KR20210100638A

KR20210100638A - 호중구 질환을 치료하는 방법

Info

Publication number: KR20210100638A
Application number: KR1020217018672A
Authority: KR
Inventors: 카렌 리사 인구안티; 조란타 알레이; 자그데브 시드후; 마이클 토르토리시; 테레사 유라스젝
Original assignee: 씨에스엘 이노베이션 피티와이 엘티디
Priority date: 2018-12-04
Filing date: 2019-12-04
Publication date: 2021-08-17
Also published as: WO2020113270A1; BR112021010920A2; AU2019393334A1; US20220220209A1; JP2024120911A; JP2022513717A; EP3891184A1; CN113272326A; CA3119192A1; EP3891184A4

Abstract

본 발명의 내용은 3등급 또는 4등급 호중구 감소증(neutropenia)을 유발하지 않으면서 대상체에서 순환 호중구(circulating neutrophils)를 감소시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 내용은 또한 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체로 호중구 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 내용은 화농성 한선 염 (hidradenitis suppurativa;HS) 및 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis;PPP)과 같은 호중구 피부병(neutrophilic dermatoses)을 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

호중구 질환을 치료하는 방법

본 발명은 과립구-콜로니 자극 인자 수용체(granulocyte-colony stimulating factor receptor;G-CSFR)에 결합하는 항체로 호중구 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.

관련 출원 참조

본 출원은 2018년 12월 4일에 출원된 미국 특허 출원번호 62/774,974 "호중구 질환 치료 방법", 2019년 8월 12일에 출원된 미국 특허 출원번호 62/885,373 "호중구 질환 치료 방법", 및 2019년 9월 9일에 출원된 미국 특허 출원번호 62/897,487 "호중구 질환 치료 방법"으로부터 우선권을 주장한다. 이들 출원의 전체 내용은 여기에 참조로서 통합된다.

배경기술

과립구 콜로니 자극 인자(granulocyte-colony stimulating factor receptor;G-CSF)는 과립구 생산의 주요 조절자이다. G-CSF는 골수 간질 세포(bone marrow stromal cells), 내피세포(endothelial cells), 대식세포(macrophages) 및 섬유 아세포(fibroblasts)에 의해 생성되며 염증 자극(inflammatory stimuli)에 의해 생성이 유도된다. G-CSF는 초기 골수 선조(early myeloid progenitors), 성숙한 호중구(mature neutrophils), 단핵구(monocytes)/대식세포, T 및 B 림프구(T and B lymphocytes) 및 내피세포에서 발현되는 G-CSF 수용체(G-CSFR)를 통해 작용한다. G-CSF 또는 G-CSFR이 결핍된 쥐는 현저한 호중구 감소증(neutropenia)을 나타내는데, 정상 상태 과립 형성에서 G-CSF의 중요성을 보여준다. G-CSF는 호중구의 생산과 방출을 증가시키고, 조혈 줄기(hematopoietic stem) 및 전구 세포(progenitor cell)를 동원하고 성숙한 호중구의 분화, 수명 및 효과 기능을 조절한다. G-CSF는 또한 단핵구/대식세포 수의 확장, 식세포 기능(phagocytic function)의 향상, 염증성 사이토 카인(inflammatory cytokine) 및 케모카인(chemokine) 생산의 조절을 포함하여 대식세포에 영향을 미칠 수 있다. G-CSF는 또한 내피 전구 세포(endothelial progenitor cells)를 동원하고 혈관 신생(angiogenesis)을 유도하거나 촉진하는 것으로 나타났다.

G-CSF는 예를 들어 호중구 감소증(neutropenia)을 치료하거나 조혈 줄기 세포(hematopoietic stem cells)를 동원하기 위해 치료적으로 사용되지만, 또한 염증 상태 및/또는 암과 같은 일부 상태에서 부정적인 작용을 한다. 예를 들어, G-CSF의 투여는 쥐에서 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis;RA), 뮤린 콜라겐 유도 관절염(murine collagen-induced arthritis;CIA) 및 CIA의 수동 전달 모델을 악화시킨다. G-CSF는 RA 환자의 혈청 및 활액에서 발견되었다. 또한, RA를 앓고 있는 환자에서 증가 된 수준으로 발견되는 인터루킨(interleukin;IL)-1 및 종양 괴사 인자α(tumor necrosis factorα;TNFα)는 인간 활액 섬유 아세포(human synovial fibroblasts) 및 연골 세포(chondrocytes)에 의한 G-CSF 생성을 유도한다. G-CSF가 결핍 된 쥐는 급성 및 만성 염증성 관절염(acute and chronic inflammatory arthritis)의 유도에 내성이 있다.

G-CSF는 또한 다발성 경화증(multiple sclerosis;MS)에서 역할을 하는 것으로 나타났다. 예를 들어, G-CSF는 MS 증상을 악화시키는 것으로 알려진 인터페론γ(interferon γ) 및 TNFα만큼 효과적으로 MS의 자가 반응성 T 세포주 모델의 세포 외 기질에 대한 접착력을 향상시킨다. 더욱이, G-CSF 결핍 쥐는 실험적 알레르기 성 뇌척수염(experimental autoimmune encephalomyelitis;EAE)의 발달에 저항력이 있다.

G-CSF 및 G-CSFR은 또한 암과 관련이 있으며, 이러한 신호 전달 경로가 다양한 암의 화학 요법 내성, 성장, 생존, 침습성 및 전이에 기여한다는 연구 결과가 있다. 또한, G-CSF는 고형 종양(solid tumors) 발생에 중요한 과정인 혈관 신생을 유도하는 것으로 나타났다.

흡착성 과립구 및 단핵구 분리법(granulocyte and monocyte apheresis;GMA)을 사용하여 호중구 및 단핵구/대식세포를 포함한 골수 세포를 제거하는 것도 수많은 질환을 치료하는 데 유용한 것으로 나타났다. GMA는 객체의 혈액이 셀룰로오스 아세테이트 비드(cellulose acetate beads)기둥을 통해 주입되고 골수 세포가 제거되는 체외 치료(extracorporeal treatment)이다. 현재 GMA는 궤양성 대장염(ulcerative colitis), 크론 병(Crohn's disease) 및 농포성 건선(pustular psoriasis)치료를 위해 일본에서 승인되었다. 피부과 질환 ((예:괴저 농증(pyoderma gangrenosum), 베체트병(Behcet's disease), 전신 농포성 건선(generalized pustular psoriasis), 건선(psoriasis), 스틸병(Still's disease), 스위트병(Sweet disease), 피부 알레르기성 혈관염(cutaneous allergic vasculitis) 및 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus) 및 관절염(arthritis) 및 건선성 관절염(psoriatic arthritis)(예:Kanekura, J. Dermatol., 45 : 943-950, 2018 참조)에 대한 임상적 효능도 보고되었다. GMA의 단점은 대상체가 백혈구 채취 세션(leukapheresis session)을 주당 1 내지 2 회, 각 세션이 약 1시간 동안 5 내지 10회 진행될 수 있게 갖추어진 병원에 방문해야 한다는 것이다. 이러한 치료는 시간이 많이 걸리고 환자에게 불편하며 전문 장비와 훈련된 직원에 의해 투여되어야 한다.

호중구 감소증을 유발하지 않으면서 G-CSFR을 통해 G-CSF의 신호 전달을 감소시키는 방법이 당 업계에 필요하다는 것은 전술한 내용으로부터 당업자에게 명백할 것이다.

요약

본 개시 내용에서 발명자들은 호중구 감소증을 유발하지 않거나 장기간 동안 중증 호중구 감소증을 유발하지 않고 대상체 에서 순환 호중구(circulating neutrophils)의 수를 감소시킬 수 있는 항-G-CSFR 항체의 용량을 확인하고자 했다. 순환 호중구의 수를 줄임으로써 본 발명자들은 호중구 매개 질환(neutrophil-mediated conditions)을 치료할 수 있었다. 그러나 본 발명자들은 또한 예를 들어 감염의 위험에 놓이는 것을 피하기 위해 장기간 동안 중증 호중구 감소증을 유도하지 않는 것이 중요하다는 점을 인식했다. 본 발명자들은 순환 호중구 수를 감소시키지만 장기간 동안 대상체 에서 심한 호중구 감소증을 유발하지 않는 항체 용량을 확인했다.

발명가들의 연구 결과를 바탕으로. 본 개시 내용은 연속 2일 이상 동안 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증 (또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않고 대상체 에서 순환 호중구를 감소시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물, 예를 들어 항체의 Fc 영역을 포함하는 단백질과 같은 단백질 기반 억제제를 0.1mg/kg 내지 1.0mg/kg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 항체는 G-CSFR에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제한다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 3일 이상 동안 대상체 에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 4일 또는 5일 또는 6일 초과 동안 대상체 에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 7일 이상 동안 대상체 에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 본 개시 내용은 연속 7일 초과 동안 3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 지속시키지 않으면서 인간 대상체 에서 순환 호중구를 감소시키는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체의 0.1mg/kg 내지 1.0mg/kg 용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.

하나의 예에서, 화합물은 G-CSF에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체이다. 하나의 예에서, 화합물은 G-CSFR에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체이다. 예를 들어 항체는 G-CSFR에 결합하거나 특이적으로 결합하는데 서열 번호 4로 표시된 서열을 포함하는 중쇄 가변영역 (heavy chain variable region;VH) 및 서열 번호 5로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄 가변영역 (light chain variable region ;VL) 을 포함하는 항체 C1.2G (본 명세서에서 CSL324라고도 함)의 G-CSFR에 대한 결합을 경쟁적으로 억제한다.

하나의 예에서, 대상체는 호중구 매개 질환을 앓고 있다. 따라서, 본 발명은 또한 호중구 매개 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은(상기 및 본 명세서에서 논의된 바와 같이) G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물의 0.1mg/kg 내지 1.0mg/kg의 용량을 호중구 매개 질환을 앓고 있는 대상체 에게 투여하는 것을 포함하고, 예를 들어, 항체는 G-CSF 또는 G-CSFR에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제한다.

하나의 예에서, 항체는 G-CSFR에 결합하거나 특이적으로 결합하고, 서열 번호 4로 표시되는 서열을 포함하는 VH 및 서열 번호 5로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄 가변영역 VL을 포함하는 항체 C1.2G의 G-CSFR에 대한 결합을 경쟁적으로 억제한다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 2일 이상 동안 대상체에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 3일 이상 동안 대상체에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 4일 또는 5일 또는 6일 초과 동안 대상체에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증 (또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다. 하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 7일 이상 동안 대상체에서 3등급 호중구 감소증 또는 4등급 호중구 감소증(또는 중증 호중구 감소증)을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 항체의 투여는 연속 7일 이상 동안 대상체에서 3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 유발하지 않는다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 4등급 호중구 감소증을 유도하지 않는다. 또 다른 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 그것이 투여되는 대상체 집단의 10% 미만에서 연속 3일 초과 동안 4등급 호중구 감소증을 유도한다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 감염, 예를 들어 결핵 감염(tuberculosis infection)과 같은 심각한 감염과 연관되지 않는다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 연속 2일 미만 동안 호중구 감소증을 유도하지 않거나 2등급 또는 3등급 호중구 감소증을 유도하지 않는다. 예를 들어, 항체 투여는 36시간 이하, 예를 들어 24시간 이하 동안 2등급 또는 3등급 호중구 감소증을 유발한다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 호중구 감소증을 유발하지 않는다. 따라서, 하나의 예에서, 대상체의 절대 호중구 수(absolute neutrophil count;ANC)는 G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체로 치료하는 동안 약 2x109/L 이상으로 유지된다.

하나의 예에서, 호중구 감소증은 열과 관련이 없다.

하나의 예에서 호중구 감소증은 치료없이 해결된다.

하나의 예에서, 호중구 감소증은 감염, 예를 들어 결핵 감염(tuberculosis infection)과 같은 심각한 감염과 관련이 없다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 단일 투여 후 4등급 호중구 감소증을 유도하지 않는다. 다른 예에서, 화합물 항체의 투여는 다중 투여, 예를 들어 2회 투여 또는 3회 투여 또는 4회 투여 또는 5회 투여 또는 6회 투여 후 4등급 호중구 감소증을 유도하지 않는다. 하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 적어도 3회 투여 후 4등급 호중구 감소증을 유도하지 않는다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체의 투여는 단일 투여 후 연속 2일 미만 동안 2등급 또는 3등급 호중구 감소증을 유도한다. 다른 예에서 화합물 또는 항체의 투여는 다중 투여 예를 들어, 2회 또는 3회 투여 또는 4회 투여 또는 5회 투여 또는 6회 투어 후 연속 2일 미만 동안 2등급 또는 3등급 호중구 감소증을 유도한다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 1mg/kg의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 0.1mg/ kg내지 0.9mg/kg, 예를 들어 0.1mg/kg 내지 0.8mg/kg의 용량으로 투여된다. 하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 0.6m /kg의 용량으로 투여된다. 하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.3mg/kg 내지 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.1mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.3mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 여러 번 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 7~35일에 한 번 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 14~28일마다 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 20~25일마다 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 여러 번 투여되며, 21일마다 1회 투여된다. 이와 관련하여 21마다(또는 다른 숫자)는 숙련된 사람에 의해 후속 투여가 직전 투여 후 21일에 수행되는 것으로 이해된다.

화합물 또는 항체는 예를 들어 수개월 또는 수년 동안 만성적으로 투여될 수 있으며, 본 발명 내용은 달리 언급되지 않는 한 특정 기간으로 제한되지 않는다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 질환 또는 질환의 증상이 해결되거나 관리될 때까지 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 질환의 완화를 유도하기 위해 투여된다. 다른 예에서, 화합물은 질환의 완화를 유지하기 위해 투여된다.

하나의 예에서, 화합물의 하나 이상의 부하 용량이 투여된 후 하나 이상의 유지 용량이 투여된다. 일반적으로, 부하 용량은 유지 용량보다 더 높거나 짧은 시간 간격으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 서열번호 1의 111-115, 170-176, 218-234 및/또는 286-300으로부터 선택된 1개 또는 2개 또는 3개 또는 4개의 영역 내에 잔기를 포함하는 에피토프(epitope)에 결합한다.

하나의 예에서, 항체는 다음을 포함한다:

(i)서열번호 4에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 5에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL;

(ii)서열번호 2에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 3에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL;

(iii) 서열번호 4에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH의 3개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열번호 5에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3개의 CDR을 포함하는 VL; 또는

(iv)서열번호 2에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH의 3개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열번호 3에 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3개의 CDR을 포함하는 VL.

하나의 예에서, 항체는 다음을 포함한다 :

(i)서열번호 14에 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15에 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는

(ii)서열번호 16에 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15에 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.

하나의 예에서, 항체는 서열번호 14에 표시되는 서열을 포함하는 하나의 중쇄, 서열번호 16에 표시되는 서열을 포함하는 하나의 중쇄 및 서열번호 15에 표시되는 서열을 포함하는 2개의 경쇄를 포함한다.

하나의 예에서, 항체는 다음 항체의 혼합물을 포함하는 조성물로 투여된다 :

(i)서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;

(ii)서열번호 16에 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15에 표시되는 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및

(iii)항체는 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 하나의 중쇄 및 서열번호 16에 표시되는 서열을 포함하는 하나의 중쇄 및 서열번호 15에 표시되는 서열을 포함하는 2개의 경쇄.

일부 예에서, 호중구 매개 질환은 자가 면역 질환(autoimmune disease), 염증 질환(inflammatory disease), 암 또는 허혈-재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)이다.

예시적인 자가면역 질환(Exemplary autoimmune condition)은 예를 들어, 크론 병(Crohn's disease) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 같은 자가 면역 장 질환(autoimmune intestinal disorders ), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)과 같은 관절염(arthritis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis) 및/또는 예를 들어 청소년 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis)과 같은 특발성 관절염(idiopathic arthritis) 또는 건선(psoriasis)을 포함한다.

예시적인 염증 질환은 데 빅병(Devic's disease), 뇌의 바이러스 감염(a viral infection in the brain), 다발성 경화증(multiple sclerosis) 및 시신경 척수염(neuromyelitis optica)과 같은 염증성 신경 질환(inflammatory neurological condition), 만성 폐쇄성 폐 질환)chronic obstructive pulmonary disease;COPD)과 같은 염증성 폐 질환(inflammatory lung disease) 또는 천식(asthma) 또는 포도막염(uveitis)과 같은 염증성 눈 질환(inflammatory eye condition )을 포함한다.

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 허혈-재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)이다. 예를 들어, 허혈-재관류 손상은 조직 또는 장기 이식(예:신장 이식)에 기인하거나 이와 관련된다. 예를 들어, 항체는 조직 또는 장기 이식 수용자에게, 예를 들어 장기 수집 전에 및/또는 이식 전에 조직 또는 장기에 투여되거나 생체 외에서 수확된 조직 또는 장기에 투여된다.

일부 예에서, 호중구 매개 질환은 건선(psoriasis)이다. 하나의 예에서, 호중구-매개 질환은 플라크 건선(plaque psoriasis, 당 업계에 "심상 성 건선"또는 "일반 건선"으로도 알려져 있음)이다.

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 호중구 피부병(neutrophilic dermatosis) 또는 호중구 피부 병변(neutrophilic skin lesion)이다. 예를 들어, 호중구 피부병은 농포성 건선(pustular psoriasis)이다.

