MX2008016334A

MX2008016334A - Composicion de rebaudiosida a y metodo para purificar rebaudiosida a.

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Publication number: MX2008016334A
Application number: MX2008016334A
Authority: MX
Inventors: Indra Prakash; Grant E Dubois; George A King; Mani Upreti
Original assignee: Coca Cola Co
Priority date: 2006-06-19
Filing date: 2007-05-23
Publication date: 2009-01-16
Also published as: US20070292582A1; KR20090021386A; CA2655440A1; RU2438353C2; BRPI0713127A2; WO2007149672A2; AU2007261243B2; JP5536449B2; AR061516A1; EP2037761A2; EP2037761B1; NZ597210A; CL2007001753A1; RU2008149916A; KR101494374B1; TWI419651B; CA2655440C; US8791253B2; UY30388A1; AP2008004716A0

Abstract

Realizaciones ilustrativas de este invento abarcan un método para purificar rebaudiosida A sin refinar. En particular, este invento se refiere a un método para purificar composiciones de rebaudiosida A sin refinar que comprenden purezas desde alrededor de 40% a alrededor de 95% de rebaudiosida A para obtener un producto de rebaudiosida A substancialmente puro con un solo paso de cristalización. Se publican también formas polimórficas y amorfas resultantes de rebaudiosida A y métodos para preparar formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A desde composiciones de rebaudiosida A sin refinar y composiciones de rebaudiosida A substancialmente pura.

Description

COMPOSICION DE REBAUDIOSIDA A Y METODO PARA PURIFICAR REBAUDIOSIDA A MEMORIA DESCRIPTIVA CAMPO DEL INVENTO Este invento se refiere en general a formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A, a métodos para purificar la rebaudiosida A y métodos para preparar formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A. Más específicamente, este invento se refiere a formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A, y a métodos para la purificación o cristalización de rebaudiosida A con solventes orgánicos acuosos o con solventes orgánicos para obtener un producto de alto rendimiento y alta pureza. ANTECEDENTES DEL INVENTO La rebaudiosida A es un endulzante glicósido diterpenoide de alto poder que tiene la estructura química: La rebaudiosida A es aislada y extraída, junto con otros glicósidos de esteviol, de la planta Stevia rebaudiana (Bertoni) ("Stevia"), cultivada comercialmente en Japón, Singapur, Taiwán, Malasia, Corea del Sur, China, India, Brasil, Australia y Paraguay. Es un endulzante no-calórico alternativo con 5 propiedades funcionales y sensoriales superiores a las de muchos endulzantes de alta potencia. Las formas procesadas de Stevia pueden ser de 70 a 400 veces más potentes que el azúcar; sin embargo, Stevia tiene también un componente amargo. De los cuatro endulzantes glicósidos diterpenoides principales presentes en Stevia, rebaudiosida A ha sido identificada como la menos amarga y con el i o resabio menos persistente. Con frecuencia, el amargor se debe significativamente a las impurezas en los extractos. Rebaudiosida A está habitualmente disponible con una pureza de ..80%. Las principales impurezas comprenden esteviosida, esteviolbiosida, rebaudiosida B, rebaudiosida C, rebaudiosida D, dulcosida A, rebaudiosida F, y i 5 otros glicósidos de esteviol. Es muy difícil obtener una rebaudiosida A de alta pureza de recuperación intensa, porque la rebaudiosida A y las otras impurezas tienen solubilidades similares. Los esfuerzos reportados con anterioridad para purificar la rebaudiosida A de mezclas de rebaudiosida A y esteviosida, requieren de 2 numerosos pasos de purificación repetidos. La patente norteamericana N° 5.962.678 revela la recristalización de rebaudiosida A usando una solución de metanol anhidro para obtener una rebaudiosida A 80% pura. Repitiendo numerosas veces la recristalización con metanol anhidro, es posible aumentar la pureza de rebaudiosida A, a más de 95%. La publicación de la patente 25 norteamericana N° 2006/0083838 revela la purificación de rebaudiosida A mediante recristalización con un solvente que comprende etanol y entre 4 y 15% de agua. La solicitud de patente japonesa N° 55-23756 revela un método para purificar rebaudiosida A y esteviosida mediante cristalización de etanol acuoso (>70%) para obtener una rebaudiosida A 80% pura. La publicación de patente 5 norteamericana N° 2007/0082103 revela un método para purificar rebaudiosida A mediante recristalización desde etanol acuoso, aseverando que una recristalización en dos pasos desde rebaudiosida sin refinar (60%) da como resultado la formación de rebaudiosida A >98% pura con un rendimiento de 97%. Estos métodos de la especialidad anterior, sin embargo, no proporcionan una i o composición de rebaudiosida A substancialmente pura usando un paso de recristalización único. En consecuencia, se necesita un método sencillo, eficiente y económico para producir rebaudiosida A substancialmente pura. COMPENDIO DEL INVENTO i 5 Realizaciones ejemplares del invento tratan la necesidad identificada anteriormente, proporcionando una rebaudiosida A substancialmente pura, formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A, métodos para purificar rebaudiosida A, y métodos para preparar formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A. En una realización en particular, el método de purificación de 20 rebaudiosida A comprende una cristalización simple. En una realización, un método para purificar rebaudiosida A comprende combinar rebaudiosida A sin refinar y un solvente orgánico acuoso para formar una solución de rebaudiosida A, en que la solución orgánica acuosa comprende agua en una cantidad desde alrededor de 10% hasta 25% en peso, aproximadamente, y cristalizar desde la solución de rebaudiosida A sin refinar, en un solo paso, una rebaudiosida A substancialmente pura con una pureza superior a 95% en peso en una base seca. En otras realizaciones particulares, se proporcionan diferentes formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A y métodos para preparar diferentes formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A. Otros objetos, propiedades y ventajas del invento serán evidentes a partir de la descripción detallada, dibujos y reivindicaciones expuestos a continuación. A menos que se defina de otro modo, todos los términos científicos y abreviaturas usados aquí tienen el mismo significado que sería comprendido habitualmente por una persona con experiencia común en la especialidad. Si bien es posible usar métodos y composiciones similares o equivalentes a esos descritos aquí en la práctica de este invento, se describen métodos y composiciones apropiadas sin pretender que tales métodos y composiciones limiten el invento. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un gráfico que ilustra un método para purificar rebaudiosida A según una realización de este invento. La Figura 2 es un gráfico de la formación y conversión de formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A según una realización de este invento. La Figura 3 es una exploración por difracción de rayos X que compara cuatro formas polimórficas de rebaudiosida A, las formas 1 , 2, 3A y 3B, en un trazado de dispersión de intensidad versus el ángulo de dispersión 2T (página 3) según una realización de este invento. La Figura 4 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, que compara polimorfos de rebaudiosida A, Forma 1 y Forma 2, en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento. La Figura 5 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, que compara polimorfos de rebaudiosida A, Forma 3A y Forma 3B, en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento. La Figura 6 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, que compara polimorfos de rebaudiosida A, Formas 2, 3A y 3B, en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento La Figura 7 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, de un polimorfo de rebaudiosida A, Forma 1 en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento. La Figura 8 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, de un polimorfo de rebaudiosida A, Forma 2 en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento. La Figura 9 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, de un polimorfo de rebaudiosida A, Forma 3A en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento. La Figura 10 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, de un polimorfo de rebaudiosida A, Forma 3B en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 20 según una realización de este invento.

