KR20210069639A - 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents

단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

(i) 제1 표적-결합 도메인; (ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및 (iii) 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 제공된다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 사용하는 방법 및 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산이 또한 본원에 제공된다.

Description

단쇄 키메라 폴리펩티드 및 이의 용도
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 2018년 8월 30일에 출원된 미국 특허출원 62/725,038호; 2019년 3월 12일에 출원된 미국 특허출원 62/817,244호; 2018년 10월 17일에 출원된 미국 특허출원 일련번호 62/746,832호; 2018년 10월 23일에 출원된 미국 특허출원 일련번호 62/749,506호; 2019년 3월 12일에 출원된 미국 특허출원 일련번호 62/817,241호; 2019년 3월 11일에 출원된 미국 특허출원 일련번호 62/816,683호; 및 2019년 7월 31일에 출원된 미국 특허출원 일련번호 62/881,039호에 대해 우선권을 주장하며, 이들은 각각 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다.
기술분야
본 개시내용은 생물공학 분야, 더욱 구체적으로 항원-결합 분자에 관한 것이다.
분자량이 약 46 kDa인 263개 아미노산 내재막 당단백질 및 외인성(extrinsic) 혈액 응고 경로의 촉발 단백질인 조직 인자(TF)는 생체내에서 응고의 1차 개시자이다. 순환중인 혈액과 통상적으로 접촉해 있지 않은 조직 인자는 순환중인 응고 세린 프로테아제 인자에 노출 시 응고 캐스케이드를 개시한다. 혈관 손상은 조직 인자를 발현하는 내피하(sub-endothelial) 세포를 노출시켜, 기존의 혈장 인자 VIIa(FVIIa)와의 칼슘-의존적, 고-친화도 복합체의 형성을 초래한다. 세린 프로테아제 FVIIa가 조직 인자에 결합하면, FX로부터 FXa로 그리고 FIX로부터 FIXa로의 신속한 절단이 촉진된다. 그 후에, 생성된 FXa 및 활성 막 표면의 단백질분해 활성은 소량의 프로트롬빈을 트롬빈으로 비효율적으로 전환시킨다. FFXa에 의해 발생된 트롬빈은 혈소판 활성화를 개시하고, 미미한 양의 전구-보조인자 인자 V(FV) 및 인자 VIII(FVIII)을 활성화시켜, 활성 보조인자, 인자 Va(FVa) 및 인자 VIIIa(FVIIIa)로 되게 한다. FIXa는 혈소판 표면 상의 FVIIIa와 복합체화하여 내인성(intrinsic) 테나제(tenase) 복합체를 형성하며, 이는 FXa의 신속한 발생을 초래한다. FXa는 FVa와 복합체화하여, 활성화된 혈소판 표면 상에서 프로트롬비나제 복합체를 형성하며, 이는 프로트롬빈을 트롬빈으로 신속하게 절단한다.
조직 인자-FVIIa 복합체 외에도, 최근의 연구는, 조직 인자-FVIIa-FXa 복합체가 FVIII을 활성화시킬 수 있으며, 이는 개시 단계(phase) 동안 FVIIIa의 추가 수준을 제공할 것임을 나타내었다. 외인성 경로는 제한된 양의 트롬빈의 활성화를 통해 응고를 개시하는 데 가장 중요한 반면, 내인성 경로는 초기 신호의 급격한 증폭에 의해 응고를 유지시킨다.
세포 표면 상에서 발현되는 많은 조직 인자는 "암호화되며", 이는 응고에 완전히 참여하기 위해서는 "해독되어야" 한다. 세포-표면 조직 인자의 "해독" 기전은 현재로서는 여전히 명확하지 않지만, 음이온성 인지질의 노출이 이 과정에서 주요한 역할을 한다. 건강한 세포는 음이온성 인지질, 예컨대 포스파티딜 세린(PS)을 원형질막의 내층(inner leaflet)에 격리시킨다. 세포 손상, 활성화, 또는 세포기질 Ca2+의 증가된 수준 후, 이러한 이중층 비대칭이 소실되어, 외층 상에서 PS 노출의 증가가 초래되며, 이는 세포-표면 조직 인자-FVIIa 복합체의 특이적인 활성을 증가시킨다. PS 노출은 조직 인자-FVIIa 복합체에 의해 FIX 및 FX의 활성화에 대한 겉보기(apparent) Km을 저하시키는 것으로 알려져 있으나, 추가 기전은 조직 인자 또는 조직 인자-FVIIa의 형태적 재배열(conformational rearrangement) 및 기질 결합 부위의 후속적인 노출을 포함할 수 있을 것이다.
본 발명은, 가용성 조직 인자가, 항원-결합 도메인을 포함하는 키메라 폴리펩타이드에 대한 스캐폴드(scaffold)로서 사용될 수 있다는 발견에 기초한다. 이러한 발견에 기초하여, (i) 제1 표적-결합 도메인; (ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및 (iii) 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 본원에 제공된다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산, 및 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 임의의 핵산을 포함하는 세포를 포함하는 조성물이 또한 본원에 제공된다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 사용을 포함하는, 면역 세포를 자극시키는 방법 및 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 추가 용도가 본원에 기재된다.
이에, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 본원에 제공되며, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는
(i) 제1 표적-결합 도메인;
(ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및
(iii) 제2 표적-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 가용성 조직 인자 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제2 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제2 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 항원-결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인과 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는, CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM-1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질이다. 일부 구현예에서, 상기 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, FLT3L, MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체이다. 일부 구현예에서, 상기 가용성 인터루킨 수용체, 상기 가용성 사이토카인 수용체, 또는 상기 가용성 세포 표면 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII), 가용성 TGF-βRIII, 가용성 NKG2D, 가용성 NKp30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM-1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 또는 가용성 CD28이다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인이다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는, 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 하나 이상을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은, 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 임의의 것을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 인자 VIIa에 결합할 수 없다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 불활성 인자 X를 인자 Xa로 전환시키지 않는다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 포유류에서 혈액 응고를 자극시키지 않는다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나는 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 N-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 N-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 C-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 C-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및 하나 이상의 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 항원-결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 표적-결합 도메인 중 하나 이상은, CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-D, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM-1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질이다. 일부 구현예에서, 상기 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, FLT3L, MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 수용체이다. 일부 구현예에서, 상기 가용성 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII), 가용성 TGF-βRIII, 가용성 NKG2D, 가용성 NKp30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM-1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 가용성 CD122, 가용성 CD3, 또는 가용성 CD28이다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 단부에 신호 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단 단부 또는 C-말단 단부에 위치한 펩타이드 태그를 추가로 포함한다.
상기에서 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 약학적 조성물이다. 일부 구현예에서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 용량의 조성물을 키트 내에 포함한다.
면역 세포를 자극시키는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 면역 세포를 유효량의 상기에서 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 시험관내에서 면역을 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증(fibrosis in pancreatitis), 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 암을 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 감염성 질환을 갖는 것으로 상기 대상체를 진단하거나 식별하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염이다.
면역 세포의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 면역 세포를 유효량의 본원에서 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 시험관내에서 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 암을 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 감염성 질환을 갖는 것으로 상기 대상체를 진단하거나 식별하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염이다.
면역 세포로부터 기억 또는 기억-유사 면역 세포로의 분화를 유도하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 면역 세포를 유효량의 상기에서 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 시험관내에서 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 생체내에서 면역 세포를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하는 면역 세포를 유전적으로 변형시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 암을 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 감염성 질환을 갖는 것으로 상기 대상체를 진단하거나 식별하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염이다.
세포의 사멸화를 필요로 하는 대상체에서 암 세포, 감염된 세포, 또는 노화 세포를 사멸화시키는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 치료적 유효량의 상기 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 암을 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택된다.
치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 치료적 유효량의 상기 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 암을 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 상기 대상체를 식별하거나 진단하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 감염성 질환을 갖는 것으로 상기 대상체를 진단하거나 식별하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염이다.
상기에서 논의된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 핵산이 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예는 상기 논의된 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터는 발현 벡터이다. 일부 구현예는 상기 논의된 핵산 또는 벡터를 포함하는 세포를 포함한다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성을 초래하기에 충분한 조건 하에 세포를 배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 상기 세포 및/또는 배양 배지로부터 회수하는 단계를 포함한다. 일부 구현예는 상기 논의된 방법에 의해 생성되는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함한다. 본원에 제공된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 인간 가용성 조직 인자 도메인은 혈액 응고를 개시하지 않는다. 본원에 제공된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 야생형 인간 조직 인자를 포함하거나 이로 구성된다.
일부 구현예에서, 돌연변이체 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 80% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 90% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 95% 동일한 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 100% 동일한 서열을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "키메라"는 2개의 상이한 공급원(예를 들어, 동일하거나 상이한 종으로부터의 예를 들어, 2개의 상이한 천연-발생 단백질)으로부터 원래 유래된 아미노산 서열(예를 들어, 도메인)을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 예를 들어, 키메라 폴리펩타이드는 적어도 2개의 상이한 천연-발생 인간 단백질로부터의 도메인을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 키메라 폴리펩타이드는 합성 서열(예를 들어, scFv)인 도메인 및 천연-발생 단백질(예를 들어, 천연-발생 인간 단백질)로부터 유래된 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키메라 폴리펩타이드는 합성 서열인 적어도 2개의 상이한 도메인(예를 들어, 2개의 상이한 scFv)을 포함할 수 있다.
"항원-결합 도메인"은 하나 이상의 단백질 도메인(들)(예를 들어, 하나 이상의 상이한 항원(들)에 특이적으로 결합할 수 있는 단일 폴리펩타이드로부터의 아미노산으로부터 형성되거나 2개 이상의 폴리펩타이드(예를 들어, 동일하거나 상이한 폴리펩타이드)로부터의 아미노산으로부터 형성됨)이다. 일부 예에서, 항원-결합 도메인은 천연-발생 항체와 유사한 특이성 및 친화도로 항원 또는 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 단편일 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 대안적인 스캐폴드(alternative scaffold)를 포함할 수 있다. 항원-결합 도메인의 비제한적인 예는 본원에 기재된다. 항원-결합 도메인의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
"가용성 조직 인자 도메인"은 막관통 도메인 및 세포내 도메인이 결여된 야생형 포유류 조직 인자 단백질(예를 들어, 야생형 인간 조직 인자 단백질)의 세그먼트와 적어도 70% 동일성(예를 들어, 적어도 75% 동일성, 적어도 80% 동일성, 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 99% 동일성, 또는 100% 동일성)의 세그먼트를 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 가용성 조직 인자 도메인의 비제한적인 예는 본원에 기재된다.
용어 "가용성 인터루킨 단백질"은 본원에서 성숙한 그리고 분비된 인터루킨 단백질 또는 이의 생물학적 활성 단편을 지칭하는 데 사용된다. 일부 예에서, 가용성 인터루킨 단백질은 야생형의 성숙한 그리고 분비된 포유류 인터루킨 단백질(예를 들어, 야생형 인간 인터루킨 단백질)과 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일하고 이의 생물학적 활성을 보유하는 서열을 포함할 수 있다. 가용성 인터루킨 단백질의 비제한적인 예는 본원에 기재된다.
용어 "가용성 사이토카인 단백질"은 본원에서 성숙한 그리고 분비된 사이토카인 단백질 또는 이의 생물학적 활성 단편을 지칭하는 데 사용된다. 일부 예에서, 가용성 사이토카인 단백질은 야생형의 성숙한 그리고 분비된 포유류 인터루킨 단백질(예를 들어, 야생형 인간 인터루킨 단백질)과 적어도 70% 동일한, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일하고 이의 생물학적 활성을 보유하는 서열을 포함할 수 있다. 가용성 사이토카인 단백질의 비제한적인 예는 본원에 기재된다.
용어 "가용성 인터루킨 수용체"는 본원에서 가장 넓은 의미로, 하나 이상의 이의 천연 리간드에(예를 들어, 생리학적 조건 하에, 예를 들어, 실온에서 포스페이트 완충 식염수에서) 결합할 수 있는, 막관통 도메인(및 선택적으로 세포내 도메인)이 결여된 폴리펩타이드를 지칭하는 데 사용된다. 예를 들어, 가용성 인터루킨 수용체는 야생형 인터루킨 수용체의 세포외 도메인과 적어도 70% 동일하고(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 하나 이상의 이의 천연 리간드에 특이적으로 결합하는 이의 능력을 보유하지만 이의 막관통 도메인이 결여되어 있는(그리고 선택적으로, 이의 세포내 도메인이 추가로 결여되어 있는) 서열을 포함할 수 있다. 가용성 인터루킨 수용체의 비제한적인 예는 본원에 기재된다.
용어 "가용성 사이토카인 수용체"는 본원에서 가장 넓은 의미로, 하나 이상의 이의 천연 리간드에(예를 들어, 생리학적 조건 하에, 예를 들어, 실온에서 포스페이트 완충 식염수에서) 결합할 수 있는, 막관통 도메인(및 선택적으로 세포내 도메인)이 결여된 폴리펩타이드를 지칭하는 데 사용된다. 예를 들어, 가용성 사이토카인 수용체는 야생형 사이토카인 수용체의 세포외 도메인과 적어도 70% 동일하고(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 하나 이상의 이의 천연 리간드에 특이적으로 결합하는 이의 능력을 보유하지만 이의 막관통 도메인이 결여되어 있는(그리고 선택적으로, 이의 세포내 도메인이 추가로 결여되어 있는) 서열을 포함할 수 있다. 가용성 사이토카인 수용체의 비제한적인 예는 본원에 기재된다.
용어 "항체"는 본원에서 이의 가장 넓은 의미로 사용되고, 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원-결합 도메인을 포함하는 소정의 유형의 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 예를 들어, 무손상(intact) 항체(예를 들어, 무손상 면역글로불린), 항체 단편, 및 다중-특이적 항체를 특이적으로 포함한다. 항원-결합 도메인의 일례는 VH -VL 이량체에 의해 형성되는 항원-결합 도메인이다. 항체의 추가 예는 본원에 기재되어 있다. 항체의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
"친화도"는 항원-결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원 또는 에피토프) 사이의 비-공유 상호작용의 총 합계의 강도를 지칭한다. 다르게 제시되지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, "친화도"는 내인성 결합 친화도를 지칭하며, 이는 항원-결합 도메인의 구성원과 항원 또는 에피토프 사이의 1:1 상호작용을 반영한다. 분자 X의 파트너 Y에 대한 상기 분자 X의 친화도는 해리 평형 상수(KD)에 의해 표시될 수 있다. 해리 평형 상수에 기여하는 동역학 구성요소는 하기에서 더욱 상세히 기재된다. 친화도는 본원에 기재된 방법을 포함하여 당업계에 알려진 보편적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 친화도는 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술(예를 들어, BIACORE®) 또는 생물층 간섭계(biolayer interferometry)(예를 들어, FORTEBIO®)를 사용하여 결정될 수 있다. 항원-결합 도메인 및 이의 상응하는 항원 또는 에피토프에 대한 친화도를 결정하는 추가 방법은 당업계에 알려져 있다.
본원에 사용된 바와 같이, "단일-사슬 폴리펩타이드"는 단일 단백질 사슬을 지칭한다.
용어 "친화도 도메인 쌍"은 1 x 10-7 M 미만(예를 들어 1 x 10-8 M 미만, 1 x 10-9 M 미만, 1 x 10-10 M 미만, 또는 1 x 10-11 M 미만)의 KD로 서로 특이적으로 결합하는 2개의 상이한 단백질 도메인(들)이다. 일부 예에서, 친화도 도메인의 쌍은 천연-발생 단백질의 쌍일 수 있다. 일부 구현예에서, 친화도 도메인의 쌍은 합성 단백질의 쌍일 수 있다. 친화도 도메인의 쌍의 비제한적인 예는 본원에 기재되어 있다.
용어 "에피토프"는 항원-결합 도메인에 특이적으로 결합하는 항원의 일부를 의미한다. 에피토프는 예를 들어, 표면-접근 가능한 아미노산 잔기 및/또는 당(sugar) 측쇄로 구성될 수 있고, 특이적인 3-차원 구조 특징, 뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 형태적 에피토프 및 비-형태적 에피토프는, 상기 비-형태적 에피토프가 아니라 형태적 에피토프가 변성 용매의 존재 하에 소실될 수 있다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접적으로 관여하는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접적으로 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 항원-결합 도메인이 결합하는 에피토프를 식별하는 방법은 당업계에 알려져 있다.
"면역 이펙터 세포"는 포유류에서 병원성 세포(예를 들어, 암세포)의 세포성 색전(cytostasis) 또는 세포 사멸을 직접적으로 또는 간접적으로 인식하고/거나 야기할 수 있는 포유류의 면역계의 세포를 지칭한다. 면역 이펙터 세포의 비제한적인 예는 대식세포, T-림프구(예를 들어, 세포독성 T-림프구 및 T-헬퍼 세포), 자연 살해 세포, 호중구, 단핵구, 및 호산구를 포함한다. 면역 이펙터 세포의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
용어 "치료"는 장애의 적어도 하나의 증상을 호전시키는 것을 의미한다. 일부 예에서, 치료되는 장애는 암이고, 암의 적어도 하나의 증상을 호전시키는 것은 인자의 비정상적인 증식, 유전자 발현, 신호화, 번역, 및/또는 분비를 감소시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 치료 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 대상체 또는 이러한 치료를 필요로 하는 것으로 결정되었던 대상체에게 장애의 적어도 하나의 증상을 감소시키는 치료적 유효량의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
다르게 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속한 당업계의 숙련자에 의해 보편적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 방법 및 물질은 본 발명에 사용하기 위해 본원에 기재되고; 당업계에 알려진 다른 적합한 방법 및 물질 또한 사용될 수 있다. 물질, 방법, 및 실시예는 예시적일 뿐이고, 제한하려는 것이 아니다. 본원에서 언급된 모든 공보, 특허 출원, 특허, 서열, 데이터베이스 엔트리, 및 다른 참조문헌은 그 전체가 참조로서 포함된다. 상충하는 경우, 정의를 포함한 본 명세서가 제어할 것이다.
본 발명의 다른 특질 및 이점은 하기 상세한 설명 및 도면으로부터, 그리고 청구항으로부터 분명해질 것이다.
도 1은 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 도식적인 다이어그램이다.
도 2는 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼으로부터 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 용출을 나타내는 크로마토그래프이다.
도 3은 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 로딩된 Superdex 200 Increase 10/300 GL 겔 여과 컬럼의 용출을 나타내는 크로마토그래프이다.
도 4는 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼을 사용하여 정제된 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔(4-12% NuPage Bis-Tris 겔)이다.
도 5는 실시예 1에 기재된 방법을 사용하여 수행된 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 ELISA 정량화를 나타내는 그래프이다. 정제된 조직 인자는 대조군으로서 사용되었다.
도 6은 2명의 공여자의 혈액으로부터 단리된 CD4+ T-세포에서 CD25 발현을 자극시키는 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 능력을 나타내는 그래프이다. 실험은 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행되었다.
도 7은 2명의 공여자의 혈액으로부터 단리된 CD8+ T-세포에서 CD25 발현을 자극시키는 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 능력을 나타내는 그래프이다. 실험은 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행되었다.
도 8은 2명의 공여자의 혈액으로부터 단리된 CD4+ T-세포에서 CD69 발현을 자극시키는 예시적인 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 능력을 나타내는 그래프이다. 실험은 실시예 2에 기재된 바와 같이 수행되었다.
도 9는 예시적인 IL-2/TF/IL-2 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 도식적인 다이어그램이다.
도 10은 32Dβ 세포 증식 검정법을 사용하여 재조합 IL-2와 비교하여 IL-2/TF/IL-2에서의 IL-2활성을 도시한다.
도 11은 CTLL-2 세포 증식 검정법을 사용하여 재조합 IL-2와 비교하여 IL-2/TF/IL-2에서의 IL-2활성을 도시한다.
도 12는 표준 사료 또는 고지방 식이요법으로 사육되고 PBS 대조군으로 치료되거나(비치료) IL-2/TF/IL-2로 치료된 ApoE-/- 마우스에서 공복 혈중 글루코스 수준을 도시한다.
도 13은 표준 사료 또는 고지방 식이요법으로 사육되고 PBS 대조군으로 치료되거나(비치료) IL-2/TF/IL-2로 치료된 ApoE-/- 마우스로부터의 혈액 림프구에서 CD4+CD25+FoxP3+ T 조절 세포의 비를 도시한다.
도 14는 항-TF 항체 수지 상에서 결합 및 용출 후 IL-2/TF/IL-2 단백질-함유 세포 배양물 상층액의 크로마토그래프 프로파일을 도시하는 선 그래프이다.
도 15는 IL-2/TF/IL-2의 분석적 SEC 프로파일을 도시한다.
도 16a 및 도 16b는 탈글리코실화 전 및 후에 IL-2/TF/IL-2의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 도 16a는 탈글리코실화 전에 IL-2/TF/IL-2의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 도 16b는 탈글리코실화 후에 IL-2/TF/IL-2의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다.
도 17a 및 도 17b는 C57BL/6 마우스에서 IL-2/TF/IL-2를 사용한 면역자극의 결과를 도시한다. 도 17a는 IL-2/TF/IL-2로 치료한 후 비장 중량을 도시한다. 도 17b는 IL-2/TF/IL-2 치료 후 면역 세포 유형의 백분율을 도시한다.
도 18은 IL-2/TF/IL-2로 치료된 마우스에서 CD4+ T 세포의 CD25 발현의 상향조절을 도시한다.
도 19는 C57BL/6 마우스에서 IL-2/TF/IL-2의 약물동력학을 도시한다.
도 20a 및 도 20b는 ApoE-/- 마우스에서 고지방-유도 아테롬성 동맥경화증 플라크(plaque)의 형성을 감쇠시키는(attenuate) 데 있어서 IL-2/TF/IL-2의 효과를 도시한다. 도 20a는 표준 사료 또는 고지방 식이요법으로 사육되고 PBS 대조군 또는 IL-2/TF/IL-2로 치료된 ApoE-/- 마우스로부터의 아테롬성 동맥경화증 플라크의 대표도를 도시한다. 도 20b는 각각의 군의 아테롬성 동맥경화증 플라크의 정량적 분석의 결과를 도시한다.
도 21은 대조군-치료 마우스와 비교하여 IL-2/TF/IL-2 치료-마우스에서 공복 글루코스 수준을 도시한다.
도 22는 IL-2/TF/IL-2로 치료된 마우스 및 대조군-치료 마우스로부터의 혈액 림프구에서 CD4+CD25+FoxP3+ Tregs의 백분율을 도시한다.
도 23은 예시적인 IL-15/TF/IL-15 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 도식적인 다이어그램이다.
도 24는 32Dβ 세포 증식 검정법을 사용하여 재조합 IL-15와 비교하여 IL-15/TF/IL-15에서의 IL-15 활성을 도시한다.
도 25는 항-TF 항체 수지 상에서 결합 및 용출 후 IL-15/TF/IL-15 단백질-함유 세포 배양물 상층액의 크로마토그래프 프로파일을 도시하는 선 그래프이다.
도 26a 및 도 26b는 탈글리코실화 전 및 후에 IL-15/TF/IL-15의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 도 26a는 탈글리코실화 전에 IL-15/TF/IL-15의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 도 26b는 탈글리코실화 후에 IL-15/TF/IL-15의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다.
도 27a 내지 도 27c는 2t2로 치료 후, C57BL/6 마우스에서 면역자극을 도시하는 그래프 세트이다.
도 28a 내지 도 28c는 서구 식이요법으로 사육되고 2t2로 치료된 ApoE-/- 마우스에서 Tregs, NK 세포, 및 CD8+ T 세포의 생체내 자극을 도시하는 그래프 세트이다.
도 29a 및 도 29b는 C57BL/6 마우스에서 2t2에 의한 비장세포 증식의 유도를 도시하는 그래프 세트이다.
도 30a 및 도 30b는 서구 식이요법으로 사육되고 2t2로 치료된 ApoE-/- 마우스에서 NK 세포 및 CD8+ T 세포의 생체내 증식 유도를 도시하는 그래프 세트이다.
도 31a 내지 도 31c는 ApoE-/- 마우스에서 2t2에 의한 서구 식이요법-유도 고혈당의 개선을 도시하는 그래프 세트이다.
도 32는 2t2로 치료 시 CD44 기억 T 세포의 상향조절을 도시한다.
도 33은 단일-사슬 또는 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드에 의한 치료 후 인자 X(FX) 활성화의 그래프를 도시한다.
도 34a 내지 도 34c는 2t2 또는 IL2 치료에 반응하여 CD4+CD25hiTreg 세포, CD4+CD25-Tcon 세포, 또는 CD8+ Tcon 세포에서 인간 혈액 림프구 pStat5a 반응을 도시한다. 도 34a는 CD4+CD25hiTreg 세포에서 pSTAT5 반응을 도시한다. 도 34b는 CD4+CD25-Tcon 세포에서 pSTAT5 반응을 도시한다. 도 34c는 CD8+ Tcon 세포에서 pSTAT5 반응을 도시한다.
(i) 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 표적-결합 도메인), (ii) 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인), 및 (iii) 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 표적-결합 도메인)을 포함하는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산, 및 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 임의의 핵산을 포함하는 세포를 포함하는 조성물이 또한 본원에 제공된다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 사용을 포함하는, 면역 세포를 자극시키는 방법 및 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법이 또한 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 예에서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 약 50개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 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약 400개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 320개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 320개 아미노산 내지 약 340개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 340개 아미노산 내지 약 360개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 360개 아미노산 내지 약 380개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 380개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 420개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 420개 아미노산 내지 약 440개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 440개 아미노산 내지 약 460개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 460개 아미노산 내지 약 480개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 480개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 950개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 950개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 950개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 950개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 950개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 1000개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 1000개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 1000개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 1000개 아미노산 내지 약 1500개 아미노산, 약 1500개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 1500개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 약 1500개 아미노산 내지 약 2000개 아미노산, 약 2000개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산, 약 2000개 아미노산 내지 약 2500개 아미노산, 또는 약 2500개 아미노산 내지 약 3000개 아미노산의 총 길이를 가질 수 있다. 본원에 제공된 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 다이어그램은 도 1에 도시되어 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 및 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)은 서로 직접적으로 인접해 있다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 및 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 서로 직접적으로 인접해 있다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)과 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 및 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 서로 직접적으로 인접해 있다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 및 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)은 서로 직접적으로 인접해 있다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 1)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO: 2)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 MKWVTFISLLFLFSSAYSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 3)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCCCAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO: 4)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKRSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO: 5)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGGAGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAGCAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO: 6)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 MKWVTFISLLFLFSSAYSVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKRSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO: 7)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 ATGAAATGGGTCACCTTCATCTCTTTACTGTTTTTATTTAGCAGCGCCTACAGCGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGGAGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAGCAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO: 8)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
이들 키메라 폴리펩타이드, 핵산, 벡터, 세포, 및 방법의 비-제한적인 양태는 하기에 기재되어 있고, 제한 없이 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 이들 키메라 폴리펩타이드, 핵산, 벡터, 세포, 및 방법의 추가 양태는 당업계에 알려져 있다.
조직 인자
인간 조직 인자는 3개의 도메인을 함유하는 263개-아미노산 막관통 단백질이다: (1) 219-아미노산 N-말단 세포외 도메인(잔기 1-219); (2) 22-아미노산 막관통 도메인(잔기 220-242); 및 (3) 21-아미노산 세포질 C-말단 테일(tail)(잔기 242-263)((UniProtKB 식별 번호: P13726). 세포질 테일은 Ser253 및 Ser258에서 2개의 인산화 부위 및 Cys245에서 하나의 S-팔미토일화 부위를 함유한다. 세포질 도메인의 결실 또는 돌연변이는 조직 인자 응고 활성에 영향을 미치는 것으로 밝혀지지 않았다. 조직 인자는 Cys245에서 단백질의 세포내 도메인에 하나의 S-팔미토일화 부위를 갖는다. Cys245는 세포내 도메인의 아미노산 말단에 그리고 막 표면에 근접하게 위치한다. 조직 인자 막관통 도메인은 단일-경유(single-spanning) α-나선으로 이루어진다.
2개의 피브로넥틴 III형 도메인으로 이루어진 조직 인자의 세포외 도메인은 6-아미노산 링커를 통해 막관통 도메인에 연결된다. 이 링커는 조직 인자 세포외 도메인을 이의 막관통 도메인 및 세포질 도메인으로부터 디커플링시키기 위해 형태적 가요성(flexibility)을 제공한다. 각각의 조직 인자 피브로넥틴 III형 모듈(module)은 3개의 역평행 β-가닥을 함유하는 상단(top) 시트 도메인 및 4개의 β-가닥을 함유하는 하단(bottom) 시트를 갖는 2개의 중첩 β 시트로 이루어진다. β-가닥은 가닥 βA와 βB, βC와 βD, 및 βE와 βF 사이에서 β-루프에 의해 연결되며, 이들은 모두 2개의 모듈에서 형태가 보존된다. β-가닥을 연결하는 3개의 짧은 α-나선 세그먼트(segment)가 존재한다. 조직 인자의 독특한 특질은 가닥 β10과 가닥 β11 사이의 17-아미노산 β-헤어핀이고, 이는 피브로넥틴 슈퍼패밀리의 공통 요소(common element)가 아니다. N-말단 도메인은 또한, C-말단 도메인에 존재하지 않고 조직 인자에 독특한 β6F와 β7G 사이에 12-아미노산 루프를 함유한다. 이러한 피브로넥틴 III형 도메인 구조는 단백질 폴드(fold)의 면역글로불린-유사 패밀리의 특질이고, 광범위하게 다양한 세포외 단백질 중에서 보존된다.
자이모겐 FVII은 제한된 단백질분해에 의해 FVIIa로 신속하게 전환되어, 일단 이것이 조직에 결합하면 활성 조직 인자-FVIIa 복합체를 형성한다. 대략 0.1 nM(1%의 혈장 FVII)의 농도에서 효소로서 순환되는 FVIIa는 또한, 조직 인자에 직접적으로 결합할 수 있다. 조직 인자-FVIIa 복합체 상에서 조직 인자와 FVIIa 사이의 알로스테릭(allosteric) 상호작용은 FVIIa의 효소적 활성을 크게 증가시킨다: 작은 발색성(chromogenic) 펩티딜 기질의 가수분해 속도에서 대략 20-배 내지 100-배 증가, 및 천연 거대분자 기질 FIX 및 FX의 활성화 속도에서 거의 100만-배 증가. 조직 인자에의 결합 시 FVIIa의 활성 부위의 알로스테릭 활성화와 협력하여, 인지질 이중층 상에서 조직 인자-FVIIa 복합체의 형성(즉, 막 표면 상에서 포스파티딜-L-세린의 노출 시)은 FIX 또는 FX 활성화 속도를 Ca2+-의존적 방식으로 추가 1,000-배 증가시킨다. 자유 FVIIa와 비교하여 조직 인자-FVIIa-인지질 복합체에 의한 FX 활성화의 대략 100만-배 전체적 증가는 응고 캐스케이드에 대한 중요한 조절점이다.
FVII는 N-말단 γ-카르복시글루타메이트-풍부(GLA) 도메인, 2개의 표피 성장 인자-유사 도메인(EGF1 및 EFG2), 및 C-말단 세린 프로테아제 도메인과 함께 406개의 아미노산 잔기로 구성된 약 50 kDa, 단일-사슬 폴리펩타이드이다. FVII는 EGF2와 프로테아제 도메인 사이의 짧은 링커 영역에서 Ile-154-Arg152 결합의 특이적인 단백질분해 절단에 의해 FVIIa로 활성화된다. 이러한 절단은 Cys135 및 Cys262의 단일 이황화 결합에 의해 함께 보유되는 경쇄 및 중쇄를 초래한다. FVIIa는 이의 N-말단 GLA-도메인을 통해 Ca2+-의존적 방식으로 인지질 막에 결합한다. GLA 도메인에 대해 바로 C-말단에 방향족 스택(stack) 및 2개의 EGF 도메인이 있다. 방향족 스택은 단일 Ca2+ 이온에 결합하는 EGF1 도메인에 GLA를 연결한다. 이 Ca2+-결합 부위의 점유(occupancy)는 FVIIa 아미도분해(amidolytic) 활성 및 조직 인자 회합을 증가시킨다. 촉매적 트리아드(triad)는 His193, Asp242, 및 Ser344로 구성되고, FVIIa 프로테아제 도메인 내에서 단일 Ca2+ 이온의 결합은 이의 촉매적 활성에 중요하다. FVII 내지 FVIIa의 단백질분해 활성화는 Ile153에서 새로 형성된 아미노 말단을 유리시켜(free) 다시 접히게 하고, Asp343의 카르복실레이트와 염 브릿지를 형성하는 활성화 포켓 내로 삽입되어 옥시음이온 정공(oxyanion hole)을 형성한다. 이 염 브릿지의 형성은 FVIIa 활성에 중요하다. 그러나, 옥시음이온 정공 형성은 단백질분해 활성화 시 자유(free) FVIIa에서 발생하지 않는다. 그 결과, FVIIa는 혈장 프로테아제 저해제에 의해 불량하게 인식되는 자이모겐-유사 상태로 순환되어, 이것이 대략 90분의 반감기로 순환할 수 있게 한다.
막 표면 위에서 FVIIa 활성 부위의 조직 인자-매개 위치화는 FVIIa가 동족(cognate) 기질로 향하게 하는 데 중요하다. 자유 FVIIa는 막 표면 위의 약 80 Å에 위치한 이의 활성 부위와 함께 막에 결합될 때 안정하고 연장된 구조를 채택한다. FVIIa가 조직 인자에 결합할 때, FVa 활성 부위는 막에 약 6 Å 더 근접하게 재위치된다. 이러한 조절은 표적 기질 절단 부위와 함께 FVIIa 촉매적 트리아드의 적절한 정렬에 일조할 수 있다. GLA-도메인리스(domainless) FVIIa를 사용하여, 활성 부위는 막 위의 유사한 거리에서 여전히 위치해 있는 것으로 나타났으며, 이는 조직 인자가 심지어 FVIIa-막 상호작용의 부재 하에 FVIIa 활성 부위 위치화를 완전히 뒷받침할 수 있음을 실증한다. 추가 데이터는, 조직 인자 세포외 도메인이 일부 방식으로 막 표면에 부착되는(tethered) 한, 완전 FVIIa 단백질분해 활성을 뒷받침하였음을 나타내었다. 그러나, FVIIa의 활성 부위를 막 표면 위에서 80 Å보다 더 크게 상승시키는 것은, 조직 인자-FVIIa 복합체가 FX를 활성화시키는 능력을 크게 감소시켰으나, 조직 인자-FVIIa 아미도분해 활성은 저하시키지 않았다.
알라닌 스캐닝 돌연변이형성(mutagenesis)은 FVIIa와의 상호작용을 위한 조직 인자 세포외 도메인에서 특이적인 아미노산 측쇄의 역할을 평가하는 데 사용되어 왔다(문헌[Gibbs 등, Biochemistry 33(47): 14003-14010, 1994]; 문헌[Schullek 등, J Biol Chem 269(30): 19399-19403, 1994]). 알라닌 치환은, 알라닌 대체가 FVIIa 결합에 대해 5-배 내지 10-배 더 낮은 친화도를 야기하는 제한된 수의 잔기 위치를 식별하였다. 대부분의 이들 잔기 측쇄는 거대분자 리간드 상호작용과 화합하는 결정 구조 내 용매에 잘-노출되는 것으로 밝혀졌다. FVIIa 리간드-결합 부위는 2개의 모듈 사이의 경계에서 광범위한 영역에 걸쳐 위치한다. C-모듈에서, 돌출형(protruding) B-C 루프 상에 위치한 잔기 Arg135 및 Phe140은 FVIIa와 독립적인 접촉을 제공한다. Leu133은 핑거유사(fingerlike) 구조의 기부(base)에 위치하고, 2개의 모듈 사이의 틈(cleft) 내로 패킹(packed)된다. 이는 Lys20, Thr60, Asp58, 및 Ile22로 구성된 중요한 결합 잔기의 주요 클러스터(cluster)에 연속성(continuity)을 제공한다. Thr60은 단지 부분적으로 용매-노출되고, 리간드와 유의한 접촉을 형성하기보다는 국소적인 구조적 역할을 할 수 있다. 결합 부위는 Glu24 및 Gln110, 그리고 잠재적으로는 더 원거리의 잔기 Val207을 수반하는 모듈간(intermodule) 각도의 오목한(concave) 측면 상으로 연장된다. 결합 영역은 Asp58로부터 Lys48, Lys46, Gln37, Asp44, 및 Trp45에 의해 형성되는 볼록한(convex) 표면적 상으로 연장된다. Trp45 및 Asp44은 FVIIa와 독립적으로 상호작용하며, 이는 Trp45 위치에서의 돌연변이 효과가 인접한 Asp44 및 Gln37 측쇄의 국소적인 패킹을 위한 이 측쇄의 구조적 중요성을 반영할 수 있음을 나타낸다. 상호적인 영역은 2개의 표면-노출된 방향족 잔기인 Phe76 및 Tyr78을 추가로 포함하고, 이들 잔기는 N-모듈에서 소수성 클러스터의 일부를 형성한다.
