MX2012001186A - Derivado de analogo glp-1 o su sal farmaceutica y su uso. - Google Patents

Abstract

Está invención describe un derivado de un análogo GLP-1 o su sales farmacéuticas, en donde el análogo GLP-1 contiene la secuencia de aminoácidos de la fórmula general (I). El derivado del análogo GLP-1 que se proporciona por esta invención tiene la función de GLP-1 humano, y una más prolongada vida media in vivo en comparación con GLP-1 humano. El derivado del análogo GLP-1 o su sales farmacéuticas, o composiciones farmacéuticas que contienen el derivado del análogo GLP-1 o sus sales farmacéuticas que se proporcionan por esta invención, pueden emplearse ampliamente para tratar diabetes no dependiente de insulina, diabetes dependiente de insulina u obesidad. X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe -Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-X13-X14-Glu-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe- Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X 39-Lys (I)).

Description

DERIVADO DE ANÁLOGO GLP-1 O SU SAL FARMACÉUTICA Y SU USO CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a una serie de derivados del análogo de péptido tipo Glucagón-1 (GLP-1) humano y sus sales farmacéuticas. Los derivados del análogo GLP-1 que se proporcionan en esta invención tiene la función de GLP-1 humano y una vida media mayor in vivo en comparación con GLP-1 humano. La presente invención también se refiere al uso de los derivados del análogo GLP-1, sus sales farmacéuticas, o composiciones farmacéuticas que contienen los derivados del análogo GLP-1 o sus sales farmacéuticas en el tratamiento de diabetes no dependiente de insulina, diabetes dependiente de insulina u obesidad.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La diabetes mellitus es una enfermedad epidémica global y es un síndrome de los desórdenes metabólicos de glucosa, proteínas y lípidos debido a la deficiencia absoluta o relativa de insulina (Chen Ruijie. Status of research on diabetes drugs, Academic journal of Guangdong College of Pharmacy, 2001, 7 ( 2 ) : 131-133 ) . La Diabetes mellitus puede ser dividida en diabetes mellitus tipo I y diabetes mellitus tipo II (diabetes mellitus Tipo 2, T2DM, el mismo a continuación) de acuerdo con su patogénesis. 90-95% de todos los pacientes con diagnóstico de diabetes mellitus sufren de T2DM, y los pacientes a menudo están acompañados de obesidad, deficiencia de la actividad física (inactividad física), edad mayor, historia familiar de diabetes mellitus, daño en el metabolismo de glucosa y que tienen una historia familiar de diabetes mellitus y semejantes. T2DM es también una enfermedad progresiva. De acuerdo con los datos estadísticos en 2000, la Organización Mundial de la Salud (World Health Organization) estimó que hay aproximadamente 171 millones de personas en todo el mundo quienes sufren de diabetes mellitus; en 2005, los Centros para Control y Prevención de Enfermedades (Centers for Disease Control and Prevention) de los E.U.A. estimaron que hay 20.8 millones de americanos quienes sufren de diabetes mellitus, que es. aproximadamente 7% de la población de los E.U.A. ; en 2006, de acuerdo con las estadísticas de la Federación de Diabetes Internacional (International Diabetes Federation) , el número global de pacientes que sufren de diabetes mellitus es de aproximadamente 246 millones (aproximadamente 5.9% de la población total global) y además 46% de los pacientes tienen 40-59 años de edad. Los estudios han mostrado que se presenta una diferencia muy importante en como responder a la glucosa entre las personas sanas y los pacientes con T2DM. La respuesta a la hiperglicemia post-prandial de las personas sanas pertenece a la respuesta temprana a insulina .

T2DM se caracteriza por la inhibición de la secreción de insulina y la disfunción de células ß pancreáticas, lo que resulta en una deficiencia de insulina y una hiperglicemia (Ferrannini E. Insulin resistance versus insulin deficiency in non-insulin-dependent diabetes mellitus: problems and prospects. Endocr Rev. 1998, 19 (4 ): 477-490) . Los pacientes con T2D típicamente tienen una hiperglicemia postprandial y en ayuno (glucosa en ayuno > 125 mg/dL) , y el alta azúcar en la sangre se debe primordialmente a que las células ß pancreáticas fallan en secretar suficiente insulina para compensar deficiencia de insulina provocada por la inhibición de insulina en el tejido circundante- (Weyer C, Bogardus C, Mott D . , et al. The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus. J. Clin. Invest. 1999, 104(6): 787-794).

El factor de riesgo principal de T2DM es la obesidad, que es muy nociva para la salud humana. El riesgo de sufrir una enfermedad cardiovascular y la muerte anormal de los pacientes se incrementa, mientras tanto T2DM a menudo co-existe con otras enfermedades de alto-riesgo tales como hipertensión, dislipidemia y obesidad; 60% de los pacientes con T2DM están acompañados por complicaciones microvasculares , incluyendo retinopatía y neuropatía, y también acompañados por morbilidades cardiovasculares asociados con T2D tales como enfermedad cardiaca coronaria, infarto al miocardio, choque y semejantes. En los E.U.A., las enfermedades cardiovasculares (CVD = cardiovascular diseases) son la causa principal que resulta en morbilidad y muerte y T2DM es el factor de riesgo principal que provoca complicaciones macrovasculares tales como aterosclerosis, infarto al miocardio, choque y enfermedades vasculares periféricas. El riesgo de muerte provocado por enfermedades cardiacas y choque de un adulto con diabetes es 2-4 veces superior que para una persona sin diabetes. Además, casi 65% de las personas con diabetes mueren de enfermedades cardiacas y choque.

Además de ,1a lesión- física y fisiológica a los pacientes, T2DM provoca una gran carga económica a la sociedad. De acuerdo con estadísticas, el costo de tratamiento de complicaciones asociadas con diabetes es de aproximadamente $22.9 miles de millones de dólares, el costo total del tratamiento de T2DM y complicaciones es casi de $57.1 miles de millones de dólares, y el costo total no incluido en el presupuesto es mayor a $8 miles de millones de dólares cada año en los E.U.A.

Los fármacos para el tratamiento de T2DM han sido el foco, tal como los fármacos hipoglicémicos orales tempranos de la clase sulfonilo y la clase biguanida y los recientes sensibilizadores de insulina e inhibidores de ot-glucosidasa, el desarrollo de insulinas de animales e insulinas de humanos y una variedad de nuevas técnicas de formulaciones, la investigación de nuevos mecanismos de tratamiento de fármacos al incrementar simplemente la insulina en nuevas formas que actúan en la producción de insulina. La ganancia en peso es la reacción secundaria común después de la administración de agentes hipoglicémicos orales o inyección, lo que puede reducir el cumplimiento del paciente, y puede incrementar el riesgo por desarrollar enfermedad cardiovascular. Por lo tanto, el desarrollo de nuevos tipos de fármacos para el tratamiento de T2DM que tienen alta seguridad, buen -cumplimiento por parte del paciente y bajas reacciones secundarias, se vuelve el tópico caliente de las instituciones de investigación y las compañías farmacéuticas contra la diabetes.

Tan reciente como hace 100 años, Moore propuso que el duodeno puede secretar un "estimulante químico" que puede estimular la secreción en el páncreas y ha intentado inyectar extracto de intestino para el tratamiento de diabetes. Subsecuentemente, se ha descubierto que factores humorales derivados de la secreción intestinal, pueden mejorar la función del páncreas endocrino, y aproximadamente 50% de secreción de insulina inducida por glucosa intravenosa u oral se deriva del estimulo de péptidos producidos por el intestino. Por lo tanto Zunz y Labarre crearon el concepto de "incretina". Dos tipos de incretinas se han aislado hasta el momento, es decir polipéptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP = Glucose-dependent Insulinotropic Polypeptide) y péptido tipo glucagon-1 (GLP-1 = Glucagon-Like Peptide-1) . Ambos GIP y GLP-1 son secretados por las células nerviosas intestinales especificas cuando se absorbe el nutriente, en donde GIP se secreta por el duodeno y la células K de yeyuno próximo, GLP-1 se sintetiza en las células L y existe primordialmente en intestino delgado distante y colon (Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003, 26(10) : 2929-2940) .

GLP-1 existe en dos formas bio-activas, es decir GLP-1 (7-37) y GLP-1 (7-36) amida en el plasma, entre las cuales solo un aminoácido es diferente y sus efectos biológicos y la vida media in vivo son las mismas (Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003, 26 ( 10 ) : 2929-2940 ) .

GLP-1 usualmente es referido como el nombre común de GLP-1 (7-37) y GLP-1 (7-36) amida. GIP y GLP-1 se degradarán a formas inactivas por dipeptidil peptidasa-IV(DPP-IV) rápidamente después de liberación en el tracto gastrointestinal, de manera tal que la vida media in vivo de GIP y GLP-1 es muy corta (vida media in vivo de GIP es aproximadamente 5-7 min, vida media in vivo de GLP-1 es aproximadamente 2 min) (Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003, 26 (10) :2929-2940) . Investigaciones muestran que la mayoría del proceso de degradación ocurre cuando GIP y GLP-1 entran a los bazos sanguíneos que contienen DPP-IV, y una pequeña cantidad de GLP-1 y GIP que no se han degradado entrarán en el páncreas y se ligarán con sus sitios de enlace para estimular células ß para liberar la insulina. Diferente del mecanismo de sulfonilurea para promover directamente células ß funcionales para liberar insulina,- la mayoría del efecto de incretina es dependiente de glucosa. Además, algunas pruebas in vitro en animales y humanos mostraron que GLP-1 también tiene funciones tales como la supresión de células y reducir la hipersecreción de glucagón y así en adelante.

Aunque los niveles de GIP en plasma en pacientes con T2DM son normales, cuando declina la función de incretina o se pierde significativamente, los niveles de GLP-1 en pacientes con T2DM declinan, de manera tal que los fármacos con base en GLP-1 contribuyen más al tratamiento de T2DM. Aunque los niveles tanto de GLP-1 (7-37) como GLP-1 (7-36) amida se incrementarán en varios minutos después de un alimento, el contenido de GLP-1 (7-36) amida es más, de manera tal que la secreción de GLP-1 puede haber sido incrementada enormemente por el doble efecto de endocrino y transmisión de señal neural antes que el alimento digerido entre al intestino delgado y colon desde el fondo del tracto digestivo. El nivel en plasma de GLP-1 bajo un estado de ayuno es muy bajo (aproximadamente 5-10 pmoles/L) , y se incrementa rápidamente después de comer (hasta 15-50 pmoles/L). Bajo la doble función de DPP-IV y eliminación renal, el nivel in vivo de GLP-1 en circulación disminuye rápidamente, mientras que el trabajo para investigar si otras enzimas tales como endopeptidasa neutral humana 24 · 11 y semejantes también juegan un papel vital- en la inactivación de la actividad de GLP-1 está en progreso, debido a que el segundo residuo aminoácido de GLP-1 es una alanina que es un buen substrato de DPP-IV de manera tal que GLP-1 es fácil de degradar en fragmentos péptido inactivos. De hecho, DPP-IV in vivo es la razón clave para la pérdida de actividad de incretina. Experimentos muestran que el nivel de GLP-1 en ratones, en donde el gen DPP-IV se ha silenciado, es superior que en ratones normales en forma significativa y la secreción de insulina se incrementa también. Solo debido a la presencia de DPP-IV, el contenido in vivo de GLP-1 completo y biológicamente activo solo es 10-20% del contenido total de GLP-1 en plasma (Deacon CF, Nauck MA, Toft-Nielsen M, et al. Both subcutaneously and intravenously administered glucagon-like peptide 1 are rapidly degraded from the NH2-terminus in type 2-diabetic patients and in healthy subjects. Diabetes. 1995, 44(9): 1126-1131).

