KR20180118808A - 인자 iｘ 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법 - Google Patents

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사만사 트루스
로버트 티 피터스
하이얀 장
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바이오버라티브 테라퓨틱스 인크.
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Abstract

본 발명은 인자 IX의 투여 방법들; 인자 IX를 포함하는 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들의 투여 방법들; 인자 IX를 포함하는 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들; 상기 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드들; 상기 폴리뉴클레오티드들을 포함하는 세포들; 및 상기 세포들을 이용한 상기 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들의 제조 방법들을 제공한다.

Description

인자 IＸ 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법{FACTOR IX POLYPEPTIDES AND METHODS OF USE THEREOF}
본 발명의 분야
본 발명은 일반적으로 혈액 응고 장애에 대한 치료 분야에 대한 것이다.
배경기술
B형 혈우병(크리스마스 질환으로도 알려져 있음)은 세계에서 가장 일반적인 선천성 출혈 장애들 중 하나이다. 이는 생체 내 및 시험관 내 혈액 응고 활성을 감소시키며, 병에 걸린 개인의 일생에 걸쳐 광범위한 의학적 모니터링을 필요로 한다. 개입 부재 하에서, 유병 개인은 중증 통증 및 부동성 약화를 일으키는 관절 내 자연발생적 출혈을 겪을 것이며; 근육들 내로의 출혈은 이들 조직들에서 혈액 축적을 일으킬 수 있고; 목구멍 및 목 내의 자연발생적 출혈은 즉시 치료되지 않는다면 질식을 일으킬 수 있고; 직장 출혈; 및 수술, 사소한 우발적 부상들, 또는 발치들 후 중증 출혈도 또한 일반적이다.
정상적인 생체 내 혈액 응고는 최소한 세린 프로테아제들 인자들 II(프로트롬빈), VII, IX, X 및 XI(가용성 혈장 단백질들); 막통과 단백질 조직 인자 및 혈장 단백질들 인자들 V 및 VIII을 포함하는 보조인자들; 피브리노겐, 트랜스글루타미나아제 인자 XIII, 인지질(활성화 혈소판들 포함), 및 칼슘을 필요로 한다. 칼리크레인, 고분자량 키니노겐, 및 인자 XII을 포함하는 추가적 단백질들이 일부 시험관 내 응고 평가들을 위해 필요하며, 병리학적 상태 하의 생체 내에서 역할을 수행할 수 있다.
혈우병에서, 혈액 응고는 특정한 혈장 혈액 응고 인자들의 부재로 인해 교란된다. B형 혈우병은 인자 IX 단백질의 합성 감소 또는 감소된 활성을 갖는 결함이 있는 분자에 의해 야기될 수 있는 인자 IX의 결핍으로 유도된다. 혈우병의 치료는 인자 IX가 고농축된 외인성 인자 농축물들에 의한 소실된 응고 인자의 대체로 수행된다. 그러나 혈액으로부터 상기 농축물의 생성에는 후술되는 바와 같이 기술적 어려움이 내포되어 있다.
혈장으로부터 인자 IX(혈장 유도 인자 IX; pdFIX)의 정제는 거의 배타적으로 활성 인자 IX를 생성한다. 그러나 인자 IX가 혈장 중에 매우 낮은 농도로만 존재하기 때문에(5ug/mL. Andersson, Thrombosis Research 7: 451 459 (1975)) 혈장으로부터 이러한 인자 IX의 정제는 매우 어렵다. 또한 혈액으로부터의 정제는 감염성 제제, 예컨대 HIV 및 HCV의 제거 또는 비활성화를 필요로 한다. 또한, pdFIX는 짧은 반감기를 가지므로 빈번한 투여를 필요로 한다. 재조합 인자 IX(rFIX)가 또한 이용 가능하지만, 동일한 짧은 반감기를 가지고 pdFIX와 같은 빈번한 투여(예로 예방을 위해 주 2-3회)를 필요로 한다. rFIX는 또한 pdFIX에 비해 더 낮은 증분 회복(K값)을 가지므로, pdFIX의 용량보다 더 높은 용량의 rFIX를 사용해야 한다.
감소된 사망률, 관절 부상의 방지 및 개선된 삶의 질은 혈장-유도 및 재조합 인자 IX로 인한 중요한 성취가 되어 왔다. 출혈로부터의 연장된 보호는 B형 혈우병 환자들의 치료에서 또 다른 주요 개선을 나타낼 것이다. 그러나 현재까지 연장된 보호를 허용하는 제품은 개발되지 않았다. 따라서 현재 치료법들에 비해 더욱 관용 가능하고 더욱 효과적인, 인자 IX 결핍으로 인한 혈우병 치료의 개선된 방법들에 대한 필요성이 여전히 존재한다.
본 발명은 인자 IX를 포함하는 키메라성 폴리펩티드들 및 상기 키메라성 폴리펩티드들의 하이브리드들을 이용한 인자 IX의 투여 방법들; 인자 IX를 포함하는 키메라성 폴리펩티드들 및 상기 키메라성 폴리펩티드들의 하이브리드들; 상기 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드들; 상기 폴리뉴클레오티드들을 포함하는 세포들; 및 상기 세포들을 이용한 상기 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들의 제조 방법들을 제공한다. 일부 구현예들에서, 인자 IX 키메라성 폴리펩티드는 인자 IX FcRn 결합 파트너(BP) 키메라성 폴리펩티드, 예컨대 인자 IX Fc 키메라성 폴리펩티드이다. 다른 구현예들에서, 인자 IX 키메라성 폴리펩티드는 인자 IX-XTEN 폴리펩티드이다.
본 발명은 적어도 약 10, 적어도 약 20, 또는 적어도 약 25IU/kg 용량의 인자 IX FcRn BP 키메라성 폴리펩티드, 예로 인자 IX-Fc 키메라성 폴리펩티드 또는 인자 IX-XTEN 키메라성 폴리펩티드를 약 주 1회 또는 더 긴 투여 간격으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에 대한 인자 IX의 투여 방법을 제공한다.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준은 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 약 100%의 환자 모집단에서 적어도 약 6일 후 적어도 약 1IU/dL의 평균 저점에 도달하거나, 또는 대상체에서 적어도 약 6일 후에 적어도 약 1, 2, 3, 4, 또는 5IU/dL의 저점에 도달한다. 일부 구현예들에서, 상기 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준은 약 1-5 또는 1-3IU/dL의 평균 저점에 도달한다. 상기 저점 또는 평균 저점은 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40일 후에 도달될 수 있다.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 혈장 유도 인자 IX에 비해 크게 감소된 인산화 및 황산화를 갖는다. 일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 25% 미만으로 인산화되고 25% 미만으로 황산화된다, 예로 25% 미만으로 전체 인산화 및 황산화된다. 일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 약 10% 미만으로 인산화되고 약 9% 미만으로 황산화된다. 일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 실시예 5-6에서 인자 IX Fc 키메라성 폴리펩티드와 유사하거나(즉 10% 이내) 또는 동일한 감마 카르복실화 패턴/분포, 감마 카르복실화 함량, 시알릴화 패턴/분포, 및/또는 시알릴화 함량을 갖는다.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 0.7 초과 또는 0.75ug/ml 초과(항원)의 증분 회복을 갖는다. 일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 IU/kg 당 적어도 약 0.8, 적어도 약 0.9, 또는 적어도 약 1IU/dL의 평균 증분 회복(K-값)(활성; 관측치)을 갖는다.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 상기 환자 모집단 또는 상기 대상체에서 하나 이상의 약동학 파라미터들을 나타낸다:
(a) 상기 환자 모집단에서 약 3.36±0.93mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성); 상기 환자 모집단에서 약 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 또는 3.72mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성); 상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 제거에 비해 약 2.5배 더 낮은 평균 제거(CL)(활성); 상기 대상체에서 약 1.84-4.58mL/시간/kg의 제거(CL)(활성)
(b) 상기 환자 모집단에서 적어도 약 68.05±11.16시간의 평균 평균 체류 시간(MRT)(활성); 상기 환자 모집단에서 약 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 또는 78시간의 평균 MRT(활성); 상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 MRT에 비해 약 3배 더 긴 평균 MRT(활성); 상기 대상체에서 약 53.1-85.8시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성); 상기 대상체에서 적어도 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 또는 약 90시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성);
(c) 상기 환자 모집단에서 약 52.5±9.2시간의 평균 t1/2베타(활성); 상기 환자 모집단에서 약 47-60시간, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 51, 약 52, 약 53, 약 54, 약 55, 약 56, 약 57, 약 58, 약 59, 약 60시간의 평균 t1/2베타(활성); 상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 t1/2베타에 비해 약 3배 더 긴 평균 t1/2베타(활성); 상기 대상체에서 약 40-67.4, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 또는 약 75시간의 t1/2베타(활성);
(d) 상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.93±0.18IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치); 상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.85-1.0, 약 0.85, 약 0.86, 약 0.87, 약 0.88, 약 0.89, 약 0.90, 약 0.91, 약 0.92, 약 0.93, 약 0.94, 약 0.95, 약 0.96, 약 0.97, 약 0.98, 약 0.99, 약 1.0, 약 1.05, 약 1.10, 또는 약 1.15IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치); 상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 증분 회복에 비해 약 24% 더 우수한 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치); 상기 대상체에서 IU/kg 당 약 0.62-1.17IU/dL의 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
(e) 상기 환자 모집단에서 약 226±67.76(69.8로 보정됨)mL/kg의 평균 Vss(활성); 상기 환자 모집단에서 약 200-300, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 또는 약 300mL/kg의 평균 Vss(활성); 상기 대상체에서 약 145-365mL/kg의 Vss(활성);
(f) 상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 32.44±10.75IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성); 상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 26-40, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성); 상기 대상체에서 IU/kg 당 약 21.80-54.30IU*h/dL의 AUC/용량.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드의 용량은 현재 판매되는 인자 IX 제품들, 예컨대 MONONINE™(pdFIX; CSL Behring) 또는 BENEFIX™(Wyeth; rFIX)(0.1%)에 비해 훨씬 더 낮은(10-100배) 수준(0.01-0.001%)의 활성화된 FIX(FIXa)를 함유한다. 상기 수준은 현재 판매되는 제품들에 비해 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100배 더 낮거나 또는 0.01, 0.05, 0.0033, 0.0025, 0.002, 0.00167, 0.00142, 0.00125, 0.00111, 또는 0.001%일 수 있다.
일부 구현예들에서, 투여 간격은 6-18, 6-10, 9-18, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 또는 적어도 18일, 주 1회, 월 2회, 또는 월 1회이다. 투여 간격은 예방적 투여 간격, 고정된 예방적 투여 간격, 또는 개인화된 예방적 투여 간격일 수 있다.
본 발명의 방법은 출혈 또는 출혈 증례들의 조절 또는 방지를 필요로 하는, 간헐적 치료를 필요로 하는, 예방적 치료를 필요로 하는, 또는 필요 시 치료를 필요로 하는 대상체에 실시된다.
본 발명의 방법들에 사용될 수 있는 치료 용량들은 약 25-180, 약 20-180, 약 20-50, 약 20-100, 약 10-180, 약 10-50, 약 10-30, 또는 약 50-100IU/kg이다. 용량은 고정된 용량 또는 개인화된 용량일 수 있다.
일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 정맥내 또는 피하 투여된다.
본 발명의 방법들에서 대상체는 인간 대상체일 수도 또는 비인간 포유류일 수도 있다. 비인간 포유류들은 마우스들, 개들, 영장류들, 원숭이들, 고양이들, 말들, 소들, 돼지들, 및 기타 가축 동물들 및 소동물들을 포함한다.
키메라성 폴리펩티드는 상기 키메라성 폴리펩티드와 연합된 제 2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드 형태일 수 있으며, 여기서 상기 제 2 폴리펩티드는 FcRn BP, 예로 Fc를 포함하거나 본질적으로 이로써 구성될 수 있다. 키메라성 폴리펩티드는 신호 서열(들) 및 프로펩티드가 있거나 없는 표 2A(서열 목록 번호 2) 및/또는 2B(서열 목록 번호 4)의 인자 IX 서열, Fc 서열, 또는 인자 IX 및 Fc 서열 모두에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 100% 동일할 수 있다.
키메라성 폴리펩티드 또는 하이브리드는 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.
본 발명은 또한 상술된 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들 자체, 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드들, 상기 폴리뉴클레오티드들을 포함하는 배양된 인간 배아 세포들, 및 상기 키메라성 및 하이브리드 폴리펩티드들의 제조 방법들, 및 상기 방법들로 제조된 폴리펩티드들을 제공한다.
도면/도의 간단한 설명
도 1. 한 유형의 인자 IX 키메라성 폴리펩티드, 인자 IX-Fc 하이브리드의 모식도.
도 2. 그룹 평균 FIXFc 농도 대 시간 프로필들; 명목 용량 비교.
도 3. 그룹 평균 FIXFc 활성 대 시간 프로필들; 명목 용량 비교.
도 4. 기준선 감산 결정 트리.
도 5. FIX 활성에 대한 Cmax 및 AUC의 용량 비례적 증가.
도 6. 50(A) 및 100(B)IU/kg 에서 rFIXFc의 산출 치료 기간.
도 7. FIX 항원에 대한 Cmax 및 AUC의 용량 비례적 증가.
도 8. 50(A) 및 100(B)IU/kg 명목 용량에서 rFIXFc 항원에 대한 약동학 산출치들.
도 9. rFIXFc 활성 및 항원 수준들 간의 뛰어난 상관성. 실시예 11에 논의된 바와 같이 활성 PK의 재계산으로 인해 R2 = 0.946임을 주지하라.
도 10. rFIX-Fc 도메인 구조 및 번역 후 개질들. PRO: 가공 효소에 의해 절단된 프로펩티드. GLA: 12 γ-카르복실화 글루탐산(Gla) 잔기들 함유. ACT PEP: 절단되어 활성 프로테아제를 생성하는 활성화 펩티드. 기타 개질들: N- 및 O-글리코실화, Asp(64) β-히드록실화, Tyr 황산화, Ser 인산화.
도 11. 정제 중간체들 및 정제된 FIXFc 단량체의 SDS-PAGE 겔. FIXFc 정제에서 상이한 단계들로부터의 시료들을 비환원 SDS-PAGE로 분석하였다. 레인 1: SeeBlue Plus 분자량 마커들(Invitrogen). 레인 2: 빈 레인. 레인 3: 단백질 A 로딩. 레인 4: 단백질 A 용출액. 레인 5: 프락토젤(Fractogel) DEAE 용출액. 레인 6: Q Seph FF 용출액. 레인 7: 최종 벌크 FIXFc. 레인 8: 빈 레인. 레인 9: 환원된 최종 벌크 FIXFc.
도 12. FIX-결핍 마우스에서 FIXFc의 기능적 활성. FIX-결핍 마우스에 219IU/kg FIXFc(군 당 3 또는 4마리, 6군들, n = 23) 또는 200IU/kg rFIX(군 당 3 또는 4마리, 5군들, n = 23)를 시간 = 0에 정맥내 투여하였다. 혈액 시료들을 투여 후 다양한 시간들(0.25시간 내지 96시간)에 수집하고, FIX 활성 분석을 이용하여 응고 활성을 분석하였다. *rFIX 활성은 투여 후 48시간 이후 시점에서 모든 마우스에서 검출할 수 없다.
도 13. FIX-결핍 마우스에서 FIXFc 대 재조합 FIX의 전혈 응고 시간. FIX-결핍 마우스(군 당 6 마리)에 50IU/kg FIXFc 또는 50IU/kg rFIX를 정맥내 투여하였다. 혈액 시료를 투여 전 및 투여 후 다양한 시간에 수집하였다. 혈액 시료들을 37℃에서 인큐베이션하고, 분 당 1회 혈액 응괴의 존재에 대해 시각적으로 검사하였다. 응괴가 형성하는데 필요한 시간을 기록하고, 응고 활성이 기준선으로 복귀하면(즉 응괴가 형성되지 않으면), 추가 시료들을 수득하지 않았다(시료들은 FIXFc에 대해 15분 내지 144시간에 또는 rFIX에 대해 15분 내지 72시간에 수집하였다).
도 14. FIX-결핍 마우스에서 FIXFc의 약력학. FIX-결핍 마우스에 219IU/kg FIXFc(군 당 5마리, 6군들, n = 30) 또는 200IU/kg rFIX(군 당 4 또는 5마리, 6군들, n = 28)를 0, 4 및 8일에 투여하였다. 혈장 시료를 각 용량 투여 후 15분 및 96시간에 심장 천자에 의해 수집하고, 응고 활성을 FIX 활성 분석을 이용하여 측정하였다. 혈장을 또한 꼬리 채혈에 의해 각 용량 투여 후 8, 24, 48, 및 72시간에 수집하였다. FIXFc 수준들을 FIXFc에 특이적인 ELISA를 이용하여 모든 시료에서 측정하였다. (A) 측정 v. 계산 활성. FIXFc에 대한 응고 활성을 FIX 활성 분석을 이용하여 세 용량들 투여 후 15분 및 96시간에 측정하였다. FIXFc에 대한 시험관 내 응고 활성은 43.8±5.4IU/mg으로 결정되었다. 상기 활성(IU/mg) 및 측정된 단백질 수준들에 근거하여, 계산된 혈장 응고 활성 수준을 각 용량 투여 후 15분, 8, 24, 48, 72 및 96시간 시점에 대해 결정하였다. (B) 최대 세 용량들의 200IU/kg의 rFIX로 처리한 FIX-결핍 마우스에 있어서, FIX 수준들을 FIX-특이적 ELISA를 이용하여 측정하였다. FIXFc 및 rFIX의 측정된 특이적 활성들을 이용하여, ELISA로 분석된 모든 시료에 대한 계산된 응고 활성을 비교할 수 있었다.
도 15. FIX-결핍 개들에서 FIXFc의 약동학 및 약력학. B형 혈우병을 가진 두 개들에 140IU/kg FIXFc를 정맥내 주입하였다. 혈액 시료들을 5, 15, 및 30분, 및 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144, 및 168시간에 수집하였다. (A) FIX 포획 항체 및 Fc-HRP 검출 항체를 사용하는 샌드위치 ELISA를 이용하여 B형 혈우병 개 혈장 시료들에서 온전한 FIXFc의 농도를 측정하였다. (B) FIX 응고 활성을 FIXFc로 생성한 표준 곡선에 대해 모든 시점에 대해 측정하였다. (C) 동물들에서 수집한 혈액을 즉시 전혈 응고 시간에 대해 분석하였다. 혈액 시료들을 28℃에서 인큐베이션하고 분 당 1회 응괴의 존재에 대해 시각적으로 검사하고, 응괴가 형성된 시간을 기록하였다.
도 16. 게잡이 원숭이들에서 FIXFc의 약동학. 원숭이들에 단일 용량(0.5, 2, 및 10mg/kg, 대략 25, 100 또는 500IU/kg에 해당)의 FIXFc(각각 n=2, 3, 및 3)를 투여하였다. 혈액 시료들을 용량 투여 후 0.25, 0.5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 및 168시간에 수집하고, 혈장을 FIXFc-특이적 ELISA에 의한 단백질 농도 분석을 위해 제조하였다.
도 17. rFIXFc 및 BENEFIX™는 HemB 마우스의 전혈에서 비등한 활성 및 용량 반응을 나타낸다. (A) ROTEM® 파라미터들. rFIX 또는 BENEFIX™가 HemB 마우스 혈액 내로 스파이크 주입되었으며 응고 파라미터들이 ROTEM®에 의해 측정되었다. (B)-(D)는 (B) CT, (C) CFT, 및 (D) 알파-각을 측정하는 용량 반응이다.
도 18. 혈우병 마우스의 꼬리 클립 출혈 모델에서 급성 유효성의 평가.
도 19. (A) rFIXFc 또는 BENEFIX™를 처리한 개별 HemB 마우스에서의 꼬리 클립 후 혈액 손실. (B) HemB 마우스에서의 꼬리 클립 후 중앙값 혈액 손실에서 rFIXFc 및 BENEFIX™의 용량 반응.
도 20. HemB 마우스의 꼬리 정맥 가로절개(TVT) 출혈 모델: 중증 혈우병 환자들의 정맥 출혈 특징에 대한 모델.
도 21. 전혈 ROTEM®에 의해 처리한 HemB 마우스에서의 BENEFIX™ 대비 rFIXFc의 연장된 활성. (A) CT, (B) CFT, (C) 알파-각, 및 (D) ROTEM®에 의한 전혈 응고 활성(CT) 대 aPTT에 의한 혈장 활성 간 부분적 상관성.
도 22. HemB 마우스의 꼬리 정맥 가로절개(TVT) 출혈 모델에서의 BENEFIX™ 대비 FIXFc의 연장된 유효성. (A) 생존: 생존율은 TVT 24시간 전에 BENEFIX™를 수여받은 마우스에서 TVT 72시간 전에 rFIXFc를 수여받은 마우스에서와 비등하였고, (B) 재출혈: 출혈율은 TVT 24시간 전에 BENEFIX™를 수여받은 마우스에서 TVT 72시간 전에 rFIXFc를 수여받은 마우스에서와 비등하였다.
도 23. 12.5 내지 100IU/kg의 rFIXFc의 단일 용량을 수여받은 12 대상체들에서 rFIXFc 활성의 증분 회복 대 체중 간 상관성.
도 24. 주 1회 (A), 10일 1회 (B), 또는 2주 1회 투여 요법들 (C) 이후 기준선을 1IU/dL 초과하는 저점을 얻는 활성-시간 프로필들을 구축하기 위한 rFIXFc 활성의 구조적 PK 모델을 이용한 몬테 카를로 시뮬레이션. 중앙값 모집단 PK 파라미터들 및 관련 대상체간 및 대상체내 변수들은 임상 1/2a상 연구에서 채용하였다. 1000 대상체들을 각 대상체에 대해 14 내지 16 시료 채취 시점들을 가지고 투여 요법 별로 시뮬레이션하고, 1000 대상체들의 활성-시간 프로필들의 평균±SD를 상이한 투여 요법들에 대해 도식적으로 구축하였다.
도 25. 재계산된 약동학 데이터에 근거하여 1IU/dL(1%)의 저점을 얻기 위한 rFIXFc 용량들에 대한 몬테 카를로 시뮬레이션. (A) 주 1회, (B) 10일 1회, 및 (C) 2주 1회.
본 발명의 상세한 설명
본 발명은 현재 공지된 인자 IX 제품들에서 가능한 것보다 더 긴 투여 간격 및/또는 개선된 약동학 파라미터들을 이용하여 인자 IX로 인자 IX 결핍, 예로 B형 혈우병을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 개선된 인자 IX 키메라성 폴리펩티드들, 인자 IX 키메라성 폴리뉴클레오티드들, 및 제조 방법들을 제공한다.
본원에서 사용되는 "투여하는"이란 약학적으로 허용가능한 경로를 통해 대상체에 본 발명의 약학적으로 허용가능한 인자 IX 폴리펩티드를 제공하는 것을 의미한다. 바람직한 투여 경로들은 정맥내, 예로 정맥내 주사 및 정맥내 주입, 예로 중앙 정맥 액세스를 통한 것이다. 추가적 투여 경로들은 피하, 근육내, 경구, 비강, 및 폐 투여, 바람직하게는 피하를 포함한다. 인자 IX 키메라성 폴리펩티드들 및 하이브리드 단백질들은 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학적 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 본 발명은 이점들은 하기를 포함한다: 개선된 요법 순응도; 감소된 출혈들을 통한 파손; 출혈들로부터 관절들의 증가된 보호; 관절 부상의 방지; 감소된 이환율; 감소된 사망률; 출혈로부터의 연장된 보호; 줄어든 혈전성 사건들; 및 개선된 삶의 질.
본원에서 사용되는 "키메라성 폴리펩티드"란 그 안에 상이한 원천들로부터의 둘 이상의 폴리펩티드들(또는 이들의 일부, 예컨대 하위서열들 또는 펩티드들)을 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. 키메라성 폴리펩티드들은 상이한 원천들, 예컨대 상이한 유전자들, 상이한 cDNA들, 또는 상이한 동물 또는 기타 종들로부터 2, 3, 4, 5, 6, 7 이상의 폴리펩티드들 또는 이들의 일부를 포함할 수 있다. 키메라성 폴리펩티드들은 상이한 폴리펩티드들 또는 이들의 일부를 연결하는 하나 이상의 링커들을 포함할 수 있다. 즉, 폴리펩티드들 또는 이들의 일부는 직접적으로 또는 간접적으로 링커들을 통해, 또는 둘 다에 의해 단일 키메라성 폴리펩티드 내에서 연결될 수 있다. 키메라성 폴리펩티드들은 추가적 펩티드들, 예컨대 신호 서열들 및 단백질 정제 또는 검출을 보조하는 6His 및 FLAG와 같은 서열들을 포함할 수 있다. 또한, 키메라성 폴리펩티드들은 N- 및/또는 C-말단들에 아미노산 또는 펩티드 부가들을 가질 수 있다. 본 발명의 예시적 키메라성 폴리펩티드들은 인자 IX-FcRn BP 키메라성 폴리펩티드들, 예로 인자 IX-Fc 키메라성 폴리펩티드들, 예컨대 그 신호 서열 및 프로펩티드가 있거나 없는 도 1, 서열 목록 번호 2(표 2) 및 실시예 1-4에서의 FIXFc이다. 본 발명의 또 다른 예시적 키메라성 폴리펩티드들은 인자 IX-XTEN 키메라성 폴리펩티드들을 비제한적으로 포함한다. 인자 IX는 XTEN의 N-말단 또는 C-말단에 융합될 수 있다.
키메라성 폴리펩티드는 인자 IX 및 FcRn BP, 예로 신호 서열 및 프로펩티드 서열이 없거나(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 642), 또는 대안적으로 프로펩티드 서열이 있거나, 또는 대안적으로 신호 서열 및 프로펩티드 서열이 있는 표 2A에 나타낸 Fc 아미노산 서열과 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 "배양", "배양하기 위해" 및 "배양하는"이란 세포 성장 또는 분열을 허용하거나 세포들을 살아있는 상태로 유지하기 위한 시험관 내 조건들 하에 세포들을 인큐베이션하는 것을 의미한다. 본원에서 사용되는 "배양된 세포들"이란 시험관 내에서 증식되는 세포들을 의미한다.
본원에서 사용되는 "인자 IX" 및 "FIX"는 달리 명시되지 않는 한 응고에서 그 정상적 역할을 하는 기능적 인자 IX 폴리펩티드를 의미한다. 따라서 인자 IX라는 용어는 기능적인 변이체 폴리펩티드들 및 상기 기능적 변이체 폴리펩티드들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드들을 포함한다. 바람직한 인자 IX 폴리펩티드들은 인간, 소, 돼지, 개, 고양이, 및 설치류 인자 IX 폴리펩티드들이다. 인자 IX의 전장 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 서열들은 여러 기능적 변이체들, 예로 단편들, 돌연변이체들 및 개질된 버전들로서 공지되어 있다. 인자 IX 폴리펩티드들은 전장 인자 IX, N-말단에서 Met을 뺀 전장 인자 IX, 신호 서열을 뺀 전장 인자 IX, 성숙 인자 IX(신호 서열 및 프로펩티드 제외), 및 N-말단에 추가적 Met을 갖는 성숙 인자 IX를 포함한다. 인자 IX는 바람직하게는 재조합 수단들에 의해 제조된다("재조합 인자 IX" 또는 "rFIX"), 즉 천연 생성되거나 혈장에서 유도되지 않는다.
매우 다양한 기능적 인자 IX 변이체들이 공지되어 있다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 02/040544 A3은 페이지 4, 라인 9-30 및 페이지 15, 라인 6-31에 헤파린에 의해 저해에 대해 증가된 내성을 나타내는 돌연변이체들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 03/020764 A2는 표 2 및 3(페이지 14-24), 및 페이지 12, 라인 1-27에서 감소된 T 세포 면역원성을 갖는 인자 IX 돌연변이체들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 2007/149406 A2는 페이지 4, 라인 1 내지 페이지 19, 라인 11에서 증가된 단백질 안정성, 증가된 생체 내 및 시험관 내 반감기, 및 프로테아제들에 대한 증가된 내성을 나타내는 기능적 돌연변이체 인자 IX 분자들을 개시한다. WO 2007/149406 A2는 또한 페이지 19, 라인 12 내지 페이지 20, 라인 9에서 키메라성 및 기타 변이체 인자 IX 분자들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 08/118507 A2는 페이지 5, 라인 14 내지 페이지 6, 라인 5에서 증가된 응고 활성을 나타내는 인자 IX 돌연변이체들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 09/051717 A2는 페이지 9, 라인 11 내지 페이지 20, 라인 2에서 증가된 수의 N-연결되고/되거나 O-연결된 글리코실화 부위들을 가져서 증가된 반감기 및/또는 회복을 일으키는 인자 IX 돌연변이체들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 09/137254 A2는 또한 페이지 2, 단락 [006] 내지 페이지 5, 단락 [011] 및 페이지 16, 단락 [044] 내지 페이지 24, 단락 [057]에서 증가된 수의 글리코실화 부위들을 갖는 인자 IX 돌연변이체들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 09/130198 A2는 페이지 4, 라인 26 내지 페이지 12, 라인 6에서 증가된 수의 글리코실화 부위들을 가져서 증가된 반감기로 이어지는 기능적 돌연변이체 인자 IX 분자들을 개시한다. 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 09/140015 A2는 페이지 11, 단락 [0043] 내지 페이지 13, 단락 [0053]에서 중합체(예로 PEG) 콘쥬게이션을 위해 사용될 수 있는 증가된 수의 Cys 잔기들을 갖는 기능적 인자 IX 돌연변이체들을 개시한다.