조직 인자-FVIIa의 기지의 생리학적 기질은 FVII, FIX, 및 FX 및 소정의 프로테이나제-활성화된 수용체이다. 돌연변이 분석은, 돌연변이화되었을 때 작은 펩티딜 기질에 대한 완전 FVIIa 아미도분해 활성을 뒷받침하지만 거대분자 기질(즉, FVII, FIX, 및 FX) 활성화를 뒷받침하는 이들의 능력이 부족한 많은 잔기를 식별하였다(문헌[Ruf 등, J Biol Chem 267(31): 22206-22210, 1992]; 문헌[Ruf 등, J Biol Chem 267(9): 6375-6381, 1992]; 문헌[Huang 등, J Biol Chem 271(36): 21752-21757, 1996]; 문헌[Kirchhofer 등, Biochemistry 39(25): 7380-7387, 2000]). 잔기 159-165에서의 조직 인자 루프 영역, 및 이러한 가요성 루프 내의 또는 루프에 인접한 잔기는 조직 인자-FVIIa 복합체의 단백질분해 활성에 중요한 것으로 나타났다. 이는, FVIIa 활성 부위로부터 꽤 원거리에 있는 조직 인자의 제안된 기질-결합 부위외(exosite) 영역을 한정한다(define). 미미하게 더 벌키한 잔기 알라닌에 의한 글리신 잔기의 치환은 조직 인자-FVIIa 단백질분해 활성을 유의하게 손상시킨다. 이는, 글리신에 의해 부여되는 가요성이 조직 인자 거대분자 기질 인식을 위해 잔기 159-165의 루프에 중요함을 시사한다.
잔기 Lys165 및 Lys166은 또한, 기질 인식 및 결합에 중요한 것으로 실증되었다. 이들 잔기로부터 알라닌으로의 돌연변이는 조직 인자 보조-인자 기능에서 유의한 저하를 초래한다. Lys165 및 Lys166은 서로로부터 멀리 향하며, 이때 Lys165은 대부분의 조직 인자-FVIIa 구조에서 FVIIa로 향하고, Lys166은 결정 구조에서 기질 결합 부위외 영역으로 향한다. FVIIa의 Lys165과 Gla35 사이의 추정상(putative) 염 브릿지 형성은, FVIIa의 GLA 도메인과의 조직 인자 상호작용이 기질 인식을 조절한다는 개념을 뒷받침할 것이다. 이들 결과는, 조직 인자 엑토도메인의 C-말단 부분이 FIX 및 FX의 GLA-도메인, 가능한 인접한 EGF1 도메인과 직접적으로 상호작용하며, FVIIa GLA-도메인의 존재는 이들 상호작용을 직접적으로 또는 간접적으로 조절할 수 있음을 시사한다.
가용성 조직 인자 도메인
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드, 조성물, 또는 방법의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 신호 서열, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인이 결여된 야생형 조직 인자 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 조직 인자 돌연변이체일 수 있으며, 여기서, 야생형 조직 인자 폴리펩타이드는 신호 서열, 막관통 도메인, 및 세포내 도메인이 결여되어 있고, 선택된 아미노산에서 추가로 변형되었다. 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인일 수 있다. 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 마우스 조직 인자 도메인일 수 있다. 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 래트 조직 인자 도메인일 수 있다. 가용성 인간 조직 인자 도메인, 마우스 가용성 조직 인자 도메인, 래트 가용성 조직 인자 도메인, 및 돌연변이체 가용성 조직 인자 도메인의 비제한적인 예는 하기에 나타나 있다.
예시적인 가용성 인간 조직 인자 도메인(SEQ ID NO: 9)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
가용성 인간 조직 인자 도메인을 인코딩하는 예시적인 핵산(SEQ ID NO: 10)
AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG
예시적인 가용성 마우스 조직 인자 도메인(SEQ ID NO: 11)
agipekafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwknkcfsttdtecdltdeivkdvtwayeakvlsvprrnsvhgdgdqlvihgeeppftnapkflpyrdtnlgqpviqqfeqdgrklnvvvkdsltlvrkngtfltlrqvfgkdlgyiityrkgsstgkktnitntnefsidveegvsycffvqamifsrktnqnspgsstvcteqwksflge
예시적인 가용성 래트 조직 인자 도메인(SEQ ID NO: 12)
Agtppgkafnltwistdfktilewqpkptnytytvqisdrsrnwkykctgttdtecdltdeivkdvnwtyearvlsvpwrnsthgketlfgthgeeppftnarkflpyrdtkigqpviqkyeqggtklkvtvkdsftlvrkngtfltlrqvfgndlgyiltyrkdsstgrktntthtneflidvekgvsycffaqavifsrktnhkspesitkcteqwksvlge
예시적인 돌연변이체 가용성 인간 조직 인자 도메인(SEQ ID NO: 96)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
예시적인 돌연변이체 가용성 인간 조직 인자 도메인(SEQ ID NO: 97)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFATALEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDAKSKCFYTTDTECALTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLAENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVARNNTALSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9, 11, 12, 96, 또는 97과 적어도 70% 동일한, 적어도 72% 동일한, 적어도 74% 동일한, 적어도 76% 동일한, 적어도 78% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 1개 내지 20개의 아미노산(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의) 아미노산이 이의 N-말단으로부터 제거되어 있고/거나 1개 내지 20개의 아미노산(예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의) 아미노산이 이의 C-말단으로부터 제거되어 있는, SEQ ID NO: 9, 11, 12, 96, 또는 97의 서열을 포함할 수 있다.
당업계에서 이해될 수 있는 바와 같이, 당업자는, 상이한 포유류 종들 사이에서 보존되는 아미노산의 돌연변이는 단백질의 활성 및/또는 구조적 안정성을 저하시킬 가능성이 더 큰 한편, 상이한 포유류 종들 사이에서 보존되지 않는 아미노산의 돌연변이는 단백질의 활성 및/또는 구조적 안정성을 저하시킬 가능성이 더 작음을 이해할 것이다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 인자 VIIa에 결합할 수 없다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 불활성 인자 X를 인자 Xa로 전환시키지 않는다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 포유류에서 혈액 응고를 자극시키지 않는다.
일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인일 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 마우스 조직 인자 도메인일 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 래트 조직 인자 도메인일 수 있다.
일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은, 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신; 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및 성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 또는 7개)을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 돌연변이체 가용성 조직 인자는 SEQ ID NO: 96 또는 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 소유한다.
일부 예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 10와 적어도 70% 동일한, 적어도 72% 동일한, 적어도 74% 동일한, 적어도 76% 동일한, 적어도 78% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩될 수 있다.
일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 약 20개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 205개 아미노산, 약 205개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 205개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 약 205개 아미노산 내지 약 210개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 210개 아미노산 내지 약 215개 아미노산, 또는 약 215개 아미노산 내지 약 220개 아미노산의 총 길이를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 야생형 인간 조직 인자(또는 이로부터의 임의의 서열)를 포함하거나 이로 구성될 수 있다.
링커 서열
일부 구현예에서, 링커 서열은 가요성 링커 서열일 수 있다. 사용될 수 있는 링커 서열의 비제한적인 예는 문헌[Klein 등, Protein Engineering, Design & Selection Vol. 27, No. 10, pp. 325―330, 2014]; 문헌[Priyanka 등, Protein Sci., 2013 Feb; 22(2):153―167]에 기재되어 있다. 일부 예에서, 링커 서열은 합성 링커 서열이다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 링커 서열(들)(예를 들어, 동일하거나 상이한 링커 서열, 예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 포함할 수 있다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 링커 서열(들)(예를 들어, 동일하거나 상이한 링커 서열, 예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 링커 서열은 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 1개 아미노산 내지 약 4개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 약 2개 아미노산 내지 약 4개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 4개 아미노산 내지 약 6개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 6개 아미노산 내지 약 8개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 8개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 12개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 12개 아미노산 내지 약 14개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 14개 아미노산 내지 약 16개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 16개 아미노산 내지 약 18개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 18개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 22개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 22개 아미노산 내지 약 24개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 40개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 45개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 60개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 70개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 80개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 또는 약 90개 아미노산 내지 약 100개 아미노산의 총 길이를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 링커는 글리신(Gly 또는 G) 잔기가 풍부하다. 일부 구현예에서, 링커는 세린(Ser 또는 S) 잔기가 풍부하다. 일부 구현예에서, 링커는 글리신 및 세린 잔기가 풍부하다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 글리신-세린 잔기 쌍(GS), 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 GS 쌍을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 Gly-Gly-Gly-Ser(GGGS) 서열, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 GGGS 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 Gly-Gly-Gly-Gly-Ser(GGGGS) 서열, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 GGGGS 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 Gly-Gly-Ser-Gly(GGSG) 서열, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 이상의 GGSG 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 링커 서열은 GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO: 13)를 포함하거나 이로 구성될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 GGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCT(SEQ ID NO: 14)를 포함하거나 이로 구성된 핵산에 의해 인코딩될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 GGGSGGGS(SEQ ID NO: 15)로 포함하거나 이로 구성될 수 있다.
표적-결합 도메인
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및/또는 추가 하나 이상의 표적-결합 도메인은 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 항원-결합 도메인), 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 인터루킨 단백질 또는 가용성 사이토카인 단백질), 및 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 수용체(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 인터루킨 수용체 또는 가용성 사이토카인 수용체)일 수 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 제1 표적 결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 제2 표적 결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적 결합 도메인은 각각 독립적으로, 하기의 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합할 수 있으며: CD16a, CD28, CD3(예를 들어, 하나 이상의 CD3α, CD3β, CD3δ, CD3ε, 및 CD3γ), CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질(예를 들어, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5, 및 ULBP6), HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD의 리간드, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 수용체, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및/또는 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 독립적으로, 약 5개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 15개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 25개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 85개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 80개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 75개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 70개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 65개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 60개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 55개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 45개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 35개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 35개 아미노산 내지 약 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아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 95개 아미노산, 약 85개 아미노산 내지 약 90개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 90개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 90개 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아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 105개 아미노산, 약 95개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 100개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 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145개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 105개 아미노산 내지 약 110개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 110개 아미노산 내지 약 115개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 115개 아미노산 내지 약 120개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 120개 아미노산 내지 약 125개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 125개 아미노산 내지 약 130개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 130개 아미노산 내지 약 135개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 135개 아미노산 내지 약 140개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 140개 아미노산 내지 약 145개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 145개 아미노산 내지 약 150개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 150개 아미노산 내지 약 155개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 155개 아미노산 내지 약 160개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 160개 아미노산 내지 약 165개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 165개 아미노산 내지 약 170개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 170개 아미노산 내지 약 175개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 175개 아미노산 내지 약 180개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 180개 아미노산 내지 약 185개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 185개 아미노산 내지 약 190개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 190개 아미노산 내지 약 195개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 195개 아미노산 내지 약 200개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 200개 아미노산 내지 약 220개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 220개 아미노산 내지 약 240개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 240개 아미노산 내지 약 260개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 260개 아미노산 내지 약 280개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 280개 아미노산 내지 약 300개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 300개 아미노산 내지 약 350개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 350개 아미노산 내지 약 400개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 400개 아미노산 내지 약 450개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 450개 아미노산 내지 약 500개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 500개 아미노산 내지 약 550개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 550개 아미노산 내지 약 600개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 600개 아미노산 내지 약 650개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 650개 아미노산 내지 약 700개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 700개 아미노산 내지 약 750개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 750개 아미노산 내지 약 800개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 800개 아미노산 내지 약 850개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 약 850개 아미노산 내지 약 900개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산, 약 900개 아미노산 내지 약 950개 아미노산, 또는 약 950개 아미노산 내지 약 1000개 아미노산의 아미노산 총 수를 가질 수 있다.
본원에 기재된 임의의 표적-결합 도메인은 1 x 10-7 M 미만, 1 x 10-8 M 미만, 1 x 10-9 M 미만, 1 x 10-10 M 미만, 1 x 10-11 M 미만, 1 x 10-12 M 미만, 또는 1 x 10-13 M 미만의 해리 평형 상수(KD)로 이의 표적에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항원-결합 단백질 작제물은 약 1 x 10-3 M 내지 약 1 x 10-5 M, 약 1 x 10-4 M 내지 약 1 x 10-6 M, 약 1 x 10-5 M 내지 약 1 x 10-7 M, 약 1 x 10-6 M 내지 약 1 x 10-8 M, 약 1 x 10-7 M 내지 약 1 x 10-9 M, 약 1 x 10-8 M 내지 약 1 x 10-10 M, 또는 약 1 x 10-9 M 내지 약 1 x 10-11 M(포함적)의 KD로 식별 항원에 결합할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 표적-결합 도메인은 약 1 pM 내지 약 30 nM(예를 들어, 약 1 pM 내지 약 25 nM, 약 1 pM 내지 약 20 nM, 약 1 pM 내지 약 15 nM, 약 1 pM 내지 약 10 nM, 약 1 pM 내지 약 5 nM, 약 1 pM 내지 약 2 nM, 약 1 pM 내지 약 1 nM, 약 1 pM 내지 약 950 pM, 약 1 pM 내지 약 900 pM, 약 1 pM 내지 약 850 pM,약 1 pM 내지 약 800 pM, 약 1 pM 내지 약 750 pM,약 1 pM 내지 약 700 pM,약 1 pM 내지 약 650 pM,약 1 pM 내지 약 600 pM,약 1 pM 내지 약 550 pM, 약 1 pM 내지 약 500 pM, 약 1 pM 내지 약 450 pM,약 1 pM 내지 약 400 pM,약 1 pM 내지 약 350 pM,약 1 pM 내지 약 300 pM, 약 1 pM 내지 약 250 pM, 약 1 pM 내지 약 200 pM,약 1 pM 내지 약 150 pM, 약 1 pM 내지 약 100 pM, 약 1 pM 내지 약 90 pM, 약 1 pM 내지 약 80 pM,약 1 pM 내지 약 70 pM,약 1 pM 내지 약 60 pM,약 1 pM 내지 약 50 pM,약 1 pM 내지 약 40 pM,약 1 pM 내지 약 30 pM,약 1 pM 내지 약 20 pM,약 1 pM 내지 약 10 pM,약 1 pM 내지 약 5 pM, 약 1 pM 내지 약 4 pM, 약 1 pM 내지 약 3 pM, 약 1 pM 내지 약 2 pM, 약 2 pM 내지 약 30 nM, 약 2 pM 내지 약 25 nM, 약 2 pM 내지 약 20 nM, 약 2 pM 내지 약 15 nM, 약 2 pM 내지 약 10 nM, 약 2 pM 내지 약 5 nM, 약 2 pM 내지 약 2 nM, 약 2 pM 내지 약 1 nM, 약 2 pM 내지 약 950 pM, 약 2 pM 내지 약 900 pM, 약 2 pM 내지 약 850 pM, 약 2 pM 내지 약 800 pM, 약 2 pM 내지 약 750 pM, 약 2 pM 내지 약 700 pM, 약 2 pM 내지 약 650 pM, 약 2 pM 내지 약 600 pM, 약 2 pM 내지 약 550 pM, 약 2 pM 내지 약 500 pM, 약 2 pM 내지 약 450 pM, 약 2 pM 내지 약 400 pM, 약 2 pM 내지 약 350 pM, 약 2 pM 내지 약 300 pM, 약 2 pM 내지 약 250 pM, 약 2 pM 내지 약 200 pM, 약 2 pM 내지 약 150 pM, 약 2 pM 내지 약 100 pM, 약 2 pM 내지 약 90 pM, 약 2 pM 내지 약 80 pM, 약 2 pM 내지 약 70 pM, 약 2 pM 내지 약 60 pM, 약 2 pM 내지 약 50 pM, 약 2 pM 내지 약 40 pM, 약 2 pM 내지 약 30 pM, 약 2 pM 내지 약 20 pM, 약 2 pM 내지 약 10 pM, 약 2 pM 내지 약 5 pM, 약 2 pM 내지 약 4 pM, 약 2 pM 내지 약 3 pM, 약 5 pM 내지 약 30 nM, 약 5 pM 내지 약 25 nM, 약 5 pM 내지 약 20 nM, 약 5 pM 내지 약 15 nM, 약 5 pM 내지 약 10 nM, 약 5 pM 내지 약 5 nM, 약 5 pM 내지 약 2 nM, 약 5 pM 내지 약 1 nM, 약 5 pM 내지 약 950 pM, 약 5 pM 내지 약 900 pM, 약 5 pM 내지 약 850 pM, 약 5 pM 내지 약 800 pM, 약 5 pM 내지 약 750 pM, 약 5 pM 내지 약 700 pM, 약 5 pM 내지 약 650 pM, 약 5 pM 내지 약 600 pM, 약 5 pM 내지 약 550 pM, 약 5 pM 내지 약 500 pM, 약 5 pM 내지 약 450 pM, 약 5 pM 내지 약 400 pM, 약 5 pM 내지 약 350 pM, 약 5 pM 내지 약 300 pM, 약 5 pM 내지 약 250 pM, 약 5 pM 내지 약 200 pM, 약 5 pM 내지 약 150 pM, 약 5 pM 내지 약 100 pM, 약 5 pM 내지 약 90 pM, 약 5 pM 내지 약 80 pM, 약 5 pM 내지 약 70 pM, 약 5 pM 내지 약 60 pM, 약 5 pM 내지 약 50 pM, 약 5 pM 내지 약 40 pM, 약 5 pM 내지 약 30 pM, 약 5 pM 내지 약 20 pM, 약 5 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 30 nM, 약 10 pM 내지 약 25 nM, 약 10 pM 내지 약 20 nM, 약 10 pM 내지 약 15 nM, 약 10 pM 내지 약 10 nM, 약 10 pM 내지 약 5 nM, 약 10 pM 내지 약 2 nM, 약 10 pM 내지 약 1 nM, 약 10 pM 내지 약 950 pM, 약 10 pM 내지 약 900 pM, 약 10 pM 내지 약 850 pM, 약 10 pM 내지 약 800 pM, 약 10 pM 내지 약 750 pM, 약 10 pM 내지 약 700 pM, 약 10 pM 내지 약 650 pM, 약 10 pM 내지 약 600 pM, 약 10 pM 내지 약 550 pM, 약 10 pM 내지 약 500 pM, 약 10 pM 내지 약 450 pM, 약 10 pM 내지 약 400 pM, 약 10 pM 내지 약 350 pM, 약 10 pM 내지 약 300 pM, 약 10 pM 내지 약 250 pM, 약 10 pM 내지 약 200 pM, 약 10 pM 내지 약 150 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 10 pM 내지 약 90 pM, 약 10 pM 내지 약 80 pM, 약 10 pM 내지 약 70 pM, 약 10 pM 내지 약 60 pM, 약 10 pM 내지 약 50 pM, 약 10 pM 내지 약 40 pM, 약 10 pM 내지 약 30 pM, 약 10 pM 내지 약 20 pM, 약 15 pM 내지 약 30 nM, 약 15 pM 내지 약 25 nM, 약 15 pM 내지 약 20 nM, 약 15 pM 내지 약 15 nM, 약 15 pM 내지 약 10 nM, 약 15 pM 내지 약 5 nM, 약 15 pM 내지 약 2 nM, 약 15 pM 내지 약 1 nM, 약 15 pM 내지 약 950 pM, 약 15 pM 내지 약 900 pM, 약 15 pM 내지 약 850 pM, 약 15 pM 내지 약 800 pM, 약 15 pM 내지 약 750 pM, 약 15 pM 내지 약 700 pM, 약 15 pM 내지 약 650 pM, 약 15 pM 내지 약 600 pM, 약 15 pM 내지 약 550 pM, 약 15 pM 내지 약 500 pM, 약 15 pM 내지 약 450 pM, 약 15 pM 내지 약 400 pM, 약 15 pM 내지 약 350 pM, 약 15 pM 내지 약 300 pM, 약 15 pM 내지 약 250 pM, 약 15 pM 내지 약 200 pM, 약 15 pM 내지 약 150 pM, 약 15 pM 내지 약 100 pM, 약 15 pM 내지 약 90 pM, 약 15 pM 내지 약 80 pM, 약 15 pM 내지 약 70 pM, 약 15 pM 내지 약 60 pM, 약 15 pM 내지 약 50 pM, 약 15 pM 내지 약 40 pM, 약 15 pM 내지 약 30 pM, 약 15 pM 내지 약 20 pM, 약 20 pM 내지 약 30 nM, 약 20 pM 내지 약 25 nM, 약 20 pM 내지 약 20 nM, 약 20 pM 내지 약 15 nM, 약 20 pM 내지 약 10 nM, 약 20 pM 내지 약 5 nM, 약 20 pM 내지 약 2 nM, 약 20 pM 내지 약 1 nM, 약 20 pM 내지 약 950 pM, 약 20 pM 내지 약 900 pM, 약 20 pM 내지 약 850 pM, 약 20 pM 내지 약 800 pM, 약 20 pM 내지 약 750 pM, 약 20 pM 내지 약 700 pM, 약 20 pM 내지 약 650 pM, 약 20 pM 내지 약 600 pM, 약 20 pM 내지 약 550 pM, 약 20 pM 내지 약 500 pM, 약 20 pM 내지 약 450 pM, 약 20 pM 내지 약 400 pM, 약 20 pM 내지 약 350 pM, 약 20 pM 내지 약 300 pM, 약 20 pM 내지 약 250 pM, 약 20 pM 내지 약 20 pM, 약 200 pM 내지 약 150 pM, 약 20 pM 내지 약 100 pM, 약 20 pM 내지 약 90 pM, 약 20 pM 내지 약 80 pM, 약 20 pM 내지 약 70 pM, 약 20 pM 내지 약 60 pM, 약 20 pM 내지 약 50 pM, 약 20 pM 내지 약 40 pM, 약 20 pM 내지 약 30 pM, 약 30 pM 내지 약 30 nM, 약 30 pM 내지 약 25 nM, 약 30 pM 내지 약 30 nM, 약 30 pM 내지 약 15 nM, 약 30 pM 내지 약 10 nM, 약 30 pM 내지 약 5 nM, 약 30 pM 내지 약 2 nM, 약 30 pM 내지 약 1 nM, 약 30 pM 내지 약 950 pM, 약 30 pM 내지 약 900 pM, 약 30 pM 내지 약 850 pM, 약 30 pM 내지 약 800 pM, 약 30 pM 내지 약 750 pM, 약 30 pM 내지 약 700 pM, 약 30 pM 내지 약 650 pM, 약 30 pM 내지 약 600 pM, 약 30 pM 내지 약 550 pM, 약 30 pM 내지 약 500 pM, 약 30 pM 내지 약 450 pM, 약 30 pM 내지 약 400 pM, 약 30 pM 내지 약 350 pM, 약 30 pM 내지 약 300 pM, 약 30 pM 내지 약 250 pM, 약 30 pM 내지 약 200 pM, 약 30 pM 내지 약 150 pM, 약 30 pM 내지 약 100 pM, 약 30 pM 내지 약 90 pM, 약 30 pM 내지 약 80 pM, 약 30 pM 내지 약 70 pM, 약 30 pM 내지 약 60 pM, 약 30 pM 내지 약 50 pM, 약 30 pM 내지 약 40 pM, 약 40 pM 내지 약 30 nM, 약 40 pM 내지 약 25 nM, 약 40 pM 내지 약 30 nM, 약 40 pM 내지 약 15 nM, 약 40 pM 내지 약 10 nM, 약 40 pM 내지 약 5 nM, 약 40 pM 내지 약 2 nM, 약 40 pM 내지 약 1 nM, 약 40 pM 내지 약 950 pM, 약 40 pM 내지 약 900 pM, 약 40 pM 내지 약 850 pM, 약 40 pM 내지 약 800 pM, 약 40 pM 내지 약 750 pM, 약 40 pM 내지 약 700 pM, 약 40 pM 내지 약 650 pM, 약 40 pM 내지 약 600 pM, 약 40 pM 내지 약 550 pM, 약 40 pM 내지 약 500 pM, 약 40 pM 내지 약 450 pM, 약 40 pM 내지 약 400 pM, 약 40 pM 내지 약 350 pM, 약 40 pM 내지 약 300 pM, 약 40 pM 내지 약 250 pM, 약 40 pM 내지 약 200 pM, 약 40 pM 내지 약 150 pM, 약 40 pM 내지 약 100 pM, 약 40 pM 내지 약 90 pM, 약 40 pM 내지 약 80 pM, 약 40 pM 내지 약 70 pM, 약 40 pM 내지 약 60 pM, 약 40 pM 내지 약 50 pM, 약 50 pM 내지 약 30 nM, 약 50 pM 내지 약 25 nM, 약 50 pM 내지 약 30 nM, 약 50 pM 내지 약 15 nM, 약 50 pM 내지 약 10 nM, 약 50 pM 내지 약 5 nM, 약 50 pM 내지 약 2 nM, 약 50 pM 내지 약 1 nM, 약 50 pM 내지 약 950 pM, 약 50 pM 내지 약 900 pM, 약 50 pM 내지 약 850 pM, 약 50 pM 내지 약 800 pM, 약 50 pM 내지 약 750 pM, 약 50 pM 내지 약 700 pM, 약 50 pM 내지 약 650 pM, 약 50 pM 내지 약 600 pM, 약 50 pM 내지 약 550 pM, 약 50 pM 내지 약 500 pM, 약 50 pM 내지 약 450 pM, 약 50 pM 내지 약 400 pM, 약 50 pM 내지 약 350 pM, 약 50 pM 내지 약 300 pM, 약 50 pM 내지 약 250 pM, 약 50 pM 내지 약 200 pM, 약 50 pM 내지 약 150 pM, 약 50 pM 내지 약 100 pM, 약 50 pM 내지 약 90 pM, 약 50 pM 내지 약 80 pM, 약 50 pM 내지 약 70 pM, 약 50 pM 내지 약 60 pM, 약 60 pM 내지 약 30 nM, 약 60 pM 내지 약 25 nM, 약 60 pM 내지 약 30 nM, 약 60 pM 내지 약 15 nM, 약 60 pM 내지 약 10 nM, 약 60 pM 내지 약 5 nM, 약 60 pM 내지 약 2 nM, 약 60 pM 내지 약 1 nM, 약 60 pM 내지 약 950 pM, 약 60 pM 내지 약 900 pM, 약 60 pM 내지 약 850 pM, 약 60 pM 내지 약 800 pM, 약 60 pM 내지 약 750 pM, 약 60 pM 내지 약 700 pM, 약 60 pM 내지 약 650 pM, 약 60 pM 내지 약 600 pM, 약 60 pM 내지 약 550 pM, 약 60 pM 내지 약 500 pM, 약 60 pM 내지 약 450 pM, 약 60 pM 내지 약 400 pM, 약 60 pM 내지 약 350 pM, 약 60 pM 내지 약 300 pM, 약 60 pM 내지 약 250 pM, 약 60 pM 내지 약 200 pM, 약 60 pM 내지 약 150 pM, 약 60 pM 내지 약 100 pM, 약 60 pM 내지 약 90 pM, 약 60 pM 내지 약 80 pM, 약 60 pM 내지 약 70 pM, 약 70 pM 내지 약 30 nM, 약 70 pM 내지 약 25 nM, 약 70 pM 내지 약 30 nM, 약 70 pM 내지 약 15 nM, 약 70 pM 내지 약 10 nM, 약 70 pM 내지 약 5 nM, 약 70 pM 내지 약 2 nM, 약 70 pM 내지 약 1 nM, 약 70 pM 내지 약 950 pM, 약 70 pM 내지 약 900 pM, 약 70 pM 내지 약 850 pM, 약 70 pM 내지 약 800 pM, 약 70 pM 내지 약 750 pM, 약 70 pM 내지 약 700 pM, 약 70 pM 내지 약 650 pM, 약 70 pM 내지 약 600 pM, 약 70 pM 내지 약 550 pM, 약 70 pM 내지 약 500 pM, 약 70 pM 내지 약 450 pM, 약 70 pM 내지 약 400 pM, 약 70 pM 내지 약 350 pM, 약 70 pM 내지 약 300 pM, 약 70 pM 내지 약 250 pM, 약 70 pM 내지 약 200 pM, 약 70 pM 내지 약 150 pM, 약 70 pM 내지 약 100 pM, 약 70 pM 내지 약 90 pM, 약 70 pM 내지 약 80 pM, 약 80 pM 내지 약 30 nM, 약 80 pM 내지 약 25 nM, 약 80 pM 내지 약 30 nM, 약 80 pM 내지 약 15 nM, 약 80 pM 내지 약 10 nM, 약 80 pM 내지 약 5 nM, 약 80 pM 내지 약 2 nM, 약 80 pM 내지 약 1 nM, 약 80 pM 내지 약 950 pM, 약 80 pM 내지 약 900 pM, 약 80 pM 내지 약 850 pM, 약 80 pM 내지 약 800 pM, 약 80 pM 내지 약 750 pM, 약 80 pM 내지 약 700 pM, 약 80 pM 내지 약 650 pM, 약 80 pM 내지 약 600 pM, 약 80 pM 내지 약 550 pM, 약 80 pM 내지 약 500 pM, 약 80 pM 내지 약 450 pM, 약 80 pM 내지 약 400 pM, 약 80 pM 내지 약 350 pM, 약 80 pM 내지 약 300 pM, 약 80 pM 내지 약 250 pM, 약 80 pM 내지 약 200 pM, 약 80 pM 내지 약 150 pM, 약 80 pM 내지 약 100 pM, 약 80 pM 내지 약 90 pM, 약 90 pM 내지 약 30 nM, 약 90 pM 내지 약 25 nM, 약 90 pM 내지 약 30 nM, 약 90 pM 내지 약 15 nM, 약 90 pM 내지 약 10 nM, 약 90 pM 내지 약 5 nM, 약 90 pM 내지 약 2 nM, 약 90 pM 내지 약 1 nM, 약 90 pM 내지 약 950 pM, 약 90 pM 내지 약 900 pM, 약 90 pM 내지 약 850 pM, 약 90 pM 내지 약 800 pM, 약 90 pM 내지 약 750 pM, 약 90 pM 내지 약 700 pM, 약 90 pM 내지 약 650 pM, 약 90 pM 내지 약 600 pM, 약 90 pM 내지 약 550 pM, 약 90 pM 내지 약 500 pM, 약 90 pM 내지 약 450 pM, 약 90 pM 내지 약 400 pM, 약 90 pM 내지 약 350 pM, 약 90 pM 내지 약 300 pM, 약 90 pM 내지 약 250 pM, 약 90 pM 내지 약 200 pM, 약 90 pM 내지 약 150 pM, 약 90 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 30 nM, 약 100 pM 내지 약 25 nM, 약 100 pM 내지 약 30 nM, 약 100 pM 내지 약 15 nM, 약 100 pM 내지 약 10 nM, 약 100 pM 내지 약 5 nM, 약 100 pM 내지 약 2 nM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 100 pM 내지 약 950 pM, 약 100 pM 내지 약 900 pM, 약 100 pM 내지 약 850 pM, 약 100 pM 내지 약 800 pM, 약 100 pM 내지 약 750 pM, 약 100 pM 내지 약 700 pM, 약 100 pM 내지 약 650 pM, 약 100 pM 내지 약 600 pM, 약 100 pM 내지 약 550 pM, 약 100 pM 내지 약 500 pM, 약 100 pM 내지 약 450 pM, 약 100 pM 내지 약 400 pM, 약 100 pM 내지 약 350 pM, 약 100 pM 내지 약 300 pM, 약 100 pM 내지 약 250 pM, 약 100 pM 내지 약 200 pM, 약 100 pM 내지 약 150 pM, 약 150 pM 내지 약 30 nM, 약 150 pM 내지 약 25 nM, 약 150 pM 내지 약 30 nM, 약 150 pM 내지 약 15 nM, 약 150 pM 내지 약 10 nM, 약 150 pM 내지 약 5 nM, 약 150 pM 내지 약 2 nM, 약 150 pM 내지 약 1 nM, 약 150 pM 내지 약 950 pM, 약 150 pM 내지 약 900 pM, 약 150 pM 내지 약 850 pM, 약 150 pM 내지 약 800 pM, 약 150 pM 내지 약 750 pM, 약 150 pM 내지 약 700 pM, 약 150 pM 내지 약 650 pM, 약 150 pM 내지 약 600 pM, 약 150 pM 내지 약 550 pM, 약 150 pM 내지 약 500 pM, 약 150 pM 내지 약 450 pM, 약 150 pM 내지 약 400 pM, 약 150 pM 내지 약 350 pM, 약 150 pM 내지 약 300 pM, 약 150 pM 내지 약 250 pM, 약 150 pM 내지 약 200 pM, 약 200 pM 내지 약 30 nM, 약 200 pM 내지 약 25 nM, 약 200 pM 내지 약 30 nM, 약 200 pM 내지 약 15 nM, 약 200 pM 내지 약 10 nM, 약 200 pM 내지 약 5 nM, 약 200 pM 내지 약 2 nM, 약 200 pM 내지 약 1 nM, 약 200 pM 내지 약 950 pM, 약 200 pM 내지 약 900 pM, 약 200 pM 내지 약 850 pM, 약 200 pM 내지 약 800 pM, 약 200 pM 내지 약 750 pM, 약 200 pM 내지 약 700 pM, 약 200 pM 내지 약 650 pM, 약 200 pM 내지 약 600 pM, 약 200 pM 내지 약 550 pM, 약 200 pM 내지 약 500 pM, 약 200 pM 내지 약 450 pM, 약 200 pM 내지 약 400 pM, 약 200 pM 내지 약 350 pM, 약 200 pM 내지 약 300 pM, 약 200 pM 내지 약 250 pM, 약 300 pM 내지 약 30 nM, 약 300 pM 내지 약 25 nM, 약 300 pM 내지 약 30 nM, 약 300 pM 내지 약 15 nM, 약 300 pM 내지 약 10 nM, 약 300 pM 내지 약 5 nM, 약 300 pM 내지 약 2 nM, 약 300 pM 내지 약 1 nM, 약 300 pM 내지 약 950 pM, 약 300 pM 내지 약 900 pM, 약 300 pM 내지 약 850 pM, 약 300 pM 내지 약 800 pM, 약 300 pM 내지 약 750 pM, 약 300 pM 내지 약 700 pM, 약 300 pM 내지 약 650 pM, 약 300 pM 내지 약 600 pM, 약 300 pM 내지 약 550 pM, 약 300 pM 내지 약 500 pM, 약 300 pM 내지 약 450 pM, 약 300 pM 내지 약 400 pM, 약 300 pM 내지 약 350 pM, 약 400 pM 내지 약 30 nM, 약 400 pM 내지 약 25 nM, 약 400 pM 내지 약 30 nM, 약 400 pM 내지 약 15 nM, 약 400 pM 내지 약 10 nM, 약 400 pM 내지 약 5 nM, 약 400 pM 내지 약 2 nM, 약 400 pM 내지 약 1 nM, 약 400 pM 내지 약 950 pM, 약 400 pM 내지 약 900 pM, 약 400 pM 내지 약 850 pM, 약 400 pM 내지 약 800 pM, 약 400 pM 내지 약 750 pM, 약 400 pM 내지 약 700 pM, 약 400 pM 내지 약 650 pM, 약 400 pM 내지 약 600 pM, 약 400 pM 내지 약 550 pM, 약 400 pM 내지 약 500 pM, 약 500 pM 내지 약 30 nM, 약 500 pM 내지 약 25 nM, 약 500 pM 내지 약 30 nM, 약 500 pM 내지 약 15 nM, 약 500 pM 내지 약 10 nM, 약 500 pM 내지 약 5 nM, 약 500 pM 내지 약 2 nM, 약 500 pM 내지 약 1 nM, 약 500 pM 내지 약 950 pM, 약 500 pM 내지 약 900 pM, 약 500 pM 내지 약 850 pM, 약 500 pM 내지 약 800 pM, 약 500 pM 내지 약 750 pM, 약 500 pM 내지 약 700 pM, 약 500 pM 내지 약 650 pM, 약 500 pM 내지 약 600 pM, 약 500 pM 내지 약 550 pM, 약 600 pM 내지 약 30 nM, 약 600 pM 내지 약 25 nM, 약 600 pM 내지 약 30 nM, 약 600 pM 내지 약 15 nM, 약 600 pM 내지 약 10 nM, 약 600 pM 내지 약 5 nM, 약 600 pM 내지 약 2 nM, 약 600 pM 내지 약 1 nM, 약 600 pM 내지 약 950 pM, 약 600 pM 내지 약 900 pM, 약 600 pM 내지 약 850 pM, 약 600 pM 내지 약 800 pM, 약 600 pM 내지 약 750 pM, 약 600 pM 내지 약 700 pM, 약 600 pM 내지 약 650 pM, 약 700 pM 내지 약 30 nM, 약 700 pM 내지 약 25 nM, 약 700 pM 내지 약 30 nM, 약 700 pM 내지 약 15 nM, 약 700 pM 내지 약 10 nM, 약 700 pM 내지 약 5 nM, 약 700 pM 내지 약 2 nM, 약 700 pM 내지 약 1 nM, 약 700 pM 내지 약 950 pM, 약 700 pM 내지 약 900 pM, 약 700 pM 내지 약 850 pM, 약 700 pM 내지 약 800 pM, 약 700 pM 내지 약 750 pM, 약 800 pM 내지 약 30 nM, 약 800 pM 내지 약 25 nM, 약 800 pM 내지 약 30 nM, 약 800 pM 내지 약 15 nM, 약 800 pM 내지 약 10 nM, 약 800 pM 내지 약 5 nM, 약 800 pM 내지 약 2 nM, 약 800 pM 내지 약 1 nM, 약 800 pM 내지 약 950 pM, 약 800 pM 내지 약 900 pM, 약 800 pM 내지 약 850 pM, 약 900 pM 내지 약 30 nM, 약 900 pM 내지 약 25 nM, 약 900 pM 내지 약 30 nM, 약 900 pM 내지 약 15 nM, 약 900 pM 내지 약 10 nM, 약 900 pM 내지 약 5 nM, 약 900 pM 내지 약 2 nM, 약 900 pM 내지 약 1 nM, 약 900 pM 내지 약 950 pM, 약 1 nM 내지 약 30 nM, 약 1 nM 내지 약 25 nM, 약 1 nM 내지 약 20 nM, 약 1 nM 내지 약 15 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 약 1 nM 내지 약 5 nM, 약 2 nM 내지 약 30 nM, 약 2 nM 내지 약 25 nM, 약 2 nM 내지 약 20 nM, 약 2 nM 내지 약 15 nM, 약 2 nM 내지 약 10 nM, 약 2 nM 내지 약 5 nM, 약 4 nM 내지 약 30 nM, 약 4 nM 내지 약 25 nM, 약 4 nM 내지 약 20 nM, 약 4 nM 내지 약 15 nM, 약 4 nM 내지 약 10 nM, 약 4 nM 내지 약 5 nM, 약 5 nM 내지 약 30 nM, 약 5 nM 내지 약 25 nM, 약 5 nM 내지 약 20 nM, 약 5 nM 내지 약 15 nM, 약 5 nM 내지 약 10 nM, 약 10 nM 내지 약 30 nM, 약 10 nM 내지 약 25 nM, 약 10 nM 내지 약 20 nM, 약 10 nM 내지 약 15 nM, 약 15 nM 내지 약 30 nM, 약 15 nM 내지 약 25 nM, 약 15 nM 내지 약 20 nM, 약 20 nM 내지 약 30 nM, 및 약 20 nM 내지 약 25 nM)의 KD로 이의 표적에 결합할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 표적-결합 도메인은 약 1 nM 내지 약 10 nM(예를 들어, 약 1 nM 내지 약 9 nM, 약 1 nM 내지 약 8 nM, 약 1 nM 내지 약 7 nM, 약 1 nM 내지 약 6 nM, 약 1 nM 내지 약 5 nM, 약 1 nM 내지 약 4 nM, 약 1 nM 내지 약 3 nM, 약 1 nM 내지 약 2 nM, 약 2 nM 내지 약 10 nM, 약 2 nM 내지 약 9 nM, 약 2 nM 내지 약 8 nM, 약 2 nM 내지 약 7 nM, 약 2 nM 내지 약 6 nM, 약 2 nM 내지 약 5 nM, 약 2 nM 내지 약 4 nM, 약 2 nM 내지 약 3 nM, 약 3 nM 내지 약 10 nM, 약 3 nM 내지 약 9 nM, 약 3 nM 내지 약 8 nM, 약 3 nM 내지 약 7 nM, 약 3 nM 내지 약 6 nM, 약 3 nM 내지 약 5 nM, 약 3 nM 내지 약 4 nM, 약 4 nM 내지 약 10 nM, 약 4 nM 내지 약 9 nM, 약 4 nM 내지 약 8 nM, 약 4 nM 내지 약 7 nM, 약 4 nM 내지 약 6 nM, 약 4 nM 내지 약 5 nM, 약 5 nM 내지 약 10 nM, 약 5 nM 내지 약 9 nM, 약 5 nM 내지 약 8 nM, 약 5 nM 내지 약 7 nM, 약 5 nM 내지 약 6 nM, 약 6 nM 내지 약 10 nM, 약 6 nM 내지 약 9 nM, 약 6 nM 내지 약 8 nM, 약 6 nM 내지 약 7 nM, 약 7 nM 내지 약 10 nM, 약 7 nM 내지 약 9 nM, 약 7 nM 내지 약 8 nM, 약 8 nM 내지 약 10 nM, 약 8 nM 내지 약 9 nM, 및 약 9 nM 내지 약 10 nM)의 KD로 이의 표적에 결합할 수 있다.
