KR940004057A - 니트릴라제 활성을 지닌 폴리펩티드, 이 폴리펩티드를 코딩하는 dna서열, 발현 카세트, 이를 포함하는 균주, 폴리펩티드에 의해 니트릴을 카르복실레이트로 전환시키는 방법 - Google Patents

니트릴라제 활성을 지닌 폴리펩티드, 이 폴리펩티드를 코딩하는 dna서열, 발현 카세트, 이를 포함하는 균주, 폴리펩티드에 의해 니트릴을 카르복실레이트로 전환시키는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 : -니트릴라아제 활성을 가지고, 니트릴을 카르복시레이트로 가수분해할 수 있는 신규한 폴리펩티드를 코드하는 DNA서열, -유전자 코드의 변화에 의해 이 서열에 대한 유사서열, -니트릴라제 활성을 가지는 폴리펩티드를 코드하고, 이 서열 또는 그 단편중 하나에 하이브리드 할수 있는 DNA서열, 그리고 -발현 카세트와 이를 가진 미생물을 생성할 수 있는 유전적기술과 니트릴라제 활성을 가진 신규한 폴리펩티드에 관계한다.

Description

니트릴라제 활성을 지닌 폴리펩티드, 이 폴리펩티드를 코딩하는 DNA서열, 발현 카세트, 이를 포함하는 균주, 폴리펩티드에 의해 니트릴을 카르복실레이트로 전환시키는 방법
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 코마모나스 테스토스테로니 균주에서 반응시간당 아디포니트릴의 시아노바러레이트(곡선a)의 가수분해와 암모니움 아디페이트(곡선b)의 가수분해 수득률(%)을 나타낸다.
제2a도와 2b도는 프라스미드pXL2075와 pXL2076의 제한효소지도이다.
제3도는 본 발명에 따른 폴리펩티드를 인코드하는 DNA 서열(니트릴라아제 유전자)을 포함한 4.1kb단편 SstI-SstI의 제한효소로써 이 단편은 플라스미드pXL2075와 pXL2076a에 있다. 본 발명에 따른 DNA 서열을 포함하는 XbaI-SstI단편을 만드는 방법은 도면에서 설명한다.

Claims (21)

  1. -제4도에서 보는 바와같이, 니트릴라제 활성을 가지는 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 서열, -유전코드의 변형에서 발생되는 이 DNA 서열의 유사서열, -니트릴라제 활성을 가지는 폴리펩티드를 코드하고, 이 서열에 또는 그 단편에 하이브리드되는 DNA 서열에서 선택되며, 니트릴라제 활성을 가지며 니트릴이 카르복실레이트로 가수분새시킬 수 있는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드를 코드하는 DNA 서열.
  2. 제1항에 있어서, 다음의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 DNA 서열.
  3. 제1항 또는 2항에 따른 니트릴라제 활성을 가지며, DNA 서열의 발현으로 인해 생성되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  4. 제3항에 있어서, 다음의 서열로 구성된 것을 특징으로 하는 폴리헵티드.
  5. 제1항 또는 2항에 다른 DNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물.
  6. 선별수단이 있는 플라스미드에 제1항 또는 2항에 따른 DNA 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물.
  7. Collection Nationale de Cultures de Mocro-organismes에 I-1242에 기탁되고, 플라스미드 pXL2148을 포함하는 대장균 TGI으로 구성되며, 이 균주 참고번호가 G4207인 것을 특징으로 하는 미생물.
  8. 제1항 또는 제2항에 따른 DNA 서열로 구성된 발헌 카세트로 포함하며, 이때 발현은 숙주미생물에서 이 서열의 발현을 위한 시그날에 따라 발현되는 것을 특징으로 하는 미생물.
  9. 제8항에 있어서, DNA 서열 상류방향에 리보좀 결합부위 그리고 생성된 폴리펩티드와 이형 또는 통형의 프로모터 서열로 구성된 것을 특징으로 하는 미생물.
  10. 제9항에 있어서, 프로모터는 대장균의 트립토판 오페톤 프로모터 Ptrp,대장균의 락로지 오페론 프로모터 Plac, 파지람다우측 프로모터 PR, 파지 람다 죄측 프로모터 PL 또는 코리네박테리움/코마모나스 또는 슈도모나스의 강력 프로머터에서 선택되는 것을 특징으로 하는 미생물.
  11. 제9항에 있어서, 리보좀 결합부위는 대장균, 코마모나스, 슈도모나스 또는 코리네박테리움의 유전자에서 유도되거나 또는 파지람다 CⅡ유전제에서 유도되는 것을 특징으로 하는 미생물.
  12. 제8항 내지 11항에 있어서, 발한카세트는 선택수단이 포함된 플라스미드에 있는 것을 특징으로 하는 미생물.
  13. 제12항에 있어서, 선택수단이 항생제 내성이 있는 표식이 되는 것을 특징으로 하는 미생물.
  14. 제5항 내지 13에 있어서,대장균, 코마모나스, 코리네박테리움, 브레비박테리움, 로도코코스 그리고 슈도모나스에서 선택된 것을 특징으로 하는 미생물.
  15. 제15항 내지 14항에 있어서,-미생물이 합성하는 폴리펩티드, 특히 제3항 또는 4항에 따른 폴리펩티드의 폴딩을 도우는 단백질 에이전트 그리고/또는 이와같은 에이전트를 코딩하는 유전자를 포함하고,-이 에이전트는 통상의 미생물에 있는 기본량에 대해 상대적으로 많은 량이 존재하는 것을 특지으로 하는 미생물.
  16. 제15항에 있어서, 에이젼트는 대장균의 GroE샤프통 또는 전핵 또는 원핵생물의 이 유사체인 것을 특징으로 하는 미생물.
  17. 제15항 또는 16항에 있어서,에이젼트를 코딩하는 유전자는 크로모좀 또는 플라스미드, 파지에 의해 수행되고 그 안에서 증폭되는 것을 특징으로 하는 미생물.
  18. 제17항에 있어서, 에이젼트를 코딩하는 유전자는 미생물의 발현시스템의 제어하에 이루어지는 것을 특징으로 하는 미생물.
  19. 제3항 또는 4항에 따른 니트릴라제 활성을 가진 폴리펩티드 또는 제5항 내지 19항에 따른 숙주미생물과 니트릴을 접촉시키는 것으로 구성된 니트릴의 전환시키는 것을 특징으로 하는 효소적방법.
  20. 제19항에 있어서, 니트릴이 NC-R-CN 구조의 디니트릴이고 R은 탄소가 1-10개인 알킬렌기인 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제19항 또는 20항에 있어서, 니트릴이 아디포니트릴인 것을 특징으로 하는 방법.
    ※ 참고사항 : 최초출원 내용에 의하여 공개하는 것임.
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