TW202402273A - Wee1抑制劑及其製備和用途 - Google Patents

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Abstract

本發明涉及WEE1抑制劑及其製備和用途，所述WEE1抑制劑結構為式I所示，本發明涉及式I化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，及其在製備用來治療WEE1活性相關的疾病的藥物中的用途。

Description

WEE1抑制劑及其製備和用途
本發明涉及一類具有抑制WEE1激酶活性的化合物，以及其在治療由WEE1介導的疾病中的用途。
WEE1酪氨酸激酶是細胞週期G2期檢查點。細胞週期受到嚴密調控，當細胞的DNA未受到損傷時，G1期、S期和G2期檢查點促進細胞進入分裂期，保證細胞週期順利完成。(Clinical Cancer Research，2011，17(13)：4200-4207) 細胞週期受細胞週期蛋白依賴激酶 (CDKs) 調控，CDKs家族有14個絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。CDK的活性被磷酸化和結合不同週期蛋白所調控。細胞從G2期到進入分裂期的轉換被CDK1 (也被稱為CDC2) 的磷酸化及其相關週期蛋白B正調控。細胞分裂前，CDK1處於非活性狀態，它的第15位員酪氨酸被WEE1磷酸化，然後它的第14位蘇氨酸被髓鞘轉錄因數 (MYT1) 磷酸化。因此，WEE1是細胞週期的負調控因數，通過阻止週期蛋白B和啟動的CDK1複合物進入細胞核，負調控細胞從G2期進入分裂期。WEE1在S期和G2期的表達量和活性都提高，在高度磷酸化的M期降低。當細胞進入G2期，沒有DNA損傷發生時，polo樣蛋白激酶1 (PLK1) 磷酸化WEE1，通過泛素連接酶複合物將WEE1降解。PLK1也磷酸化並且啟動蛋白磷酸酶細胞分裂週期25類似物 (CDC25)，CDC25通過去磷酸化啟動CDK1。活性的CDK1可以和週期蛋白B結合，促進細胞進入分裂期 (Molecular & Cellular Biology，2012，32 (20)：4226)。
當細胞的DNA受到損傷時，G1期、S期和G2期檢查延遲細胞進入分裂期，為細胞進入分裂之前修復損傷的DNA爭取了時間，從而保證了基因組的完整性。G1期檢查點的關鍵調控因數P53在很多惡性腫瘤細胞中是突變形式。(Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2007，104 (10)：3753-3758) P53功能缺陷的腫瘤細胞，在DNA受到損傷時，不能將細胞週期阻滯在G1期，因此更加依賴於G2期檢查點。針對DNA損傷，G2期檢查點通過平行且互相聯繫的兩條路徑抑制CDK1的磷酸化，從而延遲細胞進入分裂期。根據DNA損傷類型，共濟失調性毛細血管擴張症變異 (ATM) 蛋白激酶或者共濟失調性毛細血管擴張相關 (ATR) 蛋白激酶被啟動 (Oncotarget，2016，7 (31)：49902-49916)。
ATM被離子輻射、放射劑和引起雙鏈DNA斷裂的試劑啟動。ATM磷酸化和啟動檢查點激酶2 (CHK2)，CHK2磷酸化細胞分裂週期25C磷酸酶 (CDC25C) 的Ser216。這就導致CDC25C的向核輸出和細胞質分離，從而抑制它的磷酸化活性。抑制CDC25C的活性導致CDK1/CDK2結合週期蛋白B複合物磷酸化被抑制，使CDK1處於失活形式，抑制細胞進入分裂期 (MolecularCancer，2014，13 (1)：72)。
ATR由廣泛的導致單鏈DNA斷裂的基因毒性刺激因素啟動的。ATR是負責磷酸化和啟動CHK1的主要激酶。與CHK2只能被ATM啟動相比，CHK1可以被ATM和ATR啟動。CHK1同時磷酸化WEE1和CDC25C，啟動WEE1激酶活性，抑制CDC25C的磷酸酶活性。WEE1磷酸化CDK1-結合週期蛋白B，導致細胞週期阻滯在G2期，為DNA修復提供時間 (Drug News&Perspectives，2010，23 (7)：425)。
WEE1在很多惡性腫瘤中過表達，比如肝癌、乳腺癌、惡性膠質瘤、黑色素瘤、成人和兒童腦瘤。其中一部分腫瘤細胞G1檢查點異常，如果抑制WEE1活性會導致G2期檢查點故障，此時帶有沒有修復的損傷DNA的細胞會持續進行分裂，最終分裂致死。(Molecular Cancer Therapeutics，2013，12 (12)：2675-2684) 無論通過嘧啶衍生物 (PD0166285) 或者小干擾RNA敲低方式，抑制WEE1的活性都會使卵巢癌、結腸癌、宮頸癌、骨肉瘤、惡性膠質瘤和肺癌細胞對放射和拓撲異構酶抑制產生的DNA損傷更敏感。因此，WEE1抑制劑單藥和聯合用藥都具有廣闊的發展空間 (Cancer Biology&Therapy，2010，9 (7)：523-525)。
專利WO2007126122、WO2008133866、WO2013012681、WO2013126656、WO2014167347、WO2015092431、WO2018011569、WO2018011570、WO2018090939、WO2018133829、WO2018171633等中描述了具有WEE1激酶抑制活性的小分子化合物。目前最領先的化合物是AZD1775，已經進入臨床II期試驗，顯示出良好的癌症治療效果。
本發明的目的是提供了一種如式I所示的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽： 式I 其中， 所述的R 1選自-C 1~6烷基、-C 2~6烯基、-C 2~6炔基、-C 0~2亞烷基-CN、-C 0~2亞烷基- (3~10員環烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員雜環烷基)； R 2選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ； 所述的X選自O、NH或CH 2； 所述的X 1選自CH或N； R 21、R 22、R 29分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員環烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員雜環烷基)； 所述的R 23、R 24與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； 所述的R 25、R 26與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； 所述的R 27、R 28與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； R 3選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)； 所述的R 4選自3~12員雜環烷基；所述的雜環烷基可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 41取代； 所述的R 41選自氫、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)、-C(O)C 1~6烷基、3~10員碳環、3~10員雜環；所述碳環、雜環可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 31取代； 或者，所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環；所述的碳環、雜環烷基可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 31取代； 所述的R 31選自氫、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 1選自 、甲基、乙基、 、 。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，R 21、R 22、R 29分別獨立地選自氫、氘、氰基、甲基、乙基、-OH、三氟甲基、環丙基、-CH 2OH、-NH 2。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 23、R 24與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基； 所述的R 25、R 26與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基； 所述的R 27、R 28與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 2選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 3選自氫、氟、甲基、-CH 2OH、甲氧基。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 4選自含氮6員雜環、7員含氮橋環、8員含氮橋環、9員含氮雜螺環、11員含氮雜螺環。
進一步地：所述的R 4選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
進一步地：所述的R 4選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成6員含氮雜環。
更優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成 、 。
進一步地：所述的R 31選自甲基。
進一步地：所述的R 31選自甲基。
優選的，本發明所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，式I所述的化合物具體為：
編號 化合物結構 編號 化合物結構
WEE1-001 WEE1-002
WEE1-003 WEE1-004
WEE1-005 WEE1-006
WEE1-007 WEE1-008
WEE1-009 WEE1-010
WEE1-011 WEE1-012
WEE1-013 WEE1-014
WEE1-015 WEE1-016
WEE1-017 WEE1-018
WEE1-019 WEE1-020
WEE1-021 WEE1-022
WEE1-023 WEE1-024
WEE1-025 WEE1-026
WEE1-027 WEE1-028
WEE1-029 WEE1-030
WEE1-031 WEE1-032
WEE1-033 WEE1-034
WEE1-035 WEE1-036
WEE1-037 WEE1-038
WEE1-039 WEE1-040
WEE1-041 WEE1-042
WEE1-043 WEE1-044
WEE1-045 WEE1-046
WEE1-047 WEE1-048
WEE1-049 WEE1-050
WEE1-051 WEE1-052
WEE1-053 WEE1-054
WEE1-055 WEE1-056
WEE1-057 WEE1-058
WEE1-059 WEE1-060
WEE1-061 WEE1-062
WEE1-063 WEE1-064
WEE1-065 WEE1-066
WEE1-067 WEE1-068
WEE1-069 WEE1-070
WEE1-071 WEE1-072
WEE1-073 WEE1-074
WEE1-075 WEE1-076
WEE1-077 WEE1-078
WEE1-079 WEE1-080
WEE1-081 WEE1-082
WEE1-083 WEE1-084
WEE1-085 WEE1-086
WEE1-087 WEE1-088
WEE1-089 WEE1-090
WEE1-091 WEE-092
WEE1-093 WEE1-094
WEE1-095 WEE1-096
WEE1-097 WEE1-098
WEE1-099 WEE1-100
WEE1-101 WEE1-102
WEE1-103 WEE1-104
WEE1-105 WEE1-106
WEE1-107 WEE1-108
WEE1-109 WEE1-110
WEE1-111 WEE1-112
WEE1-113 WEE1-114
WEE1-115 WEE1-116
WEE1-117 WEE1-118
WEE1-119 WEE1-120
WEE1-121 WEE1-122
WEE1-123 WEE1-124
WEE1-125 WEE1-126
WEE1-127 WEE1-128
WEE1-129 WEE1-130
WEE1-131 WEE1-132
WEE1-133 WEE1-134
WEE1-135 WEE1-136
WEE1-137 WEE1-138
WEE1-139 WEE1-140
WEE1-141 WEE1-142
WEE1-143 WEE1-144
WEE1-145 WEE1-146
WEE1-147 WEE1-148
WEE1-149 WEE1-150
WEE1-151 WEE1-152
WEE1-153 WEE1-154
WEE1-155 WEE1-156
WEE1-157 WEE1-158
WEE1-159 WEE1-160
WEE1-161 WEE1-162
WEE1-163 WEE1-164
WEE1-165 WEE1-166
WEE1-167 WEE1-168
WEE1-169 WEE1-170
WEE1-171 WEE1-172
WEE1-173 WEE1-174
WEE1-175 WEE1-176
WEE1-177 WEE1-178
WEE1-179 WEE1-180
WEE1-181 WEE1-182
WEE1-183 WEE1-184
WEE1-185 WEE1-186
WEE1-187 WEE1-188
WEE1-189 WEE1-190
WEE1-191 WEE1-192
WEE1-193 WEE1-194
WEE1-195 WEE1-196
WEE1-197 WEE1-198
WEE1-199 WEE1-200
WEE1-201 WEE1-202
WEE1-203 WEE1-204
WEE1-205 WEE1-206
WEE1-207 WEE1-208
WEE1-209 WEE1-210
WEE1-211 WEE1-212
WEE1-213 WEE1-214
WEE1-215 WEE1-216
WEE1-217 WEE1-218
WEE1-219 WEE1-220
WEE1-221 WEE1-222
WEE1-223 WEE1-224
WEE1-225 WEE1-226
WEE1-227 WEE1-228
WEE1-229 WEE1-230
WEE1-231 WEE1-232
WEE1-233 WEE1-234
WEE1-235 WEE1-236
WEE1-237      
更優選，本發明的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，式I所述的化合物具體為： 、 。
本發明還提供一種上述任一項所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽在製備治療WEE1介導的疾病的藥物中的用途。
所述WEE1介導的疾病是與炎症、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期綜合征相關的疾病中的一種或幾種。
本發明還提供一種藥物組合物，它是以上述任一項所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，加上藥學上可接受的輔料製備而成的製劑。
以下為對本發明的名詞術語的解釋和說明：
「癌症」或「惡性腫瘤」是指以不受控制的細胞異常增殖為特徵的多種疾病中的任何一種，受影響的細胞在局部或通過血流和淋巴系統擴散到其他部位的能力的身體 (即轉移) 以及許多特徵結構和/或分子特徵中的任何一個。「癌細胞」是指經歷多步驟腫瘤進展的早期，中期或晚期階段的細胞。癌症包括肉瘤、乳腺癌、肺癌、腦癌、骨癌、肝癌、腎癌、結腸癌和前列腺癌。在一些實施方案中，式I的化合物用於治療選自結腸癌、腦癌、乳腺癌、纖維肉瘤和鱗狀細胞癌的癌症。在一些實施方案中，癌症選自黑素瘤、乳腺癌、結腸癌、肺癌和卵巢癌。在一些實施方案中，所治療的癌症是轉移性癌症。
自身免疫性疾病是由身體對體內正常存在的物質和組織的免疫反應引起的。自身免疫疾病的例子包括心肌炎、狼瘡性腎炎、原發性膽汁性肝硬化、牛皮癬、I型糖尿病、格雷夫氏病、腹腔疾病、克羅恩病、自身免疫性中性白細胞減少症、幼年型關節炎、類風濕性關節炎、纖維肌痛、吉蘭巴厘綜合征、多發性硬化症和自身免疫性視網膜病變。本發明的一些實施方案涉及治療自身免疫疾病如牛皮癬或多發性硬化症。
炎症疾病包括以組織病理性炎症為特徵的多種病症。炎性疾病的例子包括尋常性痤瘡、哮喘、腹腔疾病、慢性前列腺炎、腎小球性腎炎、炎症性腸病、盆腔炎、再灌注損傷、類風濕性關節炎、結節病、血管炎、房塵蟎引起的氣道炎症和間質性膀胱炎。炎性疾病與自身免疫性疾病之間存在顯著重疊。本發明的一些實施方案涉及炎性疾病哮喘的治療。免疫系統通常涉及炎症性疾病，在過敏反應和一些肌病中都有表現，許多免疫系統疾病導致異常炎症。IL-17A介導的疾病也包括自身免疫性炎症性疾病。
本發明中提供的化合物和衍生物可以根據 IUPAC (國際純粹與應用化學聯合會) 或CAS (化學文摘服務社，Columbus，OH) 命名系統命名。
關於本發明的使用術語的定義：除非另有說明，本文中基團或者術語提供的初始定義適用於整篇說明書的該基團或者術語；對於本文沒有具體定義的術語，應該根據公開內容和上下文，給出本領域技術人員能夠給予它們的含義。
「取代」是指分子中的氫原子被其它不同的原子或分子所替換。
碳氫基團中碳原子含量的最小值和最大值通過首碼表示，例如，首碼C a ～ b烷基表明任何含「a」至「b」個碳原子的烷基。因此，例如，「C 1 ～ 4烷基」是指包含 1～4個碳原子的烷基。
「烷基」是指具有指定數目的成員原子的飽和烴鏈。例如，C 1~ 6烷基是指具有1至6個成員原子，例如1至4個成員原子的烷基基團。烷基基團可以是直鏈或支鏈的。代表性的支鏈烷基基團具有一個、兩個或三個支鏈。烷基基團可任選地被一個或多個如本文所定義的取代基取代。烷基包括甲基、乙基、丙基 (正丙基和異丙基)、丁基 (正丁基、異丁基和叔丁基)、戊基 (正戊基、異戊基和新戊基) 和己基。烷基基團也可以是其他基團的一部分，所述其他基團為例如C 1~C 6烷氧基。
「環烷基」、「環烷烴」是指具有碳原子且沒有環雜原子且具有單個環或多個環 (包括稠合、並和、橋環) 的飽和或部分飽和的環狀基團。對於具有不含環雜原子的芳族和非芳族環的多環體系，當連接點位於非芳族碳原子時，適用術語「環烷基」 (例如5,6,7,8,-四氫化萘-5-基)。術語「環烷基」包括環烯基基團，諸如環己烯基。環烷基基團的實例包括例如，金剛烷基、環丙基、環丁基、環己基、環戊基、環辛基、環戊烯基和環己烯基。包括多雙環烷基環體系的環烷基基團的實例是雙環己基、雙環戊基、雙環辛基等。例如 、 、 。
「烯基」是指具有2至10個碳原子和在一些實施方案中2至6個碳原子或2至4個碳原子且具有至少1個乙烯基不飽和位點 (＞C=C＜) 的直鏈或支鏈烴基基團。例如， (Ca-Cb) 烯基是指具有a至b個碳原子的烯基基團並且意在包括例如乙烯基、丙烯基、異丙烯基、1,3-丁二烯基等。
「炔基」是指含有至少一個三鍵的直鏈一價烴基或支鏈一價烴基。術語「炔基」還意在包括具有一個三鍵和一個雙鍵的那些烴基基團。例如， (C2-C6) 炔基意在包括乙炔基、丙炔基等。
「鹵素」為氟、氯、溴或碘。
「鹵素烷基」指烷基中的氫原子可被一個或多個鹵素原子取代。例如C 1 ～ 4鹵素烷基指氫原子被一個或多個鹵素原子取代的包含 1～4個碳原子的烷基。
「雜環」、 「雜環烷基」、 「雜環烷烴」指包含至少一個雜原子的飽和環或非芳香性的不飽和環；其中雜原子指氮原子、氧原子、硫原子；
「芳雜環」指包含至少一個雜原子的芳香性不飽和環；其中雜原子指氮原子、氧原子、硫原子；
「立體異構體」包括對映異構體和非對映異構體；
本發明的化合物可以包含不對稱中心或手性中心，因此存在不同的立體異構體。本發明的化合物所有的立體異構形式，包括但絕不限於，非對映體，對映異構體，阻轉異構體，和它們的混合物，如外消旋混合物，組成了本發明的一部分。很多有機化合物都以光學活性形式存在，即它們有能力旋轉平面偏振光的平面。在描述光學活性化合物時，首碼D、L或R、S用來表示分子手性中心的絕對構型。這些立體異構體的化學結構是相同的，但是它們的立體結構不一樣。特定的立體異構體可以是對映體，異構體的混合物通常稱為對映異構體混合物。50：50的對映體混合物被稱為外消旋混合物或外消旋體，這可能導致化學反應過程中沒有立體選擇性或立體定向性。術語「外消旋混合物」和「外消旋體」是指等摩爾的兩個對映異構體的混合物，缺乏光學活性。
術語「藥學上可接受的」是指某載體、運載物、稀釋劑、輔料，和/或所形成的鹽通常在化學上或物理上與構成某藥物劑型的其它成分相容，並在生理上與受體相相容。
本發明所述藥物組合物，可以是任意一種可複用的藥物製劑形式，如：口服，注射，外用等形式，口服劑型包括但不限於：片劑，膠囊劑，口服液，顆粒劑，丸劑，混懸劑，注射劑選自水針，粉針，外用製劑選自貼劑，膏劑。所有制劑均可以按照製劑學常規技術製備，如以本發明化合物，或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽中的任意一項作為藥物活性成份，必要時加入藥學上可接受的載體，製備成適於服用的上述藥物劑型，其中，單位劑量的藥物活性成份可以是0.1 mg-1000 mg，如片劑的每片含有0.1 mg-1000 mg 優選5-500 mg的藥物活性成份。
術語「鹽」和「可藥用的鹽」是指上述化合物或其立體異構體，與無機和/或有機酸和鹼形成的酸式和/或鹼式鹽，也包括兩性離子鹽 (內鹽)，還包括季銨鹽，例如烷基銨鹽。這些鹽可以是在化合物的最後分離和純化中直接得到。也可以是通過將上述化合物，或其立體異構體，與一定數量的酸或鹼適當 (例如等當量) 進行混合而得到。這些鹽可能在溶液中形成沉澱而以過濾方法收集，或在溶劑蒸發後回收而得到，或在水介質中反應後冷凍乾燥製得。本發明中所述鹽可以是化合物的鹽酸鹽、硫酸鹽、枸櫞酸鹽、苯磺酸鹽、氫溴酸鹽、氫氟酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、丁二酸鹽、草酸鹽、蘋果酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽或三氟乙酸鹽。
在某些實施方式中，本發明的一種或多種化合物可以彼此聯合使用。也可選擇將本發明的化合物與任何其它的活性試劑結合使用，用於製備調控細胞功能或治療疾病的藥物或藥物組合物。如果使用的是一組化合物，則可將這些化合物同時、分別或有序地對受試物件進行給藥。
對本發明的化合物的製備方法進行說明，具體步驟如下：
步驟1:
式B、式C中R P表示氫原子或亞氨基的保護基團，作為R P的亞氨基的保護基團，優選為苄基、對甲氧基苄基、叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等。式B、式C和式D中的R 1基團參見上述的定義，與前文的定義相同。
在製備方法1中，使式A所示化合物與式B所示的肼衍生物在鹼的存在下反應得到式C所示化合物，反應通常可以在三乙基胺、二異丙基乙基胺DIPEA、吡啶、4-二甲基氨基吡啶等有機鹼或氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉等無機鹼的存在下進行反應；例如可以在二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙醚、苯、甲苯、二甲苯、二甲基甲醯胺等或混合溶劑等惰性溶劑中進行。然後進行脫保護反應，通過該化合物環化形成式D所示的化合物。上述鹼的用量相對於式A化合物1摩爾，優選為等摩爾~過量摩爾，更優選為1摩爾量-5摩爾量，最優選為1摩爾-3摩爾。此外，該鹼為液體時，可以將該鹼兼用作溶劑和鹼。反應溫度通常為-78℃-200℃，優選為20-100℃。反應時間通常為5分鐘-7天，優選為8小時-96小時。
在製備方法1中，使式C化合物進行脫保護和環化反應得到式D所示的化合物，其中脫保護反應中反應試劑選自三氟乙酸、鹽酸溶液等、溶劑選擇甲醇、二氯甲烷或1,4-二氧六環等，優選TFA/CH 2Cl 2的方式脫除保護基；如果使用Boc作為保護基時，脫保護反應可以在標準條件下進行，例如，二氯甲烷/三氟乙酸體系、飽和的氯化氫二氧六環溶液中進行；其中所述的環化反應的反應條件為鹼性條件，鹼性條件選自一定濃度的氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、碳酸鈉溶液、碳酸鉀溶液或碳酸氫鈉溶液等，優選為氫氧化鈉溶液。脫保護和環化反應溫度通常為-78℃-200℃，優選為20-100℃，反應時間通常為5分鐘-7天，優選為8小時-96小時。
步驟2： 式G所示的化合物可以通過步驟2-1或步驟2-2的方式製備得到，步驟2-1或步驟2-2的製備方法如下:
步驟2-1：
式E和式G所述化合物的取代基R 1和R 2基團參見上述的定義，與前文的定義相同。該反應中通過C-N偶聯反應將式E和式D化合物反應製備得到式G所示化合物。反應溶劑為1,4二氧六環、四氫呋喃、乙醚、苯、甲苯、二甲苯等或混合溶劑中進行，反應溫度為0-200攝氏度，優選為20-150℃。
步驟2-2：
式F和式G所述化合物的取代基R 1和R 2基團參見上述的定義，與前文的定義相同，鹵原子為F、Cl、Br、I。式F所示化合物與式D所示化合物經C-N偶聯反應得到式G所示化合物，反應溶劑為1,4二氧六環、四氫呋喃、乙醚、苯、甲苯、二甲苯等或混合溶劑中進行，反應溫度為0-200攝氏度，優選為20-150℃。該步驟中所述C-N偶聯反應為本領域慣常用於構建C-N鍵的偶聯方法，例如 Ullmann反應，Buchwald反應，優選Ullmann反應，更優選碘化亞銅/碳酸鉀/N,N-二異丙基乙胺DMEDA/1,4-二氧六環的反應條件 (偶聯反應的條件為CuI, DMEDA, K2CO3, 1,4-dioxane) ,或更優選為CuI /K 2CO 3/N,N'-二甲基-1,2-環己二胺、苯甲醚/NaI/微波，或更優選為CuI /K 2CO 3/苯甲醚/NaI/微波。
步驟2-1和2-2中化合物R 2B (OH) 2和R 2-鹵原子可以通過有機化學領域中通常的合成方法以簡單易得的原料製備得到。
步驟3：
式H和式G所述化合物的取代基R 1、R 2、R 3、R 4基團參見上述的定義，與前文的定義相同。式G所示化合物先在氧化劑的作用下形成活性較高的中間體亞碸，然後再與式H所示化合物進行取代反應得到式I所示化合物。其中反應溶劑選自二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙醚、苯、甲苯、二甲苯、二甲基甲醯胺等或其混合溶劑；在氧化反應中所述氧化劑優選為間氯過氧苯甲酸m-CPBA；所述取代反應的條件為本領域慣常用於取代的反應條件，例如鹼性條件或酸性條件，鹼性條件優選二異丙基乙胺DIPEA，酸性條件優選三氟乙酸，反應溫度為-20-200℃，優選為20-150℃，最優選為室溫。
在步驟3中式H所示取代苯胺類化合物可以通過有機化學領域中通常的合成方法以簡單易得的原料製備得到。
步驟4：如若步驟3中製備得到式I化合物含有手性中心，本領域技術人員可結合已知的分離技術通過色譜方法或其他拆分方法得到純手性化合物。例如可通過SFC拆分得到含有一個手性中心的兩個手性化合物。如果步驟3中得到的式I化合物不含有手性中心，就不需要進行步驟4的拆分過程。
顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的範圍僅限於以下的實例。凡基於本發明上述內容所實現的技術均屬於本發明的範圍。
化合物的結構是通過核磁共振 (NMR) 和質譜 (MS) 來確定的。NMR位移 (δ) 以10-6 (ppm) 的單位給出。NMR的測定是用 (Bruker AvanceIII 400和Bruker Avance 300) 核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基亞碸 (DMSO-d6)、氘代氯仿 (CDCl 3)、氘代甲醇 (CD 3OD)，內標為四甲基矽烷 (TMS)。
LC-MS的測定使用島津液質聯用儀 (Shimadzu LC-MS 2020 (ESI) )。HPLC的測定使用島津高壓液相色譜儀 (Shimadzu LC-20A)。MPLC (中壓製備色譜) 使用Gilson GX-281 反相製備色譜儀。薄層層析矽膠板用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4 mm~0.5 mm。柱層析一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。
本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買于安耐吉化學、成都科龍化工、韶遠化學科技、百靈威科技等公司。
實施例中無特殊說明，反應在氮氣氛圍下進行。實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫。實施例中無特殊說明，M是摩爾每升。
THF：四氫呋喃；DIPEA：N,N-二異丙基乙胺；
DCM：二氯甲烷；TFA：三氟乙酸； m-CPBA：間氯過氧苯甲酸；
DMF：二甲基甲醯胺；PTSA：對甲苯磺醯胺；
DMSO：二甲基亞碸；NBS：N-溴代琥珀醯亞胺；AIBN：偶氮二異丁腈；
DMP：鄰苯二甲酸二甲酯；TBAHS：四丁基硫酸氫銨；
BMS：4-苯甲醯基-4"-甲基-二苯硫醚；
實施例中無特殊說明時，HPLC測試條件如下：
method A:柱規格：Boston Green C18 150 mm*4.6 mm 5 μm；流動相：A：0.05% TFA Water B:0.05% TFA Acétonitrile；梯度：B from 5% to 95% in 10.0 min and hold 95% for 5.0 min; 流速：1.5 mL/min; 柱內溫度：40 ℃.
method B:柱規格：Boston Green ODS 150 mm*4.6 mm 5 μm；流動相：A：0.01M NH 4HCO 3Water B：Acetonitrile；梯度：B from 5% to 95% in 10.0 min and hold 95% for 5.0 min; 流速：1.5 mL/min; 柱內溫度：40 ℃.
