JP2009523814A - Ｒｔｐ８０１の阻害剤の治療的使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子および／またはタンパク質の阻害により微小血管障害、眼疾患、呼吸器状態、および聴力障害を処置するための新規の分子、組成物、方法、および使用を提供する。

Description

本明細書を通じて、様々な刊行物および米国特許を含む特許が、著者および発表年ならびに特許番号により参照されている。これらの刊行物ならびに特許および特許出願の開示は、本発明の属する技術水準をより十分に記述するため、その全体が参照によって本願に組み込まれる。
本発明は、ＲＴＰ８０１遺伝子を阻害する新規のｓｉＲＮＡ分子、ならびに全てのタイプの呼吸器疾患（肺疾患を含む）、眼疾患および状態、微小血管障害、血管新生およびアポトーシス−関連状態、ならびに難聴を処置するためのそのような分子の使用に関する。

慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、１６００万人を超える米国人に影響を与えており、米国内で四番目に高い死因である。喫煙が、この衰弱性疾患の最も大きな発症原因であるが、他の環境要因も排除することはできない（Ｐｅｔｔｙ ＴＬ．２００３．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ，ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，ｃｏｕｒｓｅ，ａｎｄ ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＣＯＰＤ．Ｃｌｉｎ．Ｃｏｒｎｅｒｓｔｏｎｅ，５−１０）。

肺気腫はＣＯＰＤの主な兆候である。終末細気管支に対して末梢側にある末梢気腔の恒久的な破壊が、気腫の特徴（ｈａｌｌｍａｒｋ）である（Ｔｕｄｅｒ ＲＭ，ｅｔ ａｌ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒａｃｔ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｄｕｅ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｌｏｃａｄｅ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２９：８８−９７；２００３．）。気腫はまた、細気管支および肺胞構造におけるマクロファージおよび好中球等の炎症細胞の蓄積によっても特徴付けられる（Ｐｅｔｔｙ，２００３）。

気腫の病因は複雑かつ多因子的である。ヒトにおいては、炎症細胞によって産生されるプロテアーゼの阻害剤、例えばアルファ１−アンチトリプシンの欠損が、プロテアーゼ／アンチプロテアーゼの不均衡をもたらし、そのために喫煙（ＣＳ）誘発型の気腫において肺胞細胞外マトリクスの破壊が進行することが示されている（Ｅｒｉｋｓｓｏｎ，Ｓ．１９６４．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ａｎｄ Ａｌｐｈａ１−Ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｓｃａｎｄ １７５：１９７−２０５．Ｊｏｏｓ，Ｌ．，Ｐａｒｅ，Ｐ．Ｄ．，ａｎｄ Ｓａｎｄｆｏｒｄ，Ａ．Ｊ．２００２．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄ Ｗｋｌｙ １３２：２７−３７）。マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）が実験的な気腫において中心的に関与することが、ＣＳの持続的吸引によって引き起こされた気腫に対するマクロファージメタロエラスターゼノックアウトマウスの耐性によって実証されている（Ｈａｕｔａｍａｋｉ，ｅｔ ａｌ：Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｅｌａｓｔａｓｅ ｆｏｒ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７７：２００２−２００４）。さらに、トランスジェニックマウスにおけるインターロイキン−１３の肺での過剰発現は、ＭＭＰおよびカテプシン依存的な気腫を引き起こす（Ｚｈｅｎｇ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ ２０００．Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＩＬ−１３ ｔｏ ｔｈｅ ａｄｕｌｔ ｌｕｎｇ ｃａｕｓｅｓ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ− ａｎｄ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １０６：１０８１−１０９３）。最近の研究は、気腫を引き起こす肺組織の破壊における中隔細胞のアポトーシスの関与を指摘している（Ｒａｎｇａｓａｍｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｒｆ２ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｄｕｃｅｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｔｏ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｎｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ．；Ｔｕｄｅｒ ＲＭ ｅｔ ａｌ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒａｃｔ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｄｕｅ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｌｏｃａｄｅ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２９：８８−９７；２００３．；Ｙｏｋｏｈｏｒｉ Ｎ，Ａｏｓｈｉｂａ Ｋ，Ｎａｇａｉ Ａ，Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｗａｌｌ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ｃｈｅｓｔ．２００４ Ｆｅｂ；１２５（２）：６２６−３２．；Ａｏｓｈｉｂａ Ｋ，Ｙｏｋｏｈｏｒｉ Ｎ，Ｎａｇａｉ Ａ．，Ａｌｖｅｏｌａｒ ｗａｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃａｕｓｅｓ ｌｕｎｇ ｄｅｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａｔｏｕｓ ｃｈａｎｇｅｓ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００３ Ｍａｙ；２８（５）：５５５−６２．）。

気腫における肺破壊の両方の経路の基礎をなすメカニズムの中でも、活性酸素種（ＲＯＳ）の過剰な形成がまず最初に言及されるべきものである。喫煙者の血液および肺組織において酸化促進物質／抗酸化物質の不均衡があることがよく確認されている（Ｈｕｌｅａ
ＳＡ，ｅｔ ａｌ：Ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｉｎｇ ｃａｕｓｅｓ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｔｈａｔ ａｒｅ ｓｕｇｇｅｓｔｉｖｅ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ：ａ ｃａｓｅ−ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｕｄｙ．Ｊ Ｅｎｖｉｒｏｎ Ｐａｔｈｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ．１９９５；１４（３−４）：１７３−８０．；Ｒａｈｍａｎ Ｉ，ＭａｃＮｅｅ Ｗ．Ｌｕｎｇ ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｉｒｗａｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ．１９９９ Ｄｅｃ；２７７（６ Ｐｔ １）：Ｌ１０６７−８８．；ＭａｃＮｅｅ Ｗ．Ｏｘｉｄａｎｔｓ／ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ ａｎｄ ＣＯＰＤ．Ｃｈｅｓｔ．２０００ Ｍａｙ；１１７（５ Ｓｕｐｐｌ １）：３０３Ｓ−１７Ｓ．；Ｍａｒｗｉｃｋ ＪＡ，Ｋｉｒｋｈａｍ Ｐ，Ｇｉｌｍｏｕｒ ＰＳ，Ｄｏｎａｌｄｓｏｎ Ｋ，ＭａｃＮＥＥ Ｗ，Ｒａｈｍａｎ Ｉ．Ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ＴＧＦ−ｂｅｔａ１ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｐ２１ｗａｆ１／ｃｉｐ１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ａｌｖｅｏｌａｒ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ．Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．２００２ Ｎｏｖ；９７３：２７８−８３．；Ａｏｓｈｉｂａ Ｋ，Ｋｏｉｎｕｍａ Ｍ，Ｙｏｋｏｈｏｒｉ Ｎ，Ｎａｇａｉ Ａ．Ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ｌｕｎｇｓ ａｆｔｅｒ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ ｅｘｐｏｓｕｒｅ．Ｉｎｈａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００３ Ｓｅｐ；１５（１０）：１０２９−３８．；Ｄｅｋｈｕｉｊｚｅｎ ＰＮ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｎ−ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ：ｔｈｅｉｒ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｉｎ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ．２００４ Ａｐｒ；２３（４）：６２９−３６．；Ｔｕｄｅｒ ＲＭ，Ｚｈｅｎ Ｌ，Ｃｈｏ ＣＹ，Ｔａｒａｓｅｖｉｃｉｅｎｅ−Ｓｔｅｗａｒｔ Ｌ，Ｋａｓａｈａｒａ Ｙ，Ｓａｌｖｅｍｉｎｉ Ｄ，Ｖｏｅｌｋｅｌ ＮＦ，ａｎｄ Ｆｌｏｒｅｓ ＳＣ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｔｅｒａｃｔ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｄｕｅ ｔｏ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｂｌｏｃａｄｅ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２９：８８−９７；２００３．）。マウスをＣＳに１時間曝露すると、肺胞上皮細胞、特にＩＩ型において８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン（８−ＯＨｄＧ）の劇的な上昇が見られる（上記のＩｎｈａｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．２００３ Ｓｅｐ；１５（１０）：１０２９−３８．参照のこと）。

過剰に生成した活性酸素種は、直接的なＤＮＡ損傷作用およびアポトーシスシグナル伝達経路の活性化に起因する細胞傷害活性を示すことが知られている（Ｔａｋａｈａｓｈｉ
Ａ，Ｍａｓｕｄａ Ａ，Ｓｕｎ Ｍ，Ｃｅｎｔｏｎｚｅ ＶＥ，Ｈｅｒｍａｎ Ｂ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｃａｓｐａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ Ｂｃｌ−２−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｐＨ（ｐＨｍ）．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ Ｂｕｌｌ．２００４ Ｆｅｂ １５；６２（６）：４９７−５０４．；Ｔａｎｉｙａｍａ Ｙ，Ｇｒｉｅｎｄｌｉｎｇ ＫＫ．Ｒｅａｃｔｉｖｅ ｏｘｙｇｅｎ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．２００３ Ｄｅｃ；４２（６）：１０７５−８１．Ｅｐｕｂ ２００３ Ｏｃｔ ２７．；Ｈｉｇｕｃｈｉ Ｙ．Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｉｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｓｔｒｅｓｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００３ Ｏｃｔ １５；６６（８）：１５２７−３５．；Ｐｕｎｊ Ｖ，Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｙ ＡＭ．Ｒｅｄｏｘ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ：ａｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２００３ Ａｐｒ；５（４）：２２５−３１．；Ｕｅｄａ Ｓ，Ｍａｓｕｔａｎｉ Ｈ，Ｎａｋａｍｕｒａ Ｈ，Ｔａｎａｋａ Ｔ，Ｕｅｎｏ Ｍ，Ｙｏｄｏｉ Ｊ．Ｒｅｄｏｘ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ．Ａｎｔｉｏｘｉｄ Ｒｅｄｏｘ Ｓｉｇｎａｌ．２００２ Ｊｕｎ；４（３）：４０５−１４．）。

ＲＯＳはそれ自体が細胞傷害性というだけでなく、炎症促進刺激因子であり、レドックス感受性の転写因子であるＮＦκＢおよびＡＰ−１の強力な活性化因子である（Ｒａｈｍａｎ Ｉ．Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｉｎ ａｓｔｈｍａ ａｎｄ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ：ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｔａｒｇｅｔｓ．Ｃｕｒｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ Ｉｎｆｌａｍｍ Ａｌｌｅｒｇｙ．２００２ Ｓｅｐ；１（３）：２９１−３１５．においてレビューされている）。両方の転写因子は、その後、炎症促進性サイトカイン（Ｒｅｎａｒｄ Ｐ，Ｒａｅｓ Ｍ．Ｔｈｅ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＮＦｋａｐｐａＢ：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．１９９９；１５（６）：３４１−４．；Ｌｅｎｔｓｃｈ ＡＢ，Ｗａｒｄ ＰＡ．Ｔｈｅ ＮＦｋａｐｐａＢｂ／ＩｋａｐｐａＢ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）．２０００；４８（２）：５９−６３においてレビューされている）およびマトリクス分解性プロテイナーゼ（Ａｎｄｅｌａ ＶＢ，Ｇｏｒｄｏｎ ＡＨ，Ｚｏｔａｌｉｓ Ｇ，Ｒｏｓｉｅｒ ＲＮ，Ｇｏａｔｅｒ ＪＪ，Ｌｅｗｉｓ ＧＤ，Ｓｃｈｗａｒｚ ＥＭ，Ｐｕｚａｓ ＪＥ，Ｏ'Ｋｅｅｆｅ ＲＪ．ＮＦｋａｐｐａＢ：ａ ｐｉｖｏｔａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｔｏ ｂｏｎｅ．Ｃｌｉｎ Ｏｒｔｈｏｐ．２００３ Ｏｃｔ；（４１５ Ｓｕｐｐｌ）：Ｓ７５−８５．；Ｆｌｅｅｎｏｒ ＤＬ，Ｐａｎｇ ＩＨ，Ｃｌａｒｋ ＡＦ．Ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ＡＰ−１ ｉｎ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１ａｌｐｈａ−ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ＭＭＰ−３ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｔｒａｂｅｃｕｌａｒ ｍｅｓｈｗｏｒｋ ｃｅｌｌｓ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００３ Ａｕｇ；４４（８）：３４９４−５０１．；Ｒｕｈｕｌ Ａｍｉｎ ＡＲ，Ｓｅｎｇａ Ｔ，Ｏｏ ＭＬ，Ｔｈａｎｔ ＡＡ，Ｈａｍａｇｕｃｈｉ Ｍ．Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ−９ ｂｙ ｔｈｅ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ＩＬ−１ｂｅｔａ：ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｕａｌ ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ，Ａｋｔ ａｎｄ Ｅｒｋ．Ｇｅｎｅｓ Ｃｅｌｌｓ．２００３ Ｊｕｎ；８（６）：５１５−２３．）の転写の刺激に大きく関与する。炎症促進性サイトカインは、その後、同様にマトリクス分解酵素、サイトカイン、および活性酸素種を分泌する炎症細胞の誘引物質として作用する。従って、例えばＣＳ等の病原因子が、病理学的ネットワークの引き金を引き、このネットワークにおいて活性酸素種が肺破壊の主要なメディエーターとして作用するようである。タバコ煙の吸引に起因する活性酸素種（ＲＯＳ）および炎症細胞により内因的に形成されるＲＯＳは両方とも、肺内オキシダント負荷（ｉｎｔｒａｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｏｘｉｄａｎｔ ｂｕｒｄｅｎ）の増加の一因となる。

ＣＯＰＤの病因に関するさらなる病原因子の一つとして、気腫患者の肺におけるＶＥＧＦおよびＶＥＧＦＲＩＩの発現の減少が観察されている（Ｙａｓｕｎｏｒｉ Ｋａｓａｈａｒａ，Ｒｕｂｉｎ Ｍ．Ｔｕｄｅｒ，Ｃａｒｌｙｎｅ Ｄ．Ｃｏｏｌ，Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｌｙｎｃｈ，Ｓｏｎｉａ Ｃ．Ｆｌｏｒｅｓ，ａｎｄ Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｆ．Ｖｏｅｌｋｅｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｉｎ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ Ｖｏｌ １６３．ｐｐ７３７−７４４，２００１）。さらに、化学的なＶＥＧＦＲ阻害剤を用いたＶＥＧＦシグナルの阻害は、肺胞中隔の内皮細胞、およびその後に上皮細胞のアポトーシスを、おそらくは肺胞における両タイプの細胞の密接な構造的／機能的なつながりを破壊することによって誘発させる（Ｙａｓｕｎｏｒｉ Ｋａｓａｈａｒａ，Ｒｕｂｉｎ Ｍ．Ｔｕｄｅｒ，Ｌａｉｍｕｔｅ Ｔａｒａｓｅｖｉｃｉｅｎｅ−Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｄ．Ｌｅ Ｃｒａｓ，Ｓｔｅｖｅｎ Ａｂｍａｎ，Ｐｅｔｅｒ Ｋ．Ｈｉｒｔｈ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，ａｎｄ Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｆ．Ｖｏｅｌｋｅｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｃａｕｓｅｓ ｌｕｎｇ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０６：１３１１−１３１９（２０００）．；Ｖｏｅｌｋｅｌ ＮＦ，Ｃｏｏｌ ＣＤ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖａｓｃｕｌａｒ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｉｎ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｕｒ Ｒｅｓｐｉｒ Ｊ Ｓｕｐｐｌ．２００３ Ｎｏｖ；４６：２８ｓ−３２ｓ）。

黄斑変性
米国における６５歳以上の個体における矯正視力の低下の最も多い原因は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）として知られている網膜障害である。ＡＭＤが進行するにつれて、この疾患は鮮明な中心視の喪失により特徴付けられる。ＡＭＤによる影響を受ける眼の領域は、黄斑（主として光受容細胞で構成される網膜の中心の小さな領域）である。ＡＭＤ患者の約８５％〜９０％を占める、いわゆる「萎縮型ＡＭＤ」は、眼の色素の分布の変化、光受容器の喪失、および全体的な細胞の衰退による網膜機能の減弱化を伴う。いわゆる「滲出
型」ＡＭＤは、網膜下領域における血塊および瘢痕をもたらす異常な脈絡膜血管の増殖を伴う。従って、滲出型ＡＭＤの発症は、神経網膜下での異常な脈絡膜血管新生網の形成（脈絡膜新生血管形成、ＣＮＶ）が原因で起こる。新しく形成された血管は非常に漏出を起こし易い。このため網膜下液および血液が蓄積され、視界の明瞭さが失われる。最終的に、脈絡膜および網膜を巻き込んだ大円板状の瘢痕が形成されると、関係する領域において機能的な網膜が完全に失われる。萎縮型ＡＤ患者は、悪化するものの視力を維持する場合があるが、滲出型ＡＭＤはしばしば失明を引き起こす（Ｈａｍｄｉ ＆ Ｋｅｎｎｅｙ，Ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ Ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ − ａ ｎｅｗ ｖｉｅｗｐｏｉｎｔ，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，ｅ３０５−３１４，Ｍａｙ ２００３）。ＣＮＶは滲出型ＡＭＤにおいてだけでなく、他の眼の病変、例えば眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症（ａｎｇｉｏｄ ｓｔｒｅａｋｓ）、ブルッフ膜における断裂、近視性変性、眼の腫瘍、および一部の網膜変性疾患においても見られる。

様々な研究が行われ、いくつかのＡＭＤの危険因子、例えば喫煙、老化、家族歴（Ｍｉｌｔｏｎ，Ａｍ Ｊ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ ８８，２６９（１９７９）；Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １０２，１４５０−１４６０（１９９５）；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １０８，６９７−７０４（２００１））、性別（女性は可能性が７倍高い；Ｋｌｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ ９９，９３３−９４３（１９９２））、および人種（白人が最も感受性がある）が決定された。さらなる危険因子には、遠視（ｆａｒｓｉｇｈｔｅｄｎｅｓｓ）（遠視（ｈｙｐｅｒｏｐｉａ））および淡色の眼等の眼の特徴ならびに心血管疾患および高血圧が含まれ得る。この疾患の発症進行における遺伝子的な関与の証拠も示されている（上記のＨａｍｄｉ ＆ Ｋｅｎｎｅｙを参照のこと）。

二つの企業、Ａｃｕｉｔｙ ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよびＳｉｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓは共に、最近、ＡＭＤ治療用の、それぞれＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ−Ｒ１（Ｆｌｔ−１）を阻害するｓｉＲＮＡ分子に関するＩＮＤを申請した。これらの分子は、それぞれ、Ｃａｎｄ５阻害剤および０２７阻害剤と名付けられている。

微小血管障害
微小血管障害は、主として微小毛細血管およびリンパ管に影響し、従って直接的な外科的介入の範囲外である大グループの状態で構成される。微小血管疾患は、大まかに、血管痙攣、脈管炎、およびリンパ管閉塞に分類できる。さらに、多くの公知の血管状態が、それらに微小血管的要素を有する。
・血管痙攣疾患 − 血管痙攣疾患は、未知の理由で末梢の血管収縮性の反射が過敏になる一群の比較的一般的な状態である。これにより、不適当な血管収縮および組織虚血（組織欠損のポイントに対してさえも）が起こる。血管痙攣の症状は通常、温度または振動系機器の使用に関係するものであるが、他の状態から続発する場合もある。
・脈管炎疾患 − 脈管炎疾患は、微小循環における一次炎症プロセスを伴う疾患である。脈管炎は通常、自己免疫障害または結合組織障害の一要因であり、一般的には外科的処置に適さないが、症状が重い場合は免疫抑制処置が必要となる。
・リンパ管閉塞疾患 − 下肢および上肢の慢性的膨脹（リンパ水腫）は、末梢リンパ管閉塞の結果である。これは、多くの原因（いくつかは遺伝性であり、いくつかは獲得性である）を有する比較的稀な状態である。処置の中心となるのは、ぴったりフィットする圧迫衣（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇａｒｍｅｎｔｓ）および断続圧迫装置の使用である。

糖尿病に付随する微小血管病変
糖尿病は、失明の最大の原因であり、切断術および不能症の一番の原因であり、かつ最
も頻繁に起こる慢性的な小児疾患の一つである。糖尿病は、米国における末期腎疾患の最大の原因でもあり、他の腎疾患と比べて３１％という有病率である。糖尿病はまた、最もよく使われる腎臓移植の適応症であり、全移植手術の２２％を占める。

一般的に、糖尿病性合併症は、大まかに、微小血管疾患または大血管疾患に分類することができる。微小血管系の合併症には、神経障害（神経損傷）、腎症（腎疾患）、および視覚障害（例えば網膜症、緑内障、白内障、および角膜疾患）が含まれる。網膜、糸球体、および神経脈管においても、同様の病態生理学的特徴が、糖尿病特異的な微小血管疾患を特徴付ける。

糖尿病に付随する微小血管病変は、例えば長期間糖尿病を有する患者において発症し得る最小の血管（毛細血管）の疾患と定義される。血管壁は、異常に厚く、しかし弱くなる。従って、患者らは、出血し、タンパク質を漏出させ、体内の血流を緩慢にする。

臨床データおよび動物モデルのデータは、全てのタイプの糖尿病性微小血管疾患において、慢性的な高血糖が中心的な開始因子であることを示している。高血糖の持続期間および規模の両方が、糖尿病性微小血管疾患の程度および進行速度に強く相関する。全ての糖尿病細胞が高レベルの血漿グルコースにさらされるが、高血糖による損傷は細胞内高血糖を発症する細胞型（例えば内皮細胞）に限定される。内皮細胞は、多くの他の細胞と異なり、細胞外高血糖にさらされた際にグルコース輸送をダウンレギュレートすることができないために、細胞内高血糖を発症する。細胞内高血糖は糖尿病性の病変にとって必要十分であることは、通常のグルコース環境下で培養したメサンギウム細胞におけるＧＬＵＴ１グルコース輸送体の過剰発現が糖尿病の表現型を模倣し、糖尿病性高血糖と同じＩＶ型コラーゲン、Ｉ型コラーゲン、およびフィブロネクチン遺伝子の発現の増加を誘発するという事実によってさらに実証される。

異常な内皮細胞機能：真性糖尿病の過程における初期の、構造的な変化が顕在化する前に、高血糖は、網膜、糸球体、および末梢神経の神経脈管において血流および血管透過性の異常を引き起こす。血流および毛細血管内圧の増加は、毛細血管床の輸出側における高血糖誘発型の一酸化窒素（ＮＯ）産生の低下を、そしておそらくはアンギオテンシンＩＩに対する感受性の増加を反映していると考えられる。毛細血管内圧の上昇および内皮細胞の機能障害の結果として、網膜毛細血管はフルオレセインの漏出の増加を示し、糸球体毛細血管は高値のアルブミン排出率（ＡＥＲ）を示す。末梢神経の脈管の脈管においてもそれに匹敵する変化が起こる。糖尿病の過程の初期における透過性の亢進は可逆的であるが；時間の経過と共に不可逆的になる。

血管壁タンパク質蓄積の増加
糖尿病性微小血管疾患に共通の病態生理学的特徴は、血管腔が徐々に狭窄し最終的には閉塞してしまうことで、灌流およびその影響を受けた組織の機能が不十分になることである。初期高血糖誘発型の微小血管の高血圧および血管透過性の亢進は、三つのプロセスによって不可逆的な微小血管閉塞の一因となる：
・第一は、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）陽性の、糖質を含有する血漿タンパク質の異常な漏出であり、このタンパク質は毛細血管壁に沈着し、血管周囲細胞、例えば周皮細胞およびメサンギウム細胞を刺激して増殖因子および細胞外マトリクスを産生させ得る。
・第二は、増殖因子、例えばトランスフォーミング増殖因子β１（ＴＧＦ−β１）の管外遊出であり、これによって細胞外マトリクス成分の過剰産生が直接的に刺激され、特定の合併症に関係する細胞型においてはアポトーシスが誘発され得る。
・第三は、内皮細胞および支持細胞による病的な遺伝子発現の高血圧誘発型の刺激であり、これにはｇｌｕｔ−１グルコース輸送体、成長因子、成長因子受容体、細胞外マトリクス成分、および循環白血球を活性化できる接着分子が含まれる。糖尿病性微小血管疾患
の重症度における片側的な減少が眼および腎臓の動脈狭窄と同じ側で起きるという観察は、この概念と一致する。

微小血管細胞の喪失および血管閉塞
糖尿病性微小血管腔の進行性の狭窄および閉塞はまた、微小血管細胞の喪失を伴う。真性糖尿病は、網膜において、ミューラー細胞および神経節細胞、周皮細胞、ならびに内皮細胞のプログラム細胞死を誘発する。糸球体においては、腎機能の低下が、広範囲の毛細血管の閉塞および有足突起の喪失に関連するが、糸球体細胞の喪失の基礎をなすメカニズムは分かっていない。神経脈管においては、内皮細胞および周皮細胞の変性が起こり、これらの微小血管の変化は、糖尿病性末梢神経障害の発症の前に起こるようである。糖尿病における軸索変性の多病巣的分布は、微小血管閉塞の主因的な役割を裏付けるものであるが、高血糖誘発型のニューロトロフィン減少もまた、正常な軸索の修復および再生を妨げることによって一因となり得る。

糖尿病性微小血管疾患の別の共通の特徴は、高血糖の記憶（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃ ｍｅｍｏｒｙ）、すなわち後続する正常なグルコース恒常性の期間における高血糖誘発型微小血管変化の持続または進行、と称されている。この現象の最も顕著な例は、２．５年間の高血糖期の後の２．５年間の正常化血糖期全体で起こった、糖尿病のイヌの組織学的には正常な眼における重度の網膜症の発症である。インビボでは、選択されたマトリクス遺伝子の転写における高血糖誘発型の増加もまた、正常血糖の回復後数週間の間持続し、培養内皮細胞においては、程度は小さいが同質の、選択されたマトリクス遺伝子の転写における高血糖誘発型の増加の延長が起こる。

さらなる情報については、「Ｓｈａｒｅｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ
ｄｉａｂｅｔｅｓ」（Ｌａｒｓｅｎ：Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１０ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ（ｃ）２００３ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ）を参照のこと。

微小血管合併症は、顕性糖尿病において起こるだけでなく、耐糖能異常（ＩＧＴ）によっても起きる。ＩＧＴの微小血管合併症：神経障害、網膜症、腎性微量蛋白尿（ｒｅｎａｌ ｍｉｃｒｏｐｒｏｔｅｉｎｕｒｉａ）。

糖尿病性神経障害
糖尿病性神経障害は、真性糖尿病に伴なう神経因性障害（末梢神経の損傷）である。これらの状態は通常、神経に供給する小血管（神経脈管）が関係する糖尿病性微小血管傷害に起因する。比較的共通する、糖尿病性神経障害に伴ない得る特徴には、第三神経の麻痺；単神経障害；多発性単神経炎；糖尿病性筋萎縮症；苦痛を伴う多発神経障害；自律神経障害；および胸腹部神経障害（ｔｈｏｒａｃｏａｂｄｏｍｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ）、ならびに最も一般的な形態である、主に足および脚に影響する末梢性神経障害が含まれる。糖尿病性神経障害の発症には４つの要因：微小血管疾患、最終糖化産物、プロテインキナーゼＣ、およびポリオール経路、が関係する。

糖尿病性神経障害における微小血管疾患
血管疾患および神経疾患は、密接に関連し、結び付く。血管は正常な神経機能に依存し、神経は十分な血流に依存している。微小血管系における最初の病理学的変化は血管狭窄である。この疾患が進行するにつれて、神経細胞の機能障害は、血管の異常の進行、例えば、酸素分圧の低下および低酸素の一因となる毛細血管基底膜の肥厚化および内皮の過形成と密接に相関するようになる。神経細胞虚血は、糖尿病性神経障害のよく知られた特徴である。血管拡張剤（例えばアンギオテンシン変換酵素阻害剤、アルファ１アンタゴニスト）は、神経細胞の血流を大きく改善させると共に、それに対応して神経伝導速度を改善させることができる。従って、微小血管の機能障害は、糖尿病の初期に起こり、神経の機能障害の進行と並行し、かつ糖尿病性神経障害において観察される構造的、機能的、および臨床的変化の重症度を支えるのに十分であり得る。末梢性神経障害（脚）、感覚運動神経障害は、糖尿病における下腿潰瘍の病理の重要な要素である。

神経障害は、糖尿病の一般的な合併症であり、時間の経過と共に２型糖尿病患者の半数以上で起きる。神経伝導研究は、神経障害が糖尿病診断時に患者の１０〜１８％ですでに存在することを実証しており、このことは末梢神経傷害が疾患の初期段階で軽度の血糖調節異常と共に起こることを示唆している。神経障害が糖尿病の初期の臨床的徴候であるという考え方は、４０年以上前に提唱されており、大部分の研究は、ＩＧＴと神経障害との間の関連性を報告している。ＩＧＴおよび付随する神経障害を有する大部分の患者は、顕著な神経因性疼痛を伴う対称性遠位性多発神経障害を有する。ＩＧＴ神経障害（Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｐａｉｒｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ − Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｊ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ，ｉｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ １，２００３）は、表現型的には、初期の糖尿病性神経障害と類似し、これも疼痛を含む感覚症状および自律神経機能障害の原因となる。６６９名の初期糖尿病性神経障害患者の調査においては、感覚症状が６０％以上で、不能症がほぼ４０％で、そして他の自律神経の障害が３３％で見られたが、運動障害の証拠はわずか１２％でしか見られなかった。これらの臨床所見は、疼痛、温度、および自律神経系のシグナルを伝える小さな無髄神経線維の顕著な初期障害を示唆している。皮膚生検からの無髄表皮内神経線維の直接的な定量は、ＩＧＴおよび初期糖尿病に伴なう神経障害を有する患者における類似の線維の喪失および形態変化を示している。

自律神経系の機能障害、特に勃起不全および心臓迷走神経反射の変化は、糖尿病における神経障害性損傷に共通の早期の特徴である。ＩＧＴ患者の研究は、よく見られる迷走神経性自律神経障害も示唆しており：別の研究により、同年齢の血糖正常コントロール被験者よりも大きい割合のＩＧＴ患者において、運動後の心拍数の回復に異常があり、深呼吸の際のＲ−Ｒ間隔の変動が鈍化しており、および呼気対吸気比が減少していること（全て迷走神経性自律神経障害において測定）が見出されている。

糖尿病における神経損傷は、運動、感覚、および自律神経線維に影響する。運動神経障害は、筋肉の衰弱、萎縮、および不全麻痺の原因となる。感覚神経障害は、痛み、圧、および熱に対する防御感覚を喪失させる。痛みが存在しないと、無感覚な足において、潰瘍化、不顕性外傷（ｕｎｐｅｒｃｅｉｖｅｄ ｔｒａｕｍａ）、およびシャルコー神経性関節症（Ｃｈａｒｃｏｔ ｎｅｕｒｏａｒｔｈｒｏｐａｔｈｙ）を含む多くの問題が生じる。患者は、創傷が進行するまで処置を求めない可能性がある。感覚・運動機能障害の合併は、患者の足に異常なストレスを加え、これが外傷を生じさせ、これにより感染が引き起こされる可能性がある。自律神経系の交感神経性神経障害は、血管拡張および発汗の減少の原因となり、これにより足が高温で過度に乾燥した状態となり、特に皮膚の崩壊および微小血管の流れにおける機能的変化を起こし易くなる。自律神経機能障害（および皮膚構造の脱神経）はまた、皮膚の完全性を損わせ、微生物の侵入にとって申し分のない部位を与える。神経障害性の足は自然に潰瘍化せず；むしろそれは神経障害に付随するいくつかの形態の外傷の組み合わせである。

微小血管の機能障害は、糖尿病の初期に起こり、神経の機能障害の進行と並行し、かつ糖尿病性神経障害において観察される構造的、機能的、および臨床的変化の重症度を支えるのに十分であり得る。

最終糖化産物 − 高い細胞内グルコースレベルは、タンパク質との非酵素的共有結合をもたらし、これによってそれらの構造が変化し機能が破壊される。これらの糖化タンパク質の一部は、糖尿病性神経障害および糖尿病の他の長期合併症の病理に関与する。

プロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ） − ＰＫＣは糖尿病性神経障害の病理に関与する。グルコースレベルの上昇は、細胞内ジアシルグリセロールを増加させ、これによってＰＫＣが活性化される。動物モデルにおいて、ＰＫＣ阻害剤は、神経細胞の血流を増加させることによって神経伝導速度を増加させる。

知覚運動性多発性神経障害
神経伝導速度は神経の長さに比例して遅くなるので、神経線維が長いほど短い線維よりも大きな影響を受ける。この症候群において、感覚の低下および反射の喪失は、最初に両側の足指において起こり、次いで上方に拡大していく。これは通常、しびれ感、感覚の喪失、知覚異常、および夜間の痛みのグローブストッキング型の分布と表現される。その痛みは、灼けつくような痛み、突き刺すような感覚、疼く痛み、または鈍い痛みであり得る。ピンおよび針で刺した感覚が一般的である。固有感覚、すなわち四肢が空間的にどこにあるかの感覚の喪失が、初期に起こる。これらの患者は、破片等の異物をいつ踏んだのか、またはいつフィットしない靴によりべんちが生じたのかを感じることができない。その結果、これらの患者は、足および脚において潰瘍および感染を引き起こす危険性があり、そのために切断術が行われる可能性がある。同様に、これらの患者は、膝、足首、または足において多発骨折を起こす可能性があり、かつシャルコー関節を発症する可能性がある。運動機能の喪失は、足指の背屈拘縮、いわゆる槌状足指を引き起こす。これらの拘縮は、足だけでなく手においても起こる。

自律神経神経障害
自律神経系は、心臓、消化管、および泌尿系を司る神経で構成される。自律神経神経障害は、これらの器官系のいずれかに影響し得る。糖尿病において最も一般的に認められる自律神経の機能障害は、起立性低血圧、すなわち患者の起立時の不快な失神感である。糖尿病性自律神経神経障害の症例では、これは心臓および動脈が、脳への血液の継続的かつ十分な流入を維持するための心拍数および血管緊張を適切に調節することができないことに起因する。この症状は、通常、洞性呼吸性変動（ｓｉｎｕｓ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ
ｖａｒｉａｔｉｏｎ）の喪失、すなわち常な呼吸の際に見られる心拍数の通常の変化の喪失を伴う。これら二つの所見が認められる場合、心臓自律神経神経障害が存在する。

消化管の症状には、胃内容排出の遅延、胃不全麻痺、悪心、鼓脹、および下痢が含まれる。多くの糖尿病患者は経口投薬を行うので、これらの医薬の吸収は、胃内容排出の遅延によって大きな影響を受ける。これは、血糖が正常またはすでに低いときに、経口糖尿病薬を食事前に摂取し数時間またはしばしば数日後まで吸収されない場合、低血糖を引き起こし得る。小腸の活動の緩慢化は細菌が過剰増殖の原因となり得、これは高血糖の存在により悪化する。これは鼓脹、ガス発生、および下痢の原因となる。

泌尿器の症状には、頻尿、尿意切迫、失禁、および貯留が含まれる。ここでも、糖尿（ｓｗｅｅｔ ｕｒｉｎｅ）の貯留により、尿路の感染が頻発する。尿閉は、膀胱憩室、結石、逆流性腎症を引き起こし得る。

脳神経障害
脳神経が影響を受けた場合は、動眼神経（第三）神経障害が最も一般的である。動眼神経は、外側直筋および上斜筋を除く、眼球を動かす全ての筋肉を制御している。動眼神経はまた、瞳孔を収縮し眼瞼を開く役割も果たす。糖尿病性の第三神経麻痺の発症は通常突発的なものであり、前頭骨または眼窩周囲の疼痛から始まり、その後に複視が起こる。第
三神経により神経支配される動眼筋の全てが、瞳孔の大きさを制御する神経を除いて、影響を受ける可能性がある。眼の外側直筋（眼を横方向に動かす）を神経支配する第六神経である外転神経もまた、多くの場合に影響を受けるが、第四神経である滑車神経（眼を下方向に動かす上斜筋を神経支配する）が関わることは通常ない。胸髄神経または腰髄神経の単神経障害は、発症すると、心筋梗塞、胆嚢炎、または虫垂炎に似た疼痛性症候群の原因となり得る。糖尿病患者は、絞扼性神経障害、例えば手根管症候群の出現率が高い。

糖尿病性肢虚血および糖尿病性足潰瘍
糖尿病および圧迫は微小血管の循環を損なわせ、下肢の皮膚の変化を引き起し、次いで潰瘍の形成およびそれに続く感染をもたらし得る。微小血管の変化は、肢筋肉の微小血管障害、ならびに末梢虚血を発症する素因および虚血イベントに対する血管新生の補償反応の減少を引き起す。微小血管の病理は、末梢血管疾患（ＰＶＤ）（または末梢動脈疾患（ＰＡＤ）もしくは下肢動脈疾患（ＬＥＡＤ） − 大血管の合併症 − アテローム硬化による脚動脈の狭窄）を悪化させる。ＰＶＤは、糖尿病の初期に発症し、より重度でより広範囲に及び、しばしば脚、眼、および腎臓に影響する併発性の微小循環の障害に関係する。

足潰瘍および壊疽は、頻発するＰＡＤの共存症である。感覚損傷を伴う同時発症性の末梢神経障害は、外傷、潰瘍化、および感染に対する足の感受性を高める。糖尿病におけるＰＡＤの進行は、末梢神経障害および疼痛および外傷に対する足および下肢の無感覚等の共存症により悪化する。循環が損なわれ感覚が損なわれることによって、潰瘍形成および感染が起こる。骨髄炎および壊疽まで進行すれば、切断術が必要となる場合がある。

糖尿病を有する人は、非糖尿病の人の最大２５倍、下肢切断術を受ける可能性が高く、これは、足潰瘍およびその後の肢喪失を防止する必要性を強調するものである。糖尿病性の足潰瘍は、ＰＡＤと共に起こるだけでなく、神経障害、静脈不全（静脈瘤）、外傷、および感染に付随して起こる場合もある。ＰＡＤは、足潰瘍の発生または促進において、これらの他の状態の一因となる。足潰瘍は、十分な臨床的末梢動脈灌流下でも起こり得るので、必ずしもＰＡＤの進行を表すものではない。患者ベースの研究は、末梢神経障害および高い足底圧を有する糖尿病患者において足潰瘍の危険が増加することを示している。南ウィスコンシンにおける集団ベースの研究において、足または足首における潰瘍またはびらんの有病歴は、全糖尿病患者の１５％であった。この有病率は、３０歳未満で診断された糖尿病患者に高く、女性（１３％）よりも男性（１６％）においてわずかに高く、インスリンを投与されていない患者（１０％）よりもインスリン処置を受けた糖尿病患者（１７％）において高かった。有病率は年齢と共に高くなり、特に３０歳未満で診断された糖尿病患者において高かった。欧州の患者研究においては、糖尿病患者における足潰瘍の有病率は、５０歳未満の患者で３％、６０歳未満の患者で７％、そして８０歳未満の患者で１４％であった。７０歳での有病率は、女性よりも男性において高かった。

糖尿病患者にとって、足の虚血および感染は深刻であり、生命を脅かすこもさえあるが；神経障害は処置するのが最も困難な状態である。糖尿病足の臨床的および病理学的な発現の全ての側面に関する医学的および外科的な文献は多数ある。神経障害、血管障害、網膜症、および腎症は、単独でまたは合併でおよび多様な程度に、糖尿病足の処置に影響し得る。

毎年、真性糖尿病患者において、８２,０００例の肢切断術が行われている。これらの切断術の大部分は、老齢集団において行われている。糖尿病が原因の切断術は、足潰瘍、虚血、静脈性下腿潰瘍（すなわち静脈の逆流に続発する潰瘍）、および踵潰瘍（すなわち踵における未処置の圧迫潰瘍から生じる潰瘍）を含む複数の病因のために行われ得る。これらの切断術の大部分は、潰瘍が原因である。糖尿病患者における足潰瘍の有病率は１２
％である。加えて、１型糖尿病患者における下肢潰瘍の２０年間累積発生率は９．９％である。糖尿病に起因する肢切断術は、５年以内の死亡率が３９％〜６８％であり、さらなる切断術の危険を伴う。糖尿病性足潰瘍患者の入院期間は、潰瘍を有さない患者と比較しておよそ６０％長い。

糖尿病性神経障害は、健常なＣ線維の侵害受容器機能に依存して、痛刺激に反応して局所的な血管拡張を起こす神経軸索反射を損なわせる。この状態はさらに、糖尿病性神経障害の足において、ストレス条件下、例えば外傷または炎症下で見られる血管拡張反応を損なわせる。この損傷は、下肢血管再生が成功した場合であっても糖尿病性神経障害の足における一部の潰瘍の治癒が遅いまたは全く治癒しない理由を部分的に説明している。

従って、最も一般的な糖尿病性足潰瘍への原因経路は、神経障害（感覚喪失）、変形（例えば突出した中足骨骨頭）、および外傷（例えばフィットしない履物）の組み合わせであると特定することができる。

多くの外科医は、肢救出および開存性の下割合の理由で、より近位の手技と比較して膝窩動脈または頸側動脈バイパスを行うことを好む。膝窩動脈または頸側動脈バイパスでは触知可能な足の脈拍が回復できない場合は、足バイパス術（ｐｅｄａｌ ｂｙｐａｓｓ）が、糖尿病および虚血性の足の創傷を有する患者に対するより持続的かつ効果的な肢救済手法を提供することが報告されている。糖尿病患者における広範囲に及ぶマルチセグメント性の閉塞疾患ですら、足の救出に対する妨げとならない。深刻な創傷合併症は惨憺な結果をもたらし得るが、それらは足バイパス移植後には稀である。既存の足感染の十分な管理および注意深い移植トンネル術（ｇｒａｆｔ ｔｕｎｎｅｌｉｎｇ）は、さらなる合併症を回避するのに効果的であることが示されている。下肢における血管形成術は、徐々に利用されるようになってきている。しかし、血管形成術が効果を発揮するためには、より近位の血管形成術が成功したとしても、遠位の血管または栄養血管を開存させなければならないことが強調されなければならない。

糖尿病性の潰瘍／肢病変は、（挫滅組織切除、抗生物質処置、肉芽組織（新しいコラーゲンおよび血管形成）を刺激する製剤の使用、および創傷部の細菌負荷の減少によって）一部の患者においては管理され得るが、これらの状態をよりよく処置および／またはその症状を軽減することができる薬学的組成物を持つことが有益となる。

さらなる情報については、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌｕｍｅ １８７・Ｎｕｍｂｅｒ ５ Ｓｕｐｐｌ １・Ｍａｙ １，２００４，Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ（ｃ）２００４ Ｅｌｓｅｖｉｅｒを参照のこと。

糖尿病における冠微小血管の機能障害
糖尿病における組織病理学と微小循環機能障害の間の相関は、古い実験的研究および剖検から周知であり、基底膜の肥厚化、血管周囲の線維症、血管の疎化（ｒａｒｅｆｉｃａｔｉｏｎ）、および毛細血管からの出血がしばしば認められる。最近の論文は病理と眼の微小血管機能障害の間の相関を実証している（Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２００３；２８５）ものの、これらのデータをインビボで確認するのは依然として困難である。しかし、多くの臨床研究は、顕性の糖尿病だけでなく代謝制御障害もまた、冠微小循環に影響し得ることを示している（Ｈｙｐｅｒｔ Ｒｅｓ ２００２；２５：８９３）。Ｗｅｒｎｅｒは、梗塞に関係する動脈の再開口成功後の患者における微小血管の機能障害の持続について示しており、そしてこれらの患者における心血管の有病率および死亡率の増加を説明し得るＳａｍｂｕｃｅｔｉら（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００１；１０４：１１２９）による重要な論文に遠回しに触れている。有病率および死亡率は梗塞に関係する動脈の再開口それ自体には関連せず、ＴＩＭＩフロー＋／−心筋内微細血管陰影（ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｂｌｕｓｈ）に大いに依存するという証拠が、大規模な短期の再灌流研究から蓄積されている（Ｓｔｏｎｅ ２００２；Ｆｅｌｄｍａｎｎ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００３）。Ｈｅｒｒｍａｎｎは、中でも、この文脈で冠微小循環の完全性が最も重要な臨床的かつ予後的因子であろうということを示している（Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ２００１）。防護デバイス（ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｄｅｖｉｃｅｓ）の中立的な効果（ＴＩＭＩフロー、ＳＴリソリューション、またはＭＡＣＥにおいて関連する変化がない）は、微小循環の機能的損壊が重要な予後決定因子であることを示し得る。冠微小血管の機能障害は非閉塞性のＣＡＤにおいても重要な役割を果たすという証拠の蓄積されつつある。冠内皮の機能障害は、依然としてこれらの患者における強力な予後の予測因子である。

糖尿病性腎症（糖尿病患者における腎機能障害）
糖尿病性腎症は、ミクロアルブミン尿（微小血管疾患の影響）、蛋白尿、およびＥＳＲＤを含む。糖尿病は、腎不全の最も一般的な原因であり、新たな症例の４０パーセントより多くを占める。薬物および食事で糖尿病を管理できる場合でさえも、この疾患は腎症および腎不全を引き起こし得る。大部分の糖尿病患者は、腎不全を引き起こす程度に重度の腎症を発症しない。米国においては約１,６００万人が糖尿病を有し、約１００,０００人が糖尿病の結果としての腎不全を有する。

糖尿病性網膜症
糖尿病状態においては、高血糖により網膜の血流の減少、網膜の透過性亢進、光受容体の神経伝導の遅延、および網膜神経細胞の死滅が起きる。短期的な糖尿病においては、神経細胞の死滅が、網膜の内顆粒層で確認されている。特に、アポトーシスが、グリア細胞、例えばミュラー細胞および星状細胞に局在し、ＳＴＺ誘発型糖尿病ラットモデルにおいては１ヶ月間の糖尿病の間に起きることが示されている。これらのイベントの原因は、ジアシルグリセロール／ＰＫＣ経路の活性化、酸化ストレス、および非酵素的グリコシル化を含む多因子性である。これらのイベントの組み合わせは網膜を低酸素状態にし、最終的には糖尿病性網膜症を発症させる。網膜虚血と糖尿病性網膜における初期の変化の間の一つの考えられる関係は、ＶＥＧＦ等の成長因子の低酸素誘導性の産生である。この低酸素反応の主調節因子（ｍａｓｔｅｒ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ）は、低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）として同定されており、これは細胞の増殖および血管新生を調節する遺伝子を制御する。これまでの研究は、ＨＩＦ−１のユビキチン化の阻害が、低酸素反応エレメント（ｈｙｐｏｘｉａ ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｅｌｅｍｅｎｔｓ）（ＨＲＥ）との結合およびＶＥＧＦ ｍＲＮＡの産生をもたらすことを実証している。

