UA126265C2 - Поліпептид фактора іх і спосіб його застосування - Google Patents

Поліпептид фактора іх і спосіб його застосування Download PDF

Info

Publication number
UA126265C2
UA126265C2 UAA201701696A UAA201701696A UA126265C2 UA 126265 C2 UA126265 C2 UA 126265C2 UA A201701696 A UAA201701696 A UA A201701696A UA A201701696 A UAA201701696 A UA A201701696A UA 126265 C2 UA126265 C2 UA 126265C2
Authority
UA
Ukraine
Prior art keywords
dose
activity
factor
polypeptide
riches
Prior art date
Application number
UAA201701696A
Other languages
English (en)
Inventor
Гленн Пірс
Саманта Трукс
Роберт Т. Пітерс
Хайянь Джіанг
Original Assignee
Байовератів Терапьютікс Інк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45441870&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=UA126265(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Байовератів Терапьютікс Інк. filed Critical Байовератів Терапьютікс Інк.
Publication of UA126265C2 publication Critical patent/UA126265C2/uk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Даний винахід надає способи введення фактора IX; способи введення химерних і гібридних поліпептидів, що містять фактор IX; химерні й гібридні поліпептиди, що містять фактор IX; полінуклеотиди, що кодують такі химерні й гібридні поліпептиди; клітини, що містять такі полінуклеотиди; і способи виробництва таких химерних і гібридних поліпептидів з використанням таких клітин.

Description

(54) ПОЛІПЕПТИД ФАКТОРА ІХ І СПОСІБ ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ (57) Реферат:
Даний винахід надає способи введення фактора ІХ; способи введення химерних і гібридних поліпептидів, що містять фактор ІХ; химерні й гібридні поліпептиди, що містять фактор ІХ; полінуклеотиди, що кодують такі химерні й гібридні поліпептиди; клітини, що містять такі полінуклеотиди; і способи виробництва таких химерних і гібридних поліпептидів з використанням таких клітин.
Даний винахід належить в цілому до галузі терапії захворювань гемостазу.
Гемофілія В (також відома як хвороба Кристмаса) є однією з найпоширеніших наслідуваних хвороб крові у світі. Вона приводить до зниження /л у/мо і /пл умйго згортання крові й потребує постійного медичного спостереження протягом життя хворого. За відсутності втручання, хворі будуть страждати від спонтанної кровотечі в суглобах, яка приводить до сильного болю і від шкідливої для здоров'я відсутності рухливості; кровотечі в м'язах, що приводять до акумуляції крові в цих тканинах; спонтанної кровотечі в горлі й шиї, яка за відсутності невідкладного лікування може спричинити асфіксію; ниркової кровотечі; поширені також тяжкі кровотечі після хірургічного втручання, незначних випадкових ушкоджень або видалення зубів.
Нормальна коагуляція крові іп мімо потребує як мінімум серинових протеаз
Факторів ІІ (протромбін), МІ, ІХ, Х і ХІ (розчинних білків плазми); кофакторів, що включають трансмембранний білковий тканинний фактор і плазматичні білкові Фактори М і МІ; фібриноген, трансглютаміназу Фактор ХІІ, фосфоліпід (включаючи активовані тромбоцити) і кальцій.
Додаткові білки, що включають каллікреїн, кініноген високої молекулярної маси і Фактор ХІЇ є необхідними в деяких із тестів згортання іп міт, і можуть відігравати роль при патологічних порушеннях іп мімо.
При гемофілії згортання крові порушується через відсутність певних плазматичних факторів згортання крові. Причиною гемофілії В є дефіцит Фактора ІХ, що може бути результатом як зменшення синтезу білка Фактора ІХ, так і дефективною молекулою зі зниженою активністю.
Лікування гемофілії проводять шляхом заміщення відсутнього фактора згортання екзогенними концентратами фактора, високо збагаченими Фактором ІХ. Однак виробництво такого концентрату із крові пов'язане з великою кількістю технічних труднощів, як описано нижче.
При очищенні Фактора ІХ із плазми (одержаний із плазми Фактор ІХ; рагіІхХ) майже виключно виходить активний Фактор ЇХ. Однак таке очищення фактора ІХ із плазми є дуже важким, оскільки Фактор ІХ представлений у плазмі тільки у низькій концентрації (5 мкг/мл. Апдегв55оп,
Тпготброві5 Кезеагсп 7: 451 459 (1975). Крім того, очищення з крові потребує видалення або інактивації інфекційних агентів, таких як ВІЛ і вірус гепатиту С. Більше того, рагіІХ має короткий період напіввиведення і, отже, потребує частого дозування. Рекомбінантний фактор ІХ (ГРІХ) також є доступним, але має такий самий короткий період напіввиведення і потребує такого ж
Зо частого дозування, як і рагІХ (наприклад, 2-3 рази на тиждень для профілактики). ГРІХ також володіє нижчим значенням поступового відновлення (К значенням) порівняно з рагіІХ, що робить необхідним застосування більш високих доз гРїЇХ, порівняно з рагіІх.
Зниження смертності, запобігання ушкодженню суглобів і покращена якість життя стали важливим досягненням внаслідок розробки одержаного із плазми і рекомбінантного Фактора ІХ.
Пролонгований захист від кровотечі стане іншим значним прогресом у лікуванні пацієнтів з гемофілією В. Однак на теперішній час не розроблені продукти, які надавали би пролонгований захист. Отже, залишається необхідність в удосконалених способах лікування гемофілії, що виникла внаслідок нестачі Фактора ІХ, які б краще переносились і були би більш ефективними, ніж існуючі способи терапії.
Даний винахід надає способи введення Фактора ЇХ з застосуванням химерних поліпептидів, що містять Фактор ІХ, і гібридів таких химерних поліпептидів; полінуклеотидів, що кодують такі химерні й гібридні поліпептиди; клітин, що містять такі полінуклеотиди; і способи виробництва таких химерних і гібридних поліпептидів з використанням таких клітин. У деяких варіантах втілення Фактор ЇХ химерний поліпептид являє собою Фактор ІХ ЕРсКп зв'язувальний партнер (ВР) химерний поліпептид, такий як Фактор ЇХ Ес химерний поліпептид. В інших варіантах втілення Фактор ЇХ химерний поліпептид являє собою Фактор ІХ-ХТЕМ поліпептид.
Даний винахід надає спосіб введення Фактора ІХ пацієнту, який потребує цього, включаючи введення пацієнту дози щонайменше приблизно 10, щонайменше приблизно 20, або щонайменше приблизно 25 МО/кг Фактора ІХ РсКп ВР химерного поліпептиду, наприклад,
Фактора ІХ-Ес химерного поліпептиду або Фактора ІХ-ХТЕМ химерного поліпептиду, з інтервалом між введенням лікарського засобу приблизно один раз на тиждень або рідше.
У деяких варіантах втілення концентрація в плазмі крові химерного поліпептиду досягає середнього мінімального значення щонайменше приблизно 1 МО/дл через щонайменше приблизно 6 днів у щонайменше приблизно 70 95, щонайменше приблизно 8095, щонайменше приблизно 90 95, або приблизно 100 95 популяції пацієнтів, або досягає у пацієнта мінімального значення щонайменше приблизно 1, 2, 3, 4 або 5 МО/дл через щонайменше приблизно 6 днів. У деяких варіантах втілення рівень у плазмі вищезгаданого химерного поліпептиду досягає середнього мінімального значення приблизно 1-5 або 1-3 МО/дл. Таке мінімальне або середнє мінімальне значення може бути досягнуте після приблизно б, приблизно 7, приблизно 8, 60 приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14,
приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, приблизно 18, приблизно 19, приблизно 20, приблизно 21, приблизно 22, приблизно 23, приблизно 24, приблизно 25, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39 або приблизно 40 днів.
У деяких варіантах втілення химерний поліпептид має сильно редуковану фосфорилізацію і сульфатацію порівняно з одержаним із плазми Фактором ІХ. У деяких варіантах втілення химерний поліпептид є менше, ніж на 25 95 фосфорильованим і менше, ніж на 25905 сульфатованим, наприклад, менше, ніж на 25 95 повністю фосфорильованим і сульфатованим.
У деяких варіантах втілення химерний поліпептид є менше, ніж приблизно на 1095 фосфорильованим і менше, ніж приблизно на 9 95 сульфатованим. У деяких варіантах втілення химерний поліпептид має патерн / розподілення гама карбоксилювання, вміст гама карбоксилювання, патерн / розподілення спалювання, і / або вміст спалювання, подібний (тобто в межах 10 95) або такий самий як у Фактора ІХ Ес химерного поліпептиду в Прикладах 5-6.
У деяких варіантах втілення химерний поліпептид має поступове відновлення більше ніж 0,7 або більше, ніж 0,75 мкг/мл (антиген). У деяких варіантах втілення химерний поліпептид має середнє поступове відновлення (К-значення) (активність; спостережуване) щонайменше приблизно 0,8, щонайменше приблизно 0,9, або щонайменше приблизно 1 МО/дл на МО/кг.
У деяких варіантах втілення химерний поліпептид демонструє один або більше фармакокінетичних параметрів у зазначеної популяції пацієнтів або у зазначеного пацієнта, обраного із групи, що складається з: (а) середній кліренс (СІ) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 3,36 ж 0,93 мл/год./кг; середній кліренс (СІ) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, або 3,72 мл/год./кг; середній кліренс (СІ) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно у 2,5 рази нижче, ніж кліренс поліпептиду, що містить зазначений Фактор ІХ без зазначеного ЕсКп ВР; кліренс (СІ) (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 1,84 - 4,58 мл/год./кг. (б) середній час затримання (МКТ) (активність) у зазначеної популяції пацієнтів є не меншою, ніж приблизно 68,05 ж 11,16 годин; середнє МКТ (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 60-78, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76 або 78 годин; середній
МЕТ (активність) у зазначеної популяції пацієнтів є приблизно втричі довшим, ніж середній МКТ поліпептиду, що містить зазначений Фактор ЇХ без зазначеного БсКп ВР; середній час затримання (МКТ) (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 53,1-85,8 годин; середній час затримання (МКТ) (активність) у зазначеного пацієнта становить щонайменше приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, або приблизно 90 годин; (в) середній і /2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 52,5 ж 9,2 годин; середній і /2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, становить приблизно 47 - 60 годин, приблизно 47, приблизно 48, приблизно 49, приблизно 50, приблизно 51, приблизно 52, приблизно 53, приблизно 54, приблизно 55, приблизно 56, приблизно 57, приблизно 58, приблизно 59, приблизно 60 годин; середній 1 /2бета (активність) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно в З рази довше, ніж середнє і //2бета Поліпептиду, ЩО містить зазначений Фактор ІХ без зазначеного ЕсКп ВР; і/гбета (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 40 - 67,4, приблизно 40, приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 565, приблизно 70 або приблизно 75 годин; (г) середнє поступове відновлення (К значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 0,93 0,18 МО/дл на МоО/кг; середнє поступове відновлення (К значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 0,85 - 1,0, приблизно 0,85, приблизно 0,86, приблизно 0,87, приблизно
БО 0,88, приблизно 0,89, приблизно 0,90, приблизно 0,91, приблизно 0,92, приблизно 0,93, приблизно 0,94, приблизно 0,95, приблизно 0,96, приблизно 0,97, приблизно 0,98, приблизно 0,99, приблизно 1,0, приблизно 1,05, приблизно 1,10 або приблизно 1,15 МО/дл на МоО/кг; середнє поступове відновлення (К значення) (активність; спостережуване) у зазначеної популяції пацієнтів, приблизно на 2495 краще, ніж середнє поступове відновлення поліпептиду, що містить зазначений Фактор ІХ без зазначеного ЕсКп ВР; поступове відновлення (К значення) (активність; спостережуване) у зазначеного пацієнта становить приблизно 0,62 - 1,17 МО/дл на
МО/кг; (017) (д) середній У55 (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 226 ж 67,76 (скоректований до 69,8) мл/кг; середній М55 (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 200 - 300, приблизно 200, приблизно 210, приблизно 220, 60 приблизно 230, приблизно 240, приблизно 250, приблизно 260, приблизно 270, приблизно 280,
приблизно 290 або приблизно 300 мл/кг; М55 (активність) у зазначеного пацієнта становить приблизно 145-365 мл/кг; () середня АШсС/доза (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 32,44 ж 10,75 МО"'год./дл на МоО/кг; середня АОС/доза (активність) у зазначеної популяції пацієнтів становить приблизно 26 - 40, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39 або приблизно 40 МО"год./дл на
МО/кг; АС/доза у зазначеного пацієнта становить приблизно 21,80 - 54,30 МоО"год./дл на
МО/кКгГ.
У деяких варіантах втілення доза химерного поліпептиду містить значно більш низьку (в 10- 100 раз) концентрацію (0,01-0,00195) активованого РІХ (РіІхХа), ніж у продуктах Фактора ІХ, що виробляються на даний час, таких як МОМОМІМЕ М (рагІіх; С5ї Вепйгіп3о)) або ВЕМЕРІХ М (умуеїйй; ГРІХ) (0,195). Така концентрація може бути в 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 або 100 разів нижчою, ніж у продуктів, що виробляються на даний час або становити 0,01, 0,05, 0,0033, 0,0025, 0,002, 0,00167, 0,00142, 0,00125, 0,00111 або 0,001 95.
У деяких варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 6 - 18, 6 - 10, 9 - 18, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше 11, щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17, або щонайменше 18 днів, щотижня, двічі на місяць, або один раз на місяць. Інтервал між введенням лікарського засобу може бути профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу, фіксованим профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу або індивідуалізованим профілактичним інтервалом між введенням лікарського засобу.
Способи винаходу застосовуються до пацієнта, який потребує контролю або запобігання кровотечі або епізодів кровотечі, який потребує інтермітуючої терапії, який потребує профілактичного лікування або який потребує лікування за вимогою.
Терапевтичні дози, які можуть бути застосовані в способах винаходу, становлять приблизно 25-180, приблизно 20-180, приблизно 20-50, приблизно 20-100, приблизно 10-180, приблизно 10-50, приблизно 10-30 або приблизно 50-100 МО/кг. Доза може бути фіксованою дозою або індивідуалізованою дозою.
У деяких варіантах втілення химерний поліпептид вводять внутрішньовенно або підшкірно.
Суб'єктом у способах винаходу може бути суб'єкт-людина або ссавець, що не є людиною.
Ссавці, що не є людьми, включають мишей, собак, приматів, мавп, кішок, коней, корів, свиней і інших свійських тварин і маленьких тварин.
Химерний поліпептид може бути у формі гібрида, що містить другий поліпептид у поєднанні із зазначеним химерним поліпептидом, при цьому зазначений другий поліпептид містить або складається переважно з ЕсКп ВР, наприклад, Ес. Химерний поліпептид може бути щонайменше на 90 95, щонайменше на 95 95 або 100 95 ідентичний послідовності Фактора ІХ, послідовності Ес або як послідовності Фактора ЇХ, так і послідовності Ес у Таблицях 2А (ЗЕО І
МО:2) і/або 28 (5ЕО ІО МО:4), з сигнальною послідовністю (ями) і поліпептидом або без них.
Химерний поліпептид або гібрид може вводитись як частина фармацевтичної композиції, що містить щонайменше одну допоміжну речовину.
Винахід також надає самі вищеописані химерні й гібридні поліпептиди, полінуклеотиди, що їх кодують, людські ембріональні клітини, що культивуються, які містять полінуклеотиди, і способи виробництва таких химерних і гібридних поліпептидів, і поліпептиди, що виробляються такими способами.
Фіг. 1. Схема одного типу Фактора ІХ химерного поліпептиду, Фактора ІХ-Ес гібрида.
Фіг. 2. Групова середня концентрація РІХЕс у порівнянні з часовими профілями; порівняння номінальної дози.
Фіг. 3. Групова середня активність РІХЕс у порівнянні з часовими профілями; порівняння номінальної дози.
Фіг. 4. Дерево розв'язків віднімання базового рівня.
Фіг. 5. Пропорційне дозі зростання Стах і АОС для ГРІХ активності.
Фіг. 6. Оцінена терапевтична тривалість гРІХЕс при 50 (А) і 100 (6) МО/кг.
Фіг. 7. Пропорційне дозі зростання Стах і АОС для ГРІХ антигену.
Фіг. 8. Фармакокінетичні оцінки для гРІХЕс антигену при 50 (А) і 100 (б) МО/кг номінальних дозах.
Фіг. 9. Точна кореляція між гРІХЕс активністю і рівнями антигену. Необхідно відзначити, що внаслідок перерахунку РК активності, як обговорюється в Прикладі 11, К2 - 0,946.
Фіг. 10. гРІХ-Ес доменна структура і посттрансляційні модифікації. РКО: пропептид, розщеплений процесуючим ферментом. (ГА: містить 12 у-карбоксильованих залишків глутамінової кислоти (Сіа). АСТ РЕР: активаційний пептид розщеплюється для одержання активної протеази. Інші модифікації: М- ї О- глікозилювання, А5р(б4) р-гідроксилювання, Туг сульфатація, Зег фосфорилювання.
Фіг. 11. 5ХО5-РАСЕ гель очищення проміжних продуктів і очищеного РІХЕс мономера. Проби з різних етапів очищення РІХЕс аналізували за допомогою невідновлювального 5О5-РАСЕ.
Доріжка 1: Маркери ЗееВіше плюс молекулярної маси (Іпмігодеп). Доріжка 2: порожня доріжка.
Доріжка 3: Білок А завантажений. Доріжка 4: Білок А елюат. Доріжка 5: Фрактогель ОЕАЕ елюат.
Доріжка 6: 0 бер ЕЕ елюат. Доріжка 7: кінцевий об'єм РІХЕс. Доріжка 8: порожня доріжка.
Доріжка 9: кінцевий об'єм редукованого РІХЕс.
Фіг. 12. Функціональна активність РІХЕс у дефіцитних за ГІХ мишей. Дефіцитним за РІХ мишам була внутрішньовенно введена доза 219 МО/кг РІХЕс (З або 4 на групу, 6 груп, п - 23) або 200 МоО/кг гРІХ (З або 4 на групу, 5 груп, п - 23) в час - 0. Проби крові відбирали в різний час після введення дози (від 0,25 год. до 96 год) і аналізували на активність згортання з використанням аналізу ГРІХ активності. " ГРІХ активність не визначалась у всіх мишей в точках часу через 48 год. після введення дози.
Фіг. 13. Час згортання цільної крові РІХЕс у порівнянні з рекомбінантним РІХ у дефіцитних по
РІХ мишей. Дефіцитні по РІХ миші (6 на групу) одержали внутрішньовенно дозу 50 МО/кг РІХЕсС або 50 МО/кг ГРІХ. Проби крові відбирали перед введенням дози і в різний час після введення дози. Проби крові інкубували за температури 37 "С і візуально перевіряли на присутність згустків крові один раз на хвилину. Відзначався час, необхідний для формування згустків крові, і коли активність згортання поверталася до базового рівня (тобто згустки не формувалися), додаткові проби не одержували (проби збиралися від 15 хв. до 144 год. для РІХЕс або від 15 хв. до 72 год. для ГРІХ).
Фіг. 14. Фармакодинаміка РІХЕс у дефіцитних за ГРІХ мишей. Дефіцитним за ГРІХ мишам була введена доза 219 МО/кг РІХЕс (5 на групу, 6 груп, п - 30) або 200 МоО/кг ГРІХ (4 або 5 на групу, 6 груп, п - 28) на День 0, 4 і 8. Проби плазми крові відбирали шляхом пункції серця через 15 хв. і 96 год. після введення кожної дози і вимірювали активність згортання з використанням аналізу
ЕІХ активності. Плазму також відбирали із крові хвоста через 8, 24, 48 і 72 год. після введення кожної дози. Рівні РІХЕс були виміряні у всіх пробах з використанням аналізу ЕП ІЗА, специфічного для РІХЕс. (А) Виміряна активність порівняно з розрахованою активністю.
Активність згортання для РІХЕс розраховували з використанням аналізу ГРІХ активності через 15 хв. і 96 год. після введення трьох доз. Було визначено, що активність згортання іп міго для
РІХЕс становила 43,8 ж 5,4 МО/мг. Грунтуючись на цій активності (МО/мг) і виміряних рівнях білка, розрахований рівень активності згортання був визначений в точках часу 15 хв., 8, 24, 48, 72 і 96 год. після введення кожної дози, (б) У дефіцитних за ГРІХ мишей, яких пролікували трьома дозами 200 Мо/кг ГРІХ, рівні ГРІХ були розраховані з використанням РБІХ-специфічного аналізу ЕГІЗА. Використовуючи виміряні показники специфічної активності РІХЕс і ГРІХ, стало можливим порівняти розраховану активність згортання для всіх проб, проаналізованих за допомогою ЕГІЗА.
Фіг. 15. Фармакокінетика і фармакодинаміка РІХЕс у дефіцитних за РІХ собак.
Двом собакам з гемофілією В ввели шляхом внутрішньовенні! інфузії 140 МО/кг РІХЕс.
Проби крові відбирали через 5, 15 і 30 хв., і через 1, 2,4,6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144 і 168 год. (А) Метод сендвіч-ЕГ ІЗА з використанням РІХ імобілізованого антитіла і ЕС-НЕР ідентифікуючого антитіла був використаний для вимірювання концентрації інтактного
РІХЕс у пробах крові собак з гемофілією В. (б) ГРІХ активність згортання вимірювали у всіх точках часу відносно стандартної кривої, згенерованої з РІХЕс. (в) Кров, відібрану у тварин, негайно аналізували на час згортання цільної крові.
Проби крові інкубували за температури 28" і візуально перевіряли на присутність згустків крові один раз на хвилину, і реєстрували час, за який формувався згусток.
Фіг. 16. Фармакокінетика РІХЕс у яванських макак. Макакам була введена однократна доза (0,5, 2 і 10 мг/кг, що відповідає приблизно 25, 100 або 500 МО/кг) РІХЕс (п - 2, З і 3, відповідно).
Проби крові відбирали через 0,25, 0,5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 і 168 год. після введення дози і плазму готували для аналізу концентрації білка за допомогою РІХЕс-специфічного ЕГІЗА.
Фіг. 17. гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М демонструють порівнянну активність і залежну від дози реакцію в цільній крові мишей з НетВ. (А) Параметри аналізу КОТЕМОФ). ГРІХ або ВЕМЕРІХ М додавали в кров НетВ мишей і вимірювали параметри згортання за допомогою аналізу КОТЕМ". (6)- (гЗалежна від дози відповідь, вимірювання (б) СТ, (В)СЕТ І (глзальфа-кут.
Фіг. 18. Визначення ефективності у невідкладних випадках у моделі відсікання хвоста у мишей з гемофілією.
Фіг. 19. (А) Втрата крові після відрізання хвоста у окремих НетВ мишей, пролікованих гРЇХЕсС або ВЕМЕРІХ "М, (б) Залежна від дози реакція на гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М за медіанною втратою крові після відрізання хвоста у НетВ мишей.
Фіг. 20. Модель кровотечі при розсіченні хвостової вени (ТМТ) у НетВ мишей: модель для характеристики венозної кровотечі у пацієнтів з важкою гемофілією.
Фіг. 21. Пролонгована активність гРІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ М у дослідних НетВ мишей за результатами аналізу КОТЕМ" цільної крові. (А) СТ, (б) СЕТ, (в)Альфа-кут, і (г)участкова кореляція між активністю згортання цільної крові (СТ) за КОТЕМО у порівнянні з плазматичною активністю за аг.
Фіг. 22. Пролонгована ефективність РІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ М у моделі кровотечі при розсіченні хвостової вени (ТМТ) у НетВ мишей. (А) Виживаність: ступені виживаності порівнювали у мишей, які одержували ВЕМЕРІХ"М за 24 години до ТМТ, і у мишей, які одержували гРІХЕс за 72 години до ТМТ, і (б) Зупинка кровотечі: ступені кровотечі порівнювали у мишей, які одержували ВЕМЕРІХ "М за 24 години до ТМТ, і у мишей, які одержували гРІХЕс за 72 години перед ТУТ.
Фіг. 23. Кореляція між поступовим відновленням активного гРІЇХЕс відносно маси тіла у 12 пацієнтів, які одержували однократну дозу 12,5 - 100 МоО/кг гРІХЕс.
Фіг. 24. Моделювання за способом Монте-Карло з використанням структурної РК моделі
ГРЇХЕс активності для створення профілів активність-ч-ас для досягнення мінімального рівня 1
МоО/дл вище базового рівня після щотижневого (А), кожні 10 днів (б) або кожні два тижні режиму дозування (С). Медіанні РК параметри популяції і релевантні варіації між пацієнтами і у одного пацієнта були взяті з Фази 1/2а клінічного дослідження. 1000 суб'єктів увійшли в моделювання дозового режиму з 14-16 точками відбору проб для кожного суб'єкта, і середні значення х 50 профілів активність--ас від 1000 суб'єктів були сконструйовані графічно для різних режимів дозування.
Фі. 25. Моделювання за способом Монте-Карло для гРІХЕс доз для досягнення мінімального рівня 1 МО/дл (195), на основі перерахованих фармакокінетичних даних. (А) один раз на тиждень, (б) кожні 10 днів, і (в)кожні два тижні.
Даний винахід надає спосіб лікування нестачі Фактора ІХ, наприклад, гемофілії В, Фактором
ЇХ, з застосуванням більш тривалого інтервалу між введенням лікарського засобу і/або покращених фармакокінетичних параметрів, ніж це можливо з відомими на даний час продуктами з Фактором ІХ. Даний винахід також надає покращені Фактор ІХ химерні поліпептиди, Фактор ІЇХ химерні полінуклеотиди і способи їх виробництва. "Введення", як використовується тут, означає надання фармацевтично прийнятного Фактор
ЇХ поліпептиду винаходу пацієнту фармацевтично прийнятним способом. Кращими способами введення є внутрішньовенні, наприклад, внутрішньовенна ін'єкція і внутрішньовенна інфузія, наприклад, за допомогою центрального венозного доступу. Додаткові шляхи введення включають підшкірне, внутрішньом'язове, пероральне, назальне і пульмонарне введення, краще підшкірне. Фактор ІХ химерні поліпептиди і гібридні білки можуть бути введені як частина фармацевтичної композиції, що містить щонайменше одну допоміжну речовину. Переваги даного винаходу включають: покращене дотримання режиму; зниження ушкоджень через кровотечу; підвищений захист суглобів від кровотеч; профілактику ушкодження суглобів; знижену болісність; знижену смертність; пролонгований захист від кровотечі; зниження тромботичних випадків; і покращену якість життя. "Химерний поліпептид" при використанні тут, означає поліпептид, який містить у собі щонайменше два поліпептиди (або їх частини, такі як субпослідовності або пептиди) із різних джерел. Химерні поліпептиди можуть включати два, три, чотири, п'ять, шість, сім або більше поліпептидів або їх частин з різних джерел, таких як різні гени, різні КДНК або різні тварини, або інші види. Химерні поліпептиди можуть включати один або більше лінкерів, що зв'язують різні поліпептиди або їх частини. Таким чином, поліпептиди або їх частини можуть бути з'єднані прямо або вони можуть бути з'єднані непрямо, за допомогою лінкерів, або обома способами, з одним химерним поліпептидом. Химерні поліпептиди можуть включати додаткові пептиди, такі як сигнальні послідовності й такі послідовності як бНів і РІГ АС, що сприяє очищенню або детекції білка. Крім того, химерні поліпептиди можуть мати амінокислотні або пептидні добавки на М- мабо С-кінці. Прикладами химерних поліпептидів винаходу є Фактор ІХ-РсСКп ВР химерні поліпептиди, наприклад, Фактор ІХ-Ес химерні поліпептиди, такі як РІХЕс на Фігурі 1, 5ЕО ІЮ
МО:2 (Таблиця 2) і Приклади 1-4, зі своєю сигнальною послідовністю або без і пропептид. Інші 60 приклади химерних поліпептидів винаходу включають, не обмежуючись перерахованим, Фактор
ЇХ-ХТЕМ химерні поліпептиди. Фактор ЇХ може бути гібридизований або з М-кінцем, або з С- кінцем ХТЕМ.
Химерний поліпептид може містити послідовність, щонайменше на 90 95 або щонайменше на 95 95 або 100 95 ідентичну Фактору ІХ і ЕсКп ВР, наприклад, Ес амінокислотну послідовність, показану в Таблиці 2А без сигнальної послідовності і пропептидної послідовності (амінокислоти 3 1 по 642 з 5БО ІЮО МО:2), або альтернативно, з пропептидною послідовністю, або альтернативно з сигнальною послідовністю і пропептидною послідовністю. "Культура", "культивувати" і "культивування" як використовується тут, означає інкубувати клітини в умовах іп міїго, які дають клітинам можливість рости або ділитися, або підтримують клітини в живому стані. "Клітини, що культивуються" при використанні тут означає клітини, які розмножуються іп міїго. "Фактор ІХ" ї "РІХ" при використанні тут означає функціональний Фактор ІХ поліпептид у своїй нормальній ролі в коагуляції, якщо не зазначене інше. Таким чином, термін Фактор ІХ включає різні поліпептиди, які є функціональними, і полінуклеотиди, які кодують такі функціональні варіанти поліпептидів. Кращі Фактор ЇХ поліпептиди являють собою людські, бичачі, свинячі, собачі, котячі й мишачі Фактор ІХ поліпептиди.
Відомі поліпептиди повної довжини і полінуклеотидні послідовності Фактора ЇХ, а також багато функціональних варіантів, наприклад, фрагменти, мутанти і модифіковані версії. Фактор
ЇХ поліпептиди включають повної довжини Фактор ІХ, повної довжини Фактор ЇХ без Меї на М- кінці, повної довжини Фактор ІХ без сигнальної послідовності, зрілий Фактор ІХ (без сигнальної послідовності й пропептиду), і зрілий Фактор ІХ з додатковим Меї на М-кінці. Фактор ІХ краще виробляється рекомбінантними способами ("рекомбінантний Фактор ІХ" або "гРІХ"), тобто він не є природним або одержаним із плазми крові.
Відомо дуже багато функціональних варіантів Фактора ІХ. Міжнародна публікація номер УМО 02/040544 АЗ, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти, які демонструють підвищену стійкість до інгібування гепарином, на сторінці 4, рядки 9-
ЗО, і на сторінці 15, рядки 6-31. Міжнародна публікація номер УМО 03/020764 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора ІХ з редукованою імуногенністю Т-клітин у Таблицях 2 і З (на сторінках 14-24), і на сторінці 12, рядки
Зо 1-27. Міжнародна публікація номер УМО 2007/149406 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональний мутант Фактора ІХ молекул, який демонструє підвищену білкову стабільність, підвищений період напіввиведення іп мімо і іп міїго і підвищену стійкість до протеаз від сторінки 4, рядок 1 до сторінки 19, рядок 11. М/О 2007/149406
А2 також розкриває химерний і інший варіант Фактора ІХ молекул від сторінки 19, рядок 12 до сторінки 20, рядок 9. Міжнародна публікація номер УУО 08/118507 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора ІХ, які демонструють підвищену активність згортання крові, від сторінки 5, рядок 14 до сторінки 6, рядок 5.
Міжнародна публікація номер УМО 09/051717 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває мутанти Фактора ІХ, що мають підвищене число М-зв'язаних і або О-зв'язаних сайтів глікозилювання, яке приводить до зростання періоду напіввиведення і/або затримання, від сторінки 9, рядок 11 до сторінки 20, рядок 2. Міжнародна публікація номер
УМО 09/137254 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, також розкриває мутанти Фактора ІХ з підвищеним числом сайтів глікозилювання від сторінки 2, параграф 006) до сторінки 5, параграф (011) і від сторінки 16, параграф (044| до сторінки 24, параграф (057). Міжнародна публікація номер УМО 09/130198 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональний мутант Фактора ІХ молекул, який має підвищене число сайтів глікозилювання, що приводить до зростання періоду напіввиведення, від сторінки 4, рядок 26, до сторінки 12, рядок 6. Міжнародна публікація номер
УМО 09/140015 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, розкриває функціональні Фактор ІХ мутанти, які мають підвищену кількість Суб5 залишків, що може бути використане для полімерної (наприклад, РЕС) кон'югації, від сторінки 11, параграф 00431) до сторінки 13, параграф (00531.
Крім того, сотні не функціональних мутацій Фактора ІХ ідентифіковані у пацієнтів з гемофілією, багато з яких розкриті в Таблиці 1, на сторінках 11-14 Міжнародної публікації номер
УМО 09/137254 А2, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Такі нефункціональні мутації не включені у винахід, але надають додатковий посібник того, які мутації з більшою або меншою імовірністю приведуть до одержання функціонального Фактор ЇХ поліпептиду.
Фактор ІХ (або Фактор ІХ частина химерного поліпептиду) може бути щонайменше на 9095 бо або щонайменше на 9595 або щонайменше на 10095 ідентичним Фактору ЇХ амінокислотної послідовності, показаної в Таблиці 2А без сигнальної послідовності і пропептидної послідовності (амінокислоти з 1 по 415 з 5БЕО ІО МО:2), або альтернативно, з пропептидною послідовністю, або з пропептидною і сигнальною послідовністю (повної довжини Фактор ІХ).
Коагуляційна активність Фактора ІХ виражається в Міжнародних Одиницях (МО). Одна МО активності Фактора ІХ відповідає приблизно кількості Фактора ІХ в одному мілілітрі нормальної плазми крові людини. Декілька досліджень підходять для вимірювання активності Фактора ІХ, включаючи одностадійне дослідження згортання крові (активований частковий тромбопластиновий час; аРТТ), час утворення тромбіну (ТОА) і ротаційна тромбоеластографія (КОТЕМФ)). Див., наприклад, Приклад 3. "ЕсКп зв'язувальний партнер" або "ГсКп ВР" при використанні тут, означає зв'язувальні партнери функціонального неонатального Ес рецептора (ЕсКп), якщо не зазначене інше. ЕсКп зв'язувальний партнер є будь-якою молекулою, яка може специфічно зв'язуватися з ЕсКп рецептором з наступним активним транспортом ЕсКп рецептором ЕсКп зв'язувального партнера. Таким чином, термін ЕсКп ВР включає будь-які варіанти Ідс Ес, які є функціональними. Наприклад, область Ес частини ІдсС, яка зв'язується з ГсКп рецептором, описана на основі рентгеноструктурної кристалографії (Виптеїіз(ег еї аІ. 1994, Маїштге 372:379, включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). Головна контактна ділянка Ес з
ЕсКп знаходиться поруч із з'єднанням СН2 ії СНЗ доменів. Всі Ес-ЕсКп контакти знаходяться усередині одного Ід важкого ланцюга. ЕсКп Вр5 включають цілий дО, Ес фрагмент до, і інші фрагменти Ідс, які включають повний зв'язувальний регіон БоКп. Головні контактні сайти включають амінокислотні залишки 248, 250-257, 272, 285, 288, 290-291, 308-311 і 314 СН2 домену і амінокислотні залишки 385-387, 428 і 433-436 СНЗ домену. Всі посилання щодо амінокислотної нумерації імуноглобулінів або фрагментів імуноглобулінів, або ділянок, засновані на роботі Кабаї єї аї. 1991, бедиепсе5 ої Ргоївіп5 ої Іттипоіодіса! Іпіегев5і, ШО. 5.
