TWI494122B

TWI494122B - Ｇｌｐ－１類似物的衍生物或其醫藥用鹽及其用途

Info

Publication number: TWI494122B
Application number: TW099146857A
Authority: TW
Inventors: Yali Wang; Changan Sun; Hengli Yuan
Original assignee: Jiangsu Hansoh Pharmaceutical
Priority date: 2010-12-30
Filing date: 2010-12-30
Publication date: 2015-08-01
Also published as: TW201225974A

Description

GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽及其用途

本發明涉及人類之類升糖素肽-1(GLP-1)類似物的衍生物或其醫藥用鹽，本發明提供的GLP-1類似物的衍生物具有人類GLP-1的功能，並且與人類GLP-1相比在體內具有更長時間的半衰期。本發明還涉及GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽或含有GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽的醫藥組成物用於治療非胰島素依賴性糖尿病、胰島素依賴性糖尿病、肥胖症的用途。

糖尿病是一種全球性流行病，是由於體內胰島素絕對或相對不足而導致的葡萄糖、蛋白質、脂質代謝紊亂的綜合症(陳睿傑.糖尿病治療藥物的研究現狀.廣東藥學院學報,2001,7(2)：131-133)，根據發病機理可分為第Ⅰ型和第Ⅱ型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM，下同)。在所有確診的糖尿病患者中，90至95%病人患有T2DM，並且病人往往伴隨著肥胖、體能活動不足(physical inactivity)、年齡偏大、家族糖尿病史、葡萄糖代謝損傷以及有家族糖尿病史等。T2DM也是一種進行性疾病(progressive disease)。2000年，世界衛生組織統計資料估計全球約有1.71億人患有糖尿病；2005年，美國疾病控制和預防中心(Centers for Disease Control and Prevention)估計約有0.208億美國人患有糖尿病，約占美國人口的7%；2006年據國際糖尿病聯盟統計，全球糖尿病患病人數約為2.46億(約占全球總人口的5.9%)並且46%的患者年齡在40-59歲之間。研究表明，正常人和T2DM患者對葡萄糖反應有著非常重要的區別。正常人在飯後對血糖升高的反應屬於早期胰島素反應(early insulin response)。

T2DM特徵是胰島素抑制和胰腺β-細胞功能損傷，導致胰島素缺乏和高血糖(Ferrannini E. Insulin resistance versus insulin deficiency in non-insulin-dependent diabetes mellitus：problems and prospects. Endocr Rev. 1998,19(4)：477-490)。T2DM病人一般會出現飯後以及空腹高血糖(空腹血糖＞125mg/dL)，而高血糖主要是由於胰腺β-細胞不能分泌足夠的胰島素來補償周邊組織中的胰島素抑制造成的(Weyer C.,Bogardus C.,Mott DM.,et al. The natural history of insulin secretory dysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus. J. Clin. Invest. 1999,104(6)：787-794)。

T2DM的主要危險因素是肥胖，它對人類健康具有非常大的危害。患者患上心血管疾病和非正常死亡的危險會變大，同時T2DM往往與其他一些高危險性疾病如高血壓、血脂障礙和肥胖等同時存在；60%的T2DM病人伴隨著微血管併發症者包括視網膜病變(retinopathy)和神經病變(neuropathy)以及與T2DM有關的心血管病狀(cardiovascular morbidities)如冠狀動脈心臟病、心肌梗塞和休克等。在美國，心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是導致發病和死亡的主要因素，而T2DM是大血管(macrovascular)併發症如動脈粥樣硬化(atherosclerosis)、心肌梗塞(myocardial infarction)、休克和外周血管病的發生的主要危險因素(major risk factor)。患糖尿病的成人發生心臟病和休克導致死亡的機率是非糖尿病人的2至4倍，此外，接近65%的糖尿病人死於心臟病和休克。

除了對患者生理和身體的傷害之外，T2DM還會給社會造成很大的經濟負擔，據統計，在美國每年用於治療糖尿病併發症的費用大約229億美元，每年用於T2DM及其併發症的總費用接近571億美元，不列入預算的花費總額超過80億美元。

T2DM治療藥物向來是人們關注的焦點，從早期的磺醯類、雙胍類口服降糖藥物到近期的胰島素增敏劑和α-糖苷酶抑制劑，從動物胰島素到人胰島素及各種新劑型的開發，從單純的增加胰島素出發的藥物治療機理到作用於更早產生胰島素的新途徑。體重增加是這類口服或注射降糖藥用藥後常見的不良反應，這一點可能降低順從性，並且可能增加發生心血管病的風險。因此開發安全性高，病人順從性好，不良反應低的新型T2DM治療藥物成為眾多研究機構和制藥企業爭相研製的熱點。

早在100多年前，Moore就提出十二指腸能分泌刺激胰腺分泌的“化學興奮劑”，並試圖注射腸道提取物來治療糖尿病。隨後發現腸道分泌的體液因數能增強胰腺的內分泌功能，無論靜脈還是口服葡萄糖所引發的胰島素分泌，約50%源於腸道所產生的肽類的刺激作用，為此Zunz和Labarre提出“腸降血糖素(incretin)”的概念。至今已分離出2種腸降血糖素，即葡萄糖依賴性胰島素釋放肽(glucose-dependent insulinotropic polypeptide,GIP)和類升糖素肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)。GIP和GLP-1都是在營養吸收時由特定的腸神經分泌細胞分泌，其中GIP由十二指腸和鄰近空腸K細胞(proximal jejunal K cells)分泌，GLP-1則在L細胞中合成且主要存在於遠端小腸和結腸中(Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003,26(10)：2929-2940)。

GLP-1在血漿中以GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)醯胺兩種生物活性形式存在，這兩個多肽僅有一個胺基酸差異，而且它們的生物作用和體內半衰期是相同的(Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003,26(10)：2929-2940)。

通常所說的GLP-1是對GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)醯胺的統稱。GIP和GLP-1在胃腸道釋放出來後會很快被體內的二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV)降解為沒有活性的形式，從而使GIP和GLP-1在體內的半衰期非常低(GIP體內半衰期約5至7min，GLP-1體內半衰期約2min)(Drucker DJ. Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes. Diabetes Care. 2003,26(10)：2929-2940)。研究表明，大多數降解過程發生在GIP和GLP-1進入含有DPP-IV的血管時發生，少量沒有被降解的GLP-1和GIP會進入胰腺並跟其結合位點結合而刺激β-細胞釋放胰島素。與磺醯脲(sulfonylureas)通過直接促進功能β-細胞釋放胰島素機制不同，腸促胰島素效應大部分都是葡萄糖依賴型。此外，一些動物和人體體外試驗表明GLP-1還具有α-細胞抑制和降低升糖素過度分泌(glucagon hypersecretion)等作用。

