KR20220035450A - Irak 억제제 및 이의 제조 방법과 용도 - Google Patents

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KR20220035450A
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구오종 예
첸닐 딩
야웬 딩
퀴안 히
차오동 왕
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상하이 메이유에 바이오테크 디벨롭먼트 컴퍼니 리미티드
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Abstract

본 발명은 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 이를 포함하는 약학적 조성물, 이의 제조 방법, 및 이의 의약 용도를 제공하고, 상기 식 I의 구조는 하기와 같다.

식 I

Description

IRAK 억제제 및 이의 제조 방법과 용도
관련 출원의 상호 참조
본 발명은 2019년 9월 24일에 중국 국가지식재산권국에 제출한, 출원번호가 201910906833.7이고, 발명 명칭이 “IRAK 억제제 및 이의 제조 방법과 용도”인 우선권을 주장하는 바, 상기 발명의 모든 내용은 참조로서 본 발명에 인용된다.
본 발명은 의약화학 분야에 관한 것으로, 구체적으로 암 및 인터루킨-1 수용체 관련 키나아제(IRAK)와 관련된 염증성 질환의 치료에 적합한 화합물, 보다 구체적으로 IRAK-4의 기능을 조절하는 화합물에 관한 것이다.
인터루킨-1 수용체 관련 키나아제(IRAK)는 세포내에 존재하는 세린/트레오닌(Serine/threonine) 단백질 키나아제 패밀리로서, IRAK1, IRAK2, IRAK-M 및 IRAK4의 4개의 구성원이 있고, 공통적인 특징은 전형적인 N-말단 사멸 도메인을 가지는 것이며, 상기 도메인은 MyD88-패밀리 어댑터 단백질과 중심에 위치한 키나아제 도메인 사이의 상호작용을 매개하고, 여기서 IRAK1과 IRAK4는 키나아제 활성을 갖는다. IRAK4는 Toll 유사 수용체(TLR)/인터루킨-1 수용체(IL-1R)에 의해 매개되는 염증 신호 전달 경로 다운스트림의 핵심 인자이고, TLR 세포외 부분은 병원체 특이적 분자(예를 들어, 지질다당류, 폴리펩티드, 바이러스 DNA 등)를 인식하며, 리간드와 결합한 후 세포내 부분은 MyD88 등을 동원하여 복합체를 형성하고, IRAK1 자가인산화를 활성화한 다음, 다운스트림 세린/트레오닌 키나아제 TAK1을 활성화하며, NF-κB 및 MAPK 신호 전달 경로를 활성화한 다음, 염증 유발 시토카인, 케모카인 및 파괴 효소를 생성하여, 최종적으로 염증 반응을 일으키고 선천적 면역을 매개한다. IL-1R은 숙주의 방어와 조혈에 참여하며 선천면역과 후천면역을 연결하는 가교 역할을 한다. (Flannery, et. al. Biochem. Pharmacol., 2010, 80 (12): 1981-1991).
류마티스성 관절염(rheumatoid arthritis, RA)은 관절과 관절 조직의 비화농성 염증을 주요 특징으로 하는 만성, 염증성, 전신성 자가면역질환으로, 주로 관절 활액막염으로 나타나며, 결국 관절 연골, 인대, 힘줄 등 다양한 조직 및 여러 장기에 손상을 입히게 된다. 연구에 따르면, RA 환자에서 T/B 림프구, 대식 세포 및 호중구를 비롯한 다양한 면역 세포가 자가면역염증에 참여하고 이를 매개한다. 동시에 많은 연구에서 시토카인이 인터루킨(IL-1/IL-6 등), TNF-α와 같은 RA 질환과 직접적인 관련이 있음이 입증되었다.
연구에 따르면, LPS 또는 CpG에 의해 유도된 인간 백혈구에서 IRAK4 억제제는 염증 유발 시토카인 종양 괴사 인자(TNF)의 생성을 효과적으로 차단할 수 있고; 콜라겐 유발 관절염의 마우스 모델에서 IRAK4 억제제는 TNF의 방출을 현저히 억제하여 질환의 진행을 제어할 수 있으며; MyD88 의존성 염증성 통풍의 마우스 모델에서 IRAK4 억제제는 사용량 의존적 방식으로 백혈구 침윤을 차단할 수 있다(Priscilla N, et. al. J. Exp. Med., 2015, 13 (212): 2189-2201).
따라서, IRAK4 의존적 TLR/IL-1R 신호 전달 경로의 과도한 활성화는 류마티스성 관절염의 발생 및 발달과 밀접한 관련이 있다고 볼 수 있으며, 다른 많은 연구에서도 IRAK4 효소 활성화가 종양, 통풍, 전신성 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 대사증후군, 죽상동맥경화증, 심근경색, 농혈증, 염증성 장질환, 천식 및 알레르기와 같은 질환의 발생 및 발달과 밀접한 관련이 있음을 입증하였다(Chaudhary D, et. al., J. Med. Chem. 2015, 58 (1): 96-110).
종래 기술에 존재하는 문제를 해결하기 위해, 본 발명은 하기 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다.
식 I
여기서,
고리 A는 적어도 하나의 N 함유 5-14원 헤테로아릴(heteroaryl) 또는 5-12원 헤테로고리기(heterocyclic group)를 포함하고;
각각의 R1, R2, R3은 각각 독립적으로 수소, 할로겐(halogen), CN, OH로부터 선택되거나 또는 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환된, (C1-C12) 지방족 탄화수소기(aliphatic hydrocarbon group), 1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기, C3-12 시클로알킬(cycloalkyl), 3-12원 헤테로고리기(heterocyclic group), C6-20 아릴(aryl) 또는 5-14원 헤테로아릴(heteroaryl), -NRaRb와 같은 그룹으로부터 선택되며;
W는 O, S, NH, 단일 결합으로부터 선택되고;
각각의 Ra, Rb는 독립적으로 H, (C1-C12) 지방족 탄화수소기로부터 선택되며;
각각의 R은 독립적으로 할로겐, CN, OH, SH, NRaRb로부터 선택되거나 또는 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R'에 의해 치환된, (C1-C12) 지방족 탄화수소기, 1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기, C3-12 시클로알킬, 3-12원 헤테로고리기, C6-20 아릴 또는 5-14원 헤테로아릴과 같은 그룹으로부터 선택되고;
각각의 R'는 독립적으로 할로겐, CN, OH, SH, NRaRb로부터 선택되며;
n은 1, 2, 3으로부터 선택되고; m은 1, 2, 3, 4, 5, 6으로부터 선택된다.
본 발명의 실시형태에 따르면,
상기 “1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기”는 (C1-C12) 지방족 히드로카빌옥시, (C1-C12) 지방족 히드로카빌메르캅토, (C1-C6) 지방족 히드로카빌옥시 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, (C1-C6) 지방족 히드로카빌메르캅토 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N,N-디-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기로부터 선택될 수 있고;
상기 “적어도 하나의 N 함유 5-14원 헤테로아릴 또는 5-12원 헤테로고리기”는 상기 헤테로아릴 또는 헤테로고리기에 적어도 하나의 질소 원자가 포함됨을 의미하고, 또한 N, O 또는 S로부터 선택되는 하나 이상의 다른 헤테로 원자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 피리딘(pyridine), 피롤(pyrrole), 피페리딘(piperidine), 테트라히드로피롤(tetrahydropyrrole)로부터 선택된다.
상기 (C1-C12) 지방족 탄화수소기는 (C1-C12) 알킬(alkyl), (C2-C12) 알케닐(alkenyl), (C2-C12) 알키닐(alkynyl)로부터 선택될 수 있고, 바람직하게 상기 (C1-C12) 지방족 탄화수소기는 (C1-C6) 알킬, (C2-C6) 알케닐, (C2-C6) 알키닐로부터 선택될 수 있으며;
상기 “할로겐”은 F, Cl, Br, I로부터 선택되고;
상기 “C3-12 시클로알킬”은 시클로프로필(cyclopropyl), 시클로부틸(cyclobutyl), 시클로펜틸(cyclopentyl), 시클로헥실(cyclohexyl)로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 실시형태에 따르면,
상기 R1, R2, R3은 각각 독립적으로 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환된, 메틸(methyl), 에틸(ethyl), n-프로필(n-propyl), 이소프로필(isopropyl), n-부틸(n-butyl), 이소부틸(isobutyl), tert-부틸(tert-butyl), n-펜틸(n-pentyl), 이소펜틸(isopentyl), 네오펜틸(neopentyl), n-헥실(n-hexyl), 비닐(vinyl), 1-프로페닐(1-propenyl), 2-프로페닐, 1-메틸비닐(1-methylvinyl), 1-부테닐(1-butenyl), 1-에틸비닐(1-ethylvinyl), 1-메틸-2-프로페닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 1-펜테닐(1-pentenyl), 1-헥세닐(1-hexenyl), 에티닐(ethynyl), 1-프로피닐(1-propynyl), 2-프로피닐, 1-부티닐(1-butynyl), 1-메틸-2-프로피닐, 3-부티닐, 1-펜티닐(1-pentynyl), 1-헥시닐(1-hexynyl), 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 메톡시(methoxy), 에톡시(ethoxy), 프로폭시(propoxy), 부톡시(butoxy), 펜톡시(pentoxy), 메톡시메틸(methoxymethyl), 에톡시메틸(ethoxymethyl), 프로폭시메틸(propoxymethyl), 메톡시에틸(methoxyethyl), 에톡시에틸(ethoxyethyl), 프로폭시에틸(propoxyethyl), 메톡시프로필(methoxypropyl), 에톡시프로필(ethoxypropyl), 프로폭시프로필(propoxypropyl), N-메틸아미노메틸(N-methylaminomethyl), N-메틸아미노에틸(N-methylaminoethyl), N-에틸아미노에틸(N-ethylaminoethyl), N,N-디메틸아미노메틸(N,N-dimethylaminomethyl), N,N-디메틸아미노에틸(N,N-dimethylaminoethyl), N,N-디에틸아미노에틸(N,N-diethylaminoethyl), 아미노(amino), N,N-디메틸아미노(N,N-dimethylamino), N,N-디에틸아미노(N,N-diethylamino), 테트라히드로피롤릴(tetrahydropyrrolyl), 피페리디닐(piperidinyl), 피리딜(pyridyl), 피라지닐(pyrazinyl), 피롤릴(pyrrolyl), 이미다졸릴(imidazolyl), 피라졸릴(pyrazolyl), 옥사졸릴(oxazolyl), 이속사졸릴(isoxazolyl), , , , , , , , , , , , , , , , 과 같은 그룹으로부터 선택될 수 있고;
상기 은 상기 그룹의 연결 사이트를 나타낸다.
본 발명의 실시형태에 따르면, 상기 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 식 I로 표시되는 화합물은 하기 식 Ia, 식 Ib, 식 Ic, 식 Id, 식 Ie와 같은 구조로부터 선택될 수 있고;
식 Ia 식 Ib
식 Ic 식 Id
식 Ie
상기 식 Ia, 식 Ib, 식 Ic, 식 Id, 식 Ie에서, R1, R2, R3, m, n, W는 식 I에서 정의된 바와 같다.
본 발명의 실시형태에 따르면, 상기 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 식 I로 표시되는 화합물은 하기와 같은 구조로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 상기 식 I로 표시되는 화합물(식 Ia ~ 식 Ie 포함), 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법을 제공하지만, 하기에서 설명되는 방법에만 한정되지 않는다.
일부 실시형태에서, 상기 제조 방법은,
(a1) M-1과 M-2를 사용하여 M-3을 생성하는 단계; 및
(a2) M-3을 RxL1과 반응시키는 단계를 포함하되,
상기 단계 (a1)의 반응은 EDCl.HCl 및 피리딘이 존재하는 조건하에 진행될 수 있고;
상기 단계 (a2)에서, Rx는 R1 또는 히드록시(hydroxy)를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택되고; Rx가 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택된 경우, 반응은 산성 및 환원 조건하에서 식 I로 표시되는 생성물을 획득하는 것을 추가로 포함하며, 상기 산성 조건은 HCl로부터 선택될 수 있고, 환원 조건은 수소화붕소나트륨(sodium borohydride)으로부터 선택될 수 있으며;
상기 단계에서, R1, R2, R3, m, W는 식 I에서 정의된 바와 같고; 상기 L1은 이탈기로 할로겐 또는 OTs로부터 선택될 수 있다.
일부 실시형태에서, 상기 제조 방법은,
(b1) N-1을 RxL1과 반응시키는 단계;
(b2) Pd/C로부터 선택될 수 있는 환원제의 조건하에 이전 단계의 반응에서 획득된 N-2를 환원하여 N-3을 획득하는 단계; 및
(b3) N-3을 M-2와 반응시켜 식 I를 획득하는 단계를 포함할 수 있되,
상기 단계 (b1)에서, Rx는 R1 또는 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택되고; Rx가 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택된 경우, 반응은 산성 및 환원 조건하에서 N-2 생성물을 획득하는 것을 추가로 포함하며, 상기 산성 조건은 HCl로부터 선택될 수 있고, 환원 조건은 수소화붕소나트륨으로부터 선택될 수 있다.
상기 단계에서, R1, R2, R3, m, W는 식 I에서 정의된 바와 같고; 상기 L1은 이탈기로 할로겐 또는 OTs로부터 선택될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명예 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 또한 치료 유효량의 본 발명에 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
본 발명은 또한 RAK 억제제 제조에서 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 IRAK에 의해 매개되는 질환 또는 병증의 예방 및/또는 치료용 약물의 제조에서 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 실시형태에 따르면, 상기 IRAK에 의해 매개되는 질환 또는 병증은 종양, 통풍, 전신성 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 대사증후군, 죽상동맥경화증, 심근경색, 농혈증, 염증성 장질환, 천식 및 알레르기와 같은 질환으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 인터루킨-1 수용체 관련 키나아제의 질환 또는 병증의 예방 및/또는 치료용 약물의 제조에서 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 필요한 개체에게 치료 유효량의 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 상기 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 IRAK에 의해 매개되는 질환 또는 병증의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 상기 IRAK는 IRAK4 관련 키나아제로부터 선택된다.
본 발명은 또한 필요한 개체에게 치료 유효량의 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 상기 약학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 인터루킨-1 수용체 관련 질환의 예방 및/또는 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 실시형태에 따르면, 상기 인터루킨-1 수용체 관련 키나아제의 질환 또는 병증은 종양, 통풍, 전신성 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 대사증후군, 죽상동맥경화증, 심근경색, 농혈증, 염증성 장질환, 천식, 류마티스성 관절염, 패혈증, 자가면역질환 및 알레르기와 같은 질환으로부터 선택된다.
본 발명의 방법은 본 발명의 화합물을 단독으로 제공하는 단계와 본 발명의 화합물을 하나 이상의 다른 화학 치료제와 조합하여 투여하는 단계를 포함할 수 있다. 다양한 약물의 투여는 동시에 또는 순차적으로 수행될 수 있다.
용어 정의 및 약어
다른 설명이 없는 한, 본 발명의 명세서 및 특허청구범위에 기재된 그룹 및 용어의 정의는 구현예의 정의, 예시적인 정의, 바람직한 정의, 표에 기재된 정의, 실시예의 구체적인 화합물의 정의 등을 포함하고, 이들은 임의로 조합 및 결합될 수 있다. 이러한 조합 및 결합된 이러한 그룹의 정의 및 화합물의 구조는 본 발명의 명세서에 기재된 범위 내에 속해야 한다.
본 발명의 명세서 및 특허청구범위에 기재된 수치 범위에서, 상기 수치 범위가 “정수”로 정의되는 경우, 상기 범위의 2개의 엔드 포인트 및 상기 범위 내의 각각의 정수를 기재한 것으로 이해해야 한다. 예를 들어, “0 ~ 6의 정수”는 응당 0, 1, 2, 3, 4, 5 및 6의 각각의 정수로 기재한 것으로 이해해야 한다. “그 이상”은 3개 또는 3개 이상을 의미한다.
본문에서 선택적으로 치환기에 의해 치환된 경우는 비치환 및 1개 이상의 치환기에 의해 치환된 경우를 포함하며, 예를 들어 “선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환”은 R에 의해 치환되지 않거나(비치환) 또는 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환될 수 있음을 의미한다.
용어 “할로겐”은 F, Cl, Br 및 I를 의미한다. 즉 F, Cl, Br 및 I는 본 명세서에서 “할로겐”으로 설명될 수 있다.
용어 “지방족 탄화수소기”는 포화 또는 불포화, 직쇄형 또는 분지쇄형의 사슬형 또는 고리형 탄화수소기를 포함하고, 상기 지방족 탄화수소기의 유형은 알킬, 알케닐, 알키닐로부터 선택될 수 있으며, 상기 지방족 탄화수소기의 탄소원자수는 바람직하게 1 ~ 12이고, 1 ~ 10일 수도 있으며, 추가적으로 바람직한 범위는 1 ~ 6이고, 구체적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-메틸비닐, 1-부테닐, 1-에틸비닐, 1-메틸-2-프로페닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 1-펜테닐, 1-헥세닐, 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 1-메틸-2-프로피닐, 3-부티닐, 1-펜티닐, 1-헥시닐, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실과 같은 그룹을 포함할 수 있지만 이에 한정되지 않으며;
상기 “지방족 탄화수소기”는 1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자(또는 선택적으로 헤테로 원자가 지방족 탄화수소기 중 선택적으로 C-C 결합 및 C-H 결합에 삽입되는 것으로 해석됨)를 선택적으로 포함할 수 있다. 적합한 헤테로 원자는 당업자에게 있어서 자명한 것이며, 예를 들어 황, 질소, 산소, 인 및 규소를 포함한다. 상기 헤테로 원자를 포함하는 지방족 탄화수소기 그룹은 (C1-C6) 지방족 히드로카빌옥시, (C1-C6) 지방족 히드로카빌메르캅토, (C1-C6) 지방족 히드로카빌옥시 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, (C1-C6) 지방족 히드로카빌메르캅토 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N,N-디-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기와 같은 그룹으로부터 선택될 수 있고, 예를 들어 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 펜톡시, 메톡시메틸, 에톡시메틸, 프로폭시메틸, 메톡시에틸, 에톡시에틸, 프로폭시에틸, 메톡시프로필, 에톡시프로필, 프로폭시프로필, N-메틸아미노메틸, N-메틸아미노에틸, N-에틸아미노에틸, N,N-디메틸아미노메틸, N,N-디메틸아미노에틸, N,N-디에틸아미노에틸일 수 있으며; 다른 그룹에 포함된 “지방족 탄화수소기”부분은 상기에서 설명된 바와 같다.