하나의 예에서, 호중구 피부병은 주름의 무균 농포증(amicrobial pustulosis of the folds;APF); 판상형 건선(plaque psoriasis); CARD14 매개 농포성 건선(CARD14-mediated pustular psoriasis;CAMPS); 크라이오피린 관련 주기적 증후군(cryopyrin associated periodic syndromes;CAPS); 인터루킨 -1 수용체 결핍(deficiency of interleukin-1 receptor;DIRA); 인터루킨-36 수용체 길항제 결핍(deficiency of interleukin-36 receptor antagonist;DIRTA); 화농성 한선 염(hidradenitis suppurativa;HS); 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis); (화농성 관절염(pyogenic arthritis); 괴저농피증(pyoderma gangrenosum) 및 여드름(acne);(PAPA)); (괴저 농피증(pyoderma gangrenosum), 여드름(acne) 및 화농성 한선 염(hidradenitis suppurativa);(PASH)); 괴저 농피증(pyoderma gangrenosum;PG); 베체트 병의 피부 병변(skin lesions of Behcet's disease); 스틸병(Still's disease); 스위트 증후군(Sweet syndrome); 각막 하 농포증(subcorneal pustulosis;Sneddon-Wilkinson); 농포성 건선(pustular psoriasis); 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis); 급성 전신성 발 진성 농포증(acute generalized exanthematic pustulosis); 유아 말단 농포증(infantile acropustulosis); (활막염(synovitis), 여드름(acne), 농포증(pustulosis); 골비대증(hyperostosis) 및 골염(osteitis);(SAPHO)) 증후군; 장 관련 피부병-관절염 증후군(bowel-associated dermatosis-arthritis syndrome;BADAS); 등쪽 손의 호중구 피부병(neutrophilic dermatosis of the dorsal hands); 호중구 에크린 한선 염(neutrophilic eccrine hidradenitis); 지속융기홍반(erythema elevatum diutinum); 및 괴저농피증(Pyoderma gangrenosum)으로 구성된 군에서 선택 되어진다. 하나의 예에서, 호중구 피부병은 화농성 한선 염(HS) 또는 손발 바닥 농포증(palmoplantar pustulosis;PPP)이다.

하나의 예에서, 호중구 피부병은 화농성 한선 염(HS)이다. 실시 예에서 볼 수 있듯이, G-CSF 신호 전달의 억제는 이동성 케모카인 수용체(a migratory chemokine receptor;CXCR1)와 관련된 호중구 이동을 현저하게 감소시키는 것으로 밝혀졌으며, 그 발현은 HS 질환 중증도와 상관관계가 있다.

하나의 예에서, 호중구 피부병은 손바닥 발바닥 농포증(PPP)이다. 실시예 5와 같이 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체로 PPP를 치료하는 것이 안전하고 효과적이라는 것이 밝혀졌다.

PPP의 치료 효능은 당 업계에 공지된 임의의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 일부 예에서, 본 개시 내용에 따른 항체의 투여는 ppPASI 점수를 감소시킨다. ppPASI는 만성 플라크 건선(chronic plaque psoriasis)의 중증도를 평가하는 데 널리 사용되는 건선영역 및 심각도 지수를 기반으로 하는 평가 도구이다. 중증도, 홍반, 농포의 총 수, 박리 등의 매개 변수를 1~4 점 척도로 채점 한 다음 관련 영역 및 부위 (손바닥 또는 단독)에 대해 수정한다. 4개 값의 합은 0 (PPP 없음)에서 72 (가장 심각한 PPP) 범위의 최종 ppPASI를 생성한다. ppPASI는 치료 효능을 평가하기 위해 본 개시 내용에 따른 항체를 투여하기 전, 투여하는 동안 및/또는 투여한 후에 스크리닝시(screening)에 평가될 수 있다. 예를 들어, 항체 투여 후, 투여 전보다 낮은 ppPASI 점수는 PPP의 효과적인 치료의 증거이다.

PPP 치료의 효능을 평가하기 위한 또 다른 측정은 Palm-Sole Physician Global Assessment(PGA)이다. 하나의 예에서, 본 개시된 내용에 따른 항체의 투여는 PGA점수를 감소시킨다. PGA는 홍반(erythema), 비늘(scale) 및 경결(induration)을 기준으로 모든 건선 병변(psoriatic lesions)의 평균 평가이다. PGA는 치료 효능을 평가하기 위해 본 개시 내용에 따른 항체를 투여하기 전, 투여 동안 및/또는 후에 스크리닝시(screening)에 평가될 수 있다. 예를 들어, 항체 투여 후, 투여 전보다 낮은 PGA 점수는 PPP의 효과적인 치료의 증거이다. PPP와 같은 호중구 피부병 치료의 효능을 평가하기 위한 다른 적절한 측정이 본원에 설명되어 있다.

일부 예에서, 대상체는 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체로 치료하기 적어도 1년, 또는 적어도 2년, 또는 적어도 3년, 또는 적어도 4년 전에 PPP로 진단되었다. 일부 예에서, PPP를 가진 대상체는 이전에 PPP 치료를 받은 적이 있다. 일부 예에서, 대상체는 이전에 다음 요법 중 하나 이상으로 치료를 받았다.

(i) 메트로 렉세이트(methotrexate);

(ii) 아시트렉틴(acitretin);

(iii) 타크로리무스(tacrolimus);

(iv) 코르티코스테로이드(corticosteroids); 및

(v) 비타민 D(vitamin D) 및 코르티코스테로이드(corticosteroids)

일부 예에서, PPP를 가진 대상체는 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체로 치료하기 전 손발 바닥 농포성 건선 부위 심각도 지수 (Palmoplantar Pustular Psoriasis Area Severity Index ;ppPASI)가 11 이상, 16 이상, 21 이상, 26 이상 또는 31 이상이다. 따라서 일부 예에서 PPP는 보통 또는 중증 PPP이다. 일부 예에서, PPP는 심각한 PPP (즉, ppPASI가 16 이상)이다.

일부 예에서, PPP를 가진 대상체는 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체로 치료하기 전에 PPP-Physician 's Global Assessment;PPP-PGA) 점수가 3 (즉, "보통") 또는 4 (즉, "심각")이다.

하나의 예에서, 본 개시 내용은 호중구 피부병을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 호중구 피부병을 앓고 있는 대상체에게 과립구-콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 0.1 내지 1mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하는 방법이며, 상기 항체는 21일마다 1회 수회 투여되고, 상기 항체는 다음을 포함한다:

(i)서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는

(ii)서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.

하나의 예에서, 본 개시 내용은 호중구 피부병을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 호중구 피부병을 앓고 있는 대상체에게 과립구-콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 0.1 내지 1mg/kg 용량으로 투여하는 단계를 포함하는 방법이며, 상기 항체는 21일마다 1회 수회 투여되고 상기 항체는 다음을 포함한다:

하나의 예에서, 본 개시 내용은 HS를 치료하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 호중구 피부병을 앓고 있는 대상체에게 과립구-콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 0.1 내지 1mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 상기 항체는 21마다 1회 수회 투여되고 상기 항체는 다음을 포함한다:

(i)서열 번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는

(ii)서열 번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.

하나의 예에서, 본 개시 내용은 PPP를 치료하는 방법을 제공하는데, 상기 방법은 호중구 피부병을 앓고 있는 대상체에게 과립구-콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 0.1 내지 1mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함하며, 상기 항체는 21일마다 1회 수회 투여되고 상기 항체는 다음을 포함한다:

본 개시 내용은 추가로 본원에 기재된 방법에서 사용하기 위한 설명서와 함께 본원에 기재된 항체와 함께 포장된 키트(kit packed)를 제공한다.

도 1은 실시 예 1에 기재된 바와 같이 0.1, 0.3, 0.6, 0.8 및 1.0 mg/kg C1.2G의 단일 용량이 투여된 건강한 대상체에서 시간에 따른 평균 혈청 CSL324 농도를 나타내는 그래프이다.
도 2는 실시 예 1에 기재된 바와 같이 0.1, 0.3, 0.6, 0.8 및 1.0 mg/kg CSL324의 단일 용량을 투여받은 건강한 대상체에서 시간에 따른 점유된 표적 수용체 백분율(percent occupied target receptor;G-CSFR)을 나타내는 그래프이다.
도 3은 실시 예 2에 기재된 바와 같이 호중구 피부병의 치료를 위해 CSL324로 투여된 대상체의 각 코호트(each cohort)에 대한 스크리닝(screening), 치료 및 추적 기간을 상세히 설명하는 개략도이다.
도 4는 실시 예 2에 기술된 바와 같이 호중구 피부병 치료를 위해 CSL324로 투여 된 대상체에 대한 코호트(each cohort) # 1의 리드(lead) 및 코호트(each cohort) # 2의 지연된 시작을 상세히 설명하는 개략도이다.
도 5는 실시 예 1에 기재된 바와 같이 0.1, 0.3, 0.6, 0.8 및 1.0 mg/kg의 단일 용량을 투여받은 건강한 대상체에서 호중구 감소증 독성 등급(즉, 등급 1, 2, 3 및 4)에 따른 절대 호중구 수(absolute neutrophil count;ANC)를 나타내는 히트 맵(heatmap)이다. .
도 6은 실시 예 1에 기재된 바와 같이, 0.6mg/kg CSL324의 3 회 용량을 투여받은 건강한 대상체에서 호중구 감소증 독성 등급(즉, 등급 1, 2, 3 및 4)에 따른 절대 호중구 수(ANC)를 나타내는 히트 맵이다.
도 7은 HS 환자의 호중구에서 세포 이동과 관련된 케모카인 수용체 인 CXCR1의 발현을 보여주는 그래프를 보여준다. 도 7A는 CXCR1 발현이 건강한 대조군에 비해 HS 환자 샘플 호중구에서 유의하게 더 높음을 보여준다. 도 7B는 HS 환자 농양과 결절 수와 HS 환자의 호중구에 대한 CXCR1 발현 사이의 상관 관계를 보여준다.
도 8은 호중구에 대한 G-CSF 유도 CXCR1(도 8A) 및 CXCR2(도 8B) 발현에 대한 CSL324의 효과를 나타내는 그래프를 보여준다. CSL324(회색)는 G-CSF가 없을 때 단독으로 배지된 것과 비교하여 CXCR1 또는 CXCR2의 발현을 변경하지 않았다. G-CSF 단독(검은색)의 존재하에서 호중구의 배양은 단독으로 배지된 것과 비교하여 CXCR1 및 CXCR2의 세포 표면 발현을 증가시켰다. CSL324(회색)와의 사전 배양은 CXCR1 및 CXCR2 발현의 G-CSF 유도 상향 조절을 감소시킬 수 있었다.
도 9는 G-CSF로 유도된 호중구 이동에 대한 CSL324의 효과를 나타내는 그래프를 보여준다. G-CSF 단독의 존재하에서 사전 배양은 호중구의 MIP-2 로의 이동을 유도했으며(도 9A;검은 색 막대), CSL324에 의해 배지 단독 대조군과 동일한 수준으로 감소되었다(도 9A;회색 막대). G-CSF와의 사전 배양은 호중구의 MIP-2 로의 이동 증가와 관련이있는 CXCR1 및 CXCR2의 상향 조절을 초래했다(도 9B 및 9C).
도 10은 건선 환자(psoriasis patient)에서 호중구 수와 세포 이동 마커 CXCR1 및 CXCR2의 발현을 나타내는 그래프를 보여준다. 호중구 수(도 10A)는 영향을 받지 않은 대조군에 비해 건선 환자의 말초 혈액(peripheral blood)에서 유의하게 증가했다. PASI 점수로 평가 한 건선의 중증도를 기반으로 한 층화는 PASI 점수가 10 이상인 개인에서 호중구 수가 유의하게 증가했음을 보여준다. 호중구:림프구 비율 (neutrophil:lymphocyte ratio;NLR)은 PASI 점수가 10 미만인 개인에 비해 PASI 점수가 10 이상인 개인에서 유의하게 상승했다(도 10B). CXCR2의 발현은 경증 (PASI <10) 및 중증 (PASI> 10) 건선 모두에서 호중구 표면에서 유의하게 증가했다(도 10C). 케모카인 수용체(chemokine receptor)CXCR1의 수준에서 통계적으로 유의한 변화는 감지되지 않았다(도 10D).
도 11은 21일마다 CSL324의 5회 IV 주입으로 처리된 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis;PPP)을 앓고 있는 인간 대상체의 손바닥 발바닥 농포 건선 영역 심각도 지수(Palmoplantar Pustular Psoriasis Area Severity Index;ppPASI)를 보여주는 그래프이다.
도 12는 21일마다 CSL324의 5회 IV 주입으로 처리된 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis;PPP)을 앓는 인간 대상체의 절대 호중구 수(absolute neutrophil count;ANC)를 보여주는 그래프이다. 수직 점선은 CSL324 복용량을 나타낸다. 정상 ANC 범위의 하한 및 상한은 각각 "LLN" 및 "ULN"으로 표시된다.

핵심 서열 목록

서열번호 1 - C-말단 폴리히스티딘 태그(C-terminal polyhistidine tag)가 있는 Homo sapiens G-CSFR(hG-CSFR)의 아미노산 25-335

서열번호 2 - C1.2의 VH

서열번호 3 - C1.2의 VL

서열번호 4 - C1.2G의 VH

서열번호 5 - C1.2G의 VL

서열번호 6 - C1.2의 HCDR1

서열번호 7 - C1.2의 HCDR2

서열번호 8 - C1.2의 HCDR3

서열번호 9 - C1.2의 LCDR1

서열번호 10 - C1.2의 LCDR2

서열번호 11 - C1.2의 LCDR3

서열번호 12 - C1.2의 HCDR3의 공통 서열(consensus sequence)

서열번호 13 - C1.2의 LCDR3의 공통 서열

서열번호 14 - 안정화된 IgG4 불변 영역(constant region)을 갖는 C1.2G의 중쇄

서열번호 15 - 카파(kappa) 불변 영역을 갖는 C1.2G의 경쇄

서열번호 16 - 안정화된 IgG4 불변 영역을 가지며 C-말단 라이신(C-terminal lysine)이 없는 C1.2G의 중쇄.

실시예

일반

본 명세서 전반에 걸쳐 달리 구체적으로 언급되거나 문맥상 달리 요구하지 않는 한 단일 단계, 물질의 구성, 단계의 그룹 또는 물질의 구성의 그룹에 대한 언급은 이러한 단계 중 하나 이상 (즉, 하나 이상의), 물질의 구성, 단계의 그룹 또는 물질의 구성의 그룹을 포함하는 것으로 간주되어야 한다.

당업자는 본 개시 내용이 구체적으로 설명된 것 이외의 변경 및 수정에 민감하다는 것을 이해할 것이다. 본 개시는 그러한 모든 변형 및 수정을 포함한다는 것을 이해되어야 한다. 본 개시 내용은 또한 본 명세서에서 개별적으로 또는 집합적으로 언급되거나 표시된 모든 단계, 특징, 조성물 및 화합물, 및 임의의 및 모든 조합 또는 임의의 2개 이상의 상기 단계 또는 특징을 포함한다. 본 개시 내용은 단지 예시의 목적으로 의도된 본 명세서에 기재된 특정 예에 의해 범위가 제한되지 않아야 한다. 기능적으로 동등한 제품, 조성물 및 방법은 분명히 본 개시 내용의 범위 내에 있다.

본 명세서에서 본 개시 내용의 임의의 예는 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 개시 내용의 임의의 다른 예에 준용하여 적용되어야 한다.

별도로 언급하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 당업자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는것으로 간주되어야 한다( 예를 들어, 세포 배양, 분자 유전학, 면역학, 면역 조직 화학, 단백질 화학 및 생화학).

달리 명시하지 않는 한, 본 발명에서 사용되는 재조합 단백질, 세포 배양 및 면역학적 기술은 당업자에게 잘 알려진 표준 절차이다. 이러한 기술들은, J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989), T.A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991), D.M. Glover and B.D. Hames (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 and 1996), and F.M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, including all updates until present), Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988), and J.E. Coligan et al. (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (including all updates until present) 와 같은 문헌 전반에 걸쳐 설명되어 있다.

가변 영역(variable regions) 및 이의 부분(parts thereof), 면역 글로불린(immunoglobulins), 항체 및 이의 단편(antibodies and fragments thereof)에 대한 설명과 정의는 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 and 1991, Bork et al., J Mol . Biol . 242, 309-320, 1994, Chothia and Lesk J. Mol Biol . 196:901 -917, 1987, Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989 and/or or Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273, 927-948, 1997 에서 논의됨으로써 더 명확해 질 수 있다.

용어 "및/또는", 예를 들어 "X 및/또는 Y"는 "X 및 Y" 또는 "X 또는 Y"를 의미하는 것으로 이해되어야 하며 두 의미 또는 두 의미 중 하나에 대한 명시적인 지원을 제공하는 것으로 간주되어야 한다.

본 명세서 전체에서, "포함한다" 라는 단어, 또는 "포함한다" 또는 "포함하는" 과 같은 변형은 언급된 요소, 정수 또는 단계, 또는 요소 그룹, 정수 또는 단계의 포함을 의미하는 것으로 이해될 것이나 다른 요소, 정수 또는 단계 또는 요소 그룹, 정수 또는 단계는 제외되지 않는다.