ЮОерапйтепі ої Рибіїс Неапйй, ВеШезда; МО, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. (ЕсКп рецептор виділений з декількох видів ссавців, включаючи людину.
Відомі послідовності людських ЕсКп, щурячих ЕсКп і мишачих ЕсКп (500огу еї аї. 1994, у). Ехр.
Меа. 180: 2377), включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.) ЕсКп ВР може містити СН2 і СНЗ домени імуноглобулінів з петльовими ділянками імуноглобуліну або без них.
Наведені як приклад ЕсКп ВР варіанти надані в УМО 2004/101740 ї МУО 2006/074199, які включені в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
ЕсКп ВР також включає альбумін і його фрагменти, які зв'язуються з ЕсКп. Краще альбумін являє собою альбумін людини. Фактор ЇХ може бути з'єднаний або з М-кінцем альбуміну або з
С-кінцем альбуміну, за умови, що Фактор ЇХ компонент Фактор ІХ-альбумін гібридного білка може процесуватися ферментативно активною пропротеїнконвертазою для одержання процесованого поліпептиду, що містить Фактор ІХ. Приклади альбуміну, такі як його фрагменти, які можна використовувати в даному винаході, відомі, наприклад, Патент США Мо. 7592010;
Патент США Мо. 6686179; і 5спине, Тпготбові5 Кев. 124 Биррі. 2:56-58 (2009), кожний з яких включений у дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
ЕсКп ВР (або ділянка ЕсКп ВР у химерному поліпептиді) може містити одну або більше мутацій, і комбінацій мутацій.
ЕсКп ВР (або ділянка ЕсКп ВР у химерному поліпептиді) може містити мутації, що надають збільшений період напіврозпаду, такі як М252У, 5254Т, Т256Е і їх комбінації, як розкрито в роботі Одапезуап еї аї., Мої. Іттипої. 46:1750 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; Н4АЗЗК, М434Е і їх комбінації, як розкрито в роботі Массаго еї аї., мМаї.
Віотесппої. 23:1283 (2005), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; мутанти розкриті на сторінках 1-2, параграф (00121, ії в Прикладах 9 і 10 США 2009/0264627 АЇ, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; і мутанти розкриті на сторінці 2, параграфи з (0014) по (0021) зі США 20090163699 АЇ, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
ЕсКп ВР (або ділянка ЕсКп ВР у химерному поліпептиді) також може включати наступні мутації: Ес регіон Ї4 може бути модифікований відповідно до добре відомих процедур, таких як сайт-спрямований мутагенез і подібними для одержання модифікованих ідо або Ес фрагментів або їх частин, які будуть зв'язуватися з ЕГсКп. Такі модифікації включають модифікації, далекі від контактуючих сайтів ЕсКп, а також модифікації в межах контактуючих сайтів, які зберігають або навіть підсилюють зв'язування з ЕсКп. Наприклад, наступні одиночні амінокислотні залишки у людському досі Ес (Есуї) можуть бути заміщені без значної втрати Ес зв'язувальної афінності для ЕсКп: Р2З38А, 5239А, К246А, К248А, 0249А, М252А, Т256А, Е258А, Т260А, 0265А, 5267А,
Н2б8А, Е269А, 0270А, Е272А, І1274А, М276А, у278А, 0280А, М282А, Е283А, Н285А, М286А, 60 Т289А, К290А, К292А, Е293А, Е294А, 0295А, У296Е, М297А, 5298А, УЗООБ, КЗО1А, МЗОЗА,
МЗОБ5А, Т307А, І 309А, О311А, 0312А, МЗ315А, КЗ17А, ЕЗІВА, КЗ20А, КЗ22А, 5324А, КЗ26А,
АЗ270О, РЗ29А, АЗ300, АЗ305, РЗЗ1ТА, РЗЗІ5, ЕЗЗЗА, КЗ34А, Т335А, 5337А, КЗЗВА, КЗ40А,
О342А, К344А, ЕЗ45А, 0О0347А, КЗ55А, ЕЗ5б6А, М358А, Т359А, КЗбОА, М361 А, О362А, У37ЗА, 5375А 0376А, АЗ3780, ЕЗВОА, ЕЗ82А, 5383А, М384А, 0О386А, ЕЗВ8А, М389А, МЗ90А, УЗ391БН,
КЗ92А, ІГ398А, 5400А, 0401А, 0413А, К414А, К416А, 0418А, 0419А, М421 А, М422А, 5424А,
Е4ЗОА, М434А, Т437А, 0438А. КАЗ9А, 5440А, 5444А и К.447А, де наприклад Р2З38А представляє дикий тип проліну, заміщений аланіном у позиції номер 238. На додаток до аланіну, інші амінокислоти можуть бути заміщені диким типом амінокислот у позиціях, позначених вище.
Мутації можуть бути впроваджені однократно в Ес, даючи початок більше, ніж одній сотні ЕсКп зв'язувальних партнерів, що відрізняються від нативного Ес. Крім того, комбінації двох, трьох або більше із цих індивідуальних мутацій можуть бути введені разом, даючи початок ще сотням
ЕсКп зв'язувальних партнерів. Деякі із цих мутацій можуть давати нову функціональність відносно ЕГсКп зв'язувального партнера. Наприклад, один варіант втілення включає М297А, видаляючи висококонсервативний сайт М-глікозилювання. Дія цієї мутації зменшує імуногенність, тим самим підсилюючи циркулюючий півперіод РсКп зв'язувального партнера, і компенсуючи нездатність ЕсКп зв'язувального партнера зв'язуватися з ЕсукКІЇ, ЕсукІА, ЕсУКІЇВ і
Есугк ПА, без афінності до ЕсКп, що заважає (Кошіеадде еї аї. 1995, Тгап5ріапіайноп 60:847, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; Егіепа еї аї. 1999,
Тгапоріапіайоп 68:1632, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; зпіеїа5 еї аїІ. 1995, 9. ВіоїЇ. Спет. 276:6591, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання). Крім того, щонайменше три людські Ес гама рецептора, очевидно, розпізнають сайт зв'язування до усередині нижньої петльової ділянки, звичайно амінокислоти 234-237. Отже, інший приклад нової функціональності й потенційно зниженої імуногенності може стати результатом мутацій у цій ділянці, як, наприклад, шляхом заміщення амінокислот 233-236 людського Ід! "ЕС" вна відповідну послідовність із Ідб52 "РМА" (з однією амінокислотною делецією). Показано, що ЕсукіІ, Есук. ії ЕсукП, які опосередковують різні ефекторні функції, не будуть зв'язуватися з ІДС, якщо інтродуковані такі мутації. (Умага апа
Спейе 1995, Тпегарешіс Іттипоіоду 2:77, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання; і Агтоиг еї аї. 1999, Еиг. У. Іттипої. 29:2613, яка включена в дану заявку
Зо у всій повноті за допомогою посилання). Як додатковий приклад нової функціональності, що виникає внаслідок мутацій, описаних вище, в деяких випадках афінність до ЕсКп може бути підвищена більше, ніж у дикого типу. Ця підвищена афінність може відображати підвищений ступінь «увімкнення», знижений ступінь «вимкнення» або як підвищений ступінь «увімкнення», так і знижений ступінь «вимкнення». Вважається, що мутації надають підвищену афінність ЕсКап, включаючи Т256А, Т307А, ЕЗ8ОА і М434А (ЗПівїа5 еї аІ. 2001, 9. Віої. Спет. 276:6591, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання).
ЕсКп ВР (або ділянка ЕсКп ВР у химерному поліпептиді) може бути щонайменше на 9095 або щонайменше на 9595 або на 100 95 ідентичною Ес амінокислотної послідовності, показаної в
Таблиці 2А або В без сигнальної послідовності (амінокислоти від 1 до 227 з 5ЕО ІЮО МО:2), або альтернативно, із сигнальною послідовністю. І069| Термін "гібридні" поліпептиди і білки, при використанні тут, означає комбінацію химерного поліпептиду з другим поліпептидом. Химерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним за допомогою нековалентних взаємодій білок-білок, таких як заряд-заряд або гідрофобні взаємодії. Химерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним через ковалентний зв'язок (зв'язки), такі як дисульфідні зв'язки. Химерний поліпептид і другий поліпептид у гібриді можуть бути зв'язані один з одним за допомогою більше ніж одного типу зв'язку, таких як нековалентні й дисульфідні зв'язки. Гібриди описані в МО 2004/101740, М/О2005/001025,
Патенті США Мо. 7,404,956, патенті США Мо. 7,348,004 і УМО 2006/074199, кожний з яких включений в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Другий поліпептид може бути другою копією того ж химерного поліпептиду або може бути неідентичним химерним поліпептидом. У кращих варіантах втілення другий поліпептид являє собою поліпептид, що містить РсКп ВР, наприклад, Ес. У кращих варіантах втілення химерний поліпептид являє собою
Фактор ІХ-есКп ВР, наприклад, Фактор ІЇХ-Ес химерний поліпептид, а другий поліпептид повністю складається з Ес. Див., наприклад. Фігуру 1, Приклади 1-3 і Таблицю 2 (ЗЕО ІЮ Мо5:2 і 4). Див., наприклад, 5 7404956, яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
Другий поліпептид у гібриді містить або повністю складається з послідовності, щонайменше на 9095 або щонайменше на 9595 або 10095 ідентичній амінокислотній послідовності, показаній в
Таблиці 2В без сигнальної послідовності (амінокислоти з 1 по 227 з 5БО ІЮО МО:4), або 60 альтернативно, з сигнальною послідовністю.
Поліпептид даного винаходу також включає Фактор ІХ, гібридизований з одним або більше
ХТЕМ поліпептидами. ЗспеПепригдег еї аї., Маї. Віотеср. 27:1186-90 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Фактор ЇХ може бути гібридизований або з М- кінцем ХТЕМ поліпептиду, або з С-кінцем ХТЕМ поліпептиду. ХТЕМ поліпептиди включають, але не обмежуючись перерахованим, поліпептиди, розкриті в МО 2009/023270, УМО 2010/091122,
УМО 2007/103515, 005 2010/0189682, ії 005 2009/0092582, кожна з яких включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. "Інтервал між введенням лікарського засобу" при використанні тут означає кількість часу, яка проходить між введенням повторних доз пацієнту. Інтервал між введенням лікарського засобу в способах винаходу, що використовують химерний Е1Х-ЕсКп ВР, наприклад, химерний
ЕІЇХ-Ес, може бути щонайменше від півтора до восьми раз довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості (у МО/кг) зазначеного Фактора ІХ без
ЕсКп ВР, наприклад, Ес частини (тобто поліпептиду, який складається із зазначеного РІХ).
Інтервал між введенням лікарського засобу при введенні, наприклад, Фактора ІХ-Ес химерного поліпептиду (або гібрида) винаходу може бути щонайменше у півтора раза довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості зазначеного Фактора
ЇХ без РсКп ВР, наприклад, Ес частини (тобто поліпептиду, що складається із зазначеного
Фактора ІХ). Інтервал між введенням лікарського засобу може бути щонайменше від півтора до восьми раз довше, ніж інтервал між введенням лікарського засобу, необхідний для еквівалентної кількості зазначеного Фактора ІХ без, наприклад, Ес частини (або поліпептиду, що складається із зазначеного Фактора ІХ).
У деяких варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 6-18, 6- 10, 9-18, щонайменше 6, щонайменше 7, щонайменше 8, щонайменше 9, щонайменше 10, щонайменше ІІ щонайменше 12, щонайменше 13, щонайменше 14, щонайменше 15, щонайменше 16, щонайменше 17 або щонайменше 18 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити щонайменше приблизно один разу на тиждень, і може становити 6-10 днів, наприклад, приблизно 7-10, приблизно 7-9, приблизно 7-8, приблизно 8-10, приблизно 9- 10, приблизно 6-7, приблизно 8-9, приблизно 6, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9, або приблизно 10 днів.
Інтервал між введенням лікарського засобу може становити 9-18 днів, наприклад, приблизно 9-17, приблизно 9-16, приблизно 9-15, приблизно 9-14, приблизно 9-13, приблизно 9-12, приблизно 9-11, приблизно 9-10 днів, приблизно 10-18, приблизно 11-18, приблизно 12-18, приблизно 13-18, приблизно 14-18, приблизно 15-18, приблизно 16-18, приблизно 17-18 днів, приблизно 10-11, приблизно 11-12, приблизно 12-13, приблизно 13-14, приблизно 14-15, приблизно 15-16, і приблизно 16-17 днів, приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, або приблизно 18 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити приблизно 10-14 днів.
Інтервал між введенням лікарського засобу може становити приблизно кожні два тижні або двічі на місяць. Інтервал між введенням лікарського засобу може становити більше, ніж 18 днів, наприклад, приблизно 19, приблизно 20, приблизно 21, приблизно 22, приблизно 23, приблизно 24, приблизно 25, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39, або приблизно 40 днів. Інтервал між введенням лікарського засобу може бути фіксованим інтервалом, наприклад, 7 днів для 25-50 МО/кг, 10-13 днів для 50-100 МО/кг або 14 днів для 100-150 МО/кг. Фіксований інтервал і доза визначаються так, що комбінація інтервалу і дози буде приводити до мінімального рівня, який становить щонайменше приблизно 1-5 або щонайменше приблизно 1-3, або щонайменше приблизно І, щонайменше приблизно 2, або щонайменше приблизно З МоО/дл РІХ активності в популяції пацієнтів або у окремого пацієнта. Фіксований інтервал між введенням лікарського засобу може також становити 7 днів для 20-50 МоО/кг, 10-14 днів для 50-100 МО/кг, 14-16 днів для 100-150
МО/кКг, 7 днів для 10-50 МоО/кг, 10-13 днів для 15-100 МО/кг, або 14-15 днів для 50-150 МО/кг.
Фіксований інтервал між введенням лікарського засобу може також становити 7 днів для 10-30
МО/КГ, 10 днів для 15-50 МО/кг, 11 днів для 20-70 МоО/кг, 12 днів для 25-85 МО/кг, 13 днів для від 30 до 100 МО/кг, 14 днів для від 40 до 125 МО/кг і 15 днів для 50-150 МоО/кг.
У кращих варіантах втілення інтервал між введенням лікарського засобу становить 20 МО/кг один раз на тиждень, 40 МО/кг кожні 10 днів або 100 МО/кг кожні два тижні (двічі на місяць).
Інтервал між введенням лікарського засобу може, альтернативно, бути індивідуалізованим інтервалом, який визначений для кожного суб'єкта на основі фармакокінетичних даних або іншої інформації про зазначеного суб'єкта. Комбінація індивідуалізованої дози/інтервалу між бо введенням лікарського засобу може бути такою ж самою, як для фіксованих інтервальних режимів у попередніх параграфах, або може відрізнятися, як проілюстровано в Прикладах.
Режим може спочатку бути з фіксованим інтервалом між введенням лікарського засобу, а потім може змінитися на індивідуалізований інтервал між введенням лікарського засобу. "Лікування за вимогою" при використанні тут означає лікування, яке призначено для застосування протягом короткого часу і відповідає існуючому стану, такому як епізод кровотечі, або виявлена короткочасна необхідність, така як плановане хірургічне втручання. Стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають епізод кровотечі, гемартроз, м'язову кровотечу, ротову кровотечу, геморрагію, крововилив у м'яз, ротовий крововилив, травму, травму голови, шлунково-кишкову кровотечу, внутрішньочерепний крововилив, внутрішньочеревний крововилив, внутрішньогрудний крововилив, перелом кістки, кровотечу в центральній нервовій системі, кровотечу в заглотковому просторі, кровотечу в зачеревному просторі або кровотечу в піхву клубово-поперекового м'яза. Інші епізоди кровотечі також включені. Пацієнт може потребувати хірургічної профілактики, периоперативного догляду або підготовки до оперативного втручання. Такі хірургічні операції включають мале хірургічне втручання, велике хірургічне втручання, видалення зуба, тонзилектомію, інші стоматологічні/грудні й лицьові операції, видалення пахової грижі, сіновектомію, повну заміну колінного суглоба, заміну інших суглобів, краніотомію, остеосинтез, травматологічну хірургію, внутрішньочерепні операції, внутрішньочеревні операції, внутрішньогрудні операції. Інші операції також включені. Додаткові стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають ті, що перераховані в Таблиці 26.
Додаткові стани, які можуть потребувати лікування за вимогою, включають малий крововилив, гемартроз, поверхневий м'язовий крововилив, крововилив у м'які тканини, середній крововилив, внутрішньом'язовий крововилив або крововилив у м'які тканини з розшаруванням, крововилив у слизові, гематурію, сильний крововилив, глотковий крововилив, заглотковий крововилив, ретроперітонеальний крововилив, крововилив у центральній нервовій системі, удари, порізи, подряпини, крововилив у суглоб , носову кровотечу, ротову кровотечу, кровотечу з ясен, внутрішньочерепну кровотечу, внутрішньочеревну кровотечу, малий спонтанний крововилив, кровотечу після серйозної травми, помірний шкірний синець або спонтанний крововилив у суглоби, м'язи, внутрішні органи або в мозок. Додаткові причини для лікування за
Зо вимогою включають необхідність у периоперативному догляді при хірургічному втручанні або видаленні зуба, велике хірургічне втручання, великі хірургічні операції в порожнині рота, урологічні операції, операції при грижі, ортопедичні операції, такі як заміна колінного, тазостегнового або будь-якого іншого основного суглоба.
Скорочення:
АОСІМЕ Площа під кривою концентрація-час від нуля нескінченності
АцСа Площа під кривою концентрація-час над фазою розподілення
АОсСр Площа під кривою концентрація-час над фазою виведення
Альфа НІ. Півперіод фази розподілення
Бета НІ. Півперіод фази виведення; також позначається як І-2 с1в8 Оцінена РІХЕс активність вище базової приблизно через 168 год. після введення дози
Стах Максимальна концентрація, що присутня на Т тах
Су Відсоток коефіцієнта варіації
СІ Кліренс мА іп міо відновлення (905) ій Поступове відновлення значення
МАТ Середній час затримання
М Номер
Мо Не розраховувалось
МА Не повідомлялось
Стандартне відхилення
ЗЕ Стандартна помилка
ТВІ РІ Модель-прогнозований час після введення дози, коли РЇХЕс активність зменшується приблизно до 1 МО/дл вище базового рівня
ТВІ РЗ Модель-прогнозований час після введення дози, коли РЇХЕсС активність зменшується приблизно до З МО/дл вище базового рівня
ТВІ РБ Модель-Прогнозований час після введення дози, коли РІЇХЕсС активність зменшується приблизно до 5 МО/дл вище базового рівня
Ме5 Об'єм розподілення на стаціонарній фазі
Мі Об'єм розподілення в центральному компартменті
Фармакокінетичні (РК) параметри включають вищевказані терміни і наступні терміни, які мають своє звичайне значення в даній галузі техніки, якщо не зазначене інше. Деякі з термінів більш детально пояснюються в Прикладах. РК параметри можуть грунтуватися на рівні РІХ антигену (часто позначеному в даній заявці в дужках як "антиген") або на рівні ГРІХ активності (часто позначеній в даній заявці в дужках як "активність"). У літературі РК параметри часто грунтуються на рівні ГРІХ активності через присутність у плазмі деяких пацієнтів ендогенних неактивних ГРІХ, які заважають можливості оцінити введений (тобто екзогенний) РІХ, використовуючи антитіло до ГРІХ. Однак коли ГРІХ вводиться як частина гібридного білка, що містить гетерологічний пептид, такий як ЕсКп ВР, то РІХ антиген що вводиться (тобто екзогенний) може бути точно виміряний з використанням антитіла до гетерологічного поліпептиду. Крім того, певні РК параметри можуть бути засновані на прогнозованих даних (часто позначуваних у даній заявці в дужках як " модель-прогнозовані") або на спостережуваних даних (часто позначуваних у даній заявці в дужках як "спостережуване"), і переважно засновані на спостережуваних даних. "Базовий" при використанні тут означає найнижчий підрахований рівень Фактора ЇХ у плазмі крові у пацієнта перед введенням дози. У дослідженні вперше проведеному на людині, описаному в Прикладі 1, рівні Фактора ІХ у плазмі були підраховані у двох точках часу перед введенням дози: на скринінговому візиті й безпосередньо перед введенням дози. Періоди часу перед введенням дози розглядалися як нуль (базовий рівень) для цілей обчислень, тобто для одержання даних "з відніманням базового рівня". Див., наприклад, Фігуру 4. Альтернативно, (а) базовий рівень у пацієнтів, чия ГРІХ активність перед лікуванням становила «1 95, які мають ГРІХ антиген, що не виявляється і мають нонсенс генотипи, визначається як 0 95, (б) базовий рівень у пацієнтів з ГРІХ активністю перед лікуванням «1 95, які мають ГРІХ антиген що виявляється, установлений на 0,595, (в)базовий рівень у пацієнтів, чия РІХ активність перед лікуванням знаходиться між 1-2 95 являє собою Стіп (найнижча активність у ході РК дослідження), і (базовий рівень у пацієнтів, чия РІХ активність перед лікуванням »2 95 становить 2 95.
Активність вище базового рівня перед введенням дози розглядається як залишкові ліки від попереднього лікування й зводиться до базового рівня й віднімається від даних РК після введення дози гГРІЇХЕс. Див. Приклад 11.
Зо "Площа під кривою плазматична концентрація відносно часу" ("АС"), при використанні тут, грунтується на швидкості й протяжності елімінації Фактора ІХ після введення. АС визначається за визначений період часу , такий як 12, 18, 24, 36, 48 або 72 годин, або для нескінченності з використанням екстраполяції, заснованої на куті нахилу кривої. Якщо тут не зазначене інше, АОС визначається для нескінченності (АОСІМІ). АОС також може бути підрахована на основі дози. Як і з багатьма іншими РК параметрами, АОС може бути визначена для одного суб'єкта або для популяції суб'єктів, для яких розраховують середнє значення. У
Прикладі 1 середнє значення АОС/доза в популяції пацієнтів становило 32,44 МО"год/дл на
МО/кг і діапазон для окремих пацієнтів становив 21,80-54,30 МО"год/дл на МО/кг. (Див. Таблицю 13 для середнього значення АОс/доза, на основі активності.) Отже, середнє значення АОсС/доза в популяції пацієнтів може становити приблизно 26-40, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35, приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39 або приблизно 40
МоО"год./ для МО/кг. Див. Таблицю 14 для значень АОсС/дози й інших ЛОС параметрів, на основі антигену. "п мімо відновлення" ("ІМК") презентовано поступовим відновленням (К-значенням), яке являє собою спостережуваний пік активності мінус рівень перед введенням дози, розділені на дозу. ІМК також може бути розраховане на основі відсотків, як описано в Прикладах. Для ясності, у даній заявці використовуються одиниці (К-значення або МО/дл на МО/кг в порівнянні з
Фо). Середнє значення ІМК можна визначити в популяції пацієнтів, або можна визначити індивідуальне значення ІМК у окремого пацієнта. РІХЕс, використане у вперше проведеному на людині дослідженні, описаному в Прикладі 1, продемонструвало середнє значення ІМК приблизно 0,93 МО/дл на МО/кг у популяції пацієнтів; і ІМ у кожного пацієнта варіювало від 0,62 до 1,17 МО/дл на МО/кг (Таблиця 13). Отже, химерний поліпептид винаходу демонструє середнє значення ІМК у популяції пацієнтів, яке становить 0,85-1,15 (наприклад, приблизно 0,85, приблизно 0,86, приблизно 0,87, приблизно 0,88, приблизно 0,89, приблизно 0,90, приблизно 0,91, приблизно 0,92, приблизно 0,93, приблизно 0,94, приблизно 0,95, приблизно 0,96, приблизно 0,97, приблизно 0,98, приблизно 0,99, приблизно 1,0, приблизно 1,05, приблизно 1,10, приблизно 1,15) і ІМК у пацієнта дорівнює щонайменше приблизно 0,6,
приблизно 0,7, 0,8, приблизно 0,9, приблизно 1,0, приблизно 1,1, або приблизно 1,2 МО/дл на
МО/кКгГ. "Швидкість кліренсу" ("СІ") при використанні тут означає оцінку здатності організму елімінувати ліки, і виражається як об'єм плазми, очищений від ліків, за період часу. РІХЕс, використаний у дослідженні, описаному в Прикладі 1, демонстрував середній Сі , що становить приблизно 3,36 мл/год/кг (див. Таблицю 13), який приблизно у 2, 5 рази нижче, ніж СІ (8,2 мл/год/кг) поліпептиду, що складається з Фактора ІХ (ВЕМЕРІХ М); діапазон значень СІ у окремих суб'єктів становив 1,84-4,58 мл/год/кг. Отже, химерний поліпептид винаходу демонструє середній СІ. у популяції 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7 або 3,72 мл/год/кг.
Для СІ, на основі антигену, див. Таблицю 14. "Середній час затримання" ("МК") при використанні тут означає вимірювання середнього часу існування лікарських молекул в організмі. РІХЕс, використаний у дослідженні, описаному в
Прикладі 1, демонстрував середнє значення МКТ приблизно 68,05 годин (див. Таблицю 13); діапазон МЕТ значень становив 53,1-85,8 годин у окремих пацієнтів. Отже, химерний поліпептид винаходу демонструє середнє значення МКТ у популяції 60-78, приблизно 60, приблизно 62, приблизно 64, приблизно 66, приблизно 68, приблизно 70, приблизно 72, приблизно 74, приблизно 76, або приблизно 78 годин і значення МЕТ у пацієнта що дорівнює щонайменше приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, або приблизно 90 годин. Для МКТ, на основі антигену, див. Таблицю 14. "нев" або ї/г а" або "Веїа НІ." при використанні тут, означає півперіод, пов'язаний з фазою елімінації, ї/гв «(Іп2ууконстанта швидкості елімінації, пов'язана з термінальною фазою. У дослідженні, описаному в Прикладі 1, використаний РІХЕс показував середнє значення К/2: у популяції пацієнтів, яке становило приблизно 52,5 годин (див. Таблицю 13) і діапазон ів значень у окремих пацієнтів становив 47-60 годин. Отже, химерний поліпептид винаходу демонструє середнє значення і/25 більше ніж приблизно 47, приблизно 48, приблизно 49, приблизно 50, приблизно 51, приблизно 52, приблизно 53, приблизно 54, приблизно 55, приблизно 56, приблизно 57, приблизно 58, приблизно 59 або приблизно 60 годин. Для і1/2в на основі антигену, див. Таблицю 14.
Зо "Мінімальний рівень" при використанні тут означає найнижчий рівень активності Фактора ІХ у плазмі, досягнутий після введення дози химерного поліпептиду винаходу або іншої молекули
Фактора ЇХ і до введення наступної дози, якщо воно відбудеться. Термін "мінімальний рівень" у даній заявці використовується взаємозамінно з "граничною величиною". Базові рівні Фактора ІХ віднімаються з виміряних рівнів Фактора ІХ для розрахунків мінімального рівня. У деяких варіантах втілення мінімальний рівень становить 1-5 або 1-3 МО/дл після приблизно 6, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13 або приблизно 14 днів. У деяких варіантах втілення рівень химерного поліпептиду в плазмі досягає середнього мінімального рівня, який дорівнює щонайменше приблизно 1 МоО/дл після щонайменше приблизно 6 днів у щонайменше приблизно 7095, щонайменше приблизно 80 95, щонайменше приблизно 9095, або приблизно 10095 популяції пацієнтів, або досягає у пацієнта мінімального рівня, який дорівнює щонайменше приблизно 1, 2, 3, 4, або 5 МоО/дл через щонайменше приблизно 6 днів. У деяких варіантах втілення рівень вищезгаданого химерного поліпептиду в плазмі досягає середнього мінімального рівня, який дорівнює приблизно 1-5 або 1-3 МоО/дл. Такий мінімальний рівень або середній мінімальний рівень може бути досягнутий через приблизно б, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, приблизно 18, приблизно 19, приблизно 20, приблизно 21, приблизно 22, приблизно 23, приблизно 24, приблизно 25, приблизно 26, приблизно 27, приблизно 28, приблизно 29, приблизно 30, приблизно 31, приблизно 32, приблизно 33, приблизно 34, приблизно 35,
БО приблизно 36, приблизно 37, приблизно 38, приблизно 39, або приблизно 40 днів. "Об'єм розподілення у стаціонарній фазі (М55)" при використанні тут означає видимий простір (об'єм), у якому розподіляється лікарський засіб. Ме55 - кількість ліків у організмі розділена на концентрацію в плазмі у стаціонарній фазі. У Прикладі 1 середній У55, виявлений у популяції, становив приблизно 226 мл/кг, і діапазон у пацієнтів становив приблизно 145-365 мл/кг. (Див. Таблицю 13.) Таким чином, середнє значення МУ55 у популяції пацієнтів може становити 200-300, приблизно 200, приблизно 210, приблизно 220, приблизно 230, приблизно 240, приблизно 250, приблизно 260, приблизно 270, приблизно 280, приблизно 290 або приблизно 300 мл/кг. Рівень У55 у окремих пацієнтів може становити приблизно 145, приблизно 150, приблизно 160, приблизно 170, приблизно 180, приблизно 190, приблизно 200, приблизно 60 210, приблизно 220, приблизно 230, приблизно 240, приблизно 250, приблизно 260, приблизно
270, приблизно 280, приблизно 290, приблизно 300, приблизно 310, приблизно 320, приблизно 330, приблизно 340, приблизно 350, приблизно 360 або приблизно 370 мл/кг. Рівні М55 на основі антигену, див. у Таблиці 14.
Терміни "поліпептид", "пептид" і "білок" використовуються як взаємозамінні й відносяться до полімерної сполуки, що містить ковалентно зв'язані амінокислотні залишки.
Терміни "полінуклеотид" і "нуклеїнова кислота" використовуються як взаємозамінні й відносяться до полімерної сполуки, яка містить ковалентно зв'язані нуклеотидні залишки.
Полінуклеотид и можуть бути ДНК, кКДНК, РНК, одноланцюговими або дволанцюговими, векторами, плазмідами, фагами або вірусами. Полінуклеотиди включають зазначені в Таблиці 1, які кодують поліпептиди Таблиці 2 (див. Таблицю 1). Полінуклеотиди також включають фрагменти полінуклеотидів Таблиці І, наприклад, ті, які кодують фрагменти поліпептидів з
Таблиці 2, такі як Фактор ІХ, Ес, сигнальну послідовність, пропептид, бНівб і інші фрагменти поліпептидів Таблиці 2. "Профілактичне лікування" при використанні тут означає введення Фактора ЇХ поліпептиду в багаторазових дозах пацієнту протягом періоду часу для підвищення рівня активності Фактора
ЇХ у плазмі крові пацієнта. Краще, підвищений рівень є достатнім для зниження частоти випадків спонтанної кровотечі або для запобігання кровотечі у випадку несподіваної травми.
Профілактичне лікування зменшує кількість епізодів кровотечі або запобігає їм, наприклад, тим, які описані нижче при лікуванні за вимогою.
Профілактичне лікування може бути фіксованим або може бути індивідуалізованим, як обговорюється нижче в розділі "інтервал між введенням дози", наприклад, для компенсації варіабельності між пацієнтами. "Суб'єкт" при використанні тут означає людину або ссавця, що не є людиною. Ссавці, що не є людиною, включають мишей, собак, приматів, мавп, кішок, коней, корів, свиней і інших свійських тварин і дрібних тварин. Суб'єкти також включають педіатричних пацієнтів, що є людьми. Педіатричні пацієнти є людьми у віці до 20 років, переважно до 18 років, до 16 років, до 15 років, до 12 років, до 11 років, до 6 років, до 5 років, до 2 років, і від 2 до 11 років.
Способи винаходу можуть практикуватися на суб'єкті, який потребує контролю або запобігання кровотечі або епізодів кровотечі. Такі суб'єкти включають тих, які потребують
Зо контролю або запобігання кровотечі при незначному крововиливі, гемартрозі, поверхневому м'язовому крововиливі, середньому крововиливі, внутрішньом'язовому крововиливі або крововиливі в м'які тканини з розшаруванням, крововиливі в слизові, гематурії, сильному крововиливі, глотковому крововиливі, заглотковому крововиливі, зачеревному крововиливі, крововиливі в центральній нервовій системі, ударах, порізах, подряпинах, суглобному крововиливі, носовій кровотечі, ротовій кровотечі, кровотечі з ясен, внутрішньочерепній кровотечі, внутрішньочеревній кровотечі, малому спонтанному крововиливі, кровотечі після серйозної травми, помірному синці шкіри або спонтанному крововиливі в суглоби, м'язи, внутрішні органи або в мозок. Такі пацієнти також включають тих, які потребують периоперативного догляду, такого як контроль кровотечі, пов'язаної з хірургічною операцією або видаленням зуба. "Терапевтична доза" при використанні тут означає дозу, за допомогою якої досягається терапевтична мета, як описано тут. Розрахунки необхідної дози одержаного із плазми крові
Фактора ІХ (ракгіІХ) грунтуються на емпіричних спостереженнях, що, у середньому 1 МО рагІхХ на кг маси тіла підвищує активність плазматичного Фактора ІХ приблизно на 1 МоО/дл (1 95). На цій основі визначають необхідну дозу, використовуючи наступну формулу:
Необхідні одиниці - маса тіла (кг) х бажане підвищення Фактора ІХ (МоО/дл або 95 від норми) х 1 (МО/КГг на МО/дл)
Оскільки РІХЕс, наприклад, як описано в Прикладах і на Фігурі 1, має таке саме поступове відновлення як і рагіхХ (одмінне від такого у ВЕМЕРІХ"М), необхідна доза визначається за наведеною вище формулою, або трохи регулюється. Див. також у
Таблиці 26 особливі рекомендовані дози для різних варіантів лікування на вимогу. Для педіатричних пацієнтів, які застосовують раРгіІхХ, керівництво з дозування є таким самим, як і для дорослих. Однак педіатричні пацієнти можуть мати нижчий рівень поступового відновлення, а отже може виникнути необхідність регулювання дози в сторону збільшення.
Терапевтичні дози, які можуть бути застосовані в способах винаходу, становлять 10-180, 20- 180 або 25-180 МО/кг, більш конкретно, кращі дози, для 6-10 денного інтервалу між введенням лікарського засобу є наступними: приблизно 25-110, приблизно 30-110, приблизно 400-110, приблизно 50-110, приблизно 60-110, приблизно 70-110, приблизно 80-110, приблизно 90-110 і приблизно 100-110; приблизно 30-100, приблизно 30-90, приблизно 30-80, приблизно 30-70, 60 приблизно 30-60, приблизно 30-50, приблизно 30-40 МО/кг; приблизно 40-110, приблизно 50-
100, приблизно 60-90 і приблизно 70-80 МоО/кг; приблизно 40-50, приблизно 50-60, приблизно 60-70, приблизно 70-80, приблизно 80-90, приблизно 90-100 і приблизно 100-110 Мо/кг; приблизно 25, приблизно 30, приблизно 35, приблизно 40, приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, приблизно 90, приблизно 95, приблизно 100, приблизно 105 і приблизно 110
МО/кг. 6-10 денний інтервал між введенням лікарського засобу включає тижневий інтервал між введенням лікарського засобу. Додаткові терапевтичні дози для 6-10 денного, наприклад, тижневого інтервалу між введенням лікарського засобу , становлять 20-50, 20-100 ії 20-180
МО/кг, більш конкретно, кращі дози для 6-10 денного, наприклад, тижневого інтервалу між введенням лікарського засобу є наступними: приблизно 20-110, приблизно 20-100, приблизно 20-90, приблизно 20-80, приблизно 20-70, приблизно 20-60, приблизно 20-50, приблизно 20-40, приблизно 20-30, приблизно 20-40 і приблизно 20 кг/кг. Див. також Приклади 10 і 11. Дози можуть бути нижчими за 20 МО/кг, якщо вони є ефективними для даного пацієнта, наприклад, приблизно 10, приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17, приблизно 18 або приблизно 19 МоО/кг.
