), 5.17 (4H, s), 3.38 (6H, s).
Intermediario 80 (2,6-bis(f(metiloxi)metil1ox¡lfenil)(oxo)acetato de etilo A una solución de 1 ,3-bis{[(metiloxi)metil]oxi}benceno (Intermediario 79, 2.19 g) en tetrahidrofurano seco (10 mi) a temperatura ambiente Buü 1.6M en hexano (8.29 mi, 13.26 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La mezcla fue enfriada a -78°C y fue agregada (a través de canulación) a una solución de cloro(oxo)acetato de etilo (2.263 g, 16.57 mmoles) en tetrahidrofurano seco (10 mi) a 78°C. La mezcla de reacción fue agitada a -78°C durante 30 minutos. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (10ml) y extraída con acetato de etilo (2x30ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyente proporcionando el compuesto del título como una aceite amarillo claro (1.75 g). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.46 (1 H, t), 6.87 (2H, d), 5.20 (4H, s), 4.29 (2H, q), 3.34 (6H, s), 1.27 (3H, t).
Intermediario 81 2-(2,6-bis(f(metiloxi)metil1oxi)fen¡l)-2-propenoato de etilo A una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (3.13 g, 8.75 mmoles) en tetrahidrofurano seco (30 mi) a 0°C KHMDS (1.745 g, 8.75 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos a 0°C y durante 45 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue enfriada a 0CC y una solución de (2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)(oxo)acetato de etilo (Intermediario 80, 1 .74 g) en tetrahidrofurano seco (10 mL) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 0°C. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (10ml), diluida con agua (20 mi) y extraída con acetato de etilo (2x50ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexa no/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un aceite sin color (1.37 g). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.21 (1 H, t), 6.78 (2H, d), 6.44 (1 H, d), 5.74 (1 H, d), 5.12 (4H, s), 4.12 (2H, q), 3.32 (6H, s), 1.17 (3H, t).
Intermediario 82 1-(2,6-bis{f(metiloxi)metil1oxi)fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo A una solución de yoduro de trimetilsulfoxonio (1.805 g, 8.20 mmoles) en sulfóxido de dimetilo seco (20 ml_) hidruro de sodio 60% de dispersión en aceite mineral (0.310 g, 7.75 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a temperatura ambiente. Una solución de 2-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-2-propenoato de etilo (Intermediario 81 , 1.35 g) en el sulfóxido de dimetilo seco (10 ml_) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (10ml), diluida con agua (20 mi) y extraída con acetato de etilo (2x50ml). La capa orgánica fue lavada con agua (50ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 50g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el título como un aceite sin color (1.14 g). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.15 (1 H, t), 6.71 (2H, d) 5.18 (4H, s), 3.97 (2H, q), 3.36 (6H, s), 1.53-1.58 (2H, m), 1.09-1.14 (2H, m) 1.04 (3H, t).
Intermediario 83 2-[1 -(hidroximetil)cicloprop¡l1-3-([(metiloxi)metillox¡)fenol A una solución de 1-(2,6-bis{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo (Intermediario 82, 490 mg) en etanol (10 mi) HCI 2N en agua (0.789 mL, 1.579 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50°C. Tolueno (20 mL) fue agregado y los solventes combinados fueron removidos bajo presión reducida. El residuos fue resuspendida en tolueno (20 mi) y el solvente se evaporó. El residuo obtenido fue disuelto en tetrahidrofurano seco (20 mi), la mezcla fue enfriada a 0°C y NaH 60% de dispersión en aceite mineral (126 mg, 3.16 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. MOM-CI (0.120 mL, 1.579 mmoles) fue entonces agregado y la mezcla de reacción fue agitada por 2 horas a 0°C. LÍAIH4 (1 M en THF, 1.579 mi, 1.579 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada más por 1 hora a la misma temperatura. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (10ml), diluida con agua (10ml) y extraída con acetato de etilo (2x50ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciciohexano a ciciohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un aceite sin color (191 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.90 (1 H, br.s) 6.96 (1 H, t), 6.50 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 5.16 (2H, s), 4.93 (1 H, br.s), 3.45 (2H, s), 3.40 (3H, s), 0.86-0.93 (2H, m), 0.56-0.62 (2H, m)¡ UPLC: 0.59 min, 225 [M+HJ+.
Intermediario 84 4-{[(metiloxi)metilloxi)spiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropanol A una solución de 2-[1-(hidroximetil)ciclopropil]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (Intermediario 83, 190 mg) en tetra h id rotura no seco (10 mi) trifenilfosfina (333 mg, 1.271 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada hasta disolución completa de PPh3. DIAD (0.198 mi, 1.017 mmoles) entonces fue agregado por goteo y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a temperatura ambiente El solvente fue removido bajo presión reducida. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un aceite amarillo claro (120 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 6.97 (1 H, t), 6.51 (1 H, d), 6.43 (1 H, d), 5.12 (2H, s), 4.40 (2H, s), 3.35 (3H, s), 1.43-1.48 (2H, m), 0.85-0.90 (2H, m); UPLC_B: 0.88 min, 207 [M+H]+.
Intermediario 85 Espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan1-4-ol A una solución de 4-{[(metiloxi)metil]oxi}spiro[1 -benzofuran-3,1 '-ciclopropano] (Intermediario 84, 1 8 mg) en metanol (5 mi), HCI 2N en agua (0.286 ml_, 0.572 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50°C. Los solventes combinados fueron removidos bajo presión reducida y el residuo fue redisuelto en tolueno (10 mi) y el solvente fue removido. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (70 mg).
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.28 (1 H, s), 6.81 (1 H, t), 6.24 (1 H, d), 6.22 (1 H, d), 4.34 (2H, s), 1.40-1.45 (2H, m), 0.77-0.82 (2H, m).
Intermediario 86 5-nitro-2-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan1-4-iloxi)piridina A una solución de espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-ol (Intermediario 85, 70 mg) en N,N- dimetilformamida seca (2 mi) carbonato de potasio (89 mg, 0.647 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropiridina (75 mg, 0.475 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a 100°C. La reacción fue templada con salmuera (1ml), diluida con agua (2ml) y extraída con acetato de etilo (3x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (100 mg).
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.05 (1 H, d), 8.63 (1 H, dd), 7.23 (1 H, d), 7.13 (1 H, t), 6.73 (1 H, d), 6.60 (1 H, d), 4.45 (2H, s), 1.05-1.10 (2H, m), 0.88-0.93 (2H, m)¡ UPLC: 0.79 min, 285 [M+H]+.
Intermediario 87 6-(espirof 1 -benzofuran-3, 1 '-ciclopropanl-4-iloxi)-3-piridinamina A una solución de 5-nitro-2-(espiro[1 -benzofuran-3, 1'-ciclopropan]-4-iloxi)piridina (Intermediario 86, 99 mg) en tetrahidrofurano (5 ml)/agua (2.5 mi) hierro (97 mg, 1.741 mmoles) y luego cloruro de amonio (93 mg, 1.741 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 4 horas a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y el residuo fue diluido con una solución saturada acuosa de NaHC03 (5 mi) y extraído con acetato de etilo (3x1 OmI). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexa no/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un sólido amarillo claro (85 mg).
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.52 (1 H, d), 7.06 (1 H, dd), 6.97 (1 H, t), 6.70 (1 H, d), 6.53 (1 H, d), 6.23 (1 H, d), 5.08 (2H, s), 4.43 (2H, s), 1.28-1.33 (2H, m), 0.86-0.91 (2H, m); UPLC: 0.62 min, 255 [M+H]+.
Intermediario 88 [(1f?)-1-(([6-(espirof1-benzofuran-3,1'-ciclopropanl-4-iloxi)-3-piridinillaminotoarboniOpropillcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de ácido (2R)-2-({[(1 ,1 -dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (94 mg, 0.462 mmoles) en N,N-Dimetilformamida seca (2 mL) DIPEA (0.1 15 ml_, 0.661 mmoles) y entonces TBTU (159 mg, 0.496 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente. 6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina (Intermediario 87, 84 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 6 horas a la misma temperatura. La reacción fue templada con salmuera (2ml), diluida con agua (5ml) y extraída con acetato de etilo (2x1 Oml). La capa orgánica fue lavada con salmuera enfriada en hielo (2x5ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un aceite sin color (130 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 10.14 (1 H, br.s), 8.32 (1 H, d), 8.08 (1 H, dd), 7.02-7.09 (2H, m), 6.96 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 6.42 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 3.93-4.01 (1 H, m), 1.52-1.75 (2H, m), 1.39 (9H, s), 1.15-1.22 (2H, m), 0.85-0.95 (5H, m); UPLC: 0.80 min, 440 [M+H]+.
Intermediario 89 (2f?)-2-amino-A/-f6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan1-4-iloxi)-3-piridininbutanamida A una solución de [(1 R)-1-({[6-(espiro[1-benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]amino}carbonil)propil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 88, 128 mg) en diclorometano seco (3 mi) a 0°C TFA (0.9 mL, 1 1.68 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a la misma temperatura. La reacción fue diluida con diclorometano (10 mi) y una solución saturada acuosa de aHC03 fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar- 8. Las fases fueron separadas y la capa acuosa fue re-extraída con diclorometano (10ml). Las capas orgánicas fueron combinadas, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas proporcionando el compuesto del título como un aceite sin color (92 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.37 (1 H, d), 8.13 (1 H, dd), 7.05 (1 H, t), 6.95 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 6.42 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 3.24 (1 H, m), 1.61-1.72 (1 H, m), 1.44-1.55 (1 H, m), 1.16-1.21 (2H, m), 0.91 (3H, t), 0.86-0.91 (2H, m); UPLC_B: 0.74 min, 340 [M+H]+.
Intermediario 90 (1 ,1 -dimetil-2-oxo-2-([6-(espirof 1 -benzofuran-3, 1 '-ciclopropanl-4-iloxi)-3-pirid¡n¡namino)etil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (80 mg, 0.393 mmoles) en N,N-dimet¡lformamida (1.5 mL) DIPEA (0.096 mL, 0.551 mmoles) y entonces HATU (150 mg, 0.393 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente Esta solución fue añadida a una solución de 6-(espiro[ -benzofuran-3 ,V-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina (Intermediario 89, 40 mg) en N,N-dimetilformamida seca (0.5 mi) y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. La reacción fue templada con agua (2ml), diluida con salmuera (10ml) y extraída con acetato de etilo (2x20ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (52 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.62 (1 H, br.s), 8.24-8.42 (1 H, br.m), 8.05 (1 H, d), 6.98-7.10 (2H, m), 6.92 (1 H, d), 6.61 (1 H, d), 6.40 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 1.42 (6H, s), 1.36 (9H, s), 1.15-1.21 (2H, m), 0.85-0.91 (2H, m)¡ UPLC: 0.81 min, 440 [M+H]+.
Intermediario 91 2-metil-A/1-f6-(espirof 1 -benzofuran-3, 1 '-ciclopropanl-4-ilox¡)-3-piridinillalaninamida A una solución de (1 ,1-dimetil-2-oxo-2-{[6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-pihdinil]amino}etil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 90, 50 mg) en diclorometano seco (4 ml_) a 0°C TFA (1 mi, 12.98 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a la misma temperatura. La reacción fue diluida con diclorometano (10 mi) y una solución saturada acuosa de aHC03 fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar- 8. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del titulo (35 mg) como un aceite sin color.
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.40 (1 H, d), 8.15 (1 H, dd), 7.04 (1 H, t), 6.94 (1 H, d), 6.62 (1 H, d), 6.41 (1 H, d), 4.43 (2H, s), 1.28 (6H, s), 1.15-1.20 (2H, m), 0.86-0.91 (2H, m); UPLC: 0.56 min, 340 [M+H]+.
Intermediario 92 [( f?)-1-metil-1-((f6-(espirof1-benzofuran-3,1 '-ciclopropanl-4-iloxi)-3-piridinil1amino)carbonil)propillcarbamato de 1 , 1 -dimetiletilo 6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinamina (Intermediario 91 , 127 mg), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isovalina (Nagase & Co Ltd,109 mg, 0.499 mmoles), DIPEA (0.131 ml_, 0.749 mmoles) y HATU (247 mg, 0.649 mmoles) fueron disueltos en ?,?-dimetilformamida seca (3 mi) y la mezcla obtenida fue agitada a temperatura ambiente por 2 días. Una solución acuosa saturada de NaHC03 entonces fue agregada y la mezcla fue extraída dos veces con éter dietílico. La fase orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio y concentrada al vacío para dar 300mg de crudo. Esto se purificó por cromatografía instantánea (columna Biotage KP-Sil 25g SNAP, eluyente ciclohexano/acetato de etilo de 90/10 a 20/80 en 12CV) para dar 106 mg del compuesto del título como un sólido marrón. 1H RMN (400MHz, CDCI3): d ppm 8.13-8.18 (2H, m), 7.06 (1 H, t), 6.85 (1 H, d), 6.66 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.85 (1 H, br.s), 4.48 (2H, s), 1.90-2.11 (2H, m), 1.53 (3H, s), 1.48 (9H, s), 1.42-1.47 (2H, m), 0.97 (3H, t), 0.81-0.86 (2H, m); UPLC: 1.19 min, 454 [M+H]+.
Intermediario 93 A/1-[6-(espirof1-benzofuran-3,1 '-ciclopropanl-4-iloxi)-3-pir¡din¡n-D- isovalinamida A una solución de [(1 R)-1-metil-1-({[6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '- c¡clopropan]-4-iloxi)-3-pi dinil]amino}carbonil)propil]carbamato de 1 ,1- dimetiletil (Intermediario 92, 106 mg) en diclorometano seco (2 mi) a 0°TFA C (0.360 mi, 4.67 mmoles) fue agregado. La mezcla fue agitada en esta temperatura durante 5 minutos, entonces permitió calentarse a temperatura ambiente. Después de 2 horas el UPLC/MS mostró la ausencia del material de partida y la presencia del compuesto deseado: tolueno (5 mi) fue agregado y la mezcla fue concentrada bajo vacío. El residuo fue cargado en un cartucho SCX (1g), cartucho que fue eluído con metanol y una solución de NH3 1 M en metanol. El eluato básico fue concentrado bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un aceite marrón (68 mg) que fue utilizado en el experimento siguiente sin purificación adicional.
H RMN (400MHz, CDCI3): d ppm 9.93 (1 H, s), 8.21-8.31 (2H, m), 7.06 (1 H, t), 6.85 (1 H, d), 6.65 (1 H, d), 6.45 (1 H, d), 4.48 (2H, s), 1.94-2.04 (1 H, m), 1.59-1.69 (1 H, m), 1.44-1.48 (2H, m), 1.43 (3H, s), 0.95 (3H, t), 0.81-0.85 (2H, m); UPLC: 0.71 min, 354 [M+H]+.
Intermediario 94 3-(f(metiloxi)metilloxi)benzoato de metilo En un matraz de fondo redondo de 500 mi, bajo limpieza de argón, 3-hidroxibenzoato de metilo (5 g, 32.9 mmoles) fue disuelto en diclorometano (100 mi) para dar una suspensión blanca. La mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. A esa temperatura cloro(metiloxi)metano (2.75 mi, 36.1 mmoles) y DIPEA (6.89 mi, 39.4 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción se agitó durante la noche. Durante ese tiempo, la temperatura de reacción fue permitida alcanzar la temperatura ambiente. La mezcla de reacción entonces fue evaporada bajo vacio para proporcionar el producto crudo como un aceite amarillo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna 50g SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 10/0 a 3/1 en 10 CV; entonces 3/1 para 5 CV). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título (5.088 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.76 - 7.68 (2H, m), 7.41 -7.34 (1 H, m), 7.27 - 7.22 (1 H, m), 5.24 (2H, s), 3.93 (3H, s), 3.51 (3H, s)¡ UPLCjpqc: 0.92 min, 197 [M+H]+ Intermediario 95 (3-{[(metiloxi)metilloxi)fenil)metanol En un matraz de fondo redondo de 250 mi, bajo limpieza de argón, 3-{[(metiloxi)metil]oxi}benzoato de metilo (Intermediario 94, 5.0875 g) fue disuelto en tetrahidrofurano (20 mi) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. En esas condiciones, una solución de LiAIH4 en (1M) (25.9 mi, 25.9 mmoles) fue agregado por goteo y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C. Después de 45 min, la mezcla de reacción fue templada con una solución de ácido clorhídrico 2M hasta pH~ 2 y diluida con 100 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el compuesto del título (4.348 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.30 (1 H, t), 7.10 - 7.05 (1 H, m), 7.04 - 7.00 (1 H, m), 7.00 - 6.95 (1 H, m), 5.20 (2H, s), 4.69 (2H, d), 3.50 (3H, s), 1.80 - 1.70 (1 H, m).
UPLCjpqc: 0.63 min, 151 [M-OH]+ Intermediario 96 1-(2-(hidroximetil)-6-{[(met¡lox¡)met¡noxi)fenil)etanol Bajo limpieza de argón, en un en un matraz de fondo redondo de 2 bocas de 100 mi equipado con un condensador de reflujo (flameado por 5 min bajo vacío y entonces 3 ciclos de Ar/Vacío) (3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metanol (Intermediario 95.1 g) fue disuelto en el hexano (20 mi) dar una solución sin color. N,N,N',N'-tetrametil-1 ,2-etanodiamina (1.872 mL, 12.49 mmoles) fue agregado. A la mezcla de reacción obtenida una solución de BuLi (1.6M/hexano) (7.80 mi, 12.49 mmoles) fue agregada por goteo. La mezcla de reacción entonces fue calentada a 60°C y agitada en esas condiciones. Después de 5 horas de agitación en esas condiciones, acetaldehído (1.090 mi, 19.30 mmoles) en 6 mi de hexano seco fue agregado por goteo a -78° C. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura durante 1 hora y entonces calentada a la temperatura ambiente. Después de agitar por la noche en esa temperatura, la reacción fue templada con una solución acuosa de ácido clorhídrico 2M y diluida con 100 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage SP1 , columna de Sílice de 25g SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 5/1 a 1/1 en 15 CV; entonces 1/1 por 5 CV). Las fracciones completas proporcionaron (3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metanol (532.4 mg, Intermediario 95 recuperado) y el compuesto del título (184.7 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.20 (1 H, t), 7.10 (1 H, dd), 7.00 (1 H, dd), 5.37 (1 H, q), 5.26 (1 H, d), 5.25 (1 H, d), 4.83 (1 H, d), 4.63 (1 H, d), 3.51 (3H, s), 3.55 (1 H, br. s ), 2.66 (1 H, br. s ), 1.60 (3H, d); UPLC Jpqc: 0.60 min, 195 [M-OH]+ Intermediario 97 1 -metil-7-([(metiloxi)metilloxi)-1.3-d¡hidro-2-benzofurano Bajo limpieza de argón, en un frasco de 8 mi 1-(2-(h¡droximetil)- 6-{[(metiloxi)metil]ox¡}fen¡l)etanol (Intermediario 96, 50.3 mg) fue disuelto en tetrahidrofurano (1 mi) para dar una solución amarilla pálida. La mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. En esas condiciones, una solución de BuLi (1.6M/hexano) (0.148 mi, 0.237 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C. Después de 30 minutos, cloruro de 4- metilbencnosulfonilo (45.2 mg, 0.237 mmoles) fue agregado a 0o C. La reacción fue agitada a esa temperatura. Después de 1 h, una cantidad adicional de la solución de BuLi (1.6M/hexano) (0.148 mi, 0.237 mmoles) fue agregado a 0o C. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 1 hora, entonces a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción entonces fue templada con 2 mi de ácido clorhídrico 2 y diluida con 5 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna de Sílice de 10g-SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 1/0 a a 3/1 en 10 CV; entonces 3/1 por 5 CV; entonces de 3/1 a 1/1 en 5 CV; entonces 1/1 por 5 CV). La fracción completa proporcionó el compuesto del título (25.2 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) : d ppm 7.25 (1 H, t), 6.99 (1 H, d), 6.88 (1 H, d), 5.53 - 5.43 (1 H, m), 5.26 (1 H, d), 5.23 (1 H, d), 5.20 (1 H, dd), 5.10 - 5.02 (1 H, m), 3.51 (3H, s), 1.57 (3H, d); UPLCjpqc: 0.92 min, 195 [M+H]+ Y también el correspondiente fenol desprotegido (Intermediario 98, 11.1 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.17 - 7.1 1 (1 H, m), 6.79 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 5.55 - 5.40 (1 H, m), 5.20 - 5.14 (2H, m), 5.04 (1 H, d), 1.57 (3H, d); UPLCJpqc: 0.66 min, 149 [M-H]- Intermediario 98 3-metil- 1.3-d ihid ro-2-benzof u ran-4-ol En un frasco de 8 mi 1-metil-7-{[(metiloxi)metil]oxi}-1 ,3-dihidro-2-benzofurano (Intermediario 97.25.2 mg) fue disuelto en metanol (1 mi) para dar una solución sin color. Una solución de HCI (2M/H20) (0.259 mi, 0.519 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue sacudida a 80°C. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción fue diluida con 10 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue mezclada con la fracción obtenida antes y evaporada bajo vacío para proporcionar un residuo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna de Sílice de 10g-SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 100/0 a 3/1 en 10 CV¡ entonces 3/1 por 5 CV; entonces de 3/1 a 1 :1 en 5 CV; entonces 1 :1 por 5 CV). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título (24 mg).
H RMN (400 Hz, CDCI3): d ppm 7.14 (1 H, t), 6.79 (1 H, d), 6.64 (1 H, d), 5.55 - 5.42 (1 H, m), 5.23 (1 H, s), 5.17 (1 H, dd), 5.04 (1 H, d), 1.57 (3H, d); UPLCjpqc: 0.66 min, 149 [M-H]- Intermediario 99 2-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzoíuran-4-il)oxn-5-nitropiridina En un frasco de microondas 3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol (Intermediario 98, 24 mg) fue disuelto en N,N- dimetilformamida (1.5 mi) para dar una solución amarilla pálida. 2-cloro-5-nitropiridina (24.07 mg, 0.152 mmoles) y carbonato de potasio (62.9 mg, 0.455 mmoles) fueron agregados. El recipiente de reacción fue sellado y calentado en un Iniciador de microondas Biotage a 1 10 °C por 1 hora. Después de endriar, la mezcla de reacción fue templada con 5 mi de agua y diluida con 25 mi de Et2Ü. La fase orgánica fue lavada con agua (3x10 mL) y las fases fueron separadas. La fase orgánica fue pasada por un cartucho separador de fase y evaporada bajo vacío para dar el compuesto del título (38.3 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.06 (1 H, d), 8.53 (1 H, dd), 7.39 (1 H, t), 7.18 (1 H, d), 7.10 (1 H, d), 7.04 (1 H, d), 5.37 - 5.26 (1 H, m), 5.26 -5.18 (1 H, m), 5.12 (1 H, d), 1.41 (3H, d); UPLC_B: 0.84 min, 273. [M+H]+ Intermediario 100 6-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinamina En un matraz de fondo redondo de 50 mi 2-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-5-nitropiridina (Intermediario 99, 38.3 mg) fue disuelto en etanol (10 mi) para dar una solución amarilla pálida. Pd/C (14.22 mg, 0.013 mmoles) e hidrato de hidrazina (0.026 mi, 0.267 mmoles) fueron agregados. La mezcla de la reacción fue agitada a 90° C. Después de 45 minutos, la mezcla de reacción fue filtrada y la fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el compuesto del título (32 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.70 (1 H, d), 7.25 (1 H, t), 7.09 (1 H, dd), 6.99 (1 H, d), 6.88 (1 H, d), 6.76 (1 H, d), 5.28 - 5.39 (1 H, m), 5.18 (1 H, dd), 5.07 (1 H, d), 3.53 (2H, br. s.), 1.47 (3H, d); UPLC_B: 0.64 min, 243 [M+H]+ Intermediario 101 (( )-1-r((6-r(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)amino)carbonillpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo En un frasco de 8 mi ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (32.2 mg, 0.158 mmoles) fue disuelto en N,N- dimetilformamida (0.5 mi) para dar una solución sin color. DIPEA (0.035 mi, 0.198 mmoles) y HATU (60.3 mg, 0.158 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. 6-[(3-metil-1,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 100, 32 mg) fue disuelto en 1.5 mi de DMF y la solución obtenida fue añadida a la mezcla de reacción. Fue sacudido a 60°C. Después de 2 horas, ninguna reacción ocurrió. Otros 0.5 mi de una solución [obtenida disolviendo en 0.5 mi de DMF ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (32.2 mg, 0.158 mmoles), DIPEA (0.035 ml_, 0.198 mmoles) y HATU (60.3 mg, 0.158 mmoles)] fue añadido a la mezcla de reacción. Fue sacudido a 60°C por el fin de semana. Después de ese tiempo, sólo trazas del compuesto del título junto con el Intermediario 100 fueron detectadas. La mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío utilizando el Vaportec V10 para dar el producto crudo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna de Sílice de 10g-SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 3/1 a 1/1 en 10 CV; entonces 1/1 por 10 CV). Las fracciones recolectadas proporcionaron 4.9 mg del compuesto del titulo mezclado con el aminoácido y 61 mg de una mezcla de material de partida (Intermediario 100) y el aminoácido.
Esto fue disuelto en 10 mi de diclorometano y lavado con 10 mi de solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. Las fases orgánicas fueron evaporadas bajo vacío para proporcionar 64 mg de la misma mezcla. Este último fue disuelto en 1.0 mi de DMF y añadido a una solución agitada de DMF (0.5 mi) de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (61.4 mg, 0.302 mmoles), DIPEA (0.066 mL, 0.378 mmoles) y TBTU (97 mg, 0.302 mmoles). La mezcla obtenida fue calentada a 60°C y fue sacudida. Después de 1 h30m¡n la mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío utilizando el Vaportec V10 para dar el producto crudo como un aceite amarillo que fue disuelto en 10 mi de EtOAc y templado con 10 mi de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio. La fase acuosa fue extraída con EtOAc (3x10 mi). Las fases orgánicas completas fueron secadas utilizando una frita hidrófoba, mezclada con el compuesto del título obtenido antes y purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna de Sílice de 10g-SNAP) con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 3/1 a 1/1 en 10 CV; entonces 1 :1 para 10 CV). Las fracciones recolectados proporcionaron el compuesto del título, como una mezcla 1 :1 de diastereoisómeros (62.3 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) : d ppm 8.20 - 8.16 (1 H, m), 8.15 -8.08 (1 H, m), 7.31 (1 H, t), 7.06 (1 H, d), 6.95 (1 H, d), 6.89 (1 H, d), 5.37 - 5.25 (1 H, m), 5.20 (1 H, dd), 5.15 - 5.02 (2H, m), 4.23 - 4.08 (1 H, m), 2.03 - 1.81 (2H, m), 1.47 (9H, s), 1.43 (3H, d), 1.08 - 0.99 (3H, m). UPLCjpqc: 1.05 min, 428 [M+H]+ Intermediario 102 (2F?)-2-am¡no-A/-(6-r(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxil-3-piridiniDbutanamida En un matraz de fondo redondo de 25 mi {(1 R)-1-[({6-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1 -dimetiletilo (Intermediario 101 , 62.3 mg) fue disuelto en diclorometano (3 mi) para dar una solución amarilla pálida. La mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. A ese tempertura TFA (0.5 mi, 6.49 mmoles) fue agregado por goteo a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo que fue cargado en un cartucho de SCX de 2g. Entonces fue limpiado con 50 mi de MeOH seguido por 25 mi de una solución de amoniaco 2M en MeOH. El eluato del amoniaco fue evaporado bajo vacío para proporcionar 34.4mg de un aceite amarillo que fue una mezcla del compuesto del título y el aminoácido desprotegido. Esta mezcla fue disuelta en 20 mi de Et2O y fue lavada con una solución acuosa saturada de aHCO3 (3x1 Oml). La fase orgánica fue secada utilizando un cartucho separador de fase y evaporado bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como una mezcla 1 : 1 de diastereoisómeros (24.4 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.58 (1 H, br. s.), 8.32 - 8.25 (1 H, m), 8.23 (1 H, t), 7.32 (1 H, t), 7.08 (1 H, d), 6.98 (1 H, d), 6.94 (1 H, d), 5.40 - 5.29 (1 H, m), 5.22 (1 H, dd), 5.1 1 (1 H, d), 3.49 (1 H, dd), 2.11 - 1.94 (1 H, m), 1.85 - 1.60 (3H, m), 1.46 (3H, d), 1.12 - 1.01 (3H, m); UPLCjpqc: 0.64 min, 328 [M+H]+ Intermediario 103 (1 ,1-dimetiletil)(dimetil)(í(3- (f(met¡loxi)metilloxi)fenil)metilloxi)silano En un matraz de fondo redondo de 100 mi (3-{[(met¡loxi)met¡l]ox¡}fen¡l)metanol (Intermediario 95, 3.5 g) fue disuelto en diclorometano (20 mi) para dar una solución sin color. 1 H-lmidazol (1.700 g, 24.97 mmoles) y cloro(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilano (3.64 g, 24.14 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción se volvió inmediatamente una suspensión blanca y fue agitada a temperatura ambiente. Después de agitar por la noche la reacción fue completada. La mezcla de reacción entonces fue templada con 10 mi de agua y diluida con 10 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un embudo de separación. La fase orgánica fue secada utilizando una frita hidrófoba y evaporada bajo vacío para dar 6,0082 g del producto crudo como un aceite sin color que fue purificado a través de Biotage SP1 (con cicIohexano/EtOAc como eluyentes de 1 :0 a 5:1 en 10 CV; entonces 5:1 para 5 CV; entonces de 5:1 a 1 :1 en 5 CV; columna de Sílice de 100g SNAP). Dos fracciones del compuesto del titulo fueron recolectadas: 1.70 g de un aceite sin color (pureza: 93%) y 3.70 g de un aceite sin color (pureza: 98%).
H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.26 (1 H, t), 7.04 - 7.08 (1 H, m), 6.96 - 7.01 (1 H, m), 6.91 - 6.96 (1 H, m), 5.20 (2 H, s), 4.75 (2 H, s), 3.50 (3 H, s), 0.92 - 1.02 (9 H, m), 0.12 (6 H, s). UPLC-MS_ipqc: 1.49 min, 281 [M-H]-.
Intermediario 104 1-(2- r(1.1-dimetiletil)(dimetil)sililloxi)metil)-6-{[(metiloxi)metilloxi)fen¡l)-1 -propanol Bajo limpieza de argón, en un matraz de fondo redondo de 2 bocas de 100 mi equipado con un condensador de reflujo (flameado durante 5 minutos bajo vacío y entonces 3 ciclos de Ar/Vacío) (1 ,1-dimetilet¡l)(dimetil){[(3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metil]oxi}silano (Intermediario 103, 0.2 g) fue disuelto en hexano (2 mi) para dar una solución sin color. Una solución de 1.6M/Hexano de Buü (0.487 mi, 0.779 mmoles) fue agregada por goteo. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente. Después de 2 horas de agitación a esas condiciones, a la mezcla de reacción amarilla pálida fue agregado propanal (0.061 mL, 0.850 mmoles) a 0o C. Después de 1 h30min, la reacción fue templada con ácido clorhídrico 2M hasta pH~ 2 y diluida con 25 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío proporcionando el producto crudo como un aceite verde/gris que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 1 :0 a 5:1 en 5 CV¡ entonces 5:1 para 5 CV¡ entonces de 5: 1 a 3:1 en 5 CV¡ entonces 3:1 para 5 CV; columna de Sílice de 10g SNAP). Esto proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (132.1 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.18 (1 H, t), 7.02 - 7.12 (2 H, m), 5.26 (1 H, d), 5.25 (1 H, d), 4.78 - 4.89 (2 H, m), 4.75 (1 H, d), 3.63 (1 H, d), 3.51 (3 H, s), 1.89 - 2.06 (1 H, m), 1.74 - 1.88 (1 H, m), 1.02 (3 H, t), 0.94 (9 H, s), 0.12 (3 H, s), 0.10 (3 H, s). UPLC-MS_¡pqc: 1.45 min, 363 [M+Na]+.
Intermediario 105 1-(2-(hidroximetil)-6-([(metiloxi)metilloxi)fenil)-1 -propanol En un matraz de fondo redondo de 50 mi 1-(2-({[(1 ,1-dimetiletíl)(dimetil)silil]oxi}metil)-6-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-1 -propanol (Intermediario 104, 132.1 mg) fue disuelto en Tetrahidrofurano (2 mi) para dar una solución amarilla pálida. Sol de TBAF (0.388 mi, 0.388 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente. Después de agitación durante la noche, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para dar el producto crudo como un aceite amarillo pálido que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 3:1 a 2:1 en 10 CV; entonces 2:1 para 5 CV; entonces de 2:1 a 2:1 en 5 CV; entonces 1 :1 para 5 CV; columna de Sílice de 25g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron un residuo que fue purificado otra vez en las mismas condiciones para proporcionar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido.
H RMN (400 Hz, CDCI3) d ppm 7.16 - 7.24 (1 H, m), 7.10 (1 H, dd), 7.02 (1 H, dd), 5.23 (2 H, dd), 5.08 (1 H, dd), 4.81 (1 H, d), 4.61 (1 H, d), 3.50 (3 H, s), 2.41 - 3.05 (2 H, m), 1.91 - 2.07 (1 H, m), 1.82 (1 H, s), 1.00 (3 H, t). UPLC-MS_ipqc: 0.70 min, 249 [M+Na]+.
Intermediario 106 3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol Bajo limpieza de argón, en un frasco de 8 mi 1-(2-(hidroximetíl)-6-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-1 -propanol (Intermediario 105, 99 mg) fue disuelto en tetrahidrofurano (2 ml) para dar una solución amarilla pálida. La mezcla de reacción fue enfriada a 0° C. En esas condiciones, una solución de BuLi en hexano (1.6M, 0.246 ml, 0.394 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 30 minutos, cloruro de 4 metilbencenosulfonilo (75 mg, 0.394 mmoles) fue agregado a 0o C. La reacción fue agitada a esa temperatura. Después de 1 hora, BuLi adicional en hexano (1.6M, 0.246 ml, 0.394 mmoles) fue agregado a 0o C. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C por 1h, entonces a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después de ese tiempo la mezcla de reacción fue templada con 2 mi de ácido clorhídrico 2M y diluida con 5 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo como un aceite amarillo pálido que fue disuelto en metanol (3.00 mi). HCI (0.788 mi, 1.575 mmoles) fue agregado al mismo. La mezcla de reacción obtenida fue calentada a 80°C y sacudida. Después de 30 minutos, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue templada con 5 mi de agua y diluida con 25 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo como un aceite amarillo pálido que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 1 :0 a 3:1 en 10 CV; entonces 3:1 para 5 CV; entonces de 3:1 a 1 :1 en 5 CV; entonces 1 :1 para 5 CV; columna de Sílice de 10g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título como un aceite sin color (49.7 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.14 (1 H, t), 6.79 (1 H, d), 6.64 (1 H, d), 5.51 (1 H, br. s.), 5.37 - 5.45 (1 H, m), 5.16 (1 H, dd), 5.07 (1 H, d), 1.99 - 2.15 (1 H, m), 1.78 - 1.92 (1 H, m), 0.91 - 1.00 (3 H, m). UPLC-MSjpqc: 0.77 min, 163 [M-H]-.
Intermediario 107 2-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxn-5-nitropiridina En un frasco de microondas 0.5-2.0 mi 3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-ol (Intermediario 106, 49.7 mg) fue disuelto en N,N-dimetilformamida (1.5 mi) para dar una solución amarilla pálida. 2-cloro-5-nitropiridina (48.0 mg, 0.303 mmoles) y carbonato de potasio (125 mg, 0.908 mmoles) fueron agregados. El recipiente de reacción fue sellado y calentado en un iniciador de microondas Biotage a 1 10 °C por 1 hora. Después de enfriar, la reacción se completó. La mezcla de reacción entonces fue templada con 5 mi de agua y diluida con 25 mi de Et20. La fase acuosa fue extraída con 3x10 mi de Et20. Las fases orgánicas recolectadas fueron pasadas por un cartucho separador de fase y evaporadas bajo vacio para dar el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (97.6 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.05 (1 H, d), 8.51 (1 H, dd), 7.37 (1 H, t), 7.16 (1 H, d), 7.06 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 5.16 - 5.25 (2 H, m), 5.13 (1 H, d), 1.77 - 1.90 (1 H, m), 1.60 - 1.72 (1 H, m), 0.82 - 0.91 (3 H, m). UPLC_B: 0.90 min, 287 [M+H]+.
Intermediario 108 6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinamina En un matraz de fondo redondo de 50 mi 2-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-5-nitropiridina (Intermediario 107, 97.6 mg) fue disuelto en etanol (10 mi) para dar una solución amarilla pálida. Pd/C (26.1 mg, 0.245 mmoles) e hidrato de hidrazina (12.29 mg, 0.245 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a 90° C. Después de 45 minutos, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue filtrada y la fase orgánica fue evaporada bajo vacío proporcionando el producto crudo que fue cargado en un cartucho de SCX de 2g. Entonces fue limpiado con 15 mi de metanol seguido por 15 mi de una solución 2M de amoniaco en metanol. El eluato del amoniaco fue evaporado bajo vacío sin proporcionar nada. El eluato del metanol entonces fue evaporado bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.70 (1 H, d), 7.24 (1 H, t), 7.09 (1 H, dd), 6.99 (1 H, d), 6.87 (1 H, d), 6.75 (1 H, d), 5.21 - 5.29 (1 H, m), 5.17 (1 H, dd), 5.09 (1 H, d), 3.57 (2 H, br. s.), 1.88 - 2.04 (1 H, m), 1.68 - 1.82 (1 H, m), 0.89 (3 H, t). UPLC_B: 0.71 min, 257 [M+H]+.
Intermediario 109 ((1 R)-1-f((6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi1-3-pirid¡nil)amino)carbonillpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo En un frasco de 8 mi 6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 108, 10 mg) fue disuelto en N,N-dimetilformamida (1 mi) para dar una solución sin color. DIPEA (10.22 µ?_, 0.059 mmoles), ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (9.52 mg, 0.047 mmoles), y por último TBTU (15.03 mg, 0.047 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue sacudida a 60° C. Después de sacudir por la noche, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para dar el producto crudo como un aceite amarillo que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclonexano/EtOAc como eluyentes de 2:1 a 1 : 1 en 10 CV; entonces 2:1 para 5 CV; columna de Sílice de 10g-SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título como un aceite sin color (12.7 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.40 (1 H, br. s.), 8.15 - 8.18 (1 H, m), 8.08 - 8.14 (1 H, m), 7.30 (1 H, t), 7.05 (1 H, d), 6.95 (1 H, d), 6.88 (1 H, d), 5.20 - 5.26 (1 H, m), 5.17 (1 H, dd), 5.10 (1 H, d), 4.99 (1 H, br. s.), 4.05 - 4.19 (1 H, m), 1.82 - 2.08 (2 H, m), 1.64 - 1.79 (2 H, m), 1.47 (9 H, s), 1.03 (3 H, t), 0.88 (3 H, t). UPLC_B: 0.91 min, 442 [M+H]+.
Intermediario 1 10 (2R)-2-amino-N-(6-r(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxil-3-piridiniDbutanamida En un matraz de fondo redondo de 50 mi {(1 R)-1-[({6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 109, 12.7 mg) fue disuelto en diclorometano (3 mi) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0° C. TFA (1.5 mi, 19.47 mmoles) fue agregado a esa temperatura. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 1 hora, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío proporcionando el producto crudo que fue cargado en un cartucho de SCX de 2g. Entonces fue limpiado con 15 mi de MeOH seguido por 15 mi de una solución de amoniaco en MeOH (2M). El eluato del amoniaco fue evaporado bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un aceite sin color (9.0 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.59 (1 H, br. s.), 8.18 - 8.28 (2 H, m), 7.30 (1 H, t), 7.05 (1 H, d), 6.95 (1 H, d), 6.90 (1 H, d), 5.21 - 5.26 (1 H, m), 5.18 (1 H, dd), 5.10 (1 H, d), 3.50 (1 H, dd), 1.79 - 2.07 (4 H, m), 1.62 - I .78 (2 H, m), 1.04 (3 H, t), 0.88 (3 H, t); UPLC_B: 0.72 min, 342 [M+H]+.
Intermediario 1 1 1 3-metil-5-(metiloxi)-2/-/-cromen-2-ona A una solución de 2-hidroxi-6-(metiloxi)benzaldehído (3 g, 19.72 mmoles) en ?,?-dimetilformamida seca (30 mi), anhídrido propanoico (12.98 mi, 101 mmoles) y K2CO3 (3.00 g, 21.69 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue calentada a 70° C. A esta temperatura agua (0.036 mi, 1.972 mmoles) fue agregada y la mezcla de reacción fue calentada a 120°C y agitada por la noche bajo nitrógeno. La reacción entonces fue templada con 60 mi de agua. Un precipitado fue formado y el material crudo fue filtrado, el sólido se disolvió en DCM/agua y las dos fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (3.25 g, 85 % rendimiento).
