NO157422B - Fremgangsmaate til fremstilling av anti-t-lymfocytt-globulin. - Google Patents
Fremgangsmaate til fremstilling av anti-t-lymfocytt-globulin. Download PDFInfo
- Publication number
- NO157422B NO157422B NO820014A NO820014A NO157422B NO 157422 B NO157422 B NO 157422B NO 820014 A NO820014 A NO 820014A NO 820014 A NO820014 A NO 820014A NO 157422 B NO157422 B NO 157422B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- test
- serum
- cells
- sterility
- immunization
- Prior art date
Links
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 title claims description 15
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 title claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 32
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 16
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 15
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 45
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 37
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 18
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 12
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 11
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 11
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 7
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 6
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 4
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 3
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 3
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 230000001494 anti-thymocyte effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000013190 sterility testing Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241001631457 Cannula Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XDMCWZFLLGVIID-SXPRBRBTSA-N O-(3-O-D-galactosyl-N-acetyl-beta-D-galactosaminyl)-L-serine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC[C@H]([NH3+])C([O-])=O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 XDMCWZFLLGVIID-SXPRBRBTSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L barium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ba+2] WDIHJSXYQDMJHN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001626 barium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000009529 body temperature measurement Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000013100 final test Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000000951 immunodiffusion Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229940105631 nembutal Drugs 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000011022 opal Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N pentobarbital Chemical compound CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O WEXRUCMBJFQVBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011046 pyrogen test Methods 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000001113 umbilicus Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/808—Materials and products related to genetic engineering or hybrid or fused cell technology, e.g. hybridoma, monoclonal products
- Y10S530/809—Fused cells, e.g. hybridoma
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/85—Reproductive organs or embryos
- Y10S530/851—Placenta; amniotic fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Oppfinnelsen vedrører fremstillingen av anti-T-lymfocytt-globulin.
Høyvirksomme immunsuppressiva anvendes ved organtransplanta-sjoner til undertrykkelse av en transplatat-avstøtning og ved benmargtransplantasjoner for behandling av donator ovenfor vertsykdommer. Deres fremstilling foregikk hittil således at lymfatiske celler innsprøytes i kroppen av et dyr, eksempel-
vis hest eller kanin og anti-lymfocytt-globulinet utvinnes av det immuniserte dyrs serum. Uheldig ved denne fremstillings-fremgangsmåte er at lymfatiske celler anvendes hvis beskaffen-het bevirker etiske problemer og de bare står til disposisjon i begrensede mengder.
Til grunn for oppfinnelsen ligger den oppgave for fremstilling av immunsuppressiva å anvende in vitro dyrkéde celler.
Overraskende ble det funnet ved anvendelse av celler fra cellelinje JM at det er mulig å fremstille et immunsuppressum med utmerket virkning. Fremstillingen og egenskapene av cellelinje JM er omtalt i publikasjonen av U. Schneider, H.U. Schwenck og G. Bornkamm i Int. J. Cancer 19, 621-626 (1977). Cellelinje JM er deponert ved Institut Pasteur Collection Nationale de Culture des Microorganismes (C.N.C.M.) under
nr. I 147. Cellene er formerbare etter ønske in vitro uten at de taper sine egenskaper.
En ytterligere oppgave med oppfinnelsen består i in vitro å fremstille anti-T-lymfocytt-globulin. Dette oppnås ifølge oppfinnelsen ved hybridisering av myelom-celler som er i stand til antilegemesyntese med B-lymfocytter fra dyr eller mennesker med en spesifitet på det innbragte antigen i form av celler fra cellelinje JM eller deres produkter. En del av de derved dannede hybridceller danner fortsatt mot anti-genet rettet antilegemer. Det er således etter adskillelse av disse hybridceller mulig in vitro å fremstille anti-T-lymf ocytt-globulin .
Metoden med cellehybridisering er f.eks. omtalt av G. Gotze
i "Immunforschung in Klinik und Labor", wissenschaftliche Information, Fresenius-Stiftung, Sonderheft August 1977,
s. 5 og følgende.
De immuniserende B-lymfocytter utvinnes fortrinnsvis fra det lymfatiske vev på mus.
