BR112019020662A2

BR112019020662A2 - terapias de combinação direcionadas a pd-1, tim-3 e lag-3

Info

Publication number: BR112019020662A2
Application number: BR112019020662A
Authority: BR
Inventors: Frohlich Camilla; Maria Carlsen Melander Eva; David Horak Ivan; Lantto Johan; Kragh Michael; Monrad Grandal Michael; Wandahl Pedersen Mikkel; Gad Monika; Lindsted Trine
Original assignee: Symphogen As
Priority date: 2017-04-05
Filing date: 2018-04-05
Publication date: 2020-05-05
Also published as: EP3606957A1; CL2021003196A1; CO2019012080A2; CN114984209A; MA49042A; SG11201908919XA; PE20191741A1; TWI801376B; TWI822101B; RU2019134934A3; CA3058960C; EA201992350A1; IL269644A; MX2022007140A; JP2024023222A; TW201841652A; CN110621698B; CL2019002850A1; EP4230654A1; JP2020513009A

Abstract

a presente invenção refere-se a terapias de combinação direcionadas a dois ou todos de pd-1, tim-3 e lag-3 usando anticorpos específicos para esses alvos em pacientes que estão em necessidade de imunidade elevada. são também incluídas na invenção composições úteis nas terapias. as terapias são úteis no tratamento de doenças, tais como cânceres.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para TERAPIAS DE COMBINAÇÃO DIRECIONADAS A PD-1, TIM-3 e LAG-3. REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO [0001] Este pedido reivindica prioridade do Pedido de Patente Provi sório dos Estados Unidos 62/481.973, depositado em 5 de abril de 2017, cuja divulgação é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

[0002] O presente pedido contém uma Listagem de Sequências que foi submetida eletronicamente no formato ASCII e é aqui incorporada por referência em sua totalidade. A cópia eletrônica da Listagem de Sequências, criada em 23 de março de 2018, é denominada 022675_VVO058_SL.txt e tem 232.360 bytes de tamanho.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO [0003] PD-1, também conhecida como Proteína de Morte Celular

Programada 1 e CD279, é um receptor de superfície celular de 268 aminoácidos que pertence à superfamília de imunoglobulinas. PD-1 é membro da família CD28 de reguladores de células T e é expressa em células T, células B e macrófagos. Liga os ligantes PD-L1 (também conhecido como homólogo B7) e PD-L2 (também conhecido como B7-DC). PD-1 é uma proteína de membrana tipo I cuja estrutura inclui um domínio de IgV extracelular, uma região transmembranar e uma cauda intracelular contendo dois sítios de fosforilação. Conhecida como proteína de ponto de verificação imune, a PD-1 funciona como um receptor modulador imune induzível, desempenhando um papel, por exemplo, na regulação negativa de respostas de células T à estimulação de antígeno.

[0004] PD-L1 é o ligante predominante para PD-1. A ligação de PDL1 a PD-1 inibe a atividade de células T, reduzindo a produção de citocinas e suprimindo a proliferação de células T. As células cancerosas que expressam PD-L1 são capazes de explorar esse mecanismo para inativar a atividade antitumoral de células T através da ligação de PD-L1 ao

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2/216 receptor PD-1. Em virtude de suas propriedades reguladoras de resposta imune, a PD-1 tem sido investigada como um alvo potencial para Imunoterapia, incluindo o tratamento de câncer e doenças autoimunes. Dois anticorpos anti-PD-1, pembrolizumabe e nivolumabe, foram aprovados nos Estados Unidos e na Europa para tratamento de determinados cânceres.

[0005] Outras proteínas de ponto de verificação imune incluem TIM-3 (domínio de mucina e imunoglobulina de células T contendo 3) e LAG-3 (gene de ativação de linfócitos 3). TIM-3, também conhecido como HAVCR2 (receptor celular do vírus da hepatite A 2) ou CD366, é um membro da família de proteínas do domínio de mucina e imunoglobulina de células T. ΊΊΜ-3 é codificado em seres humanos pelo gene Havcr2 e é uma glicoproteína tipo I de 33 kDa com um domínio de IgV distai da membrana e um domínio de mucina proximal da membrana. Contém uma região conservada de cinco resíduos de Tyr no domínio intracelular, que são fosforilados quando da ligação ao ligante. TIM-3 é expresso por uma variedade de diferentes células originárias de ambos os braços adaptativos e inatos do sistema imune, incluindo células T, células dendríticas, macrófagos e células exterminadoras naturais (NK). A expressão de TIM-3 é baixa em células T sem tratamento prévio (naive), mas tornase aitamente sobrerregulada quando da ativação de células T. Ao contrário das células T, células inatas, tais como células dendríticas, células NK e monócitos, apresentam alta expressão basal de TIM-3. TIM-3 tem sido associado a vários ligantes, principalmente promíscuos, incluindo galectinaa-9, fosfatidilserina, CEACAM-1 e HMGB-1, mas os papéis exatos desses ligantes são atualmente desconhecidos.

[0006] Embora tenha sido sugerido que TIM-3 é um inibidor de ponto de verificação, existem evidências relativamente escassas para apoiar a ideia de que TIM-3 medeia diretamente a supressão da ativação de células T ou secreção de citocinas de maneira semelhante a, por exemplo,

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PD-1. Além disso, e em contraste com PD-1, TIM-3 parece desempenhar um papel na regulação de células do sistema inato e, em particular, nas células dendríticas. A maioria dos dados funcionais relacionados a TIM-3 e seu papel na imunologia tumoral provêm de estudos in vivo, utilizando vários anticorpos. Na maioria desses estudos, devido à baixa validação de anticorpos, não fica claro se os efeitos dos anticorpos TIM-3 são mediados pela inibição da ligação de ligante ou por um efeito agonístico no alvo. Em virtude de suas propriedades reguladoras da resposta imune, TIM-3 tem sido investigado como um alvo potencial para imunoterapia, inclusive para o tratamento de câncer e doenças autoimunes. Um único anticorpo anti-TIM-3 está atualmente em desenvolvimento clínico, mas atualmente não há nenhum anticorpo anti-TIM-3 aprovado.

[0007] LAG-3, também conhecido como CD223, é uma proteína da superfamília de imunoglobulinas que funciona como um receptor de ponto de verificação imune. A proteína madura é uma proteína transmembranar tipo I de 503 aminoácidos com quatro domínios do tipo Ig extracelulares. É expresso em vários tipos de células, incluindo células T ativadas, células T reguladoras (Treg), células exterminadoras naturais, células B e células dendríticas plasmocitoides. Informações sobre dados de sequência, organização do éxons/íntrons e a localização cromossômica de LAG-3 indicam que ele é intimamente relacionado a CD4. Semelhante a CD4, LAG-3 liga moléculas de MHC classe II, embora com maior afinidade e em sítio distinto em comparação com CD4.

[0008] LAG-3 é um receptor coinibidor que se pensa regular a proliferação, ativação e homeostase de células T de maneira semelhante a CTLA-4 e PD-1. Após a ligação do ligante ao domínio extracelular, LAG-3 exerce seu efeito através de sinalização subsequente via domínio citoplasmático. O ligante melhor caracterizado para LAG-3 é MHC classe II (MHCII), mas outros ligantes de LAG-3 foram descritos, incluindo LSECtina. LAG-3 não possui motivos ITIM ou ITSM clássicos, mas tem um mo

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4/216 tivo KIEELE conservado (SEQ ID N°: 397) que é considerado indispensável para realizar seu efeito inibidor na atividade de células T. O mecanismo exato pelo qual LAG-3 afeta a atividade de células T é pouco conhecido. LAG-3 inibe a expansão de células T bloqueando a entrada de células T ativadas na fase de crescimento do ciclo celular, resultando no acúmulo de células na fase S. Acredita-se também que LAG-3 desempenha um papel no aumento da atividade supressora de células T reguladoras e na modulação da função de células dendríticas. As células cancerosas têm a capacidade de sobrerreguiar a expressão de MHCII, que liga LAG-3 às células T efetoras, inibindo sua atividade e induzindo o escape imune do tumor.

[0009] Tendo em vista o papel crítico de PD-1, LAG-3 e TIM-3 como moduladores imunes, existe a necessidade de novas e aprimoradas terapias de combinação que tenham como alvo esses receptores para tratar cânceres e determinados distúrbios do sistema imune.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO [0010] A presente invenção baseia-se na descoberta de que a eficácia de aumento de imunidade de um anticorpo anti-PD-1, tais como os descritos aqui, aumenta significativamente quando o anticorpo é usado em combinação com um anticorpo anti-TIM- 3 e/ou um anticorpo antiLAG-3. Os presentes inventores descobriram que as terapias de combinação da presente invenção são particularmente eficazes no tratamento de câncer em um paciente humano pela ativação da imunidade anticâncer própria do paciente. Em comparação com os tratamentos para câncer atualmente disponíveis, incluindo tratamentos com anticorpos, contempla-se que as terapias de combinação da Invenção podem prover uma resposta clínica superior.

[0011] Por conseguinte, a presente invenção provê um método para aumentar a imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo, tal como um paciente com câncer, administrando ao paciente (1)

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5/216 um anticorpo anti-PD-1, ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, que compete pela ligação a PD-1 humana com, ou se liga ao mesmo epitope de PD-1 humana que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 e 13112.15380; e (2) um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo. Em determinadas modalidades, o método compreende administrar o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo e o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo. [0012] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 se liga a um epítopo de PD-1 humana compreendendo:

a) resíduos V64, L128, P130, K131 e A132 da SEQ ID N°: 388;

b) resíduos V44 e T145 da SEQ ID N°: 388;

c) resíduos K131 e E136 da SEQ ID N°: 388; ou

d) resíduos V44 e T145 da SEQ ID N°: 388.

[0013] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 se liga a um epítopo de PD-1 humana compreendendo:

a) resíduos 56-64, 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388;

b) resíduos 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388;

c) resíduos 69-75 da SEQ ID N°: 388;

d) resíduos 136-140 da SEQ ID N°: 388; ou

e) resíduos 69-75 e 136-140 da SEQ ID N°: 388.

[0014] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) se liga a PD-1 humana com uma Kd de 750 pM ou menos;

b) se liga a PD-1 de cinomolgo com uma Kd de 7 nM ou

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6/216 menos;

c) se liga a PD-1 de camundongo com uma Kd de 1 nIVI ou menos;

d) não se liga a PD-1 de rato;

e) aumenta a secreção de IL-2 em um ensaio de sangue total de enterotoxina estafilocócica B (SEB);

f) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

g) inibe a interação de PD-1 com PD-L1 em pelo menos 60% em uma concentração de 10 pg/ml em um ensaio de competição por citometria de fluxo;

h) bloqueia a ligação de PD-L1 e PD-L2 a PD-1 em pelo menos 90% em uma concentração de 10 pg/ml conforme determinado por análise de Interferometria de Biocamada; e

i) inibe o crescimento tumoral in vivo.

[0015] Em determinadas modalidades, o anticorpo antiPD-1 tem todas as referidas propriedades.

[0016] Em algumas modalidades, as regiões de determinação de complementaridade de cadeia pesada (H-CDR) 1-3 e regiões de determinação de complementaridade de cadeia leve (L-CDR) 1-3 do anticorpo anti-PD-1 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 238-243, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 248-253, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 258-263, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 268-273, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 278-283, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 288-293, respectivamente; ou

h) SEQ ID N°s: 298-303, respectivamente.

[0017] Em algumas modalidades, os domínios variáveis de

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7/216 cadeia leve e pesada do anticorpo anti-PD-1 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 236 e 237, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 236 e 392, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 246 e 247, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 256 e 257, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 266 e 267, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 276 e 277, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 286 e 287, respectivamente; ou

i) SEQ ID N°s: 296 e 297, respectivamente.

[0018] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende:

a) uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma cadeia leve (LC) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 247 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da

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SEQ ID N°: 256 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

h) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379; ou

i) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 297 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.

[0019] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM~3 compete pela ligação a TIM-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de TIM3 humano que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 e 20621.

[0020] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-S se liga a um epítopo de TIM-3 humano compreendendo:

a) resíduos P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118 e D120da SEQ ID N°: 389;

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b) resíduos F61, R69 e 1117 da SEQ ID N°: 389; ou

c) resíduos P50, F61, E62, 1117, M118 e D120 da SEQ ID N°: 389.

[0021] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 se liga a um epítopo de TIM-3 humano compreendendo:

a) resíduos 62-67 da SEQ ID N°: 389; ou

b) resíduos 114-117 da SEQ ID N°: 389.

[0022] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) se liga a TIM-3 humano com uma Kd de 23 nM ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

b) se liga a TIM-3 de cinomolgo com uma Kd de 22 nM ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

c) se liga a TIM-3 humano com um EC50 de 1,2 nM ou menos, conforme medido por ELISA;

d) se liga a TIM-3 de cinomolgo com um EC50 de 46 nM ou menos, conforme medido por ELISA;

e) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

f) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista bldirecional;

g) aumenta a secreção de TNF-α em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

h) aumenta a secreção de TNF-α a partir de células dendríticas; e

i) inibe a interação de TIM-3 com fosfatidilserina.

[0023] Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem pelo menos as propriedades a), c), d), e), g), h) e I).

[0024] Em algumas modalidades, a H-CDR1-3 e a L-CDR1-3 do anticorpo anti-TIM-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

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a) SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 18-23, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 28-33, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 38-43, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 48-53, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 58-63, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 68-73, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 78-83, respectivamente;

i) SEQ ID N°s: 88-93, respectivamente;

j) SEQ ID N°s: 98-103, respectivamente;

k) SEQ ID N°s: 108-113, respectivamente;

l) SEQ ID N°s: 118-123, respectivamente;

m) SEQ ID N°s: 128-133, respectivamente;

n) SEQ ID N°s: 138-143, respectivamente;

o) SEQ ID N°s: 148-153, respectivamente;

p) SEQ ID N°s: 158-163, respectivamente;

q) SEQ ID N°s: 168-173, respectivamente;

r) SEQ ID N°s: 178-183, respectivamente;

s) SEQ ID N°s: 188-193, respectivamente;

t) SEQ ID N°s: 198-203, respectivamente;

u) SEQ ID N°s: 208-213, respectivamente; ou

v) SEQ ID N°s: 218-223, respectivamente.

[0025] Em algumas modalidades, os domínios variáveis de cadeia leve e pesada do anticorpo anti-TIM-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 3 e 4, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 16 e 17, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 26 e 27, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 36 e 37, respectivamente;

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f) SEQ ID N°s: 46 e 47, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 56 e 57, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 66 e 67, respectivamente;

i) SEQ ID N°s: 76 e 77, respectivamente;

j) SEQ ID N°s: 86 e 87, respectivamente;

k) SEQ ID N°s: 96 e 97, respectivamente;

l) SEQ ID N°s: 106 e 107, respectivamente;

m) SEQ ID N°s: 116 e 117, respectivamente;

n) SEQ ID N°s: 126 e 127, respectivamente;

o) SEQ ID N°s: 136 e 137, respectivamente;

p) SEQ ID N°s: 146 e 147, respectivamente;

q) SEQ ID N°s: 156 e 157, respectivamente;

r) SEQ ID N°s: 166 e 167, respectivamente;

s) SEQ ID N°s: 176 e 177, respectivamente;

t) SEQ ID N°s: 186 e 187, respectivamente;

u) SEQ ID N°s: 196 e 197, respectivamente;

v) SEQ ID N°s: 206 e 207, respectivamente; ou

w) SEQ ID N°s: 216 e 217, respectivamente.

[0026] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 7 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3ea sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375,

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376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 27 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 56 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

h) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 67 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

i) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

j) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

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k) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

l) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

m) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 117 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

n) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 127 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

o) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

p) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

q) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

r) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375,

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376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

s) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

t) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

u) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

v) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 206 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378; ou

w) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 217 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378.

[0027] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compete pela ligação a LAG-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572 e 15011.

[0028] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 se liga a um epítopo de LAG-3 humano compreendendo:

a) resíduos H85, P86, A87, P89, S91, W92 e G93 da SEQ ID N°: 68;

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b) resíduos A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68;

c) resíduos A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68; ou

d) resíduos G107, L109, R110 e S111 da SEQ ID N°: 68. [0029] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 se liga a um epítopo de LAG-3 humano compreendendo:

a) resíduos 98-105 da SEQ ID N°: 68;

b) resíduos 78-105 e 123-131 da SEQ ID N°: 68;

c) resíduos 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 e 148-152 da SEQ ID N°: 68; ou

d) resíduos 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 e 148-161 da SEQ ID N°: 68.

[0030] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) em uma concentração de 20 pg/ml, reduz a ligação de LAG-3 humano a MHC humana classe II em células A375 em mais de 85% em comparação com um anticorpo controle negativo, conforme determinado por um ensaio de competição de citometria de fluxo;

b) em uma concentração de 20 pg/ml, reduz a ligação de LAG-3 humano a MHC humana classe II em células A375 para entre 35% e 85% em comparação com um anticorpo controle negativo, conforme determinado por um ensaio de competição de citometria de fluxo;

c) bloqueia a ligação entre LAG-3 humano expresso em células Jukart e MHC humana classe II expressa em células Raji;

d) se liga a LAG-3 humano com um EC50 de 0,1 nM ou

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16/216 menos, conforme medido por citometria de fluxo;

e) se liga a LAG-3 de cinomolgo com um EC50 de 0,3 nM ou menos, conforme medido por citometria de fluxo;

f) se liga a LAG-3 humano com uma Kd de 3,0 x 10-8 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

g) se liga a LAG-3 de cinomolgo com uma Kd de 1,5 x 10-7 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

h) se liga a LAG-3 de camundongo com uma Kd de 3,5 x 10-8 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

i) estimula a produção de IL-2 em células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) humanas tratadas com enterotoxina estafilocócica B (SEB);

j) reduz os níveis celulares de LAG-3 em células T humanas;

k) reduz os níveis solúveis de LAG-3 na cultura de células T humanas;

l) induz a regressão de crescimento tumoral in vivo;

m) retarda o crescimento tumoral in vivo; e

n) não se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que o anticorpo 25F7-Lag3.5.

[0031] Em determinadas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem pelo menos as propriedades a), c), d), e), f), g), I), j), k), m) e n).

[0032] Em algumas modalidades, a H-CDR1-3 e a L-CDR1-3 do anticorpo antl-LAG-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 308-313, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 328-333, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 338-343, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 348-353, respectivamente;

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f) SEQ ID N°s: 358-363, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 368-373, respectivamente.

[0033] Em algumas modalidades, os domínios variáveis de cadeia leve e pesada do anticorpo anti-LAG-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 306 e 307, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 326 e 327, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 336 e 337, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 346 e 347, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 356 e 357, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 366 e 367, respectivamente.

[0034] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 327 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

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e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378; ou

g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.

[0035] Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente; e um anticorpo anti-TIM-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD~1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; e um anticorpo anti-TIIVI-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-THVI-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378.

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19/216 [0036] Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-233, respectívamente; e um anticorpo antí-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR13 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectívamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectívamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectívamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[0037] Em algumas modalidades, o método compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-233, respectívamente; um anticorpo anti~TIM~3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente; e um anticorpo antí-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectívamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectívamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de

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20/216 aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo antiLAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[0038] Os anticorpos ou porções de ligação a antígeno podem ser administrados ao paciente simultaneamente (por exemplo, em uma única composição farmacêutica) ou sequencialmente.

[0039] As terapias da presente invenção são úteis no tratamento de um paciente que tem câncer, tal como uma malignidade hematológica (por exemplo, leucemia, linfoma de Hodgkin ou iinfoma não Hodgkin), ou um tumor sólido. Em algumas modalidades, o paciente pode ter melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de bexiga, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, câncer de ovário, câncer colorretal, carcinoma de células renais, carcinoma de células de Merkel, fibrossarcoma, gliossarcoma ou glioblastoma. As terapias da presente invenção podem adicionalmente incluir radiação ou pelo menos um de um agente quimioterápico, um agente antineoplásico e um agente antiangiogênico.

[0040] É também provido na presente invenção um anticorpo multiespecífico (por exemplo, biespecífico ou triespecífico) que especificamente se liga a: a) PD-1 humana e ΊΊΜ-3 humano; b) PD-1 humana e

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LAG-3 humano; ou c) PD-1 humana, anti-TIM-3 humano e LAG-3 humano. Em determinadas modalidades, o anticorpo multiespecífico compreende uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui, uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui e/ou uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui.

[0041] É também provida na presente invenção uma composição farmacêutica compreendendo (1) um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, (2) um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, e (3) um excipiente farmaceuticamente aceitável. O anticorpo anti-TIM-3 e o anticorpo anti-LAG-3 pode ser selecionado daqueles descritos aqui.

[0042] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo antiLAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e

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22/216 uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[0043] Os anticorpos na composição podem estar presentes em quantidades iguais. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica é para uso no tratamento de um paciente humano em um método descrito aqui. Em modalidades particulares, a composição farmacêutica é para uso no aumento de imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo, por exemplo, para tratamento de câncer.

[0044] A presente invenção também provê um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui para uso em um método de tratamento descrito aqui, por exemplo, aumento de imunidade e/ou tratamento de câncer em um paciente humano em necessidade do mesmo, em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo antiLAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo. O anticorpo antiTlM-3 e o anticorpo anti-LAG-3 podem ser selecionados daqueles descritos aqui.

[0045] A presente invenção também provê um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui para uso no tratamento de um paciente humano em um método descrito aqui.

[0046] A presente invenção também provê o uso de um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui para a fabricação de um medicamento para aumentar a

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23/216 imunidade e/ou tratar câncer em um paciente em necessidade do mesmo (por exemplo, um paciente humano), em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, a presente invenção provê o uso de um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, e um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, para a fabricação de um medicamento para aumentar a imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo, por exemplo, para tratamento de câncer. O anticorpo anti-TIM-3 e o anticorpo anti-LAG-3 podem ser selecionados daqueles descritos aqui.

[0047] A presente invenção também provê o uso de um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui para a fabricação de um medicamento para tratamento de um paciente humano em um método descrito aqui.

[0048] A presente invenção ainda provê um artigo de fabricação compreendendo um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, em que o referido artigo de fabricação é adequado para aumentar a imunidade e/ou tratar câncer em um paciente (tal como um paciente humano), por exemplo, em um método de tratamento descrito aqui. O anticorpo anti-TIM-3 e o anticorpo anti-LAG-3 podem ser selecionados daqueles descritos aqui.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS [0049] A Figura 1 é um conjunto de gráficos mostrando o aumento percentual nos níveis de IFN-y em três pares de doador (Painéis A-C)

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24/216 após o tratamento com 10 pg/mi de anticorpo controle (lgG1 LALA ou lgG2), anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145, ou uma combinação de anticorpos 12819 e 15086.17145 em uma razão 1:1, após 5 dias de cultura em um ensaio MLR (reação linfocitária mista) unidirecional. Cada ponto no gráfico representa uma replicata e a média é indicada por uma barra horizontal.

[0050] A Figura 2 é um conjunto de gráficos mostrando o aumento percentual nos níveis de IFN-y em três pares de doador (Painéis A-C) após o tratamento com 10 pg/ml de anticorpo controle (lgG1 LALA ou lgG2), anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145, ou uma combinação de anticorpos 12819 e 15086.17145 em uma razão 1:1, após 5 dias de cultura em um ensaio MLR bidirecional. Cada ponto no gráfico representa uma replicata e a média é indicada por uma barra horizontal.

[0051] A Figura 3 é um par de gráficos mostrando o efeito do anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 em comparação com anticorpo anti-PD-1 controle positivo 12819 na proliferação de células T no ensaio MLR unidirecional. Os anticorpos foram adicionados a uma concentração final de 25 pg/ml e incubados sem (Painel A) ou com (Painel B) anti-CD3 solúvel por 5 dias antes da adição de 1 pCi/cavidade de 3H-timidina por mais 18 horas. A incorporação de 3H-timidina nas células coletadas foi determinada por contagem por clntilação líquida.

[0052] A Figura 4 é um gráfico mostrando o efeito do anticorpo antiTIM-3 15086.17145 na secreção de IL-12p40 a partir de células dendríticas derivadas de monócitos incubadas por 5 dias com 10 pg/ml de anticorpo. Os níveis de IL-12p40 nos sobrenadantes celulares foram determinados usando ELISA.

[0053] A Figura 5 é um par de gráficos mostrando níveis de expressão de marcadores de ativação selecionados em células dendríticas derivadas de monócitos após o tratamento com 25 pg/ml de anticorpo anti

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TIM-3 15086.17145 por 24 horas. O Painel A apresenta análise de expressão de gene de vários marcadores de ativação e moléculas coestimuladoras. O Painel B apresenta validação de níveis de CD80 e CD86 elevados usando FACS. As sobreposições de histograma mostradas são representativas de células dendríticas CD11c+, e números adjacentes aos histogramas representam valores de MFI (intensidade de fluorescência média).

[0054] A Figura 6 é um gráfico mostrando o efeito de TIM-3 direcionado a crescimento tumoral em um modelo de camundongo NSG-SGM3 humanizado com CD34+ enxertado com o modelo de xenoenxerto derivado de paciente (PDX) de pulmão humano LG1306. Os camundongos foram tratados com anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 em uma dose inicial de 10 mg/kg seguida por 5 mg/kg 5x Q5D. A área cinza representa o período de tratamento. Os dados são apresentados como médias ± SEM. ** p<0,01.

[0055] A Figura 7 é um par de gráficos mostrando o efeito melhorado nos níveis de IL-2 da combinação de anticorpo anti-PD~1 12819 com anticorpo anti-LAG-3 15532 e/ou anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 em um ensaio SEB (Enterotoxina Estafilocócica B) + PBMC (célula mononuclear de sangue periférico) para dois pares de doadores (Painéis A e B). As barras indicam secreção de IL-2 de PBMCs tratadas com 10 pg/ml dos anticorpos ou misturas de anticorpos indicados, e SEB, por 48 horas. Os sinais acima das barras indicam tratamentos únicos que são significativamente diferentes (p<0,05) do anticorpo controle (*) ou misturas de dois anticorpos que são significativamente diferentes dos tratamentos com anticorpos constituintes únicos (#).

[0056] A Figura 8 é um par de gráficos mostrando o efeito no crescimento tumoral de 10 mg/kg de anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo antiLAG-3 C9B7W (que é reativo com LAG-3 de camundongo), ou a combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-LAG-3, ou tratamento com veículo,

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26/216 em dois modelos de tumor de camundongo singênicos: MC38 (câncer de cólon, Painel A) e ASB-XIV (câncer de pulmão, Painel B). A área cinza representa o período de tratamento. Os dados são apresentados como médias ± SEM (erro padrão da média). ** p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001.

[0057] A Figura 9 é um gráfico mostrando o efeito no crescimento tumoral de 10 mg/kg de anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-LAG-3 15011, ou a combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-LAG-3, ou tratamento com veículo, no modelo de tumor de camundongo singênico ASBXIV. A área cinza representa o período de tratamento. Os dados são apresentados como médias ± SEM. * p<0,05, ****p<0,0001.

[0058] A Figura 10 é um par de gráficos mostrando o efeito no crescimento tumoral de anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 5D12, ou a combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3, ou tratamento com veículo, crescimento tumoral em dois modelos de tumor de camundongo singênicos: ASB-XIV (câncer de pulmão, Painel A) e Sa1N (fibrossarcoma, Painel B). Os tratamentos com anticorpos foram administrados em uma dose de 10 mg/kg/alvo em camundongos com tumores ASB-XIV. Camundongos com tumores Sa1N foram doseados com anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 em 1 mg/kg e 10 mg/kg, respectivamente. A área cinza representa o período de tratamento. Os dados são apresentados como médias ± SEM. ** p<0,01, ***p<0,001, e ****p<0,0001.

[0059] A Figura 11 é um conjunto de gráficos mostrando o efeito no crescimento tumoral de 10 mg/kg de anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086, ou a combinação de anticorpos anti-PD-1 e antiTIM-3, ou tratamento com veículo, em um modelo de tumor de xenoenxerto humano, em que a linhagem celular de melanoma humano A375 foi enxertada em camundongos reconstituídos com PBMC humana. Um doador de PBMC humana foi usado em cada experimento e os três gráficos representam três diferentes doadores (Painéis A-C). A área cinza repre

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27/216 senta o período de tratamento. Os dados são apresentados como médias ±SEM. *p<0,05e**p<0.01.

[0060] A Figura 12 é um conjunto de gráficos mostrando o efeito de direcionamento único e duplo de PD-1 e TIM-3 na sobrevivência percentual (Painel A) e crescimento tumoral (Painéis B-E) em camundongos NOD-sád enxertados com uma mistura de PBMCs humanas e células de melanoma A375. Os camundongos foram tratados com anticorpo antiPD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145, ou uma combinação dos anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3. Os tratamentos com anticorpos foram administrados em uma dose de 10 mg/kg três vezes por semana para cada anticorpo. A área cinza representa o período de tratamento. Dos dados no Painel A são apresentados como porcentagem de camundongos com tamanho de tumor <400 mm³ em cada grupo de tratamento ao longo do tempo.

[0061] A Figura 13 é um conjunto de gráficos mostrando o efeito de direcionamento único, duplo e triplo de PD-1, LAG-3 e TIM-3 na sobrevivência percentual (Painel A) e crescimento tumoral (Painéis B-H) no modelo de tumor singênlco ASB-XIV usando anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-LAG-3 C9B7W, anticorpo anti-TIM-3 5D12, a combinação de anticorpos anti~PD1 e anti-LAG3, a combinação de anticorpos anti~PD1 e anti-TIM-3, ou o combo triplo (que se refere à combinação dos anticorpos anti-PD-1, anti-LAG-3 e anti-TIM-3). Os tratamentos com anticorpos foram administrados em uma dose de 10 mg/kg para cada anticorpo. A área cinza representa o período de tratamento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO [0062] A presente invenção provê novas terapias de combinação e composições que têm como alvo PD-1 humana, TIM-3 humano e/ou LAG-3 humano usando anticorpos que ligam esses alvos. As terapias e composições podem ser usadas para melhorar o sistema imune em um paciente humano, tal como um paciente com câncer. Salvo especificação

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28/216 em contrário, como usado neste documento, PD-1 refere-se a PD-1 humana. Uma sequência de polipeptideo de PD-1 humana está disponível sob o N° de Acesso Uniprot Q15116, mostrada aqui como SEQ ID N°: 388. Salvo especificação em contrário, como usado neste documento, TIM-3 refere-se a TIM-3 humano. Uma sequência de polipeptideo de TIM-3 humano está disponível sob o N° de Acesso Uniprot Q8TDQ0, mostrada aqui como SEQ ID N°: 389. Salvo especificação em contrário, como usado neste documento, LAG-3 refere-se a LAG-3 humano. Uma sequência de polipeptideo de LAG-3 humano está disponível sob o N° de Acesso Uniprot P18627, mostrada aqui como SEQ ID N°: 390.

[0063] O termo anticorpo (Ab) ou imunoglobulina (Ig), como usado neste documento, refere-se a um tetrâmero que compreende duas cadeias pesadas (H) (cerca de 50-70 kDa) e duas cadeias leves (L) (cerca de 25 kDa) interconectadas por ligações dissulfeto. Cada cadeia pesada é composta por um domínio variável de cadeia pesada (VH) e uma região constante de cadeia pesada (CH). Cada cadeia leve é composta por um domínio variável de cadeia leve (VL) e uma região constante de cadeia leve (CL). Os domínios VH e VL podem ser subdivididos ainda em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões de determinação de complementaridade (CDRs), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões de quadro” (FRs). Cada VH e VL é composta por três CDRs (H-CDR aqui designa uma CDR da cadeia pesada; e L-CDR aqui designa uma CDR da cadeia leve) e quatro FRs, dispostas do terminal amino ao terminal carboxila na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. A atribuição de números de aminoácidos na cadeia pesada ou leve pode estar de acordo com as definições IMGT® (Lefranc et ah, Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)); ou as definições de Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 e 1991)); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); ou Chothia et al., Nature

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342:878-883 (1989). Salvo indicação em contrário, todos os números de resíduos de aminoácidos de anticorpos referidos nesta divulgação são aqueles sob o esquema de numeração IMGT®.

[0064] O termo anticorpo recombinante refere-se a um anticorpo que é expresso a partir de uma célula ou linhagem celular que compreende a(s) sequência(s) de nucleotídeo que codifica(m) o anticorpo, em que a(s) referida(s) sequência(s) de nucleotídeo nâo é(sâo) naturalmente associada(s) à célula.

[0065] O termo proteína isolada, polipeptideo isolado ou anticorpo isolado refere-se a uma proteína, polipeptideo ou anticorpo que, em virtude de sua origem ou fonte de derivação (1), não está associado a componentes naturalmente associados que o acompanham em seu estado nativo, (2) é livre de outras proteínas da mesma espécie, (3) é expresso por uma célula de uma espécie diferente e/ou (4) não ocorre na natureza. Assim, um polipeptideo que é quimicamente sintetizado ou sintetizado em um sistema celular diferente da célula da qual naturalmente se origina será isolado de seus componentes naturalmente associados. Uma proteína também pode se tornar substancialmente livre de componentes naturalmente associados por isolamento, usando técnicas de purificação de proteínas bem conhecidas na técnica.

[0066] O termo afinidade refere-se a uma medida da atração entre um antígeno e um anticorpo. A atratividade intrínseca do anticorpo para o antígeno é normalmente expressa como a constante de equilíbrio de afinidade de ligação (Kd) de uma interação anticorpo-antígeno particular. Um anticorpo é dito se ligar especificamente a um antígeno quando a Kd é < 1 mM, preferencialmente < 100 nM. Uma constante de afinidade de ligação Kd pode ser medida, por exemplo, por ressonância de plasmon de superfície (SPR) (BIAcore™) ou Interferometria de Biocamada, por exemplo, usando o sistema IBIS MX96 SPR da IBIS Technologies, o sistema ProteOn™ XPR36 SPR da Βίο-Rad, ou o sistema Octet™ da For

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30/216 teBio.