또한, 인자 IX의 수백가지 비기능적 돌연변이들이 혈우병 환자들에서 동정되었으며, 그 다수는 그 전문이 본원에 참조로 도입된 국제 공개 번호 WO 09/137254 A2의 페이지 11-14에서 표 1에 개시된다. 상기 비기능적 돌연변이들은 본 발명에 포함되지 않지만, 다소 기능적 인자 IX 폴리펩티드를 생성할 수 있는 돌연변이들에 대한 추가 지침을 제공한다.
인자 IX(또는 키메라성 폴리펩티드의 인자 IX 부분)는 신호 서열 및 프로펩티드 서열이 없거나(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 415), 또는 대안적으로 프로펩티드 서열이 있거나 또는 프로펩티드 및 신호 서열이 있는(전장 인자 IX) 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열과 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 100% 동일할 수 있다.
인자 IX 응고 활성은 국제 단위(들)(IU)로 표현된다. 1IU의 인자 IX 활성은 대략 정상 인간 혈장 1밀리리터 중 인자 IX의 양에 해당한다. 1단계 응고 분석(활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간; aPTT), 트롬빈 생성 시간(TGA) 및 회전 혈액응괴분석(ROTEM®)을 포함하는 몇몇 분석들이 인자 IX 활성의 측정을 위해 이용 가능하다. 예로 실시예 3을 참고하라.
본원에서 사용되는 "FcRn 결합 파트너" 또는 "FcRn BP"란 달리 명시되지 않는 한 기능적 신생아 Fc 수용체(FcRn) 결합 파트너들을 의미한다. FcRn 결합 파트너는 FcRn 결합 파트너의 FcRn 수용체에 의한 결과적 활성 수송으로 FcRn 수용체에 의해 특이적으로 결합될 수 있는 임의 분자이다. 따라서 FcRn BP라는 용어는 기능적인 IgG Fc의 임의 변이체들을 포함한다. 예를 들어, FcRn 수용체에 결합하는 IgG의 Fc 부분의 영역은 X-선 결정측정에 근거하여 설명되었다(Burmeister 등, 1994, Nature 372:379, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨). Fc의 FcRn와의 주요 접촉 부위는 CH2 및 CH3 도메인들의 결찰부 근처이다. Fc-FcRn 접촉부들은 모두 단일 Ig 중쇄 내에 있다. FcRn BP들은 전체 IgG, IgG의 Fc 단편, 및 FcRn의 전체 결합 영역을 포함하는 IgG의 기타 단편들을 포함한다. 주요 접촉 부위들은 CH2 도메인의 아미노산 잔기들 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311, 및 314 그리고 CH3 도메인의 아미노산 잔기들 385-387, 428, 및 433-436을 포함한다. 면역글로불린들 또는 면역글로불린 단편들, 또는 영역들의 아미노산 숫자 지정에 대한 참조는 모두 [Kabat 등, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Public Health, Bethesda; MD, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨]을 기준으로 한다(FcRn 수용체는 인간들을 포함하는 몇몇 포유류종들에서 단리되었다. 인간 FcRn, 래트 FcRn, 및 마우스 FcRn의 서열들은 공지되어 있다(Story 등, 1994, J. Exp. Med. 180: 2377), 본원에 그 전문이 참조로 도입됨). FcRn BP는 면역글로불린의 힌지 영역이 있거나 없는 면역글로불린의 CH2 및 CH3 도메인들을 포함할 수 있다. 예시적 FcRn BP 변이체들은 본원에 그 전문이 참조로 도입된 WO 2004/101740 및 WO 2006/074199에 제공된다.
FcRn BP는 또한 FcRn에 결합하는 알부민 및 이들의 단편들을 포함한다. 바람직하게는 알부민은 인간 알부민이다. 인자 IX는 인자 IX-알부민 융합 단백질의 인자 IX 성분이 효소적-활성 프로단백질 전환효소에 의해 가공되어 가공된 인자 IX-함유 폴리펩티드를 생성할 수 있는 한, 알부민의 N-말단 또는 알부민의 C-말단에 융합될 수 있다. 본 발명에 사용될 수 있는 알부민, 예로 이들의 단편들의 예들은, 예로 그 각각의 전문이 본원에 참조로 도입된 U.S. 특허 번호 7,592,010; U.S. 특허 번호 6,686,179; 및 [Schulte, Thrombosis Res. 124 Suppl. 2:S6-S8 (2009)]에 공지되어 있다.
FcRn BP(또는 키메라성 폴리펩티드의 FcRn BP 부분)는 하나 이상의 돌연변이들, 및 돌연변이들의 조합들을 함유할 수 있다.
FcRn BP(또는 키메라성 폴리펩티드의 FcRn BP 부분)는 본원에 그 전문이 참조로 도입된 [Oganesyan 등, Mol. Immunol. 46:1750 (2009)]에 개시된 바와 같은 증가된 반감기를 부여하는 돌연변이들, 예컨대 M252Y, S254T, T256E, 및 이들의 조합들; 본원에 그 전문이 참조로 도입된 [Vaccaro 등, Nat. Biotechnol. 23:1283 (2005)]에 개시된 바와 같은 H433K, N434F, 및 이들의 조합들; 본원에 그 전문이 참조로 도입된 U.S. 2009/0264627 A1의 페이지 1-2, 단락 [0012], 및 실시예 9 및 10에 개시된 돌연변이체들; 및 본원에 그 전문이 참조로 도입된 U.S. 20090163699 A1의 페이지 2, 단락들 [0014] 내지 [0021]에 개시된 돌연변이체들을 함유할 수 있다.
FcRn BP(또는 키메라성 폴리펩티드의 FcRn BP 부분)는 또한 하기 돌연변이들을 포함할 수 있다: IgG의 Fc 영역은 널리 인지된 절차들, 예컨대 부위 지정 돌연변이화 등에 따라 개질되어 FcRn에 의해 결합될 개질된 IgG 또는 Fc 단편들 또는 이들의 일부들을 생성할 수 있다. 상기 개질들은 FcRn 접촉 부위들로부터 먼 부위의 개질들뿐만 아니라 FcRn에 대한 결합을 보존하거나 증강시키는 접촉 부위들 내의 개질들을 포함한다. 예를 들어 인간 IgG1 Fc(Fcy1) 내의 하기 단일 아미노산 잔기들이 FcRn에 대한 Fc 결합 친화도에 대한 상당한 손실 없이 치환될 수 있다: P238A, S239A, K246A, K248A, D249A, M252A, T256A, E258A, T260A, D265A, S267A, H268A, E269A, D270A, E272A, L274A, N276A, Y278A, D280A, V282A, E283A, H285A, N286A, T289A, K290A, R292A, E293A, E294A, Q295A, Y296F, N297A, S298A, Y300F, R301A, V303A, V305A, T307A, L309A, Q311A, D312A, N315A, K317A, E318A, K320A, K322A, S324A, K326A, A327Q, P329A, A330Q, A330S, P331A, P331S, E333A, K334A, T335A, S337A, K338A, K340A, Q342A, R344A, E345A, Q347A, R355A, E356A, M358A, T359A, K360A, N361A, Q362A, Y373A, S375A D376A, A378Q, E380A, E382A, S383A, N384A, Q386A, E388A, N389A, N390A, Y391F, K392A, L398A, S400A, D401A, D413A, K414A, R416A, Q418A, Q419A, N421A, V422A, S424A, E430A, N434A, T437A, Q438A, K439A, S440A, S444A, 및 K447A(여기서, 예를 들어 P238A는 위치 번호 238에서 야생형 프롤린이 알라닌으로 치환된 것을 나타낸다). 알라닌에 부가하여, 기타 아미노산들도 상기 특정한 위치들에서 야생형 아미노산들에 대해 치환될 수 있다. 돌연변이들은 단독으로 Fc 내로 도입되어 천연 Fc와 상이한 백 가지가 넘는 FcRn 결합 파트너들을 만들 수 있다. 추가적으로 이들 단일 돌연변이들의 둘, 셋 또는 그 초과의 조합들을 함께 도입하여 수백 가지가 넘는 FcRn 결합 파트너들을 만들 수 있다. 특정한 이들 돌연변이들은 FcRn 결합 파트너에 새로운 기능성을 부여할 수 있다. 예를 들어, 하나의 구현예는 고도로 보존된 N-글리코실화 부위를 제거하는 N297A를 도입한다. 상기 돌연변이의 효과는 면역원성을 감소시킴으로써 FcRn 결합 파트너의 순환 반감기를 증강시키고, FcRn에 대한 친화도를 상쇄하지 않으면서 FcRn 결합 파트너가 FcyRI, FcyRIIA, FcyRIIB, 및 FcyRIIIA에 결합할 수 없도록 만드는 것이다(Routledge 등, 1995, Transplantation 60:847, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨; Friend 등, 1999, Transplantation 68:1632, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨; Shields 등, 1995, J. Biol. Chem. 276:6591, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨). 추가적으로 적어도 3 인간 Fc 감마 수용체들이 더 낮은 힌지 영역, 일반적으로 아미노산들 234-237 내에서 IgG 상 결합 부위를 인식하는 것으로 나타난다. 따라서 새로운 기능성 및 잠재적으로 줄어든 면역원성의 다른 예는 상기 영역의 돌연변이들에서, 예를 들어 인간 IgG1 "ELLG"의 아미노산들 233-236을 IgG2 "PVA"의 대응 서열(1 아미노산 결실을 가짐)로 대체함으로써 일어날 수 있다. 다양한 효과기 기능들을 매개하는 FcyRI, FcyRII, 및 FcyRIII는 상기 돌연변이들이 도입되는 경우 IgG1에 결합하지 않을 것으로 나타났다(Ward and Ghetie 1995, Therapeutic Immunology 2:77, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨; 및 Armour 등,1999, Eur. J. Immunol. 29:2613, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨). 상술된 돌연변이들에서 얻어지는 새로운 기능성의 추가 예로서, FcRn에 대한 친화도가 일부 경우들에서 야생형에 비해 더 증가될 수 있다. 이러한 증가된 친화도는 증가된 "on" 비율, 줄어든 "off" 비율 또는 증가된 "on" 비율과 줄어든 "off" 비율 모두를 반영할 수 있다. FcRn에 대한 증가된 친화도를 부여하는 것으로 여겨지는 돌연변이들은 T256A, T307A, E380A, 및 N434A를 포함한다(Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276:6591, 본원에 그 전문이 참조로 도입됨).
FcRn BP(또는 키메라성 폴리펩티드의 FcRn BP 부분)는 신호 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 227)을 갖지 않거나, 또는 대안적으로 신호 서열을 갖는 표 2A 또는 B에 나타낸 Fc 아미노산 서열과 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 100% 동일할 수 있다.
본원에서 사용되는 "하이브리드" 폴리펩티드들 및 단백질들이란 키메라성 폴리펩티드와 제 2 폴리펩티드의 조합을 의미한다. 하이브리드 중 키메라성 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드는 서로 비공유 단백질-단백질 상호작용들, 예컨대 전하-전하 또는 소수성 상호작용들을 통해 연관될 수 있다. 하이브리드 중 키메라성 폴리펩티드 및 제 2 폴리펩티드는 서로 공유 결합(들), 예컨대 디설피드 결합들을 통해 연관될 수 있다. 키메라성 펩티드 및 제 2 펩티드는 둘 이상의 결합 유형, 예컨대 비공유 및 디설피드 결합들을 통해 서로 연관될 수 있다. 하이브리드들은 WO 2004/101740, WO2005/001025, US 특허 번호 7,404,956, US 특허 번호 7,348,004, 및 WO 2006/074199에 기재되며, 그 각각은 본원에 그 전문이 참조로 도입된다. 제 2 폴리펩티드는 동일한 키메라성 폴리펩티드의 제 2 사본일 수 있고, 또는 동일하지 않은 키메라성 폴리펩티드일 수 있다. 바람직한 구현예들에서, 제 2 폴리펩티드는 FcRn BP, 예로 Fc를 포함하는 폴리펩티드이다. 바람직한 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드는 인자 IX-FcRn BP, 예로 인자 IX-Fc 키메라성 폴리펩티드이며, 제 2 폴리펩티드는 본질적으로 Fc로 구성된다. 예로 도 1, 실시예 1-3, 및 표 2(서열 목록 번호들 2 및 4)를 참고하라. 예로 본원에 그 전문이 참조로 도입된 US 7404956을 참고하라.
하이브리드 중 제 2 폴리펩티드는 신호 서열이 없는(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227), 또는 대안적으로 신호 서열이 있는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 90% 또는 적어도 95% 또는 100% 동일한 서열을 포함하거나 본질적으로 이로써 구성될 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드는 또한 하나 이상의 XTEN 폴리펩티드들에 융합된 인자 IX를 포함한다[Schellenburger 등, Nat. Biotech. 27:1186-90 (2009), 본원에 그 전문이 참조로 도입됨]. 인자 IX는 XTEN 폴리펩티드의 N-말단 또는 XTEN 폴리펩티드의 C-말단에 융합될 수 있다. XTEN 폴리펩티드들은 WO 2009/023270, WO 2010/091122, WO 2007/103515, US 2010/0189682, 및 US 2009/0092582에 개시된 것들을 비제한적으로 포함하며, 그 각각은 본원에 그 전문이 참조로 도입된다.
본원에서 사용되는 "투여 간격"이란 대상체에 투여되는 다회 용량들 사이에 경과하는 시간의 양을 의미한다. 키메라성 FIX-FcRn BP, 예로 키메라성 FIX-Fc를 사용하는 본 발명의 방법들에서의 투여 간격은 FcRn BP, 예로 Fc 부분이 없는 상기 인자 IX(즉, 상기 FIX로 구성된 폴리펩티드)의 동등량(IU/kg)에 대해 필요한 투여 간격보다 적어도 약 1.5 내지 8배 더 길 수 있다. 예로 본 발명의 인자 IX-Fc 키메라성 폴리펩티드(또는 하이브리드)를 투여하는 경우 투여 간격은 FcRn BP, 예로 Fc 부분이 없는 상기 인자 IX(즉, 상기 인자 IX로 구성된 폴리펩티드)의 동등량에 대해 필요한 투여 간격보다 적어도 약 1.5배 더 길 수 있다. 투여 간격은 예로 Fc 부분이 없는 상기 인자 IX(또는 상기 인자 IX로 구성된 폴리펩티드)의 동등량에 대해 필요한 투여 간격보다 적어도 약 1.5 내지 8배 더 길 수 있다.
일부 구현예들에서, 투여 간격은 6-18, 6-10, 9-18, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9, 적어도 10, 적어도 11, 적어도 12, 적어도 13, 적어도 14, 적어도 15, 적어도 16, 적어도 17, 또는 적어도 18일이다. 투여 간격은 적어도 약 주 1회일 수 있고, 6-10일, 예로 약 7-10, 약 7-9, 약 7-8, 약 8-10, 약 9-10, 약 6-7, 약 8-9, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 또는 약 10일일 수 있다.
투여 간격은 9-18일, 예로 약 9-17, 약 9-16, 약 9-15, 약 9-14, 약 9-13, 약 9-12, 약 9-11, 약 9-10일, 약 10-18, 약 11-18, 약 12-18, 약 13-18, 약 14-18, 약 15-18, 약 16-18, 약 17-18일, 약 10-11, 약 11-12, 약 12-13, 약 13-14, 약 14-15, 약 15-16, 및 약 16-17일, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 또는 약 18일일 수 있다. 투여 간격은 약 10-14일일 수 있다. 투여 간격은 약 2주 1회 또는 월 2회일 수 있다. 투여 간격은 18일, 예로 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40일보다 길 수 있다. 투여 간격은 고정된 간격, 예로 25-50IU/kg에 대해 7일, 50-100IU/kg에 대해 10-13일, 또는 100-150IU/kg에 대해 14일일 수 있다. 고정된 간격 및 용량은 용량 및 간격의 조합이 대상체들의 모집단에서 또는 개인 대상체에서 적어도 약 1-5 또는 적어도 약 1-3, 또는 적어도 약 1, 적어도 약 2, 또는 적어도 약 3IU/dL FIX 활성의 저점을 야기하도록 결정된다. 고정된 투여 간격은 또한 20-50IU/kg에 대한 7일, 50-100IU/kg에 대해 10-14일, 100-150IU/kg에 대해 14-16일, 10-50IU/kg에 대해 7일, 15-100IU/kg에 대해 10-13일, 또는 50-150IU/kg에 대해 14-15일일 수 있다. 고정된 투여 간격은 또한 10-30IU/kg에 대해 7일, 15-50IU/kg에 대해 10일, 20-70IU/kg에 대해 11일, 25-85IU/kg에 대해 12일, 30 내지 100IU/kg에 대해 13일, 40 내지 125IU/kg에 대해 14일, 및 50 내지 150IU/kg에 대해 15일일 수 있다.
바람직한 구현예들에서, 투여 간격은 주 1회 20IU/kg, 10일 1회 40IU/kg, 또는 2주 1회(월 2회) 100IU/kg이다.
투여 간격은 대안적으로 해당 대상체에 대한 약동학 데이터 또는 기타 정보에 근거하여 각 대상체에 대해 결정되는 개인화된 간격일 수 있다. 개인화된 용량/투여 간격 조합은 선행 단락들에서 고정된 간격 요법들에 대한 것과 동일할 수 있고, 또는 실시예에서 나타낸 바와 같이 상이할 수 있다. 요법은 초기에는 고정된 투여 간격일 수 있고, 이어서 개인화된 투여 간격으로 변경될 수 있다.
본원에서 사용되는 "필요 시 치료"란 짧은 시간 경과에 걸쳐 일어나며, 기존 상태, 예컨대 출혈 증례 또는 감지되는 단기 필요성, 예컨대 계획된 수술에 반응하는 치료를 의미한다. 필요 시 치료를 필요로 할 수 있는 상태들은 출혈 증례, 혈관절증, 근육 출혈, 경구 출혈, 출혈, 근육들 내로의 출혈, 경구 출혈, 외상, 두부 외상, 위장관계 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 흉곽내 출혈, 뼈 골절, 중추 신경계 출혈, 인두뒤 공간 내 출혈, 복강뒤 공간 내 출혈, 또는 장요근집 내 출혈을 포함한다. 이들 이외의 출혈 증례들도 또한 포함된다. 대상체는 수술적 예방, 수술 주변 관리, 또는 수술을 위한 치료를 필요로 할 수 있다. 상기 수술들은 소수술, 대수술, 발치, 편도절제술, 기타 치과적/흉부-안면 수술들, 서혜부 탈장절개술, 윤활막절제술, 전체 슬관절 치환술, 기타 관절 치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술, 두개내 수술, 복강내 수술, 흉곽내 수술을 포함한다. 이들 이외의 수술들도 또한 포함된다. 필요 시 치료를 필요로 할 수 있는 추가적 상태들은 표 26에 열거된 것들을 포함한다.
필요 시 치료를 필요로 할 수 있는 추가적 상태들은 경증 출혈, 혈관절증, 표재근 출혈, 연조직 출혈, 중등 출혈, 박리를 동반하는 근육내 또는 연조직 출혈, 점막 출혈, 혈뇨, 중증 출혈, 인두 출혈, 인두뒤 출혈, 복강뒤 출혈, 중추 신경계 출혈, 멍들, 절상들, 상처들, 관절 출혈, 코 출혈, 입 출혈, 잇몸 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 경증 자연발생적 출혈, 중증 외상 후 출혈, 중등 피부 타박상, 또는 관절들, 근육들, 내부 장기들 또는 뇌 내로의 자연발생적 출혈을 포함한다. 필요 시 치료를 위한 추가 이유들은 수술 또는 발치, 대수술, 광범위 경구 수술, 비뇨기 수술, 탈장 수술, 정형외과 수술, 예컨대 슬관절, 고관절, 또는 기타 주요 관절의 치환술을 위한 수술 주변 관리에 대한 필요성을 포함한다.
약어들:
AUCINF 0에서부터 무한대까지의 농도-시간 곡선 하의 면적
AUCα 분포상에 걸친 농도-시간 곡선 하의 면적
AUCβ 제거상에 걸친 농도-시간 곡선 하의 면적
알파 HL 분포상 반감기
베타 HL 제거상 반감기; t1/2로도 불림
C168 용량 투여 후 대략 168시간에서 산출된 기준선 초과 FIXFc 활성
Cmax 최대 농도, Tmax에서 얻어짐
CV% 변이 계수%
Cl 제거
IVR 생체 내 회복(%)
K-값 증분 회복
MRT 평균 체류 시간
N 수
NC 계산 불가
NR 보고되지 않음
SD 표준 편차
SE 표준 오차
TBLP1 용량 투여 후 FIXFc 활성이 기준선의 대략 1IU/dL 초과로 감퇴되는 모델-예측 시간
TBLP3 용량 투여 후 FIXFc 활성이 기준선의 대략 3IU/dL 초과로 감퇴되는 모델-예측 시간
TBLP5 용량 투여 후 FIXFc 활성이 기준선의 대략 5IU/dL 초과로 감퇴되는 모델-예측 시간
VSS 안정 상태에서의 분포 부피
V1 중앙 구획의 분포 부피
약동학(PK) 파라미터들은 달리 나타내지 않는 한 당분야의 일반적 의미를 갖는 상기 용어들 및 하기 용어들을 포함한다. 일부 용어들은 실시예에서 보다 상세히 설명된다. PK 파라미터들은 FIX 항원 수준(종종 본원에서 부수적으로 "항원"으로 나타냄) 또는 FIX 활성 수준(종종 본원에서 부수적으로 "활성"으로 나타냄)에 근거할 수 있다. 문헌에서 PK 파라미터들은 종종 FIX에 대한 항체를 이용하여 투여된(즉, 외인성) FIX를 측정하는 능력을 방해하는, 일부 환자들의 혈장 중 내인성 비활성 FIX의 존재로 인해 FIX 활성 수준에 근거한다. 그러나 FIX가 이종성 폴리펩티드, 예컨대 FcRn BP를 함유하는 융합 단백질의 일부로서 투여되는 경우, 투여되는(즉, 외인성) FIX 항원은 이종성 폴리펩티드에 대한 항체를 이용하여 정확히 측정될 수 있다. 또한, 특정 PK 파라미터들은 모델 예측 데이터(종종 본원에서 부수적으로 "모델 예측된"으로 나타냄) 또는 관측 데이터(종종 본원에서 부수적으로 "관측된"으로 나타냄)에 근거할 수 있고, 바람직하게는 관측 데이터에 근거한다.
본원에서 사용되는 "기준선"은 용량 투여 이전에 대상체에서 측정되는 최저 혈장 인자 IX 수준이다. 실시예 1에 기재된 최초 인간 내 연구에서, 인자 IX 혈장 수준들은 투여 전 2 시점: 스크리닝 방문 시 및 투여 직전에 측정되었다. 투여 전 시간들은 계산들을 위한 목적으로, 즉 "기준선 감산" 데이터를 생성하기 위해 0(기준선)으로서 처리되었다. 예로 도 4를 참고하라. 대안적으로 (a) 검출 가능한 FIX 항원을 갖지 않으며 논센스 유전형을 갖는, 치료 전 FIX 활성이 <1%인 환자들에서의 기준선은 0%로 정의되며, (b) 치료 전 FIX 활성이 <1%이고 검출 가능한 FIX 항원을 갖는 환자들에서의 기준선은 0.5%로 정의되며, (c) 치료 전 FIX 활성이 1-2%인 환자들에서의 기준선은 Cmin(PK 연구에 걸친 최저 활성)으로 정의되며, (d) 치료 전 FIX 활성이 ≥2%인 환자들에서의 기준선은 2%로 정의된다. 투여 전 기준선을 초과하는 활성은 이전 치료의 잔여 약물로 간주되며, rFIXFc 투여 후 기준선으로 감퇴되고 PK 데이터로부터 감산되었다. 실시예 11을 참고하라.
본원에서 사용되는 "혈장 농도 대 시간 곡선 하의 면적"("AUC")은 투여 후 인자 IX의 베타 제거율 및 범위에 근거한다. AUC는 지정된 시기, 예컨대 12, 18, 24, 36, 48, 또는 72시간들에 걸쳐 또는 곡선의 경사도에 근거한 외삽을 이용하여 무한대에 대해 결정된다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, AUC는 무한대에 대해 결정된다(AUCINF). AUC는 또한 용량 기준 별로 계산될 수 있다. 여러 다른 PK 파라미터들과 마찬가지로, AUC의 결정은 단일 대상체에서, 또는 평균이 계산되는 대상체들의 모집단에서 수행될 수 있다. 실시예 1에서, 환자 모집단에서의 평균 AUC/용량은 IU/kg 당 32.44IU*h/dL였으며, 개인 대상체들에 대한 범위는 IU/kg 당 21.80-54.30IU*h/dL였다(활성에 근거한 평균 AUC/용량에 대해서는 표 13을 참고하라). 따라서 환자 모집단에서의 평균 AUC/용량은 IU/kg 당 약 26-40, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40IU*h/dL일 수 있다. 항원에 근거한 AUC/용량 및 기타 AUC 파라미터들에 대해서는 표 14를 참고하라.
"생체 내 회복"("IVR")은 관측된 피크 활성에서 투여 전 활성을 뺀 후 용량으로 나눈 증분 회복(K-값)으로 나타낸다. IVR은 또한 실시예에 기재된 바와 같이 백분율 기준으로 계산될 수 있다. 명확히 하기 위해, 단위들(IU/kg 당 K값 또는 IU/dL 대 %)을 본원에서 이용한다. 평균 IVR이 환자 모집단에서 결정될 수 있고, 또는 개인 IVR이 단일 대상체에서 결정될 수 있다. 실시예 1에 기재된 최초 인간 내 연구에서 사용되는 FIXFc는 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.93IU/dL의 평균 IVR을; 그리고 각 대상체에서 IU/kg 당 0.62 내지 1.17IU/dL 범위의 IVR을 나타내었다(표 13). 따라서 본 발명의 키메라성 폴리펩티드는 환자 모집단에서 0.85-1.15(예로 약 0.85, 약 0.86, 약 0.87, 약 0.88, 약 0.89, 약 0.90, 약 0.91, 약 0.92, 약 0.93, 약 0.94, 약 0.95, 약 0.96, 약 0.97, 약 0.98, 약 0.99, 약 1.0, 약 1.05, 약 1.10, 약 1.15)의 평균 IVR을, 그리고 대상체에서 IU/kg 당 적어도 약 0.6, 약 0.7, 0.8, 약 0.9, 약 1.0, 약 1.1, 또는 약 1.2IU/dL의 IVR을 나타낸다.
본원에서 사용되는 "제거율"("CL")은 약물을 제거하는 신체 능력의 척도이며, 경시적으로 제거된 약물의 혈장 제거 부피로서 표현된다. 실시예 1에 기재된 연구에서 사용되는 FIXFc는 약 3.36ml/시간/kg의 평균 CL을 나타내었으며(표 13 참고), 이는 인자 IX(BENEFIX™)로 구성된 폴리펩티드의 CL(8.2mL/시간/kg)보다 약 2.5배 더 낮다; 개인 대상체들에서 CL값들의 범위는 1.84-4.58ml/h/kg이었다. 따라서 본 발명의 키메라성 폴리펩티드는 모집단에서 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 또는 3.72mL/시간/kg의 평균 CL을 나타낸다. 항원에 따른 CL에 대해서는 표 14를 참고하라.
본원에서 사용되는 "평균 체류 시간"("MRT")은 체내 약물 분자들의 평균 수명의 척도이다. 실시예 1에 기재된 연구에서 사용되는 FIXFc는 약 68.05시간의 평균 MRT를 나타내었다(표 13 참고); MRT값들의 범위는 개인 대상체들에서 53.1-85.8시간이었다. 따라서 본 발명의 키메라성 폴리펩티드는 모집단에서 60-78, 약 60, 약 62, 약 64, 약 66, 약 68, 약 70, 약 72, 약 74, 약 76, 또는 약 78시간의 평균 MRT를 나타내며, 대상체에서 적어도 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 또는 약 90시간의 MRT를 나타낸다. 항원에 따른 MRT에 대해서는 표 14를 참고하라.