I det følgende omtales et utførelseseksempel til fremstilling av anti-tymozytt-globulin under anvendelse av T-lymfoblast-cellelinje JM som består av følgende trinn:
1. Sentrifugering av T-lymfoblast-celler.
2. Innstillingen av cellesuspensjonen med et fysiologisk cellemedium (CL 15) på en cellekonsentrasjon på 30 x 10 celle pr. ml.
3. Immunisering av kaniner ved intravenøs applikasjon av
3 ml cellesuspensjon i ørevenen.
4. Etter 4 ukers immuniseringstid blodtappes dyrene.
5. Ved sentrifugering av blodet utvinnes serum.
6. Etter bestemmelse av antilegeme-titer og sterilitets-prøving poles kaninenes serum.
7. Absorpsjon av serumet med forskjellige humanceller.
8. Opprensing av antiserumet til globulinfraksjonen ved hjelp av ammoniumsulfat-felling og etterfølgende søyle-kromatografi. 9. Immunglobulinfraksjon innstilles på et bestemt eggehvite-innhold (2 0 mg/ml). 10. Deretter ultrasentrifugeres og sterilfiltreres anti-tymocytt-globulin. 11. Avfylling av immunglobulin i ampuller og gjennomføring av sluttkontroller (kvalitets-, steril- og pyrogenprøve).
I . ££§5}§tillin2_av_anti2ener__(cellevekst)_
Lymfoblastoid T-celler (cellelinje JM) vokser som en suspendert kultur.
Næringsmiddel: RPMI-1640 medium med tilsetninger av fetal kalveserum, serum av neonatal kalv, humanserum, streptomycin-penicillin, L-glutamin.
Optimum temperatur 37°C.
Optimum pH-verdi: 7,2 (fenol/rød indikator)
Normal vekstgrad: Celletallet fordobles i løpet av 48 timer. Cellene inspiseres hver 48. time. Celletallet justeres til 0,5 million pr. ml.
Mengde av døde celler skal ikke overskride 10%.
Overskytende celler fjernes, sentrifugeres, vaskes og benyttes for immunisering.
Vaskemedium: Leibowitz Medium (L-15).
Immuniseringsdose for.en kanin: 100 x 10^ celler pr. 3 mm medium.
Kontrollert frysing av celler for immunisering:
Alle overskuddsceller som er blitt fjernet vaskes tre ganger med L-15 medium og etter en tilsetning av DMSO-oppløsning i en konsentrasjon på 10% fryses ved -90°C. Dette utføres ved automatisk kontrollert frysing med nedgang i temperatur på 1°C pr. minutt. For immunisering blir de frosne celler tinet ved 37°C og vaskes deretter umiddelbart for å fjerne DMSO. Bare friske celler benyttes for første immunisering, frosne celler kan benyttes for hjelp.
Frysing av celler for etterfølgende vekst:
Slike celler fryses i flytende nitrogen og forbehandles som angitt ovenfor før de fryses. I intervaller på 3 til 4 måneder tines deler av slike frosne celler for fortsatt vekst. Dette er nødvendig fordi cellevekstlinjen kan forandre og tape dets overflate T-antigen (dette må kontrolleres ved spontan rosettprøve).
Produkt av medium.
1. RPMI-1640 medium
Dette medium er publisert av Moore, G.E. et al. J.A.M.A. 199, 519 (1967).
Mediumpulveret fremstilles av Fresenius i Bad Homburg og leveres i aliquoter for 1 x 10 liter av flytende medium
(Dr. Kempf).
Pulveret lagres i et kjøleskap.
Pulveret oppløses i 10 liter vann for injeksjon ved tilsetning av 20 g NaHCO^• pH-verdien justeres i 7,05 (ved en tilsetning av IN HC1). Etter omrøring utsettes mediet for sterilfiltrering og fylles i 500 ml flasker.
Flaskene undersøkes for sterilitet ved inkubering ved
37°C i 5 dager.
De inkuberte flasker lagres deretter i et kjøleskap ved
6-8°C.
2. L-15 Leibowith Medium.
Dette medium er publisert av Leibowith, A. et al. Am. J.
Hyg. 78, 173 (1963) og benyttes til å suspendere celler
for immunisering.
Pulveret fåes fra Dynatech. Plochinger.