[0067] O termo 'W refere-se à constante de taxa de dissociação de uma interação anticorpo-antígeno particular. Uma constante de taxa de dissociação k_Off pode ser medida, por exemplo, por Interferometria de Biocamada, por exemplo, usando um dos sistemas listados acima.

[0068] O termo epítopo, como usado neste documento, refere-se a uma porção (determinante) de um antígeno que especificamente se liga a um anticorpo ou uma molécula relacionada, tal como uma molécula de ligação biespecífica. Os determinantes epitópicos geralmente consistem em agrupamentos de superfície quimicamente ativos de moléculas, tais como aminoácidos ou carboidratos ou cadeias laterais de açúcar e geralmente têm características estruturais tridimensionais específicas, bem como características de carga específicas. Um epítopo pode ser linear ou conformacional. Em um epítopo linear, todos os pontos de interação entre uma proteína (por exemplo, um antígeno) e uma molécula de interação (tal como um anticorpo) ocorrem linearmente ao longo da sequência de aminoácido primária da proteína. Em um epítopo conformacional, os pontos de interação ocorrem entre os resíduos de aminoácido na proteína que são separados um do outro na sequência de aminoácido primária. Uma vez determinado o epítopo desejado em um antígeno, é possível gerar anticorpos para esse epítopo usando técnicas bem conhecidas na técnica. Por exemplo, um anticorpo para um epítopo linear pode ser gerado, por exemplo, imunizando um animal com um peptídeo tendo os resíduos de aminoácido do epítopo linear. Um anticorpo para um epítopo conformacional pode ser gerado, por exemplo, Imunizando um animal com um minidomínio contendo os resíduos de aminoácido relevantes do epítopo conformacional. Um anticorpo para um epítopo particular também pode ser gerado, por exemplo, imunizando um animal com a molécula alvo de interesse ou uma porção relevante da mesma e, em seguida, analisando a ligação ao epítopo.

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31/216 [0069] Pode-se determinar se um anticorpo se liga ao mesmo epítopo que, ou compete pela ligação com, um anticorpo conforme aqui descrito usando métodos conhecidos na técnica, incluindo, sem limitação, ensaios de competição, classificação de epítopos e escaneamento de alanina. Em algumas modalidades, o anticorpo de teste e um anticorpo conforme descrito aqui se ligam a pelo menos um resíduo comum (por exemplo, pelo menos dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito ou nove resíduos) na proteína alvo (isto é, ΊΠΜ-3, PD-1 ou LAG-3). Em outras modalidades, os resíduos de contato na proteína alvo são completamente idênticos entre o anticorpo de teste e o anticorpo conforme descrito aqui. Em uma modalidade, permite-se que o anticorpo conforme descrito aqui se ligue à proteína alvo sob condições de saturação e, em seguida, mede-se a capacidade do anticorpo de teste para se ligar à proteína alvo. Se o anticorpo de teste for capaz de se ligar à proteína alvo ao mesmo tempo que o anticorpo de referência, então, o anticorpo de teste se liga a um epítopo diferente do anticorpo de referência. No entanto, se o anticorpo de teste não for capaz de se ligar à proteína alvo ao mesmo tempo, então, o anticorpo de teste se liga ao mesmo epítopo, um epítopo de sobreposição, ou um epítopo que esteja próximo do epítopo ligado pelo anticorpo conforme descrito aqui. Esse experimento pode ser realizado usando, por exemplo, ELISA, RIA, BIACORE™, SPR, Interferometria de Biocamada ou citometria de fluxo. Para testar se um anticorpo compete de forma cruzada com outro anticorpo, pode-se usar o método de competição descrito acima em duas direções, isto é, determinando se o anticorpo conhecido bloqueia o anticorpo de teste e vice-versa. Tais experimentos de competição cruzada podem ser realizados, por exemplo, usando um instrumento IBIS MX96 SPR ou o sistema Octet™.

[0070] O termo anticorpo quimérico refere-se, em seu sentido mais amplo, a um anticorpo que contém uma ou mais regiões de um anticorpo e uma ou mais regiões de um ou mais outros anticorpos, normalmente

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32/216 um anticorpo que é parcialmente de origem humana e parcialmente de origem não humana, isto é, derivado em parte de um animal não humano, por exemplo, um camundongo, rato ou outro roedor, ou uma ave, tal como uma galinha. Anticorpos quiméricos sâo preferidos aos anticorpos não humanos, a fim de reduzir o risco de uma resposta antianticorpo humana, por exemplo, uma resposta de anticorpo anticamundongo humana, no caso de um anticorpo murino. Um exemplo de um anticorpo quimérico típico é um em que as sequências de domínio variável são marinas, enquanto as sequências de região constante são humanas. No caso de um anticorpo quimérico, as partes não humanas podem estar sujeitas a alterações adicionais para humanizar o anticorpo. Os quiméricos descritos aqui têm sequências de domínio variável de galinha e sequências de região constante humanas.

[0071] O termo “humanizar refere-se ao fato de que um anticorpo é totalmente ou parcialmente de origem não humana (por exemplo, um anticorpo de murino ou galinha obtido da imunização de camundongos ou galinhas, respectivamente, com um antígeno de interesse, ou um anticorpo quimérico com base em tal anticorpo de murino ou de galinha), é possível substituir determinados aminoácidos, em particular, nas regiões de quadro e regiões constantes das cadeias pesadas e leves, a fim de evitar ou minimizar uma resposta imune em seres humanos. Embora não seja possível prever com precisão a imunogenicidade e, portanto, a resposta antianticorpo humana de um anticorpo particular, os anticorpos não humanos tendem a ser mais imunogênicos em seres humanos do que os anticorpos humanos. Anticorpos quiméricos, em que as regiões constantes estrangeiras (por exemplo, de roedor ou aves) foram substituídas por sequências de origem humana, mostraram-se geralmente menos imunogênicas do que anticorpos de origem totalmente estrangeira, e a tendência em anticorpos terapêuticos é para anticorpos humanizados ou totalmente humanos. Os anticorpos quiméricos ou outros anticorpos de ori

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33/216 gem não humana podem, assim, ser humanizados para reduzir o risco de uma resposta antianticorpo humana.

[0072] Para anticorpos quiméricos, a humanização tipicamente envolve a modificação das regiões de quadro das sequências de domínio variável. Os resíduos de aminoácidos que fazem parte das regiões de determinação de complementaridade (CDRs) na maioria das vezes não serão alterados em conexão com a humanização, embora, em certos casos, seja desejável alterar os resíduos individuais de aminoácidos de CDR, por exemplo, para remover um sítio de glicosilação, um sítio de desamidaçâo, um sítio de isomerizaçâo de aspartato ou um resíduo indesejado de cisteína ou metionina. A glicosilação ligada a N ocorre por associação de uma cadeia de oligossacarídeo a um resíduo de asparagina na sequência de tripeptídeo Asn-X-Ser ou Asn-X-Thr, em que X pode ser qualquer aminoácido, exceto Pro. A remoção de um sítio de N~ glicosilação pode ser obtida através da mutação do resíduo Asn ou Ser/Thr em um resíduo diferente, preferencialmente, por substituição conservadora. A desamidação de resíduos de asparagina e glutamina pode ocorrer dependendo de fatores como pH e exposição da superfície. Os resíduos de asparagina são partlcularmente suscetíveis à desamidação, principalmente quando presentes na sequência Asn-Gly, e em menor grau em outras sequências de dipeptídeo, tais como Asn-Ala. Quando um tal sítio de desamidação, em particular, Asn-Gly, está presente em uma sequência de CDR, pode, portanto, ser desejável remover o sítio, tipicamente, por substituição conservadora para remover um dos resíduos implicados.

[0073] São conhecidos na técnica vários métodos para humanização de uma sequência anticorpo; ver, por exemplo, a revisão de Almagro & Fransson, Front BioscL 13:1619-1633 (2008). Um método comumente usado é o enxerto de CDR, que, por exemplo, para um anticorpo quimérico derivado de murinho, envolve a identificação de contrapartes do ge

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34/216 ne da linha germinativa humana para os genes de domínio variável de murino e o enxerto das sequências de CDR de murino nesse quadro. A especificidade da interação de um anticorpo com um antígeno alvo reside principalmente nos resíduos de aminoácido localizados nas seis CDRs da cadeia pesada e leve. As sequências de aminoácido dentro de CDRs são, portanto, muito mais variáveis entre anticorpos individuais do que as sequências fora das CDRs. Como as sequências de CDR são responsáveis pela maioria das interações anticorpo-antígeno, é possível expressar anticorpos recombinantes que imitam as propriedades de um anticorpo de ocorrência natural específico ou, mais geralmente, qualquer anticorpo específico com uma determinada sequência de aminoácido, por exemplo, construindo vetores de expressão que expressam sequências de CDR do anticorpo específico enxertado em sequências de quadro de um anticorpo diferente. Como resultado, é possível humanizar um anticorpo nãohumano e ainda manter substancialmente a especificidade e afinidade de ligação do anticorpo original. O enxerto de CDR pode se basear nas definições de CDR de Kabat, embora uma publicação mais recente (Magdelaine-Beuzelin et al., Crit Rev.Oncol HematoL 64:210-225 (2007)) tenha sugerido que a definição de IMGT® (o sistema de informações internacional ImMunoGeneTics®, www.imgt.org) pode melhorar o resultado da humanização (ver Lefranc et al., Dev. Comp Immunoi. 27:55-77 (2003)).

[0074] Em alguns casos, o enxerto de CDR pode reduzir a especificidade e afinidade de ligação e, portanto, a atividade biológica, de um anticorpo não humano enxertado em CDR, em comparação com o anticorpo de origem a partir do qual as CDRs são obtidas. Mutações reversas (às vezes denominadas reparo de quadro) podem ser introduzidas em posições selecionadas do anticorpo enxertado em CDR, normalmente nas regiões de quadro, a fim de restabelecer a especificidade e afinidade de ligação do anticorpo de origem. As posições para possíveis mutações

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35/216 reversas podem ser identificadas usando as informações disponíveis na literatura e nos bancos de dados de anticorpos. Os resíduos de aminoácidos que são candidatos a mutações reversas são tipicamente aqueles que estão localizados na superfície de uma molécula de anticorpo, enquanto os resíduos que são cobertos ou que apresentam um baixo grau de exposição superficial normalmente não serão alterados.

[0075] Uma técnica de humanização alternativa ao enxerto de CDR e à mutação reversa é ressuperficialização (resurfacing), na qual os resíduos expostos de não superfície de origem não humana são retidos, enquanto os resíduos de superfície são alterados para resíduos humanos.

[0076] Em certos casos, pode ser desejável alterar um ou mais resíduos de aminoácidos de CDR, a fim de melhorar a afinidade de ligação ao epítopo alvo. Isso é conhecido como maturação por afinidade. Vários métodos de maturação por afinidade são conhecidos na técnica, por exemplo, o método de mutagênese de saturação por varredura in vitro descrito por Burks et al., Proc Natl Acad Sei USA, 94:412-417 (1997), e o método de maturação por afinidade in vitro em etapas de Wu et al., Proc NatlAcad Sei USA 95:6037-6042 (1998).

[0077] O termo anticorpo humano refere-se a um anticorpo em que as sequências de região constante e domínio variável são derivadas de sequências humanas. O termo abrange anticorpos com sequências que são derivadas de genes humanos, mas foram modificadas, por exemplo, para reduzir a imunogenicidade, aumentar a afinidade e/ou aumentar a estabilidade. Além disso, o termo engloba os anticorpos produzidos de forma recombinante usando sequências derivadas de seres humanos em células não humanas, que podem conferir glicosilação não típica de células humanas. O termo também engloba os anticorpos produzidos em organismos não humanos transgênicos com genes de anticorpos humanos (por exemplo, ratos OmniRat®).

[0078] O termo porção de ligação a antígeno de um anticorpo (ou

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36/216 simplesmente porção de anticorpo”), como usado neste documento, refere-se a uma ou mais porções ou fragmentos de um anticorpo que mantêm a capacidade de se ligar especificamente a um antígeno (por exemplo, TIM-3 humano, PD-1 humana ou LAG-3 humano, ou uma porção dos mesmos). Demonstrou-se que certos fragmentos de um anticorpo de comprimento total podem desempenhar a função de ligação a antígeno do anticorpo. Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo porção de ligação a antígeno incluem (i) um fragmento Fab: um fragmento monovalente que consiste nos domínios Vl, Vh, Cl. e Ch1; (ii) um fragmento F(ab’)2: um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça; (iii) um fragmento Fd que consiste nos domínios Vh e Ch1 ; (iv) um fragmento Fv consistindo nos domínios Vl e Vh de um único braço de um anticorpo;

(v) um fragmento dAb, que consiste em um domínio Vh; e (vi) uma região de determinação de complementaridade isolada (CDR) capaz de se ligar especificamente a um antígeno. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, Vl e Vh, sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos, usando métodos recombinantes, por um ligante sintético que permite que sejam produzidos como uma única cadeia proteica na qual os domínios Vl e Vh emparelham para formar moléculas monovalentes (conhecidas como Fv de cadeia única (scFv)). Também dentro da invenção estão moléculas de ligação a antígeno que compreendem um Vh e/ou um Vl. No caso de um Vh, a molécula também pode compreender uma ou mais de uma região CH1, de dobradiça, CH2 ou CH3. Tais anticorpos de cadeia única também se destinam a serem incluídos no termo porção de ligação a antígeno” de um anticorpo. Outras formas de anticorpos de cadeia única, tais como diacorpos, também são abrangidas. Os diacorpos são anticorpos bivalentes e biespecíficos em que os domínios Vh e Vl são expressos em uma única cadeia de polipeptídeo, mas usando um ligante que é muito curto para permitir o emparelhamento en

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37/216 tre os dois domínios na mesma cadeia, forçando os domínios a emparelharem com domínios complementares de outra cadeia e criando dois sítios de ligação a antígeno.

[0079] Porções de anticorpo, tais como fragmentos Fab e F(ab’)2, podem ser preparadas a partir de anticorpos totais usando técnicas convencionais, tais como digestão de papaína ou pepsina de anticorpos totais. Além disso, os anticorpos, porções de anticorpos e moléculas de imunoadesão podem ser obtidos usando técnicas padrão de DNA recombinante, por exemplo, conforme descrito neste documento.

[0080] A classe (isótipo) e subclasse de anticorpos descritos aqui podem ser determinadas por qualquer método conhecido na técnica. Em geral, a classe e a subclasse de um anticorpo podem ser determinadas usando anticorpos que são específicos para uma determinada classe e subclasse de anticorpo. Tais anticorpos estão disponíveis comercialmente. A classe e a subclasse podem ser determinadas por ELISA e Western Blot, além de outras técnicas. Alternativamente, a classe e a subclasse podem ser determinadas por sequenciamento de toda ou uma porção das regiões constantes das cadeias leves e/ou pesadas dos anticorpos, comparando suas sequências de aminoácidos com as sequências de aminoácidos conhecidas de várias classes e subclasses de imunoglobulinas, e determinando a classe e a subclasse dos anticorpos. Um isótipo preferido da presente invenção é um isótipo de IgG.

[0081] Ao se referir a resíduos de aminoácidos particulares em uma determinada posição de uma sequência de anticorpo, uma indicação de, por exemplo, 35S se refere à posição e resíduo, isto é, neste caso, indicando que um resíduo de serina (S) está presente na posição 35 da sequência. Da mesma forma, uma indicação de, por exemplo, 13Q+35S refere-se aos dois resíduos nas respectivas posições. Salvo indicação em contrário, todos os números de resíduos de aminoácido de anticorpos referidos nesta divulgação são aqueles sob o esquema de

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38/216 numeração IMGT®.

Anticorpos Anti-PD-1 [0082] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-PD-1 divulgados neste documento podem ser quiméricos, com domínios variáveis derivados de galinhas e regiões constantes humanas, ou podem ser humanizados.

[0083] Os anticorpos anti-PD-1 divulgados neste documento podem ser referidos por um número de 5 dígitos, por exemplo, 12819, ou por um número de 10 dígitos, por exemplo, 12819.15384. Como usado aqui, o número de 5 dígitos refere-se a todos os anticorpos com as sequências CDR1-3 de cadeia pesada e leve mostradas para esse número, enquanto o uso de um número de 10 dígitos refere-se a uma variante humanizada particular. Por exemplo, 12819.15384 é uma variante humanizada particular tendo as sequências CDR de um anticorpo 12819. O número de 5 dígitos abrange, por exemplo, variantes de 10 dígitos que são idênticas, exceto por algumas alterações nas FRs (por exemplo, sem resíduos SY no terminal N da cadeia leve madura ou tendo resíduos SS no lugar de SY). Essas modificações não alteram as propriedades funcionais (por exemplo, ligação a antígeno) dos anticorpos.

[0084] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição compreende um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, em que o anticorpo anti-PD-1 é o anticorpo referido neste documento como anticorpo 12819.15384, 12748.15381,

12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382,

12760.15375 ou 13112.15380 ou uma variante de qualquer um desses, em que a variante pode, por exemplo, conter certas alterações mínimas de aminoácido relativas ao referido anticorpo (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 alterações de aminoácido, que podem ser, por exemplo, nas regiões de quadro) sem perder a especificidade de ligação a antígeno do anticorpo.

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39/216 [0085] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compete pela ligação a PD-1 humana com, ou se liga ao mesmo epítopo de PD-1 humana que, qualquer um dos anticorpos 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382,

12760.15375 e 13112.15380.

[0086] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode competir ou competir de forma cruzada pela ligação a PD-1 com anticorpos 12865, 12892 e 12777 (por exemplo, anticorpos 12865.15377, 12892, 15378 e 12777.15382). Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode competir ou competir de forma cruzada pela ligação a PD-1 com um anticorpo 12819 (por exemplo, anticorpo 12819.15384). Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode competir ou competir de forma cruzada pela ligação a PD-1 com anticorpos 12760 e 13112 (por exemplo, anticorpos

12760.15375 e 13112.15380). Em algumas modalidades, o anticorpo tem um formato de IgG 1 ou lgG2. Em determinadas modalidades, o anticorpo tem um formato de IgG 1.

[0087] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compete ou compete de forma cruzada pela ligação a PD-1 humana com, ou se liga ao mesmo epítopo de PD-1 humana que, um anticorpo cujas CDR1-3 de cadeia pesada (H) e CDR1-3 de cadeia leve (L) compreendem, respectsvamente, as SEQ ID N°s: 228-233, 238-243, 248-253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293 ou 298-303.

[0088] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma H-CDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de H-CDR3 da SEQ ID N°: 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 ou 300.

[0089] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende a H-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 278/478

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3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 228-230, 238-240, 248-250, 258260, 268-270, 278-280, 288-290 ou 298-300.

[0090] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-l tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência de aminoácido à SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296.

[0091] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma VH que compreende a SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296. [0092] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296; e uma CH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 375.

[0093] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma HC que compreende uma sequência de aminoácido de VH da SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296 e a sequência de aminoácido de CH da SEQ ID N°: 375.

[0094] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma LCDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de L-CDR3 da SEQ ID N°: 233, 243, 253, 263, 273, 283, 293 ou 303.

[0095] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende a L-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de L-CDR13, respectivamente, das SEQ ID N°s: 231-233, 241-243, 251-253, 261263, 271-273, 281-283, 291-293 ou 301-303.

[0096] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos

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99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392.

[0097] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-l tem uma VL que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392.

[0098] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-l tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392; e uma CL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 379.

[0099] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma LC que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392 e a sequência de aminoácido de CL da SEQ ID N°: 379.

[00100] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-l compreende qualquer uma das sequências de cadeia pesada acima e qualquer uma das sequências de cadeia leve acima.

[00101] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende uma H-CDR3 e L-CDR3 compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR3 e L-CDR3, respectívamente, das SEQ ID N°s: 230 e 233, 240 e 243, 250 e 253, 260 e 263, 270 e 273, 280 e 283, 290 e 293 ou 300 e 303.

[00102] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendendo as sequências de H-CDR1-3 e L-CDR1-3, respectívamente, das SEQ ID N°s: 228-233, 238-243, 248253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293 ou 298-303.

[00103] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-l compreende

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 280/478

42/216 uma VH que é peto menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, peto menos 95%, pelo menos 96%, peto menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296, e uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, peto menos 92%, peto menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392.

[00104] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma VH que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296, e uma VL que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392.

[00105] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 tem uma HC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 ou 296 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e uma LC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 ou 392 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.

[00106] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 de:

a) SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 238-243, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 248-253, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 258-263, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 268-273, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 278-283, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 288-293, respectivamente; ou

h) SEQ ID N°s: 298-303, respectivamente.

[00107] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 281/478

43/216 uma VH e uma VL tendo as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 236 e 237, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 236 e 392, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 246 e 247, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 256 e 257, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 266 e 267, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 276 e 277, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 286 e 287, respectivamente; ou

i) SEQ ID N°s: 296 e 297, respectivamente.

[00108] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257 e a

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 282/478

44/216 sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

[00109] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-230, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 231-233, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em se

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 283/478

45/216 quência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é peio menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379.

[00110] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 238-240, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ iD N°s: 236 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 284/478

46/216 de aminoácido das SEQ ID N°s: 241-243, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 237 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 238-243, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 237 e 379.

[00111] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 285/478

47/216 aminoácido das SEQ ID N°s: 236 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 241-243, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 392 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 238-243, respectsvamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 392 e 379.

[00112] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 248-250, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de ami

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48/216 noácido da SEQ ID N°: 246;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 246 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 251-253, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 247;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de amlnoácido da SEQ ID N°: 247;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 247 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 248-253, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 247;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 247; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 247 e 379.

[00113] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 258-260, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em se

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 287/478

49/216 quência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 256 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 261-263, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 257 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 258-263, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 257 e 379.

[00114] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 288/478

50/216 de aminoácido das SEQ ID N°s: 268-270, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 266 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 271-273, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 267 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 268-273, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 267 e 379.

[00115] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é seieciona

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 289/478

51/216 do do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 278-280, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 276 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 281-283, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 277 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 278-283, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID

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52/216

N°s: 277 e 379.

[00116] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 288-290, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 286 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 291-293, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 287 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 288-293, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de ami

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53/216 noácido da SEQ ID N°: 286 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 287 e 379.

[00117] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 298-300, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 296 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 301-303, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 297;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 297;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 297 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 298-303, respectsvamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 297;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296 e cuja VL compreende a sequência de ami

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54/216 noácido da SEQ ID N°: 297; e

I) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 297 e 379.

[00118] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a PD1 humana com uma Kd de pelo menos 900, pelo menos 850, pelo menos 800, pelo menos 750, pelo menos 700, pelo menos 650, pelo menos 600, pelo menos 550, pelo menos 500, pelo menos 450, pelo menos 400, pelo menos 350, pelo menos 300, pelo menos 250, pelo menos 200, pelo menos 150, pelo menos 100, pelo menos 50, pelo menos 40, pelo menos 30 ou pelo menos 20 pM. Em determinadas modalidades, a Kd é determinada usando ressonância de plasmon de superfície. Em modalidades particulares, os anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno se ligam a PD-1 humana com maior afinidade do que nlvolumabe, pembrolizumabe ou ambos.

[00119] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a PD1 de cinomolgo com uma Kd de pelo menos 9000, pelo menos 8000, pelo menos 7000, pelo menos 6000, pelo menos 5000, pelo menos 4000, pelo menos 3000, pelo menos 2500, pelo menos 2000, pelo menos 1500, pelo menos 1000, pelo menos 900, pelo menos 800, pelo menos 700, pelo menos 600, pelo menos 500, pelo menos 400, pelo menos 300, pelo menos 200, pelo menos 100, pelo menos 75, pelo menos 50, pelo menos 25, pelo menos 20, pelo menos 15, pelo menos 10 ou pelo menos 5 pM. Em determinadas modalidades, a Kd é determinada usando ressonância de plasmon de superfície.

[00120] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a PDPetição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 293/478

55/216 de camundongo com uma Kd de pelo menos 1000, pelo menos 950, pelo menos 900 ou pelo menos 850 pM. Em determinadas modalidades, a Kd é determinada usando ressonância de plasmon de superfície.

[00121] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode inibir a interação de PD-1 com PD-L1 em pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 81%, pelo menos 82%, pelo menos 83%, pelo menos 84%, pelo menos 85%, pelo menos 86%, pelo menos 87%, pelo menos 88%, pelo menos 89%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% em uma concentração de 10 pg/ml em um ensaio de competição por citometria de fluxo. Em determi nadas modalidades, os anticorpos anti-PD~1 ou porções de ligação a antígeno podem inibir a interação de PD-1 com PD-L1 em pelo menos 83%. [00122] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiPD-1 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode bloquear a ligação de PD-L1 e PD-L2 a PD-1 em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% em uma concentração de 10 pg/ml, conforme determinado por análise de Interferometria de Biocamada. Em determinadas modalidades, os anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno bloqueiam a ligação de PD-L1 e PD-L2 a PD-1 em pelo menos 90%.

[00123] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno descrito aqui tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) se liga a PD-1 humana com uma Kd de 750 pM ou me

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56/216 nos;

b) se liga a PD-1 de cinomolgo com uma Kd de 7 nM ou menos;

c) se liga a PD-1 de camundongo com uma Kd de 1 nM ou menos;

d) não se liga a PD-1 de rato;

e) aumenta a secreção de IL-2 em um ensaio de sangue total de SEB;

i) inibe o crescimento tumoral in vivo.

[00124] Exemplos de tal anticorpo incluem, sem limitação, um anticorpo 12819 (tendo as propriedades a-i); anticorpos 12748, 12892 e 12777 (tendo pelo menos as propriedades a, b, e e-h); anticorpos 12865 e 12796 (tendo pelo menos as propriedades a, b, e, f, e h), e anticorpos 12760 e 13112 (tendo pelo menos as propriedades a, b, e, e f). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno tem todas as referidas propriedades. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, b, e e-h. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, b, e, f, e h. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, b, e, e f.

[00125] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PD-1 ou uma

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57/216 porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui se liga a um epítopo de PD-1 que inclui pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro ou pelo menos cinco) dos seguintes resíduos da SEQ ID N°: 388: V44, V64, L128, P130, K131, A132, E136 e T145. Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de PD-1 que inclui resíduos V64, L128, P130, K131 e A132 da SEQ ID N°: 388 (tal como um anticorpo 12819, por exemplo, anticorpo 12819.15384). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de PD-1 que inclui resíduos K131 e E136 da SEQ ID N°: 388 (tal como um anticorpo 12865, por exemplo, anticorpo 12865.15377). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de PD-1 que inclui resíduos V44 e T145 da SEQ ID N°: 388 (tal como um anticorpo 13112, por exemplo, anticorpo 13112.15380).

[00126] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição compreende um anticorpo anti~PD~1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo que se liga a um epítopo de PD-1 compreendendo o resíduo de aminoácido K131 da SEQ ID N°: 388 (por exemplo, um anticorpo 12819 ou 12865). Em algumas modalidades, o epítopo ainda compreende os resíduos de aminoácido P130 e A132, e pode adicionalmente compreender os resíduos de aminoácido V64 e L128 (por exemplo, um anticorpo 12819). Em algumas modalidades, o epítopo ainda compreende o resíduo de aminoácido E136 (por exemplo, um anticorpo 12865).

[00127] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui se liga a um epítopo de PD-1 que compreende os resíduos 56-64, 69-90 e/ou 122140 da SEQ ID N°: 388. Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de PD-1 que compreende os resíduos 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388 (tais como os anti

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58/216 corpos 12819 e 12865, por exemplo, anticorpos 12819.15384 e

12865.15377). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antigeno se liga a um epítopo de PD-1 que compreende os resíduos 56-64, 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388 (por exemplo, um anticorpo 12819). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antigeno se liga a um epítopo de PD-1 que compreende os resíduos 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388 (por exemplo, um anticorpo 12865). Em algumas modalidades, o anticorpo ou porção se liga a resíduos 69-75 (ou um fragmento dos mesmos, tal como a um, dois, três, quatro, cinco ou seis fragmentos de resíduo) da SEQ ID N°: 388 (tais como anticorpos 12819 e 12865, por exemplo, anticorpos 12819.15384 e

12865.15377). Em algumas modalidades, o anticorpo ou porção se liga a resíduos 136-140 (ou um fragmento dos mesmos, tais como a um, dois, três, ou quatro fragmentos de resíduo) da SEQ ID N°: 388 (tais como anticorpos 12819 e 12865, por exemplo, anticorpos 12819.15384 e

12865.15377). Em algumas modalidades, o anticorpo ou porção se liga a resíduos 69-75 (ou um fragmento dos mesmos) e resíduos 136-140 (ou um fragmento dos mesmos) da SEQ ID N°: 388, (tais como anticorpos 12819 e 12865, por exemplo, anticorpos 12819.15384 e 12865.15377). Um epítopo com qualquer combinação dos resíduos acima é também contemplado.

[00128] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo, conforme descrito aqui, é um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antigeno descrito na Publicação de Patente PCT WO 2017/055547 ou Pedido de Patente PCT PCT/EP2017/079615, que são incorporados aqui por referência em sua totalidade.

Anticorpos Anti-ΊΊ M-3 [00129] Em uma modalidade particular, os anticorpos anti-TIM-3 divulgados aqui são anticorpos humanos gerados a partir de ratos transgêni

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59/216 cos que são capazes de gerar anticorpos com idlótipos humanos.

[00130] Os anticorpos anti-TIM-3 divulgados aqui podem ser referidos por um número de 5 dígitos, por exemplo 20131, ou por um número de 10 dígitos, por exemplo 15086.16837. Números de 10 dígitos com os mesmos primeiros cinco dígitos são derivados do mesmo anticorpo de origem, como no caso dos anticorpos 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144. Espera-se que tais anticorpos, que compartilham as mesmas seis CDRs, tenham as mesmas ou substancialmente as mesmas propriedades de ligação ao alvo. Como será evidente a partir das sequências de DNA e proteína providas aqui, as variantes

15086.16837, 15086.17145 e 15086.17144 têm apenas uma única diferença de amlnoácido em uma sequência de VH em comparação com o anticorpo 15086 de origem (15086.15086), nomeadamente E, em vez de Q, na posição 6, ao passo que as sequências de aminoácido de VL são Idênticas. Será também evidente que essas variantes diferem prlncipalmente por seu formato/subclasse de anticorpo, isto é:

15086.15086: lgG1

15086.16837: lgG1 LALA

15086.17145: lgG2

15086.17144: lgG4 [00131] A sequência de VH dos anticorpos de subclasse lgG2 e lgG4 é a mesma que a da variante IgG 1 LALA. A sequência de VL é a mesma para todas as quatro subclasses de anticorpo.

[00132] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição compreende um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, em que o anticorpo antl-TIM-3 é o anticorpo referido neste documento como anticorpo 15086.17145, 15086.15086,

15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 ou 20621 ou uma variante de qual

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60/216 quer um desses, em que a variante pode, por exemplo, conter certas alterações mínimas de aminoácido relativas ao referido anticorpo (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 alterações de aminoácido, que podem ser, por exemplo, nas regiões de quadro) sem perder a especificidade de ligação a antígeno de anticorpo.

[00133] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compete ou compete de forma cruzada pela ligação a TIM-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de TIM-3 humano que, o anticorpo 15086.15086 tendo o formato de lgG1, anticorpo 15086.16837 tendo o formato de lgG1 LALA, anticorpo 15086.17145 tendo o formato de lgG2, ou anticorpo

15086.17144 tendo o formato de lgG4. Em algumas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG1 ou lgG2. Em determinadas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG2.

[00134] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compete ou compete de forma cruzada pela ligação a TIM-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de TIM-3 humano que, o anticorpo 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 ou 20621. Em algumas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG1 ou lgG2. Em determinadas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG2.

[00135] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compete ou compete de forma cruzada pela ligação a TIM-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de TIM-3 humano que, um anticorpo cuja CDR1-3 de cadeia pesada (H) e CDR1-3 de cadeia leve (L) compreendem, respectivamente, as SEQ ID N°s: 8-13, 18-23, 28-33, 38-43, 48-53, 58-63, 68-73, 78-83, 88-93, 98-103, 108-113, 118-123, 128-133, 138-143, 148-153, 158-163, 168-173, 178-183, 188-193, 198-203, 208-213 ou 218-223.

[00136] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende uma H-CDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de H-CDR3

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61/216 da SEQ ID N°: 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210 ou 220.

[00137] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende uma H-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de HCDR1-3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 8-10, 18-20, 28-30, 38-40, 48-50, 58-60, 68-70, 78-80, 88-90, 98-100, 108-110, 118-120, 128-130, 138-140, 148-150, 158-160, 168-170, 178-180, 188-190, 198-200, 208210 ou 218-220.

[00138] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência de aminoácido à SEQ ID N°: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216.

[00139] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que compreende SEQ ID N°: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216.

[00140] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 3, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216; e uma CH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 374.

[00141] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma HC que compreende uma sequência de aminoácido de VH da SEQ ID N°: 3, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216 e a sequência de aminoácido de CH da SEQ ID N°: 374.

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62/216 [00142] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216; e uma CH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 375, 376 ou 377.

[00143] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma HC que compreende uma sequência de aminoácido de VH da SEQ ID N°: 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206 ou 216 e a sequência de aminoácido de CH da SEQ ID N°: 375, 376 ou 377. Em determinadas modalidades, a sequência de aminoácido de CH é SEQ ID N°: 377.

[00144] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende uma L-CDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de L-CDR3 da SEQ ID N°: 13, 23, 33, 43, 53, 63, 73, 83, 93, 103, 113, 123, 133, 143, 153, 163, 173, 183, 193, 203, 213 ou 223.

[00145] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende L-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de L-CDR1-3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 11-13, 21-23, 31-33, 41-43, 51-53, 6163, 71-73, 81-83, 91-93, 101-103, 111-113, 121-123, 131-133, 141-143, 151-153, 161-163, 171-173, 181-183, 191-193, 201-203, 211-213 ou 221223.

[00146] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217.

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 301/478

63/216 [00147] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VL que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217.

[00148] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217; e uma CL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 378.

