KR20190137105A

KR20190137105A - Pd-1, tim-3 및 lag-3을 표적화하는 조합 요법

Info

Publication number: KR20190137105A
Application number: KR1020197030876A
Authority: KR
Inventors: 트리네 린드스테트; 미카엘 몬라트 그랜달; 에바 마리아 카를센 멜란데르; 카밀라 프뢸리히; 미켈 반다흘 페데르젠; 미카엘 크라호; 요한 란토; 모니카 가트; 이반 다비드 호락
Original assignee: 심포젠 에이/에스
Priority date: 2017-04-05
Filing date: 2018-04-05
Publication date: 2019-12-10
Also published as: MX2022007140A; CN110621698A; CA3058960C; CN110621698B; CN114984209A; TWI822101B; US11939380B2; AU2022204078A1; PE20191741A1; AU2018247916A1; CA3185303A1; RU2019134934A; TW202235106A; EP3606957A1; MX2019011961A; KR20220083863A; SG11201908919XA; US20220380470A1; TWI801376B; CA3058960A1

Abstract

본 개시내용은 면역 강화가 필요한 환자에서 PD-1, TIM-3, 및 LAG-3에 특이적인 항체를 사용하는 이들 표적 중 2개 또는 모두를 표적화하는 조합 요법에 관한 것이다. 또한 요법에 유용한 조성물이 본 개시내용에 포함된다. 상기 요법은 암과 같은 질병을 치료하는데 유용하다.

Description

PD-1, TIM-3 및 LAG-3을 표적화하는 조합 요법

관련 출원의 전후 참조

본 출원은 2017년 4월 5일 출원된 미국 가특허 출원 62/481,973호로부터 우선권을 주장하며, 이의 개시내용은 전문이 본원에 참조로서 포함된다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이의 전체내용은 참조로서 본원에 포함된다. 2018년 3월 23일에 작성된 서열 목록의 전자 사본의 명칭은 022675_WO058_SL.txt이고 크기는 232,360 바이트이다.

발명의 배경

프로그램된 세포 사멸 단백질 1 및 CD279로도 알려진 PD-1은 면역글로불린 슈퍼패밀리에 속하는 268개 아미노산의 세포 표면 수용체이다. PD-1은 T 세포 조절제의 CD28 패밀리의 구성원이며 T 세포, B 세포 및 대식세포에서 발현된다. 이것은 리간드 PD-L1(B7 동족체로도 알려짐) 및 PD-L2(B7-DC로도 알려짐)에 결합한다. PD-1은 타입 I 막 단백질이고, 이의 구조는 세포외 IgV 도메인, 막통과 영역 및 2개의 인산화 부위를 함유하는 세포내 꼬리를 포함한다. 면역 체크포인트 단백질로 알려진 PD-1은, 예를 들어, 항원 자극에 대한 T 세포 반응의 음성 조절에서 역할을 하는 유도성 면역 조절 수용체로서 기능한다.

PD-L1은 PD-1에 대한 주요 리간드이다. PD-1에 대한 PD-L1의 결합은 T 세포 활성을 억제하여, 사이토카인 생산을 감소시키고 T 세포 증식을 억제한다. PD-L1을 발현하는 암 세포는 PD-1 수용체에 대한 PD-L1의 결합을 통해 T 세포의 항-종양 활성을 불활성화시키기 위해 이 메커니즘을 이용할 수 있다. PD-1은 이의 면역 반응 조절 특성에 비추어, 암 및 자가면역 질환의 치료를 포함하는 면역요법의 잠재적 표적으로서 연구되어 왔다. 2개의 항-PD-1 항체인 펨브롤리주맙 및 니볼루맙은 특정 암 치료를 위해 미국 및 유럽에서 승인되었다.

다른 면역 체크포인트 단백질은 TIM-3(T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유 3) 및 LAG-3(림프구-활성화 유전자 3)을 포함한다. HAVCR2(A형 간염 바이러스 세포 수용체 2) 또는 CD366으로도 알려진 TIM-3은 T-세포 면역글로불린 및 뮤신 도메인 단백질 패밀리의 구성원이다. TIM-3는 인간에서 Havcr2 유전자에 의해 인코딩되고, 막 원위 IgV 도메인 및 막 근위 뮤신-도메인을 갖는 33 kDa 타입 I 당단백질이다. 이것은 리간드 결합시 인산화되는 5개의 Tyr 잔기의 보존된 영역을 세포내 도메인에 함유한다. TIM-3는 T-세포, 수지상 세포, 대식세포, 및 자연 살해(NK) 세포를 포함하는 면역 시스템의 적응성 및 선천성 아암 둘 모두로부터 유래된 많은 상이한 세포에 의해 발현된다. TIM-3 발현은 나이브 T 세포에서는 낮지만 T 세포 활성화시에 고도로 상향조절된다. T-세포와 달리, 수지상 세포, NK 세포 및 단핵구와 같은 선천성 세포는 높은 기초 TIM-3 발현을 갖는다. TIM-3는 갈랙틴-9, 포스파티딜세린, CEACAM-1 및 HMGB-1을 포함하는 대부분 무차별한 여러 리간드와 관련이 있지만, 이러한 리간드의 정확한 역할은 현재 알려져 있지 않다.

비록 TIM-3는 체크포인트 억제제인 것으로 제안되었지만, TIM-3이, 예를 들어, PD-1과 유사한 방식으로 T 세포 활성화 또는 사이토카인 분비의 억제를 직접적으로 매개한다는 발상을 지지하는 증거는 비교적 드물다. 또한, PD-1과 달리, TIM-3는 선천계의 세포, 및 특히 수지상 세포의 조절에서 역할을 하는 것으로 보인다. TIM-3 및 종양 면역학에서 이의 역할과 관련된 기능적 데이터의 대부분은 다양한 항체를 이용한 생체내 연구에서 비롯된다. 이러한 대부분의 연구에서, 불충분한 항체 검증으로 인해, TIM-3 항체의 효과가 리간드 결합의 억제 또는 표적에 대한 효능제 효과에 의해 매개되는지는 확실하지 않다. TIM-3은 이의 면역 반응 조절 특성에 비추어, 암 및 자가면역 질환의 치료를 포함하는 면역요법의 잠재적 표적으로서 연구되어 왔다. 단일 항-IM-3 항체가 현재 임상 개발 중에 있으나, 현재 승인된 항-TIM-3 항체는 없다.

CD223으로도 알려진 LAG-3은 면역 체크포인트 수용체로서 기능하는 면역글로불린 슈퍼패밀리 단백질이다. 성숙 단백질은 4개의 세포외 Ig-유사 도메인을 갖는 503개-아미노산 타입 I 막통과 단백질이다. 이것은 활성화된 T 세포, T 조절성(Treg) 세포, 자연 살해 세포, B 세포 및 플라스마사이토이드(plasmacytoid) 수지상 세포를 포함하는 다양한 유형의 세포에서 발현된다. 서열 데이터, 엑손/인트론 구성, 및 LAG-3의 염색체 국소화에 대한 정보는 이것이 CD4와 밀접한 관련이 있음을 나타낸다. CD4와 유사하게, LAG-3는 MHC 클래스 II 분자에 결합하지만, CD4와 비교하여 더 높은 친화도로 그리고 별개의 위치에서 결합한다.

LAG-3는 CTLA-4 및 PD-1과 유사한 방식으로 T 세포 증식, 활성화 및 항상성을 조절하는 것으로 여겨지는 보조-억제 수용체이다. 리간드가 세포외 도메인에 결합하면, LAG-3는 세포질 도메인을 통한 후속 신호전달을 통해 그 효과를 발휘한다. LAG-3에 대해 가장 잘 특성화된 리간드는 MHC 클래스 II(MHCII)이지만, LSECtin을 포함하는 다른 LAG-3 리간드가 기재되어 있다. LAG-3는 전통적인 ITIM 또는 ITSM 모티프를 갖지 않지만, T-세포 활성에 대한 그 억제 효과를 확립하는데 필수적이라고 여겨지는 보존된 KIEELE 모티프(SEQ ID NO: 397)를 갖는다. LAG-3가 T-세포 활성에 영향을 미치는 정확한 메커니즘은 잘 이해되어 있지 않다. LAG-3는 활성화된 T 세포가 세포 주기의 성장 단계로 들어가는 것을 차단함으로써 T 세포 확장을 억제하여, S-단계에 세포의 축적을 발생시킨다. LAG-3는 또한 조절성 T-세포의 억제 활성을 강화시키고 수지상 세포 기능을 조절하는데 역할을 한다고 여겨진다. 암 세포는 이펙터 T 세포에서 LAG-3와 결합하여 이들의 활성을 억제하고 종양 면역 이탈을 유도하는 MHCII의 발현을 상향조절하는 능력을 갖는다.

면역 조절제로서 PD-1, LAG-3 및 TIM-3의 중요한 역할을 고려할 때, 암 및 면역 시스템의 특정 장애를 치료하기 위해 이들 수용체를 표적화하는 새롭고 개선된 조합 요법이 필요하다.

발명의 개요

본 발명은 본원에 기재된 것들과 같은 항-PD-1 항체가 항-TIM-3 항체 및/또는 항-LAG-3 항체와 조합하여 사용될 때 상기 항체의 면역-강화 효능이 현저하게 증가한다는 발견에 기반한다. 본 발명자들은 본 발명의 조합 요법이 환자 자신의 항암 면역을 활성화시킴으로써 인간 환자에서 암을 치료하는데 특히 효과적이라는 것을 발견하였다. 항체 치료법을 포함하는 현재 이용 가능한 암 치료법과 비교하여, 본 발명의 조합 요법은 우수한 임상 반응을 제공할 수 있을 것으로 고려된다.

따라서, 본 발명은 환자에게 (1) 인간 PD-1과의 결합에 대해 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 및 13112.15380으로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 (2) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여함으로써 암 환자와 같은 이를 필요로 하는 인간 환자에서 면역을 강화시키는 방법을 제공한다. 특정 구체예에서, 상기 방법은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 하기를 포함하는 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다:

a) SEQ ID NO: 388의 잔기 V64, L128, P130, K131, 및 A132;

b) SEQ ID NO: 388의 잔기 V44 및 T145;

c) SEQ ID NO: 388의 잔기 K131 및 E136; 또는

d) SEQ ID NO: 388의 잔기 V44 및 T145.

a) SEQ ID NO: 388의 잔기 56-64, 69-90, 및 122-140;

b) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-90 및 122-140;

c) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75;

d) SEQ ID NO: 388의 잔기 136-140; 또는

e) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75 및 136-140.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

a) 750 pM 이하의 K_D로 인간 PD-1에 결합하고;

b) 7 nM 이하의 K_D로 시노몰구스 PD-1에 결합하고;

c) 1 nM 이하의 K_D로 마우스 PD-1에 결합하고;

d) 래트 PD-1에 결합하지 않고;

e) 스태필로코쿠스 엔테로톡신 B(SEB) 전혈 검정에서 IL-2 분비를 증가시키고;

f) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;

g) 유세포분석 경쟁 검정에서 10 μg/mL의 농도에서 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 적어도 60%만큼 억제하고;

h) Bio-Layer Interferometry 분석에 의해 결정된 바와 같이 10 μg/mL의 농도에서 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 적어도 90%만큼 차단하고;

i) 생체내 종양 성장을 억제한다.

특정 구체예에서, 항-PD-1 항체는 상기 모든 특징을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체의 중쇄 상보성-결정 영역(H-CDR) 1-3 및 경쇄 상보성-결정 영역(L-CDR) 1-3은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 228-233;

b) 각각 SEQ ID NO: 238-243;

c) 각각 SEQ ID NO: 248-253;

d) 각각 SEQ ID NO: 258-263;

e) 각각 SEQ ID NO: 268-273;

f) 각각 SEQ ID NO: 278-283;

g) 각각 SEQ ID NO: 288-293; 또는

h) 각각 SEQ ID NO: 298-303.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 226 및 227;

b) 각각 SEQ ID NO: 236 및 237;

c) 각각 SEQ ID NO: 236 및 392;

d) 각각 SEQ ID NO: 246 및 247;

e) 각각 SEQ ID NO: 256 및 257;

f) 각각 SEQ ID NO: 266 및 267;

g) 각각 SEQ ID NO: 276 및 277;

h) 각각 SEQ ID NO: 286 및 287; 또는

i) 각각 SEQ ID NO: 296 및 297.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 다음을 포함한다:

a) SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC), 및 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);

b) SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

c) SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

d) SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

e) SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

f) SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

g) SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

h) SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는

i) SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 인간 TIM-3와의 결합에 대해 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, 및 20621로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 TIM-3의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 다음을 포함하는 인간 TIM-3의 에피토프에 결합한다:

a) SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, 및 D120;

b) SEQ ID NO: 389의 잔기 F61, R69, 및 I117; 또는

c) SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, F61, E62, I117, M118, 및 D120.

a) SEQ ID NO: 389의 잔기 62-67; 또는

b) SEQ ID NO: 389의 잔기 114-117.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

a) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 23 nM 이하의 K_D로 인간 TIM-3에 결합하고;

b) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 22 nM 이하의 K_D로 시노몰구스 TIM-3에 결합하고;

c) ELISA에 의해 측정시 1.2 nM 이하의 EC50으로 인간 TIM-3에 결합하고;

d) ELISA에 의해 측정시 46 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 TIM-3에 결합하고;

e) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;

f) 이원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;

g) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 TNF-α 분비를 증가시키고;

h) 수지상 세포로부터 TNF-α 분비를 증가시키고;

i) TIM-3와 포스파티딜세린의 상호작용을 억제한다.

특정 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 적어도 특징 a), c), d), e), g), h), 및 i)를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 8-13;

b) 각각 SEQ ID NO: 18-23;

c) 각각 SEQ ID NO: 28-33;

d) 각각 SEQ ID NO: 38-43;

e) 각각 SEQ ID NO: 48-53;

f) 각각 SEQ ID NO: 58-63;

g) 각각 SEQ ID NO: 68-73;

h) 각각 SEQ ID NO: 78-83;

i) 각각 SEQ ID NO: 88-93;

j) 각각 SEQ ID NO: 98-103;

k) 각각 SEQ ID NO: 108-113;

l) 각각 SEQ ID NO: 118-123;

m) 각각 SEQ ID NO: 128-133;

n) 각각 SEQ ID NO: 138-143;

o) 각각 SEQ ID NO: 148-153;

p) 각각 SEQ ID NO: 158-163;

q) 각각 SEQ ID NO: 168-173;

r) 각각 SEQ ID NO: 178-183;

s) 각각 SEQ ID NO: 188-193;

t) 각각 SEQ ID NO: 198-203;

u) 각각 SEQ ID NO: 208-213; 또는

v) 각각 SEQ ID NO: 218-223.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 7 및 4;

b) 각각 SEQ ID NO: 3 및 4;

c) 각각 SEQ ID NO: 16 및 17;

d) 각각 SEQ ID NO: 26 및 27;

e) 각각 SEQ ID NO: 36 및 37;

f) 각각 SEQ ID NO: 46 및 47;

g) 각각 SEQ ID NO: 56 및 57;

h) 각각 SEQ ID NO: 66 및 67;

i) 각각 SEQ ID NO: 76 및 77;

j) 각각 SEQ ID NO: 86 및 87;

k) 각각 SEQ ID NO: 96 및 97;

l) 각각 SEQ ID NO: 106 및 107;

m) 각각 SEQ ID NO: 116 및 117;

n) 각각 SEQ ID NO: 126 및 127;

o) 각각 SEQ ID NO: 136 및 137;

p) 각각 SEQ ID NO: 146 및 147;

q) 각각 SEQ ID NO: 156 및 157;

r) 각각 SEQ ID NO: 166 및 167;

s) 각각 SEQ ID NO: 176 및 177;

t) 각각 SEQ ID NO: 186 및 187;

u) 각각 SEQ ID NO: 196 및 197;

v) 각각 SEQ ID NO: 206 및 207; 또는

w) 각각 SEQ ID NO: 216 및 217.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 하기를 포함한다:

a) SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

b) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

e) SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

f) SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

g) SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

h) SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

i) SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

j) SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

k) SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

l) SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

m) SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

n) SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

o) SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

p) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

q) SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

r) SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

s) SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

t) SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

u) SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

v) SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는

w) SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 인간 LAG-3와의 결합에 대해 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572, 및 15011로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 하기를 포함하는 인간 LAG-3의 에피토프에 결합한다:

a) SEQ ID NO: 68의 잔기 H85, P86, A87, P89, S91, W92, 및 G93;

b) SEQ ID NO: 68의 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163;

c) SEQ ID NO: 68의 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163; 또는

d) SEQ ID NO: 68의 잔기 G107, L109, R110, 및 S111.

a) SEQ ID NO: 68의 잔기 98-105;

b) SEQ ID NO: 68의 잔기 78-105 및 123-131;

c) SEQ ID NO: 68의 잔기 23-30, 40-66, 88-105, 123-137, 및 148-152; 또는

d) SEQ ID NO: 68의 잔기 23-30, 40-66, 98-105, 118-137, 및 148-161.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

a) 20 μg/mL의 농도에서, A375 세포 상의 인간 MHC 클래스 II에 대한 인간 LAG-3의 결합을 유세포분석 경쟁 검정에 의해 측정시 음성 대조군 항체와 비교하여 85% 넘게 감소시키고;

b) 20 μg/mL의 농도에서, A375 세포 상의 인간 MHC 클래스 II에 대한 인간 LAG-3의 결합을 유세포분석 경쟁 검정에 의해 측정시 음성 대조군 항체와 비교하여 35% 내지 85% 감소시키고;

c) Jurkat 세포 상에 발현된 인간 LAG-3 및 Raji 세포 상에 발현된 인간 MHC 클래스 II 사이의 결합을 차단하고;

d) 유세포분석에 의해 측정시 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합하고;

e) 유세포분석에 의해 측정시 0.3 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합하고;

f) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.0 x 10-8 이하의 K_D로 인간 LAG-3에 결합하고;

g) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 1.5 x 10-7 이하의 K_D로 시노몰구스 LAG-3에 결합하고;

h) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.5 x 10-8 이하의 K_D로 마우스 LAG-3에 결합하고;

i) 스태필로코쿠스 엔테로톡신 B(SEB)로 처리된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 IL-2 생산을 자극하고;

j) 인간 T 세포에서 LAG-3의 세포 수준을 감소시키고;

k) 인간 T 세포의 배양물에서 LAG-3의 가용성 수준을 감소시키고;

l) 생체내에서 종양 성장 회귀를 유도하고;

m) 생체내에서 종양 성장을 지연시키고;

n) 항체 25F7-Lag3.5와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합하지 않는다.

특정 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 적어도 특징 a), c), d), e), f), g), i), j), k), m), 및 n)을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 318-323;

b) 각각 SEQ ID NO: 308-313;

c) 각각 SEQ ID NO: 328-333;

d) 각각 SEQ ID NO: 338-343;

e) 각각 SEQ ID NO: 348-353;

f) 각각 SEQ ID NO: 358-363; 또는

g) 각각 SEQ ID NO: 368-373.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인은 하기의 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 316 및 317;

b) 각각 SEQ ID NO: 306 및 307;

c) 각각 SEQ ID NO: 326 및 327;

d) 각각 SEQ ID NO: 336 및 337;

e) 각각 SEQ ID NO: 346 및 347;

f) 각각 SEQ ID NO: 356 및 357; 또는

g) 각각 SEQ ID NO: 366 및 367.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 다음을 포함한다:

a) SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

b) SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

c) SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

d) SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

e) SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

f) SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는

g) SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC.

일부 구체예에서, 상기 방법은 환자에게 다음을 투여하는 단계를 포함한다:

a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체;

b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 7 및 4의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 또는

c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체.

a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체;

b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 316 및 317의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체; 또는

c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.

a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체;

b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 7 및 4의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 316 및 317의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체; 또는

c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.

항체 또는 항원-결합 부분은 환자에게 동시에(예를 들어, 단일 약학적 조성물로) 또는 순차적으로 투여될 수 있다.

본 발명의 요법은 혈액학적 악성종양(예를 들어, 백혈병, 호지킨 림프종, 또는 비호지킨 림프종)과 같은 암, 또는 고형 종양을 갖는 환자를 치료하는데 유용하다. 일부 구체예에서, 환자는 흑색종, 비소세포폐암, 방광암, 두경부 편평 세포 암종, 난소암, 결장직장암, 신장 세포 암종, 메르켈(Merkel)-세포 암종, 섬유육종, 신경아교육종, 또는 아교모세포종을 가질 수 있다. 본 발명의 요법은 추가로 방사선, 또는 화학치료제, 항신생물제, 및 항혈관형성제 중 적어도 하나를 포함할 수 있다.

또한 a) 인간 PD-1 및 인간 TIM-3; b) 인간 PD-1 및 인간 LAG-3; 또는 c) 인간 PD-1, 인간 항-TIM-3, 및 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 다중-특이적(예를 들어, 이특이적 또는 삼특이적) 항체가 본 발명에서 제공된다. 특정 구체예에서, 다중-특이적 항체는 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 항원-결합 부분, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체의 항원-결합 부분, 및/또는 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 항원-결합 부분을 포함한다.

또한 (1) 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, (2) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 (3) 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 본 발명에서 제공된다. 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 것들로부터 선택될 수 있다.

일부 구체예에서, 약학적 조성물은 다음을 포함한다:

조성물 내의 항체들은 동일한 양으로 존재할 수 있다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 본원에 기재된 방법에서 인간 환자를 치료하는데 사용하기 위한 것이다. 특정 구체예에서, 약학적 조성물은 이를 필요로 하는 인간 환자에서 면역을 강화시키는데 사용하기 위한 것이고, 예를 들어, 암을 치료하기 위한 것이다.

본 발명은 또한 본원에 기술된 치료 방법에 사용하기 위한, 예를 들어, 이를 필요로 하는 인간 환자에서 면역을 강화시키고/거나 암을 치료하기 위한, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다. 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 것들로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 방법에서 인간 환자를 치료하는데 사용하기 위한 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 제공한다.

본 발명은 또한 이를 필요로 하는 환자(예를 들어, 인간 환자)에서 면역을 강화시키고/거나 암을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 용도를 제공한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 인간 환자에서 면역을 강화시키기 위한, 예를 들어, 암을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 용도를 제공한다. 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 것들로부터 선택될 수 있다.

본 발명은 또한 본원에 기재된 방법에서 인간 환자를 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 용도를 제공한다.

본 발명은 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 제조 물품을 추가로 포함하고, 상기 제조 물품은, 예를 들어, 본원에 기재된 치료 방법에서, 환자(예를 들어, 인간 환자)의 면역을 강화시키고/거나 암을 치료하기에 적합하다. 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 것들로부터 선택될 수 있다.