Pulveret oppløses i 10 liter vann for injeksjon. Oppløs-ningen underkastes sterilfiltrering og fylles i 500 ml flasker. Inkubasjon: Lagring i kjøleskap.
II. Fremstilling_av_antiierum
Immunisering og blodtapping av kaniner.
Overensstemmende med forskrifter vedrørende serum og vaksiner av 14.11.72 (§15), akkommoderes dyrene som følger:
Første bur: Holdt av Freesenius, ved Gut Raucherberg,
8121 Wielenbach.
Overvåkende veterinær: Dr. Thimel-Baumer hos Fresenius AG.
Overvåkende offentlige veterinær: Dr. Hanfstingi. Statens Veterinærkontor, 8120 Weilheim. Autopsy: Tiergesundheitsdienst Bayern e.v., Senator Gerauerstrasse 23, 8011 Grub nær Munchen.
Annet bur: Dr. Ivanovas GmbH., oppdrettere av eksperiment-dyr, 7964 Kisslegg, Allgau.
Veterinær: Dr. Albus.
Journaler over immunisering, blodtapping" og autopsy føres
og oppbevares.
Dyrene immuniseres med celler og cellelinje JM.
Første immunisering: På første dag, intravenøs injeksjon
(i ørevenen) av 3 ml cellesuspensjon
(80 til 100 x IO<6> celler).
Annen immunisering: På 14. dag som angitt ovenfor.
Tredje immunisering: På 17. dag som angitt ovenfor. Blodtapping: På 21. og 22. dag: Punktering av hjertet under anestesi pl anestesi: Ved intravenøs injeksjon av 37 mg nembutal pr. kg legemsvekt.
Punktering av hjertet: Med K kanuuler, 180/1,8
5 0 ml E-sprøyter.
100 ml sentrifugeglass med skrukork.
De individuelle blodprøver holdes ved 4°C natten over og behandles neste dag. Den gjennomsnittlige blodmengde som tas varierer i avhengighet av alder og vekt på dyrene og går opp til 150 ml.
III. E£§2§tilling_av_r^ser^m
Videre behandling av individuelle blodprøver.
Sentrifugering (ved ca. 3000 g) i 15 minutter ved 4-8°C. Fylling av serumet og annen sentrifugering.
Fylling av individuelle prøver i skrukorkflasker. Gjennom-snittlig utbytte ca. 70 ml pr. dyr.
Prøvetaking for sterilitet og aktivitetsprøver. Inaktivisering av serumet ved 56°C i vannbad i 30 minutter. Lagring av individuelle prøver ved -18°C inntil de samles. Mellomprøver (for sterilitet, aktivitet).
Samling.
De individuelle sera av 25 0 til 3 00 dyr samles avhengig av resultatene av mellomprøvene.
Samling A: KBR titer mot perifere lymfocytter:1:256 og mer. Samling B: KBR titer mot perifere lymfocytter:1:64 til 1:128. Samling C: KBR-titer mot perifere lymfocytter.:mindre enn 1:64 Hemagglutinasjonstiteren er vanligvis ikke over 1:4000. Samlingene A og B blandes således at den totale titer ikke
er mindre enn 1:256. Samling C kasseres (10 til 20% av de individuelle prøver).
Det samlede serum fylles i 500 ml flasker og lagres deretter ved -18°C.
Mellomprøver
(a) Sterilitetsprøve på hver flaske.
(b) Prøve for KBR titer av samlingene A, B og C.
Etter mellomprøver frigjøres serumsamleflaskene for videre-behandling .
IV. Fremstilling_av_absorbent
Behandling av placenta.
Frisk human placenta oppnås fra hospitalet og holdes i frossen tilstand inntil de behandles.
Den frosne placenta smeltes gradvis og vaskes godt med normal saltoppløsning. Den umbilikale korden og fasciae fjernes. En blodprøve for hepatitisprøven tas fra umbili-kalkorden. Placenta oppdeles og knuses i en blander. Homo-genisatet sentrifugeres (avkjølt sentrifuge, 15 minutter ved 3000 g) og vaskes 3 ganger med normal saltoppløsning og fylles deretter i 500 ml flasker. En prøve taes for bakteriologisk undersøkelse og lagres ved -18°C inntil avslutning av mellom-prøver:
(a) Sterilitetsprøve
(b) Virus hepatitisprøve
Erytrocyttkonsentrat.