[00149] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma LC que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217 e a sequência de aminoácido de CL da SEQ ID N°: 378.

[00150] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende qualquer uma das sequências de cadeia pesada acima e qualquer uma das sequências de cadeia leve acima.

[00151] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende uma H-CDR3 e L-CDR3 compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR3 e L-CDR3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 10 e 13, 20 e 23, 30 e 33, 40 e 43, 50 e 53, 60 e 63, 70 e 73, 80 e 83, 90 e 93, 100 e 103, 110 e 113, 120 e 123, 130 e 133, 140 e 143, 150 e 153, 160 e 163, 170 e 173, 180 e 183, 190 e 193, 200 e 203, 210 e 213 ou 220 e 223.

[00152] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendendo as sequências de H-CDR1-3 e L-CDR1-3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 8-13, 18-23, 28-33, 38-43,

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 302/478

64/216

48-53, 58-63, 68-73, 78-83, 88-93, 98-103, 108-113, 118-123, 128-133, 138-143, 148-153, 158-163, 168-173, 178-183, 188-193, 198-203, 208213 ου 218-223.

[00153] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, ou 216, e uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217.

[00154] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma VH que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3, 7, 16, 26, 36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186, 196, 206, ou 216, e uma VL que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4, 17, 27, 37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187, 197, 207 ou 217.

[00155] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 tem uma HC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3, 7, 16, 26,

36, 46, 56, 66, 76, 86, 96, 106, 116, 126, 136, 146, 156, 166, 176, 186,

196, 206 ou 216 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378; e uma LC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4, 17, 27,

37, 47, 57, 67, 77, 87, 97, 107, 117, 127, 137, 147, 157, 167, 177, 187,

197, 207 ou 217 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377.

[00156] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 de:

a) SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 303/478

65/216

b) SEQ ID N°s: 18-23, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 28-33, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 38-43, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 48-53, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 58-63, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 68-73, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 78-83, respectivamente;

i) SEQ ID N°s: 88-93, respectivamente;

j) SEQ ID N°s: 98-103, respectivamente;

k) SEQ ID N°s: 108-113, respectivamente;

l) SEQ ID N°s: 118-123, respectivamente;

m) SEQ ID N°s: 128-133, respectivamente;

n) SEQ ID N°s: 138-143, respectivamente;

o) SEQ ID N°s: 148-153, respectivamente;

p) SEQ ID N°s: 158-163, respectivamente;

q) SEQ ID N°s: 168-173, respectivamente;

r) SEQ ID N°s: 178-183, respectivamente;

s) SEQ ID N°s: 188-193, respectivamente;

t) SEQ ID N°s: 198-203, respectivamente;

u) SEQ ID N°s: 208-213, respectivamente; ou

v) SEQ ID N°s: 218-223, respectivamente.

[00157] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreende um domínio variável de cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve tendo as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 3 e 4, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 16 e 17, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 26 e 27, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 36 e 37, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 46 e 47, respectivamente;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 304/478

66/216

g)	SEQ ID N°s:	56 e 57, respectivamente;
h)	SEQ ID N°s:	66 e 67, respectivamente;
0	SEQ ID N°s:	76 e 77, respectivamente;
j)	SEQ ID N°s:	86 e 87, respectivamente;
k)	SEQ ID N°s:	96 e 97, respectivamente;
D	SEQ ID N°s:	106 e 107, respectivamente;
m)	SEQ ID N°s:	116 e 117, respectivamente;
n)	SEQ ID N°s:	126 e 127, respectivamente;
o)	SEQ ID N°s:	136 e 137, respectivamente;
P)	SEQ ID N°s:	146 e 147, respectivamente;
q)	SEQ ID N°s:	156 e 157, respectivamente;
r)	SEQ ID N°s:	166 e 167, respectivamente;
s)	SEQ ID N°s:	176 e 177, respectivamente;
t)	SEQ ID N°s:	186 e 187, respectivamente;
u)	SEQ ID N°s:	196 e 197, respectivamente;
V)	SEQ ID N°s:	206 e 207, respectivamente; ou
w)	SEQ ID N°s:	216 e 217, respectivamente.
[00158] Em	algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 compreen-
de: a)	uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da

SEQ ID N°: 7 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 305/478

67/216

SEQ ID N°: 17 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378:

k) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 306/478

68/216

SEQ ID N°: 96 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

r) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 307/478

69/216

SEQ ID N°: 167 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

[00159] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-10, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3 ou 7;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3 ou 7;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 308/478

70/216 aminoácido das SEQ ID N°s: 3 e 374, ou a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 7 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 11-13, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3 ou 7 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3 ou 15 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 3 e 374, ou a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 7ea sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378.

[00160] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 18-20, respectivamente;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 309/478

71/216

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 21-23, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 17 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 18-23, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 17 e 378.

[00161] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 310/478

72/216

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 28-30, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 31-33, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 27;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 27;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 27 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 28-33, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 27;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 27; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 27 e 378.

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73/216 [00162] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 38-40, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 41-43, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 37 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 38-43, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°:

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374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 37 e 378.

[00163] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 48-50, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 51-53, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 47 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 48-53, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47; e

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75/216

I) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 47 e 378.

[00164] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 58-60, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 56;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de ami~ noácido da SEQ ID N°: 56;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 56 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 61-63, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 57 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 58-63, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 56 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de ami

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76/216 noácido da SEQ ID N°: 56 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57; e

I) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 56 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 57 e 378.

[00165] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 68-70, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é peio menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 71-73, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 67;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 67;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 67 e 378;

I) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 68-73, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ

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ID N°: 67;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 67; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 67 e 378.

[00166] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 78-80, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 81-83, respectívamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 77 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 78-83, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em se

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78/216 quência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 77 e 378.

[00167] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 88-90, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 91-93, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 87 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 88-93, respectiva

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79/216 mente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 87 e 378.

[00168] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 98-100, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 101-103, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 97 e 378;

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80/216

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 98-103, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 97 e 378.

[00169] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 108-110, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 111-113, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107;

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81/216

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 107 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 108-113, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 107 e 378.

[00170] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 118-120, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 121-123, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 117;

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82/216

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 117;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 117 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 118-123, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 117;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 117; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 117 e 378.

[00171] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 128-130, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 131-133, respectivamente;

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f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 127;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 127;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 127 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 128-133, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 127;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 127; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 127 e 378.

[00172] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 138-140, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

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84/216

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 141-143, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 137 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 138-143, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 137 e 378.

[00173] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 148-150, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 323/478

85/216

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 151-153, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 147 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 148-53, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 147 e 378.

[00174] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 158-160, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 324/478

86/216

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 161-163, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 157 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 158-163, respectsvamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 157 e 378.

[00175] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 168-170, respectivamente;

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 325/478

87/216

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 171-173, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 167 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 168-173, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 167 e 378.

[00176] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 326/478

88/216

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 178-80, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 181-183, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 177 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 178-183, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177:

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 177 e 378.

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 327/478

89/216 [00177] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 188-190, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 191-193, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 187 e 378;

I) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 188-193, respectsvamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°:

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374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 187 e 378.

[00178] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 198-200, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 201-203, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 197 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 198-203, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197; e

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I) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 197 e 378.

[00179] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 208-210, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 206;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 206;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 206 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 211-213, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 207 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 208-213, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 206 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de ami

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92/216 noácido da SEQ ID N°: 206 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207; e

I) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 206 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 207 e 378.

[00180] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 218-220, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 221-223, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 217;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 217;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 217 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 218-223, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ

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ID N°: 217:

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 217; e

l) um anticorpo cuja HC compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 217 e 378.

[00181] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiTIM-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode inibir a ligação de ligantes, tais como galectina~9, CEACAM1, HMGB-1 e fosfatidilserina a TIM-3.

[00182] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiTIM-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode aumentar a atividade de células NK. Em algumas modalidades, essa atividade pode mediar ADCC.

[00183] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui pode ativar células dendríticas, causando sua maturação e, assim, sua capacidade de estimular células T. Embora não desejando estar vinculado a qualquer teoria particular, acredita-se que os anticorpos anti-TIM-3 descritos aqui funcionam como ativadores de células dendríticas de TIM-3, pelo que seu efeito nas células dendríticas serve para estimular células T. Em uma configuração relacionada a tumor, os anticorpos anti-TIM-3 causariam, assim, a maturação e ativação de células dendríticas associadas a tumor, resultando na ativação de células T específicas de tumor.

[00184] Em algumas modalidades, a administração de um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui pode diretamente ativar células T.

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94/216 [00185] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antigeno descrito aqui tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

d) se liga a ΤΊΜ-3 de cinomolgo com um EC50 de 46 nM ou menos, conforme medido por ELISA;

e) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação iinfocitária mista unidirecional;

f) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação Iinfocitária mista bidirecional;

g) aumenta a secreção de TNF-α em um ensaio de reação Iinfocitária mista unidirecional;

h) aumenta a secreção de TNF-α a partir de células dendríticas; e

i) inibe a interação de TIM-3 com fosfatidilserina.

[00186] Exemplos de tal anticorpo incluem, sem limitação, anticorpo 15086.15086 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, g, h); anticorpo 15086.17145 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, g, h, i), anticorpo 15086.16837 ou 15086.17144 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d), anticorpo 20293 ou 20131 (tendo pelo menos as propriedades a, b, c, d, e, f, h), anticorpo 20362 (tendo pelo menos as propriedades c, e, f, h), e anticorpo 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, ou 20621 (tendo pelo menos as propriedades c, d, e, f, h). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antigeno tem todas as referidas propriedades. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3

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95/216 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, c, d, e, g, h. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, c, d, e, g, h, i. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, c, d. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades a, b, c, d, e, f, h. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades c, e, f, h. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno tem pelo menos as propriedades c, d, e, f, h.

[00187] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui se liga a um epítopo de TIM-3 que inclui pelo menos um (por exemplo, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito ou pelo menos nove) dos seguintes resíduos da SEQ ID N°: 389: P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118 e D120. Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de TIM-3 que inclui resíduos P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118 e D120 da SEQ ID N°: 389 (tal como o anticorpo 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145 ou 15086.17144). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de TIM-3 que inclui resíduos F61, R69, e 1117 da SEQ ID N°: 389 (tal como o anticorpo 20293). Em determinadas modalidades, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno se liga a um epítopo de TIM-3 que inclui resíduos P50, F61, E62, 1117, M118e D120 da SEQ ID N°: 389 (tal como o anticorpo 20131).

[00188] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo se liga a um epítopo de TIM-3 compreendendo resíduos de aminoácido F61 e 1117 da SEQ ID N°: 389 (por

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96/216 exemplo, anticorpo 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145,

15086.17144, 20293 ou 20131). Em algumas modalidades, o epítopo ainda compreende resíduo de aminoácido R69 (por exemplo, anticorpo 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 ou 20293). Em algumas modalidades, o epítopo ainda compreende P50, E62, M118 e D120 (por exemplo, anticorpo 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145,

15086.17144 ou 20131) e pode adicionalmente compreender resíduos de aminoácido V60 e G64 (por exemplo, anticorpo 15086.15086,

15086.16837, 15086.17145 ou 15086.17144).

[00189] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui se liga a um epítopo de TIM-3 que inclui pelo menos um (por exemplo, pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis, pelo menos sete, pelo menos oito ou pelo menos nove) dos seguintes resíduos da SEQ ID N°: 236: P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118, e D120. Um epítopo com qualquer combinação dos resíduos acima é contemplado.

[00190] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui se liga a um epítopo de TIM-3 que compreende resíduos 62-67 e/ou 114-117 da SEQ ID N°: 389. Em algumas modalidades, o anticorpo ou porção se liga a resíduos 62-67 (ou um fragmento dos mesmos, tais como a um, dois, três, quatro ou cinco fragmentos de resíduo) da SEQ ID N°: 389 (por exemplo, anticorpos 15086.15086, 15086.16837, 15086.17145, 15086.17144 e 20293). Em algumas modalidades, o anticorpo ou porção se liga a resíduos 114-117 (ou um fragmento dos mesmos, tais como a um, dois ou três fragmentos de resíduo) da SEQ ID N°: 389 (por exemplo, anticorpo 20131). Um epítopo com qualquer combinação dos resíduos acima é também contemplado.

[00191] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção

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97/216 de ligação a antígeno do mesmo não compete pela ligação a TIM-3 com ABTIM3 (da Publicação de Patente PCT WO 2015/117002) e/ou mAb15 (da Publicação de Patente PCT WO 2016/111947). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno não se liga ao mesmo epítopo que ABTIM3 e/ou mAB15; por exemplo, o anticorpo ou porção se liga a um ou mais resíduos em TIM-3 que não são ligados por ABTIM3 e/ou mAb15.

[00192] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui é um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno descrito na Publicação de Patente PCT WO 2017/178493, que é aqui incorporada por referência em sua totalidade.

Anticorpos Anti-LAG-3 [00193] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-LAG-3 divulgados aqui são anticorpos humanos gerados a partir de ratos transgênicos que são capazes de gerar anticorpos com idiótipos humanos. Em outra modalidade, os anticorpos são anticorpos quiméricos derivados de galinha compreendendo sequências de CDR de galinha e regiões de quadro humanas, em que as regiões de quadro foram submetidas à humanização.

[00194] Uma vantagens dos novos anticorpos anti-LAG-3 descritos aqui é que eles são capazes de aumentar a atividade de células T, conforme medido por produção elevada de IL-2. Embora não desejando estar vinculado a qualquer teoria particular, acredita-se que os anticorpos anti-LAG-3 são capazes de bloquear a interação de LAG-3 com seus ligantes putativos, tais como MHCII e LSECtin. Os anticorpos podem realizar isso diretamente através de bloqueio da região de ligação a ligante ou através da indução de internalização de LAG-3. Outra vantagem potencial dos anticorpos anti-LAG-3 descritos aqui é um baixo nível de funções efetoras secundárias em anticorpos tendo as mutações LALA

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98/216 (L234A/L235A), que dificultam a significativa ligação de anticorpo aFcgR humano (receptores de Fc gama) e, portanto, a depleção de células T efetoras.

[00195] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição compreende um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo, em que o anticorpo anti-LAG-3 é o anticorpo referido neste documento como anticorpo 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 ou 15011 ou uma variante de qualquer um desses, em que a variante pode, por exemplo, conter certas alterações mínimas de aminoácido relativas ao referido anticorpo (por exemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 alterações de aminoácido, que podem ser, por exemplo, nas regiões de quadro) sem perder a especificidade de ligação a antigeno de anticorpo.

[00196] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3, ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo, compete ou compete de forma cruzada pela ligação a LAG-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que, o anticorpo 15646, 15532, 15723, 15595, 15431, 15572 ou 15011. Em algumas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG1 ou lgG2. Em determinadas modalidades, o anticorpo tem um formato de lgG2.

[00197] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compete ou compete de forma cruzada pela ligação a LAG-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que, um anticorpo cuja CDR1-3 de cadeia pesada (H) e CDR1-3 de cadeia leve (L) compreendem, respectivamente, as SEQ ID N°s: 308-313, 318-323, 328-333, 338-343, 348-353, 358-363 ou 368-373.

[00198] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende uma H-CDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de HCDR3 da SEQ ID N°: 310, 320, 330, 340, 350, 360 ou 370.

[00199] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreen

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99/216 de uma H-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de HCDR1-3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 308-310, 318-320, 328-330, 338-340, 348-350, 358-360 ou 368-370.

[00200] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência de aminoácido à SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366.

[00201] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VH que compreende SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366.

[00202] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366; e uma CH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 375.

[00203] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma HC que compreende a sequência de aminoácido de VH da SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366 e a sequência de aminoácido de CH da SEQ ID N°: 375.

[00204] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende uma L-CDR3 compreendendo a sequência de aminoácido de L-CDR3 da SEQ ID N°: 313, 323, 333, 343, 353, 363 ou 373.

[00205] Em algumas modalidades, o anticorpo antl-LAG-3 compreende L-CDR1-3 compreendendo as sequências de aminoácido de L-CDR13, respectivamente, das SEQ ID N°s: 311-313, 321-323, 331-333, 341343, 351-353, 361-363 ou 371-373.

[00206] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%,

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100/216 pelo menos 96%, peto menos 97%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347, 357 ou 367.

[00207] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VL que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347, 357 ou 367.

[00208] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, peto menos 96%, pelo menos 97%, peto menos 98% ou peto menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347 ou 357; e uma CL que é peto menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98% ou peto menos 99%) idêntica em sequência à SEQ ID N°: 378.

[00209] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma LC que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347 ou 357 e a sequência de aminoácido de CL da SEQ ID N°: 378. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma LC que compreende a sequência de aminoácido de VL da SEQ ID N°: 367 e a sequência de aminoácido de CL da SEQ ID N°: 379.

[00210] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende qualquer uma das sequências de cadeia pesada acima e qualquer uma das sequências de cadeia leve acima.

[00211] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende uma H-CDR3 e L-CDR3 compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR3 e L-CDR3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 310 e 313, 320 e 323, 330 e 333, 340 e 343, 350 e 353, 360 e 363 ou 370 e 373.

[00212] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendendo as sequências de H-CDR1-3 e L-CDR1-3, respectivamente, das SEQ ID N°s: 308-313, 318-323, 328

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333, 338-343, 348-353, 358-363 ou 368-373.

[00213] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VH que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366, e uma VL que é pelo menos 90% (por exemplo, pelo menos 92%, pelo menos 95%, pelo menos 98% ou pelo menos 99%) idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347, 357 ou 367.

[00214] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma VH que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366, e a VL que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347, 357 ou 367.

[00215] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma HC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e uma LC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307, 317, 327, 337, 347 ou 357 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378.

[00216] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 tem uma HC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306, 316, 326, 336, 346, 356 ou 366 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375; e uma LC que compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.

[00217] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 de:

a) SEQ ID N°s: 308-313, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 328-333, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 338-343, respectivamente;

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102/216

e) SEQ ID N°s: 348-353, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 358-363, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 368-373, respectivamente.

[00218] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende um domínio variável de cadeia pesada e um domínio variável de cadeia leve tendo as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 306 e 307, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 326 e 327, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 336 e 337, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 346 e 347, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 356 e 357, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 366 e 367, respectivamente.

[00219] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337 e a

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103/216 sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

[00220] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 308-310, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 306 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 311-313, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de

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104/216 aminoácido das SEQ ID N°s: 307 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 308-313, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 306 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 307 e 378.

[00221] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-320, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 321-323, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317;

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105/216

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[00222] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 328-330, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 326 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 331-333, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 327;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de ami

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106/216 noácido da SEQ ID N°: 327;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 327 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 328-333, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% Idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 327;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 327; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 326 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 327 e 378.

[00223] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 338-340, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 336 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 341-343, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337;

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107/216

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 337 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 338-343, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337:

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 336 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 337 e 378.

[00224] Em algumas modalidades, o anticorpo antl-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 348-350, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 346 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 351-353, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em se

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108/216 quência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 347 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 348-353, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 346 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 347 e 378.

[00225] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 358-360, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 356 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 361-363, respectivamente;

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109/216

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 357 e 378;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 358-363, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 356 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 357 e 378.

[00226] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 é selecionado do grupo que consiste em:

a) um anticorpo cuja H-CDR1-3 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 368-370, respectivamente;

b) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366;

c) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366;

d) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ iD N°s: 366 e 375;

e) um anticorpo cuja L-CDR1-3 compreende as sequências

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110/216 de aminoácido das SEQ ID N°s: 371-373, respectivamente;

f) um anticorpo cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367;

g) um anticorpo cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367;

h) um anticorpo cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 367 e 379;

i) um anticorpo cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 368-373, respectivamente;

j) um anticorpo cuja VH é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366 e cuja VL é pelo menos 90% idêntica em sequência à sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367;

k) um anticorpo cuja VH compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366 e cuja VL compreende a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367; e

l) um anticorpo cuja HC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 366 e 375; e cuja LC compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 367 e 379.

[00227] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 humano com um EC50 de, por exemplo, 0,2 nM ou menos, 0,15 nM ou menos, 0,1 nM ou menos, 0,09 nM ou menos, 0,08 nM ou menos, 0,07 nM ou menos, 0,06 nM ou menos, 0,05 nM ou menos, ou 0,04 nM ou menos. Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 de cinomolgo com, por exemplo, um EC50 de 0,4 nM ou menos, 0,3 nM ou menos, 0,2 nM ou menos, 0,1 nM ou menos, 0,09 nM ou menos, 0,08 nM ou menos, 0,07 nM ou menos, 0,06 nM ou menos, 0,05 nM

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111/216 ou menos, 0,04 nM ou menos, ou 0,03 nM ou menos. Em modalidades particulares, qualquer um dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 humano com, por exemplo, um EC50 de 0,1 nM ou menos e LAG-3 de cinomolgo com, por exemplo, um EC50 de 0,3 nM ou menos.

[00228] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 humano com um EC50 de, por exemplo, 0,1 nM ou menos. Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 de ci nomolgo com, por exemplo, um EC50 de 0,3 nM ou menos. Em modalidades particulares, qualquer um dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 humano com, por exemplo, um EC50 de 0,1 nM ou menos e LAG-3 de cinomolgo com, por exemplo, um EC50 de 0,3 nM ou menos.

[00229] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode inibir a ligação de ligantes, tais como MHC classe II (MHCII) ou LSECtin a LAG-3.

Por exemplo, a 20 pg/ml, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno pode reduzir a ligação de LAG-3 a MHCII em pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo pelo menos 60%, pelo pelo menos 80%, pelo pelo menos 91%, pelo pelo menos 95%, pelo menos 45%, pelo menos menos 65%, pelo menos menos 85%, pelo menos menos 92%, pelo menos menos 96%, pelo menos

50%, pelo menos 55% 70%, pelo menos 75% 89%, pelo menos 90% 93%, pelo menos 94% 97%, pelo menos 98% pelo menos 99%, ou 100% em comparação com a ligação na presença de um anticorpo controle negativo. Em uma modalidade, o anticorpo antiLAG-3 ou proteína de ligação a antígeno pode reduzir a ligação de LAG3 a MHCII em mais de 85% em comparação com o controle negativo. Em uma modalidade, o anticorpo anti-LAG-3 ou proteína de ligação a antíge

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112/216 no pode reduzir a ligação de LAG-3 a MHCII por entre cerca de 25% e 95%, 30% e 90%, ou 35% e 85%, em comparação com o controle negativo.

[00230] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode bloquear a ligação entre LAG-3 e MHC classe II, por exemplo, LAG-3 humano expresso em células Jukart e MHC humana classe II expressas em células Raji (por exemplo, em uma concentração de 0,1 pg/ml, 0,5 pg/ml, 1 pg/ml, 5 pg/ml, 10 pg/ml, 20 pg/ml, 30 pg/ml, 40 pg/ml ou 50 pg/ml).

[00231] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 humano com uma Kd de 5,0 x 10~⁸ ou menos, 4,0 x 10'^s ou menos, 3,0 x 10'⁸ ou menos, 2,0 x 10^-8 ou menos, 1,0 x 10’⁸ ou menos, 9,0 x 10'⁹ou menos, 8,0 x 10’⁹ ou menos, 7,0 x 10’⁹ ou menos, 6,0 x 10⁹ ou menos, 5,0 x 10'⁹ ou menos, 4,0 x 10 ⁹ ou menos, 3,0 x 10 ⁹ ou menos, 2,0 x 10'⁹ ou menos, ou 1,0 x 10~⁹ ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície.

[00232] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 de cinomolgo com uma Kd de 1,5 x 10⁷ ou menos, 1,0 x 10’⁷ ou menos, 9,0 x 10 ⁸ ou menos, 8,0 x 10⁸ ou menos, 7,0 x 10“⁸ ou menos, 6,0 x 10'⁸ ou menos, 5,0 x 10 ⁸ ou menos, 4,0 x 10'⁸ ou menos, 3,0 x 10'^sou menos, 2,0 x 10’⁸ ou menos, ou 1,0 x 10’⁸ ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície.

[00233] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antígeno descritos aqui pode se ligar a LAG-3 de camundongo com uma Kd de 5,0 x 10’⁸ ou menos, 4,5 x 10'⁸ ou menos, 4,0 x 10 ⁸ ou menos, 3,5 x 10'^s ou menos, ou 3,0 x 10'⁸ ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície.

[00234] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos anti

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LAG-3 ou porções de ligação a antigeno descritos aqui pode estimular a produção de IL-2, por exemplo, a partir de PBMCs estimuladas por SEB. [00235] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antigeno descritos aqui pode reduzir níveis solúveis e/ou celulares de LAG-3, por exemplo, em uma linhagem de célula T humana (tal como uma linhagem de célula T humana sobreexpressando LAG-3).

[00236] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antigeno descritos aqui pode induzir regressão de crescimento tumoral e/ou crescimento tumoral retardado in vivo.

[00237] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antigeno descritos aqui pode se ligar a um epítopo diferente de LAG-3 humano do anticorpo 25F7-Lag3.5.

[00238] Em algumas modalidades, qualquer um dos anticorpos antiLAG-3 ou porções de ligação a antigeno descritos aqui pode ativar células T, causando atividade antitumoral melhorada.

[00239] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antigeno descrito aqui tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

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114/216

d) se liga a LAG-3 humano com um EC50 de 0,1 nM ou menos, conforme medido por citometria de fluxo;

j) reduz os níveis celulares de LAG-3 em células T humanas;

k) reduz os níveis solúveis de LAG-3 na cultura de células T humanas;

l) induz a regressão de crescimento tumoral in vivo;

m) retarda o crescimento tumoral in vivo; e

n) não se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que o anticorpo 25F7-Lag3.5.

[00240] Exemplos de tal anticorpo incluem, sem limitação, anticorpo 15646 (tendo pelo menos as propriedades b, c, d, e, i, n), anticorpo 15532 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, i, j, k, m, n), anticorpo 15723 (tendo pelo menos as propriedades b, c, d, e, I, n), anticorpo 15595 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, i, n), anticorpo 15431 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, I, n), anticorpo 15572 (tendo pelo menos as propriedades b, c, d, e, f, g, i, n), e anticorpo 15011 (tendo pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, I, m, n).

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Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção tem pelo menos 13,12,11,10,9,8,7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 das referidas propriedades. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção tem pelo menos as propriedades b, c, d, e, i, n; pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, i, j, k, m, n; pelo menos as propriedades a, c, d, e, i, n; pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, i, n; pelo menos as propriedades b, c, d, e, f, g, i, n; ou pelo menos as propriedades a, c, d, e, f, g, h, i, j, k, I, m, n.

[00241] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção compete pela ligação a LAG-3 humano com anticorpo 15011, 15572 e/ou 15431.

[00242] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção se liga a um epítopo de LAG-3 humano tendo:

a) resíduos de aminoácido H85, P86, A87, P89, S91, W92 e G93 da SEQ ID N°: 68;

b) resíduos de aminoácido A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, TWO, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68;

c) resíduos de aminoácido A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, TWO, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68; ou

d) resíduos de aminoácido G107, L109, R110 e S111 da SEQ ID N°: 68.

[00243] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção se liga a um epítopo tendo resíduos de aminoácido 98-105 da SEQ ID N°: 68. Exemplos de tal anticorpo incluem, sem limitação, anticorpos 15532, 15431, 15572 e 15011.

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116/216 [00244] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno da invenção se liga a um epítopo tendo:

a) resíduos de aminoácido 78-105 e 123-131 da SEQ ID N°: 68;

b) resíduos de aminoácido 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 e 148-152 da SEQ ID N°: 68; ou

c) resíduos de aminoácido 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 e 148-161 da SEQ ID N°: 68 [00245] Em algumas modalidades, um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui é um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno descrito no Pedido de Patente PCT PCT/EP2017/076188, que é aqui incorporado por referência em sua totalidade.

[00246] A classe de um anticorpo descrito aqui pode ser alterada ou alternada por outra classe ou subclasse. Em um aspecto, uma molécula de ácido nucleico codificando VL ou VH é isolada usando métodos bem conhecidos na técnica, de modo que não inclui sequências de ácidos nucleicos codificando CL ou CH. As moléculas de ácido nucleico codificando VL ou VH são, então, operacionalmente ligadas a uma sequência de ácido nucleico que codifica uma CL ou CH, respectivamente, a partir de uma classe diferente de molécula de imunoglobulina. Isso pode ser conseguido usando uma molécula de ácido nucleico ou vetor que compreende uma cadeia de CL ou CH, como descrito acima. Por exemplo, um anticorpo que era originalmente IgM pode ser alternado em classe para IgG. Além disso, a alternância de classe pode ser usada para converter uma subclasse de IgG em outra, por exemplo, de lgG1 para lgG2. Uma região constante da cadeia leve K pode ser alterada, por exemplo, para uma região constante de cadeia leve λ. Um método preferido para produzir um anticorpo conforme descrito aqui com um isótipo de Ig desejado compreende as etapas de isolamento de uma molécula de ácido nucleico

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117/216 que codifica a cadeia pesada de um anticorpo e uma molécula de ácido nucleico que codifica a cadeia teve de um anticorpo, obtendo o domínio variável da cadeia pesada, ligante o domínio variável da cadeia pesada com a região constante de uma cadeia pesada do isótipo desejado, expressando a cadeia leve e a cadeia pesada ligada em uma célula e coletando o anticorpo com o isótipo desejado.

[00247] Um anticorpo descrito aqui pode ser uma molécula de IgG, IgM, IgE, IgA ou IgD, mas normalmente é o isótipo de IgG, por exemplo, da subclasse de IgG lgG1, igG2a ou lgG2b, lgG3 ou lgG4. Em uma modalidade, o anticorpo é uma lgG1. Em outra modalidade, o anticorpo é uma lgG2.

[00248] Em uma modalidade, o anticorpo pode compreender pelo menos uma mutação na região Fc. São conhecidas várias mutações de Fc diferentes, em que essas mutações fornecem função efetora alterada. Por exemplo, em muitos casos, será desejável reduzir ou eliminar a função efetora; por exemplo, em que as interações ligante/receptor são indesejadas ou no caso de conjugados de anticorpo-droga.

[00249] Em uma modalidade, o anticorpo compreende pelo menos uma mutação na região Fc que reduz a função efetora. As posições de aminoácidos da região Fc que podem ser vantajosas para mutação a fim de reduzir a função efetora incluem uma ou mais das posições 228, 233, 234 e 235, em que as posições de aminoácidos são numeradas de acordo com o esquema de numeração IMGT®.

[00250] Em algumas modalidades, um ou ambos os resíduos de aminoácidos nas posições 234 e 235 podem ser mutados, por exemplo, de Leu para Ala (L234A/L235A). Essas mutações reduzem a função efetora da região Fc de anticorpos lgG1. Adicionalmente ou alternativamente, o resíduo de aminoácido na posição 228 pode ser mutado, por exemplo, para Pro. Em algumas modalidades, o resíduo de aminoácido na posição 233 pode ser mutado, por exemplo, para Pro, o resíduo de aminoácido

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118/216 na posição 234 pode ser mutado, por exemplo, para Vai, e/ou o resíduo de aminoácido na posição 235 pode ser mutado, por exemplo, para Ala. As posições dos aminoácidos são numeradas de acordo com o esquema de numeração IMGT®.

[00251] Em algumas modalidades, onde o anticorpo é anticorpo da subclasse lgG4, ele pode compreender a mutação S228P, isto é, tendo uma prolina na posição 228, em que a posição de aminoácido é numerada de acordo com o esquema de numeração IMGT® UE. Esta mutação é conhecida por reduzir a troca indesejável de braço Fab (Angal et al., Mol Immunol. 30:105-8 (1993)).

[00252] Em determinadas modalidades, um anticorpo ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui pode fazer parte de uma molécula de imunoadesão maior, formada por associação covalente ou não covalente do anticorpo ou porção de anticorpo com uma ou mais outras proteínas ou peptídeos. Exemplos dessas moléculas de imunoadesão incluem o uso da região núcleo de estreptavidina para produzir uma molécula de scFv tetramérica (Kipriyanov et al., Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101 (1995)) e o uso de um resíduo de clsteina, urn peptídeo marcador e uma etiqueta de poli-histidina C-terminal para produzir moléculas de scFv bivalentes e biotiniladas (Kipriyanov et al., Moi. Immunol. 31:1047-1058 (1994)). Outros exemplos incluem que uma ou mais CDRs de um anticorpo sejam incorporadas a uma molécula de forma covalente ou não covalente para tomá-la uma imunoadesina que especificamente se liga a um antígeno de interesse. Em tais modalidades, a(s) CDR(s) pode(m) ser incorporada(s) como parte de uma cadeia de polipeptídeo maior, pode(m) ser ligada(s) covalentemente a outra cadeia de polipeptídeo, ou pode(m) ser incorporada(s) de forma não covalente.

[00253] Em outra modalidade, um anticorpo de fusão ou imunoadesina pode ser produzido que compreende todas ou uma porção de um anticorpo descrito aqui ligado a outro polipeptídeo. Em determinadas moda

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119/216 lidades, apenas os domínios variáveis de anticorpo são ligados ao polipeptídeo. Em determinadas modalidades, o domínio VH de um anticorpo é ligado a um primeiro polipeptídeo, enquanto o domínio VL de um anticorpo é ligado a um segundo polipeptídeo que se associa ao primeiro polipeptídeo de maneira tal que os domínios VH e VL possam interagir um com o outro para formar um sítio de ligação a antígeno. Em outra modalidade preferida, o domínio VH é separado do domínio VL por um ligante, tal que os domínios VH e VL possam interagir um com o outro (por exemplo, anticorpos de cadeia única). O anticorpo VH-ligante-VL é, então, ligado ao polipeptídeo de interesse. Além disso, anticorpos de fusão podem ser criados em que dois (ou mais) anticorpos de cadeia única são ligados um ao outro. Isso é útil caso se deseje criar um anticorpo divalente ou polivalente em uma única cadeia de polipeptídeo, ou caso se deseje criar um anticorpo biespecífico.