雖然T2DM患者體內血漿GIP濃度正常但其腸促胰島素作用顯著下降或喪失，而GLP-1在T2DM患者體內濃度則是降低，因此研究基於GLP-1的藥物更有助於治療T2DM。雖然飯後幾分鐘內GLP-1醯胺(7-37)和GLP-1(7-36)醯胺濃度均會提高，但GLP-1(7-36)醯胺含量更多些，因此內分泌和神經信號傳遞的雙重作用可能在被消化的食物從消化道下端進入小腸和結腸前已經大大提高了GLP-1的分泌。空腹狀態下血漿中GLP-1濃度是很低的(約5至10pmol/L)，而在進食後其濃度迅速增加(達到15至50pmol/L)。在DPP-IV和腎清除雙重作用下，體內循環的GLP-1濃度迅速降低，而其他的酶如人體中性肽鏈內切酶24.11(human neutral endopeptidase 24‧11)等是否也對GLP-1活性的喪失起決定性的作用的研究工作正在進行中。由於GLP-1在2位胺基酸是丙胺酸，是DPP-IV的良好的基質，更容易降解為無活性的肽段。實際上，體內DPP-IV才是腸促胰島素活性喪失的主要原因，實驗表明DPP-IV基因被靜默化的小鼠體內GLP-1濃度顯著提高，增加了胰島素的分泌。正是在DPP-IV作用下，體內完整且具有生物活性的GLP-1僅僅為血漿GLP-1總含量的10至20%(Deacon CF,Nauck MA,Toft-Nielsen M,et al. Both subcutaneously and intravenously administered glucagon-like peptide 1 are rapidly degraded from the NH2-terminus in type 2-diabetic patients and in healthy subjects. Diabetes. 1995,44(9)：1126-1131)。

GLP-1和GIP經由與結構完全不同的G-蛋白偶聯受體(G-protein-coupled receptors,GPCRs)結合而發揮各自作用。GIP受體大部分是由胰島β-細胞表達，少部分在脂肪組織和中樞神經系統表達。與此相反，GLP-1受體則主要是在胰島α-和β-細胞以及周緣組織包括中樞和周圍神經系統、腦、腎、肺和胃腸道等中表達。兩個腸促胰島素在β-細胞中的啟動會導致cAMP和胞內鈣濃度的迅速增加，從而導致其以葡萄糖依賴方式向胞外分泌，持續的腸促胰島素受體信號傳遞跟蛋白激酶A相關，會導致基因轉錄、增加胰島素的生物合成並且刺激β-細胞的增殖(Gallwitz B. Glucagon-like peptide-1-based therapies for the treatment of type 2 diabetes mellitus. Treat Endocrinol. 2005,4(6)：361-370)。GLP-1和GIP受體的啟動也可以抑制嚙齒目動物和人類胰島中β-細胞凋亡同時增加其存活率(Li Y,Hansotia T,Yusta B,et al. Glucagon-like peptide-1 receptor signaling modulates beta cell apoptosis. J Biol Chem. 2003,278(1)：471-478)。與GLP-1受體表達相一致的是GLP-1也可以抑制升糖素分泌、胃排空和食物攝入，同時通過神經機制(neural mechanism)增強對葡萄糖的降解。需要注意的是，跟其他胰島素分泌反應相同，GLP-1對葡萄糖分泌的作用是升糖素依賴性的，而由於低血糖作用而引起升糖素反調節釋放(counter-regulatory release of glucagon)的升糖素作用即使在GLP-1藥理學濃度下仍然得到了完全保留。

內源性GLP-1和GIP在葡萄糖體內平衡中發揮的重要生理學作用已經藉由使用受體拮抗劑或在基因剔除小鼠中進行了深入研究。急性GLP-1或GIP的拮抗作用減少了嚙齒目動物體內胰島素的分泌並且增加了血漿葡萄糖含量。同樣，GIP或GLP-1受體失活突變小鼠同樣有缺陷型葡萄糖刺激胰島素分泌和損傷性葡萄糖耐受性。GLP-1還具有空腹血糖調節功能，因為GLP-1作用的急性拮抗或遺傳破壞會導致嚙齒目動物空腹葡萄糖濃度的提高；同時，GLP-1是人體內葡萄糖控制的基礎，對拮抗Exendin(9-39)的研究表明GLP-1作用被破壞後會造成缺陷性葡萄糖刺激胰島素分泌(defective glucose-stimulated insulin secretion)、減少葡萄糖廓清率、增加升糖素濃度和加快胃排空作用。此外，GLP-1的生理作用(Deacon CF. Therapeutic strategies based on glucagon-like peptide 1. Diabetes. 2004,53(9)：2181-2189)還包括：(1)幫助組織血糖吸收，介導葡萄糖依賴型胰島素分泌；(2)抑制餐後升糖素分泌，降低肝糖釋放；(3)調節胃排空，防止食物在腸道吸收時葡萄糖的過度循環；(4)抑制食物攝入(如食欲)。此外動物試驗還表明GLP-1的一個生理學作用是穩定體內胰腺β-細胞數量。

因為GLP-1和GIP在控制血糖等多方面具有良好作用，特別是其不產生低血糖和延緩胃排空控制體重的特點引起了眾多科學家的興趣。人們開始嘗試研究基於GLP-1和GIP藥物治療T2DM。眾所周知，T2DM病人缺乏或喪失了腸促胰島素效應，其中一個原因是T2DM病人體內GIP的腸促胰島素作用大大減弱；同時，T2DM患者體內GLP-1濃度很低，且因飲食刺激產生的GLP-1濃度顯著減少(Toft-Nielsen MB,Damholt MB,Madsbad S,et al. Determinants of the impaired secretion of glucagon-like peptide-1 in type 2 diabetic patients. J Clin Endocrinol Metab. 2001,86(8)：3717-3723)。因為T2DM患者體內GLP-1作用得到了部分保留，旨在增強T2DM患者體內腸促胰島素效應的藥物研究方向之一就是GLP-1增效劑。

GLP-1類似物與內源性GLP或GIP一樣，可以以葡萄糖依賴型的方式刺激體內胰島素的分泌，同時抑制升糖素的體內釋放。此外GLP-1類似物對以下症狀具有作用：(1)低血糖。與其他促分泌藥物不同，GLP-1類似物由於以一種葡萄糖依賴方式促進體內胰島素分泌，因此其降血糖作用具有自限性，在大劑量時一般不會引起嚴重的低血糖。儘管有文獻報告GLP-1可以將血糖降低到正常濃度以下，但該效應短暫，而且被認為是GLP-1促胰島素分泌作用的自然結果。由於胰島素的失活需要一定時間，因此當因血糖濃度降低，GLP-1的刺激作用減弱而沒有新胰島素分泌的時候，原有的胰島素仍產生作用。總之，GLP-1可以使血糖暫時降低到正常濃度之下，但不會引起嚴重和持久的低血糖。(2)對飽食和體重的作用。除了直接降低血糖之外，GLP-1還可以降低食物的攝入量，這在齧齒類動物和人身上都得到了驗證。這樣可以經由降低體重間接控制血糖濃度。GLP-1還有潛在的抑制胃泌素和進食刺激的胃酸分泌的作用，這些效果表明GLP-1可能還具有預防消化道潰瘍的作用。GLP-1的作用機制使其不但可以成為理想的2型糖尿病患者的治療藥物，還可以成為肥胖型糖尿病患者的治療藥物。GLP-1可以增強病人的飽食感、減少食物攝入和保持體重或減肥；(3)維持β-細胞健康。一些研究提示GLP-1可以預防由糖耐受異常到糖尿病的轉化，還有一些文獻報告了GLP-1類化合物對實驗動物胰島β細胞的生長和增殖具有直接的作用，而且有實驗發現GLP-1可以促進胰腺幹細胞向功能性β細胞的分化。這些結果暗示GLP-1具有保護胰島及延緩糖尿病進展的功能，可以保持β-細胞的形態和功能，同時減少其凋亡；(4)對餐後高血糖的作用。這一現象代表了T2DM治療的一種新方向。由於一些口服藥物和外源胰島素不能抑制或減少T2DM患者升糖素的過高分泌，GLP-1類似物可以可能經由直接抑制升糖素釋放或因促進胰島素分泌而產生旁分泌抑制作用而對升糖素高分泌產生影響。經由這兩個機制可以有效減少餐後高血糖現象；同時，保持β-細胞功能也可能對長期控制餐後高血糖有作用。