Кращі терапевтичні дози, для 9-18 денного інтервалу між введенням лікарського засобу, наприклад, для введення двічі на місяць є наступними: приблизно 50-180, приблизно 600-180, приблизно 70-180, приблизно 80-180, приблизно 90-180, приблизно 100-180, приблизно 110- 180, приблизно 120-180, приблизно 130-180, приблизно 140-180, приблизно 150-180, приблизно 160-180 і приблизно 170-180 МО/кг; приблизно 90-170, приблизно 90-160, приблизно 90-150, приблизно 90-140, приблизно 90-130, приблизно 90-120, приблизно 90-110 і приблизно 90-100
МО/кг; приблизно 100-170, приблизно 110-160, приблизно 120-150, і приблизно 130-140 МО/кг; приблизно 90-100, приблизно 100-110, приблизно 110-120, приблизно 120-130, приблизно 130- 140, приблизно 140-150, приблизно 150-160 і приблизно 160-170 МоО/кг; приблизно 60, приблизно 70, приблизно 80, приблизно 90, приблизно 95, приблизно 100, приблизно 105, приблизно 110, приблизно 115, приблизно 120, приблизно 125, приблизно 130, приблизно 135, приблизно 140, приблизно 145, приблизно 150, приблизно 155, приблизно 160, приблизно 165, приблизно 170, приблизно 175 і приблизно 180 МоО/кг. Див. також Приклади 10 і 11.
Кращі терапевтичні дози становлять 10-50, 15-100, 20-100, 20-50, 50-100, 10, 20, 40, 501100
Зо МО/кКг.
Терапевтична доза може становити приблизно 20-50, приблизно 20-100, приблизно 20-180, 25-110, приблизно 30-110, приблизно 400-110, приблизно 50-110, приблизно 60-110, приблизно 70-110, приблизно 80-110, приблизно 90-110, приблизно 100-110, приблизно 30-100, приблизно 30-90, приблизно 30-80, приблизно 30-70, приблизно 30-60, приблизно 30-50, приблизно 30-40
МО/кг, приблизно 40-110, приблизно 50-100, приблизно 60-90, приблизно 70-80 МоО/кг, приблизно 40-50, приблизно 50-60, приблизно 60-70, приблизно 70-80, приблизно 80-90, приблизно 90-100, приблизно 100-110 МоО/кг, приблизно 20, приблизно 25, приблизно 30, приблизно 35, приблизно 40, приблизно 45, приблизно 50, приблизно 55, приблизно 60, приблизно 65, приблизно 70, приблизно 75, приблизно 80, приблизно 85, приблизно 90, приблизно 95, приблизно 100, приблизно 105 і приблизно 110 МоО/кг. Такі дози кращі для інтервалів між введенням дози, які дорівнюють приблизно 6-10, приблизно 7-10, приблизно 7-9, приблизно 7-8, приблизно 8-10, приблизно 9-10, приблизно 6-7, приблизно 8-9, приблизно 6, приблизно 7, приблизно 8, приблизно 9 і приблизно 10 днів, і один раз на тиждень.
Терапевтична доза може становити приблизно 90-180, приблизно 100-180, приблизно 110- 180, приблизно 120-180, приблизно 130-180, приблизно 140-180, приблизно 150-180, приблизно 160-180 і приблизно 170-180 МО/кг. Доза може становити приблизно 90-170, приблизно 90-160, приблизно 90-150, приблизно 90-140, приблизно 90-130, приблизно 90-120, приблизно 90-110 і приблизно 90-100 МО/кг. Доза може становити приблизно 100-170, приблизно 110-160, приблизно 120-150 і приблизно 130-140 МоО/кг. Доза може становити приблизно 90-100, приблизно 100-110, приблизно 110-120, приблизно 120-130, приблизно 130-140, приблизно 140- 150, приблизно 150-160 і приблизно 160-170 МоО/кг. Доза може становити приблизно 90, приблизно 95, приблизно 100, приблизно 105, приблизно 110, приблизно 115, приблизно 120, приблизно 125, приблизно 130, приблизно 135, приблизно 140, приблизно 145, приблизно 150, приблизно 155, приблизно 160, приблизно 165, приблизно 170, приблизно 175 і приблизно 180
МО/кг. Такі дози є кращими для інтервалу між введенням лікарського засобу, який дорівнює приблизно 9-18, приблизно 9-17, приблизно 9-16, приблизно 9-15, приблизно 9-14, приблизно 9- 13, приблизно 9-12, приблизно 9-11, приблизно 9-10, приблизно 10-18, приблизно 11-18, приблизно 12-18, приблизно 13-18, приблизно 14-18, приблизно 15-18, приблизно 16-18, приблизно 17-18, приблизно 10-11, приблизно 11-12, приблизно 12-13, приблизно 13-14, 60 приблизно 14-15, приблизно 15-16 і приблизно 16-17 днів, приблизно 9, приблизно 10,
приблизно 11, приблизно 12, приблизно 13, приблизно 14, приблизно 15, приблизно 16, приблизно 17 і приблизно 18 днів, один раз на місяць і двічі на місяць (кожні два тижні).
Краща терапевтична доза і інтервали між введенням лікарського засобу є наступними: 20
МО/кг один раз на тиждень, 40 МоО/кг кожні 10 днів, і 100 МоО/кг кожні два тижні (двічі на місяць).
Додаткові комбінації дози і інтервалу між введенням дози включають: дозу щонайменше приблизно 50 МоО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу щонайменше приблизно 7 днів, дозу щонайменше приблизно 100 МоО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу щонайменше приблизно 9 днів, дозу щонайменше приблизно 100 МоО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу щонайменше приблизно 12 днів, дозу щонайменше приблизно 150 МО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу щонайменше приблизно 14 днів, дозу 20-50 або 20-100 МО/кг і зазначений інтервал між введенням лікарського засобу являє собою один раз на тиждень, дозу 20-50 МО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу 7 днів, дозу 50-100 МО/кг і інтервал між введенням лікарського засобу 10-14 днів, або дозу 100-150 МО/Кгі інтервал між введенням лікарського засобу 14-16 днів. Кращі комбінації інтервалу між введенням лікарського засобу і дози також включають 10-50 МО/кг для 7 днів, 15-І 00 Мо/кг для 10-13 днів, 50-150 МоО/кг для 14-15 днів, 10-30 МоО/кг для 7 днів, 15-50 МоО/кг для 10 днів, 20-70
МО/кКг для 1 1 днів, 25-85 МО/кг для 12 днів, від ЗО до 100 МоО/кг для 13 днів, від 40 до 125 МО/кг для 14 днів, і 50-150 МО/кг для 15 днів. "Варіант" при використанні тут означає полінуклеотид або поліпептид, відмінний від вихідного полінуклеотиду або поліпептиду, але такий, що зберігає його основні властивості, наприклад коагулюючу активність Фактора ЇХ або Ес ( ЕсВп-зв'язувальну) активність. Звичайно варіанти в цілому подібні, а на багатьох ділянках ідентичні вихідним полінуклеотидам або поліпептидам. Варіанти включають фрагменти полінуклеотидів і поліпептидів, делеції, вставки і модифіковані версії вихідних поліпептидів.
Варіантні полінуклеотиди можуть містити або ж, альтернативно, складатися з послідовності нуклеотидів, щонайменше на 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 906 або 9995 ідентичної, наприклад, кодуючій послідовності нуклеотидів в ЗЕО ІЮ МО:1 або З (ділянка Фактора ІХ, ділянка Ес, окремо або разом) або відповідного їй комплементарного ланцюга, послідовності нуклеотидів, що кодує відомі мутантні й рекомбінантні Фактор ІЇХ або Ес, як ті, що розкриті в
Зо процитованих тут публікаціях і патентах, або у відповідному їй комплементарному ланцюзі, послідовності нуклеотидів, що кодує поліпептид 5ЕО ІЮО МО:2 або 4 (ділянка Фактора ІХ, ділянка
Ес, окремо або разом), і/або полінуклеотидним фрагментам будь-якої з цих нуклеїнових кислот (наприклад, їх фрагментам, описаним тут). Полінуклеотиди, які гібридизуються із цими молекулами нуклеїнових кислот за точних умов гібридизації або за менш точних умов, також включаються як варіанти, так само як і поліпептиди, які кодуються цими полінуклеотидами у випадку їх функціональності.
Варіантні поліпептиди можуть містити, або, альтернативно, складатися з послідовності амінокислот, яка є щонайменше на 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичною, наприклад, послідовності поліпептидів, показаній в 5ЕО ІЮ МО:2 або 4 (ділянка Фактора ІХ, ділянка Ес, окремо або разом), і/або поліпептидним фрагментам будь-якого із цих поліпептидів (наприклад, описаним тут фрагментам). Під нуклеїновою кислотою, що містить послідовність нуклеотидів, наприклад, щонайменше на 95 95, " ідентичну" еталонній послідовності нуклеотидів мають на увазі, що послідовність нуклеотидів у нуклеїновій кислоті є ідентичною еталонній послідовності, за тим виключенням, що ця послідовність нуклеотидів може включати до п'яти точкових мутацій на кожні 100 нуклеотидів еталонної послідовності нуклеотидів. Інакше кажучи, щоб одержати нуклеїнову кислоту, що містить послідовність нуклеотидів, щонайменше на 95 95 ідентичну еталонній послідовності нуклеотидів, до 595 нуклеотидів в еталонній послідовності можуть бути видалені або заміщені іншими нуклеотидами, або нуклеотиди в кількості до 595 від загального числа нуклеотидів в еталонній послідовності можуть бути вставлені в еталонну послідовність. Запитуваною послідовністю може бути, наприклад, ціла послідовність, показана в
ЗЕО ІОЮО МО: 1 або 3, ОРЕ (відкрита рамка зчитування) або будь-який фрагмент, визначений як описано тут.
На практиці, чи є будь-яка конкретна молекула нуклеїнової кислоти або поліпептиду щонайменше на 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 99 95 ідентичною послідовності нуклеотидів або поліпептиду даного винаходу, можна встановити конвенціональним шляхом з використанням відомих комп'ютерних програм. Кращий спосіб установлення кращого загального збігу між запитуваною послідовністю (еталонною або вихідною послідовністю) і досліджуваною послідовністю, також відомий як глобальне вирівнювання послідовностей, може бути вибраний за допомогою комп'ютерної програми ГА5ТОВ, на основі алгоритму Вгийад еї аї. бо (Сотр. Арр. Віозсі. (1990) 6:237-245), що включений в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. У вирівнюванні послідовностей, як запитувана, так і досліджувана послідовності є послідовностями ДНК. Послідовність РНК можна порівняти шляхом конвертації 0 в Т. Результат вищезазначеного глобального вирівнювання послідовностей дається в процентному співвідношенні. Кращі параметри, застосовувані у вирівнюванні послідовностей ДНК за допомогою РАБТОВ для обчислення процентного співвідношення: Матриця:Одинична, к- кратний-4, Поправковий коефіцієнт за неузгодження-1, Поправковий коефіцієнт за зшивання - 30, Довжина групи рандомізації-0, Поріг-1, Поправковий коефіцієнт за геп - 5, Поправковий коефіцієнт розміру гепа 0,05, Розмір вікна - 500 або довжині досліджуваної послідовності нуклеотидів, якщо вона є коротшою.
Якщо досліджувана послідовність коротше запитуваної послідовності внаслідок делецій 5' або 3", але не внаслідок внутрішніх делецій, результати необхідно коректувати вручну. Це тому, що програма РГАЗТОВ не враховує усікання 5'і 3' досліджуваної послідовності при обчисленні процентного співвідношення. Для досліджуваних послідовностей, усічених на закінченнях 5' або
З відносно запитуваної послідовності, процентне співвідношення коректується шляхом обчислення кількості основ у запитуваній послідовності, які є 5 і 3 у досліджуваній послідовності, і які не збігаються / вирівняні, у відсотках від загального числа основ у запитуваній послідовності. Чи збігається / вирівняний нуклеотид, визначають за результатами
ЕАБТОВ вирівнювання послідовностей. Цей відсоток потім віднімається із процентного співвідношення, обчисленого вищезгаданою програмою ЕАЗТОВ з використанням установлених параметрів, для одержання підсумкового значення процентного співвідношення. Це відкоректоване значення і використовується для цілей даного винаходу. Тільки основи, розташовані за межами основ 5' і 3 досліджуваної послідовності, згідно з показаннями вирівнювання БАБЗТОВ, які вне збігаються / вирівняні із запитуваною послідовністю, враховуються з метою ручного виправлення значення процентного співвідношення.
Наприклад, досліджувана послідовність із 90 основ вирівняна із запитуваною послідовністю з 100 основ для визначення процентного співвідношення. Делеції присутні на закінченні 5' досліджуваної послідовності, і отже, вирівнювання ЕАЗТОВ не демонструє збігу / вирівнювання перших 10 основ на закінченні 5'. Ці 10 непарних основ являють собою 10 95 послідовностей (кількість основ, що не співпали, на закінченнях 5' й
З / загальна кількість основ у в запитуваній послідовності), отже, 10 95 віднімаються зі значенням процентного співвідношення, обчисленого за допомогою програми ЕА5ТОВ. Якщо інші 90 основ збігаються ідеально, підсумкове процентне співвідношення буде становити 90 95.
В іншому прикладі досліджувана послідовність із 90 основ порівнюється із запитуваною послідовністю з 100 основ. Цього разу делеції є внутрішніми делеціями, так що відсутні основи на 5 або 3" досліджуваній послідовності, які не збігаються / вирівняні із запитуваною. У такому випадку, процентне співвідношення, обчислене за допомогою ЕА5ТОВ, вручну не коректується.
Тільки для основ 5' і 3' досліджуваної послідовності, які не збігаються / вирівняні із запитуваною послідовністю, виконується ручна корекція. Ніякі інші ручні корекції не потрібні для цілей даного винаходу.
Під поліпептидом, що містить послідовність амінокислот, "їдентичну" запитуваній послідовності амінокислот даного винаходу щонайменше, наприклад, на 95 95, мається на увазі, що послідовність амінокислот досліджуваного поліпептиду ідентична запитуваній послідовності, за тим виключенням, що досліджувана послідовність поліпептидів може включати до п'яти змін амінокислот на кожні 100 амінокислот запитуваної послідовності амінокислот. Інакше кажучи, щоб одержати поліпептид, що містить послідовність амінокислот, щонайменше на 95 95 ідентичну запитуваній послідовності амінокислот, до 5 905 амінокислотних залишків у досліджуваній послідовності можуть бути вставлені, видалені або замінені іншими амінокислотами. Такі зміни в еталонній послідовності можуть бути присутнім на аміно- або карбокси-термінальних позиціях еталонної послідовності амінокислот або де завгодно між цими термінальними позиціями, поодинці серед залишків в еталонній послідовності або у вигляді однієї або більше злитих груп у межах еталонної послідовності.
На практиці, чи є будь-який конкретний поліпептид щонайменше на 85 95, 90 95, 95 95, 96 95, 97 95, 98 95 або 9995 ідентичним, наприклад, послідовності амінокислот в 5ЕО ІЮ МО:2 (ділянка
Фактора ІХ, ділянка Ес, окремо або разом) або 4, або відомій поліпептидній послідовності
Фактора ЇХ або Ес, можна встановити конвенціональним шляхом з використанням відомих комп'ютерних програм. Кращий спосіб встановлення кращого загального збігу між запитуваною послідовністю (еталонною або початковою послідовністю) і досліджуваною послідовністю, також відомий як глобальне вирівнювання послідовностей, може бути обраний за допомогою комп'ютерної програми ЕАЗТОВ, заснованої на алгоритмі Вгиад еї аї. (Сотр. Арр. Віозсі. (1990) бо 6:237-245), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. У вирівнюванні послідовностей як запитувана, так і досліджувана послідовності є послідовностями нуклеотидів, або як запитувана, так і досліджувана послідовності є послідовностями амінокислот. Результат вищезазначеного глобального вирівнювання послідовностей дається в процентному співвідношенні. Кращі параметри, застосовувані у вирівнюванні амінокислот за допомогою
ЕАЗТОВ для обчислення процентного співвідношення: Матриця-РАМ 0, к-кратний-2,
Поправковий коефіцієнт за неузгодження -1, Поправковий коефіцієнт за зшивання - 20,
Довжина групи рандом ізації-О, Поріг-1, Розмір вікна-довжина послідовності, Поправковий коефіцієнт за геп - 5, Поправковий коефіцієнт розміру гепа 0,05, Розмір вікна - 500 або довжині досліджуваної послідовності нуклеотидів, якщо вона є коротшою.
Якщо досліджувана послідовність коротше запитуваної послідовності внаслідок М- або С- кінцевих делецій, але не внаслідок внутрішніх делецій, результати повинні бути відкоректовані вручну. Це тому, що програма ЕАБТОВ не враховує М- і С-кінцеві усікання досліджуваної послідовності при обчисленні підсумкового процентного співвідношення. Для досліджуваних послідовностей, усічених на М- ії С-кінцях відносно запитуваної послідовності, процентне співвідношення коректується шляхом обчислення кількості залишків у запитуваній послідовності, які є М- ї С-кінцевими в досліджуваній послідовності, і які не збігаються / вирівняні з відповідними досліджуваними залишками, у відсотках від загального числа основ у запитуваній послідовності. Чи збігається / вирівняний залишок, визначається за результатами вирівнювання послідовностей ЕБАБТОВ. Цей відсоток потім віднімається із процентного співвідношення, обчисленого вищезгаданою програмою ЕАЗТОВ з використанням установлених параметрів, для одержання підсумкового значення процентного співвідношення. Це відкоректоване значення і використовується для цілей даного винаходу. Тільки залишки на М- і
С-кінцях досліджуваної послідовності, які не збігаються/вирівняні із запитуваною послідовністю, враховуються з метою ручного виправлення значення процентного співвідношення. Іншими словами, тільки позиції залишків у запитуваній послідовності, розташовані за межами найбільш віддалених М- і С-термінальних залишків досліджуваної послідовності.
Наприклад, досліджувана послідовність із 90 амінокислотних залишків вирівняна із запитуваною послідовністю з 100 амінокислотних залишків для визначення процентного співвідношення. Делеції присутні на М-кінці досліджуваної послідовності, і отже, вирівнювання
Зо ЕАЗТОВ не демонструє збігуу/ вирівнювання перших 10 залишків на М-кінці. Ці 10 непарних залишків являють собою 10 95 послідовності (число залишків, що не збіглися, на М- ії С-кінцях / загальне число залишків у запитуваній послідовності), отже, 10 95 віднімаються від значення процентного співвідношення, обчисленого програмою БАБЗТОВ. Якщо інші 90 залишків збігаються ідеально, підсумкове процентне співвідношення буде 90 95. В іншому прикладі, досліджувана послідовність із 90 залишків порівнюється із запитуваною послідовністю з 100 залишків. Цього разу делеції є внутрішніми делеціями, тому на М- і С-кінцях досліджуваної послідовності відсутні основи, які не збігаються / вирівняні із запитуваною послідовністю. У такому випадку, процентне співвідношення, обчислене за допомогою програми ЕА5ТОВ, вручну не коректується. Тільки для позицій залишків, розташованих за межами М- і С-кінців досліджуваної послідовності, згідно з показаннями вирівнювання ЕА5ТОВ, які не збігаються / вирівняні із запитуваною послідовністю, виконується ручна корекція. Ніякі інші ручні корекції для цілей даного винаходу не потрібні .
Варіанти полінуклеотиду можуть містити зміни у кодуючих ділянках, некодуючих ділянках, або в обох. Найбільш кращі варіанти полінуклеотиду, що містять зміни, які створюють мовчазні заміни, вставки або делеції, але не змінюють властивості й активність поліпептиду, що кодується. Кращими варіантами нуклеотиду є створені за допомогою мовчазної заміни внаслідок дегенерації генетичного коду. Крім того, кращими варіантами також є ті, у яких 5-10, 1-5, або 1-2 амінокислоти замінені, видалені або вставлені в будь-якій комбінації. Варіанти полінуклеотиду можуть бути створені з різною метою, наприклад, для оптимізації експресії кодонів для конкретного хазяїна (заміна кодонів в людській ІРНК на кращі для бактеріального хазяїна, такого як БЕ. сої).
Природні варіанти називаються "алельні варіанти" і відносяться до однієї з декількох різних форм гена, що займають даний локус на хромосомі організму (Сепез ІІ, І ем/іп, В., ейд., доп
УмМіеу 5 Боп5, Мем ХогКк (1985)). Ці алельні варіанти можуть різнитися на рівні полінуклеотидів і/або на рівні поліпептидів і включаються в даний винахід. Альтернативно, неприродні варіанти можуть бути одержані за допомогою способів мутагенезу або шляхом прямого синтезу.
Використовуючи відомі способи білкової інженерії і технології рекомбінантної ДНК, можна створювати варіанти з метою покращення або зміни характеристики поліпептидів. Наприклад, одна або більше амінокислот можуть бути видалені з М-кінця або С-кінця виділеного білка без бо значних втрат у біологічній функції. Автори роботи Коп еї аї., У. ВіоЇї. Спет. 268: 2984-2988
(1993), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання, відзначали, що варіанти білка К.СЕ зберігали гепарин-зв'язувальну активність навіть після видалення 3, 8, або 27 амінотермінальних амінокислотних залишків. Подібним же чином, гама інтерферон демонстрував підвищену до 10 раз активність після видалення 8-Ю амінокислотних залишків з карбокси-кінця цього білка. (Ообеїї еї аї., У. ВіоФесппоїоду 7:199-216 (1988), включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.)
Більше того, існує достатня кількість даних, які демонструють, що варіанти нерідко зберігають біологічну активність, подібну до активності природного білка. Наприклад, сауїе і співробітники в роботі (9. ВіоЇ. Спет. 268:22105-22111 (1993), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання) провели розширений мутаційний аналіз людського цитокіну
І -їа. Вони використовували випадковий мутагенез для генерації більше 3500 незалежних мутантів ІІ-Іа, які в середньому містили по 2,5 зміни амінокислот на варіант по всій довжині молекули. Множинні мутації були розглянуті на кожній з можливих амінокислотних позицій.
Дослідники виявили, що «більша частина молекули може бути змінена без особливого впливу на зв'язувальну або біологічну активність») (Див. розділ Реферат) Фактично, тільки 23 унікальні послідовності амінокислот з більш ніж 3500 досліджених послідовностей нуклеотидів продукували білок, який значно відрізнявся за своєю активністю від дикого типу.
Як зазначено вище, варіанти поліпептидів включають модифіковані поліпептиди.
Модифікації включають ацетилування, ацилювання, АдДФф-рибозилювання, амідування, ковалентне приєднання флавіну, ковалентне приєднання гемової групи, ковалентне приєднання нуклеотиду або похідного нуклеотиду, ковалентне приєднання ліпіду або похідного ліпіду, ковалентне приєднання фосфотидилінозитолу, перехресне зшивання, циклізацію, формування дисульфідних зв'язків, деметилювання, формування ковалентних зшивок, формування цистеїну, формування піроглютамату, формілювання, гама- карбоксилювання, глікозилювання, формування глікозилфосфатидилінозитолу, гідроксилювання, йодування, метилювання, міристіолювання, окиснення, пегілювання, протеолітичний процесінг, фосфорилювання, пренілювання, рацемізацію, селеноіїлювання, сульфатування, тРНК-опосередкована вставка амінокислот у білки, як аргинілування, і убік вітинування.
Термін "приблизно" застосовується тут у значенні «приблизно», «округлено», «близько» або
Зо «у районі». Коли термін "приблизно" використовується в комбінації з областю числових значень, він модифікує цю область шляхом розширення її меж вище й нижче зазначених числових значень. У цілому, термін "приблизно" використовується тут для модифікації числового значення на величину в 1095, як угору, так і вниз (більше або менше).
Тепер, коли ми детально описали даний винахід, те ж саме можна повніше зрозуміти за допомогою посилання до нижченаведених прикладів, які включені сюди тільки з метою ілюстрації і не обмежують даний винахід. Всі наведені тут патенти і публікації включені повністю за допомогою посилання.
Приклад 1 Дослідження, вперше поставлене на людині (РіН від англ. йгеі-іп-питап)
Дослідження, вперше поставлене на людині, було відкритим, з ескалацією дози, Фаза 1/2 дослідженням для визначення безпечності, переносності й фармакокінетичних (РК) параметрів
ЕЇХЕс (рекомбінантний гібридний білок людського фактора ЇХ коагуляції). ЕІХЕс являє собою рекомбінантний гібридний білок, що містить людський фактор ЇХ згортання, з'єднаний з Ес доменом з людського дО. Гібридний білок експресується в людських ембріональних ниркових клітинах (НЕК. 293). Див. Приклад 3. РІХЕс розроблений для контролю й запобігання випадків крововиливу у пацієнтів з гемофілією В (вроджений дефіцит фактора ЇХ або хвороба
Кристмаса), включаючи контроль і запобігання кровотечі при хірургічних втручаннях. РІХЕсС являє собою рекомбінантний гібридний білок, що містить Фактор ІХ (РІХ) коагуляції і Ес домен людського антитіла (дО ізотип). Молекула РІХЕс являє собою гетеродимер з одним ланцюгом
РІХЕс (РІХЕс-5сє) і одним ланцюгом с (Бо-5с), зв'язаними разом за допомогою двох дисульфідних зв'язків у петльовій ділянці Ес. Див. Фігуру 1 і Таблицю 2.
Лікарський продукт гРІХЕс являє собою прозорий безбарвний розчин, призначений для внутрішньовенного (ВВ) введення. Продукт гРІХЕс поставляється в ампулах для одноразового використання об'ємом 10 мл в дозі 1000 МО на об'єм 5 мл. Лікарський продукт упаковується в скляні ампули типу І Ю5Р із бромбутиловими пробками і відривними простими алюмінієвими додатковими закупорювальними засобами. Лікарський продукт гРІХЕс містить 200 МО/мл в 10
ММ натрій-фосфатному буфері рН 7,0 з додаванням 145 мМ Масі і 0,1 95 полісорбату 20.
Розчин гРІХЕс не слід розбавляти.
Дизайн дослідження. Раніше проліковані пацієнти з важкою гемофілією В, загальною кількістю 14 людей, були включені в дослідження і проліковані РІЇХЕс шляхом внутрішньовенної бо (ВВ) інфузії протягом приблизно 10 хвилин. У дослідженні оцінювались шість дозових рівнів, 1;
5; 12,5; 25; 50 ії 100 МоО/кг. Один пацієнт на дозовий рівень був включений у дослідження дозових рівнів 1; 5; 12,5 і 25 МО/кг, і щонайменше три пацієнта, що підлягають оцінюванню були включені в дослідження дозового рівня 50 і 100 МО/кг.
Після скринінгу (призначеного протягом 14 днів БІХЕс дози) почався період лікування пацієнтів. Період лікування для кожного дозового рівня включав одну дозу РІХЕс (День 1) до завершення 72-годинного періоду спостереження безпечності (3 дня) для дозових рівнів 1 і 5
МО/кг або до моменту відбору останньої проби РК для пацієнтів у випадку дозових рівнів від 12,5 до 100 МоО/кг (приблизно 10 днів). Пацієнти, проліковані дозами 1; 5; 12,5 або 25 МО/кг були включені в дослідження і проліковані послідовним способом, починаючи з дози 1 МоО/кг.
Пацієнти, які одержували дозу 50 МО/кг, не одержували більше лікування в той же день, і щонайменше один день розділяв введення дози. Після лікування пацієнтів дозою 50 МоО/кг, починалось лікування пацієнтів дозою 100 МО/кг.
Період після лікування являв собою 30-денніий період спостереження за безпечністю, який починався від дня, коли пацієнт одержував дозу РІХЕс, і частково збігався з періодом лікування з того моменту, коли пацієнти проходили необхідне для дослідження оцінювання, таке як відбір проб для РК, протягом цього періоду часу.
У пацієнтів, яким були призначені дозові рівні від 12,5 до 100 МО/кг, відбирали зразки крові для оцінювання РІЇХ активності й РІХЕс концентрації. Зразки крові відбирали безпосередньо перед введенням РІХЕс; через 15 хвилин після закінчення інфузії; і через 1, 3, 6, 9, 24, 48, 72, 96, 120, 168 і 240 годин після закінчення інфузії або доти, доки досягались базові рівні РІХ.
Якщо у пацієнта продовжували спостерігати рівні ГРІХ вище базового в часовій точці 240-годин (День дослідження 11), зразки брали через 288 годин (День дослідження 13) і знову через 336 годин (День дослідження 15), якщо рівень ГРІХ був вище базового на День 13 Дослідження.
Пацієнт 10 одержав ВЕМЕРІХ "М лікування кровотечі перед призначеним відбором РІХЕсС зразка через 216 годин після введення дози. Отже, РІХЕс активність і дані щодо антигену через 216 год. і в наступних точках часу були виключені з аналізу. Не відбулося додаткових відхилень, які, як вважається, могли би вплинути на попередні результати аналізу в ланому дослідженні.
Для антигену Фактора ІХ фармакокінетичні аналізи були проведені для спостережуваної концентрації РІХЕс проти часових даних після ВВ інфузії РІХЕс окремому пацієнту. Первинний
Зо аналіз був проведений з використанням модель-залежної методології. Дані концентрації РІХЕс були оброблені комп'ютером для двокомпартментної відкритої моделі з елімінацією із центрального компартмента з використанням визначених користувачем оцінок первинного параметра для розрахунків значень вихідного параметра. Були згенеровані У/пМопіїп оцінені константи мікроскопічного ступеня й дані і концентрації РІХЕс були оцінені за допомогою функції 1 устах мта3, Спостережувані дані для двох пацієнтів (наприклад, пацієнти 5 і 6) були недостатньо описані двокомпартментною моделлю. Тому для цих двох пацієнтів був проведений модель-незалежний аналіз із використанням УмМіпМопіїп некомпарментного аналізу
ВВ-інфузії моделі входу (лінійне правило трапецій для АОС розрахунків). Для некомпарментного аналізу півперіод був розрахований за бета фазою з використанням точок даних, які описують термінальне логарифмічно-лінійне зниження регресії. Мінімум три точки використовувалися для опису фази елімінації. Це відбулося приблизно між 4 і 14 днями. Для РК аналізу антигену були використані "мг/кг" дозові еквіваленти. Ці значення були визначені на основі специфічної активності РІХЕс в дозі 60,2 МО/мг. Фактичні часові точки відбору проб, дози й тривалості інфузії були використані для розрахунків. Номінальні часові точки відбору проб і дози були використані для створення таблиць і фігур концентрація-час. Представлені індивідуальні й середні РК параметри і описова статистика. Формальний статистичний аналіз не був проведений, оскільки дозовий діапазон і число пацієнтів у кожній когорті були занадто малими для значущого аналізу.
Для активності Фактора ІХ спосіб віднімання базового рівня був застосований до активності в порівнянні з часовим профілем відповідно до дерева розв'язків віднімання базового рівня (Фігура 4). Значення активності « 195 були визначені за 1 МО/дл для загасання до базового рівня. Часові точки перед введенням дози для цілей розрахунків приймали за нуль. Крім того, скоректовані за базовим рівнем дані активності були округлені в точках часу, що представляло повернення до базових рівнів. Фармакокінетичний аналіз був проведений для РіІХ-активності з відніманням базового рівня в порівнянні з часовими точками, одержаними після введення РІХЕс шляхом ВВ інфузії. Модель-залежне оцінювання використовували для аналізу дозових груп ВВ- інфузії. Дані з відніманням базового рівня були оброблені за допомогою комп'ютера для двокомпартментної відкритої моделі з елімінацією із центрального компартмента з використанням УМіпМопіїп-визначених меж параметрів для розрахунків значень вихідного бо параметра. Були сгенеровані М/пМопіїп оцінені константи мікроскопічного ступеня й дані і концентрації РІХЕс були оцінені за допомогою функції 1/7 аг Ута)9, Фактичні часові точки відбору проб, дози й тривалості інфузії були використані для розрахунків. Номінальні часові точки відбору проб і дози були використані для створення таблиць і фігур концентрація-час.
За відсутності фактичних даних, активність через 168 год. після введення дози (СІб8) і час до 1 МО/дл вище базового рівня (ТВІ Р1) гРІХЕс були одержані з використанням згенерованих
МуіпМопіїпй констант мікроскопічного ступеня для моделювання рівня активності РІХЕс у порівнянні з часовими даними. Індивідуальні й середні РК параметри і описова статистика представлені в цьому Прикладі. Формальний статистичний аналіз не був проведений, оскільки дозовий діапазон і число пацієнтів у кожній когорті були занадто малими для значущого аналізу.
Результати фармакокінетики РІХЕс антигену показали, що концентрації РІХЕс у плазмі крові різко зростали після швидкої ВВ інфузії РІХЕс, із середніми (550) Стах значеннями 1670 (п-1), 2730 (п-1), 7510 ж 2480 і 15400 я 3960 нг/мл для 12,5; 25; 50 і 100 МО/кг номінальних дозових рівнів, відповідно, і були досягнуті протягом першої півгодини для всіх пацієнтів. Усі РІХЕс- проліковані пацієнти мали залежнне від дози зростання системного РІХЕс експонування в плазмі ( як оцінювалося за Стах і АОСІМЕ)-Хоча і обмежене одним оцінюваним пацієнтом з номінальною дозою 12,5 і 25 МО/кг, спостережуване збільшення як Стах, так і АОСІМЕ було обгрунтовано пропорційно дозі в оціненому дозовому діапазоні. (Таблиця З демонструє середню концентрацію РІХЕс антигену для окремих пацієнтів і груп у співставленні з часовими даними; розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта. Таблиця 4 демонструє середні сумарні дані РК РІХЕс антигену окремих пацієнтів і групові, розсортовані за номінальною дозою, фактичною дозою, "мг/кг" еквівалентною дозою і номером пацієнта, демонструє середні сумарні дані РК РІХЕс антигену окремих пацієнтів і групові, розсортовані за номінальною дозою, фактичною дозою, "мг/кг" еквівалентною дозою і номером пацієнта, і див. Таблицю 11.)
Концентрації РІХЕс у плазмі крові знижувалися за біекспонентою після короткої ВВ інфузії.