糖尿病性網膜症は、慢性的な高血糖により引き起こされる網膜血管系の進行性の機能障害と定義される。糖尿病性網膜症の鍵となる特徴には、微細動脈瘤、網膜出血、網膜における脂質滲出、綿状白斑、毛細血管不灌流（ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｎｏｎｐｅｒｆｕｓｉｏｎ）、黄斑水腫、および新生血管形成が含まれる。関連する特徴には、硝子体出血、網膜剥離、血管新生緑内障、白内障の早期発症、および脳神経麻痺が含まれる。

米国において、１型および２型糖尿病患者は１,６００万人存在する。１５年以内に、１型患者の８０％が糖尿病性網膜症を発症し、２型糖尿病患者の８４％は１９年以内に網膜症を発症する。これらの数は、新生血管系の眼疾患を対象とする治療剤にとって大きな市場を構成する。糖尿病性網膜症の発症は時間依存性である。最適な血糖管理がなされた場合でさえも、長期間疾患を有する患者は最終的には何らかの形態の網膜症を発症すると考えられ得る。Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｔｏ Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓは、米国において４００〜６００万人の糖尿病患者が糖尿病性網膜症を有すると見積もっている。増殖性糖尿病性網膜症および糖尿病性黄斑水腫の新たな症例の年間発生数の概算値はそれぞれ６５,０００および７５,０００例であり、有病数はそれぞれ７００,０００および５００,０００例である。糖尿病性網膜症は、米国において毎年１２,０００〜２４,０００の失明の新規症例の原因となっている。網膜症は、外科的手法によって処置され、重度の失明を減らすのに有効であるが、網膜のレーザー処置した部分は不可逆的に破壊される。薬物処置は利用できない。

主として毛細血管に影響を及ぼす微小血管疾患である真性糖尿病は、結膜、網膜、および中枢神経系の血管系を破壊することによって眼に影響を及ぼす。患者は、長期にわたる眼球結膜への注射という病歴、さらには正常な食欲よりも旺盛な（多食症）状況での体重減、異常な渇き（多渇症）、および異常に高頻度の排尿（多尿症）という全身的愁訴を示す。

不安定な血糖に続発する視力の変動は、共通の眼の徴候である。水晶体内での膨張は、突然の大きな屈折の変化および白内障の早期発症をもたらす。視力の変化は、疾患の重症度および病期に依存するであろう。

網膜においては、細動脈および毛細血管の脆弱化により、網膜内の斑点およびシミ状の出血、滲出物、網膜内細小血管異常（ＩＲＭＡ）、微細動脈瘤、水腫、および綿状梗塞（ｃｏｔｔｏｎ ｗｏｏｌ ｉｎｆａｒｃｔｓ）という特徴的な外観があらわれ得る。増殖性糖尿病性網膜症は、重度の血管損傷の結果であり、円板の新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉｓｃ）（ＮＶＤ）、他の新生血管形成（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｅｌｓｅｗｈｅｒｅ）（ＮＶＥ）、および虹彩の新血管新生（ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｒｉｓ）（ＮＶＩ、または虹彩ルベオーシス）として視認できる。神経学的合併症には、第三、第四、および第六脳神経の麻痺ならびに糖尿病性乳頭炎および顔面神経麻痺が含まれる。

真性糖尿病は、耐糖能異常が共通する遺伝的影響を受ける疾患グループである。真性糖尿病は、不十分もしくは機能不良なインスリンまたは不十分もしくは機能不良な細胞のインスリン受容体の結果としての代謝調節障害と特徴付けられている。

ソルビトールの形成に関係する生化学は、血管内皮を支持する細胞である周皮細胞の破壊において役割を果たす。支持していた周皮細胞が消滅するにつれて、毛細血管の内皮は障害を起こし、血液、タンパク質、および脂質が血管から漏出する。これは、濃くなったグルコース含有血液と共に、血管不全、毛細血管不灌流、網膜低酸素症、構造変化、および機能減退を起こす。網膜新生血管形成に関与する血管増殖因子（ｖａｓｏｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ ｆａｃｔｏｒｓ）の形成および放出についてはほとんど理解されていない。

糖尿病の失明の恐れのある後発症の大部分は、医学的な管理下での数週間から数ヶ月の過程で自然に消散する。大きな屈折の変化がある症例では、患者は、屈折が安定するまで一時的な眼鏡の処方を必要とし得る。黄斑が網膜症の危険にさらされる場合または新たな血管が増殖する場合、患者にレーザー光凝固術を施し得る。糖尿病性網膜症スタディ（ＤＲＳ）により、最終的に、広範囲網膜光凝固術（ｐａｎｒｅｔｉｎａｌ ｐｈｏｔｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ）が高リスク患者において重度の失明の恐れを軽減するのに有効であったことが証明されている。それによりこの高リスクの特徴は、（１）円板径の４分の１から３分の１の大きさの視神経円板の新生血管形成（ＮＶＤ）、および（２）何らかの硝子体出血を伴う他の新生血管形成（ＮＶＥ）として定義された。

糖尿病性黄斑水腫（ＤＭＥ）
ＤＭＥは、網膜の血管に影響を及ぼす疾患である、糖尿病性網膜症の合併症である。糖尿病性網膜症は、網膜において、網膜の肥厚化および水腫、出血、血流の妨げ、血管からの流体の過剰な漏出、ならびに最終段階では異常な血管の増殖を含む多数の異常を引き起
こす。この血管の増殖は、大規模な出血および重度の網膜損傷を引き起こし得る。糖尿病性網膜症の血管漏出により黄斑の膨脹が起きた場合は、ＤＭＥと称される。ＤＭＥの主要な症状は中心視の喪失である。ＤＭＥに関連する危険因子には、十分に制御されない血中グルコースレベル、高血圧、体液貯留を引き起こす異常な腎機能、高いコレステロールレベル、およびその他の一般的な全身的因子が含まれる。

世界保健機関によれば、糖尿病性網膜症は、労働年齢の成人における失明の最大の原因であり、糖尿病患者における失明の最大の原因である。米国糖尿病協会（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）は、米国におよそ１８００万人の糖尿病患者がおり、米国において毎年およそ１３０万例が新たに糖尿病と診断されていることを報告している。米国失明防止協会（Ｐｒｅｖｅｎｔ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ Ａｍｅｒｉｃａ）および国民の眼の協会（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）は、米国において、およそ５００,０００人のＤＭＥ患者を含む、５３０万を超える１８歳以上の人間が糖尿病性網膜症を有していると見積もっている。ＣＤＣは、米国において毎年およそ７５,０００例の新規ＤＭＥ症例が出ていると見積もっている。

さらなる神経障害
糖尿病に加えて、神経障害の一般的な原因は、帯状ヘルペス感染、慢性または急性の外傷（手術を含む）、および様々な神経毒である。神経因性疼痛は、末梢神経に対するがんの直接的結果（例えば腫瘍による圧迫）としておよび多くの化学療法薬の副作用として、がんにおいて一般的である。

微小血管疾患 − 血管疾患および神経疾患は、密接に関連し、結びつく。血管は正常な神経機能に依存し、神経は十分な血流に依存している。微小血管系における最初の病理学的変化は血管狭窄である。この疾患が進行するにつれて、神経細胞の機能障害は、血管異常の進行、例えば、酸素圧の低下および低酸素の一因となる毛細血管基底膜の肥厚化および内皮の過形成と密接に相関する。血管拡張剤（例えばアンギオテンシン変換酵素阻害剤、α１−アンタゴニスト）は、神経細胞の血流を実質的に改善させると共に、それに対応して神経伝導速度を改善させることができる。

臨床症状発理
神経障害は、全ての末梢神経：痛覚線維、運動ニューロン、自律神経に影響を及ぼす。従って、神経障害は、全ての器官および系を神経支配しているため、全てに影響を及ぼし得る。影響を受ける器官系およびメンバーによりいくつかの異なる症候群が見られるが、これらは唯一というものではない。患者は、感覚運動と自律神経の神経障害、または他のあらゆる組み合わせを有し得る。

神経障害の代謝的原因の理解が進歩しているにもかかわらず、これらの病理学的プロセスを妨げることを目的とする処置は、副作用および効能不足により限界がある。つまり、処置は対症療法的であり、根本的な問題に取り組むものではない。感覚運動神経障害により引き起こされる疼痛に対する薬剤には、三環系抗うつ薬（ＴＣＡ）、セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、および抗てんかん薬（ＡＥＤ）が含まれる。これらの薬剤の中に、糖尿病性神経障害を引き起こす病理学的プロセスを逆転させるものや、この病気の過酷な過程を変更させるものはない。従って、これらの状態を処置および／またはその症状を軽減することができる薬学的組成物を提供することが有益となる。

さらなる網膜症
網膜微小血管症（ＡＩＤＳ網膜症）
網膜微小血管症（Ｒｅｔｉｎａｌ ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ）は、ＡＩＤＳ患者の１００％で見られる。この疾患は、網膜内出血、微細動脈瘤、ロート斑、綿状白斑
（神経線維層の微小梗塞）、および血管周囲鞘形成（ｐｅｒｉｖａｓｃｕｌａｒ ｓｈｅａｔｈｉｎｇ）により特徴付けられる。この網膜症の病因は不明であるが、循環中の免疫複合体、細胞傷害性物質の局所的放出、異常な血液レオロジー、および内皮細胞のＨＩＶ感染に起因するものと考えられている。ＡＩＤ網膜症は、現在よく知られているので、糖尿病または高血圧を有さないがＨＩＶの危険のある患者に綿状白斑が見られれば、医師はウイルス試験を考慮するようになっている。ＡＩＤ網膜症に対する特別な処置は存在しないが、それが継続的に存在すれば、医師はＨＩＶ療法の効能および患者のコンプライアンスの再試験できるようになっている。

骨髄移植（ＢＭＴ）網膜症
骨髄移植網膜症は１９８３年に最初に報告された。この疾患は、典型的にはＢＭＴ後６ヶ月以内に起こるが、最も遅くて６２ヶ月後に起こり得る。糖尿病および高血圧等の危険因子は、虚血性微小血管症を増悪することによってＢＭＴ網膜症の発症を促進させる場合がある。ＢＭＴ網膜症の発症の、年齢、性別、または人種についての傾向は知られていない。患者には、視力低下および／または視野欠損が見られる。後区（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ）の所見は典型的には両側性・対称性のものである。臨床症状発現には、複数の綿状白斑、毛細血管拡張、微細動脈瘤、黄斑水腫、硬性白斑、および網膜出血が含まれる。フルオレセイン血管造影法は、毛細血管不灌流および脱落、網膜内微小血管異常、微細動脈瘤、および黄斑水腫を示す。ＢＭＴ網膜症の正確な病因は解明されていないが、いくつかの要因：シクロスポリン毒性、全身照射法（ＴＢＩ）、および化学療法剤による影響を受けるようである。シクロスポリンは、移植片対宿性免疫反応を抑制する強力な免疫調節剤である。シクロスポリンは内皮細胞の傷害および神経学的な副作用を引き起す可能性があり、ＢＭＴ網膜症の原因であると示唆されている。しかしＢＭＴ網膜症は、シクロスポリン非使用下でも発症し得、シクロスポリンが自己または同系骨髄レシピエントにおいてＢＭＴ網膜症を引き起こすことは示されていない。従って、シクロスポリンだけが、ＢＭＴ網膜症の原因ではないようである。全身照射法（ＴＢＩ）もまた、ＢＭＴ網膜症の原因であると指摘されている。放射線照射は網膜微小血管系を傷つけ、虚血性血管症を引き起こす。総放射線量および放射線照射と骨髄切除の間の時間間隔等の変数が重要のようである。しかし、ＢＭＴ網膜症は、ＴＢＩを受けなかった患者においても起こり得、かつＢＭＴ網膜症は同じ様な放射線量を受けた固形臓器移植レシピエントにおいては観察されない。従ってＴＢＩは唯一の原因ではないが、ＢＭＴ網膜症の発症におけるもう一つの寄与因子である。化学療法剤は、ＢＭＴ網膜症における潜在的な寄与因子であることが示唆されている。シスプラチン、カルムスチン、およびシクロホスファミド等の薬物は、乳頭水腫、視神経炎、視野欠損、および皮質盲を含む眼の副作用を引き起こし得る。これらの化学療法薬により患者は放射線照射誘発型の網膜損傷を受け易くなり、放射線照射の悪影響が増強されることが示唆されている。一般に、ＢＭＴ網膜症患者の予後は良い。網膜症は通常、シクロスポリン投与を停止または縮小した後２〜４ヶ月以内に消散する。ある報告では、患者の６９％が網膜の所見を完全に消散し、患者の４６％が元の視力を完全に回復したということである。ＢＭＴ網膜症の良好な予後および比較的非進行的な性質から、積極的な介入は通常必ずしも必要ない。

虚血状態
虚血は、二つのカテゴリーに分類することができる：その一つ目は糖尿病患者において、すなわち大腿、膝窩、および後脛骨動脈において一般的に起こる促進性アテローム硬化症を含むものである。これらの血管は、多くはわずか１または２ｃｍ径であり、血流を大きく減少させる動脈硬化プラークを発生し得る。大血管が完全に閉塞するようになった後、脳卒中、心筋梗塞、虚血、および非治癒性糖尿病性足潰瘍が起こり得る。この形態の虚血は、本質的には大血管疾患である。

脳卒中後認知症
脳卒中後２５％の人間は認知症（多くはその後の５〜１０年の間に発症する他の認知症と共に）を患う。さらに、多くの個体は、それよりも軽度の高度脳機能（例えば計画能力および情報処理速度）の障害を経験し、その後に認知症を発症する危険が非常に高い。（微小血管疾患と呼ばれる）このプロセスにおける脳深部の非常に小さな脳卒中が、脳卒中後認知症に特有であることが確認されている脳委縮パターンを引き起こすプロセスに必須のようである。

眼虚血性症候群
眼虚血症候群（ＯＩＳ）患者は、一般的に、５０代〜８０代の範囲の高齢者である。男性は女性の二倍影響を受ける。ごくわずかな患者のみが無症候性である。症例の９０％において診察時に視力低下が認められ、患者の４０％は眼の痛みを伴う。一過性の虚血性発作または一過性黒内障の付随または前駆病歴（ａｎｔｅｃｅｄｅｎｔ ｈｉｓｔｏｒｙ）が見られる場合もある。患者はまた、診察時に深刻な既知または未知の全身性疾患を有する。最も一般的に見られる全身性疾患は高血圧、糖尿病、虚血性心疾患、脳卒中、および末梢血管疾患である。多くはないが、患者は、巨細胞性動脈炎（ＧＣＡ）の結果としてＯＩＳを発現する。

症例の８０％で片側性の所見（ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ ｆｉｎｄｉｎｇｓ）が見られる。一般的な所見には、進行した片側白内障（ａｄｖａｎｃｅｄ ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ ｃａｔａｒａｃｔ）、前眼部の炎症（ａｎｔｅｒｉｏｒ ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ）、無症候性前房反応、黄斑水腫、拡張しているが蛇行していない網膜静脈、中〜末梢の斑点およびシミ状の出血、綿状白斑、滲出物、ならびに円板および網膜の新生血管形成が含まれ得る。自然発生的な動脈の拍動、高眼内圧、ならびに血管新生緑内障（ＮＶＧ）における虹彩および隅角（ａｎｇｌｅ）の新生血管形成が見られる場合もある。患者は前眼部の新生血管形成を示す場合があり、毛様体への動脈灌流の低下から低眼圧が起こる場合もある。たまに、網膜に塞栓（ホレンホースト斑）が見られる。

ＯＩＳにおける所見は、総頚動脈の分岐における内頚動脈のアテローム性潰瘍形成および狭窄が原因である。内胸動脈狭窄を有する患者の５％がＯＩＳを発症する。しかし、ＯＩＳは、狭窄の規模が９０％を超えた場合にのみ発症する。頸動脈の狭窄は、眼に対する灌流圧を低下させ、上記の虚血現象を引き起こす。狭窄が９０％に達すると、網膜中心動脈（ＣＲＡ）の灌流圧はわずか５０％にまで下降する。しばしば、動脈圧の低下は、ＣＲＡの自然発生的な拍動として顕在化する。所見は変りやすく、上記所見のいずれかまたは全てを含み得る。

ＯＩＳ患者は、診断されなければならない深刻な全身性疾患を有する。心臓死は、ＯＩＳ患者における一番の死亡原因であり − ５年以内死亡率は４０％である。この理由から、ＯＩＳ患者は、完全な血清学、ＥＫＧ、ＥＣＧ、および頸動脈の評価について心臓病専門医に付託されなければならない。

腎臓の微小血管疾患
腎臓は、全身および腎臓の微小血管系に影響を及ぼす多くの目立たない臨床病理状態に関係する。これらの状態の一部は、内皮細胞に対する一次的な傷害により特徴付けられる、例えば：
・溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）および血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）ＨＵＳおよびＴＴＰは、密接に関連する疾患であり、細血管異常性溶血性貧血および様々な臓器の損傷によって特徴付けられる。伝統的に、ＨＵＳの診断は、腎不全がその症候群の優勢な特徴である場合になされ、これは子供に多い。成人においては、神経学的損傷が支配的な場合が多く、その場合その症候群はＴＴＰと称される。血栓性微小血管症は、両方の症候群の根底にある病理学的病変であり、ＨＵＳまたはＴＴＰのいずれかを有する患者に対す
る臨床的および研究室的所見は大いに重複する。このため、一部の研究者は、この二つの症候群を、単一の疾患の連続体（ｃｏｎｔｉｎｕｕｍ）と考慮している。病因論：実験データは、内皮細胞の傷害がＨＵＳ／ＴＴＰの病因における中心的なイベントであることを強く示唆している。内皮の損傷は、局所的な血管内凝固、フィブリン沈着、ならびに血小板の活性化および凝集を含むイベントのカスケードを開始させる。その最終的な結果は、様々な形態のＨＵＳ／ＴＴＰ症候群に共通の血栓性微小血管症の病理組織学的所見である。ＨＵＳ／ＴＴＰを未処置のまま放置すると、死亡率は９０％に達する。支持療法 − 透析、降圧薬投薬、輸血、および神経学的合併症の管理を含む − は、ＨＵＳ／ＴＴＰ患者の生存率を向上させる。下痢を伴う典型的なＨＵＳを処置する上では、十分な体液平衡および腸管安静が重要である。
・放射線腎炎 − ２５００ｒａｄを超える腎照射の長期的な結果は、五つの臨床的症候群に分けることができる：
（ｉ）患者のおよそ４０％において、６〜１３ヶ月の潜伏期間の後に急性放射線腎炎が発症する。この疾患は、臨床的には、高血圧、蛋白尿、水腫、および進行性腎不全の突然の発症により特徴付けられ、ほどんどの症例において末期段階の腎臓をもたらす。
（ｉｉ）慢性放射線腎炎は、逆に、最初の傷害の後、１８ヶ月から１４年の間で変動する潜伏期間を有する。この疾患は発現の面で潜伏性であり、高血圧、蛋白尿、および腎機能の漸進的喪失により特徴付けられる。
（ｉｉｉ）第三の症候群は、放射線被爆から５〜１９年後に正常な腎機能を有する良性蛋白尿として発現する。
（ｉｖ）第四の患者グループは、２〜５年後に良性の高血圧のみを示し、変りやすい蛋白尿を有する場合がある。後期の悪性高血圧は、慢性放射線腎炎または良性高血圧のいずれかを有する患者において、照射から１８ヶ月〜１１年後に発症する。罹患した腎臓の除去により高血圧は逆転する。腎動脈に対する照射誘発型の損傷（その後の腎血管性高血圧を伴なう）が報告されている。
（ｖ）急性放射線腎炎に類似する腎不全の症候群は、全身照射法（ＴＢＩ）による処置を受けた骨髄移植（ＢＭＴ）患者において観察されている。

放射線照射は、照射後初期の段階で内皮の機能障害を引き起こすが血管平滑筋細胞は傷つけないことが報告されている。放射線照射はＤＮＡに直接危害を加え、糸球体毛細血管および細管においてこれらの細胞の再生を減少させ基底膜を裸出（ｄｅｎｕｄｅｍｅｎｔ）させる。この初期傷害が最終的にどのようにして糸球体硬化症、細管萎縮、および間質性線維症につながるのかは不明である。内皮細胞層の変質が毛細血管および小動脈において血管内血栓を引き起こすと仮定されている。この腎臓内血管障害が、放射線腎炎を特徴付ける進行性腎線維症および高血圧を説明するものであろう。放射線照射したマウス腎臓についての最近の研究は、腎皮質における白血球の線量依存的な増加を示しており、このことは放射線照射により誘発される腎炎における炎症プロセスの役割を示唆している。

他の腎疾患において、腎臓の微小血管系は、自己免疫傷害、例えば全身性硬化症（強皮症）に関与する。全身性硬化症における腎臓の関与は、穏やかに進行する慢性腎疾患としてまたは強皮症腎クリーゼ（ＳＲＣ）として顕われ、悪性高血圧および急性高窒素血症により特徴付けられる。ＳＲＣは、腎臓におけるレイノー様現象により引き起こされると仮定されている。重度の血管痙攣は、皮質虚血ならびにレニンおよびアンギオテンシンＩＩの高産生を引き起こし、これはさらに腎血管収縮を永続させる。ホルモンの変化（妊娠）、肉体的および情動的なストレス、または低温は、レイノー様動脈血管痙攣を誘発し得る。腎虚血の永続におけるレニン−アンギオテンシン系の役割は、ＳＲＣの処置におけるＡＣＥ阻害剤の有意な利益によって強調されている。降圧処置を施しても重度の腎不全を進行させるＳＲＣ患者においては、透析が必要になる。腹膜透析および血液透析の両方が利用される。１９８３〜１９８５年の間に透析を行った３１１人の全身性硬化症誘発型末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者に関するＥＳＲＤネットワークの報告は、３年目の生存率が３３％であることを明らかにした。

腎臓の微小循環はまた鎌状赤血球症において影響を受け、この疾患に対して腎臓は、直細血管における酸素の逆流移動の結果として腎髄質の深血管において生じた低酸素圧が原因で特に影響を受け易い。それよりも小さな腎動脈および小動脈もまた、大血管壁から遊離したコレステロール含有物による血栓塞栓性傷害の部位であり得る。

まとめると、腎臓の微小血管系の一過的または永続的な閉塞を引き起こす疾患は、一様に、糸球体の灌流を、従って糸球体の濾過率を損壊させ、それによって全身的なホメオスタシスに対する深刻な脅威となる。

急性腎不全（ＡＲＦ）
ＡＲＦは、微小血管または大血管の疾患（主要な腎動脈閉塞または重度の腹部大動脈疾患）によって引き起こされ得る。古典的な微小血管疾患は、多くは糸球体毛細血管の血栓もしくは閉塞が原因で起こる細血管異常性溶血および急性腎不全を示し、多くは付随的な血小板減少症を示す。これらの疾患の典型例には：
ａ）血栓性血小板減少性紫斑病 − 血栓性血小板減少性紫斑病における古典的な五つ組（ｐｅｎｔａｄ）には、発熱、神経学的変化、腎不全、細血管異常性溶血性貧血、および血小板減少症が含まれる、
ｂ）溶血性尿毒症症候群 − 溶血性尿毒症症候群は血栓性血小板減少性紫斑病と似ているが、神経学的変化を示さない、
ｃ）ＨＥＬＬＰ症候群（溶血、肝酵素増加、および低血小板） − ＨＥＬＬＰ症候群は、妊娠女性においてトランスアミナーゼ上昇に加えて起こる溶血性尿毒症症候群の一タイプである、
が含まれる。

急性腎不全は、全ての医学的状況下で起こり得るが、大部分は院内で起こる。この状態は入院患者の５％で発症し、入院患者のおよそ０．５％は透析を必要とする。過去４０年以上、急性腎不全の生存率は改善されておらず、それは主として罹患した患者がその時点で高齢であり多くの合併症を有するからである。感染は、急性腎不全患者の死亡の７５％において見られ、心肺系の合併症が第二の死因である。腎不全の重症度に依存して、死亡率は７％から最高で８０％の範囲であり得る。急性腎不全は、三つのカテゴリー：腎前性、内因性、および腎後性のＡＲＦに分けることができる。内因性ＡＲＦは、四つのカテゴリー：尿細管性疾患、糸球体性疾患、血管性疾患（微小血管を含む）、および間質性疾患に細分される。

進行性腎疾患
進行性腎疾患は微小血管系の進行性の喪失により特徴付けられるという証拠が存在する。微小血管系の喪失は、糸球体および尿細管間質の瘢痕化の進行と直接相関する。このメカニズムは、部分的に、内皮の増殖反応の減少により媒介され、この毛細血管修復における損傷は、腎臓における血管新生因子（血管内皮増殖因子）および抗血管新生因子（トロンボスポンジン１）の両方の局所的発現の変化により媒介される。血管新生増殖因子のバランスの変化は、マクロファージ関連サイトカイン（インターロイキン−１β）および血管作動性メディエーターの両方によって媒介される。最後に、血管新生および／または毛細血管修復の刺激が腎機能を安定化させ進行を遅らせ得ることならびにこの利益がＢＰまたは蛋白尿に対する効果から独立して生じるという興味深い証拠が存在する。

さらなる情報については、Ｂｒｅｎｎｅｒ ＆ Ｒｅｃｔｏｒ'ｓ Ｔｈｅ Ｋｉｄｎｅｙ，７ｔｈ ｅｄ．，Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ（ｃ）２００４ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ：Ｃｈａｐｔｅｒ ３３ − Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｋｉｄｎｅｙおよびＴｉｗａｒｉ ａｎｄＶｉｋｒａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｄｉａｎ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏｌ．５，Ｎｏ．１ Ｒｅｖｉｅｗ Ａｒｔｉｃｌｅ − Ｓｅｐｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ Ｋｉｄｎｅｙも参照のこと。

聴力障害
化学的に誘導される耳毒性
様々な耳毒性治療薬の聴細胞およびラセン神経節細胞に対する毒性作用は、それらの治療上有用性に対する制限要因となることが多い。主な耳毒性薬には、幅広く使用されている化学療法剤であるシスプラチンおよびそのアナログ、一般的に使用されているアミノグリコシド系抗生物質、例えばグラム陰性細菌により引き起こされる感染の処置のためのゲンタマイシン、キニーネおよびそのアナログ、サリチラートおよびそのアナログ、ならびにループ利尿薬が含まれる。

例えば、抗菌性アミノグリコシド、例えばゲンタマイシン、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン等は、大きな毒性、特に耳毒性および腎毒性を有することが公知であり、これらがそのような抗菌剤の有用性を低下させている（Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ'ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，６ｔｈ ｅｄ．，Ａ．Ｇｏｏｄｍａｎ Ｇｉｌｍａｎ ｅｔ
ａｌ．，ｅｄｓ；Ｍａｃｍｉｌｌａｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１１６９−７１（１９８０）を参照のこと）。耳毒性が抗生物質投与における用量制限的な副作用であることははっきりしている。１週間を超えて１日あたり１グラムを投与された患者の４〜１５％は、測定可能な程度の難聴を発症し、これは治療を継続すれば徐々に悪化し完全に永久的な難聴（ｄｅａｆｎｅｓｓ）を引き起こす可能性もある。

耳毒性はまた、精巣がん、卵巣がん、膀胱がん、および頭頸部がんを含む様々なヒトがんに対する有効性が証明されている白金配位錯体であるシスプラチンにとっても重大な用量制限的副作用である。シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））は聴覚系および前庭系を損なわせる。サリチラート類、例えばアスピリンは、それらの消炎、鎮痛、解熱、および抗血栓作用により最も一般的に使用されている治療薬である。残念ながら、これらもまた耳毒性の副作用を有する。これらはしばしば耳鳴（「耳内での響き」）および一時的な聴力損失を引き起こす。さらに、この薬物が高用量で長期間使用されると、難聴が永続的かつ不可逆的になる可能性がある。

従って、内耳組織、特に内耳有毛細胞が関係する内耳障害および難聴の発症率および／または重症度を予防、軽減、または処置するための手段が求められている。特に注目されているのが、シスプラチンおよびそのアナログ、アミノグリコシド系抗生物質、サリチル酸およびそのアナログ、またはループ利尿薬を含む耳毒性治療薬の望ましくない副作用として生じる状態である。さらに、これらの耳毒性誘導性の薬物のより高用量、つまりより効果的な用量の投与を可能にすると同時にこれらの薬物により引き起こされる耳毒性作用を防止または減少させる方法が求められている。必要なのは、内耳組織の損傷、喪失、または変質に関連する難聴、特に耳毒性誘発型の、特に内耳有毛細胞が関係する難聴の予防的または治療的処置のための安全、有効、かつ持続可能な手段を提供する方法である。さらに、内耳外傷（音響外傷）から生じる損傷およびろうの処置のための方法および組成物が必要とされる。

理論に拘束されるものではないが、シスプラチン薬ならびに耳毒性（例えばアミノグリコシド系抗生物質）および音響外傷を誘発する他の薬物は、内耳組織、特に内耳有毛細胞におけるプログラム細胞死またはアポトーシスを介して耳毒性作用を誘発すると考えられ
る（Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １２０（２００３）１９１−２０５；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２３（（２４）：８５９６−８６０７）。哺乳動物において、聴覚有毛細胞は、胚発生時にのみ生産され、出生後の時期に喪失したとしても再生しない、従って有毛細胞の喪失は、重大かつ不可逆的な難聴を引き起こし得る。残念ながら、現在、蝸牛を処置しこの状態を逆転させるのに効果的な治療法は存在しない。従って、聴覚有毛細胞の細胞死を防止するのに有効な治療法は、大きな治療的価値を有するであろう。

褥瘡
褥瘡または圧迫潰瘍は、継続的な圧迫（通常はベッドまたは車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分、特に殿部、股関節部、および踵の皮膚への循環が遮断された場合に生じる損傷した皮膚および組織の領域である。十分な血流の欠如は、影響を受ける組織の虚血性壊死および潰瘍化を引き起こす。褥瘡は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者において最も頻繁に起こる。仙骨、坐骨、大転子、外果、および踵の組織が特に影響を受け易く；他の部位も患者の姿勢によっては含まれる場合がある。
褥瘡は、通常非常にゆっくりとしか治癒しない創傷であり、特にこのような場合、当然ながら、改善されたより迅速な治療法が、患者にとって非常に重要である。さらに、このような創傷を患った患者の処置に関する費用は、治療法が改善されより迅速に行われるようになった場合、大いに抑えられる。

虚血状態
虚血性傷害は、酸素欠乏による細胞傷害の最も一般的な臨床的発現である。虚血性傷害を研究するための最も有用なモデルには、器官につながる終動脈の一つ（例えば冠動脈）の完全な閉塞および動脈による供給を受ける領域における組織（例えば心筋）の試験を含む。虚血の際、様々な細胞系において複雑な病理学的変化が起きる。期間は細胞のタイプの違いによって異なるが、ある時点までは、傷害は修復することができ、影響を受けた細胞は、酸素および代謝物質が血流の回復によって再び利用可能となった場合に回復する場合がある。虚血期間がさらに長引くと、進行中の傷害メカニズムが容赦なく進むため、細胞構造は悪化し続ける。時間の経過と共に、細胞のエネルギー機構 − ミトコンドリアの酸化型発電所および解糖系 − は、修復不能な程度に損傷し、血流の回復（再灌流）によっても損傷した細胞を救済することができなくなる。細胞のエネルギー機構が無傷のままの状態であっても、ゲノムまたは細胞膜に対する修復不能な損傷は、再灌流に関わらず致死的な結果をもたらし得る。この不可逆的傷害は通常、壊死として顕われるが、アポトーシスもまた一因となり得る。特定の環境下では、以前に虚血状態になったが死滅しなかった細胞に対する血流が回復した場合、皮肉なことにしばしば傷害が悪化し、進行速度が加速される − これが再灌流傷害である。

再灌流傷害は、血管形成術、心臓手術、または血栓溶解；移植臓器への血流の再生後の虚血再灌流の結果として移植片拒絶を起こす可能性のある臓器移植（肺、心臓、腎臓、肝臓等）；形成外科の結果として；重度の仕切り症候群の際に；切断された四肢の再結合の際に；多臓器不全症候群の結果として；脳卒中または頭部外傷の結果として脳において；慢性的創傷、例えば褥瘡、静脈性潰瘍、および糖尿病性潰瘍と関連して；骨格筋虚血または四肢移植の際に；腸間膜虚血または虚血性腸疾患の結果として；肺高血圧、低酸素血症、および非心臓性肺水腫を引き起こす下胴虚血（ｌｏｗｅｒ ｔｏｒｓｏ ｉｓｃｈｅｍｉａ）の結果としての呼吸不全；腎移植、大手術、外傷、ならびに敗血症性ショックおよび出血性ショック後に見られる急性腎不全；敗血症；急性緑内障、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、および網膜血管閉塞等の多くの眼疾患において失明を引き起こす急性血管閉塞の結果として起こる網膜虚血；蝸牛虚血；頭頸部欠陥に対する微小血管手術における弁不全（ｆｌａｐ ｆａｉｌｕｒｅ）；強皮症におけるレイノー現象およびそれに付随する指虚血病巣（ｄｉｇｉｔａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｌｅｓｉｏｎｓ）；脊髄損傷；血管手術；外傷性横紋筋融解症（圧挫症候群）；ならびにミオグロビン尿症を含むがこれらに限定されない様々な条件下で、特に医学的介入時に起こり得る。

さらに、虚血／再灌流は、以下の状態に関与し得る：高血圧、高血圧性脳血管疾患、動脈瘤破裂、血栓または塞栓の際に起きる血管の狭窄または閉塞、血管腫、血液疾患、心停止または心不全を含むいずれかの形態の心機能障害、全身性低血圧、心停止、心臓性ショック、敗血症性ショック、脊髄外傷、頭部外傷、発作、腫瘍からの出血；ならびに脳卒中、パーキンソン病、てんかん、うつ、ＡＬＳ、アルツハイマー病、ハンチントン病、およびいずれかのその他の疾患により誘発される認知症（例えばＨＩＶ誘発型の認知症）等の疾患。

さらに、虚血性のエピソードは、中枢神経系に対する機械的傷害、例えば頭部または脊椎への殴打による傷害により引き起こされ得る。外傷には、頭部、頸部、または脊柱のいずれかの位置またはそれらの付属物と外来物体との外傷性の接触により生じ得る組織への傷害、例えば擦過傷、切開、挫傷、穿刺、圧迫等が含まれ得る。他の形態の外傷性傷害は、体液の不適切な蓄積（例えば正常な脳脊髄液または硝子体液の産生、代謝回転、もしくは量の調節の妨害もしくは機能障害、または硬膜下もしくは頭蓋内の血腫もしくは水腫）によるＣＮＳ組織の狭窄または圧迫から起こり得る。同様に、外傷性の狭窄または圧迫は、異常な組織、例えば転移性または原発性の腫瘍が多量に存在することにより起こり得る。

結論を言うと、ＣＯＰＤ、黄斑変性、微小血管疾患、および耳毒性状態の予防および／または処置のための現在の治療様式は満足のいくものではなく、従ってこの目的で新規化合物を開発する必要性が存在する。現在、特定の薬物および状態、特にシスプラチン、化学療法剤、および特定の抗生物質に伴う耳毒性効果をその薬物の効能を犠牲にすることなく処置するこができる治療法および薬剤を開発する必要性も存在する。さらに、音響外傷または内耳における機械的外傷に伴う耳毒性作用を処置するこができる治療法および薬剤を開発する必要性が存在する。さらに、褥瘡、虚血、および虚血−再灌流関連状態の処置のための治療法および薬剤を開発する必要性が存在する。本明細書中で上述した全ての疾患および徴候ならびに本明細書中に記載される他の疾患および状態、例えばＭＩもまた、本発明の新規化合物により処置され得る。

ＲＴＰ８０１
ＲＴＰ８０１遺伝子は、本願の共同譲受人により最初に報告された。米国特許第６４５５６７４号、同第６５５５６６７号、および同第６７４０７３８号（全て本願の共同譲受人の一人が譲受）はＲＴＰ８０１ポリヌクレオチドおよびポリペプチド自体、ならびにこのポリペプチドに対する抗体を開示し、クレームする。ＲＴＰ８０１は、ＶＥＧＦ等の増殖因子から独立して低酸素誘発型の発病を調節し得る低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）に対する唯一の遺伝子標的である。

以下の特許出願および刊行物は背景情報の側面を提供する
ＷＯ ２００１０７０９７９は、卵巣がん細胞において過剰発現される核酸マーカーに関する。
ＵＳ ６６７３５４９には、ステロイド処理に反応して示差的に発現されるｃＤＮＡを含む組み合わせを記載される。
米国公開出願２００３１６５８６４は、ＤＮＡ脱メチル化剤で処理した細胞において示差的に発現されるｃＤＮＡに関する。
米国出願公開２００３１０８８７１は、処理されたヒトＣ３Ａ肝細胞培養物において示差的に発現されるいくつかのｃＤＮＡを含む組み合わせに関する。
米国出願公開２００２１１９４６３は、前立腺がんにおいて示差的に発現されるヒトｃＤＮＡを含む、前立腺がんの処置および診断に有用な新規組成物を開示する。
ＷＯ ２００４０１８９９９は、子宮頸がんを評価、特徴付け、モニター、予防、および処置する方法を開示する。
ＥＰ １３９４２７４は、被験者由来の生物学的サンプルにおけるマーカー遺伝子の発現レベルと健常な被験者由来のサンプルにおける遺伝子の発現レベルを比較することによる気管支喘息または慢性閉塞性肺疾患の試験方法に関する。
ＷＯ ２００２１０１０７５は、ヒト子宮頸がんの検出、特徴付け、予防、および処置に有用な単離された核酸分子に関する。
ＷＯ ２００３０１０２０５は、創傷治癒、網膜症、虚血、炎症、微小血管症、骨折治癒、および皮膚炎症を処置するための血管新生の阻害に関する。
ＷＯ ２００２０４６４６５は、低酸素により調節される状態の処置のための、疾患に関与する遺伝子に同定に関する。
ＷＯ ２００２０３１１１１は、ポリペプチドおよびそれらにコードされるタンパク質に関し、従って多くの用途が提供されている。
ＷＯ ２００１０１２６５９は、組換えＤＮＡ法において有用な核酸に関する。
ＷＯ ２００１０７７２８９は、様々なヒト組織源から得た６２３個のポリヌクレオチドを開示する。
ＷＯ ２００３１０１２８３は、多くのｃＤＮＡおよびタンパク質を含む組み合わせに関する。
特開２００３２５９８７７は、多くの肝線維症疾患マーカーに関する。

Ｔｚｉｐｏｒａ Ｓｈｏｓｈａｎｉ，ｅｔ ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｈｙｐｏｘｉａ−Ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｆａｃｔｏｒ １−Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｇｅｎｅ，ＲＴＰ８０１，Ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＡＮＤ ＣＥＬＬＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ，Ａｐｒ．２００２，ｐ．２２８３−２２９３；本発明者らによる共著のこの論文は、ＲＴＰ８０１遺伝子（当時は新規ＨＩＦ−１依存的遺伝子）の発見について詳述している。

Ａｎａｔ Ｂｒａｆｍａｎ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｘｙｇｅｎ−Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ ｉｎ ＲＴＰ８０１−Ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ
Ｍｉｃｅ．Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．２００４ Ｏｃｔ；４５（１０）：３７９６−８０５；この論文も本発明者らによる共著であるが、ＲＴＰ８０１ノックアウトマウスにおいては、高酸素が網膜の毛細血管網の変質を引き起こさないことを実証している。

Ｌｅｉｆ Ｗ．Ｅｌｌｉｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．ＲＥＤＤ１，ａ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ Ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｐ６３ ａｎｄ ｐ５３，Ｌｉｎｋｓ ｐ６３ ｔｏ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ
Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．１０，９９５−１００５，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ，２００２；この論文は、ＲＴＰ８０１（同論文ではＲＥＤＤ１と称される）の過剰発現が活性酸素種の過剰生産をもたらすことを実証している。

Ｒｉｃｈａｒｄ ＤＲ，Ｂｅｒｒａ Ｅ，ａｎｄ Ｐｏｕｙｓｓｅｇｕｒ Ｊ．Ｎｏｎ−ｈｙｐｏｘｉｃ ｐａｔｈｗａｙ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｘｉａ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｆａｃｔｏｒ １ ａｌｐｈａ ｉｎ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０００，Ｓｅｐ１；２７５（３５）：２６７６５−７１。この論文は、ＨＩＦ−１依存的な転写が、活性酸素種の過剰産生によって誘導され得ることを実証している。

Ｒａｎｇａｓａｍｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｒｆ２ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｔｏ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ。この研究は、抗酸化物質防御が損なわれているマウスに関する。

本発明は、微小血管障害、黄斑変性、呼吸器疾患、および脊髄損傷または疾患を処置するための新規な方法および組成物を提供する。

一つの実施態様において、ＲＴＰ８０１を阻害し様々な疾患および適応症の処置に使用できる新規分子を提供する。

別の実施態様において、本発明は、ＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、微小血管障害、黄斑変性、または呼吸器疾患に罹患した患者の処置方法を提供する。

本発明の別の実施態様は、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、ＣＯＰＤ患者の処置方法に関する。一つの実施態様において、阻害剤はｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、抗体（例えば中和抗体）、ドミナントネガティブペプチド、またはリボザイムである。

本発明の別の実施態様は、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、黄斑変性患者の処置方法に関する。一つの実施態様において、阻害剤はｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、抗体（例えば中和抗体）、ドミナントネガティブペプチド、またはリボザイムである。

本発明の別の実施態様は、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、微小血管障害患者の処置方法に関する。一つの実施態様において、阻害剤はｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、抗体（例えば中和抗体）、ドミナントネガティブペプチド、またはリボザイムである。

本発明のさらなる実施態様は、呼吸器疾患患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用を提供する。一つの実施態様において、呼吸器疾患はＣＯＰＤであり、阻害剤は好ましくはｓｉＲＮＡである。

本発明のさらなる実施態様は、黄斑変性患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用を提供する。一つの実施態様において、黄斑変性はＡＭＤであり、阻害剤は好ましくはｓｉＲＮＡである。

本発明のさらなる実施態様は、微小血管障害患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用を提供する。一つの実施態様において、微小血管障害は糖尿病性網膜症であり、阻害剤は好ましくはｓｉＲＮＡである。

本発明は、概して、難聴（または平衡機能障害（ｂａｌａｎｃｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ））、特に内耳有毛細胞の細胞死に関連する難聴の発症または重症度を処置または予防するための方法および組成物に関する。この方法および組成物は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする予防有効量または治療有効量の一つまたはそれ以上の化合
物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をこのような処置が必要な哺乳動物に投与することを含む。

より詳細には、本発明は、難聴または内耳有毛細胞の細胞死に関連する他の耳病変に罹患した患者を処置するための方法および組成物を提供する。このような耳病変は、音響外傷、機械的外傷（ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｔｒａｕｍａ）、または耳毒物誘発聴力損失（ｏｔｏｔｏｘｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｈｅａｒｉｎｇ ｌｏｓｓ）の結果であり得る。本発明の方法は、患者を処置するため、治療有効用量でＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする一つまたはそれ以上の化合物、特にＲＴＰ８０１を阻害するｓｉＲＮＡを、典型的には薬学的組成物として患者に投与することを含む。

一つの実施態様において、本発明は、耳毒性の、聴力損傷性の副作用を有する薬物により誘発される耳毒性を処置または予防するために、ＲＴＰ８０１を阻害する治療有効量の一つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡ分子と組み合わせてその薬物を投与することを必要とする、改善された組成物および処置方法を提供する。本発明の組成物は、内耳におけるアポトーシス性の組織損傷を誘発する耳毒性の、聴力損傷性の薬物の投与前、投与後の適切な間隔で、または実質的に同時投与のいずれかで投与され得る。同様に、この処置は、音響外傷を引き起こす条件の前またはそれに併せての予防的処置としても有効であり得る。

従って、本発明の目的は、哺乳動物への投与用の、耳毒性の、聴力損傷性の薬物と組み合わせてＲＴＰ８０１を阻害する治療有効量の一つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡを含有する改善された組成物を提供することである。この組み合わせ薬は、別々に投与される；その場合、耳毒性の、聴力損傷性の薬物が全身投与される一方でＲＴＰ８０１を阻害するｓｉＲＮＡ分子が局所的に投与されることになる。ｓｉＲＮＡ分子は、耳毒性薬の前、同時、後に投与され得る。このような組み合わせ組成物はさらに、薬学的に許容できる担体を含み得る。薬学的組成物は、耳毒性薬単独よりも低耳毒性を有するものとなり、好ましくは典型的に使用されるよりも耳毒性薬を高用量で含むものとなる。このような改善された組成物の例には、シスプラチンまたはその他の耳毒性の腫瘍薬もしくはアミノグリコシド系抗生物質と、ＲＴＰ８０１を阻害する治療有効量の一つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡの組み合わせが含まれる。

なおさらに、本発明は、利尿薬を必要とする症例における本発明の組成物の使用に関する。本発明は、特定の利尿薬、特により好評で一般に使用されているループ利尿薬にこれまでのところ付随する耳毒性作用を、それらの利尿効果を犠牲にすることなく処置することのできる治療法および薬剤を長い間模索してきた当該分野に対してその解決手段を提供する。

なおさらに、本発明は、キニーネまたはキニーネ様化合物を必要とする症例における本発明の組成物の使用に関する。本発明は、特定のキニーネにこれまでのところ付随する耳毒性作用を、それらの効能を犠牲にすることなく処置することのできる治療法および薬剤を長い間模索してきた当該分野に対してその解決手段を提供する。

本発明はさらに、褥瘡の発症または重症度を処置または予防するための方法および組成物に関する。この方法および組成物は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする予防有効量または治療有効量の一つまたはそれ以上の化合物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をこのような処置が必要な哺乳動物に投与することを含む。

さらに、本発明は、本明細書で記載されているように、いずれの虚血性または虚血−再灌流による傷害または状態の処置のための方法および組成物に関する。この方法および組成物は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする予防有効量または治療有効
量の一つまたはそれ以上の化合物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をこのような処置が必要な哺乳動物に投与することを含む。

