MX2008009355A - Usos terapeuticos de inhibidores de rtp801. - Google Patents

Abstract

La presente invención proporciona moléculas, composiciones, métodos y usos novedosos para tratar trastornos microvasculares, enfermedades oculares, afecciones respiratorias y trastornos auditivos que se basan en la inhibición del gen y/o proteína RTP801.

Description

USOS TERAPEUTICOS DE INHIBIDORES DE RTP801 A través de esta solicitud, varias publicaciones y patentes, incluyendo patentes de Estados Unidos, se mencionan por el autor y año y patentes por número. Las descripciones de estas publicaciones y patentes y solicitudes de patente en su totalidad se incorporan en la presente por referencia en esta solicitud con el fin de describir en su totalidad el estado de la técnica a la cual pertenece esta invención.

CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a moléculas de ARNip novedosas que inhiben el gen RTP801 y al uso de tales moléculas para tratar trastornos respiratorios de todo tipo (que incluyen trastornos pulmonares), enfermedades y afecciones oculares, trastornos microvasculares, afecciones relacionadas con angiogenia y apoptosis y deficiencias auditivas.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) La Enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), afecta a más de 16 millones de americanos y es la cuarta causa principal de muerte en los Estados Unidos. El consumo de tabaco provoca la mayoría de los casos de la enfermedad debilitante, pero no pueden excluirse otros factores ambientales (Petty TL. 2003. Definition, epidemiology, course, and prognosis of COPD. Clin. Cornerstone, 5-10). El enfisema pulmonar es una manifestación principal de la EPOC. La destrucción permanente de los alveolos, distales de los bronquiolos terminales, es el sello del enfisema (Tuder RM, y cois. Oxidalive stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29: 88-97; 2003.). El enfisema se caracteriza también por la acumulación de células inflamatorias tales como macrófagos y neutrófilos en los bronquiolos y estructuras alveolares (Petty, 2003). La patogenia del enfisema es compleja y multifactorial. En los seres humanos, se ha demostrado que una deficiencia de inhibidores de proteasas producidas por células inflamatorias, tales como a 1 -antitripsina contribuye al desequilibrio entre proteasas y antiproteasas, favoreciendo así la destrucción de la matriz extracelular alveolar en el enfisema inducido por el humo de tabaco (CS) (Eriksson, S. 1964. Pulmonary Emphysema and Alpha 1 -Antitrypsin Deficiency. Acta Med Scand 175: 197-205. Jóos, L., Pare, P.D., y Sandford, A.J. 2002. Genetic risk factors of chronic obstructive pulmonary disease. Swiss Med Wkly 132: 27-37). Las metaloproteinasas de la matriz (MMP) desempeñan un papel clave en el enfisema experimental, según se ha documentado por la resistencia de los ratones con metaloelastasa de macrófagos inactivada contra el enfisema producido por la inhalación crónica de humo del tabaco (Hautamaki, y cois.: Requirement for macrophage elastase for cigarette smoke-induced emphysema in mice. Science 277: 2002-2004). Además, la hiperexpresión pulmonar de interleuquina-13 en los ratones transgénicos produce enfisema dependiente de MMP y catepsina (Zheng, T., y cois. 2000. Inducible targeting of IL-13 to the adult lung causes matrix metalloproteinase- and cathepsin-dependent emphysema. J Clin Invest 106: 1081-1093). Investigaciones recientes describen la implicación de la apoptosis de las células del septo en la destrucción del tejido pulmonar que provoca enfisema (Rangasami T, y cois. Genetic ablation of Nrf2 enhances cell susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Presentado para su publicación al Journal of Clinical Investigaron.; Tuder RM y cois. Oxidative stress and apoplosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth facial blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29: 88-97; 2003; Yokohori N, Aoshiba K, Nagai A, Increased levéis of cell death and proliferation in alveolar wall cells in patients with pulmonar/ emphysema. Chest. 2004 Feb; 125(2): 626-32; Aoshiba K, Yokohori N, Nagai A., Alveolar wall apoptosis causes lung destruction and emphysematous changes. Am J Respir Cell Mol Biol. Mayo de 2003; 28(5): 555-62). Entre los mecanismos que subyacen ambas vías de destrucción pulmonar en el enfisema, antes que nada debería mencionarse la formación excesiva de especies de oxígeno reactivo (ROS). Está bien establecido que existe un desequilibrio entre prooxidantes y antioxidantes en la sangre y en el tejido pulmonar de los fumadores (Hulea SA, y cois.: Cigarette smoking causes biochemical changes in blood that are suggestive of oxidative stress: a case-control study. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 1995; 14(34): 173-80; Rahman I, MacNee W. Lung glutathione and oxidative stress: implications in cigarette smoke-induced airway disease. Am J Physiol. Diciembre de 1999; 277 (6 Pt 1 ): L 1067-88.; MacNee W. Oxidants/antioxidants and COPD. Chest. Mayo de 2000, 1 17 (5 Supl 1 ): 303S-17S.; Marwick JA, Kirkham P, Gilmour PS, Donaldson K, MacNEE W, Rahman I. Cigarette smoke induced oxidative stress and TGF-beta1 increase p21waf1/cip1 expression in alveolar epithelial cells. Ann N Y Acad Sci. Nov de 2002; 973: 278-83; Aoshiba K, Koinuma M, Yokohori N, Nagai A. Immunohistochemical evaluation of oxidative stress in murine lungs after cigarette smoke exposure. Inhal Toxicol. Sep de 2003; 15 (10): 1029-38.; Dekhuijzen PN. Antioxidant properties of N-acetylcysteine: their relevance in relation to chronic obstructive pulmonar/ disease. Eur Respir. J. A. Abril de 2004; 23(4): 629-36.; Tuder RM, Zhen L, Cho CY, Taraseviciene-Stewart L, Kasahara Y, Salvemini D, Voelkel NF y Flores SC. Oxidative stress and apoptosis interact and cause emphysema due to vascular endothelial growth factor blocade. Am J Respir Cell Mol Biol, 29: 88-97; 2003). Después de una hora de exposición de ratones a humo del tabaco se produce un aumento espectacular de 8-hidroxi-2'-desoxiguanosina (8-OHdG) en las células epiteliales alveolares, en particular del tipo II (véase Inhal Toxicol. Sep de 2003 15 (10): 1029-38, referencia anterior). Las especies de oxígeno reactivo producidas en exceso son conocidas por su actividad citotóxica, que se deriva de un efecto directo de deterioro del DNA y de la activación de rutas de transducción de señales de apoptosis (Takahashi A, Masuda A, Sun M, Centonze VE, Hermán B. Oxidative stress-induced apoptosis is associated with alterations in mitochondrial caspase activity and Bcl-2-dependent alterations in mitochondrial pH (pHm). Brain Res Bull. Feb de 2004 15; 62(6): 497-504; Taniyama Y, Griendling KK. Reactive oxygen species in the vasculature: molecular and cellular mechanisms. Hypertension. Diciembre de 2003; 42(6): 1075-81. Epub 27 de octubre de 2003. Higuchi Y. Chromosomal DNA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress. Biochem Pharmacol. 15 de octubre de 2003; 66(8): 1527-35; Punj V, Chakrabarty AM. Redox proteins in mammalian cell death: an evolutionarily conserved function in mitochondria and prokaryotes. Cell Microbiol. 5 de abril de 2003 (4): 225-31 ; Ueda S, Masutani H, Nakamura H, Tanaka T, Veno M, Yodoi J. Redox control of cell death. Antioxid Redox Signal. Jun de 2002; 4(3): 405-14.). Las ROS no son sólo citotóxicas per se sino que también son estímulos proinflamatorios y son activadores prominentes de los factores de transcripción sensibles a las reacciones de redox NFkB y AP-1 (que se revisan en Rahman I. Oxidative stress and gene transcription in asthma and chronic obstructive pulmonary disease: antioxidant therapeutic targets). Curr. Drug Targets Inflamn Allergy. Sep de 2002 1 (3): 291 -315.). Ambos factores de transcripción, a su vez, están muy implicados en la estimulación de la transcripción de las citoquinas proinflamatorias (que se revisan en Renard P, Raes M. The proinflammatory transcription factor NFkappaB: a potential target for novel therapeutical strategies. Cell Biol Toxicol. 1999; 15(6): 341 -4.; Lentsch AB, Ward PA. The NFkappaBb/lkappaB system in acute inflammation. Arch Immunol. Ther Exp (Warsz). 2000; 48(2): 59-63) y las proteinasas degradantes de la matriz (Andela VB, Gordon AH, Zotalis G, Rosier RN, Goater JJ, Lewis GD, Schwarz EM, Puzas JE, O'Keefe RJ. NFkappaB a pivotal transcription factor in prostate cáncer metástasis to bone. Clin Orthop. Octubre de 2003; (415 Supl): S75-85.; Fleenor DL, Pang I H, Clark AF. Involvement of AP-1 in interleukin-1 -alpha-stimulated MMP-3 expression in human trabecular meshwork cells. Invest Ophthalmol Vis Sci. Agosto de 2003; 44(8): 3494-501 .; Ruhul Amin AR, Senga T, Oo ML, Thant AA, Hamaguchi M. Secretion of matríx melalloproteinase-9 by the proinflammatory cytokine, IL-1beta: a role for the dual signalling pathways, Akt and Erk. Genes Cell., Junio de 2003; 8(6): 515-23.). Las citoquinas proinflamatorias, a su vez, atraen a las células inflamatorias que también segregan enzimas degradantes de la matriz, citoquinas y especies de oxígeno reactivas. Así, parece que un factor patógeno como por ejemplo el humo del tabaco, desencadena un entramado patológico en el que las especies de oxígeno reactivo actúan como mediadores principales de la destrucción pulmonar. Tanto las especies de oxígeno reactivas (ROS) del humo del tabaco inhalado como las que forman de forma endógena las células inflamatorias contribuyen a una carga oxidativa intrapulmonar mayor. Un factor patógeno adicional con respecto a la patogenia de la EPOC es la expresión disminuida de VEGF y VEGFRII en los pulmones de los pacientes enfisematosos (Yasunori Kasahara, Rubín M. Tuder, Carlyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores, y Norbert F. Voelkel. Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema. Am J Respir Crit Care Med Vol 163, páginas 737-744, 2001 ). Además, la inhibición de la señalización de VEGF usando un inhibidor químico de VEGFR produce apoptosis del endotelío del septo alveolar y después de las células epiteliales, probablemente debido a la alteración de la conexión íntima entre la estructura y la función de ambos tipos de células de los alvéolos (Yasunori Kasahara, Rubin M. Tuder, Laímute Tarasevicíene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hirth, Johannes Waltenberger y Norbert F. Voelkel. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema. J. Clin. Invest. 106: 1311-1319 (2000).; Voelkel NF, Cool CD. Pulmonar/ vascular involvement in chronic obstructive pulmonar/ disease. Eur Respir J Suppl. Nov de 2003: 46: 28s-31s).

Degeneración macular La causa más común de la disminución de la visión corregida en los individuos de más de 65 años de edad en los Estados Unidos es el trastorno de la retina conocido como degeneración macular relacionado con la edad (DMRE). Al progresar la DMRE, la enfermedad se caracteriza por pérdida de la visión central nítida. La zona del ojo afectada por la DMRE es la mácula - una pequeña zona del centro de la retina, compuesta principalmente por células fotorreceptoras. La denominada DMRE "seca", que es responsable de aproximadamente el 85% - 90% de los pacientes de DMRE, implica alteraciones en la distribución del pigmento ocular, pérdida de fotorreceptores y función retiniana disminuida debido a la atrofia global de las células. La denominada DMRE "húmeda" implica la proliferación de vasos coroideos anormales que produce coágulos o cicatrices en el espacio sub-retiniano. Así, el inicio de la DMRE húmeda se produce debido a la formación de un entramado neovascular anormal (neovascularización coroidea, NVC) por debajo de la retina neural. Los vasos sanguíneos recién formados son demasiado permeables. Esto provoca la acumulación de líquido sub-retiniano y sangre que provoca la pérdida de la agudeza visual. Con el tiempo, se produce una pérdida total de la retina funcional en la región afectada, al formarse una gran cicatriz disciforme que afecta a las coroides y a la retina. Mientras que los pacientes con DMRE seca pueden conservar una visión con una calidad menor, la DMRE húmeda a menudo provoca ceguera. (Hamdi & Kenney, Age-Related Macular degeneraron - a new viewpoint, Fronliers in Bioscience, e305-314, Mayo de 2003). La NVC se produce no sólo en la DMRE húmeda, sino también en otras patologías oculares, tales como el síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, roturas de la membrana de Bruch, degeneración miope, tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas retinianas. Diversos estudios realizados han determinado diversos factores de riesgo para la DMRE, tales como tabaquismo, envejecimiento, antecedentes familiares (Milton, Am J Ophthalmol 88, 269 (1979); Mitchell y cois., Ophthalmology 102, 1450-1460 (1995); Smith y cois., Ophthalmology 108, 697-704 (2001 )), sexo (la probabilidad es 7 veces mayor en las mujeres: Klein y cois., Ophthalmology 99, 933-943 (1992) y raza (los blancos son los más susceptibles). Factores de riesgo adicionales pueden incluir características del ojo tales como hipermetropía y ojos de color claro, así como enfermedad cardiovascular e hipertensión. También se han documentado indicios de que puede haber genes implicados en el inicio y la progresión de la enfermedad (véase Hamdi & Kenney referencia anterior). Dos compañías, Acuity Pharmaceuticals y Sima Therapeutics, han presentado recientemente unos IND (Producto en fase de investigación clínica) para moléculas de ARNip que inhiben VEGF y VEGF-R1 (Flt-1 ), respectivamente, para el tratamiento de DMRE. Estas moléculas se denominan inhibidor de Cand5 e inhibidor de 027 respectivamente.

Trastornos microvasculares Los trastornos microvasculares comprenden un grupo amplio de afecciones que principalmente afectan a los capilares y vasos linfáticos microscópicos y por lo tanto están fuera del alcance de la intervención quirúrgica directa. La enfermedad microvascular puede agruparse en líneas generales en la vasoespástica, la vasculitis y la oclusiva linfática. Además, muchas de las afecciones vasculares conocidas tienen un componente microvascular.

Enfermedad vasoespástica - Las enfermedades vasoespásticas son un grupo de afecciones relativamente comunes en las que, por razones que se desconoce, los reflejos vasoconstrictores periféricos son hípersensibles. Esto provoca una vasoconstricción inapropiada e isquemia tisular, incluso hasta el punto de la pérdida de tejidos. Los síntomas vasoespásticos habitualmente están relacionados con la temperatura o el uso de maquinaria vibradora pero puede ser secundaria a otras afecciones.

Enfermedad vasculítica - Las enfermedades vasculíticas son las que implican un proceso inflamatorio primario de la microcirculación. La vasculitis es habitualmente un componente de un trastorno autoinmunitario o de los tejidos conjuntivos y generalmente no puede resolverse con tratamiento quirúrgico, sino que requiere tratamiento inmunosupresor si los síntomas son graves.

Enfermedad linfática oclusiva - La inflamación crónica de los miembros inferiores o superiores (linfoedema) está provocada por la oclusión de los vasos linfáticos periféricos. Esta es una afección relativamente rara que tiene un gran número de causas, algunas hereditarias, algunas adquiridas. Los pilares principales de tratamiento son prendas de compresión con ajuste correcto y el uso de dispositivos de compresión intermitentes.

Patologías microvasculares asociadas a la diabetes La diabetes es la causa principal de ceguera, la causa número uno de amputaciones e impotencia y una de las enfermedades crónicas más frecuentes en la infancia. La diabetes también es la causa principal de enfermedad renal terminal en los Estados Unidos, con una tasa de prevalencia del 31 % comparada con otras enfermedades renales. La diabetes es también la indicación más frecuente para el trasplante de riñon y supone el 22% de todas las operaciones de trasplante. En general, las complicaciones diabéticas pueden clasificarse en líneas generales como enfermedad microvascular o macrovascular. Las complicaciones microvasculares incluyen neuropatía (lesiones nerviosas), nefropatía (enfermedad renal) y trastornos de la visión (por ejemplo retinopatía, glaucoma, cataratas y enfermedad corneal). En la retina, glomérulo y vasa nervorum, la enfermedad microvascular específica de la diabetes presenta características patofisiológicas similares. Las patologías microvasculares asociadas a la diabetes se definen como una enfermedad de los vasos sanguíneos menores (capilares) que puede producirse, por ejemplo, en las personas que han padecido diabetes durante mucho tiempo. Las paredes de los vasos se vuelven anormalmente gruesas pero débiles. Por lo que sangran, son permeables a las proteínas y ralentizan el flujo de la sangre por el cuerpo. Los datos de modelos clínicos y animales indican que la hiperglucemia crónica es el principal factor que inicia todos los tipos de enfermedad microvascular diabética. La duración y magnitud de la hiperglucemia muestran ambas una fuerte correlación con la magnitud y velocidad de la progresión de la enfermedad microvascular diabética. Aunque todas las células diabéticas están expuestas a niveles elevados de glucosa en plasma, las lesiones por hiperglucemia se limitan a aquellos tipos celulares (por ejemplo, las células endotelíales) que desarrollan hiperglucemia intracelular. Las células endotelíales desarrollan hiperglucemia intracelular ya que, al contrario que muchas otras células, no pueden regular por disminución en transporte de glucosa cuando están expuestas a la hiperglucemia extracelular. Que la hiperglucemia intracelular es necesaria y suficiente para el desarrollo de la patología diabética se demuestra además por el hecho de que la hiperexpresión del transportador de glucosa GLUT1 en las células mesangíales cultivadas en un medio de glucosa normal reproduce el fenotipo diabético, induciendo los mismos aumentos de la expresión de los genes del colágeno tipo IV, del colágeno tipo I y de la fibronectina que la hiperglucemia diabética.

Función anormal de las células endotelíales: Al inicio de la diabetes mellitus, antes de que los cambios estructurales sean evidentes, la hiperglucemia provoca anormalidades en el flujo sanguíneo y en la permeabilidad vascular de la retina, glomérulo y vasa nervorum de los nervios periféricos. Se cree que el aumento del flujo sanguíneo y de la presión intracapilar refleja la disminución en la producción de óxido nítrico (ON) inducida por la hipergiucemia en la porción eferente de los lechos capilares y, posiblemente, una mayor sensibilidad a la angiotensina II. Como consecuencia de la mayor presión intracapilar y de la disfunción de las células endoteliales, los capilares retiñíanos muestran una permeabilidad mayor a la fluoresceína y los capilares glomerulares presentan una velocidad de excreción de albúmina (VEA) elevada. En los vasa vasorum de los nervios periféricos se producen cambios comparables. En la diabetes temprana, la permeabilidad aumentada es reversible; al ir pasando el tiempo, sin embargo, se vuelve irreversible.

Aumento de la acumulación de proteínas en las paredes de los vasos La característica patofisiológica común de la enfermedad microvascular diabética es el estrechamiento progresivo y la eventual oclusión de la luz vascular, que provoca una perfusión y función inadecuada de los tejidos afectados. La hipertensión microvascular temprana inducida por la hipergiucemia y la mayor permeabilidad vascular contribuyen a la oclusión irreversible de los microvasos mediante tres procesos: El primero es la permeabilidad anormal de las proteínas plasmáticas que contienen carbohidratos que presentan ácido peryódico y base de Schiff (PAS), que se depositan en la pared capilar y que pueden estimular a las células perivasculares tales como pericitos y células mesangiales para que elaboren factores de crecimiento y matriz extracelular.

El segundo es la extravasación de los factores de crecimiento, tales como el factor de crecimiento transformante ß1 (TGF-ß? ), que estimula directamente la sobreproducción de componentes de la matriz extracelular y puede inducir la apoptosis en ciertos tipos celulares relevantes para las complicaciones. El tercero es la estimulación inducida por la hipertensión de la expresión génica patológica por las células endoteliales y las células de soporte, que incluye transportadores de glucosa glut-1 , factores de crecimiento, receptores de factores de crecimiento, componentes de la matriz extracelular y moléculas de adhesión que pueden activar los leucocitos en circulación. La observación de que la reducción unilateral de la gravedad de la enfermedad microvascular diabética se produce junto con la estenosis arterial oftálmica o renal es consistente con este concepto.

Pérdida de células microvasculares y oclusión de los vasos El progresivo estrechamiento y la oclusión de la luz microvascular diabética también se acompañan de pérdida de las células microvasculares. En la retina, la diabetes mellitus induce la muerte celular programada de las células de Müller y de las células ganglionales, pericitos y células endoteliales. En el glomérulo, la función renal en deterioro se asocia a la oclusión capilar generalizada y a la pérdida de podocitos, pero los mecanismos que subyacen la pérdida de las células glomerulares no son conocidos todavía. En los vasa nervorum, se produce la degeneración de las células endoteliales y de los pericitos, y estos cambios microvasculares parecen preceder al desarrollo de la neuropatía periférica diabética. La distribución multifocal de la degeneración axonal en la diabetes apoya un papel causal de la oclusión microvascular, pero los descensos inducidos por la hiperglucemia de las neurotropinas pueden contribuir a evitar la reparación y regeneración normales de los axones. Otra característica común de la enfermedad microvascular diabética se ha denominado memoria hiperglucémica, o la persistencia o progresión de las alteraciones microvasculares inducidas por la hiperglucemia durante periodos subsiguientes de homeostasis normal de la glucosa. El ejemplo más chocante de este fenómeno es el desarrollo de retinopatía grave en ojos histíológicamente normales de perros diabéticos que se produjo completamente durante un periodo de 2.5 años de glucosa en sangre normalizada después de 2.5 años de hiperglucemia. Los aumentos inducidos por la hiperglucemia de la transcripción de genes seleccionados de la matriz también persisten durante semanas después de restablecer la normoglucemia in vivo, y se produce una prolongación menos pronunciada, pero cualitativamente similar, del aumento de la transcripción de genes seleccionados de la matriz inducida por la hiperglucemia en células endoteliales cultivadas. Para información adicional, véase "Shared pathophysiologíc features of microvascular complications of diabetes", (Larsen: Williams Textbook of Endocrinology, 10a ed., Copyright© 2003 Elsevier).

Las complicaciones microvasculares se producen no sólo en la diabetes sintomática sino que también son debidas a una tolerancia anormal a la glucosa (ITG). Las complicaciones microvasculares de la ITG son neuropatía, retinopatía, y microproteinuria renal.

Neuropatía diabética Las neuropatías diabéticas son trastornos neuropáticos (lesión de los nervios periféricos) que se asocian a la diabetes mellitus. Estas afecciones habitualmente se producen por lesiones microvasculares diabéticas que afectan a los vasos sanguíneos menores que riegan los nervios (vasa nervorum). Las afecciones relativamente comunes que pueden asociarse a la neuropatía diabética incluyen parálisis del III par craneal; mononeuropatía; mononeuropatía múltiple; amiotrofia diabética; una polineuropatía dolorosa, neuropatía del sistema nervioso autónomo; y neuropatía toracoabdominal y la forma más común de neuropatía periférica, que afecta principalmente a los pies y piernas. Existen cuatro factores implicados en el desarrollo de la neuropatía diabética: enfermedad microvascular, productos finales glicados avanzados, proteína quinasa C, y la ruta de los polioles.

Enfermedad microvascular en la neuropatía diabética Las enfermedades vasculares y neuronales están estrechamente relacionadas e interconexionadas. Los vasos sanguíneos dependen de la función nerviosa normal, y los nervios dependen de un flujo sanguíneo adecuado. El primer cambio patológico de la microvasculatura es la vasoconstricción. Al progresar la enfermedad, la disfunción neuronal presenta una correlación estrecha con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como engrasamiento de la membrana basal capilar e hiperplasia endotelial, que contribuyen a una tensión menor del oxígeno e hipoxia. La isquemia neuronal es una característica bien establecida de la neuropatía diabética. Los agentes vasodilatadores (por ejemplo, los inhibidores de la enzima conversora de angiotensina, antagonistas de a 1 ) pueden provocar mejoras sustanciales del flujo sanguíneo neuronal, con mejoras correspondientes en la velocidad de conducción nerviosa. Así, la disfunción microvascular se produce al principio de la diabetes, es paralela a la progresión de la disfunción neuronal, y puede ser suficiente para apoyar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales y clínicos que se observan en la neuropatía diabética. La neuropatía periférica (piernas), la neuropatía sensoriomotora, es un componente significativo de la patogenia de las úlceras de las piernas en la diabetes. La neuropatía es una complicación habitual de la diabetes que se produce con el tiempo en más de la mitad de los pacientes con diabetes de tipo 2. Los estudios de conducción nerviosa demuestran que la neuropatía ya está presente en 10-18% de los pacientes en el momento del diagnóstico de la diabetes, lo que sugiere que la lesión de los nervios periféricos se produce en las etapas tempranas de la enfermedad y con una alteración glucémica más suave. El concepto de que la neuropatía es un síntoma clínico temprano de la diabetes se propuso hace menos de 40 años, y la mayoría de los estudios refieren una asociación entre la ITG y la neuropatía. La mayoría de los pacientes con ITG y neuropatía asociada presentan una polineuropatía sensorial, distal simétrica con dolor neuropático prominente. La neuropatía por ITG (Microvascular complications of impaired glucose tolerance - Perspectives in Diabetes, J. Robinson Singleton, en Diabetes 1 de diciembre de 2003) es fenotípicamente similar a la neuropatía diabética temprana, que también provoca síntomas sensoriales, que incluyen dolor y disfunción del sistema nervioso autónomo. En un sondeo de 669 pacientes con neuropatía diabética temprana, los síntomas sensoriales estaban presentes en >60%, la impotencia en casi el 40%, y otras afectaciones del sistema nervioso autónomo en el 33%, pero sólo había indicios de afectación motora en el 12%. Estos signos clínicos sugieren una afectación temprana prominente de las fibras nerviosas sin mielina que conducen el dolor, la temperatura y las señales autónomas. La cuantificación directa de las fibras nerviosas intraepidérmicas sin mielina provenientes de biopsias de piel muestran una pérdida de fibras y morfología alterada similares en los pacientes con neuropatía asociada a IGT y a la diabetes temprana. La disfunción del sistema nervioso autónomo, en particular la disfunción eréctil y la respuesta vagal cardiaca alterada son características tempranas comunes de la lesión neuropática en la diabetes. Los trabajos con pacientes con ITG también sugieren la disautonomía vagal prevalente: estudios independientes han encontrado una recuperación anormal de la frecuencia cardiaca tras el ejercicio, una variabilidad menor del intervalo entre respiraciones profundas y una menor relación entre la expiración y la inspiración (todas son mediciones de la disautonomía vagal) en una fracción mayor de los pacientes de ITG que en sujetos de control normoglucémicos de edades iguales. Las lesiones nerviosas en la diabetes afectan a las fibras motoras, sensoriales y autónomas. La neuropatía motora provoca debilidad, atrofia y parálisis musculares. La neuropatía sensorial provoca pérdida de las sensaciones protectoras de dolor, presión y calor. La ausencia de dolor provoca muchos problemas en los pies insensibles que incluyen ulceración, traumatismo no percibido y neuroartropatía de Charcot. El paciente puede no buscar tratamiento hasta después de que la herida haya avanzado. Una combinación de la disfunción sensorial y motora puede hacer que el paciente asiente el pie de forma anormal, provocando traumatismo, que puede provocar infección. La neuropatía de los nervios simpáticos autónomos provoca vasodilación y menor sudoración, lo que provoca unos pies calientes y demasiado secos que son particularmente susceptibles a que se abra la piel, así como a alteraciones funcionales del flujo microvascular. La disfunción del sistema nervioso autónomo (y la desinervación de las estructuras dérmicas) también produce una pérdida de la integridad de la piel, lo que proporciona un área ideal para la invasión microbiana. Los pies neuropáticos no se ulceran espontáneamente, sino que es por la combinación de alguna forma de traumatismo acompañado de neuropatía. La dísfunción microvascular se produce al principio de la diabetes, es paralela a la disfunción neuronal, y puede ser suficiente para apoyar la gravedad de los cambios estructurales, funcionales y clínicos de la neuropatía diabética.

Productos finales qlicados avanzados - Los niveles intracelulares elevados de glucosa provocan la unión covalente no enzimática a proteínas, lo que altera su estructura y destruye su función. Algunas de estas proteínas glicadas están implicadas en la patología de la neuropatía diabética y otras complicaciones a largo plazo de la diabetes.

Proteína quinasa C (PKC) - La PKC está implicada en la patología de la neuropatía diabética. Los mayores niveles de glucosa provocan un aumento del diacilglicerol intracelular que activa PKC. Los inhibidores de PKC en modelos animales aumentarán la velocidad de la conducción nerviosa al aumentar el flujo sanguíneo neuronal.

Polineuropatia sensoriomotora Las fibras nerviosas más largas se ven afectadas en un grado mayor que las más cortas, debido a que la velocidad de la conducción nerviosa se ralentiza de forma proporcional a la longitud del nervio. En este síndrome, la disminución de las sensaciones y la pérdida de los reflejos se producen primero en los dedos de los pies de forma bilateral, después se extiende hacia arriba. Habitualmente se describe como una distribución de la falta de sensación de guantes y medias, pérdida sensorial, disestesia y dolor nocturno. El dolor puede sentirse como quemazón, sensación de pinchazos, dolorido o sordo. Es común la sensación de alfileres y agujas. La pérdida de la propriocepción, es decir, de la sensación de en qué posición espacial se encuentra un miembro, se ve afectada de forma temprana. Estos pacientes no pueden sentir cuando están pisando un cuerpo extraño, como una astilla, o cuando están desarrollando un callo por un zapato que no les sienta bien. En consecuencia, presentan riesgo de desarrollar úlceras e infecciones en los pies y piernas, que pueden llevar a su amputación. De forma similar, estos pacientes pueden sufrir fracturas múltiples de la rodilla, tobillo o pie y desarrollar una articulación de Charcot. La pérdida de la función motora provoca contracturas de los dedos de los pies en dorsiflexión, denominados dedos en martillo. Estas contracturas se producen no sólo en los dedos de los pies, sin también de las manos.

Neuropatía del sistema nervioso autónomo El sistema nervioso autónomo está compuesto por nervios que inervan el corazón, el tubo Gl y el sistema urinario. La neuropatía del sistema nervioso autónomo puede afectar a cualquiera de estos sistemas de órganos. La disfunción del sistema nervioso autónomo reconocida más ampliamente en los diabéticos es la hipotensión ortoestática o la sensación incómoda de desmayarse cuando un paciente se levanta. En el caso de la neuropatía diabética del sistema nervioso autónomo, esto se debe a que el corazón y las arterias no ajustan de forma apropiada la frecuencia cardiaca y el tono vascular para que la sangre fluya de forma continua y completa al cerebro. Este síntoma habitualmente se acompaña de una pérdida de la variación respiratoria sinusal, es decir, del cambio habitual en la frecuencia cardiaca que se observa con la respiración normal. Cuando se encuentran estos dos signos, está presente la neuropatía cardiaca del sistema nervioso autónomo. Las manifestaciones del tubo Gl incluyen retrasos en el vaciado grástrico, gastroparesia, nauseas, hinchazón y diarrea. Debido a que muchos diabéticos toman medicación oral para su diabetes, la absorción de estas medicinas se ve muy afectada por el retraso en el vaciado gástrico. Esto puede provocar hipoglucemia cuando se administra un agente antidiabético oral antes de una comida y no se absorbe hasta horas o, a veces días después, cuando ya hay un nivel de azúcar en sangre normal o bajo. El lento movimiento del intestino delgado puede provocar un crecimiento excesivo de bacterias, empeorado por la presencia de hiperglucemia. Esto provoca hinchazón, gases y diarrea. Los síntomas urinarios incluyen poliuria, urgencia, incontinencia y retención urinarias. De nuevo, debido a la retención de orina dulce, las infecciones del sistema urinario son frecuentes. La retención urinaria puede provocar divertículos en la vejiga, piedras, nefropatía de reflujo.

Neuropatía craneal Cuando se ven afectados los nervios craneales, las neuropatías más comunes son las motoras oculares (III par). El nervio motor ocular controla todos los músculos que mueven el ojo a excepción de los músculos recto lateral y superior oblicuo. También sirve para contraer la pupila y abrir el párpado. El inicio de una parálisis del III par craneal diabética es habitualmente brusco, empezando con dolor frontal o periorbital y después diplopía. Todos los músculos motores oculares ¡nervados por el III par craneal pueden verse afectados, excepto los que controlan el tamaño de la pupila. El VI par craneal, el nervio abductor, que inerva el músculo recto lateral del ojo (mueve el ojo lateralmente), también se ve afectado habitualmente, pero es inusual la afectación del IV par craneal, el nervio patético, (inerva el músculo oblicuo superior, que mueve el ojo hacia abajo). Pueden producirse mononeuropatías de los nervios espinales torácicos o lumbares y provocar síndromes dolorosos que reproducen un infarto de miocardio, coleocistitis o apendicitis. Los diabéticos tienen una mayor incidencia de neuropatías por compresión, tales como el síndrome del túnel carpiano.

Isquemia diabética de los miembros y úlceras diabéticas en los pies La diabetes y la presión pueden dificultar la circulación microvascular y provocar cambios en la piel de las extremidades inferiores que, a su vez, pueden provocar la formación de úlceras y la subsiguiente infección. Los cambios microvasculares provocan microangiopatía muscular, así como una predisposición a desarrollar isquemia periférica y una menor respuesta compensatoria de angiogenia a los eventos isquémicos. La patología microvascular exacerba la Enfermedad vascular periférica (EVP) (o la Enfermedad arterial periférica (EAP) o la Enfermedad arterial de las extremidades inferiores (EAMI)- una complicación macrovascular- que estrechan las arterias de las piernas debido a la aterosclerosis. La EVP se produce antes en los diabéticos, es más grave y generalizada y a menudo presenta problemas microcirculatorios interrecurrentes que afectan a las piernas, los ojos y los ríñones. Las úlceras en los pies y la gangrena son afecciones concomitantes habituales de la EAP. La neuropatía periférica concurrente con la falta de sensación hacen que los pies sean susceptibles a traumatismos, ulceración e infección. La progresión de la EAP en la diabetes se agrava con afecciones concomitantes tales como neuropatía e insensibilidad periféricas de los pies y las extremidades inferiores al dolor y el traumatismo. Con la circulación deficiente y la sensación deficiente se producen la ulceración y la infección. La progresión a la osteomielitis y la gangrena puede precisar amputación. Las personas con diabetes tienen una probabilidad hasta 25 veces mayor que las personas no diabéticas de sufrir amputación de un miembro inferior, subrayando la necesidad de prevenir las úlceras en los pies y la subsiguiente pérdida de los miembros. Las úlceras diabéticas en los pies pueden producirse no sólo junto con la EAP sino que también pueden estar asociadas a neuropatía, insuficiencia venosa (venas varicosas), traumatismo e infección. La EAP contribuye a estas otras afecciones produciendo o precipitando las úlceras en los pies. Las úlceras en los pies no representan necesariamente la progresión de la EAP, ya que pueden producirse en presencia de perfusión arterial periférica clínica adecuada. Los estudios basados en pacientes indican un mayor riesgo de ulceración de los pies en los pacientes diabéticos que sufren neuropatía periférica y una elevada presión plantar en los pies. La frecuencia de una historia de úlceras o llagas, en los pies o tobillos era del 15% de todos los pacientes diabéticos en el estudio poblacional en el suroeste de Wisconsin. La frecuencia era superior para los individuos diabéticos que habían sido diagnosticados a una edad <30 años, era ligeramente superior en los hombres (16%) que en las mujeres (13%), y era superior en los pacientes diabéticos tratados con insulina (17%) que en los pacientes que no se administraban insulina (10%). La frecuencia aumentaba con la edad, especialmente en pacientes diabéticos diagnosticados a una edad <30 años. En estudios en pacientes de Europa, la frecuencia de úlceras en los pies en pacientes diabéticos era del 3% en aquellos con una edad <50 años, del 7% en aquellos con una edad <60 años, y del 14% en aquellos con una edad <80 años. La frecuencia era superior en los hombres que en las mujeres a la edad de 70 años. En los pacientes diabéticos, la isquemia e infección de los pies son sucesos graves e incluso potencialmente mortales; sin embargo, la neuropatía es la afección más difícil de tratar. La bibliografía médica y quirúrgica que se refiere a todos los aspectos de las manifestaciones clínicas y patológicas del pie diabético es abrumadora. La neuropatía, la angiopatía, la retinopatía, y la nefropatía, solas o combinadas y en diferentes grados de gravedad pueden influir en el tratamiento del pie diabético. Cada año se realizan 82.000 amputaciones de miembros en pacientes de diabetes mellitus. La mayoría de estas amputaciones se realizan en la populación de más edad. Las amputaciones provocadas por la diabetes pueden surgir por etiologías múltiples, que incluyen úlceras en los pies, isquemia, úlceras varicosas en las piernas (es decir, las secundarias al reflujo venoso) y úlceras de los talones (es decir, las producidas por las úlceras de decúbito en los talones). La mayoría de estas amputaciones se originan en las úlceras. La frecuencia de las úlceras en los pies entre pacientes con diabetes es del 12%. Además, la incidencia acumulada durante 20 años de úlceras en las extremidades inferiores en pacientes con diabetes de tipo I es del 9.9%. Las amputaciones de miembros inducidas por la diabetes provocan una tasa de mortalidad en 5 años del 39% al 68% y están asociadas a un riesgo mayor de amputaciones adicionales. El tiempo de hospitalización es aproximadamente un 60% mayor entre los pacientes con úlceras diabéticas en los pies que entre los que no tienen úlceras. La neuropatía diabética deteriora el reflejo de los axones nerviosos que depende de la función de los nociceptores de las fibras C sanas y provoca una vasodilación local en respuesta a un estímulo doloroso. Esta afección compromete incluso más la respuesta vasodilatadora presente en afecciones de estrés, tales como lesión o inflamación, en el pie neuropático diabético. Este deterioro puede explicar parcialmente porqué algunas úlceras en los pies diabéticos neuropáticos cicatrizan lentamente o no cicatrizan, a pesar de la revascularización exitosa de las extremidades inferiores. La ruta causal más común de la ulceración del pie diabético puede identificarse así como la combinación de neuropatía (pérdida sensorial), deformidad (por ejemplo, cabezas prominentes de los metatarsos), y traumatismo (por ejemplo, calzado mal adaptado). La mayoría de los cirujanos prefieren realizar derivaciones poplíteas o de las arterias de la tibia debido a las menores tasas de recuperación de los miembros y permeabilidad comparadas con los métodos más proximales. Si las derivaciones poplíteas o de arterias de la tibia no son capaces de devolver un pulso palpable al pie, se ha reseñado que una derivación podal proporciona un procedimiento de recuperación de miembros más duradero y eficaz para los pacientes con diabetes y heridas isquémicas en los pies. Incluso una extensa enfermedad oclusiva multisegmetada en pacientes con diabetes no representa un impedimento para la recuperación del pie. Aunque las complicaciones graves de las heridas pueden tener resultados desastrosos, son poco comunes tras el injerto de derivaciones pódales. El control adecuado de la infección preexistente en los pies y un cuidadoso tunelado con injerto han demostrado ser eficaces para evitar complicaciones adicionales. La angioplastia en las extremidades inferiores se está utilizando cada vez más. Sin embargo, debe enfatizarse que para que la angioplastia sea eficaz, debe haber un vaso distal o de alimentación patente para que tenga éxito la angioplastia más proximal. Aunque las úlceras diabéticas y las patologías de los miembros pueden resolverse en algunos pacientes (mediante desbridamiento, tratamiento con antibióticos, uso de preparaciones para estimular el tejido de granulación (colágeno nuevo y angiogenia) y reducción de la carga bacteriana de la herida), sería beneficioso contar con una composición farmacéutica que pudiera mejorar estas afecciones y/o aliviar los síntomas. Para información adicional, véase American Journal of Surgery, Volumen 187, Número 5 Supl 1 , 1 de mayo de 2004, Copyright © 2004 Elsevier.

Disfunción microvascular coronaria en la diabetes La correlación entre la histopatología y la disfunción microcirculatoria en la diabetes es notoria desde los viejos estudios experimentales y de autopsia, en los que frecuentemente se encuentran engrasamiento de la membrana basal, fibrosis perivascular, rarificación vascular y hemorragia capilar. Sigue siendo difícil confirmar estos datos in vivo, aunque un estudio reciente demostró la correlación entre la patología y la disfunción microvascular ocular (Am J Physiol 2003; 285). Sin embargo, una gran cantidad de estudios clínicos indican que no sólo la diabetes franca sino también el control metabolico deficiente pueden afectar a la microcirculación coronaria (Hipert Res 2002; 25: 893). Werner aludió al importante artículo de Sambuceti y cois. (Circulation 2001 ; 104: 1129) que mostraba la persistencia de la disfunción microvascular en pacientes tras una reperfusión exitosa de la arteria relacionada con el infarto y que puede explicar la mayor morbilidad y mortalidad cardiovascular en estos pacientes. Existen crecientes indicios por grandes estudios de reperfusión aguda de que la morbilidad y la mortalidad en estos pacientes no están relacionadas con la reperfusión de la arteria relacionada con el infarto en sí, sino que dependen mucho más del flujo de TIMI +/- neovascularizacíón del miocardio (Stone 2002; Feldmann Circulation 2003). Herrmann indicó, entre otros, que la integridad de la microcirculación coronaria es probablemente el factor clínico y de pronóstico más importante en este contexto (Circulation 2001 ). El efecto neutro de los dispositivos de protección (sin cambios relevantes para el flujo TIMI, para la resolución del ST, o para MACE puede indicar que un deterioro funcional de la microcirculación es el principal determinante del pronóstico. También existen indicios crecientes de que la disfunción microvascular coronaria desempeña un papel principal en la DEC. La disfunción endotelial coronaria sigue siendo un elemento de predicción del pronóstico poderoso en estos pacientes.

Nefropatía diabética (Disfunción renal en pacientes con diabetes) La nefropatía diabética engloba la microalbuminuria (un efecto de la enfermedad microvascular), proteinuria y ESRD. La diabetes es la causa más habitual de insuficiencia renal y es responsable de más del 40 por ciento de los nuevos casos. Incluso cuando los fármacos y la dieta son capaces de controlar la diabetes, la enfermedad puede provocar nefropatía e insuficiencia renal. La mayoría de la gente con diabetes no desarrolla una nefropatía que sea lo suficientemente grave como para provocar insuficiencia renal. Aproximadamente 16 millones de personas en los Estados Unidos tienen diabetes, y aproximadamente 100.000 sufren de insuficiencia renal como resultado de la diabetes.