Періоди напіввиведення як значень розподілення (альфа), так і елімінації (бета), як видно, були незалежними від дози в інтервалі доз, оцінених за періодами напіввиведення альфа і бета у окремого пацієнта в інтервалі від 9,79 до 21,2 годин і від 71,0 до 140 годин, відповідно. Середні періоди напіввиведення альфа (4503) для 50 і 100 МО/кг номінальних дозових рівнів становили 13,1 ж 4,77 і 12,1 я 2,33 години, відповідно. Середні періоди напіввиведення бета (5503) для 50 і 100 МО/кг номінальних дозових рівнів становили 110 5 26,5 і 95,8 хз 11,1 годин, відповідно. Крім того, були визначені первинні значення параметра РК для СІ, М55, і МКТ і, у цілому, всі, як видно, були незалежними від дози в інтервалі доз, які одержали оцінку. Як показано, ця оцінка обмежена даними по одному пацієнту на 12,5 і 25 МО/кг номінальних дозових рівнях (Таблиця 12 і Фігури2, 7 і 8.)
Крім того, середні СІ значення становили 2,28 ж 0,374 і 2,11 зт 0,464 мл/год/кг для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг,, відповідно. Середні У55 значення становили 259 ж 78,5 і 238 ж 52,2 мл/кг для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг, відповідно. Крім того, середні МКТ значення становили 112 5 21,5 і 114 хз 17,1 год. для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг.
Результати для скоректованої за базовим рівнем фармакокінетичної активності РІХЕсС показали, що РІХЕс активність різко зросла після короткої ВВ інфузії РІХЕс, із середніми (5-50) модель-прогнозованими Стах значеннями 11,9 (п-1), 19,9 (п-1), 41,6 з 8,97 і 98,2 ж 8,21 МО/дл для номінальних дозових рівнів 12,5, 25, 50 і 100 МоО/кг, відповідно, і була досягнута протягом першої півгодини для всіх пацієнтів. (У Таблиці 5 показана середня скоректована за базовим рівною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта. У Таблиці 6 показані сумарні РК дані середньої РБІХЕс активності окремих пацієнтів і групи; розподілені за номінальною дозою, фактичною дозою, "мг/кг" еквівалентною дозою і номером пацієнта.)
Всі проліковані РІХЕс пацієнти мали залежне від дози зростання РІХ активності (у порівнянні з базовою відповіддю перед введенням дози). Хоча і обмежене тим, що оцінювався тільки один пацієнт при номінальних дозових рівнях 12,5 і 25 МО/кг, спостережуване зростання як Стах, так і
АШбСіме було обгрунтовано пропорційним дозі всередині оцінюваного дозового діапазону. (Таблиці 6, 9 ї 13 ї Фігури З і 5.) (0137) Після закінчення інфузії зниження скоректованої за базовим рівнем РІХ активності демонструвало біекспоненційний спад; характеризувалося швидкою фазою розподілення (альфа), за якою ішла лінійна логарифмічна фаза елімінації (бета). Під час альфа-фази ступінь зменшення РІХЕс активності варіювала зі значеннями півперіоду альфа у окремих пацієнтів від 0,140 до 16,6 годин. Видиме залежне від дози зростання середніх значень півперіоду альфа було змішане у одного пацієнта при номінальних дозових рівнях 12,5 і 25 МО/кг.. Напроти, значення півперіоду елімінації (бета), очевидно, є бо незалежним від дози при дозовому діапазоні зі значеннями бета півперіоду у окремих пацієнтів в діапазоні від 42,1 до 67,4 годин при дозовому діапазоні від 25 до 100 МО/кг. Хоча, півперіод елімінації, що одержав оцінку і був описаний у пацієнта 1, який одержав лікування 12,5 МО/кг
ГЕЇХЕс, не ввійшов у сумарну оцінку через те, що рівні ГРІХ у цього пацієнта детектувались тільки протягом періоду до 96 годин через укорочену термінальну фазу і сприяли недооцінці термінального півперіоду елімінації. Середні періоди напіввиведення бета (-50) для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг становили 52,1 хз 10,4 і 52,5 хз 10,1 годин, відповідно, і 52,5 ж 9,2 (діапазон 40-67,4) годин для комбінованих номінальних доз 25, 50 і 100 МО/кг (Таблиці 6, 8 і 13).
Крім того, були визначені первинні значення параметра РК для СІ, Мі, Мез і МЕТ і, у цілому, всі, очевидно, були незалежними від дози в оціненому діапазоні доз. Крім того, середні значення СІ становили 3,77 5 1,12 і 2,89 50,615 мл/год/кг для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг , відповідно, і 3,36 0,928 мл/год/кг для комбінованих номінальних доз 25, 50 і 100
МО/кг . (Таблиці 6, 8 і 13.)
Середні значення Ме5 становили 264 х 77,6 і 179 ж 31,1 мл/кг для номінальних дозових рівнів 50 ії 100 МО/кг , відповідно, і 226 т 69,8 мл/кг для комбінованих номінальних доз 25, 50, і 100
МО/кг. (Таблиці 6, 8 і 13). Крім того, середні значення МКТ становили 71,7 - 13,01 62,8 5 8,82 год. для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МоО/кг, відповідно, і 68,05 ж 11,16 год. для комбінованих номінальних доз 25, 50 і 100 МО/кг . (Таблиці 6, 8 і 13.)
На додаток до первинних РК параметрів, вторинні РК параметри (наприклад, С168, К- значення, ІМК і т.д.) були визначені для оцінки тривалості ефекту РІХЕс. Як очікувалося, спостерігалось залежне від дози зростання значень С168, ТВІ Р1, ТВІ РЗ ї ТВІ Р5. Напроти, К- значення й ІМК значення, як видно, були незалежними від дози в оціненому діапазоні доз. У повному дозовому діапазоні модель-прогнозовані й спостережувані К-значення окремих пацієнтів знаходились в діапазоні від 0,61 до 1,02 і від 0,62 до 1,17 МО/дл на МО/кг, відповідно.
Середні модель-прогнозовані К-значення для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МоО/кг становили 0,76 і 0,90 МО/дл на МО/кг, відповідно, і 0,821 ж 0,1387 (діапазон 0,61-1,02) МО/дл на 1 Мо/кг для комбінованих номінальних доз 25, 50 і 100 МО/кг. Середні модель-прогнозовані ІМК значення для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МоО/кг становили 34,5 і 35,1 95, відповідно.
Середні спостережувані К-значення для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг становили 0,86 і 1,02 МО/дл на МО/кг, відповідно, і 0,926 ж 0,1787 (діапазон 0,97-1,17) МО/дл на 1 МО/кг для комбінованих номінальних доз 25, 50 і 100 МО/кг. Середні спостережувані ІМК значення для номінальних дозових рівнів 50 і 100 МО/кг становили 39,2 і 39,895, відповідно. (Таблиці 6, 7, ві 133 Таблиця 7А-7В шоу7 демонструє вторинні сумарні дані РК активності БІХЕс у окремих пацієнтів і групове середнє; сортовані за номінальною дозою, фактичною дозою і номером пацієнта.
Кожний 1 МО/кг введеного шляхом інфузії ггІХЕс підвищував активність ГРІХ у плазмі крові на 0,93 х 0,18 Мо/дл у середньому, і це поступове відновлення (К значення) показувало слабку позитивну кореляцію з масою тіла (22-0,336, р-0,048) (Фігура 23).
Фармакокінетичні оцінки активності РІХЕс узгоджувалися з оцінками гРІХЕс антигену (наприклад, порівняйте Таблиці 13 ії 14). Крім того, спостерігалася відмінна кореляція між активністю гРІХЕс і рівнями антигену, що демонструє збереження активності гРЇХЕс іп мімо. (Фігура 9.) Крім того, у порівнянні з накопиченими даними по ВЕМЕРІХ "М (Мууеїй), гРІХЕс демонстрував (Таблиця 8) наступне:
Дозова лінійність від 25-100 МО/кг
З-кратне зростання 1/2 фета
З-кратне зростання середнього часу затримання 24 95 підвищене поступове відновлення в 2,5 рази знижений кліренс
РІХЕс являє собою рекомбінантний гібридний білок, який складається з РІХ, прикріпленого до Ес домену людського ІдсіІ. БІХЕс розроблений як версія РІХ із продовженою дією. Доклінічні дослідження з БІХЕс показали подовження періоду напіввиведення активності БІХ у порівнянні з ВЕМЕРІХ'"М, комерційно доступним рекомбінантним РІХ продуктом. Обгрунтуванням для цього дослідження була оцінка безпечності й РК РІХЕс у пацієнтів з важкою гемофілією В. Для цього дослідження 12 пацієнтів, що підлягали оцінюванню у віці від 18 до 76 років, підходили для оцінки РК. Кожний пацієнт одержав одне введення РІХЕс у номінальній дозі 12,5, 25, 50 або 100 МО/кг маси тіла шляхом внутрішньовенної інфузії протягом приблизно 10 хвилин. Зразки плазми крові для оцінки РК як на активність РІХЕс, так і на концентрації антигену, відбирали перед інфузією, а також протягом періоду часу до 14 днів після введення дози. В даному дослідженні були незалежно охарактеризовані РК як РІХЕс антигену, так і активності з використанням модель-залежних і 60 модель-незалежних способів.
РІХЕсС добре переносився після введення одиничних ВВ доз 12,5; 25; 50 і 100 МО/кг маси тіла. У цьому дослідженні не було доказів серйозних побічних ефектів, пов'язаних з лікарським засобом. У жодного пацієнта не були виявлені нейтралізуючі або зв'язувальні антитіла до
ГРІХЕс.
Апроксимоване пропорційне дозі зростання Стах і АОСімє спостерігалось як для РІХЕс антигену, так і для активності після введення доз від 12,5 до 100 МоО/кг, але М їі СІ були однаковими при всіх дозах. Ці результати показують, що ГІХЕсС антиген і активність демонстрували лінійний РК протягом оціненого дозового діапазону. Порівняно маленькі значення М параметра можуть означати, що РІХЕс входить у внутрішньо-тканинну рідину, але не проникає через клітинну мембрану у внутрішньоклітинні рідини.
Пікові концентрації в плазмі крові РІХЕс антигену й активності спостерігалися протягом 0,5 год. після закінчення інфузії й залишалися виявлюваними протягом декількох днів після введення дози. Свідчення зниженого кліренсу й пролонгованого періоду напіввиведення спостерігалися як для РІХЕс антигену, так і для активності.
Середній кліренс і кінцеві значення півперіоду елімінації, пов'язані з концентраціями РІХЕсС антигену в дозових рівнях 50 і 100 МО/кг, становили 2,28 і 2,11 мл/год/кг і 110 ї 95,8 годин, відповідно. Подібним чином, середній кліренс і кінцеві значення півперіоду елімінації, пов'язані з рівнями активності РІХЕс у тому ж дозовому діапазоні, становили 3,77 і 2,89 мл/год/кг і 521 і 52,5 годин, відповідно. Порівняння РК результатів РІХЕс активності, спостережуваних у даному дослідженні, з повідомленими РК для ВЕМЕРІХ "М активності (Зиттагу ої Ргодисії Спагасіегізіїс5 ої ВЕМЕРІХ М: 18 листопада, 2009) показало приблизно 3-кратне зменшення РІХЕс кліренсу і приблизно З3-кратне збільшення як РІХЕс півперіоду кінцевої елімінації, так і середнього часу знаходження в організмі в порівнянні з ВЕМЕРІТХ М,
Зі спостережуваними покращеннями РК, РІХЕс надасть пролонгований захист від кровотеч, дозволяючи знизити частоту ін'єкцій індивідуумам з гемофілією В. Грунтуючись на результатах цього дослідження, дозу гРІХЕсС можна вводити кожні два тижні або двічі на місяць із використанням доз 100 МоО/кг і щонайменше раз на тиждень із використанням більш низьких доз. Такий режим потребує введення ін'єкцій рідше. Крім того, використання гРІХЕс буде мати інші потенційні клінічні впливи, такі як: доступ до центральних вен; покращене дотримання
Зо схеми прийому лікарського засобу; зниження ушкоджень через кровотечі; і підвищений захист суглобів від кровотеч.
Приклад 2. В- ПРОТЯЖНА Фаза 1/2/3 дослідження
Це буде відкрите, багатоцентрове дослідження безпечності, фармакокінетики і ефективності рекомбінантного, довгодіючого коагулянту Фактора ІЇХ Ес гібрида (гРІХЕс) у профілактиці й лікуванні кровотечі у раніше пролікованих пацієнтів з важкою гемофілією В. Лікування РІХ продуктами, комерційно доступними на даний час, потребує введення дози 2-3 рази на тиждень. Продукт із пролонгованим періодом напіввиведення, у якого необхідний інтервал між введенням лікарського засобу продовжений до одного разу на тиждень або більше, медичне співтовариство визначило би значущим покращенням у лікуванні пацієнтів з важкою гемофілією.
Дозові рівні широко варіюють у клінічних профілактичних дослідженнях ГРІХ продуктів: повідомлювані дози варіюють від 10 до 171 МоО/кг (Коїй еї а!., Віоса 98:3600 (2001)) або від 40 до 100 МО/кг (МАЗБАС Кесоттепаацйоп 177, Майопа! Неторпіййа Еоипаайоп (Осії. 2006)). Крім того, мінімальні рівні ГРІХ активності під час профілактичного лікування у пацієнтів без клінічних ознак кровотечі прогнозуються в діапазоні між 0,2 і 3,8 МО/дл (Сагівзоп еї аї., Неторпіїйа 4:83 (1998)). Беручи до уваги індивідуальну варіабельність у пацієнта, індивідуалізовані дозові режими на основі клінічного статусу пацієнта є загальноприйнятою практикою.
Результати Фази 1/2а дослідження (Приклад 1), що оцінює безпечність і фармакокінетику однократної дози замороженої ліпідної лікарської форми гРІХЕс продемонстрували, що ліки добре переносяться в дозах у діапазоні від 1 до 100 МоО/кг і характеризація РК підтверджує декілька переваг у порівнянні з доступними на даний час способами лікування, а саме період напіввиведення й МКТ є в З рази довшими, ніж ті, про які повідомлялося раніше для ВЕМЕРІХ М (61 година порівняно з 19 годинами). Метою цього дослідження було визначити параметр РК подальшого оцінювання ліофілізованого гРІХЕс у людей, порівняти його з ВЕМЕРІХ "М РК параметром оцінок у людей, і продемонструвати ефективність ліофілізованого гРІХЕс для профілактики і лікування кровотечі й безпечності повторюваного введення його дози у попередньо пролікованих пацієнтів з важкою гемофілією В.
У дослідження увійшло чотири групи: низькодозовий профілактичний режим лікування (п-25), високодозовий профілактичний режим лікування (п-25), режим лікування за вимогою (п-20) і режим лікування при серйозних хірургічних втручаннях (п-5). Група низькодозового режиму включила РК підгрупу (п-16), що одержала дозу ВЕМЕРІХ М, після чого послідувало лікування гЕРІХЕс.
Першорядними цілями дослідження є наступні: оцінити безпечність і переносність гРІХЕс у всіх лікувальних групах; оцінити ефективність гРІХЕс у всіх лікувальних групах; і оцінити ефективність профілактики в порівнянні з терапією за вимогою (порівняння річного числа епізодів кровотечі між Групами 1 і 2 відносно режиму на вимогу Групи 3).
Другорядними цілями дослідження є наступні: порівняти оцінки параметра РК в гРІХЕс і
ВЕМЕРІХ "М: оцінити ефективність гГРІХЕс у групі лікування за вимогою і в хірургічній групі; оцінити і порівняти базові оцінки параметра РК в 'гРІХЕс і на Тижні 26 (5 1 тиждень) у підгрупі РК; оцінити реакцію пацієнтів на лікування у всіх групах; і оцінити споживання гРІХЕс у всіх групах.
Основні критерії включення:
Чоловіча стать, 12 років і більше, маса тіла щонайменше 40 кг
Діагностована гемофілія В (базовий рівень Фактора ІЇХ менше ніж або еквівалентний 2 95)
В анамнезі щонайменше 100 днів впливу будь-яким продуктом з Фактором ЇХ
Число тромбоцитів » 100000 клітин/мкл
ІМК (міжнародне нормалізоване співвідношення) х 1,40 як визначено за нормальним діапазоном лабораторії, що проводить тест
Сра4 число г 200 клітин/мкл
Основні критерії виключення:
Інгібітори Фактора ІХ в анамнезі
Дисфункція нирок або печінки
Діагностований інший дефект коагуляції, відмінний від гемофілії В
В анамнезі були випадки анафілаксії, пов'язаної з будь-яким ВВ веденням РГІХ або імуноглобуліну
Прийом системних імуносупресорних лікарських засобів (наприклад, системних кортикостероїдів; однак, НААКТ (високоактивна антиретровірусна терапія) дозволена)
Приклад 3. Виробництво РІХЕс в клітинах НЕК293
РІХЕсС був одержаний у стабільно трансфікованих НЕК293 клітинах, що містять експресійну касету для РІХЕс (нативний РІХ, з'єднаний прямо з Ес ділянкою) і експресійну касету для одного
Зо Ес. У клітини також була трансфікована експресійна касета РС5, яка являє собою ензим, що процесується, який надає можливість повного процесінгу ГРІХ пропептиду. Трансфіковані клітини росли в безсироватковому суспензійному середовищі, що містить вітамін К, і вони секретували три білки: РІХЕс дімер, РІХЕс мономер (один ланцюг РІХЕс і один ланцюг Ес), і Ес дімер. РІХЕС мономер ("РІХЕс") був очищений шляхом колоночної хроматографії (Білок А, Фрактогель ОЕАЕ, і ОО Сефароза псевдоафінне елюювання з низькою іонною силою Сасіг), і вірус був інактивований і профільтрований для введення пацієнтам, що є людьми. Також див. Реїег5 еї а!., Віоса. 2010 Маг 11; 115( 10):2057-64 (Ериб 2010 дап 7); і Патент США Мо. 7566565; кожний з яких включений у дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
Коагулююча активність РІХЕс була оцінена шляхом кількісного оцінювання його здатності відновлювати активність згортання дефіцитної за ГРІХ плазми крові з використанням МГА ЕїІесіга 1600С (Медіса!І Гарогагу Ашоптаїйоп/Іпбігитепі аре, Ріеазапіміе, МУ). Результати порівнювали з каліброваною кривою, сгенерованою з використанням серійних розведень РІХ стандарту Всесвітньої Організації Охорони здоров'я.
Припускають, що фосфорилювання серину і сульфатація тирозину Фактора ІХ важливі для відновлення іп мімо. Повідомлялося, що МОМОМІМЕ "м ( очищений із плазми Фактор ІХ (рагіх), комерційно доступний від С5І Вегпіпуд) має краще відновленняїіп мімо, порівняно з ВЕМЕРІХ "М (рекомбінантний РІХ (ГРІХ), що є комерційно доступним від Уууеїй) через більш високий рівень фосфорилювання/сульфатації МОМОМІМЕ м (290 96/290 95 у порівнянні з «10 95/5 95). Однак
РІХЕс, що виробляється в НЕК293 клітинах, майже не має фосфорилювання/сульфатації («1095/495, що дуже схоже на ВЕМЕРІХ "М), ї демонструє кращий ІМК (1,0 МО/дл на МО/кг), ніж
ВЕМЕРІХ "М (0,7).
Крім того, РІХЕс, вироблений, як описано вище, мав значно більш низький (в 10-100 раз) рівень (0,01-0,001 95) активованого РБІЇХ (РіХа), пов'язаної із продуктом домішки, ніж
МОМОМІМЕ "М (рагіХ) або ВЕМЕРІХ "М (ТРІХ) (0,1 95). Одержаний у результаті РІХЕс буде рідше давати небажані випадки тромбоутворення після введення, ніж МОМОМІМЕ "М або ВЕМЕРІХ М,
Приклад 4. Педіатричні дослідження: екстраполяція і взаємозв'язок між розвитком в дорослій й педіатричній популяції
Характеристики пацієнтів, які показують взаємозв'язок з ГІХ фармакокінетикою, включають залежні від віку фізіологічні зміни (Віогктап апа Вегпіогр, Сіїп. РпаппасокКіпейіс5 40:815-32 (510) (2001); апа Віобктап, Неторнпіїа 9(5!ррі 1 ):101 -10 (2003)) розмір тіла і його склад (Зпаріго,
Неторпіїйа 11:571-82 (2005) Таким чином, звичайно виявлялося, що приведений у відповідність із масою кліренс (СІ) РІХ зменшується з віком і/або масою тіла під час росту від дитячого періоду до дорослого стану, з відповідним підвищенням термінального півперіоду (/г).
Для ГРІХ продукту (ВЕМЕРІХ М) СІ ї об'єм розподілення в стаціонарній фазі (М55) зростають у дітей і потім залишаються постійними в дорослому стані; таким чином, за цими параметрами будуть ретельно спостерігати в педіатричних дослідженнях.
Пікові рівні РІХ прокоагулянтної активності (РІХ:С) залежать від первинного об'єму розподілення РІХ:С після однократних і/або повторних доз РІХ. Початкове розподілення РІХ є швидким. Однак було показано, що іп мімо відновлення (середнє поступове відновлення) для
ВЕМЕРІХ "М було звичайно на 30 95 нижче, ніж у фактора коагуляції, одержаного із плазми і очищеного моноклональним антитілом (рагіІх) (Коїп еї а1., Віоса 98:3600-3606 (2001)). Крім того, дослідження з ракгіІХ показали, що пацієнти у віці 15 років і молодше мають значно більш низьке відновлення, ніж пацієнти більш старшого віку (М/пйе еї а!І., Тиготр. Наетозві. 73:779-84 (1995)).
Тому в педіатричних дослідженнях буде також проводитися моніторинг мінімальних і пікових рівнів.
Оскільки дослідження показали, що діти можуть реагувати по-іншому в порівнянні з дорослими, фармакокінетичні оцінки при базовому рівні 50 МО/кг гРІХЕс будуть проведені на дітях зі скороченими фармакокінетичними зразками. Фаза 1/2а дослідження (5'УМ-РІХЕс-07- 001), що оцінює безпечність і фармакокінетичний профіль однократного внутрішньовенного введення гРІХЕс в РТР5 у віці 18 років і більше із тяжкою гемофілією В, була завершена недавно. Попередні результати цього первинного дослідження на людях демонструють приблизно З-кратне підвищення фармакокінетичних параметрів (середній термінальний півперіод, МКТ і АОС) гРЇХЕс у порівнянні з тими, що повідомлялись в літературі для ВЕМЕРІХ "М (див. вище). Крім того, ГРІЇХЕс добре переносився і не було зареєстровано ознак реакцій у місці ін'єкції а також не вироблялися інгібітори. Взяті разом, ці результати з безпечності і фармакокінетики підтримують ініціацію Фази 1/2/3 реєстраційного дослідження (998НВ1ІО2
Дослідження (В-ГОМ(О), див. вище), що оцінює безпечність, фармакокінетику і ефективність
ГРЇХЕс у профілактиці й лікуванні кровотечі у 104 РТР5 (із щонайменше 100 лікувальних ЕО5 попередніх продуктів) 12 років і більше з важкою гемофілією В («2 95). Коли достатня кількість
Ко) даних безпечності буде доступною після реєстраційного дослідження, буде розпочата педіатрична програма для подальшого дослідження безпечності й ефективності гРЇХЕс у дітей.
Демонстрація пролонгованого півперіоду ГРІХ у дорослих буде означати, що для профілактики й лікування кровотеч у індивідуумів з гемофілією В ін'єкції будуть потребуватися рідше.
Фаза 2/3 Педіатричне РТР5 дослідження у раніше пролікованих дітей (вік « 12 років)
Коли будуть доступні дані з 10 РТР5 12 років) для 26 ЕЮр5 з реєстраційного дослідження (Дослідження 998НВ 102), буде розпочате Педіатричне Дослідження, фаза 3. Ця Фаза 2/3 педіатричного дослідження, відносно РТР5, які мали щонайменше 50 ЕЮз до РІХ продуктів до включення в дослідження, буде проведена глобально приблизно в 25 клінічних областях.
Приблизно 25 РТР: ( для того щоб гарантувати 20 підходящих для оцінки пацієнтів), у віці 2-1 1 років з важкою гемофілією В («2 МО/дл |«2 95| ендогенний РІХ), будуть скринінговані й відібрані відповідно до визначених заздалегідь критеріїв. Всі пацієнти, що одержали оцінку, увійдуть у фармакокінетичну частину дослідження (РК із попереднім дослідженням РІХ продукту і потім РК з ТРІХЕс) і будуть одержувати щотижня дозу гРІХЕс протягом 52 тижнів. У цьому дослідженні буде фіксуватися поступове відновлення, період напіввиведення іп мімо, АГ УС, і кліренс гРІЇХЕс.
Всі пацієнти будуть піддаватись фармакокінетичній оцінці базового рівня з РІХ і гРІЇХЕс перед дослідженням, і тривалість дослідження для кожного пацієнта буде становити приблизно 69 тижнів, включаючи скринінг і наступне спостереження.
Кожний пацієнт одержить 50 МО/кг гРІХЕс при першому візиті для фармакокінетичної оцінки, з наступними повторюваними щотижневими введеннями дози 50-60 МоО/кг гРІХЕс. З урахуванням дотримання режиму пацієнтом, фармакокінетичні проби для попереднього дослідження продукту й для гРІХЕс будуть відбирати за скороченою програмою, а саме: перед введенням дози, кінець ін'єкції, 302410 хвилин, З х 1 година, 24 хз З (День 1), 72 ж З (День 3), 120
З (День 5) і 168 ж З годин (День 7) після закінчення ін'єкції. Для того щоб досліджувати імуногенність, всі пацієнти одержать з ГРІХЕс щотижня мінімум 50 ЕО5. Параметри безпечності будуть включені для негайної оцінки безпечності й переносності, такі як: (а) основні показники стану організму (пульс, тиск крові, частота дихання, температура) перед ін'єкцією гРІХЕс і через
ЗО хвилин після ін'єкції; (б) параметри гематології й коагуляції; (в)клінічна хімія; (г)часті визначення РІХ інгібітору з використанням модифікованого за Неймегеном Бетезда-аналізу (безпосередньо перед першим впливом, ЕО4 (Тиждень 4|Ї, ЕОБІ2, ЕО24, ЕЮЗб і ЕО5БО); і 60 (д)інебажані явища.
Ефективність буде оцінюватися за оцінкою числа епізодів кровотечі, інтервалів між кровотечами і кількості лікувань і споживання ГРІХ на оцінюваний рік і на випадок, що потребує лікування.
Фаза 2/3 Педіатричне РР» дослідження дітей, що раніше не одержували лікування (вік 0-11 років)
Коли дані по 10 дітям, що раніше одержали лікування (2-11 років) з повною фармакокінетикою і 50 ЕЮОз5 будуть доступні в попередньому дослідженні, буде розпочата Фаза 213 педіатричного РОР5 дослідження. Це дослідження буде проведено глобально приблизно в 60 клінічних областях. До 30 РР: ( для забезпечення 20 придатних для оцінки пацієнтів) у віці
О років і більше із серйозною гемофілією В («2 МО/дл |«2 95| ендогенний РІХ) будуть скриніровані і відібрані відповідно до попередньо визначених критеріїв.
Участь у дослідженні буде варіювати, оскільки при початку лікування може використовуватися гРІХЕс як модифікований профілактичний режим. Очікується, що участь пацієнта в дослідженні буде тривати приблизно чотири роки, включаючи скринінг і спостереження за віддаленими результатами. Очікується, що протягом цього часу більшість пацієнтів досягнуть 50 ЕЮ5 до гРІХЕс. Для того щоб досліджувати імуногенність, всі пацієнти будуть піддані лікуванню приблизно 50 ЕЮО5 гРІХЕс або протягом періоду часу до 4 років.
Параметри безпечності будуть включені для негайної оцінки безпечності й переносності: (а) часті визначення РІХ інгібітору з використанням модифікованого за Неймегеном Бетезда- аналізу; і (б) небажані явища.
Ефективність буде оцінюватися за оцінюванням числа епізодів кровотечі, інтервалів між кровотечами й кількості лікувань і споживання ГРІХ за аналізований рік і за випадок, що потребує лікування.
Приклад 5. Біохімічна характеристика, активність і аналіз РК у тварин, що не є людиною
ГРІХЕс, вироблений у Прикладі 3, був охарактеризований за своєю посттрансляційною модифікацією, і були одержані наступні результати (див. Таблицю 15 і Фігуру 11). Пропептид
ГРІХЕсС був належним чином процесований під час виробництва. Патерн гРІХЕс гамма- карбоксилювання був подібний патерну ГРІХ. Крім того, загальне Сіа/молекула (11,2 5 0,7)
ГРЇХЕс було порівнянним з ГРІХ. Оскільки гамма-карбоксилювання певних залишків необхідно
Зо для активності РІХ, ці результати є важливими. Крім того, зег 158 фосфорилювання і Туг 155 сульфатування гРІХЕс були порівнянними з гРЇХ. М-зв'язані глікани в ГРІХ не є повністю сіальовані, так само як в гРЇХ. гРІХЕс О-зв'язане глікозилювання першого ЕСЕ домена було таким самим, як в РІХ, хоча й у різних порівняльних співвідношеннях. Азр 64 з гРІХЕс мав більш високий ступінь бета-гідроксилювання, ніж ГРІХ або отриманий із плазми РІХ (рагіх).
Активований РІХ був присутній у набагато більш низькій концентрації в препараті гРІХЕс, ніж в
ГРЇХ або рагіІХ препаратах, як описано детально в Прикладі 3.
Крім того, ГРІХЕс був введений різним видам тварин для визначення його активності й параметрів РК. Результати показані в Таблиці 16 і на Фігурах 12-16.
Приклад 6. Гамма-карбоксилювання
Метою цього дослідження було проаналізувати й охарактеризувати у-карбоксилювання глутамінових кислот (Сіа) у доклінічній партії РІХЕс матеріалу й комерційно доступних РІХ продуктах, охарактеризувати вміст Сіа у збагаченій "піковій"" фракції і «стрип» фракції високосольового елюювання, спочатку одержаної на етапі псевдоафінної іон-обмінної хроматографії, і надалі розділити на збагачену «пікову» фракцію і на «стрип» фракцію високосольового елюювання шляхом аніон-обмінної ВЕРХ, а потім охарактеризувати різні зразки.
Для досягнення цієї мети, був розроблений ряд додаткових аналітичних способів. Вони включають амінокислотний аналіз (ААА) з використанням лужного гідролізу для визначення (загального) вмісту Сіа, пептидну карту (РХ/МС) з використанням Гу5-С пептидів для визначення розподілення Сіа, аналітичну аніонобмінну ВЕРХ інтактних молекул для розділення ізоформ, і активований частковий тромбопластиновий час (аРТТ) для визначення біологічної активності.
Два пептиди, що містять Са (д) являють собою: -КІК2: УМЗОКІ М'ЕЄЗЕЕМОСМІ ЕК ЕСМОЕЛЕК "ІМАНІЄ Сіа - 2953,9 «ІМАНІК5 Сіа - 2909,9 -КЗ: СЗЕ29Е2"БАВЗОЕМЕЗЗЕМ ЗЕ ТТ ОЕРМУК "ІМАНІб Сіа - 2959,9 «ІМАНІК5 Сіа - 2915,9 (510) "ІМАНІна Сіа - 2871,9
Тридцять мікрограм зразка (одержаного зі збагаченої пікової фракції, високосольової стрип- фракції, і кожний зразок з аналітичної аніонобмінної ВЕРХ) були денатуровані, відновлені, алкіловані і перетравлені І уб-С (1:20, Е:5). Перетравлювання було зупинено за допомогою 2 95
ТЕА, і продукт був вприснутий в колонку диріег Рпепотепех С18 (2,0 х 250 мм). Розділення здійснювали на приладі Адіїепі 1100 зузіет. Стовпчик був установлений на температуру 25" Сі пептиди були елюйовані за багатоступінчастим ацетоннітриловим градієнтом. Мас- спектрометрія (Тпегто-Ріхпег І СО) була проведена за способом "Ттгіріє Ріау" .
Для аналізу й характеристики вмісту Сіа і розподілення докліничного гРІХЕс матеріалу були розроблені додаткові способи. Було проведено у-карбоксилювання частки глутамінових кислот (Сіа) і розподілення докліничної партії гРІХЕс (збагачена пікова фракція) і порівняно з комерційно доступними продуктами. Аналіз продемонстрував такий самий вміст і розподілення
Са, як і в комерційно доступних продуктах. «Стрип» фракція високосольового елюювання була проаналізована і порівняна зі збагаченою піковою фракцією. Аналіз показав знижений рівень у- карбоксилювання.
РІХЕс (збагачена пікова фракція) була виділена на іон-обмінному етапі псевдоафінної хроматографії й потім розділена на З ізоформи шляхом аналітичної аніонобмінної ВЕРХ.
Завантажені в АЕХ колонкові й розділені зразки були високо у-карбоксильовані. (Завантаження
АЕХ стовпчика являє собою стрип фракцію, відібрану під час етапу високосольового елюювання з етапу псевдоафінної іон-обмінної хроматографії.) Завантажені в АЕХ колонки і розділені зразки були біологічно активними. Вміст і розподілення Сіа було подібним до гріх.
Пептидна карта показала розподілення 4/5/6 Сіаз5 в КЗ пептиді. Пептидна карта демонструє високу кількість 6 Сіа5 в КІК2 пептиді і незначні кількості 5 Сіа'5.
РІХЕсС (стрип пікова фракція) була виділена на іонобмінному етапі псевдоафінної хроматографії і потім розділена на 2 ізоформи шляхом аналітичної аніонобмінної ВЕРХ.
Завантажені в АЕХ колонки і розділені зразки мали знижений рівень у-карбоксилювання.
Спостерігався зменшений вміст Сіа у порівнянні зі збагаченою РІХЕс піковою фракцією.
Спостерігався знижений рівень біологічної активності. Пептидна карта демонструє підвищену кількість 5 Сіа5 в К.1К2 у порівнянні зі збагаченою піковою фракцією, що може підтверджувати вплив біологічної активності.
Зо Посилання (кожне з яких є включеним в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання):
Битопі ОА, єї а)І., Мопотетгіс Ес Ривіоп МоїІесціев іп Тнегарешіс Арвз-Егот Вепсйі юю Сіїпіс, СІ. 33 р779-795; Сів 5, еї аї., Ргоївіп бсіепсе (1997) 6:185; М/нпйе СС, єї аї.,, У. Тиготброзів апа
Наєтозіавзів (1997) 78:261; Напвзоп К, апа етепіо .), доигттаї! Тиготбровів апа Наетозвіавів (2005) 3:2633; апа Реїегз НТ, вї а!., Віоса (2010) 115:2057.
Приклад 7. Оцінка гРІХЕс про-коагулянтної активності в моделях кровотеч у НетВ мишей
Порівняльний потенціал гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М був продемонстрований у НетВ мишей в аналізі цільній крові КОТЕМ іп міїго і в моделі кровотечі при відсіканні хвоста у НетВ мишей іп мімо.