도면의 간단한 설명
도 1은 10 μg/mL의 대조군 항체(IgG1 LALA 또는 IgG2), 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 또는 1:1 비의 항체 12819 및 15086.17145의 조합물로 처리한 후, 일원 MLR(혼합 림프구 반응) 검정에서 5일 배양 후, 3개의 도너 쌍(패널 A-C)에서 IFN-γ 수준의 증가율을 나타내는 그래프의 세트이다. 그래프의 각 점은 반복 실험을 나타내며 평균은 가로 막대로 표시된다.
도 2는 10 μg/mL의 대조군 항체(IgG1 LALA 또는 IgG2), 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 또는 1:1 비의 항체 12819 및 15086.17145의 조합물로 처리한 후, 이원 MLR 검정에서 5일 배양 후, 3개의 도너 쌍(패널 A-C)에서 IFN-γ 수준의 증가율을 나타내는 그래프의 세트이다. 그래프의 각 점은 반복 실험을 나타내며 평균은 가로 막대로 표시된다.
도 3은 일원 MLR 검정에서 양성 대조군 항-PD-1 항체 12819와 비교하여 T-세포 증식에 대한 항-TIM-3 항체 15086.17145의 효과를 나타내는 한 쌍의 그래프이다. 항체를 25 μg/mL의 최종 농도로 첨가하고, 가용성 항-CD3 없이(패널 A) 또는 함께(패널 B) 5일 동안 인큐베이션한 후 1 μCi/웰 3H-티미딘을 추가 18시간 동안 첨가하였다. 수확된 세포 내의 3H-티미딘 혼입은 액체 섬광 계수에 의해 측정되었다.
도 4는 10 μg/mL의 항체와 함께 5일 동안 인큐베이션된 단핵구 유래 수지상 세포로부터의 IL-12p40 분비에 대한 항-TIM-3 항체 15086.17145의 효과를 나타내는 그래프이다. 세포 상청액 중의 IL-12p40 수준을 ELISA를 사용하여 측정하였다.
도 5는 24시간 동안 25 μg/mL의 항-TIM-3 항체 15086.17145로 처리한 후 단핵구 유래 수지상 세포 상에서 선택된 활성화 마커의 발현 수준을 보여주는 한 쌍의 그래프이다. 패널 A는 몇몇 활성화 마커 및 공-자극 분자의 유전자 발현 분석을 보여준다. 패널 B는 FACS를 사용하여 증가된 CD80 및 Cd86 수준의 검증을 보여준다. 도시된 히스토그램 오버레이는 CD11c+ 수지상 세포를 나타내고, 히스토그램에 인접한 숫자는 MFI(평균 형광 강도) 값을 나타낸다.
도 6은 인간 폐 환자-유래 이종이식(PDX) 모델 LG1306으로 생착된 CD34⁺ 인간화된 NSG-SGM3 마우스 모델에서 종양 성장에 대한 TIM-3 표적화의 효과를 나타내는 그래프이다. 마우스는 10 mg/kg의 초기 용량의 항-TIM-3 항체 15086.17145에 이어 5 mg/kg 5x Q5D로 처리되었다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다. ** p<0.01.
도 7은 2개의 도너 쌍(패널 A 및 B)에 대한 SEB(스태필로코쿠스 엔테로톡신 B) + PBMC(말초 혈액 단핵 세포) 검정에서 IL-2 수준에 대한 항-PD-1 항체 12819와 항-LAG-3 항체 15532 및/또는 항-TIM-3 항체 15086.17145를 조합시킨 것의 향상된 효과를 나타내는 한 쌍의 그래프이다. 막대는 10 μg/mL의 표시된 항체 또는 항체 혼합물, 및 SEB로 48시간 동안 처리된 PBMC로부터의 IL-2 분비를 나타낸다. 막대 위의 표시는 대조군 항체(*)와 유의하게 상이한(p<0.05) 단일 처리 또는 구성 단일 항체 처리(#)와 유의하게 상이한 2개 항체의 혼합물을 나타낸다.
도 8은 2개의 동계 마우스 종양 모델: MC38(결장암, 패널 A) 및 ASB-XIV(폐암, 패널 B)에서 10 mg/kg의 항-PD-1 항체 12819, 항-LAG-3 항체 C9B7W(마우스 LAG-3과 반응성임), 또는 항-PD-1 및 항-LAG-3의 조합물, 또는 비히클 처리의 종양 성장에 대한 효과를 나타내는 한 쌍의 그래프이다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM(평균의 표준 오차)으로 나타낸다. **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001.
도 9는 ASB-XIV 동계 마우스 종양 모델에서 10 mg/kg의 항-PD-1 항체 12819, 항-LAG-3 항체 15011, 또는 항-PD-1 및 항-LAG-3 항체의 조합물, 또는 비히클 처리의 종양 성장에 대한 효과를 나타내는 그래프이다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다. *p<0.05, ****p<0.0001.
도 10은 2개의 동계 마우스 종양 모델: ASB-XIV(폐암, 패널 A) 및 Sa1N(섬유육종, 패널 B)에서 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 5D12, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물, 또는 비히클 처리의 종양 성장에 대한 효과를 나타내는 한 쌍의 그래프이다. 항체 처리는 ASB-XIV 종양을 갖는 마우스에서 10 mg/kg/표적의 용량으로 투여되었다. Sa1N 종양을 지닌 마우스에 각각 1 mg/kg 및 10 mg/kg의 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 투여하였다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다. **p<0.01, ***p<0.001, 및 ****p<0.0001.
도 11은 인간 이종이식 종양 모델에서 10 mg/kg의 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물, 또는 비히클 처리의 종양 성장에 대한 효과를 나타내는 그래프의 세트이고, 여기서 인간 흑색종 세포주 A375는 인간 PBMC로 재구성되어 마우스에 생착되었다. 하나의 인간 PBMC 도너를 각 실험에 사용하였고 3개의 그래프는 3개의 상이한 도너를 나타내다(패널 A-C). 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다. *p<0.05 및 **p<0.01.
도 12는 인간 PBMC 및 A375 흑색종 세포의 혼합물로 생착된 NOD-scid 마우스에서 생존율(패널 A) 및 종양 성장(패널 B-E)에 대한 PD-1 및 TIM-3의 단일 및 이중 표적화의 효과를 나타내는 그래프의 세트이다. 마우스를 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물로 처리하였다. 항체 처리는 각 항체에 대해 10 mg/kg의 용량으로 매주 3회 투여되었다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. 패널 A의 데이터는 시간에 따른 각 처리 그룹에서의 <400 mm³의 종양 크기를 갖는 마우스의 백분율로 제시된다.
도 13은 항-PD-1 항체 12819, 항-LAG-3 항체 C9B7W, 항-TIM-3 항체 5D12, 항-PD1 및 항-LAG3 항체의 조합물, 항-PD1 및 항-TIM-3 항체의 조합물, 또는 "트리플 콤보"(항-PD-1, 항-LAG-3, 및 항-TIM-3 항체의 조합물을 지칭함)를 사용한 ASB-XIV 동계 종양 모델에서 생존율(패널 A) 및 종양 성장(패널 B-H)에 대한 PD-1, LAG-3 및 TIM-3의 단일, 이중 및 삼중 표적화의 효과를 나타내는 그래프의 세트이다. 항체 처리는 각 항체에 대해 10 mg/kg의 용량으로 투여되었다. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 인간 PD-1, 인간 TIM-3, 및/또는 인간 LAG-3에 결합하는 항체를 사용하여 이들 표적을 표적화하는 새로운 조합 요법 및 조성물을 제공한다. 상기 요법 및 조성물은 암 환자와 같은 인간 환자에서 면역 시스템을 향상시키는데 사용될 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에서 사용되는 "PD-1"은 인간 PD-1을 지칭한다. 인간 PD-1 폴리펩티드 서열은 Uniprot 수탁 번호 Q15116 하에 이용 가능하며, 본원에서 SEQ ID NO: 388로서 나타낸다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에서 사용되는 "TIM-3"은 인간 TIM-3을 지칭한다. 인간 TIM-3 폴리펩티드 서열은 Uniprot 수탁 번호 Q8TDQ0 하에 이용 가능하며, 본원에서 SEQ ID NO: 389로서 나타낸다. 달리 언급되지 않는 한, 본원에서 사용되는 "LAG-3"는 인간 LAG-3을 지칭한다. 인간 LAG-3 폴리펩티드 서열은 Uniprot 수탁 번호 P18627 하에 이용 가능하며, 본원에서 SEQ ID NO: 390으로서 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"(Ab) 또는 "면역글로불린"(Ig)은 디설파이드 결합에 의해 상호 연결된 2개의 중쇄(H)(약 50 내지 70 kDa) 및 2개의 경쇄(L)(약 25 kDa)를 포함하는 테트라머를 지칭한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)을 포함한다. 각 경쇄는 경쇄 가변 도메인(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)을 포함한다. VH 도메인 및 VL 도메인은 "프레임워크 영역"(FR)으로 지칭되는 더욱 보존적인 영역에 배치된, "상보성 결정 영역"(CDR)으로 지칭되는 과가변성(hypervariability)의 영역으로 추가로 세분화될 수 있다. 각 VH 및 VL은 하기 순서로 아미노-말단에서 카르복실-말단으로 배열된 3개의 CDR(본원에서 H-CDR은 중쇄로부터의 CDR을 명시하며; 본원에서 L-CDR은 경쇄로부터의 CDR을 명시함) 및 4개의 FR을 포함한다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 또는 경쇄에서의 아미노산 번호의 정렬은 IMGT^® 정의[Lefranc et al., Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)]; 또는 카바트의 정의[Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 and 1991); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); 또는 Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]에 따를 수 있다. 달리 언급되지 않는 한, 본 개시내용에서 언급되는 모든 항체 아미노산 잔기 번호는 IMGT® 넘버링 체계 하에 있는 것들이다.

용어 "재조합 항체"는 항체를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열(들)을 포함하는 세포 또는 세포주로부터 발현되는 항체를 지칭하며, 여기서 상기 뉴클레오티드 서열(들)은 자연적으로 세포와 관련이 없다.

용어 "분리된 단백질," "분리된 폴리펩티드" 또는 "분리된 항체"는 이의 유래 기원 또는 공급원에 의해 (1) 이의 천연 상태에서 수반되는 자연적으로 결합된 성분들과 결합되지 않고/거나, (2) 동일한 종으로부터의 다른 단백질이 존재하지 않고/거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되고/거나, (4) 자연에서 발생하지 않는 단백질, 폴리펩티드 또는 항체를 지칭한다. 이에 따라, 화학적으로 합성되거나 이것이 자연적으로 유래하는 세포와 상이한 세포 시스템에서 합성된 폴리펩티드는 이의 자연적으로 결합된 성분으로부터 "분리"될 것이다. 단백질은 또한 당 분야에 널리 공지된 단백질 정제 기술을 이용하여, 분리에 의해 자연적으로 결합된 성분들이 실질적으로 존재하지 않게 제공될 수 있다.

용어 "친화도"는 항원과 항체 간의 인력의 척도를 지칭한다. 항원에 대한 항체의 고유 친화도는 통상적으로 특정 항체-항원 상호작용의 결합 친화도 평형 상수(K_D)로서 표현된다. 항체는 K_D가 ≤ 1 mM, 바람직하게, ≤ 100 nM일 때, 항원에 특이적으로 결합한다고 한다. K_D 결합 친화도 상수는, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명(SPR)(BIAcore™) 또는 Bio-Layer Interferometry에 의해, 예를 들어, IBIS Technologies로부터의 IBIS MX96 SPR 시스템, Bio-Rad로부터의 ProteOn™ XPR36 SPR 시스템, 또는 ForteBio로부터의 Octet™ 시스템을 사용하여 측정될 수 있다.

용어 "k_off"는 특정 항체 항원 상호작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. k_off 해리 속도 상수는, 예를 들어, Bio-Layer Interferometry에 의해, 예를 들어, 상기 열거된 시스템 중 하나를 사용하여 측정될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "에피토프"는 항체 또는 관련 분자, 예를 들어, 이특이적 결합 분자에 특이적으로 결합하는 항원의 부분(결정인자)을 지칭한다. 에피토프성 결정인자는 일반적으로 분자의 화학적 활성 표면 그룹핑, 예를 들어, 아미노산 또는 탄수화물 또는 당 측쇄로 이루어지고, 일반적으로 특정 3차원 구조 특징 뿐만 아니라 특정 전하 특징을 갖는다. 에피토프는 "선형"이거나 "입체구조(conformational)"일 수 있다. 선형 에피토프에서, 단백질(예를 들어, 항원)과 상호작용하는 분자(예를 들어, 항체) 간의 모든 상호작용 지점은 단백질의 일차 아미노산 서열을 따라 선형으로 일어난다. 입체구조 에피토프에서, 상호작용 지점은 일차 아미노산 서열에서 서로 분리되어 있는 단백질 상의 아미노산 잔기를 가로질러 일어난다. 항원 상의 요망되는 에피토프가 결정되면, 당 분야에 널리 공지된 기술을 이용하여 그 에피토프에 대한 항체를 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 선형 에피토프에 대한 항체는, 예를 들어, 동물을 선형 에피토프의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드로 면역시킴에 의해 생성될 수 있다. 입체구조 에피토프에 대한 항체는, 예를 들어, 동물을 입체구조 에피토프의 관련 아미노산 잔기를 함유하는 미니-도메인으로 면역시킴에 의해 생성될 수 있다. 특정 에피토프에 대한 항체는 또한, 예를 들어, 동물을 관심 표적 분자 또는 이의 관련 부분으로 면역시킨 다음, 에피토프에 대한 결합을 스크리닝함으로써 생성될 수 있다.

경쟁 검정, 에피토프 비닝(epitope binning), 및 알라닌 스캐닝을 비제한적으로 포함하는 당 분야에 공지된 방법을 사용하여 항체가 본원에 개시된 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 결합에 대해 이러한 항체와 경쟁하는지 여부를 결정할 수 있다. 일부 구체예에서, 시험 항체 및 본원에 기재된 바와 같은 항체는 표적 단백질(즉, TIM-3, PD-1, 또는 LAG-3) 상의 적어도 하나의 공통 잔기(예를 들어, 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9개 잔기)에 결합한다. 추가의 구체예에서, 표적 단백질 상의 접촉 잔기는 시험 항체와 본원에 기재된 항체 사이에 완전히 동일하다. 한 구체예에서, 본원에 기재된 항체가 포화 조건 하에 표적 단백질에 결합하는 것을 허용한 다음 시험 항체가 표적 단백질에 결합하는 능력을 측정한다. 시험 항체가 참조 항체와 동시에 표적 단백질에 결합할 수 있다면, 시험 항체는 참조 항체와 상이한 에피토프에 결합한 것이다. 그러나, 시험 항체가 동시에 표적 단백질에 결합할 수 없다면, 시험 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프, 또는 본원에 기재된 항체에 의해 결합된 에피토프에 매우 근접한 에피토프에 결합한 것이다. 이 실험은, 예를 들어, ELISA, RIA, BIACORE™, SPR, 바이오-레이어 간섭굴절측정법(Bio-Layer Interferometry) 또는 유세포분석을 이용하여 수행될 수 있다. 항체가 또 다른 항체와 교차-경쟁하는지를 시험하기 위해, 상기 기재된 경쟁 방법을 두 방향으로 이용할 수 있고, 즉, 공지된 항체가 시험 항체를 차단하는지 및 그 반대인지를 결정할 수 있다. 그러한 교차-경쟁 실험은, 예를 들어, IBIS MX96 SPR 기계 또는 Octet™ 시스템을 이용하여 수행될 수 있다.

용어 "키메라 항체"는 가장 넓은 의미에서 한 항체로부터의 하나 이상의 영역 및 하나 이상의 다른 항체로부터의 하나 이상의 영역을 함유하는 항체, 전형적으로 부분적으로는 인간 기원이고 부분적으로는 비-인간 기원, 즉, 비-인간 동물, 예를 들어, 마우스, 래트 또는 다른 설치류, 또는 닭과 같은 조류에서 부분적으로 유래된 항체를 지칭한다. 키메라 항체는 인간 항-항체 반응, 예를 들어, 뮤린 항체의 경우 인간 항-마우스 항체 반응의 위험을 감소시키기 위해 비-인간 항체보다 바람직하다. 전형적인 키메라 항체의 예는 가변 도메인 서열이 뮤린인 한편 불변 영역 서열은 인간인 항체이다. 키메라 항체의 경우, 비-인간 부분은 항체를 인간화하기 위해 추가 변경을 거칠 수 있다. 본원에 기재된 키메라 항체는 닭 가변 도메인 서열 및 인간 불변 영역 서열을 갖는다.

용어 "인간화"는 항체가 전체적으로 또는 부분적으로 비-인간 기원인 경우(예를 들어, 관심 항원으로 마우스 또는 닭을 각각 면역화하여 얻은 뮤린 또는 닭 항체, 또는 그러한 뮤린 또는 닭 항체에 기반한 키메라 항체), 인간의 면역 반응을 피하거나 최소화하기 위해, 특히 프레임워크 영역 및 중쇄 및 경쇄의 불변 영역의 특정 아미노산을 대체할 수 있다는 사실을 지칭한다. 특정 항체의 면역원성 및 그에 따른 인간 항-항체 반응을 정확하게 예측하는 것은 불가능하지만, 비-인간 항체는 인간 항체보다 인간에서 더 면역원성인 경향이 있다. 외래(예를 들어, 설치류 또는 조류) 불변 영역이 인간 기원의 서열로 대체된 키메라 항체는 일반적으로 완전한 외래 기원의 항체보다 덜 면역원성인 것으로 나타났고, 치료용 항체의 경향은 인간화 또는 완전한 인간 항체로 향한다. 따라서 키메라 항체 또는 비-인간 기원의 다른 항체는 인간 항-항체 반응의 위험을 감소시키기 위해 인간화될 수 있다.

키메라 항체의 경우, 인간화는 전형적으로 가변 도메인 서열의 프레임워크 영역의 변형을 포함한다. 상보성 결정 영역(CDR)의 일부인 아미노산 잔기는 인간화와 관련하여 가장 자주 변경되는 것은 아니지만, 특정 경우에 개별 CDR 아미노산 잔기를 변경하여, 예를 들어, 글리코실화 부위, 탈아미드화 부위, 아스파르테이트 이성질체화 부위 또는 요망되지 않는 시스테인 또는 메티오닌 잔기를 제거하는 것이 바람직할 수 있다. N-결합된 글리코실화는 트리펩티드 서열 Asn-X-Ser 또는 Asn-X-Thr의 아스파라긴 잔기에 올리고사카라이드 사슬을 부착시킴으로써 발생하며, 여기서 X는 Pro를 제외한 임의의 아미노산일 수 있다. N-글리코실화 부위의 제거는 Asn 또는 Ser/Thr 잔기를 상이한 잔기로, 바람직하게는 보존적 치환에 의해 돌연변이시킴으로써 달성될 수 있다. 아스파라긴 및 글루타민 잔기의 탈아미드화는 pH 및 표면 노출과 같은 요인에 따라 발생할 수 있다. 아스파라긴 잔기는 주로 서열 Asn-Gly에 존재할 때 탈아미드화에 특히 민감하고, Asn-Ala와 같은 다른 디펩티드 서열에 존재할 때 덜 민감하다. 그러한 탈아미드화 부위, 특히 Asn-Gly가 CDR 서열에 존재하는 경우, 그러므로 통상적으로 보존적 치환에 의해 그 부위를 제거하여 내포된 잔기 중 하나를 제거하는 것이 바람직할 수 있다.

항체 서열의 인간화를 위한 수많은 방법이 당 분야에 공지되어 있다; 예를 들어, Almagro & Fransson, Front Biosci. 13:1619-1633 (2008)에 의한 검토 참조. 일반적으로 사용되는 방법 중 하나는 CDR 그라프팅이고, 이를 위해, 뮤린-유래된 키메라 항체는 뮤린 가변 도메인 유전자에 대한 인간 생식계열 유전자 대응부의 식별 및 뮤린 CDR 서열의 이의 프레임워크로의 그라프팅을 포함한다. 항체와 표적 항원의 상호작용의 특이성은 주로 중쇄 및 경쇄의 6개 CDR에 위치한 아미노산 잔기에 존재한다. 따라서 CDR 내의 아미노산 서열은 CDR 외부의 서열보다 개별 항체 사이에서 훨씬 더 가변적이다. CDR 서열이 대부분의 항체-항원 상호작용을 담당하기 때문에, 특정 자연 발생 항체의 특성을 모방한 재조합 항체, 또는 보다 일반적으로 주어진 아미노산 서열을 갖는 임의의 특정 항체를, 예를 들어, 다른 항체로부터의 프레임워크 서열에 그라프팅된 특정 항체로부터의 CDR 서열을 발현시키는 발현 벡터를 작제함으로써, 발현시키는 것이 가능하다. 결과적으로, 비-인간 항체를 "인간화"할 수 있고 원래 항체의 결합 특이성 및 친화도를 여전히 실질적으로 유지할 수 있다. CDR 그라프팅은 카바트 CDR 정의에 기반할 수 있지만, 보다 최근의 간행물(Magdelaine-Beuzelin et al., Crit Rev.Oncol Hematol. 64:210-225(2007))은 IMGT^® 정의(the international ImMunoGeneTics information system®, www.imgt.org)가 인간화의 결과를 개선시킬 수 있다고 제안하였다(문헌[Lefranc et al., Dev. Comp Immunol. 27:55-77 (2003) 참조).

일부 경우에, CDR 그라프팅은 CDR이 수득되는 부모 항체와 비교하여 CDR-그라프팅된 비-인간 항체의 결합 특이성 및 친화도, 및 이에 따라 생물학적 활성을 감소시킬 수 있다. 부모 항체의 결합 특이성 및 친화도를 재확립하기 위해, 전형적으로 프레임워크 영역에서, CDR-그라프팅된 항체의 선택된 위치에 역 돌연변이(때로 "프레임 워크 복구"로서 언급됨)가 도입될 수 있다. 가능한 역 돌연변이에 대한 위치는 문헌 및 항체 데이터베이스에서 이용 가능한 정보를 사용하여 확인될 수 있다. 역 돌연변이의 후보인 아미노산 잔기는 전형적으로 항체 분자의 표면에 위치한 아미노산 잔기인 반면, 묻혀 있거나 표면 노출 정도가 낮은 잔기는 일반적으로 변동이 없을 것이다.

CDR 그라프팅 및 역 돌연변이에 대한 대안적인 인간화 기술이 재건중이며, 여기서 비-인간 기원의 표면 노출되지 않은 잔기는 유지되는 반면, 표면 잔기는 인간 잔기로 변경된다.

특정 경우에, 표적 에피토프에 대한 결합 친화도를 개선시키기 위해 하나 이상의 CDR 아미노산 잔기를 변경시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 "친화도 성숙(affinity maturation)"으로서 알려져 있다. 다양한 친화도 성숙 방법, 예를 들어, 문헌[Burks et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94:412-417 (1997)]에 의해 기술된 시험관내 스캐닝 포화 돌연변이발생 방법 및 문헌[Wu et al. Proc Natl Acad Sci USA 95:6037-6042 (1998)]의 단계별 시험관내 친화도 성숙화 방법이 당 분야에 공지되어 있다.

용어 "인간 항체"는 가변 도메인 및 불변 영역 서열이 인간 서열로부터 유래된 항체를 지칭한다. 상기 용어는 인간 유전자로부터 유래되지만, 예를 들어, 면역원성을 감소시키고/거나, 친화도를 증가시키고/시키거나, 안정성을 증가시키도록 변형된 서열을 갖는 항체를 포함한다. 또한, 상기 용어는 비-인간 세포에서 인간-유래 서열을 사용하여 재조합적으로 생산된 항체를 포함하며, 이는 인간 세포에 전형적이지 않은 글리코실화를 부여할 수 있다. 상기 용어는 또한 인간 항체 유전자를 갖는 트랜스제닉 비-인간 유기체(예를 들어, OmniRat® 래트)에서 생산된 항체를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분"(또는 단순하게 "항체 부분")은 항원(예를 들어, 인간 TIM-3, 인간 PD-1, 또는 인간 LAG-3, 또는 이의 부분)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 부분 또는 단편을 지칭한다. 이는 전장 항체의 특정 단편이 항체의 항원-결합 기능을 수행할 수 있다는 것을 보여주었다. 용어 "항원-결합 부분" 내에 포함되는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편: V_L, V_H, C_L 및 C_H1 도메인으로 구성된 일가 단편; (ii) F(ab')₂ 단편: 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편들을 포함하는 이가 단편; (iii) V_H 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, (v) V_H 도메인으로 구성된 dAb 단편; 및 (vi) 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 분리된 상보성 결정 영역(CDR)을 포함한다. 또한, Fv 단편의 2개의 도메인인 V_L 및 V_H는 분리된 유전자에 의해 인코딩되지만, 이들은 일가 분자(단일쇄 Fv(scFv)로서 공지됨)를 형성시키기 위해 V_L 및 V_H 도메인이 쌍을 이루는 단일 단백질 사슬로서 만들 수 있는 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 이용하여, 결합될 수 있다. 또한, 본 발명 내에 V_H 및/또는 V_L을 포함하는 항원-결합 분자가 있다. V_H의 경우에, 분자는 또한 CH1, 힌지, CH2, 또는 CH3 영역 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 그러한 단일쇄 항체는 또한 용어 항체의 "항원-결합 부분" 내에 포함되는 것으로 의도된다. 다른 형태의 단일쇄 항체, 예를 들어, 디아바디(diabody)가 또한 포함된다. 디아바디는 V_H 및 V_L 도메인이 단일 폴리펩티드 사슬 상에서 발현되지만, 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 사이에서 쌍을 이룰 수 없는 링커를 이용하여, 도메인이 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루게 하고, 2개의 항원-결합 부위를 생성시키는 이가의 이특이적 항체이다.

항체 부분, 예를 들어, Fab 및 F(ab')₂ 단편은 전체 항체의 파파인 또는 펩신 분해와 같은 통상적인 기술을 이용하여 전체 항체로부터 제조될 수 있다. 또한, 항체, 항체 부분 및 면역접합 분자는, 예를 들어, 본원에 기술된 표준 재조합 DNA 기술을 이용하여 수득될 수 있다.

본원에 기재된 항체의 부류(아이소형) 및 아부류는 당 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로, 항체의 부류 및 아부류는 항체의 특정 부류 및 아부류에 대해 특이적인 항체를 사용하여 결정될 수 있다. 그러한 항체는 상업적으로 입수 가능하다. 부류 및 아부류는 ELISA, 웨스턴 블롯(Western Blot) 뿐만 아니라 다른 기술들에 의해 결정될 수 있다. 대안적으로, 부류 및 아부류는 항체의 중쇄 및/또는 경쇄의 불변 영역 모두 또는 이의 일부를 서열화시키고, 이들의 아미노산 서열을 면역글로불린의 다양한 부류 및 아부류의 공지된 아미노산 서열과 비교하고, 항체의 부류 및 아부류를 결정함으로써 결정될 수 있다. 본 발명의 바람직한 아이소형은 IgG 아이소형이다.

항체 서열의 주어진 위치에서 특정 아미노산 잔기를 언급할 때, 예를 들어, "35S"의 표시는 위치와 잔기를 언급하며, 즉, 이 경우에 세린 잔기(S)가 서열의 위치 35에 존재함을 나타낸다. 유사하게, 예를 들어, "13Q+35S"의 표시는 각각의 위치에 있는 2개의 잔기를 나타낸다. 달리 언급되지 않는 한, 본 개시내용에서 언급되는 모든 항체 아미노산 잔기 번호는 IMGT® 넘버링 체계 하에 있는 것들이다.

항-PD-1 항체

일부 구체예에서, 본원에 개시된 항-PD-1 항체는 닭 및 인간 불변 영역으로부터 유래된 가변 도메인을 갖는 키메라일 수 있거나, 인간화될 수 있다.