實施例中無特殊說明時，SFC測試條件如下： 柱規格：3 μm,150 mm*3 mm；流動相：A：CO 2，流動相B：Alcohols solvent；流速：1 mL/min 柱內溫度：40℃ 中間體實施例 1 ：中間體 IM-1 的合成
步驟 1 ：化合物 IM-1-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 IM-1-2(8.15 g, 35 mmol) 和THF (50 mL)，攪拌溶解後加入 IM-1-1(6.3 g, 37 mol) 和DIPEA (15 mL, 75 mol)，加熱至110℃反應，LC-MS監測。反應結束後，待體系恢復至室溫，析出固體後濾出，烘箱烘乾，即為粗產物 IM-1-3(9.87 g, 76.6% 產率)，LCMS (ESI +) m/z: 369.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 IM-1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 IM-1-3(9.16 g, 27.5 mmol) 和DCM (18 mL)，攪拌溶解後，緩慢加入TFA (18 mL)，加熱至75℃反應，LC-MS監測。反應結束後有機溶劑減壓濃縮，用乙醇溶解後，加入6M NaOH溶液室溫攪拌，LC-MS監測。反應完成後，減壓濃縮後有固體析出，濾出固體，用水洗滌三次，冷的乙醇洗滌三次，室溫晾乾，即為粗產物 IM-1(5 g, 81.7%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 223.1 [M+H] +。 實施例 1 ：化合物 1 的合成
步驟 1 ：化合物 1-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-1(1 g, 4.72 mmol) 和THF (10 mL)，攪拌溶解後在-40℃和氮氣保護下緩慢滴加 n-BuLi (2.5 M, 4.15 mL)，在-40℃下攪拌反應1小時後滴加 1-2(2.66 g, 14.15 mmol)，滴加完成後恢復到室溫反應12小時，LC-MS監測。反應結束後，加入4 N HCl (5 mL)，旋乾溶劑後加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，得到產物 1-3(1.2 g, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 238/240 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 1-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-3(700 mg, 2.94 mmol) 和DMF (3 mL)，攪拌溶解後加入 碘乙烷 (458.57 mg, 2.94 mmol) 和碳酸銫 (1.05 g, 3.23 mmol)，在75℃下攪拌反應8小時， LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 1-4(285 mg, 1.07 mmol, 36.42%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 266 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 1-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-4(155 mg, 582.41 μmol)、B (pin) 2(325.38 mg, 1.28 mmol)、Pd (dppf) Cl 2(42.73 mg, 58.24 μmol) 和碳酸鉀 (241.47 mg, 1.75 mmol) 用1,4-二氧六環 (5 mL)，在氮氣保護下，升溫至110℃下攪拌反應12小時， LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 1-5(80 mg, 255.43 μmol, 43.86%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 314 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 1-6 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-5(57 mg, 181.99 μmol) 用ACN (5 mL) 溶解，加入HCL (6 M, 1 mL)，升溫至60℃，攪拌反應6小時， LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 1-6(24 mg, 103.87 μmol, 57.07%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 232 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 1-7 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-6(24 mg, 103.87 μmol) 用DCM (3 mL) 溶解，加入 IM-1(26.93 mg, 121.18 μmol)，醋酸銅 (4.52 mg, 24.86 μmol) 和吡啶 (9.59 mg, 121.18 μmol, 9.76 μL)，室溫攪拌反應72小時， LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 1-7(19 mg, 46.63 μmol, 38.48%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 408 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 1-7(19 mg, 46.63 μmol) 用THF (1.5 mL) 溶解，加入m-CPBA (14.48 mg, 83.93 μmol)，室溫攪拌反應0.5小時後加入DIPEA (30.13 mg, 233.14 μmol, 40.61 μL)，和 1-8(10.70 mg, 55.95 μmol)，繼續室溫攪拌12小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，用反相柱層析純化得到產物 1(3.1 mg, 5.63 μmol, 12.07%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO-d 6) δ10.03 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.21 (s, 2H), 7.11 – 7.09 (m, 1H), 6.83 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 5.70 – 5.67 (m, 1H), 5.09 (d, J =10.2 Hz, 1H), 4.97 (d, J = 17.4 Hz, 1H), 4.28 (s, 2H), 3.82 – 3.78 (m, 2H), 3.06 (s, 4H), 2.47 (s, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.69 (d, J = 3.6 Hz, 2H), 1.58 (d, J = 3.0 Hz, 2H), 1.15 (t, J = 6.6 Hz, 3H). LCMS (ESI +) m/z: 551.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=5.65 min, purity:100%。 實施例 2 化合物 2 的合成
步驟 1 ：化合物 2-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-1(870 mg, 4.42 mmol) 和DMF (8 mL)，攪拌溶解後加入 碘乙烷 (1.38 g, 8.83 mmol) 和碳酸鉀 (1.22 g, 8.83 mmol)，在75℃下攪拌反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 2-2(600 mg, 2.67 mmol, 60.37%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 225 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 2-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-2(600 mg, 2.67 mmol) 和1,4-二氧六環 (10 mL)，攪拌溶解後加入三溴吡啶 (3.41 g, 10.66 mmol)，在室溫下攪拌反應16小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，加入水和DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 2-3(230 mg, 576.62 μmol, 21.63%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 399 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 2-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-3(230 mg, 576.62 μmol) 和THF (1.5 mL)，攪拌溶解後加入飽和氯化銨溶液 (1.5 mL) 和鋅粉 (753.99 mg, 11.53 mmol)，在室溫下攪拌反應10分鐘，LC-MS監測。反應結束後，過濾，旋乾溶劑，用反相柱層析純化得到產物 2-4(44 mg, 182.51 μmol, 31.65%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 241 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 2-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-4(20 mg, 82.96 μmol) 和DMF (1 mL)，攪拌溶解後加入NaH (11.95 mg, 497.75 μmol)，在0℃下攪拌反應0.5小時後，加入1,3-二碘丙烷 (73.64 mg, 248.88 μmol)，在室溫下攪拌反應0.5小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水淬滅反應，用EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 2-5(10 mg, 35.57 μmol, 42.87%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 281 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 2-6 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-5(10 mg, 35.57 μmol) 和1,4-二氧六環 (1 mL)，攪拌溶解後加入 IM-1(10 mg, 44.99 μmol)、CuI (15.58 mg, 81.80 μmol)、 K 2CO 3(7.91 mg, 57.26 μmol) 和DMEDA (14.42 mg, 163.60 μmol)，在氮氣保護下升溫至110℃，攪拌反應3小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 2-6(5 mg, 11.83 μmol, 28.93%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 423 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-6(5.0 mg, 11.86 μmol) 用THF (1 mL) 溶解，加入m-CPBA (3.68 mg, 21.35 μmol)，室溫攪拌反應0.5小時後加入DIPEA (7.67 mg, 59.31 μmol, 10.33 μL)，和 1-8(2.72 mg, 14.23 μmol)，繼續室溫攪拌8小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，用反相柱層析純化得到產物 2(2.1 mg, 3.71 μmol, 31.30%產率)。 1 H NMR(600 MHz, CDCL 3) δ 8.77 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.86 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.67 – 5.62 (m, 1H), 5.00 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.92 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.75 (q, J = 14.4 Hz, 2H), 3.40 (s, 4H), 2.93 – 2.87 (m, 2H), 2.64 – 2.61 (m, 4H), 2.37 – 2.28 (m, 4H), 2.23 – 2.18 (m, 1H), 1.57 (s, 2H), 1.21 (t, J =7.2 Hz, 3H). LCMS (ESI +) m/z: 566.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.03 min, purity:85.9%。 實施例 3 ：化合物 3 的合成
步驟 1 ：化合物 3-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質NaH (166.08 mg, 4.15 mmol, 60% purity) 和DMF (20 mL)，攪拌溶解後在0℃和氮氣保護下加入1,2-二溴乙烷 (780 mg, 4.15 mmol) 和 3-1(200 mg, 1.19 mmol) 的DMF (10 mL) 溶液，在0℃下攪拌反應1小時後室溫反應2小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和氯化銨溶液和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 3-2(35 mg, 180.76 μmol, 15.24%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 194.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 3-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 3-2(33 mg, 170.43 μmol) 和THF (5 mL)，攪拌溶解後在0℃和氮氣保護下滴加加入甲基溴化鎂 (2 M, 340.86 μL)，在0℃下攪拌反應1小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和氯化銨溶液和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 3-3(33 mg, 157.39 μmol, 92.35%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 210.1 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 3-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 3-3(33 mg, 157.39 μmol) 和苯甲醚 (2 mL)，攪拌溶解後加入 IM-1(34.98 mg, 157.39 μmol)、CuI (59.95 mg, 314.78 μmol)、 K 2CO 3(54.38 mg, 393.47 μmol)、N,N'-二甲基-1,2-環己二胺 (89.55 mg, 629.56 μmol) 和NaI (47.18 mg, 314.78 μmol)，微波130℃，攪拌反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 3-4(38 mg, 96.09 μmol, 61.05%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 396.1 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 3-4(38 mg, 96.09 μmol) 用THF (4 mL) 溶解，加入m-CPBA (35.11 mg, 172.96 μmol, 85% purity)，室溫攪拌反應1小時後加入DIPEA (124.18 mg, 960.86 μmol, 167.36 μL)，和 1-8(22.05 mg, 115.30 μmol)，升溫至50℃ 攪拌5小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，用反相柱層析純化得到產物 3(22.6 mg, 40.24 μmol, 41.88%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.76 (m, 1H), 5.02 (s, 1H), 5.01 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.88 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.82 – 4.68 (m, 1H), 4.66 – 4.52 (m, 1H), 3.09 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.93 – 2.86 (m, 2H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.91 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.60 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.45 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 539.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.92 min, purity:95.9%。
化合物3通過SFC拆分得到以下兩個化合物： 3aR T= 2.51 min; 3bR T= 3.51 min (如無特殊說明，化合物的手性此處只進行分子區分，不代表確切的絕對構型，下同)。 、
3a結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.92 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.66 – 7.46 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.67 (m, 1H), 5.10 – 4.98 (m, 2H), 4.90 – 4.86 (m, 1H), 4.83 – 4.67 (m, 1H), 4.60 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 3.11 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.90 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 2.50 –2.44 (m, 4H), 2.26 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.61 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.45 (m, Hz, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 539.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.80 min, purity:97.8%。
3b結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.92 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 7.02 – 6.83 (m, 2H), 5.74 – 5.67 (m, 1H), 5.06 – 4.97 (m, 2H), 4.90 – 4.86 (m, 1H), 4.80 – 4.66 (m, 1H), 4.60 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 3.09 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.90 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 2.45 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.61 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.45 (m, Hz, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 539.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.80 min, purity:98.1%。 實施例 4 ：化合物 4 的合成
步驟 1 ：化合物 4-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質NaH (1.40 g, 34.96 mmol, 60% purity) 和DMF (150 mL)，攪拌溶解後在0℃和氮氣保護下加入1,2-二溴乙烷 (6.57 g, 34.96 mmol) 和 4-1(1.47 g, 9.99 mmol) 的DMF (30 mL) 溶液，在0℃下攪拌反應3小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和氯化銨溶液和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 4-2(0.55 g, 3.18 mmol, 31.79%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 174.0 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 4-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-2(470 mg, 2.71 mmol) 和甲醇 (20 mL)，攪拌溶解後在0℃下加入硼氫化鈉 (205.30 mg, 5.43 mmol)，在0℃下攪拌反應1小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和碳酸氫鈉溶液和DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 4-3(470 mg, 2.68 mmol, 98.95%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 176.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 4-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-3(470 mg, 2.68 mmol) 和DCM (20 mL)，攪拌溶解後在0℃下加入DIPEA (1.39 g, 10.73 mmol, 1.87 mL)，在0℃下緩慢滴加加入乙醯氯 (421.10 mg, 5.36 mmol, 381.43 μL)，0℃下攪拌反應1小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，用反相柱層析純化得到產物 4-4(540 mg, 2.49 mmol, 92.66%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 218.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 4-6 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-4(540 mg, 2.49 mmol) 和DCM (5 mL)，攪拌溶解後加入 4-5(736.29 mg, 4.97 mmol) 和H 2O 2(845.31 mg, 7.46 mmol, 761.54 μL, 30% purity)，升溫至40℃下攪拌反應16小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和碳酸氫鈉溶液和DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 4-6(560 mg, 2.40 mmol, 96.59%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 234.0 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 4-7 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-6(560 mg, 2.40 mmol) 和DCM (20 mL)，攪拌溶解後在0℃和氮氣保護下滴加加入三乙胺 (1.28 g, 12.65 mmol, 1.76 mL) 和POCl 3(775.65 mg, 5.06 mmol, 471.52 μL)， 0℃下攪拌反應3小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和碳酸氫鈉溶液和DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾得到粗產物 4-7(650 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 252.0 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 4-8 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-7(650 mg, 2.58 mmol) 和甲醇 (20 mL)，攪拌溶解後加入碳酸鉀 (1.78 g, 12.91 mmol)，室溫下攪拌反應2小時，LC-MS監測。反應結束後，過濾，濾液旋乾，用反相柱層析純化得到產物 4-8(197 mg, 939.56 μmol, 36.38%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 210.1 [M+H] +。
步驟 7 ：化合物 4-9 的合成：
按照實施例 3中步驟 3的合成方法，將步驟 3中的 3-3替換為 4-8(40 mg, 190.77 μmol)，合成方法相同，得到化合物 4-9(39 mg, 98.62 μmol, 51.69%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 396.0 [M+H] +。
步驟 8 ：化合物 4 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 4-9(39 mg, 98.62 μmol)，合成方法相同，得到化合物 4(24.4 mg, 45.30 μmol, 45.93%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 – 7.50 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.78 – 4.54 (m, 2H), 3.75 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.10 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.88 – 2.79 (m, 2H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.28 – 2.19 (m, 4H), 1.13 – 1.11 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.41 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI +) m/z: 539.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.98 min, purity:98.9%。
化合物 4通過SFC拆分得到以下兩個化合物： 4aR T= 3.12 min; 4bR T= 5.44 min. 、
4a結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.61 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 1H), 4.91 – 4.87 (m, 1H), 4.77 – 4.57 (m, 2H), 3.75 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.10 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.94 – 2.75 (m, 2H), 2.46 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.31 – 2.18 (m, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.41 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI +) m/z: 539.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.91 min, purity:98.7%。
4b結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.97 – 6.87 (m, 2H), 5.74 – 5.61 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 1H), 4.91 – 4.87 (m, 1H), 4.76 – 4.56 (m, 2H), 3.75 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.10 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.97 – 2.76 (m, 2H), 2.46 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.30 –2.18 (m, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.41 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI +) m/z: 539.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.92 min, purity:98.0%。 實施例 5 ：化合物 5 的合成
步驟 1 ：化合物 5-1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 3-2(40.21 mg, 207.64 μmol) 和MeOH (1.2 mL)，攪拌溶解後在0℃下緩慢加入NaBD 4(9.56 mg, 228.40 μmol)，在0℃下攪拌反應1小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 5-1(37 mg, 188.15 μmol, 90.62%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 196 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 5-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 5-1(37 mg, 188.15 μmol) 和苯甲醚 (2 mL)，攪拌溶解後加入 IM-1(50.18 mg, 225.78 μmol)、CuI (71.67 mg, 376.30 μmol)、 K 2CO 3(65.01 mg, 470.38 μmol)、N,N'-二甲基-1,2-環己二胺 (107.05 mg, 752.60 μmol) 和NaI (56.40 mg, 376.30 μmol)，微波130℃，攪拌反應5小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 5-2(13 mg, 34.08 μmol, 18.11% yield)，LCMS (ESI +) m/z: 383 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 5 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 5-2(13 mg, 33.99 μmol)，合成方法相同，得到化合物 5(8.5 mg, 15.28 μmol, 44.96%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.68 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.91 (d, J=8.4 Hz, 2H), 5.69 – 5.67 (m, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.02 (d, J=10.2 Hz, 1H), 4.90 (d, J=16.8 Hz, 1H), 4.63 – 4.49 (m, 2H), 3.10 – 3.08 (m, 4H), 3.07 – 3.04 (m, 1H), 2.78 (d, J=18.0 Hz, 1H), 2.47 –2.45 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.01 – 0.98 (m, 1H), 0.69 (t, J=7.8 Hz, 2H), 0.53 – 0.49 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 526.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.47 min, purity: 96.2%。 實施例 6 ：化合物 6 的合成
步驟 1 ：化合物 6-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 6-1(157 mg, 748.79 μmol) 和DCM (10 mL)，攪拌溶解後加入DMP (635.18 mg, 1.50 mmol)，在20℃下攪拌反應16小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和碳酸氫鈉溶液和DCM萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 6-2(141 mg, 679.01 μmol, 90.68%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 208.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 6-3 的合成：
按照實施例 3中步驟 2的合成方法，將步驟 2中的 3-2替換為 6-2(141 mg, 679.01 μmol)，合成方法相同，得到化合物 6-3(150 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 224.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 6-4 的合成：
按照實施例 3中步驟 3的合成方法，將步驟 3中的 3-3替換為 6-3(95.39 mg, 429.15 μmol)，合成方法相同，得到化合物 6-4(75 mg, 183.15 μmol, 51.21%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 410.4 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 6 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 6-4(45 mg, 109.89 μmol)，合成方法相同，得到化合物 6(28.5 mg, 51.56 μmol, 45.97%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.04 – 4.95 (m, 1H), 4.86 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.69 – 4.63 (m, 1H), 3.10 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.90 – 2.86 (m, 1H), 2.81 – 2.79 (m, 1H), 2.47 (s, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.01 – 1.96 (m, 1H), 1.48 – 1.39 (m, 4H), 0.86 – 0.85 (m, 1H), 0.64 – 0.62 (m, 1H), 0.34 – 0.31 (m, 1H), 0.22 – 0.21 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 553.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.91 min, purity:99.7%。
化合物 6通過SFC拆分得到以下兩個化合物： 6aR T= 2.75 min; 6bR T= 4.41 min 、
6a結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.99 – 6.85 (m, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.00 – 4.98 (m, 1H), 4.98 – 4.84 (m, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.69 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 4.68 – 4.66 (m, 1H), 3.10 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.89 – 2.78 (m, 2H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.99 – 1.97 (m, 1H), 1.46 – 1.38 (m, 4H), 0.87 – 0.85 (m, 1H), 0.65 – 0.61 (m, 1H), 0.33 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 553.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.91 min, purity:97.9%。
6b結構確證： 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 – 7.49 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.03 – 4.94 (m, 1H), 4.88 – 4.84 (m, 1H), 4.79 (s, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.67 – 4.65 (m, 1H), 3.10 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.93 – 2.77 (m, 2H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.99 – 1.97 (m, 1H), 1.47 – 1.36 (m, 4H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.62 (m, 1H), 0.33 – 0.30 (m, 1H), 0.22 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 553.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.91 min, purity:99.1%。 實施例 7 ：化合物 7 的合成
步驟 1 ：化合物 7-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 7-1(400 mg, 2.02 mmol) 和DMSO (5 mL)，攪拌溶解後加入 7-2(313.14 mg, 2.22 mmol) 和碳酸鉀 (836.50 mg, 6.05 mmol)，在65℃下攪拌反應10小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 7-3(633 mg, 1.98 mmol, 98.24%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 319 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 7-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 7-3(633 mg, 1.98 mmol) 和甲醇 (5 mL)，攪拌溶解後加入Pd/C (60 mg, 494.03 μmol)，在H 2下室溫攪拌反應12小時，LC-MS監測。反應結束後，用矽藻土過濾反應液，濾液旋乾，得到粗產物 7-4(459 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 290 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 7-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 7-4(150 mg, 518.36 μmol) 和THF (5 mL)，攪拌溶解後在0℃下緩慢加入LiAlH 4(19.67 mg, 518.36 μmol)，後在65℃下攪拌反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，在0℃下加入水淬滅反應，用10%的氫氧化鈉溶液處理後，再加入水，過濾，濾液旋乾，用反相柱層析純化得到產物 7-5(70 mg, 0.34 mmol, 66.43%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 204 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 7 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 6-4(15 mg, 36.63 μmol)，將 1-8替換為 7-5(8.94 mg, 43.96 μmol) 合成方法相同，得到化合物 7(10.4 mg, 16.21 μmol, 44.25%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 – 7.47 (m, 2H), 6.72 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 4.99 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.86 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.64 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 3.75 – 3.54 (m, 2H), 3.46 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.88 – 2.77 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.12 – 1.92 (m, 4H), 1.57 (s, 1H), 1.45 – 1.39 (m, 4H), 0.87 – 0.85 (m, 1H), 0.65 – 0.61 (m, 1H), 0.33 – 0.29 (m, 1H), 0.26 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 565.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.49 min, purity:88.0%。
化合物 7通過SFC拆分得到以下兩個化合物： 7aR T= 3.564 min; 7bR T= 6.246 min 、
化合物 7a(8.3 mg, 13.52 μmol)；SFC保留時間t = 3.564 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.71 (d, J=8.8 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.00 – 4.98 (m, 1H), 4.88 – 4.79 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.67 – 4.61 (m, 1H), 4.80 – 4.77 (m, 1H), 3.58 (d, J=5.2 Hz, 2H), 3.43 (d, J=10.8 Hz, 2H), 3.27 (d, J=10.8 Hz, 2H), 2.92 – 2.76 (m, 2H), 2.46 – 2.41 (m, 1H), 2.02 – 1.94 (m, 4H), 1.53 (d, J=8.0 Hz, 1H), 1.46 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.87-0.84 (m, 1H), 0.68 – 0.60 (m, 1H), 0.34 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 565.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.36 min, purity＞ 92.1%。
化合物 7b(8.3 mg, 13.91 μmol)；SFC保留時間t = 6.246 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.71 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.00 – 4.98 (m, 1H), 4.88 – 4.79 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.67 – 4.61 (m, 1H), 4.80 – 4.77 (m, 1H), 3.58 (d, J=5.2 Hz, 2H), 3.43 (d, J=10.8 Hz, 2H), 3.27 (d, J=10.8 Hz, 2H), 2.92 – 2.76 (m, 2H), 2.45 – 2.40 (m, 1H), 2.02 – 1.95 (m, 4H), 1.53 (d, J=8.0 Hz, 1H), 1.46 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.68 – 0.60 (m, 1H), 0.34 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 565.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.30 min, purity＞ 95.2%. 實施例 8 ：化合物 8 的合成
步驟 1 ：化合物 8 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 6-4(15 mg, 36.63 μmol)，將 1-8替換為 8-1(9.02 mg, 43.96 μmol) 合成方法相同，得到化合物 8(7.4 mg, 12.14 μmol, 33.15%產率)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 7.76 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.45 – 7.36 (m, 1H), 6.99 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.00 – 4.98 (m, 1H),, 4.91 – 4.83 (m, 1H), 4.83 – 4.75 (m, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.67 – 4.61 (m, 1H), 2.90 – 2.77 (m, 6H), 2.52 – 2.45 (m, 4H), 2.25 (s, 6H), 2.01 – 1.97 (m, 1H), 1.47 – 1.38 (m, 4H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.60 (m, 1H), 0.36 – 0.29 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 567.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.83 min, purity:93.0%。 實施例 9 ：化合物 9 的合成
步驟 1 ：化合物 9-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 9-1(3 g, 18.62 mmol) 和DMF (20 mL)，攪拌溶解後加入碘甲烷 (8.7 g, 61.43 mmol)、TBAHS (630 mg, 18.62 mmol) 和碳酸鉀 (8.48 g, 61.43 mmol)，在70℃下攪拌反應15小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水淬滅反應，加入EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 9-2(3.4 g, 16.73 mmol, 89.87%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 204 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 9-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 9-2(3.4 g, 16.73 mmol) 和H 2SO 4(10 mL)，攪拌溶解後在0℃下，緩慢滴加加入HNO 3(1.02 g, 16.24 mmol)，在0℃下攪拌反應，TLC監測。反應結束後，0℃下加入水淬滅反應，加入EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 9-3(3.9 g, 15.71 mmol, 96.76%產率)。