당업계에 알려진 여러 가지 상이한 방법들(예를 들어, 전기영동 이동성 시프트 검정법(electrophoretic mobility shift assay) 필터 결합 검정법, 표면 플라즈몬 공명, 및 생물분자 결합 동역학 검정법(biomolecular binding kinetics assay) 등)은 본원에 기재된 임의의 항원-결합 단백질 작제물의 KD 값을 결정하는 데 사용될 수 있다.
항원-결합 도메인
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 항원-결합 도메인이다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인이다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체(예를 들어, VHH 또는 VNAR 도메인)를 포함하거나 이것이다
일부 예에서, 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 항원-결합 도메인)은 CD16a(예를 들어, 미국 특허 제9,035,026호에 기재된 것들 참조), CD28(예를 들어, 미국 특허 제7,723,482호에 기재된 것들 참조), CD3(예를 들어, 미국 특허 제9,226,962호에 기재된 것들 참조), CD33(예를 들어, 미국 특허 제8,759,494호에 기재된 것들 참조), CD20(예를 들어, WO 2014/026054호에 기재된 것들 참조), CD19(예를 들어, 미국 특허 제9,701,758호에 기재된 것들 참조), CD22(예를 들어, WO 2003/104425호에 기재된 것들 참조), CD123(예를 들어, WO 2014/130635호에 기재된 것들 참조), IL-1R(예를 들어, 미국 특허 제8,741,604호에 기재된 것들 참조), IL-1(예를 들어, WO 2014/095808호에 기재된 것들 참조), VEGF(예를 들어, 미국 특허 제9,090,684호에 기재된 것들 참조), IL-6R(예를 들어, 미국 특허 제7,482,436호에 기재된 것들 참조), IL-4(예를 들어, 미국 특허출원공개 2012/0171197호에 기재된 것들 참조), IL-10(예를 들어, 미국 특허출원공개 2016/0340413호에 기재된 것들 참조), PDL-1(예를 들어, 문헌[Drees 등, Protein Express. Purif. 94:60-66, 2014]에 기재된 것들 참조), TIGIT(예를 들어, 미국 특허출원공개 2017/0198042호에 기재된 것들 참조), PD-1(예를 들어, 미국 특허 제7,488,802호에 기재된 것들 참조), TIM3(예를 들어, 미국 특허 제8,552,156호에 기재된 것들 참조), CTLA4(예를 들어, WO 2012/120125호에 기재된 것들 참조), MICA(예를 들어, WO 2016/154585호에 기재된 것들 참조), MICB(예를 들어, 미국 특허 제8,753,640호에 기재된 것들 참조), IL-6(예를 들어, 문헌[Gejima 등, Human Antibodies 11(4):121-129, 2002]에 기재된 것들 참조), IL-8(예를 들어, 미국 특허 제6,117,980호에 기재된 것들 참조), TNFα(예를 들어, 문헌[Geng 등, Immunol. Res. 62(3):377-385, 2015]에 기재된 것들 참조), CD26a(예를 들어, WO 2017/189526호에 기재된 것들 참조), CD36(예를 들어, 미국 특허출원공개 2015/0259429호에 기재된 것들 참조), ULBP2(예를 들어, 미국 특허 제9,273,136호에 기재된 것들 참조), CD30(예를 들어, 문헌[Homach 등, Scand. J. Immunol. 48(5):497-501, 1998]에 기재된 것들 참조), CD200(예를 들어, 미국 특허 제9,085,623호에 기재된 것들 참조), IGF-1R(예를 들어, 미국 특허출원공개 2017/0051063호에 기재된 것들 참조), MUC4AC(예를 들어, WO 2012/170470호에 기재된 것들 참조), MUC5AC(예를 들어, 미국 특허 제9,238,084호에 기재된 것들 참조), Trop-2(예를 들어, WO 2013/068946호에 기재된 것들 참조), CMET(예를 들어, 문헌[Edwardraja 등, Biotechnol. Bioeng. 106(3):367-375, 2010]에 기재된 것들 참조), EGFR(예를 들어, 문헌[Akbari 등, Protein Expr. Purif. 127:8-15, 2016]에 기재된 것들 참조), HER1(예를 들어, 미국 특허출원공개 2013/0274446호에 기재된 것들 참조), HER2(예를 들어, 문헌[Cao 등, Biotechnol. Lett. 37(7):1347-1354, 2015]에 기재된 것들 참조), HER3(예를 들어, 미국 특허 제9,505,843호에 기재된 것들 참조), PSMA(예를 들어, 문헌[Parker 등, Protein Expr. Purif. 89(2):136-145, 2013]에 기재된 것들 참조), CEA(예를 들어, WO 1995/015341호에 기재된 것들 참조), B7H3(예를 들어, 미국 특허 제9,371,395호에 기재된 것들 참조), EPCAM(예를 들어, WO 2014/159531호에 기재된 것들 참조), BCMA(예를 들어, 문헌[Smith 등, Mol. Ther. 26(6):1447-1456, 2018]에 기재된 것들 참조), P-카드헤린(예를 들어, 미국 특허 제7,452,537호에 기재된 것들 참조), CEACAM5(예를 들어, 미국 특허 제9,617,345호에 기재된 것들 참조), UL16-결합 단백질(예를 들어, WO 2017/083612호에 기재된 것들 참조), HLA-DR(예를 들어, 문헌[Pistillo 등, Exp. Clin. Immunogenet. 14(2):123-130, 1997]에 기재된 것들 참조), DLL4(예를 들어, WO 2014/007513호에 기재된 것들 참조), TYRO3(예를 들어, WO 2016/166348호에 기재된 것들 참조), AXL(예를 들어, WO 2012/175692호에 기재된 것들 참조), MER(예를 들어, WO 2016/106221호에 기재된 것들 참조), CD122(예를 들어, 미국 특허출원공개 2016/0367664호에 기재된 것들 참조), CD155(예를 들어, WO 2017/149538호에 기재된 것들 참조), 또는 PDGFDD(예를 들어, 미국 특허 제9,441,034호에 기재된 것들 참조) 중 임의의 하나에 특이적으로 결합할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 존재하는 항원-결합 도메인은 각각 독립적으로, VHH 도메인, VNAR 도메인, 및 scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 제1 표적 결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및/또는 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나 이상은 항-CD3 scFv일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO: 16)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및/또는 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR(SEQ ID NO: 17)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, scFv(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 scFv)는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 중쇄 가변 도메인과 경쇄 가변 도메인 사이에 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 CAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO: 18)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGT(SEQ ID NO: 19)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO: 20)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 SEQ ID NO: 20에 존재하는 6개의 CDR을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD3 scFv는 CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGTGGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGCCAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC(SEQ ID NO: 21)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 핵산 서열에 의해 인코딩되는 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제1 표적 결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및/또는 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나 이상은 항-CD28 scFv일 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD28 scFv는 DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 22)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및/또는 VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSS(SEQ ID NO: 23)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD28 scFv는 GACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG(SEQ ID NO: 24)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 중쇄 가변 도메인, 및/또는 GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCC(SEQ ID NO: 25)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩되는 경쇄 가변 도메인을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD28 scFv는 VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 26)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-CD28 scFv는 SEQ ID NO: 26에 존재하는 6개의 CDR을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항-CD28 scFv는 GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCCGGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGCGACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG(SEQ ID NO: 27)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 핵산 서열에 의해 인코딩되는 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 항원-결합 도메인은 BiTe, (scFv)2, 나노바디, 나노바디-HSA, DART, TandAb, scDiabody, scDiabody-CH3, scFv-CH-CL-scFv, HSAbody, scDiabody-HAS, 또는 탠덤-scFv이다. 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 사용될 수 있는 항원-결합 도메인의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
VHH 도메인은 낙타과(camelid)에서 발견될 수 있는 단일 단량체성 가변 항체 도메인이다. VNAR 도메인은 연골 어류(cartilaginous fish)에서 발견될 수 있는 단일 단량체성 가변 항체 도메인이다. VHH 도메인 및 VNAR 도메인의 비제한적인 양태는 예를 들어, 문헌[Cromie 등, Curr. Top. Med. Chem. 15:2543-2557, 2016]; 문헌[De Genst 등, Dev. Comp. Immunol. 30:187-198, 2006]; 문헌[De Meyer 등, Trends Biotechnol. 32:263-270, 2014]; 문헌[Kijanka 등, Nanomedicine 10:161-174, 2015]; 문헌[Kovaleva 등, Expert. Opin. Biol. Ther. 14:1527-1539, 2014]; 문헌[Krah 등, Immunopharmacol. Immunotoxicol. 38:21-28, 2016]; 문헌[Mujic-Delic 등, Trends Pharmacol. Sci. 35:247-255, 2014]; 문헌[Muyldermans, J. Biotechnol. 74:277-302, 2001]; 문헌[Muyldermans 등, Trends Biochem. Sci. 26:230-235, 2001]; 문헌[Muyldermans, Ann. Rev. Biochem. 82:775-797, 2013]; 문헌[Rahbarizadeh 등, Immunol. Invest. 40:299-338, 2011]; 문헌[Van Audenhove 등, EBioMedicine 8:40-48, 2016]; 문헌[Van Bockstaele 등, Curr. Opin. Investig. Drugs 10:1212-1224, 2009]; 문헌[Vincke 등, Methods Mol. Biol. 911:15-26, 2012]; 및 문헌[Wesolowski 등, Med. Microbiol. Immunol. 198:157-174, 2009]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 각각의 항원-결합 도메인은 둘 다 VHH 도메인이거나, 적어도 하나의 항원-결합 도메인은 VHH 도메인이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 각각의 항원-결합 도메인은 둘 다 VNAR 도메인이거나, 적어도 하나의 항원-결합 도메인은 VNAR 도메인이다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 각각의 항원-결합 도메인은 둘 다 scFv 도메인이거나, 적어도 하나의 항원-결합 도메인은 scFv 도메인이다. DARTs는 예를 들어, 문헌[Garber, Nature Reviews Drug Discovery 13:799-801, 2014]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 임의의 항원-결합 도메인은 단백질, 탄수화물, 지질, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원에 결합할 수 있다.
항원-결합 도메인의 추가 예 및 양태는 당업계에 알려져 있다.
가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨 단백질, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 인터루킨 또는 가용성 사이토카인 단백질은 IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, FLT3L의 군으로부터 선택된다. 가용성 IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, 및 FLT3L의 비제한적인 예는 하기에 제공된다.
인간 가용성 IL-2(SEQ ID NO: 28)
aptssstkkt qlqlehllld lqmilnginn yknpkltrml tfkfympkka telkhlqcle eelkpleevl nlaqsknfhl rprdlisnin vivlelkgse ttfmceyade tativeflnr witfcqsiis tlt
인간 가용성 IL-3(SEQ ID NO: 29)
apmtqttplkt swvncsnmid eiithlkqpp lplldfnnln gedqdilmen nlrrpnleaf nravkslqna saiesilknl lpclplataa ptrhpihikd gdwnefrrkl tfylktlena qaqqttlsla if
인간 가용성 IL-7(SEQ ID NO: 30)
dcdiegkdgkqyesv lmvsidqlld smkeigsncl nnefnffkrh icdankegmf lfraarklrq flkmnstgdf dlhllkvseg ttillnctgq vkgrkpaalg eaqptkslee nkslkeqkkl ndlcflkrll qeiktcwnki lmgtkeh
인간 가용성 IL-8(SEQ ID NO: 31)
egavlprsak elrcqcikty skpfhpkfik elrviesgph canteiivkl sdgrelcldp kenwvqrvve kflkraens
인간 가용성 IL-10(SEQ ID NO: 32)
spgqgtqsensc thfpgnlpnm lrdlrdafsr vktffqmkdq ldnlllkesl ledfkgylgc qalsemiqfy leevmpqaen qdpdikahvn slgenlktlr lrlrrchrfl pcenkskave qvknafnklq ekgiykamse fdifinyiea ymtmkirn
인간 가용성 IL-12β(p40)(SEQ ID NO: 33)
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCS
인간 가용성 IL-12β(p40)를 인코딩하는 핵산(SEQ ID NO: 34)
ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCC
인간 가용성 IL-12α(p35)(SEQ ID NO: 35)
RNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS
인간 가용성 IL-12α(p35)를 인코딩하는 핵산(SEQ ID NO: 36)
CGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC
예시적인 인간 가용성 IL-12(SEQ ID NO: 37)
IWELKKDVYVVELDWYPDAPGEMVVLTCDTPEEDGITWTLDQSSEVLGSGKTLTIQVKEFGDAGQYTCHKGGEVLSHSLLLLHKKEDGIWSTDILKDQKEPKNKTFLRCEAKNYSGRFTCWWLTTISTDLTFSVKSSRGSSDPQGVTCGAATLSAERVRGDNKEYEYSVECQEDSACPAAEESLPIEVMVDAVHKLKYENYTSSFFIRDIIKPDPPKNLQLKPLKNSRQVEVSWEYPDTWSTPHSYFSLTFCVQVQGKSKREKKDRVFTDKTSATVICRKNASISVRAQDRYYSSSWSEWASVPCSGGGGSGGGGSGGGGSRNLPVATPDPGMFPCLHHSQNLLRAVSNMLQKARQTLEFYPCTSEEIDHEDITKDKTSTVEACLPLELTKNESCLNSRETSFITNGSCLASRKTSFMMALCLSSIYEDLKMYQVEFKTMNAKLLMDPKRQIFLDQNMLAVIDELMQALNFNSETVPQKSSLEEPDFYKTKIKLCILLHAFRIRAVTIDRVMSYLNAS
예시적인 인간 가용성 IL-12를 인코딩하는 핵산(SEQ ID NO: 38)
ATTTGGGAACTGAAGAAGGACGTCTACGTGGTCGAACTGGACTGGTATCCCGATGCTCCCGGCGAAATGGTGGTGCTCACTTGTGACACCCCCGAAGAAGACGGCATCACTTGGACCCTCGATCAGAGCAGCGAGGTGCTGGGCTCCGGAAAGACCCTCACAATCCAAGTTAAGGAGTTCGGAGACGCTGGCCAATACACATGCCACAAGGGAGGCGAGGTGCTCAGCCATTCCTTATTATTATTACACAAGAAGGAAGACGGAATCTGGTCCACCGACATTTTAAAAGATCAGAAGGAGCCCAAGAATAAGACCTTTTTAAGGTGTGAGGCCAAAAACTACAGCGGTCGTTTCACTTGTTGGTGGCTGACCACCATTTCCACCGATTTAACCTTCTCCGTGAAAAGCAGCCGGGGAAGCTCCGACCCTCAAGGTGTGACATGTGGAGCCGCTACCCTCAGCGCTGAGAGGGTTCGTGGCGATAACAAGGAATACGAGTACAGCGTGGAGTGCCAAGAAGATAGCGCTTGTCCCGCTGCCGAAGAATCTTTACCCATTGAGGTGATGGTGGACGCCGTGCACAAACTCAAGTACGAGAACTACACCTCCTCCTTCTTTATCCGGGACATCATTAAGCCCGATCCTCCTAAGAATTTACAGCTGAAGCCTCTCAAAAATAGCCGGCAAGTTGAGGTCTCTTGGGAATATCCCGACACTTGGAGCACACCCCACAGCTACTTCTCTTTAACCTTTTGTGTGCAAGTTCAAGGTAAAAGCAAGCGGGAGAAGAAAGACCGGGTGTTTACCGACAAAACCAGCGCCACCGTCATCTGTCGGAAGAACGCCTCCATCAGCGTGAGGGCTCAAGATCGTTATTACTCCAGCAGCTGGTCCGAGTGGGCCAGCGTGCCTTGTTCCGGCGGTGGAGGATCCGGAGGAGGTGGCTCCGGCGGCGGAGGATCTCGTAACCTCCCCGTGGCTACCCCCGATCCCGGAATGTTCCCTTGTTTACACCACAGCCAGAATTTACTGAGGGCCGTGAGCAACATGCTGCAGAAAGCTAGGCAGACTTTAGAATTTTACCCTTGCACCAGCGAGGAGATCGACCATGAAGATATCACCAAGGACAAGACATCCACCGTGGAGGCTTGTTTACCTCTGGAGCTGACAAAGAACGAGTCTTGTCTCAACTCTCGTGAAACCAGCTTCATCACAAATGGCTCTTGTTTAGCTTCCCGGAAGACCTCCTTTATGATGGCTTTATGCCTCAGCTCCATCTACGAGGATTTAAAGATGTACCAAGTGGAGTTCAAGACCATGAACGCCAAGCTGCTCATGGACCCTAAACGGCAGATCTTTTTAGACCAGAACATGCTGGCTGTGATTGATGAGCTGATGCAAGCTTTAAACTTCAACTCCGAGACCGTCCCTCAGAAGTCCTCCCTCGAGGAGCCCGATTTTTACAAGACAAAGATCAAACTGTGCATTTTACTCCACGCCTTTAGGATCCGGGCCGTGACCATTGACCGGGTCATGAGCTATTTAAACGCCAGC
인간 가용성 IL-15(SEQ ID NO: 39)
Nwvnvisdlkki edliqsmhid atlytesdvh psckvtamkc fllelqvisl esgdasihdt venliilann slssngnvte sgckeceele eknikeflqs fvhivqmfin ts
인간 가용성 IL-17(SEQ ID NO: 40)
gitiprn pgcpnsedkn fprtvmvnln ihnrntntnp krssdyynrs tspwnlhrne dperypsviw eakcrhlgci nadgnvdyhm nsvpiqqeil vlrrepphcp nsfrlekilv svgctcvtpi vhhva
인간 가용성 IL-18(SEQ ID NO: 41)
YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED
인간 가용성 IL-18을 인코딩하는 핵산(SEQ ID NO: 42)
TACTTCGGCAAACTGGAATCCAAGCTGAGCGTGATCCGGAATTTAAACGACCAAGTTCTGTTTATCGATCAAGGTAACCGGCCTCTGTTCGAGGACATGACCGACTCCGATTGCCGGGACAATGCCCCCCGGACCATCTTCATTATCTCCATGTACAAGGACAGCCAGCCCCGGGGCATGGCTGTGACAATTAGCGTGAAGTGTGAGAAAATCAGCACTTTATCTTGTGAGAACAAGATCATCTCCTTTAAGGAAATGAACCCCCCCGATAACATCAAGGACACCAAGTCCGATATCATCTTCTTCCAGCGGTCCGTGCCCGGTCACGATAACAAGATGCAGTTCGAATCCTCCTCCTACGAGGGCTACTTTTTAGCTTGTGAAAAGGAGAGGGATTTATTCAAGCTGATCCTCAAGAAGGAGGACGAGCTGGGCGATCGTTCCATCATGTTCACCGTCCAAAACGAGGAT
인간 가용성 IL-21(SEQ ID NO: 43)
QGQDRHMIRMRQLIDIVDQLKNYVNDLVPEFLPAPEDVETNCEWSAFSCFQKAQLKSANTGNNERIINVSIKKLKRKPPSTNAGRRQKHRLTCPSCDSYEKKPPKEFLERFKSLLQKMIHQHLSSRTHGSEDS
인간 가용성 IL-21을 인코딩하는 핵산(SEQ ID NO: 44)
CAGGGCCAGGACAGGCACATGATCCGGATGAGGCAGCTCATCGACATCGTCGACCAGCTGAAGAACTACGTGAACGACCTGGTGCCCGAGTTTCTGCCTGCCCCCGAGGACGTGGAGACCAACTGCGAGTGGTCCGCCTTCTCCTGCTTTCAGAAGGCCCAGCTGAAGTCCGCCAACACCGGCAACAACGAGCGGATCATCAACGTGAGCATCAAGAAGCTGAAGCGGAAGCCTCCCTCCACAAACGCCGGCAGGAGGCAGAAGCACAGGCTGACCTGCCCCAGCTGTGACTCCTACGAGAAGAAGCCCCCCAAGGAGTTCCTGGAGAGGTTCAAGTCCCTGCTGCAGAAGATGATCCATCAGCACCTGTCCTCCAGGACCCACGGCTCCGAGGACTCC
인간 가용성 PDGF-DD(SEQ ID NO: 45)
rdtsatpqsasi kalrnanlrr desnhltdly rrdetiqvkg ngyvqsprfp nsyprnlllt wrlhsqentr iqlvfdnqfg leeaendicr ydfvevedis etstiirgrw cghkevppri ksrtnqikit fksddyfvak pgfkiyysll edfqpaaase tnwesvtssi sgvsynspsv tdptliadal dkkiaefdtv edllkyfnpe swqedlenmy ldtpryrgrs yhdrkskvdl drlnddakry sctprnysvn ireelklanv vffprcllvq rcggncgcgt vnwrsctcns gktvkkyhev lqfepghikr rgraktmalv diqldhherc dcicssrppr
인간 가용성 SCF(SEQ ID NO: 46)
egicrnrvtnnvkdv tklvanlpkd ymitlkyvpg mdvlpshcwi semvvqlsds ltdlldkfsn iseglsnysi idklvnivdd lvecvkenss kdlkksfksp eprlftpeef frifnrsida fkdfvvaset sdcvvsstls pekdsrvsvt kpfmlppvaa sslrndssss nrkaknppgd sslhwaamal palfsliigf afgalywkkr qpsltraven iqineednei smlqekeref qev
인간 가용성 FLT3L(SEQ ID NO: 47)
tqdcsfqhspissd favkirelsd yllqdypvtv asnlqdeelc gglwrlvlaq rwmerlktva gskmqgller vnteihfvtk cafqpppscl rfvqtnisrl lqetseqlva lkpwitrqnf srclelqcqp dsstlpppws prpleatapt apqpplllll llpvglllla aawclhwqrt rrrtprpgeq vppvpspqdl llveh
예시적인 가용성 세포 표면 단백질은 가용성 MICA, MICB, 및 ULP16 결합 단백질(예를 들어, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5, 또는 ULBP6)을 포함한다. 가용성 MICA, MICB, ULBP1, ULBP2, ULBP3, ULBP4, ULBP5, 및 ULBP6에 대한 예시적인 서열은 하기에 나열되어 있다.
인간 가용성 MICA(SEQ ID NO: 48)
ephslry nltvlswdgs vqsgfltevh ldgqpflrcd rqkcrakpqg qwaedvlgnk twdretrdlt gngkdlrmtl ahikdqkegl hslqeirvce ihednstrss qhfyydgelf lsqnletkew tmpqssraqt lamnvrnflk edamktkthy hamhadclqe lrrylksgvv lrrtvppmvn vtrseasegn itvtcrasgf ypwnitlswr qdgvslshdt qqwgdvlpdg ngtyqtwvat ricqgeeqrf tcymehsgnh sthpvpsgkv lvlqshwqtf hvsavaaaai fviiifyvrc ckkktsaaeg pelvslqvld qhpvgtsdhr datqlgfqpl msdlgstgst ega
인간 가용성 MICB(SEQ ID NO: 49)
aephslry nlmvlsqdes vqsgflaegh ldgqpflryd rqkrrakpqg qwaedvlgak twdtetedlt engqdlrrtl thikdqkggl hslqeirvce ihedsstrgs rhfyydgelf lsqnletqes tvpqssraqt lamnvtnfwk edamktkthy ramqadclqk lqrylksgva irrtvppmvn vtcsevsegn itvtcrassf yprnitltwr qdgvslshnt qqwgdvlpdg ngtyqtwvat rirqgeeqrf tcymehsgnh gthpvpsgkv lvlqsqrtdf pyvsaampcf viiiilcvpc ckkktsaaeg pelvslqvld qhpvgtgdhr daaqlgfqpl msatgstgst ega
인간 가용성 ULBP1(SEQ ID NO: 50)
wvdthclcydfiit pksrpepqwc evqglvderp flhydcvnhk akafaslgkk vnvtktweeq tetlrdvvdf lkgqlldiqv enlipieplt lqarmscehe ahghgrgswq flfngqkfll fdsnnrkwta lhpgakkmte kweknrdvtm ffqkislgdc kmwleeflmy weqmldptkp pslapg
인간 가용성 ULBP2(SEQ ID NO: 51)
gradphslcyditvi pkfrpgprwc avqgqvdekt flhydcgnkt vtpvsplgkk lnvttawkaq npvlrevvdi lteqlrdiql enytpkeplt lqarmsceqk aeghssgswq fsfdgqifll fdsekrmwtt vhpgarkmke kwendkvvam sfhyfsmgdc igwledflmg mdstlepsag aplams
인간 가용성 ULBP3(SEQ ID NO: 52)
dahslwynfti ihlprhgqqw cevqsqvdqk nflsydcgsd kvlsmghlee qlyatdawgk qlemlrevgq rlrleladte ledftpsgpl tlqvrmscec eadgyirgsw qfsfdgrkfl lfdsnnrkwt vvhagarrmk ekwekdsglt tffkmvsmrd ckswlrdflm hrkkrlepta pptmapg
인간 가용성 ULBP4(SEQ ID NO: 53)
hslcfnftik slsrpgqpwc eaqvflnknl flqynsdnnm vkplgllgkk vyatstwgel tqtlgevgrd lrmllcdikp qiktsdpstl qvemfcqrea erctgaswqf atngeksllf damnmtwtvi nheaskiket wkkdrgleky frklskgdcd hwlreflghw eampeptvsp vnasdihwss sslpdrwiil gafillvlmg ivlicvwwqn gewqaglwpl rts
인간 가용성 ULBP5(SEQ ID NO: 54)
gladp hslcyditvi pkfrpgprwc avqgqvdekt flhydcgskt vtpvsplgkk lnvttawkaq npvlrevvdi lteqlldiql enyipkeplt lqarmsceqk aeghgsgswq lsfdgqifll fdsenrmwtt vhpgarkmke kwendkdmtm sfhyismgdc tgwledflmg mdstlepsag apptmssg
인간 가용성 ULBP6(SEQ ID NO: 55)
rrddp hslcyditvi pkfrpgprwc avqgqvdekt flhydcgnkt vtpvsplgkk lnvtmawkaq npvlrevvdi lteqlldiql enytpkeplt lqarmsceqk aeghssgswq fsidgqtfll fdsekrmwtt vhpgarkmke kwendkdvam sfhyismgdc igwledflmg mdstlepsag aplamssg
일부 구현예에서, 가용성 IL-12 단백질은 SEQ ID NO: 33과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제1 서열, 및 SEQ ID NO: 35와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제2 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 IL-12는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 제1 서열과 제2 서열 사이에 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 가용성 IL-12 단백질은 SEQ ID NO: 34와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제1 서열을 인코딩하는 제1 핵산, 및 SEQ ID NO: 36과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제2 서열을 인코딩하는 제2 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 가용성 IL-12 단백질을 인코딩하는 핵산은 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 인코딩하는 핵산 서열을 제1 핵산과 제2 핵산 사이에 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 가용성 IL-12 단백질은 SEQ ID NO: 37과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 IL-12 단백질은 SEQ ID NO: 38과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 가용성 IL-18 단백질은 SEQ ID NO: 41과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 IL-18 단백질은 SEQ ID NO: 42과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 가용성 IL-21 단백질은 SEQ ID NO: 43과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 IL-21 단백질은 SEQ ID NO: 44과 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
가용성 인터루킨 단백질 및 가용성 사이토카인 단백질의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
가용성 수용체
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체이다. 일부 구현예에서, 가용성 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)(예를 들어, 문헌[Yung 등, Am. J. Resp. Crit. Care Med. 194(9):1140-1151, 2016]에 기재된 것들 참조), 가용성 TGF-βRIII(예를 들어, 문헌[Heng 등, Placenta 57:320, 2017]에 기재된 것들 참조), 또는 가용성 NKG2D(예를 들어, 문헌[Cosman 등, Immunity 14(2):123-133, 2001]; 문헌[Costa 등, Front. Immunol., Vol. 9, Article 1150, May 29, 2018; doi: 10.3389/fimmu.2018.01150] 참조)이다. 일부 구현예에서, 가용성 세포 표면 수용체는 가용성 NKp30(예를 들어, 문헌[Costa 등, Front. Immunol., Vol. 9, Article 1150, May 29, 2018; doi: 10.3389/fimmu.2018.01150] 참조), 가용성 NKp44(예를 들어, 문헌[Costa 등, Front. Immunol., Vol. 9, Article 1150, May 29, 2018; doi: 10.3389/fimmu.2018.01150]에 기재된 것들 참조), 가용성 NKp46(예를 들어, 문헌[Mandelboim 등, Nature 409:1055-1060, 2001]; 문헌[Costa 등, Front. Immunol., Vol. 9, Article 1150, May 29, 2018; doi: 10.3389/fimmu.2018.01150] 참조), 가용성 DNAM1(예를 들어, 문헌[Costa 등, Front. Immunol., Vol. 9, Article 1150, May 29, 2018; doi: 10.3389/fimmu.2018.01150]에 기재된 것들 참조), scMHCI(예를 들어, 문헌[Washburn 등, PLoS One 6(3):e18439, 2011]에 기재된 것들 참조), scMHCII(예를 들어, 문헌[Bishwajit 등, Cellular Immunol. 170(1):25-33, 1996]에 기재된 것들 참조), scTCR(예를 들어, 문헌[Weber 등, Nature 356(6372):793-796, 1992]에 기재된 것들 참조), 가용성 CD155(예를 들어, 문헌[Tahara-Hanaoka 등, Int. Immunol. 16(4):533-538, 2004]에 기재된 것들 참조), 또는 가용성 CD28(예를 들어, 문헌[Hebbar 등, Clin. Exp. Immunol. 136:388-392, 2004] 참조)이다.
일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체는 IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO: 56)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제1 서열, 및 IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO: 56)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제2 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 제1 서열과 제2 서열 사이에 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체는 ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO: 57)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제1 서열을 인코딩하는 제1 핵산, 및 ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGAT(SEQ ID NO: 57)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 제2 서열을 인코딩하는 제2 핵산 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체를 인코딩하는 핵산은 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 인코딩하는 핵산 서열을 제1 핵산과 제2 핵산 사이에 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체는 IPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPDGGGGSGGGGSGGGGSIPPHVQKSVNNDMIVTDNNGAVKFPQLCKFCDVRFSTCDNQKSCMSNCSITSICEKPQEVCVAVWRKNDENITLETVCHDPKLPYHDFILEDAASPKCIMKEKKKPGETFFMCSCSSDECNDNIIFSEEYNTSNPD(SEQ ID NO: 60)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가용성 TGFβRII 수용체는 ATCCCCCCCCATGTGCAAAAGAGCGTGAACAACGATATGATCGTGACCGACAACAACGGCGCCGTGAAGTTTCCCCAGCTCTGCAAGTTCTGCGATGTCAGGTTCAGCACCTGCGATAATCAGAAGTCCTGCATGTCCAACTGCACGATCACCTCCATCTGCGAGAAGCCCCAAGAAGTGTGCGTGGCCGTGTGGCGGAAAAATGACGAGAACATCACCCTGGAGACCGTGTGTCACGACCCCAAGCTCCCTTATCACGACTTCATTCTGGAGGACGCTGCCTCCCCCAAATGCATCATGAAGGAGAAGAAGAAGCCCGGAGAGACCTTCTTTATGTGTTCCTGTAGCAGCGACGAGTGTAACGACAACATCATCTTCAGCGAAGAGTACAACACCAGCAACCCTGATGGAGGTGGCGGATCCGGAGGTGGAGGTTCTGGTGGAGGTGGGAGTATTCCTCCCCACGTGCAGAAGAGCGTGAATAATGACATGATCGTGACCGATAACAATGGCGCCGTGAAATTTCCCCAGCTGTGCAAATTCTGCGATGTGAGGTTTTCCACCTGCGACAACCAGAAGTCCTGTATGAGCAACTGCACAATCACCTCCATCTGTGAGAAGCCTCAGGAGGTGTGCGTGGCTGTCTGGCGGAAGAATGACGAGAATATCACCCTGGAAACCGTCTGCCACGATCCCAAGCTGCCCTACCACGATTTCATCCTGGAAGACGCCGCCAGCCCTAAGTGCATCATGAAAGAGAAAAAGAAGCCTGGCGAGACCTTTTTCATGTGCTCCTGCAGCAGCGACGAATGCAACGACAATATCATCTTTAGCGAGGAATACAATACCAGCAACCCCGAC(SEQ ID NO: 61)와 적어도 70% 동일한(예를 들어, 적어도 75% 동일한, 적어도 80% 동일한, 적어도 85% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 95% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함하는 핵산에 의해 인코딩된다.
가용성 인터루킨 수용체 및 가용성 사이토카인 수용체의 추가 예는 당업계에 알려져 있다.
추가 항원-결합 도메인
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의) 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)을 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 하나 이상의(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의) 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단에서 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 중 하나는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)에 직접적으로 인접해 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단에서 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 C-말단에 하나 이상의(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의) 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 C-말단에서 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 중 하나는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 C-말단에서 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및 이의 C-말단에 하나 이상의(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의) 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)을 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 중 하나는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 N-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, C-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인) 중 하나는 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인)에 직접적으로 인접해 있다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 C-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)과 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 또는 가용성 조직 인자 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인) 사이에 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 링커 서열)을 추가로 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 2개 이상(예를 들어, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 각각 동일한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 각각 동일한 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 상이한 항원에 특이적으로 결합한다.