発明の詳細な説明
本発明は、その実施態様のいくつかにおいて、特に、眼疾患、呼吸器疾患、微小血管障害、聴力障害、および虚血状態の処置のための、ＲＴＰ８０１遺伝子またはポリペプチドの阻害に関する。本明細書中に記載されるように、本発明において使用するのに好ましい阻害剤は、生物学的分子である。

理論に拘束されるものではないが、本発明者らは、ＲＴＰ８０１が、微小血管障害、眼疾患、呼吸器疾患、聴力障害、褥瘡、虚血状態、および脊髄損傷および疾患を含む様々な疾患状態に関与すること、ならびに上記の疾患または障害のいずれかを処置するためにＲＴＰ８０１を阻害することが有益となることを発見した。ＲＴＰ８０１を阻害する方法、分子、および組成物については本明細書を通じて詳細に記載されており、上記の分子および／または組成物のいずれも、前記状態のいずれかに罹患した患者の処置において有益に利用され得る。

本発明は、インビボでＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するための方法および組成物を提供する。この方法は、概して、オリゴリボヌクレオチド、例えばＲＮＡ干渉機構によって標的遺伝子の発現をダウンレギュレートするのに十分な量の、特定のｍＲＮＡを標的化しそれにハイブリダイズする低分子干渉ＲＮＡ（すなわちｓｉＲＮＡ）、または細胞内でｓｉＲＮＡを生成することができる核酸物質を投与することを含む。特に、主題の方法は、呼吸器疾患、微小血管障害、眼障害、および難聴の処置のためにＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害するのに使用することができる。

従って、一つの実施態様において、本発明は、患者を処置するため、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、微小血管障害、眼疾患、呼吸器疾患、聴力障害、褥瘡、もしくは脊髄損傷またはその他の創傷から選択される状態に罹患した患者を処置する方法を提供する。本発明はさらに、ＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を、回復を促進するのに十分な投与量でおよび十分な時間にわたり、患者に投与することからなる、微小血管障害、眼疾患、呼吸器疾患、聴力障害、褥瘡、もしくは脊髄損傷またはその他の創傷に罹患した患者を処置する方法を提供する。眼疾患は特に、黄斑変性、例えば加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）であり得る。微小血管障害は特に、糖尿病性網膜症または急性腎不全であり得る。呼吸器疾患は特に、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息、および肺がんであり得る。聴力障害は特に、音響外傷またはシスプラチン誘発の難聴（ｄｅａｆｎｅｓｓ）であり得る。ＲＴＰ８０１阻害剤は、ポリヌクレオチド、アンチセンスフラグメント、ＲＴＰ８０１遺伝子ｍＲＮＡを標的化するＲＮＡ分子、例えばリボザイムもしくはｓｉＲＮＡ（例えば表Ａ〜ＤのｓｉＲＮＡ、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８）またはそれらを含む発現ベクター；ポリペプチド、例えばドミナントネガティブ、抗体（例えば図２に示される配列（配列番号２）を有する連続アミノ酸を含むポリペプチド内に存在するエピトープに特異的に結合する抗体）、またはいくつかの場合においては酵素等の化合物を含むがこれらに限定されない多種の分子から選択され得る。さらに、ＲＴＰ８０１阻害剤は、化学的な阻害剤、例えば低分子、例えば低分子量、例えば２０００ダルトン未満の分子量を有する化学分子であり得る。特定のＲＴＰ８０１阻害剤は以下に示されている。

本発明はさらに、患者を処理するため、ＲＴＰ８０１遺伝子から転写されたｍＲＮＡに特異的にハイブリダイズしＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートするポリヌク
レオチドを含む治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、黄斑変性、ＣＯＰＤ、糖尿病性網膜症、または音響外傷誘発の難聴に罹患した患者の処置方法を提供する。このポリヌクレオチドは、表Ａ〜Ｄに示されるいずれかの配列（配列番号３〜５３６）と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８であり得る。

さらに、本発明のさらなる実施態様は、ｓｉＲＮＡ分子、場合により表Ａ〜Ｄのいずれか一つに詳細に示されているｓｉＲＮＡ分子を含む治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤を含む薬学的組成物を、患者を処置するための投与量でおよび時間にわたり、患者に投与することを含む、微小血管障害、眼疾患、呼吸器疾患、聴力障害、褥瘡、もしくは脊髄損傷またはその他の創傷に罹患した患者の処置方法に関する。

ＲＴＰ８０１遺伝子ｍＲＮＡを標的化する治療有効用量のＲＮＡ分子を含む薬学的組成物を、患者を処置するための投与量でおよび時間にわたり、患者に投与することを含む、微小血管障害、眼疾患、呼吸器疾患、聴力障害、褥瘡、もしくは脊髄損傷またはその他の創傷に罹患した患者のさらなる処置方法も提供する。このＲＮＡ分子は、ｓｉＲＮＡ分子、例えば表Ａ〜Ｄに詳細に示されているｓｉＲＮＡ分子、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０もしくは表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８、またはリボザイムであり得る。

本発明はさらに、ＲＴＰ８０１遺伝子ｍＲＮＡを標的化する治療有効用量のｓｉＲＮＡ分子、場合により表Ａ〜Ｄに詳細に示されているｓｉＲＮＡ分子を含む薬学的組成物を、患者を処置するための投与量でおよび時間にわたり、患者に投与することを含む、微小血管障害、眼疾患、呼吸器状態、聴力障害、褥瘡、もしくは脊髄損傷またはその他の創傷もしくは本明細書中に開示される状態のいずれかに罹患した患者の処置方法も提供する。さらに、眼疾患は、黄斑変性、例えば加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）であり得；微小血管障害は、糖尿病性網膜症または急性腎不全であり得；呼吸器疾患はＣＯＰＤであり得、処置されるＣＯＰＤの側面は、気腫、慢性気管支炎、喘息、またはその両方を含むがこれらに限定されず；聴力障害は、音響外傷誘発の難聴であり得る。

本発明はさらに、ＲＴＰ８０１の発現の阻害が有益な難聴の処置における、本明細書に開示される新規ｓｉＲＮＡの使用に関する。一つの実施態様において、本発明は、難聴（または平衡機能障害）を有するもしくはそれにかかり易い哺乳動物の処置方法、またはＲＴＰ８０１の発現の阻害が有益な状態下の哺乳動物の予防的処置方法に関する。本発明のこの実施態様の方法は、内耳細胞の傷害、喪失、または変質から生じ得る、特に音響外傷または耳毒性剤により引き起こされる難聴（または平衡機能障害）の発症または重症度を予防または軽減する。この実施態様において、本発明の方法は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする治療有効量の一つまたはそれ以上の化合物、特に本発明の新規ｓｉＲＮＡを投与することを含む。

一つの実施態様において、本発明の目的は、難聴、聴力障害、または聴力平衡機能障害、好ましくは音響外傷または耳毒性誘発の聴力状態を予防、軽減、または処置するために、このような処置が必要な哺乳動物に本発明の組成物を投与することにより哺乳動物を処置する方法を提供する。一つの実施態様は、音響外傷が、極めて大きな音への一回の曝露または長い間に難聴を引き起こし得る騒音環境への継続的曝露から生じる聴力障害または難聴の処置方法である。難聴はまた、耳に対する物理的な外傷によっても引き起こされ得る。別の実施態様は、治療有効量の耳毒性薬物の投与から耳毒性が引き起こされる聴力障害または難聴の処置方法である。典型的な耳毒性薬は、化学療法剤、例えば抗腫瘍薬、および抗生物質である。他の潜在的候補には、ループ利尿薬、キニーネまたはキニーネ様化合物、およびサリチル酸またはサリチル酸様化合物が含まれる。これらの方法は、耳毒性化合物が抗生物質、好ましくはアミノグリコシド系抗生物質である場合に特に効果的である。耳毒性アミノグリコシド系抗生物質には、ネオマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、カナマイシン、アミカシン、トブラマイシン、バイオマイシン、ゲンタマイシン、シソマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、ジベカシン、フォーチミシン、およびジヒドロストレプトマイシン、またはこれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない。格別な抗生物質には、ネオマイシンＢ、カナマイシンＡ、カナマイシンＢ、ゲンタマイシンＣ１、ゲンタマイシンＣ１ａ、およびゲンタマイシンＣ２が含まれる。本発明の方法はまた、耳毒性化合物が腫瘍薬、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物、ならびにタキソールおよびタキソール様化合物である場合にも効果的である。

聴力障害の処置または予防を目的とするいくつかの実施態様において、本発明の組成物は、耳毒性物質と共投与される（ｃｏ−ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）。例えば、アミノグリコシド系抗生物質の投与による哺乳動物の感染の処置のための改善された方法が提供され、その改善とは、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする治療有効量の一つまたはそれ以上の化合物、特に新規ｓｉＲＮＡをそのような処置が必要な患者に投与し抗生物質に関連する耳毒性誘発の難聴を軽減または予防することを含むものである。耳毒性誘発の難聴を軽減または予防する化合物、特に新規ｓｉＲＮＡは、好ましくは、内耳に局所的に、場合により鼓膜内注射により投与される。

さらに別の実施態様において、化学療法化合物の投与による哺乳動物のがんの処置のための改善された方法が提供され、その改善とは、治療有効量の本発明の組成物をそのような処置が必要な患者に投与し化学療法薬に関連する耳毒性誘発の難聴を軽減または予防することを含むものである。別の実施態様において、本処置方法は、その耳毒性副作用を処置するために、化学療法剤の投与に起因する難聴に対して適用される。本発明の方法に適した耳毒性化学療法剤には、シスプラチンまたはシスプラチン様化合物、タキソールまたはタキソール様化合物を含む抗腫瘍薬、ならびに耳毒性誘発の難聴を引き起こすと考えられる他の化学療法剤、例えば悪性血液疾患および肉腫を処置するために使用される抗腫瘍薬であるビンクリスチン、が含まれるがこれらに限定されない。シスプラチン様化合物には、特に、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、テトラプラチン、オキサリプラチン、アロプラチン、およびトランスプラチンが含まれる。別の実施態様において、本発明の方法は、典型的にはマラリアの処置に使用されるキニーネおよびその合成基質の投与に起因する難聴に対して、その耳毒性副作用を処置するために、適用される。別の実施態様において、本発明の方法は、利尿薬の投与に起因する難聴に対して適用される。利尿薬、特に「ループ」利尿薬、すなわち、主としてヘンレ係蹄において作用する利尿薬が候補耳毒性物質である。本発明の方法にとって非限定の実例には、フロセミド、エタクリン酸（ｅｔｈａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ）、および水銀剤が含まれる。利尿薬は、典型的には、浮腫を予防または除去するために使用される。利尿薬はまた、非浮腫性の状態、例えば高血圧、高カルシウム血症、特発性高カルシウム尿症、および腎性尿崩症においても使用される。

別の実施態様において、本発明の方法は、褥瘡の発症または重症度の処置または予防に適用される。この方法および組成物は、ＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする予防有効量または治療有効量の一つまたはそれ以上の化合物、特に新規な低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をそのような処置が必要な哺乳動物に投与することを含む。褥瘡の発症または重症度を処置または予防する化合物、特に新規ｓｉＲＮＡは、好ましくは損傷領域に局所投与される。本発明の方法および組成物は、継続的な圧迫（通常はベッドまた
は車椅子によるもの）により、身体の脆弱な部分への循環が遮断された場合に生じる褥瘡または圧迫潰瘍の処置および予防に効果的である。この方法および組成物は、感覚が減退したもしくは無感覚の患者または衰弱、やつれた、麻痺状態の、もしくは長期間寝たきりの患者に効果的である。本発明の組成物は、この組成物を用いて褥瘡の治癒を改善するのにも効果的である。この組成物は、何らかの治癒が開始される前の段階または特定のびらんが形成される前の段階でさえ（予防的処置）も含めて、治癒プロセスにおける任意の特定の段階において使用され得る。

本発明に従い処置しようとする他の種類の創傷には、ｉ）一般的な創傷、例えば、手術性、外傷性、感染性、虚血性、熱性、化学性、および水疱性の創傷；ｉｉ）口腔特異的な創傷、例えば抜歯後の創傷、特に嚢および膿瘍、潰瘍、および細菌、ウイルスまたは自己免疫学的原因の病巣の処置と関連する歯内創傷、機械的、化学性、熱性、感染性、および苔癬様の創傷；ヘルペス潰瘍、アフタ性口内炎、急性壊死性潰瘍性歯肉炎、および口腔焼灼症候群が具体例である；ならびにｉｉｉ）皮膚の創傷、例えば腫瘍、熱傷（例えば、化学性、熱性）、病巣（細菌性、ウイルス性、自己免疫性）、刺傷、および外科的切開も含まれる。

本発明の方法および組成物はまた、特に褥瘡、静脈性潰瘍、および糖尿病性潰瘍を含むいずれの慢性的な創傷の処置および予防に効果的である。これらの慢性創傷型の全てにおいて、その根底にある増悪事象は、虚血期およびその後の再灌流期である。これらの虚血−再灌流事象は通常反復的なものであり、このことは虚血−再灌流の悪影響が増幅され、最終的には潰瘍化を引き起こす程度に至ることを意味する。褥瘡および糖尿病性足潰瘍の両方について、虚血現象は、組織への灌流を妨げるのに十分な継続的圧迫の結果であり、その圧迫が最終的に取り除かれた場合、再灌流傷害が起こる。本発明の組成物は、慢性創傷における虚血−再灌流により引き起こされる損傷を妨げるのに効果的である。

本発明の組成物はまた、虚血−再灌流に関連する他の状態、例えば臓器移植、腸吻合および結腸吻合、大血管手術、分離した四肢の縫合、バルーン血管形成術またはいずれかの心臓手術、脳卒中または脳外傷、四肢移植、肺高血圧、低酸素血症、および非心臓性肺水腫、急性腎不全、急性緑内障、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、網膜血管閉塞、蝸牛虚血、微小血管手術、ならびに強皮症における虚血病巣であるがこれらに限定されない、においても効果的である。

本発明の方法および組成物はまた、音響外傷または機械的外傷、好ましくは内耳有毛細胞の喪失をもらたす音響外傷または機械的外傷の処置に効果的である。本発明において処置しようとする音響外傷は、極めて大きな音への一回の曝露によりまたは毎日約８５デシベル超の音量に長期間曝露した後に引き起こされ得る。本発明において処置しようとする機械的な内耳外傷は、例えば内耳への電子機器の挿入手術後の内耳外傷である。本発明の組成物は、この手術に関係する内耳有毛細胞への損傷を防止または最小限に抑える。耳毒性誘発の難聴を軽減または予防する化合物、特に新規ｓｉＲＮＡは、好ましくは内耳に局所的に、場合により鼓膜内注射により投与される。

さらに、本発明の組成物は、虚血、場合により虚血−再灌流が関与するいずれかの状態を処置するのに使用することができる。このような状態には、血管形成術、心臓手術、または血栓溶解に起因する；臓器移植に起因する；形成外科の結果としての；重度のコンパートメント症候群の際の；重度の四肢の再接続の際の；多臓器不全症候群の結果としての；脳における脳卒中または脳外傷の結果としての；慢性創傷、例えば褥瘡、静脈性潰瘍、および糖尿病性潰瘍と関連する；骨格筋虚血または四肢移植の際の；腸間膜虚血または急性虚血性腸疾患の結果としての虚血または虚血−再灌流；肺高血圧、低酸素血症、および非心臓性肺水腫を引き起こす、下胴虚血の結果としての呼吸不全；腎移植、大手術、外傷、および敗血症、ならびに出血性ショック後に見られるような急性腎不全；敗血症；多くの眼疾患、例えば急性緑内障、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、および網膜血管閉塞において失明を引き起こす、急性血管閉塞の結果として起きる網膜虚血；蝸牛虚血；頭頸部の欠陥に対する微小血管手術における弁不良（ｆｌａｐ ｆａｉｌｕａｒ）；強皮症におけるレイノー現象およびそれに付随する指虚血病巣；脊髄損傷；血管手術；外傷性横紋筋融解症（圧挫症候群）；ならびにミオグロビン尿症が含まれる。さらに、虚血／再灌流は、以下の状態に関与する可能性がある：高血圧、高血圧性脳血管疾患、動脈瘤破裂、血栓または塞栓の際に起きる血管の狭窄または閉塞、血管腫、血液疾患、心停止または心不全を含むいずれかの形態の心機能障害、全身性低血圧、心停止、心臓性ショック、敗血症性ショック、脊髄損傷、頭部外傷、発作、腫瘍からの出血；ならびに脳卒中、パーキンソン病、てんかん、うつ、ＡＬＳ、アルツハイマー病、ハンチントン病、およびいずれかのその他の疾患により誘発される認知症（例えばＨＩＶ誘発の認知症）等の疾患。さらに、虚血性のエピソードは、中枢神経系に対する機械的外傷、例えば頭部または脊椎への殴打による傷害により引き起こされ得る。外傷には、頭部、頸部、または脊柱のいずれかの位置またはそれらの付属物と外来物体との外傷性の接触により生じ得る組織への傷害、例えば擦過傷、切開、挫傷、穿刺、圧迫等が含まれ得る。他の形態の外傷性傷害は、体液の不適当な蓄積（例えば正常な脳脊髄液または硝子体液の産生、代謝回転、もしくは量の調節の遮断もしくは機能障害、または硬膜下もしくは頭蓋内の血腫もしくは水腫）によるＣＮＳ組織の狭窄または圧迫から起こり得る。同様に、外傷性の狭窄または圧迫は、異常な組織、例えば転移性または原発性の腫瘍が多量に存在することにより起こり得る。

「疾患を処置する」は、疾患に関連する症状を緩解させる、疾患の重症度を低下させるもしくは疾患を治癒する、または疾患が発症するのを予防するのに効果的な治療物質を投与することを意味する。「処置」は、治療的処置および、その目的が疾患または障害を防ぐまたは鈍化（緩和）させることである、予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）処置の両方を意味する。

「治療有効用量」は、生存率の改善、より迅速な回復、または症状の改善もしくは排除、および当業者により適切な決定手段として選択される他の指標を含むがこれらに限定されない患者または患者の生理系における改善を達成するのに効果的な薬学的化合物または組成物の量を意味する。

本明細書中に開示され本発明に包含される疾患の処置方法には、ＲＴＰ８０１阻害剤を、追加のＲＴＰ８０１阻害剤、以下に詳述されるような活性成分の薬理学的特性を改善する物質、または処置しようとする疾患、例えば特に黄斑変性、ＣＯＰＤ、ＡＲＦ、ＤＲ、シスプラチンまたは音響外傷誘発難聴の処置に効果的であることが知られている追加の化合物と併せて投与することが含まれ得る。「〜と併せて」は、〜の前、同時、または後を意味する。例示の併用療法についてのさらなる詳細は以下に示されている。

別の実施態様において、本発明は、上記のような、黄斑変性、ＣＯＰＤ、ＡＲＦ、ＤＲ、シスプラチンもしくは音響外傷誘発難聴またはおずれかの他の眼疾患、微小血管もしくは呼吸器状態、または聴力障害に罹患した患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用、ならびに上記疾患および状態を処置するための薬剤の製造のための、治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用を提供する。この実施態様において、ＲＴＰ８０１阻害剤は、図１（配列番号１）に示される配列に対するアンチセンス配列を含む配列を有する連続ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含み得る。さらに、ＲＴＰ８０１阻害剤は、図１（配列番号１）に示される配列に対するアンチセンス配列である配列を有するポリヌクレオチドを含む発現ベクターであり得る。前記使用に従うＲＴＰ８０１阻害剤はまた、抗体、例えば図２（配列番号２）に示される配列の連続アミノ酸を含むポリペプチド内に存在するエピトープに特異的に結合する中和抗体であり得る。さらに、ＲＴＰ８０１阻害剤は、ＲＴＰ８０１遺伝子ｍＲＮＡを標的化するＲＮＡ分子、場合によりｓｉＲＮＡ、場合により表Ａ〜Ｄ（配列番号３〜５３６）に示されるいずれかの配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０もしくは表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８、またはリボザイムであり得る。

従って、本明細書中に開示される情報に従えば、本明細書中に開示される方法のいずれか、本明細書中に開示される使用のいずれか、および本明細書中に開示される薬学的組成物のいずれかにおいて使用されるＲＴＰ８０１阻害剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡを含むベクター、ｓｉＲＮＡを発現するベクター、および内因的なプロセシングを受けてｓｉＲＮＡとなるいずれかの分子からなる群より選択され得る。本明細書中で詳述されているように、このｓｉＲＮＡは、好ましくは、表Ａ〜Ｄ（配列番号３〜５３６）に示されるいずれかの配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含むｓｉＲＮＡ、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８である。

「呼吸器疾患」は、特に慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気腫、慢性気管支炎、喘息、および肺がんを含む全てのタイプの肺疾患を含むがこれらに限定されない呼吸器系の状態、疾患、または症候群を意味する。気腫および慢性気管支炎は、ＣＯＰＤの一部としてまたは独立して発症し得る。

「微小血管障害」は、微視的な毛細血管およびリンパ管に影響を及ぼすいずれかの状態、特に血管痙攣疾患、脈管炎疾患、およびリンパ管閉塞疾患を意味する。微小血管障害の例には、特に：眼障害、例えば一過性黒内障（塞栓性またはＳＬＥ続発性）、ａｐｌａ症候群、Ｐｒｏｔ ＣＳおよびＡＴＩＩＩ欠損、ＩＶドラッグの使用によって引き起こされる微小血管病変、異常蛋白血症、側頭動脈炎、前部虚血性視神経症、視神経炎（原発性または自己免疫疾患続発性）、緑内障、フォンヒッペル・リンダウ病、角膜疾患、角膜移植後拒絶反応白内障（ｃｏｒｎｅａｌ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ ｃａｔａｒａｃｔｓ）、イールズ病、霜状分枝血管炎、輪状バックリング手術（ｅｎｃｉｒｃｌｉｎｇ ｂｕｃｋｌｉｎｇ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ）、扁平部炎を含むブドウ膜炎、脈絡膜黒色腫、脈絡膜血管腫、視神経形成不全；網膜状態、例えば網膜動脈閉塞症、網膜静脈閉塞症、未熟児網膜症、ＨＩＶ網膜症、プルチャー網膜症（Ｐｕｒｔｓｃｈｅｒ ｒｅｔｉｎａｐａｔｈｙ）、全身性血管炎および自己免疫疾患の網膜症、糖尿病性網膜症、高血圧性網膜症、放射線網膜症、網膜動脈分枝閉塞症または網膜静脈分枝閉塞症、特発性網膜血管炎、動脈瘤、視神経網膜炎、網膜塞栓形成、急性網膜壊死、バードショット網膜脈絡膜症（ｂｉｒｄｓｈｏｔ ｒｅｔｉｎｏｃｈｏｒｏｉｄｏｐａｔｈｙ）、長期的網膜剥離；全身性の状態、例えば真性糖尿病、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、糖尿病関連微小血管病変（本明細書中に詳述されるような）、過粘稠度症候群、大動脈弓症候群および眼虚血症候群、頚動脈海綿静脈洞瘻、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、ＳＳ−Ａ自己抗体を伴なう細動脈炎、急性多病巣性出血性血管炎（ａｃｕｔｅ ｍｕｌｔｉｆｏｃａｌ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）、感染に起因する血管炎、ベーチェット病に起因する血管炎、サルコイドーシス、凝固障害、神経障害、腎症、腎臓の微小血管疾患、ならびに虚血性微小血管状態が含まれる。

微小血管障害は、血管新生的要素を含み得る。用語「血管新生障害」は、血管形成（新生血管形成）が患者に悪影響を及ぼす状態を意味する。眼の新生血管形成の例には：網膜疾患（糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、慢性緑内障、網膜剥離、および鎌状赤血球網膜症）；虹彩ルベオーシス；増殖性硝子体網膜症；炎症性疾患；慢性ブドウ膜炎；腫瘍（網膜芽腫、偽神経膠腫、および黒色腫）；フックス紅彩異色性虹彩毛様体炎（Ｆｕｃｈｓ' ｈｅｔｅｒｏｃｈｒｏｍｉｃ ｉｒｉｄｏｃｙｃｌｉｔｉｓ）；血管新生緑内障；角膜新生血管（虹彩の炎症性、移植性、および発達性の形成不全）；硝子体切除および水晶体切除の両手術後の新生血管形成、血管疾患（網膜虚血、脈絡膜血管不全、脈絡膜血栓、および頸動脈虚血）；視神経の新生血管形成；ならびに眼の穿通または挫傷性の眼外傷に起因する新生血管形成が含まれる。これら全ての血管新生状態は、本発明の化合物および薬学的組成物を用いて処置され得る。

「眼疾患」は、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、滲出型および萎縮型ＡＭＤ、眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症、ブルッフ膜における破裂、近視性変性、眼腫瘍、網膜変性疾患、および網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）を含むいずれかの状態を含むがこれらに限定されない眼の状態、疾患、または症候群を意味する。本明細書中に開示される、本発明の方法により処置され得るいくつかの状態、例えばＤＲは、本明細書中に示される定義の下では微小血管障害および眼疾患のいずれかまたはその両方とされている。

本発明に関連する難聴は、内耳有毛細胞を含む末端器官の病変、例えば音響外傷、ウイルス性内リンパ迷路炎（ｖｉｒａｌ ｅｎｄｏｌｙｍｐｈａｔｉｃ ｌａｂｙｒｉｎｔｈｉｔｉｓ）、メニエール病に起因するものであり得る。難聴には、一時的または継続的な、音響的刺激の不在下での音の感知である耳鳴が含まれ、これは感音難聴と診断される。聴力損失は、細菌またはウイルスの感染に起因し得る、例えば耳帯状疱疹、急性中耳炎により引き起こされる化膿性迷路炎、化膿性髄膜炎、慢性中耳炎、ウイルス性のものを含む突発性難聴、例えばおたふく風邪、麻疹、インフルエンザ、水痘、単核細胞症、およびアデノウイルスを含むウイルスにより引き起こされるウイルス性内リンパ迷路炎であり得る。聴力損失は、先天性であり得る、例えば風疹、出産時の無酸素症、分娩時の外傷に起因する内耳への出血、母体に投与された耳毒性薬、胎児赤芽球症、ならびにワールデンブルヒ症候群およびハーラー症候群を含む遺伝性状態により引き起こされ得る。聴力損失は、騒音誘発性であり得、一般的には、内耳に損傷を与える約８５デシベル（ｄｂ）超の騒音に起因し得る。好ましくは、聴力損失は、内耳の聴覚部分、特に内耳有毛細胞に影響する音響外傷または耳毒性薬により引き起こされる。難聴および平衡機能障害についての解説および診断に関するＴｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，１４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（１９８２），Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｎ．Ｊ．の１９６、１９７，１９８、および１９９章ならびに最新の第１６版における、２０７および２１０章を含む対応する章は参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明との関係で処置または予防しようとする聴力障害または難聴（または平衡機能障害）は、好ましくは、理論によって拘束されるものではないが、耳毒性または外傷により誘発される内耳有毛細胞に対するアポトーシス性の損傷である。処置の必要がある患者には、既に難聴にかかった患者、難聴を起こし易い患者、および難聴を予防しようとする患者が含まれる。理論によって拘束されるものではないが、難聴は、アポトーシス性の内耳有毛細胞の損傷または喪失に起因し得、損傷または喪失は感染、機械的傷害、大音量、加齢、または化学誘発性の耳毒性により引き起こされる。耳毒性物質には、抗腫瘍剤を含む治療薬、サリチラート類、キニーネ類、およびアミノグリコシド系抗生物質、食物または薬物中の混入物質、ならびに環境または産業汚染物質が含まれる。典型的には、処置は、耳毒性または音響外傷、特に治療薬の投与もしくは音響外傷を誘発する環境への曝露に起因するまたは起因すると考えられる耳毒性または音響外傷を予防または軽減するために行われる。好ましくは、治療上有効な組成物は、耳毒性作用または外傷作用を予防または軽減するために、曝露の直後に投与される。より好ましくは、処置は、耳毒性薬物または耳毒性もしくは音響外傷を誘発する環境への曝露の前にまたはそれらと同時のいずれかに組成物を投与することによって予防的に提供される。

難聴は化学療法によって誘発され得る。より詳細には、難聴は、化学療法剤、例えばエトポシド、５−ＦＵ（５−フルオロウラシル）、シスプラチナム（シスプラチン）、ドキソルビシン、ビンカアルカロイド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、タキソール、シクロホスファミド、イホスファミド、クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｍｂｕｃｉｌ）、ブスルファン、メクロレタミン（ｍｅｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、マイトマイシン、ダカルバジン、カルボプラチン、チオテパ、ダウノルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、エスペラマイシン（ｅｓｐｅｒａｍｉｃｉｎ）Ａ１、ダクチノマイシン（ｄａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、プリカマイシン（ｐｌｉｃａｍｙｃｉｎ）、カルムスチン（ｃａｒｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン（ｌｏｍｕｓｔｉｎｅ）、タウロムスチン（ｔａｕｒｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ストレプトゾシン（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ）、メルファラン、ダクチノマイシン、プロカルバジン、デキサメタゾン、プレドニゾン（ｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、２−クロロデオキシアデノシン、シタラビン、ドセタキセル、フルダラビン、ゲムシタビン、ハーセプチン（ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、ヒドロキシ尿素、イリノテカン、メトトレキサート、オキサリプラチン、リツキシン（ｒｉｔｕｘｉｎ）、セムスチン（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）、エピルビシン、エトポシド、トムデックス（ｔｏｍｕｄｅｘ）、およびトポテカン、またはこれらの化学療法剤のうちの一つの化学的アナログにより引き起こされ得る。難聴を引き起こす可能性が最も高い化学療法剤は、シスプラチナム（シスプラチン）およびシスプラチン様化合物である。

本発明との関係において、「耳毒性物質」は、その化学的作用を通じて、聴力に関連する神経系の音受容器の活性を傷つけ、損なわせ、または阻害し、さらに聴力（および／または平衡機能）を損なわせる物質を意味する。本発明との関係において、耳毒性には、内耳有毛細胞に対する有害な作用が含まれる。難聴を引き起こす耳毒性剤には、腫瘍剤、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、シスプラチンおよびシスプラチン様化合物、タキソールおよびタキソール様化合物、ジデオキシ化合物、例えばジデオキシイノシン；アルコール；金属；職業曝露または環境曝露に関与する工業毒；食物または薬物中の混入物質；ならびにビタミンまたは治療剤、例えば抗生物質、例えばペニシリンまたはクロラムフェニコールの過剰投与、ならびにビタミンＡ、Ｄ、またはＢ６、サリチラート類、キニーネ類、およびループ利尿薬の大量投与が含まれるがこれらに限定されない。「耳毒性剤への曝露」は、耳毒性剤が動物に対して使用されることまたは動物と接触することを意味する。耳毒性剤に対する曝露は、直接的投与により、例えば食物、薬物、または治療剤、例えば化学療法剤の摂取または投与により、偶発的混入により、または環境曝露、例えば空気曝露もしくは水暴露によりなされ得る。

「ＲＴＰ８０１遺伝子」は、図１（配列番号１）に示されるオープンリーディングフレーム配列またはその任意の相同配列、好ましくは少なくとも７０％の同一性、より好ましくは８０％の同一性、さらにより好ましくは９０％もしくは９５％の同一性を有する相同配列をコードするＲＴＰ８０１を意味する。これには、本明細書中に記載されるような、配列番号１由来の、変異、改変、または修飾がなされたあらゆる配列が含まれる。従って、好ましい実施態様において、ＲＴＰ８０１は、配列番号１に従う核酸配列によりコードされる。本発明に従う核酸が、好ましくは第一ストレッチとして、ＲＴＰ８０１をコードする核酸の一部に対して相補的および同一であるにすぎないもの、および第一鎖が典型的には本発明に従う核酸よりも短いものも、本発明に含まれる。ＲＴＰ８０１のアミノ酸配列があれば、このようなアミノ酸配列をコードするあらゆる核酸配列は、その遺伝子コードに基づいて当業者によって理解され得るものであることは認められるべきである。しかし、本発明に従う核酸の想定される作用様式から、ＲＴＰ８０１をコードする核酸、好ましくはそのｍＲＮＡが、ＲＴＰ８０１の発現を減少させようとするそれぞれ生物、組織、および／または細胞に存在するものであることが最も好ましい。

「ＲＴＰ８０１ポリペプチド」は、ＲＴＰ８０１遺伝子のポリペプチドを意味し、本発
明の目的上、いずれかの生物由来、場合によりヒト由来の用語「ＲＴＰ７７９」、「ＲＥＤＤ１」、「Ｄｄｉｔ４」、「ＦＬＪ２０５００」、「Ｄｉｇ２」、および「ＰＲＦ１」、生物学的活性を保持するそれらのスプライスバリアントおよびフラグメント、ならびにそれらに対して好ましくは少なくとも７０％、より好まししくは少なくとも８０％、さらにより好ましくは少なくとも９０％または９５％の相同性を有するそれらのホモログを含むことは当然のこととして理解されよう。さらに、この用語は、当然ながらＲＴＰ８０１コード配列における小規模の改変、例えば、特に得られるポリペプチドと天然型のＲＴＰ８０１の間に数個のアミノ酸の違いを与え得る点変異、置換、欠失、および挿入により得られるポリペプチドを包含する。当該分野でよく知られた（例えばＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８８），１９９５年および１９９８年改訂）、高度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でＲＴＰ８０１コード配列またはゲノム配列に結合する核酸配列によりコードされるポリペプチドもまた、この用語に包含される。化学修飾されたＲＴＰ８０１またはＲＴＰ８０１の化学修飾フラグメントもまた、その生物学的活性が保持されている限り、この用語に含まれる。ＲＴＰ８０１は、好ましくは、配列番号２に従うアミノ酸配列を有するまたは含む。本発明の様々な実施態様において本発明に従う核酸を適用することができる、生物の様々な組織の間でおよび一つの種内の異なる生物の間でまたは異なる種の間でアミノ酸配列に違いが存在し得ることは認識されていることである。しかし、本明細書に提供される技術的教示に基づけば、その各配列は、本発明に従う任意の核酸を設計する際に適宜考慮することが可能である。ＲＴＰ８０１の特定のフラグメントには、図２に示される配列のアミノ酸１〜５０、５１〜１００、１０１〜１５０、１５１〜２００、および２０１〜２３２が含まれる。ＲＴＰ８０１のさらなる特定のフラグメントには、図２に示される配列のアミノ酸２５〜７４、７５〜１２４、１２５〜１７４、１７５〜２２４、および２２５〜２３２が含まれる。本明細書で使用するＲＴＰ８０１は、とりわけ、ＷＯ ９９／０９０４６に記載されるタンパク質である。ＲＴＰ８０１とも称されるＲＴＰ８０１は、Ｓｈｏｓｈａｎｉ Ｔら（Ｓｈｏｓｈａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２２，２２８３−９３）によってＨＩＦ−１αの転写標的として記載されている。さらに、Ｅｌｌｉｓｅｎら（Ｅｌｌｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ，１０，９９５−１００５）による研究により、ＲＴＰ８０１は、ｐ５３依存的ＤＮＡ損傷反応遺伝子としておよび上皮の分化に関与するｐ６３依存的遺伝子として同定された。また、ＲＴＰ８０１は、ｐ５３ファミリーのメンバーであるｐ６３の組織特異的パターンを反映し、ＴＰ６３と同様にまたはＴＰ６３に加えて効果的であり、インビトロ分化に対する阻害剤であり、かつ活性酸素種の調節に関与する。それとは別に、ＲＴＰ８０１は、低酸素反応性の転写因子である低酸素誘導因子−１（ＨＩＦ−１）と反応し、典型的にはインビトロまたは虚血性脳卒中の動物モデルにおけるインビボの両方において低酸素時にアップレギュレートされる。ＲＴＰ８０１は、活性酸素種（ＲＯＳ）の調節において機能するようであり、ＲＯＳレベルおよび酸化ストレスに対する低下した感受性の両方がＲＴＰ８０１の異所的発現により上昇する（Ｅｌｌｉｓｅｎ ｅｔ ａｌ．２００２，前出；Ｓｏｓｈａｎｉ ｅｔ ａｌ．２００２，前出）。好ましくは、ＲＴＰ８０１は、生物学的に活性なＲＴＰ８０１タンパク質であり、好ましくはこれらの特徴のうちの少なくとも一つ、好ましくは二つまたはそれ以上、最も好ましくはこれらの特徴の各々およびいずれかを発揮するものである。

理論に拘束されるものではないが、ストレス誘導性の（低酸素、酸化ストレス、熱ストレス、ＥＲストレスに対して反応性の）タンパク質であるＲＴＰ８０１は、エネルギーの不均衡に対する細胞反応の微調整を行う因子である。従って、ストレスの多い条件に起因するアポトーシスから細胞を救出すべきいずれかの疾患（例えば正常細胞の死滅を伴う疾患）またはＲＴＰ８０１発現の変化によりストレスの多い条件に適合した細胞（例えばがん細胞）を死滅させるべきいずれかの疾患の処置に適した標的である。後者の場合、ＲＴ
Ｐ８０１は、がん細胞にとっての生存因子と捉えられ、その阻害剤は、単独療法としてまたは化学療法または放射線療法と併用する感作薬としてがんを処置し得る。

用語「ポリヌクレオチド」は、ＤＮＡヌクレオチド、ＲＮＡヌクレオチド、または両タイプの組み合わせで構成される、すなわち、特に、グアニジン、シトシン、チミジン、アデニン、ウラシル、またはイノシンという塩基を二つまたはそれ以上含む、任意の分子を意味する。ポリヌクレオチドには、天然型のヌクレオチド、化学修飾されたヌクレオチドおよび合成ヌクレオチド、またはそれらの化学アナログが含まれ得る。この用語には「オリゴヌクレオチド」が含まれ、かつこの用語は「核酸」を包含する。

用語「アミノ酸」は、２０個の天然アミノ酸、化学修飾されているアミノ酸（下記参照）、または合成アミノ酸のいずれか一つからなる分子を意味する。

用語「ポリペプチド」は、二つまたはそれ以上のアミノ酸残基で構成される分子を意味する。この用語には、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、およびペプチド模倣物が含まれる。

「ペプチド模倣物」は、天然型の親ペプチドの生物学的効果を模倣することができる非ペプチド構造エレメントを含む化合物である。古典的ペプチドの特徴のいくつか、例えば酵素切断され易いペプチド結合は、通常、ペプチド模倣物に存在しない。

用語「ドミナントネガティブペプチド」は、タンパク質の一部をコードするｃＤＮＡフラグメントによりコードされるポリペプチドを意味する（Ｈｅｒｓｋｏｗｉｔｚ Ｉ．：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ．Ｎａｔｕｒｅ．１９８７ Ｓｅｐ １７−２３；３２９（６１３６）：２１９−２２．Ｒｅｖｉｅｗ；Ｒｏｎｉｎｓｏｎ ＩＢ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｅｌｅｍｅｎｔｓ：ｎｅｗ
ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｏｎｃｏｌｏｇｙ−−ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ Ｐ．Ｒｈｏａｄｓ Ｍｅｍｏｒｉａｌ Ａｗａｒｄ Ｌｅｃｔｕｒｅ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９９５ Ｓｅｐ １５；５５（１８）：４０２３を参照のこと）。このペプチドは、その由来となったタンパク質と異なる機能を有し得る。このペプチドは、全長タンパク質と相互作用してその活性を阻害するか、または他のタンパク質と相互作用し、その全長（親）タンパク質と反応してそれらの活性を阻害することができる。ドミナントネガティブは、そのペプチドが天然型の親タンパク質に打ち勝ちその活性を阻害することで細胞に異なる特徴、例えば死滅に対する抵抗性もしくは感作、または任意の目的の細胞表現型を与えることができることを意味する。治療的介入においては、公知の方法を用いて、そのペプチド自体が薬学的組成物の活性成分として送達される場合もあり、ｃＤＮＡを細胞に送達することもできる。

ペプチドおよびポリペプチドの作製
ポリペプチドは、いくつかの方法を通じて生成され得る。例えば：
１）合成法：
合成ポリペプチドは、市販の機器を用い、既知のＲＴＰ８０１配列またはその一部を用いて生成することができる。
２）組換え法：
ＲＴＰ８０１ポリペプチドまたはそのフラグメントの好ましい製法は、ＲＴＰ８０１遺伝子のｃＤＮＡを含むポリヌクレオチドを発現ベクターにクローニングし、コードされるポリペプチドを発現させるため、そのベクターを保有する細胞を培養し、次いで得られたポリペプチドを精製することであり、その全てが、例えばＭａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｃｏｕｒｓｅ ｍａｎｕａｌ．”ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ （１９９６）．（さらに、Ｂｉｂｌ Ｈａｅｍａｔｏｌ．１９６５；２３：１１６５−７４ Ａｐｐｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９６７ Ｊｕｌ；１５（４）：８５１−６；Ｃａｎ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９６８ Ｍａｙ；４６（５）：４４１−４； Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９６８ Ｊｕｌ；７（７）：２５７４−８０；Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．１９６８ Ｓｅｐ １０；１２６（３）：７４６−７２；Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．１９７０ Ｆｅｂ ２０；３８（４）：８２５−３０を参照のこと）に記載されるような当該分野で公知の方法を用いて行なえる。

発現ベクターは、異種成分の転写を制御するためのプロモーターを含み得、それは選択的な転写を実現するよう構成性プロモーターまたは誘導性プロモーターのいずれかであり得る。場合により、必要な転写レベルを得るために必要とされ得るエンハンサーが含まれ得る。この発現媒体はまた、選択遺伝子を含み得る。

ベクターは、当該分野で公知の様々な方法のうちの任意の一つによって細胞または組織に導入することができる。このような方法には、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８９，１９９２）において、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８９），Ｖｅｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ（１９９５），Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ，Ｂｏｓｔｏｎ ＭＡ（１９８８），およびＧｉｌｂｏａ ｅｔ ａｌ．（１９８６）に一般的に記載されているのを見出すことができる。

３）天然源からの精製：
ＲＴＰ８０１ポリペプチドまたはその天然フラグメントは、当業者に公知の多くの方法、例えば：抗ＲＴＰ８０１抗体による免疫沈降またはＲＴＰ８０１に結合することが既知の任意の分子によるマトリクス結合型アフィニティクロマトグラフィを用いて天然源（例えば組織）から精製することができる。タンパク質の精製は、例えばＭａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｃｏｕｒｓｅ ｍａｎｕａｌ．”ＣＳＨＬ Ｐｒｅｓｓ（１９９６）に記載されるように、当該分野で公知の通りに行われる。

「ＲＴＰ８０１の生物学的効果」または「ＲＴＰ８０１の生物学的活性」は、直接的または間接的な、呼吸器疾患におけるＲＴＰ８０１の効果を意味し、理論に拘束されることなく、これには低酸素条件または過酸素条件により誘発される肺胞細胞のアポトーシスに対するＲＴＰ８０１の効果が含まれる。間接的効果には、アポトーシスを導くシグナル伝達カスケードに関与するいくつかの分子の一つに対するＲＴＰ８０１結合またはその分子に対する効果が含まれるがこれらに限定されない。

「アポトーシス」は、いくつかの細胞機構の活性化から生ずる生理学的なタイプの細胞死、すなわち細胞機構によって制御される死を意味する。アポトーシスは、例えば、細胞死を導く外的誘因、例えばサイトカインもしくは抗ＦＡＳ抗体によるまたは内部シグナルによる細胞機構の活性化の結果であり得る。用語「プログラム細胞死」もまた、「アポトーシス」と相互変換可能に使用され得る。

「アポトーシス関連疾患」は、その病因が全体的または部分的のいずれかでアポトーシスプロセスに関連する疾患を意味する。この疾患は、（例えばがんまたは自己免疫疾患における）アポトーシスプロセスの機能不全によりまたは（例えば特定の神経変性疾患における）アポトーシスプロセスの過剰活動により引き起こされ得る。ＲＴＰ８０１が関与する多くの疾患は、アポトーシス関連疾患である。例えば、アポトーシスは、萎縮型ＡＭＤにおける重要な機構であり、それによって、主に網膜の中心（黄斑）領域において起る、光受容器および色素上皮細胞の萎縮が徐々に進行する。神経網膜のアポトーシスは、糖尿病性網膜症においても重要な機構である。

「阻害剤」は、所望の生物学的または生理学的効果を達成するのに十分な程度に遺伝子またはその遺伝子産物の活性を阻害することができる化合物である。「ＲＴＰ８０１阻害剤」は、ＲＴＰ８０１遺伝子またはＲＴＰ８０１遺伝子産物、特にヒトＲＴＰ８０１遺伝子または遺伝子産物の活性を阻害することができる化合物である。このような阻害剤には、その遺伝子の転写または翻訳に影響を及ぼす物質およびその遺伝子産物の活性に影響を及ぼす物質が含まれる。ＲＴＰ８０１阻害剤はまた、ＲＴＰ８０１プロモーターの阻害剤であり得る。このような阻害剤の例には、特に：ＡＳフラグメント、ｓｉＲＮＡ、またはそれらを含むベクター等のポリヌクレオチド；ドミナントネガティブ体、抗体、および酵素等のポリペプチド；リボザイム等の触媒性ＲＮＡ；ならびに低分子量、例えば２０００ダルトン未満の分子量の化学分子が含まれ得る。特定のＲＴＰ８０１阻害剤は以下に示されている。

「発現ベクター」は、外来細胞に異種ＤＮＡフラグメントを組み込みこれを発現させる能力を有するベクターを意味する。多くの原核生物性および真核生物性の発現ベクターが公知および／または市販されている。適当な発現ベクターの選択は、当業者の知識の及ぶ範囲内にある。

用語「抗体」は特にＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、およびＩｇＥ抗体を意味する。この定義には、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体が含まれる。この用語は、全抗体または抗原結合ドメインを含む抗体のフラグメント、例えばＦｃ部分を含まない抗体、単鎖抗体、ミニ抗体、実質的に抗体の可変性抗原結合ドメインのみからなるフラグメント等を意味する。用語「抗体」はまた、ｃＤＮＡワクチン接種によって得られるポリヌクレオチド配列に体する抗体を意味する場合もある。この用語はまた、それらの抗原または受容体に選択的に結合する能力を保持する抗体フラグメントを含み、特に以下のようなものが例示される：
（１）酵素パパインによる全抗体の消化により生産され軽鎖および重鎖の一部として得ることができる抗体分子の一価の抗原結合フラグメントを含むフラグメントである、Ｆａｂ；
（２）全抗体を酵素ペプシンで処理しその後の還元を行わないことによって得ることができる抗体のフラグメントである、（Ｆａｂ'）₂；（Ｆａｂ' ₂）は、二つのＦａｂフラグメントが二つのジスルフィド結合によってひとまとまりになった二量体である；
（３）二つの鎖として発現された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む遺伝子操作されたフラグメントと定義される、Ｆｖ；ならびに
（４）遺伝子的に融合された単鎖分子として、適切なポリペプチドリンカーにより連結された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含む遺伝子操作された分子と定義される、単鎖抗体（ＳＣＡ）。
ミニボディおよびマイクロボディもまた、この用語に含まれる。マイクロボディは、高度に選択的かつ安定な、シュードノット（ｐｓｅｕｄｏ−ｋｎｏｔ）構造を有する非常に小さな（典型的には約２８〜４５アミノ酸の）タンパク質である。従って、本明細書中に開示される抗体を含むあらゆる応用および新規化合物は、その分子の抗体部分の代わりに
ミニボディまたはマイクロボディを含み得る。

