JP2019506408A - レプチン欠乏状態を治療するためのｃｄ２４タンパク質の使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、循環レプチンのレベルを上昇させることによって、リポジストロフィー等のレプチン欠乏状態を治療するためのＣＤ２４タンパク質の使用に関する。本発明は、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することによって、被験体におけるレプチン欠乏状態を治療するための新規の方法について説明する。また、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することによって、ＨＩＶを有する患者におけるリポジストロフィーを治療または治療することを予防するための方法も提供される。
【選択図】図２

Description

本発明は、レプチン欠乏状態の治療に使用するためのＣＤ２４タンパク質に関する。

レプチン遺伝子の変異によるレプチン欠損症、視床下部性無月経、及びリポジストロフィー症候群（ＬＳ）等のレプチン欠乏状態は、脂肪組織及び脂肪組織由来のホルモン、つまり最も重要なレプチンの部分的または完全な欠如を特徴とする（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら２０１５）。これらの疾患では、皮下脂肪組織が最も罹患しやすく、脂肪が非脂肪組織に蓄積する。脂肪萎縮症は、１つの部位（通常は顔）からの脂肪の消失を説明するときに使用するより具体的な用語である。レプチンを欠乏している患者は、高血糖症、高トリグリセリド血症、及び肝脂肪変性等の多くの重度代謝異常を示し、これらの異常は、それぞれ糖尿病、急性膵炎、及び肝硬変に進行し得る。リポジストロフィーも骨硬化症の原因となり得る。

全身性リポジストロフィーは、最も顕著なリポジストロフィー型であり、後天性または先天性のいずれかであり得る。後天性リポジストロフィーは、高活性レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）の使用または潜在するＨＩＶ感染（最も一般的なリポジストロフィー型）もしくは自己免疫性状態から発現し得る。先天性のリポジストロフィー型の病因は、脂肪細胞分化、脂肪滴形態、及び脂質代謝を主導するいくつかの遺伝子の分子欠乏によって決定される。

ＬＳの臨床症状は、低レベルまたは検出不能なレベルの脂肪由来のサイトカインレプチンの原因となる白色脂肪組織の部分的または完全な欠如によって本質的に決定される。レプチンは、以前は、グルコース恒常性、インスリン感受性、及び脂肪酸酸化を含むいくつかの代謝過程を調節するアディポサイトカインとして知られている。リポジストロフィーに見られるレプチン欠損症の状態は、いくつかの代謝異常の発現の原因となり、リポジストロフィー患者の約８０％は、メタボリック症候群の診断基準を満たしている。

リポジストロフィーのようなレプチン欠乏状態のために現在承認されている治療法は、レプチンアナログメトレレプチン（ＭＹＡＬＥＰＴ）等によるレプチン補充療法（ＬＲＴ）を伴う。しかしながら、ＬＲＴは、中和抗薬物抗体及びリンパ腫の発現に関連するリスクと関係し、全身性非ＨＩＶリポジストロフィーの症例のみに現在承認されている。さらに、その低半減期により、メトレレプチンは、固有のレプチン概日周期を模倣するために１日に１回または２回（通常は同じ時刻に）投与しなければならない。ゆえに、特にＨＩＶ患者のＬＳ及びレプチン欠損症を治療する代替方法の必要性がある。

本発明は、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することによって、被験体におけるレプチン欠乏状態を治療するための新規の方法について説明する。また、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することによって、ＨＩＶを有する患者におけるリポジストロフィーを治療または治療することを予防するための方法も提供される。

ＣＤ２４タンパク質は、成熟ヒトＣＤ２４の配列またはその変異体を含んでもよい。成熟ヒトＣＤ２４は、配列番号１または２の配列を含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質は、ヒトＣＤ２４の細胞外ドメインのうちのいずれかまたは全てを含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質は、タンパク質を発現する細胞からの分泌を可能にするように、配列番号４のシグナル配列を含んでもよい。シグナルペプチド配列は、他の膜貫通または分泌タンパク質上に見られるものであってもよく、または当技術分野で既知である既存のシグナルペプチドから修飾されたものであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、可溶性であってもよく、及び／またはグリコシル化されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、真核生物タンパク質発現系を使用して産生されてもよく、真核生物タンパク質発現系は、チャイニーズハムスター卵巣細胞株または複製欠損レトロウイルスベクターに含有されるベクターを含んでもよい。複製欠損レトロウイルスベクターは、真核生物細胞のゲノム内に安定して組み込まれてもよい。