H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.91 (1 H, s), 7.37 (1 H, t), 6.92 (1H, d), 6.71 (1 H, d), 3.94 (3H, s), 2.22 (3H, s); UPLCjpqc: 0.95 min, 191 [M+H]+.
Intermediario 112 5-hidroxi-3-metil-2H-cromen-2-ona A una solución de 3-metil-5-(met¡loxi)-2/-/-cromen-2-ona (Intermediario 1 1 1 , 2.5 g) en diclorometano seco (45 mi) enfriado a 0°C fue agregado BBr3 (39.4 mi, 39.4 mmoles). La mezcla de reacción fue calentada a temperatura ambiente y agitada a temperatura ambiente por la noche bajo nitrógeno. La reacción entonces fue enfriada a 0°C y templada con hielo. La mezcla obtenida fue diluida con éter dietilico y las dos fases obtenidas fueron separadas por un embudo de separación. La fase acuosa fue retro-extraída con éter dietilico. Las fases orgánicas recolectadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas bajo vacío para dar el compuesto del título como un sólido marrón claro (2.225 g). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.92 (1 H, s), 7.30 (1 H, t), 6.93 (1 H, d), 6.67 (1 H, d), 5.54 (1 H, s), 2.26 (3H, s); UPLCjpqc: 0.70 min, 177 [M+HJ+.
Intermediario 1 13 3-metil-5-{[(metiloxi)metilloxi)-2H-cromen-2-ona A una solución de 5-hidroxi-3-metil-2/-/-cromen-2-ona (Intermediario 1 12, 2.225 g) en ?,?-Dimetilformamida seca (60 mi) enfriada a 0°C fue agregado hidruro de sodio (60%, 0.532 g, 13.89 mmoles) seguido por la adición de cloro (metiloxi) metano (1.919 mi, 25.3 mmoles). La mezcla de reacción fue calentada a temperatura ambiente y agitada por 30 minutos bajo nitrógeno. Entonces fue templada por la adición de una solución saturada de NH4CI, el producto fue extraído con éter dietílico, lavado con salmuera, secado sobre sulfato de sodio, filtrado y concentrado bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage, con un gradiente de ciciohexano puro a ciclohexano/acetato de etilo 5/1 ) para dar el compuesto del titulo como un sólido blanco (2.15 g).
H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.94 (1 H, s), 7.38 (1 H, t), 6.93 - 7.05 (2H, m), 5.33 (2H, s), 3.55 (3H, s), 2.26 (3H, s); UPLCjpqc: 0.94 min, 221 [M+H]+.
Intermediario 1 14 Mezcla 3:1 de 2-[3-hidroxi-2-metil-1-propen-1-¡n-3- {[(metiloxi)metilloxi)fenol y. 2-(3-hidroxi-2-metilpropil)-3- (metiloxi)metil|oxi)fenol En un matraz de fondo redondo de 50 mi 3-metil-5-{[(metiloxi)metil]oxi}-2H-cromen-2-ona (Intermediario 1 13, 461.1 mg) fue disuelto en tetrahidrofurano (3 mi) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de LiAIH4 (1 M/THF, 4.19 mi, 4.19 mmoles) entonces fue agregada por goteo. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 30 minutos, la mezcla de reacción fue templada con 5 mi de ácido clorhídrico (2M) y diluida con 10 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar una mezcla 3:1 de 2-[3-hidroxi-2-metil-1-propen-1-il]-3-{[(metilox¡)met¡l]oxi}fenol y 2-(3-hidroxi-2-metilpropil)-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (548 mg) como un aceite amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) componente principal de la mezcla d ppm 7.11 (1 H, t), 6.67 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 6.08 - 6.16 (1 H, m), 5.81 (1 H, br. s.), 5.15 (2 H, s), 4.74 (1 H, br. s.), 4.00 (2 H, s), 3.47 (3 H, s), 2.08 (3 H, d); H NMR (400 MHz, CDCI3) componente menor de la mezcla d ppm 7.05 (1 H, t), 6.97 (1 H, br. s ), 6.66 (1 H, d), 6.58 (1 H, d), 5.19 (2 H, s), 3.51 - 3.59 (1 H, m), 3.49 (3 H, s), 3.41 - 3.49 (1 H, m), 2.78 (1 H, dd), 2.66 (1 H, dd), 2.13 (1 H, br. s.), 1.94 - 2.07 (1 H, m), 1.09 (3 H, d); UPLC-MS_¡pqc: componente principal de la mezcla: 0.70 min, 223 [M-H]-; componente menor de la mezcla: 0.78 min, 225 [M-H]-.
Intermediario 1 15 2-(3-hidroxi-2-metilpropil)-3-f[(metiloxi)met¡noxi)fenol En un matraz de fondo redondo de 100 mi una mezcla 3:1 de 2-[3-hidroxi-2-metil-1-propen-1 -il]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol y 2-(3-hidroxi-2-metilpropil)-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (Intermediario 114, 548 mg) fue disuelta en metanol (10 mi) para dar una solución sin color. Tres ciclos de vacio/N2 fueron realizados luego Pd/C (129 mg, 0.122 mmoles) fue agregado a la mezcla de reacción. De nuevo tres ciclos de vacío/N2 fueron realizados antes de tres ciclos de vacio/H2. Por último, la mezcla de reacción fue dejada agitar a temperatura ambiente en atmósfera de H2 (sin presión). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente. Después de 1 h30min la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue filtrada sobre una almohadilla de celite. El filtrado fue evaporado bajo vacío proporcionando el producto crudo que fue purificado en el sistema de Biotage SP1 con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 1 :0 a 5:1 en 10 CV; entonces 5:1 para 5 CV; entonces de 5:1 a 3:1 en 5 CV; entonces 3:1 para 5 CV; entonces de 3:1 a 1 :1 en 5 CV; entonces 1 : 1 para 5 CV (columna de Sílice de 25g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título como un aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.05 (1 H, t), 6.97 (1 H, br. s.), 6.66 (1 H, d), 6.58 (1 H, d), 5.19 (2 H, s), 3.51 - 3.59 (1 H, m), 3.49 (3 H, s), 3.41 - 3.49 (1 H, m), 2.78 (1 H, dd), 2.66 (1 H, dd), 2.13 (1 H, br. s.), 1 94 -2.07 (1 H, m), 1.09 (3 H, d). UPLC-MS_¡pqc: 0.79 min, 225 [M-H]-.
Intermediario 116 3-metil-5-{f(metiloxi)metilloxi)-3,4-dihidro-2H-cromeno En un matraz de fondo redondo de 50 mi bajo argón, 2-(3-hidroxi-2-metilpropil)-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (Intermediario 15, 377.9 mg) fue disuelto en tetrahidrofurano (5 mi) para dar una solución sin color. TEA (0.409 mi, 2.93 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. A esa temperatura cloruro de metanosulfonilo (0.124 mi, 1.591 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 45 minutos, cloruro de metanosulfonilo adicional (0.124 mi, 1.591 mmoles) fue agregado. Después de otros 45 minutos, 2-metil-2-propanolato de potasio (422 mg, 3.76 mmoles) fue agregado. Después de 15 minutos de esta última adición, 2-metil-2-propanolato de potasio adicional (422 mg, 3.76 mmoles) fue agregado. Después de 15 minutos la reacción fue completada. La reacción entonces fue templada con 10 mi de una solución acuosa saturada de NH4CI, acidificada hasta pH~ 2 con ácido clorhídrico 2M y diluida con 25 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el compuesto del titulo.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.04 (1 H, t), 6.63 (1 H, d), 6.53 (1 H, d), 5.21 (2 H, s), 4.13 - 4.19 (1 H, m), 3.60 - 3.71 (1 H, m), 3.50 (3 H, s), 2.84 - 2.95 (1 H, m), 2.19 - 2.30 (1 H, m), 2.04 - 2.18 (1 H, m), 1.08 (3 H, d); UPLC-MS_ipqc: 1.16 min, 209 [M+H]+.
Intermediario 1 17 3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-ol En un frasco de 8 mi 3-metil-5-{[(metiloxi)metil]oxi}-3,4-dihidro-2H-cromeno (Intermediario 116, 103.6 mg) fue disuelto en metanol (3 mi) para dar una solución sin color. Una solución 2M/H20 de HCI (0.224 mi, 0.448 mmol) fue agragada. La mezcla de reacción fue sacudida a 60°C. Después de 2h30min, la mezcla de reacción fue diluida con 10 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 1 :0 a 5:1 en 10 CV; entonces 5:1 para 5 CV; entonces de 5:1 a 3:1 en 5 CV; (columna de Sílice de 10g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título como un sólido blanco (53.0 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 6.96 (1 H, t), 6.46 (1 H, d), 6.35 (1 H, dd), 4.79 (1 H, s), 4.10 - 4.22 (1 H, m), 3.61 - 3.73 (1 H, m), 2.78 -2.90 (1 H, m), 2.19 - 2.30 (1 H, m), 2.16 (1 H, d), 1.09 (3 H, d). UPLC-MSjpqc: 0.90 min, 165 [M+H]+.
Intermediario 1 18 2-f(3-met¡l-314-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi1-5-nitropirid¡na En un frasco de microondas, 3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-ol (Intermediario 117, 53 mg), carbonato de potasio (134 mg, 0.968 mmoles) y 2-cloro-5-nitropiridina (51.2 mg, 0.323 mmoles) fueron disueltos en N,N-dimetilformamida (2 mi) para dar una solución marrón claro. El recipiente de reacción fue sellado y calentado en Iniciador Biotage a 1 10 °C por 1 hora. Después de enfriar, la mezcla de reacción fue templada con 5 mi de agua y diluida con 10 mi de Et20. Las fases fueron separadas por un embudo de separación. La fase acuosa fue extraída con 3x10 mi de Et20. La fase orgánica completa fue secada utilizando una frita hidrófoba y evaporada bajo vacío para dar el compuesto del título como un aceite marrón (181 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.06 (1 H, d), 8.48 (1 H, dd), 7.17 (1 H, t), 7.02 (1 H, d), 6.80 (1 H, d), 6.66 (1 H, dd), 4.16 - 4.24 (1 H, m), 3.63 - 3.75 (1 H, m), 2.62 - 2.74 (1 H, m), 2.04 - 2.18 (2 H, m), 1.00 (3 H, d). UPLC_B: 0.95 min, 287 [M+H]+.
Intermediario 1 19 6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi1-3-piridinamina En un matraz de fondo redondo de 50 mi 2-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-5-nitropiridina (Intermediario 1 18, 181 mg) fue disuelto en etanol (10 mi) para dar una solución amarilla pálida. Pd/C (33.0 mg, 0.031 mmoles) e hidrato de hidrazina (0.030 mi, 0.310 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 90° C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción fue filtrada y fue evaporada bajo vacío para dar el compuesto del titulo (131.4 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.72 (1 H, d), 7.02 - 7.13 (2 H, m), 6.72 (1 H, d), 6.65 (1 H, d), 6.51 (1 H, dd), 4.1 1 - 4.20 (1 H, m), 3.67 (1 H, s), 3.52 (2 H, br. s.), 2.81 - 2.89 (1 H, m), 2.16 - 2.25 (1 H, m), 2.05 - 2.16 (1 H, m), 1.02 (3 H, d). UPLC_B: 0.75 min, 257 [M+H]+.
Intermediario 120 H .1-dimetil-2-((6-r(3-metil-3.4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxil-3-piridinil)amino)-2-oxoetil1carbamato de 1 ,1-dimetiletilo En un frasco de 8 mi 6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 1 19, 131.4 mg) fue disuelto en ?,?-dimetilformamida (2 mi) para dar una solución amarilla pálida. DIPEA (0.215 mi, 1.230 mmoles), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (188 mg, 0.923 mmoles) y HATU (351 mg, 0.923 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue sacudida a 60° C. Después de 3 horas, la mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para dar el producto crudo que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclonexario/EtOAc como eluyentes de 3:1 a 1 :2 en 15 CV¡ entonces 1 :2 para 5 CV; columna de Sílice de 25g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el título como un sólido blanco (104.0 mg). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9.58 (1 H, br. s.), 8.29 (1 H, br. s ), 7.97 - 8.13 (1 H, m), 7.08 (1 H, t), 7.00 (1 H, br. s.), 6.93 (1 H, d), 6.63 (1 H, dd), 6.53 (1 H, dd), 4.08 - 4.17 (1 H, m), 3.62 (1 H, dd), 2.58 - 2.71 (1 H, m), 1.92 - 2.13 (2 H, m), 1.36 (15 H, br. s.), 0.93 (3 H, d). UPLC_B: 0.91 min, 442 [M+H]+.
Intermediario 121 2-metil-N1-(6-i(3-metil-3.4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxil-3-piridiniDalaninamida En un matraz de fondo redondo de 50 mi [1 ,1-dimetil-2-({6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}amino)-2-oxoetil]carbamato de ,1-dimetiletilo (Intermediario 120, 104.0 mg) fue disuelto en diclorometano (6 mi) para dar una solución amarilla pálida. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y TFA (2 mi, 26.0 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0° C. Después de 2h 30 min, la mezcla fue evaporada bajo vacio para dar el producto crudo que fue cargado en un cartucho de SCX de 5g. Entonces fue limpiado con 40 mi de metanol seguido por 40 mi de una solución 2M de amoniaco en metanol. El eluato del amoniaco fue evaporado bajo vacío para dar el compuesto del título como un aceite sin color (72.6 mg). H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.90 (1 H, br. s.), 8.17 - 8.26 (2 H, m), 7.10 (1 H, t), 6.84 (1 H, d), 6.70 (1 H, d), 6.56 - 6.62 (1 H, m), 4.12 -4.22 (1 H, m), 3.67 (1 H, t), 2.70 - 2.85 (1 H, m), 2.13 (2 H, s), 1.47 (6 H, s), 1.00 (3 H, d), NH2 Missed. UPLC_B: 0.78 min, 342 [M+H]+.
Intermediario 122 1a-metil-7-([(metiloxi)metilloxi)- a,7b-dihidrociclopropa[Clcromen-2(1 H) -ona A una solución de yoduro de trimetilsulfoxonio (4.52 g, 20.55 mmoles) en sulfóxido de dimetilo seco (50 mi) agitado bajo nitrógeno a temperatura ambiente fue agregado hidrurode sodio puro (60%, 0.822 g, 20.55 mmoles). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 1 hora antes de agregar 3-metil-5-{[(metiloxi)metil]oxi}-2H-cromen-2-ona (Intermediario 1 13, 1.81 g) disuelto en 15 mi de DMSO. La mezcla de reacción se volvió amarilla y fue calentada y fue agitada a 100°C por 4h. La reacción entonces fue trabajada por la adición de una solución saturada de NH4CI y extraída con éter díetílico, lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage, con un gradiente de ciciohexano puro a ciciohexano/acetato de etilo 5/1) para dar el compuesto del titulo como un sólido blanco (360 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.10 (1 H, t), 6.88 (1 H, d), 6.67 (1 H, d), 5.26 (2H, s), 3.53 (3H, s), 2.71 (1 H, dd), 1.58 (1 H, dd), 1.44 (3H, s), 1.08 (1 H, t); UPLCjpqc: 0.96 min, 235 [M+H]+.
Intermediario 123 2-[2-(hidrox¡metil)-2-met¡lciclopropin-3-([(metiloxi)metilloxi)fenol A una solución de 1a-metil-7-{[(metiloxi)metil]oxi}- a,7b-dihidrociclopropa[c]cromen-2(1 H)-ona (Intermediario 122, 360 mg) en tetrahidrofurano seco (15 mi) agitada bajo nitrógeno a 0°C fue agregada una solución de hidruro de litio y aluminio (1.0M de THF, 1.537 mi, 1.537 mmoles) y la mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura durante 20 minutos. La mezcla de reacción se diluyó entonces con THF (20ml) y templada con la adición de a2SO4.10H2O (10eq) dejando la mezcla bajo agitación durante 30 minutos. La reacción fue diluida con acetato de etilo, secada sobre Na2S04, filtrada y concentrada bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciciohexano/acetato de etilo 5/1 a ciciohexano/acetato de etilo 1/1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (307 mg). 1RMN H (400 Hz, CDCI3) : ppm 7,40 (1 H, br. S.), 7,06 (1 H, T), 6,67 (1 H, D), 6,59 (1 H, D), 5,12 - 5,27 (2H, M), 3,57 - 3,68 (1 H, M), 3,53 (3H, la s), 3,42 - 3,51 (1 H, M), 2,98 (1 H, D), 1 ,54 (1 H, dd), 1 ,41 (3H, la s), 1 ,05 (1 H, dd), 0,86 (1 H, dd); UPLCjpqc: 0.73 min, 237 [M-H]+.
Intermediario 124 1 a-metil-7-([(metiloxi)metilloxi)-1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropafclcromeno A una solución de 2-[2-(hidroximetil)-2-metilciclopropil]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenol (Intermediario 123, 307 mg) en tetrahidrofurano seco (10 mi) fue agregado trifenilfosfina (338 mg, 1.288 mmoles) y bis(l-metiletil) (E)-1 ,2-diazendicarboxilato (261 mg, 1.288 mmoles). La reacción se volvió amarilla y fue agitada durante 20 minutos a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Entonces el solvente fue evaporado bajo vacío para dar el producto crudo como un aceite amarillo pálido. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciclohexano puro a ciclohexano/acetato de etilo 10/1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (280 mg). 1H RMN (400 Hz, CDCI3): d ppm 6.97 (1 H, t), 6.73 (1 H, d), 6.53 (1 H, d), 5.15 - 5.30 (2H, m), 4.17 (1 H, d), 3.67 (1 H, d), 3.54 (3H, s), 2.15 (1 H, dd), 1.27 (3H, s), 1.20 (1 H, t), 0.94 (1 H, dd); UPLCjpqc: 1.15 min, 221 [M+H]+.
Intermediario 125 1 a-metil- , 1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[Clcromen-7-ol A una solución de 1a-metil-7-{[(metiloxi)metil]oxi}-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromeno (Intermediario 124, 280 mg) en metanol (16 mi) una solución acuosa 2.0M de HCI (1.271 mi, 2.54 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue agitada a 50°C durante 2 horas y entonces a temperatura ambiente por la noche en cuyo momento la reacción todavía mostró algún material de partida sin reaccionar, por lo tanto más HCI 2.0 M fue agregado (2 eq). y la agitación fue continuada a 50°C durante 2 horas. La mezcla de reacción entonces fue templada con agua y diluida y extraída con diclorometano, lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciclohexano puro a ciclohexano/acetato de etilo 5/1 ) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (192 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 6.91 (1 H, t), 6.40 - 6.53 (2H, m), 5.00 (1 H, s), 4.18 (1 H, d), 3.72 (1 H, d), 2.00 (1 H, dd), 1.29 (3H, s), 1.20 (1 H, t), 0.98 (1 H, dd); UPLCjpqc: 0.91 min, 177 [M+H]+.
Intermediario 126 2-[(1 a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropafC1cromen-7-il)oxn-5-nitropiridina A una solución de 1a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-ol (Intermediario 125, 190 mg) en N,N-dimetilformamida seca (10 mi) fueron agregados K2CO3 (447 mg, 3.23 mmoles) y 2-cloro-5-nitropiridina (171 mg, 1.078 mmoles) para dar una solución marrón claro. La reacción fue calentada a 1 10°C durante 1 hora y entonces templada con agua, extraída con acetato de etilo, lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciciohexano puro a ciciohexano/acetato de etilo 5/1 ) para dar el compuesto del título como un sólido marrón claro (250 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.12 (1 H, d), 8.51 (1 H, dd), 7.12 (1 H, t), 7.04 (1 H, d), 6.81 (1 H, d), 6.75 (1 H, dd), 4.22 (1 H, d), 3.74 (1 H, d), 1.73 (1 H, dd), 1.23 (1 H, t), 1.21 (3H, s), 0.85 (1 H, dd); UPLCjpqc: 1.21 min, 299 [M+H]+.
Intermediario 127 6-[(1 a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[Clcromen-7-il)oxi1-3-piridinamina A una solución de 2-[(1a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-5-nitropiridina (Intermediario 126, 250 mg) en tetrahidrofurano (6 ml)/agua (3 mi) fueron agregados hierro (234 mg, 4.19 mmoles) y cloruro de amonio (224 mg, 4.19 mmoles). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por la noche en cuyo momento UPLC mostró formación parcial del compuesto objetivo con algo de intermediario de hidroxil-amina, por lo tanto 3 equivalentes adicionales de cloruro de amonio y hierro fueron agregados y la reacción fue dejada agitando por otras 5 horas. El hierro entonces fue filtrado sobre una almohadilla de celite y la solución fue diluida con una solución saturada acuosa de NaHC03 (100 mi) y acetato de etilo (200ml). Dos fases fueron separadas y la capa acuosa fue extraída con acetato de etilo. Las capas orgánicas fueron combinadas, secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente del ciclohexa no/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1) para dar el compuesto del título como un sólido marrón claro (150 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 7.75 (1 H, d), 7.08 (1 H, dd), 6.99 (1 H, t), 6.73 (1 H, d), 6.64 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 4.17 (1 H, d), 3.70 (1 H, d), 3.50 (2H, br. s.), 2.00 (1 H, dd), 1.17 - 1.23 (4H, m), 0.85 (1 H, dd); UPLCjpqc: 0.88 min, 269 [M+H]+.
Intermediario 128 [1.1 -dimetil-2-f (6-f ( 1 a-metil- 1.1 a.2 ,7b-tetrahidrociclopropa[c1cromen-7-il)oxil-3-piridinil)amino)-2-oxoetil1carbamato de 1.1-dimetiletilo A una solución de 6-[(1 a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 127, 150 mg) en ?,?-dimetilformamida seca (10 mi) DIPEA (0.352 mi, 2.013 mmoles), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (307 mg, 1.509 mmoles) y HATU (574 mg, 1.509 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue calentada a 60°C por 2.5 horas. La fase orgánica fue lavada con salmuera saturada, extraída con éter dietílico, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y concentrada bajo vacio. El residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 ) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (135 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.17 (1 H, d), 8.13 (1 H, dd), 7.03 (1 H, t), 6.86 (1 H, d), 6.69 (2 H, t), 5.86 (1 H, br. s.). 4.89 (1 H, br. s.), 4.18 (1 H, d), 3.71 (1 H, d), 1.90 (1 H, dd), 1.60 (6H, s), 1.45 (9H, s), 1.15 - 1.23 (4H, m), 0.84 (1 H, dd); UPLCjpqc: 1.18 min, 454 [M+H]+.
Intermediario 129 2-metil-A/ -(6-[(1a-metil-1 ,1a,2l7b-tetrahidrociclopropa[clcromen- 7-il)oxfl-3-piridinil)alaninamida A una solución de [1 ,1-dimetil-2-({6-[(1 a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-3-piridinil}amino)-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 128, 135 mg, 0.298 mmoles) en diclorometano seco (10 mi) a 0°C TFA (5 mi, 64.9 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a la misma temperatura. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue disuelto en diclorometano y una solución saturada de NaHC03 fue agregada lentamente mientras el pH fue permitido alcanzar 8. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título como un aceite sin color utilizado tal cual sin más purificación (105 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.94 (1 H, br. s.), 8.19 - 8.30 (2H, m), 7.03 (1 H, t), 6.85 (1 H, d), 6.70 (1 H, d), 6.67 (1 H, d), 4.18 (1 H, d), 3.71 (1 H, d), 1.91 (1 H, dd), 1.72 (2H, br. s.), 1.48 (6H, s), 1.15 - 1.23 (4H, m), 0.84 (1 H, dd); UPLCjpqc: 0.76 min, 354 [M+1]+.
Intermediario 130 (2-gr(1.1-dimetiletil)(dimetil)sililloxi)metil)-6-(f(metiloxi)met¡noxi)fenil)(oxo)acetato de etilo A · una solución de (1 , 1-dimetiletil)(dimetil){[(3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metil]oxi}silano (Intermediario 103, 3 g) en N-hexano seco (30 ml_) una solución de BuLi en hexano (1.6M, 7.63 mL, 12.21 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue enfriada a -78°C y fue agregada (a través de canulación) a una solución de cloro(oxo) acetato de etilo (1.780 mL, 15.93 mmoles) en tetrahidrofurano seco (20 mL) a -78°C. La reacción fue templada con agua (20 mi) y extraída con acetato de etilo (2x30ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciciohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes. Esto proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (2.67 g). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.53 (1 H, t), 7.20 (1 H, d), 7.15 (1 H, d), 5.21 (2H, s), 4.76 (2H, s), 4.27 (2H, q), 3.34 (3H, s), 1.27 (3H, t), 0.86 (9H, s), 0.05 (6H, s).
Intermediario 131 Dimetiltitanoceno f F A una suspensión de diclorotitanoceno (8.3 g, 33.3 mmoles) en tolueno seco (100 mL) a -10°C una solución de metillitio en Et20 (1.6M, 47.3 mL, 76 mmoles) fue agregada lentamente (20 minutos) y la mezcla de reacción fue agitada durante 45 minutos a la misma temperatura. La mezcla de reacción fue agregada (a través de canulación) a una solución de cloruro de amonio (1.2g) en agua (24 mi) enfriada a -10°C. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con agua fresca (3x20ml) y salmuera (1x20ml), secada sobre sulfato de sodio filtrada y concentrada bajo presión reducida a 60 mi conteniendo 9 % p/p de dimetiltitanoceno (5.04 g, 24 mmoles) en tolueno. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 6.10 (10H, s), -0.11 (6H, s).
Intermediario 132 2-(2-g[(1 ,1-dimetiletil)(dimetil)sililloxi)metil)-6-([(metiloxi)metilloxi)fenil)-2-propenoato de etilo A una solución de (2-({[(1 ,1-dimetiletil)(dimetil)silil]oxi}metil)-6-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)(oxo)acetato de etilo (Intermediario 130, 1.4 g) en tolueno seco (8 mi) titanoceno de dimetilo 9% p/p en tolueno (Intermediario 131 , 30 mi) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 1.5 horas a 90°C. Después de enfriar la reacción fue diluida con agua (20 mi) y acetato de etilo (30ml). Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes. Esto proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo pálido (865 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.30 (1 H, t), 7.12 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 6.46 (1 H, d), 5.74 (1 H, d), 5.12 (2H, s), 4.54 (2H, s), 4.12 (2H, q), 3.32 (3H, s), 1.16 (3H, t), 0.88 (9H, s), 0.04 (6H, s); UPLCJPQC: 1.54 min, 381 [M+HJ+.
Intermediario 133 1 -(2-(fr(1.1-dimetiletil)(dimetil)sililloxi)metil)-6-(f(metiloxi)metinoxi)fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo A una solución de yoduro de Trimetilsulfoxonio (816 mg, 3.71 mmoles) en sulfóxido de dimetilo seco (10 ml_) NaH 60% de disp en aceite mineral (140 mg, 3.49 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a temperatura ambiente. Una solución de 2-(2-({[(1 ,1-dimetiletil)(dimetil)silil]oxi}metil)-6-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)-2-propenoato de etilo (Intermediario 132, 830 mg) en sulfóxido de dimetilo seco (5 ml_) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reacción fue templada con hielo, diluida con salmuera (10 mi) y agua (10 mi) y extraída con acetato de etilo (2x30ml). La capa orgánica fue lavada con agua (3x15ml) y salmuera (1x20ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 50g SNAP y ciclohexano a ciclohexa no/acetato de etilo 7:3 como eluyente. Esto proporcionó el compuesto del título como un aceite sin color (780 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6, 65°C): d ppm 7.25 (1 H, t), 7.12 (1 H, d), 6.98 (1 H, d), 5.19 (2H, s), 4.78 (2H, br.s), 4.01 (2H, q), 3.41 (3H, s), 1.55-1.65 (2H, m), 1.13-1.21 (2H, m), 1.08 (3H, t), 0.94 (9H, s), 0.1 1 (6H, s); UPLCJPQC: 1.57 min, 395 [M+HJ+.
Intermediario 134 (2-[1-(hidroximetil)ciclopropill-3-{[(metiloxi)metinoxi)fenil)metanol A una solución de 1-(2-({[(1 ,1-dimetiletil)(dimetil)silil]oxi}metil)-6-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)ciclopropanocarboxilato de etilo (Intermediario 133, 780 mg) en tetrahidrofurano seco (20 mi) a 0°C, una solución de LÍAIH4 en THF (1 M, 2.076 mL, 2.076 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10ml) y salmuera (10ml) y diluida con acetato de etilo (30ml). El sólido fue filtrado y dos fases fueron separadas. La capa acuosa fue extraída con acetato de etilo (30 mi) y las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtrados y evaporado a proporcionar el alcohol intermedio como un aceite sin color. Fue disuelto en tetrahidrofurano seco (20.00 mL) y solución de TBAF 1 M en THF (2.076 mL, 2.076 mmoles) fue agregado lentamente a 0o C. La mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10ml) y salmuera (10ml) y extraída con acetato de etilo (2x30ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 50g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 7:3 a 3:7. Esto proporcionó el compuesto del título (450 mg) como un sólido blanco cristalino. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.16 (1 H, t), 7.07 (1 H, d), 6.92 (1 H, d), 5.17-5.24 (2H, m), 5.00 (1 H, t), 4.67-4.74 (3H, m), 3.65-3.76 (1 H, m), 3.41 (3H, s), 3.1 1-3.21 (1 H, m), 0.83-0.94 (2H, m), 0.65-0.77 (1 H, m), 0.51-0.61 (1 H, m).
Intermediario 135 5-(r(metiloxi)met¡lloxi)-1 /- -espiror2-benzopiran-4,1'-ciclopropanol A una solución de (2-[1-(hidroximetil)ciclopropil]-3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metanol (Intermediario 134, 450 mg) en tetrahidrofurano seco (10 mi) a 0°C, una solución de BuLi en hexano (1.6M, 1.180 mL, 1.889 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. Una solución de cloruro de tosilo (360 mg, 1.889 mmoles) en tetrahidrofurano seco (5 mi) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a 0°C. Un segundo equivalente de una solución de BuLi en hexano (1.6M, 1.180 mL, 1.889 mmoles) fue agregada y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de NaHC03 (10 mi) diluida con agua (10 mi) y extraída con acetato de etilo (2x30ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna de 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100:0 a 8:2. Esto proporcionó el compuesto del título 5-{[(metiloxi)metil]oxi}-1 H-espiro[2-benzopíran-4,1'-ciclopropano] como un aceite sin color (385 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.04 (1 H, t), 6.83 (1 H, d), 6.68 (1 H, d), 5.1 1 (2H, s), 4.75 (2H, s), 3.49 (2H, s), 3.37 (3H, s), 1 .64-1 .70 (2H, m), 0.56-0.61 (2H, m).
Intermediario 136 1 - -espiro[2-benzopiran-4, 1 '-ciclopropanl-5-ol A una solución de 5-{[(metiloxi)metil]oxi}-1 H-espíro[2-benzopiran-4,1'-ciclopropano] (Intermediario 135, 380 mg) en metanol (10 mL) HCI 10% en agua (1.048 mL, 3.45 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50°C. Los solventes combinados fueron evaporados y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100:0 a 8:2. Esto proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (260 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.18 (1 H, s), 6.88 (1 H, t), 6.56 (1 H, d), 6.47 (1 H, d), 4.71 (2H, s), 3.47 (2H, s), 1.69-1.74 (2H, m), 0.47-0.52 (2H, m).
Intermediario 137 5-nitro-2-(1/-/-espiro[2-benzopiran-4,1 '-ciclopropanl-5-iloxi)piridina A una solución de 1 H-espiro[2-benzopiran-4,1 '-ciclopropan]-5-ol (Intermediario 136, 150 mg) en ?,?-dimetilformamida seca (4 mi) carbonato de potasio (176 mg, 1.277 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropiridina (148 mg, 0.936 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por 1 h a 1 10°C. Después de enfriar la reacción fue templada con salmuera (1 ml), diluida con agua (5 mi) y extraída con acetato de etilo (3x15ml). La capa orgánica fue lavada con salmuera enfriada en hielo (2x1 Oml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100:0 a 7:3. Esto proporcionó el compuesto del título como una goma sin color (240 mg). 1H R N (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.05 (1 H, d), 8.64 (1 H, dd), 7.24 (1 H, d), 7.20 (1 H, t), 7.01 (1 H, d), 6.88 (1 H, d), 4.86 (2H, s), 3.53 (2H, s), 1.23-1.27 (2H, m), 0.63-0.68 (2H, m); UPLCJPQC: 1.08 min, 299 [M+H]+.
Intermediario 138 6-(1H-espirof2-benzopiran-4,1 '-ciclopropan1-5-iloxi)-3-piridinamina A una solución de 5-nitro-2-(1 H-espiro[2-benzopiran-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)pir¡dina (Intermediario 137, 238 mg) en tetrahidrofurano (10 ml_)/agua (5 mL) hierro (223 mg, 3.99 mmoles) y luego cloruro de amonio (213 mg, 3.99 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y la solución fue diluida con una solución saturada acuosa de NaHCO3 y extraída con acetato de etilo (2x30ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 7:3 a 3:7. Esto proporcionó el compuesto del título (180 mg) como un sólido amarillo claro. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 7.51 (1 H, d), 7.07 (1 H, dd), 7.04 (1 H, t), 6.80 (1 H, d), 6.69 (1 H, d), 6.53 (1 H, d), 5.06 (2H, br.s), 4.81 (2H, s), 3.53 (2H, s), 1.49-1.53 (2H, m), 0.58-0.62 (2H, m).
Intermediario 139 S-2-piridinil (2R)-2-((r(1.1-dimetiletinoxi1carbonil)amino)-2-metilbutanetioato A una solución de N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isovalina (100 mg, 0.460 mmoles) en tetrahidrofurano seco (THF) (10 mi) 2,2'-dithiodipiridina (254 mg, 1.151 mmoles) y trifenilfosfina (302 mg, 1.151 mmoles) fueron agregados. La mezcla fue agitada a temperatura ambiente por 3 horas. THF fue evaporado bajo vacío. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g del compuesto del título (78 mg, 0.251 mmoles) como un sólido blanco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6)5 ppm 8.59 (1 H, d), 7.87 (1 H, t), 7.70 (1 H, br.s.), 7.51 (1 H, d), 7.41 (t, 1 H), 2.02-1.84 (1 H, m), 1.74-1.60 (1 H, m), 1.43 (9H, s), 1.33 (3H, s), 0.81 (3H, t).
UPLCJPQC: 1.01 min, 31 1 [M+H]+.
Intermediario 140 [( 1 f?)-1 -metil-1 -(( [6-(1 /-/-espiro[2-benzopiran-4, 1 '-ciclopropanl-5-iloxi)-3-piridinil1amino)carbonil)propillcarbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de 6-(1 H-espiro[2-benzopiran-4,1'-ciclopropan]-5-iloxi)-3-piridinamina (Intermediario 138, mg, 0.242 mmoles) en tolueno seco (4 mL) S-2-piridinil (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-metilbutanetioato (Intermediario 139, 75 mg, 0.242 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a 150°C. Después de enfriar el solvente fue removido bajo presión reducida y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 9:1 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyente proporcionando el compuesto del título como un sólido blanco (64 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 9.63 (1 H, br s), 8.30 (1H, br.s), 8.01-8.16 (1 H, m), 7.11 (1 H, t), 6.87-6.95 (3H, m), 6.69 (1 H, d), 4.83 (2H, s), 3.53 (2H, s), 1.70-1.90 (2H, m), 1.26-1.47 (14H, m), 0.78 (3H, t), 0.58-0.65 (2H, m); UPLCJPQC: 1.14 min, 468 [M+HJ+.
Intermediario 141 A/1-[6-(1 /-/-espiro[2-benzopiran-4,1'-ciclopropan1-5-iloxi)-3-piridinin-D-isovalinamida A una solución de [(1 R)-1-metil-1-({[6-(1 H-espiro[2-benzopiran- 4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-3-pir¡dinil]amino}carbonil)propil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 140, 62 mg) en diclorometano seco (6 ml_) a 0°C TFA (2 mi, 26.0 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a la misma temperatura. La mezcla de reacción fue diluida con diclorometano (15 mi) y una solución saturada acuosa de NaHC03 fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar ~8. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y diclorometano/metanoi como eluyentes de 99:1 a 95:5. Esto proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (42 mg, 86 % rendimiento). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.40 (1 H, d), 8.16 (1 H, dd), 7.1 1 (1 H, t), .94 (1 H, d), 6.90 (1 H, d), 6.69 (1 H, d), 4.84 (2H, s), 3.53 (2H, s), 1.66-1.78 (1 H, m), 1.46-1.58 (1 H, m), 1.37-1.42 (2H, m), 1.24 (3H, s), 0.83 (3H, t), 0.59-0.64 (2H, m); UPLCJPQC: 0.69 min, 368 [M+H]+.
Intermediario 142 f2-((2-r(3.3-dimet¡l-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-5-pirimidinil)amino)-1 , 1 -dimetil-2-oxoetillcarbamato de 1 , 1 -dimetiletilo A una solución de N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (59.2 mg, mL 0.292mmoles) DIPEA(0.068, 0.389 mmoles) y entonces HATU (11 mg, 0.292 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a t.a. 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinamina (Intermediario 65, 50 mg, 0.194 mmoles) entonces fue agregado y mezcla de reacción fue agitada durante 18 horas a 50°C. La reacción fue templada con salmuera (1 ml), diluida con agua (2ml) y extraída con acetato de etilo (2x5ml). La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (31 mg) como un sólido blanco.
UPLC: 0.75 min, 443 [M+H]+.
Intermediario 143 N1-(2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidin¡l)-2-metilalaninamida A una solución de [2-({2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}amino)-1 ,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 142, 30 mg, 0.068 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (1.6 mL) a 0°C TFA (0.4 mi, 5.19 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 1 h a la misma temperatura. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue disuelto en DCM (5 mi) y una solución saturada acuosa de NaHC03 fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar -8-9. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título (20 mg) como un sólido blanco.
UPLC: 0.51 min, 343 [M+H]+.
Intermediario 144 ((1 R)-1-r((2-f(3.3-dimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidinil)amino)carbonill-2-metilpropil)carbamato de ,1-dimetiletilo A una solución de Boc-D-Valina (63.3 mg, 0.292 mmoles) en ?,?-Dimetilformamida (DMF) (2 mL) DIPEA (0.068 ml_, 0.389 mmoles) y entonces HATU (11 1 mg, 0.292 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a t.a. 2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinamina (Intermediario 65, 50 mg, 0.194 mmoles) entonces fue agregado y mezcla de reacción fue agitada durante 5 horas a 50°C. La reacción fue templada con salmuera (1ml), diluida con agua (2ml) y extraída con acetato de etilo (2x5ml). La capa orgánica fue secada (Na2S0 ), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna SNAP 25g y cyclohexano a ciclohexani/acetato de etilo 7:3 como eluyente propocionando el compuesto del título {(1R)-1-[({2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)oxi]-5-p¡rimidinil}amino)carbonil]-2-etilpropil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (55 mg, 0.120 mmoles, 62.0 % rendimiento) como un sólido blanco.
Intermediario 145 (2R)-2-amino-N-f2-[(3.3-dimetil-2H-benzofuran-4-inoxnpirimidin-5-ill-3-metil-butanamida A una solución de {(1 R)-1-[({2-[(3,3-d¡metil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidin¡l}amino)carbonil]-2-metilpropil}carbamato de 1 ,1-dimetiletil (Intermediario 144, 52 mg, 0.1 14 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (2 mL) a 0°C TFA (0.5 mi, 6.49 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 1 h a la misma temperatura. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue disuelto en DCM (5 mi) y una solución saturada acuosa de NaHC03 ue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar -8-9. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del titulo (40 mg) como un sólido blanco.
UPLC: 0.53 min, 357 [M+H]+.
Intermediario 146 N-r( R)-1-metil-1-rr6-(3-metilcroman-5-il)oxi-3-piridincarbamoillpropillcarbamato de ter-butilo En un 8 ml_ 6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 119, 82.4 mg, 0.0305 mmoles), ácido (2R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-2-metil-butanoico (59.7 mg, 0.275 mmoles) y DIPEA (0.080 ml_,0.458 mmoles) fueron disueltos en ?,?-Dimetilformamida (DMF) (2 ml_) para dar una solución amarillo pálida. HATU (151 mg, 0.397 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante el fin de semana. La mezcla de reacción fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel dé sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (55.8 mg) como un sólido blanco.
H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.08 - 8.16 (2H, m), 7.10 (1 H, t), 6.84 (1 H, d), 6.70 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 6.13 (1 H, br. s.), 4.90 (1 H, br. s.), 4.12 -4.22 (1 H, m), 3.59 - 3.75 (1 H, m), 2.59 - 2.92 (1 H, m), 1.85 - 2.25 (3H, m), 1.69 - 1.84 (1 H, m), 1.51 (3H, s), 1.45 (9H, s), 0.91 - 1.05 (6H, m).
UPLCjpqc: 1.22min, 456 [M+H]+.