본원에 개시된 항-PD-1 항체는 5-자리 숫자, 예를 들어, "12819", 또는 10-자리 숫자, 예를 들어, "12819.15384"에 의해 지칭될 수 있다. 본원에서 사용되는 5-자리 숫자는 그 숫자로 제시된 중쇄 및 경쇄 CDR1-3 서열을 갖는 모든 항체를 지칭하는 반면, 10-자리 숫자의 사용은 특정 인간화된 변이체를 지칭한다. 예를 들어, 12819.15384는 12819 항체의 CDR 서열을 갖는 특정 인간화된 변이체이다. 5-자리 숫자는, 예를 들어, FR의 일부 변화(예를 들어, 성숙한 경쇄의 N-말단에 잔기 SY 결여, 또는 SY 대신에 잔기 SS를 지님)를 제외하고는 동일한 10-자리 변이체를 포함하다. 이들 변형은 항체의 기능적(예를 들어, 항원-결합) 특성을 변화시키지 않는다.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하고, 여기서 항-PD-1 항체는 본원에서 항체 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 또는 13112.15380으로서 지칭되는 항체 또는 이들 중 임의의 것의 변이체이며, 상기 변이체는, 예를 들어, 항체의 항원-결합 특이성의 손실 없이 상기 항체와 비교하여 특정 최소 아미노산 변화(예를 들어, 이를 테면, 프레임워크 영역에 있을 수 있는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 아미노산의 변화)를 함유할 수 있다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1과의 결합에 대해 항체 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 및 13112.15380 중 어느 하나와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 PD-1과의 결합에 대해 12865, 12892, 및 12777 항체(예를 들어, 항체 12865.15377, 12892.15378, 및 12777.15382)와 경쟁하거나 교차-경쟁할 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 PD-1과의 결합에 대해 12819 항체(예를 들어, 항체 12819.15384)와 경쟁하거나 교차-경쟁할 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 PD-1과의 결합에 대해 12760 및 13112 항체(예를 들어, 항체 12760.15375 및 13112.15380)와 경쟁하거나 교차-경쟁할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG2 포맷을 갖는다. 특정 구체예에서, 항체는 IgG1 포맷을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1과의 결합에 대해 중쇄(H) CDR1-3 및 경쇄(L) CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233, 238-243, 248-253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293, 또는 298-303을 포함하는 항체와 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 또는 300의 H-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 H-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 228-230, 238-240, 248-250, 258-260, 268-270, 278-280, 288-290, 또는 298-300의 H-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 아미노산 서열에 있어 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296을 포함하는 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 375와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296의 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 CH 아미노산 서열을 포함하는 HC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 233, 243, 253, 263, 273, 283, 293, 또는 303의 L-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 L-CDR3을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 231-233, 241-243, 251-253, 261-263, 271-273, 281-283, 291-293, 또는 301-303의 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 VL 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 379와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 VL 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 CL 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 임의의 상기 중쇄 서열 및 임의의 상기 경쇄 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 230 및 233, 240 및 243, 250 및 253, 260 및 263, 270 및 273, 280 및 283, 290 및 293, 또는 300 및 303의 H-CDR3 및 L-CDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR3 및 L-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 228-233, 238-243, 248-253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293, 또는 298-303의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286, 또는 296의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC; 및 SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297, 또는 392의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 하기의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 228-233;

b) 각각 SEQ ID NO: 238-243;

c) 각각 SEQ ID NO: 248-253;

d) 각각 SEQ ID NO: 258-263;

e) 각각 SEQ ID NO: 268-273;

f) 각각 SEQ ID NO: 278-283;

g) 각각 SEQ ID NO: 288-293; 또는

h) 각각 SEQ ID NO: 298-303.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 226 및 227;

b) 각각 SEQ ID NO: 236 및 237;

c) 각각 SEQ ID NO: 236 및 392;

d) 각각 SEQ ID NO: 246 및 247;

e) 각각 SEQ ID NO: 256 및 257;

f) 각각 SEQ ID NO: 266 및 267;

g) 각각 SEQ ID NO: 276 및 277;

h) 각각 SEQ ID NO: 286 및 287; 또는

i) 각각 SEQ ID NO: 296 및 297.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 다음을 포함한다:

a) SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-230의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 231-233의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 238-240의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 236 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 241-243의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 237 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 238-243의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 237 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

c) VH가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 236 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 392 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 392 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 248-250의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 246 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 251-253의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 247 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 248-253의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 247 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 258-260의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 256 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 261-263의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 257 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 258-263의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 257 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 268-270의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 266 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 271-273의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 267 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 268-273의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 267 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 278-280의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 276 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 281-283의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 277 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 278-283의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 277 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 288-290의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 286 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 291-293의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 287 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 288-293의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 287 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 298-300의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 296 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 301-303의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 297 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 298-303의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 297 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 900, 적어도 850, 적어도 800, 적어도 750, 적어도 700, 적어도 650, 적어도 600, 적어도 550, 적어도 500, 적어도 450, 적어도 400, 적어도 350, 적어도 300, 적어도 250, 적어도 200, 적어도 150, 적어도 100, 적어도 50, 적어도 40, 적어도 30, 또는 적어도 20 pM의 K_D로 인간 PD-1에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, K_D는 표면 플라스몬 공명을 사용하여 결정된다. 특정 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 또는 둘 모두보다 높은 친화도로 인간 PD-1에 결합한다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 9000, 적어도 8000, 적어도 7000, 적어도 6000, 적어도 5000, 적어도 4000, 적어도 3000, 적어도 2500, 적어도 2000, 적어도 1500, 적어도 1000, 적어도 900, 적어도 800, 적어도 700, 적어도 600, 적어도 500, 적어도 400, 적어도 300, 적어도 200, 적어도 100, 적어도 75, 적어도 50, 적어도 25, 적어도 20, 적어도 15, 적어도 10, 또는 적어도 5 pM의 K_D로 시노몰구스 PD-1에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, K_D는 표면 플라스몬 공명을 사용하여 결정된다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 1000, 적어도 950, 적어도 900, 또는 적어도 850 pM의 K_D로 마우스 PD-1에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, K_D는 표면 플라스몬 공명을 사용하여 결정된다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 유세포분석 경쟁 검정에서 10 μg/mL의 농도에서 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%만큼 억제할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 적어도 83%만큼 억제할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 바이오-레이어 간섭굴절측정법 분석에 의해 측정시 10 μg/mL의 농도에서 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%만큼 차단할 수 있다. 특정 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 적어도 90%만큼 차단한다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

a) 750 pM 이하의 K_D로 인간 PD-1에 결합하고;

b) 7 nM 이하의 K_D로 시노몰구스 PD-1에 결합하고;

c) 1 nM 이하의 K_D로 마우스 PD-1에 결합하고;

d) 래트 PD-1에 결합하지 않고;

e) SEB 전혈 검정에서 IL-2 분비를 증가시키고;

h) 바이오-레이어 간섭굴절측정법 분석에 의해 결정된 바와 같이 10 μg/mL의 농도에서 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 적어도 90%만큼 차단하고;

i) 생체내 종양 성장을 억제한다.

그러한 항체의 예는 비제한적으로 12819 항체(특징 a-i를 지님); 12748, 12892, 및 12777 항체(적어도 특징 a, b, 및 e-h를 지님); 12865 및 12796 항체(적어도 특징 a, b, e, f, 및 h를 지님), 및 12760 및 13112 항체(적어도 특징 a, b, e, 및 f를 지님)를 포함한다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 특징 모두를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 특징 a, b, 및 e-h를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 특징 a, b, e, f, 및 h를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 특징 a, b, e, 및 f를 갖는다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 다음 잔기: V44, V64, L128, P130, K131, A132, E136, 및 T145 중 적어도 하나(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 또는 적어도 5개)를 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다. 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 V64, L128, P130, K131, 및 A132를 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 12819 항체, 예컨대, 12819.15384). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 K131 및 E136를 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 12865 항체, 예컨대, 12865.15377). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 V44 및 T145를 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 13112 항체, 예컨대, 13112.15380).

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 SEQ ID NO: 388의 아미노산 잔기 K131을 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다(예를 들어, 12819 또는 12865 항체). 일부 구체예에서, 에피토프는 아미노산 잔기 P130 및 A132를 추가로 포함하고, 아미노산 잔기 V64 및 L128을 추가로 포함할 수 있다(예를 들어, 12819 항체). 일부 구체예에서, 에피토프는 아미노산 잔기 E136을 추가로 포함한다(예를 들어, 12865 항체).

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 56-64, 69-90, 및/또는 122-140을 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다. 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 69-90 및 122-140을 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 12819 및 12865 항체, 예컨대, 항체 12819.15384 및 12865.15377). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 56-64, 69-90, 및 122-140을 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 12819 항체). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 69-90 및 122-140을 포함하는 PD-1의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 12865 항체). 일부 구체예에서, 항체 또는 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75(또는 이의 단편, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 잔기 단편)에 결합한다(예를 들어, 12819 및 12865 항체, 예컨대, 항체 12819.15384 및 12865.15377). 일부 구체예에서, 항체 또는 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 136-140(또는 이의 단편, 예를 들어, 1, 2, 3, 또는 4개 잔기 단편)에 결합한다(예를 들어, 12819 및 12865 항체, 예컨대, 항체 12819.15384 및 12865.15377). 일부 구체예에서, 항체 또는 부분은 SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75(또는 이의 단편) 및 잔기 136-140(또는 이의 단편)에 결합한다(예를 들어, 12819 및 12865 항체, 예컨대, 항체 12819.15384 및 12865.15377). 상기 잔기의 임의의 조합을 갖는 에피토프가 또한 고려된다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 전문이 본원에 참조로서 포함되는 PCT 특허 공개 WO 2017/055547호 또는 PCT 특허 출원 PCT/EP2017/079615호에 기재된 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분이다.

항-TIM-3 항체

특정 구체예에서, 본원에 개시된 항-TIM-3 항체는 인간 이디오타입을 지닌 항체를 생성할 수 있는 트렌스제닉 래트로부터 생성된 인간 항체이다.

본원에 개시된 항-TIM-3 항체는 5-자리 숫자, 예를 들어, "20131", 또는 10-자리 숫자, 예를 들어, "15086.16837"에 의해 지칭될 수 있다. 처음 5자리가 같은 10-자리 숫자는, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144의 경우에서와 같이, 동일한 부모 항체로부터 유래된다. 동일한 6개의 CDR을 공유하는 그러한 항체는 동일하거나 실질적으로 동일한 표적 결합 특징을 가질 것으로 기대된다. 본원에서 제공된 단백질 및 DNA 서열로부터 명백한 바와 같이, 15086.16837, 15086.17145, 및 15086.17144 변이체는 부모 15086 항체("15086.15086")와 비교하여 VH 서열에서 단 하나의 아미노산 차이, 즉, 위치 6에 Q보다 오히려 E를 갖는 반면, VL 아미노산 서열은 동일하다. 또한 이러한 변이체는 주로 항체 포맷/아부류에 따라 상이하고, 즉:

15086.15086: IgG1

15086.16837: IgG1 LALA

15086.17145: IgG2

15086.17144: IgG4임이 자명할 것이다.

IgG2 및 IgG4 아부류 항체의 VH 서열은 IgG1 LALA 변이체의 것과 동일하다. VL 서열은 4개의 항체 아부류 모두에 대해 동일하다.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하고, 여기서 항-TIM-3 항체는 본원에서 항체 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, 또는 20621로서 지칭되는 항체 또는 이들 중 임의의 것의 변이체이며, 상기 변이체는, 예를 들어, 항체의 항원-결합 특이성의 손실 없이 상기 항체와 비교하여 특정 최소 아미노산 변화(예를 들어, 이를 테면, 프레임워크 영역에 있을 수 있는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 아미노산의 변화)를 함유할 수 있다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 인간 TIM-3와의 결합에 대해 IgG1 포맷을 갖는 항체 15086.15086, IgG1 LALA 포맷을 갖는 항체 15086.16837, IgG2 포맷을 갖는 항체 15086.17145, 또는 IgG4 포맷을 갖는 항체 15086.17144와 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 TIM-3의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG2 포맷을 갖는다. 특정 구체예에서, 항체는 IgG2 포맷을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 인간 TIM-3와의 결합에 대해 항체 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, 또는 20621과 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체들과 동일한 인간 TIM-3의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG2 포맷을 갖는다. 특정 구체예에서, 항체는 IgG2 포맷을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 인간 TIM-3와의 결합에 대해 중쇄(H) CDR1-3 및 경쇄(L) CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13, 18-23, 28-33, 38-43, 48-53, 58-63, 68-73, 78-83, 88-93, 98-103, 108-113, 118-123, 128-133, 138-143, 148-153, 158-163, 168-173, 178-183, 188-193, 198-203, 208-213, 또는 218-223을 포함하는 항체와 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 TIM-3의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 또는 220의 H-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 H-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 8-10, 18-20, 28-30, 38-40, 48-50, 58-60, 68-70, 78-80, 88-90, 98-100, 108-110, 118-120, 128-130, 138-140, 148-150, 158-160, 168-170, 178-180, 188-190, 198-200, 208-210, 또는 218-220의 H-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 아미노산 서열에 있어 SEQ ID NO: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216을 포함하는 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 3, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 374와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 3, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216의 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374의 CH 아미노산 서열을 포함하는 HC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 375, 376, 또는 377과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216의 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375, 376, 또는 377의 CH 아미노산 서열을 포함하는 HC를 갖는다. 특정 구체예에서, CH 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 377이다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 133, 143, 153, 163, 173, 183, 193, 203, 213, 또는 223의 L-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 L-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 11-13, 21-23, 31-33, 41-43, 51-53, 61-63, 71-73, 81-83, 91-93, 101-103, 111-113, 121-123, 131-133, 141-143, 151-153, 161-163, 171-173, 181-183, 191-193, 201-203, 211-213, 또는 221-223의 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 VL 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 378과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 VL 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 CL 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 임의의 상기 중쇄 서열 및 임의의 상기 경쇄 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 10 및 13, 20 및 23, 30 및 33, 40 및 43, 50 및 53, 60 및 63, 70 및 73, 80 및 83, 90 및 93, 100 및 103, 110 및 113, 120 및 123, 130 및 133, 140 및 143, 150 및 153, 160 및 163, 170 및 173, 180 및 183, 190 및 193, 200 및 203, 210 및 213, 또는 220 및 223의 H-CDR3 및 L-CDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR3 및 L-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 8-13, 18-23, 28-33, 38-43, 48-53, 58-63, 68-73, 78-83, 88-93, 98-103, 108-113, 118-123, 128-133, 138-143, 148-153, 158-163, 168-173, 178-183, 188-193, 198-203, 208-213, 또는 218-223의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH, 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 SEQ ID NO: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, 또는 216의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 HC; 및 SEQ ID NO: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207, 또는 217의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 하기의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 8-13;

b) 각각 SEQ ID NO: 18-23;

c) 각각 SEQ ID NO: 28-33;

d) 각각 SEQ ID NO: 38-43;

e) 각각 SEQ ID NO: 48-53;

f) 각각 SEQ ID NO: 58-63;

g) 각각 SEQ ID NO: 68-73;

h) 각각 SEQ ID NO: 78-83;

i) 각각 SEQ ID NO: 88-93;

j) 각각 SEQ ID NO: 98-103;

k) 각각 SEQ ID NO: 108-113;

l) 각각 SEQ ID NO: 118-123;

m) 각각 SEQ ID NO: 128-133;

n) 각각 SEQ ID NO: 138-143;

o) 각각 SEQ ID NO: 148-153;

p) 각각 SEQ ID NO: 158-163;

q) 각각 SEQ ID NO: 168-173;

r) 각각 SEQ ID NO: 178-183;

s) 각각 SEQ ID NO: 188-193;

t) 각각 SEQ ID NO: 198-203;

u) 각각 SEQ ID NO: 208-213; 또는

v) 각각 SEQ ID NO: 218-223.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 7 및 4;

b) 각각 SEQ ID NO: 3 및 4;

c) 각각 SEQ ID NO: 16 및 17;

d) 각각 SEQ ID NO: 26 및 27;

e) 각각 SEQ ID NO: 36 및 37;

f) 각각 SEQ ID NO: 46 및 47;

g) 각각 SEQ ID NO: 56 및 57;

h) 각각 SEQ ID NO: 66 및 67;

i) 각각 SEQ ID NO: 76 및 77;

j) 각각 SEQ ID NO: 86 및 87;

k) 각각 SEQ ID NO: 96 및 97;

l) 각각 SEQ ID NO: 106 및 107;

m) 각각 SEQ ID NO: 116 및 117;

n) 각각 SEQ ID NO: 126 및 127;

o) 각각 SEQ ID NO: 136 및 137;

p) 각각 SEQ ID NO: 146 및 147;

q) 각각 SEQ ID NO: 156 및 157;

r) 각각 SEQ ID NO: 166 및 167;

s) 각각 SEQ ID NO: 176 및 177;

t) 각각 SEQ ID NO: 186 및 187;

u) 각각 SEQ ID NO: 196 및 197;

v) 각각 SEQ ID NO: 206 및 207; 또는

w) 각각 SEQ ID NO: 216 및 217.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 다음을 포함한다:

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-10의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 3 또는 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 3 또는 7의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 3 및 374의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 11-13의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 3 또는 7의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 3 또는 15의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 3 및 374의 아미노산 서열, 또는 SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 18-20의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 16 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 21-23의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 17 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 18-23의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 17 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 28-30의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 26 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 31-33의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 27 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 28-33의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 27 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 38-40의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 36 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 41-43의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 37 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 38-43의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 37 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 48-50의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 46 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 51-53의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 47 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 48-53의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 47 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 58-60의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 56 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 61-63의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 57 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 58-63의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 57 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 68-70의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 66 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 71-73의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 67 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 68-73의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 67 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 78-80의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 76 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 81-83의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 77 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 78-83의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 77 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 88-90의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 86 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 91-93의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 87 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 88-93의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 87 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 98-100의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 96 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 101-103의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 97 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 98-103의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 97 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 108-110의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 106 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 111-113의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 107 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 108-113의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 107 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 118-120의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 116 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 121-123의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 117 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 118-123의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 117 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 128-130의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 126 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 131-133의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 127 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 128-133의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 127 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 138-140의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 136 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 141-143의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 137 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 138-143의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 137 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 148-150의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 146 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 151-153의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 147 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 148-53의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 147 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 158-160의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 156 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 161-163의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 157 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 158-163의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 157 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 168-170의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 166 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 171-173의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 167 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 168-173의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 167 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 178-80의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 176 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 181-183의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 177 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 178-183의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 177 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 188-190의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 186 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 191-193의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 187 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 188-193의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 187 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 198-200의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 196 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 201-203의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 197 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 198-203의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 197 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 208-210의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 206 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 211-213의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 207 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 208-213의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 207 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 218-220의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 216 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 221-223의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 217 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 218-223의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 217 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 갈랙틴-9, CEACAM1, HMGB-1, 및 포스파티딜세린과 같은 리간드가 TIM-3에 결합하는 것을 억제할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 NK 세포의 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 구체예에서, 이 활성은 ADCC를 매개할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 투여는 수지상 세포를 활성화하여, 이들의 성숙화 및 이에 의해 T-세포를 자극하는 능력을 발생시킬 수 있다. 임의의 특정 이론에 구속되기를 바라지 않으며, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체가 TIM-3 수지상 세포 활성제로서 기능하여, 수지상 세포에 대한 이의 효과가 T 세포를 자극하는 역할을 하는 것으로 여겨진다. 종양-관련 환경에서, 항-TIM-3 항체는 이와 같이 종양 관련 수지상 세포의 성숙화 및 활성화를 초래하여, 종양 특이적 T-세포의 활성화를 발생시킬 것이다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 투여는 T 세포를 직접 활성화시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

h) 수지상 세포로부터 TNF-α 분비를 증가시키고;

i) TIM-3와 포스파티딜세린의 상호작용을 억제한다.

그러한 항체의 예는 비제한적으로 항체 15086.15086(적어도 특징 a, c, d, e, g, 및 h를 지님); 항체 15086.17145(적어도 특징 a, c, d, e, g, h, 및 i를 지님), 항체 15086.16837 또는 15086.17144(적어도 특징 a, c, 및 d를 지님), 항체 20293 또는 20131(적어도 특징 a, b, c, d, e, f, 및 h를 지님), 항체 20362(적어도 특징 c, e, f, 및 h를 지님), 및 항체 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 또는 20621(적어도 특징 c, d, e, f, 및 h를 지님)을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 모든 특징을 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 a, c, d, e, g 및 h를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 a, c, d, e, g, h, 및 i를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 a, c, 및 d를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 a, b, c, d, e, f, 및 h를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 c, e, f, 및 h를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원 결합 부분은 적어도 특징 c, d, e, f, 및 h를 갖는다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 다음 잔기: P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, 및 D120 중 적어도 하나(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 또는 적어도 9개)를 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다. 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, 및 D120을 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 또는 15086.17144). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 F61, R69, 및 I117을 포함하는 TIM-3의 에피토프를 포함한다(예를 들어, 항체 20293). 특정 구체예에서, 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, F61, E62, I117, M118, 및 D120을 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 항체 20131).

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 아미노산 잔기 F61 및 I117을 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 20293, 또는 20131). 일부 구체예에서, 에피토프는 아미노산 잔기 R69를 추가로 포함한다(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 또는 20293). 일부 구체예에서, 에피토프는 P50, E62, M118, 및 D120을 추가로 포함하고(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 또는 20131) 아미노산 잔기 V60 및 G64를 추가로 포함할 수 있다(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 또는 15086.17144).

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 236의 다음 잔기: P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, 및 D120 중 적어도 하나(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 또는 적어도 9개)를 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다. 상기 잔기의 임의의 조합을 갖는 에피토프가 고려된다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 62-67 및/또는 114-117을 포함하는 TIM-3의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체 또는 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 62-67(또는 이의 단편, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5개 잔기의 단편)에 결합한다(예를 들어, 항체 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144, 및 20293). 일부 구체예에서, 항체 또는 부분은 SEQ ID NO: 389의 잔기 114-117(또는 이의 단편, 예를 들어, 1, 2, 또는 3개 잔기의 단편)에 결합한다(예를 들어, 항체 20131). 상기 잔기의 임의의 조합을 갖는 에피토프가 또한 고려된다.

일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 TIM-3와의 결합에 대해 ABTIM3(PCT 특허 공개 WO 2015/117002호로부터) 및/또는 mAb15(PCT 특허 공개 WO 2016/111947호로부터)와 경쟁하지 않는다. 일부 구체예에서, 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 ABTIM3 및/또는 mAB15와 동일한 에피토프에 결합하지 않는다; 예를 들어, 항체 또는 부분은 ABTIM3 및/또는 mAb15에 의해 결합되지 않는 TIM-3 상의 하나 이상의 잔기에 결합한다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 전문이 본원에 참조로서 포함되는 PCT 특허 공개 WO 2017/178493호에 기술된 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분이다.

항-LAG-3 항체

특정 구체예에서, 본원에 개시된 항-LAG-3 항체는 인간 이디오타입을 지닌 항체를 생성할 수 있는 트렌스제닉 래트로부터 생성된 인간 항체이다. 또 다른 구체예에서, 항체는 닭 CDR 서열 및 인간 프레임워크 영역을 포함하는 닭-유래된 키메라 항체이고, 여기서 프레임워크 영역은 인간화를 거쳤다.

본원에 기재된 신규한 항-LAG-3 항체의 한 가지 이점은 증가된 IL-2 생산에 의해 측정된 바와 같이 T-세포의 활성을 향상시킬 수 있다는 것이다. 임의의 특정 이론에 구속되기를 바라지 않으며, 본 발명의 항-LAG-3 항체는 LAG-3와 이의 추정상 리간드, 예를 들어, MHCII 및 LSECtin의 상호작용을 차단할 수 있다고 여겨진다. 항체는 리간드 결합 영역의 차단을 통해 또는 LAG-3 내재화의 유도를 통해 이를 직접 달성할 수 있다. 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 또 다른 잠재적인 이점은 "LALA" 돌연변이(L234A/L235A)를 갖는 항체의 낮은 수준의 이차 이펙터 기능이고, 이는 인간 FcgR(Fc 감마 수용체)에 대한 상당한 항체 결합 및 이에 따른 이펙터 T-세포의 고갈을 방해한다.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하고, 여기서 항-LAG-3 항체는 본원에서 항체 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 또는 15011로서 지칭되는 항체 또는 이들 중 임의의 것의 변이체이며, 상기 변이체는, 예를 들어, 항체의 항원-결합 특이성의 손실 없이 상기 항체와 비교하여 특정 최소 아미노산 변화(예를 들어, 이를 테면, 프레임워크 영역에 있을 수 있는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 아미노산의 변화)를 함유할 수 있다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 LAG-3와의 결합에 대해 항체 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 또는 15011과 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG1 또는 IgG2 포맷을 갖는다. 특정 구체예에서, 항체는 IgG2 포맷을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 인간 LAG-3와의 결합에 대해 중쇄(H) CDR1-3 및 경쇄(L) CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 308-313, 318-323, 328-333, 338-343, 348-353, 358-363, 또는 368-373을 포함하는 항체와 경쟁 또는 교차-경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 310, 320, 330, 340, 350, 360, 또는 370의 H-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 H-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 308-310, 318-320, 328-330, 338-340, 348-350, 358-360, 또는 368-370의 H-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 아미노산 서열에 있어 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366을 포함하는 VH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 375와 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CH를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366의 VH 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 CH 아미노산 서열을 포함하는 HC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 313, 323, 333, 343, 353, 363, 또는 373의 L-CDR3 아미노산 서열을 포함하는 L-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 311-313, 321-323, 331-333, 341-343, 351-353, 361-363, 또는 371-373의 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 357, 또는 367의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 357, 또는 367의 VL 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 또는 357의 VL 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL; 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 378과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 CL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 또는 357의 VL 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 CL 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다. 일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 367의 VL 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 CL 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 임의의 상기 중쇄 서열 및 임의의 상기 경쇄 서열을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 310 및 313, 320 및 323, 330 및 333, 340 및 343, 350 및 353, 360 및 363, 또는 370 및 373의 H-CDR3 및 L-CDR3 아미노산 서열을 각각 포함하는 H-CDR3 및 L-CDR3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 308-313, 318-323, 328-333, 338-343, 348-353, 358-363, 또는 368-373의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 서열을 각각 포함하는 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3을 포함한다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 서열에 있어 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VH, 및 서열에 있어 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 357, 또는 367의 아미노산 서열과 적어도 90%(예를 들어, 적어도 92%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%) 동일한 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 357, 또는 367의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC; 및 SEQ ID NO: 307, 317, 327, 337, 347, 또는 357의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 SEQ ID NO: 306, 316, 326, 336, 346, 356, 또는 366의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC; 및 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 갖는다.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 하기의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 308-313;

b) 각각 SEQ ID NO: 318-323;

c) 각각 SEQ ID NO: 328-333;

d) 각각 SEQ ID NO: 338-343;

e) 각각 SEQ ID NO: 348-353;

f) 각각 SEQ ID NO: 358-363; 또는

g) 각각 SEQ ID NO: 368-373.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 하기의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인을 포함한다:

a) 각각 SEQ ID NO: 306 및 307;

b) 각각 SEQ ID NO: 316 및 317;

c) 각각 SEQ ID NO: 326 및 327;

d) 각각 SEQ ID NO: 336 및 337;

e) 각각 SEQ ID NO: 346 및 347;

f) 각각 SEQ ID NO: 356 및 357; 또는

g) 각각 SEQ ID NO: 366 및 367.