La Figura 1 1 es una exploración por difracción de rayos X en polvo, de Forma 4 amorfa de rebaudiosida A, en un trazado de dispersión de intensidad versus ángulo de dispersión 2T según una realización de este invento. DESCRIPCIÓN DETALLADA DEL INVENTO 5 La rebaudiosida A es un endulzante natural de alta potencia, disponible generalmente a un costo moderado con ^0% y >80% pureza sólo a costos elevados. Las muestras comerciales de rebaudiosida A tienen, con frecuencia un sabor amargo que se cree que se debe a impurezas. Por consiguiente, existe una necesidad de rebaudiosida A substancialmente pura y un i o método simple y económico para purificar rebaudiosida A, a fin de obtener una rebaudiosida A substancialmente pura, apropiada para usar como endulzante natural de alta potencia. En la forma usada aquí, el término "substancialmente" o "substancialmente pura" se refiere a una composición de rebaudiosida A que i 5 incluye por lo menos alrededor de 85% en peso seco de rebaudiosida A, en otra realización, por lo menos 90% en peso seco, en otra realización, desde alrededor de 95% hasta alrededor de 98% en peso seco, aproximadamente, y en otra realización más, desde alrededor de 99% hasta 100% en peso seco, aproximadamente. 20 Las realizaciones ejemplares de este invento satisfacen estas necesidades al proporcionar un método para purificar rebaudiosida A sin refinar a rebaudiosida A substancialmente pura, por cristalización de una rebaudiosida A sin refinar desde una solución orgánica acuosa que comprende agua en una cantidad desde alrededor de 10% hasta alrededor de 25% en peso y cristalizar en 25 por lo menos un paso una rebaudiosida A substancialmente pura. Otras realizaciones ejemplares de este invento abarcan una composición de una rebaudiosida A substancialmente pura y composiciones que comprenden uno, o más de un polimorfo(s) de rebaudiosida A. Otras realizaciones ejemplares de este invento abarcan una forma amorfa de rebaudiosida A y métodos para preparar formas amorfas de rebaudiosida A. En otra realización más, se proporciona un método para convertir una forma de polimorfo en otra forma de polimorfo o en una forma amorfa. A continuación se describen en detalle realizaciones ejemplares de este invento y son ilustradas en las Figuras 1 -1 1 . Método de Purificación de una Mezcla de Rebaudiosida A Hay productos de rebaudiosida A sin refinar, disponibles en el comercio, que comprenden rebaudiosida A en purezas desde alrededor de 40% hasta alrededor de 95% en peso, desde alrededor de 60% hasta alrededor de 85% en peso, o desde alrededor de 70% hasta alrededor de 85% en peso. Se prevee que la rebaudiosida A sin refinar, en su forma sin depurar tal como se extrae de plantas de Stevia, puede ser purificada por cristalización. Las impurezas principales, identificadas por HPLC, son esteviosida, rebaudiosida B, rebaudiosida C, y rebaudiosida D. Las impurezas de rebaudiosida D pueden ser eliminadas aumentando la cantidad de agua en un solvente de recristalización orgánico acuoso; sin embargo, un contenido excesivo de agua en el solvente de recristalización dará como resultado una menor recuperación de rebaudiosida A. La impureza de rebaudiosida B puede ser reducida significativamente formando una lechada con la rebaudiosida A sin refinar en un solvente orgánico o en una solución orgánica acuosa, o mediante el tratamiento de la solución de rebaudiosida A sin refinar con una resina de intercambio de aniones. En consecuencia, el método de purificación depende de las impurezas presentes en el material iniciador de rebaudiosida A sin retinar. En una realización ejemplar de un método para purificar rebaudiosida A 1 10, ilustrado en la Figura 1 , se puede combinar 1 14 rebaudiosida A 1 12 con una solución orgánica acuosa 1 16 para formar una solución de rebaudiosida A 1 18. La solución orgánica acuosa 1 16 comprende agua en una cantidad desde alrededor de 10% hasta alrededor de 25% en peso y, por lo menos, un solvente orgánico. Alternativamente, la solución orgánica acuosa 1 16 puede comprender agua en una cantidad desde alrededor de 15% hasta alrededor de 20% en peso y por lo menos un solvente orgánico. Solventes orgánico acuosos, en la forma usada aquí se refieren a mezclas de agua y por lo menos un solvente orgánico. Ejemplos no limitantes de solventes orgánicos incluyen alcohol, acetona, y acetonitrilo. Alcohol, como se usa aquí, se refiere, a cualquier grupo alquilo, alquenilo o alquinilo lineal, ramificado o cíclico, substituido o insubstituido, unido a, por lo menos, una porción hidroxilo. Ejemplos no limitantes de alcoholes incluyen etanol, metanol, isopropanol, 1 - propanol, 1 -butanol-2-butanol, ter-butanol e ¡sobutanol. En una realización ilustrativa, la solución orgánica acuosa 1 16 comprende una mezcla de agua y por lo menos un solvente orgánico. En otra realización ilustrativa, por lo menos un solvente orgánico comprende un alcohol, el alcohol comprende etanol, metanol, o mezclas suyas. En realizaciones ilustrativas en que el por lo menos un solvente orgánico comprende una mezcla de etanol y metanol, el etanol y metanol pueden ser combinados en el solvente orgánico con una proporción en peso que varía desde alrededor de 20 partes por una parte de etanol hasta alrededor de una parte de metanol. En otra realización ilustrativa, el etanol y metanol pueden ser combinados en el solvente orgánico acuoso en una proporción en peso que varía desde alrededor de 3 partes a 1 parte de etanol, hasta alrededor de 1 parte de metanol. En una realización ilustrativa, la solución de rebaudiosida A 118 5 comprende el solvente orgánico acuoso 1 16 y la rebaudiosida A sin retinar 1 2 en una relación en peso que varía desde alrededor de 10 hasta alrededor de 4 partes de solvente orgánico acuoso con alrededor de 1 parte de rebaudiosida A sin retinar. En otra realización ilustrativa, la solución de rebaudiosida A 118 comprende la solución orgánica acuosa 1 16 y la rebaudiosida A sin retinar 1 112 i o en una relación en peso que varía desde alrededor de 5 hasta 3 partes de solvente orgánico acuoso con alrededor de una parte de rebaudiosida A sin retinar. En una realización ilustrativa, el método 1 10 puede ser llevado a cabo a una temperatura aproximada a la temperatura ambiente. En otra i 5 realización, el método 1 10 comprende adicionalmente el paso de calentar 120 de la solución de rebaudiosida A 1 18. En una realización, el paso de calentar 120 de la solución de rebaudiosida A 1 18, comprende calentar la solución de rebaudiosida A hasta una temperatura que varía desde alrededor desde 20°C hasta alrededor de 70°C, desde alrededor de 20°C hasta alrededor de 60°C, desde alrededor de 20 20°c hasta alrededor de 40°C, o desde alrededor de 40°C hasta alrededor de 60°C, En otra realización, el paso de calentar 120 de la solución de rebaudiosida A 1 18 comprende calentar la solución de rebaudiosida A hasta una temperatura aproximada a la temperatura de reflujo. El paso de calentar 120 de la solución de rebaudiosida A 1 18 comprende calentar la solución de rebaudiosida A durante 25 aproximadamente 0,25 horas hasta alrededor de 8 horas. En otra realización ilustrativa, donde el método para purificar rebaudiosida A 1 10 comprende el paso de calentar 120 de la solución de rebaudiosida A 1 18, en que el método comprende adicionalmente el paso de enfriar 122 la solución de rebaudiosida A. En una realización, el paso de enfriar 122 la solución de rebaudiosida A, comprende enfriar la solución de rebaudiosida A hasta una temperatura dentro del margen de variación desde alrededor de 4°C hasta alrededor de 25°C. El paso de enfriar 122 la solución de rebaudiosida A 1 18 comprende enfriar la solución de rebaudiosida A durante aproximadamente 0,5 hasta alrededor de 24 horas. El método para purificar rebaudiosida A 1 10 comprende adicionalmente el paso de cristalizar 124 desde la solución de rebaudiosida A 1 18 en un paso único, una composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 que comprende rebaudiosida A en una cantidad superior a alrededor de 85% en peso en base seca, superior a 97% en peso en una base seca, superior a alrededor de 98% en una base seca, o superior a 99% en peso en una base seca. La solución de rebaudiosida A 1 18 durante el paso único de cristalización puede ser o no agitada. En una realización ilustrativa, el método 1 10 puede incluir además el paso opcional de sembrar 128 la solución de rebaudiosida A 8 a una temperatura apropiada, con cristales de rebaudiosida A substancialmente puros 130 suficientes para promover la cristalización de la rebaudiosida A para formar rebaudiosida A pura. Una cantidad de rebaudiosida A 130 suficiente para promover la cristalización de rebaudiosida A substancialmente pura 126 comprende una cantidad de rebaudiosida A desde alrededor de 0,0001 % hasta alrededor de 1 % en peso de la rebaudiosida A presente en la solución. En otra realización, una cantidad de rebaudiosida A 130 suficiente para promover la cristalización de la rebaudiosida A para formar una composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126, comprende una cantidad de rebaudiosida A desde alrededor de 0,01 % hasta 1 % en peso. Una temperatura apropiada para el paso de sembrar 128 comprende una temperatura en un margen de variación de alrededor de 18° hasta alrededor de 35°C. En otra realización ilustrativa el método comprende, adicionalmente, los pasos de separar 132 y lavar 134 la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126. La composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126, puede ser separada de la solución orgánica acuosa 1 18 empleando una diversidad de técnicas de separación sólido-líquido que usan fuerza centrífuga, que incluye sin limitaciones, centrífuga de cesta perforada vertical y horizontal, centrífuga de campana tubular (solid bowl), centrífuga decantadora, centrífuga descascaradora (pee/er type), centrífuga de empuje, centrífuga tipo Heínkel, centrífuga con separador de discos, y separador ciclónico. Además, se puede intensificar la separación mediante cualesquier métodos de filtración por presión, al vacío, o por gravedad que incluyen, sin limitación el uso de filtros de banda, de tambor, tipo Nutsche, de hoja, de placa, Rosenmund, tipo centelleo (Sparkier), y filtros de bolsa y filtros prensa. La operación del dispositivo de separación sólido- líquido de rebaudiosida A puede ser en modalidad continua, semi-continua o por lotes. La composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 puede ser lavada 134 también sobre el dispositivo de separación usando diversos solventes orgánicos acuosos 136 y mezclas de ellos. La composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 puede ser secada total o parcialmente sobre el dispositivo de separación usando muchos gases, incluyendo sin limitación, nitrógeno o argón, para evaporar el solvente líquido residual 136. La composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 puede ser retirada manual o automáticamente del dispositivo de separación usando medios mecánicos, gases o líquidos, ya sea disolviendo el sólido o manteniendo la forma sólida. En otra realización ilustrativa más, el método 1 10 comprende adicionalmente el paso de secar 138 la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126. Tales métodos son conocidos por los peritos en la especialidad e incluyen, pero no se limitan, al uso de un secador rotatorio al vacío, secador de lecho fluido, secador de túnel rotatorio, secador de placas, secador de bandejas, secador tipo Nauta, secador de rociado, secador instantáneo, secador de micrón, secador tipo recipiente, secador de paleta de baja y alta velocidad y secador por microondas. En una realización ilustrativa, el paso de secado 138 comprende secar la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 usando una purga de nitrógeno o argón para eliminar el solvente residual 120 a una temperatura en un margen de variación de alrededor de 40°C hasta alrededor de 60°C durante 5 horas, aproximadamente, hasta alrededor de 100 horas. En otra realización ilustrativa más, donde la mezcla de rebaudiosida A sin refinar 1 12 no comprende substancialmente ninguna impureza de rebaudiosida D, el método 1 10 comprende además el paso de formar una lechada 140 con la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126, con un solvente orgánico o con un solvente orgánico acuoso 142 previo al paso de secar 138 la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. La lechada puede ser una mezcla que comprende un sólido y un solvente orgánico acuoso o un solvente orgánico donde el sólido comprende la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 y es sólo escasamente soluble en el solvente orgánico acuoso o en el solvente orgánico 142. En una realización, una composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 y el solvente orgánico acuoso o el solvente orgánico 142 pueden estar presentes en la lechada en una relación en peso en un margen de variación desde aproximadamente 15 partes hasta aproximadamente 1 parte de solvente orgánico acuoso hasta alrededor de 1 parte de composición de rebaudiosida A substancialmente pura. En una realización, la lechada puede ser mantenida a la temperatura ambiente. En otra realización, el paso de formar una lechada 140 comprende calentar la lechada hasta una temperatura dentro de un margen de variación desde aproximadamente 20° C hasta alrededor de 40° C. La composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 puede ser suspendida durante 0,5 hasta 24 horas aproximadamente. En otra realización ilustrativa más, el método comprende adicionalmente los pasos de separar 132 la composición de rebaudiosida A substancialmente pura 126 del solvente orgánico acuoso 142 de la lechada y lavar 134 la composición de rebaudiosida A substancialmente pura seguido por el paso de secado 138 de la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. Si se desea una purificación más amplia, puede repetirse el método para purificar la rebaudiosida A 1 10 descrito aquí, o se puede purificar adicionalmente la composición de rebaudiosida A substancialmente pura, usando un método de purificación alternativo, tal como la cromatografía en columna. La pureza, en el sentido usado aquí, representa el porcentaje en peso de rebaudiosida A presente en una composición de rebaudiosida A sin refinar o purificada. En una realización la composición de rebaudiosida A comprende rebaudiosida A de una pureza específica, y el resto de la composición comprende una mezcla de otros glicósidos de esteviol o de cualquier componente que no sea rebaudiosida A. La pureza de la compasión puede ser medida usando métodos conocidos por las personas con experiencia común en la especialidad. Uno de tales métodos incluye cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). Las personas con experiencia común en la especialidad apreciarán también que la humedad de la muestra puede afectar la precisión de las medidas de pureza. En consecuencia, la composición debería estar substancialmente seca cuando se mide su pureza. En la forma usada aquí, una composición substancialmente seca comprende hasta 10% en peso de humedad. Formas Amorfas y Polimórficas de Rebaudiosida A La purificación de rebaudiosida A usando el método descrito anteriormente, da como resultado la formación de por lo menos tres polimorfos diferentes de rebaudiosida A: Forma 1 : un hidrato de rebaudiosida A; Forma 2: una rebaudiosida A anhidra, y Forma 3: un solvato de rebaudiosida A. Las personas con experiencia común en la especialidad apreciarán que, tanto la solución orgánica acuosa como las temperaturas del proceso de purificación descritas aquí, podrán influir sobre los polimorfos resultantes de una composición de rebaudiosida A substancialmente pura. Se define polimorfismo como la capacidad de una substancia de existir como dos o más estados cristalinos que tiene diferentes disposiciones y/o conformaciones de las moléculas en la red de cristales. Se cree que aproximadamente 30% de los compuestos orgánicos exhiben polimorfismo (Zell, y colaboradores, Tetrahedron 56(36)6603-16 (2000)). El polimorfismo es importante en la formulación de farmacéuticos, pigmentos y colorantes, endulzantes, explosivos y agroquímicos. El polimorfismo puede hacer variar las propiedades físicas tales como densidad, punto de fusión, y porcentaje de disolución.