GLP-1 y GIP juegan sus papeles respectivos a través del enlace a los receptores acoplados a proteina G (GPCRs = G-Protein-Coupled Receptors) que son estructuras completamente diferentes. La mayoría de los receptores GIP se expresan por las células ß pancreáticas, y una parte menor de los receptores GIP se expresa por el tejido adiposo y el sistema nervioso central. En contraste, los receptores GLP-1 primordialmente se expresan en las células OÍ" Y ß~ pancreáticas, y tejidos periféricos que incluyen los sistemas nerviosos centrales y periféricos, cerebro, riñon, pulmón y tracto gastrointestinal y semejantes. La activación de dos incretinas en células ß resultará en el aumento rápido del nivel de cAMP y calcio intracelular en las células, llevando de esta manera a su secreción a la región extracelular en una forma dependiente de glucosa. La transmisión de señal sostenida de receptores de incretina se asocia con proteína cinasa A, lo que resulta en la transcripción del gen, incrementando la biosíntesis de insulina y estimulando la proliferación de células ß (Gallwitz B. Glucagon-like peptide-l-based therapies for the treatment of type 2 diabetes mellitus. Treat Endocrinol. 2005, 4 (6) : 361-370) . La activación del receptor GLP-1 y receptor GIP también pueden inhibir la apoptosis de células ß-pancreáticas de roedores y humanos, mientras tanto incrementando su supervivencia (Li Y, Hansotia T, Yusta B, et al. Glucagon-like peptide-1 receptor signaling modulates beta cell apoptosis. J Biol Chem. 2003, 278(1): 471-478). En consistencia con la expresión del receptor GLP-1, GLP-1 también puede inhibir la secreción de glucagón, vaciado gástrico e ingesta de alimentos, y mejorar la degradación de glucosa a través del mecanismo neural . Habrá de notarse que, al igual que otra reacción de secreción de insulina, el papel de GLP-1 para controlar el nivel de glucosa es dependiente de glucagón, mientras que el papel de glucagón de liberación contra-regulatoria de glucagón provocada por bajo nivel de azúcar en la sangre se ha retenido completamente incluso a nivel farmacológico de GLP-1.

El papel fisiológico importante de GLP-1 y GIP endógenos en la homeostasis de glucosa se ha estudiado a profundidad a través del uso de antagonistas receptores de ratones de gen inoperativo. El antagonismo agudo de GLP-1 o GIP reduce la secreción de insulina in vivo de roedores y aumenta el contenido de glucosa en plasma. De manera similar, el ratón mutante en el que el receptor GIP o GLP-1 se inactiva, también experimenta secreción de insulina estimulada por glucosa defectuosa y tolerancia de glucosa dañada. GLP-1 también tiene una función de regular la glucosa en sangre en ayunas, debido a que los antagonistas agudos o el daño en el gen GLP-1 provocará el aumento del nivel de glucosa en ayunas de los roedores; al mismo tiempo, GLP-1 es la base de control de glucosa en cuerpos humanos y estudios en el antagonismo de Exendina (9-39) han mostrado que la destrucción de la función GLP-1 resultará en secreción de insulina estimulada por glucosa-defectuosa, disminuida velocidad de eliminación de glucosa, incrementados niveles de glucagón y vaciado gástrico acelerado. Los papeles fisiológicos de GLP-1 (Deacon CF. Therapeutic strategies based on glucagon-like peptide 1. Diabetes. 2004, 53 ( 9 ): 2181-2189 ) comprenden: (1) ayudar en organizar la absorción de glucosa, mediar la secreción de insulina dependiente de glucosa; (2) inhibir la secreción de glucagón posprandial, reducir la liberación de glucosa hepática; (3) regular el vaciado gástrico, evitar circulación excesiva de glucosa cuando el alimento se absorbe en el intestino; (4) inhibir la ingesta de alimentos (tal como apetito) . Estudios en animales también han mostrado un papel fisiológico de GLP-1 que estabiliza el número de células ß-pancreáticas in vivo.

Debido a los buenos efectos de GLP-1 y GIP para controlar el azúcar en la sangre y muchos otros aspectos, especialmente sus características que no producen hipoglicemia y retraso del vaciado gástrico para controlar el peso, atraen el interés de muchos científicos. La gente trata de investigar fármacos basados en GLP-1 y GIP para el tratamiento de T2DM. Es bien conocido que los pacientes de T2DM carecen o pierden su efecto de incretina, en donde una razón es que el efecto de incretina de GIP in vivo en el paciente T2DM se reduce significativamente; mientras tanto, el nivel de GLP-1 in vivo en el paciente T2DM es muy bajo, y el nivel de GLP-1 provocado por estímulos de dieta se reduce significativamente (Toft-Nielsen MB, Damholt MB, Madsbad S, et al. Determinants of the impaired secretion of glucagort-like peptide-1 in type 2 diabetic patients. J Clin Endocrinol Metab. 2001, 86 ( 8 ) : 3717-3723 ) . Debido a que el papel de GLP-1 in vivo en pacientes con T2DM se ha reservado parcialmente, el sinergista GLP-1 es una de las direcciones de investigación de los fármacos diseñados para mejorar el efecto de incretina en paciente con T2DM.

El análogo GLP-1, al igual que GLP o GIP endógenos, puede inhibir la liberación de glucagón in vivo y estimular la secreción de insulina ín vivo en la forma dependiente de glucosa. Además, los análogos GLP-1 tienen un papel en los siguientes síntomas: (1) bajo contenido de azúcar en la sangre. Diferentes de otros fármacos secretagogos, los análogos GLP-1 promueven la secreción de insulina in vivo en una forma dependiente de glucosa y de esta manera su papel para reducir la glucosa en la sangre exhibe una auto-limitación, que generalmente no provoca hipoglicemia en grandes dosis. A pesar de que se ha reportado en la literatura que GLP-1 puede reducir el azúcar en la sangre a un nivel por debajo del nivel normal, este efecto es transitorio y se considera como resultado natural de GLP-1 que promueve secreción de insulina. Debido a que la inactivación de insulina tardará cierto tiempo, cuando el efecto de estimulo de GLP-1 se reduce debido a la disminución de los niveles de azúcar en la sangre mientras que no hay nueva secreción de insulina, la insulina original todavía funciona.". En una palabra, GLP-1 puede reducir temporalmente el azúcar en la sangre a un nivel por debajo del nivel normal pero no provoca hipoglicemia seria y persistente; el papel en la saciedad y peso corporal. Además, la reducción directa de glucosa en la sangre, GLP-1 también puede reducir la cantidad de ingesta de alimentos, que se ha verificado en roedores y humanos. Por lo tanto, el nivel de glucosa en la sangre puede ser controlado al reducir indirectamente el peso corporal. GLP-1 también tiene el papel potencial de inhibir la secreción de gastrina y ácido gástrico estimulado por la alimentación, y estas funciones muestran que GLP-1 también puede tener un papel en la prevención de úlcera péptica. Mecanismos de acción de GLP-1 hacen que se convierta no solo en un fármaco ideal para el tratamiento de pacientes con diabetes tipo 2, sino también el fármaco para el tratamiento de pacientes con diabetes por obesidad. GLP-1 puede mejorar la saciedad de los pacientes, reducir la ingesta de alimentos y mantener el peso corporal o perder peso; (3) manteniendo la salud de la células ß. Varios estudios sugieren que GLP-1 puede evitar la conversión de tolerancia de glucosa deteriorada en diabetes y algunas literaturas reportan que la clase GLP-1 de compuestos tienen efecto directo en el crecimiento y proliferación de células ß-pancreáticas de animales experimentales, y se encontró por algunos experimentos que GLP-1 puede promover la diferenciación de células madre pancreáticas a células ß-funcionales . Estos resultados sugieren que GLP-1 tiene la función de proteger las isletas pancreáticas y retrasar el avance de diabetes, y pueden mantener las morfologías y funciones de células ß, mientras que reducen la apoptosis de células ß; (4) el efecto en hiperglicemia posprandial. Este fenómeno representa una nueva dirección para el tratamiento de T2DM. Debido a que algunos fármacos orales e insulinas exógenas pueden no inhibir o reducir la secreción de glucagón exorbitante en pacientes con T2DM, análogos de GLP-1 pueden afectar la hipersecreción de glucagón a través de inhibición directa de liberación de glucagón o inhibición parácrina de glucagón resultante de promoción de secreción de insulina. La hiperglicemia posprandial puede ser reducida efectivamente a través de estos dos mecanismos; mientras tanto, el mantener la función de células ß también puede jugar un papel para controlar la hiperglicemia posprandial a largo plazo.

Mientras tanto, los análogos de GLP-1 se administran a través de inyección subcutánea, lo que no requiere cálculo de la cantidad de carbohidratos para estimar la dosis óptima del fármaco, y no requiere la propia supervisión de glucosa en la sangre, resultando en que estos tipos de fármacos son más fáciles de utilizar que la insulina.

Una variedad de efectos de GLP-1 natural se ha confirmado, lo que trae nueva esperanza para el tratamiento de T2DM, sin embargo, GLP-1 humano natural es muy inestable y puede degradarse por dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) y su vida media es solo de 1 ~ 2 minutos. Cuando se utiliza GLP-1 natural para reducir el azúcar en la sangre, se requiere continua infusión intravenosa o inyección subcutánea continua, resultando en la deficiente factibilidad clínica. Enfrentados con esta situación, los investigadores continúan explorando el método para extender el tiempo de acción de GLP-1. Por lo tanto, el desarrollo de análogos de GLP-1 de prolongada acción o sus derivados, se vuelve un área importante de interés en el campo farmacéutico .

Exenatida es una Exendina-4 sintética, que se desarrolló por Eli Lilly Company y Amylin Company con la marca Byetta®. Exenatida se ha aprobado para el tratamiento de T2DM por la FDA y EMEA. Tiene 50% de homología con GLP-1 de mamífero en secuencia y tiene sitio de afinidad similar del receptor con GLP-1 ( Drucker DJ, Nauck MA. The incretin system: glucagon-like peptide-1 receptor agonists and dipeptidyl peptidase-4 inhibitors in type 2 diabetes. Lancet . 2006, 368 ( 9548 ): 1696-1705) , y se codifica por el gen. específico de lagartija; comparado con GLP-1, la posición 2 Alanina en GLP-1 se reemplaza con una glicina en Exenatida, que inhibe efectivamente la enzimólisis de la enzima DPP-IV, y su vida media in vivo es aproximadamente 60-90 min ( olterman OG, Kim DD, Shen L, et al. Pharmacokinetics , pharmacodynamics, and safety of exenatide in patients with type 2 diabetes mellitus. Am Health Syst Pharm. 2005, 62(2): 173-181), la concentración in vivo de Exenatida después de una inyección subcutánea sencilla, se aumenta en forma persistente y puede llegar a la concentración máxima en plasma después de 2 horas aproximadamente, lo que puede mantenerse por 4-6 h (Nielsen LL, Barón AD. Pharmacology of exenatide in vivo (synthetic exendin-4) for the treatment of type 2 diabetes. Curr Opin Investig Drugs. 2003, 4 ( ) : 401-05 ) . Habrá de notarse que el metabolismo de Exenatida no ocurre en el hígado, pero se degrada primordialmente por la proteína proteasa después de filtrarse por los glomérulos renales.