본원에서 사용되는 "t1/2β" 또는 "t1/2베타" 또는 "베타 HL"은 제거상과 연관된 반감기이다(t1/2β = ln2/말단상과 연관된 제거율 상수). 실시예 1에 기재된 연구에서, 사용되는 FIXFc는 환자 모집단에서 약 52.5시간인 평균 t1/2z를 나타내었으며(표 13 참고), 개인 대상체들에서 t1/2β값들의 범위는 47-60시간이었다. 따라서 본 발명의 키메라성 폴리펩티드는 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 51, 약 52, 약 53, 약 54, 약 55, 약 56, 약 57, 약 58, 약 59, 또는 약 60시간을 초과하는 평균 t1/2β를 나타낸다. 항원에 따른 t1/2β에 대해서는 표 14를 참고하라.
본원에서 사용되는 "저점"은 본 발명의 키메라성 폴리펩티드 또는 다른 인자 IX 분자의 용량 투여 후 그리고 다음 용량이 존재하는 경우 그 투여 전에 도달하는 최저 혈장 인자 IX 활성 수준이다. 저점은 본원에서 "역치"와 상호 교환적으로 사용된다. 기준선 인자 IX 수준들은 저점 수준을 계산하기 위해 측정된 인자 IX 수준들로부터 감산된다. 일부 구현예들에서, 저점은 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13 또는 약 14일 후 1-5 또는 1-3IU/dL이다. 일부 구현예들에서, 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준은 적어도 약 6일 후에 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 약 100%의 환자 모집단에서 적어도 약 1IU/dL의 평균 저점에 도달하거나, 또는 대상체에서 적어도 약 6일 후에 적어도 약 1, 2, 3, 4, 또는 5IU/dL의 저점에 도달한다. 일부 구현예들에서, 상기 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준은 약 1-5 또는 1-3IU/dL의 평균 저점에 도달한다. 상기 저점 또는 평균 저점은 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 약 19, 약 20, 약 21, 약 22, 약 23, 약 24, 약 25, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40일 후에 도달될 수 있다.
본원에서 사용되는 "안정 상태 시의 분포 부피(Vss)"는 약물이 분포하는 겉보기 공간(부피)이다. Vss = 안정 상태 시 혈장 농도로 나눈 체내 약물의 양. 실시예 1에서, 모집단에서 확인되는 평균 Vss는 약 226mL/kg였으며, 대상체들에 대한 범위는 약 145-365mL/kg이었다(표 13 참고). 따라서 환자 모집단에서의 평균 Vss는 200-300, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 또는 약 300mL/kg일 수 있다. 개인 대상체들에 대한 Vss는 약 145, 약 150, 약 160, 약 170, 약 180, 약 190, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 약 300, 약 310, 약 320, 약 330, 약 340, 약 350, 약 360, 또는 약 370ml/kg일 수 있다. 항원에 따른 Vss에 대해서는 표 14를 참고하라.
"폴리펩티드," "펩티드" 및 "단백질"은 상호 교환적으로 사용되며, 공유 연결된 아미노산 잔기들로 이루어진 중합체성 화합물을 나타낸다.
"폴리뉴클레오티드" 및 "핵산"은 상호 교환적으로 사용되며, 공유 연결된 뉴클레오티드 잔기들로 이루어진 중합체성 화합물을 나타낸다. 폴리뉴클레오티드들은 DNA, cDNA, RNA, 단일쇄, 또는 이중쇄, 벡터들, 플라스미드들, 파지, 또는 바이러스들일 수 있다. 폴리뉴클레오티드들은 표 2의 폴리펩티드들을 인코딩하는 표 1에 기재된 것들을 포함한다(표 1 참고). 폴리뉴클레오티드들은 또한 표 1의 폴리뉴클레오티드들의 단편들, 예로 표 2의 폴리펩티드들의 단편들, 예컨대 표 2의 폴리펩티드들의 인자 IX, Fc, 신호 서열, 프로펩티드, 6His 및 기타 단편들을 인코딩하는 것들을 포함한다.
본원에서 사용되는 "예방적 치료"는 대상체의 혈장 중에서 인자 IX 활성 수준을 증가시키는 시간 경과에 걸쳐 대상체에 다회 용량들의 인자 IX 폴리펩티드 투여를 의미한다. 바람직하게는 증가된 수준은 자연발생적 출혈의 발생율을 감소시키거나 예측되지 않은 부상 사건에서 출혈을 방지하기 충분하다. 예방적 치료는 출혈 증례들, 예를 들어 필요 시 치료 하에 기재된 것들을 감소시키거나 방지한다. 예방적 치료는 "투여 간격" 하에 논의되는 바와 같이, 예를 들어 환자 간 편차를 보상하기 위해 고정될 수도 있고 또는 개인화될 수도 있다.
본원에서 사용되는 "대상체"는 인간 또는 비인간 포유류를 의미한다. 비인간 포유류들은 마우스들, 개들, 영장류들, 원숭이들, 고양이들, 말들, 소들, 돼지들, 및 기타 가축 동물들 및 소동물들을 포함한다. 대상체들은 또한 인간 소아들을 포함한다. 인간 소아 대상체들은 출생부터 20세, 바람직하게는 출생부터 18세, 출생부터 16세, 출생부터 15세, 출생부터 12세, 출생부터 11세, 출생부터 6세, 출생부터 5세, 출생부터 2세, 및 2 내지 11세 연령이다.
본 발명의 방법들은 출혈 또는 출혈 증례들의 조절 또는 방지를 필요로 하는 대상체 상에 실시될 수 있다. 상기 대상체들은 경증 출혈, 혈관절증, 표재근 출혈, 연조직 출혈, 중등 출혈, 박리를 동반하는 근육내 또는 연조직 출혈, 점막 출혈, 혈뇨, 중증 출혈, 인두 출혈, 인두뒤 출혈, 복강뒤 출혈, 중추 신경계 출혈, 멍들, 절상들, 상처들, 관절 출혈, 코 출혈, 입 출혈, 잇몸 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 경증 자연발생적 출혈, 중증 외상 후 출혈, 중등 피부 타박상, 또는 관절들, 근육들, 내부 장기들 또는 뇌 내로의 자연발생적 출혈에서 출혈의 조절 또는 방지를 필요로 하는 대상체들을 포함한다. 상기 대상체들은 또한 수술 주변 관리, 예컨대 수술 또는 발치와 연관된 출혈의 관리를 필요로 하는 대상체들을 포함한다.
본원에서 사용되는 "치료 용량"은 본원에 기재된 바와 같은 치료 목표를 달성하는 용량을 의미한다. 혈장 유도 인자 IX(pdFIX)의 필요 투여량의 계산은 평균적으로 체중 1kg 당 1IU의 pdFIX가 대략 1IU/dL(1%)의 혈장 인자 IX 활성을 상승시킨다는 실험적 발견에 근거한다. 이러한 기준에서, 필요 투여량은 하기 식을 이용하여 결정된다:
필요 단위들 = 체중(kg) x 목적하는 인자 IX 상승(IU/dL 또는 정상 대비 %) x 1(1IU/dL 당 IU/kg)
실시예 및 도 1에 기재된 바와 같이 FIXFc는 pdFIX와 유사한 증분 회복을 갖기 때문에(BENEFIX™의 증분 회복과는 상이함), 필요 용량은 상기 식을 이용해서 또는 이를 약간 조정하여 결정된다. 다양한 필요 시 치료 필요성들에 대한 구체적 권장 용량들에 대해서는 표 26을 또한 참고하라. pdFIX를 이용한 소아 대상체들에 있어서, 투여량 지침은 성인들에 대한 것과 동일하다. 그러나 소아 환자들은 더 낮은 증분 회복을 가질 수 있으며, 이에 따라 투여량이 상향 조정될 필요가 있을 수 있다.
본 발명의 방법들에 사용될 수 있는 치료 용량들은 10-180, 20-180, 또는 25-180IU/kg이며, 보다 구체적으로 6-10일 투여 간격에 대해 바람직한 용량들은 다음과 같다: 약 25-110, 약 30-110, 약 40-110, 약 50-110, 약 60-110, 약 70-110, 약 80-110, 약 90-110, 및 약 100-110; 약 30-100, 약 30-90, 약 30-80, 약 30-70, 약 30-60, 약 30-50, 약 30-40IU/kg; 약 40-110, 약 50-100, 약 60-90, 및 약 70-80IU/kg; 약 40-50, 약 50-60, 약 60-70, 약 70-80, 약 80-90, 약 90-100, 및 약 100-110IU/kg; 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 및 약 110IU/kg. 6-10일 투여 간격은 주 1회 투여 간격을 포함한다. 6-10일에 대한, 예로 주 1회에 대한 추가적 치료 용량들은 20-50, 20-100, 및 20-180IU/kg을 포함하며, 보다 구체적으로 6-10일에 대한, 예로 주 1회에 대한 바람직한 용량들에 대해 투여 간격은 다음과 같다: 약 20-110, 약 20-100, 약 20-90, 약 20-80, 약 20-70, 약 20-60, 약 20-50, 약 20-40, 약 20-30, 약 20-40, 및 약 20IU/kg. 또한 실시예 10 및 11을 참고하라. 용량들은 주어진 환자에 대해 효과적인 경우 20IU/kg 미만, 예로 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 약 18, 또는 약 19IU/kg일 수 있다.
9-18일, 예로 월 2회에 대해 바람직한 치료 용량들에 대한 투여 간격은 다음과 같다: 약 50-180, 약 60-180, 약 70-180, 약 80-180, 약 90-180, 약 100-180, 약 110-180, 약 120-180, 약 130-180, 약 140-180, 약 150-180, 약 160-180, 및 약 170-180IU/kg; 약 90-170, 약 90-160, 약 90-150, 약 90-140, 약 90-130, 약 90-120, 약 90-110, 및 약 90-100IU/kg; 약 100-170, 약 110-160, 약 120-150, 및 약 130-140IU/kg; 약 90-100, 약 100-110, 약 110-120, 약 120-130, 약 130-140, 약 140-150, 약 150-160, 및 약 160-170IU/kg; 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 약 110, 약 115, 약 120, 약 125, 약 130, 약 135, 약 140, 약 145, 약 150, 약 155, 약 160, 약 165, 약 170, 약 175, 및 약 180IU/kg. 또한 실시예 10 및 11을 참고하라.
바람직한 치료 용량들은 10-50, 15-100, 20-100, 20-50, 50-100, 10, 20, 40, 50, 및 100IU/kg이다.
치료 용량은 약 20-50, 약 20-100, 약 20-180, 25-110, 약 30-110, 약 40-110, 약 50-110, 약 60-110, 약 70-110, 약 80-110, 약 90-110, 약 100-110, 약 30-100, 약 30-90, 약 30-80, 약 30-70, 약 30-60, 약 30-50, 약 30-40IU/kg, 약 40-110, 약 50-100, 약 60-90, 약 70-80IU/kg, 약 40-50, 약 50-60, 약 60-70, 약 70-80, 약 80-90, 약 90-100, 약 100-110IU/kg, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 및 약 110IU/kg일 수 있다. 상기 용량들은 약 6-10, 약 7-10, 약 7-9, 약 7-8, 약 8-10, 약 9-10, 약 6-7, 약 8-9, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 및 약 10일 및 주 1회의 투여 간격들에 대해 바람직하다.
치료 용량은 약 90-180, 약 100-180, 약 110-180, 약 120-180, 약 130-180, 약 140-180, 약 150-180, 약 160-180, 및 약 170-180IU/kg일 수 있다. 용량은 약 90-170, 약 90-160, 약 90-150, 약 90-140, 약 90-130, 약 90-120, 약 90-110, 및 약 90-100IU/kg일 수 있다. 용량은 약 100-170, 약 110-160, 약 120-150, 및 약 130-140IU/kg일 수 있다. 용량은 약 90-100, 약 100-110, 약 110-120, 약 120-130, 약 130-140, 약 140-150, 약 150-160, 및 약 160-170IU/kg일 수 있다. 용량은 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 약 110, 약 115, 약 120, 약 125, 약 130, 약 135, 약 140, 약 145, 약 150, 약 155, 약 160, 약 165, 약 170, 약 175, 및 약 180IU/kg일 수 있다. 상기 용량들은 약 9-18, 약 9-17, 약 9-16, 약 9-15, 약 9-14, 약 9-13, 약 9-12, 약 9-11, 약 9-10, 약 10-18, 약 11-18, 약 12-18, 약 13-18, 약 14-18, 약 15-18, 약 16-18, 약 17-18, 약 10-11, 약 11-12, 약 12-13, 약 13-14, 약 14-15, 약 15-16, 및 약 16-17일, 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 및 약 18일, 월 1회 및 월 2회(2주 1회)의 투여 간격에 대해 바람직하다.
바람직한 치료 용량 및 투여 간격들은 다음과 같다: 20IU/kg 주 1회, 40IU/kg 10일 1회, 및 100IU/kg 2주 1회(월 2회). 용량 및 투여 간격의 추가적 조합들은 다음을 포함한다: 적어도 약 50IU/kg의 용량 및 적어도 약 7일의 투여 간격, 적어도 약 100IU/kg의 용량 및 적어도 약 9일의 투여 간격, 적어도 약 100IU/kg의 용량 및 적어도 약 12일의 투여 간격, 적어도 약 150IU/kg의 용량 및 적어도 약 14일의 투여 간격, 20-50 또는 20-100IU/kg 및 상기 투여 간격은 주 1회이며, 20-50IU/kg의 용량 및 7 일의 투여 간격, 50-100IU/kg의 용량 및 10-14일의 투여 간격, 또는 100-150IU/kg의 용량 및 14-16일의 투여 간격. 투여 간격 및 용량의 바람직한 조합들은 또한 7일에 대해 10-50IU/kg, 10-13일에 대해 15-100IU/kg, 14-15일에 대해 50-150IU/kg, 7일에 대해 10-30IU/kg, 10일에 대해 15-50IU/kg, 11일에 대해 20-70IU/kg, 12일에 대해 25-85IU/kg, 13 일에 대해 30 내지 100IU/kg, 14 일에 대해 40 내지 125IU/kg, 및 15 일에 대해 50-150IU/kg을 포함한다.
본원에서 사용되는 "변이체"는 원래 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 상이하지만 이들의 본질적 특성들, 예로 인자 IX 응고 활성 또는 Fc(FcRn 결합) 활성을 보유하는 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드를 나타낸다. 일반적으로 변이체들은 전체적으로 매우 유사하며, 여러 영역들에서 원래 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드와 동일하다. 변이체들은 원래 폴리펩티드들의 폴리펩티드 및 폴리뉴클레오티드 단편들, 결실들, 삽입들, 및 개질된 버전들을 포함한다.
변이체 폴리뉴클레오티드들은, 예를 들어 서열 목록 번호 1 또는 3의 뉴클레오티드 코딩 서열(인자 IX 부분, Fc 부분이 개별적으로 또는 함께) 또는 이에 대한 상보쇄, 공지된 돌연변이체 및 재조합 인자 IX 또는 Fc의 뉴클레오티드 코딩 서열, 예컨대 본원에 언급된 공보들 및 특허들에 개시된 것들 또는 이에 대한 상보쇄, 서열 목록 번호 2 또는 4의 폴리펩티드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열(인자 IX 부분, Fc 부분이 개별적으로 또는 함께) 및/또는 임의의 이들 핵산 분자들의 폴리뉴클레오티드 단편들(예로 본원에 기재된 단편들)과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함하거나 또는 대안적으로 이로써 구성될 수 있다. 엄격한 혼성화 조건들 또는 더 낮은 엄격성 조건들 하에 이들 핵산 분자들에 혼성화하는 폴리뉴클레오티드들은 이들이 기능적인 한 이들 폴리뉴클레오티드들에 의해 인코딩되는 폴리펩티드들과 마찬가지로 또한 변이체들로서 포함된다.
변이체 폴리펩티드들은, 예를 들어 서열 목록 번호 2 또는 4에 나타낸 폴리펩티드 서열(인자 IX 부분, Fc 부분이 개별적으로 또는 함께) 및/또는 임의의 이들 폴리펩티드들의 폴리펩티드 단편들(예로 본원에 기재된 단편들)과 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하거나 또는 대안적으로 이로써 구성될 수 있다.
예를 들어 참조 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 95% "동일한" 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산이란 뉴클레오티드 서열이 참조 뉴클레오티드 서열의 각 100개 뉴클레오티드들 당 최대 5개의 점 돌연변이들을 포함할 수 있다는 것을 제외하고 핵산의 뉴클레오티드 서열이 참조 서열과 동일하다는 것을 의미한다. 달리 말하면, 참조 뉴클레오티드 서열에 대해 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산을 수득하기 위해서는 참조 서열에서 최대 5%의 뉴클레오티드들이 또 다른 뉴클레오티드로 결실되거나 치환될 수 있거나, 또는 참조 서열 중 전체 뉴클레오티드들의 최대 5%까지의 뉴클레오티드들의 수가 참조 서열 내로 삽입될 수 있다. 검색 서열은, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 서열 목록 번호 1 또는 3에 나타낸 전체 서열, ORF(개방 해독틀), 또는 특정된 임의의 단편일 수 있다.
실제적인 문제로서, 임의의 특정 핵산 분자 또는 폴리펩티드가 본 발명의 뉴클레오티드 서열 또는 폴리펩티드와 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한지 여부는 공지된 컴퓨터 프로그램들을 이용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 광역 서열 정렬로도 불리는 검색 서열(참조 또는 원래 서열) 및 대상체 서열 간 최적의 전체적 매치를 결정하기 위한 바람직한 방법은 그 전문이 본원에 참조로 도입되는 [Brutlag 등, (Comp. App. Biosci. (1990) 6:237-245)]의 알고리즘에 근거한 FASTDB 컴퓨터 프로그램을 이용하여 결정될 수 있다. 서열 정렬에서, 검색 및 대상체 서열들은 둘 다 DNA 서열들이다. RNA 서열은 U를 T로 전환함으로써 비교될 수 있다. 상기 광역 서열 정렬의 결과는 동일성 백분율이다. 동일성 백분율을 계산하기 위한 DNA 서열들의 FASTDB 정렬에서 이용되는 바람직한 파라미터들은 다음과 같다: 매트릭스=단독, k-터플=4, 미스매치 페널티=1, 결합 페널티=30, 무작위화 그룹 길이=0, 컷오프 스코어=1, 갭 페널티=5, 갭 크기 페널티 0.05, 윈도우 크기=500 또는 대상체 뉴클레오티드 서열의 길이 중 더 짧은 것.
대상체 서열이 내부 결실들 때문에 아니라 5' 또는 3' 결실들로 인해 검색 서열에 비해 더 짧은 경우, 결과들에 수동 보정을 수행해야 한다. 이는 FASTDB 프로그램이 동일성 백분율을 계산할 때 대상체 서열의 5' 및 3' 절단들을 설명하지 못하기 때문이다. 검색 서열에 비해 5' 또는 3' 말단들에서 절단된 대상체 서열들에 대해, 검색 서열의 전체 염기들의 백분율로서 매치/정렬되지 않은 대상체 서열의 5' 및 3'인 검색 서열의 염기들의 수를 계산함으로써 동일성 백분율이 보정된다. 뉴클레오티드가 매치/정렬되는지 여부는 FASTDB 서열 정렬의 결과들로 결정된다. 이어서 이러한 백분율은 특정된 파라미터들을 이용하여 상기 FASTDB 프로그램에 의해 계산되는 동일성 백분율로부터 감산되어 최종 동일성 백분율 스코어에서 도달한다. 이러한 보정된 스코어는 본 발명의 목적을 위해 이용되는 것이다. 검색 서열과 매치/정렬되지 않은, FASTDB 정렬에 의해 디스플레이되는 바와 같은 대상체 서열의 5' 및 3' 염기들 밖의 염기들만이 동일성 백분율 스코어를 수동 조정하기 위한 목적으로 계산된다.
예를 들어, 동일성 백분율을 결정하기 위해 90개 염기 대상체 서열이 100개 염기 검색 서열에 정렬된다. 대상체 서열의 5' 말단에서 결실들이 일어나며, 따라서 FASTDB 정렬은 5' 말단에서 최초 10개 염기들의 매치/정렬을 나타내지 않는다. 쌍을 형성하지 않은 10개 염기들은 서열의 10%(매치되지 않은 5' 및 3' 말단들에서 염기들의 수/검색 서열에서 염기들의 전체 수)를 나타내므로, 10%는 FASTDB 프로그램에 의해 계산되는 동일성 백분율 스코어에서 감산된다. 나머지 90개 염기들이 완벽하게 매치된 경우, 최종 동일성 백분율은 90%일 것이다. 또 다른 예에서, 90개 염기 대상체 서열이 100개 염기 검색 서열과 비교된다. 이번에는 결실들이 내부 결실들이므로 대상체 서열의 5' 또는 3'에는 검색에 매치/정렬되지 않은 염기들이 없다. 이 경우, FASTDB에 의해 계산된 동일성 백분율은 수동 보정되지 않는다. 다시 한번 검색 서열과 매치/정렬되지 않은 대상체 서열의 5' 및 3' 염기들만이 수동 보정된다. 본 발명의 목적들을 위해 다른 수동 보정들은 행해지지 않는다.
본 발명의 검색 아미노산 서열에 대해 적어도, 예를 들어 95% "동일한" 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드는 대상체 폴리펩티드 서열이 검색 아미노산 서열의 각 100개 아미노산들 당 최대 5개의 아미노산 변경들을 포함할 수 있는 경우를 제외하고 대상체 폴리펩티드의 아미노산 서열이 검색 서열과 동일함을 나타내려는 것이다. 다시 말하면, 검색 아미노산 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 수득하려면, 대상체 서열 중 최대 5%의 아미노산 잔기들이 삽입, 결실, (삽입결실) 또는 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. 참조 서열의 이러한 변경들은 참조 아미노산 서열의 아미노 또는 카르복시 말단 위치들에서 또는 참조 서열 중이나 참조 서열 내 하나 이상의 인접 군들 중의 잔기들 사이에 개별적으로 분산된 이들 말단 위치들 사이의 아무 위치에서나 일어날 수 있다.
실제적으로 임의의 특정 폴리펩티드가 서열 목록 번호 2(인자 IX 부분, Fc 부분이 개별적으로 또는 함께) 또는 4의 아미노산 서열들, 또는 공지된 인자 IX 또는 Fc 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한지 여부는 공지된 컴퓨터 프로그램들을 이용하여 통상적으로 결정될 수 있다. 광역 서열 정렬로도 불리는 검색 서열(참조 또는 원래 서열) 및 대상체 서열 간 최적의 전체적 매치를 결정하기 위한 바람직한 방법은 본원에 그 전문이 참조로 도입된 [Brutlag 등, Comp. App. Biosci. 6:237-245(1990)]의 알고리즘에 기반한 FASTDB 컴퓨터 프로그램을 이용하여 결정될 수 있다. 서열 정렬에서, 검색 및 대상체 서열들은 둘 다 뉴클레오티드 서열들이거나 둘 다 아미노산 서열들이다. 상기 광역 서열 정렬의 결과는 동일성 백분율이다. FASTDB 아미노산 정렬에 이용되는 바람직한 파라미터들은 다음과 같다: 매트릭스=PAM 0, k-터플=2, 미스매치 페널티=1, 결합 페널티=20, 무작위화 그룹 길이=0, 컷오프 스코어=1, 윈도우 크기=서열 길이, 갭 페널티=5, 갭 크기 페널티=0.05, 윈도우 크기=500 또는 대상체 아미노산 서열의 길이 중 더 짧은 것.
대상체 서열이 내부 결실들 때문이 아니라 N- 또는 C-말단 결실들로 인해 검색 서열보다 더 짧은 경우, 결과들을 수동 보정해야 한다. 이는 FASTDB 프로그램이 광역 동일성 백분율을 계산할 때 대상체 서열의 N- 및 C-절단들을 설명하지 못하기 때문이다. 검색 서열에 비해 N- 또는 C-말단들에서 절단된 대상체 서열들에 대해, 검색 서열의 전체 염기들의 백분율로서 대응 대상체 잔기와 매치/정렬되지 않은 대상체 서열의 N- 및 C-말단인 검색 서열의 잔기들의 수를 계산함으로써 동일성 백분율이 보정된다. 잔기가 매치/정렬되는지 여부는 FASTDB 서열 정렬의 결과들로 결정된다. 이어서 이러한 백분율은 특정된 파라미터들을 이용하여 상기 FASTDB 프로그램에 의해 계산되는 동일성 백분율로부터 감산되어 최종 동일성 백분율 스코어에서 도달한다. 이러한 최종 동일성 백분율은 본 발명의 목적들을 위해 이용되는 것이다. 검색 서열과 매치/정렬되지 않은 대상체 서열의 N- 및 C-말단들에 대한 잔기들만이 동일성 백분율 스코어를 수동 조정하기 위한 목적들을 위해 고려된다. 즉, 대상체 서열의 가장 먼 N- 및 C-말단 잔기들 밖의 검색 잔기 위치들만이 고려된다.
예를 들어, 동일성% 백분율을 결정하기 위해 90개 아미노산 대상체 서열이 100개 잔기 검색 서열에 정렬된다. 대상체 서열의 N-말단에서 결실이 일어나며, 따라서 FASTDB 정렬은 N-말단에서 최초 10개 잔기들의 매치/정렬을 나타내지 않는다. 쌍을 형성하지 않은 10개 잔기들은 서열의 10%(매치되지 않은 N- 및 C-말단들에서 잔기들의 수/검색 서열에서 잔기들의 전체 수)를 나타내므로, 10%는 FASTDB 프로그램에 의해 계산되는 동일성 백분율 스코어에서 감산된다. 나머지 90개 잔기들이 완벽하게 매치된 경우, 최종 동일성 백분율은 90%일 것이다. 또 다른 예에서, 90개 잔기 대상체 서열이 100개 잔기 검색 서열과 비교된다. 이번에는 결실들이 내부 결실들이므로 대상체 서열의 N- 또는 C-말단들에는 검색에 매치/정렬되지 않은 잔기들이 없다. 이 경우, FASTDB에 의해 계산된 동일성 백분율은 수동 보정되지 않는다. 다시 한번 FASTDB 정렬에서 디스플레이되는 바와 같이, 검색 서열과 매치/정렬되지 않은 대상체 서열의 N- 및 C-말단 밖의 잔기 위치들만이 수동 보정된다. 본 발명의 목적들을 위해 다른 수동 보정들은 행해지지 않는다.
폴리뉴클레오티드 변이체들은 코딩 영역들, 비코딩 영역들 또는 둘 다에 변경들을 함유할 수 있다. 침묵 치환들, 부가들 또는 결실들을 생성하지만 인코딩된 폴리펩티드의 특성들 또는 활성들을 변경하지 않는 변경들을 함유하는 폴리뉴클레오티드 변이체들이 특히 바람직하다. 유전자 코드의 축퇴로 인한 침묵 치환들에 의해 생성되는 뉴클레오티드 변이체들이 바람직하다. 또한, 5-10, 1-5, 또는 1-2 아미노산들이 임의의 조합으로 치환, 결실, 또는 첨가되는 변이체들이 또한 바람직하다. 폴리뉴클레오티드 변이체들은 다양한 이유들을 위해, 예로 특정 숙주에 대한 코돈 발현을 최적화(인간 mRNA에서의 코돈들을 박테리아 숙주, 예를 들어 대장균에 의해 바람직한 것들로 변경)하기 위해 생성될 수 있다.
천연 생성 변이체들은 "대립유전자 변이체들"로 불리며, 유기체의 염색체 상에서 주어진 유전자위를 점유하는 유전자의 몇몇 대안적 형태들 중 하나를 나타낸다(Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)). 이러한 대립유전자 변이체들은 폴리뉴클레오티드 및/또는 폴리펩티드 수준에서 변할 수 있고, 본 발명에 포함된다. 대안적으로 비천연 생성 변이체들은 돌연변이화 기법들에 의해 또는 직접적 합성에 의해 생성될 수 있다.
단백질 조작 및 재조합 DNA 기술의 공지된 방법들을 이용하여, 폴리펩티드들의 특징들을 개선 또는 변경하기 위한 변이체들이 생성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 아미노산들이 생물학적 기능의 실질적 손실 없이 분비된 단백질의 N-말단 또는 C-말단에서 결실될 수 있다. 본원에 그 전문이 참조로 도입된 [Ron 등, J. Biol. Chem. 268: 2984-2988 (1993)]의 저자들은 3, 8, 또는 27 아미노-말단 아미노산 잔기들의 결실 후에도 헤파린 결합 활성을 갖는 변이체 KGF 단백질들을 보고하였다. 유사하게 인터페론 감마는 상기 단백질의 카르복시 말단에서 8-10 아미노산 잔기들의 결실 후 최대 10배 더 높은 활성을 나타내었다(Dobeli 등, J. Biotechnology 7:199-216 (1988), 본원에 그 전문이 참조로 도입됨).