Здатність ГРЇХЕс формувати міцні й стабільні згустки була оцінена за допомогою Ротаційної
Тромбоеластометрії (КОТЕМФ),, Репіарпагт стр, Мипісп, Септапу) із хлоридом кальцію як активатором (МАТЕМ). Сукупна цільна кров, відібрана з порожнистої вени НетВ мишей, була розділена на сім аліквот, у які був доданий гРІХЕс до кінцевої концентрації 7,4 95, 0,74 95 і 0,074
Фо нормальної плазматичної ГРІХ активності, або ВЕМЕРІХ М до 10 95, 1 95, 0,1 95 від норми. У якості негативного контролю, у пробу крові був доданий буфер РІХ композиції. Пули в загальній кількості 10 від 5 НетВ мишей були створені для завершення дослідження. Реакція МАТЕМ була ініційована додаванням Сась. Досліджувалися параметри коагуляції, включаючи час згортання (СТ), час формування згустків (СЕТ) і альфа кут. Середні значення і 50 від СТ, СЕТ і альфа кута підсумовані в Таблиці 17. Дозові відповіді для трьох параметрів нанесені на графік на Фігурі 17.
Усі три параметри порівнювали між гРІХЕс і ВЕМЕРІХ М у досліджуваному дозовому діапазоні (р»0,05 за однофакторним аналізом АМОМА ( Крускал-Уолліс)).
Ефективність у невідкладному випадку гРІХЕс була також оцінена в моделі кровотечі при відсіканні хвоста у НетВ мишей. (Фігура 18.) Самці НетВ мишей були стратифіковані для еквівалентної презентації маси тіла і віку в різних експериментальних групах. Перед відсіканням хвоста миші були анестезовані сумішшю 5Омг/кг кетаміну і 0,5 мг/кг дексмедетомідину і поміщені на подушку з підігрівом для підтримування температури тіла. Хвости мишей були потім занурені у воду за з температурою 37 "С на 10 хвилин для розширення латеральної вени. Після розширення латеральної вени гРІХЕс, ВЕМЕРІХ М або розчин-наповнювач були введені шляхом ін'єкції у хвостову вену і через 5 хвилин дистальні 4 мм хвоста були відсічені з використанням скальпеля Ж11 із прямим лезом. Кров, що виливалась, збирали в 13 мл теплого сольового розчину протягом 30 хвилин і втрата крові була кількісно гравіметрично проаналізована. 60 Тестуванню піддавали шість експериментальних груп гРІХЕс (720, 360, 240, 120, 80, 40 МО/кг,
п: 15) і три експериментальні групи ВЕМЕРІХ "М (360, 120, 40 МО/кг, п-15). Об'єм втрати крові окремої тварини і крива дозової відповіді медіанної втрати крові показані на Фігурі 19(А), і медіанний об'єм втрати крові кожної експериментальної групи підсумований в Таблиці 18.
Дозові відповіді за медіанним об'ємом втрати крові для гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "м є порівнянними (р Й - 0,9315 за непарним ї критерієм з корекцією Уелча).
Для визначення того, чи є трикратне збільшення тривалості періоду напіввиведення гРІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ "М результатом пролонгованої ефективності гРІХЕс, винахідники даного винаходу оцінили ефективність гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М як в аналізі КОТЕМФО ех-мімо , так і в моделі кровотечі при розсіченні хвостової вени (ТМТ) е НетВ мишей. Фігура 20.
Для ех мімо аналізу КОТЕМФ), самці НетВ мишей одержали 50 МО/кг ггІХЕс або 100 МО/кг
ВЕМЕРІХ "М шляхом внутрішньовенної ін'єкції. Цільна кров була відібрана з порожнистої вени пролікованих тварин через 5 хв., 24, 72, 96, 120, 168 і 216 години після введення дози гРЇХЕсС (п-8 мишей на кожну часову точку) або через 5 хв., 24, 48, 72 і 96 години після введення дози
ВЕМЕРІХ М (п-4 миші/часова точка). Проби крові аналізувалися за допомогою МАТЕМ. Середні значення і 5О для СТ, СЕТ і альфа кута показані в Таблиці 19, і СТ, СЕТ і альфа кут у порівнянні з часовими кривими показані на Фігурі 21. У порівнянні з ВЕМЕРІХ М. гРІХЕс продемонстрував порівнянний СТ, СЕТ і альфа кут через 5 хв/, але значуще підвищений СТ, СЕТ і альфа кут через 72 год., незважаючи на дозу, яка була в 2 рази нижчою в порівнянні з ВЕМЕРІХ "М,
Для оцінювання профілактичної ефективності ГРІХЕс і ВЕМЕРІХ М, самці НетВ мишей були стратифіковані для еквівалентної репрезентації маси тіла і віку до 9 різних дослідних груп.
ГРЇХЕс був введений шляхом ВВ ін'єкції в дозі 4 МО/кг, 13 МО/кг, 40 МО/кг і 120 МО/кг за 72 години перед розсіченням хвостової вени, тоді як ті ж дози ВЕМЕРІХ"М були введені за 24 години перед травмою. Перед розсіченням хвостової вени миші були анестезовані сумішшю 50 мг/кг кетамін/0,125 мг/кг дексмедетомідин/ 0,1 мг/кг бупренекс. Для того щоб дати можливість мишам підтримувати нормальну активність після розсічення хвостової вени, 1 мг/кг розчину атипамезолу було дано для того щоб відмінити вплив дексмедетомідину, після чого негайно виконували розсічення латеральної хвостової вени хірургічним скальпелем номер 11 із плоским лезом в області, де діаметр хвоста приблизно дорівнює З мм. Кров, що виливалась, змивали теплим сольовим розчином для забезпечення чіткої видимості рани, і миша була потім
Зо поміщена окремо в чисту клітину з білою паперовою підстилкою на наступні 24 години. Зупинка кровотечі і фізична активність спостерігались і фіксувались щогодини протягом 12 годин після травми. Вмираючі миші були негайно піддані евтаназії після ідентифікації, і повний огляд для завершення дослідження був проведений через 24 години після травми. Крива Каплана-Мейера для часу евтаназії і карта ступенів виживаності через 24 години після ТМТ продемонстровані на
Фігурі 22. Логарифмічний ранговий критерій визначив, що всі експериментальні групи з дозою вище ніж 4 МО/кг є значуще кращими, ніж група, оброблена розчином-наповнювачем (р«0,001).
Крім того, виживаність між мишами, які одержали однакову дозу гРІХЕс за 72 год. перед травмою й ВЕМЕРІХ "М за 24 год. перед травмою є порівнянною (р- 0,4886; 0,9268; 0,7279 і 0,5209 для 4, 13, 40 ї 120 МО/кг дозових груп відповідно). Ступені виживаності через 24 години після ТМТ були нанесені на графік і ЕО50 значення для кожної молекули було екстрапольовані із кривої, ЕО5О для двох груп лікування є однаковими для дози 17,8 МО/кг для гРІХЕс і 15,4
МО/кг для ГРІХ. Отже, гРІХЕс надавав в З рази більшу тривалість захисту у НетВ мишей у порівнянні з порівнянною дозою ВЕМЕРІХ"М, як оцінювалося за виживаністю і повторною кровотечею після травми розсічення хвостової вени. Отже, гГРІХЕс надавав в З рази більшу тривалість захисту у НетВ мишей у порівнянні з порівнянною дозою ВЕМЕРІХ "М, як оцінювалося за виживаністю і повторною кровотечею після травми розсічення хвостової вени.
На закінчення, як показують дані, незважаючи на те, що доза 15,4 МоО/кг ВЕМЕРІХ М приводила в результаті до 5095 виживаності НетВ мишей при розсіченні хвостової вени через 24 год. після введення дози, 5095 виживаності у тварин, що одержали 17,8 МО/кг гРІХЕс були досягнуті при травмі через 72 год. після введення дози. Отже, гРІХЕс демонструє в З рази більш тривалу профілактичну ефективність у кореляції із продовженням його періоду напіввиведення в порівнянні з ВЕМЕРІХ М. Результати за моделями кровотечі надалі були підтверджені ех мімо аналізом КОТЕМФ цільної крові у НетВ мишей, пролікованих або 100 МО/кг ВЕМЕРІХ "М, або 50
МО/кг гРІХЕс. Черех 5 хв. після введення дози, порівнянні покращення в утворенні згустку спостерігалися в обох експериментальних групах. Однак більшість параметрів аналізу КБОТЕМФ , таких як час згортання, час утворення згустку і альфа-кут були значуще краще в гРІХЕс- пролікованих мишей протягом періоду від 72 до 216 год. після введення дози, незважаючи на в 2 рази нижчу дозу гРЇХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ "М,
Підводячи підсумок, потенціал гГРІХЕс у невідкладному випадку є порівнянним з таким у бо ВЕМЕРІХ М, як показано і в аналізі КОТЕМ цільної крові іп міго, і на моделі кровотечі при відсіканні хвоста у НетВ мишей. Пролонгована профілактична ефективність гРІХЕс була показана в аналізі цільної крові КОТЕМФ ех мімо у пролікованих НетВ мишей і вона була визначена як приблизно в З рази довша в порівнянні з ВЕМЕРІХ "М у моделі кровотечі при розсіченні хвостової вени у НетВ мишей. Пролонгована ефективність ГРІЇХЕс добре корелює з довшим у З рази Ті» гРІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ"М, що раніше демонструвалися у фармакокінетичному дослідженні у НетВ мишей. Отже, гРІХЕс є повністю активним для лікування на вимогу, оскільки досягається значуще пролонгований профілактичний захист із потенціалом зменшення частоти введення дози, що є об'єктом вивчення у фазі З дослідження.
Приклад 8. Аналіз фармакокінетики й фаркакодинаміки гРІХЕс і ВЕМЕРІХ'"М після однократного підшкірного введення дози дефіцитним за РІХ мишам
Фармакокінетичні (РК) ії фармакодинамічні (РО) профілі рекомбінантного Фактора ІХ-Ес (ГРЇХЕс) ії ВЕМЕРІХ "М (ТРІХ) були визначені після однократної внутрішньовенної або підшкірної ін'єкції 200 або 400 МО/кг у дефіцитних за ГРІХ мишей. Цільна кров була відібрана з порожнистої вени (п-4 миші/часова точка/обробка). Концентрації ггІХЕс і ВЕМЕРІХ "М у плазмі крові були визначені з використанням специфічного для людського ГРІХ аналізу ІФА. Активність гРІХЕс і
ВЕМЕРІХ М визначалася з використанням аналізу активованого часткового тромбопластинового часу (аРТТ). РК аналізи були проведені з використанням модель-залежної методології, яка використовує М/іпМопі іп. Результати показані в Таблицях 22 і 23.
Для РІХЕс, біодоступність у дефіцитних за ГРІХ мишей становила 3895 для дози 200 МО/кг і 38-46 95 для комбінованої дози (антиген ІФА) і 29 95 для дози 200 МоО/кг і 29-3995 для комбінованої дози (дослідження аРтТтТ активності) у порівнянні з ГРІХ, 23 95 і 19 95, відповідно.
ГРІЇХЕс мав біодоступність підвищену в 1,5-1, 7 рази (доза 200 Мо/кг) і в 1,5-2, 5 рази (комбіновані дози) у порівнянні з ВЕМЕРІХ М,
Для гРІХЕс термінальний півперіод (антиген ІФА) становив 62 год. для дози 200 МО/кг і 51-62 год. для комбінованих доз і термінальний півперіод (дослідження аРтТ активності) становив 42 год. для дози 200 МО/кг і 40-42 год. для комбінованих доз, тоді як для ВЕМЕРІХ М термінальний півперіод становив 24 год. (антиген ІФА) для дози 200 МоО/кг і 17 год. (дослідження аРТТ активності) для дози 200 МО/кг. Це вказує на 2,5-2,6 кратне (доза 200 МО/кг і комбінована доза) підвищення півперіоду з гРІХЕс.
Крім того, як показано в Таблицях 22 і 23, гРІХЕс мав 4,5-5,6 кратне зростання АОс/доза і 1,9-3,7 кратне зростання Стах/доза в порівнянні з ВЕМЕРІХ "М,
Рекомбінантний фактор ІХ Ес гібридний (гРІХЕс) білок є довгодіючою формою рекомбінантного РГІЇХ (ГРІХ), що надасть можливість рідшого дозування ГРІХ при лікуванні гемофілії В. У мишей і нелюдиноподібних приматів і пацієнтів з гемофілією В гРІЇХЕс має приблизно в З рази довший період напіввиведення в порівнянні з гРІХ (ВЕМЕРІХ М). Для профілактичного лікування внутрішньовенне введення ГРІХ залишається складним способом доставки, особливо у дітей і пацієнтів з важкодоступними венами. Підшкірне введення ГЕРХ представляється більш привабливим шляхом доставки, менш травматичним і з рідшим введенням дози. Таким чином, підшкірне введення гРІЇХЕс заподіє менше болю і дискомфорту ніж внутрішньовенне введення, і приведе до покращеного дотримання режиму лікування, оскільки введення є легшим й займає менше часу, ніж у випадку внутрішньовенного введення.
Профілактичний режим також покращить якість життя, і клінічні наслідки будуть включати знижені випадки кровотечі.
Концентрація гРІХЕс у плазмі мишей була підрахована з використанням ІФА, специфічного до людського РІХ, за яким оцінювали РІХ частину молекули і в аналізі використовувалась мг/кг номінальна доза. Сумарні РК параметри для гРІЇХЕс і ВЕМЕРІХ "М показані в Таблиці 20 (антиген
ІФА) і Таблиці 21 (дослідження активності аРТТ) для п-4/група. Обидва аналізи за антигеном і активністю показали, що Стах і АОС у випадку гРІХЕс були значуще покращені в порівнянні з
ВЕМЕРІХ М. При використанні антигену ІФА, біодоступність (Е 95) становила 3895 для гРІЇХЕс у порівнянні з 23 96 для ВЕМЕРІХ М. Подібним чином, при використанні дослідження активності аРтТт біодоступність становила 29 95 для гРІХЕс у порівнянні з 19 95 для ВЕМЕРІХ М. Таким чином, ГРІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ "м демонстрував підвищення біодоступності в 1,5-1,6 раз.
Оцінки півперіоду елімінації показали, що гРІХЕс помітно підвищував півперіод, як було підраховано за аналізами антигену (гРІХЕс 62 год. у порівнянні з ВЕМЕРІХ "М 24 год.) або активності (гРІХЕс 42 год. у порівнянні з ВЕМЕРІХ "м 17 год). Ці дані показують, що гРІЇХЕс мав півперіод, подовжений у порівнянні з ВЕМЕРІХ "М у 2,6-2, 5 рази.
ГРЇХЕс, що вводять підшкірно дефіцитним за РІХ мишам, демонстрував РК їі РО профіль зі зростаннями Стах і АОС для гРІХЕс у порівнянні з ВЕМЕРІХ М. У цілому, біодоступність для
ГРЇХЕс знаходилась в діапазоні від 2995 (активність) до 3895 (антиген) з півперіодом від 42 год. бо (активність) до 62 год. (антиген) у порівнянні з ВЕМЕРІХ "М, який мав біодоступність від 19-23 95 і півперіод від 17-24 95, відповідно. Таким чином, півперіод для гРІХЕс, введеного підшкірно дефіцитним за ГРІХ мишам, продемонстрував зростання від приблизно у 2,2 (антиген) рази до 3,3 (активність) рази в порівнянні з комерційно доступними ГРІХ продуктами, що вводяться внутрішньовенно. У цілому, ці дані підтверджують, що зауваження, відносно гРЇХЕсС, який вводять підшкірно, буде мати клінічні переваги для профілактичного лікування пацієнтів з гемофілією В.
Приклад 9. Фармакокінетичний аналіз гРІЇХЕс після однократного підшкірного введення дози яванським макакам
Фармакокінетичний профіль (РК) рекомбінантного Фактора ІХ-Ес (гТРІХЕс) був досліджений після однократного підшкірного введення дози 50 МО/кг, 100 МО/кг або 200 МО/кг яванським макакам. Концентрація гРІХЕс у плазмі крові була підрахована з використанням РіІхХ- специфічного ІФА. Первинний аналіз був проведений з використанням модель-залежної методології з використанням М/іпМопі іп. Див. Таблиці 22-25.
Фармакокінетичний аналіз концентрації в плазмі в порівнянні з часовими даними (підрахований за РІХ-специфічним ІФА) продемонстрував, що біодоступність і термінальний півперіод були однаковими за різних доз. Біодоступність гРЇХЕс становила 40 95 (50 МО/кг), 34 95 (100 МО/кг), 36 95 (200 МоО/кг) і 36-45 95 (комбіновані дози). Термінальні півперіоди для гРЇХЕсС становили 61 год. (50 МоО/кг), 45 год. (100 МоО/кг), 49 год. (200 МО/кг) і 44-58 год. (комбіновані дози).
Концентрація гРІХЕс у плазмі крові мавп була виміряна з використанням РІХ-специфічного
ІФА, який вимірював ГРІХ частину молекули, і в аналізі була використана мг/кг номінальна доза.
Аналізи піку і відновлення продемонстрували точність цього РІХ-специфічного ІФА аналізу для детекції ГРІХЕс у діапазоні оцінюваних плазматичних концентрацій. Зведення РК параметрів для
ГРЇХЕс показано в Таблиці 22 (50 МО/кг), Таблиці 23 (100 МО/кг) і Таблиці 24 (200 МоО/кг) для п-:З/група. Для гРІХЕс 5С геометричні середні і СМ 956 геометричного середнього для Стах становили 860 ї- 22 (50 МоО/кг), 1630 - 97 (100 МО/кг) і 3,750 ж 26 (200 МО/кг), відповідно вказуючи на залежне від дози зростання. Подібні зростання спостерігалися для А!С.
Геометричні середні для біодоступності (Е 95) становили 40416 (50 МО/кг), 30 ж 75 (100 МО/кг) і 36 - 27 (200 МО/кг), демонструючи, що біодоступність була однакова при різних дозах.
Зо Вимірювання термінального півперіоду показали, що півперіод був однаковий у діапазоні доз 58 --39 год. (50 МоО/кг), 45--13 год. (100 МоО/кг) і 46 -- 44 год. (200 МоО/кг).
ГРЇХЕс, введений підшкірно яванським макакам, демонстрував РК профіль із залежним від дози зростанням Стах і АС. У цілому, біоактивність знаходилась в діапазоні 30-4095 з півперіодом 45-58 год. Таким чином, півперіод для гРІХЕс, введеного підшкірно макакам, демонстрував приблизно 2,8-кратне зростання в порівнянні з комерційно доступними гРЇХ продуктами, що вводяться внутрішньовенно. У цілому, ці дані підтримують погляд, що гРІХЕс, який вводиться підшкірно, буде мати клінічні переваги для профілактичного лікування пацієнтів з гемофілією В.
Приклад 10. Рекомендовані профілактичні дозові режими
У порівнянні зі стандартними рекомендованими дозовими режимами від 25 до 40 МО/кг РІХ двічі або тричі на тиждень, медіанна гРІХЕс активність РК, одержана в ході Фази 1/2а дослідження, описаного вище, підтверджує, що введення гРІХЕс приблизно один раз на тиждень в дозі приблизно 22,5 МО/кг, або введення приблизно кожні 10 днів дози приблизно 45
МО/кг, або введення приблизно кожні 2 тижня дози приблизно 120 МоО/кг є достатнім для підтримання мінімального рівня на 195 вище базового рівня (Фігура 24). Ці модель-симульовані оцінки валідовані за доступним даними з Фази 1/2а дослідження, яке повністю попадає в 9595 довірчий інтервал модельованої кривох «активність відносно часу». Ці режими часто будуть слугувати для початку терапії. Беручи до уваги гетерогенність повідомлюваних клінічних випадків проривної кровотечі відносно мінімального рівня плазматичної РІХ активності, підтримуючі дози необхідно буде розраховувати індивідуально.
Після перерахунку РК результатів Фази 1/2 дослідження (див. Приклад 11), новий розрахунковий дозовий режим, наприклад, для профілактики, становить 20 МоО/кг один раз на тиждень, 40 МО/кг кожні 10 днів або 100 МО/кг кожні два тижні (двічі на місяць). Див. також
Таблицю 27 і Фігуру 25.
Приклад 11. Перерахунок фармакокінетичних даних з вперше проведеного на людині (ГІН) дослідження (Приклад 1)
Пацієнти з різними генотипами гемофілії В, такими як стоп кодон/нонсенс і міссенс- мутаціями, були включені в ГРІН дослідження, обговорюване в Прикладі 1. Декілька пацієнтів мали помітно знижені ендогенні рівні РІХ антигену, що корелювало з помітно зниженою РІХ 60 активністю, тоді як у декількох пацієнтів з міссено-генотипами мали більше антигеннох, ніж підрахованої активності, що вказує на дисфункціональний циркулюючий білок. ГРІХ активність до лікування у 2 пацієнтів перевищувала 2 МоО/дл, імовірно, внаслідок неповного вимивання після останньої інфузії ГРІХ концентрату на основі тестування в анамнезі і фенотипу захворювання.
Грунтуючись на цій інформації, дані РК із Прикладу 1 були перерозраховані без віднімання базового рівня, як детально описане нижче. Див. Таблицю 27.
На відміну від РК розрахунків (основаних на активності) у Прикладі 1, якщо гРІХЕс активність
РК моделювалася без віднімання базового рівня, як нещодавно повідомлялося для РК аналізу глікопегильованого гРЇХ (Медгіег еї аїІ., Віа БОЇ 10.1 182/біооа 2011 02 335596 (2011), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання), одержані в результаті оцінки, півперіоду елімінації і МКТ є набагато довшими, ніж оцінки в Прикладі 1, на 82,2 ж 21,6 і 96,8 ж 22,0 години (середнє ж 503), відповідно. Однак, знаючи, що не всі пацієнти з важкою гемофілією
В мають 095 ендогенної РЇХ активності, і беручи до уваги генотип пацієнта і ендогенний рівень
ЕІХ антигену, винахідники даного винаходу адаптували спосіб аналізу з відніманням базового рівня у своєму РК моделюванні. Більш точно, (а) базовий рівень у двох пацієнтів був визначений як 095, оскільки їх ГРІХ активність перед лікуванням становила «195, вони не мали виявленого ГРІХ антигену і мали нонсенс-генотипи, (б) базовий рівень у трьох пацієнтів був визначений як 0,595, оскільки їх РІХ активність перед лікуванням була «195 і вони мали виявлюваний БІХ антиген, (в) для пацієнтів, чия РІХ активність перед лікуванням була в діапазоні між 1 - 295, Стіп (найнижча активність у ході РК дослідження) визначалася як базовий рівень, і (г) для пацієнтів, чия ГРІХ активність перед лікуванням була 2295, базовим рівнем було 2
Фо (що було вищою межею значення для входження в дослідження). Активність вище базового рівня перед введенням дози розглядалася як залишкова дія ліків від попереднього лікування, і була зведена до базового рівня і віднята з РК даних після введення дози гРІЇХЕс.
Одержаний в результаті середній термінальний півперіод, (56,7510,9 годин, діапазон 42,4 - 74,5 години) і МЕТ(71,68:2 10 годин, діапазон 53,2 - 85,9 години) гРІХЕс є приблизно в 3 рази довшим, ніж повідомлювані для ГРІХ. Повідомлюваний термінальний півперіод ГРІХ становить 19,3 з 4,97 годин (діапазон 11,1 - 36,4 годин) і МКТ становить 26,0 хз 6,07 годин (діапазон 15,8 - 46,1 годин). Коїй єї аї, Віооа 98:3600-3606 (2001); ї Биттагу ої Ргодисі СВагасіегів(йс5 ТОг
ВЕМЕРІХ "М, ЕІесігопіс Меадісіпе5 Сотрепаіїйт (2010)
Зо (пер:/Лумлм. тедісіпе5.огд.иКк/етс/тедісіпе/20376/5Р С/ВЕМЕРІХ 7М/Ж
РНАКМАСОЮМУМАМІСРКОРО), кожна з яких включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Таким чином, діапазони для гРІХЕс не перекривають діапазони для гРїХ.
Подібним чином, середнє значення СІ. гРІХЕс активності (3,18 ж0,78 мл/год/кг, діапазон 2,05 - 4,18 мл/год/кг)у є приблизно в 2,6 рази меншим, ніж повідомлюване для гРЇХ (8,40 х-2,01 мл/год/кг, діапазон 4,66 - 13,64 мл/год/кг), тоді як М55 обох білків є порівнянним при 4-5 кратному об'ємі плазми.
Хоча та ж тенденція покращення показників спостерігалася при РК гРІХЕс антигені, і Тіро і
Ті2В гРІХЕс антигену були значуще довшими, ніж одержані із підрахунків ГРІХ активності.
Оцінений Тс, для ГРІХЕс антигену, явно відхиляється від того, який у нормі пов'язаний з ГРІХ (2-3 години). Крім того, можливе недостатнє вимивання від замісної терапії до дослідження перед інфузіям ГРІХЕс іноді приводило до більш високого базового значення, яке у свою чергу могло приводити до недооцінки гРІХЕс Тр, як підрахованого за ГРІХ активностю. Багато пацієнтів мали аРТТт активність до З МО/дл, що значно перевищує граничну кількість (1 МО/дл) для аРтТт аналізу, на останніх точках часу 336 годин (14 днів) після введення дози. Однак ці часові точки були виключені з оцінки термінального півперіоду, оскільки ці значення або перебували на базових рівнях, або були лише незначно вищими за них, що розглядалось як повернення до базового рівня. Напроти, низькі але виявлювані термінальні рівні ГРІЇХЕс можуть бути виявлені шляхом специфічного і високочутливого ІФА гРІЇХЕс антигену , який виявляє 0,1
МО)/дл, у порівнянні із найнижчим лімітом для аРтТтТ, що дорівнює 1,0 МО/дл.
Параметри РК (активність), що залишилися, змінювалися незначуще відповідно до півперіоду елімінації і МКТ. Див. Таблицю 27(6). Пропорційне дозі лінійне підвищення РІХ активності спостерігалося на основі Стах, ЩО виникає відразу ж після інфузії й АОСімеє (Таблиця 4). РІХ активність демонструвала біекспоненційне загасання після інфузії тгРІХЕс і характеризувалася швидкою фазою розподілення (альфа), за якою ішла лінійно-логарифмічна фаза елімінації (бета). Середній півперіод розподілення (Ті/2«ех) був високо варіабельний у окремих пацієнтів (середнє 3,4 і 10,3 годин для двох груп з більш високими дозами) (Таблиця 27(6)). Середній півперіод елімінації (Т1/2Р) був незалежним від дози у терапевтичному дозовому діапазоні, що підлягав тестуванню , тобто становив 53,5 годин, 57,5 х 8,2 годин і 56,5:- 14,1 годин при дозі 25 МО/кг, 50 МоО/кг і 100 МО/кг, відповідно. Час до 195 (1 МоО/дл) вище бо базової лінії, при оцінці гРІХЕс активності, продемонстрував пропорційне дозі зростання. Він
Зо становив 7,3; 10,1 1,51 12,3 ж 2,5 днів для доз 25, 50 і 100 МО/кг, відповідно. Через 168 годин (1 тиждень) після введення дози плазматична ГРІХ активність установилася як 1,1 МоО/дл, 2,5 ж 0,9 МоО/дл і 4,6 ж 1,7 МО/дл вище базового рівня для дозових груп 25, 50 і 100 МоО/кг, відповідно. Також незалежними від дози були МЕТ, СІ. і М55 у межах дозового діапазону від 25 до 100 МоО/кг. Крім того, кожний 1 МО/кг введеного за допомогою інфузіх гРІХЕс піднімав плазматичну ГРІХ активність у середньому на 0,93 50,18 МО/дл (Таблиця 27(6)), і це поступове відновлення (К) показало слабку позитивну кореляцію з мсою тіла (К -0,336, р-0,048)
Тривалий емпіричний клінічний досвід підтверджує, що постійна активність фактора в плазмі на рівні 1-2 МО/дл буде достатньою для запобігання спонтанних випадків кровотечі у пацієнтів з важкою гемофілією А і В, (Міїззоп еї аї., у. Іпіегтп. Мед. 232:25-32 (1992), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання), і підвищенню частоти випадків кровотечі пов'язаних з кількістю часу нижче 195 від нормальної ЕМІІЇ активності. СоПпе еї аїЇ., Тпготр
Наєтові 7:413-420 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
Таким чином, РК аналізи надають засоби для оптимізації профілактичного лікування з індивідуалізованим моделюванням дози для досягнення постійних мінімальних рівнів вище 1 95 (І МоО/дл ) ввід базового рівня, зменшення варіабельності пік/мінімум і покращення співвідношення вартістьл-ефективність лікування. Сагіззоп еї аїЇ., Наєторнпійа 4:83-88 (1998);
КізКег еї ап,Наєторпіїа 9:279-284 (2003), кожна з яких включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання.
Для створення профілів концентрація-час, відповідних до різних режимів дозування, було проведене моделювання за способом Монте-Карло з використанням популяційної РК моделі
ГРЇХЕс. Середні оцінки параметрів моделі (СІ, об'єм розподілення, інтеркомпартментий кліренс і об'єм другого компартмента) у досліджуваної популяції, варіабельність між окремими індивідуумами, і залишкова варіабельність були адаптовані для цієї Фази 1/2а дослідження.
Мапа еї! а!., У. СІп. Рнаптасої. 49:1012-1024 (2009), яка включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання. Одна тисяча пацієнтів були змодельовані для дозового режиму з 14-16 точками відбору проб для кожного пацієнта. Було 14 точок відбору проб для щотижневого введення дози, 15 для введення дози кожні 10 днів, і 16 для введення дози раз на 2 тижні. Маса тіла (ВУМ) була змодельованою відповідно до опублікованого способу, УМапод еї аї. (2009), тобто
Зо на основі степеневого рівняння 2-ВУУ-0,5. Медіанний ВУМ у 1000 пацієнтів був допущений як 75 кг. На основі модельованих профілів концентрація-час, середнє значення х стандартне відхилення (50) лікарських профілів концентрація-час у 1000 пацієнтів було сконструйовано графічно для різних режимів дозування. Фігура 25.
У порівнянні зі стандартним рекомендованим дозовим режимом від 25 до 40 МО/кг РІХ двічі на тиждень, моделюючі результати медіанної гРІХЕс активності РК із цього дослідження показують, що введення один раз на тиждень гРЇХЕс в дозі 20 МО/кг, або введення кожні 10 днів в дозі 40 МоО/кг, або введення кожні 2 тижня в дозі 100 МО/кг є достатнім для підтримки мінімального рівня 195 вище базового рівня. Фігура 25. Ці модель-прогнозовані оцінки підтверджені доступними даними цієї Фази 1/2а дослідження, які повністю попадають в 95 95 довірчий інтервал модельованої кривої «активність відносно часу». Однак, беручи до уваги гетерогенність повідомлюваних клінічних випадків проривної кровотечі відносно мінімального рівня плазматичної ГРІХ активності (ВіогКктап, Наеторпіййа, 9:101-110 (2003); Анп5ігот еї аї
Наеторпійа, 10:689-697 (2004), кожна з яких включена в дану заявку у всій повноті за допомогою посилання) підтримуюча доза вірогідніше буде потребувати індивідуального підбору.