同時GLP-1類似物是經由皮下注射服用，不需要計算碳水化合物的量來估計最佳的藥物用量，也不需要對血糖進行自行監測，使這類藥物的使用比胰島素更加方便。

天然GLP-1多種功效的證實為T2DM的治療帶來了新希望，但是，人體天然的GLP-1很不穩定，可被二肽基肽酶IV(DPP-IV)降解，半衰期僅為1至2min。若採用天然GLP-1來降低血糖，需持續靜脈輸注或持續皮下注射，臨床可行性較差。面對這種情況，人們不斷探索，希望能找到延長GLP-1作用時間的方法。因此開發長效的GLP-1類似物或其衍生物，成為醫藥界關注的重要領域。

Exenatide是合成的Exendin-4，由禮來公司和Amylin公司合作開發，商品名，FDA和EMEA已經批准其上市，用於治療T2DM。它在序列上與哺乳動物GLP-1有50%同源性且其與GLP-1受體親和位點跟GLP-1相似(Drucker DJ,Nauck MA. The incretin system：glucagon-like peptide-1 receptor agonists and dipeptidyl peptidase-4 inhibitors in type 2 diabetes. Lancet. 2006,368(9548)：1696-1705)，由蜥蜴特有的基因編碼；與GLP-1相比，Exenatide將GLP-1第2位丙胺酸替換成甘胺酸，有效的抑制了DPP-IV酶解，在體內半衰期約60至90min(Kolterman OG,Kim DD,Shen L,et al. Pharmacokinetics,pharmacodynamics,and safety of exenatide in patients with type 2 diabetes melllitus. Am Health Syst Pharm. 2005,62(2)：173-181)，單次皮下注射後Exenatide在體內濃度持續增加，2h左右可以在血漿中達到最大濃度，可維持4至6h(Nielsen LL,Baron AD. Pharmacology of exenatide(synthetic exendin-4)for the treatment of type 2 diabetes. Curr Opin Investig Drugs. 2003,4(4)：401-05)。需要注意的是Exenatide的代謝不發生在肝臟中，而主要經腎小球過濾後經蛋白酶降解。

Exenatide具有特殊的葡萄糖調節活性，包括葡萄糖依賴型增強胰島素分泌作用、葡萄糖依賴型抑制不正確過高升糖素分泌作用、減緩胃排空和減少食物攝入等作用。體內和體外糖尿病模型研究還發現，Exenatide還具有儲存第一階段(first-phase)胰島素分泌、促進β-細胞增殖和胰島素從其前體細胞再生的作用。

為了達到較好的血糖控制，每天需要兩次注射Exenatide，這給病人帶來了很大的不便。再者Exenatide還具有輕微至中等反胃(約40%病人會有此反應)、腹瀉和嘔吐(少於15%的病人會有這兩種反應)；Exenatide治療的病人中約50%會產生抗體，雖然這些抗體不會影響藥效或引起其他臨床作用。最近又發現6例服用Byetta後發生出血或壞死性胰腺炎症狀的情況。

CJC-1131是ConjuChem Biotechnologies Inc開發的一種肽酶抑制型GLP-1類似物，將GLP-1序列中2位的Ala替換成了D-Ala，用以增強抵抗DPP-IV酶解的能力，其結構中包含一個具有反應活性的鏈結劑(reactive linker)以便於其經由共價(非可逆)方式結合到血清白蛋白上(Kim JG,Baggio LL,Bridon DP,et al. Development and characterization of a glucagon-like peptide-1 albumin conjugate：the ability to activate the glucagon-like peptide 1 receptor in vivo. Diabetes. 2003,52(3)：751-759)，產生的GLP-1-血清白蛋白複合物保留了GLP-1的活性，同時增加了對DPP-IV酶解的穩定性，延長了體內作用時間，其血漿清除半衰期約20天。

已經進行的一項研究發現，CJC-1131-血清白蛋白複合物與用人類重組胰腺GLP-1受體轉染的中國倉鼠卵巢細胞結合時Ki約為12nM(GLP-1的K_i 為5.2nM)；同時該複合物活化cAMP的EC₅₀ 為11至13nM，EC₅₀ 與GLP-1相似。現有文獻表明，該結合分子可以降低血糖正常和高血糖小鼠餐後血糖濃度，而且試驗表明CJC-1131的這一活性作用於GLP-1某一功能性受體上，同時在小鼠中CJC-1131還具有減緩胃排空和抑制食物攝入等作用。

CJC-1131已經完成了部分Ⅱ期臨床試驗。2005年9月，ConjuChem對已有的試驗結果分析後認為CJC-1131可能不適合慢性劑量策略(chronic dosing regimens)，因而暫停了CJC-1131的臨床研究。目前CJC-1131臨床試驗仍未重新啟動。

Albugon(albumin-GLP-1)是由葛蘭素史克在Human Genome Sciences Inc授權下開發的一種長效T2DM治療藥物，它是GLP-1(帶增加對DDP-IV抗性的突變)和白蛋白的融合體。它在猴子體內的半衰期為3天。其基本的研發思路是將重組GLP-1與血清白蛋白偶聯後形成一個複合物，這樣便顯著增加了其體內半衰期。服用Albugon後有效降低了小鼠血糖濃度、增加了胰島素分泌、減緩了胃排空和減少食物攝入等(Baggio LL,Huang Q,Brown TJ,et al. A Recombinant Human Glucagon-Like Peptide(GLP)-1-Albumin Protein(Albugon)Mimics Peptidergic Activation of GLP-1Receptor-Dependent Pathways Coupled With Satiety,Gastrointestinal Motility,and Glucose Homeostasis. Diabetes. 2004,53(9)：2492-2500)。目前Albugon正在進行III期臨床試驗。

WO9808871公開了一種在GLP-1(7-37)的基礎上進行脂肪酸修飾的GLP-1衍生物，使得GLP-1在體內的半衰期得到大大增強。WO9943705公開了一種在GLP-1的N端進行化學修飾的衍生物，但是有文獻報導在N端的胺基酸進行修飾會造成整個GLP-1衍生物的活性大大降低(J. Med. Chem. 2000,43,1664 1669)。另外CN200680006362、CN200680006474、WO2007113205、CN200480004658、CN200810152147、WO2006097538等專利也公開了一系列經化學修飾或胺基酸替換得到的GLP-1類似物或其衍生物，其中最具有代表性的是諾和諾德公司開發的liraglutide，已經完成了III期臨床。Liraglutide是一種GLP-1衍生物，其結構中含有序列與人源GLP-1具有97%同源性的GLP-1類似物，該類似物與棕櫚酸共價連接構成了Liraglutide^[ ，Liraglutide結構中的棕櫚酸以非共價形式連接到血清白蛋白上，這一結構特徵決定了它會緩慢的從注射位點釋放，在不改變其GLP-1活性基礎上延長了體內循環半衰期；同時結構中的棕櫚酸會形成一定空間位阻，從而防止DPP-IV的降解作用，減少了腎臟清除作用。由於具有以上特性，Liraglutide在經由皮下注射之後在人體內的半衰期約10至14h，理論上可以一天給藥一次，每天劑量為0.6至1.8mg。2009年4月23日，諾和諾德宣佈EMEA下屬的人用藥物委員會(CHMP,Committee for Medicinal products for Human Use)對Liraglutide評價積極，並且建議批准其上市。諾和諾德期待歐盟委員會可以在兩個月以內批准其上市申請。