ＣＤ２４タンパク質は、タンパク質タグを含んでもよく、タンパク質タグは、ＣＤ２４タンパク質のＮ末端またはＣ末端に融合されてもよい。タンパク質は、哺乳類免疫グロブリン（Ｉｇ）の一部分を含んでもよく、哺乳類免疫グロブリンの一部分は、ヒトＩｇタンパク質のＦｃ部分であってもよい。ヒトＩｇタンパク質は、ヒトＩｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含んでもよく、ヒトＩｇタンパク質は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、またはＩｇＡであってもよい。Ｆｃ部分は、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ３及びＣＨ４ドメインも含んでもよい。ＣＤ２４タンパク質は、配列番号５、６、８、または９の配列を含んでもよい。

全長ＣＤ２４融合タンパク質、ＣＤ２４ＩｇＧ１Ｆｃ（本明細書においてＣＤ２４Ｆｃとも呼ばれる）のアミノ酸組成物を示す（配列番号５）。下線の２６個のアミノ酸は、ＣＤ２４のシグナルペプチドであり（配列番号４）、これは、タンパク質を発現する細胞からの分泌中に切断され、タンパク質の成熟型から欠如している（配列番号６）。配列の太字部分は、融合タンパク質に使用される成熟ＣＤ２４タンパク質の細胞外ドメインである（配列番号２）。成熟ＣＤ２４タンパク質に通常存在している最後のアミノ酸（ＡまたはＶ）は、免疫原性を回避するために構築体から削除されている。下線無しの太字無しの文字は、ＩｇＧ１Ｆｃの配列であり、ヒンジ領域ならびにＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む（配列番号７）。 ＣＤ２４^ＶＦｃの配列を示し（配列番号８）、配列において、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）は、配列番号１のバリン多型変異体である。 ＣＤ２４^ＡＦｃの配列を示し（配列番号９）、配列において、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質（太字）は、配列番号１のアラニン多型変異体である。図１Ｂ及び図１Ｃにおける融合タンパク質の様々な部分が図１Ａのように示され、変異バリン／アラニンアミノ酸は２重下線が引かれる。

治療前１日目と比較したＣＤ２４Ｆｃ治療後３日目における健常ヒト被験体の血清中のレプチンの比率を示す。薬剤は、０日目に投与された。データは、ＣＤ２４Ｆｃ投薬コホートによって示され、０ｍｇ／ｋｇ群は、プラセボ対照群を示す。

本明細書において、ＣＤ２４タンパク質のヒト被験体への投与によって血液内の循環レプチンレベルが上昇するという驚くべき発見について説明する。これは、循環レプチンレベルを上昇させることによる、リポジストロフィー等のレプチン欠乏状態の治療に有用である。具体的な実施形態では、本発明は、ＨＩＶ患者のリポジストロフィーを治療する方法に関する。

本明細書においてより詳細に説明するように、ＣＤ２４は、造血細胞及び非造血細胞の両方で広範囲に発現する小さなグリコシル−ホスファチジル−イノシトール（ＧＰＩ）−アンカー型糖タンパク質であり、これは、２４０個の塩基対のコード配列によってコード化される。８０個のアミノ酸のうちの最初の２６個は、シグナルペプチドを構成し、最後の２３個は、ＧＰＩ尾部の付着を可能にする切断のためのシグナルとしての役割を果たす。結果として、成熟ヒトＣＤ２４分子は、３１個のアミノ酸のみを有する。成熟ＣＤ２４タンパク質中の３１個のアミノ酸のうち、最後の（Ｃ末端）アミノ酸は、ヒト集団において多型である。ヌクレオチド２２６におけるＣからＴへの転移によって、アラニン（ａ）のバリン（ｖ）との置換がもたらされる。この残基が、切断部位への近接Ｎ末端であるため、及び置き換えが非保存性であるため、これらの２つのアレルは、細胞表面上に異なる効果で発現され得る。

ＣＤ２４は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、及び全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）のための遺伝的修飾因子であることが知られている。集団レベルにおいて、ＣＤ２４^ｖ／ｖ遺伝子型は、正常集団における頻度の２倍を超える。ＭＳ多発家系では、ＣＤ２４^ｖアレルは、健常対照に比べて、ＭＳ患者に優先的に伝達される。さらに、より重症の病気型（総合障害度評価［ＥＤＳＳ］６．０以上、患者が一人で歩行する能力を失うとき）のＭＳ患者では、ＣＤ２４^ｖ／ｖ個体は、最初の臨床症状からＥＤＳＳ６．０に到達するまでに平均７年かかり、さらに、ＣＤ２４^ａ／ｖまたはＣＤ２４^ａ／ａ個体は、ＥＤＳＳ６．０に到達するのに１３〜１５年かかった。反対に、ＣＤ２４伝令リボ核酸（ｍＲＮＡ）の３’非翻訳領域におけるジヌクレオチド欠失は、ＣＤ２４のｍＲＮＡ安定性を低下させ、ひいてはＣＤ２４発現を低下させるものであり、ＭＳ及び他の自己免疫疾患からヒトを保護する。これまで、ＣＤ２４は、脂質レベルに影響を及ぼすことが示されていない。