Det vaskede, sterile erytrocyttkonsentratet fåea fra blod-bank, hvor det var prøvet.
v • Yi^®£§_^®i}§2åii£2_§Y_E姧£^S£amlin2en_t il_sluttp_rodukt 1. Absorbent.
(a) Absorpsjon av placenta.
Det smeltede placentahomogenisat sentrifugeres og vaskes igjen. Sedimentet veies.
Forhold under absorpsjon: 1 del placenta pr. 6 deler serum. Serumet helles over placentamassen og begge rystes i en
halv time og sentrifugeres deretter.
Den overstående væske bestående av uabsorbent serum fjernes og holdes klar for neste absorpsjon.
En prøve taes for direkte hemagglutinasjon. Titeren er vanligvis 1:512.
(b) Absorpsjon av erytrocytter.
Den blodbeholder inneholdende vasket, sterilt, friskt erytrocyttkonsentrat fåes fra blodbanken og benyttes med en gang. To absorpsjoner utføres i forhold på 1 del erytrocytter pr. 5 deler serum.
Erytrocyttene settes forsiktig til serumet. Blandingen rystes sakte og inkuberes i vannbad ved 37°C i 1,5 timer under rysting hvert 10. minutt.
Blandingen sentrifugeres deretter i 15 minutter ved
10000 opm i en avkjølt sentrifuge.
Den overstående væske utsettes for absorpsjonsbehandlingen
en gang til.
Mengden av absorbert serum er omtrent samme som begynnelsesmengden av råserum.
Hemagglutinasjonstiteren bestemmes etter hver absorpsjon og er mellom 1:128 og 1:64 etter første absorpsjon og mellom 1:8 og 1:4 etter annen absorpsjon.
2. Utfelling med ammoniumsulfat og dialyse.
Det absorberte serum blandes med en lik mengde sterilt, pyrogenfritt vann. Deretter tilsettes en steril, mettet oppløsning av (NH^^SO^ (justert med ammoniakk til pH 7,2) ved å dryppe i et forhold på 82 deler av ammoniumsulfatopp-løsning pr. 100 deler fortynnet serum. Utfellingen fort-settes natten over under omrøring.
Utfellingen fjernes ved sentrifugering ved 5000 til 6000 g
i 30 minutter. Den overstående væske er kassert. Utfellingen vaskes 3 ganger med ammoniumsulfatoppløsning med en konsentrasjon på 45%.
Sluttutfellingen oppløses sammen med halvparten av begynnelsesmengden av råserum i tris-HCl-pufferoppløsning med en pH-verdi på 8,0 til 8,1. Oppløsningen fylles i dialysesekker og dialyseres mot tris-HCl-pufferoppløsning (24 timer, pufferoppløsningen erstattes 4 ganger). Globulinfraksjonen fylles deretter i 500 ml flasker og lagres ved
-18°C. En prøve tas for sterilitetsprøve.
3. Ioneutvekslingskromatografi.
Kolonnen pakkes med cellulose og ekvillibreres ved Tris-HCl-puf f eroppløsning . Slangen og slangekoblinger autoklaveres på forhånd. Et sterilfilter forbindes foran innløpet av kolonnen.
Prøven bestående av dialysert globulinfraksjon leveres ved hjelp av en pumpe og fortynnes deretter med Tris-HCl-puf f eroppløsning (pB-verdi 8,0 til 8,1, 0,05M). Den første topp representerende IgG fraksjon forurenset med andre immunoglobulin samles og konsentreres etter en tilsetning av natriumkloridoppløsning med en konsentrasjon på 0,9%.
4. Ultrafiltrering.
Den første fraksjon oppnådd ved ioneutveksling konsentreres ved ultrafiltrering med et Diaflo Hollow Fiber Apparatus (Amicon) med en rejeksjonsgrense på M.G. 50.000. Eluatet konsentreres til et proteinkonsentrat på minst 25 mg/ml bestemmelse ved filtrometer ved 280 nm). Immunoglobulinut-byttet er ca. 50% av begynnelsesmengden. Det høyeste tap opptrer under kolonnefraksjoneringen.
