KR910012245A - 신규한 폴리펩티드와 이들을 코드하는 발현가능한 dna시퀀스 및 그의 제조방법 - Google Patents

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Abstract

내용 없음

Description

신규한 폴리펩티드와 이들을 코드하는 발현가능한 DNA시퀀스 및 그의 제조방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도의 A는BrevibacteriumR312에서 정제된 아미다제에서 얻어진 펩티드의 시퀀스 (N-터미널과 내부구조)와 B는 내부의 펩티드 절편에서 유도된 올리고뉴클레도티드 프토브이다.

Claims (29)

  1. 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코드하는 DNA 시퀀스.
  2. 제1항에 있어서의 DNA 시퀀스는 -. 제8도에 나타낸 Brevibacterium R312의 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제를 코드하는 시퀀스와 제13도에 나타낸 Rhodocoius의 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제를 코드하는 시퀀스. - . 유전코드의 축퇴로 발생하는 것이 아닌 동일한 단백질을 코드하는 상기 시퀀스들의 유사물, - . 상기 시퀀스중 하나 또는 그들의 절편과 혼성화 되고 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 활성을 가진 폴리펩티드를 코드하는 DNA 로부터 선택되어지는 것을 특징으로 하는 DNA 시퀀스.
  3. 제1항에 있어서의 DNA 시퀀스는 제13도에 나타난 137 내지 193 아미노산이나 제8도에 나타난 159 내지 215 아미노산이나 적어도 50%의 동질성을 가지는 펩티드 시퀀스를 코드하는 시퀀스를 포함하는 것임을 특징으로 하는 DNA 시퀀스.
  4. 적어도 제8도에 나타난 시퀀스의 코딩영역을 함유하는 DNA.
  5. 적어도 제13도에 나타난 시퀀스의 코딩영역을 함유하는 DNA.
  6. 제1항 내지 제5항중의 한항에 따른 DNA 시퀀스를 함유하는 유전자.
  7. 제1항 내지 제6항 따른 DNA 시퀀스의 발현으로 생성되며 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제의 활성을 함유하는 폴리펩티드.
  8. 제7항에 있어서, 상기 시퀀스는 제8도 또는 제13도에 나타내어진 것임을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  9. 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 활성을 가지며, -. 제13도의 아미노산 137 내지 193에 해당하는 시퀀스. - . 제8동의 아미노산 159 내지 125에 해당하는 시퀀스. -. 선행 시퀀스와 적어도 50%의 동종성을 나누어 가지는 시퀀스. 중에서 적어도 하나 선택된 시퀀스를 포함하는 폴리펩티드.
  10. 제7항 내지 9항중 어느하나의 항에 있어서의 펩티드는 자연 그대로의 것이 아님을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  11. 숙주세포에서 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 활성을 갖는 폴리펩티드를 코드하는 DNA 시퀀스가 발현되는 DNA 시퀀스의 조절하에서 시퀀스를 운반하는 발현 카셋트를 적어도 하나를 함유하는 변형된 미생물.
  12. 제1항에 있어서, 제1항 내지 제6항에 따른 시퀀스가 발현되는 DNA 시퀀스는 전사 및 번역 개시 영역을 함유하는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  13. 제11항에 있어서, 상기 전사 및 번역개시 영역이 포르모터 시퀀스와 리보소옴 결합부위를 함유하는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  14. 제13항에 있어서, 상기 프로모터 시퀀스와 리보소움 결합부위는 동종이거나 펩티드를 생산하는 이종일 수 있음을 특징으로 하는 미생물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 프로모터 시퀀스 corynebacterium 파아지의 강력한 프로모터, 트립토판 오페론의 Ptrp 프로모터, 락오페론의 Plac 프로모터, 파아지 람다의 PL 좌측 프로모터 도는 PR 우측 프로모터 중에서 선택될 수 있는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  16. 제15항에 있어서, 상기 프로모터는 트립토판 오페폰 Ptrp 르포롬터와 파이지 람다의 PRCITS 우측 프로모터를 사용하는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  17. 제11항에 있어서, 상기 리보소옴 결합부위는 파이지 람다의 CII 유전자나 corynebacteria 의 동종 유전자에서 유도되는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  18. 제11항 내지 제 17항중 어느 한항에 있어서, 상기 발현 카세트는 선택방법을 가진 플라스미드에 연장되는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  19. 제11항에 있어서, 상기 선택방법을 항생물질에 내성을 주는 선택가능한 마키임을 특징으로 하는 미생물.
  20. 제11항에 있어서, 상기 플라스미드는 트립토판 오페론의 Ptrp 프로모터, 전사종료 시쿠너스 tR1이 제거된 파아지 람다의 CII 유전자의 리보소옴 결합부위, Brevibacterium R312의 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 유전자를 코드하는 DNA와 암피실린 내성을 주는 유전자를 함유하는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  21. 제11항에 있어서, 사익 플라스미드는 파아지 람다 PRCITs의 온도 감지성 우측프로모터, 전사종료 시퀀스 ZR1이 제거된 파아지 람다의 CII 유전자의 리보소옴 결합부위, Brevibacteriun 312의 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제 유전자를 코드하는 DNA와 암피실린 내성을 주는 유전자를 함유하는것임을 특징으로 하는 미생물.
  22. 제11항 내지 제21항중 한항에 있어서, 상기 미생물은E. coli, Brevibacterim, Corynebacterium. Thodocouus균주들중에서 선택되어 지는 것임을 특징으로 하는 미생물.
  23. 제22항에 있어서, 상기 균주는E. coliB 또는E. coli. K12E103s 임을 특징으로 하는 미생물.
  24. 거울상 이성질체에 대해 선택적인 아미다제를 제조함에 있어서, 제11항 내지 제23항에 다른 미생물을 상기 아미다제를 코드하는 시퀀스가 발현될 수 있는 조건에서 배양하고 배양후 미생물을 분리하여 아미다제를 추출하여서 되는 거울상 이성질체에 대해 선택적인 아미다제의 제조방법.
  25. 제24항에 있어서, 상기 배양물을 초움파 분해한고 암모니옴 설페이트로 분별하여 페닐0세파로스에 크로마토 그래피하고 그회의 젤여과를 실시하는 것임을 특징으로 하는 거울상 이성질체에 대해 선택적인 아미다제의 제조방법.
  26. 제11항 내지 제23항에 따른 미생물 갈재하에서 또는 제7항 내지 제10항에 따른 폴리펩티드 존재하에 라세믹아미드를 해당하는 유기상의 입체이성질체로 합성하여 반응후 입체 이성질체를 회수하는 것임을 특징으로 하는 거울상 이성질체에 대해 선택적인 아미다제의 제조방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 아미드와 산은 각각 라세믹 아리-2-프로피온 아미드와(s)-형 산임을 특징으로 하는 거울상 이성질체에 대해 선택적인 아미다제의 제조방법.
  28. 제27항에 있어서, 상기 라세믹 아릴-2-프로피온 아미드와 산은 각각 케토프로펜 아미드와 S(+)형 케토프로펜임을 특징으로 하는 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제의 제조방법.
  29. 제26항에 있어서, 상기 아미드와 산은 각각 라세믹 아리옥시-2-프로피온 아미드와 해당 R형 입체이성질체임을 특징으로 하는 거울상 이성질체에 선택적인 아미다제의 제조방법
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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