Таблиці
Таблиця 1:
Полінуклеотидні послідовності: РІХ-Ес
А. РІХ-Ес ланцюги ДНК послідовність (ЗЕО ІЮ МО: 1, яка кодує ЗЕО ІО МО:2) роУМ-РІХ-030 Нуклеотидна послідовність (пі 1 до 7583):
РІХ екзон 1 (сигнальний пептид, 1-а амінокислота пропептиду): пі 690-777
НІХ міні інтрон: пі 778-1076
РІХ пропептидна послідовність : пі 1077-1126
Зріла РІХ послідовність : пі 1127-2371
Ес: пі 2372-3052 чезсЧезстзасасезчастасссаствчасгастзагтвасзассзаставсозчазесасгачексакачосео «сасасзлаацчссссасочстасасвасскасузтазасосчссссстассзвссосссвасовоссссое ссагсззсаєсваєзасузсзвксзккоссасзасавсзссавтазадасьссссвккавсассвасаоЗ тзавзбакстасочкааассцсссасказсвасасаєтавасзіаксеасагдесвазкасатосестах класобсвассвасзасазвзасозососсососмисвссасоасссвогвсасзастссс вас ктовас тЧосзосасахєстасзкаттачссвсассастзосасзусзагсасЧчассстадсвачтасвусяаве че
ЧпкчЧЧчаєсєвасоаспсссчастсвссочЧчасекссвачЕссссассссассозвзсзссавсачавУсо ее чесассвазассзасчсчассссссаввакчсчпавсвассссотссссастчзасосзвасачасоасаваа счблесзсачсзодазачсстагтасзвазсавзчпаЧчетсіссооссвасіазчацаасссвосоасєкастоцесе в озчавзаствайасзасссассасазодачаєсссвазссс совок асоузососсассавасва со со є чазсасзлассасоуосацвассассачассосвісассвосєцесоссєвззасасстастсвусассзав косзсвозоссго сс ссог сс сазвасасаєссачкасо сс осот азласасачазаєахстовко стчссссеосесасктазассЕЕзчассасвозасссдасвоасзасагсазачаусставсадпоссачсвшо са ччЕтзчіакзгвнсогасоавасчнесасасві г тоазсоссясчсосстазачасавастасте са зкссазасєстазаавсаввсасексстазоазатзсаазассеєсасазецессЕсескескустазвас пазвоазвастаскстетсвасастостачгтсвссгІочвсаксаваасоссваєсазаавіствчаавсосЗасса ззоавзисасавсксеачустазаскочазовЗс кас саазузазссазазЗалаавкоса сода а ва азкасвассетзавцаватасувчавацссговавасвссаавначавсвастчав ста чвазсвака заст осасоцазассзакуклачсссзаєссасуссзазідлоасодосвасгдсвавазасавсаєсваєсссс таксазсчі с оазсесесссссКоЗзасссоназоавазчаавттосззассвоавсзсавсасосавса се а а асчласачЧчасастачсвчкссосваазагсатсоссуасаасазаче ас оуссстосассузоелоека тсчасточсаззавассачавазсссьасзавстсвасачсвссассссасосочвачасісвц са саавсетствзазсксасссесзсастоазасочс тс ссксагсасчаастакчіавкваткесгастчавчиса завосвІсгтоЧавгазвсассасеісазавосвоссозатсасссаакоаасссвососсачЕоскоаЧеаов ов зуассассвзаавссачассзасссссттзасачахучегтсавстоачсаавагтчасасасссут а очаочо кстаксоссавгсдзазазсосаєтосвасьастосссассосостзЗавастозсассваватсасачька гссасауатувасатаваквессазчоваасасаасатасачазусвавнассоваасаєчасссовааттатксс ссассвсазоетасваагсосвоасевіазтазасасавссасчатаксоссскссозавсозчзаасчавосх квас зчстазасачстасоастасасстатссЧсаєтоссззасвазччаасвсасзавсасстєсстсвавх сттачакстчаствізкавсгостсооавсачсссссвсазчасачазассаосоєтассстсвока ссікКачазссссвссгосЕсзаєссоавассисайвакссссцесстасавачкссассвістагавтсався су
ЕкссстастчоусссстасЧааозазусасазахг свіч ссавачачактачіучоазаасесссясоккатко аваслдчавосчвосачгсосссвастозаастастсаассаазассавчачсостасавсчазвччсаваєа гчзсЧвасасасвссаазчсассссаатагассвзасгозастазводавааавсавазчсссастовсяавасть сасасакцссовссчхгосссачстссозчвасссстчЧаЧсасдассоксвасстксстстсесссосавади псазаззатсассосєсвечЧчассссссозпассоскавозесасасосззосласазасосовассисовада сссгічЧазоссзвасісвассзусасопсзчасзчочсочачисосекзвзасоссватасвавуссуса че чвчсззсасавсвазсасссасспіоссозссваасаксстспастассисосассазсасвоазссовакчеаса ацчачсвсавстзсзвачасссссвасавацчесссесссвасесссвксуавоаввассвістссваацесва вачзчеазссссчачаассвсасоакогасассстасссссассссзочасовоасіопассдачаассачео ззсстовссресссазссвавазососссассссвоасзвсассоассчсодвасоазалассав азс сазчадаасадскасавоаассасассьсссосзсодаскссовсчустосксстсоскстасваєсависє саптсзїзчатсавовоасазчаслчсазчсаздчузавасисс стан ссссзвовсасасовчасоскосає авссаскатсасчсастзовчЧоссссіссстнЕстссооЧЕазатчачавстстадчасагсоаваівачасасасе чассаавзсгстацасаааєсєсвзсааствчаагоусачсзазанаватчскстасккзсвавквассгасцчасиска ссоЧссосасссосвассассасавоассосватазасавоассоцазосозасзавоааастссаосасцаав є шппоесцеозстадчазуассвзоссазссоасуссссловааасласвссссавоасссввссссг са адавоує зчаслотзоазассчвавестсоасвзасасасзсвцсесстассссгсзастасуваусчсвсочсачокосся
ЧоесодчісосасазочсЧаастссспссстссвсчассастсозссчаассссччисакоадссоадессоЧаЗу сЧЕсссочаачссчсозчасвасЧчассісспассасссопосасасаасісчссвазссосасасстасає ссозозессазччоасасічессозсассасстаасстачасизсостсасозансазао ово осо ассасассолзсчвачксчісстссасчавосссспчоазчвасссзчачссачусаспсссачвастсзасся скссуцессаасзссчсосоаспоусавоасассодаасозсастчоссавсскззссакочеестацссетесво естассзсессвтассацшссчастасастагоссовсчассваГассоссавсасососсзаєсачасстза звакоччасавхстзсвачстсссзучсчачесгсгосааавосстачесессссавававчссесссасовесе стачвзатєсзвасссасвочсвовчасоасогсчасссстосакадатвавазаавскасчесвчессакочес ззавсаахтазччсзчаасточасазвассзазЧасчазагсдассзУачссвазадссзасастаскчассчсга асквасссЧечвсссасассссусагассгссосскоссосачажсстізаччассссасасстоазчи кас ссаассаастзчзачасзсасчссстасвтассістосскчссозачачсссчаоча сс ссвсвоосс ох пчвоастазоссссабоасосессоагасссзгсаЧчіазЧсачвосасасвтсцососвсадтссссзвчвац гтазазосвасазссоасавесолавссзусасестацачавазкоезсссасоазсаваскоодавассоау ссосасасеоастссЗссксЕсссоааЗусзсслоазчавссатастатадзкасазсасссассосава пес ссзсаасоазасссоассоуссазчазсасвоачсачччссосогесоссЕссососоусссі оо сет сасозастасчосссуоусчеоссстозвзактастустасстасессваасоутвасевозаєс ссоазвастопаосовзозапсачасст асо еачавнассссіксасосс сага зазассао сестазасастоЧчассдссасоасасозасстастадсасстесасусскоксєсастасекссцчаєаацє стсбєзвоссасстаззасссгсавечастстозссоассасоссеЕкссгссооасавозеіаУсскскагааакце чзачесвоазассстосасавесоастакссаосссссдоазуссоасозчсзасовсозчасссасчсооссад сосасакчтссассЧачасачЧоасссосачвасасоачесасслазвассодасозаччвачЕссавясе а чпссаУссозсссгочічссгчасесссосассасосчхчЕвІсссссассскчЧопасадсвазасоцссоя псісоапсассаоассусасвазчсозазачатлозссасоососсачсессточскссвочаЗастсаваатадазу всЧасЧаасцстсасоавсачесачасчеазічачесастсасвсавазовазцчаЗассі сс сссвяссо тсЧскссагсатчастссасточачіассчазсассакссаасатсі ство азс озчачс го тасаксозсскстазчкслоасоачоасчазс ово сЧасосачестесссасессчачучоссоаЧачатх чазвассвзачесачесспосаГасусчасагвассстсстсааавсссасессссссс азс со псаккстсавчосусачасазчгссзсгсаааукссссвксетссовикгссвачоассчгадваасасосоавося сзассусассассассвгодазчасачасасасссссзссагчччкассассасіссазаессаЗиєсс астчозсдасаавасстсасвсовзізссеасспсосссваосассквасісосонврювзоассоуксаосксс
Косстссссссазаассстаавоузасасссесавчайсссстчасоссгісвазчссасагасчачсчосеча сзчгдЧачесасчааЧасостчазчесавчосзасьотіасчсазасачсосчзчачохосвеватасстац асазвассососоачоачсазсасавсадсесосассосасоцтсачссстсассокостосвссвац асточстоаакоачдсазаоачтасаазчсчсаачосстссвасзаавцчессосссссвасссссаєссоазчвавнас саАтстссавачЧесавазчлоасадсссосзачаассатстаусзтасассстсссссасссстчспагвачско ассаачцаассаддаісвассгоаасстасстзчосавазчсссстассссвасстасвассзссзс чав злдачеавсчасдсачесосачаасаасовсвнавссасассосссз года сіссуасудесгссскеюе сстсбаслосавоасгсассзсчоасавазазсачоасчосачсаччаочавсЧчессссссвіЧсссоаво сагчазчцастстасасвассастасасочсазвазчачсссгсосстасскссочотавзасчасссозчача їх січзчассзчссчаасссзсстсчаноачсазоассграсссствассстсвссосачесссапассстасасата ссчаксатсавтсвссабсассассоачкгсзвасссзстоааксачсстсзастассссоусгазсксса цЧесатстаккасссасссстсссссаассекесЕгсасссгтодазаучкоссавсосссаста сс ссс сзасазвасдачааассосвсосассасссзахсвовсассагсссасустосачоа соч се запчаєсдусавчсчЧацноЧасгцачавчаснагачсассасагчст чада осацсаЧчастстатоЧесес
Ксачасоздавазчавссачіозосоазгваткасацстагсссвасазаавісачзззасаасасачуавзовасах челазчсавзаазчоссацсвзавзопсачаааєсзгаававчопосозсавг ост олег ссвгацУс счессссстчЧасувоасассасаазавссаасасссаацісазЧазчухоодсслазасссзласазччасктатсава часассасзчсозссгссоссстасавулуссптсосасосістсссагтсосцуассстуссчестассодЧета сестатссоасссеіссессстссосчаавасосассасостсасазсьсасостатазосакстьсвостосо чкссачачссоасксцсгссазассочеасоасасасасчавссссссасксачесссовссцссасасссках ссчотбаассвссочстгЧачессавсссоуузазчасасзастсахтсоцссассуссацевесастодева сазчастазссачазчссзапосасотазвосчасостасвавас состава саассгавстасоо ска асівоззасдасачтасссзасакстссЧчесстастзазассацікасстгслзаваавачачсгсачеадчеої сттзчасєссчоасваасзавссассоастсасзасчсаЧсссосостасавусвусавактасастсац азавзаавначасстсвдацеваувесстугдасостгссасазЧчоєскзасастсачсповассааавсьса счссвачззчассссцессвічасасгавсстасаваазватасзсзтассасоводесосг са сс чЕгссзчугасаасозтовазасстсісчасасасоасозосссссадачастмсвзсачсса сканує ззаглесзудадсадасавасссзксадаосочсассзаспозгастаЗзсадпатассадоачстазссваас тасспеЧасаксачачовоаастататсттчасвачкоасатсасасетасзпсчгіЧаватастосасачи касу зазсзузавастасттчсвісачасоессастсчоссатісвачстоасозсавассу і чачаазчачсчассчака пачассісетезссавсатосев
В. Ес ДНК послідовність (мишачий Іцк сигнальний пептид підкреслений) (ЗЕО ІЮ МО:3, яка кодує
ЗЕО ІЮ МО:4) Це є Ес касета з режМ-РІХ-030. Крім того, існує роздільна Ес експресійна касета, яка трансфікується в клітинну лінію в плазміду Р2ЖУМ-Рс-015, яка кодує ту ж саму амінокислотну послідовність, але містить декілька некодуючих змінень. Друга копія Ес кодуючої послідовності запускає в роботу краще співвідношення мономер: дімер .
Агдоззасадасасастостчстатозатасстоссоссстооаскссяопекссассдаєдасяя застсасасвсссссвссскасссвосассговастсскосчацавссаксвакскксостсккссосссса авасссазучЧасвсссковісатссосссучасоссстзачассасавосоасча ов учасосазоссвоу авачасссстчводісаавчисвассзагасчгозатучсоассзачагосатаакопссаачасавачссасо чавзчачесваїзсавсвасвсусасосозасоачесазсочососвосгсттоасассвзчаскачско виє зчсзаводвасасвзвзасзсввозискссзасваавосссссссавчсссссеасссазвавассавссссазвах спозаазчадсвЗссссчвзавассасвоокусасвсксгаосссиста осо счасоастаасствача ан жвисзасстаасскасстодісавааЗосссгарсссвоасовсаяссЗссусоаавасзачазаства оо тазчсссзпазвасвзастасззЧчассвоссссоссукоассзоветосоавесчасссскестсссвттасвота азсгсзссзсзузсвазчаосвачсзЗсзасачоазчавсзскссссвісессссЗзгдЧасасвсовоаескеся псеасаассастасзвсосачавсазчесссссссстЧчссссЗдоавая
Таблиця 2
Поліпептидні послідовності
ЕРІХ-Ес Мономер гібрид: створений шляхом коекспресії РІХ-Ес і Ес ланцюгів.
А. РІХ-Ес ланцюг (ЗЕО ІЮ МО:2): (28-амінокислотна сигнальна послідовність підкреслена, 18-амінокислотний про пептид підкреслений подвійною лінією, Ес ділянка виділена курсивом.) С-термінальний лізин не представлений у жодній субодиниці; цей процесінг часто спостерігається в рекомбінантних білках, які виробляються у культурі клітин ссавців, а також у білках, одержаних із плазми крові.
РІХЕС-5С СУБОДИНИЦЯ:
ЕРЇХ Сигнальний пептид : -46 МОВМММІМАЕ З5РОІТІСІІ СМ ЗАЕС
ЕІХ Пропептид : -18 ТМЕГОНЕМАМ КІСМАРКА і ТнБаКЬЕиКУ ОсОМОЕБЕСМЕ БКСОКЕВАВЕ УБЕМТЕВТТВ вчКОожЖУроро 51 СЕБМРСЬМОС ВСКБРІМВІУЮ СЯСРЕСЕВОК МСЕООУТСМІ КНСЕСЕОЖКСЕ. 101 МБАОМКУуУуСВ СТЕОСУВІАКМ ОКЯСЕРАУРЕ РСОВУБУБОТ БКІТВАЖТУВ 151 РОУрУУМОТЕ АЕТІБОМІТО ЄТОБЕМНОЕТВ УУСсСЕОАЕРО ОКРИОУУСНОИ 201 КУОСАЖСОСВІ УМЕКМІУТАА НСУБТОУКІТ УУАСЕНМІВЕ ТЕНТЕОКЕМУ 251 ХВХІРННМУМ ААЇМКЯМНрІ АБЬББОВРОЬУ МОЖУТ РІСІ АОКЕХТМІРІ,
З01 кЕОБСХУБСЯ СВУКНКСВВА БУБОТІВУВЬ УЮВАТСЬВОТ КЕТХУМММЕС з51 дсЕНЕСОВОВ СсСОСОВБОЗРНУ ТЕУЖЕСТВВІТ СІХЗКСЕЕСА МКОКІСІЖЕК ої УВВХУМННІКЕ КТКІТОКТНТ СРРСРАРЕТЬ СОРОУКЬЕВР КРКОТЬМІВЕ 451 ТРЕУТСУУУЮ УБНЕВРКУКЕ ММИУУТСУКУН МАКТЕРЕЖЕО УМаТУКУучУву
БІ БТУЬБНОЮИМ СКЕЖКСКУВМ КАБРАРІЕКТ ІЯКАКСОРКЕ РОУУТЬРРВК
ВБІ ОБЬТКМОУВІ ТСПУКОКХРВ ПІАУЕНЕСМС ОРЕММУКТТР РУБОВООСВЕЕ бво1 БУБКОТУЮрКЕ НИООСМУКВС ВУМНЕАЬНМИ УТОКВЬВІдР СК
В. Ес ланцюг (ЗЕО ІО МО 4) 20-амінокислотний сигнальний пептид легкого ланцюга гетерологічного мишачого Ідк (підкреслений): -20 МЕТОТ УМ ПЛ ЛУУРСОаЗТа
Зріла Ес послідовність (відповідно до нумерації людського ЇдДС1 амінокислот з 221 до 447, нумерація ЕО)
М ПВЕХНТСВВОСр АВЕТОсСорУ КБЕРРЕВКОТ БМмІБНТВВБУТ СУучУрУВНЕЮ зі РЕТЕЕМНУУЄ ЗУКУМНМАКТК РБЕКОЖМОТЕ ве ТУВи ОСЬ 103 СЕУВЕКАСРА РІБКТІВКАК сСОоБВЕРОУУТ БРеаВОЕБМТК МОУБТСГУЄ 1У ШЕУ АУЄ МКІМОССОРЕММ жЕтТТВеТ ОЗ ПОБЕЕБуВК ТУ хо) МугЕСВУМНЕ АНМАЖТОКВ БВ РОК !
Таблиця З
Концентрація антигену РІХЕс у окремого пацієнта відповідно до часових даних; розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) 050 | 00 | 723 | 00 | ов | 00 | в | 00 (
о23л3о | 764 | оз | 1257 | | --// | го | вл
Таблиця З
Концентрація антигену РІХЕс у окремого пацієнта відповідно до часових даних; розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта (продовження) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) ов 00 | що07| щ--00 | ле| 00 | 37| оо лег | 4337 | ..юЮЙБЖЖБІ | леа| 4465 | сввяз| 6824 гів) зве | 7777/1777 || 4278 | з3703| вБвб4 ою | го | 7 Ї77111111111Т11ТЕЕ
Таблиця З
Концентрація антигену РІХЕс у окремого пацієнта відповідно до часових даних; розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії ії номером пацієнта (продовження) час (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) час (год.) (нг/мл) год. ве | 05 | 8 | 00 | 05 | 00 1 5 1 00 лббло | 0об72 | 42? | ме | 1... 16738 | 587
Совавив 10 б862 | оа6822 | 2 0,331 23950 | 84 оввив | ває | лег | 902 | 1.1 28725 | 655 зав? | ва | 28522 | 38 5 511 1-3
Таблиця 4
Сумарні дані фармакокінетики РІХЕс антигену - окремі пацієнти і середнє групове значення доза доза дози (мг/кг) (год-нг/мл) | (мл/год./кг) |. (мл/кг) (год) не не (МО/кг) (МО/Кг) (год) | (год) 2 7-5 5 « Р АН ННЯ
ЕЕ А-А---е 2 5З3--5-5И5-АИНБНАН ННЯ 5о вав | бо | 5 | 706 | ваюю | 1 1 190. 12 МС | 150
ВЕ 10101011 о | 330 | олб7 | вл | 860) був | 18) 100 | 81 | 8 | 21600 | ї2000бо | їв | 156 | 103 | 157 | 543. 51810151 1500 | вового | 81 | 28 | 137 | 115) 107 х СІ, М55, МЕТ, ТІ/2 а ії Т1/2р для комбінованих доз 12,5-100 МО/кг становлять 2,30:20.46 (1,51-2,723; 250582 (156- 366); 110--18,5 (84,5-144); 12,0ж4,0 (10,1-18,6, не включаючи двох пацієнтів, чиї РК параметри були визначені шляхом некомпартментного аналізу); і 1012-420,9 (78-140), відповідно. Внаслідок корекції округлення або інших помилок, (а) повинне бути 207000, ії (б) повинне бути 0,468, (в)повинне бути 52,1.
Таблиця 5
Середня активність РІХЕс у окремих пацієнтів і групова і скоректована за базовим рівнем РІХЕс активність у порівнянні з часовими даними;
Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта час (год.) льтат за базовим ктичний | зультат за базовим час (год.) тат за базовим (МоО/дл) рівнем час (год.) | (МО/дл) | рівнем результат (Мо/дл) | рівнем результат результат (МоО/дл) (МоО/дл) (МО/дл) 050 | з | 00 | 723 | 2 | 00 | 08 | 2 | 00 63 9 | 66 | 65 | Мо 90 | 67 | 718 | 64 2 77017506 | 28 81 850 || 5 о | 5 | 20 |85| 8 1 20 | 8 7 1 50 7» |: 1 20 |з 51 5 |2ю| 61 50 вл | 500 | 8257 2 1 20 | 8 6 | 50 лева | 2,00 | 6798 3 1 10 | 5 1 1 00 ла | 78116 | 55 2 1 06 |057| 1 1 00 ав 53 | 0 |85585| 3 1 10 | 8785 1 1 00 7 ле | 307770 |в 2 1 9 1 1025177
Примітка: Дані, виділені напівжирним шрифтом, представляють повернення до базового рівня і були виключені з аналізу.
Таблиця 5
Середня активність РІХЕс у окремих пацієнтів і групова і скоректована за базовим рівнем РІХЕсС активність у порівнянні з часовими даними;
Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта(продовження)
Фа- Ре- Ско- Фа- Ре- |Скоректований| Фа- Ре- |Скоректований час |(МоО/дл)| забазовим| час |(МоО/дл) рівнем час І(Мо/дл) рівнем (год) рівнем (год) результат (год) результат результат (МО/дл) (МоО/дл) (МоО/дл) 018 | «о | 00 |ол8| «0 00 | 007| з | 00 ол | 59 | 580 |017| 35 | 350 |07| з | 00 4820 | 9 | 80 |48и15| 9 | 80 |4817| 17 | 150 (
7247| 8 | 70 |72и5| 7 | 60 |727| їз | 10 967 | 5 | 40 1/9603| 5 | 40 |9617| 0 | 80 12013| 4 | 30 |ї20и3| 4 | 30 |ї2г0лу| 9 | 70 14418 | 4 | 30 |ї4403| з | 20 |68л7| 6 | 40 і 720,73| «0 | 00 |54707| «0 | 00 | !/ /
Примітка: Дані, виділені напівжирним шрифтом, представляють повернення до базового рівня і були виключені з аналізу.
Таблиця 5
Середня активність РІХЕс у окремих пацієнтів і групова і скоректована за базовим рівнем РІХЕсС активність у порівнянні з часовими даними;
Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта(продовження)
Фа- Ре- Ско- Фа- Ре- |Скоректований| Фа- Ре- |Скоректований час |(МоО/дл)| забазовим!| час |(МоО/дл) рівнем час І(МоО/дл) рівнем (год) рівнем (год) результат (год) результат результат (МоО/дл) (МоО/дл) (МоО/дл) 438,43) «10 | МС |-л2042| «10 | МС |-793,05| 8 | мМ 127 | 4 | 00 |-37| «0 | 00 |0082| з | 00
ЗЛ | 28 | 245 | 322 | 98 | 970 | 320 | 80 | 773 бл | 24 | 208 | 617 | 80 | 7950 | бгаг| 69 | 666 48,82| 10 | 90 |4890| 30 | 290 |4662| 25 | 230 7257 | 6 | 5О |7238| 19 | 180 |7м0| 17 | 150 12115 4 | 30 |т12030| 9 | 80 |пвиз| 9 | 70 144ло| з | 20 |т1685577| 6 | 50 |т66блоОЇ 5 | 30 192,77| 2 | 10 |28856838| 2 | 70 |28615| 2 | 00 240,57| 2 | 10 |337,03| 2 | ї0 Щ|933557| 2 | 00 744,57| 3 | 20 |84028| «10 | 00 |74177| з | 170
Примітка: Дані, виділені напівжирним шрифтом, представляють повернення до базового рівня і були виключені з аналізу.
Таблиця 5
Середня активність РІХЕс у окремих пацієнтів і групова і скоректована за базовим рівнем РІХЕс активність у порівнянні з часовими даними;
Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою, тривалістю інфузії і номером пацієнта(продовження) час (МоО/дл) за базовим час (год) (МоО/дл) за базовим час (год) (МоО/дл) за базовим (год) рівнем рівнем рівнем результат результат результат (МО/дл) (МоО/дл) (МО/дл) а 1721001 512 1 00 15121 0 7 ово 11041 0261 047 | 6 | 040 | 045 | 81 880 2 178 | 8 12 1 96 | 50 | їдї | 7 | 5850 7322 | 5 | 72 | 3» | 82 | 0 | 37 | 89 | 870 7522 | 8560 | 8584 | 855 8 | 70 | 517 | 551 550 вва | 7301706 | 16772181 850 | 557 | 180 12022 | 71 850 | 97 8 1 850 | лей | 7 1 50 ла | 550 | 25721 2 | 20 | 678) 6 | 50 лева | 6150 | 3/2 3 | 10 | 2556 | 3 | 10 лез 112130 3887 | 8 | 0 | 875 | 2 1 00 яв | 2179 1ИШ07012Ш010И77772020122020100010
Примітка: Дані, виділені напівжирним шрифтом, представляють повернення до базового рівня і були виключені з аналізу.
Таблиця 6
Фармакокінетичні сумарні дані середньої активності РІХЕс у окремих пацієнтів і групові; Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою і номером пацієнта мінальна| ктична | цієнт | (МО/дл) | (год'"МО/дл)| (95) | (95) Доза (мл/год/кг) | (мл/кг) (год)! НІ Но доза доза (МО"год/дл (год) | (год) (МО/Кг). | (МО/кг) на МоО/кг) зв
ШИ пон шк полин поля воло плн пон Пл Пн пи В ВА 5о вавіз| 6 | 535 | 2960 |1о|551| 525 | їв | 00 155 |е1| 107 |567 геометричне геометричне 10 ле | 81 | 586 ||| 420 | 298 |8850| 5 |611| 32 |БА2 о5 | 5 821 | з5ю |ї70|825| 325 | зо || 65 |551| 545 Гага
Середнє | 982 | 3930 |204|755| 61 | 285 || 179 |625| 555 |Бов геометричне
Середнє геометричне
Внаслідок корекції округлення й інших помилок, (а) повинне бути 8,98, (б) повинне бути 8,23, (в)повинне бути 892, і (г)/повинне бути 42,2.
Таблиця 7А-7В
Вторинні фармакокінетичні сумарні дані середньої активності РІХЕс у окремих пацієнтів і групові;
Розсортовано за номінальною дозою, фактичною дозою і номером пацієнта доза (МО/кг) | ктична | цієнт | (МО/дл) | (День) | (День) | (День) | значення" | значення! | відновлення: | відновлення" доза (МО/дл на | (МО/дл на (Ус) (Ус) (МО/Кг) МО Кг) МО Кг) 25
ШИ пи иня шокл поклони поклони поля полон полон поля ПОЛЯ 25 7 -НА НН АА А ЛА---А-- 5о вів) 6 | 461 | 122 | ва | 67 | ов | 2 | 382 | 436 вБете| 7 | 147 | 737 | 27 | зві | ов | ов | 299 | 356 геометричне ешее| | 1722) 011 МОМ геометричне а С168 - Оцінена ГРІХ активність вище базового рівня приблизно через 168 год. після введення дози. Значення, виділене курсивом, оцінювали за стимуляцією, здійсненою з використанням однокомпартментної моделі й констант мікроскопічного ступеня пацієнта.
ЬТВІ РІ - Модель-прогнозований час після введення дози, коли ГРІХ активність зменшується до приблизно 1 МоО/дл вище базового рівня. Значення, виділені курсивом, оцінювали за стимуляцією, проведеною з використанням однокомпартментної моделі й констант мікроскопічного ступеня пацієнта. сТВІРЗ - Модель-прогнозований час після введення дози, коли РІХ активність зменшується до приблизно З МО/дл вище базового рівня.
ТВі Р5 - Модель-прогнозований час після введення дози, коли ГРІХ активність зменшується до приблизно 5 МО/дл вище базового рівня. є К-значення було розраховано з використанням модель-прогнозованого Стах значення, згенерованого за результатом з відніманням вихідних результатів, розділених на дозу. 7 К-значення було розраховано з використанням спостережуваного максимального результату проби після введення дози ; К-значення - (спостережуваний Стах з відніманням базового рівня )/доза). 9 /п-мімо відновлення - 100 х ( модель-прогнозоване Стах за даними з відніманням базового рівня/доза) х об'єм плазми (дл)/ Доза в МО; де об'єм плазми в мл - - (23,7 х Ні в см) з (9,0 х УМ у кг)- 1709. п Іп-мімо відновлення - 100 х (спостережуваний Стах з відніманням базового рівня ) х об'єм плазми (дл)/доза в Мо; де об'єм плазми в мл - (23,7 х Ні в см) - (9,0 х УМ у кг) - 1709.
Таблиця 78
Номінальна | Фактична | Пацієнт! С 1682 | ТВІ РІЇ ТВІ РІЗУ | ТВІ РБО К К Іп Мімо Іп Мімо доза доза (МоО/дпл) | (День) | (День) | (День) | значення?" | значення| | відновлення: | відновлення" (МО/Кг) (МО/Кг) (МоО/дл на | (МО/дл на (дв) (дв)
МО/кг) МО/кг) мо | | 79 | ов || вої | 634 091 | 08 | а | 518 лов | 8 | 88 | ал | в5и | 692 | 102 | 7 | в лов | 9 | 309 | 987) 70 | 578 | ов | 089 | зи | 8 лоелує| 11) 677 | лах | лоз | ва | 091 | 089 | 278 | 303 лови | ла | 309 | ве) 70 | 572 | 082 | 097 | 358 | 422 о Середне | 438 | 116 | 820 | 659 | 090 | 702 | зм | 398 8077 | 753 | 197 | та | то | ооля | ол | 68 | 85
Середнє 4,19 11,5 812 6,53 1,02 34,5 39,1 мере | | ІТТ
СМУ9ь середнє 341 16,5 15,7 15,0 10,5 19,8 21,6 тає | ||| МІ М ІДИ ІМ
Таблиця 8
Дослідження Фази 1/2а: Порівняння РК параметрів для гРІХЕс і ВЕМЕРІХ тм н"ниєенинининннннннннншнн ж НИ й ТВЕМЕРІХ "М |Середнє ж 50
Параметри ГРІХЕс (Середнє хз 50 (тіп - тах)) (М-11) (тіп -тахд ГІМА-1 112 (години) 52,5 9,2 (40 - 67,4 19,3 з 4,97 (11,1 -36,4
МКТ (години) 68,05 хз 11,16 (53,1-85,68 26,0 6,07 (15,81-46,09
СІ. (мл/год./кг) 3,36 я 0,93 (1,84-4,58 8,4 з 2,01 (4,66-13,64
Поступове відновлення Й Й (МО/дл на МО/Кг) 0,93 ж 0,18 (0,62-1,17)2 0,75 - 0,23 (0,34-1,38)
Стах (МО/ДЛ на МО/кг) 24 год. після ін'єкції пн 48 год. після ін'єкції наш х Оцінки за 2-компартментним аналізом ГРІХ активності при номінальних дозах 25, 50 і 100
МО/кг (п--11) їСумарні характеристики продукту ВЕМЕРІХ"М (18 листопада, 2009); Медіана і діапазон (п-56) а. діапазон, скоректований через округлення або інших помилок як 0,63 - 1,18.
У порівнянні зі статистичними даними для ВЕМЕРІХ "М, гЕІХ-Ес продемонстрував: - зростання періоду напіввиведення і середнього часу затримання втричі - 24 95 покращення відносного поступового відновлення - 2,5-кратне зменшення кліренсу
Таблиця 9
Фаза 1/2а дослідження: пропорційне дозі зростання Стах і АОС гРїЇХЕс (активність)
Доза (МО/Кг) Ж пацієнтів Стах (МО/дпл) ІСереднє хз ОЇ АОС (год. МО)/дп) ІСереднє ж 50 (тіп -тах (тіп - тах 41,6 «8,97 (33,0-53,5 1630 750 (1190-2960 98,2 258,21 (89,9-111,0 3930 1893 (3060-5150
Також див. Фігуру 5.
Таблиця 10А-108
Оцінена терапевтична тривалість гРЇХЕс в дозах 50 і 100 МоО/кг.
РІХ:С на День 7 2,0 МоО/дл (вище базового рівня)
Час при 1 МО/дл вище базового рівня
Час при З МО/дл вище базового рівня
Е1Х:С на День 7 4,2 МО/дл (вище базового рівня)
Час при 1 МО/дл вище базового рівня
Час при З МоО/дл вище базового рівня
Див. також Фігури бА-68В.
Таблиця 11
Пропорційне дозі зростання Стах і АОС для гРІХЕсС антигену. 2. Стах (нг/мл) АЦШС (год"нг/мл) |Середнє ж
Доза (МО/кг) й пацієнтів (Середнє «501 ср 2730 144000 7510 2480 408000 х 73900 15400 «3960 897000 ж 206000
Див. також Фігуру 7.
Таблиця 12
Фармакокінетичні оцінки для гРІХЕс антигену 50 МО/кг «Середне т 50) 100 мок (Середнє т 50)
СІ. (мл/год/кг) 2,28 1 0,37 2,11 0,46
У55 (мл/кг) 259 78,5 238 5 522
МЕТ (години) 112 521,5 114-171 110 ж26,5 95,8 я
Див. також Фігуру 8А-88.
Таблиця 13
Середні значення РК на основі активності
Стах |АОСІМЕЇ АЇОСа | АОСЬ ГТАОС/До- СІ М У5 МАТ М/г2о, н/гр8 (Мо/дл) | (год"МО/ (дв) (дв) за (мл/кг). | (мл/год/к| (мл/кг) (год) (год) (год) дл) (мо г) год /дл на
МО Кг) 65,364 |2596,636| 11,591 | 88,427 | 32,436 | 3,555 |123,364 | 2265,000 | 68,045 | 5,463 | 52,455 32,9708 11497,1231 10,4490 | 10,5210 | 10,7506 | 0,9257 | 21,2804 | 69,7582 | 11,1637 щЩщ 9,1674 відхил 4 ни п я я п ПНЯ ПО ПОЛЯ КО КОХ НОЯ ДЕС НИНІ 50,4420 | 57,6563 | 90,1479 | 11,8980 | 33,1435 | 27,5890 | 17,2501 І 30,8664І16,4063| 00001 17,4768 и п я п п ПНЯ ПО ПОЛ КО КОХ НЕСЛА ЕІ НИ 53,500 |2960,000| 9,200 | 90,800 | 28,000 | 3,580 |118,000 | 216,000 | 65,900 | 3,640 | 54200 19,90 | 753,00 71,10 21,80 98,00 | 145,00 | 5310 40,00 111,00 | 5150001 28,90 | 99,10 | 54,30 160,00 | 365,00 | 85,80 16,60 | 67,40
М
Геом. | 56,951 |2181,294| 6,781 | 87,26 | 31,020 | 3,226 | 121,767 | 216,533 | 67,218 | 3,326 | 51,715 середнє
С168|11| ТВі РІ ТВІРЗ | ТВІ РБ5 | Поступо | Поступо | іп Мімо | Іп Мімо (МО/дл) (21 ІЗІ ІМ ве ве Відновле |Відновле (День) (День) (День) |Відновле|відновле| ння (71 ння |8І ння (5) | ння |бЄЇ (Ус) (Ус) (МоО/дл | (МО/дл на на
МО/кг МО Кг) не п я Пл п СЯ ПО БО ОО Є ПНЯ КОН 1 НОЯ КОН 1 ОНИ КОН 1 ННЯ КОНТ НАННЯ КОН НА 77777771 |Середнє| 3106 | 10177 | 6,727 0,821 | 0,926 | 34518 | 38,991 шия 1,8231 | 2,3315 | 2,0089 | 1,8975 | 01387 | 0,1787 | 4,9250 | 6,6636 відхил 10 96СМ | 586897 | 22,9088 | 29,8623 | 37,0944 | 16,8921 | 19,2940 | 14,2678 | 17,0900 10100000 |Медіана| 3,090 9,870 7,070 5,720 0,840 0,970 | 33,600 | 40,200 77777711 |Мінмум/! 709 | 728 | 372 | 206 | 061 | 062 | 27,80 | 30,30
М
Геом.се| 2,621 9,938 6,447 4,781 0,810 0910 | 34202 | 38,486 реднє
Виноски:
Примітка: Значення РК параметра були визначені за допомогою 2-компартментного способу.
Геом. Середнє - Геометричне Середнє
ІП С168 - ГРІХ активність вище базового рівня через 168 год. посля введення дози.
І2) ТВІ РІ - Оцінений час після введення дози, коли ГРІХ активність знизилась до 1 МО/дл вище базового рівня.
ІЗ) ТВІ РЗ - Оцінений час після введення дози, коли ГРІХ активність знизилась до З МО/дл вище базового рівня.
ІЗ) ТВІ Р5 - Оцінений час після введення дози, коли ГРІХ активність знизилась до 5 МО/дл вище базового рівня.
ІБЇ Поступове відновлення було розраховано з використанням модель-прогнозованого Стах значення, сгенерованого з результатів з відніманням даних базового рівня, розділених на дозу.
ІБЇ Поступове відновлення було розраховано з використанням спостережуваного максимального результату після дозової проби;
Поступове відновлення - (спостережуване Стах з відніманням базового рівня )/Доза.
ЇЙ /п-мімо відновлення - 100 х ( Модель-прогнозоване Стах з відніманням базового рівня даних/Доза) х Об'єм плазми (дл)/Доза в МО; де об'єм плазми в мл - (23,7 х Ні в см) -- (9,0 х УМ у кг) - 1709.
ІВЇ /п-у/го відновлення - 100 х (Спостережуване Стах з відніманням базового рівня ) х
Об'єм плазми (дл)/Доза в МО; де об'єм плазми в мл - (23,7 х Ні у см) -- (9,0 х УМ у кг) -1709.
Таблиця 14
Середні значення РК на основі рівня антигену. доза (МО/кг) доза доза (мг/кг) (год" нг/мл) | (мл/год/кг) | (мл/кг) | (год) Но Но (МО/кг) (год) | (год)
СБаБі3 | б8о6 | 5 | 11700 | 530о | 7 | 150 | 2 Мо | 140 5о
Шен
З 6,8 9 8 рр в в (в) 6 оз 7 4,3 еррртві вві т, ит тт 8 37 о 07 176 (г) 05 7 100 11720172 121215 71771111 бередне 0000 | вого | Безвхо| 29 | вою |в 13 | от» 7Ш202020201777777777756011111111 | во | зювво| о | 85852 |85| 407 205. 10вЕ00101010101010101 ро | зво | о | 685319 | 60 2170 теометризнесередне | 80120 | яБозвво| 23 | 2437 |082| 128 | 85.