임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상의 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및 하나 이상의 표적-결합 도메인은 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 항원-결합 도메인)이다. 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 항원-결합 도메인)이다. 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상(예를 들어, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개)의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려진 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 하기의 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합하며: CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD의 리간드, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 수용체, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합할 수 있다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질이다. 가용성 인터루킨 단백질 및 가용성 사이토카인 단백질의 비제한적인 예는 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, 및 FLT3L을 포함한다. 가용성 세포 표면 단백질의 비제한적인 예는 MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상의 제1 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 제2 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인), 및 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 표적-결합 도메인)은 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체이다. 가용성 인터루킨 수용체 및 가용성 사이토카인 수용체의 비제한적인 예는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII) 및 가용성 TGF-βRIII을 포함한다. 가용성 세포 표면 수용체의 비제한적인 예는 가용성 NKG2D, 가용성 NK30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 가용성 CD122, 가용성 CD3, 및 가용성 CD28을 포함한다.
신호 서열
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 단부에 신호 서열을 포함한다. 당업자가 이해할 바와 같이, 신호 서열은, 많은 내인성적으로 생성된 단백질의 N-말단에 존재하고 상기 단백질을 분비 경로로 안내하는 아미노산 서열이다(예를 들어, 단백질은 소정의 세포내 소기관에 체류하도록, 세포막에 체류하도록, 또는 세포로부터 분비되도록 안내됨). 신호 서열은 이종성이고, 이의 1차 아미노산 서열에서 크게 차이가 난다. 그러나, 신호 서열은 전형적으로 16개 내지 30개 아미노산 길이이고, 친수성의 통상 양으로 하전된 N-말단 영역, 중심의 소수성 도메인, 및 신호 펩티다제에 대한 절단 부위를 함유하는 C-말단 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 아미노산 서열 MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO: 62)를 갖는 신호 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 핵산 서열 ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO: 63), ATGAAGTGGGTCACATTTATCTCTTTACTGTTCCTCTTCTCCAGCGCCTACAGC(SEQ ID NO: 64), 또는 ATGAAATGGGTGACCTTTATTTCTTTACTGTTCCTCTTTAGCAGCGCCTACTCC(SEQ ID NO: 65)에 의해 인코딩되는 신호 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 아미노산 서열 MKCLLYLAFLFLGVNC(SEQ ID NO: 66)을 갖는 신호 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 아미노산 서열 MGQIVTMFEALPHIIDEVINIVIIVLIIITSIKAVYNFATCGILALVSFLFLAGRSCG(SEQ ID NO: 67)를 갖는 신호 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 아미노산 서열 MPNHQSGSPTGSSDLLLSGKKQRPHLALRRKRRREMRKINRKVRRMNLAPIKEKTAWQHLQALISEAEEVLKTSQTPQNSLTLFLALLSVLGPPVTG(SEQ ID NO: 68)를 갖는 신호 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 아미노산 서열 MDSKGSSQKGSRLLLLLVVSNLLLCQGVVS(SEQ ID NO: 69)를 갖는 신호 서열을 포함한다. 당업자는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 사용되기에 적절한 다른 신호 서열을 알고 있을 것이다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 약 10개 내지 100개 아미노산 길이인 신호 서열을 포함한다. 예를 들어, 신호 서열은 약 10개 내지 100개 아미노산 길이, 약 15개 내지 100개 아미노산 길이, 약 20개 내지 100개 아미노산 길이, 약 25개 내지 100개 아미노산 길이, 약 30개 내지 100개 아미노산 길이, 약 35개 내지 100개 아미노산 길이, 약 40개 내지 100개 아미노산 길이, 약 45개 내지 100개 아미노산 길이, 약 50개 내지 100개 아미노산 길이, 약 55개 내지 100개 아미노산 길이, 약 60개 내지 100개 아미노산 길이, 약 65개 내지 100개 아미노산 길이, 약 70개 내지 100개 아미노산 길이, 약 75개 내지 100개 아미노산 길이, 약 80개 내지 100개 아미노산 길이, 약 85개 내지 100개 아미노산 길이, 약 90개 내지 100개 아미노산 길이, 약 95개 내지 100개 아미노산 길이, 약 10개 내지 95개 아미노산 길이, 약 10개 내지 90개 아미노산 길이, 약 10개 내지 85개 아미노산 길이, 약 10개 내지 80개 아미노산 길이,약 10개 내지 75개 아미노산 길이, 약 10개 내지 70개 아미노산 길이,약 10개 내지 65개 아미노산 길이,약 10개 내지 60개 아미노산 길이,약 10개 내지 55개 아미노산 길이,약 10개 내지 50개 아미노산 길이,약 10개 내지 45개 아미노산 길이,약 10개 내지 40개 아미노산 길이,약 10개 내지 35개 아미노산 길이,약 10개 내지 30개 아미노산 길이,약 10개 내지 25개 아미노산 길이,약 10개 내지 20개 아미노산 길이,약 10개 내지 15개 아미노산 길이, 약 20개 내지 30개 아미노산 길이, 약 30개 내지 40개 아미노산 길이, 약 40개 내지 50개 아미노산 길이, 약 50개 내지 60개 아미노산 길이, 약 60개 내지 70개 아미노산 길이, 약 70개 내지 80개 아미노산 길이, 약 80개 내지 90개 아미노산 길이, 약 90개 내지 100개 아미노산 길이, 약 20개 내지 90개 아미노산 길이, 약 30개 내지 80개 아미노산 길이, 약 40개 내지 70개 아미노산 길이, 약 50개 내지 60개 아미노산 길이, 또는 이들 사이의 임의의 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 신호 서열은 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100개 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 본원에 개시된 임의의 신호 서열은 상기 신호 서열의 기능이 무손상으로 유지되는 한, 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열 MKWVTFISLLFLFSSAYS(SEQ ID NO: 62)를 갖는 신호 서열은 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 분비 경로로 안내하는 능력을 여전히 보유하면서도, N-말단 또는 C-말단에 하나 이상의 추가 아미노산을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 세포외 공간으로 안내하는 신호 서열을 포함한다. 이러한 구현예는 단리되고/거나 정제되기에 상대적으로 용이한 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 데 유용하다.
펩타이드 태그
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 펩타이드 태그를(예를 들어, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단 단부 또는 C-말단 단부에서) 포함한다. 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 2개 이상의 펩타이드 태그를 포함한다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 포함될 수 있는 예시적인 펩타이드 태그는 제한 없이, AviTag(GLNDIFEAQKIEWHE; SEQ ID NO: 70), 칼모듈린(calmodulin)-태그(KRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGAL; SEQ ID NO: 71), 폴리글루타메이트 태그(EEEEEE; SEQ ID NO: 72), E-태그(GAPVPYPDPLEPR; SEQ ID NO: 73), FLAG-태그(DYKDDDDK; SEQ ID NO: 74), HA-태그, 헤마글루티닌으로부터의 펩타이드(YPYDVPDYA; SEQ ID NO: 75), his-태그(HHHHH(SEQ ID NO: 76); HHHHHH(SEQ ID NO: 77); HHHHHHH(SEQ ID NO: 78); HHHHHHHH(SEQ ID NO: 79); HHHHHHHHH(SEQ ID NO: 80); 또는 HHHHHHHHHH(SEQ ID NO: 81)), myc-태그(EQKLISEEDL; SEQ ID NO: 82), NE-태그(TKENPRSNQEESYDDNES; SEQ ID NO: 83), S-태그, (KETAAAKFERQHMDS; SEQ ID NO: 84), SBP-태그(MDEKTTGWRGGHVVEGLAGELEQLRARLEHHPQGQREP; SEQ ID NO: 85), Softag 1(SLAELLNAGLGGS; SEQ ID NO: 86), Softag 3(TQDPSRVG; SEQ ID NO: 87), Spot-태그(PDRVRAVSHWSS; SEQ ID NO: 88), Strep-태그(WSHPQFEK; SEQ ID NO: 89), TC 태그(CCPGCC; SEQ ID NO: 90), Ty 태그(EVHTNQDPLD; SEQ ID NO: 91), V5 태그(GKPIPNPLLGLDST; SEQ ID NO: 92), VSV-태그(YTDIEMNRLGK; SEQ ID NO: 93), 및 Xpress 태그(DLYDDDDK; SEQ ID NO: 94)를 포함한다. 일부 구현예에서, 조직 인자 단백질은 펩타이드 태그이다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 포함될 수 있는 펩타이드 태그는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 관련된 임의의 여러 가지 적용에 사용될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드 태그는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 정제에 사용될 수 있다. 하나의 비제한적인 예로서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 myc 태그를 포함할 수 있고; myc 태그(들)를 인식하는 항체를 사용하여 정제될 수 있다. Myc 태그를 인식하는 항체의 하나의 비제한적인 예는 비-상업적인 Developmental Studies Hybridoma Bank로부터 입수 가능한 9E10이다. 또 다른 비제한적인 예로서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 히스티딘 태그를 포함할 수 있고, 니켈 또는 코발트 킬레이트를 사용하여 정제될 수 있다. 당업자는 다른 적합한 태그 및 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 정제하는 데 사용되기 위한 태그에 결합하는 제제를 알고 있을 것이다. 일부 구현예에서, 펩타이드 태그는 정제 후 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 펩타이드 태그는 정제 후 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로부터 제거되지 않는다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 포함될 수 있는 펩타이드 태그는 예를 들어, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 면역침전, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의(예를 들어, 웨스턴 블로팅, ELISA, 유세포분석, 및/또는 면역세포화학을 통한) 이미지화, 및/또는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 용해에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 약 10개 내지 100개 아미노산 길이인 펩타이드 태그를 포함한다. 예를 들어, 펩타이드 태그는 약 10개 내지 100개 아미노산 길이, 약 15개 내지 100개 아미노산 길이, 약 20개 내지 100개 아미노산 길이, 약 25개 내지 100개 아미노산 길이, 약 30개 내지 100개 아미노산 길이, 약 35개 내지 100개 아미노산 길이, 약 40개 내지 100개 아미노산 길이, 약 45개 내지 100개 아미노산 길이, 약 50개 내지 100개 아미노산 길이, 약 55개 내지 100개 아미노산 길이, 약 60개 내지 100개 아미노산 길이, 약 65개 내지 100개 아미노산 길이, 약 70개 내지 100개 아미노산 길이, 약 75개 내지 100개 아미노산 길이, 약 80개 내지 100개 아미노산 길이, 약 85개 내지 100개 아미노산 길이, 약 90개 내지 100개 아미노산 길이, 약 95개 내지 100개 아미노산 길이, 약 10개 내지 95개 아미노산 길이, 약 10개 내지 90개 아미노산 길이, 약 10개 내지 85개 아미노산 길이, 약 10개 내지 80개 아미노산 길이,약 10개 내지 75개 아미노산 길이, 약 10개 내지 70개 아미노산 길이,약 10개 내지 65개 아미노산 길이,약 10개 내지 60개 아미노산 길이,약 10개 내지 55개 아미노산 길이,약 10개 내지 50개 아미노산 길이,약 10개 내지 45개 아미노산 길이,약 10개 내지 40개 아미노산 길이,약 10개 내지 35개 아미노산 길이,약 10개 내지 30개 아미노산 길이,약 10개 내지 25개 아미노산 길이,약 10개 내지 20개 아미노산 길이,약 10개 내지 15개 아미노산 길이, 약 20개 내지 30개 아미노산 길이, 약 30개 내지 40개 아미노산 길이, 약 40개 내지 50개 아미노산 길이, 약 50개 내지 60개 아미노산 길이, 약 60개 내지 70개 아미노산 길이, 약 70개 내지 80개 아미노산 길이, 약 80개 내지 90개 아미노산 길이, 약 90개 내지 100개 아미노산 길이, 약 20개 내지 90개 아미노산 길이, 약 30개 내지 80개 아미노산 길이, 약 40개 내지 70개 아미노산 길이, 약 50개 내지 60개 아미노산 길이, 또는 이들 사이의 임의의 범위일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드 태그는 약 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100개 아미노산 길이이다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 포함된 펩타이드 태그는 임의의 적합한 길이일 수 있다. 예를 들어, 펩타이드 태그는 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20개 이상의 아미노산 길이일 수 있다. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 2개 이상 펩타이드 태그를 포함하는 구현예에서, 2개 이상 펩타이드 태그는 동일하거나 상이한 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 개시된 임의의 펩타이드 태그는 상기 펩타이드 태그의 기능이 무손상으로 유지되는 한, 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 아미노산)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 아미노산 서열 EQKLISEEDL(SEQ ID NO: 82)을 갖는 myc 태그는, 항체(예를 들어, 9E10)에 의해 결합되는 능력을 여전히 보유하면서도, 하나 이상의 추가 아미노산을(예를 들어, 펩타이드 태그의 N-말단 및/또는 C- 말단에서) 포함할 수 있다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드- A형의 예시적인 구현예
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및/또는 제2 표적-결합 도메인은 독립적으로, CD3(예를 들어, 인간 CD3) 또는 CD28(예를 들어, 인간 CD28)에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인은 CD3(예를 들어, 인간 CD3)에 특이적으로 결합하고, 제2 표적-결합 도메인은 CD28(예를 들어, 인간 CD28)에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인은 CD28(예를 들어, 인간 CD28)에 특이적으로 결합하고, 제2 표적-결합 도메인은 CD3(예를 들어, 인간 CD3)에 특이적으로 결합한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 항원-결합 도메인이다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 서로 항원-결합 도메인(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 항원-결합 도메인)이다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함한다.
CD3에 특이적으로 결합하는 scFv의 비제한적인 예는, QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO: 20)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, CD3에 특이적으로 결합하는 scFv는, CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGC(SEQ ID NO: 99)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
CD28에 특이적으로 결합하는 scFv의 비제한적인 예는, VQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 26)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, CD28에 특이적으로 결합하는 scFv는, GTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO: 101)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및/또는 제2 표적-결합 도메인은 가용성 수용체(예를 들어, 가용성 CD28 수용체 또는 가용성 CD3 수용체)이다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인일 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 1)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 CAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO: 2)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 MKWVTFISLLFLFSSAYSQIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINRGGGGSGGGGSGGGGSQVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYVIQWVKQKPGQGLEWIGSINPYNDYTKYNEKFKGKATLTSDKSSITAYMEFSSLTSEDSALYYCARWGDGNYWGRGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR(SEQ ID NO: 3)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCCCAGATCGTGCTGACCCAAAGCCCCGCCATCATGAGCGCTAGCCCCGGTGAGAAGGTGACCATGACATGCTCCGCTTCCAGCTCCGTGTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAAAGCGGAACCAGCCCCAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCTCCGGAGTGCCCGCTCATTTCCGGGGCTCTGGATCCGGCACCAGCTACTCTTTAACCATTTCCGGCATGGAAGCTGAAGACGCTGCCACCTACTATTGCCAGCAATGGAGCAGCAACCCCTTCACATTCGGATCTGGCACCAAGCTCGAAATCAATCGTGGAGGAGGTGGCAGCGGCGGCGGTGGATCCGGCGGAGGAGGAAGCCAAGTTCAACTCCAGCAGAGCGGCGCTGAACTGGCCCGGCCCGGCGCCTCCGTCAAGATGAGCTGCAAGGCTTCCGGCTATACATTTACTCGTTACACAATGCATTGGGTCAAGCAGAGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATCGGATATATCAACCCTTCCCGGGGCTACACCAACTATAACCAAAAGTTCAAGGATAAAGCCACTTTAACCACTGACAAGAGCTCCTCCACCGCCTACATGCAGCTGTCCTCTTTAACCAGCGAGGACTCCGCTGTTTACTACTGCGCTAGGTATTACGACGACCACTACTGTTTAGACTATTGGGGACAAGGTACCACTTTAACCGTCAGCAGCTCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGTCCAGCTGCAGCAGAGCGGACCCGAACTCGTGAAACCCGGTGCTTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCCAGCGGATACACCTTCACCTCCTATGTGATCCAGTGGGTCAAACAGAAGCCCGGACAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAACCCTTACAACGACTATACCAAATACAACGAGAAGTTTAAGGGAAAGGCTACTTTAACCTCCGACAAAAGCTCCATCACAGCCTACATGGAGTTCAGCTCTTTAACATCCGAGGACAGCGCTCTGTACTATTGCGCCCGGTGGGGCGACGGCAATTACTGGGGACGGGGCACAACACTGACCGTGAGCAGCGGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCCGACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG(SEQ ID NO: 4)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드- B형의 예시적인 구현예
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및/또는 제2 표적-결합 도메인은 독립적으로, IL-2 수용체(예를 들어, 인간 IL-2 수용체)에 특이적으로 결합할 수 있다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 가용성 인간 IL-2 단백질이다. IL-2 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-2 단백질의 비제한적인 예는 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO: 28)과 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, IL-2 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-2 단백질은 GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO: 106)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-2 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-2 단백질은 GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC(SEQ ID NO: 107)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인일 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO: 108)과 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT(SEQ ID NO: 109)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 MKWVTFISLLFLFSSAYSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFREAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT(SEQ ID NO: 110)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCGCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT (SEQ ID NO: 111)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드- C형의 예시적인 구현예
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및/또는 제2 표적-결합 도메인은 독립적으로, IL-15 수용체(예를 들어, 인간 IL-15 수용체)에 특이적으로 결합할 수 있다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있다. 이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 링커 서열(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 링커)을 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 추가로 포함한다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 가용성 인간 IL-15 단백질이다. IL-15 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-15 단백질의 비제한적인 예는 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO: 39)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, IL-15 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-15 단백질은 AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC(SEQ ID NO: 112)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
일부 구현예에서, IL-15 수용체에 특이적으로 결합하는 IL-15 단백질은 AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO: 113)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩될 수 있다.
이들 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 일부 구현예에서, 가용성 조직 인자 도메인은 본원에 기재된 임의의 예시적인 가용성 조직 인자 도메인일 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO: 114)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO: 115)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 MKWVTFISLLFLFSSAYSNWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSSGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRENWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS(SEQ ID NO: 116)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCCAACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGCAGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAGAACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC(SEQ ID NO: 117)와 적어도 80% 동일한(예를 들어, 적어도 82% 동일한, 적어도 84% 동일한, 적어도 86% 동일한, 적어도 88% 동일한, 적어도 90% 동일한, 적어도 92% 동일한, 적어도 94% 동일한, 적어도 96% 동일한, 적어도 98% 동일한, 적어도 99% 동일한, 또는 100% 동일한) 서열에 의해 인코딩된다.
조성물/키트
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드, 임의의 세포, 또는 임의의 핵산 중 적어도 하나를 포함하는 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 적어도 하나의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 임의의 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포, 예를 들어, 본원에 기재된 임의의 방법을 사용하여 생성되는 임의의 면역 세포)를 포함한다.
일부 구현예에서, 약학적 조성물은 상이한 투여 경로(예를 들어, 정맥내, 피하)용으로 제형화된다. 일부 구현예에서, 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체(예를 들어, 포스페이트 완충 식염수)를 포함할 수 있다.
약학적 조성물의 단일 또는 다중 투여는 예를 들어, 대상체에 의해 필요하고 내약력있는 바와 같은 투약량 및 빈도에 따라 이를 필요로 하는 대상체에게 주어질 수 있다. 제형은 병태, 질환 또는 증후군을 효과적으로 치료하거나, 예방하거나 호전시키기에 충분한 양의 활성제를 제공해야 한다.
또한, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드, 조성물, 핵산, 또는 세포(예를 들어, 면역 세포)를 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 키트는 본원에 기재된 임의의 방법을 수행하기 위한 설명서를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 적어도 하나의 용량의 본원에 기재된 임의의 약학적 조성물을 포함할 수 있다.
핵산/벡터
또한, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산이 본원에 제공된다. 또한, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 임의의 핵산을 포함하는 벡터가 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 벡터는 발현 벡터일 수 있다. 예를 들어, 발현 벡터는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 서열에 작동적으로 연결된 프로모터 서열을 포함할 수 있다.
벡터의 비제한적인 예는 플라스미드, 트랜스포존, 코스미드, 및 바이러스 벡터(예를 들어, 임의의 아데노바이러스 벡터(예를 들어, pSV 또는 pCMV 벡터), 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터, 렌티바이러스 벡터, 및 레트로바이러스 벡터), 및 임의의 Gateway® 벡터를 포함한다. 벡터는 예를 들어, 발현을 위한 충분한 cis-작용 요소를 포함할 수 있으며; 발현을 위한 다른 요소는 숙주 포유류 세포에 의해 또는 시험관내 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 당업자는 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 제조하기에 적합한 벡터 및 포유류 세포를 선택할 수 있을 것이다.
세포
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 본원에 기재된 임의의 핵산을 포함하는 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 세포)가 또한 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 본원에 기재된 임의의 벡터를 포함하는 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 세포)가 또한 본원에 제공된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 세포는 진핵 세포일 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "진핵 세포"는 별개의, 막-결합 핵을 갖는 세포를 지칭한다. 이러한 세포는 예를 들어, 포유류(예를 들어, 설치류, 비-인간 영장류, 또는 인간), 곤충, 진균류, 또는 식물 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 진핵 세포는 효모 세포, 예컨대 사카로마이세스 세레비지애(saccharomyces cerevisiae)이다. 일부 구현예에서, 진핵 세포는 고등 진핵생물, 예컨대 포유류, 조류, 식물, 또는 곤충 세포이다. 포유류 세포의 비제한적인 예는 차이니즈 햄스터 난소 세포 및 인간 배아 신장 세포(예를 들어, HEK293 세포)를 포함한다.
핵산 및 발현 벡터를 세포(예를 들어, 진핵 세포) 내로 도입하는 방법은 당업계에 알려져 있다. 핵산을 세포 내로 도입하는 데 사용될 수 있는 방법의 비제한적인 예는 리포펙션(lipofection), 형질주입, 전기천공, 미세주사, 칼슘 포스페이트 형질주입, 덴드리머-기초 형질주입, 양이온성 중합체 형질주입, 세포 스퀴징(cell squeezing), 소노포레이션(sonoporation), 광학적 형질주입, 임팔레펙션(impalefection), 유체역학적 전달(hydrodynamic delivery), 마그네토펙션(magnetofection), 바이러스 형질도입(예를 들어, 아데노바이러스 및 렌티바이러스 형질도입), 및 나노입자 형질주입을 포함한다.
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법
본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성을 초래하기에 충분한 조건 하에 본원에 기재된 임의의 세포를 배양 배지에서 배양하는 단계; 및 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 상기 세포 및/또는 배양 배지로부터 회수하는 단계를 포함한다.
세포 배지 또는 세포(예를 들어, 진핵 세포)로부터 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 회수는 당업계에 잘 알려진 기법(예를 들어, 암모늄 설페이트 침전, 폴리에틸렌 글리콜 침전, 이온-교환 크로마토그래피(음이온 또는 양이온), 소수성 상호작용에 기초한 크로마토그래피, 금속-친화도 크로마토그래피, 리간드-친화도 크로마토그래피, 및 크기 배제 크로마토그래피)을 사용하여 수행될 수 있다.
세포를 배양하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 세포는 증식, 분화 및 성장을 선호하는 조건 하에 시험관내에서 유지될 수 있다. 간략하게는, 세포는 세포 생존력 및 성장을 뒷받침하기 위해 필요한 성장 인자 및 보충제를 포함하는 세포 배양 배지와 세포(예를 들어, 임의의 세포)를 접촉시킴으로써 배양될 수 있다.
본원에 기재된 임의의 방법에 의해 생성되는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드)가 또한 본원에 제공된다.
면역 세포를 자극시키는 방법
면역 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 면역 세포)를 자극시키는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 유효량의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 본원에 기재된 임의의 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)을 면역 세포와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 예에서, 면역 세포는 시험관내에서(예를 들어, 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 조건 하에 적합한 액체 배양 배지에서) 접촉된다.
일부 예에서, 면역 세포는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)로부터 이전에 수득되었다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 예에서, 면역 세포는 생체내에서 접촉된다. 이러한 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)에서 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 양으로 상기 대상체에게 투여된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 또는 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일부 예에서, 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다. 일부 예에서, 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포)는 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다.
이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
이들 방법의 일부 구현예는 치료적 유효량의 면역 세포를 이를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 대상체)에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 예에서, 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 대상체일 수 있다. 나이-관련 질환 또는 장애의 비제한적인 예는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애를 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 암을 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단되었던 대상체일 수 있다. 암의 비제한적인 예는 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종을 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별되었던 대상체일 수 있다. 감염성 질환의 비제한적인 예는 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
면역 세포의 활성화는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 면역 세포의 활성화는 상기 면역 세포의 활성화 시 분비되는 사이토카인 및 케모카인의 수준을 검출함으로써 결정될 수 있다. 면역 세포의 활성화 시 분비되거나 상향조절되는 사이토카인, 케모카인, 및 조절 분자의 비제한적인 예는 IL-2, IFN-γ, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22, IL-33, 류코트리엔 B4, CCL5, TNFα, 그랜자임, 퍼포린, TGFβ, STAT3, RORγT, FOXP3, STAT6, 및 GATA3을 포함한다. 이들 사이토카인 및 케모카인, 또는 조절 분자의 검출은 면역검정법(예를 들어, 효소-연결 면역흡착 검정법) 또는 정량적 PCR을 사용하여 수행될 수 있다. 예를 들어, 면역 세포의 활성화는 약 1% 내지 약 800%(예를 들어, 약 1% 내지 약 750%, 약 1% 내지 약 700%, 약 1% 내지 약 650%, 약 1% 내지 약 600%, 약 1% 내지 약 550%, 약 1% 내지 약 500%, 약 1% 내지 약 450%, 약 1% 내지 약 400%, 약 1% 내지 약 350%, 약 1% 내지 약 300%, 약 1% 내지 약 280%, 약 1% 내지 약 260%, 약 1% 내지 약 240%, 약 1% 내지 약 220%, 약 1% 내지 약 200%, 약 1% 내지 약 180%, 약 1% 내지 약 160%, 약 1% 내지 약 140%, 약 1% 내지 약 120%, 약 1% 내지 약 100%, 약 1% 내지 약 90%, 약 1% 내지 약 80%, 약 1% 내지 약 70%, 약 1% 내지 약 60%, 약 1% 내지 약 50%, 약 1% 내지 약 45%, 약 1% 내지 약 40%, 약 1% 내지 약 35%, 약 1% 내지 약 30%, 약 1% 내지 약 25%, 약 1% 내지 약 20%, 약 1% 내지 약 15%, 약 1% 내지 약 10%, 약 1% 내지 약 5%, 약 5% 내지 약 800%, 약 5% 내지 약 750%, 약 5% 내지 약 700%, 약 5% 내지 약 650%, 약 5% 내지 약 600%, 약 5% 내지 약 550%, 약 5% 내지 약 500%, 약 5% 내지 약 450%, 약 5% 내지 약 400%, 약 5% 내지 약 350%, 약 5% 내지 약 300%, 약 5% 내지 약 280%, 약 5% 내지 약 260%, 약 5% 내지 약 240%, 약 5% 내지 약 220%, 약 5% 내지 약 200%, 약 5% 내지 약 180%, 약 5% 내지 약 160%, 약 5% 내지 약 140%, 약 5% 내지 약 120%, 약 5% 내지 약 100%, 약 5% 내지 약 90%, 약 5% 내지 약 80%, 약 5% 내지 약 70%, 약 5% 내지 약 60%, 약 5% 내지 약 50%, 약 5% 내지 약 45%, 약 5% 내지 약 40%, 약 5% 내지 약 35%, 약 5% 내지 약 30%, 약 5% 내지 약 25%, 약 5% 내지 약 20%, 약 5% 내지 약 15%, 약 5% 내지 약 10%, 약 10% 내지 약 800%, 약 10% 내지 약 750%, 약 10% 내지 약 700%, 약 10% 내지 약 650%, 약 10% 내지 약 600%, 약 10% 내지 약 550%, 약 10% 내지 약 500%, 약 10% 내지 약 450%, 약 10% 내지 약 400%, 약 10% 내지 약 350%, 약 10% 내지 약 300%, 약 10% 내지 약 280%, 약 10% 내지 약 260%, 약 10% 내지 약 240%, 약 10% 내지 약 220%, 약 10% 내지 약 200%, 약 10% 내지 약 180%, 약 10% 내지 약 160%, 약 10% 내지 약 140%, 약 10% 내지 약 120%, 약 10% 내지 약 100%, 약 10% 내지 약 90%, 약 10% 내지 약 80%, 약 10% 내지 약 70%, 약 10% 내지 약 60%, 약 10% 내지 약 50%, 약 10% 내지 약 45%, 약 10% 내지 약 40%, 약 10% 내지 약 35%, 약 10% 내지 약 30%, 약 10% 내지 약 25%, 약 10% 내지 약 20%, 약 10% 내지 약 15%, 약 15% 내지 약 800%, 약 15% 내지 약 750%, 약 15% 내지 약 700%, 약 15% 내지 약 650%, 약 15% 내지 약 600%, 약 15% 내지 약 550%, 약 15% 내지 약 500%, 약 15% 내지 약 450%, 약 15% 내지 약 400%, 약 15% 내지 약 350%, 약 15% 내지 약 300%, 약 15% 내지 약 280%, 약 15% 내지 약 260%, 약 15% 내지 약 240%, 약 15% 내지 약 220%, 약 15% 내지 약 200%, 약 15% 내지 약 180%, 약 15% 내지 약 160%, 약 15% 내지 약 140%, 약 15% 내지 약 120%, 약 15% 내지 약 100%, 약 15% 내지 약 90%, 약 15% 내지 약 80%, 약 15% 내지 약 70%, 약 15% 내지 약 60%, 약 15% 내지 약 50%, 약 15% 내지 약 45%, 약 15% 내지 약 40%, 약 15% 내지 약 35%, 약 15% 내지 약 30%, 약 15% 내지 약 25%, 약 15% 내지 약 20%, 약 20% 내지 약 800%, 약 20% 내지 약 750%, 약 20% 내지 약 700%, 약 20% 내지 약 650%, 약 20% 내지 약 600%, 약 20% 내지 약 550%, 약 20% 내지 약 500%, 약 20% 내지 약 450%, 약 20% 내지 약 400%, 약 20% 내지 약 350%, 약 20% 내지 약 300%, 약 20% 내지 약 280%, 약 20% 내지 약 260%, 약 20% 내지 약 240%, 약 20% 내지 약 220%, 약 20% 내지 약 200%, 약 20% 내지 약 180%, 약 20% 내지 약 160%, 약 20% 내지 약 140%, 약 20% 내지 약 120%, 약 20% 내지 약 100%, 약 20% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 20% 내지 약 70%, 약 20% 내지 약 60%, 약 20% 내지 약 50%, 약 20% 내지 약 45%, 약 20% 내지 약 40%, 약 20% 내지 약 35%, 약 20% 내지 약 30%, 약 20% 내지 약 25%, 약 25% 내지 약 800%, 약 25% 내지 약 750%, 약 25% 내지 약 700%, 약 25% 내지 약 650%, 약 25% 내지 약 600%, 약 25% 내지 약 550%, 약 25% 내지 약 500%, 약 25% 내지 약 450%, 약 25% 내지 약 400%, 약 25% 내지 약 350%, 약 25% 내지 약 300%, 약 25% 내지 약 280%, 약 25% 내지 약 260%, 약 25% 내지 약 240%, 약 25% 내지 약 220%, 약 25% 내지 약 200%, 약 25% 내지 약 180%, 약 25% 내지 약 160%, 약 25% 내지 약 140%, 약 25% 내지 약 120%, 약 25% 내지 약 100%, 약 25% 내지 약 90%, 약 25% 내지 약 80%, 약 25% 내지 약 70%, 약 25% 내지 약 60%, 약 25% 내지 약 50%, 약 25% 내지 약 45%, 약 25% 내지 약 40%, 약 25% 내지 약 35%, 약 35% 내지 약 800%, 약 35% 내지 약 750%, 약 35% 내지 약 700%, 약 35% 내지 약 650%, 약 35% 내지 약 600%, 약 35% 내지 약 550%, 약 35% 내지 약 500%, 약 35% 내지 약 450%, 약 35% 내지 약 400%, 약 35% 내지 약 350%, 약 35% 내지 약 300%, 약 35% 내지 약 280%, 약 35% 내지 약 260%, 약 35% 내지 약 240%, 약 35% 내지 약 220%, 약 35% 내지 약 200%, 약 35% 내지 약 180%, 약 35% 내지 약 160%, 약 35% 내지 약 140%, 약 35% 내지 약 120%, 약 35% 내지 약 100%, 약 35% 내지 약 90%, 약 35% 내지 약 80%, 약 35% 내지 약 70%, 약 35% 내지 약 60%, 약 35% 내지 약 50%, 약 35% 내지 약 45%, 약 35% 내지 약 40%, 약 40% 내지 약 800%, 약 40% 내지 약 750%, 약 40% 내지 약 700%, 약 40% 내지 약 650%, 약 40% 내지 약 600%, 약 40% 내지 약 550%, 약 40% 내지 약 500%, 약 40% 내지 약 450%, 약 40% 내지 약 400%, 약 40% 내지 약 350%, 약 40% 내지 약 300%, 약 40% 내지 약 280%, 약 40% 내지 약 260%, 약 40% 내지 약 240%, 약 40% 내지 약 220%, 약 40% 내지 약 200%, 약 40% 내지 약 180%, 약 40% 내지 약 160%, 약 40% 내지 약 140%, 약 40% 내지 약 120%, 약 40% 내지 약 100%, 약 40% 내지 약 90%, 약 40% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 60%, 약 40% 내지 약 50%, 약 40% 내지 약 45%, 약 45% 내지 약 800%, 약 45% 내지 약 750%, 약 45% 내지 약 700%, 약 45% 내지 약 650%, 약 45% 내지 약 600%, 약 45% 내지 약 550%, 약 45% 내지 약 500%, 약 45% 내지 약 450%, 약 45% 내지 약 400%, 약 45% 내지 약 350%, 약 45% 내지 약 300%, 약 45% 내지 약 280%, 약 45% 내지 약 260%, 약 45% 내지 약 240%, 약 45% 내지 약 220%, 약 45% 내지 약 200%, 약 45% 내지 약 180%, 약 45% 내지 약 160%, 약 45% 내지 약 140%, 약 45% 내지 약 120%, 약 45% 내지 약 100%, 약 45% 내지 약 90%, 약 45% 내지 약 80%, 약 45% 내지 약 70%, 약 45% 내지 약 60%, 약 45% 내지 약 50%, 약 50% 내지 약 800%, 약 50% 내지 약 750%, 약 50% 내지 약 700%, 약 50% 내지 약 650%, 약 50% 내지 약 600%, 약 50% 내지 약 550%, 약 50% 내지 약 500%, 약 50% 내지 약 450%, 약 50% 내지 약 400%, 약 50% 내지 약 350%, 약 50% 내지 약 300%, 약 50% 내지 약 280%, 약 50% 내지 약 260%, 약 50% 내지 약 240%, 약 50% 내지 약 220%, 약 50% 내지 약 200%, 약 50% 내지 약 180%, 약 50% 내지 약 160%, 약 50% 내지 약 140%, 약 50% 내지 약 120%, 약 50% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 90%, 약 50% 내지 약 80%, 약 50% 내지 약 70%, 약 50% 내지 약 60%, 약 60% 내지 약 800%, 약 60% 내지 약 750%, 약 60% 내지 약 700%, 약 60% 내지 약 650%, 약 60% 내지 약 600%, 약 60% 내지 약 550%, 약 60% 내지 약 500%, 약 60% 내지 약 450%, 약 60% 내지 약 400%, 약 60% 내지 약 350%, 약 60% 내지 약 300%, 약 60% 내지 약 280%, 약 60% 내지 약 260%, 약 60% 내지 약 240%, 약 60% 내지 약 220%, 약 60% 내지 약 200%, 약 60% 내지 약 180%, 약 60% 내지 약 160%, 약 60% 내지 약 140%, 약 60% 내지 약 120%, 약 60% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 90%, 약 60% 내지 약 80%, 약 60% 내지 약 70%, 약 70% 내지 약 800%, 약 70% 내지 약 750%, 약 70% 내지 약 700%, 약 70% 내지 약 650%, 약 70% 내지 약 600%, 약 70% 내지 약 550%, 약 70% 내지 약 500%, 약 70% 내지 약 450%, 약 70% 내지 약 400%, 약 70% 내지 약 350%, 약 70% 내지 약 300%, 약 70% 내지 약 280%, 약 70% 내지 약 260%, 약 70% 내지 약 240%, 약 70% 내지 약 220%, 약 70% 내지 약 200%, 약 70% 내지 약 180%, 약 70% 내지 약 160%, 약 70% 내지 약 140%, 약 70% 내지 약 120%, 약 70% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 약 80%, 약 80% 내지 약 800%, 약 80% 내지 약 750%, 약 80% 내지 약 700%, 약 80% 내지 약 650%, 약 80% 내지 약 600%, 약 80% 내지 약 550%, 약 80% 내지 약 500%, 약 80% 내지 약 450%, 약 80% 내지 약 400%, 약 80% 내지 약 350%, 약 80% 내지 약 300%, 약 80% 내지 약 280%, 약 80% 내지 약 260%, 약 80% 내지 약 240%, 약 80% 내지 약 220%, 약 80% 내지 약 200%, 약 80% 내지 약 180%, 약 80% 내지 약 160%, 약 80% 내지 약 140%, 약 80% 내지 약 120%, 약 80% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 800%, 약 90% 내지 약 750%, 약 90% 내지 약 700%, 약 90% 내지 약 650%, 약 90% 내지 약 600%, 약 90% 내지 약 550%, 약 90% 내지 약 500%, 약 90% 내지 약 450%, 약 90% 내지 약 400%, 약 90% 내지 약 350%, 약 90% 내지 약 300%, 약 90% 내지 약 280%, 약 90% 내지 약 260%, 약 90% 내지 약 240%, 약 90% 내지 약 220%, 약 90% 내지 약 200%, 약 90% 내지 약 180%, 약 90% 내지 약 160%, 약 90% 내지 약 140%, 약 90% 내지 약 120%, 약 90% 내지 약 100%, 약 100% 내지 약 800%, 약 100% 내지 약 750%, 약 100% 내지 약 700%, 약 100% 내지 약 650%, 약 100% 내지 약 600%, 약 100% 내지 약 550%, 약 100% 내지 약 500%, 약 100% 내지 약 450%, 약 100% 내지 약 400%, 약 100% 내지 약 350%, 약 100% 내지 약 300%, 약 100% 내지 약 280%, 약 100% 내지 약 260%, 약 100% 내지 약 240%, 약 100% 내지 약 220%, 약 100% 내지 약 200%, 약 100% 내지 약 180%, 약 100% 내지 약 160%, 약 100% 내지 약 140%, 약 100% 내지 약 120%, 약 120% 내지 약 800%, 약 120% 내지 약 750%, 약 120% 내지 약 700%, 약 120% 내지 약 650%, 약 120% 내지 약 600%, 약 120% 내지 약 550%, 약 120% 내지 약 500%, 약 120% 내지 약 450%, 약 120% 내지 약 400%, 약 120% 내지 약 350%, 약 120% 내지 약 300%, 약 120% 내지 약 280%, 약 120% 내지 약 260%, 약 120% 내지 약 240%, 약 120% 내지 약 220%, 약 120% 내지 약 200%, 약 120% 내지 약 180%, 약 120% 내지 약 160%, 약 120% 내지 약 140%, 약 140% 내지 약 800%, 약 140% 내지 약 750%, 약 140% 내지 약 700%, 약 140% 내지 약 650%, 약 140% 내지 약 600%, 약 140% 내지 약 550%, 약 140% 내지 약 500%, 약 140% 내지 약 450%, 약 140% 내지 약 400%, 약 140% 내지 약 350%, 약 140% 내지 약 300%, 약 140% 내지 약 280%, 약 140% 내지 약 260%, 약 140% 내지 약 240%, 약 140% 내지 약 220%, 약 140% 내지 약 200%, 약 140% 내지 약 180%, 약 140% 내지 약 160%, 약 160% 내지 약 800%, 약 160% 내지 약 750%, 약 160% 내지 약 700%, 약 160% 내지 약 650%, 약 160% 내지 약 600%, 약 160% 내지 약 550%, 약 160% 내지 약 500%, 약 160% 내지 약 450%, 약 160% 내지 약 400%, 약 160% 내지 약 350%, 약 160% 내지 약 300%, 약 160% 내지 약 280%, 약 160% 내지 약 260%, 약 160% 내지 약 240%, 약 160% 내지 약 220%, 약 160% 내지 약 200%, 약 160% 내지 약 180%, 약 180% 내지 약 800%, 약 180% 내지 약 750%, 약 180% 내지 약 700%, 약 180% 내지 약 650%, 약 180% 내지 약 600%, 약 180% 내지 약 550%, 약 180% 내지 약 500%, 약 180% 내지 약 450%, 약 180% 내지 약 400%, 약 180% 내지 약 350%, 약 180% 내지 약 300%, 약 180% 내지 약 280%, 약 180% 내지 약 260%, 약 180% 내지 약 240%, 약 180% 내지 약 220%, 약 180% 내지 약 200%, 약 200% 내지 약 800%, 약 200% 내지 약 750%, 약 200% 내지 약 700%, 약 200% 내지 약 650%, 약 200% 내지 약 600%, 약 200% 내지 약 550%, 약 200% 내지 약 500%, 약 200% 내지 약 450%, 약 200% 내지 약 400%, 약 200% 내지 약 350%, 약 200% 내지 약 300%, 약 200% 내지 약 280%, 약 200% 내지 약 260%, 약 200% 내지 약 240%, 약 200% 내지 약 220%, 약 220% 내지 약 800%, 약 220% 내지 약 750%, 약 220% 내지 약 700%, 약 220% 내지 약 650%, 약 220% 내지 약 600%, 약 220% 내지 약 550%, 약 220% 내지 약 500%, 약 220% 내지 약 450%, 약 220% 내지 약 400%, 약 220% 내지 약 350%, 약 220% 내지 약 300%, 약 220% 내지 약 280%, 약 220% 내지 약 260%, 약 220% 내지 약 240%, 약 240% 내지 약 800%, 약 240% 내지 약 750%, 약 240% 내지 약 700%, 약 240% 내지 약 650%, 약 240% 내지 약 600%, 약 240% 내지 약 550%, 약 240% 내지 약 500%, 약 240% 내지 약 450%, 약 240% 내지 약 400%, 약 240% 내지 약 350%, 약 240% 내지 약 300%, 약 240% 내지 약 280%, 약 240% 내지 약 260%, 약 260% 내지 약 800%, 약 260% 내지 약 750%, 약 260% 내지 약 700%, 약 260% 내지 약 650%, 약 260% 내지 약 600%, 약 260% 내지 약 550%, 약 260% 내지 약 500%, 약 260% 내지 약 450%, 약 260% 내지 약 400%, 약 260% 내지 약 350%, 약 260% 내지 약 300%, 약 260% 내지 약 280%, 약 280% 내지 약 800%, 약 280% 내지 약 750%, 약 280% 내지 약 700%, 약 280% 내지 약 650%, 약 280% 내지 약 600%, 약 280% 내지 약 550%, 약 280% 내지 약 500%, 약 280% 내지 약 450%, 약 280% 내지 약 400%, 약 280% 내지 약 350%, 약 280% 내지 약 300%, 약 300% 내지 약 800%, 약 300% 내지 약 750%, 약 300% 내지 약 700%, 약 300% 내지 약 650%, 약 300% 내지 약 600%, 약 300% 내지 약 550%, 약 300% 내지 약 500%, 약 300% 내지 약 450%, 약 300% 내지 약 400%, 약 300% 내지 약 350%, 약 350% 내지 약 800%, 약 350% 내지 약 750%, 약 350% 내지 약 700%, 약 350% 내지 약 650%, 약 350% 내지 약 600%, 약 350% 내지 약 550%, 약 350% 내지 약 500%, 약 350% 내지 약 450%, 약 350% 내지 약 400%, 약 400% 내지 약 800%, 약 400% 내지 약 750%, 약 400% 내지 약 700%, 약 400% 내지 약 650%, 약 400% 내지 약 600%, 약 400% 내지 약 550%, 약 400% 내지 약 500%, 약 400% 내지 약 450%, 약 450% 내지 약 800%, 약 450% 내지 약 750%, 약 450% 내지 약 700%, 약 450% 내지 약 650%, 약 450% 내지 약 600%, 약 450% 내지 약 550%, 약 450% 내지 약 500%, 약 500% 내지 약 800%, 약 500% 내지 약 750%, 약 500% 내지 약 700%, 약 500% 내지 약 650%, 약 500% 내지 약 600%, 약 500% 내지 약 550%, 약 550% 내지 약 800%, 약 550% 내지 약 750%, 약 550% 내지 약 700%, 약 550% 내지 약 650%, 약 550% 내지 약 600%, 약 600% 내지 약 800%, 약 600% 내지 약 750%, 약 600% 내지 약 700%, 약 600% 내지 약 650%, 약 650% 내지 약 800%, 약 650% 내지 약 750%, 약 650% 내지 약 700%, 약 700% 내지 약 800%, 약 700% 내지 약 750%, 또는 약 750% 내지 약 800%)의 본원에 기재된 하나 이상의 임의의 사이토카인 또는 케모카인 또는 조절 분자(예를 들어, 하나 이상의 임의의 IL-2, IFN-γ, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22, IL-33, 류코트리엔 B4, CCL5, TNFα, 그랜자임, 퍼포린, TGFβ, STAT3, RORγT, FOXP3, STAT6, 및 GATA3)의 증가를(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉되지 않은 대조군에서의 하나 이상의 사이토카인 및 케모카인의 수준과 비교하여) 초래할 수 있다.