5. Dialyse, ultrasentrifugering, sterilfiltrering.
Etter ultrafilteringen fylles konsentratet i dialysesekker og dialyseres mot en fosfatpufret vanlig saltoppløsning,
pH 7,0 (24 timer ved 4°C, pufferoppløsningen erstattes 4 ganger). For å eliminere store kompleksmolekyler og fett-molekyler blir proteinoppløsningen som er blitt dialysert sentrifugert ved 18.000 opm i 60 minutter ved ca. 50.000 g.
Globulinoppløsningen utsettes deretter for en sterilfiltrering i et trykkar av stål under en nitrogentrykkatmos-fære med en rettet membrankapsel med en porevidde på
0,22 yM og utsettes for en boblepunktprøve. Globulinopp-løsningen justeres deretter til et proteininnhold på 20 mg/ml, fylles på 500 ml flasker og lagres i et kjøle-skap inntil den fylles på mindre flasker. En prøve tas for mellomprøver.
6. Flaskefylling og merking.
Globulinoppløsningen fylles i 5 ml og 10 ml serumflasker
av glass som er utstyrt med gummikork og aluminiumkapsel. Disse flasker steriliseres ved å autoklaveres umiddelbart før de fylles. Fylleapparatet undersøkes for forurensninger før fylloperasjonen. Fyllerommet fylles med formalindamp natten før fylleoperasjonen. Fylleslangen autoklaveres.
Sterilitetsprøver: Sterilitetsprøvestrimler, autoklavbehand-lingsprøvestrimler, bioindikatorér/ temperaturmåling.
Umiddelbart før de flaskefylles utsettes proteinoppløsningen til en annen sterilfiltrering og fylles deretter i flaskene ved hjelp av automatiske fylleapparater.
Under flaskefyllingen taes prøver for sluttprøvene og en prøve for justering taes.
Produktet lagres i karahtenekjøleskap ved 4°C.
Etter frigjøring holdes produktet i lagringskjøleskap ved 4°C.
Produksjonsstadier hvor undersøkelser er gjort:
I. Inspeksjon av cellelinje.
Spontan rosettprøve for kvantitativ bestemmelse av
T antigen.
II. Undersøkelse av kaniner.
Dyrene er under veterinærkontroll.
III. Prøver av mellomprodukter.
I. Individuelle kaninserumprøver
a) sterilitetsprøve (bakterie, sopp)
b) spesielle aktivitetsprøver (komplimentfikséring-reaksjon) c) toksisitet mot humane erytrocytter (direkte hemagglutinasjon)
II. Aborbenter
a) placenta:
1. Prøve for virus hepatitis (HbsAG-RIA),
2. Sterilitetsprøver
a) Vasket erytrocyttkonsentrat: Prøver for virus hipatitis og sterilitet (ved blodbanken) 3. Sterilitetsprøver etter utfellingen med ammoniumsulfat og dialyse. 4. In-vitro prøve for pyrdgener før og etter kolonnefraksjonering.
IV. Prøver av sluttprodukt før flaskefylling.
1. Sterilitetsprøve overensstemmende med Ph. Eur. 2. Innpodningsprøve (Limulus-prøve pyrogen)
3. Aktivitet
Komplimentfikseringreaksjon ProteinbestemmeIse
V. Prøver på sluttprodukt etter flaskefylling
1. Sterilitetsprøve
2. Prøve for virus
3. Innpodningsprøve
Pyrogenitetsprøve på en kanin.
Limulus-prøve (pyrogen)
4. Aktivitet og identitetsprøver Rosetthindring
Lymfotoksisitetsprøve
Komplimentfikseringreaksjon
Direkte hemagglutinasjon Immunoelektroforese
Immunodiffusjon
ProteinbestemmeIse
Immunosuppressiv egenskap (hudtransplantat over-levningstid på aper).
Fremgangsmåter for undersøkelse og prøver.
1. Spesifikasjon og prøver av mellomprodukter. 1.1. Individueyle kaninserumprøver
a) Sterilitetsprøve (bakterie og sopp) b) Aktivitetsprøve (måling av antistofftiter mot perifere humane lymfocytter i komplimentfikseringreaksjonen) c) Toksisitet mot humane erytrocytter bestemmelse av hemagglutinasjonsantistoffer ved direkte
hemagglutinasjonsprøve).