步驟 3 ：化合物 9-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 9-3(270 mg, 1.09 mmol) 和THF (10 mL)，攪拌溶解後加入BMS (334.8 mg, 4.35 mmol))，在70℃下攪拌反應24小時，LC-MS監測。反應結束後，加入飽和亞硫酸鈉溶液淬滅反應，加入EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 9-4(200 mg, 907.99 μmol, 83.48%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 220 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 9-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 9-4(200 mg, 907.99 μmol) 和乙醇 (10 mL)，攪拌溶解後加入Pd/C (110.28 mg, 907.99 μmol)，在H 2下室溫攪拌反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，用矽藻土過濾反應液，濾液旋乾，得到粗產物 9-5(170 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 191 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 9 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 9-5(8.66 mg, 45.51 μmol) 合成方法相同，得到化合物 9(1.7 mg, 2.98 μmol, 7.84%產率)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.18 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.54 (s, 1H), 7.42 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.75 – 5.65 (m, 1H), 5.04 (s, 1H), 5.04 – 5.00 (m, 1H), 4.91 – 4.86 (m, 1H), 4.80 – 4.67 (m, 1H), 4.61 – 4.56 (m, 1H), 3.45 – 3.37 (m, 2H), 2.91 (s, 2H), 2.43 – 2.28 (m, 5H), 1.26 – 1.20 (m, 9H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.72 – 0.67 (m, 1H), 0.61 – 0.56 (m, 1H),, 0.49 – 0.45 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 538.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.20 min, purity:94.1%。 實施例 10 ：化合物 10 的合成
步驟 1 ：化合物 10 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 8-1(9.34 mg, 45.51 μmol) 合成方法相同，得到化合物 10(7.6 mg, 13.11 μmol, 34.55%產率)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.89 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.47 – 7.39 (m, 1H), 6.99 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.75 – 5.65 (m, 1H), 5.03 (s, 1H), 5.03 – 4.97 (m, 1H), 4.90 – 4.86 (m, 1H), 4.74 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 4.63– 4.57 (m, 1H), 2.89 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 2.83 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.58 – 2.51 (m, 4H), 2.28 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.60 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.45 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 553.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.62 min, purity:95.3%。 實施例 11 ：化合物 11 的合成
步驟 1 ：化合物 11 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 11-1(15.74 mg, 60.69 μmol)，合成方法相同，得到化合物 11(5.33 mg, 8.16 μmol, 16.14%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.66 (m, 1H), 5.03 – 4.99 (m, 2H), 4.87 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.76 – 4.73 (m, 1H), 4.61 – 4.59 (m 1H), 3.09 – 3.07 (m, 4H), 2.92 – 2.86 (m, 2H), 2.43 – 2.39 (m, 4H), 2.64 (s, 3H), 1.55 – 1.49 (m, 8H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.91 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.59 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.46 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 607.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.06 min, purity: 93.4%。
化合物 11通過SFC拆分得到以下兩個化合物： 11aR T= 3.475 min; 11bR T= 5.377min
化合物 11a(12.86 mg, 21.19 μmol)；SFC保留時間t = 3.475 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 2H), 4.88 (dd, J= 17.2, 1.2 Hz, 1H), 4.72 – 4.58 (m, 2H), 3.08 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.94 – 2.85 (m, 2H), 2.29 (s, 4H), 2.16 (s, 3H), 1.53 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.46 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.60 – 0.55 (m, 1H), 0.48 – 0.43 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.35 min, purity＞ 94.6%。
化合物 11b(12.1 mg, 19.94 μmol)；SFC保留時間t = 5.377 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 2H), 4.88 (dd, J= 17.2, 1.2 Hz, 1H), 4.72 – 4.58 (m, 2H), 3.08 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.94 – 2.85 (m, 2H), 2.29 (s, 4H), 2.16 (s, 3H), 1.53 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.46 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.60 – 0.55 (m, 1H), 0.48 – 0.43 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.89 min, purity＞ 97.2%。 實施例 12 ：化合物 12 的合成
步驟 1 ：化合物 12 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 12-1(16.64 mg, 75.86 μmol)，合成方法相同，得到化合物 12(9.38 mg, 15.64 μmol, 30.93%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.92 – 7.90 (m, 1H), 7.69 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.72 – 5.66 (m, 1H), 5.03 – 4.99 (m, 2H), 4.87 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.61 – 4.58 (m, 1H), 3.68 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.92 – 2.86 (m, 2H), 2.63 (t, J= 12.0 Hz, 2H), 2.38 – 2.32 (m, 7H), 1.91 – 1.87 (m, 2H), 1.55 – 1.49 (m, 2H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.91 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.59 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.46 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 567.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.29 min, purity: 93.3%。 實施例 13 ：化合物 13 的合成
步驟 1 ：化合物 13 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 7-5(19.76 mg, 97.21 μmol)，合成方法相同，得到化合物 13(14 mg, 22.88 μmol, 47.08%產率)。 1 H NMR(600 MHz, Chloroform- d) δ 8.81 (s, 1H), 7.69 – 7.67 (m, 2H), 7.49 (s, 2H), 6.72 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.74 – 5.68 (m, 1H), 5.02 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 4.94 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.84 – 4.80 (m, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.64 – 3.58 (m, 4H), 2.95 (d, J= 6.6 Hz, 2H), 2.32 (s, 3H), 1.77 (s, 2H), 1.41 (s, 3H), 1.12 – 1.08 (m, 1H), 0.91 – 0.87 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.60 – 0.56 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 551.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.16 min, purity: 90.0%。 實施例 14 ：化合物 14 的合成
步驟 1 ：化合物 14-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 14-1(217.24 mg, 1 mmol) 用甲醇 (3 mL) 溶解，加入 14-2(200.32 mg, 2 mmol)，醋酸 (3.00 mg, 50.00 μmol)，室溫攪拌反應0.5小時，加入NaBH 3CN (94.26 mg, 1.50 mmol) 後升溫至50℃反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 14-3(200 mg, 663.57 μmol, 66.36%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 302 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 14-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 14-3(200 mg, 663.57 μmol) 用DCM (1 mL) 溶解，加入TFA (756.61 mg, 6.64 mmol)，室溫攪拌反應0.5小時，LC-MS監測。反應結束後，旋乾溶劑得到粗產物 14-4(100 mg, 496.81 μmol, 74.87%產率)，LCMS (ESI+) m/z: 202 [M+H]+。
步驟 3 ：化合物 14-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 14-4(140 mg, 695.54 μmol) 和DMSO (3 mL)，攪拌溶解後加入對氟硝基苯 (98.14 mg, 695.54 μmol) 和碳酸鉀 (288.38 mg, 2.09 mmol)，在80℃下攪拌反應4小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 14-5(95 mg, 294.69 μmol, 42.37%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 322 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 14-6 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 14-5(95 mg, 294.69 μmol) 和甲醇 (5 mL)，攪拌溶解後加入Pd/C (10.74 mg, 88.41 μmol)，在H 2下室溫攪拌反應12小時，LC-MS監測。反應結束後，用矽藻土過濾反應液，濾液旋乾，得到粗產物 14-6(73 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 293 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 14 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 14-6(15 mg, 51.30 μmol)，合成方法相同，得到化合物 14(4.1 mg, 5.72 μmol, 22.31%產率)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.75 – 7.64 (m, 1H),, 5.13 – 4.97 (m, 3H), 4.88 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 4.73 (s, 1H), 4.60 (d, J= 15.2 Hz, 1H), 3.88 (t, J= 12.4 Hz, 1H), 3.75 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 2.90 (d, J= 2.4 Hz, 2H), 2.78 – 2.69 (m, 1H), 2.60 (s, 4H), 2.42 – 2.22 (m, 6H), 2.15 (s, 3H), 1.94 – 1.81 (m, 6H), 1.75 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.84 (m, 6H), 0.73 – 0.66 (m, 6H), 0.61 – 0.53 (m, 1H), 0.48 – 0.43 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 640.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.63 min, purity: 89.4%。 實施例 15 ：化合物 15 的合成
步驟 1 ：化合物 15-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 15-1(181.83 mg, 1.42 mmol) 和DMF (10 mL)，攪拌溶解後加入 15-2(200 mg, 1.29 mmol) 和碳酸鉀 (534.53 mg, 3.87 mmol)，在90℃下攪拌反應3小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水和EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，得到粗產物 15-3(100 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 263 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 15-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 15-3(100 mg, 379.75 μmol) 和甲醇 (5 mL)，攪拌溶解後加入Pd/C (230.60 mg, 1.90 mmol)，在H 2下室溫攪拌反應0.5小時，LC-MS監測。反應結束後，用矽藻土過濾反應液，濾液旋乾，得到粗產物 15-4(109 mg, crude)，LCMS (ESI +) m/z: 234 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 15 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 1-8替換為 15-4(8.85 mg, 37.93 μmol)，合成方法相同，得到化合物 15(1.75 mg, 2.59 μmol, 10.23%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 – 7.40 (m, 1H), 6.97 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.74 – 5.66 (m, 1H), 5.03 (s, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.90 – 4.85 (m, 1H), 4.77 – 4.71 (m, 1H), 4.62 – 4.57 (m, 1H), 3.03 (d, J=12.0 Hz, 2H), 2.89 – 2.87 (m, 2H), 2.59 – 2.53 (m, 2H), 2.24 – 2.18 (m, 10H), 1.83 (d, J=11.6 Hz, 2H),1.58 – 1.49 (m, 2H), 1.22 (s, 3H), 0.95 – 0.89 (m, 1H), 0.71 – 0.66 (m, 1H), 0.61 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.44 (m, 1H). LCMS (ESI +) m/z: 581.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.41 min, purity: 88.68%。 實施例 16 ：化合物 16 的合成
步驟 1 ：化合物 16-1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-5(60 mg, 0.21 mmol) 和THF (1 mL)，攪拌溶解後加入硼烷的四氫呋喃絡合物 (1 mL)，在室溫下攪拌反應5小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水淬滅，用EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 16-1(40 mg, 0.15 mmol, 70.18%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 267 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 16-2 的合成：
按照實施例 2中步驟 5的合成方法，將步驟 5中的 2-5替換為 16-1(40 mg, 0.15 mmol)，合成方法相同，得到化合物 16-2(30 mg, 73.43 μmol, 48.83%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 409 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 16 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 16-2(30 mg, 73.43 μmol)，合成方法相同，得到化合物 16(6.31 mg, 11.44 μmol, 15.58 %產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.70 – 7.52 (m, 2H), 7.98 – 7.82 (m, 3H), 5.72 – 7.68 (m, 1H), 5.05 (d, J= 10.2 Hz, 2H), 4.93 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 4.51 (s, 2H), 3.62 (s, 2H), 3.31 (d, J= 14.4 Hz, 1H), 3.08 (s, 4H), 2.46 (s, 4H), 2.45 (s, 2H), 2.28 (s, 3H), 2.20 (t, J= 14.4 Hz, 3H), 2.03 – 1.99 (m, 2H), 1.09 (t, J= 7.2 Hz, 3H). LCMS (ESI +) m/z: 552.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.03 min, purity: 95.7%。 實施例 17 ：化合物 17 的合成
步驟 1 ：化合物 17-1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 2-4(200 mg, 829.6 μmol) 和DMF (10 mL)，攪拌溶解後加入NaH (119.5 mg, 4.98 mmol)，在0℃下攪拌反應0.5小時後，加入1,3-二碘丙烷 (736.4 mg, 2.48 mmol)，在室溫下攪拌反應0.5小時，LC-MS監測。反應結束後，加入水淬滅反應，用EA萃取3次，合併有機相，無水硫酸鈉處理後，過濾旋乾，用反相柱層析純化得到產物 17-1(70 mg, 250 μmol, 29.87%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 281 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 17-2 的合成：
按照實施例 2中步驟 5的合成方法，將步驟 5中的 2-5替換為 17-1(70 mg, 250 μmol)，合成方法相同，得到化合物 17-2(25 mg, 59.17 μmol, 23.69%產率)，LCMS (ESI +) m/z: 423 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 17 的合成：
按照實施例 3中步驟 4的合成方法，將步驟 4中的 3-4替換為 17-2(25 mg, 59.17 μmol)，合成方法相同，得到化合物 17(5 mg, 8.84 μmol, 14.94%產率)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.25 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.62 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 5.75 – 5.65 (m, 1H), 5.08 – 5.03 (m, 1H), 4.95 – 4.89 (m, 1H), 4.59 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 4.16 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.82 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 3.10 (t, J= 4.9 Hz, 4H), 2.82 (t, J= 6.1 Hz, 2H), 2.46 (t, J= 4.9 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 2.20 – 2.15 (m, 2H), 1.15 (t, J= 7.1 Hz, 3H). LCMS (ESI +) m/z: 598.2 [M+MeOH+H] +, HPLC method B: R T=7.23 min, purity: 80.0%。
實施例 18 ：化合物 18 的合成
步驟 1 ：化合物 18-1 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 3-2(100 mg, 516.45 μmol)，加入無水四氫呋喃 (2 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加乙基溴化鎂的四氫呋喃溶液 (2.07 mmol, 1.04 mL, 2M)，保持溫度反應1個小時。LC-MS監測。向反應液中加入飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 18-1(112.00 mg, 500.67 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 224.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 18-2 的合成：
在乾燥的微波管中，加入基質 18-1(112.00 mg, 500.67 μmol)、基質 IM-1(111.00 mg, 499.40 μmol)、碘化亞銅 (190.22 mg, 998.80 μmol)、碘化鈉 (149.71 mg, 998.80 μmol)、碳酸鉀 (172.29 mg, 1.25 mmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (284.48 mg, 2.00 mmol)，然後加入苯甲醚 (3 mL)，在氮氣環境下，130度微波加熱反應三小時。LC-MS監測。將反應液冷卻至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌兩次，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 18-2(90 mg, 220.31 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 410.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 18 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(16 mg, 39.07 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (12.14 mg, 70.33 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (50.40 mg, 390.72 μmol) 和基質4- (4-甲基呱嗪) 苯胺 (8.97 mg, 46.89 μmol)，45度反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 18(5.41 mg, 9.79 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.16 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.72 – 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.95 – 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.64 (m, 1H), 5.02 – 5.01 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.89 – 4.86 (m, 1H), 4.84 – 4.71 (m, 1H), 4.60 – 4.52 (m, 1H), 3.26 – 3.05 (m, 4H), 3.01 (m, 1H), 2.74 (m, 1H), 2.48 – 2.31 (m, 7H), 1.78 – 1.73 (m, 1H), 1.60 – 1.54 (m, 1H), 0.96 – 0.95 (m, 1H), 0.71 – 0.69 (m, 5H), 0.41 – 0.39 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 553.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.26 min, purity: ＞ 97.4%。 實施例 19 ：化合物 19 的合成
步驟 1 ：化合物 19-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 19-1(142.09 mg, 570.04 μmol)，然後加入甲醇 (2 mL) 溶解，冷卻至零度，加入硼氫化鈉 (86.26 mg, 2.28 mmol) 保持溫度不變反應1個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，殘餘物加入水，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 19-2(130 mg, 517.35 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 252.3 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 19-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 19-2(125.64 mg, 0.5 mmol)，溶於甲醇 (2 mL) 中，然後加入鈀炭 (20 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 19-3(100 mg, 451.88 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 222.3 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 19 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 3-4(10 mg, 25.29 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (9.60 mg, 55.63 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (32.68 mg, 252.86 μmol) 和基質 19-3(33.57 mg, 151.72 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 19(4 mg, 6.57 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.20 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 7.88 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.45 – 7.48 (m, 1H), 7.03 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.74 – 5.67 (m, 1H), 5.12 (s, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 2H), 4.87 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.63 – 4.60 (m, 1H), 4.57 (d, J= 4.2 Hz, 2H), 2.88 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 2.82 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.46 (s, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 0.93 – 0.90 (m, 1H), 0.70 – 0.66 (m, 1H), 0.60 – 0.57 (m, 1H), 0.47 – 0.44 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 569.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=6.37 min, purity: ＞ 93.4%。 實施例 20 ：化合物 20 的合成
步驟 1 ：化合物 20-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 20-1(100 mg, 683.97 μmol)，溶於二甲基亞碸 (2 mL) 中，然後加入對氟硝基苯 (96.51 mg, 683.97 μmol) 和碳酸鉀 (94.53 mg, 683.97 μmol)，80℃下反應4個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 20-2(120 mg, 448.94 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 267.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 20-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 20-2(110 mg, 411.52 μmol)，溶於甲醇 (2 mL) 中，然後加入鈀炭 (15 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 20-3(90 mg, 379.24 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 238.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 20a & 20b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 3-4(10 mg, 25.29 μmol)，溶於四氫呋喃 (0.5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (6.55 mg, 37.93 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (32.68 mg, 252.86 μmol) 和基質 20-3(12.00 mg, 50.57 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 20a(1.0 mg, 1.47 μmol) ( 20a和 20b為非對映異構體，直接分離得到產物，結構為隨機書寫，絕對構型未確定，以保留時間為准，下同)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.73 – 5.66 (m, 1H), 5.09 – 4.96 (m, 3H), 4.88 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.74 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.88 (t, J= 12.6 Hz, 1H), 3.74 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 2.95 – 2.86 (m, 2H), 2.85 – 2.76 (m, 1H), 2.68 (t, J= 11.4 Hz, 1H), 2.40 – 2.31 (m, 1H), 2.28 (s, 6H), 1.90 – 1.83 (m, 1H), 1.76 (d, J= 12.6 Hz, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.90 (m, 1H), 0.70 – 0.64 (m, 1H), 0.60 – 0.55 (m, 1H), 0.49 – 0.42 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.69 min, purity＞ 88.7%。
化合物 20b(1.0 mg, 1.50 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.15 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.96 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.66 (m, 1H), 5.04 – 4.85 (m, 3H), 4.80 – 4.74 (m, 1H), 4.73 – 4.64 (m, 1H), 4.60 (s, 1H), 3.87 (s, 1H), 3.57 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 2.90 (d, J= 5.4 Hz, 2H), 2.71 – 2.59 (m, 3H), 2.30 (s, 6H), 1.82 (s, 1H), 1.60 – 1.54 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.90 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.62 – 0.55 (m, 1H), 0.48 – 0.45 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.70 min, purity＞ 90.2%。 實施例 21 ：化合物 21 的合成
步驟 1 ：化合物 21-2 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 21-1(80 mg, 385.25 μmol)，加入無水四氫呋喃 (4.5 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加乙基溴化鎂的四氫呋喃溶液 (1.54 mmol, 0.77 mL, 2M)，保持溫度反應2個小時。LC-MS監測。向反應液中加入飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 21-2(68 mg, 286.05 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 238.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 21-3 的合成：
在乾燥的微波管中，加入基質 21-2(68 mg, 286.05 μmol)、基質 IM-1(73.86 mg, 332.29 μmol)、碘化亞銅 (108.95 mg, 572.09 μmol)、碘化鈉 (85.75 mg, 572.09 μmol)、碳酸鉀 (98.83 mg, 715.11 μmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (162.75 mg, 1.14 mmol)，然後加入苯甲醚 (3 mL)，在氮氣環境下，130度微波加熱反應四小時。LC-MS監測。將反應液冷卻至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌兩次，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 21-3(57 mg, 134.58 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 424.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 21 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 21-3(20 mg, 47.44 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (16.37 mg, 94.89 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (61.75 mg, 477.78 μmol) 和基質4- (4-甲基呱嗪) 苯胺 (40 mg, 209.13 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 21(12 mg, 20.54 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform- d) δ 8.81 (s, 1H), 7.64 – 7.58 (m, 2H), 7.47 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.76 – 5.66 (m, 1H), 5.08 – 5.05 (m, 1H), 5.00 – 4.94 (m, 1H), 4.75 – 4.61 (m, 2H), 3.56 (s, 1H), 3.28 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.04 – 2.95 (m, 1H), 2.91 – 2.85 (m, 1H), 2.73 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.50 – 2.43 (m, 4H), 2.02 – 1.93 (m, 1H), 1.80 – 1.71 (m, 1H), 1.19 – 1.14 (m, 1H), 1.02 (t, J= 7.6 Hz, 3H), 0.75 – 0.71 (m, 1H), 0.49 – 0.44 (m, 1H), 0.07 – 0.01 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.54 min, purity＞ 97.0%。 實施例 22 ：化合物 22 的合成
步驟 1 ：化合物 22-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 22-1(90 mg, 410.51 μmol)，溶於1,2-二氯乙烷 (5 mL) 中，加入醋酸 (49.30 mg, 821.02 μmol) 和環丁酮 (143.86 mg, 2.05 mmo)，室溫攪拌半個小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (435.02 mg, 2.05 mmol)，50℃加熱反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 22-2(93 mg, 340.25 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 274.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 22-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 22-2(93 mg, 340.25 μmol)，溶於甲醇 (3 mL) 中，然後加入鈀炭 (10 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 22-3(80 mg, 328.74 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 244.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 22a & 22b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 22-3(18 mg, 43.96 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.17 mg, 87.91 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (28.40 mg, 219.78 μmol) 和基質 21-3(16.04 mg, 65.93 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合 22a(2.40 mg, 3.62 μmol)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.08 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.64 – 7.55 (m, 2H), 6.79 – 6.68 (m, 1H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.01 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.88 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.81 – 4.71 (m, 1H), 4.59 – 4.53 (m, 1H), 3.89 – 3.76 (m, 2H), 3.48 – 3.42 (m, 4H), 3.03 – 2.99 (m, 1H), 2.75 – 2.71 (m, 1H), 2.48 (s, 1H), 2.19-2.12 (m, 2H), 1.79 – 1.73 (m, 1H), 1.61 – 1.52 (m, 2H), 0.99 – 0.94 (m, 1H), 0.85 – 0.79 (m, 1H), 0.73 – 0.68 (m, 5H), 0.41 – 0.35 (m, 3H), 0.08 – 0.05 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 605.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.26 min, purity＞ 91.2%。
化合物 22b(6.40 mg, 10.03μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.08 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.69 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.01 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.86 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.70 – 4.77 (m, 1H), 4.59 – 4.53 (m, 1H), 3.81 – 3.71 (m, 2H), 3.19 – 3.08 (m, 4H), 3.01 (d, J=16.4 Hz, 2H), 2.73 (d, J=16.4 Hz, 1H), 2.42 – 2.37 (m, 1H), 2.03 – 1.91 (m, 2H), 1.79 – 1.73 (m, 5H), 1.61 – 1.52 (m, 2H), 0.99 – 0.94 (m, 1H), 0.72 – 0.68 (m, 5H), 0.39 – 0.35 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 605.3 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.37 min, purity＞ 94.8%。 實施例 23 ：化合物 23 的合成
步驟 1 ：化合物 23a & 23b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (22.76 mg, 131.87 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (94.68 mg, 732.59 μmol)和基質 23-1(30.08 mg, 146.52 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到 化合物 23a(12.00 mg, 18.78 μmol)；SFC保留時間t = 2.302 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.79 – 7.57 (m, 3H), 7.41 – 7.38 (m, 1H), 6.98 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.60 (m, 1H), 5.01 – 4.96 (m, 1H), 4.88 – 4.77 (m, 2H), 4.69 (s, 1H), 4.67 – 4.58 (m, 1H), 2.92 – 2.74 (m, 6H), 2.47 (s, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 – 1.92 (m, 1H), 1.39 (s, 4H), 0.86 – 0.82 (m, 1H), 0.64 – 0.62 (m, 1H), 0.30 – 0.29 (m, 1H), 0.22 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.69 min, purity＞ 86.0%。
化合物 23b（11.00 mg, 17.51 μmol）; SFC保留時間 t = 3.705 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.79 – 7.57 (m, 3H), 7.41 – 7.38 (m, 1H), 6.98 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.60 (m, 1H), 5.01 – 4.86 (m, 1H), 4.89 – 4.74 (m, 2H), 4.72 – 4.57 (m, 2H), 2.94 – 2.77 (m, 6H), 2.46 (s, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.03 – 1.92 (m, 1H), 1.39 (s, 4H), 0.86 – 0.82 (m, 1H), 0.64 – 0.62 (m, 1H), 0.31 – 0.29 (m, 1H), 0.22 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.70 min, purity ＞ 87.8%. 實施例 24 ：化合物 24 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(10 mg, 24.42 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (8.43 mg, 48.84 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (31.56 mg, 244.20 μmol) 和基質 24-1(21.76 mg, 122.10 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 24(4 mg, 6.92 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.15 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.91 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 12.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 2H), 6.93 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.04 – 5.00 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.90 – 4.85 (m, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.59 – 4.53 (m, 1H), 3.76 – 3.73 (m, 4H), 3.08 – 3.06 (m, 4H), 3.01 (d, J= 25.2 Hz, 1H), 2.74 (d, J= 24.4 Hz, 1H), 1.81 – 1.72 (m, 1H), 1.61 – 1.52 (m, 1H), 0.99 – 0.94 (m, 1H), 0.73 – 0.68 (m, 5H), 0.40 – 0.35 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 540.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.49 min, purity＞ 93.2%。 實施例 25 ：化合物 25 的合成