La Exenatida tiene especiales actividades reguladoras de glucosa, incluyendo mejora dependiente de glucosa de secreción de insulina, inhibición dependiente de glucosa de una secreción de glucagón excesiva errónea, frenado de vaciado gástrico y disminución de ingesta de alimentos y semejantes. Estudios in vitro e in vivo en los modelos de diabetes encontraron que Exenatida también tiene os. efectos de almacenar la secreción de insulina de primera etapa (primera fase) , promover la proliferación de células ß y promover la regeneración de insulina de sus células precursoras.

A fin de lograr mejor control de glucosa en la sangre, una inyección dos veces al día de Exenatida se requiere, lo que da los pacientes una gran inconveniencia. Además, Exenatida también tiene un efecto ligero a moderado de náusea (aproximadamente 40% de los pacientes tendrán esta reacción) , diarrea y vómito (menos de 15% de los pacientes tendrán ambas reacciones); aproximadamente 50% de pacientes tratados con Exenatida pueden generar anticuerpos, aunque estos anticuerpos no afectan la eficacia o llevan a otros efectos clínicos. Recientemente se encontró que seis pacientes tuvieron hemorragia o síntomas de pancreatitis necrotizante después de tomar Byetta.

CJC-1131 es un análogo de GLP-1 con resistencia a peptidasa desarrollada por ConjuChem Biotechnologies Inc., en donde Ala en la posición 2 de GLP-1 se reemplaza con D-Ala a fin de mejorar la capacidad de resistir la enzimólisis de DPP-IV, y de la cual la estructura contiene un enlazador reactivo activo que puede ligar albúmina de suero a través de una forma covalente (no-reversible) (Kim JG, Baggio LL, Bridón DP, et al. Development and characterization of a glucagon-like peptide-1 albumin conjúgate: the ability to actívate the glucagon-like peptide 1 receptor in vivo. Diabetes 2003, 52 (3) : 751-759) , y el complejo de albúmina de suero-GLP-1 retiene la actividad de GLP-1, mientras que aumenta la estabilidad a enzimólisis de DPP-IV, extiende la duración de acción in vivo, y la vida media en plasma es de aproximadamente 20 días .

Un estudio ha encontrado que Ki fue aproximadamente 12 n (el Ki de GLP-1 es 5.2 nM) cuando el complejo de albúmina de suero-CJC-1131 se liga a células de ovario de hámster chino transfectadas con receptor GLP-1 pancreático humano recombinante; mientras tanto, EC50 del cAMP activador de complejo es 11-13 nMr en donde EC50 es similar a GLP-1. Las literaturas existentes muestran que esta molécula de enlace puede reducir el nivel posprandial de glucosa en la sangre de ratones cuya azúcar en la sangre es normal o elevada, y las pruebas muestran que esta actividad de CJC-1131 actúa en un cierto receptor funcional de GLP-1, mientras tanto en ratones CJC-1131 también tiene un efecto para frenar el vaciado gástrico e inhibir la ingesta de alimentos y semejantes.

Parte de la prueba clínica Fase II de CJC-1131 se ha completado. En septiembre 2005, ConjuChem concluyó que CJC-1131 puede no ser adecuado para los regímenes de dosis crónica después de análisis de los resultados de prueba existentes y suspendió el estudio clínico de CJC-1131. La prueba clínica de CJC-1131 no ha vuelto a iniciarse todavía .

Albugón (albúmina-GLP-1 ) es un fármaco de prolongada acción para el tratamiento de T2DM desarrollado por GlaxoSmithKline autorizado por Human Genome Sciences Inc., que es una proteína de fusión de GLP-1 (con mutaciones que aumentan la resistencia a DDP-IV) y albúmina. Su vida media en monos es de 3 días. La idea básica de su desarrollo es acoplar el GLP-1 recombinante y albúmina de suero para formar un complejo; de esta manera su vida media in vivo se incrementa significativamente. La administración de Albugón reduce efectivamente el nivel de glucosa en la sangre en ratones, aumenta la secreción de insulina, frena el vaciado gástrico y reduce la ingesta de alimentos, etc. (Baggio LL, Huang Q, Bro n TJ, et al. A Recombinant Human Glucagon-Like Peptide (GLP) -1-Albumin Protein (Albugon) Mimics Peptidergic Activation of GLP-lReceptor-Dependent Pathways Coupled With Satiety, Gastrointestinal Motility, and Glucose Homeostasis. Diabetes 2004, 53 ( 9 ) : 2492-2500 ) . Actualmente Albugón está en prueba clínica fase III.

WO9808871 describe un derivado GLP-1 que se obtiene a través de la modificación en GLP-1 (7-37) con ácido graso, y la vida media in¦ vivo de GLP-1 se mejora significativamente. WO9943705 describe un derivado de GLP-1, que se modifica químicamente en el N terminal, pero algunas literaturas reportan que la modificación de los aminoácidos en N-terminal disminuirá significativamente la actividad de todo el derivado GLP-1 (J. Med. Chem. 2000, 43, 1664 1669). Además, CN200680006362 , CN200680006474 , WO2007113205, CN200480004658, CN200810152147 y WO2006097538 etc., también describen una serie de análogos de GLP-1 o sus derivados producidos por la modificación química o substitución de aminoácidos, en donde el más representativo es Liraglutida desarrollado por Novo Nordisk, la prueba clínica fase III del cual se ha terminado. Liraglutida es un derivado de GLP-1, del cual la estructura contiene un análogo GLP-1 del cual la secuencia es 97% homologa con GLP-1 humano, y ese análogo GLP-1 se enlaza con ácido palmítico de manera covalente para formar Liraglutida, en donde el ácido palmítico de la estructura de Liraglutida se liga en forma no covalente con albúmina en suero, y estas características estructurales determinan que puede liberarse lentamente del sitio de inyección sin cambiar la actividad de GLP-1 y la vida media in vivo se prolonga; mientras tanto, el ácido palmítico en la estructura formará un cierto impedimento estérico para evitar la degradación de DPP-IV y reducir la eliminación renal. Debido a las características- anteriormente descritas, la vida media de Liraglutida en el cuerpo humano administrada por inyección subcutánea es de aproximadamente 10-14 h, en teoría, puede administrarse una vez al día y la dosis diaria es 0.6-1.8 mg. En abril 23 2009, Novo Nordisk anunció que el Comité de Productos Médicos para Uso en Humanos (CHMP = Committee for Medicinal products for Human Use) bajo EMEA dio una evaluación positiva en Liraglutida y recomendó la aprobación de su lista. Novo Nordisk espera que la Comisión Europea apruebe su aplicación de la lista dentro de dos meses.

BREVE COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La presente invención pretende proporcionar una serie de derivados de análogo GLP-1 que son mucho más activos y tienen una más prolongada vida media in vivo. El derivado del análogo GLP-1 que se proporciona en esta invención tiene la misma función que GLP-1 humano y tiene una más prolongada vida media in vivo en comparación con GLP-1 humano.

La presente invención también pretende proporcionar una composición farmacéutica que comprende el derivado del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable, para utilizar en el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina, diabetes dependiente de insulina y obesidad.

. Los objetivbs de la pre.sente invención se logran por las siguientes soluciones técnicas. La presente invención proporciona una serie de derivados de análogo GLP-1 que tienen secuencia de aminoácidos de la fórmula (I) o su sal farmacéutica aceptable: Xl-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-Xl2-X13-X14-Glu-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-Lys (I) en donde los derivados del análogo GLP-1 contienen un substituyente lipofilico de la fórmula Rl (CH2) n-CO-, en donde Rl se elige de CH3- y HOOC-, n de 8-25, XI, X2, X10, X12, X13, X14, X16, X17, X19, X20, X21, X24, X27, X28, X29, X30, X31, X32, X33, X34, X35, X36, X37, X38 y X39 se elige independientemente de cualquier aminoácido natural o natural o los segmentos péptido que consisten de cualquier aminoácido natural o no-natural.

Los derivados del análogo GLP-1 se refieren a un nuevo péptido GLP-1 que se obtiene por la substitución de aminoácidos parcial o la extensión en el C terminal del péptido GLP-1 humano (7-37) que sirve como un precursor, que comprende GLP-1 (7-36) amida y GLP-1 (7-37), que tiene la misma función que la de GLP-1 humano.

Los derivados se refieren a realizar modificación química a residuos aminoácidos de análogo de GLP-1 al utilizar substituyen-tes lipofílicos, en donde una modificación típica es formar una amida o éster, de preferencia formar una amida.

En una modalidad preferida de la invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl(CH2)n-CO- y el grupo amino de los residuos aminoácidos del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Rl se elige de CH3-y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

En otra modalidad preferida de la invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl(CH2)n-CO- y el grupo e amino de Lys en C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Rl se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

Todavía en otra modalidad preferida de la invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl(CH2)n-C0- y el grupo amino de Lys en el C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Rl se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25, y 14 es el más preferido.

En otra modalidad preferida de la invención, XI en la secuencia de aminoácidos del análogo GLP-1 se elige de L-His y D-His; X2 se elige de Ala, D-Ala, Gly, Val, Leu, lie, Lys y Aib; X10 se elige de Val y Leu; X12 se elige de Ser, Lys y Arg; X13 se elige de Tyr y Gln; X14 se elige de Leu y et; X16 se elige de Gly, Glu y Aib; X17 se elige de Gln,- Glu, Lys y Arg;- X19 se elige . de . Ala y Val; ?20· se elige de Lys, Glu y Arg; X21 se elige de Glu y Leu; X24 se elige de Val y Lys; X27 se elige de Val y Lys; X28 se elige de Lys, Glu, Asn y Arg; X29 se elige de Gly y Aib; X30 se elige de Arg, Gly y Lys; X31 se elige de Gly, Ala, Glu, Pro y Lys; X32 se elige de Lys y Ser; X33 se elige de Lys y Ser; X34 se elige de Gly, Ala y Sar; X35 se elige de Gly, Ala y Sar; X36 se elige de Pro y Gly; X37 se elige de Pro y Gly; X38 se elige de Pro y Gly; X39 se elige de Ser y Tyr.

En una modalidad más preferida de la presente invención, la secuencia de aminoácidos del análogo GLP-1 se elige del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120.

En otra modalidad preferida de la presente invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl (CH2)n-CO- y el grupo amino del residuo aminoácido del análogo GLP-1, del cual la secuencia se elige del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120, se ligan por un enlace amida en donde Rl se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

En una modalidad más preferida de la presente invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl (CH2)n-CO- y el grupo e amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1, seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120, se ligan por un enlace amida, en donde' Rl se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

En una modalidad más preferida de la presente invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl (CH2)n-CO- y el grupo a amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1, seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120, se ligan por un enlace amida, en donde Rl se elige de CH3 y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25, de preferencia n se elige de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22, más preferiblemente n es 14.

En una modalidad más preferida de esta invención, el substituyente lipofílico de la fórmula Rl(CH2)n-C0- y el grupo amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1, seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 20, se ligan por un enlace amida, en donde Rl se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25, de preferencia n se selecciona de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22, más preferiblemente n es 14.