Usteril serum kasseres. Den nedre grense for komplimentfikseringreaksjonen er 1:64. Serum som har lavere verdier kasseres. En øvre grense for komplimentfikseringreaksjonen behøver ikke fastslås fordi immunisering med JM celle-linjen ikke vil resultere i HV verdier over 1:4000.
1.2 Kaninserumsamling
Samme prøver som angitt i l.a (a til c).
Nedre grense for komplimentfikseringreaksjon:1:256
1.3 Absorbent
a) Placenta (blod fra unbilikalkord): Undersøkelse for virus hepatitis b) Placenta (knust og vasket): Sterilitetsprøve Virus forurenset og usterilt placenta kasseres. c) Vasket erytrocyttkonsentrat undersøkes for sterilitet og virus hepatitis av blodbanken.
1.4 Utfelt serum
Etter utfellingen med ammoniumsulfat og den etter-følgende dialyse:
a) Sterilitetsprøve
b) Fjerning av ammoniumsulfat ved dialyse undersøkes ved en tilsetning av salpetersyre og bariumklorid
til en prøve.
1.5 Undersøkelse på cellulose før og etter kolonnefraksjonering ved en prøve av eluatet for pyrogen Limulus-prøve - pyrogen.
1.6 Inspeksjon av sluttprodukt før flaskefylling
a) Sterilitetsprøve (bakterie og sopp)
b) In-vitro prøve for pyrogener
c) Komplimentfikseringreaksjon mot perifere lymfocytter
d) Fotometrisk proteinbestemmelse ved 280 n:m.
2. Spesifikasjon og inspeksjon av sluttprodukt (sluttinspeksjon) 2.1 Undersøkelse av de generelle egenskaper av produktet som skal administreres. a) Farge: Fargeløst, klart som vann til svakt opalt
b) Lukt: Ingen spesiell lukt
c) Visuell inspeksjon for suspendert stoff
d) pH-verdi 6,8 til 7,1.
2.2 Prøve på identitet og bestemmelse av innholdene av
aktive ingredienser kanin immunoglobulin
a) Immunelektroforese mot kaninhelserum og mot kaninimmunoglobulin
b) Polyacrylamidgelektroforese
c) HPLC gelfiltrering
d) Proteinbesetmmelse (fotometrisk, 280 nm, kvotient 1,4), toleransegrense for godkjennelse
10% protein.
2.3 Aktivitetsprøve
a) Komplimentfikseringreaksjon
Bestemmelse av antistofftiter mot perifere
humanlymfocytter
Lavere grense 1:28, ingen øvre grense.
b) Rosettinhibisjonsprøve
Lavere grense for 50% inhibisjon 1:2000
c) Lymfocytt-toksisitetsprøve
Lavere grense for 50% cytotoksisitet 1:2000
d) Direkte hemagglutinasjon
Bestemmelse av hemagglutinering antistoffer
mot humanerytrocytter.
2.4 Undersøkelse av sluttprodukt for renhet
a) Undersøkelse for bakterier og sopp
b) Undersøkelse for pyrogener
c) Prøve for virus
d) Prøve for fremmedprotein
e) Prøve for antistoffer mot humanserum (immunoelektroforese) f) Prøve for antistoffer mot humane trombocytter
(trombocyttaggregasjon)
Claims (2)
1. Fremgangsmåte til fremstilling av anti-T-lymfocytt-globulin fra serum av immuniserte dyr,
karakterisert ved at det til immunisering anvendes celler av cellelinje JM.