또한, 변이체들이 종종 천연 생성 단백질과 유사한 생물학적 활성을 보유한다는 것을 풍부한 증거가 나타낸다. 예를 들어 Gayle과 동료들[J. Biol. Chem. 268:22105-22111 (1993), 본원에 그 전문이 참조로 도입됨]은 인간 사이토카인 IL-1a의 광범위 돌연변이 분석을 수행하였다. 이들은 무작위 돌연변이화를 이용하여 분자의 전체 길이에 걸쳐 변이체 당 평균 2.5 아미노산 변화들을 갖는 3,500개를 초과하는 개별 IL-1a 돌연변이체들을 생성하였다. 다중 돌연변이들을 가능한 모든 아미노산 위치에서 조사하였다. 연구자들은 "[대]부분의 분자가 [결합 또는 생물학적 활성]에 거의 변화 없이 변경될 수 있었다"(초록 참고)는 것을 확인하였다. 실제로 검사한 3,500개를 초과하는 뉴클레오티드 서열 중 23개의 독특한 아미노산 서열들만이 야생형과 활성이 크게 상이한 단백질을 제조하였다.
상기 언급된 바와 같이, 폴리펩티드 변이체들은 개질된 폴리펩티드들을 포함한다. 개질들은 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 부분의 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스포티딜이노시톨의 공유 부착, 가교, 고리화, 디설피드 결합 형성, 탈메틸화, 공유 가교들의 형성, 시스테인의 형성, 피로글루타메이트의 형성, 포르밀화, 감마-카르복실화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 히드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화, 산화, peg화, 단백분해 가공, 인산화, 프레닐화, 라세미화, 셀레노일화, 황산화, 단백질들에 대한 아미노산들의 전달-RNA 매개 첨가, 예컨대 아르기닐화, 및 유비퀴틴화를 포함한다.
"약"이라는 용어는 본원에서 대략, 대체로, 주위 또는 그 영역들에 있음을 나타내기 위해 사용된다. "약"이라는 용어가 수치 범위와 함께 사용되는 경우, 이는 나타낸 수치값들의 초과 및 미만 경계들을 확장함으로써 범위를 개질한다. 일반적으로 "약"이라는 용어는 본원에서 언급된 값을 10% 내외 초과 및 미만의(더 높거나 더 낮은) 수치값으로 개질하기 위해 사용된다.
이제 본 발명을 상세히 설명하였으며, 이는 본 발명의 예시적 목적으로만 본원에 포함되고 제한하기 위한 것이 아닌 하기 실시예를 참조로 더욱 명확히 이해될 것이다. 본원에서 언급되는 모든 특허들 및 공보들은 명시적으로 참조로 도입된다.
실시예 1. 최초의 인간 내(FiH) 시험
최초의 인간 내 연구는 FIXFc(재조합 인간 응고 인자 IX 융합 단백질)의 안전성, 관용성 및 약동학(PK) 파라미터들을 결정하기 위한 개방형, 증량, 1/2상 연구였다. FIXFc는 인간 IgG1 유래의 Fc 도메인에 연결된 인간 응고 인자 IX를 포함하는 재조합 융합 단백질이다. 융합 단백질은 인간 배아 신장 세포들(HEK 293)에서 발현된다. 실시예 3을 참고하라.
FIXFc는 수술 조건들에서 출혈의 조절 및 방지를 포함하는 B형 혈우병(선천성 인자 IX 결핍 또는 크리스마스 질환)을 갖는 환자들에서 출혈 증례들의 조절 및 방지를 위해 개발되고 있다.
FIXFc는 응고 인자 IX(FIX) 및 인간 항체(IgG1 이소형)의 Fc 도메인으로 이루어진 재조합 융합 단백질이다. FIXFc 분자는 Fc의 힌지 영역에서 두 디설피드 결합들을 통해 함께 결합된 FIXFc 단일쇄(FIXFc-sc) 및 Fc 단일쇄(Fc-sc)를 갖는 이종이량체이다. 도 1 및 표 2를 참고하라.
rFIXFc 약물 제품은 정맥내(IV) 투여를 위한 투명 무색 용액이다. rFIXFc는 10mL 일회용 바이알 중 5mL 부피 당 1000IU로 공급된다. 약물 제품은 브로모부틸 마개들과 벗겨내는 단순 알루미늄 덮개들을 갖는 USP I형 유리 바이알들에 포장된다. rFIXFc 약물 제품은 145mM NaCl 및 0.1% 폴리소르베이트 20이 첨가된 10mM 인산나트륨 완충액 pH 7.0 중 200IU/mL로 함유된다. rFIXFc 용액은 희석해서는 안 된다.
연구 설계. 전체 14명의 사전 치료받은 중증 B형 혈우병 환자들을 참여시키고 대략 10분에 걸쳐 정맥내(IV) 주입으로 FIXFc를 처리하였다. 6 용량 수준들인 1, 5, 12.5, 25, 50, 및 100IU/kg이 연구에서 평가되었다. 용량 수준들 1, 5, 12.5, 및 25IU/kg에서는 용량 수준 별로 1명 환자를 참여시켰고, 50 및 100IU/kg에서는 용량 수준 별로 적어도 3명의 평가 가능한 환자들을 참여시켰다.
스크리닝(FIXFc 용량 투여 후 14일 내로 일정잡음) 후, 환자들에 대한 치료 기간을 시작하였다. 각각의 용량 수준에 대한 치료 기간은 용량 수준들 1 및 5IU/kg에 대한 72-시간 안전성 관찰 기간(3일) 완료시까지 또는 용량 수준들 12.5 내지 100IU/kg에서 환자들에 대한 최종 PK 시료를 채취할 때까지(대략 10일) 단일 용량의 FIXFc를 포함하였다(1일). 1, 5, 12.5, 또는 25IU/kg을 처리한 환자들을 참여시키고 1IU/kg에서 시작하여 순차적 방식으로 처리하였다. 50IU/kg을 수여받는 환자들은 동일한 날에 처리하지 않고 적어도 하루를 건너뛰고 투여하였다. 50IU/kg 환자들의 처리 후, 100IU/kg 환자들의 치료를 시작하였다.
치료 후 기간은 환자가 FIXFc 용량을 수여받은 날로부터 시작하는 30-일 안전성 관찰 기간이었으며, 이 시간 동안 환자들에 필요 연구 평가들, 예컨대 PK 시료 채취를 수행하였으므로 치료 기간과 겹쳤다.
용량 수준들 12.5 내지 100IU/kg이 지정된 환자들의 혈액 시료들을 인취하여 FIX 활성 및 FIXFc 농도를 평가하였다. 혈액 시료들은 FIXFc의 투여 직전; 주입 종료 15분 후; 및 주입 종료 1, 3, 6, 9, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 및 240시간 후 또는 기준선 FIX 수준들에 도달할 때까지 인취하였다. 환자가 240-시간 시점(연구 11일)에 기준선을 초과하는 FIX 수준들을 계속 갖는 경우, 시료를 288시간(연구 13일)에 채취하고, FIX 수준이 연구 13일에 기준선을 초과하는 경우 336시간(연구 15일)에 다시 채취하였다.
환자 10은 투여 후 216시간에 예정된 FIXFc 시료 채취 전에 출혈로 인해 BENEFIX™ 치료를 받았다. 따라서 216시간 및 후속 시점들에서의 FIXFc 활성 및 항원 데이터는 분석에서 배제되었다. 본 연구의 중간 분석 결과들에 영향을 미치는 것으로 느껴지는 추가적 일탈들은 발생하지 않았다.
인자 IX 항원에 대해, FIXFc의 IV 주입 후 개별 환자 관측 FIXFc 농도 대 시간 데이터에 대한 약동학 분석들이 수행되었다. 일차적 분석은 모델-의존적 방법론을 이용하여 수행되었다. FIXFc 농도 데이터는 초기 파라미터값들의 계산을 위한 사용자 정의 초기 파라미터 산출치들을 이용하여 중앙 구역에서 제거를 갖는 2구획 개방 모델에 대해 컴퓨터로 적합화하였다. WinNonlin 산출 마이크로스코픽 비율 상수들을 생성하고, FIXFc 농도 데이터에 1/(Y-hat*Y-hat)의 함수로 가중치를 부여하였다. 두 대상체들(예로 환자들 5 및 6)에 대해 관측된 데이터는 2구획 모델로는 부적절하게 설명되었다. 따라서, 이들 두 환자들에 대해 WinNonlin 비구획 분석 IV-주입 입력 모델(AUC 계산을 위한 선형사다리꼴 공식)을 이용하여 모델-비의존적 분석을 수행하였다. 비구획 분석을 위해, 회귀에서 말단 로그 선형 쇠퇴를 서술하는 데이터 점들을 이용하여 베타상으로부터 반감기를 계산하였다. 제거상을 서술하기 위해 최소 3개 점들을 이용하였다. 이는 대략 4 내지 14일 사이에 일어났다. 항원의 PK 분석을 위해, "mg/kg" 용량 등량을 이용하였다. 이들 값을 60.2IU/mg의 FIXFc에 대한 특이적 활성에 기준하여 결정하였다. 실제 시료 채취 시간들, 용량들, 및 주입 기간들을 계산들을 위해 이용하였다. 명목 시료 채취 시간들 및 용량들을 표 및 농도-시간 도면들의 생성을 위해 이용하였다. 개인 및 평균 PK 파라미터들 그리고 서술적 통계들이 제시된다. 유의미한 분석을 위해서는 각 무리의 대상체들의 수와 용량 범위가 너무 작았기 때문에 공식적 통계 분석은 수행하지 않았다.
인자 IX 활성에 대해, 기준선 감산 방법을 기준선 감산 결정 트리(도 4)에 따른 활성 대 시간 프로필에 적용하였다. <1%의 활성값들은 기준선 쇠퇴에 있어 1IU/dL로 정의되었다. 투여 전 시간을 계산들의 목적으로 0으로 처리하였다. 또한 기준선 보정 활성 데이터를 기준선 수준들로의 복귀를 나타내는 시점에서 절단하였다. 약동학 분석들을 FIXFc의 IV 주입 후 기준선 감산 FIX 활성 대 시간 데이터 상에서 수행하였다. IV-주입 용량군들의 분석을 위해 모델-의존적 평가를 이용하였다. 기준선 감산 데이터는 초기 파라미터값들의 계산을 위한 WinNonlin 정의 파라미터 경계들을 이용하여 중앙 구역에서 제거를 갖는 2구획 개방 모델에 대해 컴퓨터로 적합화하였다. WinNonlin 산출 마이크로스코픽 비율 상수들을 생성하고, FIXFc 활성 데이터에 1/(Y-hat*Y-hat)의 함수로 가중치를 부여하였다. 계산들을 위해 실제 시료 채취 시간들, 용량들, 및 주입 기간들을 이용하였다. 명목 시료 채취 시간들 및 용량들을 표 및 농도-시간 도면들의 생성을 위해 이용하였다.
실제 데이터에서 이용이 불가능한 경우, FIXFc 활성 수준 대 시간 데이터를 시뮬레이션하기 위해 rFIXFc의 투여 후 168시간(C168) 및 기준선 1IU/dL 초과 시간(TBLP1)에서의 활성을 WinNonlin 생성 마이크로스코픽 비율 상수들을 이용하여 수득하였다. 개인 및 평균 PK 파라미터들 그리고 서술적 통계들이 본 실시예에 제시된다. 유의미한 분석을 위해서는 각 무리의 대상체들의 수와 용량 범위가 너무 작았기 때문에 공식적 통계 분석은 수행하지 않았다.
FIXFc 항원 약동학에 대한 결과들은 FIXFc 혈장 농도들이 FIXFc의 짧은 IV 주입 후 각각 12.5, 25, 50, 및 100IU/kg의 명목 용량 수준들에 대해 평균(±SD) Cmax값들 1670(n=1), 2730(n=1), 7510±2480 및 15400±3960ng/mL로 크게 증가되었고, 모든 환자들에 대해 처음 반 시간 내에 도달하였음을 나타내었다. 모든 FIXFc-처리 환자들은 전신 FIXFc 혈장 노출에서 용량 관련 증가들을 가졌다(Cmax 및 AUCINF로 평가됨). 12.5 및 25IU/kg 명목 용량에서 평가 가능한 단일 환자에 국한되었지만, Cmax 및 AUCINF 모두에서 관측된 증가는 평가된 용량 범위에 걸쳐 용량에 대해 합리적으로 비례하였다(표 3은 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 항원 농도 대 시간 데이터를 나타낸다; 표 4는 명목 용량, 실제 용량, "mg/kg" 동등 용량 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 항원 PK 요약 데이터를 나타내며, 명목 용량, 실제 용량, "mg/kg" 동등 용량, 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 항원 PK 요약 데이터를 나타낸다; 표 11을 참고하라).
FIXFc 혈장 농도들은 짧은 IV 주입 후 이중지수적 방식으로 쇠퇴하였다. 분포(알파) 및 제거(베타) 반감기값들은 모두 각각 9.79 내지 21.2시간 및 71.0 내지 140시간 범위의 개인 환자 알파 및 제거 반감기값들로 평가되는 용량 범위에 걸쳐 용량-비의존적인 것으로 나타났다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 알파 반감기값들(±SD)은 각각 13.1±4.77 및 12.1±2.33시간이었다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 제거 반감기값들(±SD)은 각각 110±26.5 및 95.8±11.1시간이었다. 또한, Cl, VSS, 및 MRT에 대한 일차적 PK 파라미터값들을 결정하였고, 일반적으로 모두 평가된 용량 범위에 걸쳐 용량-비의존적인 것으로 나타났다. 나타낸 바와 같이, 상기 평가는 12.5 및 25IU/kg 명목 용량 수준들에서의 단일 환자 데이터로 국한된다(표 12 및 도 2, 7, 및 8).
또한, 평균 Cl값들은 각각 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 2.28±0.374 및 2.11±0.464mL/h/kg이었다. 평균 VSS값들은 각각 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 259±78.5 및 238±52.2mL/kg이었다. 또한, 평균 MRT값들은 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 112±21.5 및 114±17.1시간이었다.
기준선 보정 FIXFc 활성 약동학에 대한 결과들은 FIXFc의 짧은 IV 주입 후 FIXFc 활성이 각각 12.5, 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 평균(±SD) 모델-예측 Cmax값들 11.9(n=1), 19.9(n=1), 41.6±8.97 및 98.2±8.21IU/dL를 가지며 크게 증가되며, 모든 환자들에 대해 처음 반 시간 내에 도달됨을 나타내었다(표 5는 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 기준선 보정 FIXFc 활성 대 시간 데이터를 나타낸다. 표 6은 명목 용량, 실제 용량, "mg/kg" 동등 용량, 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 PK 요약 데이터를 나타낸다).
모든 FIXFc 처리 환자들은 FIX 활성에서 용량 관련 증가들을 가졌다(투여 전 기준선 반응 대비). 12.5 및 25IU/kg 명목 용량 수준들 모두에서 평가 가능한 단일 환자에게 국한되지만, Cmax 및 AUCINF 모두에서 관측된 증가는 평가된 용량 범위에 걸쳐 용량에 대해 합리적으로 비례적이었다(표 6, 9, 및 13 및 도 3 및 5).
주입 종료 후, 기준선 보정 FIX 활성의 쇠퇴는 신속한 분포(알파)상에 뒤따르는 선형 로그 제거(베타)상을 특징으로 하는 이중 지수적 쇠퇴를 나타내었다. 알파상 동안, FIXFc 활성의 쇠퇴 속도는 0.140 내지 16.6시간 범위의 개인 환자 알파 반감기값들을 가지며 변하였다. 평균 알파 반감기값들에서 용량-의존적으로 보이는 증가는 12.5 및 25IU/kg 명목 용량 수준들에서 단일 환자에 의해 혼동되었다. 대조적으로 제거(베타) 반감기값들은 25 내지 100IU/kg 용량 범위에 걸쳐 42.1 내지 67.4시간 범위의 개인 환자 제거 반감기값들을 가지며 용량 범위에 걸쳐 용량-비의존적인 것으로 나타났다. 산출 및 보고되었지만, 12.5IU/kg의 rFIXFc로 처리된 환자 1에 대한 제거 반감기는 상기 환자의 FIX 수준들이 단지 96시간까지만 검출 가능하여 절단된 말단상이 얻어지고 말단 제거 반감기의 하향 산출에 기여함으로 인해 요약 평가에 포함되지 않는다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 제거 반감기값들(±SD)은 각각 52.1±10.4 및 52.5±10.1시간이었으며, 조합된 25, 50 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해서는 52.5±9.2(범위 40-67.4)시간이었다(표 6, 8 및 13).
또한, Cl, V1, VSS, 및 MRT에 대한 일차적 PK 파라미터값들이 결정되었으며, 일반적으로 모두 평가된 용량 범위에 걸쳐 용량-비의존적인 것으로 나타났다.
또한, 평균 Cl값들은 각각 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 3.77±1.12 및 2.89±0.615mL/h/kg이었으며, 조합된 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해 3.36±0.928mL/h/kg이었다(표 6, 8 및 13).
평균 VSS값들은 각각 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 264±77.6 및 179±31.1mL/kg이었으며, 조합된 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해 226±69.8mL/kg이었다(표 6, 8 및 13). 또한, 평균 MRT값들은 각각 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대해 71.7±13.0 및 62.8±8.82시간이었으며, 조합된 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해 68.05±11.16시간이었다(표 6, 8 및 13).
일차적 PK 파라미터들에 부가하여, 이차적 PK 파라미터들(예로 C168, K-값들, IVR 등)은 FIXFc 효과 기간을 평가하기 위해 결정되었다. 이해되는 바와 같이, C168, TBLP1, TBLP3, 및 TBLP5값들에서의 용량-의존적 증가들이 관측되었다. 대조적으로 K-값들 및 IVR값들은 평가된 용량 범위에 걸쳐 용량-비의존적인 것으로 나타났다. 전체 용량 범위에 걸쳐, 개인 환자 모델-예측 및 관측된 K-값들은 IU/kg 당 각각 0.61 내지 1.02 및 0.62 내지 1.17IU/dL였다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 모델-예측 K-값들은 IU/kg 당 각각 0.76 및 0.90IU/dL였으며, 조합된 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해 1 IU/kg 당 0.821±0.1387(범위 0.61-1.02)IU/dL이었다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 모델-예측 IVR값들은 각각 34.5 및 35.1%였다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 관측된 K-값들은 IU/kg 당 각각 0.86 및 1.02IU/dL였으며, 조합된 25, 50, 및 100IU/kg 명목 용량들에 대해 1IU/kg 당 0.926±0.1787(범위 0.97-1.17)IU/dL였다. 50 및 100IU/kg 명목 용량 수준들에 대한 평균 관측된 IVR값들은 각각 39.2 및 39.8%였다(표 6, 7, 8 및 13). 표 7A-7B는 명목 용량, 실제 용량, 및 환자 수로 정렬된 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 이차적 PK 요약 데이터를 나타낸다.
각각 1IU/kg의 주입된 rFIXFc는 평균 0.93±0.18IU/dL의 혈장 FIX 활성을 상승시켰으며, 상기 증분 회복(K값)은 체중과 약한 양성 상관성을 보였다(R2=0.336, p=0.048)(도 23).
FIXFc 활성에 대한 약동학 산출치들은 rFIXFc 항원에 대한 것과 일치하였다(예로 표 13 및 14를 비교하라). 또한, rFIXFc 활성 및 항원 수준들 간에 뛰어난 상관성이 존재하여 rFIXFc 생체 내 활성 보존을 시사하였다(도 9). 또한, BENEFIX™(Wyeth)에 대한 이력 데이터에 대비하여, rFIXFc는 하기를 나타내었다(표 8):
25-100IU/kg의 용량 선형성
t1/2베타의 3배 증가
평균 체류 시간의 3배 증가
24% 개선된 증분 회복
2.5배 감소된 제거
FIXFc는 인간 IgG1의 Fc 도메인에 부착된 FIX로 이루어진 재조합 융합 단백질이다. FIXFc는 장기 작용버전의 FIX로서 설계되었다. FIXFc를 이용한 전임상 연구들은 시판 재조합 FIX 제품인 BENEFIX™ 대비 FIX 활성의 반감기 연장을 나타내었다. 상기 연구의 이유는 중증 B형 혈우병 환자들에서 FIXFc의 안전성 및 PK를 평가하기 위함이었다. 상기 연구를 위해, 18 내지 76세의 12명의 평가 가능한 대상체들을 PK 평가할 수 있었다. 각각의 대상체는 대략 10분에 걸쳐 정맥내 주입된 12.5, 25, 50, 또는 100IU/체중kg의 명목 용량으로 FIXFc의 단일 투여를 수여받았다. FIXFc 활성 및 항원 농도들 모두에 대한 PK 평가들을 위한 혈장 시료들은 주입 전뿐만 아니라 투여 후 14일까지 수득되었다. FIXFc 항원 및 활성 모두에 대한 PK는 모델-의존적 및 모델-비의존적 방법들을 이용하는 상기 연구에서 비의존적으로 특징 분석되었다.
FIXFc는 12.5, 25, 50, 또는 100IU/체중kg의 단일 IV 용량들의 투여 후 잘 관용되었다. 본 연구에서 약물 관련 심각한 유해 사례들에 대한 증거는 없었다. 어느 대상체에서도 rFIXFc에 대한 중화 또는 결합 항체들은 검출되지 않았다.
12.5 내지 100IU/kg의 용량들의 투여 후 FIXFc 항원 및 활성에 대해 Cmax 및 AUCINF에서 유사한 용량-비례적 증가들이 관측되었지만, V 및 Cl은 모든 용량들에 걸쳐 유사하였다. 이러한 결과들은 FIXFc 항원 및 활성이 평가된 용량 범위에 걸쳐 선형 PK를 나타냄을 시사한다. 상대적으로 작은 V 파라미터값들은 FIXFc가 간질액에 들어갈 수 있지만 세포막을 통과하여 세포내액으로는 들어가지 않는다는 것을 시사할 수 있다.
FIXFc 항원 및 활성의 피크 혈장 수준들은 주입 종료 후 0.5시간 이내에 관측되었으며, 투여 후 수일 동안 검출 가능하게 유지되었다. 감소된 제거 및 연장된 반감기에 대한 증거가 FIXFc 항원 및 활성 모두에 대해 관측되었다.
50 및 100IU/kg 용량 수준들에 대한 FIXFc 항원 농도들에 연관된 평균 제거 및 말단 제거 반감기값들은 각각 2.28 및 2.11mL/h/kg 및 110 및 95.8시간이었다. 유사하게 동일한 용량 범위에 걸쳐 FIXFc 활성 수준들과 연관된 평균 제거 및 말단 제거 반감기값들은 각각 3.77 및 2.89mL/h/kg 및 52.1 및 52.5시간이었다. 현재 연구에서 관측된 FIXFc 활성 PK 결과들 대 BENEFIX™ 활성에 대해 보고된 PK(BENEFIX™의 제품 특징들 요약, 2009. 11. 18.)의 비교는 BENEFIX™에 비해 FIXFc 제거에서 대략 3-배 감소 및 FIXFc 말단 제거 반감기 및 평균 체류 시간 모두에서 대략 3-배 증가를 나타내었다.
관측된 PK 개선들로 인해 FIXFc는 출혈에 대해 연장된 보호를 제공하여 B형 혈우병을 가진 개인들에 대해 덜 빈번한 주사들을 가능케 할 것이다. 본 시험의 결과들에 근거하여, rFIXFc는 100IU/kg의 용량들을 이용하여 2주 1회 또는 월 2회 및 더 적은 용량들을 이용해서는 적어도 주 1회 투여될 수 있다. 상기 요법은 더 적은 횟수의 주사들을 필요로 한다. 또한, rFIXFc의 사용은 다른 잠재적 임상 영향들, 예컨대 중앙 정맥 액세스; 개선된 요법 순응도; 출혈들을 통한 감소된 파손; 및 출혈들로부터 관절들의 증가된 보호를 가질 것이다.
실시예 2. B-LONG 1/2/3상 시험
이는 중증 B형 혈우병을 갖는 이전에 치료받은 대상체들에서 출혈의 방지 및 치료에서 재조합, 장기 작용 응고 인자 IX Fc 융합물(rFIXFc)의 안전성, 약동학, 및 유효성의 공개, 다기관 평가일 것이다. 현재 시판되는 FIX 제품들로의 치료는 주 2-3회 투여를 필요로 한다. 필요 투여 간격을 주 1회 또는 더 길게 연장하는 연장된 반감기를 갖는 제품은 의학 사회에서 중증 혈우병 환자들의 치료를 위해 중요한 개선으로서 간주될 것이다.
용량 수준들은 임상적 예방 연구들에서 rFIX 제품들에 대해 크게 다르다: 보고된 용량들은 10 내지 171IU/kg(Roth 등, Blood 98:3600 (2001)) 또는 40 내지 100IU/kg(MASAC Recommendation 177, National Hemophilia Foundation (Oct. 2006)) 범위이다. 또한, 출혈의 임상적 증후들이 없는 대상체들에서의 예방 치료 동안 FIX 활성의 저점 수준들은 0.2 내지 3.8IU/dL 범위인 것으로 예측된다(Carlsson 등, Hemophilia 4:83 (1998)). 개인 환자 간 편차를 고려하여, 환자의 임상적 상태에 근거한 개인화된 투여량 요법들이 일반적으로 실시된다.
냉동 액체 제형 rFIXFc의 단일 용량의 안전성 및 약동학을 평가하는 1/2a상 연구의 결과들(실시예 1)은 약물이 1 내지 100IU/kg 범위의 용량에서 잘 관용됨을 나타내었으며, PK 특징 분석은 현재 이용 가능한 치료들에 비한 여러 이점들, 즉 BENEFIX™에 대해 이전에 보고된 것보다 3-배 더 긴 반감기 및 MRT(61 시간 vs. 19 시간)를 제시한다. 본 연구의 목적은 인간들에서 동결건조된 rFIXFc의 PK 파라미터 산출치들을 전향적으로 결정하고, 인간들에서 이들과 BENEFIX™ PK 파라미터 산출치들을 비교하고, 출혈의 방지 및 치료에서 동결건조된 rFIXFc의 유효성 및 중증 B형 혈우병을 갖는 이전에 치료받은 대상체들에 대한 그 반복 투여의 안전성을 나타내는 것이다.
본 연구는 4가지 방책들을 수반할 것이다: 저용량 예방 요법(n=25), 고용량 예방 요법(n=25), 필요 시 요법(n=20) 및 대수술 요법(n=5). 저용량 요법 방책은 BENEFIX™ 이후 rFIXFc가 교차 투여되는 PK 하위군(n=16)을 포함할 것이다.
연구의 일차적 목적들은 다음과 같다: 모든 치료 방책들에서 rFIXFc의 안전성 및 관용성을 평가하고; 모든 치료 방책들에서 rFIXFc의 유효성을 평가하고; 필요시 치료법에 비해 예방의 유효성을 평가하는 것(방책 1 및 2 대 필요시 요법 방책 3 간 출혈 증례들의 연간 환산된 횟수의 비교).
연구의 이차적 목적들은 다음과 같다: rFIXFc 및 BENEFIX™의 PK 파라미터 산출치들을 비교하고; 필요 시 및 수술적 방책들에서 rFIXFc의 유효성을 평가하고; PK 하위군에서 기준선 및 26주(±1주)에서 rFIXFc의 PK 파라미터 산출치들을 평가 및 비교하고; 모든 방책들에서 치료에 대한 대상체들의 반응을 평가하고; 모든 방책들에서 rFIXFc 소비를 평가하는 것.
주요 포함 기준:
남성 및 12세 이상 그리고 체중 적어도 40kg
B형 혈우병으로 진단됨(기준선 인자 IX 수준 2% 이하)
임의의 인자 IX 제품에 대한 적어도 100일의 노출 이력
혈소판수≥100,000세포들/㎕
실험실 정상 범위 평가에 의해 정의되는 INR(국제 표준화 비율)≤1.40
CD4수≥200세포들/㎕
주요 배제 기준:
인자 IX 저해제들 사용 이력
신장 또는 간 기능부전
B형 혈우병 이외 다른 응고 결함으로 진단됨
임의의 FIX 또는 IV 면역글로불린 투여와 연관된 이전 과민증 이력
전신성 면역억제제 약물들의 복용(예로, 전신성 코르티코스테로이드; 그러나, HAART(고활성 항레트로바이러스 치료법)은 허용됨)
실시예 3. HEK293 세포들에서의 FIXFc 제조
FIXFc는 FIXFc(Fc 영역에 직접 융합된 천연 FIX)에 대한 발현 카세트 및 Fc 단독에 대한 발현 카세트를 함유하는 안정적으로 전달감염된 HEK293 세포들에서 제조되었다. 세포들은 또한 FIX 프로펩티드의 전체 가공을 허용하는 가공 효소인 PC5에 대한 발현 카세트로 전달감염되었다. 전달감염된 세포들은 비타민 K를 함유하는 무혈청 현탁액 배지 중에서 배양되었고, 이들은 3 단백질들: FIXFc 이량체, FIXFc 단량체(1개 FIXFc쇄 및 1개 Fc쇄), 및 Fc 이량체를 분비하였다. FIXFc 단량체("FIXFc")는 컬럼 크로마토그래피(단백질 A, 프락토젤(Fractogel) DEAE, 및 저이온 강도 CaCl2를 이용한 가친화도 Q Sepharose 용출)로 정제되고, 인간 대상체들에 대한 투여를 위해 바이러스 비활성화 및 여과되었다. [Peters 등, Blood. 2010 Mar 11;115(10):2057-64 (Epub 2010.01.07.); 및 U.S. 특허 번호 7,566,565; 각각 그 전문이 본원에 참조로 도입됨]도 참고하라.