En otra modalidad más preferida de esta invención, el substituyente lipofilico de la fórmula Rl (CH2)n-CO- y el amido del Lys C-terminal del análogo GLP-1, seleccionado del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 8, se ligan por un enlace amida, en donde Rl es CH3, y n es 14.

Los derivados de los análogos GLP-1 que se proporcionan en esta invención pertenecen a compuestos anfotéricos y la persona con destreza en la técnica puede convertirlos en sales al utilizar compuestos ácidos o alcalinos con tecnologías conocidas, en donde los ácidos usualmente empleados para la formación de sales de adición de ácido son: ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido yodhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido p-toluensulfónico, ácido metansulfónico, ácido oxálico, ácido p-bromofenil sulfónico, ácido carbónico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido acético; las sales comprenden sulfato, pirosulfato, trifluoroacetato, sulfito, bisulfito, fosfato, bifosfato, fosfato dihídrico, metafosfato, pirofosfato, hidrocloruro, bromuro, yoduro, acetato, propionato, octanoatos, acrilato, formiato, ácido isobutirico, hexanoato, enantatos, propiolato, oxalato, malonato, succinato, suberato, fumarato, maleato, 1,4-butindioato, 1 , ß-hexindioato, benzoato, cloro-benzoato, metil-benzoato, dinitro-benzoato, hidroxil-benzoato, metoxi-benzoato, fenilacetato, fenpropionato, fenilbutirato, citrato, lactato, ?-hidroxibutirato, glicolato, tartrato, metansulfonato, propansulfonato, 1-naftol-sulfonato, 2-naftol-sulfonato, mandelato y semejantes, de preferencia trifluoro-acetato . Sustancias alcalinas también pueden convertirse en sales con derivados de análogos GLP-1, en donde las sustancias alcalinas comprenden amonio, hidróxidos de metales alcalinos o metales alcalino férreos y carbonato, bicarbonato, típicamente hidróxido de sodio, hidróxido de potasio, hidróxido de amonio, carbonato de sodio, carbonato de potasio y semejantes.

Las composiciones farmacéuticas que contienen derivados GLP-1 de acuerdo con la invención, pueden emplearse para tratar pacientes quienes requieren este tratamiento mediante administración parenteral. La administración parenteral puede seleccionarse de inyecciones subcutánea, intramuscular o intravenosa. Los derivados GLP-1 de la invención también pueden administrarse por rutas transdérmicas, tales como administración por parche (de preferencia parche de iontoforésis ) y administración a través de la mucosa.

Las composiciones farmacéuticas que contienen los derivados GLP-1 de la invención pueden prepararse a través de técnicas comunes en la especialidad de la industria farmacéutica. Estas técnicas comprenden adecuada disolución y mezclado de los componentes para obtener las composiciones finales deseadas. Por ejemplo, los derivados GLP-1 se disuelven en una cierta cantidad de agua, en donde el volumen de agua es ligeramente menor que el volumen final de la composición obtenida. Agentes isotónicos, conservadores, surfactantes y amortiguadores se agregan de acuerdo con la necesidad, en donde los agentes isotónicos son cloruro de sodio, manitol, glicerol, propileno glicol, azúcar o alditol. Estos conservadores son fenol, ortocresol, para-cresol, meta-cresol, metilparahidroxibenzoato éster, bencil alcohol. Los agentes amortiguadores apropiados son acetato de sodio, carbonato de sodio, glicina, histidina, lisina, hidrógeno fosfato de sodio, hidrógeno fosfato disodio, fosfato de sodio. Los surfactantes son Poloxámero, Poloxámero-188 , Poloxámero-407 , Tween 80 y Tween-20. De ser necesario, las soluciones acuosas de ácidos tales como ácido clorhídrico o álcali tales como solución de hidróxido de sodio, se agregan para ajustar valores de pH a las soluciones y finalmente el volumen de solución se ajusta al agregar agua para obtener la concentración requerida. Además de los componentes, las composiciones farmacéuticas de la invención también comprenden suficientes aminoácidos u otros reactivos alcalinos que tienen la misma función para disminuir los agregados formados por la composición durante almacenamiento, tales como lisina, histidina, arginina, imidazol durante almacenamiento.

Los derivados de los análogos GLP-1 de la invención se sintetizan manualmente, en donde la resina es resina HMPA-AM, el grupo a-amino de los derivados aminoácidos se protege por el Fmoc (fluoreno formil carbonilo) , el tiol de cadena lateral de cisteina, el amido de cadena lateral de glutamina, el imidazol de cadena lateral de histidina se protegen por Trt ( trifenilmetilo) , el guanidilo de cadena lateral de arginina se protege por Pbf (2,2,4,6, 7-pentametil-dihidrobenzofuran-5-sulfonilo) , el indolilo de cadena lateral de triptofano y el grupo amino de cadena lateral de lisina se protegen por Boc (ter-Butoxicarbonilo) , el hidroxilo de cadena lateral de treonina, el fenilol de cadena lateral de tirosina, el hidroxilo de cadena lateral de serina se protegen por tBu (ter-butilo) . El carboxilo de los aminoácidos C-terminales de la cadena péptido sencilla de los derivados péptido raiméticos eritropoyetina que se sintetizarán, se conecta con una resina de alto peso molecular insoluble (resina rink amind) a través de enlaces covalentes y después, los aminoácidos ligados a un portador de fase sólida actúan como componentes amino, el grupo de protección amino se retira por solución al 20% de Hexahidropiridina / DMF, y después reacciona con derivados de aminoácido en exceso para ligar a una larga cadena péptido. La operación (Condensación ? lavado ? desprotección ? lavado ? siguiente ronda de condensación) se repite para lograr la longitud de cadena péptido deseada. Finalmente, la cadena péptido se rompe de las resinas al utilizar mezcla de TFA: agua: 1,2-ditioglicol: triisopropilsilano (92.5:2.5:2.5:2.5), para obtener los derivados crudos de análogos GLP-1 a través- de precipitación en un éter. Los monómeros de péptido crudo se purifican utilizando columna de fase inversa C18 y de esta manera obtener los derivados deseados de análogos GLP-1. El método de prueba de ninhidrina se emplea para supervisar las etapas de condensación y desprotección. Esto es, cuando hay aminos libres en la cadena resina-péptido, el reactivo ninhidrina mostrará azul y no se mostrará color cuando no hay aminos libres (el propio reactivo Ninhidrina es amarillo) . Por lo tanto, después de que se completa la reacción de condensación, se muestra amarillo a través de la prueba ninhidrina (color de reactivo de Ninhidrina per se) , entonces sugiere que la etapa de acoplamiento está completa y la operación de desprotección antes del siguiente acoplamiento aminoácido puede llevarse a cabo; si la prueba muestra azul, sugiere que todavía hay algunos aminos libres en las cadenas péptido y se requiere además repetir la etapa de acoplamiento o cambiar el agente de condensación existente hasta que las resinas péptido muestran amarillo a través de la prueba con ninhidrina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Para describir con más detalle la presente invención, se proporcionan los siguientes ejemplos. Sin embargo, la presente invención no habrá de considerarse como limitada a las modalidades aquí establecidas.

Ejemplo 1 El método para síntesis en fase sólida de HS-20001 1. Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt)-HMP-AM (1) secado e hinchado de resina HMP-AM 50 g (30 mmoles) de resina HMP-AM (0.6 mmol/g) seca por 24 h vacío se colocan en una botella de burbujeo de 2 L, las resinas se hinchan con 500 mL de N,N-dimetilformamida (DMF) por 30 minutos, DMF se retira, las resinas se lavan con DMF por 1 minuto, la etapa de lavado se repite dos veces. (2) Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt) -HMP-AM ( ) Acoplamiento de Fmoc-Lys (Mtt) -OH con resina HMP-AM Las resinas se lavan con 500 mL de DCM, y después la etapa de lavado se repite dos veces. 56.2 g (90 mmoles) de Fmoc-Lys (Mtt ) -OH y 11.4 g (90 mmoles) de DIC se disuelven en 1L de DCM, después se agregan a la resina HMP-AM hinchada, después 366 mg (3 mmoles) de DMAP se agregan para reaccionar por 24 h; @ Lavado de la resina Después de la reacción, la resina se lava en forma alterna con DMF e IPA dos veces, lava con DMF por 3 veces; (D Tapado de extremo de hidroxilo 15.3 g (150 mmoles) .de anhídrido acético y 19.4 g (150 mmoles) DIEA se disuelven en 1L de DMF y se agregan a la resina para reaccionar por 10 minutos. (4) Lavado de la resina La resina se lava dos veces con 1 L de MeOH/DMF al 50%, DCM/DMF al 50%, y después lavan con DCM por tres veces con etanol deshidratado por tres veces a la vez. Después de secar al vacio, la resina Fmoc-Lys (Mtt) -HMP-AM se obtiene. (3) Ensayos de carga de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMP-AM 5 - 10 mg precisos de resina se ponen en 1 mL de solución de Hexahidropiridina al 20%/DMF, se agita por 20 minutos, después 50 uL del sobrenadante se toman con una pipeta y se diluye en 2.5 mi de DMF; Muestras de blanco: 50 uL de Hexahidropiridina al 20%/DMF se toman con una pipeta y diluyen en 2.5 mi de DMF; Grado de substitución se calcula como sigue: Sub=(A*51) / (7.8xm) en donde A es el valor de absorción de UV a 301 nm; m es el peso de la resina, la unidad es mg. 2. Secado e hinchado de la resina sintetizada en fase sólida 50 g (20 mmoles) de resina Fmoc-Lys (Mtt)-HMPA-AM (0.4 mmol/g) secos en vacio por 24 h se colocan en una botella de burbujeo de 2L, después 500 mi de N,N-dimetilformamida (DMF) se agregan para hinchar la resina por 30 min, después se retira la solución de DMF. 3. Eliminación de grupo protector 4 - metil trifenilmetilo (Mtt) de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM La resina se lava dos veces con 200 mi de DCM, después 1200 mL de TFA al 1%/DCM (TFA está en aproximadamente un exceso de 8-veces) se agregan para retirar el grupo protector Mtt por 1 hora, la resina en forma alterna se lava tres veces con 200 mL de N,N-diisopropil etilamina (DIEA) al 5%/DMF y DMF, después es lavada con DMF 3 veces; 4. Condensación de ácido palmitico 50 mmoles de ácido palmítico y 50 mmoles de 3-(dietoxifosforiloxi) -1, 2, 3-fentriazin-4-cetona (DEPBT) se disuelven en 400 mi de DMF, después 100 mmoles de DIEA se agregan y se agitan por 3 minutos a temperatura ambiente, la solución se agrega a la resina, reacciona en baños de agua a 37°C por 2 horas bajo N2. Después de la reacción, la solución de reacción se retira, la resina se lava con DMF, isopropil alcohol (IPA) y DMF a su vez. 5. Eliminación del grupo protector Fmoc de la resina Fmoc-Lys (N-ácido e-palmitico) -HMPA-AM 200 mi de solución al 20% de Piperidina/DMF se colocan en una botella de burbujeo llena con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM, se retira después de reaccionar por 5 min, después 200·.mi de. solución al 20% de Piperidina/DMF se agregan para reaccionar por 20 min a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, la resina se lava cuatro veces con 200 mi de DMF. 6. Método de síntesis en fase sólida para la parte de cadena péptido de HS-20001 () Condensación de Fmoc-Ser (tBu)-OH 50 mmoles de Fmoc-Ser (tBu) -OH se disuelven en 125 mL de 1-hidroxibenzo triazol (HOBt) 0.4 M/DMF, después 125 mL de N, N' -diisopropil carbodiimida (DIC) 0.4M/DCM se agregan para activar y reaccionar por 10 min a temperatura ambiente; dicha solución se agrega a la resina, reacciona bajo protección de nitrógeno a temperatura ambiente, y se emplea ninhidrina para detectar y controlar el grado de reacción. Después de reacción, se retira la solución de reacción, y la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez.