면역 세포의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법
또한, 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 면역 세포)의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법이 본원에 제공되며, 상기 방법은 면역 세포를 유효량의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 본원에 기재된 임의의 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 예에서, 면역 세포는 시험관내에서(예를 들어, 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 조건 하에 적합한 액체 배양 배지에서) 접촉된다.
일부 예에서, 면역 세포는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)로부터 이전에 수득되었다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 예에서, 면역 세포는 생체내에서 접촉된다. 이러한 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)에서 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 양으로 상기 대상체에게 투여된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 또는 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일부 예에서, 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다. 일부 예에서, 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포)는 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다.
이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
이들 방법의 일부 구현예는 치료적 유효량의 면역 세포를 이를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 대상체)에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 예에서, 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 대상체일 수 있다. 나이-관련 질환 또는 장애의 비제한적인 예는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애를 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 암을 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단되었던 대상체일 수 있다. 암의 비제한적인 예는 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종을 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별되었던 대상체일 수 있다. 감염성 질환의 비제한적인 예는 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
면역 세포의 증식의 검출은 예를 들어, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉되지 않은 시료 내에서의 면역 세포의 농도의 증가 속도를 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉된 유사한 시료 내에서의 면역 세포의 농도의 증가 속도와 비교함으로써, 당업계에 알려진 방법, 예를 들어, 유세포분석(예를 들어, 형광-보조 유세포분석), 현미경 분석, 및 면역형광 현미경 분석을 사용하여 수행될 수 있다.
다른 예에서, 면역 세포의 증식은 면역 세포를 증식시킴으로써 분비되는 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인 또는 조절 분자(예를 들어, 하나 이상의 IL-2, IFN-γ, IL-1, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-22, IL-33, 류코트리엔 B4, CCL5, TNFα, 그랜자임, 퍼포린, TGFβ, STAT3, RORγT, FOXP3, STAT6, 및 GATA3)의 수준의 증가를(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉되지 않은 대조군에서 하나 이상의 사이토카인 및 케모카인의 수준과 비교하여) 검출함으로써 간접적으로 검출될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법은 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉되지 않은 유사한 대조군 시료에서의 증가 속도와 비교하여, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드와 접촉된 시료에서 면역 세포의 농도의 증가 속도의 증가(예를 들어, 약 1% 내지 약 800% 증가, 또는 본원에 기재된 이 범위의 임의의 서브범위)를 초래할 수 있다.
면역 세포의 분화를 유도하는 방법
면역 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 면역 세포)로부터 기억 또는 기억-유사 면역 세포로의 분화를 유도하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 면역 세포를 유효량의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 본원에 기재된 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)과 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 예에서, 면역 세포는 시험관내에서(예를 들어, 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 조건 하에 적합한 액체 배양 배지에서) 접촉된다.
일부 예에서, 면역 세포는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)로부터 이전에 수득되었다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 예에서, 면역 세포는 생체내에서 접촉된다. 이러한 구현예에서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 대상체(예를 들어, 포유류, 예를 들어, 인간)에서 면역 세포의 자극을 초래하기에 충분한 양으로 상기 대상체에게 투여된다.
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 예에서, 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 또는 자연 살해 세포, 또는 이들의 조합일 수 있다.
일부 예에서, 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다. 일부 예에서, 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포)는 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 발현하도록 이전에 유전적으로-조작되었다.
이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 이들 방법의 일부 구현예는 접촉 단계 후, 공동-자극 분자(예를 들어, CD28)를 인코딩하는 핵산을 면역 세포(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 면역 세포) 내로 도입하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
이들 방법의 일부 구현예는 치료적 유효량의 면역 세포를 이를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 예시적인 대상체)에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
일부 예에서, 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 대상체일 수 있다. 나이-관련 질환 또는 장애의 비제한적인 예는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애를 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 암을 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단되었던 대상체일 수 있다. 암의 비제한적인 예는 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종을 포함한다.
일부 예에서, 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별되었던 대상체일 수 있다. 감염성 질환의 비제한적인 예는 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 또는 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
일부 예에서, 면역 세포는 NK 세포이고, 기억 NK 세포의 검출은 예를 들어, CD25, CD69, CD62L, IL-12, IL-18, IL-33, STAT4, STAT5, Zbtb32, DNAM-1, NKp30, NKp40, NKp46, BIM, Noxa, SOCS1, BNIP3, BNIP3L, IFN-γ, CXCL16, CXCR6, NKG2D, TRAIL, CD49, Ly49D, CD49b, 및 Ly79H 중 하나 이상의 증가된 수준의 검출을 포함할 수 있다. NK 기억 세포 및 이를 검출하는 방법의 설명은 문헌[O'Sullivan 등, Immunity 43:634-645, 2015]에 기재되어 있다.
일부 예에서, 면역 세포는 T 세포이고, 기억 T 세포의 검출은 예를 들어, CD45RO, CCR7, L-셀렉틴(CD62L), CD44, CD45RA, 인테그린 αeβ7, CD43, CD27, CD28, IL-7Rα, CD95, IL-2Rβ, CXCR3, 및 LFA-1 중 하나 이상의 발현 수준의 검출을 포함할 수 있다. 일부 예에서, 면역 세포는 B 세포이고, 기억 B 세포의 검출은 예를 들어, CD27의 발현 수준의 검출을 포함할 수 있다. 기억 또는 기억-유사 면역 세포의 다른 유형 및 마커는 당업계에 알려져 있다.
치료 방법
치료를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 대상체)를 치료하는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 유효량의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 본원에 기재된 임의의 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
이들 방법의 일부 구현예에서, 대상체는 암을 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있다. 암의 비제한적인 예는 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 대상체에서 암의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도의 감소를(예를 들어, 치료 전의 대상체에서의 암의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도와 비교하여) 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 대상체에서 하나 이상의 고형 종양의 부피의(예를 들어, 치료 전의 또는 치료 시작 시의 하나 이상의 고형 종양의 부피와 비교하여) 감소(예를 들어, 약 1% 감소 내지 약 99% 감소, 약 1% 감소 내지 약 95% 감소, 약 1% 감소 내지 약 90% 감소, 약 1% 감소 내지 약 85% 감소, 약 1% 감소 내지 약 80% 감소, 약 1% 감소 내지 약 75% 감소, 약 1% 감소 내지 약 70% 감소, 약 1% 감소 내지 약 65% 감소, 약 1% 감소 내지 약 60% 감소, 약 1% 감소 내지 약 55% 감소, 약 1% 감소 내지 약 50% 감소, 약 1% 감소 내지 약 45% 감소, 약 1% 감소 내지 약 40% 감소, 약 1% 감소 내지 약 35% 감소, 약 1% 감소 내지 약 30% 감소, 약 1% 감소 내지 약 25% 감소, 약 1% 감소 내지 약 20% 감소, 약 1% 감소 내지 약 15% 감소, 약 1% 감소 내지 약 10% 감소, 약 1% 감소 내지 약 5% 감소, 약 5% 감소 내지 약 99% 감소, 약 5% 감소 내지 약 95% 감소, 약 5% 감소 내지 약 90% 감소, 약 5% 감소 내지 약 85% 감소, 약 5% 감소 내지 약 80% 감소, 약 5% 감소 내지 약 75% 감소, 약 5% 감소 내지 약 70% 감소, 약 5% 감소 내지 약 65% 감소, 약 5% 감소 내지 약 60% 감소, 약 5% 감소 내지 약 55% 감소, 약 5% 감소 내지 약 50% 감소, 약 5% 감소 내지 약 45% 감소, 약 5% 감소 내지 약 40% 감소, 약 5% 감소 내지 약 35% 감소, 약 5% 감소 내지 약 30% 감소, 약 5% 감소 내지 약 25% 감소, 약 5% 감소 내지 약 20% 감소, 약 5% 감소 내지 약 15% 감소, 약 5% 감소 내지 약 10% 감소, 약 10% 감소 내지 약 99% 감소, 약 10% 감소 내지 약 95% 감소, 약 10% 감소 내지 약 90% 감소, 약 10% 감소 내지 약 85% 감소, 약 10% 감소 내지 약 80% 감소, 약 10% 감소 내지 약 75% 감소, 약 10% 감소 내지 약 70% 감소, 약 10% 감소 내지 약 65% 감소, 약 10% 감소 내지 약 60% 감소, 약 10% 감소 내지 약 55% 감소, 약 10% 감소 내지 약 50% 감소, 약 10% 감소 내지 약 45% 감소, 약 10% 감소 내지 약 40% 감소, 약 10% 감소 내지 약 35% 감소, 약 10% 감소 내지 약 30% 감소, 약 10% 감소 내지 약 25% 감소, 약 10% 감소 내지 약 20% 감소, 약 10% 감소 내지 약 15% 감소, 약 15% 감소 내지 약 99% 감소, 약 15% 감소 내지 약 95% 감소, 약 15% 감소 내지 약 90% 감소, 약 15% 감소 내지 약 85% 감소, 약 15% 감소 내지 약 80% 감소, 약 15% 감소 내지 약 75% 감소, 약 15% 감소 내지 약 70% 감소, 약 15% 감소 내지 약 65% 감소, 약 15% 감소 내지 약 60% 감소, 약 15% 감소 내지 약 55% 감소, 약 15% 감소 내지 약 50% 감소, 약 15% 감소 내지 약 45% 감소, 약 15% 감소 내지 약 40% 감소, 약 15% 감소 내지 약 35% 감소, 약 15% 감소 내지 약 30% 감소, 약 15% 감소 내지 약 25% 감소, 약 15% 감소 내지 약 20% 감소, 약 20% 감소 내지 약 99% 감소, 약 20% 감소 내지 약 95% 감소, 약 20% 감소 내지 약 90% 감소, 약 20% 감소 내지 약 85% 감소, 약 20% 감소 내지 약 80% 감소, 약 20% 감소 내지 약 75% 감소, 약 20% 감소 내지 약 70% 감소, 약 20% 감소 내지 약 65% 감소, 약 20% 감소 내지 약 60% 감소, 약 20% 감소 내지 약 55% 감소, 약 20% 감소 내지 약 50% 감소, 약 20% 감소 내지 약 45% 감소, 약 20% 감소 내지 약 40% 감소, 약 20% 감소 내지 약 35% 감소, 약 20% 감소 내지 약 30% 감소, 약 20% 감소 내지 약 25% 감소, 약 25% 감소 내지 약 99% 감소, 약 25% 감소 내지 약 95% 감소, 약 25% 감소 내지 약 90% 감소, 약 25% 감소 내지 약 85% 감소, 약 25% 감소 내지 약 80% 감소, 약 25% 감소 내지 약 75% 감소, 약 25% 감소 내지 약 70% 감소, 약 25% 감소 내지 약 65% 감소, 약 25% 감소 내지 약 60% 감소, 약 25% 감소 내지 약 55% 감소, 약 25% 감소 내지 약 50% 감소, 약 25% 감소 내지 약 45% 감소, 약 25% 감소 내지 약 40% 감소, 약 25% 감소 내지 약 35% 감소, 약 25% 감소 내지 약 30% 감소, 약 30% 감소 내지 약 99% 감소, 약 30% 감소 내지 약 95% 감소, 약 30% 감소 내지 약 90% 감소, 약 30% 감소 내지 약 85% 감소, 약 30% 감소 내지 약 80% 감소, 약 30% 감소 내지 약 75% 감소, 약 30% 감소 내지 약 70% 감소, 약 30% 감소 내지 약 65% 감소, 약 30% 감소 내지 약 60% 감소, 약 30% 감소 내지 약 55% 감소, 약 30% 감소 내지 약 50% 감소, 약 30% 감소 내지 약 45% 감소, 약 30% 감소 내지 약 40% 감소, 약 30% 감소 내지 약 35% 감소, 약 35% 감소 내지 약 99% 감소, 약 35% 감소 내지 약 95% 감소, 약 35% 감소 내지 약 90% 감소, 약 35% 감소 내지 약 85% 감소, 약 35% 감소 내지 약 80% 감소, 약 35% 감소 내지 약 75% 감소, 약 35% 감소 내지 약 70% 감소, 약 35% 감소 내지 약 65% 감소, 약 35% 감소 내지 약 60% 감소, 약 35% 감소 내지 약 55% 감소, 약 35% 감소 내지 약 50% 감소, 약 35% 감소 내지 약 45% 감소, 약 35% 감소 내지 약 40% 감소, 약 40% 감소 내지 약 99% 감소, 약 40% 감소 내지 약 95% 감소, 약 40% 감소 내지 약 90% 감소, 약 40% 감소 내지 약 85% 감소, 약 40% 감소 내지 약 80% 감소, 약 40% 감소 내지 약 75% 감소, 약 40% 감소 내지 약 70% 감소, 약 40% 감소 내지 약 65% 감소, 약 40% 감소 내지 약 60% 감소, 약 40% 감소 내지 약 55% 감소, 약 40% 감소 내지 약 50% 감소, 약 40% 감소 내지 약 45% 감소, 약 45% 감소 내지 약 99% 감소, 약 45% 감소 내지 약 95% 감소, 약 45% 감소 내지 약 90% 감소, 약 45% 감소 내지 약 85% 감소, 약 45% 감소 내지 약 80% 감소, 약 45% 감소 내지 약 75% 감소, 약 45% 감소 내지 약 70% 감소, 약 45% 감소 내지 약 65% 감소, 약 45% 감소 내지 약 60% 감소, 약 45% 감소 내지 약 55% 감소, 약 45% 감소 내지 약 50% 감소, 약 50% 감소 내지 약 99% 감소, 약 50% 감소 내지 약 95% 감소, 약 50% 감소 내지 약 90% 감소, 약 50% 감소 내지 약 85% 감소, 약 50% 감소 내지 약 80% 감소, 약 50% 감소 내지 약 75% 감소, 약 50% 감소 내지 약 70% 감소, 약 50% 감소 내지 약 65% 감소, 약 50% 감소 내지 약 60% 감소, 약 50% 감소 내지 약 55% 감소, 약 55% 감소 내지 약 99% 감소, 약 55% 감소 내지 약 95% 감소, 약 55% 감소 내지 약 90% 감소, 약 55% 감소 내지 약 85% 감소, 약 55% 감소 내지 약 80% 감소, 약 55% 감소 내지 약 75% 감소, 약 55% 감소 내지 약 70% 감소, 약 55% 감소 내지 약 65% 감소, 약 55% 감소 내지 약 60% 감소, 약 60% 감소 내지 약 99% 감소, 약 60% 감소 내지 약 95% 감소, 약 60% 감소 내지 약 90% 감소, 약 60% 감소 내지 약 85% 감소, 약 60% 감소 내지 약 80% 감소, 약 60% 감소 내지 약 75% 감소, 약 60% 감소 내지 약 70% 감소, 약 60% 감소 내지 약 65% 감소, 약 65% 감소 내지 약 99% 감소, 약 65% 감소 내지 약 95% 감소, 약 65% 감소 내지 약 90% 감소, 약 65% 감소 내지 약 85% 감소, 약 65% 감소 내지 약 80% 감소, 약 65% 감소 내지 약 75% 감소, 약 65% 감소 내지 약 70% 감소, 약 70% 감소 내지 약 99% 감소, 약 70% 감소 내지 약 95% 감소, 약 70% 감소 내지 약 90% 감소, 약 70% 감소 내지 약 85% 감소, 약 70% 감소 내지 약 80% 감소, 약 70% 감소 내지 약 75% 감소, 약 75% 감소 내지 약 99% 감소, 약 75% 감소 내지 약 95% 감소, 약 75% 감소 내지 약 90% 감소, 약 75% 감소 내지 약 85% 감소, 약 75% 감소 내지 약 80% 감소, 약 80% 감소 내지 약 99% 감소, 약 80% 감소 내지 약 95% 감소, 약 80% 감소 내지 약 90% 감소, 약 80% 감소 내지 약 85% 감소, 약 85% 감소 내지 약 99% 감소, 약 85% 감소 내지 약 95% 감소, 약 85% 감소 내지 약 90% 감소, 약 90% 감소 내지 약 99% 감소, 약 90% 감소 내지 약 95% 감소, 또는 약 95% 감소 내지 약 99% 감소)를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 대상체에서 전이를 발증시키거나 하나 이상의 추가 전이를 발증시킬 위험을(예를 들어, 치료 전의 대상체에서 또는 상이한 치료가 투여된 유사한 대상체 또는 대상체들의 집단에서 전이를 발증시키거나 하나 이상의 추가 전이를 발증시킬 위험과 비교하여) 감소(예를 들어, 약 1% 감소 내지 약 99% 감소, 또는 본원에 기재된 이 범위의 임의의 서브범위)시킬 수 있다.
이들 방법의 일부 예에서, 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있다. 나이-관련 질환 및 병태의 비제한적인 예는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애를 포함한다. 일부 예에서, 이들 방법은 대상체에서 나이-관련 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도의 감소를(예를 들어, 치료 전의 대상체에서의 나이-관련 질환 또는 병태의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도와 비교하여) 초래할 수 있다. 일부 예에서, 상기 방법은 예를 들어, 치료 전의 대상체에서의 노화 세포 수와 비교하여, 대상체에서 노화 세포 수의 저하(예를 들어, 대상체에서 나이-관련 질환 또는 장애에 관여하고/거나 연루된 하나 이상의 특정 조직에서의 노화 세포 수의 저하)(예를 들어, 약 1% 저하 내지 약 99% 저하, 약 1% 저하 내지 약 95% 저하, 약 1% 저하 내지 약 90% 저하, 약 1% 저하 내지 약 85% 저하, 약 1% 저하 내지 약 80% 저하, 약 1% 저하 내지 약 75% 저하, 약 1% 내지 약 70% 저하, 약 1% 저하 내지 약 65% 저하, 약 1% 저하 내지 약 60% 저하, 약 1% 저하 내지 약 55% 저하, 약 1% 저하 내지 약 50% 저하, 약 1% 저하 내지 약 45% 저하, 약 1% 저하 내지 약 40% 저하, 약 1% 저하 내지 약 35% 저하, 약 1% 저하 내지 약 30% 저하, 약 1% 저하 내지 약 25% 저하, 약 1% 저하 내지 약 20% 저하, 약 1% 저하 내지 약 15% 저하, 약 1% 저하 내지 약 10% 저하, 약 1% 저하 내지 약 5% 저하, 약 5% 저하 내지 약 99% 저하, 약 5% 저하 내지 약 95% 저하, 약 5% 저하 내지 약 90% 저하, 약 5% 저하 내지 약 85% 저하, 약 5% 저하 내지 약 80% 저하, 약 5% 저하 내지 약 75% 저하, 약 5% 내지 약 70% 저하, 약 5% 저하 내지 약 65% 저하, 약 5% 저하 내지 약 60% 저하, 약 5% 저하 내지 약 55% 저하, 약 5% 저하 내지 약 50% 저하, 약 5% 저하 내지 약 45% 저하, 약 5% 저하 내지 약 40% 저하, 약 5% 저하 내지 약 35% 저하, 약 5% 저하 내지 약 30% 저하, 약 5% 저하 내지 약 25% 저하, 약 5% 저하 내지 약 20% 저하, 약 5% 저하 내지 약 15% 저하, 약 5% 저하 내지 약 10% 저하, 약 10% 저하 내지 약 99% 저하, 약 10% 저하 내지 약 95% 저하, 약 10% 저하 내지 약 90% 저하, 약 10% 저하 내지 약 85% 저하, 약 10% 저하 내지 약 80% 저하, 약 10% 저하 내지 약 75% 저하, 약 10% 내지 약 70% 저하, 약 10% 저하 내지 약 65% 저하, 약 10% 저하 내지 약 60% 저하, 약 10% 저하 내지 약 55% 저하, 약 10% 저하 내지 약 50% 저하, 약 10% 저하 내지 약 45% 저하, 약 10% 저하 내지 약 40% 저하, 약 10% 저하 내지 약 35% 저하, 약 10% 저하 내지 약 30% 저하, 약 10% 저하 내지 약 25% 저하, 약 10% 저하 내지 약 20% 저하, 약 10% 저하 내지 약 15% 저하, 약 15% 저하 내지 약 99% 저하, 약 15% 저하 내지 약 95% 저하, 약 15% 저하 내지 약 90% 저하, 약 15% 저하 내지 약 85% 저하, 약 15% 저하 내지 약 80% 저하, 약 15% 저하 내지 약 75% 저하, 약 15% 내지 약 70% 저하, 약 15% 저하 내지 약 65% 저하, 약 15% 저하 내지 약 60% 저하, 약 15% 저하 내지 약 55% 저하, 약 15% 저하 내지 약 50% 저하, 약 15% 저하 내지 약 45% 저하, 약 15% 저하 내지 약 40% 저하, 약 15% 저하 내지 약 35% 저하, 약 15% 저하 내지 약 30% 저하, 약 15% 저하 내지 약 25% 저하, 약 15% 저하 내지 약 20% 저하, 약 20% 저하 내지 약 99% 저하, 약 20% 저하 내지 약 95% 저하, 약 20% 저하 내지 약 90% 저하, 약 20% 저하 내지 약 85% 저하, 약 20% 저하 내지 약 80% 저하, 약 20% 저하 내지 약 75% 저하, 약 20% 내지 약 70% 저하, 약 20% 저하 내지 약 65% 저하, 약 20% 저하 내지 약 60% 저하, 약 20% 저하 내지 약 55% 저하, 약 20% 저하 내지 약 50% 저하, 약 20% 저하 내지 약 45% 저하, 약 20% 저하 내지 약 40% 저하, 약 20% 저하 내지 약 35% 저하, 약 20% 저하 내지 약 30% 저하, 약 20% 저하 내지 약 25% 저하, 약 25% 저하 내지 약 99% 저하, 약 25% 저하 내지 약 95% 저하, 약 25% 저하 내지 약 90% 저하, 약 25% 저하 내지 약 85% 저하, 약 25% 저하 내지 약 80% 저하, 약 25% 저하 내지 약 75% 저하, 약 25% 내지 약 70% 저하, 약 25% 저하 내지 약 65% 저하, 약 25% 저하 내지 약 60% 저하, 약 25% 저하 내지 약 55% 저하, 약 25% 저하 내지 약 50% 저하, 약 25% 저하 내지 약 45% 저하, 약 25% 저하 내지 약 40% 저하, 약 25% 저하 내지 약 35% 저하, 약 25% 저하 내지 약 30% 저하, 약 30% 저하 내지 약 99% 저하, 약 30% 저하 내지 약 95% 저하, 약 30% 저하 내지 약 90% 저하, 약 30% 저하 내지 약 85% 저하, 약 30% 저하 내지 약 80% 저하, 약 30% 저하 내지 약 75% 저하, 약 30% 내지 약 70% 저하, 약 30% 저하 내지 약 65% 저하, 약 30% 저하 내지 약 60% 저하, 약 30% 저하 내지 약 55% 저하, 약 30% 저하 내지 약 50% 저하, 약 30% 저하 내지 약 45% 저하, 약 30% 저하 내지 약 40% 저하, 약 30% 저하 내지 약 35% 저하, 약 35% 저하 내지 약 99% 저하, 약 35% 저하 내지 약 95% 저하, 약 35% 저하 내지 약 90% 저하, 약 35% 저하 내지 약 85% 저하, 약 35% 저하 내지 약 80% 저하, 약 35% 저하 내지 약 75% 저하, 약 35% 내지 약 70% 저하, 약 35% 저하 내지 약 65% 저하, 약 35% 저하 내지 약 60% 저하, 약 35% 저하 내지 약 55% 저하, 약 35% 저하 내지 약 50% 저하, 약 35% 저하 내지 약 45% 저하, 약 35% 저하 내지 약 40% 저하, 약 40% 저하 내지 약 99% 저하, 약 40% 저하 내지 약 95% 저하, 약 40% 저하 내지 약 90% 저하, 약 40% 저하 내지 약 85% 저하, 약 40% 저하 내지 약 80% 저하, 약 40% 저하 내지 약 75% 저하, 약 40% 내지 약 70% 저하, 약 40% 저하 내지 약 65% 저하, 약 40% 저하 내지 약 60% 저하, 약 40% 저하 내지 약 55% 저하, 약 40% 저하 내지 약 50% 저하, 약 40% 저하 내지 약 45% 저하, 약 45% 저하 내지 약 99% 저하, 약 45% 저하 내지 약 95% 저하, 약 45% 저하 내지 약 90% 저하, 약 45% 저하 내지 약 85% 저하, 약 45% 저하 내지 약 80% 저하, 약 45% 저하 내지 약 75% 저하, 약 45% 내지 약 70% 저하, 약 45% 저하 내지 약 65% 저하, 약 45% 저하 내지 약 60% 저하, 약 45% 저하 내지 약 55% 저하, 약 45% 저하 내지 약 50% 저하, 약 50% 저하 내지 약 99% 저하, 약 50% 저하 내지 약 95% 저하, 약 50% 저하 내지 약 90% 저하, 약 50% 저하 내지 약 85% 저하, 약 50% 저하 내지 약 80% 저하, 약 50% 저하 내지 약 75% 저하, 약 50% 내지 약 70% 저하, 약 50% 저하 내지 약 65% 저하, 약 50% 저하 내지 약 60% 저하, 약 50% 저하 내지 약 55% 저하, 약 55% 저하 내지 약 99% 저하, 약 55% 저하 내지 약 95% 저하, 약 55% 저하 내지 약 90% 저하, 약 55% 저하 내지 약 85% 저하, 약 55% 저하 내지 약 80% 저하, 약 55% 저하 내지 약 75% 저하, 약 55% 내지 약 70% 저하, 약 55% 저하 내지 약 65% 저하, 약 55% 저하 내지 약 60% 저하, 약 60% 저하 내지 약 99% 저하, 약 60% 저하 내지 약 95% 저하, 약 60% 저하 내지 약 90% 저하, 약 60% 저하 내지 약 85% 저하, 약 60% 저하 내지 약 80% 저하, 약 60% 저하 내지 약 75% 저하, 약 60% 내지 약 70% 저하, 약 60% 저하 내지 약 65% 저하, 약 65% 저하 내지 약 99% 저하, 약 65% 저하 내지 약 95% 저하, 약 65% 저하 내지 약 90% 저하, 약 65% 저하 내지 약 85% 저하, 약 65% 저하 내지 약 80% 저하, 약 65% 저하 내지 약 75% 저하, 약 65% 내지 약 70% 저하, 약 70% 저하 내지 약 99% 저하, 약 70% 저하 내지 약 95% 저하, 약 70% 저하 내지 약 90% 저하, 약 70% 저하 내지 약 85% 저하, 약 70% 저하 내지 약 80% 저하, 약 70% 저하 내지 약 75% 저하, 약 75% 저하 내지 약 99% 저하, 약 75% 저하 내지 약 95% 저하, 약 75% 저하 내지 약 90% 저하, 약 75% 저하 내지 약 85% 저하, 약 75% 저하 내지 약 80% 저하, 약 80% 저하 내지 약 99% 저하, 약 80% 저하 내지 약 95% 저하, 약 80% 저하 내지 약 90% 저하, 약 80% 저하 내지 약 85% 저하, 약 85% 저하 내지 약 99% 저하, 약 85% 저하 내지 약 95% 저하, 약 85% 저하 내지 약 90% 저하, 약 90% 저하 내지 약 99% 저하, 약 90% 저하 내지 약 95% 저하, 또는 약 95% 저하 내지 약 99% 저하)를 초래할 수 있다.
이들 방법의 일부 예에서, 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있다. 감염성 질환의 비제한적인 예는 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 대상체에서 감염 역가(infectious titer)(예를 들어, 바이러스 역가)의 저하를(예를 들어, 치료 전의 대상체에서의 감염 역가와 비교하여) 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 대상체에서 감염성 질환(예를 들어, 바이러스 감염)의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도의 감소를(예를 들어, 치료 전의 대상체에서의 감염성 질환의 하나 이상의 증상의 수, 중증도, 또는 빈도와 비교하여) 초래할 수 있다.
용어 "대상체"는 임의의 포유류를 지칭한다. 일부 구현예에서, 대상체 또는 "치료를 필요로 하는 대상체"는 개과(예를 들어, 개), 고양이과(예를 들어, 고양이), 말과(예를 들어, 말), 양, 소, 돼지, 염소, 영장류, 예를 들어, 시미안(simian)(예를 들어, 원숭이(예를 들어, 마모셋(marmoset), 개코원숭이(baboon)), 또는 유인원(예를 들어, 고릴라, 침팬지, 오랑우탄, 또는 긴팔원숭이(gibbon)) 또는 인간, 또는 설치류(예를 들어, 마우스, 기니피그, 햄스터, 또는 래트)일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체 또는 "치료를 필요로 하는 대상체"는 비-인간 포유류일 수 있으며, 특히 인간에서 치료적 효능을 실증하기 위한 모델로서 통상적으로 사용되는 포유류(예를 들어, 뮤린, 토끼(lapine), 돼지, 개과 또는 영장류 동물)가 이용될 수 있다.