Intermediario 147 (2R)-2-amino-2-metil-N-f6-(3-metilcroman-5-il)oxi-3-piridillbutanamida En un matraz de fondo redondo de 50 mL N-[(1 R)-1-metil-1-[[6-(3-metilcroman-5-il)oxi-3-piridil]carbamoil]propil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 146, 55.8 mg, 0.104 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (3 mL) para dar una solución amarilla pálida. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y TFA (2 mL, 26.0 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 2 horas. La mezcla de reacción fue evaporada al vacio para dar el producto crudo como un aceite amarillo. La muestra fue cargada en un cartucho SCX de 2 g. Entonces fue limpiada con 36 mL de MeOH seguido por 25 mL de solución 2M de amoniaco en MeOH. El eluato de amoniaco fue evaporado al vacio proporcionando el compuesto del título(32.9 mg) como un aceite amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.88 (1 H, br. s.), 8.14 -8.28(2H, m), 7.10 (1 H, t), 6.83 (1 H, d), 6.70 (1 H, dd), 6.59 (1 H, dd), 4.12 - 4.21 (1 H, m),3.61 - 3.72 (1 H, m), 2.72 - 2.84 (1 H, m), 2.04 - 2.24 (2H, m), 1.92 -2.04 (1 H, m), 1.52 -1.84 (6H, m), 1.00 (3H, d), 0.94 (3H, t). UPLCjpqc: 0.76 min, 356 [M+H]+.
Intermediario 148 [2-((6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)amino)- 1 ,1-dimetil-2-oxoet¡ncarbamato de 1 ,1-dimetiletilo En un frasco de 8 ml_ 6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 108, 55 mg, 0.215mmoles) fue disuelto en ?,?-Dimetilformamida (2 ml_) para dar una solución sin color. DIPEA (0.056 mL, 0.322 mmoles), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (52.3 mg, 0.258 mmoles) y, TBTU (83 mg, 0.258 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue sacudida a 60°C por la noche. DIPEAaAdicional (0.1 mL), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (105 mg) y TBTU (170 mg) fueron agregados. La mezcla de reacción fue sacudida a 60 °C por otras 10 horas. La mezcla de reacción fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexa no/acetato de etilo de 2:1 a 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (36.5 mg) como un sólido de aceite sin color. 1H RMN (400MHz, CDCI3) d ppm 8.12 - 8.17 (2H, m), 7.30 (1 H, t), 7.05 (1 H, d), 6.95 (1 H,d), 6.89 (1 H, d), 6.16 (1 H, br. s.), 5.20 - 5.27 (1 H, m), 5.17 (1 H, dd), 5.10 (1H, d), 4.92 (1 H, br. s.), 1.84 - 1.97 (1 H, m), 1.66 - 1.78 (1 H, m), 1.63 (6H, s), 1.45 (9H, s), 0.88 (3H,t). UPLC_B: 0.89 min, 442 [M+HJ+.
Intermediario 149 N1-(6-r(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridin¡l)-2-metilalaninamida En un matraz de fondo redondo de 50 mL 1 ,1-dimetiletil [2-({6- [(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}amino)-1 ,1-dimetil-2-oxoetil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 148, 36.5 mg, 0.066 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (3 mL) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y TFA (1.5 mL, 19.47 mmoles) fue agregado a esa temperatura. La mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 1 .5 horas. La mezcla de reacción fue evaporada al vacío proporcionando y el residuo fue cargado en un cartucho SCX de 2g. Entonces fue limpiada con 15 mL de MeOH seguido por 15 mL de solución 2M de amoniaco en MeOH. El eluato de amoniaco fue evaporado al vacio proporcionando el compuesto del título (17.2mg) como un aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 9.91 (1 H, br. s.),8.26 (1 H, dd), 8.20 (1 H, d), 7.30 (1 H, t), 7.05 (1 H, d), 6.94 (1 H, d), 6.90 (1 H, d), 5.21 -5.27 (1 H, m), 5.17 (1 H, dd), 5.10 (1 H, d), 1.83 - 1.98 (1 H, m), 1.68 - 1.79 (1 H, m), 1.47(61-1, s), 0.88 (3H, t).UPLC_B: 0.74 min, 342 [M+H]+.
Intermediario 150 2,4-bis(metoximetoxi)-1-metil-benceno A una solución de 4-metilbenceno-1 ,3-diol (4 g, 32.26 mmoles) en ?,?-Dimetilformamida seca (30 mi) a 0°C hidruro de sodio (60% de dispersión en aceite mineral) (3.87 g, 96.78 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. MOM-CI (7.35 mi, 96.78 mmoles) fue agregado rápidamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora mientras la temperatura fue permitida alcanzar la temperatura ambiente. La reacción fue templada con salmuera (40ml) y extraída con acetato de etilo (3x80ml). La capa orgánica fue lavada con salmuera enfriada con hielo (2x50ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (6.1 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.811 mín; 213 [M+H]+.
Intermediario 151 2-[2,6-bis(metoximetoxi)-3-metil-fenil1-2-oxo-acetato de etilo A una solución de 2,4-bis(metoximetoxi)-1-metil-benceno (Intermediario 150, 5.5 g, 25.94 mmoles) en tetra h id roturan seco (50 mi) a temperatura ambiente BuLi 1.6M en hexano (19.45 mi, 31.13 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La mezcla fue enfriada a -78°C y fue agregada (a través de canulación) a una solución de clorooxoacetato de etilo (4.35 mi, 38.9 mmoles) en tetrahidrofurano seco (30 mi) a -78°C. La mezcla de reacción fue agitada a -78°C durante 30 minutos. La reacción fue templada con agua (20ml), diluida con salmuera (50ml) y extraída con acetato de etilo (2x100ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyente proporcionando el compuesto del título (4.65 g) como un aceite amarillo claro.
LC/MS: QC_3_ IN: Rt = 1.865 min.
Intermediario 152 2-[2,6-b¡s(metoximetoxi)-3-metil-fenil]prop-2-enoato de etilo A una suspensión de bromuro de metiltrifenilfosfonio (8.78 g, 24.6 mmoles) en tetrahidrofurano seco (50 mi) a 0°C solución de KHMDS 0.5M en tolueno (44.22 mi, 22.1 1 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a 0°C y durante 45 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y fue añadida lentamente a una solución de 2-[2,6-bis(metoximetoxi)-3-metil-fenil]-2-oxo-acetato de etilo (Intermediario 151 , 4.6g, 14.74 mmoles) en tetrahidrofurano seco (25 mL) a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 0o C. La reacción fue templada con agua (50ml), diluida con salmuera (50 mi) y extraída con acetato de etilo (2x100ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (3.8 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.930 min.
Intermediario 153 1-[2,6-bis(metoximetoxi)-3-metil-fenillciclopropanocarboxilato de etilo A una solución de yoduro de trimetilsulfoxonio (4.4 g, 20 mmoles) en sulfóxido de dimetilo seco (30 mL) hidruro de sodio (60% de dispersión en . aceite mineral) (0.720 g, 18 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por 1 hora a temperatura ambiente. Una solución de 2-[2,6-bis(metoximetoxi)-3-metil-fenil]prop-2-enoato de etilo (Intermediario 152, 3.5 g, 1 1.29 mmoles) en sulfóxido de dimetilo (15 mL) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (10ml), diluida con agua (40ml) y extraída con acetato de etilo (2x100ml). La capa orgánica fue lavada con agua (2x50ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciciohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (3.1g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.028 min.
Intermediario 154 2-[1-(hidroximetil)ciclopropil1-3-(metoximetoxi)-6-metil-fenol A una solución de 1-[2,6-bis(metoximetoxi)-3-metil-fenil]ciclopropanocarboxilato de etilo (Intermediario 153, 300 mg, 0.93 mmoles) en etanol ( 0 mi) HCI 6N en agua (0.4 mL, 2.4 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50° C. Los solventes combinados fueron removido bajo presión reducida. El residuo fue suspendido en tolueno seco (10 mL) y el solvente fue evaporado. El residuo obtenido fue disuelto en tetrahidrofurano seco (10 mi), la mezcla fue enfriada a 0°C y NaH (60% de dispersión en aceite mineral) (80 mg, 2 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. MO -CI (0.083 mL, 1.1 mmoles) entonces fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a 0o C. LiAIH4 (1 M en THF, 1.2 mi, 1.2 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada aún más durante 1 hora a la misma temperatura. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (10ml), diluida con agua (20ml) y extraída con acetato de etilo (2x50ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (70 mg) como un sólido blanco.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.690 min; 239 [M+H]+.
Intermediario 155 4-(metoximetoxi)-7-metil-espiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano1 A una solución de 2-[1-(hidroximetil)ciclopropil]-3-(metoximetoxi)-6-metil-fenol (Intermediario 154, 65 mg, 0.27 mmoles) en tetrahidrofuran seco (5 mi) trifenilfosfina (84 mg, 0.32 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada hasta disolución completa de PPh3. DIAD (0.056 mi, 0.285 mmoles) entonces fue agregado por goteo y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a temperatura ambiente. El solvente fue removido bajo presión reducida y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (40 mg) como un aceite amarillo claro.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.024 min; 221 [M+H]+.
Intermediario 156 7-metilespiro[2H-benzofuran-3, 1 '-ciclopropanol-4-ol A una solución de 4-(metoximetoxi)-7-metil-espiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano] (Intermediario 155, 38 mg, 0.17 mmoles) en etanol (5 mi), HCI 6N en agua (0.1 ml_, 0.6 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 4 días a temperatura ambiente. Los solventes combinados fueron removidos bajo presión reducida y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (24 mg) como un sólido anaranjado claro.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 9.02 (1 H, s), 6.65 (1 H, d), 6.06 (1 H, d), 4.36 (2H, s), 2.02 (3H, s), 1.40-1.44 (2H, m), 0.77-0.82 (2H, m).ROESY (400 MHz, DMSO-d6): La correlación de OE entre protón en 6,65 ppm y protones (CH3) en 2,02 ppm, correlación de NOE entre protón en 9,02 ppm y el protón en 6,06 ppm. LC/la Sra: QC_3_MIN: Rt = 1.647 min; 177 [M+H]+.
Intermediario 157 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropanol-4-il)oxi-5-nitro-piridina A una solución de 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-ol (Intermediario 156, 176 mg, 1 mmoles) en DMF seco (4 mi) carbonato de potasio (207 mg, 1.5 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropiridina (158 mg, 1 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 80° C. Después de enfriar la mezcla de reacción fue templada con agua (2ml), diluida con salmuera (10 mi) y extraída con acetato de etilo (2x20ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título (270 mg) como un sólido anaranjado que fue utilizado en el próximo paso como material crudo sin purificación adicional.
LC/MS: QC_3_ IN: Rt = 2.138 min; 299 [M+H]+.
Intermediario 158 6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano1-4-il)oxipiridin- A una solución de 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-il)oxi-5-nitro-piridina (Intermediario 157, 265 mg) en tetrahidrofurano (5 ml)/agua (2.5 mi) hierro (245 mg, 4.45 mmoles) y luego cloruro de amonio (238 mg, 4.45 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y el residuo fue diluido con una solución saturada acuosa de NaHC03 (5 mi) y extraído con acetato de etilo (3x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexa no/acetato de etilo 8:2 al ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (203 mg) como un sólido amarillo claro.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.740 min; 269 [M+H]+.
Intermediario 159 N-[(1R)-1-[[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano1-4-il)oxi-3-pirídincarbamo¡Hpropincarbamato de ter-butilo A una solución de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (36 mg, 0.18mmoles) en DMF seco ( ml) DIPEA (52µ?, 0.3mmoles) y luego HATU (65mg, 0. 7mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a t.a. 6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-il)oxipiridin-3-amina (Intermediario 158, 40 mg, 0.15 mmoles) entonces fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 4 horas a temperatura ambiente. La reacción fue templada con agua (2ml) diluida con salmuera (5ml) y extraída con acetato de etilo (2x1 OmI). La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 90:10 a ciclohexano/acetato de etilo 60:40 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (57 mg) como un sólido blanco.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.190 min; 454 [M+H]+.
Intermediario 160 (2R)-2-amino-N-r6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropanol-4-il)oxi-3-piridiHbutanamida A una solución de N-[(1 R)-1-[[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-il)oxi-3-piridil]carbamoil]propil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 159, 55 mg) en DCM seco (3 mi) a 0°TFA C (1 mi) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a la misma temperatura. El solvente y el exceso de TFA fueron removidos bajo presión reducida y el residuo fue diluido con DCM (10 mi) y una solución saturada acuosa NaHC03 fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar~ 8. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2S04), filtradas y evaporadas proporcionando el compuesto del título (41 mg) como un sólido blanco.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.792 min; 354 [M+H]+.
Intermediario 161 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano1-4-il)oxi-5-nitro-pirimidina A una solución de 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-ol (Intermediario 156, 176 mg, 1 mmoles) en Acetonitrilo seco (4 mi) carbonato de potasio (207 mg, 1.5 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropirimidina (159 mg, 1 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 24 horas a 80° C. Después de enfriar la mezcla de reacción fue templada con agua (2ml), diluida con salmuera (10 mi) y extraída con acetato de etilo (2x20ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título (258mg) como un sólido anaranjado que fue utilizado en el próximo paso como material crudo sin purificación adicional.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.007 min; 300 [M+H]+.
Intermediario 162 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3, 1 '-ciclopropanol-4-il)oxipirimidin-5-amina A una solución de 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-il)oxi-5-nitro-pirimidina (Intermediario 161 , 255 mg) en tetrahidrofurano (5 ml)/agua (2.5 mi) hierro (234 mg, 4.25 mmoles) y luego cloruro de amonio (227 mg, 4.25 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 48 horas a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y el residuo fue diluido con una solución saturada acuosa de NaHCO3 (5 mi) y extraído con acetato de etilo (3x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 4:6 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (52 mg) como un sólido anaranjado claro.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.746 min; 270 [M+H]+.
Intermediario 163 N-[(1 R)-1-[[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropanol-4-il)oxipirimidin-5-illcarbamoillpropincarbamato de ter-butilo A una solución de ácido (2 ?)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (45 mg, 0.222mmoles) en DMF seco (1 ml) DIPEA (87µ?, 0.5mmoles) y luego HATU (80mg, 0.21mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a t.a. 2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-il)oxipirimidin-5-amina (Intermediario 162, 50 mg, 0.185 mmoles) entonces fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 6 horas a temperatura ambiente. La reacción fue templada con agua (2ml) diluida con salmuera (5ml) y extraída con acetato de etilo (2x1 Oml). La capa orgánica fue secada (Na2SO4), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 90:10 a ciciohexano/acetato de etilo 60:40 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (45mg) como un sólido blanco.
LC/MS: QC_3_ IN: Rt = 2.109 min; 455 [M+H]+.
Intermediario 64 (2R)-2-amino-N-[2-(7-metilespiror2H-benzofuran-3.1 '-ciclopropano1-4-il)oxipirimidin-5-inbutanamida A una solución de N-[(1 R)-1-[[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-il)oxipirimidin-5-il]carbamoil]propil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 163, 42 mg) en DCM seco (3 mi) a 0°TFA C (1 mi) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a la misma temperatura. El solvente y el exceso de TFA fueron removidos bajo presión reducida y el residuo fue diluido con DCM (10 mi) y una solución saturada acuosa NaHCCb fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar- 8. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título (25 mg) como una goma amarilla clara.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.688 min; 355 [M+HJ+.
Intermediario 165 (5R)-3-(2-cloropirimidin-5-il)-5-etil-5-metil-imidazolidina-2,4-diona A una solución de trifósgeno (1.38 g, 4.65mmoles) en acetato de etilo (20 mi) a 0°C una solución de 2-cloro-5-aminopirimidina (1 g, 7.75 mmoles) /DIPEA (8 mi, 4.65 mmoles) en acetato de etilo (40 mi) fue agregado lentamente (20 minutos) y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. Manteniendo la mezcla de reacción a 0o C, el vacío fue aplicado (10 minutos) para quitar el exceso de fosgeno. Una solución de DMAP (0.945g, 7.75mmoles) en acetato de etilo/diclorometano 1 :1 (8 mi) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos a la misma temperatura. Una solución de clorhidrato de (R)-2-amino-2-metil-butirato de metilo (2.59 g, 15.5 mmoles) en acetato de etilo (30 mi) fue agregada lentamente (15 minutos) a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con búfer acuoso (pH3) mientras el pH fue permitido alcanzar -5-6 y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con búfer acuoso (pH3) mi (2x20) y entonces salmuera (20 mi), secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el intermediario de urea como espuma anaranjada.
La urea fue disuelta en MeOH (20 mi), NaOMe (0.41 g, 7.75 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a t.a. La mezcla fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (25 mi) y diluida con acetato de etilo (50 mi). Las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con salmuera (2x20 mi), secada ( a2S04), filtrada y evaporada. El residuo fue triturado con Et2Ó (10 mi) y el sólido recolectado proporcionando el compuesto del titulo (1.22 g) como un sólido beige.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.341 min; 255 [M+H]+.
Intermediario 166 3-(2-cloropirim¡din-5-il)-5,5-dimetil-imidazolidina-2,4-diona A una solución de trifósgeno (1.38 g, 4.65mmoles) en acetato de etilo (20 mi) a 0°C una solución de 2-cloro-5-aminopirimidina (1 g, 7.75 mmoles) /DIPEA (8 mi, 4.65 mmoles) en acetato de etilo (40 mi) fue agregado lentamente (20 minutos) y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. Manteniendo la mezcla de reacción a 0° C, el vacío fue aplicado (10 minutos) para quitar el exceso de fosgeno. Una solución de DMAP (0.945g, 7.75mmoles) en acetato de etilo/diclorometano 1 :1 (8 mi) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 5 minutos a la misma temperatura. El clorhidrato de metil éster de 2,2-Dimetilglicina (2.37 g, 15.5 mmoles) en acetato de etilo (30 mi) fue agregado lentamente (15 minutos) a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con búfer acuoso (pH3) mientras el pH fue permitido alcanzar ~5-6 y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con búfer acuoso (pH3) mi (2x20) y entonces salmuera (20 mi), secada (Na2SO4), filtrada y evaporada proporcionando el intermediario de urea como espuma anaranjada.
La urea fue disuelta en MeOH (20 mi), NaOMe (0.41 g, 7.75 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a t.a. La mezcla fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (25 mi) y diluida con acetato de etilo (50 mi). Las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con salmuera (2x20 mi), secada (Na2S04), filtrada y evaporada. El residuo fue triturado con Et20 (10 mi) y el sólido recolectado proporcionando el compuesto del título (1.08 g) como un sólido anaranjado.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.062 min; 241 [M+HJ+.
Intermediario 167 3-(2-metilalliloxi)benzoato de metilo El 3-h¡droxibenzoato de metilo (1 g, 6.57 mmoles) fue disuelto en DMF (10 mi) para dar una solución sin color. A la solución carbonato de potasio (1.089 g, 7.88 mmoles) y 3-Bromo-2-metilpropeno (0.729 mi, 7.23 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue calentada a 90 °C y agitada por 1h. Después de enfriar la mezcla de reacción fue diluida con agua y extraída con acetato de etilo. La fase orgánica fue lavada con agua, secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacío para proporcionar el compuesto del título (1. 80 mg) LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.073 mín; 207 [M+H]+.
Intermediario 168 3-hidroxi-2-(2-met¡lall¡l)benzoato de metilo El 3-(2-met¡lalliloxi)benzoato de metilo (Intermediario 167, 1.100 g, 5.3 mmoles) fue disuelto en 1 -Metil-2-pirrolidinona (12 mi) y calentado a 200°C. La solución fue agitada por 30 h a la misma temperatura. Después de enfriamiento, la mezcla fue diluida con agua y extraída con acetato de etilo. La fase orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada al vacío para producir un producto crudo que fue purificado vía Biotage SP1 con ciclohexano/EtOAc como eluyentes (de 10/0 a 7/3 por 12 CV, columna de sílice 50g SNAP). Las fracciones fueron recolectadas y fueron evaporadas para proporcionar el compuesto del título (507 mg).
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.772 min; 207 [M+H]+.
Intermediario 169 3-(hidroximetil)-2-(2-metilallinfenol El 3-hidroxi-2-(2-metilallil)benzoato de metilo (Intermediario 168, 410 mg, 1.99 mmoles) fue disuelto en tetrahidrofurano (5 mi) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Una solución de LiAIH42M en THF (1.09 mi, 2.19 mmoles) fue agregada por goteo y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C por 30 min. Después de este tiempo la mezcla de reacción fue vertida en hielo y diluida con 60 mi de acetato de etilo. Las fases fueron separadas, la fase orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacio para proporcionar el compuesto del título (360 mg) como un aceite sin color.
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 1.192 min.
Intermediario 170 3,3-dimetilisocroman-5-ol 3-(hidroximetil)-2-(2-metilaHil)fenol (Intermediario 169, 360 mg, 2 mmoles) fue disuelto en acetato de etilo (20 mi), dos gotas de ácido sulfúrico fueron añadidas a la solución que fue agitada durante 4 horas a temperatura ambiente. Después de este tiempo la reacción fue diluida con agua (40 mi) y acetato de etilo (40 mi). Las fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporadas al vacío para proporcionar un aceite sin color. El aceite fue triturado con ciclohexano para obtener un sólido blanco que fue filtrado, lavado con ciclohexano (20 mi) y secado al vacío para proporcionar el compuesto del título (130 mg).
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 1.441 min.
Intermediario 171 2-(3,3-dimetilisocroman-5-il)oxi-5-nitro-piridina A una solución de 3,3-dimetilisocroman-5-ol (Intermediario 170, 65 mg, 0.36 mmoles) en DMF seco (3 mi) carbonato de potasio (207 mg, 1.5 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropiridina (50.8 mg, 0.32 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 80° C. Después de enfriar la mezcla de reacción fue templada con agua (2ml), diluida con salmuera (10 mi) y extraída con acetato de etilo (2x20ml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada proporcionando el compuesto del título (80 mg) como un sólido anaranjado que fue utilizado en el próximo paso como crudo sin purificación adicional.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.027 min; 301 [M+H]+.
Intermediario 172 6-(3.3-dimetilisocroman-5-il)oxipiridin-3-amina A una solución de 2-(3,3-dimetilisocroman-5-il)oxi-5-nitro-piridina (Intermediario 171 , 80 mg) en tetrahidrofurano (5 ml)/agua (2.5 mi) hierro (70 mg, 1.3 mmoles) y luego cloruro de amonio (70 mg, 1.3 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y el residuo fue diluido con una solución saturada acuosa de aHCOa (5 mi) y extraído con acetato de etilo (3x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 8:2 a ciciohexano/acetato de etilo 4:6 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (25 mg) como un sólido blanco.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.586 min; 271 [M+H]+.
Intermediario 173 [5-(metoximetoxi)-2-metil-fen¡nmetanol El ácido 5-Hidroxi-2-metil-benzoico (2 g, 13.3 mmoles) fue disuelto en tetrahidrofurano (40 mi). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C e hidruro de sodio (60 % dispersión en aceite mineral) (1.8 g, 39.5 mmoles) fue agregada por porciones. Cloro(metiloxi)metano (4 mi, 52 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada por 30 min a 0° C. La mezcla fue vertida en hielo y extraída con acetato de etilo, dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacío para dar el producto crudo como un aceite amarillo. A este material, disuelto en THF (20 mi), enfriado a 0o C, LiAIH41 M en THF (15 mi, 15 mmoles) fue agregado por goteo y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C por 30 min. Después de este tiempo la mezcla de reacción fue vertida en hielo y diluida con 60 mi de acetato de etilo. Las fases fueron separadas, la fase orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacío para proporcionar un aceite sin color que fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 75:25 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (1.9 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 1.351 min.
Intermediario 174 ter-butil-f[5-(metoximetoxi)-2-metil-fenillmetoxi1-dimetil-silano [5-(metoximetoxi)-2-metil-fenil]Metanol (Intermediario 173,1.9g, 10mmoles) fue disuelto en diclorometano (10 mi) para dar una solución sin color. 1 H-lmidazol (1.137 g, 16.7 mmoles) y cloro(1 ,1-dimetiletil)dimetilsilano (2.095 g, 13.9 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción se volvió inmediatamente una suspensión blanca y fue agitada a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla de reacción fue templada con 10 mi de agua y diluida con 10 mi de diclorometano. Dos fases fueron separadas por un embudo de separación. La fase orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 100g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 50:50 como eluyentes proporcionando el compuesto del titulo (2.9g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 2.437min Intermediario 175 1-[2-[[ter-butil(dimetil)silil1oximetill-6-(metoximetoxi)-3-metil-fenillciclobutanol A una solución de ter-butil-[[5-(metoximetoxi)-2-metil-fenil]metoxi]-dimetil-silano (Intermediario 174, 0.3 g, 1 mmoles) en hexano (5 ml), BuLi (1.6M en hexano, 0.9 ml, 1.4mmoles) fue agregado a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue agitada por 2h y luego por goteo fue agregado a -30°C a una suspensión de CeC (0.37g, 1.5 mmoles) en THF seco (5 ml) que fue agitado anteriormente a temperatura ambiente por la noche. Después de 45 min a -30° C, ciclobutanona (0.07g, 1 mmoles) disuelto en THF (1 ml) fue agregado. La reacción fue agitada a la misma temperatura y entonces templada con cloruro de amonio (20 ml) y extraída con Acetato de Etilo (2x20ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S0 y evaporadas bajo vacío para proporcionar un aceite sin color que fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 75:25 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.05 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 2.437min Intermediario 176 7-metilespirof 1 H-isobenzofuran-3, 1 '-ciclobutanol-4-ol A una solución de 1-[2-[[ter-butil(dimetil)silil]oximetil]-6-(metoxímetoxí)-3-metil-fenil]ciclobutanol (Intermediario 175, 0.05g, 0.136 mmoles) en Acetato de etilo (5 mi), Acido Sulfúrico (96%, 2 gotas) fue agregado a temperatura ambiente y la mezcla de reacción fue agitada por 2h. Acetato de etilo (20 mi) fue agregado y la fase orgánica fue lavada con salmuera (2x50ml), secada sobre sulfato de sodio y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.02 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC 3 MIN: Rt = 1.720 min Intermediario 177 2-[[Ter-butil(dimetil)silil1oximetill-6-(metoximetoxi)benzoato de Bajo limpieza de nitrógeno, en un matraz de fondo redondo de 100 mi de 2 bocas equipado con un condensador de reflujo (flamredo durante 5 minutos bajo vacío y entonces 3 ciclos de N2/vacío), (1 ,1-dimet¡letil)(dimetil){[(3-{[(metiloxi)metil]oxi}fenil)metil]oxi}silano, (Intermediario 103, 1.5 g, 5.31 mmoles) fue disuelto en hexano (20 mi) para dar una solución sin color. Butilitio1.6N en hexano (4.31 mi, 6.9 mmoles) fue agregado por goteo y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente. Después de 2 horas de agitación en esas condiciones, la mezcla de reacción amarilla pálida fue añadida a una solución de cloroformato de etilo (1.015 mi, 10.62 mmoles) en tetrahidrofurano a -78° C. Después de 30 min, la reacción fue templada con una solución acuosa 2M de ácido clorhídrico mientras el pH fue permitido alcanzar- 2 y diluido con 10 mi de acetato de etilo. Las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada bajo vacio proporcionando el producto crudo como un aceite amarillento que fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 8:2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (1.396 g) como un aceite amarillo pálido.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.413min;355 [M+H]+.
Intermediario 178 2-[[Ter-butil(dimetil)sililloximetil1-6-hidrox¡-benzoato de etilo 2-[[ter-butil(dimetil)silil]ox¡metil]-6-(metoximetoxi)benzoato de etilo (Intermediario 177, 950 mg, 2.68 mmoles) fue disuelto en diclorometano (30 mi), la solución fue enfriada a 0°C y ácido trifluoroacético (2 mi) fue agregado. Después de 3 h de agitación a 0°C agua (20 mi) fue agregada a 0°C y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporada al vacio para proporcionar un aceite sin color que fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.345 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.463 min; 311 [M+H]+.
Intermediario 179 3,3-dietil-1 H-isobenzofuran-4-ol A una solución 1 M en THF de bromuro de etilmagnesio (10 mi, 5 mmoles) en THF seco (5 mi) a 0°C una solución de 2-[[ter-butil(dimetil)silil]ox¡metil]-6-hidroxi-benzoato de etilo (Intermediario 178, 0.31g, 1 mmol) en Et2O (10 mi) fue agregado en 15 min. La mezcla de reacción fue agitada por 1.5h a la misma temperatura y entonces por otras 2 horas mientras la temperatura fue permitida alcanzar la temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (40ml) y extraída con acetato de etilo (3x80ml). La capa orgánica fue lavada con salmuera (2x50ml), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue disuelto en THF (5 mi) y fluoruro de tetrabutilamonio (1 M en THF, 1.5ml, 1.5mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos. Acetato de etilo (50 mi) fue agregado y las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con Cloruro de amonio (2x50ml), secadas sobre sulfato de sodio, y concentradas. El sólido amarillo obtenido fue triturado con Acetato de etilo y Pentano (1 :1 , 5 mi) para dar un sólido blanco.
El sólido fue disuelto en Acetato de etilo (5 mi) y Acido Sulfúrico (96%, 4 gotas) fue agregado a temperatura ambiente. La reacción fue agitada por 2h, luego Acetato de etilo (20 mi) fue agregado y la fase orgánica lavada con salmuera (2x50ml), secada sobre sulfato de sodio y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.05 g) como un aceite sin color.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.683 min.
Intermediario 180 6-[(3,3-dietil-1 H-isobenzofuran-4-il)oxi1piridin-3-amina A una solución ae 3,3-dietil-1 H-isobenzofuran-4-ol (Intermediario 179, 0.03g, 0.15mmoles) en DMF seco (3 mi) carbonato de potasio (0.08g, 0.6 mmoles) y entonces 2-Cloro-5-Nitropiridina (0.026g, 0.17mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 80° C. Después de enfriar la mezcla de reacción fue templada con agua (1 ml), diluida con salmuera (5 mi) y extraída con acetato de etilo (2x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue disuelto en tetrahidrofurano (5 mi) /agua (2.5 mi), hierro (0.04 g, 0.75 mmoles) y luego cloruro de amonio (0.4 g, 0.75 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y el residuo fue diluido con una solución saturada acuosa de NaHC03 (5 mi) y extraído con acetato de etilo (3x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 8:2 a ciciohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.025 g) como un sólido amarillo claro.
LC/MS: QC_3_MIN: Rt 1.735 min, 285 [M+H]+.
Intermediario 181 í(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil[tris(1-metiletiQIsilano 3,3-Dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol (Intermediario 50, 3.6g, 21.91mmoles) fue disuelto en THF anhidro (20.0 mL) y la solución sin color fue enfriada a 0°C agitando bajo nitrógeno. Una solución 2M de n-BuL¡ en ciclohexano (13.2mL, 26.4 mmoles) fue agregada por goteo y la solución amarilla resultante fue agitada a 0°C por 10 min. Thisopropilsislílthflato (7.7mL, 28.5mmoles) fue agregado por goteo: la solución se decoloró casi completamente. Esta fue dejada calentar a temperatura ambiente y agitar por la noche. Agua (1 ,0 ml_) fue añadida a y los volátiles evaporados bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en acetato de etilo y lavado con salmuera tres veces. La capa orgánica fue secada sobre Na2S04 anhidro y evaporada a sequedad para dar un aceite amarillo que fue re-disuelto en TBME y lavado dos veces con agua. La solución orgánica fue secada sobre Na2SO y evaporada a sequedad para dar el compuesto del título (7.4g) como un aceite amarillo.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 6.94 (1 H, t), 6.31-6.36 (1 H, m), 6.29 (1 H, d), 4.14 (2H, s), 1.28-1.40 (9H, m), 1.09 (18 H, d).
Intermediario 182 [(7-bromo-3,3-d¡metil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1[tris(1-metiletiDlsilano [(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-il)oxi][tris(1 -metiletil)]Silano (Intermediario 181 , 7.4g, 23.19 mmoles) fue disuelto en THF (70.0 mL). N-Bromosucinimida (4.2g, 23.88 mmoles) fue agregado disolviéndose en pocos minutos. Esta mezcla fue agitada a temperatura ambiente por 3 hrs. Más NBS (0.64g, 3.48 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por una hora adicional. CCI4 (50 ml_) fue añadido a la mezcla de reacción y la solución fue evaporada a sequedad. El residuo fue re-suspendido en CCI4 y agitada a temperatura ambiente por 15 min. El sólido blanco fue removido por filtración y la torta húmeda fue lavada con más CCI4. El CCI4 fue cambiado con acetato de etilo y la solución orgánica fue lavada tres veces con 2.5% en p/p de NaHC03 acuoso y por último con agua. La solución orgánica fue secada en Na2S04 anhidro y evaporada a sequedad para dar el compuesto del título (8.6g) como un aceite marrón. 1H RMN (400 Hz, DMSO-d6) d ppm 7.14 (1 H, d), 6.29 (1 H, d), 4.24 (2H, s), 1.27-1.41 (9H, m), 1.08 (18H, d).
Intermediario 183 tris( 1 -metiletiM (3.3.7-trimetil-2.3-d¡hidro-1 -benzofuran-4-il)oxi]silano [(7-bromo-3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi][tris(1-metiletil)]silano (Intermediario 182, 7.1g, 17.72mmoles) fue disuelto en THF anhidro (72mL) y enfriado a 0°C. Tetrametiletilenediamina (8.0mL, 53.16 mmoles) fue agregado and the yellow solution fue agitada at 0°C for 10 min. A solution of 1.6 M butillitio in hexano (22.5mL, 35.4 mmoles) fue agregado drop wise over 10 minutos and then stirred at 0°C for 15 min. Metil iodide (1 1 ml_, 177.2 mmoles) fue agregado drop wise over 6 min. The white solid was removed by filtration and the wet cake was washed in con THF. Las capas orgánicas combinadas fueron evaporadas a sequedad. El residuo fue disuelto en acetato de etilo y lavado dos veces con NaHCÜ3 acuoso y una vez con agua. La solución orgánica fue secada en Na2S04 y evaporado a sequedad, para dar un aceite marrón. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexanoto ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (3.6 g) como un aceite marrón. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 6.76 (1 H, d), 6.20 (1 H, d), 4.14 (2H, s), 2.02 (3H, s), 1.28-1.39 (9H, m), 1.09 (18H, d).
Intermediario 184 3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-ol Tris(1-metiletil)[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]silano (Intermediario 183, 3.6g, 10.84mmoles) fue disuelto en THF (36 mL) para obtener una solución amarilla oscura. TBAF (8.5g, 32.5 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El solvente fue removido bajo presión reducida. El residuo fue disuelto en acetato de etilo y lavado con HCI acuoso, luego NaHC03 acuoso y por último con salmuera. La solución orgánica fue secada sobre Na2S04 y evaporado a sequedad y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 95:5 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (1.69 g) como aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 9.06 (1 H,s), 6.65-6.69 (1 H, m), 6.19 (1 H, d), 4.11 (2H, s), 1.99 (3H, s), 1.33 (6H, s).
Intermediario 185 5-nitro-2-[(3,3,7-trimet¡l-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1piridina 3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-ol (Intermediario 184, 0.9g, 5.0mmoles) fue disuelto en CH3CN (5 mL) en la presencia de 2-cloro-5-nitropiridina (790 mg, 5.0 mmoles) y K2C03 (1.72 g, 12.5mmoles) y la suspensión resultante fue calentada a 60°C por 1.5 hrs. La mezcla entonces fue enfriada a temperatura ambiente y diluida con agua y acetato de etilo. Las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con salmuera, entonces secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad, El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 90:10 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.92 g) como sólido amarillento.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.04 (1 H, d), 8.61 (1 H, dd), 7.24 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 6.54 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 2.14 (3H, s), 1.21 (6H, s). 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm 166.6, 158.7, 147.2, 144.8, 140.4, 135.8, 130.2, 126.1 , 116.7, 114.5, 11 1.0, 83.6, 42.2, 26.0, 14.4.
Intermediario 186 6-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)ox¡1-3-piridinamina 5-Nitro-2-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]pir¡dina (Intermediario 185, 920 mg, 3.0mmoles) fue disuelto en EtOH (13.5ml_) y agitado bajo atmósfera de hidrógeno (2 bar) en la presencia de Pd/C 10% en p/p (46 mg, 5% de p/p) a temperatura ambiente durante 30 minutos. El catalizador fue filtrado, lavado con THF y la solución resultante evaporada a sequedad para proporcionar un sólido anaranjado. El producto crudo fue cristalizado de MeOH al compuesto del título (565 mg) como un sólido beige. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm7.51 (1 H, d), 7.05 (1 H, dd), 6.85 (1 H, d), 6.69 (1 H, d), 6.21 (1 H, d), 5.04 (2H, br.s), 4.19 (2H, s), 2.08 (3H, s), 1.30 (6H, s). 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm158.3, 154.2, 150.7, 141.5, 132.2, 129.6, 125.3, 124.7, 113.9, 112.2, 111.8, 83.7, 42.2, 26.0, 14.4.
Intermediario 187 1 R)-1-f((6-r(3,3.7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinil)amino)carbonillpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo 6-{[3,3,7-Trimetil-6-(trifluorometoxi)-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il]oxi}piridin-3-amina (Intermediario 186, 405 mg, 1.27 mmoles) fue suspendido en acetato de etilo (4 mL). Trietilamina (0.44ml, 3.175 mmoles) fue agregado seguido por la adición de ácido (2/?)-2-({[(T,1 -dimetilet¡l)oxi]carbonil}amino)butanoico (258 mg, 1.27 mmoles). La suspensión resultante fue enfriada a 0°C y solución de T3P 50 % p/p en acetato de etilo (1.4 mmoles) fue agregado por goteo. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 1 hora y entonces calentada a temperatura ambiente y agitada por una hora adicional. Una solución saturada acuosa de Na2C03 fue agregado y la mezcla se agitó por 10 min. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con agua y salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 80:20 a ciclohexano/acetato de etilo 70:30 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.50 g) como una espuma blanca. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.08 y 10.03 (I H.br.s), 8.30 (1 H, d), 8.03 (1 H, dd), 7.00 (1 H, d), 6.95-6.90 (2H, m), 6.36 (1 H, d), 4.17 (2H, s), 3.98-3.92 (1 H, m), 2.10 (3H, s), 1.73-1.52 (2H, m), 1.36 and 1.29 (9H, br.s), 1.23 (6H, s), 0.88 (3H, t). 3C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm 171.4, 159.0, 158.5, 155.5, 148.9, 138.1 , 131.4, 129.8, 125.8, 115.1 , 1 13.9, 1 10.7, 83.6, 78.0, 56.3, 42.2, 28.9, 26.0, 25.0, 20.7, 14.4, 14.1 , 10.5.
Intermediario 188 (2R)-2-amino-N-(6-f(3.3.7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)ox¡1-3-piridinil)butanamida El {(1 R)-1-[({6-[(3,3,7-trimetil-2,3-d¡hidro-1-benzofuran-4-il)ox¡]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 187, 480 mg, 1.05 mmoles) fue disuelto en acetato de /'so-propilo (5 mL) y HCI 5-6N en isopropanol (1 ml, 5.25 mmoles) fue agregado. La solución fue agitada a temperatura ambiente durante 1 hora y entonces calentada a ~ 50-55°C hasta conversión completa. La mezcla fue enfriada a temperatura ambiente y tratada con una solución saturada acuosa de NaHC03. Las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando diclorometano/metanol 95:5 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (0.31 g) como una espuma amarillenta.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm8.36 (1 H, d), 8.1 1 (1 H, dd), 6.96-6.92 (2H, m), 6.38 (1 H, d), 4.19 (2H, s), 3.23 (1 H, dd), 2.1 1 (3H, s), 1 .72-1.61 (1 H, m), 1.53-1.43 (1 H, m), 1.25 (6H, s), 0.90 (3H, t). 13C-RMN (200 MHz, DMSO-de): d ppm 174.5, 159.0, 158.5, 148.9, 138.2, 131.5, 131.4, 129.8, 125.7, 1 15.1 , 1 13.9, 110.6, 83.6, 56.7, 42.2, 28.0, 26.0, 14.4, 10.2.
Intermediario 189 5-n¡tro-2-f(3,3,7-trimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4- rimidína 3,3,7-TMmet¡l-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-ol (Intermediario 184, 178 mg, 1.0 mmoles) y 2-cloro-5-nitropirimidina (191 ,5 mg, 1.2 mmoles) fueron disueltos en CH3CN (3.0 mL) y K2CO3 (345.5 mg, 2.5 mmoles) fue agregado.
La suspensión resultante fue calentada a 40°C y agitada por 1 hora. La mezcla de reacción entonces fue diluida con agua (50 mL) y acetato de etilo (50 mL), La fase orgánica fue recolectada, lavada con salmuera (50 mL) y secada sobre Na2S04. El residuo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/ acetato de etilo 97:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (243 mg).
Intermediario 190 2-r(3.3,7-trimet¡l-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-5-pirimidinamina 5-nitro-2-[(3,3,7-thmetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]pirimidina (Intermediario 189, 243 mg, 0.81 mmoles) fue disuelto en THF (4 mL) y paladio en carbón (5 % molar, 85 mg) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada bajo atmósfera de hidrógeno (3 bar) durante 1 hora a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado en una almohadilla de celite, lavado con THF y la solución resultante fue concentrada bajo vacío. El residuo fue diluido con acetato de etilo y agua, la fase orgánica recolectada, secada sobre Na2S04y evaporada para proporcionar el compuesto del título (220 mg) como aceite sin color. El producto crudo, fue utilizado en el paso siguiente sin purificación adicional.