본 명세서에서 사용된 용어 "유래된"은 특정 출처로부터 반드시 직접적으로는 아니지만 특정 출처로부터 특정 정수를 얻을 수 있음을 나타내기 위해 사용되어야 한다.

정의

본원에서 "과립구 콜로니 자극 인자"(G-CSF)에 대한 언급은 G-CSF의 천연 형태, 이의 돌연변이 형태, 예를 들어, 필그라스팀(filgrastim) 및 페 길화된 형태의 G-CSF 또는 필그라스팀(pegylated forms of G-CSF or filgrastim)을 포함한다. 이 용어는 또한 G-CSFR (예를 들어, 인간 G-CSFR)에 결합하고 신호 전달을 유도하는 G-CSF 보유 활성의 돌연변이 형태를 포함한다.

G-CSF는 과립구 생산의 주요 조절제이다. G-CSF는 골수 간질 세포(bone marrow stromal cells), 내피세포(endothelial cells), 대식세포(macrophages) 및 섬유아세포(fibroblasts)에 의해 생성되며 염증 자극에 의해 생성이 유도된다. G-CSF는 초기 골수 선조(early myeloid progenitors), 성숙한 호중구(mature neutrophils), 단핵구/대식세포(monocytes/macrophages), T 및 B 림프구(T and B lymphocytes) 및 내피세포(endothelial cells)에서 발현되는 G-CSF 수용체 (G-CSFR)를 통해 작용한다.

제한이 아닌 명명의 목적으로, 인간 G-CSFR의 예시적인 서열은 NCBI 참조 서열 NP_000751.1 (및 서열 번호 16에 표시)에 제시되어 있다. 다른 종으로부터의 G-CSFR의 서열은 본 명세서에 제공된 서열을 사용하여 및/또는 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스에서 결정될 수 있고 및/또는 표준 기술을 사용하여 결정될 수 있다(예:Ausubel et al.,(편집자), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates 및 Wiley-Interscience (1988, 현재까지의 모든 업데이트 포함)에 설명 됨) 또는 Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)) 인간 G-CSFR에 대한 언급은 hG-CSFR로 축약될 수 있으며 시노 몰 구스 원숭이 G-CSFR에 대한 언급은 cynoG-CSFR로 축약 될 수 있다. 가용성 G-CSFR에 대한 언급은 G-CSFR의 리간드 결합 영역을 포함하는 폴리펩티드를 의미한다. G-CSFR의 Ig 및 CRH 도메인은 리간드 결합 및 수용체 이량 체화에 관여합니다 (Layton et al., J. Biol Chem., 272 : 29735-29741, 1997 및 Fukunaga et al, EMBO J. 10 : 2855-2865 , 1991). 수용체의 이러한 부분을 포함하는 G-CSFR의 가용성 형태는 수용체에 대한 다양한 연구에 사용되었고 수용체의 위치 78, 163 및 228에서 유리 시스테인의 돌연변이는 리간드 결합에 영향을주지 않고 가용성 수용체 폴리펩티드의 발현 및 분리를 돕는다 (Mine et al., Biochem., 43 : 2458-2464 2004).

본원에 사용된 용어 "호중구 매개 질환"은 호중구의 활성에 의해 야기되거나 순환 호중구의 수를 제거 또는 감소시킴으로써 치료적 이점이 달성되는 임의의 불리한 상태 또는 질환을 포함하는 것으로 이해 될 것이다.

본원에서 사용되는 용어 "호중구 감소증"은 정상 범위의 하한치 미만의 절대 호중구 수(absolute neutrophil count;ANC)를 지칭하기 위해 사용되며, 예를 들어 ANC가 2000개 세포/μL 혈액 미만, 또는 1500개 세포/μL 혈액 미만 또는 1000개 세포/μL 미만, 예를 들어 500개 세포/μL 혈액 미만을 말한다 (Sibille et al. 2010 Br J Clin 참조) Pharmacol 70 (5) : 736-748). 일부 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체는 중증 호중구 감소증을 유발하지 않는 양으로 투여된다. 본원에서 사용된 용어 "중증 호중구 감소증"은 1000개 세포/μL 혈액 미만의 절대 호중구 수 (ANC)를 지칭하기 위해 사용된다. 본 개시의 목적을 위해, 호중구 감소증의 등급을 정의하기 위해 다음이 사용될 것이다.

등급 1:<2.0x109/L(<2000/mm3) 및> 1.1x109/L(>1500/mm3)

등급 2:<1.5x109/L(<1500/mm3) 및> 1.0x109/L(>1000/mm3)

등급 3:<1.0x109/L(<1000/mm3) 및> 0.5x109/L(>500/mm3)

등급 4:<0.5x 109/L(<500/mm3)

본원에 사용된 용어 "예방하는", "예방하다" 또는 "예방"은 본 개시 내용의 항체를 투여하여 상태의 하나 이상의 증상의 발생을 중지 또는 방해하는 것을 포함한다. 이 용어는 또한 재발을 예방하거나 방해하기 위해 관해 상태에 있는 대상체의 치료를 포함한다. 예를 들어, 재발 완화 다발성 경화증(relapsing-remitting multiple sclerosis)을 앓고 있는 대상체는 관해 동안 치료되어 재발을 예방한다.

본원에 사용된 용어 "치료하는", "치료하다" 또는 "치료"는 본 명세서에 기재된 항체를 투여하여 특정 질환 또는 상태의 적어도 하나의 증상을 감소 또는 제거하는 것을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "대상체"은 인간을 포함한 임의의 동물, 예를 들어 포유동물을 의미하는 것으로 간주 되어야한다. 예시적인 대상체는 인간 및 비인간 영장류를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.

숙련된 기술자는 "항체"가 일반적으로 복수의 폴리펩티드 사슬, 예를 들어 VL을 포함하는 폴리펩티드 및 VH를 포함하는 폴리펩티드로 구성된 가변영역을 포함하는 항체로 간주 된다는 것을 인식할 것이다. 항체는 또한 일반적으로 불변 도메인을 포함하며, 그중 일부는 불변영역으로 배열될 수 있으며, 중쇄의 경우 불변 단편 또는 결정화 가능한 단편 (Fc)을 포함한다. VH 및 VL은 상호 작용하여 하나 또는 몇 개의 밀접하게 관련된 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 영역을 포함하는 Fv를 형성한다. 일반적으로 포유류의 경쇄는 κ경쇄 또는 λ경쇄이며 포유류의 중쇄는 α, δ, ε, γ 또는 μ이다. 항체는 임의의 유형 (예:IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 클래스 (예:IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 클래스 일 수 있다. 용어 "항체"는 또한 인간화 항체, 영장류화 항체, 인간 항체 및 키메라 항체를 포함한다.

용어 "전장 항체(full-length antibody)", "온전한 항체(intact antibody)" 또는 "전체 항체(whole antibody)"는 항체의 항원 결합 단편과는 반대로 실질적으로 온전한 형태의 항체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 항체를 포함한다. 불변 도메인은 야생형 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 야생형 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체 일 수 있다.

본원에 사용된 "가변 영역"은 항원에 특이적으로 결합할 수 있고 상보성 결정 영역 (complementarity determining regions;CDR)의 아미노산 서열을 포함하는 본원에 정의된 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 부분을 지칭한다; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3 및 프레임 워크 영역 (FR)을 말한다. 예시적인 가변 영역은 3개의 CDR과 함께 3개 또는 4개의 FR (예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 임의로 FR4)을 포함한다. VH는 중쇄의 가변 영역을 의미합니다. VL은 경쇄의 가변 영역을 나타낸다.

본원에 사용된 용어 "상보성 결정 영역"(동의 CDR; 즉, CDR1, CDR2 및 CDR3)은 항원 결합에 필요한 항체 가변 영역의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각 가변 영역은 일반적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 식별되는 3개의 CDR영역을 가지고 있다. CDR 및 FR에 할당된 아미노산 위치는 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 및 1991 또는 본 개시 내용의 수행에서 다른 넘버링 시스템(numbering systems), 예를 들어 Chothia 및 Lesk J. Mol Biol의 번호 체계. 196 : 901-917, 1987; Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989; 및/또는 Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273 : 927-948, 1997; Lefranc et al., Devel의 IMGT 번호 체계. 그리고 비교. Immunol., 27 : 55-77, 2003; 또는 Honnegher 및 Pl

kthun J. Mol의 AHO 번호 체계. Biol., 309 : 657-670, 2001에 따라 정의될 수 있다. 예를 들어 Kabat의 넘버링 시스템에 따르면 VH 프레임 워크 영역 (FR) 및 CDR은 다음과 같이 위치한다: 잔기 1-30 (FR1), 31-35 (CDR1), 36-49 (FR2), 50-65 ( CDR2), 66-94 (FR3), 95-102 (CDR3) 및 103-113 (FR4). Kabat의 번호 체계에 따르면 VL FR 및 CDR은 다음과 같이 위치한다: 잔기 1-23 (FR1), 24-34 (CDR1), 35-49 (FR2), 50-56 (CDR2), 57-88 ( FR3), 89-97 (CDR3) 및 98-107 (FR4). 본 개시 내용은 Kabat 넘버링 시스템에 의해 정의된 FR 및 CDR로 제한되지 않고, 위에서 논의된 것을 포함하는 모든 넘버링 시스템을 포함한다. 한 예에서, CDR (또는 FR)에 대한 본원의 언급은 Kabat 넘버링 시스템에 따른 영역에 관한 것이다.

본원에 사용된 용어 "결합"은 항체 또는 이의 항원 결합 부위와 항원의 상호 작용과 관련하여 상호 작용이 특정 구조 ((예 : antigenic determinant(항원결정기) 또는 epitope(에피토프))의 존재에 의존함을 의미한다. 예를 들어, 항체는 일반적으로 단백질보다는 특정 단백질 구조를 인식하고 결합한다. 항체가 항원 결정기 "A"에 결합하는 경우, 표지된 "A"및 단백질을 포함하는 반응에서 항원 결정기 "A"(또는 자유, 표지되지 않은 "A")를 포함하는 분자의 존재는 표지 된 "A"의 양을 감소시킬 것이다.

본원에 사용된 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "결합을 특이하게 하다"는 본 개시 내용의 항체가 더 자주, 더 빠르게, 더 긴 기간 및/또는 특정 항원 또는 세포와 더 큰 친화도로 반응하거나 결합함을 의미하며 이는 대체 항원 또는 세포와 동일하게 표현한다. 예를 들어, 항체는 사이토카인(cytokine receptor)수용체 또는 다 반응성 천연 항체(polyreactive natural antibodies)에 의해 일반적으로 인식되는 항원 (즉, 인간에서 자연적으로 발견되는 다양한 항원에 결합하는 것으로 알려진 자연 발생 항체에 의해)이 G-CSFR(예:hG-CSFR)에 결합하는 것보다 물질적으로 더 큰 친화성(예:20배 또는 40배 또는 60배 또는 80배에서 100배 또는 150배 또는 200배)으로 결합한다. 일반적으로 결합에 대한 언급은 특정 결합을 의미하며 각 용어는 다른 용어에 대한 명시적인 지원을 제공하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에 사용된 용어 "에피토프(epitope)"(동의어 "항원결정기(antigenic determinant)")는 항체가 결합하는 hG-CSFR의 영역을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 이 용어는 항체가 접촉하는 특정 잔기 또는 구조에 반드시 제한되지는 않는다. 예를 들어, 이 용어는 단백질과 접촉하는 아미노산 및/또는 이 영역 외부의 5-10 또는 2-5 또는 1-3 아미노산에 걸친 영역을 포함한다. 일부 예에서, 항원 결정기는 hG-CSFR이 접힐 때 서로 가까이 위치하는 일련의 불연속 아미노산, 즉 "구조적 항원결정기(conformational epitope)"를 포함한다. 예를 들어, 입체 형태 항원 결정기는 서열번호 1의 111-115, 170-176, 218-234 및/또는 286-300에 해당하는 하나 이상의 영역 또는 둘 이상의 영역에 아미노산을 포함한다. 숙련된 기술자는 또한 용어 "항원결정기"가 펩티드 또는 폴리펩티드에 제한되지 않음을 인식할 것이다. 예를 들어, 용어 "항원결정기"는 당 곁사슬(sugar side chains), 인산 곁사슬(phosphoryl side chains) 또는 황 곁사슬(sulfonyl side chains)과 같은 분자의 화학적 활성 표면 그룹을 포함하고, 특정 예에서 특정 3차원 구조적 특성 및/또는 특정 전하 특성을 가질수 있다.

용어 "경쟁적으로 억제한다"는 본 개시 내용의 항체 (또는 이의 항원 결합 부위)가 G-CSFR에 대한 다른 항체, 예를 들어 hG-CSFR에 대한 결합을 감소시키거나 방지하는 것을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. 이것은 항체 (또는 항원 결합 부위) 및 다른 항체가 동일하거나 중복되는 항원 결정기에 결합하기 때문이다. 항체가 다른 항체의 결합을 완전히 억제할 필요는 없고, 오히려 통계적으로 유의한 양, 예를 들어 적어도 약 10% 또는 20% 또는 30% 또는 40% 또는 50% 또는 60% 또는 70% 또는 80% 또는 90% 또는 95%.만큼 결합을 감소시킬 필요가 있음이 상기로부터 명백할 것이다. 바람직하게는, 항체는 항체의 결합을 적어도 약 30%, 더 바람직하게는 적어도 약 50%, 더 바람직하게는 적어도 약 70%, 더더욱 바람직하게는 적어도 약 75%, 훨씬 더 바람직하게는 약 80% 또는 85% 이상, 더욱더 바람직하게는 약 90% 이상 결합을 감소시킬 필요가 있을 것이다. 결합의 경쟁적 억제를 결정하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 기술되어있다. 예를 들어, 항체는 항체의 존재 또는 부재하에 G-CSFR에 노출된다. 항체가 없을 때보다 항체가 있을 때 결합하는 항체가 적다면, 항체는 항체의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것으로 간주된다. 한 예에서, 경쟁적 억제는 입체 장애로 인한 것이 아니다. 2 개의 항원 결정기와 관련하여 "겹침"은 2개의 항원 결정기가 하나의 항원 결정기에 결합하거나 다른 항원 결정기에 결합하는 항체 (또는 이의 항원 결합 부위)가 항체의 결합을 경쟁적으로 억제할 수 있도록 충분한 수의 아미노산 잔기를 공유함을 의미한다. 예를 들어, "겹치는"항원 결정기“는 적어도 1개 또는 2개 또는 3개 또는 4개 또는 5개 또는 6개 또는 7개 또는 8개 또는 9개 또는 20개의 아미노산을 공유한다.

본원에서 사용되는 용어 "중화"는 항체가 G-CSFR을 통해 세포에서 G-CSF 매개 신호 전달을 차단, 감소 또는 예방할 수 있음을 의미하는 것으로 간주되어야 한다. 중화를 결정하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 설명되어있다.

호중구 매개 질환 치료(Treating neutrophil-mediated conditions)

일부 예에서, 호중구 매개 질환은 자가 면역 질환(autoimmune disease), 염증성 질환(inflammatory disease), 암 또는 허혈-재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)이다.

예시적인 자가 면역 질환(Exemplary autoimmune conditions)은 크론 병(Crohn's disease) 및 궤양성 대장염(ulcerative colitis)과 같은 자가 면역 장 질환(autoimmune intestinal disorders), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선성 관절염(psoriatic arthritis)과 같은 관절염(arthritis) 및/또는 청소년 특발성 관절염(juvenile idiopathic arthritis)과 같은 특발성 관절염(idiopathic arthritis) 또는 건선(psoriasis)을 포함한다.

예시적인 염증성 질환(Exemplary inflammatory conditions)은 데 빅병(Devic's disease), 뇌의 바이러스 감염(a viral infection in the brain), 다발성 경화증(multiple sclerosis) 및 시신경 골수염(neuromyelitis optica)과 같은 염증성 신경 질환(inflammatory neurological conditions ), 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease;COPD) 또는 천식(asthma)과 같은 염증성 폐 질환(inflammatory lung disease ) 또는 포도막염(uveitis)과 같은 염증성 눈 질환(inflammatory eye condition)을 포함한다.

하나의 예에서 호중구 매개 질환은 허혈-재관류 손상이다. 예를 들어, 허혈-재관류 손상은 조직 또는 장기 이식 (예 : 신장 이식)으로 인한 것이다. 예를 들어, 항체는 조직 또는 장기 이식 수용자에게, 예를 들어 장기 수집 전에 및/또는 이식 전에 조직 또는 장기에 투여되거나 생체 외에서 수확된 조직 또는 장기에 투여된다.

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 호중구 피부병 또는 호중구 피부 병변이다.

예시적인 자가 면역 질환

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis;RA)이다. RA의 특정 하위 유형은 본 개시에 따라 치료 될 수 있다. 한 예에서, 보통 내지 중증 RA는 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다. 하나의 예에서 대상체는 보통 내지 관절 RA와 같은 중증 RA임을 확인했다.

본 개시 내용은 또한 특히 치료하기 어려울 수 있는 RA 환자의 특정 하위 집단을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 하나의 예에서, 본 개시 내용은 치료에 대한 준 치료반응을 갖는 환자, 예컨대 그들의 RA 치료를 위한 메토트렉세이트(methotrexate) 또는 종양 괴사 인자(tumor necrosis factor )의 억제제에 대해 반응이 없거나 불내성(intolerant)인 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시 내용은 또한 질환 상태를 측정하는 데 사용되는 지표에 기초하여 대상체에서 RA 증상을 개선하는 방법을 제공한다. 본원에 개시된 항체를 사용한 RA의 치료는 또한 당 업계에 공지된 조치를 사용하여 결정될 수 있다.