©Extensión de la cadena péptido Péptido de resina HS-20001 se sintetiza de acuerdo con la secuencia de la cadena péptido de HS-20001 del amino (N-terminal) al carboxi-terminal (C-terminal) (His- (D) -Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Nle-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys- Gln-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser) , en donde las cantidades de aminoácidos y reactivos de condensación son las mismas que las de Fmoc-Ser (tBu)-OH, los aminoácidos protegidos son Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln (Trt) -OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Arg ( Pbf) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Nle-OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Thr ( tBu) -OH, Fmoc-D-Ala-OH y Fmoc-His (Trt ) -OH respectivamente, y se repiten las reacciones de condensación y desprotección. (3) Post-procesamiento de péptido de resina HS-20001 El péptido de resina HS-20001 obtenido en la etapa ® se lava con DMF, IPA y DMF a su vez, se lava dos veces con éter absoluto, después seca al vacio, péptido de resina pHS-20001 se obtiene finalmente. (5) Preparación de péptido crudo HS-20001 La resina de péptido HS-20001 seca se reacciona con lisado fresco de ácido trifluoroacético (TFA) : triisopropilsilano (TIS) : agua: 1 , 2-etanditiol (EDT)= 94:1:2.5:2.5 (en volumen y total de 10 mL de lisado por grado de la resina seca) por 4h a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtra después de la reacción, la resina se lava con TFA dos veces, el filtrado se recolecta y combina, y se concentra a 1/3 del volumen original a través de evaporación rotatoria, HS-20001 se precipita y lava con éter absoluto frió, después de centrifugación y secado al vacio, se obtiene HS-20001 crudo blanco. (5) Preparación de HS-20001 con cromatografía de líquido de fase inversa 10 g de HS-20001 crudo se disuelven en una cierta cantidad de agua, filtran con filtro de membrana de 0.45 µ??, después se purifican con cromatografía de líquido de alto desempeño en fase inversa (RP-HPLC = Reversed-Phase High Performance Liquid Chromatography) , en donde la fase móvil es A TFA al 0.1%/H2O, B TFA al 0.1%/acetonitrilo, en donde la columna es la columna Denali C-18 (diámetro de partículas 8.3 µ??, 5?30 cm) , la temperatura de columna es 45 grados C, longitud de onda de detección es 220 nm, gasto de flujo es 120 mL/min. Se recolectan los picos de producto, concentran al vacío para retirar la mayoría del acetonitrilo, después el producto de HS-20001 2.25 g se obtienen por liofilización, de lo cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 22.5%.

Ejemplo 2 El método de síntesis en fase sólida para HS-20002 1. Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt) -HMP-AM Ver Ejemplo 1. 2. Secado e hinchado de la resina sintetizada fase sólida 50 g (20 mmoles) de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM (0.4 mmol/g) seca por 24 h al vacío se colocan en una botella para burbujeo de 2L, la resina se hincha con 500 mL de DMF por 30 min, después se retira la solución de DMF. 3. Eliminación de grupo protector Mtt de la resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM La resina se lava dos veces con 200 mL de DCM, se retira el grupo protector Mtt al agregar 1200 mL de TFA al 1%/ DCM (TFA está en exceso de aproximadamente 8-veces) por lh, después se lava tres veces con 200 mL DIEA al 5%/DMF y DMF en forma alterna, después se lava tres veces con DCM. 4. Condensación de Ácido Palmitico 50 mmoles de ácido palmitico y 50 mmoles de DEPBT se disuelven en 400 mL de DMF, y después 100 mmoles de DIEA se agregan por agitación para reaccionar por 3 minutos a temperatura ambiente, la solución se agrega a la resina, reacciona en baños de agua a 37 grados bajo N2 por 2 h. Después de la reacción, la solución de reacción se retira y la resina se lava con DMF, alcohol isopropilico (IPA) y DMF a su vez. 5. Eliminación del grupo protector Fmoc de la resina Fmoc-Lys (N-ácido e-palmitico) -HMPA-AM 200 mi de solución al 20% de Piperidina/DMF se colocan en una botella de burbujeo llena con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM, se retira después de reaccionar por 5 min, después 200 mi de solución al 20% de Piperidina/DMF se agregan -para reaccionar por 20 min a temperatura ambiente. Después de completar la reacción, la resina se lava por cuatro veces con 200 mi de DMF. 6. Método de síntesis en fase sólida para la parte de cadena péptido de HS-20002 (T) Condensación de Fmoc-Ser (tBu) -OH 50 mmoles de Fmoc-Ser (tBu) -OH se disuelven en 125 mL de HOB5t 0.4 M/DMF, después 125 mL de DIC 0.4M/DCM se agregan para activar y reaccionar por 10 min a temperatura ambiente; dicha solución se coloca en la resina y reacciona bajo N2 a temperatura ambiente, y se emplea prueba de ninhidrina para detectar y controlar el grado de reacción.

Después de reacción, se retira la solución de reacción, y la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez.

©Extensión de la cadena péptido Péptido de resina HS-20002 se sintetiza de acuerdo con la secuencia de la cadena péptido de HS-20002 del N-amino (N-terminal) a carboxi-terminal (C-terminal) (His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp -Leu-Ser-Lys-Gln- Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser ) , en donde las cantidades de aminoácidos y reactivos de condensación son las mismas que las de Fmoc-Ser (tBu)-OH, aminoácidos protegidos son Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Asn(Trt)-0H, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Gln (Trt ) -OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Thr (tBu) -OH y Fmoc-His (Trt ) -OH respectivamente, y se repiten las reacciones de condensación y desprotección. (3) Post-procesamiento de péptido de resina HS-20002 El péptido de resina HS-20002 obtenida en la etapa (¾) se lava con DMF, IPA y DMF a su vez, se lava dos veces con éter absoluto, después seca al vacio, péptido de resina pHS-20002 se obtiene finalmente. (4) Preparación de péptido crudo HS-20002 La resina de péptido HS-20002 seca se reacciona con lisado fresco de ácido trifluoroacético (TFA) : triisopropilsilano (TIS) : agua: 1, 2-etanditiol (EDT) = 94:1:2.5:2.5 (en volumen y total de 10 mL de lisado por grado de la resina seca) por 4h a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtra después de la reacción, la resina se lava con TFA dos veces, el filtrado se recolecta y combina, y se concentra a 1/3 del volumen original a través de evaporación rotatoria, HS-20002 se precipita con éter absoluto frió, después de centrifugación y secado al vacio, se obtiene HS-20002 crudo blanco. (5) Preparación de HS-20002 con cromatografía de líquido de fase inversa 10 g de HS-20002 crudo se disuelven en una cierta cantidad de agua, filtran con filtro de membrana de 0.45 µp?, después purifican con cromatografía de líquido de alto desempeño en fase inversa (RP-HPLC = reversed-phase high performance liquid chromatograph ) , en donde la fase móvil es A TFA al 0.1%/H2O, B TFA al 0.1%/acetonitrilo, en donde la columna es la columna Denali C-18 (diámetro de partículas 8.3 µ??, 5><30 cm) , la temperatura de columna es 45 grados C, longitud de onda de detección es 220 nm, gasto de flujo es 120 mL/min. Se recolectan los picos de producto, concentran al vacío para retirar la mayoría del acetonitrilo, después el producto de HS-20002 2.1 g se obtienen por liofilización, de lo cual la pureza es 98%, el rendimiento es 20.5%.

Ejemplo 3 El método de síntesis en fase sólida para HS-20003 1. Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMP-AM Ver Ejemplo 1. 2. Secado e hinchado de la resina sintetizada fase sólida 50 g (20 mmoles) de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM (0.4 mmol/g) seca por 24 h al vacío se colocan en una botella para burbujeo de 2L, la resina se hincha con 500 mL de DMF por 30 min, despuésla solución de DMF se retira. 3. Eliminación de grupo protector Fmoc de la resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM 200 mL de solución al 20% de piperidina/DMF se agregan en una botella de burbujeo llena con resina Fmoc- Lys (Mtt ) -HMPA-AM, la solución se retira después de 5 min, y después 200 mL de solución al 20% de piperidina/DMF se agregan y se dejan reaccionar por otros 20 minutos a temperatura ambiente. Después de la reacción, la resina se lava cuatro veces con 200 mL de DMF. 4. Condensación de Ácido Palmítico 50 mmoles de ácido palmítico y 50 mmoles de DEPBT se disuelven en 400 mL de DMF, después 100 mmoles de DIEA se agregan por agitación para reaccionar por 3 minutos a temperatura ambiente, la solución se agrega a la resina, reacciona en baños de agua a 37 grados bajo N2 por 2 h. Después de la reacción, la solución de reacción se retira y la resina se lava con D F, alcohol isopropilico (IPA) y DMF a su vez. 5. Eliminación de grupo protector Mtt de resina ácido palmítico-Lys (Mtt) -HMPA-AM La resina se lava con 200 mL de DCM dos veces, se retira el grupo protector Mtt al agregar 1200 mL de TFA al 1%/ DCM (TFA es aproximadamente 8-veces en exceso) para reaccionar por 1 h. La resina se lava con 200 mL de DIEA al 5%/DMF y DMF en forma alterna tres veces, después lava con DCM tres veces. 6. Método de síntesis en fase sólida para la parte de cadena péptido de HS-20003 D Condensación de Fmoc-Ser (tBu)-OH 50 mmoles de Fmoc-Ser (tBu)-OH y 50 mmoles de DEPBT se disuelven en una cierta cantidad de DCM, después 100 mmoles de DIEA se agregan para activación por 3 minutos a temperatura ambiente; la solución se agrega a la resina, reacciona bajo N2 a temperatura ambiente y se emplea ninhidrina para detectar y controlar el grado de reacción. Después de la reacción, la solución de reacción se retira y la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez. (2) Extensión de la cadena péptido Péptido de resina HS-20003 se sintetiza de acuerdo con la secuencia de la cadena péptido de HS-20003 de N-amino (N-terminal) a carboxi-terminal (C-terminal) (His- (D) -Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val- Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser) , en donde las cantidades de aminoácidos y reactivos de condensación son las mismas que las de Fmoc-Ser (tBu)-OH, aminoácidos protegidos son Fmoc-Ser ( tBu) -OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg ( Pbf ) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Tyr ( tBu) -OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Thr (tBu) -OH respectivamente, y se repiten reacciones de condensación y desprotección. (3) Post-procesamiento de péptido de resina HS- 20003 El péptido resina HS-20003 que se obtiene en la etapa © se lava con DMF, IPA y DMF a su vez, lava dos veces con éter absoluto, después seca al vacio y el péptido de resina HS-20003 se obtiene finalmente.