本発明において使用される用語「エピトープ」は、抗体が結合する抗原上の抗原決定基を意味する。エピトープ決定基は通常、分子の化学的に活性な表面群、例えばアミノ酸または糖側鎖からなり、通常特異的な三次元構造的特徴および特異的な荷電的特徴を有する。

抗ＲＴＰ８０１抗体の作製
ＲＴＰ８０１またはそれ由来のフラグメントに結合する抗体は、免疫抗原としてインタクトなポリペプチドまたはそれより小さなポリペプチドを含むフラグメントを使用して作製され得る。例えば、ＲＴＰ８０１のＮ末端もしくはＣ末端またはいずれか他の適切なドメインに特異的に結合する抗体を生成するのが望ましい場合がある。動物を免疫するのに使用されるポリペプチドは、翻訳ｃＤＮＡまたは化学合成から誘導でき、それらは所望の場合はキャリアタンパク質に結合され得る。このようなポリペプチドに化学的に結合される一般的に使用されるキャリアには、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、サイログロブリン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、および破傷風トキソイドが含まれる。次いで、結合されたポリペプチドが動物を免疫するのに使用される。

所望の場合、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体は、例えばその抗体を生じさせたポリペプチドまたはペプチドを結合させたマトリクスに結合させ、それから溶出させることによってさらに精製することができる。当業者は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の精製および／または濃縮のための、免疫学において一般的な様々な技術を理解している（Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ，Ｕｎｉｔ ９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，１９９４）。

フラグメントを含む全てのタイプの抗体の作製法は当該分野で公知である（例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）を参照のこと）。適切なアジュバント下での免疫原の調製、抗体の結合性の測定、抗体の単離の全ての必要な工程を含む免疫法、モノクローナル抗体の取得法、およびモノクローナル抗体のヒト化は全て、当業者に公知である。

抗体は、ヒト化抗体またはヒト抗体であり得る。抗体は、ＣＤＲグラフティング法（ＥＰ２３９,４００：ＰＣＴ公開ＷＯ．９１／０９９６７；米国特許第５,２２５,５３９号；同第５,５３０,１０１号；および同第５,５８５,０８９号）、ベニアリング法または再サーフェシング法（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ ５９２,１０６；ＥＰ ５１９，５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２８（４／５）：４８９−４９８（１９９１）；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４（１９９４）；Ｒｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ９１：９６９−９７３（１９９４））、およびチェーンシャッフリング法（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む当該分野で公知の様々な技術を用いてヒト化することができる。

定義されるようなモノクローナル抗体には、一つの種（例えばマウス、ウサギ、ヤギ、ラット、ヒト等）由来の抗体ならびに二つ（またはそれ以上）の種由来の抗体、例えばキメラ抗体およびヒト化抗体が含まれる。

ヒト患者の治療的処置には完全ヒト抗体が特に望ましい。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から誘導された抗体ライブラリを用いるファージディスプレイ法を含む当該分野
で公知の様々な方法によって製造され得る。各々その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第４,４４４,８８７号および同第４,７１６,１１１号；ならびにＰＣＴ公開ＷＯ ９８／４６６４５、ＷＯ ９８／５０４３３、ＷＯ ９８／２４８９３、ＷＯ ９８／１６６５４、ＷＯ ９６／３４０９６、ＷＯ ９６／３３７３５、およびＷＯ ９１／１０７４１もまた参照のこと。

ヒト化抗体、ヒト抗体、および抗体フラグメントを含む全てのタイプの抗体に関するさらなる情報は、その全体が参照により本明細書に組み込まれるＷＯ ０１／０５９９８において見出すことができる。

中和抗体は、場合により例えば生存アッセイによる中和活性についての追加のスクリーニング工程を加えた、上記の方法により調製できる。

用語「化学化合物」、「低分子」、「化学分子」、「小化学分子」、および「小化学化合物」は、本明細書中で相互変換可能に使用され、合成により製造されるかまたは天然源から獲得でき、通常２０００ダルトン未満、１０００ダルトン未満、さらには６００ダルトン未満の分子量を有するいずれかの特定のタイプの化学的部分を意味すると理解される。

本発明はまた、二本鎖構造を有する機能的核酸、薬剤の製造のためのそれらの使用、そのような機能的核酸を含む薬学的組成物、および患者の処置方法に関する。

低酸素は、非常に多くの疾患、例えば脳卒中、気腫、および最適以下の酸素利用能および低酸素条件に対する組織損傷反応に関連する梗塞、の病理学的機序において鍵となる要素であると認識されている。腫瘍を含む、急速に増殖する組織においては、最適以下の酸素利用能は、望ましくない血管新生により補償される。従って、少なくともがん疾患の場合、血管系の増殖は望ましくない。

この観点から、血管新生および血管増殖のそれぞれの阻害が熱心に研究されている。今日すでに、望ましくない血管新生および血管増殖を阻害するいくつかの化合物が利用可能となっている。特に有名な化合物のいくつかはＶＥＧＦおよびＶＥＧＦ受容体を阻害する化合物である。両方の場合において、ＶＥＧＦの作用は、ＶＥＧＦをブロックすることによって、例えばＧｅｎｅｎｔｅｃｈ社のＡＶＡＳＴＩＮ（ＶＥＧＦに特異的なモノクローナルＡＢ）によって追求されるようにＶＥＧＦに対する抗体を使用することによって（Ｆｅｒｒａｒａ Ｎ．；Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ．２００４ Ａｕｇ；２５（４）：５８１−６１１）、または対応する受容体、すなわちＶＥＧＦ受容体をブロックすることによって（Ｔｒａｘｌｅｒ Ｐ；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００４ Ｊｕｌ １５；６４（１４）：４９３１−４１；またはＳｔａｄｌｅｒ ＷＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００４ Ｍａｙ １５；１０（１０）：３３６５−７０）のいずれかにより回避される。

しかし、血管新生および血管増殖は、あらゆる動物およびヒトにおいて非常に根本的かつ致命的なプロセスなので、この種の化合物の作用は、血管新生および血管増殖が実際に望まれていない特定部位に集中させなければならず、このためこの種の治療アプローチに関連して適切な標的化または送達が重要事項となっている。

従って、本発明の目的は、望ましくない血管増殖および血管新生のそれぞれを含む、疾患の処置のためのさらなる手段を提供することである。

「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）は、その内因的な細胞性カウンターパートの遺伝
子／ｍＲＮＡの発現を減少またはサイレンシングさせる（妨げる）ＲＮＡ分子を意味する。この用語は、「ＲＮＡ干渉」（ＲＮＡｉ）を含むものと解される。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）により媒介される、哺乳動物における配列特異的な転写後遺伝子サイレンシングプロセスを意味する（Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ ３９１，８０６）。植物における対応プロセスは、一般的に、特異的な転写後遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡサイレンシングと称され、真菌においてはクエリング（ｑｕｅｌｌｉｎｇ）とも称される。ＲＮＡ干渉反応は、一般的にＲＮＡ誘導型サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）と称され、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な配列を有する一本鎖ＲＮＡの切断を媒介する、ｓｉＲＮＡを含むエンドヌクレアーゼ複合体を特徴とする。標的ＲＮＡの切断は、ｓｉＲＮＡ二本鎖のアンチセンス鎖に相補的な領域の中間で行われ得る（Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ ２００１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．，１５，１８８）。これらの用語に関する最近の情報および提唱されているメカニズムについては、Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ Ｅ．，Ｄｅｎｌｉ ＡＭ．，Ｈａｎｎｏｎ ＧＪ：Ｔｈｅ ｒｅｓｔ ｉｓ ｓｉｌｅｎｃｅ．ＲＮＡ．２００１ Ｎｏｖ；７（１１）：１５０９−２１；およびＮｉｓｈｉｋｕｒａ Ｋ．：Ａ ｓｈｏｒｔ ｐｒｉｍｅｒ ｏｎ ＲＮＡｉ：ＲＮＡ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ ＲＮＡ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ａｃｔｓ ａｓ ａ ｋｅｙ ｃａｔａｌｙｓｔ．Ｃｅｌｌ．２００１ Ｎｏｖ １６；１０７（４）：４１５−８を参照のこと。本発明において使用され得るｓｉＲＮＡ分子の例は、表Ａ〜Ｄに示されている。

近年、最も効果的な遺伝子不活性化方法の一つとしてＲＮＡｉが登場した（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，ｖ．３，ｐ．７３７−４７；Ｎａｔｕｒｅ，２００２，ｖ．４１８，ｐ．２４４−５１）。方法として、ＲＮＡｉは、ｄｓＲＮＡ種が特異的なタンパク質複合体に侵入し、そしてその相補的な細胞ＲＮＡを標的化しそれを特異的に分解するする能力に基づく。より詳細には、ｄｓＲＮＡは、ＩＩＩ型ＲＮＡｓｅ（ダイサー、Ｄｒｏｓｈａ等）によって短い（１７〜２９ｂｐ）阻害性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）に消化される（Ｎａｔｕｒｅ，２００１，ｖ．４０９，ｐ．３６３−６；Ｎａｔｕｒｅ，２００３，．４２５，ｐ．４１５−９）。これらのフラグメントおよび相補的ｍＲＮＡは、特異的なＲＩＳＣタンパク質複合体により認識される。全プロセスは、標的ｍＲＮＡのエンドヌクレアーゼ切断により完結する（Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００２，ｖ．３，ｐ．７３７−４７；Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００３ Ｊｕｎ；５（３）：２１７−２４）。

既知の遺伝子に対するｓｉＲＮＡを設計および作製する方法に関する記載については、例えば、Ｐｅｉ ＆ Ｔｕｓｃｈｌ Ｏｎ ｔｈｅ Ａｒｔ ｏｆ Ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉＲＮＡｓ Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３ Ｎｏ．９ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００６；Ｃｈａｌｋ ＡＭ，Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ Ｃ，Ｓｏｎｎｈａｍｍｅｒ ＥＬ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｎｄ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｉＲＮＡ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２００４ Ｊｕｎ １８；３１９（１）：２６４−７４；Ｓｉｏｕｄ Ｍ，Ｌｅｉｒｄａｌ Ｍ．，Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｒｕｌｅｓ ａｎｄ ｅｎｚｙｍａｔｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｉＲＮＡｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００４；２５２：４５７−６９；Ｌｅｖｅｎｋｏｖａ Ｎ，Ｇｕ Ｑ，Ｒｕｘ ＪＪ．：Ｇｅｎｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｓｉＲＮＡ ｓｅｌｅｃｔｏｒ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ．２００４ Ｆｅｂ １２；２０（３）：４３０−２．およびＵｉ−Ｔｅｉ Ｋ，Ｎａｉｔｏ Ｙ，Ｔａｋａｈａｓｈｉ Ｆ，Ｈａｒａｇｕｃｈｉ Ｔ，Ｏｈｋｉ−Ｈａｍａｚａｋｉ Ｈ，Ｊｕｎｉ Ａ，Ｕｅｄａ Ｒ，Ｓａｉｇｏ Ｋ．，Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｇｈｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｓｉＲＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｆｏｒ ｍａｍｍａｌｉａｎ ａｎｄ ｃｈｉｃｋ ＲＮＡ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２００４ Ｆｅｂ ９；３２（３）：９３６−４８を参照のこと。Ｌｉｕ Ｙ，Ｂｒａａｓｃｈ ＤＡ，Ｎｕｌｆ ＣＪ，Ｃｏｒｅｙ ＤＲ．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ａｎｄ ｉｓｏｆｏｒｍ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００４ Ｆｅｂ ２４；４３（７）：１９２１−７もまた参照のこと。ＰＣＴ公開ＷＯ ２００４／０１５１０７（Ａｔｕｇｅｎ）およびＷＯ ０２／４４３２１（Ｔｕｓｃｈｌ ｅｔ ａｌ）、ならびに修飾型／安定性向上型のｓｉＲＮＡの作製についてのＣｈｉｕ ＹＬ，Ｒａｎａ ＴＭ．ｓｉＲＮＡ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ＲＮＡｉ：ａ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ，ＲＮＡ ２００３ Ｓｅｐ；９（９）：１０３４−４８ならびに米国特許第５８９８０３１号および同第６１０７０９４号（Ｃｒｏｏｋ）もまた参照のこと。

細胞内でｓｉＲＮＡを生成できるＤＮＡベースのベクターが開発されている。この方法は、一般的に、細胞内で効率的にプロセシングされてｓｉＲＮＡを形成する短鎖ヘアピン型ＲＮＡの転写を含む。Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２００２，９９：１４４３−１４４８；Ｐａｄｄｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ ２００２，１６：９４８−９５８；Ｓｕｉ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ ２００２，８：５５１５−５５２０；およびＢｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００２，２９６：５５０−５５３。これらの報告は、多くの内因的および外因的に発現される遺伝子を特異的に標的化することができるｓｉＲＮＡを生成させる方法を記載している。

ｓｉＲＮＡの送達については、例えば、Ｓｈｅｎ ｅｔ ａｌ（ＦＥＢＳ ｌｅｔｔｅｒｓ ５３９：１１１−１１４（２００３）），Ｘｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：１００６−１０１０（２００２），Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｖｉｓｉｏｎ ９：２１０−２１６（２００３），Ｓｏｒｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３２７：７６１−７６６（２００３），Ｌｅｗｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ３２：１０７−１０８（２００２）およびＳｉｍｅｏｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１，１１：２７１７−２７２４（２００３）を参照のこと。ｓｉＲＮＡは最近、霊長類における阻害目的の使用に成功している；さらなる詳細についてはＴｏｌｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｔｉｎａ ２４（１） Ｆｅｂｒｕａｒｙ ２００４ ｐｐ １３２−１３８を参照のこと。

本発明のｓｉＲＮＡ
本発明のｓｉＲＮＡの一般的な明細
一般的に、本発明において使用されるｓｉＲＮＡは二本鎖構造を含むリボ核酸を含み、二本鎖構造は第一鎖および第二鎖を含み、第一鎖は連続ヌクレオチドからなる第一ストレッチを含み、第一ストレッチは標的核酸に対して少なくとも部分的に相補的であり、第二鎖は連続ヌクレオチドからなる第二ストレッチを含み、第二ストレッチは標的核酸に対して少なくとも部分的に同一であり、第一鎖および／または第二鎖は２’位に修飾を含む複数の修飾型ヌクレオチド群を含み、その鎖内で各修飾型ヌクレオチド基は片側または両側で隣接ヌクレオチド群と接しており、隣接ヌクレオチド群を形成する隣接ヌクレオチドは非修飾型ヌクレオチドまたは上記修飾型ヌクレオチドの修飾と異なる修飾を有するヌクレオチドのいずれかである。さらに、第一鎖および／または第二鎖は、複数の修飾型ヌクレオチドを含み、かつ複数の修飾型ヌクレオチド群を含む場合がある。

修飾型ヌクレオチド群および／または隣接ヌクレオチド群は多数のヌクレオチドを含み得、その数は１ヌクレオチド〜１０ヌクレオチドを含む群より選択される。本明細書中で特定されるあらゆる範囲に関連して、各範囲は、当然ながらその範囲を定義する二つの数
字を含み、その範囲を定義するために使用される各々の数字の間の任意の個々の整数を表すものである。従って、上記の場合、この群は１ヌクレオチド、２ヌクレオチド、３ヌクレオチド、４ヌクレオチド、５ヌクレオチド、６ヌクレオチド、７ヌクレオチド、８ヌクレオチド、９ヌクレオチド、および１０ヌクレオチドを含む。

第一鎖の修飾型ヌクレオチドのパターンは、第二鎖の修飾型ヌクレオチドのパターンと同じであり得、第二鎖のパターンと整列し得る。さらに、第一鎖のパターンは、第二鎖のパターンに対して一つまたはそれ以上のヌクレオチド分ずれている場合がある。

上記の修飾は、アミノ、フルオロ、メトキシ、アルコキシ、およびアルキルを含む群より選択され得る。

ｓｉＲＮＡの二本鎖構造は、片側または両側において、平滑末端を有する場合がある。とりわけ、二本鎖構造は、第一鎖のＳ’末端および第二鎖の３’末端により定義される二本鎖構造の側部において平滑末端を有する場合があり、または二本鎖構造は第一鎖の３’末端および第二鎖の５’末端により定義される二本鎖構造の側部において平滑末端を有する場合もある。

さらに、二つの鎖の少なくとも一方は、その５’末端に少なくとも１ヌクレオチドのオーバーハングを有し得；そのオーバーハングは少なくとも一つのデオキシリボヌクレオチドからなり得る。少なくとも一方の鎖はまた、場合により、その３’末端に少なくとも一つのヌクレオチドのオーバーハングを有し得る。

ｓｉＲＮＡの二本鎖構造の長さは、典型的には、約１７〜２１、より好ましくは１８または１９塩基である。さらに、第一鎖の長さおよび／または第二鎖の長さは、相互に独立して、約１５〜約２３塩基の範囲、１７〜２１塩基の範囲、および１８または１９塩基を含む群より選択され得る。

さらに、第一鎖と標的核酸の間の相補性は完全なものである場合があり、または第一鎖と標的核酸の間で形成される二本鎖は少なくとも１５ヌクレオチドを含み、二本鎖構造を形成する第一鎖と標的核酸の間で一つのミスマッチまたは二つのミスマッチが生じる場合もある。

いくつかの場合において、第一鎖および第二鎖の両方は、各々、少なくとも一つの修飾型ヌクレオチド群および少なくとも一つの隣接ヌクレオチド群を含み、各々の修飾型ヌクレオチド群は少なくとも一つのヌクレオチドを含み、各々の隣接ヌクレオチド群は少なくとも一つのヌクレオチドを含み、第一鎖の各々の修飾型ヌクレオチド群が第二鎖の隣接ヌクレオチド群と整列し、第一鎖の最末端Ｓ’ヌクレオチドは修飾型ヌクレオチド群のヌクレオチドであり、第二鎖の最末端３’ヌクレオチドは隣接ヌクレオチド群のヌクレオチドである。各々の修飾型ヌクレオチド群は単一ヌクレオチドからなっていてもよく、および／または各々の隣接ヌクレオチド群は単一ヌクレオチドからなっていてもよい。

さらに、第一鎖において、隣接ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドが、修飾型ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドより３’方向に配置された非修飾型ヌクレオチドであり、第二鎖において、修飾型ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドが、隣接ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドより５’方向に配置された修飾型ヌクレオチドである場合がある。

さらに、ｓｉＲＮＡの第一鎖は、８〜１２、好ましくは９〜１１の修飾型ヌクレオチド群を含み得、第二鎖は、７〜１１、好ましくは８〜１０の修飾型ヌクレオチド群を含み得
る。

第一鎖および第二鎖は、非核酸ポリマー、特にポリエチレングリコールで構成され得るループ構造により連結されている場合がある。あるいは、ループ構造は核酸で構成されている場合がある。

さらに、ｓｉＲＮＡの第一鎖の５’末端が第二鎖の３’末端に連結されるか、または第一鎖の３’末端が第二鎖の５’末端に連結される場合があり、この連結は典型的には１０〜２０００核酸塩基の長さを有する核酸リンカーを介して行われる。

本発明のｓｉＲＮＡの特定の明細
本発明は、次の構造（構造Ａ）：
５' （Ｎ）_x−Ｚ ３' （アンチセンス鎖）
３' Ｚ'−（Ｎ'）_y ５' （センス鎖）
［式中、ＮおよびＮ’は各々リボヌクレオチドであり、その糖残基において修飾されているものでも未修飾のものでもよく、（Ｎ）_xおよび（Ｎ'）_yは、各々の連続するＮまたはＮ’が隣のＮまたはＮ’に共有結合によりつながれているオリゴマーであり；
ｘおよびｙの各々は１９〜４０の間の整数であり；
ＺおよびＺ’の各々は存在してもしなくともよいが、存在する場合はｄＴｄＴでありそれを含む鎖の３’末端に共有結合により結合されており；かつ
（Ｎ）_xの配列はＲＴＰ８０１遺伝子のｃＤＮＡに対して相補的な配列を含む］
を有する化合物を提供する。

特に、本発明は、（Ｎ）_xの配列が、表Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤ、特に表Ｄに存在するアンチセンス配列の一つまたはそれ以上を含む上記化合物を提供する。

特に、本発明は、共有結合がホスホジエステル結合であり、ｘ＝ｙ、好ましくはｘ＝ｙ＝１９であり、ＺおよびＺ’が両方とも存在せず、少なくとも一つのリボヌクレオチドがその糖残基の２’位において修飾されており、２’位の部分がメトキシ（２’−Ｏ−メチル）であり、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において一つおきのリボヌクレオチドが修飾されており、アンチセンス鎖の５’末端および３’末端のリボヌクレオチドがそれらの糖残基において修飾されており、かつセンス鎖の５’末端および３’末端のリボヌクレオチドがそれらの糖残基において修飾されていない、上記化合物を提供する。

特に、本発明において使用されるｓｉＲＮＡは、一方の鎖が、５’から３’の方向に、配列番号３〜５２または配列番号１０３〜１７４または配列番号２４７〜２９５または配列番号３４５〜４４０に示される配列を有する連続ヌクレオチドを含み（センス鎖である）、複数の塩基が、好ましくは２−Ｏ−メチル修飾により修飾されているかまたは各々の末端領域のヌクレオチドの最大二つにおいて塩基が変更されたそのホモログであり得る、オリゴリボヌクレオチドである。

さらに、本発明は、患者を処置するため、上記構造（Ａ）の（上記特定のいずれかを有する）化合物を治療有効量含む薬学的組成物を患者に投与することからなる、呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、聴力障害、褥瘡、または他の寝たきりに関連する身体の創傷または脊髄損傷もしくは疾患に罹患した患者の処置方法を提供する。さらに、本発明は、呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、聴力障害、褥瘡、または他の寝たきりに関連する身体の創傷または脊髄損傷もしくは疾患に罹患した患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量の上記構造（Ａ）（上記特定のいずれかを有する）の使用を提供する。

本発明のさらなる側面は、本明細書中で言及される疾患および状態のいずれかの処置の
ための、上記構造（Ａ）の化合物を含む薬学的組成物を提供する。

さらに、この側面は、上記構造（Ａ）の化合物を二つまたはそれ以上含み、二つの化合物が同等またはそうでなければ有益な活性を生じる量で薬学的組成物中で物理的に混合されているか、共有結合もしくは非共有結合により結合されているか、または２〜１００、好ましくは２〜５０、もしくは２〜３０ヌクレオチドの範囲の長さの核酸リンカーにより一緒に接続されている、本明細書中で言及される疾患および状態のいずれかの処置のための薬学的組成物を提供する。従ってこのようなｓｉＲＮＡ分子は、本明細書中に記載されるような二本鎖核酸構造で構成され、二つのｓｉＲＮＡ配列が表Ａ〜Ｄ、好ましくは表Ａから選択され、識別番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８が共有結合もしくは非共有結合により結合またはリンカーにより連結され直列型のｓｉＲＮＡ分子を形成している。このような二つのｓｉＲＮＡ配列を含む直列型ｓｉＲＮＡ分子は、典型的には、３８〜１５０ヌクレオチド長、より好ましくは３８または４０〜６０ヌクレオチド長であり、二つより多いｓｉＲＮＡ配列がこの直列型分子に含まれる場合はそれに応じてそれよりも長くなる。細胞内プロセシングを介して生成されるｓｉＲＮＡ、例えば長鎖型ｄｓＲＮＡをコードする二つまたはそれ以上の長鎖配列で構成される長鎖直列型分子もまた想定されており、二つまたはそれ以上のｓｈＲＮＡをコードする直列型分子も同様である。このような直列型分子もまた本発明の一部であると考えており、それらに関するさらなる情報は以下に記している。

前記の結合型または直列型構造は、各ｓｉＲＮＡの毒性および／またはオフターゲット（ｏｆｆ−ｔａｒｇｅｔ）効果を最小限に抑えつつその効能を高めるという利点を有する。

特に、実施例において使用されるｓｉＲＮＡは、アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、および第１９ヌクレオチドに２’−Ｏ−Ｍｅ基が存在し、センス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、および第１８ヌクレオチドに全く同じ修飾、すなわち２’−Ｏ−Ｍｅ基が存在したよう修飾されている。さらに、本発明に従うこれらの個々の核酸の場合、第一ストレッチが第一鎖と同一であり、第二ストレッチが第二鎖と同一であり、これらの核酸はまた平滑末端を有することに留意されたい。使用されたｓｉＲＮＡはリン酸化されたが、ラージスケールで調製するには非リン酸化型がより簡便であることが想定され、ＲＥＤＤ−１４ＮＰと称される非リン酸化型ＲＥＤＤ１４は、ＣＮＶモデルにおいてＲＥＤＤ−１４と同様生物学的に活性であることが見出された（実施例６を参照のこと）。実施例６〜８の実験において使用されるｓｉＲＮＡの配列は、ＲＥＤＤ１４のそれ、すなわち内部参照番号１４を有する配列である（表Ａを参照のこと）。実施例１４の実験において使用されるｓｉＲＮＡは、８０１＿１および８０１＿４と称され；８０１＿１は表Ｄの内部参照番号２５７（配列番号４２９［センス］および５２５［アンチセンス］）を有し、８０１＿４は表Ｄの内部参照２６０（配列番号４３２［センス］および５２８［アンチセンス］）を有する（表Ｄを参照のこと）。

このようなｓｉＲＮＡもまた、リン酸化型であっても非リン酸化型であってもよい。

オリゴヌクレオチドの末端領域は、１９マー配列においては塩基１〜４および／または１６〜１９であり（以下の表Ａ、Ｂ、およびＤ）、２１マー配列においては塩基１〜４および／または１８〜２１である（以下の表Ｃ）。

さらに、本発明において使用されるｓｉＲＮＡは、一方の鎖が、５’から３’の方向に、配列番号５３〜１０２もしくは配列番号１７５〜２４６もしくは配列番号２９６〜３４４もしくは配列番号４４１〜５３６（アンチセンス鎖）に示される配列を有する連続ヌクレオチドまたは各末端領域のヌクレオチドの最大二つが変更されているそれらのホモログを含むオリゴリボヌクレオチドである。

従って、特定の側面において、このオリゴヌクレオチドは、二本鎖構造を含み、このような二本鎖構造は第一鎖および第二鎖を含み、第一鎖は連続ヌクレオチドからなる第一ストレッチを含み、第二鎖は連続ヌクレオチドからなる第二ストレッチを含み、第一ストレッチはＲＴＰ８０１遺伝子をコードする核酸配列に対して相補的または同一のいずれかであり、第二ストレッチはＲＴＰ８０１遺伝子をコードする核酸配列に対して同一または相補的のいずれかである。前記第一ストレッチは、少なくとも１４ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１８ヌクレオチド、さらにより好ましくは１９ヌクレオチド、または少なくとも２１ヌクレオチドすら含む。一つの実施態様において、第一ストレッチは約１４〜４０ヌクレオチド、好ましくは約１８〜３０ヌクレオチド、より好ましくは約１９〜２７ヌクレオチド、最も好ましくは約１９〜２３ヌクレオチドを含む。一つの実施態様において、第二ストレッチは約１４〜４０ヌクレオチド、好ましくは約１８〜３０ヌクレオチド、より好ましくは約１９〜２７ヌクレオチド、最も好ましくは約１９〜２３ヌクレオチドまたは約１９〜２１ヌクレオチドすら含む。一つの実施態様において、第一ストレッチの最初のヌクレオチドは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列のヌクレオチドに対応し、第一ストレッチの最後のヌクレオチドはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列のヌクレオチドに対応する。一つの実施態様において、第一ストレッチは、配列番号３〜５３６、好ましくは表Ａのシリアル番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表Ｄの２６０〜２６２および２６４〜２６８のいずれかの配列を有するオリゴリボヌクレオチドを含む群より選択されるオリゴヌクレオチドの少なくとも１４連続ヌクレオチドの配列を含む。本発明において使用されるｓｉＲＮＡ分子のさらなる詳細により、二ヌクレオチドｄＴｄＴが３’末端に共有結合により結合されており、および／または少なくとも一つのヌクレオチドにおいて、糖鎖が、場合により２’−Ｏ−メチル修飾を含む修飾により修飾されているオリゴリボヌクレオチドが提供される。さらに、２’ＯＨ基は、−Ｈ −ＯＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ₂、およびＦを含む群より選択される基または部分で置き換え得る。さらに、上記のような本発明の好ましい化合物は、リン酸化型であっても非リン酸化型であってもよい。

さらに、本発明において使用されるｓｉＲＮＡは、両方の鎖における一つおきのヌクレオチドに修飾型の糖が存在するオリゴリボヌクレオチドであり得る。特に、このオリゴリボヌクレオチドは、末端の５’および３’ヌクレオチドにおいて糖が修飾されていないセンス鎖の一つならびに末端の５’および３’ヌクレオチドにおいて糖が修飾されているアンチセンス鎖の一つを含み得る。

さらに、本発明において使用されるさらなる核酸は、上記のような第一ストレッチおよび第二ストレッチで構成される二本鎖構造の任意の末端に、配列番号３〜５３６のいずれか一つの少なくとも１４連続ヌクレオチド、より好ましくは１４連続ヌクレオチドの塩基対を含む。本発明に従う核酸、特に本発明に従うこのような核酸を形成する個々のストレッチの可能性のある長さが与えられれば、配列番号１に詳述されるＲＴＰ８０１遺伝子のコード配列に対して各末端の方にいくらかずらすことが可能であり、このようなシフトは両方向に最大１、２、３、４、５、および６ヌクレオチドであり得、かつこのようにして生成した二本鎖核酸分子もまた本発明の範囲内であることが当業者に理解されよう。

本発明のさらなる側面は、二本鎖構造を含む機能的核酸に関し、このような二本鎖構造は
第一鎖および第二鎖を含み、
第一鎖は連続ヌクレオチドからなる第一ストレッチを含み、第二鎖は連続ヌクレオチ
ドからなる第二ストレッチを含み、
第一ストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して相補的または同一のいずれかであり、第二ストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して同一または相補的のいずれかである。

一つの実施態様において、この核酸はＲＴＰ８０１をダウンレギュレートし、ＲＴＰ８０１のダウンレギュレーションは、ＲＴＰ８０１機能のダウンレギュレーション、ＲＴＰ８０１タンパク質のダウンレギュレーション、およびＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ発現のダウンレギュレーションを含む群より選択される。

一つの実施態様において、第一ストレッチは、少なくとも１４ヌクレオチド、好ましくは少なくとも１８ヌクレオチド、さらにより好ましくは１９ヌクレオチドを含む。

一つの実施態様において、第一ストレッチは、約１４〜４０ヌクレオチド、好ましくは約１８〜３０ヌクレオチド、より好ましくは約１９〜２７ヌクレオチド、最も好ましくは約１９〜２３ヌクレオチドを含む。

一つの実施態様において、第二ストレッチは、約１４〜４０ヌクレオチド、好ましくは約１８〜３０ヌクレオチド、より好ましくは約１９〜２７ヌクレオチド、最も好ましくは約１９〜２３ヌクレオチドを含む。

一つの実施態様において、第一ストレッチの最初のヌクレオチドは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列のヌクレオチドに対応し、第一ストレッチの最後のヌクレオチドはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列のヌクレオチドに対応する。

一つの実施態様において、一つのストレッチは、表Ａ〜Ｄで開示される配列から選択される、好ましくは配列番号５３、６６、６７、７２、７３、７４、７５、７６、７７、９１、９２、９３、９４、９６、１０１、１０２、５２５、５２８、５２９、５３０、５３２、５３３、５３４、５３５、および５３６を含む群より選択される、より好ましくは配列番号６６、７５、７９、９１、９４、１０１、１０２、５２５、および５２８を含む群より選択される、最も好ましくは配列番号６６、７４、７５、７９、５２５、および５２８を含む群より選択される核酸配列の少なくとも１４連続ヌクレオチドの配列を含む。

一つの実施態様において、他のストレッチは、表Ａ〜Ｄで開示される配列から選択される、好ましくは配列番号３、１６、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２９、４１、４２、４３、４４、４５、４６、５１、５２、４２９、４３２、４３３、４３４、４３６、４３７、４３８、４３９、および４４０を含む群より選択される、より好ましくは配列番号１６、２４、２５、２９、４１、４４、５１、および５２を含む群より選択される、最も好ましくは配列番号１６、２４、２５、および２９を含む群より選択される核酸配列の少なくとも１４連続ヌクレオチドの配列を含む。

一つの実施態様において、
第一ストレッチは配列番号５３に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号３に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号６６に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号１６に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号６７に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号１７に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７２に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２２に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７３に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２３に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７４に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２４に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７５に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２５に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７６に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２６に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７７に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２７に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号７９に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号２９に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９１に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４１に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９２に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４２に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９３に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４３に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９４に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４４に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９５に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４５に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号９６に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号４６に示される配列を有する；
第一ストレッチは配列番号１０１に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号５１に示される配列を有する；および
第一ストレッチは配列番号１０２に示される配列を有し、かつ第二ストレッチは配列番号５２に示される配列を有する。

一つの実施態様において、第一ストレッチは、配列番号５３、６６、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７９、９１、９２、９３、９４、９５、９６、１０１、１０２、５２５、５２８、５２９、５３０、５３２、５３３、５３４、５３５、および５３６を含む群より選択される核酸配列を有する。

本発明の核酸に関して、用語「第一」および「第二」ストレッチが使用されているが、これらは単に便宜上使用されているものであり、配列Ｘを有する第一ストレッチおよび配列Ｙを有する第二ストレッチを有するものと表現されている本発明のいずれかの核酸分子はまた同等に、全て本明細書中に示される定義および詳細に従い、一方のストレッチがＲＴＰ８０１遺伝子のコード配列の一部に対してアンチセンスでなければならないアンチセンス鎖に含まれ、もう一方のストレッチがアンチセンス鎖に対して相補的（１００％相補的とは限らない）でなければならないセンス鎖に含まれると解される限り、当然ながら配列Ｙを有する第一ストレッチおよび配列Ｘを有する第二ストレッチを有するものと表現することができると解すべきである。

一つの実施態様において、第一鎖および／または第二鎖は、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の対応するヌクレオチドに対して相補的または同一の、少なくとも一つのオーバーハングヌクレオチドを３’末端に含む。

一つの実施態様において、第一鎖および／または第二鎖は、３’末端に１〜１５個のオーバーハングヌクレオチドを含み、好ましくは第一鎖および／または第二鎖は、３’末端に１〜１０個のオーバーハングヌクレオチドを含み、より好ましくは第一鎖および／または第二鎖は、３’末端に１〜５個のオーバーハングヌクレオチドを含み、最も好ましくは第一鎖および／または第二鎖は、３’末端に１〜２個のオーバーハングヌクレオチドを含む。

一つの実施態様において、第一鎖および／または第二鎖は、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の対応するヌクレオチドと異なる、少なくとも一つのオーバーハングヌクレオチドを含む。
一つの実施態様において、第一鎖は、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の対応するヌクレオチドと異なる、二つのオーバーハングヌクレオチドを含む。
一つの実施態様において、第一鎖は第一ストレッチのみからなる。
一つの実施態様において、第二鎖は第二ストレッチのみからなる。
一つの実施態様において、第一ストレッチおよび／または第一鎖はリボヌクレオチドを含む。
一つの実施態様において、第二ストレッチおよび／または第二鎖はリボヌクレオチドを含む。
一つの実施態様において、第一ストレッチおよび／または第二鎖はリボヌクレオチドからなる。
一つの実施態様において、ヌクレオチドの一部または全てが修飾されている。

好ましい実施態様において、このような修飾は、ヌクレオチドの核酸塩基部分、ヌクレオチドの糖部分、および／またはヌクレオチドのリン酸部分に対するものである。

より好ましい実施態様において、修飾は糖部分の修飾であり、この修飾は２’位の修飾であり、２’ＯＨ基が−Ｈ −ＯＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ₂、および−Ｆを含む群より選択される基または部分で置換されたものである。

一つの実施態様において、修飾は核酸塩基部分の修飾であり、この修飾または修飾型核酸塩基はイノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピルおよびその他のアルキルアデニン類、５−ハロ ウラシル、５−ハロシトシン、５−ハロ シトシン、６−アザシトシン、６−アザ チミン、プソイド−ウラシル、４−チオウラシル、８−ハロアデニン、８−アミノアデニン、８−チオール アデニン、８−チオールアルキル アデニン類、８−ヒドロキシルアデニンおよびその他の８−置換アデニン類、８−ハロ グアニン、８−アミノ グアニン、８−チオール グアニン、８−チオールアルキル グアニン、８−ヒドロキシルグアニンおよびその他の置換グアニン類、その他のアザ−およびデアザ アデニン類、その他のアザ−およびデアザ グアニン類、５−トリフルオロメチル ウラシルおよび５−フルオロ シトシンを含む群より選択される。

一つの実施態様において、修飾はリン酸部分の修飾であり、修飾型リン酸は、ホスホチオエートを含む群より選択される。

一つの実施態様において、第一ストレッチおよび／または第二ストレッチは、２’位に修飾を有する複数の修飾型ヌクレオチド群を含み、各修飾型ヌクレオチド群は、そのストレッチ内で、片側または両側が隣接ヌクレオチド群と接しており、隣接ヌクレオチド群を形成する隣接ヌクレオチドは非修飾型ヌクレオチドまたは上記修飾型ヌクレオチドの修飾と異なる修飾を有するヌクレオチドのいずれかである。

好ましい実施態様において、第一ストレッチおよび／または第二ストレッチはリボヌクレオチドからなる。

より好ましい実施態様において、第一ストレッチおよび第二ストレッチは複数の修飾型ヌクレオチド群を含む。

一つの実施態様において、第一ストレッチは前記複数の修飾型ヌクレオチド群を含む。
一つの実施態様において、第二ストレッチは前記複数の修飾型ヌクレオチド群を含む。
一つの実施態様において、各々の修飾型ヌクレオチド群および／または各々の隣接ヌクレオチド群は、多数のヌクレオチドを含み、その数は１ヌクレオチド〜１０ヌクレオチドを含む群より選択される。
一つの実施態様において、第一ストレッチは第一パターンの修飾型ヌクレオチドを含み、第二ストレッチは第二パターンの修飾型ヌクレオチドを含む。
一つの実施態様において、第一パターンは第二パターンと同一パターンである。

別の実施態様において、第一パターンは第二パターンと整列する。

好ましい実施態様において、第一パターンは第二パターンに対して一つまたはそれ以上のヌクレオチド分ずれている。

一つの実施態様において、修飾型ヌクレオチド群の各々は一つの修飾型ヌクレオチドからなり、隣接ヌクレオチド群の各々は一つの非修飾型ヌクレオチドまたは上記修飾型ヌクレオチドの修飾と異なる修飾を有するヌクレオチドからなる。

好ましい実施態様において、修飾型ヌクレオチドは２’位に−ＯＭｅ基を有する。
好ましい実施態様において、隣接ヌクレオチドは２’ＯＨ基を有するリボヌクレオチドである。

一つの実施態様において、第一ストレッチは５’末端の修飾型ヌクレオチドから始まり、そのストレッチの全ての他のヌクレオチドもまた修飾型ヌクレオチドであり、第二ヌクレオチドは５’末端から始まり全ての他のヌクレオチドが非修飾型ヌクレオチドまたは上記修飾型ヌクレオチドの修飾と異なる修飾を有するヌクレオチドである。

一つの実施態様において、第一ストレッチは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対してアンチセンス配向をしている。

本発明のさらなる側面は、本発明の第一の側面に従う核酸および／または本発明の第二の側面に従うベクター、ならびに好ましくは薬学的に許容できる担体を含み；場合により全身投与または局所投与される薬学的組成物に関する。

一つの実施態様において、この組成物は、腫瘍疾患を含む群より選択される疾患の処置用である。

さらなる側面において、本発明の土台となった問題は、本発明に従う核酸および／または本発明に従うベクターおよび／または本発明に従う薬学的組成物の投与を含む、予防および／または処置が必要な患者の予防および／または処置方法により解決される。

さらなる実施態様において、本発明に従う核酸および／または本発明に従うベクターは、薬剤の製造のための使用される。その薬剤は、腫瘍疾患を含む群より選択される疾患の予防および／または処置用であり得る。腫瘍疾患は、固形腫瘍、ＰＴＥＮ陰性腫瘍を含む転移腫瘍、薬剤耐性腫瘍、および感作のためにＲＴＰ８０１の阻害が使用できる腫瘍を含む群より選択され得る。さらに、腫瘍疾患は末期の腫瘍疾患であるか、または腫瘍抑制因子陰性の細胞を含んでいてもよく；該腫瘍抑制因子はＰＴＥＮであり得る。

本発明のさらなる側面は、以下の工程：
ａ）ＲＴＰ８０１をダウンレギュレートするのに適した核酸を設計またはスクリーニングすること；
ｂ）本発明の上記側面のいずれかに従う核酸の欠如を評価すること；および
ｃ）工程ａ）の核酸の効果と工程ｂ）の核酸の効果を比較する工程
を含む、ＲＴＰ８０１をダウンレギュレートするのに適した核酸の設計またはスクリーニング方法により解決される。

一つの実施態様において、その効果はＲＴＰ８０１のダウンレギュレーションである。

本発明のさらなる側面は、本発明に従う核酸の感受性増強剤としての使用、特に疾患の処置における、好ましくは腫瘍ならびにとりわけ化学療法および／または放射線療法を用いる処置に耐性の腫瘍を含む群より選択される疾患の処置における感受性増強剤としての使用である。本発明の核酸を感受性増強剤として使用することのできるさらなる疾患については、本明細書中に開示されている。

本願は、ＲＴＰ８０１に特異的な二本鎖構造を含む核酸が血管新生／血管増殖および血管漏出（既存の血管からのものおよび増殖過程の血管からのものの両方）の阻害に適した手段であることを開示する。さらに、本願は、（理論に拘束されることなく）ストレス誘導性タンパク質である（低酸素、酸化ストレス、熱ストレス、ＥＲストレスにより誘導される）ＲＴＰ８０１が、エネルギーの不均衡に対する細胞反応の微調整を行う因子であることを開示する。従って、このような二本鎖核酸によるＲＴＰ８０１の阻害は、細胞をストレスが多い条件に起因するアポトーシスから救出すべき（例えば正常細胞の死滅を伴う疾患）またはＲＴＰ８０１発現の変化によりストレスが多い条件に適合した細胞（例えば腫瘍細胞）を死滅させるべきいずれかの疾患の処置に適している。後者の場合、このような二本鎖核酸を通じたＲＴＰ８０１の阻害により、低酸素状態の細胞、特に低酸素状態のがん細胞において抗アポトーシス機能を有するこの生存因子が無力化され、ＲＴＰ８０１を介する保護を失った細胞をアポトーシスに誘導することができる。このことはさらに、他のアポトーシス促進因子が存在する場合にも起こり得る。このような他のアポトーシス促進因子には、中でも、化学療法および放射線療法が含まれる。言い換えると、本発明に従う二本鎖核酸は、がんの処置において単独で（単剤療法として）有効であり、かつ補助療法としても有効であり得る。

このような二本鎖構造は、第一鎖および第二鎖を含み、第一鎖は連続ヌクレオチドの第一ストレッチを含み、第二鎖は連続ヌクレオチドの第二ストレッチを含み、第一ストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して相補的または同一のいずれかであり、第二ストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して同一または相補的のいずれかである。特にこのような種類の二本鎖核酸の標的としてＲＴＰ８０１を使用することによって、血管の増殖および発達ならびに血管新生のそれぞれに関与するカスケードにおける標的に対して、直接的に、従ってＶＥＧＦ阻害剤、例えばＶＥＧＦ抗体により使用される経路とは異なる方法で対処することも可能である。いずれかの理論に拘束されることを望まないが、本発明者らは、本発明に従う核酸が、望ましくない、特に低酸素により誘導される、血管新生および／または血管の増殖または発達が起きるいずれかの疾患に関与するまたはそれに関連して観察される背景を与える細胞においてその機能を発揮し得ると考えている。この考え方は、ＲＴＰ８０１ノックアウトマウスが非低酸素条件下で野生型マウスと異なる表現型を示さないという知見により支持される。疾患状態、例えば腫瘍増殖において観察されるような低酸素が誘導された場合のみ、ＲＴＰ８０１関連ノックアウトは、この種の疾患に罹患したヒトにおいて観察されるのと同様の病理を示す。

本発明に従う核酸は、好ましくは機能的核酸であることが理解されるべきである。本明細書中で使用される場合、機能的核酸という用語は、好ましくは、その機能が、細胞内でいずれかのｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡまたはいずれかの他の転写産物の転写のテンプレートとして作用し、それによって上記のｈｎＲＮＡ、ｍＲＮＡもしくはいずれかの他の転写産物のそれぞれ、または本発明に従う核酸のいずれかが、翻訳プロセス、好ましくは細胞内翻訳プロセスに供され、生物学的に活性なＲＴＰ８０１タンパク質を生じさせるものとは異なる核酸を意味する。本発明において好ましく使用される機能的核酸が、標的核酸の発現を減少させ得るものであることは認識されるべきである。より好ましくは、このような減少は、標的核酸の転写後遺伝子サイレンシングプロセスに基づくものである。さらにより好ましくは、このような減少は、ＲＮＡ干渉に基づくものである。機能的核酸の最も好ましい形態は、ｓｉＲＮＡ分子またはｓｉＲＮＡ分子と同じ効果を有する任意のさらなる分子である。このようなさらなる分子は、ｓｉＲＮＡ、合成ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、および合成ｓｈＲＮＡを含む群より選択される。本明細書中で使用する場合、ｓｉＲＮＡはさらに、発現ベクター由来のｓｉＲＮＡを含み得、好ましい実施態様において発現ベクターはウイルス、例えばアデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、およびレンチウイルスである。本明細書中で使用する場合、ｓｈＲＮＡは、好ましくは、短鎖ヘアピン型ＲＮＡを意味する。このようなｓｈＲＮＡは、合成により作製することもできるし、好ましくはＲＮＡポリメラーゼＩＩＩプロモーターを用いるベクターによりコードされる発現系を用いて生成させることもできる。これと関連して、本発明に従う機能的核酸は、ＲＴＰ８０１に対するものであり、これは本明細書中で好ましくは標的と称され、この標的をコードする核酸は標的核酸と称されることを認識されたい。