암 세포, 감염된 세포, 또는 노화 세포를 사멸화시키는 방법
암세포 또는 노화 세포의 사멸화를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 대상체)에서 암세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 유형의 암), 감염된 세포(예를 들어, 본원에 기재되어 있거나 당업계에 알려져 있는 임의의 예시적인 바이러스로 감염된 세포), 또는 노화 세포(예를 들어, 노화 암세포, 노화 섬유모세포, 또는 노화 내피 세포)를 사멸화시키는 방법이 또한 본원에 제공되며, 상기 방법은 치료적 유효량의 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 본원에 기재된 임의의 조성물(예를 들어, 약학적 조성물)을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
이들 방법의 일부 구현예에서, 대상체는 암을 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있다. 암의 비제한적인 예는 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종을 포함한다.
이들 방법의 일부 예에서, 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖고 있는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있다. 나이-관련 질환 및 병태의 비제한적인 예는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애를 포함한다.
이들 방법의 일부 예에서, 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있다. 감염성 질환의 비제한적인 예는 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염을 포함한다.
노화 세포
노화는 표현형 변화, 세포자멸사에 대한 저항성 및 손상-감지 신호화 경로의 활성화에 의해 동반되는 비가역적인 성장 억제 형태이다. 세포 노화는 증식 능력을 상실하여 약 50 집단 배가(population doubling)(헤이플릭 한계(Hayflick limit)로 지칭됨) 후 영구 억제(permanent arrest)에 도달한 배양된 인간 섬유모세포에서 최초로 기재되었다. 노화는 산화적 및 유전자독성(genotoxic) 스트레스, DNA 손상, 텔로미어 마모(attrition), 종양원성(oncogenic) 활성화, 미토콘드리아 기능장애, 또는 화학치료제를 포함하여 광범위한 내인성 공격(insult) 및 외인성 공격에 의해 유도될 수 있는 스트레스 반응으로 간주된다.
노화 세포는 대사적으로 활성적으로 남아 있고, 이들 세포의 분비 표현형을 통해 조직 항상성, 질환 및 노화에 영향을 미칠 수 있다. 노화는 생리학적 과정으로서 간주되고, 상처 치유, 조직 항상성, 재생, 및 섬유증 조절을 촉진하는 데 중요하다. 예를 들어, 노화 세포의 일시적인 유도는 상처 치유 동안 관찰되고, 상처 해소(resolution)에 기여한다. 아마도 노화의 가장 중요한 역할 중 하나는 종양 억제에서의 노화의 역할이다. 그러나, 노화 세포의 축적은 또한, 나이- 및 나이-관련 질환 및 병태를 유발한다. 노화 표현형은 또한, 만성 염증 반응을 촉발하고 결과적으로 만성 염증 병태를 악화시켜(augment) 종양 성장을 촉진할 수 있다. 노화와 나이먹음(aging) 사이의 연관성은 처음에, 노화 세포가 나이먹은 조직에서 축적된다는 관찰에 기초하였다. 유전자이식(trasngenic) 모델의 사용은 많은 나이-관련 병상(pathology)에서 노하 세포를 전신적으로 검출할 수 있게 하였다. 노화 세포를 선택적으로 제거하기 위한 전략은, 노화 세포가 사실상 나이먹음 및 관련 병상에서 인과 관계 역할을 할 수 있음을 실증하였다.
노화 세포는 형태, 염색질 구조화, 유전자 발현, 및 대사에서의 변화를 포함하는 중요하고 독특한 특성을 나타낸다. 세포적 노화와 관련된 생화학적 특성 및 기능적 특성, 예컨대 (i) 사이클린-의존적 키나제의 저해제인 p16 및 p21의 증가된 발현, (ii) 리소좀 활성의 마커인 노화-관련 β-갈락토시다제의 존재, (iii) 노화-관련 이질염색질 좌(loci)의 출현 및 라민 B1 수준의 하향조절, (iv) 항-세포자멸사 BCL-패밀리 단백질의 증가된 발현에 의해 야기되는 세포자멸사에 대한 내성, 및 (v) CD26(DPP4), CD36(스캐빈저 수용체), 포크헤드 박스 4(FOXO4), 및 분비형 담체 막 단백질 4(SCAMP4)의 상향조절이 존재한다. 노화 세포는 또한, 소위 노화-관련 분비 표현형(SASP)인 염증 시그너처를 발현한다. SASP를 통해, 노화 세포는, 노화를 보강하고(자가분비(autocrine) 효과) 미세환경과 소통하며 이를 변형시키는(측분비(paracrine) 효과) 세포-자율 방식으로 작동하는 광범위한 염증성 사이토카인(IL-6, IL-8), 성장 인자(TGF-β), 케모카인(CCL-2), 및 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP-3, MMP-9)를 생성한다. SASP 인자는 노화 세포의 면역-매개 청소인 노화 감시를 촉발함으로써 종양 억제에 기여할 수 있다. 그러나, 만성 염증 또한 종양발생의 기지의 유발자이고, 축적중인 증거는 만성 SASP가 또한 암 및 나이-관련 질환을 증강시킬 수 있음을 나타낸다.
노화 세포의 분비 프로파일은 컨텍스트(context) 의존적이다. 예를 들어, 인간 섬유모세포에서 상이한 미토콘드리아 기능장애에 의해 유도되는 미토콘드리아 기능장애-관련 노화(MiDAS)는 IL-1-의존적 염증 인자가 부족한 SASP의 출현을 유발하였다. NAD+/NADH 비의 저하는 AMPK 신호화를 활성화시켰으며, 이는 p53의 활성화를 통해 MiDAS를 유도하였다. 그 결과, p53은 전-염증성 SASP의 중요한 유도인자인 NF-κB 신호화를 저해하였다. 대조적으로, 인간 세포에서 지속적인 DNA 손상에 의해 야기되는 세포 노화는 염증성 SASP를 유도하였으며, 이는 p53이 아니라 운동실조-모세혈관확장증 돌연변이화된(ATM: ataxia-telangiectasia mutated) 키나제의 활성화에 의존하였다. 특히, IL-6 및 IL-8의 발현 및 분비 수준은 증가되었다. 이소성(ectopic) 발현 p16INK4a 및 p21CIP1에 의해 야기된 세포 노화는 염증성 SASP 없이 인간 섬유모세포에서 노화 표현형을 유도하였으며, 이는 성장 억제 자체가 SASP를 자극시키지 않았음을 나타내는 것이 또한 실증되었다.
노화의 가장 규정적인(defining) 특징 중 하나는 안정한 성장 억제이다. 이는 2개의 중요한 경로인 p16/Rb 및 p53/p21에 의해 달성되며, 둘 다 종양 억제에서 중심적이다. DNA 손상은 (1) 염색질에서 γH2Ax(히스톤 코딩 유전자) 및 53BP1(DNA 손상 반응에 관여함)의 높은 침착을 초래하며: 이는 키나제 캐스케이드의 활성화를 유발하여 결국 p53 활성화를 초래하고, (2) p16INK4a 및 ARF(둘 다 CDKN2A에 의해 인코딩됨) 및 P15INK4b(CDKN2B에 의해 인코딩됨)의 활성화를 초래하며: p53은 사이클린-의존적 키나제 저해제(p21)의 전사를 유도하고, p16INK4a와 p15INK4b 둘 다와 함께 세포 주기 진행을 위한 유전자(CDK4 및 CDK6)를 차단시킨다. 이는 결국 망막모세포종 단백질(Rb)의 과소인산화(hypophosphorylation) 및 G1 기에서 세포 주기 억제를 유발한다.
노화 세포의 선택적인 사멸화는 정상적인 나이먹음의 맥락에서 마우스의 건강 수명(health span)을 유의하게 향상시키는 것으로 나타났으며 나이-관련 질환 또는 암 치료법의 결과를 호전시킨다(문헌[Ovadya, J Clin Invest. 128(4):1247-1254, 2018]). 자연상에서, 노화 세포는 내재 면역(innate immune) 세포에 의해 정상적으로 제거된다. 노화의 유도는 손상된/변경된 세포의 잠재적인 증식 및 형질전환을 방지할 뿐만 아니라, 주로 자연 살해(NK) 세포(예컨대 IL-15 및 CCL2) 및 대식세포(예컨대 CFS-1 및 CCL2)에 대해 화학주성인자(chemoattractant)로서 작용하는 SASP 인자의 생성을 통한 조직 복구를 선호한다. 이들 내재 면역 세포는 스트레스를 받은 세포를 제거하기 위한 면역감시 기전을 매개한다. 노화 세포는 통상, NK-세포 활성화 수용체 NKG2D 및 DNAM1 리간드를 상향조절하며, 상기 리간드는 스트레스-유도성 리간드: 감염성 질환 및 악성물에 대한 최전방 면역 방어의 중요한 구성요소의 패밀리에 속한다. 수용체 활성화 시, NK 세포는 그 후에 노화 세포의 사멸을 이들 세포의 세포용해 머시너리를 통해 특이적으로 유도할 수 있다. 노화 세포의 면역 감시에서 NK 세포의 역할은 간 섬유증(문헌[Sagiv, Oncogene 32(15): 1971-1977, 2013]), 간세포 암종(문헌[Iannello, J Exp Med 210(10): 2057-2069, 2013]), 다발성 골수종(문헌[Soriani, Blood 113(15): 3503-3511, 2009]), 및 메발로네이트(mevalonate) 경로의 기능장애에 의해 스트레스를 받는 신경교종 세포(문헌[Ciaglia, Int J Cancer 142(1): 176-190, 2018])에서 주목되었다. 자궁내막 세포는 급성 세포 노화를 겪고, 탈락막(decidual) 세포로 분화되지 않는다. 분화된 탈락막 세포는 IL-15를 분비하여, 자궁 NK 세포를 표적으로 동원시키고 미분화된 노화 세포를 제거하므로, 자궁내막의 재건(re-model) 및 회춘(rejuvenate)을 돕는다(문헌[Brighton, Elife 6: e31274, 2017]). 유사한 기전을 이용하여, 간 섬유증 동안, p53-발현 노화 간 위성 세포(satellite cell)는, 전-염증성 M1 표현형으로 향하는 체류하는 쿠퍼 대식세포 및 새로 침윤된 대식세포의 분극화를 회피하였으며(skew), 이는 노화세포용해(senolytic) 활성을 나타낸다. F4/80+ 대식세포는 분만후 자궁 기능을 유지시키기 위해 마우스 자궁 노화 세포의 청소에서 주요 역할을 하는 것으로 나타났다.
노화 세포는 NKG2D(NK 세포 상에서 발현됨), 케모카인, 및 다른 SASP 인자에 대한 리간드를 주로 상향조절함으로써 NK 세포를 동원한다. 간 섬유증의 생체내 모델은 활성화된 NK 세포에 의한 노화 세포의 효과적인 청소를 나타내었다(문헌[Krizhanovsky, Cell 134(4): 657-667, 2008]). 연구는 간 섬유증(문헌[Krizhanovsky, Cell 134(4): 657-667, 2008]), 골관절염(문헌[Xu, J Gerontol A Biol Sci Med Sci 72(6): 780-785, 2017]), 및 파킨슨 질환(문헌[Chinta, Cell Rep 22(4): 930-940, 2018])을 포함하여 노화를 연구하기 위한 다양한 모델을 기재하였다. 노화 세포를 연구하기 위한 동물 모델은 문헌[Krizhanovsky, Cell 134(4): 657-667, 2008]; 문헌[Baker, Nature 479(7372): 232-236, 2011]; 문헌[Farr, Nat Med 23(9): 1072-1079, 2017]; 문헌[Bourgeois, FEBS Lett 592(12): 2083-2097, 2018]; 문헌[Xu, Nat Med 24(8): 1246-1256, 2018)]에 기재되어 있다.
추가 치료제
본원에 기재된 임의의 방법의 일부 구현예는 치료적 유효량의 하나 이상의 추가 치료제를 대상체(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 대상체)에게 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 하나 이상의 추가 치료제는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드) 또는 면역 세포와 실질적으로 동시에 대상체에게 투여(예를 들어, 단일 제형 또는 2개 이상의 제형으로서 대상체에게 투여)될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료제는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드) 또는 면역 세포의 투여 전에 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료제는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(예를 들어, 본원에 기재된 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드) 또는 면역 세포가 대상체에게 투여된 후에 대상체에게 투여될 수 있다.
추가 치료제의 비제한적인 예는 항암 약물, 활성화 수용체 작용제, 면역 체크포인트 저해제, HLA-특이적 저해 수용체를 차단하기 위한 제제, 글루코겐 신타제 키나제(GSK) 3 저해제, 및 항체를 포함한다.
항암 약물의 비제한적인 예는 항대사 약물(예를 들어, 5-플루오로우라실(5-FU: 5-fluorouracil), 6-머캅토퓨린(6-MP: 6-mercaptopurine), 카페시타빈(capecitabine), 시타라빈(cytarabine), 플록수리딘(floxuridine), 플루다라빈(fludarabine), 겜시타빈(gemcitabine), 하이드록시카르바마이드(hydroxycarbamide), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 클라드리빈(cladribine), 넬라라빈(nelarabine), 펜토스타틴(pentostatin), 또는 페메트렉세드(pemetrexed)), 식물 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴(vinblastine), 빈크리스틴(vincristine), 빈데신(vindesine), 캄토테신(camptothecin), 9-메톡시캄토테신, 코로나리딘(coronaridine), 택솔(taxol), 나우클레아오랄스(naucleaorals), 디프레닐화된 인돌 알칼로이드(diprenylated indole alkaloid), 몬타민(montamine), 쉬시키니인(schischkiniin), 프로토베르베린(protoberberine), 베르베린, 산귀나린(sanguinarine), 켈레리트린(chelerythrine), 켈리도닌(chelidonine), 리리오데닌(liriodenine), 클리보린(clivorine), β-카르볼린(carboline), 안토핀(antofine), 틸로포린(tylophorine), 크립톨레핀(cryptolepine), 네오크립톨레핀, 코리놀린(corynoline), 삼판긴(sampangine), 카르바졸(carbazole), 크리나민(crinamine), 몬타닌(montanine), 엘립티신(ellipticine), 파클리탁셀(paclitaxel), 도세탁셀(docetaxel), 에토포사이드(etoposide), 테니포사이드(tenisopide), 이리노테칸(irinotecan), 토포테칸(topotecan), 또는 아크리돈 알칼로이드), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 락타시스틴(lactacystin), 디설피람(disulfiram), 에피갈로카테킨-3-갈레이트(epigallocatechin-3-gallate), 마리조밉(marizomib)(살리노스포라마이드 A(salinosporamide A)), 오프로조밉(oprozomib)(ONX-0912), 델란조밉(delanzomib)(CEP-18770), 에폭소미신(epoxomicin), MG132, 베타-하이드록시 베타-메틸부티레이트, 보르테조밉(bortezomib), 카르필조밉(carfilzomib), 또는 익사조밉(ixazomib)), 항종양 항생제(예를 들어, 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 에피루비신(epirubicin), 미톡산트론(mitoxantrone), 이다루비신(idarubicin), 액티노마이신(actinomycin), 플리카마이신(plicamycin), 미토마이신(mitomycin), 또는 블레오마이신(bleomycin)), 히스톤 데아세틸라제 저해제(예를 들어, 보리노스탓(vorinostat), 파노비노스탓(panobinostat), 벨리노스탓(belinostat), 기비노스탓(givinostat), 아벡시노스탓(abexinostat), 뎁시펩타이드(depsipeptide), 엔티노스탓(entinostat), 페닐 부티레이트, 발프로산(valproic acid), 트리코스타틴 A(trichostatin A), 다시노스탓(dacinostat), 모세티노스탓(mocetinostat), 프라시노스탓(pracinostat), 니코틴아미드(nicotinamide), 캄비놀(cambinol), 테노빈 1(tenovin 1), 테노빈 6, 시르티놀(sirtinol), 리콜리노스탓(ricolinostat), 테피노스탓(tefinostat), 케베트린(kevetrin), 퀴시노스탓(quisinostat), 레스미노스탓(resminostat), 타세디날린(tacedinaline), 키다마이드(chidamide), 또는 셀리시스탓(selisistat)), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, 악시티닙(axitinib), 다사티닙(dasatinib), 엔코라피닙(encorafinib), 에를로티닙(erlotinib), 이마티닙(imatinib), 닐로티닙(nilotinib), 파조파닙(pazopanib), 및 수니티닙(sunitinib)), 및 화학치료제(예를 들어, 올-트랜스(all-trans) 레티노산, 아자시티딘(azacitidine), 아자티오프린(azathioprine), 독시플루리딘(doxifluridine), 에포틸론(epothilone), 하이드록시우레아, 이마티닙(imatinib), 테니포사이드(teniposide), 티오구아닌(tioguanine), 발루비신(valrubicin), 베무라페닙(vemurafenib), 및 레날리도마이드(lenalidomide))을 포함한다. 화학치료제의 추가 예는 알킬화제, 예를 들어, 메클로레타민(mechlorethamine), 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 클로람부실(chlorambucil), 멜팔란(melphalan), 이포스파미드(ifosfamide), 티오테파(thiotepa), 헥사메틸멜라민, 부설판(busulfan), 알트레타민(altretamine), 프로카바진(procarbazine), 다카바진(dacarbazine), 테모졸로마이드(temozolomide), 카르무스틴(carmustine), 루무스틴(lumustine), 스트렙토조신(streptozocin), 카르보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 및 옥살리플라틴(oxaliplatin)을 포함한다.
활성화 수용체 작용제의 비제한적인 예는 항-CD16 항체(예를 들어, 항-CD16/CD30 이중특이적 모노클로날 항체(BiMAb)) 및 Fc-기초 융합 단백질을 포함하여 NK 세포의 세포독성을 활성화시키고 증강시키는 활성화 수용체에 대한 임의의 작용제를 포함한다. 체크포인트 저해제의 비제한적인 예는 항-PD-1 항체(예를 들어, MEDI0680), 항-PD-L1 항체(예를 들어, BCD-135, BGB-A333, CBT-502, CK-301, CS1001, FAZ053, KN035, MDX-1105, MSB2311, SHR-1316, 항-PD-L1/CTLA-4 이중특이적 항체 KN046, 항-PD-L1/TGFβRII 융합 단백질 M7824, 항-PD-L1/TIM-3 이중특이적 항체 LY3415244, 아테졸리주맙(atezolizumab), 또는 아벨루맙(avelumab)), 항-TIM3 항체(예를 들어, TSR-022, Sym023, 또는 MBG453) 및 항-CTLA-4 항체(예를 들어, AGEN1884, MK-1308, 또는 항-CTLA-4/OX40 이중특이적 항체 ATOR-1015)를 포함한다. HLA-특이적 저해 수용체를 차단하기 위한 제제의 비제한적인 예는 모날리주맙(monalizumab)(예를 들어, 항-HLA-E NKG2A 저해 수용체 모노클로날 항체)을 포함한다. GSK3 저해제의 비제한적인 예는 티데글루십(tideglusib) 또는 CHIR99021을 포함한다. 추가 치료제로서 사용될 수 있는 항체의 비제한적인 예는 항-CD26 항체(예를 들어, YS110), 항-CD36 항체, 및 NK 세포 상의 Fc 수용체(예를 들어, CD16)에 결합하고 이를 활성화시킬 수 있는 임의의 다른 항체 또는 항체 작제물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 인슐린 또는 메트포르민(metformin)일 수 있다.
실시예
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 기재되며, 이 실시예는 청구항에 기재된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.
실시예 1. 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성
항-CD3 scFv인 제1 표적-결합 도메인, 가용성 인간 조직 인자 도메인, 및 항-CD28 scFv인 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 생성되었다(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(도 1). 이 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 핵산 및 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(SEQ ID NO: 4)
(신호 펩타이드)
ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCTTATTATTTTTATTCAGCTCCGCCTATTCC
(αCD3 경쇄 가변 영역)
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(링커)
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(αCD3 중쇄 가변 영역)
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(인간 조직 인자 219 형태)
TCCGGCACCACCAATACCGTGGCCGCTTATAACCTCACATGGAAGAGCACCAACTTCAAGACAATTCTGGAATGGGAACCCAAGCCCGTCAATCAAGTTTACACCGTGCAGATCTCCACCAAATCCGGAGACTGGAAGAGCAAGTGCTTCTACACAACAGACACCGAGTGTGATTTAACCGACGAAATCGTCAAGGACGTCAAGCAAACCTATCTGGCTCGGGTCTTTTCCTACCCCGCTGGCAATGTCGAGTCCACCGGCTCCGCTGGCGAGCCTCTCTACGAGAATTCCCCCGAATTCACCCCTTATTTAGAGACCAATTTAGGCCAGCCTACCATCCAGAGCTTCGAGCAAGTTGGCACCAAGGTGAACGTCACCGTCGAGGATGAAAGGACTTTAGTGCGGCGGAATAACACATTTTTATCCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGACCTCATCTACACACTGTACTATTGGAAGTCCAGCTCCTCCGGCAAAAAGACCGCTAAGACCAACACCAACGAGTTTTTAATTGACGTGGACAAAGGCGAGAACTACTGCTTCAGCGTGCAAGCCGTGATCCCTTCTCGTACCGTCAACCGGAAGAGCACAGATTCCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG
(αCD28 경쇄 가변 영역)
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(링커)
GGAGGCGGAGGCTCCGGCGGAGGCGGATCTGGCGGTGGCGGCTCC
(αCD28 경쇄 가변 영역)
GACATCGAGATGACCCAGTCCCCCGCTATCATGTCCGCCTCTTTAGGCGAGCGGGTCACAATGACTTGTACAGCCTCCTCCAGCGTCTCCTCCTCCTACTTCCATTGGTACCAACAGAAACCCGGAAGCTCCCCTAAACTGTGCATCTACAGCACCAGCAATCTCGCCAGCGGCGTGCCCCCTAGGTTTTCCGGAAGCGGAAGCACCAGCTACTCTTTAACCATCTCCTCCATGGAGGCTGAGGATGCCGCCACCTACTTTTGTCACCAGTACCACCGGTCCCCCACCTTCGGAGGCGGCACCAAACTGGAGACAAAGAGG
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(αCD3scFv/TF/αCD28scFv)(SEQ ID NO: 3)
(신호 펩타이드)
MKWVTFISLLFLFSSAYS
(αCD3 경쇄 가변 영역)
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(링커)
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(αCD3 중쇄 가변 영역)
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(인간 조직 인자 219)
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(αCD28 경쇄 가변 영역)
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(링커)
GGGGSGGGGSGGGGS
(αCD28 중쇄 가변 영역)
DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR
항-CD28 scFv인 제1 표적-결합 도메인, 가용성 인간 조직 인자 도메인, 및 항-CD3 scFv인 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 제2 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 생성되었다(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(도 2). 이 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 핵산 및 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(SEQ ID NO: 8)
(신호 펩타이드)
ATGAAATGGGTCACCTTCATCTCTTTACTGTTTTTATTTAGCAGCGCCTACAGC
(αCD28 경쇄 가변 영역)
GTGCAGCTGCAGCAGTCCGGACCCGAACTGGTCAAGCCCGGTGCCTCCGTGAAAATGTCTTGTAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCTCCTACGTCATCCAATGGGTGAAGCAGAAGCCCGGTCAAGGTCTCGAGTGGATCGGCAGCATCAATCCCTACAACGATTACACCAAGTATAACGAAAAGTTTAAGGGCAAGGCCACTCTGACAAGCGACAAGAGCTCCATTACCGCCTACATGGAGTTTTCCTCTTTAACTTCTGAGGACTCCGCTTTATACTATTGCGCTCGTTGGGGCGATGGCAATTATTGGGGCCGGGGAACTACTTTAACAGTGAGCTCC
(링커)
GGCGGCGGCGGAAGCGGAGGTGGAGGATCTGGCGGTGGAGGCAGC
(αCD28 중쇄 가변 영역)
GACATCGAGATGACACAGTCCCCCGCTATCATGAGCGCCTCTTTAGGAGAACGTGTGACCATGACTTGTACAGCTTCCTCCAGCGTGAGCAGCTCCTATTTCCACTGGTACCAGCAGAAACCCGGCTCCTCCCCTAAACTGTGTATCTACTCCACAAGCAATTTAGCTAGCGGCGTGCCTCCTCGTTTTAGCGGCTCCGGCAGCACCTCTTACTCTTTAACCATTAGCTCTATGGAGGCCGAAGATGCCGCCACATACTTTTGCCATCAGTACCACCGGTCCCCTACCTTTGGCGGAGGCACAAAGCTGGAGACCAAGCGG
(인간 조직 인자 219 형태)
AGCGGCACCACCAACACAGTGGCCGCCTACAATCTGACTTGGAAATCCACCAACTTCAAGACCATCCTCGAGTGGGAGCCCAAGCCCGTTAATCAAGTTTATACCGTGCAGATTTCCACCAAGAGCGGCGACTGGAAATCCAAGTGCTTCTATACCACAGACACCGAGTGCGATCTCACCGACGAGATCGTCAAAGACGTGAAGCAGACATATTTAGCTAGGGTGTTCTCCTACCCCGCTGGAAACGTGGAGAGCACCGGATCCGCTGGAGAGCCTTTATACGAGAACTCCCCCGAATTCACCCCCTATCTGGAAACCAATTTAGGCCAGCCCACCATCCAGAGCTTCGAACAAGTTGGCACAAAGGTGAACGTCACCGTCGAAGATGAGAGGACTTTAGTGCGGAGGAACAATACATTTTTATCCTTACGTGACGTCTTCGGCAAGGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCTAGCTCCTCCGGCAAGAAGACCGCCAAGACCAATACCAACGAATTTTTAATTGACGTGGACAAGGGCGAGAACTACTGCTTCTCCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACAGTGAACCGGAAGTCCACCGACTCCCCCGTGGAGTGCATGGGCCAAGAGAAGGGAGAGTTTCGTGAG
(αCD3 경쇄 가변 영역)
CAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCCGCTATTATGAGCGCTAGCCCCGGTGAAAAGGTGACTATGACATGCAGCGCCAGCTCTTCCGTGAGCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAGTCCGGCACCAGCCCTAAAAGGTGGATCTACGACACCAGCAAGCTGGCCAGCGGCGTCCCCGCTCACTTTCGGGGCTCCGGCTCCGGAACAAGCTACTCTCTGACCATCAGCGGCATGGAAGCCGAGGATGCCGCTACCTATTACTGTCAGCAGTGGAGCTCCAACCCCTTCACCTTTGGATCCGGCACCAAGCTCGAGATTAATCGT
(링커)
GGAGGCGGAGGTAGCGGAGGAGGCGGATCCGGCGGTGGAGGTAGC
(αCD3 중쇄 가변 영역)
CAAGTTCAGCTCCAGCAAAGCGGCGCCGAACTCGCTCGGCCCGGCGCTTCCGTGAAGATGTCTTGTAAGGCCTCCGGCTATACCTTCACCCGGTACACAATGCACTGGGTCAAGCAACGGCCCGGTCAAGGTTTAGAGTGGATTGGCTATATCAACCCCTCCCGGGGCTATACCAACTACAACCAGAAGTTCAAGGACAAAGCCACCCTCACCACCGACAAGTCCAGCAGCACCGCTTACATGCAGCTGAGCTCTTTAACATCCGAGGATTCCGCCGTGTACTACTGCGCTCGGTACTACGACGATCATTACTGCCTCGATTACTGGGGCCAAGGTACCACCTTAACAGTCTCCTCC
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(αCD28scFv/TF/αCD3scFv)(SEQ ID NO: 7)
(신호 펩타이드)
MKWVTFISLLFLFSSAYS
(αCD28 경쇄 가변 영역)
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(링커)
GGGGSGGGGSGGGGS
(αCD28 중쇄 가변 영역)
DIEMTQSPAIMSASLGERVTMTCTASSSVSSSYFHWYQQKPGSSPKLCIYSTSNLASGVPPRFSGSGSTSYSLTISSMEAEDAATYFCHQYHRSPTFGGGTKLETKR
(인간 조직 인자 219)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
(αCD3 경쇄 가변 영역)
QIVLTQSPAIMSASPGEKVTMTCSASSSVSYMNWYQQKSGTSPKRWIYDTSKLASGVPAHFRGSGSGTSYSLTISGMEAEDAATYYCQQWSSNPFTFGSGTKLEINR
(링커)
GGGGSGGGGSGGGGS
(αCD3 중쇄 가변 영역)
QVQLQQSGAELARPGASVKMSCKASGYTFTRYTMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSRGYTNYNQKFKDKATLTTDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARYYDDHYCLDYWGQGTTLTVSS
αCD3scFv/TF/αCD28scFv를 인코딩하는 핵산을 이전에 기재된 바와 같이 변형된 레트로바이러스 발현 벡터 내로 클로닝하였다(문헌[Hughes 등, Hum Gene Ther 16:457―72, 2005]). αCD3scFv/TF/αCD28scFv를 인코딩하는 발현 벡터를 CHO-K1 세포 내로 형질주입하였다. CHO-K1 세포에서 발현 벡터의 공동-발현은 가용성 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(3t28로 지칭됨)의 분비를 가능하게 하였으며, 이는 항-TF 항체 친화도 및 다른 크로마토그래피 방법에 의해 정제될 수 있다.
항-조직 인자 항체 친화도 컬럼을 사용하여, αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 정제하였다. 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼을 GE Healthcare AKTA Avant 시스템에 연결하였다. 유속이 2 mL/분인 용출 단계를 제외하고는, 모든 단계에 대해 4 mL/분의 유속을 사용하였다.
αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 세포 배양 수합물을 1 M Tris 염기를 이용하여 pH 7.4로 조정하고, 5 컬럼 부피의 PBS로 평형화된 항-TF 항체 친화도 컬럼(상기 기재됨) 상으로 로딩하였다. 시료를 로딩한 후, 컬럼을 5 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 뒤이어 6 컬럼 부피의 0.1 M 아세트산, pH 2.9로 용출하였다. A280 용출 피크를 수집한 다음, 1 M Tris 염기를 첨가함으로써 pH 7.5 내지 8.0으로 중화시켰다. 그 후에, 30 KDa 분자량 컷오프와 함께 Amicon 원심분리 필터를 사용하여, 중화된 시료를 PBS로 완충제 교환하였다. 도 2의 데이터는, 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼이, 인간 가용성 조직 인자 도메인을 함유하는 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드에 결합할 수 있음을 나타낸다. 완충제-교환된 단백질 시료를 추가의 생화학적 분석 및 생물학적 활성 시험을 위해 2℃ 내지 8℃에 보관하였다.
각각의 용출 후, 6 컬럼 부피의 0.1 M 글리신, pH 2.5를 사용하여 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼을 박리시켰다. 그 후에, 컬럼을 10 컬럼 부피의 PBS, 0.05% NaN3를 사용하여 중화시키고, 2℃ 내지 8℃에 보관하였다.
αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 상에서, AKTA Avant 단백질 정제 시스템(GE Healthcare)에 연결된 Superdex 200 Increase 10/300 GL 겔 여과 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 수행하였다. 상기 컬럼을 2 컬럼 부피의 PBS로 평형화시켰다. 0.8 mL/분의 유속을 사용하였다. 200 μL의 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(1 mg/mL)를 모세관 루프를 사용하여 컬럼 상으로 주사하였다. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 주사 후, 1.25 컬럼 부피의 PBS를 컬럼 내로 유동시켰다. SEC 크로마토그래프를 도 3에 도시한다. 데이터는, αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 단량체 형태 및 이량체 형태 또는 다른 상이한 형태를 나타내는 것 같은 3개의 단백질 피크가 존재함을 나타낸다.
αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 순도 및 단백질 분자량을 결정하기 위해, 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼으로부터의 정제된 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단백질 시료를, 환원된 조건 하에 표준 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔(4% 내지 12% NuPage Bis-Tris 겔) 전기영동(SDS-PAGE) 방법에 의해 분석하였다. 상기 겔을 InstantBlue로 약 30분 동안 염색시키고, 뒤이어 정제수에서 밤새 탈색시켰다. 도 4는 항-조직 인자 항체 친화도 컬럼을 사용하여 정제된 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 SDS 겔을 도시한다. 결과는, 정제된 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 환원된 SDS 겔에서 예상된 분자량(72 kDa)을 가짐을 나타낸다.
실시예 2. αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 기능적 특징화
ELISA-기초 방법은 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 형성을 확인시켜 주었다. 포착을 위한 하나의 항-TF 모노클로날 항체 및 검출을 위한 상이한 항-TF 모노클로날 항체를 이용하는 ELISA를 사용하여 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 검출하였다(도 5). 유사한 농도의 정제된 조직 인자 단백질을 대조군으로서 사용하였다.
추가의 시험관내 방법을 수행하여, αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 활성화시킬 수 있는지의 여부를 결정하였다. 신선한 인간 림프구를 혈액 은행으로부터 수득하고, 밀도 구배 Histopaque(Sigma)를 사용하여 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 단리하였다. 세포를 96웰 편평 바닥 플레이트에서 0.2 mL의 완전 배지(2 mM L-글루타민(Thermo Life Technologies), 페니실린(Thermo Life Technologies), 스트렙토마이신(Thermo Life Technologies), 및 10% FBS(Hyclone)가 보충된 RPMI 1640(Gibco))에서 0.2 x 106/mL에서 카운팅하고 재현탁시켰다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 3일 동안 0.01 nM 내지 1000 nM의 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로 자극시켰다. 72시간 후, 세포를 수합하고, CD4-488, CD8-PerCP Cy5.5, CD25-BV421, CD69-APCFire750, CD62L-PE Cy7, 및 CD44-PE(Biolegend)에 대해 30분 동안 표면 염색하였다. 표면 염색 후, 세포를 FACS 완충액(0.5% BSA(EMD Millipore) 및 0.001% 소듐 아자이드(Sigma)를 포함하는 1X PBS(Hyclone))에서 세척하였다(실온에서 1500 RPM에서 5분 동안). 2회의 세척 후, 세포를 300 μL의 FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포분석법(Celesta-BD Bioscience)에 의해 분석하였다. 도 6및 도 7의 데이터는, αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 CD8+ T-세포와 CD4+ T-세포 둘 다를 자극시킬 수 있음을 나타낸다.
추가의 실험을 수행하였으며, 이 실험에서 Histopaque(Sigma)를 사용하여 혈액으로부터 단리된 PBMC를 96웰 편평 바닥 플레이트에서 0.2 mL의 완전 배지(2 mM L-글루타민(Thermo Life Technologies), 페니실린(Thermo Life Technologies), 스트렙토마이신(Thermo Life Technologies), 및 10% FBS(Hyclone)가 보충된 RPMI 1640(Gibco))에서 0.2 x 106/mL에서 카운팅하고 재현탁시켰다. 그 후에, 세포를 37℃, 5% CO2에서 3일 동안 0.01 nM 내지 1000 nM의 αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로 자극시켰다. 72시간 후, 세포를 수합하고, CD4-488, CD8-PerCP Cy5.5, CD25-BV421, CD69-APCFire750, CD62L-PE Cy7, 및 CD44-PE(Biolegend)에 대해 30분 동안 표면 염색하였다. 표면 염색 후, 세포를 FACS 완충액(0.5% BSA(EMD Millipore) 및 0.001% 소듐 아자이드(Sigma)를 포함하는 1X PBS(Hyclone))에서 세척하였다(실온에서 1500 RPM에서 5분 동안). 2회의 세척 후, 세포를 300 μL의 FACS 완충액에 재현탁시키고, 유세포분석법(Celesta-BD Bioscience)에 의해 분석하였다. 데이터는 다시, αCD3scFv/TF/αCD28scFv 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 CD4+ T-세포의 활성화를 자극시킬 수 있었음을 나타낸다(도 8).
실시예 3. 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 IL-2/TF/IL-2의 생성 및 특징화
IL-2 수용체에 결합하는 제1 표적-결합 도메인, 가용성 인간 조직 인자 도메인, 및 IL-2 수용체에 결합하는 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 생성되었다(IL-2/TF/IL-2)(도 9). 이 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 핵산 및 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산(IL-2/TF/IL-2)(SEQ ID NO: 111)
(신호 펩타이드)
ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC
(제1 IL-2 단편)
GCCCCCACCTCCTCCTCCACCAAGAAGACCCAGCTGCAGCTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTAAACGGCATCAACAACTACAAGAACCCCAAGCTGACTCGTATGCTGACCTTCAAGTTCTACATGCCCAAGAAGGCCACCGAGCTGAAGCATTTACAGTGTTTAGAGGAGGAGCTGAAGCCCCTCGAGGAGGTGCTGAATTTAGCCCAGTCCAAGAATTTCCATTTAAGGCCCCGGGATTTAATCAGCAACATCAACGTGATCGTTTTAGAGCTGAAGGGCTCCGAGACCACCTTCATGTGCGAGTACGCCGACGAGACCGCCACCATCGTGGAGTTTTTAAATCGTTGGATCACCTTCTGCCAGTCCATCATCTCCACTTTAACC
(인간 조직 인자 219 형태)
AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG
(제2 IL-2 단편)
GCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCTACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAATTAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTTTTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAGAAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGCAAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTAATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATATGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTACCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTAACT
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(IL-2/TF/IL-2)(SEQ ID NO: 110)
(신호 펩타이드)
MKWVTFISLLFLFSSAYS
(인간 IL-2)
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
(인간 조직 인자 219)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
(인간 IL-2)
APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT
IL-2/TF/IL-2를 인코딩하는 핵산을 이전에 기재된 바와 같이 변형된 레트로바이러스 발현 벡터 내로 클로닝하였다(문헌[Hughes 등, Hum Gene Ther 16:457―72, 2005]). IL-2/TF/IL-2를 인코딩하는 발현 벡터를 CHO-K1 세포 내로 형질주입하였다. CHO-K1 세포에서 발현 벡터의 공동-발현은 가용성 IL-2/TF/IL-2 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(2t2로 지칭됨)의 분비를 가능하게 하였으며, 이는 항-TF 항체 친화도 및 다른 크로마토그래피 방법에 의해 정제될 수 있다.