１．定義
本明細書で使用する専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のためだけのものであり、限定するものとして意図されない。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上明白に他の意味を示す場合を除いて、複数の指示対象を含む。

本明細書における数値範囲の列挙について、同じ精度でその間に介在する各数字が、明示的に企図される。例えば、６〜９の範囲について、６及び９に加えて数字の７及び８が企図され、６．０〜７．０の範囲について、数字の６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、及び７．０が明示的に企図される。

「ペプチド」または「ポリペプチド」は、アミノ酸の結合配列であり、天然、合成、または天然及び合成の修飾もしくは組み合わせであってもよい。

「実質的に同一」は、第１及び第２のアミノ酸配列が、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または３００個のアミノ酸の領域について、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％であることを意味してもよい。

「治療」または「治療する」は、ヒトまたは動物の病気からの保護を指すとき、病気を予防、抑制、抑止、または完全に排除することを意味する。病気を予防することは、発病前に、本発明の組成物をヒトまたは動物に投与することを伴う。病気を抑制することは、病気誘導後、但し臨床的所見前に、本発明の組成物をヒトまたは動物に投与することを伴う。病気を抑止することは、病気の臨床的所見後に本発明の組成物をヒトまたは動物に投与することを伴う。

「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失、または保守的置換によってアミノ酸配列の点で異なるが、いくつかの生物学的活性を保持するペプチドまたはポリペプチドを意味してもよい。ＣＤ２４の「生物学的活性」の代表的な例として、レクチン、具体的には、シグレック（シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン）に結合し、かつ特異抗体により結合される能力が挙げられる。また、変異体は、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を有する参照タンパク質に実質的に同一であるアミノ酸配列を有するタンパク質も意味してもよい。アミノ酸の保守的置換、すなわち、類似の特性（例えば、親水性、荷電領域の度合い及び分布）の異なるアミノ酸とのアミノ酸の置き換えが、典型的にはわずかな変化を伴うものとして当技術分野において認識されている。これらのわずかな変化は、当技術分野において理解されているように、アミノ酸の疎水性指標を考慮することによって部分的に同定され得る。アミノ酸の疎水性指標は、その疎水性及び荷電の考慮に基づく。類似の疎水性指標のアミノ酸が置換され、依然としてタンパク質機能を保持することができることが当技術分野において既知である。一態様では、±２の疎水性指標を有するアミノ酸が置換される。生物学的機能を保持するタンパク質をもたらし得る置換を明らかにするためにアミノ酸の親水性も使用することができる。ペプチドの観点からアミン酸の親水性について考慮することによって、そのペプチドの最大局所平均親水性の計算、つまり、抗原性及び免疫原性とよく相関するように報告されている有用な測定が可能になる。米国特許第４，５５４，１０１号は、参照により本明細書に完全に組み込まれる。類似の親水性値を有するアミノ酸の置換によって、当技術分野で理解されるように、生物学的活性、例えば、免疫原性を保持するペプチドがもたらされ得る。置換は、互いに±２内の親水性値を有するアミノ酸で行われてもよい。アミノ酸の疎水性指標及び親水性値の両方が、アミノ酸の特定の側鎖によって影響を受ける。その観察と一致して、生物学的機能に適合するアミノ酸置換は、疎水性、親水性、荷電、サイズ、及び他の特性により明らかにされるように、アミノ酸の相対類似性、具体的には、これらのアミノ酸の側鎖に依存すると理解されている。

２．ＣＤ２４
細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に対応する、成熟ヒトＣＤ２４または他の哺乳類からのアミノ酸配列、またはその変異体を含み得るＣＤ２４タンパク質が本明細書に提供される。上述のように、成熟ヒトＣＤ２４タンパク質の配列は、３１アミノ酸長であり、バリン（ｖ）残基との可変アラニン（ａ）をそのＣ末端に有する。
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（Ｖ／Ａ）（配列番号１）

Ｃ末端バリンまたはアラニンは、免疫原性であってもよく、ＣＤ２４タンパク質から省略されてその免疫原性を低下させてもよい。ゆえに、別の実施形態では、ＣＤ２４タンパク質は、以下のＣ末端アミノ酸を欠如しているアミノ酸配列または成熟ヒトＣＤ２４を含んでもよい。
ＳＥＴＴＴＧＴＳＳＮＳＳＱＳＴＳＮＳＧＬＡＰＮＰＴＮＡＴＴＫ（配列番号２）