好ましくは本明細書中で使用する場合、本発明に従う核酸の二本鎖構造は任意の二本鎖構造を含み、このような二本鎖構造は、好ましくは、基本デザインを有する核酸により提供される第一ストレッチおよび第二ストレッチにより形成される。二本鎖構造は、一つまたは数個のミスマッチを含み得る。このような二本鎖構造は、ワトソン−クリック塩基対および／もしくはフーグステン塩基対ならびに／または類似の塩基対形成機構により形成される。本発明に従う核酸の基本デザインに基づき、一方のストレッチがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分に対してアンチセンス配向をしており、もう一方のストレッチがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分に対してセンス配向をしていることが好ましい。これにより、一方のストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分に対して相補的であり、もう一方のストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分と同一となる。これに関連して、同一という用語は、当然ながら、部分的な同一も意味し、相同性で表現される同一性は、少なくとも８０％、好ましくは９０％、より好ましくは９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％であることを認識すべきである。同一性の定義と同様に、相補性は、相同性の観点で定義することができ、その相同性は、相補鎖がワトソン−クリック塩基対の法則に従い同一鎖に翻訳される場合、同一性と同じ範囲である。代替の実施態様において、一方のストレッチはＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分と同一であり、もう一方のストレッチがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列またはその部分に対して相補的である。

好ましい実施態様において、本発明に従う核酸は、ＲＴＰ８０１機能をダウンレギュレートする。ＲＴＰ８０１機能のダウンレギュレーションは、好ましくは、そのタンパク質レベルおよび／またはｍＲＮＡレベルでの発現レベルの低下により生じ、そのような発現レベルの低下、好ましくはタンパク質レベルでの発現レベルの低下は、本発明に従う核酸が投与されないまたは機能的活性を発揮しない条件下での発現を基準にして、少ない方では５％、高い方では１００％であり得る。このような条件は、好ましくは、発現系、好ましくはＲＴＰ８０１の発現系の条件またはそのような発現系に存在するような条件である。このような発現系は、好ましくは、翻訳系であり、インビトロ翻訳系、より好ましくは細胞、器官、および／または生物であり得る。生物は多細胞生物、より好ましくは哺乳動物であることがより好ましく、このような哺乳動物は、好ましくはヒト、サル、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ネコ、イヌ、ヒツジ、ウシ（ｃｏｗ）、ウマ、ウシ類（ｃａｔｔｌｅ）、およびブタを含む群より選択される。ダウンレギュレーションに関連して、このダウンレギュレーションは時間の関数であり得る、すなわちダウンレギュレーション効果は本発明に従う核酸の投与または機能的活性化の直後に観察されるとは限らず、時間的および空間的、すなわち様々な細胞、組織、および／または器官において遅れて現われることがあることを認識すべきである。このような遅れは、５％〜１００％、好ましくは１０％〜５０％の範囲であり得る。長時間にわたる５％の低下は短期間の１００％の低下と同程度に効果的であり得ることが当業者に認識されるであろう。このような遅れは、実際に使用する個々の機能的核酸および標的細胞集団に、そして究極的には本願の技術的教示に従い処置および／または予防しようとする疾患に大きく依存することも当業者に認識されるであろう。その限りにおいて、長時間にわたる５％の低下は短期間の１００％の低下と同程度に効果的であり得る。この遅れは、上記のように任意のレベルで、すなわちＲＴＰ８０１により示される任意の機能面での遅れ、タンパク質発現における遅れ、またはｍＲＮＡ発現レベルにおける遅れとして起こり得ることも当業者に認識されるであろう。

好ましい実施態様において、第一ストレッチは、少なくとも１４ヌクレオチド、好ましくは１４連続ヌクレオチドを含む。第一ストレッチは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列、特にＲＴＰ８０１の発現を低下させようとする翻訳系に存在するＲＴＰ８０１をコードする核酸配列と、特異的に対応するのに適した長さを有することが、当業者に認識されるであろう。ここでも、いずれかの理論または本発明に従う核酸のいずれかの作用様式に拘束されることを望むものではないが、本発明に従う核酸とＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の間で、好ましくは転写レベルで、すなわち各々のＲＴＰ８０１をコードする核酸配列からのｍＲＮＡの生成の際に相互作用が起こるようである。本発明に従う核酸の任意の配列がゲノムまたは翻訳系のトランスクリプトームに含まれる配列に対して同一または相補的である可能性があるため、第一ストレッチの長さは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸と本発明に従う核酸の一方の鎖の間である種の塩基対形成が実際に起こるという仮定の下で、ＲＴＰ８０１をコードする配列のみがこのような塩基対形成に対応し、ゲノムまたはトランスクリプトームの他のコード配列、特に他の必須のコード配列は対応しないことが確保される長さであるべきである。この長さにより、オフターゲット効果の発生を減少させる、好ましくは排除することができる。この種のＲＴＰ８０１およびそれをコードする核酸配列に対する特異的反応のストリンジェンシーを高めるため、第一ストレッチは、好ましくは、少なくとも１８または１９ヌクレオチド長を有する。第一ストレッチの長さの上限は、好ましくは５０ヌクレオチド未満であるが、この長さはそれよりもずっと長くすることもでき、１００、２００、さらには５００ヌクレオチド、またはその間の任意の長さを含み得る。これとは別に、当業者は、特に本発明に従う核酸を化学合成する場合に、配列が短ければ合成に費やす時間および材料が減り、不正確なヌクレオチドが各配列に挿入される割合も低下することから、それよりずっと短い第一ストレッチを有することを好むであろう。第一ストレッチの長さの調節に関連して考慮されるべき別の要素は、典型的には５０またはそれ以上のヌクレオチドを超える長さで非特異的なインターフェロン反応が観察される場合があるという事実である。この種の非特異的インターフェロン反応を許容すべきか否かは処置しようとする特定の状態に依存する。例えば、インターフェロン反応は、そのインターフェロン反応および／またはインターフェロン遺伝子の発現が病変細胞に限定され得る場合に許容することができる。

この観点で、より好ましい第一ストレッチの長さは約１４〜４０ヌクレオチド、１８〜３０ヌクレオチド、１９〜２７ヌクレオチド、２１〜２５ヌクレオチド、および１９〜２３ヌクレオチドである。

第一ストレッチについて上述したのと同じ考え方が、第二ストレッチに対しても適用でき、従って第一ストレッチに関して本明細書中に記載されるような任意の長さを含み得る。第一ストレッチの長さが第二ストレッチの長さと異なることも本発明の範囲内であるが、両方のストレッチが同じ長さを有することが好ましい。

核酸の基本デザインによれば、第一ストレッチおよび第二ストレッチは、本発明に従う核酸の、それぞれ、第一鎖および第二鎖の一部である。いずれかの末端、すなわち５’末端および３’末端において第一鎖および／または第二鎖が、一つまたは任意の組み合わせの数個のヌクレオチド、好ましくは付加的なヌクレオチドを含み得ることが理解されるであろう。

これに関連して、各々の鎖に対応するストレッチの末端の先に続く個々の鎖のヌクレオチドを利用して、そのストレッチの相補性および同一性のそれぞれにさらに貢献する、従ってＲＴＰ８０１をコードする核酸配列との特異的反応にさらに貢献することができることを認識すべきである。

基本的に、本明細書中に提供される技術的教示に基づけば、本発明に従う核酸は、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列、好ましくはＲＴＰ８０１の発現を低下しようとする翻訳系におけるＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の任意の部分を標的とすることができることが認識されるであろう。そうである限り、本発明は、本発明に従う核酸の相補的および同一な鎖およびストレッチが基本的にＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の任意のヌクレオチドから始まる、本明細書中で定義されるような特徴を有する任意の核酸を含む。従って、本発明に従う核酸の第一ストレッチがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して相補的である、すなわちそのアンチセンス鎖であるまたはそれに対してアンチセンス配向をしているという条件の下、このストレッチの最初のヌクレオチド、すなわち５’最末端ヌクレオチドは、ＲＴＰ８０１をコードする配列の３’末端の最後のヌクレオチドに対応する、すなわち整列する。さらなる実施態様において、このような５’最末端ヌクレオチドは、アンチセンスストレッチの長さが与えられれば本発明に従う核酸のアンチセンス鎖がＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対する相補性をなおも実現する最後の位置に達するまで、ＲＴＰ８０１等をコードする核酸の最後から二番目のヌクレオチドに対応する。そうである限り、ＲＴＰ８０１をコードする核酸配列をその５’最末端ヌクレオチドからスキャンし、本発明に従う核酸の基本デザインを踏襲し、このような本発明に従う核酸の特徴を実現することによって作製することができる本発明に従うあらゆる核酸は、本発明の範囲内である。同じ考え方が、本明細書中に開示される実施態様にも適用でき、本発明に従う核酸の相補性および同一性が第一ストレッチおよび第二ストレッチによってのみ提供されるのではなく、このような相補性および同一性は、第一鎖および第二鎖のそれぞれの一部である、それぞれ、第一ストレッチおよび第二ストレッチの先にある一つまたはそれ以上のヌクレオチドをも含むものである。

本明細書中に開示される本発明に従う様々な核酸の中でも、内部参照番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０（表Ａを参照のこと）ならびに２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８（表Ｄを参照のこと）を有する核酸が特に好ましい。これに関連して、ヒトおよび動物モデル、例えばラットおよび／またはマウスの両方で使用できる本発明に従う核酸が特に有用であることに留意されたい。本発明のこれらの特定の核酸の驚くべき利点は、それらがヒトおよび動物モデルの両方で有効であるという事実にあり、このことは動物モデルにおいて得られた試験結果を動物モデルからヒトに直接転用することができる、特に本発明に従う核酸が種間で、とりわけ動物モデル試験において使用される種と究極的に好ましい生物または患者であるヒトの間で異なる配列を含むよう設計された場合に必要となるヒト配列への変更を行う必要なしに転用するこ
とができることを意味する。これらの核酸が実施例にも記載される修飾パターンを有することがさらに好ましい。

しかし、配列番号３、１６〜１７、２２〜２７、２９、４１〜４６、５１〜５３、６６〜６７、７２〜７７、７９、９１〜９６、１０１〜１０２、５２５、５２８〜５３０、５３２〜５３６に示される配列のいずれか、ならびに（表Ａの）内部参照番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０ならびに（表Ｄの）２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８を有する本発明に従う核酸分子を形成する任意の組み合わせが、本発明に従うさらなる核酸中に部分的にのみ含まれることも本発明の範囲内である。好ましくは、本発明に従うさらなる核酸は、配列番号３、１６〜１７、２２〜２７、２９、４１〜４６、５１〜５３、６６〜６７、７２〜７７、７９、９１〜９６、１０１〜１０２、５２５、５２８〜５３０、５３２〜５３６の少なくとも１４連続ヌクレオチド、より好ましくは上記一覧で概説されるような第一ストレッチおよび第二ストレッチで構成される二本鎖構造の任意の末端に１４連続ヌクレオチド塩基対を含む。本発明に従う核酸、特に本発明に従いこのような核酸を形成する個々のストレッチの可能性のある長さが与えられれば、ＲＴＰ８０１のコード配列において各側にいくらかずらすことが可能であり、このようなシフトは両方向に最大１、２、３、４、５、および６ヌクレオチドであり得、かつこのようにして得られた二本鎖核酸分子もまた当然ながら本発明の範囲内であることが当業者に理解されよう。

本発明の好ましい実施態様において、第一ストレッチおよび第一鎖は同じ長さを有する。同様に、第二鎖は第二ストレッチと同じ長さを有することが好ましく、第一ストレッチおよび第二ストレッチが同じ長さを有することがさらにより好ましい。さらにより好ましい実施態様において、第一鎖は第一ストレッチのみを含み、第二鎖は第二ストレッチのみを含む。さらにより好ましい実施態様において、第一ストレッチつまり第一鎖も第二ストレッチつまり第二鎖もオーバーハングを含まない。言い換えると、本発明に従う二本鎖核酸が、好ましくは本発明に従う核酸の二本鎖構造の各末端で平滑末端を有することも本発明の範囲内である。このような平滑末端構造は、本発明に従う核酸の任意の他の実施態様、特に本発明に従う核酸が修飾パターン、より好ましくは本明細書中に記載されるような修飾パターンを有する実施態様と関連して実現することができる。

さらなる側面において、本発明に従う核酸は、本発明に従う核酸の二本鎖構造の両末端において平滑末端を提供する基本デザインを有する。しかし、オーバーハング、すなわち二本鎖構造から突出した一つまたはそれ以上のヌクレオチドのストレッチが存在することも本発明の範囲内である。オーバーハングは、原理的には、アンチセンス鎖の５’末端、アンチセンス鎖の３’末端、センス鎖の５’末端、および／またはセンス鎖の３’末端に存在し得る。上記選択肢の任意の一つおよびその任意の組み合わせを実現することも本発明の範囲内であることに留意されたい。オーバーハングがアンチセンス鎖の３’末端およびセンス鎖の３’末端に存在する組み合わせがより好ましい。オーバーハングがアンチセンス鎖の５’末端およびセンス鎖の５’末端に存在することも本発明の範囲内である。さらに、オーバーハングが二本鎖構造のアンチセンス鎖のみに、より好ましくは二本鎖構造のアンチセンス鎖の３’末端のみに存在することも本発明の範囲内である。

オーバーハングに関連して、オーバーハング＋ストレッチは好ましくは鎖を形成し、本明細書中でストレッチについて提供されている長さはこれらの実施態様にも適用されることに留意されたい。個々のオーバーハングは、その位置によらず、少なくとも一つのヌクレオチドからなり得る。しかし、個々のオーバーハングは、１０ヌクレオチドを含み得、好ましくは２ヌクレオチド長である。その第一鎖がＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対して相補的であり、オーバーハングがアンチセンス鎖の３’もしくは５’末端に存在する場合に、オーバーハングを形成する各ヌクレオチドもまたＲＴＰ８０１をコードする核
酸配列に対して相補的であること、または第一鎖がＲＴＰ８０１をコードする核酸配列と同一である場合に、オーバーハングがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に同一であることは、本発明の範囲内である。同じことが、本発明に従う核酸の基本デザインの第二ストレッチに存在する任意のオーバーハングに対しても適用され、第二ストレッチにおけるオーバーハングのデザインは第一ストレッチのオーバーハングのデザインから独立したものとすることができることを認識すべきである。

オーバーハング形成ヌクレオチドがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列の対応するヌクレオチドに対して相補的でも同一でもないことも本発明の範囲内である。本明細書中で使用される場合、好ましくはこの実施態様において、「対応する」は、ＲＴＰ８０１をコードする核酸上にヌクレオチドカウンターパートを有するストレッチの５’末端および／または３’末端に続く各ヌクレオチドを意味する。

好ましくは、第一鎖は、その３’末端に二つのヌクレオチド、好ましくはデオキシヌクレオチド、より好ましくは二つのＴＴを含み、および／または第二鎖の３’末端にもこの種のヌクレオチドが含まれ、より好ましくは第一ストレッチおよび第二ストレッチの長さは１９ヌクレオチドである。従って、この鎖は、ストレッチおよびオーバーハングで構成される。この実施態様において、二本鎖構造は、１９塩基対および個々のストレッチの各３’末端の２ヌクレオチドのオーバーハングからなる。

好ましい実施態様において、第一ストレッチおよび／または第一鎖はリボヌクレオチドを含み、第一ストレッチ全体がリボヌクレオチドからなることが特に好ましい。同じことが、第二ストレッチおよび第二鎖のそれぞれにも適用される。しかし、これに関連して、第一ストレッチおよび第二ストレッチのそれぞれのヌクレオチドの各々およびいずれかは、好ましい実施態様において修飾される。同じことが、第一鎖および第二鎖のそれぞれにも適用される。特に末端のヌクレオチドは、それらがリボヌクレオチドであるかデオキシリボヌクレオチドであるかによらず、それ自体修飾され得るＯＨ基を有し得る。このようなＯＨ基は、ヌクレオチドの糖部分、より好ましくは５’ＯＨ基の場合は５’位および／もしくは３’ＯＨ基の場合は３’位、または各末端ヌクレオチドの糖部分に結合されたホスファート基に由来するものであり得る。ホスファート基は、原理的には、ヌクレオチドの糖部分のあらゆるＯＨ基に結合され得る。好ましくは、ホスファート基は、遊離の５’ＯＨ基の場合は糖部分の５’ＯＨ基におよび／または遊離の３’ＯＨ基の場合は糖部分の３’ＯＨ基に結合されるが、これはなお、本明細書中で遊離の５’または３’ＯＨ基として言及される場合を条件とする。

ＲＮＡｉの設計についてのストラテジーまたは本明細書中に開示される任意のＲＮＡｉの実施態様に本明細書中で使用される場合、末端修飾という用語は、第一鎖および／または第二鎖の５’または３’最末端のヌクレオチドに付加される化学的実体を意味する。このような末端修飾の例には、３’または５’ホスファート、逆（デオキシ）脱塩基（ｉｎｖｅｒｔｅｄ （ｄｅｏｘｙ） ａｂａｓｉｃｓ）、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、ＣＮ、ＣＦ、メトキシ、イミダゾール、カルボキシラート、チオアート、Ｃ₁〜Ｃ₁₀低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル、またはアラルキル；ＯＣＦ₃、ＯＣＮ、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ−アルケニル；ＳＯＣＨ₃；ＳＯ₂ＣＨ₃；ＯＮＯ₂；ＮＯ₂、Ｎ₃；ヘテロシクロアルキル；ヘテロシクロアルカリル；アミノアルキルアミノ；中でも欧州特許ＥＰ ０ ５８６ ５２０ Ｂ１またはＥＰ ０ ６１８ ９２５ Ｂ１に記載されるようなポリアルキルアミノまたは置換シリル；が含まれるがこれらに限定されない。

本明細書中で使用される場合、アルキルまたは「アルキル」を含むあらゆる用語は、好ましくは、１〜１２、好ましくは１〜６、より好ましくは１〜２個のＣ原子を含むあらゆ
る炭素原子鎖を意味する。

さらなる末端修飾はビオチン基である。このようなビオチン基は、好ましくは第一鎖および／もしくは第二鎖の５’最末端もしくは３’最末端のいずれかのヌクレオチドにまたはその両末端に結合され得る。より好ましい実施態様において、ビオチン基は、ポリペプチドまたはタンパク質にカップリングされる。ポリペプチドまたはタンパク質が他の上記の末端修飾のいずれかを通じて結合されることも本発明の範囲内である。ポリペプチドまたはタンパク質は、本発明に従う核酸分子にさらなる特徴を付与し得る。特にポリペプチドまたはタンパク質は、別の分子に対するリガンドとして作用し得る。他の分子が受容体の場合、その受容体の機能および活性は結合リガンドによって活性化され得る。受容体は、インターナリゼーション（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ）活性を示し得、これによりリガンドに結合された本発明に従う核酸分子の効率的なトランスフェクションが実現する。本発明の核酸分子に結合されるリガンドの例はＶＥＧＦであり、対応する受容体はＶＥＧＦ受容体である。

様々な種の末端修飾を有する本発明のＲＮＡｉの様々な可能性のある実施態様を以下の表１に示す。

本明細書中に開示される様々な末端修飾は、好ましくは、本発明に従う核酸のヌクレオチドのリボース部分に設けられる。特に、末端修飾は、このように修飾されるヌクレオチドが末端ヌクレオチドであることを条件として、２'ＯＨ、３'ＯＨ、および５'ＯＨ位を含むがこれらに限定されないリボース部分のＯＨ基のいずれかに結合されるかまたは置換され得る。逆脱塩基（Ｉｎｖｅｒｔｅｄ ａｂａｓｉｃｓ）は、核酸塩基部分を有さない
、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドである。この種の化合物は、特に、Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．，Ｓｃｈｍｉｅｄｅｋｎｅｃｈｔ，Ａ．，Ｋｒｅｔｓｃｈｍｅｒ，Ａ．，Ｇｅｂｈａｒｄｔ，Ｆ．，Ｌｅｅｎｄｅｒｓ，Ｆ．，Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，Ｆ．，Ｖｏｎ Ｃａｒｌｏｗｉｔｚ，Ｉ．，Ｅｎｇｌｅ，Ｍ．，Ｇｉｅｓｅ，Ｋ．，Ｂｅｉｇｅｌｍａｎ，Ｌ．＆ Ｋｌｉｐｐｅｌ，Ａ．（２００２）．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ，１２，１３１−４３に記載されている。上記の末端修飾のいずれも、表１に示されるＲＮＡｉの様々な実施態様に関連して使用され得；上記の５’末端は通常、ｓｉＲＮＡ分子のセンス鎖にのみ存在することに留意されたい。

さらなる修飾は、個々のヌクレオチドの核酸塩基部分、糖部分、またはホスファート部分に関するものであり得る。

このような核酸塩基部分の修飾は、アデニン、グアニン、シトシンおよびチミジン、ならびにウラシルのそれぞれの誘導体が修飾されたものであり得る。特に好ましい修飾型核酸塩基は、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピルおよび他のアルキルアデニン類、５−ハロ ウラシル、５−ハロシトシン、５−ハロ シトシン、６−アザシトシン、６−アザ チミン、プソイド−ウラシル、４−チオウラシル、８−ハロ アデニン、８−アミノアデニン、８−チオール アデニン、８−チオールアルキル アデニン、８−ヒドロキシルアデニンおよび他の８−置換アデニン類、８−ハロ グアニン、８−アミノ グアニン、８−チオール グアニン、８−チオアルキル グアニン、８−ヒドロキシルグアニンおよび他の置換グアニン類、他のアザ−およびデアザ アデニン類、他のアザ−およびデアザ グアニン類、５−トリフルオロメチル ウラシル、ならびに５−トリフルオロ シトシンを含む群より選択される。

別の好ましい実施態様において、ヌクレオチドの糖部分が修飾され、このような修飾は、好ましくは、ヌクレオチドのリボース部分およびデオキシリボース部分のそれぞれの２’位におけるものである。より好ましくは、２’ＯＨ基は、アミノ、フルオロ、アルコキシ、およびアルキルを含む群より選択される基または部分により置き換えられる。好ましくは、アルコキシはメトキシまたはエトキシのいずれかである。また好ましくは、アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソブチル、ブチル、およびイソブチルを意味する。修飾のタイプに関わらず、ヌクレオチドは好ましくはリボヌクレオチドであることがさらにより好ましい。

ホスファート部分の修飾は、好ましくは、ホスホチオアート類を含む群より選択される。

多数のヌクレオチドからなる本発明の核酸は、個々の鎖およびストレッチのそれぞれのヌクレオチド配列に沿うホスホジエステル結合もしくはホスホチオエート結合またはその両方の組み合わせを介して連結されたヌクレオチドにより形成され得ることが当業者に認識されるであろう。

使用されるヌクレオチドのさらなる形態は、実際は、中でも国際特許出願ＷＯ ０３／０７０９１８に記載されるｓｉＮＡであり得る。

本発明に従う核酸の第一ストレッチおよび第一鎖のそれぞれを形成するヌクレオチドは、一つまたはそれ以上の修飾型ヌクレオチドを含み得、個々の修飾型ヌクレオチドは、好ましくは本明細書中に開示されるような修飾を有する。特定の修飾に加えて、修飾は、ある種の標識であるかまたはその標識を含み得、標識は、化学発光標識、蛍光標識、および放射線標識の群より選択される。これらの種の標識は当業者に公知であり、例えばＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，１９９８に記載されている。このように標識された本発明に従う核酸は、好ましくは本明細書中に開示される疾患のいずれかに関係する、診断目的または作用部位の監視およびいずれかの処置の病期分類（ｓｔａｇｉｎｇ）にも使用され得る。

好ましい実施態様において、本発明に従う核酸は、センスストレッチまたはセンス鎖のピリミジンヌクレオチドが２’Ｏ−メチルピリミジンヌクレオチドであり、付加的にまたは代替的に、センスストレッチまたはセンス鎖のプリンヌクレオチドが２’−デオキシプリンヌクレオチドとなるよう修飾される。さらなる実施態様において、センスストレッチまたはセンス鎖に存在するピリミジンヌクレオチドは、２’−デオキシ−２’−フルオロピリミジンヌクレオチドである。

代替の実施態様において、修飾はヌクレオチドの化学に基づくものではない、すなわち修飾は、修飾されるヌクレオチドがプリンヌクレオチドであるかピリミジンヌクレオチドであるかに依存するのではなく、主として本発明に従う核酸の基本デザインの二本鎖構造全体における個々のヌクレオチドの空間配置に基づくものである。

特に、第一鎖および第一ストレッチのそれぞれ、または第二鎖および第二ストレッチのそれぞれのいずれかが、上記ストレッチおよび鎖のそれぞれを形成するヌクレオチドの空間的修飾パターンを示す。

まず第一ストレッチに着目すると、修飾型ヌクレオチド群および非修飾型ヌクレオチド群のパターンが存在する。これらの非修飾型ヌクレオチド群はまた、本明細書中では、隣接ヌクレオチド群とも称される。より好ましくは、このパターンは、修飾型ヌクレオチド群および非修飾型ヌクレオチド群からなる。さらにより好ましくは、このパターンは規則的パターンであり、さらにより好ましくは本発明に従う核酸の第一ストレッチに沿う交互パターンである。修飾型ヌクレオチド群は、修飾された、好ましくは２’位で修飾された、すなわち糖部分に修飾を有する一つのヌクレオチドからなるかまたは数個のヌクレオチドからなるかのいずれかであり得る。より好ましくは、この修飾は２’−Ｏ−Ｍｅ修飾である。

非修飾型ヌクレオチド群は、未修飾であり、未修飾型ヌクレオチドが好ましくはリボヌクレオチドであるか、または未修飾型ヌクレオチドが修飾型ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドにより示される修飾と異なる修飾を有するヌクレオチドである、一つのヌクレオチドからなるかまたは数個のヌクレオチドからなるかのいずれかであり得る。さらにより好ましくは、未修飾型ヌクレオチドはリボヌクレオチドである。未修飾型および非修飾型ヌクレオチドという用語は、そうでないことが記されない限り交換可能な様式で使用されることに留意されたい。本発明に従う核酸の第一ストレッチは、本明細書中で定義されるような、修飾型ヌクレオチド群から始まるかまたは非修飾型ヌクレオチド群から始まるかのいずれかであり得る。しかし、第一ストレッチが修飾型ヌクレオチド群から始まることが好ましい。より好ましくは、修飾型ヌクレオチド群は、単一ヌクレオチドからなる。この実施態様に関連して、第一ストレッチは、好ましくは、ＲＴＰ８０１をコードする核酸に対してアンチセンス配向をしている。修飾型ヌクレオチド群を形成するヌクレオチドによって示される修飾が、第一ストレッチに存在する全ての修飾型ヌクレオチド群で同一であることも本発明の範囲内である。しかし、修飾型ヌクレオチド群のいくつかが、第一ストレッチに存在する修飾型ヌクレオチド群の一つまたは数個と異なる修飾を有することも本発明の範囲内である。

本発明に従う核酸の第二鎖においても、第一ストレッチについて記載されたパターンが
実現され得る。一つの実施態様において、第一ストレッチに関して記載されたのと同じ特徴が第二ストレッチにおいても実現され得、第二ストレッチがＲＴＰ８０１をコードする核酸配列に対してセンス配向をしている場合、本発明に従う核酸の第二鎖が非修飾型ヌクレオチド群から始まることが好ましい。

二本鎖構造を含む本発明に従う核酸は、本明細書中に記載されるような修飾パターンを有する第一ストレッチを含み得る。あるいは、本発明に従う二本鎖核酸は、上記のような修飾パターンを有する第二ストレッチを含み得る。しかし、本発明に従う二本鎖核酸が第一ストレッチおよび第二ストレッチからなり、第一ストレッチおよび第二ストレッチの両方が本明細書中に記載されるような空間的修飾パターンを有することが最も好ましい。

空間的修飾パターンの特徴は、修飾型ヌクレオチド群および非修飾型ヌクレオチド群の大きさならびに実際に使用する修飾の種類の点で、両ストレッチとも同じであることも本発明である。好ましくは、第一ストレッチにおける修飾の空間的パターンは、第一ストレッチにおける修飾型ヌクレオチド群が第二ストレッチにおける非修飾型ヌクレオチド群と対置するようシフトしたものであり、その逆も同様である。しかし、そのパターンが正確に整列している、すなわち第一ストレッチの修飾型ヌクレオチド群が第二ストレッチの非修飾型ヌクレオ群と対置し、第一ストレッチの非修飾型ヌクレオ群が第二ストレッチの非修飾型ヌクレオチド群と対置していることもまた本発明である。第一ストレッチおよび第二ストレッチにおける修飾の空間的パターンが相互に対してシフトしており、一方のストレッチの修飾型ヌクレオチド群の第一部分のみがもう一方のストレッチの非修飾型ヌクレオチド群の一部と対置し、その修飾型ヌクレオチド群の第二部分が別の修飾型ヌクレオチド群と対置していることも本発明の範囲内である。本明細書中に提供される、本発明に従う核酸のストレッチの空間的修飾パターンについての開示は、本発明に従う核酸の鎖に適用することも本発明の範囲内である。しかし、核酸のストレッチが空間的修飾パターンを含み、その鎖がそのようなストレッチおよび本明細書中に開示されるような一つまたはそれ以上のオーバーハングを含むことが好ましい。オーバーハングは、アンチセンス鎖もしくはセンス鎖のいずれかまたは両方の鎖の３’末端におけるホスファート基であることが特に好ましく、ホスファート基がアンチセンス鎖およびセンス鎖の両方の３’末端に存在することがより好ましい。さらにより好ましい実施態様において、ホスファート基は本明細書中で定義されるようなホスファート基である。

本発明に従う核酸は、第一鎖および第二鎖を結ぶリンカーを有し得ることも本発明の範囲内である。このようなリンカーは、好ましくはポリマーである。ポリマーは任意の合成または天然ポリマーであり得る。中でも、可能性のある合成ポリマーは、ＰＥＧまたはポリヌクレオチドである。このようなリンカーは、好ましくは、部分的または完全にかのいずれかで、第一ストレッチが第二ストレッチ上に折り返される（ｆｏｌｄｉｎｇ ｂａｃｋ ｏｆ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｓｔｒｅｔｃｈ ｏｎｔｏ ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｓｔｒｅｔｃｈ）よう設計される。逆もまたしかりである。

最後に、本発明に従う核酸が、合成性のもの、化学的に合成されたもの、単離されたもの、または任意の天然供給源から誘導されたもの、例えば組換え技術によって調製されたものであることも本発明の範囲内である。本発明に従う任意の核酸の調製に関連して、本明細書中に開示されるようないずれかの修飾は、当業者に公知のように、本発明に従う各々の核酸の調製の前、その間、またはその後に導入することができる。

本発明に従うベクターは、本発明に従う核酸を含む。さらに、ベクターは、当該分野で公知のように、細胞選択的な様式で、当該核酸の標的化、発現、および転写を制御するエレメントを含み得る。プラスミドは、異種成分、すなわち本発明に従う核酸の転写を制御するプロモーターを含み得、選択的な転写を実現する構成的なまたは誘導可能ないずれか
のプロモーターを含み得る。必要な転写レベルを得るために必要とされ得るエンハンサーは、必要に応じて組み込まれ得る。エンハンサーは一般的に、プロモーターにより指示される基準転写レベルを変化させるよう、コード配列と隣接して、従ってシス配列で機能する任意の非翻訳型ＤＮＡ配列である。このような構築物の発現については、当業者に公知であり、例えば、各々の直列型の構築物を提供することによってまたは本発明に従う核酸の第一鎖および第二鎖ならびに第一ストレッチおよび第二ストレッチのそれぞれを転写する種々のプロモーターを加えることによって行われ得る。

本発明に従う核酸が製造または発現、好ましくはインビボで発現、より好ましくは本発明に従う核酸を必要とする患者において発現される場合、このような製造または発現は、好ましくは、発現ベクター、好ましくは哺乳動物発現ベクターを使用する。発現ベクターは当該分野で公知であり、好ましくはプラスミド、コスミド、ウイルス発現系を含む。好ましいウイルス発現系にはアデノウイルス、レトロウイルス、およびレンチウイルスが含まれるがこれらに限定されない。

ベクターを細胞または組織に導入する方法は、当該分野で公知である。このような方法は、一般的に記載された、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８３，１９９２）またはＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，１９９８において見出すことができる。

適する方法には、中でも、トランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、および組換えウイルスベクターによる感染が含まれる。一つの実施態様において、本発明に関連するベクターのさらなる特徴は、発現限局的な特徴、例えばそれぞれ所望の細胞型にそれぞれ特異的であり、従って所望の発現を実現する環境が提供された場合にのみ本発明に従う核酸配列をそれぞれ発現する、プロモーターおよび調節エレメントである。

さらなる側面において、本発明は、本発明に従う核酸および／または本発明に従うベクター、ならびに場合により薬学的に許容できる担体、賦形剤、もしくはアジュバントまたはその他のビヒクルを含む薬学的組成物に関する。好ましくは、このような担体、賦形剤、アジュバント、およびビヒクルは、不活性であり、非毒性である。この薬学的組成物は、その様々な実施態様において、様々な方法による投与に適合される。このような投与には、全身投与および局所投与、ならびに経口投与、皮下投与、非経口投与、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、鼻腔内投与、および（ｉｎｔｒａｔｅｇｒａｌ）投与が含まれる。

薬学的組成物ならびに各々の核酸およびベクターそれぞれの量は、個々の患者の臨床状態、投与部位およびその方法、投与計画、患者の年齢、性別、体重、および医師に公知のその他の要因に依存することは当業者に認識されるであろう。予防および／または処置の目的のための薬学的有効量は、医学分野で公知のように、このような検討事項により決定される。好ましくは、その量は、疾患状態の改善、または症状のより迅速な回復、改善、もしくは排除および医学分野の当業者により適切な目安として選択されるその他の指標の提供を含むがこれらに限定されない改善を達成するのに効果的な量である。

好ましい実施態様において、本発明に従う薬学的組成物は、他の薬学的に活性な化合物を含み得る。好ましくは、このような他の薬学的に活性な化合物は、取込み細胞内細胞送達（ｕｐｔａｋｅ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｅｌｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ）を実現
する化合物、エンドソームからの放出を実現する化合物、より長い循環時間を実現する化合物、および内皮細胞または病変細胞の標的化を実現する化合物を含む群より選択される。エンドソームからの放出について好ましい化合物は、クロロキンおよびＡＴＰ依存性Ｈ⁺ポンプ阻害剤である。

薬学的組成物は、好ましくは、単回投与または反復投与を提供するよう処方される。

本発明に従う薬学的組成物は、血管新生を含む望ましくない血管の発達または増殖が関与するあらゆる疾患ならびに本明細書中に記載される任意の疾患および状態に対して使用することができることが認識されるであろう。好ましくは、これらの種の疾患は腫瘍疾患である。腫瘍疾患の中でも、以下の腫瘍が最も好ましい：子宮内膜がん、結腸直腸がん類、神経膠腫類、子宮内膜がん類、腺がん類、内膜増殖症類、コーデン症候群、遺伝性非ポリープ性結腸直腸がん、リ・フラウメニ（Ｌｉ−Ｆｒａｕｍｅｎｅ’ｓ）症候群、乳がん・卵巣がん、前立腺がん（Ａｌｉ，Ｉ．Ｕ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｖｏｌ．９２，ｎｏ．１１，Ｊｕｎｅ ０７，２０００，ｐａｇｅ ８６１−８６３）、バンナヤン・ゾナナ（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｚｏｎａｎａ）症候群、ＬＤＤ（レールミット・デュクロス（Ｌｈｅｒｍｉｔｔｅ−Ｄｕｋｌｏｓ’）症候群）（Ｍａｃｌｅｏｄ，Ｋ．，前出）、牛病（Ｃｏｗ ｄｉｓｅａｓｅ）（ＣＢ）およびバンナヤン・ルヴァルカバ・リリー（Ｂａｎｎａｙａｎ−Ｒｕｖａｌｃａｂａ−Ｒｉｌｙ）症候群（ＢＢＲ）を含む過誤腫−大頭症疾患（ｈａｍａｒｔｏｍａ−ｍａｃｒｏｃｅｐｈａｌｙ ｄｉｓｅａｓｅｓ）、粘膜皮膚病変類（例えば外毛根鞘腫）、大頭症、精神遅滞、胃腸血腫類、脂肪腫類、甲状腺腫類、乳腺線維嚢胞症、小脳異形成性神経節細胞腫、ならびに胸部および甲状腺悪性腫瘍類（Ｖａｚｑｕｅｚ，Ｆ．，Ｓｅｌｌｅｒｓ，Ｗ．Ｒ．，前出）。

本発明に従う薬学的組成物により処置されるいずれかの腫瘍疾患が、好ましくは末期段階の腫瘍疾患であることを認識すべきである。別の実施態様においては、腫瘍疾患は、腫瘍抑制因子陰性の細胞を含むものであり、より好ましくは腫瘍抑制因子はＰＴＥＮである。

本発明に従う薬学的組成物はまた、本明細書中に開示されるような疾患を予防および／または処置する方法において使用でき、この方法は本明細書中に記載される疾患のいずれかに対して本発明に従う核酸、本発明に従うベクター、または本発明に従う薬学的組成物もしくは薬剤の投与からなる。

さらなる側面において、本発明は、ＲＴＰ８０１をダウンレギュレートする、特にＲＴＰ８０１の機能をダウンレギュレートするのに適した核酸を設計またはスクリーニングする方法に関する。この方法は、本明細書中に開示される核酸配列の使用および適切なアッセイにおけるこのような核酸の評価を含む。このようなアッセイは当該分野で公知であり、例えば、本願の実施例の部に記載されている。さらなる工程において、ＲＴＰ８０１をダウンレギュレートする、好ましくは転写後遺伝子サイレンシング機構、例えばＲＮＡ干渉に関連してダウンレギュレートするのに適した二本鎖核酸が、好ましくは本明細書中に記載される基本デザインに従い設計される。このようにして得られた、すなわち設計またはスクリーニングされた核酸はまた、各アッセイにおいて評価され、その結果は、すなわち本発明に従う核酸および新しく設計またはスクリーニングされた核酸の両方のこのようなアッセイにおける効果は比較された。好ましくは、設計またはスクリーニングされた核酸は、より安定またはより効果的、好ましくはその両方である場合により適している。この方法が、本発明に従う核酸のいずれかを出発点として使用する場合に特に効果的となることは認識されるであろう。従って、新規核酸分子が本明細書中に開示される原理に基づき設計され、ＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ上の標的配列が、対応する本発明に従う核酸についてのＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ上の標的配列に対してわずかにずれていることも本発明の範囲内である。好ましくは、新規核酸は、標的ｍＲＮＡ上のストレッチに対して、ＲＴＰ８０１をコードするｍＲＮＡの５’方向または３’方向のいずれかに少なくとも１つまたはそれ以上のヌクレオチド分ずれている。しかし、このシフトが両方の方向に同時に起こる（これは新規核酸が、出発点として使用された本発明に従う核酸を組み入れていることを意味する）ことも本発明の範囲内である。本発明に従う、出発点として使用された核酸の伸長が３’末端または５’末端のいずれかの方に偏っていることもまた本発明の範囲内である。このような偏りがある場合、新規核酸の３’末端または５’末端のいずれかは、もう一方の末端よりも長い、すなわちより長く伸長されている。新規核酸分子がアンチンセンス鎖および／またはセンス鎖の３’末端または５’末端のいずれかを伸長させることによって作製される場合、典型的には以下の工程系統が適用される。シフトがＲＴＰ８０１のｍＲＮＡの５’末端側へのものである場合、ＲＴＰ８０１のｍＲＮＡの５’末端がシフトした分のヌクレオチド数だけアンチセンス鎖の３’末端を伸長する必要がある。従って、新規核酸のアンチセンス鎖の３’末端に付加しようとするヌクレオチドは、出発点として使用された本発明に従う核酸分子用に使用されたＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ上の標的配列の５’末端側に続くヌクレオチドと相補的なものである。同じことがセンス鎖に対してもなされる必要がある。しかし、センス鎖に加えようとするヌクレオチドは、アンチセンス鎖の３’末端に新たに加えられたヌクレオチドに対応する、すなわち相補的である必要があり、このことはそれらがセンス鎖の５’末端に加えられる必要があることを意味する。しかし、後者のセンス鎖に対する工程は、アンチセンス鎖から離れてセンス鎖がシフトされる範囲でのみ行われる必要があり、これは本発明の好ましい実施態様のケースである。このシフトの範囲は当業者が決めて行うことができるものであるが、より好ましくは、このシフトは、新規核酸が、本明細書中に開示される核酸分子のいずれかにより示されるような少なくとも１４ヌクレオチド、好ましくは１４連続ヌクレオチドのストレッチをなおも含むよう行われなければならない。

本明細書中に記載のあらゆる核酸の合成は、当業者の及ぶ範囲内である。このような合成は、中でも、Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ．Ｌ．ａｎｄ Ｉｙｅｒ Ｒ．Ｐ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９２；４８：２２２３−２３１１，Ｂｅａｕｃａｇｅ Ｓ．Ｌ．ａｎｄ
Ｉｙｅｒ Ｒ．Ｐ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ １９９３；４９：６１２３−６１９４およびＣａｒｕｔｈｅｒｓ Ｍ．Ｈ．ｅｔ．ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７；１５４：２８７−３１３に記載されており、チオエートの合成は、中でも、Ｅｃｋｓｔｅｉｎ Ｆ．，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８５；５４：３６７−４０２に記載されており、ＲＮＡ分子の合成は、Ｓｐｒｏａｔ Ｂ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００５，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ Ｐ．編；Ｋａｐ．２：１７−３１に記載されており、各々の下流のプロセスは、中でも、Ｐｉｎｇｏｕｄ Ａ．ｅｔ．ａｌ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ １９８９，Ｏｌｉｖｅｒ Ｒ．Ｗ．Ａ．編；Ｋａｐ．７：１８３−２０８およびＳｐｒｏａｔ Ｂ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ ２００５，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ Ｐ．編；Ｋａｐ．２：１７−３１（前出）に記載されている。

ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡは、公知のＲＴＰ８０１配列（配列番号１）に基づき、上記のような当該分野で公知の方法を用いて作製することができ、上記のような様々な修飾により安定に作製することができる。さらなる情報については、実施例９を参照のこと。

さらに、本明細書中に記載される本発明の方法と関連して、追加のＲＮＡ分子を上記方法と共に使用できる、例えば本発明の阻害性ＲＮＡ分子は、好ましくは表Ａ〜Ｄに詳述される配列に存在する少なくとも７〜１０連続ヌクレオチドのストレッチを含む一本鎖オリゴリボヌクレオチドを含み、これらのオリゴリボヌクレオチドは、これらのオリゴリボヌクレオチドを、それらの対応する内因性遺伝子の阻害を与えることが可能な小さなＲＮＡ
分子、およびこのようなＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ分子に分解する、細胞内複合体によって認識される特定の立体配座の二本鎖領域を形成する［および／または含む］ことができる。対応する内因性遺伝子は、好ましくは８０１遺伝子であり、さらにはＶＥＧＦ遺伝子および／またはＶＥＧＦ−Ｒ１遺伝子であり得る。本発明はまた、前記の一本鎖オリゴリボヌクレオチドを担体、好ましくは薬学的に許容できる担体中に含む組成物を提供する。

さらに、本発明は、本明細書中に開示される全ての状態、特に脈絡膜新生血管形成を含む状態のための併用療法を提供する。この併用療法では、処置しようとする疾患の症状を改善させるためにＲＴＰ８０１およびＲＴＰ８０１遺伝子の両方を阻害する。これらの遺伝子は、一つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡまたは抗体またはアプタマーの併用によって阻害され得る。従って本発明はまた、ＲＴＰ８０１阻害剤およびＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲ−１阻害剤を含む新規の薬学的組成物を提供し、ＲＴＰ８０１阻害剤は、好ましくはｓｉＲＮＡであり、より好ましくは表Ａ〜Ｄに詳述されているｓｉＲＮＡ分子であり、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８であり、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ−１阻害剤は場合により抗体またはアプタマーである。薬剤の製造における上記化合物（すなわちＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡおよびＶＥＧＦ抗体または本明細書中に開示される任意のその他の組み合わせ例）の組み合わせ使用もまた本発明の一部である。

従って、ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ、例えば表Ａ〜Ｄに詳述されているｓｉＲＮＡ分子、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体１（ＶＥＧＦＲ１）を標的とする薬剤と併せて投与され得る。このような薬剤は現在市場に出回っているかまたは様々な承認段階にあり、異なる機構を通して作用する。ラニビズマブ（ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂ）（ルセンティス、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）等の抗体および抗体フラグメントは、遊離型のＶＥＧＦに結合し、活性な受容体に対するＶＥＧＦの結合を阻害する。リガンド／抗体の様に作用することができるアプタマー（マクジェン、Ｅｙｅｔｅｃｈ／Ｐｆｉｚｅｒ、滲出型ＡＭＤについて最近ＦＤＡにより承認）もまた利用可能である。マクジェンは、細胞外ＶＥＧＦに結合しその活性をブロックする。これらの薬物は、硝子体内注射により局所的に投与される。抗ＶＥＧＦ ｓｉＲＮＡベースの化合物（例えばＡｃｕｉｔｙ社のＶＥＧＦのＣａｎｄ５阻害剤またはＳＩＲＮＡ社のＶＥＧＦＲ−１の０２７阻害剤）もまた利用可能である。さらに、全身投与される低分子アミノステロールであるスクアラミン（Ｇｅｎａｅｒａ）が、血管新生プロセスの多くの局面において、ＶＥＧＦおよび内皮細胞における他の増殖因子シグナル伝達の阻害を含む干渉をすることが報告されている。

ＲＴＰ８０１阻害剤、好ましくはｓｉＲＮＡと上記ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ−１阻害剤のいずれかとの結合投与（ｃｏｎｊｏｉｎｅｄ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）は相乗的効果を有し得、この併用的処置はこれらの個々の組成物のいずれかによる処置よりも、その単独療法の選択肢における投与量にかかわらず、効果が高い。この相乗的効果はまた、実施例６に詳述されているような予備的結果によっても支持されている。