FIXFc의 응고 활성은 MLA Electra 1600C(Medical Laboratory Automation/Instrument Labs, Pleasantville, NY)를 이용하여 FIX-결핍 혈장의 그 응고 활성 복귀 능력을 정량하여 측정되었다. 결과들을 세계 보건 기구 FIX 표준물의 연속 희석물들을 이용하여 생성된 적정 곡선과 비교하였다.
인자 IX의 세린 인산화 및 티로신 황산화는 생체 내 회복을 위해 중요한 것으로 여겨진다. MONONINE™(>90%/>90% 대 <10%/5%)의 더 높은 인산화/황산화 수준으로 인해, MONONINE™(CSL Berhing에서 판매하는 혈장 정제 인자 IX(pdFIX))이 BENEFIX™(Wyeth에서 판매하는 재조합 FIX(rFIX))에 비해 더 우수한 생체 내 회복을 갖는 것으로 보고되었다. 그러나 HEK293 세포들에서 제조된 FIXFc는 인산화/황산화를 거의 갖지 않았으며(<10%/4%로 BENEFIX™와 매우 유사), BENEFIX™(0.7)에 비해 더 우수한 IVR(IU/kg 당 1.0IU/dL)을 나타낸다.
또한, 상술된 바와 같이 제조된 FIXFc는 MONONINE™(pdFIX) 또는 BENEFIX™(rFIX)(0.1%)에 비해 현저히 더 낮은(10-100배) 수준(0.01-0.001%)의 불순물 관련 산물인 활성화 FIX(FIXa)를 가졌다. 생성 FIXFc는 MONONINE™ 또는 BENEFIX™에 비해 투여 시 원치 않는 혈전성 사건들을 더 적게 가질 것이다.
실시예 4. 소아 연구들: 성인 및 소아 모집단들에서의 발생 간 외삽 및 상호 관계
FIX 약동학에 대한 상관관계를 보여주는 환자 특징들은 연령-의존적 생리학적 변화들(Bjoerkman and Berntorp, Clin. Pharmacokinetics 40:815-32 (2001); 및 Bjorkman, Hemophilia 9(suppl 1):101-10 (2003)) 및 신체 크기와 조성(Shapiro, Hemophilia 11:571-82 (2005))을 포함한다. 따라서 FIX의 체중 조정 제거(CL)는 일반적으로 말단 반감기(tl/2)의 대응 증가와 함께 유아기에서 성인기로의 성장 동안 연령 및/또는 체중이 감소하는 것으로 나타났다. rFIX 제품(BENEFIX™)에 있어서, 안정 상태(Vss)에서의 CL 및 부피 분포는 소아기에서 증가된 후 성인기 동안 일정하게 유지된다; 따라서 이들 파라미터들은 소아 연구들에서 밀접하게 모니터링될 것이다.
FIX 응고촉진 활성(FIX:C)의 피크 수준들은 FIX의 단일 및/또는 반복된 용량들 투여 후 FIX:C 분포의 초기 부피에 의존한다. FIX의 초기 분포는 신속하다. 그러나 BENEFIX™에 대한 생체 내 회복(평균 증분 회복)은 모노클로날 항체 정제 혈장 유도 응고 인자(pdFIX)에 비해 전형적으로 30% 더 낮은 것으로 나타났다(Roth 등, Blood 98:3600-3606 (2001)). 또한, pdFIX를 이용한 연구들은 15세 연령 이하의 대상체들이 더 연장자들에 비해 훨씬 더 낮은 회복을 가지는 것을 나타내었다(White 등, Thromb. Haemost. 73:779-84 (1995)). 따라서 저점 및 피크 수준들의 모니터링이 또한 소아 연구들에서 수행될 것이다.
연구들에서 어린이들이 성인들에 비해 상이하게 반응할 수 있다는 것을 나타내었으므로, 50IU/kg rFIXFc를 이용한 기준선에서의 약동학 평가들이 간략화된 약동학 시료 채취를 이용하여 소아들에서 수행될 것이다.
중증 B형 혈우병을 갖는 18세 이상 연령의 PTP들에서의 rFIXFc의 단일 정맥내 투여의 안전성 및 약동학 프로필을 평가하는 1/2a상 연구(SYN-FIXFc-07-001)가 최근 완료되었다. 인간들에서 상기 초기 검사의 예비적 결과들은 BENEFIX™에 대해 문헌에서 보고된 것(상기 참고)에 비해 rFIXFc의 약동학 파라미터들(평균 말단 반감기, MRT, 및 AUC)에서 대략 3-배 증가를 나타내었다. 추가적으로 rFIXFc는 잘 관용되었으며, 주사 부위 반응들의 증후뿐만 아니라 저해제들의 발생도 없었다. 이와 함께 이들 안전성 및 약동학 결과들은 중증 B형 혈우병을 갖는 12세 이상(<2%)의 104 PTP들(이전 제품들에 대해 적어도 100 치료 ED들)에서 출혈의 방지 및 치료에서 rFIXFc의 안전성, 약동학, 및 유효성을 평가하는 1/2/3상 등록 연구(998HB102 연구(B-LONG), 상기 참고)의 개시를 지지한다. 일단 등록 연구로부터 충분한 안전성 데이터가 이용 가능한 경우, 어린이에서 rFIXFc의 안전성 및 유효성을 추가 조사하기 위한 소아 프로그램이 개시될 것이다. 인간들에서 rFIX의 연장된 반감기의 표시는 B형 혈우병을 갖는 개인들에 대한 출혈의 방지 및 치료를 위해 덜 빈번한 주사들이 필요할 것임을 의미할 것이다.
이전에 치료받은 어린이(<12세)에서의 2/3상 소아 PTP들 연구
일단 등록 연구(998HB 102 연구)로부터 26 ED들에 대한 10 PTP들(≥12세) 상에서 데이터가 이용 가능한 경우, 소아 연구 3상이 개시될 것이다. 참여 전에 FIX 제품들에 대해 적어도 50 ED들을 가진 PTP들에서 상기 2/3상 소아 연구는 대략 25 임상 부위들에서 광역으로 수행될 것이다. 중증 B형 혈우병(<2IU/dL[<2%] 내인성 FIX)을 갖는 연령 2-11세의 대략 25 PTP들(20명의 평가 가능한 대상체들을 확보하기 위해)이 사전 정의된 기준에 따라 스크리닝 및 선택될 것이다. 모든 평가 가능한 대상체들로 연구의 약동학 부분을 완료할 것이며(연구 전 FIX 제품을 이용한 PK 및 이어서 rFIXFc를 이용한 PK) 52주 동안 rFIXFc의 주 1회 투여를 수여하게 될 것이다. 상기 연구는 rFIXFc의 증분 회복, 생체 내 반감기, AUC, 및 제거를 기록할 것이다. 모든 대상체들은 연구 전 FIX 및 rFIXFc를 이용한 기준선에서 약동학 평가를 거칠 것이며, 각 대상체에 대한 연구 기간은 스크리닝 및 추적을 포함하여 대략 69주일 것이다.
각 대상체는 약동학 평가를 위해 기준선에서 rFIXFc 50IU/kg, 이어서 rFIXFc 50-60IU/kg의 주 1회 반복 투여를 수여받을 것이다. 환자 순응도에 관해, 다음과 같이 연구 전 제품 및 rFIXFc에 대해 간략화된 약동학 시료 채취를 채용할 것이다: 투여 전, 주사 종료 시, 주사 종료 후 30+10분, 3±1시간, 24±3(1일), 72±3(3일), 120±3(5일), 및 168±3시간들(7일). 면역원성을 해결하기 위해, 모든 대상체들에 최소 50 ED들에 대한 rFIXFc를 주 1회 처리할 것이다. 다음과 같은 안전성 파라미터들이 즉각적 안전성 및 관용성 평가를 위해 포함될 것이다: (a) rFIXFc 주사 전 및 주사 후 30분에서의 활력 증후들(맥박, 혈압, 호흡율, 체온); (b) 혈액학 및 응고 파라미터들; (c) 임상 화학; (d) Nijmegen-개질 Bethesda 분석을 이용한 빈번한 FIX 저해제 결정들(최초 노출 직전, ED4[4주], ED12, ED24, ED36, 및 ED50); 및 (e) 유해 사례들.
유효성은 연간 환산한 해 당 및 사건 당 출혈 증례들의 수, 출혈 간격들 및 치료들의 수 및 FIX의 소비 평가에 의해 평가될 것이다.
이전에 치료받지 않은 어린이(0-11세)에서의 2/3상 소아 PUP들 연구
일단 완전 약동학 및 50 ED들이 있는 이전에 치료받은 10명의 어린이(2-11세)로부터의 데이터가 선행 연구에서 이용 가능한 경우, 2/3상 소아 PUP들 연구가 개시될 것이다. 상기 연구는 대략 60 임상 부위들에서 광역으로 수행될 것이다. 중증 B형 혈우병을 갖는 0세 이상(<2IU/dL[<2%] 내인성 FIX)의 최대 30 PUP들(20명의 평가 가능한 대상체들을 보장하기 위해)이 사전 정의된 기준에 따라 스크리닝 및 선택될 것이다.
치료 개시가 개질된 예방 요법으로 rFIXFc를 이용하여 시작될 수 있으므로 연구에서의 참여가 변할 것이다. 환자별로 연구 참여는 스크리닝 및 추적을 포함하여 대략 4년으로 예측된다. 상기 시간 동안 대부분의 환자들은 rFIXFc에 대해 50 ED들을 달성할 것으로 예측된다. 면역원성을 해결하기 위해, 모든 대상체들은 대략 50 ED들의 rFIXFc로 또는 4세까지 치료될 것이다. 안전성 파라미터들이 즉각적 안전성 및 관용성 평가를 위해 포함될 것이다: (a) Nijmegen-개질 Bethesda 분석을 이용한 빈번한 FIX 저해제 결정들; 및 (b) 유해 사례들.
유효성은 연간 환산한 해 당 및 사건 당 출혈 증례들의 수, 출혈 간격들 및 치료들의 수 및 FIX의 소비 평가에 의해 평가될 것이다.
실시예 5. 비인간 동물들에서의 생화학적 특징 분석, 활성, 및 PK 분석
실시예 3에서 제조된 rFIXFc를 그 번역 후 개질에 대해 분석하였으며, 하기 결과들이 수득되었다(표 15 및 도 11 참고). rFIXFc의 프로펩티드를 제조 동안 적절히 가공하였다. rFIXFc의 감마-카르복실화 패턴은 rFIX와 유사하였다. 또한, rFIXFc의 전체 Gla/분자(11.2±0.7)는 rFIX와 비등하였다. 특정 잔기들에서의 감마-카르복실화는 FIX 활성을 위해 필수적이므로, 이들은 중요한 결과들이다. 또한, rFIXFc의 Ser158 인산화 및 Tyr155 황산화는 rFIX와 비등하였다. FIX에서의 N-연결된 글리칸들은 rFIX와 유사하게 전체 시알화되지 않는다. 첫번째 EGF 도메인에서의 rFIXFc O-연결된 글리코실화는 상이한 상대 비율들이긴 하지만 FIX와 동일하였다. rFIXFc의 Asp64는 rFIX 또는 혈장 유도 FIX(pdFIX)에 비해 더 높은 정도의 베타-히드록실화를 가졌다. 활성화 FIX는 실시예 3에서 상세히 논의된 바와 같이 rFIX 또는 pdFIX 제조물들에 비해 rFIXFc 제조물에서 훨씬 더 낮은 수준으로 존재하였다.
또한, rFIXFc는 그 활성 및 PK 파라미터들을 결정하기 위해 다양한 동물종들에 투여되었다. 결과들을 표 16 및 도 12-16에 나타낸다.
실시예 6. 감마-카르복실화
상기 연구의 목표들은 FIXFc 재료의 전임상 로트 및 시판 FIX 제품들에서 글루탐산들(Gla)의 γ-카르복실화를 분석 및 특징분석하기 위한, 가친화도 크로마토그래피 이온 교환 단계로부터 생성된 농축된 "피크" 분획 및 고염 용출 "스트립" 분획의 Gla 함량을 특징분석하기 위한, 그리고 음이온 교환 HPLC에 의해 농축된 "피크" 및 고염 용출 "스트립" 분획을 분리하고 또한 분리된 종들을 특징분석하기 위한 것이었다.
상기 목표들을 달성하기 위해, 여러 보완적 분석 방법들이 개발되었다. 이들은 (전체) Gla 함량을 결정하기 위한 기본적 가수분해를 이용한 아미노산 분석(AAA), Gla 분포를 결정하기 위한 Lys-C 펩티드들을 이용한 펩티드 맵(LC/MS), 이소형들을 분리하기 위한 온전한 분자들의 분석 음이온 교환 HPLC, 및 생물학적 활성을 결정하기 위한 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT)을 포함한다.
두 Gla(E) 함유 펩티드들은 다음과 같다:
-K1K2: YNSGKL 7 E 8 E FVQGNL15 E R17 E CM20 E 21 E K
*[M+H]+6Gla = 2953.9
*[M+H]+5Gla = 2909.9
-K3: CSF26 E 27 E AR30 E VF33 E NT36 E RTT40 E FWK
*[M+H]+6Gla = 2959.9
*[M+H]+5Gla = 2915.9
*[M+H]+4Gla = 2871.9
30㎍의 시료(분석 음이온 교환 HPLC로부터 농축된 피크 분획, 고염 스트립 분획 및 각각의 종들에서 유래된 것)를 변성하고, 환원하고, 알킬화하고, Lys-C(1:20, E:S)로 소화시켰다. 소화물을 2% TFA로 켄칭하고 Jupiter C18(2.0 x 250mm) Phenomenex 컬럼 상에 주입하였다. 분리는 Agilent 1100 시스템 상에서 수행하였다. 컬럼을 25℃에서 유지하고 펩티드들을 다단계 아세토니트릴 구배로 용출하였다. 질량 분광측정(Thermo-Fisher LCQ)을 "트리플 플레이" 모드로 수행하였다.
전임상 rFIXFc 재료의 Gla 함량 및 분포를 분석 및 특징분석하기 위한 보완적 방법들을 개발하였다. rFIXFc(농축된 피크 분획)의 전임상 로트에서 글루탐산들(Gla)의 γ-카르복실화 함량 및 분포를 분석하고 시판 제품들과 비교하였다. 분석은 시판 제품들에 대해 유사한 Gla 함량 및 분포를 나타내었다. 고염 용출 "스트립" 분획을 분석하고 농축된 피크 분획과 비교하였다. 분석은 감소된 수준의 γ-카르복실화를 시사하였다.
FIXFc(농축된 피크 분획)는 가친화도 크로마토그래피 이온 교환 단계로부터 단리하고 분석 음이온 교환 HPLC에 의해 3 이소형들로 추가 분리하였다. AEX 컬럼 로드 및 분리된 종들은 고도로 γ-카르복실화되었다(AEX 컬럼 로드는 가친화도 크로마토그래피 이온 교환 단계로부터의 고염 용출 단계 동안 수집된 스트립 분획이다). AEX 컬럼 로드 및 분리된 종들은 생물학적으로 활성이 있었다. Gla 함량 및 분포는 rFIX와 유사하였다. 펩티드 맵은 K3 펩티드 상에 4/5/6 Gla의 분포를 시사하였다. 펩티드 맵은 K1K2 펩티드 상에 6 Gla 및 소량 수준의 5 Gla의 고수준 모집단을 시사하였다.
FIXFc(스트립 피크 분획)를 가친화도 크로마토그래피 이온 교환 단계로부터 단리하고 또한 분석 음이온 교환 HPLC에 의해 2 이소형들로 추가 분리하였다. AEX 컬럼 로드 및 분리된 종들은 γ-카르복실화 수준이 감소되었다. 이들은 FIXFc 농축된 피크 분획에 비해 Gla 함량이 감소되었다. 줄어든 수준의 생물학적 활성이 관측되었다. 펩티드 맵은 농축된 피크 분획에 비해 K1K2에서 5 Gla의 증가된 모집단을 시사하며, 생물학적 활성에 대한 영향을 제시할 수 있다.
참조(각각 그 전문이 본원에 참조로 도입됨): Dumont JA, 등, Monomeric Fc Fusion Molecules in Therapeutic Abs-From Bench to Clinic, Ch. 33 p779-795; Gillis S, 등, Protein Science (1997) 6:185; White GC, 등, J. Thrombosis and Haemostasis (1997) 78:261; Hansson K, and Stenflo J, Journal Thrombosis and Haemostasis (2005) 3:2633; 및 Peters RT, 등, Blood (2010) 115:2057.
실시예 7. HemB 마우스 출혈 모델들에서 rFIXFc 응고촉진 활성의 평가
rFIXFc 및 BENEFIX™의 비등한 역가가 시험관 내 HemB 마우스 전혈 ROTEM에서 및 생체 내 HemB 마우스 꼬리 클립 출혈 모델에서 나타났다.
rFIXFc가 단단하고 안정한 응괴들을 형성하는 능력을 활성화제로 염화칼슘(NATEM)을 이용하여 회전 혈액응괴분석(ROTEM®, Pentapharm GmbH, Munich, Germany)으로 평가하였다. 풀링한 전혈을 HemB 마우스의 대정맥으로부터 수집하여 7개 당량들로 나누고, 정상 혈장 FIX 활성의 최종 농도 7.4%, 0.74% 및 0.074%에 대한 rFIXFc로 또는 정상의 10%, 1%, 0.1%에 대한 BENEFIX™로 스파이크 주입하였다. 음성 대조군으로서, 혈액 시료를 FIX 제형 완충액과 함께 스파이크 주입하였다. 5마리 HemB 마우스들로부터 전체 10개 혈액 풀들을 생성하여 평가를 완료하였다. NATEM 반응을 CaCl2 첨가에 의해 개시하였다. 응고 시간(CT), 응괴 형성 시간(CFT) 및 알파 각을 포함하는 응고 파라미터들을 평가하였다. CT, CFT 및 알파 각의 평균 및 SD를 표 17에 요약한다. 3 파라미터들에 대한 용량 반응들을 도 17에 도식화한다. 3 파라미터들 모두 평가된 용량 범위에서 rFIXFc 및 BENEFIX™ 간에 비등하다(원웨이 ANOVA(Kruskal-Wallis) 분석에 있어 p>0.05).
rFIXFc의 급성 유효성을 또한 HemB 마우스 꼬리 클립 출혈 모델에서 평가하였다(도 18). 남성 HemB 마우스를 상이한 치료군들에서 동일한 체중 및 연령을 나타내도록 계층화하였다. 꼬리 클립 부상 전에 마우스를 50mg/kg 케타민 및 0.5mg/kg 덱스메데토미딘 칵테일로 마취하고 온열 패드에 올려놓아 체온 유지를 도왔다. 이어서 마우스의 꼬리들을 10분 동안 37℃ 수중에 침지시켜 측면 정맥을 확장시켰다. 정맥 확장 후, rFIXFc, BENEFIX™ 또는 담체를 꼬리 정맥을 통해 주사하고 5분 뒤에 꼬리의 원위 4mm를 직선 에지로 #11 외과용 메스를 이용해 절단하였다. 방출 혈액을 30분 동안 가온 식염수 13mL 내로 수집하고, 혈액 손실을 중량 측정으로 정량하였다. 6 rFIXFc 치료군들(720, 360, 240, 120, 80, 40IU/kg, n=15) 및 3 BENEFIX™ 치료군들(360, 120, 40IU/kg, n=15)을 평가하였다. 개별 동물의 혈액 손실값 및 중앙값 혈액 손실의 용량 반응 곡선을 도 19(A)에 나타내며, 각 치료군의 중앙값 혈액 손실 부피를 표 18에 요약한다. rFIXFc 및 BENEFIX™ 둘 다에 대한 중앙값 혈액 손실 부피에서의 용량 반응은 비등하다(Welch's 보정을 이용한 쌍을 형성하지 않은 t 평가에 따른 p = 0.9315).
BENEFIX™에 대한 rFIXFc의 3배 연장된 반감기가 rFIXFc의 연장된 유효성을 야기하는지를 결정하기 위해, 본 발명자들은 HemB 마우스에서 생체 외 ROTEM® 분석 및 꼬리 정맥 가로절개 출혈 모델(TVT) 둘 다에서 rFIXFc 및 BENEFIX™의 유효성을 평가하였다. 도 20.
생체 외 ROTEM®을 위해, 남성 HemB 마우스가 50IU/kg의 rFIXFc 또는 100IU/kg의 BENEFIX™를 정맥내 주사로 수여받았다. 처리 동물들의 대정맥으로부터 rFIXFc 투여 후 5분, 24, 72, 96, 120, 168, 및 216시간에(각 시점에 n=8 마우스) 또는 BENEFIX™ 투여 후 5분, 24, 48, 72, 및 96시간에(n=4 마우스/시점) 전혈을 수집하였다. 혈액 시료들을 NATEM으로 즉시 분석하였다. CT, CFT, 및 알파 각에 대한 평균 및 SD를 표 19에 나타내며, CT, CFT 및 알파-각 대 시간 곡선들을 도 21에 나타낸다. BENEFIX™과 대조적으로, rFIXFc는 5분에 비등한 CT, CFT, 및 알파 각을 나타내었으나 BENEFIX™에 비해 2-배 더 낮은 용량에도 불구하고 72시간 후에 크게 개선된 CT, CFT 및 알파 각을 나타내었다.
rFIXFc 및 BENEFIX™의 예방적 유효성을 평가하기 위해, 남성 HemB 마우스를 상이한 9 치료군들에서 동일한 체중 및 연령을 나타내도록 계층화하였다. rFIXFc를 꼬리 정맥 가로절개 전 72시간에 4IU/kg, 13IU/kg, 40IU/kg 및 120IU/kg의 용량으로 iv 주사에 의해 투여한 반면, 동일한 용량들의 BENEFIX™는 부상 전 24시간에 투여하였다. 꼬리 정맥 가로절개 전에 마우스를 50mg/kg 케타민/0.125mg/kg 덱스메데토미딘/0.1mg/kg 부프레넥스의 칵테일로 마취하였다. 마우스가 꼬리 정맥 가로절개 후 정상 활성을 유지할 수 있도록 하기 위해, 덱스메데토미딘의 효과를 역전시키기 위해 1mg/kg 아티파메졸 용액을 준 직후 꼬리 직경이 대략 3mm인 부위에서 직선 에지로 번호 11 수술 블레이드로 측면 꼬리 정맥을 가로절개하였다. 방출 혈액을 가온 식염수로 세척 제거하여 상처를 확실히 관찰한 뒤, 마우스를 다음 24시간 동안 백색지가 깔린 깨끗한 우리에 개별 수용하였다. 재출혈 및 신체적 활성을 부상 후 12시간까지 매시간 관찰 및 기록하였다. 빈사 마우스는 확인 직후 안락사시키고, 부상 후 24시간 체크업을 수행하여 연구를 완료하였다. 안락사 시간에 대한 카플란-마이어 곡선 및 TVT 후 24시간의 생존율 차트를 도 22에 나타내었다. 로그-랭크 평가는 4IU/kg 용량보다 높은 모든 치료군들이 담체군들에 비해 현저히 더 우수함을 결정하였다(p<0.001). 또한, 생존은 부상 전 72시간에서 동일한 용량의 rFIXFc를 수여받은 마우스 및 부상 전 24시간에 BENEFIX™를 수여받은 마우스 간에 비등하다(4, 13, 40 및 120IU/kg 용량군들 각각에 대해 p=0.4886, 0.9268, 0.7279 및 0.5209). TVT 후 24시간에서의 생존율을 도시하고, 각각의 분자에 대한 ED50값을 곡선으로부터 외삽하였으며, 두 치료들에 대한 ED50은 rFIXFc에 대해 17.8IU/kg 및 rFIX에 대해 15.4IU/kg로 유사하다. 따라서 rFIXFc는 꼬리 정맥 가로절개 부상 후 생존 및 재출혈로 측정되는 바와 같이 비등한 용량의 BENEFIX™에 비해 HemB 마우스에서 3-배 더 긴 보호 기간을 제공하였다. 따라서 rFIXFc는 꼬리 정맥 가로절개 부상 후 생존 및 재출혈로 측정되는 바와 같이 비등한 용량의 BENEFIX™에 비해 HemB 마우스에서 3-배 더 긴 보호 기간을 제공하였다.
결론적으로 데이터가 나타내는 바와 같이, 15.4IU/kg의 BENEFIX™는 투여 후 24시간에 꼬리 정맥 가로절개에서 살아남은 HemB 마우스 50%로 이어진 반면, 17.8IU/kg의 rFIXFc는 투여 후 72시간에서 부상된 동물들의 50% 생존을 달성하였다. 따라서 rFIXFc는 BENEFIX™에 비해 그 반감기 연장과의 상관성에 있어서 3-배 더 긴 예방적 유효성을 나타낸다. 출혈 모델들로부터의 결과들도 100IU/kg의 BENEFIX™ 또는 50IU/kg의 rFIXFc로 처리한 HemB 마우스로부터의 전혈의 생체 외 ROTEM® 분석으로 확실시된다. 투여 후 5분에, 두 치료군들에서 응괴 형성에 있어 비등한 개선이 관측되었다. 그러나 주요 ROTEM® 파라미터들, 예컨대 응고 시간, 응괴 형성 시간 및 알파-각은 BENEFIX™에 비해 2배 더 낮은 용량의 rFIXFc에도 불구하고 투여 후 72 내지 216시간에서 rFIXFc 처리 마우스에서 크게 개선되었다.
요약하면, rFIXFc의 급성 역가는 시험관 내 전혈 ROTEM® 및 HemB 마우스에서 꼬리 클립 출혈 모델 모두에서 나타낸 바와 같이 BENEFIX™와 비등하다. rFIXFc의 연장된 예방적 유효성은 처리된 HemB 마우스에서 생체 외 전혈 ROTEM®에 나타났으며, HemB 마우스에서 꼬리 정맥 가로절개 출혈 모델에서 BENEFIX™에 비해 대략 3-배 더 긴 것으로 결정되었다. rFIXFc의 연장된 유효성은 HemB 마우스의 약동학 연구에서 이전에 나타낸 BENEFIX™ 대비 rFIXFc의 3-배 더 긴 T1/2와 잘 연관된다. 따라서 rFIXFc는 3상 연구에서의 조사 하에 투여 빈도를 감소시키기 위한 잠재력을 갖는 크게 연장된 예방적 보호를 달성하면서 필요 시 치료에 대해 완전 활성을 갖는다.
실시예 8. FIX-결핍 마우스에서 단일 피하 용량 투여 후 rFIXFc 및 BENEFIX™의 약동학 및 약력학 분석
재조합 인자 IX-Fc(rFIXFc) 및 BENEFIX™(rFIX)의 약동학(PK) 및 약력학(PD) 프로필들을 FIX-결핍 마우스에서 200 또는 400IU/kg의 단일 정맥내 또는 피하 주사 후 결정하였다. 전혈을 대정맥을 통해 수집하였다(n=4 마우스/시점/치료). 혈장 중 rFIXFc 및 BENEFIX™의 농도들을 인간 FIX-특이적 ELISA를 이용하여 결정하였다. rFIXFc 및 BENEFIX™들의 활성들을 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT) 분석을 이용하여 결정하였다. PK 분석들을 WinNonLin을 이용한 모델-의존적 방법론을 이용하여 수행하였다. 결과들을 표 22 및 23에 나타낸다.