용어 “C3-12 시클로알킬”은 포화 또는 불포화된 1가 단일 고리 또는 이중 고리 탄화수소 고리를 의미하는 것으로 이해되어야 하고, 이는 3-12개의 탄소 원자를 가지며, 바람직하게는 “C3-10 시클로알킬”이다. 용어 “C3-10 시클로알킬”은 포화된 1가 단일 고리 또는 이중 고리 탄화수소 고리를 의미하는 것으로 이해되어야 하고, 이는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 탄소 원자를 갖는다. 상기 C3-10 시클로알킬은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸(cycloheptyl), 시클로옥틸(cyclooctyl), 시클로노닐(cyclononyl) 또는 시클로데실(cyclodecyl)과 같은 단일 고리 탄화수소기 또는 데카히드로나프탈렌 고리(decahydronaphthalene ring)와 같은 이중 고리 탄화수소기일 수 있다.
용어 “3-12원 헤테로고리기”는 포화 또는 불포화된 1가 단일 고리 또는 이중 고리를 의미하고, 이는 독립적으로 N, O 및 S로부터 선택되는 1-5개의 헤테로 원자를 포함하며, 헤테로 원자를 포함하는 그룹은 방향족을 갖지 않고, 상기 3-12원 헤테로고리기는 바람직하게 “3-10원 헤테로고리기”이다. 용어 “3-10원 헤테로고리기”는 포화된 1가 단일 고리 또는 이중 고리를 의미하고, 이는 N, O 및 S로부터 선택되는 1-5개, 바람직하게 1-3개의 헤테로 원자를 포함한다. 상기 헤테로고리기는 상기 탄소 원자 중 어느 하나 또는 질소 원자(존재하는 경우)를 통해 분자의 나머지 부분에 연결될 수 있다. 특히, 상기 헤테로고리기는 아제티디닐(azetidinyl), 옥세타닐(oxetanyl)과 같은 4원 고리; 테트라히드로푸라닐(tetrahydrofuranyl), 테트라히드로티에닐(tetrahydrothienyl), 디옥솔릴(dioxolyl), 피롤리디닐(pyrrolidinyl), 이미다졸리디닐(imidazolidinyl), 피라졸리디닐(pyrazolidinyl), 피롤리닐(pyrrolinyl)과 같은 5원 고리; 또는 테트라히드로피라닐(tetrahydropyranyl), 피페리디닐, 모르폴리닐(morpholinyl), 디티아닐(dithianyl), 티오모르폴리닐(thiomorpholinyl), 피페라지닐(piperazinyl) 또는 트리티아닐(trithianyl)과 같은 6원 고리; 또는 디아자시클로헵타닐(diazacycloheptanyl)과 같은 7원 고리를 포함할 수 있지만 이에 한정되지 않는다. 선택적으로, 상기 헤테로고리기는 벤조-축합된 것일 수 있다. 상기 헤테로고리기는 이중 고리일 수 있으며, 예를 들어 헥사히드로시클로펜타[c]피롤-2(1H)-일 고리(hexahydrocyclopenta[c]pyrrole-2(1H)-yl ring)와 같은 5,5원 고리 또는 헥사히드로피롤로[1,2-a]피라진-2(1H)-일 고리(hexahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine-2(1H)-yl ring)와 같은 5,6원 이중 고리일 수 있지만 이에 한정되지 않는다. 질소 원자를 포함하는 고리는 부분적으로 불포화된 것일 수 있으며, 즉 2,5-디히드로-1H-피롤릴(2,5-dihydro-1H-pyrrolyl), 4H-[1,3,4]티아디아지닐(4H-[1,3,4]thiadiazinyl), 4,5-디히드로옥사졸릴(4,5-dihydrooxazolyl) 또는 4H-[1,4]티아지닐(4H-[1,4]thiazinyl)일 수 있지만 이에 한정되지 않는 1개 이상의 이중 결합을 포함한 것일 수 있거나, 또는 디히드로이소퀴놀리닐(dihydroisoquinoliny)일 수 있지만 이에 한정되지 않는 벤조-축합된 것일 수 있다. 본 발명에 따르면, 상기 3-12원 헤테로고리기는 또한 하기와 같은 그룹으로부터 선택될 수 있다.
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용어 “C6-20 아릴”은 바람직하게는 6-20개의 탄소 원자를 갖는 1가 방향족 또는 부분 방향족 이중 고리 또는 삼중 고리 탄화수소 고리를 의미하는 것으로 이해되어야 하고, 바람직하게 “C6-14 아릴”이다. 용어 “C6-14 아릴”은 바람직하게는 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 탄소 원자를 갖는 1가 방향족 또는 부분 방향족 단일 고리, 이중 고리 또는 삼중 고리 탄화수소 고리(“C6-14 아릴”)를 의미하는 것으로 이해되어야 하고, 특히 페닐(phenyl) 또는 비페닐(biphenyl)과 같은 6개의 탄소 원자를 갖는 고리(“C6 아릴”), 또는 인다닐(indanyl) 또는 인데닐(indenyl)과 같은 9개의 탄소 원자를 갖는 고리(“C9 아릴”), 또는 테트라히드로나프틸(tetrahydronaphthyl), 디히드로나프틸(dihydronaphthyl) 또는 나프틸(naphthyl)과 같은 10개의 탄소 원자를 갖는 고리(“C10 아릴”), 또는 플루오레닐(fluorenyl)과 같은 13개의 탄소 원자를 갖는 고리(“C13 아릴”), 또는 안트릴(anthryl)과 같은 14개의 탄소 원자를 갖는 고리(“C14 아릴”)이다.
용어 “5-14원 헤테로아릴”은 이러한 1가 단일 고리, 이중 고리 또는 삼중 고리 방향족 고리 시스템을 포함하는 것으로 이해되어야 하고, 이는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 14개의 고리 원자, 특히는 5, 6, 9 또는 10개의 탄소 원자를 가지며, 각각 독립적으로 N, O 및 S로부터 선택되는 1-5개, 바람직하게 1-3개의 헤테로 원자를 포함하고, 또한 각 경우에 벤조-축합된 것일 수 있다. 특히, 헤테로아릴은 티에닐(thienyl), 푸릴(furyl), 피롤릴, 옥사졸릴(oxazolyl), 티아졸릴(thiazolyl), 이미다졸릴, 피라졸릴, 이속사졸릴, 이소티아졸릴(isothiazolyl), 옥사디아졸릴(oxadiazolyl), 트리아졸릴(triazolyl), 티아디아졸릴(thiadiazolyl), 티오-4H-피라졸릴(thio-4H-pyrazolyl) 등 및 이들의 벤조 유도체로부터 선택되고, 상기 벤조 유도체는 예를 들어 벤조푸라닐(benzofuranyl), 벤조티에닐(benzothienyl), 벤조옥사졸릴(benzoxazolyl), 벤조이속사졸릴(benzoisoxazolyl), 벤즈이미다졸릴(benzimidazolyl), 벤조트리아졸릴(benzotriazolyl), 인다졸릴(indazolyl), 인돌릴(indolyl), 이소인돌릴(isoindolyl) 등; 또는 피리딜, 피리다지닐(pyridazinyl), 피리미디닐(pyrimidinyl), 피라지닐, 트리아지닐(triazinyl) 등 및 이들의 벤조 유도체, 예를 들어 퀴놀리닐(quinolinyl), 퀴나졸리닐(quinazolinyl), 이소퀴놀리닐(isoquinolinyl) 등; 또는 아조시닐(azocinyl), 인도지닐(indozinyl), 퓨리닐(purinyl) 등 및 이들의 벤조 유도체; 또는 시놀리닐(cinolinyl), 프탈라지닐(phthalazinyl), 퀴나졸리닐(quinazolinyl), 퀴녹살리닐(quinoxalinyl), 나프티리디닐(naphthyridinyl), 프테리디닐(pterridinyl), 카바졸릴(carbazolyl), 아크리디닐(acridinyl), 페나지닐(phenazinyl), 페노티아지닐(phenothiazinyl), 페녹사지닐(phenoxazinyl) 등이다.
다른 설명이 없는 한, 헤테로고리기 또는 헤테로 아릴은 이의 위치 이성질체와 같은 이의 모든 가능한 이성질체 형태를 포함한다. 따라서, 일부 설명적인 비제한적 구현예의 경우, 피리딜 또는 피리딜렌(pyridylene)은 피리딘-2-일, 피리딜렌-2-일, 피리딘-3-일, 피리딜렌-3-일, 피리딘-4-일 및 피리딜렌-4-일을 포함하고; 티에닐 또는 티에닐렌(thienylene)은 티오펜-2-일, 티에닐렌-2-일, 티오펜-3-일 및 티에닐렌-3-일을 포함한다.
본문에서, 상기 “3-12원 헤테로고리기”, “5-14원 헤테로아릴”은 또한 N 함유 5-12원 헤테로고리기 또는 5-14원 헤테로아릴을 추가로 포함할 수 있고, 즉 N 함유 5-12원 헤테로고리기 또는 5-14원 헤테로아릴은 용어 “3-12원 헤테로고리기”, “5-14원 헤테로아릴”의 정의 범위 내의 상응한 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물은 분자 구조에 따라 키랄일 수 있으므로, 다양한 거울상이성질체 형태가 존재할 수 있다. 따라서, 이러한 화합물은 라세미체 형태 또는 광학 활성 형태로 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 이의 중간체는 당업자에게 공지된 화학적 또는 물리적 방법을 통해 거울상이성질체 화합물로 분리되거나 또는 이러한 형태로 합성에 사용될 수 있다. 라세미 아민의 경우, 광학 활성 분해 시약과 반응시켜, 혼합물로부터 부분입체이성질체가 제조된다. 적절한 분해 시약의 예시로는 광학 활성 산, 예를 들어 R 및 S 형태의 타타르산(tartaric acid), 디아세틸타타르산(diacetyl tartaric acid), 디벤조일타타르산(dibenzoyl tartaric acid), 만델산(mandelic acid), 말산(malic acid), 젖산(lactic acid), 적절한 N-보호 아미노산(예를 들어, N-벤조일프롤린(N-benzoyl proline ) 또는 N-벤젠설포닐프롤린(N-benzenesulfonyl proline ) 또는 다양한 광학 활성의 장뇌설폰산(camphor sulfonic acid)이다. 광학 활성 분해 시약(예를 들어, 실리카겔에 고정된 디니트로벤조일페닐글리신(dinitrobenzoylphenylglycine), 셀룰로오스 트리아세테이트(cellulose triacetate) 또는 다른 탄수화합물의 유도체 또는 키랄 유도체화 메타크릴레이트(methacrylate) 중합체)의 도움으로, 크로마토그래피 거울상이성질체의 분해도 유리하게 수행될 수 있다. 이를 위한 적절한 용리제는 헥산(hexane)/이소프로판올(isopropanol)/아세토니트릴(acetonitrile)과 같은 물 또는 알코올 함유 용매 혼합물이다.
약학적으로 허용 가능한 염은 예를 들어 사슬 또는 고리에서 질소 원자를 갖고 충분한 염기성을 갖는 본 발명의 화합물의 산 부가염일 수 있으며, 예를 들어 염산(hydrochloric acid), 불화수소산(hydrofluoric acid), 브롬화수소산(hydrobromic acid), 요오드화수소산(hydroiodic acid), 황산(sulfuric acid), 피로황산(pyrosulfuric acid), 인산(phosphoric acid) 또는 질산(nitric acid), 또는 황산수소염(bisulfate)과 같은 무기산과 형성된 산 부가염이거나, 또는 포름산(formic acid), 아세트산(acetic acid), 아세토아세트산(acetoacetic acid),피루브산(pyruvic acid), 트리플루오로아세트산(trifluoroacetic acid), 프로피온산(propionic acid), 부티르산(butyric acid), 카프로산(caproic acid), 헵탄산(heptanoic acid), 운데칸산(undecanoic acid), 라우르산(lauric acid), 벤조산(benzoic acid), 살리실산(salicylic acid), 2-(4-히드록시벤조일)벤조산(2-(4-hydroxybenzoyl)benzoic acid), 장뇌산(camphoric acid), 신남산(cinnamic acid), 시클로펜탄프로피온산(cyclopentanepropionic acid), 디글루콘산(digluconic acid), 3-히드록시-2-나프토산(3-hydroxy-2-naphthoic acid), 니코틴산(nicotinic acid), 팜산(pamoic acid), 펙틴산(pectinic acid), 과산화황산(peroxosulfuric acid), 3-페닐프로피온산(3-phenylpropionic acid), 피크르산(picric acid), 피발산(pivalic acid), 2-히드록시에탄설폰산(2-hydroxyethanesulfonic acid), 이타콘산(itaconic acid), 술팜산(sulfamic acid), 트리플루오로메탄설폰산(trifluoromethanesulfonic acid), 도데실설폰산(dodecylsulfonic acid), 에탄설폰산(ethanesulfonic acid), 벤젠설폰산(benzenesulfonic acid), p-톨루엔설폰산(p-toluenesulfonic acid), 메탄설폰산(methanesulfonic acid), 2-나프탈렌설폰산(2- naphthalenesulfonic acid), 나프탈렌디설폰산(naphthalenedisulfonic acid), 장뇌설폰산, 시트르산(citric acid), 타타르산, 스테아르산(stearic acid), 젖산, 옥살산(oxalic acid), 말론산(malonic acid), 숙신산(succinic acid), 말산, 아디핀산(adipic acid), 알긴산(alginic acid), 말레산(maleic acid), 푸마르산(fumaric acid), D-글루콘산(D-gluconic acid), 만델산, 아스코르브산(ascorbic acid), 글루코헵탄산(glucoheptose), 글리세로인산(glycerophosphoric acid), 아스파르트산(aspartic acid), 설포살리실산(sulfosalicylic acid), 헤미황산(hemisulphate) 또는 티오시안산(thiocyanic acid)과 같은 유기산과 형성된 산 부가염일 수 있다.
또한, 충분한 산성을 갖는 본 발명의 화합물의 다른 적합한 약학적으로 허용 가능한 염은 알칼리 금속염(alkali metal salt)(예를 들어, 나트륨염(sodium salt) 또는 칼륨염(potassium salt)), 알칼리 토금속염(alkaline earth salt)(예를 들어, 칼슘염(calcium salt) 또는 마그네슘염(magnesium salt)), 암모늄염(ammonium salt) 또는 생리학적으로 허용 가능한 양이온을 제공하는 유기 염기와 형성된 염이고, 예를 들어 나트륨 이온(sodium ion), 칼륨 이온(potassium ion), N-메틸글루카민(N-methylglucamine), 디메틸글루카민(dimethylglucamine), 에틸글루카민(dimethylglucamine), 라이신(lysine), 디시클로헥실아민(dicyclohexylamine), 1,6-헥산디아민(1,6-hexanediamine), 에탄올아민(ethanolamine), 글루코사민(glucosamine), 메글루민(meglumine), 사르코신(sarcosine), 세리놀(sarcosine), 트리히드록시메틸아미노메탄(trihydroxymethylaminomethane), 아미노프로판디올(aminopropanediol), 1-아미노-2,3,4-부탄트리올(1-amino-2,3,4-butanetriol)과 같은 물질과 형성된 염이다. 구현예로서, 상기 약학적으로 허용 가능한 염은 나트륨 이온, 칼륨 이온, 칼슘 이온(calcium ion), 마그네슘 이온(magnesium ion), N-메틸글루카민, 디메틸글루카민, 에틸글루카민, 라이신, 디시클로헥실아민, 1,6-헥산디아민, 에탄올아민, 글루코사민, 메글루민, 사르코신, 세리놀, 트리히드록시메틸아미노메탄, 아미노프로판디올, 1-아미노 -2,3,4-부탄트리올과 같은 물질과 그룹 -COOH로 형성된 염을 포함한다.
또한, 염기성 질소 함유 그룹은 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 염화물(chloride), 브롬화물(bromide) 및 요오드화물(iodide)과 같은 저급 알킬 할로겐화물(lower alkyl halide); 황산디메틸(dimethyl sulfate), 황산디에틸(diethyl sulfate), 황산디부틸(dibutyl sulfate) 및 황산디펜틸(dipentyl sulfate)과 같은 황산디알킬(dialkyl sulfate); 데실(decyl), 라우릴(lauryl), 미리스틸(myristyl) 및 스테아릴(stearyl) 염화물, 브롬화물 및 요오드화물과 같은 장쇄 할로겐화물; 벤질(benzyl) 및 페네틸(phenethyl) 브롬화물과 같은 아랄킬(aralkyl) 할로겐화물과 같은 시약을 사용하여 4차화될 수 있다. 구현예로서, 약학적으로 허용 가능한 염은 염산염(hydrochloride), 황산염(sulfate), 질산염(nitrate), 황산수소염, 브롬화수소산염(hydrobromide), 아세트산염(acetate), 옥살산염(oxalate), 시트르산염(citrate), 메탄술폰산염(methanesulfonate), 포름산염(formate) 또는 메글루민염(meglumine salt) 등을 포함한다.
본 발명의 화합물은 다수의 염 형성 사이트를 가질 수 있으므로, 상기 “약학적으로 허용 가능한 염”은 본 발명의 화합물 중 1개의 염 형성 사이트에서 형성된 염 뿐만 아니라, 2개, 3개 또는 모든 염 형성 사이트에서 형성된 염을 포함한다. 따라서, 상기 “약학적으로 허용 가능한 염”에서 식 (I)의 화합물과 염 형성에 필요한 산의 라디칼 이온(음이온) 또는 염기의 양이온의 몰비는 비교적 큰 범위 내에서 변할 수 있으며, 예를 들어 4:1 ~ 1:4, 예를 들어 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3 등일 수 있다.
본 발명에 따르면, 약학적으로 허용 가능한 음이온은 무기산 또는 유기산의 이온화로부터 선택되는 음이온을 포함한다. 상기 “무기산”은 염산, 불화수소산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 피로황산, 인산 또는 질산을 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 상기 “유기산”은 포름산, 아세트산, 아세토아세트산, 피루브산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 부티르산, 카프로산, 헵탄산, 운데칸산, 라우르산, 벤조산, 살리실산, 2-(4-히드록시벤조일)벤조산, 장뇌산, 신남산, 시클로펜탄프로피온산, 디글루콘산, 3-히드록시-2-나프토산, 니코틴산, 팜산, 펙틴산, 과산화황산, 3-페닐프로피온산, 피크르산, 피발산, 2-히드록시에탄설폰산, 이타콘산, 술팜산, 트리플루오로메탄설폰, 도데실설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 2-나프탈렌설폰산, 나프탈렌디설폰산, 장뇌설폰산, 시트르산, 타타르산, 스테아르산, 젖산, 옥살산, 말론산, 숙신산, 말산, 아디핀산, 알긴산, 말레산, 푸마르산, D-글루콘산, 만델산, 아스코르브산, 글루코헵탄산, 글리세로인산, 아스파르트산, 설포살리실산, 헤미황산 또는 티오시안산을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
상이한 치환기의 위치 및 성질에 따라, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 비대칭 중심을 더 포함할 수 있다. 비대칭 탄소 원자는 (R) 또는 (S) 배열로 존재할 수 있고, 하나의 비대칭 중심만 있는 경우 라세미 혼합물을 생성하고, 다수의 비대칭 중심이 포함되는 경우 부분입체이성질체 혼합물을 획득한다. 일부 경우, 특정 결합을 중심으로 하는 회전 장애로 인해 비대칭이 발생할 수 있으며, 예를 들어 상기 중심 결합은 특정 화합물의 2개의 치환된 방향족 고리를 연결한다. 또한, 치환기는 시스 또는 트랜스 이성질체 형태로도 존재할 수 있다.
본 발명의 화합물은 각각의 가능한 모든 입체이성질체를 더 포함하며, 이는 단일 입체이성질체 또는 상기 입체이성질체(예를 들어, R-이성질체 또는 S-이성질체 또는 E-이성질체 또는 Z-이성질체)의 임의의 비율의 임의의 혼합물의 형태이다. 임의의 적합한 종래 기술 방법(예를 들어 크로마토그래피, 특히 예를 들어 키랄 크로마토그래피)을 통해 본 발명의 화합물의 단일 입체이성질체(예를 들어, 단일 거울상이성질체 또는 단일 부분입체이성질체)의 분리를 구현할 수 있다.
용어 “호변이성질체”는 분자 중 어느 원자가 2개의 위치에서 급속히 이동함으로써 생성된 관능기 이성질체를 의미한다. 본 발명의 화합물은 호변이성질체를 나타낼 수 있다. 호변이성질체의 화합물은 두 가지 이상의 상호 전환 가능한 종류가 존재할 수 있다. 양성자 이동 호변이성질체는 2개 원자 사이에서 공유 결합된 수소 원자의 전이로부터 발생된다. 호변이성질체는 일반적으로 평형 형태로 존재하고, 단일 호변 이성질체의 분리를 시도하는 경우 통상적으로 물리적 및 화학적 성질이 화합물의 혼합물과 일치한 혼합물을 생성한다. 평형 위치는 분자 내의 화학적 특성에 따라 다르다. 예를 들어, 아세트알데히드(acetaldehyde)와 같은 많은 지방족 알데히드(aldehyde) 및 케톤(ketone)에서 케톤 유형이 우세를 차지하고; 페놀(phenol)에서 에놀(enol) 유형이 우세를 차지한다. 본 발명은 화합물의 모든 호변이성질체 형태를 포함한다.