(?) Preparación de péptido crudo HS-20003 La resina de péptido crudo 20003 seca se reacciona con lisado fresco de ácido trifluoroacético (TFA) : triisopropilsilano (TIS) : agua = 95:2.5:2.5 (en volumen y total de 10 mL de lisado por gramo de la resina seca) por 4 h a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtra después de reacción, la resina se lava con TFA dos veces, el filtrado se recolecta y combina, y se concentra a 1/3 del volumen original a través de evaporación rotatoria, HS-20003 se precipita con éter frió bajo agitación, después de centrifugación y secado al vacio, se obtiene finalmente HS-20003 crudo blanco. (5) Preparación de HS-20003 con cromatografía de líquido en fase inversa 10 g de HS-20003 crudo se disuelven en una cierta cantidad de ácido acético al 20%/agua y agitan por al menos 4 h, se filtran con filtro de membrana 0.45 µp? después purifican por cromatografía de líquido de alto desempeño en fase inversa (RP-HPLC) , en donde la fase móvil es A TFA al 0.1%/H2O, B TFA al 0.1%/acetonitrilo, en donde la columna es columna Denali C-18 (diámetro de partículas 8.3 µp\, 5*30 cm) , temperatura de columna es 45 grados, longitud de onda de detección es 220 nm, gasto de flujo es 120 mL/min. Los picos de producto se recolectan, concentran con descompresión para retirar la mayoría del acetonitrilo, después el producto de HS-20003 2.5 g se obtiene por liofilización, de lo cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 25%.

Ejemplo 4 El método de síntesis en fase sólida para HS-20004 1. Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMP-AM Ver Ejemplo 1. 2. Secado e hinchado de la resina sintetizada en fase sólida 50 g (20 mmoles) de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM (0.4 mmol/g) seca por 24 al vacio se colocan en una botella de burbujeo de 2L, 500 mL de DMF se agregan para hinchar la resina por 30 min, solución DMF se retira. 3. Eliminación de grupo protector Fmoc de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM 200 mL de solución al 20% de piperidina/DMF se agregan a una botella de burbujeo llena con resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMPA-AM, y posteriormente se retiran después de 5 min, y después ,200 mL de solución al 20% de piperidina/DMF se agregan para reaccionar por 20 min a temperatura ambiente. Después de la reacción, la resina se lava cuatro veces con 200 mL de DMF. 4. Condensación de ácido palmitico 50 mmoles de ácido palmitico y 50 mmoles de DEPBT se disuelven en 400 mL de DMF, y después 100 mmoles de DIEA se agregan por agitación durante 3 min a temperatura ambiente, la solución se agrega a la resina, reacciona en baño de agua a 37 grados C bajo N2 por 2 h. Después de la reacción, la solución de reacción se retira y la resina se lava con DMF, isopropil alcohol (IPA) y DMF a su vez. 5. Eliminación de grupo protector tt de resina ácido palmitico-Lys (Mtt) -HMPA-AM La resina se lava con 200 mL de DCM dos veces, el grupo protector Mtt se retira al agregar 1200 mL de TFA al 1%/DCM (TFA es aproximadamente 8-veces en exceso) para reaccionar por 1 h, después lava con DIEA al 5%/DMF y DMF en forma alterna por tres veces, después lava tres veces con DCM. 6. El método de síntesis en fase sólida para la parte de cadena péptido de HS-20004 (T) Condensación de Fmoc-Ser (tBu)-OH 50 mmoles de Fmoc-Ser (tBu) -OH y 50 mmoles de DEPBT se disuelven en una cierta cantidad de DCM, después 100 mmoles de DIEA se agregan para activación por 3 min a temperatura ambiente; la solución se agrega a la resina, reacciona bajo N2 a temperatura ambiente, y se emplea ninhidrina para detectar y controlar el grado de reacción. Después de la reacción, la solución de reacción se retira; la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez.

© Extensión de la cadena péptido Péptido de resina HS-20004 se sintetiza de acuerdo con la secuencia de la cadena péptido de HS-20004 de N-amino (N-terminal) a carboxi-terminal (C-terminal) (His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser -Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser ) , en donde las cantidades de aminoácidos y reactivos de condensación son las mismas que las de Fmoc-Ser (tBu)-OH, aminoácidos protegidos son Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg ( Pbf) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Lys (Boc) -OH, Fmoc-Tyr ( tBu) -OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Thr (tBu) -OH, Fmoc-Aib-OH y Fmoc-His (Trt ) -OH respectivamente y se repiten las reacciones de condensación y desprotección. (3) Post-procesamiento para péptido de resina HS-20004 El péptido de resina HS-20004 obtenido en la etapa ® se lava con DMF, IPA y DMF a su vez, lava dos veces con éter absoluto, después seca al vacio, finalmente se obtiene péptido de resina HS-20004. (5) Preparación de péptido HS-20004 crudo El péptido de resina HS-20004 seco se reacciona con lisado fresco de ácido trifluoroacético (TFA) : triisopropilsilano (TIS) : agua = 95:2.5:2.5 (en volumen y total de 10 mL de lisado por gramo de la resina seca) por 4h a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtra después de la reacción, la resina se lava dos veces con TFA, el filtrado se recolecta y combina, y se concentra a 1/3 del volumen original a través de evaporación rotatoria, HS-20004 se precipita con éter frió bajo agitación, después de centrifugación y secado al vacio, obteniéndose finalmente HS-20004 crudo blanco. (5) Preparación de HS-20004 con cromatografía de líquido de fase inversa 10 g de HS-20002 crudo se disuelven en una cierta cantidad de ácido acético al 20%/agua y agitan por al menos 4h, después filtran con un filtro de membrana de 0.45 µ??, posteriormente purifican con cromatografía de líquido de alto desempeño en fase inversa (RP-HPLC) , en donde la fase móvil es A de TFA al 0.1%/H2O, B TFA al 0.1%/acetonitrilo, el gradiente es como sigue: en donde la columna es columna Denali C-18 (diámetro de partículas 8.3 µp?, 5><30 cm) , temperatura de columna es 45°C, longitud de onda de detección es 220 nm, gasto de flujo es 120 mL/min. Los picos de producto se recolectan, concentran al vacío para retirar la mayoría del acetonitrilo, después del producto de HS-20004 de 2.25 g se obtiene por liofilización del cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 22.5%.

Ejemplo 5 El método de síntesis en fase sólida para HS-20005 El método de preparación de HS-20005 es el mismo que el descrito en el Ejemplo 4, en donde la diferencia es que la secuencia de aminoácidos se reemplace con SEQ ID NO: 5, y 2.5 g de producto HS-20005 se obtienen, de lo cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 25%.

Ejemplo 6 El método de síntesis en fase sólida para HS-20006 El método de preparación de HS-20006 es el mismo que el descrito en el Ejemplo 4, en donde la diferencia es que la secuencia de aminoácidos se reemplaza con SEQ ID NO: 6, y 2.25 g de producto HS-20006 se obtienen, del cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 22.5%.

Ejemplo 7 El método de síntesis en fase sólida para HS-20007 El método de preparación de HS-20007 es el mismo que el descrito en el Ejemplo 4, en donde la diferencia es que la secuencia de aminoácidos se reemplaza con SEQ ID NO: 7, y. 2.1 g de producto HS-20007 se obtienen, de lo cual la pureza es 98%, el rendimiento es 20.5%.

Ejemplo 8 El método de síntesis en fase sólida para HS-20008 El método de preparación de HS-20008 es el mismo que el descrito en el Ejemplo 4, en donde la diferencia es que la secuencia de aminoácidos se reemplaza con SEQ ID NO: 8, y 2.5 g de producto HS-20008 se obtienen, del cual la pureza es 98.5%, el rendimiento es 25%.

Ejemplo de Referencia método de síntesis en fase sólida para Liraglutida 1. Preparación de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMP-AM (1) Secado e hinchado de resina H P-AM 50 g (30 moles) de resina HMP-AM (0.6 mmol/g) seca por 24 h al vacio se colocan en una botella de burbujeo de 2L, 500 mL de N, N-dimetilformamida (DMF) se agregan para hinchar la resina por 30 min, la solución DMF se retira, DMF se agrega para lavar la resina por 1 min, la etapa de lavado se repite dos veces. (2) Preparación de Resina Fmoc-Lys (Mtt) -HMP-AM (T) Acoplamiento de Fmoc-Lys (Mtt) -OH y resina HMP-AM La resina se lava con 500 mL de DCM tres veces, 56.2 g (90 mmoles) de Fmoc-Lys (Mtt ) -OH y 11.4 g (90 mmoles) DIC se disuelven en DCM 1L, después se agregan a la resina ¦HMP-AM hinchada.,' después 366 mg ¦ (3 mmoles) de DMAP se agregan para dejar que reaccionen por 24 h; (I) Lavado de la resina Después de la reacción, la resina se lava dos veces en forma alterna con DMF y IPA, lava 3 veces con DMF; (§) Tapado de hidroxilo 15.3 g (150 mmoles) de anhídrido acético y 19.4 g (150 mmoles) de DIEA se disuelven en 1L de DMF y agregan a la resina para reaccionar por 10 min. (?) lavado de la resina La resina se lava dos veces con 1 L de MeOH al 50%/DMF, DCM al 50%/DMF, lava tres veces con DCM, lava tres veces con etanol absoluto, después seca al vacio para obtener la resina Fmoc-Lys (Mtt) -HMP-AM. (3) Ensayos de carga de resina Fmoc-Lys (Mtt ) -HMP-AM Precisos 5 ~ 10 mg de resina se colocan en 1 mL de solución al 20% de Hexahidropiridina / DMF, agitan por 20 min, después 50 uL del sobrenadante se toman con una pipeta y diluyen en 2.5 mi de DMF; Muestras en blanco: 50 uL de Hexahidropiridina al 20% /DMF se toman con una pipeta y se diluyen en 2.5 mi de DMF; Grado de substitución se calcula como sigue: Sub= (??51) / (7.8xm) en donde A es el valor de absorción, de UV a 301 nm; m es la cantidad de la resina, la unidad es mg. 2. Secado e hinchado de la resina de la síntesis en fase sólida 50 g (20 mmoles) de resina Fmoc-Gly-HMP-AM (0.4 mmol/g) seca por 24 h al vacío, se colocan en una botella de burbujeo de 2L, después 500 mi de N, -dimetilformamida (DMF) se agregan para hinchar la resina por 30 min, después la solución de DMF se retira. 3. El método de síntesis en fase sólida de la parte de cadena péptido de Liraglutida (T) condensación de Fmoc-Arg ( Pbf ) -OH 50 mmoles de Fmoc-Arg ( Pbf) -OH se disuelven en 125 mL de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt) 0.4 M/DMF, después 125 mi de N,N ' -diisopropilcarbodiimida (DIC) 0.4 M/DCM se agregan para activar y reaccionar por 10 minutos a temperatura ambiente; la solución se agrega a la resina, reacciona bajo N2 a temperatura ambiente, y se emplea prueba con ninhidrina para detectar y controlar el grado de reacción. Después en la reacción, la solución de reacción se retira; la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez.