マウス及びヒトからの成熟ＣＤ２４タンパク質のアミノ酸配列における大幅な配列変異にもかかわらず、ヒトＣＤ２４Ｆｃがマウスにおいて活性であるように示されているため、機能的に同等である。ヒトＣＤ２４ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスタンパク質とのいくつかの配列保存を示す（３９％同一性、ジェンバンク登録番号ＮＰ＿０３３９７６）。しかしながら、ＣＤ２４ＥＣＤがその種に応じた長さにおいて２７〜３１個のアミノ酸のみであるように、同一性割合がより高くないことは驚くには当たらず、シグレック１０／Ｇ等のその受容体のいくつかに結合することは、そのシアル酸及び／または糖タンパク質のガラクトース糖によって介在される。ヒトシグレック１０（ジェンバンク登録番号ＡＦ３１０２３３）の細胞外ドメインとそのマウス相同体シグレックＧ（ジェンバンク登録番号ＮＰ＿７６６４８８）受容体タンパク質とのアミノ酸配列同一性は、６３％である。主にＣ末端及びグリコシル化部位の存在量におけるマウスとヒトＣＤ２４との間の配列保存の結果、成熟ＣＤ２４タンパク質における著しい変異が、ＣＤ２４タンパク質の使用において認められてもよく、これは、特にこれらの変異が、Ｃ末端における保存残基に影響を及ぼさない場合、またはマウスもしくはヒトＣＤ２４からのいずれもグリコシル化部位に影響を及ぼさない場合である。ゆえに、ＣＤ２４タンパク質は、以下の成熟マウスＣＤ２４のアミノ酸配列を含んでもよい。
ＮＱＴＳＶＡＰＦＰＧＮＱＮＩＳＡＳＰＮＰＴＮＡＴＴＲＧ（配列番号３）。

ヒトＣＤ２４ＥＣＤのアミノ酸配列は、マウスよりもカニクイザルのタンパク質とより多くの配列保存を示す（５２％同一性、ユニプロット登録番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ−Ｉ７ＧＫＫ１）。この場合も、ＥＣＤがこれらの種における長さにおいて２９〜３１個のアミノ酸のみであるように、同一性割合がより高くないことは驚くには当たらず、糖残基の役割はその受容体への結合である。カニクイザルシグレック１０受容体のアミノ酸配列は、決定されていないが、ヒトとアカゲザルシグレック１０（ジェンバンク登録番号ＸＰ＿００１１１６３５２）タンパク質との間のアミノ酸配列同一性は、８９％である。ゆえに、ＣＤ２４タンパク質は、以下の成熟カニクイ（またはアカゲ）ザルＣＤ２４のアミノ酸配列も含んでもよい。
ＴＶＴＴＳＡＰＬＳＳＮＳＰＱＮＴＳＴＴＰＮＰＡＮＴＴＴＫＡ（配列番号１０）

ＣＤ２４タンパク質は、可溶性であってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、タンパク質を発現する細胞からの分泌を可能にするように、Ｎ末端シグナルペプチドをさらに含んでもよい。シグナルペプチド配列は、アミノ酸配列ＭＧＲＡＭＶＡＲＬＧＬＧＬＬＬＬＡＬＬＬＰＴＱＩＹＳ（配列番号４）を含んでもよく、これは、内因性ヒトＣＤ２４シグナルペプチドからのものである。代替として、シグナル配列は、他の膜貫通タンパク質もしくは分泌タンパク質に見られるものまたは当技術分野で既知である既存のシグナルペプチドから修飾されたもののうちのいずれかであってもよい。

ａ．融合
ＣＤ２４タンパク質は、そのＮ末端またはＣ末端においてタンパク質タグに融合されてもよく、タンパク質タグは、ヒトまたはマウスであり得る哺乳類Ｉｇタンパク質の一部分を含んでもよい。その部分は、Ｉｇタンパク質のＦｃ領域を含んでもよい。Ｆｃ領域は、Ｉｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含んでもよい。Ｉｇタンパク質は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、またはＩｇＡであってもよい。Ｆｃ部分は、ヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１）アイソタイプ配列番号７を含んでもよい。Ｉｇタンパク質は、ＩｇＭであってもよく、Ｆｃ部分は、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ３及びＣＨ４ドメインを含んでもよい。タンパク質タグは、ＧＳＴ、Ｈｉｓ、またはＦＬＡＧも含んでもよい。融合タンパク質を作製し、融合タンパク質を浄化するための方法は、当技術分野において周知である。

我々の前臨床研究に基づいて、例において同定された融合タンパク質ＣＤ２４Ｆｃの構築のために、ＧＰＩシグナル切断部位の前の最終多型アミノ酸が欠如している３０個のアミノ酸のうちの天然ＣＤ２４分子の切断型を使用するように選択した（配列番号２）。このタンパク質は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインに融合される（配列番号７）。全長ＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質が、配列番号５（図１）に提供され、細胞から分泌される（すなわち、切断されるシグナル配列が欠如している）ＣＤ２４Ｆｃ融合タンパク質の成熟型が、配列番号６に提供される。ＩｇＧ１Ｆｃに融合される成熟ＣＤ２４（つまり、配列番号１を有する成熟ＣＤ２４タンパク質）のプロセス多型変異体は、配列番号１１または１２を含んでもよい。