本發明的目的在於提供一種活性更高、體內半衰期更長的GLP-1類似物的衍生物，本發明提供的GLP-1類似物的衍生物具有人類GLP-1的功能，並且與人類GLP-1相比有著較長的體內半衰期。

本發明的另一目的在於提供一種含上述GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽的醫藥組成物，用於治療胰島素依賴性糖尿病、非胰島素依賴性糖尿病和肥胖病。

本發明的目的是經由以下技術方案來達到的。本發明提供一種含有胺基酸序列通式為(I)的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，

X₁ -X₂ -Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X₁₀ -Ser-X₁₂ -X₁₃ -X₁₄ -Glu-X₁₆ -X₁₇ -Ala-X₁₉ -X₂₀ -X₂₁ -Phe-Ile-X₂₄ -Trp-Leu-X₂₇ -X₂₈ -X₂₉ -X₃₀ -X₃₁ -X₃₂ -X₃₃ -X₃₄ -X₃₅ -X₃₆ -X₃₇ -X3₈ -X39-Lys(I)

其中該GLP-1類似物的衍生物具有一個結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基，R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數，X₁ 、X₂ 、X₁₀ 、X₁₂ 、X₁₃ 、X₁₄ 、X₁₆ 、X₁₇ 、X₁₉ 、X₂₀ 、X₂₁ 、X₂₄ 、X₂₇ 、X₂₈ 、X₂₉ 、X₃₀ 、X₃₁ 、X₃₂ 、X₃₃ 、X₃₄ 、X₃₅ 、X₃₆ 、X₃₇ 、X₃₈ 、X₃₉ 各自獨立的選自任意天然的胺基酸或非天然胺基酸或由其組成的肽段。

該GLP-1類似物是指以人類GLP-1(7-37)肽為母體，包括GLP-1(7-36)醯胺和GLP-1(7-37)，進行部分胺基酸的替換或在C端的延伸得到新的GLP-1肽，該GLP-1肽具備人類GLP-1的功能。

該衍生物是指利用親脂性取代基對GLP-1類似物的胺基酸殘基進行化學修飾，典型的修飾方式為形成醯胺或酯，較佳的修飾方式為形成醯胺。

本發明的一個較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物的胺基酸殘基的胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數。

本發明的另一較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物C端Lys的ε胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數。

本發明的另一較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物C端Lys的α胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數，較佳為14。

本發明的另一較佳的實施方案是GLP-1類似物的胺基酸序列中X₁ 選自L-His、D-His；X₂ 選自Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Lys、Aib；X₁₀ 選自Val、Leu；X₁₂ 選自Ser、Lys、Arg；X₁₃ 選自Tyr、Gln；X₁₄ 選自Leu、Met；X₁₆ 選自Gly、Glu、Aib；X₁₇ 選自Gln、Glu、Lys、Arg；X₁₉ 選自Ala、Val；X₂₀ 選自Lys、Glu、Arg；X₂₁ 選自Glu、Leu；X₂₄ 選自Val、Lys；X₂₇ 選自Val、Lys；X₂₈ 選自Lys、Glu、Asn、Arg；X₂₉ 選自Gly、Aib；X₃₀ 選自Arg、Gly、Lys；X₃₁ 選自Gly、Ala、Glu、Pro、Lys；X₃₂ 選自Lys、Ser；X₃₃ 選自Lys、Ser；X₃₄ 選自Gly、Ala、Sar；X₃₅ 選自Gly、Ala、Sar；X₃₆ 選自Pro、Gly；X₃₇ 選自Pro、Gly；X₃₈ 選自Pro、Gly；X₃₉ 選自Ser、Tyr。

更進一步的較佳的實施方案是GLP-1類似物的胺基酸序列選自SEQ ID NO 1至120。

本發明的另一較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基與選自序列如SEQ ID No：1至120所示的GLP-1類似物的胺基酸殘基的胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數。

更進一步較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基與選自序列如SEQ ID No：1至120所示的GLP-1類似物的C端Lys的ε胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數。

更進一步較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基與選自序列如SEQ ID No：1至120所示的GLP-1類似物的C端Lys的α胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數，n較佳為8、10、12、14、16、18、20或22，n進一步較佳為14。

本發明的另一較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基與選自序列如SEQ ID No：1至20所示的GLP-1類似物的C端Lys的α胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數，n較佳為8、10、12、14、16、18、20或22，n進一步較佳為14。

本發明的另一較佳的實施方案是結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基與選自序列如SEQ ID No：1至8所示的GLP-1類似物的C端Lys的α胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -，n為14。

本發明提供的GLP-1類似物的衍生物屬於兩性化合物，所屬領域技術人員經由公知技術可使用酸性或鹼性化合物與之反應成鹽，通常採用的形成酸加成鹽的酸為：

鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸；鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、三氟乙酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、鹽酸鹽、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、苯乙酸鹽、苯丙酸鹽、苯丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、甘醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等，較佳為三氟乙酸鹽。鹼性物質也可以和GLP-1類似物的衍生物成鹽，這些鹼性物質包括銨，鹼金屬或鹼土金屬的氫氧化物，以及碳酸鹽、碳酸氫鹽，典型的有氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、碳酸鈉、碳酸鉀等。

根據本發明的含有GLP-1衍生物的醫藥組成物可以經由胃腸外給藥的方式用於治療需要這種治療的病人。胃腸外給藥途徑可選擇皮下注射、肌肉注射或靜脈注射。本發明的GLP-1衍生物還可以選擇透皮途徑給藥，如經貼劑頭皮給藥，可選擇離子透入貼劑；或經透黏膜途徑給藥。

本發明提供的GLP-1衍生物的醫藥組成物可以使用製藥工業常規的技術製備，這些技術包括適當的溶解和混合各組分以得到所需的最終組成物。比如將GLP-1衍生物溶解於一定量的水中，其中水的量稍小於所製備的組成物的最終體積。按需要加入等滲劑、防腐劑、界面活性劑和緩沖劑，等滲劑例如氯化鈉、甘露醇、甘油、丙二醇、糖或糖醇。防腐劑例如苯酚、鄰甲酚、對甲酚、間甲酚、甲基對羥基苯甲酸酯、苄醇。適宜的緩衝劑如乙酸鈉、碳酸鈉、甘胺酸、組胺酸、賴胺酸、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸鈉。界面活性劑如泊絡沙姆、泊絡沙姆-188、泊絡沙姆-407、吐溫-80、吐溫-20。並在需要時用酸如鹽酸、或鹼如氫氧化鈉水溶液調節溶液的pH值，最後用水調節溶液體積得到所需的組分濃度。除上述成分外，本發明提供的醫藥組成物還包括足夠量的鹼性胺基酸或具有相同作用的鹼性試劑用以減少組成物在貯存過程中形成的聚集體，比如賴胺酸、組胺酸、精胺酸、咪唑。