본 발명에서, 관련된 화합물은 동위원소로 표지된 화합물도 포함하며, 상기 동위원소로 표지된 화합물은 식 I로 표시되는 것과 동일하지만, 그 중 하나 이상의 원자는 원자 질량 또는 질량수가 천연적으로 존재하는 통상적인 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자에 의해 치환된다. 본 발명의 화합물에 혼입될 수 있는 동위원소의 구현예는 H, C, N, O, S, F 및 Cl의 동위원소를 포함하고, 각각 예를 들어 2H, 3H, 13C, 11C, 14C, 15N, 18O, 17O, 32P, 35S, 18F 및 36Cl이다. 상기 동위원소 및/또는 다른 원자의 다른 동위원소를 포함하는 본 발명의 화합물, 이의 프로드러그, 또는 상기 화합물 또는 상기 프로드러그의 약학적으로 허용 가능한 염은 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 동위원소로 표지된 일부 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소(예를 들어, 3H 및 14C)가 혼입된 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포 측정에 사용될 수 있다. 삼중수소(즉, 3H) 및 탄소 14(즉, 14C)의 동위원소는 제조 및 검출이 용이하므로 특히 바람직한 것이다. 또한, 비교적 무거운 동위원소(예를 들어 삼중수소, 즉 2H)로 치환되면 더 높은 대사 안정성에서 유래된 일부 치료 우세(예를 들어, 증가된 체내 반감기 또는 감소된 사용량 요구 사항)를 제공할 수 있으므로, 일부 상황에서 바람직한 것일 수 있다. 특허청구범위에서 보호받고자 하는 본 발명의 화합물은 중수소 또는 삼중수소로 대체되는 것을 특별히 한정할 수 있다. 또한, 치환기에 나타난 수소의 경우, 용어 중수소 또는 삼중수소가 별도로 기재되지 않았다고 하여 중수소 또는 삼중수소가 배제되는 것은 아니며, 중수소 또는 삼중수소도 포함될 수 있다.
용어 “유효량” 또는 “치료 유효량”은 예기 적용(하기에서 정의된 질환 지료를 포함하지만 이에 한정되지 않음)을 구현하기에 충분한 본 발명에 따른 화합물의 양을 의미한다. 치료 유효량은 예기 적용(체외 또는 체내) 또는 피험자의 체중 및 연령, 질환 상태의 중증도 및 투여 방식과 같은 치료 받는 피험자 및 질환 상태와 같은 요소에 따라 변할 수 있고, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 구체적인 사용량은 선택된 특정 화합물, 기반이 되는 투여 방법, 다른 화합물과 조합하여 투여되는지 여부, 투여 시간 안배, 투여되는 조직 및 운반하는 물리적 전달 시스템과 같은 요소에 따라 변한다.
용어 “보조 물질”은 약학적으로 허용 가능한 불활성 성분을 의미한다. 부형제 종류의 구현예는 비제한적으로 결합제, 붕괴제, 윤활제, 활택제, 안정제, 충진제 및 희석제 등을 포함한다. 부형제는 약물 제제의 조작 특성을 향상시킬 수 있고, 즉 유동성 및/또는 접착성을 증가시켜 제제가 직접 압축에 더 적합하도록 할 수 있다. 상기 제제에 적용되는 전형적인 약학적으로 허용 가능한 담체의 구현예로는 락토오스(lactose), 수크로오스(sucrose), 만니톨(mannitol) 및 소르비톨(sorbitol)과 같은 당; 옥수수 전분, 타피오카 전분, 감자 전분과 같은 전분; 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨(carboxymethyl cellulose sodium), 에틸 셀룰로오스(ethyl cellulose) 및 메틸 셀룰로오스(ethyl cellulose)와 같은 셀룰로오스(cellulose) 및 이의 유도체; 인산이칼슘(dicalcium phosphate) 및 인산삼칼슘(tricalcium phosphate)과 같은 인산칼슘(calcium phosphate); 황산나트륨(sodium sulfate); 황산칼슘(calcium sulfate); 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone); 폴리비닐알코올(polyvinyl alcohol); 스테아르산; 스테아르산마그네슘(magnesium stearate) 및 스테아르산칼슘(calcium stearate)과 같은 스테아르산 알칼리 토금속염(alkaline earth metal stearate); 스테아르산; 땅콩유, 면실유, 참기름, 올리브유 및 옥수수유와 같은 식물성 오일; 비이온성, 양이온성 및 음이온성 계면활성제; 에틸렌글리콜 중합체; 지방 알코올; 곡물 가수분해 고체 및 다른 무독성 및 상용성 충전제, 결합제, 붕괴제, 완충제, 방부제, 항산화제, 윤활제, 착색제와 같은 약물 제제에서 흔히 사용하는 보조 물질이 있다.
용어 “용매화물”은 고체 또는 액체의 상태로 용매 분자와의 배위 작용을 통해 착물을 형성하는 본 발명의 화합물의 형태이다. 수화물은 용매화물의 특정 형태이고, 여기서 배위 작용은 물과 함께 진행되는 것이다. 본 발명에서, 바람직한 용매화물은 수화물이다. 또한, 본 발명의 일반식 I의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 용매화물(수화물)은 화합물 I와 화학양론적의 하나 이상의 분자의 물 또는 다른 용매로 형성된 공정(eutectic) 및 포접물(clathrate compound)을 의미한다. 용매화물에 사용될 수 있는 용매는 물, 메탄올, 에탄올, 에틸렌글리콜 및 아세트산을 포함하지만 이에 한정되지 않는다.
용어 “프로드러그” 또는 “전구약물”은 화합물이 체내에서 전술한 일반식 또는 구체적인 화합물로 표시되는 화합물로 전환되는 것을 의미한다. 이러한 전환은 전구약물이 혈액에서 가수분해 또는 혈액 또는 조직에서 효소를 통해 모체 구조로 전환되는 영향을 받는다. 본 발명의 프로드러그는 에스테르일 수 있고, 본 발명에서 에스테르는 페닐 에스테르(phenyl ester), 지방족 (C1-C24) 에스테르, 아실옥시메틸 에스테르(acyloxymethyl ester), 카보네이트 에스테르(carbonate ester), 카바메이트 에스테르(carbamate ester) 및 아미노산 에스테르를 포함하는 프로드러그로 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명에서 하나의 화합물은 히드록시/카르복실을 포함하고, 즉 이를 아실화하여 전구약물 형태의 화합물을 획득할 수 있다. 다른 프로드러그 형태는 포스페이트 에스테르(phosphate)를 포함하고, 이러한 포스페이트 에스테르 화합물은 모체 상의 히드록시의 인산화에 의해 획득된 것이다.
시약 영문 약어에 대응되는 시약 명칭
1) 본 발명은 신규한 구조를 갖는 일반식 I로 표시되는 화합물을 제공하는데, 실험을 통해 본 발명의 화합물이 IRAK4 키나아제 활성에 대해 억제 작용이 현저하고, 다른 키나아제에 비해 IRAK4 키나아제 활성 대한 선택적 억제 작용이 우수한 것으로 검증되었다.
2) 본 발명의 화합물은 약물의 안전성이 우수하며, 적용 범위가 넓고 독성 및 부작용이 낮으며, 실험을 통해 본 발명의 화합물이 인간 hERG에 대한 억제율이 매우 낮고, 인간 CYP3A4에 대해 현저한 시간 의존적 억제가 없으며, 인간, 래트, 마우스의 혈장 단백질에 대한 결합률이 적당하고, 종간 차이가 매우 작은 동시에 인간의 5가지 CYP 서브타입에 대해 현저한 억제 작용이 없는 것으로 검증되었다.
3) 본 발명의 화합물은 LPS 유도 Balb/c 암컷 마우스의 TNF-α 방출에 대해 현저한 억제 작용이 있다.
4) 본 발명의 화합물은 우수한 약동학적 특징을 갖고, 동물 체내에서 우수한 노출량과 체류 시간을 나타내며, 적절한 반감기 및 우수한 약물 흡수성을 갖는다.
이하, 구체적인 실시예를 결부하여 본 발명의 기술적 해결수단을 보다 더 상세하게 설명한다. 이해해야 할 것은, 하기 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하고 해석할 뿐, 본 발명의 보호범위를 한정하는 것으로 해석되어서는 아니된다. 본 발명의 전술한 내용에 기반하여 구현되는 모든 기술은 본 발명의 보호범위에 포함된다.
다른 설명이 없는 한, 하기 실시예에서 사용되는 원료와 시약은 모두 시판 제품이거나 공지된 방법으로 제조될 수 있다.
실시예 1 화합물 001의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
15℃에서 화합물 1(50 g)의 디클로로메탄 용액(500 mL)에 순차적으로 DMAP(42.5 g), 화합물 2(63.4 g) 및 트리에틸아민(63.9 g)을 첨가하고, 25℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응액에 디클로로메탄(200 mL)을 첨가하고 물로 세척(300 mL×2)하며, 1M의 묽은 염산(300 mL×3)으로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 3(98 g, 수율: 99%)을 획득하였다.
2. 화합물 4의 합성
15℃에서 화합물 3(50 g)의 테트라히드로푸란 용액(300 mL)에 1M의 묽은 염산(300 mL)을 첨가하고 25℃에서 20시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 0℃로 냉각시키고, 1M의 수산화나트륨 용액으로 PH=9로 조절하며, 에틸 아세테이트(200 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(300 mL)으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 석유 에테르(150 mL)로 슬러리화하여 화합물 4(39 g, 수율 91%)를 획득하였다.
3. 화합물 5&6의 합성
-40℃에서 메틸마그네슘 브로마이드(85.8 mL)의 테트라히드로푸란 용액(500 mL)에 화합물 4(34.5 g)의 테트라히드로푸란 용액(200 mL)을 적가하고, -40℃에서 4시간 동안 교반하면서 반응시키며, 포화 염화암모늄 용액(100 mL)으로 반응물을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(500 mL×3)로 추출하며, 추출액을 포화 식염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=5:1)하여 화합물 5(4.3 g, 수율 10%), 화합물 6(7.0 g, 수율 17%) 및 혼합물 12 g을 획득하였다.
화합물 5
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.52-4.41 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.95-1.80 (m, 2H), 1.77-1.61 (m, 4H), 1.46-1.35 (m, 2H), 1.19 (s, 3H).
화합물 6
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.74-4.64 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.92-1.79 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 4H), 1.49-1.38 (m, 2H), 1.23 (s, 3H).
4. 화합물 8의 합성
-15℃에서 화합물 7(2.0 g)의 진한 황산(12 mL, 98%) 용액에 질산(1.6 mL, 70%)의 진한 황산(1.6 mL, 98%) 혼합 용액을 적가하였다. 적가 후, 혼합 시스템을 -15℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응액을 얼음물에 천천히 부은 다음 5분 동안 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 건조시켜 화합물 8(2.5 g, 수율: 97%)을 획득하였다.
5. 화합물 9의 합성
실온에서 화합물 8(2.0 g)의 DMF(20 mL) 용액에 히드라진 수화물(2.4 mL, 98%)을 첨가하고, 첨가 후 혼합 시스템을 120℃로 가열하여 16시간 동안 교반하며, 실온으로 냉각시킨 후 혼합 시스테을 얼음물에 천천히 붓고 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 농축하여 화합물 9(1.3 g, 수율: 67%)를 획득하였다.
6. 화합물 10의 합성
15℃에서 화합물 9(12.4 g) 및 팔라듐 탄소(7 g, 10%)를 순차적으로 400 mL의 에틸 아세테이트에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합 시스템을 15℃에서 수소 보호하에 18시간 동안 교반하고, 반응액 중 팔라듐 탄소를 여과한 다음 여액을 농축하고 증발 건조시켜 화합물 10(10.4 g, 수율 99%)을 획득하였다.
7. 화합물 12의 합성
25℃에서 EDCI.HCl(2.6 g)를 화합물 10(1.5 g) 및 화합물 11(1.4 g)의 Py(15 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 MeOH/H2O=20 mL/20 mL로 슬러리화하여 화합물 12(1.3 g, 수율 48%)를 획득하였다.
8. 화합물 001, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(985 mg)을 화합물 12(300 mg) 및 화합물 5(344 mg)의 5 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 30 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=15-45%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 001(70 mg, 수율 17%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.16 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.32-8.30 (m, 1H), 7.77 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.45 (s, 1H), 4.43-4.40 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.09-2.00 (m, 4H), 1.68-1.58 (m, 4H), 1.22 (s, 3H). LCMS: Rt = 3.646 min, [M+H]+ = 411.1.
9. 화합물 11의 합성
25℃에서 m-CPBA(25 g)를 화합물 13(10 g)의 200 mL의 DCM 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액을 15.6 g의 아황산나트륨으로 제조된 포화 용액으로 퀀칭하며, 혼합 용액을 2시간 동안 교반하고 추출하며, 수상을 묽은 염산으로 PH<7로 조절하고, DCM으로 추출(50 mL×3)하며, 유기상을 병합하여 농축한 다음, 잔여물을 300 mL의 EA로 슬러리화하여 화합물 11(10.1 g, 수율 90%)을 획득하였다.
실시예 2 화합물 010의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
15℃에서 화합물 1(50 g)의 디클로로메탄 용액(500 mL)에 순차적으로 DMAP(42.5 g), TsCl(63.4 g) 및 트리에틸아민(63.9 g)을 첨가하고, 25℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응액에 디클로로메탄(200 mL)을 첨가하고 물로 세척(300 mL×2)하며, 1M의 묽은 염산(300 mL×3)으로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 2(98 g. 수율: 99%)를 획득하였다.
2. 화합물 3의 합성
15℃에서 화합물 2(50 g)의 테트라히드로푸란 용액(300 mL)에 1M의 묽은 염산(300 mL)을 첨가하고 25℃에서 20시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 0℃로 냉각시키고, 1M의 수산화나트륨 용액으로 PH=9로 조절하며, 에틸 아세테이트(200 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(300 mL)으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 석유 에테르(150 mL)로 슬러리화하여 화합물 3(39 g, 수율 91%)을 획득하였다.
3. 화합물 4&5의 합성
-40℃에서 메틸마그네슘 브로마이드(85.8 mL)의 테트라히드로푸란 용액(500 mL)에 화합물 3(34.5 g)의 테트라히드로푸란 용액(200 mL)을 적가하고, -40℃에서 4시간 동안 교반하면서 반응시키며, 포화 염화암모늄 용액(100 mL)으로 반응물을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(500 mL×3)로 추출하며, 추출액을 포화 식염수(300 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=5:1)하여 화합물 4(4.3 g, 수율 10%), 화합물 5(7.0 g, 수율 17%) 및 혼합물 12g을 획득하였다.
화합물 4
1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.32 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.52-4.41 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.95-1.80 (m, 2H), 1.77-1.61 (m, 4H), 1.46-1.35 (m, 2H), 1.19 (s, 3H).
화합물 5
1H NMR (400 MHz, CDCl3) : δ 7.79 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.33 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.74-4.64 (m, 1H), 2.44 (s, 3H), 1.92-1.79 (m, 2H), 1.77-1.62 (m, 4H), 1.49-1.38 (m, 2H), 1.23 (s, 3H).
4. 화합물 7의 합성
25℃에서 m-CPBA(25 g)를 화합물 6(10 g)의 200 mL의 DCM 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액을 15.6 g의 아황산나트륨으로 제조된 포화 용액으로 퀀칭하며, 혼합 용액을 2시간 동안 교반하고 추출하며, 수상을 묽은 염산으로 PH<7로 조절하고, DCM으로 추출(50 mL×3)하며, 유기상을 병합하여 농축한 다음, 잔여물을 300 mL의 EA로 슬러리화하여 화합물 7(10.1 g, 수율 90%)을 획득하였다.
5. 화합물 9의 합성
80 mL의 진한 황산을 500 mL의 삼구 플라스크에 첨가하고, -7℃로 냉각시켜 화합물 8(10 g)을 천천히 첨가하며, 이 온도에서 5분 동안 교반한 후, -15℃로 냉각시켜 질산칼륨(8.9 g)을 천천히 첨가하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 병합한 반응액을 1.2 L의 얼음물에 붓고, 석출된 고체를 여과하며, 여과 케이크를 2 L의 에틸 아세테이트에 용해하고, 4 L의 탄산수소나트륨 용액을 첨가하여 염기성으로 조절하며, 에틸 아세테이트로 추출(2 L×3)한 후, 유기상을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 실리카겔 컬럼(DCM/MeOH=300/1)으로 정제하여 화합물 9(12.3 g, 수율 27%)를 획득하였다.
6. 화합물 11의 합성
실온에서 화합물 9(400 mg), 화합물 10(1.81 g) 및 DIPEA(2.86 g)를 순차적으로 20 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 핫포트에서 80℃하에 밤새 교반하며, 반응이 완료된 후 물을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 3회 추출하며, 감압하에 농축하고 실리카겔 컬럼으로 정제(DCM/CH3OH=200/1)하여 화합물 11(570 mg, 수율 83%)을 획득하였다.
7. 화합물 12의 합성
실온에서 화합물 11(80 mg) 및 Pd/C(5 mg)를 순차적으로 10 mL의 메탄올 용액에 첨가하고, 반응액을 55℃에서 수소 보호하에 밤새 반응시키며, 반응이 완료된 후 여과하고, 여액을 감압하에 농축한 후 실리카겔 컬럼으로 정제(DCM/CH3OH=100/1)하여 화합물 12(60 mg, 수율 65%)를 획득하였다.
8. 화합물 13의 합성
25℃에서 EDCI.HCl(950 mg)를 화합물 12(580 mg) 및 화합물 7(505 mg)의 Py(11 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔여물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=1:1)으로 정제하여 화합물 13(550 mg, 수율 55%)을 획득하였다.