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 다음을 포함한다:

a) SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

b) SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;

일부 구체예에서, 항-LAG-3 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된다:

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 308-310의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 306 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 311-313의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 307 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 308-313의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 306 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 307 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-320의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 321-323의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 328-330의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 326 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 331-333의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 327 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 328-333의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 326 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 327 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 338-340의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 336 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 341-343의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 337 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 338-343의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 336 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 337 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 348-350의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 346 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 351-353의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 347 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 348-353의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 346 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 347 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 358-360의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 356 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 361-363의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 357 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 358-363의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 356 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 357 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

a) H-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 368-370의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

b) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

c) VH가 SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

d) HC가 SEQ ID NO: 366 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

e) L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 371-373의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

f) VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

g) VL이 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

h) LC가 SEQ ID NO: 367 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

i) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 368-373의 아미노산 서열을 포함하는 항체;

j) VH가 서열에 있어 SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일하고 VL이 서열에 있어 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 항체;

k) VH가 SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열을 포함하고 VL이 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열을 포함하는 항체; 및

l) HC가 SEQ ID NO: 366 및 375의 아미노산 서열을 포함하고; LC가 SEQ ID NO: 367 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 항체.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.2 nM 이하, 0.15 nM 이하, 0.1 nM 이하, 0.09 nM 이하, 0.08 nM 이하, 0.07 nM 이하, 0.06 nM 이하, 0.05 nM 이하, 또는 0.04 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.4 nM 이하, 0.3 nM 이하, 0.2 nM 이하, 0.1 nM 이하, 0.09 nM 이하, 0.08 nM 이하, 0.07 nM 이하, 0.06 nM 이하, 0.05 nM 이하, 0.04 nM 이하, 또는 0.03 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합하고, 예를 들어, 0.3 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.3 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합하고, 예를 들어, 0.3 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 MHC 클래스 II(MHCII) 또는 LSECtin과 같은 리간드가 LAG-3에 결합하는 것을 억제할 수 있다. 예를 들어, 20 μg/mL에서, 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 MHCII에 대한 LAG-3의 결합을 음성 대조군 항체의 존재 하에서의 결합과 비교하여 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100%만큼 감소시킬 수 있다. 한 구체예에서, 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 단백질은 MHCII에 대한 LAG-3의 결합을 음성 대조군과 비교하여 85% 넘게 감소시킬 수 있다. 한 구체예에서, 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 단백질은 MHCII에 대한 LAG-3의 결합을 음성 대조군과 비교하여 약 25% 내지 95%, 30% 내지 90%, 또는 35% 내지 85%만큼 감소시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 LAG-3와 MHC 클래스 II, 예를 들어, Jurkat 세포에서 발현된 인간 LAG-3 및 Raji 세포에서 발현된 인간 MHC 클래스 II의 결합을 차단할 수 있다(예를 들어, 0.1 μg/mL, 0.5 μg/mL, 1 μg/mL, 5 μg/mL, 10 μg/mL, 20 μg/mL, 30 μg/mL, 40 μg/mL, 또는 50 μg/mL의 농도에서).

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 5.0 x 10^-8 이하, 4.0 x 10^-8 이하, 3.0 x 10^-8 이하, 2.0 x 10^-8 이하, 1.0 x 10^-8 이하, 9.0 x 10^-9 이하, 8.0 x 10^-9 이하, 7.0 x 10^-9 이하, 6.0 x 10^-9 이하, 5.0 x 10^-9 이하, 4.0 x 10^-9 이하, 3.0 x 10^-9 이하, 2.0 x 10^-9 이하, 또는 1.0 x 10^-9 이하의 K_D로 인간 LAG-3에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 1.5 x 10^-7 이하, 1.0 x 10^-7 이하, 9.0 x 10^-8 이하, 8.0 x 10^-8 이하, 7.0 x 10^-8 이하, 6.0 x 10^-8 이하, 5.0 x 10^-8 이하, 4.0 x 10^-8 이하, 3.0 x 10^-8 이하, 2.0 x 10^-8 이하, 또는 1.0 x 10^-8 이하의 K_D로 시노몰구스 LAG-3에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 5.0 x 10^-8 이하, 4.5 x 10^-8 이하, 4.0 x 10^-8 이하, 3.5 x 10^-8 이하, 또는 3.0 x 10^-8 이하의 K_D로 마우스 LAG-3에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, SEB-자극된 PBMC로부터 IL-2 생산을 자극할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은, 예를 들어, 인간 T 세포주(예를 들어, LAG-3를 과발현시키는 인간 T 세포주)에서 LAG-3의 세포 및/또는 가용성 수준을 감소시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 생체내에서 종양 성장 회귀를 유도하고/거나 종양 성장을 지연시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 임의의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 항체 25F7-Lag3.5와 상이한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합할 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 T 세포를 활성화하여, 강화된 항-종양 활성을 발생시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는다:

f) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.0 x 10^-8 이하의 K_D로 인간 LAG-3에 결합하고;

g) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 1.5 x 10^-7 이하의 K_D로 시노몰구스 LAG-3에 결합하고;

h) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.5 x 10^-8 이하의 K_D로 마우스 LAG-3에 결합하고;

j) 인간 T 세포에서 LAG-3의 세포 수준을 감소시키고;

l) 생체내에서 종양 성장 회귀를 유도하고;

m) 생체내에서 종양 성장을 지연시키고;

그러한 항체의 예는 비제한적으로 항체 15646(적어도 특징 b, c, d, e, i, 및 n을 지님), 항체 15532(적어도 특징 a, c, d, e, f, g, i, j, k, m, 및 n을 지님), 항체 15723(적어도 특징 b, c, d, e, i, 및 n을 지님), 항체 15595(적어도 특징 a, c, d, e, i, 및 n을 지님), 항체 15431 (적어도 특징 a, c, d, e, f, g, i, 및 n을 지님), 항체 15572(적어도 특징 b, c, d, e, f, g, i, 및 n을 지님), 및 항체 15011 (적어도 특징 a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m, 및 n을 지님)을 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 상기 특징 중 적어도 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1개를 갖는다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-TIM-3 항체 또는 항원-결합 부분은 적어도 특징 b, c, d, e, i, 및 n; 적어도 특징 a, c, d, e, f, g, i, j, k, m, 및 n; 적어도 특징 a, c, d, e, i, 및 n; 적어도 특징 a, c, d, e, f, g, i, 및 n; 적어도 특징 b, c, d, e, f, g, i, 및 n; 또는 적어도 특징 a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, l, m, 및 n을 갖는다.

일부 구체예에서, 본 발명의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 인간 LAG-3과의 결합에 대해 항체 15011, 15572, 및/또는 15431과 경쟁한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 하기를 갖는 인간 LAG-3의 에피토프에 결합한다:

a) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 H85, P86, A87, P89, S91, W92, 및 G93;

b) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163;

c) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163; 또는

d) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 G107, L109, R110, 및 S111.

일부 구체예에서, 본 발명의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 98-105를 갖는 에피토프에 결합한다. 그러한 항체의 예는 비제한적으로 항체 15532, 15431, 15572, 및 15011을 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명의 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분은 하기를 갖는 에피토프에 결합한다:

a) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 78-105 및 123-131;

b) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 23-30, 40-66, 88-105, 123-137, 및 148-152; 또는

c) SEQ ID NO: 68의 아미노산 잔기 23-30, 40-66, 98-105, 118-137, 및 148-161.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 전문이 본원에 참조로서 포함되는 PCT 특허 출원 PCT/EP2017/076188호에 기술된 항-LAG-3 항체 또는 항원-결합 부분이다.

본원에 기재된 항체의 부류는 또 다른 부류 또는 아부류로 변경되거나 전환될 수 있다. 한 양태에서, VL 또는 VH를 인코딩하는 핵산 분자는 CL 또는 CH를 인코딩하는 핵산 서열을 포함하지 않도록 당 분야에 널리 공지된 방법을 이용하여 분리된다. VL 또는 VH를 인코딩하는 핵산 분자는 이후에 상이한 부류의 면역글로불린 분자로부터의 CL 또는 CH를 인코딩하는 핵산 서열에 각각 작동가능하게 결합된다. 이는 상술된 바와 같이, CL 또는 CH 사슬을 포함하는 벡터 또는 핵산 분자를 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 본래 IgM인 항체는 IgG로 부류가 변경될 수 있다. 또한, 부류 변경(class switching)은 하나의 IgG 아부류를 다른 IgG 아부류로, 예를 들어, IgG1에서 IgG2로 전환시키기 위해 사용될 수 있다. κ 경쇄 불변 영역은, 예를 들어, λ 경쇄 불변 영역으로 변경될 수 있다. 요망되는 Ig 아이소형을 갖는 본원에 기재된 항체를 생산하기 위한 바람직한 방법은 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산 분자 및 항체의 경쇄를 인코딩하는 핵산 분자를 분리시키는 단계, 중쇄의 가변 도메인을 수득하는 단계, 중쇄의 가변 도메인을 요망되는 아이소형의 중쇄의 불변 영역과 라이게이션시키는 단계, 경쇄 및 라이게이션된 중쇄를 세포에서 발현시키는 단계, 및 요망되는 아이소형을 갖는 항체를 수집하는 단계를 포함한다.

본원에 기재된 항체는 IgG, IgM, IgE, IgA, 또는 IgD 분자일 수 있으나, 전형적으로 IgG 아이소형, 예를 들어, IgG 아부류 IgG1, IgG2a 또는 IgG2b, IgG3 또는 IgG4일 수 있다. 한 구체예에서, 항체는 IgG1이다. 다른 구체예에서, 항체는 IgG2이다.

한 구체예에서, 항체는 Fc 영역에 적어도 하나의 돌연변이를 포함할 수 있다. 다수의 상이한 Fc 돌연변이가 공지되어 있고, 이러한 돌연변이는 변경된 이펙터 기능을 제공한다. 예를 들어, 많은 경우에, 예를 들어, 리간드/수용체 상호작용이 요망되지 않거나 항체-약물 컨쥬게이트의 경우에, 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 것이 바람직할 것이다.

한 구체예에서, 항체는 이펙터 기능을 감소시키는 적어도 하나의 돌연변이를 Fc 영역에 포함한다. 이펙터 기능을 감소시키기 위해 돌연변이되는 것이 바람직할 수 있는 Fc 영역 아미노산 위치는 위치 228, 233, 234 및 235 중 하나 이상을 포함하고, 이 때 아미노산 위치는 IMGT® 넘버링 체계에 따라 넘버링된다.

일부 구체예에서, 위치 234 및 235의 아미노산 잔기 중 하나 또는 둘 모두는, 예를 들어, Leu에서 Ala로 돌연변이될 수 있다(L234A/L235A). 이러한 돌연변이는 IgG1 항체의 Fc 영역의 이펙터 기능을 감소시킨다. 추가로 또는 대안적으로, 위치 228의 아미노산 잔기는, 예를 들어, Pro으로 돌연변이될 수 있다. 일부 구체예에서, 위치 233의 아미노산 잔기는, 예를 들어, Pro으로 돌연변이될 수 있고/거나, 위치 234의 아미노산 잔기는, 예를 들어, Val으로 돌연변이될 수 있고/거나, 위치 235의 아미노산 잔기는, 예를 들어, Ala으로 돌연변이될 수 있다. 아미노산 위치는 IMGT® 넘버링 체계에 따라 넘버링된다.

다른 구체예에서, 항체가 IgG4 아부류인 경우, 이것은 돌연변이 S228P를 포함할 수 있고, 즉, 위치 228에 프롤린을 가질 수 있으며, 이 때 아미노산 위치는 Eu IMGT® 넘버링 체계에 따라 넘버링된다. 이러한 돌연변이는 요망되지 않는 Fab 아암 교환을 감소시키는 것으로 공지되어 있다(Angal et al., Mol Immunol. 30:105-8 (1993)).

특정 구체예에서, 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 항체 또는 항체 부분과 하나 이상의 다른 단백질 또는 펩티드의 공유 또는 비공유 회합에 의해 형성된 보다 큰 면역접합 분자의 일부일 수 있다. 그러한 면역접합 분자의 예는 테트라머 scFv 분자를 제조하기 위해 스트렙타비딘 코어 영역의 사용[Kipriyanov et al., Human antibody and Hybridomas 6:93-101 (1995)] 및 이가 및 바이오티닐화된 scFv 분자를 제조하기 위해 시스테인 잔기, 마커 펩티드 및 C-말단 폴리히스티딘 태그의 사용[Kipriyanov et al., Mol. Immunol. 31:1047-1058 (1994)]을 포함한다. 다른 예는 항체로부터의 하나 이상의 CDR이 관심 항원에 특이적으로 결합하는 면역접합체(immunoadhesin)를 제조하기 위해 분자에 공유적으로 또는 비공유적으로 도입되는 경우를 포함한다. 그러한 구체예에서, CDR(들)은 보다 큰 폴리펩티드 사슬의 일부로서 도입될 수 있거나, 다른 폴리펩티드 사슬에 공유 결합될 수 있거나, 비공유적으로 도입될 수 있다.

다른 구체예에서, 또 다른 폴리펩티드에 결합된 본원에 기재된 항체의 전부 또는 일부를 포함하는 융합 항체 또는 면역접합체가 제조될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체의 가변 도메인만이 폴리펩티드에 결합된다. 특정 구체예에서, 항체의 VH 도메인은 제1 폴리펩티드에 결합되며, 항체의 VL 도메인은 항원-결합 부위를 형성시키기 위해 VH 도메인 및 VL 도메인이 서로 상호작용할 수 있는 방식으로 제1 폴리펩티드와 회합하는 제2 폴리펩티드에 결합된다. 다른 바람직한 구체예에서, VH 도메인은 VH 도메인 및 VL 도메인이 서로 상호작용할 수 있도록 링커에 의해 VL 도메인으로부터 분리된다(예를 들어, 단일쇄 항체). VH-링커-VL 항체는 이후에 관심 폴리펩티드에 결합된다. 또한, 2개(또는 그 초과)의 단일쇄 항체가 서로 결합된 융합 항체가 생성될 수 있다. 이는 단일 폴리펩티드 사슬 상에 이가 또는 다가 항체를 형성시키고자 하는 경우에 또는 이특이적 항체를 생성시키고자 하는 경우에 유용하다.

단일쇄 항체(scFv)를 형성시키기 위해, VH- 및 VL-인코딩 DNA 단편은 가요성 링커(flexible linker)를 인코딩하는, 예를 들어, 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3(SEQ ID NO: 396)을 인코딩하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결되며, 이에 의해 VH 서열 및 VL 서열은 VL 도메인 및 VH 도메인이 가요성 링커에 의해 연결된 인접한 단일쇄 단백질로서 발현될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Bird et al., Science 242:423 426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 5883 (1988); and McCafferty et al., Nature 348:552 554 (1990)] 참조. 단일쇄 항체는 단일 VH 및 VL만이 사용되는 경우에 일가, 2개의 VH 및 VL이 사용되는 경우에 이가, 또는 2개 초과의 VH 및 VL이 사용되는 경우에 다가일 수 있다. 예를 들어, 인간 PD-1, TIM-3, 또는 LAG-3 및 다른 분자에 특이적으로 결합하는 이특이적 또는 다가 항체가 생성될 수 있다. 일부 구체예에서, 이특이적 또는 다가 항체는 PD-1 및 TIM-3, PD-1 및 LAG-3, TIM-3 및 LAG-3, 또는 PD-1, TIM-3, 및 LAG-3에 결합할 수 있다.

다른 구체예에서, 다른 변형된 항체는 항체-인코딩 핵산 분자를 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, "카파 바디(kappa body)"(Ill et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), "미니바디(minibody)"(Martin et al., EMBO J. 13:5303-9 (1994)), "디아바디"(Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)), 또는 "자누신(Janusin)"(Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991) 및 Traunecker et al., Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992))은 본 명세서의 교시에 따라 표준 분자 생물학적 기술을 이용하여 제조될 수 있다.

본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 부분은 다른 분자(예를 들어, 다른 펩티드 또는 단백질)로 유도체화되거나 여기에 결합될 수 있다. 일반적으로, 항체 또는 이의 부분은 항원 결합이 유도체화 또는 표지화에 의해 악영향을 받지 않도록 유도체화된다. 이에 따라, 본 발명의 조합 요법 및 조성물에 사용될 수 있는 항체 또는 항체 부분은 본원에 기술된 완전한 형태 및 변형된 형태의 항체 둘 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체 또는 항체 부분은 하나 이상의 다른 분자 실체, 예를 들어, 다른 항체(예를 들어, 이특이적 항체 또는 디아바디), 검출제, 약학적 제제, 및/또는 다른 분자(예를 들어, 스트렙타비딘 코어 영역 또는 폴리히스티딘 태그)와 항체 또는 항체 부분의 회합을 매개할 수 있는 단백질 또는 펩티드에 (화학적 커플링, 유전학적 융합, 비공유 회합 또는 다른 방법에 의해) 기능적으로 결합될 수 있다.

유도체화된 항체의 한 유형은 2개 이상의 항체(예를 들어, 이특이적 항체를 생성시키기 위해 동일하거나 상이한 유형)를 가교시킴으로써 생산된다. 적합한 가교제는 적절한 스페이서(예를 들어, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시석신이미드 에스테르)에 의해 분리된 2개의 별개의 반응성 기를 갖는 헤테로이작용성이거나 호모이작용성(예를 들어, 디석신이미딜 수베레이트)인 것들을 포함한다. 그러한 링커는, 예를 들어, Pierce Chemical Company(Rockford, Il.)로부터 입수 가능하다.

항체는 또한 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 메틸 또는 에틸 기, 또는 탄수화물 기와 같은 화학적 기로 유도체화될 수 있다. 이러한 기들은 항체의 생물학적 특징을 개선시키기 위해, 예를 들어, 혈청 반감기를 증가시키기 위해 유용할 수 있다.

본원에 기재된 항체는 또한 표지될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "표지(label)" 또는 "표지된(labeled)"은 항체에 다른 분자의 혼입을 지칭한다. 한 구체예에서, 표지는 검출 가능한 마커, 예를 들어, 방사선표지된 아미노산의 도입 또는 마킹된 아비딘(예를 들어, 광학적 방법 또는 비색법에 의해 검출될 수 있는 형광 마커 또는 효소적 활성을 함유한 스트렙타비딘)에 의해 검출될 수 있는 바이오티닐 모이어티의 폴리펩티드에 대한 부착이다. 다른 구체예에서, 표지 또는 마커는 치료제, 예를 들어, 약물 컨쥬게이트 또는 독소일 수 있다. 폴리펩티드 및 당단백질을 표지하는 다양한 방법은 당 분야에 공지되어 있고 사용될 수 있다. 폴리펩티드용 표지의 예는 방사성 동위원소 또는 방사성 핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광 표지(예를 들어, FITC, 로다민, 란타나이드 인광체), 효소 표지(예를 들어, 호스래디쉬 퍼옥시다제, β-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼린 포스파타제), 화학발광 마커, 바이오티닐 기, 2차 리포터(secondary reporter)에 의해 인지되는 사전결정된 폴리펩티드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그), 자성 제제(magnetic agent), 예를 들어, 가돌리늄 킬레이트, 독소, 예를 들어, 백일해 독소, 탁솔, 시토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포사이드, 테노포사이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히친, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신 디온, 미톡산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 및 푸로마이신 및 이들의 유사체 또는 동족체를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 일부 구체예에서, 표지는 잠재적인 입체 장애를 감소시키기 위해 다양한 길이의 스페이서 아암(spacer arm)에 의해 부착된다.

특정 구체예에서, 본원에 기재된 항체는 중성 형태(쯔비터 이온 형태를 포함함) 또는 양으로 또는 음으로-하전된 종으로서 존재할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체는 약학적으로 허용되는 염을 형성하기 위해 반대이온과 복합체화될 수 있다.

용어 "약학적으로 허용되는 염"은 하나 이상의 항체 및 하나 이상의 반대이온을 포함하는 복합체를 지칭하며, 여기서 반대이온은 약학적으로 허용되는 무기 및 유기 산 및 염기로부터 유래된다.

조합 요법

본 발명은 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 조합 요법(예를 들어, 조성물)을 제공한다. 일부 구체예에서, 조합 요법은 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 일부 구체예에서, 조합 요법은 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 특정 구체예에서, 조합 요법은 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 본원에 기재된 임의의(예를 들어, 어느 하나의) 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함한다. 조합 요법은, 예를 들어, 상기 항체 또는 항원-결합 부분을 사용한 치료 방법 또는 상기 항체 또는 항원-결합 부분을 포함하는 약학적 조성물의 형태를 취할 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 항-PD-1 항체 12819 및 항-TIM-3 항체 15086.17145를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 항-PD-1 항체 12819 및 항-LAG-3 항체 15532를 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 및 항-LAG-3 항체 15532를 포함한다.

특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 하기를 포함한다:

- SEQ ID NO: 228-233의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 8-13의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- SEQ ID NO: 226 및 227의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 7 및 4의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 또는

- SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체.

- SEQ ID NO: 228-233의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 318-323의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- SEQ ID NO: 226 및 227의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 316 및 317의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 또는

- SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.

- SEQ ID NO: 8-13의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 318-323의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- SEQ ID NO: 7 및 4의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 316 및 317의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 또는

- SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.

- SEQ ID NO: 228-233의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; SEQ ID NO: 8-13의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 318-323의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- SEQ ID NO: 226 및 227의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; SEQ ID NO: 7 및 4의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및 SEQ ID NO: 316 및 317의 VH 및 VL 아미노산 서열을 각각 포함하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 또는

SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물 내의 임의의 또는 모든 항체는 IgG, 예를 들어, IgG1 또는 IgG2일 수 있다.

다중특이적 결합 분자

추가 양태에서, 본 발명은 다음의 결합 특이성을 갖는 다중특이적 결합 분자를 제공한다(예를 들어, 항원-결합 부분, 이를 테면, 6개의 CDR을 포함하는 항원-결합 부분 포함):

- 본원에 기재된 항-PD-1 항체 및 본원에 기재된 항-TIM-3 항체;

- 본원에 기재된 항-PD-1 항체 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체; 또는

- 본원에 기재된 항-TIM-3 항체 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체.

일부 구체예에서, 항-PD-1 항체, 항-TIM-3 항체, 및/또는 항-LAG-3 항체는 본원에 기재된 항체들로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 다중특이적 결합 분자는 본원에 기재된 항-PD-1 항체, 본원에 기재된 항-TIM-3 항체, 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 결합 특이성을 갖는다. 다중특이적 결합 분자는 당 분야에 공지되어 있고, 상이한 유형의 다중특이적 결합 분자의 예는 본원에서 달리 제공된다. 그러한 다중특이적(예를 들어, 이특이적 또는 삼특이적) 결합 분자는 본 발명의 조합 요법에 포함된다.

추가 양태에서, 본 발명은 PD-1을 표적화하는 이특이적 결합 분자, TIM-3을 표적화하는 이특이적 분자, 및 LAG-3을 표적화하는 이특이적 결합 분자 중 2개 이상에 의한 조합 요법을 제공한다. PD-1, TIM-3, 또는 LAG-3을 표적화하는 이특이적 결합 분자는 본원에 기재된 바와 같은 상기 항원을 표적화하는 항체의 결합 특이성, 및 동일한 항원을 표적화하는 다른 항체(예를 들어, 본원에 기재된 다른 항체) 또는 상이한 단백질, 예를 들어, 또 다른 면역 체크포인트 단백질, 암 항원, 또는 그 활성이 암과 같은 질병 상태를 매개하는 또 다른 세포 표면 분자를 표적화하는 항체의 결합 특이성을 가질 수 있다. 그러한 이특이적 결합 분자는 당 분야에 공지되어 있고, 상이한 유형의 이특이적 결합 분자의 예는 본원에서 달리 제공된다.

핵산 분자 및 벡터

또한 본원에 기재된 항-PD-1, 항-TIM-3, 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자 및 서열이 기술된다. 일부 구체예에서, 상이한 핵산 분자는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 인코딩한다. 다른 구체예에서, 동일한 핵산 분자는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 인코딩한다.

뉴클레오티드 서열에 대한 언급은 달리 기술하지 않는 한 이의 보체(complement)를 포함한다. 이에 따라, 특정 서열을 갖는 핵산에 대한 언급은 이의 보체 서열을 갖는 이의 보체 가닥을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 본원에서 언급되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 길이가 적어도 10개의 염기인 뉴클레오티드의 폴리머 형태, 즉, 리보뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드 중 어느 하나, 또는 어느 한 유형의 뉴클레오티드의 변형된 형태를 의미한다. 이 용어는 단일 및 이중 가닥 형태를 포함한다.