本發明提供的GLP-1類似物的衍生物採用手工合成的方法，樹脂為HMPA-AM resin，所用的胺基酸衍生物的α胺基由Fmoc(芴甲醯羰基)保護，半胱胺酸側鏈巰基、穀胺醯胺側鏈胺基、組胺酸側鏈咪唑基由Trt(三苯甲基)保護、精胺酸側鏈胍基由Pbf(2,2,4,6,7-五甲基二氫化苯並呋喃-5-磺醯基)保護，色胺酸側鏈吲哚基、賴胺酸側鏈胺基由Boc(叔丁氧羰基)保護，蘇胺酸側鏈羥基、酪胺酸側鏈苯酚基、絲胺酸側鏈羥基由tBu(叔丁基)保護。將所要合成之促紅細胞生成素模擬肽衍生物單體肽肽鏈的C末端胺基酸的羧基以共價鍵的結構與高分子的不溶性樹脂(rink amind resin)相連，然後以此結合在固相載體上的胺基酸作為胺基組份經過20%六氫吡啶/DMF溶液脫去胺基保護基，然後和過量的胺基酸衍生物反應，接長肽鏈。重複(縮合→洗滌→去保護→洗滌→下一輪縮合)操作，達到所要合成的肽鏈長度，最後用三氟乙酸：水：乙二硫醇：三異丙基矽烷=92.5：2.5：2.5：2.5混合溶液將肽鏈從樹脂上裂解下來，經乙醚沉降得到GLP-1類似物的衍生物粗品，單體肽粗品使用C18反相製備柱分離純化，即得所要的GLP-1類似物的衍生物。其中縮合和去保護反應步驟的中間控制採取的是茚三酮檢測的方法，即當樹脂肽鏈上有游離的胺基時，經茚三酮試劑檢測會顯藍色，沒有游離胺基時不顯色(茚三酮試劑本身為黃色)。因此在進行縮合反應完畢後，通過茚三酮檢測，如果顯黃色(茚三酮試劑本身的顏色)，則說明本步驟偶合完畢可以進行下一個胺基酸的偶合前的脫保護操作，如果顯藍色，則證明肽鏈上還有些游離胺基，需進一步的重複偶合或改變現有的縮合劑直至樹脂肽經茚三酮檢測為黃色。

為了更詳細地說明本發明，給出下列實例。但本發明的範圍並非限定於此。

實施例一　HS-20001的固相合成方法 1、Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

(1)HMP-AM樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的HMP-AM樹脂(0.6mmol/g) 50g(30mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液，加入DMF洗滌1min，重複洗滌2次。

(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

Fmoc-Lys(Mtt)-OH與HMP-AM樹脂的偶合

用500mL DCM洗滌樹脂1次，重複2次，稱取Fmoc-Lys(Mtt)-OH 56.2g(90mmol)和DIC11.4g(90mmol)，加入1L DCM溶解，加入到溶脹後的HMP-AM樹脂中，之後加入DMAP 366mg(3mmol)，反應24h；

樹脂的洗滌

反應結束後用DMF、IPA交替洗滌樹脂肽兩次，DMF洗滌3次；

羥基的封閉

稱取乙酸酐15.3g(150mmol)和DIEA 19.4g(150mmol)溶解於1L DMF中，加入到樹脂中，反應10min；

樹脂的洗滌

依次用1 L 50% MeOH/DMF、50% DCM/DMF洗滌樹脂兩次，DCM洗滌樹脂3次，無水乙醇洗滌3次，減壓乾燥，得Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂。

(3)Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂載量測定

精確稱量5至10mg樹脂定容在1mL 20%六氫吡啶/DMF中，攪勻20min後，移液槍取出上清液50uL溶解在2.5mL DMF中；空白樣品：移液槍取出50uL 20%六氫吡啶/DMF溶解在2.5mL DMF中；取代度計算公式如下：

Sub=(A×51)/(7.8×m)

其中，A為301nm紫外吸光值；m為樹脂品質，單位mg。

2、固相合成樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液。

3、Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除4-甲基三苯甲基(Mtt)保護基

用200mL DCM洗滌樹脂，重複1次，加入1200mL 1% TFA/DCM(TFA約8倍過量)脫除Mtt保護基，反應時間1h，用200mL 5% N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/DMF和DMF交叉洗滌3次，DMF洗滌3次。

4、棕櫚酸的縮合

稱量棕櫚酸和3-(二乙氧基磷醯氧基)-1,2,3-苯並三嗪-4-酮(DEPBT)各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA於室溫攪拌反應3min，將上述溶液加入到樹脂中，37度水浴下通入N₂ 反應2h。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、異丙醇(IPA)和DMF洗滌樹脂。

5、Fmoc-Lys(N-ε-棕櫚酸)-HMPA-AM樹脂脫除9-芴甲氧羰基(Fmoc)保護基

向裝有Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂的鼓泡瓶中加入200mL 20%六氫吡啶/DMF溶液，反應5min後抽出，再加入200mL 20%六氫吡啶/DMF溶液室溫反應20min。反應結束後用DMF 200mL洗滌樹脂4次。

6、HS-20001肽鏈部分的固相合成

①縮合Fmoc-Ser(tBu)-OH

稱量50mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH，加入125mL 0.4M 1-羥基苯並三氮唑(HOBt)/DMF溶解，再加入125mL 0.4M N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)/DCM於室溫活化反應10min；將上述溶液加入到樹脂中，於室溫通入N₂ 反應，採用茚三酮檢測中控反應進行程度。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂。

②肽鏈的延長

按照HS-20001肽鏈部分(SEQ ID NO：1)從胺基端(N-端)到羧基端(C-端)的順序(His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Nle-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Gln-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys)，胺基酸和縮合試劑的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保護胺基酸分別是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重複縮合和脫保護2步反應，合成HS-20001樹脂肽。

HS-20001樹脂肽的後處理

將所得到的HS-20001樹脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂，用無水乙醚洗滌2次後真空乾燥，得HS-20001樹脂肽。

HS-20001粗品肽的製備

取乾燥後的HS-20001樹脂肽，加入新鮮配製的10mL/(g樹脂肽)的三氟乙酸(TFA)：三異丙基矽烷(TIS)：水=95：2.5：2.5(體積比)的裂解液，於室溫反應4h。反應結束後過濾，用TFA洗滌樹脂2次，收集併合並濾液，旋轉蒸發至原體積的1/3，攪拌下加入到大量冰的無水乙醚析出HS-20001，離心後真空乾燥得白色HS-20001粗品。

HS-20001的逆相液相色譜製備

取HS-20001粗品10g溶於一定量水中，後經0.45μm膜過濾後用逆相高效液相色譜(RP-HPLC)進行分離，流動相為A 0.1%TFA/H₂ O，B 0.1%TFA/乙腈，其中，色譜柱為Denali C-18柱(粒徑8.3μm，5×30cm)，柱溫45度，檢測波長220nm，流速120mL/min。收集產物峰，減壓濃縮除去大部分乙腈後凍乾得HS-20001成品2.25g，純度98.5%，收率22.5%。

實施例二　HS-20002的固相合成方法 1、Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

參見實施例一。

2、固相合成樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL DMF溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液。

3、Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除Mtt保護基

用200mL DCM洗滌樹脂，重複一次，加入1200mL 1% TFA/DCM(TFA約8倍過量)脫除Mtt保護基，反應時間1h，用200mL 5% DIEA/DMF和DMF交叉洗滌3次，DMF洗滌3次。

4、棕櫚酸的縮合

稱量棕櫚酸和DEPBT各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA於室溫攪拌反應3min，將上述溶液加入到樹脂中，37度水浴下通入N₂ 反應2h。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂。

5、Fmoc-Lys(N-ε-棕櫚酸)-HMPA-AM樹脂脫除Fmoc保護基

6、HS-20002肽鏈部分的固相合成

縮合Fmoc-Ser(tBu)-OH

稱量50mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH，加入125mL 0.4M HOBt/DMF溶解，再加入125mL 0.4M DIC/DCM室溫下活化反應10min；將上述溶液加入到樹脂中，於室溫通入N₂ 反應，採用茚三酮檢測中控反應進行程度。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂。

肽鏈的延長

按照HS-20002肽鏈部分從胺基端(N-端)到羧基端(C-端)的順序(His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-ASp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，胺基酸和縮合試劑的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保護胺基酸分別是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重複縮合和脫保護兩步反應，合成HS-20002樹脂肽。