[00254] Para criar um anticorpo de cadeia única (scFv), os fragmentos de DNA que codificam VH e VL são operacionalmente ligados a outro fragmento que codifica um ligante flexível, por exemplo, que codifica uma sequência de aminoácido (Giy4 -Ser)3 (SEQ ID N°: 396), tal que sequências de VH e VL podem ser expressas como uma proteína de cadeia única contígua, com os domínios VL e VH unidos pelo ligante flexível. Ver, por exemplo, Bird et al., Science 242:423 426 (1988); Huston et ai., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879 5883 (1988); e McCafferty et al., Nature 348:552 554 (1990). O anticorpo de cadeia única pode ser monovalente se apenas um único VH e VL for usado; bivalente se dois VH e VL forem utilizados; ou polivalente se mais de dois VH e VL forem utilizados. Anticorpos biespecíficos ou polivalentes podem ser gerados, os quais se ligam especificamente a PD-1, ΤΊΜ-3 ou LAG-3 humanos e à outra molécula, por exemplo. Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos ou polivalentes podem se ligar a PD-1 e TIM-3, PD-1 e LAG-3, ΤΊΜ-3 e LAG-3, ou PD-1, TIM-3 e LAG-3.

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120/216 [00255] Em outras modalidades, outros anticorpos modificados podem ser preparados usando moléculas de ácido nucleico que codificam anticorpo. Por exemplo, corpos kapa (III et al., Protein Eng. 10:949-57 (1997)), minicorpos (Martin et ah, EMBO J. 13:5303-9 (1994)), diacorpos (Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90:6444-6448 (1993)), ou Janusins (Traunecker et al., EMBO J. 10:3655-3659 (1991) e Traunecker et. al., Int. J. Cancer (Suppl.) 7:51-52 (1992)) podem ser preparados utilizando técnicas biológicas molecularespadrão seguindo os ensinamentos da especificação.

[00256] Um anticorpo ou porção de ligação a antígeno conforme descrito aqui pode ser derivatizado ou ligado a outra molécula (por exemplo, outro peptídeo ou proteína). Em geral, os anticorpos ou porções dos mesmos são derivatizados, tal que a ligação a antígeno não é afetada adversamente pela derivatização ou rotulagem. Por exemplo, os anticorpos ou porções de anticorpo que podem ser usados nas terapias de combinação e composições de invenção devem incluir as formas intactas e modificadas dos anticorpos descritos aqui. Por exemplo, um anticorpo ou porção de anticorpo conforme descrito aqui pode ser funcionalmente ligado (por acoplamento químico, fusão genética, associação não covalente ou de outro modo) a uma ou mais outras entidades moleculares, tais como outro anticorpo (por exemplo, um anticorpo biespecífico ou um diacorpo), um agente de detecção, um agente farmacêutico e/ou uma proteína ou peptídeo que pode mediar a associação do anticorpo ou porção de anticorpo com outra molécula (tal como uma região núcleo de estreptavidina ou uma etiqueta de poli-histidina).

[00257] Um tipo de anticorpo derivatizado é produzido pela reticulação de dois ou mais anticorpos (do mesmo tipo ou de tipos diferentes, por exemplo, para criar anticorpos biespecíficos). Reticuladores adequados incluem aqueles que são heterobifuncionais, tendo dois grupos reativos distintos, separados por um espaçador apropriado (por exemplo, malei

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121/216 midobenzoil-N-hidroxissuccinimida éster) ou homobifuncional (por exemplo, suberato de dissucclnimidila). Tais ligantes estão disponíveis, por exemplo, em Pierce Chemical Company, Rockford, II.

[00258] Um anticorpo também pode ser derivatizado com um grupo químico, tal como polietilenogllcol (PEG), um grupo metila ou etila ou um grupo carboidrato. Esses grupos podem ser úteis para melhorar as características biológicas do anticorpo, por exemplo, para aumentar a meiavida sérlca.

[00259] Um anticorpo conforme descrito aqui também pode ser rotulado. Como usado neste documento, os termos rótulo ou rotulado referem-se à incorporação de outra molécula no anticorpo. Em uma modalidade, o rótulo é um marcador detectável, por exemplo, incorporação de um aminoácido radiomarcado ou associação a um polipeptídeo de porções biotinila que pode ser detectado por avidina marcada (por exemplo, estreptavidina contendo um marcador fluorescente ou atividade enzimática que pode ser detectada por métodos ópticos ou colorimétricos). Em outra modalidade, o rótulo ou marcador pode ser terapêutico, por exemplo, um conjugado de droga ou toxina. Vários métodos de rotulagem de polipeptideos e glicoproteínas são conhecidos na técnica e podem ser utilizados. Exemplos de rótulos para polipeptideos incluem, mas sem limitação, os seguintes: radioisótopos ou radionuclídeos (por exemplo, 3H, 14C, 15N, 35N, 35S, 90Y, 99Tc, 1111n, 1251, 1311), rótulos fluorescentes (por exemplo, FITC, rodamina, fósforos de lantanídeo), rótulos enzimáticos (por exemplo, peroxidase de rábano silvestre, β-galactosidase, luciferase, fosfatase alcalina), marcadores quimioluminescentes, grupos biotinila, epítopos de polipeptídeo predeterminados reconhecidos por um repórter secundário (por exemplo, sequências de pares de zíperes de leucina, sítios de ligação para anticorpos secundários, domínios de ligação a metais, etiquetas de epítopos), agentes magnéticos, tais como quelatos de gadolínio, toxinas, tais como toxina pertussis, taxol, citocalasina B,

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122/216 gramicidins D, brometo de etídio, emetina, mitomicina, etoposídeo, tenoposídeo, vincristina, vinblastina, colchicina, doxorrubicina, daunorrubicina, di-hidróxi antracina diona, mitoxantrona, mitramicina, actinomicina D,

1-desidrotestosterona, giicocorticoides, procaína, tetracaína, lidocaína, propranolol e puromicina, e análogos ou homólogos dos mesmos. Em algumas modalidades, os rótulos são associados por braços espaçadores de vários comprimentos para reduzir o potencial impedimento estérico.

[00260] Em determinadas modalidades, os anticorpos descritos aqui podem estar presentes em uma forma neutra (incluindo formas zwitteriônicas) ou como uma espécie positiva ou negativamente carregada. Em algumas modalidades, os anticorpos podem ser complexados com um contraíon para formar um sai farmaceuticamente aceitável.

[00261] O termo sal farmaceuticamente aceitável refere-se a um complexo que compreende um ou mais anticorpos e um ou mais contraíons, em que os contraíons sâo derivados de ácidos e bases inorgânicos e orgânicos farmaceuticamente aceitáveis.

Terapias de Combinação [00262] A presente invenção provê uma terapia de combinação (por exemplo, uma composição) que compreende qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui e qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-TIM-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui. Em algumas modalidades, a terapia de combinação compreende qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui e qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui. Em algumas modalidades, a terapia de combinação compreende qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-TiM-3 ou porções de ligação a antígeno dos

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123/216 mesmos descritos aqui e qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui. Em modalidades particulares, a terapia de combinação compreende qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-PD-1 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui, qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-TIM~3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui, e qualquer (por exemplo, qualquer um) dos anticorpos anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui. A terapia de combinação pode ter a forma de, por exemplo, um método para tratamento usando os referidos anticorpos ou porções de ligação a antígeno ou uma composição farmacêutica compreendendo os referidos anticorpos ou porções de ligação a antígeno.

[00263] Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende anticorpo anti-PD-1 12819 e anticorpo anti-TIM-3 15086.17145. Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende anticorpo antiPD-1 12819 e anticorpo anti-LAG-3 15532. Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145, e anticorpo anti-LAG-3 15532.

[00264] Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende:

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente; e um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno

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124/216 do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; e um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; ou

- um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378. [00265] Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende:

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 228-233, respectlvamente; e um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

- um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma

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LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[00266] Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende:

- um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de HCDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

- um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

- um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.

[00267] Em determinadas modalidades, a terapia de combinação ou composição da invenção compreende:

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ

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ID N°s: 8-13, respectivamente: e um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de H-CDR1-3 e L-CDR1-3 das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

- um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo compreendendo as sequências de aminoácido de VH e VL das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

- um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378. [00268] Em algumas modalidades, qualquer um ou todos os anticorpos na terapia de combinação ou composição pode ser uma IgG, por exemplo, lgG1 ou lgG2.

Moléculas de Ligação Multiespecíficas [00269] Em outro aspecto, a invenção provê uma molécula de ligação multiespecífica tendo uma especificidade de ligação (por exemplo, compreendendo as porções de ligação a antígeno, tais como porções de ligação a antígeno compreendendo as seis CDRs) de:

- um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui e um anticorpo anti-TIM

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127/216 conforme descrito aqui;

- um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui e um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui; ou

- um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui e um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui.

[00270] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-TIM-3 e/ou anticorpo anti-LAG-3 são selecionados dos anticorpos descritos aqui. Em determinadas modalidades, a molécula de ligação multiespecífica tem a especificidade de ligação de um anticorpo anti-PD1 descrito aqui, um anticorpo anti-TIM-3 descrito aqui e um anticorpo anti~LAG~3 descrito aqui. As moléculas de ligação multiespecíficas são conhecidas na técnica, e exemplos de diferentes tipos de moléculas de ligação multiespecíficas são fornecidos aqui. Tais moléculas de ligação multiespecíficas (por exemplo, biespecíficas ou triespecíficas) são englobadas pelas terapias de combinação da invenção.

[00271] Em um aspecto adicional, a invenção provê a terapia de combinação com duas ou mais de uma molécula de ligação biespecífica direcionadas a PD-1, uma molécula biespecífica direcionada a TIM-3, e uma molécula de ligação biespecífica direcionada a LAG-3. Uma molécula de ligação biespecífica direcionada a PD-1, TIM-3 ou LAG-3 pode ter a especificidade de ligação de um anticorpo direcionado ao referido antígeno conforme descrito aqui e a especificidade de ligação de outro anticorpo direcionado ao mesmo antígeno (por exemplo, outro anticorpo conforme descrito aqui) ou um anticorpo que tenha como alvo uma proteína diferente, tal como outra proteína de ponto de verificação imune, um antígeno de câncer, ou outra molécula de superfície celular cuja atividade medeia uma condição de doença, tal como câncer. Tais moléculas de ligação biespecíficas são conhecidas na técnica, e exemplos de diferentes tipos de moléculas de ligação biespecíficas são providos aqui.

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Vetores e Moléculas de Ácido Nucleico [00272] São também descritas moléculas de ácido nucleico e sequências codificando anticorpos anti-PD-1, anti-TIM-3 e/ou anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos descritos aqui. Em algumas modalidades, diferentes moléculas de ácido nucleico codificam as sequências de aminoácido de cadeia leve e cadeia pesada do anticorpo anti-PD1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, ou anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo. Em outras modalidades, a mesma molécula de ácido nucleico codifica as sequências de aminoácido de cadeia leve e cadeia pesada do anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, ou anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo.

[00273] Uma referência a uma sequência de nucleotídeo abrange seu complemento, salvo especificação em contrário. Assim, uma referência a um ácido nucleico tendo uma sequência particular deve ser entendida como abrangendo seu filamento complementar, com sua sequência complementar. O termo polinucleotídeo, conforme referido neste documento, significa uma forma polimérica de nucleotídeos com pelo menos 10 bases de comprimento, ribonucleotídeos ou desoxinucleotídeos ou uma forma modificada de qualquer tipo de nucleotídeo. O termo inclui formas de filamento simples e duplo.

[00274] Em algumas modalidades, as sequências de nucleotídeo são pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97%, 98% ou 99% idênticas a uma ou mais sequências de nucleotídeo citadas aqui, por exemplo, a uma sequência de nucleotídeo codificando uma sequência de aminoácido selecionada do grupo que consiste nas SEQ ID N°s: 1, 2, 5, 6, 14, 15, 24, 25, 34, 35, 44, 45, 54, 55, 64, 65, 74, 75, 84, 85, 94, 95, 104, 105, 114, 115, 124, 125, 134, 135, 144, 145, 154, 155, 164, 165, 174, 175,

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184, 185, 194, 195, 204, 205, 214, 215, 224, 225, 234, 235, 244, 245, 254, 255, 264, 265, 274, 275, 284, 285, 294, 295, 304, 305, 314, 315, 324, 325, 334, 335, 344, 345, 354, 355, 364, 365 ou 391. O termo identidade de sequência percentual no contexto de seqüências de ácido nucleico refere-se aos resíduos em duas sequências que são iguais quando alinhados para obter a máxima correspondência. O comprimento da comparação de identidade de sequência pode ser superior a uma extensão de pelo menos cerca de nove nucleotídeos, geralmente pelo menos cerca de 18 nucleotídeos, mais geralmente pelo menos cerca de 24 nucleotídeos, tipicamente pelo menos cerca de 28 nucleotídeos, mais tipicamente pelo menos cerca de 32 nucleotídeos e, de preferência, pelo menos cerca de 36, 48 ou mais nucleotídeos. Existem vários algoritmos diferentes algoritmos conhecidos na técnica que podem ser usados para medir a identidade de sequência de nucleotídeo. Por exemplo, sequências de polinucleotídeo podem ser comparadas usando FASTA, Gap ou Bestfít, que são programas no Wisconsin Package Versão 10.0, Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin. O FASTA, que inclui, por exemplo, os programas FASTA2 e FASTA3, fornece alinhamentos e identidade de sequência percentual das regiões com melhor sobreposição entre as sequências de consulta e pesquisa (ver, por exemplo, Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000); Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); e Pearson, J. Mol. Biol. 276:71-84 (1998); incorporado aqui por referência). Salvo especificação em contrário, parâmetros padrão para um programa ou algoritmo particular são utilizados. Por exemplo, a identidade de sequência percentual entre sequências de ácido nucleico pode ser determinada usando FASTA com seus parâmetros padrão (tamanho de palavra de 6 e fator NOPAM para a matriz de pontuação) ou usando Gap com seus parâmetros padrão, conforme fornecido em GCG Versão 6.1, incorporado aqui por referência.

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130/216 [00275] Em algumas modalidades, a molécula de ácido nucleico compreendendo uma ou mais sequências de nucleotídeo selecionadas do grupo que consiste nas SEQ ID N°s: 1,2, 5, 6, 14, 15, 24, 25, 34, 35, 44, 45, 54, 55, 64, 65, 74, 75, 84, 85, 94, 95, 104, 105, 114, 115, 124, 125,

134, 135, 144, 145, 154, 155, 164, 165, 174, 175, 184, 185, 194,195,

204, 205, 214, 215, 224, 225, 234, 235, 244, 245, 254, 255, 264,265,

274, 275, 284, 285, 294, 295, 304, 305, 314, 315, 324, 325, 334,335,

344, 345, 354, 355, 364, 365 ou 391.

[00276] Em qualquer uma das modalidades acima, as moléculas de ácido nucleico podem ser isoladas. Uma molécula de ácido nucleico que codifica a cadeia pesada e/ou leve de um anticorpo ou porção de ligação a antígeno do mesmo descrito aqui pode ser isolada de qualquer fonte que produz tal anticorpo ou porção. Em várias modalidades, as moléculas de ácido nucleico são isoladas de células B que expressam um anticorpo isolado de um animal imunizado com um antígeno de PD-1, TIM-3 ou LAG-3, ou de uma célula imortalizada produzida a partir de tal célula B. Os métodos de isolamento de ácidos nucleicos que codificam um anticorpo são bem conhecidos na técnica. O mRNA pode ser isolado e usado para produzir cDNA para uso na reação de cadeia de polimerase (PCR) ou na clonagem de cDNA de genes de anticorpo. Em determinadas combinações, uma molécula de ácido nucleico, conforme descrita aqui, pode ser sintetizada em vez de isolada.

[00277] Em algumas modalidades, uma molécula de ácido nucleico conforme aqui descrita pode compreender uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio VH de um anticorpo ou porção de ligação a antígeno aqui descrito, unida no quadro a uma sequência de nucleotídeo que codifica uma região constante de cadeia pesada de qualquer fonte. Da mesma forma, uma molécula de ácido nucleico conforme descrita aqui pode compreender uma sequência de nucleotídeo que codifica um domínio VL de um anticorpo ou porção de ligação antígeno descrito aqui,

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131/216 unida no quadro a uma sequência de nucleotídeo que codifica uma região constante de cadeia leve de qualquer fonte.

[00278] Em um aspecto adicionai, as moléculas de ácido nucleico que codificam o domínio variávei das cadeias pesadas (VH) e/ou leves (VL) podem ser convertidas em genes de anticorpo de comprimento total. Em uma modalidade, moléculas de ácido nucleico que codificam os domínios VH ou VL são convertidas em genes de anticorpo de comprimento total por inserção em um vetor de expressão que já codifica regiões constantes de cadeia pesada (CH) ou constantes de cadeia leve (CL), respectivamente, tai que o segmento VH é operacionalmente ligado ao(s) segmento(s) CH dentro do vetor e/ou o segmento VL é operacionalmente ligado ao segmento CL dentro do vetor. Em outra modalidade, as moléculas de ácido nucleico que codificam os domínios VH e/ou VL são convertidas em genes de anticorpo de comprimento total por ligação, por exemplo, ligante, uma molécula de ácido nucleico que codifica domínios VH e/ou VL a uma molécula de ácido nucleico que codifica uma região CH e/ou CL usando técnicas de biologia molecular padrão. As moléculas de ácido nucleico que codificam as cadeias leves e/ou pesadas de comprimento total podem, então, ser expressas a partir de uma célula na qual elas foram introduzidas e o anticorpo foi isolado.

[00279] As moléculas de ácido nucleico podem ser usadas para expressar recombinantemente grandes quantidades de anticorpos. As moléculas de ácido nucléico também podem ser usadas para produzir anticorpos quiméricos, anticorpos biespecíficos, anticorpos de cadeia única, imunoadesinas, diacorpos, anticorpos mutados e derivados de anticorpos, conforme descrito aqui.

[00280] É também descrito aqui é um vetor adequado para expressar uma ou ambas as cadelas de um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antigeno do mesmo, um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antigeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação

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132/216 a antigeno do mesmo, conforme descrito aqui. O termo vetor, como usado neste documento, significa uma molécula de ácido nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico ao qual foi ligado. Em algumas modalidades, o vetor é um plasmideo, isto é, um pedaço de DNA de filamento duplo circular, no qual segmentos de DNA adicionais podem ser ligados. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor viral, em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados ao genoma viral. Em algumas modalidades, os vetores são capazes de replicação autônoma em uma célula hospedeira na qual são introduzidos (por exemplo, vetores bacterianos que têm origem bacteriana de replicação e vetores de mamíferos epissomais). Em outras modalidades, os vetores (por exemplo, vetores de mamíferos não epissomais) podem ser integrados no genoma de uma célula hospedeira após a introdução na célula hospedeira e, assim, são replicados juntamente com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a expressão de genes aos quais estão operacionalmente ligados. Esses vetores são referidos neste documento como vetores de expressão recombinantes (ou simplesmente vetores de expressão).

[00281] Em algumas modalidades, os vetores compreendem moléculas de ácido nucleico que codificam a cadeia pesada, a cadeia leve ou ambas as cadeias pesada e leve de um anticorpo descrito aqui ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo. Em algumas modalidades, os vetores compreendem moléculas de ácido nucleico que codificam proteínas de fusão, anticorpos modificados, fragmentos de anticorpo e sondas dos mesmos.

[00282] Em algumas modalidades, os anticorpos anti-PD-1, anti-TIM-3 ou anti-LAG-3 ou porções de ligação a antigeno dos mesmos são expressos pela inserção de DNAs que codificam cadeias leves e pesadas de comprimento parcial ou total, obtidos como descrito acima, em vetores de expressão, tal que os genes são operacionalmente ligados às se

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133/216 quências de controle de expressão necessárias, tais como sequências de controle transcricionaís e translaclonais. Os vetores de expressão incluem plasmídeos, retrovirus, adenovirus, vírus adeno-associados (AAV), vírus de plantas, tais como vírus de mosaico da couve-flor, vírus de mosaico do tabaco, cosmídeos, YACs, epissomas derivados de EBV, e semelhantes. A sequência de codificação de anticorpo pode ser ligada a um vetor, tal que sequências de controle transcricionaís e translacionais dentro do vetor cumprem sua função pretendida de regular a transcrição e translação da sequência de codificação de anticorpo. O vetor de expressão e as sequências de controle de expressão podem ser selecionados para serem compatíveis com a célula hospedeira de expressão usada. A sequência de codificação de cadeia leve de anticorpo e a sequência de codificação de cadeia pesada de anticorpo podem ser inseridas em vetores separados, e podem ser operacionalmente ligadas às mesmas ou diferentes sequências de controie de expressão (por exemplo, promotores). Em uma modalidade, ambas as sequências de codificação são inseridas no mesmo vetor de expressão, e podem ser operacionalmente ligadas às mesmas sequências de controle de expressão (por exemplo, um promotor comum), para separar sequências de controle de expressão idênticas (por exemplo, promotores), ou a diferentes sequências de controle de expressão (por exemplo, promotores). As sequências de codificação de anticorpo podem ser inseridas no vetor de expressão por métodos padrão (por exemplo, ligação de sítios de restrição complementares no vetor e fragmento de gene de anticorpo, ou ligação de extremidade cega se nenhum sítio de restrição estiver presente).

[00283] Um vetor conveniente é um que codifica uma sequência de imunoglobulina CH ou CL humana funcionalmente completa, com sítios de restrição apropriados projetados para que qualquer sequência de VH ou VL possa ser facilmente inserida e expressa, como descrito acima. Os genes que codificam HC e LC em tais vetores podem conter sequências

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134/216 de introns que resultarão em melhores rendimentos gerais de proteína de anticorpo estabilizando o mRNA relacionado. As sequências de introns são flanqueadas por sítios doadores de junção e aceptores de junção, que determinam onde a junção de RNA ocorrerá. A localização das sequências de introns pode ser tanto em regiões variáveis ou constantes das cadeias de anticorpo, ou em ambas regiões variáveis e constantes quando vários introns são usados. A terminação de transcrição e poliadenilação podem ocorrer em sítios cromossômicos nativos a jusante das regiões de codificação. O vetor de expressão recombinante também pode codificar um peptídeo sinal que facilita a secreção da cadeia de anticorpo de uma célula hospedeira. O gene da cadeia de anticorpo pode ser clonado no vetor, de modo que o peptídeo sinal seja ligado no quadro ao terminal amino da cadeia de imunoglobulina. O peptídeo sinal pode ser um peptídeo sinal de imunoglobulina ou um peptídeo sinal heterólogo (isto é, um peptídeo sinal de uma proteína não imunoglobulina).

[00284] Além dos genes da cadeia de anticorpo, os vetores de expressão recombinantes podem conter sequências reguladoras que controlam a expressão dos genes da cadeia de anticorpo em uma célula hospedeira. Será apreciado pelos versados na técnica que o projeto do vetor de expressão, incluindo a seleção de sequências reguladoras, pode depender de fatores como a escolha da célula hospedeira a ser transformada, o nível de expressão da proteína desejada etc. As sequências reguladoras preferidas para a expressão de células hospedeiras de mamíferos incluem elementos virais que direcionam altos níveis de expressão de proteínas em células de mamíferos, tais como promotores e/ou intensificadores derivados de LTRs retrovirais, citomegalovírus (CMV) (como o promotor/intensificador de CMV), Vírus Símio 40 (SV40) (tal como o promotor/intensificador de SV40), adenovirus (por exemplo, o promotor tardio principal de adenovirus (AdMLP)), polioma e promotores de mamíferos fortes, tais como promotores de imunoglobulina e actina nati

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135/216 vos. Para uma descrição mais detalhada dos elementos reguladores virais, e sequências dos mesmos, ver, por exemplo, as Patentes dos EUA 5.168.062, 4.510.245 e 4.968.615. Métodos para expressão de anticorpos em plantas, incluindo uma descrição de promotores e vetores, bem como a transformação de plantas, são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, a Patente US 6.517.529. Os métodos de expressão de polipeptídeos em células bacterianas ou células fúngicas, por exemplo, células de levedura, também são bem conhecidos na técnica.

[00285] Além dos genes de cadeia de anticorpo e das sequências reguladoras, os vetores de expressão recombinantes podem conter sequências adicionais, tais como sequências que regulam a replicação do vetor em células hospedeiras (por exemplo, origens da replicação) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador selecionável facilita a seleção de células hospedeiras nas quais o vetor foi introduzido (ver, por exemplo, Patentes dos EUA 4.399.216, 4.634.665 e 5.179.017). Por exemplo, normalmente, o gene marcador selecionável confere resistência a drogas, tais como G418, higromicina ou metotrexato, em uma célula hospedeira na qual o vetor foi introduzido. Por exemplo, os genes marcadores selecionáveis incluem o gene de diidrofolato redutase (DHFR) (para uso em células hospedeiras de dhfr com seleção/amplificação de metotrexato), o gene neo (para seleção de G418) e o gene de glutamato sintetase.

[00286] O termo “sequência de controle de expressão, como usado neste documento, significa sequências de polinucleotídeo que são necessárias para efetuar a expressão e processar sequências de codificação às quais estão ligadas. As sequências de controle de expressão incluem sequências apropriadas de iniciação, terminação, promotoras e intensificadoras de transcrição; sinais eficientes de processamento de RNA, tais como sinais de junção e poliadenilação; sequências que estabilizam o mRNA citoplasmático; sequências que melhoram a eficiência

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136/216 de translação (isto é, sequência consenso de Kozak); sequências que melhoram a estabilidade de proteína; e quando desejado, sequências que melhoram a secreção de proteínas. A natureza de tais sequências de controle difere dependendo do organismo hospedeiro; em procariontes, essas sequências de controle geralmente incluem promotor, sítio de ligação ribossômica e sequência de terminação de transcrição; em eucariontes, geralmente, essas sequências de controle incluem promotores e sequência de terminação de transcrição. O termo sequências de controle pretende incluir, no mínimo, todos os componentes cuja presença é essencial para a expressão e processamento, e também pode incluir componentes adicionais cuja presença é vantajosa, por exemplo, sequências líderes e sequências de parceiros de fusão.

Células Hospedeiras e Métodos de Produção de Anticorpo e Composição de Anticorpo [00287] Também são descritos métodos para produzir as terapias de combinação (por exemplo, composições) da invenção. Uma modalidade refere-se a um método para a produção de anticorpos conforme descrito aqui, compreendendo prover células hospedeiras recombinantes capazes de expressar os anticorpos, cultivar as referidas células hospedeiras sob condições adequadas para a expressão dos anticorpos, e isolar os anticorpos resultantes. Os anticorpos produzidos por essa expressão em tais células hospedeiras recombinantes são descritos neste documento como anticorpos recombinantes. Também são descritas células descendentes de tais células hospedeiras, e anticorpos produzidos por elas.

[00288] O termo célula hospedeira recombinante (ou simplesmente célula hospedeira), como usado neste documento, significa uma célula na qual um vetor de expressão recombinante foi introduzido. A célula hospedeira pode compreender, por exemplo, um ou mais vetores conforme descrito aqui. As células hospedeiras podem compreender, por exemplo, uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada ou

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137/216 porção de ligação a antígeno da mesma, uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-PD-1, anti~TIM~3 e/ou anti-LAG~3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui. Deve-se entender que célula hospedeira recombinante e célula hospedeira significam não apenas a célula em questão, mas também a progênie dessa célula. Como certas modificações podem ocorrer nas gerações seguintes devido a mutações ou influências ambientais, essa progênie pode não ser, de fato, idêntica à célula de origem, mas ainda está incluída no escopo do termo célula hospedeira como usado neste documento.

[00289] Moléculas de ácido nucleico que codificam anticorpos anti-PD~ 1, anti-TIM-3 e/ou anti-LAG-3 ou porções de ligação a antígeno dos mesmos e vetores que compreendem essas moléculas de ácido nucleico podem ser usadas para transfecção de uma célula hospedeira de mamífero, planta, bactéria ou levedura. A transformação pode ser realizada por qualquer método conhecido para a introdução de polinucleotídeos em uma célula hospedeira. Os métodos para introdução de polinucleotídeos heterólogos em células de mamíferos são bem conhecidos na técnica e incluem transfecção mediada por dextrano, precipitação com fosfato de cálcio, transfecção mediada por polibreno, fusão de protoplastos, eletroporação, encapsulamento do(s) polinucleotídeo(s) em lipossomas e microinjeção direta do DNA nos núcleos. Além disso, as moléculas de ácido nucleico podem ser introduzidas nas células de mamíferos por vetores virais. Os métodos de transformação de células são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, as Patentes dos EUA 4.399.216, 4.912.040, 4.740.461 e 4.959.455. Os métodos de transformação de células de platas são bem conhecidos na técnica, incluindo, por exemplo, transformação mediada por Agrobacterium, transformação bioiística, injeção direta, eletroporação e transformação viral. Os métodos de transformação de células bacterianas e de levedura também são bem conhecidos na técni

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138/216 ca.

[00290] As linhagens celulares de mamíferos disponíveis como hospedeiros para expressão são bem conhecidas na técnica e incluem muitas linhagens celulares imortalizadas disponíveis na American Type Culture Collection (ATCC). Essas incluem, inter alia, células de ovário de hamster chinês (CHO), células NSO, células SP2, células HEK-293T, células 293 Freestyle (Invitrogen), células NIH-3T3, células HeLa, células de rim de hamster bebê (BHK), células renais de macaco verde africano (COS), células de carcinoma hepatocelular humano (por exemplo, Hep G2), células A549, e uma variedade de outras linhagens celulares. As linhagens celulares de preferência particular são selecionadas determinando quais linhagens celulares têm altos níveis de expressão. Outras linhagens celulares que podem ser usadas são linhagens celulares de insetos, tais como células Sf9 ou Sf21. Quando vetores de expressão recombinantes que codificam genes de anticorpo são introduzidos em células hospedeiras de mamíferos, os anticorpos são produzidos cultivando as células hospedeiras por um período de tempo suficiente para permitir a expressão do anticorpo nas células hospedeiras ou, mais preferencialmente, a secreção do anticorpo no meio de cultura em que as células hospedeiras são cultivadas. Os anticorpos podem ser recuperados do meio de cultura usando métodos padrão de purificação de proteínas. As células hospedeiras de plantas incluem, por exemplo, Nicotiana, Arabidopsis, lentilha, milho, trigo, batata etc. As células hospedeiras bacterianas incluem as espécies de E. coli e Streptomyces. As células hospedeiras de levedura incluem Schizosaccharomyces pombe, Saccharomyces cerevisiae e Pichia pastoris.

[00291] Além disso, a expressão de anticorpos ou porções de ligação a antígeno dos mesmos conforme descritos aqui a partir de linhagens celulares de produção pode ser aprimorada usando várias técnicas conhecidas. Por exemplo, o sistema de expressão gênica de glutamina sin

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139/216 tetase (o sistema GS) é uma abordagem comum para melhorar a expressão sob certas condições. O sistema GS é discutido, no todo ou em parte, em conexão com as Patentes EP 0 216 846, 0 256 055, 0 323 997 e 0 338 841.

[00292] É provável que os anticorpos expressos por diferentes linhagens celulares ou em animais transgênicos tenham padrões de glicosilaçâo diferentes entre si. No entanto, todos os anticorpos codificados pelas moléculas de ácido nucleico aqui fornecidas, ou compreendendo as sequências de aminoácidos aqui fornecidas, fazem parte da presente invenção, independentemente do estado de glicosilação dos anticorpos e, de forma mais geral, independentemente da presença ou ausência de modlficação(ões) pós-translacional(is).

[00293] Em algumas modalidades, a invenção refere-se a um método para produção de uma composição de anticorpo compreendendo um anticorpo anti-PD-1 e um anticorpo anti-TIM-3, o método compreendendo:

- prover primeira e segunda células hospedeiras, em que a primeira célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui e a segunda célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui,

- cultivar as primeira e segunda células hospedeiras sob condições adequadas para expressão do anticorpo anti-PD-1 e do anticorpo anti-TIM-3, e

- isolar os anticorpos resultantes.

[00294] Em algumas modalidades, a invenção refere-se a um método para produção de uma composição de anticorpo compreendendo um anticorpo antl-PD-1 e um anticorpo anti-LAG-3, o método compreendendo:

- prover primeira e segunda células hospedeiras, em que a primeira célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui e a segunda célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui,

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- cultivar as primeira e segunda células hospedeiras sob condições adequadas para expressão do anticorpo anti-PD-1 e do anticorpo anti-LAG-3, e

- isolar os anticorpos resultantes.

[00295] Em algumas modalidades, a invenção refere-se a um método para produção de uma composição de anticorpo compreendendo um anticorpo anti-TIM-3 e um anticorpo anti-LAG-3, o método compreendendo:

- prover primeira e segunda células hospedeiras, em que a primeira célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui e a segunda célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui,

- cultivar as primeira e segunda células hospedeiras sob condições adequadas para expressão do anticorpo anti-TIM-3 e do anticorpo anti-LAG-3, e

- isolar os anticorpos resultantes.

[00296] Em algumas modalidades, a invenção refere-se a um método para produção de uma composição de anticorpo compreendendo um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-TIM-3 e um anticorpo anti-LAG-3, o método compreendendo:

- prover primeira, segunda e terceira células hospedeiras, em que a primeira célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo antiPD-1 conforme descrito aqui, a segunda célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui, e a terceira célula hospedeira é capaz de expressar um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui,

- cultivar as primeira, segunda e terceira células hospedeiras sob condições adequadas para expressão do anticorpo anti-PD-1, do anticorpo anti-TIM-3 e do anticorpo anti-LAG-3, e

- isolar os anticorpos resultantes.

[00297] Para a produção de uma composição de anticorpo da inven

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141/216 ção, os anticorpos direcionados a diferentes alvos podem ser produzidos separadamente, ou seja, cada anticorpo sendo produzido em um biorreator separado, ou os anticorpos individuais podem ser produzidos juntos em um único biorreator. Se a composição de anticorpo for produzida em mais de um biorreator, a composição de anticorpo purificada pode ser obtida através do agrupamento dos anticorpos obtidos de sobrenadantes purificados individualmente de cada biorreator. Várias abordagens para a produção de uma composição de anticorpo policlonal em múltiplos biorreatores, em que as linhagens celulares ou preparações de anticorpo são combinadas posteriormente a montante ou antes ou durante o processamento a jusante, são descritas na publicação PCT WO 2009/129814.

