LU83932A1 - Herstellung von anti-t-lymphozyten-globulin - Google Patents

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LU83932A1
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Description

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Dr.Eduard Eresenius, chemisch-pharmazeutische industrie EG Gluckensteinveg 5, 638 Bad Homburg v.d.H.
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Herstellung von AlïTI-T-LlLÎ?HOZYTEfl-GL03ULIN
Die Erfindung betrifft die Herstellung von Anti-T-Lympho zyt en-Gl obulin.
Hochwirksame Immunsuppressiva werden bei Organtransplantationen zur Unterdrückung einer Transplantat-Abstossung und bei Knochenmarktramsplantaticnen zur Behandlung der Spen-der-gegen-Uirt-Erkrankungen eingesetzt. Ihre Herstellung erfolgte bislang, so, daß lymphatische Zellen in den Körper eine t ( Tieres, zum Beispiel Pferdes oder Kaninchens, eingespritzt v:erden und das Anti-Lymphozyten-Globulin aus dem Serum der immunisierten Tiere gewonnen wird. Nachteilig an diesem Herstellungsverfahren ist, daß lymphatische Zellen verv;endet v;ei den, deren Beschaffung ethische Probleme 'aufwirft und sie nui in begrenzter Menge zur Verfügung stehen. j i
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, für die Her- j Stellung von iEmunsuppressiva in vitro gezüchtete Zellen zu I , verwenden. | . h- . · ‘ : - P _ . ! r
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4 - 2 - ' ' - Üb erra sehend hat die Amelderin gefunden, daß es hei
Verwendung von. Zellen der Zellinie JM zur Immunisierung möglich ist, ein ImHunsuppressivum mit ausgezeichneter Wirkung herzustellen. Pie Herstellung und die Eigenschaften der. Zellinie JM sind in der Veröffentlichung von U.Schneider, H.U.Schwenk und G.Bornkazo in Int.J.Cancer 19, 621-626 (1977) beschrieben.Pie Zellinie JM ist heim Institut Pasteuer Collection Nationale de Culture des Micro organismes (C.N.C.M.) unter der Nummer I 1^7 hinterlegt. Pie Zellen - sind in vitro heliehig vermehrbar, ohne daß sie ihre Eigenschaften verlieren.
Eine weitere Aufgabe der Erfindung besteht darin, Anti-T-Lymphozyten-Globulin in vitro herzustellen. Pies wird erfindungsgemäß durch die Hybridisation von Myelom-Zellen, die zur Antikörpersynthese befähigt sind, mit B-Lymphozyten aus Tieren oder Menschen nit einer Spezifjtät gegen das eingebrachte Antigen in Perm von Zellen der Zellinie JM oder d ren Produkte erreicht. Ein Teil der dabei gebildeten Hybridzellen bildet fortgesetzt gegen das Antigen gerichtete Antikörper. Es ist somit nach der Abtrennung dieser Hybridzellen möglich, Ariti-T-Pymphozyten-Globulin in vitro herzustellen.
Pie Methode der Zellhybridisierung ist z.B. von P.Götze in 11 Immunforschurgin Elinik and Labor", wissenschaftliche Information, Eresenius-Stiftung, Sonderheft August 1977, - S-5 ff .beschrieben.
Pie immunizierenden B-Lymphozyten werden Vorzugspreise , aus dem lymphatischen Gewebe der Maus gewonnen.
l·' / . : c - 3 -
Nachstehend, wird ein Ausführungsueispiel zur Herstellung vor. Anti-Thymo zytenglobulin unter- Tervendmg der T-Lymphoblasten— Zell-Iiinie-Jii beschrieben, das ans folgenden Schritten, "besteht: 1· Zentrifugieren der T-Lymphcblasien-Zellen.
k 2. Einstellung- der Zellsusnersinn mit eines physiologischen “ c
Zellmediun (CL 15), auf eine Zellkonzenbration von 3° ^ 10 * Zellen pro ml.
3* Immunisieren der Kaninchen dinrcn intravenöse Applikation von 3 ml Zellsuspension in die Ohrvené.
4. Hach 4-wöchiger Tmaunisierrrgszeit werden die Tiere entblutet.
5- Durch Zentrifugation des Blutes wird das Sermun gewonnen.
6. Hach Bestimmung der Antikorrer-Titer und der St e rillt äts-priifungen wird das Serum der Kaninchen· gepoolt.
7- Absorption des Serums mit verschiedenen Hunan-Zellen. .
8. Aufreinigung des Antiserurs sur Globulir.frsktion mittels Amoniumsulfat-Fällung und eus chlieS ender Saulenchromato- * graphie.
9. Immunglobulinfraktion wird anf ein bestimmtes Eiweifgehalt eingestellt (20 ug/ml).
10. Anschließend wird das Anti-ihyuoz jten-G-lobulin ultra-zertri— fugiert und steril filtriert- 11. Abfüllung des Immunglobulixs in Anpullen und Durchfüiiruag der Endkontrollen (Qualitäts-, Steril— und Pyrogentestung).
h\ '

Claims (4)

1. Verfahren zur Herstellung von AntI-T-Lymphozyt en-Globuli aus dem Serum immunisierter Tiere, dadurch g e k e i zeich.net, daß zur Immunisierung Zellen der Zelllinie JI1 verv;endet -werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,, daß ( - das Anti-T-Lymphozyt en-Globulin aus dem Serum immunisierte: Kaninchen gev;onnen wird. . '
3· Verfahren zur Herstellung von Anti-T-Lymphozyten-G-lobul: mittels Hybridzell en, die durch Hybridisation von Eyelon-* . Zellen, die zur Antikörper Synthese befähigt sind, mit B- lymphozyten aus Tieren oder Henschen mit einer Spezifität * - gegen ein eingebracht es Antigen erhalten werden, dadurch g' kennzeichnet, daß als Antigen-Zellen der Zellinie Jli oder deren Produkte verwendet vrerden.
'4. Verfahren nach Anspruch 3j dadurch gekennzeichnet, daß B-lymphozyten aus Kausen verwendet werden. -h UOOduy
LU83932A 1981-02-12 1982-02-10 Herstellung von anti-t-lymphozyten-globulin LU83932A1 (de)

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