Retinopatía diabética En el estado diabético, la híperglucemia provoca un menor flujo de sangre a la retina, hiperpermeabílidad retiniana, retrasos en la conducción de los nervios fotorreceptores y muerte de las neuronas retinianas. En la diabetes de corta duración, se ha identificado la muerte de las neuronas en la capa nuclear interna de la retina. De forma específica, se ha localizado apoptosis en los gliocitos tales como las células de Mueller y los astrocitos y se ha demostrado que se produce al mes de la diabetes en el modelo de diabetes inducida por STZ en ratas. La causa de estos eventos es multifactorial e incluye la activación de la ruta del diacilglicerol/PKC, el estrés oxidativo y la glucosilacion no enzimática. La combinación de estos eventos produce hipoxia en la retina y finalmente provoca la aparición de retinopatía diabética. Una posible relación entre la isquemia retiniana y los cambios tempranos en la retina diabética es la producción inducida por la hipoxia de factores de crecimiento tales como VEGF. Se ha identificado que el regulador principal de la respuesta hipóxica es el factor inducible por hipoxia-1 (HIF-1 ), que controla los genes que regulan la proliferación y angiogenia celulares. Estudios anteriores han demostrado que la inhibición de la ubiquitinación de HIF-1 provoca la unión con elementos de respuesta a la hipoxia (HRE) y la producción de mRNA de VEGF. La retinopatía diabética se define como la disfunción progresiva de la vasculatura retiniana provocada por la hiperglucemia crónica. Las características clave de la retinopatía diabética incluyen microaneurismas, hemorragias retinianas, exudados lipidíeos retiñíanos, manchas algodonosas, falta de perfusión capilar, edema macular y neovascularizacíón. Características asociadas incluyen hemorragia vitrea, desprendimiento de retina, glaucoma neovascular, cataratas prematuras y parálisis de los nervios craneales. Existen 16 millones de personas en los Estados Unidos con diabetes de tipo 1 y de tipo 2. En 15 años, el 80% de los pacientes de Tipo 1 han desarrollado retinopatía diabética mientras que el 84% de los pacientes diabéticos de tipo 2 desarrollan retinopatía en 19 años. Estas cifras constituyen un mercado significativo para los agentes terapéuticos destinados a las enfermedades oculares de neovasculatura. El desarrollo de la retinopatía diabética depende del tiempo. A pesar de un control óptimo del azúcar en sangre, puede esperarse que los pacientes con enfermedad de larga duración finalmente desarrollen alguna forma de retinopatía. The National Society to Prevent Blindness ha estimado que de 4 a 6 millones de diabéticos en los Estados Unidos padecen retinopatía diabética. La incidencia anual estimada de nuevos casos de retinopatía diabética proliferativa y de edema macular diabético son de 65.000 y 75.000, respectivamente, con una frecuencia de 700.000 y 500.000 respectivamente. La retinopatía diabética provoca de 1 2.000 a 24.000 nuevos casos de ceguera en los Estados Unidos todos los años. La retinopatía se trata mediante métodos quirúrgicos, eficaces para reducir la pérdida de visión grave, pero las porciones de la retina que reciben el láser son destruidas de forma irreversible. No hay tratamientos farmacológicos disponibles. Una enfermedad microvascular que afecta principalmente a los capilares, la diabetes mellitus afecta al ojo destruyendo la vasculatura de la conjuntiva, retina y sistema nervioso central. Los pacientes pueden acudir con historias de conjuntivas bulbares inyectadas desde hace mucho tiempo junto con dolencias sistémicas de pérdida de peso a pesar de un apetito superior al normal (polifasia), sed anormal (polidipsia) y micción excesivamente frecuente (poliuria). La agudeza visual fluctuante secundaria al azúcar inestable en sangre es un signo ocular común. La inflamación del cristalino provoca cambios bruscos en la refracción así como formación prematura de cataratas. Los cambios en la agudeza visual dependerán de la gravedad y del estado de la enfermedad. En la retina, el debilitamiento de las arteriolas y capilares puede provocar la aparición característica de hemorragias de puntos y manchas intrarretinianos, exudados, anormalidades microvasculares intrarretinianas (IRMA) microaneurismas, edema e infartos algodonosos. La retinopatía diabética proliferativa se produce por una deficiencia vascular grave y puede verse como neovascularización de la papila (NVD), neovascularización en otras zonas (NVE) y neovascularización del iris (NVI, o rubeosis irides). Las complicaciones neurologicas incluyen parálisis de los pares craneales III, IV y VI así como papilitis diabética y parálisis del nervio facial. La diabetes mellitus es un grupo de enfermedades con influencia genética que comparten la intolerancia a la glucosa. Se caracteriza por un trastorno de la regulación metabólica producido por insulina deficiente o disfuncional o por receptores celulares de insulina deficientes o disfuncionales. Las reacciones bioquímicas que implican la formación de sorbitol desempeñan un papel en la destrucción de los pericitos, que son células que soportan el endotelio vascular. Al ir muriendo los pericitos de soporte, el endotelio capilar se ve comprometido, provocando la excesiva permeabilidad de la sangre, proteínas y lípidos. Esto, combinado con una sangre espesa, repleta de glucosa, produces insuficiencia vascular, falta de perfusión de los capilares, hipoxia retiniana, estructura alterada y función disminuida. La formación y liberación de los factores vasoproliferativos que desempeñan un papel en la génesis de la neovascularización retiniana no se comprenden bien. La mayoría de las secuelas de la diabetes no relacionadas con la visión se resuelven de forma espontánea durante el transcurso de semanas a meses tras el control médico. En los casos en los que se han producido grandes cambios en la refracción, los pacientes pueden necesitar gafas hasta que se estabilice la refracción. Cuando la retinopatía amenaza la mácula o cuando proliferan nuevos vasos sanguíneos, el paciente puede derivarse a fotocoagulación. El Diabetic Retinopath Study (DRS) ha demostrado de forma concluyente que la fotocoagulación panretiniana redujo satisfactoriamente el riesgo de pérdida de visión grave en los pacientes de alto riesgo. Las características del alto riesgo que definía son: (1 ) Neovascularización de la papila óptica (NVD) de un tamaño de un cuarto a un tercio del diámetro de una papila y (2) Neovascularización en otras zonas (NVE) con cualquier hemorragia vitrea.

Edema macular diabético (EMD) El EMD es una complicación de la retinopatía diabética, una enfermedad que afecta a los vasos sanguíneos de la retina. La retinopatía diabética provoca anormalidades múltiples en la retina, que incluyen engrasamiento retiniano y edema, hemorragias, flujo sanguíneo impedido, permeabilidad excesiva de líquido de los vasos sanguíneos y, en las etapas finales, crecimiento anormal de vasos sanguíneos. Este crecimiento de vasos sanguíneos puede provocar grandes hemorragias y daños retiñíanos graves. Cuando la permeabilidad excesiva de los vasos sanguíneos en la retinopatía diabética provoca inflamación de la macula, se denomina EMD. El síntoma principal de la EMD es una pérdida de visión central. Los factores de riesgo asociados a la EMD incluyen niveles de glucosa deficientemente controlados, tensión alta, función renal anormal que provoca retención de líquidos, niveles de colesterol elevados y otros factores sistémicos generales. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud, la retinopatía diabética es la causa principal de ceguera entre los adultos en edad laboral y una causa principal de pérdida de visión en los diabéticos. La American Diabetes Association informa de que existen aproximadamente 18 millones de diabéticos en los Estados Unidos y aproximadamente 1.3 millones de nuevos casos de diabetes diagnosticados en los Estados Unidos todos los años. Prevent Blindness America y el National Eye Institute estiman que en los Estados Unidos existen más de 5.3 millones de personas de 18 o más años de edad con retinopatía diabética, que incluyen aproximadamente 500.000 con EMD. El CDC estima que existen aproximadamente 75.000 casos nuevos de EMD en los Estados Unidos todos los años.

Neuropatías adicionales Además de la diabetes, las causas comunes de neuropatía son la infección por herpes zoster, traumatismo crónico o agudo (que incluye cirugía) y diversas neurotoxinas. El dolor neuropático es habitual en el cáncer como resultado directo del cáncer sobre los nervios periféricos (por ejemplo, compresión por un tumor) y como efecto secundario de muchos fármacos quimioterapéuticos.

Enfermedad microvascular - Las enfermedades vasculares y neuronales están estrechamente relacionadas e interconexionadas. Los vasos sanguíneos dependen de la función nerviosa normal, y los nervios dependen de un flujo sanguíneo adecuado. El primer cambio patológico de la microvasculatura es la vasoconstricción. Al progresar la enfermedad, la disfunción neuronal presenta una correlación estrecha con el desarrollo de anormalidades vasculares, tales como engrasamiento de la membrana basal capilar e hiperplasia endotelial, que contribuyen a una tensión menor del oxígeno e hipoxia. Los agentes vasodilatadores (por ejemplo, los inhibidores de la enzima conversora de angiotensina, antagonistas de a 1 ) pueden provocar mejoras sustanciales del flujo sanguíneo neuronal, con mejoras correspondientes en la velocidad de la conducción nerviosa.

Manifestaciones clínicas La neuropatía afecta a todos los nervios periféricos: fibras del dolor, neuronas motoras, nervios del sistema nervioso autónomo. Por lo tanto necesariamente puede afectar a todos los órganos y sistemas dado que todos están inervados. Existen diversos síndromes diferentes basándose en los sistemas de órganos y miembros afectados, pero estos no son excluyentes en modo alguno. Un paciente puede tener una neuropatía sensoriomotora o cualquier otra combinación. A pesar de los avances en la comprensión de las causas metabólicas de la neuropatía, los tratamientos dirigidos a interrumpir estos procesos patológicos han estado limitados debido a los efectos secundarios y a la falta de eficacia. Así, los tratamientos son sintomáticos y no hacen frente a los problemas subyacentes. Los agentes para el dolor provocados por la neuropatía sensoriomotora incluyen los antidepresivos tricíclicos (TCA), los inhibidores de la recaptación de serotonina (SSRI) y los fármacos antiepilépticos (AED). Ninguno de estos agentes invierten los procesos patológicos que provocan la neuropatía diabética y ninguno altera el implacable avance de la enfermedad. Así, sería útil contar con una composición farmacéutica que pudiera mejorar estas afecciones y/o aliviar los síntomas.

Retinopatías adicionales Microvasculopatía retiniana (retinopatía por SIDA) La microvasculopatía retiniana se observa en el 100% de los pacientes de SIDA. Se caracteriza por hemorragias intrarretinianas, microaneurismas, manchas de Roth, manchas algodonosas (microinfartos de la capa de la fibra nerviosa) y envainamiento perivascular. La etiología de la retinopatía es desconocida aunque se ha pensado que se debe a los inmunocomplejos en circulación, la liberación local de sustancias citotóxicas, la hemorreología anormal y la infección por VIH de las células endoteliales. La retinopatía por SIDA es ahora tan común que las manchas algodonosas en un paciente sin diabetes o hipertensión pero con riesgo de infección por VIH deberían incitar a que el médico considere realizar pruebas para el virus. No existe ningún tratamiento específico para la retinopatía por SIDA pero su presencia continuada puede incitar a un médico a reexaminar la eficacia del tratamiento contra VIH y la aceptación del paciente.

Retinopatía por transplante de médula ósea (TMO) La retinopatía por transplante de médula ósea se reseñó por vez primera en 1983. Habítualmente se produce en seis meses, pero puede producirse hasta 62 meses después del TMO. Los factores de riesgo tales como diabetes e hipertensión pueden facilitar el desarrollo de la retinopatía por TMO al aumentar la microvasculopatía isquémica. No se conoce ninguna predilección de edad, sexo o raza para el desarrollo de la retinopatía por TMO. Los pacientes acuden con agudeza visual disminuida y/o deficiencia del campo visual. Los signos en los segmentos posteriores son típicamente bilaterales y simétricos. Las manifestaciones clínicas incluyen manchas algodonosas múltiples, telangiectasia, microaneurismas, edema macular, exudados duros y hemorragias retinianas. La angiografia con fluoresceína demuestra la falta de perfusión de los capilares y claudicación, anormalidades microvasculares intrarretinianas, microaneurismas y edema macular. Aunque la etiología precisa de la retinopatía por TMO no se ha elucidado, parece que se ve afectada por diversos factores: la toxicidad de la ciclosporina, la irradiación corporal total (TBI) y los agentes quimíoterapéuticos. La ciclosporina es un potente agente inmunomodulador que suprime la respuesta ¡nmunitaria del injerto contra el huésped. Puede provocar lesiones en las células endoteliales y efectos secundarios neurológicos y, por ello, se ha sugerido que es la causa de la retinopatía por TMO. Sin embargo, la retinopatía por TMO puede producirse sin el uso de ciclosporina, y no se ha demostrado que la ciclosporina provoque retinopatía por TMO en receptores de médula ósea autólogos o singenéicos. La ciclosporina, por lo tanto, no parece ser la única causa de la retinopatía por TMO. La irradiación corporal total (TBI) también ha sido implicada como causa de la retinopatía por TMO. La radiación lesiona la microvasculatura retíniana y provoca vasculopatía isquémica. Las variables tales como la dosis total de radiación y el intervalo de tiempo entre la radiación y la ablación de la médula ósea parece ser importante. Sin embargo, la retinopatía por TMO puede producirse en pacientes que no recibieron TBI, y la retinopatía por TMO no se observa en los receptores de trasplantes de órganos sólidos que recibieron dosis similares de radiación. Así, la TBI no es la única causa, pero es otro factor que contribuye al desarrollo de la retinopatía por TMO. Se ha sugerido que los agentes quimioterapéuticos son un factor que contribuye a la retinopatía por TMO. Las medicaciones tales como cisplatina, carmustina y ciclofosfamida pueden provocar efectos secundarios oculares que incluyen papiloedema, neuritis óptica, deficiencia del campo visual y ceguera cortical. Se ha sugerido que estos fármacos quimioterapéuticos pueden predisponer a los pacientes a daños retiñíanos inducidos por la radiación y potenciar el efecto dañino de la radiación. En general, los pacientes con retinopatía por TMO tienen buen pronóstico. La retinopatía habitualmente se resuelve de dos a cuatro meses después de interrumpir o reducir la dosis de ciclosporina. En un informe, el 69 por ciento de los pacientes experimentaron una resolución completa de los signos retiñíanos, y el 46 por ciento de los pacientes recuperaron completamente su agudeza visual inicial. Debido al pronóstico favorable y a la naturaleza relativamente no progresiva de la retinopatía por TMO, habitualmente no es necesaria una intervención agresiva.

Afecciones isquémicas La isquemia puede dividirse en 2 categorías: la primera implica la aterosclerosis acelerada que se produce habitualmente en los pacientes con diabetes, es decir, en las arterias femoral, poplítea y tibial posterior. Estos vasos, que a menudo sólo tienen 1 ó 2 cm de diámetro, pueden desarrollar placa aterosclerótíca, que disminuye gravemente el flujo venoso. Después de que los vasos grandes se ocluyen completamente pueden producirse ictus, infartos de miocardio y úlceras diabéticas que no cicatrizan en los pies. Esta forma de isquemia es esencialmente una enfermedad de los vasos grandes.

Demencia por ictus El 25% de las personas padecen demencia después de un ictus y muchos otros desarrollan demencia en los 5 a 10 años siguientes. Además, muchas personas experimentan deficiencias más sutiles en sus funciones cerebrales superiores (tales como habilidades de planificación y velocidad de procesamiento de la información) y presentan un riesgo muy elevado de desarrollar demencia subsiguientemente. Los ictus muy pequeños en las partes profundas del cerebro en este proceso (denominados enfermedad microvascular) parecen ser esenciales en el proceso que provoca un patrón identificado de atrofia cerebral específica de la demencia por ictus.

Síndrome isquémico ocular Los pacientes que padecen síndrome isquémico ocular (SIO) son generalmente personas mayores, cuya edad varía en el intervalo desde los 50 a los 90. Afecta a los hombres dos veces más habitualmente que a las mujres. El paciente sólo raramente es asintomático. La reducción de la visión está presente al acudir a consulta en el 90 por ciento de los casos, y el 40 por ciento de los pacientes presentan dolor ocular concomitante. También puede existir una historia concomitante o antecedente de ataques isquémicos transitorios o amaurosis fugax. Los pacientes también padecen la enfermedad sistémica conocida o desconocida en el momento de acudir a consulta. Las enfermedades sistémicas que aparecen más frecuentemente son hipertensión, diabetes, enfermedad coronaria isquémica, ictus y enfermedad vascular periférica. En menor grado, los pacientes manifiestan SIO producido por la arteritis de células gigantes (GCA). Los signos unilaterales están presentes en el 80 por ciento de los casos. Los signos habituales pueden incluir catarata unilateral avanzada, inflamación del segmento anterior, reacción de la cámara anterior asintomática, edema macular, venas retinianas dilatadas pero no tortuosas, hemorragias de puntos y manchas midperiféricas, manchas algodonosas, exudados y neovascularización de la papila y la retina. También puede existir una pulsación arterial espontánea, tensión intraocular elevada y neovascularización del iris y ángulo con glaucoma neovascular (GNV). Aunque el paciente puede presentar neovascularización del segmento anterior, puede darse hipotonía ocular debido a una perfusión arterial baja al cuerpo ciliado. En ocasiones, existen embolias retinianas visibles (placas de Hollenhorst). Los signos del SIO son provocados por ulceración ateromatosa y estenosis de las arterias carótidas internas en la bifurcación de la arteria carótida común. El cinco por ciento de los pacientes con estenosis arterial interna desarrollan SIO. Sin embargo, el SIO sólo se produce si el grado de estenosis supera el 90 por ciento. La estenosis de la arteria carótida reduce la tensión de perfusión al ojo, provocando los fenómenos isquémicos mencionados anteriormente. Una vez la estenosis alcanza el 90 por ciento, la tensión de perfusión de la arteria retiniana central (ARC) se reduce sólo al 50 por ciento. A menudo, la tensión arterial reducida se manifiesta en forma de una pulsación espontánea de la ARC. Los signos son variables y pueden incluir cualquiera o todos los signos anteriores. Los pacientes con SIO presentan una enfermedad sistémica significativa que debe evaluarse. La muerte por causa cardiaca es la principal causa de mortalidad en los pacientes con SIO - la tasa de mortalidad a cinco años es del 40 por ciento. Por esta razón, los pacientes con SIO deben derivarse a un cardiólogo para un análisis serologico completo, EKG, ECG y evaluación de las carótidas.

Enfermedades microvasculares del riñon El riñon está implicado en un número de afecciones clinocopatoiogicas diferentes que afectan a la microvasculatura sistémica y renal. Algunas de estas afecciones se caracterizan por lesión primaria de las células endoteliales, tales como: Síndrome hemolítico-urémico (SHU) y púrpura trombocitopénico trombótico (PTT) - El SHU y el PTT son enfermedades estrechamente relacionadas caracterizadas por anemia hemolítica microangiopática y deficiencia orgánica variable Tradicionaimente, el diagnóstico del SHU se realiza cuando la insuficiencia renal es una característica predominante del síndrome, tal como es común en los niños. En los adultos, la deficiencia neurológica predomina frecuentemente y entonces el síndrome se denomina PTT. La microangiopatía trombótica es la lesión patológica subyacente de ambos síndromes y los signos clínicos y de laboratorio en los pacientes con SHU o PTT se solapan en gran medida. Esto ha empujado a diversos investigadores a considerar los dos síndromes como un continuo de una única entidad patológica. Patogenia: Los datos experimentales sugieren poderosamente que la lesión de las células endoteliales es el evento principal en la patogenia de SHU/PTT. Los daños al endotelio desencadenan una cascada de eventos que incluye la coagulación intravascular local, la deposición de fibrina y la activación y agregación de las plaquetas. El resultado final es el signo histopatológico de la microangiopatía trombótica común a las diferentes formas del síndrome SHU/PTT. Si no se trata el SHU/PTT, la tasa de mortalidad se aproxima al 90%. El tratamiento de apoyo que incluye diálisis, medicaciones antihipertensoras, transfusiones de sangre y manejo de las complicaciones neurológicas, contribuye a la supervivencia mejorada de los pacientes con SHU/PTT. Un adecuado equilibro hídrico y el descanso del intestino son importantes para el tratamiento del SHU típico asociado a diarrea. nefritis por radiation - Las consecuencias a largo plazo de la irradiación renal superior a 2500 rad pueden dividirse en cinco síndromes clínicos: (i) La nefritis aguda por radiación se produce aproximadamente en el 40% de los pacientes tras un periodo de latencia de 6 a 13 meses. Se caracteriza clínicamente por un inicio brusco de hipertensión, proteinuria, edema e insuficiencia renal progresiva que, en la mayoría de los casos, provoca insuficiencia renal terminal. (ii) La nefritis crónica por radiación, a la inversa, presenta un periodo de latencia que varía entre 18 meses y 14 años tras la agresión inicial. Es de inicio gradual y se caracteriza por hipertensión, proteinuria y pérdida gradual de la función renal. (iii) El tercer síndrome se manifiesta de 5 a 19 años tras la exposición a la radiación en forma de proteinuria benigna con función renal normal. (iv) Un cuarto grupo de pacientes muestra sólo hipertensión benigna de 2 a 5 años después y puede presentar proteinuria variable. La hipertensión maligna tardía surge de 18 meses a 1 1 años después de la irradiación en pacientes con nefritis por radiación o hipertensión benigna crónicas. La eliminación del riñon afectado revierte la hipertensión. Se ha informado de daños inducidos por radiación a las arterias renales con hipertensión renovascular subsiguiente. (v) Se ha observado un síndrome de insuficiencia renal análogo a la nefritis aguda por radiación en los pacientes de transplante de médula ósea (TMO) tratados con irradiación corporal total (TBI). Se ha reseñado que la irradiación provoca disfunción endotelial pero no afecta a las células de músculo liso vasculares en la fase temprana posterior a la radiación. La radiación podría dañar directamente el DNA, provocando una menor regeneración de estas células y denudación de la membrana basal de los capilares y túbulos glomerulares. No está claro cómo esta agresión inicial finalmente produce glomerulosclerosis, atrofia tubular y fibrosis intersticial. Se conjetura que la degeneración de la capa de las células endoteliales puede provocar trombosis intravascular en los capilares y las arteriolas menores. Esta angiopatía intrarrenal explicaría entonces la fibrosis renal progresiva y la hipertensión que caracterizan a la nefritis por radiación. Un estudio reciente con ríñones de ratón irradiados mostró un aumento dependiente de la dosis de los leucocitos en el córtex renal, lo que sugiere un papel de los procesos inflamatorios en la nefritis inducida por radiación. En otras enfermedades renales, la microvasculatura del riñon se ve afectada en trastornos autoinmunitarios, tales como esclerosis sistémica (escleroderma). La afectación del riñon en la esclerosis se manifiesta como una enfermedad renal crónica de progresión lenta o como una crisis de escleroderma renal (SRC), que se caracteriza por hipertensión maligna y azoemia aguda. Se postula que la SRC está provocada por un fenómeno de tipo Raynaud del riñon. El vasoespasmo grave provoca isquemia cortical y mayor producción de renina y angiotensina II, que a su vez perpetúan la vasoconstricción renal. Los cambios hormonales (embarazo), el estrés físico y emocional o el frío pueden desencadenar el vasoespasmo arterial de tipo Raynaud. El papel del sistema de renina y angiotensina en la perpetuación de la isquemia renal es subrayado por el significativo beneficio de los inhibidores de ACE en el tratamiento de SRC. En los pacientes con SRC que progresan a insuficiencia renal aguda a pesar del tratamiento antihipertensor, se hace necesaria la diálisis. Se ha empleado tanto la diálisis peritoneal como la hemodiálisis. El informe de la End-Stage Renal Disease (ESRD) Network sobre 3 1 pacientes con ESRD inducida por esclerosis sistémica sometidos a diálisis entre 1983 y 1985 reveló una tasa de supervivencia del 33% a los 3 años.

La microcirculación renal también puede afectar a la enfermedad drepanocítica, a la que el riñon es particularmente susceptible debido a la baja tensión de oxígeno obtenida en los vasos profundos de la médula renal como resultado de la transferencia contracorriente de oxígeno por los vasa recta. Las arterias y arteriolas renales más pequeñas también pueden ser objeto de lesión tromboembólica debida al material que contiene colesterol desprendido de las paredes de los vasos grandes. Tomadas en conjunto, las enfermedades que provocan la oclusión transitoria o permanente de la microvasculatura renal de forma uniforme provocan la alteración de la perfusión glomerular y, por lo tanto, de la velocidad de filtración glomerular, constituyendo así una amenaza grave para la homeostasis.

Insuficiencia renal aguda (IRA) La IRA puede ser provocada por la enfermedad microvascular o macrovascular (oclusión de la arteria renal principal o enfermedad aórtica abdominal grave). Las enfermedades microvasculares clásicas a menudo cursan con hemólisis microangiopática e insuficiencia renal aguda provocada por la trombosis u oclusión de los capilares glomerulares, a menudo con trombocitopenia concomitante. Ejemplos típicos de estas enfermedades incluyen: a) Púrpura trombocitopénico trombótico - El quinteto clásico en el púrpura trombocitopénico trombótico incluye fiebre, cambios neurológicos, insuficiencia renal, anemia hemolítica microangiopática y trombocitopenia. b) Síndrome urémico hemolítico- El síndrome urémico hemolítico es similar al púrpura trombocitopénico trombótico pero no presenta cambios neurológicos. c) Síndrome de HELLP (hemolisis, enzimas hepáticas elevadas y plaquetas bajas). El síndrome HELLP es un tipo de síndrome urémico hemolítico que se produce en las mujeres embarazadas con la adición de elevación de las transaminasas. La insuficiencia renal aguda puede presentarse en todos los entornos médicos pero se adquiere principalmente en los hospitales. La afección se desarrolla en el 5 por ciento de los pacientes hospitalizados y aproximadamente el 0.5 por ciento de los pacientes hospitalizados necesitan diálisis. Durante los últimos 40 años, la tasa de supervivencia para la insuficiencia renal aguda no ha mejorado, principalmente porque los pacientes afectados son ahora más mayores y presentan más afecciones concomitantes. La infección provoca el 75 por ciento de las muertes en los pacientes con insuficiencia renal aguda, y las complicaciones cardiorrespiratorias son la segunda causa más común de muerte. Dependiendo de la gravedad de la insuficiencia renal, la tasa de mortalidad puede variar en el intervalo desde el 7 por ciento hasta el 80 por ciento. La insuficiencia renal aguda puede dividirse en tres categorías: IRA prerrenal, intrínseca y postrenal. La IRA intrínseca se subdivide en cuatro categorías: enfermedad tubular, enfermedad glomerular, enfermedad vascular (incluye microvascular) y enfermedad intersticial.

Enfermedad renal progresiva Existen indicios de que la enfermedad renal progresiva se caracteriza por una pérdida progresiva de la microvasculatura. La pérdida de la microvasculatura presenta una correlación directa con el desarrollo de cicatrices glomerulares y tubulointersticiales. El mecanismo es mediado en parte por una reducción de la respuesta proliferativa endotelial, y esta deficiencia en la reparación capilar es mediada por la alteración de la expresión local tanto de factores renales angiogenos (factor de crecimiento endotelial vascular) como antiangiógenos (tromboespondina I). La alteración del equilibrio de los factores de crecimiento angiogenos está mediada tanto por las citoquinas asociadas a macrofagos (interleuquina-? ß,) como por mediadores vasoactivos. Finalmente, existen indicios fascinantes de que la estimulación de la angiogenia y/o de la reparación de los capilares puede estabilizar la función renal y ralentizar la progresión y que este beneficio se produce de forma independiente de los efectos sobre la TA o la proteinuria. Para información adicional véase Brenner y Rector, The Kidney, 7a ed., Copyright © 2004 Elsevier: Capítulo 33 - Microvascular diseases of the kidney y también Tiwari y Vikrant Journal of Indian Academy of Clinical Medicine Vol. 5, n.° 1 Review Article- Sepsis and the Kidney.

Trastornos auditivos Ototoxicidad inducida por sustancias químicas Los efectos tóxicos de diversos fármacos ototóxicos sobre las células auditivas y las neuronas del ganglio espiral son a menudo el factor limitante para su utilidad terapéutica. Los fármacos ototóxicos principales incluyen el agente quimioterapéutico ciplastina y sus análogos, antibióticos aminoglucósidos de uso habitual, por ejemplo gentamicina, para el tratamiento de infecciones provocadas por bacterias gram negativas, quinina y su análogos, salicilato y sus análogos y diuréticos del asa. Por ejemplo, se sabe que los aminoglucósidos antibacterianos tales como las gentamicinas, estreptomicinas, canamicinas, tobramicinas y similares presentan toxicidad grave, en particular ototoxicidad y nefrotoxicidad, que reducen la utilidad de tales agentes antimicrobianos (véase Goodman y Gilman, The Pharmacological Basis of Therapeutics, 6a ed., A. Goodman Gilman y cois., editores; Macmillan Publishing Co., Inc., Nueva York, páginas 1 169-71 (1980)). Claramente, la ototoxicidad es un efecto secundario que limita la dosis de la administración de antibióticos. Del 4 al 15% de los pacientes que reciben 1 gramo al día durante más de 1 semana desarrollan una pérdida auditiva cuantificable, que empeora lentamente y puede provocar sordera permanente si continúa el tratamiento. La ototoxicidad es también un efecto secundario grave que limita la dosis para la cisplatina, un complejo de coordinación de platino, que ha demostrado ser eficaz en una variedad de cánceres humanos que incluyen cáncer de testículo, ovario, vejiga y cabeza y cuello. Cisplatina (Platinol®) daña los sistemas auditivo y vestibular. Los salicilatos, tales como la aspirina, son los fármacos terapéuticos de uso más habitual debido a sus efectos antiinflamatorios, analgésicos, antipiréticos y antitrombóticos. Desafortunadamente, estos también presentan efectos secundarios ototóxicos. A menudo provocan acúfenos ("zumbidos") y pérdida auditiva temporal. Además, si el fármaco se usa en dosis elevadas durante un tiempo prolongado, la deficiencia auditiva puede volverse persistente e irreversible. Por consiguiente, existe la necesidad de un medio para prevenir, reducir o tratar la incidencia y/o gravedad de los trastornos y deficiencias auditivas del oído interno que afectan al tejido del oído interno, en particular las células ciliadas del oído interno. De interés particular son aquellas afecciones que surgen como efectos secundarios no deseados de los fármacos ototóxicos que incluyen cisplatina y sus análogos, antibióticos aminoglucosídicos, salicilato y sus análogos o diuréticos del asa. Además, existe una necesidad de métodos que permitan una dosificación mayor y por lo tanto más eficaz con estos fármacos que induce ototoxicidad, mientras que a la vez se previenen o reducen los efectos ototóxicos provocados por estos fármacos. Lo que se necesita es un procedimiento que proporcione un medio seguro, eficaz y prolongado para el tratamiento profiláctico o curativo de deficiencias auditivas relacionadas con los daños, pérdida o degeneración de los tejidos del oído interno, en particular los inducidos por ototoxinas y en particular los que afectan a las células ciliadas del oído interno. Además, se requiere un procedimiento y una composición para el tratamiento de daños y sordera provocados por traumatismo del oído interno (traumatismo acústico). Sin comprometerse con la teoría, se cree que los fármacos de cisplatina y otros fármacos que inducen ototoxicidad (tales como antibióticos aminoglucosídicos), así como el traumatismo acústico, pueden inducir los efectos ototóxicos mediante la muerte celular programada o apoptosis del tejido del oído interno, en particular de las células ciliadas del oído interno (Zhang y cois., Neuroscience 120 (2003) 191 -205; Wang y cois., J. Neuroscience 23((24): 8596-8607). En los mamíferos, las células ciliadas auditivas se producen sólo durante el desarrollo embrionario y no se regeneran si se pierden durante la vida posterior al nacimiento, por lo tanto, una pérdida de las células ciliadas provocará una sordera profunda e irreversible. Desafortunadamente, actualmente, no existen tratamientos eficaces para tratar la cóclea y revertir esta afección. Así, un tratamiento eficaz para evitar la muerte celular de las células ciliadas auditivas sería de gran valor terapéutico. Úlceras de decúbito Las llagas de decúbito o úlceras de decúbito, son zonas de piel y tejidos dañadas que se desarrollan cuando una presión mantenida (habitualmente por una cama o silla de ruedas) corta la circulación a partes vulnerables del cuerpo, especialmente la piel de los glúteos, caderas y talones. La falta de un flujo sanguíneo adecuado provoca necrosis isquémica y ulceración del tejido afectado. Las úlceras de decúbito se presentan más a menudo en pacientes con sensación disminuida o ausente o que están debilitados, demacrados, paralizados o en cama durante mucho tiempo. Los tejidos que recubren el sacro, los isquiones, los trocánters mayores, los maleólos externos y los talones son especialmente susceptibles; otros sitios pueden verse afectados dependiendo de la posición del paciente. Las úlceras de decúbito son heridas que normalmente solo cicatrizan muy lentamente y especialmente en tales casos por supuesto es muy importante una cicatrización mejorada y más rápida para el paciente. Además, el coste que representa el tratamiento de pacientes que padecen tales heridas se reduce notablemente cuando se mejora la cicatrización y se produce más rápidamente.

Afecciones isquémicas Las lesiones isquémicas son la expresión clínica más habitual de lesión celular por carencia de oxígeno. Los modelos más útiles para estudiar la lesión isquémica implican la oclusión completa de una de las arterias finales a un órgano (por ejemplo, una arteria coronaria) y examen del tejido (por ejemplo, el músculo cardiaco) en las zonas que riega la arteria. Durante la isquemia se producen cambios patológicos complejos en diversos sistemas celulares. Hasta un cierto punto, durante un tiempo que varía entre los distintos tipos de células, la lesión puede ser reparable y las células afectadas pueden recuperarse si vuelve a haber oxígeno y sustratos metabólicos disponibles al restablecer el riego sanguíneo. Cuando la duración de la isquemia es mayor, la estructura celular continua deteriorándose, debido a la incesante progresión de los mecanismos de lesión en curso. Con el tiempo, la maquinaria energética de la célula - la central energética oxídativa mitocondrial y la ruta glucolítica - se dañan de forma irreparable y el restablecimiento del flujo sanguíneo (reperfusión) no puede recuperar la célula dañada. Incluso si la maquinaria energética se mantuviera intacta, los daños irreparables al genoma o a las membranas celulares asegurará un resultado letal independientemente de la reperfusión. Esta lesión irreversible se manifiesta habitualmente en forma de necrosis, pero la apoptosis también puede desempeñar un papel. En ciertas circunstancias, cuando se restaura el flujo sanguíneo a las células que previamente habían sufrido la isquemia pero no habían muerto, la lesión a menudo paradójicamente se exacerba y progresa a un paso acelerado - esta es la lesión por reperfusión. La lesión por reperfusión puede producirse en una variedad de afecciones, especialmente durante la intervención médica que incluye, pero sin limitación, angioplastia, cirugía cardiaca o trombolisis; transplante de órganos; como resultado de la cirugía plástica; durante el síndrome compartimental grave; durante la unión de miembros amputados; como resultado del síndrome de insuficiencia multiorgánica; en el cerebro como resultado de ¡ctus o traumatismo cerebral; relacionadas con heridas crónicas tales como úlceras de decúbito, úlceras venosas y úlceras diabéticas; durante la isquemia en músculos esqueléticos o el transplante de miembros; como resultado de la isquemia mesentéríca o de la enfermedad intestinal isquémica aguda; insuficiencia respiratoria como resultado de isquemia en el torso inferior, que provoca hipertensión pulmonar, hipoxemia y edema pulmonar no cardiógeno; insuficiencia renal aguda tal como se observa tras el transplante renal, intervención quirúrgica mayor, traumatismo y choque septicémico así como hemorrágico; septicemia; isquemia retiniana que se produce como resultado de la oclusión vascular aguda, que produce pérdida de visión en un número de enfermedades oculares, tales como glaucoma agudo, retinopatía diabética, retinopatía por hipertensión y oclusión vascular retiniana; isquemia coclear; insuficiencia del colgajo en intervenciones quirúrgicas microvasculares para defectos de cabeza y cuello; fenómeno de Raynaud y las lesiones isquémicas digitales asociadas en el escleroderma; lesiones de la médula espinal; cirugía vascular, rabdomiolisis traumática (síndrome de aplastamiento); y mioglobinuria. Además, la isquemia/reperfusión puede estar implicada en las siguientes afecciones: hipertensión, enfermedad vascular cerebral por hipertensión, ruptura de aneurisma, una constricción u obstrucción de un vaso sanguíneo - tal como se produce en el caso de un trombo o émbolo, angioma, discrasias sanguíneas, cualquier forma de función cardiaca deficiente que incluye parada o insuficiencia cardiacas, hipotensión sistémica, parada cardiaca, choque cardiógeno, choque septicémico, traumatismo de la médula espinal, traumatismo craneal, ataque, sangrado de un tumor; y enfermedades tales como ictus, enfermedad de Parkinson, epilepsia, depresión, ALS, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington y cualquier otra demencia inducida por enfermedades (tales como la demencia inducida por VIH por ejemplo). Además, un episodio isquémico puede ser provocado por una lesión mecánica al sistema nervioso central, tal como la resultante por un golpe en la cabeza o columna. El traumatismo puede implicar una agresión a los tejidos tal como una abrasión, incisión, contusión, perforación, compresión, etc., tal como la que puede producirse por un contacto traumático de un objeto extraño con cualquier zona de la cabeza, cuello o columna vertebral o dependiente de ellos. Otras formas de lesión traumática pueden producirse por la constricción o compresión del tejido del SNC por una acumulación inadecuada de líquido (por ejemplo, un bloqueo o disfunción de la producción, recambio o regulación del volumen normales del líquido cefaloraquídeo o del líquido del humor vitreo, o un hematoma o edema subdural o intracraneal). De forma similar, la constricción o compresión traumáticas pueden producirse por la presencia de una masa de tejido anormal, tal como un tumor metastático o primario.

En conclusión, los actuales tratamientos para la prevención y/o tratamiento de EPOC, enfermedades microvasculares de degeneración macular y afecciones ototóxicas no son satisfactorios y existe una necesidad por lo tanto de desarrollar compuestos para este fin. También existe la necesidad de desarrollar un tratamiento y un medicamento que pueda tratar los efectos ototóxicos asociados actualmente a ciertos fármacos y afecciones, en particular a los agentes quimioterapéuticos de cisplatina y ciertos antibióticos sin sacrificar la eficacia de los fármacos. Además, existe una necesidad de desarrollar un tratamiento y medicamento que pueda tratar los efectos ototóxicos asociados al traumatismo acústico o traumatismo mecánico del oído interno. Además, existe una necesidad de desarrollar un tratamiento y un medicamento para el tratamiento de úlceras de decúbito, isquemia y afecciones relacionadas con la isquemia y la reperfusión. Todas las enfermedades e indicaciones que se describen anteriormente en la presente memoria, así como otras enfermedades y afecciones que se describen en la presente memoria tales como el IM pueden tratarse también mediante los compuestos novedosos de esta invención.

RTP801 El gen RTP801 , fue descrito por primera vez por el cocesionario de la presente solicitud. Las patentes de Estados Unidos n.° 6455674, 6555667 y 6740738, todas cedidas a uno de los cocesionarios de la presente solicitud de patente, describen y reivindican per se el polinucleótido y polipéptido RTP801 , y anticuerpos dirigidos contra el polipéptido. RTP801 representa una diana génica única para el factor inducible por hipoxia-1 (HIF-1 ) que puede regular la patogenia inducida por hipoxia de forma independiente de factores de crecimiento tales como VEGF.

Las siguientes solicitudes y publicaciones de patentes proporcionan aspectos de información de los antecedentes. El documento WO 2001070979 se refiere a marcadores de ácido nucleico que están hiperexpresados en las células de cáncer de ovario. El documento US 6673549 describe una combinación que comprende cDNA que se expresan de forma diferente como respuesta al tratamiento con esteroides. La solicitud de patente de Estados Unidos 2003 65864 se refiere a cDNA que se expresan de forma diferente en células tratadas con un agente que desmetila DNA. La solicitud de patente de Estados Unidos 2003108871 se refiere a una composición que comprende diversos cDNA que se expresan de forma diferente en cultivos de células hepáticas humanas C3A tratadas. La solicitud de patente de Estados Unidos 2002119463 describe una composición novedosa, de utilidad para tratar y diagnosticar cáncer de próstata, comprendiendo dicha composición cDNA humanos que se expresan de forma diferente en el cáncer de próstata. El documento WO 2004018999 describe un procedimiento para evaluar, caracterizar, controlar, prevenir y tratar el cáncer de cuello de útero. El documento EP 1394274 se refiere a un procedimiento de realizar pruebas para determinar el asma bronquial o la enfermedad pulmonar obstructiva crónica comparando el nivel de expresión de un gen marcador en una muestra biológica de un sujeto con el nivel de expresión del gen en una muestra de un sujeto sano. El documento WO 2002101075 se refiere a una molécula de ácido nucleico aislada de utilidad para detectar, caracterizar, prevenir y tratar cánceres de cuello de útero humanos. El documento WO 2003010205 se refiere a la inhibición de la angiogenia para tratar la cicatrización de heridas, retinopatía, isquemia, inflamación, microvasculopatía, consolidación ósea e inflamación cutánea. El documento WO 2002046465 se refiere a la identificación de un gen implicado en enfermedades para tratar afecciones reguladas por hipoxia. El documento WO 2002031111 se refiere a polipéptidos y las proteínas que codifican y se proporcionan muchos usos para ellos. El documento WO 2001012659 se refiere a ácidos nucleicos de utilidad en metodologías de DNA recombinante. El documento WO 2001077289 describe seiscientos veintitrés polinucleótidos derivados de una variedad de fuentes de tejido humano. El documento WO 2003101283 se refiere a una combinación que comprende muchos cDNA y proteínas.

El documento JP 2003259877 se refiere a muchos marcadores de la enfermedad fibrosis hepática. Tzipora Shoshani, y cois. Identification of a Novel Hypoxia-inducible Factor 1-Responsive Gene, RTP801. Involved in Apoptosis. MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY, Abril de 2002, páginas 2283-2293; este artículo cuyos coautores son los inventores de la presente invención, detalla el descubrimiento del gen RTP801 (un gen dependiente de HIF-1 novedoso por aquel entonces). Anat Brafman, y cois. Inhibition of Oxygen-lnduced Retinopathy in RTP801-Deficient Mice. Invest Ophthalmol. Vis Sci. Octubre de 2004; 45 (10): 3796-805; cuyos coautores son también los inventores de la presente invención, este artículo demuestra que, en los ratones con RTP801 inactivado, la hiperoxia no provoca degeneración del entramado capilar retiniano. Leif W. Ellisen, y cois. REDD1, A Developmentally Regulated Transcriptional Target of p63 and p53, Links p63 to Regulation of Reactive Oxygen Species. Molecular Cell, Vol. 10, 995-1005, noviembre de 2002; este artículo demuestra que la hiperexprseión de RTP801 (denominado en aquel documento REDD1 ) provoca una producción mayor de especies de oxígeno reactivas. Richard DR, Berra E, y Pouyssegur J. Non-hypoxic pathway mediates the induction of hypoxia-inducible factor 1 alpha in vascular smooth músete cells. J. Biol. Chem. 1 de septiembre de 2000; 275(35): 26765-71 . Este artículo demuestra que la transcripción dependiente de HIF-I puede inducirse mediante la producción excesiva de especies de oxígeno reactivas. Rangasami T, y cois., Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette smoke-induced emphysema in mice. Presentado para publicación al Journal of Clinical Investigation. Este trabajo se refiere a ratones con una defensa deficiente contra antioxidante.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención proporciona métodos y composiciones novedosas para tratar trastornos microvasculares, degeneración macular, trastornos respiratorios y lesión o enfermedad de la médula espinal. En una modalidad, se proporcionan moléculas novedosas que inhiben RTP801 y que pueden usarse para tratar diversas enfermedades e indicaciones. En otra modalidad, la presente invención proporciona un procedimiento de tratar a un paciente que padece un trastorno microvascular, degeneración macular o un trastorno respiratorio, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 . Otra modalidad de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar a un paciente que padece EPOC, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801. En una modalidad, el inhibidor es una molécula de ARNip, una molécula no codificante, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizador), un péptido negativo dominante o una ribozima. Otra modalidad de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar a un paciente que padece degeneración macular, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801. En una modalidad el inhibidor es una molécula de ARNip, una molécula no codificante, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizador), un péptido negativo dominante o una ribozima. Otra modalidad de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar a un paciente que padece un trastorno microvascular, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801. En una modalidad, el inhibidor es una molécula de ARNip, una molécula no codificante, un anticuerpo (tal como un anticuerpo neutralizador), un péptido negativo dominante o una ribozima. Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece un trastorno respiratorio. En una modalidad el trastorno respiratorio es EPOC y el inhibidor es preferiblemente un ARNip. Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece degeneración macular. En una modalidad, la degeneración macular es DMRE y el inhibidor es preferiblemente un ARNip. Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece un trastorno microvascular. En una modalidad el trastorno microvascular es retinopatía diabética y el inhibidor es preferiblemente un ARNip. La presente invención se refiere de forma general a métodos y composiciones para tratar o prevenir la incidencia o gravedad de deficiencia auditiva (o deficiencia del equilibrio), en particular deficiencia auditiva asociada a la muerte celular de las células ciliadas del oído. Los métodos y composiciones implican la administración a un mamífero que necesite tal tratamiento de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , en particular los RNA interfirientes pequeños (ARNips) novedosos. De forma más específica, la presente invención proporciona métodos y composiciones para tratar a un paciente que padece deficiencia auditiva, u otras otopatologías asociadas a la muerte celular de las células ciliadas del oído. Tales otopatologías pueden deberse a traumatismo acústico, traumatismo mecánico o pérdida auditiva inducida por ototoxinas. Los métodos de la invención que comprenden administrar al paciente uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , en particular ARNip que inhiben RTP801 típicamente en forma de una composición farmacéutica, en una dosis terapéuticamente eficaz de forma que asi se trate al paciente. En una modalidad, la presente invención proporciona composiciones y métodos mejorados para tratamientos que requieren la administración de un fármaco que tiene un efecto secundario ototóxico, que provoca deficiencia auditiva, combinado con una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más moléculas de ARNip que inhiben RTP801 , para tratar o prevenir la ototoxicidad inducida por el fármaco. Las composiciones de la invención pueden administrarse a intervalo(s) adecuado(s) bien antes, de forma subsiguiente o de forma sustancialmente concurrente a la administración del fármaco ototóxico, que provoca deficiencia auditiva, que induce daños de apoptosis tisular en el oído interno. De forma similar, este tratamiento puede ser eficaz como tratamiento profiláctico antes o conjuntamente con afecciones que provocan traumatismo acústico. Por consiguiente, es un objeto de la invención proporcionar una composición mejorada que contiene una cantidad terapéuticamente eficaz de una o más moléculas de ARNip que inhiben RTP801 combinadas con un fármaco ototóxico, que provoca deficiencia auditiva para su administración a un mamífero. Dichos fármacos combinados pueden administrarse por separado; las moléculas de ARNip que inhiben RTP801 entonces se administrarían de forma local, mientras que el fármaco ototóxico que provoca deficiencia auditiva se administra sistémicamente. Las moléculas de ARNip pueden administrarse antes, de forma simultánea o de forma subsiguiente al fármaco ototóxico. Tales composiciones combinadas pueden contener además un vehículo farmacéuticamente aceptable. La composición farmacéutica presentará una ototoxicidad menor que el fármaco ototóxico solo, y preferiblemente, tendrá una dosificación mayor del fármaco ototóxico que la que se usa habitualmente. Ejemplos de tales composiciones mejoradas incluyen cisplatina u otro agente antineoplásico ototóxico o un(os) antibiótico(s) aminoglucosídico(s) combinado(s) con la cantidad terapéuticamente eficaz de una o más moléculas de ARNip que inhiben RTP801 . Todavía de forma adicional, la invención se refiere al uso de las composiciones de la invención en casos en los que son necesarios diuréticos. La presente invención proporciona una solución a la técnica que durante mucho tiempo ha buscado un tratamiento y un medicamento que pueda tratar los efectos ototóxicos asociados actualmente a ciertos diuréticos y, en particular, a los diuréticos del asa más populares y de uso más habitual, sin sacrificar su eficacia diurética. Todavía de forma adicional, la invención se refiere al uso de las composiciones de la invención en casos en los que es necesaria la quinina o compuestos de tipo quinina. La presente invención proporciona una solución a la técnica que durante mucho tiempo ha buscado un tratamiento y un medicamento que pueda tratar los efectos ototóxicos asociados actualmente a ciertas quininas sin sacrificar su eficacia. La presente invención se refiere además a métodos y composiciones para tratar o prevenir la frecuencia o gravedad de las úlceras de decúbito. Los métodos y composiciones implican la administración a un mamífero que necesite tal tratamiento de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , en particular de los RNA interfirientes pequeños (ARNips) novedosos. Además, la presente invención se refiere a métodos y composiciones para el tratamiento de cualquier lesión o afección isquémica o por reperfusión de isquemia, tal como se describe en la presente memoria.