步驟 1 ：化合物 25-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 25-1(332 mg, 1.56 mmol)，溶於二甲基亞碸 (5 mL) 中，然後加入對氟硝基苯 (242.73 mg, 1.72 mmol) 和碳酸鉀 (648.42 mg, 4.69 mmol)，80℃下反應12個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 25-2(512 mg, 1.54 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 278.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 25-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 25-2(640 mg, 1.92 mmol)，溶於甲醇 (10 mL) 中，然後加入鈀炭 (60 mg)，在氫氣環境下室溫反應12個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 25-3(570 mg, 1.88 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 248.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 25-4 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 25-3(200 mg, 659.20 μmol)，加入無水四氫呋喃 (5 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加氫化鋁鋰的四氫呋喃溶液 (3.3 mL, 3.30 mmol, 1M)，65度加熱回流反應四個小時。LC-MS監測。向反應液中加入水，10%氫氧化鈉水溶液，攪拌半個小時，用無水硫酸鈉乾燥，加矽藻土過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 25-4(89 mg, 409.55 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 218.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 25 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(10 mg, 24.42 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (7.59 mg, 43.96 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (31.56 mg, 244.20 μmol) 和基質 25-4(10.60 mg, 48.78 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 25(2 mg, 2.98 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.09 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.90 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.55 (s, 2H), 6.78 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 5.02 (dd, J= 10.0, 1.6 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.87 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.61 – 4.49 (m, 1H), 3.20 (s, 2H), 3.01 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.76 (dd, J= 18.0, 13.6 Hz, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.98 – 1.90 (m, 2H), 1.80 – 1.72 (m, 1H), 1.66 – 1.53 (m, 3H), 0.99 – 0.93 (m, 1H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 5H), 0.42 – 0.33 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.93 min, purity＞ 86.1%。 實施例 26 ：化合物 26 的合成
步驟 1 ：化合物 26-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 26-1(200 mg, 857.39 μmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，然後加入鈀炭 (20 mg)，在氫氣環境下室溫反應12個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 26-2(170 mg, 836.28 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 204.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 26 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(10 mg, 24.42 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (9.27 mg, 53.72 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (15.78 mg, 122.10 μmol) 和基質 26-2(10.92 mg, 53.72 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 26(2.03 mg, 3.59 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.02 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.51 – 7.48 (m, 2H), 6.55 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.73 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.88 (d, J=17.2 Hz, 1H), 4.80 – 4.77 (m 1H), 4.58 – 4.52 (m, 1H), 4.26 (s, 1H), 3.41 (s, 1H), 3.33 – 3.30 (m, 1H), 3.12 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 3.01 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.78 – 2.72 (m, 2H), 2.47 – 2.44 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 1.84 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 1.79 – 1.74 (m, 1H), 1.61 – 1.52 (m, 1H), 0.98 – 0.93 (m, 1H), 0.72 – 0.68 (m, 5H), 0. 39 – 0.34 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 565.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.65 min, purity＞ 95.9%。 實施例 27 ：化合物 27 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(30 mg, 73.26 μmo)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (25.28 mg, 146.52 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (94.68 mg, 732.59 μmol) 和基質 11-1(38.01 mg, 146.52 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 27(15.00 mg, 22.64 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.63 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.87 (dd, J= 17.3, 1.7 Hz, 1H), 4.77 (s, 1H), 4.55 (dd, J= 16.0, 6.7 Hz, 1H), 3.08 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 3.01 (d, J= 16.6 Hz, 1H), 2.74 (d, J= 16.6 Hz, 1H), 2.28 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.15 (s, 3H), 1.79 – 1.74 (m, 7.3 Hz, 1H), 1.62 – 1.50 (m, 5H), 1.46 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 0.97 – 0.93 (m, 1H), 0.73 – 0.68 (m, 5H), 0.40 – 0.36 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 621.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.72 min, purity＞ 93.7%。 實施例 28 ：化合物 28 的合成
步驟 1 ：化合物 28-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 28-1(500 mg, 2.36 mmol)，溶於N,N-二甲基甲醯胺 (7 mL) 中，然後加入對氟硝基苯 (302.12 mg, 2.14 mmol) 和碳酸鉀 (887.73 mg, 6.42 mmol)，90℃下反應12個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 28-2(670 mg, 2.01 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 278.1 [M+H-56] +。
步驟 2 ：化合物 28-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 28-2(670 mg, 2.01 mmol)，溶於二氯甲烷 (5 mL) 中，加入三氟乙酸 (2.5 mL)，室溫下反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮得到粗品化合物 28-3(670 mg, 2.87 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 234.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 28-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 28-3(670 mg, 2.87 mmol)，溶於甲醇 (8 mL) 中，加入醋酸 (344.96 mg, 5.74 mmol) 和甲醛水溶液 (862.42 mg, 28.72 mmol, 37 %)，室溫攪拌半個小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (360.99 mg, 5.74 mmol)，50℃下反應3個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 28-4(520 mg, 2.10 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 248.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 28-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 28-4(520 mg, 2.10 mmol)，溶於甲醇 (7 mL) 中，然後加入鈀炭 (50 mg)，在氫氣環境下室溫反應三個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 28-5(400 mg, 1.84 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 218.1 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 28 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(15 mg, 36.63 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (13.91 mg, 80.59 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (47.34 mg, 366.30 μmol) 和基質 28-5(17.51 mg, 80.59 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 28(8.09 mg, 11.21 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.02 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.88 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 6.63 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.89 – 4.85 (m, 1H), 4.80 – 4.77 (m, 1H), 4.58 – 4.53 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.06 – 2.99 (m, 3H), 2.89 – 2.84 (m, 2H), 2.74 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 2.58 – 2.55 (m, 2H), 2.40 – 2.37 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.79-1.74 (m, 1H), 1.59 – 1.54 (m, 1H), 0.98 – 0.94 (m, 1H), 0. 72 – 0.68 (m, 5H), 0. 39 – 0.31 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.17, purity＞ 80.2%。 實施例 29 ：化合物 29 的合成
步驟 1 ：化合物 29-2 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入氫化鈉 (696.50 mg, 17.41 mmol, 60%)，加入N,N-二甲基甲醯胺 (50 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加基質 29-1(1.05 g, 4.98 mmol) 和1，2-二溴乙烷 (3.27 g, 17.41 mmol) 的N,N-二甲基甲醯胺 (20 mL) 溶液，保持溫度反應2個小時。LC-MS監測。向反應液中加入飽和氯化銨水溶液，然後用二氯甲烷萃取四次，有機相用水洗滌三次，飽和食鹽水洗滌一次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 29-2(820 mg, 3.46 mol)。LCMS (ESI) m/z: 238.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 29-3 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 29-2(800 mg, 3.46 mol)，加入四氫呋喃 (10 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加乙基溴化鎂的四氫呋喃溶液 (2 M, 6.92 mL)，保持溫度反應1個小時。LC-MS監測。向反應液中加入飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 29-3(665 mg, 2.49 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 268.1 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 29-4 的合成：
在乾燥的微波管中，加入基質 29-3(30 mg, 112.29 μmol)、基質 IM-1(26.21 mg, 117.91 μmol)、碘化亞銅 (42.77 mg, 224.58 μmol)、碘化鈉 (33.66 mg, 224.58 μmol)、碳酸鉀 (38.80 mg, 280.73 μmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (63.89 mg, 449.17 μmol)，然後加入苯甲醚 (1 mL)，在氮氣環境下，130度微波加熱反應3.5個小時。LC-MS監測。將反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 29-4(8 mg, 19.58 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 409.1 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 29 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 29-4(8 mg, 19.58 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (6.08 mg, 35.25 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (25.31 mg, 195.83 μmol) 和基質4- (4-甲基呱嗪) 苯胺 (7.49 mg, 39.17 μmol)，45度反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 29(2.9 mg, 4.38 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.55 (s, 2H), 7.41 – 7.29 (m, 2H), 7.24 (s, 1H), 6.85 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.63 (m, 1H), 5.13 – 5.07 (m, 1H), 4.94 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 4.86 (s, 1H), 4.23 (d, J= 12.0 Hz, 1H), 3.05 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.45 (d, J= 4.8 Hz, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.67 (dd, J= 13.9, 7.2 Hz, 1H), 1.59 – 1.54 (m, 1H), 1.23 (s, 3H), 0.93 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 0.72 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.67 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 0.33 (t, J= 5.2 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z: 552.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.57, purity＞ 83.3%。 實施例 30 ：化合物 30 的合成
步驟 1 ：化合物 30-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 30-1(230 mg, 2.01 mmol)，溶於二甲基亞碸 (5 mL) 中，然後加入對氟硝基苯 (298.42 mg, 2.11 mmol) 和碳酸鉀 (1.39 g, 10.07 mmol)，100℃下反應4個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 30-2(450 mg, 1.91 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 236.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 30-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 30-2(450 mg, 1.91 mmol)，溶於甲醇 (3 mL) 中，然後加入鈀炭 (40 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 30-3(380 mg, 1.85 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 206.1 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 30 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(20 mg, 48.84 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.17 mg, 87.91 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (63.12 mg, 488.40 μmol) 和基質 30-3(20.05 mg, 97.68 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 30(4.9 mg, 8.32 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.73 – 5.63 (m, 1H), 5.02 (dd, J= 10.2, 1.5 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.87 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 4.78 (s, 1H), 4.56 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 3.48 (s, 2H), 3.02 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.84 – 2.69 (m, 4H), 2.37 – 2.30 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.77 (dd, J= 13.6, 7.2 Hz, 1H), 1.56 (dd, J= 13.6, 7.2 Hz, 1H), 1.05 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.98 – 0.91 (m, 1H), 0.70 (t, J= 7.2 Hz, 5H), 0.42 – 0.31 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.57, purity＞ 96.1%。 實施例 31 ：化合物 31 的合成
步驟 1 ：化合物 31a & 31b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(20 mg, 48.84 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.18 mg, 87.91 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (63.00 mg, 488.40 μmol) 和基質 31-1(12.09 mg, 58.61 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 31a(5.1 mg, 8.92 μmol)；SFC保留時間t = 2.264 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.16 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.72 – 7.70 (m, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.94 – 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.89 – 4.85 (m, 1H), 4.82 – 4.72 (m, 1H), 4.58 – 4.53 (m, 1H), 3.74 – 3.66 (m, 2H), 3.55 – 3.50 (m, 2H), 3.05 – 2.98 (m, 1H), 2.76 – 2.72 (m, 1H), 2.24 – 2.18 (m, 2H), 1.79 – 1.74 (m, 1H), 1.59 – 1.53 (m, 1H), 1.19 – 1.26 (m, 6H), 0.98 – 0.93 (m, 1H), 0.72 – 0.68 (m, 5H), 0.41 – 0.32 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 568.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=8.29 min, purity＞ 99.3%。
化合物 31b(5.1 mg, 17.60 μmol)；SFC保留時間t = 3.730 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.16 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.00 - 7.88 (m, 1H), 7.72 – 7.70 (m, 1H), 7.66 – 7.55 (m, 2H), 6.94 – 6.91 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.89 – 4.85 (m, 1H), 4.85 – 4.72 (m, 1H), 4.63 – 4.50 (m, 1H), 3.74 – 3.66 (m, 2H), 3.55 – 3.50 (m, 2H), 3.06 – 2.98 (m, 1H), 2.79 – 2.71 (m, 1H), 2.26 – 2.17 (m, 2H), 1.82 – 1.72 (m, 1H), 1.61 – 1.51 (m, 1H), 1.19 – 1.12 (m, 6H), 0.98 – 0.92 (m, 1H), 0.74 – 0.66 (m, 5H), 0.43 – 0.32 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 568.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.30 min, purity＞ 95.7%。 實施例 32 ：化合物 32 的合成
步驟 1 ：化合物 32 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 3-2(200 mg, 1.03 mol)，加入四氫呋喃 (5 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至0℃，然後緩慢滴加 (三氟甲基) 三甲基矽烷 (732.28 mg, 5.15 mol) 和四丁基氟化銨 (1.03 mL, 1M)，保持溫度反應1個小時。LC-MS監測。將反應液減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 32-1(220 mg, 834.47 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 264.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 32-2 的合成：
在乾燥的微波管中，加入基質 32-1(220 mg, 834.47 μmol)、基質 IM-1(194.75 mg, 876.19 μmol)、碘化亞銅 (318.05 mg, 1.67 mmol)、碘化鈉 (250.32 mg, 1.67 mmol)、碳酸鉀 (288.86 mg, 2.09 mmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (475.08 mg, 3.34 mmol)，然後加入苯甲醚 (4 mL)，在氮氣環境下，130℃微波加熱反應3.5個小時。LC-MS監測。將反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 32-2(150 mg, 333.74 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 450.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 32 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 32-2(20 mg, 44.50 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (13.82 mg, 80.10 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (57.40 mg, 444.99 μmol) 和基質4- (4-甲基呱嗪) 苯胺 ( 1-8, 10.21 mg, 53.40 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物： 32(6.2 mg, 9.65 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.21 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.14 – 8.00 (m, 1H), 7.94 – 7.87 (m, 1H), 7.67 – 7.50 (m, 2H), 6.96 – 6.90 (m, 2H), 6.80 – 6.60 (m, 1H), 5.74 – 5.60 (m,1H), 5.03 – 4.94 (m, 1H), 4.90 – 4.72 (m, 2H), 4.63 – 4.50 (m, 1H), 3.14 – 3.04 (m, 4H), 2.78 – 2.69 (m, 1H), 2.48 – 2.41 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.94 – 1.76 (m, 1H), 1.09 – 0.99 (m, 2H), 0.94 – 0.86 (m, 1H), 0.52 – 0.44 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 593.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.79 min, purity＞ 92.3%。 實施例 33 ：化合物 33 的合成
步驟 1 ：化合物 33-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 33-1(160 mg, 668.77 μmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，然後加入鈀炭 (20 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 33-2(68 mg, 324.95 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 210.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 33 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(20 mg, 36.63 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (16.55 mg, 65.93 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (45.56 mg, 352.52 μmol) 和基質 33-2(30 mg, 143.36 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 33(6.37 mg, 11.16 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform- d) δ 8.78 (s, 1H), 7.81 – 7.70 (m, 3H), 6.99 – 6.85 (m, 2H), 5.75 – 5.65 (m, 1H), 5.03 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4.95 – 4.85 (m, 2H), 4.70 – 4.64 (m, 1H), 3.18 – 3.10 (m, 5H), 2.80 – 2.76 (m, 5H), 2.47 (s, 3H), 1.99 – 1.90 (m, 1H), 1.79 – 1.70 (m, 1H), 1.19 – 1.14 (m, 1H), 0.94 – 0.89 (m, 1H), 0.85 – 0.79 (m, 4H), 0.51 – 0.46 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 571.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.71 min, purity＞ 87.6%。 實施例 34 ：化合物 34 的合成
步驟 1 ：化合物 34-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 34-1(100.00 g, 904.08 mmol)，然後加入碘甲烷 (256.65 g, 1.81 mol) 室溫反應48個小時，有黃色固體產生。向反應液中加入甲基叔丁基醚，打漿、過濾、真空乾燥得到化合物 34-2(189.00 g, 748.40 mmol)。
步驟 2 ：化合物 4-2 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 4-1(30.00 g, 203.84 mmol)，然後加入四氫呋喃 (750 mL) 和叔丁醇 (1500 mL) 溶解，在氮氣保護下冷卻至零下40℃。向反應液中滴加叔丁醇鉀 (73.19 g, 652.29 mmol) 的四氫呋喃 (650 mL) 溶液，保持溫度不變反應四十分鐘，然後加入三乙基苄基氯化銨 (4.64 g, 20.38 mmol) 和基質 34-2(77.22 g, 305.72 mmol)，在室溫下反應18個小時，TLC監測反應完全。向反應液中緩慢加入飽和氯化銨溶液，減壓濃縮除去有機相，水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析 (石油醚：乙酸乙酯=1:1洗脫) 純化得到化合物 4-2(11.00 g, 63.51 mmol)。LCMS (ESI +) m/z: 174.1 [M+H] +。
化合物 4-3~ 4-8的合成請參考 實施例 4中的合成方法
步驟 3 ：化合物 34-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 4-8(27.50 g, 131.12 mmol)，加入二氯甲烷 (300 mL) 溶解，冰浴冷卻下加入戴斯馬丁氧化劑 (83.42 g, 196.68 mmol)，室溫反應兩個小時，TLC監測反應完全。向反應液中加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH到8，然後用二氯甲烷萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析 (石油醚：乙酸乙酯=2:1洗脫) 純化得到化合物 34-3(18.55 g, 89.33 mmol)。LCMS (ESI +) m/z: 208.1 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 34-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 34-3(18.55 g, 89.33 mmol)，然後加入甲醇 (270 mL) 溶解，冷卻至零度，緩慢加入硼氘化鈉 (4.48 g, 107.20 mmol) 保持溫度不變反應1個小時，TLC監測反應完全。將反應液減壓濃縮，殘餘物加入水，用二氯甲烷萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 34-4(18.00g, 85.44 mmol)。LCMS (ESI +) m/z: 211.0 [M+H] +。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 7.63 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 5.35 (s, 1H), 2.86 – 2.67 (m, 2H), 2.22 – 2.15 (m, 1H), 1.12 – 1.06 (m, 1H), 0.73 – 0.62 (m, 1H), 0.44 – 0.40 (m, 1H), 0.38 – 0.30 (m, 2H)。
步驟 5 ：化合物 34-5 的合成：
在乾燥的密封管中加入基質 34-4(5 g, 23.73 mmol)、基質 IM-1(5.55 g, 24.92 mmol)、碘化亞銅 (4.5 g, 23.73 mmol)、碘化鈉 (7.14 g, 47.46 mmol)、碳酸鉀 (8.2 g, 59.33 mmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (6.76 g, 47.46 mmol)，然後加入苯甲醚 (80 mL)，氮氣環境下，在110℃反應18個小時，TLC監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌兩次，濾液用氨水洗滌兩次，飽和食鹽水洗滌兩次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析 (石油醚：乙酸乙酯 = 1:1洗脫) 純化得到化合物 34-5(4.60 g, 11.60 mmol)。LCMS (ESI +) m/z: 397.1 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 34 & 34a & 34b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(57 mg, 143.77 μmol)，溶於四氫呋喃 (5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (44.66 mg, 258.78 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (46 mg, 177.34 μmol) 和基質 7-5(43.84 mg, 215.66 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 34(4.2 mg, 6.40 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 – 7.45 (m, 2H), 6.71 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.73 – 5.64 (m, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.00 (dd, J= 10.0, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (dd, J= 17.2, 1.6 Hz, 1H), 4.74 – 4.56 (m, 2H), 3.59 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.44 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 3.29 – 3.25 (m, 2H), 2.88 – 2.80 (m, 2H), 2.47 – 2.39 (m, 1H), 2.29 – 2.22 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.54 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.16 – 1.08 (m, 1H), 0.71 – 0.64 (m, 1H), 0.45 – 0.40 (m, 1H), 0.40 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 552.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.26 min, purity＞ 84.0%。
按照同樣的方法合成 34，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 34a(10.1 mg, 18.31 μmol)；SFC保留時間t = 4.312 min。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.07 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 2H), 6.71 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.70 (s, 1H), 4.64 – 4.54 (m, 1H), 3.59 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.44 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 3.28 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.92 – 2.81 (m, 2H), 2.43 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 2.41 – 2.29 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.54 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.15 – 1.07 (m, 1H), 0.72 – 0.63 (m, 1H), 0.45 – 0.41 (m, 1H), 0.40 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 552.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.29 min, purity＞ 94.5%。
化合物 34b(10.5 mg, 19.03 μmol)；SFC保留時間t = 7.619 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.07 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.61 (s, 2H), 6.71 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.73 – 5.63 (m, 1H), 5.40 – 5.18 (m, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.76 – 4.54 (m, 2H), 3.59 (d, J= 6.0Hz, 2H), 3.44 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 3.28 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.91 – 2.81 (m, 2H), 2.44 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 2.41 – 2.30 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.54 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.14 – 1.08 (m, 1H), 0.71 – 0.63 (m, 1H), 0.45 – 0.41 (m, 1H), 0.40 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 552.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.38 min, purity＞ 84.4%。 實施例 35 ：化合物 35 的合成
步驟 1 ：化合物 35a & 35b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(40 mg, 97.68 μmol)，溶於四氫呋喃 (4 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.34 mg, 175.82 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (126.24 mg, 976.79 μmol) 和基質 35-1(25.22 mg, 131.87 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 35a(10.0 mg, 14.69 μmol)；SFC保留時間t = 3.112 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.79 – 7.67 (m, 2H), 7.59 (s, 2H), 6.69 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.62 (m, 1H), 5.02 – 4.98 (m, 1H), 4.90 – 4.73 (m, 2H), 4.68 (s, 2H), 3.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 3.24 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 2.93 – 2.75 (m, 2H), 2.49 – 2.44 (m, 1H), 2.35 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 2.04 – 1.93 (m, 1H), 1.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 1.40 (s, 4H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 7H), 0.66 – 0.58 (m, 1H), 0.36 – 0.27 (m, 1H), 0.25 – 0.17 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 593.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.55 min, purity＞ 85.5%。
化合物 35b(10.0 mg, 14.21 μmol)；SFC保留時間t = 4.854 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.87 – 7.67 (m, 2H), 7.59 (s, 2H), 6.69 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.4, 1.6 Hz, 1H), 4.91 – 4.75 (m, 2H), 4.72 – 4.57 (m, 2H), 3.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 3.24 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 2.93 – 2.77 (m, 2H), 2.49 – 2.44 (m, 1H), 2.35 (q, J= 6.4 Hz, 1H), 2.05 – 1.91 (m, 1H), 1.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 1.40 (s, 4H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 7H), 0.65 – 0.58 (m, 1H), 0.34 – 0.27 (m, 1H), 0.23 – 0.17 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 593.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.59 min, purity＞ 84.0%。 實施例 36 ：化合物 36 的合成
步驟 1 ：化合物 36a & 36b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 21-3(45 mg, 106.25 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (33.00 mg, 191.25 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (137.32 mg, 1.06 mmol) 和基質 35-1(49.16 mg, 212.50 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 36a(14.24 mg, 23.47 μmol)；SFC保留時間t = 2.868 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.77 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.69 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 7.63 (m, 1H), 5.03 – 4.96 (m, 1H), 4.85 (d, J= 17.2 Hz, 1H), 4.75 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 4.61 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 3.24 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 2.95 – 2.80 (m, 1H), 2.83 (dd, J= 17.2, 6.0 Hz, 1H), 2.47 (d, J= 6.0 Hz, 1H), 2.38 – 2.28 (m, 2H), 1.95 – 1.88 (m, 1H), 1.79 – 1.71 (m, 1H), 1.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 1.17 – 1.11 (m, 1H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 7H), 0.61 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 0.43 – 0.38 (m, 1H), 0.00 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.29 min, purity ＞ 89.7%。