MS_2 (ESI): 272[M+H]+ Intermediario 191 {(1 R)-1-f((2-[(3.3,7-t metil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-Dirimidinil)amino)carboninpropillcarbamato de 1.1-dimetiletilo 2-[(3,3,7-trimetil-2,3-d¡h¡dro-1-benzofuran-4-il)ox¡]-5-pirimidinamina (Intermediario 190, 220 mg, 0.81 mmoles) fue disuelto en acetato de etilo (10 mL) y ácido (2f?)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanóico (181.1 mg, 0.89 mmoles) fue agregado seguido por la adición de Et3N (0.35 mL, 2.02 mmoles). La solución resultante fue enfriada a 5°C y una solución de T3P 50 % p/p en acetato de etilo (0.53 mL, 0.89 mmoles) fue agregado por goteo en 15 min. La mezcla de reacción fue agitada por 30 min a 5°C. La reacción fue templada con agua (50 mL) y acetato de etilo (50 mL), dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada sobre Na2S04 y concentrada bajo vacío. El residuo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 60:40 como eluyente para proporcionar el compuesto del título (213 mg).
MS_2 (ESI):457 [M+H]+.
Intermediario 192 7-(metoximetoxi)-3H-isobenzofuran-1-ona 4-Hidroxi-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-1 ,3-diona (685 mg, 4 mmoles) fue disuelto en THF seco (30 mL) a -78°C. La solución de K-Selectrido M en THF (13 mL, 13 mmoles) fue agregado por goteo en 20 min entonces la mezcla fue calentada de -78°C a -30°C durante 3 Horas. La mezcla final fue vertida en acetato de etilo (100mL), salmuera (25 mL) y una solución de ácido clorhídrico 3M (25mL). La capa orgánica fue recolectada, lavada con salmuera y evaporada a sequedad. El compuesto resultante fue disuelto en MeOH (20 mL) y tratado bajo agitación con una solución de ácido clorhídrico 3M (10mL). La mezcla entonces fue diluida con acetato de etilo (100 mL) y salmuera (25mL), la capa orgánica fue recolectada y fue evaporada bajo vacío. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando diclorometano como eluyente proporcionando el intermediario de fenol (430 mg).
El intermediario de fenol (430 mg, 2.9 mmoles) fue disuelto en diclorometano seco (20 mL) a 0o C, DIPEA (5 mL, 5.5 mmoles) fue agregado seguido por una adición por goteo de éter clorometilmetílico (0.44 mL, 5.7 mmoles) durante 10 min. La solución resultante fue agitada a 0°C durante 30 minutos entonces a temperatura ambiente durante 15 minutos. El diclorometano fue evaporado parcialmente y la suspensión obtenida fue disuelta en acetato de etilo (20mL), lavada con una mezcla 50/50 de agua y salmuera (2x1 OmL), secada sobre Na2S04 y evaporadaó para dar el compuesto del título (549 mg) como un sólido amarillo pálido. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm7.68 (1 H, m), 7.20 (2H, m), 5.36 (2H, s), 5.31 (2H, s), 3.41 (3H, s).
Intermediario 193 3,3-dimetil-1 H-isobenzofuran-4-ol 7-(metoximetoxi)-3H-isobenzofuran-1-ona (Intermediario 192, 550 mg, 2.8 mmoles) fue disuelto a -70°C en THF seco (150 mL). Una solución 3M de bromuro de metilmagnesio en éter dietílico (5.6mL, 16.8 mmoles) fue agregado por goteo en 30 minutos y la mezcla obtenida se agitó durante 30 minutos a -70°C y entonces 30 minutos a temperatura ambiente. La mezcla de reacción fue vertida en acetato de etilo (100 mL) y solución saturada acuosa de cloruro de amonio (50 mL) a 0o C. La capa orgánica fue recolectada, lavada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (50mL), salmuera (50 mL) y evaporada para dar un aceite amarillo que fue disuelto en acetonitrilo (15 mL) y tratado con ácido sulfúrico (0.15 mL). Acetonitrilo fue reemplazado con alcohol metílico (15 mL) y la solución resultante tratada con ácido p-toluensulfónico (100 mg). La solución fue calentada a 60°C y agitada por 2 horas. El solvente fue evaporado y el residuo se disolvió en acetato de etilo (30mL), se lavó dos veces con una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio (10 mL) y entonces con una solución acuosa diluida de ácido clorhídrico, secado sobre Na2S04, y evaporada a sequedad. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 90.10 como eluyente proporcionando el compuesto del título (210 mg) como sólido blanco. 1H RMN (DMSO-de, 400MHz): d ppm 9.51 (1 H, s), 7.00-7.10 (1H, m), 6.60-6.70 (2H, m), 4.89 (2H, s), 1.45 (6H, s).
Intermediario 194 (5R)-3-(6-cloro-3-piridinil)-5-etil-5-metil-2,4-imidazolidinadiona 6-Cloropiridin-3-amina (3.0 g, 23.3 mmoles) fue disuelto en una mezcla 3:1 V/V de Ch CN/acetato de etilo (20 mL) y clorhidrato del ácido (2F?)-2-amino-2-metilbutanoico (3.97 g, 25.63 mmoles) fue agregado, seguido por una solución al 50 % p/p en acetato de etilo de T3P (15.3 mL, 25.63). La mezcla fue calentada a 60°C por 2 Horas, entonces templada con NaOH 3N mientras el pH fue ~10 y entonces diluido con acetato de etilo (100 mL). La fase orgánica fue recolectada, secada sobre Na2S04 y concentrada bajo vacío a un volumen final de ~ 15 mL. La solución se enfrió a 0-5 °C y Et3N (1 1.4 mi, 81.9 mmoles) fue agregado. Una solución de trifósgeno (2.76 g, 6.96 mmoles) en 10 mL de acetato de etilo fue agregada por goteo en 15 min, manteniendo la temperatura interna abajo de 5°C. La mezcla fue agitada a 5°C durante 30 minutos entonces templada con agua (100 mL) y por último diluida con acetato de etilo adicional (100 mL). Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con agua y salmuera, secada sobre Na2S04 y concentrada bajo vacío. El producto crudo fue suspendido en 15 mL de acetato de etilo seguido por adición por goteo de 65 mL de N-heptano. La suspensión resultante fue agitada a temperatura ambiente por 2 Horas, filtrada, y la torta lavada con una mezcla 2:8 v/v de acetato de etilo/n-heptano (2 X 10 mL) antes de ser secada a 40°C por 18 Horas proporcionando el compuesto del título (3.5 g) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.68 (1 H, s), 8.47 (1 H, d), 7.95-7.89 (m, 1 H), 7.68-7.63 (1 H, m), 1.83-1.58 (2H, m), 1.38 (3H, s), 0.85 (3H, t).
Intermediario 195 Ácido (2,2-difluoro-1 ,3-benzodioxol-4-il)borónico 2,2-Difluoro-1 ,3-benzodioxol (960 mg, 6.1 mmoles) fue disuelto en THF (8 mL) y ciclohexano (4 mL) y la solución resultante enfriada a -78°C. Solución de sec-BuLi 1.4M en ciclohexano (4.3 mL, 6.1 mmoles) fue agregada por goteo y la mezcla de reacción se agitó durante 1.5 horas a -78° C. Trimetilborato (694 mg, 6.75 mmoles) fue agregado y la mezcla fue permitida calentar lentamente a -30°C. La mezcla de reacción fue templada con una solución 2N de HCI y diluida con acetato de etilo. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada dos veces con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporadas a sequedad proporcionando el compuesto del título como un aceite amarillo que fue utilizado en el próximo paso sin purificación adicional. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6 + D20): d ppm 7.39 (1 H, dd), 7.34 (1 H, dd), 7.14 (t, 1 H, J=7.90 Hz). 9F-RMN (376 MHz, DMSO-d6 + D20): d ppm -48.92. 3C-RMN (200 MHz, DMSO-d6 + D20): d ppm 147.3, 142.8, 131.6 (t, J=250.7 Hz), 130.1 , 124.3, 1 12.0 Intermediario 196 Ácido (2,2-difluoro-7-metil-1 ,3-benzodioxol-4-il)boronico Acido (2,2-difluoro-1 ,3-benzodioxol-4-il)boronico (Intermediario 195, material crudo) fue disuelto en THF (20 mL) y la solución resultante se enfrió a -78° C. La solución de sec-BuLi 1.4M en ciclohexano (17.4 mi, 24.36 mmoles) fue agregada por goteo y la mezcla de reacción fue agitada durante 1.5 horas a -78°C. Yoduro de metilo (4.6 mi, 73 mmoles) entonces fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas mientras la temperatura fue permitida alcanzar la temperatura ambiente. La reacción fue templada por adición de una solución acuosa 2N de HCI y diluida con acetato de etilo. La capa orgánica fue recolectada y entonces fue lavada dos veces con salmuera, secada sobre Na2SO4 y evaporada a sequedad. La cristalización de n-heptano proporcionó el compuesto del título (150 mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, D SO-d6 + D20): d ppm 7.30 (1 H, d), 6.68 (1 H, d), 2.25 (s, 3H). 19F-RMN (376 MHz, DMSO-d6 + D2O): d ppm -48.55. 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6 + D20): d ppm 152.5, 147.1 , 141.5, 131.6 (t, J=250.0 Hz), 129.9, 125.8, 122.7, 1 10.1 , 14.6.
Intermediario 197 2,2-difluoro-7-metil-1 ,3-benzodioxol-4-ol Acido (2,2-difluoro-7-metil-1 ,3-benzodioxol-4-il)boronico (Intermediario 196, 150 mg, 1.28 mmoles) fue disuelto en THF (1.5 ml_) y una solución acuosa al 30 % p/p de H202 (2.56 mmoles) y NaOH (51 mg, 1.28 mmoles) fue agregada y la mezcla de reacción se agitó durante 2 días a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa 2N de HCI y diluida con acetato de etilo. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada dos veces con salmuera, secada sobre Na2SO4 y evaporada a sequedad, proporcionando el compuesto del título (140 mg) como un aceite amarillo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.31 (1 H, s), 6.83 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 2.17 (3H, s). 9F-RMN (376 MHz, DMSO-d6): d ppm-48.68. 3C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm142.3, 139.1 , 131.4 (t, J=251.9 Hz), 129.9, 125.6, 1 12.8, 1 10.0, 13.2.
Intermediario 198 2,2-difluoro-1 ,3-benzodioxol-4-ol 2,2-Difluoro-1 ,3-benzodioxolo (320 mg, 2.05 mmoles) fue disuelto en THF (2.5 mL) y ciclohexano (1.2 mL) y la solución resultante se enfrió a -78° C. Solución de sec-BuLi 2M en ciclohexano (1.025 mi, 2.05 mmoles) fue agregada por goteo y la mezcla de reacción se agitó durante 2 horas a -78°C. Trimetilborato (230 mg, 2.25 mmoles) fue agregado y la mezcla fue permitida calentar lentamente a temperatura ambiente. Una solución acuosa el 30 % p/p de H202 (4.1 mmoles) y NaOH (82 mg, 2.05 mmoles) fue agregada y la mezcla de reacción se agitó durante 18 horas a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa 2N de HCI y diluida con acetato de etilo. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada dos veces con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad, proporcionando el compuesto del titulo (340 mg). 1H-RMN (400 Hz, CDCI3): d ppm6.93 (1 H, t), 6.69 (1 H, d), 6.65 (1 H, d). 9F-RMN (376 MHz, CDCI3):6 ppm -49.86. 13C-RMN (200 MHz, CDCI3): d ppm144.8, 139.6, 131.5 (t, J=255.1 Hz), 131.2, 123.9, 1 12.7, 101.8 Intermediario 199 2-[2-amino-6-(metiloxi)fenill-2-propanol 1-(2-Amino-6-metoxifenil)etanona (500 mg, 3.03 mmoles) fue disuelta en THF (7.5 mL) y enfriada a 0o C. Una solución 3M de bromuro de metilmagnesio en Et20 (2.12 mi, 6.36 mmoles) fue agregada por goteo manteniendo la temperatura debajo de 10° C. La reacción fue templada con una solución saturada acuosa de NH4CI (7.5 mL) manteniendo la temperatura debajo de 15° C. La mezcla fue diluida con agua y acetato de etilo, dos fases separadas y la capa orgánica fue lavada dos veces con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad proporcionando el compuesto del título (500 mg) como un sólido anaranjado claro. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm6.79 (1 H, t), 6.19 (1 H, dd), 6.14 (1 H, dd), 5.76 (2H, br.s), 5.26 (1 H, br.s), 3.64 (3H, s), 1.55 (6H, s). 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm157.4, 148.5, 126.8, 118.1 , 110.5, 100.2, 74.2, 55.3, 30.7.
Intermediario 200 N-f2-(1-hidroxi-1-metiletil)-3-(metiloxi)feninacetamida 2-(2-Amino-6-metoxifenil)propan-2-ol (Intermediario 199, 500 mg, 2.76 mmoles) fue disuelto en DCM (10 ml_) y trietilamina (0.770 mi, 5.52 mmoles) fue agregado. La solución fue enfriada a 0°C y tratada con cloruro de acetilo (0.2 mi, 2.76 mmoles) en un modo por goteo. Al final de la adición, la conversión completa fue alcanzada. La mezcla fue tratada con una solución saturada acuosa de NH4CI, dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con una solución saturada acuosa de NaHC03 y salmuera, entonces secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad. El crudo fue purificado por re-formación de lodo en ter-butil metil éter aislando 490 mg del compuesto del titulo como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, D SO-d6): d ppm1 1.53 (1 H, br.s), 7.91 (1 H, d), 7.11 (1 H, t), 6.71 (1 H, d), 6.25 (1 H, br.s), 3.74 (3H, s), 2.50 (1 H, br.s), 2.00 (3H, s), 1.61 (6H, s). 3C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm167.0, 156.6, 138.5, 127.0, 123.1 , 114.3, 107.6, 75.2, 55.7, 30.8, 25.2.
Intermediario 201 2,4,4-trimetil-5-(metiloxi)-4H-3, 1 -benzoxazina A/-[2-(2-hidroxipropan-2-il)-3-metoxifenil]acetamida (Intermediario 200, 470 mg, 2.10 mmoles) fue agregado a ácido fosfórico caliente y calentado a 110°C por 1 hora. La mezcla fue enfriada a temperatura ambiente y templada con agua. Na2C03 sólido fue agregado mientras el pH fue dejado alcanzar ~ 8-9. Agua y DCM fueron agregados y dos fases fueron separadas. Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas dos veces con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporadas a sequedad, para obtener el compuesto del título (342 mg) como un aceite que fue utilizado en el próximo paso sin purificación adicional. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm7.17 (1 H, t), 6.83 (1 H, dd), 6.63 (1 H, dd), 3.78 (3H, s), 1.98 (3H, s), 1.60 (6H, s). ' 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm158.4, 154.7, 139.0, 128.6, 1 17.0 (2C), 109.7, 77.8, 55.7, 28.5, 21.3.
Intermediario 202 2,4,4-trimetil-4H-3, 1 -benzoxazin-5-ol 5-Metoxi-2,4,4-tr¡met¡l-4H-3,1-benzoxazina (Intermediario 201 , 342 mg, 1.67 mmoles) fue disuelto en DCM (7 ml_) ysolución 1 M de BBr3 en DCM (1.67ml, 1.67 mmoles) fue agregado. Después de 1.5 H a temperatura ambiente la mezcla fue calentada a reflujo y después de 6 horas a reflujo, más solución 1 M de BBr3 DCM (1.67 mi, 1.67 mmoles) fue agregado dejando la mezcla a reflujo por la noche. La mezcla de reacción fue templada con una solución saturada acuosa de NaHCOsmientras el pH fue permitido llegar a básico. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre I^SC y evaporada a sequedad, para obtener el compuesto del título (330 mg) como una espuma. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm9.62 (1 , s), 6.98 (1 H, t), 6.62 (1 H, dd), 6.46 (1H, dd), 1.96 (3H, s), 1.62 (6H, s). 13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm157.9, 152.6, 139.2, 128.2, 1 15.4, 115.3, 1 13.9, 77.8, 28.3, 21.3.
Intermediario 203 2,4,4-trimetil-5-f(5-nitro-2-piridil)oxi1-3, -benzoxazina A una suspensión de 2,4,4-trimetil-4/-/-3,1-benzoxazin-5-ol (Intermediario 202, 500 mg, 2.61 mmoles) y 2-cloro-5-nitropiridina (410 mg, 2.58 mmoles) en DMF seco (4 mL) carbonato de potasio (400 mg, 2.89 mmoles) fue agregado y la mezcla resultante fue calentada en un aparato de MW a 70°C por 40 min. La mezcla fue diluida con agua y acetato de etilo, las fases fueron separadas y la acuosa fue extraída de nuevo con acetato de etilo (2 X 20 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera (2 X 20 mL), secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo de 70:30 a 50:50 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (225 mg) como una espuma amarilla.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6ppm 9.05 (1 H, d), 8.63 (1 H, dd), 7.21 - 7.40 (2H, m), 6.84 - 7.02 (2H, m),2.01 (3H, s), 1.50 (6H, s).
Intermediario 204 6-f(2,4,4-trimetil-3l 1-benzoxazin-5-il)oxilpiridin-3-amina A una solución de 2,4,4-trimetil-5-[(5-nitro-2-piridil)oxi]-3,1- benzoxazina (Intermediario 203, 220 mg, 0.70 mmoles) en EtOH (3 mL) paladio en carbón 10% de p/p (25 mg) fue agregado y la mezcla resultante fue agitada durante 40 minutos bajo atmósfera de hidrógeno (2 bar) a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y lavado con EtOH (3 x 10 mL). El filtrado fue concentrado al compuesto del título (185 mg) como un sólido verdoso. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6ppm 7.51 (1 H, d), 7.12 (1 H, t), 7.05 (1 H, dd), 6.75 (2H, d), 6.55 (1 H, d), 5.07 (2H, s), 1.99 (3H, s), 1.58 (6H, s).
Intermediario 205 (2R)-2-amino-2-metil-N-r6-[(2,4,4-trimetil-3,1-benzoxazin-5-il)oxil- 3-piridillbutanamida A una suspensión de 6-[(2,4,4-trimetil-3,1 -benzoxazin-5-il)oxi]piridin-3-amina (Intermediario 204, 185 mg, 0,65 mmoles) y clorhidrato de ácido (R)-2-amino-2-metil-butanoico (100 mg, 0.67 mmoles) en acetato/MeCN de etilo (2 mL, 1 :3 mezcla V/V), una solución al 50 % p/p en acetato de etilo de T3P (0.43 mL) fue agregado por goteo a 0o C. La mezcla entonces fue calentada a 60°C durante 3 horas y a 80°C durante 4.5 horas. La mezcla fue enfriada a temperatura ambiente diluida con agua (5 mL) y acetato de etilo (10 mL), Dos fases fueron separadas y la acuosa fue tratada con una solución saturada de NaHC03 (pH = 8) y extraída de nuevo con acetato de etilo (2 X 10 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 20:80 como eluyente proporcionando el compuesto del título (143 mg) como una espuma amarilla. 1H RMN (400 Hz, DMSO-d6): 6ppm 8.39 (1 H, d), 8.17 (1 H, dd), 7.20 (1 H, t), 7.01 (1 H, d), 6.84 (1 H, d), 6.73 (1 H, d), 2.00 (3H, s), 1.69 (1 H, m), 1.43 - 1.57 (7H, m), 1.21 (3H, s), 0.80 (3H, t).
Intermediario 206 2-[(2,2-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-nitropiridina En un frasco de microondas, 2-cloro-5-nitropiridina (97 mg, 0.609 mmoles) fue disuelto en 3 mL de dimetilformamida. 2,2-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol (100 mg, 0.609 mmoles) y carbonato de potasio (253 mg, 1.827 mmoles) fueron agregados. La mezcla de radiación fue calentada bajo irradiación de microondas durante 1 hora a 1 10C. La mezcla de reacción fue filtrada. El sólido filtrado fue lavado con diclorometano (5ml). Los volátiles fueron evaporados bajo vacio. El compuesto crudo fue disuelto en diclorometano (8 mi) y salmuera fue agregada (8 mi). El compuesto fue extraído 2 veces con diclorometano (2 X 8 mi) y 2 veces con acetato de etilo (2 X 8 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, cartucho de Si de 12g) con ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 80:20 como eluyentes proporcionando él compuesto del título (120 mg).
UPLCJpqc: 1.20 min, 287 [M+H]+.
Intermediario 207 6-f(2,2-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinamina Polvo de hierro (1 12 mg, 2.009 mmoles) fue añadido a una solución de 2-[(2,2-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi)-5-nitropiridina (Intermediario 206, 1 15 mg 0.402 mmoles) en un mezcla de THF/agua (9 ml/3 mi) seguido por la adición de cloruro de amonio (107 mg 2.009 mmoles). La mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y la solución fue diluida con una solución acuosa, saturada acuosa de NaHC03 (10 mi) y acetato de etilo (15ml). Dos fases fueron separadas y la capa acuosa fue extraída dos veces con acetato de etilo (2x15ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Companion, cartucho de gel de sílice de 12g) utilizando ciclohexano/acetato de etilo de 80:20 a 50:50 como eluyentes proporcionando el compuesto del titulo (95 mg).
UPLCjpqc: 0.87 min, 257 [M+HJ+.
Intermediario 208 N-r(1 R)-1-rr6-r(2,2-dimetil-3H-benzofuran-4-il)oxil-3-piridillcarbamoillpropillcarbamato de ter-butilo A una solución de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (17.84 mg, 0.088 mmoles) en N.Ndimetilformamida seca (DMF) (1 mL), DIPEA (25.6 µ?, 0.146 mmoles) y luego HATU (37.8mg, 0.099 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a temperatura ambiente bajo argón. Entonces 6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinamina (Intermediario 207, 15 mg, 0.059 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue dejada por la noche bajo agitación a 35°C bajo argón. La mezcla de reacción fue evaporada. Salmuera (4 mi) fue agregada y fue extraída 3 veces con acetato de etilo (3 X 5 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y evaporadas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Companion, cartucho de sílice de 12g) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100:0 a 70:30 proporcionando el compuesto del título (18 mg).
UPLC_ipqc: 1.21 min, 442 [M+H]+.
Intermediario 209 ((2ffl-2-amino-/\/-(6-r(2.2-dimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinil)butanamida) A una solución de N-[(1 R)-1-[[6-[(2,2-dimetil-3H-benzofuran-4-il)ox¡]-3-piridil]carbamoil]propil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 208, 14 mg, 0.032 mmoles) en diclorometano seco (1 mi) a 0°C, TFA (98 µ?, 1.268 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 4 horas a la misma temperatura. Más diclorometano (4 mi) fue agregado a la mezcla de reacción. Una solución acuosa saturada de NaHC03 entonces fue agregada mientras el pH fue permitido alcanzar- 8. Dos fases fueron separadas y la acuosa fue extraída además con DCM (3 X 3 mi). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas y evaporadas proporcionando el compuesto del título (10mg).
UPLCjpqc: 0.73 min, 342 [M+HJ+.
Intermediario 210 5-(metoximetoxi)-4-metil-cromano En un matraz de fondo redondo de 50 ml_ 2-(3-hidroxi-1-metil-propil)-3-(metoximetoxi)fenol (56,3 mg, 0.249 mmoles) fue disuelto en Tetrahidrofurano (THF) para dar una solución sin color. Trifenilfosfina (59.4 mg, 0.226 mmoles) fue agregada y la mezcla de reacción fue agitada hasta solubilización completa de la trifenilfosfina. DIAD (45.8 mg, 0.226 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada. Trifenilfosfina adicional (59.4 mg, 0.226 mmoles) y DIAD (45.8 mg, 0.226 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción evaporada al vacíoy el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (Biotage SP1 ) en gel de sílice utilizando un cartucho de sílice 10g SNAP como columna y ciclohexano/acetato de etilo 10:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (50.3 mg) como un aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.03 (1 H, t), 6.63(1 H, d), 6.52 (1 H, d), 5.22 (2H, dd), 4.20 - 4.28 (1 H, m), 4.09 - 4.19 (1 H, m), 3.51 (3H,s), 3.09 - 3.23 (1 H, m), 1.96 - 2.17 (1 H, m), 1.61 - 1.74 (1 H, m), 1.31 (3H, d).
Intermediario 211 4-metilcroman-5-ol En un matraz de fondo redondo de 50 mL 5-(metoximetox¡)-4-metil-cromano (Intermediario 210, 50.3 mg, 0.229 mmoles) fue disuelto en Metanol (4 mL) para dar una solución amarilla pálida. Una solución acuosa 2M de HCI (0.100 mL, 0.200 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción se agitó a 50 °C. La adición secuencial de solución 2M/H20 de HCI (0.100 mL, 0.200 mmoles) fueron agregados hasta el término de la reacción. La mezcla de reacción fue templada con 10 mL de agua y diluida con 25 mL de DCM. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La capa orgánica fue evaporada al vacío proporcionando el compuesto del título (38.7 mg) como un aceite anaranjado. 1H RMN (400 Hz, CDCI3) d ppm 6.95 (1 H, t), 6.44 (1 H, d), 6.32 (1 H, dd), 4.87 (1 H, br. s.), 4.20 - 4.31 (1 H, m), 4.07 - 4.19 (1 H, m), 3.05 - 3.15 (1 H, m), 2.02 - 2.19 (1 H, m), 1.66 - 1.74 (1 H, m), 1.32 (3H, d).
Intermediario 212 2-(4-met¡lcroman-5-il)oxi-5-nitro-piridina En un frasco de microondas de 0.5-2ml 4-metilcroman-5-ol (Intermediario 211 , 38.7 mg, 0.212 mmoles) K2C03 (88 mg, 0.636 mmoles) y 2-cloro-5-nitropiridina (33.6 mg, 0.212 mmoles) fueron disueltos en N,N-dimetilformamida (DMF) (2 mL) para dar una solución marrón claro. El recipiente de reacción fue sellado y calentado bajo microondas a 110 °C por 1 hora. Después de enfriar la reacción fue templada con 5 mL de agua y diluida con 10 mL de acetato de etilo. Las fases fueron separadas por un embudo de separación. La fase acuosa fue extraída con mL 3x10 de acetato de etilo. La capa orgánica completa fue secada utilizando una frita hidrófoba y evaporada al vacío para dar el compuesto del título (22.9 mg) como un aceite sin color.
UPLC B: 0.94min, 287 [M+HJ+.
Intermediario 213 6-(4-metilcroman-5-il)oxipiridin-3-amina En un matraz de fondo redondo de 50 mL 2-(4-metilcroman-5-il)oxi-5-nitro-piridina (Intermediario 212, 22.9 mg, 0.08 mmoles) fue disuelto en Etanol (10 mL) para dar una solución amarilla pálida. Pd/C (17.88 mg, 0.017 mmoles) e hidrato de hidrazina (0.4 mL, 4.15 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a 90 °C. La mezcla de racción fue filtrada y evaporada al vacío para dar el compuesto del título (22.9 mg) como un aceite amarillo pálido.
UPLC_B: 0.65min, 257 [M+H]+.
Intermediario 214 N-í1 ,1-dimetil-2-[[6-(4-metilcroman-5-il)oxi-3-piridil1amino1-2-oxo-etillcarbamato de ter-butilo En un frasco de 8 mL el 6-(4-metilcroman-5-il)oxipiridin-3-amina (Intermediario 213, 22.9 mg, 0.089 mmoles) fue disuelto en N,N-Dimetilformamida (3 mL) para dar una solución amarilla pálida. DIPEA (0.069 mL, 0.394 mmoles), N-{[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}-2-metilalanina (60.0 mg, 0.295 mmoles) y HATU (1 12 mg, 0.295 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue sacudida a 60 °C por 1 hora. La mezcla de reacción fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna de 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (63.3 mg) como un aceite sin color.
UPLC_B: 0.91min, 442 [M+H]+.
Intermediario 215 2-amino-2-metil-N-[6-(4-metilcroman-5-il)ox¡-3-piridillpropanamida En un matraz de fondo redondo de 50 mL N-[1 ,1-dimetil-2-[[6-(4-metilcroman-5-il)oxi-3-piridil]amino]-2-oxo-etil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 214, 63.3 mg, 0.093 mmoles), fue disuelto en Diclorometano (DC ) (3 mL) para dar una solución amarillo pálido. La mezcla de reacción fue enfriada a 0 °C y TFA (3 mL, 38.9 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 2horas. La mezcla de reacción fue evaporada al vacio para dar el producto crudo como un aceite amarillo pálido. El residuo fue cargado en un cartucho de SCX de 2g. Entonces fue limpiado con 40 mL de MeOH seguido por 40 mL de solución 2M de amoniaco en MeOH. El eluato del amoniaco fue evaporado al vacío para dar el compuesto del título (22.9 mg) como un aceite sin color.
UPLC_B: 0.77min, 342 [M+HJ+.
Intermediario 216 2-(4-metilcroman-5-il)oxi-5-nitro-pir¡midina 4-metil-3,4-dihidro-2Hcromen-5-ol(lntermediario 211 , 1 1 1 mg, 0.676 mmoles) fue disuelto en 5.0 mL de DMF. K2CO3 (140 mg, 1.01 mmoles) y 2-cloro-5-nitropirimidina (162 mg, 1.01 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 1 hora. DMF entonces fue evaporado bajo alto vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo de 1 :0 a 7:3 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (192 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) 5 ppm 9.36 (2H, s), 7.21 ( H, t), 6.85 (1 H, d), 6.68 (1 H, d), 4.15 -4.35 (2H, m), 2.90-3.02 (1 H, m), 2.08-2.20 (1 H, m), 1.65 - 1.75 (1 H, m), 1.29 (3H, d).
Intermediario 217 2-f(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi1-5-pirimidinamina 2-[(4-metil-3,4-dihidro-2Hcromen-5-il)oxi]-5-nitropirimidina (Intermediario 216, 192 mg, 0.668 mmoles) fue disuelto en 9.0 ml_ de una solución 2/1 de THF/agua. Hierro (187 mg, 3.34 mmoles) y cloruro de amonio (179 mg, 3.34 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por 24 horas a temperatura ambiente. Después de dilución con AcOEt y filtración sobre una almohadilla de celite (lavando con AcOEt), la fase orgánica fue lavada (dos veces) con una solución saturada acuosa de NaHCO3. La capa orgánica fue secada sobre Na2SO4, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo de 1 :0 a 0:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (144 mg).
H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.11 (2H, s), 7.13 (1 H, t), 6.73 (1 H, d), 6.60 (1 H, d), 4.12 -4.30 (2H, m), 3.52 (1 H, br.s), 3.05-3.45 (1 H, m), 2.08-2.18 (1 H, m), 1.63 - 1.73 (1 H, m), 1.31 (3H, d).
Intermediario 2 8 ((1 R)-1-metil-1-[((2-f(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-¡noxi1-5-pirimidinil)amino)carbon¡Hpropil)carbamato 1 ,1-dimetiletilo 2-[(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-5-pirimidinamina (Intermediario 217, 144 mg, 0.56 mmoles) fue disuelto en tolueno (8.0 mL) y (2R)-2-({[(1 , 1 -dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-metilbutanetioato de S-2-piridinilo (Intermediario 139, 86 mg, 0.28 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 140°C por 20 minutos. (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-metilbutanetioato de S-2-piridinilo adicional (Intermediario 139, 134 mg, 0.43 mmoles) fue agregado y la mezcla fue agitada a 140°C durante 15 minutos. (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-met¡lbutanetioato de S-2-piridinilo adicional (Intermediario 139, 100 mg, 0.32 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 50° C por la noche a 80°C y por 4 horas. (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-metilbutanetioato de S-2-piridinilo adicional (Intermediario 139, 100 mg, 0.32 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 80°C por 20 horas. (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)-2-metilbutanetioato de S-2-piridinilo adicional (Intermediario 139, 50 mg, 0.16 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por otras 30 horas a 80° C. Después de enfriamiento los volátiles fueron removido y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (Biotage SP1) en gel de sílice utilizando un cartucho de sílice de 10g SNAP como columna y ciclohexano/acetato de etilo de 10:0 a 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (100 mg).
UPLC_B: 1.13 min, 457 [M+H]+.
Intermediario 219 N1-(2-f(4-metil-3.4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi1-5-pirimidinil)-D-isovalinamida A una solución de {(1 R)-1-metil-1-[({2-[(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-5-pirimidinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 218, 100 mg, 0.219 mmoles) en Diclorometano seco (5 mL), enfriado a 0 °C, TFA (1 ml_, 12.98 mmoles) fue agregado por goteo. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura durante 3 horas, entonces fue permitida alcanzar la temperatura ambiente y agitada a esa temperatura durante 2 horas. Los volátiles fueron evaporados y el residuo fue diluido con DCM (10 mL) y lavados con una solución saturada acuosa de NaHCO3 (10 mL). La capa orgánica fue separada, secada (Na2S04), filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (78 mg) como un sólido blanco que fue utilizado en el próximo paso sin purificación adicional.
UPLC_B: 0.68 min, 357 [M+H]+.
Intermediario 220 5-{[(metiloxi)metilloxi)-2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropanol A una solución de 2,4,6-triclorofenol (307 mg, 1.557 mmoles) en 12.0 mL de DCM, a -40°C, 1 M solución en hexano de dietilconc (1.557 mL, 1.557 mmoles) fue agregado. Después de agitación a esa temperatura por 15 minutos, CH2I2 (0.126 mL, 1.557 mmoles) fue agregada. Después de agitar por otros 15 minutos, 4-metiliden-5-{[(metiloxi)metil]oxi}-3,4-dihidro-2H-cromeno (169 mg, 0.819 mmoles) disuelto en 3.0 mL de DCM fue agregado. El baño frío fue removido y la mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla fue diluida con DCM, lavada con una solución acuosa al 10% de HCI 2 veces, entonces con una solución saturada acuosa de NaHC032 veces, una solución saturada acuosa de a2S03 2 veces y salmuera (2 veces). La capa orgánica fue luego secada sobre Na2OS4, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (Biotage SP1) en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 95:5. El residuo recolectado fue disuelto en DCM y lavado (dos veces) con KOH (30% sol ac). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (145 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 6.96 (1 H, t), 6 52-6.62 (2H, m), 5.05-5.15 (2H, m), 4.22 (2H, dd), 3.47 (3H, s), 1.80-1.86 (2H, m), 1.72-1.80 (2H, m), 0.51-0.61 (2H, m).
Intermediario 221 2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropanl-5-ol 5-{[(metiloxi)metil]oxi}-2,3-dih¡drospiro[cromeno-4,1'-ciclopropano] (Intermediario 220, 145 mg, 0.658 mmoles) fue disuelto en MeOH (6.0 mL) y una solución acuosa 2N de HCI (0.494 mL, 0.99 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 50°C por la noche. Después de adición de agua, MeOH fue removido bajo vacío y la fase acuosa fue extraída con acetato de etilo (tres veces). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2SO , filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando ciciohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (64mg).
UPLC_B: 0.93 min, 177 [M+H]+.
Intermediario 222 2-(2,3-dih¡drospiroícromeno-4,1 '-ciclopropan1-5-iloxi)-5-nitropirimidina A una solución de 2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropan]-5-ol (Intermediario 221 , 63 mg, 0.358 mmoles) en DMF (3 mi) K2C03 (74.1 mg, 0.536 mmoles) y 2-cloro-5-nitropirimidina (86.0 mg, 0.536 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada a ta por 1 H. El DMF entonces fue evaporado bajo alto vacío, agua fue agregada y la mezcla de reacción fue extraída con AcOEt (tres veces). Las capas orgánicas recolectadas fueron secadas sobre Na2S0 , filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando ciciohexano a ciclohexano/acetato de etilo 9:1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (91 mg).
UPLC_B: 1.10 min, 300 [M+H]+.
Intermediario 223 2-(2,3-dihidrospiro[cromeno-4.1 '-ciclopropan1-5-iloxi)-5- 2-(2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-5-nitropirimidina (Intermediario 222, 91 mg, 0.304 mmoles) fue disuelto en 9.0 ml_ de una solución 2/1 de THF/agua. Entonces hierro (85 mg, 1.52 mmoles) y cloruro de amonio (81 mg, 1.52 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 10h. Después de dilución con AcOEt y filtración sobre una almohadilla de celite (lavando con AcOEt), la fase orgánica fue lavada (dos veces) con una solución saturada acuosa de NaHCO3. La capa orgánica fue secada sobre Na2S04, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (52mg).
UPLC_B: 0.82 min, 270 [M+HJ+.
Intermediario 224 [(1 R)-1-(([2-(2,3-dihidrospirorcromeno-4,1 '-ciclopropan1-5-iloxi)-5-pirimidinil1amino)carbonil)-1 -metilpropillcarbamato de 1 , 1 -dimetiletilo A una solución de ácido (2R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-2-metil-butanoico (105 mg, 0.483 mmoles) en ?,?-Dimetilformamida seca (2 mL) DI PEA (0.101 mL, 0.579 mmoles) y HATU (184 mg, 0.483 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a t.a. durante 15 minutos, entonces fue añadida a una solución de 2-(2,3-dihidroespiro[cromeno-4;1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-5-pirimidinamina (Intermediario 223, 52 mg, 0.193 mmoles) en DMF seco (0.5 mL). La mezcla fue calentada a 40°C de noche, entonces fue calentada a 60°C y agitada a esa temperatura durante 4 horas. Después de enfriamiento la reacción fue templada con agua (5 mL) y extraída con acetato de etilo (3x5 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera (3x5 mL), secadas (Na2S04), filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y tolueno a tolueno/acetato de etilo 60:40 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (10 mg) como un sólido blanco.
UPLC_B: 1.15 min, 469 [M+H]+.
Intermediario 225 N1-f2-(2,3-dihidroespiro[cromeno-4,1 '-ciclopropan1-5-iloxi)-5-pirimidinill-D-isovalinamida A una solución de [(1 R)-1-({[2-(2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-5-pirimidinil]amino}carbonil)-1-metilpropil]carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 224, 5 mg, 10.67 en Diclorometano seco (1 ml_) enfriado a 0°C TFA (0.822 pL, 10.67 pmoles) fue agregado por goteo. La mezcla de reacción fue agitada por 2 horas a la misma temperatura. La reacción fue permitida alcanzar la temperatura ambiente entonces los volátiles fueron evaporados. El residuo fue diluido con DCM (2 mL), y lavado con sol. sat. de NaHC03. (7 mL). La capa orgánica fue secada (Na2SO4), filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (4 mg) como un aceite amarillo que fue utilizado en el próximo paso sin purificación adicional.
UPLC_B: 0.71 min, 369 [M+H]+.
Intermediario 226 6-(1 ,1a,2,7btetrahidrociclopropa[c1cromen-7-iloxi)-3-piridinamina En un frasco de 8 mL 5-nitro-2-(1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-ilox¡)piridina (94.6mg, 0.300 mmoles) fue disuelto en Tetrahidrofurano (THF) (3 mL) para dar una solución amarillo pálido. Hierro (84 mg, 1.498 mmoles) y cloruro de amonio (80 mg, 1.498 mmoles) fueron agregados seguido agua (1.500 mL). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente. Hierro adicional (44 mg, 0.75 mmoles) y cloruro de amonio (40 mg, 0.75 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 6 horas. La mezcla de reacción fue templada con 10 mL de una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio y diluida con 25 mL de EtOAc. La mezcla de reacción fue filtrada sobre una almohadilla de celite. Las fases fueron separadas por un embudo de separación. La fase acuosa fue extraída con DCM (3x10 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron evaporadas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (82.9 mg) como un aceite sin color.
H-RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 7.76 (1 H, d), 7.09 (1 H, dd), 7.02 (1 H, t), 6.75(11-1, d), 6.66 (1 H, dd), 6.62 (1 H, dd), 4.32 (1 H, dd), 3.97 (1 H, dd), 3.55 (2H, br. s.), 2.16- 2.27 (1 H, m), 1.61 - 1.76 (1 H, m), 0.98 - 1.07 (2H, m). UPLC_B: 0.78min, 255 [M+H]+.
Intermediario 227 N-[(1 R)-1-ff6-(1.1a.2.7b-tetrahidrociclopropa[c1cromen-7-iloxi)-3-piridillcarbamoill-1-metil-propillcarbamato de ter-butilo En un frasco de 8 mL 6-(1 ,1 a,2,7btetrahidrociclopropa[c]cromen- 7-iloxi)-3-piridinamina (Intermediario 226, 84 mg, 0.0305 mmoles), ácido (2R)-2-(ter-butoxicarbonilamino)-2-metil-butanoico (59.7 mg, 0.275 mmoles) y DIPEA (0.080 ml_, 0.458 mmoles) fueron disueltos en ?,?-Dimetilformamida (DMF) (2 ml_) para dar una solución amarillo pálido. HATU (151 mg, 0.397 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante el fin de semana. La mezcla de reacción fue evaporada al vacio y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (74 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.14 - 8.18 (1 H, m), 8.09 - 8.14 (1 H, m), 7.04 (1 H, t), 6.85 (1 H, d), 6.64 - 6.72 (2H, m), 6.30 (1 H, br. s.), 4.91 (1 H, br. s.), 4.31 (1 H, dd), 3.94 (1 H, dd), 1.83 - 2.17 (3H, m), 1.70 - 1.83 (1 H, m), 1.51 (3H, s), 1.45 (9H, s), 0.91 - 1.05 (5H, m). UPLCjpqc: 1.17 min, 454 [M+H]+.