ＲＴＰ８０１ｉは、異なる作用機序を有し、潜在的にＶＥＧＦ−ＶＥＧＦＲ阻害剤と相乗作用性である。ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスにおける研究は、眼内でのＶＥＧＦ ｍＲＮＡの発現がＷＴマウスと同程度に高いという事実にも関わらず、ＫＯマウスにおいて保護的な表現型が持続することを示している。本発明者らのさらなる予備的データは、腎病変の処置において、ＲＴＰ８０１の阻害が、ＶＥＧＦ−ＶＥＧＦＲの調節軸（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ａｘｉｓ）の阻害と相乗作用的であり得ることを示している。本発明者らは、
適切な実験において、ＡＭＤモデルにおけるＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡの投与（実施例６を参照のこと）が、ＲＴＰ８０１自体のダウンレギュレーションのみならず、結果的に、抗血管新生・神経保護因子であるＰＥＤＦのアップレギュレーションおよびマクロファージ化学誘引タンパク質であるＭＣＰ１の発現のダウンレギュレーションをもたらすことを見出した。従って、ＲＴＰ８０１の阻害は、同時に、抗血管新生効果、神経保護効果、および抗炎症効果を与えるのである。

本明細書中に開示されるように、本発明においては、アプタマーもまた、本明細書中に開示される新規ｓｉＲＮＡと併せて使用され得る。例えば、アプタマーは、本明細書中に開示される状態のいずれか一つの処置のための併用療法において、本明細書中に開示されるｓｉＲＮＡのいずれか一つと共に使用することができる。このような併用療法に使用される新規な薬学的組成物（これもまた本発明の一部である）は共有結合または非共有結合によりアプタマーに結合された本発明のｓｉＲＮＡを含み得る。アプタマーは、標的タンパク質に結合し一般的には非特異的効果を示さないＲＮＡまたはＤＮＡの一本鎖または二本鎖オリゴ核酸である。アプタマーは、本明細書中に開示されるおよび／または当業者に公知の任意の核酸修飾に従い安定化または他の所望の性質のために修飾することができる。アプタマーに対する修飾は、分子内のあらゆる部位に、例えば５’末端もしくは３’末端に、またはその内部に規定される任意の修飾部位に導入することができる。例えば、ＲＮＡアプタマーは、２’−フルオロまたは２’−アミノ修飾型ピリミジンを用いて安定化させることができる。アプタマーもまた、レポーター分子またはリンカー化合物に結合させることができ、必要な場合はビーズまたは他の固体支持体に結合させることができる（例えば５’または３’アミノ基、チオールエステル基、またはビオチン基）。チオアプタマーは、特定のヌクレオシド内ホスホリル部位に硫黄修飾を含み、安定性、ヌクレアーゼ耐性、標的親和性、および／または選択性が向上したアプタマーである。チオアプタマーの例には、ホスホロモノチオエート（Ｓ−ＯＤＮ）およびホスホロジチオエート（Ｓ２−ＯＤＮ）オリゴデオキシチオアプタマーが含まれる。アプタマーおよびチオアプタマーに関するさらなる情報については、米国特許第５，２１８，０８８号および同第６，４２３，４９３号を参照のこと。

本発明との関係で、当然ながら本明細書中に開示されるあらゆるｓｉＲＮＡ分子、または内因性細胞内複合体（例えばダイサー − 上記参照）によるプロセシングを受けて本明細書中に開示されるｓｉＲＮＡ分子もしくは本明細書中に開示されるｓｉＲＮＡ分子を含む分子を形成するあらゆる長鎖型二本鎖ＲＮＡ分子（典型的には２５〜５００ヌクレオチド長）は、本明細書中に記載される疾患または障害の処置に利用され得る。

本発明の分子および組成物によって処置できるさらなる障害には、滲出型ＡＭＤのみならず他の眼病変、例えば眼ヒストプラスマ症候群、網膜色素線条症、ブルッフ膜における断裂、近視性変性、眼の腫瘍、およびいくつかの網膜変性疾患において起こる全てのタイプの脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）が含まれる。

本発明のさらなる側面は、アポトーシス関連疾患の処置方法を提供する。抑えられない病変細胞の増殖に関連する疾患または障害、特にがん、乾癬、自己免疫疾患の治療法、ならびに虚血および適切な血流の欠如に関連する疾患、例えば心筋梗塞（ＭＩ）および脳卒中の治療法が提供される。「がん」または「腫瘍」は、抑えられない増殖する異常細胞の塊を意味する。これらの用語には、良性または悪性であり得る原発性腫瘍、および体内の他の部位に拡散した二次性腫瘍または転移腫瘍の両方が含まれる。がん型疾患の例には、特に：がん腫（例えば、乳がん、結腸がん、および肺がん）、白血病、例えばＢ細胞白血病、リンパ腫、例えばＢ細胞リンパ腫、芽細胞腫、例えば神経芽腫および黒色腫が含まれる。

本発明はまた、一つまたはそれ以上の本発明の化合物を担体、好ましくは薬学的に許容できる担体中に含む組成物を提供する。この組成物は、二つまたはそれ以上の、異なる遺伝子に対するｓｉＲＮＡまたは同じ遺伝子に対する異なるｓｉＲＮＡの混合物を含み得る。ＲＴＰ８０１遺伝子に対するｓｉＲＮＡならびにＶＥＧＦ遺伝子および／またはＶＥＧＦ−Ｒ１遺伝子に対するｓｉＲＮＡを含む組成物が想定される。

本発明の別の化合物は、一つまたはそれ以上の本発明の化合物（構造Ａ）に共有結合または非共有結合により結合された上記の本発明の化合物（構造Ａ）を含む。この化合物は、担体、好ましくは薬学的に許容できる担体を用いて送達され得、かつ内因性の細胞内複合体により細胞内でプロセシングを受けて一つまたはそれ以上の本発明のｓｉＲＮＡを生成し得る。本発明の別の化合物は、別の遺伝子、特にＶＥＧＦ遺伝子および／またはＶＥＧＦ−Ｒ１遺伝子に対するｓｉＲＮＡに共有結合または非共有結合により結合された上記の本発明の化合物（構造Ａ）を含む。

本発明はまた、ＲＴＰ８０１阻害剤、好ましくは上記のＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ−１阻害剤のいずれかに共有結合または非共有結合により化学的に結合されたｓｉＲＮＡである、新規化合物を含む。特に想定される化合物は、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ受容体−１に対する抗体に共有結合により結合されたｓｉＲＮＡ ＲＴＰ８０１阻害剤である。さらなる想定される化合物は、本明細書中に開示されるＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡに共有結合により結合された、ＶＥＧＦ受容体−１を標的とする修飾型または非修飾型ＤＮＡアプタマーである。理論に拘束されるものではないが、このような薬学的組成物のアプタマー部分はＶＥＧＲ受容体−１に結合して細胞内に移行し（ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ）、そこでこの分子のｓｉＲＮＡ部分が細胞内のＲＴＰ８０１発現を阻害する。従ってこのような薬物は、高選択性および高標的性という利益、ならびに本明細書中に開示されるような併用療法というさらなる利益を有する。このような新規化合物を製造する方法は、当業者に公知である。

本発明はまた、細胞内でプロセシングを受けて、一つ目が８０１を阻害し二つ目がＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ−１を阻害する、二つまたはそれ以上の異なるｓｉＲＮＡを形成する二つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡ配列を含む直列型二本鎖構造を含む。関連する側面において、本発明はまた、細胞内で分解されて、両方ともが８０１を阻害する二つまたはそれ以上の異なるｓｉＲＮＡを形成する二つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡ配列を含む直列型二本鎖構造を含む。

特に、一つまたはそれ以上のステムおよびループ構造を含み、ステム領域が本発明のオリゴヌクレオチドの配列を含む、長鎖型オリゴヌクレオチド（典型的には約８０〜５００ヌクレオチド長）が、担体、好ましくは薬学的に許容できる担体を用いて送達され、そして内因性の細胞内複合体によって（例えば上記のようなＤＲＯＳＨＡおよびダイサーによって）細胞内でプロセシングを受けて、本発明のオリゴヌクレオチドである一つまたはそれ以上の小さな二本鎖オリゴヌクレオチド（ｓｉＲＮＡ）が生成されることが想定される。このオリゴヌクレオチドは、直列型ｓｈＲＮＡ構築物と称することができる。この長鎖型オリゴヌクレオチドは、一つまたはそれ以上のステムおよびループ構造を含み、各ステム領域が８０１遺伝子のセンスおよび対応するアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含む、一本鎖オリゴヌクレオチドであることが想定される。特に、このオリゴヌクレオチドが、表Ａ〜Ｄのいずれか一つに示されるセンスおよびアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含むことが想定される。あるいは、直列型ｓｈＲＮＡ構築物は、８０１遺伝子のセンスおよび対応するアンチセンスｓｉＲＮＡ配列、さらには、異なる遺伝子、例えばＶＥＧＦまたはＶＥＧＦ−Ｒ１のセンスおよび対応するアンチセンスｓｉＲＮＡ配列を含み得る。

本明細書中で言及された通り、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡは、薬学的組成物にお
ける主たる活性成分であるか、または二つもしくはそれ以上のｓｉＲＮＡ（または二つもしくはそれ以上のｓｉＲＮＡをコードするもしくは内因的に生産される分子（二つもしくはそれ以上のｓｉＲＮＡをコードする分子の混合物または一つもしくはそれ以上の直鎖型分子であり得る））を含む薬学的組成物の一つの活性成分であり得、この薬学的組成物は一つまたはそれ以上のさらなる遺伝子を標的とする一つまたはそれ以上のさらなるｓｉＲＮＡ分子をさらに含み得る。ＲＴＰ８０１および上記のさらなる遺伝子の同時阻害は、おそらく、以下のような、本明細書中に開示される疾患の処置に対して付加的または相乗作用的な効果を有するであろう：
急性腎不全（ＡＲＦ）および他の微小血管障害、ならびに聴力障害および褥瘡：ＡＲＦの処置のための薬学的組成物は以下の化合物の組み合わせを含み得る：１）ＲＴＰ８０１
ｓｉＲＮＡおよびｐ５３ ｓｉＲＮＡの二量体；２）ＲＴＰ８０１およびＦａｓ ｓｉＲＮＡの二量体；３）ＲＴＰ８０１およびＢａｘ ｓｉＲＮＡの二量体；４）ＲＴＰ８０１およびＦａｓ ｓｉＲＮＡの二量体；５）ＲＴＰ８０１およびＢａｘ ｓｉＲＮＡの二量体；６）ＲＴＰ８０１およびＮｏｘａ ｓｉＲＮＡの二量体；７）ＲＴＰ８０１およびＰｕｍａ ｓｉＲＮＡの二量体；８）ＲＴＰ８０１（ＲＥＤＤ１）およびＲＴＰ８０１Ｌ（ＲＥＤＤ２）ｓｉＲＮＡの二量体；９）三量体または多量体（すなわち、三つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡをコードする直列型分子）を形成するＲＴＰ８０１ｓｉＲＮＡ、Ｆａｓ ｓｉＲＮＡ、およびＲＴＰ８０１Ｌ ｓｉＲＮＡ ｐ５３ ｓｉＲＮＡ、Ｂａｘ ｓｉＲＮＡ、Ｎｏｘａ ｓｉＲＮＡ、またはＰｕｍａ ｓｉＲＮＡの任意のもの。

さらに、ＡＲＦ、聴力障害、褥瘡、および本明細書中に開示されるいずれかの他の疾患または状態に対する併用療法のためのさらなる薬学的組成物は、二つのｓｉＲＮＡを含み得、第一のｓｉＲＮＡは、ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ、好ましくは表Ａ〜Ｄから選択されるｓｉＲＮＡであり、第一のｓｉＲＮＡに共有結合または非共有結合により結合されるかまたは第一のｓｉＲＮＡと混合され得る第二のｓｉＲＮＡは、以下の群：腫瘍タンパク質ｐ５３結合タンパク質、２（ＴＰ５３ＢＰ２）；ロイシンリッチリピートおよびデスドメイン含有（ＬＲＤＤ）；シトクロムｂ−２４５、アルファポリペプチド（ＣＹＢＡ）；活性化転写因子３（ＡＴＦ３）；カスパーゼ２、アポトーシス関連システインペプチダーゼ（神経前駆細胞で発現、発達過程でダウンレギュレート２（ｎｅｕｒａｌ ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ ｃｅｌｌ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ， ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ ｄｏｗｎ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ２））（ＣＡＳＰ２）；ＮＡＤＰＨオキシダーゼ３（ＮＯＸ３）；ハラキリ（ｈａｒａｋｉｒｉ）、ＢＣＬ２相互作用タンパク質（ＨＲＫ）；補体成分１、ｑサブコンポーネント結合タンパク質（Ｃ１ＱＢＰ）；ＢＣＬ２／アデノウイルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用タンパク質３（ＢＮＩＰ３）；マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ８（ＭＡＰＫ８）；マイトジェン活性化タンパク質キナーゼ１４（ＭＡＰＫ１４）；ｒａｓ関連Ｃ３ボツリヌス毒素基質１（ｒｈｏファミリー、小ＧＴＰ結合タンパク質Ｒａｃ１）；グリコーゲンシンターゼキナーゼ３ベータ（ＧＳＫ３Ｂ）；プリン受容体Ｐ２Ｘ、リガンド依存性イオンチャネル、７（Ｐ２ＲＸ７）；一過性受容体電位カチオンチャネル、サブファミリーＭ、メンバー２（ＴＲＰＭ２）；ポリ（ＡＤＰ−リボース）グリコヒドロラーゼ（ＰＡＲＧ）；ＣＤ３８分子（ＣＤ３８）；ＳＴＥＡＰファミリーメンバー４（ＳＴＥＡＰ４）；骨形成タンパク質２ − ＢＭＰ２；ギャップ結合タンパク質、アルファ１、４３ｋＤａ（コネキシン４３）（ＧＪＡ１）；ＴＹＲＯタンパク質チロシンキナーゼ結合タンパク質（ＴＹＲＯＢＰ）；結合組織成長因子（ＣＴＧＦ）；分泌リンタンパク質１（オステオポンチン、骨シアロタンパク質Ｉ、初期Ｔリンパ球活性化１）（ＳＰＰ１）；レチクロン（ｒｅｔｉｃｕｌｏｎ）４受容体（ＲＴＮ４Ｒ）；アネキシンＡ２（ＡＮＸＡ２）；ｒａｓホモログ遺伝子ファミリー、メンバーＡ（ＲＨＯＡ）；デュアルオキシダーゼ１（ＤＵＯＸ１）；溶質キャリアファミリー５（ナトリウム／グルコース共役輸送体）、メンバー１（ＳＣＬ５Ａ１）；溶質キャリアファミリー２（促進グルコース輸送体）、メンバー２（ＳＬＣ２Ａ２）；アルド−ケトレダクターゼファミリー１、メンバーＢ１（アルドースレダクターゼ）（ＡＫＲ１Ｂ１）；ソルビトールデヒドロゲナーゼ（ＳＯＲＤ）；溶質キャリアファミリー２（促進グルコース輸送体）、メンバー１（ＳＬＣ２Ａ１）；および膜メタロエンドペプチダーゼ（神経エンドペプチダーゼ、エンケファリナーゼ）（ＭＭＥ）から選択される遺伝子を標的とするｓｉＲＮＡである。

黄斑変性（ＭＤ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、脊髄損傷；ＭＤ、ＤＲ、および脊髄損傷の処置のための薬学的組成物は以下の化合物の組み合わせを含み得る：１）ＲＴＰ８０１
ｓｉＲＮＡと、ＶＥＧＦ ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ−Ｒ１ ｓｉＲＮＡ、ＶＥＧＦ Ｒ２
ｓｉＲＮＡ、ＰＫＣｂｅｔａ ｓｉＲＮＡ、ＭＣＰ１ ｓｉＲＮＡ、ｅＮＯＳ ｓｉＲＮＡ、ＫＬＦ２ ｓｉＲＮＡ、ＲＴＰ８０１Ｌ ｓｉＲＮＡのいずれかとの組み合わせ（物理的混合または直列型分子のいずれか）；２）ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡと、上記リストの中の二つまたはそれ以上のｓｉＲＮＡとの組み合わせ（物理的混合もしくは三つのｓｉＲＮＡをコードする直列型分子、またはそれらの組み合わせ）。

ＣＯＰＤおよび呼吸器疾患：呼吸器疾患の処置のための薬学的組成物は以下の化合物の組み合わせを含み得る：ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡと、以下の遺伝子の一つまたはそれ以上に対するｓｉＲＮＡとの組み合わせ：エラスターゼ、マトリクスメタロプロテアーゼ、ホスホリパーゼ、カスパーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、およびセラミドシンターゼ。

さらに、ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ、またはＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡを含むまたはコードする任意の核酸分子は、以下のような、本明細書中に開示される疾患の処置のための標的性を高めるために、抗体またはアプタマーに（共有結合または非共有結合により）連結され得る：
ＡＲＦ：抗Ｆａｓ抗体（好ましくは中和抗体）。

黄斑変性、糖尿病性網膜症、脊髄損傷：抗Ｆａｓ抗体またはアプタマー、抗ＭＣＰ１抗体またはアプタマー、抗ＶＥＧＦＲ１および抗ＶＥＧＦＲ２抗体またはアプタマー。抗体は好ましくは中和抗体であるべきである。

本明細書中に開示される（適切な核酸修飾を含む）ｓｉＲＮＡ配列を含む任意の分子、例えばアンチセンスＤＮＡ分子が特に望ましく、本明細書中に開示される全ての使用および方法においてそれらの対応するｓｉＲＮＡと同じ能力で使用され得る。

本発明はまた、患者を処置するため、治療有効用量の上記組成物または化合物を患者に投与することを含む、障害、例えば本明細書中に記載される障害に罹患した患者の処置方法を含む。

用語「アンチセンス（ＡＳ）」または「アンチセンスフラグメント」は、対応する遺伝子（この場合はＲＴＰ８０１）の内因的なゲノムコピーの発現を減少させる阻害性のアンチセンス活性を有するポリヌクレオチドフラグメント（デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、または両者の混合物を含む）を意味する。ＲＴＰ８０１ ＡＳポリヌクレオチドは、配列番号１に示されるＲＴＰ８０１遺伝子の配列内に存在する配列に対して、その遺伝子に対するＡＳのハイブリダイゼーションを許容するのに十分長く相同な配列を有する連続ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドである。ＡＳの配列は、目的の標的ｍＲＮＡを補完し、ＲＮＡ：ＡＳ二本鎖を形成するよう設計される。この二本鎖の形成は、関連するｍＲＮＡのプロセシング、スプライシング、輸送、または翻訳を妨げることができる。さらに、一定のＡＳヌクレオチド配列は、それらの標的ｍＲＮＡとハイブリダイズすることによって細胞のＲＮａｓｅ Ｈ活性を引き出され、ｍＲＮＡを分解することができる（Ｃａｌａｂｒｅｔｔａ ｅｔ ａｌ，１９９６：Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａｓ．Ｓｅｍｉｎ
Ｏｎｃｏｌ．２３（１）：７８−８７）。この場合、ＲＮａｓｅ Ｈは二本鎖のＲＮＡ
成分を切断することになり、さらなる標的ＲＮＡ分子にさらにハイブリダイズできるようＡＳを遊離させることができる。さらなる作用様式は、ＡＳとゲノムＤＮＡの相互作用から生じ、転写不活性とされ得る三重ヘリックスを形成する。特定のＡＳフラグメントは、本明細書中に開示されるＲＴＰ８０１の特定のフラグメントをコードするＤＮＡのＡＳである。

多くのレビュー記事で、アンチセンス（ＡＳ）技術の主な側面およびその治療上の可能性が網羅されている（Ｗｒｉｇｈｔ ＆Ａｎａｚｏｄｏ，１９９５．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ＡＩＤＳ．Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． ８：１８５−１８９．）。この技術の化学的（Ｃｒｏｏｋｅ，１９９５．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｈｅｍａｔｏｌ．Ｐａｔｈｏｌ．２：５９；Ｕｈｌｍａｎｎ ａｎｄ Ｐｅｙｍａｎ，１９９０．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：Ａ Ｎｅｗ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ．Ｃｈｅｍ Ｒｅｖ ９０（４）：５４３−５８４．）、細胞学的（Ｗａｇｎｅｒ，１９９４．Ｇｅｎｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ ３７２：３３３．）、および治療的（Ｈａｎａｎｉａ，ｅｔ ａｌ １９９５．Ｒｅｃｅｎｔ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ．Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９９：５３７．；Ｓｃａｎｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１２８８．；Ｇｅｗｉｒｔｚ，１９９３．Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ−ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｌｅｕｋｅｍｉａｓ，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ Ｄａｙｔ．１１：９６．）側面に関するレビュー記事が存在する。

特定の遺伝子の発現に対するアンチセンスインターベンションは、合成のＡＳオリゴヌクレオチド配列の使用によって達成することができる（Ｌｅｆｅｂｖｒｅ−ｄ'Ｈｅｌｌｅｎｃｏｕｒｔ ｅｔ ａｌ，１９９５．Ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．６：７．；Ａｇｒａｗａｌ，１９９６．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｔｏｗａｒｄｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ，１４：３７６．；Ｌｅｖ−Ｌｅｈｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ａ．Ｃｏｈｅｎ ａｎｄ Ｓ．Ｓｍｉｃｅｋ，ｅｄｓ（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照のこと）。ＡＳオリゴヌクレオチド配列は、目的の標的ｍＲＮＡを補完し、ＲＮＡ：ＡＳ二本鎖を形成するよう設計される。この二本鎖の形成は、関連するｍＲＮＡのプロセシング、スプライシング、輸送、または翻訳を妨げることができる。さらに、一定のＡＳヌクレオチド配列は、それらの標的ｍＲＮＡとハイブリダイズすることによって細胞のＲＮａｓｅ Ｈ活性を引き出し、ｍＲＮＡを分解することができる（Ｃａｌａｂｒｅｔｔａ，ｅｔ ａｌ，１９９６．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｌｅｕｋｅｍｉａｓ．Ｓｅｍｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２３：７８．）。この場合、ＲＮａｓｅ Ｈは二本鎖のＲＮＡ成分を切断することになり、さらなる標的ＲＮＡ分子にさらにハイブリダイズできるようＡＳを遊離させることができる。さらなる作用様式は、ＡＳとゲノムＤＮＡの相互作用から生じ、転写不活性とされ得る三重ヘリックスを形成する。

アンチセンスオリゴヌクレオチドの配列標的セグメントは、その配列がそれらの相補的
なテンプレートとのオリゴヌクレオチド二本鎖の形成に重要な適切なエネルギー関連の特徴を示し、かつ自己二量体化または自己補完（ｓｅｌｆ−ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）の可能性が低くなるよう選択される（Ａｎａｚｏｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９９６）。例えば、アンチセンス配列の融点、自由エネルギー特性を測定すため、ならびに潜在的な自己二量体形成および自己補完特性を評価するために、コンピュータープログラムＯＬＩＧＯ（Ｐｒｉｍｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ３．４）を使用することができる。このプログラムは、これらの二つのパラメータ（潜在的な自己二量体形成および自己補完）の定性的評価を決定することができ、「可能性なし（ｎｏ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」または「可能性あり（ｓｏｍｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」または「ほぼ確実（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ）」という指標を提供する。一般的に、このプログラムを用いることで、これらのパラメータについて可能性なしの評価を有する標的セグメントが選択される。しかし、このカテゴリーのうちの一つについて「可能性あり」を有するセグメントも使用することができる。当該分野で公知のように、選択の際には、パラメータのバランスが使用される。さらに、オリゴヌクレオチドはまた、必要に応じて、アナログ置換が実質的に機能に影響しないよう選択される。

ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドは通常、動物において効果的であり十分な薬物動態学的半減期を示す濃度で有意な毒性を示さず（Ａｇｒａｗａｌ，１９９６．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ：ｔｏｗａｒｄｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｉａｌｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ，１４：３７６．）、かつヌクレアーゼ耐性である。アンチセンスにより誘導される、細胞の発生に関連する機能喪失表現型は、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）で、ヒヨコにおける中脳蓋板形成の確立で（Ｇａｌｉｌｅｏ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１２：１２８５．）、および神経外胚葉培養物における細胞の異質性の維持に関与する、Ｎ−ｍｙｃタンパク質で（上皮細胞 対 神経芽細胞、これらはそれらのコロニー形成能、腫瘍形成性および付着性の点で異なる）（Ｒｏｓｏｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０：６３１６．；Ｗｈｉｔｅｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９１．Ｅｐｉｓｏｍｅ−ｇｅｎｅｒａｔｅｄ Ｎ−ｍｙｃ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ｒｅｓｔｒｉｃｔｓ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｒｍａｌ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１：１３６０．）示されている。マイトジェン特性および血管新生特性を有する塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦｇＦ）のアンチセンスオリゴヌクレオチド阻害は、可飽和かつ特異的な様式で、神経膠腫細胞の増殖を８０％抑制した（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９９１．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｈｕｍａｎ ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：７２８．）。疎水性であれば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン脂質膜とよく相互作用する（Ａｋｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ，１９９１．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＤＮＡ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎａｌｏｇｓ ｗｉｔｈ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ ｍｅｍｂｒａｎｅｓ（ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）Ｎｕｃ．Ｒｅｓ．１９：５５５１−５５５９．）。それらと細胞の原形質膜との相互作用の後、それらは、特異的な受容体を含むと予測される可飽和のメカニズムで（Ｙａｋｕｂｏｖ ｅｔ ａｌ，１９８９．ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８６：６４５４．）、生細胞に能動（または受動）輸送される（Ｌｏｋｅ ｅｔ ａｌ，１９８９．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｉｎｔｏ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ．ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８６：３４７４．）。

「リボザイム」は、ＲＮＡ触媒能（レビューについてはＣｅｃｈを参照のこと）を有し、標的ＲＮＡ内の特異的部位を切断するＲＮＡ分子である。

本発明に従い、ＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡを切断するリボザイムは、ＲＴＰ８０１阻害剤として利用され得る。これは、アンチセンス療法が化学量論的考察で制限される症例で必要となり得る（Ｓａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｇｅｎｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｉｄｓ，ｐｐ．３０５−３２５）。ＲＴＰ８０１配列を標的とするリボザイムを使用することができる。リボザイムにより切断されるＲＮＡ分子の数は、化学量論により推定される数よりも大きい（Ｈａｍｐｅｌ ａｎｄ Ｔｒｉｔｚ，１９８９；Ｕｈｌｅｎｂｅｃｋ，１９８７）。

リボザイムは、ＲＮＡのホスホジエステル結合の切断を触媒する。グループ１イントロン、ＲＮａｓｅ Ｐ、デルタ型肝炎ウイルスリボザイム、ハンマーヘッド型リボザイム、およびタバコ輪点ウイルスのサテライトＲＮＡ（ｓＴＲＳＶ）のマイナス鎖を起源に誘導されたヘアピン型リボザイムを含む、いくつかのリボザイムの構造ファミリーが同定されている（Ｓｕｌｌｉｖａｎ，１９９４；米国特許第５,２２５,３４７号、第４〜５カラム）。後者の二つのファミリーは、ウイロイドおよびウイルソイドに由来するものであり、そこでリボザイムはローリングサークルの複製の間に作出されたオリゴマーからモノマーを分離すると考えられている（Ｓｙｍｏｎｓ，１９８９および１９９２）。ハンマーヘッド型およびヘアピン型のリボザイムモチーフは、遺伝子療法のｍＲＮＡのトランス切断に最も一般的に適している（Ｓｕｌｌｉｖａｎ，１９９４）。本発明のおいて使用されるリボザイムのタイプは当該分野で公知の通りに選択される。ヘアピン型リボザイムは現在臨床試験段階にあり、これが好ましいタイプである。一般的に、リボザイムは３０〜１００ヌクレオチド長である。リボザイムの送達は、ＡＳフラグメントおよび／またはｓｉＲＮＡ分子のそれに近い。

本発明において使用しようとする全てのポリヌクレオチドは、改善された治療特性を有するよう修飾に供され得ることに留意されたい。ヌクレオチドの修飾またはアナログは、ポリヌクレオチドの治療特性を改善するよう導入され得る。改善される特性には、ヌクレアーゼ耐性の向上および／または細胞膜を透過する能力の向上が含まれる。必要に応じて、使用方法および送達方法のために必要とされるＡＳポリヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｃＤＮＡ、および／またはリボザイムの生物学的活性と干渉しないヌクレアーゼ耐性が、当該分野で公知の任意の方法によって提供される（Ｉｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，１９８５；Ｓｐｉｔｚｅｒ ａｎｄ Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，１９８８；Ｗｏｏｌｆ ｅｔ ａｌ．，１９９０；Ｓｈａｗ ｅｔ ａｌ．，１９９１）。ヌクレアーゼ耐性を増強するためにオリゴヌクレオチドに対してなされ得る修飾には、ホスファートバックボーンにおけるリン（ｐｈｏｐｈｏｒｏｕｓ）または酸素ヘテロ原子の修飾が含まれる。これらには、メチルホスホナート、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、およびモルホリノオリゴマーの作製が含まれる。一つの実施態様において、修飾は、４〜６個の３’末端ヌクレオチド塩基の間を結ぶホスホロチオアート結合を与えることによって提供される。あるいは、ホスホロチオアート結合は、全てのヌクレオチド塩基を連結する。当該分野で公知の他の修飾も、その生物学的活性が保持されるがそのヌクレアーゼに対する安定性が実質的に向上する場合に使用され得る。

ポリヌクレオチドの全てのアナログまたはポリヌクレオチドに対する修飾は、そのアナログまたは修飾がそのポリヌクレオチドの機能に実質的に影響しない限り、本発明で利用され得る。ヌクレオチドは、天然の塩基または合成修飾の塩基から選択され得る。天然の塩基には、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、およびウラシルが含まれる。ヌクレオチドの修飾塩基には、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノアデニン、６−メチル、２−プロピルおよび他のアルキルアデニン類、５−ハロ ウラシル、５−ハロ シトシン、６−アザ シトシンおよび６−アザ チミン、プソイドウラシル、４−チ
オウラシル（４−ｔｈｉｕｒａｃｉｌ）、８−ハロ アデニン、８−アミノアデニン、８−チオール アデニン、８−チオールアルキル アデニン類、８−ヒドロキシル アデニンおよび他の８−置換アデニン類、８−ハロ グアニン類、８−アミノ グアニン、８−チオール グアニン、８−チオールアルキル グアニン類、８−ヒドロキシル グアニンおよび他の置換グアニン類、他のアザおよびデアザ アデニン類、他のアザおよびデアザ
グアニン類、５−トリフルオロメチル ウラシル、ならびに５−トリフルオロ シトシンが含まれる。

さらに、そのヌクレオチドの構造が根本的に改変され治療剤または実験用試薬としてより適するポリヌクレオチドのアナログを調製することができる。ヌクレオチドアナログの例は、ＤＮＡ（またはＲＮＡ）のデオキシリボース（またはリボース）ホスファートバックボーンがペプチドにおいて見られるのと類似のポリアミドバックボーンで置換されたペプチド核酸（ＰＮＡ）である。ＰＮＡアナログは、酵素による分解に対して耐性であることならびにインビボおよびインビトロでの寿命が延びることが示されている。さらに、ＰＮＡは、ＤＮＡ分子よりも相補的なＤＮＡ配列に対して強く結合することが示されている。この観察は、ＰＮＡ鎖とＤＮＡ鎖の間の電荷の反発がないことに起因する。オリゴヌクレオチドに対してなされ得る他の修飾には、ポリマーバックボーン、環式バックボーン、または非環式バックボーンが含まれる。

本発明において使用されるポリペプチドはまた、それらの治療活性を改善するために修飾、場合により化学修飾され得る。「化学修飾」は、ポリペプチドに対して言及する場合、そのアミノ酸残基の少なくとも一つが自然プロセス、例えばプロセシングもしくは他の翻訳後修飾によって、または当該分野で周知の化学修飾技術によってのいずれかによって修飾されたポリペプチドを意味する。多くの公知の修飾の中でも、典型的であるが、それだけに限られない例には：アセチル化、アシル化、アミド化、ＡＤＰ−リボシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、脂質または脂質誘導体の共有結合、メチル化、ミリスチル化、ペグ化、プレニル化、リン酸化、ユビキチン化、またはあらゆる類似プロセスが含まれる。

さらなる可能性のあるポリペプチド修飾（例えば核酸配列の改変により得られるもの）には、以下のもが含まれる：
「保存的置換」 − あるクラスのアミノ酸を同じクラスのアミノ酸で置換することを意味し、そのクラスは共通の物理化学的なアミノ酸側鎖の特性および自然界で見出される相同なポリペプチドにおける高置換頻度、例えば標準的なデイホフ頻度変換マトリクスまたはＢＬＯＳＵＭマトリクスによって決定される置換頻度により定義される。アミノ酸側鎖は６つの一般的なクラスに分類され、以下を含む：クラスＩ（Ｃｙｓ）；クラスＩＩ（Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ｇｌｙ）；クラスＩＩＩ（Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ）；クラスＩＶ（Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ）；クラスＶ（Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｖａｌ、Ｍｅｔ）；およびクラスＶＩ（Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ）。例えば、Ａｓｐを別のクラスＩＩＩ残基、例えばＡｓｎ、Ｇｌｎ、またはＧｌｕで置換することは、保存的置換である。

「非保存的置換」 − あるクラスのアミノ酸を別のクラスのアミノ酸で置換することを意味する；例えばクラスＩＩ残基であるＡｌａをクラスＩＩＩ残基、例えばＡｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、またはＧｌｎで置換すること。

「欠失」 − 一つまたはそれ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸残基がそれぞれ存在しない、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列のいずれかにおける変化である。

「挿入」または「付加」 − その天然配列と比較して、一つまたはそれ以上のヌクレ
オチドまたはアミノ酸残基がそれぞれ付加されている、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列における変化のことである。

「置換」 − 一つまたはそれ以上のヌクレオチドまたはアミノ酸を、それぞれ、異なるヌクレオチドまたはアミノ酸で置き換えること。アミノ酸配列に関しては、この置換は保存的または非保存的であり得る。

本発明のさらなる実施態様において、ＲＴＰ８０１ポリペプチドまたはポリヌクレオチドは、対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）における黄斑変性を診断または検出するために使用され得る。検出方法は、典型的には、対象由来のサンプル中のＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡまたはＲＴＰ８０１ポリペプチドをアッセイすることからなる。

「検出」 − 疾患の検出方法を意味する。この用語は、疾患の素因の検出、または疾患の重症度の検出を意味し得る。

「ホモログ／相同性」は、本発明において使用される場合、少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約７５％の相同性、有利には少なくとも約８０％の相同性、より有利には少なくとも約９０％の相同性、さらにより有利には少なくとも約９５％、例えば少なくとも約９７％、約９８％、約９９％、またはさらには約１００％の相同性を意味する。本発明はまた、これらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドが、本明細書中のまたは上述のポリヌクレオチドおよびポリペプチドと同じ様式で使用できることを包含する。

あるいはまたはさらに、「相同性」は、配列に関しては、同一ヌクレオチドまたはアミノ酸残基を有する位置の数を、二つの配列の短い方のヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数で割ったものを意味し、二つの配列のアラインメントは、ウィルバーおよびリップマンのアルゴリズム（（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：７２６）に従い決定することができ；例えばウィンドウサイズ２０ヌクレオチド、ワード長４ヌクレオチド、およびギャップペナルティ４を用いて決定することができ、アラインメントを含むコンピューター支援分析および配列データ解釈は、市販のプログラム（例えばＩｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ（商標）Ｓｕｉｔｅ，Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｃ．，ＣＡ）を用いて簡単に実行することができる。ＲＮＡ配列が、ＤＮＡ配列と類似である、または一定の配列同一性もしくは相同性を有すると表現される場合、ＤＮＡ配列上のチミジン（Ｔ）はＲＮＡ配列上のウラシル（Ｕ）と等しいものと考察されている。本発明の範囲に含まれるＲＮＡ配列は、ＤＮＡ配列上のチミジン（Ｔ）をウラシル（Ｕ）で置換することによって、ＤＮＡ配列またはそれらの相補鎖から得ることができる。

さらにまたはあるいは、アミノ酸配列の類似性または相同性は、例えば、ＢｌａｓｔＰプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）を用いて決定することができ、これはＮＣＢＩから入手可能である。以下の参考文献は、二つのポリペプチドのアミノ酸残基の相対的な同一性または相同性の比較のためのアルゴリズムを提供し、さらにまたはあるいは、上記の件に関連して、これらの参考文献の教示はパーセント相同性を決定するのに使用することができる：Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９；Ｓｍｉｔｈ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１１：２２０５−２２２０；Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．，（１９８４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：３８７−３９５；Ｆｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｅｖｏｌ．２５：３５１−３６０；Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１−１５３；およびＴｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２２：４６７３−４６８０。

「少なくともＸ％の相同性を有する」 − 二つのアミノ酸またはヌクレオチド配列に関して言えば、それらの配列の最適なアラインメントを行った場合の、その二つの配列における同一の残基の百分率を意味する。従って、９０％のアミノ酸配列の同一性は、二つまたはそれ以上の最適にアラインメントさせたポリペプチド配列におけるアミノ酸の９０％が同一であることを意味する。

本発明のさらなる実施態様は、活性成分としての治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤および薬学的に許容できる担体を含む薬学的組成物に関する。阻害剤は、生物学的阻害剤、有機分子、化学分子等であり得る。この薬学的組成物は、図１（配列番号１）に示される配列に対するアンチセンス配列である配列を有する連続ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドであるＲＴＰ８０１阻害剤を含み得る。さらに、ＲＴＰ８０１阻害剤は、これらのポリヌクレオチドを含むベクターであり得る。さらに、ＲＴＰ８０１阻害剤は、図２（配列番号２）に示される４〜２５アミノ酸を含むエピトープに特異的に結合するモノクローナル抗体、またはＲＴＰ８０１遺伝子ｍＲＮＡを標的とするＲＮＡ分子、例えばｓｉＲＮＡ分子（場合により表Ａ〜Ｄに示される、特に表ＡのｓｉＲＮＡ番号２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０、または表ＤのｓｉＲＮＡ番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８）またはリボザイムであり得る。

薬学的組成物の活性成分は、本発明の実施に必要とされるヌクレアーゼ耐性のオリゴヌクレオチドもしくは適当な配列に対して標的化された同一効果を有することが示されたそのフラグメント、および／またはリボザイムを含み得る。アンチンセンス配列の組み合わせを含む、本発明において開示される活性成分の組み合わせも使用することができる。

本発明のさらなる実施態様は、脊髄疾患または脊髄損傷に罹患した患者の回復を促進するための薬剤の製造のための、治療有効用量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用を提供する。一つの実施態様において、阻害剤は好ましくはｓｉＲＮＡである。別の実施態様において、阻害剤は好ましくは本明細書中に示される構造Ａである。

本発明は例示的な方法で開示されており、使用されている専門用語は、当然ながら限定用語ではなく解説用語の範疇に含むものとされている。

明らかなことは、上記の教示に照らせば本発明の多くの修飾および変形が可能なことである。従って、当然ながら添付の特許請求の範囲内で、本発明は具体的に記載された以外の方法で実施することができる。

当業者は、さらに細かい説明がなくとも、上記の説明を利用すれば、本発明を完全に使用することができるものと考える。従って、以下の好ましい特定の実施態様は、例示にすぎず、いかなる様式によっても特許請求の範囲に記載の本発明を限定するものではないと解釈されるべきである。

本明細書中に具体的に記載されていない、当該分野で公知の標準的な分子生物学プロトコルは、概ね、基本的にＳａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ−Ｙｏｒｋ（１９８９，１９９２）およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ（１９８８）に従う。

本明細書中に具体的に記載されていない、当該分野で公知の標準的な有機合成プロトコ
ルは、概ね、基本的にＯｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ：Ｖｏｌ．１−７９，ｅｄｉｔｏｒｓ ｖａｒｙ，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９４１−２００３）；Ｇｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｗｏｒｋｂｏｏｋ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ（２０００）；Ｓｍｉｔｈ ＆ Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）に従う。

本明細書中に具体的に記載されていない、当該分野で公知の標準的な医薬化学法は、概ね、基本的に、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓにより発行されている、様々な著者および編者による「Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」シリーズに従う。

本明細書、特許請求の範囲、および／または図面に開示される本発明の特徴は、個別におよびその任意の組み合わせの両方において、本発明を様々な形態で実現するための素材となり得る。

実施例１
一般的な材料および方法
そうでないことが記されない限り、実施例１〜５においては以下の材料および方法を使用した。
細胞培養
第一のヒト細胞株、すなわちＨｅＬａ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）は以下の通りに培養した：Ｈｅｌａ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）は、Ｃｚａｕｄｅｒｎａ Ｆら（Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，Ｆ．，Ｆｅｃｈｔｎｅｒ，Ｍ．，Ａｙｇｕｎ，Ｈ．，Ａｒｎｏｌｄ，Ｗ．，Ｋｌｉｐｐｅｌ，Ａ．，Ｇｉｅｓｅ，Ｋ．＆ Ｋａｕｆｍａｎｎ，Ｊ．（２００３）．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ，３１，６７０−８２）に記載される通りに培養した。
第二のヒト細胞株はヒトケラチノサイト細胞株であり、これは以下の通りに培養した：ヒトケラチノサイトは、１０％ ＦＣＳを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃で培養した。
マウス細胞株は、１０％ ＦＣＳを含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）中、３７℃で培養したＢ１６Ｖ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）であった。培養条件は、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｉｎｄ Ｅｘｐ Ｃｌｉｎ
Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９７ Ｍａｙ；１９（４）：２３１−９に記載される通りであった。
各ケースにおいて、細胞を、ウェルあたり約５０,０００細胞の密度で、本明細書中に記載される実験に供し、本発明に従う二本鎖核酸は２０ｎＭを添加し、これにより二本鎖核酸を、独自の脂質１μｇ／ｍｌを用いて複合体化させた。

低酸素様状態の誘発
低酸素様状態を誘発させるため、以下の通り、細胞をＣｏＣｌ₂で処理した：ｓｉＲＮＡトランスフェクションは、（Ｃｚａｕｄｅｒｎａ ｅｔ ａｌ．，２００３；Ｋｒｅｔｓｃｈｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００３）に記載される通り、１０ｃｍプレート（３０〜５０％のコンフルエンシー）で行った。簡単に説明すると、無血清培地中で予め形成しておいたＧＢおよび脂質の１０×濃縮複合体を完全培地中の細胞に添加することによって、ｓｉＲＮＡをトランスフェクションした。総トランスフェクション量は１０ｍｌであった。脂質の終濃度は１．０μｇ／ｍｌであり；ｓｉＲＮＡの終濃度は、そうでないことが記されない限り、２０ｎＭであった。低酸素反応の誘発は、溶解の２４時間前に組織培養培地に直接ＣｏＣｌ₂（１００μＭ）を加えることによって行った。

細胞抽出物の調製および免疫ブロッティング
細胞抽出物の調製および免疫ブロット分析は、基本的に、Ｋｌｉｐｐｅｌら（Ｋｌｉｐｐｅｌ，Ａ．，Ｅｓｃｏｂｅｄｏ，Ｍ．Ａ．，Ｗａｃｈｏｗｉｃｚ，Ｍ．Ｓ．，Ａｐｅｌｌ，Ｇ．，Ｂｒｏｗｎ，Ｔ．Ｗ．，Ｇｉｅｄｌｉｎ，Ｍ．Ａ．，Ｋａｖａｎａｕｇｈ，Ｗ．Ｍ．＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｔ．（１９９８）．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１８，５６９９−７１１；Ｋｌｉｐｐｅｌ，Ａ．，Ｒｅｉｎｈａｒｄ，Ｃ．，Ｋａｖａｎａｕｇｈ，Ｗ．Ｍ．，Ａｐｅｌｌ，Ｇ．，Ｅｓｃｏｂｅｄｏ，Ｍ．Ａ．＆ Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｌ．Ｔ．（１９９６）．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，１６，４１１７−２７）に記載される通りに行った。全長ＲＴＰ８０１に対するポリクローナル抗体は、ｐＥＴ１９−ｂ発現ベクター（Ｍｅｒｃｋ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＧｍｂＨ，Ｓｃｈｗａｌｂａｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）により組換えＲＴＰ８０１タンパク質を産生する細菌でウサギを免疫することによって作製した。マウスモノクローナル抗ｐ１１０ａおよび抗ｐ８５抗体については、Ｋｌｉｐｐｅｌら（前出）に記載されている。

実施例２
第一のヒト細胞株におけるＲＴＰ８０１発現の減少
様々な二本鎖核酸を調製した。それらの、ヒトＲＴＰ８０１をコードする核酸（データバンク登録番号ＮＭ＿０１９０５８）におけるｍＲＮＡおよびＣＤＳならびにヒトＳＮＰに対する位置については図３に示されている。第一のヒト細胞株を、実施例１に記載されるように、二本鎖核酸と接触させた。低酸素様状態の誘発および二本鎖核酸による処理後、細胞を溶解させ、細胞溶解産物を免疫ブロッティングに供した。ＰＩ３−キナーゼの触媒ユニットであるｐ１１０ａおよびｐ８５をローディングコントロールとして使用した。ＲＴＰ８０１ポリクローナル抗体を用いて可視化したＲＴＰ８０１のバンドの強度は、ＲＴＰ８０１の発現レベルの減少に関する個々の二本鎖核酸の活性の尺度である。
二本鎖核酸の各々およびいずれかを、そのアンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、および第１９ヌクレオチドに２’Ｏ−Ｍｅ基が存在し、全く同じ修飾、すなわち２’ −Ｏ−Ｍｅ基がセンス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、および第１８ヌクレオチドにも存在するよう修飾した。さらに、これらの個々の本発明に従う核酸においては、第一ストレッチが第一鎖と同一であり、第二ストレッチが第二鎖と同一であり、かつこれらの核酸が平滑末端を有することに留意されたい。
本実験は二度行い、個々の結果を図４Ａ〜Ｈに示し、それらをそれぞれ実験１および実験２と呼ぶ。
図４Ａ〜Ｈにおけるｈ、ｈｒ、およびｈｍｒという表記は、各二本鎖核酸が、ヒトＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡに特異的なＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのセクション（ｈ）、ヒトおよびラットＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡに特異的なＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのセクション（ｈｒ）、ならびにヒト、マウス、およびラットＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡに特異的なＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのセクション（ｈｍｒ）に向けるよう設計されたことを示す。４０．１番と表記された二本鎖核酸をポジティブコントロールとして使用し、未処理細胞（ＵＴ＋）をネガティブコントロールとして使用した。
この結果によれば、以下の二本鎖核酸が、ＲＴＰ８０１の発現のダウンレギュレーションに特に有用であることが明らかになった：１４番、１５番、２０番、２１番、２２番、２３番、２４番、２５番、２７番、３９番、４０番、４１番、４２番、４３番、４４番、４９番、および５０番（表Ａを参照のこと）。