9. 화합물 010, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-디메틸아미노-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(936 mg)을 화합물 13(300 mg) 및 화합물 4(409 mg)의 6 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 30 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=20-70%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 010(59 mg, 수율 14%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.01 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.33-8.30 (m, 1H), 7.77-7.74 (m, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.33 (s, 1H), 4.44-4.41 (m, 2H), 2.72 (s, 6H), 2.52 (s, 3H), 2.06-2.01 (m, 4H), 1.68-1.55 (m, 4H), 1.23 (s, 3H). LCMS: Rt = 3.318 min, [M+H]+ = 424.2.
실시예 3 화합물 013의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
-15℃에서 화합물 1(2.0 g)의 진한 황산(12 mL, 98%) 용액에 질산(1.6 mL, 70%)의 진한 황산(1.6 mL, 98%) 혼합 용액을 적가하였다. 적가 후, 혼합 시스템을 -15℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응액을 얼음물에 천천히 부은 다음 5분 동안 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 건조시켜 화합물 2(2.5 g, 수율: 97%)를 획득하였다.
2. 화합물 3의 합성
실온에서 화합물 2(2.0 g)의 DMF(20 mL) 용액에 히드라진 수화물(2.4 mL, 98%)을 첨가하고, 첨가 후 혼합 시스템을 120℃로 가열하여 16시간 동안 교반하며, 실온으로 냉각시킨 후 혼합 시스테을 얼음물에 천천히 붓고 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 농축하여 화합물 3(1.3 g, 수율: 67%)을 획득하였다.
3. 화합물 4의 합성
15℃에서 화합물 3(12.4 g) 및 팔라듐 탄소(7 g, 10%)를 순차적으로 400 mL의 에틸 아세테이트에 첨가하였다. 혼합 시스템을 15℃에서 수소 보호하에 18시간 동안 교반하고, 반응액 중 팔라듐 탄소를 여과한 다음 여액을 농축하고 증발 건조시켜 화합물 4(10.4 g, 수율 99%)를 획득하였다.
4. 화합물 6의 합성
25℃에서 EDCI.HCl(2.6 g)를 화합물 4(1.5 g) 및 화합물 5(1.4 g)의 Py(15 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 MeOH/H2O=20 mL/20 mL로 슬러리화하여 화합물 6(1.3 g, 수율 48%)을 획득하였다.
5. 화합물 8의 합성
25℃에서 탄산세슘(3.3 g)을 화합물 6(1 g) 및 화합물 7(1.3 g)의 20 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 50 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=20-60%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 8(370 mg, 수율 25%)을 획득하였다.
6. 화합물 9의 합성
25℃에서 화합물 8(350 mg)의 5 mL 디옥산 용액에 5 mL의 2 M 묽은 염산을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 탄산나트륨 용액으로 염기성으로 조절하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하여 화합물 9(150 mg, 수율 48%)를 획득하였다.
7. 화합물 013, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
0℃에서 수소화붕소나트륨(25 mg)을 화합물 9(130 mg)의 2 mL 메탄올 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 10 mL의 염화암모늄 용액으로 퀀칭하고, 에틸 아세테이트로 추출(5 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=10-60%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 013(54 mg, 수율 41%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.16 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.31-8.29 (m, 2H), 7.78-7.76 (m, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.71 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.57-3.50 (m, 1H), 2.53 (s, 3H), 2.09-2.06 (m, 2H), 1.97-1.88 (m, 4H), 1.45-1.34 (m, 2H). LCMS: Rt = 2.541 min, [M+H]+ = 397.2.
실시예 4 화합물 016 및 화합물 220의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
18℃에서 화합물 1(2 g) 및 AlCl3(4.13 g)을 순차적으로 디클로로메탄(150 mL)에 첨가하고, 반응액을 55℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응액을 50 mL의 물로 퀀칭하고 150 mL의 디클로로메탄으로 추출한 다음 에틸 아세테이트로 추출(150 mL×3)하며, 유기상을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 30 mL의 디클로로메탄으로 슬러리화하여 화합물 2(1.6 g, 수율 86%)를 획득하였다.
2. 화합물 3의 합성
25℃에서 탄산칼륨(93 mg)을 화합물 2(0.1 g) 및 요오도에탄(105 mg)의 2 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 20 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(5 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르/에틸 아세테이트=2/1)하여 화합물 3(0.1 g, 수율 86%)을 획득하였다.
3. 화합물 4의 합성
25℃에서 화합물 3(1.1 g)의 100 mL 메탄올 용액에 0.3 g의 Pd/C를 첨가하고, 반응액을 25℃에서 하나의 수소 벌룬 압력(760 Torr)하에 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액을 스핀 건조시켜 화합물 4(0.71 g, 수율 76%)를 획득하였다.
4. 화합물 6의 합성
25℃에서 화합물 5(558 mg)를 화합물 4(710 mg) 및 EDCI(840 mg)의 25 mL 피리딘 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 100 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 실리카겔 컬럼으로 정제(디클로로메탄/메탄올=60/1)하여 화합물 6(0.67 g, 수율 54%)을 획득하였다.
5. 화합물 8의 합성
25℃에서 화합물 6(630 mg)을 화합물 7(945 mg) 및 탄산세슘(1.97 g)의 25 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 질소 가스 보호하에 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 100 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=5-95%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 8(160 mg, 수율 18%)을 획득하였다.
6. 화합물 9의 합성
25℃에서 화합물 8(180 mg)을 30 mL의 디옥산 및 10 mL의 2M 묽은 염산의 혼합 용액에 용해하고, 반응액을 45℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 포화 탄산수소나트륨으로 PH>7로 조절한 다음, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하고, 유기상을 스핀 건조시켜 화합물 9(180 mg, 수율 97%)를 획득하였다.
7. 화합물 016, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시시클로헥실)-6-에톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드 및 화합물 220, 즉 2-((2-(시스-4-히드록시시클로헥실)-6-에톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
0℃에서 수소화붕소나트륨(50 mg)을 화합물 9(180 mg)의 20 mL 메탄올 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응액을 10 mL의 염화암모늄 용액으로 퀀칭하고, 에틸 아세테이트로 추출(20 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=20-50%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 체류 시간이 Rt = 11.25 min인 화합물 016(123 mg, 수율 68%) 및 체류 시간이 Rt = 11.75 min인 화합물 220(30 mg, 수율 17%)을 획득하였다.
화합물 016
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.30 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.43-7.36 (m, 2H), 7.03 (s, 1H),4.37-4.30 (m, 1H), 4.24 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.82-3.80 (m, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.28 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 2.18 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.06 (q, J = 13.2 Hz, 2H), 1.65-1.56 (m, 3H), 1.55-1.50 (m, 2H).
LCMS: Rt = 2.486 min, [M+H]+ = 411.2.
화합물 220
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.30 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.43-7.36 (m, 2H), 7.04 (s, 1H), 4.41-4.35 (m, 1H), 4.24 (q, J = 8.8 Hz, 2H), 4.14 (br s, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.35 (q, J = 8.8 Hz, 2H), 2.08 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 1.98 (d, J = 13.2 Hz, 2H), 1.75 (t, J = 13.2 Hz, 2H), 1.64 (t, J = 6.8 Hz, 3H). LCMS: Rt = 2.642 min, [M+H]+ = 411.2.
실시예 5 화합물 025의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
-40℃에서 화합물 2(45 mL)의 테트라히드로푸란 용액(100 mL)에 화합물 1(3 g)의 테트라히드로푸란 용액(10 mL)을 적가하고, 0℃에서 8시간 동안 교반하면서 반응시키며, 포화 염화암모늄 용액(200 mL)으로 반응물을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(200 mL×3)로 추출하며, 추출액을 포화 식염수(400 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=5:1)하여 화합물 3(1.5 g, 수율 44%)을 획득하였다.
2. 화합물 025, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-시클로프로필시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(820 mg)을 화합물 4(300 mg) 및 화합물 3(374 mg)의 NMP(30 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16 h 동안 교반하였다. 냉각시키고 물(100 mL)을 첨가하며, 에틸 아세테이트로 추출(80 mL×4)하고, 유기상을 감압하에 농축하며, 잔류물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=5-95%, UV: 214 nm, 유속: 15mL /min)에 통과시켜 화합물 025(79 mg, 수율 18%)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.13 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.45 (d, J = 12 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.42-7.37 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 4.49-4.41(m, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.64 (s, 3H), 2.38-2.22 (m, 4H),1.92-1.88 (m, 2H), 1.72-1.64 (m, 2H), 1.31-1.26 (m, 1H) , 0.98 (s, 1H), 0.43-0.41 (m, 4H). LCMS: Rt =3.198, [M+H]+ = 437.2.
실시예 6 화합물 163의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
15℃에서 P-톨루엔설포닐 클로라이드(11.8 g)를 화합물 1(6.1 g), 트리에틸아민(14.8 g) 및 DMAP(7.2 g)의 DCM(120 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 10℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 1N의 HCl 용액으로 세척(100 mL×3)하고, 유기상을 건조시킨 다음 농축하여, 화합물 2(13.1 g, 수율 84%)를 획득하였다.
2. 화합물 9의 합성
-15℃에서 화합물 8(2.0 g)의 진한 황산(12 mL, 98%) 용액에 질산(1.6 mL)의 진한 황산(1.6 mL, 98%) 혼합 용액을 적가하였다. 적가 후, 혼합 시스템을 -15℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응액을 얼음물에 천천히 부은 다음 5분 동안 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 건조시켜 화합물 9(2.5 g, 수율: 97%)를 획득하였다.
3. 화합물 3의 합성
실온에서 화합물 8(2.0 g)의 DMF(20 mL) 용액에 히드라진 수화물(2.4 mL, 98%)을 첨가하고, 첨가 후 혼합 시스템을 120℃로 가열하여 16시간 동안 교반하며, 실온으로 냉각시킨 후 혼합 시스테을 얼음물에 천천히 붓고 교반하며, 흡인 여과하고 물로 세척하며, 고체를 수집하고 감압하에 농축하여 화합물 3(1.3 g, 수율: 67%)을 획득하였다.
4. 화합물 4의 합성
15℃에서 DIPEA(13.4 g)를 화합물 3(4.0 g) 및 화합물 2(10.7 g)의 80 mL 톨루엔 용액에 첨가하고, 반응액을 130℃에서 48시간 동안 교반하며, 반응액을 100 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(50 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=10-50%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 4(2.5 g, 수율 43%)를 획득하였다.
5. 화합물 5의 합성
30℃에서 400 mg의 Pd/C를 화합물 4(1.3 g)의 에틸 아세테이트(30 mL) 용액에 첨가하고, 반응물을 하나의 수소 벌룬 압력하에 16 h 동안 교반하며, 반응액을 병합하고 여과한 다음, 감압하에 농축하여 화합물 5(1.9 g, 수율 95%)를 획득하였다.
6. 화합물 163, 즉 2-((2-(3-히드록시-3-메틸부틸)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
30℃에서 HATU(273 mg), Et3N(145 mg)을 화합물 5(120 mg) 및 화합물 6(81 mg)의 DMF(2mL) 용액에 첨가하고, 반응물을 30℃에서 18시간 동안 교반하며, 반응액을 감압하에 농축하고, 조생성물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O (0.1% NH4HCO3) = 5-95%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 163(110 mg, 60%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.13 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.31-8.28 (m, 2H), 7.77-7.75(m, 1H), 7.60-7.55(m, 1H), 7.09 (s, 1H), 4.50 (s, 1H), 4.44-4.40 (m, 2H), 3.93 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.04-2.00 (m, 2H), 1.15 (s, 6H). LCMS: Rt = 2.784 min, [M+H]+ = 385.2.
실시예 7 화합물 284의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
25℃에서 P-톨루엔설포닐 클로라이드(2.3 g)를 화합물 1(1 g), 트리에틸아민(2.9 g) 및 DMAP(1.4 g)의 DCM (20 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 1N의 HCl 용액으로 세척(200 mL×3)하고, 유기상을 건조시킨 다음 농축하여, 화합물 2(2.1 g, 수율 75%)를 획득하였다.
2. 화합물 284, 즉 2-((2-시클로펜틸-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(1.6 g)을 화합물 3(500 mg) 및 화합물 2(485 mg)의 10 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 50 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)= 25-60%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 284(123 mg, 수율 20%)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.15 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 2H), 7.77-7.75 (m, 1H), 7.57 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.97-4.90 (m, 1H), 3.96 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.22-2.13 (m, 2H), 2.10-2.01 (m, 2H), 1.92-1.82 (m, 2H), 1.74-1.65 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.562 min, [M+H]+ = 367.2.
실시예 8 화합물 285의 합성
반응식:
1. 화합물 285, 즉 2-((2-시클로헥실-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(1.3 g)을 화합물 2(400 mg) 및 화합물 1(511 mg)의 8 mL의 NMP 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 30 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=25-75%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 285(68 mg, 수율 13%)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.15 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 2H), 7.78-7.76 (m, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.11-2.07 (m, 2H), 1.90-1.80 (m, 4H), 1.70 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 1.50-1.40 (m, 2H), 1.31-1.23 (m, 1H). LCMS: Rt = 3.971 min, [M+H]+ = 381.2.
실시예 9 화합물 286의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
0℃에서 DAST(6 g)를 화합물 1(2 g)의 DCM(70 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응액을 50 mL의 얼음물에 붓고, 디클로로메탄으로 추출(30 mL×2)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=10:1)으로 정제하여 화합물 2(1.8 g, 수율 82%)를 획득하였다.
2. 화합물 286, 즉 2-((2-(4,4-디플루오로시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(1.6 g)을 화합물 3(500 mg) 및 화합물 2(731 mg)의 10 mL의 NMP 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 30 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=40-70%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 286(129 mg, 수율 18%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.17 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 1H), 7.78-7.76 (m, 1H), 7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 4.68-4.57 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 2.53 (s, 3H), 2.32-2.07 (m, 8H). LCMS: Rt = 3.692 min, [M+H]+ = 417.2.
실시예 10 화합물 287의 합성
반응식:
1. 화합물 287, 즉 2-((2-(시스-4-히드록시-트랜스-4-메틸시클로헥실)-6-디메틸아미노-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(800 mg)을 화합물 1(255 mg) 및 화합물 2(350 mg)의 5 mL의 NMP 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 30 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=35-60%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 287(51 mg, 수율 15%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.03 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.89 (s, 1H), 7.41-7.35 (m, 3H), 4.37-4.31 (m, 1H), 2.84 (s, 6H), 2.63 (s, 3H), 2.37-2.27 (m, 2H), 2.11-2.05 (m, 2H), 1.93-1.85 (m, 2H), 1.61-1.58 (m, 2H), 1.33 (s, 3H). LCMS: Rt = 3.298 min, [M+H]+ = 424.3.
실시예 11 화합물 015 및 화합물 288의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
20℃에서 화합물 1(5 g), 화합물 2(26 g) 및 탄산세슘(29 g)을 순차적으로 DMF(400 mL)에 첨가하고, 질소 가스 치환 후, 90℃에서 24시간 동안 교반하며, 20℃로 냉각시키고 물(800 mL)을 첨가하며, 에틸 아세테이트(800 mL×3)로 추출하고, 유기상을 포화 염화나트륨 용액(500 mL×3)으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=1: 1)하고 MTBE(50 mL)로 슬러리화하여, 화합물 3(1.2 g, 수율 14%)을 획득하였다.
2. 화합물 4의 합성
25℃에서 0.1 g의 Pd/C를 화합물 3(1.1 g)의 에틸 아세테이트(200 mL) 용액에 첨가하고, 수소 벌룬하에 16 h 동안 교반하며, 여과하고 감압하에 농축하여, 화합물 4(901 mg, 수율 90%)를 획득하였다.
3. 화합물 6의 합성
화합물 5(900 mg)를 디클로로메탄(20 mL) 용액에 용해하고, mCPBA(2.5 g)를 천천히 첨가하며, 반응액을 25℃에서 16 h 동안 교반하였다. 여과 후, 잔류물을 아황산나트륨 수용액으로 퀀칭한 다음 묽은 염산으로 PH<7로 조절하고, 디클로로메탄으로 추출(50 mL×3)하며, 유기상을 농축하고 (석유 에테르:에틸 아세테이트=1: 1)로 컬럼에 통과시켜 정제하여 화합물 6(0.68 g, 수율 69%)을 획득하였다.
4. 화합물 7의 합성
25℃에서 화합물 6(164 mg) 및 화합물 4(250 mg)의 DMF(10 mL) 용액에 HATU(376 mg) 및 DIPEA(128 mg)를 첨가하여 16 h 동안 교반하였다. 반응상에 물(100 mL)을 첨가하고, EA(20 mL×3)로 추출하며, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 (디클로로메탄: 메탄올=40:1)로 컬럼에 통과시켜 정제하고 슬러리화하여 화합물 7(480 mg, 수율 99%)을 획득하였다.
5. 화합물 8의 합성
0℃에서, 화합물 7(480 mg)의 디옥산 용액(10 mL)에 4M의 염산(10 mL)을 첨가하고, 30℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 0℃로 냉각시키고 포화 NaHCO3 용액으로 pH=8로 조절하며, EA(40 mL×5)로 추출하고 포화 NaCl(200 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 8(435 mg, 수율 99%)을 획득하였다.
7. 화합물 015, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-이소프로필피리딘 1-옥시드 및 화합물 288, 즉 2-((2-(시스-4-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-이소프로필피리딘 1-옥시드의 합성
0℃에서 수소화붕소나트륨(118 mg)을 화합물 8(435 mg)의 20 mL 메탄올 용액에 첨가하고, 30℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 포화 염화암모늄으로 pH=7로 조절하고, DCM(40 mL×5)으로 추출하며, 포화 NaCl(200 mL)로 세척하고, 감압하에 농축시키며, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=30-70%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 체류 시간이 Rt=28.13 min인 화합물 015(171 mg, 수율 39%); 체류 시간이 Rt=29.25 min인 화합물 288(44 mg, 수율 10%)을 획득하였다.
화합물 015
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.18 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.44(d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.83 (s, 1H), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 4.34-4.33 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.99-3.95 (m, 1H), 3.82-3.80 (m, 1H), 2.30-2.26 (m, 2H), 2.19-2.16 (m, 2H), 2.05 (q, J = 9.2 Hz, 2H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.36 (s, 3H).1.35 (s, 3H). LCMS: Rt =3.531, [M+H]+ = 425.2.
화합물 288
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.17 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.44 (d, J = 5.2 Hz, 1H) , 7.89 (s, 1H), 7.47-7.40 (m, 2H), 7.06 (s, 1H), 4.39-4.37 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.99-3.95 (m, 1H), 2.38-2.34 (m, 2H), 2.09-2.04 (m, 2H), 2.01-1.96 (m, 2H), 1.80-1.76 (m, 2H), 1.36 (s, 3H).1.35 (s, 3H). LCMS: Rt =3.472, [M+H]+ = 425.2.
실시예 12 화합물 014 및 화합물 218의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
Pd(dppf)Cl2(113 mg)와 K3PO4(13.4 g)를 화합물 1(7.3 g) 및 화합물 2(6.5 g)의 톨루엔(70 mL) 용액에 첨가하고, 질소 가스 치환 후, 반응액을 100℃에서 16 h 동안 교반하였다. 냉각 후, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 박층 컬럼크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=20:1)로 정제하여 화합물 3(1.2 g, 수율 20%)을 획득하였다.
2. 화합물 4의 합성
25℃에서 m-CPBA(5.7 g)를 화합물 3(1.1 g)의 100 mL의 DCM 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 48시간 동안 교반하며, 반응액을 2.4 g의 아황산나트륨으로 제조된 포화 용액으로 퀀칭하고, 유기상을 포화 탄산수소나트륨(100 mL×3)으로 세척하며, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 4(1.1 g, 수율 92%)를 획득하였다.
3. 화합물 5의 합성
화합물 4(1.2 g) 및 LiOH.H2O(730 mg)를 순차적으로 THF/H2O(30 mL /10 mL)에 첨가하고, 질소 가스를 치환하였다. 첨가 후 혼합 시스템을 30℃에서 4시간 동안 교반하였다. 물(50 mL)을 첨가하고, 수상을 1N의 HCl로 pH를 7로 천천히 조절하며, 에틸 아세테이트로 추출(100 mL×3)하고, 포화 식염수로 세척(200 mL)하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 흡인 여과하고 감압하에 건조시켜 화합물 5(844 mg, 수율 84%)를 획득하였다.
4. 화합물 7의 합성
25℃에서 화합물 6(450 mg) 및 화합물 5(319 mg)의 피리딘(35 mL) 용액에 DECI(427 mg)를 첨가하고 16 h 동안 교반하였다. 감압하에 농축 건조시키고, 물(100 mL)을 첨가한 다음 DCM(100 mL×3)으로 추출하며, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(200 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고 감압하에 농축한 다음, 잔류물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 슬러리화 하여 화합물 7(314 mg, 수율 45%)을 획득하였다.
5. 화합물 8의 합성
0℃에서, 화합물 7(289 mg)의 테트라히드로푸란 용액(25 mL)에 4M의 염산(250 mL)을 첨가하고, 30℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 0℃로 냉각시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 pH=8로 조절하며, DCM(40 mL×5)으로 추출하고, 추출액을 포화 NaCl(200 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 8(249 mg, 수율 95%)을 획득하였다.
6. 화합물 014, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-시클로프로필피리딘 1-옥시드 및 화합물 218, 즉 2-((2-(시스-4-히드록시시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-시클로프로필피리딘 1-옥시드의 합성
0℃에서 수소화붕소나트륨(67 mg)을 화합물 8(249 mg)의 20 mL 메탄올 용액에 첨가하고, 30℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 포화 염화암모늄으로 pH=7로 조절하고, DCM(40 mL×5)으로 추출하며, 추출액을 포화 NaCl(200 mL)로 세척하고, 감압하에 농축시키며, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3) =30-70%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 체류 시간이 Rt=7.99 min인 화합물 014(108 mg, 수율 43%); 체류 시간이 Rt=8.50 min인 화합물 218(14 mg, 수율 5%)을 획득하였다.
화합물 014
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.26 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.39 (d, J =8.0 Hz, 1H) , 7.82 (s, 1H), 7.39-7.35 (m, 1H), 7.04 (s, 2H), 4.37-4.29 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.83-3.75 (m, 1H), 2.88-2.80 (m, 1H), 2.28-2.25 (m, 2H), 2.18-2.15 (m, 2H), 2.09-2.00 (m, 2H), 1.58-1.48 (m, 2H), 1.29-1.26 (m, 2H), 0.84-0.82 (m, 2H).
LCMS: Rt =3.312, [M+H]+ = 423.2.
화합물 218
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.20 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.40(d, J =8.0 Hz, 1H) , 7.80 (s, 1H), 7.38-7.26 (m, 1H), 7.06 (s, 2H), 4.69 (s, 1H), 4.41-4.35 (m, 1H), 4.14 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.41-2.31 (m, 2H), 2.08-2.04 (m, 2H), 2.00-1.96 (m, 2H), 1.80-1.72 (m, 2H), 1.28-1.26 (m, 2H), 0.84-0.83 (m, 2H).
LCMS: Rt =2.807, [M+H]+ = 423.2.
실시예 13 화합물 187의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
15℃에서 화합물 1(50 g)의 디클로로메탄 용액(500 mL)에 순차적으로 DMAP(42.5 g), TsCl(63.4 g) 및 트리에틸아민(63.9 g)을 첨가하고, 25℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응액에 디클로로메탄(200 mL)을 첨가하고 물로 세척(300 mL×2)하며, 1M의 묽은 염산(300 mL×3)으로 세척하고, 유기상을 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 2(98 g. 수율: 99%)를 획득하였다.
2. 화합물 3의 합성
15℃에서 화합물 2(50 g)의 테트라히드로푸란 용액(300 mL)에 1M의 묽은 염산(300 mL)을 첨가하고, 25℃에서 20시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 0℃로 냉각시키고, 1M의 수산화나트륨 용액으로 PH=9로 조절하며, 에틸 아세테이트(200 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(300 mL)으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 석유 에테르(150 mL)로 슬러리화하여 화합물 3(39 g, 수율 91%)을 획득하였다.
3. 화합물 5의 합성
-40℃에서 화합물 4(5.0 g)의 테트라히드로푸란(100 mL)에 화합물 3(74.6 mL)을 적가하고 -40℃에서 4시간 동안 교반하면서 반응시키며, TLC에서 반응이 완료됨을 나타내면, 포화 염화암모늄 용액(50 mL)으로 반응물을 퀀칭하고, 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하며, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(50 mL)으로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키며, 여과하고 감압하에 농축한 다음, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=5:1)로 정제하여 화합물 5(900 mg, 수율: 16%)를 획득하였다.
4. 화합물 7의 합성
80 mL의 진한 황산을 1 L의 삼구 플라스크에 첨가하고, -12℃에서 5분 동안 교반한 후(일부 진한 황산은 동결 상태임), 이 온도에서 온도가 큰 변동 없이 유지되도록 화합물 6(10g)을 가능한 천천히 첨가하며, 이 온도에서 5분 동안 교반한 후, -약 12℃에서 8 mL의 질산 및 8 mL의 진한 황산의 혼합액을 천천히 적가하고, 온도를 유지하면서 1.5시간 동안 교반하였다. TLC로 원료의 반응이 완료되었는지 모니터링한다. 혼합액을 얼음물(저온 유지)에 천천히 붓고 20분 동안 교반한 다음 여과하며, 물로 세척하고 감압하에 증발 건조시켜 화합물 7(13 g, 수율: 100%)을 획득하였다.
5. 화합물 8의 합성
화합물 7(30 g)을 450 mL의 DMF에 용해하고, 0℃에서 히드라진 수화물 36.3 mL(98%)를 천천히 적가한 후, 혼합액을 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 냉각된 반응액을 얼음물에 천천히 붓고, 10분 동안 교반한 다음 여과하며, 물로 세척하고 감압하에 증발 건조시켜 화합물 8(20 g, 수율: 69%)을 획득하였다.
6. 화합물 9의 합성
화합물 8(10 g) 및 5 g의 팔라듐 탄소(10%)를 순차적으로 200 mL의 에틸 아세테이트에 첨가하고, 20℃에서 반응액을 수소 가스 보호하에 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 셀라이트를 첨가하여 팔라듐 탄소를 여과하고, 여액을 농축 건조시켜 화합물 9(8 g, 수율: 94%)를 획득하였다.
7. 화합물 11의 합성
25℃에서 m-CPBA(25 g)를 화합물 12(10 g)의 200 mL의 DCM 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 여과하고, 여액을 15.6 g의 아황산나트륨으로 제조된 포화 용액으로 퀀칭하며, 혼합 용액을 2시간 동안 교반하고 추출하며, 수상을 묽은 염산으로 PH<7로 조절하고, DCM으로 추출(50 mL×3)하며, 유기상을 병합하여 농축한 다음, 잔여물을 300 mL의 EA로 슬러리화하여 화합물 11(10.1 g, 수율 90%)을 획득하였다.
8. 화합물 10의 합성
25℃에서 EDCI.HCl(2.6 g)를 화합물 9(1.5 g) 및 화합물 11(1.4 g)의 Py(15 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 MeOH/H2O=20 mL/20 mL로 슬러리화하여 화합물 10(1.3 g, 수율 48%)을 획득하였다.
9. 화합물 187, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-에티닐시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