化合物 36b(13.16 mg, 21.69 μmol)；SFC保留時間t = 3.896 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.77 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.69 (d, J= 8.6 Hz, 2H), 5.72 – 5.60 (m, 1H), 5.00 (dd, J= 10.2, 1.6 Hz, 1H), 4.85 (d, J= 17.1 Hz, 1H), 4.75 (d, J= 15.3 Hz, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.71 (d, J= 5.9 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 11.0 Hz, 2H), 3.24 (d, J= 11.0 Hz, 2H), 2.95 – 2.80 (m, 1H), 2.83 (dd, J= 17.0, 5.9 Hz, 1H), 2.49 – 2.44 (m, 1H), 2.38 – 2.28 (m, 2H), 1.95 – 1.88 (m, 1H), 1.79 – 1.71 (m, 1H), 1.50 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 1.16 – 1.11 (m, 1H), 0.93 (t, J= 7.4 Hz, 3H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 6H), 0.85 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 0.65 – 0.58 (m, 1H), 0.43 – 0.38 (m, 1H), -0.00 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=9.31 min, purity＞ 87.9%。 實施例 37 ：化合物 37 的合成
步驟 20 ：化合物 37a & 37b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(4.10 g, 10.35 mmol)，溶於四氫呋喃 (55 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (3.79 g, 18.63 mmol)，室溫下反應一個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (5.33 g, 41.29 mmol) 和基質 11-1(3.22 g, 12.41 mmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化 (乙腈/0.01%碳酸氫銨水溶液洗脫，60毫升/分鐘) 得到得到化合物，化合物再經超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 37a(1.30 g, 2.14 mmol )，SFC保留時間 t = 5.043 min。LCMS (ESI +) m/z: 608.2 [M+H] +, 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 – 7.42 (m, 2H), 6.91 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.69 – 4.62 (m, 2H), 3.11 – 3.07 (m, 4H), 2.86 – 2.81 (m, 2H), 2.27 (q, J= 12.6, 9.0 Hz, 5H), 2.15 (s, 3H), 1.53 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.46 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.65 (m, 1H), 0.49 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.32 (m, 2H), HPLC method B: RT=8.83 min, purity ＞ 94.1 %。
化合物 37b(1.50 g, 2.47 mmol)，SFC保留時間 t =9.666 min。LCMS (ESI +) m/z: 608.2 [M+H] +, 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 – 7.47 (m, 2H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.62 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 3.09 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.88 – 2.79 (m, 2H), 2.29 (d, J= 6.0 Hz, 4H), 2.24 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.54 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.47 (t, J= 5.4Hz, 4H), 1.13 – 1.09 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.46 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.33 (m, 2H), HPLC method B: RT=8.09 min, purity ＞ 96.5 %。 實施例 38 ：化合物 38 的合成
步驟 1 ：化合物 38a & 38b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 4-9(80 mg, 202.29 μmol)，溶於四氫呋喃 (10 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (61.60 mg, 303.43 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (260.58 mg, 2.02 mmol) 和基質 11-1(78.71 mg, 303.43 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 38a(32.43 mg, 53.45 μmol)；SFC保留時間t = 4.513 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.83 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.67 – 5.65 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.01 – 4.99 (m, 1H), 4.93 – 4.85 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.64 – 4.64 (m, 1H), 3.75 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.09 – 3.07 (m, 4H), 2.87 – 2.80 (m, 2H), 2.30 – 2.26 (m, 4H), 2.24 – 2.22 (m, 1H), 2.16 (s, 3H), 1.54 – 1.52 (m, 4H), 1.47 – 1.45 (m, 4H), 1.14 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.67 (m, 1H), 0.46 – 0.41 (m, 1H), 0.41 – 0.30 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 607.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.39 min, purity ＞ 94.4%。
化合物 38b(32.44 mg, 53.46 μmol)；SFC保留時間t = 8.668 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.83 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.91 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.67 – 5.55 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.65 – 4.52 (m, 1H), 3.75 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.09 – 3.07 (m, 4H), 2.87 – 2.80 (m, 2H), 2.84 – 2.77 (m, 1H), 2.35 – 2.26 (m, 4H), 2.26 – 2.22 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 1.54 – 1.52 (m, 4H), 1.47 – 1.45 (m, 4H), 1.14 – 1.10 (m, 1H), 0.68 – 0.66 (m, 1H), 0.46 – 0.42 (m, 1H), 0.37 – 0.35 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 607.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.40 min, purity ＞ 95.7%。 實施例 39 ：化合物 39 的合成
步驟 1 ：化合物 39a & 39b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(40 mg, 100.89 μmol)，溶於四氫呋喃 (5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (36.87 mg, 181.60 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (130.39 mg, 1.01 mmol) 和基質 35-1(46.68 mg, 201.77 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 39a(10.1 mg, 16.50 μmol)；SFC保留時間t = 3.831 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 – 7.41 (m, 2H), 6.69 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.60 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.77 – 4.64 (m, 1H), 4.62 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 3.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 3.25 (d, J= 11.4 Hz, 2H), 2.85 – 2.81 (m, 2H), 2.49 – 2.46 (m, 1H), 2.35 (q, J= 6.8 Hz, 1H), 2.26 – 2.23 (m, 1H), 1.50 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 1.12 – 1.10 (m, 1H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 6H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 580.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.43 min, purity＞ 94.7%。
化合物 39b(10.4 mg, 17.49 μmol)；SFC保留時間t = 6.371 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 – 7.38 (m, 2H), 6.69 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.60 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.04 – 4.96 (m, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.77 – 4.64 (m, 1H), 4.62 (d, J= 15.0 Hz, 1H), 3.71 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.42 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.25 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.89 – 2.79 (m, 2H), 2.48 – 2.44 (m, 1H), 2.35 (d, J= 11.4 Hz, 1H), 2.28 – 2.22 (m, 1H), 1.50 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.88 (d, J= 6.0 Hz, 6H), 0.71 – 0.65 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 580.2 [M+H] +, HPLC method B: R T=7.44 min, purity＞ 97.5%。 實施例 40 ：化合物 40 的合成：
步驟 1 ：化合物 40-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 40-1(180 mg, 1.58 mmol)，溶於二甲基亞碸 (3 mL) 中，然後加入對氟硝基苯 (233.54 mg, 1.66 mmol) 和碳酸鉀 (1.09 g, 7.88 mmol)，100℃下反應12個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 40-2(300 mg, 1.28 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 236.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 40-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 40-2(300 mg, 1.28 mmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，然後加入鈀炭 (30 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 40-3(230 mg, 1.12 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 206.1 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 40 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 18-2(20 mg, 48.84 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.17 mg, 87.91 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (63.12 mg, 488.40 μmol) 和基質 40-3(20.05 mg, 97.68 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 40(4 mg, 7.06 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 7.91 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.75 – 5.64 (m, 1H), 5.03 – 4.98 (m, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.88 (dd, J= 17.2, 1.6 Hz, 1H), 4.78 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 4.56 (dd, J= 16.0, 6.4 Hz, 1H), 3.48 (t, J= 10.8 Hz, 2H), 3.02 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 2.82 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.75 (d, J= 13.6 Hz, 1H), 2.72 – 2.66 (m, 1H), 2.38 – 2.30 (m, 1H), 2.27 (d, J= 11.2 Hz, 1H), 2.22 (s, 3H), 2.13 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 1.80 – 1.75 (m, 1H), 1.62 – 1.53 (m, 1H), 1.06 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.99 – 0.92 (m, 1H), 0.76 – 0.67 (m, 5H), 0.42 – 0.33 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 567.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.59, purity＞ 88.5%。 實施例 41 ：化合物 41 的合成
步驟 1 ：化合物 41a & 41b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(40 mg, 100.89 μmol)，溶於四氫呋喃 (3 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (36.87 mg, 181.60 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (130.39 mg, 1.01 mmol) 和基質 41-1(47.08 mg, 201.77 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 41a(5.1 mg, 8.45 μmol)；SFC保留時間t = 3.476 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.84 – 7.78 (m, 1H), 7.76 – 7.70 (m, 1H), 7.70 – 7.60 (m, 1H), 7.43 – 7.37 (m, 1H), 7.00 – 6.94 (m, 1H), 5.74 – 5.60 (m,1H), 5.29 (s, 1H), 5.03 – 4.96 (m, 1H), 4.93 – 4.83 (m, 1H), 4.74 – 4.58 (m, 2H), 3.10 – 3.01 (m, 2H), 2.92 – 2.76 (m, 2H), 2.62 – 2.53 (m, 2H), 2.30 – 2.20 (m, 1H), 1.90 – 1.80 (m, 2H), 1.60 – 1.48 (m, 2H), 1.15 – 1.14 (m, 1H), 0.71 – 0.62 (s, 1H), 0.47 – 0.31 (m, 3H)。LCMS (ESI) m/z: 582.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.13 min, purity＞ 96.4%。
化合物 41b(5.2 mg, 8.47 μmol)；SFC保留時間t = 8.440 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.88 – 7.76 (m, 1H), 7.76 – 7.69 (m, 1H), 7.70 – 7.55 (m, 1H), 7.44 – 7.31 (m, 1H), 7.02 – 6.94 (m, 1H), 5.74 – 5.60 (m,1H), 5.29 (s, 1H), 5.03 – 4.96 (m, 1H), 4.93 - 4.83 (m, 1H), 4.77 – 4.56 (m, 2H), 3.10 – 3.01 (m, 2H), 2.92 – 2.76 (m, 2H), 2.62 – 2.53 (m, 2H), 2.30 – 2.20 (m, 1H), 1.90 – 1.79 (m, 2H), 1.60 – 1.48 (m, 2H), 1.17 – 1.06 (m, 1H), 0.71 – 0.62 (s, 1H), 0.47 – 0.31 (m, 3H). LCMS (ESI) m/z: 582.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.56 min, purity＞ 94.8%。 實施例 42 ：化合物 42 的合成
步驟 1 ：化合物 42a & 42b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 3-4(30 mg, 75.86 μmol)，溶於四氫呋喃 (1.5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (26.18 mg, 151.72 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (98.04 mg, 758.58 μmol) 和基質 41-1(17.70 mg, 75.86 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 42a(4.0 mg, 6.39 μmol)；SFC保留時間t = 2.339 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 – 7.40 (m, 1H), 6.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.74 – 5.65 (m, 1H), 5.03 – 4.99 (m, 2H), 4.90 – 4.85 (m, 1H), 4.74 (d, J= 16.4 Hz, 1H), 4.62 – 4.57 (m, 1H), 3.04 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 2.89 (s, 2H), 2.60 – 2.49 (m, 2H), 2.23 (s, 9H), 1.84 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 1.58-1.50 (m, 2H), 1.22 (s, 4H), 0.95 – 0.90 (m, 1H), 0.70 – 0.66 (m, 1H), 0.61 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.43 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 581.3[M+H] +, HPLC method B: R T=8.01 min, purity＞ 92.7%。
化合物 42b(4.0 mg, 6.40 μmol)；SFC保留時間t = 5.345 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 – 7.40 (m, 1H), 6.97 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.74 – 5.65 (m, 1H), 5.03 – 4.99 (m, 2H), 4.74 (d, J= 16.0 Hz, 1H), 4.62 – 4.57 (m, 1H), 3.04 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 2.89 (d, J= 2.0 Hz, 2H), 2.60 – 2.54 (m, 2H), 2.23 (d, J= 4.0 Hz, 9H), 1.84 (d, J= 12.4 Hz, 2H), 1.57 – 1.49 (m, 2H), 1.26 – 1.22 (m, 4H), 0.95 – 0.90 (s, 1H), 0.72 – 0.66 (m, 1H), 0.60 – 0.56 (m, 1H), 0.48 – 0.43 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 581.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.11 min, purity＞ 92.9%。 實施例 43 ：化合物 43 的合成
步驟 1 ：化合物 43 & 43a & 43b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(105 mg, 256.41 μmol)，溶於四氫呋喃 (5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (79.65 mg, 461.54 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (330.24 mg, 2.56 mmol) 和基質 28-5(111.44 mg, 512.82 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 43(20.09 mg, 28.74 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.77 – 7.68 (m, 2H), 7.53 (s, 2H), 6.63 (d, J=8.8 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J=10.2, 1.6 Hz, 2H), 4.88 – 4.79 (m, 2H), 4.69 – 4.61 (m, 2H), 3.31 (s, 2H), 3.06 – 3.03 (m, 2H), 2.93 – 2.76 (m, 4H), 2.59 – 2.55 (m, 2H), 2.40 – 2.37 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.45 – 1.40 (m, 4H), 1.87 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.61 (m, 1H), 0.34 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.97min, purity＞ 82.8%。
用同樣方法合成化合物 43，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 43a(2.3 mg, 3.50 μmol)；SFC保留時間t = 3.946 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 6.64 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.73 – 5.64 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.86 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.64 (d, J= 13.8 Hz, 1H), 3.06 – 3.01 (m, 2H), 2.90 – 2.84 (m, 3H), 2.82 – 2.78 (m, 1H), 2.59 – 2.55 (m, 2H), 2.38 (dd, J= 9.0, 3.0 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.45 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.88 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.61 (m, 1H), 0.34 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.76min, purity＞ 88.0%。
化合物 43b(9.3 mg, 13.90 μmol)；SFC保留時間t = 6.047 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.54 (s, 2H), 6.63 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.86 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.80 (s, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.67 – 4.59 (m, 1H), 3.08 – 3.02 (m, 2H), 2.90 – 2.84 (m, 3H), 2.82 – 2.78 (m, 1H), 2.57 (t, J= 7.8 Hz, 2H), 2.42 – 2.37 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.46 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.66 – 0.61 (m, 1H), 0.35 – 0.30 (m, 1H), 0.24 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.81 min, purity＞ 82.1%。 實施例 44 ：化合物 44 的合成
步驟 1 ：化合物 44 & 44a & 44b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(90 mg, 219.78 μmol)，溶於四氫呋喃 (4 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (68.27 mg, 395.06 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (282.51 mg, 2.19 mmol) 和基質 11-1(114.02 mg, 439.56)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 44(21.5 mg, 34.63 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.10 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.78 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 5.03 – 4.98 (m, 1H), 4.92 – 4.75 (m, 2H), 4.69 – 4.58 (m, 2H), 3.09 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.92 – 2.76 (m, 2H), 2.38 – 2.28 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 2.04 – 1.96 (m, 1H), 1.54 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.47 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.45 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.88 – 0.82 (m, 1H), 0.65 – 0.59 (m, 1H), 0.36 – 0.29 (m, 1H), 0.25 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 621.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.63min, purity＞ 96.8%。
同樣方法合成化合物 44 ，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 44a(1.6 mg, 2.23 μmol)；SFC保留時間t = 3.819 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.10 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.82 – 7.73 (m, 1H), 7.71 – 7.65 (m, 1H), 7.63 – 7.48 (m, 2H), 6.96 – 6.86 (m, 2H), 5.72 – 5.62 (m,1H), 5.03 – 4.95 (m, 1H), 4.91 – 4.74 (m, 2H), 4.73 – 4.58 (m, 2H), 3.29 (s, 1H), 3.10 – 3.06 (m, 4H), 2.93 – 2.84 (m, 1H), 2.83 – 2.76 (m, 1H), 2.36 – 2.25 (m, 3H), 2.24 – 2.13 (m, 3H), 2.03 – 1.95 (m, 1H), 1.56 – 1.51 (m, 4H), 1.50 – 1.45 (m, 4H), 1.40 (s, 3H), 1.25 – 1.21 (m, 1H), 0.88 – 0.82 (m, 1H), 0.66 – 0.58 (m, 1H), 0.35 – 0.29 (m, 1H), 0.24 – 0.18 (m, 1H)。 LCMS (ESI) m/z: 621.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.05 min, purity＞ 86.7%。
化合物 44b(1.5 mg, 2.21 μmol)；SFC保留時間t = 6.629 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.10 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 7.82 – 7.73 (m, 1H), 7.71 – 7.65 (m, 1H), 7.61 – 7.49 (m, 2H), 6.96 – 6.86 (m, 2H), 5.71 – 5.61 (m,1H), 5.03 – 4.95 (m, 1H), 4.89 – 4.83 (m, 1H), 4.83 – 4.74 (m, 1H), 4.73 – 4.67 (m,1H), 4.67 – 4.59 (m, 1H), 3.10 – 3.06 (m, 4H), 2.92 – 2.85 (m, 1H), 2.83 – 2.76 (m, 1H), 2.32 – 2.27 (m, 3H), 2.20 – 2.13 (m, 3H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.56 – 1.51 (m, 4H), 1.50 – 1.45 (m, 4H), 1.40 (s, 3H), 1.26 – 1.17 (m, 2H), 0.88 – 0.82 (m, 1H), 0.66 – 0.58 (m, 1H), 0.35 – 0.29 (m, 1H), 0.24 – 0.18 (m, 1H)。LCMS (ESI) m/z: 621.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.03 min, purity＞ 91.4%。 實施例 45 ：化合物 45 的合成
步驟 1 ：化合物 45a & 45b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(40 mg, 97.68 μmol)，溶於四氫呋喃 (4 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.34 mg, 175.82 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (126.01 mg, 976.79 μmol) 和基質 45-1(39.71 mg, 195.36 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 45a(8.52 mg, 14.66 μmol)；SFC保留時間t = 3.602 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.00 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.79 – 7.62 (m, 2H), 7.57 – 7.31 (m, 2H), 6.56 (d, J= 7.8 Hz, 2H), 5.72 – 5.60 (m,1H), 5.04 – 4.94 (m, 1H), 4.91 – 4.72 (m, 2H), 4.72 – 4.56 (m, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.42 – 3.40 (m, 2H), 3.16 – 3.10 (m, 1H), 2.92 – 2.82 (m, 1H), 2.82 – 2.74 (m, 2H), 2.48 – 2.44 (m, 1H), 2.24 (s, 3H), 2.02 – 1.92 (m, 1H), 1.90- 1.81 (m, 1H), 1.79 – 1. 71 (m, 1H), 1.47 – 1.37 (m, 4H), 0.90 – 0.80 (m, 1H), 0.66 – 0.58 (m, 1H), 0.36 – 0.26 (m, 1H), 0.24 – 0.15 (m, 1H)。LCMS (ESI) m/z: 565.4[M+H] +， HPLC Method B Rt = 8.36 min, purity ＞ 97.13%。
化合物 45b(7.8 mg, 13.39 μmol)；SFC保留時間t = 7.195 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.00 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.79 – 7.62 (m, 2H), 7.57 – 7.15 (m, 2H), 6.57 – 6.41 (m, 2H), 5.72 – 5.60 (m,1H), 5.04 – 4.94 (m, 1H), 4.91 – 4.72 (m, 2H), 4.72 – 4.56 (m, 2H), 4.27 (s, 1H), 3.42 – 3.40 (m, 2H), 3.16 – 3.10 (m, 1H), 2.92 – 2.82 (m, 1H), 2.82 – 2.74 (m, 2H), 2.48 – 2.44 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.02 – 1.92 (m, 1H), 1.90 – 1.81 (m, 1H), 1.79 – 1. 71 (m, 1H), 1.47 – 1.37 (m, 4H), 0.90 – 0.80 (m, 1H), 0.66 – 0.58 (m, 1H), 0.36 – 0.26 (m, 1H), 0.24 – 0.15 (m, 1H)。LCMS (ESI) m/z: 565.3[M+H] +， HPLC Method B Rt = 8.317 min, purity ＞ 96.94%。 實施例 46 ：化合物 46 的合成
步驟 1 ：化合物 46-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 46-1(400 mg, 2.02 mmol)，溶於二甲基亞碸 (5 mL) 中，然後加入2-氟-5-硝基甲苯 (310 mg, 2.00 mmol) 和碳酸鉀 (390.35 mg, 2.82 mmol)，120℃下反應6個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 46-2(290 mg, 869.87 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 278.2 [M+H-56] +。
步驟 2 ：化合物 46-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 46-2(290 mg, 869.87 μmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，然後加入鈀炭 (30 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 46-3(240 mg, 791.03 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 248.0 [M+H-56] +。
步驟 3 ：化合物 46-4 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 46-3(120 mg, 395.52 μmol)，加入無水四氫呋喃 (3 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加氫化鋁鋰的四氫呋喃溶液 (1.98 mL, 1.98 mmol, 1M)，65℃加熱回流反應四個小時。LC-MS監測。向反應液中加入水，10%氫氧化鈉水溶液，攪拌半個小時，用無水硫酸鈉乾燥，加矽藻土過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 46-4(38 mg, 174.87 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 218.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 46 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 3-4(15 mg, 37.93 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (7.59 mg, 68.27 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (48.93 mg, 379.30 μmol) 和基質 46-4(16.49 mg, 75.86 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 46(2.0 mg, 3.10 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.15 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.88 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.74 – 7.70 (m, 2H), 7.48 – 7.42 (m, 1H), 7.29 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.73 – 5.67 (m, 1H), 5.03 – 5.00 (m, 2H), 4.88 (d, J= 16.8 Hz, 1H), 4.73 – 4.58 (m, 2H), 3.52 (d, J= 10.8 Hz, 4H), 3.17 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 3.04 – 3.03 (m, 2H), 2.92 – 2.86 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.99 – 1.96 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 0.94 – 0.90 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.59 – 0.56 (m, 1H), 0.47 – 0.44 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 565.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.66 min, purity＞ 87.6%。 實施例 47 ：化合物 47 的合成
步驟 1 ：化合物 47-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 47-1(300 mg, 1.15 mmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，然後加入鈀炭 (30 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 47-2(230 mg, 994.23 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 232.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 47 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(15 mg, 36.63 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (11.38 mg, 65.93 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (47.34 mg, 366.30 μmol) 和基質 47-2(16.95 mg, 73.26 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 47(4.0 mg, 6.75 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d6) δ 8.97 – 8.66 (m, 1H), 7.79 – 7.45 (m, 3H), 7.35 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.68 – 6.47 (m, 2H), 5.68 – 5.59 (m, 2H), 5.00 (d, J= 10.4 Hz, 1H), 4.86 (d, J= 14.8 Hz, 1H), 4.76 – 4.57 (m, 2H), 4.16 (s, 3H), 3.85 (d, J= 10.0 Hz, 1H), 3.78 – 3.66 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 3.23 (s, 3H), 2.85 – 2.71 (m, 2H), 2.16 (s, 2H), 1.99 – 1.89 (m, 3H), 1.40 (s, 4H), 0.85 – 0.83 (m, 1H), 0.64 – 0.62 (m, 1H), 0.34 – 0.31 (m, 1H), 0.26 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 593.4 [M+H] +, HPLC Method B R T= 7.58 min, purity ＞98.6%. LCMS (ESI) m/z: 593.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.55 min, purity＞ 98.8%。 實施例 48 ：化合物 48 的合成
步驟 1 ：化合物 48a & 48b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 4-9(20 mg, 50.57 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (17.45 mg, 101.14 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (65.36 mg, 505.72 μmol) 和基質 41-1(11.80 mg, 50.57 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 48a(4.93 mg, 7.62 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 – 7.66 (m, 1H), 7.42 – 7.39 (m, 1H), 6.97 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 5.01 (dd, J= 1.2, 10.4 Hz, 1H), 4.88 (dd, J= 10.4, 1.2 Hz, 1H), 4.72 – 4.64 (m, 2H), 3.74 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 3.04 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.87 – 2.84 (m, 1H), 2.57 (t, J= 10.8 Hz, 2H), 2.28 – 2.18 (m, 11H), 1.83 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 1.57 – 1.52 (m, 2H), 1.15 – 1.09 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 581.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.46 min, purity＞ 89.8%。
化合物 48b(4.43 mg, 6.42 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 – 7.66 (m, 1H), 7.42 – 7.39 (m, 1H), 6.97 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 5.01 (dd, J= 1.2, 10.4 Hz, 1H), 4.88 (dd, J= 10.4, 1.2 Hz, 1H), 4.72 – 4.60 (m, 2H), 3.74 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 3.04 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.87 – 2.84 (m, 1H), 2.57 (t, J= 10.8 Hz, 2H), 2.28 – 2.18 (m, 11H), 1.83 (d, J= 11.2 Hz, 2H), 1.57 – 1.52 (m, 2H), 1.15 – 1.09 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 581.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.50 min, purity＞ 84.1%。 實施例 49 ：化合物 49 的合成
步驟 1 ：化合物 49-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 49-1(416 mg, 2.10 mmol)，溶於二甲基亞碸 (5 mL) 中，然後加入2-氟5-硝基苯甲醚 (342 mg, 2.00 mmol) 和碳酸鉀 (386.68 mg, 2.80 mmol)，110℃下反應4個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 49-2(470 mg, 1.35 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 294.3 [M+H-56] +。