Tales métodos y composiciones implican la administración a un mamífero que necesite tal tratamiento de una cantidad profilácticamente o terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , en particular los RNA interfirientes pequeños (ARNips) novedosos.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La presente invención, en algunas de sus modalidades, se refiere a la inhibición del gen o polipéptido RTP801 para el tratamiento de enfermedades oculares trastornos respiratorios, trastornos microvasculares, trastornos auditivos y afecciones isquémicas, entre otros. Como se describirá en la presente memoria descriptiva, los inhibidores preferidos a usar con la presente invención son moléculas biológicas. Sin adherirse a ninguna teoría, los autores de la presente invención han encontrado que el RTP801 está implicado en diversos estados de enfermedad que incluyen trastornos microvasculares, enfermedades oculares, trastornos respiratorios, trastornos auditivos, úlceras de decúbito, afecciones isquémicas y lesión de la médula espinal, y sería beneficioso para inhibir el RTP801 con el fin de tratar cualquiera de dichos trastornos o enfermedades. Los métodos, las moléculas y las composiciones que inhiben el RTP801 son mencionados detenidamente en la presente memoria descriptiva, y cualquiera de dichas moléculas y/o composiciones puede ser empleadas beneficiosamente en el tratamiento de un paciente que padece de cualquiera de dichas afecciones. La presente invención proporciona métodos y composiciones para inhibir la expresión del gen RTP801 in vivo. En general, el procedimiento incluye administrar oligoribonucleótidos, tales como pequeños RNA interferente (es decir, ARNip) que son dirigidos a un mRNA particular y se hibrídan al mismo, o material de ácido nucleico que puede producir ARNip en una célula, en una cantidad suficiente para regular por disminución la expresión de un gen diana por un mecanismo de interferencia de RNA. En particular, el procedimiento en cuestión puede ser utilizado para inhibir la expresión del gen RTP801 para el tratamiento de trastornos respiratorios, trastornos microvasculares, trastornos oculares y afecciones auditivas. De este modo, en una modalidad la presente invención proporciona un procedimiento para tratar un paciente que padece una afección seleccionada entre un trastorno microvascular, una enfermedad ocular, un trastorno respiratorio, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o una lesión de la médula espinal u otra herida, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 en una cantidad terapéuticamente eficaz para de este modo tratar al paciente. La invención proporciona, además, un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular, un trastorno respiratorio, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o una lesión de la médula espinal u otra herida, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 , en una dosificación y a lo largo de un periodo de tiempo suficiente para favorecer la recuperación. La enfermedad ocular puede ser degeneración macular tal como la degeneración macular relacionada con la edad (AMD), entre otras. El trastorno microvascular puede ser retinopatía diabética o insuficiencia renal aguda, entre otros, El trastorno respiratorio puede ser enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, entre otros. El trastorno auditivo puede ser traumatismo acústico o sordera inducida por cisplatina, entre otros. El inhibidor de RTP801 puede ser seleccionado a partir de una gran variedad de moléculas, que incluyen perno no se limitan a compuestos tales como polinucleótidos, fragmentos no codificante, moléculas de RNA que dirigen el mRNA del gen RTP801 tal como ribozimas o ARNip (tales como los ARNip de los cuadros A-D y en particular, los número de ARNip: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los números de ARNip: 260-262, y 264-268 del cuadro D), o vectores de expresión que los comprenden; polipéptidos tales como negativos dominantes, anticuerpos (tales como un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo presente en un polipéptido RTP801 que comprende aminoácidos consecutivos, cuya secuencia se describe en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2)o, en algunos casos enzimas. Además, el inhibidor de RTP801 puede ser un inhibidor químico tal como una pequeña molécula, por ejemplo, moléculas químicas con una peso molecular bajo, por ejemplo un peso molecular inferior a 2000 daltones. Los inhibidores específicos de RTP801 son ofrecidos más adelante. La presente invención proporciona, además, un procedimiento para tratar a un paciente que padece de degeneración macular, EPOC, retinopatía diabética o sordera inducida por traumatismo acústico, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 que comprende un polinucleótido que se híbrida específicamente al mRNA trascrito a partir del gen RTP801 y regula por disminución la expresión del gen RTP801 para de este modo tratar al paciente. El polinucleótido puede ser un ARNip que comprende nucleotidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en los cuadros A-D (SEQ ID NO: 3-558) y en particular, los números de ARNip: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los números de ARNip 257, 260-262, y 264-268 del cuadro D. Además, una modalidad adicional de la presente invención se refiere a un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular, un trastorno respiratorio, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o una lesión de la médula espinal u otra herida, que comprende administrar a un paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 que comprende una molécula de ARNip, opcionalmente una molécula de ARNip detallada en cualquiera de los cuadros A-D, en una dosificación y a lo largo de un periodo de tiempo para de este modo tratar al paciente. Se proporciona un procedimiento adicional para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular, un trastorno respiratorio, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o una lesión de la médula espinal u otra herida, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de una molécula de RNA que se dirige al mRNA del gen RTP801 en una dosificación y a lo largo de un periodo de tiempo para de este modo tratar al paciente. La molécula de RNA puede ser una molécula de ARNip, tal como una molécula de ARNip detallada en los cuadros A-D y en particular los números de ARNip: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los números de ARNip: 257, 260-262, y 264-268 del cuadro D o una ribozima. La presente invención proporciona, además, un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno microvascular, una enfermedad ocular, un trastorno respiratorio, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o una lesión de la médula espinal u otra herida o cualquiera de las afecciones descritas en la presente memoria descriptiva, que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende una dosis terapéuticamente eficaz de una molécula de ARNip que se dirige al mRNA del gen RTP801 , opcionalmente una molécula de ARNip detallada en los cuadros A-D, en una dosificación y a lo largo de un periodo de tiempo para de este modo tratar al paciente, Además. La enfermedad ocular puede ser degeneración macular tal como la degeneración macular relacionada con la edad (AMD); el trastorno microvascular puede ser retinopatía diabética o insuficiencia renal aguda; el trastorno respiratorio puede ser EPOC y los aspectos de la EPOC que es tratada pueden comprender, pero no limitarse a, enfisema, bronquitis crónica o ambos, y el trastorno auditivo puede ser sordera inducida por traumatismo acústico. La presente invención se refiere, además, al uso del los nuevos ARNip descrito en la presente memoria descriptiva en los tratamientos de afección auditiva en la cual la inhibición de la expresión de RTP801 es beneficiosa. En una modalidad, la presente invención constituye un procedimiento para tratar un mamífero que tiene o es propenso a una afección auditiva (o de equilibrio) o para tratar un mamífero profilácticamente en condiciones en las cuales la inhibición de la expresión de RTP801 es beneficiosa. El procedimiento de esta modalidad de la presente invención prevendría o reduciría la aparición o la gravedad de una afección auditiva (o de equilibrio) que se resultaría de la lesión pérdida, o degeneración celular del oído interno, en particular producida por un traumatismo acústico o un agente ototóxico. En esta modalidad, el procedimiento de la invención incluye administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , particularmente los nuevos ARNip de la presente invención. En una modalidad, el objeto de la presente invención es proporcionar un procedimiento para tratar un mamífero, para prevenir, reducir o tratar una afección, trastorno o desequilibrio auditivo, preferiblemente un traumatismo acústico o una afección auditiva inducida por ototoxina, administrando a un mamífero que necesita tal tratamiento una composición de la invención. Una modalidad es un procedimiento para tratar un trastorno o afección auditiva en el cual el traumatismo auditivo resulta de una única exposición a un sonido extremadamente alto o una exposición continua a un entorno ruidoso que puede producir sordera a lo largo del tiempo. La afección auditiva puede también ser producida por un traumatismo físico en el oído. Otra modalidad es un procedimiento para tratar un trastorno o afección auditiva en la cual la ototoxicidad resulta de la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un fármaco farmacéutico ototóxico. Los fármacos ototóxicos típicos son agentes quimioterapéuticos, por ejemplo agentes antineoplásicos y antibióticos. Otros candidatos posibles incluyen diuréticos del bucle, quininas o un compuesto de tipo quinina, y salicilato o compuestos de tipo salicilato. Estos métodos son especialmente eficaces cuando el compuesto ototóxico es un antibiótico, preferiblemente un antibiótico aminoglucósido Los antibióticos aminoglucósidos ototóxicos incluyen pero no se limitan a meomicina, gentamicina, paromomicina, ribostamicina, lividomicina, canamicina, amicacina, tobramicina, y dihidroestreptomicina, o las combinaciones de los mismos. Los antibióticos particulares incluyen neomicina B, canamicina A, canamicina B, gentamicina G1 , gentamicina C1a, y gentamicina C2. Los métodos de la invención son también eficaces cuando el compuesto ototóxico es un agente neoplásico tal como vincristina, vinblastina, cisplatina y compuestos de tipo cisplatina y taxol y compuestos de tipo taxol. En algunas modalidades dirigidas a tratar o prevenir un trastorno auditivo, la composición de la invención se coadministra con una ototoxina. Por ejemplo, se proporciona un tratamiento mejorado para el tratamiento de la infección de un mamífero por la administración de un antibiótico aminoglicosido, comprendiendo la mejora administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 particularmente los nuevos ARNip, al paciente que necesita tal tratamiento para reducir o prevenir la afección auditiva inducida por ototoxina asociada al antibiótico. Los compuestos que reducen o previenen la afección auditiva inducida por ototoxina, particularmente los nuevos ARNip son preferiblemente administrados localmente dentro del oído interno. En otra modalidad más se proporciona un procedimiento mejorado para el tratamiento del cáncer en un mamífero por la administración de un compuesto quimioterapéutico, la mejora comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención al paciente que necesita tal tratamiento para reducir o prevenir la afección auditiva inducida por ototoxina asociada al fármaco quimioterapéutico. En otra modalidad, los métodos de tratamiento son aplicados a las afecciones auditivas que resultan de la administración de un agente quimioterapéutico para tratar su efecto secundario ototóxico. Los agente quimioterapéuticos ototóxicos susceptibles de ser utilizados en los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, un agente antineoplásico, que incluye cisplatina o compuestos de tipo cisplatina, taxol o compuestos de tipo taxol, y otros agentes quimioterapéuticos que se creen que causan afecciones auditivas inducidas por ototoxina, por ejemplo, vincristina, un fármaco antineoplásico usado para tratar malignidades hematologicas y sarcomas. Los compuestos de tipo cisplatina incluyen carboplatina (Paraplatin ®), tetraplatina, oxaliplatina, aroplatina y transplatina entre otros. En otra modalidad, los métodos de la invención son aplicados a afecciones auditivas que resultan de la administración de quinina y sus sustitutos sintéticos, típicamente usados en el tratamiento de la malaria, para tratar su efecto secundario ototóxico. En otra modalidad, los métodos de la invención se aplican a afecciones auditivas que resultan de la administración de un diurético. Los diuréticos, particularmente, los diuréticos "del bucle", es decir los que actúan primariamente en el Bucle de Henle, son ototoxinas candidatas. Los ejemplos ilustrativos, que no se limitan al procedimiento de la invención, incluyen furosemida, ácido etacrílico, y productos mercuriales. Los diuréticos se usan típicamente para prevenir o eliminar los edemas. Los diuréticos se usan también en estados no edematosos, por ejemplos hipertensión, hipercalcemia, hipercalciuria idiopática, y diabetes insípida nefrogénica. En otra modalidad, los métodos de la invención se aplican para tratar o prevenir la incidencia o severidad de úlceras de decúbito. Los métodos y las composiciones implican administrar a un mamífero que necesita tal tratamiento una cantidad profiláctica o terapéuticamente eficaz de uno o más compuestos que regulan por disminución la expresión del gen RTP801 , particularmente los nuevos pequeños RNA interferentes (ARNip). Los compuestos que tratan o previenen la incidencia o la severidad de las úlceras de decúbito, particularmente los nuevos ARNip preferiblemente se administran localmente dentro del área lesionada. Los métodos y las composiciones de la presente invención son eficaces en el tratamiento y la prevención de llagas o úlceras de decúbito desarrolladas cuando la presión sostenida (normalmente de una cama o una silla de ruedas) corta la circulación a partes vulnerables del cuerpo. El procedimiento y las composiciones son eficaces en pacientes con sensación disminuida o ausente o que están debilitados, demacrados, paralizados o postrados en cama de larga duración. Las composiciones de la presente invención son eficaces también en mejorar la curación de las úlceras de decúbito usando las composiciones. Las composiciones se pueden usar en cualquier etapa en el proceso de curación incluyendo la etapa antes de que se inicie cualquier curación o incluso antes de se forme una úlcera específica (tratamiento profiláctico). Otros tipos de heridas a tratar según la invención incluyen también i) heridas generales tales como, por ejemplo, heridas quirúrgicas, traumáticas, infecciosas, isquémicas, térmicas, químicas, y hulosas., ii) heridas específicas para la cavidad oral como, por ejemplo, heridas postextracción, heridas endodóncicas, especialmente en relación con el tratamiento de quistes y abscesos, úlceras y lesiones de origen bacteriano, viral o autoinmunologico, heridas mecánicas, químicas, térmicas, infecciosas y liquenoides; herpes, úlceras, aftosa estomatitis, gingivitis ulcerativa necrosante y síndrome de boca quemada son ejemplos específicos; y iii) heridas sobre la piel tales como, por ejemplo neoplasma quemaduras, (por ejemplo químicas o térmicas), lesiones (bacterianas, virales autoinmunológicas), picaduras e incisiones quirúrgicas. Los métodos y las composiciones de la presente invención también son eficaces en el tratamiento y la prevención de cualquier herida crónica incluyendo entre otras úlceras de decúbito, úlceras venosas y úlceras diabéticas. En todos estos tipos de herida crónica, el evento desencadenante subyacente es un periodo de isquemia seguido por un periodo de reperfusión. Los eventos de isquemia-reperfusión son normalmente repetitivos, lo cual significa que los efectos deletéreos de la isquemia-reperfusión son potenciados y eventualmente suficientes para causar ulceración. Tanto para las úlceras de decúbito como las úlceras de pie diabético, el evento isquémico es el resultado de presión prolongada suficiente para prevenir la perfusión tisular, y cuando la presión es finalmente aliviada, se produce la lesión por reperfusión. Las presentes composiciones son eficaces en la inhibición del daño causado por isquemia-reperfusión en heridas crónicas. Las presentes composiciones son también eficaces en otras afecciones asociadas a isquemia-reperfusión tales como pero no limitadas a, trasplante de órganos, anastomosis intestinal y de colon operaciones en grandes vasos sanguíneos, suturar extremidades separadas, angioplastia con balón o cualquier cirugía cardiaca, apoplejía o traumatismo cerebral, transplante de extremidad, hipertensión pulmonar, hipoxemia y edema pulmonar no cardiogénico, insuficiencia renal aguda, glaucoma agudo, retinopatía diabética, retinopatía hipertensiva, oclusión vascular retiniana, isquemia coclear, cirugía microvascular y lesiones isquémicas en esclerodermia. Los métodos y composiciones de la presente invención son también eficaces en el tratamiento de traumatismo acústico o traumatismo mecánico, preferiblemente traumatismo acústico o mecánico que conduce a la pérdida de células ciliadas del oído interno. El traumatismo acústico a tratar en la presente invención puede ser causado por una única exposición a un sonido extremadamente alto o una exposición continuada a sonidos cotidianos altos superiores a 85 decibelios. El traumatismo mecánico del oído interno a tratar en la presente invención es por ejemplo el traumatismo del oído interno después de una operación de inserción de un dispositivo electrónico en el oído interno. Las composiciones de la presente invención previenen o minimizan el daño a las células ciliadas del oído interno asociado a la operación. Los compuestos que reducen o previenen la afección auditiva inducida por ototoxina, particularmente los nuevos ARNip se administran preferiblemente localmente dentro del oído interno. Además, el compuesto de la presente invención se puede usar para tratar cualquier afección en la cual esté implicada la isquemia, opcionalmente isquemia-reperfusión. Tal afección incluye la isquemia o la isquemia-reperfusión que resulta de una angioplastia, cirugía cardiaca o trombosis, trasplante de órganos, como resultado de cirugía plástica, durante el síndrome compartimental severo; durante la reposición de miembros cortados, como un resultado del síndrome de fallo multiorgánico; en el cerebro como un resultado de apoplejía o traumatismo cerebral; en relación con heridas crónicas tales como úlceras de decúbito, úlceras venosas y úlceras diabéticas; durantes la isquemia del músculo esquelético o el transplante de extremidad; como un resultado de isquemia meséntrica o enfermedad aguda del intestino isquémico; insuficiencia respiratoria como un resultado de isquemia del torso inferior, que conduce a hipertensión pulmonar, hipoxemia y edema pulmonar no cardiogénico, insuficiencia renal aguda observada después de transplante renal, cirugía mayor, traumatismo y choque séptico así como hemorrágico; sepsis; isquemia retiniana que se produce como resultado de oclusión vascular aguda, que conduce a pérdida de visión en una serie de enfermedades oculares tales como glaucoma agudo, retinopatía diabética, retinopatía hipertensiva y oclusión vascular retiniana; isquemia coclear, fallo de colgajo en cirugía microvascular para defectos de cabeza y cuello. Fenómeno de Raynaud y las lesiones isquémicas digitales asociadas en esclerodermia; lesión de médula espinal, cirugía vascular; rabdomiolisis traumática (síndrome de aglomeración), y mioglobinuria. Además, la isquemia-reperfusión puede estar implicada en las siguientes afecciones: hipertensión, enfermedad vascular cerebral hipertensiva, rotura de aneurisma, una constricción u obstrucción de un vaso sanguíneo - como ocurre en el caso de un trombo o émbolo, angioma, discrasias sanguíneas, cualquier forma de función cardiaca comprometida que incluye parada o fallo cardiaco, hipotensión sistémica, parada cardiaca, choque cardiogénico, choque séptico, traumatismo de la médula espinal, traumatismo en la cabeza, ataque, hemorragia de un tumor; y enfermedades tales como apoplejía, enfermedad de Parkinson, epilepsia, depresión ALS, enfermedad de Alzeimer, enfermedad de Huntington, y cualquier otra demencia inducida por enfermedad (tal como demencia inducida por VIH, por ejemplo) Además, un episodio isquémico puede ser causado por una lesión mecánica al sistema nervioso central, tal como resulta de un golpe en la cabeza o en la columna vertebral. El traumatismo puede implicar una lesión tisular tal como abrasión, incisión, contusión, pinchazo, compresión, etc., que se puede producir a partir de un contacto traumático con un objeto extraño en cualquier lugar de o perteneciente a la cabeza, el cuello o la columna vertebral. Otras formas de lesión traumática se pueden producir por constricción o compresión del tejido del CNS por una acumulación inapropiada de fluido (por ejemplo, un bloqueo o disfunción de la producción, renovación, o regulación del volumen normal de fluido cerebroespinal o fluido del humor vitreo, o un hematoma o edema subdural o intracraneal). Igualmente, la constricción o compresión traumática puede originarse a partir de la presencia de una masa de tejido anormal, tal como un tumor metastático o primario. "Tratar una enfermedad" se refiere a administrar una sustancia terapéutica eficaz para mejorar síntomas asociados a una enfermedad, para reducir la severidad o curar la enfermedad, o para prevenir la enfermedad. "Tratamiento" se refiere tanto al tratamiento terapéutico como al tratamiento profiláctico o medidas preventivas, en las cuales el objeto es prevenir o ralentizar (reducir) una enfermedad o un trastorno. Una "dosis terapéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto farmacéutico o composición que es eficaz para conseguir una mejora en un paciente o en sus sistemas fisiológicos, que incluye, pero no se limita a, nivel de supervivencia mejorado, recuperación más rápida, o mejora o eliminación de los síntomas, y otros indicadores son seleccionados como medidas determinantes apropiadas por los expertos en la técnica.

Los métodos para tratar las enfermedades descritos en la presente memoria descriptiva e incluidos en la presente invención pueden incluir administrar un inhibidor de RTP801 junto con un inhibidor adicional de RTP801 , una sustancia que mejora las propiedades farmacológicas del ingrediente activo como se detalla más adelante, o un compuesto adicional conocido por ser eficaz en el tratamiento de la enfermedad a tratar, tal como la degeneración macular, EPOC, ARD, DR, cisplatina o sordera inducida por traumatismo acústico, entre otros. Por "junto con" se entiende antes de, simultáneamente a o posteriormente a, Más adelante se ofrecerán más en detalle terapias ejemplares conjuntas. En otra modalidad, la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de degeneración macular, EPOC, ARF, DR, cistaplina o sordera inducida por traumatismo acústico o cualquier otra enfermad ocular, afección microvascular o respiratoria o trastorno auditivo como se ha detallado anteriormente, y el uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibido de RTP801 para la preparación de un medicamento para tratar dichas enfermedades y afecciones. En esta modalidad, el inhibidor de RTP801 puede comprender un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tiene una secuencia que comprende una secuencia no codificante respecto de la secuencia descrita e la figura 1 (SEQ !D NO: 1 ). Además, el inhibidor de RTP801 puede ser un vector de expresión que comprende un polinucleótido que tiene una secuencia que es una secuencia no codificante respecto de la secuencia descrita en la figura 1 (SEQ ID NO: 1 ). El inhibidor de RTP801 según dichos usos puede también ser un anticuerpo, tal como un anticuerpo neutralizante que se une específicamente a un epítopo presente dentro de un polipéptido que comprende aminoácidos consecutivos, cuya secuencia se describe en la figura 2 (SEQ ID NO: 2). Además, el inhibidor de RTP801 puede ser una molécula de RNA que se dirige al mRNA opcionalmente un ARNip del gen RTP801 opcionalmente un ARNip que comprende nucleótidos consecutivos que tiene una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en los cuadros A-D (SEQ ID NO: 3-538) y en particular, los números de ARNip: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los números de ARNip: 257, 260-262, y 264-268 del cuadro D o una ribozima. De este modo, según la información descrita en la presente memoria descriptiva, el inhibidor de RTP801 a usar con cualquiera de los métodos descritos en la presente memoria descriptiva, en cualquiera de los usos descritos en la presente memoria descriptiva y en cualquiera de las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria descriptiva, puede ser seleccionado en el grupo constituido por un ARNip, un vector que comprende un ARNip, un vector que expresa un ARNip, y cualquier molécula que es endógenamente procesada en un ARNip. Como se detalla en la presente memoria descriptiva, dicho ARNip es preferiblemente un ARNip que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en los cuadros A-D (SEQ ID NO: 3-538) y en particular, los números de ARNip: 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los números de ARNip: 257, 260-262, y 264-268 del cuadro D. "Trastorno respiratorio" se refiere a afecciones, enfermedades o síndromes del sistema respiratorio que incluyen pero no se limita a trastornos pulmonares de todos los tipos que incluyen la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC) enfisema, bronquitis crónica, asma y cáncer de pulmón, entre otros. El enfisema y la bronquitis crónica pueden ocurrir como parte de la EPOC o independientemente. "Trastorno microvascular" se refiere a cualquier afección que afecte a los sistemas linfáticos y capilares microscópicos, en particular enfermedades vasoespásticas, enfermedades vasculíticas y enfermedades oclusivas linfáticas. Los ejemplos de trastornos microvasculares incluyen, entre otros, trastornos tales como Amaurosis Fugax (embólica o secundaria a SLE), síndrome apla deficiencia de Prot CS y ATIII, patologías microvasculares causadas por el uso de fármaco IV, disproteinemia, arteritis temporal, neuropatía ótica isquémica anterior, neuritis óptica (primaria o secundaria a enfermedades autoinmunes), glaucoma, síndrome von hippel lindau, enfermedad de la cornea , cataratas por rechazo de trasplante de córnea, enfermedad de Eale, angitis de rama escarchada, operación de cerclaje envolvente, pars planitis, melanoma coroidal, hemangiona coroidal, aplasia del nervio óptico, afecciones retinianas tales como oclusión de la arteria retiniana, oclusión de la vena retiníana, retinopatía de premadurez, retinopatía de VIH, retinopatía de Purtscher, retinopatía de vasculitis sistémica y enfermedades autoinmunes, retinopatía diabética, retinopatía hipertensiva, retinopatía de radiación, oclusión de la rama arterial o venal retiniana, vasculitis retiniana idiopática, aneurismas, neuroretinitis, embolización retiniana, necrosis retiniana aguda, retinocoroidiopatía en perdigonada, desprendimiento retiniano prolongando; afecciones sistémicas tales como la diabetes mellitus, retinopatía diabética (DR), patología microvasculares relacionadas con la diabetes (como se detalla en la presente memoria descriptiva), síndromes de hiperviscosidad, síndromes del arco aórtico y síndromes isquémicos oculares, fístula carotídeo-caveronosa esclerosis múltiple, lupus eritomatoso sistémico arteriolitis con autoanticuerpo SS-A, vasculitis hemorrágica multifocal aguda, vasculitis que resulta de infección, vasculitis que resulta de enfermedad de Behget, sarcoidosis, coagulopatías, neuropatías, nefropatías, enfermedades microvasculares del riñon, y afecciones microvasculares isquémicas, entre otros. Los trastornos microvasculares pueden comprenden un elemento neovascular. El término "trastorno neovascular" se refiere a las afecciones en las cuales la formación de vasos sanguíneos (neovascularización) es perjudicial para el paciente. Los ejemplos de neovascularización ocular incluyen: enfermedades retinianas (retinopatía diabética, Edema macular diabético, glaucoma crónico, desprendimiento de la retina, y retinopatía de células falciformes, rubeoris iridiana, vitro-retinopatía proliferativa, enfermedades inflamatorias, uveítis crónica, neoplasmas (retinoblastoma, pseudoglioma y melanoma), iridodiclitis heterocrómica de Fuch, glaucoma neovascular, neovascularización corniana (hipoplasia inflamatoria, de transplante y de desarrollo del iris) neovascularización después de una vitrectomía y lensectomía combinada; enfermedades vasculares (isquemia retiniana, insuficiencia vascular coroidal, trombosis coroidal e isquemia de la arteria carótida); neovascularización del nervio óptico, y neovascularización debida a la penetración del ojo o herida ocular contusiva. Todas las afecciones neovasculares pueden ser tratadas usando los compuestos y las composiciones farmacéuticas de la presente invención. "Enfermedad ocular" se refiere a condiciones, enfermedades o síndromes del ojo que incluyen pero no se limitan a cualquier afección que implica neovascularización coroidal (CNV), AMD húmeda y seca, síndrome, síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angíoides, roturas e la membrana de Bruch, degeneración miópica, tumores oculares, enfermedades degenerativas retinianas y oclusión de la vena retiniana (RVO). Algunas afecciones descritas en la presente memoria descriptiva, tales como DR, que se puede tratar según los métodos de la presente invención han sido considerados bien tanto como un trastorno micro y como una enfermedad ocular, o ambas, en las definiciones presentadas en la presente memoria descriptiva. Las afecciones auditivas relevantes para la invención pueden ser debidas a lesiones de órganos terminales que implican las células ciliadas del oído interno, por ejemplo traumatismo acústico, laberintitis endolinfática viral, enfermedad de Meniere, las afecciones auditivas incluyen tinitus, que es una percepción de sonido en ausencia de estímulo acústico, y puede ser intermitente o continuo, en el cual se ha diagnosticado una pérdida sensorineural. . La pérdida auditiva puede ser debida a infección bacteriana o viral, tal como en herpes zoster oticus, laberintis purulenta que se produce a partir de otitis aguda media aguda, meningitis purulenta, otitis media crónica, sordera súbita que incluye la de origen viral, por ejemplo laberintis endolifática viral causada por virus que incluyen paperas, sarampión, gripe, varicela, mononucleosis y adenovirus. La pérdida auditiva puede ser congénita, tal como la causada por la rubéola la anoxia durante el parto hemorragia en el oído interno debido a traumatismo durante el parto, fármacos ototóxicos administrados a la madre, eritoblastosis fetalis y afecciones hereditarias que incluyen síndrome de Waardenburg y síndrome de Hurler. La pérdida auditiva puede ser inducida por ruido, generalmente debido a un ruido superior a aproximadamente 85 decibelios (db) que daña el oído interno. Preferiblemente, la pérdida auditiva es causada por traumatismo acústico o un fármaco ototóxico que afecta a la porción auditiva del oído interno, particularmente las células ciliadas del oído interno. Incorporado en la presente memoria descriptiva por referencia son los Capítulos 196, 197, 198 y 1 99 del Merk Manual of Diagnosis and Therapy, [4° Edición (1982), Merck Sharp & Dome Research Laboratories, N.J. y los capítulos correspondientes en la 16° edición más recientes, que incluye los capítulos 207 y 210 respecto de la descripción y diagnosis de afecciones de oído y equilibrio.

Los trastornos o afecciones auditivas (o afecciones del equilibrio) a tratar o prevenir en el contexto de la presente invención son preferiblemente, sin unirse a ninguna teoría, daño apoptótico inducido por ototoxina o traumatismo a las células ciliadas del oído interno. Las personas que necesitan tratamiento incluyen las que ya experimentan una afección auditiva, las que son susceptibles de tener la afección, y aquellas en las que la afección ha de prevenirse. Sin unirse a ninguna teoría, las afecciones auditivas pueden ser debidas a daño o pérdida auditiva de las células ciliadas del oído interno, en las cuales el daño o pérdida es causado por infección lesión mecánica, sonido alto, la edad, u ototoxicidad inducida químicamente. Las ototoxinas incluyen fármacos terapéuticos que incluyen agentes antineoplásicos, salicilatos, quininas, y antibióticos aminoglicosidos, contaminantes en comidas o medicamentos, y contaminantes ambientales o industriales. Típicamente, el tratamiento se lleva a cabo para prevenir o reducir la ototoxicidad o el traumatismo acústico, especialmente el que resulta de o se espera que resulte de la administración de fármacos terapéuticos o una exposición a entorno que incluyen traumatismo acústico. Preferiblemente, se da una composición terapéuticamente eficaz inmediatamente después de la exposición para prevenir o reducir el efecto ototóxico o el efecto traumático. Más preferiblemente se proporciona profilácticamente tratamiento, bien mediante administración de la composición antes de o concomitantemente con el compuesto farmacéutico ototóxico o la exposición a la ototoxina o al entorno que induce el traumatismo acústico.

La afección auditiva puede ser inducida por quimioterapia. Más detalladamente, la afección auditiva puede ser causada por agentes quimioterapéuticos tales como etoposida, 5-FU (5-fluorouracilo), cis-platino, doxorubicina, alcaloide de la vina, vincristina, vinblastina, vinorelbina, taxol, ciclofosfamida, ifosfamida, clorambucilo, busulfano, mecloretamina, mitomicina, dacarbazina, carboplatino, tiotepa, daunorubicina, idarubicina, mitoxantrona, bleomicina, esperamicina A1 , dactinomicina, plicamicina, carmustina, lomustina, tauromustina, estreptozocina, melfalano, dactinomicina, procarbazina, dexametasona, prednisona, 2-clorodeoxiadenosina, citarabina, docetaxel, fludarabina, gemcitabina, herceptina, hidroxiurea, irinotecano, metotrexato, oxaliplatina, rituxina, semustina, epirubicina, etoposida, tomudex y tipotecam o un análogo químico de uno de los agentes quimioterapéuticos. Los agentes quimioterapéuticos más probables para causar afecciones auditivas son la cist.-platino(cisplatina) y los compuestos de tipo cisplatina. Por "ototoxina" en el contexto de la presente invención se entiende una sustancia que a través de su acción química perjudica, daña o inhibe la actividad de los receptores de sonido del sistema nervioso relacionados con la audición, que a su vez daña la audición (y/o el equilibrio). En el contexto de la presente invención, la ototoxicidad incluye un efecto deletéreo sobre las células ciliadas del oído interno. Los agentes ototoxicos que causan afecciones auditivas incluyen, pero no se limitan a, agentes neoplásicos tales como vincristina, vinblastina, cisplastina y compuestos de tipo cisplastina, taxol y compuestos de tipo taxol, compuestos dideoxi, por ejemplo dideoxünosina; alcoholes; metales; toxinas industriales implicadas en exposición ocupacional o ambiental; contaminantes de la comida o de los medicamentos; y sobredosis de vitaminas o fármacos terapéuticos, por ejemplo, antibióticos tales como penicilina o cloramfenicol y megadosis de vitamina A, D o B7, salicilatos, quininas y diuréticos del bucle. Por "exposición a un agente ototóxico" se entiende que el agente ototóxico está disponible, o entra en contacto con, un mamífero. La exposición a un agente ototóxico puede ocurrir por administración directa, por ejemplo por ingestión o administración de un alimento, medicamento o agente terapéutico, por ejemplo un agente quimioterapéutico, por contaminación accidental o por exposición ambiental, por ejemplo exposición aérea o acuosa. "Gen RTP8" se refiere al tramo de lectura abierto de la secuencia codificante RTP801 , como se muestra en la figura 1 (SEQ ID NO: 1 ) o cualquier secuencia homologa del mismo, que tiene preferiblemente al menos I 70% de identidad., más preferiblemente el 80% de identidad, incluso más preferiblemente el 905 o el 95% de identidad. Esto engloba cualquier secuencia derivada de SEQ ID NO:1 que ha experimentado mutaciones, alteraciones o modificaciones descritas en la presente memoria descriptiva. De este modo, en una modalidad preferida, RTP801 está codificado por una secuencia de ácidos nucleicos según SEQ ID NO:1. Igualmente dentro de la presente invención, los ácidos nucleicos según la presente invención son solamente complementarios e idénticos respectivamente, a una parte del ácido nucleico para RTP801 , ya que, preferiblemente, le primer tramo y el primer ramal es típicamente mas corto que el ácido nucleico según la presente invención. Igualmente se ha de saber que basado en la secuencia de aminoácidos de RTP801 , cualquier secuencia de ácido nucleico que codifica tal secuencia de aminoácidos puede ser percibida por el experto en la técnica basándose en el código genético. Sin embargo, debido al modo de acción asumido de los ácidos nucleicos según la presente invención, se prefieren en mayor medida que el ácido nucleico que codifica RTP801 , preferiblemente el mRNa del mismo, sea el presente en el organismo, tejido y7o célula, respectivamente, donde se ha de reducir la expresión de RTP801. "Polipéptido RTP801" se refiere al polipéptido del gen RTP801 , y se ha de entender que incluye, para los fines de la presente invención, los términos "RTP779"; REDD1", "Ddit4", "FLj20500", "Dig2", y PRF1 ", derivados de cualquier organismo, opcionalmente el ser humano, une variantes y fragmentos de los mismos que retienen actividad biológica, y homólogos de los mismos, que tienen preferiblemente al menos el 70%, más preferiblemente al menos el 80%, incluso más preferiblemente al menos el 90% o el 95% de homología a los mismos. Además, este término se ha de entender que engloba los polipéptidos que resultan de alteraciones menores en la secuencia codificante de RTP801 , tal como, entre otros, mutaciones, sustituciones y alteraciones puntuales que pueden causar una diferencia en una pocos aminoácidos entre el polipéptido resultante y el RTP801 generado naturalmente. Los polipéptidos codificados por las secuencias de ácidos nucleicos que se unen a la secuencia codificante de RTP801 o secuencia genómica en condiciones de hibridación altamente rigurosas, que son bien conocidos en la técnica (por ejemplo Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988) actualizado en 1995 y 1998), están también englobados por este término. El RTP801 químicamente modificado o los fragmentos químicamente modificados de RTP801 están también incluidos en el término, mientras es retenida la actividad biológica. RTP801 tiene o comprende preferiblemente una secuencia de aminoácidos según SEQ ID NO:2. Es sabido que puede haber diferencias en la secuencia de aminoácidos entre diversos tejidos de un organismo y entre diferentes organismos de una especie o entre diferentes especies a las cuales el ácido nucleico según la presente invención se puede aplicar en diversas modalidades de la presente invención. Sin embargo, basado en la enseñanza técnica proporcionada en la presente memoria descriptiva, la respectiva secuencia puede ser tomada en consideración en consecuencia cuando designa cualquiera de los ácidos nucleicos según la presente invención. Los fragmentos particulares de RTP801 incluyen los aminoácidos 1 -50, 51 -100, 101 -150, 151 -200 y 201 -232 de la secuencia mostrada en la figura 2. Los fragmentos particulares adicionales de RTP801 incluyen los aminoácidos 25-74, 75-124, 125-174, 175-224 y 225-232 de la secuencia mostrada en la figura 2. RTP801 tal como se usa en la presente memoria descriptiva es una proteína descrita, entre otras, en el documento WO 99/09046. RTP801 que se denomina también RTP801 ha sido descrito como un a diana de trascripción de HIF-1a por Shoshani T et al., (Shoshani et al., 2002. mol. Cell. BioL 22, 2283-93). Además, el estudio de Ellisen et al., /Ellisen et al., Mol. Cell., qO, 995-1005) ha identificado RTP801 como un gen de respuesta de daño de DNAp53-dependiente y como un gen ?-63-dependiente implicado en diferenciación epitelial. Igualmente RTP801 refleja el modelo específico tisular del miembro p63 de la familia p53, es eficaz similar a o además del TP 63, es un inhibidor a la diferenciación in vitro, y está implicado en la regulación de la especie de oxigeno reactivo. Aparte de esto, RTP responde al factor inducible por hipoxia del factor de trascripción de respuesta a la hipoxia (HIH-1 ) y está típicamente regulado por aumento durante la hipoxia tanto in vitro como in vivo en un modelo animal de apoplejía isquémica. RTP801 aparece para funcionar en la regulación de la especie de oxígeno reactivo (ROS) y los niveles de ROS y la sensibilidad reducida a la muerte oxidativa se incrementan ambos después de la expresión ectópica de RTP801 (Ellisen et al., 2002, supra; Soshani et al., 2002, supra). Preferiblemente, RTP801 es una proteína de RTP801 biológicamente activa que exhibe preferiblemente al menos una de las características, preferiblemente dos o más y más preferiblemente cada una de estas características. Sin adherirse a ninguna teoría, RTP801 que es una proteína inducible por esfuerzo (que responde a hipoxia, muerte oxidativa, esfuerzo térmico, esfuerzo ER) es un factor que actúa en el ajuste fino de la respuesta celular al desequilibrio energético. Como tal, es "una diana" apropiada para el tratamiento de cualquier enfermedad donde las células podrían ser rescatadas de la apóptosis debido a las condiciones de esfuerzo (por ejemplo enfermedades acompañadas por muerte de células normales) o donde las células, que están adaptadas a las condiciones de esfuerzo debido a los cambios en la expresión de RTP801 (por ejemplo células cancerosas), deberían ser matadas. En este último caso, RTP801 puede ser visto como un factor de supervivencia para células cancerosas y sus inhibidores pueden tratar el cáncer como una monoterapia o como fármacos de sensibilización en combinación con quimioterapia o radioterapia. El término "polinucleótido" se refiere a cualquier molécula compuesta de nucleótidos de DNA, nucleótidos de RNA o una combinación de ambos tipos, es decir que comprende dos o más de las bases, guanidina, citosina, timidina, adenina, uracilo o inosina, entre otras. Un polinucleótido puede incluir nucleótidos naturales, nucleótidos químicamente modificados y nucleótidos sintéticos o los análogos químicos de los mismos. El término incluye "oligonucleótidos" y engloba "ácidos nucleicos". El término "aminoácido" se refiere a una molécula que consiste en uno cualquiera de los aminoácidos generado naturalmente, que han sido modificados químicamente (véase más adelante), o aminoácidos sintéticos. El término "polipéptido" se refiere a una molécula compuesta de dos o más residuos de aminoácidos. El término incluye péptidos, polipéptidos, proteínas y péptido miméticos. Un péptido mimético" es un compuesto que contiene elementos estructurales no-peptídicos que es capas de mimetizar la(s) accíón(es) biológica(s) de un péptido genitor natural. Algunas de las características clásicas del péptido tal como los enlaces peptídicos escindibles enzimáticamente no están normalmente presente en un péptido mimético. Con el término "péptido dominante negativo" se entiende un polipéptido codificado por un fragmento de cDNA que codifica una parte de una proteína (véase Herskowitz L. Functional inactivation of genes by dominant negative mutations. Naure. ¡987 sep. 17-23;329(6136):219-22) Revisión; Robinson et al., Generic supresor elements: new tools for molecular oncology - thirteenth Cornelius P. Rhoads Memorial. Award Lecture. Cáncer Res. 1995 Sep 5;55(18):4023).. Este péptido puede tener una función diferente de la proteína de la cual se deriva. Puede interactuar con la toda la proteína e inhibir su actividad o puede interactuar con otras proteínas e inhibir su actividad en respuesta a la proteína de longitud total (genitora). Negativo dominante significa que el péptido es capaz de vencer la proteína genitora natural e inhibir su actividad para dar a la célula una característica diferente. Tal como resistencia o sensibilización a la muerte o a cualquier fenotipo celular de interés. Para intervención terapéutica, el propio péptido puede ser suministrado como el ingrediente activo de una composición farmacéutica, o el cDNA puede ser suministrado a la célula utilizando métodos conocidos.

Preparación de péptidos y polipéptidos Los polipéptidos se pueden producir por diversos métodos, por ejemplo: 1 ) Sintéticamente: Los polipéptidos sintéticos se puede elaborar usando una máquina comercialmente disponible, que usa la secuencia conocida de RTP801 o una porción de la misma. 2) Métodos recombinantes Un procedimiento para elaborar los polipéptidos RTP801 de fragmentos de los mismos es clonar un polinucleótido que comprende el cDNA del fen RTP801 en un vector de expresión y cultivar la célula que contiene el vector para de este modo expresar el polipéptido codificado, y a continuación purificar el polipéptido resultante, todo conseguido usando métodos conocidos en la técnica, descritos por ejemplo en Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Charaterization. A laboratory course manual" CSHL Press (1996). ( Véase, además, Bibl Haematol. 1965;23:1165-74. Appl.Microbiol. 1967 Jul; 15(4): 851 -6. Can J. Biochem. 1968 Mayo; 46(5):441-4; Biochemistry. 1968 Jul; 7(7):2574-80; Arch Biochem Biophys. 1968 Sep 10;126(3):746-72; Biochem Biophys Res Commun. 1970 Feo 20:38(4):825-30).). El vector de expresión puede incluir un promotor para controlar la trascripción del material heterologo y puede bien ser un promotor constitutivo o inducible para permitir la trascripción selectiva. Los potenciadores que pueden ser requeridos para obtener los niveles necesarios de trascripción pueden opcionalmente estar incluidos. El vehículo de expresión también puede incluir un gen de selección.