RA의 중증도를 측정하는 방법은 숙련된 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 치료 중 기준점과 다양한 시점 사이의 압통 및 부종 관절 수를 비교하는 것은 관절 상태와 치료에 대한 반응을 평가하는 일반적인 방법이다. RA에 대한 American College of Rheumatology(ACR) 관절 수(Felson et al. Arthritis & Rheumatology 38:727-735,1995)에서 68개의 관절이 압통에 대해 평가되고 66개의 관절이 부기에 대해 평가된다(엉덩이는 부기에 대해 평가되지 않음). 주로 유럽에서 사용되는 질병 활동 점수(Disease Activity Score;DAS)에서는 RA에 44개 또는 28개 관절 계수가 사용된다. 관절 수 외에도 ACR 평가 기준에는 종합 점수를 구성하는 다음 요소가 포함된다: 환자 전체 (시각적 아날로그 척도 [on a visual analog scale;VAS]), 환자 통증, 의사 전체, 건강 평가 설문지 (Health Assessment Questionnaire;HAQ, 기능 측정), 급성기 반응물 (C 반응성 단백질 또는 침강 속도). ACR 20 반응은 압통 및 부은 관절 수의 20% 개선과 복합 기준의 다른 5개 요소 중 최소 3개의 20% 개선을 구성한다. ACR 50 및 70 응답은 이러한 요소의 최소 50% 및 70% 개선을 나타낸다. ACR 시스템은 변화만을 나타내는 반면 DAS 시스템은 질병 활동의 현재 상태와 변화를 모두 나타낸다.

DAS 점수 시스템은 RA의 임상 시험에서 파생된 가중 수학 공식을 사용한다. 예를 들어, DAS 28은 0.56(T28)+0.28(SW28)+0.70(Ln ESR)+0.014 GH이고, 여기서 T는 부드러운 관절 수를 나타내고, SW는 부은 관절 수, ESR은 적혈구 침강 속도, GH는 글로벌 건강이다. DAS의 다양한 값은 높거나 낮은 질병 활동과 관해를 나타내며, 변화 및 종말점 점수는 반응 정도 (없음, 보통, 좋음)에 따라 환자를 분류한다.

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 건선이다. 본원에 사용된 용어 "건선"은 플라크(plaque), 구 테이트(guttate), 역(inverse), 농포(pustular) 및 적혈구를 포함하는 모든 하위 유형의 건선을 포함한다. 한 가지 예에서, 호중구-매개 상태는 플라크 건선 (당 업계에 "심상 성 건선"또는 "일반 건선"으로도 알려져 있음)이다. 특정 아형의 건선은 본 개시 내용에 따라 치료 될 수 있다. 한 가지 예에서, 중증도 내지 중증 건선은 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다. 하나의 예에서, 대상체는 중증도 내지 중증 건선, 예를 들어 만성 중등도 내지 중증 건선을 확인하였다.

본 개시 내용은 또한 특히 치료하기 어려울 수 있는 건선 환자의 특정 하위 집단을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 한 예에서, 본 개시 내용은 치료에 대한 준 치료반응을 갖는 환자, 예를 들어 국소 코르티코스테로이드 또는 그들의 건선 치료를 위한 종양 괴사 인자의 억제제에 반응하지 않거나 불내성인 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시 내용은 또한 질환 상태를 측정하는 데 사용되는 지표에 기초하여 대상체에서 건선 증상을 개선하는 방법을 제공한다. 본원에 개시된 항체를 사용한 건선 치료는 또한 당 업계에 공지된 조치를 사용하여 결정될 수 있다.

건선의 중증도를 측정하는 방법은 숙련된 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들어, 건선 부위 및 심각도 지수(Psoriasis Area and Severity Index:PASI)는 피부과 의사가 건선 질환 강도를 평가하는 데 사용된다. 이 지수는 피부 표면적 침범과 결합하여 건선 병변의 세 가지 전형적인 징후인 홍반(erythema), 침윤(infiltration) 및 박리(desquamation)의 정량적 평가를 기반으로 한다. 1978년 개발된 이래 이 기기는 임상 연구자들이 전 세계적으로 사용하고 있다 (Fredriksson T, Petersson U : Dermatologica 1978; 157 : 238-41). PASI는 PASI 50 (기준선에서 PASI의 50% 개선), PASI 75 (기준선에서 PASI의 75% 개선), PASI 90 (기준선에서 PASI의 90% 개선) 및 PASI 100 (100%)으로 표시된다. 기준선에서 PASI의 개선).

PGA (Physicians Global Assessment)는 건선 활동을 평가하고 치료에 대한 임상 반응을 추적하는 데 사용된다. 6점 점수는 기준 평가와 관련된 전반적인 품질 (홍반, 스케일링 및 두께) 및 플라크의 정도로 요약된다. 환자의 반응은 더 나쁨, 나쁨 (0-24%), 보통 (25-49%), 좋음 (50-74%), 우수 (75-99%) 또는 지워짐 (100%)으로 평가된다 (van der Kerkhof P. Br J Dermatol 137 : 661-662, 1997). 건선을 앓고 있는 대상체의 질병 상태 개선에 대한 다른 측정으로는 피부과 생활 품질 지수(Dermatology Life Quality Index;DLQI) 및 최소 임상적으로 중요한 차이 (Minimum Clinically Important Difference;MCID)와 같은 임상 반응이 포함된다.

천식(Asthma)

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 천식, 예를 들어 중증 천식이다. 천식과 관련하여, 용어 "치료하는" 또는 "치료하다"는 적어도 하나의 증상의 발생 또는 악화를 감소, 제거 또는 예방하기 위해 본원에 기재된 항체를 투여하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 본원에 기재된 항체는 천식 발작을 예방하기 위해 투여 될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 천식, 숨가쁨, 흉부 압박감 및/또는 기침과 같은 천식 증상을 완화시키기 위해 항체를 투여할 수 있다.

하나의 예에서 천식은 알레르기성 천식(allergic asthma)이다. 본원에 사용된 용어 "알레르기성 천식"( "급성 천식"이라고도 함)은 호흡기 하 기도의 점막 아래에 위치한 비만 세포를 활성화하는 알레르겐 (예를 들어, 먼지 진드기 또는 꽃가루)에 의해 유발된 천식을 의미한다. 비만 세포의 활성화는 비강 상피(nasal epithelium)를 자극하여 점액(mucus)을 생성하고 기도 내 평활근의 후속 수축을 자극하는 과립의 방출을 유발한다. 이러한 평활근 수축은 기도를 수축시켜 천식 증상을 유발한다.

하나의 예에서 천식은 호중구 천식이다. 본원에 사용된 용어 "호중구 천식"은 대상체의 기도에서 호중구 양의 증가를 특징으로 하는 천식의 하위 집합을 지칭한다. 호중구 천식은 가래에서 높은 호중구 수, 예를 들어 40% 이상 또는 60% 이상, 예를 들어 40% 이상 또는 60% 이상으로 분류될 수 있다. 코르티코스테로이드(corticosteroid)를 사용한 호중구 천식 치료에 대한 반응은 호산구성 천식 환자에 비해 종종 효과가 없는 것으로 밝혀졌다. 호중구 천식은 또한 기도에서 IL-8, IL-17 및 IFN-γ의 상향 조절된 발현과 관련이 있다. 대조적으로, 기도에서 호산구 수준의 증가를 특징으로 하는 "호산구성 천식(eosinophilic asthma)"은 IL-5 발현 및 Th2 우세한 염증 반응의 증가와 관련이 있다.

하나의 예에서, 천식은 혼합 과립구 천식(mixed granulocytic asthma)이다. 본원에 사용된 용어 "혼합 과립구 천식"은 대상체의 기도에서 호중구 및 호산구 양의 증가를 특징으로 하는 천식을 지칭한다.

하나의 예에서, 천식은 중증 천식이다. 본원에 사용된 용어 "중증 천식"은 표준 요법을 사용한 집중 치료에도 불구하고 증상이 부분적으로만 조절되거나 심지어 조절되지 않는 천식을 의미한다. 중증 천식의 정의, 평가 및 치료에 관한 국제 ERS/ATS 지침에 따라 중증 천식을 정의 할 수 있다(Chung et al., Eur Respir J. 2014; 43 (2) : 343-73). ERS/ATS 지침에 따르면, 중증 천식은 고용량 흡입 코르티코스테로이드(high dose inhaled corticosteroids;ICS)와 두 번째 컨트롤러 ((예:장기간 작용하는 ß2 작용제(Long-acting ß2 agonist), 몬테루카스트(montelukast) 또는 테오필린(theophylline))으로 치료 및/또는 통제되지 않는 것을 방지하기 위해 또는 치료에도 불구하고 통제되지 않는 채로 남아있는 전신 코르티코스테로이드로 치료해야 하는 천식으로 정의된다.

하나의 예에서 천식은 중증도 천식이다. 한 가지 예에서 천식은 ?O증도 또는 중증 천식이다.

천식은 증상이 매일 발생하면 "중등도"로 분류되며 증상은 자주 악화되며 일반적으로 며칠 지속된다. 기침과 쌕쌕거림은 정상적인 일상 활동을 방해하고 수면을 어렵게 만들 수 있다. 야간 증상 악화는 일주일에 한 번 이상 발생한다. 중등도 천식에서 폐기능은 치료없이 정상의 약 60%에서 80% 사이이다. GINA (Global Initiative for Asthma) 지침은 중등도 천식을 포함한 천식 중증도를 분류하는 데 사용할 수 있다. 하나의 예에서, 천식은 잘 조절되지 않거나 조절되지 않는 천식이다. 예를 들어, Juniper et al., (1999) Eur Respir J 14 : 902-907, Juniper et al, (1999) Eur Respir J 14:902-907, Juniper et al., Respiratory Medicine (2006) 100:616-621, and Juniper et al., Respiratory Medicine (2005) 99:553-558 에 설명된 바와 같이 천식 조절 수준은 중증도와 반대되는 천식 조절 설문지(Asthma Control Questionanaire;ACQ)를 사용하여 결정할 수 있다.

하나의 예에서, 천식은 불응성 천식(refractory asthma)이다. 본원에 사용된 용어 "불응성 천식"은 "치명적" 또는 "거의 치명적" 천식 환자를 포함할 뿐 아니라 "중증 천식(severe asthma) "및 "스테로이드 의존성(steroid-dependent) 및/또는 내성천식(resistant asthma)", "천식조절이 어려움(difficult to control asthma)", "잘 조절 되지 않은 천식(poorly controlled asthma)", "취약성 천식(brittle asthma)" 또는 비가역성 천식(irreversible asthma)을 포함한다. 불응성 천식(Refractory asthma)은 다음과 같이 한 가지 또는 두 가지 주요 기준과 두 가지 경미한 기준이 충족될 때 미국 흉부 학회(American Thoracic Society) 지침에 따라 정의 될 수 있다. 주요 기준은 다음과 같다: 경증-중등도 지속성 천식 수준에 대한 통제를 달성하기 위해: (1) 지속적 또는 거의 연속 (연간 50% 이상) 경구 코르티코스테로이드(corticosteroid)로 치료 2) 고용량 흡입 코르티코스테로이드(corticosteroid) 치료에 대한 요구 사항. 사소한 기준은 다음과 같다: (1) 흡입 된 코르티코스테로이드 ((예:LABA, 테오필린(theophylline) 또는 류코트리엔 길항제(leukotriene antagonist))에 더해 조절 약물을 사용한 일일 치료 요건 (2) 매일 또는 거의 매일 단기 작용 β작용제(short-acting β-agonist)를 사용해야하는 천식 증상 (3) 지속적인기도 폐쇄(Persistent airway obstruction;FEV1 <80% 예측, 일주 최고 호기 흐름 (PEF) 변동성> 20%) (4) 연간 천식에 대한 1회 이상의 긴급 진료 방문 (5) 연간 3회 이상의 경구 스테로이드 "파열" (6) 경구 또는 흡입 코르티코스테로이드(inhaled corticosteroid) 용량이 25% 이하로 감소한 즉각적인 악화 (7) 과거에 거의 치명적인 천식 사건. 불응성 천식(refractory asthma)의 정의를 위해 약물(μg/d) 및 용량(puffs/d)은 다음과 같다: (a) 베클로메타손 디프로피오네이트(Beclomethasone dipropionate)> 1,260> 40 puffs (42μg/흡입)> 20 puffs (84μg/흡입); (b) 부데소니드(Budesonide)> 1,200> 6 puffs; 35/5000 ; (c) 푸르니솔리드(Flunisolide)> 2,000> 8 puffs; (d) 플루티카손 프로피오네이트( Fluticasone propionate)> 880> 8 puffs (110μg),> 4 puffs (220μg); (e) 트리암시놀론 아세토나이드(Triamcinolone acetonide)> 2,000> 20 puffs.

"만성 천식(Chronic asthma)"은 알레르겐(allergen)이 아니라 급성 천식(acute asthma)으로 인한 염증의 결과이다. 급성 천식(Acute asthma)은 만성 염증(chronic inflammation)을 일으켜 점막 상피(mucosal epithelium)가 환경반응에 과민해 지게 한다. 따라서 연기와 같은 단순한 환경 물질은 과민성 상피(hypersensitive epithelium)를 자극하여 다량의 점액(mucous)을 생성하고 수축시킬 수 있다. 한 가지 예에서, 항체는 폐기능을 향상시키기에 충분한 양으로 투여된다. 폐기능은 예를 들어 폐활량 측정법으로 평가할 수 있다. 한 가지 예에서, 항체는 FEV1(forced expiratory volume in one second)을 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. 하나의 예에서, 항체는 FVC (forced vital capacity)를 증가시키기에 충분한 양으로 투여된다. FEV1은 완전한 영감에서 시작된 최대 호기의 첫 번째 초에 호기 된 부피이며 폐기능의 한 척도이다. FVC는 테스트 중에 만료 될 수 있는 최대 공기량이다.

하나의 예에서, 항체는 기도과민반응(airway hyper-responsiveness;AHR)을 감소 또는 예방하기에 충분한 양으로 투여된다. AHR은 흡입 수축 작용제에 대한기도의 증가 된 민감도, 용량 반응 곡선의 더 가파른 기울기, 작용제에 대한 더 큰 최대 반응이다. AHR은 일반적으로 폐기능 저하 및 천식 증상과 관련이 있다. AHR은 예를 들어 기관지 시험( bronchial challenge test)으로 평가될 수 있다. 이것은 대부분 메타콜린(methacholine)이나 히스타민(histamine)과 같은 수축 작용제를 사용한다. 이러한 화학 물질은 천식이 없는 대상체에게도 기관지 경련(bronchospasm)을 유발하지만 AHR이 있는 대상체는 수축 작용제에 대해 더 낮은 반응 역치를 가지고 있다. 적합한 방법은 (FitzPatrick et al., Sci Rep, 2016 6 : 22751)에 설명되어 있다.

예시적인 호중구 피부병(Exemplary neutrophilic dermatoses )

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 HS이다. HS는 아포크린 땀샘(apocrine glands, 신체의 특정 부위에서 발견되는 땀샘) 및 모낭의 피부 질환으로, 붓고 통증이 있으며 염증이 있는 병변 또는 덩어리가 사타구니, 때로는 팔 아래 및 가슴 아래에 발생한다. HS는 아포크린 분비샘 출구가 땀에 의해 막히거나 불완전한 분비샘 발달로 인해 정상적으로 배액 할 수 없을 때 발생한다. 분비선에 갇힌 분비물은 땀과 박테리아를 주변 조직으로 밀어 넣어 피하 경결(subcutaneous induration), 염증 및 감염을 유발한다. HS는 아포크린 땀샘을 포함하는 신체 부위에 국한된다. 이 부위는 겨드랑이(axillae), 유두 유륜(areola of the nipple), 사타구니(groin), 회음부(perineum), 외주(circumanal) 및 담관 주위부(periumbilical regions)이다.

HS의 특정 하위 유형은 본 개시 내용에 따라 치료 될 수 있다. 한 가지 예에서, 중등도 내지 중증 HS는 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다. 한 가지 예에서, 만성 HS, 예를 들어 중등도 내지 중증 만성 HS는 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다. 한 가지 예에서, 대상체는 중등도 내지 중증 HS, 예를 들어 확인 된 만성 중등도 내지 중증 HS를 확인했다.

본 개시 내용은 또한 특히 치료하기 어려울 수 있는 HS 환자의 특정 하위 집단을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 하나의 예에서, 본 개시 내용은 HS 치료를 위해 경구 항생제에 반응하지 않거나 불내성인 환자와 같이 치료에 대한 준 치료 반응을 갖는 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시 내용은 또한 질환 상태를 측정하는 데 사용되는 지표에 기초하여 대상체에서 HS 증상을 개선하는 방법을 제공한다.

본원에 개시된 항체를 사용한 HS의 치료는 또한 당 업계에 공지된 조치를 사용하여 결정될 수 있다. HS의 치료는 당 업계에 공지된 임의의 측정, 예를 들어 헐리 단계(Hurley Staging) 또는 사토리우스 스케일(Sartorius scale), 또는 당업자에게 공지된 임의의 측정을 사용하여 결정될 수 있다.