Los polimorfos de rebaudiosida A fueron identificados por análisis de muestras con difracción de rayos X en polvo (XRPD), una técnica muy conocida por los peritos en la especialidad. Las Figuras 3-1 1 son exploraciones de XRPD de composiciones de rebaudiosida A substancialmente pura obtenidas del proceso de purificación descrito aquí. Las exploraciones de XRDP de polimorfos de rebaudiosida A fueron creadas trazando la intensidad de dispersión versus el ángulo de dispersión 2T. Las muestras fueron analizadas por XRPD usando un difractómetro de rayos X en polvo Shimadzu XRD-6000, usando radiación Cu ?s. El instrumento estaba equipado con un tubo enfocador de rayos X largo y fino. El voltaje y amperaje del tubo fueron ajustados a 40 kV y 40 mA, respectivamente. La divergencia y ranuras de dispersión fueron ajustadas a 1 " y la ranura receptora fue ajustada a 0,15 mm. La radiación difractada fue detectada con un detector de centelleo Nal. Se usó una exploración continua T-2T a 37min (paso de 0,4 seg/0,02") desde 2,5 a 40" 2T. Se analizó un estándar de silicio para revisar la alineación del instrumento. Los datos fueron recolectados y analizados usando XRD-60000 v. 4,1. Los patrones muestran resolución de reflejos, que indican que las muestras están compuestas de material cristalino. La Figura 3 muestra patrones representativos de las Forma , Forma 2, y Forma 3a (solvato de metanol) y 3B (solvato de etanol). El patrón de la forma 2 (patrón superior) es distintivamente diferente de los otros patrones. Debería advertirse que pueden existir múltiples polimorfos dentro de cada clasificación de Formas 1 , 2, y 3. La Figura 4 destaca las diferencias entre las Formas 1 y 2. Adicionalmente se muestran los dos patrones de la Forma 2 para ilustrar la reproductividad en la generación de diferentes polimorfos bajo condiciones variables de cristalización de los polimorfos. La Figura 5 muestra una similitud significativa entre los patrones XRPD de las Formas 3A y 3B. Sin que se desee ser forzado por ninguna teoría, es posible que estos polimorfos sean solvatos isoestructurales, donde las únicas diferencias entre los patrones son los desplazamientos de ciertos valores máximos debido a la variación de la identidad del solvente. Esta relación isoestructural entre las Formas 3A y 3B podría ser verificada de ser necesario indexar los patrones. Los asteriscos identifican los valores máximos que son desplazados a la derecha en alrededor de 0,2 grados 2T en el patrón para la Forma 3A. Además, varios valores máximos en la Forma 3B son más intensos que los valores máximos correspondientes en la Forma 3A. Por ejemplo, los valores máximos a 5,5, 11 ,0, 14,2 y 19,4 grados son más intensos para la Forma 3B que para la Forma 3A. La Figura 6 compara la Forma 2 con las Formas 3A y 3B de la Figura 5. La Forma 2 se parece más a la Forma 3A que a la Forma 3B. Aunque no se observan en el patrón de la Forma 2, los valores máximos identificados en la Figura 5 como más intensos en la Forma 3B que en la Forma 3A, hay por lo menos tres valores máximos (marcados con un doble asterisco bajo los patrones) que muestran la tendencia inversa (es decir, los valores máximos están presentes en la Forma 2, pequeños en la forma 3A y más grandes en la Forma 3B). Finalmente, un valor máximo grande en la Forma 3B en 17,6 grados parece estar desplazado ligeramente a la derecha en la Forma 3A (17,9 grados) y desplazado más a la derecha en la Forma 2 (18,0 grados). Otras dos series de valores máximos entre 21 y 23 grados muestran también este desplazamiento. Sin que se desee ser forzado por ninguna teoría, el desplazamiento de los valores máximos puede ser una indicación de que la Forma A estar desolvatado parcialmente, conteniendo así una mezcla tanto del solvato como de los cristales de Forma 2. Las Figuras 7-10 son exploraciones XRPD de los polimorfos individuales de Forma 1 , Forma 2, Forma 3A, y Forma 3B, respectivamente, desde una composición de rebaudiosida A substancialmente pura obtenida del proceso de purificación descrito aquí anteriormente. Como se ilustra en la Figura 2, el tipo de polimorfo formado puede ser dependiente de factores tales como la composición de la solución orgánica acuosa, la temperatura del paso de cristalización, y la temperatura durante el paso de secado. Sin que se desee ser forzado por ninguna teoría, se cree que la Forma 1 y la Forma 3 se forman durante el paso de cristalización único, en tanto que se cree que la Forma 2 se forma durante el paso de secado después de la conversión desde la Forma 1 y la Forma 3. Las temperaturas bajas durante el paso de cristalización, entre alrededor de 20° C y alrededor de 50°C, y una baja relación de agua con el solvente orgánico en el solvente orgánico acuoso da como resultado en la formación de la Forma 3. Altas temperaturas durante el paso de cristalización, entre alrededor de 50°C hasta alrededor de 80°C, y la alta relación entre agua y solvente orgánico en el solvente orgánico acuoso dan como resultado la formación de la Forma 1. La Forma 1 puede ser convertida en la Forma 3 formando una lechada en un solvente anhidro a una temperatura próxima a la temperatura ambiente durante alrededor de 2 hasta alrededor de 16 horas, o formando una lechada en un solvente anhidro a una temperatura próxima al reflujo durante aproximadamente 0,5 hasta alrededor de 3 horas. La Forma 3 puede ser convertida en la Forma 1 formando una lechada del polimorfo en agua a una temperatura aproximada a la temperatura ambiente durante aproximadamente 16 horas o hasta alrededor de la temperatura de reflujo durante aproximadamente 2 a 3 horas. La Forma 3 puede ser convertida en la Forma 2 durante el proceso de secado; sin embargo, el aumento ya sea de la temperatura de secado sobre 70°C o el tiempo de secado de una composición de rebaudiosida A substancialmente pura, puede dar como resultado la descomposición de la rebaudiosida A y el aumento de la impureza de rebaudiosida B remanente en la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. La Forma 2 puede ser convertida en la Forma 1 con la adición de agua. Además de las, por lo menos tres, formas polimórficas de rebaudiosida A, la purificación de rebaudiosida A puede dar como resultado la formación de una forma amorfa de rebaudiosida A, la Forma 4, como se muestra en la Figura 1 1 . La Forma 4 tiene un halo amorfo amplio que identifica la composición como amorfa. Amorfo, en la forma usada aquí, describe un material sólido no- cristalino. La forma amorfa de rebaudiosida A (Forma 4) tiene un porcentaje de disolución mejorado comparado con las formas polimórficas de rebaudiosida A (Formas 1 , 2, o 3). Las personas con experiencia común en la especialidad apreciarán que el porcentaje de disolución de una composición endulzante puede ser importante en la formulación de composiciones endulzantes sólidas y líquidas, ejemplos no limitantes de las cuales incluyen goma de mascar, productos horneados y bebidas. Como se describió aquí anteriormente, la Forma A puede ser obtenida durante la purificación inicial de rebaudiosida A, o directamente desde cualquier polimorfo individual o combinación de polimorfos usando métodos muy conocidos por las personas con experiencia común en la especialidad. Además, la Forma 4 puede ser obtenida desde una composición de rebaudiosida A sin refinar o desde una composición de rebaudiosida A substancialmente pura, obtenida a través de medios de purificación diferentes de los descritos aquí anteriormente. Ejemplos no limitantes de métodos para preparar formas amorfas de rebaudiosida A incluyen molienda con molinos de bolas, precipitación, liofilización, criomolienda, y secado por aspersión de una composición de rebaudiosida A. En una realización en particular, la purificación de rebaudiosida A descrita aquí anteriormente, da como resultado una composición que comprende la rebaudiosida A amorfa de la Forma A. Las personas con experiencia común en la especialidad deberán apreciar que los parámetros del procedimiento de cristalización pueden ser modificados para intensificar la formación de la Forma 4. En otra realización en particular, la Forma 4 puede ser preparada desde una composición de rebaudiosida A secando por aspersión una solución de la composición de rebaudiosida A. Dicho en pocas palabras, el secado por aspersión requiere en general la alimentación de una solución de rebaudiosida A, a través de una bomba de alimentación en una boquilla atomizadora que atomiza la solución en un rocío de gotitas con la ayuda de un flujo constante de nitrógeno/aire. La humedad es evaporada desde las gotitas en condiciones de temperatura y condiciones de flujo de aire controladas en la cámara de secado, dando como resultado la formación de partículas secas de rebaudiosida A amorfa. La pureza de la rebaudiosida A amorfa dependerá de la pureza de la solución de rebaudiosida A. En otra realización en particular, se puede preparar la Forma A desde una composición de rebaudiosida A moliendo las formas no-amorfas de rebaudiosida A. La molienda es un proceso mecánico que se cree que produce áreas de energía localizadas que convierten las formas cristalinas de rebaudiosida A en la forma amorfa. Las técnicas de molienda ilustrativas incluyen molienda con molino de bolas, o molienda por chorro de aire, ambas muy conocidas por las 5 personas con experiencia común en la especialidad. Descrito en pocas palabras, las formas no amorfas de rebaudiosida A son molidas por un período de tiempo y a una velocidad eficaz para formar una rebaudiosida A amorfa. Estos parámetros pueden ser determinados por personas con experiencia común en la especialidad. Los períodos típicos de molienda pueden fluctuar desde alrededor de 15 minutos i o hasta alrededor de dos horas, aunque también se pueden emplear otros períodos de tiempo. Las propiedades materiales de los tres polimorfos de rebaudiosida A y la forma amorfa de rebaudiosida A se resumen en la tabla siguiente: Tabla 1 : Formas de Rebaudiosida A Polimórficas y Amorfa I 5 Las propiedades de los materiales descritas anteriormente son sólo ilustrativas de realizaciones particulares de las formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A. Las personas con experiencia común en la especialidad apreciarán que el polimorfo de rebaudiosida A anhidra (Forma 2), el polimorfo de solvato de rebaudiosida A, y la rebaudiosida A amorfa son higroscópicas y pueden absorber humedad hasta alrededor de 10% en peso en una base seca. Las personas con experiencia común en la especialidad apreciarán que la composición de rebaudiosida A puede ser modificada para obtener una mezcla deseada de formas polimórficas y amorfas de rebaudiosida A que dependen de las cualidades deseadas de la composición de rebaudiosida A (es decir, porcentaje de disolución, etc.). En una realización, una composición de rebaudiosida A substancialmente pura puede comprender una forma polimórfica o amorfa particular de rebaudiosida A en una cantidad que varía entre alrededor de 1 % hasta alrededor de 100% en peso. Por ejemplo, una composición de rebaudiosida A substancialmente pura puede comprender una cantidad polimórfica o amorfa de rebaudiosida A en una cantidad superior a alrededor de 50% en peso, aún más particularmente en una cantidad superior a 75% en peso, o aún más todavía en una cantidad superior a alrededor de 85% en peso. También pueden emplearse cantidades apropiadas de formas polimórficas o amorfas de rebaudiosida A dentro de estos márgenes de variación. En otra realización, una composición de rebaudiosida A substancialmente pura puede comprender una combinación de una forma polimórfica y/o amorfa en particular de rebaudiosida A. Este invento es ilustrado adicionalmente por los ejemplos siguientes, que no deben ser considerados de ningún modo como limitantes de su campo de acción. Por el contrario, debe entenderse claramente que debe hacerse uso de otras diversas realizaciones, modificaciones y equivalentes suyos que, después de leer la descripción incluida aquí, puedan sugerirse por sí mismas a los peritos en la especialidad, sin alejarse del espíritu del presente invento y/o el campo de acción de las reivindicaciones anexas. A menos que se especifique algo diferente, los porcentajes (%s) son expresados en peso. EJEMPLOS La pureza de las composiciones de rebaudiosida A descritas en los ejemplos citados aquí, a continuación, fue determinada usando HPLC. Los métodos para ejecutar análisis por HPLC son muy conocidos por aquellos con experiencia común en la especialidad. En pocas palabras, el análisis empleando HPLC fue ejecutado usando una columna ZORBAX NH2 (150 x 4,6 mm, 5µ??) a una temperatura de 30°C. La fase móvil comprendió una solución de solución amortiguadora 20% (0,0125% de ácido acético y 0,0125% de acetato de amonio) y acetonitrilo (80%) con una velocidad de flujo de 1 ,5 mL/min. Se inyectaron 12 µL· de cada muestra en duplicado y la muestra fue analizada usando un detector UV a 210 nm (ancho de banda 4 nm) con una referencia de 260 nm (ancho de banda 100 nm). Los análisis empleando HPLC necesitaron un tiempo de recorrido fluctuó de 40 a 60 min. Se preparó una solución amortiguadora de 0,0125 de ácido acético y 0,0125% de acetato de amonio disolviendo 0,125 g de acetato de amonio y 125 µ? de ácido acético glacial en un litro de agua. El tiempo de retención (TR) de rebaudiosida B fue ajustado variando la relación de acetato de amonio a ácido acético mientras se mantenía un total de 0,025% de ambos combinado. El aumento de la cantidad de ácido acético disminuyó el tiempo de retención de rebaudiosida B.