ｂ．産生
本明細書で説明するＣＤ２４タンパク質は、高度にグリコシル化されてもよく、糖部分は、免疫細胞共刺激、シグレック（シアル酸結合免疫グロブリン型レクチン）との相互作用、及び損傷関連分子パターン（ＤＡＭＰ）との相互作用等のＣＤ２４の生物学的活性に関与してもよい。ＣＤ２４タンパク質は、真核生物発現系を使用して調製されてもよい。発現系は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳類細胞におけるベクターからの発現を伴ってもよい。その発現系はまた、真核生物細胞に感染するために使用され得る複製欠損レトロウイルスベクター等のウイルスベクターであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、細胞ゲノムに組み込まれているベクターまたはベクターの一部分からＣＤ２４タンパク質を発現する安定細胞株からも産生されてもよい。安定細胞株は、組み込まれた複製欠損レトロウイルスベクターからＣＤ２４タンパク質を発現してもよい。発現系は、ＧＰＥｘ（商標）であってもよい。

ｃ．医薬組成物
本明細書に説明するＣＤ２４タンパク質は、医薬組成物に含有されてもよく、医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含んでもよい。医薬組成物は、長期間にわたってＣＤ２４タンパク質を安定させ得る溶媒を含んでもよい。溶媒は、ＰＢＳであってもよく、ＰＢＳは、少なくとも６６ヶ月の間約−２０°Ｃ（−１５〜−２５°Ｃ）でＣＤ２４タンパク質を安定させ得る。溶媒は、別の薬剤と組み合わせてＣＤ２４タンパク質を収容することができ得る。

ｄ．投薬量
ＣＤ２４タンパク質の用量は、許容可能な毒性及び臨床有効性を有する用量を決定するために、臨床試験によって最終的に決定されてもよい。初回臨床用量は、げっ歯類及び非ヒト霊長類における薬物動態及び毒性研究によって見積もられてもよい。ＣＤ２４タンパク質の用量は、所望の量のレプチン上昇及び投与経路に応じて、０．０１ｍｇ／ｋｇ〜１０００ｍｇ／Ｋｇであってもよく、１〜５００ｍｇ／ｋｇであってもよい。ＣＤ２４タンパク質は、静脈内注入または皮下もしくは壁内注射によって投与されてもよく、用量は、被験体がヒトである場合、１０〜１００，０００ｍｇ、１０〜１０，０００ｍｇ、１０〜１０００ｍｇ、１０〜５００ｍｇ、１０〜２４０ｍｇ、１０〜１２０ｍｇ、または１０、３０、６０、１２０、もしくは２４０ｍｇであってもよい。

３．治療の方法
ＣＤ２４タンパク質は、レプチン遺伝子におけるハイポモルフ変異またはエピジェネティックサイレンシングによるレプチン欠損症、視床下部性無月経、及び脂肪萎縮症を含むリポジストロフィー症候群（ＬＳ）等のレプチン欠乏状態を有する被験体等の、レプチンレベルを上昇させる必要のある被験体に投与されてもよい。さらに、被験体は、先天性または後天性のいずれかである全身性リポジストロフィーを有してもよい。後天性リポジストロフィーは、高活性レトロウイルス療法（ＨＡＡＲＴ）を使用する被験体または潜在するＨＩＶ感染（最も一般的なリポジストロフィー型）もしくは自己免疫状態を有する被験体を含む。後天性リポジストロフィーは、脂肪細胞分化、脂肪滴形態、及び脂質代謝を主導するいくつかの遺伝子のうちのいずれかに分子欠損を有する被験体を含む。被験体は、ヒト等の哺乳類であってもよい。

被験体は、レプチン補充療法（ＬＲＴ）等のレプチン補充薬剤、または血中のレプチンレベルを上昇させる薬剤で過去に治療されていてもよい。ＬＲＴ療法の具体的な例として、レプチンアナログメトレレプチン（Ｍｙａｌｅｐｔ，Ａｅｇｅｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）が挙げられる。

ａ．投与
医薬組成物の投与の経路は、非経口であってもよい。非経口投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、髄腔内、関節内、及び罹患関節内への直接注射を含むがこれらに限定されない。獣医学的使用について、薬剤は、通常の獣医学診療に従って、適切に許容可能な製剤として投与されてもよい。獣医は、特定の動物に最も適切な投薬計画及び投与経路を容易に決定することができる。医薬組成物は、ヒト患者、ネコ、イヌ、大型動物、または鳥類に投与されてもよい。