예를 들어, 하나의 예에서, HS를 갖는 대상체의 헐리 단계(Hurley Staging)의 개선 또는 본원에 기재된 임의의 조치는 효과적인 HS 치료의 증거이다. 한 예에서 HS의 심각도는 헐리 단계(Hurley Staging)시스템에 따라 결정된다. 헐리 단계(Hurley staging)는 질병 수준에 따라 세 가지 다른 "단계"중 하나에 HS를 가진 대상체를 할당하는 것을 기반으로 한다. 더 구체적으로, I 단계는 부비동관(sinus tracts) 및 반흔(cicatrisation)이 없는 단일 또는 다중 농양 형성을 나타낸다. II 단계는 광범위하게 분리된 단일 또는 다중 병변(lesions)뿐만 아니라 관 형성 및 반흔 화를 동반 한 재발성 농양(recurrent abscesses)을 의미한다; 그리고 III단계는 확산 또는 거의 확산 된 침범, 또는 전체 영역에 걸쳐 여러 개의 상호 연결된 관 및 농양을 나타낸다. 헐리 3단계Hurley Stage III는 가장 심한 형태이다. 하나의 예로, HS를 갖는 대상체는 적어도 두 개의 별개의 해부학적 영역 (예를 들어, 왼쪽 및 오른쪽 겨드랑이; 또는 왼쪽 겨드랑이 및 왼쪽 사타구니-경절 주름)에 존재하는 HS병변을 가지고 있으며, 그중 하나는 적어도 헐리 II단계(Hurley Stage II)이다. 다른 예에서, 치료되는 대상체는 적어도 헐리 II단계의 하나의 병변을 갖는다.

하나의 예에서, 본원에 개시된 항체로 HS를 치료하는 것은 주어진 기준선, 예를 들어 TNFα억제제로 치료하기 전에 대상체의 헐리 단계에 비해 개선된 헐리 점수(Hurley score)에 의해 결정된다. 하나의 예에서, 헐리 점수의 개선은 대상의 헐리 점수가 항체 치료 후 개선되었거나 유지되었음을 나타낸다.

HS의 심각도는 예를 들어, HS (Poli F,Jemec GBE,Revuz J.,Clinical Presentation.In:Jemec GBE,Revuz J,Leyden JJ, 편집자. Hidradenitis Suppurativa. Springer)에 대한 헐리 단계 {III 대 (I 또는 II)} 참조, New York, 2006, pp 11-24)와 같은 표준 임상 정의에 따라 결정될 수 있다. 헐리 III단계 질환은 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa)의 가장 심각한 단계로, 감염된 부위의 확산 또는 거의 확산 된 침범을 반영한다.

하나의 예에서 사토리우스 스케일(Sartorius scale)은 항체의 효능을 측정하기 위한 지표로 사용될 수 있다. 사토리우스 스케일은 Sartorius et al. British Journal of Dermatology, 149:211-213에 설명되어 있다. 간단히 말해 다음 결과 변수는 사토리우스 스케일을 기반으로 한 보고서에서 명시적으로 언급된다: (1) 관련된 해부학적 영역 (겨드랑이, 사타구니, 둔부 또는 기타 영역 또는 유방 하 영역 왼쪽 및/또는 오른쪽 : 관련된 영역 당3 점); (2) 병변의 수와 점수 (농양, 결절, 누공, 흉터 : 관련된 모든 부위의 병변 당 점수 : 결절 2; 누공 4; 흉터 1; 기타 1); (3) 각 부위에서 두 개의 관련 병변, 즉 결절(nodules)과 누공(fistulas) 사이의 최장 거리 또는 하나의 병변만 있는 경우 크기 (<5cm, 2; <10cm, 4;> 10cm, 8); 그리고 (4) 모든 병변이 정상 피부로 명확하게 분리되어 있습니까? 각 지역에서 (예0 / 아니오6). 이러한 변수에 숫자 점수를 할당함으로써 질병 강도를 개방형 척도에서 임상적으로 의미있는 방식으로 정량화 할 수 있다. 수술 또는 기타 중재를 위해 선택된 영역의 점수뿐만 아니라 총 점수를 계산하여 시간이 지남에 따라 추적 할 수 있다.

하나의 예에서, 본원에 개시된 항체를 사용한 HS의 치료는 치료되는 대상체의 수파 선염 임상 반응(Hidradenitis Suppurativa Clinical Response;HiSCR) 달성에 따라 결정된다. HisSCR은 기준선에 비해 대상체에서 총 염증성 병변(total inflammatory lesion) (농양 및 염증성 결절(abscess and inflammatory nodule)) 수 (AN 수)의 최소 50% 감소로 정의되며 농양 수(abscess count)는 증가하지 않고 배액 누공 수(draining fistula count)는 증가하지 않는다. 한 가지 예에서, 대상체에서 HS 치료는 염증성 병변(농양 및 결절) 수의 50% 이상 감소로 정의된다. HiSCR 점수 시스템은 치료 전후에 영향을 받은 대상체의 화농성 한선 염 활동을 평가하도록 설계되었다.

또 다른 예에서, 본원에 개시된 항체로 HS를 치료하는 것은 아래에 정의된 바와 같이 PGA(Physician 's Global Assessment) 점수를 달성하는 것으로 정의된다. 선택적으로 치료 기간이 끝날 때(예:16주차) 기준 PGA 점수가 최소 1등급 또는 2등급으로부터 투명(0), 최소(1) 또는 경미(2),(즉, 감소)가 있다. 기준 PGA 점수는 치료 시작 직전에 측정된 PGA 점수이며, 치료 기간 후에 얻은 PGA 점수를 비교한다.

하나의 예에서 본 개시 내용은 HS를 앓고 있는 대상체의 DLQI 점수를 개선하는 방법을 제공한다. 하나의 예에서, DLQI 점수의 개선은 대상체에 대한 질병 상태의 "아니오" 또는 "작은 영향"과 관련된 점수, 예를 들어 통계적으로 유의한 점수를 달성함으로써 결정된다. 또 다른 예에서, 본원에 개시된 항체로 HS를 치료하는 것은 International Hidradenitis Suppurativa Severity Score System (IHS4)을 달성하는 것으로 정의된다. IHS4는 HS (Zouboulis, et al., Br J Dermatol, 177 : 1401-09, 2017)의 동적 중증도 평가를 위한 검증된 도구이며 질병 중증도보다는 치료 반응을 평가하도록 설계되었으므로 HiSCR 평가를 개선합니다(Kimball et al., Br J Dermatol, 171:1434-42, 2014). IHS4 점수 (점) = (결절의 수에 1을 곱한 값) + (농양의 수에 2를 곱한 값) + [배액 터널 (누공 / 부비동)의 수에 4를 곱한 값]. 3점 이하는 경증 HS, 4-10점은 중등도 HS, 11점 이상은 심한 HS를 의미한다 (Zouboulis, et al., Br J Dermatol, 177:1401-09, 2017). 한 가지 예에서, 대상체는 치료 전에 ≥4의 IHS4 점수를 갖는다.

하나의 예에서, 본 개시 내용은 HS를 갖는 대상체에서 염증성 병변(AN 수)의 수를 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본원에 개시된 항체를 대상체에게 전신 투여하여 AN 수를 감소시키는 것을 포함한다. AN 수의 감소는 10% 이상일 수 있다, 예를 들어, AN 수는 기준선 AN 수에 비해 대상체의 최소 50%로 감소 될 수 있다. 대상체는 또한 본원에 개시된 항체로 치료한 후 HS에서 다른 개선을 나타낼 수 있으며, 예를 들어 대상체는 항체 투여 후 농양 수의 증가 및/또는 배수 누공 수의 증가를 갖지 않을 수 있다.

하나의 예에서, 호중구 매개 질환은 PPP이다. PPP는 손 및/또는 발바닥에 영향을 미치는 만성 농포 상태(chronic pustular condition)이다. PPP는 건선 또는 피부 질환 없이 발생할 수 있다. PPP는 손바닥과 발바닥에서 가장 흔한 외분비 땀샘(eccrine sweat glands)에 영향을 미친다. PPP는 손바닥 및/또는 발바닥에 가렵거나 아픈 농포의 작물로 나타난다. PPP는 한쪽 또는 양쪽 손 및/또는 발에서 발생할 수 있다. 비늘 모양의 붉은 반점이 농포와 관련하여 나타날 수도 있다. 질병의 더 만성적인 단계에서 피부는 건조하고 깊은 균열(피부 균열)로 두꺼워 질 수 있다. 일반적으로 정상 피부 영역과 영향을받은 피부 영역 사이에는 뚜렷한 경계가 있다. PPP는 심각도가 다르며 수년 동안 지속될 수 있습니다. 불편함은 상당할 수 있으며 업무를 방해하고 삶의 질에 영향을 미칠 수 있다. 손가락 끝에 영향을 미치는 PPP의 한 형태를 Hallopeau의 acrodermatitis continua 또는 acropustulosis라고 한다. 감염된 손가락의 손톱이 파괴 될 수 있다.

PPP의 특정 서브 타입은 본 개시에 따라 치료될 수 있다. 한 가지 예에서, 중등도 내지 중증 PPP는 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다 한 가지 예에서, 만성 PPP, 예를 들어 중등도 내지 중증 만성 PPP는 본원에 개시된 항체를 투여함으로써 치료된다. 한 가지 예에서, 대상체는 중등도에서 중증 PPP, 예를 들어 확인된 만성 중등도에서 중증 PPP를 확인했다.

본 개시 내용은 또한 특히 치료하기 어려울 수 있는 PPP 환자의 특정 하위 집단을 치료하는 방법을 제공한다. 예를 들어, 한 가지 예에서, 본 개시 내용은 치료에 대한 준 치료적 반응을 갖는 환자, 예를 들어 반응이 없거나 국소 코르티코 스테로이드(corticosteroids), 비타민 D3 유사체(vitamin D3 analogues), 에트레티 네이트(etretinate) 및 그들의 PPP 치료를 위한 광선 요법을 받은 환자를 치료하는 방법을 제공한다.

본 개시 내용은 또한 질환 상태를 측정하는 데 사용되는 지표에 기초하여 대상체에서 PPP 증상을 개선하는 방법을 제공한다.

본원에 개시된 항체를 사용한 PPP의 치료는 또한 당 업계에 공지된 조치를 사용하여 결정될 수 있다. PPP의 치료는 당 업계에 공지된 임의의 조치, 예를 들어 ppPASI의 개선 또는 당 업계에 공지된 임의의 조치를 사용하여 결정될 수 있다.

ppPASI는 만성 플라크 건선( chronic plaque psoriasis.)의 중증도를 평가하는 데 널리 사용되는 건선 영역 및 심각도 지수를 기반으로 하는 평가 도구이다. 중증도(severity), 홍반(erythema), 농포의 총수(total number of pustules) 및 박리(desquamation)를 포함한 매개 변수는 1-4의 척도로 점수를 매긴 다음 관련 영역 및 부위 (손바닥 또는 단독)에 대해 수정한다. 4개의 값의 합은 0 (PPP 없음)과 72 (가장 심각한 PPP) 범위의 최종 ppPASI를 생성한다(Bhushan, et al., Br J Dermatol, 145 : 546-53, 2001). ppPASI는 투여 전 스크리닝(screening)에서 평가할 수 있다. 하나의 예에서, 본원에 개시된 항체의 투여는 ppPASI 점수를 감소시킨다. 한 가지 예에서, 대상체는 본원에 기술된 바와 같이 치료를 시작하기 전에 ≥12의 ppPASI 점수를 갖는다. 한 가지 예에서, 대상체는 본원에 기재된 바와 같이 치료 후 <12의 ppPASI 점수를 갖는다.

하나의 예에서, 본원에 개시된 항체의 투여는 PPP를 앓고 있는 대상체에서 Palm-Sole Physician Global Assessment(PGA) 점수를 감소시킨다. PGA는 홍반, 비늘 및 경결(induration)을 기준으로 모든 건선 병변의 평균 평가이다(Robinson, 2011). PGA는 항체 투여 전에 평가할 수 있다. PPP에 대한 기타 응답 지표는 다음과 같다: the PASI scoring system, Investigator's Global Assessment mod 2011 (IGA mod 2011), Dermatology Life Quality Index(DLQI) and Subject's Global Assessment(SGA), Work Productivity and Activity Impairment Questionnaire-Psoriasis(WPAI-PSO), Palmar-Pustular Quality of Life Index(ppQoL-Index).

항체

예시적인 항체는 G-CSFR에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제한다. 이러한 항체는 WO2012 / 171057에 설명되어 있다.

예시적인 항체는 G-CSF에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제한다. 이러한 항체는 WO2018 / 145206에 설명되어 있다.

항체를 생성하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고/있거나 Harlow and Lane (editors) Antibodies;A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)에 설명되어 있다. 일반적으로, 이러한 방법에서 G-CSFR 또는 G-CSF (예: hG-CSFR 또는 hG-CSF) 또는 이의 영역 (예:세포 외 도메인) 또는 이의 면역 원성 단편(immunogenic fragment) 또는 에피토프(epitope) 또는 이를 발현하고 나타내는 세포(즉, 면역원), 임의의 적합하거나 원하는 담체(carrier), 보조제(adjuvant) 또는 제약 상 허용되는 부형제( excipient)와 함께 임의로 제형화 된것은 비인간 동물, 예를 들어 마우스, 닭, 쥐, 토끼, 기니피그, 개, 말, 소, 염소 또는 돼지에게 투여된다. 면역원은 비강 내, 근육 내, 피하, 정맥 내, 피내, 복강 내 또는 다른 공지 된 경로에 의해 투여 될 수 있다.

단일클론 항체는 본 개시 내용에 의해 고려되는 항체의 한 예시적인 형태이다. 용어 "단일클론 항체"또는 "mAb"는 동일한 항원 (들), 예를 들어 항원 내의 동일한 에피토프(epitope)에 결합 할 수 있는 동종 항체 집단을 지칭한다. 이 용어는 항체의 공급원 또는 그것이 만들어지는 방식과 관련하여 제한되지 않는다.

mAb의 생산을 위해, 예를 들어 US4196265 또는 상기 Harlow and Lane(1988)에 예시 된 절차와 같은 다수의 공지 된 기술 중 어느 하나가 사용될 수 있다.

대안적으로, ABL-MYC 기술 (NeoClone, Madison WI 53713, USA)을 사용하여 MAb를 분비하는 세포주를 생산한다(예를 들어, Largaespada et al, J. Immunol. Methods. 197:85-95, 1996에 설명됨).

항체는 또한 디스플레이 라이브러리(display library), 예를 들어, US6300064 및/또는 US5885793에 기재된 바와 같이 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library)를 스크리닝함으로써 생산되거나 분리될 수있다.

본 개시 내용의 항체는 합성 항체 일 수 있다. 예를 들어, 항체는 키메라 항체(chimeric antibody), 인간화 항체, 인간 항체 또는 탈 면역화 항체이다.

하나의 예에서, 본원에 기술된 항체는 키메라 항체이다. 용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종 (예:마우스와 같은 뮤린)에서 유래 된 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동적인 항체를 의미하는 반면, 사슬(들)의 나머지는 다른 종 (예를 들어, 인간과 같은 영장류)에서 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위 부류에 속하는 항체에 상응하는 서열과 동일하거나 상동성이다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 예를 들어 US4816567; 및 US5807715에 설명되어 있다.

본 개시 내용의 항체는 인간화 또는 인간 일 수 있다.

용어 "인간화 항체"는 비인간 종의 항체로부터 유래 된 항원 결합 부위, 인간 항체의 구조 및/또는 서열에 기초한 나머지 항체 구조 또는 가변 영역을 갖는 키메라 항체의 서브 클래스(subclass)를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 인간화 항체에서, 항원 결합 부위는 일반적으로 인간 항체의 가변 영역 및 인간 항체의 나머지 영역에서 적절한 FR에 이식된 비인간 항체의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions ;CDR)을 포함한다. 항원 결합 부위는 야생형 (즉, 비인간 항체와 동일)이거나 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 변형 될 수 있다. 일부 경우에, 인간 항체의 FR 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다.

비인간 항체 또는 이의 일부 (예를 들어, 가변 영역)를 인간화하는 방법은 당 업계에 공지되어있다. 인간화는 US5225539 또는 US5585089의 방법에 따라 수행 할 수 있다. 항체를 인간화하는 다른 방법은 배제되지 않는다. G-CSF에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제하는 예시적인 인간화 항체는 WO2018/145206에 설명되어 있다.

본원에 사용된 용어 "인간 항체"는 예를 들어 인간 생식선(human germline) 또는 체세포(somatic cells)에서 가변 영역 (예:VH,VL) 및 임의로 인간에서 발견 된 서열로부터 유래되거나 이에 상응하는 불변 영역을 갖는 항체를 지칭한다.

예시적인 인간 항체가 본원에 기술되고 C1.2 및 C1.2G 및/또는 이의 가변 영역을 포함한다. 이러한 인간 항체는 비인간 항체에 비해 인간의 면역 원성(immunogenicity)이 감소하는 이점을 제공한다. 예시적인 항체는 WO2012/171057에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참고로 포함된다.