Intermediario 228 (2R)-N-[6-(1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropafclcromen-7-iloxi)-3-piridill-2-amino-2-metil-butanamida En un matraz de fondo redondo de 50 mL N-[(1 R)-1-[[6- (1 , 1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-iloxi)-3-piridil]carbamoil]-1 -metil-propil]carbamato de ter-butilo (Intermediario 227, 74 mg, 0.139 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (3 mL) para dar una solución amarilla pálido. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y TFA (2 mL, 26.0 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 2 horas. La mezcla de reacción fue evaporada al vacio para dar el producto crudo como un aceite amarillo. La muestra fue cargada en un cartucho SCX de 2 g. Entonces fue limpiada con 36 mL de MeOH seguido por 25 mL de solución 2M de amoniaco en MeOH. El eluato de amoniaco fue evaporado al vacíoproporcionando el compuesto del título (46.2 mg) como un aceite amarillo pálido. 1RMN H (400 MHz, CDCI3) ppm 9,89 (1 H, br. S.), 8,17 - 8,28 (2H, M), 7,04 (1 H, T), 6,81 - 6,88 (1 H, M), 6,65 - 6,71 (2H, M), 4,31 (1 H, dd), 3,95 (1 H, dd), 2,06 - 2,14 (1 H, M), 1 ,91 - 2,05 (1 H, M), 1 ,53 - 1 ,77 (7H, M), 0,94 (3H, T), 0,90 - 1 ,05 (2H, M). LCMS UPLC/MS (método: IPQC2): ta = 0.72 mins, MH+ = 354.UPLC_ipqc: 0.72 min, 354 [M+H]+.
EJEMPLO 1 (5 ?)-3-r4-(1.3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)fenin-5-metil-2.4- imidazolidinadiona Una solución de N1-[4-(1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-iloxi)fenil]-D-alaninamida (Intermediario 7, 80 mg) y TEA (0.187 mi, 1.341 mmoles) en diclorometano (10 mi) fue agitado bajo argón a 0' C. Trifósgeno (39.8 mg, 0.134 mmoles) en diclorometano (4 mi) fue agregado y la mezcla fue dejada bajo agitación a 0°C durante 45 minutos. Una solución saturada acuosa de NaHC03 entonces fue agregada. Las fases fueron separadas y la acuosa fue extraída 3 veces con diclorometano. Las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio y concentradas al vacío. El crudo fue purificado por cromatografía instantánea (FlashMasterPersonal), utilizando como eluyentes un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 40:60. Esto proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (58.5 mg).
H RMN (400 MHz, DMSO-cfe): d ppm 8.49 - 8.44 (1 H, m), 7.39 -7.32 (3H, m), 7.18 - 7.13 (1 H, m), 7.11 - 7.06 (2H, m), 6.91 - 6.87 (1 H, m), 5.09 - 5.03 (2H, m), 4.91 - 4.87 (2H, m), 4.29 - 4.22 (1 H, m), 1.36 (3H, d); UPLC-MS : 0.69 min, 325 [M+1]+ EJEMPLO 2 (5 ?)-5-metil-3-(4-r(3-metil-1.2-bencisoxazol-4-il¾oxilfenil)-2.4- imidazolidinadiona /V1-{4-[(3-metil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}-D-alaninamida (Intermediario 14, 337 mg) fue disuelto en 8.0 ml de acetato de etilo. Trietilamina (0.33 ml, 2.38 mmoles) fue agregada seguido por una solución de trifósgeno (161 mg, 0.54 mmoles) en 2.0 ml de acetato de etilo. Después de 5 minutos de agitación, DMAP (66 mg, 0.54 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 10 minutos. Después de templar con una solución acuosa saturada de NaHC03, la mezcla de reacción fue extraída dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente Cy-Hex/EtOAc de 100/0% a 0/100%. Esto proporcionó el compuesto del título (160 mg). 1H RMN (400 Hz, DMSO-cfe): d ppm 8.49 (1 H, br. s), 7.64 - 7.58 (1 H, m), 7.50 - 7.40 (3H, m), 7.34 - 7.25 (2H, m), 6.76 (1 H, d), 4.34 - 4.18 (1 H, m), 2.58 (3H, s), 1.38 (3H, d); UPLC-MS_B: 0.73 min, 338 [M+H]+.
EJEMPLO 3 (5f?)-3-(4-r(3.6-dimetil-1.2-bencisoxazol-4-il)oxi1fenil)-5-metil-2,4- imidazolidinadiona /V1-{4-[(3,6-dimetil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]fenil}-D-alaninamida (Intermediario 23, 54 mg) fue disuelto en 7.0 mi de acetato de etilo. Entonces trietilamina (0.051 mi, 0.37 mmoles) fue agregado seguido por una solución de trifósgeno (24.6 mg, 0.083 mmoles) en 2.0 mi de acetato de etilo. Después de agitación por 5 minutos, DMAP (10.1 mg, 0.083 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 10 minutos. Después de templar con una solución acuosa de NaHC03, la mezcla fue extraída dos veces con acetato de etilo y las capas orgánicas recolectadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con un gradiente c-Hex/ EtOAc de 100/0 a 0/100 para proporcionar el compuesto del título (11 mg) 1H-RMN (400 MHz, CD3OD): d ppm 7.50 - 7.45 (2H, m), 7.26 -7.16 (3H, m), 6.63 - 6.57 (1 H, m), 4.36 - 4.26 (1 H, m), 2.57 (3H, s), 2.45 (3H, s), 1.52 (3H, d)¡ UPLC-MS_B: 0.78 min, 352 [M+H]+.
EJEMPLO 4 5.5-dimetil-3-{4-r(3-metil-1,2-bencisoxazol-4-il)oxnfenilV2,4- imidazolidinadiona 2-metil-A/1-{4-[(3-metil-1 ,2-bencísoxazol-4-il)oxi]fenil}alaninamida (Intermediario 25, 18 mg) fue disuelto en 4 mi de acetato de etilo. Trietilamina (0.017 mi, 0.12 mmoles) entonces fue agregado seguido por una solución de trifósgeno (8.21 mg, 0.028 mmoles) en 1.0 mi de acetato de etilo. Después de agitación por 5 minutos, DMAP (3.4 mg, 0.028 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por 10 minutos. Después de templar con una solución acuosa saturada de NaHC03, la mezcla fue extraída dos veces con acetato de etilo y las capas orgánicas recolectadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El crudo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido CO c-Hex/EtOAc como eluyentes (de todos 100:0 a 0:100). Esto proporcionó 10 mg del compuesto del titulo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.57 (1 H, br. s), 7.66 -7.57 (1 H, m), 7.51 - 7.43 (3H, m), 7.27 (2H, d), 6.76 (1 H, d), 2.57 (3H, s), 1.43 (6H, s); UPLC-MS: 0.72 min, 352 [M+H]+.
EJEMPLO 5 (5 )-5-etil-3-(6-r(3-etil-1.2-bencisoxazol-4-¡noxi1-3-piridinil)-2,4- imidazolidinadiona (2f?)-2-amino-A/-{6-[(3-etil-1 ,2-bencisoxazol-4-il)oxi]-3-piridinil}butanamida (Intermediario 35) fue disuelto en diclorometano (1.0 mi) y TEA (0.004 mi, 0.03 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y trifósgeno (1.3 mg, 4.49 pmoles) disuelto en 0.1 mi de diclorometano fue agregado. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura por 30 minutos. La mezcla fue templada con 0.5 mi de agua y el agua fue removida por la adición de sulfato de sodio. La fase orgánica fue pipeteada y evaporada y el crudo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con Cyhexano/EtOAv (de 1/0 a 7/3, entonces 7/3, entonces de 7/3 a 1/1 , 1/1 , entonces de 1/1 a 0/1) para proporcionar el compuesto del título (1.3 mg).
H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.35 - 8.31 (1 H, m), 7.92 7.87 (1 H, m), 7.60 - 7.52 (1H, m), 7.46 - 7.41 (1 H, m), 7.19 - 7.13 (1 H, m 7.05 - 7.00 (1 H, m), 5.57 (1 H, br. s), 4.29 - 4.23 (1 H, m), 2.94 (2H, q), 2.12 1.91 (2H, m), 1.39 (3H, t), 1.1 1 (3H, t).UPLC: 0.68 min, 367 [M+H]+.
EJEMPLO 6 (5 ?)-5-etil-3-(6-(r3-(1-metiletil .2-bencisoxazol-4-inoxi 3-piridinil)-2,4- imidazolidinadiona (2f?)-2-am¡no-A/-(6-{[3-(1-metilet¡l)-1 ,2-bencisoxazol-4-il]ox¡}-3-p¡r¡din¡l)butanam¡da (Intermediario 44) fue disuelto en diclorometano (1.0 mi) y TEA (3 µ?_, 0.022 mmoles) fue agregado. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y trifósgeno (0.6 mg, 1.98 pmoles) fue agregado y la mezcla fue agitada a esa temperatura durante 30 minutos. La mezcla de reacción fue templada con agua y el agua fue removida por adición de sulfato de sodio. La fase orgánica fue pipeteada y evaporada y el residuo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 ) y eluido con Cyhexano/EfOAc (de todo 1/0 a 7/3, entonces 7/3, entonces de 7/3 a 1/1 , entonces 1/1 , entonces 0/1 ) para proporcionar el compuesto del título (1 mg). 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.39 - 8.34 (1 H, m), 7.93 - 7.87 (1 H, m), 7.59 - 7.51 (1 H, m), 7.46 - 7.38 (1 H, m), 7.20 - 7.14 (1 H, m), 7.06 - 6.97 (1 H, m), 5.50 (1 H, br. s), 4.31 - 4.23 (1 H, m), 3.42 - 3.32 (1 H, m), 2.08 - 1.91 (2H, m), 1.45 (6H, d), 1.1 1 (3H, t).UPLC: 0.72 min, 381 [M+H]+.
EJEMPLO 7 (5/?)-3-{4-r(3.3-dimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi1fenil)-5-metil-2,4- imidazolidinadiona A una solución de A/1-{4-[(3,3-d¡met¡l-2,3-dih¡dro-1-benzofuran-4-il)oxi]fen¡l}-D-alaninamida(lntermed¡ar¡o 57, 66 mg) en diclorometano (20 mi, SCRC) fue agregado trietilamina (0.085 mi, 0.607 mmoles, SCRC). Trifósgeno (24,00 mg, 0.081 mmoles, SCRC) fue agregado por goteo a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 0.5 horas. La mezcla fue templada con agua (20 mi) y fue extraída con diclorometano (3 veces 50 mi, SCRC). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas, fueron evaporadas y fueron purificadas por cromatografía de columna en gel de sílice con EtAc/PE (1/30) como eluyentes para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (40 mg). 1HRMN (CDCI3): d ppm 7.36 - 7.34 (2H, m), 7.09 - 7.03 (3H, m), 6.60 - 6.58 (1 H, d), 6.41 - 6.39 (1 H, d), 5.60 (1 H, s), 4.27 - 4.25 (3H, m), 1.58 -1.51 (3H, d), 1.42 (6H, s)¡ MS_2 (ESI): 353 [M+H]+ EJEMPLO 8 (5ffl-3-(6-r(3,3-dimetil-2.3-dihidro-1 -ben^^ metil-2,4-imidazolidinadiona A/1-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermediario 61 , 28 mg) fue disuelto en diclorometano seco (3 mi). La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Trietilamina (71.5 pL, 0.513 mmoles) fue agregado. Entonces una solución de trifósgeno en diclorometano seco (11.42 mg, 0.038 mmoles se disolvió en 1 mi de diclorometano) fue agregado por goteo.
La mezcla de reacción fue agitada a 0°C, bajo argón, durante 15 min. Una solución acuosa saturada de NaHC03 fue agregada (4 mi) y la capa acuosa fue extraída con diclorometano 4 veces (4 x 5 mi). Después de secar sobre sulfato de sodio, los solventes fueron removidos bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía en gel de sílice (sistema Companion, cartuchos de sílice 2 x 4g) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 50/50. Esto proporcionó el compuesto del título como una película (17.5 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) : d ppm 8.31 (1 H, d), 7.77 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 7.00 (1 H, d), 6.66 (1 H, d), 6.56 (1 H, d), 5.81 (1 H, br.s), 4.29 (1 H, dd), 4.23 (2H, s), 1.58 (3H, d), 1.37 (6H, s); UPLC_B: 0.76 min, 354 [M+H]+ EJEMPLO 9 (5ft)-3-(6-r(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzo 2,4-imidazólidinadiona Ei compuesto del título fue formado en un modo similar a la preparación del Ejemplo 8 reemplazando A/1-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-D-alaninamida (Intermediario 61 ) con (2R)-2-amino-A/-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-il)ox¡]-3-piridiniljbutanamida (Intermediario 63, 57 mg). Esto proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (40 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.30 (1 H, d), 7.77 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 7.01 (1 H, d), 6.67 (1 H, d), 6.57 (1 H, d), 5.96 (1 H, br.s), 4.23 (2H, s), 4.20 (1 H, m), 2.03 - 1.97 (1 H, m), 1.93 - 1 .87 (1 H, m), 1.38 (6H, s), 1.06 (3H, t)¡ UPLC: 0.73 min, 368 [M+H]+ EJEMPLO 10 (5 )-3-(2-r(3,3-dimet¡l-2,3-dihidro-1 -benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidinil -5- etil-2,4-imidazolidinadiona A una solución de (2R)-2-amino-N-{2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}butanamida (Intermediario 67, 3 mg) en diclorometano seco (0.5 mi), TES (6.11 µ?_, 0.044 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de trifósgeno (1.170 mg, 3.94 pmoles) en diclorometano seco (0.125 mi) entonces fue agregada por goteo y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 30 minutos. La reacción fue templada con agua (3 mi), y la fase orgánica fue separada, secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna Isolute (1 9) y diclorometano/metanol de 99.5:0.5 a 9:10 como eluyente para proporcionar el compuesto del título (0.7 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 Hz, CDCI3): d ppm 8.73 (2H, s), 7.18 (1 H, t), 6.72 (1 H, d), 6.63 (1 H, d), 5.58 (1H, bs), 4.28-4.23 (1 H, m), 4.24 (2H, s), 2.09-1.89 (2H, m), 1.37 (6H, s). 1.09 (3H, t).
EJEMPLO 11 7-(6-r(3,3-dimetil-2,3-di idro-1-benzofuran-4-il)oxi1-3-piridinil>-5J- diazaspirof3.41octano-6,8-diona 1 amino-N-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}ciclobutanocarboxamida (Intermediario 70, 17 mg) fue disuelto en diclorometano seco (1.8 mi). La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Trietilamina (39.48 µ?, 0.283 mmoles) fue agregada a 0o C. Entonces 0.89 mi de una solución de trifósgeno en diclorometano seco fue agregada por goteo (0.0135 mg, 4.00mg). La mezcla de reacción fue agitada bajo argón durante 10 min a 0o C, entonces durante 30 min a temperatura ambiente. Entonces un adicional de 0.25 equivalentes de trifósgeno en diclorometano (solución 0.26 M) fue agregado a 0°C y la mezcla de reacción fue agitada bajo argón otros 30 min á temperatura ambiente. Los solventes fueron removidos bajo vacío. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (sistema Companion, cartucho de sílice 4g) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 55/45. Esto proporcionó el compuesto del título (12 mg).
H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.31 (1 H, d), 7.76 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 7.1 1 (1 H, d), 6.67 (1 H, d), 6.65 (1 H, d), 5.70 (1 H, s), 2.50 (2H,s), 4.74 (2H, m), 2.43 (2H, m), 2.24 (1 H,m), 1.94 (1 H, m), 1.38 (6H, m); UPLC. 0.72 min, 380 [M+HJ+ EJEMPLO 12 e-ie-fQ^-dimetil^^-dihidro-l-benzofuran^-iDoxil-S-piridinil)^^- diazaspirof2.4Theptano-5,7-diona El compuesto del título (5 mg, 49% rendimiento) fue formado en un modo similar a la preparación del Ejemplo 1 1 reemplazando 1-amino-A/-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridiniljciclobutanocarboxamida (Intermediario 70) con 1-amino-A/-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}ciclopropanocarboxamida (Intermediario 73.9 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD): d ppm 8.24 (1 H, m), 7.93 (1 H, m), 7.14 (1 H, t), 7.07 (1 H, d), 6.64 (1 H, d), 6.54 (1 H, d), 4.22 (2H,s), 1.51 (2H, m), 1.42 (2H, m), 1.35 (6H, s); UPLC: 0.78 min, 366 [M+H]+ EJEMPLO 13 3-(6-r(3,3-dimet¡l-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)oxn-3-piridinil)-5,5-dimet»l- 2,4-imidazolidinadiona N1-{6-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2-metilalaninamida (Intermediario 75, 7.5 mg) fue disuelto en el diclorometano seco (1 mi). La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Trietilamina (18.37 pL, 0.132 mmoles) fue agregado a 0o C. Entonces 0.5 mi de una solución de trifósgeno en diclorometano seco (0.012 mmoles) fue agregado por goteo. La solución fue preparada con 7.18 mg de trifósgeno disuelto en 1 mi de diclorometano). La mezcla de reacción fue agitada bajo argón durante 10 min a 0o C, entonces durante 30 min a temperatura ambiente. Una solución acuosa saturada de NaHCC>3 fue agregada y la capa acuosa fue extraída con diclorometano 4 veces. Después de secar sobre sulfato de sodio, los solventes fueron removidos bajo vacio.
El residuo obtenido fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (sistema Companion, cartucho de sílice 4g) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 55/45. Esto proporcionó el compuesto del título (4.5 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.31 (1 H, d), 7.77 (1 H, dd), 7.12 (1 H, t), 6.99 (1 H, d), 6.66 (1 H, d), 6.56 (1 H, d), 5.47 (1 H, br s), 4.22 (2H, s), 1.56 (6H, s), 1.36 (6H, s); UPLC: 0.70 min, 368 [M+H]+ EJEMPLO 14 (5ff^3-(2-f(3.3-dimetit-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il oxn-5-pirimidinil)-5- (1 ,1 -dimetiletil)-2,4-imidazolidinadiona N1-{2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-3-metil-D-valinamida (Intermediario 78, 9.9 mg) fue disuelto en diclorometano seco (1 mi). La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Thetilamina (22.35 pL, 0.160 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Entonces 0.5 mi de una solución de trifósgeno en diclorometano seco (0.015 mmoles) fue agregada por goteo. La mezcla de reacción fue agitada bajo argón durante 20 min a 0o C. Algo de agua (2 mi) fue agregada y la capa acuosa fue extraída con diclorometano 4 veces. Después de secar sobre sulfato de sodio, los solventes fueron removidos bajo vacio. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (sistema Companion, cartucho de sílice 4g) con ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 60/40. Esto proporcionó el compuesto del título (7.7 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.68 (2H, s), 7.17 (1 H, t), 6.71 (1 H, d), 6.62 (1 H, d), 6.19 (1 H, s), 4.23 (2H, s) 3.92 (1 H, s) 1.36 (6H, s) 1.12 (9H, s)¡ UPLC: 0.75 min, 397 [M+H]+ EJEMPLO 15 (5f?)-5-etil-3-r6-(espirof1-benzofuran-3,1'-ciclopropan1-4-iloxi)-3-piridinin- 2,4-imidazolidinadiona A una solución de (2R)-2-amino-N-[6-(espiro[1 -benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]butanamida (Intermediario 89, 90 mg) en diclorometano seco (15 mi) TEA (0.185 mi, 1.326 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de trifósgeno (35.4 mg, 0.119 mmoles) en diclorometano seco (5 mL) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10 mi) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (65 mg, 0.178 mmoles) como un sólido blanco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.63 (1 H, s), 8.14 (1 H, d), 7.85 (1 H, dd), 7.1 1 (1 H, s), 7.09 (1 H, t), 6.68 (1 H, dd), 6.52 (1 H, dd), 4.45 (2H, s), 4.18-1.24 (1 H, m), 1.76-1.88 (1 H, m), 1.64-1.76 (1 H, m), 1.13-1 .18 (2H, m), 0.96 (3H, t), 0.89-0.94 (2H, m); UPLC_B: 0.78 min, 366 [M+H]+.
EJEMPLO 16 5,5-dimetil-3-f6-(espiroM -benzofuran-3,1'-ciclopropan -iloxi)-3-piridinin- 2,4-imidazolidinadiona A una solución de 2-metil-N1-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]alaninamida (Intermediario 91 , 34 mg) en diclorometano seco (6 mL) TEA (0.070 mL, 0.501 mmoles) fue agregado y la mezcla fue enfriada a 0°C. Una solución de trifósgeno (13.38 mg, 0.045 mmoles) en diclorometano seco (2 ml_) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (3ml) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 7:3 a ciciohexano/acetato de etilo 3:7 como eluyentes proporcionando el titulo como un sólido blanco (23 mg). 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.63 (1 H, s), 8.17 (1H, d), 7.88 (1 H, d), 7.06-7.12 (2H, m), 6.67 (1 H, d), 6.51 (1 H, d), 4.45 (2H, s), 1.41 (6H, s), 1.12-1.17 (2H, m), 0.88-0.93 (2H, m); UPLC: 0.73 min, 366 [M+HJ+.
EJEMPLO 17 (5 ?)-5-etil-5-metil-3-f6-(espirof1-benzofuran-3,1'-ciclopropan1-4-iloxi)-3- piridinil1-2,4-imídazolidinadiona A una solución de N1-[6-(espiro[1-benzofuran-3,1 '-ciclopropan]-4-iloxi)-3-piridinil]-D-isovalinamida (Intermediario 93, 68 mg) y TEA (0.134 mL, 0.962 mmoles) en diclorometano seco (11 mi) a 0 °C fue agregada por goteo una solución de trifósgeno (25.7 mg, 0.087 mmoles) en diclorometano seco (3.14 m) y la mezcla así obtenida fue agitada a la misma temperatura. Después de 1 hora una solución de trifósgeno (25.7 mg, 0.087 mmoles) en diclorometano seco (3.14 mi) fue agregada. Después de 3 horas el UPLC/MS mostró la ausencia del material de partida y la presencia del compuesto deseado. Agua entonces fue agregada, la fase orgánica fue separada y la acuosa fue extraído otra vez con diclorometano. La fase orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre sulfato de sodio y concentrada bajo vacío para dar 87mg de crudo. Esto se purificó por cromatografía instantánea (columna Biotage KP-Sil 10g SNAP, eluyente ciclohexano/acetato de etilo de 88/12 a 0/100 en 10CV) para dar 47mg del compuesto del título como una espuma blanca. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.59 (1 H, s), 8.14 (1 H, d), 7.85 (1 H, dd), 7.08 (2H, t), 6.66 (1 H, d), 6.50 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 1.70-1.84 (1 H, m), 1.57-1.70 (1 H, m), 1.38 (3H, s), 1.08-1.19 (2H, m), 0.89-0.95 (2H, m), 0.85 (3H, t)¡ UPLC: 1.04 min, 380 [M+H]+.
EJEMPLO 18 (5/?)-5-et¡l-3-(6-(r(3S//?)-3-metil-1.3-dihidro-2-benzofuran-4-¡noxi)-3- piridinil)-2,4-imidazolidinadiona (mezcla diastereoisomérica) 2 diastereoisómeros En un matraz de fondo redondo de 50 mi (2R)-2-amino-N-{6-[(3-metil-1 ,3-d¡hidro-2-benzofuran-4-il)ox¡]-3-p¡rid¡n¡l}butanam¡da (Intermediario 102, 24.4 mg) fue disuelto en diclorometano (3 mi) para dar una solución amarillo pálido que fue enfriada a 0°C. TEA (0.049 mi, 0.354 mmoles) fue agregado. Una solución de trifósgeno (9.46 mg, 0.032 mmoles) en 0.7ml de diclorometano fue agregada por goteo a la mezcla de la reacción a 0° C. Después de 20 minutos, la mezcla de reacción fue templada con 5 mi de agua y diluida con 5 mi de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema de Biotage SP1 , columna de Sílice de 10g SNAP) con cidohexano/EtOAc como eluyentes (de 2/1 a 1/2 en 15 CV; entonces 1/2 para 10 CV). Las fracciones recolectadas proporcionaron el compuesto del título como una mezcla 1 :1 de diastereoisómeros (20.2 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.27 (1 H, d), 7.78 (1 H, dd), 7.33 (1 H, t), 7.09 (1 H, d), 7.06 - 6.96 (2H, m), 5.91 (1 H, br. s.), 5.40 - 5.29 (1 H, m), 5.20 (1 H, dd), 5.09 (1 H, d), 4.25 - 4.18 (1 H, m), 2.08 - 1 .84 (2H, m), 1 .45 (3H, d), 1 .07 (3H, t). UPLCjpqc: 0.87 min, 354 [M+H]+ EJEMPLO 19 Y EJEMPLO 20 (5R)-5-etil-3-{6-r(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxil-3-piridinil)-2.4- imidazolidinadiona (diastereoisómeros 1 y 2) quiral - diastereoisómero 1 qu¡ral - diastereoisómero 2 Ambos diastereoisómeros del Ejemplo 18 fueron separados por cromatografía quiral preparativa.
Las condiciones de HPLC Quiral preparativa fueron las siguientes: Columna: Chiralpak AS-H (25 x 2 cm), 5u; fase móvil: n-Hexano/Etanol 70:30 % v/v; velocidad de flujo: 15 ml/min; UV: 220 nm; preparación de muestra: 20 mg se disolvió en 1 mi de hexano/etanol 1 : 1 VA/; concentración de Muestra: 20 mg/ml; volumen de inyección: 1000 uL.
Las condiciones de la cromatografía Analítica Quiral fueron las siguientes: Columna: Chiralpak AS-H (25 x 0.46 cm); fase móvil: n-Hexano/Etanol 70:30 % v/v; velocidad de flujo: 0.8 ml/min; DAD: 2 0-340 nm; CD: 240 nm.
Esta HPLC Quiral Preparativa dio •Ejemplo 19 que fue el diastereoisómero 1 de (5R)-5-etil-3-{6-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinad (7.1 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d???t? 8.27 (d, 1 H), 7.78 (dd, 1 H), 7.33 (t, 1 H), 7.09 (d, 1 H), 6.96 - 7.06 (m, 2 H), 5.91 (br. s., 1 H), 5.29 - 5.40 (m, 1 H), 5.20 (dd, 1 H), 5.09 (d, 1 H), 4.18 - 4.25 (m, 1 H), 1.84 - 2.08 (m, 2 H), 1.45 (d, 3 H), 1.07 (t, 3 H). UPLC-MS_¡pqc: 0.87 min, 354 [M+1]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: t.a. = 12.327 min, 100% d.e.
•Ejemplo 20 que fue el diastereoisómero 2 de (5R)-5-etil-3-{6-[(3-metil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-p¡ridinil}-2,4-imidazolid¡nadiona (8.0 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.27 (d, 1 H), 7.78 (dd, 1 H), 7.33 (t, 1 H), 7.09 (d, 1 H), 6.96 - 7.06 (m, 2 H), 5.91 (br. s., 1 H), 5.29 - 5.40 (m, 1 H), 5.20 (dd, 1 H), 5.09 (d, 1 H), 4.18 - 4.25 (m, 1 H), 1.84 - 2.08 (m, 2 H), 1.45 (d, 3 H), 1.07 (t, 3 H). UPLC-MS_¡pqc: 0.87 min, 354 [M+1 ]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: t.a. = 16.579 min, 100% d.e.
EJEMPLO 21 (5 ?)-5-etil-3-(6-r(3-et¡l-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxn-3-piridinil>-2.4- imidazolidinadiona (mezcla diastereomérica) En un matraz de fondo redondo de 50 mi (2R)-2-amino-N-{6-[(3-etil-1 ,3-dih¡dro-2-benzofuran-4-¡l)oxi]-3-p¡hd¡nil}butanam¡da (Intermediario 1 10, 9 mg) fue disuelto en diclorometano (2 mi) para dar una solución amarillo pálido que fue enfriada a 0°C. TEA (0.017 mi, 0.119 mmoles) fue agregado. 0.5 mi de una solución de trifósgeno (14 mg en 2 mi de diclorometano) fue agregada por goteo a la mezcla de reacción a 0o C. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 20 minutos, la reacción fue completada. La mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para proporcionar el producto crudo como un aceite amarillo pálido que fue purificado a través de Biotage SP1 (con ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 2:1 a 1 :2 en 15 CV; entonces 1 :2 para 10 CV; columna de Sílice de 10g SNAP). Las fracciones completas proporcionaron el compuesto del título (5R)-5-etil-3-{6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-p¡hdinil}-2,4-im¡dazolid¡nadiona (6.9 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) óppm 8.29 (1 H, d), 7.80 (1 H, dd), 7.35 (1 H, t), 7.1 1 (1 H, d), 6.99 - 7.07 (2 H, m), 5.91 (1 H, br. s.), 5.25 - 5.33 (1 H, m), 5.21 (1 H, dd), 5.14 (1 H, d), 4.21 - 4.26 (1 H, m), 1.82 - 2.13 (3 H, m), .69 - 1.81 (1 H, m), 1.09 (3 H, t), 0.93 (3 H, t). UPLC_B: 0.78 min, 368 [M+H]+.
EJEMPLO 22 Y EJEMPLO 23 (5ffl-5-etil-3-(6-r(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxn-3-piridinil)-2,4- imidazolidinadiona (diastereoisómeros 1 y 2) quiral - diastereoisómero 1 quiral - diastereoisómero 2 Ambos diastereoisómeros del Ejemplo 21 fueron separados por cromatografía quiral preparativa proporcionando dos fracciones.
Las condiciones de HPLC Quiral preparativa fueron las siguientes: Columna Chiralpak AD-H (25 x 2 cm) 5pm; fase móvil n-Hexano 12-Propanol 85:15 % v/v; velocidad de flujo (ml/min) 15; detección de UV 220 nm; preparación de muestra 4 mg disuelto en 2 mi de metanol/etanol 50:50 % v/v; concentración de muestra 2 mg/ml; volumen de inyección 2000 µ? (equivalente a 4 mg) Las condiciones de la Cromatografía Analítica Quiral fueron las siguientes: Columna: Chiralpak AD-H (25 x 0.46 cm); fase móvil: n-hexano/2-Propanol 85:15 % v/v; velocidad de flujo: 0.8 ml/min; DAD: 210-340 nm; CD: -.
Esta HPLC Quiral preparativa produjo: • Ejemplo 22 que fue diastereoisómero 1 de (5R)-5-etil-3-{6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridin¡l}-2,4-imidazolidinadiona (2.3 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD) d ppm 8.17 (1 H, d), 7.89 (1 H, dd), 7.37 (1 H, t), 7.17 (1 H, d), 7.10 (1 H, d), 7.01 (1 H, d), 5.13 - 5.23 (2 H, m), 5.08 (1 H, d), 4.25 (1 H, dd), 1.78 - 2.01 (3 H, m), 1.64 - 1.78 (1 H, m), 1.05 (3 H, t), 0.81 -0.89 (3 H, m). NH perdido. UPLC_B: 0.76 min, 368 [M+1]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: 14.93 min, 98.6% d.e.
• Ejemplo 23 que fue diastereoisómero 2 de (5R)-5-etil-3-{6-[(3-et¡l-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-imidazolidinadiona (2.6 mg). 1H RMN (400 MHz, MeOD) d ppm 8.18 (1 H, d), 7.89 (1 H, dd), 7.38 (1 H, t), 7.17 (1 H, d), 7.10 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 5.13 - 5.24 (2 H, m), 5.09 (1 H, d), 4.25 (1 H, dd), 1.79 - 2.05 (3 H, m), 1.65 - 1.78 (1 H, m), 1.06 (3 H, t), 0.85 (3 H, t). NH perdido. UPLC_B: 0.76 min, 368 [M+1 ]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: 17.51 min, 100% d.e.
EJEMPLO 24 5,5-dimetil-3-(6-r(3-metil-3,4-dihidro-2H-crom imidazolidinadiona (mezcla racémica) racemato En un matraz de fondo redondo de 50 mi 2-metil-N1-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}alaninamida (Intermediario 121 , 72.6 mg) fue disuelto en diclorometano (5 mi) para dar una solución amarilla pálido.
TEA (0.142 mi, 1.021 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Una solución de trifósgeno (27.3 mg, 0.092 mmoles) en ml de diclorometano fue agregada a la mezcla de reacción que fue agitada a 0°C. Después de 15 minutos, solución de trifósgeno adicional (27.3 mg, 0.092 mmoles) en ml de diclorometano fue agregada a la mezcla de reacción. Después de 15 minutos, la mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío para dar el producto crudo que fue purificado a través de Biotage SP1 (utilizando ciclohexano/EtOAc como eluyentes de 3:1 a 1 :2 en 10 CV; entonces 1 :2 para 5 CV; columna de Sílice de 10g SNAP). Las fracciones recolectadas proporcionaron el compuesto del título 5,5-dimetil-3-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-pirid¡nil}-2,4-imidazolidinadiona como un aceite sin color (41.6 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.28 (1 H, d), 7.75 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, d), 6.74 (1 H, dd), 6.65 (1 H, dd), 5.76 (1 H, br. s.), 4.15 - 4.20 (1 H, m), 3.63 - 3.74 (1 H, m), 2.72 - 2.82 (1 H, m), 2.06 - 2.23 (2 H, m), 1.57 (6 H, s), 1.02 (3 H, d). UPLC_B: 0.80 min, 368 [M+H]+.
EJEMPLO 25 Y EJEMPLO 26 5.5-dimetil-3-(6-r(3-metil-3.4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxn-3-p¡ridinil)-2.4- imidazolidinadiona (enantiómero 1 y enantiómero 2) Ambos enantiómeros del Ejemplo 24 fueron separados por cromatografía quiral preparativa.
Las condiciones de la HPLC quiral preparativa fueron las siguientes: Columna: Chiralpak AD-H (25 x 2 cm), 5u; fase móvil: n-hexano/Etanol 40/60 v/v; velocidad de flujo: 15 ml/min; UV: 220 nm; preparación de muestra: 50 mg disuelto en 2 mi de etanol Agregado 1 mi de n-hexano; concentración de Muestra: 16.7 mg/ml; volumen de inyección: 1000 ML Las condiciones de la cromatografía analítica quiral fueron las siguientes: Columna: Chiralpak AD-H (25 x 0.46 cm); fase móvil: n-hexano/Etanol 40:60 % v/v; velocidad de flujo: 0.8 ml/min; DAD: 210-340 nm.
Esta cromatografía quiral preparativa dio • Ejemplo 25 que fue el enantiómero 1 de 5,5-dimetil-3-{6-[(3- metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-piridinil}-2,4-^ (16.6 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.28 (1 H, d), 7.75 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, d), 6.74 (1 H, dd), 6.65 (1 H, dd), 5.76 (1 H, br. s.), 4.15 - 4.20 (1 H, m), 3.63 - 3.74 (1 H, m), 2.72 - 2.82 (1 H, m), 2.06 - 2.23 (2H, m), 1.57 (6H, s), 1.02 (3H, d). UPLC_B: 0.81 min, 368 [M+H]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: 12.48 min, 100.0% e.e.
• Ejemplo 26 que fue el enantiómero 2 de 5,5-dimetil-3-{6-[(3-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-3-píridin¡l}-2,4-imidazolid¡nadiona (17.0 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.28 (1 H, d), 7.75 (1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, d), 6.74 (1 H, dd), 6.65 (1 H, dd), 5.76 (1 H, br. s.), 4.15 - 4.20 (1 H, m), 3.63 - 3.74 (1 H, m), 2.72 - 2.82 (1 H, m), 2.06 - 2.23 (2H, m), 1.57 (6H, s), 1.02 (3H, d). UPLC_B: 0.81 min, 368 [M+H]+. HPLC de Cromatografía Analítica Quiral: 14.68 min, 98.4% e.e.
EJEMPLO 27 5,5-dimetil-3-(6-r(1a-metil-1 ,1a,2,7b-tetrahidrocicloproparc1cromen-7- il)oxfl-3-p¡ridinil)-2,4-imidazolidinadiona (mezcla racémica) A una solución de 2-metil-N1-{6-[(1a-metil-1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxi]-3-piridinil}alaninamida (Intermediario 129, 100 mg) en diclorometano seco (10 mi) TEA (0.177 mi, 1.273 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. En este punto una solución de trifósgeno (37.8 mg, 0.127 mmoles) en diclorometano seco (2.5 mi) fue agregado lentamente (durante 30 minutos) y la mezcla de reacción fue agitada durante 1 hora a la misma temperatura. La reacción entonces fue templada con agua y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Companion, con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo 8:2 a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1) para dar el compuesto del título como un sólido blanco (40 mg, 0.103 mmoles). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.33 (1 H, d), 7.77 (1H, dd), 7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.74 (2H, dd), 5.60 (1 H, br. s.), 4.19 (1 H, d), 3.72 (1 H, d), 1.88 (1 H, dd), 1.59 (6H, s), 1.18 - 1.26 (4H, m), 0.87 (1 H, dd); UPLCjpqc: 1.03 min, 380 [M+H]+.
EJEMPLO 28 Y EJEMPLO 29 5,5-dimetil-3-(6-[(1a-metil-1 ,1a.2.7b-tetrahidrocicloproparc1cromen-7-M)oxfl-3-piridinil)-2,4-imidazolidinadiona (enantiómero 1 y enantiómero 2) Ambos enantiómeros del Ejemplo 27 fueron separados por cromatografía SFC quiral semi-preparativa. Las condiciones de SFC quiral fueron las siguientes: Columna: Chiralpak IC (25 x 2.1 cm); fase móvil: Etanol +0.1% l-propilamina 20%; velocidad de flujo: 45 ml/min; Presión: 120 bar; UV: 220 nm; Esta cromatografía SFC quiral semi-preparativa en 30 mg del Ejemplo 27 dio: • Ejemplo 28 que fue el enantiómero 1 de 5,5-dimetil-3-(6-f(1a-metil-1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-il)oxn-3-piridinil)-2,4-imidazolidinadiona (12mg). 1H R N (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.33 (1H, d), 7.77 (1H, dd), 7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.74 (2 H, dd), 5.81 (1H, s), 4.19 (1H, d), 3.72 (1H, d), 1.88 (1 H, dd), 1.60 (6H, s), 1.16 - 1.24 (4H, m), 0.87 (1 H, dd); Quiral Analytical SFC Chromatography: 7.51 min, 100.0% e.e. • y el Ejemplo 29 que fue el enantiómero 2 de 5,5-dimetil-3-{6-f(1a-metil-1 , a,2,7b-tetrahidrociclopropa[clcromen-7-il)oxn-3-piridinil>-2,4-imidazolidinadiona (14mg).
H RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.33 (1 H, d), 7.77 (1 H, dd), 7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.74 (2 H, dd), 5.87 (1H, s), 4.19 (1H, d), 3.72 (1H, d), 1.88 (1 H, dd), 1.59 (6H, s), 1.19 - 1.23 (4H, m), 0.87 (1 H, dd); Quiral Analytical SFC Chromatography: 9.40 min, 100.0% e.e.
EJEMPLO 30 (5 ?)-5-etil-5-metil-3-f6-(1H-espirof2-benzopiran-4,1'-ciclopropanl-5-iloxi)- 3-piridinin-2,4-imidazolidinadiona A una solución de N1-[6-(1 H-espiro[2-benzopiran-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-3-piridinil]-D-isovalinamida (Intermediario 141 , 40 mg) en diclorometano seco (8 ml_) TEA (0.076 mL, 0.544 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Una solución de trifósgeno (14.54 mg, 0.049 mmoles) en diclorometano seco (4 mi) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 3 horas a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10 mi) y las dos fases se separaron. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) utilizando gel de sílice 10 G SNAP y ciciohexano/acetato de etilo como eluyentes de 7:3 a 3:7 como eluyente. Esto proporcionó el compuesto del título (25 mg) como un sólido blanco.
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.60 (1 H, s), 8.15 (1 H, d), 7.87 (1 H, dd), 7.15 (1 H, t), 7.10 (1 H, d), 6.95 (1 H, d), 6.79 (1 H, d), 4.85 (2H, s), 3.54 (2H, s), 1.72-1.84 (1 H, m), 1.60-1.72 (1 H, m), 1.39 (3H, s), 1.33-1.38 (2H, m), 0.87 (3H, t), 0.62-0.67 (2H, m); UPLCJPQC: 0.97 min, 394 [M+H]+: EJEMPLO 31 3-(2-r(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-5-pirimidinil)-5,5- dimetil-2,4-imidazolidinadiona A una solución de N1-{2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-2-metilalaninamida (Intermediario 143, 18 mg, 0.053 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (3 mL) TEA (0.037ml, 0.263 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Una solución de trifósgeno (7.02 mg, 0.024 mmoles) en Diclorometano seco (1 mL) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas mientras la temperatura fue dejada alcanzar la t.a. La reacción fue templada con agua (3ml) y las dos fases fueron separadas.La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage en gel de sílice utilizando una columna 10 g SNAP ciclohexano/acetato de etilo de 8:2 a 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (13 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.72-8.77 (3H, m), 7.17 (1 H, t), 6.65-6.75 (2H, m), 4.23 (2H, s), 1.43 (6H, s), 1.25 (6H, s). UPLC: 0.67 min, 369 [M+H]+.