[00298] No caso de produção de anticorpos individuais em um único biorreator, Isso pode ser realizado, por exemplo, como descrito na Publicação PCT WO 2004/061104 ou WO 2008/145133. O método descrito no WO 2004/061104 baseia-se na integração sítio-específica da sequência de codificação de anticorpo no genoma das células hospedeiras individuais, enquanto o método do WO 2008/145133 envolve uma abordagem alternativa, usando a integração aleatória para produzir anticorpos em um único biorreator.

[00299] Mais informações sobre métodos adequados para a preparação das composições de anticorpo da invenção podem ser encontradas nas Publicações PCT WO 2012/059857 e WO 2013/164689.

[00300] A presente invenção também provê uma linhagem celular policlonal que produz:

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo

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142/216 anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

- pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui; ou

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui.

[00301] A presente invenção também provê um método para produção da linhagem celular policlonal acima, compreendendo prover células hospedeiras que compreendem, cada uma, uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antígeno da mesma e uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno da mesma de pelo menos um dos anticorpos ou porções produzidas pela linhagem celular policlonal.

[00302] A presente invenção também provide células hospedeiras compreendendo:

- uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui, e uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui;

- uma sequência de nucleotídeo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antígeno da mesma, uma sequência de nu

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143/216 cleotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui; e uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui;

- uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia ieve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui; e uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui; ou

- uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui; uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-TIM-3 conforme descrito aqui; e uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia pesada ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, uma sequência de nucieotideo que codifica a cadeia leve ou uma porção de ligação a antigeno da mesma, ou ambas, de um anticorpo anti-LAG-3 conforme descrito aqui.

Composições Farmacêuticas [00303] Outro aspecto da invenção é uma composição farmacêutica compreendendo como ingredientes ativos (por exemplo, como os únicos

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144/216 ingredientes ativos):

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, e pelo menos um anticorpo anti~LAG~3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui.

[00304] Em alguns aspectos, a composição farmacêutica compreende uma molécula de ligação multiespecífica (por exemplo, uma molécula de ligação multiespecífica que tem uma especificidade de ligação de um anticorpo anti-PD-1 conforme descrito aqui e um anticorpo anti-TIM-3 ou anti-LAG-3 conforme descrito aqui; ou um anticorpo anti-PD1, um anticorpo anti-TIM-3 e um anticorpo anti-LAG-3 conforme descritos aqui).

[00305] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica pode ainda compreender um ou mais anticorpos adicionais que têm como alvo um ou mais receptores de superfície celular relevantes, por exemplo, um ou mais receptores relevantes de câncer.

[00306] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica destina-se à melhoria, prevenção e/ou tratamento de um distúrbio, doença ou

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145/216 condição que que melhore, ou retarde sua progressão, pode mudulação de PD-1, TIM-3 e/ou LAG-3. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica destina-se à melhoria, prevenção e/ou tratamento de câncer. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica destina-se à ativação do sistema imune.

[00307] A proporção entre os anticorpos de porções de ligação a antígeno dos mesmos em uma composição farmacêutica da invenção (ou de anticorpos ou porções individuais descritos aqui sendo asministrados simultaneamente, sequencialmente ou separadamente) será geralmente aquela que os anticorpos sâo administrados em quantidades iguais, mas isso não precisa ser necessariamente o caso. Dessa forma, uma composição da invenção compreendendo um anticorpo anti-PD-1 e um anticorpo anti-TIM-3, um anticorpo anti-PD-1 e um anticorpo anti-LAG-3, ou um anticorpo anti~TIM~3 e um anticorpo anti-LAG-3 pode conter os referidos anticorpos em aproximadamente uma proporção de 1:1. Uma composição da invenção compreendendo um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-TIM-3 e um anticorpo anti-LAG-3 pode conter os referidos anticorpos em aproximadamente uma proporção de 1:1:1 o (isto é, em quantidades iguais). Dependendo das características dos anticorpos individuais, no entanto, pode ser desejável usar quantidades não iguais dos diferentes anticorpos. As proporções adequadas para os diferentes anticorpos nas composições de invenção podem ser determinadas conforme descrito na Publicação PCT WO 2010/040356, que descreve métodos para identificar e selecionar a razão estequiométrica ideal entre entidades químicas em um produto de droga combinatória, por exemplo, uma composição de anticorpo policlonal, para obter uma droga combinatoric com potência e eficácia ideais.

[00308] Geralmente, as composições farmacêuticas descritas aqui são adequadas para serem administradas como uma formulação em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis, por

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146/216 exemplo, como descrito abaixo.

[00309] O termo excípiente é usado aqui para descrever qualquer ingrediente que não seja o(s) composto(s) da invenção. A escolha do(s) excipiente(s) dependerá em grande parte de fatores, tais como o modo de administração particular, o efeito do excípiente na solubilidade e estabilidade, e a natureza da forma de dosagem. Como usado neste documento, excípiente farmaceuticamente aceitável inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antlbacterianos e antifúngicos, agentes isotônicos e retardadores de absorção, e semelhantes, que são fisiologicamente compatíveis. Alguns exemplos de excipientes farmaceuticamente aceitáveis são água, soiução salina, solução salina tamponada com fosfato, dextrose, glicerol, etanol e similares, bem como combinações dos mesmos. Em muitos casos, será preferível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, poliálcoois, tais como manitol, sorbitol ou cloreto de sódio na composição. Exemplos adicionais de substâncias farmaceuticamente aceitáveis são agentes umectantes ou quantidades menores de substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes ou emulsificantes, conservantes ou tampões, que aumentam a vida útil ou a eficácia do anticorpo.

[00310] As composições farmacêuticas da presente invenção e métodos para a sua preparação serão facilmente evidentes para os versados na técnica. Tais composições e métodos para sua preparação podem ser encontrados, por exemplo, em Remington’s Pharmaceutical Sciences, 19^a edição (Mack Publishing Company, 1995). As composições farmacêuticas são preferencialmente fabricadas sob condições GMP (boas práticas de fabricação).

[00311] Uma composição farmacêutica da invenção pode ser preparada, embalada ou vendida a granel como uma dose unitária única ou como uma pluralidade de doses unitárias únicas. Como usado neste documento, uma dose unitária é uma quantidade discreta da composição

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147/216 farmacêutica que compreende uma quantidade predeterminada do ingrediente ativo. A quantidade do ingrediente ativo é geraimente igual à dosagem do ingrediente ativo que seria administrada a um indivíduo ou uma fração conveniente de tal dosagem, como, por exemplo, metade ou um terço de tal dosagem.

[00312] Qualquer método aceito na técnica para administração de peptídeos, proteínas ou anticorpos pode ser adequadamente empregado para os anticorpos e porções de iigação a antígeno descritos aqui.

[00313] As composições farmacêuticas da invenção são tipicamente adequadas para administração parenteral. Como usado neste documento, administração parenteral de uma composição farmacêutica inclui qualquer via de administração caracterizada por ruptura física de um tecido de um indivíduo e administração da composição farmacêutica através da ruptura no tecido, assim resultando geralmente na administração direta na corrente sanguínea, no músculo ou em um órgão interno. A administração parenterai inclui, mas sem limitação, a administração de uma composição farmacêutica por injeção da composição, aplicação da composição através de uma incisão cirúrgica, aplicação da composição através de uma ferida não cirúrgica que penetra nos tecidos, e similares. Em particular, a administração parenteral é contemplada para incluir, mas sem limitação, injeção ou infusões subcutânea, intraperitoneal, intramuscular, intraesternal, intravenosa, intra-arterial, intratecal, intraventricular, intrauretral, intracraniana, intratumoral e intrassinovial; e técnicas de infusão dialítica renal. A perfusão regional também é contemplada. Modalidades particulares incluem as vias intravenosa e subcutânea.

[00314] As formulações de uma composição farmacêutica adequada para administração parenteral geralmente compreendem o ingrediente ativo combinado com um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como água estéril ou solução salina isotônica estéril. Tais formulações podem ser preparadas, embaladas ou vendidas em uma forma adequada para

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148/216 administração em bolus ou para administração contínua. As formulações injetáveis podem ser preparadas, embaladas ou vendidas em forma de dosagem unitária, tal como em ampolas ou em recipientes de doses múltiplas contendo um conservante. As formulações para administração parenteral incluem, mas sem limitação, suspensões, soluções, emulsões em veículos oleosos ou aquosos, pastas e similares. Tais formulações ainda podem compreender um ou mais ingredientes adicionais, incluindo, mas sem limitação, agentes de suspensão, estabilização ou dispersão. Em uma modalidade de uma formulação para administração parenteral, o ingrediente ativo é fornecido na forma seca (isto é, em pó ou granular) para reconstituição com um veículo adequado (por exemplo, água estéril livre de pirogênio) antes da administração parenteral da composição reconstituída. As formulações parenterais também incluem soluções aquosas que podem conter excipientes, tais como sais, carboidratos e agentes tamponantes (preferencialmente a um pH de 3 a 9), mas, para algumas aplicações, elas podem ser mais adequadamente formuladas como uma solução não aquosa estéril ou como uma forma seca para serem usadas em conjunto com um veículo adequado, tal como água estéril livre de pirogênio. Formas de administração parenteral exemplificativas incluem soluções ou suspensões em soluções aquosas estéreis, por exemplo, soluções aquosas de propilenoglicol ou dextrose. Tais formas de dosagem podem ser adequadamente tamponadas, se desejado. Outras formulações administradas parentericamente que são úteis incluem aquelas que compreendem o ingrediente ativo na forma microcristalina, ou em uma preparação lipossômica. As formulações para administração parenteral podem ser formuladas para serem de liberação imediata e/ou modificada. As formulações de liberação modificada incluem liberação retardada, sustentada, pulsada, controlada, direcionada e programada.

[00315] Por exemplo, em um aspecto, soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas pela incorporação das composições na quantidade

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149/216 necessária em um solvente apropriado, como um ou uma combinação de ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido por esterilização filtrada. Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando o composto ativo em um veículo estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários dentre os enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e liofilização que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado de uma solução previamente filtrada por esterilização do mesmo. A fluidez adequada de uma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento, tal como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula requerido no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A absorção prolongada de composições injetáveis pode ser provocada pela inclusão, na composição, de um agente que retarda a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina, e/ou pelo uso de revestimentos de liberação modificada (por exemplo, revestimentos de liberação lenta).

Usos Terapêuticos de Terapias de Combinação e Composições da Invenção [00316] Em um aspecto, as terapias de combinação e composições de invenção são usadas para aprimorar ou ativar o sistema imune em um paciente (por exemplo, um ser humano) em necessidade do mesmo. Em algumas modalidades, o paciente é imunossuprimido. Em algumas modalidades, um médico pode potencializar a atividade anticâncer do sistema imune do paciente administrando uma terapia de combinação ou composição da presente invenção, sozinha ou em combinação com outros agentes terapêuticos (sequencialmente ou simultaneamente). A terapia de combinação ou composição modula a atividade de PD-1, TIM-3 e/ou LAG-3 em células imunes, resultando no aprimoramento da imunidade anticâncer. Em determinadas modalidades, as terapias de combi

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150/216 nação e composições da invenção são para uso no tratamento de câncer, por exemplo, cânceres que se originam em tecidos, tais como pele, pulmão, intestino, cólon, ovário, cérebro, próstata, rim, tecidos moles, sistema hematopoiético, cabeça e pescoço, fígado, bexiga, mama, estômago, útero e pâncreas, e quaisquer cânceres ou outras condições que dependam da atividade de PD-1, TIM-3 e/ou LAG-3 e/ou em que o paciente expresse ou sobre-expresse um ligante de qualquer um desses.

[00317] Em algumas modalidades, os cânceres tratados pelas terapias de combinação e composições da invenção podem incluir, por exemplo, melanoma (por exemplo, melanoma avançado ou metastático), câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de células escamosas da cabeça e pescoço, carcinoma de células renais, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, glioblastoma, glioma, câncer de pulmão de células escamosas, câncer de pulmão de células pequenas, carcinoma hepatocelular, câncer de bexiga, câncer do trato urinário superior, câncer de esôfago, câncer de junção gastroesofágica, câncer gástrico, câncer de fígado, câncer de cólon, carcinoma colorretal, mieloma múltiplo, sarcomas, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica, síndrome mielodisplásica, câncer nasofaríngeo, leucemia linfocítica crônica, leucemia linfoblástica aguda, linfoma linfocítico pequeno, câncer de ovário, câncer gastrointestinal, câncer peritoneal primário, câncer das trompas de falópio, câncer urotelial, leucemia/linfoma de células T associado a HTLV, câncer de próstata, câncer geniturinário, meningioma, câncer adrenocortical, gliossarcoma, fibrossarcoma, câncer de rim, câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer endometrial, câncer de células basais da pele, câncer do apêndice, câncer do trato biliar, câncer da glândula salivar, câncer de células Merkel avançado, linfoma difuso de células B grandes, linfoma folicular, mesotelioma, tumores neuroendócrinos, câncer urológico, câncer ósseo, câncer torácico, câncer do trato respiratório, carcinoma adenoide cístico, câncer cervical, astrocitoma, cordoma, neuroblastoma,

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151/216 câncer da cavidade oral, carcinoma de células escamosas cutâneas, câncer de tireoíde, sarcoma de Kaposi, câncer anal, câncer de vesícula biliar, câncer tímico, câncer uterino e tumores sólidos. O câncer pode estar, por exemplo, em um estágio inicial, intermediário, avançado ou metastático.

[00318] Em modalidades particulares, o câncer tratado por terapias de combinação e composições da invenção pode incluir, por exemplo, melanoma (por exemplo, melanoma avançado, melanoma irressecável ou metastático), câncer de pulmão de células não pequenas (por exemplo, câncer avançado de pulmão de células não pequenas), carcinoma de pulmão, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, glioblastoma (por exemplo, glioblastoma recorrente), gliossarcoma, carcinoma de células de Merkel, fibrossarcoma, câncer de ovário, câncer de bexiga, carcinoma de células renais, câncer colorretal, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin, leucemia (por exemplo, leucemia mieloide aguda), malignidades hematológicas, tumores sólidos (por exemplo, tumores sólidos avançados ou metastáticos), tumores MSI elevados, malignidades associadas a HPV e HIV, e tumores com mutações BRAC1 e BRAC2.

[00319] Em determinadas modalidades, as composições farmacêuticas da invenção destinam-se ao tratamento de um distúrbio imunomediado, tal como psoríase, lúpus eritematoso sistêmico, MLS (esclerose), doença de Crohn, diabetes mellitus e/ou colite ulcerativa.

[00320] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição é para uso no tratamento de infecções virais e/ou parasitárias, por exemplo, em que os patógenos inibem a resposta imune do hospedeiro. Por exemplo, o patógeno pode ser, por exemplo, HIV, hepatite (A, B ou C), vírus do papiloma humano (HPV), vírus de coriomeningite linfocítica (LCMV), adenovirus, flavivírus, echovirus, rinovírus, vírus coxsackie, comovírus, vírus sincicial respiratório, vírus da caxumba, rotavirus, vírus do sarampo, vírus da rubéola, parvovirus, vírus vaccinia, vírus

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152/216 linfotrófico de células T humanas (HTLV), citomegalovírus humano (HCMV), vírus da dengue, vírus do molusco, poliovirus, vírus da raiva, vírus de John Cunningham (JC), vírus da encefalite arboviral, vírus da imunodeficiência símia (SIV), influenza, herpes, Giardia, malária, Leishmania, Staphylococcus aureus ou Pseudomonas aeruginosa.

[00321] Em algumas modalidades, as terapias de combinação e composições da invenção podem ser usadas para tratar um paciente que é, ou estar em risco de ser, imunocomprometido (por exemplo, devido à terapia quimioterápica ou de radiação).

[00322] Em algumas modalidades, as terapias de combinação e composições da invenção podem ser usadas para ativação e expansão ex vivo de células T específicas de antígeno.

[00323] Em algumas modalidades, o paciente pode ter sido tratado previamente para uma condição caracterizada por sobre-expressão ou superatividade de PD-1, TiM-3 e/ou LAG-3 ou qualquer um de seus ligantes (por exemplo, câncer ou um distúrbio imune). Por exemplo, o paciente pode ter sido tratado com uma ou mais drogas direcionadas a PD1, TIM-3 e/ou LAG-3 e pode ter adquirido resistência à(s) referida(s) drogais).

[00324] Tratar, tratando e tratamento se referem a um método para aliviar ou revogar um distúrbio biológico e/ou pelo menos um de seus sintomas associados. Como usado neste documento, aliviar uma doença, distúrbio ou condição significa reduzir a gravidade e/ou a frequência de ocorrência dos sintomas da doença, distúrbio ou condição. Além disso, as referências aqui a tratamento incluem referências a tratamento curativo, paliativo e profiiático.

[00325] Quantidade terapeuticamente eficaz refere-se à quantidade do agente terapêutico que está sendo administrado que aliviará em certa medida um ou mais dos sintomas do distúrbio que está sendo tratado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente terapêutico anti

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153/216 câncer pode, por exemplo, resultar em encolhimento do tumor, aumento da sobrevida, eliminação de células cancerosas, diminuição da progressão da doença, reversão de metástase ou outros parâmetros clínicos desejados pelos profissionais de saúde.

[00326] Em algumas modalidades, os anticorpos, porções de ligação a antígeno ou moléculas de ligação multiespecíficas na terapia de combinação da invenção são administrados em uma única composição. Em outras modalidades, os anticorpos, porções de ligação a antígeno ou moléculas de ligação multi-específicas são administrados em mais de uma composição. Por exemplo, uma terapia de combinação compreendendo um anticorpo anti-PD-1, um anticorpo anti-TIM-3 e um anticorpo antiLAG-3 pode envolver a administração de uma única composição compreendendo todos os três anticorpos, uma composição compreendendo dois dos anticorpos e uma composição compreendendo um dos anticorpos, ou uma composição separada para cada anticorpo. Em um caso em que há mais de uma composição, as composições podem ser administradas simultaneamente, sequencialmente, separadamente ou qualquer combinação dos mesmos.

[00327] As terapias de combinação e composições da invenção podem ser administradas sozinhos ou em combinação com uma ou mais outras drogas ou anticorpos (ou como qualquer combinação dos mesmos). As composições farmacêuticas, métodos e usos da invenção, portanto, também abrangem modalidades de combinações (coadministração) com outros agentes ativos, conforme detalhado abaixo.

[00328] Como usado neste documento, os termos coadministração, coadministrado e em combinação com”, referindo-se a terapias de combinação ou composições de invenção com um ou mais outros agentes terapêuticos, pretendem significar, e se referem a e incluem o seguinte:

- administração simultânea de tal terapia de combinação (ou

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154/216 um componente da mesma) ou composição e agente(s) terapêutico(s) a um paciente em necessidade de tratamento, quando esses componentes são formulados juntos em uma única forma de dosagem que libera os referidos componentes substancialmente ao mesmo tempo ao referido paciente,

- administração substanciaimente simultânea de tal terapia de combinação (ou um componente da mesma) ou composição ou agente(s) terapêutico(s) a um paciente em necessidade de tratamento, quando esses componentes são formulados separadamente de outros em formas de dosagem separadas, que são tomadas substancialmente ao mesmo tempo pelo referido paciente, após o que os referidos componentes são liberados substancialmente ao mesmo tempo ao referido paciente,

- administração sequencial de tal terapia de combinação (ou de um componente da mesma) ou composição e agente(s) terapêutico(s) a um paciente em necessidade de tratamento, quando esses componentes são formulados separadamente de outros em formas de dosagem separadas que são tomadas em momentos consecutivos pelo referido paciente com um intervalo de tempo significativo entre cada administração, após o que os referidos componentes são liberados em momentos substancialmente diferentes ao referido paciente;

- administração sequencial de tal terapia de combinação (ou um componente da mesma) ou composição ou agente(s) terapêutico(s) a um paciente em necessidade de tratamento, quando esses componentes são formulados juntos em uma única forma de dosagem que libera os referidos componentes de maneira controlada, quando são liberados simultaneamente, consecutivamente e/ou sobrepostos nos mesmos e/ou diferentes momentos ao referido paciente, e cada parte pode ser administrada pela mesma ou por uma rota diferente.

[00329] As terapias de combinação e composições da invenção po

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155/216 dem ser administradas sem tratamentos terapêuticos adicionais, isto é, como uma terapia independente (isto é, monoterapia). Alternativamente, o tratamento com uma terapia de combinação ou composição da invenção pode incluir pelo menos um tratamento terapêutico adicional, por exemplo, outro agente imunoestimulador, um agente anticâncer, um agente antiviral ou uma vacina (por exemplo, uma vacina de tumor). Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou composição pode ser coadministrada ou formulada com outro medicamento/droga para o tratamento de câncer. O tratamento terapêutico adicional pode compreender, por exemplo, um agente quimioterápico, antineoplásico ou antiangiogênico, um anticorpo anticâncer diferente e/ou terapia de radiação.

[00330] Ao combinar as terapias de combinação e composições da invenção com agentes conhecidos por induzir a diferenciação terminal de células de câncer, o efeito pode ser ainda mais melhorado. Tais compostos podem, por exemplo, ser selecionados do grupo que consiste em ácido retinoico, ácidos trans-retinoicos, ácidos cis-retinoicos, fenilbutirato, fator de crescimento de nervos, dimetilsulfóxido, vitamina D3 em forma ativa, receptor gama ativado por proliferador de peroxissomo, 13-acetato de 12-0-tetradecanoilforbol, hexametileno-bis-acetamida, fator beta de crescimento transformador, ácido butírico, AMP cíclico e vesnarinona. Em algumas modalidades, o composto é selecionado do grupo que consiste em ácido retinóico, fenilbutirato, ácido all-trans-retinóico e vitamina D em forma ativa.

[00331] Os artigos farmacêuticos que compreendem uma terapia de combinação ou composição da invenção e pelo menos um outro agente (por exemplo, um agente quimioterápico, antineoplásico ou antlangiogênico) podem ser usados como um tratamento de combinação para administração simultânea, separada ou sucessiva em terapia de câncer. O outro agente pode ser qualquer agente adequado para o tratamento do câncer particular em questão, por exemplo, um agente selecionado do

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156/216 grupo que consiste em agentes alquilantes, por exemplo, derivados de platina, tais como cisplatina, carboplatina e/ou oxaliplatina; alcalóides vegetais, por exemplo, paclitaxel, docetaxel e/ou irinotecano; antibióticos antitumorais, por exemplo, doxorrubicina (adriamicina), daunorrubicina, epirrubicina, idarubicina mitoxantrona, dactinomicina, bleomicina, actinomicina, luteomicina e/ou mitomicina; inibidores de topoisomerase, tais como topotecano; e/ou antimetabólitos, por exemplo, fluorouracil e/ou outras fluoropirimidinas. Em algumas modalidades, o outro agente é dacarbazina ou gencitabina.

[00332] Uma terapia de combinação ou composição da invenção também pode ser usada em combinação com outras terapias anticâncer, tais como vacinas, citocinas, inibidores de enzima, compostos imunoestimuladores e terapias com células T. No caso de uma vacina, pode, por exemplo, ser uma vacina de proteína, peptídeo ou DNA contendo um ou mais antígenos relevantes para o câncer em tratamento, ou uma vacina que compreende células dendríticas junto com um antígeno. Citocinas adequadas incluem, por exemplo, IL-2, IFN-gama e GM-CSF. Um exemplo de um tipo de inibidor de enzima que tem atividade anticâncer é um inibidor da indoleamina-2,3-dioxigenase (IDO), por exemplo 1-metil-Dtriptofano (1-D-MT). A terapia com células T adotivas refere-se a várias técnicas de imunoterapia que envolvem a expansão ou modificação das células T dos próprios pacientes para reconhecer e atacar seus tumores. [00333] Também é contemplado que uma terapia de combinação ou composição da invenção pode ser usada em terapia adjuvante em conexão com inibidores de tirosina quinase. Estas são moléculas sintéticas, principalmente derivadas de quinazolina, de baixo peso molecular que interagem com o domínio de receptores intracelular de tirosina quinase e inibem a fosforilação do receptor induzida por ligante, competindo pelo sítio de ligação a Mg-ATP intracelular.

[00334] Em algumas modalidades, a terapia de combinação ou com

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157/216 posição pode ser usada em combinação com outro medicamento/droga que medeia a ativação do sistema imune, incluindo, mas sem limitação, um agente que modula a expressão ou atividade de A2AR, BTLA, B7-H3, B7-H4, CTLA-4, CD27, CD28, CD39, CD40, CD47, CD55, CD73, CD122, CD137, CD160. CGEN-15049, LY108, CHK1, CHK2, CTLA-3, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1 e/ou CEACAM-5), GAL9, GITR, HVEM, ICOS, IDO, KIR, LAIR1, NKG2A, 0X40, PD-L1/PD-L2, LILRB2, CMTM6, TIGIT, TGFR-beta, TNFR2, VISTA e/ou 2B4. Em determinadas modalidades, o agente é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo que se liga a uma das moléculas acima. Em modalidades particulares, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno do mesmo, composição ou molécula de ligação biespecífica da invenção podem ser administrados em combinação com um inibidor de CTLA-4 (por exemplo, um anticorpo anti-CTLA-4, tal como tremelimumabe ou ipilimumabe). Em uma modalidade, o anticorpo ou porção de ligação a antígeno do mesmo, composição ou molécula de ligação biespecífica da invenção podem ser administrados em combinação com ipilimumab. Também é contemplado que a terapia de combinação ou composição da invenção pode ser usada em combinação com uma citocina (por exemplo, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15 ou IL21), um inibidor de EGFR, um inibidor de VEGF etc.

[00335] Em determinados aspectos, as terapias de combinação e composições da invenção podem ser administradas em combinação com outro inibidor da via de PD-1, TIM-3 ou LAG-3, que pode ter como alvo PD-1, TIM-3, LAG-3, ou um ou mais dos ligantes de qualquer um desses alvos. Exemplos de tais inibidores incluem:

- outros anticorpos anti-PD-1 e anticorpos que têm como alvo correceptores e/ou ligantes de PD-1, tais como PD-L1 ou PD-L2 (por exemplo, pembrolizumabe e/ou nivolumabe);

- outros anticorpos anti-TIM-3e anticorpos que têm como alvo correceptores e/ou ligantes de TIM-3, tais como galectina-9, HMGB-1,

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Hpídios de fosfatidilserina, CEACAM1, LILRA1-6 ou LILRB1-5 (por exemplo, MGB453. TSR-022 e/ou LY3321367); e

- outros anticorpos anti-LAG-3 e anticorpos que têm como alvo correceptores e/ou ligantes de LAG-3, tais como MHCII, Galectina-3, e LSECtin (por exemplo, BMS-986016, GSK2831781, REGN3767, BAP050 ou BAP050-chi, ou LAG525).

[00336] Entende-se que as terapias de combinação e composições da invenção podem ser usadas em um método de tratamento conforme aqui descrito, podem ser para uso em um tratamento conforme descrito aqui, e/ou podem ser para uso na fabricação de um medicamento para um tratamento conforme descrito aqui. A invenção também fornece kits e artigos de fabricação que compreendem as terapias de combinação ou composições de invenção conforme descritas aqui.

Dose e Rota de Administração [00337] As terapias de combinação e composições da invenção serão administradas em uma quantidade eficaz para o tratamento da condição em questão, isto é, em dosagens e por períodos de tempo necessários para alcançar um resultado desejado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores, tais como a condição particular que está sendo tratada, a idade, o sexo e o peso do paciente, e se os anticorpos estão sendo administrados como um tratamento independente ou em combinação com um ou mais tratamentos anticâncer adicionais.

[00338] Os regimes de dosagem podem ser ajustados para fornecer a resposta desejada ideal. Por exemplo, um único bolus pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parentéricas em forma de dosagem unitária para facilitar a administração e uniformidade de dosagem. A forma de dosagem unitária, como usada neste documento, refere-se a unidades

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159/216 fisicamente discretas adequadas como doses unitárias para pacientes/indivíduos a serem tratados; cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de composto ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veículo farmacêutico necessário. A especificação para as formas de dosagem unitárias da invenção é geralmente ditada por e diretamente dependente de (a) as características únicas do agente quimioterápico e do efeito terapêutico ou profilático específico a ser alcançado; e (b) as limitações inerentes à técnica de composição de tal composto ativo para o tratamento de sensibilidade em indivíduos.

[00339] Dessa forma, o versado na técnica apreciaria, com base na divulgação aqui fornecida, que a dose e o regime de dosagem são ajustados de acordo com métodos bem conhecidos nas técnicas terapêuticas. Ou seja, a dose máxima tolerável pode ser facilmente estabelecida, e a quantidade eficaz que fornece um benefício terapêutico detectável a um paciente também pode ser determinada, assim como os requisitos temporais para que a administração de cada agente forneça um benefício terapêutico detectável ao paciente. Por conseguinte, embora certos regimes de administração e doses sejam exemplificados neste documento, esses exemplos de forma alguma limitam a dose e o regime de administração que pode ser fornecido a um paciente na prática da presente invenção.

[00340] Deve-se observar que os valores de dosagem podem variar com o tipo e gravidade da condição a ser aliviada, e podem incluir doses únicas ou múltiplas. Deve ser entendido ainda que, para qualquer indivíduo em particular, os regimes de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições, e que as faixas de dosagem estabelecidas neste documento são apenas exemplificativas e não se destinam a limitar

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160/216 o escopo ou a prática da terapia de combinação incorporada. Além disso, o regime de dosagem com as terapias de combinação e composições da presente invenção pode se basear em vários fatores, incluindo o tipo de doença, idade, peso, sexo, condição médica do paciente, gravidade da condição, via de administração e anticorpo específico empregado. Assim, o regime de dosagem pode variar amplamente, mas pode ser determinado rotineiramente usando métodos padrão. Por exemplo, as doses podem ser ajustadas com base em parâmetros farmacocinéticos ou farmacodinâmicos, que podem incluir efeitos clínicos, tais como efeitos tóxicos e/ou valores laboratoriais. Assim, a presente invenção abrange a escalada de dose intrapaciente, conforme determinado pelo especialista. A determinação de dosagens e regimes apropriados é bem conhecida na técnica relevante e seria entendida como abrangida pelo versada na técnica, desde que fornecidos os ensinamentos aqui divulgados.

[00341] Contempla-se que uma dose adequada de um anticorpo em uma terapia de combinação ou composição da invenção será na faixa de 0,1-100 mg/kg, tal como cerca de 0,5-50 mg/kg, por exemplo, cerca de 120 mg/kg. O anticorpo pode, por exemplo, ser administrado em uma dosagem de pelo menos 0,25 mg/kg, por exemplo, pelo menos 0,5 mg/kg, tal como pelo menos 1 mg/kg, por exemplo, pelo menos 1,5 mg/kg, tal como pelo menos 2 mg/kg, por exemplo, pelo menos 3 mg/kg, tal como pelo menos 4 mg/kg, por exemplo, pelo menos 5 mg/kg; e por exemplo, até no máximo 50 mg/kg, tal como até no máximo 30 mg/kg, por exemplo, até no máximo 20 mg/kg, tal como até no máximo 15 mg/kg. A administração normalmente será repetida em intervalos adequados, por exemplo, uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas ou uma vez a cada quatro semanas, e pelo tempo que for considerado apropriado pelo médico responsável, que pode aumentar ou diminuir opcionalmente a dosagem conforme necessário.

[00342] Uma quantidade eficaz para terapia tumoral pode ser medida

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161/216 por sua capacidade de estabilizar a progressão da doença e/ou melhorar os sintomas em um paciente e, de preferência, reverter a progressão da doença, por exemplo, reduzindo o tamanho do tumor. A capacidade de uma terapia de combinação da invenção para inibir o câncer pode ser avaliada por ensaios /n vitro, por exemplo, como descrito nos Exemplos, bem como em modelos animais adequados que são preditivos da eficácia em tumores humanos (veja, por exemplo, os Exemplos). Os regimes de dosagem adequados serão selecionados para fornecer uma resposta terapêutica ideal em cada situação específica, por exemplo, administrados como um bolus único ou como infusão contínua, e com o possível ajuste da dosagem conforme indicado pelas exigências de cada caso.

Artigos de Fabricação e Kits [00343] A presente invenção também provê artigos de fabricação compreendendo um anticorpo anti-PD-1 que compete pela ligação a PD1 humana com, ou se liga ao mesmo epítopo de PD-1 humana que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 12819.15384,

12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376,

12777.15382, 12760.15375 e 13112.15380; e um anticorpo anti-TIM-3 ou um anticorpo anti-LAG-3.

[00344] Em algumas modalidades, the artigo de fabricação compreende:

- pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a

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162/216 antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui; ou

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, pelo menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

bem como métodos de fabricação dos referidos artigos.

[00345] A presente invenção também provê kits compreendendo um anticorpo anti-PD-1 que compete pela ligação a PD-1 humana com, ou se liga ao mesmo epítopo de PD-1 humana que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 e 13112.15380; e um anticorpo anti-TIM-3 ou um anticorpo anti-LAG-3.

[00346] Em algumas modalidades, o kit compreende:

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e peio menos um anticorpo anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

- peio menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui;

- pelo menos um anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, pelo menos um anticorpo

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163/216 anti-TIM-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui, e pelo menos um anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo conforme descrito aqui.

[00347] A menos que aqui definido de outra forma, os termos técnicos e científicos utilizados em conexão com a presente invenção devem ter os significados que são comumente entendidos pelos versados na técnica. Métodos e materiais exemplificativos são descritos abaixo, embora métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos aqui também possam ser usados na prática ou no teste da presente invenção. Em caso de conflito, a presente especificação, incluindo as definições, prevalecerá.