IL-2 및 IL-2/TF/IL-2는 IL-2Rβ 및 공통 γ 사슬 함유 32Dβ 세포 증식을 유사한 방식으로 촉진하였다
IL-2/TF/IL-2의 IL-2 활성을 평가하기 위해, IL-2/TF/IL-2를, IL-2Rβ 및 공통 γ 사슬을 발현하는 32Dβ 세포의 증식을 촉진하는 데 대해 재조합 IL-2와 비교하였다. IL-2 의존적 32Dβ 세포를 IMDM-10% FBS로 5회 세척하고, 웰에 2 x 104 세포/웰로 접종하였다. IL-2/TF/IL-2 또는 IL-2의 단계 희석물을 세포에 첨가하였다(도 10). 세포를 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 제3일에 10 μl의 WST1을 각각의 웰에 첨가하고 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 추가 3시간 동안 인큐베이션함으로써 세포 증식을 검출하였다. 450 nm에서 흡광도를 측정함으로써, 생성된 포르마잔 염료의 양을 분석하였다. 도 10에 도시된 바와 같이, IL-2/TF/IL-2 및 IL-2는 32Dβ 세포를 유사한 방식으로 활성화시켰다. IL-2/TF/IL-2 및 IL-2의 EC50은 각각 158.1 pM 및 140 pM이었다.
IL-2/TF/IL-2는 IL-2와 비교하여 IL-2Rαβγ 함유 CTLL-2 세포 증식을 촉진하는 향상된 능력을 나타내었다
IL-2/TF/IL-2의 IL-2 활성을 평가하기 위해, IL-2/TF/IL-2를, IL-2Rα, IL-2Rβ 및 공통 γ 사슬을 발현하는 CTLL-2 세포의 증식을 촉진하는 데 대해 재조합 IL-2와 비교하였다. IL-2 의존적 CTLL-2 세포를 IMDM-10% FBS로 5회 세척하고, 웰에 2 x 104 세포/웰로 접종하였다. IL-2/TF/IL-2 또는 IL-2의 단계 희석물을 세포에 첨가하였다(도 11). 세포를 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 제3일에 10 μl의 WST1을 각각의 웰에 첨가하고 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 추가 3시간 동안 인큐베이션함으로써 세포 증식을 검출하였다. 450 nm에서 흡광도를 측정함으로써, 생성된 포르마잔 염료의 양을 분석하였다. 도 3에 도시된 바와 같이, IL-2/TF/IL-2는 IL-2보다 CTLL-2 세포 증식을 4배 내지 5배 더 강하게 촉진하였다. IL-2/TF/IL-2의 EC50은 123.2 pM이었고, IL-2는 548.2 pM이었다.
IL-2/TF/IL-2는 ApoE -/- 마우스에서 고지방-유도 고혈당증의 증가를 억제시켰다.
6-주령 암컷 ApoE-/- 마우스(Jackson Lab)를 표준 사료 식이요법 또는 고지방 식이요법(21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분을 함유함)(TD88137, Harlan Laboratories)으로 사육하고, 표준 조건에서 유지시켰다. 제7주 후, 고지방 식이요법으로 사육된 마우스를 대조군 및 치료군으로 무작위로 할당하였다. 그 후에, 마우스는 피하 주사당 3 mg/kg의 투약량에서 IL-2/TF/IL-2(치료군) 또는 PBS(사료 식이요법 군 및 대조군)를 받았다. 투약 후 3일째에, 마우스를 밤새 단식시키고, 혈액 시료를 안와 정맥총 천자(retro-orbital venous plexus puncture)를 통해 수집하였다. OneTouch 글루코스 측정기(Glucometer)를 사용하여, 밤새 공복 글루코스 수준을 측정하였다. 도 12에 도시된 바와 같이, 결과는, IL-2/TF/IL-2 주사가 ApoE-/- 마우스에서 글루코스 수준의 증가를 효과적으로 억제시킴을 나타내었다.
IL-2/TF/IL-2는 혈액 림프구에서 CD4 + CD25 + FoxP3 + T 조절(Treg) 세포의 비를 유의하게 상향조절한다
6-주령 암컷 ApoE-/- 마우스(Jackson Lab)를 표준 사료 식이요법 또는 고지방 식이요법(21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분을 함유함)(TD88137, Harlan Laboratories)으로 사육하고, 표준 조건에서 유지시켰다. 제7주 후, 고지방 식이요법으로 사육된 마우스를 대조군 및 치료군으로 무작위로 할당하였다. 그 후에, 마우스는 피하 주사당 3 mg/kg의 투약량에서 IL-2/TF/IL-2(치료군) 또는 PBS(사료 식이요법 군 및 대조군)를 받았다. 투약 후 3일째에, 밤새 공복 혈액 시료를 안와 정맥총 천자(retro-orbital venous plexus puncture)를 통해 수집하고 ACK 용해 완충액(Thermo Fisher Scientific)과 함께 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 시료를 FACS 완충액(0.5% BSA(EMD Millipore) 및 0.001% 소듐 아자이드(Sigma)를 포함하는 1 X PBS(Hyclone))에 재현탁시키고, FITC-항-CD4 및 APC-항-CD25 항체(BioLegend)로 30분 동안 표면 염색하였다. 표면-염색된 시료를 추가로 고정시키며, Fix/Perm 완충액(BioLegend)으로 투과시키고 PE-항-Foxp3 항체(BioLegend)로 세포내 염색시켰다. 염색 후, 세포를 FACs 완충액으로 2회 세척하고, 뒤이어 실온에서 1500 RPM에서 5분 동안 원심분리하였다. 유세포분석기(Celesta-BD Bioscience)에 의해 세포를 분석하였다. 도 13에 도시된 바와 같이, IL-2/TF/IL-2 처리는 비처리군(먹이 식이요법 군에 대해 0.4%±0.16 및 고지방 식이요법 군에 대해 0.46%±0.09)과 비교하여 혈액 림프구(3.5%±0.32)에서 Treg 집단을 유의하게 증가시켰다.
항-TF 항체 친화도 컬럼으로부터의 IL-2/TF/IL-2의 정제 용출 크로마토그래프
세포 배양물로부터 수합된 IL-2/TF/IL-2를 5 컬럼 부피의 PBS로 평형화된 항-TF 항체 친화도 컬럼 상으로 로딩하였다. 시료를 로딩한 후, 컬럼을 5 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 뒤이어 6 컬럼 부피의 0.1 M 아세트산, pH 2.9로 용출하였다. A280 용출 피크를 수집한 다음, 1 M Tris 염기를 첨가함으로써 pH 7.5 내지 8.0으로 중화시켰다. 그 후에, 30 KDa 분자량 컷오프와 함께 Amicon 원심분리 필터를 사용하여, 중화된 시료를 PBS로 완충제 교환하였다. 도 14에 도시된 바와 같이, 항-TF 항체 친화도 컬럼은, TF를 융합 도메인으로서 함유하는 IL-2/TF/IL-2에 결합하였다. 완충제-교환된 단백질 시료를 추가의 생화학적 분석 및 생물학적 활성 시험을 위해 2℃ 내지 8℃에 보관하였다. 각각의 용출 후, 6 컬럼 부피의 0.1 M 글리신, pH 2.5를 사용하여 항-TF 항체 친화도 컬럼을 박리시켰다. 그 후에, 보관을 위해 상기 컬럼을 5 컬럼 부피의 PBS, 및 7 컬럼 부피의 20% 에탄올을 사용하여 중화시켰다. 항-TF 항체 친화도 컬럼을 GE Healthcare AKTA Avant 시스템에 연결하였다. 유속이 2 mL/분인 용출 단계를 제외하고는, 모든 단계에 대해 유속은 4 mL/분이었다.
IL-2/TF/IL-2의 분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC) 분석
분석적 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 IL-2/TF/IL-2를 분석하기 위해, Superdex 200 Increase 10/300 GL 겔 여과 컬럼(GE Healthcare)을 AKTA Avant 단백질 정제 시스템(GE Healthcare)에 연결하였다. 상기 컬럼을 2 컬럼 부피의 PBS로 평형화시켰다. 유속은 0.7 mL/분이었다. IL-2/TF/IL-2를 PBS에 함유하는 시료를 모세관 루프를 사용하여 Superdex 200 컬럼 내로 주사하고, SEC에 의해 분석하였다. 시료의 SEC 크로마토그래프를 도 15에 도시한다. SEC 결과는 IL-2/TF/IL-2에 대한 2개의 단백질 피크를 나타내었다.
IL-2/TF/IL-2의 환원된 SDS-PAGE
IL-2/TF/IL-2 단백질의 순도 및 분자량을 결정하기 위해, 항-TF 항체 친화도 컬럼으로 정제된 단백질 시료를, 환원된 조건 하에 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔(4% 내지 12% NuPage Bis-Tris gel) 전기영동(SDS-PAGE) 방법에 의해 분석하였다. 전기영동 후, 상기 겔을 InstantBlue로 약 30분 동안 염색시키고, 뒤이어 정제수에서 밤새 탈색시켰다.
IL-2/TF/IL-2 단백질이 CHO 세포에서 번역 후 글리코실화를 겪음을 확증하기 위해, New England Biolabs로부터의 단백질 탈글리코실화 믹스 II 키트를 제조업체의 설명서에 따라 사용하여 탈글리코실화 실험을 수행하였다. 도 16a 및 도 16b는 비-탈글리코실화된 상태(붉은 윤곽선에서 레인 1) 및 탈글리코실화된 상태(황색 윤곽선에서 레인 2)에서 시료의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 그 결과는, IL-2/TF/IL-2 단백질이 CHO 세포에서 발현되었을 때 글리코실화됨을 나타내다. 탈글리코실화 후, 정제된 시료는 환원된 SDS 겔에서 예상된 분자량(56 kDa)으로 진행되었다. 레인 M에는 10 μL의 SeeBlue Plus2 예비염색된 표준을 로딩하였다.
IL-2/TF/IL-2의 생체내 특징화
IL-2/TF/IL-2를 C57BL/6 마우스 내로 다양한 용량으로 피하 주사하여, 생체내에서 IL-2/TF/IL-2의 면역자극 활성을 결정하였다. 상기 마우스를 대조군 용액(PBS) 또는 0.1, 0.4, 2 및 10 mg/kg에서 IL-2/TF/IL-2로 피하 치료하였다. 치료 후 3일째에, 치료된 마우스를 안락사시켰다. 치료 후 제3일에 마우스의 비장을 수집하고 칭량하였다. 단일 비장세포 현탁액을 제조하며, 제조된 비장세포를 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 NK 세포(형광색소-접합 항-CD4, 항-CD8, 및 항―NK1.1 항체를 이용)에 대해 염색시키고 유세포분석에 의해 분석하였다. 그 결과는, IL-2/TF/IL-2가 특히 0.1 내지 10 mg/kg에서 비장 중량(도 17a)에 기초하여 비장세포를 확장시키는 데 효과적이었다. CD8+ T 세포의 백분율은 2 mg/kg 및 10 mg/kg에서 대조군-치료 마우스(도 17b)와 비교하여 더 높았다. NK 세포의 백분율은 시험된 모든 용량에서 대조군-치료 마우스(도 17b)와 비교하여 더 높았다.
IL-2는 면역세포에 의한 CD25 발현을 상향조절하는 것으로 알려져 왔다. 따라서, 본 발명자들은 IL-2/TF/IL-2 치료 마우스에서 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 및 NK 세포의 CD25 발현을 평가하였다. C57BL/6 마우스를 상기 단락에 기재된 바와 같이 IL-2/TF/IL-2로 피하 치료하였다. 비장세포를 형광색소-접합 항-CD4, 항-CD8, CD25 및 NK1.1 모노클로날 항체로 염색하였다. 비장세포 서브세트의 CD25 발현(MFI)을 유세포분석에 의해 분석하였다. 도 18에 도시된 바와 같이, 시험된 용량 및 시점(제3일)에서, IL-2/TF/IL-2는 CD8+ T 세포 및 NK 세포가 아니라 CD4+ T 세포에 의한 CD25 발현을 유의하게 상향조절하였다.
C57BL/6 마우스에서 IL-2/TF/IL-2의 약물동력학을 또한 조사하였다. IL-2/TF/IL-2를 C57BL/6 마우스 내로 1 mg/kg으로 피하 주사하였다. 마우스 혈액을 도 19에 도시된 바와 같이 다양한 시점에서 꼬리 정맥으로부터 채혈하고, 혈청을 제조하였다. IL-2/TF/IL-2 농도를 ELISA(포착: 항-조직 인자 항체; 검출: 비오틴화된 항-인간 IL-2 항체, 뒤이어 SA-HRP 및 ABTS 기질)로 결정하였다. IL-2/TF/IL-2의 반감기는 PK Solutions 2.0(Summit Research Services)으로 계산 시 1.83시간이었다.
IL-2/TF/IL-2는 ApoE -/- 마우스에서 고지방-유도 아테롬성 동맥경화증 플라크(plaque)의 형성을 감쇠시켰다
6-주령 암컷 ApoE-/- 마우스(The Jackson Laboratory)를 표준 사료 식이요법 또는 고지방 식이요법(21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분)(TD88137, Harlan Laboratories)으로 사육하고, 표준 조건에서 유지시켰다. 제7주 후, 고지방 식이요법(HFD)으로 사육된 마우스를 대조군 및 치료군으로 무작위로 할당하였다. 그 후에, 마우스에게 IL-2/TF/IL-2(치료군) 또는 PBS(사료 식이요법 군 및 대조군)를 4주 동안 매주 3 mg/kg의 투약량에서 피하 투여하였다. 제12주에, 모든 마우스를 이소플루란에 의해 안락사시켰다. 대동맥을 수집하며, 세로방향으로 개방하고, 인 페이스(en face) 방법을 사용하여 수단(Sudan) IV 용액(0.5%)으로 염색하였다. 그 후에, 총 대동맥 면적과 비교하여 플라크 면적의 백분율(도 20a에 도시된 바와 같이 적색)을 Image J 소프트웨어로 정량화하였다. 도 20a는 각각의 군으로부터의 아테롬성 동맥경화증 플라크의 대표도를 도시한다. 도 20b는 각각의 군의 아테롬성 동맥경화증 플라크의 정량적 분석의 결과를 도시한다. 대조군(HF 식이요법)에서 플라크 면적의 백분율은 10.28% 대 4.68%로 치료군(HFD+IL-2/TF/IL-2)보다 훨씬 더 높았다.
IL-2/TF/IL-2는 2형 당뇨병의 진행을 억제시킨다.
수컷 BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb/J(db/db(Jackson Lab)) 마우스를 표준 사료 식이요법으로 사육하고, 식수(drinking water)를 마음대로 받았다. 6주령에서, 마우스를 대조군 및 치료군으로 무작위로 할당하였다. 치료군은 IL-2/TF/IL-2를 3 mg/kg에서 격주로 피하 주사에 의해 받은 한편, 대조군은 비히클(PBS) 단독을 받았다. OneTouch 글루코스 측정기(Glucometer)를 사용하여, 밤새 공복 글루코스 수준을 매주 측정하였다. 결과는, IL-2/TF/IL-2가 BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb/J 마우스에서 글루코스 수준의 증가를 효과적으로 억제시켰음을 나타내었다.
IL-2/TF/IL-2는 제1 주사 후 혈액 림프구에서 CD4 + CD25 + FoxP3 + T 조절 세포의 비를 유의하게 상향조절한다
수컷 BKS.Cg-Dock7m +/+ Leprdb/J(db/db)(The Jackson Laboratory) 마우스를 표준 사료 식이요법으로 사육하고, 식수를 마음대로 받았다. 6주령에서, 마우스를 대조군 및 치료군으로 무작위로 할당하였다. 치료군은 IL-2/TF/IL-2를 3 mg/kg에서 격주로 피하 주사에 의해 받은 한편, 대조군은 비히클(PBS) 단독을 받았다. 제1 약물 주사 후 4일째에, 밤새 공복 혈액 시료를 수집하고 ACK 용해 완충액(Thermo Fisher Scientific)과 함께 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 그 후에, 시료를 FACS 완충액(0.5% BSA(EMD Millipore) 및 0.001% 소듐 아자이드(Sigma)를 포함하는 1X PBS(Hyclone))에 재현탁시키고, FITC-항-CD4 및 APC-항-CD25 항체(BioLegend)로 30분 동안 표면 염색하였다. 표면-염색된 시료를 추가로 고정시키며, Fix/Perm 완충액(BioLegend)으로 투과시키고 PE-항-Foxp3 항체(BioLegend)로 세포내 염색시켰다. 염색 후, 세포를 FACs 완충액으로 2회 세척하고, 유세포분석기(Celesta-BD Bioscience)에 의해 분석하였다. 혈액 림프구 내 CD4+CD25+FoxP3+ Tregs의 백분율을 측정하였다. 도 22에 도시된 바와 같이, 결과는, IL-2/TF/IL-2가 혈액 림프구에서 Tregs의 비를 유의하게 상향조절하였음을 나타내었다. * p<0.05
실시예 4. 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 IL-15/TF/IL-15의 생성 및 특징화
IL-15 수용체에 결합하는 제1 표적-결합 도메인, 가용성 인간 조직 인자 도메인, 및 IL-15 수용체에 결합하는 제2 표적-결합 도메인을 포함하는 제2 예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드가 생성되었다(IL-15/TF/IL-15 또는 IL-15/TF/IL-15)(도 23). 이 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 핵산 및 아미노산 서열은 하기에 제시된다.
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산(IL-15/TF/IL-15)(SEQ ID NO: 117)
(신호 펩타이드)
ATGAAGTGGGTGACCTTCATCAGCCTGCTGTTCCTGTTCTCCAGCGCCTACTCC
(제1 IL-15 단편)
AACTGGGTGAACGTGATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAGGATTTAATCCAGAGCATGCACATCGACGCCACTCTGTACACTGAGAGCGACGTGCACCCTAGCTGCAAGGTGACTGCCATGAAGTGCTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGCGATGCCAGCATCCACGACACTGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAACAACTCTTTAAGCAGCAACGGCAACGTGACAGAGAGCGGCTGCAAGGAGTGCGAGGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTTTACAGAGCTTCGTGCACATCGTGCAGATGTTCATCAACACTAGC
(인간 조직 인자 219 형태)
AGCGGCACAACCAACACAGTCGCTGCCTATAACCTCACTTGGAAGAGCACCAACTTCAAAACCATCCTCGAATGGGAACCCAAACCCGTTAACCAAGTTTACACCGTGCAGATCAGCACCAAGTCCGGCGACTGGAAGTCCAAATGTTTCTATACCACCGACACCGAGTGCGATCTCACCGATGAGATCGTGAAAGATGTGAAACAGACCTACCTCGCCCGGGTGTTTAGCTACCCCGCCGGCAATGTGGAGAGCACTGGTTCCGCTGGCGAGCCTTTATACGAGAACAGCCCCGAATTTACCCCTTACCTCGAGACCAATTTAGGACAGCCCACCATCCAAAGCTTTGAGCAAGTTGGCACAAAGGTGAATGTGACAGTGGAGGACGAGCGGACTTTAGTGCGGCGGAACAACACCTTTCTCAGCCTCCGGGATGTGTTCGGCAAAGATTTAATCTACACACTGTATTACTGGAAGTCCTCTTCCTCCGGCAAGAAGACAGCTAAAACCAACACAAACGAGTTTTTAATCGACGTGGATAAAGGCGAAAACTACTGTTTCAGCGTGCAAGCTGTGATCCCCTCCCGGACCGTGAATAGGAAAAGCACCGATAGCCCCGTTGAGTGCATGGGCCAAGAAAAGGGCGAGTTCCGGGAG
(제2 IL-15 단편)
AACTGGGTGAACGTCATCAGCGATTTAAAGAAGATCGAAGATTTAATTCAGTCCATGCATATCGACGCCACTTTATACACAGAATCCGACGTGCACCCCTCTTGTAAGGTGACCGCCATGAAATGTTTTTTACTGGAGCTGCAAGTTATCTCTTTAGAGAGCGGAGACGCTAGCATCCACGACACCGTGGAGAATTTAATCATTTTAGCCAATAACTCTTTATCCAGCAACGGCAACGTGACAGAGTCCGGCTGCAAGGAGTGCGAAGAGCTGGAGGAGAAGAACATCAAGGAGTTTCTGCAATCCTTTGTGCACATTGTCCAGATGTTCATCAATACCTCC
예시적인 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(IL-15/TF/IL-15)(SEQ ID NO: 116)
(신호 펩타이드)
MKWVTFISLLFLFSSAYS
(인간 IL-15)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
(인간 조직 인자 219)
SGTTNTVAAYNLTWKSTNFKTILEWEPKPVNQVYTVQISTKSGDWKSKCFYTTDTECDLTDEIVKDVKQTYLARVFSYPAGNVESTGSAGEPLYENSPEFTPYLETNLGQPTIQSFEQVGTKVNVTVEDERTLVRRNNTFLSLRDVFGKDLIYTLYYWKSSSSGKKTAKTNTNEFLIDVDKGENYCFSVQAVIPSRTVNRKSTDSPVECMGQEKGEFRE
(인간 IL-15)
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
IL-15/TF/IL-15를 인코딩하는 핵산을 이전에 기재된 바와 같이 변형된 레트로바이러스 발현 벡터 내로 클로닝하였다(문헌[Hughes 등, Hum Gene Ther 16:457―72, 2005]). IL-15/TF/IL-15를 인코딩하는 발현 벡터를 CHO-K1 세포 내로 형질주입하였다. CHO-K1 세포에서 발현 벡터의 공동-발현은 가용성 IL-15/TF/IL-15 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드(15t15로 지칭됨)의 분비를 가능하게 하였으며, 이는 항-TF 항체 친화도 및 다른 크로마토그래피 방법에 의해 정제될 수 있다.
IL-15/TF/IL-15는 IL-2Rβ 및 공통 γ 사슬 함유 32Dβ 세포 증식을 촉진한다
IL-15/TF/IL-15의 IL-15 활성을 IL2Rβ 및 공통 γ 사슬 발현된 32Dβ 세포에서 재조합 IL-15와 비교하였다. IL-15 의존적 32Dβ 세포를 IMDM-10% FBS로 5회 세척하고, 웰에 2 x 104 세포/웰로 접종하였다. IL-15/TF/IL-15 또는 IL-15의 단계 희석물을 세포에 첨가하였다(도 24). 세포를 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. 제3일에 10 μl의 WST1을 각각의 웰에 첨가하고 CO2 인큐베이터에서 37℃에서 추가 3시간 동안 인큐베이션함으로써 세포 증식을 검출하였다. 450 nm에서 흡광도를 측정함으로써, 생성된 포르마잔 염료의 양을 분석하였다. 도 24에 도시된 바와 같이, IL-15/TF/IL-15는 IL-15와 비교하여 32Dβ 세포 증식을 덜 효율적으로 촉진하였다. IL-15/TF/IL-15 및 IL-15의 EC50은 각각 161.4 pM 및 1.6 pM이었다.
항-TF 항체 친화도 컬럼으로부터의 IL-15/TF/IL-15의 정제 용출 크로마토그래프
세포 배양물로부터 수합된 IL-15/TF/IL-15를 5 컬럼 부피의 PBS로 평형화된 항-TF 항체 친화도 컬럼 상으로 로딩하였다. 시료를 로딩한 후, 컬럼을 5 컬럼 부피의 PBS로 세척하고, 뒤이어 6 컬럼 부피의 0.1 M 아세트산, pH 2.9로 용출하였다. A280 용출 피크를 수집한 다음, 1 M Tris 염기를 첨가함으로써 pH 7.5 내지 8.0으로 중화시켰다. 그 후에, 30 KDa 분자량 컷오프와 함께 Amicon 원심분리 필터를 사용하여, 중화된 시료를 PBS로 완충제 교환하였다. 도 25에 도시된 바와 같이, 항-TF 항체 친화도 컬럼은, TF를 융합 도메인으로서 함유하는 IL-15/TF/IL-15에 결합하였다. 완충제-교환된 단백질 시료를 추가의 생화학적 분석 및 생물학적 활성 시험을 위해 2℃ 내지 8℃에 보관하였다. 각각의 용출 후, 6 컬럼 부피의 0.1 M 글리신, pH 2.5를 사용하여 항-TF 항체 친화도 컬럼을 박리시켰다. 그 후에, 보관을 위해 상기 컬럼을 5 컬럼 부피의 PBS, 및 7 컬럼 부피의 20% 에탄올을 사용하여 중화시켰다. 항-TF 항체 친화도 컬럼을 GE Healthcare AKTA Avant 시스템에 연결하였다. 유속이 2 mL/분인 용출 단계를 제외하고는, 모든 단계에 대해 유속은 4 mL/분이었다.
IL-15/TF/IL-15의 환원된 SDS-PAGE
단백질의 순도 및 분자량을 결정하기 위해, 항-TF 항체 친화도 컬럼으로 정제된 IL-15/TF/IL-15(15t15) 단백질 시료를, 환원된 조건 하에 소듐 도데실 설페이트 폴리아크릴아미드 겔(4% 내지 12% NuPage Bis-Tris gel) 전기영동(SDS-PAGE) 방법에 의해 분석하였다. 전기영동 후, 상기 겔을 InstantBlue로 약 30분 동안 염색시키고, 뒤이어 정제수에서 밤새 탈색시켰다.
IL-15/TF/IL-15 단백질이 CHO 세포에서 번역 후 글리코실화를 겪음을 확증하기 위해, New England Biolabs로부터의 단백질 탈글리코실화 믹스 II 키트를 제조업체의 설명서에 따라 사용하여 탈글리코실화 실험을 수행하였다. 도 26a 및 도 26b는 비-탈글리코실화된 상태(붉은 윤곽선에서 레인 1) 및 탈글리코실화된 상태(황색 윤곽선에서 레인 2)에서 시료의 환원된 SDS-PAGE 분석을 도시한다. 그 결과는, IL-15/TF/IL-15 단백질이 CHO 세포에서 발현되었을 때 글리코실화됨을 나타내었다. 탈글리코실화 후, 정제된 시료는 환원된 SDS 겔에서 예상된 분자량(50 kDa)으로 진행되었다. 레인 M에는 10 μL의 SeeBlue Plus2 예비염색된 표준을 로딩하였다.
실시예 5: 생체내에서 IL-2/TF/IL-2(2t2)에 의한 NK 세포의 자극
실험 세트를 수행하여, C57BL/6 마우스에서 면역 자극에 미치는 2t2 작제물의 효과를 결정하였다. 이들 실험에서, C57BL/6 마우스를 대조군 용액(PBS) 또는 0.1, 0.4, 2 및 10 mg/kg에서 2t2로 피하 치료하였다. 치료-후 3일째에 치료된 마우스를 안락사시켰다. 비장 중량을 측정하고, 단일 비장세포 현탁액을 제조하였다. 비장세포 현탁액을 접합된 항-CD4, 항-CD8, 및 항-NK1.1(NK) 항체로 염색하였다. CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 NK 세포의 백분율, 및 림프구 서브세트 상에서 CD25 발현을 유세포분석에 의해 분석하였다. 도 27a는, 2t2가 특히 0.1 내지 10 mg/kg의 용량 수준에서 비장 중량에 기초하여 비장세포를 확장시키는 데 효과적이었음을 도시한다. 치료 후, CD8+ T 세포의 백분율을 2 mg/kg 및 10 mg/kg에서 대조군-치료 마우스(도 27b)와 비교하여 2t2-치료 마우스에서 더 높았다. NK 세포의 백분율 또한, 시험된 모든 용량의 2t2에서 대조군-치료 마우스(도 27b)와 비교하여 2t2-치료 마우스에서 더 높았다. 추가로, 2t2는 0.4 mg/kg 내지 10 mg/kg에서 치료 후, CD8+ T 세포 및 NK 세포가 아니라 CD4+ T 세포에 의한 CD25 발현을 유의하게 상향조절하였다(도 27c).
실험 세트를 수행하여, 서구 식이요법으로 사육된 ApoE-/- 마우스에서 면역 자극에 미치는 2t2 작제물의 효과를 결정하였다. 이들 실험에서, 21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분(TD88137, Envigo Laboratories)을 함유하는 서구 식이요법으로 6-주령 암컷 B6.129P2-ApoEtm1Unc/J 마우스(Jackson Laboratory)를 사육하였다. 8-주의 서구 식이요법 후, 상기 마우스에게 3 mg/kg에서 2t2를 피하 주사하였다. 치료 후 3일째에, 마우스를 16시간 동안 단식시킨 다음, 혈액 시료를 안와 정맥총 천자를 통해 수집하였다. 혈액을 10 μL 0.5 M EDTA와 혼합하고, 림프구 서브세트 분석을 위해 20 μL 혈액을 얻었다. 적혈구 세포를 ACK(0.15 M NH4Cl, 1.0 mM KHCO3, 0.1 mM Na2EDTA, pH 7.4)로 용해시키고, 림프구를 FACS 염색 완충액(PBS 중 1% BSA)에서 항-마우스 CD8a 항체 및 항-마우스 NK1.1 항체로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 1회 세척하고, BD FACS Celesta로 분석하였다. Treg 염색을 위해, ACK 처리된 혈액 림프구를 FACS 염색 완충액에서 항-마우스 CD4 항체 및 항-마우스 CD25 항체로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 1회 세척하며, 고정/투과 작업 용액에 재현탁시키고, 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 1회 세척하고, 투과 용액에 재현탁시켰다. 시료를 300 내지 400 x g에서 실온에서 5분 동안 원심분리한 다음, 상층액을 폐기하였다. 세포 펠렛을 잔여 부피에 재현탁시키고, 1 x 투과 완충액을 이용하여 부피를 약 100 μL로 조정하였다. 항-Foxp3 항체를 세포에 첨가하고, 상기 세포를 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 투과 완충액(200 μL)을 세포에 첨가하고, 상기 세포를 300 내지 400 x g에서 실온에서 5분 동안 원심분리하였다. 세포를 유세포분석 염색 완충액에 재현탁시키고, 유세포분석기 상에서 분석하였다. 도 28b 내지 도 28c는, 2t2에 의한 치료가 서구 식이요법으로 사육된 ApoE-/- 마우스에서 NK 세포 및 CD8+ T 세포의 백분율을 증가시켰음을 도시한다. 도 28a는 2t2에 의한 치료가 또한 Treg 세포의 백분율을 증가시켰음을 도시한다.
실시예 6: 생체내에서 면역 세포의 증식 유도
실험 세트를 수행하여, C57BL/6 마우스에서 면역 세포 자극에 미치는 2t2 작제물의 효과를 결정하였다. 이들 실험에서, C57BL/6 마우스를 대조군 용액(PBS) 또는 0.1, 0.4, 2 및 10 mg/kg에서 2t2로 피하 치료하였다. 치료-후 3일째에 치료된 마우스를 안락사시켰다. 비장 중량을 측정하고, 단일 비장세포 현탁액을 제조하였다. 비장세포 현탁액을 접합된 항-CD4, 항-CD8, 및 항-NK1.1(NK) 항체로 염색하였다. CD4+ T 세포, CD8+ T 세포, 및 NK 세포의 백분율을 유세포분석에 의해 분석하였다. 도 29a는, 2t2 치료가 특히 0.1 내지 10 mg/kg에서 비장 중량에 기초하여 비장세포를 확장시키는 데 효과적이었음을 도시한다. CD8+ T 세포의 백분율은 2 mg/kg 및 10 mg/kg에서 대조군-치료 마우스와 비교하여 더 높았다(도 29b). NK 세포의 백분율은, 시험된 모든 용량의 2t2에서 대조군-치료 마우스(도 29b)와 비교하여 더 높았다. 이들 결과는, 2t2 치료가 C57BL/6 마우스에서 CD8+ T 세포와 NK 세포 둘 다의 증식을 유도할 수 있었음을 실증한다.
실험 세트를 수행하여, 서구 식이요법으로 사육된 ApoE-/- 마우스에서 면역 자극에 미치는 2t2 작제물의 효과를 결정하였다. 이들 실험에서, 21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분(TD88137, Envigo Laboratories)을 함유하는 서구 식이요법으로 6-주령 암컷 B6.129P2-ApoEtm1Unc/J 마우스(Jackson Laboratory)를 사육하였다. 8-주의 서구 식이요법 후, 상기 마우스에게 3 mg/kg에서 2t2를 피하 주사하였다. 치료 후 3일째에, 마우스를 16시간 동안 단식시킨 다음, 혈액 시료를 안와 정맥총 천자를 통해 수집하였다. 혈액을 10 μL 0.5 M EDTA와 혼합하고, 림프구 서브세트 분석을 위해 20 μL 혈액을 얻었다. 적혈구 세포를 ACK(0.15 M NH4Cl, 1.0 mM KHCO3, 0.1 mM Na2EDTA, pH 7.4)로 용해시키고, 림프구를 FACS 염색 완충액(PBS 중 1% BSA)에서 항-마우스 CD8a 항체 및 항-마우스 NK1.1 항체로 4℃에서 30분 동안 염색하였다. 세포를 1회 세척하며, 고정 완충액(BioLegend Cat# 420801)에 실온에서 20분 동안 재현탁시켰다. 세포를 350 x g에서 5분 동안 원심분리하고, 고정된 세포를 세포내 염색 투과 세척 완충액(BioLegend Cat# 421002)에 재현탁시킨 다음, 350 x g에서 5분 동안 원심분리하였다. 그 후에, 세포를 항-Ki67 항체로 RT에서 20분 동안 염색하였다. 세포를 세포내 염색 투과 세척 완충액으로 2회 세척하고, 350 x g에서 5분 동안 원심분리하였다. 그 후에, 세포를 FACS 염색 완충액에 재현탁시켰다. 림프구 서브세트를 BD FACS Celesta로 분석하였다. 도 30a 및 도 30b는, 2t2에 의한 ApoE-/- 마우스의 치료는 NK 세포 및 CD8+ T 세포에서 증식(Ki67-양성 염색)을 유도하였음을 도시한다.
실시예 7: 당뇨병의 치료
실험 세트를 수행하여, ApoE-/- 마우스에서 2t2에 의한 서구 식이요법-유도 고혈당의 개선을 조사하였다. 이들 실험에서, 21% 지방, 0.15% 콜레스테롤, 34.1% 수크로스, 19.5% 카제인, 및 15% 전분(TD88137, Envigo Laboratories)을 함유하는 서구 식이요법으로 6-주령 암컷 B6.129P2-ApoEtm1Unc/J 마우스(Jackson Laboratory)를 사육하였다. 8-주의 서구 식이요법 후, 상기 마우스에게 3 mg/kg에서 2t2를 피하 주사하였다. 치료 후 3일째에, 마우스를 16시간 동안 단식시킨 다음, 혈액 시료를 안와 정맥총 천자를 통해 수집하였다. 신선한 혈액 한방울을 사용하여 글루코스 미터(OneTouch UltraMini) 및 GenUltimated 시험 스트립에 의해 혈중 글루코스를 검출하였다. 도 31a에 도시된 바와 같이, 2t2 치료는 서구 식이요법에 의해 유도된 고혈당증을 감소시켰다(p<0.04). Eve Technologies에 의한 마우스 래트 대사 어레이를 이용하여 혈장 인슐린 및 레지스틴 수준을 분석하였다. HOMA-IR을 하기 식을 사용하여 계산하였다: 항상성 모델 평가-인슐린 내성 = 글루코스(mg/dL) * 인슐린(mU/mL)/405. 도 31b에 도시된 바와 같이, 2t2 치료는 비치료군과 비교하여 인슐린 내성을 감소시켰다. 2t2(p<0.02)는 도 31c에 도시된 바와 같이 비치료군과 비교하여 레지스틴 수준을 유의하게 감소시켰으며, 이는 2t2에 의해 유도되는 감소된 인슐린 내성과 관련이 있을 수 있다(도 31b).
실시예 8. CD44 기억 T 세포의 상향조절
C57BL/6 마우스를 2t2로 피하 치료하였다. 치료된 마우스를 안락사시키고, 치료 후 4일째에(TGFRt15-TGFRs) 단일 비장세포 현탁액을 제조하거나 3일째에(2t2) 제조하였다. 제조된 비장세포를 형광색소-접합 항-CD4, 항-CD8 및 항-CD44 항체로 염색하고, CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포 내 CD44고 T 세포의 백분율을 유세포분석에 의해 분석하였다. 결과는, 2t2가 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 상에서 기억 마커 CD44의 발현을 상향조절하였음을 나타낸다(도 32). 이들 발견은, 2t2가 마우스 T 세포를 기억 T 세포로 분화되도록 유도할 수 있었음을 나타낸다.