Los vectores pueden ser incluidos dentro de las células o los tejidos por uno cualquiera de los métodos conocidos en la técnica. Tales métodos pueden ser encontrados generalmente descritos en Sambrook et al., Molecular Cloning: Alaboratory Manual, Cold Springs Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992) en Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology John Wiley and Sons, Baltimore, Mariland (1989), Vega et al., Gene Targeting, CRC Press, Ann Harbor, MI (1995), Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses. Butterworths, Boston MA (1988) and Gilboa et ai, (1968). 3) Purificación de Fuentes naturales: El polipéptido RTP801 , o los fragmentos generados naturalmente del mismo, pueden ser purificados a partir de fuentes naturales (tales como tejidos) usando diversos métodos conocidos por un experto en la técnica, tal como por ejemplo, la inmunoprecipitación con anticuerpo anti-RTP801 , o la cromatografía de afinidad de unión a matriz con cualquier molécula conocida para unirse a RTP801 . La purificación de proteína se practica como e sabido en la técnica como se describe en, por ejemplo, Marshak et al., "Strategies for Protein Purification and Characterization. A laboratory course manual". CSHL Press (1996). Por "efecto biológico de RTP801 0 actividad biológica de RTP801 " se entiende que el efecto de RTP801 en los trastornos respiratorios, que pueden ser directos o indirectos, e incluye, sin adherirse a ninguna teoría, el efecto de RTP801 en apóptosis de células alveolares inducida por condiciones hipóxicas o hiperóxicas. El efecto indirecto incluye, pero no se limita a, RTP801 que se adhiere a o que tiene un efecto sobre una de diversas moléculas, que están implicadas en una cascada de traducción de señal resultante en apóptosis. "Apóptosis" se refiere a un tipo fisiológico de muerte celular que resulta de la activación de algunos mecanismos celulares, es decir muerte que es controlada por la maquinaria de la célula. La apóptosis puede, por ejemplo, ser el resultado de la activación de la maquinaria celular por un disparador externo, por ejemplo un anticuerpo de citoquina o un anticuerpo anti-FAS, que conduce a muerte celular o por una señal interna. El término "muerte celular programada" también puede ser usado indistintamente con "apóptosis". "Enfermedad relacionada con apóptosis" se refiere a una enfermedad cuya etiología está relacionada bien con todo o con parte del proceso de apóptosis. La enfermedad puede ser causada bien por una disfunción del proceso apoptótico (tal como en cáncer o una enfermedad autoinmune) o por sobreactividad del proceso apoptótico (tal como en algunas enfermedades neurodegenerativas). Muchas enfermedades en las cuales RTP801 está implicado son enfermedades relacionadas con apóptosis. Por ejemplo, la apóptosis es un mecanismo significante en AMD húmeda, con lo cual se realiza la atrofia lenta de las células epiteliales de los fotorreceptores y de pigmento, primariamente en la región central (macular) de la retina. La apóptosis neuroretiniana también es un mecanismo significante en la retinopatía diabética. Un "inhibidor" es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad de un gen o el producto de tal gen en una medida suficiente para conseguir un efecto deseado biológico o fisiológico. En "inhibidor de RTP801 ) es un compuesto que es capaz de inhibir la actividad del gen RTP801 o el producto del gen RTP801 , particularmente el gen o el producto de gen RTP801 humano. Tales inhibidores incluyen sustancias que afectan a la trascripción o la traducción del gen así como sustancias que afectan a la actividad del producto del gen. Un inhibidor de RTP801 también puede ser un inhibidor del promotor de RTP801. Los ejemplos de tales inhibidores pueden incluir, entre otros, polinucleótidos tales como fragmentos AS, ARNip, o vectores que los comprenden; polipéptidos tales como negativos dominantes, anticuerpos, y enzimas; RNA catalítico tales como ribozimas, y moléculas químicas con un bajo peso molecular, por ejemplo un peso molecular inferior a 2000 daltones. Los inhibidores específicos de RTP801 son dados más adelante. "Vector de expresión" se refiere a un vector que tiene la capacidad de incorporar y expresar fragmentos de ADN heterólogo en una célula extraña. Diversos vectores de expresión procariótica y eucariótica son conocidos y/o están comercialmente disponibles. La selección de vectores de expresión apropiados está dentro del conocimiento de los expertos en la técnica. El término "anticuerpo" se refiere a IgG, IgM, IgD, IgA e IgE, entre otros. La definición incluye anticuerpos policlonales o anticuerpos monoclonales. Este término se refiere a todos los anticuerpos o fragmentos de anticuerpos que comprenden un dominio de unión a anticuerpo, por ejemplo antígeno sin porción Fe, anticuerpos de cadena simple, minianticuerpos, fragmentos constituidos esencialmente solamente el dominio de unión a antígeno del anticuerpo, etc. El término "anticuerpo" también se puede referir a anticuerpos contra secuencias de polinucleótidos obtenidos por vacunación de cDNA. El término también engloba fragmentos de anticuerpo que retienen la capacidad de unirse selectivamente con su antígeno o receptor y se ejemplifican como siguen, entre otros; (1 ) Fab, el fragmento que contiene un fragmento de unión a antígeno monovalente de una molécula de anticuerpo que puede ser producida por digestión de todo el anticuerpo con la enzima papaina para producir una cadena ligera y una porción de la cadena pesada; (2) (Fab')2, el fragmento del anticuerpo que puede ser obtenido tratando todo el anticuerpo con la enzima pepsina sin reducción posterior; F(ab'2) es un dimero de dos fragmentos fab mantenidos juntos por dos enlaces disulfuro (3) Fv, definido como un fragmento genéticamente manipulado que contiene la región variable de la cadena ligera y la región variable de la cadena pesada expresado como dos cadenas; y (4) Anticuerpo de cadena simple (SCA), definido como una molécula genéticamente manipulada que contiene la región variable de la cadena ligera y la región variable de la región de la cadena pesada unidas por un engarce polipéptido en forma de una molécula de cadena simple genéticamente fusionada. Los minicuerpos y los microcuerpos también están incluidos en este término. Los microcuerpos son proteínas muy pequeñas, (típicamente de aproximadamente 28-45 aminoácidos) con estructuras de pesudonudos, que son altamente selectivas y estables. Cualquiera de las aplicaciones y de los nuevos compuestos descritos en la presente memoria descriptiva que incluyen anticuerpos puede por lo tanto incluir en su lugar un mini cuerpo o microcuerpo en forma de la porción de anticuerpo de la molécula. Por el término "epítopo" tal como se usa en esta invención se entiende que un determinante antigénico sobre un antígeno al que se une el anticuerpo. Los determinantes epitopicos consisten normalmente en grupos de superficie químicamente activa de moléculas tales como aminoácidos o cadenas laterales de azúcares y normalmente tienen características estructurales tridimensionales, así como características específicas de carga.

Preparación de anticuerpo anti-RTP801 Los anticuerpos que se unen a RTP801 o un fragmento derivado del mismo se pueden preparar usando un polipéptido intacto o fragmentos que contienen polipéptidos más pequeños como el antígeno de inmunización. Por ejemplo, puede ser deseable producir anticuerpos que se unen específicamente al terminal N o C o a cualquier otro dominio apropiado del RTP801. El polipéptido usado para inmunizar un animal puede derivarse de cDNA traducido o síntesis química y puede conjugarse a una proteína portadora, si se desea. Tales portadoras comúnmente usadas que están acopladas químicamente al polipéptido incluyen hemocianina de lapa (KLH), tiroglobulina, albúmina de suero bovino (BSA) y toxoide del tétano. El polipéptido acoplado se usa entonces para inmunizar el animal. Si se desea, los anticuerpos policlonales y monoclonales puede además, purificarse, por ejemplo por unión a y elusión de una matriz a la cual se une el polipéptido o un péptido al cual los anticuerpos fueron elevados. Los expertos en la técnica conocen diversas técnicas comunes en inmunología para la purificación y/o la concentración de anticuerpos policlonales así como de anticuerpos monoclonales (Coligan et al., Unit 9, Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1994). Los métodos para elaborar anticuerpos de todos tipos, incluyendo fragmentos, son conocidos en la técnica (véase por ejemplo Harlow y Lañe, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York (¡988)). Los métodos de inmunización, incluyendo todos los pasos necesarios para preparar el inmunógeno en un adyuvante apropiado, que determinan la unión a anticuerpo, el aislamiento de anticuerpos, métodos para obtener anticuerpos monoclonales y humanización de anticuerpos monoclonales son bien conocidos por los expertos en la técnica. Los anticuerpos pueden ser anticuerpos humanizados o anticuerpos humanos. Los anticuerpos pueden ser humanizados usando diversas técnicas conocidas en la técnica que incluyen el injerto de CDR (EP239-400: publicación PCT WO/91/09967, los números de patentes de los Estados Unidos 5.225.539, 5.530.101 ; y 5.585.089, recubrir o revestir (EP 592.106; EP 519.596; Padlan, ¡Molecular Immunology 28(4/5):489-498 (1991 ); Studnicka et al., Protein Engineering 7(6)_805-8 4; Roguska et al., PNAS 91 :969-973 (1994), e intercambio de cadenas (número de patente de los estados Unidos 5.565.332). Los anticuerpos monoclonales definidos incluyen anticuerpos derivados de una especie (tal como murina, conejo, cabra, rata, humano, etc) así como anticuerpos derivados de dos (o más) especies tales como anticuerpos quiméricos y humanizados. Los anticuerpos completamente humanos son particularmente deseables para tratamiento terapéutico de pacientes humanos. Los anticuerpos humanos pueden ser elaborados por diversos métodos conocidos en la técnica que incluyen métodos de presentación de fagos que usan librerías de anticuerpos derivadas de secuencias de inmunoglobulina humana. Véase también los números de patentes de los Estados Unidos 4.444.887 y 4.716.1 1 1 ; y las publicaciones PCT WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 y WO 91/10741 , cada uno de los cuales se incorpora a la presente memoria descriptiva por referencia en su integridad. Se puede encontrar información adicional relativa a todos los tipos de anticuerpos, incluyendo los anticuerpos humanizados, los anticuerpos humanos y los fragmentos de anticuerpos en el documento WO 01 /05998, que se incorpora la presente memoria descriptiva por referencia en su integridad. Los anticuerpos neutralizantes pueden ser preparados por los métodos mencionados anteriormente, posiblemente con un paso adicional de detección para la actividad neutralizante por, por ejemplo, un ensayo de supervivencia. Los términos "compuesto químico", "pecunia molécula", "molécula química", "pequeña molécula química" y "pequeño compuesto químico" se usan indistintamente en la presente memoria descriptiva y se entiende que se refieren a residuos químicos de cualquier tipo que pueden ser producido sintéticamente u obtenidos a partir de fuentes naturales y tienen normalmente un peso molecular inferior a 2000 daltones, inferior a 1000 daltones e incluso inferior a 600 daltones. La presente invención se refiere también a ácidos nucleicos funcionales que comprenden una estructura de doble cadena, su uso para la elaboración de un medicamento, una composición farmacéutica que comprende tales ácidos nucleicos funcionales y un procedimiento para el tratamiento de un paciente. La hipoxia ha sido reconocida como un elemento clave en el patomecanismo de bastantes enfermedades tales como la apoplejía, el enfisema y el infarto que están asociados con disponibilidad de oxígeno subóptima y respuestas de daño tisular a las afecciones de hipoxia. En los tejidos de crecimiento de grasa, que incluyen un tumor, la disponibilidad de oxígeno subóptima está compensada por neoangiogénesis no deseada. Por lo tanto, al menos en el caso de enfermedades cancerosas, el crecimiento de vasculatura no es deseado. A la vista de esto, la inhibición de angiogénesis y crecimiento vascular, respectivamente, está sometida a una intensa investigación. Actualmente están disponibles algunos compuestos que inhiben la angiogénesis no deseada y el crecimiento vascular. Algunos de los compuestos más destacados son los que inhiben VEGF y el receptor de VEGF. En ambos casos, el efecto de VEGF es evitado bien bloqueando VEGF como tal, por ejemplo usando un anticuerpo dirigido contra VEGF tal como lo reivindica AVASTIN de Geentech (AB monoclonal específico para VEGF) (FerraraN; Endoc Rev. 2004 agosto; 25(4):581 -61 ) o bloqueando el receptor correspondiente, es decir el receptor de VEGF (Traxier P; Cáncer Res; 2004 jul. 15;64(14):493-41 ; o Stadler WM et al., Clin Cáncer Res. 2004 May. 1 5;10(10);3365-70).

Sin embargo, como la angiogénesis y el crecimiento de vasculatura es un proceso muy básico y vital en cualquier ser animal y humano, el efecto de este tipo de compuesto ha de ser enfocado n el lugar particular donde no se desea actualmente la angiogénesis y el crecimiento vascular lo cual se convierte en objeto o distribución apropiado, un asunto crítico en relación con este tipo de enfoques terapéuticos. De este modo, un objetivo de la presente invención es proporcionar, además, medios para el tratamiento de enfermedades que implican el crecimiento no deseado de vasculatura y angiogénesis, respectivamente. Por "pequeño RNA interferente" (ARNip) se entiende una molécula de RNA que reduce o silencia (previene) la expresión de un gen/mRNA de su contraparte celular endógena. Se entiende que el término engloba "interferencia de RNA" (RNAi". La interferencia de RNA (RNAi) se refiere al proceso de silenciamiento de gen post-transcripcional específico d secuencia en mamíferos mediados por pequeños RNA interferentes (ARNip) (FIRE et al., 1998, Naure 38_1 806). El proceso correspondiente en las plantas se denomina comúnmente silenciamiento de gen post-transcipcional específico o silenciamiento de RNA y se denomina también como quelante en hongos. La respuesta de interferencia de RNA puede caracterizar un complejo de endonucleasa que contiene un ARNip, comúnmente denominado complejo de silenciamiento inducido por RNA (RISC) que media la escisión de RNA de cadena simple que tiene una secuencia complementaria a la cadena no codificante del dúplex de ARNip. La escisión del ARN diana puede realizarse en el medio de la región complementaria a la cadena no codificante del dúplex de ARNip (Ibashir et al., 2001 , Genes Dev. 15, 188). Para información reciente de estos términos y mecanismos propuestos, véase Bemstein E., Denli AM., Hammon GJ: The rest is silence, RNA, 2001 Nov; 7(1 1 ):1509-21 ); y Nishikura K: A short primer on RNAi; RNA-directed RNA polymerase acts as a key catalyst. Cell. 2001 nov. 16;107(4):41 5-8. Los ejemplos de moléculas de ARNip que se pueden usar en la presente invención se dan en los cuadros A-D. Durante los últimos años; RNAi ha emergido como uno de los métodos más eficientes para la inactivación de genes (Revista Nature, 2002, v.3, p. 737-47; Naure, 2002, v.418, p.244-51 ). Como procedimiento, está basado en la capacidad de la especie dsRNA de entrar en un complejo de proteína específica, donde se dirige entonces al RNA celular complementario y lo degrada específicamente. Más en detalle, los dsRNA son diferidos en RNA inhibitorios cortos (17-29 bp) (ARNip) por RNAsas de tipo III (DICER, Drosha, etc.) (Nature, 2001 , v.409, p.363-6; Nature, 2003, 425, p.415-9). Estos fragmentos y mRNA complementario son reconocidos por el complejo de proteína RISC específico. Todo el proceso culmina por la escisión de la endonucleasa del mRNA diana (Revistas Nature, 2002, v.3, p.737-47; Curr Opin Mol Ther. 2003 jun; 5(3):217-24). Para explicar cómo diseñar y preparar ARNip a genes conocidos véase por ejemplo Pei & TuschI On the Art of Identifying Effective ARNips Nature Methodes 3 No 9 de Septiembre de 006; Chalk AM, Wahlestedt C. Sonnhammer EL. Improved an automated prediction of effective ARNipB ochem. Biophys. Res. Commun. 2004 Jun 18;319(1 ): 264-74; Sioud M, Leirdal M., Potential design rules and enzymatic synthesis of ARNips, Methods Mol Biol. 2004;252:457-69; Levenkova N, Gu Q, Rux JJ.; Gene Specific ARNip selector Bioinfromatics. 200 Feb 12;20(3):430-2 y Ui-Tei K Naito Y, Takahashi F. Haraguchi T, Ohki-Hamazaki H, Juni A. Ueda R, Saigo K., Guidelines for the selection of highly effective ARNip sequences for mammalian and chick RNA interference Nucleic Acids Res. 2004 Feb. 9;32(3):936-48. Véase también LiuY, Braasch DA, Nulf CJ, Corey DR. Efficient and isoformselective inhibition of ceilular gene expression by peptide nucleic acids Biochemistry, 2004 Feb 24; 43(7):1921 -7. Véase también las publicaciones PCT WO 2004/015107 (Atugen) y WO 02/44321 (Tuschl ef al.,, y también Chiu YL, Rana TM, ARNip function in RNAi: a chemical modificación análisis, RNA 2003 Sep; 9(9): 1034-48 y los números de patentes de los Estados Unidos 5898031 y 6107094 (Crooke) para la producción de ARNip modificado/más estable. Se han desarrollado vectores basados en DNA capaces de generar ARNip dentro de las células. El procedimiento implica generalmente la trascripción de RNA de haripina cortos que son procesaos eficientemente para formar ARNip dentro de las células. Paddisson ef al., PNAS 2002, 99: 1443-148; Paddison et al., Genes & Dev. 2002, 16_948-958; Sui et al., PNAS 2002, 8:5515-5520; y Brummelkamp et al., Science 2002, 296:550-553.Estos informes describen métodos para generar ARNip capaces de dirigirse específicamente a numerosos genes expresados endógena y exógenamente. Para la distribución de ARNip, véase, por ejemplo, Shen et a/.,(FEBS letters 539: 1 1 1 - 14 (2003)), Xia et al.,, Nature Biotechnology 20: 006-1010 (2002), Reich et al., Molecular visión 9: 210-216 (2003), Sorensen et al., (J. Mol. BioL 327: 761 -766 (2003), Lewis et al., Nature Genetics 32: 107-108 (2002) y Simenoni et al., Nucleic Acids Researchs 31 , 1 1 :2717-2724 (2003). ARNip ha sido usada con éxito recientemente para la inhibición en primates; para más detalles véase Tolentino et al., Retina 24(l) Febrero 2004, pp 132-138.

ARNip de la presente invención Especificaciones generales de ARNip de la presente invención Generalmente, los ARNip usados en la presente invención comprenden un ácido que comprende una estructura de doble cadena, en el cual la estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, con lo cual la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y con lo cual dicho primer tramo es al menos parcialmente complementario a un ácido nucleico diana, y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleotido contiguos y con lo cual dicho segundo tramo es al menos parcialmente idéntico a un ácido nucleico diana, con lo cual dicha primera cadena y/o dicha segunda cadena comprende una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2' con lo cual dentro de la cadena, cada grupo de nucleótidos modificados está flanqueado por uno o ambos lados por un grupo flanqueador de nucleótidos que forman una modificación diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. Además, dicha primera cadena y/o dicha segunda cadena pueden comprender dicha pluralidad de nucleótidos modificados y pueden comprender dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. El grupo de nucleótidos modificados y/o el grupo de nucleótidos flanqueadores pueden comprender un número de nucleótidos con lo cual el número es seleccionado en el grupo que comprende entre un nucleótido a 10 nucleótidos. En relación con cualquier rango especificado en la presente memoria descriptiva, se ha de entender que cada intervalo describe cualquier número entero individual entre los números respectivos usados para definir el intervalo que incluye dichos dos números que definen dicho intervalo. En el presente caso, el grupo comprende, un nucleótido, dos nucleótidos, tres nucleótidos, cuatro nucleótidos, cinco nucleótidos, seis nucleótidos, siete nucleótidos, ocho nucleótidos, nueve nucleótidos y diez nucleótidos. El patrón de nucleótidos modificados de dicha primera cadena puede ser igual al patrón de los nucleótidos modificados de dicha segunda cadena, y se puede alinear con el patrón de dicha segunda cadena. Además, el patrón de dicha primera cadena se puede desplazar en uno o más nucleótidos respecto del patrón de la segunda cadena.

Las modificaciones mencionadas anteriormente pueden ser seleccionadas a partir del grupo que comprende amino, fluoro, metoxi, alcoxi y alquilo. La estructura de doble cadena del ARNip puede ser de extremo romo, por uno o ambos lados. Más específicamente la estructura d doble cadena puede ser de extremo romo sobre el lado de la estructura de doble cadena que está definido por el extremo S' de la primera cadena y el extremo 3' de la segunda cadena, o la estructura de doble cadena puede ser de extremo romo por el lado de la estructura de doble cadena que está definido por el extremo 3' de la primera cadena y el extremo 5' de la segunda cadena. Además, al menos una de las dos cadenas puede tener una proyección de al menos un nucleótidos en el extremo 5'; la proyección puede consistir en al menos un desoxirribonucleotido. Al menos una de las cadenas puede tener también opcionalmente una proyección de la menos un nucleótido en el extremo 3'. La longitud de la estructura de doble cadena del ARNip es típicamente de aproximadamente 17 a 21 y más preferiblemente de 18 o 19 bases. Además la longitud de dicha primera cadena y/o la longitud de dicha segunda cadena puede independientemente de cada una ser seleccionada a partir del grupo que comprende los intervalos de aproximadamente 15 a aproximadamente 23 bases, 17 a 21 bases y 18 o 19 bases. Además, la complementariedad entre dicha primera cadena y el ácido nucleico diana puede ser perfecta, o el dúplex formado entre la primera cadena y el ácido nucleico diana puede comprende al menos 5 nucleotidos en el cual hay un fallo de emparejamiento o dos fallos de emparejamientos entre dicha primera entre dicha primera cadena y el ácido nucleico que forma dicha estructura de doble cadena. En algunos casos, tanto la primera cadena como la segunda cadena comprenden un grupo de nucleotidos modificados y al menos un grupo flanqueador de nucleotidos, con lo cual cada grupo de nucleotidos modificado comprende al menos un nucleotido, y con lo cual cada grupo flanqueador de nucleotidos que comprende al menos un nucleotido con cada grupo de nucleotidos modificados de la primera cadena que está alineado con un grupo flanqueador de nucleotidos sobre la segunda cadena, con lo cual la mayor parte del nucleotido de terminal S de la segunda cadena es un nucleotido del grupo de nucleotidos modificado, y la mayor parte del nucleotido terminal 3' de la segunda cadena es un nucleotido del grupo flanqueador de nucleotidos. Cada grupo de nucleotidos modificados puede consistir en un único nucleotido y/o cada grupo flanqueador de nucleotidos puede consistir en un único nucleotido. Además, es posible que en la primera cadena, el nucleotido que forma el grupo flanqueador de nucleotidos sea un nucleotido no modificado que está dispuesto en una dirección 3' relativa al nucleotido que forma el grupo de nucleotidos modificados, y sobre la segunda cadena, el nucleotido que forma el grupo de nucleotidos modificados sea un nucleotido modificado que está dispuesto en la dirección 5' relativa al nucleótido que forma el grupo flanqueador de nucleótidos. Además, la primera cadena del ARNip puede comprender ocho o doce, preferiblemente nueve a once grupos de nucleótidos modificados, y la segunda cadena puede comprender siete a once, preferiblemente ocho a diez grupos de nucleótidos modificados La primera cadena y la segunda cadena pueden estar unidas por una estructura de bucle, que puede comprender un polímero de ácido no nucleico tal como, entre otros, el polietilenglicol. Alternativamente, la estructura de bucle puede comprender un ácido nucleico. Además, el extremo 5' de la primera cadena del ARNip puede estar unido al extremo 3' de la segunda cadena, o el extremo 3' de la primera cadena puede estar enlazado al extremo 5' de la segunda cadena, siendo dicho enlace por medio de un engarce de ácido nucleico que tiene típicamente una longitud entre 10-20 nucleobases.

Especificaciones particulares de los ARNip de la presente invención La invención proporciona un compuesto que tiene la estructura (estructura A) 5'(N)X-Z3' (cadena no codificante) 3'Z'-(N')y5' (cadena codificante) en la cual cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su residuo azúcar y (N)x y (N')y es oligómero en el que cada uno de N o N' consecutivo está unido al siguiente N o N' por un enlace covalente; en la cual cada uno de x e y es un número entero entre 19 y 40; en el cual cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente puede ser dTdT y estar fijado covalentemente al extremo 3' de la cadena en la cual está presente; y en el cual la secuencia (N)x comprende una secuencia complementaria de cDNA del gen RTP801 . En particular, la invención proporciona el anterior compuesto en el cual la secuencia de (N)x comprende una o más de las secuencias no codificante presentes en los cuadros A, B, C y D, en particular el cuadro D. En particular, la invención proporciona el anterior compuesto en el cual el enlace covalente es un enlace fosfodiester, en el cual x = y, preferiblemente en el cual x = y = 9, en el cual Z y Z' están ambos ausentes, en el cual al menos un ribonucleótido está modificado en su residuo azúcar en la posición 2', en el cual el resto en la posición 2' es metoxi (2'-0-metilo) en el cual los ribonucleótidos alternativos están modificados tanto en la cadena no codificante como en la cadena codificante en el cual los ribonucleótidos en los extremos 5' y 3' déla cadena no codificante están modificados en sus residuos azúcar, y los ribonucleótidos en los extremos 5' y 3' de la cadena codificante están sin modificar en sus residuos azúcar.

En particular, el ARNip usado en la presente invención es un oligorribonucleótido en el cual una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, de 5' a 3', la secuencia descrita en SEQ ID NO: 3-52 o en SEQ ID NO: 103- 74 o en SEQ ID NO: 247-295 o en SEQ ID NI: 345-441 (que son cadenas codificante), en el que una pluralidad de las bases pueden estar modificadas, preferiblemente por una modificación 2-O-metilo, o un homólogo del mismo en el cual en hasta 2 de los nucleótidos en cada región terminal una base está alterada. Además, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar a un paciente que padece de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito u otras heridas en la carne asociadas a la postración en cama o una lesión o enfermedad de la médula espinal que comprende administrar al paciente una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura (A) anterior (que tienen cualquiera de los rasgos específicos anteriormente mencionados) en una cantidad terapéuticamente eficaz para de este modo tratar al paciente. Además, la invención proporciona el uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de la estructura anterior (A) (que tiene cualquiera de los rasgos específicos anteriormente mencionados) para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que padece de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito u otras heridas en la carne asociada a la postración en cama o lesión o enfermedad de la médula espinal. Un aspecto adicional de la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la estructura (A) anterior para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y afecciones mencionadas en la presente memoria descriptiva. Además, este aspecto proporciona una composición farmacéutica que comprende dos o más compuestos de la estructura (A) anterior para el tratamiento de cualquiera de las enfermedades y afecciones mencionadas en la presente memoria descriptiva, con lo cual dichos dos compuestos pueden estar físicamente mezclados juntos en la composición farmacéutica en cantidades que generan una actividad beneficiosa igual o diferente, o pueden estar covalentemente o no covalentemente enlazados, o unidos juntos por un engarce de ácido nucleico de una longitud de un intervalo de 2 a 100, preferiblemente de 2 a 50 o de 2 a 30 nucleótidos. Tales moléculas de ARNip comprenden entonces una estructura de ácido nucleico de doble cadena como se describe en la presente memoria descriptiva., con lo cual dos secuencias de ARNip seleccionadas a partir de los cuadros A-D y preferiblemente del cuadro A, los números de ID: 14. 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 o los números de ARNip: 257, 260-262 y 264-268 del cuadro D están covalentemente o no covalentemente enlazados o unidos por un engarce para formar una molécula de ARNip tándem. Tales moléculas de ARNip tándem que comprenden dos secuencias de ARNip serían típicamente de 38-150 nucleótidos de longitud, más preferiblemente de 38 o 40-60 nucleótidos de longitud, y más larga si, en consecuencia, se incluyen más de dos secuencias de ARNip en la molécula tándem. Una molécula tándem más larga constituida por dos o más secuencias más largas que codifican el ARNip producido por procesamiento celular interno, por ejemplo dsRNA largo, también es considerada, ya que es una molécula tándem que codifica dos o más shRNA. También se considera que tales moléculas tándem forman parte de la presente invención, y además, se da mayor información relativa a ellas más adelante. Tales estructuras combinadas o tándem tienen la ventaja de que los efectos de la toxicidad y/o fuera de objetivo de cada ARNip se minimizan, mientras que la eficacia aumenta. En particular, el ARNip usado en los Ejemplos ha sido modificado de tal manera que un grupo 2'-O-Me estaba presente en el primer, tercer, quinto, séptimo, noveno, undécimo, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno de la cadena no codificante, con lo cual la modificación es muy parecida, es decir un grupo 2'-0-Me estaba presente en el nucleótido segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, duodécimo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo de la cadena codificante. Además, se ha de resaltar que en el caso de estos ácidos nucleicos particulares según la presente invención, el primer tramo es idéntico a la primera cadena y el segundo tramo es idéntico a la segunda cadena y estos ácidos nucleicos son de extremo romo. El ARNip usado fue fosforilado pero se considera que una versión no fosforilada puede ser más simple de preparar a gran escala y dicho REDD12 no fosforilado, denominado REDD-14NP, se encontró que era justo tan biológicamente activo como RED-14 en un modelo CNV (véase el ejemplo 6). La secuencia de este ARNip usado en los experimentos en los Ejemplos 6-8 es la de REDD-14, es decir, la secuencia que tiene el número de referencia interna 14 (véase el cuadro A). El ARNip usado en los experimentos en el Ejemplo 4 son denominados 801_1 y 801_4¡ 801_1 tiene el número de referencia interna 257 en el cuadro D (SEQ ID NO: 430) [codificante] y 527 [no codificante]) y 801 _4 tiene el número de referencia interna 260 en el cuadro D (SEQ ID NO: 433) [codificante] y 530 [no codificante]) (véase el cuadro D). Tales sRNA también pueden estar fosforilados o no fosforilados La región terminal del oligonucleótido se refiere a las bases 1 -4 y/o 16-19 en las secuencias 10-mer (cuadros A, B y D más adelante) y a las bases 1 -4 y/o 18-21 en las secuencias 21 -mer (cuadro C más adelante). Además, los ARNip usado en la presente invención son oligonucleótidos en los cuales una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, de 5' a 3', la secuencia descrita SEQ ID NO: 53-102 o SEQ ID NO: 175-246 o SEQ ID NO: 296-344 o SEQ ID NO: 442-538 (cadenas no codificantes) o un homólogo de las mismas en las cuales en hasta 2 de los nucleótidos en cada región terminal una base está alterada. De ecte modo, en aspectos particulares el oligonucleótido comprende una estructura de doble cadena, con lo cual tal estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, con lo cual la primera cadena comprende un primer tamo de nucleotidos contiguos y el segundo tramo comprende un segundo tramo de nucleotidos contiguos, con lo cual el primer tramo es bien complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica el gen RTP801 y con lo cual el segundo tramo es bien idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. Dicho primer tramo comprende al menos 14 nucleotidos, preferiblemente al menos 18 nucleotidos e incluso más preferiblemente 19 nucleotidos o incluso al menos 21 nucleotidos. En una modalidad, el primer tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleotidos, preferiblemente aproximadamente 18 a 30 nucleotidos, más preferiblemente de aproximadamente 19 a 27 nucleotidos y más preferiblemente de aproximadamente 19 a 23 nucleotidos. En una modalidad, el segundo tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleotidos, preferiblemente aproximadamente 18 a 30 nucleotidos, más preferiblemente de aproximadamente 19 a 27 nucleotidos y más preferiblemente de aproximadamente 19 a 23 nucleotidos o incluso aproximadamente 19 a 21 nucleotidos. En una modalidad, el primer nucleotido del primer tramo corresponde a un nucleotido de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , con lo cual el último nucleotido del primer tramo corresponde a un nucleotido de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. en una modalidad, el primer tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleotidos contiguos de un oligonucleótido, con lo cual tal oligonucleótido es seleccionado a partir del grupo que comprende los SEQ ID NO: 3-538, preferiblemente a partir del grupo que comprende los oligorribonucleótidos que tienen la secuencia de cualquiera de los números de serie 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 en el cuadro A o 260-262 y 264-268 en el cuadro D. Las especificaciones adicionales de las moléculas de ARNip usadas en la presente invención pueden proporcionar un oligorribonucleotido en el cual el dinucleótido dTdT está unido covalentemente al extremo 3' y/o en al meno un nucleótido está modificado un residuo azúcar, posiblemente con una modificación que comprende una modificación 2'-O-metilo. Además, el grupo 2' OH puede ser reemplazado por un grupo o resto seleccionado a partir del grupo que comprende -H-OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2 CH3, -NH2, y -F. Además, los compuestos preferibles de la presente invención descritos anteriormente pueden estar fosforilados o no fosforilados. Además, el ARNip usado en la presente invención puede ser un oligorribonucleótido en el cual en nucleotidos alternativos están situados azúcares en ambas cadenas. Particularmente, el oligorribonucleótido puede comprende una de las cadenas codificantes en las que el azúcar no está modificado en los nucleotidos terminal 5' y 3', o una de las cadenas no codificantes en las que el azúcar está modificado en los nucleotidos terminales 5' y 3'. Además, otros ácidos nucleicos a usar en la presente invención comprenden al menos nucleotidos contiguos de uno cualquiera de la SEQ ID NO: 3 a 538 y más preferiblemente 14 pares de bases de nucleotidos contiguos en cualquier extremo de la estructura de doble cadena constituida por el primer tramo y el segundo tramo descritos anteriormente. El experto en la técnica entenderá que dado la longitud potencial del ácido nucleico según la presente invención y particularmente de los tramos individuales que forman I ácido nucleico según la presente invención, algunos desplazamientos relativos a la secuencia codificante del gen RTP801 detallado en SEQ ID NO:1 a cada lado es posible, con lo cual tales desplazamientos pueden de hasta 1 , 2, 3, 4, 5 y 6 nucleotidos en ambas direcciones, y por lo tanto, las moléculas de ácido nucleico de doble cadena generadas de este modo también estarán dentro de la presente invención. Un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un ácido nucleico funcional que comprende una estructura de doble cadena, con lo cual tal estructura de doble cadena comprende una primer cadena y una segunda cadena con lo cual la primera cadena comprende un primer tramo de nucleotidos contiguos y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleotidos contiguos, con lo cual el primer tramo es bien complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 y por lo tanto el segundo tramo es bien idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. En una modalidad el ácido nucleico se regula por RTP de regulación por disminución, con lo cual la regulación por disminución de RTP801 se selecciona a partir del grupo que comprende la regulación por disminución de la función RTP801 , la regulación por disminución de la proteina RTP801 y la regulación por disminución de la expresión mRNA de RTP801. En una modalidad el primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, preferiblemente al menos 18 nucleótidos e incluso más preferiblemente 19 nucleótidos. En una modalidad, el primer tramo comprende de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, preferiblemente aproximadamente 18 a 30 nucleótidos, más preferiblemente de aproximadamente 19 a 27 nucleótidos y más preferiblemente de aproximadamente 19 a 23 nucleótidos. En una modalidad, el primer nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , con lo cual el último nucleótido del primer tramo corresponde a un nucleótido de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. En una modalidad, un tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, con lo cual tal secuencia de ácido nucleico es seleccionada a partir de las secuencias descritas en los cuadros A-D, preferiblemente a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 53, 66, 67, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 91 , 92, 93, 94, 96, 101 , 102, 525, 528, 529, 530, 532, 533, 534, 535 y 536, más preferiblemente seleccionada a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 66, 75, 79, 91 , 94, 101 , 102, 525 y 528, y más preferiblemente seleccionada a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 66, 74, 75, 79 525 y 528.

En una modalidad, el otro tramo comprende una secuencia de al menos 14 nucleótidos contiguos de una secuencia de ácido nucleico, con lo cual la secuencia de ácido nucleico es seleccionada a partir de las secuencias descritas en los cuadros A-D, preferiblemente a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 3, 16, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 29, 41 , 43, 44, 45, 46, 51 , 52, 430, 433, 435, 437, 438, 439, 440 y 441 , más preferiblemente seleccionada a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 16, 24, 25, 29, 41 , 44, 51 y 52; y más preferiblemente seleccionada a partir del grupo que comprende SEQ ID NO: 16, 24, 25 y 29. En una modalidad el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 53 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 3; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 66 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 16; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 67 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 17; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 72 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 22; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 73 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 23; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 74 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 24; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 75 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 25; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 76 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 26; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 77 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 27; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 79 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 29; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 91 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 4 ; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 92 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 42; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 93 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 43; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 94 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 44; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 95 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 45; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 96 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 46; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 101 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 51 ; el primer tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO. 102 y el segundo tramo tiene una secuencia según SEQ ID NO 52; En una modalidad, el primer tramo tiene una secuencia de ácido nucleico que se selecciona a partir del grupo que comprende SEQ ID NO 53, 66, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 79, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 101 , 102, 525, 528, 529, 530, 533, 534, 535, y 536. Se ha de entender que aunque los términos "primero" y "segundo" tramo se usan con relación a los ácidos nucleicos de la presente invención, se usan únicamente por motivo de conveniencia, y cualquier molécula de ácido nucleico de la invención descrita que tiene un primer tramo con la secuencia X y un segundo tramo con la secuencia Y, podría también igualmente ser descrita como teniendo un primer tramo con la secuencia Y y un segundo tramo con la secuencia X, siempre que se entienda que un tramo está comprendido en la cadena no codificante, la cual debe ser no codificante respecto de una porción de la secuencia codificante del gen RTP801 , y el otro tramo está comprendido en la cadena codificante, la cual debe ser complementaria (aunque no complementaria al 100%) de la cadena no codificante, todo según las definiciones y especificaciones presentadas en la presente memoria descriptiva. En una modalidad, la primera y/o la segunda cadena comprende al menos un nucleotido proyectado en el extremo 3' que es complementario o idéntico al nucleotido correspondiente de una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801.

En una modalidad, la primera y/o la segunda cadena comprende de 1 a 5 nucleótidos proyectados en el extremo 3', preferiblemente la primera y/o la segunda cadena comprende de 1 a 10 nucleótidos proyectados en el extremo 3', más preferiblemente la primera y/o la segunda cadena comprende de 1 a 5 nucleótidos proyectados en el extremo 3', y más preferiblemente la primera y/o la segunda cadena comprende de 1 a 2 nucleótidos proyectados en el extremo 3'. En una modalidad la primera cadena y/o la segunda cadena comprende al menos un nucleotido proyectado que es diferente del nucleotido correspondiente de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. En una modalidad, la primera cadena comprende dos nucleótidos proyectados que son diferentes del nucleotido correspondiente de una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. En una modalidad, la primera cadena consiste en únicamente el primer tramo. En una modalidad la segunda cadena consiste en únicamente el segundo tramo. En una modalidad, el primer tramo y/o la primera cadena comprende(n) ribonucleótidos. En una modalidad, el segundo tramo y/o la segunda cadena comprende(n) ribonucleótidos. En una modalidad, el primer tramo y/o la segunda cadena comprende(n) ribonucleótidos.

En una modalidad, algunos o todos los nucleótidos están modificados. En una modalidad, tal modificación se relaciona con el resto nucleobase del nucleótido, con el resto azúcar del nucleótido y/o el resto fosfato del nucleótido. En una modalidad más preferida, la modificación es una modificación de un resto azúcar y la modificación es una modificación en la posición 2', con lo cual el grupo 2' OH está reemplazado por un grupo o resto seleccionado a partir del grupo que comprende -H-OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2 CH3, -NH2, y -F. En una modalidad, la modificación es una modificación del resto nucleobase y la modificación o nucleobase modificada es seleccionada a partir del grupo que comprende inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo, 2-propilo y otras alquiladeninas, 5-halouracilo, 5-halocistosina, 5-halocistosina, 6-azacistosina, 6-azatimina, pseudouracilo, 4-tiouracilo, 8-haloadenina, 8-aminoadenina, 8-tioladenina, 8-tioalquiladeninas, 8-hidroxiladeninas y otras adeninas 8-sustituidas, 8-haloguaninas, 8-aminoguaninas, 8-tiolguanina, 8-tioalquilguanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otras aza- y deazaadeninas, otras aza- y deaza guaninas, 5-trifluorometiluracilo y 5-trifluorocistosina. En una modalidad, la modificación es una modificación del resto fosfato, con lo cual el resto fosfato modificado es seleccionado a partir del grupo que comprende fosfotioato.

En una modalidad, el primer tramo y/o I segundo tramo comprende una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados que tienen una modificación en la posición 2', con lo cual dentro del tramo cada grupo de nucleótidos modificados está flanqueado en uno o ambos lados por un grupo flanqueador de nucleótidos, con lo cual los nucleótidos flanqueadores que forman el grupo flanqueador de nucleótidos son bien un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. En una modalidad preferida, el primer tramo y/o el segundo tamo consiste en ribonucleótidos. En una modalidad más preferida, el primer y el segundo tramo comprenden una pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. En una modalidad, el primer tramo comprende dicha pluralidad de grupos de nucleótidos modificados. En una modalidad el segundo tramo comprende dicha pluralidad de grupo de nucleótidos modificados. En una modalidad, cada grupo de nucleótidos modificado y/o cada grupo de nucleótidos flanqueadores comprende un número de nucleótidos, con lo cual el número es seleccionado a partir del grupo que comprende uno a 10 nucleótidos. En una modalidad, el primer tramo comprende un primer patrón de nucleótidos modificados y el segundo tramo comprende un segundo patrón de nucleótidos modificados.

En una modalidad, el primer patrón es el mismo patrón que el segundo patrón. En otra modalidad, el primer patrón se alinea con el segundo patrón. En una modalidad preferida, el primer patrón es desplazado por uno o más nucleótidos relativos al segundo patrón. En una modalidad, cada uno de los grupos de nucleótidos modificados consiste en un nucleótido modificado y cada uno de los grupos de nucleótidos flanqueadores consiste en un nucleótido no modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación de los nucleótidos modificados. En una modalidad preferida, el nucleótido modificado tiene un grupo a-O-me en la posición 2'. En una modalidad preferida, el nucleótido flanqueador es un ribonucleótido que tiene un grupo 2' OH. En una modalidad, el primer tramo empieza con un nucleótido modificado en el extremo 5' y cualquier otro nucleótido del tramo es también un nucleótido modificado, mientras que un segundo nucleótido que empieza a partir del extremo 5' y cualquier otro nucleótido no es un nucleótido modificado o un nucleótido que tiene una modificación que es diferente de la modificación del (los) nucleótido(s). En una modalidad, el primer tramo está en una orientación no codificante respecto de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801.

Un aspecto adicional de la presente invención se refería a una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico según el primer aspecto de la presente invención y/o un vector según el segundo aspecto de la presente invención y preferiblemente un portador farmacéuticamente aceptable; siendo opcionalmente dicha composición para administración sistémica o local. En una modalidad, la composición es para el tratamiento de una enfermedad, con lo cual la enfermedad es seleccionada a partir del grupo que comprende enfermedades tumorales. En un aspecto adicional, el problema que subyace de la presente invención es resuelto por un procedimiento para la prevención y/o el tratamiento de un paciente que necesita tal prevención y/o tratamiento que comprende la administración de un ácido nucleico según la presente invención y/o un vector según la presente invención y/o una composición farmacéutica según la presente invención. En una modalidad adicional, un ácido nucleico según la presente invención y/o un vector según la presente invención son usados para la fabricación de un medicamento. El medicamento puede ser para la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad, por lo tanto tal enfermedad se selecciona a partir del grupo que comprende enfermedades tumorales. La enfermedad tumoral puede ser seleccionada a partir del grupo que comprende tumores sólidos, tumores metastáticos incluyendo tumores negativos PTEN, tumores que son resistentes a los fármacos y tumores donde la inhibición de RTP801 se puede usar para la sensibilización. Además, la enfermedad tumoral puede ser una enfermedad tumoral terminal, o puede implicar células que son negativas supresoras de tumores; dicho supresor puede ser PTEN. Un aspecto adicional de la presente invención es resulto por un procedimiento designando o identificando un ácido nucleico que es apropiado para regular por disminución RTP801 , que comprende los siguientes pasos: a) designar o identificar un ácido nucleico que es apropiado para regular por disminución RTP801 ; b) evaluar el defecto de un ácido nucleico según cualquiera de los aspectos anteriores de la presente invención; y c) comparar el efecto del ácido nucleico del paso a) con el efecto del ácido nucleico del paso b). En una modalidad el efecto es la regulación por disminución de RTP801. Un aspecto adicional de la presente invención es el uso de un ácido nucleico según la presente invención en forma de un sensibilizador, particularmente como un sensibilizador en el tratamiento de una enfermedad, con lo cual tal enfermedad es preferiblemente seleccionada a partir del grupo que comprende un tumor y más particularmente tumores que son resistentes a un tratamiento que usa agentes quimioterapéuticos y/o radioterapéuticos. Se describen en la presente memoria descriptiva, enfermedades adicionales para las cuales un ácido nucleico de la presente invención puede servir como sensibilizador.