FIXFc에 있어서, FIX-결핍 마우스에서의 생체이용율은 rFIX의 23% 및 19% 각각에 비해 200IU/kg 용량에 대해 38%, 조합된 용량(항원 ELISA)에 대해 38-46%, 200IU/kg 용량에 대해 29% 및 조합된 용량에 대해 29-39%(aPTT 활성 분석)였다. rFIXFc는 BENEFIX™에 비해 1.5-1.7배(200IU/kg 용량) 및 1.5-2.5배(조합된 용량들)의 개선된 생체이용율을 가졌다.
rFIXFc에 있어서, 말단 반감기(항원 ELISA)는 200IU/kg 용량에 대해 62시간 및 조합된 용량들에 대해 51-62시간이었으며, 말단 반감기(aPTT 활성 분석)는 200IU/kg 용량에 대해 42시간 및 조합된 용량들에 대해 40-42시간이었던 반면, BENEFIX™에 있어서, 말단 반감기는 200IU/kg 용량에 대해 24시간(항원 ELISA) 및 200IU/kg 용량에 대해 17시간(aPTT 활성 분석)이었다. 이는 rFIXFc를 이용한 반감기에서 2.5-2.6배(200IU/kg 용량 및 조합된 용량)의 개선을 나타낸다.
또한, 표 22 및 23이 나타내는 바와 같이, rFIXFc는 BENEFIX™에 비해 AUC/용량에서 4.5-5.6배 증가를 그리고 Cmax/용량에서 1.9-3.7배 증가를 가졌다.
재조합 인자 IX Fc 융합(rFIXFc) 단백질은 B형 혈우병의 치료를 위해 rFIX의 덜 빈번한 투여를 제공할 장기 작용형 재조합 FIX(rFIX)이다. 마우스에서부터 비인간 영장류들에 이르기까지 그리고 B형 혈우병 환자들에서, rFIXFc는 rFIX(BENEFIX™)에 비해 대략 3-배 더 긴 반감기를 갖는다. 예방적 치료를 위해, rFIX의 정맥내 전달은 특히 접근도가 나쁜 정맥들을 갖는 환자들 및 어린이들을 위해 번거로운 전달 방법으로 남아 있다. rFIX의 피하 투여는 덜 침습성이고 덜 빈번한 투여를 제공하는 보다 매력적인 전달 경로로 나타난다. 이처럼 rFIXFc의 피하 전달은 투여하기 더 쉽고 정맥내 경로에 비해 더 짧은 시간 동안 투여됨으로 인해 정맥내 전달에 비해 더 적은 통증과 불편함을 야기하여 개선된 순응도로 이어질 것이다. 예방 요법들은 또한 삶의 질을 개선할 것이며 임상적 결과들은 줄어든 출혈 발생율들을 포함할 것이다.
마우스 혈장에서의 rFIXFc의 농도는 분자의 FIX 부분을 측정하는 인간 FIX-특이적 ELISA를 이용하여 측정되었으며, mg/kg 명목 용량을 분석에서 이용하였다. rFIXFc 및 BENEFIX™에 대한 PK 파라미터들의 요약은 표 20(항원 ELISA) 및 표 21(aPTT 활성 분석)에 n=4/군에 대해 나타낸다. 항원 및 활성에 의한 분석은 모두 Cmax 및 AUC가 BENEFIX™에 비해 rFIXFc에 있어서 크게 개선되었음을 나타내었다. 항원 ELISA를 이용하면, 생체이용율(F%)은 BENEFIX™에 대한 23% 대비 rFIXFc에 대해 38%였다. 유사하게 aPTT 활성 분석을 이용하면, 생체이용율은 BENEFIX™에 대한 19% 대비 rFIXFc에 대해 29%였다. 따라서 rFIXFc는 BENEFIX™에 비해 1.5 내지 1.6배 생체이용율 증가를 나타내었다. 제거 반감기의 측정들은 항원(rFIXFc 62시간 대 BENEFIX™ 24시간) 또는 활성(rFIXFc 42시간 대 BENEFIX™ 17시간) 분석에 의해 측정되었는지 여부와 무관하게 rFIXFc의 반감기가 현저히 증가되었음을 나타내었다. 이들 데이터는 rFIXFc가 BENEFIX™에 비해 2.6 내지 2.5배 증가된 반감기를 가짐을 나타낸다.
FIX-결핍 마우스에 피하 제공된 rFIXFc는 BENEFIX™에 비해 rFIXFc에 대한 Cmax 및 AUC가 증가된 PK 및 PD 프로필을 나타내었다. rFIXFc에 대한 전체적인 생체이용율은 19-23%의 생체이용율 및 17-24%의 반감기를 각각 갖는 BENEFIX™에 비해 29%(활성) 내지 38%(항원) 범위로 42시간(활성) 내지 62시간(항원)의 반감기를 가졌다. 따라서 FIX-결핍 마우스에 피하 전달된 rFIXFc에 대한 반감기는 정맥내 주어진 현재 판매되는 rFIX 제품들에 비해 약 2.2(항원) 내지 3.3(활성)배 증가를 나타내었다. 전체적으로 이들 데이터는 피하 전달된 rFIXFc가 B형 혈우병 환자들에서의 예방적 치료를 위해 임상적 이득을 제공할 것이라는 생각을 지지한다.
실시예 9. 게잡이 원숭이들에서 단일 피하 용량 투여 후 rFIXFc의 약동학 분석
재조합 인자 IX-Fc(rFIXFc)의 약동학(PK) 프로필을 게잡이 원숭이들에서 50IU/kg, 100IU/kg 또는 200IU/kg의 단일 피하 용량 투여 후 연구하였다. 혈장 중 rFIXFc의 농도를 FIX-특이적 ELISA를 이용하여 측정하였다. 일차적 분석은 WinNonLin을 이용한 모델-의존적 방법론을 이용하여 수행하였다. 표 22-25를 참고하라.
혈장 농도 대 시간 데이터(FIX-특이적 ELISA로 측정됨)의 약동학 분석은 생체이용율 및 말단 반감기가 용량들 간에 유사함을 나타내었다. rFIXFc에 대한 생체이용율들은 40%(50IU/kg), 34%(100IU/kg), 36%(200IU/kg), 및 36-45%(조합된 용량들)였다. rFIXFc에 대한 말단 반감기는 61시간(50IU/kg), 45시간(100IU/kg), 49시간(200IU/kg), 및 44-58시간(조합된 용량들)였다.
원숭이 혈장 중 rFIXFc의 농도를 분자의 FIX 부분을 측정하는 FIX-특이적 ELISA를 이용하여 측정하였고, mg/kg 명목 용량을 분석에서 이용하였다. 스파이크 주입 및 회복 분석은 평가된 혈장 농도들의 범위에 걸쳐 rFIXFc를 검출하기 위한 상기 FIX-특이적 ELISA 분석의 정확성을 나타내었다. rFIXFc에 대한 PK 파라미터들의 요약을 표 22(50IU/kg), 표 23(100IU/kg) 및 표 24(200IU/kg)에 n=3/군에 대해 나타낸다. rFIXFc SC에 있어서, 기하 평균들 및 Cmax에 대한 기하 평균의 CV%는 860±22(50IU/kg), 1630±97(100IU/kg) 및 3,750±26(200IU/kg)로 각각 용량-의존적 증가를 시사하였다. 유사한 증가들이 AUC에 대해 나타났다. 생체이용율(F%)에 대한 기하 평균들은 40±16(50IU/kg), 30±75(100IU/kg) 및 36±27(200IU/kg)로, 생체이용율이 용량들 간에 유사함을 나타내었다. 말단 반감기의 측정들은 반감기가 용량들 간에 58±39시간(50IU/kg), 45±13시간(100IU/kg) 및 46±44시간(200IU/kg)에서 유사함을 나타내었다.
게잡이 원숭이들에게 피하 제공된 rFIXFc는 Cmax 및 AUC에서 용량-의존적 증가들을 갖는 PK 프로필을 나타내었다. 전체적인 생체이용율은 45-58시간의 반감기를 가지며 30-40% 범위였다. 따라서 원숭이들에게 전달되는 rFIXFc의 반감기는 정맥내 주어지는 현재 판매되는 rFIX 제품들에 비해 약 2.8-배 증가를 나타내었다. 전체적으로 이들 데이터는 피하 전달된 rFIXFc가 B형 혈우병 환자들에서의 예방적 치료를 위해 임상적 이득을 제공할 것이라는 생각을 지지한다.
실시예 10. 예측되는 예방적 투여 요법들
주 2 또는 3회 25 내지 40IU/kg FIX의 표준 권장 용량 요법과 비교해서, 상술된 1/2a상 연구로부터의 중앙값 rFIXFc 활성 PK 결과들은 rFIXFc 약 22.5IU/kg의 약 주 1회, 또는 약 45IU/kg의 약 10일 1회, 또는 약 120IU/k의 약 2주 1회 투여가 기준선 초과 1%의 저점을 유지하기 충분함(도 24)을 제시한다. 이러한 모델 시뮬레이션 산출치들은 1/2a상 시험에서 이용 가능한 데이터에 의해 검증되며, 전체적으로 시뮬레이션한 경시적 활성 곡선의 95% 신뢰도 간격 내에 모두 포함된다. 이들 요법들은 종종 치료법의 시작으로 작용할 것이다. 혈장 FIX 활성의 저점 수준에 대한 보고된 출혈 사건들을 통한 임상적 파손의 이질성을 고려하면, 유지 용량들은 개인별로 조정되어야 할 것이다.
1/2 상 연구로부터의 PK 결과들의 재계산 후(실시예 11 참고), 예로, 예방을 위한 신규한 예측 투여 요법은 20IU/kg 주 1회, 40IU/kg 10일 1회, 또는 100IU/kg 2주 1회(월 2회)이다. 또한 표 27 및 도 25를 참고하라.
실시예 11. 인간 내 최초(FiH) 연구(실시예 1)로부터 약동학 데이터의 재계산
다양한 B형 혈우병 유전형들, 예컨대 정지 코돈/논센스 및 미스센스 돌연변이들을 갖는 대상체들이 실시예 1에서 논의된 FiH 연구에 포함되었다. 몇몇 대상체들은 크게 감소된 FIX 활성에 관련된 크게 감소된 내인성 FIX 항원 수준들을 가졌지만, 미스센스 유전형들을 갖는 소수의 대상체들은 측정된 활성보다 많은 항원을 가져서 기능부전 순환 단백질을 시사하였다. 2 대상체들에서의 치료 전 FIX 활성은 2IU/dL를 초과하였는데, 이력 평가 및 질환 표현형에 따른 FIX 농축물의 최종 주입으로부터의 불완전 제거때문인 것으로 보인다. 이러한 정보에 근거하여, 실시예 1로부터의 PK 데이터를 하기에 상세히 기재된 바와 같이 기준선 감산 없이 재계산하였다. 표 27을 참고하라.
실시예 1에서의 PK 계산들(활성 기준)과는 대조적으로, rFIXFc 활성 PK가 당PEG화 rFIX의 PK 분석에 대해 최근 보고된 바와 같이(Negrier 등, Blood DOI 10.1182/blood 2011 02 335596 (2011), 그 전문이 본원에 참조로 도입됨) 기준선 감산 없이 모델링되는 경우, 제거 반감기 및 MRT의 생성 산출치들은 각각 82.2±21.6 및 96.8±22.0시간(평균±SD)에서 실시예 1에서의 산출치들에 비해 훨씬 더 길다. 그러나 모든 중증 B형 혈우병 환자들이 0% 내인성 FIX 활성을 갖지는 않는다는 지식에 의해, 그리고 환자의 유전형 및 내인성 FIX 항원 수준을 고려하여, 본 발명자들은 이들의 PK 모델링에 기준선 감산 분석 방법을 채용하였다. 구체적으로, (a) 두 환자들에서의 기준선은 이들의 치료 전 FIX 활성이 <1%였고, 검출 가능한 FIX 항원을 갖지 않았으며 논센스 유전형들을 가졌기 때문에 0%로 정의되었고, (b) 3 환자들에 대한 기준선은 이들의 치료 전 FIX 활성이 <1%였고, 검출 가능한 FIX 항원을 가졌기 때문에 0.5%로 설정되었고, (c) 치료 전 FIX 활성이 1-2%인 환자들에 대해서는 Cmin(PK 연구를 통한 최저 활성)이 기준선으로 정의되었고, (d) 치료 전 FIX 활성이 ≥2%인 환자들에 대해서는 2%(시험에 참여하기 위한 상한치)가 기준선으로 정의되었다. 투여 전 기준선을 초과하는 활성은 이전 치료로부터의 잔여 약물로 간주되었고, 기준선으로부터 쇠퇴하고 rFIXFc 투여 후 PK 데이터로부터 감산되었다.
rFIXFc의 생성 평균 말단 반감기(56.7±10.9시간, 42.4-74.5시간 범위) 및 MRT(71.8±10시간, 53.2-85.9시간 범위)는 rFIX에 대해 보고된 것보다 대략 3-배 더 길다. rFIX의 보고된 말단 반감기는 19.3±4.97시간(11.1-36.4시간 범위) 및 MRT 26.0±6.07시간(15.8-46.1시간 범위)이다. 각각 본원에 그 전문이 참조로 도입되는 [Roth 등, Blood 98:3600-3606 (2001); 및 BENEFIX™에 대한 제품 특징들의 요약, Electronic Medicines Compendium (2010) (http://www.medicines.org.uk/emc/medicine/20376/SPC/BENEFIX™/#PHARMACODYNAMIC_PROPS)] 참고. 따라서 rFIXFc에 대한 범위들은 rFIX에 대한 범위들과 겹치지 않는다. 유사하게 rFIXFc 활성의 평균 CL(3.18±0.78mL/hr/kg, 2.05-4.18mL/hr/kg 범위)은 rFIX에 대해 보고된 것(8.40±2.01 mL/hr/kg, 4.66-13.64mL/hr/kg 범위)보다 대략 2.6-배 더 적지만, 두 단백질들의 Vss는 혈장 부피의 4-5배에서 비등하다.
개선을 향한 동일한 경향이 rFIXFc 항원 PK에서 관측되었지만, rFIXFc 항원의 T1/2α 및 T1/2β는 FIX 활성 측정치들에서 유도된 것보다 훨씬 더 길었다. rFIXFc 항원에 대해 산출된 T1/2α는 뚜렷이 FIX에 정상적으로 연관된 것에서 일탈한다(2-3시간). 또한, rFIXFc의 주입 전 연구 전 치환술 치료법에서의 불완전한 세척 가능성은 때때로 더 높은 기준선값으로 이어졌으며, 이는 다시 FIX 활성으로 측정되는 바와 같은 rFIXFc T1/2β의 하향산출로 이어질 수 있다. 여러 대상체들은 용량 투여 후 336시간(14일)까지의 이후 시점에 aPTT 분석에 대한 정량 한계(1IU/dL)를 훨씬 넘는 3IU/dL까지의 aPTT 활성을 가졌다. 그러나 이러한 시점들은 값들이 치료 전 기준선들이거나 이를 약간만 초과하고, 이에 따라 기준선으로 복귀한 것으로 간주되기 때문에, 말단 반감기의 산출에서 배제되었다. 대조적으로 rFIXFc의 낮지만 검출 가능한 말단 수준들은 aPTT 하한치 1.0IU/dL에 비해 0.1IU/dL만큼 낮게 검출되는 특이적인 고감도 rFIXFc 항원 ELISA에 의해 차폐되지 않을 수 있다.
나머지 PK 파라미터들(활성)은 제거 반감기 및 MRT에 비해 소량 변화하였다. 표 27(B)를 참고하라. FIX 활성의 용량-비례적, 선형 증가가 주입 직후 일어나는 Cmax 및 AUCINF(표 4)에 근거하여 관측되었다. FIX 활성은 rFIXFc의 주입 후 이중지수적 쇠퇴를 나타내었으며, 신속한 분포(알파)상에 뒤따르는 선형 로그 제거(베타)상을 특징으로 하였다. 평균 분포 반감기(T1/2α)는 개인 대상체들에 있어서 크게 변하였다(더 높은 두 용량군들에 대해 평균 3.4 및 10.3시간)(표 27(B)). 평균 제거 반감기(T1/2β)는 평가된 치료 용량 범위에 걸쳐 용량 비의존적, 즉 각각 25IU/kg, 50IU/kg, 및 100IU/kg에 대해 53.5시간, 57.5±8.2시간, 및 56.5±14.1시간이었다. 기준선의 1% 초과(1IU/dL) 시간, rFIXFc 활성의 평가는 용량-비례적 증가를 나타내었다. 이는 각각 용량들 25, 50, 및 100IU/kg에 대해 7.3, 10.1±1.5, 및 12.3±2.5일이었다. 용량 투여 후 168시간(1주)에, 혈장 FIX 활성은 각각 25, 50, 및 100IU/kg 용량군들에 대해 1.1IU/dL, 2.5±0. 9IU/dL, 및 4.6±1.7IU/dL 기준선을 초과하여 유지되었다. 또한 25 내지 100IU/kg의 용량 범위에 걸쳐 MRT, CL, 및 Vss가 용량-비의존적이었다. 또한 주입된 rFIXFc의 각 1IU/kg은 혈장 FIX 활성을 평균 0.93±0.18IU/dL 상승시켰으며(표 27(B)), 상기 증분 회복(K)은 체중과 약한 양성 상관성을 나타내었다(R2=0.336, p=0.048)
장기간의 경험적 임상 경험은 1 내지 2IU/dL만큼 낮게 유지되는 혈장 인자 활성이 A 및 B형 중증 혈우병 환자들에서의 자연발생적 출혈 사건들을 방지하기 위해 적절할 것이며(Nilsson 등, J. Intern. Med. 232:25-32 (1992), 그 전문이 본원에 참조로 도입됨), 증가된 출혈 사건들은 정상 FVIII 활성의 1% 미만 시간량과 연관된다는 것을 제시하였다(Collins 등, Thromb Haemost 7:413-420 (2009), 그 전문이 본원에 참조로 도입됨). 따라서 PK 분석들은 기준선의 1% 초과(1IU/dL) 저점 수준들의 유지를 달성하고, 피크/저점 변화를 감소시키고, 치료의 비용 유효성을 개선하기 위해 개인화된 용량 모델링으로 예방적 치료를 최적화하기 위한 수단을 제공한다(Carlsson 등, Haemophilia 4:83-88 (1998); Kisker 등, Haemophilia 9:279-284 (2003), 각각 그 전문이 본원에 참조로 도입됨).
상이한 투여 요법들 후 농도-시간 프로필들을 구축하기 위해, rFIXFc의 모집단 PK 모델을 이용하여 몬테 카를로 시뮬레이션을 수행하였다. 평가된 모집단, 개인간 편차 및 잔여 가변성에서의 모델 파라미터들(CL, 분포 부피, 구획 간 제거, 및 제 2 구획의 부피)의 평균 산출치들을 상기 1/2a상 연구를 위해 채용하였다(Wang 등, J. Clin. Pharmacol. 49:1012-1024 (2009), 본원에 그 전문이 참조로 도입됨). 각 대상체의 14 내지 16 시료 채취 시점을 갖는 투여 요법 당 천개 대상체들을 시뮬레이션하였다. 주 1회 투여에 대해 14, 10일 1회 투여에 대해 15, 및 2주 1회 투여에 대해 16 시료 채취 시점이 있었다. 체중(BW)은 공개된 방법(Wang 등, (2009))에 따라, 즉 Z=BW-0.5의 곱의 공식에 근거하여 생성하였다. 1000 대상체들의 중앙값 BW는 75kg으로 추정되었다. 시뮬레이션된 농도-시간 프로필들에 근거하여, 1000 대상체들의 약물 농도-시간 프로필들의 평균±표준 편차(SD)가 상이한 투여 요법들에 대해 그래프적으로 구축되었다. 도 25 참고.
25 내지 40IU/kg FIX 주 2회의 표준 권장 용량 요법에 비해, 상기 연구로부터의 중앙값 rFIXFc 활성 PK 모델링 결과들은 rFIXFc 20IU/kg에서 주 1회 투여, 또는 40IU/kg에서 10일 1회, 또는 100IU/kg에서 2주 1회가 기준선 1% 초과 저점을 유지하는데 충분한 것으로 나타났다. 도 25. 이들 모델-시뮬레이션 산출치들은 전체적으로 경시적인 시뮬레이션 활성 곡선의 95% 신뢰도 간격 내에 포함되는 상기 1/2a상 연구로부터 이용 가능한 데이터에 의해 검증된다. 그러나 혈장 FIX 활성의 저점 수준에 대한 보고된 출혈 사건들을 통한 임상적 파손의 이질성을 고려하면(Bjorkman, Haemophilia 9:101-110 (2003); Ahnstrom 등, Haemophilia 10:689-697 (2004), 각각 그 전문이 본원에 참조로 도입됨), 유지 용량들은 개인별로 조정되어야 할 것이다.
표
[표 1]
폴리뉴클레오티드 서열들: FIX-Fc
A. FIX-Fc쇄 DNA 서열(서열 목록 번호 2를 인코딩하는 서열 목록 번호 1)
pSYN-FIX-030 뉴클레오티드 서열(nt 1 내지 7583):
FIX 엑손 1 (신호 펩티드, 1st 아미노산 프로펩티드): nt 690-777
FIX 미니 인트론: nt 778-1076
FIX 프로펩티드 서열: nt 1077-1126
성숙 FIX 서열: nt 1127-2371
Fc: nt 2372-3052
Figure pat00001
Figure pat00002
B. Fc DNA 서열(마우스 Igκ 신호 펩티드는 밑줄쳐서 나타냄)(서열 목록 번호 4를 인코딩하는 서열 목록 번호 3). 이는 pSYN-FIX-030으로부터의 Fc 카세트이다. 또한, 동일한 아미노산 서열을 인코딩하지만 몇몇 비코딩 변화들을 함유하는 플라스미드 pSYN-Fc-015 중 세포주내로 전달감염된 별도의 Fc 발현 카세트가 있다. Fc 인코딩 서열의 제 2 사본은 더 나은 단량체:이량체 비를 가능케 한다.
Figure pat00003
[표 2]
폴리펩티드 서열들
FIX-Fc 단량체 하이브리드: 공발현하는 FIX-Fc 및 Fc쇄들에 의해 생성됨.
A. FIX-Fc쇄(서열 목록 번호 2):
(28 아미노산 신호 서열을 밑줄쳐서, 18 아미노산 프로펩티드를 두줄로 밑줄쳐서, Fc 부분을 이탤릭체로 나타냄). C-말단 라이신은 어느 서브유닛에도 존재하지 않는다; 이 가공은 종종 포유류 세포 배양에서 제조된 재조합 단백질들뿐만 아니라 혈장 유도 단백질들에서도 관측된다.
FIXFC-SC 서브유닛:
FIX 신호 펩티드: -46
Figure pat00004
FIX 프로펩티드: -18
Figure pat00005
Figure pat00006
B. Fc쇄(서열 목록 번호 4)
20 아미노산 이종성 마우스 Igκ 경쇄 신호 펩티드(밑줄쳐서 나타냄):
Figure pat00007
성숙 Fc 서열(EU 번호 지정, 인간 IgG1 아미노산들 221 내지 447에 대응)
Figure pat00008
[표 3a]
Figure pat00009
[표 3b]
Figure pat00010
[표 3c]
개인 환자 FIXFc 항원 농도 대 시간 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬됨(계속)
Figure pat00011
[표 4]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 항원 약동학 요약 데이터
Figure pat00012
*조합된 12.5-100IU/kg 용량들에 대한 CL, Vss, MRT, T1/2α 및 T1/2β는 각각 2.30±0.46(1.51-2.72); 250±58.2(156-366); 110±18.5(84.5-144); 12.0±4.0(10.1-18.6, PK 파라미터들이 비구획 분석으로 결정된 두 환자들은 포함하지 않음); 및 101±20.9(78-140)이다. 반올림 보정 또는 다른 오차들로 인해, (a)는 207,000이며, (b)는 0.468이고, (c)는 52.1이어야 한다.
[표 5a]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 및 기준선 보정 FIXFc 활성 대 시간 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬됨
Figure pat00013
주의: 진하게 나타낸 데이터는 기준선으로의 복귀를 나타내며, 분석에서 배제되었다.
[표 5b]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 및 기준선 보정 FIXFc 활성 대 시간 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬됨(계속)
Figure pat00014
주의: 진하게 나타낸 데이터는 기준선으로의 복귀를 나타내며, 분석에서 배제되었다.
[표 5c]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 및 기준선 보정 FIXFc 활성 대 시간 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬됨(계속)
Figure pat00015
주의: 진하게 나타낸 데이터는 기준선으로의 복귀를 나타내며, 분석에서 배제되었다.
[표 5d]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 및 기준선 보정 FIXFc 활성 대 시간 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 주입 기간, 및 환자 수로 정렬됨(계속)
Figure pat00016
주의: 진하게 나타낸 데이터는 기준선으로의 복귀를 나타내며, 분석에서 배제되었다.
[표 6]
개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성 약동학 요약 데이터; 명목 용량, 실제 용량, 및 환자 수로 정렬됨.
Figure pat00017
반올림 보정 및 다른 오차들로 인해, (a)는 8.98이며, (b)는 8.23이고, (c)는 892이고, (d)는 42.2여야 함.
표 7A-7B. 개인 환자 및 군 평균 FIXFc 활성의 이차적 약동학 요약 데이터;
명목 용량, 실제 용량, 및 환자 수로 정렬됨.
[표 7a]
Figure pat00018
aC168 = 용량 투여 후 대략 168h에서 기준선을 초과한 산출 FIX 활성. 이탤릭체로 나타낸 값은 1구획 모델 및 환자 마이크로스코픽 비율 상수들을 이용하여 수행된 시뮬레이션들로부터 산출되었다.
bTBLP1 = FIX 활성이 기준선의 대략 1IU/dL로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 모델-예측 시간. 이탤릭체로 나타낸 값들은 1구획 모델 및 환자 마이크로스코픽 비율 상수들을 이용하여 수행된 시뮬레이션들로부터 산출되었다.
cTBLP3 = FIX 활성이 기준선의 대략 3IU/dL로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 모델-예측 시간.
dTBLP5 = FIX 활성이 기준선의 대략 5IU/dL로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 모델-예측 시간.
eK-값은 배경 감산 결과들로부터 생성된 모델 예측 Cmax값을 용량으로 나누어 계산되었다.
fK-값은 용량 투여 후 관찰된 최대 시료 결과를 이용하여 계산되었다; K-값 = (관측된 기준선 감산 Cmax/용량).
g생체 내 회복 = 100×(기준선 감산 데이터/용량으로부터의 모델 예측 Cmax)×혈장 부피(dL)/용량(IU); (식 중, 혈장 부피(mL) = (23.7×Ht(cm))±(9.0×Wt(kg))-1709).
h생체 내 회복 = 100×(관측된 기준선 감산 Cmax)×혈장 부피(dL)/용량(IU); 식 중, 혈장 부피(mL) = (23.7×Ht(cm))±(9.0×Wt(kg))-1709.
[표 7b]
Figure pat00019
[표 8]
1/2a상 연구: rFIXFc 및 BENEFIX™에 대한 PK 파라미터들의 비교
Figure pat00020
*명목 용량들 25, 50 및 100IU/kg(n=11)에서 FIX 활성의 2-구획 분석으로부터의 산출치들
∮BENEFIX™의 제품 특징들 요약(2009.11.18.); 중앙값 및 범위(n=56)
a. 반올림 또는 다른 오차들로 인해 보정된 범위 0.63-1.18.
BENEFIX™에 대한 이력 데이터와 대비하여, rFIX-Fc는 하기를 나타냄:
- 반감기 및 평균 체류 시간 3x 증가
- 상대적으로 24% 개선된 증분 회복
- 2.5x 감소된 제거
[표 9]
1/2a상 연구: rFIXFc(활성)의 Cmax 및 AUC에서의 용량 비례적 증가
Figure pat00021
도 5를 또한 참고하라.
표 10A-10B. 50 및 100IU/kg 용량들에서의 rFIXFc의 산출 치료 기간.
[표 10a]
Figure pat00022
[표 10b]
Figure pat00023
도 6A-6B를 또한 참고하라.
[표 11]
rFIXFc 항원에 대한 Cmax 및 AUC의 용량 비례적 증가.
Figure pat00024
도 7을 또한 참고하라.
[표 12]
rFIXFc 항원에 대한 약동학 산출치들
Figure pat00025
도 8A-8B를 또한 참고하라.
[표 13]
활성에 근거한 평균 PK값들
Figure pat00026
각주들:
주의: PK 파라미터값들은 2-구획 방법으로 결정되었다.
Geo. 평균 = 기하 평균
[1] C168 = 용량 투여 후 168시간에서 기준선 초과 FIX 활성.
[2] TBLP1 = FIX 활성이 기준선의 1IU/dL 초과로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 산출 시간.
[3] TBLP3 = FIX 활성이 기준선의 3IU/dL 초과로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 산출 시간.
[4] TBLP5 = FIX 활성이 기준선의 5IU/dL 초과로 쇠퇴했을 때의 용량 투여 후 산출 시간.
[5] 증분 회복은 용량으로 나눈 배경 감산 결과들에서 생성된 모델 예측 Cmax값을 이용하여 계산되었다.
[6] 증분 회복은 용량 투여 후 관측된 최대 시료 결과를 이용하여 계산되었다;
증분 회복 = (관측된 기준선 감산 Cmax)/용량.
