KR960001125A - 말토오스를 트레할로오스로 변환하는 재조합형 효소 - Google Patents

말토오스를 트레할로오스로 변환하는 재조합형 효소 Download PDF

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Abstract

SDS-DAGE에서의 분자량 약 57000∼67000달톤 및 등전점 전기영동법에서의 등전점(pI) 약 4.1∼5.1이고, 말토오스를 트레할로오스로, 그리고 트레할로오스를 말토오스로 변환하는 재조합형 효소를 제공한다. 효소반응 조건에 따라 이 효소는 말토오스에 작용시킬 경우 약 70w/w%의 트레할로오스를 생성하는 반면 트레할로오스에 작용시킬 경우 약 20w/w%의 말토오스를 생성한다. 상기 효소에 대해 코우드하는 DNA와 자체복제가능한 벡터를 함유한 재조합형 효소를 숙주에 도입하여 제조된 형질전환체에 의해 트레할로오스의 대규모 제조가 용이하게 된다.

Description

말토오스를 트레할로오스로 변환하는 재조합형 효소
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 피멜로박터 sp. R48에 의해 생성된 효소의 최적 온도를 나타내는 그래프.
제2도는 피멜로박터 sp. R48에 의해 생성된 효소의 최적 pH를 나타내는 그래프.
제3도는 피멜로박터 sp. R48에 의해 생성된 효소의 열적 안정성을 나타내는 그래프.

Claims (28)