G- CSF 신호 전달을 억제하는 추가 화합물

하나의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 G-CSF 또는 G-CSFR에 결합한다. 하나의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 G-CSF에 결합한다. 하나의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 G-CSFR에 결합한다.

하나의 예에서 G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 단백질이다.

한 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 G-CSFR에 결합하거나 특이 적으로 결합하고 G-CSF 신호 전달을 중화시키는 항체 가변 영역을 포함하는 단백질이다. 본 명세서에서 G-CSFR에 "결합하는" 단백질 또는 항체에 대한 언급은 G-CSFR에 "특이적으로 결합하는" 단백질 또는 항체에 대한 문자적 지원을 제공한다.

일부 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 Fv를 포함하는 단백질이다. 일부 예에서, 단백질은 다음으로 구성된 군에서 선택된다:

(i) 단일 사슬 Fv 단편 (a single chain Fv fragment;scFv);

(ii) 이량체 scFv (a dimeric scFv;di-scFv);또는

(iv) 디아 바디(a diabody);

(v) 트리아바디(a triabody);

(vi) 테트라바디(a tetrabody);

(vii) a Fab;

(viii) a F(ab')₂;

(ix) a Fv

(x) 항체, Fc 또는 중쇄 불변 도메인 (CH) 2 및/또는 CH3의 불변 영역에 연결된 (i) 내지 (ix) 중 하나; 또는

(xi) 알부민, 이의 기능적 단편 또는 변이체 또는 알부민에 결합하는 단백질 (예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)에 연결된 (i) 내지 (ix) 중 하나.

하나의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물은 항체의 Fc 영역을 포함하는 단백질이다. 하나의 예에서, 단백질은 적어도 약 5nM의 친화 도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 하나의 예에서, 단백질은 적어도 약 4nM의 친화 도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 하나의 예에, 단백질은 적어도 약 3nM의 친화 도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 하나의 예에서, 단백질은 적어도 약 2 nM의 친화 도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 하나의 예에서, 단백질은 적어도 약 1nM의 친화도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 1nM의 친화 도로 세포 표면에서 발현되는 hG-CSFR에 결합하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 4nM의 IC50으로 hG-CSFR을 발현하는 BaF3 세포의 G-CSF 유도 증식을 억제하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 3nM의 IC50으로 hG-CSFR을 발현하는 BaF3 세포의 G-CSF 유도 증식을 억제하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 2nM의 IC50으로 hG-CSFR을 발현하는 BaF3 세포의 G-CSF 유도 증식을 억제하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 1nM의 IC50으로 hG-CSFR을 발현하는 BaF3 세포의 G-CSF 유도 증식을 억제하는 항체이다. 한 가지 예에서, 단백질은 적어도 약 0.5nM의 IC50으로 hG-CSFR을 발현하는 BaF3 세포의 G-CSF 유도 증식을 억제하는 항체이다.

단일 도메인 항체(Single-Domain Antibodies)

일부 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 단일-도메인 항체("도메인 항체" 또는 "dAb"와 상호 교환적으로 사용됨)이거나 이를 포함하는 단백질이다. 단일 도메인 항체는 항체의 중쇄 가변영역의 전부 또는 일부를 포함하는 단일 폴리펩티드 사슬이다. 특정 예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체(Domantis, Inc.,Waltham,MA;참조, 예를 들어 US6248516)이다.

디아바디 ( Diabodies ), 트리아바디 ( Triabodies ), 테트라바디 ( Tetrabodies )

일부 예에서, 본 개시 내용의 단백질은 디아바디, 트리아바디, 테트라바디 또는 WO98/044001 및/또는 WO94/007921에 기재된 것과 같은 고차 단백질 복합체(higher order protein complex)이거나 이를 포함한다.

단일 체인 Fv ( scFv )

숙련된 기술자는 scFv가 단일 폴리펩티드 사슬에 VH 및 VL 영역을 포함하고, scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있도록 하는 VH 및 VL 사이의 폴리펩티드 링커(즉, 단일의 VH 및 VL에 대해 Fv를 형성하기 위해 서로 결합하는 폴리펩티드 사슬)를 포함한다는 것을 인식할 것이다. 예를 들어, 링커는 12 개 이상의 아미노산 잔기를 포함하며 (Gly4Ser) 3는 scFv에 대해 더 선호되는 링커 중 하나이다.

중쇄 항체

중쇄 항체는 중쇄를 포함하지만 경쇄를 포함하지 않는 한 많은 다른 형태의 항체와 구조적으로 다르다. 따라서, 이들 항체는 "중쇄 전용 항체" 라고도 한다. 중쇄 항체는 예를 들어 IgNAR라고도 불리는 낙타류(camelids) 및 연골어류(cartilaginous fish)에서 발견된다.

낙타류로부터의 중쇄 항체 및 이의 가변 영역 및 이의 생산 및/또는 분리 및/또는 사용 방법에 대한 일반적인 설명은 그 중에서도 참고 문헌 WO94/04678, WO97/49805 및 WO 97/49805에서 발견된다.

연골어류로부터의 중쇄 항체 및 이의 가변 영역 및 이의 생산 및/또는 분리 및/또는 사용 방법에 대한 일반적인 설명은 특히 WO200 /118629에서 찾아 볼 수 있다.

기타 항체 및 항체 단편

본 개시 내용은 또한 다음과 같은 다른 항체 및 항체 단편을 고려한다:

(i) US5,731,168에 기재된 "키 앤 홀(key and hole)"이중 특이적 단백질(bispecific proteins);

(ii) 예를 들어 US4,676,980에 기재된 바와 같은 이종 접합 단백질(heteroconjugate proteinss);

(iii) 예를 들어 US4,676,980에 기재된 바와 같이 화학적 가교제를 사용하여 생산된 이종 접합 단백질; 및

(iv) Fab3 (예 : EP19930302894에 기술 됨).

V- 유사 단백질(V-Like Proteins)

본 개시 내용의 화합물의 예는 T- 세포 수용체이다. T 세포 수용체에는 항체의 Fv 모듈(Fv module)과 유사한 구조로 결합하는 두 개의 V- 도메인이 있다. Novotny et al.,Proc Natl Acad Sci USA 88:8646-8650, 1991은 T- 세포 수용체(알파 및 베타라고 함)의 두 V- 도메인이 융합되고 단일 사슬 폴리펩티드로 발현될 수있는 방법 및 항체 scFv와 직접적으로 유사한 소수성을 감소시키기 위해 표면 잔기를 변경하는 방법을 설명한다. 2개의 V-알파 및 V-베타 도메인을 포함하는 단일 사슬 T 세포 수용체 또는 다량 체 T 세포 수용체의 생산을 설명하는 다른 공보 WO1999/045110 또는 WO2011/107595에 설명되어 있다.

항원 결합 도메인을 포함하는 다른 비 항체 단백질은 일반적으로 단량체 인 V-유사 도메인을 갖는 단백질을 포함한다. 이러한 V-유사 도메인을 포함하는 단백질의 예는 CTLA-4, CD28 및 ICOS를 포함한다. 이러한 V-유사 도메인을 포함하는 단백질의 추가 개시는 WO1999/045110에 포함되어 있다.

애드넥틴 ( Adnectins )

한 가지 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 애드넥틴이다. 애드넥틴은 루프 영역이 변경되어 항원 결합을 부여하는 인간 피브로넥틴(human fibronectin)의 10번째 피브로넥틴 유형 III(10Fn3) 도메인을 기반으로 한다. 예를 들어, 10Fn3 도메인의 β-샌드위치(β-sandwich) 한쪽 끝에 있는 3개의 루프를 조작하여 애드 넥틴이 항원을 특이적으로 인식할 수 있도록 한다. 자세한 내용은 US20080139791 또는 WO2005/056764를 참조할 수 있다.

안티칼린 ( Anticalins )

추가 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 안티칼린이다. 안티칼린은 스테로이드(steroids), 빌린(bilins), 레티노이드(retinoids) 및 지질(lipids)과 같은 작은 소수성 분자를 운반하는 세포 외 단백질 계열인 리포칼린(lipocalins)에서 파생된다. 리포칼린은 항원에 결합하도록 조작 될 수 있는 원뿔형 구조의 개방 된 끝에 여러 개의 루프가 있는 단단한 β-시트 이차구조(β-sheet secondary structure)를 가지고 있다. 이러한 조작 된 리포칼린은 안티칼린으로 알려져 있다. 안티칼린에 대한 자세한 설명은 US7250297B1 또는 US20070224633을 참조할 수 있다.

아피바디 ( Affibodies )

추가의 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 아피바디이다. 아피바디는 항원에 결합하도록 조작될 수 있는 황색 포도상 구균(Staphylococcus aureus)의 단백질 A의 Z 도메인(항원 결합 도메인)에서 유래된 스캐폴드(scaffold)이다. Z 도메인은 약 58개 아미노산의 3개 나선 번들(three-helical bundle)로 구성된다. 라이브러리는 표면 잔류물의 무작위 화에 의해 생성되었다. 자세한 내용은 EP1641818을 참조할 수 있다.

아비머 ( Avimers )

추가의 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 아비머이다. 아비머는 A 도메인 스캐폴드 패밀리(A-domain scaffold family)에서 파생된 다중 도메인 단백질이다. 약 35개 아미노산의 고유 도메인은 정의된 이황화 결합 구조(disulfide bonded structure)를 채택한다. 다양성은 A-도메인 계열에 의해 나타나는 자연적 변이를 섞임으로 생성된다. 자세한 내용은 WO2002088171을 참조할 수 있다.

DARPins

추가 예에서, 본 개시 내용의 화합물은 디자인된 안키린 반복 단백질 (Designed Ankyrin Repeat Protein;DARPin)이다. DARPins는 세포골격에 대한 통합 막 단백질의 부착을 매개하는 단백질 계열인 안키린(Ankyrin)에서 파생된다. 단일 안키린 반복은 2개의 α-나선(α-helices)과 β-회전(β-turn)으로 구성된 33개의 잔기 모티프(residue motif)이다. 그들은 각 반복의 첫 번째 α-나선 및 β-턴의 잔기를 무작위화 하여 다른 표적 항원에 결합하도록 설계 될 수 있다. 그들의 결합 계면(binding interface)은 모듈수(method of affinity maturation(친화성 성숙 방법))를 늘림으로써 증가할 수 있다. 자세한 내용은 US20040132028을 참조할 수 있다.

가용성 G- CSFR (Soluble G- CSFR )

본 개시 내용은 또한 G-CSF 상호 작용을 위해 자연 발생 막 관련 G-CSRF와 경쟁하는 G-CSRF의 가용성 형태를 고려한다. 당업자는 가용성 형태의 수용체를 용이하게 제조 할 수 있는데 이는 예를 들어, 미국 특허 제 5,589,456호 및 Honjo et al, Acta Crystallograph Sect F Struct Biol Cryst Commun. 61 (Pt 8):788-790, 2005에서 확인할 수 있다.

불변 영역(Constant Regions)

본 개시 내용의 화합물 및 항체에 유용한 불변 영역의 서열은 다수의 상이한 공급원으로부터 수득 될 수 있다. 일부 예에서, 항체의 불변 영역 또는 이의 부분은 인간 항체로부터 유래 된다. 불변 영역 또는 이의 일부는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 임의의 항체 클래스 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하는 임의의 항체 아이소타입(isotype)으로부터 유래 될 수 있다. 한 가지 예에서, 불변 영역은 인간 아이소 타입 IgG4 또는 안정화된 IgG4 불변 영역이다. 한 가지 예에서, 불변 영역의 Fc 영역은 예를 들어 천연 또는 야생형 인간 IgG1 또는 IgG3 Fc 영역과 비교하여 이펙터 기능(effector function)을 유도하는 감소된 능력을 갖는다. 한 가지 예에서, 이펙터 기능은 항체 의존성 세포 매개 세포 독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity;ADCC) 및/또는 항체 의존성 세포 매개 식세포 작용(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis;ADCP) 및/또는 보체 의존성 세포 독성(complement-dependent cytotoxicity;CDC)이다. 단백질 함유 Fc 영역의 이펙터 기능 수준을 평가하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 기술되어있다.

하나의 예에서, Fc 영역은 IgG4 Fc 영역(즉, IgG4 불변 영역으로부터의), 예를 들어 인간 IgG4 Fc 영역이다. 적합한 IgG4 Fc 영역의 서열은 당업자에게 명백 할 것이며/있거나 공개적으로 이용 가능한 데이터베이스(예를 들어, National Center for Biotechnology Information에서 이용 가능)에서 이용 가능할 것이다.

하나의 예에서, 불변 영역은 안정화된 IgG4 불변 영역이다. 용어 "안정화 된 IgG4 불변 영역"은 Fab 팔 교환을 감소시키도록 변형된 IgG4 불변 영역 또는 Fab 팔 교환 또는 반 항체의 형성 또는 반 항체를 형성하는 성향을 의미하는 것으로 이해될 것이다. "Fab 팔 교환"은 IgG4 중쇄 및 부착된 경쇄(반 분자)가 다른 IgG4 분자의 중쇄 쌍으로 교환되는 인간 IgG4에 대한 단백질 변형 유형을 지칭한다. 따라서, IgG4 분자는 두 개의 별개의 항원을 인식하는 두 개의 별개의 Fab 암을 획득 할 수 있다(결과적으로 이중 특이적 분자). Fab 팔 교환은 생체 내에서 자연적으로 발생하며 정제된 혈액 세포 또는 환원된 글루타티온(glutathione)과 같은 환원제에 의해 시험관 내에서 유도될 수 있다. "반 항체"는 IgG4 항체가 해리되어 각각 단일 중쇄 및 단일 경쇄를 포함하는 2개의 분자를 형성할 때 형성된다. 하나의 예에서, 안정화된 IgG4 불변 영역은 Kabat 시스템에 따라 힌지 영역(hinge region)의 위치 241에 프롤린(proline)을 포함한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 1987 and / 또는 1991). 이 위치는 EU 넘버링 시스템(EU numbering system)에 따른 힌지 영역의 위치 228에 해당한다 (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest Washington DC United States Department of Health and Human Services, 2001 and Edelman et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85, 1969). 인간 IgG4에서 이 잔기는 일반적으로 세린(serine)이다. 프롤린에 대한 세린의 치환 후, IgG4 힌지 영역은 서열 CPPC를 포함한다. 이와 관련하여, 당업자는 "힌지 영역"이 항체의 2개의 Fab 팔에 이동성을 부여하는 Fc 및 Fab 영역을 연결하는 항체 중쇄 불변 영역의 프롤린이 풍부한 부분임을 인식 할 것이다. 힌지 영역은 중쇄 이황화 결합(disulfide bonds)에 관여하는 시스테인(cysteine) 잔기를 포함한다. 일반적으로 Kabat의 넘버링 시스템에 따라 인간 IgG1의 Glu226에서 Pro243으로 확장되는 것으로 정의된다. 다른 IgG 아이소 타입의 힌지 영역은 동일한 위치에 중쇄 이황화 (S-S) 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 배치함으로써 IgG1 서열과 정렬될 수 있다(예를 들어 WO2010/080538 참조).

안정화된 IgG4 항체의 추가 예는 인간 IgG4의 중쇄 불변 영역(EU 넘버링 시스템에 따름)에서 위치 409에 있는 아르기닌(arginine)이 라이신(lysine), 트레오닌(threonine), 메티오닌(methionine) 또는 류신(leucine)으로 치환된 항체(예 : WO2006/033386)이다. 불변 영역의 Fc 영역은(EU 넘버링 시스템에 따라) 405에 상응하는 위치에서 알라닌(alanine), 발린(valine), 글리신(glycine), 이소류신(isoleucine) 및 류신(leucine)으로 구성된 군으로부터 선택된 잔기를 추가로 또는 대안적으로 포함할 수 있다. 선택적으로, 힌지 영역은 위치 241에 프롤린 (즉, CPPC 서열)을 포함한다(상기 설명 됨).

또 다른 예에서, Fc 영역은 감소된 효과기 기능을 갖도록 변형된 영역, 즉 "비 면역 자극 Fc 영역(non-immunostimulatory Fc region)"이다. 예를 들어, Fc 영역은 268, 309, 330 및 331로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 위치에 치환을 포함하는 IgG1 Fc 영역이다. 또 다른 예에서, Fc 영역은 다음 변경 E233P, L234V, L235A 및 G236의 삭제 중 하나 이상 및/또는 다음 변경 A327G, A330S 및 P331S 중 하나 이상을 포함하는 IgG1 Fc 영역이다 (Armour et al., Eur J Immunol. 29 : 2613-2624, 1999; Shields et al., J Biol Chem. 276 (9) : 6591-604, 2001). 비 면역 자극 Fc 영역의 추가 예는 예를 들어 Dall'Acqua et al., J Immunol에 설명되어 있다, 177 : 1129-1138 2006; 및 / 또는 Hezareh J Virol; 75 : 12161-12168, 2001).

또 다른 예에서, Fc 영역은 예를 들어, IgG4 항체로부터의 적어도 하나의 CH2 도메인 및 IgG1 항체로부터의 적어도 하나의 CH3 도메인을 포함하며, 여기서 Fc 영역은 240, 262, 264, 266, 297, 299, 307, 309, 323, 399, 409 및 427 (EU 넘버링) (예를 들어, WO2010 / 085682에 설명 됨)으로 구성된 그룹으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서의 치환을 포함하는 키메라 Fc 영역이다.