HS-20002樹脂肽的後處理

將所得到的HS-20002樹脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂，用無水乙醚洗滌兩次後真空乾燥，得HS-20002樹脂肽。

HS-20002粗品肽的製備

取乾燥後的HS-20002樹脂肽，加入新鮮配製的10mL/(g樹脂肽)的TFA：TIS：水：1,2-乙二硫醇(EDT)=94：1：2.5：2.5(體積比)的裂解液，於室溫反應4h。反應結束後過濾，用TFA洗滌樹脂2次，收集併合並濾液，旋轉蒸發至原體積的1/3，攪拌下加入到大量冰的無水乙醚析出HS-20002，離心後真空乾燥得白色HS-20002粗品。

HS-20002的逆相液相色譜製備

取HS-20002粗品10g溶於一定量的水中，後經0.45μm膜過濾後用逆相高效液相色譜(RP-HPLC)進行分離，流動相為A 0.1%TFA/H₂ O，B 0.1%TFA/乙腈，其中，色譜柱為Denali C-18柱(粒徑8.3μm，5×30cm)，柱溫45度，檢測波長220nm，流速120mL/min。收集產物峰，減壓濃縮除去大部分乙腈後凍乾得HS-20002成品2.1g，純度98.%，收率20.5%。

實施例三　HS-20003的固相合成方法 1、Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

參見實施例一。

2、固相合成樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mLDMF溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液；

3、Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除Fmoc保護基

4、棕櫚酸的縮合

稱量棕櫚酸和DEPBT各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA於室溫攪拌反應3min，將上述溶液加入到樹脂中，於37度水浴中通入N₂ 反應2h。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂。

5、棕櫚酸-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除Mtt保護基

用200mL DCM洗滌樹脂，重複一次，加入1200mL 1%TFA/DCM(TFA約8倍過量)脫除Mtt保護基，反應時間1h，用200mL 5%DIEA/DMF和DMF交叉洗滌3次，DMF洗滌3次。

6、HS-20003肽鏈部分的固相合成

縮合Fmoc-Ser(tBu)-OH

稱量Fmoc-Ser(tBu)-OH和DEPBT各50mmol，加入一定量DMF溶解，再加入100mmol DIEA於室溫活化3min，將上述溶液加入到樹脂中，於室溫通入N₂ 反應，採用茚三酮檢測中控反應進行程度。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂。

肽鏈的延長

按照HS-20003肽鏈部分從胺基端(N-端)到羧基端(C-端)的順序(His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，胺基酸和縮合試劑的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保護胺基酸分別是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重複縮合和脫保護兩步反應，合成HS-20003樹脂肽。

HS-20003樹脂肽的後處理

將所得到的HS-20003樹脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂，用無水乙醚洗滌兩次後真空乾燥，得HS-20003樹脂肽。

HS-20003粗品肽的製備

取乾燥後的HS-20003樹脂肽，加入新鮮配製的10mL/(g樹脂肽)的TFA：TIS：水=95：2.5：2.5(體積比)的裂解液，於室溫反應4h。反應結束後過濾，用TFA洗滌樹脂2次，收集併合並濾液，旋轉蒸發至原體積的1/3，攪拌下加入到大量冰的無水乙醚析出HS-20003，離心後真空乾燥得白色HS-20003粗品。

HS-20003的逆相液相色譜製備

取HS-20003粗品10g溶於一定量的20%乙酸/水中攪拌不少於4h，後經0.45μm膜過濾後用逆相高效液相色譜(RP-HPLC)進行分離，流動相為A 0.1%TFA/H₂ O，B 0.1%TFA/乙腈，其中，色譜柱為Denali C-18柱(粒徑8.3μm，5×30cm)，柱溫45度，檢測波長220nm，流速120mL/min。收集產物峰，減壓濃縮除去大部分乙腈後凍乾得HS-20003成品2.5g，純度98.5%，收率25%。

實施例四　HS-20004的固相合成方法 1、Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

參見實施例一。

2、固相合成樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL DMF溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液；

3、Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除Fmoc保護基

4、棕櫚酸的縮合

5、棕櫚酸-Lys(Mtt)-HMPA-AM樹脂脫除Mtt保護基

6、HS-20004肽鏈部分的固相合成

縮合Fmoc-Ser(tBu)-OH

肽鏈的延長

按照HS-20004肽鏈部分從胺基端(N-端)到羧基端(C-端)的順序(His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，胺基酸和縮合試劑的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保護胺基酸分別是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Aib-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重複縮合和脫保護兩步反應，合成HS-20004樹脂肽。

HS-20004樹脂肽的後處理

將所得到的HS-20004樹脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂，用無水乙醚洗滌兩次後真空乾燥，得HS-20004樹脂肽。

HS-20004粗品肽的製備

取乾燥後的HS-20004樹脂肽，加入新鮮配製的10mL/(g樹脂肽)的TFA：TIS：水=95：2.5：2.5(體積比)的裂解液，於室溫反應4h。反應結束後過濾，用TFA洗滌樹脂2次，收集併合並濾液，旋轉蒸發至原體積的1/3，攪拌下加入到大量冰的無水乙醚析出HS-20004，離心後真空乾燥得白色HS-20004粗品。

HS-20004的逆相液相色譜製備

取HS-20004粗品10g溶於一定量的20%乙酸/水中攪拌不少於4h，後經0.45μm膜過濾後用逆相高效液相色譜(RP-HPLC)進行分離，流動相為A 0.1%TFA/H₂ O，B 0.1%TFA/乙腈，梯度如下：

其中，色譜柱為Denali C-18柱(粒徑8.3μm，5×30cm)，柱溫45度，檢測波長220nm，流速120mL/min。收集產物峰，減壓濃縮除去大部分乙腈後凍乾得HS-20004成品2.25g，純度98.5%，收率22.5%。

實施例五　HS-20005的固相合成

製備方法同實施例四，不同之處是將胺基酸序列變換為SEQ ID NO：5，得HS-20005成品2.5g，純度98.5%，收率25%。

實施例六　HS-20006的固相合成

製備方法同實施例四，不同之處是將胺基酸序列變換為SEQ ID NO：6，得HS-20006成品2.25g，純度98.5%，收率22.5%。

實施例七　HS-20007的固相合成

製備方法同實施例四，不同之處是將胺基酸序列變換為SEQ ID NO：7，得HS-20007成品2.1g，純度98%，收率20.5%。

實施例八　HS-20008的固相合成

製備方法同實施例四，不同之處是將胺基酸序列變換為SEQ ID NO：8，得HS-20008成品2.5g，純度98.5%，收率25%。

參考例　Liraglutide的固相合成 1、Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

(1)HMP-AM樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的HMP-AM樹脂(0.6mmol/g)50g(30mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液，加入DMF洗滌1min，重複洗滌2次。

(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂的製備

Fmoc-Lys(Mtt)-OH與HMP-AM樹脂的偶合

樹脂的洗滌

反應結束後用DMF、IPA交替洗滌樹脂肽2次，DMF洗滌3次；

羥基的封閉

樹脂的洗滌

依次用1 L 50%MeOH/DMF、50%DCM/DMF洗滌樹脂2次，DCM洗滌樹脂3次，無水乙醇洗滌3次，減壓乾燥，得Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂。

(3)Fmoc-Lys(Mtt)-HMP-AM樹脂載量測定

精確稱量5~10 mg樹脂定容在1mL 20%六氫吡啶/DMF中，攪勻20min後，移液槍取出上清液50uL溶解在2.5mL DMF中；空白樣品：移液槍取出50uL 20%六氫吡啶/DMF溶解在2.5mL DMF中；取代度計算公式如下：