실시예 9. 단일-사슬 또는 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드에 의한 치료 후 조직 인자 응고 검정법
실험 세트를 수행하여, 단일-사슬 또는 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드에 의한 치료 후 혈액 응고를 평가하였다. 혈액 응고 캐스케이드 경로를 개시하기 위해, 조직 인자(TF)는 인자 VIIa(FVIIa)에 결합하여 TF/FVIIa 복합체를 형성한다. 그 후에, TF/FVIIa 복합체는 인자 X(FX)에 결합하고, FX를 FXa로 전환시킨다.
혈액 응고를 측정하기 위한 검정법은 인자 X(FX)의 활성화를 측정하는 단계를 수반한다. 간략하게는, TF/VIIa는 칼슘 및 인지질의 존재 하에 혈액 응고 인자 X(FX)를 인자 Xa(FXa)로 활성화시킨다. TF의 막관통 도메인을 함유하는 TF243은, 막관통 도메인을 함유하지 않는 TF219보다 FX를 FXa로 활성화시키는 데 있어서 훨씬 더 높은 활성을 가진다. FXa-특이적 발색성 기질 S-2765(Diapharma, West Chester, OH)를 사용하여 FXa 활성을 측정함으로써 FX의 TF/VIIa 의존적 활성화를 결정한다. S-2765의 색상 변화는 분광광도법으로 측정될 수 있고, FXa의 단백질분해 활성에 비례한다.
이들 실험에서, 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드(18t15-12s, 마우스 (m)21t15, 21t15-TGFRs, 및 21t15-7s)에 의한 FX 활성화를 양성 대조군(이노빈) 또는 TF219와 비교하였다. TF219(또는 TF219-함유 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드)/FVIIa 복합체를 96-웰 ELISA 플레이트의 둥근 바닥 웰에서 50 μL의 부피에서 동일한 몰 농도(각각 0.1 nM)로 혼합하고, 이후에 10 μL의 180 nM FX를 첨가하였다. 37℃에서 15분 동안 인큐베이션한 후, 8 μL의 0.5 M EDTA(칼슘을 킬레이트화시켜 TF/VIIa에 의한 FX 활성화를 종결시킴)를 각각의 웰에 첨가하여 FX 활성화를 중단시켰으며, 상기 인큐베이션 동안 FX를 FXa로 전환되었다. 다음, 10 μL의 3.2 mM S-2765 기질을 반응 혼합물에 첨가하였다. 즉시, 플레이트 흡광도를 405 nm에서 측정하고, 제0시간에서 흡광도로서 기록하였다. 그 후에, 플레이트를 37℃에서 10분 내지 20분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 405 nm에서 흡광도를 판독함으로써 색상 변화를 모니터링하였다. 발색성 기질 S-2765를 사용하여 FXa 활성에 의해 측정된 바와 같은 FX 활성화의 결과를 도 33에 도시한다. 이 실험에서, 지질화된 재조합 인간 TF243을 함유하는 상업적인 프로트롬빈 시약인 이노빈을 FX 활성화에 대한 양성 대조군으로서 사용하였다. 정제수를 이용하여 이노빈을 약 10 nM의 TF243으로 재구성하였다. 다음, 동일한 부피의 0.2 nM의 FVIIa를 0.2 nM의 이노빈과 혼합함으로써 0.1 nM TF/VIIa 복합체를 만들었다. 이노빈은 매우 강력한 FX 활성화 활성을 실증한 한편, TF219 및 TF219-함유 다중-사슬 키메라 폴리펩타이드는 매우 낮은 FX 활성화 활성을 가졌고, 이는 TF219가 생체내에서 천연 기질 FX를 활성화시키기 위한 TF/FVIIa 복합체에서 활성이지 않음을 확인시켜 준다.
실시예 10: 2t2에 의한 Treg 세포의 유도
건강한 공여자(공여자 163)의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 Ficoll Paque Plus(GE17144003)에 의해 5 mL의 전혈 연막으로부터 단리하였다. 그 후에, PBMC를 ACK로 용해시켜, 적혈구를 제거하였다. 세포를 IMDM-10% FBS로 세척하고, 카운팅하였다. 1.8 x106 세포(100 μL/튜브)를 유동 튜브에 접종하고, 50 μL의 디센딩(descending) 2t2 또는 IL2(15000, 1500, 150, 15, 1.5, 0.15, 또는 0 pM) 및 50 μL의 예비-염색 항체(항-CD8-BV605 및 항-CD127-AF647)와 함께 인큐베이션하였다. 세포를 37℃에서 수조에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 200 μL의 예열된 BD Phosflow Fix 완충액 I(Cat# 557870, Becton Dickinson Biosciences)을 37℃에서 수조에서 10분 동안 첨가하여, 자극을 중단시켰다. 세포(4.5 x105 세포/100 μL)를 V-모양 96-웰 플레이트로 이전시키며, 회전시키고, 뒤이어 100 μL의, -20℃의 예비냉각된 BD Phosflow Perm 완충액 III(Cat# BD Biosciences)을 얼음 상에서 30분 동안 이용하여 투과시켰다. 그 후에, 세포를 200 μL의 FACS 완충액으로 2회 광범위하게 세척하고, 형광 항체 패널(항-CD25-PE, CD4-PerCP-Cy5.5, CD56-BV421, CD45RA-PE-Cy7 및 pSTAT5a-AF488)로 염색하여, 상이한 림프구 서브집단들 사이를 구별하고 pSTAT5a 상태를 평가하였다. 세포를 FACSCelesta 분석을 위해 200 μL의 FACS 완충액에 재현탁시켰다. 도 C1a에 도시된 바와 같이, 6 pM의 2t2는 CD4+CD25hi Treg 세포에서 Stat5a의 인산화를 유도하기에 충분한 한편, 43.11 pM의 IL-2를 동일한 림프구 집단에서 Stat5a의 인산화를 유도하는 데 필요하였다. 대조적으로, 2t2는 CD4+CD25-Tcon 및 CD8+Tcon 세포에서 Stat5a의 인산화를 유도하는 데 있어서 IL2와 비교하여 덜 활성이었거나(도 34b) 동등하게 활성이었다(도 34c). 이들 결과는, 인간 PBMC에서 Treg를 증가시키는 데 있어서 IL2와 비교하여 2t2는 우수하고, 2t2는 인간 혈액 림프구 pStat5a 반응에서 IL-2와 비교하여 증가된 Treg 선택성을 실증한다.
다른 구현예
본 발명이 이의 상세한 설명과 함께 기재되긴 하였지만, 상기 설명은 본 발명의 범위를 예시하는 것이고 이를 제한하려는 것이 아니며, 본 발명의 범위는 첨부된 청구항의 범위에 의해 정의된다. 다른 양태, 이점 및 변형은 하기 청구항의 범위 내에 있다.
A. 예시적인 구현예
구현예 A1. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는
(i) 제1 표적-결합 도메인;
(ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및
(iii) 제2 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A2. 구현예 A1에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A3. 구현예 A1에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A4. 구현예 A1 내지 구현예 A3 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A5. 구현예 A1 내지 구현예 A3 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A6. 구현예 A1에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A7. 구현예 A1에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A8. 구현예 A6 또는 구현예 A7에 있어서, 상기 제2 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A9. 구현예 A6 또는 구현예 A7에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제2 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A10. 구현예 A1 내지 구현예 A9 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A11. 구현예 A10에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A12. 구현예 A11에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A13. 구현예 A1 내지 구현예 A9 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A14. 구현예 A1 내지 구현예 A13 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A15. 구현예 A14에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A16. 구현예 A13에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A17. 구현예 A1 내지 구현예 A16 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인과 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는, CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM-1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A18. 구현예 A1 내지 구현예 A16 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A19. 구현예 A18에 있어서, 상기 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, FLT3L, MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A20. 구현예 A1 내지 구현예 A16 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A21. 구현예 A20에 있어서, 상기 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII), 가용성 TGF-βRIII, 가용성 NKG2D, 가용성 NK30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 또는 가용성 CD28인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A22. 구현예 A1 내지 구현예 A21 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A23. 구현예 A22에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A24. 구현예 A23에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A25. 구현예 A24에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A26. 구현예 A22 내지 구현예 A25 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 하나 이상을 포함하지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A27. 구현예 A26에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 임의의 것을 포함하지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A28. 구현예 A1 내지 구현예 A27 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 인자 VIIa에 결합할 수 없는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A29. 구현예 A1 내지 구현예 A28 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 불활성 인자 X를 인자 Xa로 전환시키지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A30. 구현예 A1 내지 구현예 A29 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 포유류에서 혈액 응고를 자극시키지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A31. 구현예 A1 내지 구현예 A30 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A32. 구현예 A31에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A33. 구현예 A32에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A34. 구현예 A33에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A35. 구현예 A31에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A36. 구현예 A35에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나는 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A37. 구현예 A35에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A38. 구현예 A31에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A39. 구현예 A38에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 N-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A40. 구현예 A38에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 N-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A41. 구현예 A38에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 C-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A42. 구현예 A38에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 C-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A43. 구현예 A31 내지 구현예 A42 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A44. 구현예 A43에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A45. 구현예 A44에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 2개 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A46. 구현예 A43에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A47. 구현예 A46에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A48. 구현예 A47에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A49. 구현예 A31 내지 구현예 A42 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A50. 구현예 A31 내지 구현예 A49 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A51. 구현예 A50에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A52. 구현예 A51에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A53. 구현예 A31 내지 구현예 A52 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 표적-결합 도메인 중 하나 이상은, CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM-1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A54. 구현예 A31 내지 구현예 A52 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A55. 구현예 A54에 있어서, 상기 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, SCF, FLT3L, MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A56. 구현예 A31 내지 구현예 A52 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나 이상은 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A57. 구현예 A56에 있어서, 상기 가용성 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII), 가용성 TGF-βRIII, 가용성 NKG2D, 가용성 NK30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 가용성 CD122, 가용성 CD3, 또는 가용성 CD28인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A58. 구현예 A1 내지 구현예 A57 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 단부에 신호 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A59. 구현예 A1 내지 구현예 A58 중 어느 한 구현예에 있어서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단 단부 또는 C-말단 단부에 위치한 펩타이드 태그를 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A60. 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
구현예 A61. 구현예 A60에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
구현예 A62. 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물의 적어도 하나의 용량을 포함하는 키트.
구현예 A63. 면역 세포를 자극시키는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A64. 구현예 A63에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A65. 구현예 A64에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 A66. 구현예 A65에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A67. 구현예 A63에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A68. 구현예 A63 내지 구현예 A67 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A69. 구현예 A63 내지 구현예 A68 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 A70. 구현예 A63 내지 구현예 A68 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A71. 구현예 A63 내지 구현예 A70 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A72. 구현예 A71에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A73. 구현예 A72에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A74. 구현예 A71에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A75. 구현예 A74에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A76. 구현예 A71에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 A77. 구현예 A76에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 A78. 면역 세포의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A79. 구현예 A88에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A80. 구현예 A79에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 A81. 구현예 A80에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A82. 구현예 A78에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A83. 구현예 A78 내지 구현예 A82 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A84. 구현예 A78 내지 구현예 A83 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 A85. 구현예 A78 내지 구현예 A83 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A86. 구현예 A78 내지 구현예 A85 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A87. 구현예 A86에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A88. 구현예 A87에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A89. 구현예 A86에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A90. 구현예 A89에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A91. 구현예 A86에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 A92. 구현예 A86에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 A93. 면역 세포로부터 기억 또는 기억-유사 면역 세포로의 분화를 유도하는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A94. 구현예 A93에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A95. 구현예 A94에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 A96. 구현예 A95에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A97. 구현예 A93에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 A98. 구현예 A93 내지 구현예 A97 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A99. 구현예 A93 내지 구현예 A98 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 A100. 구현예 A93 내지 구현예 A98 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A101. 구현예 A93 내지 구현예 A100 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 A102. 구현예 A101에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A103. 구현예 A102에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A104. 구현예 A101에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A105. 구현예 A104에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A106. 구현예 A101에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 A107. 구현예 A106에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 A108. 세포의 사멸화를 필요로 하는 대상체에서 암 세포, 감염된 세포, 또는 노화 세포를 사멸화시키는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A109. 구현예 A108에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A110. 구현예 A109에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A111. 구현예 A108에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A112. 구현예 A111에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A113. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 구현예 A1 내지 구현예 A59의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 A60 또는 구현예 A61의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A114. 구현예 A113에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A115. 구현예 A114에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A116. 구현예 A113에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 A117. 구현예 A116에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 A118. 구현예 A113에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 A119. 구현예 A118에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 A120. 구현예 A1 내지 구현예 A59 중 임의의 한 구현예의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산.
구현예 A121. 구현예 A120의 핵산을 포함하는 벡터.
구현예 A122. 구현예 A121에 있어서, 상기 벡터는 발현 벡터인, 벡터.
구현예 A123. 구현예 A120의 핵산 또는 구현예 A121 또는 구현예 A122의 벡터를 포함하는 세포.
구현예 A124. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성을 초래하기에 충분한 조건 하에 구현예 A123의 세포를 배양 배지에서 배양하는 단계; 및
상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 상기 세포 및/또는 상기 배양 배지로부터 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 A125. 구현예 A124의 방법에 의해 생성되는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A126. 구현예 A26에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A127. 구현예 A126에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A128. 구현예 A127에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A129. 구현예 A128에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 100% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A130. 구현예 A26에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A131. 구현예 A130에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A132. 구현예 A131에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 A133. 구현예 A132에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 100% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
B. 예시적인 구현예
구현예 B1. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는
(i) 제1 표적-결합 도메인;
(ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및
(ii) 제2 표적-결합 도메인을 포함하고,
여기서:
제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 각각 IL-2 수용체에 특이적으로 결합하거나;
제1 표적-결합 도메인 및 제2 표적-결합 도메인은 각각 IL-15 수용체에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B2. 구현예 B1에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B3. 구현예 B1에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B4. 구현예 B1 내지 구현예 B3 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B5. 구현예 B1 내지 구현예 B3 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B6. 구현예 B1에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B7. 구현예 B1에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B8. 구현예 B6 또는 구현예 B7에 있어서, 상기 제2 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B9. 구현예 B6 또는 구현예 B7에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제2 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B10. 구현예 B1 내지 구현예 B9 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인과 상기 제2 표적-결합 도메인은 둘 다 가용성 인터루킨 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B11. 구현예 B10에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 가용성 IL-2 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B12. 구현예 B11에 있어서, 상기 가용성 IL-2 단백질은 가용성 인간 IL-2 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B13. 구현예 B12에 있어서, 상기 가용성 인간 IL-2 단백질은 SEQ ID NO: 28을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B14. 구현예 B10에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 가용성 IL-15 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B15. 구현예 B14에 있어서, 상기 가용성 IL-15 단백질은 가용성 인간 IL-15 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B16. 구현예 B15에 있어서, 상기 가용성 인간 IL-15 단백질은 SEQ ID NO: 39를 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B17. 구현예 B1 내지 구현예 B16 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B18. 구현예 B17에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B19. 구현예 B18에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B20. 구현예 B19에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B21. 구현예 B17 내지 구현예 B20 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 하나 이상을 포함하지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B22. 구현예 B21에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 20에 상응하는 아미노산 위치에서 라이신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 22에 상응하는 아미노산 위치에서 이소류신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 45에 상응하는 아미노산 위치에서 트립토판;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 58에 상응하는 아미노산 위치에서 아스파르트산;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 94에 상응하는 아미노산 위치에서 티로신;
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 135에 상응하는 아미노산 위치에서 아르기닌; 및
성숙한 야생형 인간 조직 인자 단백질의 아미노산 위치 140에 상응하는 아미노산 위치에서 페닐알라닌 중 임의의 것을 포함하지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B23. 구현예 B1 내지 구현예 B22 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 인자 VIIa에 결합할 수 없는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B24. 구현예 B1 내지 구현예 B23 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 불활성 인자 X를 인자 Xa로 전환시키지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B25. 구현예 B1 내지 구현예 B24 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 포유류에서 혈액 응고를 자극시키지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B26. 구현예 B1 내지 구현예 B25 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B27. 구현예 B26에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B28. 구현예 B27에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B29. 구현예 B28에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B30. 구현예 B26에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B31. 구현예 B30에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인 중 하나는 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B32. 구현예 B30에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 적어도 하나의 추가 표적-결합 도메인과 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B33. 구현예 B26에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B34. 구현예 B33에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 N-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B35. 구현예 B33에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 N-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B36. 구현예 B33에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나는 C-말단에서 상기 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인에 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B37. 구현예 B33에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 C-말단에서 하나 이상의 추가 항원-결합 도메인 중 하나와 제1 표적-결합 도메인, 제2 표적-결합 도메인, 또는 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B38. 구현예 B26 내지 구현예 B37 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 IL-2 수용체 또는 IL-15 수용체에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B39. 구현예 B38에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인, 상기 제2 표적-결합 도메인, 및 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 각각 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B40. 구현예 B26 내지 구현예 B37 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 하나 이상의 표적-결합 도메인은 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B41. 구현예 B40에 있어서, 상기 항원-결합 도메인은 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B42. 구현예 B26 내지 구현예 B37, 구현예 B40, 및 구현예 B41 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGF-DD, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM-1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B43. 구현예 B6 내지 구현예 B37, 구현예 B40, 및 구현예 B41 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B44. 구현예 B43에 있어서, 상기 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-DD, 및 SCF로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B45. 구현예 B6 내지 구현예 B37, 구현예 B40, 및 구현예 B41 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인은 가용성 인터루킨 또는 사이토카인 수용체인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B46. 구현예 B45에 있어서, 상기 가용성 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII) 및 가용성 TGF-βRIII인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B47. 구현예 B1 내지 구현예 B46 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 단부에 신호 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B48. 구현예 B1 내지 구현예 B47 중 어느 한 구현예에 있어서, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 N-말단 단부 또는 C-말단 단부에 위치한 펩타이드 태그를 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B49. 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
구현예 B50. 구현예 B49에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
구현예 B51. 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물의 적어도 하나의 용량을 포함하는 키트.
구현예 B52. 면역 세포를 자극시키는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B53. 구현예 B52에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B54. 구현예 B53에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 B55. 구현예 B54에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B56. 구현예 B52에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B57. 구현예 B52 내지 구현예 B56 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B58. 구현예 B52 내지 구현예 B57 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 B59. 구현예 B52 내지 구현예 B57 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B60. 구현예 B52 내지 구현예 B59 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B61. 구현예 B60에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B62. 구현예 B61에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B63. 구현예 B60에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B64. 구현예 B63에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B65. 구현예 B60에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 B66. 구현예 B65에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 B67. 면역 세포의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B68. 구현예 B67에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B69. 구현예 B68에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 B70. 구현예 B60에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B71. 구현예 B67에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B72. 구현예 B67 내지 구현예 B71 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, 기억 T 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B73. 구현예 B67 내지 구현예 B72 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 B74. 구현예 B67 내지 구현예 B72 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B75. 구현예 B67 내지 구현예 B74 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B76. 구현예 B75에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B77. 구현예 B76에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B78. 구현예 B75에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B79. 구현예 B78에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B80. 구현예 B75에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 B81. 구현예 B75에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 B82. 면역 세포로부터 기억 또는 기억-유사 면역 세포로의 분화를 유도하는 방법으로서, 상기 방법은
면역 세포를 유효량의 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B83. 구현예 B82에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B84. 구현예 B83에 있어서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 이전에 수득되었던 것인, 방법.
구현예 B85. 구현예 B84에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 전에 대상체로부터 면역 세포를 수득하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B86. 구현예 B82에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
구현예 B87. 구현예 B82 내지 구현예 B86 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B88. 구현예 B82 내지 구현예 B87 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
구현예 B89. 구현예 B82 내지 구현예 B87 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 접촉 단계 후, 키메라 항원-수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 인코딩하는 핵산을 면역 세포 내로 도입하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B90. 구현예 B82 내지 구현예 B89 중 어느 한 구현예에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 B91. 구현예 B90에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B92. 구현예 B91에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B93. 구현예 B90에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B94. 구현예 B93에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B95. 구현예 B90에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 B96. 구현예 B95에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 B97. 세포의 사멸화를 필요로 하는 대상체에서 암 세포, 감염된 세포, 또는 노화 세포를 사멸화시키는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B98. 구현예 B97에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B99. 구현예 B98에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B100. 구현예 B97에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B101. 구현예 B100에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B102. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 구현예 B1 내지 구현예 B48의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 구현예 B49 또는 구현예 B50의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B103. 구현예 B102에 있어서, 상기 대상체는 암을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B104. 구현예 B103에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B105. 구현예 B102에 있어서, 상기 대상체는 나이-관련 질환 또는 병태를 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
구현예 B106. 구현예 B105에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
구현예 B107. 구현예 B102에 있어서, 상기 대상체는 감염성 질환을 갖는 것으로 진단되거나 식별된 적이 있는, 방법.
구현예 B108. 구현예 B107에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
구현예 B109. 구현예 B1 내지 구현예 B48 중 임의의 한 구현예의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산.
구현예 B110. 구현예 B109의 핵산을 포함하는 벡터.
구현예 B111. 구현예 B110에 있어서, 상기 벡터는 발현 벡터인, 벡터.
구현예 B112. 구현예 B109의 핵산 또는 구현예 B110 또는 구현예 B111의 벡터를 포함하는 세포.
구현예 B113. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은
단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성을 초래하기에 충분한 조건 하에 구현예 B112의 세포를 배양 배지에서 배양하는 단계; 및
상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 상기 세포 및/또는 상기 배양 배지로부터 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
구현예 B114. 구현예 B113의 방법에 의해 생성되는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B115. 구현예 B21에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B116. 구현예 B115에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B117. 구현예 B116에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B118. 구현예 B117에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 96과 100% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B119. 구현예 B21에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B120. 구현예 B119에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97와 적어도 90% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B121. 구현예 B120에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97와 적어도 95% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
구현예 B122. 구현예 B121에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 97과 100% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
SEQUENCE LISTING <110> HCW BIOLOGICS, INC. <120> SINGLE-CHAIN CHIMERIC POLYPEPTIDES AND USES THEREOF <130> 47039-0008WO1 <140> <141> <150> 62/881,039 <151> 2019-07-31 <150> 62/817,244 <151> 2019-03-12 <150> 62/817,241 <151> 2019-03-12 <150> 62/816,683 <151> 2019-03-11 <150> 62/749,506 <151> 2018-10-23 <150> 62/746,832 <151> 2018-10-17 <150> 62/725,038 <151> 2018-08-30 <160> 117 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 696 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic alphaCD3scFv/TF/alphaCD28scFv sequence" <400> 1 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Gly Met Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser 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/note="Soluble Mouse Tissue Factor Domain" <400> 11 Ala Gly Ile Pro Glu Lys Ala Phe Asn Leu Thr Trp Ile Ser Thr Asp 1 5 10 15 Phe Lys Thr Ile Leu Glu Trp Gln Pro Lys Pro Thr Asn Tyr Thr Tyr 20 25 30 Thr Val Gln Ile Ser Asp Arg Ser Arg Asn Trp Lys Asn Lys Cys Phe 35 40 45 Ser Thr Thr Asp Thr Glu Cys Asp Leu Thr Asp Glu Ile Val Lys Asp 50 55 60 Val Thr Trp Ala Tyr Glu Ala Lys Val Leu Ser Val Pro Arg Arg Asn 65 70 75 80 Ser Val His Gly Asp Gly Asp Gln Leu Val Ile His Gly Glu Glu Pro 85 90 95 Pro Phe Thr Asn Ala Pro Lys Phe Leu Pro Tyr Arg Asp Thr Asn Leu 100 105 110 Gly Gln Pro Val Ile Gln Gln Phe Glu Gln Asp Gly Arg Lys Leu Asn 115 120 125 Val Val Val Lys Asp Ser Leu Thr Leu Val Arg Lys Asn Gly Thr Phe 130 135 140 Leu Thr Leu Arg Gln Val Phe Gly Lys Asp Leu Gly Tyr Ile Ile Thr 145 150 155 160 Tyr Arg Lys Gly Ser Ser Thr Gly Lys Lys Thr Asn Ile Thr Asn Thr 165 170 175 Asn Glu Phe Ser Ile Asp Val Glu Glu Gly Val Ser Tyr Cys Phe Phe 180 185 190 Val Gln Ala Met Ile Phe Ser Arg Lys Thr Asn 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Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Anti-CD3 scFv light chain variable domain sequence" <400> 19 cagatcgtgc tgacccagtc ccccgctatt atgagcgcta gccccggtga aaaggtgact 60 atgacatgca gcgccagctc ttccgtgagc tacatgaact ggtatcagca gaagtccggc 120 accagcccta aaaggtggat ctacgacacc agcaagctgg ccagcggcgt ccccgctcac 180 tttcggggct ccggctccgg aacaagctac tctctgacca tcagcggcat ggaagccgag 240 gatgccgcta cctattactg tcagcagtgg agctccaacc ccttcacctt tggatccggc 300 accaagctcg agattaatcg t 321 <210> 20 <211> 241 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Anti-CD3 scFv sequence" <400> 20 Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr 35 40 45 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala His Phe Arg Gly Ser 50 55 60 Gly 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Synthetic NE-tag sequence" <400> 83 Thr Lys Glu Asn Pro Arg Ser Asn Gln Glu Glu Ser Tyr Asp Asp Asn 1 5 10 15 Glu Ser <210> 84 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic S-tag sequence" <400> 84 Lys Glu Thr Ala Ala Ala Lys Phe Glu Arg Gln His Met Asp Ser 1 5 10 15 <210> 85 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic SBP-tag sequence" <400> 85 Met Asp Glu Lys Thr Thr Gly Trp Arg Gly Gly His Val Val Glu Gly 1 5 10 15 Leu Ala Gly Glu Leu Glu Gln Leu Arg Ala Arg Leu Glu His His Pro 20 25 30 Gln Gly Gln Arg Glu Pro 35 <210> 86 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Softag 1 sequence" <400> 86 Ser Leu Ala Glu Leu Leu Asn Ala Gly Leu Gly Gly Ser 1 5 10 <210> 87 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Softag 3 sequence" <400> 87 Thr Gln Asp Pro Ser Arg Val Gly 1 5 <210> 88 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Spot-tag sequence" <400> 88 Pro Asp Arg Val Arg Ala Val Ser His Trp Ser Ser 1 5 10 <210> 89 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Strep-tag sequence" <400> 89 Trp Ser His Pro Gln Phe Glu Lys 1 5 <210> 90 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic TC tag sequence" <400> 90 Cys Cys Pro Gly Cys Cys 1 5 <210> 91 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Ty tag sequence" <400> 91 Glu Val His Thr Asn Gln Asp Pro Leu Asp 1 5 10 <210> 92 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic V5 tag sequence" <400> 92 Gly Lys Pro Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Ser Thr 1 5 10 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic VSV-tag sequence" <400> 93 Tyr Thr Asp Ile Glu Met Asn Arg Leu Gly Lys 1 5 10 <210> 94 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic Xpress tag sequence" <400> 94 Asp Leu Tyr Asp Asp Asp Asp Lys 1 5 <210> 95 <400> 95 000 <210> 96 <211> 219 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> source <223> /note="Mutant Soluble Human Tissue Factor Domain" <400> 96 Ser Gly Thr Thr Asn Thr Val Ala Ala Tyr Asn Leu Thr Trp Lys Ser 1 5 10 15 Thr Asn Phe Ala Thr Ala Leu Glu Trp Glu Pro Lys Pro Val Asn Gln 20 25 30 Val Tyr Thr Val Gln Ile Ser Thr Lys Ser Gly Asp Trp Lys Ser Lys 35 40 45 Cys Phe Tyr Thr Thr Asp Thr Glu Cys Ala Leu Thr Asp Glu Ile Val 50 55 60 Lys Asp Val Lys Gln Thr 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Glu Phe Thr Pro Tyr Leu Glu Thr Asn Leu Gly Gln 210 215 220 Pro Thr Ile Gln Ser Phe Glu Gln Val Gly Thr Lys Val Asn Val Thr 225 230 235 240 Val Glu Asp Glu Arg Thr Leu Val Arg Arg Asn Asn Thr Phe Leu Ser 245 250 255 Leu Arg Asp Val Phe Gly Lys Asp Leu Ile Tyr Thr Leu Tyr Tyr Trp 260 265 270 Lys Ser Ser Ser Ser Gly Lys Lys Thr Ala Lys Thr Asn Thr Asn Glu 275 280 285 Phe Leu Ile Asp Val Asp Lys Gly Glu Asn Tyr Cys Phe Ser Val Gln 290 295 300 Ala Val Ile Pro Ser Arg Thr Val Asn Arg Lys Ser Thr Asp Ser Pro 305 310 315 320 Val Glu Cys Met Gly Gln Glu Lys Gly Glu Phe Arg Glu Asn Trp Val 325 330 335 Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile Gln Ser Met 340 345 350 His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His Pro Ser Cys 355 360 365 Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln Val Ile Ser 370 375 380 Leu Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu Asn Leu Ile 385 390 395 400 Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val Thr Glu Ser 405 410 415 Gly Cys Lys Glu 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Claims (42)

  1. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드로서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는
    (i) 제1 표적-결합 도메인;
    (ii) 가용성 조직 인자 도메인; 및
    (iii) 제2 표적-결합 도메인을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 가용성 조직 인자 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  3. 제1항에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 제1 표적-결합 도메인과 가용성 조직 인자 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 서로 직접적으로 인접해 있는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 가용성 조직 인자 도메인과 제2 표적-결합 도메인 사이에 링커 서열을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  7. 제6항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  8. 제7항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  9. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인은 상이한 항원에 특이적으로 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 항원-결합 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인과 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는, CD16a, CD28, CD3, CD33, CD20, CD19, CD22, CD123, IL-1R, IL-1, VEGF, IL-6R, IL-4, IL-10, PDL-1, TIGIT, PD-1, TIM3, CTLA4, MICA, MICB, IL-6, IL-8, TNFα, CD26a, CD36, ULBP2, CD30, CD200, IGF-1R, MUC4AC, MUC5AC, Trop-2, CMET, EGFR, HER1, HER2, HER3, PSMA, CEA, B7H3, EPCAM, BCMA, P-카드헤린, CEACAM5, UL16-결합 단백질, HLA-DR, DLL4, TYRO3, AXL, MER, CD122, CD155, PDGFDD, TGF-β 수용체 II(TGF-βRII)의 리간드, TGF-βRIII의 리간드, DNAM1의 리간드, NKp46의 리간드, NKp44의 리간드, NKG2D의 리간드, NKp30의 리간드, scMHCI에 대한 리간드, scMHCII에 대한 리간드, scTCR에 대한 리간드, IL-1에 대한 수용체, IL-2에 대한 수용체, IL-3에 대한 수용체, IL-7에 대한 수용체, IL-8에 대한 수용체, IL-10에 대한 수용체, IL-12에 대한 수용체, IL-15에 대한 수용체, IL-17에 대한 수용체, IL-18에 대한 수용체, IL-21에 대한 수용체, PDGF-DD에 대한 수용체, 줄기세포 인자(SCF)에 대한 수용체, 줄기세포-유사 티로신 키나제 3 리간드(FLT3L)에 대한 수용체, MICA에 대한 수용체, MICB에 대한 수용체, ULP16-결합 단백질에 대한 수용체, CD155에 대한 수용체, CD122에 대한 수용체, 및 CD28에 대한 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 표적에 결합하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  13. 제12항에 있어서, 상기 가용성 인터루킨, 가용성 사이토카인 단백질, 또는 가용성 세포 표면 단백질은 IL-1, IL-2, IL-3, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-21, PDGF-D, SCF, FLT3L, MICA, MICB, 및 ULP16-결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  14. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 표적-결합 도메인 및 상기 제2 표적-결합 도메인 중 하나 또는 둘 다는 가용성 인터루킨 수용체, 가용성 사이토카인 수용체, 또는 가용성 세포 표면 수용체인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  15. 제14항에 있어서, 상기 가용성 인터루킨 수용체, 상기 가용성 사이토카인 수용체, 또는 상기 가용성 세포 표면 수용체는 가용성 TGF-β 수용체 II(TGF-βRII), 가용성 TGF-βRIII, 가용성 NKG2D, 가용성 NKp30, 가용성 NKp44, 가용성 NKp46, 가용성 DNAM-1, scMHCI, scMHCII, scTCR, 가용성 CD155, 또는 가용성 CD28인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 가용성 인간 조직 인자 도메인인, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  17. 제16항에 있어서, 상기 가용성 인간 조직 인자 도메인은 SEQ ID NO: 9와 적어도 80% 동일한 서열을 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드는 이의 N-말단 및/또는 C-말단에 하나 이상의 추가 표적-결합 도메인을 추가로 포함하는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  19. 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 조성물은 약학적 조성물인, 조성물.
  21. 제19항 또는 제20항의 조성물의 적어도 하나의 용량을 포함하는 키트.
  22. 면역 세포를 자극시키는 방법으로서, 상기 방법은
    면역 세포를 유효량의 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 제19항 또는 제20항의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  23. 면역 세포의 증식을 유도하거나 증가시키는 방법으로서, 상기 방법은
    면역 세포를 유효량의 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 제19항 또는 제20항의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  24. 면역 세포로부터 기억 또는 기억-유사 면역 세포로의 분화를 유도하는 방법으로서, 상기 방법은
    면역 세포를 유효량의 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 제19항 또는 제20항의 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 시험관내에서 접촉되는, 방법.
  26. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 생체내에서 접촉되는, 방법.
  27. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 미성숙한 흉선세포, 말초 혈액 림프구, 미접촉 T 세포, 만능 Th 세포 전구체, 림프계 전구 세포, Treg 세포, Th17 세포, Th22 세포, Th9 세포, Th2 세포, Th1 세포, Th3 세포, γδ T 세포, αβ T 세포, 종양-침윤 T 세포, CD8+ T 세포, CD4+ T 세포, 자연 살해 T 세포, 비만 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 호염기구, 호산구, 및 자연 살해 세포로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  28. 제22항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 면역 세포는 키메라 항원 수용체 또는 재조합 T-세포 수용체를 발현하도록 이전에 유전적으로 변형되었던 것인, 방법.
  29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 면역 세포를, 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  30. 세포의 사멸화를 필요로 하는 대상체에서 암 세포, 감염된 세포, 또는 노화 세포를 사멸화시키는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 제19항 또는 제20항의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  31. 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 치료적 유효량의 제1항 내지 제18항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드 또는 제19항 또는 제20항의 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  32. 제30항 또는 제31항에 있어서, 상기 대상체는 암, 나이-관련 질환 또는 병태, 또는 감염성 질환을 갖는 것으로 식별되거나 진단된 적이 있는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 암은 고형 종양, 혈액학적 종양, 육종, 골육종, 교모세포종, 신경모세포종, 흑색종, 횡문근육종, 에윙 육종, 골육종, B-세포 신생물, 다발성 골수종, B-세포 림프종, B-세포 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 골수이형성 증후군(MDS), 피부 T-세포 림프종, 망막모세포종, 위암, 요로상피세포암종, 폐암, 신세포 암종, 위 및 식도 암, 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장직장암, 난소암, 비-소세포 폐 암종, 편평 세포 두경부 암종, 자궁내막암, 자궁경부암, 간암, 및 간세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  34. 제32항에 있어서, 상기 나이-관련 질환 또는 병태는 알츠하이머 질환, 동맥류, 낭포성 섬유증, 췌장염 중 섬유증, 녹내장, 고혈압, 특발성 폐 섬유증, 염증성 장 질환, 추간판 퇴행, 황반 변성, 골관절염, 2형 진성 당뇨병, 지방질 위축, 지방이영양증, 아테롬성 동맥경화증, 백내장, COPD, 특발성 폐 섬유증, 신장 이식 실패, 간 섬유증, 골 질량 손실, 심근 경색, 근감소증, 상처 치유, 탈모, 심근세포 비대, 골관절염, 파킨슨 질환, 폐 조직 탄성의 나이-관련 손실, 황반 변성, 악액질, 사구체경화증, 간경변, NAFLD, 골다공증, 근위축성 측색 경화증, 헌팅턴 질환, 척수소뇌 실조증, 다발성 경화증, 및 신장 기능장애로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  35. 제32항에 있어서, 상기 감염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스, 사이토메갈로바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 리노바이러스, 로타바이러스, 천연두, 단순포진 바이러스, B형 간염 바이러스, A형 간염 바이러스, 및 C형 간염 바이러스, 유두종바이러스, 및 인플루엔자 바이러스에 의한 감염인, 방법.
  36. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 임의의 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 인코딩하는 핵산.
  37. 제36항의 핵산을 포함하는 벡터.
  38. 제36항의 핵산 또는 제37항의 벡터를 포함하는 세포.
  39. 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은
    단일-사슬 키메라 폴리펩타이드의 생성을 초래하기에 충분한 조건 하에 제38항의 세포를 배양 배지에서 배양하는 단계; 및
    상기 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드를 상기 세포 및/또는 상기 배양 배지로부터 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
  40. 제39항의 방법에 의해 생성되는 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  41. 제16항에 있어서, 상기 인간 가용성 조직 인자 도메인은 혈액 응고를 개시하지 않는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
  42. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가용성 조직 인자 도메인은 야생형 가용성 인간 조직 인자로부터의 서열을 포함하거나 이로 구성되는, 단일-사슬 키메라 폴리펩타이드.
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