단백질 생산(Protein Production)

하나의 예에서, 임의의 예에 따른 본원에 기재된 항체는 재조합체이다.

재조합 항체의 경우, 이를 암호화하는 핵산은 발현 구조 또는 벡터로 클로닝 될 수 있으며, 그런 다음 대장균 세포, 효모 세포, 곤충 세포 또는 유인원 COS 세포(simian COS cells)와 같은 포유류 세포(mammalian cells). 차이니즈 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary;CHO)세포, 인간 배아 신장(human embryonic kidney;HEK) 세포 또는 항체를 생산하지 않는 골수종 세포(myeloma cells)와 같은 숙주 세포로 형질 감염된다. 항체 발현에 사용되는 예시적인 세포는 CHO 세포, 골수종 세포 또는 HEK 세포입니다. 이러한 목적을 달성하기 위한 분자 클로닝 기술은 당 업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 Ausubel et al.,(editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience(1988, 현재까지의 모든 업데이트 포함) 또는 Sambrook et al.,Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)에서 확인 할 수 있다. 다양한 클로닝 및 시험관 내 증폭 방법이 재조합 핵산의 구성에 적합하다. 재조합 항체를 생산하는 방법은 또한 당 업계에 공지되어 있다 (예:US4816567 또는 US5530101 참조).

분리 후, 핵산은 추가 클로닝(DNA 증폭) 또는 무 세포 시스템 또는 세포에서의 발현을 위해 발현 구조 또는 발현 벡터의 프로모터에 작동 가능하게 삽입된다.

본원에 사용된 용어 "프로모터(promoter)"는 가장 넓은 맥락에서 취해지고 추가 조절 요소의 유무에 관계없이 정확한 전사 개시에 필요한 TATA 박스 또는 개시제 요소를 포함하는 게놈 유전자의 전사 조절 서열을 포함한다 (예를 들어, 발달 및/또는 외부 자극에 반응하여 또는 조직 특이적 방식으로 핵산의 발현을 변경하는 상류 활성화 서열, 전사 인자 결합 부위, 인핸서 및 침묵제). 본 맥락에서, 용어 "프로모터"는 또한 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 부여, 활성화 또는 향상시키는 재조합, 합성 또는 융합 핵산, 또는 유도체를 설명하기 위해 사용된다. 예시적인 프로모터는 발현을 추가로 향상시키고/거나 상기 핵산의 공간적 발현 및/또는 시간적 발현을 변경하기 위해 하나 이상의 특정 조절 요소의 추가 카피를 포함 할 수있다.

본원에 사용된 용어 "작동 가능하게 연결된"은 핵산의 발현이 프로모터에 의해 제어되도록 프로모터를 핵산에 상대적으로 배치하는 것을 의미한다.

세포에서 발현을 위한 많은 벡터를 사용할 수 있다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 신호 서열, 항체를 코딩하는 서열(예를 들어, 본원에 제공된 정보로부터 유래), 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 순서. 당업자는 항체 발현에 적합한 서열을 알고있을 것이다. 예시적인 신호 서열은 pelB, 알칼리성 포스파타제(alkaline phosphatase), 페니실리나제(penicillinase), Ipp 또는 열 안정성 장 독소 II(heat-stable enterotoxin II)와 같은 원핵 분비 신호(prokaryotic secretion signals), 인버타제리더(invertase leader), α 인자 리더(α factor leader) 또는 산성 포스파타제 리더(acid phosphatase leader)와 같은 효모 분비 신호(yeast secretion signals) 또는 단순 헤르페스 gD 신호(herpes simplex gD signal)와 같은 포유류 분비 신호(mammalian secretion signals)를 포함한다.

포유동물 세포에서 활성인 예시적인 프로모터에는 거대 세포 바이러스 즉시 초기 프로모터(cytomegalovirus immediate early promoter;CMV-IE), 인간 신장 인자 1-α프로모터(human elongation factor 1-α promoter;EF1), 소형 핵 RNA 프로모터(small nuclear RNA promoters;U1a 및 U1b), α-미오신 중쇄 프로모터(α-myosin heavy chain promoter), Simian 바이러스 40 프로모터(Simian virus 40 promoter;SV40), Rous 육종 바이러스 프로모터(Rous sarcoma virus promoter;RSV), 아데노 바이러스 주요 후기 프로모터(Adenovirus major late promoter), β-액틴 프로모터(β-actin promoter); CMV 인핸서(CMV enhancer)/β-액틴 프로모터 또는 면역 글로불린 프로모터(immunoglobulin promoter) 또는 이의 활성 단편을 포함하는 하이브리드 조절 요소를 포함한다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환 된 원숭이 신장 CV1 계통(monkey kidney CV1 line)(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 계통(human embryonic kidney line )현탁 배양에서 성장을 위해 서브 클로닝 된 293 또는 293 세포; 아기 햄스터 신장 세포(baby hamster kidney cells)(BHK, ATCC CCL 10); 또는 중국 햄스터 난소 세포( Chinese hamster ovary cells )(CHO)가 있다.

예를 들어 Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae 및 S. pombe를 포함하는 군으로부터 선택된 효모 세포와 같은 효모 세포에서의 발현에 적합한 전형적인 프로모터를 포함하나 ADH1 프로모터, GAL1 프로모터, GAL4 프로모터, CUP1 프로모터, PHO5 프로모터, nmt 프로모터, RPR1 프로모터 또는 TEF1 프로모터로 제한되지는 않는다.

분리된 핵산 또는 이를 포함하는 발현 구조체의 발현을 위해 세포 내로 도입하기 위한 수단은 당업자에게 공지되어있다. 주어진 세포에 사용되는 기술은 알려진 성공적인 기술에 따라 다르다. 재조합 DNA를 세포에 도입하기 위한 수단에는 미세주입(microinjection), dextran에 의해 매개되는 형질감염, 리포펙타민(lipofectamine)(Gibco, MD, USA) 및/또는 셀펙틴(cellfectin)(Gibco, MD, USA)을 사용하여 리포솜(liposomes)에 의해 매개되는 형질감염, PEG 매개 DNA 흡수(PEG-mediated DNA uptake), 특히, DNA 코팅된 텅스텐 또는 금 입자(DNA-coated tungsten or gold particles)(Agracetus Inc., WI, USA)를 사용하는 것과 같은 전기 천공(electroporation) 및 마이크로 입자 충격(microparticle bombardment)이 포함된다.

항체 생산에 사용되는 숙주 세포는 사용되는 세포 유형에 따라 다양한 배지에서 배양 될 수 있다. Ham 's Fl0 (Sigma), Minimal Essential Medium((MEM), (Sigma)), RPMl-1640(Sigma), Dulbecco 's Modified Eagle 's Medium((DMEM), Sigma))과 같은 상업적으로 이용 가능한 배지는 포유류 세포 배양에 적합하다. 본원에서 논의된 다른 세포 유형을 배양하기위한 것은 당 업계에 공지되어있다.

단백질 분리(Isolation of Proteins)

항체를 분리하는 방법은 당 업계에 공지되어 있고/있거나 본원에 기술되어있다.

항체가 배양 배지로 분비되는 경우, 이러한 발현 시스템의 상층액은 먼저 상업적으로 이용 가능한 단백질 농축 필터, 예를 들어 Amicon 또는 Millipore Pellicon 한외 여과 장치를 사용하여 농축될 수 있다. PMSF와 같은 프로테아제 억제제(protease inhibitor)는 단백질 분해를 억제하기 위해 전술 한 단계 중 어느 하나에 포함될 수 있으며, 외래성 오염물의 성장을 방지하기 위해 항생제가 포함될 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 상층액은 예를 들어 연속 원심 분리를 사용하여 항체를 발현하는 세포로부터 여과 및/또는 분리 될 수 있다.

세포로부터 제조된 항체는 예를 들어 이온 교환(ion exchange), 하이드록시 아파타이트 크로마토그래피(hydroxyapatite chromatography), 소수성 상호 작용 크로마토그래피(hydrophobic interaction chromatography), 겔 전기영동(gel electrophoresis), 투석(dialysis), 친화성 크로마토그래피 단백질 A 친화성 크로마토그래피 또는 단백질 G 크로마토그래피 같은 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)또는 이들의 임의 조합을 사용하여 정제 될 수 있다. 이러한 방법은 당 업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 WO99/57134 또는 Ed Harlow 및 David Lane(편집자) Antibodies:A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)에 설명되어 있다.

항체의 분석 활동(Assaying Activity of an antibody)

G- CSFR 및 그 돌연변이체에 결합

본 개시 내용의 화합물 또는 항체가 hG-CSFR의 리간드 결합 도메인 및 hG-CSFR의 리간드 결합 도메인의 특정 돌연변이체 형태(예를 들어, 특정 점 돌연번이가 있거나 없는 서열번호 1) 및/또는 인간 및 사이노몰구스 원숭이(cynomolgus monkey)G-CSFR 둘 다에 결합한다는 것이 본원 개시 내용으로부터 숙련된 기술자에게 명백할 것이다. 화합물 또는 항체에 대한 결합을 평가하는 방법은 예를 들어 Scopes (In:Protein Purification:Principles and Practice, Third Edition, Springer Verlag, 1994)에 기재된 바와 같이 당 업계에 공지되어있다. 이러한 방법은 일반적으로 화합물 또는 항체를 표지하고 고정된 G-CSFR과 접촉시키는 것을 포함한다. 비특이적 결합 화합물 또는 항체를 제거하기 위해 세척한 후, 표지 및 결과적으로 결합된 화합물 또는 항체의 양이 검출된다. 물론, 화합물 또는 항체는 고정화되고 G-CSFR 신호가 표지될 수 있다. 패닝 유형 분석( Panning-type assays)도 사용할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 표면 플라스몬 공명 분석(surface plasmon resonance assays)이 사용될 수 있다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 대체로 동일한 수준(예를 들어, 10% 또는 5% 또는 1% 이내)으로 서열번호 1의 위치 167에서 알라닌이 리신으로 치환되고/되거나 서열번호 1의 위치 168에 있는 알라닌이 히스티딘으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 100배 또는 150배 또는 160배 또는 200배 이하 수준에서 서열번호 1의 위치 287에서 알라닌이 아르기닌으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩티드에 결합한다. 하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 약 160배 이하의 수준으로 서열번호 1의 위치 287에서 알라닌이 아르기닌으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 20배 또는 40배 또는 50배 또는 60배 이하의 수준으로 서열번호 1의 위치 237에서 알라닌이 히스티딘으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다. 하나의 예에서 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 50배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 237에서 알라닌이 히스티딘으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 20배 또는 40배 또는 60배 또는 70배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 198에서 알라닌이 메티오닌으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다. 하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 40배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 198에서 알라닌이 메티오닌으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 20배 또는 30배 또는 40배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 172에서 알라닌이 티로신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다. 하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 40배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 172에서 알라닌이 티로신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 100배 또는 120배 또는 130배 또는 140배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 171에서 알라닌이 류신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다. 하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 140배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 171에서 알라닌이 류신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 20배 또는 40배 또는 60배 또는 70배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 111에서 알라닌이 류신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다. 한 가지 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 적어도 약 60배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 111에서 알라닌이 류신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 5배 이하 또는 4배 또는 3배 또는 2배 또는 1배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 168에서 알라닌이 히스티딘으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 5배 이하 또는 4배 또는 3배 또는 2배 또는 1배 이하의 수준에서 서열번호 1의 위치 167에서 알라닌이 리신으로 치환된 서열번호 1의 폴리펩타이드에 결합한다.

결합 수준은 바이오 센서를 사용하여 편리하게 결정된다.

본 개시 내용은 전술한 특징의 임의의 조합을 고려한다. 한 가지 예에서, 본원에 기술된 항체는 앞의 7개 단락에 명시된 모든 결합 특성을 가지고 있다.

에피토프 맵핑 ( Epitope Mapping)

또 다른 예에서, 본원에 기재된 화합물 또는 항체에 의해 결합된 에피토프가 맵핑된다. 에피토프 맵핑 방법은 숙련된 기술자에게 명백할 것이다. 예를 들어, hG-CSFR 서열 또는 관심 에피토프를 포함하는 이의 영역에 걸친 일련의 중첩 펩티드, 예를 들어 10-15개의 아미노산을 포함하는 펩티드가 생성된다. 이어서 화합물 또는 항체를 각 펩티드에 접촉시키고 결합하는 펩티드를 결정한다. 이것은 항체가 결합하는 에피토프를 포함하는 펩티드(들)의 결정을 가능하게 한다. 다수의 비 연속적 펩티드가 단백질에 의해 결합되면 항체는 입체 형태 에피토프에 결합할 수 있다.

대안적으로 또는 추가로, hG-CSFR 내의 아미노산 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발에 의해 돌연변이( alanine scanning mutagenesis)되고, 이러한 돌연변이는 단백질 결합을 감소시키거나 막는다. 화합물 또는 항체의 결합을 감소 또는 방지하는 어떤 돌연변이는 단백질에 의해 결합된 에피토프 내에 있을 가능성이 있다.

추가 방법이 본원에서 예시되고, hG-CSFR 또는 이의 영역을 본 개시 내용의 고정 된 화합물 또는 항체에 결합시키고 생성된 복합체를 프로테아제(proteases)로 분해하는 것을 포함한다. 서열을 결정하기 위해서 고정된 단백질에 결합된 상태로 남아있는 펩티드를 예를 들어 질량 분석법(mass spectrometry)같은 것을 사용하여 분리하고 분석한다.

경쟁적 결합의 결정(Determining Competitive Binding)

단일 클론 항체 C1.2 또는 C1.2G의 결합을 경쟁적으로 억제하는 화합물 또는 항체를 결정하기 위한 분석은 당업자에게 명백 할 것이다. 예를 들어, C1.2 또는 C1.2G는 검출 가능한 라벨(예:형광 라벨 또는 방사성 라벨)에 접합된다. 표지된 항체 및 시험 화합물 또는 항체를 혼합하고 hG-CSFR 또는 이의 영역 (예를 들어, 서열 번호 1을 포함하는 폴리펩티드) 또는 이를 발현하는 세포와 접촉시킨다. 표지 된 C1.2 또는 C1.2G의 수준이 결정되고 표지된 화합물 또는 항체가 시험 항체의 부재하에 hG-CSFR, 영역 또는 세포와 접촉할 때 결정된 수준과 비교된다. 표지된 C1.2 또는 C1.2G의 수준이 항체의 부재와 비교하여 시험 화합물 또는 항체의 존재하에 감소되는 경우, 항체는 hG-CSFR에 대한 C1.2 또는 C1.2G의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것으로 간주된다.

선택적으로, 시험 화합물 또는 항체는 C1.2 또는 C1.2G와 다른 표지에 접합된다. 이 대체 표지는 hG-CSFR 또는 이의 영역 또는 세포에 대한 시험 항체의 결합 수준의 검출을 허용한다

또 다른 예에서, 화합물 또는 항체는 hG-CSFR 또는 이의 영역 (예를 들어, 서열 번호 1을 포함하는 폴리 펩타이드) 또는 hG-CSFR, 영역 또는 세포를 C1.2 또는 C1.2G와 접촉시키기 전에 동일한 수준으로 발현되는 세포에 결합하도록 허용된다. 화합물 또는 항체의 부재와 비교하여 화합물 또는 항체의 존재하에 결합 된 C1.2 또는 C1.2G의 양이 감소하면 단백질이 hG-CSFR에 대한 C1.2 또는 C1.2G 결합을 경쟁적으로 억제함을 나타낸다. 상호 분석은 표지된 화합물 또는 항체를 사용하여 수행할 수도 있으며 먼저 C1.2 또는 C1.2G가 G-CSFR에 결합하도록 허용한다. 이 경우, C1.2 또는 C1.2G의 부재와 비교하여 C1.2 또는 C1.2G의 존재에서 hG-CSFR에 결합된 표지된 화합물 또는 항체의 감소된 양은 화합물 또는 항체가 hG-CSFR에 대한 C1.2 또는 C1.2G의 결합을 경쟁적으로 억제함을 나타낸다.

임의의 전술 한 분석은 hG-CSRF 및/또는 서열 번호 1의 돌연변이 형태 및/또는 C1.2 또는 C1.2G가 결합하는 hG-CSRF의 리간드 결합영역으로 수행 될 수 있다.

중화반응 결정(Determining Neutralization)

본 개시 내용의 일부 예에서, 화합물 또는 항체는 hG-CSFR 신호 전달을 중화 할 수 있다.

수용체를 통한 리간드의 신호 전달을 중화하는 화합물 또는 항체의 능력을 평가하기위한 다양한 분석이 당업계에 공지되어있다.

하나의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 hG-CSFR에 대한 G-CSF 결합을 감소시키거나 방지한다. 이들 분석은 표지된 G-CSF 및/또는 표지된 단백질을 사용하여 본원에 기술 된 경쟁적 결합 분석으로서 수행 될 수 있다.