Esta solicitud describe que un ácido nucleico que comprende una estructura de doble cadena que es específica para RTP801 es un medio apropiado para inhibir angiogénesis/crecimiento de vasculatura y enlace vascular (tanto a partir de la vasculatura existente como a partir de la vasculatura en crecimiento). Además, esta aplicación describe (sin adherirse a ninguna teoría) que RTP801 que es una proteína ¡nducible por esfuerzo (inducible por hipoxia, esfuerzo oxidativo, esfuerzo térmico, esfuerzo ER) es un factor que actúa en el ajuste fino de la respuesta celular al desequilibrio energético. Tal inhibición de RTP801 por tal ácido nucleico de doble cadena es apropiada para el tratamiento de cualquier enfermedad donde las células deberían ser rescatadas de la apoptosis debida a condiciones de esfuerzo (por ejemplo enfermedades acompañadas de muerte de células normales) o donde las células adaptadas a condiciones de esfuerzo debidas a cambios en la expresión de RTP801 , deberían ser matadas (por ejemplo células tumorales). En este último caso, al inhibir RTP801 a través de tal ácido nucleico de doble cadena, este factor de supervivencia con función antiapóptica en células hipóxicas, más particularmente células cancerosas hipóxicas se vuelve ineficaz permitiendo de este modo que las células desprovistas de protección mediada por RTP801 sean conducidas a apoptosis. Esto puede ocurrir, además, cuando están presentes otros factores promotores de apoptosis. Tales otros factores promotores de apoptosis incluyen, entre otros, la quimioterapia y la radioterapia. Dicho de otro modo, el ácido nucleico de doble cadena según la presente invención puede ser eficaz en solitario en el tratamiento contra el cáncer (monoterapia) y también como terapia suplementaria. Tal estructura de doble cadena comprende una primera cadena y una segunda cadena, con lo cual la primera cadena comprende un primer tramo de nucleótidos contiguos y la segunda cadena comprende un segundo tramo de nucleótidos contiguos, con lo cual el primer tramo es bien complementario o idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 y con lo cual I segundo tramo es bien idéntico o complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 . Usando particularmente RTP801 como una diana para tal tipo de ácido nucleico de doble cadena, también, es posible de este modo dirigir inmediatamente una diana en la cascada implicada en el crecimiento y desarrollo de vasculatura y angiogénesis, respectivamente, y de este modo se compara de manera diferente al camino usado por los inhibidores de VEGF tales como los anticuerpos VEGF. Sin desear adherirse a ninguna teoría, los presentes autores asumen que el ácido nucleico según la presente invención puede ejercer su función en las células que proporcionan un contexto que está implicado en o observado con relación a cualquier enfermedad donde se produce de manera no deseada particularmente, angiogénesis inducida por hipoxia y/o crecimiento y desarrollo de vasculatura. Esta interpretación es apoyada por el descubrimiento de que los ratones producido con RTP801 no muestran ningún fenotipo diferente de los ratones naturales en condiciones no hipóxicas. Solamente al inducir hipoxia como se observa en una afección de enfermedad, tal como, por ejemplo crecimiento tumoral, la producción relacionada con RTP801 da como resultado una patología similar a la observada en humanos que padecen de este tipo de enfermedad. Se ha de entender que el ácido nucleico según la presente invención es preferiblemente un ácido nucleico funcional. Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, el término ácido nucleico funcional significa preferiblemente un ácido nucleico cuya función es diferente del hecho de estar activo en la célula como una plantilla para la trascripción de cualquier hnRNA, mRNA o cualquier otro producto de trascripción, con lo cual bien hnRNA, mRNA o cualquier otro producto de trascripción, respectivamente, o el ácido nucleico según la presente invención es sometido a un proceso de traducción, preferiblemente un proceso de traducción celular que da como resultado una proteína RTP801 biológicamente activa. Se ha de reconocer que un ácido nucleico funcional tal como se usa preferiblemente en la presente memoria descriptiva es capaz de reducir la expresión de un ácido nucleico diana. Más preferiblemente, tal reducción está basada en un proceso de silenciamíento de gen de post-trascripción del ácido nucleico diana. Incluso más preferiblemente tal reducción está basada en interferencia de RNA. Una forma más preferida del ácido nucleico funcional es una molécula de ARNip o cualquier otra molécula que tiene el mismo efecto que una molécula de ARNip. Tal molécula es seleccionada a partir del grupo que comprende ARNip, ARNip sintéticos, shRNA y sHRNA sintéticos. Tal como se usa en la presente memoria descriptiva ARNip puede comprender, además, ARNip derivados de vector de expresión, con lo cual el vector de expresión es una modalidad preferida, un virus tal como Adenovirus, virus adenoasociados, virus herpes, y lentivirus. Tal como se usa en la presente memoria descriptiva shRNA significa preferiblemente RNA de hairpina. Tal shRNA puede ser elaborado sintéticamente o puede ser generado usando sistemas de expresión codificada por vector, preferiblemente usando promotores III de polimerasa RNA. Con relación a esto mismo, se ha de reconocer que el ácido nucleico funcional según la presente invención es dirigido a RTP801 lo cual también es referido en la presente memoria descriptiva como la diana y el ácido nucleico que codifica dicha diana como el ácido nucleico diana. Tal como se usa preferiblemente en la presente memoria descriptiva, la estructura de doble cadena del ácido nucleico según la presente invención comprende cualquier estructura de doble cadena, con lo cual tal estructura de doble cadena es generada preferiblemente por el primer tramo y el segundo tramo proporcionados por el ácido nucleico que tiene el diseño básico. La estructura de doble cadena puede comprender uno o más fallos de emparejamiento. Tal estructura de doble cadena está formada por el mecanismo de emparejamiento de la base de Watson y Crick y/o el mecanismo de emparejamiento de la base Hoogsteen y/o los mecanismos de emparejamiento de bases similares. Basado en el diseño básico del ácido nucleico según la presente invención se prefiere que un tramo, este en una orientación no codificante respecto de una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo, mientras que el otro tramo está en la orientación codificante respecto de una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo. Por este motivo, un tramo es complementario de una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo, y el otro tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo. En relación con esto mismo, se ha de reconocer que el término idéntico, significa, por supuesto, también parcialmente idéntico, con lo cual la identidad, expresada como homología, es al menos del 80%, preferiblemente del 90%, más preferiblemente del 95%, 96%, 98%, 99% o del 100%. Igual que para la definición de identidad, complementariedad puede ser definida en término de homología, con lo cual la homología es del mismo rango que la identidad si la cadena complementaria se tradujese en la cadena idéntica según las reglas de emparejamiento de la base de Watson y Crick. En una modalidad alternativa, un tramo es idéntico a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo y el otro tramo es complementario a una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 o una parte del mismo. En una modalidad preferida, el ácido nucleico según la presente invención es una función de RTP801 de regulación por disminución. La regulación por disminución de la función RTP801 ocurre preferiblemente por reducción en el nivel de expresión en el nivel de proteína y/o el nivel de mRNA, con lo cual tal nivel reducido de expresión, preferiblemente en el nivel de proteína, puede ser tan bajo como el 5% y puede ser tan alto como el 1 00%, con referencia a una expresión en condiciones donde el ácido nucleico según la presente invención no es administrado o no está funcionalmente activo. Tales condiciones son preferiblemente condiciones de o como presentes en un sistema de expresión, preferiblemente un sistema de expresión para RTP801 . Tal sistema de expresión es preferiblemente un sistema de traducción que puede ser un sistema de traducción in vitro, más preferiblemente una célula, un órgano y/o un organismo. Es más preferido que el organismo sea un organismo multicelular, más preferiblemente un mamífero, con lo cual tal mamífero es preferiblemente seleccionado a partir del grupo que comprende el hombre, el mono, el ratón, la rata, la cobaya, e conejo, el gato, el perro, la oveja, la vaca, el caballo, ganado, y el cerdo. En relación con la regulación por disminución se ha de reconocer que dicha regulación por disminución puede ser una función de tiempo, es decir, el efecto de regulación por disminución no se observa necesariamente inmediatamente tras la administración o la activación funcional de los ácidos nucleicos según la presente invención, sino que puede ser diferido en el tiempo así como en el espacio, es decir en diversas células, diversos tejidos y/o órganos. Tal aplazamiento puede variar del 5% al 100%, preferiblemente del 10% al 50%. El experto en la técnica reconocerá que una reducción del 5% durante un periodo de tiempo más largo podría ser tan eficaz como una reducción del 100% a lo largo de un periodo de tiempo más corto. El experto en la técnica reconocerá también que tal aplazamiento depende en gran medida del ácido nucleico funcional particular usado de hecho, así como de la población de células diana y de este modo, finalmente, de la enfermedad a tratar y/o prevenir según la enseñanza técnica de la presente solicitud. Por lo tanto, una reducción del 5% a lo largo de un periodo de tiempo más largo podría ser tan eficaz como una reducción del 100% a lo largo de un periodo de tiempo más corto. El experto en la técnica reconocerá que el aplazamiento puede ocurrir a cualquier nivel como se ha expuesto anteriormente, es decir un aplazamiento en función, con lo cual tal función es cualquier función exhibida por RTP801 , un aplazamiento en expresión de proteína o un aplazamiento en el nivel de expresión de mRNA. En una modalidad preferida, el primer tramo comprende al menos 14 nucleótidos, preferiblemente 14 nucleótidos contiguos. El experto en la técnica reconocerá que el primer tramo debería tener una longitud que es apropiada para permitir dirigir específicamente una secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 y más específicamente el ácido nucleido que codifica RTP801 presente en el sistema de traducción donde la expresión RTP801 ha de ser reducida. De nuevo, sin desear adherirse a ninguna teoría o ningún modo de acción del ácido nucleico según la presente invención, parece que hay una interacción entre el ácido nucleico según la presente invención y la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , preferiblemente en el nivel de trascripción, es decir en la generación de un mRNA a partir de la secuencia de ácido nucleico respectiva que codifica RTP801. Debido a la probabilidad de que cualquier secuencia del ácido nucleico según la presente invención sea idéntica a o complementaria a una secuencia contenida en el genoma o trascriptoma del sistema de traducción, la longitud del primer tramo debería ser de este modo tan largo como para garantizar que, al asumir que se produce de hecho este tipo de emparejamiento de base entre el ácido nucleico que codifica RTP801 y una de las cadenas del ácido nucleico según la presente invención, solamente la secuencia que codifica RTP801 pero no otra secuencia codificante distinta, seguramente no otra secuencia codificante esencial, del genoma o el transcriptoma es dirigida para o por tal emparejamiento de base. Por esta longitud, se puede reducir el caso de efecto de fuera de diana y preferiblemente se pueden eliminar. Para incrementar, el rigor de este tipo de direccionamiento específico de RTP801 y la secuencia de ácido nucleico que lo codifica, el primer tramo tiene preferiblemente una longitud de al menos de al menos 18 o 19 nucleotidos. El límite superior para la longitud del primer tramo es preferiblemente inferior a 50 nucleotidos o cualquier longitud intermedia. Aparte de esto, el experto en la técnica preferirá tener un primer tramo bastante corto en caso de que el ácido nucleico según la presente invención esté sintetizado químicamente puesto que cuanto más corta es la secuencia, la síntesis del mismo consume menos tiempo y material, y el menor será el nivel al cual los nucleotidos incorrectos son insertados dentro de la secuencia respectiva. Otro factor que se ha de tomar en consideración en relación con la fijación de la longitud del primer tramo es el hecho de que, típicamente a una longitud superior a 50 0 más nucleotidos, se puede observar una respuesta e interferon inespecífica. Depende de la afección particular a tratar, si este tipo de respuesta de interferon inespecífica ha de ser tolerada o no. Por ejemplo, una respuesta de interferon podría ser tolerada si la respuesta de interferon y/o la expresión de los genes de interferon puede limitarse a las células patogénicas. A la vista de esto, las longitudes más preferidas del primer tramo son de aproximadamente 14 a 40 nucleótidos, 18 a 30 nucleótidos, 19 a 27 nucleótidos, 21 a 25 nucleótidos, 21 a 25 nucleótidos y 19 a 23 nucleótidos. Las mismas consideraciones expuestas anteriormente para el primer tramo son aplicables al segundo tramo que puede, de este modo, comprender cualquier longitud descrita en la presente memoria descriptiva en relación con el primer tramo. También está dentro de la presente invención que la longitud del primer tramo es diferente de la longitud del segundo tramo, sin embargo, se prefiere que ambos tramos tengan la misma longitud. Según el diseño básico del ácido nucleico, el primer tramo y el segundo tramo son partes de la primera cadena y la segunda cadena, respectivamente, del ácido nucleico según la presente invención. Se reconocerá que en uno de los dos extremos, es decir en el extremo 5' así como el extremo 3', la primera cadena y/o la segunda cadena puede comprender uno o más nucleótidos, preferiblemente nucleótidos adicionales, en cualquier combinación. En relación con lo mismo, se ha de reconocer que los nucleótidos de la cadena individual que están más allá del (los) extremo(s) del tramo correspondiente a la cadena respectiva pueden ser usados para contribuir, además, a la complementariedad e identidad, respectivamente, del tramo y de este modo a la dirección específica de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. Se reconocerá que, básicamente, basado en la enseñanza técnica proporcionada en la presente memoria descriptiva, el ácido nucleico según la presente invención se puede dirigir a cualquier parte de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , preferiblemente que codifica RTP801 en el sistema de traducción donde la expresión de RTP801 ha de ser reducida. Por lo tanto, la presente invención comprende cualquier ácido nucleico con las características definidas en la presente memoria descriptiva, con lo cual las cadenas y los tramos complementarios e idénticos del ácido nucleico según la presente invención pueden empezar básicamente a partir de cualquier nucleotido de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. Por consiguiente, a condición de que el primer tramo del ácido nucleico según la presente invención sea complementario a la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , es decir es la cadena no codificante del mismo o está en una orientación no codificante al mismo, el primer nucleotido de dicho tramo, es decir, el nucleotido más terminal 5' corresponde, es decir, se alinea con el último nucleotido de la secuencia que codifica RTP801 en el extremo 3'. En otra modalidad, tal nucleotido más terminal 5' corresponde al penúltimo nucleotido del ácido nucleico que codifica RTP801 y así sucesivamente hasta que se alcanza la última posición que, dada la longitud del tramo no codificante, sigue permitiendo que la cadena no codificante del ácido nucleico según la presente invención sea complementaria a la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 . Por lo tanto, cualquier ácido nucleico según la presente invención está dentro de la presente invención, el cual podría ser generado explorando la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 partido del nucleósido más terminal 5' de la misma y disponiendo el diseño básico del ácido nucleico según la presente invención y llevando a cabo las características para tal ácido nucleico según la presente invención. Las mismas consideraciones son aplicables a las modalidades descritas en la presente memoria descriptiva done la complementariedad e identidad del ácido nucleico según la presente invención no solamente es proporcionada por el primer tramo y el segundo tramo respectivamente, sino que tal complementariedad e identidad también implica uno o más nucleótidos más allá del primer tramo y el segundo tramo, respectivamente, formando entonces parte de la primera cadena y la segunda cadena, respectivamente. De los diversos ácidos nucleicos según la presente invención descritos en la presente memoria descriptiva, se prefieren particularmente los que tienen números de referencia interna, 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 (véase el cuadro A) y 257, 260-262 y 264-268 (véase el cuadro D). En relación con lo miso, se ha de resaltar que los ácidos nucleicos según la presente invención que se pueden usar tanto en el ser humano como en un modelo animal tal como la rata y/o el ratón son particularmente útiles. La sorprendente ventaja de estos ácidos nucleicos particulares según la presente invención reside en el hecho de que son eficaces tanto en el ser humano como en el modelo animal, lo cual significa que los resultados de ensayo obtenidos en el modelo animal pueden ser transferidos inmediatamente desde el modelo animal al ser humano y más particularmente sin la necesidad de realizar ningún cambio en la secuencia humana, lo cual sería de otro modo necesario en el caso de que el ácido nucleico según la presente invención fuese designado tal como para comprender (a) la(s) secuencia(s) que difiere(n) entre especies, más particularmente las especies usadas para el ensayo del modelo animal y el ser humano como los último organismo o paciente preferidos. Se prefiere, además, que estos ácidos nucleicos tengan un patrón de modificación también descrito en los ejemplos. Sin embargo, también está dentro de la presente invención que cualquiera de las secuencias según SE! ID NO 3, 16-17, 22-27, 29, 41 -46, 51 -53, 66-67, 72-77, 79, 91-96, 101-102, 527, 530-532, 534-538, y las combinaciones respectivas que dan como resultado las moléculas de ácido nucleico según la presente invención con números de referencia interna 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50. (del cuadro A) y 257, 260-262 y 264-268 (del cuadro D) está solamente parcialmente contenida en otro ácido nucleico según la presente invención. Preferiblemente, los otros ácidos nucleicos según la presente invención comprenden al menos 14 nucleotidos contiguos de la SEQ ID NO 3, 16-17, 22-27, 29, 41 -46, 51 -53, 66-67, 72-77, 79, 91 -96, 101 -102, 527, 530-532, 534-538 y más preferiblemente 14 pares de bases de nucleotidos continuos en cualquier extremo de la estructura de doble cadena constituida por el primer tramo y el segundo tramo expuestos en el cuadro anterior. El experto en la técnica entenderá que dada la longitud potencial del ácido nucleico según la presente invención y particularmente de los tramos individuales que forman tal ácido nucleico según la presente invención, algunos desplazamientos relativos a la secuencia codificante de RTP801 de cada lado son posibles, con lo cual los desplazamientos pueden ser hasta 1 , 2 3, 4, 5 y 6 nucleótidos en ambas direcciones, y con lo cual las moléculas de ácido nucleico de doble cadena generadas de este modo estarán también dentro de la presente cadena. En una modalidad preferida de la presente invención, el primer tramo y el segundo tramo tienen la misma longitud. Igualmente, se prefiere que la segunda cadena tenga la misma longitud que el segundo tramo, con lo cual se prefiere incluso más que el primer tramo y el segundo tramo tengan la misma longitud. En una modalidad aun más preferida, la primera cadena sólo comprende el primer tramo y la segunda cadena comprende el segundo tramo. En una modalidad aun más preferida, ni el primer tramo y de este modo la primera cadena, ni el segundo tramo, y de este modo la segunda cadena, comprenden una proyección. Dicho de otro modo, también está dentro de la presente invención, que los ácidos nucleicos de doble cadena según la presente invención son de extremo romo, preferiblemente en cada extremo de la estructura de doble cadena de los ácidos nucleicos según la presente invención. Tal estructura de extremos romos puede ser llevada a cabo en relación con cualquier otra modalidad de los ácidos nucleicos según la presente invención, particularmente las modalidades donde los ácidos nucleicos según la presente invención tienen un patrón de modificación, más preferiblemente un patrón de modificación descrito en la presente memoria descriptiva. En otro aspecto, el ácido nucleico según la presente invención tiene, de este modo, un diseño básico que proporciona los extremos romos de la estructura de doble cadena del ácido nucleico según la presente invención. Sin embargo, también está dentro de la presente invención que hay una proyección, es decir un tramo de uno o más nucleótidos que sobresalen de la estructura de doble cadena. La proyección puede ser, en principio, en el extremo 5' de la cadena no codificante, en el extremo 3' de la cadena no codificante, en el extremo 5' de la cadena codificante y/o en el extremo 3' de la cadena codificante. Se ha de resaltar que la modalidad de una cualquier de dichas opciones así como de cualquier combinación de las mismas está dentro de la presente invención. Se prefiere más una combinación, con lo cual la proyección está situada en el extremo 3' de la cadena no codificante y en el extremo 3' de la cadena codificante. También está dentro de la presente invención que la proyección está en el extremo 5' de la cadena no codificante y en el extremo 5' de la cadena codificante. Además, está dentro de la presente invención que la proyección esta situada solamente en la cadena no codificante de estructura de doble cadena, más preferiblemente en el extremo 3' de la cadena no codificante de la estructura de doble cadena. En relación con las proyecciones, se ha de resaltar que la proyección más el tramo forman preferiblemente la cadena y las longitudes proporcionadas para los tramos en la presente memoria descriptiva se aplica también a las modalidades. La proyección individual puede, independientemente de su situación, consistir en al menos un nucleótido. Sin embargo, la proyección individual puede comprender tantos como 10 nucleotidos largos y preferiblemente 2 nucleotidos largos Está dentro de la presente invención que el (los) nucleótido(s)que forma(n) la(s) proyección(es) es/son complementario(s) a dicha secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , y la proyección que está en el extremo 3' o 5' de la cadena no codificante, o que la(s) proyección(es) es /son idénticas a la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 en el caso de que la primera cadena sea igual a la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801. Lo mismo se aplica a cualquier proyección situada en el segundo extremo del diseño básico del ácido nucleico según la presente invención, con lo cual se ha de reconocer que el diseño de proyección en el segundo tramo puede ser independiente del diseño de proyección del primer tramo. Está también dentro de la presente invención que los nucleotidos que forman la proyección no son ni complementarios ni idénticos a los nucleotidos correspondientes de la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 . Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, y preferiblemente en esta modalidad, "correspondiente" significa los nucleotidos respectivos que siguen al extremo 5' y/o el extremo 3' del tramo que tiene un nucleótido equivalente sobre el ácido nucleico que codifica RTP801 .

Preferiblemente, la primera cadena comprende en su extremo 3' dos nucleotidos, preferiblemente desoxinucleótidos y más preferiblemente dos TT y/o I tipo de nucleotidos también en el extremo 3' de la segunda cadena, con lo cual más preferiblemente, la longitud del primer tramo y el segundo tramo es de 19 nucleotidos. Las cadenas están constituidas por el tramo y la proyección. En esta modalidad, la estructura de doble cadena consiste en 19 pares de bases y una proyección de nucleotidos en cada extremo del extremo 3' del tramo individual. En una modalidad preferida, el primer tramo y/o la primera cadena comprende(n) ribonucleótidos, con lo cual se prefiere particularmente que el primer tramo consista en su integridad en ribonucleótidos. Lo mismo se aplica al segundo tramo y la segunda cadena, respectivamente. Sin embargo, en relación con lo mismo, cada uno de y cualquiera de los nucleotidos del primer tramo y del segundo tramo, respectivamente está modificado en una modalidad preferida. Lo mismo se aplica a la primera cadena y la segunda cadena, respectivamente. Particularmente, los nucleotidos terminales, si tener en cuenta si son ribonucleótidos o desoxirribonucleótidos, pueden tener un grupo OH- que de este modo puede ser modificado. Tal grupo OH- puede ser el resultado bien del resto azúcar del nucleótido, más preferiblemente de la posición 5' en el caso del grupo 5??- y/0 de la posición 3' en el caso del grupo3'OH- o de un grupo fosfato unido al resto azúcar del nucleótido terminal respectivo. El grupo fosfato puede, en principio, estar unido a cualquier grupo OH- del resto azúcar del nucleótido. Preferiblemente, el grupo fosfato está unido al grupo 5??- del resto azúcar en el caso del grupo 5??- y/o al grupo 3??- del resto azúcar en el caso del grupo libre 3??- que sigue proporcionando lo que se denomina en la presente memoria descriptiva como grupo libre 5' o 3??-. Tal como se usa en la presente memoria descriptiva con cualquier estrategia para el diseño de RNAi o cualquier modalidad de RNAi descrita en la presente memoria descriptiva, el término modificación de extremo significa una entidad química añadida I nucleótidos más 5' o 3' de la primera y/o segunda cadena. Los ejemplos para tales modificaciones de extremo incluyen, pero no se limitan a, fosfato 3' o 5', (desoxi) abásteos invertidos, amino, fluoro, cloro, bromo, CN, CF, metoxi, imidazol, carboxilato, tioato, Alquilo inferior CrCio, alquilo inferior sustituido, alcarilo o aralquilo, OCF3, OCN, O-, S-, o N-alquilo, O-, S- o N-alquenilo; SOCH3, S02CH3; ON02, N02, N3; heterocicloalquilo; heterocicloalcarilo; aminoalquilamino; polialquilamino o sililo sustituido como entre otros se describe en las patentes europeas EP 0 586 520 B1 o EP 0 618 925 B1. Tal como se usa en la presente memoria descriptiva, alquilo o cualquier término que comprende "alquilo" significa preferiblemente cualquier cadena de átomo de carbono que comprende 1 a 12, preferiblemente 1 a 6 y más preferiblemente 1 a 2 átomos de carbono. Otra modificación de extremo es un grupo biotina. Tal grupo biotina puede preferiblemente estar unido bien la nucleótido más 5' o el nucleótido mas 3' de la primera y/o de la segunda cadena o a ambos extremos. En una modalidad más preferida el grupo biotina está acoplado a un polipéptido o una proteína. Está también dentro del alcance de la presente invención que el polipéptido o la proteína esté unida a través de cualquiera de las otras modificaciones de extremo anteriormente mencionadas. El polipéptido o la proteína puede conferir otras características a las moléculas de ácido nucleico según la presente invención. Entre otros, el polipéptido o la proteína pueden actuar como un ligando a otra molécula. Si dicha otra molécula es un receptor, la función y la actividad de receptor pueden ser activadas por le ligando de unión. El receptor puede mostrar una actividad de internalización que permite una transfección eficaz de las moléculas de ácido nucleico unidas al ligando según la presente invención. Un ejemplo para el ligando a acoplar a la molécula de ácido nucleico de la invención es VEGF y el receptor correspondientes es el receptor de VEGF. Diversas posibles modalidades del RNAi de la presente invención que tiene diferentes tipos de modificación(es) de extremo se presentan en el siguiente cuadro I CUADRO 1 Diversas modalidades del ácido interferente según la presente invención 1a cadena/1 er tramo 2a cadena/20 tramo 1 .) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' OH libre OH libre 2·) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' modificación de extremo modificación de extremo 3·) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' OH libre modificación de extremo 4.) extremo 5' OH libre OH libre extremo 3' modificación de extremo OH libre 5.) extremo 5' OH libre modificación de extremo extremo 3' OH libre OH libre 6.) extremo 5' OH libre modificación de extremo extremo 3' modificación de extremo OH libre 7.) extremo 5' OH libre modificación de extremo extremo 3' OH libre modificación de extremo 8.) extremo 5' OH libre modificación de extremo extremo 3' modificación de extremo modificación de extremo Las diversas modificaciones de extremo descritas en la presente memoria descriptiva están preferiblemente situadas en el resto ribosa de un nucleótido del ácido nucleico según la presente invención. Más particularmente, la modificación de extremo puede unirse a o sustituir cualquier a de los grupos OH del resto ribosa, que incluye pero no se limita a la posición 2'=H, 3?? y 5??, siempre que el nucleótido modificado de este modo sea un nucleótido terminal. Los abáscios invertidos son nucleótidos, bien desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos que no tienen un resto nucleobase. Este tipo de compuesto está, entre otros, descrito en Sternberg. M., Schmiedeknecht. A,. Kretschmer. A., Gebhardt. F., Leenders. F., Czauderna. F., von Carlowitz. I., Engle. M., Giese. K., Beigelman. L & Klippel, a. (2002). Antisense Nucleic Acid Drug Dev. !2, 131 -43. Cualquiera de las modificaciones de extremo anteriormente mencionadas pueden ser usadas en relación con las diversas modalidades de RNAi descrito en el cuadro 1 ; se ha de resaltar que las modificaciones de extremo 5' mencionadas anteriormente están normalmente presentes solamente en la cadena codificante de la molécula de ARNip. Otras modificaciones pueden estar relacionadas con el resto nucleobase, el resto azúcar o el resto fosfato del nucleótido individual Tales modificaciones del resto nucleobase puede ser tales que los derivados de adenina, guanina, cistosina y timidina y urcilo, respectivamente, estén modificado. Particularmente las ucleobases modificadas preferidas se seleccionan a partir del grupo que comprende inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metilo, 2-propilo y otras alquiladeninas, 5-halouracilo, 5-halocistosina, 5-halocistosina, 6-azacistosina, 6-azatimina, pseudouracilo, 4-tiouracilo, 8-haloadenina, 8-aminoadenina, 8-tioladenina, 8-tioalquiladeninas, 8-hidroxiladeninas y otras adeninas 8-sustituidas, 8-haloguaninas, 8-aminoguaninas, 8-tiolguanina, 8-tioalquilguanina, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otras aza- y deazaadeninas, otras aza- y deaza guaninas, 5-trifluorometiluracilo y 5-trifluorocistosina. En otra modalidad preferida, el resto azúcar del nucleótido está modificado, con lo cual tal modificación está preferiblemente en la posición 2' del resto ribosa y desoxirribosa, respectivamente del nucleótido. Más preferiblemente, el grupo 2?? está sustituido por un grupo o resto seleccionado a partir del grupo que comprende amino, fluoro, alcoxi y alquilo.

Preferiblemente alcoxi es bien metoxi o etoxi, También preferiblemente alquilo significa metilo, etilo, propilo, isobutilo, butilo e isobutilo. Se prefiere incluso más que, sin tener en cuenta el tipo de modificación, el nucleótido sea preferiblemente un ribonucleótido. La modificación del resto fosfato es seleccionada preferiblemente a partir del grupo que comprende fosfotioatos. El experto en la técnica reconocerá que el ácido nucleico de la presente invención que consiste en una multitud de nucleótidos puede, de este modo, ser formado por nucleótidos que están unidos a través de un enlace de fosfodiester o a través de un enlace fosfotioato, o una combinación de ambos a lo largo de la longitud de la secuencia de nucleótidos de la cadena y el tramo individuales, respectivamente. Otra forma de nucleótidos usados puede de hecho ser ARNip que está, entre otros, descrita en la solicitud de patente internacional WO 03/070918 Los nucleotidos que forman el primer tramo y la primera cadena, respectivamente del ácido nucleico según la presente invención pueden comprender uno o más nucleotidos modificados, con lo cual el nucleótido modificado individual tiene una modificación que es preferiblemente una modificación descrita en la presente memoria descriptiva. Además de la modificación particular, la modificación puede estar o comprender algunas clases de mareaje, con lo cual el mareaje es seleccionado partir de grupo de mareajes quimiloluminiscentes, mareajes fluorescentes y radiomarcajes. Estos tipos de mareajes son conocidos por el experto en la técnica y, por ejemplo son descritos en Ausubel et al., Current Prortocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, Baltimore, _Maryland, 1998. El ácido así marcado según la presente invención puede ser usado también con fines de diagnóstico o para vigilar el sitio de acción así como para el estadificación de cualquier tratamiento, preferiblemente relacionado con cualquiera de las enfermedades descritas en la presente memoria descriptiva. En una modalidad preferida, el ácido nucleico según la presente invención está modificado tal como los nucleotidos de pirimidina en el tramo o la cadena codificante son nucleotidos 2'0-metilopirimidina y, bien adicionalmente o alternativamente, los nucleotidos purina en el tramo o la cadena codificante son nucleotidos 2'-desoxipurina. En otra modalidad los nucleotidos pirimidina presentes en el tramo o la cadena codificante son nucleotidos 2'-desoxy-2'-fluoropirimidina En una modalidad alternativa, la modificación no está basada en la química del nucleótido, es decir, la modificación de pende de sí el nucleótido a modificar es bien un nucleótido purina o un nucleótido pirimidina, pero está predominantemente basada en la disposición espacial de los nucleótidos individuales en la estructura global de doble cadena del diseño básico del ácido nucleico según la presente invención. Más particularmente, bien la primera cadena y el primer tramo, respectivamente, o la segunda cadena y el segundo tramo, respectivamente, muestran un patrón espacial de modificación de los nucleótidos que forman dichos tramos y cadenas, respectivamente. Respecto del primer tramo, en primer lugar, hay un patrón de grupo de nucleótidos modificados y grupos de nucleótidos no modificados. Estos grupos de nucleótidos no modificados también son denominados en la presente memoria descriptiva como grupos flanqueadores de nucleótidos. Más preferiblemente, el patrón consiste en grupos de nucleótidos modificados y nucleótidos no modificados. Incluso más preferiblemente, el patrón es un patrón regular e incluso más preferiblemente un patrón alternativo a lo largo de la longitud del primer tramo del ácido nucleico según la presente invención. El grupo de nucleótido modificados puede, bien consistir en uno de diversos nucleótidos que están modificados y que son preferiblemente nucleótidos que están modificados en la posición 2', es decir tienen una modificación en el resto azúcar. Más preferiblemente, esta modificación es una modificación 2'-O-Me.

El grupo de nucleótidos pude bien consistir en uno o diversos nucleótidos que están o no están modificado, con lo cual los nucleótidos no modificados son preferiblemente ribonucleótidos, o los nucleótidos no modificados son nucleótidos que tiene una modificación, con lo cual tal modificación es diferente de la modificación mostrada por los nucleótidos que forman el grupo de nucleótidos modificados. Incluso más preferiblemente, los nucleótidos no modificados son ribonucleótidos. Se ha de resaltar que el término nucleotido no modificados y no-modificados se usa indistintamente si no se indica lo contrario. El primer tramo del ácido nucleico según la presente invención puede, bien empezar con un grupo de nucleótidos modificados o empezar con un grupo de nucleótidos no modificados definidos en la presente memoria descriptiva. Sin embargo, se prefiere que el primer tramo empiece con un grupo de nucleótidos modificados. Más preferiblemente, el grupo de nucleótidos modificados consiste en un único nucleotido. En relación con esta modalidad, el primer tramo está preferiblemente en una orientación no codificante respecto del ácido nucleico que codifica RTP801. Está también dentro de la invención que la modificación exhibida por los nucleótidos que forman el grupo de nucleótidos modificados es la misma Para todos los grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo. Sin embargo. Está también dentro de la presente invención que algunos grupos de nucleótidos modificados tienen una modificación diferente de uno o diversos grupos de nucleótidos modificados presentes en el primer tramo.

En la segunda cadena del ácido nucleico según la presente invenció, se puede realizar también un patrón descrito para el primer tramo. Las mismas características descritas con relación al primer tramo pueden ser realizadas también en una modalidad sobre el segundo tramo, con lo cual se prefiere que, a condición de que el segundo tramo esté en una orientación codificante relativa a la secuencia de ácido nucleico que codifica RTP801 , la segunda cadena del ácido nucleico según la presente invención empieza con un grupo de nucleótidos no modificados. El ácido nucleico según la presente invención que comprende una estructura de doble cadena puede comprende un primer tramo que tiene el patrón de modificación descrito en la presente memoria descriptiva. Alternativamente, el ácido nucleico de doble cadena según la presente invención puede comprender un segundo tramo que tiene el patrón de modificación expuesto anteriormente. Sin embargo, se prefiere más que el ácido nucleico de doble cadena según la invención consista en un primer tramo y un segundo tramo, con lo cual tanto el primer como el segundo tramo tienen un patrón de modificación espacial tal como se describe en la presente memoria descriptiva. Está dentro de la presente invención que las características del patrón de modificación espacial es el mismo en ambos tramos en términos de dimensión de los grupos de nucleótidos modificados y grupos de nucleótidos no modificados y el tipo de modificaciones usadas de hecho. Preferiblemente, el patrón espacial de modificación en el primer tramo está desplazado de manera que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo y viceversa. Sin embargo, también está dentro de la presente invención que los patrones están alineados exactamente, es decir, que un grupo de nucleótidos modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótido no modificados en el segundo tramo y un grupo de nucleótidos no modificados en el primer tramo se opone a un grupo de nucleótidos no modificados en el segundo tramo. Sigue estando dentro de la presente invención que el patrón espacial de modificación en el primer tramo y el segundo tramo está desplazado el uno respecto del otro de manera que solo una primera porción de un grupo de nucleótidos modificados en un tramo se opone a una porción de un grupo de nucleótidos no modificados en el otro tramo, mientras que la segunda porción del grupo de nucleótidos modificados se opone a otro grupo de nucleótidos modificados. Esta dentro de la presente invención que la descripción proporcionada en la presente memoria descriptiva sobre el patrón de modificación espacial del (los) tramo(s) del ácido nucleico según la presente invención también se aplica a la(s) cadena(s) del ácido nucleico según la presente invención. Sin embargo, se prefiere que los tramos del ácido nucleico comprendan el patrón de modificación espacial y que las cadenas comprendan tales tramos y una o más proyecciones tal como se describen en la presente memoria descriptiva. Se prefiere particularmente que la proyección sea un grupo fosfato en el extremo 3' de bien la cadena no codificante, o la cadena codificante o ambas cadenas, con lo cual se prefiere más que el grupo fosfato esté en el extremo 3' tanto de la cadena no codificante como de la cadena codificante. En una modalidad incluso más preferida, el grupo fosfato es un grupo fosfato tal como se ha definido en la presente memoria descriptiva. Está también dentro de la presente invención que el ácido nucleico según la presente invención puede exhibir un enlazador que conecta la primera y segunda cadenas. Dicho enlazador es preferiblemente un polímero. El polímero puede ser cualquier polímero sintético o natural. Los enlazadores sintéticos posibles son, entre otros, PEG o un polinucleótido. Dicho enlazador se diseña preferiblemente para permitir un replegamiento parcial o completo del primer tramo en el segundo tramo y viceversa. Finalmente, está dentro de la presente invención que el ácido nucleico según la presente invención es uno sintético, uno sintetizado químicamente, uno aislado o uno derivado de cualquier fuente natural tal como, por ejemplo, preparado mediante tecnología recombinante. Con respecto a la preparación de cualquier ácido nucleico según la presente invención, puede introducirse cualquier modificación como se da a conocer en la presente memoria antes, durante o después de la preparación del ácido nucleico respectivo según la presente invención como es conocido por los expertos en la técnica. El vector según la presente invención comprende un ácido nucleico según la presente invención. Adicionalmente, el vector puede incluir elementos para controlar la dirección, expresión y transcripción de dicho ácido nucleico en una célula de manera selectiva como es conocido en la técnica. El plásmido puede incluir un promotor para controlar la transcripción del material heterólogo, concretamente, el ácido nucleico según la presente invención, y puede ser un promotor constitutivo o inducible para permitir la transcripción selectiva. Pueden incluirse opcionalmente potenciadores que pueden ser necesarios para obtener los niveles de transcripción necesarios. Los potenciadores son generalmente cualquier secuencia de ADN no traducida que funciona contiguamente a la secuencia codificante, por tanto en cis, cambiando el nivel de transcripción basal dictado por el promotor. La expresión de dichos constructos es conocida por un experto en la técnica, y puede hacerse, por ejemplo, proporcionando un constructo en serie respectivo o teniendo diferentes promotores que transcriben la primera y segunda cadenas y primer y segundo tramos, respectivamente, del ácido nucleico según la presente invención. Cuando el ácido nucleico según la presente invención se fabrica o expresa, preferiblemente se expresa in vivo, más preferiblemente en un paciente que está necesitado del ácido nucleico según la presente invención, dicha fabricación o expresión utiliza preferiblemente un vector de expresión, preferiblemente un vector de expresión de mamífero. Los vectores de expresión son conocidos en la técnica y comprenden preferiblemente plásmidos, cósmidos, sistemas de expresión viral. Los sistemas de expresión viral preferidos incluyen, pero sin limitación, adenovirus, retrovirus y lentivirus. Son conocidos en la técnica métodos para introducir los vectores en células o tejidos. Dichos métodos pueden encontrarse generalmente descritos en Sambrook ef al.: "Molecular cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbour Laboratory, Nueva York (1983, 1992), o en Ausubel er al., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland, 1998. Los métodos adecuados comprenden, entre otros, transfección, lipofección, electroporación e infección con vectores virales recombinantes. Con respecto a la presente invención, es un rasgo adicional del vector en una modalidad un rasgo limitador de la expresión tal como un elemento promotor y regulador, respectivamente, que son específicos del tipo celular deseado, permitiendo así la expresión de la secuencia de ácido nucleico según la presente invención sólo una vez se proporciona el fondo que permite la expresión deseada. En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un ácido nucleico según la presente invención y/o un vector según la presente invención y, opcionalmente, un vehículo, diluyente o coadyuvante u otro(s) excipientes(s) farmacéuticamente aceptable(s). Preferiblemente, dichos vehículos, diluyentes, coadyuvantes y medios son inertes y no tóxicos. La composición farmacéutica está adaptada en sus diversas modalidades para administración de diversos modos. Dicha administración comprende la administración sistémica y local así como oral, subcutánea, parenteral, intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitoneal, intranasal e intrategral.

Se reconocerá por los expertos en la técnica que la cantidad de composición farmacéutica y el ácido nucleico y vector respectivos depende, respectivamente, del estado clínico del paciente individual, del sitio y procedimiento de administración, del esquema de administración, la edad del paciente, el sexo, el peso corporal y otros factores conocidos por los practicantes de medicina. La cantidad farmacéuticamente eficaz con fines de prevención y/o tratamiento se determina por tanto mediante consideraciones tales como son conocidas en las técnicas médicas. Preferiblemente, la cantidad es eficaz para conseguir una mejora, incluyendo pero sin limitación la mejora de la afección patológica, o para proporcionar una recuperación, mejora o eliminación de síntomas más rápidas y otros indicadores como se seleccionan mediante medidas apropiadas por los expertos en las técnicas médicas. En una modalidad preferida, la composición farmacéutica según la presente invención puede comprender otros compuestos farmacéuticamente activos. Preferiblemente, dichos otros compuestos farmacéuticamente activos se seleccionan del grupo que comprende compuestos que permiten la captación del suministro celular intracelular, compuestos que permiten la liberación endosomica, compuestos que permiten un tiempo de circulación más largo y compuestos que permiten la dirección a células endoteliales o células patógenas. Los compuestos preferidos para liberación endosomica son cloroquina, e inhibidores de bombas de H+ dependientes de ATP.

La composición farmacéutica se formula preferiblemente para proporcionar una administración de dosificación única o una administración de dosificación múltiple. Se reconocerá que la composición farmacéutica según la presente invención puede utilizarse para cualquier enfermedad que implique un desarrollo o crecimiento indeseado de los vasos, incluyendo angiogénesis, así como cualquiera de las enfermedades y afecciones descritas en la presente memoria. Preferiblemente, estas clases de enfermedades son enfermedades tumorales. Entre las enfermedades tumorales, los presentes tumores son los más preferidos: carcinomas colorrectales, gliomas, cánceres de endometrio, adenocarcinomas, hiperplasias de endometrio, síndrome de Cowden, carcinoma colorrectal sin poliposis hereditario, síndrome de Li-Fraumene, cáncer de mama-ovario, cáncer de próstata (Ali, I.U., Journal of the National Cáncer Institute, vol. 92, n° 1 1 , 7 de junio de 2000, páginas 861 -863), síndrome de Bannayan-Zonana, LDD (síndrome de Lhermitte-Duklos) (McLeod, K., anteriormente), enfermedades de hamartoma-macrocefalia, incluyendo enfermedad de Cow (CD) y síndrome de Bannayan-Ruvalcaba-Rily (BRR), lesiones mucocutáneas (por ejemplo, triquilemomas), macrocefalia, retardo mental, harmatomas gastrointestinales, lipomas, adenomas tiroideos, enfermedad fibroquística de mama, gangliocitoma displásico cerebelar y malignidades de mama y tiroidea (Vázquez, F., Sellers, W.R., anteriormente). Se reconoce que cualquiera de las enfermedades tumorales que se van a tratar con la composición farmacéutica según la presente invención es preferiblemente una enfermedad tumoral de etapa tardía. En otra modalidad, la enfermedad tumoral implica células que son negativas de supresor tumoral, por lo cual el supresor tumoral más preferido es PTEN. La composición farmacéutica según la presente invención puede utilizarse también en un procedimiento para prevenir y/o tratar una enfermedad como se da a conocer en la presente memoria, por lo cual el procedimiento comprende la administración de un ácido nucleico según la presente invención, un vector según la presente invención o una composición farmacéutica o medicamento según la presente invención para cualquiera de las enfermedades descritas en la presente memoria. En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un procedimiento para diseñar o seleccionar un ácido nucleico que es adecuado para regular por disminución RTP801 , más particularmente para regular por disminución la función RTP801 . Este procedimiento comprende el uso de una secuencia de ácido nucleico como se da a conocer en la presente memoria y la valoración de dicho ácido nucleico en un ensayo adecuado. Dicho ensayo es conocido en la técnica y, por ejemplo, se describe en la parte de ejemplos de esta solicitud. En una etapa adicional, se diseña un ácido nucleico bicatenario, preferiblemente según los principios de diseño declarados en la presente memoria, que es adecuado para regular por disminución RTP801 , preferiblemente con respecto a un mecanismo de silenciamiento génico post-transcripcional tal como interferencia de ARN. También se valora el ácido nucleico así obtenido, concretamente diseñado o seleccionado, en el ensayo respectivo y se compara el resultado, concretamente el efecto, tanto del ácido nucleico según la presente invención como del ácido nucleico recién diseñado o seleccionado en dicho ensayo. Preferiblemente, el ácido nucleico diseñado o seleccionado es más adecuado en caso de que sea más estable o más eficaz, preferiblemente ambos. Se reconocerá que el procedimiento será particularmente eficaz si cualquiera de los ácidos nucleicos según la presente invención se utiliza como punto de partida. Por tanto, está dentro de la presente invención que se diseñen nuevas moléculas de ácido nucleico basadas en los principios dados a conocer en la presente memoria, por lo cual la secuencia diana en el ARNm de RTP801 estará ligeramente desplazada respecto a la secuencia diana en el ARNm de RTP801 del correspondiente ácido nucleico según la presente invención. Preferiblemente, el nuevo ácido nucleico estará desplazado en al menos uno o más nucleótidos respecto al tramo en el ARNm diana en la dirección 5' o 3' del ARNm que codifica RTP801 . Sin embargo, está dentro de la presente invención que el desplazamiento ocurra en ambas direcciones simultáneamente, lo que significa que el ácido nucleico nuevo incorpora el ácido nucleico según la presente invención utilizado como punto de partida. Está también dentro de la presente invención que la elongación del ácido nucleico según la presente invención y utilizado como punto de partida está desviado hacia el extremo 3' o el extremo 5'. En caso de dicha desviación, el extremo 3' o el extremo 5' del ácido nucleico nuevo es más largo, concretamente más extendido, que el otro extremo. Cuando la molécula de ácido nucleico nuevo se genera extendiendo el extremo 3' o el extremo 5' de la cadena sin sentido y/o la cadena con sentido, se aplica típicamente la siguiente secuencia de etapas. Si el desplazamiento es al extremo 5' del ARNm de RTP801 , el extremo 3' de la cadena sin sentido tiene que extenderse el número de nucleótidos en que se desplaza el extremo 5' del ARNm de RTP801 . El(los) nucleótido(s) que se va(n) a añadir por tanto al extremo 3' de la cadena sin sentido del ácido nucleico nuevo es(son) complementario(s) de los nucleótidos siguientes en el extremo 5' de la secuencia diana en el ARNm de RTP801 utilizado para la molécula de ácido nucleico según la presente invención utilizada como punto de partida. Ha de hacerse lo mismo en la cadena con sentido. Sin embargo, los nucleótidos que se van a añadir a la cadena con sentido tienen que corresponder, concretamente ser complementarios, con los nucleótidos recién añadidos al extremo 3' de la cadena sin sentido, lo que significa que tienen que añadirse al extremo 5' de la cadena con sentido. Sin embargo, la última etapa de la cadena sin sentido ha de hacerse sólo en la medida en que, aparte de la cadena sin sentido, también se desplace la cadena con sentido, que es el caso en modalidades preferidas de la presente invención. Aunque este desplazamiento puede hacerse en una medida definida por los expertos en la técnica, más preferiblemente el desplazamiento se hará de tal modo que también el ácido nucleico nuevo siga conteniendo un tramo de al menos 14 nucleótidos, preferiblemente 14 nucleótidos contiguos como se exhibe en cualquiera de las moléculas de ácido nucleico dadas a conocer en la presente memoria.

La síntesis de cualquiera de los ácidos nucleicos descritos en la presente memoria está dentro de las capacidades de un experto en la técnica.

Dicha síntesis se describe, entre otros, en Beucage S.L. y lyer R.P., Tetrahedron 1992; 48: 2223-231 1 , Beaucage S.L. y lyer R.P., Tetrahedron 1993; 49: 6123-6194 y Caruthers M.H., et al., Methods Enzvmol. 1987; 154: 287-313; la síntesis de tioatos se describe, entre otros, en Eckstein F., Annu.