步驟 2 ：化合物 49-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 49-2(200 mg, 572.44 μmol)，溶於二氯甲烷 (3 mL) 中，加入三氟乙酸 (3 mL)，室溫下反應1個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮得到粗品化合物 49-3(140 mg, 561.65 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 250.1 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 49-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 49-3(140 mg, 561.65 μmol)，溶於甲醇 (5 mL) 中，加入醋酸 (0.5 mL) 和甲醛水溶液 (191.30 mg, 5.62 mmol, 37 %)，室溫攪拌半個小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (105.88 mg, 1.68 mmol)，50℃下反應6個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 49-4(32 mg, 121.54 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 264.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 49-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 49-4(32 mg, 121.54 μmol)，溶於甲醇 (3 mL) 中，然後加入鈀炭 (5 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 49-5(25.0 mg, 107.15 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 234.1 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 49 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 4-9(20 mg, 50.57 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.54 mg, 90.03 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (138.49 mg, 1.07 mmol) 和基質 49-5(25.0 mg, 107.15 μmol)，25℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 49(3.0 mg, 4.71 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, Chloroform-d) δ 8.83 (s, 1H), 7.67 – 7.63 (m, 2H), 7.17 (s, 1H), 7.10 – 7.09 (m, 1H), 7.00 – 6.98 (m, 1H), 5.76 – 5.69 (m, 1H), 5.06 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 17.4, 1.2 Hz, 1H), 4.69 – 4.63 (m, 2H), 4.28 (s, 1H), 3.80 (d, J = 4.2 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.75 – 3.72 (m, 2H), 3.59 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 2.91 – 2.89 (m, 2H), 2.76 (s, 1H), 2.35 (s, 3H), 2.04 (s, 1H), 2.00 – 1.95 (m, 2H), 1.63 – 1.59 (m, 1H), 0.84 – 0.83 (m, 1H), 0.68 – 0.66 (m, 1H), 0.48 – 0.44 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 581.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.19 min, purity＞ 91.1%。 實施例 50 ：化合物 50 的合成
步驟 1 ：化合物 50a & 50b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (22.76 mg, 131.87 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (81.02 mg, 626.91 μmol) 和基質 50-1(29 mg, 125.38 μmol)，25℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 50a(10.1 mg, 16.68 μmol)；SFC保留時間t = 6.088 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.68 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 5.70 – 5.63 (m, 1H), 4.99 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.87 – 4.80 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.65 – 4.63 (m, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.70 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 3.60 (d, J =9.6 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.31 (s, 1H), 2.91-2.86 (m, 1H), 2.81 – 2.78 (m, 1H), 2.64 – 2.61 (m, 1H), 2.01 – 1.96 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.45 – 1.40 (m, 4H), 0.86 – 0.84 (m, 1H), 0.64 – 0.61 (m, 1H), 0.33 – 0.30 (m, 1H), 0.22 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 593.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.16 min, purity＞ 97.9%。
化合物 54b(9.5 mg, 15.44 μmol)；SFC保留時間t = 9.232 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO-d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.70 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.68 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.63 (m, 1H), 5.00 – 4.98 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 4.87 – 4.80 (m, 2H), 4.68 (s, 1H), 4.65 – 4.63 (m, 2H), 4.40 (s, 1H), 3.70 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.60 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 3.30 (s, 1H), 2.91 – 2.86 (m, 1H), 2.81 – 2.78 (m, 1H), 2.64 – 2.61 (m, 1H), 2.01 – 1.96 (m, 1H), 1.82 (s, 3H), 1.58 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 1.45 – 1.40 (m, 4H), 0.86 – 0.84 (m, 1H), 0.64 – 0.61 (m, 1H), 0.33 – 0.30 (m, 1H), 0.22 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 581.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.17 min, purity＞ 96.3%。 實施例 51 ：化合物 51 的合成
步驟 1 ：化合物 51a & 51b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (22.76 mg, 131.87 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (89.21 mg, 690.26 μmol) 和基質 51-1(30 mg, 138.05 μmol)，25℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 51a(9.1 mg, 14.28 μmol)；SFC保留時間t = 3.568 min。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.66 (d, J =12.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J =12.0 Hz, 1H), 7.46 (s, 2H), 6.72 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 5.78 – 5.68 (m, 1H), 5.07 (dd, J = 15.6, 1.2 Hz, 1H), 4.99 (dd, J = 25.2, 1.8 Hz, 1H), 4.78 – 4.61 (m, 2H), 3.97 (s, 2H), 3.59 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 3.02 – 2.93 (m, 1H), 2.86 – 2.80 (m, 2H), 2.54 – 2.52 (m, 2H), 2.36 – 2.28 (m, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.30 – 1.24 (m, 2H), 1.10 (t, J = 10.8 Hz, 3H), 1.03 – 0.98 (m, 1H), 0.88 – 0.83 (m, 1H), 0.44 – 0.39 (m, 1H), 0.25 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.55 min, purity＞ 90.8%。
化合物 51b(7.9 mg, 13.65 μmol)；SFC保留時間t = 5.059 min。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.65 (d, J =12.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J =12.0 Hz, 1H), 7.49 (s, 2H), 6.72 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 5.77 – 5.68 (m, 1H), 5.07 (dd, J = 15.6, 1.2 Hz, 1H), 4.98 (dd, J = 25.2, 1.8 Hz, 1H), 4.78 – 4.61 (m, 2H), 4.06 (s, 2H), 3.62 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 3.48 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 3.34 (s, 1H), 3.02 – 2.93 (m, 1H), 2.86 – 2.80 (m, 2H), 2.60 – 2.59 (m, 2H), 2.36 – 2.28 (m, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.30 – 1.24 (m, 2H), 1.15 (t, J = 10.8 Hz, 3H), 1.03 – 0.98 (m, 1H), 0.88 – 0.83 (m, 1H), 0.44 – 0.39 (m, 1H), 0.25 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.40 min, purity＞ 95.4%。 實施例 52 ：化合物 52 的合成
步驟 1 ：化合物 52a & 52b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (31.61 mg, 183.15 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (94.68 mg, 732.59 μmol) 和基質 41-1(34.19 mg, 146.52 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 52a(6.2 mg, 9.00 μmol)；SFC保留時間t = 3.064 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72 – 7.65 (m, 2H), 7.41 – 7.38 (m, 1H), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J = 10.4, 1.2 Hz, 1H), 4.88 – 4.83 (m, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.66 – 4.61 (m, 1H), 3.04 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.93 – 2.77 (m, 2H), 2.59 – 2.54 (m, 2H), 2.25 – 2.15 (m, 11H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.83 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.58 – 1.48 (m, 2H), 1.46 – 1.40 (m, 4H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.60 (m, 1H), 0.35 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 595.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.14 min, purity＞ 86.3%。
化合物 52b(6.56 mg, 9.89 μmol)；SFC保留時間t = 5.193 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.72 – 7.65 (m, 2H), 7.41 – 7.38 (m, 1H), 6.97 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J =10.4, 1.2 Hz, 1H), 4.88 – 4.78 (m, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.67 – 4.61 (m, 1H), 3.04 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.93 – 2.77 (m, 2H), 2.59 – 2.54 (m, 2H), 2.25 – 2.15 (m, 11H), 2.02 – 1.95 (m, 1H), 1.83 (d, J =11.6 Hz, 2H), 1.58 – 1.48 (m, 2H), 1.46 – 1.40 (m, 4H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.65 – 0.60 (m, 1H), 0.35 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 595.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.32 min, purity＞ 89.7%。 實施例 53 ：化合物 53 的合成
步驟 1 ：化合物 53-1 的合成：
在乾燥的三口瓶中加入基質 34-3(180 mg, 866.82 μmol)，加入四氫呋喃 (5 mL) 溶解，氮氣保護下冷卻至零度，然後緩慢滴加 (三氟甲基) 三甲基矽烷 (616.28 mg, 4.33 mmol) 和四丁基氟化銨 (1 M, 866.82 μL)，保持溫度反應1個小時。LC-MS監測。將反應液減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得化合物 53-1(209 mg, 752.69 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 278.1 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 53-2 的合成：
在乾燥的微波管中，加入基質 53-1(209 mg, 752.69 μmol)、基質 IM-1(175.66 mg, 790.33 μmol)、碘化亞銅 (286.70 mg, 1.51 mmol)、碘化鈉 (225.64 mg, 1.51 mmol)、碳酸鉀 (260.07 mg, 1.88 mmol) 和反- (1R,2R) -N,N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (428.25 mg, 3.01 mmol)，然後加入苯甲醚 (15 mL)，在氮氣環境下，130度微波加熱反應3個小時。LC-MS監測。將反應液冷卻至室溫，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 53-2(210 mg, 453.10 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 464.3 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 53a & 53b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 53-2(40 mg, 86.30 μmol)，溶於四氫呋喃 (4 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (31.54 mg, 155.35 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (111.54 mg, 863.05 μmol) 和基質4- (4-甲基呱嗪) 苯胺 (33.02 mg, 172.61 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 53a(12.6 mg, 18.88 μmol)；SFC保留時間t = 2.141 min。 1 H NMR(600 MHz, Methanol- d 4) δ 10.17 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.06 – 7.92 (m, 1H), 7.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 4.97 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.88 – 4.73 (m, 2H), 4.59 (dd, J= 16.2, 7.2 Hz, 1H), 3.11 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.05 – 2.99 (m, 1H), 2.93 (dd, J= 17.2, 6.0 Hz, 1H), 2.47 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.25 – 1.17 (m, 2H), 1.05 – 1.09 (m, 1H), 0.74 – 0.72 (m, 1H), 0.60 – 0.52 (m, 1H), 0.22 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.5 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.74 min, purity＞ 90.9%。
化合物 53b(13.7 mg, 20.60 μmol)；SFC保留時間t = 3.522 min。 1 H NMR(600 MHz, Methanol- d 4) δ 10.17 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.07 – 7.92 (m, 1H), 7.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 5.02 – 4.93 (m, 1H), 4.86 – 4.73 (m, 2H), 4.59 (dd, J= 16.2, 7.2 Hz, 1H), 3.11 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.05 – 2.99 (m, 1H), 2.93 (dd, J= 17.2, 6.0 Hz, 1H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.25 – 1.16 (m, 2H), 1.05 – 1.09 (m, 1H), 0.74 – 0.72 (m, 1H), 0.60 – 0.52 (m, 1H), 0.22 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 607.1 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.77 min, purity＞ 91.2%。 實施例 54 ：化合物 54 的合成
步驟 1 ：化合物 54a & 54b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 53-2(40 mg, 86.30 μmol)，溶於四氫呋喃 (4 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (31.54 mg, 155.35 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (111.54 mg, 863.05 μmol) 和基質 12-1(37.86 mg, 172.61 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 54a(8.2 mg, 12.61 μmol)；SFC保留時間t = 2.764 min。 1 H NMR(600 MHz, Methanol- d 4) δ 10.17 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.06 – 7.92 (m, 1H), 7.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 4.97 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.88 – 4.73 (m, 2H), 4.59 (dd, J= 16.2, 7.2 Hz, 1H), 3.11 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.06 – 2.98 (m, 1H), 2.93 (dd, J= 17.2, 6.0 Hz, 1H), 2.47 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.25 – 1.17 (m, 2H), 1.03 – 0.97 (m, 1H), 0.70 – 0.75 (m, 1H), 0.60 – 0.52 (m, 1H), 0.23 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 635.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.66 min, purity＞ 97.6%。
化合物 54b(10.0 mg, 14.98 μmol)；SFC保留時間t = 4.157 min。 1 H NMR(600 MHz, Methanol- d 4) δ 10.17 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.07 – 7.92 (m, 1H), 7.89 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.94 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.03 (s, 1H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 5.02 – 4.93 (m, 1H), 4.86 – 4.73 (m, 2H), 4.59 (dd, J= 16.2, 7.2 Hz, 1H), 3.11 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 3.06 – 2.98 (m, 1H), 2.93 (dd, J= 17.2, 6.0 Hz, 1H), 2.46 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.25 – 1.16 (m, 2H), 1.03 – 0.97 (m, 1H), 0.70 – 0.75 (m, 1H), 0.60 – 0.52 (m, 1H), 0.23 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 635.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.75 min, purity＞ 95.1%。 實施例 55 ：化合物 55 的合成
步驟 1 ：化合物 55 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 32-2(40 mg, 89.00 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (38.40 mg, 222.49 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (115.02 mg, 889.98 μmol) 和基質 28-5(38.68 mg, 178.00 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 55(12.38 mg, 17.33 μmol)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.04 – 8.02 (m, 1H), 7.91 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.53 (s, 2H), 6.69 (s, 1H), 6.54 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.62 (m, 1H), 4.98 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 4.82 (d, J = 16.8 Hz, 2H), 4.57 (dd, J = 7.2, 16.0 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.22 – 3.18 (m, 1H), 3.05 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.87 – 2.86 (m, 2H), 2.75 – 2.71 (m, 1H), 2.56 (t, J = 8.8 Hz, 2H), 2.40 – 2.22 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.04 – 0.99 (m, 2H), 0.91 – 0.88 (m, 1H), 0.49 – 0.47 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 619.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.79 min, purity＞ 86.6%。 實施例 56 ：化合物 56 的合成
步驟 1 ：化合物 56a & 56b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(35 mg, 88.28 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (27.42 mg, 158.90 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (114.09 mg, 882.76 μmol,) 和基質 30-3(36.25 mg, 176.55 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 56a(11.0 mg, 19.87 μmol)；SFC保留時間t = 3.027 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.62 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.02 – 4.97 (m, 1H), 4.93 – 4.85 (m, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.61 (dd, J= 15.9, 5.7 Hz, 1H), 3.52 – 3.43 (m, 2H), 2.89 – 2.78 (m, 3H), 2.72 – 2.65 (m, 1H), 2.37 – 2.31 (m, 1H), 2.30 – 2.22 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.17 – 2.10 (m, J= 9.7, 6.3, 2.9 Hz, 1H), 1.14 – 1.08 (m, 1H), 1.06 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 0.71 – 0.63 (m, 1H), 0.46 – 0.41 (m, 1H), 0.40 – 0.32 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 554.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.15 min, purity＞ 82.1%。
化合物 56b(10.8 mg, 19.51 μmol)；SFC保留時間t = 5.117 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 7.01 – 6.79 (m, 2H), 5.73 – 5.62 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.02 – 4.97 (m, 1H), 4.94 – 4.85 (m, 1H), 4.68 (s, 1H), 4.61 (dd, J= 15.7, 5.7 Hz, 1H), 3.49 (d, J= 11.0 Hz, 2H), 2.88 – 2.78 (m, 3H), 2.72 – 2.64 (m, 1H), 2.34 (dd, J= 11.6, 9.9 Hz, 1H), 2.30 – 2.23 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.17 – 2.10 (m, J= 9.7, 6.3, 2.9 Hz, 1H), 1.15 – 1.08 (m, 1H), 1.06 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 0.71 – 0.62 (m, 1H), 0.47 – 0.41 (m, 1H), 0.40 – 0.33 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 554.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.15 min, purity＞ 87.6%。 實施例 57 ：化合物 57 的合成
步驟 1 ：化合物 57a & 57b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(35 mg, 88.28 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.23 mg, 88.28 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (114.09 mg, 882.76 μmol,) 和基質 57-1(38.72 mg, 176.55 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 57a(12.5 mg, 22.02 μmol)；SFC保留時間t = 3.149 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 – 7.49 (m, 2H), 6.91 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.74 – 5.63 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (dd, J= 10.2, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (dd, J= 17.2, 1.6 Hz, 1H), 4.64 (dd, J= 17.2, 1.2 Hz, 2H), 3.09 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.90 – 2.81 (m, 2H), 2.71 – 2.64 (m, 1H), 2.58 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.29 – 2.21 (m, 1H), 1.14 – 1.08 (m, 1H), 1.02 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.70 – 0.64 (m, 1H), 0.47 – 0.41 (m, 1H), 0.39 – 0.30 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 568.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.64 min, purity＞ 86.5%。
化合物 57b(12.4 mg, 21.84 μmol)；SFC保留時間t = 4.956 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.91 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 5.74 – 5.64 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (dd, J= 10.2, 1.6 Hz, 1H), 4.89 (dd, J= 17.2, 1.6 Hz, 1H), 4.64 (dd, J= 17.2, 1.6 Hz, 2H), 3.09 (t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.89 – 2.79 (m, 2H), 2.71 – 2.64 (m, 1H), 2.58 (t, J= 5.0 Hz, 4H), 2.29 – 2.21 (m, 1H), 1.14 – 1.07 (m, 1H), 1.02 (s, 3H), 1.00 (s, 3H), 0.70 – 0.64 (m, 1H), 0.47 – 0.41 (m, 1H), 0.39 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 568.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.63 min, purity＞ 88.6%。 實施例 58 ：化合物 58 的合成
步驟 1 ：化合物 58a & 58b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 53-2(40 mg, 86.30 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (37.23 mg, 215.76 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (111.54 mg, 863.05 μmol) 和基質 28-5(18.75 mg, 86.30 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 58a(7.25 mg, 9.60 μmol)；SFC保留時間t = 3.125 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.09 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.94 – 7.88 (m, 2H), 7.52 (s, 2H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.69 – 5.59 (m, 1H), 4.96 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.80 – 4.76 (m, 2H), 4.61 – 4.56 (m, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.99 – 2.88 (m, 3H), 2.57 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 2.46 (s, 1H), 2.39 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.23 (s, 1H), 1.02 – 0.97 (m, 1H), 0.74 – 0.71 (m, 1H), 0.59 – 0.54 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 633.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.11 min, purity＞ 83.8%。
化合物 58b(6.7 mg, 8.65 μmol)；SFC保留時間t = 4.825 min。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.09 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.94 – 7.88 (m, 2H), 7.53 – 7.37 (m, 2H), 6.64 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.02 (s, 1H), 5.69 – 5.59 (m, 1H), 4.96 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 4.80 – 4.76 (m, 2H), 4.61 – 4.56 (m, 1H), 3.30 (s, 2H), 3.06 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 2.99 – 2.88 (m, 3H), 2.59 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 2.47 – 2.41 (m, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.26 – 1.23 (m, 2H), 1.03 – 0.97 (m, 1H), 0.74 – 0.71 (m, 1H), 0.59 – 0.54 (m, 1H), 0.23 – 0.19 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 633.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.14min, purity＞ 81.7%。 實施例 59 ：化合物 59 的合成
步驟 1 ：化合物 59-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 59-1(66 mg, 301.04 μmol)，溶於丙酮 (2 mL) 中，1-氟-2-碘乙烷 (57 mg, 327.67 μmol) 和碳酸鉀 (58 mg, 419.68 μmol)，50℃加熱反應6個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加水，用乙酸乙酯取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 59-2(55 mg, 207.33 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 266.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 59-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 59-2(55 mg, 207.33 μmol)，溶於甲醇 (5mL) 中，然後加入鈀炭 (10 mg)，在氫氣環境下室溫反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 59-3(30 mg, 127.50 μmol)。LCMS (ESI) m/z: 236.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 59a & 59b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (22.76 mg, 131.87 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (54.67 mg, 423.03 μmol) 和基質 59-3(30 mg, 127.50 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 59a(10.8 mg, 16.54 μmol)；SFC保留時間t = 3.435 min。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.68 – 7.57 (m, 2H), 7.49 – 7.47 (m, 2H), 6.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.77 – 5.68 (m, 1H), 5.08 – 5.06 (m, 1H), 5.01 – 4.96 (m, 1H), 4.79 – 4.57 (m, 4H), 4.03 – 4.02 (m, 2H), 3.68 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.45 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.34 (s, 1H), 3.02 – 2.94 (m, 1H), 2.89 – 2.76 (m, 4H), 2.36 – 2.28 (m, 1H), 1.73 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.29 – 1.24 (m, 2H), 1.03 – 0.99 (m, 1H), 0.88 – 0.84 (m, 1H), 0.44 – 0.39 (m, 1H), 0.25 – 0.20 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 597.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.95 min, purity＞ 91.4%。
化合物 59b(13.6 mg, 22.22μmol)；SFC保留時間t = 4.794 min。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.4Hz, 1H), 7.58 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 – 7.47 (m, 2H), 6.73 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.77 – 5.68 (m, 1H), 5.08 – 5.05 (m, 1H), 5.01 – 4.96 (m, 1H), 4.79 – 4.54 (m, 4H), 3.98 (d, J = 4.0 Hz, 2H), 3.67 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.43 (d, J = 11.2 Hz, 2H), 3.34 (s, 1H), 3.02 – 2.95 (m, 1H), 2.85 – 2.73 (m, 4H), 2.36 – 2.28 (m, 1H), 1.70 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.29 – 1.24 (m, 2H), 1.03 – 0.99 (m, 1H), 0.88 – 0.83 (m, 1H), 0.44 – 0.39 (m, 1H), 0.25 – 0.22 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 597.2[M+H] +, HPLC method B: R T= 7.96 min, purity＞ 97.5%。 實施例 60 ：化合物 60 的合成
步驟 1 ：化合物 60a & 60b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(30 mg, 73.26 μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (22.76 mg, 131.87 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (54.67 mg, 423.03 μmol) 和基質 60-1(35 mg, 147.48 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合 60a(8.16 mg, 11.67 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.81 (s, 1H), 7.66-7.58 (m, 2H), 7.46 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.77 – 5.67 (m, 1H), 5.15 – 4.96 (m, 3H), 4.80 – 4.63 (m, 2H), 4.00 – 3.94 (m, 1H), 3.76 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 3.35 (s, 1H), 3.03 – 2.76 (m, 4H), 2.48 (s, 6H), 2.40 – 2.28 (m, 2H), 2.22 – 2.12 (m, 1H), 1.95 – 1.92 (m, 2H), 1.54 (s, 3H), 1.30 – 1.25 (m, 1H), 1.02 – 1.00 (m, 1H), 0.88 – 0.83 (m, 1H), 0.44 – 0.39 (m, 1H), 0.26 – 0.21 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 599.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.91 min, purity＞ 85.6%。
化合物 60b(2 mg, 2.84 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, Chloroform-d) δ 8.82 (s, 1H), 7.65 – 7.58 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.77 – 5.67 (m, 1H), 5.08 – 5.06 (m, 1H), 5.00 – 4.96 (m, 1H), 4.90 – 4.61 (m, 3H), 3.96 – 3.90 (m, 1H), 3.63 – 3.60 (m, 1H), 3.30 (s, 1H), 3.03 – 2.95 (m, 1H), 2.88 – 2.70 (m, 4H), 2.52 (s, 6H), 2.32 – 2.29 (m, 1H), 2.06 (s, 1H), 1.80 – 1.70 (m, 1H), 1.55 (s, 3H), 1.31 – 1.25 (m, 2H), 1.03 – 0.98 (m, 1H), 0.88 – 0.83 (m, 1H), 0.44 – 0.40 (m, 1H), 0.26 – 0.21 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 599.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.26 min, purity＞ 85.1%。 實施例 61 ：化合物 61 的合成
步驟 1 ：化合物 61-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 61-1(0.5 g, 1.97 mmol)，溶於二甲基亞碸 (10 mL) 中，然後加入對2-氟-5-硝基甲苯 (304.93 mg, 1.97 mmol) 和碳酸鉀 (543.33 mg, 3.93 mmol)，80℃下反應16個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 61-2(740 mg, 1.90 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 390.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 61-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 61-2(740 mg, 1.90 mmol)，溶於二氯甲烷 (15 mL) 中，加入三氟乙酸 (5 mL)，室溫下反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，殘餘物溶于水，並加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 61-3(550 mg, 1.90 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 290.2 [M+H] +。