ＣＤ２４タンパク質は、他の治療と同時にまたはメトロノミックに投与されてもよい。本明細書で使用する用語の「同時」または「同時に」は、ＣＤ２４タンパク質及び他の治療が、相互に４８時間、好ましくは２４時間、より好ましくは１２時間、さらにより好ましくは６時間、及び最も好ましくは３時間以下以内に投与されることを意味する。本明細書で使用する用語の「メトロノミックに」は、他方の治療とは異なる時間における及び反復投与に対する一定の頻度における薬剤の投与を意味する。

ＣＤ２４タンパク質は、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、及び１分を含む別の治療前の任意の時点で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、及び１分を含むＣＤ２４タンパク質の第２の治療前の任意の時点で投与されてもよい。

ＣＤ２４タンパク質は、約１分、２分、３分、４分、５分、６分、７分、８分、９分、１０分、１５分、２０分、２５分、３０分、３５分、４０分、４５分、５０分、５５分、１時間、２時間、３時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、２６時間、２８時間、３０時間、３２時間、３４時間、３６時間、３８時間、４０時間、４２時間、４４時間、４６時間、４８時間、５０時間、５２時間、５４時間、５６時間、５８時間、６０時間、６２時間、６４時間、６６時間、６８時間、７０時間、７２時間、７４時間、７６時間、７８時間、８０時間、８２時間、８４時間、８６時間、８８時間、９０時間、９２時間、９４時間、９６時間、９８時間、１００時間、１０２時間、１０４時間、１０６時間、１０８時間、１１０時間、１１２時間、１１４時間、１１６時間、１１８時間、及び１２０時間を含む別の治療後の任意の時点で投与されてもよい。ＣＤ２４タンパク質は、約１２０時間、１１８時間、１１６時間、１１４時間、１１２時間、１１０時間、１０８時間、１０６時間、１０４時間、１０２時間、１００時間、９８時間、９６時間、９４時間、９２時間、９０時間、８８時間、８６時間、８４時間、８２時間、８０時間、７８時間、７６時間、７４時間、７２時間、７０時間、６８時間、６６時間、６４時間、６２時間、６０時間、５８時間、５６時間、５４時間、５２時間、５０時間、４８時間、４６時間、４４時間、４２時間、４０時間、３８時間、３６時間、３４時間、３２時間、３０時間、２８時間、２６時間、２４時間、２２時間、２０時間、１８時間、１６時間、１４時間、１２時間、１０時間、８時間、６時間、４時間、３時間、２時間、１時間、５５分、５０分、４５分、４０分、３５分、３０分、２５分、２０分、１５分、１０分、９分、８分、７分、６分、５分、４分、３分、２分、及び１分を含む前のＣＤ２４治療後の任意の時点で投与されてもよい。

ｂ．組み合わせ治療
ＣＤ２４タンパク質は、レプチン補充療法（ＬＲＴ）、または血中のレプチンレベルを上昇させる薬剤等の、別の薬剤または治療計画と組み合わせてもよい。ＬＲＴ療法の具体的な例として、レプチンアナログメトレレプチン（Ｍｙａｌｅｐｔ，Ａｅｇｅｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ，ＵＳＡ）が挙げられる。ＣＤ２４タンパク質及び他方の薬剤は、同時または順番に投与されてもよい。

本発明は、多数の態様を有し、以下の非限定的な実施例によって説明される。

実施例１
本実施例は、ＣＤ２４Ｆｃが循環レプチンレベルを上昇させることを実証する。ベースラインからの血漿中のレプチンの変化を、以下に詳細に説明する臨床研究において分析した（本実施例の方法セクション参照）。

Ｌｕｍｉｎｅｘビーズベースの免疫測定を使用して、ＣＤ２４Ｆｃまたはプラセボを服用する４０人の健常被験体から、１日目の治療前及び３日目の治療後に得られた８０個の試料において、血漿レプチンレベルを決定した。データを表１に要約する。

分析感度または検出限界（ＬＯＤ）は、平均背景を上回る２つの標準偏差にある点における標準曲線から計算した値として決定した（２０のゼロ標準レプリケート）。定量下限（ＬＬＯＱ）は、３つの異なるラウンドにおいて３部ずつアッセイした標準希釈剤における２倍数希釈系列の標準を使用して決定し、測定の変動係数（ＣＶ）が３０％である時点として定義した。ＣＶを計算して濃度に対してプロットし、ＬＬＯＱをプロットから補間した。アッセイの性能特性は表２の以下の通りである。