Rev. Biochem. 1985; 54: 367-402; la síntesis de moléculas de ARN se describe en Sproat B., en Humana Press 2005, editado por Herdewijn P.; cap. 2, 17-31 y los métodos cadena abajo respectivos se describen, entre otros, en Pingoud A., et al., en IRL Press, 1989, editado por Oliver R.W.A., cap. 7, 183- 208 y Sproat B., en Humana Press, 2005, editado por Herdewijn P., cap. 2: 1 7-31 (anteriormente). El ARNip de RTP801 puede prepararse utilizando métodos conocidos en la técnica como se describen anteriormente, basados en la secuencia conocida de RTP801 (SEQ ID NO: 1 ) y puede hacerse estable mediante diversas modificaciones como se describen anteriormente. Para información adicional, véase el ejemplo 9. Además, con relación a los métodos de la presente invención como se describen en la presente memoria, pueden utilizarse moléculas de ARN adicionales con dichos métodos, por ejemplo, las moléculas de ARN inhibidoras de la presente invención incluyen oligorribonucleótidos monocatenarios que comprenden preferiblemente tramos de al menos 7-10 nucleótidos consecutivos presentes en las secuencias detalladas en los cuadros A-D, siendo capaces dichos oligorribonucleótidos de formar (y/o comprenden) regiones bicatenarias en conformaciones particulares que son reconocidas por complejos intracelulares, que conducen a la degradación de dichos oligorribonucleótidos a moléculas de ARN menores que son capaces de ejercer la inhibición de su correspondiente gen endógeno, y moléculas de ADN que codifican dichas moléculas de ARN. El correspondiente gen endógeno es preferiblemente el gen 801 y puede ser adicionalmente el gen VEGF y lo el gen VEGFR-1 . La invención proporciona también una composición que comprende el oligorhbonucleótido monocatenario anterior en un vehículo, preferiblemente un vehículo farmacéuticamente aceptable. Adicionalmente, la presente invención proporciona terapia de combinación para todas las afecciones dadas a conocer en la presente memoria y, en particular, afecciones que implican la neovascularización coroidea. En dicha terapia de combinación, tanto los genes RTP801 como VEGFR se inhiben para mejorar los síntomas de la enfermedad que se está tratando. Estos genes pueden inhibirse con una combinación de uno o más ARNip o anticuerpos o aptámeros. Por lo tanto, la presente invención proporciona también una nueva composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 y un inhibidor de VEGF o VEGFR-1 , siendo preferiblemente el inhibidor de RTP801 un ARNip, más preferiblemente una molécula de ARNip detallada en los cuadros A-D y, en particular, los ARNip n° 1 4, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los ARNip n° 257, 260-262 y 264-268 del cuadro D, y siendo opcionalmente el inhibidor de VEGF/VEGFR-1 un anticuerpo u aptámero. El uso combinado de dichos compuestos (concretamente, ARNip de RTP801 y anticuerpo de VEGF o cualquier otro ejemplo combinado dado a conocer en la presente memoria) en la preparación de un medicamento es también parte de la presente invención. Por tanto, los ARNip de RTP801 tales como una molécula de ARNip detallada en los cuadros A-D y, en particular, los ARNip n° 14, 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los ARNip n° 257, 260-262, y 264-268 del cuadro D pueden administrarse junto con agentes que se dirigen a VEGF o al receptor 1 de VEGF (VEGFR-1 ). Dichos agentes existen actualmente en el mercado o en diversas etapas de aprobación y funcionan mediante diferentes mecanismos. Los anticuerpos y fragmentos de anticuerpo tales como ranibizumab (Lucentís, Genentech) se unen al VEGF liberado inhibiendo la unión de VEGF a receptores activos. Es también una posibilidad un aptámero que puede actuar como un ligando/anticuerpo (macugén, Eyetech/Pfizer, aprobado recientemente por la FDA para AMD húmeda). El macugén se une con VEGF extracelular bloqueando su actividad. Estos fármacos se administran por vía local mediante inyección intravítrea. Están también disponibles compuestos basados en ARNip anti-VEGF (tales como el inhibidor de VEGF Cand5 de Acuity o el inhibidor de VEGFR-1 027 de ARNIP). Adicionalmente, la molécula pequeña de aminoesterol escualamina (Genaera), que se administra sistémicamente, interfiere según los informes con múltiples facetas del proceso angiogénico, incluyendo la inhibición de VEGF y otra señalización de factor de crecimiento en células endoteliales.

La administración conjunta de un inhibidor de RTP801 , preferiblemente un ARNip, y cualquiera de los agentes inhibidores de VEGF/VEGFR-1 puede tener un efecto sinérgico, por lo cual dicho tratamiento combinado es más eficaz que el tratamiento con cualquiera de estas composiciones individuales, independientemente de la dosificación en la opción de monoterapia. Este efecto sinérgico está también apoyado por resultados preliminares como se detallan en el ejemplo 6. El RTP801 Í tiene un mecanismo de acción diferente y es potencialmente sinérgico con inhibidores de VEGF-VEGFR. Un estudio en ratones KO de RTP801 indica que el fenotipo protector en los ratones KO persiste a pesar del hecho de que la expresión de ARNm de VEGF en el ojo es tan alta como en los ratones WT. Los datos preliminares adicionales indican que la inhibición de RTP801 puede ser sinérgica con la inhibición del eje regulador de VEGF-VEGFR en el tratamiento de patología retiniana. Los inventores de la presente invención han encontrado en experimentos apropiados que la administración de ARNip contra RTP801 en el modelo de AMD (véase el ejemplo 6 a continuación) conduce no sólo a la regulación por disminución del RTP180 mismo, sino también, como consecuencia, a la regulación por aumento del factor PEDF antiangiogénico y neuroprotector, así como a la regulación por disminución de la expresión de MCP1 , una proteína quimioatractora de macrofagos. Por tanto, la inhibición de RTP801 confiere simultáneamente efectos antiangiogénicos, neuroprotectores y antiinflamatorios.

Como se da a conocer en la presente memoria, pueden utilizarse también aptámeros en la presente invención en combinación con los nuevos ARNip dados a conocer en la presente memoria. Por ejemplo, puede utilizarse un aptámero con cualquiera de los ARNip dados a conocer en la presente memoria en terapia de combinación para el tratamiento de una cualquiera de las afecciones dadas a conocer en la presente memoria. La nueva composición farmacéutica empleada para dicha terapia de combinación, que es también parte de la presente invención, puede comprender un ARNip de la presente invención unido covalente o no covalentemente a un aptámero. Los aptámeros son ácidos oligonucleicos de ARN o ADN mono- o bicatenarios que se unen a una proteína diana y generalmente no exhiben efectos no específicos. Los aptámeros pueden modificarse para estabilidad u otras cualidades deseadas según cualquier modificación de ácido nucleido dada a conocer en la presente memoria y/o conocida por un experto en la técnica. Las modificaciones en aptámeros pueden introducirse en cualquier lugar de la molécula, tal como las terminaciones 5' o 3', o en cualquier sitio de modificación definido internamente. Por ejemplo, los aptámeros de ARN pueden estabilizarse con pirimidinas modificadas con 2'-fluoro o 2'-amino. Los aptámeros pueden ligarse también a moléculas informadoras o químicas de enlazador y pueden unirse a perlas u otro soporte sólido si es necesario (por ejemplo, grupos 5' o 3' amino, éster tiol o biotina). Los tioaptámeros son aptámeros que contienen modificaciones de azufre en sitios de fosforilo internucleósido específicos, y pueden poseer estabilidad potenciada, resistencia a nucleasa, afinidad y/o selectividad de diana. Los ejemplos de tioaptámeros incluyen oligodesoxitioaptámeros de fosforomonotioato (S-ODN) y fosforoditioato (S2-ODN). Para información adicional sobre aptámeros y tioaptámeros, véanse las patentes de EE.UU. n° 5.218.088 y 6.423.493. Ha de entenderse que, en el contexto de la presente invención, puede emplearse cualquiera de las moléculas de ARNip dadas a conocer en la presente memona, o cualquier molécula de ARN bicatenaria larga (típicamente de 25-500 nucleótidos de longitud) que se procesan mediante complejos celulares endógenos (tales como DICER- véase anteriormente) formando las moléculas de ARNip dadas a conocer en la presente memoria, o moléculas que comprenden las moléculas de ARNip dadas a conocer en la presente memoria, en el tratamiento de las enfermedades o trastornos descritos en la presente memoria. Los trastornos adicionales que pueden tratarse mediante las moléculas y composiciones de la presente invención incluyen todos los tipos de neovascularización coroidea (CNV), que ocurren no sólo en AMD húmeda, sino también en otras patologías oculares tales como síndrome de histoplasmosis ocular, estrías angioides, rupturas de la membrana de Bruch, degeneración miópica, tumores oculares y algunas enfermedades degenerativas retinianas. Un aspecto adicional de la presente invención proporciona métodos de tratamiento de una enfermedad relacionada con la apoptosis. Se proporcionan métodos para la terapia de enfermedades o trastornos asociados al crecimiento celular incontrolado patológico, por ejemplo, cáncer, psoriasis, trastornos autoinmunes, entre otros, y métodos para la terapia de enfermedades asociadas a isquemia y falta de flujo sanguíneo apropiado, por ejemplo, infarto de miocardio (MI) y apoplejía. "Cáncer" o "tumor" designa una masa en crecimiento incontrolado de células anormales. Estos términos incluyen tanto tumores primarios, que pueden ser benignos o malignos, como tumores secundarios o metástasis, que se han extendido a otros sitios del cuerpo. Los ejemplos de enfermedades de tipo canceroso incluyen, entre otros: carcinoma (por ejemplo: de mama, colon y pulmón), leucemia tal como leucemia de células B, linfoma tal como linfoma de células B, blastoma tal como neuroblastoma y melanoma. La invención proporciona también una composición que comprende uno o más de los compuestos de la invención en un vehículo, preferiblemente un vehículo farmacéuticamente aceptable. Esta composición puede comprender una mezcla de dos o más ARNip para diferentes genes o diferentes ARNip para el mismo gen. Se prevé una composición que comprende ARNip para el gen RTP801 y ARNip para el gen VEGF y/o el gen VEGFR-1 . Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido covalente o no covalentemente a uno o más compuestos de la invención (estructura A). Este compuesto puede suministrarse en un vehículo, preferiblemente un vehículo farmacéuticamente aceptable, y puede procesarse intracelularmente mediante complejos celulares endógenos produciendo uno o más ARNip de la invención. Otro compuesto de la invención comprende el compuesto anterior de la invención (estructura A) unido covalente o no covalentemente a un ARNip de otro gen, especialmente el gen VEGF y/o el gen VEGFR-1 . Esta invención comprende también una-nueva entidad química que es un inhibidor de RTP801 , preferiblemente un ARNip, unido químicamente, de forma covalente o no covalente, a cualquiera de los agentes inhibidores de VEGFA/EGFR-1 anteriores. Es una entidad química particular prevista un ARNip inhibidor de RTP801 unido covalentemente a un anticuerpo de VEGF o receptor 1 de VEGF. Es una entidad química adicional prevista un aptámero de ADN modificado o no modificado que se dirige al receptor 1 de VEGF unido covalentemente a un ARNip de RTP801 dado a conocer en la presente memoria. Sin ligarse a teoría alguna, la porción de aptámero de dicha composición farmacéutica se uniría al receptor 1 de VEGF y se internalizaría en la célula, tras de lo cual la porción de ARNip de la molécula inhibiría la expresión de RTP801 en la célula. Dicho fármaco tendría por tanto el efecto de una selectividad y dirección aumentadas, así como los beneficios adicionales de terapia de combinación como se dan a conocer en la presente memoria. Los métodos de producción de dichas nuevas entidades químicas son conocidos por los expertos en la técnica. Esta invención comprende también una estructura bicatenaria en serie que comprende dos o más secuencias de ARNip, que se procesa intracelularmente formando dos o más ARNip diferentes, uno que inhibe 801 y un segundo que inhibe VEGF/VEGFR-1 . En un aspecto relacionado, esta invención comprende también una estructura bicatenaria en serie que comprende dos o más secuencias de ARNip que se degradan intracelularmente, formando dos o más ARNip diferentes, inhibiendo ambos 801 . En particular, se prevé que un oligonucleotido largo (típicamente de aproximadamente 80-500 nucleótidos de longitud) que comprende una o más estructuras de tallo y bucle, en el que las regiones de tallo comprenden las secuencias de los oligonucleótidos de la invención, pueda suministrarse en un vehículo, preferiblemente un vehículo farmacéuticamente aceptable, y pueda procesarse intracelularmente mediante complejos celulares endógenos (por ejemplo, mediante DROSHA y DICER como se describen anteriormente) produciendo uno o más oligonucleótidos bicatenarios menores (ARNip) que son los oligonucleótidos de la invención. Este oligonucleotido puede denominase un constructo de ARNhp en serie. Se prevé que este oligonucleotido largo sea un oligonucleotido monocatenario que comprenda una o más estructuras de tallo y bucle, en el que cada región de tallo comprende una secuencia de ARNip con sentido y la correspondiente sin sentido de un gen 801 . En particular, se prevé que este oligonucleotido comprenda secuencias de ARNip con sentido y sin sentido como se representan en una cualquiera de los cuadros A a D. Como alternativa, el constructo de ARNhp en serie puede comprender la secuencia de ARNip con sentido y la correspondiente sin sentido de un gen 801 , y adicionalmente secuencia de ARNip con sentido y la correspondiente sin sentido de un gen diferente tal como VEGF o VEGFR-1 . Como se cita anteriormente en la presente memoria, ARNip contra RTP801 puede ser el componente activo principal en una composición farmacéutica, o puede ser un componente activo de una composición farmacéutica que contiene dos o más ARNip (o moléculas que codifican o producen endógenamente dos o más ARNip, sea una mezcla de moléculas o una o más moléculas en serie que codifican dos o más ARNip), comprendiendo adicionalmente dicha composición farmacéutica una o más moléculas de ARNip adicionales que se dirigen a uno o más genes adicionales. La inhibición simultánea de RTP801 y dicho(s) gen(es) adicional(es) tendrá probablemente un efecto aditivo o sinérgico para el tratamiento de las enfermedades dadas a conocer en la presente memoria, según lo siguiente. Insuficiencia renal aguda (ARF) y otros trastornos microvasculares, así como trastornos auditivos y úlceras de decúbito: la composición farmacéutica para tratamiento de ARF puede comprender las siguientes combinaciones de compuestos: 1 ) dimeros de ARNip de RTP801 y ARNip de p53; 2) dimeros de ARNip de RTP801 y Fas; 3) dimeros de ARNip de RTP801 y Bax; 4) dimeros de ARNip de RTP801 y Fas; 5) dimeros de ARNip de RTP801 y Bax; 6) dimeros de ARNip de RTP801 y Noxa; 7) dimeros de ARNip de RTP801 y Puma; 8) dimeros de ARNip de RTP801 (REDD1 ) y RTP801 L (REDD2); 9) ARNip de ARTP801 , ARNip de Fas y cualquiera de ARNip de RTP801 L, ARNip de p53, ARNip de Bax, ARNip de Noxa o ARNip de Puma para formar trímeros o polímeros (concretamente, moléculas en serie que codifican tres o más ARNip). Además, las composiciones farmacéuticas adicionales para terapias de combinación para ARF, trastornos auditivos, úlceras de decúbito y cualquier otra enfermedad o afección dada a conocer en la presente memoria, pueden comprender dos ARNip en los que el primer ARNip es un ARNip de RTP801 , preferiblemente seleccionado de los cuadros A-D, y el segundo ARNip, que puede unirse covalentemente o no covalentemente al primer ARNip o mezclarse con el primer ARNip, es un ARNip que se dirige a un gen seleccionado del siguiente grupo: proteína de unión 2 a proteína tumoral p53 (TP53BP2); proteína que contiene repeticiones ricas en leucina y dominio de muerte (LRDD); alfa-polipéptido de citocromo b-245 (CYBA); factor activante de la transcripción 3 (ATF3); caspasa 2, cisteinpeptidasa relacionada con la apoptosis 2 (expresada en célula precursora neural, regulada por disminución en el desarrollo) (CASP2); NADPH oxidasa 3 (NOX3); proteína de interacción con BLC2 haraquiri (HRK); proteína de unión al subcomponente q del componente 1 del complemento (C1 QBP); proteína de interacción 3 de 19 kDa con BCL2/E1 B de adenovirus (BNIP3); proteína quinasa 8 activada por mitógeno (MAPK8); proteína quinasa 14 activada por mitógeno ( AP14); sustrato 1 de toxina botulínica C3 relacionado con Ras (familia ro, proteína Rac1 de unión a GTP pequeña); glicógeno sintasa quinasa 3 beta (GSK3B); canal iónico controlado por ligando 7 del receptor purinérgico P2X (P2RX7); miembro 2 de la subfamilia M del canal de catión de potencial receptor transitorio (TRPM2); poli(ADP-ribosa) glicohidrolasa (PARG); molécula CD38 (CD38); miembro 4 de la familia STEAP (STEAP4); proteína morfogenética ósea 2 (BMP2); proteína de unión de hueco alfa 1 , 43 kDa (conexina 43) (GJA1 ); proteína de unión a proteína tirosina quinasa (TYROBOP); factor de crecimiento de tejido conectivo (CTGF); fosfoproteína secretada 1 (osteopontina, sialoproteína ósea 1 , activación de linfocitos T temprana 1 ) (SPP1 ); receptor de reticulón 4 (RTN4R); anexina 2 (ANXA2); miembro A de la familia del gen homólogo de ras (RHOAA) y oxidasa dual 1 (DUOX1 ). Degeneración macular (MD), retinopatia diabética (DR), lesión de médula espinal: las composiciones farmacéuticas para el tratamiento de MD, RD y lesión de médula espinal pueden comprender las siguientes combinaciones de compuesto: 1 ) ARNip de RTP801 combinado con ARNip de VEGF, ARNip de VEGFR-1 , ARNip de VEGFR-2, ARNip de PKCbeta, ARNip de MCP1 , ARNip de eNOS, ARNip de KLF2, ARNip de RTP801 L (mezclados físicamente o en una molécula en serie); 2) ARNip de RTP801 en combinación con dos o más ARNip de la lista anterior (mezclados físicamente o en una molécula en serie que codifica tres ARNip, o una combinación de los mismos). EPOC y trastornos respiratorios: la composición farmacéutica para el tratamiento de trastornos respiratorios puede comprender las siguientes combinaciones de compuesto: ARNip de RTP801 combinado con ARNip contra uno o más de los siguientes genes: elastasas, metaloproteasas de matriz, fosfolípasas, caspasas, esfingomielinasa y ceramida sintasa. Adicionalmente, pueden unirse ARNip de RTP801 o cualquier molécula de ácido nucleico que comprende o codifica ARNip de RTP801 (covaiente o no covalentemente) a un anticuerpo o aptámero para conseguir una dirección potenciada para el tratamiento de las enfermedades dadas a conocer en la presente memoria, según lo siguiente: ARF: anticuerpo anti-Fas (preferiblemente anticuerpos neutralizantes). Degeneración macular, retinopatía diabética, lesión de médula espinal: anticuerpo o aptámero anti-Fas, anticuerpo o aptámero anti-MCP1 , anticuerpo o aptámero anti-VEGFR-1 y anti-VEGFR-2. Los anticuerpos deben ser preferiblemente anticuerpos neutralizantes. Es particularmente deseable cualquier molécula tal como, por ejemplo, moléculas de ADN sin sentido que comprenden las secuencias de ARNip dadas a conocer en la presente memoria (con las modificaciones de ácido nucleico apropiadas), y puede utilizarse en la misma calidad que sus correspondientes ARNip para todos los usos y métodos dados a conocer en la presente memoria. La invención comprende también un procedimiento de tratamiento de un paciente que sufre un trastorno tal como los trastornos descritos en la presente memoria, que comprende administrar al paciente la composición o compuesto anterior en una dosis terapéuticamente eficaz de forma que así se trate al paciente. Por el término "sin sentido" (SS) o "fragmento sin sentido", se quiere indicar una fragmento de polinucleótido (que comprende desoxirribonucleótidos, ribonucleótidos o una mezcla de ambos) que tienen actividad sin sentido inhibidora, causando dicha actividad una reducción de la expresión de la copia genómica endógena del correspondiente gen (en este caso RTP801 ). Un polinucleótido SS de RTP801 es un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia de suficiente longitud y homología con una secuencia presente dentro de la secuencia del gen RTP801 expuesto en la SEQ ID NO: 1 para permitir la hibridación del SS al gen. La secuencia del SS se diseña para complementar un ARNm diana de interés y formar un dúplex ARN:SS. Esta formación de dúplex puede evitar el procesamiento, ayuste, transporte o traducción del ARNm relevante. Además, ciertas secuencias nucleotídicas del SS pueden desencadenar la actividad ARNasa H celular cuando hibridan con su ARNm diana, dando como resultado la degradación de ARNm (Calabretta et al., 1996, "Antisense strategies in the treatment of leukemias", Semin. Oncol. 23(1 ): 78-87). En ese caso, la ARNasa H escindirá el componente ARN del dúplex y puede liberar potencialmente el SS para hibridar adicionalmente con moléculas adicionales del ARN diana. Un modo de acción adicional es el resultado de la interacción del SS con ADN genómico formando una triple hélice que puede ser transcripcionalmente inactiva. Son fragmentos SS particulares los SS del ADN que codifica los fragmentos particulares de RTP801 descritos en la presente memoria. Muchas revisiones han cubierto los aspectos principales de la tecnología sin sentido (SS) y su potencial terapéutico (Wright y Anazodo, 1995, "Antisense Molecules and Their Potential for the Treatment of Cáncer and AIDS", Cáncer J. 8: 185-189). Hay revisiones sobre los aspectos químico (Crooke, 1995, "Progress in antisense therapeutics", Hematol. Pathol. 2: 59; Uhlmann y Peyman, 1990, "Antisense Oligonucleotides: A New Therapeutic Principie", Chem. Rev. 90(4): 543-584), celular (Wagner, 1994, "Gene inhibition using antisense oligodeoxynucleotides", Nature 372: 333) y terapéutico (Hanania et al. , 1995, "Recent advances in the application of gene therapy to human disease", Am. J. Med. 99: 537; Scanlon et al., 1995, "Oligonucleotides-mediated modulation of mammalian gene expression", FASEB J. 9: 1288; Gewirtz, 1993, "Oligodeoxynucleotide-based therapeutics for human leukemias", Stem Cells Davt. 1 1 : 96) de esta tecnología. La intervención sin sentido en la expresión de genes específicos puede conseguirse mediante el uso de secuencias oligonucleotídicas SS sintéticas (véase Lefebvre-d'Hellencourt et al., 1995, "Immunomodulation by cytokine antisense oligonucleotides", Eur. Cvtokine Ntw. 6: 7; Agrawal, 1996, "Antisense oligonucleotides: towards clinical triáis", TIBTECH 14: 376; Lev-Lehman et al., 1997, "Antisense Oligomers in vitro and in vivo. In Antisense Therapeutics", A. Cohén y S. Smicek, ed. (Plenum Press, Nueva York)). Las secuencias de oiigonucleotidos SS se diseñan para complementar un ARNm diana de interés y formar un dúplex ARN:SS. Esta formación de dúplex puede evitar el procesamiento, ayuste, transporte o traducción del ARNm relevante. Además, ciertas secuencias de nucleótidos SS pueden desencadenar la actividad ARNasa H cuando hibridan con su ARNm diana, dando como resultado la degradación de ARNm (Calabretta et al., 1996, "Antisense strategies in the treatment of leukemias", Semin. Oncol. 23: 78). En ese caso, la ARNasa H escindirá el componente de ARN del dúplex y puede liberar potencialmente el SS para hibridar adicionalmente con moléculas adicionales del ARN diana. Un modo de acción adicional es el resultado de la interacción de SS con ADN genómico formando una triple hélice que puede ser transcripcionalmente inactiva. El segmento diana de secuencia para el oligonucleotido sin sentido se selecciona de tal modo que la secuencia exhibe unas características relacionadas con la energía adecuadas importantes para la formación de dúplex de oligonucleotido con sus moldes complementarios, y muestra un bajo potencial de autodimerización o autocomplementación (Anazodo et al., 1996). Por ejemplo, puede utilizarse el programa informático OLIGO (Primer Analysis Software, versión 3.4) para determinar la temperatura de fusión de la secuencia sin sentido, las propiedades de energía libre y para estimar la formación potencial de autodímero y las propiedades autocomplementarias. El programa permite la determinación de una estimación cualitativa de estos dos parámetros (formación potencial de autodímero y autocomplementariedad) y proporciona una indicación de "sin potencial", "cierto potencial" o "potencial esencialmente completo". Utilizando este programa, se seleccionan generalmente segmentos diana que tienen estimaciones "sin potencial" en estos parámetros. Sin embargo, pueden utilizarse segmentos que tienen "cierto potencial" en una de las categorías. Se utiliza un equilibrio de los parámetros en la selección como es conocido en la técnica. Adicionalmente, se seleccionan también los oligonucleótidos según sea necesario de modo que la sustitución análoga no afecte sustancialmente a la función. Los oligonucleótidos sin sentido de fosforotioato normalmente no muestran toxicidad significativa a concentraciones que son eficaces y exhiben suficientes semividas farmacodinámicas en animales (Agrawal, 1996, "Antisense oligonucleotides: towards clinical triáis", TIBTECH, 14: 376) y son resistentes a nucleasa. Se han mostrado fenotipos de pérdida de función inducida por sin sentido relacionados con el desarrollo celular para la proteína ácida fibrilar glial (GFAP), para el establecimiento de la formación de placa tectal en pollo (Galileo er a/., 1991 , J. Cell. Biol., 1 12: 1285) y para la proteína N-myc, responsable del mantenimiento de la heterogeneidad celular en cultivos neuroectodérmicos (células epiteliales frente a neuroblásticas, que difieren en sus capacidades de formación de colonia, tumorigenicidad y adherencia) (Rosolen et al., 1990, Cáncer Res. 50: 6316; Whitesell et al., 1991 , "Episome-generated N-myc antisense RNA restricts the differentiation potential of primitive neuroectodermal cell lines", Mol. Cell. Biol. 1 1 : 1360). La inhibición por oligonucleótidos sin sentido de factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF), que tiene propiedades mitogénicas y angiogénicas, suprimió un 80% del crecimiento en células de glioma (Morrison, 1991 , "Suppression of basic fibroblast growth factor expression by antisense oligonucleotides inhibits the growth of transformed human astrocytes", J. Biol. Chem. 266: 728) de manera saturable y específica. Al ser hidrófobos, los oligonucleótidos sin sentido interaccionan bien con membranas de fosfolípido (Akhter et al., 1991 , "Interactions of antisense DNA oligonucleotide analogs with phospholipid membranes (liposomes)", Nuc. Res. 19: 5551 -5559). Después de su interacción con la membrana plasmática celular, se transportan activa (o pasivamente) a células vivas (Loke et al., 1989, "Characterization of oligonucleotide transport in living cells", PNAS USA 86: 3474) en un mecanismo saturable que se predice que implica receptores específicos (Yakubov et al., 1989, PNAS USA 86: 6454). Una "ribozima" es una molécula de ARN que posee capacidad catalítica de ARN (véase Cech para revisión) y escinde un sitio específico en un ARN diana. Según la presente invención, las ribozimas que escinden ARNm de RTP801 pueden utilizarse como inhibidores de RTP801 . Esto puede ser necesario en casos en que la terapia sin sentido está limitada por consideraciones estequiométricas (Sarver et al., 1990, "Gene Regulation and Aids", pág. 305-325). Pueden utilizarse entonces ribozimas que se dirigirán a la secuencia de RTP801 . El número de moléculas de ARN que se escinden por una ribozima es mayor que el número predicho por la estequiometría (Hampel y Tritz, 1989; Uhlenbeck, 1987).

Las ribozimas catalizan la escisión del enlace fosfodiéster del ARN. Se han identificado varias familias estructurales de ribozimas, incluyendo intrones del grupo 1 , ARNasa P, ribozima del virus delta de la hepatitis, ribozimas cabeza de martillo y la ribozima de horquilla derivada originalmente de la cadena negativa del ARN satélite del virus del mosaico anular del tabaco (sTRSV) (Sullivan, 1994; patente de EE.UU. n° 5.225.347, columnas 4-5). Las dos últimas familias derivan de viroides y virusoides, en los que se cree que la ribozima separa monómeros de oligómeros creados durante la replicación del círculo rodante (Symons, 1989 y 1992). Los motivos de ribozima de cabeza de martillo y horquilla son los más habitualmente adaptados para escisión en trans de ARNm para terapia génica (Sullivan, 1994). El tipo de ribozima utilizado en la presente invención se selecciona como es conocido en la técnica. Las ribozimas de horquilla están ahora en ensayo clínico y son el tipo preferido. En general, la ribozima es de 30-100 nucleótidos de longitud. El suministro de ribozimas es similar al de fragmentos SS y/o moléculas de ARNip. Se observará que todos los polinucleótidos que se van a utilizar en la presente invención pueden experimentar modificaciones para poseer propiedades terapéuticas mejoradas. Pueden introducirse modificaciones o análogos de nucleótidos para mejorar las propiedades terapéuticas de los polinucleótidos. Las propiedades mejoradas incluyen resistencia aumentada a nucleasa y/o capacidad aumentada de permear membranas celulares. La resistencia a nucleasa, cuando sea necesaria, se proporciona mediante cualquier procedimiento conocido en la técnica que no interfiera con la actividad biológica del polinucleotido SS, ARNip, ADNc y/o ribozimas según sea necesarios para el procedimiento de uso y suministro (lyer et al., 1990; Eckstein, 1985; Spitzer y Eckstein, 1988; Woolf et al., 1990; Shaw et al., 1991 ). Las modificaciones que pueden hacerse a oligonucleótidos para potenciar la resistencia a nucleasa incluyen modificar el heteroátomo de fósforo u oxígeno en la cadena principal fosfato. Éstas incluyen preparar fosfonatos de metilo, fosforotioatos, fosforoditioatos y oligómeros de morfolino. En una modalidad, se proporciona ligando enlaces fosforotioato entre las cuatro a seis bases de nucleótidos de la terminación 3'. Como alternativa, los enlaces fosforotiato ligan todas las bases de nucleótidos. Pueden utilizarse otras modificaciones conocidas en la técnica en las que se retiene la actividad biológica, pero la estabilidad a las nucleasas aumenta sustancialmente. Pueden emplearse con la presente invención todos los análogos, o modificaciones, de un polinucleotido, a condición de que dicho análogo o modificación no afecte sustancialmente a la función del polinucleotido. Los nucleótidos pueden seleccionarse de bases de origen natural o sintéticas modificadas. Las bases de origen natural incluyen adenina, guanina, citosina, timina y uracilo. Las bases modificadas de nucleótidos incluyen inosina, xantina, hipoxantina, 2-aminoadenina, 6-metil-, 2-propil- y otras alquiladeninas, 5-halouracilo, 5-halocitosina, 6-azacitosina y 6-azatimina, pseudouracilo, 4-tiouracilo, 3-haloadenina, 8-aminoadenina, 8-tioladenina, 8-tioalquiladeninas, 8-hidroxiladenina y otras aminas sustituidas en 8, 8- haloguaninas, 8-am¡noguanina, 8-t¡olguan¡na, 8-t¡oalqu¡lguan¡nas, 8-hidroxilguanina y otras guaninas sustituidas, otras aza- y desazadeninas, otras aza- y desazaguaninas, 5-trifluorometiluracilo y 5-trifluorocitosina. Además, pueden prepararse análogos de polinucleótidos en los que la estructura del nucleótido está fundamentalmente alterada y que son más adecuados como reactivos terapéuticos o experimentales. Es un ejemplo de un análogo de nucleótido un ácido peptidonucleico (PNA) en el que la cadena principal fosfato de desoxirribosa (o ribosa) en el ADN (o ARN) está reemplazada por una cadena principal de poliamida que es similar a la encontrada en péptidos. Se ha mostrado que los análogos de PNA son resistentes a la degradación por enzimas y que tienen vidas extendidas in vivo e in vitro. Adicionalmente, se ha mostrado que los PNA se unen más fuertemente a una secuencia de ADN complementario que una molécula de ADN. Esta observación se atribuye a la falta de repulsión de carga entre la cadena de PNA y la cadena de ADN. Otras modificaciones que pueden hacerse a oligonucleótidos incluyen cadenas principales poliméricas, cadenas principales cíclicas o cadenas principales acíclicas. Los polipéptidos empleados en la presente invención pueden modificarse también, opcionalmente modificarse químicamente, para mejorar su actividad terapéutica. "Modificado químicamente" cuando se designan polipéptidos, significa un polipéptido en el que al menos uno de sus restos de aminoácido se modifica mediante métodos naturales, tales como procesamiento u otras modificaciones post-traduccionales, o mediante técnicas de modificación química que son bien conocidas en la técnica. Entre las numerosas modificaciones conocidas, los ejemplos típicos, pero no exclusivos, incluyen: acetilación, acilación, amidación, ADP-ribosilación, glicosilación, formación de anclaje de GPI, unión covalente de un lípido o derivado lipídico, metilación, miristilación, pegilación, prenilación, fosforilación, ubiquitinación o cualquier procedimiento similar. Las posibles modificaciones de polipéptido adicionales (tales como las resultantes de alteración de la secuencia de ácido nucleico) incluyen las siguientes: "Sustitución conservativa" designa la sustitución de un aminoácido de una clase por un aminoácido de la misma clase, en la que la clase se define por propiedades fisicoquímicas comunes de cadena lateral de aminoácido y altas frecuencias de sustitución en polipéptidos homólogos encontrados en la naturaleza, como se determina, por ejemplo, mediante una matriz de intercambio de frecuencia Dayhoff estándar o matriz BLOSUM. Se han clasificado seis clases generales de cadenas laterales de aminoácido, e incluyen: clase I (Cys); clase II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); clase III (Asn, Asp, Gln, Glu); clase IV (His, Arg, Lys); clase V (lie, Leu, Val, Met) y clase VI (Phe, Tyr, Trp). Por ejemplo, la sustitución de un Asp por otro resto de clase III tal como Asn, Gln o Glu es una sustitución conservativa. "Sustitución no conservativa" designa la sustitución de un aminoácido de una clase por un aminoácido de otra clase, por ejemplo, la sustitución de un Ala, un resto de clase II, por un resto de clase III tal como Asp, Asn, Glu o Gln. "Deleción" es un cambio en la secuencia de nucleótidos o aminoácidos en el que uno o más nucleótidos o restos de aminoácido, respectivamente, están ausentes. "Inserción" o "adición" es el cambio en la secuencia de nucleótidos o aminoácidos que da como resultado la adición de uno o más nucleótidos o restos de aminoácidos, respectivamente, comparada con la secuencia de origen natural. "Sustitución", reemplazo de uno o más nucleótidos o aminoácidos por diferentes nucleótidos o aminoácidos, respectivamente. Con respecto a las secuencias de aminoácido, la sustitución puede ser conservativa o no conservativa. En una modalidad adicional de la presente invención, el polipéptido o polinucleótido RTP801 puede utilizarse par diagnosticar o detectar degeneración macular en un sujeto. Un procedimiento de detección comprendería típicamente ensayar ARNm de RTP801 o polipéptido RTP801 en una muestra derivada de un sujeto. "Detección" designa un procedimiento de detección de una enfermedad. Este término puede designar la detección de una predisposición a una enfermedad, o la detección de la gravedad de la enfermedad. Por "homólogo/homología", como se utiliza en la presente invención, se quiere indicar al menos aproximadamente un 70%, preferiblemente al menos aproximadamente un 75% de homología, ventajosamente al menos aproximadamente un 80% de homología, más ventajosamente al menos aproximadamente un 90% de homología, aún más ventajosamente al menos aproximadamente un 95%, por ejemplo, al menos aproximadamente un 97%, aproximadamente un 98%, aproximadamente un 99% o incluso aproximadamente un 100% de homología. La invención abarca también que estos polinucleótidos y polipéptidos puedan utilizarse del mismo modo que los polinucleótidos y polipéptidos de la presente memoria o citados anteriormente. Como alternativa o adicionalmente, "homología" con respecto a secuencias puede designar el número de posiciones con nucleotidos o restos de aminoácidos idénticos dividido entre el número de nucleotidos o restos de aminoácidos en la más corta de las dos secuencias, en la que el alineamiento de las dos secuencias puede determinarse según el algoritmo de Wilbur y Lipman ((1983) Proa Nati. Acad. Sci. USA 80: 726); por ejemplo, utilizando un tamaño de ventana de 20 nucleotidos, una longitud de palabra de 4 nucleotidos y una penalización por hueco de 4, puede realizarse convenientemente un análisis e interpretación asistidos por ordenador de los datos de secuencia, incluyendo alineamiento, utilizando programas disponibles comercialmente (por ejemplo, Intelligenetics™ Suite, Intelligenetics Inc., CA). Cuando se dice que las secuencias de ARN son similares, o que tienen un grado de identidad de secuencia u homología con secuencias de ADN, la timidina (T) en la secuencia de ADN se considera igual al uracilo (U) en la secuencia de ARN. Las secuencias de ARN dentro del alcance de la invención pueden derivar de secuencias de ADN o sus complementarias, sustituyendo la timidina (T) en la secuencia de ADN por uracilo (U). Adicionalmente, o como alternativa, la similitud u homología de secuencia de aminoácidos puede determinarse, por ejemplo, utilizando el programa BlastP (Altschul et al., Nucí. Acids Res. 25: 3389-3402) y disponible en NCBI. Las siguientes referencias proporcionan algoritmos para comparar la identidad u homología relativa de restos de aminoácidos de dos polipéptidos y, adicionalmente o como alternativa, con respecto a los anteriores, pueden utilizarse las enseñanzas en estas referencias para determinar el porcentaje de homología: Smith et al. (1981 ) Adv. Appl. Math. 2: 482-489; Smith et al., ( 1983) Nucí. Acids. Res. 1 1 : 2205-2220; Devereux er al., (1984) Nucí. Acids. Res. 12: 387-395; Feng et al., (1987) J. Molec. Evol. 25: 351 -360; Higgins et al., (1989) CABIOS 5: 151 -153 y Thompson er al. (1994) Nucí. Acids Res. 22: 4673-4680. "Que tiene al menos un X% de homología" con respecto a dos secuencias de aminoácidos o nucleótidos, designa el porcentaje de restos que son idénticos en las dos secuencias cuando las secuencias se alinean óptimamente. Por tanto, una identidad de secuencia de aminoácidos de un 90% significa que un 90% de los aminoácidos en dos o más secuencias polipeptídicas alineadas óptimamente son idénticos. Una modalidad adicional de la presente invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un inhibidor de RTP801 en una cantidad terapéuticamente eficaz como ingrediente activo y un vehículo farmacéuticamente aceptable. El inhibidor puede ser un inhibidor biológico, una molécula orgánica, una molécula química, etc., dicha composición farmacéutica puede comprender un inhibidor de RTP801 que es un polinucleótido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia que es una secuencia sin sentido de la secuencia expuesta en la Figura 1 (SEQ ID NO: 1 ). Adicionalmente, el inhibidor de RTP801 puede ser un vector que comprende estos polinucleótidos. Adicionalmente, el inhibidor de RTP801 puede ser un anticuerpo monoclonal que se une específicamente a un epítopo que comprende 4-25 aminoácidos expuestos en la Figura 2 (SEQ ID NO: 2) o una molécula de ARN que se dirige al ARNm del gen RTP801 tal como una molécula de ARNip (opcionalmente representada en los cuadros A-D y, en particular, los ARNip n° 22, 23, 25, 27, 39, 41 , 42, 49 y 50 del cuadro A o los ARNip n° 257, 260-262 y 264-268 del cuadro D) o una ribozima. Los ingredientes activos de la composición farmacéutica pueden incluir oligonucleótidos que son resistentes a nucleasa necesarios para la práctica de la invención, o un fragmento de los mismos que se ha mostrado que tiene el mismo efecto dirigido contra la(s) secuencia(s) y/o ribozimas apropiada(s). Pueden utilizarse combinaciones de ingredientes activos como se dan a conocer en la presente invención, incluyendo combinaciones de secuencias sin sentido. Una modalidad adicional de la presente invención proporciona el uso de una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para promover la recuperación en un paciente que sufre enfermedad o lesión de médula espinal. En una modalidad, el inhibidor es preferiblemente un ARNip. En otra modalidad, el inhibidor es preferiblemente la estructura A representada en la presente memoria. La invención se ha descrito de manera ilustrativa, y ha de entenderse que la terminología que se ha utilizado se pretende que sea de naturaleza descriptiva en lugar de limitante. Obviamente, son posibles muchas modificaciones y variaciones de la presente invención a la vista de las enseñanzas anteriores. Por lo tanto, ha de entenderse que, dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la invención puede practicarse de otros modos que los descritos específicamente.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS Fig. 1 detalla la secuencia de codificación del gen RTP801 (SEQ ID NO: 1 ); Fig. 2 detalla la secuencia de aminoácidos del polipéptido RTP801 (SEQ ID NO: 2); Fig. 3 es un diagrama que representa los exones, CDS, SNP humanos y la posición de las diversas moléculas de ácido nucleico que son específicas de ser humano o específicas de ser humano, ratón y rata en paralelo; Fig. 4A-4H representa un panel de resultados de análisis de transferencia Western obtenidos tras aplicar diversos ácidos nucleicos bicatenarios según la presente invención a una primera línea celular humana, por lo cual el experimento se llevó a cabo dos veces, designadas como experimento 1 y experimento 2, y por lo cual el nivel de expresión de p 10a y p85 se representa como controles de carga y la intensidad (densidad) de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico bicatenario particular aplicado; Fig. 5A-5F representa un panel de resultados de análisis de transferencia Western obtenidos tras aplicar diversos ácidos nucleicos bicatenarios según la presente invención a una segunda linea celular humana, por lo cual el experimento se llevó a cabo dos veces, designadas como experimento 1 y experimento 2, y por lo cual el nivel de expresión de p1 0a y p85 se representa como controles de carga y la intensidad (densidad) de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico particular aplicado; Fig. 6A-6C representa un panel de resultados de análisis de transferencia Western obtenidos tras aplicar diversos ácidos nucleicos bicatenarios según la presente invención a la primera línea celular humana a diferentes concentraciones, a saber, 10 nM (5A), 5 nM (5B) y 1 nM (5C), por lo cual el experimento se llevó a cabo dos veces, designadas como experimento 1 y experimento 2, y por lo cual el nivel de expresión de p1 10a y p85 se representa como controles de carga y la intensidad (densidad) de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico bicatenario particular aplicado; Fig. 7A y 7B representan un panel de resultados de análisis de transferencia Western obtenidos aplicando diversos ácidos nucleicos bicatenarios según la presente invención a una línea de célula de ratón, por lo cual el experimento se llevó a cabo dos veces, designadas como experimento 1 y experimento 2, y por lo cual el nivel de expresión de p1 10a y p85 se representa como controles de carga y la densidad de la banda de RTP801 es una medida de la actividad inhibidora del ácido nucleico bicatenario particular aplicado; Fig. 8 muestra los resultados de experimentos en un sistema de modelo de AMD en ratón; Fig. 9 muestra los resultados de experimentos adicionales en un sistema de modelo de AMD en ratón; Fig. 10 muestra los resultados de experimentos en un sistema modelo de AMD en primate no humano; Fig. 1 1A-1 1 B muestra los resultados de experimentos adicionales en un sistema modelo de AMD en primate no humano; Fig. 12A-12B muestra los resultados de más experimentos adicionales en un sistema modelo de AMD en primate no humano; Fig. 13A-13B representa un análisis de los resultados -experimentales conseguidos en un modelo de AMD en primate no humano; Fig. 14 representa un análisis adicional de los resultados experimentales conseguidos en un modelo de AMD en primate no humano; Fig. 15A-15C muestra los resultados de un experimento que implica la instilación ¡ntratraqueal de un plásmido de expresión de RTP801 en ratones; Fig. 16A-16C muestra los resultados de un modelo de tabaquismo a corto plazo (7 días) en ratones KO de RTP801 y WT; Fig. 17A-17C muestra los resultados de un modelo de tabaquismo a corto plazo en ratones WT instilados con ARNip activo anti-RTP801 (REDD14) y control (REDD8); Fig. 18 muestra los resultados de experimentos con ratones KO de RTP801 en un modelo de tabaquismo a largo plazo; Fig. 19 muestra los resultados de experimentos en un sistema modelo de ARF en ratón; Fig. 20 muestra los resultados de experimentos en un sistema modelo de retinopatía diabética en ratón; Fig. 21 muestra los resultados de experimentos adicionales en el sistema modelo de retinopatía diabética en ratón; Fig. 22 muestra los resultados de más experimentos adicionales en un sistema modelo de retinopatía diabética en ratón; Fig. 23 muestra los resultados de experimentos combinados de inhibición de RTP801 VEGF en un sistema modelo de CNV en ratón; Fig. 24 muestra los resultados de experimentos combinados de inhibición de RTP801/VEGF en un sistema modelo de CNV en ratón; Fig. 25 muestra los resultados de experimentos que estudian el efecto de ARNip de RTP801 sobre la expresión génica en RPE y retina neural; Fig. 26A-26B muestra resultados adicionales de experimentos que estudian el efecto de ARNip de RTP801 sobre la expresión génica en RPE y retina neural; y Fig. 27 muestra los resultados de experimentos que demuestran que RT801 NP es tan activo como RTP801 ; Fig. 28 muestra los resultados de eficacia relativos a 801 _1 (SEQ ID NO: 430 y 527) y 801 _4 (SEQ ID NO: 433 y 530); Fig. 29 muestra más resultados de eficacia relativos a 801_1 (SEQ ID NO: 430 y 527) y 801_4 (SEQ ID NO: 433 y 530); Fig. 30 muestra más resultados de eficacia relativos a 801 _1 (SEQ ID NO: 430 y 527) y 801_4 (SEQ ID NO: 433 y 530).