2. Fremgangsmåte ifølge krav 1,
karakterisert ved at anti-T-lymfocytt-globulin utvinnes av serum fra immuniserte kaniner.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19813105150 DE3105150A1 (de) | 1981-02-12 | 1981-02-12 | Herstellung von anti-t-lymphozyten-globulin. |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO820014L NO820014L (no) | 1982-08-13 |
| NO157422B true NO157422B (no) | 1987-12-07 |
| NO157422C NO157422C (no) | 1988-03-16 |
Family
ID=6124731
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO820014A NO157422C (no) | 1981-02-12 | 1982-01-05 | Fremgangsmaate til fremstilling av anti-t-lymfocytt-globulin. |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4541953A (no) |
| AT (1) | AT377698B (no) |
| AU (1) | AU550257B2 (no) |
| BE (1) | BE891944A (no) |
| CA (1) | CA1184491A (no) |
| CH (1) | CH652410A5 (no) |
| DE (1) | DE3105150A1 (no) |
| DK (1) | DK56882A (no) |
| ES (1) | ES8401982A1 (no) |
| FI (1) | FI72139C (no) |
| FR (1) | FR2499413B1 (no) |
| GB (1) | GB2093037B (no) |
| HU (1) | HU189998B (no) |
| IT (1) | IT1195296B (no) |
| LU (1) | LU83932A1 (no) |
| NL (1) | NL8200458A (no) |
| NO (1) | NO157422C (no) |
| SE (1) | SE460826B (no) |
| ZA (1) | ZA82905B (no) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE60233T1 (de) * | 1983-09-15 | 1991-02-15 | Univ Leland Stanford Junior | Allotransplantat mit verminderter immunogenitaet und verfahren und reagenz fuer seine herstellung. |
| US4681760A (en) * | 1985-04-17 | 1987-07-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method of conferring immunotolerance to a specific antigen |
| US5011684A (en) * | 1985-09-05 | 1991-04-30 | Beth Israel Hospital Association | Lysing or blocking unwanted cells with IL-2 receptor-specific binding substance |
| US5785966A (en) * | 1994-06-15 | 1998-07-28 | Coles; John G. | Inhibition of human xenogenic or allogenic antibodies to reduce xenograft or allograft rejection in human recipients |
| FR2878852B1 (fr) * | 2000-09-28 | 2007-02-23 | Imtix Sangstat | Procede de production d'immunoglobulines anti-thymocytes humains |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4363799A (en) * | 1979-03-20 | 1982-12-14 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to human T cells, and methods for preparing same |
| US4361549A (en) * | 1979-04-26 | 1982-11-30 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Complement-fixing monoclonal antibody to human T cells, and methods of preparing same |
| US4364935A (en) * | 1979-12-04 | 1982-12-21 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to a human prothymocyte antigen and methods of preparing same |
| US4364933A (en) * | 1979-12-04 | 1982-12-21 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Monoclonal antibody to a human thymocyte antigen and methods of preparing same |
| US4361550A (en) * | 1979-12-04 | 1982-11-30 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Complement-fixing monoclonal antibody to human suppressor T cells and methods of preparing same |
-
1981
- 1981-02-12 DE DE19813105150 patent/DE3105150A1/de active Granted
- 1981-11-23 GB GB8135192A patent/GB2093037B/en not_active Expired
- 1981-11-24 IT IT25247/81A patent/IT1195296B/it active
- 1981-12-11 FR FR8123180A patent/FR2499413B1/fr not_active Expired
-
1982
- 1982-01-05 NO NO820014A patent/NO157422C/no unknown
- 1982-01-14 AT AT0011482A patent/AT377698B/de not_active IP Right Cessation
- 1982-01-26 FI FI820233A patent/FI72139C/fi not_active IP Right Cessation
- 1982-01-29 BE BE0/207174A patent/BE891944A/fr not_active IP Right Cessation
- 1982-02-04 SE SE8200639A patent/SE460826B/sv not_active IP Right Cessation
- 1982-02-05 NL NL8200458A patent/NL8200458A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-02-08 CA CA000395714A patent/CA1184491A/en not_active Expired
- 1982-02-10 LU LU83932A patent/LU83932A1/de unknown