La fase móvil fue preparada mezclando la solución amortiguadora con acetonitrilo para lograr un tiempo de retención de rebaudiosida A de 7,0 ± 0,5 min. Inicialmente, esto fue de aproximadamente 20% de solución amortiguadora (200 mL de solución amortiguadora y 800 mL de acetonitrilo). El aumento de la cantidad de acetonitrilo en 1 a 2% aumentó el tiempo de retención de rebaudiosida A en alrededor de 1 minuto. Se preparó una solución disolvente mezclando 750 mL de acetonitrilo y 250 mL de solución amortiguadora. Los patrones de rebaudiosida A fueron preparados diluyendo 20,0 ± 0,5 mg (registrado hasta el 0,1 mg más cercano) del patrón de rebaudiosida A con 4 mL de solución disolvente para elaborar una solución patrón de 5000 mg/L aproximadamente. La solución patrón de rebaudiosida A fue inyectada a 10,8, 1 1 ,4, 12,6 y 13,2 µ?. El contenido de humedad fue medido por análisis de Kart Fischer cada vez que se preparó un patrón, y se realizaron correcciones basados en la pureza del solvente según el certificado de análisis. En forma alternativa, se prepararon patrones de rebaudiosida A diluyendo muestras individuales de 18, 19, 21 , y 22 (cada ± 0,2) mg del patrón de rebaudiosida A con 4 mL de solución disolvente (corrigiendo por humedad y pureza. Las muestras preparadas individualmente fueron inyectadas al mismo nivel que las muestras (12 µ\_.) Se prepararon los patrones de esteviosida diluyendo 12,5 ± 0,5 mg (registrado hasta el 0,1 mg más cercano) del patrón de esteviosida con 5 mL de solución disolvente para preparar una solución patrón de aproximadamente 2500 mg/ patrón (disolución madre A) (corrigiendo por humedad y pureza). El patrón de esteviosida fue diluido después usando un mL de disolución madre A para diez mL de diluyente para producir 250 mg/L de patrón (disolución madre B) y los patrones de disolución madre fueron diluidos hasta concentraciones finales que fluctuaban desde 2,5 a 50 mg/L. Se prepararon muestras de composiciones de rebaudiosida A 5 diluyendo 125 ± 2 mg (registrado hasta el 0,1 mg más cercano) de la composición de rebaudiosida A con 25 mL de solución disolvente para elaborar una solución de muestra de 5000 mg/L aproximadamente (corrigiendo por humedad). Si las muestras no fueron analizadas inmediatamente, fueron almacenadas sin dejar espacio libre superior (headspace), bajo nitrógeno y desecadas. i o La tabla siguiente proporciona una pauta para tiempos de retención (TR) para rebaudiosida A y otros glicósidos de esteviol. Sin embargo, las personas con experiencia común en la especialidad deberían apreciar que los tiempos de retención pueden ser modificados según se necesite. Tabla 2: Pautas de retención de HPLC CONJUNTO DE EJEMPLOS A Tabla 3: Resumen de los Ejemplo A1 -3 Rebaudios Etan Metan Agu Calentamie Seca Rendimie Puré ida A sin ol ol a nto do nto za refinar (95% Solven (mL T(°C) T(°C) (g) de ) te ) HPL (mL) (99%) C (mL) %p/p ) A 400 1200 400 320 50 50 130 98,9 1 A 100 320 120 50 30-40 60 72 98,3 2 A 50 60 60 25 -30 60 27,3 98,2 3 EJEMPLO A1 Se obtuvo una mezcla de rebaudiosida sin refinar (77,4% de pureza) desde una fuente comercial. Las impurezas (6,2% de esteviosida, 5,6% de s rebaudiosida C, 0,6% de rebaudiosida F, 1 ,00% de otros glicósidos de esteviol 3,0% de rebaudiosida D, 4,9% de rebaudiosida B, 0,3% de estevioibiosida) fueron identificados y cuantificados usando HPLC en base seca (contenido de humedad 4,7%). Rebaudiosida A sin refinar (400 g), etanol (95% 1200 mL), metanol i o (99% 40 mL), y agua (320 mL) fueron combinados y calentados a 50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas. Los cristales blancos fueron filtrados y lavados dos veces con etanol (2x 200 mL, 95%) y secados en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm). La composición final de la rebaudiosida A substancialmente pura (130 g) comprendió 98,91 % de rebaudiosida A, 0,06% de esteviosida, 0,03% de rebaudiosida C, 0,12% de rebaudiosida F, 0,13% de glicósidos de esteviol, 0,1 % de rebaudiosida D, 0,49% de rebaudiosida B y 0,03% de estevioibiosida, todos en peso. EJEMPLO A2 La rebaudiosida A sin refinar (80,37%) fue obtenida desde una fuente comercial. Las impurezas (6,22% de esteviosida, 2,28% de rebaudiosida C, 0,35% de dulcosida A, 0,78% de rebaudiosida F, 0,72% de otros glicósidos de esteviol, 3,33% de rebaudiosida B, 0,07% de estevioibiosida, fueron identificadas y cuantificadas empleando HPLC en base seca (contenido de humedad 3,4%). La rebaudiosida A sin refinar (100 g), etanol (95%, 320 mL), metanol (99%, 120 mL) y agua fueron combinados y calentados a 30-40°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas. Los cristales blancos fueron filtrados y lavados dos veces con etanol (2 x 50 mL, 95%). Se formó una lechada con la torta de filtrado húmeda (88 g) en etanol (95%, 1320 mL) durante 16 horas, y fue filtrada, lavada con etanol 95%, 2 x 100 mL) y secada en un horno de vacío durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm). La composición final de la rebaudiosida A substancialmente pura (72 g) comprendió 98,29% de rebaudiosida A, 0,03% de esteviosida, 0,02% de rebaudiosida C, 0,17% de rebaudiosida F, 0,06% de rebaudiosida D y 1 ,09% de rebaudiosida B. No se detectó estevioibiosida empleando HPLC.