Внаслідок корекції округлення або інших помилок, (а) повинне бути 0,46, (б) повинне бути 110, (в)повинне бути 12,0, (г)повинне бути 3,95 і (д)уповинне бути 101
Таблиця 15:
Біохімічна характеристика Фактора ІХ 000 Гамма-зарбоксилювання.у///| ЇЇ аа 1-23 і з6бсіа | 978 | 969 2 щЩ | 9956 (К1К2 пептид) о з64сбіа | -:-:( 00077771 Ї17771717110111117111101 аа 24-43 (КЗ пептид)
І зе4сСіа | 7125 | 54 | 0 карта
Таблиця 16:
Зведення термінальних півперіодів РІХЕс і ВЕМЕРІХ "М після однократного введення дози внутрішньовенно . 11111111 Види! | ВЕМЕРІХ тм РІХЕс 47.2 х 4,8 год
Дефіцитні за РІХ миші 46,2 х 10,1 год
ЕСЕМ КО миші 16,5 -3,0 год 16,9 21 год
ЕсВМ ТоЗ2БМНІіпі 14,2 ж 2,9 год 53,0 з 6,6 год 34,8 ж 5,3 год
Дефіцитні за ГРІХ собаки 14-18 год. х 47,3ж 9.1 год " ВііпКпоиз еї аї, Віоса, 1996; 88: 2603-2610 ї Мессапйну еї аї, 2002, Тнготь Наєтозві, 2002; 87: 824-830
Таблиця 17
Зведення /п и/йго КОТЕМО параметрів для гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М доданих у пули цільної крові
НетВ мишей до нормальної СТ (сек) (Середнє ж СЕТ (сек) Альфа Кут С) активності ЗО (Середнє 5 503) (Середнє ж 50)
ВІХЕ 0,074 2283 ж 209 1152 2170 (пе10 пулів) ТЗ Во 159 х 45 у 790,8 ж 30 226 ж 20 2019 5178 732 х 123 тм з (пе10 пулів) т090 ЗВ Зо ж За у 551,1 ж38 127 210
Таблиця 18
Медіанна втрата крові після відрізання хвоста у НетВ мишей, пролікованих гРІЇХЕс або
ВЕМЕРІХ "М
Доза (МО/Кг) Медіанна втрата крові (мл)
ГРЇХЕс (п-:15/доза) ВЕМЕРІХ "м (п-:15/доза)| Наповнювач (п -18) 0,101 нини 0,651 0,218 нн 0,298 нини 0,4567 0,564 нн 80 0,8474 нини 1,0097 0,918 нн нини 11586
Таблиця 19
Ех мімо КОТЕМО параметр у НетВ мишей, пролікованих гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М
Час (Сер сбвю 1 сРТ (сек) (Середнє | Альфа кут (ступінь) (години) сг х 50) (Середнє х 50) 0,083 599 ж 23 174 516 682 х 49 184 34 тм (пе4 мишічасову точку) 897 з114 то во ут 1141ж155 508 х123 96 | 1613 ж181 605 ж 92 0,083 700 ж 18 21329 836 ж 31 281 15 50 МО/кг ГРІЇХЕс 845 ж 38 285 517 (п-8мишей/часову | 96 | 957530 296 з 26 точку) 1014 583 342 ж 50 1139 х65 408 ж 41 1366 х 96 453 х 48
Таблиця 20А
РК параметри гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "м (200 МО/кг) після підшкірної ін'єкції однократної дози дефіцитним за РІХ мишам (антиген ІФА) полука х , оо нг/кг | мл/кгі год |год'нг/мл| Ні год НІ год | мл/год/кг| год | нг/мл | год.кг/дл: г/мл
Таблиця 208
РК параметри гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "м (200 МО/кг) після підшкірної ін'єкції однократної дози дефіцитним за РІХ мишам (аналіз аРТТ активності) нг/кг | мл/кг | год | годУнг/мл НІ. год НІ. год мл/год/кг| год | нг/мл | год. кг/мл: г/мл
Таблиця 21
РК і РО аналізи гРІХЕс і ВЕМЕРІХ "М після однократного підшкірного введення дози дефіцитним за ГРІХ мишам. днапіз АИС/Доза Елім. СУБ Ттах | Стах/Доза (ее) (год"кг/мл) | півперіод(год) | (мл/год/кг)/95 | (год) (кг/мл) Й
ГРЇХЕс 200 МО/Кг 0,041 0,00035
ТМ
ВЕМЕРІХ 200 | днтиген | 0,0073 23,9 114 10,6 | 000017 |233
МО/кг
Співвідношення шипи а В я я Я ПО ПОЇ
ГРЇХЕс 400 МО/Кг 0,042 0,00045
ТМ
ВЕМЕРІХ 400 | антиген | 00089 20,2 113 виз | 000024 |202
МО/кг
Співвідношення оди півперіод Сук Ттах|Стах/Доза (оо) о, о кг/мл) (год) (мл/год/кг)/95 | (год) (кг/мл)
ГРЇХЕс 200 МО/Кг 0,021 0,00024
ТМ
ВЕМЕРІХ200 |дктивність) 0,0047 172 220 16,0) 000010 |18,9
МО/кг
Співвідношення й г
ГРЇХЕс 400 МО/Кг 0,028 0,00037
ТМ
ВЕМЕРІХ 400 | ктивність| 0,0052 15,6 193 Іви | 000010 | 155
МО/кг
Співвідношення й
Таблиця 22
РК параметри гРІХЕс (50 МоО/кг) після однократної підшкірної ін'єкції дози яванським макакам.
М/Е АОС Абсорбція | Кінцевий сут Ттах | Стах АиС/ о 50,2 7,53 ва5
З
Бо | Середнє | 714 | 9800 | 779 | 605 | 835 )|257| 873 | 022 401 мок
ТЖЕе середнє
СМУоь середнє
Таблиця 23
РК параметри гРІХЕс (100 МоО/кг) після однократної підшкірної ін'єкції дози яванським макакам.
АОС Ге . АОС/О
М/Е Абсорбція |Кінцевий СУБ |Ттах| Стах
Група | Тварина ІЮ (год" (год" |Е(9о) (мл/кг) нг/мл) НІ (год) | НІ (год) (мл/год/кг) | (год) І| (нг/мл) кг/мл) 29109 1630 | 69800| 114 | 48 23,5. | 31 | 644 |0,0426 14,0 605097 | 561 |207000|1 52 | 492 7,9 18,6. 2250 | 0,126. 41,5 с35785 | 387 238000 2970 | 0,145 47,8
З
100 858 172000| 762 | 454 | 128 232|1950|0105 344
МО/Кг 50 671 89600 9,3 6,79 | 1190 10,0546| 18,0. "ЕІХЕс ЗЕ 388 51700 5,37 3,92 687 10,0315|10,4
Геометричне 797 твтобо| тив | яв 10,9. 22,6. 1630 о,о92т | 30,3 середнє
Суд
Геометричне 86.2 | 75.5 43,1 12,8 75,5 282 96,9 | 75,5 |75,5 середнє
Таблиця 24
РК параметри гРІХЕс (200 МО/кг) після підшкірної однократної ін'єкції дози яванським макакам.
М/Е АОС Абсорбція | Кінцевий сут Ттах | Стах АООС/Ю о 100 іх
Геометричне
СМ середнє
Таблиця 25
РК аналіз гРІХЕс після однократного підшкірного введення дози яванським макакам.
Абс. Елім.
ТРІХЕс дос . ; . . Сук Ттах| Стах середнє з з з з з 50 СУудь Сео середнє 100 СУудь Сео середнє 200 СУудь Сео
Біодоступність у діапазоні від 35,5 до 44,595 для гг ЇХЕс
Півперіод елімінації в діапазоні від 43,8 до 57,9 годин для гРЇХЕсС
Таблиця 26
Рекомендації з дозування гРІХЕс для терапії Гемофілії В . Необхідна концентрація Частота дозування
Тип кровотечі фактора ІХ (95) (години) 1111111 Носовакровотвча./7/7/7/://ЗГ/| //://СС7/!77777111111111111111
Гемартрози, неускладнені 20-30 20-30 20-30 11111111 Носовакровотвча.7/7/7/://Г/|.Ї ///::27777////!777771111111111111111
Внутрішньом'язова з розсіченням 25-50 25-50 25-50 25-50 25-50
Гемартрози, з обмеженою рухливістю 40-80 50-100 24-48 50-100 24-48 50-100 24-48 50-100 24-48
Хірургічне втручання 50-100 24-48 50-100 24-48
Пацієнту необхідно проконсультуватися зі своїм лікарем, але він повинен приймати тільки 1 наступну дозу не раніше ніж через 24-48 годин після прийому першої дози.
Таблиці 27А і 278.
Порівняння даних з використанням розрахунків в (А) Прикладі 1 і (б) Прикладі 11.
Параметр (середнє х 50)
Поступо ве Час до 1
Доза АШсСіме С відновле до вище (МО/Кг п (Мол (год- | (мл/год/к млн (од) ТП/годго| Т2р ння моту базового дп)| модлу| г д д) (од) | (Мо/дл ДЛ | рівня на (День)?
МО)" 41,628,9 | 163075 | 3,7 71,1 717513, 11,7941,11 52,1:10, | 0,86:0,2 | 2,23:1,4 | 9,2941,9 98,2-8,2 | 3930-89 | 2,89:-0,6 62,8:28,8 | 9,99ж4,9 | 52,5:410, | 1,020 1 | 4,38:71,5 | 11,6:21,9 25-100
Параметр (середнє х 50) (Діапазон)
Доза АШСМУ Поступове тб вище (МОУ п Стах (год" С У55 Ме т(год) Тидою | Т1/28 |відновлення| Свв «| базового (МоО/дл) (мл/год/кг) | (мл/кг) (год) (год) (МоО/дл наг |(МоО/дл) -
Мо/дл) х рівня
МО/Кг) х (День) 2,46 47,5:112,8| 17002550 344-084 262555,4| 76,8-6,7 | 3,4 53,4 | 57,5:28,2 087-021 0,89 10,1 ж 50 |51 (33,0- (1300- (205-418) (163- (67,9- | (0,13- (47,9- (063-142) | (1,63- 1,5 61,1) 2660) мн 296) 85,9) 8,72) 67,2) мм 392) (8,4-12,3) 4,65 98,5:-7,9 | 40202986 2 ван0,66 183ж227,9165,9410,3 | 10,3ж5,6 | 56,5:14,1 1,024071 173 1123 525 100 151 (90,8- (3090- (213-355) (162- (53,2- | (3,97- (42,А- (08-18) | (308- |(9.9-15.0) 110) 5130) ши 221) 76,5) 16,6) 74,5) мм 585 м 227 ж 71,8 ж 56,7 ж 3,18 -0,78| 58,6 10,0 10,9 0,93 0,18 25100111 мА» МА5 о еов-аляМ (162- | (532- | МА8 | (дам | (0638) | МА5 |) МАВ 296) 85,9) 74,5)
Представлені результати є середнім 5 50 з діапазоном, зазначеним у дужках
Стах демонструє максимальну концентрацію; АОСТМЕ, площа під кривою (нульовий час, екстрапольоване до часу на нескінченності);
СІ, кліренс; М55, об'єм розподілення в стабільному стані; МЕТ, середній час затримання;
Т1/205, півперіод розподілення; 11/2 р, півперіод елімінації; МА, не застосовне "Поступове відновлення було розраховано з використанням спостережуваного Стах з відніманням значення базового рівня перед лікуванням і розділеного на дозу
Т Плазматична ГРІХ активність вище базового рівня через 168 годин (7 днів) після введення дози
Її Модель-прогнозований час після введення дози, коли ГРІХ активність зменшується до 1
МоО)/дл вище базового рівня суб'єкта 5 Дані не застосовні, оскільки параметри не є незалежними від дози, у такий спосіб середнє і 5О значення не були розраховані в різних дозових групах
ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ
«110» ВІОСЕМ ІЕС НЕМОРНІПА ІМС.
Ріегсе, Сіепп
Тгіцех, Затапіна
Реїегв, Нобет Т.
Уапод, Наіуап «120» ФАКТОР ІХ ПОЛІИПЕПТИДИ ТА СПОСОБИ ЇХ ВИКОРИСТАННЯ 130» 2159.273РС06
«1405 РСТ/О052011/043569 «1415 2011-07-11 -1505» 61/470,951 -1515 2011-04-01 -150» 61/442,079 «1515 2011-02-11 -1505 61/438,572 -1515 2011-02-01 -1505» 61/430,819 -1515 2011-01-07 -1505» 61/424,555 «151» 2010-12-17 -1505» 61/363,064 -151» 2010-07-09 «160» 4 «1705» патентна версія 3.5 «21051 «211» 7583 «212» ДНК 213» штучний «220» «223» РІХ-ЕС ланцюги ДНК (ремм-РІХ-030) «4005» 1 асосоасаєса асастоаста їтоастадікї актзатаата атсазаттасу дутсасва9 бо
ЖЕсатасссс атїтатакоово сессосакта сатаасїттас дотазатодс ссосстаасе 120 чассосссаа свасссссос ссаттуасоє саатаатчасє атататтссс атадтаасос 150 саатадачає тсссастда сассаатада тодачтат асааттадаст ссссастсоо 240 садбтасасса зосотатсак асудссазута соассссстаїтї тоасчтсват часовтаває 300 даасссодєсто осаєтаєосс садтасатуа сстітатоадца сттксстаст рюсафіаса 360 тстасосатс астсатсост астассасєоо суактасоадеє сеоосзасає зісзатодас 420
Ятадаїтачсо чістодастса сододаттсс савуєстсса сессаттоас дссаатодоа 480 дсстосеєто осассзааах сзасозчаст їкссвавата їсоїзасаас тссдсесссах 40 єдасосваає ззсовсачо сатосасвдоє бдозадосеста сакаадсача астстстє 600 свастазазча асссастост тастоастта їсозаактаа тасозстсає тзтаоудацча ОБО ссесааосесс осоасогаса ассассасса тосаососаї азасатчатс атоосацааї 720 сассваосст сзісаєсакс кассмлтза сататстаст саотоустова тотасавоє 780 дБ тасткссккт тттааазтає ахтазатата сттоасстІї адататасаа ататстоао 840 статсттстт саставаттї їдаїтасасо асстсасавс зататєцаза адєстаасад 00 ссадсасоса уассоосаао састосовоа асатсасада стстодастсс ахтоассстаза 960 задаааєсоЗ сссссадаєх асссвозтта аазасаваца сіттсктазго адататааваа 1050 жесЕсвтоас ЗЕЕСЕсТсеК стостаааас гзазозатта тестіІкттаєа їхтїсавтх 1050 тсЕсоаксаї дзазасоєса асазааттст даакєсоюсса азодадотата атісадотаа 1140 астаозчанцау скат сзац сода стаца даЗадаз аїшазазааа аотасзакх 1200 таазаазоуса созоуавоатиї стозалпасас сдпадасаваса астдаате ддавосауа 1260 таїтоаточа чдаїсачіоїто адієсаатсс аєціїтазаї досудсавеє дсайодаєоа 1320 саттааттсс татааататї детатсссеї їосатттоаа соазадаасї всоаассада 13850 тасаасатає засатівада аїоасачато созосасіїї соїададаиса осостлаєай 1440 сааадціЧаЕ тостсстота стовдодаєа їсуастсоса ддаавассаця ацбссстохай 1500 ассацсаута ссатттссає згузаазаві стстєєса сазасттста адстсвссса 1560 тастозоаст Ззсееесссто асєзєодаєта татазасєсст зстодаачста авассатт т 1650 пшфатсавсатс астсавадса сссваєсакт тзасоасесс асссодатто стоадтодача 1680 адасадссайа ссадоєсває ксссєсооса досто закодтаазу сбозтасатх 1740 стшсвовдос тстатсотта асдааачаку дастосваєт остасссаст дтохтоаває 1800 тдасцєсаза аїтасазєто ссосаросоа асасаатаєх даводззасаз аасаїасада 1850 дсавазосоа засуєцаєсс давстаєтсс їсассасаас тасаатосад статтватав 1950
Чтасаассат сасатіцссс ттстодааст доасоваєсс стаотостаа асвостасах 1980 тасасстаїт тосаїттосід асадодайта сасозасатс схестсааат ттодатстод 2040 статагааої достадодда дадісстїсса саазацозоз ссафстттад ст кезата 2100 ссітадачії ссасттоєто ассдадссас атотсткисда кстасазаді їсассатста 2160 таасаасато С(стотосто остїссатой асозудтада даттсатотє азочадасад ага тосдовассс саїоітстаста аасіозазза зассааккс стзастодав ттастадста 2280 зчасзазово собгазсавасоз задосазата тодвататат ассзачатає сесататух 21340 саастозасї ааодааадваа сааавостсас їтдасазазст сасасатуєс сассотоассс 2400 азстссодаа стсстодосо зассоїтсаці сттестсттс сссссааває ссаваодасасє 2460 сестсатаатс ссссозасесс ссоваоатсяис атодсактавко чкадасавта зссасдазаа 2520 сесстоздчіс аасіїсзастї здетасутода сузсуєоЗзад зсаосатзато ссзазаєзаз. 2580 шссасодоазо ззасазтаса асадсасота ссуєуєовєс адсотестса ссоатсстаса 2640 ссаачасєсоо стазатвоса зашзитасаа сосвааЗоюс жссайсваао сестсссазс 2700 ссссаєсово зазассатстї ссавадссва адодсадесс соаодассає здасосасас 2758 сетассссса тессааазка воастдассаа даассадаєс авоасскуассї дсстоцсва 2820 зоачстжстат сссацсчаса їсоссатада дсовозадос затодасаце соодовасаз 2858 стасаздасс асасстсссо сосбодастс соасодетсс кусттсстсх асадсзаасх 2940 сассоатачасє аволосацє засадсазод заасеаєсєкс ссатастесо кчатосатоа 3000
Фстстсас аассастаса сосасашщнн сстстссста сСтесадота затозоазатх 3050 сацасатоак аадатасаїї датовоссто сасаваєсає застаоааїо своїдавава 3120 захтастттат тттораваєт босдасоаста сстастетаскь тосвассатх атаазстоєса 3180 атааасайсії тоаосоЗос дпасоваєєсс ассаєозове сессососте дадовісатє 3240 садссодечї сссодаадає раїсссозваз сссваєстьє сахзоаадас доосооходаз 3300 тсочазватстс зіеасасоєо саотсстас тестсцасса соазадтоасає дсзаттоассо 3360 зссодоссос осаодасоза стсссосссс сасодстаст соассуатсто дуссатасс 3420 зосссодадо соїсссодаа чххсатоаас асцасстоса ассастсчас пгасадетсо з48о тссадоссос дсасссасає ссадассааа зкаттоіссоа осассасєста чесстоадасс 1540 осастзаєза асазчозісає фусоїтєссов ассасассоо созаацтістс стссасоаад 2600 тсссодоваоа асссуадесся дісодтссая аастсдаєся стссудсцчає десосоасасиа 36560
Чктдассассо паасоусасе зоссзастсо оссатодітх аоіїсстсвс сітаїсотах 3720 татастатоає соасатаста боссраєоає тааттотсва сасотдєтоа тсадасссоа 3780 азатоачатат асасгестссс айаоаєсет касаазаасє гасдсстсса аававодссс 3840 стсастасеє стосаакачс ссадзочсви асо засстстоса сазаатадава 3900 зааєсацзеса зссатадцочє чозазатаса соспаастяца сздавасєсаза пасчазаєда з950 озсозазссвзо зчдасаччаст асзастасто аставттова аїкасассї соасасассс 4020 тосстостоо одзоасстозо дастттссас асстоцітос тозстааєсу вааскасає 4080 кссосахтаст кстосстоаєї додоазссто додастттсс асассстсує сзаастацеєє о тсеатазааст ссчуктасссо їсзоіддоса дадсосасає сосссасадї ссессоввад 4200 ттодоуоцоза 9дЧактсадсаа їтоаассоиИ Ясстадаова сосоовсосво вобавастод 4250 дзаазкаатеа ксототасто остссосст їїтсссоаваа зтаанааца ассататата 41320 зустасадтад тсоссуєва сесесессЕ сосвасодох стдссассау засасадата Зо вакассататх атасесссоа совасстоос стстстасцоа остатдассс ктасахасстх 4440 тазаєтастт ссасстадсеї ссаотасота атжстєзаєс ссоадснюв дссадоваса 4500 чассттасасє ітаоазес сессесосстс отостєоаох хоаовестов сстовасаєх 4550 чачассосса сесусааєс тоотвосасс стсососста тстсастост гтсаатавох 4620 стствассаї тазааєтсте сраєдассто стоасуасост піт їссоо сазозхааїс 4680 тктзказнатас чдуссазЗат стосасаєсо гассссЧаї поитоавдасс ссочасаса 440 асдачусссо тосотсссад сосасасас: соаасазадса ачаасстасаа ссоасоадссас ай саацчаатсоо асодадчатай стсавостоа дссдасстасЄ стае сІ Ффсстсасас 4860 соссаттат соссссоссс сооосодсва Чеаствзссса весоосаєса уссосотоза 4920 свазавцдаєи десасттссс пддссстосес сададуасес зазасодаао асоасодсосх 4980 сооадазацсу оосодасчая тсасссасас аваддлавва десскссса коссвассо 5040 тсасктсата тдастсосасо заусассодо соссуєссав зсасстсдах тасккстода 00 осттттваза тТасотсасст сезоостодоа одозуаоаах статасчато чав 5160 асастазута зсоцнас дазастадос савсетвуса сттдататаа ТЕСТесСІттац 5220 аатттассст ссссоаасЄ чоаесттавх саттстсза осстсваавса акаде сада 5280
ЖЕ сс тсвВа атоссотоза сасотодісєд свдссососс дссассахоо 5340 азасацчасає астсстоста тодастастоє тостетодеє тесадоаєтсс астдоатався 5400 заастсасає акасссассо тосссадсає стозастісстї зобаддассо тсадістсе 5450
СЕКосессс азаасссаво дасаєсстса їдатстсссо васссстоао оісасатосо 5520 таакадтооз сотдаоссає уазайсссто адуєсадеєє саастозтас зсдоасодся 5580 тдчасатаса тзатассаау асаавассос дорадоаоса обасаасвоє асотаєсоєо 56540 тааксзоасат сстсассЯєс стосассауу ассзастоаа соосаводад сасзаєтоса 57 заацістссаз саавуєсстс ссацдссссса Єсовозааає саєссссааа дссваадоаоєс 57650 адассссозда ассасацаєу сасассстус ссессаєсссо сдасовосто ассазозасе 5820 задтсзасст дасстоссто зссазаааост Єстатсссаз сдасаєсосе осооакооа 5880 ацдацсватод осадссоцає засаастаса здассасосс єсссосоєсе озстеєсоасо 5940 астесттстт сстстасвдоє задстсассо хтодасааово саодідосво саодоуаасо 65000 тестсстсато стссосчасо сасоядасес косасзаєсса стасасосво авовассісї 5060 сестасстсс оздсаяасоя сссодазчає стозесаосє адасесац сазадатадод 6120 скстакссстя асестскссх соцкстсдах сгстазсосата ссадісатса ссассассає Іо саставакс азасссаста аксносстсо астатасстї стазстусса дссассеоєх 6240 пстжассест ссоссутасе хтіссттцаєс стодавоадта ссастсссає тоїестевсс 65300 їааївазата зддалаткос аїтсосаттої сітчаста зЕсастстає сссодоЧавє 350
Чадаходоас зодасєлосаа ододоаодаї тодозадаса аїадсаодся бассоцадає 645) чсадкдаасі статодєсттє тдадосодад аоаассадсд усоутватас паста сссас 6480 асзаїтсадуо озіїзасосаа даазозасаї стдадсаааа доуссадсааа звоссадова 5540 ссотааааза оссосоттеоє тодосоїї: ссатавоасто соссосссто асдадсакса 6500 сазааатсуа состсавоатє авоаодосадсо ааасссодса одастатада забтассацос Бобо акхтссссст зоаадстссє їсотосЯстє їсстоттссо ассстдсєсоє сстассодата 65720 сстакссасс пгттстссстї содоазаоасоаї оосастксЕ саїдасєтсає зссатацака 6780 їстсаоттса актадчатсо їсостссаа остосостЯЄ отосасувас ссесссускся 6840 чессдассас тосссттат ссуостааста тсоссттова їссазсссза таадасасоа 5500 стітатсосса стодсвосад ссасточіаа сазосаттяацсє водаосовочі абсотадосао БУБО тостасадац сксттодазої датоддсстаа стасодстас астадаацва сазтаєссов 7055 тахкстосасх стосторавоє сацтїтасстї содазаавоаа сітадсазст сетоаєссоо 7080 сазвасидасс ассестаасз соках сгеттаттє авасацсааа стасусосад 7140 аазаназода ссссанозаз абтсстткоах сттсістасу поддестдаса сесвотодаа 7200 созвазастсвя саккавнюа ЕккцЧатсах дасаттаасс татавадата пдосотатсає Те папчсссттх сокстсасас одкхтсодкоа кчасучічаа аасстствас асатусаося 7320 сесададчасо дісасадстї честотавос оса сює аосадасазва сесахсввао 7380 сасоїсаасо дат9стодсЯ дагоїсоо99 ссосттаас сатосодсах сзавасздах 7440 їФфастоузоа Фкосаєсата таїосооїзї оазатассос асауатосає заддадазай 7500 тассосятся дасоассаїЕс ессяттсацзц стососваст остоздоза9зо всзатсо999 7560 соадосстстї састаттаса сса 7583 -21052 -2115 688 «212» білок 213» штучний «220» «223» БІХ-Ес ланцюги «220» «221» СИГНАЛ «Рог» (1).(28) «220»
«221» ПРОПЕПТИД «222» (29).(46) «220» «221» Зрілий пептид «Рог» (47)..(688) «220» «221» РІЗНЕ «222 (1)..(415) «223» ГРІХ ділянка «220» «221» РІЗНЕ «222» (416).(688) «223» Ес ділянка «4005» 2 меж бій Ага Уа! А5и меж ті меї Аа сід бег Рго біу ме 118 тТаг -45 -40 -35 ті Суб бен бен біу Туг сечо їви Зак АТа бід Су5 Тнгоуаї РНе вер -30 -25 -29 -15
Авр о нів бін АбБп Аа ах о сух Ті ей Аяп о Аго Рго бух Аг туг Ази -10 - -1 1 его оіу уз іем 5іш бій РМйЄ Уді біп біу Ахп ву бів Аг ої сСух 5 10 15 мех сш сі вує Сув 5ес впе бій бій Ай Аг бу маї Ре о1и Авп 29 25 30
ТАгобТв Аг тиб тб обід РНе Тер о гу5 бів Тук маї Ар обіу Ахр сів що сСуз піц баг Ап о рго Суб без Ахпобіу бі Звг бух Сув АвБр Ар о ї1е во 05
Ап бек Тук бін Суз Тер Су Рго Ре біу Ре 51 біу ух Ап сСух 7 75 80 сій їви дер узі Тве Суб деп т1іе їуб5 Аза с1у Ага Суз бі біп вве 85 зо з5
Сув уз Аби бег Аа Ар одн бух маї Уаї Сух зек Суб ті б о1у 100 305 що
Тук Ак цен АТЯ СТ АБИ біп ух б5ег Сук бЇи Рго Аїа уаї Рго рве 115 120 125 130 вео Су СІу Аг Уа! Зегомаї Зег біб Те его буз Сей Твк Ак Аа 135 140 145 січ Типг Уа! РМНе Рго д5ромаї АброТує маї Ап бек Тиг осів Аа бі 150 155 160
Тиг їв беи АброАБиа Ті Те бій бек Тк обі бЗес Рпе Ап о А5рорРНе 165 170 175
Твг Ага маї ма! біу біу біб АБр Аа зу Рго пфу біп РНе Рго тгр 180 185 190 бій маї маї цей Аби 0іу уз маї А5р Аа по Суз б1іу б1у бек їв 195 200 205 210 чі Ах бі фу тро ї1е УЗ тТВг о Аїа АТа нів Суб уді бій ТАБ обу 215 220 225
Уаі ув Гі ТВг узі узі Аа біУ бів нів Аза Т16 бі бів тТВг обу 230 235 240
Ніє Те обід сів бує АР дей Уа! 116 Аго їі їіє вго Ні5 нія Або 250 255
Туг Азп АТа Аа ї18 Азп вує Тук Ахп нія Ар їі діа ву без 01 260 285 270 ген оАзробЇш вго мен мщі рей де Зег отуб ув! Ве о рго їТ6 Суб ї1е ра Ра 285 290 бо дів Ар оух бі Тує тйг АБО ї1е бе без бух ве С1у бег сіу Туг 295 300 305
Ууаї бек біу Тер біу алго маї Рвйе ніз бух біу Аго Зек Аїд (ви маї 310 315 3829 цеи бій Туг о іви Або Уа! бго бен маї Азр Ага АТа тик Сух мац Аго 325 330 335 «ес тТиг оКух Ре тТАг о тТе тТуг дп Аа Меї Ре Сух діа ціу Ре нів 340 345 350 січ біу сіу Аго АхроЗег Сух бій б1іу д5р бек біу біу рго нів ма! 355 360 385 370 тТвг обі Уві бін біу тТвгобає вве вео ТвВгеосіу їів ї1а баг Те Фу 375 зво зв сі бі бух Аїа Меї суб біу муз тує біу їв Тур ТиК ух уаї заг 390 395 400 дгу Тук уві Аа Тер їТе вує бій Су ТАг Оу ви ТВгоАробув тв 405 410 415
Ніж тТйк Су Рго Рго Су Рго Аїа Рго біб без бец біу біу Рко 5ег
А20 425 430
Уаї ве цец Ре РГО Рго уз Рго Суб дер тТВг о цец Мет ї1е 5ег Аго 435 440 445 450
Твговго біз уаї ТвгоСух маї уаї Уаі Ар оуаї баг Ні 910 Ар о рго 455 480 465 бій маї ух Ре АбпотТгротуг маї Авробі Ууді бій ма! нія Аяп Аза 470 475 480
Муз Тк огує Рго Аго бів бін бій тТуг деп Зег Те отук Ако Уа! ма 455 що 495 «аг омаї цен тТагоУаї цен ніх бій А5ротгросви ап обіу уз б1ц туг 500 505 50 цу Сух мух Уаї Баг АБИ ух Аа ви Рго діа Рго ЇТе бів Був ТВ 515 520 525 530
Хі бег о гух АТа їх бі оп РО Аго бій Рго біп маї Тук ТВК оре 535 540 545
Рго Рго Заг Ага Ахробіц би Твг о Гу5 деп біп Уа! бБегозен твг о сСух 555 550 цей ма! уз сіу РНе Тук рРго Зек Ар хе Аа уд бін Тер би 5ег 555 570 575
Аза Ту біп Ро бій Аби ди Туб Суб ТВеОТВК РКО го УВІ Кен Ахр
ЗО 585 50
Зег Ахр о біу заг РМе РНе ву Тут бек Суб їец ТАБ о УДІ Ар бух Заг 555 БО 605 510
Ага тгтро ап ан піу дей маї Ре бек Суб бек уді Меж ні «1 Аа 515 620 525 сей нів Аа ні Ту ТАЄ бій ух баг ви бег їеу бек рво Ту ув 50 535 БЮ «210» З «2115» 741 «212» ДНК «213» штучний «220» «223» Ес ДНК послідовність «4005 З атоздачасау асасастсст остатодата стостастс спот тссвоая сессастодї БО дасаааастс асасатассс ассяїтдаєсса псасстузає тсстодавуя ассоєсваєс 120
Ессе ссссаваасс сааоаасаєс стсатоааест сессадасссс созоддссаса То тосаспоссо содасокозо ссасазачцає сстодочіса аастсаасто абасосопас 240
Ччасасосаов госасзактоє сазуасааад ссосодовод аосаобасаа сарсасеває за0 сасатадеса сатсстсає сакесстосає саозастовс созаєсписаа зуадсасаво з6о0 тоасазаціст ссзасааадє сстсссадес сссаєсоаца ааассаєстс сазадссава 420
Ччавсаосссс дадаассаса чакастасасс стоасссссає сссосоасоа астуассаво 4кО зассацвіса осстдассту сстодссада дасеєстаєс ссадсосасає сассоточаа 540 тядазузоса аїсцасацес чддзавасвасє басаадаєса сосстсссах оітадастес 500 часоастсст їсттсстста садсааостє ассобтодаса аозадсавосо дсардсаЗацо 650 аасахсттст сатоастссоає затосатодау зессстосаса ассаствсас осацдавоавас 728 сіІстссстаї стіссацатаа а 741 «2105» 4 «2115» 247 «212» білок 213» штучний «220» «223» Ес ланцюг «220» «221» СИГНАЛ «дд2» (1)..(20)
«223» сигнальний пептид легкого ланцюга гетерологічного мишиного Ід «221» Зрілий пептид «РРО» (21).(247) «223» Зріла Ес послідовність «400» 4
Меж біцч Тк о Азр тТйг Бев сей ке ТРр ма! (ей ву івц Тгромаї Рво -28 «5 -Ю -5 б1іу бек тТвгк бі Ар вух ТАК ОМНіх ТИ Суб РгО Рг Сук Рг Аа РгО -ї 1 5 1 зів бец фен сіу біу Рго Зег ма! РЕ бец ве го вгОо вуз го уз її: 20 25
АЗротТВг о бго меж же баг о Агуу тТвгоРго біз маї тб оСу5 Уа! чаї ха зо 35 0
Авр ма! Зег ні ші АБр Рго біц Уа! уз Ре Ап о тТгроТук уд! Ар 45 50 55 БО с1у ма! січ Уа! Ні Абп Аїа Суб Тйгофух Рго Аго сім бій біп о тТуг 655 70 75 деп бег ТВг ну Ага Маї ма? Заг омаї еп тк маї цем ніх біп А5р
В 85 90 тТеріец Ап біу ух Ти тує ух Суб ух маі бек дв вуз АЇЗ Сем
95 105 105
Бго аіа Рго ї1іе біб бує ТВгОліе Зегокух Аїя ух піу Бій РрРо Аг
КяК; 115 120 сім го сіп Уа? Туг Тиг о їви Рго рРгОо 5ег го дербі се Те бу 125 130 13 140
Азп обіп Уаі баг сени Тс оСух ву муаї фує бі Ре Туг Рго Бег АБр 145 150 155 ї16 Аа уУді біз тгробім баг Ази б1іу бій бго бій Ази Ази Туг Гу 165 165 170
ТвАг тА овРОо вго мМаї іви Ахробег Азрос1у баб Ре вве сеу Тук бак 175 150 155
Куб фреш тТвгоУаі Ар ух Зег Ага Теробів біб су дей уаї Ре баг 190 135 20
Суз бЗег уа! меж ніх бі Аїа Сем нів Авп Ні Тук Тс об груз баг 205 210 215 22
Мей бек ву бБег рго біу гу

Claims (18)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ
1. Спосіб припинення або запобігання епізоду кровотечі у суб'єкта-людини, що цього потребує, який включає введення суб'єкту химерного поліпептиду фактора ІХ (ГРІХ), що містить РІХ та ЕсКп зв'язувальний партнер (ЕсРп ВР), у дозі від приблизно 50 МО/кг до приблизно 100 МО/кг з інтервалом дозування від приблизно 7 днів до приблизно 14 днів, де БсКп ВР містить Ес людини, і де рівень химерного поліпептиду ГРІХ у плазмі крові досягає мінімального значення щонайменше 1 МоО/дл через 6 днів у суб'єкта.
2. Спосіб за п. 1, в якому людина хвора на гемофілію В.