EJEMPLO 32 (5/?)-3-(2-r(3.3-dimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxn-5-pirimidm metiletil)-2,4-imidazolidinadiona A una solución de N1-{2-[(3,3-dimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}-D-valinamida(lntermediario 145, 38 mg, 0.107 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (5 mL) TEA (0.074 mL, 0.533 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0 °C. Una solución de trifósgeno (14.24 mg, 0.048 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (1 mL) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (3 mi) y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 8:2 a 1 :1 como eluyente proporcionando el compuesto del título (15 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.77 (1 H, br.s), 8.62 (2H, s), 7.18 (1 ?, t), 6.65-6.75 (2H, m), 4.22 (2H, s), 4.15-4.20 (1H,m), 2.10-2.20 (1 H, m),1.25 (6H, s), 1.03 (3H, d), 0.90 (3H, d). UPLC: 0.71 min, 383 [M+H]+.
EJEMPLO 33 (5fl)-3-{6-r(2,2-dimetil-2.3-dihidro-1-ben^ 2,4-imidazolidinadiona ((2R)-2-amino-N-{6-[(2,2-dimet¡l-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-¡l)oxi]-3-pirid¡n¡l}butanam¡da)(lntermed¡ar¡o 209, 10 mg, 0.029 mmoles) fue disuelto en diclorometano seco (1 mi). La mezcla de reacción fue enfriada en un baño de hielo. Trietilamina (0.024 mi, 0.176 mmoles) fue agregada a 0°C. Luego 0.5 mi de una solución de trifósgeno en diclorometano seco (4.78 mg, 0.016 mmoles en 0.5 mi) fue agregado por goteo. La mezcla de reacción fue agitada bajo argón durante 20 min a 0°C. Una solución saturada acuosa de NaHCOa fue agregada (3 mi). La capa acuosa fue extraída con diclorometano 4 veces (4 X 4 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2SO4 y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Companion) en gel de sílice utilizando un carticho de 4g y ciclohexano/acetato de etilo de 100:0 a 60:40 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (7mg). 1H RMN (400MHz, CDCI3): d ppm 8.29 (1 H, d), 7.74 (1 H, dd), 7.14 (1 H, d), 7.00 (1 H, d), 6.61 (1 H, dd), 6.55 (1 H, d), 5.91 (1 H, br.s), 4.20-4.25 (1 H, m), 3.02 (2H, s), 1.85-2.10 (2H, m), 1.51 (6H, s), 1.08 (3H, t).
UPLC_B: 1.02 min, 368 [M+H]+.
EJEMPLO 34 515-dimetil-3-r6-(1H-espiror2-benzopiran-4,1'-ciclopropan1-5-iloxi)-3- piridinin-2,4-i imidazolidinadiona A una solución de 2-metil-N1-[6-(1 H-espiro[2-benzopiran-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-3-piridinil]alaninamida (34 mg, 0.096 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (5 mL) TEA (0.067 mL, 0.481 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0 °C. Una solución de trifósgeno (12.85 mg, 0.043 mmoles) en Diclorometano seco (DCM) (2 mL) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (5ml) y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columns 10g SNAP y diclorometano/metanol 99:1 a Diclorometano/metanol 95:5 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (35 mg) como un sólido blanco.
H RMN (400MHz, DMSO-d6): d ppm 8.63 (1 H, s), 8.18 (1 H, d), 7.90 (1 H, dd), 7.16 (1 H, t), 7.10 (1 H, d), 6.96 (1 H, dd), 6.80 (1 H, dd), 4.86 (2H, s), 3.55 (2H, s), 1.43 (6H, s), 1.34-1.39 (2H, m), 0.63-0.68 (2H, m).UPLC_B: 0.92 min, 380 [M+H]+.
EJEMPLO 35 (5 ?)-3-r2-(2,3-dihidrospirofcromeno-4,1'-ciclopropanV5-iloxi)-5- pirimidinil1-5-etil-5-metil-2,4-imidazolidinadiona A una solución de N1-[2-(2,3-dihidrospiro[cromeno-4,1 '-ciclopropan]-5-iloxi)-5-pirimid¡nil]-D-isovalinamida (Intermediario 225, 4 mg, 10.86 pmoles) en Diclorometano seco (1 mL) TEA (3.78 µ?_, 0.027 mmoles) fue agregado. La reacción fue enfriada en un baño de hielo, luego una solución de trifósgeno (1.450 mg, 4.89 pmoles) en Diclorometano seco (0.250 mL) fue agregado y luego otras dos veces con 10 minutos de intermedio. La reacción se agitó a 0 °C por 40 minutos, luego fue templada con agua (5 mL) manteniendo la reacción en el baño de hielo. La capa orgánica fue separada, secada (Na2S04), filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía en gel de sílice utilizando una columna isolute 2 g y ciclohexano a ciclohexano/acetato de etilo 1 :1 como eluyente proporcionando el compuesto del título (3 mg,) como un sólido blanco. 1H RMN (400 Hz, CDCI3) d ppm 8.73 (2H, s), 7.07 (1 H, t), 6.78 (1 H, dd) 6.52(1 H, dd) 5.69 (1H, br.s) 4.25 - 4.33 (2H, m) 1.95 - 2.05 (1 H, m) 1.74 - 1.86 (3H, m) 1.54 - 1.62 (5H, s), 1.00 (3H, t) 0.60 - 0.67 (2H, m).
EJEMPLOS 36, EJEMPLO 37 Y EJEMPLO 38 5.5-dimetil-3-(6-r(4-metil-3 -dihidro-2H-cromen-5-ihoxi1-3-piridin imidazolidinadiona (mezcla de racemato, enantiómero 1, enantiómero 2) mezcla de racemato enantiómero 1 enantiómero 2 En un matraz de fondo redondo de 50 mL 2-amino-2-metil-N-[6- (4-metilcroman-5-il)oxi-3-p¡rid¡l]propanamida (Intermediario 215, 22.9 mg, 0.064 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (3 mL) para dar una solución sin color. TEA (0.051 mL, 0.369 mmoles) fue agregado y la mezcla obtenida fue enfriada a 0 °C. Trifósgeno (21.87 mg, 0.074 mmoles) fue disuelto en 1ml de DCM y la solución obtenida fue agregada a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 15 minutos. TEA adicional (0.051 mL, 0.369 mmoles) y trifósgeno (21.87 mg, 0.074 mmoles) disuelto en 1ml de DCM fue agregado a la mezcla de reacción a 0 °C y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos. La mezcla de reacción fue templada con 5 mL de solución saturada de bicarbonato de sodio y diluida con 10 mL de DCM. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La fase orgánica fue evaporada al vacío y el residuo se purificó por cromatografía instantánea (sistema Biotage system) en gel de sílice utilizando una columnal Og SNAP y ciciohexano/acetato de etilo de 2:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título del Ejemplo 36 (19.1 mg) como un aceite sin color. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.30 (1 H, d),7.76 (1 H, dd), 7.12 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (1 H, dd), 6.61 (1 H, dd), 5.74 (1 H, br. s.), 4.23 -4.32 (1 H, m), 4.15 - 4.22 (1 H, m), 2.97 - 3.11 (1 H, m), 2.07 - 2.16 (1 H, m), 1.62 -1.70 (1 H, m), 1.57 (6H, s), 1.28 (3H, d).
Ambos enantiómeros del Ejemplo 36 fueron separados por cromatografía quiral preparativa.
Las condiciones de la HPLC quiral preparativa fueron las siguientes: Columna: ChiralcelOD-H (25 x 2 cm), 5u; fase móvil: n-hexano/2-propanol 85:15 % v/v; velocidad de flujo: 18 ml/min; UV: 220 nm; preparación de muestra: 18 mg disuelto en 1.2 mi de etanol. Concentración de prueba: 15 mg/ml; volumen de inyección: 600 µ?_.
Esta cromatografía quiral preparativa dio: Ejemplo 37: 7.1 mg de un sólido blanco (enantiómero 1 ); Rt (HPLC Quiral preparativa) = 21.0 8 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.30 (1 H, d),7.76 (1 H, dd), 7.12 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (1 H, dd), 6.61 (1 H, dd), 5.74 (1 H, br. s.), 4.23 -4.32 (1 H, m), 4.15 - 4.22 (1 H, m), 2.97 - 3.11 (1 H, m), 2.07 - 2.16 (1 H, m), 1.62 -1.70 (1 H, m), 1.57 (6H, s), 1.28 (3H, d).
Ejemplo 38: 6.9 mg de un sólido blanco (enantiómero 2); Rt (HLPC Quiral preparativa) - 25.752 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.30 (1 H, d),7.76 (1 H, dd), 7.12 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (1 H, dd), 6.61 (1 H, dd), 5.74 (1 H, br. s.), 4.23 -4.32 (1 H, m), 4.15 - 4.22 (1 H, m), 2.97 - 3.11 (1 H, m), 2.07 - 2.16 (1 H, m), 1.62 -1.70 (1H, m), 1.57 (6H, s), 1.28 (3H, d).
EJEMPLOS 39. EJEMPLO 40 Y EJEMPLO 41 (5 ?)-5-etil-5-met¡l-3-(6-í(3-metil-3.4-dihidro-2H-cromen-5-¡l)oxi1-3- pir¡dinil)-2.4-imidazolidinadiona (mezcla diastereoisomérica, diastereoisómero 1, diastereoisómero 2) mezcla diastereoisomérica diastereoisómero 1 diastereoisómero 2 En un matraz de fondo redondo de 25 mL (2R)-2-amino-2-metil-N-[6-(3-metilcroman-5-il)oxi-3-piridil]butanamida (Intermediario 147, 33 mg, 0.088 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (5 mL) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0 °C. TEA (0.061 mL, 0.441 mmoles) y trifósgeno (26.2 mg, 0.088 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 15 minutos. La mezcla de reacción fue templada con una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio (5 mL) y diluida con 10 mL de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La capa orgánica fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título del Ejemplo 39 (26.8 mg) como un amarillo pálido. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.26 (1 H, d), 7.73 (1 H, dd),7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, dd), 6.74 (1 H, dd), 6.64 (1 H, dd), 5.95 (1 H, br. s ), 4.15 - 4.21 (1 H, m), 3.57 - 3.75 (1 H, m), 2.70 - 2.84 (1 H, m), 2.17 (2H, d), 1.91 - 2.04 (1 H, m), 1.70 -1.82 (1 H, m), 1.54 (3H, s), 1.01 (3H, d), 0.97 (3H, t).
Ambos diastereoisómeros del Ejemplo 39 fueron separados por SFC quiral Semi-preparativa.
Las condiciones de la SFC Quiral Semi-preparativa fueron las siguientes: Columna: ChiralpackAD-H (25 x 3 cm), 5um; Modificador (Metanol + 0.1% isopropilamina) 20 %; velocidad de flujo 50 ml/min; Presión 120 bar; Temperatura 38°C; detección de UV 220 nm; Circuito 750 pL; Inyección 3 mg (en Metanol).
Esta cromatografía quiral preparativa dio: Ejemplo 40: 5.9 mg (diastereoisómero 1 ); Rt (SFC quiral semi-preparativa) - 13.48 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3)5 ppm 8.26 (1 H, d), 7.73(1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, dd), 6.74 (1 H, dd), 6.64 (1 H, dd), 5.95 (1 H, br. s.), 4.15- 4.21 (1 H, m), 3.57 - 3.75 (1 H, m), 2.70 - 2.84 (1 H, m), 2.17 (2H, d), 1.91 - 2.04 (1 H,m), 1.70 - 1.82 (1 H, m), 1.54 (3H, s), 1.01 (3H, d), 0.97 (3H, t).
Ejemplo 41 : 6.6 mg (diastereoisómero 1 ); Rt (SFC quiral semi-preparativa) = 15.23 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3)5 ppm 8.26 (1 H, d), 7.73(1 H, dd), 7.13 (1 H, t), 6.95 (1 H, dd), 6.74 (1 H, dd), 6.64 (1 H, dd), 5.95 (1 H, br. s.), 4.15- 4.21 (1 H, m), 3.57 - 3.75 (1 H, m), 2.70 - 2.84 (1 H, m), 2.17 (2H, d), 1.91 - 2.04 (1 H,m), 1.70 - 1.82 (1 H, m), 1.54 (3H, s), 1.01 (3H, d), 0.97 (3H, t).
EJEMPLO 42 EJEMPLO 43 Y EJEMPLO 44 (5R)-5-etil-5-metil-3-f6-(1 ,1a,2,7b-tetrahidrociclopropafc1cromen-7-iloxi)-3- piridinin-2,4-imidazolidinad¡ona (mezcla diastereoisomérica, diastereoisómero 1 , diastereoisómero 2) En un matraz de fondo redondo de 25 mL (2R)-N-[6-(1 ,1 a,2,7b-tetrahidrociclopropa[c]cromen-7-iloxi)-3-piridil]-2-amino-2-metil-butanam¡da (Intermediario 228, 33 mg, 0.088 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (5 mL) para dar una solución sin color. La mezcla de reacción fue enfriada a 0 °C. TEA (0.091 mL, 0.66 mmoles) y trifósgeno (39 mg, 0.131 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 15 minutos. La mezcla de reacción fue templada con una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio (5 mL) y diluida con 10 mL de diclorometano. Las fases fueron separadas por un cartucho separador de fase. La capa orgánica fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 3:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título del Ejemplo 42 (42.6 mg) como un amarillo pálido.
H RMN (400 MHz, CDCI3)6ppm 8.29 (1 H, d), 7.73 (1 H, dd),7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (2H, d), 5.77 (1 H, br. s.), 4.31 (1 H, dd), 3.95 (1 H, dd),1.92 - 2.1 1 (2H, m), 1.72 - 1.83 (1 H, m), 1.64 - 1.73 (1 H, m), 1.54 (3H, s), 0.97 (3H, t),0.93 - 1.06 (2H, m).
Ambos diastereoisómeros del Ejemplo 42 fueron separados por cromatografía quiral preparativa.
Las condiciones de la cromatografía HPLC quiral Preparativa fueron las siguientes: Columna: ChiralpackAD-H (25 x 3 cm), 5um; fase móvil: n-hexano/2-Propanol 90/10 % v/v; velocidad de flujo: 40 ml/min; UV: 220 nm¡ preparación de muestra: 41 mg disuelto en 4 mi de etanol. Concentración de prueba: 10.3 mg/ml; volumen de inyección: 2000 pL.
Esta cromatografía quiral preparativa dio: Ejemplo 43: 14.1 mg como sólido blanco (diastereoisómero 1); Rt (HPLC Quiral preparativa) - 17.95 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3)5ppm 8.29 (1 H, d), 7.74 (1 H, dd), 7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (2H, d), 5.51 (1 H, br. s.), 4.32 (1 H, dd), 3.96 (1 H, dd), 2.01 - 2.09 (1 H, m), 1.92 - 2.02 (1 H,m), 1.72 - 1.82 (1 H, m), 1.64 - 1.73 (1 H, m), 1.55 (3H, s), 0.99 - 1.05 (2H, m), 0.95 - 1.01(3H, m).
Ejemplo 44: 15 mg como sólido blanco (diastereoisómero 2); Rt (HPLC Quiral preparativa) = 21.99 minutos 1H RMN (400 MHz, CDCI3)6ppm 8.29 (1 H, d), 7.74(1 H, dd), 7.07 (1 H, t), 6.97 (1 H, d), 6.72 (2H, d), 5.51 (1 H, br. s.), 4.32 (1 H, dd), 3.96 (1 H, dd), 2.01 - 2.09 (1 H, m), 1.92 - 2.02 (1 H, m), 1.72 - 1.82 (1 H, m), 1.64 - 1 .73 (1 H, m),1.55 (3H, s), 0.99 - 1.05 (2H, m), 0.95 - 1.01 (3H, m).
EJEMPLO 45, EJEMPLO 46 Y EJEMPLO 47 3-l6-r(3-etil-1.3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxn-3-piridinil)-5.5-dimetil-2.4- imidazolidinadiona (mezcla racemato, enantiómero 1 , enantiómero 2) mezcla racémica enantiómero 1 enantiómero 2 En un matraz de fondo redondo de 50 ml_ N1-{6-[(3-etil-1 ,3-dihidro-2-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}-2-metilalaninamida (Intermediario 149, 17.2 mg, 0.050 mmoles) fue disuelto en Diclorometano (3 ml_) para dar una solución amarillo pálido que fue enfriada a 0 °C. TEA (0.035 mL, 0.252 mmoles) fue agregado seguido por la adición por goteo de una solución de trifósgeno (6.43mg, 0.023 mmoles) en diclorometano (0.5 ml) y la mezcla de reacción fue agitada a 0 °C por 20 minutos. La mezcla de reacción fue evaporada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema de Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 2:1 a 1 :2 como eluyentes proporcionando el compuesto del título del Ejemplo 45 (15.3 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3)óppm 8.29 (1 H,d), 7.80 (1 H, dd), 7.33 (1 H, t), 7.09 (1 H, d), 6.97- 7.04 (2H, m), 5.70 (1 H, br. s.). 5.23 -5.30 (1 H, m), 5.19 (1 H, dd), 5.12 (1 H, d), 1.85 - 1.98 (1 H, m), 1.67 - 1.80 (1 H, m), 1.57(6H, s), 0.86 - 0.92 (3H, m).
Ambos enantiómeros del Ejemplo 45 fueron separados por cromatografía quiral preparativa.
Las condiciones de la HPLC quiral preparativa fueron las siguientes: Columna: Chiralpack AD-H (25 x 2 cm), 5u¡ fase móvil: n-hexano/2-propanol 85:15 % v/v; velocidad de flujo: 18 ml/min; UV: 220 nm; preparación de muestra: 15 mg se disolvió en 1.0 mi de etanol (la muestra necesita algunas gotas de metanol para un solubilización completa). Concentración de prueba: 5 mg/ml; volumen de inyección: 1000 pl_.
Esta cromatografía quiral preparativa dio: Ejemplo 46: 5.6mg (enantiómero 1 ); Rt (HPLC quiral preparativa) = 9.877 minutos 1H RMN (400 MHz, MeOD) d???t? 8.20(1 H, d), 7.92 (1 H, dd), 7.38 (1 H, t), 7.18 (1 H, d), 7.10 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 5.14 - 5.24(2H, m), 5.09 (1 H, d), 1.81 - 1.96 (1 H, m), 1.65 - 1.79 (1 H, m), 1.52 (6H, s), 0.86 (3H, s).
Ejemplo 47: 5.5mg (enantiómero 2); Rt (HPLC quiral preparativa) = 13.203 minutos H RMN (400 MHz, MeOD) 6ppm 8.20(1 H, d), 7.92 (1 H, dd), 7.38 (1 H, t), 7.18 (1 H, d), 7.10 (1 H, d), 7.02 (1 H, d), 5.14 - 5.24(2H, m), 5.09 (1 H, d), 1.81 - 1.96 (1 H, m), 1.65 - 1.79 (1 H, m), 1.52 (6H, s), 0.86 (3H, s).
EJEMPLO 48. EJEMPLO 49 Y EJEMPLO 50 (5R)-5-etil-5-metil-3-[2-(4-metílcroman-5-il)oxipirimidin-5-in¡midazoli 2,4-diona (mezcla diastereoisomérica, diastereoisómero 1 , diastereoisómero 2) A una solución de N1-{2-[(4-metil-3,4-dihidro-2H-cromen-5-il)oxi]-5-pirimidinil}-Disovalinamida(lntermediar¡o 219, 78 mg, 0.219 mmoles) en Diclorometano seco (4 mL) TEA (0.076 mL,0.547 mmoles) fue agregado. La mezcla fue enfriada a 0 °C luego una solución de trifósgeno (29.2 mg, 0.098 mmoles) en Diclorometano seco (1.0 mL) fue agregado por goteo. La mezcla de reacción fue agitada por 10 minutos a 0 °C luego fue mantenida en el baño de hielo y templada con agua (10 mL). La capa orgánica fue recolectada y la fase acuosa fue extraída con DCM (2x5 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2S04), filtradas y evaporadas. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando una columna 25g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo de 8:2 a 1 :1 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (66 mg) como un sólido blanco.
UPLCJPQC: 0.99 min, 383 [ +H]+.
Ambos diastereoisómeros del Ejemplo 48 fueron separados por SFC quiral semi-preparativa.
Las condiciones de la SFC Quiral Semi-preparativa fueron las siguientes: Columna: ChiralpackAD-H (25 x 0 46 cm), 5um; Modificador (Etanol + 0.1 % isopropilamina) 20%; velocidad de flujo 2.5 ml/min; Presión 120 bar; Temperatura 38°C; detección de UV 210 -340 nm.
Esta cromatografía quiral preparativa dio: Ejemplo 49: 24 mg como sólido blanco (diastereoisómero 1 ); Rt (SFC quiral preparativa) = 7.583 min 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.72 (2H, s), 7.17 (1 H, t), 6.79 (1 H, d), 6.68 (1 H, d), 5.36 (1 H, br.s), 4.25 - 4.35 (1 H, m), 4.14 - 4.25 (1 H, m), 2.98 - 3.09 (1 H, m), 2.06 - 2.20 (1 H, m), 1.95 - 2.06 (1 H, m), 1.74 - 1.87 (1 H, m), 1.70 (1 H, d), 1.59 (3H, s), 1.31 (3H, s), 1.01 (3H, t).
Ejemplo 50: 25 mg como sólido blanco (diastereoisómero 2); Rt (SFC quiral preparativa) = 10. 56 min 1H RMN (400 MHz, CDCI3) d ppm 8.72 (2H, s), 7.17 (1 H, t), 6.78 (1 H, d), 6.68 (1 H, d), 5.38 (1 H, br.s), 4.25 - 4.36 (1 H, m), 4.12 - 4.25 (1 H, m), 2.94 - 3.12 (1 H, m), 2.05 - 2.20 (1 H, m), 1.95 - 2.05 (1 H, m), 1.75 - 1.87 (1 H, m), 1.63-1.74 (1 H, m), 1.58 (3H, s.) 1.31 (3H, s), 1.01 (3H, t).
EJEMPLO 51 (5R)-5-etil-5-metil-3-f2-(7-metilespirof2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano1- - il)oxipirimidin-5-ill¡midazolidina-2,4-diona A una solución de 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-ol (Intermediario 156, 18 mg, 0.1 mmoles) en DMF seco (1 mi) carbonato de potasio (27.6 mg, 0.2 mmoles) y entonces (5R)-3-(2-cloropirimidin-5-il)-5-etil-5-metil-imidazolidina-2,4-diona (Intermediario 165, 20 mg, 0.08 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 80° C. Después de enfriar la mezcla de reacción fue templada con agua (1ml), diluida con salmuera (5 mi) y extraída con acetato de etilo (2x1 OmI). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 7:3 a ciclohexano/acetato de etilo 3:7 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (21 mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) 5 ppm: 8.69-8.74 (3H, m), 6.94 (1 H, d), 6.52 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 2.15 (3H, s), 1.73-1.83 (1 H, m), 1.63-1.73 (1 H, m), 1.40 (3H, s), 1.02-1.06 (2H, m), 0.85-0.92 (5H, m).LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.007 min; 395 [M+HJ+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '- ciclopropano]-4-ol (Intermediario 152) con el fenol apropiado. Los productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (cartucho de Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
EJEMPLO 58 5,5-dimetil-3-f2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano1-4- il)oxipirimidin-5-il1imidazolidina-2,4-diona A una solución de 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '-ciclopropano]-4-ol (Intermediario 156, 18 mg, 0,1 mmoles) en DMF seco (1 mi) carbonato de potasio (27.6 mg, 0.2 mmoles) y entonces 3-(2-cloropirimidin-5- il)-5,5-dimetil-imidazolidina-2,4-diona (Intermediario 166, 20 mg, 0.083 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 80° C. Después de refrescar la mezcla de reacción fue templada con agua (1 ml), diluyó con salmuera (5 mi) y extrajo con acetato de etilo (2x1 Oml). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Bíotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 7:3 a ciciohexano/acetato de etilo 3:7 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (18 mg) como un sólido beige ligero. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 8.74 (1 H, s), 8.70 (2H, s), 6.94 (1 H, d), 6.52 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 2.14 (3H, s), 1.42 (6H, s), 1.01-1.06 (2H, m), 0.87-0.92 (2H, m).LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.946 min; 380 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '- ciclopropano]-4-ol (Intermediario 152) con el fenol apropiado. Los productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (cartucho de Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
EJEMPLO 61 (5R)-5-etil-3-f2-(7-metilespirof2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano1-4- il)oxipirimidin-5-il1imidazolidina-2,4-diona A una solución de (2R)-2-amino-N-[2-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3, 1 '-ciclopropano]-4-il)oxipirimidin-5-il]butanamida (Intermediario 164, 24 mg, 0.068 mmoles) en DCM seco (3 mi) TE (0.028ml, 0.2mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de trifósgeno (15 mg, 0.05mmoles) en DCM seco (1.5ml) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10ml) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporadaa y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 75:25 a ciciohexano/acetato de etilo 25:75 como eluyentes proporcionando el compuesto del titulo (11 mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 8.75 (1 H, s), 8.68 (2H, s), 6.94 (1 H, d), 6.52 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 4.20-4.25 (1H, m), 2.15 (3H, s), 1.77-1.88 (1 H, m), 1.66-1.76 ( H, m), 1.02-1.06 (2H, m), 0.96 (3H, t), 0.87-0.92 (2H, m).LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 1.955 min; 381 [M+H]+.
EJEMPLO 62 (5R)-5-etil-3-r6-f7-metilespiror2H-benzofuran-3.1'-ciclopropano1-4-il)oxi-3- p¡ridin¡midazolidina-2,4-diona A una solución de (2R)-2-amino-N-[6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3, 1 '-ciclopropano]-4-il)oxi-3-piridil]butanamida (Intermediario 160, 40 mg, O. U mmoles) en DCM seco (5ml) TEA (0.042ml, 0.3mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0°C. Una solución de trifósgeno (23.7mg, 0.08 mmoles) en DCM seco (3ml) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (10ml) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada (Na2SC>4), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en' gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciciohexano/acetato de etilo 75:25 a ciclohexano/acetato de etilo 25:75 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (22mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 8,63 (1 H, la s), 8,13 (1 H, D), 7,84 (1 H, dd), 7,07 (1 H, D), 6,94 (1 H, D), 6,44 (1 H, D), 4,46 (2H, la s), 4,19-4,24 (1 H, ), 2,15 (3H, la s), 1 ,77-1 ,88 (1 H, M), 1 ,65-1 ,75 (1 H, M), 1 ,10-1 ,14 (2H, M), 0,96 (3H, T), 0,87-0,92 (2H, M) LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.025 min; 380 [M+H]+.
EJEMPLO 63 (5R)-5-etil-3-(6-r(3,3.7-trimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxil-3- pir¡dinil>-214-im¡dazolidinadiona (2f?)-2-amino-N-{6-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-3-piridinil}butanamida (Intermediario 188, 300 mg, 0.84 mmoles) fue disuelto en acetato de etilo (6 mL). Trietilamina (0.47 mi, 3.36 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de trifósgeno (100 mg, 0.34 mmoles) en acetato de etilo (6 mL) fue agregada lentamente. Al final de la adición la mezcla fue tratada con solución saturada acuosa de NaHC03 y las dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con salmuera, secada sobre Na2S04 y evaporada a sequedad para obtener un sólido ceroso. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 70:30 a ciclohexano/acetato de etilo 50:50 como eluyentes proporcionando el compuesto del titulo (166 mg) como una espuma blanca.
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm8.61 (1 H, br.s), 8.12 (1 H, d), 7.82 (1 H, dd), 7.10 (1 H, d), 6.98 (1 H, d), 6.47 (1 H, d), 4.21 (2H, s), 4.18 (1 H, br.s), 2.13 (3H, s), 1.86-176 (1 H, m), 1.75-1.64 (1 H, m), 1.25 (6H, s), 0.95 (3H, t).13C-RMN (200 MHz, DMSO-d6): d ppm 173.2, 162.5, 158.6, 155.4, 148.2, 145.2, 138.5, 130.0, 126.1 , 124.3, 115.7, 114.4, 110.6, 83.6, 57.5, 42.2, 26.0, 24.4, 14.4, 8.8.
EJEMPLO 64 (5R)-5-etil-3-(2-r(3.3,7-trimetil-2.3-dihidro-1-benzofuran-4-inoxn-5- pirimidinil)-2.4-imidazolidinadiona {( R)-1-[({2-[(3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-il)oxi]-5-pirimidinil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario 191 , 213 mg, 0.47 mmoles) fue disuelto en HCI 5-6 N en isopropanol (1 mL) y la solución resultante fue calentada a 35°C por 30 minutos. La mezcla de reacción fue entonces concentrada al vacío, el residuo diluido con acetato de etilo (50 mL) y una solución acuosa al 5% de K2C03 (30 mL). Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue lavada con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (30 mL), secada sobre Na2SO4 y concentrada bajo vacío. El crudo resultante fue disuelto en acetato de etilo (10 mL) y trietilamina fue agregado (0.23 mL, 1.64 mmoles). La mezcla de reacción fue enfriada a 0-5 °C y una solución de trifósgeno (55 mg, 0.185 mmoles) en acetato de etilo (5 mL) fue agregada por goteo en 10 minutos. La reacción fue templada con agua (50 mL) y extraída con acetato de etilo (50 mL). La capa orgánica fue lavada con salmuera secada sobre Na2S04 y concentrada bajo vacío. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 50:50 como eluyente proporcionando el compuesto del título (161 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.72 (1 H, s), 8.66 (2H, s), 7.03-6.93 (1 H, m), 6.55 (1 H, d), 4.18 (2H, s), 2.12 (3H, s), 1.87-1.61 (2H, m), 1.2 (6H, s), 1.15 (1 H, t), 0.94 (3H, t). MS_2 (ESI): 383 [M+H].
EJEMPLO 65 (5R)-5-etil-5-metil-3-r6-(7-metHespirof2H-benzofuran-3l1'-ciclopropanol- - ¡l)oxi-3-piridin¡midazolidina-2.4-diona A una solución de trifósgeno (30 mg, 0.1 mmoles) en DCM seco (1ml) a 0°C, bajo atmósfera de nitrógeno, DIPEA (0.175 mi, 1.0 mmoles) fue agregado seguido de la adición (agregado lentamente) de una solución de 6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-il)oxipiridin-3-amina (Intermediario 158, 27 mg, 0.1 mmoles) en DCM seco (2ml) y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a la misma temperatura. Después de eso una solución de clorhidrato de (R)-2-amino-2-metil-butirato de metilo (33mg, 0.2 mmoles) en DCM seco (2ml) fue agregada y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a 0°C. La reacción fue templada con una solución acuosa 1 M de HCI (5ml), diluida con DCM (10 mi) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con salmuera (10ml), secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el intermediario de urea como una espuma amarilla.
La urea fue disuelta en MeOH (5ml), NaOMe (10 mg) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (20ml) y diluida con acetato de etilo (40ml). Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 75:25 a ciclohexano/acetato de etilo 25:75 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (29 mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: -8.60 (1 H, s), 8.15 (1 H, d), 7.85 (1 H, dd), 7.06 (1 H, d), 6.94 (1 H, d), 6.44 (1 H, d), 4.46 (2H, s), 2.15 (3H, s), 1.73-1.83 (1 H, m), 1.62-1.72 (1 H, m), 1.40 (3H, s), 1.10-1.14 (2H, m), 0.84- 0.92 (5H, m).LC/MS: QC_3_MIN: Rt = 2.076 min; 394 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando 6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1 '- ciclopropano]-4-il)oxipiridin-3-amina (Intermediario 154) con la anilina apropiada. Los productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (cartucho de Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
EJEMPLO 68 (5R)-5-etil-5-metil-3-r6-r(2,4,4-trimetil-3,1-benzoxazin-5-inoxi1-3- piridillimidazolid¡na-2,4-diona A una solución de (2R)-2-amino-2-metil-N-[6-[(2,4,4-trimetil-3,1-benzoxazin-5-il)oxi]-3-piridil]butanamida(lntermediario 205, 143 mg, 0.37 mmoles) y TEA (0.21 mL) en acetato de etilo (2.5 mL) a 0 °C, trifósgeno (44 mg, 0.15 mmoles) disuelto en acetato de etilo (2.5 mL) fue agregado por goteo en 10 min. La mezcla de reacción fue agitada a 0°C por 40 min. La mezcla de reacción fue diluida con agua (5 mL) y acetato de etilo (10 mL). Las fases fueron separadas y la acuosa extaída de nuevo con acetato de etilo (2 x 10 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con salmuera (15 mL), secadas sobre Na2S04, filtradas y concentradas y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando acetato de etilo como eluyente proporcionando el compuesto del título (1 5 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm8.58 (1 H, s), 8.15 (1 H, d), 7.87 (1 H, dd), 7.24 (1 H, t), 7.17 (1 H, d), 6.89 (1 H, d), 6.84 (1 H, d), 2.01 (3H, s), 1.81- 1.70 (1 H, m), 1.69 - 1.59 (1 H, m), 1.54 (6H, s), 1.37 (3H, s), 0.84 (3H, t).
EJEMPLO 69 (5R)-3-f6-r(3.3-dimetil-1 ,3-dihidro-2-be^ 5-metil-2,4-imidazolidinadiona 3,3-Dimetil-1 ,3-dih¡dro-2-benzofuran-4-ol (Intermediario 193, 68 mg, 0.4 mmoles) y (5f?)-3-(6-cloropiridin-3-il)-5-etil-5-metilimidazolidina-2,4-diona (Intermediario 194, 126 mg, 0.48 mmoles) fueron disueltos en DMF (1.0 mL) y K2C03 (143 mg, 1.03 mmoles) fue agregado. La suspensión resultante fue calentada a 130°C bajo irradiación de microondas por 40 minutos. La mezcla de reacción fue diluida con agua (25 mL) y acetato de etilo (25 mL), y entonces dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con agua y salmuera, secada sobre Na2S04 y concentrada bajo vacío. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando ciclohexano/acetato de etilo 50:50 como eluyente proporcionando el compuesto del título (70 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.57 (1 H, s), 8.12 (1 H, d), 7.86 (1 H, dd), 7.30 (1 H, t), 7.22-7.03 (2H, m), 6.96 (1 H, d), 4.99 (2H, s), 1.80-1.57 (2H, m), 1.37 (6H, s), 1.36 (3H, s), 0.84 (3H, s). MS_2 (ESI): 382 [M+HJ+.
EJEMPLO 70 5.5-dimetil-3-r6-(7-metilespirof2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano1-4-il)oxi- 3-piridil1imidazolidina-2,4-diona A una solución de trifósgeno (30 mg, 0.1 mmoles) en DCM seco (1ml) a 0°C, bajo atmósfera de nitrógeno, DIPEA (0.175 mi, 1.0 mmoles) fue agregado seguido de la adición (agregado lentamente) de una solución de 6-(7-metilespiro[2H-benzofuran-3, 1 '-ciclopropano]-4-il)oxip¡ridin-3-am¡na (Intermediario 158, 27 mg, 0.1 mmoles) en DCM seco (2ml) y la mezcla de reacción fue agitada por 15 minutos a la misma temperatura. Después de eso una solución de clorhidrato de 2-amino-2-metilpropanoato de metilo (30mg, 0.2mmoles) en DCM seco (2ml) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a 0°C. La reacción fue templada con una solución acuosa 1 M de HCI (5ml), diluida con DCM (10 mi) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue lavada con salmuera (10ml), secada (Na2S04), filtrada y evaporada proporcionando el intermediario de urea como una espuma amarilla.
La urea fue disuelta en MeOH (5ml), NaOMe (10 mg, 0,19 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (20ml) y diluida con acetato de etilo (40ml).
Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2SO4), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Biotage) en gel de sílice utilizando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo 75:25 a ciclohexano/acetato de etilo 25:75 como eluyentes proporcionando el compuesto del título (23mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 8.62 (1 H, s), 8.14 (1 H, d), 7.86 (1 H, dd), 7.05 (1 H, d), 6.92 (1 H, d), 6.43 (1 H, d), 4.44 (2H, s), 2.14 (3H, s), 1.40 (6H, s), 1.08-1.13 (2H, m), 0.96 (3H, t), 0.85-0.90 (2H, m).LC/MS: QC_3_ IN: Rt = 2.016 min; 380 [M+H]+.
Los siguientes Intermediarios de Referencia y Ejemplos describen la preparación de los compuestos para el uso en los ensayos.
Intermediario de Referencia R1 4-metil-3-(metiloxi)anilina A una solución de 1-metil-2-(metiloxi)-4-nitrobenceno (2.5 g, 1 .96 mmoles) en metanol (50 ml_) Ni-Raney (~ 2 g) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a temperatura ambiente bajo atmósfera de H2 (1.03 kg/cm2). El catalizador fue filtrado y el residuo fue purificado por cartucho de SCX (50 g) para proporcionar el compuesto del título (1.86 g) como un aceite sin color. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 6.73 (1 H, d), 6.19 (1 H, d), 6.05 (1 H, dd), 4.85 (2H, s), 3.68 (3H, s), 1.97 (3H, s)¡ UPLC_B: 0.62 min, 138 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R2 4-metil-3-(metiloxi)fenol A una suspensión de 4-metil-3-(metíloxi)anilina (Intermediario de Referencia R1 , 1.86 g) en agua (100 mL)/H2SO4 (30 ml_, 563 mmoles) a 0°C una solución de nitrito de sodio (1.029 g, 14.91 mmoles) en agua (10 ml_) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos a 0 °C. La mezcla de reacción fue agregada lentamente a una solución de H2S04 98% (20 ml_) en agua (80 ml_) pre-calentada a 90°C y agitada a esta temperatura por 1 h. Después de enfriar la mezcla fue extraída con Et20 (2x200mL), la capa orgánica fue secada en sulfato de sodio, filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (1.86 g) como un aceite rojo/marrón. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 9.14 (1 H, br.s), 6.87 (1 H, d), 6.35 (1 H, d), 6.24 (1 H, dd), 3.71 (3H, s), 2.01 (3H, s); UPLC_B: 0.63 min, 137 [M-H]-.
Intermediario de Referencia R3 2-([4-metil-3-(metiloxi)feninoxi)-5-nitropiridina A una solución de 4-metil-3-(metiloxi)fenol (Intermediario de Referencia R2, 400 mg) en ?,?-dimetilformamida seca (15 mL), carbonato de potasio (1200 mg, 8.69 mmoles) y entonces 2-cloro-5-nitropiridina (551 mg, 3.47 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 2 horas a 1 15° C. La reacción fue templada con agua (10 mL), diluida con salmuera (20 mL) y extraída con acetato de etilo (3 veces 30 mL). La capa orgánica fue lavada con salmuera enfriada en hielo (2 veces 30 mL), secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada. El residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage, 100 g SNAP) con un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 10/0 a 8/2. La evaporación proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo claro (570 mg). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) d ppm: 2.16 (3H, s), 3.76 (3H, s), 6.68 - 6.73 (1 H, m), 6.83 - 6.86 (1 H, m), 7.24 - 7.18 (2H, m), 8.64 - 8.58 (1 H, m), 9.08 - 9.02 (1 H, m)¡ UPLC_B: 0.93 min, 261 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R4 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenilloxi)-3-piridinamina A una solución de 2-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-5-nitropiridina (Intermediario de Referencia R3, 568 mg) en tetrahidrofurano (25 mL) /agua (12.50 mL), hierro (609 mg, 10.91 mmoles) y luego cloruro de amonio (584 mg, 10.91 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 8 horas a temperatura ambiente. El catalizador fue filtrado y la solución fue diluida con una solución saturada acuosa de Na2CÜ3 (5 mL) y extraída con acetato de etilo (2 veces 40mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas y el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage con una columna 50g SNAP) utilizando como un eluyente un gradiente de ciclohexano/acetato de etilo de 8/2 a 1/1. La evaporación proporcionó el compuesto del título como un aceite amarillo claro (465 mg).