EJEMPLO A3 La rebaudiosida A sin refinar (80,37%) fue obtenida desde una fuente comercial. Las impurezas (6,22% de esteviosida, 2,28% de rebaudiosida C, 0,35% de dulcosida A, 0,78% de rebaudiosida F, 0,72% de otros glicósidos de esteviol, 5 3,33% de rebaudiosida B, 0,07% de esteviolbiosida) fueron identificados y cuantificados empleando HPLC en una base seca (contenido de humedad 3,4%) La rebaudiosida A sin refinar (50 g), etanol (95%, 160 mL), metanol (99%, 60 mL) y agua (25 mL) fueron combinados y calentados hasta 30°C aproximadamente, durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a i o 22°C durante 16 horas. Los cristales blancos fueron filtrados y lavados dos veces con etanol (2 x 25 mL, 95%). La torta de filtrado húmeda (40 g) formó una lechada en etanol (99%, 600 mL) durante 16 horas, fue filtrada, lavada con metanol 99%, 2 x 25 mL) y secada en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm). i í La composición final de la rebaudiosida A substancialmente pura (27,3 g) comprendió 98,22% de rebaudiosida A, 0,04% de esteviosida, 0,04% de rebaudiosida C, 0,18% de rebaudiosida F, 0,08 de rebaudiosida D y 1 ,03% de rebaudiosida B. No se detectó esteviolbiosida empleando HPLC.