步驟 3 ：化合物 61-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 61-3(550 mg, 1.90 mmol)，溶於甲醇 (15 mL) 中，加入醋酸 (3 mL) 和甲醛水溶液 (1.91 g, 20.73 mmol, 37 %)，室溫攪拌1個小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (260.60 mg, 4.15 mmol) 室溫下反應18個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 61-4(400 mg, 1.32 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 304.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 61-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 61-4(400 mg, 1.32 mmol)，溶於甲醇 (10 mL) 中，然後加入鈀炭 (50 mg)，在氫氣環境下室溫反應16個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 61-5(340 mg, 1.24 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 274.4 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 61a & 61b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(33.35 mg, 84.12 μmol)，溶於四氫呋喃 (3 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.74 mg, 151.42 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (108.72 mg, 841.21 μmol) 和基質 61-5(46 mg, 168.24 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 61a(8.1 mg, 11.75 μmol)；SFC保留時間t = 3.216 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.13 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 – 7.42 (m, 1H), 7.01 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.77 – 4.57 (m, 2H), 2.90 – 2.82 (m, 2H), 2.75 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.32 (s, 4H), 2.26 – 2.22 (m, 4H), 2.18 (s, 3H), 1.55 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.51 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.16 – 1.09 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.44 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 622.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.98 min, purity ＞ 90.2%。
化合物 61b(7.9 mg, 11.60 μmol)；SFC保留時間t = 5.557 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.14 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 – 7.42 (m, 1H), 7.01 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.70 – 5.64 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.73 – 4.58 (m, 2H), 2.90 – 2.81 (m, 2H), 2.75 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.34 (s, 4H), 2.27 – 2.22 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.55 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.51 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.16 – 1.09 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.44 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 622.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 10.05 min, purity ＞ 91.3%。 實施例 62 ：化合物 62a 和 62b 的合成
步驟 1 ：化合物 62-1 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 61-1(0.5 g, 1.97 mmol)，溶於二甲基亞碸 (10 mL) 中，然後加入3,4-二氟硝基苯 (312.72 mg, 1.97 mmol) 和碳酸鉀 (326.00 mg, 2.36 mmol)，80℃下反應16個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，加水，然後用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 62-1(730 mg, 1.86 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 394.2 [M+H] +。
步驟 2 ：化合物 62-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 62-1(730 mg, 1.86 mmol)，溶於二氯甲烷 (10 mL) 中，加入三氟乙酸 (5 mL)，室溫下反應2個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，殘餘物溶于水，並加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 62-2(540 mg, 1.84 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 294.1[M+H] +。
步驟 3 ：化合物 62-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 62-2(540 mg, 1.84 mmol)，溶於甲醇 (15 mL) 中，加入醋酸 (3 mL) 和甲醛水溶液 (1.73 g, 18.75 mmol, 37 %)，室溫攪拌1個小時，然後加入氰基硼氫化鈉 (235.66 mg, 3.75 mmol) 室溫下反應18個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液減壓濃縮，加入飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9，然後水相用二氯甲烷萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 62-3(500 mg, 1.63 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 308.1 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 62-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 62-3(500 mg, 1.63 mmol)，溶於甲醇 (10 mL) 中，然後加入鈀炭 (60 mg)，在氫氣環境下室溫反應16個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液用矽藻土過濾，用甲醇洗滌兩次，濾液減壓濃縮得到化合物 62-4(450 mg, 1.62 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 278.4 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 62a & 62b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(33.34 mg, 84.09 μmol)，溶於四氫呋喃 (3 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.73 mg, 151.36 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (108.68 mg, 840.91 μmol) 和基質 62-4(46.65 mg, 168.18 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 62a(6.0 mg, 8.32 μmol)；SFC保留時間t = 3.230 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.31 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 – 7.66 (m, 2H), 7.39 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7..04 – 7.01 (m, 1H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.89 (dd, J= 17.4, 1.8 Hz, 1H), 4.74 – 4.57 (m, 2H), 2.92 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.88 – 2.80 (m, 2H), 2.35 – 2.23 (m, 5H), 2.18 (s, 3H), 1.56 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.49 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.68 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.43 (m, 1H), 0.39 – 0.33 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 626.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.55 min, purity ＞ 86.8%。
化合物 62b(6.2 mg, 8.76 μmol)；SFC保留時間t = 5.103 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.31 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 – 7.66 (m, 2H), 7.39 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.04 – 7.01 (m, 1H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.89 (dd, J= 17.4, 1.8 Hz, 1H), 4.74 – 4.58 (m, 2H), 2.92 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.88 – 2.81 (m, 2H), 2.33 – 2.23 (m, 5H), 2.16 (s, 3H), 1.56 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.49 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.68 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.43 (m, 1H), 0.40 – 0.33 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 626.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.50 min, purity ＞ 88.4%。 實施例 63 ：化合物 63a 和 63b 的合成
步驟 1 ：化合物 63a & 63b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(33.33 mg, 83.99 μmol)，溶於四氫呋喃 (3 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.69 mg, 151.18 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (108.55 mg, 839.88 μmol) 和基質 28-5(36.50 mg, 167.98 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 63a(6.9 mg, 10.11 μmol)；SFC保留時間t = 3.357 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 2H), 6.64 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.28 (s, 1H), 5.04 – 4.96 (m, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.82 – 4.54 (m, 2H), 3.11 – 3.03 (m, 2H), 2.92 – 2.79 (m, 4H), 2.66 – 2.57 (m, 2H), 2.53 – 2.50 (m, 2H), 2.46 – 2.39 (m, 2H), 2.29 – 2.21 (m, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 566.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.83 min, purity ＞ 82.9%。
化合物 63b(6.8 mg, 10.53 μmol)；SFC保留時間t = 5.596 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.55 (s, 2H), 6.64 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.76 – 4.58 (m, 2H), 3.07 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 2.93 – 2.81 (m, 4H), 2.62 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 2.52 – 2.59 (m, 2H), 2.47 – 2.38 (m, 2H), 2.29 – 2.21 (m, 4H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.69 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 566.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.78 min, purity ＞ 87.6%。 實施例 64 ：化合物 64a & 64b 的合成
步驟 1 ：化合物 64a & 64b 的合成
在乾燥的單口瓶中，加入基質 21-3(40 mg, 94.44 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (29.34 mg, 170.00 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (122.06 mg, 944.44 μmol) 和基質 7-5(38.40 mg, 188.89 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 64a(10.1 mg, 17.45 μmol)；SFC保留時間t = 2.944 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.77 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.71 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.85 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.75 (s, 1H), 4.61 (d, J= 16.2 Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.84 (s, 2H), 3.64 – 3.55 (m, 2H), 3.44 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.27 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.95 – 2.89 (m, 1H), 2.86 – 2.80 (m, 1H), 2.42 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 2.35 – 2.29 (m, 1H), 2.00 (s, 3H), 1.92 (dd, J= 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.75 (dd, J= 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.54 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.15 – 1.11 (m, 1H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.87 – 0.85 (m, 1H), 0.64 – 0.57 (m, 1H), 0.42 – 0.36 (m, 1H), 0.00 (d, J= 3.5 Hz, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 9.34 min, purity＞ 86.7%。
化合物 64b(8.7 mg, 15.03 μmol)；SFC保留時間t = 4.409 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.06 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.60 (s, 2H), 6.71 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.72 – 5.63 (m, 1H), 5.04 – 4.97 (m, 1H), 4.85 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.66 – 4.54 (m, 1H), 4.40 (s, 1H), 3.58 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.43 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 3.27 (d, J= 10.8 Hz, 2H), 2.95 – 2.89 (m, 1H), 2.87 – 2.81 (m, 1H), 2.46 – 2.40 (m, 1H), 2.35 – 2.29 (m, 1H), 1.99 (s, 3H), 1.96 – 1.90 (m, 1H), 1.75 (dd, J= 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.53 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 1.15 – 1.11 (m, 1H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.87 – 0.84 (m, 1H), 0.64 – 0.57 (m, 1H), 0.42 – 0.36 (m, 1H), 0.00 (s, 1H). LCMS (ESI) m/z: 579.4 [M+H] +, HPLC method B: R T=9.25 min, purity＞ 91.1%。 實施例 65 ：化合物 65 的合成
步驟 1 ：化合物 65a & 65b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 6-4(40 mg, 97.68 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.34 mg, 175.82 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (126.24 mg, 976.79 μmol) 和基質 12-1(42.85 mg, 195.36 μmol)，50℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合 65a(14.3 mg, 24.62 μmol)；SFC保留時間t = 3.425 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.56 (s, 2H), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.89 – 4.84 (m, 1H), 4.83 – 4.73 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.64 (dd, J= 16.2, 6.0 Hz, 1H), 3.66 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.93 – 2.86 (m, 1H), 2.83 – 2.77 (m, 1H), 2.67 – 2.59 (m, 2H), 2.19 (s, 6H), 2.18 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 2.03 – 1.96 (m, 1H), 1.83 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 1.52 – 1.45 (m, 2H), 1.45 – 1.42 (m, 1H), 1.40 (s, 3H), 0.91 – 0.84 (m, 1H), 0.68 – 0.60 (m, 1H), 0.35 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 581.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.79 min, purity＞ 93.5%。
化合物 65b(15.6 mg, 26.86 μmol)；SFC保留時間t = 5.024 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.78 (d, J= 7.8 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 – 7.41 (m, 2H), 6.93 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.70 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.86 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.81 (d, J= 15.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.64 (dd, J= 16.2, 6.0 Hz, 1H), 3.66 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 2.93 – 2.86 (m, 1H), 2.83 – 2.77 (m, 1H), 2.67 – 2.59 (m, 2H), 2.20 (s, 6H), 2.19 – 2.13 (m, 1H), 1.96 (m, 1H), 1.86 – 1.81 (m, 2H), 1.48 (dd, J= 11.8, 3.7 Hz, 2H), 1.45 – 1.42 (m, 1H), 1.41 (s, 3H), 0.91 – 0.84 (m, 1H), 0.67 – 0.60 (m, 1H), 0.35 – 0.30 (m, 1H), 0.23 – 0.18 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 581.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.86min, purity＞ 93.6%。 實施例 66 ：化合物 66 的合成
步驟 1 ：化合物 66a & 66b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(40 mg, 100.89 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.72 mg, 151.33 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (65.19 mg, 504.43 μmol) 和基質 12-1(33.19 mg, 151.33 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 66a(12.12 mg, 21.35 μmol)；SFC保留時間t = 3.579 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.98 – 6.90 (m, 2H), 5.73 – 5.63 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.65 – 4.56 (m, 1H), 3.66 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 3.04 (s, 1H), 2.87 – 2.78 (m, 2H), 2.65 – 2.59 (m, 2H), 2.29 – 2.20 (m, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.88 – 1.80 (m, 2H), 1.53 – 1.44 (m, 2H), 1.13 – 1.09 (m, 1H), 0.71 – 0.62 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.32 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 568.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.48min, purity ＞ 86.1%。
化合物 66b(12.56 mg, 22.12 μmol)；SFC保留時間t = 5.858 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.70 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.58 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.73 – 5.63 (m, 1H), 5.29 (s, 1H), 5.00 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.65 – 4.54 (m, 1H), 3.66 (d, J= 12.0 Hz, 2H), 3.07 (s, 1H), 2.87 – 2.79 (m, 2H), 2.65 – 2.59 (m, 2H), 2.29 – 2.20 (m, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.82 (s, 2H), 1.53 – 1.44 (m, 2H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.71 – 0.62 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.32 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 568.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.50 min, purity ＞ 89.5%。 實施例 67 ：化合物 67 的合成
步驟 1 ：化合物 67 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 4-9(20 mg, 50.57μmol)，溶於四氫呋喃 (2 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (15.4 mg, 75.86 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (65.15 mg, 0.51 mmol) 和基質 67-1(16.48mg, 75.86 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到化合物 67(6.8 mg, 12.02 μmol)。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.18 (s, 1H), 8.85 (s, 1H), 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.77 – 7.62 (m, 2H), 7.46 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 5.71 - 5.65 (m, 1H), 5.33 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.01 (d, J= 10.2 Hz, 1H), 4.89 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.71 – 4.62 (m, 2H), 3.75 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 3.65 – 3.65 (m, 2H), 3.23 – 3.02 (m, 4H), 2.86 – 2.80 (m, 2H), 2.52 (s, 3H), 2.33 – 2.21 (m, 6H), 1.14 – 1.10 (m, 1H), 0.70 – 0.66 (m, 1H), 0.45 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.34 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 565.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 8.22 min, purity ＞ 87.8%。 實施例 68 ：化合物 68 的合成
步驟 1 ：化合物 68a & 68b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 4-9(40 mg, 101.14 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (30.80 mg, 151.72 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (65.36 mg, 505.72 μmol) 和基質 40-3(31.15 mg, 151.72 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 68a(10.48 mg, 518.96 μmol)；SFC保留時間t = 3.121 min。 1H NMR (600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 – 7.46 (m, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.69 – 5.64 (m, 6.0 Hz, 1H), 5.32 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.03 – 4.98 (m, 1H), 4.91 – 4.85 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.63 – 4.60 (m, 5.4 Hz, 1H), 3.75 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.47 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 2.88 – 2.80 (m, 3H), 2.71 – 2.70 (m, 1H), 2.35 – 2.33 (m, 1H), 2.27 – 2.23 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.17 – 2.11 (m, 1H), 1.13 – 1.11 (m, 1H), 1.06 (s, 3H), 0.70 – 0.66 (m, 1H), 0.46 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.35 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 553.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.23min, purity ＞ 96.1%。
化合物 68b(12.34 mg, 22.33 μmol)；SFC保留時間t = 5.185 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.12 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 7.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 – 7.67 (m, 1H), 7.59 (s, 2H), 6.92 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 5.69 – 5.66 (m, 1H), 5.31 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 5.05 – 4.96 (m, 1H), 4.94 – 4.87 (m, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.62 – 4.60 (m, 1H), 3.75 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 3.48 – 3.45 (m, 2H), 2.86 – 2.81 (m, 3H), 2.74 – 2.69 (m, 1H), 2.36 – 2.34 (m, 1H), 2.29 – 2.23 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 2.15 (s, 1H), 1.14 – 1.10 (m, 1H), 1.06 (s, 3H), 0.69 – 0.67 (m, 1H), 0.44 – 0.42 (m, 1H), 0.39 – 0.36 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 553.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.24 min, purity ＞ 94.1%。 實施例 69 ：化合物 69 的合成
步驟 1 ：化合物 69a & 69b 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 21-3(40 mg, 94.44 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (28.76 mg, 141.67 μmol)，室溫下反應1個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (61.03 mg, 472.22 μmol) 和基質 11-1(36.75 mg, 141.67 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜純化得到產物，再經過超臨界液相色譜手型拆分得到化合物 69a(1.1 mg, 1.73 μmol)；SFC保留時間t = 3.897 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.67 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.74 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.85 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.62 (s, 1H), 4.40 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 3.09 (s, 4H), 2.98 – 2.89 (m, 1H), 2.84 (dd, J= 17.4, 6.0 Hz, 1H), 2.36 – 2.29 (m, 4H), 2.18 (s, 3H), 1.94 – 1.89 (m, 1H), 1.75 (dd, J= 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.54 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.47 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 0.93 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.87 – 0.84 (m, 2H), 0.78 – 0.73 (m, 2H), 0.64 – 0.58 (m, 1H), 0.43 – 0.37 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 635.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.07 min, purity ＞ 83.2%。
化合物 69b(1.0 mg, 1.58 μmol)；SFC保留時間t = 5.463 min。 1 H NMR(600 MHz, DMSO- d 6) δ 10.11 (s, 1H), 8.81 (d, J= 4.3 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.67 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.0 Hz, 2H), 5.74 – 5.62 (m, 1H), 4.99 (dd, J= 10.2, 1.8 Hz, 1H), 4.85 (d, J= 17.4 Hz, 1H), 4.74 (s, 1H), 4.61 (s, 1H), 4.40 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 3.13 – 3.06 (m, 4H), 2.98 – 2.89 (m, 1H), 2.84 (dd, J= 16.8, 6.0 Hz, 1H), 2.38 – 2.29 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 1.93 – 1.89 (m, 1H), 1.75 (dd, J= 14.4, 7.2 Hz, 1H), 1.54 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 1.48 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 0.93 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 0.87 – 0.84 (m, 2H), 0.78 – 0.73 (m, 2H), 0.64 – 0.58 (m, 1H), 0.43 – 0.37 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 635.4 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.08 min, purity ＞ 80.1%。 實施例 70 ：化合物 70 的合成
步驟 1 ：化合物 70 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 34-5(68.41 mg, 172.55 μmol)，溶於四氫呋喃 (3 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (59.55 mg, 345.10 μmol)，室溫下反應一個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (111.50 mg, 862.75 μmol) 和基質 70-1(65.67 mg, 345.10 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜 (鹼性) 純化得到化合物 70(43.75mg, 90.97 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.23 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 7.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.75 – 7.63 (m, 3H), 7.27 – 7.12 (m, 2H), 5.74 – 5.61 (m, 1H), 5.30 (s, 1H), 5.02 – 4.99 (m, 1H), 4.91 – 4.87 (m, 1H), 4.64 – 4.51 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.93 – 2.78 (m, 2H), 2.68 – 2.51 (m, 5H), 2.31 – 2.20 (m, 1H), 1.88 (d, J= 13.2 Hz, 2H), 1.71 – 1.69 (m, 2H), 1.13 – 1.10 (m, 1H), 0.70 – 0.67 (m, 1H), 0.47 – 0.40 (m, 1H), 0.39 – 0.31 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 539.2 [M+H] +, HPLC method B: R T= 6.88 min, purity ＞ 97.1 %。 實施例 71 ：化合物 71 的合成
步驟 1 ：化合物 71-2 的合成：
向單口瓶中，加入基質 71-1(2.5 g, 9.54 mmol)、碳酸鉀 (5.27 g, 38.16 mmol) 和苄基三乙基氯化銨 (217.34 mg, 0.95 mmol)，然後加入乙腈 (30 mL) 溶解，待溶液變成黃色後，加入3-溴丙烷 (1.58 g, 14.31 mmol)，80℃下攪拌48小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，過濾，然後用乙酸乙酯洗滌，向濾液中加入乙酸乙酯和水，然後用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產物，粗產物再用石油醚和二氯甲烷重結晶過濾真空乾燥得到化合物 71-2(2.00 g, 6.57 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 205.0 [M+H-100] +。
步驟 2 ：化合物 71-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 71-2(2.00 g, 6.57 mmol)，溶於乙醇 (40 mL) 中，然後加入水合肼 (10 mL)，50℃下加熱反應兩個小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫, 過濾，用乙醇洗滌三次，濾液減壓濃縮，殘餘物水和乙酸乙酯溶解，並用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 71-3(1.1 g, 6.31 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 160.2 [M+H-56+41] +。
步驟 3 ：化合物 71-5 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 71-3(1.1 g, 6.31 mmol) 和基質4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯 ( 71-4，1.40 g, 6.01 mmol)，溶於四氫呋喃 (20 mL) 中，然後加入N,N-二異丙基乙胺 (1.94 g, 15.03 mmol)，80℃下加熱反應16個小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮得到粗品，然後將粗品溶於乙酸乙酯中，用1M的稀鹽酸洗滌五次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 71-5(2.15 g, 5.81 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 371.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 71-6 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 71-5(2.15 g, 5.81 mmol)，溶於二氯甲烷 (30 mL) 中，冰浴冷下然後加入三氟乙酸 (10 mL)，45℃下反應兩個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冰浴冷卻至0度，緩慢加入40 % 氫氧化鈉水溶液至pH = 11，然後加入甲醇 (30 mL) ,室溫反應6個小時 LC-MS監測。反應結束減壓濃縮除去有機相，然後加入3M的稀鹽酸至pH = 1,有黃色沉澱物產生，過濾，並用水洗滌兩次，將固體真空乾燥得到化合物 71-6(785.00 mg, 3.50 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 225.2 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 71-7 的合成：
在乾燥的密封管中加入基質 4-8(183.6 mg, 875.66 μmol)、基質 71-6(206.21 mg, 919.44 μmol)、碘化亞銅 (166.77 mg, 875.66 μmol)、碘化鈉 (262.50 mg, 1.75 mmol)、碳酸鉀 (302.56 mg, 2.19 mmol) 和反- (1R,2R) - N, N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (249.11 mg, 1.75 mmol)，然後加入苯甲醚 (4 mL)，氮氣環境下，110℃反應18個小時。TLC監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌兩次，濾液用氨水洗滌兩次，飽和食鹽水洗滌兩次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 71-7(132 mg, 332.08 μmol)。LCMS (ESI +) m/z: 398.1 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 77 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 71-7(132 mg, 332.08 μmol)，溶於四氫呋喃 (5 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (85.96 mg, 498.12 μmol)，室溫下反應一個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (214.59 mg, 1.66 mmol) 和基質 11-1(172.28 mg, 664.16 μmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜 (鹼性) 純化得到化合物 71(75.15 mg, 123.45 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.05 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 7.83 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.63 – 7.45 (m, 3H), 6.88 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.24 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 4.23 – 4.11 (m, 1H), 3.72 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.07 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.92 – 2.75 (m, 2H), 2.35 – 2.20 (m, 5H), 2.16 (s, 3H), 1.53 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.46 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.31 (d, J= 7.2 Hz, 6H), 1.14 – 1.06 (m, 1H), 0.72 – 0.62 (m, 1H), 0.46 – 0.41 (m, 1H), 0.40 – 0.34 (m, 1H), 0.33 – 0.27 (m, 1H). LCMS (ESI) m/z: 609.3 [M+H] +, HPLC method B: R T= 7.55 min, purity ＞ 95.5 %。 實施例 72 ：化合物 72 的合成
步驟 1 ：化合物 72-1 的合成：
向單口瓶中，加入基質 71-1(2.5 g, 9.54 mmol)、碳酸鉀 (5.27 g, 38.16 mmol) 和苄基三乙基氯化銨 (217.34 mg, 0.95 mmol)，然後加入乙腈 (30 mL) 溶解，待溶液變成黃色後，加入碘甲烷 (2.71 g, 19.08 mmol)，60℃下攪拌24小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，過濾，然後用乙酸乙酯洗滌，向濾液中加入乙酸乙酯和水，然後用乙酸乙酯萃取三次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到粗產物，粗產物再用石油醚和二氯甲烷重結晶過濾真空乾燥得到化合物 72-1(1.80 g, 6.51 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 177.0 [M+H-100] +。
步驟 2 ：化合物 72-2 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 72-1(1.80 g, 6.51 mmol)，溶於乙醇 (30 mL) 中，然後加入水合肼 (8 mL)，50℃下加熱反應兩個小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫, 過濾，用乙醇洗滌三次，濾液減壓濃縮，殘餘物水和乙酸乙酯溶解，並用乙酸乙酯萃取四次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 72-2(0.91 g, 6.20 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 132.2 [M+H-56+41] +。
步驟 3 ：化合物 72-3 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 72-2(0.91 g, 6.20 mmol) 和基質4-氯-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸乙酯 (1.37 g, 5.90 mmol)，溶於四氫呋喃 (20 mL) 中，然後加入N,N-二異丙基乙胺 (1.90 g, 14.75 mmol)，80℃下加熱反應16個小時。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮得到粗品，然後將粗品溶於乙酸乙酯中，用1M的稀鹽酸洗滌五次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮得到化合物 72-3(1.96 g, 5.71 mmol)，LCMS (ESI) m/z: 343.2 [M+H] +。
步驟 4 ：化合物 72-4 的合成：