(D Extensión de la cadena péptido Péptido precursor de Liraglutida se sintetiza de acuerdo con la secuencia de la cadena péptido de Liraglutida a partir de N-amido (N-terminal) a carboxi-terminal (C-terminal )' (His-Ala^Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly) , en donde las cantidades de aminoácidos y reactivos de condensación son las mismas que las de Fmoc-Arg ( Pbf) -OH, aminoácidos protegidos son Fmoc-Arg (Pbf ) -OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp (Boc) -OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Glu (OtBu) -OH, Fmoc-Lys (Mtt) -OH, Fmoc-Gln (Trt ) -OH, Fmoc-Tyr (tBu) -OH, Fmoc-Ser (tBu) -OH, Fmoc-Asp (OtBu) -OH, Fmoc-Thr ( tBu) -OH, Fmoc-His (Trt ) -OH respectivamente, y se repiten las reacciones de condensación y desprotección. (3) Eliminación de grupo protector Mtt del péptido precursor de Liraglutida La resina se lava con 200 mi de DCM dos veces, se retira el grupo protector Mtt dos veces al agregar 1200 mL de TFA al 1%/DCM (TFA está en aproximadamente un exceso de 8-veces) para reaccionar por lh, la resina se lava tres veces en forma alterna con 200 mL de N,N-diisopropiletilamina (DIEA) al 5%/DMF y DMF, se lava 3 veces con DMF; (?) Modificación del péptido precursor de Liraglutida con ácido palmitico 50 mmoles de Fmoc-Glu-OtBu se disuelven en 125 mL de 1-hidroxibenzo triazol (HOBt) 0.4 M/DMF, después 125 mi de N, N ' -diisopropilcarbodiimida (DIC) al 0.4 M/DCM se agregan para activar y reaccionar por 10 minutos a temperatura ambiente; la solución se agrega a la resina, reacciona bajo N2 a temperatura ambiente y se emplea ninhidrina para detectar y controlar los grados de reacción. Después de la reacción, se retira la solución de reacción, la resina se lava con DMF, IPA y DMF a su vez. 1 L de PIP al 20%/DMF se agregan para retirar el grupo protector Fmoc por 5 minutos, después se retiran, posteriormente 1L de PIP al 20%/DMF se agregan para retirar el grupo protector Fmoc por 20 minutos, después se retira, la resina se lava con DMF cuatro veces; 50 mmoles de ácido palmitico y 50 mmoles de 3- (dietoxifosforiloxi) -1, 2, 3-fentriazin-4-cetona (DEPBT) se disuelven en 400 mi de DMF, después 100 mmoles de DIEA se agregan para reaccionar por 3 minutos bajo agitación a temperatura ambiente, la solución se agrega a la resina, reacciona en baños de agua a 37°C bajo N2 por 2 horas. Después de la reacción, se retira la solución de reacción, la resina se lava con DMF, isopropil alcohol (IPA) y DMF a su vez. 4. Post-procesamiento de la resina péptido de Liraglutida.

La resina péptido de Liraglutida que se obtiene en la etapa (2) se lava con DMF, IPA y DMF a su vez, lava tres veces con DCM, lava dos veces con éter absoluto, después seca, al vacio, resina péptido de Liraglutida se obtiene finalmente. 5. Preparación de péptido crudo de Liraglutida La resina péptido seca de Liraglutida se reacciona con lisado fresco de ácido trifluoroacético (TFA) : triisopropilsilano (TIS) : agua = 95:2.5:2.5 (en volumen y total 10 mL de lisado por gramo de la resina seca) por 4 horas a temperatura ambiente. La solución de reacción se filtra después de la reacción, la resina se lava dos veces con TFA, el filtrado se recolecta y combina, concentra a 1/3 del volumen original a través de evaporación rotatoria, Liraglutida se precipita con éter absoluto frío, después de centrifugación y secado al vacio se obtiene HS-20001 crudo blanco. (5) Preparación de Liraglutida con cromatografía en líquido de fase inversa 10 g de Liraglutida cruda se disuelven en una cierta cantidad de solución de NH4HC03, filtran con membrana filtro de 0.45 µp\, después se purifican con cromatografía de líquido de alto desempeño de fase inversa (RP-HPLC) , en donde la fase móvil es A TFA al 0.1%/H2O, B de TFA al 0.1%/acetonitrilo, en donde la columna es Denali C-18 (diámetro de partículas 8.3 pm, 5x30 cm) , temperatura de columna es 45°C, longitud de onda de detección es 220 nm, gasto de flujo es 120 mL/min. Los picos de producto se recolectan, concentran con descompresión para retirar la mayoría de acetonitrilo, después 2.25 g de producto de Liraglutida se obtienen por liofilización, de lo cual la pureza es 98%, el rendimiento es 12.5%.

Ejemplo Experimental 1: Prueba de actividad agonista de los compuestos en receptor péptido tipo glucagón-1 (GLP1R) GLP1R es un receptor acoplado con proteína Gs, de lo cual el enlace a los agonistas resultará en incrementar la concentración de cAMP intracelular . En el presente experimento, GLP1R y el plásmido de gen reportero luciferasa regulado por elementos de respuesta cAMP son co-transíectados en células HEK293. Cuando el compuesto liga al receptor y activa los receptores, la expresión de la luciferasa aumentará. El estado de activación del compuesto a GLPIR puede conocerse al probar la actividad de la luciferasa.

Procedimientos experimentales: 1. Células HEK293 transíectadas en forma estable con GLPIR y plásmido pCRE-Luc se implantan en placas de 96 pozos con la cantidad de 40000 células / pozo / 100 µ?, e incuban a 37 °C por 24 horas. 2. Los compuestos o fármacos positivos que tienen un cierto gradiente de concentración se agregan (3 pozos por concentración) e incuban a 37 °C por 5 horas. El control negativo es el solvente DMSO. 3. 50 µ? de medio de cultivo se toman de cada pozo y 50 µ? del substrato de la luciferasa se agregan y después someten a torbellino por 10 minutos. 4. 80 µ? de solución de reacción se toman y transfieren a una placa de 96 pozos blanca, después detectan en el lector de microplacas Invision (instrumento de medición con etiquetado de enzima) .

Los resultados experimentales: comparado con compuestos positivos liraglutida, la actividad del compuesto HS-20001 de la invención es aproximadamente igual a la de los compuestos positivos, pero HS-20002—20008 muestra mucho mejor actividad agonista.

Tabla 1. Valores EC50 de la serie de compuestos: Ejemplos Experimental 2 Prueba de actividad in vivo Ratones db/db con diabetes tipo 2 se dividen en seis grupos con base en glucosa en la sangre y peso corporal aleatorio (8 por grupo) . Salino fisiológico, 3 o 10 µg/kg de nuevos compuestos serie HS (Liraglutida, 20001, 20002, 20003, 20004, 2005, 2006, 2007, 2008) se administran por una sola inyección subcutánea. La glucosa en la sangre aleatoria de los ratones se determina a diferentes tiempos después de administración.

Los sujetos animales empleados en el experimento son ratones db/db, que son productos de una empresa de los E.U.A. con nombre Jackson y se conservan y reproducen por Shanghai Institute of Materia Medica of Chínese Academy of Science (Instituto de Shanghai de Materia Médica de la Academia de Ciencias China) , de lo cual el Certificado de Conformidad es: SCXK (HU) 2008-0017 , Peso Corporal: 35-50 g; Género: Machos 85, hembras 86, criados en una sala para animales grado SPF; Temperatura: 22— 24°C; Humedad: 45-80%; Luz: 150-300 Lx, 12 h de día alternado con oscuridad.

Los fármacos de prueba del experimento son HS-20001, HS-20002, HS-20003, HS-20004, HS-20005, HS-20006, HS-20007, HS-20008, liraglutida (desarrollado por Novo Nordisk, como Control Positivo) .

Método de preparación: 1 botella del compuesto (2 mg/botella) se disuelve con agua doble destilada para preparar una solución incolora y transparente de la cual la concentración es 2 mg/ml, después la solución se diluye a 0.6 µg/ml y 2 µg/ml con salino fisiológico (inyección de cloruro de sodio, Double-Crane Pharmaceutical Co., Ltd. Anhui, número de lote: 080728 6C) . Medidor de glucosa en la sangre "ACCU-CHEK® Advantage" de Roche se emplea para determinar la glucosa en la sangre.

Ajuste de dosis y grupo Grupo de Prueba 1: Grupo de control: salino fisiológico Grupo Liraglutida 3 µg/kg Grupo HS-20001: 3 µg/kg Grupo HS-20002: 3 µg/kg Grupo HS-20003: 3 µg/kg Grupo HS-20004: 3 µg/kg Grupo HS-20005: 3 µg/kg Grupo HS-20006: 3 µg/kg Grupo HS-20007: 3 µg kg Grupo HS-20008: 3 µg/kg Grupo de Prueba 2 : Grupo de Control: salino fisiológico Grupo Liraglutida 10 Grupo HS-20001 : 10 µq/kq Grupo HS-20002 : 10 µ? kg Grupo HS-20003 : 10 µg/kg Grupo HS-20004 : 10 Grupo HS-20005 : 10 µ?/kg Grupo HS-20006 : 10 µg/kg Grupo HS-20007 : 10 µg/kg Grupo HS-20008 : 10 µg/kg Ruta y volumen de administración: Dosis de inyección subcutánea sencilla, volumen de dosis es 5 ml/kg.

Método de Prueba Evaluación, agrupado y administración para ratones db/db con diabetes tipo 2 Grupo de Prueba 1 : Ratones 171 db/db (machos 85, hembras 86) se crian en una sola jaula después de destetar, se alimentan con una dieta de alto contenido de grasas. Los niveles de glucosa en la sangre aleatorios y en ayunas se miden después de que los ratones db/db tienen siete semanas de edad. 80 ratones db/db que enferman se seleccionan y se dividen en 10 grupos de acuerdo con la glucosa en la sangre aleatoria, glucosa en la sangre en ayunas y peso corporal como sigue: grupo de control modelo, grupo de Liraglutida-3 µg/kg, grupo HS-20001-3 µg/kg, grupo HS-20002-3 Mg/kg, grupo HS-20003-3 µg/kg, grupo HS-20004-3 µg/kg, grupo HS-20005-3 µg/kg, grupo HS-20006-3 µg/kg, grupo HS-20007-3 µg/kg y grupo HS-20008-3 µg/kg.

Grupo de Prueba 2 : Se miden los niveles de glucosa en la sangre aleatorios de ratones db/db. 80 ratones db/db que enferman son seleccionados y dividen en 10 grupos de acuerdo con glucosa en la sangre aleatoria y peso corporal como sigue: grupo de control modelo, grupo Liraglutida-10 µg/kg, grupo HS-20001-10 µg/kg, grupo HS-20002-10 µg/kg, grupo HS-20003-10µq/kql grupo HS-20004-10 µg kg, grupo HS-20005-10 µg/kg, grupo HS-20006-10 µg/kg, grupo HS-20007-10 µg/kg y grupo HS-20008-10 µg/kg.

Cada grupo tiene 8 ratones, la mitad son machos y la mitad son hembras. Los animales de cada grupo se administran con los compuestos de prueba o control de solvente respectivamente a través de inyección subcutánea sencilla. La glucosa en la sangre aleatoria se determina a lh, 2h, 4h, 8h y 24h después de administración y la velocidad de disminución de glucosa en la sangre se calcula : Velocidad de disminución de glucosa en la sangre = (glucosa en la sangre de grupo de control - glucosa en la sangre de grupo de tratamiento) / glucosa en la sangre de grupo de control * 100%.