30℃에서 NMP(10 mL)에 순차적으로 화합물 10(300 mg), 화합물 5(444 mg) 및 탄산세슘(820 mg)을 첨가하고, 90℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시키며, LCMS로 반응이 완료되었는지 검출하고, 30℃로 낮추어 물(15 mL)을 첨가하여 반응물을 퀀칭하며, 에틸 아세테이트(10 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 염화나트륨 용액(10 mL)으로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=5-90%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 187(85 mg, 수율 20%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.14 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.46 (dd, J 1= 7.6 Hz, J 2= 2.8 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.45-7.37 (m, 2H), 7.07 (s, 1H), 4.44-4.33 (m, 1H), 4.06 (s, 3H), 2.69-2.60 (m, 4H), 2.33-2.27 (m, 4H), 2.25-2.17 (m, 2H), 1.90-1.79 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.162 min, [M+H]+ = 421.2
실시예 14 화합물 019 및 화합물 292의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
아이스 배스에서 PPh3(15 g)을 화합물 1(7 g) 및 화합물 2(3.37 g)의 THF(200 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 10 min 동안 교반한 후, DIAD(3.1 g)를 반응액에 천천히 적가하며, 반응물을 30℃에서 18 h 동안 교반하고, 반응액에 50 mL의 물을 첨가하며, 에틸 아세테이트로 추출(40 mL×4)하고, 유기상을 감압하에 농축한 다음, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(PE/EA=10/1 to PE/EA=2/1)하여 화합물 3(6.0 g, 수율 66%)을 획득하였다.
2. 화합물 4의 합성
15℃에서 Pd/C(1.0 g, 10%)를 화합물 3(6.5 g)의 에틸 아세테이트(300 mL) 용액에 첨가하고, 반응물을 30℃에서 수소 벌룬 (760 Torr)하에 18시간 동안 교반하며, 반응액을 여과하고 감압하에 농축하여, 화합물 4(4.5 g, 수율 80%)를 획득하였다.
3. 화합물 6의 합성
25℃에서 EDCI.HCl(2.1 g)를 화합물 4(1.5 g) 및 화합물 5(1.1 g)의 피리딘(30 mL) 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 실리카겔 컬럼(PE:EA=1:1)으로 정제하여 화합물 6(810 mg, 수율 32%)을 획득하였다.
4. 화합물 8의 합성
25℃에서 탄산세슘(2.3 g)을 화합물 6(810 mg) 및 화합물 7(1.1 g)의 15 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 50 mL의 물에 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=30-55%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 8(320 mg, 수율 28%)을 획득하였다.
5. 화합물 9의 합성
25℃에서 화합물 8(320 mg)의 4 mL디옥산 용액에 4 mL의 2 M 묽은 염산을 첨가하고, 반응액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 탄산수소나트륨 용액으로 염기성으로 조절하고, 에틸 아세테이트로 추출(10 mL×2)하며, 유기상을 감압하에 농축하여 화합물 9(250 mg, 수율 86%)를 획득하였다.
6. 화합물 019, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시시클로헥실)-6-시클로프로필메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드 및 화합물 292, 즉 2-((2-(시스-4-히드록시시클로헥실)-6-시클로프로필메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
0℃에서 수소화붕소나트륨(44 mg)을 화합물 7(250 mg)의 5 mL 메탄올 용액에 첨가하고, 반응액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응액을 10 mL의 염화암모늄 용액으로 퀀칭하고, 에틸 아세테이트로 추출(5 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=35-60%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 체류 시간이 Rt=10.7 min인 화합물 019(77 mg, 수율 31%) 및 체류 시간이 Rt=11.1 min인 화합물 292(12 mg, 수율 5%)를 획득하였다.
화합물 019:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.31 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.31-8.27 (m, 2H), 7.77-7.75 (m, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.40-4.32 (m, 1H), 4.02 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 3.56-3.51 (m, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.09-2.05 (m, 2H), 1.97-1.87 (m, 4H), 1.44-1.34 (m, 3H), 0.66-0.61 (m, 2H), 0.48-0.45 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.391 min, [M+H]+ = 437.2.
화합물 292:
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.31 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.31-8.29 (m, 2H), 7.77-7.75 (m, 1H), 7.57 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 4.49 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.40-4.34 (m, 1H), 4.02 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.87 (s, 1H), 2.52 (s, 3H), 2.33-2.22 (m, 2H), 1.56-1.75 (m, 4H), 1.66-1.60 (m, 2H), 1.41-1.34 (m, 1H), 0.65-0.61 (m, 2H), 0.49-0.45 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.101 min, [M+H]+ = 437.2.
실시예 15 화합물 291의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
0℃에서 화합물 1(800 mg)을 10 mL의 테트라히드로푸란에 용해하고, 0℃에서 LiHMDS(1M의 THF 용액, 5.50 mL)를 천천히 적가하며, 0℃에서 60분 동안 교반한 다음 반응액에 요오드화메틸(680 mg)을 천천히 첨가하고, 이 온도에서 1.5시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후 반응액에 포화 염화암모늄 용액(10 mL)을 첨가하여 반응물을 퀀칭한 다음, 에틸 아세테이트(25 mL×2)로 추출하고, 감압하에 농축시키며, 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=7:1)하여 화합물 2(420 mg. 수율: 55%)를 획득하였다.
2. 화합물 3의 합성
0℃에서 화합물 2(700 mg) 및 3M의 HCl(18 mL)를 순차적으로 테트라히드로푸란(18 mL) 용액에 첨가하고, 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응액에 3M의 수산화나트륨 수용액을 첨가하여 pH=8로 조절한 다음, 디클로로메탄(20 mL×2)으로 추출하고, 감압하에 농축시키며, 잔류물을 실리카겔 컬럼으로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=4:1)하여 화합물 3(420 mg, 수율: 78%)을 획득하였다.
3. 화합물 4의 합성
25℃에서 화합물 3(390 mg)을 8 mL의 에탄올에 용해하고, -70℃에서 수소화붕소나트륨(112 mg)의 에탄올(1 mL) 용액을 반응액에 적가하며, -70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 반응액에 8 mL의 물을 첨가하여 반응물을 퀀칭한 다음, 에틸 아세테이트(15 mL×2)로 추출하고, 유기상을 감압하에 농축하며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=1:1)하여 화합물 4(280 mg, 수율: 66%)를 획득하였다.
4. 화합물 5의 합성
28℃에서 화합물 4(250 mg), TosCl(406 mg), DMAP(261 mg) 및 트리에틸아민(0. 5mL)을 순차적으로 디클로로메탄(8 mL)에 첨가하고, 28℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 반응액을 농축하고 증발 건조시키며, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 정제(석유 에테르:에틸 아세테이트=6:1)하여 화합물 5(370 mg, 수율: 64%)를 획득하였다.
5. 화합물 291, 즉 2-((2-(트랜스-4-시아노-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 화합물 5(296mg), 화합물 6(350 mg) 및 탄산세슘(808 mg)을 DMF(6 mL)에 첨가한 후, 혼합 시스템을 90℃로 가열시키고 18시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 10 mL의 물을 첨가하여 반응물을 퀀칭하고, 40 mL의 에틸 아세테이트로 2회 추출하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔류물은 HPLC(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=5-95%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)를 사용하여 화합물 291(80 mg, 수율 19%)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.14 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.45 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H) , 7.44-7.38 (m, 2H) , 7.06 (s, 1H) , 4.53-4.50 (m, 1H) , 4.06 (s, 3H) , 2.63 (s, 3H), 2.46-2.39 (m, 2H), 2.28-2.20 (m, 2H), 2.02-1.88 (m, 4H) , 1.45 (s, 3H). LCMS: Rt =3.310 min, [M+H]+ = 420.2
실시예 16 화합물 002의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
28℃에서 화합물 2(1.0 g), 화합물 1(0.91 g), EDCI(1.6 g)를 피리딘(15 mL)에 첨가하고, 28℃에서 18시간 동안 교반하며, 반응이 완료된 후 감압하에 농축시키고, 잔류물을 메탄올과 물로 슬러리화하여 화합물 3(1.0 g, 수율: 56%)을 획득하였다.
2. 화합물 002, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-시클로프로필피리딘 1-옥시드의 합성
25℃에서 DMF(10 mL)에 순차적으로 화합물 3(500 mg), 화합물 4(675 mg), 탄산세슘(1.26 g)을 첨가하고, 90℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시키며, 반응이 완료된 후 25℃로 냉각시키고, 물(5 mL)을 첨가하여 반응물을 퀀칭하며, 에틸 아세테이트(15 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(10 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물은 HPLC(CH3CN:H2O=20-45%, UV: 214 nm, 유속 15mL /min)을 사용하여 화합물 002(130 mg, 수율 19 %)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.22 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.40 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.37 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.14-7.01 (m, 2H), 4.46-4.34 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.91-2.81 (m, 1H), 2.30-2.08 (m, 4H), 1.93-1.82 (m, 2H), 1.76-1.69(m, 2H), 1.39 (s, 3H), 1.32-1.23 (m, 2H), 0.89-0.76 (m, 2H). LCMS: Rt = 2.859 min, [M+H]+ = 437.2
실시예 17 화합물 289의 합성
반응식:
1. 화합물 3의 합성
26℃에서 화합물 1(5.0 g), 화합물 2(2.3 g), 탄산세슘(13.4 g) 및 Pd2(dba)3(0.25 g), BINAP(0.51 g)를 순차적으로 톨루엔(100 mL)에 첨가하고, 80℃에서 질소 가스 보호하에 18시간 동안 교반하면서 반응시키며, 반응이 완료된 후 26℃로 온도를 낮추고 물(100 mL)을 첨가하며, 에틸 아세테이트(200 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(100 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 실리카겔 컬럼크로마토그래피(석유 에테르:에틸 아세테이트=10:1)로 정제하여 화합물 3(1.3 g, 수율 30 %)을 획득하였다.
2. 화합물 4의 합성
화합물 3(1.3g)의 에탄올/물(40 mL/10 mL) 용액에 수산화칼륨(4.58 g)을 첨가하고, 90℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 1M의 묽은 염산으로 PH=6으로 조절하고, 에틸 아세테이트(100 mL×3)로 추출하며, 추출액을 물(50 mL), 포화 식염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 감압하에 농축시켜 화합물 4(1.12 g, 수율 77 %)를 획득하였다.
3. 화합물 5의 합성
26℃에서 화합물 4(360 mg)의 디클로로메탄 용액(50 mL)에 화합물m-CPBA(1.86 g)를 첨가하고 26℃에서 3일 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 여과하고 여액에 아황산나트륨의 포화 용액을 첨가하며, 묽은 염산으로 pH<7로 조절하고, 26℃에서 2시간 동안 교반하며, 디클로로메탄(200 mL×3)으로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(100 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 제조 플레이트(디클로로메탄:메탄올=20:1)로 정제하여 화합물 5(60 mg, 수율 15 %)를 획득하였다.
4. 화합물 289, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-시클로프로필아미노피리딘 1-옥시드의 합성
화합물 5(49 mg), 화합물 6(69 mg), HATU (118 mg), DIPEA (66 mg)을 순차적으로 DMF(5 mL)에 첨가하고, 25℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시키며, 감압하에 농축시키고, 잔류물을 HPLC(CH3CN:H2O=30-95%, UV: 214 nm, 유속 15mL /min)로 정제하여 화합물 289(95 mg, 수율 83 %)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.29 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 7.86 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 7.41 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.15(s, 2H), 7.07 (s, 1H), 4.43-4.38 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 2.61 (br s, 1H), 2.25-2.13 (m, 4H), 1.89-1.85 (m, 1H), 1.75-1.64 (m, 4H), 1.39 (s, 3H), 0.93-0.90 (m, 2H), 0.74-0.72 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.308 min, [M+H]+ = 452.2.
5. 화합물 9의 합성
0℃에서 화합물 10(34 g)의 에탄올 용액(350 mL)에 NaN3(13.2 g)을 첨가하고, 25℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 반응이 완료된 후 바로 다음 단계에 투입하였다.
6. 화합물 7의 합성
25℃에서 화합물 9(0.17 mol)의 에탄올 용액(350 mL)에 아세트산(30.6 g), 화합물 8(22 g)을 첨가하고 25℃에서 10분 동안 교반하며, 80℃에서 16 h 동안 환류 반응시키고, 반응이 완료된 후 반응액을 부분적으로 농축하며, 물(70 mL)을 첨가하여 슬러리화한 다음, 여과하여 고체를 획득하고, 고체에 에탄올(200 mL)을 가하여 가열 환류로 용해하며, 실온으로 냉각시킨 후 n-헵탄(200 mL)을 첨가하여 2시간 동안 슬러리화하고, 2단계로 여과하여 화합물 7(35 g, 수율 67%)을 획득하였다.
7. 화합물 6의 제조
25℃에서 화합물 7(300 mg)의 에틸 아세테이트 용액(50 mL)에 Pd/C(150 mg)를 첨가하고 25℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 여과하고 감압하에 농축하여 화합물 6(260 mg, 수율 96 %)을 획득하였다.
실시예 18 화합물 175의 합성
반응식:
1. 화합물 175, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-에틸시아노시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린 1-옥시드의 합성
25℃에서 탄산세슘(1.4 g)을 화합물 1(520 mg) 및 화합물 2(806 mg)의 10 mL의 DMF 용액에 첨가하고, 반응액을 90℃에서 16시간 동안 반응시켰다. 반응액을 50 mL의 물에 붓고, 에틸 아세테이트로 추출(30 mL×3)하며, 유기상을 감압하에 농축하고, 잔여물을 HPLC 컬럼(CH3CN:H2O(0.1% NH4HCO3)=20-40%, UV: 214 nm, 유속: 15 ml/min)으로 정제하여 화합물 175(64 mg, 수율 8%)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ 14.16 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.32-8.29 (m, 1H), 7.78-7.76 (m, 1H),7.58 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 5.20 (s, 1H), 4.49-4.45 (m, 1H), 3.95 (s, 3H), 2.82 (s, 2H), 2.53 (s, 3H), 2.14-2.01 (m, 4H), 1.84-1.80 (m, 2H), 1.71-1.64 (m, 2H). LCMS: Rt = 9.367 min, [M+H]+ = 436.2
실시예 19 화합물 176의 합성
반응식:
1. 화합물 176, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-에틸시아노시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-시클로프로필피리딘 1-옥시드의 합성