在乾燥的單口瓶中加入基質 72-3(1.96 g, 5.71 mmol)，溶於二氯甲烷 (20 mL) 中，冰浴冷下然後加入三氟乙酸 (80 mL)，45℃下反應兩個小時。LC-MS監測反應完全。將反應液冰浴冷卻至0度，緩慢加入40 % 氫氧化鈉水溶液至pH = 11，然後加入甲醇 (20 mL) ,室溫反應6個小時 LC-MS監測。反應結束減壓濃縮除去有機相，然後加入3M的稀鹽酸至pH = 1，有黃色沉澱物產生，過濾，並用水洗滌兩次，將固體真空乾燥得到化合物 72-4(647.00 mg, 3.30 mmol)。LCMS (ESI) m/z: 197.2 [M+H] +。
步驟 5 ：化合物 72-5 的合成：
在乾燥的密封管中加入基質 4-8(101.76 mg, 485.34 μmol)、基質 72-4(100.00 mg, 509.61 μmol)、碘化亞銅 (97.05 mg, 509.61 μmol)、碘化鈉 (153.00 mg, 1.02 mmol)、碳酸鉀 (175.82 mg, 1.27 mmol) 和反- (1R, 2R) - N, N'-二甲基1,2-環己烷二胺 (144.73 mg, 1.02 mmol)，然後加入苯甲醚 (2 mL)，氮氣環境下，110℃反應18個小時。TLC監測反應完全。將反應液冷卻至室溫，過濾，用乙酸乙酯洗滌兩次，濾液用氨水洗滌兩次，飽和食鹽水洗滌兩次，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，殘餘物用柱層析純化得到化合物 72-5(36.00 mg, 97.44 μmol)。LCMS (ESI +) m/z: 370.1 [M+H] +。
步驟 6 ：化合物 72 的合成：
在乾燥的單口瓶中，加入基質 72-5(36.00 mg, 97.44 μmol)，溶於四氫呋喃 (1 mL) 中，然後加入間氯過氧苯甲酸 (33.63 mg, 194.88 μmol)，室溫下反應一個小時，再向反應液中加入N,N-二異丙基乙胺 (125.70 mg, 974.40 μmol) 和基質 11-1(50.55 mg, 194.88 mmol)，45℃反應過夜。LC-MS監測。反應結束後將反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，殘餘物用製備高效液相色譜 (鹼性) 純化得到化合物 72(10.23 mg, 36.44 μmol)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO- d 6) δ 10.07 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 7.86 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.57 (s, 2H), 6.92 (d, J= 9.2 Hz, 2H), 5.30 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.75 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 3.38 (s, 3H), 3.09 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.92 – 2.81 (m, 2H), 2.39 – 2.27 (m, 4H), 2.19 (s, 3H), 1.54 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.48 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 1.27 – 1.21 (m, 1H), 1.18 – 1.10 (m, 1H), 0.70 – 0.61 (m, 1H), 0.47 – 0.40 (m, 1H), 0.39 – 0.32 (m, 2H). LCMS (ESI) m/z: 581.6 [M+H] +, HPLC method B: R T= 6.70 min, purity ＞ 92.9 %。 效果實驗例：生物活性評價試驗
無特殊說明時，該部分實施例中部分生物學評價實驗用化合物 AZD1775和 ZnC3作為對照， AZD1775(CAS號：955365-80-7) 和 ZnC3(CAS號： 2376146-48-2) 的結構資訊如下： 效果實驗例 1：通過TR-FRET方法評價化合物在Wee1蛋白與Tracer 178結合。
首先準備不同濃度梯度的化合物溶液。將化合物溶解於DMSO中，並將化合物進行4倍稀釋，共10個劑量點，每個濃度設置2個平行重複，加入DMSO作為陽性對照 (最大信號對照) 和陰性對照 (最小信號對照)，同時確保每個反應孔中的DMSO最終含量為0.25%。
將配置於緩衝液 (50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.01% Brij-35) WEE1 (Thermo Fisher, Cat#PR7373A) 蛋白最終反應濃度為15 nM) ,不同濃度的化合物中，反應基質Tracer 178 (Invitrogen, PV5593) 和MAb Anti-GST-Eu crypate (Cisbio, 61GSTKLA) 加入384孔板 (Corning, cat#3574) 中，1000 rpm離心1 min，將384孔反應板置於恒溫搖床孵育60 min, 25 oC，300 rpm。 其中 Tracer 178和MAb Anti-GST-Eu crypate配置於緩衝液 (50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0.01% Brij-35)，且Tracer178最終反應濃度為50 nM, MAb Anti-GST-Eu crypate的最終濃度為2 nM，其中陰性對照 (最小信號對照) 使用等量的緩衝液來代替蛋白溶液。
孵育完成後，使用BMG PHERAStar 讀數 (用337nm波長為激發光，在620nm和665nm波長值為發射光讀螢光信號值)。計算螢光信號比值：665/620*1000為最終的酶活性信號值，根據陽性對照 (最大信號對照) 和陰性對照 (最小信號對照) 獲得的讀數TR-FRET信號進行標準化，以給出不同濃度化合物的抑制率。再通過GraphPad Prism 6 以log (inhibitor) vs. response–Variable slope模式擬合計算得出化合物對酶活性抑制的IC50。擬合方程為：Y=Bottom + (Top-Bottom) / (1+10^ ((LogIC50-X) *HillSlope))，其中Y代表已知的百分剩餘酶活性，X代表Log 後的已知化合物的濃度。
按照上述方法對實施例化合物進行Wee1抑制活性檢測，試驗結果見表1，其中測定各化合物的IC 50按照說明分類如下：
「-」表示IC 50測定值大於10 μM；
「+」表示IC 50測定值小於等於10 μM大於1 μM；
「++」表示IC 50測定值小於等於1 μM大於100 nM；
「+++」表示IC 50測定值小於等於100 nM大於10 nM；
「++++」 表示IC 50測定值小於等於10 nM大於5 nM；
「+++++」 表示IC 50測定值小於等於5 nM。
表1 本發明化合物對Wee1激酶的抑制活性
化合物編號 IC 50/nM 化合物編號 IC 50/nM 化合物編號 IC 50/nM
AZD1775 +++++ ZnC3 +++ / /
1 +++ 2 +++ 3 ++++
4 +++++ 4a +++++ 4b +++++
5 +++++ 6 +++++ 6a +++++
7 +++++ 7a ++++ 17 +++++
23a +++++ 28 +++++ 30 +++++
32 ++++ 37a ++++ 37b ++++
39b ++++ 41b +++++ 44a +++++
51a +++++ 58b ++++ 61b ++++
65a ++++ 38b ++++ / /
結論：本發明化合物具有良好的Wee1激酶抑制活性。 效果實驗例 2：化合物抗細胞增殖活性評價
A. 通過Cell Titer-Glo方法評價化合物對BxPC3、HT-29和OVCAR-3細胞抗增殖的效果。
配置不同濃度梯度的化合物溶液。取DMSO溶解到濃度為10 mM測試化合物和10 mM參考化合物AZD1775，將化合物進行系列稀釋於培養基中，共9個劑量點，每個濃度設置2個平行重複。不添加化合物的細胞生長組作為陽性對照 (最大信號對照)，將培養基作為陰性對照 (最小信號對照)，同時確保每個反應孔中的DMSO最終含量為0.2%。移除384孔板中的培養基後，將配置好的25 µL的不同濃度化合物轉移進孔板中，化合物和細胞在細胞培養箱37℃，5% CO2 孵育3天。
將384孔板從細胞培養箱中取出使其平衡1 h至室溫，再將25 µL的Cell Titer-Glo檢測試劑加入每個反應孔，搖床裂解2 min後，於孵育10min後，用BMG PHERAStar讀數 (Luminescence)。根據發光信號計算抑制率。
來計算出不同濃度化合物對細胞的抑制率。通過GraphPad Prism 6 以log(inhibitor) vs. response–Variable slope模式擬合計算得出化合物對細胞活性抑制的IC 50。擬合方程為：Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))，其中Y代表抑制率，X代表Log 後的已知化合物的濃度。
按照上述方法對實施例化合物進行BxPC3、HT-29和OVCAR-3體外抗細胞增殖試驗，試驗結果見表2，其中測定各化合物的IC 50按照說明分類如下： 「-」表示IC 50測定值大於10 μM； 「+」表示IC 50測定值小於等於10 μM大於5 μM； 「++」表示IC 50測定值小於等於5 μM大於2 μM； 「+++」表示IC 50測定值小於等於2 μM大於1 μM； 「++++」 表示IC 50測定值小於等於1 μM大於0.1 μM； 「+++++」表示IC 50測定值小於等於0.1 μM。
表2 本發明化合物對BxPC3、HT-29和OVCAR-3體外細胞增殖抑制活性
抗增殖活性 BxPC3 HT-29 OVCAR-3 抗增殖活性 BxPC3 HT-29 OVCAR-3
AZD1775 ++++ ++++ ++++ ZnC3 ++++ ++++ ++++
1 + +++ 未測試 2 ++ +++ 未測試
3 +++ ++++ +++ 3a +++ +++ +++
3b +++ ++++ ++++ 4 +++ ++++ +++
4a ++ +++ ++ 4b ++++ ++++ ++++
5 +++ +++ +++ 6 +++ ++++ ++++
6a +++ ++++ ++++ 6b +++ ++++ ++++
7 ++++ ++++ ++++ 7a ++++ ++++ ++++
7b ++++ ++++ ++++ 8 +++ ++++ +++
9 - +++ ++++ 10 ++ +++ ++++
11 ++++ ++++ ++++ 11a ++++ ++++ ++++
11b ++++ ++++ ++++ 12 ++ ++++ ++++
13 ++++ ++++ ++++ 14 +++ ++++ ++++
15 ++++ ++++ ++++ 16 +++ ++++ 未測試
17 +++ ++++ ++++ 18 ++ ++++ ++
19 ++ ++ ++ 20a +++ +++ +++
20b +++ +++ +++ 21 +++ ++++ ++++
22a +++ ++++ ++++ 22b ++++ ++++ ++++
23a ++++ ++++ ++++ 23b ++++ ++++ ++++
24 +++ +++ +++ 25 +++ +++ ++++
26 ++ +++ ++ 27 ++++ ++++ ++++
28 ++++ ++++ ++++ 29 ++ +++ ++++
30 +++ ++++ +++ 31a + ++ +
31b ++ ++ +++ 32 +++ ++++ +++
33 ++ +++ ++ 34 +++ ++++ +++
34a 2.13 ++++ ++ 34b ++++ ++++ +++
35a ++++ ++++ ++++ 35b ++++ ++++ ++++
36a ++++ ++++ ++++ 36b ++++ ++++ ++++
37a ++++ ++++ ++++ 37b ++++ ++++ ++++
38a +++ ++++ +++ 38b ++++ ++++ ++++
39a ++++ ++++ ++++ 39b ++++ ++++ ++++
40 +++ ++++ ++++ 41a +++ ++++ ++++
41b ++++ ++++ ++++ 42a ++++ ++++ ++++
42b ++++ ++++ ++++ 43 ++++ ++++ ++++
43a ++++ ++++ ++++ 43b ++++ ++++ ++++
44 ++++ ++++ ++++ 44a ++++ ++++ ++++
44b ++++ ++++ ++++ 45a +++ ++++ ++++
45b +++ ++++ +++ 46 +++ +++ +++
47 - - - 48a ++++ ++++ ++++
48b ++++ ++++ ++++ 49 ++ ++ ++
50a ++++ ++++ ++++ 50b ++++ ++++ ++++
51a ++++ ++++ ++++ 51b ++++ ++++ ++++
52a ++++ ++++ ++++ 52b ++++ ++++ ++++
53a ++ +++ ++ 53b ++++ ++++ +++
54a ++ +++ ++ 54b ++++ ++++ ++++
55 ++++ ++++ ++++ 56a +++ +++ +++
56b ++++ ++++ ++++ 57a ++ +++ ++
57b ++++ ++++ ++++ 58a +++ ++++ ++
58b ++++ ++++ ++++ 59a ++++ ++++ ++++
59b +++ ++++ +++ 60a ++++ ++++ ++++
60b ++++ ++++ ++++ 61a ++++ ++++ ++++
61b ++++ ++++ ++++ 62a +++ ++++ +++
62b ++++ ++++ ++++ 63a ++++ ++++ ++++
63b +++ ++++ +++ 64a ++++ ++++ ++++
64b ++++ ++++ ++++ 65a ++++ ++++ ++++
65b ++++ ++++ ++++ 66a ++ +++ ++
66b ++++ ++++ +++ 67 +++ +++ +++
68a ++ +++ ++ 68b ++++ ++++ ++++
69a +++ ++++ ++++ 69b +++ ++++ +++
結論：本發明化合物對腫瘤細胞增殖具有良好的抑制作用，抗增殖活性資料部分化合物與對照化合物AZD1775相當或更優。
B. 通過Cell Titer-Glo方法評價化合物對正常細胞HUVEC和HK2的細胞抗增殖的效果。
測試方法同對腫瘤細胞的抗增殖活性評價。對兩株正常細胞的測試結果如表3所示。
表3 化合物對HUVEC和HK2細胞增殖抑制活性
IC 50/µM HUVEC HK2 IC 50/µM HUVEC HK2
AZD1775 ＞10 0.26 ZnC3 ＞10 0.34
4b ＞10 1.29 7a ＞10 0.67
11 ＞10 1.46 15 ＞10 0.76
28 ＞10 1.19 32 ＞10 1.14
37b ＞10 1.53 39b ＞10 0.73
41b ＞10 0.55 44a 1.03 0.36
52a 3.83 0.48 55 ＞10 0.93
56b ＞10 0.99 57b ＞10 0.92
58b 0.66 0.47 61b 4.46 0.49
65a ＞10 0.70 / / /
結論：本發明化合物對正常細胞HUVEC增殖抑制活性較弱，對HK2細胞具有一定的抑制作用。與對照化合物相比，本發明化合物大部分表現出相當或者更低的增殖抑制活性，具有更好的安全性。 效果實驗例 3：體外肝微粒體 (小鼠和人) 代謝穩定性評價
1. 工作液的配製：
微粒體從-80 ˚C冰箱取出，在37 ˚C水浴鍋中迅速融解，置於冰上待用。將供試品用DMSO稀釋配製成10 mM的儲備液，然後用乙腈稀釋成0.5 mM的次級儲備液。使用Buffer C將微粒體稀釋為0.75 mg/ml；再加入次級儲備液至化合物終濃度1.5 μM為工作液，依據n=2，5個時間點計算，每個化合物配製350 μL，使用前置於冰上。用Buffer C將NADPH稀釋為6 mM的工作液，為啟動液。配製含內標的乙腈溶液作為沉澱劑，內標選用Verapamil-HCl，濃度為4 ng/ml。
2. 實驗過程：
取一塊圓底孔板，記做反應板，將各化合物配置好的工作液按照複樣數和時間點分裝到孔板中(0 h的樣品同樣加在反應板上)，30 μL/孔；反應板於37 ˚C 孵育10分鐘。另取一塊尖底孔板，記做沉澱板，每孔加入135 μL沉澱劑；0 h的樣品在孵育10分鐘後轉移至沉澱板中，再加入15 μL啟動液，沉澱板在離心前置於冰上待用。
將稀釋好的啟動液足量加入至分裝板中，方便排槍吸取操作。
反應在溫孵震盪裝置上進行，使用排槍吸取啟動液15 μL/樣品，加入反應板中。稍震盪混勻以啟動反應，使用計時器準確計時並記錄；
到反應時間後，使用排槍將反應板中的所有溶液吸出加入到沉澱板中以終止該時間點反應。所有反應終止後，將沉澱板在搖板機上600 rpm震盪十分鐘沉澱蛋白。離心機最大轉數在4 ˚C離心15分鐘，取上清80 μL，加入320μL純水，混勻後進行LC-MS分析。
3. 測試結果如表4所示。
表4不同種屬肝微粒體穩定性資料
實施例化合物編號 小鼠 人 大鼠 狗 猴
T 1/2(min)
AZD1775 25.99 38.12 38.08 10.76 20.09
4b 72.82 44.82 ＞120 41,74 22.84
7a 72.56 63.40 21.4 92.48 15.75
28 51.65 29.95 30.9 38.2 17.74
37b 37.8 ＞120 ＞120 69.59 37.98
44 62.8 77.75 ＞120 42.81 30.09
52a 96.19 26.24 31.42 22.8 14.22
結論：本發明化合物，在五種不同種屬肝微粒體上均體現出良好的代謝穩定性。 效果實驗例驗例 4 ：溶解度評價
將化合物置對應pH下的緩衝溶液中，恒溫振搖24h，取上清液配製成約100 µg/ml供試品溶液，採用反相高效液相色譜法，梯度洗脫，外標法計算溶解度。色譜條件：C18柱，流動相A: 0.02M磷酸二氫鉀：乙腈=90:10 ，流動相B: 乙腈；V: 1.0 ml/min，T:35℃，λ: 210nm。
測試結果如表5所示。
表5 化合物在不同pH條件下的溶解度
化合物編號 飽和溶解度 (mg/mL) (37℃ ， 24h)
pH 5.0 pH 6.5 pH 7.4
37b 0.37 0.37 0.62
AZD1775 0.41 0.05 0.02
ZnC3 0.35 0.59 0.68
結論：在三個pH條件下，本發明化合物 37b與對照化合物 ZnC3的溶解度相近，總體上本發明化合物的溶解度明顯優於對照化合物 AZD1775。 效果實驗例 5：細胞滲透性評價
Caco-2細胞購買自美國模式組織細胞收藏中心 (Rockville，MD)。細胞培養液為含10%滅活胎牛血清和1%非必須氨基酸的改良Eagle’s培養基 (MEM)。細胞接種於聚碳酸脂濾膜 (貨號：3396) 並置於37°C，5% CO 2培養箱中培養。
細胞接種後培養21~28天可用於轉運實驗，並通過路西法黃的表觀通透係數 (P app) 來表徵和驗證細胞單層的緻密性。實驗中將化合物溶解于DMSO中製備10 mM的儲備液，並使用含有25 mM HEPES (pH 7.4) 的漢克斯平衡鹽溶液 (HBSS，Invitrogen，Cat# 14025-092) 進行稀釋得到工作液。將10 µM的待測化合物工作液加入Caco-2頂膜側 (apical side) 和基底側 (basolateral side) 並於37°C孵育90分鐘，孵育結束後，將頂膜側和基底側的樣品稀釋，並通過LC-MS/MS檢測頂膜側和基底側化合物的濃度，並通過標準曲線定量計算化合物的濃度。
測試結果如表6所示：
表6 化合物在Caco2模型上的滲透性資料
化合物編號 Papp (10 -6cm/s) Efflux Ration
A to B B to A
Atenolol 0.43 0.18 0.42
Propranolol 14.71 13.02 0.88
Quinidine 4.05 18.72 4.62
AZD1775 0.80 15.17 18.96
ZnC3 0.42 15.01 35.74
3b 0.73 13.07 17.90
4b 0.94 13.19 14.03
11 0.41 8.85 21.59
37b 0.46 9.69 21.06
39b 0.38 13.62 35.84
65a 0.96 9.17 9.55
結論：本發明化合物在Caco2模型上的透膜性與對照化合物相當。總體來看本發明化合物和對照化合物的細胞滲透性均不佳，且具有一定的外排屬性。 效果實驗例 6：血漿蛋白結合率 (PPB) 評價
1. 實驗過程
樣品準備：
將化合物用DMSO溶解為10 mM的儲備液，然後用PBS將化合物稀釋為 0.02 mM的次級儲備液，再使用空白血漿將上述0.02 mM稀釋至1 μM，即為待孵育樣品。
透析裝置準備：
先在平衡透析板的白色孔中加入400 μL空白PBS，紅色孔中加入200 μL配置好的血漿樣品，用封口膜將透析板進行封口
回收率孔板準備：
準備兩塊96孔深孔板，標記為T0及T5，所有血漿樣品以n=2分別加入兩板。T0板直接加入300 μL乙腈 (Verapamil-HCl，4 ng/mL)，再補加50 μL空白PBS混勻5 min，放入4 °C冰箱中靜置至孵育實驗結束。
實驗操作：
透析裝置和T5板置於微孔板恒溫振盪器中共同孵育5 h (37 °C，使用300 rpm或最小轉速)。孵育結束後，加入300 μL乙腈 (Verapamil-HCl，4 ng/mL)，再補加50 μL PBS溶液。透析孵育結束後，取一塊新96孔深孔板。取50 μL血漿孔樣品加入96孔板對應位置，再加入300 μL乙腈，補加50 μL空白PBS；取50 μL緩衝孔樣品加入96孔板對應位置，再加入300 μL乙腈，補加50 μL空白血漿。T5板含血漿孔中加入300 μL乙腈 (Verapamil-HCl，4 ng/mL)，再補加50 μL PBS溶液。振盪5 min以充分沉澱蛋白，4 °C，20000 g 離心10分鐘。取200 µL上清液加入200 µL純水中，混勻後進行LC-MS/MS分析。
2. 資料處理和參數計算 Ÿ   血漿蛋白結合率=[ (Rpe−Rb) / Rpe] ×100 % Ÿ   回收率=[ (Rpe+ Rb) / R5h] ×100% Ÿ   穩定性= (R5/R0) ×100% 其中： Ÿ   R pe=血漿側供試品峰面積與內標比值 Ÿ   R b=緩衝液側供試品峰面積與內標比值 Ÿ   R 5=孵箱穩定性樣品峰面積與內標比值 Ÿ   R 0=冰箱穩定性樣品峰面積與內標比值
3. 測試結果如表7所示：
表7代表性化合物的血漿蛋白結合率 (小鼠/大鼠/人)
化合物 Plasma Protein binding(PPB)/%
小鼠 大鼠 人
AZD1775 91.3 62.6 66.38
3 87.75 未測試 未測試
4b 87.71 77.45 未測試
6 97.2 未測試 未測試
7a 97.21 94.82 未測試
11 92.17 未測試 未測試
15 93.51 未測試 未測試
21 98.86 未測試 未測試
28 92.29 86.08 未測試
32 96.87 未測試 未測試
37b 92.46 84.10 77.58
41b 96.26 未測試 未測試
44 98.46 96.98 未測試
61b 98.46 93.61 未測試
結論：本發明化合物具有良好的血漿蛋白結合能力。 效果實驗例 7 ：化合物對細胞色素P450抑制評價
酶學實驗通過細胞色素P450對基質的氧化產生的螢光，定量檢測小分子抑制劑對CYP450各亞型酶活性的抑制情況。實驗在384孔板 (Corning，Cat# 3575) 中進行，使用的反應緩衝液為：142.86 mM Potassium Phosphate，pH 7.4。實驗所用Solution A 成分為：26.13 mM NADP+ (Sigma-aldrich，Cat#N0505)，65.77 mM G6P (J&K，Cat#968161) 及65.42 mM MgCl2 (Sigma-aldrich，Cat#M2670)。實驗所用的Solution B 成分為：40 U/mL G6PDH (Sigma-aldrich，Cat#G6378)。基質混合溶液成分為：0.05 X Solution A，0.01 X Solution B，50 mM Potassium Phosphate，0.01 mM BOMCC/ 0.01 mM EOMCC/0.001 mM DBOMF。對於CYP3A4和CYP2C9，反應體系分別為50 μL或20 μL，包括3 nM CYP3A4或120 nM CYP2C9，BOMCC基質混合溶液和不同濃度的待測化合物。對於CYP2C19，CYP2D6及CYP1A2，反應體系為20 μL，包括12.5 nM CYP2C19，80 nM CYP2D6或1 nM CYP1A2，EOMCC基質混合溶液和不同濃度的待測化合物。對於CYP2C8，反應體系為50 μL，包括1.5 nM CYP2C8，DBOMF基質混合溶液和不同濃度的待測化合物。化合物與酶預孵10分鐘後，加入基質，並根據不同基質使用BMG PHERAStar讀取不同波段的螢光信號 (BOMCC/EOMCC Ex430 nm/Em480 nm，DBOMF Ex490 nm/Em520 nm)，反應間隔30秒或更多 (根據實際實驗孔數設置)，反應時長為30分鐘。實驗資料通過GraphPad Prism 6軟體進行分析處理得到IC50值。
測試結果如表8所示：
表8 化合物對7中CYP亞型的抑制活性
IC 50/µM CYP3A4 CYP1A2 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP2C8 CYP 2B6
AZD1775 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 1＜IC 50＜10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10
3 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 未測試
7a ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 1＜IC 50＜10 ＞ 10 ＞ 10 未測試
37b ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10
44 ＞ 10 ＞ 10 ＞ 10 1＜IC 50＜10 ＞ 10 ＞ 10 未測試
結論：本發明化合物均未表現出明顯的細胞色素P450酶抑制，其中本發明化合物 37b對所有亞型的抑制均大於10 µM，優於對照化合物 AZD1775。 效果實驗例 8 ： hERG 鉀離子通道抑制試驗
實驗步驟：
(一) 實驗材料：
A. CHO (中華倉鼠卵巢細胞) 穩定轉染細胞系培養
膜片鉗實驗所用細胞株為過表達hERG 鉀離子通道cDNA的第10代CHO細胞。CHO hERG細胞在37°C、5 % CO2 培養箱中用培養皿或培養瓶培養。電生理實驗前24-48小時，將細胞滴於圓形玻片上在細胞培養液中培養，待細胞貼壁後用於實驗。
細胞培養基 (購自Invitrogen) 成分： • Ham’s F12培養基 • 10 % (v/v) 熱滅活FBS • 100 μg/ml Hygromycin B (潮黴素) • 100 μg/ml Geneticin (遺傳黴素，G418)
B. 化合物準備
化合物粉末溶解在細胞外液中，都經過常規的5 到10 分鐘超聲和振盪以保證化合物完全溶解。
用於電生理檢測的化合物終濃度為5、20μM，DMSO的終濃度為0.1%。
(二) 實驗方案：
A. 電生理記錄實驗過程
細胞膜電流記錄使用HEKA EPC-10 USB膜片鉗放大器(德國HEKA Elektronik)。
1) 取表面有大量單個CHO hERG細胞均勻生長的蓋玻片，放置於倒置顯微鏡上的連續記錄池中，灌流細胞外液 (大約每分鐘1毫升) 並持續記錄，等待電流穩定。
2) 使用標準的全細胞記錄模式記錄單個細胞的HERG通道電流。首先將膜電壓鉗制在-80 mV，給予細胞持續5s，+20mV電壓刺激，以啟動hERG鉀通道，再複極化至-50 mV，持續5s，產生外向尾電流，持續灌注待電流穩定，此時尾電流峰值即為對照電流值。
3) 接著灌流含待測藥物的細胞外液並持續記錄直到藥物對hERG電流的抑制作用到達穩定狀態，此時尾電流峰值即為加藥後電流值。
4) 再次用細胞外溶液灌注細胞，直到hERG電流回復或接近加藥物之前的水準，則可以繼續灌流測試其它濃度或藥物。可在每個細胞上測試一種或多種化合物或藥物濃度。
5) 以Cisapride (C4740-10mg，Sigma) 作為實驗中的陽性對照以保證所使用的細胞反應正常。
(三) 品質控制
試驗資料需要滿足以下標準：
電生理記錄參數
a) 封接電阻 ＞ 500MΩ
b) 接觸電阻(Ra) ＜ 10MΩ
c) 初始尾電流幅度 ＞ 200pA
d) 電流rundown (自發性減小) ＜ 2%/min
e) 漏電流 ＜ 200pA或者hERG電流峰值的10% (在90%的記錄時間之內)
測試結果如表9所示：
表9 化合物的hERG抑制活性
化合物 測試濃度 /µM 抑制率 /% 化合物 測試濃度 /µM 抑制率 /%
AZD1775 5 35.62 ± 1.43 ZnC3 5 7.38 ± 1.59
20 55.56 ± 1.83 20 18.05 ± 7.58
4b 5 23.84 ± 4.39 7 5 88.02 ± 3.87
20 42.42 ± 5.58 20 95.13 ± 1.06
37b 5 18.00 ± 4.80 39b 5 47.26 ± 2.27
20 34.70 ± 4.40 20 67.24 ± 1.32
44 5 77.68 ± 4.16 48b 5 73.67 ± 0.93
20 91.56 ± 2.72 20 90.92 ± 0.49
結論：部分本發明化合物 (如 4b， 37b) 的hERG抑制活性弱於對照化合物AZD1775，其心臟毒性風險相對更低。 效果實驗例 9 ：藥物代謝動力學評價
（一）小鼠單次給藥藥代動力學評價
本實驗旨在研究受試化合物單次靜脈、單次口服給藥後，在雄性ICR小鼠血漿中的藥代動力學情況
1. 試驗目的
本試驗的目的是為了獲得受試化合物在ICR小鼠的藥物代謝動力學情況 (含靜脈和口服)
2. 規範依從性
本試驗(非GLP研究)供試品-檢測，DMPK動物試驗，DMPK分析均在成都先導完成，所有試驗均遵循本試驗方案，及相關機構的相關SOP。
3. 試驗材料、儀器和設備
3.1 試驗材料
3.1.1 供試品
以下供試品由成都先導提供，並確保其品質符合要求。
名稱/代碼 受試化合物
性狀 溶液
溶媒/劑型 5%DMSO-10%Solutol-85%HPBCD(20%,W/V)
保存條件 室溫
配試液濃度 0.2 mg/ml (靜脈)，1 mg/ml (口服)
配試液體積 3 ml，3 ml
3.1.2 試驗系統
種屬：SPF級雄性ICR小鼠
體重/周齡：30g左右
數量：6只
實驗動物來源：維通利華
4. 試驗過程
4.1 溶媒配製
靜注溶媒：5%DMSO-10%Solutol-85%HPBCD(20%,W/V)
「灌胃溶媒/劑型：5%DMSO-10%Solutol-85%HPBCD(20%,W/V)」
4.2 受試物給予 (途徑)
靜脈注射：給藥劑量1 mg/kg，給藥體積5 mL/kg
灌胃：給藥劑量 10 mg/kg，給藥體積 10 mL/kg
給藥前超聲5min
4.3 受試物配製 (濃度)
靜脈：0.2 mg/ml
灌胃：1 mg/ml
給藥前禁食過夜，給藥後四小時餵食。
4.4 樣品採集
給藥後5分鐘 (僅IV)、15分鐘、30分鐘、1小時、2小時、4小時、8小時、24小時分別於每個時間點經眼眶靜脈叢穿刺采血 (40-50 ul) 至含預噴塗EDTA-K2的抗凝管中，血液樣品1小時內以10000 rpm離心20分鐘 (離心前後至於濕冰上保存) 取上層液即血漿，於-20℃及以下冰箱冷凍保存，以備LC-MS/MS分析。
4.5 生物藥品分析方法及檢測: 用LC-MS/MS分析檢測。
5 資料處理
樣品通過LC-MS/MS檢測各時間點的藥物濃度。採用Phoenix WinNonlin 5.2非房室模型計算藥代動力學參數末端消除半衰期 (t 1/2)、藥時曲線下面積 (AUC)、表觀分佈容積 (Vd)、清除率 (CL)、平均駐留時間 (MRT)、Cmax、生物利用度 (F%) 直接從血清濃度結果中獲得。血藥濃度及藥代參數等採用均數±標準差 (X±SD)。具體檢測分析方法以方案修訂的形式明確。
6 試驗結果如表10所示：
表10 化合物 AZD1775和 37b在ICR小鼠上的藥代動力學參數
參數 iv (1 mg/kg) 參數 po (10 mg/kg)
AZD1775 37b AZD1775 37b
C 0 (ng/mL) 250 186 C max (ng/mL) 398 307
AUC last (h*ng/mL) 116 558 AUC last (h*ng/mL) 396 1607
T 1/2(h) 0.5 2.99 T 1/2(h) 0.87 NA
T max (h) / / T max (h) 0.42 2.67
Cl (L/h/kg) 8.05 1.58 Cl (L/h/kg), 26.76 4.44
F/% / / F/% 32 29
結論：在小鼠體內藥代動力學檢測分析發現，本發明化合物 37b與對照化合物 AZD1775相比，其藥代動力學性質更優，化合物 37b的藥物暴露更高、清除更慢。
( 二 ) 大鼠單次給藥藥代動力學評價
採用與小鼠體內藥代動力學研究方法，評價藥物在雄性SD大鼠中的藥代動力學性質。結果如表11所示：
表11 化合物 AZD1775和 37b在SD大鼠上的藥代動力學參數
參數 iv (1 mg/kg) 參數 po (10 mg/kg)
AZD1775 37b AZD1775 37b
C0 (ng/mL) 100.7 313.2 Cmax (ng/mL) 188.5 188.6
AUClast (h*ng/mL) 72.3 471 AUClast (h*ng/mL) 881 1131
T1/2 (h) 0.91 3.97 T1/2 (h) 2.68 NA
Tmax (h) / / Tmax (h) / 2.67
Cl (L/h/kg), 8.86 / Cl (L/h/kg), 10.25 /
F/% / / F/% 121.8 24.01
結果：本發明化合物 37b和對照化合物 AZD1775的最大血藥濃度值相當，藥物暴露情況本發明化合物 37b靜脈注射優勢明顯，表明化合物 37b清除更慢，口服暴露水準化合物 37b也優於對照化合物 AZD1775。
( 三 ) 比格犬單次給藥代動力學評價
採用小鼠藥代動力學評價方法，開展雄性比格犬的藥待動力學評價。基本資訊如下：
比格犬：體重8-11公斤，購自Jiangsu Marshall biotechnology Co. LTD
給藥劑量: 2mg/kg (靜脈注射) ；10 mg/kg (口服)
溶媒：5%DMSO+5%Solutol+90%(20%HP-β-CD in saline)
測試結果如表12所示：
表12 化合物 37b和 AZD1775在比格犬上的藥代動力學參數
參數 iv (2 mg/kg) 參數 po (10 mg/kg)
AZD1775 37b AZD1775 37b
Vss (ng/mL) 3.01 5.71 C max (ng/mL) 405 171
AUC last (h*ng/mL) 877 1602 AUC last (h*ng/mL) 1624 1816
T 1/2(h) 1.03 5.05 T 1/2(h) 2.34 4.69
T max (h) / / T max (h) 1.67 2.00
Cl (L/h/kg), 2.64 1.31 F/% 37.9 22.8
結論：在比格犬上，本發明化合物 37b的藥代動力學性質略優於對照化合物 AZD1775。 效果實驗例 10： 動物體內藥效評價 (CDX模型)
(一) 化合物對人結腸癌HT-29細胞皮下異種植瘤雌性BALB/c 裸鼠體內藥效學評價
試驗目的：評價化合物 37b和 AZD1775對異種荷瘤 (HT-29) 裸鼠的抑瘤藥效評價
試驗方法：選用BALB/c裸小鼠 (維通利華提供)，7-8周齡，體重19-22 g
準備並培養好的HT-29細胞，計數，將5 × 10 6個HT-29細胞混於0.1 mL PBS溶液中，皮下接種於小鼠右翼。待細胞成瘤，平均腫瘤體積達到120 mm 3時，開始進行分組並開始給藥。給藥劑量： AZD1775，60毫克/公斤，每日一次； 37b設置3個劑量組分別為30毫克/公斤、60毫克/公斤和120毫克/公斤，給藥頻次每日一次。試驗指標是考察腫瘤生長是否被抑制。腫瘤體積計算公式為：V= 0.5a×b 2, a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。
化合物的抑瘤效果用TGI (%) 來評價。TGI (%) 的計算：TGI (%) = [1-(某處理組給藥結束時平均瘤子體積-該處理組開始給藥時平均瘤子體積)/ (溶媒對照組給藥結束時平均瘤子體積-溶媒對照組開始給藥時平均瘤子體積)] ×100%。
在給藥24天后，化合物 37b和 AZD1775的抑瘤效果如表13所示：
表13 化合物 AZD1775和 37b在HT-29模型上的抑瘤效果
化合物 AZD1775 37b 37b 37b
劑量 60毫克/公斤 30毫克/公斤 60毫克/公斤 120毫克/公斤
給藥頻次 每日一次 每日一次 每日一次 每日一次
TGI (%) 54.5 34.7 57.7 100.0
結論：在60毫克/公斤劑量下，本發明化合物 37b與對照化合物 AZD1775的抑瘤效果相當；在120毫克/公斤劑量下，本發明化合物 37b具有顯著的腫瘤生長抑制作用。
(二) 化合物對人胰腺癌BxPC3細胞皮下異種植瘤雌性BALB/c 裸鼠體內藥效學評價
試驗目的：評價化合物 37b和 AZD1775對異種荷瘤 (BxPC3) 裸鼠的抑瘤藥效評價
試驗方法：選用BALB/c裸小鼠 (維通利華提供)，7-8周齡，體重19-22 g
準備並培養好的BxPC3細胞，計數，將1 × 10 7個BxPC3細胞混於0.1 mL PBS溶液中，皮下接種於小鼠右翼。待細胞成瘤，平均腫瘤體積達到190 mm 3時，開始進行分組並開始給藥。給藥劑量： AZD1775，60毫克/公斤，每日一次； 37b設置3個劑量組分別為30毫克/公斤、60毫克/公斤和120毫克/公斤，給藥頻次每日一次。試驗指標是考察腫瘤生長是否被抑制。腫瘤體積計算公式為：V= 0.5a×b 2, a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。
化合物的抑瘤效果用TGI (%) 來評價。TGI (%) 的計算：TGI (%) = [1-(某處理組給藥結束時平均瘤子體積-該處理組開始給藥時平均瘤子體積)/ (溶媒對照組給藥結束時平均瘤子體積-溶媒對照組開始給藥時平均瘤子體積)] ×100%。
在給藥40天后，化合物 37b和 AZD1775的抑瘤效果如表14所示：
表14 化合物 AZD1775和 37b在HT-29模型上的抑瘤效果
化合物 AZD1775 37b 37b 37b
劑量 60毫克/公斤 30毫克/公斤 60毫克/公斤 120毫克/公斤
給藥頻次 每日一次 每日一次 每日一次 每日一次
TGI (%) 57.6 70.1 72.4 100.9
結論：在30毫克/公斤和30毫克/公斤劑量下，本發明化合物 37b比對照化合物 AZD1775抑瘤效果更佳；在120毫克/公斤劑量下，化合物 37b具有顯著的腫瘤生長抑制作用。 效果實驗例 11： 化合物毒理評價
(一) 大鼠單次給藥毒性——最大耐受劑量評價
試驗目的：化合物 AZD1775和 37b單次給藥下，大鼠耐受性評價
試驗動物：SD大鼠 (維通利華提供)，6-8周齡，180-220克。
試驗方法：按預定劑量對大鼠進行單次口服給藥，後續考察大鼠的生存情況 (最長持續觀察14天)，試驗方案及結果請見表15。
表15 AZD1775和 37b大鼠單次給藥最大耐受劑量試驗方案
組別 動物數 / 只 性別 劑量 (mg/kg) 給藥方式與頻次 死亡數量 / 只 死亡比例
AZD1775低劑量組 3 雄 100 灌胃、單次給藥 0 0%
3 雌 100 灌胃、單次給藥 0 0%
AZD1775中劑量組 3 雄 200 灌胃、單次給藥 0 0%
3 雌 200 灌胃、單次給藥 0 0%
AZD1775高劑量組 3 雄 300 灌胃、單次給藥 0 0%
3 雌 300 灌胃、單次給藥 2 67%
37b低劑量組 5 雄 200 灌胃、單次給藥 0 0%
5 雌 200 灌胃、單次給藥 0 0%
37b次低劑量組 5 雄 300 灌胃、單次給藥 0 0%
5 雌 300 灌胃、單次給藥 0 0%
37b中劑量組 5 雄 400 灌胃、單次給藥 2 40%
5 雌 400 灌胃、單次給藥 3 60%
37b高劑量組 5 雄 500 灌胃、單次給藥 2 40%
3 雌 500 灌胃、單次給藥 2 67%
試驗結果：在大鼠單次給藥中，本發明化合物 37b的最大耐受劑量高於對照化合物 AZD1775，具有明顯的安全性優勢。
(二) 大鼠連續14天給藥毒性評價
試驗目的：化合物 AZD1775 、 ZnC3和 37b 在連續給藥情況下，大鼠耐受性表現和化合物毒性評價
試驗動物：SD大鼠 (維通利華提供)，6-8周齡，180-220克。
試驗方法：按預定劑量對大鼠進行，每日一次口服給藥，後續考察大鼠的生存、體重變化 (最長持續給藥14天)，試驗方案請見表16。
表16 大鼠14天連續給藥毒研究方案
組別 動物數 劑量(mg/kg) 給藥方式
對照組 4只雄性+4只雌性 溶媒 灌胃、每日一次給藥
AZD1775低劑量組 7只雄性+7只雌性  (其中4只毒理研究+3只毒性代謝動力學研究) 25 灌胃、每日一次給藥
AZD1775中劑量組 75 灌胃、每日一次給藥
37b低劑量組 40 灌胃、每日一次給藥
37b中劑量組 75 灌胃、每日一次給藥
37b高劑量組 120 灌胃、每日一次給藥
ZnC3 75 灌胃、每日一次給藥
其中毒性代謝動力學研究取樣如下：首末次給藥取樣；取樣時間點：15分鐘, 30分鐘, 1小時, 2小時, 4小時, 8小時和24小時。
試驗結果：
1.大鼠總體存活情況
按照上面的給藥方案進行14天連續給藥，發現部分劑量組大鼠由死亡現象，結果如表17所示。
表17 連續給藥14天大鼠存活情況統計
雌性 對照 AZD1775- 25毫克每公斤 AZD1775-75毫克每公斤 37b-40毫克每公斤 37b-75毫克每公斤 37b-120毫克每公斤 Zn-C3 - 75毫克每公斤
大鼠存活情況 4/4 7/7 0/7 7/7 7/7 6/7 1/7
雄性 對照 AZD1775- 25毫克每公斤 AZD1775-75 25毫克每公斤 37b-40毫克每公斤 37b-75毫克每公斤 37b-120毫克每公斤 Zn-C3- 75毫克每公斤
大鼠存活情況 4/4 7/7 1/7 7/7 7/7 4/7 2/7
結果：本發明化合物37b組大鼠的生存率明顯優於對照化合物AZD1775組和對照化合物ZnC3組。
2. 毒性代謝動力學參數
三個化合物在大鼠上的毒性代謝動力學測試結果如表18 (雌性大鼠) 和表19 (雄性大鼠) 所示。
結論：從大鼠單次給藥最大耐受劑量和大鼠連續14天給藥毒性研究結果分析，本發明化合物 37b在藥物安全性上較對照化合物 AZD1775和對照化合物 ZnC3具有明顯的優勢。
無
無

Claims (17)

  1. 式I所示的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽： 式I
    其中，所述的R 1選自-C 1~6烷基、-C 2~6烯基、-C 2~6炔基、-C 0~2亞烷基-CN、-C 0~2亞烷基- (3~10員環烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員雜環烷基)； R 2選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ； 所述的X選自O、NH或CH 2； 所述的X 1選自CH或N； R 21、R 22、R 29分別獨立地選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員環烷基)、-C 0~2亞烷基- (3~10員雜環烷基)； 所述的R 23、R 24與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； 所述的R 25、R 26與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； 所述的R 27、R 28與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環； R 3選自氫、氘、鹵素、氰基、硝基、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)； 所述的R 4選自3~12員雜環烷基；所述的雜環烷基可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 41取代； 所述的R 41選自氫、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)、-C (O) C 1~6烷基、3~10員碳環、3~10員雜環；所述碳環、雜環可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 31取代； 或者，所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成3~10員碳環、3~10員雜環；所述的碳環、雜環烷基可進一步被一個、兩個、三個或四個獨立的R 31取代； 所述的R 31選自氫、鹵素、氰基、硝基、-OH、-C 1~6烷基、鹵素取代的C 1~6烷基、-C 0~2亞烷基-OH、-O (C 1~6烷基)、-O (鹵素取代的C 1~6烷基)、-NH 2、-C 0~2亞烷基-NH (C 1~6烷基)、-C 0~2亞烷基-N (C 1~6烷基) (C 1~6烷基)。
  2. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 1選自 、甲基、乙基、 、 。
  3. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中R 21、R 22、R 29分別獨立地選自氫、氘、氰基、甲基、乙基、-OH、三氟甲基、環丙基、-CH 2OH、-NH 2。
  4. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 23、R 24與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基； 所述的R 25、R 26與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基； 所述的R 27、R 28與其直接相連的原子一起形成環丙基、環丁基、環戊基。
  5. 根據請求項1或3或4所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 2選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  6. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 3選自氫、氟、甲基、-CH 2OH、甲氧基。
  7. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 4選自含氮6員雜環、7員含氮橋環、8員含氮橋環、9員含氮雜螺環、11員含氮雜螺環。
  8. 根據請求項7所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 4選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 ；其中R 41如請求項1所述。
  9. 根據請求項8所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 4選自 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、 。
  10. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成6員含氮雜環。
  11. 根據請求項10所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 3、R 4與其直接相連的原子一起形成 、 ，其中R 31如請求項1所述。
  12. 根據請求項11所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中所述的R 31選自甲基。
  13. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中式I所述的化合物具體為： 編號 化合物結構 編號 化合物結構 WEE1-001 WEE1-002 WEE1-003 WEE1-004 WEE1-005 WEE1-006 WEE1-007 WEE1-008 WEE1-009 WEE1-010 WEE1-011 WEE1-012 WEE1-013 WEE1-014 WEE1-015 WEE1-016 WEE1-017 WEE1-018 WEE1-019 WEE1-020 WEE1-021 WEE1-022 WEE1-023 WEE1-024 WEE1-025 WEE1-026 WEE1-027 WEE1-028 WEE1-029 WEE1-030 WEE1-031 WEE1-032 WEE1-033 WEE1-034 WEE1-035 WEE1-036 WEE1-037 WEE1-038 WEE1-039 WEE1-040 WEE1-041 WEE1-042 WEE1-043 WEE1-044 WEE1-045 WEE1-046 WEE1-047 WEE1-048 WEE1-049 WEE1-050 WEE1-051 WEE1-052 WEE1-053 WEE1-054 WEE1-055 WEE1-056 WEE1-057 WEE1-058 WEE1-059 WEE1-060 WEE1-061 WEE1-062 WEE1-063 WEE1-064 WEE1-065 WEE1-066 WEE1-067 WEE1-068 WEE1-069 WEE1-070 WEE1-071 WEE1-072 WEE1-073 WEE1-074 WEE1-075 WEE1-076 WEE1-077 WEE1-078 WEE1-079 WEE1-080 WEE1-081 WEE1-082 WEE1-083 WEE1-084 WEE1-085 WEE1-086 WEE1-087 WEE1-088 WEE1-089 WEE1-090 WEE1-091 WEE-092 WEE1-093 WEE1-094 WEE1-095 WEE1-096 WEE1-097 WEE1-098 WEE1-099 WEE1-100 WEE1-101 WEE1-102 WEE1-103 WEE1-104 WEE1-105 WEE1-106 WEE1-107 WEE1-108 WEE1-109 WEE1-110 WEE1-111 WEE1-112 WEE1-113 WEE1-114 WEE1-115 WEE1-116 WEE1-117 WEE1-118 WEE1-119 WEE1-120 WEE1-121 WEE1-122 WEE1-123 WEE1-124 WEE1-125 WEE1-126 WEE1-127 WEE1-128 WEE1-129 WEE1-130 WEE1-131 WEE1-132 WEE1-133 WEE1-134 WEE1-135 WEE1-136 WEE1-137 WEE1-138 WEE1-139 WEE1-140 WEE1-141 WEE1-142 WEE1-143 WEE1-144 WEE1-145 WEE1-146 WEE1-147 WEE1-148 WEE1-149 WEE1-150 WEE1-151 WEE1-152 WEE1-153 WEE1-154 WEE1-155 WEE1-156 WEE1-157 WEE1-158 WEE1-159 WEE1-160 WEE1-161 WEE1-162 WEE1-163 WEE1-164 WEE1-165 WEE1-166 WEE1-167 WEE1-168 WEE1-169 WEE1-170 WEE1-171 WEE1-172 WEE1-173 WEE1-174 WEE1-175 WEE1-176 WEE1-177 WEE1-178 WEE1-179 WEE1-180 WEE1-181 WEE1-182 WEE1-183 WEE1-184 WEE1-185 WEE1-186 WEE1-187 WEE1-188 WEE1-189 WEE1-190 WEE1-191 WEE1-192 WEE1-193 WEE1-194 WEE1-195 WEE1-196 WEE1-197 WEE1-198 WEE1-199 WEE1-200 WEE1-201 WEE1-202 WEE1-203 WEE1-204 WEE1-205 WEE1-206 WEE1-207 WEE1-208 WEE1-209 WEE1-210 WEE1-211 WEE1-212 WEE1-213 WEE1-214 WEE1-215 WEE1-216 WEE1-217 WEE1-218 WEE1-219 WEE1-220 WEE1-221 WEE1-222 WEE1-223 WEE1-224 WEE1-225 WEE1-226 WEE1-227 WEE1-228 WEE1-229 WEE1-230 WEE1-231 WEE1-232 WEE1-233 WEE1-234 WEE1-235 WEE1-236 WEE1-237      
  14. 根據請求項1所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，其中式I所述的化合物具體為： 、 。
  15. 一種請求項1-14任一項所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽在製備治療WEE1介導的疾病的藥物中的用途。
  16. 一種請求項15所述的用途，其中所述WEE1介導的疾病是與炎症、自身免疫性疾病、感染性疾病、癌症、癌前期綜合征相關的疾病中的一種或幾種。
  17. 一種藥物組合物，其是以請求項1-4任一項所述的化合物、或其立體異構體、或其藥學上可接受的鹽，加上藥學上可接受的輔料製備而成的製劑。
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