  1. 아래의 물리화학적 성질을 가진 재조합형 효소.
    (1)작용 말토오스에 작용하면 트레할로오스를 생성함. 트레할로오스에 작용하면 말토오스를 생성함.
    (2)분자량 소디움 도데실술페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동법(SDS-PAGE)으로 측정할 경우 분자량 약 57,000∼67,000달톤.
    (3)등전점(pI) 등전점 전기영동법으로 측정할 경우 4.1∼5.1.
  2. 제1항에 있어서, 아래의 SEQ ID NO: 1에 있는 N말단을 가진 아미노산 배열 또는 이 아미노산 배열과 상동적인 아미노산 배열을 가진 재조합형 효소.
  3. 제1항에 기재된 재조합형 효소를 코우드 하는 분리된 DNA.
  4. 제3항에 있어서, 아래의 SEQ ID NO: 2에 있는 5'말단을 가진 염기배열 또는 이 염기배열과 상동적인 염기배열 또는 이들 염기배열에 대해 상보적인 염기배열을 가진 DNA.
  5. 제3항에 있어서, 유전자 코우드의 축중에 따라, 아래의 SEQ ID NO: 1의 아미노산 배열을 바꾸지 않고 SEQ ID NO: 2에서의 염기 1개 또는 그 이상을 다른 염기로 치환한 DNA.
  6. 제3항에 있어서, 피멜로박터속(屬)의 미생물에서 유래하는 DNA.
  7. 제1항에 기재된 효소를 코우드하는 DNA와 자체 복제가능한 벡터를 함유하는 복제가능한 재조합 DNA.
  8. 제7항에 있어서, DNA가 아래의 SEQ ID NO: 2에 있는 5'말단을 가진 염기배열 또는 이 염기배열과 상동적인 염기배열 또는 이들 염기배열에 대해 상보적인 염기배열을 가진 복제가능한 재조합 DNA.
  9. 제7항에 있어서, DNA가 유전자 축증에 따라, 아래의 SEQ ID NO: 1의 아미노산 배열을 바꾸지 않고 SEQ ID NO: 2에서의 염기 1개 또는 그 이상을 다른 염기로 치환하여 얻는 것인 복제가능한 재조합 DNA.
  10. 제7항에 있어서, DNA가 피멜로박터속의 미생물에서 유래하는 복제가능한 재조합 DNA.
  11. 제7항에 있어서, 자체 복제가능한 벡터가 플라스미드 벡터 Bluescript ⅡSK(+)인 복제가능한 재조합 DNA.
  12. 제1항에 기재된 DNA와 자체 복제가능한 벡터를 함유하는 복제가능한 재조합 DNA를 적당한 숙주에 도입하여 제조되는 형질전환체.
  13. 제12항에 있어서, DNA가 아래의 SEQ ID NO: 2에 있는 5'말단으로부터 시작하는 염기배열 또는 이 염기배열과 상동적인 염기배열 또는 이들 염기배열에 대해 상보적인 염기배열을 가진 것인 형질전환체.
  14. 제12항에 있어서, DNA가 유전자 코우드의 축중에 따라, 아래의 SEQ ID NO: 1의 아미노산 배열을 바꾸지 않고 SEQ ID NO: 2에서의 염기 1개 또는 그 이상을 다른 염기로 치환하여 얻는 것인 형질전환체.
  15. 제12항에 있어서, DNA가 피멜로박터속의 미생물에서 유래하는 형질전환체.
  16. 제7항에 있어서, 자체 복제가능한 벡터가 플라스미드 벡터 Bluescript ⅡSK(+)인 형질전환체.
  17. 제12항에 있어서, 숙주가 에쉐리히아 콜리(Escherichia coli) 종(鍾)의 미생물인 형질전환체.
  18. (가)제1항에 기재된 재조합형 효소를 코우드하는 DNA와 자체 복제가능한 벡터를 함유하는 재조합 DNA를 숙주에 도입하여 제조된 형질전환체를 영양배지에서 배양하여 재조합형 효소를 생성시키고, (나)생성된 재조합형 효소를 배양물로부터 채취하여서 되는 아래의 물리화학적 성질을 가진 재조합형 효소의 제조방법.
    (1)작용 말토오스에 작용하면 트레할로오스를 생성함. 트레할로오스에 작용하면 말토오스를 생성함.
    (2)분자량 소디움 도데실술페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기영동법(SDS-PAGE)으로 측정할 경우 분자량 약 57,000∼67,000달톤.
    (3)등전점(pI) 등전점 전기영동법으로 측정할 경우 4.1∼5.1.
  19. 제18항에 있어서, DNA가 아래의 SEQ ID NO: 2에 있는 5'말단에서 시작하는 염기배열 또는 이 염기배열과 상동적인 염기배열 또는 이들 염기배열에 대해 상보적인 염기배열을 가지는 제조방법.
  20. 제19항에 있어서, DNA가 유전자 코우드의 축중에 따라, 아래의 SEQ ID NO: 1의 아미노산 배열을 바꾸지 않고 SEQ ID NO: 2에서의 염기 1개 또는 그 이상을 다른 염기로 치환하여 얻는 것인 제조방법.
  21. 제18항에 있어서, 자체 복제가능한 벡터가 플라스미드 벡터 Bluescript ⅡSK(+)인 제조방법.
  22. 제18항에 있어서, 숙주가 에쉐리히아 콜리(Escherichia coli) 종(鍾)의 미생물인 제조방법.
  23. 제18항에 있어서, (나)단계 공정에서의 채취방법은 원심분리, 여과, 농축, 염석, 투석, 분별침전, 이온교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 겔 전기영동 및 등전점 전기영동으로 된 군으로부터 선택된 1종 또는 그 이상인 제조방법.
  24. 말토오스에 제1항에 기재된 재조합형 효소를 작용시켜 트레할로오스를 생성시키는 공정을 포함해서 되는 말토오스 효소적 변환방법.
  25. 제24항에 있어서, 말토오스를 50w/v%까지 함유하는 수성 매체중에 유효량의 재조합형 효소를 공존시켜 4∼45℃의 온도 및 pH 5.5∼9.0에서 효소반응시키는 말토오스의 효소적 변환방법.
  26. 제24항에 있어서, 건조고형분 기준으로 트레할로오스를 약 80w/w%까지 함유하는 조성물을 생성하는 말토오스의 효소적 변환방법.
  27. 말토오스에 제1항에 기재된 재조합형 효소를 작용시켜 트레할로오스를 생성시키는 공정을 포함해서 되는 말토오스의 효소적 변환방법.
  28. 제27항에 있어서, 말토오스의 순도가 건조 고형분 기준으로 약 70w/w%이상인 말토오스의 효소적 변환방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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