[00348] Geralmente, a nomenclatura usada em conexão com e as técnicas de cultura de células e tecidos, biologia molecular, imunologia, microbiologia, genética, química analítica, química orgânica sintética, química medicinal e farmacêutica, química de proteínas e ácidos nucleicos e hibridização aqui descritas são bem conhecidas e comumente usadas na técnica. As reações enzimáticas e as técnicas de purificação são realizadas de acordo com as especificações do fabricante, conforme comumente realizado na técnica ou conforme descrito aqui.

[00349] Além disso, a menos que de outro modo exigido pelo contexto, os termos singulares devem incluir pluralidades e os termos plurais devem incluir o singular. Ao longo desta especificação e modalidades, as palavras ter e compreender, ou variações, tais como tem, tendo, compreende ou compreendendo, serão entendidas como implicando a inclusão de um número inteiro declarado ou grupo de números inteiros, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro ou grupo de números inteiros.

[00350] Todas as publicações e outras referências mencionadas aqui são incorporadas por referência na íntegra. Embora vários documentos sejam citados aqui, esta citação não constitui uma admissão de que

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164/216 qualquer um desses documentos faça parte do conhecimento geral comum na técnica.

[00351] Para que a presente invenção possa ser melhor compreendida, os seguintes exemplos são apresentados. Esses exemplos sâo apenas para fins ilustrativos e não devem ser interpretados como limitando o escopo da invenção de qualquer maneira.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Atividade in vitro melhorada de direcionamento combinado de PD-1/TIM-3 em ensaio MLR unidirecional [00352] Este exemplo demonstra que o direcionamento combinado de PD-1 e TIM-3 usando o anticorpo anti-PD-1 12819 e o anticorpo anti-TIM3 15086.17145 melhoram a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista (MLR) unidirecional.

[00353] No ensaio MLR unidirecional, células dendríticas (DCs) e células T CD4+ isoladas de dois doadores saudáveis humanos diferentes foram cocultivadas para induzir uma reação específica de aloantígeno, resultando na produção de citocinas e na ativação/proliferação de células T. As células dendríticas (DCs) foram diferenciadas de monócitos CD14+ por 6 dias de cultura com 20 ng/ml de fator estimulador de colônias de granulócitos-macrófagos (GM-CSF) e 20 ng/ml de interleucina-4 (IL-4) e misturados em uma proporção 1:10 com células T CD4+ isoladas de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de material de doador humano saudável. Os anticorpos ou mistura de anticorpos indicados foram adicionados a uma concentração final total de 10 pg/ml. A mistura de anticorpos continha uma proporção 1:1 de anticorpos anti-PD-1 e antiTIM-3. Após 5 dias de cultura, os sobrenadantes foram coletados e os níveis de IFN-y foram determinados utilizados o ensaio de citocinas por eletroquimioluminescência Meso Scale. O teste t não pareado de Student foi usado para análise estatística e correção de Bonferroni foi usada para ajustar várias comparações. Um valor de p corrigido <0,05 é considerado

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165/216 estatisticamente significativo.

[00354] A Figura 1 apresenta o efeito de anticorpos anti-PD-1 e antiTIM-3 na secreção de IFN-γ no ensaio MLR unidirecional em três pares de doadores independentes. Ambos os anticorpos anti-PD-1 (12819) e anti-TIM-3 (15086) foram funcionais no ensaio MLR unidirecional e aumentam a secreção de IFN-y em todos os três pares de doadores. Além disso, a combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 apresenta atividade melhorada pela indução de um aumento estatisticamente significativo em IFN-y em comparação com os anticorpos individuais.

Exemplo 2: Atividade in vitro melhorada de direcionamento combinado de PD-1/TIM-3 em ensaio MLR bidirecional [00355] Este exemplo demonstra que o direcionamento combinado de PD-1 e TIM-3 usando o anticorpo anti-PD-1 12819 e o anticorpo anti-TIM3 15086.17145 melhoram a secreção de IFN-y em um ensaio MLR bidirecional.

[00356] No ensaio MLR bidirecional, PBMCs de dois doadores humanos saudáveis diferentes foram cocultivadas para induzir uma reação específica de aloantígeno, resultando na produção de citocinas e na ativação/proliteração de células T. As PBMCs dos dois doadores diferentes foram misturadas na proporção de 1:1. Os anticorpos foram testados em uma concentração de anticorpo final total de 10 pg/ml. Após 5 dias de cuitura, os sobrenadantes foram coletados e os níveis de IFN-y foram determinados usando o ensaio de citocinas por eletroquimioluminescência Meso Scale. O teste t não pareado de Student foi usado para análise estatística e correção de Bonferroni foi usada para ajustar várias comparações. Um valor de p corrigido <0,05 é considerado estatisticamente significativo.

[00357] A Figura 2 mostra o efeito dos anticorpos anti-PD-1 e antiTIM-3 na secreção de IFN-y no ensaio MLR bidirecional em três pares de doadores humanos independentes. Ambos os anticorpos anti-PD-1 e anPetição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 404/478

166/216 ti-TIM-3 aumentaram a secreção de IFN-γ no ensaio MLR bidirecional. Além disso, a combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 mostrou melhor atividade pela indução de maior secreção de IFN-y em comparação com os anticorpos individuais.

Exemplo 3: Anticorpo anti-TIM-3 induz a profilefração de células T in vitro em ensaio MLR unidirecional [00358] A capacidade do anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 de induzir a proliferação de células T foi investigada no ensaio MLR unidirecional. O anticorpo anti-TIM-3, um anticorpo controle positivo contra PD-1 (12819) ou um anticorpo de lgG2 controle negativo foram adicionados a uma concentração final de 25 pg/ml e incubados por 5 dias antes da adição de 1 pCi/cavidade de 3H-timidina por mais 18 horas. As células foram coletadas, e a incorporação de 3H-timidina efoi determinada por contagem de cintilação liquida (MicroBeta2).

[00359] Como mostrado na Figura 3, o anticorpo anti-TIM-3

15086.17145 induziu a proliferação de células T CD4+ e CD8+ em um grau semelhante ao anticorpo controle positivo contra PD-1 (Painel A). A adição de anti-CD3 solúvel aumentou a proliferação induzida pelo anticorpo anti-TIM-3 (Painel B).

Exemplo 4: Anticorpo anti-TIM-3 induz secreção de IL-12p40 a partir de células dendríticas [00360] Células dendríticas derivadas de monócitos foram geradas a partir de material doador saudável, como descrito anteriormente no Exemplo 1. As células dendríticas foram incubadas por 5 dias com 10 pg/ml de anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 ou um anticorpo de lgG2 controle negativo, ou sem tratamento, e os níveis de IL-12p40 nos sobrenadantes foram determinados usando o teste de citocina ELISA padrão.

[00361] Como mostrado na Figura 4, a ligação de TIM-3 pelo anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 resultou em um aumento na secreção de IL12p40 a partir de células dendríticas.

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Exemplo 5: Anticorpo anti-TIM-3 induz a expressão de marcadores de ativação de células dendríticas [00362] Para melhor investigar o papel funcional de direcionamento de TIM-3, os níveis de expressão de marcadores de ativação selecionados em células dendríticas derivadas de monócitos foram determinados após tratamento com anticorpo anti-TIM-3 15086.17145.

[00363] Células dendríticas foram tratadas com 25 pg/ml de anticorpo anti-TIM-3 por 24 horas e a expressão gênica de moléculas coestimuladoras foi determinada usando NanoString Technologies. Os níveis de expressão gênica foram normalizados para 30 genes de limpeza (housekeeping) com expressão uniforme. Os dados para os genes relevantes selecionados são apresentados como uma alteração de dobra em relação às células de controle não tratadas.

[00364] A análise de expressão gênica mostrou uma sobrerregulação de vários marcadores de ativação e moléculas coestimuladoras, incluindo MHC-II (HLA-DQB1 e HLA-DQA1), CD80 e CD86 (Figura 5, Painel A). A expressão aumentada de superfície celular de CD80 e CD86 após tratamento com anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 foi validada usando análise FACS (Figura 5, Painel B). As sobreposições de histograma mostradas são representativas de células dendríticas CD11c+, e os números adjacentes aos histogramas representam valores de IMF.

Exemplo 6: Eficácia in vivo de anticorpo anti-TIM-3 15086 no crescimento tumoral de PDX de pulmão humano [00365] Este exemplo mostra a eficácia in vivo de anticorpo anti-TIM-3

15086.17145 em um modelo de tumor de xenoenxerto derivado de paciente (PDX) de pulmão humano em camundongos NSG-SGM3 humanizados com CD34+.

[00366] Os camundongos NSG-SGM3 foram humanizados usando células CD34+ derivadas de sangue do cordão umbilical e enxertados no flanco direito com fragmentos de tumor de pulmão derivado de paciente

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168/216 (LG1306). Nos tamanhos de tumor entre 50-150 mm³, os camundongos foram randomizados e o tratamento foi iniciado. Os camundongos receberam injeção intraperitoneal de veiculo ou anticorpo anti-TIM-S 15086 com uma dose inicial de 10 mg/kg seguida por 5 mg/kg 5x Q5D. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³ foi calculado de acordo com a fórmula: (largura)² x comprimento x 0,5. A área cinza representa o período de tratamento. Teste ANOVA bidirecional com múltiplas comparações de Bonferroni foi aplicado para comparar volumes tumorais em cada período de tempo entre os grupos de tratamento. Os dados são apresentados como média ± SEM, **p<0,01.

[00367] O tratamento com anticorpo anti-TIM-3 15086 resultou em uma inibição de tumor significativa em um modelo PDX de pulmão humano de camundongo NSG-SGM3 humanizado com CD34+ (Figura 6).

Exemplo 7: Efeito melhorado de direcionamento combinado de PD1/LAG-3, PD-1/TIM-3 ou PD-1/TIM-3/LAG-3 em um ensaio PBMC+SEB [00368] Este exemplo descreve o efeito melhorado da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 com anticorpo anti-LAG-3 15532 ou anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 no ensaio PBMC+SEB (Enterotoxina Estafilocócica B).

[00369] SEB é um superantígeno que se liga a moléculas MHC classe II e regiões νβ específicas de receptores de células T (TCR) e ativa a estimulação não específica de células T. Isso resulta na ativação/proliferaçâo de células T policlonais e na liberação de citocinas, incluindo IL-2. PBMCs humanas isoladas de buffy-coats (camadas leucoplaquetárias) de doadores saudáveis foram semeadas em placas de 384 cavidades e deixadas sem tratamento ou tratadas com 10 ng/ml de SEB e 10 pg/ml dos anticorpos únicos ou misturas de anticorpos indicados. As combinações de vetores foram 1:1 ou 1:1:1 de misturas dos anticorpos indicados. Após 48 horas em uma incubadora umidificada a 37°C, os so

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169/216 brenadantes foram removidos e analisados quanto aos níveis de IL-2, utilizando um kit ELISA de IL-2 (Life Technologies). Os dados são apresentados como média ± SEM. As diferenças significativas foram testadas usando o teste t de Student com correção de Bonferroni.

[00370] A Figura 7 apresenta um aumento na secreção de IL-2 após o tratamento com um único anticorpo anti-PD-1, anti-LAG-3 ou anti-TIM-3, misturas de dois dos anticorpos ou a mistura de todos os três anticorpos. Os dados demonstraram que os níveis de IL-2 foram elevados por tratamento único com anticorpo anti-PD-1, anti-LAG-3 ou anti-TIM-3, enquanto a secreção de IL-2 foi elevada ainda mais por tratamento com uma combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti~LAG~3, ou anticorpos anti-PD~ 1 e anti-TIM-3. A combinação tripla de anticorpos anti-PD-1, anti-LAG-3 e anti-TIM-3 aumentou a secreção de IL-2 mais do que qualquer uma das combinações de dois anticorpos.

Exemplo 8: Eficácia in vivo melhorada da combinação de anticorpos antiPD-1 e anti-LAG-3 em dois modelos de tumor de camundongo singênicos [00371] Este exemplo demonstra a eficácia in vivo da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 com anticorpo anti-LAG-3 C9B7W (reativo com LAG-3 de camundongo; BioXcell) ou anticorpo anti-LAG-3 15011 em dois modelos de tumor de camundongo singênicos.

[00372] 0,5 x 10⁶ células MC38 (carcinoma de cólon) ou 5 x 10⁶ células ASB-XIV (carcinoma de pulmão) foram inoculadas subcutaneamente no flanco de camundongos fêmeas BALB/cAnNRj (ASB-XIV) ou C57BL/6 (MC38) com 6-8 semanas de idade, respectivamente. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³ foi calculado de acordo com a fórmula: (largura)²x comprimento x 0,5. No dia 5 (ASB-XIV) ou dia 13 (MC38) após a inoculação com um tamanho médio de tumor de 30-50 mm³, os camundongos foram randomizados em quatro grupos de dez animais e o tratamento foi

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170/216 iniciado. Os camundongos foram tratados três vezes por semana com um total de seis tratamentos por injeção intraperitoneal de tampão de veiculo, anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-LAG-3 C9B7W, anticorpo anti-LAG-3 15011, ou uma combinação de anticorpos anti-PD-1 e antiLAG-3. Os tratamentos com anticorpos foram administrados em uma dose de 10 mg/kg/alvo. Teste ANOVA bidirecional com múltiplas comparações de Bonferroni foi aplicado para comparar volumes tumorais em cada ponto no tempo entre os grupos de tratamento. Análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism versão 5,0 (GraphPad Software, Inc.).

[00373] Os tumores singênicos MC38 tratados com anticorpo anti-PD~ 1 monoclonal 12819 exibiram um crescimento tumoral contínuo, embora com uma cinética de crescimento mais lenta do que os tumores tratados com veículo (Figura 8). Não foi observado nenhum efeito de tratamento com anticorpo anti-LAG-3 C9B7W sozinho. A combinação do anticorpo anti-PD-1 e do anticorpo anti-LAG-3 mostrou aumento da inibição de crescimento tumoral em comparação com o tratamento com anti-PD-1 e inibição de crescimento tumoral significativa em comparação com tumores tratados com veículo (p<0,001) (Figura 8).

[00374] Os tumores singênicos ASB-XIV tratados com anticorpo com anticorpo anti-PD-1 12819 mostraram crescimento tumoral tardio em comparação com tumores tratados com veículo (Figuras 8 e 9). Não foi observado nenhum efeito de tratamento com o anticorpo anti-LAG-3 C9B7W sozinho (Figura 8), enquanto o anticorpo anti-LAG-3 15011 inibiu significativamente o crescimento tumoral em comparação com o tratamento com veículo (p<0,05) (Figura 9). A combinação do anticorpo antiPD-1 e do anticorpo anti-LAG-3 C9B7W aumentou significativamente a eficácia antitumoral em comparação com o tratamento com veículo (Figura 8). Um efeito inibidor de tumor significativamente melhorado também foi observado por uma combinação do anticorpo anti-PD-1 e anticorpo

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171/216 anti-LAG-3 15011 em comparação com tratamento único com o anticorpo anti-PD-1 (p<0,0001) ou anticorpo anti-LAG-3 (p<0,05) (Figura 9).

Exemplo 9: Eficácia /n vivo melhorada da combinação de anticorpos antiPD-1 e anti-TIM-3 em dois modelos de tumor de camundongo singênicos [00375] Este exemplo demonstra a eficácia in vivo da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 e anticorpo anti-TIM-3 5D12 (reativo com TIM3 de camundongo; Anderson et al., Science 318:1141-43 (2007)) em dois modelos de tumor de camundongo singênicos.

[00376] 0,2 x 10⁶ células Sa1N (fibrossarcoma) ou 5 x 10⁶ células

ASB-XIV (carcinoma de pulmão) foram inoculadas por via subcutânea no flanco de camundongos fêmeas A/J (Sa1N) e BALB/cAnNRj (ASB-XIV) de 6-8 semanas de idade, respectivamente. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³ foi calculado de acordo com a fórmula: (largura)² x comprimento x 0,5. Em um tamanho médio de tumor de 60-110 mm³, os camundongos foram randomizados e o tratamento foi iniciado. Os camundongos foram tratados com uma dose única (Sa1N), ou tratados três vezes por semana com um total de seis tratamentos (ASB-XIV), por injeção intraperitoneal de tampão de veículo, anticorpo anti-PD-1 12819 e/ou anticorpo anti-TIM-3 5D12. Os tratamentos com anticorpo foram administrados em uma dose de 10 mg/kg/alvo em camundongos com tumores ASB-XIV. Os camundongos com tumores Sa1N foram doseados com anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 em 1 mg/kg e 10 mg/kg, respectivamente. Teste ANOVA bidirecional com múltiplas comparações de Bonferroni foi aplicado para comparar volumes tumorais em cada ponto no tempo entre os grupos de tratamento. Análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism versão 5,0 (GraphPad Software, Inc.).

[00377] No dia 6 após a inoculação de células tumorais ASB-XIV, com tamanho médio de tumor de 56 mm³, os camundongos foram randomizados em quatro grupos de dez animais e o tratamento foi iniciado. O

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172/216 tratamento com anticorpo anti-PD-1 12819 retardou o crescimento tumoral, enquanto o tratamento com anticorpo anti-TIM-3 5D12 não teve efeito sobre o crescimento tumoral em comparação com o tratamento com veículo. Um efeito inibidor de tumor acentuado foi observado pela combinação do anticorpo anti-PD-1 com o anticorpo anti-TIM-3, em comparação com o tratamento único com qualquer anticorpo (p<0,001) (Figura 10).

[00378] No dia 13 após a inoculação de céluias tumorais Sa1N, com um tamanho médio de tumor de 110 mm³, os camundongos foram randomizados em quatro grupos de dez animais e doseados com um único tratamento de anticorpos. Os resultados mostraram um atraso no crescimento tumoral inicial a partir do tratamento com anticorpo único com anticorpo anti-PD-1 12819 ou anticorpo anti-TIM-3 5D12. Um efeito antitumoral melhorado foi observado por combinação do anticorpo anti-PD-1 com o anticorpo anti~TIM~3, em comparação com o tratamento com anticorpo único. O tratamento de combinação também inibiu significativamente o crescimento tumoral em comparação com o tratamento com veículo (p<0,0001) (Figura 10).

Exemplo 10: Eficácia in vivo da combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 em um modelo de tumor de xenoenxerto humano [00379] Este exemplo demonstra eficácia in vivo melhorada da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 com anticorpo anti-TIM-3

15086.17145 em um modelo de tumor de xenoenxerto humano, em que células A375 (melanoma humano) foram enxertadas em camundongos reconstituídos com PBMC humanas.

[00380] PBMCs humanas foram injetadas interperitonealmente nos camundongos NOG (doador 1 e doador 2) ou NOG-EXL (hGM-CSF/hlL3-NOG) (doador 3) um dia antes do enxerto subcutâneo das células humanas de melanoma A375. O tratamento foi iniciado no dia da injeção de PBMC e os camundongos foram tratados três vezes por semana com um total de seis tratamentos por injeção intraperitoneal de tampão de veícuPetição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 411/478

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Io, anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 ou uma combinação dos anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3. Os tratamentos com anticorpo foram administrados em uma dose de 10 mg/kg/alvo. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³ foi calculado pela fórmula: (largura)² x comprimento x 0,5. Teste ANOVA bidirecional com múltiplas comparações de Bonferroni foi aplicado para comparar volumes tumorais em cada ponto no tempo entre os grupos de tratamento. Análises estatísticas foram realizadas usando o GraphPad Prism versão 5,0 (GraphPad Software, Inc.).

[00381] Como mostrado na Figura 11, o tratamento com a combinação dos anticorpos anti-PD-1 e anti-TIM-3 resultou em retardo do crescimento tumoral significativo (e sinérgico, pelo menos no doador 3) (p<0,05 e p<0,01), enquanto o tratamento com anticorpo único (anti-PD-1 ou antiTIM-3) mostrou efeito limitado no crescimento tumoral em comparação com o grupo tratado com veículo.

Exemplo 11: Direcionamento combinado de PD-1 e TIM-3 leva a aumento da sobrevivência em camundongos coenxertados com células tumorais e imunes humanas [00382] Este exemplo demonstra a eficácia in vivo da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 com anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 em modelos de camundongo de tumores humanos.

[00383] 2x10® células A375 (melanoma) foram misturadas com 2x10⁶

PBMCs humanas e inoculadas subcutaneamente no flanco de camundongos fêmeas NOD-scid com 6-8 semanas de idade. No momento da inoculação celular, o tratamento foi iniciado. Os camundongos foram tratados três vezes por semana com um total de seis tratamentos por injeção intraperitoneal de tampão de veículo, anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-TIM-3 15086.17145 ou uma combinação de anti-PD-1 e antiTIM- 3. Os tratamentos com anticorpo foram administrados em uma dose

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174/216 de 10 mg/kg para cada anticorpo. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³ foi calculado de acordo com a fórmula: (largura)² x comprimento x 0,5.

[00384] A sobrevivência foi definida como tendo um tamanho de tumor <400 mm³. Os resultados mostraram um aumento na sobrevivência de camundongos tratados com uma combinação dupla de anticorpos antiPD-1 e anti-TIM-3 em comparação com qualquer tratamento com anticorpo único (Figura 12, Painéis A-E).

Exemplo 12: Direcionamento combinado de PD-1, LAG-3 e TIM-3 levam a aumento de sobrevivência em um modelo de tumor de camundongo singênico [00385] Este exemplo demonstra a eficácia ín vivo da combinação de anticorpo anti-PD-1 12819 com anticorpo anti-LAG-3 C9B7W e anticorpo anti-TIM-3 5D12 em um modelo de tumor de camundongo singênico.

[00386] 5x10⁶ células ASB-XIV (carcinoma de pulmão) foram inoculadas por via subcutânea no flanco de camundongos BALB/cAnNRj fêmeas de 6-8 semanas de Idade. Os tumores foram medidos três vezes por semana com paquímetro em duas dimensões e o volume tumoral em mm³foi calculado de acordo com a fórmula: (largura)² x comprimento x 0,5. No dia 5 após a inoculação, com tamanho de tumor médio de 50 mm³, os camundongos foram randomizados em sete grupos de dez animais e o tratamento foi iniciado. Os camundongos foram tratados três vezes por semana com um total de seis tratamentos por injeção intraperitoneal de tampão de veículo, anticorpo anti-PD-1 12819, anticorpo anti-LAG-3 C9B7W, anticorpo anti-TIM-3 5D12 ou uma combinação de anticorpos anti-PD-1 e anti-LAG-3, anti-PD-1 e anti-TIM-3, ou anti-PD-1, anti-LAG-3 e anti-TIM-3. Os tratamentos com anticorpo foram administrados em uma dose de 10 mg/kg para cada anticorpo.

[00387] A sobrevivência foi definida como tendo um tamanho de tumor

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175/216 <400 mm³. Os resultados mostraram maior sobrevivência de camundongos tratados com uma combinação tripla de anticorpos anti-PD-1, antiLAG-3 e anti-TIM-3, em comparação com qualquer tratamento com anticorpo único ou duplo (Figura 13, Painéis A-H).

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Tabela 1: Identificadoes de Sequência de Anticorpos

Alvo	Ab	DNA	Proteína	H-CDR1	H-CDR2	H-CDR3	L-CDR1	L-CDR2	L-CDR3
VH	VL	VH	VL
TIM-3	15086.15086	1	2	3	4	8	9	10	11	12	13
15086.16837 15086.17145 15086.17144	5	6	7
15105	14	15	16	17	18	19	20	21	22	23
15107	24	25	26	27	28	29	30	31	32	33
15109	34	35	36	37	38	39	40	41	42	43
15174	44	45	46	47	48	49	50	51	52	53 \|
15175	54	55	56	57	58	59	60	61	62	63
15260	64	65	66	67	68	69	70	71	72	73
15284	74	75	76	77	78	79	80	81	82	83 \|
15299	84	85	86	87	88	89	90	91	92	93
15353	94	95	96	97	98	99	100	101	102	103
15354	104	105	106	107	108	109	110	111	112	113 \|
17244	114	115	116	117	118	119	120	121	122	123
17245	124	125	126	127	128	129	130	131	132	133
19324	134	135	136	137	138	139	140	141	142	143
19416	144	145	146	147	148	149	150	151	152	153
19568	154	155	156	157	158	159	160	161	162	163
20131	164	165	166	167	168	169	170	171	172	173
20185	174	175	176	177	178	179	180	181	182	183

176/216

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Alvo	Ab	DNA	Proteína	H-CDR1	H-CDR2	H-CDR3	L-CDR1	L-CDR2	L-CDR3
VH	VL	VH	VL
20293	184	185	186	187	188	189	190	191	192	193 \|
20300	194	195	196	197	198	199	200	201	202	203
20362	204	205	206	207	208	209	210	211	212	213
20621	214	215	216	217	218	219	220	221	222	223 \|

PD-1	12819.15384	224	225	226	227	228	229	230	231	232	233
12748.15381	234	235	236	237	238	239	240	241	242	243 \|
12865.15377	244	245	246	247	248	249	250	251	252	253
12892.15378	254	255	256	257	258	259	260	261	262	263
12796.15376	264	265	266	267	268	269	270	271	272	273
12777.15382	274	275	276	277	278	279	280	281	282	283
12760.15375	284	285	286	287	288	289	290	291	292	293
13112.15380	294	295	296	297	298	299	300	301	302	303
12748.16124	234	391	236	392	238	239	240	393	394	395
LAG-3	15646	304	305	306	307	308	309	310	311	312	313
15532	314	315	316	317	318	319	320	321	322	323
15723	324	325	326	327	328	329	330	331	332	333 \|
15595	334	335	336	337	338	339	340	341	342	343
15431	344	345	346	347	348	349	350	351	352	353
15572	354	355	356	357	358	359	360	361	362	363 \|
15011	364	365	366	367	368	369	370	371	372	373

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Tabela 2: Sequências de Região Constante

SEQ ID NO	Descrição	Sequência
374	Sequência de proteína de região constante de cadeia pesada de lgG1	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELL GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCWVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
375	Sequência de proteína de região constante de cadeia pesada de lgG1-LALA	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAA GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
376	Sequência de proteína de região constante de cadeia pesada de lgG4 (S228P)	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSWTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGG PSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ FNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPS QEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
377	Sequência de proteína de região constante de cadeia pesada de lgG2	ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQS SGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGP SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQF NSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSR EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
378	Sequência de proteína de região constante de cadeia	RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

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SEQ ID NO	Descnção	Sequência
	leve Kappa
379	Sequência de proteína de região constante de cadeia leve Lambda	GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPS KQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
380	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de IgGI-LALA excluindo introns	GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAA GGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGT GCCCAGCACCTGAAGCCGCCGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACC CAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGAC GTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG TGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGT GGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCC AAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGA TGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGAC ATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGC CTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGAC AAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCT GCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA
381	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de lgG1-LALA incluindo introns	GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTC TGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTG ACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTG TCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGC AGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAA

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SEQ ID NO	Descnção	Sequência
		GGTGGACAAGAGAGTTGGTGAGAGGCCAGCACAGGGAGGGAGGGTGTCTGCTGG AAGCCAGGCTCAGCGCTCCTGCCTGGACGCATCCCGGCTATGCAGTCCCAGTCCA GGGCAGCAAGGCAGGCCCCGTCTGCCTCTTCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCA CTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTGGCTTTTTCCCCAGGCTCTGGGCAGGCACAG GCTAGGTGCCCCTAACCCAGGCCCTGCACACAAAGGGGCAGGTGCTGGGCTCAGA CCTGCCAAGAGCCATATCCGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCAAA GGCCAAACTCTCCACTCCCTCAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATTCCAGTAA CTCCCAATCTTCTCTCTGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCAC CGTGCCCAGGTAAGCCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTG CCCTAGAGTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACACGTCCAC CTCCATCTCTTCCTCAGCACCTGAAgccgccGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCC CCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGT GGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGC GTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGT ACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGA GTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCT CCAAAGCCAAAGGTGGGACCCGTGGGGTGCGAGGGCCACATGGACAGAGGCCGG CTCGGCCCACCCTCTGCCCTGAGAGTGACCGCTGTACCAACCTCTGTCCCTACAGG GCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACC AAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGC CGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCC GTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAG CAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACA ACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGTAAA
382	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de lgG4 (S228P) excluindo introns	GCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCT CCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT GACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCT GTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG

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SEQ ID NO	Descnção	Sequência
		CAGCTTGGGCACGAAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGAGAGTTGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCAcCATGCCCAGCA CCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAACCCAAGGACAC TCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCAG GAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGAGGTGCATAATG CCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGT CCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCT CCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAG CCCCGAGAGCCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCAGGAGGAGATGACCAAGA ACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGC TGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCA CTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
383	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de lgG4 (S228P) incluindo introns	GCTTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCT CCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT GACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCT GTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG CAGCTT GGGCACGAAGACCT ACACCTGCAACGT AGAT CACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGAGAGTTGGTGAGAGGCCAGCACAGGGAGGGAGGGTGTCTGCTG GAAGCCAGGCTCAGCCCTCCTGCCTGGACGCACCCCGGCTGTGCAGCCCCAGCCC AGGGCAGCAAGGCAGGCCCCATCTGTCTCCTCACCCGGAGGCCTCTGACCACCCC ACTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTGGATTTTTCCACCAGGCTCCGGGCAGCCAC AGGCTGGATGCCCCTACCCCAGGCCCTGaGCATACAGGGGCAGGTGCTGCGCTCA GACCTGCCAAGAGCCATATCCGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCCACCCCA AAGGCCAAACTCTCCACTCCCTCAGCTCAGACACCTTCTCTCCTCCCAGATCTGAGT AACTCCCAATCTTCTCTCTGCAGAGTCCAAATATGGTCCCCCATGCCCAcCATGCCC AGGTAAGCCAACCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCTAGA

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SEQ ID NO	Descnção	Sequência
		GTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCCGGGTGCTGACGCATCCACCTCCATC TCTTCCTCAGCACCTGAGTTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTGTTCCCCCCAAAA CCCAAGGACACTCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGG ACGTGAGCCAGGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGATGGCGTGGA GGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTACCGT GTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACA AGTGCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCGTCCTCCATCGAGAAAACCATCTCCAAA GCCAAAGGTGGGACCCACGGGGTGCGAGGGCCACATGGACAGAGGTCAGCTCGG CCCACCCTCTGCCCTGGGAGTGACCGCTGTGCCAACCTCTGTCCCTACAGGGCAG CCCCGAGAGCCACAGGT GT ACACCCTGCCCCCAT CCCAGGAGGAGAT GACCAAGA ACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTG GAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGC TGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGG TGGCAGGAGGGGAATGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCA CTACACACAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCTGGGTAAA
384	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de lgG2 excluindo introns	GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCT CCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT GACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCT GTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG CAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGACAGTTGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCCAGCA CCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCT CATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAA GACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCA AGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTGGTCAGCGTCCT CACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCA ACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACCAAAGGGCAGCCC CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACC

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 421/478

SEQ ID NO	Descnção	Sequência
		AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGA GTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTG GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTG GCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT ACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
385	Sequência de DNA de região constante de cadeia pesada de lgG2 incluindo introns	GCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCGCCCTGCTCCAGGAGCACCT CCGAGAGCACAGCCGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGT GACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCTCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCAGCT GTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAG CAACTTCGGCACCCAGACCTACACCTGCAACGTAGATCACAAGCCCAGCAACACCA AGGTGGACAAGACAGTTGGTGAGAGGCCAGCTCAGGGAGGGAGGGTGTCTGCTGG AAGCCAGGCTCAGCCCTCCTGCCTGGACGCACCCCGGCTGTGCAGCCCCAGCCCA GGGCAGCAAGGCAGGCCCCATCTGTCTCCTCACCCGGAGGCCTCTGCCCGCCCCA CTCATGCTCAGGGAGAGGGTCTTCTGGCTTTTTCCACCAGGCTCCAGGCAGGCACA GGCTGGGTGCCCCTACCCCAGGCCCTTCACACACAGGGGCAGGTGCTTGGCTCAG ACCTGCCAAAAGCCATATCCGGGAGGACCCTGCCCCTGACCTAAGCCGACCCCAAA GGCCAAACTGTCCACTCCCTCAGCTCGGACACCTTCTCTCCTCCCAGATCCGAGTA ACTCCCAATCTTCTCTCTGCAGAGCGCAAATGTTGTGTCGAGTGCCCACCGTGCCC AGGTAAGCCAGCCCAGGCCTCGCCCTCCAGCTCAAGGCGGGACAGGTGCCCTAGA GTAGCCTGCATCCAGGGACAGGCCCCAGCTGGGTGCTGACACGTCCACCTCCATC TCTTCCTCAGCACCACCTGTGGCAGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACC CAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACGTGCGTGGTGGTGGAC GTGAGCCACGAAGACCCCGAGGTCCAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGG TGCATAATGCCAAGACAAAGCCACGGGAGGAGCAGTTCAACAGCACGTTCCGTGTG GTCAGCGTCCTCACCGTTGTGCACCAGGACTGGCTGAACGGCAAGGAGTACAAGT GCAAGGTCTCCAACAAAGGCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAACC AAAGGTGGGACCCGCGGGGTATGAGGGCCACATGGACAGAGGCCGGCTCGGCCC ACCCTCTGCCCTGGGAGTGACCGCTGTGCCAACCTCTGTCCCTACAGGGCAGCCC

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 422/478

SEQ ID NO	Descnção	Sequência
		CGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACC AGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTACCCCAGCGACATCGCCGTGGA GTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCCATGCTG GACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTG GCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACT ACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAA
386	Sequência de DNA de região constante de cadeia leve Kappa	CGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAA TCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAA GTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCAC AGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGC AAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCT GAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
387	Sequência de DNA de região constante de cadeia leve Lambda	CCTAGGTCAGCCCAAGGCCAACCCCACTGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGG AGCTCCAAGCCAACAAGGCCACACTAGTGTGTCTGATCAGTGACTTCTACCCGGGA GCTGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATGGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAG ACCACCAAACCCTCCAAACAGAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAG CCTGACGCCCGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCAT GAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 423/478