일부 구체예에서, 뉴클레오티드 서열은 본원에 인용된 하나 이상의 뉴클레오티드 서열, 예를 들어, SEQ ID NO: 1, 2, 5, 6, 14, 15, 24, 25, 34, 35, 44, 45, 54, 55, 64, 65, 74, 75, 84, 85, 94, 95, 104, 105, 114, 115, 124, 125, 134, 135, 144, 145, 154, 155, 164, 165, 174, 175, 184, 185, 194, 195, 204, 205, 214, 215, 224, 225, 234, 235, 244, 245, 254, 255, 264, 265, 274, 275, 284, 285, 294, 295, 304, 305, 314, 315, 324, 325, 334, 335, 344, 345, 354, 355, 364, 365 또는 391로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% 또는 99% 동일하다. 핵산 서열의 맥락에서 용어 "서열 동일성 퍼센트"는 최대 일치(correspondence)를 위해 정렬될 때 2개의 서열에서 동일한 잔기를 지칭한다. 서열 동일성 비교의 길이는 적어도 약 9개의 뉴클레오티드, 대개 적어도 약 18개의 뉴클레오티드, 보다 일반적으로 적어도 약 24개의 뉴클레오티드, 통상적으로 적어도 약 28개의 뉴클레오티드, 더욱 통상적으로 적어도 약 32개의 뉴클레오티드, 및 바람직하게는 적어도 약 36, 48개 이상의 뉴클레오티드의 신장(stretch) 위에 있을 수 있다. 뉴클레오티드 서열 동일성을 측정하기 위해 사용될 수 있는 당 분야에 공지된 여러 상이한 알고리즘이 존재한다. 예를 들어, 폴리뉴클레오티드 서열은 FASTA, Gap 또는 Bestfit를 이용하여 비교될 수 있으며, 이는 Wisconsin Package Version 10.0, Genetics Computer Group (GCG)(Madison, Wisconsin)의 프로그램이다. 예를 들어, 프로그램 FASTA2 및 FASTA3을 포함하는 FASTA는 조회 서열과 검색 서열 간의 최상의 중첩 영역의 정렬 및 서열 동일성 퍼센트를 제공한다(예를 들어, 문헌[Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998)] 참조; 본원에서 참조로서 포함됨]. 달리 명시하지 않는 한, 특정 프로그램 또는 알고리즘에 대한 기본 파라미터들이 사용된다. 예를 들어, 핵산 서열들 간의 서열 동일성 퍼센트는 이의 기본 파라미터(6의 단어 크기 및 스코어링 매트릭스를 위한 NOPAM 인자)를 갖는 FASTA를 이용하거나 GCG Version 6.1에 제공된 바와 같은 이의 기본 파라미터를 갖는 Gap을 이용하여 결정될 수 있으며, 이들은 본원에 참고로 포함된다.

일부 구체예에서, 핵산 분자는 SEQ ID NO: 1, 2, 5, 6, 14, 15, 24, 25, 34, 35, 44, 45, 54, 55, 64, 65, 74, 75, 84, 85, 94, 95, 104, 105, 114, 115, 124, 125, 134, 135, 144, 145, 154, 155, 164, 165, 174, 175, 184, 185, 194, 195, 204, 205, 214, 215, 224, 225, 234, 235, 244, 245, 254, 255, 264, 265, 274, 275, 284, 285, 294, 295, 304, 305, 314, 315, 324, 325, 334, 335, 344, 345, 354, 355, 364, 365 또는 391로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

임의의 상기 구체예에서, 핵산 분자는 분리될 수 있다. 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및/또는 경쇄를 인코딩하는 핵산 분자는 그러한 항체 또는 부분을 생산하는 임의의 공급원으로부터 분리될 수 있다. 다양한 구체예에서, 핵산 분자는 PD-1, TIM-3, 또는 LAG-3 항원으로 면역된 동물로부터 분리된 항체를 발현시키는 B 세포로부터, 또는 그러한 B 세포로부터 생산된 무한증식 세포로부터 분리된다. 항체를 인코딩하는 핵산을 분리시키는 방법은 당 분야에서 널리 공지되어 있다. mRNA는 항체 유전자의 중합효소 연쇄 반응(PCR) 또는 cDNA 클로닝에서 사용하기 위한 cDNA를 생산하기 위해 분리되고 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 본원에 기재된 핵산 분자는 분리되기보다는 합성될 수 있다.

일부 구체예에서, 본원에 기재된 핵산 분자는 임의의 공급원으로부터의 중쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 인-프레임으로 결합된 본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 부분으로부터의 VH 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다. 유사하게, 본원에 기재된 핵산 분자는 임의의 공급원으로부터의 경쇄 불변 영역을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열에 인-프레임으로 결합된 본원에 기재된 항체 또는 항원-결합 부분으로부터의 VL 도메인을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.

추가 양태에서, 중쇄(VH) 및/또는 경쇄(VL)의 가변 도메인을 인코딩하는 핵산 분자는 전장 항체 유전자로 "전환"될 수 있다. 한 구체예에서, VH 또는 VL 도메인을 인코딩하는 핵산 분자는, VH 세그먼트가 벡터 내에서 CH 세그먼트(들)에 작동 가능하게 결합되고/거나 VL 세그먼트가 벡터 내에서 CL 세그먼트에 작동 가능하게 결합되도록, 중쇄 불변(CH) 또는 경쇄 불변(CL) 영역을 각각 이미 인코딩하는 발현 벡터로의 삽입에 의해 전장 항체 유전자로 전환된다. 다른 구체예에서, VH 및/또는 VL 도메인을 인코딩하는 핵산 분자는 표준 분자 생물학적 기술을 이용하여 CH 및/또는 CL 영역을 인코딩하는 핵산 분자에 VH 및/또는 VL 도메인을 인코딩하는 핵산 분자를 연결시킴으로써, 예를 들어, 라이게이션시킴으로써 전장 항체 유전자로 전환된다. 이후 전장 중쇄 및/또는 경쇄를 인코딩하는 핵산 분자는 이들이 도입되고 항체가 분리된 세포로부터 발현될 수 있다.

핵산 분자는 대량의 항체를 재조합적으로 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 핵산 분자는 또한 본원에 기술된 바와 같은 키메라 항체, 이특이적 항체, 단일쇄 항체, 면역접합체, 디아바디, 돌연변이된 항체 및 항체 유도체를 생산하기 위해 사용될 수 있다.

또한 본원에 기재된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 사슬들 중 하나 또는 둘 모두를 발현시키기에 적합한 벡터가 본원에 기술된다. 본원에서 사용되는 용어 "벡터"는 여기에 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 의미한다. 일부 구체예에서, 벡터는 플라스미드, 즉, 추가적인 DNA 세그먼트가 라이게이션될 수 있는 DNA의 원형의 이중 가닥 조각이다. 일부 구체예에서, 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가적인 DNA 세그먼트는 바이러스 게놈에 라이게이션될 수 있다. 일부 구체예에서, 벡터는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자율 복제가 가능하다(예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 구체예에서, 벡터(예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포에 도입 시에 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있고, 이에 의해, 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 유도할 수 있다. 그러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터"(또는 단순하게, "발현 벡터")로서 지칭된다.

일부 구체예에서, 벡터는 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄와 경쇄 둘 모두를 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 구체예에서, 벡터는 융합 단백질, 변형된 항체, 항체 단편, 및 이의 프로브를 인코딩하는 핵산 분자를 포함한다.

일부 구체예에서, 항-PD-1, 항-TIM-3, 또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 전사 및 번역 조절 서열과 같은 필수적인 발현 조절 서열에 유전자가 작동 가능하게 결합되도록 발현 벡터에, 상기 기술된 바와 같이 얻어진 부분 또는 전장 경쇄 및 중쇄를 인코딩하는 DNA를 삽입함으로써 발현된다. 발현 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV), 식물 바이러스, 예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스, 담배 모자이크 바이러스, 코스미드, YAC, EBV 유래된 에피솜 등을 포함한다. 항체 코딩 서열은 벡터 내의 전사 및 번역 조절 서열이 항체 코딩 서열의 전사 및 번역을 조절하는 이의 의도된 기능을 수행하도록 벡터에 라이게이션될 수 있다. 발현 벡터 및 발현 조절 서열은 사용되는 발현 숙주 세포와 양립 가능하도록 선택될 수 있다. 항체 경쇄 코딩 서열 및 항체 중쇄 코딩 서열은 별도의 벡터에 삽입될 수 있고, 동일하거나 상이한 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터)에 작동 가능하게 결합될 수 있다. 한 구체예에서, 둘 모두의 코딩 서열은 동일한 발현 벡터에 삽입되고 동일한 발현 조절 서열(예를 들어, 공통 프로모터), 별도의 동일한 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터), 또는 상이한 발현 조절 서열(예를 들어, 프로모터)에 작동 가능하게 결합될 수 있다. 항체 코딩 서열은 표준 방법(예를 들어, 항체 유전자 단편 및 벡터의 상보적 제한 부위의 라이게이션, 또는 제한 부위가 존재하지 않는 경우, 블런트 단부 라이게이션(blunt end ligation))에 의해 발현 벡터에 삽입될 수 있다.

편리한 벡터는, 상술된 바와 같이, 임의의 VH 또는 VL 서열이 용이하게 삽입되고 발현되도록 공학처리된 적절한 제한 부위를 갖는, 기능적으로 완전한 인간 CH 또는 CL 면역글로불린 서열을 인코딩하는 벡터이다. 그러한 벡터의 HC- 및 LC-인코딩 유전자는 관련 mRNA를 안정화시킴으로써 전체 항체 단백질 수율을 향상시킬 인트론 서열을 함유할 수 있다. 인트론 서열은 스플라이스 도너 및 스플라이스 어셉터 부위의 측면에 있으며, RNA 스플라이싱이 발생할 곳을 결정한다. 인트론 서열의 위치는 항체 사슬의 가변 또는 불변 영역에 있거나, 다중 인트론이 사용되는 경우 가변 및 불변 영역 둘 모두에 있을 수 있다. 폴리아데닐화 및 전사 종결은 코딩 영역의 다운스트림의 고유 염색체 부위에서 일어날 수 있다. 재조합 발현 벡터는 또한 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 촉진시키는 신호 펩티드를 인코딩할 수 있다. 항체 사슬 유전자는 신호 펩티드가 면역글로불린 사슬의 아미노 말단에 인-프레임으로 결합되도록 벡터에 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 이종 신호 펩티드(즉, 비-면역글로불린 단백질로부터의 신호 펩티드)일 수 있다.

항체 사슬 유전자에 추가하여, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 항체 사슬 유전자의 발현을 조절하는 조절 서열을 지닐 수 있다. 조절 서열의 선택을 포함하는 발현 벡터의 설계는 형질전환되는 숙주 세포의 선택, 요망되는 단백질의 발현 수준 등과 같은 인자에 좌우될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 포유동물 숙주 세포 발현을 위한 바람직한 조절 서열은 포유동물 세포에서 높은 수준의 단백질 발현을 유도하는 바이러스 요소, 예를 들어, 레트로바이러스 LTR, 사이토메갈로바이러스(CMV)(예를 들어, CMV 프로모터/인핸서), 원숭이 바이러스 40(SV40)(예를 들어, SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터(adenovirus major late promoter; AdMLP))로부터 유래된 프로모터 및/또는 인핸서, 폴리오마(polyoma) 및 강한 포유동물 프로모터, 예를 들어, 고유 면역글로불린 및 액틴 프로모터를 포함한다. 바이러스 조절 요소 및 이의 서열의 추가 설명을 위하여, 예를 들어, 미국특허 제5,168,062호, 제4,510,245호 및 제4,968,615호가 참조된다. 프로모터 및 벡터의 설명을 포함하는, 식물에서 항체를 발현시키는 방법 뿐만 아니라 식물의 형질전환이 당 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국특허 제6,517,529호 참조. 박테리아 세포 또는 진균 세포, 예를 들어, 효모 세포에서 폴리펩티드를 발현시키는 방법이 또한 당 분야에 널리 공지되어 있다.

항체 사슬 유전자 및 조절 서열에 추가하여, 재조합 발현 벡터는 추가적인 서열, 예를 들어, 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제 기점) 및 선택 가능한 마커 유전자를 지닐 수 있다. 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, 미국특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예를 들어, 통상적으로, 선택 가능한 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 대해 약물, 예를 들어, G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여한다. 예를 들어, 선택 가능한 마커 유전자는 디하이드로폴레이트 환원효소(DHFR) 유전자(메토트렉세이트 선택/증폭을 갖는 dhfr-숙주 세포에서 사용하기 위한), neo 유전자(G418 선택을 위한), 및 글루타메이트 합성효소 유전자를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "발현 조절 서열"은 라이게이션되는 코딩 서열의 발현 및 처리를 달성하는데 필수적인 폴리뉴클레오티드 서열을 의미한다. 발현 조절 서열은 적절한 전사 개시, 종결, 프로모터 및 인핸서 서열; 효율적인 RNA 처리 신호, 예를 들어, 스플라이싱 및 폴리아데닐화 신호; 세포질 mRNA를 안정화시키는 서열; 번역 효율을 향상시키는 서열(즉, Kozak 컨센서스 서열); 단백질 안정성을 향상시키는 서열; 및 요망될 때, 단백질 분비를 향상시키는 서열을 포함한다. 그러한 조절 서열의 특성은 숙주 유기체에 따라 상이하며, 원핵생물에서, 그러한 조절 서열은 일반적으로 프로모터, 리보솜 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함하며; 진핵생물에서, 일반적으로 그러한 조절 서열은 프로모터 및 전사 종결 서열을 포함한다. 용어 "조절 서열"은 발현 및 처리를 위해 필수적으로 존재하는 모든 성분들을 최소한으로 포함하도록 의도되고, 또한 존재하는 것이 유리한 추가적인 성분, 예를 들어, 리더 서열(leader sequence) 및 융합 파트너 서열을 포함할 수 있다.

숙주 세포 및 항체 및 항체 조성물을 생산하는 방법

또한 본 발명의 조합 요법(예를 들어 조성물)을 생산하는 방법이 기술된다. 한 구체예는 항체를 발현시킬 수 있는 재조합 숙주 세포를 제공하고, 항체의 발현에 적합한 조건 하에 상기 숙주 세포를 배양시키고, 생성된 항체를 분리시키는 것을 포함하는, 본원에 기재된 항체를 생산하는 방법에 관한 것이다. 그러한 재조합 숙주 세포에서 상기 발현에 의해 생산된 항체는 본원에서 "재조합 항체"로서 지칭된다. 또한 그러한 숙주 세포의 자손 세포, 및 이에 의해 생산된 항체가 기술된다.

본원에서 사용되는 용어 "재조합 숙주 세포"(또는 간단하게 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 의미한다. 숙주 세포는, 예를 들어, 본원에 기재된 하나 이상의 벡터를 포함할 수 있다. 숙주 세포는, 예를 들어, 본원에 기재된 항-PD-1, 항-TIM-3, 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이들의 항원-결합 부분의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두를 포함할 수 있다. "재조합 숙주 세포" 및 "숙주 세포"는 특정 해당 세포 뿐만 아니라, 그러한 세포의 자손을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향 중 어느 하나로 인해 다음 세대에서 일어날 수 있기 때문에, 그러한 자손은 실제로 부모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 여전히 포함된다.

항-PD-1, 항-TIM-3, 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산 분자 및 이러한 핵산 분자를 포함하는 벡터는 적합한 포유동물, 식물, 박테리아 또는 효모 숙주 세포의 트랜스펙션(transfection)을 위해 사용될 수 있다. 형질전환은 폴리뉴클레오티드를 숙주 세포에 도입하기 위한 임의의 공지된 방법에 의한 것일 수 있다. 이종 폴리뉴클레오티드를 포유동물 세포에 도입하는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 덱스트란-매개 트랜스펙션, 칼슘 포스페이트 침전, 폴리브렌-매개 트랜스펙션, 원형질 융합, 전기천공, 리포솜 중에 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화, 및 핵에 DNA의 직접 미세주입을 포함한다. 또한, 핵산 분자는 바이러스 벡터에 의해 포유동물 세포에 도입될 수 있다. 세포를 형질전환시키는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 미국특허 제4,399,216호, 제4,912,040호, 제4,740,461호, 및 제4,959,455호 참조. 식물 세포를 형질전환시키는 방법은 당 분야에 널리 공지되어 있고, 예를 들어, 아그로박테리윰-매개 형질전환, 유전자총법 형질전환, 직접 주입, 전기천공 및 바이러스 형질전환을 포함한다. 박테리아 및 효모 세포를 형질전환시키는 방법이 또한 당 분야에 널리 공지되어 있다.

발현을 위한 숙주로서 입수 가능한 포유동물 세포주는 당 분야에서 널리 공지되어 있고, 미국 표준 균주 배양 수집소(American Type Culture Collection; ATCC)로부터 입수 가능한 다수의 무한증식 세포주를 포함한다. 이러한 것은 다른 것들 중에서, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, NS0 세포, SP2 세포, HEK-293T 세포, 293 Freestyle 세포(Invitrogen), NIH-3T3 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 아프리카 그린 몽키 신장 세포(COS), 인간 간세포 암종 세포(예를 들어, Hep G2), A549 세포, 및 다수의 다른 세포주를 포함한다. 특히 바람직한 세포주는 세포주가 높은 발현 수준을 갖는 지를 결정함에 의해 선택된다. 사용될 수 있는 다른 세포주에는 곤충 세포주, 예를 들어, Sf9 또는 Sf21 세포가 있다. 항체 유전자를 인코딩하는 재조합 발현 벡터가 포유동물 숙주 세포에 도입될 때, 항체는 숙주 세포를, 숙주 세포에서 항체의 발현을 가능하게 하거나 더욱 바람직하게는 숙주 세포가 성장되는 배양 배지에 항체의 분비를 가능하게 하는데 충분한 시간 동안 배양시킴으로써 생산된다. 항체는 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 배양 배지로부터 회수될 수 있다. 식물 숙주 세포는 예를 들어, 니코티아나(Nicotiana), 아라비돕시스(Arabidopsis), 좀개구리밥(duckweed), 옥수수, 밀, 감자 등을 포함한다. 박테리아 숙주 세포는 이.콜라이(E.coli) 및 스트렙토마이세스 종을 포함한다. 효모 숙주 세포는 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae) 및 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)를 포함한다.

또한, 생산 세포주로부터의 본원에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 발현은 다수의 공지된 기술을 이용하여 향상될 수 있다. 예를 들어, 글루타민 합성효소 유전자 발현 시스템(GS 시스템)은 특정 조건 하에 발현을 향상시키기 위한 일반적인 방법이다. GS 시스템은 EP 특허 0 216 846호, 0 256 055호, 0 323 997호 및 0 338 841호와 관련하여 전부 또는 일부 논의되어 있다.

상이한 세포주에 의해 또는 트랜스제닉 동물에서 발현된 항체는 서로 상이한 글리코실화 패턴을 가질 가능성이 있다. 그러나, 본원에 제공된 핵산 분자에 의해 인코딩되거나 본원에 제공된 아미노산 서열을 포함하는 모든 항체는 항체의 글리코실화 상태와 무관하게, 그리고, 보다 일반적으로, 번역후 변형(들)의 존재 또는 부재와는 무관하게, 본 발명의 일부이다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-PD-1 항체 및 항-TIM-3 항체를 포함하는 항체 조성물을 생산하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은,

- 제1 및 제2 숙주 세포를 제공하는 단계로서, 상기 제1 숙주 세포가 본원에 기재된 항-PD-1 항체를 발현할 수 있고 상기 제2 숙주 세포가 본원에 기재된 항-TIM-3 항체를 발현할 수 있는 단계,

- 항-PD-1 항체 및 항-TIM-3 항체의 발현에 적합한 조건 하에 상기 제1 및 제2 숙주 세포를 배양하는 단계, 및

- 생성된 항체를 분리시키는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-PD-1 항체 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 항체 조성물을 생산하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은,

- 제1 및 제2 숙주 세포를 제공하는 단계로서, 상기 제1 숙주 세포가 본원에 기재된 항-PD-1 항체를 발현할 수 있고 상기 제2 숙주 세포가 본원에 기재된 항-LAG-3 항체를 발현할 수 있는 단계,

- 항-PD-1 항체 및 항-LAG-3 항체의 발현에 적합한 조건 하에 상기 제1 및 제2 숙주 세포를 배양하는 단계, 및

- 생성된 항체를 분리시키는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 항체 조성물을 생산하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은,

- 제1 및 제2 숙주 세포를 제공하는 단계로서, 상기 제1 숙주 세포가 본원에 기재된 항-TIM-3 항체를 발현할 수 있고 상기 제2 숙주 세포가 본원에 기재된 항-LAG-3 항체를 발현할 수 있는 단계,

- 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체의 발현에 적합한 조건 하에 상기 제1 및 제2 숙주 세포를 배양하는 단계, 및

- 생성된 항체를 분리시키는 단계를 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 항-PD-1 항체, 항-TIM-3 항체, 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 항체 조성물을 생산하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은,

- 제1, 제2, 및 제3 숙주 세포를 제공하는 단계로서, 상기 제1 숙주 세포가 본원에 기재된 항-PD-1 항체를 발현할 수 있고, 상기 제2 숙주 세포가 본원에 기재된 항-TIM-3 항체를 발현할 수 있고, 상기 제3 숙주 세포가 본원에 항-LAG-3 항체를 발현할 수 있는 단계,

- 항-PD-1 항체, 항-TIM-3 항체, 및 항-LAG-3 항체의 발현에 적합한 조건 하에 상기 제1, 제2, 및 제3 숙주 세포를 배양하는 단계, 및

- 생성된 항체를 분리시키는 단계를 포함한다.

본 발명의 항체 조성물의 생산을 위해, 상이한 표적에 대한 항체가 별도로 생산될 수 있고, 즉, 각각의 항체가 분리된 생물반응기에서 생산되거나, 개별 항체들이 단일 생물반응기에서 함께 생산될 수 있다. 항체 조성물이 하나 초과의 생물반응기에서 생산되는 경우, 각각의 생물반응기로부터 개별적으로 정제된 상청액으로부터 수득된 항체를 풀링시킴으로써 정제된 항체 조성물을 수득할 수 있다. 세포주 또는 항체 제조물이 나중에 상류에서 또는 하류 공정 전 또는 동안에 조합되는, 다수의 생물반응기에서 폴리클로날 항체 조성물을 생산하기 위한 다양한 접근법이 PCT 공개 WO 2009/129814호에 기재되어 있다.

단일 생물반응기에서 개별 항체들을 생산하는 경우, 이는 예를 들어, PCT 공개 WO 2004/061104호 또는 WO 2008/145133호에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. WO 2004/061104호에 기술된 방법은 개별 숙주 세포의 게놈으로의 항체 코딩 서열의 부위-특이적 통합에 기반한 반면, WO 2008/145133호의 방법은 단일 생물반응기에서 항체를 생산하기 위해 무작위 통합을 이용하는 대안적인 접근법을 포함한다.

본 발명의 항체 조성물을 제조하기에 적합한 방법에 관한 추가 정보는 PCT 공개 WO 2012/059857호 및 WO 2013/164689호에서 찾을 수 있다.

본 발명은 또한 하기를 생산하는 폴리클로날 세포주를 제공한다:

- 본원에 기재된 적어도 하나의 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 적어도 하나의 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- 본원에 기재된 적어도 하나의 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 적어도 하나의 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

- 본원에 기재된 적어도 하나의 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 적어도 하나의 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 또는

- 본원에 기재된 적어도 하나의 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 본원에 기재된 적어도 하나의 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 본원에 기재된 적어도 하나의 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분.

본 발명은 또한 폴리클로날 세포주에 의해 생산된 항체 또는 부분 중 적어도 하나의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열 또는 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 각각 포함하는 숙주 세포를 제공하는 단계를 포함하는 상기 폴리클로날 세포주를 생산하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 하기를 포함하는 숙주 세포를 제공한다:

- 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두, 및 본원에 기재된 항-TIM-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두;

- 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두, 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두;

- 본원에 기재된 항-TIM-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두, 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두; 또는

- 본원에 기재된 항-PD-1 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두; 본원에 기재된 항-TIM-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두; 및 본원에 기재된 항-LAG-3 항체의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 경쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 또는 둘 모두.

약학적 조성물

본 발명의 다른 양태는 활성 성분으로서(또는 단독 활성 성분으로서) 다음을 포함하는 약학적 조성물이다:

본원에 기재된 적어도 하나의 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및 본원에 기재된 적어도 하나의 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분;

일부 양태에서, 약학적 조성물은 다중특이적 결합 분자(예를 들어, 본원에 기재된 항-PD-1 항체 및 본원에 기재된 항-TIM-3 또는 항-LAG-3 항체; 또는 본원에 기재된 항-PD1 항체, 항-TIM-3 항체, 및 항-LAG-3 항체의 결합 특이성을 갖는 다중특이적 결합 분자)를 포함한다.

일부 구체예에서, 약학적 조성물은 하나 이상의 관련 세포 표면 수용체, 예를 들어, 하나 이상의 암-관련 수용체를 표적화하는 하나 이상의 추가적인 항체를 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 약학적 조성물은 PD-1, TIM-3, 및/또는 LAG-3의 조절에 의해 개선되거나 진행이 느려지는 장애, 질병, 또는 질환의 개선, 예방, 및/또는 치료를 위해 의도된다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 암의 개선, 예방, 및/또는 치료를 위해 의도된다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 면역 시스템의 활성화를 위해 의도된다.

본 발명의 약학적 조성물 내의 항원-결합 부분의(또는 동시에, 순차적으로 또는 별도로 투여되는 본원에 기술된 개별 항체 또는 부분의) 항체 사이의 비율은 종종 항체가 동일한 양으로 투여되도록 할 것이나, 반드시 그런 것은 아니다. 따라서, 항-PD-1 항체 및 항-TIM-3 항체, 항-PD-1 항체 및 항-LAG-3 항체, 또는 항-TIM-3 항체 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 본 발명의 조성물은 상기 항체들을 약 1:1 비로 함유할 수 있다. 항-PD-1 항체, 항-TIM-3 항체, 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 본 발명의 조성물은 상기 항체들을 약 1:1:1 비(즉, 동일한 양으로) 함유할 수 있다. 그러나, 개별 항체의 특성에 따라, 동일하지 않은 양의 상이한 항체들을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 본 발명의 조성물 내의 상이한 항체들에 대한 적합한 비율은 최적의 역가 및 효능을 갖는 조합 약물을 수득하기 위해 조합 약물 제품, 예를 들어, 폴리클로날 항체 조성물 내의 화학적 실체들 사이의 최적 화학량론적 비를 확인하고 선택하는 방법을 기술하고 있는 PCT 공개 WO 2010/040356호에 기술된 바와 같이 결정될 수 있다.