Resultados experimentales • Prueba 1: Efecto de los nuevos compuestos con baja dosis administrados con una sola dosis en glucosa en la sangre aleatoria de ratones db/db.

Pueden verse los resultados en la Tabla 2 y Tabla 3. Ratones db/db se administran con 3 g/kg de HS-20002, 20004, 20005, 20006, 20007 o 20008 a través de inyección subcutánea sencilla, después de una hora, valores de glucosa en la sangre aleatorios de los ratones se disminuyen significativamente en comparación con aquellos del grupo de control (P <0.05), velocidades disminuidas son 24.51%, 15.00%, 14.00%, 14.25%, 13.98% y 13.90% respectivamente; después de 2h y 4h de administración, los valores de glucosa en la sangre aleatorios mantienen un nivel menor y tienen una diferencia significante de aquellos del grupo de control (P <0.05); después de 8h de la administración, los valores de glucosa en la sangre aleatorios no tienen diferencia significante de aquellos del grupo de control. Los ratones son administrados con 3 µg/kg de HS-20003 a través de inyección subcutánea, después de una hora, los valores de glucosa en la sangre aleatorios se disminuyen significativamente en comparación con los del grupo de control (P <0.05), hasta 17.33%, después de 2h, 4h y 8h de la administración, los valores de glucosa en la sangre aleatorios no muestran diferencia significante de aquellos del grupo de control. Después de administrar 3 ^g/kg de HS-20001 para ratones db/db a través de inyección subcutánea sencilla, se disminuyen un poco los valores de glucosa en la sangre aleatorios en comparación con aquellos del grupo de control, pero no hay diferencia significante. Los valores de glucosa en la sangre aleatoria del grupo de ratones administrados con Liraglutida no tienen disminución significante.

Tabla 2: Efecto de administración de nuevos compuestos (mmol/L, X+s, n=8) a través de una sola dosis en glucosa en la sangre aleatoria de ratones db / db en el mismo día.

Cont .

*P<0.05, **P<0.01, Comparado con aquellos del grupo de control Tabla 3: La velocidad de disminución de glucosa en la sangre aleatoria (%, n=8) de ratones db / db administrados con los nuevos compuestos a través de una sola dosis el mismo día.

Cont.

Pr.ueba 2: · Efecto de altas dosis de nuevos compuestos administrados por una sola dosis de glucosa en la sangre aleatoria de ratones db/db.

Resultados pueden verse en la Tabla 4 y Tabla 5. Ratones db/db se administran con 10 ^ug/kg HS-20002 a través de una sola inyección subcutánea, después de una hora, los valores de glucosa en la sangre aleatorios de los ratones se disminuyen significativamente en comparación con los del grupo de control (P <0.01); después de 2 horas, 4 horas y 8 horas de la administración, los valores de glucosa en la sangre aleatorios mantienen un menor nivel, en donde los valores a 4 horas después de administración son más obvios, de lo cual la velocidad de disminución es hasta 40.67% y significativamente diferente del grupo de control (P<0.001), hasta 24 horas después de la administración, los valores aleatorios de glucosa en la sangre todavía son significativamente menores que los del grupo de control. A los ratones se les administró 10 µ?/kg de HS-20003 a través de una sola inyección subcutánea, después de una hora, los valores aleatorios de glucosa en la sangre se disminuyen en forma significante en comparación con los del grupo de control (P <0.01) y es hasta 23.62% disminución, después de 2 horas, 4 horas y 8 horas de la administración, los valores aleatorios de glucosa en la sangre todavía se mantienen a un nivel menor, después de 24 horas de la administración, no hay diferencia significante en comparación con el grupo de control. Ratones db/db se administran 10 µ?/kq de HS-20001 a través de una sola inyección subcutánea, después de 2 horas, los valores aleatorios de glucosa en la sangre se disminuyen significativamente en comparación con los del grupo de control, después de 4 horas y 8 horas de la administración, los valores aleatorios de glucosa en la sangre todavía se mantienen a un nivel menor, después de 24 horas de la administración, los valores aleatorios de glucosa en la sangre no muestran diferencia significante de los del grupo de control. HS-20002, HS-20004, HS-20005, HS-20006, HS-20007 o HS-20008 se administran a ratones a través de una sola inyección subcutánea y los valores aleatorios de glucosa en la sangre se disminuyen inmediatamente y en forma significante, la velocidad de disminución es hasta 36.20%, después de 2 horas, después de 4 horas y 8 horas de la administración, los valores de glucosa en la sangre todavía se mantienen a un nivel menor, después de 24 horas de la administración, no hay diferencia significante en comparación con los del grupo de control. Los valores de glucosa aleatoria en la sangre de ratones de grupo administrado con Liraglutida no tienen disminución significante .

Tabla 4 : Efecto de los nuevos compuestos administrados a través de una , sola dosis (mmol/L, +s, n=8) en glucosa aleatoria en la sangre de ratones db/db en el mismo día.

*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001, En comparación con grupo de control Tabla 5: La velocidad de disminución de glucosa aleatoria en la sangre (%, n=8) de ratones db/db administrados con los nuevos compuestos a través de una sola dosis el mismo día.

Cont .

Conclusión de las pruebas: La glucosa aleatoria en la sangre de ratones db/db administrada con series de nuevos compuestos de la invención a través de una sola inyección subcutánea puede disminuirse en forma significante; la glucosa aleatoria en la sangre puede disminuirse evidentemente por HS-20002, HS-20003, HS-20004, HS-20005, HS-20006, HS-20007 y HS-20008 en una dosis de 3 g/kg. Cuando, HS-20002 y HS-20004 muestran un mucho mejor efecto para reducir glucosa aleatoria en la sangre, la duración del efecto hipoglicémico después de una sola inyección subcutánea está relacionada con la dosis, la duración del efecto de HS-20002 y HS-20004 en disminuir la glucosa aleatoria en la sangre en la dosis de 3 ¿g/kg es mayor que 4 horas, y la duración del efecto de HS-20001, HS-20002, HS-20003, HS-20004, HS-20005, HS-20006, HS-20007 y HS-20008 al disminuir glucosa aleatoria en la sangre en la dosis de 10 //g/kg es mayor que 8 horas.

Claims (22)

REIVINDICACIONES

1. Una serie de derivados de análogo GLP-1 que comprenden una secuencia de aminoácidos de la fórmula (I) o su sal farmacéutica aceptable: Xi-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xio-Ser-Xi2 -Xi3-Xi4-Glu- i6-Xi7-Ala-Xi9-X20-X2i-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X3i- ?32-?33-?3 ~?35-?36-?37-?38-?39-^?5 (I) en donde los derivados del análogo GLP-1 contienen un substituyente lipofilico de la fórmula Ri (CH2) n-CO-, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC-, n es un entero seleccionado de 8-25, Xi , X2 , ??? , Xi2 , X13, Xi4, Xie , Xl7/ Xl9r 20 f 21/ 24 f 27Í X28Í 29Í r 1 32 / 33 X-34r X35/ 36 X37, X38 y X39 se eligen independientemente de cualesquiera aminoácidos naturales o no naturales o segmentos péptido que consisten de cualesquiera aminoácidos naturales o no naturales.

2. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 1, caracterizados porque el substituyente lipofilico de la fórmula Ri ( CH2 ) n-CO- y el grupo amino de los residuos aminoácidos del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC- , y n es un entero seleccionado de 8-25.

3. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 2, caracterizados porque el substituyente lipofilico de la fórmula Ri(CH2)n-CO- y el grupo e amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

4. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 2, caracterizados porque el substituyente lipofilico de la fórmula Ri(CH2)n-CO- y el grupo a amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

5. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 4, caracterizados porque Ri es CH3-, y n es un entero seleccionado de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22.

6. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 5, caracterizados porque Ri es CH3-, y n es 14.

7. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 4, caracterizados porque Ri es HOOC-, y n es un entero seleccionado de 14, 16, 18, 20 y 22.

8. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 7, caracterizados porque Ri es HOOC-, y n es 14.

9. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad de cualquiera de las reivindicaciones 1-8, caracterizados porque ?? se elige de L-His y D-His; X2 se elige de Ala, D-Ala, Gly, Val, Leu, lie, Lys y Aib; Xio se elige de Val y Leu; ??2 se elige de Ser, Lys y Arg; X13 se elige de Tyr y Gln; Xi4 se elige de Leu y Met; Xi6 se elige de Gly, Glu y Aib; X17 se elige de Gln, Glu, Lys y Arg; ?9 se elige de Ala y Val; X2o se elige de Lys, Glu y Arg; X2i se elige de Glu y Leu; X24 se elige de Val y Lys; X27 se elige de Val y Lys; X28 se elige de Lys, Glu, Asn y Arg; X29 se elige de Gly y Aibl; X30 se elige de Arg, Gly y Lys; X31 se elige de Gly, Ala, Glu, Pro y Lys; X32 se elige de Lys y Ser; X33 se elige de Lys y Ser; X34 se elige de Gly, Ala y Sar; X35 se elige de Gly, Ala y Sar; X36 se elige de Pro y Gly; X37 se elige de Pro y Gly; X38 se elige de Pro y Gly; X39 se se elige de Ser y Tyr.

10. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 9, caracterizados porque la secuencia de aminoácidos del análogo GLP-1 se elige del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120.

11. El derivado del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el substituyente lipofílico de la fórmula Ri ((¾) n-CO- y el grupo amino de los residuos aminoácidos del análogo GLP-1 de los cuales la secuencia se selecciona del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 120 se ligan por un enlace amida, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC-, n es un entero de 8-25.

12. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 11, caracterizados porque el substituyente lipofílico de. la fórmula Ri (CH2) n-CO- y el grupo e amino del Lys C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Ri es HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

13. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 12, caracterizados porque Ri se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22.

14. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 12, caracterizados porque Ri es CH3-, y n es 14.

15. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 14, caracterizados porque la secuencia aminoácidos del análogo GLP-1 se elige del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 20.

16. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 11, caracterizados porque el substituyente lipofilico de la fórmula Ri(CH2)n-CO- y el grupo a amino de Lys C-terminal del análogo GLP-1 se ligan por un enlace amida, en donde Ri se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8-25.

17. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 16, caracterizados porque Ri se elige de CH3- y HOOC-, y n es un entero seleccionado de 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20 y 22.

18. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 17, caracterizados porque Ri es CH3-, y n es 14.

19. Los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 18, caracterizados porque la secuencia aminoácido del análogo GLP-1 se elige del grupo que consiste de SEQ ID NO: 1 a SEQ ID NO: 8, en donde Ri es CH3-, y n es 14.

20. El derivado del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad con la reivindicación 19, caracterizados porque la secuencia aminoácidos del análogo GLP-1 es SEQ ID NO: 4.

21. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende: (1) una cantidad terapéutica efectiva de los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de conformidad de cualquiera de las reivindicaciones 1-20, y (2) un excipiente farmacéutico aceptable o portador de fármaco.

22. El uso de los derivados del análogo GLP-1 o su sal farmacéutica aceptable de cualquiera de las reivindicaciones 1-20 o la composición farmacéutica de la reivindicación 21 en la preparación de un medicamento para el tratamiento de diabetes mellitus no dependiente de insulina, diabetes dependiente de insulina u obesidad.