EJEMPLOS Sin elaboración posterior, se cree que un experto en la técnica, utilizando la descripción precedente, puede utilizar la presente invención en su mayor extensión. Por lo tanto, las modalidades específicas preferidas siguientes han de considerarse como meramente ilustrativas y no limitantes de la invención reivindicada en modo alguno. Los protocolos de biología molecular estándar conocidos en la técnica que no se describen específicamente en la presente memoria se siguen esencialmente como en Sambrook et al., "Molecular cloning: A laboratory manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Nueva York (1989, 1992) y en Ausubel et al. "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley and Sons, Baltimore, Maryland (1988). Los protocolos de síntesis orgánica estándar conocidos en la técnica no descritos específicamente en la presente memoria se siguen esencialmente como en "Organic syntheses: Vol. 1 -79", varios editores, J. Wiley, Nueva York (1941 -2003); Gewert et al., Organic synthesis workbook", Wiley-VCH, Weinheim (2000); Smith y March, "Advanced Organic Chemistry", Wiley-lnterscience, 5a edición (2001 ). Los métodos de química médica estándar conocidos en la técnica no descritos específicamente en la presente memoria se siguen esencialmente como en la serie "Comprehensive Medicinal Chemistry" de diversos autores y editores, publicado por Pergamon Press. Los rasgos de la presente invención dados a conocer en la memoria descriptiva, las reivindicaciones y/o los dibujos pueden ser, tanto separadamente como en cualquier combinación de los mismos, material para realizar la invención en las diversas formas de la misma.

EJEMPLO 1 Materiales y métodos generales Si no se indica lo contrario, se utilizaron los siguientes materiales y métodos en los ejemplos 1 -5: Cultivo celular Se cultivó la primera línea celular humana, a saber, células HeLa (American Type Culture Collection) del modo siguiente: se cultivaron células HeLa (American Type Culture Collection) como se describe en Czauderna F. et al. (Czauderna, F., Fechtner, M., Aygun, H., Arnold, W., Klippel, A., Giese, K. y Kaufmann, J. (2003) Nucleic Acids Res. 31 , 670-682). La segunda línea celular humana era una línea celular de queratinocito humano que se cultivó del modo siguiente: se cultivaron queratinocitos humanos a 37°C en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contenía 10% de FCS. La línea celular de ratón era B16V (American Type Culture Collection) cultivada a 37°C en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) que contenía 10% de FCS. Las condiciones de cultivo eran como se describen en Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol., mayo de 1997; 19(4): 231 -239. En cada caso, se sometieron las células a experimentos como se describen en la presente memoria a una densidad de aproximadamente 50.000 células por pocilio y se añadió el ácido nucleico bicatenario según la presente invención a 20 nM, por lo cual el ácido nucleico bicatenario se complejo utilizando 1 pg/ml de un lípido patentado.

Inducción de una afección de tipo hipoxia Se trataron las células con CoCI2 para inducir una afección de tipo hipoxia del modo siguiente: se llevaron a cabo transfecciones con ARNip en placas de 10 cm (30-50% de confluencia) como se describe por (Czauderna et al., 2003; Kretschmer et al., 2003). Brevemente, se transfectaron ARNip añadiendo un complejo concentrado 10x preformado de GB y lípido en medio exento de suero a células en medio completo. El volumen total de transfeccion era de 10 mi. La concentración de lípido final era 1 .0 g/ml; la concentración de ARNip final era 20 mM a menos que se indique lo contrario. La inducción de las respuestas hipóxicas se llevó a cabo añadiendo CoCI2 (100 µ?) directamente al medio de cultivo de tejido 24 h antes de la lisis.

Preparación de extractos celulares e inmunotransferencia Se llevaron a cabo la preparación de extractos celulares y análisis de inmunotransferencia esencialmente como se describe por Klippel et al. (Klippel A., Escobedo M.A., Wachowicz M.S., Apell G., Brown T.W., Giedlin M.A., Kavanaugh W.M. y Williams L.T. (1998) Mol. Cell Biol. 18, 5699-571 ; Klippel A., Reinhard C, Kavanaugh W.M., Apell G., Escobedo M.A. y Williams L.T. (1996) Mol. Cell Biol. 16, 41 17-4127). Los anticuerpos policlonales contra RTP801 completo se generaron inmunizando conejos con bacterias productoras de proteína RTP801 recombinante a partir del vector de expresión pET19-b (Merck Biosciences, GmbH, Schwalbach, Alemania). Los anticuerpos monoclonales de murina anti-p1 10a y anti-p85 se han descrito por Klipel et al. (anteriormente).

EJEMPLO 2 Reducción de la expresión de RTP801 en una primera línea celular humana Se prepararon diversos ácidos nucleicos bicatenarios. Se representa su localización respecto a ARNm y CDS así como SNP humanos en el ácido nucleico que codifica RTP801 humano (n° de acceso a banco de datos NM_019058) en la Figura 3. Se puso en contacto la primera línea celular humana con dichos ácidos nucleicos bicatenarios como se describe en el ejemplo . Tras la inducción de una afección de tipo hipoxia y el tratamiento con dichos ácidos nucleicos bicatenarios, se lisaron las células y se sometieron los lisados celulares a inmunotransferencia. Se utilizaron p1 10a, que es una unidad catalítica de la PI3 quinasa, y p85 como controles de carga. La intensidad de la banda de RTP801 .visualizada utilizando los anticuerpos policlonales de RTP801 , es una medida de la actividad de los ácidos nucleicos bicatenarios individuales en términos de reducción del nivel de expresión de RTP801 .

Cada uno y cualquiera de los ácidos nucleicos bicatenarios se ha modificado de tal modo que estuviera presente un grupo 2'-0-Me en el primer, tercer, quinto, séptimo, noveno, undécimo, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno nucleótido de la cadena sin sentido, por lo cual la misma modificación, concretamente, un grupo 2'-0-Me, estaba presente en el segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, duodécimo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo nucleótido de la cadena con sentido. Adicionalmente, ha de observarse que en el caso de estos ácidos nucleicos particulares según la presente invención, el primer tramo es idéntico a la primera cadena y el segundo tramo es idéntico a la segunda cadena, y estos ácidos nucleicos son también de extremo romo. Los experimentos se realizaron dos veces y los resultados individuales se muestran en las Fig. 4A a 4H, en las que se designan como experimento 1 y experimento 2, respectivamente. Las representaciones h, hr y hmr en las Fig 4A a 4H indican que el ácido nucleico bicatenario respectivo se diseñó de tal modo que se dirige a una sección del ARNm de RTP801 que es específica de ARNm de RTP801 (h), se dirige a una sección del ARNm de RTP801 que es específica de ARNm de RTP801 humano y de rata (hr) y se dirige a una sección de ARNm de RTP801 que es específica de ARNm de RTP801 humano, de ratón y rata (hmr). El ácido nucleico bicatenario designado como n° 40.1 se utilizó como control positivo y las células no tratadas (UT+) se utilizaron como control negativo.

Según los resultados, los siguientes ácidos nucleicos bicatenarios resultaron ser particularmente útiles en la regulación por disminución de la expresión de RTP801 : n° 14, n° 15, n° 20, n° 21 , n° 22, n° 23, n° 24, n° 25, n° 27, n° 39, n° 40, n° 41 , n° 42, n° 43, n° 44, n° 49 y n° 50 (véase el cuadro A).

EJEMPLO 3 Reducción de la expresión de RTP801 en una segunda línea celular humana Se repitieron los experimentos como se describen con respecto al ejemplo 2 utilizando la segunda línea celular humana especificada en el ejemplo 1 , y los resultados se representan en las Fig. 5A a 5F. Como puede deducirse a partir de estas figuras, se confirmaron los resultados obtenidos con respecto a los experimentos descritos en el ejemplo 2 utilizando esta segunda línea celular humana.

EJEMPLO 4 Efecto de la dosificación de ácidos nucleicos bicatenarios específicos de RTP801 En este experimento, se investigó el efecto de la dosificación de ácidos nucleicos bicatenarios específicos de RTP801 .

Con ese fin, se trataron las células HeLa como con respecto a los ejemplos 2 y 3, por lo cual la concentración de ácido nucleico bicatenario en el caldo de cultivo era de 10 nM, 5 nM y 1 nM. Como control positivo, se utilizó el ácido nucleico bicatenario n° 40.1 , como control negativo células no tratadas (UT+). La lectura fue la misma que la descrita con respecto a los ejemplos 2 y 3. Los ácidos nucleicos bicatenarios particulares utilizados fueron aquellos con los números de referencia internos 14, 22, 23 y 27, que están dirigidos a los tramos en el ARNm de RTP801 que son compartidos por seres humanos, ratones y ratas, y los ácidos nucleicos bicatenarios con números de referencia internos 39 y 42, que están dirigidos a tramos de ARNm de RTP801 específicos de RTP801 humano. Se muestran los resultados en las Fig. 6A a 6C. A partir de dichas figuras puede verse que hay una clara dependencia de la concentración del efecto de los ácidos nucleicos bicatenarios específicos de RTP901 , por lo cual las moléculas de ácido nucleico que tienen números de referencia internos 1 , 15, 20, 21 , 24, 40, 41 , 43, 44, 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 , 44.1 y 14, preferiblemente 22, 23, 27, 39, 42, 40.1 y 44.1 , y más preferiblemente 14, 23 y 27, y preferiblemente cada una de dichas moléculas de ácido nucleico que tienen el patrón de modificación particular descrito para ellos en la parte de ejemplos de la presente memoria, son particularmente eficaces.

EJEMPLO 5 Especificidad de especie del ácido nucleico bicatenario específico de RTP801 Los ácidos nucleicos bicatenarios según la presente invención se han diseñado contra tramos de ARNm de RTP801 que son iguales o diferentes en diversas especies. Para ensayar si hay especificidad de especie de un ácido nucleico bicatenario específico de RTP801 , se compararon los ácidos nucleicos bicatenarios con números de referencia internos 14, 22, 23 y 27 que se dirigen a un tramo de ARNm de RTP801 que está conservado entre ser humano, ratón y rata, y los ácidos nucleicos bicatenarios con números de referencia internos 39 y 42 que se dirigen a un tramo de ARNm de RTP801 que es específico de ARNm de RTP801 humano, concretamente, que se dirigen a un tramo que como tal no está presente en ratón o rata, en términos de regulación por disminución de RTP801 utilizando el mismo enfoque y lectura que se especifica en los ejemplos 1 y 2. Aunque todos los ácidos nucleicos bicatenarios utilizados son en principio activos contra ARNm humano y, como se muestra en los ejemplos precedentes, son también adecuados para regular por disminución la expresión de RTP801 , tras utilizar una línea celular de ratón, sólo aquellos ácidos nucleicos bicatenarios que son también específicos de ARNm de RTP801 de ratón redujeron eficazmente la expresión de RTP801 , a saber, los ácidos nucleicos bicatenarios n° 14, 22, 23 y 27.

A partir de este resultado puede concluirse que es posible diseñar ácidos nucleicos bicatenarios que se dirigen a RTP801 que sean específicos de una o varias especies. Esto permite el uso de la misma molécula en modelos animales así como en el hombre.

EJEMPLO 6 Modelos experimentales, métodos y resultados relacionados con degeneración macular Se ensayaron los compuestos de la presente invención en el siguiente modelo animal de neovascularización coroidea (CNV). Este signo característico de la AMV húmeda se indujo en modelos animales mediante tratamiento láser.

A) Modelo de ratón Inducción de neovascularización coroidea (CNV) Se desencadenó la neovascularización coroidea (CNV), un signo característico de AMD húmeda, mediante fotocoagulación láser (532 nm, 200 mW, 100 ms, 75 pm) (OcuLight GL, Iridex, Mountain View, CA) realizada en ambos ojos de cada ratón el día 0 medíante una asignación a grupo individual sencilla con fármaco oculto. Se aplicaron puntos láser de manera aleatoria alrededor del nervio óptico, utilizando un sistema de suministro de lámpara de ranura y un cubreobjetos como lente de contacto.

Grupos de tratamiento Se indujo la CNV en los siguientes grupos de ratones (machos de 6-8 semanas de edad): (1 ) 12 ratones WT; (2) 12 ratones KO de RTP801 ; (3) 2 ratones WT inyectados con 0.25 pg de ARNip anti-RTP801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNip anti-RTP801 inactivo (REDD8- control negativo) en el ojo complementario, los días 0 y 7; (4) 12 ratones WT inyectados con 0.25 pg de ARNip anti-RPT801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y ARNip anti-GFP inactivo (control negativo) en el ojo complementario, los días 0 y 7; (5) 12 ratones WT inyectados con 0.1 pg de ARNip anti- RPT801 activo estabilizado sintético (REDD14) en un ojo y PBS (control negativo) en el ojo complementario, los días 0 y 7; (6) 12 ratones WT inyectados con 0.05 pg de ARNip anti-RPT801 activo estabilizado sintético (REDD 4) en un ojo y PBS (control negativo) en el ojo complementario, los días 0 y 7. Ambos ojos de cada ratón se trataron con láser. El volumen inyectado fue de 2 µ?.

Evaluación 1 . El experimento se terminó el día 14. Para la evaluación, se enuclearon los ojos y se fijaron con paraformaldehído al 4% durante 30 min a 4°C. Se retiró la retina neurosensorial y se cortó del nervio óptico. Se montó plano el complejo RPE-coroides-esclerótica restante en Immu-Mount (Vectashield Mounting Médium, Vector) y se cubrió con cubreobjetos. Se examinaron los montajes planos con un microscopio confocal láser de barrido (TCS SP, Leica, Alemania). Se visualizaron vasos mediante excitación con láser de argón azul. Se obtuvieron secciones ópticas horizontales (1 µ?? de paso) a partir de la superficie del complejo RPE-coroides-esclerótica. El plano focal más profundo que pudo identificarse en el que la red vascular coroidea circundante conectaba con la lesión se juzgó como el suelo de la lesión. Cualquier vaso en el área tratada con láser y superficial a este plano de referencia se juzgó como CNV. Se almacenaron digitalmente imágenes de cada sección. Se midió el área de fluorescencia relacionada con CNV mediante análisis de imagen computerizado utilizando el software Leica TCS SP. Se utilizó la suma del área fluorescente entera en cada sección horizontal como índice para el volumen de CNV. 2. Se utilizaron ratones WT separados (5 ojos por grupo) para evaluar la expresión de ARNm de RTP801 en CNV (así como la expresión de otros genes relevantes para AMD) (no tratados y tratados con ARNip) utilizando PCR a tiempo real en ARN extraído de RPE/coroides, o de retina neural.

Resultados 1 . Los ratones KO de RTP801 exhibieron un 30% menos de derrame de vasos sanguíneos comparados con ratones WT después de la inducción de CNV, véase la figura 8. 2. El ARNip estabilizado sintético contra RTP801 , REDD14, desencadenó una reducción dependiente de la dosis del volumen de CNV. Se consiguió un máximo de -70% de inhibición comparado con ojos inyectados con PBS a una dosis de REDD14 (n° de secuencia 14 en el cuadro 1 , SEQ ID NO: 16 (con sentido) y 66 (sin sentido)) de 0.25 [ig por ojo. A la misma dosis, ambos ARNip control negativo, REDD8 y ARNIP anti-GFP, exhibieron sólo un 27% y un 33% de reducción del volumen de CNV, respectivamente, apoyando tanto la eficacia superior de REDD14 como la especificidad de este efecto.

B) Modelo de primate no humano Inducción de CNV Se utilizaron ocho monos Cynomolgus macho (Macaca fascicularis) de 2-6 años de edad para el estudio. Se indujo la neovascularización coroidea (CNV) mediante tratamiento láser perimacular de ambos ojos antes de la administración de dosis. Se colocaron nueve lesiones en la mácula con un láser [fotocoagulador láser OcuLight GL (532 nm) con un adaptador de lámpara de ranura portátil IRIS Medical®], y se dispusieron puntos láser en el ojo derecho simétricamente al ojo izquierdo. Los parámetros láser aproximados fueron los siguientes: tamaño de punto: 50-100 µ?t? de diámetro; potencia de láser: 300-700 mW; tiempo de exposición: 0.1 s.

Tratamiento Inmediatamente después del tratamiento con láser, se sometieron ambos ojos de todos los animales a una inyección intravítrea única. Se dosificaron al ojo izquierdo 350 pg de ARNip estabilizado sintético contra RTP801 (el mismo utilizado en el estudio en ratón) a un volumen final de 50 µ?, mientras que el ojo contralateral recibió 50 µ? de PBS (vehículo).

Evaluación 1 . Todos los animales se sometieron a examen diario del consumo de alimento y medida de peso corporal, 2. Se sacrificaron dos monos el día 6 después de la inducción de CNV. Se enuclearon sus ojos y se aplanó el polo posterior. Después, se extirpó la región foveal y se separó en coroides y retina neural, que se congelaron separadamente en nitrógeno líquido para utilizarse posteriormente para extracción de ARN y evaluación por PCR a tiempo real de la expresión de RTP801 . 3. Se realizaron angiogramas de fluoresceína antes del estudio y al final de las semanas 1 , 2 y 3 después de la inducción de CNV. Se tomaron fotografías utilizando una cámara de fondo (cámara de retina TRC-50EX). Se capturaron imágenes utilizando el sistema TOPCON IMAGEnet™ . Se inyectó tinte fluoresceína (fluoresceína de sodio al 10%, aproximadamente 0.1 ml/kg) mediante puertos de acceso vascular. Se tomaron fotografías en varios puntos temporales después de la inyección de tinte para incluir la fase arterial, la fase arteriovenosa temprana y varias fases arteriovenosas tardías para evaluar la neovascularización y controlar el derrame de fluoresceína asociado a las lesiones de CNV. La interpretación y análisis de los angiogramas de fluoresceína se realizaron independientemente por dos oftalmólogos. Se evaluó la neovascularización (NV) en angiogramas tempranos y se graduó cada punto según el siguiente esquema: 0- sin signos de NV 0.5- punto sospechoso 1 - punto "caliente" 2- NV en la quemadura láser 3- NV evidente Se evaluó el derrame según el siguiente esquema: 0- sin derrame 0.5- punto sospechoso 1 - derrame de punto pequeño evidente 2- derrame creciente con el tiempo 3- derrame mayor que los bordes anteriores (evidentemente) Además, se comparó el tamaño de cada punto entre los angiogramas temprano y tardío utilizando medidas morfométricas, y se calculó el aumento del tamaño del punto como resultado del derrame. 4. Se registraron electrorretinogramas (ERG) utilizando un electrorretinógrafo Epic 2000 según SOP de Sierra y SOP específicos de estudio, incluyendo el uso del dispositivo Ganzfield, en el pre-estudio y al final de la semana 3. Se evaluaron los datos de ERG tabulados por un oftalmólogo veterinario. Se terminó el estudio el día 21 después de la inducción de CNV. Se realizaron exámenes de necropsia e histológicos macroscópicos en órganos y tejidos, incluyendo los ojos.

Resultados 1 . El ARNip contra RPT801 reducía la expresión de RTP801 en RPE/coroides de animales tratados con láser, medido el día 6 después de la inducción de CNV mediante PCR a tiempo real (véase la Figura 0). 2. La comparación de la graduación de puntos para derrame y neovascularización entre los ojos complementarios en cada mono individual reveló que ambas de estas características patológicas estaban reducidas en los ojos inyectados con ARNip de RTP801 comparados con el control (para los resultados de derrame, véase la figura 1 1 A-1 1 B; para los resultados de neovascularización, véase la figura 12A-12B). 3. El cálculo del número global de puntos con graduaciones clínicamente relevantes mayores (2 y 3) de derrame o neovascularización en todos los ojos inyectados con ARNip comparados con todos los ojos inyectados con PBS reveló de nuevo que los ojos inyectados con ARNip estaban menos afectados (véase la figura 13A-13B, a+b). 4. Se sometieron los datos de graduación total de puntos de derrame y neovascularización a evaluación estadística. Se analizó la existencia de diferencias entre el ARNip y los tratamientos control calculando la delta entre los rangos de punto medio del ojo derecho control (R) y el ojo izquierdo inyectado con ARNip (L) (delta= R-L). Se calculó la significación de la diferencia utilizando un procedimiento estadístico no paramétrico, el test de rangos con signo de Wilcoxon, un test unilateral. Se analizaron separadamente diferentes fases de angiogramas (arterial temprano, arteriovenoso y venoso tardío) para cada semana (1 , 2, y 3). El cuadro 2 muestra la significación (test unilateral) de la diferencia de rangos de derrame desde 0 para cada grupo (se subrayan los valores de p<0.05). Se encontró una reducción del rango de derrame significativa en los ojos izquierdos (tratados con ARNip) con respecto a los derechos (tratados con placebo) en la semana 2 y 3 en los angiogramas tardíos.

CUADRO 2 Obsérvese que los angiogramas tardíos se utilizan habítualmente para evaluación de los parámetros de derrame. El cuadro 3 muestra las significación (test unilateral) de la diferencia de rangos de neovascularizacíón (NV) a partir de 0 para cada grupo (se subrayan los valores de p<0.05).

CUADRO 3 Se encontró una reducción significativa del rango de NV en los ojos izquierdos con respecto a los derechos en la semana 2 y 3 en el periodo temprano y en el periodo arteriovenoso en la semana 2. Obsérvese que los angiogramas se utilizan habitualmente para la evaluación de los parámetros de neovascularización. 5. La evaluación morfométrica cuantitativa del aumento de área de los puntos que aparecen entre los angiogramas temprano (fase arterial) y tardío (fase venosa) debido al derrame reveló que este parámetro se reducía significativamente en los puntos láser dentro de los ojos inyectados con ARNip (ojos izquierdos, OS) comparados con los control (ojos derechos, OD). Se muestran dos ejemplos en la Figura 14. Las gráficas demuestran el aumento relativo (en %) del área de cada punto en el ojo izquierdo y derecho de los animales n° 3315 y 3300. Adicionalmente, se observó a lo largo de los estudios anteriores que el ARNip anti-RTP801 no tenía efectos adversos sobre los electrorretinogramas (ERG), sobre la histología del ojo o sobre la estructura o función de otros órganos y sistemas.

Para resumir los experimentos y resultados anteriores: 1 . Tanto la inhibición genética (RTP801 -/-) como la terapéutica con ARNip de la expresión de RTP801 en el modelo de CNV inducida por láser de degeneración macular relacionada con la edad (AMD húmeda), dieron como resultado una reducción significativa del volumen de CNV. 2. Se obtuvieron resultados positivos en el modelo de ratón y primate no humano. 3. El examen patológico y de ERG en mono no reveló ninguna toxicidad mediada por ARNip en los ojos ni en ningún otro órgano ni sistema.

C) Eficacia de la terapia de combinación de amip de rtp801 (redd14) y anticuerpo anti-vegf Se ensayó la eficacia de la terapia de combinación de ARNip de RTP801 (REDD14) y anticuerpo anti-VEGF en el tratamiento de enfermedades en las que ocurre CNV en el modelo de CNV de ratón anterior.

A) Estudios de volumen de CNV Se computó el volumen de neovascularización coroidea (CNV) 3 semanas después de la lesión por láser mediante microscopía de fluorescencia confocal como se describe anteriormente (Sakurai et al., IQVS 2003; 44: 3578-3585 y Sakurai et al. IQVS 2003; 44: 2743-2749). En estudios previos, se encontró que el anticuerpo anti-VEGF-A (Ab) reducía el volumen de CNV de modo dependiente de la dosis. Se eligió una dosis de 1 ng de Ab de VEGF-A para los estudios de combinación REDD14 + Ab de VEGF-A porque esta dosis tenía un efecto inhibidor intermedio: el Ab de VEGF-A (1 ng) reducía el tamaño de la CNV en un 26±6%. Los descubrimientos principales del estudio de REDD14 + anticuerpo de VEGF-A (Ab) son: • La adición de REDD14 a la dosis inferior de 0.05 pg reducía el tamaño de la CNV en un 27±14%, comparada con el Ab de VEGF-A solo. • La adición de REDD14 a la dosis superior de 0.25 \ig reducía el tamaño de la CNV en un 55±3%, comparada con el Ab de VEGF-A solo.

B) Estudios de derrame de CNV Experimento 1 Este experimento se diseñó para identificar un efecto terapéutico aditivo o sinérgico potencial de la inhibición de VEGF y RTP801 en el modelo de neovascularización coroidea inducida por láser en ratones. Materiales REDD14 (ARNip de RTP801 ) · REDD8 (control negativo) • Anticuerpos anti-VEGF • IgG no específica (control negativo) Se indujo la CNV el día 0 como se describe anteriormente; se inyectó el material de ensayo a los sujetos el día 0 y el día 7. Se evaluaron los resultados medíante angiografía de fluoresceína las semanas 1 , 2, 3, y medíante medida del volumen de CNV la semana 3. Cada grupo de ensayo estaba compuesto por 10 ojos. Grupos experimentales: Ab de VEGF 0.5 ng/ojo, • Ab de VEGF 1 ng/ojo. • Ab de VEGF 2 ng/ojo, • Ab de VEGF 4 ng/ojo, • REDD14 0.05 pg/ojo, • REDD14 0.1 pg/ojo, • REDD14 0.25 pg/ojo, • REDD14 0.05 pg/ojo + Ab de VEGF1 ng/ojo, • REDD14 0.1 pg/ojo + Ab de VEGF 1 ng/ojo • REDD14 0.25 pg/ojo + Ab de VEGF1 ng/ojo. Controles PBS, • IgG no específica 2 ng/ojo REDD8 0.1 pg/ojo REDD8 0.1 pg/ojo + Ab de VEGF 1 ng/ojo, Resultados Se presentan los resultados del experimento anterior en las Figuras 23-24. Estos resultados muestran que la administración intravítrea simultánea de Ab de VEGF y REDD14 conduce a una inhibición aumentada y dependiente de la dosis de la neovascularización coroidea y el derrame de vasos sanguíneos coroideos, como se expresa por la incidencia reducida de puntos de grado 4 y la incidencia aumentada de puntos de grado 1 .

Se graduaron los angiogramas utilizando una modificación de un esquema de graduación semicuantitativa (1 -4) publicado anteriormente (Sakurai et al. , IOVS 2003; 44: 2743-2749). Las lesiones de grado 1 se considera que no se han formado nunca, concretamente, equivalentes a prevención completa. Las lesiones de grado 4 se consideran patológicamente significativas, concretamente, equivalentes a lesiones que se tratarían en pacientes. El Ab de VEGF-A (1 ng) reducía la incidencia de lesiones de grado 4 por ojo en un 38±8%, y aumentaba la incidencia de lesiones de grado 1 por ojo en un 66±43%. Los descubrimientos principales del estudio de derrame de combinación de REDD14 + Ab de VEGF-A son: • La adición de REDD14 a la dosis inferior de 0.05 pg reducía la incidencia de lesiones de grado 4 en un 66±12% comparada con Ab de VEGF-A solo. « La adición de REDD14 a la dosis superior de 0.25 pg reducía la incidencia de lesiones de grado 4 en un 60±12%, comparada con Ab de VEGF-A solo. • La adición de REDD14 a la dosis superior de 0.25 pg duplicaba (100±34%) la incidencia de lesiones de grado 1 comparada con Ab de VEGF-A solo.

Experimento 2 Se diseñó este experimento para estudiar el efecto de REDD14 sobre la expresión génica en RPE y retina neural. Diseño experimental Grupos: PBS. • REDD14 0.25 mg. El tamaño de los grupos era de 5 ojos. Se indujo la CNV mediante tratamiento láser como se describe anteriormente el día 0; se inyectó también el material de ensayo el día 0, y se evaluó el efecto mediante análisis de PCRq de la expresión génica en RPE y retina neural los días 0 y 5.

Resultados Se presentan los resultados del experimento anterior en la Figura 25. Estos resultados muestran que la administración de REDD14 causa: • -40% de regulación por disminución de la expresión de RTP801 por debajo de la línea base tanto en RPE como en retina neural (véase también la figura 26A-26B); · -70% de regulación por aumento de la expresión de PEDF por encima de la línea base en retina neural (nota: en ojos inyectados con PBS, la expresión de PEDF se regula por disminución un 40% por debajo de la línea base); • -40% de regulación por disminución de la expresión de VEGF 64 por debajo de la línea base en RPE (nota: en ojos inyectados con PBS, la expresión de VEGF 64 se regula por disminución un 20%); • -50% de reducción de la expresión de MCP1 en RPE/coroides (figura 26A-26B).

Conclusiones generales de ambos experimentos: • La inhibición simultánea de RTP801 y VEGF ha potenciado el efecto inhibidor sobre la neovascularización coroidea y el derrame neovascular. • La inhibición de la expresión de RTP801 por REDD 4 no sólo evita la regulación por disminución de PEDF en el modelo de CNV, sino que potencia su expresión comparada con la línea base. • La inhibición de la expresión de RTP801 conduce a la regulación por disminución concomitante de MCP1 , lo que debe tener un efecto antiinflamatorio. • Sin ligarse a teoría alguna, el aumento de la expresión de PEDF por REDD14 puede ser la base del efecto cooperativo observado de la inhibición simultánea de VEGF y RTP801 . (PEDF es un factor antiangiogénico y neuroprotector bien conocido). • Sin ligarse a teoría alguna, la reducción de la expresión de MCP1 por REDD14 puede ser la base del efecto cooperativo observado de la inhibición simultánea de VEGF y RTP801 . (MCP1 es una quimiocina proinflamatoria conocida implicada en la patogénesis de AMD). Modelos de AMD adicionales que pueden utilizarse para ensayar los métodos de la presente invención: • Animales deficientes en ccl-2 o ccr-2, la deficiencia de cualquiera de estas proteínas causa el desarrollo de algunos de los rasgos principales de AMD. Los animales deficientes en estas proteínas pueden utilizarse para ensayar los métodos de la presente invención. Para información adicional sobre modelos animales de AMD, véanse: Chader, "Vision Research" 42 (2002), 393-399; Ambati er a/., Nature Medicine 9(1 1 ) (2003), 1390-1397; Tolentino er a/.. Retina 24 (2004), 132-138.

D) Comparación de la actividad ARNip anti-RTP801 REDD14 que posee un grupo 3' fosfato en cada cadena con la misma molécula que carece de 3' fosfatos (REDD14NP) en el modelo de CNV inducida por láser Se realiza y se evalúa generalmente el experimento como se describe anteriormente. Se inyectó un ojo de cada ratón (12 por grupo) con 0.25 pg de ARNip REDD14, mientras que el otro ojo se inyectó con ARNip REDD14NP.

Resultados Ambos ARNip redujeron de forma igualmente eficaz el volumen de CNV (Fig. 27).

EJEMPLO 7 Modelos y resultados relacionados con EPOC y enfisema.

Se ensayaron los compuestos de la presente invención en los siguientes modelos animales: • Modelo de enfisema inducido por tabaquismo: la exposición crónica al tabaquismo causa enfisema en varios animales tales como, entre otros, ratones, conejillos de indias. • Actividad proteasa pulmonar como desencadenante de enfisema. • Modelo de inhibición de VEGFR de enfisema. • Instilación bronquial con elastasa de neutrófilos/pancreática humana en roedores. • Enfisema inducido por MMP (metaloproteasa de matriz). · Enfisema inducido por inflamación. Adicionalmente, pueden generarse modelos de enfisema mediante medios genéticos (por ejemplo, ratones que portan la mutación TSK), y pueden generarse animales enfisematosos mediante modificadores conocidos de la sensibilidad al enfisema tales como, entre otros, lesión pulmonar, hipoplasia alveolar, hiperoxia, tratamiento y nutrición con glucocorticoides.

A. Evaluación de la influencia de la falta de RTP801 sobre el desarrollo de la enfermedad en modelos de enfisema en ratón (utilizando ratones KO de RTP801 ). (1 ) Se inician inflamación y apoptosis inducidas por tabaquismo (CS) en 5 ratones macho KO de RTP801 y 5 de tipo salvaje control de 4 meses de edad. Se someten los ratones a CS intenso (como se describe en Rangasamy et al., véase anteriormente) durante 7 días. Los ratones KO y WT no tratados del experimento de inhibición de VEGFR anterior pueden servir también como grupos de control no tratados para este experimento. Se inflan con agarosa posteriormente los pulmones, se fijan y se embeben en parafina, y se evalúa el desarrollo de estrés oxidativo en los ratones KO mediante: a) localización inmunohistoquímica y cuantificación de 8-oxo-dG en las secciones pulmonares; b) localización inmunohistoquímica y cuantificación de caspasa 3 activa en las secciones pulmonares utilizando anticuerpos específicos, o evaluación cuantitativa del número de células positivas de TUNEL; c) medida de la concentración de ceramida en los extractos pulmonares; d) medida de la actividad caspasa en los extractos pulmonares. (2) Tabaquismo a largo plazo en ratones KO Se sometieron 6 ratones hembra KO y 6 WT de edad coincidente a tabaquismo intenso (5 horas al día) durante un periodo de 6 meses. Se sacrificaron después los ratones, y se evaluó el diámetro interseptal medio (un parámetro del desarrollo de enfisema) utilizando un enfoque morfométrico.

B. Evaluación de la influencia de la falta de RTP801 sobre la progresión de la enfermedad en modelos de enfisema en ratón mediante la inhibición de RTP801 endógeno empleando el suministro intrapulmonar de ARNip inactivante de RTP801 Se indujo la inflamación inducida por CS mediante 7 días de tabaquismo en 2 grupos de ratones C57BL6, 10 ratones por grupo. Grupo 1 : CS + suministro de ARNip control (REDD8); grupo 2: CS + ARNip de RTP801 (REDD14). Se instilaron los grupos control con cualquier tipo de ARNip, pero mantenido a las condiciones del aire ambiental. Se evaluaron los animales como en el experimento anterior con los ratones KO.

Métodos Exposición a tabaquismo (CS) Se lleva a cabo la exposición (7h/día, 7 días/semana) quemando cigarrillos 24RF de referencia (2.45 mg de nicotina por cigarrillo, adquiridos en Tobacco Research Institute, Universidad de Kentucky, Lexington, KY, EE.UU.) utilizando una máquina de fumar (modelo TE-10, Teague Entrerprises, Davis, CA, EE.UU.). Se sopló cada cigarrillo encendido durante 2 s, una vez por minuto, para un total de ocho ráfagas a un caudal de 1.05 l/min, proporcionando una ráfaga estándar de 35 cm3. Se ajusta la máquina de fumar para producir una mezcla de corriente secundaria de humo (89%) y corriente principal de humo (1 1 %) quemando cinco cigarrillos a la vez. Se controla en la atmósfera de la cámara las partículas suspendidas totales y el monóxido de carbono, con concentraciones de 90 mg/m3 y 350 ppm, respectivamente.

Análisis morfológicos y morfométricos Después de exponer ratones a CS o instilación de plásmido que expresa RTP801 , se anestesian los ratones con halotano y se inflan los pulmones con agarosa de bajo punto de fusión al 0.5% a una presión constante de 25 cm como se describe anteriormente6. Se fijan los pulmones inflados en formalina tamponada al 10% y se embeben en parafina. Se tiñen secciones (5 pm) con hematoxilina y eosina. Se determinan el diámetro alveolar medio, la longitud alveolar y las intercepciones lineales medias mediante morfometría asistida por ordenador con el software Image Pro Plus (Media Cybernetics, Silver Spring, MD, EE.UU.). Se codifican las secciones pulmonares en cada grupo y se adquieren imágenes representativas (15 por sección pulmonar) por un investigador con los portaobjetos de identidad ocultada con un microscopio Nikon E800, lente de 20x.

Lavado bronce-alveolar (BAL) y fenotipado Después de la exposición a CS o instilación de plásmido que expresa RTP801 , se anestesian los ratones con pentobarbital de sodio. Se centrifuga el fluido BAL recogido de los pulmones de los ratones (500 g a 4°C) y se resuspende el sedimento celular en solución salina tamponada con fosfato. Se determina el número total de células en el fluido de lavado, y se citocentrifugan 2 x 104 células (Shandon Southern Products, Pittsburgh, PA, EE.UU.) sobre portaobjetos de vidrio y se tiñen con tinte Wright-Giemsa. Se realizan recuentos celulares diferenciales en 300 células, según técnicas citológicas estándar.

Identificación de poblaciones de células apoptóticas alveolares en los pulmones Para identificar los diferentes tipos celulares alveolares que experimentan apoptosis en los pulmones, se realiza una tinción inmunohistoquímica de la caspasa activa 3 en las secciones pulmonares de ratones expuestos al aire ambiental (AA) así como a CS. Para identificar las células epiteliales de tipo II apoptóticas en los pulmones, después de marcar la caspasa 3 activa, se incuban las secciones pulmonares en primer lugar con anticuerpo anti-proteína C tensioactiva de ratón (SpC) y después con anticuerpo anti-rojo Texas de conejo. Se identifican las células endoteliales apoptóticas incubando las secciones en primer lugar con el anticuerpo anti-CD31 de ratón y después con el anticuerpo secundario de conejo anti-ratón biotinilado. Se aclaran las secciones pulmonares con PBS y después se incuban con el complejo conjugado estreptavidina-rojo Texas. Se identifican los macrófagos apoptóticos en los pulmones mediante la incubación de las secciones en primer lugar con el anticuerpo de rata anti-Mac-3 de ratón y después con el anticuerpo anti-rojo Texas de rata. Finalmente, se aplica DAPI a todas las secciones pulmonares, se incuba durante 5 minutos, se lava y se monta con medio de montaje Vectashield HardSet. Se visualizan DAPI y fluoresceína a 330-380 nm y a 465-495 nm, respectivamente. Se adquieren las imágenes de las secciones pulmonares con el microscopio Nikon E800, lente 40x.

Localización inmunohistoquímica de caspasa 3 activa Se realiza la tinción inmunohistoquímica del ensayo de caspasa 3 activa utilizando anticuerpo anti-caspasa 3 activa y se recuentan las células positivas de caspasa 3 activa con una macro, utilizando el programa Image Pro Plus. Se normalizan las cuentas mediante la suma de los perfiles alveolares, denominados en la presente memoria longitud alveolar y expresados en µ?t?. La longitud alveolar se correlaciona inversamente con la intercepción lineal media, concretamente, a medida que se destruyen los septos alveolares, aumentan las intercepciones lineales medias a medida que se reduce la longitud alveolar total, concretamente, la longitud septal alveolar total.

Ensayo de actividad de caspasa 3 Se mide la actividad caspasa 3/7 en extractos de tejido pulmonar utilizando un ensayo fluorométrico según las instrucciones del fabricante. Se homogeneizó tejido pulmonar congelado instantáneamente (n= 3 por grupo) con el tampón de ensayo, seguido de sonicación y centrifugación a 800 x g. Después de la retirada de los núcleos y desecho celular, se incuba entonces el sobrenadante (300 pg de proteína) con el sustrato profluorescente a temperatura ambiente durante 1 h, y se midió la intensidad de fluorescencia utilizando un Typhoon Phosphoimager (Amersham Biosciences, Inc., Piscataway, NJ, EE.UU.). Los resultados se expresan como la velocidad de escisión del sustrato específico de caspasa 3, expresado en unidades de actividad enzimática de caspasa 3, normalizada por la concentración de proteína total. Se utilizó caspasa 3 recombinante activa como patrón de ensayo (0-4 U). Se utilizaron como controles negativos lisados de tejido sin sustrato, tampón de ensayo solo, y lisados con inhibidor de caspasa 3.

Localización inmunohistoquímica de 8-oxo-dG Para la localización inmunohistoquímica y cuantificación de 8-oxo-dG, se incuban secciones pulmonares de los ratones expuestos a CS o instilados con plásmido que expresa RTP801 con anticuerpo anti-8-oxo-dG y se tiñen utilizando el kit InnoGenex™ Iso-IHC DAB utilizando anticuerpos de ratón. Se recuentan las células positivas de 8-oxo-dG con una macro (utilizando Image Pro Plus), y se normalizaron los recuentos mediante la longitud alveolar como se ha descrito.

Instilación de ADN de plásmido en pulmones de ratón Se prepararon ADN de plásmido de vectores que expresan RTP801 y control utilizando un kit de aislamiento de ADN exento de endotoxina. Para instilación intratraqueal, se suministran 50 pg de ADN de plásmido en 80 µ? de perfluorocarbono estéril. Las propiedades portadoras de oxígeno del perfluorocarbono lo hacen bien tolerados a estos volúmenes, mientras que sus propiedades fisicoquímicas permiten un suministro pulmonar distal extremadamente eficaz cuando se instilan por vía intratraqueal. Se anestesian los ratones mediante una breve exposición por inhalación a haloetano, se tira suavemente hacia delante de la lengua con fórceps y se instila la tráquea con solución de perfluorocarbono aplicada a la base de la lengua mediante un angiocatéter romo.

Instilación de ARNip a pulmones de ratón Se anestesian los ratones con una inyección intraperitoneal de ketamina/xilazina (1 15/22 mg/kg). Se instilan por vía intranasal 50 g de ARNip en 50 µ? de volumen de NaCI al 0.9% mediante el suministro de cinco porciones consecutivas de 10 µ?. Al final de la instilación intranasal, se mantiene derecha la cabeza del ratón durante 1 minuto para asegurar que toda la solución instilada drena dentro. Para información adicional, véanse: Rangasamy T., Cho C.Y., Thimmulappa R.K, Zhen L, Srisuma S.S., Kensler T.W., Yamamoto M., Petrache I., Tuder R.M., Biswal S. "Genetic ablation of Nrf2 enhances susceptibility to cigarette-smoke induced emphysema in mice", enviado al Journal of Clinical Investigation; Yasounori Kasahara, Rubín M. Tuder, Cariyne D. Cool, David A. Lynch, Sonia C. Flores y Norbert F. Voelkel "Endothelial Cell Death and Decreased Expression of Vascular Endothelial Growth Factor and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor 2 in Emphysema", Am. J. Respir. Crit. Care Med., vol. 163, pág., 737-744, 2001 ; Yasunori Kasahara, Rubín M. Tuder, Laimute Taraseviciene-Stewart, Timothy D. Le Cras, Steven Abman, Peter K. Hírth, Johannes Waltenberg y Norbert F. Voelkel "Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema", J. Clin. Invest. 106: 13 -1319 (2000); y una revisión del tema: Robin M. Tuder, Sharon McGrath y Enid Neptune, "The pathological mechanisms of emphysema models: what do they have ¡n common? Pulmonary Pharmacology & Therapeutics, 2002.

Resultados 1 . La instilación de un plásmido que expresa RTP801 da como resultado un fenotipo de tipo enfisema en pulmones de ratón que es evidente por (1 ) aumento del recuento celular de lavado broncoalveolar (Fig. 15A); (2) apoptosis de células septales pulmonares (Figura 15B) y aumento del diámetro alveolar (Fig. 15C). 2. La instilación de ARNip de RTP801 (REDD14) da como resultado la reducción de la expresión de RTP801 en los pulmones (Fig. 17B). 3. Se protegen ratones KO de RTP801 del desarrollo de enfisema después de 6 meses de tabaquismo como es evidente por la falta de ensanchamiento del diámetro alveolar (Fig. 18). 4. Se protegen ratones KO de RTP801 de la inflamación inducida por el tabaquismo como es evidente por el número reducido de células inflamatorias de lavado broncoalveoar después de 1 semana de tabaquismo (Figura 16A-16B). 5. Se protegen ratones KO de RTP801 de la apoptosis inducida por el tabaquismo de células septales pulmonares como se evidencia por la tinción pulmonar para caspasa activada (Fig. 16C). 6. Se protegen parcialmente ratones instilados con REDD14 de la inflamación inducida por tabaquismo como es evidente por el número reducido de células inflamatorias de lavado broncoalveolar después de 1 semana de tabaquismo (Figura 17A). 7. Se protegen parcialmente ratones instilados con REDD14 de la apoptosis inducida por tabaquismo como es evidente por la tinción de sección pulmonar para caspasa activada y por la inmunotransferencia de extractos pulmonares con anticuerpos anti-caspasa 3 activada (Fig. 17C).

EJEMPLO 8 Modelos y resultados referentes a trastornos microvasculares Se ensayaron los compuestos de la presente invención en modelos animales de un intervalo de trastornos microvasculares como se describen a continuación. 1 . Retinopatía diabética RTP801 promueve la apoptosis de células neuronales y la generación de especies de oxígeno reactivas in vitro. El inventor de la presente invención encontró también que en ratones con supresión génica (KO) de RTP801 sometidos al modelo de retinopatía de prematuridad (ROP), la neovascularización patológica NV se reducía en condiciones hipóxicas, a pesar de elevaciones de VEGF, mientras que la falta de este gen no influía en la NV retiniana neonatal fisiológica. Además, en este modelo, la falta de RPT801 era también protectora frente a apoptosis neuronal hipóxica y vaso-obliteración hiperóxica.