Tabela 3: Sequências de Proteína Alvo

Proteína	Sequência de Aminoácido
PD-1 humana UniProt Q15116 (SEQ ID N°: 388)	MQIPQAPWPWWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPS NQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSWRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTER RAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGWGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVD YGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL
TIM-3 humano UniProt Q8TDQ0 (SEQ ID N°: 389)	MFSHLPFDCVLLLLLLLLTRSSEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNWLRTDERDV NYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIKPAKVTPAPTRQRDFTAAFPRML TTRGHGPAETQTLGSLPDINLTQISTLANELRDSRLANDLRDSGATIRIGIYIGAGICAGLALALIFGALIFKWYSHSKE KIQNLSLISLANLPPSGLANAVAEGIRSEENIYTIEENVYEVEEPNEYYCYVSSRQQPSQPLGCRFAMP
LAG-3 humano UniProt P18627 (SEQ ID N°: 390)	MWEAQFLGLLFLQPLWVAPVKPLQPGAEVPVVWAQEGAPAQLPCSPTIPLQDLSLLRRAGVTWQHQPDSGPPA AAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVLSVGPGGLRSGRLPLQPRVQLDERGRQRGDFSLWLRPARRADAG EYRAAVHLRDRALSCRLRLRLGQASMTASPPGSLRASDWVILNCSFSRPDRPASVHWFRNRGQGRVPVRESPH HHLAESFLFLPQVSPMDSGPWGCILTYRDGFNVSIMYNLTVLGLEPPTPLTVYAGAGSRVGLPCRLPAGVGTRSF LTAKWTPPGGGPDLLVTGDNGDFTLRLEDVSQAQAGTYTCHIHLQEQQLNATVTLAIITVTPKSFGSPGSLGKLLC EVTPVSGQERFVWSSLDTPSQRSFSGPWLEAQEAQLLSQPWQCQLYQGERLLGAAVYFTELSSPGAQRSGRAP GALPAGHLLLFLILGVLSLLLLVTGAFGFHLWRRQWRPRRFSALEQGIHPPQAQSKIEELEQEPEPEPEPEPEPEP EPEPEQL

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 424/478

Tabela 4: Sequências de nucleotídeo de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-TIM-3

Ab	Sequência (5'a 3')
15086. 15086 VH	CAGGTGCAGCTACAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGTTGGACCCGTCAGCACCCAGGGATGGGCCTGG AGTGGATTGGATACATCTCTTACAGTGGGAGTATCTATTACACTCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATC AGTGGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTATATTA CTGTGCGAGTTTGGATTCCTGGGGATCTAACCGTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGA GT (SEQ ID N°: 1)
15086. 15086 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGA Μ IIGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGCTC ACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATTAAG (SEQ ID N°: 2)
15086. 16837/15086. 17145/15086. 17144 VH	CAGGTGCAGCTGCAGGAGAGTGGCCCCGGACTGGTCAAGCCTTCACAGACTCTGAGCCTGACCTGCACAGT GTCTGGCGGAAGTATCAGCTCCGGGGGTTACTATTGGAGCTGGACCCGACAGCACCCAGGAATGGGTCTGG AATGGATCGGGTACATTTCATATAGCGGCTCCATCTACTATACACCCTCACTGAAAAGCAGGCTGACCATTTC CGTGGACACATCTAAGAACCAGTTCAGCCTGAAACTGTCTAGTGTGACAGCCGCTGATACTGCAGTCTACTAT TGTGCCTCCCTGGACTCTTGGGGCAGTAATAGAGATTACTGGGGCCAGGGAACTCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 5)
15086. 16837/15086.	GAGATCGTGCTGACTCAGTCCCCAGCCACCCTGTCACTGAGCCCAGGAGAACGAGCAACCCTGTCTTGCAG GGCCTCCCAGTCTGTCAGCTCCTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGGCAGGCACCTCGACTGCTGA

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 425/478

Ab	Sequência (5'a 3')
17145/15086. 17144 VL	TCTACGACGCCAGTAACAGAGCTACCGGTATTCCCGCCCGCTTCAGTGGTTCAGGCAGCGGAACAGACTTTA CCCTGACAATCTCTAGTCTGGAGCCTGAAGATTTCGCCGTGTACTATTGTCAGCAGAGGTCTAATTGGCCACT GACATTTGGCGGAGGGACTAAGGTCGAGATCAAG (SEQ ID N°: 6)
15105 VH	CAGGTCACCTTGAAGGAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAGGCCCTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGT CTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGA TAGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAG ACGCGACCAAGAAACAATTCTCCCTGAAGCTGACCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTG CGAGATATTGGGAGCTCCCTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 14)
15105 VL	GACATCCAGTTGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATC TATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGA I I I I GCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCTCCGA CGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID N°: 15)
15107 VH	CAGATGCAGCTGGTGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGT CTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGA TTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTTG ACACGTCCAAGCACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTG CGAGATGGTGGGAGCTTCCTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 24)
15107 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCAAGTCAGGGCATTAGAAATGATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTGATC

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 426/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	TATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGA I II I GCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCGTGGA CGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID N°: 25)
15109 VH	CAGATGCAGCTGGTGCAATGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGT CTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGA TTGGGGAAATCAATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAG ACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTGTGTATTACTGTG CGAGGTTTTACTATGCTCCGAACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 34)
15109 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGACAGCCCCTAAGCTCCTGATC TATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCCACTTT CGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA (SEQ ID N°: 35)
15174 VH	CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTAGTAATTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG AGTGGATTGGGAGTATCTATTATAGTGGGAACACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATC CGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTA CTGTGCGAGACAGACAGTGGCTGGCCCCCTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGA GT (SEQ ID N°: 44)

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 427/478

Ab	Sequência (5'a 3')
15174 VL	GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCCAGTCAGAGTATTAGTAGCTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGGTCCTGATC TATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAACTCACT CTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCATTCAC TTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAG (SEQ ID N°: 45)
15175 VH	CAGGTCCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGC TGCTGGATACACCTTAACCGGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGCCTTGAGTGGAT GGGACGGATCAACCCTAACAGTGGTGGCTCAAACAATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCA GGGACACGTCCATCAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTAC TGTGCGAGAGAGGGTCCCCTGTATAGCAGTGGCTGGTACGAGGGTGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGAC AATGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 54)
15175 VL	GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCTTCCACCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCCAGTCAGAGTATTAGTAGTTGGTTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATC TATAAGGCGTCTAGTTTAGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGATGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTATTCTCCGG GGCTCACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAG (SEQ ID N°: 55)
15260 VH	CAGATGCAGCTACAGCAGTCAGGTCCAGGACTGGTGAAGCCCTCGCAGACCCTCTCACTCACCTGTGCCAT CTCCGGGGACAGTGTCTCTAGCAACAGTGCTGCTTGGAACTGGATCAGGCAGTCCCCATCGAGAGGCCTTG AGTGGCTGGGAAGGACATACTACAGGTCCAAGTGGTATTCTGCTTTTGCAGTATCTGTGAAAAGTCGAATAAC CATCAACCCAGACACATCCAAGAACCAGTTCTCCCTGCAGCTGAACTCTGTGACTCCCGAGGACACGGCTGT

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 428/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	GTATTACTGTGCAAGAGAGGGTAGCAGTGGCTGGTACGGATACGTCCACCACTGGGGCCAGGGCACCCTGG TCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 64)
15260 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCTTCCCTGTCTGTATCTCTGGGAGAAACTGTCACCATCGAATGTCGAG CAAGTGAGGACATTTACAATGGTTTAGCATGGTATCAGCAGAAGCCAGGGAAATCTCCTCAGCTCCTGATCTA TAATGCAAATAGCTTGCATACTGGGGTCCCATCACGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGTACACAGTATTCTCTC AAGATAAACAGCCTGCAATCTGAAGATGTCGCAAGTTATTTCTGTCAACAGTATTACGATTATCCTCCGACGTT CGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID N°: 65)
15284 VH	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCTTCAGCAGTAGTAGTTACTACTGGGGCTGGATCCGCCAGCCCCCTGGGAAGGGGCTGG AGTGGATTGGGATCTTCTATTATAGTGGGACCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATC CGCACACACGTCCAAGAGCCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTA CTGTGCGAGAGGGGGAGAATAI II IGACCGGTTACTCCCCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCA CCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 74)
15284 VL	GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCATCCTTCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCCAGTCAGGGCATTAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATC TATGCTGCATCCACTTTGGAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGA I I I I GCAACTTATTACTGTCAACAGCTTAATAGTTACCCATTCAC TTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA (SEQ ID N°: 75)
15299 VH	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAG CCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 429/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	GTCTCAGCTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC AGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGTGAAAGATGGGGCAGGAGGCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 84)
15299 VL	GATATTGTGATGACGCAGTCTTCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCAAGTCAGGGCATTATAAATCATTTAGGCTGGTATCAGCATAAACCAGGGAAAGCCCCTAATCGCCTAATCT ATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACTC TCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGTCTACGGCATAATAGTTACCCTCCGAC GTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID N°: 85)
15353 VH	CAGGTGCAGCTACAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTGGTCACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAGGGGCCTGG AGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCATCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATC AGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTA CTGTGCGAGTTATTACTATGCCAGTAGTGGTGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGT CTCGAGT (SEQ ID N°: 94)
15353 VL	GAAACGACACTCACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTCCG ACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID N°: 95)

191/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 430/478

Ab	Sequência (5'a 3')
15354 VH	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAG CCTCTGGATTCACCTTTAGTAATTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG GTCTCAGCTATTAGTGGTCGTGGTGGTAGCACATTCTTCGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC AGAGACAATTCCAAGAGCACGCTGTATCTGCAAACGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGCGAAAGGGGGCCCGTTGTATAACTGGAACGACGGTGATGGTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 104)
15354 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCAACTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCAT CTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCACTGGGTCTGGGACAGAGTTCA CTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCACTTTATTACTGTCAGCAGTATGATAACTGGCCTCC GTGGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID N°: 105)
17244 VH	CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAG CCTCTGGATTCACCTTCAGTGACTACTACATGACCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG ATTTCATACATTAGTGGTGGTGGTGGTTCCATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCA GGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTTCT GTGCGAGAGGGAACTGGGGATCGGCGGCTCTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACGGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 114)
17244 VL	GAAATTGTGTTGACGCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGG GCGAGTCAGGGCATTAACAATTATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAGAGCCCCTAAGTCCCTGATC TATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCGAAGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACT

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 431/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	CTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGTTACCCTCCAA CTCTCGGCCCTGGGACCAACGTGGATATCAAA (SEQ ID N°: 115)
17245 VH	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTACAG CCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG GTCTCAGCTATTGGTGGTAGTGGTGGTAGCGCATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC AGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGTGAAAGATGGGGCAGGAGGCTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 124)
17245 VL	GACATCCAGTTGACCCAGTCCCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGG GCAAGTCAGGGCATTAGAAATCATTTAGGCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGCCTAATC TATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGAATTCACT CTCACAATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGA I II I GCAACTTATTACTGTCTACAGCATAATAGTTACCCTCCGA CGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID N°: 125)
19324 VH	CAGATGCAGCTACAGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAG CCTCTGGATTCACCGTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCTAGGGAAGGGGCTGGAGTGG GTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC AGAGACAATTCCAAGAATACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGCGAAGATAGTGGGAGCTACCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACGGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 134)
19324 VL	GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAG

193/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 432/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	TCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGC CTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGG TCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAAT ATTATAGTGGTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAG (SEQ ID N°: 135)
19416 VH	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAACAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGG AGTGGATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCATCTACTACAACCCGTCCCTCAGGAGTCGACTTACCATATC AGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTTTATTA CTGTGCGACTCCTTATTACTATGGTTCGGGGAGTTATGGGGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACTGT CTCGAGT (SEQ ID N°: 144)
19416 VL	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAACAACTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCCATC ACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAA (SEQ ID N°: 145)
19568 VH	CAGATGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCTCAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT GTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGTTGGTTACTACTGGAACTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGG AGTTCATTGGGTACATCTATTACAGTGGGAGCATCTACTACAATCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATC CGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCCTATATTA CTGTGCGAGCGTCGGTATAGTGGGAGCCTCCTACTTTGAGTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTCT

194/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 433/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	CGAGT (SEQ ID N°: 154)
19568 VL	GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGA I I I I GCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCTATC ACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATCAAG (SEQ ID N°: 155)
20131 VH	CAGGTGCAGCTACAGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAG CCTCTGGATTCACCTTAAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG GTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACAACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC AGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTTTCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGCGAAAATTTTTGGGTCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 164)
20131 VL	GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAG TCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAACAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAGC CTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGACATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTAACCGATTCAGTGGCAGCGGGT CTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAATA TTATAGTGGTCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID N°: 165)
20185 VH	CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAG TCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGG GTCTCAGGTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACAACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCC

195/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 434/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	AGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTAC TGTGCGAAAATTTTTGGGTCCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 174)
20185 VL	GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAAG TCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGCTCCAATAATAAGAACTACTTAGCTTGGTACCAGCAGAAATCAGGACAGC CTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGGG TCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCAAT ATTATAGTGGTCCACCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA (SEQ ID N°: 175)
20293 VH	ACGTGACAGGGCGCGCCCAGGTCCAGCTGCAGGAGAGCGGTCCCGGACTGGTGAAGCCATCCCAGACACT GAGCCTGACTTGTACTGTGAGCGGCGGTAGCATCTCCAGCGGCGGCTACTATTGGTCCTGGATCAGGCAGC ACCCAGGCAAGGGCCTGGAGTGGATCGGCTACATCTACTATAGCGGCTCTATCTACTATAACCCTTCCCTGA AGAGCCGGGTGACCATCTCTGTGGACACATCCAAGAATCAGTTCTATCTGAAGCTGTCTTCCGTGACCGCCG CTGATACAGCCGTGTACTATTGCGCCTCACTGATGGTCTGGGGGGTCATGGGCGATTACTGGGGGCAGGGC ACACTGGTCACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 184)
20293 VL	GAGATTGTGCTGACCCAGTCTCCCGCCACCCTGTCTCTGAGTCCTGGCGAGAGAGCCACCCTGAGCTGCAG AGCCTCTCAGTCCGTGTCCAGCTATCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGA TCTACGATGCCTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCTGCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTA CCCTGACCATCTCCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGCGGTCCGACTGGCCT CCTACATTTGGCCAAGGCACCAAGGTGGAAATCAAG (SEQ ID N°: 185)
20300 VH	CAGGTCCAGCTACAGCAGTCTGGGGGAGGCTTGGTTCATCCTGGGGGGTCCCTAAGACTCTCCTGTGCAGC

196/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 435/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	CTCTGGATTCACCGTTGACACCTATGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGG TCTCAGGTATTAGCGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCA GAGACAACTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGACGAGGACACGGCCGTATATTACT GTGCGAAGATAGTGGGAGTTACCCACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACGGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 194)
20300 VL	GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGACTCCCTGGCTGTGTCTCTGGGCGAGAGGGCCACCATCAACTGCAA GTCCAGCCAGAGTGTTTTATACAGGTCCAACAATAAGAACTATTTAGCTTGGTACCAGCAGAAACCAGGACAG CCTCCTAAGCTGCTCATTTACTGGGCATCTACCCGGGAATCCGGGGTCCCTGACCGATTCAGTGGCAGCGG GTCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGGCTGAAGATGTGGCAGTTTATTACTGTCAGCA ATATTATAGTGGTCCGATCACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAG (SEQ ID N°: 195)
20362 VH	CAGGTCACCTTGAAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTCATTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGG AGTGGATTGGGTACATCTCTTACAGTGGGAGCACCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGACTTACCATATC AGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCGCGGACACGGCCGTGTATTA CTGTGCGACCGCGTATTACGATATTTTGACTGGTTACCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC GGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 204)
20362 VL	GAAATTGTGATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCGACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGATC

197/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 436/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	ACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATCAAG (SEQ ID N°: 205)
20621 VH	CAGGTGCAGCTACAGCAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCACAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGT CTCTGGTGGCTCCATCAGCAGTGGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCACCCAGGGAAGGGCCTGG AGTGGATTGGGTACATCTCTTATAGTGGGAGTATCTACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTTACCATATC AGTAGACACGTCTAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACTGCCACGGACACGGCCGTGTATTA CTGTGCGACCGCGTATTACGATCTTTTGACTGGTTACCCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCAC GGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 214)
20621 VL	GAAATTGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGG GCCAGTCAGAGTGTTAGCAGCTACTTAGCCTGGTACCAACAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATC TATGATGCATCCAACAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGCAGCCTAGAGCCTGAAGA I Μ I GCAGTTTATTACTGTCAGCAGCGTAGCAACTGGCCGATC ACCTTCGGCCAAGGGACACGACTGGAGATTAAG (SEQ ID N°: 215)

198/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 437/478

Tabela 5: Sequências de aminoácido de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-TIM-3 (CDRs estão em negrito e itálico)

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
15086.15086 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSGGYYWSWTRQHPGMGLEWIGY/SYSGS/YYTPSLKSRLTISV DTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLDSWGSMRDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 3)
15086.16837 15086.17145 15086.17144 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSGGYYWSWTRQHPGMGLEWIGY/SySGS/YYTPSLKSRLTISVD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASLDSWGS/VRDyWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 7)
15086.15086 15086.16837 15086.17145 15086.17144 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSyLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID N°: 4)
15105 VH	QVTLKEWGAGLLRPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEWHSGSTNYNPSLKSRVTISVDA TKKQFSLKLTSVTAADTAVYYCARWfiLPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 16)
15105 VL	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQG/RMDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT ISSLQPEDFATYYCLQHNSyPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 17)
15107 VH	QMQLVQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEWVHSGSTNYNPSLKSRVTMSVD TSKHQFSLKLSSVTAADTAVYYCARWWELPDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 26)

199/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 438/478

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
15107 VL	EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQG/RMDLGWYQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT ISSLQPEDFATYYCLQHA/SrPWFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 27)
15109 VH	QMQLVQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYyWSWIRQPPGKGLEWIGEflVHSGSTNYNPSLKSRVTISVDT SKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARFYYAPNFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 36)
15109 VL	EIVLTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQS/SSWLAWYQQKPGTAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPDDFATYYCQQVWSYSTFGGGTKVEIK (SEQ ID N°: 37)
15174 VH	QVQLQQSGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSNYYWGWIRQPPGKGLEWIGS/yySGNTYYNPSLKSRVTISVD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARQ7VAGPLFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 46)
15174 VL	EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQS/SSWLAWYQQKPGKAPKVLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTELTLTI SSLQPDDFATYYCQQY/VSYSFTFGPGTKVDIK (SEQ ID N°: 47)
15175 VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAAGYTLTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGR/A/P/VSGGSNNAQKFQGRVTM TRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGPLYSSGWYGGAFD/IM3QGTMVTVSS (SEQ ID N°: 56)
15175 VL	EIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQS/SSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPDDFATYYCQQY/VSYSPGLTFGGGTKVEIK (SEQ ID N°: 57)
15260 VH	QMQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSSWSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRryYRSKWYSAFAVSVKSRIT INPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARFGSSGWyGyVHHIMSQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 66)
15260 VL	EIVLTQSPASLSVSLGETVTIECRASED/yWGLAWYQQKPGKSPQLLIYMA/VSLHTGVPSRFSGSGSGTQYSLKI NSLQSEDVASYFCQQyyDyPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 67)
15284 VH	QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSFSSSSyYWGWIRQPPGKGLEWIGIFyySGTTYYNPSLKSRVTISAH TSKSQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGEyFDRLLPFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 76)

200/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 439/478

Ab	Sequência (N-terminai a C-terminal)
15284 VL	EIVMTQSPSFLSASVGDRVTITCRASQG/SSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCQQLWSYPFTFGPGTKVDIK (SEQ ID N°: 77)
15299 VH	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSA/GGSGGSTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDGAGGFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 86)
15299 VL	DIVMTQSSSSLSASVGDRVTITCRASQG/WVHLGWYQHKPGKAPNRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTI SSLQPEDFATYYCLRHNSYPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 87)
15353 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSWVSGGHYWSWIRQHPGRGLEWIGY/YYSGS/YYNPSLKSRLTISVD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCASYYYASSGDAFD/M/GQGTMVTVSS (SEQ ID N°: 96)
15353 VL	ETTLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQPSAWPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 97)
15354 VH	QVQLQESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSMyAMSWVRQAPGKGLEWVSA/SGRGGSTFFADSVKGRFTIS RDNSKSTLYLQTNSLRAEDTAWYCAKGGPLYJWWDGDGFD/W3QGTTVTVSS (SEQ ID N°: 106)
15354 VL	EIVLTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSS/VLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGTGSGTEFTLTI SSLQSEDFALYYCQQYDNWPPWTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 107)
17244 VH	QVQLQESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMTWIRQAPGKGLEW/SY/SGGGGS/YYADSVKGRFTISRD NAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYFCARG/VWGSAALD/WGQGTMVTVSS (SEQ ID N°: 116)
17244 VL	EIVLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQG/NNYLAWFQQKPGRAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCQQY/VSYPPTLGPGTNVDIK (SEQ ID N°: 117)
17245 VH	QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSA/GGSGGSAYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKDGAGGFDYW3QGTLVTVSS (SEQ ID N°: 126)

201/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 440/478

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
17245 VL	DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQG/RA/HLGWYQQKPGKAPKRUYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLT ISSLQPEDFATYYCLQHA/SYPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 127)
19324 VH	QMQLQQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGF7VSSYAMSWVRQALGKGLEWVSG/SGSGGS7YYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC4K/VG4THFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 136)
19324 VL	EIVMTQSPDSLjWSLGERATINCKSSQSVLYSSAWKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSGP/TFGQGTRLEIK (SEQ ID N°: 137)
19416 VH	QVQLVESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/NSGGYyWSWIRQHPGKGLEWIGY/YYSGS/YYNPSLRSRLTISVD TSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCATPYYYGSGSYGDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 146)
19416 VL	DIQMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVMVYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTL TISSLEPEDFAVYYCQQRS/WP/TFGQGTRLEIK (SEQ ID N°: 147)
19568 VH	QMQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSVGYyWNWIRQHPGKGLEFIGY/YYSGS/YYNPSLKSRVTISVD TSKNQFSLKLSSVTAADTALYYCASVG/VGASYFEYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 156)
19568 VL	EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYD4SNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQRSAWP/TFGQGTRLEIK(SEQ ID N°: 157)
20131 VH	QVQLQQSGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYdMSWVRQAPGKGLEWVSG/SGSGGSTYNADSVKGRFTIS RDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCAK/FGSYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 166)
20131 VL	EIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSMVKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWTSTRESGVPNRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQVYSGPPTFGQGTKVEIK (SEQ ID N°: 167)
20185 VH	QVQLVESGGGLVRPGGSLRLSCAVSGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSG/SGSGGSTYNADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK/FGSYYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 176)

202/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 441/478

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
20185 VL	EIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSMVKNYLAWYQQKSGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSGPPTFGQGTKVEIK(SEQ ID N°: 177)
20293 VH	QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSGGyyWSWIRQHPGKGLEWIGY/yySGS/YYNPSLKSRVTISVD TSKNQFYLKLSSVTAADTAVYYCASL/WVWGVMGDWVGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 186)
20293 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLUYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAVYYCQQRSDWPPTFGQGTKVEIK(SEQ ID N°: 187)
20300 VH	QVQLQQSGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTVDTYAMTWVRQAPGKGLEWVSG/SGSGGSTYYADSVKGRFTIS RDNSKNTLYLQMNSLRDEDTAVYYCAK/VGVTHFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 196)
20300 VL	EIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYPSWWK/VyLAWYQQKPGQPPKLLIYM/ASTRESGVPDRFSGSGS GTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQVYSGP/TFGQGTRLEIK (SEQ ID N°: 197)
20362 VH	QVTLKESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSGGHYWSWIRQHPGKGLEWIGY/SYSGS7YYNPSLKSRLTISVD TSKNQFSLKLSSVT AADTAVYY CA TA YYDILTGYPFD WGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 206)
20362 VL	EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASDRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQRSAWP/TFGQGTRLEIK (SEQ ID N°: 207)
20621 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGS/SSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGY/SYSGS/YYNPSLKSRVTISVD TSKNQFSLKLSSVTATDTAVYYCATAYYDLLTGYPFDyWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 216)
20621 VL	EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLT ISSLEPEDFAVYYCQQRSWWP/TFGQGTRLEIK (SEQ ID N°: 217)

203/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 442/478

Tabela 6: Sequências de nucleotídeo de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-PD-1

Ab	Sequência (5'a 3')
12819.15384 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGCGACTGAGC TGCGCCGCTTCTGGATTCACCTTTACAAGATACGACATGGTGTGGGTCCGCCAGGCACCAGGAAAGGGACTG GAGTGGGTGGCTGGTATCGGCGATAGTAACAAGATGACCCGCTACGCACCTGCCGTCAAAGGGAGGGCAAC AATTAGTCGGGACAACTCAAAGAATACTCTGTATCTGCAGATGAATTCCCTGCGAGCTGAGGATACAGCAGTG TACTATTGTGCCAAAGGTAGCTGCATCGCCTGTTGGGACGAAGCTGGCCGTATTGATGCATGGGGACAGGGG ACTCTGGTGACCGTCTCGAG (SEQ ID N°: 224)
12819.15384 VL	GCTAGCCTCTTACGAGCTGACTCAGGACCCTGCAGTGAGTGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CTCCGGCGGAGGGAGCTACGATGGTTCCAGCTACTATGGCTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCACCTGT GACCGTCATCTATAACAATAACAATAGGCCATCTGACATTCCCGATCGGTTCAGTGGATCTAGTTCAGGGAACA CAGCTTCTCTGACCATTACAGGAGCCCAGGCTGAGGACGAAGCAGATTACTATTGTGGGTCATACGACAGGC CAGAAACAAATTCCGATTATGTGGGAATGTTTGGTAGCGGCACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 225)
12748.15381 12748.16124 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCTCTGCGACTGAGT TGCGCCGCTTCAGGCTTCACAI I I I CTGACTACGCCATGAACTGGGTGAGGCAGGCTCCTGGCAAGGGACTG GAGTGGGTCGCAGGAATCGGGAACGATGGAAGTTACACTAATTATGGAGCAGCCGTGAAGGGGAGAGCTACT ATTTCCCGCGACAACAGCAAAAATACCCTGTACCTGCAGATGAACTCACTGAGAGCTGAAGATACCGCAGTGT ACTATTGTGCCTCTGACATCAGGAGTCGGAATGATTGCTCCTATTTCCTGGGAGGGTGTTCCAGCGGCTTTATT GACGTGTGGGGTCAGGGCACCCTGGTCACAGTCTCGAG (SEQ ID N°: 234)
12748.15381 VL	GCTAGCCTCTTACGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGTCCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CTCCGGCGGATCCAGCTACAGCTATGGGTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGTCAGGCCCCTGTGACCGTCATCTA

204/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 443/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	TGAAAGTAACAATAGGCCATCAGACATTCCCGATCGGTTTTCTGGCTCTAGTTCAGGAAACACAGCTAGTCTGA CCATCACAGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCTGATTACTATTGTGGCAATGCAGATTCCAGCTCTGGAATTTT CGGGTCCGGTACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 235)
12865.15377 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAATCCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGCGACTGAG CTGCGCCGCTTCTGGATTCGACTTTAGCGATCACGGGATGCAGTGGGTGAGACAGGCACCAGGCAAGGGACT GGAGTACGTGGGTGTCATCGACACCACAGGCCGCTATACATACTATGCACCTGCCGTCAAGGGCAGGGCTAC CATTAGTCGGGACAACTCAAAAAATACACTGTACCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCTGAAGATACTGCAGTG TACTATTGCGCCAAAACTACCTGCGTGGGAGGGTACCTGTGCAATACCGTCGGAAGTATCGATGCTTGGGGA CAGGGGACACTGGTGACTGTCTCGAG (SEQ ID N°: 244)
12865.15377 VL	GCTAGCCTCCTACGAGCTGACTCAGGACCCAGCAGTGAGCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CTCTGGCGGAGGGTCCAGCTCTTACTATGGTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCTCCTGTGACCGTCAT CTATGACGATACAAACAGGCCAAGTGGAATTCCCGATCGGTTCTCAGGTAGTTCATCCGGCAATACAGCTTCT CTGACCATCACAGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCAGATTACTATTGTGGTGGCTATGAAGGAAGCTCTCAC GCCGGGATTTTTGGAAGTGGGACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 245)
12892.15378 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAAAGTGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGAAGCCTGAGACTGTCT TGCGCCGCTAGTGGCTTCGACTTTTCCAGCTACACCATGCAGTGGGTGAGGCAGGCACCAGGCAAGGGACTG GAGTGGGTGGGCGTCATCTCTAGTACTGGAGGGTCTACCGGATACGGGCCTGCTGTGAAGGGAAGGGCAAC AATTTCACGGGATAACTCCAAAAATACTCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCAGAAGACACAGCCGTG TACTATTGCGTGAAATCAATCTCCGGAGATGCCTGGTCTGTGGACGGGCTGGATGCTTGGGGTCAGGGCACC CTGGTCACAGTCTCGAG (SEQ ID N°: 254)

205/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 444/478

Ab	Sequência (5'a 3')
12892.15378 VL	GCTAGCCTCATACGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGTCCGTCGCCCTGGGACAGACAGTGAGAATCACTTG CTCCGGAGGAGGATCCGCCTACGGTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCACCTGTGACCGTCATCTACTA TAACAATCAGAGGCCATCTGGCATTCCCGACCGGTTCAGTGGATCCAGCTCTGGGAACACAGCAAGTCTGAC CATCACAGGCGCCCAGGCTGAGGACGAAGCCGATTACTATTGTGGAAGCTATGATAGTTCAGCTGTGGGGAT TTTTGGTTCTGGCACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 255)
12796.15376 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAAAGTGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGAAGCCTGAGACTGTCT TGCGCCGCTAGTGGCTTCGACTTTTCCAGCTACACCATGCAGTGGGTGAGGCAGGCACCAGGCAAGGGACTG GAGTGGGTGGGCGTCATCTCTAGTACTGGAGGGTCTACCGGATACGGGCCTGCTGTGAAGGGAAGGGCAAC AATTTCACGGGATAACTCCAAAAATACTCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGAGGGCAGAAGACACAGCCGTG TACTATTGCGTGAAATCAGTCTCCGGAGATGCCTGGTCTGTGGACGGGCTGGATGCTTGGGGTCAGGGCACC CTGGTCACAGTCTCGAG (SEQ ID N°: 264)
12796.15376 VL	GCTAGCCTCATACGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGTCCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CTCCGGAGGAGGATCCGCCTACGGTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCACCTGTGACCGTCATCTACTA TAACAATCAGAGGCCATCTGACATTCCCGATCGGTTCAGTGGATCCAGCTCTGGGAACACAGCAAGTCTGACC ATCACAGGCGCCCAGGCTGAGGACGAAGCCGATTACTATTGTGGAAGCTATGATAGTTCAGCTGTGGGGATTT TTGGTTCTGGCACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 265)
12777.15382 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAATCCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGAAGCCTGCGACTGTCT TGCGCCGCTAGTGGATTCGACII IICCAGCTACGGAATGCAGTGGGTGAGGCAGGCACCAGGCAAGGGACTG GAGTGGGTGGGCGTCATCTCTGGAAGTGGGATTACCACACTGTACGCACCTGCCGTCAAGGGAAGGGCTACT ATCTCACGGGACAACTCTAAAAATACAGTGTATCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCTGAAGATACCGCAGTCT

206/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 445/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	ACTATTGTACACGCTCACCCTCCATCACAGACGGCTGGACTTATGGAGGGGCCTGGATTGATGCTTGGGGTCA GGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAG (SEQ ID N°: 274)
12777.15382 VL	GCTAGCCAGCTACGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGTCCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CAGTGGCGGAGATGGGTCATACGGTTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCTGTGACCGTCATCTATGA CAACGATAATAGGCCATCTGACATTCCCGATCGGTTTAGTGGCTCCAGCTCTGGAAACACAGCTTCTCTGACC ATCACAGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCTGATTACTATTGTGGCAATGCAGACCTGTCCGGGGGTATTTTC GGCAGCGGAACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 275)
12760.15375 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAATCTGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGAGACTGAGC TGCGCCGCTTCTGGATTCACCTTTAGTACATTCAACATGGTGTGGGTCAGGCAGGCACCTGGAAAGGGACTG GAGTACGTGGCTGAAATCTCCAGCGACGGCTCTTTTACATGGTATGCAACTGCCGTCAAGGGCAGGGCCACC ATTAGTCGGGATAACTCAAAAAATACAGTGTACCTGCAGATGAATTCCCTGAGGGCTGAGGACACCGCAGTCT ACTATTGCGCAAAATCCGATTGTTCTAGTTCATACTATGGATATAGCTGTATCGGGATCATTGACGCTTGGGGT CAGGGCACTCTGGTGACCGTCTCGAG (SEQ ID N°: 284)
12760.15375 VL	GCTAGCCTCCTATGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGAGCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CTCCGGCGGAATTAGCGACGATGGCTCTTACTATTACGGATGGTTCCAGCAGAAGCCCGGACAGGCCCCTGT GACCGTCATCTATATTAACGACAGGCGGCCAAGTAATATCCCCGATAGGTTTTCAGGGTCCAGCTCTGGTAAC ACAGCTTCTCTGACCATTACAGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCTGATTATTACTGTGGCTCTTACGATAGTT CAGCAGGGGTGGGTATCTTCGGCAGTGGAACTAAAGTCACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 285)
13112.15380 VH	GGCGCGCCGAGGTGCAGCTGCTGGAAAGTGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCACTGAGACTGTCC TGCGCCGCCTCCGGCTTCACCTTTTCCAGCTACAACATGTTCTGGGTGCGCCAGGCACCAGGAAAGGGACTG