H-RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 7.54 (1 H, d), 7.06 (2H, ddd), 6.72 (1 H, d), 6.59 (1 H, d), 6.38 (1 H, dd), 5.07 (2H, s), 3.73 (3H, s), 2.10 (3H, s); UPLC_B: 0.72 min, 231 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R5 ((1 R)-1-ff(6-(r4-metil-3-(metiloxi)fenilloxi)-3-piridinil)aminolcarbonil)propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de ácido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (106 mg, 0.521 mmoles) en N,N-dimetilformamida seca (2 mL) DIPEA (0.152 mL, 0.869 mmoles) y entonces TBTU (181 mg, 0.565 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada durante 15 minutos a temperatura ambiente. 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermediario de Referencia R4, 100 mg) entonces fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (1 mL), diluida con salmuera (1 mL) y extraída con acetato de etilo (3 veces 5 mL). La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage, 10g SNAP) utilizando como eluyente un gradiente ciclohexano/acetato de etilo de 100/0 a 70/30 para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (180 mg). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm: 10.13 (1 H, br. s), 8.31 -8.37 (1 H, m), 8.02 - 8.10 (1 H, m), 7.09 - 7.16 (1 H, m), 7.01 - 7.08 (1 H, m), 6.96 (1 H, d), 6.70 (1 H, d), 6.51 - 6.58 (1 H, m), 3.91 - 4.03 (1 H, m), 3.75 (3H, s), 2.13 (3H, s), 1.50-1 .76 (2H, m), 1.39 (9H, s), 0.90 (3H, t); UPLC_B: 0.91 min, 416 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R6 (2R)-2-amino-N-(6-{f4-metil-3-(metiloxi)fenilloxi)-3-piridiniDbutanamida A una solución de ((1 R)-1-{[(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario de Referencia R5, 175 mg) en diclorometano seco (DCM) (6 ml_) TFA (2 ml_, 26.0 mmoles) fue agregado lentamente y la mezcla de reacción fue agitada por 1 h a temperatura ambiente. El solvente y el exceso de TFA fueron evaporados y el residuo fue purificado por cartucho de SCX (5 g) para proporcionar el compuesto del título como un sólido sin color (122 mg).
H-RMN (400 MHz, DMSO-Ge) d ppm: 8.36 - 8.42 (1 H, m), 8.1 1 (1 H, dd), 7.12 (? ?, d), 6.95 (1 H, d), 6.67 - 6.73 (1 H, m), 6.54 (1 H, dd), 3.75 (3H, s), 3.24 (1 H, m), 2.13 (3H, s), 1.59 - 1.73 (1 H, m), 1.42 - 1.56 (1 H, m), 0.90 (3H, t); UPLC_B: 0.74 min, 316 [M+HJ+.
Intermediario de Referencia R7 ((1 f?)-1-met¡l-1-ir(6-(r4-metil-3-(metiloxi)fenilloxiV3-piridinil)aminolcarbonil)propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de /\/-{[(1 ,1 -dimetiletil)oxi]carbonil}-D-isoval¡na (94 mg, 0.434 mmoles) en ?,?-Dimetilformamida seca (1 mL) DIPEA (0.1 14 mL, 0.651 mmoles) y HATU (165 mg, 0.434 mmoles) fue agregado. La reacción se agitó a temperatura ambiente durante 15 minutos. 6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinamina (Intermediario de Referencia R4, 50 mg) entonces fue agregado. Después de 1 hora de agitar a temperatura ambiente la mezcla fue calentada a 50°C y agitada a esa temperatura durante 4 horas, entonces fue enfriada a temperatura ambiente y agitada por la noche a esa temperatura. La mezcla fue templada con salmuera (2 mL) y extraída con acetato de etilo (3x2 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo se purificó por cromatografía instantánea en gel de sílice usando una columna 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 100/0 a 60/40 (sistema Biotage) para proporcionar el compuesto del titulo como un sólido blanco (65 mg).
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.60 (1 H, br s), 9.10 (1 H, br s), 8.31 (1 H, br. s.), 8.03 (1 H, br s), 7.12 (1 H, d), 6.93 (1 H, d), 6.69 (1 H, d), 6.53 (1 H, dd), 3.74 (3H, s), 2.1 1 (3H, s), 1.72-1.86 (1 H, m), 1.60-1.72 (1 H, m), 1.41 (9H, s), 1.33 (3H, s), 0.78 (3H, t); UPLC: 0.87 min, 430 [M+H]+ Intermediario de Referencia R8 /\/1-(6-([4-metil-3-(mettloxi)fenilloxi)-3-piridinil)-D-isovalinamida A una solución de ((1 R)-1-metil-1-{[(6-{[4-metil-3- (metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario de Referencia R7, 65 mg) en diclorometano seco (3 mL) enfriado a 0°C, TFA (0.700 mL, 9.08 mmoles) fue agregado por goteo. La reacción fue agitada a esa temperatura por 2 horas. La reacción fue templada con una solución acuosa saturada de NaHC03 (20 mL) agregada a 0 °C, y extraída con diclorometano (3x7 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (44 mg).
Intermediario de Referencia R9 3-(1 ,1-dimetiletil)-4-hidrox¡benzaldehído 2-(1 ,1-dimetiletil)fenol (10 g, 66.67 mmoles) fue disuelto en 40 mL de MeOH y NaOH (40 g, 1 mol) disuelto en 40 mL de agua fue agregado por goteo. Luego 40 mL de CHCI3 fue agregado (durante el transcurso de 1 h) a 60°C. La mezcla de reacción fue agitada a esa temperatura por 3 h. Después de enfriar a t.a., la mezcla fue enfriada a 0°C y HCI 4M fue agregado hasta que la solución alcanzó pH 5-6. La mezcla fue extraída con DCM (tres veces) y los orgánicos recolectados fueron secados sobre Na2S04, filtrados y evaporados. El crudo fue cargado en una columna de gel de sílice y eluído con cicIohexano/EtOAc (de 100:0 a 80:20 cicIohexano/EtOAc, entonces plato a 80:20) proporcionando 766 mg del compuesto del titulo. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.62 (1 H, s), 9.79 (1 H, s), 7.73 (1 H, br. s), 7.67 - 7.57 (1 H, m), 7.01 - 6.90 (1 H, m), 1.38 (9H, s); UPLC_ipqc: 0.97 min, 177 [M-H]\ Intermediario de Referencia R10 3-(1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxibenzonitrilo 3-(1 ,1-dimetiletil)-4-hidroxibenzaldehído (Intermediario de Referencia R9, 550 mg) y clorhidrato de hidroxilamina (322 mg, 4.63 mmoles) fue agitado en 8.0 mL de ácido acético a reflujo por 1 h. Después de enfriar a 0°C, la mezcla fue vertida en Et20 y lavada una vez con agua y una vez con NaOH (5% solución acuosa). Las fases acuosas recolectadas fueron extraídas con Et20 (dos veces) y las fases orgánicas combinadas fueron secadas sobre Na2S04, filtradas, evaporadas y trituradas con pentano para proporcionar 540 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.92 (1 H, br. s), 7.53 - 7.45 (2H, m), 6.92 (1 H, d), 1.34 (9H, s); UPLCjpqc: 1.03 min, 174 [M-H]'.
Intermediario de Referencia R11 4-hidroxi-2-iodobenzonitrilo A una solución de 2-fluoro-4-iodobenzonitrilo (5.0 g, 20.24 mmoles) en acetonitrilo seco (100 mL) trimetilsilanolato de potasio (1 .18 g) fue agregado y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50°C. El solvente fue removido bajo presión reducida y el residuo fue disuelto en acetato de etilo (100 mL) y una solución búfer acuosa de pH 3 fue ascendida a pH~ 5. Dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada (Na2SO4), filtrada y evaporada para proporcionar el compuesto del título (4.90 g) como un sólido marrón.
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): óppm 10.92 (1 H, s), 7.65 (1 H, d), 7.39 (1 H, d), 6.93 (1 H, dd); UPLCjpqc: 0.81 min, 244 [M-H]-.
Intermediario de Referencia R12 4-hidroxi-2-f(trifluorometil)oxi1benzonitrilo Dos reacciones fueron realizadas en paralelo (A y B) y luego las dos mezclas de reacción fueron combinadas para corrida de trabajo y purificación.
Reacción A: A una solución de 4-Metoxi-2-(trifluorometoxi)benzonitrilo (50 mg, 0.23 mmoles) en 1 ,2-dicloroetano (1 mL) fue agregada una solución 1 M de BBr3 en DCM (0.69 mL, 0.69 mmoles) por goteo. La mezcla resultante de reacción fue agitada bajo irradiación de microondas cinco veces (parámetros de ajuste: T= 100°C, t= 1 hora) agregando más solución 1 de BBr3 en DCM (1 mL) cada vez. La cantidad total de solución 1 M de BBr3 en DCM utilizada fue 4.69 mL.
Reacción B: En un frasco fueron agregados 4-Metox¡-2- (trifluorometoxi)benzonitrilo (750 mg, 3.45 mmoles), 1 ,2-dicloroetano (5 mL) y luego solución 1 M de BBr3 en DCM (10.36 mL, 10.36 mmoles) por goteo. La mezcla de reacción resultante fue agitada bajo irradiación de microondas por 1 hora (ajuste T= 100°C). A la mezcla de reacción más solución 1 M de BBr3 en DCM (1 mL) fue agregado y la mezcla de reacción resultante fue agitada bajo irradiación de microondas tres veces (parámetros de ajuste: T= 100°C, t= 1.5 horas), agregando más solución 1 M de BBr3 en DCM (0.8 mL) cada vez. La cantidad total de solución M de BBr3 en DCM utilizada fue 13.76 mL.
Las dos mezclas de reacción A y B fueron agregadas por goteo a una solución saturada acuosa de NaHC03 y el pH fue ajustado a 7 con la adición de NaHC03 sólido. Las dos fases fueron separadas y la fase acuosa fue extraída con DCM (1x) y con EtOAc (2x). Las fases orgánicas combinadas fueron secadas y fueron evaporadas a sequedad para dar el compuesto del título en mezcla con material de partida sin reaccionar (1.48 g) como un aceite negro. Esta mezcla fue utilizada en el siguiente paso sin purificación adicional. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): óppm 11.35 (1 H, s), 7.82 (1 H, d), 6.91 - 6.98 (2H, m); UPLCjpqc: 0.88 min, 204 [M+HJ+, 202 [M-H]-.
Intermediario de Referencia R 3 4-[(5-nitro-2-piridinil)oxil-3-(trifluorometil)benzonitrilo Una mezcla de 2-cloro-5-nitropiridina (70 mg, 0.44 mmoles), 4- hidroxi-3-(trifluorometil)benzonitrilo (91 mg, 0.49 mmoles), K2C03 (92 mg, 0.66 mmoles) en DMF (2 mL) fue agitada a 50°C por la noche. Agua (4 mL) fue agregada y un precipitado fue formado. El sólido fue filtrado y fue triturado con MeOH para dar el compuesto del título (85 mg) como un sólido pardusco. 1H RMN (400 MHz, CDCI3): óppm 8.99 (1 H, d), 8.60 (1 H, dd), 8.07 (1 H, s), 7.95 (1 H, d), 7.48 (1 H, d), 7.19 - 7.32 (1 H, m); UPLCjpqc: 1.1 min, 310 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reaccionando el halo nitroarilo apropiado tal como 2- cloro-5-nitropiridina, 2-cloro-5-nitropirimidina, 1-fluoro-4-nitrobenceno con el fenol apropiadamente sustituido a una temperatura conveniente, opcionalmente bajo irradiación de microondas. Algunos productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
Intermediario de Referencia R18 2-c¡clopropil-4-[(5-nitro-2-piridin¡l)oxi1benzonitrilo Preparación de solución organometálica: a una solución de 0.5M ZnC en THF (9 mL) una solución de 0.5M bromuro de ciclopropil Magnesio en THF (9 mL) fue lentamente agregado a t.a. y la mezcla de reacción fue agitada por 20 minutos a t.a.
A una solución de 2-yodo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermediario de Referencia R16, 550 mg) y Pd(fBu3P)2 (76 mg, 0.15 mmoles), calentada a 60°C, fueron agregados 6 mL de la solución organometálica previamente formada y la mezcla de reacción fue agitada por 1 hora a 60°C. Otros 6 mL de la solución oroganometálica fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por otra hora a 60°C. Otros 6 mL de la solución oroganometálica fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por otra hora a 60°C. Después de enfriar la reacción, fue templada con agua (1 mL), diluida con una solución saturada acuosa de cloruro de amonio (20 mL) y extraída con acetato de etilo (2x50mL). La capa orgánica fue lavada con salmuera (2x20mL), secada ( a2SO4), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (50 g SNAP), eluyendo de 100:0 a 80:20 n-hexano/acetato de etilo proporcionando el compuesto del titulo (400 mg) como un sólido blanco. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 6ppm 9.06 (1 H, d), 8.67 (1 H, dd), 7.88 (1 H, d), 7.35 (1 H, d), 7.23 (1 H, dd), 7.01 (1 H, dd), 2.17 - 2.27 (1 H, m), 1.10 - 1.19 (2H, m), 0.82 - 0.90 (2H, m)¡ UPLCjpqc: 1.13 min, 282 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando bromuro ciclopropil Magnesio con el reactivo apropiado de Grignard para formar el reactivo de organocinc.
Intermediario de Referencia R20 3-ciclopropil-4-f(5-nitro-2-piridinil)ox¡1benzonitrilo En un frasco 3-bromo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermediario de Referencia R14, 800 mg) fue disuelto en 16.0 mL de tolueno. Acido ciclopropilboronico (1073.8 mg, 12.5 mmoles) fue agregado, seguido por Pd(OAc)2 (56.1 mg, 0.25 mmoles) y (Cy)3P (70.0 mg 0.25 mmoles). Luego, una solución acuosa (8.0 mL de agua) de K3P04 (1855.0 mg, 8.75 mmoles) fue agregada. La mezcla de reacción fue calentada a 80°C durante la noche. Después de enfriarse a t.a., la mezcla fue dividida entre salmuera y EtOAc y la fase acuosa separada fue extraída con EtOAc (tres veces). Los orgánicos recolectados fueron secados sobre Na2S04l filtrados y evaporados. El crudo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con ciclohexano/EtOAc (de 100:0 a 80:20 ciclohexano/EtOAc) proporcionando 634 mg del compuesto del título. 1H RMN (400 MHz, D SO-d6): d ppm 9.04 (1 H, br. s), 8.69 (1 H, dd), 7.75 (1 H, d), 7.58 (1 H, s), 7.41 (2H, t), 1.90 - 1.80 (1 H, m), 0.90 - 0.73 (4H, m); UPLCjpqc: 1.12 min, 282 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R21 2-(1-met¡letenil)-4-f(5-nitro-2-piridinil)oxilbenzonitrilo A una solución de 2-yodo-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]benzonitrilo (Intermediario de Referencia R16, 5.0 g) en DMF (50 mL) fueron agregados K3PO4 (5.77 g, 27.24 mmoles), Pd(rBu3)2 (696 mg, 1.36 mmoles) y 4,4,5,5-tetrametil-2-(1-metiletenil)-1 ,3,2-dioxaborolano (3.84 mL, 20.43 mmoles) y la mezcla de reacción fue agitada por 4 horas a 1 10°C. Después de enfriar la reacción fue diluida con agua (100 mL) y extraída con acetato de etilo (3x100mL). La capa orgánica fue lavada con salmuera enfriada en hielo (3x50mL), secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (100 g SNAP) eluyendo de 100:0 a 80:20 ciclohexano/acetato de etilo para proporcionar el compuesto del título (1.8 g) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 9.08 (1 H, d), 8.69 (1 H, dd), 7.97 (1 H, d), 7.47 (1 H, d), 7.40 (2H, d), 5.46 (1 H, s), 5.32 (1 H, s), 2.16 (3H, s); UPLCjpqc: 1.14 min, 282 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R22 2-[(1-metiletil)oxil-4-[(5-nitro-2-piridinil)oxilbenzonitrilo En un frasco 2,4-dihidroxibenzonitrilo (300 mg, 2.2 mmoles), 2-cloro-5-nitropiridina (351.96 mg, 2.22 mmoles) y K2C03 (920 mg, 6.62 mmoles) fueron disueltos en DMF (5 mL). La reacción fue calentada durante 1 hora bajo irradiaciones de microondas (Temperatura de ajsute: 1 10°C). La mezcla de reacción fue diluida con Et20 y agua, acidifiicada con HCI acuoso 1 N hasta pH= 2, las fases fueron separadas y los orgánicos fueron secados sobre Na2S04. El sólido fue filtrado y el solvente fue removido proporcionando 2-h¡drox¡-4-[(5-nitro-2-pirid¡n¡l)ox¡]benzonitr¡lo crudo (664 mg) como un sólido marrón. A una solución de este crudo en DMF seco (5 ml_) carbonato de potasio (460 mg, 3.33 mmoles) y bromuro de isopropilo (313 µ?_, 3.33 mmoles) fueron agregados y la mezcla de reacción fue agitada por la noche a 50°C. La reacción fue diluida con salmuera (10 mL) y extraída con acetato de etilo (2x20mL). La capa orgánica fue secada (Na2S04), filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (25 g SNAP) eluyendo de 100:0 a 75:25 ciclohexano/acetato de etilo proporcionando el compuesto del título (260 mg) como un sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.06 (1 H, d), 8.56 (1 H, dd), 7.61 - 7.67 (1 H, m), 7.15 (1 H, d), 6.76 - 6.84 (2H, m), 4.56 - 4.68 (1 H, m), 1.44 (6H, d).
Intermediario de Referencia R23 4-[(5-amino-2-p¡ridinil)oxil-3-(trifluoromet¡l)benzonitrilo A una solución de 4-[(5-nitro-2-piridin¡l)ox¡]-3-(trifluorometil)benzonitrilo (Intermediario de Referencia R13, 83 mg) en THF (3 mL) / agua (1.5 mL) fue agregada a temperatura ambiente, hierro (75 mg, 1.34 mmoles) y NH CI (72 mg, 1.34 mmoles) y la mezcla de reacción resultante fue agitada por la noche. La mezcla fue filtrada por una pequeña almohadilla de celite lavando con EtOAc y agua. A la mezcla filtrada fue agregado una solución acuosa saturada de NaHC03 y las dos fases fueron separadas. La fase acuosa fue extraída con EtOAc y las fases orgánicas combinadas fueron secadas y fueron evaporadas a sequedad. El crudo fue purificado por cromatografía instantánea (sistema Companion, cartucho de Si 2 x 12 g, de 100:0 a 70:30 ciclohexano/EtOAc) para proporcionar el compuesto del título (72 mg). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): 6ppm 7.97 (1 H, s), 7.69 - 7.79 (2H, m), 7.23 (1 H, d), 7.16 (1 H, dd), 6.93 (1 H, d); UPLCjpqc: 0.91 min, 280 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando 4-[(5-nitro-2-piridinil)oxi]-3-(trifluorometil)benzonitrilo (Intermediario de Referencia R13) con el nitro derivado apropiado. Algunos productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (cartucho de sílice o de NH; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado). A veces la purificación por SCX (MeOH y entonces solución de amoniaco 2M en MeOH) fue corrida antes de la cromatografía instantánea usual.
Intermediario de Referencia R30 f (1 -f ((6-f(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxil-3-piridinil)amino)carboninpropil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo Acido (2R)-2-({[(1 ,1-dimetiletil)oxi]carbonil}amino)butanoico (121.4 mg, 0.60 mmoles) fue disuelto en N,N-Dimetilformamida (1 ml_). N,N-Diisopropiletilamina (0.126 mL, 0.72 mmoles) y 0-(7-Azabenzotriazol-1 -il)-?,?,?',?'-tetrametiluronio hexafluorofosfato (227.2 mg, 0.60 mmoles) fueron agregados. La mezcla de reacción fue agitada a t.a. por 30 min. 4-[(5-amino-2-piridinil)oxi]-3-ciclopropilbenzonitrilo (Intermediario de Referencia R24, 100 mg) fue disuelto en 1.0 mL de DMF y la solución obtenida fue añadida a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada y fue calentada a 60°C por 2 h. Después de enfriarse a t.a., la mezcla de reacción fue evaporada bajo vacío y el crudo obtenido fue cargado en una columna de gel de sílice y eluido con cicIohexano/EtOAc (de 100:0 a 50:50 cicIohexano/EtOAc, entonces plato a 50:50) proporcionando 133 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 8.42 (1 H, br. s), 8.20 - 8.10 (2H, m), 7.51 - 7.44 (1 H, m), 7.32 - 7.23 (1 H, m), 7.08 (1 H, d), 7.03 - 6.95 (1 H, m), 4.95 (1 H, br. s), 4.16 - 4.05 (1 H, m), 2.07 - 1.95 (2H, m), 1.77 - 1.68 (1 H, m), 1.47 (9H, s), 1.04 (3H, t), 0.95 - 0.88 (2H, m), 0.71 - 0.64 (2H, m); UPLCJpqc: 1.14 min, 437 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando el ácido (2R)-2-({[(1 , 1 - dimetilet¡l)oxi]carbonil}amino)butanoico con el aminoácido apropiado y 4-[(5- amíno-2-piridinil)oxi]-3-ciclopropilbenzonitrilo (Intermediario 165) con la anilina apropiada. La reacción fue llevada a cabo a una temperatura conveniente que varia de t.a. a alta temperatura. Los productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
Intermediario de Referencia R36 ((1 R)-1-(í(6-(r4-ciano-3-(1-metiletil)fenillox¡)-3-piridinil)aminolcarbonil)propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo A una solución de ((1 R)-1-{[(6-{[4-ciano-3-(1-metiletenil)fenil]oxi}-3-piridinil)amino]carbonil}propil)carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario de Referencia R32, 73 mg) en MeOH (10 ml_) fue agregado Pd 10% p/p en carbón activado (14 mg) y la mezcla de reacción fue agitada por 30 minutos bajo atmósfera de H2 (P= 1.03 kg/cm2). El catalizador fue filtrado y el solvente removido bajo presión reducida. El residuo fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice (10 g SNAP) eluyendo de 75:25 a 40:60 ciclohexano/acetato de etilo proporcionando el compuesto del título (62 mg) como sólido blanco. 1H-RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 10.24 (1 H, br. s.), 8.42 (1 H, d), 8.16 (1 H, dd), 7.78 (1 H, d), 7.24 (1 H, d), 7.15 (1 H, d), 7.07 - 7.1 1 (1 H, m), 7.05 (1 H, dd), 3.95 - 4.02 (1 H, m), 3.19 - 3.27 (1 H, m), 1.57 - 1.76 (2H, m), 1.39 (9H, s), 1.26 (6H, d), 0.91 (3H, t); UPLCjpqc: 1.20 min, 439 [M+H]+.
Intermediario de Referencia R37 (2R)-2-amino-A/-(6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxil-3- Dbutanamida 1 ,1 -dimetiletil {(1 R)-1-[({6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxi]-3-piridinil}amino)carbonil]propil}carbamato (Intermediario de Referencia R30, 133 mg) fue disuelto en DCM (6 ml_) y, a 0 °C, TFA (3.0 ml_) fue agregado lentamente. La mezcla de reacción fue agitada en esa temperatura por 2 h. Después de la eliminación de los volátiles, el crudo obtenido fue cargado en un cartucho de SCX y eluido con MeOH y entonces NH3 2M en MeOH para proporcionar 102 mg del compuesto del título. 1H-RMN (400 MHz, CDCI3): d ppm 9.68 (1 H, br. s), 8.32 - 8.18 (2H, m), 7.51 - 7.43 (1 H, m), 7.25 - 7.31 (1 H, m), 7.08 (1 H, d), 6.99 (1 H, d), 3.59 - 3.51 (1 H, m), 2.06 - 1.95 (2H, m), 1.73 - 1.63 (1 H, m), 1.03 (3H, t), 0.95 - 0.89 (2H, m), 0.74 - 0.63 (2H, m)¡ UPLCjpqc: 0.68 min, 337 [M+H]+.
Las siguientes compuestos fueron preparados utilizando la metodología anterior, reemplazando {(1 /?)-1-[({6-[(4-ciano-2-ciclopropilfenil)oxi]-3-pirid¡nil}amino)carbonil]propil}carbamato de 1 ,1-dimetiletilo (Intermediario de Referencia R30) con la amina protegida adecuada N-BOC protegida. Los productos finales fueron purificados por SCX (MeOH y entonces solución de amoniaco 2M en MeOH) y las fracciones eluidas con amoniaco, conteniendo el producto, fueron concentradas para proporcionar la base libre. Alternativamente, después de quitar los volátiles, al crudo tomado con un solvente orgánico apropiado fue agregado solcuión acuosa saturada de NaHCO3, las dos fases fueron separadas y la capa orgánica fue secada, fue filtrada y fue evaporada proporcionando el compuesto final como la base libre.
Ejemplo de referencia RE1 (5R)-5-etil-3-(6-([4-met¡l-3-(metiloxi)fenil1oxi)-3-piridinil)-2.4-imidazolidindiona Método A A una solución de (2R)-2-amino-N-(6-{[4-metil-3- (metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)butanamida (Intermediario de Referencia R6, 120 mg) en diclorometano seco (8 mL) TE (0.265 mL, 1.903 mmoles) fue agregado y la mezcla de reacción fue enfriada a 0o C. Una solución de trifósgeno (50.8 mg, 0.171 mmoles) en diclorometano seco (DCM) (2 mL) fue agregada lentamente y la mezcla de reacción fue agitada durante 30 minutos a la misma temperatura. La reacción fue templada con agua (2 mL) y dos fases fueron separadas. La capa orgánica fue secada sobre sulfato de sodio, filtrada y evaporada y el residuo fue purificado por cromatografía de gel de sílice (sistema Biotage, 10g SNAP) con como eluyente un gradiente de ciclohexa no/acetato de etilo 80/20 a ciclohexano/acetato de etilo 50/50 para proporcionar el compuesto del título como un sólido blanco (108 mg).
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.61 (1 H, s), 8.12 (1 H, d), 7.82 (1 H, dd), 7.17 (1 H, d), 7.08 (1 H, d), 6.79 (1 H, d), 6.63 (1 H, dd), 4.25 - 4.18 (1 H, m), 3.77 (3H, s), 2.15 (3H, s), 1.89 - 1.62 (2H, m), 0.95 (3H, t): UPLC_B: 0.79 min, 342 [M+H]+.
Referencia RE2 (5 )-5-etil-5-metil-3-(6-(f4-metil-3-(metiloxi)fenilloxi)-3-piriclinil)- 2,4-imidazolidindiona A una solución de N1-(6-{[4-metil-3-(metiloxi)fenil]oxi}-3-piridinil)-D-isovalinamida (Intermediario de Referencia R842 mg) en diclorometano seco (6 mL), TEA (0.089 mL, 0.638 mmol) fue agregado. La mezcla fue enfriada a 0°C y una solución de trifósgeno (17.03 mg, 0.057 mmoles) en diclorometano seco (1.500 mL) fue agregado por goteo. La mezcla fue agitada a esa temperatura durante 1 hora, entonces una solución de trifósgeno (17.03 mg, 0.057 mmoles) en diclorometano seco (DCM) (1.500 mL) fue agregada por goteo otra vez. La reacción fue agitada durante 30 minutos, fue mantenido en baño de hielo y templada con agua (10 mL). La mezcla fue permitida alcanzar la temperatura ambiente entonces fue extraída con diclorometano (3x7 mL). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas sobre sulfato de sodio, filtradas y evaporadas. El residuo obtenido fue purificado por cromatografía instantánea en gel de sílice utilizando un 10g SNAP y ciclohexano/acetato de etilo como eluyentes de 80/20 a 50/50 (sistema Biotage). Esto proporcionó el compuesto del título como un sólido blanco (24 mg).
H RMN (400 MHz, DMSO-d6): d ppm 8.57 (1 H, s), 8.13 (1 H, d), 7.83 (1 H, dd), 7.17 (1 H, d), 7.07 (1 H, d), 6.79 (1 H, d), 6.62 (1 H, dd), 3.76 (3H, s), 2.14 (3H, s), 1.57-1.86 (2H, m), 1.39 (3H, s), 0.86 (3H, t); UPLC_B: 0.83 min, 354 [M-H]+.
Método para Ejemplos de Referencia RE3 a RE8 4-([4-(4,4-dimetil-2,5-dioxo-1-imidazolidinil)fenilloxi)-2- (metiloxi)benzonitrilo N1-(4-{[4-ciano-3-(metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2-metilalaninamida (77.0 mg) fue disuelto en DCM (10 mL). Trietilamina (0.218 mL, 1.57 mmoles) fue agregado y la mezcla obtenida fue enfriada a 0° C. Bis(triclorometil) carbonato (68.1 mg, 0.22 mmoles) fue disuelto en 5 mL de DCM y la solución obtenida fue agregada por goteo a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada a 0o C. Después de 15 min, la mezcla de reacción fue evaporada al vacío para obtener el producto crudo que fue purificado por cromatografía de gel de sílice (de 100:0 a 50:50 cicIohexano/EtOAc en 10 CV; entonces 50:50 cicIohexano/EtOAc para 10 CV) obtener 65.1 mg del compuesto del título como un sólido blanco. 1H RMN (400 Hz, DMSO-d6): d ppm 8.56 (1 H, br. s.) 7.72 (1 H, d) 7.42 - 7.49 (2 H, m) 7.19 - 7.29 (2 H, m) 6.97 (1 H, d) 6.57 (1 H, dd) 3.89 (3 H, s) 1.41 (6 H, s); UPLCjpqc: 0.93 min, 352 [M+H]+.
Los compuestos siguientes fueron preparados utilizando la metodología precedente, reemplazando N -(4-{[4-ciano-3- (metiloxi)fenil]oxi}fenil)-2-metilalaninamida con la amina apropiada. Los productos finales fueron purificados por cromatografía instantánea (cartucho de Sílice; ciclohexano/EtOAc u otro sistema solvente apropiado).
EJEMPLO BIOLOGICO 1 La capacidad de los compuestos de la invención para modular los subtipos de canal de potasio de compuerta de voltaje Kv3.2/3.1 puede ser determinada utilizando el ensayo siguiente.
Biología celular Para valorar los efectos compuestos en canales Kv3.2 humanos (hKv3.2), una línea celular estable que expresa hKv3.2 fue creada al transfectar células de Ovario (CHO)-K1 de Hámster Chino con un vector pCIH5-hKv3.2. Las células fueron cultivadas en medio DMEM/F12 suplementado por 10% de Suero Bovino Fetal, 1X aminoácidos no esenciales (Invitrogen) y 500ug/ml de Higromicina-B (Invitrogen). Las células fueron cultivadas y mantenidas a 37°C en un ambiente humedecido que contenía 5% CO2 en el aire.
Para valorar los efectos de los compuestos en los canales Kv3.1 humanos (hKv3.1), CHO/Gam/E1A-clone22 alias células CGE22 fueron transducidas utilizando un reactivo de BacMam hKv3.1. Esta linea celular fue diseñada para ser un anfitrión a base de CHO-K1 mejorado para la expresión recombinante aumentada de proteina comparado con el CHO-K1 de tipo silvestre. La línea celular fue generada siguiendo la transducción de células CHO-K1 con un virus de BacMam que expresa la proteína Adenovirus-Gam1 y la selección con Geneticin-G418, para generar una línea celular estable, CHO/Gam-A3. Las células CHG7Gam-A3 fueron transfectadas con pCDNA3-E1A-Hygro, seguido por higromicina-B y clasificación FACS para obtener clones unicelulares. Los virus de BacMam-Luciferasa y BacMam-GFP entonces fueron utilizados en estudios de transducción transitoria para seleccionar el clon basado en la transducción más alta de BacMam y expresión recombinante de proteina. Las células CGE22 fueron cultivadas en el mismo medio utilizado para la línea celular estable hKv3.2 CHO-K1 con la adición de higromicina-B y G418. Todas las otras condiciones fueron idénticas a ésas para las células hKv3.2 CHO-K1. El día antes de un experimento 10 millones de células CGE22 fueron colocdas en placas en un frasco de cultivo T175 y el reactivo de BacMam hKv3.1 (pFBM/humano Kv3.1) fue agregado (MOI de 50). Las células Transducidas fueron utilizadas 24 horas más tarde.
Preparación celular para experimentos lonWorks Quattro El día del experimento, las células fueron removidas de la incubadora y el caldo de cultivo removido. Las células fueron lavadas con 5 mi de PBS de Dulbecco (DPBS) libre de calcio y magnesio y separado por la adición de 3 mi de Versene (Invitrogen, Italia) seguido por una incubación breve a 37°C durante 5 minutos. El frasco fue utilizado para sacar células y 10 mi de DPBS que contenía calcio y magnesio fue agregado para preparar una suspensión celular. La suspensión celular entonces fue colocada en un tubo de centrifugadora de 15 mi y centrifugada por 2 min a 1200 rpm. Después de centrifugación, el sobrenadante fue removido y la perla celular re-suspendida en 4 mi de DPBS conteniendo calcio y magnesio utilizando una pipeta de 5 mi para romper la perla. El volumen de la suspensión celular entonces fue corregido para dar una concentración celular para el ensayo de aproximadamente 3 millones de células por mi.
Todas las soluciones agregadas a las células fueron pre-calentadas a 37° C.
Electrofisioloqía Los experimentos fueron realizados a temperatura ambiente utilizando tecnología de electrofisiología de arreglo plano lonWorks Quattro™ (Molecular Devices Corp.) con PatchPlate™ PPC. Los protocolos de estimulación y la adquisición de datos fueron realizados utilizando una microcomputadora (Dell Pentium 4). Las resistencias completas de electodo planar (Rp) fueron determinadas aplicando un paso de voltaje de 10 mV a través de cada pozo. Estas mediciones fueron realizadas antes de la adición celular. Después de la adición celular y formación de sello, una prueba de sello fue realizada aplicando un paso de voltaje de -80 mV a -70 mV por 160 ms. Siguiendo esto, la solución de amfotericina-B fue añadida a la cara intracelular del electrodo para lograr acceso intracelular. Las células fueron mantenidas a -70mV. La sustracción de la filtración fue realizada en todos los experimentos aplicando 50 ms de pre-pulsos de hiperpolarización (10 mV) prepulses para evocar corrientes de filtración seguidas por un período de 20 ms en el potencial sostenido antes de los pulsos de prueba. Del potencial sostenido de -70 mV, un primer pulso de prueba a -15 mV fue aplicado para 100 ms y siguiendo otros 100 ms a -70 mV, un segundo pulso a 40 mV fue aplicado por 50 ms. Las células entonces fueron mantenidas por otros 00 ms a -100 mV y luego una rampa de voltaje de -100 mV a 40 mV fue aplicado sobre 200 ms. En todos los experimentos, el protocolo de los pulsos de prueba fue realizado en la ausencia (pre-lectura) y presencia (post-lectura) del compuesto de prueba. Las pre- y post-lecturas fueron separadas por la adición de compuesto seguida por una incubación de 3 minutos.
Soluciones y fármacos La solución intracelular contuvo lo siguiente (en mM) : K-gluconato 100, KCI 54, gCI2 3.2, HEPES 5, ajustado a pH 7.3 con KOH. La solución de Amfotericina-B fue preparada como solución de reserva en DMSO y diluida a una concentración final de trabajo de 0.1 mg/ml en la solución intracelular. La solución externa fue Salina Amortiguada con Fosfato de Dulbecco (DPBS) y contuvo lo siguiente (en mM) : CaCI2 0.90, KCI 2.67, KH2P04 1.47, MgCI.6H20 0.493, NaCI 136.9, Na3P04 8.06, con un pH de 7.4.
Los compuestos de la invención (o compuestos de referencia tal como N-ciclohexil-N-[(7,8-dimetil-2-oxo-1 ,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-N' fenilurea fue disuelto en sulfóxido de dimetilo (DMSO) a una concentración de reserva de 10 mM. Estas soluciones fueron diluidas aún más con DMSO utilizando un Biomek FX (Beckman Coulter) en una placa de compuesto de 384. Cada dilución (1 pL) fue transferida a otra placa de compuesto y solución externa conteniendo 0.05% de ácido pluronico (66 µ?.) fue agregada. 3.5 µ?_ de cada placa conteniendo un compuesto de la invención fue agregada e incubada con las células durante el experimento lonWorks Quattro™. La dilución final del ensayo fue 200 y las concentraciones de compuesto finales estuvieron en el intervalo de 50 µ? a 50 nM.
Análisis de datos Los registros fueron analizados y filtrados utilizando tanto resistencia del sello (>20 ?O) como amplitud de la corriente pico (>500pA al paso de voltaje de 40 mV) en la ausencia de compuesto para eliminar las células inadecuadas de análisis posterior. Las corrientes hacia afuera mediadas por el canal Kv3 fueron medidas determinadas de la amplitud media de la corriente sobre los 10 ms finales del pulso de voltaje de -15mV menos la corriente media de línea de fbase a -70mV sobre un período de 10 ms sólo antes del paso de -15mV. Estas corrientes del canal Kv3 que siguen la adición del compuesto de prueba entonces fueron comparadas con las corrientes registradas antes de la adición del compuesto. Los datos fueron normalizados al efecto máximo del compuesto de referencia (50microM de N-ciclohexil-N-[(7,8-dimetil-2-oxo-1 ,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-N' -fenilurea) y al efecto de un control de vehículo (0.5% de DMSO). Los datos normalizados fueron analizados utilizando software ActivityBase o Excel. La concentración de compuesto requerida para aumentar las corrientes por 50% del aumento máximo producido por el compuesto de referencia (pEC50) fue determinada ajusfando los datos de concentración-respuesta utilizando uns función logística de cuatro parámetros.
N-ciclohexil-N-[(7,8-dimetil-2-oxo-1 ,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-N' -fenilurea fue obtenido de ASINEX (Número de Registro: 55231 1-06-5) Todos los compuestos del Ejemplo fueron probados en el ensayo antes mencionado y demostraron la potenciación de las corrientes de celda completa de Kv3.1 o Kv3.2 o de Kv3.1 y Kv3.2 (en la presente después "Kv3.1 y/o Kv3.2") , en promedio, por lo menos 20% de ese observado con 50microM de N-ciclohexil-N-[(7,8-dimet¡l-2-oxo-1 ,2-dihidro-3-quinolinil)metil]-N' -fenilurea. Así, en los ensayos de células recombinantes del Ejemplo Biológico 1 , todos los compuestos del Ejemplo actúan como moduladores positivos. Como es utilizado en la presente, un modulador positivo Kv3.1 y/o Kv3.2 es un compuesto que ha mostrado producir al menos 20% e potenciaicón de corrientes de celda completa mediaadas por canales de Kv3.1 humano y/o Kv3.2 humano recombinantemente expresado en células de mamífero, como es determinado usando los ensayos descritos en el Ejemplo Biológico 1 (Ensayos Biológicos).
Un análisis secundario de los datos de los ensayos descritos en el Ejemplo Biológico 1 investiga el efecto de los compuestos en la velocidad de elevación de la corriente del comienzo de los pulsos de voltaje de despolarización. La magnitud del efecto de un compuesto puede ser determinada de la constante de tiempo (Tauacl) obtenida de un ajuste no lineal, utilizando la ecuación dada a continuación, de la elevación en las corrientes de Kv3.1 o Kv3.2 siguiendo el comienzo del pulso del voltaje de despolarización de -15mV.
Y = (YO - Ymax) * exp(-K*X) + Ymax donde: YO es el valor actual en el comienzo del pulso de voltaje de despolarización; Ymax es la corriente de plato; K es la constante de velocidad, y Tauact es la constante del tiempo de activación, que es el recíproco de K.
Asimismo, el efecto de los compuestos en el momento tomado para las corrientes Kv3.1 y Kv3.2 para decaer en el cierre de los canales al final de los pulsos de voltaje de despolarización de -15mV también puede ser investigado. En este último caso, la magnitud del efecto de un compuesto en el cierre del canal puede ser determinado de la constante de tiempo (Taudeact) de un ajuste no lineal del decaimiento de la corriente ("corriente de cola") que sigue inmediatamente el final del pulso del voltaje de despolarización.
La constante de tiempo para la activación (Tauact) ha sido determinada para muchos de los compuestos de los Ejemplos. Las Figuras 1A y 1 B muestran los datos para los dos compuestos de la invención. El Cuadro 1 proporciona el dato de Tauact para todos los Ejemplos analizados de este modo.
La figura 1A muestra las corrientes hKv3.2 registradas utilizando el ensayo descrito en el Ejemplo Biológico 1. Los datos mostrados son las corrientes individuales sobre el período del paso de voltaje de despolarización a -15mV registrado de 4 celdas diferentes a dos concentraciones de compuesto (Ejemplo de Referencia RE1). Los datos son ajustados por una curva exponencial única (líneas sólidas) utilizando el procedimiento de ajuste en la versión 5 de Prisma (Graphpad Software Inc.).
La figura 1 B muestra corrientes hKv3.2 registradas utilizando el ensayo descrito en el Ejemplo Biológico 1. Los datos mostrados son las corrientes individuales sobre el período del paso de voltaje de despolarización a -15mV registrado de 2 celdas diferentes a dos concentraciones del compuesto del Ejemplo de Referencia RE3. Los datos son ajustados por una curva exponencial única (líneas sólidas) utilizando el procedimiento de ajuste en la versión 5 de Prisma (Graphpad Software Inc.).
CUADRO 1 Resumen de datos de hKv3.2 del análisis del tiempo de activación (Tauact). Para permitir la comparación entre compuestos, la concentración de compuesto escogida fue esa que produjo una corriente semejante (~0.3nA) al final del pulso de voltaje, a excepción del vehículo, donde las corrientes máximas fueron <0.1nA Como puede observarse del Cuadro 1 , en la ausencia del compuesto y la presencia del vehículo el Tauact fue 7.1±1.7 mseg. Un intervalo de valores de Tauact (7.3 - 50.1 mseg) fue observado en la presencia de los compuestos de prueba cuando cada uno fue probado a una concentración que aumentó la corriente de Kv3.2 a un nivel similar (~ 0.3nA).