Experimento 1 Se indujo diabetes en ratones C57/129sv de 8 semanas KO de RTP801 y de tipo salvaje de la misma carnada mediante inyección intraperitoneal de STZ. Después de 4 semanas, se obtuvieron las ERG (flash blanco único, 1 .4 x 104 ftc, 5 ms) del ojo izquierdo después de 1 hora de adaptación a la oscuridad. Se evaluó la RVP de ambos ojos utilizando la técnica de permeación en albúmina de azul de Evans.

Resultados La glucosa sanguínea no era diferente entre ratones diabéticos (DM) WT y DM KO (495±109 frente a 513±76 mg/dl) y no diabéticos (NDM) WT y KO (130±10 frente a 135±31 mg/dl, respectivamente). La RVP en el grupo DM WT aumentó un 138% (51 .2±37.9 µ?/g/h, n= 8) comparado con NDM WT (21 .5±18.8 µ?/g/hm n= 9, p= 0.055). En contraposición, la RVP se redujo un 80% en DM KO (9.5±8.5 µ?/g/h, n= 6, p= 0.023) comparado con ratones DM WT, dando como resultado una reducción de un 140% de la RVP inducida por diabetes. En ratones DM WT, había una prolongación (p<0.05) de los tiempos implícitos potenciales oscilatorios para OP2 (1 1 %), OP3 (12%) y OP4 (14%) y para la onda B (23%) comparado con los NDM WT. La onda A no cambió significativamente. Se normalizaron estos cambios a -100% en ratones DM KO para OP3 y OP4 y a 65% para onda B comparado con NDM KO.

Conclusión: La supresión génica de RTP801 mejora la RVP inducida por diabetes y las anormalidades de ERG en ratones, sugiriendo que este gen inducíble por hipoxia puede servir para un papel importante en la patogénesis de enfermedad retiniana diabética temprana.

Experimento 2 Se indujo diabetes en ratones con supresión génica de RTP801 y de tipo salvaje control con el fondo genético coincidente. Además, se indujo en ratones C57B16, que se utilizaron posteriormente para inyección intravítrea de ARNip anti-RTP801 y control. Para la inducción de diabetes, se inyectaron los ratones con estreptozotocina (STZ 90 mg/kg/d durante 2 días después de ayuno durante una noche). Se controló la fisiología animal a lo largo del estudio para cambios de glucosa sanguínea, peso corporal y hematocrito. Ratones inyectados con vehículo sirvieron como controles. Se trataron los animales apropiados mediante inyecciones intravítreas de 1 pg de ARNip anti-RTP801 REDD14 o 1 pg de ARNip control anti-GFP. Se inyectó dos veces ARNip en el transcurso del estudio, el día 0 cuando se realizó la primera inyección de STZ, y el día 14 después de la inyección de STZ. Se midió el derrame vascular retiniano utilizando la técnica de tinción con azul de Evans (EB) en los animales después de 4 semanas de duración de diabetes. Se implantó en los ratones un catéter en la vena yugular derecha 24 horas antes de las medidas de azul de Evans (EB). Las medidas de permeabilidad retiniana en ambos ojos de cada animal seguían un protocolo estándar de azul de Evans.

Resultados 1 . Se redujo el derrame de vaso sanguíneo retiniano un 70% en ratones diabéticos KO de RTP801 comparado con ratones diabéticos de tipo silvestre (véase la Figura 20). 2. La supresión génica de RTP801 normaliza las anormalidades de ERG en ratones: en ratones DM WT, hubo una prolongación (p<0.05) de los tiempos implícitos potenciales oscilatorios para OP2 (1 1 %), OP3 (12%) y OP4 (14%) y para la onda B (23%) comparado con NDM WT. La onda A no cambió significativamente. Se normalizaron estos cambios a -100% en ratones DM KO de RTP801 para OP3 y OP4 y a un 65% para onda B comparado con NDM KO de RTP801 (véase la Figura 21 ). 3. De forma similar a los resultados en ratones KO, se redujo el derrame de vasos sanguíneos retiñíanos en un 50% en ratones diabéticos inyectados por vía intravítrea con ARNip REDD14 contra RTP801 comparado con ratones diabéticos inyectados por vía intravítrea con ARNip control contra GFP (véase la Figura 22). 2. Retinopatía de prematuridad Se indujo retinopatía de prematuridad exponiendo los animales de ensayo a condiciones hipóxicas e hiperóxicas, y ensayando posteriormente los efectos sobre la retina. Los resultados mostraron que los ratones KO de RTP801 se protegían frente a retinopatía de prematuridad, validando así el efecto protector de la inhibición de RTP801 . 3. Infarto de miocardio Se indujo infarto de miocardio mediante ligamiento de la arteria descendente anterior izquierda en ratones, tanto a corto plazo como a largo plazo. Resultados: reducción de los niveles de fracción TnT y CPK-MB a las 24 después del infarto en la sangre, y mejor ecocardiograma (volumen de fracción de eyección) a los 28 días después del infarto en ratones KO de RTP801 . 4. Afecciones isquémicas microvasculares Los modelos animales para evaluar las afecciones isquémicas incluyen: 1 . Lesión de cabeza cerrada (CHI). La TBI experimental produce una serie de eventos que contribuyen a cascadas neurológicas y neurometabólicas que están relacionadas con el grado y la extensión de déficit de comportamiento. La CHI se induce bajo anestesia, mientras se deja caer libremente un peso desde una altura prefijada (Chen et al. , Neurotrauma 13, 557, 1996) sobre el cráneo expuesto que cubre el hemisferio izquierdo en el plano coronal medio. 2. Oclusión de arteria cerebral media (MCAO) transitoria. Se realiza una isquemia focal transitoria de 90 a 120 minutos en ratas Sprague- Dawley macho adultas de 300-370 g. El procedimiento empleado es la MCAO por sutura intraluminal (Longa et al., Stroke, 30, 84, 1989 y Dogan et al., J, Neurochem. 72, 765, 1999). Brevemente, se inserta bajo anestesia con halotano un material de sutura de nailon 3-0 recubierto con poli-L-lisina en la arteria carótida interna derecha (ICA) a través de un orificio en la arteria carótida externa. Se empuja el hilo de nailon por la ICA hasta el origen de la MCA derecha. (20-23 mm). 90-120 minutos después de retirar el hilo, se cierra el animal y se deja recuperar. 3. Oclusión de arteria cerebral media (MCAO) permanente. La oclusión es permanente, inducida unilateralmente mediante la electrocoagulación de MCA. Ambos métodos conducen a isquemia cerebral focal del lado ipsilateral de la corteza cerebral, dejando el lado contralateral intacto (control). Se expone la MCA izquierda mediante una craniectomía temporal, como se describe para ratas por Tamura A. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab. 1981 ; 1 : 53-60. Se ocluyen la MCA y su rama lenticuloestriada proximalmente al borde medio del tracto olfatorio con coagulación microbipolar. Se sutura la herida y se devuelven los animales a su jaula hogar en una sala calentada a 26°C a 28°C. Se mantiene la temperatura de los animales todo el tiempo con un termostato automático. 5. Insuficiencia renal aguda (ARF) Puede hacerse el ensayo de ARNip activa para tratar ARF utilizando ARF inducida por sepsis o ARF inducida por reperfusión por isquemia. 1 . ARF inducida por sepsis Se describen dos modelos animales predictivos de ARF inducida por sepsis por Miyaji T., Hu X., Yuen P.S., Muramatsu Y., lyer S., Hewitt S.M., Star R.A., 2003, "Ethyl pyruvate decreases sepsis-induced acute renal failure and múltiple organ damage in aged mice", Kidnev Int. Nov. 64(5): 1620-1631. Estos dos modelos son administración de lipopolisacárido y punción de ligamiento cecal en ratones, preferiblemente en ratones maduros. 2. ARF inducida por reperfusión por isquemia Se describe este modelo animal predictivo por Kelly K.J., Plotkin Z., Vulgamott S.L., Dagher P.C., enero de 2003, "P53 mediates the apoptotic response to GTP depletion after renal ischemia-reperfusion: protective role of a p53 inhibitor", J. Am. Soc. Nephrol. 14(1 ): 128-138. Se indujo la lesión de reperfusión por isquemia en ratas después de 45 minutos de pinzamiento de la arteria renal bilateral y posterior liberación del pinzamiento permitiendo 24 horas de reperfusión. Se inyectaron 250 g de REDD14 o ARNip de GFP (control negativo) en la vena yugular 2 h antes y 30 minutos después del pinzamiento. Se añadieron 250 g adicionales de ARNip por la vena de cola a las 4 y 8 horas después del pinzamiento. El ARNip contra GFP sirvió como control negativo. Se controló la progresión de ARF mediante la medida de los niveles de creatinina en suero antes y 24 horas después de la cirugía. Al final del experimento, se perfundieron las ratas por un conducto femoral residente con PBS caliente seguido de paraformaldehído al 4%. Se retiraron los ríñones izquierdos y se almacenaron en paraformaldehído al 4% para análisis histológico posterior. La insuficiencia renal aguda se define frecuentemente como un aumento agudo del nivel de creatinina en suero a partir de la línea base. Un aumento de creatinina de al menos 0.5 mg por di o 44.2 pmol por I de suero se considera una indicación de insuficiencia renal aguda. Se midió la creatinina de suero a tiempo cero antes de la cirugía y 24 horas después de la cirugía de ARF. Para estudiar la distribución de ARNip en el riñon de rata, se administraron por vía í.v. durante 3-5 min moléculas de ARNip marcadas con Cy3 de 19 unidades de extremos romos (2 mg/kg) con modificación con O-metilo alternante en los restos de azúcar, después de lo cual se realizó la formación de imágenes in vivo utilizando microscopía confocal de dos fotones. El análisis de microscopía confocal reveló que la mayoría del ARNip en los ríñones se concentra en el compartimento endosómico de las células tubulares proximales. Tanto la fluorescencia endosómica como citoplasmática de ARNip fueron relativamente estables durante las primeras 2 horas después del suministro, y desaparecieron a las 24 horas. Como es evidente por la Figura 19, había un aumento de diez veces del nivel de creatinina en suero después de un tratamiento de pinzamiento de 45 min de la arteria bilateral renal (tratamiento con PBS). Cuatro inyecciones de ARNip 801 (REDD14, SEQ ID NO: 16 y 66) (2 horas antes del pinzamiento y 30 mín, 4 h y 8 h después del pinzamiento) redujeron significativamente el nivel de creatinina en suero en un 40% (p<0.02). Estos resultados sugieren que el ARNip 801 puede proteger al tejido renal de los efectos de la lesión de reperfusión por isquemia y por tanto reducir la gravedad de la ARF.

EJEMPLO 9 Preparación de ARNip Utilizando algoritmos patentados y la conocida secuencia del gen RTP801 (SEQ ID NO: 1 ), se generaron las secuencias de muchos ARNi potenciales. Se prepararon moléculas de ARNip según las especificaciones anteriores esencialmente como se describe en la presente memoria. Los ARNip de la presente invención pueden sintetizarse mediante cualquiera de los métodos que son bien conocidos en la técnica para la síntesis de oligonucleotidos ribonucleicos (o desoxirribonucleicos). Por ejemplo, puede utilizarse una máquina disponible comercialmente (disponible, entre otros, en Applied Biosystems); los oligonucleotidos se preparan según la secuencias dadas a conocer en la presente memoria. Pueden ligarse pares superpuestos de fragmentos sintetizados químicamente utilizando métodos bien conocidos en la técnica (por ejemplo, véase la patente de EE.UU. n° 6.121 .426). Las cadenas se sintetizan separadamente y después se asocian entre sí en el tubo. Después, se separan los ARNip bicatenarios de los oligonucleotidos monocatenarios que no se asociaron (por ejemplo, debido al exceso de uno de ellos) mediante HPLC. Con respecto a los ARNip o fragmentos de ARNip de la presente invención, pueden sintetizarse dos o más de dichas secuencias y ligarse conjuntamente para uso en la presente invención. Las moléculas de ARNip de la invención pueden sintetizarse mediante métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, los métodos descritos en Usman et al., 1987, J. Am. Chem. Soc. 109, 7845; Scaringe et al., 1990, Nucleic Acids Res. 18, 5433; Wincott et al., 1995, Nucleic Acids Res.. 23, 2677-2684 y Wincott er al., 1997, Methods Mol. Bio. 74, 59, y puede hacerse uso de grupos protectores y acoplantes comunes de ácidos nucleicos tales como dimetoxitritilo en el extremo 5' y fosforamiditas en el extremo 3'. Los nucleótidos modificados (por ejemplo, 2'-0-metilados) y nucleótidos no modificados se incorporan como se desee. Como alternativa, las moléculas de ácido nucleico de la presente invención pueden sintetizarse separadamente y unirse conjuntamente post-sintéticamente, por ejemplo, mediante ligamiento (Moore et al., 1992, Science 256, 9923; Draper et al., publicación PCT internacional N° WO93/23569; Shabarova er a/., 1991 , Nucleic Acids Research 19, 4247; Bellon et al., 1997, Nucleosides & Nucleotides, 16, 951 ; Bellon er a/., 1997, Bioconjugate Chem., 8, 204) o mediante hibridación después de síntesis y/o desprotección. Las moléculas de ARNip de la invención pueden sintetizarse también mediante una metodología de síntesis en serie como se describe en la publicación de solicitud de patente de EE.UU. n° US2004/0019001 (McSwiggen), en la que se sintetizan ambas cadenas de ARNip en forma de un fragmento de oligonucleótido contiguo individual o cadena separada por un enlazador escindible que se escinde posteriormente, proporcionando fragmentos o cadenas que hibridan y permiten la purificación del dúplex de ARNip. El enlazador puede ser un enlazador polinucleotídico o un enlazador no polinucleotídico. Para información adicional, véase la publicación PCT n° WO 2004/015107 (ATUGEN). Como se describe anteriormente, los ARNip del cuadro A (a continuación) se construyeron de tal modo que azúcares alternados tienen la modificación 2'-O-metilo, concretamente, se modificaron por tanto nucleótidos alternados. En estas modalidades preferidas, en una cadena del ARNip, los nucleótidos modificados eran los números 1 , 3, 5, 7, 9, 1 1 , 13, 15, 17 y 19, y en la cadena opuesta los nucleótidos modificados eran los números 2, 4, 6, 8, 1 0, 12, 14, 16 y 18. Por tanto, estos ARNip eran moléculas de ARN de 19 unidades de extremos romos con modificaciones 2'-0-metilo alternadas como se describe anteriormente. Los ARNip de los cuadros 2 y 3 (a continuación) se construyeron también de esta manera; los ARNip de los cuadros B y D son moléculas de ARN de 19 unidades de extremos romos con modificaciones 2'-O-metilo alternadas; los ARNip del cuadro C son moléculas de ARN de 21 unidades de extremos romos con modificaciones 2'-O-metilo alternadas. El cuadro A detalla diversas nuevas moléculas de ARNip que se generaron y posteriormente sintetizaron por el gen RTP801 . Las dos columnas finales indican los resultados de dos experimentos realizados para examinar la actividad de las nuevas moléculas. Brevemente, se transfectaron células HeLA o HaCat con un ARNip nuevo específico para ensayo. Se determinó después la expresión del polipéptido RTP801 mediante transferencia Western utilizando un anticuerpo contra el polipéptido RTP801 . Con respecto a las dos columnas a la derecha del cuadro A, "-" significa una molécula inactiva o de baja actividad (que no inhibe sustancialmente la expresión del gen RTP801 ); "+" significa una molécula de ARNip con cierta actividad inhibidora (de la expresión del gen RTP801 ), "++" significa una molécula con mayor actividad inhibidora, y así. Cualquiera de las moléculas de ARNip dadas a conocer en la presente memoria, y en particular las moléculas activas detalladas en el cuadro A, son nuevas y son también consideradas una parte de la presente invención.

CUADRO A Nótese que en el cuadro A anterior, las cadenas de ARNip en sentido correcto 1 -50 tienen SEQ ID NoS.: 3-52 respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 1 -50 tienen SEQ ID NoS.: 53-102 respectivamente. La molécula designada REDD 14 tiene SEQ ID NoS.: 16 (cadena en sentido correcto) y 66 (cadena antisentido).

CUADRO B Nótese que en el cuadro B anterior, las cadenas de ARNip en sentido correcto 51 -122 tienen SEQ ID NoS.: 103-174 respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 51 -122 tienen SEQ ID NoS.: 175-246 respectivamente.

Nótese que en el cuadro C anterior, las cadenas de ARNip en sentido correcto 123-171 tienen SEQ ID NoS.: 247-295 respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 123-171 tienen SEQ ID NoS.: 296-344 respectivamente. 11 .¾A A oouaucA GcaACAcwAo: len. :s: 1 .o ;;"-·;«- [1049- ilCS'S- _ CCUCASÜACaSUAC AUCA (JCAÜS UACAGIJAO.GAGS l D ¾ "7 ? U9/1S) U07K19 1S) Í544-9Ó4! (IS/1S; 11050- ? !C=s¡ a?/;*; [S47-96S1 ¡1S 1S! Nótese que en el cuadro D anterior, las cadenas de ARNip en sentido correcto 172-268 tienen SEQ ID NoS.: 345-441 respectivamente, y las cadenas antisentido de ARNip 172-268 tienen SEQ ID NoS.: 442-538 respectivamente.

EJEMPLO 10 Farmacología y desarrollo de fármacos Las secuencias nucleotídicas de la presente invención se pueden administrar bien directamente o bien con vectores víricos o no víricos. Cuando se administran directamente las secuencias se vuelven generalmente resistentes a nucleasas. Alternativamente las secuencias se pueden incorporar dentro de casetes o construcciones de expresión tales que la secuencia se expresa en la célula como se discute en el presente documento más adelante. Generalmente la construcción contiene la secuencia reguladora apropiada o el promotor apropiado permitiendo expresarse a la secuencia en la célula a la cual se dirigen. Los compuestos de composiciones farmacéuticas de la presente invención se administran y dosifican de acuerdo con la buena práctica médica, tomando en cuenta la condición clínica del paciente individual, la enfermedad a tratarse, el sitio y el procedimiento de administración, programa de administración, edad del paciente, sexo, peso corporal y otros factores conocidos por los practicantes médicos.

La "cantidad efectiva" farmacéuticamente para propósitos del presente documento se determina de este modo mediante consideraciones tales como se conocen en la técnica. La cantidad debe ser efectiva logrando la mejora que incluye pero no se limita a tasa de supervivencia mejorada o recuperación más rápida, o mejora o eliminación de los síntomas y otros indicadores según se seleccionan como medidas apropiadas por aquellos expertos en la técnica. El tratamiento generalmente tiene una duración proporcional a la duración de los procesos morbosos y efectividad del fármaco y a la especie del paciente que se esté tratando. Se destaca que los humanos se tratan generalmente más tiempo que los ratones y otros animales experimentales ejemplificados en el presente documento. Los compuestos de la presente invención se pueden administrar mediante cualquiera de las vías de administración convencionales. Se debería destacar que el compuesto se puede administrar como el compuesto o como sal farmacéuticamente aceptable y se puede administrar solo o como un ingrediente activo en combinación con transportadores, disolventes, diluyentes, excipientes, coadyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables. Los compuestos se pueden administrar oralmente, subcutáneamente o parenteralmente incluyendo administración intravenosa, intraarterial, intramuscular, intraperitonealmente, y por administración intranasal así por como técnicas intratecales y de infusión. También son útiles los implantes de los compuestos. Las formas líquidas se pueden preparar para inyección, el término incluye subcutánea, transdérmica, intravenosa, intramuscular, intratecal y otras vías parentales de administración. Las composiciones líquidas incluyen disoluciones acuosas, con o sin codisolventes orgánicos, suspensiones acuosas o aceitosas, emulsiones con aceites comestibles, así como vehículos farmacéuticos similares. Además, bajo ciertas circunstancias las composiciones para usar en los tratamientos novedosos de la presente invención pueden conformarse como aerosoles, para administración intranasal y similares. El paciente que se trata es un animal de sangre caliente y, en particular, mamíferos, incluyendo el hombre. Los transportadores, disolventes, diluyentes, excipientes, coadyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables así como transportadores de implantes farmacéuticamente aceptables se refieren generalmente a agentes de carga sólidos o líquidos inertes, no tóxicos, diluyentes o material encapsulador que no reacciona con los ingredientes activos de la invención. Cuando se administra el compuesto de la presente invención parenteralmente, se formula generalmente en una forma inyectable de dosificación unitaria (disolución, suspensión, emulsión). Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para inyección incluyen disoluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para reconstitución en disoluciones o dispersiones acuosas estériles inyectables. El transportador puede ser un disolvente o medio dispersante que contenga, por ejemplo, agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, y similares), mezclas adecuadas de los mismos, y aceites vegetales.

La fluidez adecuada se puede mantener, por ejemplo, mediante el uso de una cobertura tal como lecitina, mediante el mantenimiento del tamaño de partícula requerido en el caso de dispersión y mediante el uso de tensioactivos. Los vehículos no acuosos tales como aceite de semilla de algodón, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de soja, aceite de maíz, aceite de girasol, o aceite de cacahuete y ésteres, tales como miristato de isopropilo, se pueden usar también como sistemas disolventes para composiciones de compuestos. Adicionalmente, diversos aditivos los cuales potencian la estabilidad, esterilidad, e isotonicidad de las composiciones, incluyendo conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes, y tampones, se pueden añadir. La prevención de la acción de microorganismos se puede asegurar mediante diversos agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, y similares. En muchos casos, es deseable incluir agentes ¡sotónicos, por ejemplo azúcares, cloruro de sodio y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable se puede provocar mediante el uso de agentes que retardan absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. De acuerdo con la presente invención, sin embargo, cualquier vehículo, diluyente, o aditivo usado tiene que ser compatible con los compuestos. Las disoluciones inyectables adecuadas se pueden preparar incorporando los compuestos utilizados en practicar la presente invención en la cantidad requerida del disolvente apropiado con diversos de los otros ingredientes, según se desee.

Se puede administrar al paciente una formulación farmacológica de la presente invención en una formulación inyectable que contiene cualquier transportador compatible, tal como diversos vehículos, coadyuvantes, aditivos, y diluyentes; o se pueden administrar parenteralmente al paciente los compuestos utilizados en la presente invención en la forma de implantes subcutáneos de liberación lenta o sistemas de administración dirigida tales como anticuerpos monoclonales, administración guiada mediante vectores, iontoforesis, matrices poliméricas, liposomas, y microsferas. Ejemplos de sistemas de administración útiles en la presente invención incluyen Patentes de los Estados Unidos NoS.: 5.225.182; 5.169.383; 5.167.616; 4.959.217; 4.925.678; 4.487.603; 4.486.194; 4.447.233; 4.447.224; 4.439.196; y 4.475.196. Se conocen bien por aquellos expertos en la técnica muchos otros implantes, sistemas de administración, y módulos tales. Se puede administrar oralmente al paciente una formulación farmacológica del compuesto utilizado en la presente invención. Los métodos convencionales tales como administrar el compuesto en comprimidos, suspensiones, disoluciones, emulsiones, cápsulas, polvos, jarabes y similares son usables. Se prefieren las técnicas conocidas las cuales lo administran oralmente o intravenosamente y retienen la actividad biológica. En una modalidad, el compuesto de la presente invención se puede administrar inicialmente mediante inyección intravenosa llevando los niveles en sangre a un nivel adecuado. Los niveles de los pacientes se mantienen después mediante una forma de dosificación oral, aunque otras formas de administración, depende de la afección del paciente y como se indica anteriormente, se pueden usar. En general, la dosis activa del compuesto para humanos está en el intervalo desde 1 ng/kg hasta aproximadamente 20-100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente de aproximadamente 0.01 mg hasta aproximadamente 2-10 mg/kg de peso corporal por día, en un régimen de una dosis por día o dos o tres o más veces por día durante un periodo de 1-2 semanas o más largo, preferiblemente de 24 a 48 horas o mediante infusión continua durante un periodo de 1 -2 semanas o más largo.

Administración de compuestos de la presente invención al ojo Los compuestos de la presente invención se pueden administrar al ojo tópicamente o en forma de una inyección, tal como una inyección intravitreal, una inyección subretinal o una inyección bilateral. La información adicional sobre administración de los compuestos de la presente invención se puede hallar en Tolentino y col., Retina 24 (2004) 132-138; Reich y col., Molecular visión 9 (2003) 210-216.

Administración pulmonar de compuestos de la presente invención Las composiciones terapéuticas de la presente invención se administran preferiblemente dentro del pulmón mediante inhalación de un aerosol que contienen estas composiciones/compuestos, o mediante instilación intranasal o intratraqueal de dichas composiciones. Formular las composiciones en liposomas puede beneficiar la absorción. Adicionalmente, las composiciones pueden incluir un líquido de PCF tal como perflubrón, y las composiciones se pueden formular como un complejo de los compuestos de la invención con polietilemeimina (PEI). Para información adicional en administración pulmonar de composiciones farmacéuticas véase Weiss y col., Human gene therapy 10: 2287-2293 (1999); Densmore y col., Molecular therapy 1 : 180-188 (1999); Gautam y col., Molecular therapy 3: 551-556 (2001 ); y Shaniwala y Misra, AAPS PharmSciTech 5 (2004). Adicionalmente, las formulaciones respiratorias por ARNip se describen en la solicitud de patente de los Estados Unidos N0.: 2004/0063654 de Davis y col. Adicionalmente, los compuestos de la presente invención se pueden administrar tópicamente donde sea apropiado (tal como en el caso de úlceras del pie de diabético por ejemplo), opcionalmente en una formulación de lípido/liposoma.

Administración de compuestos de la presente invención para el oído Un modo de administración preferido es la administración tópica de los inhibidores de RTP801 sobre la membrana ventana oval de la cóclea como se describe por ejemplo en Tanaka y col. (Hear Res. marzo de 2003, 177 (1 -2): 21 -31 ). Un modo adicional de administración para el oído es por medio de inyección trans-timpánica. En el tratamiento de las úlceras de decúbito u otras heridas, la administración de la composición farmacéutica es preferiblemente mediante administración tópica al área de los daños, pero las composiciones se pueden administrar también sistémicamente. Formulaciones adicionales para la administración mejorada de los compuestos de la presente invención puede incluir compuestos no formulados, compuestos covalentemente unidos a colesterol, y compuestos unidos a anticuerpos señaladores (Song y col., Antibody mediated in vivo delivery of small interfering RNAs vía cell-surface receptors, Nat. Biotechnol., junio 2005; 23 (6): 709-17). Todos los ARNip descritos en la presente pueden administrarse en un formato no formulado como ARNip desnudos para el tratamiento de cualquier enfermedad o condición descrita en la presente. El término "ARNip desnudo" se refiere a moléculas de ARNip que están libres de cualquier vehículo de suministro que actúa para ayudar, promover o facilitar la entrada en la célula, incluyendo secuencias virales, partículas virales, formulaciones de liposoma, lipofectina o agentes de precipitación y similares. Por ejemplo, ARNsi en PBS es "ARNip desnudo". Aemás, la administración de cualquier ARNip desnudo, oligonucleótido, combinación de ARNip desnudo o combinación de ARNsi y molécula adicional con el fin de tratar cualquier enfermedad y condición descrita en la presente está dentro del alcance de la presente invención.

Sin embargo, como se describe en la presente, las moléculas de ARNsi de la invención también pueden ser suministradas en formulaciones de liposoma y formulaciones de lipofectina y similares y pueden prepararse por métodos bien conocidos por los expertos en la técnica. Dichos métodos se describen por ejemplo en la patente de E.U.A. 5,593,972, 5,589,466. y 5,580,859 que se incorpora en la presente por referencia.

EJEMPLO 11 Modelo ex vivo para ototoxicidad inducida por cisplatina y el efecto protector de ARNip de RTP801 La ototoxicidad inducida mediante cisplatina se induce en cultivos organotípicos coclear y vestibular. Se usaron cachorros de rata de 3-4 días tras nacer preparando los cultivos organotípicos coclear y vestibular como se detalla en Zhang y col., Neuroscience 120 (2003) 191-2005. Las cócleas se retiran mediante disección cuidadosamente y se retiran el tejido coclear que contiene el ganglio espiral, el órgano de Corti y la espira media preparando los cultivos organotípicos como se describe en Zhang y col. Los cultivos se situaron en un incubador de CO2 durante 24 horas acondicionándose antes del tratamiento. Después de acondicionarse, los cultivos se trataron con cisplatina sola a 1.5 ó 10 pg/ml durante 48 horas. Para estudiar el efecto protector de ARNip de RTP801 , se trataron los explantes cocleares (5 cócleas por grupo) durante 48 horas con 10 pg/ml de cisplatina y concentraciones que varían de ARNip de RTP801 con o sin Lipofectamina. Los cultivos de control no tratados y los cultivos tratados con ARNip de RTP801 durante 48 horas se dejan en paralelo. Al final de los experimentos, los cultivos se fijaron con formalina al 10% y se tiñeron con faloidina conjugada con FITC. Se contaron los números de células del cabello internas y células del cabello externas por 0.25 mm de longitud de la cóclea y se determina para cada tratamiento el número medio de células del pelo.

EJEMPLO 12 Modelo in vivo para ototoxicidad inducida por gentamicina y el efecto protector de ARNip de RTP801 Las chinchillas se trataron con sulfato de gentamicina bien solo durante 5 días (125-300 mg/kg, intramuscular) o bien en combinación con ARNip de RTP801. Las moléculas de ARNip se administran tópicamente sobre la membrana ventana oval de la cóclea dos días antes de y durante la exposición de 5 días a gentamicina. Al final del tratamiento, los animales se mataron mediante exposición a dióxido de carbono y decapitación. Las cócleas se eliminaron y se prepararon tiñendo con faloidina conjugada con FITC determinando los números de células del pelo internas y células del pelo externas en el tejido coclear (como se describe en Ding y col., Hearing Research 164 (2002) 15-126 y en Wang y col., The Journal of Neuroscience 23 (24): 8596-8607).

EJEMPLO 13 Modelo in vivo para traumatismo acústico y el efecto protector de ARNip de RTP801 Los conejillos de indias pigmentados se usan en el estudio del traumatismo acústico (descrito en Wang y col., The Journal of Neuroscience 23 (24): 8596-8607). Las moléculas de ARNip de RTP801 se administran tópicamente sobre la membrana ventana oval de la cóclea durante un periodo de 7 días. Las cócleas izquierdas no tratadas sirvieron como controles para la efectividad del trauma acústico en causar pérdida de células del pelo auditivo y pérdida de función auditiva. Los animales se expusieron a traumatismo acústico [6 kHz, 120 dB de nivel de presión sonora (SPL), 30 minutos], y los audiogramas de ambas orejas se derivan de los potenciales de acción del compuesto (CAP) registrados a partir de los nervios auditivos por medio de electrodos de membrana ventana oval crónicos. Los audiogramas de CAP de ambos oídos se miden diariamente en animales despiertos. 30 días después de la exposición sonora, los animales se sacrifican, y sus cócleas se preparan para una evaluación cuantitativa de pérdidas de células del pelo usando microscopía electrónica de barrido con el fin de contar todas las células del pelo en la longitud completa del conducto coclear.

EJEMPLO 14 Resultados experimentales relativos a 801 1 (N°. de identificación: 257 en el cuadro D, SEQ ID N°.: 527 Tcadena antisentidol) y 801 4 (N°. de identificación: 260 en el cuadro D, SEQ ID N°.: 530 fcadena antisentidol) Eficacia in vitro en células HEK293 Se transfectaron tres concentraciones diferentes de ARNip, 5, 10 y 20 nm dentro de células HEK293. Se usaron como un control negativo concentraciones idénticas de un ARNip irrelevante (TGsi), mientras que se usaron concentraciones idénticas de REDD14 como un control positivo. 72 horas después de la transfección, las células se recogieron; el ARN se purificó y usó como una plantilla en una reacción de qPCR para la determinación cuantitativa de los niveles de tránscrito RTP801 endógeno. La ciclofilina A humana se usó como una referencia interna para qPCR. Los datos normalizados de referencia se sometieron a normalización biológica: para cada concentración de ARNip, los niveles detectados de RTP801 se expresaron como porcentaje de RTP801 en la muestra control negativo correspondiente. Los resultados se muestran en la figura 28.

Eficacia in vitro en las células BE2C Mientras que los niveles de expresión de RTP801 básales se analizaron en las células HEK293, para valoración de la capacidad de ARNip para disminuir niveles de expresión de RTP801 inducidos, se usaron células BE2C tratadas con CoCI2 como un inductor de RTP801. El diseño y la evaluación de datos fueron esencialmente como se describen anteriormente en este documento. 24 horas después de la transfeccion con ARNip, las células BE2C se trataron con CoCI2 10 uM durante 24 horas adicionales y después se procesaron para extracción de ARN. Los resultados se muestran en la figura 29. Los resultados indican que 801 _1 y 801 _4 son al menos tan efectivas como REDD14 contra RTP801 en ensayos in vitro.

Eficacia in vivo en el modelo de CNV de ratón Los experimentos se llevaron como se describe en el ejemplo 6, con los siguientes grupos experimentales: CUADRO 4 Los resultados se presentan en la figura 30, y muestran que 801_4 es al menos tan efectivo como REDD14 en el modelo in vivo de CNV de ratón.

EJEMPLO 15 Modelos y Resultados Relativos a Sordera El efecto de un tratamiento de RNAip ejemplar (p53) sobre muerte celular capilar inducida acústicamente en la cóclea de la chinchilla La actividad de un RNAip ejemplar (QM5 - anti-p53) en un modelo de traumatismo acústico se estudió en chinchilla. Un grupo de siete animales sufrieron traumatismo acústico. Los animales se expusieron a una banda de una octava de ruido centrada a 4 kHz durante 3 horas a 105 dB. El oído izquierdo de las chinchillas expuestas al ruido se trató con 30 pg de RNAip en -20 µ? de PBS; el oído derecho se trató con vehículo (PBS). El umbral medio del potencial de acción del compuesto registrado de la ventana espiral se determinó 2.5 semanas después del trauma acústico con el fin de determinar si los umbrales en el oído tratado con RNAip fueron menores (mejores) que en el oído no tratado (vehículo). Los umbrales medios fueron menores en los oídos tratados con RNAip frente a los oídos no tratados. La diferencia a 4 kHz fue estadísticamente significativa (p<0.033). Estos resultados indican que el RNAip de p53 ejemplar administrado a la ventana espiral de la cóclea es capaz de reducir el daño causado por trauma acústico.

El efecto de tratamiento de RNAip de p53 ó 801 en muerte celular capilar inducida por cisplatina en la cóclea de ratas Ratas Wistar macho se probaron para umbrales de respuesta del tallo cerebral auditivo para señales de chasquidos, 8, 16 y 32 kHz antes del tratamiento con cisplatinas. Tras la prueba de respuesta del tallo cerebral auditivo basal, se administró cisplatina como una infusión intraperitoneal de 13 mg/kg durante 30 minutos. Los oídos tratados recibieron bien 15 ug/4 microlitros del RNAip ejemplar de p53 en PBS (como anteriormente) o bien REDD14 RNAip de RTP801 en PBS (secuencia N0.: 14 en cuadro A, SEQ ID NoS: 16 (en sentido correcto) y 66 (antisentido) aplicados directamente a la membrana ventana espiral. Los oídos control se trataron bien con RNAip de GPF no relacionado en PBS o con PBS solo. Las moléculas de RNAip se administraron entre 3-5 días antes de administración de cisplatina con el fin de examinar el efecto protector en la cóclea. La prueba de respuesta del tallo cerebral auditivo se repitió 3 días después de la administración de cisplatina. Los umbrales de respuesta del tallo cerebral auditivo se compararon entre pretratamiento y posttratamiento y el cambio en los umbrales está indicado en cuadro 5. Alto cambio en umbrales tras tratamiento con cisplatina es indicador de pérdida más grave de células capilares en la cóclea. Después la repetición de prueba de respuesta del tallo cerebral auditivo, los animales se sacrificaron y las cócleas se retiraron y procesaron por microscopía electrónica de barrido (SEM) para cuantificar pérdida de células capilares exteriores (OHC) en la región de gancho (región de alta frecuencia). El porcentaje de pérdida de células capilares exteriores se calculó dividiendo el número de células pérdidas o gravemente dañadas por el número total de células capilares exteriores en el campo de la fotografía. En el cuadro 5 manifiesta los resultados obtenidos a partir de cuatro animales que sufrieron el daño inducido por císplatina y analizado por pérdida de células capilares en la región del gancho. Como se muestra a partir de los resultados, los animales que recibieron el RNAip dirigido contra p53 ó 801 presentaron menor pérdida de células capilares y menores cambios en el umbral para las señales de 32 kHz. Ambos parámetros indican que RNAip dirigido contra p53 ó 801 es protectora contra daño inducido por císplatina en la cóclea.

CUADRO 5 Pérdida de células capilares frente a cambio en el umbral en cóclea de ratas tratada con císplatina Tratamiento Pérdida de células Respuesta del tallo cerebral capilares extemas (OHC) auditivo (cambio en el umbral a 32 KHz) QC/L RNAip de P53 (Q 5) 50% 10 dB QC/R PBS 100% 30 dB QF/L RNAip de P53 (QM5) 20% 10 dB QF/R GFP 56% 27.5 dB QJ/R RNAip de 801 (REDD14) 20% 17.5 dB QJ/L GFP 100% 27.5 dB QN/L RNAip de 801 (REDD14) 0% 10 dB QN/R PBS 100% 17.5 dB

Claims (36)

1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1. - El uso de un inhibidor del polinucleótido RTP801 para la preparación de un medicamento útil para tratar a un paciente que padece un trastorno auditivo o úlceras de decúbito. 2. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el polinucleótido es un ARNip. 3. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 2, en donde el ARNip comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en una cualquiera de SEQ ID NO: 3-536. 4. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor se selecciona del grupo constituido por un ARNip, un vector que comprende un ARNip, un vector que expresa un ARNip y una molécula que se procesa endógenamente a un ARNip. 5. - Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento para tratar a un paciente que padece un trastorno auditivo. 6. - Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de RTP801 para la preparación de un medicamento útil para promover la recuperación en un paciente que padece úlceras de decúbito. 7. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 5, en donde el trastorno auditivo es traumatismo acústico. 8. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 5 o 6, en donde el inhibidor comprende un polinucleotido que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia de longitud y homología con una secuencia presente en la secuencia de un gen que codifica RTP801 tal como se describe en la SEQ ID NO: 1 suficientes para permitir la hibridación del inhibidor con el gen y evitar la expresión de RTP801 en el paciente. 9. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 5 o 6, en donde el inhibidor de RTP801 es un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo presente en un polipéptido RTP801 que comprende aminoácidos consecutivos, cuya secuencia se describe en SEQ ID NO: 2 e inhibe la actividad del polipéptido RTP801 en el paciente. 10. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 5 o 6, en donde el polinucleotido regula por disminución la expresión de un gen RTP801. 11. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 5 o 6, en donde el polinucleotido es un ARNip. 12. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 11 , en donde el ARNip comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en SEQ ID NO: 3-536. 13. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 9, en donde el inhibidor se selecciona del grupo constituido por un ARNip, un vector que comprende un ARNip, un vector que expresa un ARNip y una molécula que se procesa endógenamente a un ARNip. 14.- Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un ARNip que inhibe la expresión de un gen RTP801 que comprende nucleótidos consecutivos que tienen una secuencia idéntica a cualquier secuencia descrita en SEQ ID NO: 345-536 para la preparación de un medicamento para tratar a un paciente que padece una afección que se selecciona de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular o una lesión o enfermedad de la médula espinal. 15.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 14, en donde la afección es una enfermedad ocular. 16. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 15, en donde la enfermedad ocular es degeneración macular. 17. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 14, en donde la afección es un trastorno respiratorio. 18. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el trastorno respiratorio es EPOC. 19. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el trastorno respiratorio es asma. 20. El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el trastorno respiratorio es bronquitis crónica. 21.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 17, en donde el trastorno respiratorio es enfisema. 22. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 14, en donde la afección es un trastorno microvascular. 23. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde el trastorno microvascular es retinopatía diabética. 24.- El uso como el que se reclama en la reivindicación 22, en donde el trastorno microvascular es insuficiencia renal aguda. 25. - Un compuesto que tiene la estructura: 5' (N)x - Z 3' (cadena no codificante) 3' Z'-(N')y 5' (cadena codificante) en el que cada N y N' es un ribonucleótido que puede estar modificado o no modificado en su resto glucídico y (N)x y (N')y es un oligómero en el que cada N o N' consecutivo está unido al siguiente N o N' mediante un enlace covalente; en el que cada uno de x e y es un número entero entre 19 y 40; en el que cada uno de Z y Z' puede estar presente o ausente, pero si está presente es dTdT y está unido covalentemente en el extremo 3' de la cadena en la que está presente; en el que la secuencia de (N)x comprende una de las secuencias presentes en SEQ ID NO: 345-536. 26. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque el enlace covalente es un enlace fosfodiéster, en el que x = y, preferiblemente en el que x = y = 19, en el que Z y Z' están ambos ausentes, en el que al menos un ribonucleótido está modificado en su resto glucídico en la posición 2', en el que el resto de la posición 2' es metoxi (2'-O-metil) en el que ribonucleotidos alternos están modificados tanto en la cadena no codificante como en la codificante y en el que los ribonucleotidos de los extremos 5' y 3' de la cadena no codificante están modificados en sus residuos glucídicos y los ribonucleótidos en los extremos 5' y 3' de la cadena codificante no están modificados en sus residuos glucídicos. 27. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-26, caracterizado además porque la secuencia de (N)x comprende la secuencia no codificante de SEQ ID NO: 525 o la secuencia no codificante de SEQ ID NO: 528. 28. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado además porque el compuesto carece de un fosfato terminal. 29.- Un compuesto que comprende un oligorribonucleótido, en el que una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, de 5' a 3', la secuencia que se describe en las SEQ ID NO: 441-536 o un homólogo de las mismas en los que una base está alterada en hasta 2 de los nucleótidos de cada región terminal. 30.- Un compuesto que comprende un oligorribonucleótido en el que una cadena comprende nucleótidos consecutivos que tienen, de 5' a 3', la secuencia descrita en las SEQ ID NO: 345-440 en las que, una pluralidad de las bases pueden estar modificadas, preferiblemente mediante una modificación 2-O-metilo, o un homólogo del mismo en el que una base está alterada en hasta 2 de los nucleótidos de cada región terminal. 31.- El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-30, caracterizado además porque comprende un grupo 2" O-Me en el nucleótido primero, tercero, quinto, séptimo, noveno, decimoprimero, decimotercero, decimoquinto, decimoséptimo y decimonoveno de la cadena no codificante y el nucleótido segundo, cuarto, sexto, octavo, décimo, decimosegundo, decimocuarto, decimosexto y decimoctavo de la cadena codificante. 32.- El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-31 , caracterizado además porque el compuesto está fosforilado o no fosforilado. 33. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-32, caracterizado además porque el dinucleotido dTdT está unido covalentemente al extremo 3'. 34. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-33, caracterizado además porque un resto glucídico está modificado en al menos un nucleótido. 35. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado además porque la modificación es una modificación 2 -O-metilo. 36. - El compuesto de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 25-35, caracterizado además porque el grupo 2' OH está reemplazado por un grupo o resto que se selecciona del grupo que comprende -H-OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH2CH3, -NH2 y F. 37.- Uso de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 25-36 para la preparación de un medicamento útil para tratar a un paciente que padece una afección que se selecciona de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular, un trastorno auditivo, úlceras de decúbito o lesión o enfermedad de la médula espinal. 38. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 37, en donde la afección es la enfermedad ocular DMRE. 39. - El uso como el que se reclama en la reivindicación 37, en donde la afección es el trastorno auditivo traumatismo acústico. 40. - Una composición farmacéutica que comprende dos o más compuestos de una cualquiera de las reivindicaciones 25-36. 41. - Una composición farmacéutica que comprende dos o más compuestos, en la que el primer compuesto es un oligorribonucleotido seleccionado de SEQ ID No: 345-536 y el segundo compuesto es un oligorribonucleótido seleccionado de SEQ ID NO: 3-344 o un anticuerpo o aptámero. 42. - La composición de conformidad con la reivindicación 40, caracterizada además porque uno o más de los compuestos es un oligorribonucleótido que se selecciona de SEQ ID NO: 429, 432-434, 436-440, 525, 528-530 y 532-536. 43. - La composición de conformidad con la reivindicación 41 , caracterizada además porque el primer compuesto es un oligorribonucleótido que se selecciona de SEQ ID NO: 429, 432-434, 436-440, 525, 528-530 y 532-536. 44. - La composición de conformidad con la reivindicación 41 , caracterizada además porque el segundo compuesto es un oligorribonucleótido que se selecciona de SEQ ID NO: 16, 24, 25, 27, 29, 41 , 43, 44, 51 , 66, 74, 75, 77, 79, 91 , 93, 94 y 101. 45. - La composición de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 40-44, caracterizada además porque los dos compuestos mencionados están mezclados físicamente en cantidades que generan actividad beneficiosa. 46. - La composición de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 40-44, caracterizada además porque los dos compuestos mencionados están unidos de forma covalente o no covalente. 47. - La composición de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 40-44, caracterizada además porque los dos compuestos mencionados están unidos por un enlazador de ácido nucleico de una longitud que varía en el intervalo de 2-100, preferiblemente 2-50 ó 2-30 nucleótidos. 48. - Uso de una composición de una cualquiera de las reivindicaciones 40-47, para la preparación de un medicamento útil para el tratamiento de un trastorno respiratorio, una enfermedad ocular, un trastorno microvascular, úlceras de decúbito o una lesión o enfermedad de la médula espinal.