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 446/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	GAGTTTGTCGCTGAAATCTCTGGTAGTAATACTGGAAGCCGAACCTGGTACGCACCTGCCGTGAAGGGCAGG GCTACAATTTCTCGGGACAACAGTAAAAATACTCTGTATCTGCAGATGAACTCTCTGAGGGCTGAGGATACAG CAGTGTACTATTGTGCAAAATCAATCTACGGAGGGTATTGCGCCGGTGGCTATTCCTGTGGTGTGGGCCTGAT TGACGCATGGGGACAGGGGACCCTGGTCACAGTCTCGAG (SEQ ID N°: 294)
13112,15380 VL	GCTAGCCTCATACGAGCTGACCCAGGACCCAGCAGTGTCCGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTG CAGTGGCGGATCCAGCGATTACTATGGGTGGTTCCAGCAGAAGCCCGGTCAGGCCCCTGTGACCGTCATCTA CTATAACAACAAGAGGCCATCTGACATTCCCGATCGGTTTAGTGGCTCTAGTTCAGGAAACACAGCCTCCCTG ACCATTACAGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCTGATTACTATTGTGGCAATGCAGACTCCAGCGTGGGAGTC TTCGGGTCTGGTACTAAGGTGACCGTCCTAGG (SEQ ID N°: 295)
12748.16124 VL	GCTAGCCTCTTACGAGCTGACTCAGCCACCTTCCGTGTCCGTGTCCCCAGGACAGACCGCAAGAATCACATG CAGTGGCGGATCCAGCTACTCATATGGGTGGTTCCAGCAGAAGCCTGGTCAGGCCCCCGTGACAGTCATCTA TGAGAGCAACAATAGGCCTTCTGACATTCCAGAACGGTTTAGTGGCTCTAGTTCAGGAACCACAGTGACTCTG ACCATCAGCGGGGTCCAGGCCGAGGACGAAGCTGATTACTATTGTGGCAACGCTGATTCCAGCTCTGGAATTT TCGGGTCCGGTACAAAAGTGACTGTCCTAGG (SEQ ID N°: 391)

208/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 447/478

Tabela 7: Sequências de aminoácido de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-PD-1 (CDRs estão em negrito e itálico)

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
12819.15384 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFTRYDMVWVRQAPGKGLEWVAG/GDSWKMTRYAPAVKGRATISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC4KGSC/ACWDEAGR/DAWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 226)
12819.15384 VL	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGGSYDGSSYYGWYQQKPGQAPVTVIYWMMNRPSDIPDRFSGSSSGNTASLTI TGAQAEDEADYYCGSYDRPETNSDYVGMFGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 227)
12748.15381 12748.16124 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMNWVRQAPGKGLEWVAG/G/VDGSyTNYGAAVKGRATISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC4SD/RSR/VDCSYFLGGCSSGF/DWVGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 236)
12748.15381 VL	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGSSYSYGWFQQKPGQAPVTVIYES/VNRPSDIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQ AEDEADYYCGWADSSSG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 237)
12865.15377 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSDHGMQWVRQAPGKGLEYVGV/D7TGRY7YYAPAVKGRATISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKTTCVGGYLC/V7VGS/DAWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 246)
12865.15377 VL	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGGSSSyYGWYQQKPGQAPVTVIYDDTNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGA QAEDEADYYCGGYEGSSHAG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 247)
12892.15378 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSSyTMQWVRQAPGKGLEWVGV/SSTGGSTGYGPAVKGRATISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKSISGDAWSVDGLDA WGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 256)
12892.15378 VL	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGGSAYGWYQQKPGQAPVTVIYYMVQRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQA EDEADYYCGSYDSS4VG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 257)

209/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 448/478

Ab	Sequência (N-terminal a C-terminal)
12796.15376	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSSyTMQWVRQAPGKGLEVWGV/SSTGGSTGYGPAVKGRATISRDN
VH	SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKSVSGDAWSVDGLDAW3QGTLVTVSS (SEQ ID N°: 266)
12796.15376	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGGSAYGWYQQKPGQAPVTVIYYMVQRPSDIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQA
VL	EDEADYYCGSYDSSAVG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 267)
12777.15382	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSSYGMQVWRQAPGKGLEW/VGV/SGSG/T7LYAPAVKGRATISRDNS
VH	KNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCTRSPS/TDGM/rYGGAmDAM/GQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 276)
12777.15382	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGDGSYGWFQQKPGQAPVTVIYDWDNRPSDIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQA
VL	EDEADYYCGWADLSGG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 277)
12760.15375	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSTFWMVWVRQAPGKGLEYVAE/SSDGSFTWYATAVKGRATISRDNS
VH	KNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSDCSSSyYGYSC/GWDAWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 286)
12760.15375	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGG/SDDGSYYYGWFQQKPGQAPVTVIY/MDRRPSNIPDRFSGSSSGNTASLTIT
VL	GAQAEDEADYYCGSYDSSAGVG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 287)
13112.15380	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSY/VMFWVRQAPGKGLEFVAE/SGSNTGSRTWYAPAVKGRATISRD
VH	NSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKS/YGGYCAGGYSCGVGL/DAWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 296)
13112.15380	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGGSSDyYGWFQQKPGQAPVTVIYY/VMKRPSDIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQ
VL	AEDEADYYCGNADSSVGVFGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 297)
12748.16124	SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSSYSYGWFQQKPGQAPVTVIYES/VNRPSDIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQ
VL	AEDEADYYCGWADSSSG/FGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 392)

210/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 449/478

Tabela 8: Sequências de nucleotídeo de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-LAG-3

Ab	Sequência (5'a 3')
15646 VH	CAGGTGCAGCTGCAGCAGTGGGGTGCCGGTCTGCTGAAGCCTTCTGAAACTCTGTCTCTGACTTGTGCCGTC TATGGTGGATCATTCAGCGGCTACTATTGGTCCTGGATCAGGCAGCCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGATC GGCGAGATCAACCACCGGGGCTCTACCAACTACAATCCCTCTCTGAAGAGCAGGGTGACCATCTCCGTGGAC ACATCTAAGAATCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTCCGTGACCGCCGCTGATACAGCCGTGTACTATTGCACAA GGGGGGAGGAATGGGAGTCACTGTTCTTTGATTACTGGGGGCAGGGGACACTGGTCACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 304)
15646 VL	GAAATCGTCCTGACCCAGTCCCCCGCCACCCTGAGCCTGAGCCCCGGAGAAAGAGCCACCCTGTCCTGCCGA GCAAGCCAGTCCATCAGCTCCTATCTCGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGCCAGGCTCCCCGGCTGCTGATC TACGGCGCCTCCAACAGAGCTACAGGAATCCCAGCCCGCTTCAGCGGCTCCGGCTCTGGCACAGACTTTACC CTGACAATCTCTAGCCTGGAGCCTGAGGATTTCGCCGTGTACTATTGCCAGCAGAGATCTAATTGGCCACTGA CATTCGGCGGCGGCACACGGGTGGAGATCAAG (SEQ ID N°: 305)
15532 VH	CAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCCGGCCTGCTGAGACCAAGCGAGACCCTGTCCCTGACATGCGCCGT GTATGGCGAGAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGGCAGCCTCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGAT CGGCGAGATCAATCACTCCGGCTCCACCAATTACAACCCATCCCTGAAGTCTCGGGTGACAATCAGCGTGGAT ACAAGCAAGACCCAGTTCAGCCTGAAGCTGAGCTCCGTGACAGCTGCCGATACCGCCGTGTATTACTGCGCC AGAGGCTGGGACCTGCTGGATTGGAATGACTACTGGAATGAGTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTC TCGAGT (SEQ ID N°: 314)
15532 VL	GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCACCCTGTCCTGTAGA GCTTCTCAGTCCGTGTCTTCCTACCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCAAGACTGCTGATCT

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 450/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	ATGACGCTTCCAATCGGGCTACCGGCATCCCAGCTCGCTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTCACCC TGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGAGGAI II IGCCGTGTATTACTGTCAGCAGAGGTCCAATTGGCCACTGAC ATTTGGCGGCGGCACAAAGGTTGAGATCAAG (SEQ ID N°: 315)
15723 VH	CAGGTTCAGCTGCAGCAGTGGGGCGCTGGCCTGCTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCTCTGACCTGTGCCGTG TATGGCGGCAGCTTCTCCGGCTATTACTGGAACTGGATCCGCCAGCCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATC GGCGAGATCAACCACTCCGGCTCTACCAACTACAATCCTTCTCTGAAGTCCAGGGTGACAATCAGCGTGGACA CCAGCAAGAACCAGTTTAGCCTGAAGCTGTCCAGCGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTGCGCCA GAGGCGAGGATTGGGGCGAGAGCTTCTTTGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 324)
15723 VL	GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCTGCCACCCTGTCTCTGTCCCCTGGCGAGCGGGCCACCCTGAGCTGTCGG GCCTCCCAGTCCGTGAGCTCCTACCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCAAGACTGCTGATC TACGCCGCTTCCAATCGGGCCACCGGCATCCCCGCCAGAI I I ICCGGCTCTGGCTCCGGCACCGATTTCACC CTGACAATCAGCTCCCTGGAGCCAGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGCAGAGGTCTAATTGGCCACTGA CATTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAGATCAAG (SEQ ID N°: 325)
15595 VH	CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCCGGCGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGAGCTTCTGTGAAGGTTTCCTGTAAGGTT TCCGGCTATAGCCTGACCGAGATCTCTATGCACTGGGTACGGCAAGCCCCCGGCAAGGGCCTGGAGTGGATG GGCGGCTTTGACCCAGAGGATGGCGAGACCATCTACGCTCAGAGGTTTCAGGGGCGCGTGATCATGACCGAG GATACCAGCACCGATACCGCCTACATGGAGCTGTCCAGCCTGAGATCCGAGGATACCGCCGTGTATTACTGC GCTACTGGTGGCTGGGGCCCCAATTGGTTCGATCCTTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACCGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 334)

212/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 451/478

Ab	Sequência (5'a 3')
15595 VL	GACATCCAGATGACACAGTCTCCTTCCTCTGTGAGCGCCTCTGTGGGCGACCGCGTGACCATCACATGCCGC GCTTCCCAGGGGATCTCTTCCTGGCTGGCTTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATC TATGCTGCCAGCAGCCTGCAGTCCGGCGTGCCTTCCAGGTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGACTTTACA CTGACAATCAGCTCCCTGCAGCCCGAGGATTTTGCCACCTATTACTGTCAGCAGGCGAATTCCTTCCCTTTTAC ATTCGGCCCTGGCACCAAGGTTGATATCAAG (SEQ ID N°: 335)
15431 VH	CAGGTTCAGCTGCAGCAGTCCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCAAGCCAGACCCTGTCTCTGACATGCGCCATC TCCGGCGACAGCGTGTCCTCTAACTCCGCCGCTTGGAATTGGATCCGGCAGTCTCCATCCAGAGGCCTGGAG TGGCTGGGCAGAACCTATTACCGGTCCAAGTGGTACAACGATTATGCCGTGTCCGTGAAGAGCAGAATCACCA TCAACCCTGATACCAGCAAGAACCAGTTCAGCCTGCAGCTGAATTCCGTGACCCCAGAGGATACAGCCGTGTA TTACTGTGCTAGGGACGATGATTGGAATGACTTCGATTACTGGGGCCAGGGGACCCTGGTGACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 344)
15431 VL	GAGATCGTGCTGACCCAGTCCCCAGCTACACTGTCCCTGTCTCCCGGCGAGCGGGCCACCCTGAGCTGTAGA GCTTCCCAGTCCGTGTCTTCCTATCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCAGGACAGGCCCCAAGGCTGCTGATCT ACGACGCCTCCAATAGAGCCACCGGCATCCCAGCTAGATTTTCTGGCTCCGGCTCCGGCACCGATTTCACACT GACCATCTCTAGCCTGGAGCCAGAGGATTTTGCTGTATATTACTGCCAGCAGCGCAGCAACTGGCCCCTGACA TTTGGCGGCGGCACCAAGGTTGAGATCAAG (SEQ ID N°: 345)
15572 VH	CAGCTGCAGCTGCAGGAAAGCGGCCCCGGCCTGGTGAAGCCCTCTGAGACCCTGTCCCTGACATGCACCGT GAGCGGCGATTCCATCAGCTCTTCCAGCTATTACTGGGGCTGGATCCGGCAGCCCCCCGGCAAGGGCCTGGA GTGGATCGGCAGCATCTTCTACTCCGGCAATACATATTATAATCCTTCTCTGAAGAGCAGGGTGACAATCAGCG TGGATACCTCCAAGAATCAGTTTAGCCTGAAGCTGAGCTCCGTGACAGCTGCCGATACAGCCGTGTATTACTG

213/216

Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 452/478

Ab	Sequência (5'a 3')
	CGCTAGGGAGGACGATTTTCTGACCGATTATTACGGCGCTTTCGACATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTGAC AGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 354)
15572 VL	GATATCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCACCCTGAGCGCCTCTGTGGGCGATCGGGTGACCATCACATGTCGG GCTTCTCAGTCCATCAGCAGCTGGCTGGCTTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCAAAGCTGCTGATC TACAAGGCCTCTTCCAGCGAGAGCGGCGTGCCATCCAGGTTTAGCGGCTCCGGCTCCGGCACCGAGTTTACC CTGACCATCTCTTCCCTGCAGCCCGATGACTTTGCCACCTACTACTGTCAGCAGTACAATTCCTATCTGACATT CGGCGGCGGCACCAAGGTTGAGATCAAG (SEQ ID N°: 355)
15011 VH	GAGGTGCAGCTGCTGGAATCCGGAGGAGGACTGGTCCAGCCAGGTGGATCCCTGCGACTGAGCTGCGCCGC TTCTGGCTTCGACTTTAGAAGCTACGCAATGATGTGGGTCCGCCAGGCACCAGGAAAGGGACTGGAGTGGGT GGGAGGGATCAACGGTGAAGTCGGTGGCTCTAATACATACTATGCACCTGCCGTCAAGGGAAGGGCTACTATT AGTCGGGACAACTCAAAAAATACCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACT ATTGCGTGAAAGGTGCTGGCGCATGCGGCATCTGTAATGACGATATTGATGCATGGGGACAGGGGACCCTGG TGACAGTCTCGAGT (SEQ ID N°: 364)
15011 VL	AGTTATGAGCTGACTCAGGACCCAGCAGTGTCAGTCGCCCTGGGCCAGACAGTGAGAATCACTTGCAGTGGG GCTGGTTCATATGCAGGCTCCTACTATTACGGATGGCACCAGCAGAAGCCCGGACAGGCACCTGTGACAGTC ATCTACGACAACGATAAAAGGCCAAGCAATATTCCCGACCGGTTCTCTGGGTCCAGCTCTGGTAACACCGCCT CCCTGACCATTACTGGGGCCCAGGCTGAGGACGAAGCTGATTATTACTGTGGCTCTACAAACGATAATGACGA TGGCGGACTGTTTGGCTCCGGAACTAAGGTCACCGTCCTA (SEQ ID N°: 365)

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 453/478

Tabela 9: Sequências de aminoácido de domínio variável de cadeia leve e pesada de anticorpo anti-LAG-3 (CDRs estão em negrito e itálico)

Ab	Sequência (N-terminal a C-termínal)
15646 VH	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGE/AWRGSTNYNPSLKSRVTIS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCTRG5EWESLFFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 306)
15646 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQS/SSyLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPARFSGSGSGTDFT LTISSLEPEDFAVYYCQQRSAWPLTFGGGTRVEIK (SEQ ID N°: 307)
15532 VH	QVQLQQWGAGLLRPSETLSLTCAVYGESFSGYYWNWIRQPPGKGLEWIGE/WSGSTNYNPSLKSRVTIS VDTSKTQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGVmLLDWWDYVWVHyWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 316)
15532 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDF TLTISSLEPEDFAVYYCQQPSWWPLTFGGGTKVEIK(SEQ ID N°: 317)
15723 VH	QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGyyWNWIRQPPGKGLEWIGEWHSGSTNYNPSLKSRVTIS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGEDWGESFFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 326)
15723 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYAASNRATGIPARFSGSGSGTDF TLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWPLTFGGGJKMEIK (SEQ ID N°: 327)
15595 VH	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKVSGYSLTE/SMHWVRQAPGKGLEWMGGFDPEDGETIYAQRFQGRVI MTEDTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCATGGWGPAWFDPWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 336)
15595 VL	DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQG/SSWLAWYQQKPGKAPKLLIYA4SSLQSGVPSRFSGSGSGTD FTLTISSLQPEDFATYYCQQA/VSFPFTFGPGTKVDIK (SEQ ID N°: 337)

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Petição 870190098308, de 01/10/2019, pág. 454/478

15431 VH	QVQLQQSGPGLVKPSQTLSLTCAISGDSVSS/VSAAWNWIRQSPSRGLEWLGRTyyRSKWYNDYAVSVKS RITINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARDDDWWDFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 346)
15431 VL	EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSyLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDF TLTISSLEPEDFAVYYCQQRS/VWPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID N°: 347)
15572 VH	QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGDS/SSSSyyWGWIRQPPGKGLEWIGS/PySG/VTYYNPSLKSRVTIS VDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREDDFLTDyyG4FD/WGQGTMVTVSS (SEQ ID N°: 356)
15572 VL	DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQS/SSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSSESGVPSRFSGSGSGTEF TLTISSLQPDDFATYYCQQyWSYLTFGGGTKVEIK (SEQ ID N°: 357)
15011 VH	EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFRSyAMMWVRQAPGKGLEWVGG//VGEVGGSA/TYYAPAVKG RATISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCVKGAGACG/OVDD/DAWGQGTLVTVSS (SEQ ID N°: 366)
15011 VL	SYELTQDPAVSVALGQTVRITCSGAGSYAGSYYYGWHQQKPGQAPVTVIYD/VDKRPSNIPDRFSGSSSGN TASLTITGAQAEDEADYYCGSnVDNDDGGLFGSGTKVTVL (SEQ ID N°: 367)

216/216

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para aumentar a imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo que compete pela ligação a PD-1 humana com, ou se liga ao mesmo epítopo de PD-1 humana que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 e 13112.15380; e um anticorpo anti~TIM~3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo.
2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar o anticorpo antiPD-1 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, o anticorpo anti-TIM3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo, e o anticorpo anti-LAG-3 ou porção de ligação a antígeno do mesmo.
3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 se liga a um epítopo de PD-1 humana compreendendo:

a) resíduos V64, L128, P130, K131 e A132 da SEQ ID N°: 388;

b) resíduos V44 e T145 da SEQ ID N°: 388;

c) resíduos K131 e E136 da SEQ ID N°: 388; ou

d) resíduos V44 e T145 da SEQ ID N°: 388.
4. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 se liga a um epítopo de PD-1 humana compreendendo:

a) resíduos 56-64, 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388;

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b) resíduos 69-90 e 122-140 da SEQ ID N°: 388;

c) resíduos 69-75 da SEQ ID N°: 388;

d) resíduos 136-140 da SEQ ID N°: 388; ou

e) resíduos 69-75 e 136-140 da SEQ ID N°: 388.
5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) se liga a PD-1 humana com uma Kd de 750 pM ou menos;

b) se liga a PD-1 de cinomolgo com uma Kd de 7 nM ou menos;

c) se liga a PD-1 de camundongo com uma Kd de 1 nM ou menos;

d) não se liga a PD-1 de rato;

e) aumenta a secreção de IL-2 em um ensaio de sangue total de enterotoxina estafilocócica B (SEB);

f) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

g) inibe a interação de PD-1 com PD-L1 em pelo menos 60% em uma concentração de 10 pg/ml em um ensaio de competição por citometria de fluxo;

h) bloqueia a ligação de PD-L1 e PD-L2 a PD-1 em pelo menos 90% em uma concentração de 10 pg/ml conforme determinado por análise de Interferometria de Biocamada; e

i) inibe o crescimento tumoral in vivo.
6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que as regiões de determinação de complementaridade de cadeia pesada (H-CDR) 1-3 e as regiões de determinação de complementaridade de cadeia leve (L-CDR) 1-3 do anticorpo anti-PD-1 compreendem as sequências de aminoácido de:

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a) SEQ ID N°s: 228-233, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 238-243, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 248-253, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 258-263, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 268-273, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 278-283, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 288-293, respectivamente; ou

h) SEQ ID N°s: 298-303, respectivamente.
7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o domínio variável de cadeia pesada (VH) e o domínio variável de cadeia leve (VL) do anticorpo anti-PD-1 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 236 e 237, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 236 e 392, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 246 e 247, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 256 e 257, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 266 e 267, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 276 e 277, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 286 e 287, respectivamente; ou

i) SEQ ID N°s: 296 e 297, respectivamente.
8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 compreende:

a) uma cadeia pesada (HC) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 226 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma cadeia leve (LC) compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 227 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e

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4/21 uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 237 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 236 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 392 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 246 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 247 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 256 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 257 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 266 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 267 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 276 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 277 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379;

h) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 286 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 287 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379; ou

i) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 296 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 297 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.

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9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 compete pela ligação a TIM-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de TIM-3 humano que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362e20621.
10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM3 se liga a um epítopo de TIM-3 humano compreendendo:

a) resíduos P50, V60, F61, E62, G64, R69, 1117, M118 e D120da SEQ ID N°: 389;

b) resíduos F61, R69 e 1117 da SEQ ID N°: 389; ou

c) resíduos P50, F61, E62, 1117, M118 e D120 da SEQ ID N°: 389.
11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM3 se liga a um epítopo de TIM-3 humano compreendendo:

a) resíduos 62-67 da SEQ ID N°: 389; ou

b) resíduos 114-117 da SEQ ID N°: 389.
12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anti-TIM-3 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) se liga a TIM-3 humano com uma Kd de 23 nM ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

b) se liga a TIM-3 de cinomolgo com uma Kd de 22 nM ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

c) se liga a TIM-3 humano com um EC50 de 1,2 nM ou menos, conforme medido por ELISA;

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d) se liga a TIM-3 de cinomolgo com um EC50 de 46 nM ou menos, conforme medido por ELISA;

e) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

f) aumenta a secreção de IFN-γ em um ensaio de reação iinfocitária mista bidirecional;

g) aumenta a secreção de TNF-o em um ensaio de reação linfocitária mista unidirecional;

h) aumenta a secreção de TNF-α a partir de células dendríticas; e

i) inibe a interação de TIM-3 com fosfatidilserina.
13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que a H-CDR1-3 e a LCDR1-3 do anticorpo anti-TIM-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 18-23, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 28-33, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 38-43, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 48-53, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 58-63, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 68-73, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 78-83, respectivamente;

i) SEQ ID N°s: 88-93, respectivamente;

j) SEQ ID N°s: 98-103, respectivamente;

k) SEQ ID N°s: 108-113, respectivamente;

l) SEQ ID N°s: 118-123, respectivamente;

m) SEQ ID N°s: 128-133, respectivamente;

n) SEQ ID N°s: 138-143, respectivamente;

o) SEQ ID N°s: 148-153, respectivamente;

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p) SEQ ID N°s: 158-163, respectivamente;

q) SEQ ID N°s: 168-173, respectivamente;

r) SEQ ID N°s: 178-183, respectivamente;

s) SEQ ID N°s: 188-193, respectivamente;

t) SEQ ID N°s: 198-203, respectivamente;

u) SEQ ID N°s: 208-213, respectivamente; ou

v) SEQ ID N°s: 218-223, respectivamente.
14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que a VH e VL do anticorpo anti-TIM-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 3 e 4, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 16 e 17, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 26 e 27, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 36 e 37, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 46 e 47, respectivamente;

g) SEQ ID N°s: 56 e 57, respectivamente;

h) SEQ ID N°s: 66 e 67, respectivamente;

í) SEQ ID N°s: 76 e 77, respectivamente;

j) SEQ ID N°s: 86 e 87, respectivamente;

k) SEQ ID N°s: 96 e 97, respectivamente;

l) SEQ ID N°s: 106 e 107, respectivamente;

m) SEQ ID N°s: 116 e 117, respectivamente;

n) SEQ ID N°s: 126 e 127, respectivamente;

o) SEQ ID N°s: 136 e 137, respectivamente;

p) SEQ ID N°s: 146 e 147, respectivamente;

q) SEQ ID N°s: 156 e 157, respectivamente;

r) SEQ ID N°s: 166 e 167, respectivamente;

s) SEQ ID N°s: 176 e 177, respectivamente;

t) SEQ ID N°s: 186 e 187, respectivamente;

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u) SEQ ID N°s: 196 e 197, respectivamente;

v) SEQ ID N°s: 206 e 207, respectivamente; ou

w) SEQ ID N°s: 216 e 217, respectivamente.
15. Método, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 7 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 4ea sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 3e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 4 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 16 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 17 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 26 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 27 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 36 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 37 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 46 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 47 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da

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SEQ ID N°: 56 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 57 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

h) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 66 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 67 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

i) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 76 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 77 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

j) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 86 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 87 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

k) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 96 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 97 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

l) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 106 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 107 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

m) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 116 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 117 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

n) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 126 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da

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SEQ ID N°: 127 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

o) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 136 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 137 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

p) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 146 e a sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 147 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

q) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 156 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 157 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

r) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 166 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 167 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

s) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 176 e a sequência de aminoácido da SEQ iD N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 177 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

t) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 186 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 187 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

u) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 196 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 197 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

v) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da

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SEQ ID N°: 206 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 207 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378; ou

w) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 216 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 374, 375, 376 ou 377, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 217 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378.
16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antiLAG-3 compete pela ligação a LAG-3 humano com, ou se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que, um anticorpo selecionado do grupo que consiste em 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572 e 15011.
17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antiLAG-3 se liga a um epítopo de LAG-3 humano compreendendo:

a) resíduos H85, P86, A87, P89, S91, W92 e G93 da SEQ ID N°: 68;

b) resíduos A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, TWO, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68;

c) resíduos A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 e R163 da SEQ ID N°: 68; ou

d) resíduos G107, L109, R110 e S111 da SEQ ID N°: 68.
18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antiLAG-3 se liga a um epítopo de LAG-3 humano compreendendo:

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a) resíduos 98-105 da SEQ ID N°: 68;

b) resíduos 78-105 e 123-131 da SEQ ID N°: 68;

c) resíduos 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 e 148-152 da SEQ ID N°: 68; ou

d) resíduos 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 e 148-161 da SEQ ID N°: 68.
19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o anticorpo antiLAG-3 tem pelo menos uma das seguintes propriedades:

a) em uma concentração de 20 pg/ml, reduz a ligação de LAG-3 humano a MHC humana classe II em células A375 em mais de 85% em comparação com um anticorpo controle negativo, conforme determinado por um ensaio de competição de citometria de fluxo;

b) em uma concentração de 20 pg/ml, reduz a ligação de LAG-3 humano a MHC humana classe II em células A375 para entre 35% e 85% em comparação com um anticorpo controle negativo, conforme determinado por um ensaio de competição de citometria de fluxo;

c) bloqueia a ligação entre LAG-3 humano expresso em células Jukart e MHC humana classe II expressa em células Raji;

d) se liga a LAG-3 humano com um EC50 de 0,1 nM ou menos, conforme medido por citometria de fluxo;

e) se liga a LAG-3 de cinomolgo com um EC50 de 0,3 nM ou menos, conforme medido por citometria de fluxo;

f) se liga a LAG-3 humano com uma Kd de 3,0 x 10-8 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

g) se liga a LAG-3 de cinomolgo com uma Kd de 1,5 x 10-7 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

h) se liga a LAG-3 de camundongo com uma Kd de 3,5 x

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10-8 ou menos, conforme medida por ressonância de plasmon de superfície;

i) estimula a produção de IL-2 em células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) humanas tratadas com enterotoxina estafilocócica B (SEB);

j) reduz os níveis celulares de LAG-3 em células T humanas;

k) reduz os níveis solúveis de LAG-3 na cultura de células T humanas;

l) induz a regressão de crescimento tumoral in vivo;

m) retarda o crescimento tumoral in vivo; e

n) não se liga ao mesmo epítopo de LAG-3 humano que o anticorpo 25F7-Lag3.5.
20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado peio fato de que a H-CDR1-3 e a LCDR1-3 do anticorpo anti-LAG-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 308-313, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 328-333, respectivamente;

d) SEQ ID N°s: 338-343, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 348-353, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 358-363, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 368-373, respectivamente.
21. Método, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que a VH e a VL do anticorpo anti-LAG-3 compreendem as sequências de aminoácido de:

a) SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente;

b) SEQ ID N°s: 306 e 307, respectivamente;

c) SEQ ID N°s: 326 e 327, respectivamente;

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14/21

d) SEQ ID N°s: 336 e 337, respectivamente;

e) SEQ ID N°s: 346 e 347, respectivamente;

f) SEQ ID N°s: 356 e 357, respectivamente; ou

g) SEQ ID N°s: 366 e 367, respectivamente.
22. Método, de acordo com a reivindicação 21, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-LAG-3 compreende:

a) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 316 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 317 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

b) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 306 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 307 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

c) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 326 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 327 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

d) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 336 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 337 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

e) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 346 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 347 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378;

f) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 356 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 357 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 378; ou

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g) uma HC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 366 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 375, e uma LC compreendendo a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 367 e a sequência de aminoácido da SEQ ID N°: 379.
23. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228233, respectivamente: e um anticorpo anti-TIM-3 cujas H-CDR1-3 e LCDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; e um anticorpo anti-TIM-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378.
24. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228233, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e LCDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as

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16/21 sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.
25. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao paciente:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228233, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas H-CDR1-3 e LCDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que

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17/21 compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti~LAG~3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.
26. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que os anticorpos ou porções de ligação a antígeno são administrados ao paciente simultaneamente.
27. Método, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pelo fato de que os anticorpos ou porções de ligação a antígeno dos mesmos são administrados em uma única composição farmacêutica.
28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que os anticorpos ou porções de ligação a antígeno são administrados ao paciente sequencialmente.
29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o paciente tem câncer.
30. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o câncer é uma malignidade hematológica.
31. Método, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a malignidade hematológica é leucemia, linfoma de Hodgkin, linfoma não Hodgkin ou mieloma.
32. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o câncer é um tumor sólido.
33. Método, de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o câncer é melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de bexiga, carcinoma de células escamosas de cabeça e pescoço, câncer de ovário, câncer colorretal, carcinoma de células renais, carcinoma de células de Merkel, fibrossarcoma, gli

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18/21 ossarcoma ou glioblastoma.
34. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 29 a 33, caracterizado pelo fato de que ainda compreende administrar ao paciente terapia de radiação ou pelo menos um de um agente quimioterápico, um agente antineoplásico e um agente antiangiogênico.
35. Anticorpo multiespecífico, caracterizado pelo fato de que especificamente se liga a:

a) PD-1 humana e TIM-3 humano;

b) PD-1 humana e LAG-3 humano; ou

c) PD-1 humana, anti-TIM-3 humano e LAG-3 humano.
36. Anticorpo multiespecífico, de acordo com a reivindicação 35, caracterizado pelo fato de que compreende uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-PD-1, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-TIM-3, como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 15, e/ou uma porção de ligação a antígeno de um anticorpo anti-LAG-3, como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22.
37. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende (1) um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, (2) um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti~LAG~3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, e (3) um excipiente farmaceuticamente aceitável.
38. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 é o anticorpo anti-TIM-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 15.
39. Composição farmacêutica, de acordo com a reivindica

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19/21 ção 37 ou 38, caracterizada pelo fato de que o anticorpo anti-LAG-3 é o anticorpo anti-LAG-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22.
40. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 39, caracterizada pelo fato de que os anticorpos na composição estão presentes em quantidades iguais.
41. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 40, caracterizada pelo fato de que compreende:

a) um anticorpo anti-PD-1 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 228233, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas H-CDR1-3 e LCDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 8-13, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas H-CDR1-3 e L-CDR1-3 compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 318-323, respectivamente;

b) um anticorpo anti-PD-1 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 227, respectivamente; um anticorpo anti-TIM-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 4, respectivamente; e um anticorpo anti-LAG-3 cujas VH e VL compreendem as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 317, respectivamente; ou

c) um anticorpo anti-PD-1 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 226 e 375 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 227 e 379; um anticorpo anti-TIM-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 7 e 377 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 4 e 378; e um anticorpo anti-LAG-3 compreendendo uma HC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 316 e 375

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20/21 e uma LC que compreende as sequências de aminoácido das SEQ ID N°s: 317 e 378.
42. Composição farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 41, caracterizada pelo fato de ser para uso no tratamento de um paciente humano em um método, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 34.
43. Anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antigeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, caracterizado pelo fato de ser para uso no aumento de imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo.
44. Anticorpo anti-PD-l ou porção de ligação a antígeno, de acordo com a reivindicação 43, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 é o anticorpo anti-TIM-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 15.
45. Anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno, de acordo com a reivindicação 43 ou 44, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti~LAG~3 é o anticorpo anti-LAG-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22.
46. Anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento de um paciente humano em um método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 34.
47. Uso de um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo para a fabricação de um medicamento para aumentar a imunidade em um paciente humano em necessidade do mesmo em combinação com um anticorpo anti-TIM-3 ou uma porção

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21/21 de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-PD-1 ou porção de ligação a antígeno é como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8.
48. Uso, de acordo com a reivindicação 47, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 é o anticorpo anti-TIM-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 15.
49. Uso, de acordo com a reivindicação 47 ou 48, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-LAG-3 é o anticorpo anti-LAG-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22.
50. Uso de um anticorpo anti-PD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de um medicamento para tratamento de um paciente humano em um método como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 34.
51. Artigo de fabricação compreendendo um anticorpo antiPD-1 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 e 3 a 8, e um anticorpo antiTIM-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo e/ou um anticorpo anti-LAG-3 ou uma porção de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que o referido artigo de fabricação é adequado para aumentar a imunidade em um paciente.
52. Artigo de fabricação, de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-TIM-3 é o anticorpo anti-TIM-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 15.
53. Artigo de fabricação, de acordo com a reivindicação 51 ou 52, caracterizado pelo fato de que o anticorpo anti-LAG-3 é o anticorpo anti-LAG-3 como definido em qualquer uma das reivindicações 16 a 22.