CONJUNTO DE EJEMPLOS Tabla 4: Resumen de los Ejemplos B1 - Solvente Rebaudio Etanol Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, (95%) solvente a de Lavado ento HPLC sin (mL) orgánico (mL) (g) (%) refinar (g) (mL) B1 5 16 Metanol 2 EtOH/MeO 3,2 >97 (6) H (4:1 ,5 v/v) B2 5 16 Metanol 2 EtOH/MeO 3,1 >97 (4) H (4:1 v/v) B3 5 9,5 1 -Butanol 1 EtOH/1 - 3,2 >95 (9,5) Butanol (1 : 1 v/v) B4 5 9,5 1 -Butanol 1 EtOH/MeO 3,5 >96 (9) H (1 :1 v/v) B5 5 12,5 Metanol 2 *EtOH/2- 3,3 >97 (6) Butanol (4:1 v/v) B6 5 12,5 Acetonitril 1 ,5 *EtOH/ 3,4 >95 o (6) Acetonitrilo (6:3 v/v) Solvente Rebaudio Etanol Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, (95%) solvente a de Lavado ento HPLC sin (mL) orgánico (mL) (g) (%) retinar (g) (mL) B7 5 14,5 Acetato de 4 *EtOH/ 3,4 >95 etilo (4) Acetato de etilo 7:2 v/v) B8 5 16 Metanol 2 EtOH/MeO 3,2 >97 (6) H (4:1 ,5 v/v) B9 5 16 Metanol 2 EtOH/MeO 3,1 >97 (4) H (4:1 v/v) B10 5 14,5 Metanol 1 ,5 EtOH/MeO 3,4 >97 (4) H (7:2 v/v) B1 1 5 16 Metanol 1 ,5 EtOH/MeO 3,2 >97 (6) H (8:3 v/v) B12 5 16 Metanol 2 *EtOH/Me 3,2 >96 (6) OH (8:3 v/v) B13 5 16 Metanol 2 *EtOH/Me 3,4 >96 (6) OH (8:3 v/v) Solvente Rebaudio Etanol Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, (95%) solvente a de Lavado ento HPLC sin (ml_) orgánico (mL) (g) (%) refinar (g) (mL) B14 5 15 Metanol 2,5 *EtOH/Me 3,2 >97 (5) OH (3:1 v/v) B15 5 15 Metanol 3 *EtOH/Me 2,7 >97 (5) OH (3: 1 v/v) B16 5 15 Metanol 3,5 *EtOH/Me 2,6 >99 (6) OH (3: 1 v/v) B17 5 15 Metanol 4 *EtOH/Me 2,3 >99 (5) OH (3:1 v/v) B18 5 16 Metanol 2,5 *EtOH/Me 3,0 >97 (6) OH (8:3 v/v) B19 5 16 Metanol 2,5 *EtOH/Me 3,2 >98 (6) OH (8:3 v/v) EJEMPLO B1 Rebaudiosida A sin refinar (pureza, 77,4%, 5g), etanol (95%, 16mL), metanol (6 mL), y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5 mL, 4:1 ,5, v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B2 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 5g), etanol (95% 16 mL), metanol (4 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5 mL, 4:1 , v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,1 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B3 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 5 g), etanol (95%, 9,5 mL), 1 -butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol: 1 -butanol (5 mL, 1 :1 , v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B4 Rebaudiosida A sin retinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 9,5 ml_), metanol (9 ml_) y agua (1 ml_) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanokmetanol (5 ml_, 1 :1 , v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,5 g del producto purificado (> 96% empleando HPLC). EJEMPLO B5 Rebaudiosida A sin retinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 12,5 mL), metanol (6 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C. La solución fue sembrada con 10 mg de rebaudiosida A 98% pura, y la mezcla fue dejada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5 mL, 4: 1 , v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,3 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B6 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 12,5 mL), acetonitrilo (6 mL) y agua (1 ,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C. La solución fue sembrada con 10 mg de rebaudiosida A 98% pura, y la mezcla fue dejada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:acetonitrilo (5 mL, 6:3, v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,4 g del producto purificado (> 95% empleando HPLC).

EJEMPLO B7 Rebaudiosida A sin retinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 14,5 mL), acetato de etilo (4 mL) y agua (1 ,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C. La solución fue sembrada con 10 mg de rebaudiosida A 98% pura y la mezcla fue dejada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol.acetonitrilo (5 mL, 7:2, v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,4 g del producto purificado (> 95% empleando HPLC). EJEMPLO B8 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (6 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10' minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,5 mL, 4:1 ,5 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B9 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (4 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 4:1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,1 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC).

EJEMPLO B10 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 14,5 mL), metanol (4 mL) y agua (1 ,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanohmetanol (5,0 mL, 7:2 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,4 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B11 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (6 mL) y agua (1 ,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 8:3 v/v) mezclado y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B12 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (6 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C y sembrada con 10 mg de rebaudiosida A pura (>98%). La mezcla fue mantenida a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 8:3 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 98% empleando HPLC).

EJEMPLO B13 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (6 mL) y agua (2 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C y sembrada con 10 mg de rebaudiosida A pura (>98%). La mezcla fue mantenida a la temperatura ambiente durante 16 horas mientras se agitaba. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 8:3 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,4 g del producto purificado (> 96% empleando HPLC). EJEMPLO B14 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 5 mL), metanol (5 mL) y agua (2,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 16 horas mientras se agitaba. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanokmetanol (5,0 mL, 3:1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B15 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 15 mL), metanol (5 mL) y agua (3 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas mientras se agitaba. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanokmetanol (5,0 mL, 3:1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,7 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B16 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 15 ml_), metanol (5 ml_) y agua (3 ml_) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas mientras se agitaba. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanohmetanol (5,0 mL, 3:1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,6 g del producto purificado (> 99% empleando HPLC). EJEMPLO B17 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 15 mL), metanol (5 mL) y agua (4 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 16 horas mientras se agitaba. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 3: 1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,3 g del producto purificado (> 99% empleando HPLC). EJEMPLO B18 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 15 mL), metanol (6 mL) y agua (2,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C. Esta mezcla fue agitada a la temperatura ambiente durante 15-20 minutos, tiempo durante el cual empezaron a aparecer cristales. Se dejó de agitar y la mezcla fue mantenida a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanokmetanol (5,0 mL, 8:3 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,0 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO B19 5 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 16 mL), metanol (6 mL) y agua (2,5 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 2 horas. Durante este tiempo empezaron a aparecer cristales. La mezcla fue agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, i o lavado dos veces con una mezcla de etanoLmetanol (5,0 mL, 8:3 v/v) y fue secado en un horno de vacio a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,2 g del producto purificado (> 98% empleando HPLC).

CONJUNTO DE EJEMPLOS C Tabla 5: Resumen de los Ejemplos C1 -9 Solvente Rebaudio Solvente Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, Orgánico solven a de Lavado ento HPLC sin (mL) te (mL) (g) (%) refinar (g) orgáni co (mL) C1 5 Isopropan Metano 1 Isopropano 3,85 >91 ol (9,5) I (9,5) l/MeOH Solvente Rebaudio Solvente Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, Orgánico solven a de Lavado ento HPLC sin (ml_) te (ml_) (g) (%) retinar (g) orgáni co (ml_) (1:1 v/v) C2 5 sec- Metano 1 MeOH/sec- 4,0 >91 Butanol I (9,5) Butanol (9,5) (1:1 v/v) C3 5 1- Metano 1 MeOH/1- 3,55 >91,2 Propanol I (9,5) Propanol (9,5) (1:1 v/v) C4 5 Etanol 1- 1 EtOH/1- 2,5 >94 (9,5) Propan Propanol ol (9,5) (1:1 v/v) C5 5 1-Butanol Metano 1 MeOH/1- 3,7 >91,5 (9,5) I (9,5) Butanol (1:1 v/v) C6 5 Etanol 2- 1 EtOH/2- 2,4 >93,5 (9,5) Propan Propanol ol (9,5) (1:1 v/v) C7 5 Etanol sec- 1 EtOH/sec- 2,9 >93 Solvente Rebaudio Solvente Co- Agu Solvente Rendimi Pureza sida A, Orgánico solven a de Lavado ento HPLC sin (mL) te (mL) (g) (%) refinar (g) orgáni co (mL) (9,5) Butano Butanol 1 (9,5) (1 : 1 v/v) C8 5 ter- Metano 1 MeOH/íer 3,9 >83 Butanol 1 (9,5) Butanol(1 : (9,5) 1 v/v) C9 5 Etanol ter- 1 EtOH/ter 2,9 >88 (9,5) Butano Butanol(1 : 1 (9,5) 1 v/v) EJEMPLO C1 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), metanol (99%, 9,5 mL), isopropanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:metanol (5,0 mL, 8:3 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,85 g del producto purificado (> 91 % empleando HPLC).