Sub=(A×51)/(7.8×m)

其中，A為301nm紫外吸光值；m為樹脂品質，單位mg。

2、固相合成樹脂的乾燥及溶脹

稱量真空乾燥24h的Fmoc-Gly-HMP-AM樹脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置於2L鼓泡瓶中，加入500mL N,N-二甲基甲醯胺(DMF)溶脹樹脂30min，抽掉DMF溶液。

3、Liraglutide肽鏈部分的固相合成

縮合Fmoc-Arg(Pbf)-OH

稱量50mmol Fmoc-Arg(Pbf)-OH，加入125mL 0.4M 1-羥基苯並三氮唑(HOBt)/DMF溶解，再加入125mL 0.4M N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)/DCM於室溫活化反應10min；將上述溶液加入到樹脂中，於室溫通入N₂ 反應，採用茚三酮檢測中控反應進行程度。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂；

肽鏈的延長

按照Liraglutide肽鏈部分從羧基端(C-端)到胺基端(N-端)的順序(His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly)，胺基酸和縮合試劑的用量和Fmoc-Arg(Pbf)-OH相同，保護胺基酸分別是Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Mtt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH，重複縮合和脫保護兩步反應，合成Liraglutide前體肽；

Liraglutide前體肽中Mtt保護基的脫除

用200mL DCM洗滌樹脂，重複一次，加入1200mL 1%TFA/DCM(TFA約8倍過量)脫除Mtt保護基，反應時間1h，重複1次，用200mL 5%N,N-二異丙基乙胺(DIEA)/DMF和DMF交叉洗滌3次，DMF洗滌3次；

棕櫚酸修飾Liraglutide前體肽

稱量50mmol Fmoc-Glu-OtBu，加入125mL 0.4M 1-羥基苯並三氮唑(HOBt)/DMF溶解，再加入125mL 0.4M N,N’-二異丙基碳二亞胺(DIC)/DCM於室溫活化反應10min；將上述溶液加入到樹脂中，於室溫通入N₂ 反應，採用茚三酮檢測中控反應進行程度。反應結束後抽掉反應液，依次用DMF、IPA和DMF洗滌樹脂；加入1 L 20%PIP/DMF脫除Fmoc保護基5min，抽乾，再加入1 L 20% PIP/DMF脫除Fmoc保護基20min，抽乾，用DMF洗滌樹脂4次；稱量棕櫚酸和3-(二乙氧基磷醯氧基)-1,2,3-苯並三嗪-4-酮(DEPBT)各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA於室溫攪拌反應3min，將上述溶液加入到樹脂中，於37度水浴中通入N₂ 反應2h。反應結束後抽掉反應液。

4、Liraglutide樹脂肽的後處理

將(2)所得到的Liraglutide樹脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗滌，用DCM洗滌3次、無水乙醚洗滌2次後真空乾燥，得Liraglutide樹脂肽。

5、Liraglutide粗品肽的製備

取乾燥後的Liraglutide樹脂肽，加入新鮮配製的10mL/(g樹脂肽)的三氟乙酸(TFA)：三異丙基矽烷(TIS)：水=95：2.5：2.5(體積比)的裂解液，於室溫反應4h。反應結束後過濾，用TFA洗滌樹脂2次，收集併合並濾液，旋轉蒸發至原體積的1/3，攪拌下加入到大量冰無水乙醚析出Liraglutide，離心後真空乾燥得白色Liraglutide粗品。

6、Liraglutide的逆相液相色譜製備

取Liraglutide粗品10g溶於一定量NH₄ HCO₃ 溶液中，後經0.45μm膜過濾後用逆相高效液相色譜(RP-HPLC)進行分離，流動相為A 0.1%TFA/H₂ O，B 0.1%TFA/乙腈，其中，色譜柱為Denali C-18柱(粒徑8.3μm，5×30cm)，柱溫45度，檢測波長220nm，流速120mL/min。收集產物峰，減壓濃縮除去大部分乙腈後凍乾得Liraglutide成品1.25g，純度98%，收率12.5%。

試驗例一： 檢測化合物對類升糖素肽1受體(GLP1R)的激動活性

GLP1R是與Gs蛋白偶聯的受體，當受體與激動劑結合時會導致細胞內cAMP濃度升高。本實驗在HEK293細胞中共轉染GLP1R和cAMP反應元件調控的螢光素酶報告基因質體，當化合物與受體結合並啟動受體時，螢光素酶表達就會增加。通過對螢光素酶活性的檢測即可獲知化合物對GLP1R的激動狀況。

實驗步驟：

1.　將穩定轉染GLP1R和pCRE-Luc質體的HEK293細胞以4萬個/孔/100μl的密度種入96孔板，在37℃培育24h。

2.　加入一定濃度梯度的化合物(每個濃度為3重複孔)或陽性藥劑，在37℃培育5h。溶劑DMSO為陰性對照。

3.　每孔取出50μl培養基，加入50μl螢光素酶基質，振盪10min。

4.　取出80μl反應液加入到白色的96孔板中，在Invision酶標儀上檢測。

實驗結果：與陽性化合物利拉魯肽(liraglutide)相比，本發明化合物HS-20001與其活性相當，而HS-20002至20008顯示了更好的激動活性。

試驗例二、 體內活性測試

將2型糖尿病db/db小鼠根據隨機血糖和體重分為6組，每組8隻，分別皮下單次注射生理鹽水、3或10μg/kg HS系列新化合物(利拉魯肽、20001、20002、20003、20004、2005、2006、2007、2008)。於給藥後不同時間測定小鼠隨機血糖。

受試動物為db/db小鼠，引種於美國Jackson公司，由中國科學院上海藥物研究所保種和繁殖，合格證號：SCXK(滬)2008-0017，體重：35-50g，性別：雄性85隻、雌性86隻，經SPF級動物房飼養，溫度：22至24℃，濕度：45至80%，光照：150至300Lx，12h晝夜交替。

受試藥物為HS-20001、HS-20002、HS-20003、HS-20004、HS-20005、HS-20006、HS-20007、HS-20008、利拉魯肽(liraglutide，諾和諾德公司開發，作為陽性對照)。

配製方法： 取2mg/瓶的化合物1瓶，用雙重蒸餾水完全溶解，配成2mg/ml的無色透明溶液，然後用生理鹽水(氯化鈉注射液，安徽雙鶴藥業有限責任公司，批號：080728 6C)稀釋至0.6、2μg/ml。血糖測定使用羅氏優越型血糖儀ACCU-Advantage。

劑量設置與組別

試驗1組：

空白對照組：生理鹽水

利拉魯肽組：3μg/kg

HS-20001組：3μg/kg

HS-20002組：3μg/kg

HS-20003組：3μg/kg

HS-20004組：3μg/kg

HS-20005組：3μg/kg

HS-20006組：3μg/kg

HS-20007組：3μg/kg

HS-20008組：3μg/kg

試驗2組：

空白對照組：生理鹽水

利拉魯肽組：10μg/kg

HS-20001組：10μg/kg

HS-20002組：10μg/kg

HS-20003組：10μg/kg

HS-20004組：10μg/kg

HS-20005組：10μg/kg

HS-20006組：10μg/kg

HS-20007組：10μg/kg

HS-20008組：10μg/kg

給藥途徑和容積： 單次皮下注射給藥，給藥容積為5ml/kg。

試驗方法

2型糖尿病db/db小鼠的篩選、分組和給藥

試驗1組：

171隻db/db小鼠(雄性85隻、雌性86隻)，斷奶後單籠飼養，以高脂飼料餵養。db/db小鼠滿7周齡後預測隨機和空腹血糖，挑選發病的80隻db/db小鼠，根據隨機血糖、空腹血糖和體重將小鼠分為10組。分別為模型對照組、利拉魯肽-3μg/kg、HS-20001-3μg/kg、HS-20002-3μg/kg、HS-20003-3μg/kg、HS-20004-3μg/kg、HS-20005-3μg/kg、HS-20006-3μg/kg、HS-20007-3μg/kg、HS-20008-3μg/kg組。