Los canales Kv3.1 y Kv3.2 deben activarse y deben desactivarse muy rápidamente para permitir a las neuronas dar paso a los potenciales de acciones a alta frecuencia (Rudy and McBain, 2001 , Trends in Neurosciences 24, 517-526). La desaceleración de la probablemente demora el comienzo de la repolarización del potencial de acción; la desaceleración de la deactivación puede llevar a corrientes de hiperpolarización que reducen la excitabilidad de la neuroma y demoran el tiempo antes que la neurona pueda dar paso a un potencial de acción adicional. Juntos estos efectos de desaceleración en la activación y desactivación del canal probablemente llevan a una reducción más que a una facilidad de la capacidad de las neuronas a dar paso a altas frecuencias. Así los compuestos que tienen este efecto de desaceleración en los canales Kv3.1 y/o Kv3.2 pueden desacelerar el paso neuronal. Esta desaceleración del paso neuronal por un compuesto de la invención, específicamente el Ejemplo 15 puede aumentar marcadamente Tauaci a 50.1 ± 7.5 mseg (Cuadro 1), puede ser observado de registros hechos de interneuronas de "paso rápido" en la corteza del cerebro de ratas utilizando técnicas electrofisiológicas, in vitro. Como puede ser observado en la Figura 2, la adición del Ejemplo 15 reduce la capacidad de las neuronas de pasar corriente en respuesta a trenes de pulsos de despolarización a 300 Hz.
La Figura 2 muestra registros hechos de interneuronas identificadas de "paso rápido" en la corteza somatosensoria del ratón. Las neuronas son inducidas a dar paso a corriente a altas frecuencias por trenes de pulsos de corriente de polarización de alta frencuencia a 100, 200, y 300 Hz. La capacidad de la neurona para despedir un potencial de acción en cada pulso es determinada. Una probabilidad de punta de 1 en el eje y del gráfico indica que un potencial de acción es generado por la neurona en cada uno de los pulsos de corriente de despolarización. En ausencia de fármaco (circuios cerrados, n=9), las neuronas mantuvieron una probabilidad de punta de 1 hasta 300 Hz. Sin embargo, en la presencia del Ejemplo 15 (I microM; círculos abiertos, n=6), las neuronas no pudieron seguir los trenes a la frencuencia más alta. * P < 0.05, ANOVA para mediciones repetidas.
Por lo tanto, aunque todos los ejemplos aquí identificados actúan como moduladores positivos en el ensayo de celda recombinante del Ejemplo Biológico 1 , esos compuestos que aumentan marcadamente el valor de Tauaci, tal como el Ejemplo 15, pueden reducir la capacidad de las neuronas en los tejidos nativos de dar paso a corriente a alta frecuencia.
En un aspecto de la invención, allí es proporcionado un compuesto potenciador de Kv3 que está asociado con un valor medio de tau que no es más que 2 desviaciones estándar mayor que el valor medio obtenido en la presencia de vehículo (DMSO 0.5%), para uso en el tratamiento de trastornos donde la modulación positiva de la función del canal Kv3.1 y/o Kv3.2 es beneficiosa, incluyendo la esquizofrenia, trastorno bipolar, trastornos auditivos, trastornos de sueño, trastornos relacionados con sustancias, y epilepsia.
En un aspecto de la invención, allí es proporcionado un compuesto potenciador de Kv3 que está asociado con un valor medio de tau que es mayor que 2 desviaciones estándar que el valor medio obtenido en la presencia del vehículo (DMSO 0.5%), para uso en el tratamiento de trastornos donde la inhibición de la función del canal Kv3.1 y/o Kv3.2 es beneficiosa, incluyendo hiperacusia, Frágil-X, y autismo.
Experimentos pre-clínicos Todos los estudios in vivo fueron realizados en cumplimiento con las Licencias de Proyecto obtenidas de acuredo con la Ley Italiana (art. 7, Legislative Decree no. 1 16, 27 January 1992), que reconoce el 86/609/EEC de la Directiva Europea, y con las políticas empresariales de GlaxoSmithKIine en el cuidado y uso de animales de laboratorio y códigos relacionados con la práctica.
En los estudios que siguen, el Compuesto 48 es el compuesto del Ejemplo de Referencia RE1 .
EJEMPLO BIOLÓGICO 2 Evaluación de los efectos del compuesto en el paso de corriente de interneurons en la corteza somatosensoria de ratones, ¡n vitro Animales Ratones transgénicos [CB6-Tg (Gad1 -EGFP) G42Zjh/J] fueron comprados de The Jackson Laboratory (Maine, USA). Estos ratones expresan selectivamente la proteína fluorescente verde aumentada (EGFP) en la subclase de interneuronas en cesta que expresan la proteína de unión a calcio parvalbúmina (Pv). La expresión de EGFP no es informada en otras clases de interneuronas positivas para la somatostatina (SOM), colecistocinina (CCK), calretinina (CR), y VIP. Estos ratones son por lo tanto útiles para la identificación del subconjunto que expresa Pv de neuronas GABAergicas que expresan los canales Kv3.1 y Kv3.2 y pueden dar paso a corriente a alta frencuencia.
Preparación de los cortes Los experimentos fueron realizados en cortes de cerebro de 250-µGt?- de espesor conteniendo la corteza somatosensoria. Brevemente, los cerebros fueron removidos de ratones Gad1-EGFP de 25-35 dias de edad profundamente anestesiados (isofluorano). Las rajas fueron cortadas utilizando un microcortador DTK 1000 (DSK, Japón) en la solución siguiente (en mM) : KCI (2.5), CaCI2 (0.1 ), NaH2P04 (1.2), MgCI2 (5), NaHC03 (26), sacarosa (189) y glucosa (10), manteniendo a 2-6°C y gaseando con 95% 02-5% C02. Después del corte, las rajas fueron dejadas equilibrarse en una cámara de recuperación por lo menos una hora en un líquido cerebroespinal artificial (ACSF) conteniendo (en mM) : NaCI (120), KCI (2.5), CaCI2 (2), NaH2PO4 (2.5), MgCI2 (1.5), NaHC03 (26), y glucosa (10), a temperatura ambiente y saturado con 95% 02-5% C02.
Registros electrofisiolóqicos Para los registros electrofisiológicos, un corte fue transferido a una cámara de inmersión montada a la altura de un microscopio vertical (Axioskop, Cari Zeiss, Alemania) y superfundido con ACSF oxigenado. La visualización de las neuronas en los cortes fue lograda con un objetivo 40X utilizando microscopía de video de contraste de interferencia diferencial de infrarrojo (IR-DIC) (Hamamatsu C5985, Ciudad de Hamamatsu, Japón). Las interneuronas positivas a parvalbúmina fueron identificadas iluminando la preparación con una lámpara de fluorescencia con un filtro de GFP y cambiando entre miscoscopía de video de fluorescencia e IR-DIC. Sólo las neuronas positivas a GFP fueron registradas. Los registros de célula completa fueron realizados utilizando pipetas de parche de vidrio de borosílicato jaladas utilizando un jalador de electrodos Sutter P-97 y llenas de una solución interna que contiene (en mM) : KGluconato (125), EGTA (10), HEPES (10), MgCI2 (1 ), KCI (10) y MgATP (2); pH 7.3 ajustado con KOH. Cuando se llenó de esta solución interna, los electrodos de parche tuvieron una resistencia de punta de 4-7 MD. Los registros fueron realizados a temperatura ambiente (20-22°C) utilizando un amplificador Multiclamp 700B (Axon Instruments, Foster City, CA, EEUU). Los protocolos de comando de corriente (indicados abajo) y la adquisición de datos fue realizada utilizando un software pClamp 10.0 y una interfaz de Digidata 1320A (Axon Instruments, Foster City, CA, EEUU). Las transitorias capacitivas fueron neutralizadas y la resistencia en serie fue monitoreada continuamente a través del experimento. Si cambió por > 20% la celda fue desechada. Los datos fueron ajustados a 3 kHz y muestreados a 10 kHz.
Fármacos Los compuestos de la invención fueron disueltos en DMSO (100%), tetraetilamonio (TEA) y tetrodotoxina (TTX), (ambos de Sigma, Italia) fueron disueltos en agua destilada y almacenados a -20°C hasta su uso. Los fármacos fueron diluidos a la concentración final en el día del experimento. La concentración final más alta de DMSO utilizada fue 0.1 %.
Procedimiento experimental La actividad de paso de corriente de las ¡nterneuronas registradas fue evaluada aplicando pasos largos de corriente a intensidades diferentes. Así, después de la formación de un giga-sello, el amplificador fue cambiado al modo de corriente-abrazadera, permitiendo a la neurona alcanzar su potencial de membrana de reposo. Una corriente negativa entonces fue inyectada en la célula para obtener un potencial de reposo cercano a -80 mV. De esta condición, las inyecciones de corriente de paso (incrementos de 50 pA, 600 ms) fueron aplicados para producir potenciales de acción. Este protocolo fue repetido por lo menos 2 veces para cada celda.
La compensación de balance de puente en línea fue realizada y el valor de Rm fue monitoreado continuamente a través del experimento.
Aplicación de fármaco Los cortes incubados en la cámara de recuperación por al menos 1 hora en la presencia de ya sea vehículo (0.1% DMSO), TEA (0.5mM) + 0.1 % DMSO, o TEA (0.5mM) + Ejemplo de Referencia RE1 (1 o 10microM). Después de la transferencia de un corte a la cámara de registro, la misma condición de fármaco fue mantenida por superfusión de los fármacos apropiados en el ACSF circulante.
Adquisición de datos y análisis Los datos sin procesar fueron adquiridos utilizando Clampex 10.0 (Molecular Devices, EEUU). Los datos se analizaron utilizando software Clampfit 10.0 (Molecular Devices, EEUU). La frecuencia del paso del potencial de acción (expresado en Hz) en respueta a las inyecciones de corriente de paso fue calculada del número de potenciales de acción detectados sobre la corriente de paso de 600 ms. Los valores de frecuencia obtenidos para cada paso de corriente en la misma condición experimental y en la misma celda fueron promediados. Ya que el umbral para evocar los potenciales de acción varía de una celda a otra, la intensidad de paso de corriente fue expresada como pA del umbralde la corriente para la generación del potencial de acción, más que valores absolutos.
La mitad de ancho del potencial de acción fue calculada para cada potencial de acción utilizando Clampfit. Los valores de los 2°-5° o lo últimos diez potenciales de acción evocados por un paso de corriente no saturante (típicamente 100-150 pA del umbral) fueon promediados para cada condición experimental en cada celda analizada.
Análisis estadístico Las diferencias estadísticas entre el efecto de los tratamientos en la frecuencia del paso de corriente de acción fueron evaluados utilizando ANOVA de dos vías para mediciones repetitivas y, si fue necesario, comparaciones planeadas post hoc (las diferencias fueron consideradas significativas donde p<0.05). El efecto del tratamiento de fármacos en la mitad de ancho del potencial de acción y en la primera derivada de la amplitud fue evaluada utilizando un ANOVA. Todos los análisis estadísticos fueron realizados utilizando Software Statistica (StatSoft versión 8). Donde es adecuado, los resultados fueron reportados como medias ± SEM.
Criterios para la inclusión/exclusión de datos Los criterios utilizados para incluir o excluir una celda del análisis fueron basados en las condiciones exactas de corriente-abrazadera y la estabilidad del registro a través del experimento. La evaluación en línea permitió la exclusión de celdas cuando los valores de Rs y/o Rm cambiaron por > 20%.
Resultados Las interneurons registraas de los cortes incubadas con TEA 0.5mM pasaron corriente a una frecuencia máxima más baja en respuesta a corrientes de paso en comparación con las neuronas grabadas de los cortes de control (Figura 3). Este efecto fue invertido apreciablemente en los cortes incubados con TEA (0.5mM) más el Ejemplo de Referencia RE1 a 1µ? o 10µ? (ANOVA de una vía para mediciones repetidas, * p<0.05 con respecto a TEA solo).
Figura 3. La frecuencia de los potenciales de acción registrados de las interneuronas positivas a pan/albúmina en la corteza somatosensoria del ratón, evocada por los pasos de corrientes de despolarización (600ms de duración y ?-incremento de 50pA) después de por lo menos 1 hora ya sea con vehículo (0.1 % DMSO; círculos rellenos, n=6), TEA (0.5mM) +0.1 % DMSO (círculos abiertos, n=7), TEA (0.5mM) + Ejemplo de Referencia RE1 (^M; triángulos rellenos, n=9), o TEA (0.5mM) + Ejemplo de referencia RE1 (10pM; triángulos abiertos, n=5). * P<0.05; ANOVA de una vía para mediciones repetidas.
Además, la mitad de ancho del potencial de acción aumentó apreciablemente en celdas registradas de cortes incubados con TEA (0.5mM) en comparación con los cortes de control (0.1 % de DMSO) (Figura 4). En los cortes incubados con TEA (0.5mM) más el Ejemplo de Referencia RE1a 1 µ? o 10µ?, la mitad de ancho del potencial de acción medio disminuyó significativamente por 24% y 36%, respectivamente, en comparación con los cortes incubados con TEA (0.5mM) sólo (ANOVA y prueba Dunnett, * p<0.05, n=9; ** p<0.01 , n=5, respectivamente).
Figura 4. La mitad de ancho de los potenciales de acción evocados de interneuronas positivas a parvalbúmina en la corteza somatosensoria del ratón. Antes de los registros, los cortes fueron incubados por lo menos 1 hora ya sea con vehículo (Control; 0.1% DMSO, n=6), TEA (0.5mM) + 0.1 % DMSO (n=7), TEA (0.5mM) + Ejemplo de Referencia RE1 (1 DM; n=9), o TEA (0.5mM) + Ejemplo de referencia RE1 (10µ?; n=5). * P<0.05; ** p<0.01 , *** p<0.00 , ANOVA seguido por prueba de Dunnett.
Estos resultados demuestran la capacidad de los compuestos que tienen actividad en los ensayos de Ejemplo Biológico 1 para modular el comportamiento de las interneuronas de paso rápido en el cerebro de ratón en una manera coherente con la modulación positiva de los canales Kv3.1 y/o Kv3.2. La capacidad de aumentar la función Kv3 en las áreas corticales del cerebro es también coherente con el potencial de estos compuestos para tratar un intervalo de trastornos del sistema nervioso central, incluyendo la esquizofrenia, trastorno bipolar, y la epilepsia.
EJEMPLO BIOLÓGICO 3 Evaluación de los efectos del compuestos en las corrientes de potasio registradas de neuronas en el núcleo central del cuerpo trapezoide en ratones, in vitro Animales Ratones macho CBA/Ca (12 - 16 días de edad) fueron utilizados en estos experimentos (de acuerdo con el Acta de Procedimientos Científicos de Animales del RU, 1986). Cortes de cerebro conteniendo el núcleo central del cuerpo trapezoide (MNTB) fueron preparados como fue descrito anteriormente (Brew and Forsythe, 2005).
Fármacos Las sustancias químicas y los reactivos fueron comprados de Sigma, (Poole, RU) a menos que de otro modo sea indicado. El Ejemplo de Referencia RE1 fue disuelto en DMSO y diluido en ACSF a la concentración requerida.
Registro electrofisiológico Los registros de las neuronas MNTB identificadas fueron realizados como fue anteriormente descrito (Brew and Forsythe, 2005). Los cortes fueron colocados en una cámara de superfusión en un portaobjetos de microscopio invertido y continuamente perfundido con ACSF gaseado (95% 02-5% C02) ACSF a una velocidad de 1 mi min- a temperatura ambiente. Los registros de la celda completa fueron realizados de neuronas MNTB visualmente identificadas utilizando un amplificador Axopatch 700B (Molecular Devices, Union City, CA, EEUU). La solución de parche comprendió (en mM) gluconato de potasio (97.5), KCI (32.5), Hepes (40), EGTA (5), MgCI2 (1 ), Na2fosfocreatina (5), pH 7.2 con KOH. Las pipetas tuvieron resistencias de 3-5 ?O y las resistencias en serie fueron 6-10 ?O (compensadas por 70%, 10 ps de demora). La resistencia al acceso fue monitoreada con frecuencia y el registro desechado si los aumentos fueron mayores de 2 ?O.
Una vez obtenida la configuración de una celda completa, las celdas fueron mantenidas a -60mV antes de la aplicación de los protocolos de voltaje como sigue: las celdas fueron escalonadas del potencial mantenido a -90 por 700ms y escalonado a -40mV por 25ms y luego un pulso de voltaje a un intervalo de voltajes de -100 a +40mV (incrementos de 0mV) fue aplicado por 220ms antes de regresar al potencial sostenido. Después del término de este protocolo, TEA (1mM) fue agregado al medio de superfusión. Después de 5 minutos, un segundo conjunto de registros utilizando el mismo protocolo de voltaje fue llevado a cabo. Después de esto, el Ejemplo de Referencia RE1 (10 microM) fue añadido al ACSF, en la presencia continua de TEA (1 mM), y después de otros 5 minutos, un conjunto final de registros con el protocolo de voltaje fue hecho.
Análisis estadístico Las corrientes evocadas por el paso de voltaje a + 40mV fue comparado a través de tratamientos de fármaco para cada celda utilizando una prueba t no apareada.
Resultados TEA (1 mM) significativamente redujo la amplitud hacia afuera, las corrientes de potasio activadas por el alto voltaje evicadas por los pasos de voltaje a +40mV (Figura 5). Este efecto fue revertido por la aplicación subsiguiente del Ejemplo de Referencia RE1 (10microM).
Figura 5. Corrientes de potasio activadas por el alto voltaje de las neuronas MNTB visualmente identificadas en el ratón, in vitro. Los datos mostrados son la media (+/- d.s.) de la amplitud de la corriente evocada por los pasos de voltaje a +40mV bajo diferentes condiciones de fármaco. TEA (1mM), TEA (1 mM) + Ejemplo de Referencia RE1 (10microM). El análisis estadístico fue realizado utilizando una prueba t no apareada.
Estos datos indican que los compuestos que tienen actividad en los ensayos del Ejemplo Biológico 1 pueden modular las corrientes de potasio activadas por alto voltaje (que se asume son medadas por los canales Kv3.1 ; Brew and Forsythe, 2005) en neuronas del MNTB, una región del tallo encefálico que procesa información auditiva. Este resultado apoya la utilidad de los compuestos de la invención para el tratamiento de trastornos de audición.
EJEMPLO BIOLÓGICO 4 Modelo de convulsión por electrochoque en ratas Preparación experimental Ratas macho CD (85-130g) fueron suministradas Charles River, Italia. Los animales fueron alojados en grupo con acceso libre al alimento (comida Estándar de roedor) y agua bajo un ciclo de 12h de luz/oscuridad (luces encendidas a las 0600h). Un periodo de por lo menos 5 días entre la llegada a GSK y el estudio fueron permitidos en todos los casos.
Protocolo experimental Los animales fueron administrados un compuesto de prueba en la dosis apropiada, ruta y tiempo de pre-tratamiento y devueltos a su jaulas. La prueba ocurrió en un cuarto separado de ese usado para el alojamiento. Las pruebas involucraron determinar el umbral para las convulsiones extensoras de la pata trasera tónica utilizando un estimulador Hugo Sachs Electronik que suministra una corriente constante de 0.3 segundos de duración, 50Hz, forma de tendón, completamente ajustable entre 1 y 300 mA. Los estímulos fueron entregados vía electrodos corneales (Stean TO, Atkins AR, Heidbreder CA, Quinn LP, Trail BK, Upton N. (2005) Br J Pharmacol.144(5):628-35). El umbral de convuslión fue determinado utilizando el método de 'arriba y abajo' de Kimball et Al. ( 957)( Kimball AW, Burnett WT Jr, Doherty DG. (1957) Radiat Res. 7(1 ):1-12). El primer animal probado en cada grupo fue estimulado con una corriente que quizás sea la esperada a estar cercana al umbral para la inducción de una convulción. Si no fue inducida una convulsión tónica, entonces el próximo animal en el grupo recibió un estímulo 5 mA más alto. Si una convulsión tónica fue inducida, entonces el próximo animal recibió un estímulo 5 mA más bajo. Esto es repetido para todos los animales dentro del grupo de control (vehículo). En el caso de grupos tratados con un compuesto de prueba pasos de 5 a 10 mA fueron utilizados. Al final del estudio, se tomaron muestras de sangre para análisis de concentraciones del fármaco en este compartimiento (n=4/grupo).
Fármacos y Materiales Todas las dosis fueron calculadas como base. Valproato de sodio fue suspendido en Methocell 1 % (p/v) y dosificado via la ruta oral (p.o.) a 5 mL/kg 1 hora antes de la prueba. El Ejemplo de Referencia RE1 fue disuelto en DMSO y entonces suspendido en Methocell 1 % (p/v) a una concentración final de DMSO de 5% (v/v) El Ejemplo de Referencia RE fue entonces dosificado p.o. a 5mL/kg 2 horas antes de la prueba.
Análisis de datos La inducción de la convulsión es medida como un efecto de todo o nada ya sea presente (+) o ausente (0) para cada animal. Los datos para cada grupo de tratamiento fueron registrados como el número de +'s y 0's a cada nivel de corriente empleado y esta información fue entonces utilizada para calcular el valor de CC50 (corriente requerida para que el 50% de los animales muestre comportamiento de convulsión) + error estándar de la media de acuerdo con el método de Kimball et al. (1957). Los efectos del fármaco fueron calculados como el % de cambio en CC50. Las diferencias significativas entre animales tratados con fármaco y los grupos tratados con vehículo adecuado fueron valorados según los métodos de Litchfield and Wilcoxon (1949).
Resultados El pretratamiento con el Ejemplo de Referencia RE1 fue asociado con un aumento significativo en el umbral de las convulsiones en ambas dosis probadas: A la dosis de 30mg/kg p.o., el Ejemplo de Referencia RE1 produjo un 91 % de aumento en el umbral de la convulsión, mientras que a la dosis de 60mg/kg p.o , el aumento en el umbral de convulsión fue +218%. El aumento producido por la dosis más alta del Ejemplo de Referencia RE1 fue semejante al aumento producido por el control positivo, valproato de sodio a 300mg/kg p.o. (+ 258%).
Las concentraciones en sangre del Ejemplo de Referencia RE1 medidas en animales satélite 2 horas después de la dosificación fueron 5.3 y 9.1 pg/mL siguiendo las dosis de 30 y 60mg/kg p.o., respectivamente. Estas concentraciones equivalen a concentraciones sueltas en sangre de 1.3 y 2.2µ?, respectivamente, y así son consistentes con las concentraciones del Ejemplo de Referencia RE1 que produce un aumento significativo en las corrientes mediadas por Kv3 observadas en el ensayo de electrofisiologia de Kv3 humano recombinante in vitro, descrito antes.
Conclusiones Estos resultados sugieren que el Ejemplo de Referencia RE1 tiene eficacia anticonvulsiva, y que este efecto es probablemente mediado por la modulación positiva de canales de potasio Kv3. Por consiguiente, los compuestos que tienen actividad en los ensayos del Ejemplo Biológico 1 pueden tener eficacia anticonvulsiva.
EJEMPLO BIOLÓGICO 5 Hiperactividad inducida por psicoestimulante en ratones Preparación experimental Ratones machos CD -1 (25-35g) fueron suministrados por Charles River, Italia. Los animales fueron alojados en grupo con acceso libre al alimento (comida Estándar de roedor) y agua bajo un ciclo de 12h de luz/oscuridad (luces encendidas a las 0600h). Un período de por lo menos 5 días entre la llegada a GSK y el estudio fueron permitidos en todos los casos.
Protocolo experimental Los animales fueron administrados un compuesto de prueba en la dosis apropiada, ruta y tiempo de pre-tratamiento, y entonces devueltos a sus jaulas. La prueba ocurrió en un cuarto separado de ese usado para el alojamiento. Los ratones fueron tratados oralmente (p.o.) con el compuesto de prueba y colocados individualmente en una caja Perspex (longitud 20.5 cm, ancho 20.5 cm, altura 34 cm) cubierta con una tapa perforada. Los sensores de monitoreo infrarrojo fueron situados alrededor de las paredes de perímetro (sensores horizontales). Dos sensores adicionales fueron situados 2.5 cm encima del piso en lados opuestos (sensores verticales). Los datos fueron recolectados y fueron analizados utilizando un Sistema de Versa ax (Accuscan Instruments Inc., Columbus, OH) que a su vez tranbsfirió información a una computadora. Después de 30 minutos de aclimatación, los ratones fueron tratados con anfetamina dosificada intraperitonealmente (i.p.) a 2mg/kg a 10mL/kg, y la subsiguiente actividad locomotriz en la arena de prueba fue evaluada por otros 60 minutos. La actividad locomotriz fue determinada como la distancia total (cm) desplazada por cada ratón en la arena de prueba sobre el período de prueba de 60 minutos.
Fármacos y Materiales Todas las dosis fueron calculadas como base. Clozapina fue disuelta en agua destilada y dosificada a 3mg/kg intraperitonelamente (i.p.) a 10mL/kg. El Ejemplo de Referencia RE1 (10, 30 o 60mg/kg) o vehículo (HPMC 0.5% p/v, Tween80 0.1 % v/v en agua) fue administrado p.o. a 10mL/kg. Tanto el Ejemplo de Referencia RE1 como la clozapina fueron dosificados inmediatamente antes de colocar el animal en la arena de prueba (30 minutos antes de la administración de la anfetamina).
Resultados La anfetamina produjo sólo un aumento grande y significativo en la distancia total desplazada. Una dosis de 30mg/kg p.o. del Ejemplo de Referencia RE1 redujo significativamente el aumento en la distancia total desplazada producida por la anfetamina. Una dosis mayor de 60mg/kg p.o. del Ejemplo de Referencia RE1 redujo más el aumento en la actividad locomotriz inducida por la anfetamina de manera similar al control positivo, clozapina (3mg/kg i.p.). Los datos son resumidos en el Cuadro 1.
CUADRO 1 Los efectos del Ejemplo de Referencia RE1 en la anfetamina indujo hoperlocomoción en el ratón. El Ejemplo de Referencia RE1 fue administrado p.o. 30 minutos antes de la anfetamina (2mg/kg i.p ). La clozapina fue administrada i.p. 30 minutos antes de la anfetamina (2mg/kg i.p.). La distancia total fue evaluada durante 60 minutos comenzando inmediatamente después de la administración de la anfetamina. Los datos son expresados como media ± sem. Los datos fueron sometidos a análisis de varianza de una vía (ANOVA) seguido por prueba de Dunnett (** = p<0.01 contra tratamiento sólo de anfetamina).
Conclusiones Estos resultados muestran que el Ejemplo de Referencia RE1 , en dosis semejantes a ésas que muestran la eficacia anticonvulsiva, pueden prevenir la hiperactividad inducida por el sicoestimulante, la anfetamina. Así, el Ejemplo de Referencia RE1 y otros compuestos que modulan positivamente los canales Kv3.1 y/o Kv3.2, como puede ser observado del ensayo descrito en el Ejemplo Biológico 1 , puede ser útil en el tratamiento de trastornos asociados con la hoperactividad, tal como manía bipolar, o interrupción del sistema de dopamina, tal como puede ocurrir en la dependencia á fármacos, trastorno de hiperactividad de déficit de atención (ADHD), o esquizofrenia.
EJEMPLO BIOLÓGICO 6 Fármaco-electroencefalografía (phEEG) en el mono tití común Animales y cirugía Machos criados en laboratorio (con vasectomía) y monos tití hembras comunes (Callithrix jacchus) mayores a 2 años de edad, pesando 250-500g fueron utilizados en este estudio. Los animales fueron enjaulados en parejas, en un alojamiento mantenido a 25 ± 1 °C, 60% humedad y un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas (luces encendidas a las 0600, con 30 min de amanecer y anochecer simulado). Los animales recibieron una dieta estándar y agua potable ad libitum. Sólo un animal de cada par participó en la prueba, que fue llevado a cabo con el animal situado en la jaula de alojamiento.
El efecto de los compuestos de la invención fue evaluado utilizando registro telemétrico de EEG cortical (ECoG). Un transmisor telemétrico multicanal (modelo DSI TL11 M2-F40-EET) es implantado intraperitonealmente utilizando técnicas quirúrgicas estándar en monos tití anestesiados. Los electrodos de registro fueron permanentemente fijados, con cemento dental, al cráneo directamente en contacto con la duramadre a través de dos orificios taladrados en la región fronto-parietal. Después de la cirugía, los animales fueron alojados en pares (uno implantado, un socio sin operar) en su jaula de albergue con acceso a alimento y y agua ad libitum. Los animales demostraron un repertorio de conducta normal inmediatamente después de la recuperación de la cirugía; sin embargo, el phEEG fue evaluado por lo menos 3 semanas más tarde. Todos los estudios ¡n vivo fueron realizados de acuerdo con las leyes Italianas y adaptados a los estándares éticos de GlaxoSmithkline.
Procedimiento experimental Los animales fueron colocados en cajas-nido en sus jaulas de alojamiento y los trazos de EEG fueron registrados utilizando software Dataquest ART por un periodo de 5 min para cada punto de tiempo y analizado utilizando software Spike2 (CED, UK). La potencia espectral en cada banda de frecuencia fue determinada para cada época de 2 seg durante el periodo de pre-tratamiento y promediado; asimismo la potencia espectral en cada banda fue determinada para sucesivas épocas de 2 seg de cada período de 5 min de registro después del tratamiento con vehículo o fármaco. El cambio en la potencia espectral absoluta, para cada una de las diferentes bandas (delta, teta, alfa y beta) fue calculada fuera de línea.
Los tratamientos de fármaco fueron asignados según un diseño cruzado completo: Todos los tratamientos fueron distribuidos al azar entre los animales, en sesiones experimentales separadas, cada animal recibió vehículo y cada dosis de fármaco, después de un período apropiado de eliminación.
Seis animales fueron tratados oralmente con el Ejemplo de Referencia RE2 a las dosis de 0.3, 1 y 3 mg/kg (1 ml/kg) y los trazos de EEG fueron registrados a +15, 30, 60, 90, 120 y 180 minutos después del tratamiento. El Ejemplo de referencia RE2 fue suspendido en 12.5% (p/v) de captisol acuoso conteniendo 0.1 % (p/v) Tween80 y 0.5 % (p/v) HPMC.
Análisis de datos Cuatro bandas diferentes de frecuencia fueron consideradas: delta (1 ,50-6,00 Hz), teta (6,00-8,00 Hz), alfa (8,00-12,00 Hz) y beta (12,00- 30,00 Hz). Los valores para la potencia espectral en cada banda en cada punto de tiempo fue primero transformada logarítmicamente y entonces analizada con un modelo mezclado de efecto con tiempo como efecto fijo, el nivel de línea de base como covariable, y el animal como término aleatorio. Los datos son resumidos como medias de los cambios de porcentaje de la linea de base y error estándar.
Resultados Los cambios en el fármaco-EEG observados en estos estudios muestran que, comparado al vehículo, el Ejemplo de Referencia RE2 a la dosis más alta (3 mg/kg) indujo un aumento estadísticamente significativo de la potencia absoluta en la banda delta entre 30 y 120 minutos (P<0.05) y un aumento estadísticamente significativo en la potencia a la banda teta a los 60 minutos (p<0.05). En la dosis intermedia (1 mg/kg) el Ejemplo de Referencia RE2 indujo un aumento marginalmente significativo (P<0.10) en la potencia absoluta en la banda delta a 30 minutos y una reducción concomitante significativa en la banda beta (p<0.05). Ningún efecto significativos fue observado en la banda alfa en cualquier dosis del Ejemplo de Referencia RE2.
Estos resultados sugieren que los compuestos que tienen actividad en los ensayos del Ejemplo Biológico 1 pueden modificar el EEG de primates despiertos. Los aumentos en la actividad de EEG de la banda delta han sido observados anteriormente con compuestos antipsicóticos en humanos.
EJEMPLO BIOLOGICO 7 Patrón circadiano de la expresión de canales Kv3.1 y Kv3.2 en el núcleo superquiasmático de ratones Material y Métodos Treinta ratones macho adultos C57BL/6J (edad: 4-5 semanas a la llegada; Charles River FR) fueron almacenados en seis jaulas diferentes (5 ratones por jaula) y mantenidos por 4 semanas en un cuarto dedicado con 12 H de luz - 12 H de condición oscura (luces encendidas a las 06:00, designadas como tiempo Circadiano [CT] 6; luces apagadas a las 18:00, designado como CT 18. La temperatura ambiente fue mantenida a 21 ± 2°C¡ alimento y agua estuvieron disponibles ad libitum.
Después de este período, los ratones fueron sacrificados por dislocación cervical en puntos diferentes de tiempo sobre un periodo de 24 horas; 5 ratones por punto de tiempo. Los animales fueron transferidos del cuarto de almacenamiento al cuarto de la cirugía y entonces inmediatamente sacrificados. Durante la fase oscura, todas estas acciones fueron realizadas bajo una luz roja débil.
Los cerebros fueron quitados del cráneo e inmediatamente sumergidos en isopentano mantenido aproximadamente a - 30°C y entonces almacenado a - 70°C antes de análisis de hibridación in situ.
Todos los cerebros fueron cortados por cryostat y varias secciones coronales de 14 pm de espesor fueron recolectadas al nivel en que el núcleo supraquiasmático nucleus está presente, approximadamente entre -0.22 mm y -0.82 mm de Bregma (Paxinos and Franklin, "The mouse brain in stereotaxic coordinates"). Las secciones entonces fueron almacenadas a -80°C hasta uso. Para cada punto de tiempo (CT12, 16, 20, 24, 4 and 8), cinco ratones fueron recolectados y dos secciones no consecutivas de cada ratón fueron seleccionadas y dejadas secar a temperatura ambiente, luego inmediatamente expuestas por protocolo de hibridación in situ, como fue . descrito en los experimentos previos.
Resultados Un ANOVA de una vía no encontró un efecto significatico de tiempo en la expresión de ARNm de Kv3.1 dentro del núcleo supraquasmático del ratón (Figura 6A). Por contraste, ANOVA de una vía indicó que hubo un efecto sumamente significativo del tiempo en la expresión de ARNm de Kv3.2 dentro del núcleo supraquiasmático del ratón (p < 0.001), con un pico significativo de expresión a ZT 10, el punto de tiempo correspondiente a 2 horas antes del cambio de la fase de luz a la de oscuridad, que es la fase activa de los ratones (Figura 6B).
Figura 6A: Expresión de ARNm de Kv3.1 en el núcleo supraquiasmático de ratones sacrificados durante diferentes tiempos Circadianos durante un ciclo de 24 horas de luz-oscuridad. La expresión de ARNm de Kv3.b1 es expresada en nCi/g como media ± S.E.M. de n = 5 ratones por punto de tiempo. Figura 6B: Expresión de ARNm de Kv3.2 en el núcleo supraquiasmático. La expresión de ARNm de Kv3.2 es expresada como media ± S. E. M. para n = 5 ratones por punto de tiempo. *** p < 0.001 : La expresión de ARNm de Kv3.2 a CT 16 es significativamente diferente de todos los otros puntos de tiempo. * p < 0.05: la expresión de ARNm de Kv3.2 a CT 20 es significativamente diferente de la expresión medida a CT 24 y 4.
Estos resultados indican que la expresión del canal Kv3.2 en el núcleo supraquiasmático varía sobre el ciclo circadiano de 24 horas. Así, dado el papel central del núcleo supraquiasmático para ajustar el reloj circadiano en mamíferos, los canales Kv3.2 son probablemente importantes para la función de este reloj. Por consiguiente, los compuestos que modulan los canales Kv3.2 pueden tener potencial en el tratamiento de trastornos asociados con la disfunción circadiana, incluyendo el sueño y los trastornos bipolares.
EJEMPLO BIOLÓGICO 9 Evaluación de sueño fisiológico en la rata Métodos Ratas macho adultas CD (C. River, Italy) fueron implantadas con sondas telemétricas y alojadas solas, bajo condiciones controladas (temperatura 18-20° C; humedad relativa 45-50%; ciclo de luz-oscuridad de 12 horas, luces encendidas a 3 p.m., designado Tiempo Circadiano (CT) 0) con libre acceso a alimento y agua.
El Ejemplo de Referencia RE1 fue formulado en tween (0.1 % v/v) y HPMC (0.5% v/v) y fue administrado oralmente a dosis de 10, 30 y 60 mg/kg (vol. 2ml/kg) a CT18 (6 horas antes de encender las luces). El encefalograma (EEG) y electromiograma (EMG) fueron registrados continuamente, comenzando inmediatamente después de la administración, utilizando un aparato telemétrico (sistema DSI dataquest® A. R. T.). Los registros de EEG y EMG fueron analizados para evaluar los patrones de sueño utilizando sleepSign® (Kissei Comtec Co.). Los análisis estadísticos (Anova de 1 vía seguido por la prueba de Dunnett) fue realizada utilizando software Statistica-8.
Resultados El Ejemplo de Referencia RE1 a 60mg/kg aumentaron significativamente el tiempo total de sueño (p<0.05, n=8) y el tiempo gastado en sueño no REM (p<0.05, n=8) sobre el periodo de 5 horas inmediatamente después de la dosificación, pero no afectó el tiempo gastado en el sueño REM.
Estos resultados sugieren que los compuestos de la invención pueden aumentar el sueño fisiológico en animales, lo que sugiere que pueden ser útiles en el tratamiento de trastornos del sueño en humanos.

Claims (22)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto de fórmula (I): en donde: Ri es H, o alquilo de Ci^, halo, halo alquilo de C -4, CN, alcoxi de C1-4, halo alcoxi de C-i-4; R2 es H, alquilo de Ci- , espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de Ci-4 o halo; R3 es H, alquilo de C-|.4, halo alquilo de C^, halo; o R3 está ausente; R13 es H, alquilo de Ci-4, halo alquilo de C- , halo; o R13 está ausente; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionaimnente fusionado a un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando se considera junto con el fenilo; X es C o N; Y es C o N; R4 es alquilo de Ci-4; R5 es H, Deuterio, alquilo de C1-4; o R4 y R5 pueden estar fusionados para formar espiro carbocíclico de C3-4; en donde R2 y R3 pueden estar unidos a un átomo de anillo fusionado; y en donde R2 puede estar unido a un átomo de anillo fusionado; o una sal y/o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque es: (la) en donde Ri es H, o alquilo de C- , halo, halo alquilo de Ci^, CN, alcoxi de Ci-4, halo alcoxi de C-i-4; R2 es H, alquilo de Ci-4, espiro carbocíclico de C3-4, halo alquilo de o halo; R3 es H, alquilo de Ci-4, halo alquilo de C1- , halo; A es un heterociclo de 5 o 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está opcionalmente fusionado con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo; X es C o N; Y es C o N; R4 es alquilo de C-u; R5 es H, Deuterio, alquilo de C1-4; o R4 y R5 pueden ser fusionados para formar un espiro carbocíclico de C3-4 ; en donde R2 y R3 pueden estar unidos al mismo o diferente átomo del anillo; y en donde R2 puede estar unido a un átomo de anillo fusionado; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 o reivindicación 2, caracterizado además porque R, es H o metilo.
4. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque A es un heterociclo de 5 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está fusionado opcionalmente con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado junto con el fenilo.
5. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado además porque A es un heterociclo de 6 miembros saturado o insaturado, con por lo menos un átomo de O; dicho heterociclo está fusionado opcionalmente con un grupo ciclopropilo para formar un triciclo cuando es considerado juntos con el fenilo.
6. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado además porque el anillo A es dihidrofurano o dihidropirano.
7. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado además porque R2 es H, metilo o un grupo espiro de C3.
8. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado además porque R3 es H o metilo.
9. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado además porque R 3 es H, F o metilo.
10. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque X es C y Y es C.
1 1 . - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque X es C y Y es N.
12.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado además porque X es N y Y es N.
13 - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado además porque R4 es metilo o etilo.
14. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado además porque R5 es H o metilo.
15. - El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, caracterizado además porque R4 y R5 tienen el arreglo estereoquímico:
16.- El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, para usarse como un medicamento.
17.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, para usarse en la profilaxis o el tratamiento de trastornos de audición, esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia o trastornos del sueño.
18.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 16 o la reivindicación 17, para usarse en conjunto con un agente farmacéuticamente activo adicional.
19.- El uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de trastornos de audición, esquizofrenia, trastorno bipolar, epilepsia o trastornos del sueño.
20. - Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15 y un portador o excipiente farmacéuticamente aceptable.
21. - Un compuesto seleccionado de: espiro[1 -benzofuran-3,1'-ciclopropan]-4-ol 7-metilespiro[2H-benzofuran-3,1'-ciclopropano]-4-ol 3,3,7-trimetil-2,3-dihidro-1-benzofuran-4-ol o una sal del mismo.
22.- Un compuesto seleccionado de: en donde: X es C o N; Y es C o N; y el grupo W es seleccionado de: o una sal del mismo.
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