[7] 생체 내 회복 = 100 x (기준선 감산 데이터로부터의 모델 예측 Cmax/용량) x 혈장 부피(dL)/용량(IU);
(식 중, 혈장 부피(mL) = (23.7 x Ht(cm))±(9.0 x Wt(kg))-1709).
[8] 생체 내 회복 = 100 x (관측된 기준선 감산 Cmax) x 혈장 부피(dL)/용량(IU); (식 중, 혈장 부피(mL) = (23.7 x Ht(cm))±(9.0 x Wt(kg))-1709).
[표 14]
항원 수준을 기준으로 한 평균 PK값들.
Figure pat00027
반올림 보정 또는 기타 오차들로 인해, (a)는 0.46이며, (b)는 110이고, (c)는 12.0이고, (d)는 3.95이고, (e)는 101이어야 한다.
[표 15]
인자 IX의 생화학적 특징 분석
Figure pat00028
[표 16]
단일 정맥내 용량 투여 후 FIXFc 및 BENEFIX™의 말단 반감기들 요약.
Figure pat00029
* Brinkhous 등, Blood, 1996; 88: 2603-2610
† McCarthy 등, 2002, Thromb Haemost, 2002; 87: 824-830
[표 17]
풀링한 HemB 마우스 전혈에서 스파이크 주입한 rFIXFc 및 BENEFIX™에 대한 시험관 내 ROTEM® 파라미터들의 요약
Figure pat00030
[표 18]
rFIXFc 또는 BENEFIX™를 처리한 HemB 마우스에서 꼬리 클립 후 중앙값 혈액 손실
Figure pat00031
[표 19]
rFIXFc 또는 BENEFIX™를 처리한 HemB 마우스에서 생체 외 ROTEM® 파라미터
Figure pat00032
[표 20a]
FIX-결핍 마우스에서 단일 용량의 피하 주사 후 rFIXFc 및 BENEFIX™(200IU/kg)의 PK 파라미터들(항원 ELISA)
Figure pat00033
[표 20b]
FIX-결핍 마우스에서 단일 용량의 피하 주사 후 rFIXFc 및 BENEFIX™(200IU/kg)의 PK 파라미터들(aPTT 활성 분석)
Figure pat00034
[표 21]
FIX-결핍 마우스에서 단일 피하 용량 투여 후 rFIXFc 및 BENEFIX™의 PK 및 PD 분석.
Figure pat00035
[표 22]
게잡이 원숭이들에서 단일 용량의 피하 주사 후 rFIXFc(50IU/kg)의 PK 파라미터들.
Figure pat00036
[표 23]
게잡이 원숭이들에서 단일 용량의 피하 주사 후 rFIXFc(100IU/kg)의 PK 파라미터들.
Figure pat00037
[표 24]
게잡이 원숭이들에서 단일 용량의 피하 주사 후 rFIXFc(200IU/kg)의 PK 파라미터들.
Figure pat00038
[표 25]
게잡이 원숭이들에서 단일 피하 용량 투여 후 rFIXFc의 PK 분석
Figure pat00039
rFIXFc에 대해 35.5 내지 44.5% 범위의 생체이용율
rFIXFc에 대해 43.8 내지 57.9시간 범위의 제거 반감기
[표 26]
B형 혈우병에서 rFIXFc 치료법을 위한 투여 지침
Figure pat00040
환자 본인의 의사들과 상의해야 하지만, 초기 용량 투여 후 24-48시간 이상 시점에 1개 후속 용량만을 복용해야 한다.
표 27A 및 27B. (A) 실시예 1 및 (B) 실시예 11에서 계산들을 이용한 데이터 비교.
[표 27a]
Figure pat00041
[표 27b]
Figure pat00042
나타낸 결과들은 괄호들 안에 기재된 범위를 갖는 평균±SD임.
Cmax는 최대 농도; AUCINF는 곡선 하 면적(무한대 시간으로 외삽된 시간 0); CL, 제거; Vss, 안정 상태에서의 분포 부피; MRT, 평균 체류 시간; T1/2α, 분포 반감기; T1/2β, 제거 반감기; NA, 적용 불가함을 나타냄.
*증분 회복은 치료 전 기준선값으로 감산되고 용량으로 나눈 관측된 Cmax를 이용함으로써 계산되었다.
†용량 투여 후 168시간(7일)에서 기준선 초과 혈장 FIX 활성
‡FIX 활성이 대상체의 기준선 1IU/dL 초과로 쇠퇴할 때의 용량 투여 후 모델 예측 시간
§데이터는 파라미터들이 용량-비의존적이 아니고, 이에 따라 평균 및 SD값들이 상이한 용량군들에 걸쳐 계산되지 않았기 때문에 적용 불가하다.
SEQUENCE LISTING <110> BIOGEN IDEC HEMOPHILIA INC. Pierce, Glenn Truex, Samantha Peters, Robert T. Jiang, Haiyan <120> FACTOR IX POLYPEPTIDES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 2159.273PC06 <140> PCT/US2011/043569 <141> 2011-07-11 <150> 61/470,951 <151> 2011-04-01 <150> 61/442,079 <151> 2011-02-11 <150> 61/438,572 <151> 2011-02-01 <150> 61/430,819 <151> 2011-01-07 <150> 61/424,555 <151> 2010-12-17 <150> 61/363,064 <151> 2010-07-09 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7583 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> FIX-Fc Chain DNA (pSYN-FIX-030) <400> 1 gcgcgcgttg acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag 60 ttcatagccc atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct 120 gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc 180 caatagggac tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg 240 cagtacatca agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat 300 ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca 360 tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc 420 gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga 480 gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat 540 tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctctctggc 600 taactagaga acccactgct tactggctta tcgaaattaa tacgactcac tatagggaga 660 cccaagcttc gcgacgtacg gccgccacca tgcagcgcgt gaacatgatc atggcagaat 720 caccaggcct catcaccatc tgccttttag gatatctact cagtgctgaa tgtacaggtt 780 tgtttccttt tttaaaatac attgagtatg cttgcctttt agatatagaa atatctgatg 840 ctgtcttctt cactaaattt tgattacatg atttgacagc aatattgaag agtctaacag 900 ccagcacgca ggttggtaag tactgtggga acatcacaga ttttggctcc atgccctaaa 960 gagaaattgg ctttcagatt atttggatta aaaacaaaga ctttcttaag agatgtaaaa 1020 ttttcatgat gttttctttt ttgctaaaac taaagaatta ttcttttaca tttcagtttt 1080 tcttgatcat gaaaacgcca acaaaattct gaatcggcca aagaggtata attcaggtaa 1140 attggaagag tttgttcaag ggaatctaga gagagaatgt atggaagaaa agtgtagttt 1200 tgaagaagca cgagaagttt ttgaaaacac tgaaagaaca actgaatttt ggaagcagta 1260 tgttgatgga gatcagtgtg agtccaatcc atgtttaaat ggcggcagtt gcaaggatga 1320 cattaattcc tatgaatgtt ggtgtccctt tggatttgaa ggaaagaact gtgaattaga 1380 tgtaacatgt aacattaaga atggcagatg cgagcagttt tgtaaaaata gtgctgataa 1440 caaggtggtt tgctcctgta ctgagggata tcgacttgca gaaaaccaga agtcctgtga 1500 accagcagtg ccatttccat gtggaagagt ttctgtttca caaacttcta agctcacccg 1560 tgctgagact gtttttcctg atgtggacta tgtaaattct actgaagctg aaaccatttt 1620 ggataacatc actcaaagca cccaatcatt taatgacttc actcgggttg ttggtggaga 1680 agatgccaaa ccaggtcaat tcccttggca ggttgttttg aatggtaaag ttgatgcatt 1740 ctgtggaggc tctatcgtta atgaaaaatg gattgtaact gctgcccact gtgttgaaac 1800 tggtgttaaa attacagttg tcgcaggtga acataatatt gaggagacag aacatacaga 1860 gcaaaagcga aatgtgattc gaattattcc tcaccacaac tacaatgcag ctattaataa 1920 gtacaaccat gacattgccc ttctggaact ggacgaaccc ttagtgctaa acagctacgt 1980 tacacctatt tgcattgctg acaaggaata cacgaacatc ttcctcaaat ttggatctgg 2040 ctatgtaagt ggctggggaa gagtcttcca caaagggaga tcagctttag ttcttcagta 2100 ccttagagtt ccacttgttg accgagccac atgtcttcga tctacaaagt tcaccatcta 2160 taacaacatg ttctgtgctg gcttccatga aggaggtaga gattcatgtc aaggagatag 2220 tgggggaccc catgttactg aagtggaagg gaccagtttc ttaactggaa ttattagctg 2280 gggtgaagag tgtgcaatga aaggcaaata tggaatatat accaaggtgt cccggtatgt 2340 caactggatt aaggaaaaaa caaagctcac tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc 2400 agctccggaa ctcctgggcg gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac 2460 cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga 2520 ccctgaggtc aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa 2580 gccgcgggag gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca 2640 ccaggactgg ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc 2700 ccccatcgag aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac 2760 cctgccccca tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa 2820 aggcttctat cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa 2880 ctacaagacc acgcctcccg tgttggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct 2940 caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga 3000 ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgagaatt 3060 cagacatgat aagatacatt gatgagtttg gacaaaccac aactagaatg cagtgaaaaa 3120 aatgctttat ttgtgaaatt tgtgatgcta ttgctttatt tgtaaccatt ataagctgca 3180 ataaacaagt tggggtgggc gaagaactcc agcatgagat ccccgcgctg gaggatcatc 3240 cagccggcgt cccggaaaac gattccgaag cccaaccttt catagaaggc ggcggtggaa 3300 tcgaaatctc gtagcacgtg tcagtcctgc tcctcggcca cgaagtgcac gcagttgccg 3360 gccgggtcgc gcagggcgaa ctcccgcccc cacggctgct cgccgatctc ggtcatggcc 3420 ggcccggagg cgtcccggaa gttcgtggac acgacctccg accactcggc gtacagctcg 3480 tccaggccgc gcacccacac ccaggccagg gtgttgtccg gcaccacctg gtcctggacc 3540 gcgctgatga acagggtcac gtcgtcccgg accacaccgg cgaagtcgtc ctccacgaag 3600 tcccgggaga acccgagccg gtcggtccag aactcgaccg ctccggcgac gtcgcgcgcg 3660 gtgagcaccg gaacggcact ggtcaacttg gccatggttt agttcctcac cttgtcgtat 3720 tatactatgc cgatatacta tgccgatgat taattgtcaa cacgtgctga tcagatccga 3780 aaatggatat acaagctccc gggagctttt tgcaaaagcc taggcctcca aaaaagcctc 3840 ctcactactt ctggaatagc tcagaggcag aggcggcctc ggcctctgca taaataaaaa 3900 aaattagtca gccatggggc ggagaatggg cggaactggg cggagttagg ggcgggatgg 3960 gcggagttag gggcgggact atggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc 4020 tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac acctggttgc tgactaattg agatgcatgc 4080 tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc acaccctcgt cgagctagct 4140 tcgtgaggct ccggtgcccg tcagtgggca gagcgcacat cgcccacagt ccccgagaag 4200 ttggggggag gggtcggcaa ttgaaccggt gcctagagaa ggtggcgcgg ggtaaactgg 4260 gaaagtgatg tcgtgtactg gctccgcctt tttcccgagg gtgggggaga accgtatata 4320 agtgcagtag tcgccgtgaa cgttcttttt cgcaacgggt ttgccgccag aacacaggta 4380 agtgccgtgt gtggttcccg cgggcctggc ctctttacgg gttatggccc ttgcgtgcct 4440 tgaattactt ccacctggct ccagtacgtg attcttgatc ccgagctgga gccaggggcg 4500 ggccttgcgc tttaggagcc ccttcgcctc gtgcttgagt tgaggcctgg cctgggcgct 4560 ggggccgccg cgtgcgaatc tggtggcacc ttcgcgcctg tctcgctgct ttcgataagt 4620 ctctagccat ttaaaatttt tgatgacctg ctgcgacgct ttttttctgg caagatagtc 4680 ttgtaaatgc gggccaggat ctgcacactg gtatttcggt ttttggggcc gcgggcggcg 4740 acggggcccg tgcgtcccag cgcacatgtt cggcgaggcg gggcctgcga gcgcggccac 4800 cgagaatcgg acgggggtag tctcaagctg gccggcctgc tctggtgcct ggcctcgcgc 4860 cgccgtgtat cgccccgccc tgggcggcaa ggctggcccg gtcggcacca gttgcgtgag 4920 cggaaagatg gccgcttccc ggccctgctc cagggggctc aaaatggagg acgcggcgct 4980 cgggagagcg ggcgggtgag tcacccacac aaaggaaagg ggcctttccg tcctcagccg 5040 tcgcttcatg tgactccacg gagtaccggg cgccgtccag gcacctcgat tagttctgga 5100 gcttttggag tacgtcgtct ttaggttggg gggaggggtt ttatgcgatg gagtttcccc 5160 acactgagtg ggtggagact gaagttaggc cagcttggca cttgatgtaa ttctccttgg 5220 aatttgccct ttttgagttt ggatcttggt tcattctcaa gcctcagaca gtggttcaaa 5280 gtttttttct tccatttcag gtgtcgtgaa cacgtggtcg cggccgcgcc gccaccatgg 5340 agacagacac actcctgcta tgggtactgc tgctctgggt tccaggttcc actggtgaca 5400 aaactcacac atgcccaccg tgcccagcac ctgaactcct gggaggaccg tcagtcttcc 5460 tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg 5520 tggtggtgga cgtgagccac gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg 5580 tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg 5640 tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca 5700 aggtctccaa caaagccctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc 5760 agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg cgatgagctg accaagaacc 5820 aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg 5880 agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgttg gactccgacg 5940 gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg 6000 tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct 6060 ccctgtctcc gggtaaatga ctcgagagat ctggccggct gggcccgttt cgaaggtaag 6120 cctatcccta accctctcct cggtctcgat tctacgcgta ccggtcatca tcaccatcac 6180 cattgagttt aaacccgctg atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt 6240 gtttgcccct cccccgtgcc ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc 6300 taataaaatg aggaaattgc atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt 6360 ggggtggggc aggacagcaa gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggat 6420 gcggtgggct ctatggcttc tgaggcggaa agaaccagtg gcggtaatac ggttatccac 6480 agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 6540 ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca 6600 caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 6660 gtttccccct agaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata 6720 cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta 6780 tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca 6840 gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga 6900 cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg 6960 tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagaa cagtatttgg 7020 tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg 7080 caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 7140 aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 7200 cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac 7260 gaggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct 7320 cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg 7380 cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat 7440 tgtactgaga gtgcaccata tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt aaggagaaaa 7500 taccgcatca ggcgccattc gccattcagg ctgcgcaact gttgggaagg gcgatcggtg 7560 cgggcctctt cgctattacg cca 7583 <210> 2 <211> 688 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> FIX-Fc chain <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(28) <220> <221> PROPEP <222> (29)..(46) <220> <221> mat_peptide <222> (47)..(688) <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(415) <223> FIX portion <220> <221> MISC_FEATURE <222> (416)..(688) <223> Fc portion <400> 2 Met Gln Arg Val Asn Met Ile Met Ala Glu Ser Pro Gly Leu Ile Thr -45 -40 -35 Ile Cys Leu Leu Gly Tyr Leu Leu Ser Ala Glu Cys Thr Val Phe Leu -30 -25 -20 -15 Asp His Glu Asn Ala Asn Lys Ile Leu Asn Arg Pro Lys Arg Tyr Asn -10 -5 -1 1 Ser Gly Lys Leu Glu Glu Phe Val Gln Gly Asn Leu Glu Arg Glu Cys 5 10 15 Met Glu Glu Lys Cys Ser Phe Glu Glu Ala Arg Glu Val Phe Glu Asn 20 25 30 Thr Glu Arg Thr Thr Glu Phe Trp Lys Gln Tyr Val Asp Gly Asp Gln 35 40 45 50 Cys Glu Ser Asn Pro Cys Leu Asn Gly Gly Ser Cys Lys Asp Asp Ile 55 60 65 Asn Ser Tyr Glu Cys Trp Cys Pro Phe Gly Phe Glu Gly Lys Asn Cys 70 75 80 Glu Leu Asp Val Thr Cys Asn Ile Lys Asn Gly Arg Cys Glu Gln Phe 85 90 95 Cys Lys Asn Ser Ala Asp Asn Lys Val Val Cys Ser Cys Thr Glu Gly 100 105 110 Tyr Arg Leu Ala Glu Asn Gln Lys Ser Cys Glu Pro Ala Val Pro Phe 115 120 125 130 Pro Cys Gly Arg Val Ser Val Ser Gln Thr Ser Lys Leu Thr Arg Ala 135 140 145 Glu Thr Val Phe Pro Asp Val Asp Tyr Val Asn Ser Thr Glu Ala Glu 150 155 160 Thr Ile Leu Asp Asn Ile Thr Gln Ser Thr Gln Ser Phe Asn Asp Phe 165 170 175 Thr Arg Val Val Gly Gly Glu Asp Ala Lys Pro Gly Gln Phe Pro Trp 180 185 190 Gln Val Val Leu Asn Gly Lys Val Asp Ala Phe Cys Gly Gly Ser Ile 195 200 205 210 Val Asn Glu Lys Trp Ile Val Thr Ala Ala His Cys Val Glu Thr Gly 215 220 225 Val Lys Ile Thr Val Val Ala Gly Glu His Asn Ile Glu Glu Thr Glu 230 235 240 His Thr Glu Gln Lys Arg Asn Val Ile Arg Ile Ile Pro His His Asn 245 250 255 Tyr Asn Ala Ala Ile Asn Lys Tyr Asn His Asp Ile Ala Leu Leu Glu 260 265 270 Leu Asp Glu Pro Leu Val Leu Asn Ser Tyr Val Thr Pro Ile Cys Ile 275 280 285 290 Ala Asp Lys Glu Tyr Thr Asn Ile Phe Leu Lys Phe Gly Ser Gly Tyr 295 300 305 Val Ser Gly Trp Gly Arg Val Phe His Lys Gly Arg Ser Ala Leu Val 310 315 320 Leu Gln Tyr Leu Arg Val Pro Leu Val Asp Arg Ala Thr Cys Leu Arg 325 330 335 Ser Thr Lys Phe Thr Ile Tyr Asn Asn Met Phe Cys Ala Gly Phe His 340 345 350 Glu Gly Gly Arg Asp Ser Cys Gln Gly Asp Ser Gly Gly Pro His Val 355 360 365 370 Thr Glu Val Glu Gly Thr Ser Phe Leu Thr Gly Ile Ile Ser Trp Gly 375 380 385 Glu Glu Cys Ala Met Lys Gly Lys Tyr Gly Ile Tyr Thr Lys Val Ser 390 395 400 Arg Tyr Val Asn Trp Ile Lys Glu Lys Thr Lys Leu Thr Asp Lys Thr 405 410 415 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 420 425 430 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 435 440 445 450 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 455 460 465 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 470 475 480 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 485 490 495 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 500 505 510 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 515 520 525 530 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 535 540 545 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 550 555 560 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 565 570 575 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 580 585 590 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 595 600 605 610 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 615 620 625 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 630 635 640 <210> 3 <211> 741 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Fc DNA sequence <400> 3 atggagacag acacactcct gctatgggta ctgctgctct gggttccagg ttccactggt 60 gacaaaactc acacatgccc accgtgccca gcacctgaac tcctgggagg accgtcagtc 120 ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca 180 tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac 240 ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac 300 cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag 360 tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa 420 gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgcgatga gctgaccaag 480 aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctatc ccagcgacat cgccgtggag 540 tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cgcctcccgt gttggactcc 600 gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 660 aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc 720 ctctccctgt ctccgggtaa a 741 <210> 4 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Fc chain <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(20) <223> Heterologous mouse Igk light chain signal peptide <220> <221> mat_peptide <222> (21)..(247) <223> Mature Fc sequence <400> 4 Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro -20 -15 -10 -5 Gly Ser Thr Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro -1 1 5 10 Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 15 20 25 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 30 35 40 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 45 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 80 85 90 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 95 100 105 Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 110 115 120 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys 125 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 160 165 170 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 175 180 185 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 190 195 200 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 205 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225

Claims (121)

  1. 인자 IX 및 FcRn 결합 파트너(FcRn BP)를 포함하는 키메라성 폴리펩티드의 적어도 약 25IU/kg 용량을 대상체에게 약 주 1회 또는 더 긴 투여 간격으로 투여하는 것을 포함하는, 인자 IX를 필요로 하는 인간 대상체에 대한 인자 IX의 투여 방법.
  2. 인자 IX 및 FcRn 결합 파트너(FcRn BP)를 포함하는 키메라성 폴리펩티드의 적어도 약 10 또는 적어도 약 20IU/kg 용량을 대상체에게 약 주 1회 또는 더 긴 투여 간격으로 투여하는 것을 포함하는, 인자 IX를 필요로 하는 인간 대상체에 대한 인자 IX의 투여 방법.
  3. 인자 IX 및 XTEN을 포함하는 키메라성 폴리펩티드의 적어도 약 10IU/kg 용량을 대상체에게 약 주 1회 또는 더 긴 투여 간격으로 투여하는 것을 포함하는, 인자 IX를 필요로 하는 인간 대상체에 대한 인자 IX의 투여 방법.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준이 적어도 약 80%의 환자 모집단에서 적어도 약 6일 후 적어도 약 1IU/dL의 저점에 도달하거나 상기 대상체에서 적어도 약 6일 후 적어도 약 1IU/dL의 저점에 도달하는 방법.
  5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드의 혈장 수준이 환자 모집단에서 약 1-5IU/dL의 평균 저점; 또는 상기 대상체에서 약 1-5IU/dL의 저점에 도달하는 방법.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량의 인자 IX 키메라성 폴리펩티드의 25% 미만이 완전 인산화되고 상기 용량의 인자 IX 키메라성 폴리펩티드의 25% 미만이 완전 황산화된 방법.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 용량의 상기 키메라성 폴리펩티드의 약 10% 미만이 인산화되고 상기 용량의 상기 키메라성 폴리펩티드의 약 9% 미만이 황산화된 방법.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 IU/kg 당 0.75IU/dL 초과의 평균 증분 회복(K-값)(활성; 관측치)을 갖는 방법.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 용량이 IU/kg 당 적어도 약 0.8, 적어도 약 0.9, 또는 적어도 약 1IU/dL의 평균 증분 회복(K-값)(활성; 관측치)을 갖는 방법.
  10. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 상기 환자 모집단 또는 상기 대상체에서 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약동력학 파라미터들을 나타내는 방법:
    상기 환자 모집단에서 약 3.36±0.93mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 또는 3.72mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 제거보다 약 2.5배 더 낮은 평균 제거(CL)(활성);
    상기 대상체에서 약 1.84-4.58mL/시간/kg의 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 적어도 약 68.05±11.16시간의 평균 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 또는 78시간의 평균 MRT(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 MRT보다 약 3배 더 긴 평균 MRT(활성);
    상기 대상체에서 약 53.1-85.8시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 대상체에서 적어도 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 또는 약 90시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 52.5±9.2시간의 평균 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 47-60시간, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 51, 약 52, 약 53, 약 54, 약 55, 약 56, 약 57, 약 58, 약 59, 약 60시간의 평균 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 t1/2베타보다 약 3배 더 긴 평균 t1/2베타(활성);
    상기 대상체에서 약 40-67.4, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 또는 약 75시간의 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.93±0.18IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.85-1.15, 약 0.85, 약 0.86, 약 0.87, 약 0.88, 약 0.89, 약 0.90, 약 0.91, 약 0.92, 약 0.93, 약 0.94, 약 0.95, 약 0.96, 약 0.97, 약 0.98, 약 0.99, 약 1.0, 약 1.05, 약 1.10, 또는 약 1.15IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 증분 회복보다 약 24% 더 우수한 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 대상체에서 IU/kg 당 약 0.62-1.17IU/dL의 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 약 226±67.76mL/kg의 평균 Vss(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 200-300, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 또는 약 300mL/kg의 평균 Vss(활성);
    상기 대상체에서 약 145-365mL/kg의 Vss(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 32.44±10.75IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 26-40, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성);
    상기 대상체에서 IU/kg 당 약 21.80-54.30IU*h/dL의 AUC/용량.
  11. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 6-10일인 방법.
  12. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 25-110, 약 30-110, 약 40-110, 약 50-110, 약 60-110, 약 70-110, 약 80-110, 약 90-110, 및 약 100-110IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  13. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 30-100, 약 30-90, 약 30-80, 약 30-70, 약 30-60, 약 30-50, 및 약 30-40IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  14. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 40-110, 약 50-100, 약 60-90, 및 약 70-80IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  15. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 40-50, 약 50-60, 약 60-70, 약 70-80, 약 80-90, 약 90-100, 및 약 100-110IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  16. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 및 약 110IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  17. 제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 7-10, 약 7-9, 및 약 7-8일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  18. 제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 8-10 및 약 9-10일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  19. 제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 6-7 및 약 8-9일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  20. 제 11 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 6, 약 7, 약 8, 약 9, 및 약 10일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  21. 제 11 항에 있어서,
    상기 용량이 약 30-50IU/kg이고 상기 투여 간격이 약 7일인 방법.
  22. 제 4 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 저점이 적어도 약 90%의 상기 환자 모집단에서 도달되는 방법.
  23. 제 22 항에 있어서,
    상기 저점이 약 100%의 상기 환자 모집단에서 도달되는 방법.
  24. 제 1 항 내지 제 11 항, 제 22 항 및 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 약 50IU/kg이고 상기 투여 간격이 약 7일인 방법.
  25. 제 4 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 약 50IU/kg이고 상기 투여 간격이 약 7일이며 상기 저점이 약 100%의 상기 환자 모집단에서 도달되는 방법.
  26. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 9-18일인 방법.
  27. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 90-180, 약 100-180, 약 110-180, 약 120-180, 약 130-180, 약 140-180, 약 150-180, 약 160-180, 및 약 170-180IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  28. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 90-170, 약 90-160, 약 90-150, 약 90-140, 약 90-130, 약 90-120, 약 90-110, 및 약 90-100IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  29. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 100-170, 약 110-160, 약 120-150, 및 약 130-140IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  30. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 90-100, 약 100-110, 약 110-120, 약 120-130, 약 130-140, 약 140-150, 약 150-160, 및 약 160-170IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  31. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 90, 약 95, 약 100, 약 105, 약 110, 약 115, 약 120, 약 125, 약 130, 약 135, 약 140, 약 145, 약 150, 약 155, 약 160, 약 165, 약 170, 약 175, 및 약 180IU/kg으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  32. 제 26 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 9-17, 약 9-16, 약 9-15, 약 9-14, 약 9-13, 약 9-12, 약 9-11, 및 약 9-10일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  33. 제 26 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 10-18, 약 11-18, 약 12-18, 약 13-18, 약 14-18, 약 15-18, 약 16-18, 및 약 17-18일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  34. 제 26 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 10-11, 약 11-12, 약 12-13, 약 13-14, 약 14-15, 약 15-16, 및 약 16-17일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  35. 제 26 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 9, 약 10, 약 11, 약 12, 약 13, 약 14, 약 15, 약 16, 약 17, 및 약 18일로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
  36. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 100IU/kg이고 상기 투여 간격이 적어도 약 12일인 방법.
  37. 제 36 항에 있어서,
    상기 저점이 적어도 약 70%, 약 80%, 또는 약 90%의 상기 환자 모집단에서 적어도 약 1IU/dL인 방법.
  38. 제 26 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 12-13일인 방법.
  39. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 100IU/kg이고 상기 투여 간격이 적어도 약 9일인 방법.
  40. 제 39 항에 있어서,
    상기 저점이 약 100%의 상기 환자 모집단에서 적어도 약 1IU/dL인 방법.
  41. 제 26 항 또는 제 39 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 약 9-15일인 방법.
  42. 제 26 항에 있어서,
    상기 용량이 약 150IU/kg이고 상기 투여 간격이 적어도 약 14일인 방법.
  43. 제 42 항에 있어서,
    상기 저점이 약 100%의 상기 환자 모집단에서 적어도 약 1IU/dL인 방법.
  44. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 출혈 또는 출혈 증례들의 조절 또는 방지를 필요로 하는 방법.
  45. 제 44 항에 있어서,
    상기 대상체가 경증 출혈, 혈관절증, 표재근 출혈, 연조직 출혈, 중등 출혈, 박리를 동반하는 근육내 또는 연조직 출혈, 점막 출혈, 혈뇨, 중증 출혈, 인두 출혈, 인두뒤 출혈, 복강뒤 출혈, 중추 신경계 출혈, 멍들, 절상들, 상처들, 관절 출혈, 코 출혈, 입 출혈, 잇몸 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 경증 자연발생적 출혈, 중증 외상 후 출혈, 중등 피부 타박상, 또는 관절들, 근육들, 내부 장기들 또는 뇌 내로의 자연발생적 출혈에서 출혈의 조절 또는 방지를 필요로 하는 방법.