25℃에서 DMF(10 mL)에 순차적으로 화합물 8(420 mg), 화합물 9(601 mg), 탄산세슘(1.06 g)을 첨가하고, 90℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 반응이 완료된 후 25℃로 냉각시키고, 물(5 mL)을 첨가하여 반응물을 퀀칭하며, 에틸 아세테이트(10 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(10 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 HPLC(CH3CN:H2O=25-55%, UV: 214 nm, 유속 15mL /min)로 정제한 다음 제조 플레이트(디클로로메탄:메탄올=20:1)로 정제하여 화합물 176(25 mg, 수율 4 %)을 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.25 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.39 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.38 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.09-7.03 (m, 2H), 4.53-4.43 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.90-2.81 (m, 1H), 2.76 (s, 2H), 2.33-2.17 (m, 4H), 2.13-2.03 (m, 2H), 1.99-1.93(m, 1H), 1.89-1.73 (m, 2H), 1.30-1.26 (m, 2H), 0.88-0.80 (m, 2H). LCMS: Rt = 3.553 min, [M+H]+ = 462.2
실시예 20 화합물 042의 합성
반응식:
1. 화합물 2의 합성
25℃에서 화합물 1(5.0 g)의 디클로로메탄 용액(50 mL)에 화합물 m-CPBA(13.3 g)를 첨가하고 25℃에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 여과 후, 여액에 아황산나트륨(8.2 g)의 포화 수용액을 첨가하고, 25℃에서 2시간 동안 교반하며, 디클로로메탄(50 mL×3)으로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(50 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 에틸 아세테이트로 슬러리화하고 정제하여 화합물 2(600 mg, 수율 11 %)를 획득하였다.
2. 화합물 042, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-메톡시피리딘 1-옥시드의 합성
25℃에서 DMF(5 mL)에 화합물 2(92 mg), 화합물 4(150 mg), HATU( 311 mg), 트리에틸아민(165 mg)을 첨가하고 25℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 반응이 완료된 후 물(5 mL)을 첨가하여 반응물을 퀀칭한 다음, 에틸 아세테이트(5 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(10 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압하에 농축시키며, 잔류물은 HPLC(CH3CN:H2O=10-40%, UV: 214 nm, 유속 15mL /min)을 사용하여 화합물 042(96 mg, 수율 41 %)를 획득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.15 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.22 (dd, J1 = 2.0 Hz, J2 = 8.0 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.49 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11-7.02 (m, 2H), 4.44-4.34 (m, 1H), 4.16 (s, 3H), 4.03 (s, 3H), 2.29-2.08 (m, 4H), 1.91-1.82 (m, 2H), 1.73-1.69 (m, 2H), 1.39 (s, 3H). LCMS: Rt = 2.713 min, [M+H]+ = 427.2
실시예 21 화합물 B, 즉 2-((2-(트랜스-4-히드록시-시스-4-메틸시클로헥실)-6-메톡시-2H-인다졸-5-일)카바모일)-6-피콜린의 합성
25℃에서 DMF(5 mL)에 순차적으로 화합물 1(150 mg), 화합물 2(75 mg), HATU(249 mg), DIPEA(141 mg)를 첨가하고, 25℃에서 16시간 동안 교반하면서 반응시키며, 물(50 mL)을 첨가한 다음, 에틸 아세테이트(10 mL×3)로 추출하고, 추출액을 포화 식염수(10 mL)로 세척하며, 무수 황산나트륨으로 건조시킨 다음, 여과하고 감압하에 농축하며, 잔류물을 HPLC(CH3CN:H2O=30-95%, UV: 214 nm, 유속 15mL /min)로 정제하여 170 mg의 백색 고체를 획득하고, 수율은 79%이다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.82 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.10 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.87 (s, 1H), 7.78 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 4.43-4.37 (m, 1H), 4.03(s, 3H), 2.66 (s, 3H), 2.27-2.13 (m, 4H), 1.89 (br s, 1H), 1.76-1.68 (m, 4H), 1.40 (s, 3H). LCMS: Rt = 3.604 min, [M+H]+ = 395.2.
생물학적 평가
하기 시험예는 본 발명을 추가로 설명하기 위해 사용되지만, 이러한 시험예는 본 발명의 범위의 한정을 의미하는 것이 아니다.
생물학적 시험예에서 화합물 A의 구조:
생물학적 시험예에서 화합물 B는 실시예 21에서 합성한 구조이다.
B
시험예1. 인간 IRAK4 키나아제 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 작용 측정
주요 시험 재료
ATP(Sigma, 제품 번호: A7699-1G)
DMSO(Sigma, 제품 번호D2650)
EDTA(Sigma, 제품 번호: E5134)
HEPES(Sigma, 제품 번호: V900477-500G)
DTT(Sigma, 제품 번호: D0632-25g)
Brij-35(Sigma, 제품 번호: B4184)
96웰 플레이트(Corning, 제품 번호: 3365)
384웰 플레이트(Corning, 제품 번호: 3573)
실험 단계
ATP의 Km 농도에서 IRAK4에 대한 화합물의 억제 활성은 아래에서 설명되는 IRAK4 MSA(Mobility-Shift Assay, 미세유체 칩 기술의 이동성 검출 기술)로 측정하였다.
N-말단 GST(글루타티온 S-전달효소) 및 인간 IRAK4의 재조합 융합 단백질을 효소(GST-IRAK4, 키나아제 IRAK4(Carna, 제품 번호: 09-145))로 사용하고, 최종 농도는 1 nM이며; ATP(Sigma, 제품 번호: A7699-1G)의 최종 농도는 37 μM이고; 카나아제 반응에 사용되는 기질은 5-FAM(5-카르복시플루오레세인) 표지 폴리펩티드(5-FAM-IPTSPITTTYFFFKKK-COOH)이며, 기질 펩티드 FAM-P8(GL Biochem, 제품 번호: 112396)의 최종 농도는 5 μM이다.
상기 시험에서, 100% DMSO로 500 μM의 화합물 용액을 제조하고, 100% DMSO로 10개의 농도 구배를 4배 희석한 다음, 화합물 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35)로 10배 더 희석하여, 10% DMSO의 화합물 중간 희석액을 제조하며, 화합물의 최종 농도는 10 μM ~ 0.04 nM 범위 내에 있고, 5 μl를 검정 384웰 플레이트에 옮겼다.
키나아제 IRAK4를 키나아제 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 2 mM DTT)로 2.5nM의 IRAK4 용액으로 희석하고, 10 μl를 384웰 플레이트에 옮기며, 화합물과 함께 10 ~ 15분 동안 공동 배양시켰다.
기질과 ATP를 각각 반응 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 10mM MgCl2)로 12.5 μM 및 92.5 μM으로 희석하였다. 10 μl를 384웰 플레이트에 옮겨 반응을 시작하고, 28℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 25 μl의 50mM EDTA를 384웰 플레이트에 옮겨 반응을 중지하였다.
Caliper EZ Reader(PerkinElmer)를 사용하여 기질 인산화 전환율을 읽고, IRAK4에 대한 화합물의 억제율을 계산하며, XL-fit 소프트웨어를 사용하여 IC50을 계산하였다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 IRAK4 키나아제 활성에 대한 억제 작용이 우수하고, IC50 값은 100 nM보다 작으며, 바람직하게 30 nM보다 작은 것으로 나타났다. 구체적으로, 일부 예시적인 화합물의 활성 값은 하기와 같다.
인간 IRAK4 키나아제 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 IC50 값은 하기 표 1과 같다.
인간 IRAK4 키나아제 활성에 대한 IC50
화합물 ID IC 50 (nM)
화합물 B 30.0
001 6.0
002 3.7
010 11.0
013 7.6
014 2.5
015 5.4
016 8.1
019 8.1
025 13.0
163 23.0
175 7.1
176 4.3
187 9.2
218 8.3
220 14.0
284 28.0
285 5.9
286 14.0
287 13.0
288 13.0
289 1.7
291 14.0
292 14
시험예 2. 인간 IRAK1 키나아제 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 작용 측정
본 시험은 인간 IRAK1 키나아제 활성에 대한 화합물의 억제 작용을 평가하기 위해 사용되고, 주요 시험 재료는 시험예 1과 같다.
ATP의 Km 농도에서 IRAK1에 대한 화합물의 억제 활성은 아래에서 설명되는 IRAK1 MSA(Mobility-Shift Assay, 미세유체 칩 기술의 이동성 검출 기술)로 측정하였다. N-말단 GST(글루타티온 S-전달효소) 및 인간 IRAK1의 재조합 융합 단백질을 효소(GST-IRAK1, 키나아제 IRAK1, Carna)로 사용하고, 최종 농도는 3 nM이며; ATP(Sigma)의 최종 농도는 97 μM이고; 카나아제 반응에 사용되는 기질은 5-FAM(5-카르복시플루오레세인) 표지 폴리펩티드(5-FAM-IPTSPITTTYFFFKKK-COOH)이며, 기질 펩티드 FAM-P8(GL Biochem)의 최종 농도는 5 μM이다.
상기 시험에서, 100% DMSO로 500 μM의 화합물 용액을 제조하고, 100% DMSO로 10개의 농도 구배를 4배 희석한 다음, 화합물 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35)로 10배 더 희석하여, 10% DMSO의 화합물 중간 희석액을 제조하며, 화합물의 최종 농도는 10 μM ~ 0.04 nM 범위 내에 있고, 5 μl를 검정 384웰 플레이트에 옮겼다.
키나아제 IRAK1을 키나아제 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 2 mM DTT)로 7.5nM의 IRAK1 용액으로 희석하고, 10 μl를 384웰 플레이트에 옮기며, 화합물과 함께 10 ~ 15분 동안 공동 배양시켰다.
기질과 ATP를 각각 반응 버퍼(50 mM HEPES, pH 7.5, 0.00015% Brij-35, 10mM MgCl2)로 12.5 μM 및 242.5 μM으로 희석하였다. 10 μl를 384웰 플레이트에 옮겨 반응을 시작하고, 28℃에서 1시간 동안 반응시켰다. 25 μl의 50mM EDTA를 384웰 플레이트에 옮겨 반응을 중지하였다.
Caliper EZ Reader(PerkinElmer)를 사용하여 기질 인산화 전환율을 읽고, IRAK1에 대한 화합물의 억제율을 계산하며, XL-fit 소프트웨어를 사용하여 IC50을 계산하였다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 IRAK4에 대한 선택적 억제 활성이 현저하고, IRAK1과 IRAK4의 IC50(nM) 비율은 500보다 크며, 바람직하게 200보다 큰 것으로 나타났다. 구체적으로, 일부 예시적인 화합물의 활성 값은 하기와 같다. 인간 IRAK1 키나아제 활성에 대한 본 발명의 화합물의 억제 IC50 값은 하기 표 2와 같다.
인간 IRAK1 키나아제 활성에 대한 IC50
화합물 ID IRAK1 IC 50 (nM) IRAK1 IC 50 (nM)/IRAK4 IC 50 (nM)
163 2993 130.1
001 4039 673.2
표 2의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 인간 IRAK1 활성과 비교하여 본 발명의 화합물은 인간 IRAK4에 대해 현저한 선택성을 갖는다.
시험예3. 본 발명의 화합물의 측정을 위한 hERG 시험
본 시험은 화합물의 심장 안전성을 평가하기 위해 사용되고, hERG 칼륨 채널을 안정적으로 발현하는 HEK-293 세포주를 사용하여 실험적 검출을 진행하였다.
기기 정보:
증폭기: HEKA(Germany)에서 구입, 모델 EPC10
미세조작기: Sutter Instruments(USA)에서 구입, 모델 MP225
마이크로피펫 풀러: Sutter Instruments(USA)에서 구입, 모델 P97
현미경: Nikon에서 구입, 모델 TE300
모세 유리관: Sutter Instruments (USA)에서 구입, 모델 BF150-86-10
데이터 수집 및 분석 소프트웨어: PatchMaster, Igor Pro 6.0 및 GraphPad Prism 5.0
실험 방법
DMSO를 사용하여 시험 화합물 저장 용액을 순차적으로 0.3 mM, 1 mM 및 3 mM의 희석액으로 희석하였다. 세포외액(140 mM NaCl, 3.5 mM KCl, 1 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM Glucose, 10 mM HEPES, 1.25 mM NaH2PO4, NaOH pH=7.4 조절)을 사용하여 시험할 화합물 저장 용액을 희석하여, 농도가 0.3 μΜ, 1 μΜ, 3 μM, 10 μΜ, 30 μΜ인 시험할 화합물 작업 용액을 획득하고, 시험할 화합물의 작업 용액 전부를 20분 동안 초음파 처리하였다.
패치 클램프 검출: 도립 현미경에서 유리 전극 미세 조작기(micromanipulator)를 조작하여 기록 전극을 세포와 접촉시킨 다음 부압을 적용하여 세포가 GΩ 씰을 형성하도록 촉진하였다. GΩ 씰을 형성한 후 빠른 전기 용량 보상을 진행한 다음 계속해서 부압을 주어 세포막을 빨아들여 전체 세포 기록 모드를 형성하였다. 전체 세포 기록 모드에서 느린 전기 용량 보상을 진행하고 멤브레인 전기 용량 및 직렬 저항값을 기록하였다.
세포 hERG 칼륨 전류의 전압 자극 방식은 다음과 같다. 세포막 클램프 전압은 -80 mV이며, -80mV에서 +30mV로 탈분극된 후 2.5초 동안 유지하고, -50mV에서 4초 동안 빠르게 유지하여 hERG 채널의 후미 전류를 자극하였다. 10초마다 반복적으로 데이터를 수집하였다. -50 mV를 누설 전류로 검출하였다.
세포 시딩의 커버글라스를 도립 현미경의 기록 챔버에 놓고, 음성 대조군과 시험 화합물을 중력 관류 방식을 사용하여 저농도에서 고농도로 순차적으로 기록 챔버를 통과시켜 세포에 빠르게 작용하도록 하였다. 기록 과정에서 진공 펌프를 사용하여 외액의 지속적인 순환을 진행하였다. 각각의 세포 음성 대조군에서 검출된 전류를 세포 자체의 대조군으로 사용하였다. 각각의 약물 농도는 5분 동안 또는 전류가 안정될 때까지 작용하였다. 모든 실험은 실온에서 진행되었다.
데이터 분석:
먼저 각 약물 농도의 작용 후 전류를 ()를 표준화한 다음, 대응되는 억제율을 계산하였다. 각 농도에 대해 평균(Mean), 표준차(SD), 표준오차(SE) 및 반복 횟수(n)를 포함하는 기본 통계를 계산하였다. 하기 방정식을 사용하여 사용량 의존 곡선을 피팅하고, 시험 화합물의 반억제 농도(IC50)를 계산하였다.
여기서, C는 시험 화합물의 농도를 나타내고, IC50은 반억제 농도를 나타내며, h는 힐 계수를 나타낸다. 곡선 피팅 및 IC50 계산은 GraphPad Prism 5.0 소프트웨어를 사용하여 완료되었다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 인간 hERG에 대한 억제율이 매우 낮고, 비교 화합물 A보다 훨씬 더 우수할 수 있으며, hERG에 대한 억제율(30 μM)은 50%보다 작고, 바람직하게 30%보다 작다. 구체적으로, 일부 예시적인 화합물의 억제율 값은 하기와 같다.
30 M 농도에서 hERG에 대한 억제
화합물 ID hERG 억제(30 M)
A 27.10% ± 1.74%
163 8.73% ± 1.37%
001 5.09% ± 2.43%
표 3의 데이터로부터 볼 수 있다시피, 본 발명의 화합물은 인간 hERG에 대한 억제율이 낮고 화합물 A에 대해 소정의 우세가 있다.
시험예4. 본 발명의 화합물의 TDI(시간 의존적 억제) 데이터 측정
본 실험 연구의 목적은 인간 P450 대사효소 CYP3A4에 대한 화합물의 시간 의존적 억제 작용을 연구하는 것이다. 본 실험은 미국 Corning사에서 유래된 인간 혼합 간 마이크로솜을 사용하였다.
시험 화합물은 인간 간 마이크로솜 및 프로브 기질 미다졸람(CYP3A4)을 공동 배양한 것이고, 시험 화합물은 30 μM으로 설정된다. 반응은 보조효소 NADPH의 첨가에 의해 개시된다. 배양 시스템에 아세토니트릴을 첨가하여 반응을 중지하고, 아세토니트릴에 내부 표준 물질을 미리 용해시켰다. 단백질이 침전된 후 원심분리로 상층액을 수집하였다. LC-MS/MS법으로 상층액 중의 특징적 대사물인 1-히드록시-미다졸람(CYP3A4)을 분석하였다. 마지막으로 획득된 데이터에 따라 이러한 특징적 대사물에 대한 시험 화합물의 영향을 연구하였다. 선택적 억제제(CYP3A4에 대한 베라파밀)는 양성 대조군으로 사용한다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 인간 CYP3A4에 대해 뚜렷한 시간 의존적 억제가 없고, 구체적으로 일부 예시적인 화합물의 TDI 값은 하기와 같다.
30 μM 농도에서 인간 CYP3A4에 대한 시간 의존적 억제(TDI)
화합물 ID TDI(3A4, 30 μM)
001 -3.68%
014 +3.85%
시험예5. 본 발명의 화합물의 혈장 단백질 결합률(PPB) 데이터 측정
본 시험의 목적은 시험 화합물의 혈장 단백질 결합률(PPB) 데이터를 측정하는 것이다.
PPB 시험에서, 최종 투여 매트릭스의 시험 화합물 또는 참조 화합물의 농도는 1 μM DMSO 함량 0.2%이다.
0시간 샘플 수집: 25 μL의 화합물 함유 매트릭스를 블랭크 96웰 수집 플레이트에 첨가하고, -20℃에서 보관하였다.
평형 투석 장치를 준비하였다. 100 μL의 버퍼를 평형 투석 플레이트의 수신측에 첨가하였다. 그 다음 화합물 또는 참조 화합물을 포함하는 100 μL의 투여 매트릭스를 평형 투석 플레이트의 투여측에 첨가하였다. 준비된 평형 투석 플레이트를 37℃의 쉐이커에 놓고 60 rpm으로 5시간 동안 쉐이킹하였다.
배양이 완료될 때(5시간), 샘플을 준비한다.
수신측 샘플 제조: 수신측의 샘플 25 μL를 취하여 96웰 샘플 수집 플레이트에 놓고, 25 μL의 해당 매트릭스(블랭크 혈장)를 첨가하여 혼합하였다. 200 μL의 내부 표준 물질 함유 ACN을 첨가하고, 600 rpm으로 10분 동안 진탕한 후, 원심분리기에서 5594 g을 15분 동안 원심분리하였다.
투여측 샘플 제조: 시험 화합물 및 참조 화합물의 투여측 샘플: 25 μL의 투여측 샘플을 취하고, 25 μL의 블랭크 버퍼를 첨가하여 혼합하였다. 200 μL의 내부 표준 물질 함유 ACN을 첨가하고, 600 rpm으로 10분 동안 진탕한 후, 원심분리기에서 5594 g을 15분 동안 원심분리하였다.
0시간 샘플 제조: 시험 화합물 및 참조 화합물의 0시간 샘플: 37℃에서 다시 용해하고, 동일한 부피(25 μL)의 상응한 매트릭스(블랭크 버퍼)와 혼합하였다. 200 μL의 내부 표준 물질 함유 ACN을 첨가하고, 600 rpm으로 10분 동안 진탕한 후, 원심분리기에서 5594 g을 15분 동안 원심분리하였다.
모든 샘플을 원심분리한 후, 50 μL의 상층액을 50 μL의 초순수에 첨가하여 혼합하고, 샘플을 LC/MS로 보내 분석하였다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 인간, 래트, 마우스의 혈장 단백질에 대한 결합률이 적당하고, 종간의 차이가 매우 작으며, 비교 화합물 A보다 현저히 작을 수도 있고, 구체적으로 일부 예시적인 화합물의 PPB 데이터는 하기와 같다.
혈장 단백질 결합률(PPB) 데이터
혈장 단백질 결합률(Bound%)