일반적으로, 본원에 기술된 약학적 조성물은, 예를 들어, 아래에 기술된 바와 같은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제(들)와 회합하여 제형으로서 투여되기에 적합하다.

용어 "부형제"는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기술하기 위해 본원에서 사용된다. 부형제(들)의 선택은 특정 투여 모드, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 및 투여 형태의 특성과 같은 인자에 상당히 크게 좌우될 것이다. 본원에서 사용되는 "약학적으로 허용되는 부형제"는 생리학적으로 양립 가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 약학적으로 허용되는 부형제의 일부 예로는 물, 염수, 포스페이트 완충된 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 뿐만 아니라 이들의 조합물이 있다. 많은 경우에, 조성물에 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예를 들어, 만니톨, 소르비톨, 또는 소듐 클로라이드를 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 약학적으로 허용되는 물질의 추가적인 예로는 습윤제 또는 소량의 보조 물질, 예를 들어, 습윤제 또는 에멀젼화제, 보존제 또는 완충제가 있으며, 이는 항체의 저장 수명 또는 효능을 향상시킨다.

본 발명의 약학적 조성물 및 이들의 제조 방법은 당업자에게 용이하게 자명할 것이다. 그러한 조성물 및 이의 제조 방법은 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)]에서 확인될 수 있다. 약학적 조성물은 바람직하게는 GMP(우수 제조관리 기준(good manufacturing practices)) 조건 하에 제조된다.

본 발명의 약학적 조성물은 벌크로, 단일 단위 용량으로서, 또는 복수의 단일 단위 용량으로서 제조되거나, 패키징되거나, 판매될 수 있다. 본원에서 사용되는 "단위 용량"은 소정량의 활성 성분을 포함하는 약학적 조성물의 개별 양이다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상체에 투여되는 활성 성분의 투여량과 같거나, 그러한 투여량의 편리한 분획, 예를 들어, 이를 테면, 그러한 투여량의 1/2 또는 1/3이다.

당 분야에서 허용되는 펩티드, 단백질 또는 항체를 투여하기 위한 임의의 방법은 본원에 기재된 항체 및 항원-결합 부분에 대해 적합하게 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 비경구 투여를 위해 적합하다. 본원에서 사용되는 약학적 조성물의 "비경구 투여"는 대상체의 조직의 물리적 브리칭(physical breaching) 및 조직에 브리치(breach)를 통한 약학적 조성물의 투여에 의해 특징되는 임의의 투여 경로를 포함하며, 이에 따라, 일반적으로 혈류에, 근육에 또는 내부 장기에 직접 투여를 발생시킨다. 이에 따라, 비경구 투여는 조성물의 주사에 의해, 외과적 절개를 통한 조성물의 적용에 의해, 조직-침투 비-외과적 상처를 통한 조성물의 적용 등에 의한 약학적 조성물의 투여를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 특히, 비경구 투여는 피하, 복강내, 근육내, 흉골내, 정맥내, 동맥내, 척추강내, 심실내, 요도내, 두개내, 종양내, 및 활막내 주사 또는 주입; 및 신장 투석 주입 기술을 비제한적으로 포함하는 것으로 고려된다. 국소 관류법이 또한 고려된다. 특정 구체예는 정맥내 및 피하 경로를 포함한다.

비경구 투여를 위해 적합한 약학적 조성물의 제형은 통상적으로 약학적으로 허용되는 담체, 예를 들어, 멸균수 또는 멸균 등장성 염수와 조합된 활성 성분을 포함한다. 그러한 제형은 볼루스 투여 또는 연속 투여에 적합한 형태로 제조, 패키징 또는 판매될 수 있다. 주사용 제형은 보존제를 함유하는 앰풀 또는 다중-용량 용기와 같은 단위 투여 형태로 제조, 패키징 또는 판매될 수 있다. 비경구 투여용 제형은 현탁액, 용액, 유성 또는 수성 비히클 중의 에멀젼, 페이스트 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 그러한 제형은 현탁제, 안정화제 또는 분산제를 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 추가적인 성분을 추가로 포함할 수 있다. 비경구 투여를 위한 제형의 한 구체예에서, 활성 성분은 건조(즉, 분말 또는 과립) 형태로 제공되고, 이는 재구성된 조성물을 비경구 투여하기 전에 적합한 비히클(예를 들어, 발열원이 없는 멸균수)로 재구성된다. 비경구 제형은 또한 부형제, 예를 들어, 염, 탄수화물 및 완충제(바람직하게, 3 내지 9의 pH로)를 함유할 수 있는 수용액을 포함하지만, 일부 적용을 위하여, 이들은 더욱 적합하게는 멸균 비-수용액으로서, 또는 적합한 비히클, 예를 들어, 발열원이 없는 멸균수와 함께 사용되는 건조된 형태로서 제형화될 수 있다. 예시적인 비경구 투여 형태는 멸균 수용액, 예를 들어, 프로필렌 글리콜 또는 덱스트로스 수용액 중의 용액 또는 현탁액을 포함한다. 그러한 투여 형태는 요망되는 경우에, 적합하게 완충될 수 있다. 유용한 다른 비경구적으로-투여 가능한 제형은 미정질 형태 또는 리포솜 제조물에 활성 성분을 포함하는 것들을 포함한다. 비경구 투여를 위한 제형은 즉방출 및/또는 변형된 방출이 되도록 제형화될 수 있다. 변형된 방출 제형은 지연된-, 지속된-, 펄스화된-, 조절된-, 표적화된 및 프로그램된 방출을 포함한다.

예를 들어, 한 양태에서, 멸균 주사 가능한 용액은, 필요한 경우에, 상기 나열된 성분들 중 하나 또는 이의 조합과 함께, 적절한 용매 중에 요구되는 양의 조성물을 혼입한 다음 멸균 여과시킴으로써 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 기본 분산 매질 및 상기 열거된 것들로부터의 필요한 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클에 활성 화합물을 혼입시킴으로써 제조된다. 멸균 주사 가능한 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우에, 바람직한 제조 방법은 활성 성분의 분말 및 이의 이전의 멸균-여과된 용액으로부터의 임의의 추가적인 요망되는 성분을 수득하는 진공 건조 및 냉동-건조이다. 용액의 적절한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해, 그리고 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 주사 가능한 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 모노스테아레이트 염 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써, 및/또는 변형된-방출 코팅제(예를 들어, 서방출 코팅제)를 조성물에 포함시킴으로써 초래될 수 있다.

본 발명의 조합 요법 및 조성물의 치료 용도

한 양태에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물은 면역 시스템의 강화 또는 활성화가 필요한 환자(예를 들어, 인간)에서 면역 시스템을 강화시키거나 활성화시키기 위해 사용된다. 일부 구체예에서, 환자는 면역-억제된 환자이다. 예를 들어, 의사는 본 발명의 조합 요법 또는 조성물을 단독으로 또는 다른 치료제와 함께(순차적으로 또는 동시에) 투여함으로써 환자 고유의 면역 시스템의 항암 활성을 부스팅할 수 있다. 조합 요법 또는 조성물은 면역 세포에서 PD-1, TIM-3, 및/또는 LAG-3의 활성을 조절하여, 항암 면역을 강화시킨다. 특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물은 암, 예를 들어, 피부, 폐, 장, 결장, 난소, 뇌, 전립선, 신장, 연조직, 조혈 시스템, 두경부, 간, 방광, 유방, 위, 자궁 및 췌장과 같은 조직에서 유래된 암, 및 PD-1, TIM-3, 및/또는 LAG-3 활성에 의존하고/거나 환자가 이들 중 어느 것의 리간드를 발현 또는 과발현하는 임의의 암 또는 다른 질환의 치료에 사용하기 위한 것이다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물에 의해 치료되는 암은, 예를 들어, 흑색종(예를 들어, 진행성 또는 전이성 흑색종), 비소세포폐암, 두경부 편평 세포 암, 신장 세포 암종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 아교모세포종, 신경아교종, 편평 세포 폐암, 소세포폐암, 간세포 암종, 방광암, 상부요로암, 식도암, 위식도 접합부 암, 위암, 간암, 결장암, 결장직장 암종, 다발성 골수종, 육종, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수이형성 증후군, 비인두암, 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 소형 림프구성 림프종, 난소암, 위장암, 원발성 복막암, 자궁관암, 요로상피암, HTLV-관련 T-세포 백혈병/림프종, 전립선암, 비뇨생식암, 수막종, 부신겉질암, 신경아교육종, 섬유육종, 신장암, 유방암, 췌장암, 자궁내막암, 피부 기저 세포암, 충수암, 담관암, 침샘암, 진행성 메르켈 세포 암, 미만성 거대 B 세포 림프종, 소포 림프종, 중피종, 신경내분비 종양, 비뇨기암, 골암, 흉부암, 호흡기암, 아데노이드 낭성 암종, 자궁경부암, 별아교세포종, 척수종, 신경모세포종, 구강암, 피부 편평 세포 암종, 갑상선암, 카포시 육종, 항문암, 담낭암, 흉선암, 자궁암, 및 고형 종양을 포함할 수 있다. 암은, 예를 들어, 초기, 중기, 진행성, 또는 전이성 단계에 있을 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물에 의해 치료되는 암은, 예를 들어, 흑색종(예를 들어, 진행성 흑색종, 또는 절제 불가능 또는 전이성 흑색종), 비소세포폐암(예를 들어, 진행성 비소세포폐암), 폐 암종, 두경부 편평 세포 암종, 아교모세포종(예를 들어, 재발성 아교모세포종), 신경아교육종, 메르켈-세포 암종, 섬유육종, 난소암, 방광암, 신장 세포 암종, 결장직장암, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 백혈병(예를 들어, 급성 골수 백혈병), 혈액학적 악성종양, 고형 종양(예를 들어, 진행성 또는 전이성 고형 종양), MSI 하이(high) 종양, HPV 및 HIV 관련 악성종양, 및 BRAC1 및 BRAC2 돌연변이와 관련된 종양을 포함할 수 있다.

특정 구체예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 건선, 전신홍반루푸스, MLS(경화증), 크론병, 당뇨병, 및/또는 궤양대장염과 같은 면역-매개 장애의 치료를 위해 의도된다.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은, 예를 들어, 병원체가 숙주 면역 반응을 억제하는 바이러스 및/또는 기생충 감염의 치료에 사용하기 위한 것이다. 예를 들어, 병원체는, 예를 들어, HIV, 간염(A, B 또는 C), 인간 유두종 바이러스(HPV), 림프구 맥락수막염 바이러스(LCMV), 아데노바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코르노바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 볼거리 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 루벨라 바이러스, 파보바이러스, 백시니아 바이러스, 인간 T-세포 림프구 친화성 바이러스(HTLV), 인간 사이토메갈로바이러스(HCMV), 뎅기 바이러스, 물렁종 바이러스, 폴리오바이러스, 광견병 바이러스, 존 커닝햄(JC) 바이러스, 아르보바이러스 뇌염 바이러스, 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV), 인플루엔자, 헤르페스, 편모충, 말라리아, 리슈만편모충, 스태필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 또는 슈도모나스 에어루기노사(Pseudomonas aeruginosa)일 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물은 면역약화되거나 면역약화의 위험이 있는(예를 들어, 화학치료 또는 방사선 요법으로 인해) 환자를 치료하는데 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물은 항원-특이적 T 세포의 생체외 활성화 및 증식을 위해 사용될 수 있다.

일부 구체예에서, 환자는 PD-1, TIM-3, 및/또는 LAG-3 또는 이들의 리간드 중 어느 것의 과발현 또는 과잉활성을 특징으로 하는 질환(예를 들어, 암 또는 면역 장애)에 대해 이전에 치료되었을 수 있다. 예를 들어, 환자는 PD-1, TIM-3, 및/또는 LAG-3을 표적화하는 하나 이상의 약물로 치료되었을 수 있고 상기 약물(들)에 대한 내성을 획득했을 수 있다.

"치료하다," "치료하는" 및 "치료"는 생물학적 장애 및/또는 이의 수반되는 증상들 중 적어도 하나를 완화시키거나 제거하는 방법을 지칭한다. 본원에서 사용되는 질병, 장애 또는 질환을 "완화시키는" 것은 질병, 장애 또는 질환의 증상의 중증도 및/또는 발생 횟수를 감소시키는 것을 의미한다. 또한, 본원에서 "치료"에 대한 언급은 치유, 완화 및 예방 치료에 대한 언급을 포함한다.

"치료적 유효량"은 치료되는 장애의 증상들 중 하나 이상을 어느 정도까지 완화시킬 투여되는 치료제의 양을 지칭한다. 항암 치료제의 치료적 유효량은, 예를 들어, 종양 수축, 생존 증가, 암 세포의 제거, 질병 진행 감소, 전이의 역전, 또는 건강관리 전문가가 원하는 다른 임상적 종말점을 발생시킬 수 있다.

일부 구체예에서, 본 발명의 조합 요법의 항체, 항원-결합 부분, 또는 다중특이적 결합 분자는 단일 조성물로 투여된다. 다른 구체예에서, 항체, 항원-결합 부분, 또는 다중특이적 결합 분자는 하나 초과의 조성물로 투여된다. 예를 들어, 항-PD-1 항체, 항-TIM-3 항체, 및 항-LAG-3 항체를 포함하는 조합 요법은 3개 모두의 항체를 포함하는 단일 조성물, 항체 중 2개를 포함하는 조성물과 항체 중 하나를 포함하는 조성물, 또는 각 항체에 대한 분리된 조성물의 투여를 포함할 수 있다. 하나 초과의 조성물이 존재하는 경우, 조성물은 동시에, 순차적으로, 별도로, 또는 이들의 임의의 조합으로 투여될 수 있다.

본 발명의 조합 요법 및 조성물은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 약물 또는 항체(또는 이의 임의의 조합으로서)와 함께 투여될 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 약학적 조성물, 방법 및 용도는 또한, 하기에 상세히 기술되는 바와 같이, 다른 활성제와의 조합(공동-투여)의 구체예를 포함한다.

하나 이상의 다른 치료제와 함께 본 발명의 조합 요법 또는 조성물을 지칭하는 본원에서 사용되는 용어 "공동-투여", "공동-투여된" 및 "~와 조합하여"는 하기 기술된 것을 의미하는 것으로 의도되고, 이를 지칭하며 이를 포함한다:

- 성분들이 환자에게 실질적으로 동시에 상기 성분들을 방출시키는 단일 투여 형태로 함께 제형화될 때, 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 조합 요법(또는 이의 성분) 또는 조성물 및 치료제(들)의 동시 투여,

- 성분들이 환자에 의해 실질적으로 동시에 취해지는 별도의 투여 형태로 서로 분리하여 제형화될 때, 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 조합 요법(또는 이의 성분) 또는 조성물 및 치료제(들)의 실질적인 동시 투여, 여기서 상기 성분들은 상기 환자에게 실질적으로 동시에 방출됨,

- 성분들이 환자에 의해 각 투여 간에 상당한 시간 간격을 갖는 연속적 시간에 취해지는 별도의 투여 형태로 서로 분리하여 제형화될 때, 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 조합 요법(또는 이의 성분) 또는 조성물 및 치료제(들)의 순차적인 투여, 여기서 상기 성분들은 상기 환자에게 실질적으로 상이한 시간에 방출됨; 및

- 성분들이 조절된 방식으로 상기 성분들을 방출하는 단일 투여 형태로 함께 제형화될 때, 치료를 필요로 하는 환자에게 상기 조합 요법(또는 이의 성분) 또는 조성물 및 치료제(들)의 순차적인 투여, 이 때 이들은 상기 환자에게 동일한 시간 및/또는 상이한 시간에 동시에, 연속하여, 및/또는 중첩하여 방출되며, 여기서 각 부분은 동일한 경로 또는 상이한 경로에 의해 투여될 수 있음.

본 발명의 조합 요법 및 조성물은 추가의 치료적 처치 없이, 즉, 단독 요법(단일요법)으로서 투여될 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 조합 요법 또는 조성물로의 치료는 적어도 하나의 추가적인 치료적 처치, 예를 들어, 다른 면역자극제, 항암제, 항바이러스제, 또는 백신(예를 들어, 종양 백신)을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 암의 치료를 위한 다른 약제/약물과 공동-투여되거나 함께 제형화될 수 있다. 추가적인 치료적 처치는, 예를 들어, 화학치료제, 항신생물제, 또는 항혈관형성제, 상이한 항암 항체, 및/또는 방사선 요법을 포함할 수 있다.

본 발명의 조합 요법 및 조성물을 암 세포의 말기 분화를 유도하는 것으로 알려진 제제와 조합함으로써, 효과가 추가로 개선될 수 있다. 그러한 화합물은, 예를 들어, 레티노산, 트랜스-레티노산, 시스-레티노산, 페닐부티레이트, 신경 성장 인자, 디메틸 설폭사이드, 활성 형태 비타민 D3, 퍼옥시좀 증식체-활성화된 수용체 감마, 12-O-테트라데카노일포르볼 13-아세테이트, 헥사메틸렌-비스-아세트아미드, 형질전환 성장 인자-베타, 부티르산, 환형 AMP 및 베스나리논으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 일부 구체예에서, 화합물은 레티노산, 페닐부티레이트, 모든-트랜스-레티노산, 및 활성 형태 비타민 D로 구성된 군으로부터 선택된다.

본 발명의 조합 요법 또는 조성물 및 적어도 하나의 다른 제제(예를 들어, 화학치료제, 항신생물제, 또는 항혈관형성제)를 포함하는 약학적 물품은 암 요법에서 동시적, 분리된 또는 연속적인 투여를 위한 조합 치료로서 사용될 수 있다. 다른 제제는 고려되는 특정 암의 치료를 위해 적합한 임의의 제제, 예를 들어, 알킬화제, 예를 들어, 백금 유도체, 예를 들어, 시스플라틴, 카르보플라틴 및/또는 옥살리플라틴; 식물 알코이드, 예를 들어, 파클리탁셀, 도세탁셀, 및/또는 이리노테칸; 항종양 항생제, 예를 들어, 독소루비신(아드리아마이신), 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신, 미톡산트론, 닥티노마이신, 블레오마이신, 악티노마이신, 루테오마이신, 및/또는 미토마이신; 토포아이소머라제 억제제, 예를 들어, 토포테칸; 및/또는 항대사산물, 예를 들어, 플루오로우라실 및/또는 다른 플루오로피리미딘으로 구성된 군으로부터 선택된 제제일 수 있다. 일부 구체예에서, 다른 제제는 다카르바진(dacarbazine) 또는 겜시타빈(gemcitabine)이다.

본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 또한 백신, 사이토카인, 효소 억제제, 면역자극 화합물, 및 T 세포 요법과 같은 다른 항암 요법과 함께 사용될 수 있다. 백신의 경우, 이것은, 예를 들어, 치료되는 암과 관련된 하나 이상의 항원을 함유하는 단백질, 펩티드 또는 DNA 백신, 또는 항원과 함께 수지상 세포를 포함하는 백신일 수 있다. 적합한 사이토카인은, 예를 들어, IL-2, IFN-감마 및 GM-CSF를 포함한다. 항암 활성을 갖는 효소 억제제 유형의 예는 인돌아민-2,3-디옥시게나제(IDO) 억제제, 예를 들어, 1-메틸-D-트립토판(1-D-MT)이다. 입양 T 세포 요법은 종양을 인지하고 공격하기 위해 환자 자신의 T 세포를 확장하거나 공학처리하는 것을 포함하는 다양한 면역요법 기술을 지칭한다.

본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 티로신 키나제 억제제와 관련하여 보조 요법에 사용될 수 있는 것으로 또한 고려된다. 이들은 수용체의 세포내 티로신 키나제 도메인과 상호작용하고 세포내 Mg-ATP 결합 부위에 대해 경쟁함으로써 리간드-유도 수용체 인산화를 억제하는 주로 퀴나졸린-유래된 합성 저분자량 분자이다.

일부 구체예에서, 조합 요법 또는 조성물은 A2AR, BTLA, B7-H3, B7-H4, CTLA-4, CD27, CD28, CD39, CD40, CD47, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160, CGEN-15049, LY108, CHK1, CHK2, CTLA-3, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1 및/또는 CEACAM-5), GAL9, GITR, HVEM, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, NKG2A, OX40, PD-L1/PD-L2, LILRB2, CMTM6, TIGIT, TGFR-베타, TNFR2, VISTA 및/또는 2B4의 발현 또는 활성을 조절하는 제제를 비제한적으로 포함하여, 면역 시스템 활성화를 매개하는 또 다른 약제/약물과 함께 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 제제는 상기 분자 중 하나에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 조성물, 또는 이특이적 결합 분자는 CTLA-4 억제제(예를 들어, 항-CTLA-4 항체, 이를 테면, 트레멜리무맙(tremelimumab) 또는 이필리무맙(ipilimumab))와 함께 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 조성물, 또는 이특이적 결합 분자는 이필리무맙과 함께 투여될 수 있다. 본 발명의 조합 요법 또는 조성물은 사이토카인(예를 들어, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 또는 IL-21), EGFR 억제제, VEGF 억제제 등과 함께 사용될 수 있는 것으로 또한 고려된다.

특정 양태에서, 본 발명의 조합 요법 및 조성물은 PD-1, TIM-3, LAG-3, 또는 이들 임의의 표적의 리간드들 중 하나 이상을 표적화할 수 있는 PD-1, TIM-3, 또는 LAG-3 경로의 또 다른 억제제와 함께 투여될 수 있다. 그러한 억제제의 예는 다음을 포함한다:

- 다른 항-PD-1 항체 및 PD-1 리간드 및/또는 공-수용체, 예를 들어, PD-L1 또는 PD-L2를 표적화하는 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙 및/또는 니볼루맙);

- 다른 항-TIM-3 항체 및 TIM-3 리간드 및/또는 공-수용체, 예를 들어, 갈랙틴-9, HMGB-1, 포스파티딜세린 지질, CEACAM1, LILRA1-6, 또는 LILRB1-5를 표적화하는 항체(예를 들어, MGB453, TSR-022, 및/또는 LY3321367); 및

- 다른 항-LAG-3 항체 및 LAG-3 리간드 및/또는 공-수용체, 예를 들어, MHCII, 갈랙틴-3, 및 LSECtin을 표적화하는 항체(예를 들어, BMS-986016, GSK2831781, REGN3767, BAP050 또는 BAP050-chi, 또는 LAG525).

본 발명의 조합 요법 및 조성물은 본원에 설명된 바와 같은 치료 방법에서 사용될 수 있고/거나, 본원에 설명된 바와 같은 치료에 사용하기 위한 것일 수 있고/거나, 본원에 설명된 바와 같은 치료를 위한 약제의 제조에서 사용될 수 있는 것으로 이해된다. 본 발명은 또한 본원에 기재된 본 발명의 조합 요법 또는 조성물을 포함하는 키트 및 제조 물품을 제공한다.

투여 용량 및 경로

본 발명의 조합 요법 및 조성물은 고려되는 질환의 치료를 위한 유효량으로 투여될 것이고, 즉, 요망되는 결과를 달성하는데 필요한 투여량 및 시간의 기간 동안 투여될 것이다. 치료적 유효량은 치료되는 특정 질환, 환자의 연령, 성별 및 체중, 및 항체가 단독 치료로서 또는 하나 이상의 추가적인 항암 치료제와 함께 투여되는 지의 여부와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다.

투여 요법은 최적의 요망되는 반응을 제공하기 위해 조정될 수 있다. 예를 들어, 단일 볼루스가 투여될 수 있거나, 여러 분할된 용량이 시간에 걸쳐 투여될 수 있거나, 용량은 치료 상황의 긴급성에 의해 지시된 바와 같이 비례적으로 감소되거나 증가될 수 있다. 투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 비경구 조성물을 투여 단위 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료되는 환자/대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하는데, 각 단위는 요구되는 약학적 담체와 함께 요망되는 치료 효과를 생성하기 위해 계산된 소정량의 활성 화합물을 함유한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 사양은 일반적으로 (a) 화학치료제의 독특한 특징 및 달성될 특정 치료 또는 예방 효과, 및 (b) 개체에서 민감성의 치료를 위해 그러한 활성 화합물을 배합하는 당 분야에서의 고유의 한계에 의해 지시되고 이에 직접적으로 따른다.

이에 따라, 당업자는 본원에 제공된 설명을 기초로 하여, 용량 및 투여 요법이 치료 분야에서 널리 공지된 방법에 따라 조정된다는 것을 인식할 것이다. 즉, 최대 내약 용량이 용이하게 규명될 수 있으며, 환자에게 검출 가능한 치료 이익을 제공하는 유효량이 또한 결정될 수 있는데, 이는 환자에게 검출 가능한 치료 이익을 제공하기 위해 각 제제를 투여하기 위한 일시적 요건일 수 있기 때문이다. 이에 따라, 특정 용량 및 투여 요법이 본원에 예시되어 있지만, 이러한 예는 본 발명을 실행함에 있어서 환자에게 제공될 수 있는 용량 및 투여 요법을 어떠한 방식으로도 한정하지 않는다.