  46. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 수술 주변 관리를 필요로 하는 방법.
  47. 제 46 항에 있어서,
    상기 대상체가 수술 또는 발치와 연관된 출혈 관리를 필요로 하는 방법.
  48. 제 46 항에 있어서,
    상기 대상체에서 대수술이 예정되어 있거나 진행 중이거나 진행된 방법.
  49. 제 48 항에 있어서,
    상기 대수술이 정형외과 수술, 광범위 경구 수술, 비뇨기 수술, 또는 탈장 수술인 방법.
  50. 제 49 항에 있어서,
    상기 정형외과 수술이 슬관절, 고관절, 또는 기타 주요 관절의 치환술인 방법.
  51. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 예방적 치료를 필요로 하는 방법.
  52. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 필요 시 치료를 필요로 하는 방법.
  53. 제 52 항에 있어서,
    상기 대상체가 출혈 증례에 대한 치료를 필요로 하는 방법.
  54. 제 53 항에 있어서,
    상기 대상체가 혈관절증, 근육 출혈, 경구 출혈, 출혈, 근육들 내로의 출혈, 경구 출혈, 외상, 두부 외상, 위장관계 출혈, 두개내 출혈, 복강내 출혈, 흉곽내 출혈, 뼈 골절, 중추 신경계 출혈, 인두뒤 공간 내 출혈, 복강뒤 공간 내 출혈, 또는 장요근집 내 출혈에 대한 치료를 필요로 하는 방법.
  55. 제 51 항에 있어서,
    상기 대상체가 수술에 대한 수술적 예방, 수술 주변 관리, 또는 치료를 필요로 하는 방법.
  56. 제 53 항에 있어서,
    상기 수술이 경증 수술, 대수술, 발치, 편도절제술, 서혜부 탈장절개술, 윤활막절제술, 전체 슬관절 치환술, 개두술, 골접합술, 외상 수술, 두개내 수술, 복강내 수술, 흉곽내 수술, 또는 관절 치환술 수술인 방법.
  57. 제 1 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 대상체가 인간인 방법.
  58. 제 1 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드 중 상기 인자 IX가 인간 인자 IX인 방법.
  59. 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드 중 상기 인자 IX가 돌연변이체 인자 IX인 방법.
  60. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드 중 상기 FcRn BP가 인간 Fc인 방법.
  61. 제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서,
    키메라성 폴리펩티드 중 상기 FcRn BP가 돌연변이체 Fc인 방법.
  62. 제 58 항에 있어서,
    상기 인자 IX가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 415)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 방법.
  63. 제 62 항에 있어서,
    상기 인자 IX가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 415)과 동일한 방법.
  64. 제 60 항에 있어서,
    상기 Fc가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 방법.
  65. 제 64 항에 있어서,
    상기 Fc가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 동일한 방법.
  66. 제 1 항 내지 제 65 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 상기 키메라성 폴리펩티드와 연관된 제 2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드의 형태이며, 상기 제 2 폴리펩티드가 FcRn BP를 포함하는 방법.
  67. 제 66 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 및 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 642)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열을 포함하는 방법.
  68. 제 67 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 및 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 642)과 동일한 서열을 포함하는 방법.
  69. 제 66 항 내지 제 68 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 제 2 폴리펩티드가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열을 포함하는 방법.
  70. 제 69 항에 있어서,
    상기 제 2 폴리펩티드가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 동일한 서열을 포함하는 방법.
  71. 제 1 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 환자가 주 1회 또는 더 긴 투여 간격들로 장기 치료를 필요로 하는 방법.
  72. 제 1 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 적어도 하나의 부형제를 포함하는 약학적 조성물의 일부로서 투여되는 방법.
  73. 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 415)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 인자 IX 및 FcRn BP를 포함하는 폴리펩티드.
  74. 제 73 항에 있어서,
    상기 인자 IX가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 415)과 동일한 폴리펩티드.
  75. 신호 서열 및 프로펩티드를 갖는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 -46 내지 415)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 인자 IX 및 FcRn BP를 포함하는 폴리펩티드.
  76. 제 75 항에 있어서,
    상기 인자 IX가 신호 서열 및 프로펩티드를 갖는 표 2A에 나타낸 인자 IX 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 -46 내지 415)과 동일한 폴리펩티드.
  77. 제 65 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 FcRn BP가 표 2B에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 폴리펩티드.
  78. 제 77 항에 있어서,
    상기 Fc가 표 2B에 나타낸 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 동일한 폴리펩티드.
  79. 제 73 항 또는 제 75 항에 있어서,
    신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 및 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 642)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  80. 제 79 항에 있어서,
    신호 서열 및 프로펩티드를 갖지 않는 표 2A에 나타낸 인자 IX 및 Fc 아미노산 서열(서열 목록 번호 2의 아미노산들 1 내지 642)과 동일한 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  81. 제 73 항 내지 제 80 항 중 어느 한 항에 있어서,
    제 2 폴리펩티드를 포함하는 하이브리드의 형태이며, 상기 제 2 폴리펩티드가 FcRn BP를 포함하는 폴리펩티드.
  82. 제 81 항에 있어서,
    제 2 폴리펩티드가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일하거나 신호 서열을 갖는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  83. 제 81 항에 있어서,
    제 2 폴리펩티드가 신호 서열을 갖지 않는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 1 내지 227)과 동일하거나 신호 서열을 갖는 표 2B에 나타낸 아미노산 서열(서열 목록 번호 4의 아미노산들 -20 내지 227)과 적어도 90% 또는 95% 동일한 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  84. 제 73 항 내지 제 83 항 중 어느 한 항에 있어서,
    혈장 유도 인자 IX에 비해 인산화 및 황산화가 크게 감소된 폴리펩티드.
  85. 제 84 항에 있어서,
    약 10% 미만으로 인산화되고 약 9% 미만으로 황산화된 폴리펩티드.
  86. 제 73 항 내지 제 85 항 중 어느 한 항에 있어서,
    0.7 또는 0.75 초과의 K값을 갖는 폴리펩티드.
  87. 제 86 항에 있어서,
    적어도 약 0.8, 적어도 약 0.9, 또는 적어도 약 1의 K값을 갖는 폴리펩티드.
  88. 제 73 항 내지 제 87 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 환자 모집단 또는 상기 대상체에서 하기로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 약동학 파라미터들을 나타내는 폴리펩티드:
    상기 환자 모집단에서 약 3.36±0.93mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 3.0-3.72, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 또는 3.72mL/시간/kg의 평균 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 제거보다 약 2.5배 더 낮은 평균 제거(CL)(활성);
    상기 대상체에서 약 1.84-4.58mL/시간/kg의 제거(CL)(활성);
    상기 환자 모집단에서 적어도 약 68.05±11.16시간의 평균 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 또는 78시간의 평균 MRT(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 MRT보다 약 3배 더 긴 평균 MRT(활성);
    상기 대상체에서 약 53.1-85.8시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 대상체에서 적어도 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 또는 약 90시간의 평균 체류 시간(MRT)(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 52.5±9.2시간의 평균 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 47-60시간, 약 47, 약 48, 약 49, 약 50, 약 51, 약 52, 약 53, 약 54, 약 55, 약 56, 약 57, 약 58, 약 59, 약 60시간의 평균 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 t1/2베타보다 약 3배 더 긴 평균 t1/2베타(활성);
    상기 대상체에서 약 40-67.4, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 또는 약 75시간의 평균 t1/2베타(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.93±0.18IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 0.85-1.15, 약 0.85, 약 0.86, 약 0.87, 약 0.88, 약 0.89, 약 0.90, 약 0.91, 약 0.92, 약 0.93, 약 0.94, 약 0.95, 약 0.96, 약 0.97, 약 0.98, 약 0.99, 약 1.0, 약 1.05, 약 1.10, 또는 약 1.15IU/dL의 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 상기 FcRn BP 없이 상기 인자 IX를 포함하는 폴리펩티드의 평균 증분 회복보다 약 24% 더 우수한 평균 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 대상체에서 IU/kg 당 약 0.62-1.17IU/dL의 증분 회복(K값)(활성; 관측치);
    상기 환자 모집단에서 약 226±67.76mL/kg의 평균 Vss(활성);
    상기 환자 모집단에서 약 200-300, 약 200, 약 210, 약 220, 약 230, 약 240, 약 250, 약 260, 약 270, 약 280, 약 290, 또는 약 300mL/kg의 평균 Vss(활성);
    상기 대상체에서 약 145-365mL/kg의 Vss(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 32.44±10.75IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성);
    상기 환자 모집단에서 IU/kg 당 약 26-40, 약 26, 약 27, 약 28, 약 29, 약 30, 약 31, 약 32, 약 33, 약 34, 약 35, 약 36, 약 37, 약 38, 약 39, 또는 약 40IU*h/dL의 평균 AUC/용량(활성);
    상기 대상체에서 IU/kg 당 약 21.80-54.30IU*h/dL의 AUC/용량.
  89. 제 73 항 내지 제 80 항 중 어느 한 항의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  90. 제 81 항 내지 제 88 항 중 어느 한 항의 인자 IX-FcRn BP 폴리펩티드 및 제 2 펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
  91. 제 89 항 또는 제 90 항에 있어서,
    벡터, 플라스미드, 파지, 또는 바이러스인 폴리뉴클레오티드.
  92. 제 89 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 있어서,
    DNA 또는 RNA인 폴리뉴클레오티드.
  93. 제 89 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 배양된 인간 배아 세포.
  94. 제 93 항에 있어서,
    HEK293 세포인 세포.
  95. 제 93 항 또는 제 94 항의 세포를 인코딩된 인자 IX-FcRn BP 키메라성 폴리펩티드 및 본질적으로 FcRn BP로 구성된 인코딩된 폴리펩티드의 발현을 허용하는 조건 하에 배양하는 단계; 및
    인코딩된 인자 IX-FcRn BP 하이브리드 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 인자 IX-FcRn BP 하이브리드 단백질의 제조 방법.
  96. 제 95 항의 방법으로 제조되는 하이브리드 단백질.
  97. 제 96 항에 있어서,
    혈장 유도 인자 IX에 비해 인산화 및 황산화가 크게 감소된 하이브리드 단백질.
  98. 제 97 항에 있어서,
    약 10% 미만으로 인산화되고 약 9% 미만으로 황산화된 하이브리드 단백질.
  99. 제 96 항 내지 제 98 항 중 어느 한 항에 있어서,
    0.7 또는 0.75 초과의 K값을 갖는 하이브리드 단백질.
  100. 제 99 항에 있어서,
    적어도 약 8, 약 9, 또는 약 1의 K값을 갖는 하이브리드 단백질.
  101. 제 66 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 하이브리드의 형태이며, 상기 하이브리드가 본질적으로 상기 키메라성 폴리펩티드의 단일쇄 및 상기 제 2 폴리펩티드의 단일쇄로 구성되고, 상기 쇄들은 (a) 비공유 상호작용들, (b) 두 디설피드 결합들 또는 (c) (a) 및 (b) 둘 다를 통해 연관되는 방법.
  102. 제 81 항 내지 제 88 항 및 제 96 항 내지 제 100 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 키메라성 폴리펩티드가 하이브리드의 형태이며, 상기 하이브리드가 본질적으로 상기 키메라성 폴리펩티드의 단일쇄 및 상기 제 2 폴리펩티드의 단일쇄로 구성되고, 상기 쇄들은 (a) 비공유 상호작용들, (b) 두 디설피드 결합들 또는 (c) (a) 및 (b) 둘 다를 통해 연관되는 폴리펩티드.
  103. 인간들에서 IU/kg 당 0.75IU/dL를 초과하는 증분 회복(K-값)을 가지며, 제조 시 rFIX의 25% 미만이 완전 인산화 및 황산화된 재조합 인자 IX(rFIX) 제조물.
  104. 제 103 항에 있어서,
    IU/kg 당 적어도 약 0.8, 적어도 약 0.9, 또는 적어도 약 1IU/dL의 증분 회복(K-값)을 갖는 rFIX 제조물.
  105. 제 103 항에 있어서,
    rFIX가 FcRn BP를 포함하는 rFIX 제조물.
  106. 제 105 항에 있어서,
    Fc의 FcRn 결합 영역을 포함하는 rFIX 제조물.
  107. 제 105 항에 있어서,
    알부민의 FcRn 결합 영역을 포함하는 rFIX 제조물.
  108. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 10-50, 10-30, 20-50, 20-100, 10, 또는 20IU/kg이고 상기 투여 간격이 주 1회인 방법.
  109. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 15-50 또는 40IU/kg이고 상기 투여 간격이 10일 1회인 방법.
  110. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 100IU/kg이고 상기 투여 간격이 2주 1회 또는 월 2회인 방법.
  111. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여 간격이 주 1회인 방법.
  112. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 15-100IU/kg이고 상기 투여 간격이 10-13일 1회인 방법.
  113. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 50-100IU/kg이고 상기 투여 간격이 10-14일 1회이거나, 상기 용량이 50-150IU/kg이고 상기 투여 간격이 14-15일 1회이거나, 또는 상기 용량이 100-150IU/kg이고 상기 투여 간격이 14-16일 1회인 방법.
  114. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 15-50IU/kg이고 상기 투여 간격이 10일 1회이거나, 상기 용량이 20-70IU/kg이고 상기 투여 간격이 11일 1회이거나, 상기 용량이 25-85IU/kg이고 상기 투여 간격이 12일 1회이거나, 상기 용량이 30-100IU/kg이고 상기 투여 간격이 13일 1회이거나, 상기 용량이 40-125IU/kg이고 상기 투여 간격이 14일 1회이거나, 또는 상기 용량이 50-150IU/kg이고 상기 투여 간격이 15일 1회인 방법.
  115. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    주 1회의 예방적 투여 간격으로 구성된 방법.
  116. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    10-14일 1회의 예방적 투여 간격으로 구성된 방법.
  117. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    15-18 또는 16-18일 1회의 예방적 투여 간격으로 구성된 방법.
  118. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    월 2회의 예방적 투여 간격으로 구성된 방법.
  119. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    월 1회의 예방적 투여 간격으로 구성된 방법.
  120. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    고정되거나 개인화된 예방적 용량 및/또는 투여 간격인 방법.
  121. 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 용량이 정맥내 또는 피하 투여되는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
DK2393828T3 (en) 2009-02-03 2017-01-23 Amunix Operating Inc Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
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DK2591099T3 (da) 2010-07-09 2021-02-15 Bioverativ Therapeutics Inc Kimære koagulationsfaktorer
KR20230156435A (ko) 2010-07-09 2023-11-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 인자 iｘ 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CN104531671A (zh) 2010-10-01 2015-04-22 现代治疗公司 设计核酸及其使用方法
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EA028914B1 (ru) 2011-07-25 2018-01-31 Байоджен Хемофилия Инк. Исследования для мониторинга нарушений свертываемости крови
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP3682905B1 (en) 2011-10-03 2021-12-01 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
ES2923757T3 (es) 2011-12-16 2022-09-30 Modernatx Inc Composiciones de ARNm modificado
ES2700583T3 (es) 2012-01-12 2019-02-18 Bioverativ Therapeutics Inc Procedimientos para reducir la inmunogenicidad contra el Factor VIII en individuos sometidos a terapia con Factor VIII
US10370430B2 (en) 2012-02-15 2019-08-06 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor VIII proteins
SG11201404885RA (en) 2012-02-15 2014-09-26 Amunix Operating Inc Factor viii compositions and methods of making and using same
AU2013243953A1 (en) 2012-04-02 2014-10-30 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US10317376B2 (en) 2012-04-11 2019-06-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
AU2013270682A1 (en) 2012-06-08 2014-12-11 Biogen Ma Inc. Procoagulant compounds
CA2875247A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Chimeric clotting factors
WO2014018777A2 (en) 2012-07-25 2014-01-30 Biogen Idec Ma Inc. Blood factor monitoring assay and uses thereof
WO2014052490A1 (en) * 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
EP2908847B1 (en) * 2012-10-18 2022-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
CA2892038C (en) * 2012-11-20 2021-12-28 Darrel W. Stafford Methods and compositions for modified factor ix proteins
DK2922554T3 (en) 2012-11-26 2022-05-23 Modernatx Inc Terminalt modificeret rna
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
DK3889173T3 (da) 2013-02-15 2023-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
EP2968498A4 (en) * 2013-03-15 2016-09-07 Biogen Ma Inc PREPARATIONS CONTAINING FACTOR IX POLYPEPTIDE
US10548953B2 (en) 2013-08-14 2020-02-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor VIII-XTEN fusions and uses thereof
EP3903599A1 (en) 2013-09-25 2021-11-03 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
WO2015051214A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
ES2967617T3 (es) 2013-12-06 2024-05-03 Bioverativ Therapeutics Inc Herramientas de farmacocinética poblacional y sus usos
US20160289633A1 (en) 2013-12-20 2016-10-06 Biogen Ma Inc. Use of Perfusion Seed Cultures to Improve Biopharmaceutical Fed-Batch Production Capacity and Product Quality
CA2934081A1 (en) * 2013-12-23 2015-07-02 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
KR102385372B1 (ko) * 2014-03-24 2022-04-11 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 동결건조된 ix 인자 제형
EP3160478A4 (en) 2014-06-30 2018-05-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor ix gene
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
AU2016301303B2 (en) * 2015-08-03 2021-10-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX fusion proteins and methods of making and using same
SG10201913278PA (en) 2016-02-01 2020-02-27 Bioverativ Therapeutics Inc Optimized factor viii genes
EA201892347A1 (ru) 2016-04-15 2019-04-30 Баксалта Инкорпорейтед Способ и устройство для предоставления фармакокинетической схемы дозирования лекарственных препаратов
TW201739448A (zh) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 用於治療及/或預防血液相關疾病之方法及配方
CN109843319A (zh) 2016-07-08 2019-06-04 康诺贝林伦瑙有限公司 长效因子ix在人中的皮下施用
CN106279437B (zh) 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
CN107759694B (zh) * 2016-08-19 2023-01-13 安源医药科技（上海）有限公司 双特异性抗体及其制备方法与用途
EP3502143A4 (en) 2016-08-19 2020-07-15 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. BINDING PEPTIDE FOR THE CONSTRUCTION OF A FUSION PROTEIN
CN110520150A (zh) 2016-12-02 2019-11-29 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 使用嵌合凝血因子治疗血友病性关节病的方法
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
AR110871A1 (es) 2017-01-31 2019-05-08 Bioverativ Therapeutics Inc Proteínas de fusión de factor ix y métodos de fabricación y uso de las mismas
US11045143B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter with connectable hub for monitoring pressure
US10799131B2 (en) 2017-06-03 2020-10-13 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intrauterine pressure to protect the fallopian tubes
US10813589B2 (en) 2017-06-03 2020-10-27 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring uterine contraction pressure
US11045128B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intra-abdominal pressure
US11185245B2 (en) 2017-06-03 2021-11-30 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure for muscle compartment syndrome
SG10202111032PA (en) 2017-06-29 2021-11-29 CSL Behring Lengnau AG 21-day dosing regimen for fusion proteins comprising factor ix and human albumin for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
MX2020001593A (es) 2017-08-09 2020-07-13 Bioverativ Therapeutics Inc Moleculas de acido nucleico y usos de las mismas.
US20200263196A1 (en) 2017-09-27 2020-08-20 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising active cells
CA3096038A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Implantable particles and related methods
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
WO2020033863A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
US11672457B2 (en) 2018-11-24 2023-06-13 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11779263B2 (en) 2019-02-08 2023-10-10 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring intra-abdominal pressure for assessing preeclampsia
AU2020242945A1 (en) 2019-03-19 2021-10-14 CSL Innovation Pty Ltd Factor IX variants and uses thereof in therapy
KR20220009389A (ko) 2019-04-17 2022-01-24 코디악 바이오사이언시즈, 인크. 엑소좀 및 aav 의 조성물
CN112175088B (zh) * 2019-07-02 2023-03-28 江苏晟斯生物制药有限公司 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用
WO2021026020A1 (en) 2019-08-08 2021-02-11 Sentinel Medical Technologies, LLC Cable for use with pressure monitoring catheters
US11617543B2 (en) 2019-12-30 2023-04-04 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11981718B2 (en) 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
EP4362971A1 (en) * 2021-07-01 2024-05-08 CSL Behring Lengnau AG Factor ix subcutaneous administration with enhanced safety
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4786726A (en) * 1986-01-06 1988-11-22 Blood Systems, Inc. Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US6406697B1 (en) 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
ATE92107T1 (de) 1989-04-29 1993-08-15 Delta Biotechnology Ltd N-terminale fragmente von menschliches serumalbumin enthaltenden fusionsproteinen.
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
EP1132471A3 (de) 1989-09-12 2001-11-28 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
ATE145428T1 (de) 1990-12-14 1996-12-15 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
CA2131003A1 (en) 1992-05-26 1993-12-09 Raymond G. Goodwin Novel cytokine that binds cd30
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
US5621039A (en) 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
ATE203274T1 (de) 1994-02-01 2001-08-15 Nasa Fusionierte proteine die antikörper-teile und nicht-antikörper-teile enthalten
MX9700764A (es) 1994-07-29 1997-05-31 Smithkline Beecham Plc Compuestos novedosos.
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
DK1323346T3 (da) 1995-01-17 2006-10-30 Brigham & Womens Hospital Receptorspecifik transport af immunogener gennem epitelet
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6344596B1 (en) 1997-02-14 2002-02-05 American Red Cross Expression of active human factor IX in mammary tissue and of milk non human transgenic mammals
BR9815975A (pt) 1998-07-31 2001-12-04 Wallace E Carroll Método e aparelho para a determinação defatores de terapia anticoagulante
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
US20030096355A1 (en) * 1999-07-09 2003-05-22 Ke Zhang Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family
JP5179689B2 (ja) 2000-02-11 2013-04-10 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体ベース融合タンパク質の循環系内半減期の増強
AU2001266557A1 (en) 2000-04-12 2001-10-23 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
AP1825A (en) 2000-04-28 2008-02-03 Inflazyme Pharm Ltd 3-Nitrogen-6, 7-dioxygen steroids and uses related thereto.
US7125841B2 (en) 2000-11-14 2006-10-24 The University Of Texas Systems Mutant human factor IX with an increased resistance to inhibition by heparin
US20030203845A1 (en) 2001-02-05 2003-10-30 Knudsen Jens Bjerre Combined use of factor VII polypeptides and factor IX polypeptides
CA2457429A1 (en) 2001-09-04 2003-03-13 Francis J. Carr Modified factor ix
ES2516041T3 (es) 2001-10-10 2014-10-30 Ratiopharm Gmbh Remodelación y glicoconjugación de la hormona del crecimiento humano (hGH)
WO2003059934A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
EP2261250B1 (en) 2001-12-21 2015-07-01 Human Genome Sciences, Inc. GCSF-Albumin fusion proteins
US7217798B2 (en) * 2003-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of Fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis
KR101204712B1 (ko) * 2003-03-18 2012-11-27 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 Ｇｌａ-잔기 함유 세린 프로테아제의 제조 방법
CA2520970A1 (en) 2003-04-09 2004-10-28 Robert G. Schaub Hemophilia treatment by inhalation of coagulation factors
ES2558102T3 (es) 2003-05-06 2016-02-02 Biogen Hemophilia Inc. Proteínas quiméricas del factor de coagulación para el tratamiento de un trastorno hemostático
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7212798B1 (en) * 2003-07-17 2007-05-01 Cisco Technology, Inc. Adaptive AGC in a wireless network receiver
JP2007501811A (ja) 2003-08-08 2007-02-01 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト 治療的な関心対象のタンパク質に対する遅延分子の選択的な化学物質接合のためのガラクトースオキシダーゼの使用。
JP4738346B2 (ja) 2003-12-03 2011-08-03 ノヴォ ノルディスク アー／エス ＧｌｙｃｏＰＥＧ化された第ＩＸ因子
ATE469216T1 (de) 2004-08-17 2010-06-15 Csl Behring Gmbh Modifizierte vitamin-k-abhängige polypeptide
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EP1831363A1 (en) 2004-12-21 2007-09-12 Novo Nordisk Health Care AG Expression of gamma-carboxylated polypeptides in gamma-carboxylation deficient host systems
US20060162552A1 (en) 2005-01-26 2006-07-27 Mohawk Valley Energy Solutions, Inc. Systems and methods for controlling room air quality
JP5216580B2 (ja) 2005-05-25 2013-06-19 ノヴォ ノルディスク アー／エス グリコペグ化第ｉｘ因子
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
EP1996220B2 (en) 2006-03-06 2023-08-16 Amunix Operating Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
KR20110128957A (ko) 2005-11-01 2011-11-30 와이어쓰 엘엘씨 약물 재구성 또는 희석을 위한 염화나트륨 용액
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1816201A1 (en) * 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
WO2007112005A2 (en) 2006-03-24 2007-10-04 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Pc5 as a factor ix propeptide processing enzyme
EP2007885B1 (en) * 2006-04-11 2010-07-21 CSL Behring GmbH Method of increasing the in vivo recovery of therapeutic polypeptides
AU2007253264A1 (en) 2006-05-24 2007-11-29 Novo Nordisk Health Care Ag Factor IX analogues having prolonged in vivo half life
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
ES2889920T3 (es) 2006-06-14 2022-01-14 Csl Behring Gmbh Proteínas de fusión escindibles proteolíticamente con alta actividad específica molar
US8383388B2 (en) 2006-06-19 2013-02-26 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
JP2009543841A (ja) 2006-07-17 2009-12-10 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 増加した活性を有する第ｖｉｉａ因子アナログの新規用途
WO2008022151A1 (en) * 2006-08-15 2008-02-21 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Prophylactic treatment of hemophilia
WO2008028977A2 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
WO2008119815A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Novo Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor ix
JP2010536341A (ja) 2007-08-15 2010-12-02 アムニクス， インコーポレイテッド 生物学的に活性なポリペプチドの特性を改変するための組成物および方法
CN104004739A (zh) 2007-10-15 2014-08-27 北卡罗来纳-查佩尔山大学 半衰期延长的人因子ix变体
JP2011517950A (ja) 2008-04-16 2011-06-23 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｉｘ因子の部位特異的修飾
RU2010146387A (ru) 2008-04-16 2012-05-27 БАЙЕР ХЕЛСКЕР ЛЛСи (US) Модифицированные полипептиды фактора ix и их применение
EP2444491B1 (en) 2008-04-21 2016-11-16 Novo Nordisk Healthcare Ag Hyperglycosylated human coagulation factor IX
CN102046205A (zh) * 2008-04-24 2011-05-04 凯尔特药物Peg有限公司 具有延长的半衰期的因子ix缀合物
US20090282865A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ortloff Engineers, Ltd. Liquefied Natural Gas and Hydrocarbon Gas Processing
KR101921698B1 (ko) 2008-08-21 2018-11-26 옥타파마 아게 재조합에 의해 제조된 인간 인자 ⅷ 및 ⅸ
GB2479069B (en) 2008-09-24 2012-07-25 Stabilitech Ltd Method for preserving polypeptides using a sugar and polyethyleneimine
DK2393828T3 (en) 2009-02-03 2017-01-23 Amunix Operating Inc Extended recombinant polypeptides and compositions comprising same
SG2014012918A (en) 2009-02-11 2014-04-28 Novozymes Biopharma Dk As Albumin variants and conjugates
WO2011030641A1 (ja) 2009-09-08 2011-03-17 コニカミノルタホールディングス株式会社 身体用装具
RU2607374C2 (ru) 2009-10-30 2017-01-10 Новозаймс Байофарма Дк А/С Варианты альбумина
EP2353588B1 (en) 2010-01-21 2015-04-15 Agricultural Technology Research Institute A sustained release preparation of factor IX
WO2011124718A1 (en) 2010-04-09 2011-10-13 Novozymes A/S Albumin derivatives and variants
KR20230156435A (ko) 2010-07-09 2023-11-14 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 인자 iｘ 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법
CN104011072B (zh) 2011-05-05 2018-10-12 阿尔布梅迪克斯医疗有限公司 白蛋白变体
US20140315817A1 (en) 2011-11-18 2014-10-23 Eleven Biotherapeutics, Inc. Variant serum albumin with improved half-life and other properties
WO2014052490A1 (en) 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
CN105007722A (zh) 2013-02-16 2015-10-28 诺维信生物制药丹麦公司 药代动力学动物模型
EP2968498A4 (en) 2013-03-15 2016-09-07 Biogen Ma Inc PREPARATIONS CONTAINING FACTOR IX POLYPEPTIDE
CA2934081A1 (en) 2013-12-23 2015-07-02 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof

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