З. Спосіб за п. 1 або 2, в якому доза становить приблизно 50 МО/кг, приблизно 60 МоО/кг, приблизно 70 МО/кг, приблизно 80 МО/кг, приблизно 90 МО/кг або приблизно 100 МО/кг.
4. Спосіб за п. 1 або 2, в якому доза становить приблизно 50 МО/кг, а інтервал між дозуванням становить приблизно 7 днів.
5. Спосіб за п. 1 або 2, в якому доза становить приблизно 100 МоО/кг, а інтервал між дозуванням становить приблизно 10 днів.
б. Спосіб за будь-яким із пп. 1-5, в якому РІХ містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 90 95 ідентичну амінокислотам 1-415 5ЕО 10 МО: 2.
7. Спосіб за будь-яким із пп. 1-5, в якому РІХ містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 95 95 ідентичну амінокислотам 1-415 5ЕО І МО: 2.
8. Спосіб за будь-яким із пп. 1-5, в якому РІХ містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотам 1-415 5ЕО ІО МО: 2.
9. Спосіб за будь-яким із пп. 1-8, в якому Ес людини містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 90 95 ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІЮО МО: 4.
10. Спосіб за будь-яким із пп. 1-8, в якому Ес людини містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 95 95 ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІЮО МО: 4.
11. Спосіб за будь-яким із пп. 1-8, в якому Ес людини містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІЮО МО: 4.
12. Спосіб за будь-яким із пп. 1-8, в якому РІХ містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотам 1-415 5ЕО ІО МО: 2, і де Ес людини містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІЮО МО: 4.
13. Спосіб за будь-яким із пп. 1-12, в якому химерний поліпептид ГРІХ додатково містить лінкер, що з'єднує ГРІХ і РсКп ВР.
14. Спосіб за будь-яким із пп. 1-13, в якому химерний поліпептид РІХ знаходиться у формі гібриду, який додатково містить другий поліпептид, де другий поліпептид містить другий ЕсКп ВР, пов'язаний з ЕсКп ВР, де другий ЕсКп ВР містить людський Ес.
15. Спосіб за п. 14, в якому ЕсКп ВР і другий ЕсКп ВР зв'язані дисульфідним зв'язком.
16. Спосіб за п. 14 або 15, в якому другий ЕсКп ВР містить амінокислотну послідовність, на щонайменше 95 95 ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІЮО МО: 4.
17. Спосіб за будь-яким із пп. 14-16, в якому другий ЕсКп ВР містить амінокислотну послідовність, ідентичну амінокислотам 1-227 5ЕО ІО МО: 4.
18. Спосіб за будь-яким із пп. 1-17, в якому химерний поліпептид ГРІХ вводять суб'єкту внутрішньовенно. Мономерна ефекторно молекула в щ е КОЗИ ть тки «сон В фо Б мав ЕВ оо и Чую ть р у Ж «Ж З і г; сте | ей ЖЕ Ї І я і; с, - Зк 5. : Й Мо Я «Кий ее Нй що Ж Е щи Димерна мслекуда «ріг. ВІХЕс концентрація по віднаекенню да часу Я Місорівчяняя до Ї Легенда: Дка в МАК/кг Ей Гезнки пагобинссуєй х Станд. ламилка ї Е мито с а ле пе - 5 х Ше: пн жк - -8 бю пн ДНЯ х ду Мак - сх Е нею Дн, Ши і пен НК - Шу Пн, Ша и не НІ ЩІ 5 в рами В о НИ зт ш і ши Ди и ЧИЯ ч. им і 1 шин її З ча за як ХЕ З 5 ча
Фіг. 7
Коб Скоректавана пляю бзловогах дівних ЯХ актменість яке віднаценнкй І дочасу Ї Гіоркяняння до Н Дегекда: Доза в МЕ/я Е Планка вогрнівеєтем з Станя, пока шОнЖх зіва КЗ дл за ТУ Е ко - х : Ше ж ню Е зт
8. т ко ще дан я т Я в й Шик Ши чи ин К; т а а З і їх ча и тону г ї у те ов сн й Ся вк зв Ме пн м ща Ї ві ї- ? У Н ІЗ « : е КО ЧАДА ПИ ще ПАК НА ОО; о ЕТ Не я ЗВ я Же ї Часігї
Фіг. З Дерева рішень віднімання базового півня /85 оцінені БІХ ран а продо жжихо ха зов свнгазихо «асових сочках ! Предоха х кріт І Предозу « Скрінікг ща у Я Й Диня ее ш- Ше а шт я - нн да плете етесессов - а ня Ї Прадоза 5 ІЯМХ 5: Прадо Ле о, Ї Предоза їх ЗК | і Нредізаз ЗОМ: пеннннння поннннннн нн нин я в пон нини інн зн мае і Н 4 я Ко пох пиши рн нт Від хскрішнє я І Взирадно 1 Й Щі ве овянг. і Ка ке Н М : вохленнвяох о и НИ я 3 днк сллня й х ке нн МАААААААКАААТИАААААААХААААЛЯ Н сСкрічіну 5 2 | | Скріні х 2ДК Глен тт Ко Взіквннщи 1) бе м вео В х віднімання базовотт піщея НО х зведений де базового щоня з гнкористамняки знаєучною перкду нахівавнвидення змести БЖ нап, ІВ г
Фіг. 4 я че ж з Ж з пенюо ВІ ВАЖКЕ дере Е ' хх пллянх З май їйе«бі Е с т Щі сн ЗДУ Мік ів, й | та я я Ше Ше Ж ше Ше 7 реч ка ек з В Мак Шк а В тки. в що й Ї Шо Ш- Ше - - ї и ПВ пн вв х Шо - Ше « те, й ра о ванн - Е вн р ме Дн г Мас Е те ж ЩА і 5 в че те зва Гак част;
фіг. 5 А о к ; їх 4 г ї., ше зе В бе ю З. жи Е аз т в Же Ха о, М ! щ - й " ех ее оп ве. Ва а - че зва часі В шк хх ії ру їв в Ком й. І же й п вх й щ ее че в ЖЕ Е х хе яке я й Ж ге се, с щ-ї й
4. офролооллаларлллу ат ртую лат рллауєь у нн а че че 288 зва час
Фіг. 6 пончо я М 1 знє За хжде рем г. 1 сяняя Бдожіг щен У І пн ЖК заврки фе, г тасіха Я. х Кк у Е 1, ва теж, шк х до, Ши Її ще м и синя тенту - пло, виш меч х і в етики тя ж 1 зе пон, тя пжнкя гЗ т 1 зве Чак (я
Фіг. 7 А, За Е 4 1 ж х Е зорю І Б М т 1 ше Ї «екшн Зі СЕ певна ванню влас тини лани лилия ния хни: зи ин нн зних нині зн кинь г 9 1 28 Чак ік) В 00000 4 З ; І х І т ло шо Е а я 1 Сх х 1 ДЕ» Е іа Е Ши ще тя КІ Пн пКнонажни Г-і і пен Ж і ск 1 я ДЖ просусттєт суток окосту ринтуєтеюєня о вк че РУ часі «Фіг. 8
! ра і й ж. : 7 щі ж й «оз вл М чи ь Е х й, РЕ Жов Н Ж й о. ?. ж ренртннтнннтн й У" Ї вееают Н к І Б'холюди ; ов «й МОЄ Гх Н ай ї т ж ве і й е й ен не ин Ви в в В й Зак що Зх ВвнЕ г хБс антирена (нт мл)
Фіг. а Бескохо НИ
ЧУ .". іні -т--- пуер есте пн вн пт іо щі нівовя. ска АсттЕР каталітзезний тк і Її КІ к і ї ГУ к Мол о вижене НН НН о кдлхлллх плиті віха пла лі іх пла хол АААЛЛАЛАНІЯ НЕ Її п | сь і | повин і У - й - - : т- й СТУ Гамзхзрінисійравака . й ЩЕ тика ро Внутркомколаннютвий Ки сненінсная хкожия Ж рчлакхомлірування РО Основу і сизифідни ява СЯ Н ох ЕХ . в деовнове ща Зеров; сульдатація Ф В-гідроколігтувани «Фіг. 10 і КІККа ше віх чат 8 8 мономер І Й - де Е вада со я Мн З веде наікнянанвї «да ва скраю ще дна З Пса ДероВНЯ щУНДЯ ек КЕ Мем вен Шедз споБее»; мож Я: микоаг ДИН А. о уфжерд и уми: я НЧХУ т: КІНО ВКЮсе ШЕяда Бе ема У Кеди СК : Ме АДУКОКК КО КЕТОрЕВНя БЯДЕ су Янко
13 г т БІК з Ох т « щ- Дутивністе р Ж знивання (МЕ Се ї млі ко ши , ва я Ж ка вт : Ж : й 2 4 що ва яю часі
Фіг. 12 сени пишне нн шин ! ' з БІХКе в РІ ва ; , т ; і ! вет ; ; В Н Мей я Н нровчо, що | бен звивається «пі і Е феснннннкне ї : ГК) ЗЕ 5 ВИ З ВЕ СТЕ кА ЗКУ я В СУ ЕХ ЗУ чЧах іт
Фіг. 13 зе ї Ф Розрахована звивання і х | щ Визмеряне зання в 5 8 і ! у х І" ек ї г з 1, ЕХ у плазмі ; У ке їж (МЕ Ин 3 се : Ме Їж й НІ Щі т ту АН К ї 7 Шо ; 3 жо У т ще ІА. вл : - Я а х Н КІ нин а го ВИ ЕЕ сх ВИШ З ВИ ВИТ Час В да доза доза ж х о ЕКЕе мономер Ку ї ії :. Не дк В Бохрахована ХГ у | Хвовя Хо к ЗНУНЕНЕТЕУ фе ВТ мя ою м; плазмійМЕЛЯані Ще В і. Ж в, і ль і Ше Я Б ІЗ й ке щ ще тої а од - "ХЕ : З ІЗ ' топки нкжжкні ж ятки іжняткткнижев кант еняжкткй кни жк пжжчежньк как т кжлінжчиннжннникий й що як виб ж 253 0050 Час (г)
Фіг. 14
А ту З «собака й 203 З СЕ собзка й ТОК 1 щк ветувність її. І МЕ вал І: оо Мн о БЕ ка у на м п й й я 5 50 НО 2 350 Час їі в 35 с Собяке К 303 З ПЗ Собана КИ в й мч ях ! еовриов концентрація і ес: й іважелккий | Модння І й І З й В ДУ, банта дннн темний й да а я ВО КО ОО мо че часів : з Базаясй дівен Предазя дефіштної по НХ в ї ЩІ су сСлбака й 303 і БЕ собака 108 і щі і час звавання З Н цільної крові 33: і мину І Н щі . дно сей т Я со десни ЗАМИННИНИ зв р ВВ енер орі рівень 3 Й ШО нерекульнаим вабчим ше М М НЕ А Час) «ріг. 15 свя 13 ЖЕ з їз ЗБЕ т ВИ мкг в ко ОБО ДЕЙ Еш ех Е ЕЙ нак Ше г ши нониентренція Ба ан ЩІ Мн чищі Івент у Вони, з су Шен ! дн хо ж я Фо що ЯР Оаб ТЯ; мо Бо їж Час(вй
Фіг. 15
Параметри ВНОТЕКМ Др звана н аААНМнНАННННННІ дв : : Дитину АХ я -и кед ку Е ш- Ж: мех; звкохкох ї и ди тт виникати уоплівоваміотвіві допимвивввовивомі щ рол ! з-к МЕТ: чих фриюю яувУ Е
Ко. .ох : о оплолялллялтяняяялялялялятя я лааляляляляля : , : іл зкддрид или ї КижйвЕмто В ди кютуюу у МИХ о за О в и її Зк зебееех сю 53 З я ЕЕ 1 - ї І: вх Я. - і К бо ж с х. ї х КЕ са й х р ке ш-й ше -е ї- код ЕІ. и Я шві од Е жк ЕК; - ; сл й - : і Я ї 1 З ї 5 Кі СЕ рен и 54 УсХуЕНЕТНИ МИ ТВ зд мекв укодосогьн ХХХ хід хор? о Жіхемюнк жі муюрх
Фіг. 17 С ій ра -У І и о р АК г ра щої я ж ее вя " й АВ Й рен ин чена я сли уд ж Її ен: Її іхаек ек деки Я а тд доякккюня Зідечакна схе Й і Ум; ЗДКВМльМУ МНЖлфьУмх «див зункчую Зак чт г З 1 зкме інхихмекі , ї ї й І брага их шк Замміоюе вна Як ярок «Фіг. 18
А в ЕЗ Н ж я З і З вжи о : кож тою ВО І жде Хо х я дов оти 5 і Коня хх І жа нич Ж У шкі г» Ж 1 мя дв Ех КОНІ х Є МИ Моя «з Е і й З я Е пох « - 1 веж С Бов, зд Лнож х і ох з Ансталюний х їй ою я т- З пі й; ше ж КК хай жи ЧА Ж Н вин я пху я нн в С Н й ШО ОБО б ит Фо В КІ кю БЕ з РІКЕс(МЕункх Вест іме х ЯК доз КЕНЕ как -к
Фіг. 19 та Ка я я ; К ра а я м я о х Я с шет но ЩІ й шиї граю х й і х ТА ван осях, 1 ; Й Кок ща нан зу хе Б ше ная в - х х Й їі Е ту й Килліхній села Жинкекосях ВІ Жозкунна Ж ЖІ ТМ іщюлодникнія ссляд І т й й ї юмюнозкоєМ : ! ! фета та - -5 ВО ЯАякоз яке здо
Фіг. 20 ; ; Н М: зов А : вот Е ; й пе і се дет холі " АЖ : Ї ж кю є 7 Я здат кан ча в. 5 | 4 х й жов ги шк; ще Б в ШИ сни ах т засн вне ЖИ жо Гевепеніх здо елнх жар Т якте ОВЕН і Ко МОТО а І о ААААЛА АЛЛУ АААААК АЛАНА АААЛАААНА АТ ААТЯ ж ЕЕ Есе БВ йю о Ж Ж ов ЕЕ іди. дізиаічьня КЕ час хіх дутауйання йхї Ват хо зов дить, Б вві І НУ І ритмемке хоргимох я вето: г: Н і ХО. 01 мовккекєт роьна ировнла му З Е і -а ж І КЦЕКЧеКН З-ФРНКОЧУИТУМо МКК пк МКК З ТБ кої Мк дк за Я : 7оддя Н 5 ої віки Н пет топос оптеттттттоттетттттттен г ї. К-я жким 2 , : щі я ст « таж щи в 5 со Не и ЩА ІВ і Й : ЕЕ
2. Же нс а Мікс кла діуєаоєя Мі Й Х дпняенетеееопенлетт тест тест еєсвсв, 1 15 М ще якТт Сокалі
Фіг. 21
UAA201701696A 2010-07-09 2011-07-11 Поліпептид фактора іх і спосіб його застосування UA126265C2 (uk)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36306410P 2010-07-09 2010-07-09
US201061424555P 2010-12-17 2010-12-17
US201161430819P 2011-01-07 2011-01-07
US201161438572P 2011-02-01 2011-02-01
US201161442079P 2011-02-11 2011-02-11
US201161470951P 2011-04-01 2011-04-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
UA126265C2 true UA126265C2 (uk) 2022-09-14

Family

ID=45441870

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201701696A UA126265C2 (uk) 2010-07-09 2011-07-11 Поліпептид фактора іх і спосіб його застосування
UAA201301039A UA115120C2 (uk) 2010-07-09 2011-07-11 Спосіб застосування химерного поліпептиду фактора ix

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
UAA201301039A UA115120C2 (uk) 2010-07-09 2011-07-11 Спосіб застосування химерного поліпептиду фактора ix

Country Status (17)

Country Link
US (13) US9670475B2 (uk)
EP (2) EP2590668A4 (uk)
JP (5) JP2013534426A (uk)
KR (5) KR20220097518A (uk)
CN (1) CN103140237A (uk)
AU (5) AU2011274414B2 (uk)
BR (1) BR112013000650A8 (uk)
CA (1) CA2804274A1 (uk)
CL (1) CL2013000058A1 (uk)
EA (2) EA037095B1 (uk)
IL (3) IL223990B (uk)
MX (2) MX356527B (uk)
MY (2) MY192639A (uk)
NZ (1) NZ605348A (uk)
SG (3) SG186856A1 (uk)
UA (2) UA126265C2 (uk)
WO (1) WO2012006624A2 (uk)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
CN108530543B (zh) 2009-02-03 2023-06-23 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
EP3222287A1 (en) 2009-08-24 2017-09-27 Amunix Operating Inc. Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same
MX2013000301A (es) 2010-07-09 2013-05-09 Biogen Idec Hemophilia Inc Factores quimericos de coagulacion.
EA037095B1 (ru) 2010-07-09 2021-02-05 Биовератив Терапьютикс Инк. Способ лечения гемофилии в и эпизодов кровотечения
WO2012019168A2 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US20120237975A1 (en) 2010-10-01 2012-09-20 Jason Schrum Engineered nucleic acids and methods of use thereof
CA2831613A1 (en) 2011-03-31 2012-10-04 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
EP2737311B1 (en) 2011-07-25 2020-12-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Assays to monitor bleeding disorders
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
EP4015005A1 (en) 2011-10-03 2022-06-22 ModernaTX, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
SG11201402666WA (en) 2011-12-16 2014-10-30 Moderna Therapeutics Inc Modified nucleoside, nucleotide, and nucleic acid compositions
EP3453402B1 (en) * 2012-01-12 2021-07-21 Bioverativ Therapeutics Inc. Reducing immunogenicity against factor viii in individuals undergoing factor viii therapy
EP3549953A1 (en) 2012-02-15 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Recombinant factor viii proteins
MY188897A (en) 2012-02-15 2022-01-12 Bioverativ Therapeutics Inc Factor viii compositions and methods of making and using same
US9303079B2 (en) 2012-04-02 2016-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
AU2013243955B2 (en) 2012-04-02 2018-02-22 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of oncology-related proteins and peptides
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
EP3521321B1 (en) 2012-04-11 2020-11-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
CA2875246A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Procoagulant compounds
WO2013185114A2 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Chimeric clotting factors
EP3970738A1 (en) 2012-07-25 2022-03-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Blood factor monitoring assay and uses thereof
WO2014052490A1 (en) * 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
CA2888806A1 (en) * 2012-10-18 2014-04-24 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
CA2892038C (en) * 2012-11-20 2021-12-28 Darrel W. Stafford Methods and compositions for modified factor ix proteins
PT2922554T (pt) 2012-11-26 2022-06-28 Modernatx Inc Arn modificado nas porções terminais
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
SI3889173T1 (sl) 2013-02-15 2023-11-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimiran gen dejavnika VIII
AU2014228938B2 (en) * 2013-03-15 2019-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2015023891A2 (en) 2013-08-14 2015-02-19 Biogen Idec Ma Inc. Factor viii-xten fusions and uses thereof
ES2900425T3 (es) 2013-09-25 2022-03-16 Bioverativ Therapeutics Inc Métodos de inactivación vírica en columna
CN105980401A (zh) 2013-10-03 2016-09-28 现代治疗公司 编码低密度脂蛋白受体的多核苷酸
US10325687B2 (en) 2013-12-06 2019-06-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
EP3083933A1 (en) 2013-12-20 2016-10-26 Biogen MA Inc. Use of perfusion seed cultures to improve biopharmaceutical fed-batch production capacity and product quality
US20160346366A1 (en) * 2013-12-23 2016-12-01 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
AU2015214245B2 (en) 2014-02-04 2020-09-10 Biogen Ma Inc. Use of cation-exchange chromatography in the flow-through mode to enrich post-translational modifications
MX2016012447A (es) 2014-03-24 2017-01-06 Biogen Ma Inc Formulaciones de factor ix liofilizadas.
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
TWI741992B (zh) * 2015-08-03 2021-10-11 美商百歐維拉提夫治療公司 因子ｉｘ融合蛋白以及其製備及使用方法
SG10201913278PA (en) 2016-02-01 2020-02-27 Bioverativ Therapeutics Inc Optimized factor viii genes
ES2973210T3 (es) 2016-04-15 2024-06-19 Takeda Pharmaceuticals Co Método y aparato para proporcionar un régimen de dosificación de fármacos farmacocinético
TW201739448A (zh) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 用於治療及/或預防血液相關疾病之方法及配方
KR102446476B1 (ko) 2016-07-08 2022-10-19 체에스엘 베링 렝나우 아게 사람에서의 장기-작용성 인자 ix의 피하 투여
WO2018032638A1 (zh) 2016-08-19 2018-02-22 安源医药科技（上海）有限公司 用于构建融合蛋白的连接肽
CN107759697B (zh) 2016-08-19 2023-03-24 安源医药科技（上海）有限公司 制备融合蛋白的方法
CN106279437B (zh) 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
KR20240069834A (ko) 2016-12-02 2024-05-20 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 키메라 응고 인자를 사용해 혈우병성 관절증을 치료하는 방법
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
CN110831613A (zh) 2017-01-31 2020-02-21 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 因子ix融合蛋白及其制备和使用方法
US10799131B2 (en) 2017-06-03 2020-10-13 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intrauterine pressure to protect the fallopian tubes
US11185245B2 (en) 2017-06-03 2021-11-30 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure for muscle compartment syndrome
US10813589B2 (en) 2017-06-03 2020-10-27 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring uterine contraction pressure
US11045143B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter with connectable hub for monitoring pressure
US11045128B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intra-abdominal pressure
ES2963665T3 (es) 2017-06-29 2024-04-01 CSL Behring Lengnau AG Régimen de dosificación de 21 días para proteínas de fusión que comprenden factor ix y albúmina humana para el tratamiento profiláctico de la hemofilia y procedimientos para ello
SG11202000764RA (en) 2017-08-09 2020-02-27 Bioverativ Therapeutics Inc Nucleic acid molecules and uses thereof
AU2018338608A1 (en) 2017-09-27 2020-04-09 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising active cells
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
WO2019195055A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Implantable particles and related methods
BR112020022164A2 (pt) 2018-05-18 2021-02-02 Bioverativ Therapeutics Inc. métodos de tratamento de hemofilia a
MX2021001599A (es) 2018-08-09 2021-07-02 Bioverativ Therapeutics Inc Moleculas de acido nucleico y sus usos para la terapia genica no viral.
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
US11672457B2 (en) 2018-11-24 2023-06-13 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11779263B2 (en) 2019-02-08 2023-10-10 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring intra-abdominal pressure for assessing preeclampsia
JP2022525660A (ja) 2019-03-19 2022-05-18 ツェー・エス・エル・ベーリング・レングナウ・アクチエンゲゼルシャフト 第ｉｘ因子バリアントおよび治療でのその使用
EP3956456A1 (en) 2019-04-17 2022-02-23 Codiak BioSciences, Inc. Compositions of exosomes and aav
CN112175088B (zh) * 2019-07-02 2023-03-28 江苏晟斯生物制药有限公司 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用
WO2021026020A1 (en) 2019-08-08 2021-02-11 Sentinel Medical Technologies, LLC Cable for use with pressure monitoring catheters
US11617543B2 (en) 2019-12-30 2023-04-04 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11981718B2 (en) 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
WO2023275024A1 (en) * 2021-07-01 2023-01-05 CSL Behring Lengnau AG Factor ix subcutaneous administration with enhanced safety
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4786726A (en) * 1986-01-06 1988-11-22 Blood Systems, Inc. Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US6406697B1 (en) 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
ATE92107T1 (de) 1989-04-29 1993-08-15 Delta Biotechnology Ltd N-terminale fragmente von menschliches serumalbumin enthaltenden fusionsproteinen.
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
EP0417563B1 (de) 1989-09-12 2000-07-05 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
AU643109B2 (en) 1990-12-14 1993-11-04 Cell Genesys, Inc. Chimeric chains for receptor-associated signal transduction pathways
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
DK0615451T3 (da) 1992-05-26 2006-04-24 Immunex Corp Hidtil ukendt cytokin der binder til CD30
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
US5621039A (en) 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
WO1995021258A1 (en) 1994-02-01 1995-08-10 United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Fusion proteins that include antibody and nonantibody portions
WO1996004388A1 (en) 1994-07-29 1996-02-15 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
ES2194973T3 (es) 1995-01-17 2003-12-01 Brigham & Womens Hospital Transporte de inmunogenes transepitelial especifico del receptor.
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
AU728657B2 (en) 1996-03-18 2001-01-18 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US5981285A (en) 1996-10-21 1999-11-09 Carroll; Wallace E. Method and apparatus for determining anticoagulant therapy factors
DE69841459D1 (en) 1997-02-14 2010-03-11 American Nat Red Cross Expression des active human factor ix im brustdrüsengewebe transgener tiere
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
US20030096355A1 (en) * 1999-07-09 2003-05-22 Ke Zhang Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family
AU4314801A (en) 2000-02-11 2001-08-20 Lexigen Pharm Corp Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
EP2213743A1 (en) 2000-04-12 2010-08-04 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
DE60126597T2 (de) 2000-04-28 2007-10-31 Inflazyme Pharmaceuticals, Ltd., Richmond 3-stickstoff-6,7-dioxygenierte steroid verbindungen und verwendungen davon
WO2002040544A2 (en) 2000-11-14 2002-05-23 Board Of Regents, University Of Texas Systems Mutant human factor ix with an increased resistance to inhibition by heparin
US20030203845A1 (en) 2001-02-05 2003-10-30 Knudsen Jens Bjerre Combined use of factor VII polypeptides and factor IX polypeptides
PL369065A1 (en) 2001-09-04 2005-04-18 Merck Patent Gmbh Modified factor ix
IL161251A0 (en) 2001-10-10 2004-09-27 Neose Technologies Inc Remodeling and glycoconjugation of peptides
EP2261250B1 (en) 2001-12-21 2015-07-01 Human Genome Sciences, Inc. GCSF-Albumin fusion proteins
WO2003059934A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
CN1761747A (zh) * 2003-03-18 2006-04-19 诺和诺德医疗保健公司 生产含有gla残基的丝氨酸蛋白酶的方法
AU2004229427A1 (en) 2003-04-09 2004-10-28 Nektar Therapeutics Hemophilia treatment by inhalation of coagulation factors
TWI353991B (en) * 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
PL1624891T5 (pl) 2003-05-06 2014-02-28 Bioverativ Therapeutics Inc Białka chimeryczne o strukturze czynnik krzepliwości krwi-fc do leczenia hemofilii
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7212798B1 (en) * 2003-07-17 2007-05-01 Cisco Technology, Inc. Adaptive AGC in a wireless network receiver
EP1653996A2 (en) 2003-08-08 2006-05-10 Novo Nordisk Health Care AG Use of galactose oxidase for selective chemical conjugation of protractor molecules to proteins of therapeutic interest
CA2545539A1 (en) * 2003-10-15 2005-04-28 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig
NZ546733A (en) 2003-12-03 2009-07-31 Novo Nordisk As Glycopegylated factor IX
BRPI0514396A2 (pt) 2004-08-17 2009-05-12 Csl Behring Gmbh polipeptìdeos dependentes de vitamina k modificada
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
EP1831363A1 (en) 2004-12-21 2007-09-12 Novo Nordisk Health Care AG Expression of gamma-carboxylated polypeptides in gamma-carboxylation deficient host systems
US20060162552A1 (en) 2005-01-26 2006-07-27 Mohawk Valley Energy Solutions, Inc. Systems and methods for controlling room air quality
EP2975135A1 (en) 2005-05-25 2016-01-20 Novo Nordisk A/S Glycopegylated factor IX
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
PL3225233T3 (pl) 2005-11-01 2019-12-31 Wyeth Llc Roztwór chlorku sodu do odtwarzania leku
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1816201A1 (en) * 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
EP2863222A1 (en) 2006-03-06 2015-04-22 Amunix Operating Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
DK2004683T3 (en) 2006-03-24 2016-08-22 Biogen Hemophilia Inc PC5 AS A FACTOR IX PROPEPTID PROCESSING ENZYM
JP2009533364A (ja) * 2006-04-11 2009-09-17 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー 治療用ポリペプチドのインビボでの回収を増大させる方法
KR20090013816A (ko) 2006-05-24 2009-02-05 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ⅸ 유사체
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
DK2256135T3 (da) * 2006-06-14 2019-06-11 Csl Behring Gmbh Proteolytisk spaltbart fusionsprotein, der omfatter en blodkoagulationsfaktor
EP2423306A1 (en) 2006-06-19 2012-02-29 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
JP2009543841A (ja) 2006-07-17 2009-12-10 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 増加した活性を有する第ｖｉｉａ因子アナログの新規用途
WO2008022151A1 (en) * 2006-08-15 2008-02-21 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Prophylactic treatment of hemophilia
US20100113339A1 (en) * 2006-09-08 2010-05-06 Ablynx N. V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
WO2008119815A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Novo Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor ix
CA2695374A1 (en) 2007-08-15 2009-02-19 Amunix, Inc. Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides
CN102026653B (zh) 2007-10-15 2014-06-18 北卡罗来纳-查佩尔山大学 半衰期延长的人因子ⅸ变体
EP2282767A4 (en) 2008-04-16 2012-07-11 Bayer Healthcare Llc MODIFICATION OF FACTOR IX ORIENTED SITE
CA2721683A1 (en) 2008-04-16 2009-11-12 Bayer Healthcare Llc Modified factor ix polypeptides and uses thereof
US20110137011A1 (en) 2008-04-21 2011-06-09 Novo Nordisk A/S Hyperglycosylated human coagulation factor ix
ES2466340T3 (es) * 2008-04-24 2014-06-10 Cantab Biopharmaceuticals Patents Limited Conjugados de Factor IX con semividas extendidas
US20090282865A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ortloff Engineers, Ltd. Liquefied Natural Gas and Hydrocarbon Gas Processing
CN102119172A (zh) * 2008-08-21 2011-07-06 奥克塔法马股份有限公司 重组制备的人类因子viii和ix
JP2012503637A (ja) 2008-09-24 2012-02-09 スタビリテック リミテッド 糖およびポリエチレンイミンを使用するポリペプチドの保存方法
CN108530543B (zh) 2009-02-03 2023-06-23 阿穆尼克斯制药公司 延伸重组多肽和包含该延伸重组多肽的组合物
KR101722961B1 (ko) 2009-02-11 2017-04-04 알부메딕스 에이/에스 알부민 변이체 및 접합체
WO2011030641A1 (ja) 2009-09-08 2011-03-17 コニカミノルタホールディングス株式会社 身体用装具
CA2776241A1 (en) 2009-10-30 2011-05-05 Novozymes Biopharma Dk A/S Albumin variants
EP2353588B1 (en) 2010-01-21 2015-04-15 Agricultural Technology Research Institute A sustained release preparation of factor IX
EP2556087A1 (en) 2010-04-09 2013-02-13 Novozymes Biopharma DK A/S Albumin derivatives and variants
EA037095B1 (ru) * 2010-07-09 2021-02-05 Биовератив Терапьютикс Инк. Способ лечения гемофилии в и эпизодов кровотечения
GB2491006A (en) 2011-05-05 2012-11-21 Novozymes Biopharma Uk Ltd Albumin variants
EP2780364A2 (en) 2011-11-18 2014-09-24 Eleven Biotherapeutics, Inc. Proteins with improved half-life and other properties
WO2014052490A1 (en) 2012-09-25 2014-04-03 Biogen Idec Ma Inc. Methods of using fix polypeptides
US20160033523A1 (en) 2013-02-16 2016-02-04 Novozymes Biopharma Dk A/S Pharmacokinetic animal model
AU2014228938B2 (en) 2013-03-15 2019-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
US20160346366A1 (en) 2013-12-23 2016-12-01 Csl Limited Fusion proteins comprising factor ix for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof

Also Published As

Publication number Publication date
US10898554B1 (en) 2021-01-26
MX2020009702A (es) 2020-10-07
AU2011274414A1 (en) 2013-01-24
JP2013534426A (ja) 2013-09-05
EP3552619A1 (en) 2019-10-16
US9233145B2 (en) 2016-01-12
AU2022204643A1 (en) 2022-07-21
UA115120C2 (uk) 2017-09-25
US20160243206A1 (en) 2016-08-25
JP2017036328A (ja) 2017-02-16
JP2022044828A (ja) 2022-03-17
EA201790876A1 (ru) 2017-12-29
KR20140017480A (ko) 2014-02-11
CN103140237A (zh) 2013-06-05
US20180207244A1 (en) 2018-07-26
EA201291480A1 (ru) 2013-09-30
US9675676B2 (en) 2017-06-13
CA2804274A1 (en) 2012-01-12
AU2016228243A1 (en) 2016-10-06
MX2013000281A (es) 2013-03-22
JP2016034973A (ja) 2016-03-17
US20160257943A1 (en) 2016-09-08
MY166954A (en) 2018-07-25
EP2590668A4 (en) 2014-04-02
US10561714B2 (en) 2020-02-18
US20190192640A1 (en) 2019-06-27
US9867873B2 (en) 2018-01-16
US20210023185A1 (en) 2021-01-28
IL277432B (en) 2021-07-29
WO2012006624A3 (en) 2012-08-02
SG186856A1 (en) 2013-02-28
KR20230156435A (ko) 2023-11-14
EA037095B1 (ru) 2021-02-05
US9629903B2 (en) 2017-04-25
EP2590668A2 (en) 2013-05-15
NZ605348A (en) 2015-01-30
US20160166657A1 (en) 2016-06-16
US20130171175A1 (en) 2013-07-04
US10548954B2 (en) 2020-02-04
KR20190104442A (ko) 2019-09-09
WO2012006624A2 (en) 2012-01-12
SG10201913700SA (en) 2020-03-30
JP2019023242A (ja) 2019-02-14
KR20220097518A (ko) 2022-07-07
KR20180118808A (ko) 2018-10-31
US20180228879A1 (en) 2018-08-16
EA028067B1 (ru) 2017-10-31
AU2020200118A1 (en) 2020-01-30
AU2011274414B2 (en) 2016-10-06
US20160346365A1 (en) 2016-12-01
MX356527B (es) 2018-06-01
US20210008178A1 (en) 2021-01-14
US20190192641A1 (en) 2019-06-27
US20130202595A1 (en) 2013-08-08
CL2013000058A1 (es) 2014-03-28
US10568943B2 (en) 2020-02-25
AU2017268650A1 (en) 2017-12-21
US9670475B2 (en) 2017-06-06
SG10201505218YA (en) 2015-08-28
AU2016228243B2 (en) 2017-08-31
AU2017268650B2 (en) 2019-10-10
IL277432A (en) 2020-11-30
BR112013000650A8 (pt) 2017-10-17
US20180228878A1 (en) 2018-08-16
IL284368A (en) 2021-07-29
IL223990B (en) 2020-10-29
US9623091B2 (en) 2017-04-18
MY192639A (en) 2022-08-29
BR112013000650A2 (pt) 2016-05-31
AU2020200118B2 (en) 2022-04-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
UA126265C2 (uk) Поліпептид фактора іх і спосіб його застосування
TWI810729B (zh) Ｆｉｘ多肽的應用
EA028914B1 (ru) Исследования для мониторинга нарушений свертываемости крови
JP2019506408A (ja) レプチン欠乏状態を治療するためのｃｄ２４タンパク質の使用