図２は、コホートを投薬することによりグループ化された患者について、３日目／１日目のレプチンの比率を示す。図が示すように、ＣＤ２４Ｆｃ治療後、循環レプチンの相対量において上昇傾向があり、０、６０、１２０、及び２４０ｍｇのコホート間において、この上昇は、統計的に有意であり（Ｐ＝０．００９３９７、用量依存的な一般線形回帰モデル）、６０ｍｇを超える用量依存的な上昇が実証される。さらに、プラセボ（０ｍｇ）と比較した２４０ｍｇのコホートにおけるＣＤ２４Ｆｃ投与後のレプチンのレベルにおいて統計的に有意な上昇があり（スチューデントのＴ検定により決定されるＰ＝０．０５）、ヒト患者におけるレプチン上昇に効果的であることが示される。

方法
これは、健常成人男女の被験体におけるＣＤ２４Ｆｃの安全性、忍容性、及びＰＫを査定するための、第１相、無作為化、二重盲検、プラセボ対照、単回漸増投与試験であった。８人の被験体から成る５つのコホートにおける全４０人の被験体が本研究に参加した。各コホートにおける８人の被験体のうちの６人が被験薬を服用し、２人の被験体がプラセボ（０．９％塩化ナトリウム、生理食塩水）を服用した。第１のコホートは、１０ｍｇの投薬を受け、後続のコホートは、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ、及び２４０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃまたは対応プラセボを服用した。投薬は、固定量のＣＤ２４Ｆｃに基づき、体重またはＢＳＡには基づかなかった。被験体は、安全性及び忍容性のデータの検討を可能にするために少なくとも３週間の間隔で投薬を受けた。被験体の新しいコホートへの次に高い用量の投与は、十分な安全性及び忍容性が実証された場合のみ許可された。

各コホートにおいて、最初の２人の被験体は、１日目における１人の被験薬服用者及び１人のプラセボ服用者であった。３〜５人目及び６〜８人目の被験体は、７日目の後に投薬を受けた（下位群間で最低２４時間の間隔）。各被験体は、同一の下位群において少なくとも１時間間隔で投薬を受けた。必要に応じて、残りの被験体の投薬は、そのコホートにおける第１または第２の下位群を伴う投薬後期間中に発生し得た任意の有意な安全性の問題の検討の間に遅らせた。後続のコホートは、前回のコホート後少なくとも３週間に投薬を受けた。

スクリーニング期間：スクリーニング訪問（訪問１）は、積極的治療期間の開始前最大２１日に発生した。インフォームドコンセントの提供後、被験体は、適格性についてのスクリーニング手順を受けた。

治療期間：被験体は、１日目に臨床薬理施設（ＣＰＵ）に入れられ（訪問２）、無作為化治療期間は、１０時間の最低夜間絶食の後、１日目に開始した。被験体は、ＣＤ２４Ｆｃまたはプラセボを単回投与として含む治療に無作為に割り当てられた。被験体は、４日目の朝まで閉じ込められたままであった。

経過観察：全被験体が、経過観察訪問（訪問３、訪問４、訪問５、訪問６、及び訪問７）のために７日目、１４日目、２１日目、２８日目、及び４２日目（±１日）にＣＰＵに戻った。訪問７は、全被験体の最終訪問であった。

治療の期間：
被験体毎の全研究期間は、最大６３日であった。

単一用量投与は、１日目に発生した。

被験体の数：
計画：４０人の被験体
スクリーニング：２２４人の被験体
無作為化：４０人の被験体
完了：３９人の被験体
中止：１人の被験体

診断及び主要な組み入れ基準：本研究の集団は、１８ｋｇ／ｍ^２以上３０ｋｇ／ｍ^２以下の体格指数を有する、１８歳以上５５歳以下の健常男女であった。

治験薬及び対照薬情報：ＣＤ２４Ｆｃ：静脈内注入を介して投与された１０ｍｇ、３０ｍｇ、６０ｍｇ、１２０ｍｇ、または２４０ｍｇの単一用量、ロット番号：０９ＭＭ−０３６。ＣＤ２４Ｆｃは、ヒトＣＤ２４の細胞外ドメイン及びヒト免疫グロブリンＧ１（ＩｇＧ１Ｆｃ）のフラグメント結晶化可能領域から成る完全ヒト化融合タンパク質である。ＣＤ２４Ｆｃは、静脈内投与のために、滅菌、澄明、無色の、防腐剤の入っていない、水溶液として供給された。ＣＤ２４Ｆｃは、１０ｍｇ／ｍＬの濃度及び７．２のｐＨで．単一用量注射液として製剤された。各ＣＤ２４Ｆｃバイアルは、１６０ｍｇのＣＤ２４Ｆｃ、５．３ｍｇの塩化ナトリウム、３２．６ｍｇのリン酸水素２ナトリウム７水和物、及び１４０ｍｇのリン酸１ナトリウム１水和物を１６ｍＬ±０．２ｍＬのＣＤ２４Ｆｃ中に含んだ。ＣＤ２４Ｆｃを、クロロブチルのゴムストッパー及びアルミニウムのフリップオフシールを含む透明のホウケイ酸ガラスバイタルに供給した。