종

화합물 ID 		인간 마우스 래트
A 99.02 85.18 86.99
013 80.90 76.20 81.70
001 81.00 79.90 84.70
163 81.66 83.78 80.59
016 86.90 87.70 90.10
시험예6. LPS 유도 Balb/c 암컷 마우스의 TNF-α 방출에 대한 본 발명의 화합물의 억제 작용
실험 단계
암컷 Balb/c마우스를 랜덤으로 4마리씩 여러 그룹으로 나누고, 그룹은 정상 대조+용매군, 모델+용매군, 모델+양성 약물군 및 다른 모델+시험 약물군을 포함한다. 정상 대조군 동물은 복강에 생리식염수(10 ml/kg)를 주사하고, 모델 동물은 LPS 자극(Sigma 제품 번호 L2630, 복강 주사, 10 mL/kg, 0.2 mg/kg)을 주사하였다. 실험에서 시험 약물에 DMSO, Solutol, 10 mM PBS를 순차적으로 첨가하여 필요한 투여 농도의 용액 또는 유탁액을 제조하고, 용매의 각 성분인 DMSO, Solutol, 10 mM PBS의 최종 부피 비율은 5:15:80이다. 각 실험군은 설정된 사용량에 따라 LPS( 또는 saline) 자극 16시간 전에 상응한 위내 투여(10ml/kg)하고, 각 군의 동물은 자극 1.5시간 후 CO2로 안락사시켜 심장 혈액을 채취하였다. 획득된 전혈은 항응고되지 않으므로, wet ice에서 1.5시간 동안 정치한 후 2000 g을 4℃에서 10 min 동안 원심분리하여 혈청을 분리하였다. 혈청은 TNFα 측정을 위해 -80°C에서 동결 저장하였다. TNFα의 정량화는 TNFα ELISA 키트를 통해 제조업체의 사용 설명서에 따라 측정을 완료하였다. 흡광도 A450의 판독값은 마이크로플레이트 판독기 SpectraMax i3x(Molecular Device)로 검출하여 화합물 쌍의 억제율을 계산하고, GraphPad Prism 7.0 소프트웨어로 IC50을 계산하였다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 LPS 유도 Balb/c 암컷 마우스의 TNF-α 방출에 대해 현저한 억제 작용을 가지며, 억제율은 50%보다 크고, 바람직하게 70%보다 크며, 구체적으로 일부 예시적인 화합물의 억제율은 하기와 같다.
LPS 유도 Balb/c 암컷 마우스의 TNF-α 방출에 대한 억제율
화합물 ID TNF-α의 억제율%
013 76.29
001 74.00
163 71.56
016 78.71
시험예7. 인간 간 마이크로솜의 5가지 주요 CYP450 효소 서브타입에 대한 본 발명의 화합물의 억제 측정
본 실험 연구의 목적은 5가지 주요 인간 P450 대사 효소, 즉 CYP1A2, 2C9, 2C19, 2D6 및 3A4-M에 대한 시험 화합물의 억제 작용을 연구하는 것이다. 본 실험에 사용된 인간 혼합 간 마이크로솜은 미국 Corning사에서 유래된 것이다. 시험 화합물(화합물 14)은 인간 간 마이크로솜 및 5가지 프로브 기질(CYP1A2에 대한 페나세틴, CYP2C9에 대한 디클로페낙, CYP2C19에 대한 메페니토인, CYP2D6에 대한 덱스트로메토르판, CYP3A4-M에 대한 미다졸람, 혼합 기질임)과 공동 배양하고(하기 표 참조), 시험 화합물은 7개의 농도 포인트를 설정하였다. 보조효소 NADPH의 첨가에 의해 반응을 개시하였다. 배양 시스템에 내부 표준 물질 함유 얼음 아세토니트릴을 첨가하여 반응을 중지하였다. 단백질이 침전된 후 원심분리로 상층액을 수집하였다. LC-MS/MS법으로 상층액 중의 특징적 대사물(CYP1A2에 대한 아세트아미노펜, CYP2C9에 대한 4-히드록시디클로페낙, CYP2C19에 대한 4-히드록시메페니토인, CYP2D6에 대한 덱스트로판, CYP3A4-M에 대한 1-히드록시-미다졸람)을 분석하였다. 마지막으로 획득된 데이터에 따라 이러한 특징적 대사물에 대한 시험 화합물의 영향을 연구하였다. 선택적 억제제(CYP3A4-M에 대한 케토코나졸)는 양성 대조군으로 사용하였다. 모든 배양은 모두 1부씩 병렬로 수행하였다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 인간의 5가지 CYP 서브타입에 대해 뚜렷한 억제 작용이 없고, 1A2, 2C9, 2C19의 3가지 서브타입에 대한 억제 작용은 비교 화합물 A에 비해 현저히 작으며, 구체적으로 일부 예시적인 화합물의 억제율은 하기와 같다.
인간 간 마이크로솜의 5가지 주요 CYP450 효소 서브타입인 CYP1A2, 2C9, 2C19, 2D6 및 3A4에 대한 억제(IC50, nM)
서브타입
화합물 ID 		1A2 2C9 2C19 2D6 3A4
A 2.91 19.06 23.48 >30 >30
001 >30 >30 >30 >30 >30
163 >30 >30 >30 >30 >30
시험예8. 래트에 대한 본 발명의 화합물의 PK 분석 시험
본 발명의 바람직한 실시예의 마우스 약동학적 시험은 수컷 SPF 레벨의 SD 래트(Shanghai Xipuer-Bikai Experimental Animal Co., Ltd.)를 사용하여 진행하였다.
투여 방식: 단일 위내 경구 투여 또는 단일 정맥 주사
샘플링 포인트: 투여 후 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24시간
샘플 처리: 정맥에서 0.2 mL의 혈액을 채취하고, 혈액 샘플을 수집한 후 얼음 위에 놓고, 혈장을 원심분리(원심분리 조건: 8000 rpm, 6분, 4℃)하였다. 수집된 혈장을 분석하기 전에 -80℃에서 저장하였다.
내부 표준 작업 용액: 농도가 645,000 ng/mL인 소정량의 톨부타미드 내부 표준 저장 용액을 소정 부피의 메스플라스크에 첨가하고, 메탄올로 표시선까지 정적하여 균일하게 혼합함으로써, 농도가 645,000 ng/mL인 내부 표준 작업 용액을 제조하였다.
샘플 전처리: 50 μL의 혈장 샘플을 1.5 mL의 원심분리 튜브에 첨가하고, 250 μL의 내부 표준 용액(블랭크군에 내부 표준 물질을 첨가하지 않고 동일한 부피의 메탄올을 첨가함)을 첨가하며, 와류로 균일하게 혼합하고, 14000 rpm으로 5분 동안 원심분리하며, 200 μL의 상층액을 96웰 샘플 주입 플레이트에 첨가하고, LC-MS/MS로 샘플 주입을 분석하였다.
액상 조건:
컬럼크로마토그래피: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 μm(50 mm×2.10 mm)
이동상: A 용액은 0.1％ 포름산 수용액이고, B 용액은 0.1% 포름산아세토니트릴 용액이다
유속: 0.5 mL/min
데이터 처리 시스템은 Analyst 소프트웨어(American Applied Biosystems, 소프트웨어 버전 번호 1.5.5)이다.
시험 결과, 본 발명의 실시예의 화합물은 마우스에서 모두 우수한 약동학적 특성을 나타내고, 동물의 체내에서 우수한 노출량 및 체류 시간을 나타내며, 적절한 반감기 및 우수한 약물 흡수성을 갖고, 구체적으로 일부 예시적인 화합물의 약동학적 데이터는 하기와 같다.
단일 위내 경구로 ICR 마우스에 투여된 상이한 화합물의 약동학적 연구 데이터
화합물 번호 경구 투여 약동학적 실험
사용량 조성 피크 도달 시간 최고 농도 곡선 면적 곡선 면적 반감기 평균 체류 시간
Dose(mpk) Formulation tmax
(h)		 Cmax
(ng/mL)		 AUC0-t
(ng/mL×h)		 AUC0-∞
(ng/mL×h)		 t1/2
(h)		 MRT
(h)
163 40 15%solutol HS15+85%PBS 4 25875 206683 206702 3.62 6.75
001 40 15%solutol HS15+85%PBS 4 24153 293784 375482 11.47 15.31
013 40 15%solutol HS15+85%PBS 1 18924 160198 182133 7.23 10.41
이상, 본 발명의 실시형태에 대해 설명하였다. 그러나, 본 발명은 상기 실시형태에 한정되지 않는다. 본 발명의 사상과 원리 내에서 이루어진 모든 수정, 균등 교체, 개선 등은 본 발명의 보호범위에 포함되어야 한다.

Claims (10)

  1. 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염으로서,

    식 I
    상기 식 I에서,
    고리 A는 적어도 하나의 N 함유 5-14원 헤테로아릴(heteroaryl) 또는 5-12원 헤테로고리기(heterocyclic group)를 포함하고;
    각각의 R1, R2, R3은 각각 독립적으로 수소, 할로겐(halogen), CN, OH로부터 선택되거나 또는 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환된, (C1-C12) 지방족 탄화수소기(aliphatic hydrocarbon group), 1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기, C3-12 시클로알킬(cycloalkyl), 3-12원 헤테로고리기(heterocyclic group), C6-20 아릴(aryl) 또는 5-14원 헤테로아릴(heteroaryl), -NRaRb와 같은 그룹으로부터 선택되며;
    W는 O, S, NH, 단일 결합으로부터 선택되고;
    각각의 Ra, Rb는 독립적으로 H, (C1-C12) 지방족 탄화수소기로부터 선택되며;
    각각의 R은 독립적으로 할로겐, CN, OH, SH, NRaRb로부터 선택되거나 또는 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R'에 의해 치환된, (C1-C12) 지방족 탄화수소기, 1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기, C3-12 시클로알킬, 3-12원 헤테로고리기, C6-20 아릴 또는 5-14원 헤테로아릴과 같은 그룹으로부터 선택되고;
    각각의 R'는 독립적으로 할로겐, CN, OH, SH, NRaRb로부터 선택되며;
    n은 1, 2, 3으로부터 선택되고; m은 1, 2, 3, 4, 5, 6으로부터 선택되는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 “1개, 2개 또는 그 이상의 헤테로 원자를 선택적으로 포함하는 (C1-C12) 지방족 탄화수소기”는 (C1-C12) 지방족 히드로카빌옥시, (C1-C12) 지방족 히드로카빌메르캅토, (C1-C6) 지방족 히드로카빌옥시 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, (C1-C6) 지방족 히드로카빌메르캅토 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기, N,N-디-(C1-C3) 지방족 히드로카빌아미노 (C1-C6) 지방족 탄화수소기로부터 선택될 수 있고;
    상기 “N 함유 5-14원 헤테로아릴 또는 5-12원 헤테로고리기”는 피리딘(pyridine), 피롤(pyrrole), 피페리딘(piperidine), 테트라히드로피롤(tetrahydropyrrole)로부터 선택되며;
    상기 (C1-C12) 지방족 탄화수소기는 (C1-C12) 알킬(alkyl), (C2-C12) 알케닐(alkenyl), (C2-C12) 알키닐(alkynyl)로부터 선택될 수 있고, 바람직하게 상기 (C1-C12) 지방족 탄화수소기는 (C1-C6) 알킬, (C2-C6) 알케닐, (C2-C6) 알키닐로부터 선택될 수 있으며;
    상기 “할로겐”은 F, Cl, Br, I로부터 선택되고;
    상기 “C3-12 시클로알킬”은 시클로프로필(cyclopropyl), 시클로부틸(cyclobutyl), 시클로펜틸(cyclopentyl), 시클로헥실(cyclohexyl)로부터 선택될 수 있는 것을 특징으로 하는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    상기 R1, R2, R3은 각각 독립적으로 선택적으로 1개, 2개 또는 그 이상의 R에 의해 치환된, 메틸(methyl), 에틸(ethyl), n-프로필(n-propyl), 이소프로필(isopropyl), n-부틸(n-butyl), 이소부틸(isobutyl), tert-부틸(tert-butyl), n-펜틸(n-pentyl), 이소펜틸(isopentyl), 네오펜틸(neopentyl), n-헥실(n-hexyl), 비닐(vinyl), 1-프로페닐(1-propenyl), 2-프로페닐, 1-메틸비닐(1-methylvinyl), 1-부테닐(1-butenyl), 1-에틸비닐(1-ethylvinyl), 1-메틸-2-프로페닐, 2-부테닐, 3-부테닐, 2-메틸-1-프로페닐, 2-메틸-2-프로페닐, 1-펜테닐(1-pentenyl), 1-헥세닐(1-hexenyl), 에티닐(ethynyl), 1-프로피닐(1-propynyl), 2-프로피닐, 1-부티닐(1-butynyl), 1-메틸-2-프로피닐, 3-부티닐, 1-펜티닐(1-pentynyl), 1-헥시닐(1-hexynyl), 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 메톡시(methoxy), 에톡시(ethoxy), 프로폭시(propoxy), 부톡시(butoxy), 펜톡시(pentoxy), 메톡시메틸(methoxymethyl), 에톡시메틸(ethoxymethyl), 프로폭시메틸(propoxymethyl), 메톡시에틸(methoxyethyl), 에톡시에틸(ethoxyethyl), 프로폭시에틸(propoxyethyl), 메톡시프로필(methoxypropyl), 에톡시프로필(ethoxypropyl), 프로폭시프로필(propoxypropyl), N-메틸아미노메틸(N-methylaminomethyl), N-메틸아미노에틸(N-methylaminoethyl), N-에틸아미노에틸(N-ethylaminoethyl), N,N-디메틸아미노메틸(N,N-dimethylaminomethyl), N,N-디메틸아미노에틸(N,N-dimethylaminoethyl), N,N-디에틸아미노에틸(N,N-diethylaminoethyl), 아미노(amino), N,N-디메틸아미노(N,N-dimethylamino), N,N-디에틸아미노(N,N-diethylamino), 테트라히드로피롤릴(tetrahydropyrrolyl), 피페리디닐(piperidinyl), 피리딜(pyridyl), 피라지닐(pyrazinyl), 피롤릴(pyrrolyl), 이미다졸릴(imidazolyl), 피라졸릴(pyrazolyl), 옥사졸릴(oxazolyl), 이속사졸릴(isoxazolyl),
    , , , , , , , , , , , , , , , 과 같은 그룹으로부터 선택될 수 있고;
    상기 은 상기 그룹의 연결 사이트를 나타내는 것을 특징으로 하는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염에서, 식 I로 표시되는 화합물은 하기 식 Ia, 식 Ib, 식 Ic, 식 Id, 식 Ie와 같은 구조로부터 선택될 수 있고;

    식 Ia 식 Ib

    식 Ic 식 Id

    식 Ie
    상기 식 Ia, 식 Ib, 식 Ic, 식 Id, 식 Ie에서, R1, R2, R3, m, n, W는 식 I에서 정의된 바와 같은 것을 특징으로 하는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식 I로 표시되는 화합물은 하기와 같은 구조로부터 선택될 수 있는 것을 특징으로 하는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염.

















































































































































  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법으로서,
    상기 제조 방법은,

    (a1) M-1과 M-2를 사용하여 M-3을 생성하는 단계; 및
    (a2) M-3을 RxL1과 반응시키는 단계를 포함하되,
    상기 단계 (a1)의 반응은 EDCl.HCl 및 피리딘이 존재하는 조건하에 진행될 수 있고;
    상기 단계 (a2)에서, Rx는 R1 또는 히드록시(hydroxy)를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택되고; Rx가 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택된 경우, 반응은 산성 및 환원 조건하에서 식 I로 표시되는 생성물을 획득하는 것을 추가로 포함하며, 상기 산성 조건은 HCl로부터 선택될 수 있고, 환원 조건은 수소화붕소나트륨(sodium borohydride)으로부터 선택될 수 있으며;
    상기 단계에서, R1, R2, R3, m, W는 식 I에서 정의된 바와 같고; 상기 L1은 이탈기로 할로겐 또는 OTs로부터 선택될 수 있는 것을 특징으로 하는 식 I 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법으로서,
    상기 제조 방법은,

    (b1) N-1을 RxL1과 반응시키는 단계;
    (b2) Pd/C로부터 선택될 수 있는 환원제의 조건하에 이전 단계의 반응에서 획득된 N-2를 환원하여 N-3을 획득하는 단계; 및
    (b3) N-3을 M-2와 반응시켜 식 I를 획득하는 단계를 포함하되,
    상기 단계 (b1)에서, Rx는 R1 또는 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택되고; Rx가 히드록시를 갖는 R1 중 히드록시가 에 의해 치환된 그룹으로부터 선택된 경우, 반응은 산성 및 환원 조건하에서 N-2 생성물을 획득하는 것을 추가로 포함하며, 상기 산성 조건은 HCl로부터 선택될 수 있고, 환원 조건은 수소화붕소나트륨으로부터 선택될 수 있으며;
    상기 단계에서, R1, R2, R3, m, W는 식 I에서 정의된 바와 같으며; 상기 L1은 이탈기로 할로겐 또는 OTs로부터 선택될 수 있는 것을 특징으로 하는 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염의 제조 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학적 조성물.
  9. IRAK에 의해 매개되는 질환 또는 병증의 예방 및/또는 치료용 약물의 제조에서 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 식 I로 표시되는 화합물, 이의 입체이성질체, 라세미체, 호변이성질체, 동위원소 마커, 프로드러그 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 제8항에 따른 약학적 조성물의 용도.
  10. 제 9항에 있어서,
    상기 질환 또는 병증은 종양, 통풍, 전신성 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 대사증후군, 죽상동맥경화증, 심근경색, 농혈증, 염증성 장질환, 천식, 류마티스성 관절염 및 알레르기와 같은 질환으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
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