투여량 값이 개선될 질환의 유형 및 중증도에 따라 달라질 수 있고, 단일 용량 또는 다중 용량을 포함할 수 있다는 것이 주목되어야 한다. 임의의 특정 대상체에 대하여, 특정 투여 요법이 조성물을 투여하거나 조성물의 투여를 감독하는 사람의 전문적인 판단 및 개개 필요에 따라 시간에 따라 조정되어야 하며, 본원에 기술된 투여량 범위는 단지 예시적인 것이고 구현된 조합 요법의 범위 또는 실시를 제한하지 않도록 의도된다는 것이 추가로 이해된다. 또한, 본 발명의 조합 요법 및 조성물에 의한 투여 요법은 질병의 유형, 연령, 체중, 성별, 환자의 의학적 상태, 질환의 중중도, 투여 경로, 및 사용되는 특정 항체를 포함하는 다양한 인자를 기초로 할 수 있다. 이에 따라, 투여 요법은 광범위하게 달라질 수 있지만, 관례대로 표준 방법을 이용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 용량은 약동력학 또는 약물역학적 파라미터를 기초로 하여 조정될 수 있으며, 이는 임상 효과, 예를 들어, 독성 효과 및/또는 실험실 값을 포함할 수 있다. 이에 따라, 본 발명은 당업자에 의해 결정되는 바와 같은 환자내 용량-상승을 포함한다. 적절한 투여량 및 요법을 결정하는 것은 관련 분야에서 널리 공지되어 있고, 본원에 기술된 교시를 제공한 후에 당업자에 의해 포함되는 것으로 이해될 것이다.

본 발명의 조합 요법 또는 조성물 내의 항체의 적합한 용량은 0.1-100 mg/kg, 예를 들어, 약 0.5-50 mg/kg, 예를 들어, 약 1-20 mg/kg의 범위일 것으로 고려된다. 항체는, 예를 들어, 적어도 0.25 mg/kg, 예를 들어, 적어도 0.5 mg/kg, 예를 들어, 적어도 1 mg/kg, 예를 들어, 적어도 1.5 mg/kg, 예를 들어, 적어도 2 mg/kg, 예를 들어, 적어도 3 mg/kg, 예를 들어, 적어도 4 mg/kg, 예를 들어, 적어도 5 mg/kg; 및 예를 들어, 최대 50 mg/kg, 예를 들어, 최대 30 mg/kg, 예를 들어, 최대 20 mg/kg, 예를 들어, 최대 15 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다. 투여는 대개 적합한 간격으로, 예를 들어, 주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 또는 4주마다 1회, 그리고 필요한 경우에 투여량을 임의적으로 증가시키거나 감소시킬 수 있는 주치의에 의해 적절한 것으로 여겨지는 동안 반복될 것이다.

종양 요법을 위한 유효량은 환자에서 질병 진행을 안정화시키고/거나 증상을 개선시키는 이의 능력, 및 바람직하게는 질병 진행을 역전시키는 능력에 의해, 예를 들어, 종양 크기가 감소하는 것에 의해 측정될 수 있다. 암을 억제하기 위한 본 발명의 조합 요법의 능력은, 예를 들어, 실시예에 기술된 바와 같은 시험관내 검정 뿐만 아니라, 인간 종양에서의 효능을 예측하는 적합한 동물 모델에서 평가될 수 있다(예를 들어, 실시예 참조). 적합한 투여 요법은 각 특정 상황, 예를 들어, 단일 볼루스로서 또는 연속 주입으로서, 및 각 경우의 경험에 의해 지시되는 바와 같은 투여량의 가능한 조절로 투여되는 상황에서 최적의 치료 반응을 제공하도록 선택될 것이다.

제조 물품 및 키트

본 발명은 또한 인간 PD-1과의 결합에 대해 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 및 13112.15380으로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체; 및 항-TIM-3 항체 또는 항-LAG-3 항체를 포함하는 제조 물품을 제공한다.

일부 구체예에서, 제조 물품 뿐만 아니라 상기 물품을 제조하는 방법은 다음을 포함한다:

본 발명은 또한 인간 PD-1과의 결합에 대해 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 및 13112.15380으로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체; 및 항-TIM-3 항체 또는 항-LAG-3 항체를 포함하는 키트를 제공한다.

일부 구체예에서, 키트는 다음을 포함한다:

본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학용어 및 기술용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 예시적인 방법 및 물질이 하기에 기술되어 있으나, 본 발명의 실시 또는 시험에서 본원에 기술된 것과 유사하거나 균등한 방법 및 물질들이 또한 사용될 수 있다. 상충의 경우, 정의를 포함하는 본 발명의 명세서가 우선할 것이다.

일반적으로, 본원에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학, 분석 화학, 합성 유기 화학, 의약 및 약학 화학, 및 단백질 및 핵산 화학 및 하이브리드화의 기술 및 이와 관련하여 사용된 명명법은 당 분야에 널리 공지되어 있고 통상적으로 사용된다. 효소적 반응 및 정제 기술은 당 분야에서 통상적으로 달성되거나 본원에 기술된 바와 같이, 제조업체의 사양에 따라 수행된다.

또한, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하고 복수 용어는 단수를 포함할 것이다. 본 명세서 및 구체예 전반에 걸쳐, 단어 "가지다" 및 "포함하다", 또는 변형예, 예를 들어, "갖다", "갖는", "포함" 또는 "포함하는"은 언급된 정수 또는 정수들의 그룹을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 정수들의 그룹을 배제하지 않는 것을 내포하는 것으로 이해될 것이다.

본원에 언급된 모든 간행물 및 다른 참고문헌은 전문이 참조로서 포함된다. 다수의 문헌들이 본원에 인용되어 있지만, 이러한 인용은 임의의 이러한 문서들이 당 분야의 공통의 일반적인 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것은 아니다.

본 발명이 보다 잘 이해될 수 있도록, 하기 실시예가 기술된다. 이러한 실시예는 단지 예시를 목적으로 하는 것이며, 어떠한 방식으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 해석되어선 안된다.

실시예

실시예 1: 일원 MLR 검정에서 조합된 PD-1/TIM-3 표적화의 향상된 시험관내 활성

이 실시예는 항-PD-1 항체 12819 및 항-TIM-3 항체 15086.17145를 사용한 PD-1 및 TIM-3의 조합된 표적화가 일원 혼합 림프구 반응(MLR) 검정에서 IFN-γ 분비를 향상시킨다는 것을 입증한다.

일원 MLR 검정에서, 2명의 상이한 건강한 인간 도너로부터 분리된 수지상 세포(DC) 및 CD4⁺ T-세포를 공동-배양하여 동종항원 특이적 반응을 유도함으로써, 사이토카인 생산 및 T-세포 활성화/증식을 일으켰다. 수지상 세포(DC)를 20 ng/ml 과립구-대식세포 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 및 20 ng/ml 인터루킨-4(IL-4)와 함께 6일 동안 배양하여 CD14⁺ 단핵구로부터 분화시키고 건강한 인간 도너 물질로부터의 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 분리된 CD4⁺ T-세포와 1:10 비로 혼합하였다. 표시된 항체 또는 항체 혼합물을 10 μg/mL의 최종 총 농도로 첨가하였다. 항체 혼합물은 1:1 비의 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 함유하였다. 5일의 배양 후, 상청액을 수확하고, IFN-γ 수준을 중규모 전기화학발광 사이토카인 검정을 사용하여 결정하였다. 스튜던트 언페어드 t-테스트를 통계 분석에 사용하고 Bonferroni 보정을 다중 비교를 조정하기 위해 사용하였다. 보정된 p-값 < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 고려된다.

도 1은 3개의 독립적인 도너-쌍에서 일원 MLR 검정에서 IFN-γ 분비에 대한 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 효과를 보여준다. 항-PD-1(12819) 및 항-TIM-3(15086) 항체 둘 모두는 일원 MLR 검정에서 기능적이었고, 3개의 도너 쌍 모두에서 IFN-γ 분비를 증가시킨다. 또한, 항 -PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합은 개별 항체와 비교하여 IFN-γ의 통계적으로 유의한 증가를 유도함으로써 향상된 활성을 보여준다.

실시예 2: 이원 MLR 검정에서 조합된 PD-1/TIM-3 표적화의 향상된 시험관내 활성

이 실시예는 항-PD-1 항체 12819 및 항-TIM-3 항체 15086.17145를 사용한 PD-1 및 TIM-3의 조합된 표적화가 이원 MLR 검정에서 IFN-γ 분비를 향상시킨다는 것을 입증한다.

이원 MLR 검정에서, 두 상이한 건강한 인간 도너로부터의 PBMC를 공동-배양하여 동종항원 특이적 반응을 유도함으로써, 사이토카인 생산 및 T-세포 활성화/증식을 발생시켰다. 두 상이한 도너로부터의 PBMC를 1:1 비로 혼합하였다. 항체를 10 μg/mL의 최종 총 항체 농도로 시험하였다. 5일의 배양 후, 상청액을 수확하고, IFN-γ 수준을 중규모 전기화학발광 사이토카인 검정을 사용하여 결정하였다. 스튜던트 언페어드 t-테스트를 통계 분석에 사용하고 Bonferroni 보정을 다중 비교를 조정하기 위해 사용하였다. 보정된 p-값 < 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 고려된다.

도 2는 3개의 독립적인 인간 도너-쌍에서 이원 MLR 검정에서 IFN-γ 분비에 대한 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 효과를 보여준다. 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체 둘 모두는 이원 MLR 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시켰다. 또한, 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합은 개별 항체와 비교하여 증가된 IFN-γ 분비를 유도함으로써 향상된 활성을 나타내었다.

실시예 3: 항-TIM-3 항체는 일원 MLR 검정에서 시험관내 T-세포 증식을 유도한다

T-세포 증식을 유도하는 항-TIM-3 항체 15086.17145의 능력을 일원 MLR 검정에서 조사하였다. 항-TIM-3 항체, PD-1에 대한 양성 대조군 항체(12819), 또는 음성 대조군 IgG2 항체를 25 μg/mL의 최종 농도로 첨가하고, 5일 동안 인큐베이션한 후 1 μCi/웰 3H-티미딘을 추가 18시간 동안 첨가하였다. 세포를 수확하고, 액체 섬광 계수(MicroBeta2)에 의해 3H-티미딘 혼입을 측정하였다.

도 3에 도시된 바와 같이, 항-TIM-3 항체 15086.17145는 PD-1에 대한 양성 대조군 항체와 유사한 정도로 CD4+ 및 CD8+ T-세포 둘 모두의 증식을 유도하였다(패널 A). 가용성 항-CD3의 첨가는 항-TIM-3 항체에 의해 유도되는 증식을 향상시켰다(패널 B).

실시예 4: 항-TIM-3 항체는 수지상 세포로부터 IL-12p40 분비를 유도한다

단핵구 유래 수지상 세포는 실시예 1에서 전술한 바와 같이 건강한 도너 물질로부터 생성되었다. 수지상 세포를 10 μg/mL의 항-TIM-3 항체 15086.17145 또는 음성 대조군 IgG2 항체와 함께, 또는 처리 없이 5일 동안 인큐베이션하고, 상청액 내의 IL-12p40 수준을 표준 ELISA 사이토카인 검정을 사용하여 측정하였다.

도 4에 도시된 바와 같이, 항-TIM-3 항체 15086.17145에 의한 TIM-3의 라이게이션은 수지상 세포로부터 IL-12p40 분비를 증가시켰다.

실시예 5: 항-TIM-3 항체는 수지상 세포에서 활성화 마커의 발현을 유도한다

TIM-3을 표적화하는 기능적 역할을 추가로 조사하기 위해, 단핵구 유래 수지상 세포 상에서 선택된 활성화 마커의 발현 수준을 항-TIM-3 항체 15086.17145로 처리한 후에 측정하였다.

수지상 세포를 24시간 동안 25 μg/mL 항-TIM-3 항체로 처리하고, 공-자극 분자의 유전자 발현을 NanoString Technologies를 사용하여 측정하였다. 유전자 발현 수준은 균일한 발현으로 30개 살림 유전자로 표준화되었다. 선택된 관련 유전자에 대한 데이터는 처리되지 않은 대조군 세포에 대한 배수 변화로 제시된다.

유전자 발현 분석은 MHC-II(HLA-DQB1 및 HLA DQA1), CD80 및 CD86을 포함하는 여러 활성화 마커 및 공-자극 분자의 상향조절을 나타내었다(도 5, 패널 A). 항-TIM-3 항체 15086.17145로 처리시 CD80 및 CD86의 증가된 세포 표면 발현은 FACS 분석을 사용하여 검증되었다(도 5, 패널 B). 도시된 히스토그램 오버레이는 CD11c+ 수지상 세포를 나타내고, 히스토그램에 인접한 숫자는 MFI 값을 나타낸다.

실시예 6: 인간 폐 PDX 종양 성장에 대한 항-TIM-3 항체 15086의 생체내 효능

이 실시예는 CD34⁺ 인간화된 NSG-SGM3 마우스에서 인간 폐 환자-유래 이종이식(PDX) 종양 모델에 대한 항-TIM-3 항체 15086.17145의 생체내 효능을 보여준다.

NSG-SGM3 마우스를 제대혈 유래 CD34⁺ 세포를 사용하여 인간화하고, 환자-유래 폐 종양 단편(LG1306)으로 우측 옆구리에 생착하였다. 50-150 mm³ 사이의 종양 크기에서, 마우스를 무작위화하고 치료를 개시하였다. 마우스는 10 mg/kg의 초기 용량의 비히클 또는 항-TIM-3 항체 15086에 이어 5 mg/kg 5x Q5D의 복강내 주사를 수용하였다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5. 회색 영역은 치료 기간을 나타낸다. Bonferroni의 다중 비교 테스트와 함께 이원 ANOVA를 적용하여 치료 그룹 간에 각 시점의 종양 부피를 비교하였다. 데이터는 평균 ± SEM, **p<0.01로 나타낸다.

항-TIM-3 항체 15086으로의 처리는 CD34⁺ 인간화된 NSG-SGM3 마우스 인간 폐 PDX 모델에서 유의한 종양 성장 억제를 발생시켰다(도 6).

실시예 7: PBMC+SEB 검정에서 조합된 PD-1/LAG-3, PD-1/TIM-3, 또는 PD-1/TIM-3/LAG-3 표적화의 향상된 효과

이 실시예는 PBMC+SEB(스태필로코쿠스 엔테로톡신 B) 검정에서 항-PD-1 항체 12819와 항-LAG-3 항체 15532 또는 항-TIM-3 항체 15086.17145를 조합시킨 것의 향상된 효과를 기술한다.

SEB는 T 세포 수용체(TCR)의 MHC 클래스 II 분자 및 특정 Vβ 영역에 결합하여 T-세포의 비-특이적 자극을 유도하는 슈퍼-항원이다. 이것은 폴리클로날 T 세포 활성화/증식 및 IL-2를 포함하는 사이토카인의 방출을 초래한다. 건강한 도너로부터의 백혈구 연층으로부터 분리된 인간 PBMC를 384-웰 플레이트에 시딩하고, 처리하지 않은 채로 두거나 10 ng/mL의 SEB 및 10 μg/mL의 표시된 단일 항체 또는 항체 혼합물로 처리하였다. 항체의 조합물은 표시된 항체의 1:1 또는 1:1:1 혼합물이었다. 37℃의 가습된 인큐베이터에서 48시간 후, 상청액을 제거하고 IL-2 ELISA 키트(Life Technologies)를 사용하여 IL-2 수준을 분석하였다. 데이터는 평균 ± SEM으로 나타낸다. Bonferroni 보정과 함께 스튜던트 t-테스트를 사용하여 유의한 차이를 시험하였다.

도 7은 단일 항-PD-1, 항-LAG-3 또는 항-TIM-3 항체, 항체 중 2개의 혼합물, 또는 3개 모두의 항체의 혼합물로 처리한 후 IL-2 분비의 증가를 보여준다. 데이터는 IL-2 수준이 항-PD-1, 항-LAG-3 또는 항-TIM-3 항체로의 단일 처리에 의해 증가한 반면, IL-2 분비는 항-PD-1 및 항-LAG-3 항체, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물로의 처리에 의해 추가로 증가되었음을 입증하였다. 항-PD-1, 항-LAG-3, 및 항-TIM-3 항체의 삼중 조합물은 임의의 2개-항체 조합물보다 IL-2 분비를 증가시켰다.

실시예 8: 2개의 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1 및 항-LAG-3 항체를 조합시킨 것의 향상된 생체내 효능

이 실시예는 2개의 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1 항체 12819와 항-LAG-3 항체 C9B7W(마우스 LAG-3과 반응성임; BioXcell) 또는 항-LAG-3 항체 15011을 조합시킨 것의 생체내 효능을 입증한다.

0.5 x10⁶개 MC38(결장 암종) 또는 5x10⁶개 ASB-XIV(폐 암종) 세포를 6-8주령 암컷 BALB/cAnNRj(ASB-XIV) 또는 C57BL/6(MC38) 마우스의 옆구리에 각각 피하 접종하였다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5. 접종 후 5일(ASB-XIV) 또는 13일(MC38)에 30-50 mm³의 평균 종양 크기에서, 마우스를 10마리 동물의 네 그룹으로 무작위화하고 치료를 개시하였다. 마우스를 비히클 완충제, 항-PD-1 항체 12819, 항-LAG-3 항체 C9B7W, 항-LAG-3 항체 15011, 또는 항-PD-1 및 항-LAG-3 항체의 조합물의 복강내 주사에 의해 매주 3회씩 총 6회 처리로 치료하였다. 항체 처리는 10 mg/kg/표적의 용량으로 투여되었다. Bonferroni의 다중 비교 테스트와 함께 이원 ANOVA를 적용하여 치료 그룹 간에 각 시점의 종양 부피를 비교하였다. GraphPad Prism 버전 5.0(GraphPad Software, Inc.)을 사용하여 통계 분석을 수행하였다.

모노클로날 항-PD-1 항체 12819로 처리된 MC38 동계 종양은 비히클 처리된 종양보다 비록 성장 속도는 느리지만 계속적인 종양 성장을 나타내었다(도 8). 항-LAG-3 항체 C9B7W 단독으로의 처리는 효과가 관찰되지 않았다. 항-PD-1 항체 및 항-LAG-3 항체의 조합은 항-PD-1 처리와 비교하여 향상된 종양 성장 억제 및 비히클 처리된 종양과 비교하여 유의한 종양 성장 억제를 나타내었다(p<0.001)(도 8).

항-PD-1 항체 12819로 처리된 ASB-XIV 동계 종양은 비히클 처리된 종양과 비교하여 지연된 종양 성장을 보여주었다(도 8 및 9). 항-LAG-3 항체 C9B7W 단독으로의 치료는 효과가 관찰되지 않은 반면(도 8), 항-LAG-3 항체 15011은 비히클 처리와 비교하여 종양 성장을 유의하게 억제하였다(p<0.05)(도 9). 항-PD-1 항체와 항-LAG-3 항체 C9B7W의 조합은 비히클 처리와 비교하여 항-종양 효능을 유의하게 향상시켰다(도 8). 항-PD-1 항체(p<0.0001) 또는 항-LAG-3 항체(p<0.05)로의 단일 치료와 비교하여 항-PD-1 항체 및 항-LAG-3 항체 15011의 조합에 의해 현저하게 향상된 종양 억제 효과가 또한 관찰되었다(도 9).

실시예 9: 2개의 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 조합시킨 것의 향상된 생체내 효능

이 실시예는 2개의 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1 항체 12819 및 항-TIM-3 항체 5D12(마우스 TIM-3과 반응성임; Anderson et al., Science 318:1141-43 (2007))를 조합시킨 것의 생체내 효능을 입증한다.

6-8주령 암컷 A/J(Sa1N) 또는 BALB/cAnNRj(ASB-XIV) 마우스의 옆구리에 0.2x10⁶개 Sa1N(섬유육종) 및 5x10⁶개 ASB-XIV(폐 암종) 세포를 각각 피하 접종하였다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5. 60-110 mm³의 평균 종양 크기에서, 마우스를 무작위화하고 치료를 개시하였다. 마우스를 단일 용량(Sa1N)으로 처리하거나, 비히클 완충제, 항-PD-1 항체 12819, 및/또는 항-TIM-3 항체 5D12의 복강내 주사에 의해, 매주 3회씩 총 6회 처리(ASB-XIV)에 의해 치료하였다. 항체 처리는 ASB-XIV 종양을 갖는 마우스에서 10 mg/kg/표적의 용량으로 투여되었다. Sa1N 종양을 지닌 마우스에 각각 1 mg/kg 및 10 mg/kg의 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 투여하였다. Bonferroni의 다중 비교 테스트와 함께 이원 ANOVA를 적용하여 치료 그룹 간에 각 시점의 종양 부피를 비교하였다. GraphPad Prism 버전 5.0(GraphPad Software, Inc.)을 사용하여 통계 분석을 수행하였다.

ASB-XIV 종양 세포의 접종 6일 후에, 56 mm³의 평균 종양 크기에서, 마우스를 10마리 동물의 네 그룹으로 무작위화하고 치료를 개시하였다. 항-PD-1 항체 12819로의 처리는 종양 성장을 지연시킨 반면, 항-TIM-3 항체 5D12로의 처리는 비히클 처리와 비교하여 종양 성장에 영향을 미치지 않았다. 항-PD-1 항체와 항-TIM-3 항체를 조합함으로써, 어느 한 항체로의 단일 처리와 비교하여 현저한 종양 억제 효과가 관찰되었다(p<0.001)(도 10).

Sa1N 종양 세포의 접종 13일 후에, 110 mm³의 평균 종양 크기에서, 마우스를 10마리 동물의 네 그룹으로 무작위화하고 단일 항체 처리제를 투여하였다. 결과는 항-PD-1 항체 12819 또는 항-TIM-3 항체 5D12로의 단일 항체 처리로부터 초기 종양 성장 지연을 보여주었다. 향상된 항-종양 효과는 단일 항체 처리와 비교하여, 항-PD-1 항체와 항-TIM-3 항체를 조합시킴으로써 관찰되었다. 조합 치료는 또한 비히클 처리와 비교하여 종양 성장을 유의하게 억제하였다(p<0.0001)(도 10).

실시예 10: 인간 이종이식 종양 모델에서 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 조합시킨 것의 생체내 효능

이 실시예는 인간 이종이식 종양 모델에서 항-PD-1 항체 12819와 항-TIM-3 항체 15086.17145를 조합시킨 것의 향상된 생체내 효능을 입증하며, 여기서 A375 세포(인간 흑색종)는 인간 PBMC로 재구성되어 마우스에 생착되었다.

인간 PBMC를 인간 A375 흑색종 세포의 피하 생착 하루 전에 NOG(도너 1 및 도너 2) 또는 NOG-EXL(hGM-CSF/hIL-3-NOG)(도너 3) 마우스에 복막간 주사하였다. PBMC 주사 당일에 치료를 개시하였고, 마우스를 비히클 완충제, 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물의 복강내 주사에 의해 매주 3회씩 총 6회 처리로 치료하였다. 항체 처리는 10 mg/kg/표적의 용량으로 투여되었다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5. Bonferroni의 다중 비교 테스트와 함께 이원 ANOVA를 적용하여 치료 그룹 간에 각 시점의 종양 부피를 비교하였다. GraphPad Prism 버전 5.0(GraphPad Software, Inc.)을 사용하여 통계 분석을 수행하였다.

도 11에 도시된 바와 같이, 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물로의 처리는 유의한(및 적어도 도너 3에서 상승적인) 종양 성장 지연을 발생시킨 반면(p<0.05 및 p<0.01), 단일 항체 처리(항-PD-1 또는 항-TIM-3)는 비히클 처리된 그룹과 비교하여 종양 성장에 제한적인 효과를 나타내었다.

실시예 11: 조합된 PD-1 및 TIM-3 표적화는 인간 면역 및 종양 세포로 공동-생착된 마우스에서 증가된 생존율을 발생시킨다

이 실시예는 인간 종양의 마우스 모델에서 항-PD-1 항체 12819와 항-TIM-3 항체 15086.17145를 조합시킨 것의 생체내 효능을 입증한다.

2x10⁶개 A375(흑색종) 세포를 2x10⁶개 인간 PBMC와 혼합하고, 6-8주령 암컷 NOD-scid 마우스의 옆구리에 피하 접종하였다. 세포 접종 시점에, 치료가 시작되었다. 마우스를 비히클 완충제, 항-PD-1 항체 12819, 항-TIM-3 항체 15086.17145, 또는 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 조합물의 복강내 주사에 의해 매주 3회씩 총 6회 처리로 치료하였다. 항체 처리는 각 항체에 대해 10 mg/kg의 용량으로 투여되었다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5.

생존율은 < 400 mm³의 종양 크기를 갖는 것으로서 정의되었다. 결과는 임의의 단일 항체 처리와 비교하여 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체의 이중 조합물로 처리된 마우스의 생존율의 증가를 나타내었다(도 12, 패널 A-E).

실시예 12: 조합된 PD-1, LAG-3, 및 TIM-3 표적화는 동계 마우스 종양 모델에서 생존율을 증가시켰다

이 실시예는 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1 항체 12819와 항-LAG-3 항체 C9B7W 및 항-TIM-3 항체 5D12를 조합시킨 것의 생체내 효능을 입증한다.

5x10⁶개 ASB-XIV(폐 암종) 세포를 6-8주령 암컷 BALB/cAnNRj 마우스의 옆구리에 피하 접종하였다. 종양을 2차원에서 캘리퍼스로 매주 3회 측정하였고 종양 부피를 mm³으로 하기 식에 따라 계산하였다: (폭)² x 길이 x 0.5. 접종 5일 후에, 평균 종양 크기 50 mm³에서, 마우스를 10마리 동물의 7개 그룹으로 무작위화하고 치료를 시작하였다. 마우스를 비히클 완충제, 항-PD-1 항체 12819, 항-LAG-3 항체 C9B7W, 항-TIM-3 항체 5D12, 또는 항-PD-1과 항-LAG-3, 항-PD-1과 항-TIM-3, 또는 항-PD-1, 항-LAG-3, 및 항-TIM-3 항체의 조합물의 복강내 주사에 의해 매주 3회씩 총 6회 처리로 치료하였다. 항체 처리는 각 항체에 대해 10 mg/kg의 용량으로 투여되었다.