EJEMPLO C2 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), metanol (99% 9,5 mL), sec-butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50 °C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de metanol:sec-butanol (10,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 4,0 g del producto purificado (> 91 % empleando HPLC). EJEMPLO C3 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), metanol (99% 9,5 mL), 1 -propanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de metanol: 1 -propanol (10,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,55 g del producto purificado (> 9 ,21 % empleando HPLC). EJEMPLO C4 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 9,5 mL), -propanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:1 -propanol (10,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,5 g del producto purificado (> 94,0% empleando HPLC). EJEMPLO C5 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), metanol (99% 9,5 mL), 1 -butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada hasta la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de metanol: 1 -butanol (10,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un homo de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,7 g del producto purificado (> 91 ,5% empleando HPLC). EJEMPLO C6 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 5 g), etanol (95% 9,5 mL), 2-propanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50X durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:2-propanol ( 0,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un homo de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,4 g del producto purificado (> 93,5% empleando HPLC). EJEMPLO C7 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 5 g), etanol (95% 9,5 mL), sec-butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con una mezcla de etanol:sec-butanol (10,0 mL, 1 :1 v/v) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,9 g del producto purificado (> 93,0% empleando HPLC). EJEMPLO C8 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 5 g), metanol (99% 9,5 mL), fer-butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados hasta alrededor de 40-50°C durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada a 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con metanol (99%, 7,0 mL) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 3,9 g del producto purificado (> 83,0% empleando HPLC). EJEMPLO C9 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 5 g), etanol (95% 9,5 mL), fer-butanol (9,5 mL) y agua (1 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 10 minutos. La solución transparente fue enfriada hasta 22°C durante 2 horas y después agitada a la temperatura ambiente durante 16 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 7,0 mL) y fue secado en un horno de vacío a 50°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 2,9 g del producto purificado (> 88,0% empleando HPLC).

CONJUNTO DE EJEMPLOS D Tabla 6: Resumen de los Ejemplos D1 - Solvente Rebaudio Solvente Agu Solvente Rendimiento Pureza sida A, Orgánico a de Lavado (g) HPLC (%) sin (mL) (mL) refinar (g) D1 50 MeOH(18 20 MeOH 29,8 96,2 0) D2 50 MeOH(16 40 MeOH 31 ,2 95,5 0) D3 50 EtOH(188) 12 EtOH 37,3 93,4 D4 50 EtOH(184) 16 EtOH 31 ,7 95,3 D5 50 EtOH(180) 10 EtOH 35,7 94,7 D6 50 EtOH(176) 24 EtOH 38,2 97,3 D7 50 EtOH(172) 28 EtOH 32 98,1 D8 50 EtOH(160) 400 EtOH 19,8 99,5 D9 50 1 - 20 1 -Propanol 27 92,9 Propanol (180) D10 50 2- 20 2-Propanol 24,9 91 ,4 Propanol (180) Solvente Rebaudio Solvente Agu Solvente Rendimiento Pureza sida A, Orgánico a de Lavado (g) HPLC (%) sin (mL) (mL) refinar (g) D1 1 50 1 -Butanol 20 1 -Butanol 40,6 93,1 (180) D12 50 2-Butanol 20 2-Butanol 40,4 90,5 (180) EJEMPLO D1 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 77,4%, 50 g), metanol (99% 180 mL) y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. 5 La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con metanol (99%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 29,8 g del producto purificado (> 96,2% empleando HPLC). l o EJEMPLO D2 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), metanol (99% 160 mL) y agua (40 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 1 semana. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con metanol i 5 (99%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 31 ,2 g del producto purificado (> 95,5% empleando HPLC). EJEMPLO D3 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 188 mL) y agua (12 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 37,3 g del producto purificado (> 93,4% empleando HPLC). EJEMPLO D4 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 184 mL) y agua (16 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 31 ,7 g del producto purificado (> 95,3% empleando HPLC). EJEMPLO D5 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 180 mL) y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 35,7 g del producto purificado (> 94,7% empleando HPLC). EJEMPLO D6 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 176 mL) y agua (24 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 38,2 g del producto purificado (> 97,3% empleando HPLC). EJEMPLO D7 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 172 mL) y agua (28 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 32,0 g del producto purificado (> 98,1 % empleando HPLC). EJEMPLO D8 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), etanol (95% 160 mL) y agua (40 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 19,8 g del producto purificado (> 99,5% empleando HPLC). EJEMPLO D9 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), 1 -propanol (180 mL) y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con 1 -propanol (25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 27,0 g del producto purificado (> 92,9% empleando HPLC). EJEMPLO D10 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), 2-propanol (180 mL) y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con 2-propanol (25 mL) y fue secado en un homo de vacio a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 34,9 g del producto purificado (> 91 ,4% empleando HPLC). EJEMPLO D11 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), 1-butanol (180 mL) y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado, lavado dos veces con 1-butanol (25 mL) y fue secado en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 40,6 g del producto purificado (> 93,1 % empleando HPLC). EJEMPLO D12 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 80,37%, 50 g), 2-butanol ( 80 mL) Í y agua (20 mL) fueron combinados y calentados a reflujo durante 30 minutos. La mezcla se dejó enfriar después hasta la temperatura ambiente durante 16-24 horas. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con 2-butanol (25 mL) y fue secado en un horno de vacio a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 40,4 g del producto purificado (> 90,5% i o empleando HPLC). CONJUNTO DE EJEMPLOS E Tabla 7: Resumen de los Ejemplos E1 \ 5 EJEMPLO E1 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 41 %, 50 g), etanol (95%, 160 mL) metanol (99,8%, 60 mL) y agua (25 mL) fueron combinados por agitación a 22°C. El producto blanco cristalizó en 5-20 horas. La mezcla fue agitada por 48 horas más. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL). Se formó después una lechada con la torta húmeda del producto cristalino blanco en metanol (99,8%, 20 mL) durante 16 horas, se filtró y lavó dos veces con metanol (99,8%, 25 mL) y fue secada en un homo de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 12,7 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO E2 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 48%, 50 g), etanol (95%, 160 mL) metanol (99,8%, 60 mL) y agua (25 mL) fueron combinados por agitación a 22°C. El producto blanco cristalizó en 3-6 horas. La mezcla fue agitada por 48 horas más. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con etanol (95%, 25 mL). Se formó después una lechada con la torta húmeda del producto cristalino blanco en metanol (99,8%, 300 mL) durante 16 horas, se filtró y lavó dos veces con metanol (99,8%, 25 mL) y fue secada en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 18,6 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO E3 Rebaudiosida A sin refinar (pureza 55%, 50 g), etanol (95%, 160 mL) metanol (99,8%, 60 mL) y agua (25 mL) fueron combinados por agitación a 22°C. El producto blanco cristalizó en 15-30 minutos. La mezcla fue agitada por 48 horas más. El producto blanco cristalino fue filtrado y lavado dos veces con etanol (95%, 25 ml_). Se formó después una lechada con la torta húmeda del producto cristalino blanco en metanol (99,8%, 350 ml_) durante 16 horas, se lavó y filtró dos veces con metanol (99,8%, 25 ml_) y fue secada en un horno de vacío a 60°C durante 16-24 horas bajo presión reducida (20 mm) para rendir 22,2 g del producto purificado (> 97% empleando HPLC). EJEMPLO F Una solución de rebaudiosida A substancialmente pura, obtenida empleando la técnica de purificación descrita aquí anteriormente, (>97% pura empleando HPLC) fue preparada en agua destilada dos veces (12,5 gm en 50 mL, 25% de concentración) agitando la mezcla a 40°C durante 5 minutos. Se formó una forma amorfa de rebaudiosida A al usar inmediatamente la solución transparente para secado por aspersión con el secador por aspersión SD-04 de Lab Plant (Lab Plant Ltd., West Yorkshire, U.K.). La solución fue alimentada a través de una bomba de alimentación a una boquilla atomizadora, que pulverizó la solución de rebaudiosida A en un rocío de gotitas con la ayuda de un flujo de nitrógeno/aire constante. La humedad fue evaporada de las gotitas bajo condiciones de temperatura (alrededor de 90 a 97°C aproximadamente) y condiciones de flujo de aire controladas en la cámara de secado y dio como resultado la formación de partículas secas. Este polvo seco (1 1 -12 g, H20 6,74%) fue descargado en forma continua desde la cámara de secado y fue recolectado en una botella. Se determinó que el porcentaje de disolución en agua a la temperatura ambiente era > 35,9% Si bien el invento ha sido descrito en detalle con respecto a realizaciones específicas suyas, los peritos en la especialidad apreciarán, después de comprender lo anterior, que se pueden discurrir fácilmente alteraciones, variaciones y equivalentes de estas realizaciones. Por consiguiente, el campo de acción de este invento debería ser estimado como el de las reivindicaciones anexas y todos sus equivalentes.