試驗2組：

db/db小鼠預測隨機血糖，挑選發病的80隻db/db小鼠，根據隨機血糖、和體重將小鼠分為10組。分別為模型對照組、利拉魯肽-10μg/kg、HS-20001-10μg/kg HS-20002-10μg/kg、HS-20003-10μg/kg、HS-20004-10μg/kg、HS-20005-10μg/kg、HS-20006-10μg/kg、HS-20007-10μg/kg、HS-20008-10μg/kg組。

每組小鼠8隻，雌雄各半。各組動物分別單次皮下注射給予受試物或溶劑對照，於給藥後1、2、4、8h及24h測定隨機血糖，並計算血糖下降率；

血糖下降率=(對照組血糖-給藥組血糖)/對照組血糖×100%。

試驗結果

試驗1：低劑量新化合物單次給藥對db/db小鼠隨機血糖的影響

結果見表2、3。db/db小鼠單次皮下注射3μg/kg HS-20002、20004、20005、20006、20007或20008後1h時，隨機血糖值比空白對照組明顯下降(P<0.05)，下降率分別為24.51%、15.00%、14.00%、14.25%、13.98%和13.90%；給藥後2h和4h時，隨機血糖值保持較低的濃度，與空白對照組相比，差異明顯(P<0.05)，至給藥後8h，隨機血糖與對照組無顯著差別。小鼠皮下注射3μg/kg HS-20003後1h，隨機血糖值比空白對照組明顯下降(P<0.05)，達17.33%，給藥2、4和8h時，隨機血糖與對照組無顯著差別。db/db小鼠單次皮下注射3μg/kg HS-20001後，隨機血糖值與空白對照組相比有所下降，但沒有顯著性差異。利拉魯肽組小鼠給藥後，隨機血糖值未見明顯下降。

試驗2：高劑量新化合物單次給藥對db/db小鼠隨機血糖的影響

結果見表4、5。db/db小鼠單次皮下注射10μg/kgHS-20002後1h時，隨機血糖值比空白對照組明顯下降(P<0.01)，給藥後2、4和8h時，隨機血糖值保持較低的濃度，其中給藥後4h最為明顯，其降幅達40.67%，與空白對照組相比，差異明顯(P<0.001)，至給藥後24h，隨機血糖與對照組相比，仍明顯較低。小鼠皮下注射10μg/kg HS-20003後1h，隨機血糖值比空白對照組明顯下降(P<0.01)，達23.62%，給藥2、4和8h時，隨機血糖仍保持在較低的濃度，至給藥後24h與對照組無顯著差別。db/db小鼠單次皮下注射10μg/kg HS-20001後2h時，隨機血糖值與空白對照組相比明顯下降，給藥後4和8h時血糖仍保持在較低的濃度，至給藥後24h，隨機血糖與空白對照組相比，沒有顯著性差異。HS-20004、20005、20006、20007、20008-10μg/kg組小鼠給藥後1h時隨機血糖即明顯下降，其降幅達36.20%，此後的2、4和8h時，血糖仍保持在較低的濃度，給藥後24h，隨機血糖與空白對照組相比，沒有顯著性差異。利拉魯肽組小鼠給藥後，隨機血糖值未見明顯下降。

試驗結論：

系列化合物單次皮下注射後可明顯降低db/db小鼠的隨機血糖，HS-20002、20003、20004、20005、20006、20007、20008在劑量為3μg/kg時即可表現出明顯的降低隨機血糖作用。其中HS-20002和20004表現出較好的降隨機血糖作用，單次皮下注射後的降血糖作用維持時間與劑量相關，3μg/kg的HS-20002和20004的降隨機血糖作用可維持4h以上，而劑量為10μg/kg時，HS-20001、20002、20003、20004、20005、20006、20007、20008的降隨機血糖作用均可維持8h以上。

<110> 江蘇豪森醫藥集團限公司

<120> GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽及其用途

<130> 890086CG

<160> 120

<170> PatentIn version 3.2

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<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

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<222>　(34)..(34)

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<222>　(34)..(34)

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<223>　Xaa代表Sar

<400>　81

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<222>　(34)..(34)

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<223>　Xaa代表Sar

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<222>　(34)..(34)

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<213>　人工序列

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<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

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<213>　人工序列

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<220>

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<222>　(34)..(34)

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<222>　(34)..(34)

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<213>　人工序列

<220>

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<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<400>　101

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　102

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<400>　103

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　104

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<213>　人工序列

<400>　105

<210>　106

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　106

<210>　107

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<400>　107

<210>　108

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　108

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<211>　39

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<213>　人工序列

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　110

<210>　111

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<400>　111

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(2)..(2)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　112

<210>　113

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<400>　113

<210>　114

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(2)..(2)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　114

<210>　115

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<400>　115

<210>　116

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(2)..(2)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　116

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<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<400>　117

<210>　118

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<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(2)..(2)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　118

<210>　119

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<400>　119

<210>　120

<211>　39

<212>　PRT

<213>　人工序列

<220>

<221>　miss_feature

<222>　(2)..(2)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(16)..(16)

<223>　Xaa代表Aib

<220>

<221>　misc_feature

<222>　(34)..(34)

<223>　Xaa代表Sar

<400>　120

Claims

一種GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，GLP-1類似物的序列選自：SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3-8，其特徵在於所述GLP-1類似物的衍生物具有一個結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基，R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數，結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物的胺基酸殘基的胺基是藉由醯胺鍵的方式連接。
如申請專利範圍第1項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物C端Lys的ε胺基通過醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8-25之間的整數。
如申請專利範圍第1項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於結構通式為R₁ (CH₂ )_n -CO-的親脂性取代基和GLP-1類似物C端Lys的α胺基藉由醯胺鍵的方式連接，其中R₁ 選自CH₃ -或者HOOC-，n為8至25之間的整數。
如申請專利範圍第3項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於R₁ 選自CH₃ -，n選自整數8、10、12、14、16、18、20或22。
如申請專利範圍第4項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於R₁ 選自CH₃ -，n選自整數14。
如申請專利範圍第3項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於R₁ 選自HOOC-，n選自整數14、16、18、20或22。
如申請專利範圍第6項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，其特徵在於R₁ 選自HOOC-，n選自整數14。
如申請專利範圍第5項所述的GLP-1類似物的衍生物及其醫藥用鹽，其特徵在於GLP-1類似物的序列選自SEQ ID NO：4。
一種醫藥組成物，包含：(1)治療量的申請專利範圍第1至8項中任一項所述的GLP-1類似物的衍生物或其醫藥用鹽，和(2)藥學可接受的賦形劑或藥物載體。
一種申請專利範圍第1至8項中任一項所述的GLP-1的類似物的衍生物或其醫藥用鹽或者申請專利範圍第9項所述的醫藥組成物的用途，其係用於製備治療非胰島素依賴性糖尿病、胰島素依賴性糖尿病或肥胖症的藥物。