実施例３
第二のヒト細胞株におけるＲＴＰ８０１発現の減少
実施例１に示される第二のヒト細胞株を用いて、実施例２に関連して記載された実験を繰り返した。その結果を図５Ａ〜Ｆに示す。
これらの図から分かるように、実施例２に記載された実験に関連して得られた結果が、第二のヒト細胞株を用いて確認された。

実施例４
ＲＴＰ８０１特異的二本鎖核酸の用量効果
この実験においては、ＲＴＰ８０１特異的二本鎖核酸の用量効果を調査した。
この目的のために、ＨｅＬａ細胞を、培養ブロス中の二本鎖核酸の濃度を１０ｎＭ、５ｎＭ、および１ｎＭにして実施例２および３と同様に処理した。ポジティブコントロールとして、二本鎖核酸４０．１番を使用し、ネガティブコントロールとして未処理細胞（ＵＴ＋）を使用した。読み取りは、実施例２および３に関連して記載されたのと同じであった。使用した特定の二本鎖核酸は、内部参照番号１４、２２、２３、および２７を有する、ヒト、マウス、およびラットにより共有されているＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ上のストレッチに対するもの、および内部参照番号３９および４２を有する、ヒトＲＴＰ８０１に特異的なＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのストレッチに対する二本鎖核酸であった。
その結果を図６Ａ〜Ｃに示す。この図から、ＲＴＰ８０１に特異的な二本鎖核酸の効果の濃度依存性が明らかであり、内部参照番号１、１５、２０、２１、２４、４０、４１、４３、４４、２２、２３、２７、３９、４２、４０．１、４４．１、および１４、好ましくは２２、２３、２７、３９、４２、４０．１、および４４．１、より好ましくは１４、２３、および２７を有する核酸分子、好ましくは本明細書中の実施例の節に記載される特定の修飾パターンを有する各核酸分子が特に効果的であると解釈することができる。

実施例５
ＲＴＰ８０１特異的二本鎖核酸の種特異性
本発明に従う二本鎖核酸を、様々な種において同一または異なるＲＴＰ ｍＲＮＡのストレッチに対して設計した。ＲＴＰ８０１特異的二本鎖核酸に種特異性が存在するかどうかを試験するため、内部参照番号１４、２２、２３、および２７を有する、ヒト、マウス、およびラットのｍＲＮＡの間で保存されているＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのストレッチに向けられる二本鎖核酸、ならびに内部参照番号３９および４２を有する、ヒトＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡに特異的なＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡのストレッチに向けられる、すなわちマウスまたはラットに存在しないストレッチに向けられる二本鎖核酸を、実施例１および２に示されるのと同じアプローチおよび読み取りを用い、ＲＴＰ８０１のダウンレギュレーションの点で比較した。
使用した二本鎖核酸の全ては、原理的にはヒトｍＲＮＡに対して活性であり、かつ先行する実施例で示されたようにＲＴＰ８０１の発現のダウンレギュレーションに適するものであるが、マウス細胞株を用いた場合は、マウスＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡに対しても特異的な二本鎖核酸のみ、すなわち二本鎖核酸番号１４、２２、２３、および２７のみが、ＲＴＰ８０１発現を効果的に減少させた。
この結果から、一つまたはいくつかの種に特異的なＲＴＰ８０１向けの二本鎖核酸を設計することが可能であると結論付けることができる。このことは、動物モデルおよびヒトにおいて全く同じ分子を使用することを可能にする。

実施例６
黄斑変性に関連する実験モデル、方法、および結果
本発明の化合物を、以下の脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の動物モデルにおいて試験した。この滲出型ＡＭＤの特徴は、動物モデルにおいてレーザー処置により誘発させた。
Ａ）マウスモデル
脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）の誘発
滲出型ＡＭＤの特徴である脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）は、第０日に各マウスの両眼に対して行った、薬物群の割当を知らない一個人によるレーザー光凝固術（５３２ｎｍ、２００ｍＷ、１００ｍｓ、７５μｍ）（ＯｃｕＬｉｇｈｔ ＧＬ，Ｉｒｉｄｅｘ，Ｍｏｕ
ｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）により誘発した。スリットランプ送達システムおよびコンタクトレンズとしてのカバースリップを使用して、レーザースポットを標準化された様式で視神経周囲に適用した。
処置グループ
ＣＮＶを、以下のマウスグループ（雄６〜８週齢）において誘発した：
（１）ＷＴマウス１２匹；
（２）ＲＴＰ８０１ノックアウトマウス１２匹；
（３）第０日および第７日に、一方の眼に合成、安定化型の活性な抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）およびもう片方の眼に不活性な抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ８ − ネガティブコントロール）を０．２５μｇ注入したＷＴマウス１２匹；
（４）第０日および第７日に、一方の眼に合成、安定化型の活性な抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）およびもう片方の眼に不活性な抗ＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ネガティブコントロール）を０．２５μｇ注入したＷＴマウス１２匹；
（５）第０日および第７日に、一方の眼に合成、安定化型の活性な抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）およびもう片方の眼にＰＢＳ（ネガティブコントロール）のいずれかを０．１μｇ注入したＷＴマウス１２匹；
（６）第０日および第７日に、一方の眼に合成、安定化型の活性な抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）およびもう片方の眼にＰＢＳ（ネガティブコントロール）のいずれかを０．０５μｇ注入したＷＴマウス１２匹。

各マウスの両眼をレーザー処置した。注入量は２μｌであった。
評価
１．本実験は、１４日目で終了した。評価のために、眼を摘出し、４℃で３０分間、４％パラホルムアルデヒドで固定した。感覚神経網膜（ｎｅｕｒｏｓｅｎｓｏｒｙ ｒｅｔｉｎａ）を剥がし、視神経から分離させた。残ったＲＰＥ−脈絡膜−強膜の複合体をＩｍｍｕ−Ｍｏｕｎｔ（Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍ，Ｖｅｃｔｏｒ）に平らにマウントし、カバースリップを被せた。平らにマウントしたものを走査レーザー共焦点顕微鏡（ＴＣＳ ＳＰ，Ｌｅｉｃａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）で試験した。青色アルゴンレーザーで励起することによって血管を可視化した。ＲＰＥ−脈絡膜−強膜複合体の表面から水平方向の光学断面（１μｍステップ）を得た。病巣につながる周囲を取り囲む脈絡膜血管網を確認できた最深の焦点面を、その病巣の底面（ｔｈｅ ｆｌｏｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｌｅｓｉｏｎ）と判断した。レーザー処置領域内でありかつこの基準面の表層にあるあらゆる血管をＣＮＶと判断した。各断面の画像をデジタル方式で記録した。ＣＮＶに関連する蛍光が見られる領域を、Ｌｅｉｃａ ＴＣＳ ＳＰソフトウェアを用いるコンピューター画像分析により測定した。各水平断面における全蛍光領域の和を、ＣＮＶ量のインデックスとして使用した。
２．ＲＰＥ／脈絡膜または神経網膜から抽出したＲＮＡに対するリアルタイムＰＣＲを用いたＣＮＶにおけるＲＴＰ８０１ ｍＲＮＡ発現（およびＡＭＤに関係する他の遺伝子の発現）（未処理およびｓｉＲＮＡで処理）の評価のために、別のＷＴマウス（グループあたり眼５つ）を使用した。

結果
１．ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスは、ＣＮＶの誘発後に、ＷＴマウスと比較して３０％低い血管漏出を示した；図８を参照のこと。
２．ＲＴＰ８０１に対する合成、安定化型のｓｉＲＮＡであるＲＥＤＤ１４は、ＣＮＶ量の用量依存的な減少を引き出された。一つの眼あたり０．２５μｇの用量のＲＥＤＤ１４（表Ａの配列番号１４、配列番号１６（センス）および６６（アンチセンス））で、ＰＢＳを注入した眼と比較して最大約７０％の阻害を達成した。同じ用量でも、ネガティブコントロールｓｉＲＮＡであるＲＥＤＤ８および抗ＧＦＰ ｓｉＲＮＡは、それぞれ、２７％および３３％のＣＮＶ量の減少しか示さず、これによりＲＥＤＤ１４の優れた効能およびその効果の特異性の両方が支持された。

Ｂ）非ヒト霊長類モデル
ＣＮＶの誘発
８匹の２〜６歳の雄カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を本研究に使用した。脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）は、投薬前に、両眼の黄斑周囲のレーザー処置により誘発させた。レーザー［ＩＲＩＳ Ｍｅｄｉｃａｌ（登録商標）ポータブルスリットランプアダプターを装備したＯｃｕＬｉｇｈｔ ＧＬ（５３２ ｎｍ）レーザー光凝固装置］により黄斑に９つの病巣を形成させ、右眼のレーザースポットは左眼の位置を反映させたものとした。およそのレーザーパラメータは次の通りであった：スポットサイズ：５０〜１００μｍ径；レーザー出力：３００〜７００ミリワット；曝露時間：０．１秒。
処置
レーザー処置の直後に、全動物の両眼に１回の硝子体内注入を行った。左眼には、ＲＴＰ８０１に対する合成、安定化型のｓｉＲＮＡ（マウス研究において使用したのと同じもの）３５０μｇ、終量５０μｌを投与し、反対側の眼にはＰＢＳ（媒体）５０μｌを与えた。

評価
１．全動物を、毎日の摂取量および体重測定の試験に供した。
２．２匹のサルをＣＮＶ誘発後第６日目に安楽死させた。その眼を摘出し、後極を平らにした。次いで、くぼみ領域（ｆｏｖｅａ ｒｅｇｉｏｎ）を切り出して脈絡膜と神経網膜に分離し、これらを後にＲＮＡ抽出およびＲＴＰ８０１発現のリアルタイムＰＣＲ評価に使用する予定のために、別個に（動物ごとに）液体窒素中で凍結させた。
３．フルオレセイン血管造影図を、研究前、ＣＮＶ誘発後第１、２、および３週目の最後に行った。眼底カメラ（ＴＲＣ−５０ＥＸ Ｒｅｔｉｎａ Ｃａｍｅｒａ）を用いて写真を撮影した。ＴＯＰＣＯＮ ＩＭＡＧＥｎｅｔ^TMシステムを用いて画像をキャプチャした。フルオレセイン色素（１０％フルオレセインナトリウム、およそ０．１ｍＬ／ｋｇ）を、血管アクセス口を通じて注入した。新血管新生形成を評価するためおよびＣＮＶ病巣に関連するフルオレセインの漏出をモニターするために、色素の注入後のいくつかの時点で、動脈フェーズ、初期動静脈フェーズ、およびいくつかの後期動静脈フェーズを含むよう写真を撮影した。フルオレセイン血管造影図の解釈および分析は、二名の眼科医により独立して行なわれた。

新生血管形成（ＮＶ）は初期血管造影図において評価し、以下のスキームに従い各スポットの格付けを行った：
０ − ＮＶの徴候なし
０．５ − 疑わしいスポット
１ − 「ホット」スポット
２ − レーザー熱傷にＮＶ
３ − 明白なＮＶ
漏出は、以下のスキームに従い評価した：
０ − 漏出なし
０．５ − 疑わしいスポット
１ − 明白な小さなスポット漏出
２ − 時間と共に大きくなる漏出
３ − それまでの境界よりも（明白に）大きな漏出
さらに、形態計測を用いて、各スポットの大きさを、初期および後期の血管造影図の間で比較し、漏出に起因するスポットサイズの拡大を計算した。

４．研究前および第３週の最後に、Ｅｐｉｃ ２０００網膜電位装置を、Ｇａｎｚｆｉｅｌｄ装置の使用を含むＳｉｅｒｒａのＳＯＰおよび本研究独自のＳＯＰに従い用いて網膜電位図（ＥＲＧ）を記録した。表にしたＥＲＧデータを、動物眼科医により評価させた。
本研究はＣＮＶ誘発後第２１日目で終了した。眼を含む器官および組織に対して検視・組織学総合試験を行った。

結果
１．ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡは、ＣＮＶ誘発後第６日目のリアルタイムＰＣＲによる測定して、レーザー処置動物のＲＰＥ／脈絡膜におけるＲＴＰ８０１発現を減少させた（図１０を参照のこと）。
２．各個別のサルの片方の眼の間の漏出および新血管新生についてのスポットの格付けの比較は、これらの病理学的特徴の両方が、ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡを注入した眼において、コントロールと比較して減少することを明らかにした（漏出の結果については図１１を参照のこと；新生血管形成の結果については図１２を参照のこと）。
３．全てのｓｉＲＮＡを注入した眼における臨床的関連性の高い漏出または新生血管形成の格付け（２および３）を有するスポットの総数と全てのＰＢＳを注入した眼のそれとの比較もまた、ｓｉＲＮＡを注入した眼は影響が少ないことを明らかにした（図１３、ａ＋ｂを参照のこと）。
４．漏出スポットおよび新血管新生についての格付けデータ全体を統計学的評価に供した。コントロールの右（Ｒ）眼とｓｉＲＮＡを注入した左（Ｌ）眼の平均スポット順位間のデルタ（デルタ＝Ｒ−Ｌ）を算出することによって、ｓｉＲＮＡ処置とコントロール処置の間に相違が存在することが分かった。この相違の有意性を、ノンパラメトリック統計法であるウイルコクソンの符号順位検定 − 片側検定を用いて算出した。血管造影図の異なるフェーズ（初期動脈、動静脈、および後期静脈）を、各週（１、２、および３）ごとに別個に分析した。

表２は、各グループについての０からの漏出順位の差の有意性（片側検定）を示す（下線はＰ値＜０．０５）。後期血管造影図の第２週および第３週の左眼（ｓｉＲＮＡ処置）において、右眼（プラセボ処置）に対して有意な漏出順位の下降が見られた。

通常、後期血管造影図を漏出パラメーターの評価に使用したことに留意されたい。

表３は、各グループについての０からの新生血管形成（ＮＶ）順位の差の有意性（片側検定）を示す（下線はＰ値＜０．０５）。

有意なＮＶ順位の下降が、初期期間の第２週および第３週ならびに動静脈期間の第２週の左眼において、右眼に対して見られた。

通常、初期血管造影図を新生血管形成パラメーターの評価に使用したことに留意されたい。

５．初期（動脈フェーズ）と後期（静脈フェーズ）の血管造影図の間で生じた漏出に起因するスポット面積の増加の量的な形態計測評価は、このパラメーターが、コントロール（右眼、ＯＤ）と比較して、ｓｉＲＮＡを注入した眼（左眼、ＯＳ）内のレーザースポットにおいて有意に減少したことを明らかにした。二つの実施例を図１４に示す。このグラフは、３３１５番および３３００番の動物の左眼および右眼におけるスポットごとの面積の相対的な増加（％）を示す。

さらに、上記の研究の全てを通じて、抗ＲＴＰ−８０１ ｓｉＲＮＡが、網膜電位図（ＥＲＧ）、眼の組織学または構造、ならびに他の臓器および系の機能に対して有害な作用を有さなかったことに留意されたい。

上記の実験および結果のまとめ
１．滲出型加齢性黄斑変性（滲出型ＡＭＤ）のレーザー誘発型ＣＮＶモデルにおけるＲＴＰ８０１発現の遺伝的（ＲＴＰ８０１−／−）および治療的ｓｉＲＮＡ阻害は共に、ＣＮＶ量を有意に減少させた。
２．マウスおよび非ヒト霊長類モデルにおいて、肯定的な結果を得た。
３．サルにおける病理学的およびＥＲＧ試験は、眼または他の臓器もしくは系のいずれにおいてもｓｉＲＮＡ媒介性の毒性を示さなかった。

Ｃ）ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）および抗ＶＥＧＦ抗体の併用療法の効能
ＣＮＶが起きる疾患の処置におけるＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）および抗ＶＥＧＦ抗体の併用療法の効能を、上記のマウスＣＮＶモデルにおいて試験した。

Ａ）ＣＮＶ量の研究
レーザー傷害から３週間後の脈絡膜新生血管形成（ＣＮＶ）量を、以前に記載されたように（Ｓａｋｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．ＩＯＶＳ ２００３；４４：３５７８−８５ ＆ Ｓａｋｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．ＩＯＶＳ ２００３；４４：２７４３−２７４９）共焦点蛍光顕微鏡によって算出した。
以前の研究において、抗ＶＥＧＦ−Ａ抗体（Ａｂ）が用量依存的な様式でＣＮＶ量を減少させることが見出されていた。ＲＥＤＤ１４＋ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ併用研究においては、中程度の阻害効果を有するという理由で、１ｎｇのＶＥＧＦ−Ａ Ａｂの用量を選択した：ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ（１ｎｇ）はＣＮＶのサイズを２６±６％減少させた。
ＲＥＤＤ１４＋ＶＥＧＦ−Ａ抗体（Ａｂ）研究の主な知見は次の通りであった：
・０．０５μｇの低用量のＲＥＤＤ１４を加えると、ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ単独の場合と比較して、ＣＮＶのサイズが２７±４％減少した。
・０．２５μｇの高用量のＲＥＤＤ１４を加えると、ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ単独の場合と比較して、ＣＮＶのサイズが５５±３％減少した。

Ｂ）ＣＮＶ漏出の研究
実験１
本実験は、マウスのレーザー誘発型脈絡膜新生血管形成モデルにおけるＶＥＧＦおよびＲＴＰ８０１の阻害の潜在的な相対的または相乗作用的治療効果を確認するために設計した。
材料：
・ＲＥＤＤ１４（ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ）
・ＲＥＤＤ８（ネガティブコントロール）
・抗ＶＥＧＦ抗体
・非特異的ＩｇＧ（ネガティブコントロール）
ＣＮＶは、第０日に上記の通りに誘発し；試験材料は、第０日および第７日に対象に注入した。
その結果を、第１、２、３週にフルオレセイン血管造影法により、および第３週にＣＮＶ量測定により評価した。各試験グループは１０個の眼で構成されるものであった。

実験グループ：
・ＶＥＧＦ Ａｂ ０．５ｎｇ／眼
・ＶＥＧＦ Ａｂ １ｎｇ／眼
・ＶＥＧＦ Ａｂ ２ｎｇ／ 眼
・ＶＥＧＦ Ａｂ ４ｎｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．０５μｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．１μｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．２５μｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．０５μｇ／眼 ＋ ＶＥＧＦ Ａｂ １ｎｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．１μｇ／眼 ＋ ＶＥＧＦ Ａｂ １ｎｇ／眼
・ＲＥＤＤ１４ ０．２５μｇ／眼 ＋ ＶＥＧＦ Ａｂ １ｎｇ／眼
コントロールグループ：
・ＰＢＳ
・非特異的ＩｇＧ ２ｎｇ／眼
・ＲＥＤＤ８ ０．１μｇ／眼
・ＲＥＤＤ８ ０．１μｇ／眼 ＋ ＶＥＧＦ Ａｂ １ｎｇ／眼

結果
上記の実験の結果を図２３〜２４に示す。これらの結果は、ＶＥＧＦ ＡｂおよびＲＥＤＤ１４の同時硝子体内投与が、グレード４スポットの発生の減少およびグレード１スポットの発生の増加に表れているように、脈絡膜新生血管形成および脈絡膜血管漏出の強力かつ用量依存的な阻害をもたらすことを示している。血管造影図を、以前に発表された半定量的格付け（１〜４）スキームの変法を用いて格付けした（Ｓａｋｕｒａｉ ｅｔ ａｌ．ＩＯＶＳ ２００３；４４：２７４３−２７４９）。グレード１病巣は、全く形成されなかった、すなわち完全な予防に匹敵する、とされる。グレード４病巣は、病理学的に有意である、すなわち患者において処置されることになる病巣に匹敵する、とされる。ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ（１ｎｇ）は、眼あたりのグレード４病巣の発生を３８±８％減少させ、眼あたりのグレード１病巣の発生を６６±４３％増加させた。

ＲＥＤＤ１４＋ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂの組み合わせによる漏出研究の主な知見は次の通りであった：
・０．０５μｇの低用量のＲＥＤＤ１４を加えると、ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ単独の場合と比較して、グレード４病巣の発生が６６±１２％減少した。
・０．２５μｇの高用量のＲＥＤＤ１４を加えると、ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ単独の場合と比較して、グレード４病巣の発生が６０±１２％減少した。
・０．２５μｇの高用量のＲＥＤＤ１４を加えると、ＶＥＧＦ−Ａ Ａｂ単独の場合と比較して、グレード１病巣の発生が倍増（１００±３４％）した。

実験２
本実験は、ＲＰＥおよび神経網膜における遺伝子発現に対するＲＥＤＤ１４の効果を研究するために設計した。
実験デザイン
グループ：
・ＰＢＳ
・ＲＥＤＤ１４ ０．２５ｍｇ
グループのサイズは眼５つであった。ＣＮＶを、第０日に上記の通りにレーザー処置により誘発させ；試験材料もまた第０日に注入し、その効果は、第０日および第５日に、ＲＰＥおよび神経網膜における遺伝子発現のｑＰＣＲ分析により評価した。

結果
上記の実験の結果を図２５に示す。これらの結果は、ＲＥＤＤ１４の投与が：
・ＲＰＥおよび神経網膜の両方における、ＲＴＰ８０１発現の基準値から約４０％のダウンレギュレーション（図２６もまた参照のこと）；
・神経網膜における、ＰＥＤＦ発現の基準値から約７０％のアップレギュレーション（注釈：ＰＢＳを注入した眼におけるＰＥＤＦの発現は基準値から４０％ダウンレギュレートされた）
・ＲＰＥにおけるＶＥＧＦ１６４発現の基準値から約４０％のダウンレギュレーション（注釈：ＰＢＳを注入した眼におけるＶＥＧＦ１６４の発現は２０％ダウンレギュレートされた）
・ＲＰＥ／脈絡膜におけるＭＣＰ１発現の約５０％の減少（図２６）
をもたらすことを示している。

両実験からの一般的結論：
・ＲＴＰ８０１およびＶＥＧＦの同時阻害により、脈絡膜新生血管形成および新生血管形成漏出に対する阻害効果が増強された。
・ＲＥＤＤ１４によるＲＴＰ８０１発現の阻害は、ＣＮＶモデルにおいてＰＥＤＦのダウンレギュレーションを妨げただけでなく、その発現を基準値よりも高めた。
・ＲＴＰ８０１発現の阻害は、ＭＣＰ１のダウンレギュレーションを同時に引きこすことから、抗炎症効果を有すると考えられる。
・理論に拘束されるものではないが、ＲＥＤＤ１４によるＰＥＤＦ発現の増加は、観察されたＶＥＧＦおよびＲＴＰ８０１の同時阻害の協同的作用に基づくものであり得る（ＰＥＤＦはよく知られた抗血管新生・神経保護因子である）。
・理論に拘束されるものではないが、ＲＥＤＤ１４によるＭＣＰ１発現の減少もまた、観察されたＶＥＧＦおよびＲＴＰ８０１の同時阻害の協同的作用に基づくものであり得る（ＭＣＰ１は、ＡＭＤの病理に関与する公知の炎症促進性サイトカインである）。

本発明の方法を試験するために使用され得るさらなるＡＭＤモデル：
・Ｃｃｌ−２またはＣｃｒ−２欠損動物 − これらのタンパク質のいずれかの欠損は、ＡＭＤの主な特徴のいくつかの発症の原因である。これらのタンパク質を欠く動物は、本発明の方法を試験するのに使用することができる。

ＡＭＤ動物モデルに関するさらなる情報については、Ｃｈａｄｅｒ，Ｖｉｓｉｏｎ ｒｅｓｅａｒｃｈ ４２（２００２）３９３−３９９；Ａｍｂａｔｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９（１１）（２００３）１３９０−１３９７；Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｔｉｎａ ２４（２００４）１３２−１３８を参照のこと。

Ｄ）レーザー誘発型ＣＮＶモデルにおける、各鎖に３’ホスファート基を有する抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡであるＲＥＤＤ１４と３’ホスファートを欠く同分子（ＲＥＤＤ１４ＮＰ）の活性の比較
本実験は、概ね、上記の通りに実施および評価した。各マウス（グループあたり１２匹）の一方の眼にＲＥＤＤ１４ ｓｉＲＮＡを０．２５μｇ注入し、もう一方の眼にはＲＥＤＤ１４ＮＰ ｓｉＲＮＡを注入した。
結果
両方のｓｉＲＮＡとも、同等の効率でＣＮＶ量を減少させた（図２７）。

実施例７
ＣＯＰＤおよび気腫に関連するモデルおよび結果
本発明の化合物を、以下の動物モデルにおいて試験した：
^*喫煙誘発型気腫モデル：タバコ煙に対する慢性的な曝露は、いくつかの動物、特にマウス、モルモットにおいて気腫を引き起こす。
^*気腫の誘発因子としての肺プロテアーゼ活性
^*気腫のＶＥＧＦＲ阻害モデル
^*げっ歯類におけるヒト好中球／膵臓エラスターゼの気管支注入
^*ＭＭＰ（マトリクスメタロプロテアーゼ）誘発型気腫
^*炎症誘発型気腫
さらに、気腫モデルは遺伝的手法を通じて作製され得（例えばＴＳＫ変異を有するマウス）、気腫性動物は、公知の気腫に対する感受性の修飾因子（ｍｏｄｉｆｉｅｒ）、特に肺傷害、肺胞発育不全、高酸素、グルココルチコイド処理、および栄養により作製され得る。

Ａ．（ＲＴＰ８０１ノックアウトマウスを用いた）気腫のマウスモデルにおける疾患の発症に対するＲＴＰ８０１の欠損の影響の評価
（１）喫煙（ＣＳ）誘発型の炎症およびアポトーシスを、５匹のＲＴＰ８０１ ＫＯおよび５匹のコントロール野生型の４ヶ月齢雄マウスにおいて惹起した。これらのマウスを、
７日間、（Ｒａｎｇａｓａｍｙ ｅｔ ａｌ．，上記参照に記載されるようにして）強烈なＣＳにさらした。上記のＶＥＧＦＲ阻害実験のＫＯおよびＷＴ未処置マウスを、本実験においても未処置コントロールグループとして用いた。その後に肺をアガロースで膨張させ、固定し、パラフィン包埋し、そしてＫＯマウスにおける酸化ストレスの発生を：
ａ）肺切片における８−オキソ−ｄＧの免疫組織化学的な局在化および定量；
ｂ）特異的な抗体を用いた肺切片における活性カスパーゼ３の免疫組織化学的な局在化および定量、またはＴＵＮＥＬ陽性細胞の数の定量的評価；
ｃ）肺抽出物におけるセラミド濃度の測定；
ｄ）肺抽出物におけるカスパーゼ活性の測定、
によって評価した。
（２）ＫＯマウスにおける長時間の喫煙
６匹のＫＯおよび６匹の同齢ＷＴ雌マウスを、６ヶ月の間（１日５時間）、強烈な喫煙にさらした。次いで、マウスを犠牲にし、平均中隔間径（ａｖｅｒａｇｅ ｉｎｔｅｒｓｅｐｔａｌ ｄｉａｍｅｔｅｒ）（気腫の発症のパラメーター）を、形態計測アプローチを用いて評価した。

Ｂ．ＲＴＰ８０１不活性化ｓｉＲＮＡの肺内送達を用いて内因性ＲＴＰ８０１を阻害することによる、気腫のマウスモデルにおける疾患の発症に対するＲＴＰ８０１の欠損の影響の評価
グループあたり１０匹のマウスの２つのＣ５７ＢＬ６マウスグループにおいて、７日間の喫煙によりＣＳ誘発型炎症を誘発させた。グループ１：ＣＳ＋コントロールｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ８）ｓｉＲＮＡの送達；グループ２：ＣＳ＋ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）。コントロールのマウスグループには、いずれかのタイプのｓｉＲＮＡを注入したが室内空気条件下に置いた。これらの動物を、ノックアウトマウスを用いた上記実験と同じようにして評価した。

方法
喫煙（ＣＳ）に対する曝露
曝露は、発煙機（Ｍｏｄｅｌ ＴＥ−１０，Ｔｅａｇｕｅ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ，Ｄａｖｉｓ，ＣＡ，ＵＳＡ）を用いて２Ｒ４Ｆ基準タバコ（１本あたり２．４５ｍｇニコチン；Ｔｏｂａｃｃｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｋｅｎｔｕｃｋｙ，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＫＹ，ＵＳＡから購入）を燃やすことにより行った（７時間／日、７日／週）。くすぶっている各タバコを、毎分一回、２秒間、１．０５Ｌ／分の流速で合計８回吹かし、３５ｃｍ³の基準流煙を与えた。一度に５本のタバコを燃やすことにより、副流煙（８９％）および主流煙（１１％）の混合煙を提供するよう発煙機を調整した。９０ｍｇ／ｍ³および３５０ｐｐｍの濃度の、それぞれ、全浮遊微粒子および一酸化炭素について、チャンバー内雰囲気をモニターした。

形態学的・形態計測分析
マウスのＣＳ曝露またはＲＴＰ８０１発現プラスミドの注入の後、以前に記載されたように⁶、マウスをハロタンで麻酔し、肺を０．５％低融点アガロースを用いて２５ｃｍの定圧で膨張させた。膨張させた肺を１０％緩衝性ホルマリン中で固定し、パラフィン包埋した。切片（５μｍ）をヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。平均肺胞径、肺胞長、および肺胞隔壁間距離（ｍｅａｎ ｌｉｎｅａｒ ｉｎｔｅｒｃｅｐｔ）を、Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓソフトウェア（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇ，ＭＤ，ＵＳＡ）を用いたコンピューター支援形態計測により測定した。各グループの肺切片をコード化し、スライドの正体を知らされていない研究者にＮｉｋｏｎ Ｅ８００顕微鏡、２０Ｘレンズを使用させて、代表画像（肺切片あたり１５個）を取らせた。

気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）およびフェノタイピング
ＣＳ曝露またはＲＴＰ８０１発現プラスミドの滴注後に、マウスをペントバルビタールナトリウムで麻酔した。マウスの肺から集めたＢＡＬ液を遠心分離し（５００ｇ、４℃）、その細胞ペレットをリン酸緩衝生理食塩水に再懸濁した。洗浄液中の総細胞数を測定し、２×１０４個の細胞をガラススライド上で細胞遠心分離し（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ，ＵＳＡ）、ライト−ギムザ染色法により染色した。標準的な細胞学的技術に従い、３００個の細胞に対して細胞分画計数（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｃｅｌｌ ｃｏｕｎｔｓ）を行った。

肺における肺胞アポトーシス細胞集団の同定
肺においてアポトーシスを起こした異なる肺胞細胞型を同定するため、室内空気（ＲＡ）およびＣＳに曝露したマウス由来の肺切片における活性カスパーゼ３の免疫組織化学染色を行った。肺におけるアポトーシス性のＩＩ型上皮細胞を同定するため、活性カスパーゼ３の標識後、肺切片を、まず、抗マウスサーファクタントタンパク質Ｃ（ＳｐＣ）抗体と、次に抗ウサギテキサスレッド抗体と共にインキュベートした。アポトーシス性の内皮細胞は、この切片を、まず、抗マウスＣＤ３１抗体と、次いでビオチニル化ウサギ抗マウス二次抗体と共にインキュベートすることによって同定した。この肺切片をＰＢＳでリンスし、次いでストレプトアビジン−テキサスレッド複合体と共にインキュベートした。肺内のアポトーシス性マクロファージは、この切片を、まず、ラット抗マウスＭａｃ−３抗体と、次いで抗ラットテキサスレッド抗体と共にインキュベートすることによって同定した。最後に、全ての肺切片にＤＡＰＩを適用し、５分間インキュベートし、洗浄し、Ｖｅｃｔａｓｈｉｅｌｄ ＨａｒｄＳｅｔ封入剤をマウントした。ＤＡＰＩおよびフルオレセインは、それぞれ、３３０〜３８０ｎｍおよび４６５〜４９５ｎｍで可視化した。肺切片の画像は、Ｎｉｋｏｎ Ｅ８００顕微鏡、４０Ｘレンズを用いて入手した。

活性カスパーゼ３の免疫組織化学による局在化
抗活性カスパーゼ３抗体を用いて活性カスパーゼ３の免疫組織化学染色アッセイを行い、活性カスパーゼ３陽性細胞を、Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓプログラムを用いてマクロで計数した。その計数を、本実験において肺胞長と呼びμｍで表される肺胞プロフィールの和により正規化した。肺胞長は、肺胞隔壁間距離と逆相関した、すなわち、肺胞間中隔が破壊されるので、肺胞隔壁間距離は、総肺胞長、すなわち総肺胞間中隔長が小さくなるにつれて大きくなった。

カスパーゼ３活性アッセイ
肺組織抽出物中のカスパーゼ−３／７の活性は、蛍光光度アッセイを製造元の指示に従い用いて測定した。瞬間凍結させた肺組織（グループあたりｎ＝３）をアッセイ緩衝液中でホモジナイズした後、超音波処理および８００×ｇでの遠心分離を行った。核および細胞残屑を除去した後、その上清（３００μｇタンパク質）を、室温で１時間、蛍光促進基質と共にインキュベートし、その蛍光強度をＴｙｐｈｏｏｎホスホイメージャー（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ＵＳＡ）を用いて測定した。その結果を、総タンパク質濃度により正規化した、カスパーゼ３酵素活性単位で表わされる、比カスパーゼ−３基質分解速度として表す。活性な組換えカスパーゼ３を、アッセイスタンダードとして用いた（０〜４Ｕ）。基質を含まない組織溶解産物、アッセイ緩衝液のみ、およびカスパーゼ３阻害剤を含む溶解産物を、ネガティブコントロールとして用いた。

８−オキソ−ｄＧの免疫組織化学により局在化
８−オキソ−ｄＧの免疫組織化学により局在化および定量のために、ＣＳ曝露したまたはＲＴＰ８０１発現プラスミドを注入したマウス由来の肺切片を、抗８−オキソ−ｄＧ抗体と共にインキュベートし、ＩｎｎｏＧｅｎｅｘＴＭ Ｉｓｏ−ＩＨＣ ＤＡＢキットお
よびマウス抗体を用いて染色した。８−オキソ−ｄＧ陽性細胞を、マクロで（Ｉｍａｇｅ
Ｐｒｏ Ｐｌｕｓを用いて）計数し、その計数を記載されたように肺胞長により正規化した。

マウス肺へのプラスミドＤＮＡの注入
ＲＴＰ８０１発現ベクターおよびコントロールベクターのプラスミドＤＮＡを、内毒素非含有ＤＮＡ単離キットを用いて調製した。気管内注入のために、プラスミドＤＮＡ ５０μｇを無菌ペルフルオロカーボン８０μｌを用いて送達した。ペルフルオロカーボンは酸素保持特性を有するがためにこれらの量でも十分許容され、気管内に注入した場合、その物理化学的特性により極めて効率的な肺遠位への送達を実現する。マウスを、短い吸入によるハロタン曝露により麻酔し、その舌をピンセットによって穏やかに前方に引き、ブラント血管カテーテルを介して舌の根元から気管にペルフルオロカーボン溶液を注入した。

マウス肺へのｓｉＲＮＡの注入
ケタミン／キシラジン（１１５／２２ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射によりマウスを麻酔した。ｓｉＲＮＡ ５０μｇは、５０μｌ量の０．９％ ＮａＣｌを用いて、１０μｌ量を５連続で送達することによって鼻腔内に注入した。注入した溶液の全てを内部に流し込むよう、鼻腔内注入の最後に、マウスの頭部を１分間まっすぐに伸ばした。
さらなる情報については、Ｒａｎｇａｓａｍｙ Ｔ，Ｃｈｏ ＣＹ，Ｔｈｉｍｍｕｌａｐｐａ，ＲＫ，Ｚｈｅｎ Ｌ，Ｓｒｉｓｕｍａ ＳＳ，Ｋｅｎｓｌｅｒ ＴＷ，Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｍ，Ｐｅｔｒａｃｈｅ Ｉ，Ｔｕｄｅｒ ＲＭ，Ｂｉｓｗａｌ Ｓ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｂｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｎｒｆ２ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｃｉｇａｒｅｔｔｅ ｓｍｏｋｅ−ｉｄｕｃｅｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ
ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｔｏ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｎｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ；Ｙａｓｕｎｏｒｉ Ｋａｓａｈａｒａ，Ｒｕｂｉｎ
Ｍ．Ｔｕｄｅｒ，Ｃａｒｌｙｎｅ Ｄ．Ｃｏｏｌ，Ｄａｖｉｄ Ａ．Ｌｙｎｃｈ，Ｓｏｎｉａ Ｃ．Ｆｌｏｒｅｓ，ａｎｄ Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｆ．Ｖｏｅｌｋｅｌ．Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ａｎｄ Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ
ａｎｄ Ｖａｓｃｕｌａｒ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｉｎ Ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ
Ｃａｒｅ Ｍｅｄ Ｖｏｌ １６３．ｐｐ ７３７−７４４，２００１；Ｙａｓｕｎｏｒｉ Ｋａｓａｈａｒａ，Ｒｕｂｉｎ Ｍ．Ｔｕｄｅｒ，Ｌａｉｍｕｔｅ Ｔａｒａｓｅｖｉｃｉｅｎｅ−Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｄ．Ｌｅ Ｃｒａｓ，Ｓｔｅｖｅｎ
Ａｂｍａｎ，Ｐｅｔｅｒ Ｋ．Ｈｉｒｔｈ，Ｊｏｈａｎｎｅｓ Ｗａｌｔｅｎｂｅｒｇｅｒ，ａｎｄ Ｎｏｒｂｅｒｔ Ｆ．Ｖｏｅｌｋｅｌ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ＶＥＧＦ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｃａｕｓｅｓ ｌｕｎｇ ｃｅｌｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ａｎｄ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０６：１３１１−１３１９（２０００）；およびこの話題に関するレビュー：Ｒｏｂｉｎ Ｍ．Ｔｕｄｅｒ，Ｓｈａｒｏｎ ＭｃＧｒａｔｈ ａｎｄ Ｅｎｉｄ Ｎｅｐｔｕｎｅ，Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ｅｍｐｈｙｓｅｍａ ｍｏｄｅｌｓ：ｗｈａｔ ｄｏ ｔｈｅｙ ｈａｖｅ ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ？，Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ＆ Ｔｈｅｒｐａｅｕｔｉｃｓ ２００２を参照のこと。

結果
１．ＲＴＰ８０１発現プラスミドの注入は、マウス肺において気腫様表現型をもたらし、これは（１）気管支肺胞洗浄液細胞数の増加（図１５ａ）；（２）肺中隔細胞のアポトーシス（図１５ｂ）および肺胞径の増加（図１５ｃ）によって証明された。
２．ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４）の注入は、肺におけるＲＴＰ８０１の
発現を減少させた（図１７ｂ）。
３．ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスは、肺胞径の拡大を欠くことにより証明されるように、６ヶ月間の喫煙後の気腫の発症から保護された（図１８）。
４．ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスは、１週間の喫煙後の炎症性気管支肺胞細胞数の減少により証明されるように、喫煙誘発型の炎症から保護された（図１６、ａ〜ｂ）。
５．ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスは、活性化型カスパーゼの肺切片染色により証明されるように、肺中隔細胞の喫煙誘発型アポトーシスから保護された（図１６ｃ）。
６．ＲＥＤＤ１４を注入したマウスは、１週間の喫煙後の炎症性気管支肺胞細胞数の減少により証明されるように、喫煙誘発型の炎症から部分的に保護された（図１７ａ）。
７．ＲＥＤＤ１４を注入したマウスは、活性化型カスパーゼの肺切片染色および抗活性化型カスパーゼ３抗体を用いた肺抽出物の免疫ブロッティングにより証明されるように、肺中隔細胞の喫煙誘発型アポトーシスから部分的に保護された（図１７ｃ）。

実施例８
微小血管障害に関連するモデルおよび結果
本発明の化合物を、以下に記載されるような微小血管障害の動物モデルにおいて試験した。
１．糖尿病性網膜症
ＲＴＰ８０１は、インビトロで神経細胞のアポトーシスおよび活性酸素種の発生を促進させる。本発明者らはまた、未熟児網膜症（ＲＯＰ）モデル化されたＲＴＰ８０１ノックアウト（ＫＯ）マウスにおいて、病的な新生血管形成ＮＶが、ＶＥＧＦの増加にもかかわらず、低酸素条件下で減少するが、この遺伝子の欠損は生理学的な未熟児網膜ＮＶには影響しないことを発見した。さらに、このモデルにおいて、ＲＴＰ８０１の欠損はまた、低酸素性神経アポトーシスおよび過酸素性血管閉塞に対して保護的であった。

実験１
８週齢のＲＴＰ８０１ ＫＯおよびＣ５７／１２９ｓｖ野生型（ＷＴ）同腹子マウスにおいて、ＳＴＺを腹腔内注入することにより糖尿病を誘発させた。４週後、１時間の暗順応後に左眼からＥＲＧ（１回の白色のフラッシュ、１．４×１０＾４ ｆｔｃ、５ｍｓ）を取った。エバンスブルーアルブミン透過技術を用いて両眼からＲＶＰを評価した。

結果
糖尿病性（ＤＭ）ＷＴとＤＭ ＫＯの間（４９５±１０９対５１３±７６ｍｇ／ｄｌ）でも非糖尿病性（ＮＤＭ）ＷＴとＫＯの間（それぞれ１３０±１０対１３５±３１ｍｇ／ｄｌ）でも血糖に差はなかった。ＤＭ ＷＴグループにおけるＲＶＰは、ＮＤＭ ＷＴ（２１．５±１８．８μＬ／ｇ／ｈｒ、ｎ＝９、ｐ＝０．０５５）と比較して１３８％増加した（５１．２±３７．９μＬ／ｇ／ｈｒ、ｎ＝８）。対照的に、ＤＭ ＫＯにおけるＲＶＰは、ＤＭ ＷＴマウスと比較して８０％減少し（９．５±８．５μＬ／ｇ／ｈｒ、ｎ＝６、ｐ＝０．０２３）、糖尿病誘発型ＲＶＰが１４０％減少した。ＤＭ ＷＴマウスにおいて、ＮＤＭ ＷＴと比較して、ＯＰ２（１１％）、ＯＰ３（１２％）、およびＯＰ４（１４％）ならびにＢ波（２３％）の律動様小波の潜時の延長（ｐ＜０．０５）が見られた。Ａ波は有意に変化しなかった。これらの変化は、ＤＭ ＫＯマウスにおいては、ＮＤＭ ＫＯと比較して、ＯＰ３およびＯＰ４については約１００％ならびにＢ波については６５％正規化された。
結論：ＲＴＰ８０１のノックアウトは、マウスにおける糖尿病誘発型のＲＶＰおよびＥＲＧの異常を改善し、これによりこの低酸素誘発性遺伝子が初期の糖尿病性網膜疾患の病理において重要な役割を果たし得ることが示唆された。

実験２
ＲＴＰ８０１ノックアウトマウスおよび遺伝的背景が一致するコントロール野生型マウ
スにおいて糖尿病を誘発させた。さらに、Ｃ５７ＢＬ１６マウスにおいても糖尿病を誘発させ、これらをその後の抗ＲＴＰ８０１およびコントロールｓｉＲＮＡの硝子体内注入に使用した。糖尿病の誘発のために、マウスにストレプトゾトシンを注入した（一晩絶食後にＳＴＺ ９０ｍｇ／ｋｇ／ｄを２日間）。本研究を通じて、血糖、体重、およびヘマトクリットの変化について、動物の生理をモニターした。ビヒクルを注入したマウスをコントロールとして使用した。適切な動物を、ＲＥＤＤ１４抗ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ １μｇまたは抗ＧＦＰコントロールｓｉＲＮＡ １μｇの硝子体内注入により処置した。ｓｉＲＮＡは、研究過程で二度 − 最初のＳＴＺ注入を行った第０日およびＳＴＺ注入後の第１４日に注入した。

網膜血管の漏出は、エバンスブルー（ＥＢ）染色技術を用いて、４週間の糖尿病期間後の動物において測定した。エバンスブルー（ＥＢ）測定の２４時間前に、マウスの右頸静脈にカテーテルを移植した。各動物の両眼における網膜透過性の測定は、標準的なエバンスブループロトコールに従った。

結果
１．網膜血管の漏出は、野生型糖尿病マウスと比較して、ＲＴＰ８０１ ＫＯ糖尿病マウスにおいて７０％減少した（図２０を参照のこと）。
２．ＲＴＰ８０１のノックアウトは、マウスにおけるＥＲＧの異常を正常化し；ＤＭ ＷＴマウスにおいて、ＮＤＭ ＷＴと比較して、ＯＰ２（１１％）、ＯＰ３（１２％）、およびＯＰ４（１４％）ならびにＢ波（２３％）の律動様小波の潜時の延長（ｐ＜０．０５）が見られた。Ａ波は有意に変化しなかった。これらの変化は、ＤＭ ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスにおいては、ＮＤＭ ＲＴＰ８０１ ＫＯと比較して、ＯＰ３およびＯＰ４については約１００％ならびにＢ波については６５％正規化された（図２１を参照のこと）。
３．ＫＯマウスの結果と同様、網膜血管の漏出は、コントロールのＧＦＰに対するｓｉＲＮＡを硝子体内注入した糖尿病マウスと比較して、ＲＴＰ８０１に対するｓｉＲＮＡであるＲＥＤＤ１４を硝子体内注入した糖尿病マウスにおいて５０％減少した（図２２を参照のこと）。

２．未熟児網膜症
未熟児網膜症は、試験動物を低酸素条件および過酸素条件に暴露することによって誘発し、その後に網膜に対する効果を試験した。結果は、ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスが、未熟児網膜症から保護されたことを示しており、それによってＲＴＰ８０１阻害の保護的効果が確認された。

３．心筋梗塞
心筋梗塞は、短期間および長期間の両方の、マウスの左動脈前下行枝の結紮によって誘発させた。結果：血液における梗塞から２４時間後のＴｎＴおよびＣＰＫ−ＭＢのフラクションレベルの減少ならびにＲＴＰ８０１ ＫＯマウスにおける梗塞から２８日後の心エコー図（駆出量）の改善。