Claims

REIVINDICACIONES 1. - Un método para purificar rebaudiosida A que comprende los pasos de: combinar rebaudiosida A cruda y una solución orgánica acuosa para formar una solución de rebaudiosida A, la rebaudiosida A cruda comprendiendo rebaudiosida A en un pureza de alrededor de 40% a alrededor de 85% en peso sobre una base seca, y la solución orgánica acuosa comprendiendo agua en una cantidad de alrededor de 0% a alrededor de 25% en peso; y cristalizar la solución de rebaudiosida A en un solo paso una composición de rebaudiosida A que comprende rebaudiosida A en una pureza mayor de alrededor de 95% en peso sobre una base seca. 2. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , que comprende además el paso de calentar la solución de rebaudiosida A. 3. - El método de conformidad con la reivindicación 2, que comprende además el paso de enfriar la solución de rebaudiosida A. 4. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la solución de rebaudiosida A en el único paso de cristalización está agitada o no agitada. 5. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , que comprende además el ñaso de sembrar la solución de rebaudiosida A a una temperatura apropiada con una cantidad de rebaudiosida A suficiente para promover la cdristalización de rebaudiosida A. 6. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , que comprende además los pasos de separar y lavar la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. 7. - El método de conformidad con la reivindicación 6, que comprende además el paso de secar la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. 8. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la rebaudiosida A cruda comprende substancialmente nada de impureza de rebaudiosida D y el método comprende además formar en suspensión la composición de rebaudiosida A substancialmente pura en una solución orgánica acuosa o en un solvente orgánico. 9. - El método de conformidad con la reivindicación 8, que comprende además los pasos de separar y lavar la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. 10. - El método de conformidad con la reivindicación 9, que comprende además el paso de secar la composición de una rebaudiosida A substancialmente pura. 1 1 . - El método de conformidad con la reivindicación , en donde la solución orgánica acuosa comprende una mezcla de cuando menos un solvente orgánico y agua. 12. - El método de conformidad con la reivindicación 1 1 , en donde cuando menos un solvente orgánico comprende un alcohol. 13. - El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el alcohol comprende etanol. 14. - El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el alcohol comprende metanol. 15. - El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde el alcohol comprende una mezcla de etanol y metano 16. - El método de conformidad con la reivindicación 15, en donde el etanol y metanol están presentes en la solución orgánica acuosa en una relación en peso de alrededor de 20 partes a alrededor de 1 parte de etanol a alrededor de 1 parte de metanol. 17. - El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde el etanol y metanol están presentes en la solución orgánica acuosa en una relación en peso de alrededor de 3 partes a alrededor de 1 parte de etanol a alrededor de 1 parte de metanol. 18. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la cuando menos una solución orgánica acuosa comprende un solvente orgánico seleccionado del grupo que consiste en acetona, acetonitrilo, metanol, etanol, 1-propanol, ¡sopropanol, 1 -butanol, 2-butanol, ter-butanol, y mezclas de los mismos. 19. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la solución orgánica acuosa y la rebaudiosida A cruda están presentes en la solución de rebaudiosida A en una relación en peso de alrededor de 4 a alrededor de 10 partes de solución orgánica acuosa a alrededor de 1 parte de rebaudiosida A cruda. 20. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la solución orgánica acuosa y la rebaudiosida A cruda están presentes en la solución de rebaudiosida A en una relación en peso de alrededor de 3 a alrededor de 5 partes de solución orgánica acuosa a alrededor de 1 parte de rebaudiosida A cruda. 21. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde la solución orgánica acuosa comprende agua en una cantidad de alrededor de 105 a alrededor de 25% en peso. 22. - Un método para purificar rebaudiosida A que comprende los pasos de: combinar rebaudiosida A cruda en una solución orgánica acuosa para formar una solución de rebaudiosida A, la rebaudiosida A cruda comprendiendo rebaudiosida A en una pureza de alrededor de 40% a alrededor de 85% en peso sobre una base seca, y la solución orgánica acuosa comprendiendo agua en una cantidad de alrededor de 10% a alrededor de 25% en peso; y cristalizar de la solución de rebaudiosida A en un solo paso una composición de rebaudiosida A que comprende rebaudiosida a en una pureza mayor de alrededor4 de 95% en peso sobre una base seca, en donde el método se lleva a cabo aproximadamente a temperatura ambiente. 23. - El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde el paso de calentar la solución de rebaudiosida A comprende calentar la solución de rebaudiosida A a una temperatura en la escala de alrededor de 20°C a alrededor de 40°C. 24. - El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde el paso de calentar la solución de rebaudiosida A comprende calentar la solución de rebaudiosida A a una temperatura en una escala de alrededor de 40°C a alrededor de 60°C. 25. - El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde el paso de calentar la solución de rebaudiosida A comprende calentar la solución de rebaudiosida A a alrededor de una temperatura de reflujo. 26. - El método de conformidad con la reivindicación 3, en donde el paso de enfriar la solución de rebaudiosida A comprende enfriar la solución de rebaudiosida A a una temperatura en una escala de alrededor de 4°C a alrededor de 25°C. 27. - El método de conformidad con la reivindicación 3, en donde el paso de enfriar la solución de rebaudiosida A comprende enfriar la solución de rebaudiosida A durante alrededor de 0.5 horas a alrededor de 24 horas. 28. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el producto de reabudiosida A substancialmente puro comprende rebaudiosida A en una pureza mayor de alrededor de 97% de rebaudiosida A en peso sobre un base seca. 29. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el producto de rebaudiosida A substancialmente puro comprende rebaudiosida A en una pureza mayor de alrededor de 98% de rebaudiosida A en peso sobre una base seca. 30. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , en donde el producto de rebaudiosida A substancialmente puro comprende rebaudiosida A en una pureza mayor de alrededor de 99% de rebaudiosida A en peso sobre una base seca. 31 . - El método de conformidad con la reivindicación 1 , que comprende además los pasos de: calentar la solución de rebaudiosida A; enfriar la solución de rebaudiosida A; separar y lavar una composición de rebaudiosida A substancialmente pura; y secar la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. 32. - Una composición de rebaudiosida A substancialmente pura hecha de conformidad con el método de la reivindicación 1 , en donde la composición de rebaudiosida A substancialmente pura comprende un polimorfo que tiene un patrón de difracción de rayos X substancialmente similar a la Figura 8. 33. - Una composición de rebaudiosida A substancialmente pura hecha de conformidad con el método de la reivindicación 1 , en donde la composición de rebaudiosida A substancialmente pura comprende un polimorfo que tiene un patrón de difracción de rayos X substancialmente similar a la Figura 9. 34. - Una composición de rebaudiosida A substancialmente pura hecha de conformidad con el método de la reivindicación 1 , en donde la composición de rebaudiosida A substancialmente pura comprende un polimorfo que tiene un patrón de difracción de rayos X substancialmente similar a la Figura 0. 35. - Una composición de rebaudiosida A substancialmente pura hecha de conformidad con el método de la reivindicación 1 , en donde la composición de rebaudiosida A substancialmente pura comprende una forma amorfa que tiene un patrón de difracción de rayos X substancialmente similar a la Figura 1 1 . 36. - El método de conformidad con la reivindicación 1 , que comprende además el paso de formar una forma amorfa de la composición de rebaudiosida A substancialmente pura. 37. - La composición de conformidad con la reivindicación 35, en donde el paso de formar una forma amorfa de la composición de rebaudiosida A substancialmente pura comprende un método seleccionado del grupo que consiste en molienda de bolas, precipitación, liofilización, criomolienda, y secado por aspersión. 38. - Una composición de rebaudiosida A substancialmente pura hecha de conformidad con el método de la reivindicación 1 .