생존율은 ≤ 400 mm³의 종양 크기를 갖는 것으로서 정의되었다. 결과는 임의의 단일 또는 이중 항체 처리와 비교하여 항-PD-1, 항-LAG-3 및 항-TIM-3 항체의 삼중 조합물로 처리된 마우스의 증가된 생존율을 보여주었다(도 13, 패널 A-H).

표 1: 항체 서열 식별자

표 4: 항-TIM-3 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 뉴클레오티드 서열

표 5: 항-TIM-3 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열

(CDR은 굵은 이탤릭체로 표시한다)

표 6: 항-PD-1 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 뉴클레오티드 서열

표 7: 항-PD-1 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열

(CDR은 굵은 이탤릭체로 표시한다)

표 8: 항-LAG-3 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 뉴클레오티드 서열

표 9: 항-LAG-3 항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 아미노산 서열

(CDR은 굵은 이탤릭체로 표시한다)

SEQUENCE LISTING <110> SYMPHOGEN A/S <120> COMBINATION THERAPIES TARGETING PD-1, TIM-3, AND LAG-3 <130> 022675.WO058 <140> <141> <150> 62/481,973 <151> 2017-04-05 <160> 397 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1 caggtgcagc tacagcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcacagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtggtggtt actactggag ttggacccgt 120 cagcacccag ggatgggcct ggagtggatt ggatacatct cttacagtgg gagtatctat 180 tacactccgt ccctcaagag tcgacttacc atatcagtgg acacgtctaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gactgccgcg gacacggccg tatattactg tgcgagtttg 300 gattcctggg gatctaaccg tgactactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcgagt 360 <210> 2 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 2 gaaattgtgt tgacgcagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 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of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 54 caggtccagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg ctgctggata caccttaacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag gccttgagtg gatgggacgg atcaacccta acagtggtgg ctcaaacaat 180 gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240 atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagagggt 300 cccctgtata gcagtggctg gtacgagggt gcttttgata tctggggcca agggacaatg 360 gtcaccgtct cgagt 375 <210> 55 <211> 327 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 55 gaaattgtga tgacgcagtc tccttccacc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggccagtca gagtattagt agttggttgg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctataag gcgtctagtt tagaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gatgattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt attctccggg 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of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 128 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 129 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 129 Ile Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ala 1 5 <210> 130 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 130 Cys Val Lys Asp Gly Ala Gly Gly Phe Asp Tyr Trp 1 5 10 <210> 131 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 131 Gln Gly Ile Arg Asn His 1 5 <210> 132 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 132 Ala Ala Ser 1 <210> 133 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 133 Cys Leu Gln His Asn 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gacaaagcca 1020 cgggaggagc agttcaacag cacgttccgt gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag 1080 gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc 1140 atcgagaaaa ccatctccaa aaccaaaggt gggacccgcg gggtatgagg gccacatgga 1200 cagaggccgg ctcggcccac cctctgccct gggagtgacc gctgtgccaa cctctgtccc 1260 tacagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac 1320 caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt 1380 ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga 1440 ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca 1500 ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa 1560 gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa 1585 <210> 386 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 386 cgtacggtgg ctgcaccatc tgtcttcatc ttcccgccat ctgatgagca gttgaaatct 60 ggaactgcct ctgttgtgtg cctgctgaat aacttctatc ccagagaggc caaagtacag 120 tggaaggtgg ataacgccct ccaatcgggt aactcccagg agagtgtcac agagcaggac 180 agcaaggaca gcacctacag cctcagcagc accctgacgc tgagcaaagc agactacgag 240 aaacacaaag tctacgcctg cgaagtcacc catcagggcc tgagctcgcc cgtcacaaag 300 agcttcaaca ggggagagtg t 321 <210> 387 <211> 325 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 387 cctaggtcag cccaaggcca accccactgt cactctgttc ccgccctcct ctgaggagct 60 ccaagccaac aaggccacac tagtgtgtct gatcagtgac ttctacccgg gagctgtgac 120 agtggcctgg aaggcagatg gcagccccgt caaggcggga gtggagacca ccaaaccctc 180 caaacagagc aacaacaagt acgcggccag cagctacctg agcctgacgc ccgagcagtg 240 gaagtcccac agaagctaca gctgccaggt cacgcatgaa gggagcaccg tggagaagac 300 agtggcccct acagaatgtt cataa 325 <210> 388 <211> 288 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 388 Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln 1 5 10 15 Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp 20 25 30 Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp 35 40 45 Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val 50 55 60 Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala 65 70 75 80 Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg 85 90 95 Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg 100 105 110 Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu 115 120 125 Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val 130 135 140 Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro 145 150 155 160 Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly 165 170 175 Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys 180 185 190 Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro 195 200 205 Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly 210 215 220 Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro 225 230 235 240 Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly 245 250 255 Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg 260 265 270 Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu 275 280 285 <210> 389 <211> 301 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 389 Met Phe Ser His Leu Pro Phe Asp Cys Val Leu Leu Leu Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Leu Thr Arg Ser Ser Glu Val Glu Tyr Arg Ala Glu Val Gly Gln 20 25 30 Asn Ala Tyr Leu Pro Cys Phe Tyr Thr Pro Ala Ala Pro Gly Asn Leu 35 40 45 Val Pro Val Cys Trp Gly Lys Gly Ala Cys Pro Val Phe Glu Cys Gly 50 55 60 Asn Val Val Leu Arg Thr Asp Glu Arg Asp Val Asn Tyr Trp Thr Ser 65 70 75 80 Arg Tyr Trp Leu Asn Gly Asp Phe Arg Lys Gly Asp Val Ser Leu Thr 85 90 95 Ile Glu Asn Val Thr Leu Ala Asp Ser Gly Ile Tyr Cys Cys Arg Ile 100 105 110 Gln Ile Pro Gly Ile Met Asn Asp Glu Lys Phe Asn Leu Lys Leu Val 115 120 125 Ile Lys Pro Ala Lys Val Thr Pro Ala Pro Thr Arg Gln Arg Asp Phe 130 135 140 Thr Ala Ala Phe Pro Arg Met Leu Thr Thr Arg Gly His Gly Pro Ala 145 150 155 160 Glu Thr Gln Thr Leu Gly Ser Leu Pro Asp Ile Asn Leu Thr Gln Ile 165 170 175 Ser Thr Leu Ala Asn Glu Leu Arg Asp Ser Arg Leu Ala Asn Asp Leu 180 185 190 Arg Asp Ser Gly Ala Thr Ile Arg Ile Gly Ile Tyr Ile Gly Ala Gly 195 200 205 Ile Cys Ala Gly Leu Ala Leu Ala Leu Ile Phe Gly Ala Leu Ile Phe 210 215 220 Lys Trp Tyr Ser His Ser Lys Glu Lys Ile Gln Asn Leu Ser Leu Ile 225 230 235 240 Ser Leu Ala Asn Leu Pro Pro Ser Gly Leu Ala Asn Ala Val Ala Glu 245 250 255 Gly Ile Arg Ser Glu Glu Asn Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Asn Val Tyr 260 265 270 Glu Val Glu Glu Pro Asn Glu Tyr Tyr Cys Tyr Val Ser Ser Arg Gln 275 280 285 Gln Pro Ser Gln Pro Leu Gly Cys Arg Phe Ala Met Pro 290 295 300 <210> 390 <211> 525 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 390 Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp 1 5 10 15 Val Ala Pro Val Lys Pro Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val 20 25 30 Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile 35 40 45 Pro Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln 50 55 60 His Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu 65 70 75 80 Ala Pro Gly Pro His Pro Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro 85 90 95 Arg Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly 100 105 110 Arg Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln 115 120 125 Arg Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala 130 135 140 Gly Glu Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys 145 150 155 160 Arg Leu Arg Leu Arg Leu Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro 165 170 175 Gly Ser Leu Arg Ala Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser 180 185 190 Arg Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln 195 200 205 Gly Arg Val Pro Val Arg Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser 210 215 220 Phe Leu Phe Leu Pro Gln Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly 225 230 235 240 Cys Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn 245 250 255 Leu Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala 260 265 270 Gly Ala Gly Ser Arg Val Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val 275 280 285 Gly Thr Arg Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Pro Asp Leu Leu Val Thr Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu 305 310 315 320 Glu Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His 325 330 335 Leu Gln Glu Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr 340 345 350 Val Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu 355 360 365 Cys Glu Val Thr Pro Val Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser 370 375 380 Leu Asp Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala 385 390 395 400 Gln Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln 405 410 415 Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser 420 425 430 Pro Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Pro Ala Gly 435 440 445 His Leu Leu Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Ser Leu Leu Leu Leu 450 455 460 Val Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro 465 470 475 480 Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln 485 490 495 Ser Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro 500 505 510 Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Gln Leu 515 520 525 <210> 391 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 391 gctagcctct tacgagctga ctcagccacc ttccgtgtcc gtgtccccag gacagaccgc 60 aagaatcaca tgcagtggcg gatccagcta ctcatatggg tggttccagc agaagcctgg 120 tcaggccccc gtgacagtca tctatgagag caacaatagg ccttctgaca ttccagaacg 180 gtttagtggc tctagttcag gaaccacagt gactctgacc atcagcgggg tccaggccga 240 ggacgaagct gattactatt gtggcaacgc tgattccagc tctggaattt tcgggtccgg 300 tacaaaagtg actgtcctag g 321 <210> 392 <211> 104 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 392 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp 20 25 30 Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Glu Ser 35 40 45 Asn Asn Arg Pro Ser Asp Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser 50 55 60 Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu 65 70 75 80 Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Asn Ala Asp Ser Ser Ser Gly Ile Phe Gly 85 90 95 Ser Gly Thr Lys Val Thr Val Leu 100 <210> 393 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 393 Ser Ser Tyr Ser 1 <210> 394 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 394 Glu Ser Asn 1 <210> 395 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 395 Cys Gly Asn Ala Asp Ser Ser Ser Gly Ile Phe 1 5 10 <210> 396 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 396 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 397 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 397 Lys Ile Glu Glu Leu Glu 1 5

Claims

면역을 강화시킬 필요가 있는 인간 환자에서 면역을 강화시키는 방법으로서, 상기 환자에게
인간 PD-1과의 결합에 대해 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 및 13112.15380로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분; 및
항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 상기 방법이 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항-PD-1 항체가 하기를 포함하는 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 388의 잔기 V64, L128, P130, K131, 및 A132;
b) SEQ ID NO: 388의 잔기 V44 및 T145;
c) SEQ ID NO: 388의 잔기 K131 및 E136; 또는
d) SEQ ID NO: 388의 잔기 V44 및 T145.
제1항 또는 제2항에 있어서, 항-PD-1 항체가 하기를 포함하는 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 388의 잔기 56-64, 69-90, 및 122-140;
b) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-90 및 122-140;
c) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75;
d) SEQ ID NO: 388의 잔기 136-140; 또는
e) SEQ ID NO: 388의 잔기 69-75 및 136-140.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체가 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는 방법:
a) 750 pM 이하의 K_D로 인간 PD-1에 결합하고;
b) 7 nM 이하의 K_D로 시노몰구스 PD-1에 결합하고;
c) 1 nM 이하의 K_D로 마우스 PD-1에 결합하고;
d) 래트 PD-1에 결합하지 않고;
e) 스태필로코쿠스 엔테로톡신 B(SEB) 전혈 검정에서 IL-2 분비를 증가시키고;
f) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;
g) 유세포분석 경쟁 검정에서 10 pg/mL의 농도에서 PD-1과 PD-L1의 상호작용을 적어도 60%만큼 억제하고;
h) 바이오-레이어 간섭굴절측정법 분석에 의해 결정된 바와 같이 10 pg/mL의 농도에서 PD-1에 대한 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 적어도 90%만큼 차단하고;
i) 생체내 종양 성장을 억제한다.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 항-PD-1 항체의 중쇄 상보성-결정 영역(H-CDR) 1-3 및 경쇄 상보성-결정 영역(L-CDR) 1-3이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 228-233;
b) 각각 SEQ ID NO: 238-243;
c) 각각 SEQ ID NO: 248-253;
d) 각각 SEQ ID NO: 258-263;
e) 각각 SEQ ID NO: 268-273;
f) 각각 SEQ ID NO: 278-283;
g) 각각 SEQ ID NO: 288-293; 또는
h) 각각 SEQ ID NO: 298-303.
제6항에 있어서, 항-PD-1 항체의 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 226 및 227;
b) 각각 SEQ ID NO: 236 및 237;
c) 각각 SEQ ID NO: 236 및 392;
d) 각각 SEQ ID NO: 246 및 247;
e) 각각 SEQ ID NO: 256 및 257;
f) 각각 SEQ ID NO: 266 및 267;
g) 각각 SEQ ID NO: 276 및 277;
h) 각각 SEQ ID NO: 286 및 287; 또는
i) 각각 SEQ ID NO: 296 및 297.
제7항에 있어서, 항-PD-1 항체가 하기를 포함하는 방법:
a) SEQ ID NO: 226의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄(HC), 및 SEQ ID NO: 227의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄(LC);
b) SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 237의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
c) SEQ ID NO: 236의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 392의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
d) SEQ ID NO: 246의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 247의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
e) SEQ ID NO: 256의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 257의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
f) SEQ ID NO: 266의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 267의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
g) SEQ ID NO: 276의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 277의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
h) SEQ ID NO: 286의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 287의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는
i) SEQ ID NO: 296의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 297의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 인간 TIM-3과의 결합에 대해 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362, 및 20621로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 TIM-3의 에피토프에 결합하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 하기를 포함하는 인간 TIM-3의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118, 및 D120;
b) SEQ ID NO: 389의 잔기 F61, R69, 및 I117; 또는
c) SEQ ID NO: 389의 잔기 P50, F61, E62, I117, M118, 및 D120.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 하기를 포함하는 인간 TIM-3의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 389의 잔기 62-67; 또는
b) SEQ ID NO: 389의 잔기 114-117.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIM-3이 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는 방법:
a) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 23 nM 이하의 K_D로 인간 TIM-3에 결합하고;
b) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 22 nM 이하의 K_D로 시노몰구스 TIM-3에 결합하고;
c) ELISA에 의해 측정시 1.2 nM 이하의 EC50으로 인간 TIM-3에 결합하고;
d) ELISA에 의해 측정시 46 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 TIM-3에 결합하고;
e) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;
f) 이원 혼합 림프구 반응 검정에서 IFN-γ 분비를 증가시키고;
g) 일원 혼합 림프구 반응 검정에서 TNF-α 분비를 증가시키고;
h) 수지상 세포로부터 TNF-α 분비를 증가시키고;
i) TIM-3와 포스파티딜세린의 상호작용을 억제한다.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항-TIM-3 항체의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 8-13;
b) 각각 SEQ ID NO: 18-23;
c) 각각 SEQ ID NO: 28-33;
d) 각각 SEQ ID NO: 38-43;
e) 각각 SEQ ID NO: 48-53;
f) 각각 SEQ ID NO: 58-63;
g) 각각 SEQ ID NO: 68-73;
h) 각각 SEQ ID NO: 78-83;
i) 각각 SEQ ID NO: 88-93;
j) 각각 SEQ ID NO: 98-103;
k) 각각 SEQ ID NO: 108-113;
l) 각각 SEQ ID NO: 118-123;
m) 각각 SEQ ID NO: 128-133;
n) 각각 SEQ ID NO: 138-143;
o) 각각 SEQ ID NO: 148-153;
p) 각각 SEQ ID NO: 158-163;
q) 각각 SEQ ID NO: 168-173;
r) 각각 SEQ ID NO: 178-183;
s) 각각 SEQ ID NO: 188-193;
t) 각각 SEQ ID NO: 198-203;
u) 각각 SEQ ID NO: 208-213; 또는
v) 각각 SEQ ID NO: 218-223.
제13항에 있어서, 항-TIM-3 항체의 VH 및 VL이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 7 및 4;
b) 각각 SEQ ID NO: 3 및 4;
c) 각각 SEQ ID NO: 16 및 17;
d) 각각 SEQ ID NO: 26 및 27;
e) 각각 SEQ ID NO: 36 및 37;
f) 각각 SEQ ID NO: 46 및 47;
g) 각각 SEQ ID NO: 56 및 57;
h) 각각 SEQ ID NO: 66 및 67;
i) 각각 SEQ ID NO: 76 및 77;
j) 각각 SEQ ID NO: 86 및 87;
k) 각각 SEQ ID NO: 96 및 97;
l) 각각 SEQ ID NO: 106 및 107;
m) 각각 SEQ ID NO: 116 및 117;
n) 각각 SEQ ID NO: 126 및 127;
o) 각각 SEQ ID NO: 136 및 137;
p) 각각 SEQ ID NO: 146 및 147;
q) 각각 SEQ ID NO: 156 및 157;
r) 각각 SEQ ID NO: 166 및 167;
s) 각각 SEQ ID NO: 176 및 177;
t) 각각 SEQ ID NO: 186 및 187;
u) 각각 SEQ ID NO: 196 및 197;
v) 각각 SEQ ID NO: 206 및 207; 또는
w) 각각 SEQ ID NO: 216 및 217.
제14항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 하기를 포함하는 방법:
a) SEQ ID NO: 7의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
b) SEQ ID NO: 3의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 4의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
e) SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
f) SEQ ID NO: 46의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 47의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
g) SEQ ID NO: 56의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 57의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
h) SEQ ID NO: 66의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 67의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
i) SEQ ID NO: 76의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 77의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
j) SEQ ID NO: 86의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 87의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
k) SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
l) SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
m) SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
n) SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
o) SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
p) SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
q) SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
r) SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
s) SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 177의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
t) SEQ ID NO: 186의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 187의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
u) SEQ ID NO: 196의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 197의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
v) SEQ ID NO: 206의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 207의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는
w) SEQ ID NO: 216의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 374, 375, 376, 또는 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 217의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 인간 LAG-3과의 결합에 대해 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572, 및 15011로 구성된 군으로부터 선택되는 항체와 경쟁하거나, 상기 항체와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합하는 방법.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 하기를 포함하는 인간 LAG-3의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 68의 잔기 H85, P86, A87, P89, S91, W92, 및 G93;
b) SEQ ID NO: 68의 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163;
c) SEQ ID NO: 68의 잔기 A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148, 및 R163; 또는
d) SEQ ID NO: 68의 잔기 G107, L109, R110, 및 S111.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 하기를 포함하는 인간 LAG-3의 에피토프에 결합하는 방법:
a) SEQ ID NO: 68의 잔기 98-105;
b) SEQ ID NO: 68의 잔기 78-105 및 123-131;
c) SEQ ID NO: 68의 잔기 23-30, 40-66, 88-105, 123-137, 및 148-152; 또는
d) SEQ ID NO: 68의 잔기 23-30, 40-66, 98-105, 118-137, 및 148-161.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 다음 특징 중 적어도 하나를 갖는 방법:
a) 20 pg/mL의 농도에서, A375 세포 상의 인간 MHC 클래스 II에 대한 인간 LAG-3의 결합을 유세포분석 경쟁 검정에 의해 측정시 음성 대조군 항체와 비교하여 85% 넘게 감소시키고;
b) 20 pg/mL의 농도에서, A375 세포 상의 인간 MHC 클래스 II에 대한 인간 LAG-3의 결합을 유세포분석 경쟁 검정에 의해 측정시 음성 대조군 항체와 비교하여 35% 내지 85% 감소시키고;
c) Jurkat 세포 상에 발현된 인간 LAG-3 및 Raji 세포 상에 발현된 인간 MHC 클래스 II 사이의 결합을 차단하고;
d) 유세포분석에 의해 측정시 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 LAG-3에 결합하고;
e) 유세포분석에 의해 측정시 0.3 nM 이하의 EC50으로 시노몰구스 LAG-3에 결합하고;
f) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.0 x 10^-8 이하의 K_D로 인간 LAG-3에 결합하고;
g) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 1.5 x 10^-7 이하의 K_D로 시노몰구스 LAG-3에 결합하고;
h) 표면 플라스몬 공명에 의해 측정시 3.5 x 10^-8 이하의 K_D로 마우스 LAG-3에 결합하고;
i) 스태필로코쿠스 엔테로톡신 B(SEB)로 처리된 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에서 IL-2 생산을 자극하고;
j) 인간 T 세포에서 LAG-3의 세포 수준을 감소시키고;
k) 인간 T 세포의 배양물에서 LAG-3의 가용성 수준을 감소시키고;
l) 생체내에서 종양 성장 회귀를 유도하고;
m) 생체내에서 종양 성장을 지연시키고;
n) 항체 25F7-Lag3.5와 동일한 인간 LAG-3의 에피토프에 결합하지 않는다.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항-LAG-3 항체의 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 318-323;
b) 각각 SEQ ID NO: 308-313;
c) 각각 SEQ ID NO: 328-333;
d) 각각 SEQ ID NO: 338-343;
e) 각각 SEQ ID NO: 348-353;
f) 각각 SEQ ID NO: 358-363; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 368-373.
제20항에 있어서, 항-LAG-3 항체의 VH 및 VL이 하기의 아미노산 서열을 포함하는 방법:
a) 각각 SEQ ID NO: 316 및 317;
b) 각각 SEQ ID NO: 306 및 307;
c) 각각 SEQ ID NO: 326 및 327;
d) 각각 SEQ ID NO: 336 및 337;
e) 각각 SEQ ID NO: 346 및 347;
f) 각각 SEQ ID NO: 356 및 357; 또는
g) 각각 SEQ ID NO: 366 및 367.
제21항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 하기를 포함하는 방법:
a) SEQ ID NO: 316의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 317의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
b) SEQ ID NO: 306의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 307의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
c) SEQ ID NO: 326의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 327의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
d) SEQ ID NO: 336의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 337의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
e) SEQ ID NO: 346의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 347의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC;
f) SEQ ID NO: 356의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 357의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC; 또는
g) SEQ ID NO: 366의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC, 및 SEQ ID NO: 367의 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC.
제1항에 있어서, 환자에게
a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체;
b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 7 및 4의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 또는
c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 환자에게
a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체;
b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 316 및 317의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체; 또는
c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 환자에게
a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체;
b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 7 및 4의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 316 및 317의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체; 또는
c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 부분이 환자에게 동시에 투여되는 방법.
제26항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 단일 약학적 조성물로 투여되는 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원-결합 부분이 환자에게 순차적으로 투여되는 방법.
제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 암을 갖는 방법.
제29항에 있어서, 암이 혈액학적 악성종양인 방법.
제30항에 있어서, 혈액학적 악성종양이 백혈병, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 또는 골수종인 방법.
제29항에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.
제29항에 있어서, 암이 흑색종, 비소세포폐암, 방광암, 두경부 편평 세포 암종, 난소암, 결장직장암, 신장 세포 암종, 메르켈-세포 암종, 섬유육종, 신경아교육종, 또는 아교모세포종인 방법.
제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 방사선 요법, 또는 화학치료제, 항신생물제, 및 항혈관형성제 중 적어도 하나를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
a) 인간 PD-1 및 인간 TIM-3;
b) 인간 PD-1 및 인간 LAG-3; 또는
c) 인간 PD-1, 인간 항-TIM-3, 및 인간 LAG-3에 특이적으로 결합하는 다중-특이적 항체.
제35항에 있어서, 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체의 항원-결합 부분, 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 정의된 항-TIM-3 항체의 항원-결합 부분, 및/또는 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항-LAG-3 항체의 항원-결합 부분을 포함하는 다중-특이적 항체.
(1) 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, (2) 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 (3) 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
제37항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 정의된 항-TIM-3 항체인 약학적 조성물.
제37항 또는 제38항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항-LAG-3 항체인 약학적 조성물.
제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물 내의 항체들이 동일한 양으로 존재하는 약학적 조성물.
제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 하기를 포함하는 약학적 조성물:
a) H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 228-233의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 8-13의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 H-CDR1-3 및 L-CDR1-3이 각각 SEQ ID NO: 318-323의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체;
b) VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 226 및 227의 아미노산 서열을 포함하는 항-PD-1 항체; VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 7 및 4의 아미노산 서열을 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 VH 및 VL이 각각 SEQ ID NO: 316 및 317의 아미노산 서열을 포함하는 항-LAG-3 항체; 또는
c) SEQ ID NO: 226 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 227 및 379의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-PD-1 항체; SEQ ID NO: 7 및 377의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 4 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-TIM-3 항체; 및 SEQ ID NO: 316 및 375의 아미노산 서열을 포함하는 HC 및 SEQ ID NO: 317 및 378의 아미노산 서열을 포함하는 LC를 포함하는 항-LAG-3 항체.
제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 방법에서 인간 환자를 치료하는데 사용하기 위한 약학적 조성물.
면역을 강화시킬 필요가 있는 인간 환자에서 면역을 강화시키는데 사용하기 위한, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
제43항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 정의된 항-TIM-3 항체인 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분.
제43항 또는 제44항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항-LAG-3 항체인 항-PD-1 항체 또는 항원-결합 부분.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 방법에서 인간 환자를 치료하는데 사용하기 위한 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분.
면역을 강화시킬 필요가 있는 인간 환자에서 면역을 강화시키는 약제의 제조를 위한, 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 조합된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 용도로서, 상기 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분이 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 것인, 용도.
제47항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 정의된 항-TIM-3 항체인 용도.
제47항 또는 제48항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항-LAG-3 항체인 용도.
제1항 내지 제34항 중 어느 한 항의 방법에서 인간 환자를 치료하는 약제의 제조를 위한 제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 용도.
제1항 및 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 정의된 항-PD-1 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 항-TIM-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분 및/또는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 제조 물품으로서, 상기 제조 물품이 환자에서 면역을 강화시키는데 적합한, 제조 물품.
제51항에 있어서, 항-TIM-3 항체가 제9항 내지 제15항 중 어느 한 항에 정의된 항-TIM-3 항체인 제조 물품.
제51항 또는 제52항에 있어서, 항-LAG-3 항체가 제16항 내지 제22항 중 어느 한 항에 정의된 항-LAG-3 항체인 제조 물품.