４．微小血管虚血状態
虚血状態を評価するための動物モデルは、次のものを含んだ：
１．閉鎖性頭部外傷（ＣＨＩ） − 実験的ＴＢＩは、行動欠陥の程度および範囲に関連する神経学的および神経代謝カスケードの一因となる一連のイベントを引き起こした。ＣＨＩは麻酔下で誘発させ、前頭面中央の左半球を覆う頭蓋の上に、重しを既定の高さから自由落下させた（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ， Ｊ．Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ １３，５５７，１９９６）。
２．一過性中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ） − 雄成体Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラ
ット、３００〜３７０ｇｒにおいて、９０〜１２０分間の一過性の限局的虚血を行った。使用した方法は、管内縫合ＭＣＡＯ法であった（Ｌｏｎｇａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｏｋｅ，３０，８４，１９８９，およびＤｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． ７２，７６５，１９９９）。簡単に説明すると、ハロタン麻酔下で、ポリ−Ｌ−リジンコートした３−０−ナイロン縫合糸を、外頚動脈上の穴を通じて右内頚動脈（ＩＣＡ）に挿入した。このナイロン糸を右ＭＣＡの起始部に向かってＩＣＡ内に押し込んだ（２０〜２３ｍｍ）。この糸を引き抜いてから９０〜１２０分後に、動物に縫合をし、回復させた。
３．持続的中大脳動脈閉塞（ＭＣＡＯ） − 閉塞を、ＭＣＡの電気凝固により持続的に、片側で誘発させた。両方の方法により、脳皮質の同側で限局的脳虚血が生じ、対側はインタクトな状態で維持された（コントロール）。左ＭＣＡを、ラットについてＴａｍｕｒａ Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｒｅｂ Ｂｌｏｏｄ Ｆｌｏｗ Ｍｅｔａｂ．１９８１；１：５３−６０により記載されるようにして側頭頭蓋局部切開術を介して露出させた。ＭＣＡおよびそのレンズ核線条体枝を、マイクロ双極凝固によって、嗅索の内側縁の近位で閉塞させた。創傷を縫合し、動物を２６℃〜２８℃に暖めた室内飼育ケージに戻した。動物の体温を、自動サーモスタットを用いて常時管理した。

５．急性腎不全（ＡＲＦ）
ＡＲＦ処置用の活性なｓｉＲＮＡの試験は、敗血症誘発型ＡＲＦまたは虚血−再灌流誘発型ＡＲＦを用いて行った。
１．敗血症誘発型ＡＲＦ
二つ敗血症誘発型ＡＲＦの予測の動物モデルがＭｉｙａｊｉ Ｔ，Ｈｕ Ｘ，Ｙｕｅｎ
ＰＳ，Ｍｕｒａｍａｔｓｕ Ｙ，Ｉｙｅｒ Ｓ，Ｈｅｗｉｔｔ ＳＭ，Ｓｔａｒ ＲＡ，２００３，Ｅｔｈｙｌ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｓ ｓｅｐｓｉｓ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｏｒｇａｎ ｄａｍａｇｅ ｉｎ ａｇｅｄ ｍｉｃｅ，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ．Ｎｏｖ；６４（５）：１６２０−３１に記載されている。これらの二つのモデルは、マウス、好ましくは老齢マウスにおけるリポ多糖類投与および盲腸の結紮・穿刺である。

２．虚血−再灌流誘発型ＡＲＦ
この予測の動物モデルは、Ｋｅｌｌｙ ＫＪ，Ｐｌｏｔｋｉｎ Ｚ，Ｖｕｌｇａｍｏｔｔ ＳＬ，Ｄａｇｈｅｒ ＰＣ，２００３ Ｊａｎｕａｒｙ，．Ｐ５３ ｍｅｄｉａｔｅｓ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ＧＴＰ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ｒｅｎａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ−ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ：ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ａ ｐ５３ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ．；１４（１）：１２８−３８に記載されている。
ラットにおいて、４５分間の両側腎動脈のクランプおよびその後のクランプからの開放による２４時間の再灌流により、虚血−再灌流傷害を誘発させた。クランプの２時間前および３０分後にＲＥＤＤ１４またはＧＦＰ ｓｉＲＮＡ（ネガティブコントロール）２５０μｇを頸静脈に注入した。さらに２５０μｇのｓｉＲＮＡを、クランプの４時間後および８時間後に尾静脈を通じて投与した。ＧＦＰに対するｓｉＲＮＡはネガティブコントロールとして用いた。手術前および手術の２４時間後に血清クレアチニンレベルを測定することによってＡＲＦの進行をモニターした。本実験の最後に、留置しておいた大腿ラインを介して暖めたＰＢＳ、その後に４％パラホルムアルデヒドをラットに灌流した。左腎を摘出し、その後の組織学的分析のために４％パラホルムアルデヒド中で保存した。急性腎不全は、多くの場合、血清クレアチニンレベルの基準値からの急性的な増加と定義される。少なくとも０．５ｍｇ／ｄＬまたは４４．２μｍｏｌ／Ｌの血清クレアチニンの増加を、急性腎不全の指標とした。血清クレアチニンは、手術前のゼロ時およびＡＲＦ手術の２４時間後に測定した。

ラット腎臓におけるｓｉＲＮＡの分布を調べるため、一つおきのＯ−メチル修飾を糖残基に有するＣｙ３標識１９マー平滑末端ｓｉＲＮＡ分子（２ｍｇ／ｋｇ）を３〜５分間ｉｖ投与し、その後に二光子共焦点顕微鏡を用いてインビボ画像化を行った。共焦点顕微鏡分析は、腎臓内のｓｉＲＮＡの大部分が、近位尿細管細胞のエンドソーム区画に集中することを明らかにした。エンドソームおよび細胞質の両方のｓｉＲＮＡの蛍光は、送達後の最初の２時間の間比較的安定であり、２４時間で消失した。

図１９から明らかなように、４５分間の腎臓両側動脈クランプ処置（ＰＢＳ処置）の後に血清クレアチニンレベルが１０倍増加した。８０１ ｓｉＲＮＡ（ＲＥＤＤ１４、配列番号１６および６６）の４回の注入（クランプの２時間前、クランプから３０分後、４時間後、および８時間後）は、血清中のクレアチニンレベルを有意に４０％減少させた（Ｐ＜０．０２）。これらの結果は、８０１ ｓｉＲＮＡが虚血−再灌流傷害の影響から腎組織を保護し、従ってＡＲＦの重症度を軽減することができることを示唆している。

実施例９
ｓｉＲＮＡの調製
独自のアルゴリズムおよび公知のＲＴＰ８０１遺伝子の配列（配列番号１）を用いて、多くの潜在的ｓｉＲＮＡの配列を作製した。基本的に本明細書中に記載された通りに、上記の仕様に従うｓｉＲＮＡ分子を調製した。
本発明のｓｉＲＮＡは、リボ核酸（またはデオキシリボ核酸）オリゴヌクレオチドの合成に関して当該分野でよく知られたいずれかの方法によって合成することができる。例えば、市販の機器（特に、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓから購入可能）を使用することができ；オリゴヌクレオチドは本明細書中に開示される配列に従い調製される。化学的に合成したフラグメントのオーバラッピングペアは、当該分野でよく知られた方法を用いてライゲートすることができる（例えば米国特許第６,１２１,４２６号を参照のこと）。鎖は別々に合成し、試験管内で相互にアニールさせる。次いで、二本鎖ｓｉＲＮＡを、ＨＰＬＣによりアニールしなかった（例えば、それらのうちの一方が過剰であるがために）一本鎖オリゴヌクレオチドから分離する。本発明のｓｉＲＮＡまたはｓｉＲＮＡフラグメントに関して、二つまたはそれ以上のこのような配列を合成し、本発明において使用するために一緒に連結させることができる。本発明のｓｉＲＮＡ分子は、当該分野で公知の手法、例えばＵｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０９，７８４５；Ｓｃａｒｉｎｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８，５４３３；Ｗｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２３，２６７７−２６８４；およびＷｉｎｃｏｔｔ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．，７４，５９に記載されるような手法により合成され得、一般的な保護基およびカップリング基、例えば５’末端のジメトキシトリチルおよび３’末端のホスホラミダイトが利用され得る。所望の場合は、修飾型（例えば２’−Ｏ−メチル化）ヌクレオチドおよび非修飾型ヌクレオチドが組み込まれる。

あるいは、本発明の核酸分子を別個に合成し、合成後に、例えばライゲーションによって（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６，９９２３；Ｄｒａｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，国際ＰＣＴ公開ＷＯ９３／２３５６９；Ｓｈａｂａｒｏｖａ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １９，４２４７；Ｂｅｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ＆ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１６，９５１；Ｂｅｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．８，２０４）または合成および／もしくは脱保護後のハイブリダイゼーションによってひとつにつなぐことができる。

本発明のｓｉＲＮＡ分子はまた、米国特許出願公開ＵＳ２００４／００１９００１（Ｍ
ｃＳｗｉｇｇｅｎ）に記載されるような、両方のｓｉＲＮＡ鎖を切断可能なリンカーで隔てられた一本の連続オリゴヌクレオチドフラグメントまたは鎖として合成し、その後にこれを切断してハイブリダイズおよびｓｉＲＮＡ二本鎖の精製が可能な個々のｓｉＲＮＡフラグメントまたは鎖を提供する、直列合成法を通じて合成することができる。リンカーはポリヌクレオチドリンカーまたは非ヌクレオチドリンカーであり得る。さらなる情報については、ＰＣＲ公開ＷＯ ２００４／０１５１０７（ＡＴＵＧＥＮ）を参照のこと。

上記のようにして、表Ａ（下記）のｓｉＲＮＡを、一つおきの糖が２’−Ｏ−メチル修飾を有するよう、すなわち一つおきのヌクレオチドがそのように修飾されるよう構築した。これらの好ましい実施態様において、ｓｉＲＮＡの一方の鎖における修飾型ヌクレオチドは１、３、５、７、９、１１、１３、１５、１７、および１９番であり、反対鎖における修飾型ヌクレオチドは２、４、６、８、１０、１２、１４、１６、および１８番である。従って、これらのｓｉＲＮＡは、上記のように一つおきに２’−Ｏ−メチル修飾を有する平滑末端の１９マーＲＮＡ分子である。表２および３（下記）のｓｉＲＮＡもまたこの様式で構築し；表ＢおよびＤのｓｉＲＮＡは一つおきに２’−Ｏ−メチル修飾を有する平滑末端の１９マーＲＮＡ分子であり；表ＣのｓｉＲＮＡは一つおきに２’−Ｏ−メチル修飾を有する平滑末端の２１マーＲＮＡ分子である。

表Ａは、ＲＴＰ８０１遺伝子に対して作製およびその後に合成した様々な新規のｓｉＲＮＡ分子について詳述する。最後の二つのカラムは、この新規分子の活性を試験するために行った二つの実験の結果を示す。簡単に説明すると、ＨｅＬａまたはＨａＣａｔ細胞を、試験しようとする個々の新規ｓｉＲＮＡでトランスフェクションした。次いで、ＲＴＰ８０１ポリペプチドの発現を、ＲＴＰ８０１ポリペプチドに対する抗体を用いるウェスタンブロットにより決定した。表Ａの右二つのカラムについて、「−」は、不活性または活性の低い分子（ＲＴＰ８０１遺伝子の発現を実質的に阻害しない）を表し；「＋」は、一定の（ＲＴＰ８０１発現の）阻害活性を有するｓｉＲＮＡ分子を表し、「＋＋」は、それよりも高い阻害活性を有する分子を表す、等である。本明細書中に開示されるｓｉＲＮＡ分子のいずれか一つ、特に表Ａに詳述される活性分子は、新規でありかつ本発明の一部であるとされる。

上記の表Ａにおいて、ｓｉＲＮＡ １〜５０のセンス鎖は、それぞれ、配列番号３〜５２を有し、ｓｉＲＮＡ １〜５０のアンチセンス鎖は、それぞれ、配列番号５３〜１０２を有することに留意されたい。ＲＥＤＤ１４と称される分子は、配列番号１６（センス鎖）および６６（アンチセンス鎖）を有する。

上記の表Ｂにおいて、ｓｉＲＮＡ ５１〜１２２のセンス鎖は、それぞれ、配列番号１０３〜１７４を有し、ｓｉＲＮＡ ５１〜１２２のアンチセンス鎖は、それぞれ、配列番号１７５〜２４６を有することに留意されたい。

上記の表Ｃにおいて、ｓｉＲＮＡ １２３〜１７１のセンス鎖は、それぞれ、配列番号２４７〜２９５を有し、ｓｉＲＮＡ １２３〜１７１のアンチセンス鎖は、それぞれ、配列番号２９６〜３４４を有することに留意されたい。

上記の表Ｄにおいて、ｓｉＲＮＡ １７２〜２３２および２３４〜２６８のセンス鎖は、それぞれ、配列番号３４５〜４４０を有し、ｓｉＲＮＡ １７２〜２３２および２３４〜２６８のアンチセンス鎖は、それぞれ、配列番号４４１〜５３６を有することに留意されたい。

実施例１０
薬理学および薬物送達
本発明のヌクレオチド配列は、直接的にかまたはウイルスもしくは非ウイルスベクターによるかのいずれかにより送達することができる。直接的に送達する場合は、一般的に、配列にヌクレアーゼ耐性とする。あるいは、本明細書中以下で議論されるようにその配列が細胞中で発現されるよう、配列を発現カセットまたは構築物に組み込むことができる。一般的に、この構築物は、標的細胞におけるその配列の発現を可能にする適切な調節配列またはプロモーターを含む。

本発明の化合物または薬学的組成物は、個々の患者の臨床的状況、処置しようとする疾患、投与部位および方法、投与スケジュール、患者の年齢、性別、体重、および臨床医に公知の他の要因を考慮しつつ、適正医療基準（ｇｏｏｄ ｍｅｄｉｃａｌ ｐｒａｃｔｉｃｅ）に従い投与および投薬する。

従って、本発明の目的上、薬学的に「有効な量」は、当該分野で公知のこのような検討事項により決定される。その量は、生存率の改善もしくはより迅速な回復、または症状および当業者により適切な尺度として選択される他の指標の改善もしくは消滅を含むがこれらに限定されない改善を達成する上で有効な量でなければならない。

処置は、一般的に、疾患過程の長さならびに薬物の有効性および処置する患者の種に比例する長さを有する。ヒトは、一般的に、マウスまたは本明細書中で例証されている他の実験動物よりも長い期間処置されることに留意されたい。

本発明の化合物は、従来的な投与経路のいずれかによって投与することができる。この化合物は、その化合物としてまたは薬学的に許容できる塩として投与することができ、かつ単独でまたは薬学的に許容できる担体、溶媒、賦形剤、添加剤、アジュバント、およびビヒクルとの組み合わせにおける活性成分として投与することができることに留意すべきである。この化合物は、経口的、皮下的、または静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、および鼻腔内投与、ならびに髄腔内および注入技術を含む非経口的に投与することができる。この化合物のインプラントもまた有用である。注射用に（この用語は皮下、経皮、静脈内、筋肉内、髄腔内、および他の非経口投与経路を含む）液体形態を調製がすることができる。液体組成物には、有機共溶媒含有／非含有の水溶液、水性または油性懸濁液、可食油を含むエマルジョン、および同様の薬学的ビヒクルが含まれる。さらに、特定の環境下では、本発明の新規処置に使用する組成物は、鼻腔内投与等のためにエアゾールとして形成される場合がある。処置しようとする患者は、温血動物、特にヒトを含む哺乳動物である。薬学的に許容できる担体、溶媒、賦形剤、添加剤、アジュバント、およびビヒクル、ならびにインプラントキャリアは、一般的に、不活性、非毒性の固体もしくは液体増量剤、賦形剤、または本発明の活性成分と反応しないカプセル化材料のことを指す。

本発明の化合物を非経口的に投与する場合、一般的には単位投与剤形の注射可能な形態（溶液、懸濁液、エマルジョン）として処方される。注射に適した薬学的製剤には、滅菌水性液剤または分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎｓ）、および滅菌注射可能な液剤または分散剤への再構成のための滅菌散剤が含まれる。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール等）、それらの適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒であり得る。

適切な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、分散剤の場合は
必要な粒子サイズの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。非水性ビヒクル、例えば綿実油、ゴマ油、オリーブ油、ダイズ油、トウモロコシ油、ひまわり油、または落花生油、およびエステル類、例えばミリスチン酸イソプロピルもまた、化合物組成物の溶媒系として使用することができる。さらに、抗菌保存剤、抗酸化剤、キレート化剤、および緩衝剤を含む、その組成物の安定性、無菌性、および等張性を増強する様々な添加物を添加することができる。微生物活動の防止は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸等によってなすことができる。多くの場合、等張剤、例えば糖、塩化ナトリウム等を加えることが望ましい。注射可能な薬物形態の持続的吸収は、吸収遅延剤、例えばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの使用によってもたらされ得る。しかし、本発明に従い使用する任意のビヒクル、希釈剤、または添加物は、化合物と適合するものである必要がある。

無菌注射可能な液剤は、本発明を実施する上で使用する化合物を、所望により様々な他の成分を含む必要量の適切な溶媒に加えることによって調製することができる。

本発明の薬理学的製剤は、任意の適合する担体、例えば様々なビヒクル、アジュバント、添加物、および賦形剤を含む注射可能な製剤として患者に投与することができ；または本発明において使用する化合物は、徐放性の皮下インプラントまたは標的化送達システム、例えばモノクローナル抗体、ベクター送達、イオントフォレーゼ、ポリマーマトリクス、リポソーム、およびマイクロスフェアの形態で患者に非経口投与することができる。本発明において有用な送達システムの例には、米国特許第５,２２５,１８２号；同第５,１６９,３８３号；同第５,１６７,６１６号；同第４,９５９,２１７号；同第４,９２５,６７８号；同第４,４８７,６０３号；同第４,４８６,１９４号；同第４,４４７,２３３号；同第４,４４７,２２４号；同第４,４３９,１９６号；および同第４,４７５,１９６号が含まれる。多くの他のこのようなインプラント、送達システム、およびモジュールは、当業者によく知られている。

本発明において使用する化合物の薬理学的製剤は、患者に経口投与することができる。従来の方法、例えば錠剤、懸濁剤、液剤、乳剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤等中の化合物の投与が使用可能である。それを経口的または静脈内送達しかつその生物学的活性を維持する公知技術が好ましい。一つの実施態様において、本発明の化合物は、最初に、血中レベルを適切なレベルに持っていくために静脈内注射により投与することができる。その後、その患者のレベルは、経口剤形により維持されるが、患者の状態に依存しておよび上記のように他の投与形態を使用することもできる。

一般的に、ヒトに対する化合物の活性用量は、１〜２週もしくはそれ以上の期間、好ましくは２４〜４８時間の期間の間の一日一回の投与または一日二回もしくは三回もしくはそれ以上のレジメンにおける、または１〜２週もしくはそれ以上の期間にわたる連続注入よる、一日あたり１ｎｇ／ｋｇから約２０〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは一日あたり０．０１ｍｇ／ｋｇから約２〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。

本発明の化合物の眼への投与
本発明の化合物は、眼に局所的にまたは注入の形態、例えば硝子体内注入、網膜下注入、もしくは両側注入により投与することができる。本発明の化合物の投与に関するさらなる情報は、Ｔｏｌｅｎｔｉｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｔｉｎａ ２４（２００４）１３２−１３８；Ｒｅｉｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｖｉｓｉｏｎ ９（２００３）２１０−２１６に見出すことができる。

本発明の化合物の肺投与
本発明の治療用組成物は、これらの組成物／化合物を含むエアゾールの吸入により、ま
たは当該組成物の鼻腔内もしくは気管内注入により肺に投与するのが好ましい。組成物をリポソーム中に製剤化することは吸収面で有益であり得る。さらに、この組成物は、ＰＦＣ液、例えばペルフルブロン（ｐｅｒｆｌｕｂｒｏｎ）を含み得、かつこの組成物は、本発明の化合物とポリエチレンイミン（ＰＥＩ）の混合物として製剤化され得る。

薬学的組成物の肺送達に関するさらなる情報については、Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ １０：２２８７−２２９３（１９９９）；Ｄｅｎｓｍｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ １：１８０−１８８（１９９９）；Ｇａｕｔａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｈｅｒａｐｙ ３：５５１−５５６（２００１）；およびＳｈａｈｉｗａｌａ ＆ Ｍｉｓｒａ，ＡＡＰＳ ＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ ５（２００４）を参照のこと。さらに、ｓｉＲＮＡの呼吸器用処方がＤａｖｉｓらの米国特許出願２００４／００６３６５４に記載されている。

さらに、本発明の化合物は、適当な場合（例えば糖尿病性足潰瘍の場合）、場合により脂質／リポソーム製剤として、局所投与され得る。

本発明の化合物の耳への投与
好ましい投与様式は、例えばＴａｎａｋａら（Ｈｅａｒ Ｒｅｓ．２００３ Ｍａｒ；１７７（１−２）：２１−３１）に開示されるように、蝸牛の正円窓膜に対するＲＴＰ８０１阻害剤の局所送達である。さらなる耳への投与の様式は、鼓室内注入によるものである。

褥瘡または他の創傷の処置においては、薬学的組成物の投与は、好ましくは、損傷領域への局所的適用によるが、組成物が全身投与される場合もある。

本発明の化合物の改善された送達のためのさらなる処方物には、非処方型化合物、コレステロールに共有結合させた化合物、およびターゲティング抗体に結合させた化合物が含まれ得る（Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ ＲＮＡｓ ｖｉａ ｃｅｌｌ−ｓｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００５ Ｊｕｎ；２３（６）：７０９−１７）

本明細書中に開示される全てのｓｉＲＮＡは、本明細書中に開示される疾患または状態の処置のいずれかのために、裸のｓｉＲＮＡとして非処方形式で投与する場合がある。用語「裸のｓｉＲＮＡ」は、ウイルス配列、ウイルス粒子、リポソーム処方物、リポフェクチン、または沈降剤等を含む、細胞への侵入を支援、促進、または容易化するよう作用するいずれの送達ビヒクルを含まないｓｉＲＮＡ分子を意味する。例えば、ＰＢＳ中のｓｉＲＮＡは「裸のｓｉＲＮＡ」である。

さらに、本明細書中に開示される疾患および状態のいずれかを処置するための、任意の裸のｓｉＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、裸のｓｉＲＮＡの組み合わせ、または裸のｓｉＲＮＡおよび追加分子の組み合わせの投与は、本発明の範囲内である。

しかし、本明細書中に開示されるように、本発明のｓｉＲＮＡ分子は、リポソーム製剤およびリポフェクチン製剤等として送達することもでき、これらは当業者によく知られた方法により作製することができる。このような方法は、例えば、米国特許第５,５９３,９７２号、同第５,５８９,４６６号、および同第５,５８０,８５９号に記載されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。

実施例１１
シスプラチン誘発型耳毒性のエクスビボ（ｅｘ ｖｉｖｏ）モデルおよびＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの保護効果
シスプラチン誘発型の耳毒性を、蝸牛および前庭の器官培養物において誘発させた。生後３〜４日のラット仔を、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ １２０（２００３）１９１−２０５において詳述されるように蝸牛および前庭の器官培養物を調製するのに使用した。蝸牛を注意深く切除し、らせん神経節、コルチ器官、および中央ターンを含む蝸牛組織を、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌに記載される器官培養物を調製するために取り出した。この培養物を、処理前のコンディショニングのために、ＣＯ₂インキュベーター中に２４時間置いた。コンディショニング後、培養物を、１、５、または１０μｇ／ｍｌのシスプラチン単独で４８時間処理した。ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの保護効果を調査するため、蝸牛外植片（グループあたり５つの蝸牛）を１０μｇ／ｍｌシスプラチンおよびリポフェクチン存在下または非存在下の様々な濃度のＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡで４８時間処理した。未処理コントロール培養物およびＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡで４８時間処理した培養物は並行して処理した。本実験の最後に、この培養物を１０％ホルマリンで固定し、ＦＩＴＣ結合型ファロイジンで染色した。各処理ごとに、０．２５ｍｍ長の蝸牛あたりの内耳有毛細胞および外有毛細胞の数を計数し、その平均有毛細胞数を決定した。

実施例１２
ゲンタマイシン誘発型耳毒性のインビボモデルおよびＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの保護効果
チンチラを、硫酸ゲンタマイシン単独で５日間（１２５〜３００ｍｇ／ｋｇ、筋内）またはＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡと組み合わせてのいずれかで処置した。ｓｉＲＮＡ分子は、５日間のゲンタマイシン曝露の２日前または曝露中に、蝸牛の正円窓膜に局所投与した。処置の最後に、動物を二酸化炭素への曝露および断頭によって殺した。蝸牛を取り出し、（Ｄｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅａｒｉｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １６４（２００２）１１５−１２６およびＷａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２３（２４）：８５９６−８６０７に記載されるように）蝸牛組織中の内耳有毛細胞および外有毛細胞の数を決定するためのＦＩＴＣ接合型ファロイジン染色のために調製した。

実施例１３
音響外傷のインビボモデルおよびＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの保護効果
音響外傷研究には有色モルモットを使用した（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２３（２４）：８５９６−８６０７に記載されている）。ＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ分子は、７日間の期間にわたって、蝸牛の正円窓膜に局所投与した。未処置の左側蝸牛を、聴覚有毛細胞の喪失および聴覚機能の喪失を引き起こす音響外傷の影響についてのコントロールとして用いた。動物を、音響外傷［６ｋＨｚ、１２０ｄＢの音圧レベル（ＳＰＬ）、３０分間］にさらし、慢性正円窓膜電極を介して聴神経から記録された複合活動電位（ＣＡＰ）から両耳のオージオグラムを得た。両耳のＣＡＰオージオグラムを毎日、意識のある動物において測定した。音響曝露から３０日後、動物を屠殺し、それらの蝸牛を、蝸牛管全体における全有毛細胞を計数するため、走査電子顕微鏡を用いる有毛細胞の喪失の量的評価のために調製した。

実施例１４
８０１＿１（表Ｄの識別番号２５７、配列番号５２７［アンチセンス鎖］）および８０１＿４（表Ｄの識別番号２６０、配列番号５３０［アンチセンス鎖］）に関する実験結果
ＨＥＫ２９３細胞におけるインビトロでの効果
三つの異なる濃度、５、１０、および２０ｎｍのｓｉＲＮＡをＨＥＫ２９３細胞にトランスフェクションした。同一濃度の無関係のｓｉＲＮＡ（ｓｉＴＧ）をネガティブコント
ロールとして使用し、同一濃度のＲＥＤＤ１４をポジティブコントロールとして使用した。トランスフェクションの７２時間後に細胞を採取し；ＲＮＡを精製し、これを内因性ＲＴＰ８０１転写物のレベルの量的測定のためのｑＰＣＲ反応におけるテンプレートとして使用した。ヒトサイクロフィリンＡをｑＰＣＲの内部参照として使用した。参照正規化した（ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ−ｎｏｒｍａｌｉｚｅｄ）データを、さらに生物学的正規化に供し；各ｓｉＲＮＡ濃度について検出されたＲＴＰ８０１レベルを、対応するネガティブコントロールサンプルにおけるＲＴＰ８０１の百分率として表した。その結果を図２８に示す。

ＢＥ２Ｃ細胞におけるインビトロでの効果
誘発されたＲＴＰ８０１発現レベルを低下させるｓｉＲＮＡの能力を評価するため、ＨＥＫ２９３細胞において基底ＲＴＰ８０１発現レベルを分析し、ＲＴＰ８０１の誘発因子としてのＣｏＣｌ₂で処理したＢＥ２Ｃ細胞を使用した。この設定およびデータの評価は、基本的に上記の通りであった。ｓｉＲＮＡのトランスフェクションから２４時間後に、ＢＥ２Ｃ細胞を１０μＭ ＣｏＣｌ₂でさらに２４時間処理し、次いでＲＮＡ抽出を行った。その結果を図２９に示す。
この結果は、８０１＿１および８０１＿４が、インビトロアッセイにおいて、少なくともＲＴＰ８０１に対するＲＥＤＤ１４と同程度に効果的であることを示している。

マウスＣＮＶモデルにおけるインビボでの効果
本実験は、以下の実験グループを用いて、実施例６に記載の通りに行った。

その結果を図３０に示す。この結果は、８０１＿４が、マウスＣＮＶのインビボモデルにおいて、少なくともＲＥＤＤ１４と同程度に効果的であることを示している。

実施例１５
難聴に関連するモデルおよび結果
チンチラの蝸牛における音響誘発型の有毛細胞の死に対する典型的な（ｐ５３）ｓｉＲＮＡ処置の効果
音響外傷モデルにおける典型的なｓｉＲＮＡ（ＱＭ５−抗ｐ５３）の活性をチンチラに
おいて研究した。７匹の動物からなるグループに音響外傷を与えた。動物を、４ｋＨｚを中心とする１オクターブ帯域の騒音１０５ｄＢに３時間さらした。騒音にさらしたチンチラの左耳を約２０μＬ中３０μｇのｓｉＲＮＡで処置し；右耳をビヒクルで処置した。正円窓から記録された複合活動電位の平均閾値を音響外傷から２．５週後に決定し、ｓｉＲＮＡ処置した耳においてこの閾値が未処置（ビヒクル）の耳よりも低く（良く）なるかどうかを決定した。ｓｉＲＮＡ処置した耳における平均閾値は、未処置の耳に対して低くなった。４ｋＨｚにおける差は、統計的に有意であった（ｐ＜０．０３３）。これらの結果は、蝸牛の正円窓に投与した典型的なｐ５３ ｓｉＲＮＡが音響外傷による損傷を軽減することができることを示している。

ラット蝸牛におけるシスプラチン誘導型の有毛細胞の死に対するｐ５３または８０１ ｓｉＲＮＡ処置の効果
雄のＷｉｓｔａｒラットを、シスプラチン処置前に、クリック音、８、１６、および３２ｋＨｚの信号に対する基底聴性脳幹反応の閾値について試験した。基底聴性脳幹反応試験後、シスプラチンを、３０分かけて、１３ｍｇ／ｋｇの腹腔内注入により投与した。処置した耳には、１５μｇ／４μｌの典型的なｐ５３ ｓｉＲＮＡ（上記）またはＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡ ＲＥＤＤ１４（表Ａの配列番号１４、配列番号１６（センス）および６６（アンチセンス）のいずれかを正円窓膜に直接的に適用した。コントロールの耳は、無関係のＧＦＰ ｓｉＲＮＡまたはＰＢＳのいずれかで処置した。ｓｉＲＮＡ分子は、蝸牛に対する保護効果を試験するため、シスプラチン投与の３〜５日前に投与した。

聴性脳幹反応試験を、シスプラチン投与から３日後に繰り返した。聴性脳幹反応の閾値を、処置前と処置後の間で比較し、その閾値の変化を表５に示す。シスプラチン処置後の閾値が変化が大きいことは、蝸牛における有毛細胞の喪失の重症度が大きいことの指標である。聴性脳幹反応試験を繰り返した後、動物を犠牲にし、蝸牛を摘出し、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）により鉤状領域（ｈｏｏｋ ｒｅｇｉｏｎ）（高周波領域）における外有毛細胞（ＯＨＣ）の喪失を定量化するために処理した。外有毛細胞の喪失の割合は、消失したまたは重度の損傷を受けた細胞の数を写真空間内の外有毛細胞の総数で割ることによって算出した。

表５は、シスプラチン誘発型損傷を受けた４匹の動物から獲得し、鉤状領域における外有毛細胞の喪失について分析した結果を示す。この結果から分かるように、ｐ５３または８０１に対するｓｉＲＮＡを投与された動物は、外有毛細胞の喪失が少なく、３２ｋＨｚのシグナルにおける閾値変化が小さいことを示した。両方のパラメータは、ｐ５３または８０１に対するｓｉＲＮＡが、蝸牛におけるシスプラチン誘発型損傷に対して保護的であることを示している。

詳述されたＲＴＰ８０１遺伝子のコード配列（配列番号１）である。 詳述されたＲＴＰ８０１ポリペプチドのアミノ酸配列（配列番号２）である。 エクソン、ＣＤＳ、ヒトＳＮＰ、およびヒト特異的またはヒト、マウス、およびラットに特異的のいずれかである様々な核酸分子の位置を並べて示す図である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第一のヒト細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの強度（密度）は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第一のヒト細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの強度（密度）は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第一のヒト細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの強度（密度）は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第二のヒト細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの密度は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第二のヒト細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの密度は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸を第一のヒト細胞株に対して異なる濃度、すなわち１０ｎＭ（５Ａ）、５ｎＭ（５Ｂ）、および１ｎＭ（５Ｃ）で適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの密度は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 本発明に従う様々な二本鎖核酸をマウス細胞株に対して適用することによって得られたウェスタンブロット分析の結果のパネルを示す。この実験は二度行い、これらを実験１および実験２と称し、ｐ１１０ａおよびｐ８５の発現レベルをローディングコントロールとして用い、ＲＴＰ８０１のバンドの密度は適用した特定の二本鎖核酸の阻害活性の尺度である。 マウスＡＭＤモデル系における実験の結果を示す。 マウスＡＭＤモデル系における追加実験の結果を示す。 非ヒト霊長類ＡＭＤモデル系における実験の結果を示す。 非ヒト霊長類ＡＭＤモデル系における追加実験の結果を示す。 非ヒト霊長類ＡＭＤモデル系におけるさらなる追加実験の結果を示す。 非ヒト霊長類ＡＭＤモデルにおいて達成された実験結果の分析を表す。 非ヒト霊長類ＡＭＤモデルにおいて達成された実験結果の追加分析を表す。 ＲＴＰ８０１発現プラスミドをマウスに気管内注入した実験の結果を示す。 ＲＴＰ８０１発現プラスミドをマウスに気管内注入した実験の結果を示す。 ＲＴＰ８０１ ＫＯおよびＷＴマウスにおける短期間（７日間）喫煙モデルの結果を示す。 活性な抗ＲＴＰ８０１（ＲＥＤＤ１４）およびコントロール（ＲＥＤＤ８）ｓｉＲＮＡを注入したＷＴマウスにおける短期間喫煙モデルの結果を示す。 活性な抗ＲＴＰ８０１（ＲＥＤＤ１４）およびコントロール（ＲＥＤＤ８）ｓｉＲＮＡを注入したＷＴマウスにおける短期間喫煙モデルの結果を示す。 ＲＴＰ８０１ ＫＯマウスの長期間ＣＳモデルを用いた実験の結果を示す。 マウスＡＲＦモデル系における実験の結果を示す。 マウス糖尿病性網膜症モデル系における実験の結果を示す。 マウス糖尿病性網膜症モデル系における追加実験の結果を示す。 マウス糖尿病性網膜症モデル系におけるさらなる追加実験の結果を示す。 マウスＣＮＶモデル系におけるＲＴＰ８０１／ＶＥＧＦ組み合わせ阻害実験の結果を示す。 マウスＣＮＶモデル系における追加のＲＴＰ８０１／ＶＥＧＦ組み合わせ阻害実験の結果を示す。 ＲＰＥおよび神経網膜における遺伝子発現に対するＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの効果を研究する実験の結果を示す。 ＲＰＥおよび神経網膜における遺伝子発現に対するＲＴＰ８０１ ｓｉＲＮＡの効果を研究する実験の追加の結果を示す。 ＲＴＰ８０１ＮＰがＲＴＰ８０１と同程度に活性であることを実証する実験の結果を示す。 ８０１＿１（配列番号４３０および５２７）ならびに８０１＿４（配列番号４３３および５３０）に関する効能の結果を示す。 ８０１＿１（配列番号４３０および５２７）ならびに８０１＿４（配列番号４３３および５３０）に関するさらなる効能の結果を示す。 ８０１＿１（配列番号４３０および５２７）ならびに８０１＿４（配列番号４３３および５３０）に関するさらなる効能の結果を示す。

Claims (65)

1. 患者を処置するのに有効な量のＲＴＰ８０１ポリペプチド阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、聴力障害患者の処置方法。
2. 患者を処置するのに有効な量のＲＴＰ８０１ポリペプチド阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、褥瘡患者の処置方法。
3. 聴力障害が音響外傷である、請求項１に記載の方法。
4. 阻害剤が、配列番号１に示されるＲＴＰ８０１をコードする遺伝子の配列内に存在する配列に対して、阻害剤とこの遺伝子のハイブリダイゼーションを実現し患者におけるＲＴＰ８０１の発現を妨げるのに十分に長く相同な配列を有する連続ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む、請求項１または２に記載の方法。
5. 阻害剤が、図２（配列番号２）に示される配列の連続アミノ酸を含むＲＴＰ８０１ポリペプチド内に存在するエピトープに特異的に結合し患者におけるＲＴＰ８０１ポリペプチドの活性を阻害する抗体を含む、請求項１または２に記載の方法。
6. 患者を処置するために治療有効量のＲＴＰ８０１ポリヌクレオチド阻害剤を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、聴力障害患者または褥瘡患者の処置方法。
7. ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである、請求項６に記載の方法。
8. ｓｉＲＮＡが、表Ａ〜Ｄ（配列番号３〜５３６）のいずれか一つに示される任意の配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含む、請求項７に記載の方法。
9. 阻害剤が、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡを含むベクター、ｓｉＲＮＡを発現するベクター、および内因的なプロセシングを受けてｓｉＲＮＡとなる分子からなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
10. 聴力障害患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用。
11. 褥瘡患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量のＲＴＰ８０１阻害剤の使用。
12. 聴力障害が音響外傷である、請求項１０に記載の使用。
13. 阻害剤が、配列番号１に示されるＲＴＰ８０１をコードする遺伝子の配列内に存在する配列に対して、阻害剤とこの遺伝子のハイブリダイゼーションを実現し患者におけるＲＴＰ８０１の発現を妨げるのに十分に長く相同な配列を有する連続ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドを含む、請求項１０または１１に記載の使用。
14. ＲＴＰ８０１阻害剤が、図２（配列番号２）に示される配列の連続アミノ酸を含むＲＴＰ８０１ポリペプチド内に存在するエピトープに特異的に結合し患者におけるＲＴＰ８０１ポリペプチドの活性を阻害する抗体である、請求項１０または１１に記載の使用。
15. ポリヌクレオチドがＲＴＰ８０１遺伝子の発現をダウンレギュレートする、請求項１０または１１に記載の使用。
16. ポリヌクレオチドがｓｉＲＮＡである、請求項１０または１１に記載の使用。
17. ｓｉＲＮＡが、表Ａ〜Ｄ（配列番号３〜５３６）のいずれか一つに示される任意の配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含む、請求項１６に記載の使用。
18. 阻害剤が、ｓｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡを含むベクター、ｓｉＲＮＡを発現するベクター、および内因的なプロセシングを受けてｓｉＲＮＡとなる分子からなる群より選択される、請求項１４に記載の使用。
19. 患者を処置するために表Ｄ（配列番号３４５〜５３６）に示される任意の配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含むＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する治療有効量のｓｉＲＮＡを含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、または脊髄損傷もしくは疾患から選択される状態に罹患した患者の処置方法。
20. 状態が眼疾患である、請求項１９に記載の方法。
21. 眼疾患が黄斑変性である、請求項２０に記載の方法。
22. 状態が呼吸器疾患である、請求項１９に記載の方法。
23. 呼吸器疾患がＣＯＰＤである、請求項２２に記載の方法。
24. 呼吸器疾患が喘息である、請求項２２に記載の方法。
25. 呼吸器疾患が慢性気管支炎である、請求項２２に記載の方法。
26. 呼吸器疾患が気腫である、請求項２２に記載の方法。
27. 状態が微小血管障害である、請求項１９に記載の方法。
28. 微小血管障害が糖尿病性網膜症である、請求項２７に記載の方法。
29. 微小血管障害が急性腎不全である、請求項２７に記載の方法。
30. 呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、または脊髄損傷もしくは疾患から選択される状態に罹患した患者の回復を促進する薬剤の製造のための、表Ｄ（配列番号３４５〜５３６）に示される任意の配列と同一の配列を有する連続ヌクレオチドを含むＲＴＰ８０１遺伝子の発現を阻害する治療有効量のｓｉＲＮＡの使用。
31. 状態が眼疾患である、請求項３０に記載の使用。
32. 眼疾患が黄斑変性である、請求項３１に記載の使用。
33. 状態が呼吸器疾患である、請求項３０に記載の使用。
34. 呼吸器疾患がＣＯＰＤである、請求項３３に記載の使用。
35. 呼吸器疾患が喘息である、請求項３３に記載の使用。
36. 呼吸器疾患が慢性気管支炎である、請求項３３に記載の使用。
37. 呼吸器疾患が気腫である、請求項３３に記載の使用。
38. 状態が微小血管障害である、請求項３０に記載の使用。
39. 微小血管障害が糖尿病性網膜症である、請求項３８に記載の使用。
40. 微小血管障害が急性腎不全である、請求項３８に記載の使用。
41. 次の構造：
    ５’（Ｎ）_x−Ｚ３’ （アンチセンス鎖）
    ３’Ｚ’−（Ｎ’）_y５’ （センス鎖）
    ［式中、ＮおよびＮ’は各々リボヌクレオチドであり、その糖残基において修飾されているものでも未修飾のものでもよく、（Ｎ）_xおよび（Ｎ’）_yは、各々の連続するＮまたはＮ’が隣のＮまたはＮ’に共有結合により連結されているオリゴマーであり；
    ｘおよびｙの各々は１９〜４０の間の整数であり；
    ＺおよびＺ’は各々存在してもしなくてもよいが、存在する場合はｄＴｄＴでありそれを含む鎖の３’末端に共有結合により結合されており；かつ
    （Ｎ）_xの配列は表Ｄに存在する配列の一つを含む］
    を有する化合物。
42. 共有結合がホスホジエステル結合であり、ｘ＝ｙ、好ましくはｘ＝ｙ＝１９であり、ＺおよびＺ’が両方とも存在せず、少なくとも一つのリボヌクレオチドがその糖残基の２’位において修飾されており、２’位の部分がメトキシ（２’−Ｏ−メチル）であり、アンチセンス鎖およびセンス鎖の両方において一つおきのリボヌクレオチドが修飾されており、アンチセンス鎖の５’末端および３’末端のリボヌクレオチドがそれらの糖残基において修飾されており、かつセンス鎖の５’末端および３’末端のリボヌクレオチドがそれらの糖残基において修飾されていない、請求項４１に記載の化合物。
43. （Ｎ）_xの配列が、表Ｄのアンチセンス配列番号２５７（配列番号５２５）または表Ｄのアンチセンス配列番号２６０（配列番号５２８）を含む、請求項４１〜４２のいずれか一つに記載の化合物。
44. 末端ホスファートを欠く、請求項４３に記載の化合物。
45. 一方の鎖が、５’から３’の方向に、配列番号４４１〜５３６に示される配列を有する連続ヌクレオチドを含むオリゴリボヌクレオチドまたは各々の末端領域の最大二つのヌクレオチドにおいて塩基が変更されているそのホモログを含む、化合物。
46. 一方の鎖が、５’から３’の方向に、複数の塩基が修飾されている場合がある、好ましくは２−Ｏ−メチル修飾により修飾されている場合がある、配列番号３４５〜４４０に示される配列を有する連続ヌクレオチドを含むオリゴリボヌクレオチドまたは各々の末端領域の最大二つのヌクレオチドにおいて塩基が変更されているそのホモログを含む、化合物。
47. アンチセンス鎖の第１、第３、第５、第７、第９、第１１、第１３、第１５、第１７、および第１９ヌクレオチドならびにセンス鎖の第２、第４、第６、第８、第１０、第１２、第１４、第１６、および第１８ヌクレオチドにおいて２’Ｏ−Ｍｅ基を含む、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の化合物。
48. リン酸化型または非リン酸化型である、請求項４１〜４７のいずれか一項に記載の化合物。
49. 二ヌクレオチドｄＴｄＴが３’末端に共有結合により結合されている、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の化合物。
50. 少なくとも一つのヌクレオチドにおいて糖残基が修飾されている、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の化合物。
51. 修飾が２’−Ｏ−メチル修飾である、請求項５０に記載の化合物。
52. ２’ＯＨ基が、−Ｈ −ＯＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₃、−ＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、−ＮＨ₂、およびＦを含む群より選択される基または部分で置換されている、請求項４１〜５１のいずれか一項に記載の化合物。
53. 患者を処置するために治療有効量の請求項４１〜５２のいずれか一項に記載の化合物を含む薬学的組成物を患者に投与することを含む、呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、聴力障害、褥瘡、または脊髄損傷もしくは疾患から選択される状態に罹患した患者の処置方法。
54. 状態が眼疾患のＡＭＤである、請求項５３に記載の方法。
55. 状態が聴力障害の音響外傷である、請求項５３に記載の方法。
56. 呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、聴力障害、褥瘡、または脊髄損傷もしくは疾患から選択される状態に罹患した患者の回復を促進する薬剤の製造のための、治療有効量の請求項４１〜５２のいずれか一項に記載の化合物の使用。
57. 請求項４１〜５２のいずれか一項に記載の二つまたはそれ以上の化合物を含む、薬学的組成物。
58. 第一の化合物が表Ｄのオリゴリボヌクレオチドであり、第二の化合物が表Ａ〜Ｃのいずれか一つのオリゴリボヌクレオチドまたは抗体またはアプタマーである、二つまたはそれ以上の化合物を含む薬学的組成物。
59. 化合物の一つまたはそれ以上が、表Ｄの識別番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８から選択されるオリゴリボヌクレオチドである、請求項５７に記載の組成物。
60. 第一の化合物が、表Ｄの識別番号２５７、２６０〜２６２、および２６４〜２６８から選択されるオリゴリボヌクレオチドである、請求項５８に記載の組成物。
61. 第二の化合物が、表Ａの識別番号１４、２２、２３、２５、２７、３９、４１、４２、４９、および５０から選択されるオリゴリボヌクレオチドである、請求項５８に記載の組成物。
62. 二つの化合物が、有益な活性を生じる量で物理的に混合される、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
63. 二つの化合物が、共有結合的にまたは非共有結合的に結合される、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
64. 二つの化合物が、２〜１００、好ましくは２〜５０、または２〜３０ヌクレオチドの範囲の長さの核酸リンカーにより一緒に連結されている、請求項５７〜６１のいずれか一項に記載の組成物。
65. 呼吸器疾患、眼疾患、微小血管障害、褥瘡、または脊髄損傷もしくは疾患の処置のための、請求項５７〜６４のいずれか一項に記載の組成物の使用。

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