- 1982-02-10 DK DK56882A patent/DK56882A/da not_active Application Discontinuation
- 1982-02-11 ES ES509504A patent/ES8401982A1/es not_active Expired
- 1982-02-11 AU AU80373/82A patent/AU550257B2/en not_active Ceased
- 1982-02-11 HU HU82426A patent/HU189998B/hu not_active IP Right Cessation
- 1982-02-12 ZA ZA82905A patent/ZA82905B/xx unknown
- 1982-02-12 CH CH905/82A patent/CH652410A5/de not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-02-21 US US06/582,030 patent/US4541953A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| LU83932A1 (de) | 1982-07-07 |
| ATA11482A (de) | 1984-09-15 |
| US4541953A (en) | 1985-09-17 |
| DK56882A (da) | 1982-08-13 |
| ES509504A0 (es) | 1984-01-16 |
| SE460826B (sv) | 1989-11-27 |
| FR2499413B1 (fr) | 1985-08-30 |
| HU189998B (en) | 1986-08-28 |
| IT8125247A0 (it) | 1981-11-24 |
| SE8200639L (sv) | 1982-08-13 |
| NL8200458A (nl) | 1982-09-01 |
| GB2093037B (en) | 1984-07-18 |
| FI72139C (fi) | 1987-04-13 |
| ZA82905B (en) | 1982-12-29 |
| AU8037382A (en) | 1982-08-19 |
| CA1184491A (en) | 1985-03-26 |
| FR2499413A1 (fr) | 1982-08-13 |
| AU550257B2 (en) | 1986-03-13 |
| IT1195296B (it) | 1988-10-12 |
| CH652410A5 (de) | 1985-11-15 |
| DE3105150A1 (de) | 1982-08-19 |
| ES8401982A1 (es) | 1984-01-16 |
| NO820014L (no) | 1982-08-13 |
| DE3105150C2 (no) | 1989-02-23 |
| FI820233L (fi) | 1982-08-13 |
| BE891944A (fr) | 1982-05-17 |
| GB2093037A (en) | 1982-08-25 |
| NO157422C (no) | 1988-03-16 |
| FI72139B (fi) | 1986-12-31 |
| AT377698B (de) | 1985-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bennett Jr et al. | Studies on the Pathogenesis of Fever: I. The Effect of Injection of Extracts and Suspensions of Uninfected Rabbit Tissues upon the Body Temperature of Normal Rabbits | |
| JANEWAY et al. | Experiments on the vasoconstrictor action of blood serum | |
| CN108624557A (zh) | 间充质干细胞外泌体的制备方法及其应用 | |
| JPS5959630A (ja) | 特定抗原に特異的なモノクロ−ン抗体 | |
| Ross et al. | Studies on immune cellular injury: I. Cytotoxic effects of antibody and complement | |
| Kabat et al. | Chemical and immunological studies on the agent producing leukosis and sarcoma of fowls | |
| Anziano et al. | Role of complement in immune lysis of Trypanosoma cruzi | |
| NO157422B (no) | Fremgangsmaate til fremstilling av anti-t-lymfocytt-globulin. | |
| Högman | The Principle of Mixed Agglutination Applied to Tissue Culture Systems: A Method for Study of Cell‐Bound Blood‐Group Antigens | |
| US4009257A (en) | Preparation of immunosuppressive materials | |
| Contrepois | Notes on the early history of infective endocarditis and the development of an experimental model | |
| Londner et al. | RNA-induced immunity against a rat sarcoma | |
| JPS59193829A (ja) | 特発性流産の治療用薬剤及び治療方法 | |
| EP0104831B1 (en) | Tissue culture and cell growth-promoting material and methods for the manufacture and use thereof | |
| US3061518A (en) | Method for the filtration of virus fluids | |
| SU1003738A3 (ru) | Способ получени вакцины таежного весенне-летнего энцефалитного вируса | |
| CN113521102A (zh) | 一种可用于神经修复的干细胞凝胶及其制备方法和应用 | |
| US20090181043A1 (en) | Method for Producing Human Anti-Thymocyte Immunoglobulins | |
| CRAIGIE et al. | The complement-fixation reaction in variola | |
| Wacker et al. | The immunologic response of rabbits to homologous and heterologous corneal and uveal tissue | |
| RU2770425C2 (ru) | Способ получения иммуноглобулина противооспенного из сыворотки крови лошадей | |
| RU2105310C1 (ru) | Способ лечения синдрома приобретенного иммунного дефицита (спид) | |
| US4490357A (en) | Simplified in-vitro interferon production | |
| RU2460786C1 (ru) | Способ получения сыворотки крови взрослого крупного рогатого скота для культивирования клеток животных и человека | |
| Phanuphak et al. | Immunologic activities of pertussis-treated lymphocytes |