静脈内注入を介した投与された対応プラセボ（０．９％塩化ナトリウム、生理食塩水）、ロット番号：Ｐ２９６８５５、Ｐ３１１８５２、Ｐ３００７１５、Ｐ３１５９５２。

治療意図（ＩＴＴ）集団は、少なくとも１つの用量の被験薬を服用した全ての被験体から成る。ＩＴＴ集団は、被験体の情報及び安全性の評価のための主要な分析集団であった。

血漿試料は、投薬前１日目、投薬日、及び２日目、３日目、４日目、７日目、１４日目、２１（±１）日目、２８（±１）日目、及び４２（±１）日目に採取された。

引用文献：Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＡＪ，Ｍａｓｔｒｏｎａｒｄｉ ＣＡ，Ｐａｚ−Ｆｉｌｈｏ ＧＪ。Ｎｅｗ ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｇｅｎｅｒａｌｉｚｅｄ ｌｉｐｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ：ｒｏｌｅ ｏｆ ｍｅｔｒｅｌｅｐｔｉｎ。Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｉｓｋ Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ．２０１５；１１：１３９１−１４００．ｄｏｉ：１０．２１４７／ＴＣＲＭ．Ｓ６６５２１。

Claims (27)

1. 被験体の血中の循環レプチンレベルを上昇させるための方法であって、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
2. 前記被験体が、低下したレプチンを有する、請求項１に記載の方法。
3. 前記被験体が、リポジストロフィーを有する、請求項２に記載の方法。
4. 前記被験体が、ＨＩＶを有する、請求項２に記載の方法。
5. 前記被験体が、抗ウイルス療法を受けている、請求項２に記載の方法。
6. 前記ＣＤ２４タンパク質が、成熟ヒトＣＤ２４の配列またはその変異体を含む、請求項１に記載の方法。
7. 前記成熟ヒトＣＤ２４が、配列番号１及び２の配列から成る群から選択される配列を含む、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＣＤ２４タンパク質が、ヒトＣＤ２４の細胞外ドメインを含む、請求項６に記載の方法。
9. 前記ＣＤ２４タンパク質が、タンパク質タグをさらに含み、前記タンパク質タグが、前記ＣＤ２４タンパク質のＮ末端またはＣ末端に融合される、請求項７に記載の方法。
10. 前記タンパク質タグが、哺乳類免疫グロブリン（Ｉｇ）の一部分を含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記Ｉｇ部分が、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分である、請求項１０に記載の方法。
12. 前記Ｆｃ部分が、前記ヒトＩｇタンパク質のヒンジ領域ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含み、前記Ｉｇが、ＩｇＧ１、ＩｇＧ１、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、及びＩｇＡから成る群から選択される、請求項１１に記載の方法。
13. 前記Ｆｃ部分が、ＩｇＭのヒンジ領域ならびにＣＨ３及びＣＨ４ドメインを含む、請求項１１に記載の方法。
14. 前記ＣＤ２４タンパク質が、配列番号６の配列を含む、請求項１１に記載の方法。
15. 前記ＣＤ２４タンパク質が、真核生物タンパク質発現系を使用して産生される、請求項１に記載の方法。
16. 前記発現系が、チャイニーズハムスター卵巣細胞株に含有されるベクターを含む、請求項１５に記載の方法。
17. 前記ＣＤ２４タンパク質が、配列番号４のシグナル配列を含む、請求項１６に記載の方法。
18. 前記シグナルペプチド配列が、天然タンパク質配列から採用されたか、または機能的に同等の変異体のいずれかである、請求項１６に記載の方法。
19. 前記ＣＤ２４タンパク質が可溶性である、請求項１に記載の方法。
20. 前記ＣＤ２４タンパク質がグリコシル化される、請求項１に記載の方法。
21. 被験体におけるリポジストロフィー症候群を治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
22. ＨＩＶを有する被験体におけるリポジストロフィーを治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
23. 抗ウイルス療法を受けた被験体におけるリポジストロフィー症候群を治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体にＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
24. 被験体の血中の循環レプチンレベルを上昇させるための方法であって、それを必要とする被験体に配列番号６のＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
25. 被験体におけるリポジストロフィー症候群を治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体に配列番号６のＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
26. ＨＩＶを有する被験体におけるリポジストロフィーを治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体に配列番号６のＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。
27. 抗ウイルス療法を受けた被験体におけるリポジストロフィー症候群を治療または予防するための方法であって、それを必要とする被験体に配列番号６のＣＤ２４タンパク質を投与することを含む、方法。