또 다른 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 CD34+골수 세포가 G-CSF의 존재하에 배양 될 때 CFU-G의 형성을 감소시킨다. 이러한 분석에서 CD34+골수세포는 시험 화합물의 존재 또는 부재하에서 G-CSF(예:약 10ng/ml 세포 배양 배지) 및 선택적으로 줄기세포 인자(예:약 10ng/ml세포)의 존재하에 반고체 세포 배양 배지에서 배양된다. 과립구 클론(granulocyte clones)(CFU-G)이 형성되는 데 충분한 시간이 지난 후 클론 또는 콜로니의 수가 결정됩니다. G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체의 부재시와 비교하여 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체의 존재하에 콜로니 수의 감소는 G-CSF 신호 전달을 억제하는 것은 G-CSF 신호 전달을 중화시키는 것으로 나타난다. G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체의 다중 농도를 테스트함으로써 IC50, 즉 CFU-G 형성의 최대 억제의 50%가 발생하는 농도가 결정된다. 한 가지 예에서, IC50은 0.2nM 이하, 예를 들어 0.1nM 이하, 예를 들어 0.09nM 이하, 또는 0.08nM 이하, 또는 0.07nM 이하, 또는 0.06nM 이하 또는 0.05nM 이하이다. 한 예에서 IC50은 0.04nM 이하이다. 다른 예에서 IC50은 0.02nM 이하이다. 전술 한 IC50은 본원에 기재된 임의의 CFU-G 분석에 관한 것이다.

추가의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 G-CSF의 존재하에 배양되는 hG-CSFR을 발현하는 세포(예를 들어, BaF3 세포)의 증식을 감소시킨다. 세포는 G-CSF (예:0.5ng/ml)의 존재 및 시험 화합물 또는 항체의 존재 또는 부재하에 배양된다. 세포 증식을 평가하는 방법은 당 업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 MTT 감소 및 티미딘 통합(thymidine incorporation)을 포함한다. 화합물 또는 항체의 부재하에 관찰되는 수준과 비교하여 증식 수준을 감소시키는 화합물 또는 항체는 G-CSF 신호 전달을 중화하는 것으로 간주된다. 화합물 또는 항체의 다중 농도를 테스트함으로써 IC50, 즉 세포 증식의 최대 억제의 50%가 발생하는 농도가 결정됩니다. 한 가지 예에서, IC50은 6nM 이하, 예를 들어 5.9nM 이하이다. 다른 예에서, IC50은 2nM 이하 또는 1nM 이하 또는 0.7nM 또는 세포 또는 0.6nM 이하 또는 0.5nM 이하이다. 전술 한 IC50은 본원에 기술된 임의의 세포 증식 분석과 관련이 있다.

추가의 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 G-CSF 투여 후 생체 내 조혈 줄기세포(hematopoietic stem cells) 및/또는 내피 전구 세포(endothelial progenitor cells)의 동원을 감소시키고/거나 생체 내, 예를 들어 G-CSF 투여 후에 호중구의 수를 감소시킨다(필수는 아님). 예를 들어, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 임의로 G-CSF 또는 PEG화된 G-CSF 또는 필그라스팀(filgrastim)과 같은 이의 변형 된 형태의 투여 전, 투여 시점 또는 후에 투여된다. 조혈 줄기 세포(예:CD34 및/또는 Thy1 발현) 및/또는 내피 전구 세포(예:CD34 및 VEGFR2 발현) 및/또는 호중구(형태학적 및/또는 발현 예:CD10, CD14, CD31 및/또는 CD88 발현)의 수가 평가된다. 항체의 부재하에 관찰된 수준과 비교하여 세포(들) 수준을 감소시키는 화합물 또는 항체는 G-CSF 신호 전달을 중화하는 것으로 간주된다. 한 가지 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 화합물 또는 항체는 호중구 감소증을 유발하지 않고 호중구의 수를 감소시킨다.

G-CSF 신호 전달의 중화를 평가하기 위한 다른 방법이 본 개시 내용에 의해 고려된다.

조성물(Compositions)

본 개시 내용의 화합물 또는 항체의 조성물은 정맥(intravenously) 내 또는 피하 투여(subcutaneously)된다. 한 가지 예에서, 항체/조성물은 정맥 내로 투여된다.

화합물 또는 항체를 투여에 적합한 형태(예:약제학적 조성물)로 제조하는 방법은 당 업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 Remington 's Pharmaceutical Sciences (18th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa ., 1990) 및 US Pharmacopeia : National Formulary (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1984)에 기재된 방법을 포함한다.

본 개시 내용의 제약 조성물은 정맥 내 투여 또는 피하 투여와 같은 비경구투여(parenteral administration)에 특히 유용하다. 투여용 조성물은 일반적으로 약제학적으로 허용되는 운반체(carrier), 예를 들어 수성 운반체(aqueous carrier)에 용해된 항체 용액을 포함할 것이다. 다양한 수성 운반체, 예를 들어 완충 식염수 등이 사용될 수 있다. 조성물은 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제 등과 같은 생리적 조건에 근접하는 데 필요한 약제 학적으로 허용되는 보조 물질, 예를 들어 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산 나트륨 등을 함유 할 수 있다. 이들 제형에서 본 개시 내용의 화합물의 농도는 광범위하게 변할 수 있고, 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 유체 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다. 예시적인 운반체는 물, 식염수, 링거 용액, 덱스트로스(dextrose)용액을 포함한다. 완충제 및 방부제와 같은 등장성(isotonicity) 및 화학적 안정성을 향상시키는 첨가제는 비수성 비히클(Nonaqueous vehicles)을 사용할 수 있다.

병용 요법(Combination Therapies)

하나의 예에서, 본 개시 내용의 화합물 또는 항체는 조합된 또는 추가의 치료 단계로서 또는 치료학적 제형의 추가 성분으로서 본원에 기재된 질환 또는 상태를 치료하는 데 유용한 또 다른 화합물과 조합하여 투여된다.

하나의 예에서, 다른 화합물은 항 염증 화합물, 예를 들어 메토트렉세이트(methotrexate) 또는 비스테로이드성 항 염증 화합물이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 다른 화합물은 면역 억제제이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 다른 화합물은 프레드니손(prednisone) 및/또는 프레드니솔론과 같은 코르티코스테로이드(corticosteroid)이다. 한 가지 예에서 다른 화합물은 메토트렉세이트이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 다른 화합물은 시클로포스파미드이다(cyclophosphamide).

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 다른 화합물과 동시에 투여된다. 한 가지 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체는 다른 화합물보다 먼저 투여된다. 한 가지 예에서, G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체는 다른 화합물 다음에 투여된다.

일부 예에서, 화합물 또는 항체는 세포와 조합하여 투여된다. 일부 예에서, 세포는 간엽 줄기 세포(mesenchymal stem cell)와 같은 줄기 세포이다.

일부 예에서, 화합물 또는 항체는 유전자 요법과 조합하여 투여된다.

일부 예에서, 화합물 또는 항체는 비약물적 개입(non-pharmaceutical intervention), 예를 들어, 혈장분리(plasmapheresis), 세포분리(cytapheresis), 백혈구분리(leukapheresis), 과립구(granulocyte) 및/또는 단핵구 분리(monocyte apheresis)와 같은 아파시스(apharesis)와 조합하여 투여된다. 이러한 맥락에서, 화합물 또는 항체는 비약물적 개입이 수행되는 기간 동안 투여될 수 있으며 비약 물적 개입과 "조합된" 것으로 간주 될 것이다. 예를 들어, 비약 물적 개입은 과립구 및/또는 단핵구 분리법 일 수 있으며, 이는 5주 동안 주 1회 수행되고 항체 또는 화합물은 이 기간 동안 투여될 수 있다. 한 가지 예에서, 항체 또는 화합물은 비약물적 개입 전에 투여된다. 한 가지 예에서, 항체 또는 화합물은 비약물적 개입 후에 투여된다.

또 다른 비약물적 개입은 광선 요법(light therapy)이다. 광선 요법은 일부 호중구 피부병을 치료하는 데 사용된다.

투약(Dosing)

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 1mg/kg의 용량으로 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg과 0.9mg/kg 사이의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 0.8mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.3mg/kg 내지 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg 내지 0.3mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.1mg/kg의 용량으로 투여된다. 한 가지 예에서, 화합물 또는 항체는 0.1mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.3mg/kg의 용량으로 투여된다. 한 가지 예에서, 화합물 또는 항체는 0.3mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 약 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다. 한 가지 예에서, 화합물 또는 항체는 0.6mg/kg의 용량으로 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 수회 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 5일 내지 40일마다 1회 투여된다. 일부 예에서, 화합물 또는 항체는 연속 일 또는 동일한 주 내에 투여되지 않는다.

예를 들어, 화합물 또는 항체는 14일 내지 28일마다 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 20일 내지 25일마다 투여된다.

예를 들어, 화합물은 7일 또는 8일 또는 9일 또는 10일 또는 11일 또는 12일 또는 13일 또는 14일 또는 15일 또는 16일 또는 17일 또는 18일 또는 19일 또는 20일 또는 21일 또는 22일 또는 23일 또는 24일 또는 25일 또는 26일 또는 27일 또는 28일마다 투여된다.

하나의 예에서, 화합물은 격주 또는 3주 또는 4주마다 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 수회 투여되고, 21일마다 1회 투여된다. 이와 관련하여 "21일마다"(또는 임의의 다른 횟수)는 후속 투여가 직전 투여 후 21일에 수행됨을 의미하는 것으로 당업자에 의해 이해될 것이다.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 방법은 과립구 콜로니 자극 인자 수용체 (G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 항체는 21일마다 1회씩 수회 투여되고 항체는 다음을 포함한다:

(i) 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는

(ii) 서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.

하나의 예에서, 본 개시 내용의 방법은 과립구 콜로니 자극 인자 수용체 (G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 상기 항체는 21일마다 1회씩 수회 투여되고, 상기 조성물은 다음 중 2개 이상 또는 3개 모두를 포함한다:

(i) 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체;

(ii) 서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체; 및/또는

(iii) 서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 2개의 경쇄를 포함하는 항체.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 정해진 기간 또는 횟수로 투여된다. 예를 들어, 화합물 또는 항체는 1개월 또는 3개월 또는 6개월 또는 12개월 동안 투여된다. 또 다른 예에서, 5회 또는 10회 또는 15회 또는 20회 용량의 항체 또는 화합물이 투여된다.

또 다른 예에서, 화합물 또는 항체는 만성적으로 또는 지속적으로, 예를 들어 수개월 또는 수년 동안 투여되며 본 개시 내용은 달리 언급되지 않는 한 특정 기간으로 제한되지 않는다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 질환 또는 질환 증상이 해결되거나 관리될 때까지 투여된다. 예를 들어, "활성" 형태의 질환의 경우, 화합물 또는 항체는 질환이 더 이상 활성으로 간주되지 않을 때까지 투여된다.

HS 또는 PPP의 경우, 화합물 또는 항체는 대상이 더 이상 눈에 보이는 병변(lesions)이나 농포(pustules)가 없을 때까지 투여된다.

하나의 예에서, 화합물 또는 항체는 관해(remission) 상태를 유도하기 위해 투여된다. 다른 예에서, 화합물은 관해 상태를 유지하기 위해 투여된다.

하나의 예에서, 화합물의 하나 이상의 로딩(loading) 용량이 투여된 후 하나 이상의 유지 용량이 투여된다. 일반적으로, 로딩 용량은 유지 용량보다 더 높거나 짧은 시간 간격으로 투여된다.

예를 들어, 항체 또는 화합물의 1개 또는 2개 또는 3개 이상의 로딩 용량이, 예를 들어 관해를 유도하기 위해 대상체에게 투여된 후 지속적인 유지 용량이 이어진다. 이러한 유지 용량은 무기한으로 또는 대상체가 부작용을 겪을 때까지 또는 상태가 회복되거나 악화되어 하나 이상의 로딩 용량이 필요할 수 있을 때까지 계속 될 수 있다.

일부 예에서, 로딩 용량은 유지 용량보다 1.5 배 또는 2배 또는 3배 더 높다. 예를 들어 로딩 용량은 0.9mg/kg이고 유지 용량은 0.3mg/kg이거나 로딩 용량은 0.3mg/kg이고 유지 용량은 0.1mg/kg이거나 로딩 용량은 0.6 mg/kg이고 유지 용량은 0.1mg/kg이 될 수 있다.

일부 예에서, 로딩 용량은 유지 용량보다 더 자주 투여된다. 예를 들어, 로딩 용량은 매주 또는 격주로 투여되고 유지 용량은 21일마다 투여된다. 이 경우 로딩 및 유지 용량의 용량은 동일하거나 다를 수 있다.

치료에 적절하게 반응하지 않는 대상체의 경우, 더 자주 또는 더 높은 용량이 투여될 수 있다.

또 다른 예에서, 부작용을 경험하는 대상체의 경우, 용량은 1주일에 수일에 걸쳐 또는 연속적으로 수일에 걸쳐 분할될 수 있다.

하나의 예에서, 부작용으로 호중구 감소증을 경험하는 대상체의 경우 간병인에게 치료중단을 지시할 수 있다. 예를 들어, 대상체가 연속 2일 이상 또는 연속 3일 이상 호중구 감소증을 경험하면 치료가 중단 될 수 있다.

하나의 예에서, 부작용으로 호중구 감소증을 경험하는 대상체의 경우 간병인은 다음 용량을 건너뛰도록 지시받을 수 있다. 예를 들어, 대상체가 연속 2일 이상 또는 연속 3일 이상 호중구 감소증을 경험하면 다음 용량을 건너뛸 수 있다.

선택적으로, 호중구 감소증을 앓고 있는 대상체는 호중구 감소증을 치료하기 위해 G-CSF 또는 GM-CSF로 치료될 수 있다.

본 발명의 광범위한 일반적인 범위를 벗어나지 않으면서 전술한 실시예에 대해 다양한 변형 및/또는 수정이 이루어질 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 본 실시예는 모든면에서 제한적이지 않고 예시적인 것으로 간주되어야 한다.

실시예 1 - G- CSFR에 결합하는 항체인 C1.2G의 안전성, 약동학(pharmacokinetics;PK) 및 약력학(pharmacodynamics;PD)이 건강한 성인 대상체에 게 투여됨

건강한 대상체에게 CSL324(본원에서 C1.2G라고도 함)의 단일 상승 용량(파트 A 및 B) 및 반복(파트 C) 정맥 내(IV) 주입의 안전성 및 내약성(tolerability)을 평가하기 위해 1 상 임상 시험이 수행되었다.

방법

이 시험은 건강한 인간 대상체에서 단일 상승 용량 및 반복 용량의 IV CSL324의 안전성, 내약성, PK 및 약력학(PD)을 평가하는 인간 최초, 단일 센터, 무작위 배정, 이중 블라인드(double-blind), 위약 대조 연구(placebo-controlled study)였다. 연구는 파트 A, B 및 C의 세 부분으로 구성되었다. 안전성, 내약성, PK 및 선별된 PD 데이터에 대한 정기적인 블라인드 검토가 안전 검토위원회( Safety Review Committee;SRC)에서 용량 선택을 안내하기 위해 수행되었다. 이 시험은 ANZCTR(Australian New Zealand Clinical Trials Registry)에 등록번호 ACTRN12616000846426, 제목 : "건강한 성인에서 CSL324의 안전성 및 내약성을 평가하기위한 용량 증량, 위약 대조 1 상 연구"에서 설명된다.

파트 A: 단일 상승 용량(Part A: Single Ascending Dose)

파트 A는 5개의 순차적 코호트(코호트 A1에서 A5)에 투여된 CSL324의 단일 상승 용량을 평가했다. 각 코호트는 1일에 CSL324(n = 4) 또는 위약(n = 2)을 받도록 무작위 배정된 6명의 대상체로 구성되었다. 5개의 순차적 코호트에 대해 0.1, 0.3, 1.0, 3.0 및 10mg/kg의 CSL324의 단일 상승 용량이 계획되었다. SRC의 권고에 따라 투여된 최고 용량은 1.0 mg/kg의 CSL324(Cohort A3); 코호트 A4 및 A5는 각각 0.6 및 0.8 mg/kg CSL324의 중간 용량을 받았다. 대상체는 85일까지 추적되었다.

파트 B- G- CSF챌린지(Challenge)가 있는 단일 상승 용량(Part B- Single Ascending Dose with G- CSF Challenge)

파트 B는 G-CSF 챌린지 동안 CSL324의 단일 용량을 평가했다. 코호트 B1, B2 및 B3은 각각 1일에 CSL324(n = 3) 또는 위약 (n = 1)을 받도록 무작위 배정된 4명의 대상체로 구성되었다. 코호트 B1은 0.1mg/kg CSL324를, 코호트 B2와 B3은 SRC의 권고에 따라 각각 0.3mg/kg CSL324를 받았다. CSL324 전후(-3 일, -2, -1, 1, 2 및 3 일)에 대상체에게 G-CSF 챌린지 (5μg/kg 필그라스틴)를 투여하였다. 코호트 B4는 1일에 CSL324(n = 4) 또는 위약(n = 2)을 받도록 무작위 배정된 6명의 대상체로 구성되었다. 대상체는 0.8mg/kg CSL324를 받고 CSL324 만(2일, 3일 및 4일) 후에 G-CSF 챌린지(5μg/kg 필그라스틴)를 투여받았다. 대상은 85 일까지 추적되었다.

파트 C - 반복 용량(Part C - Repeat Dose)

파트 C는 21일 간격으로 투여된 CSL324의 3회 반복 용량을 평가했다(1일, 22일 및 43일). 10명의 피험자는 CSL324(n = 6) 또는 위약(n = 4)을 받도록 무작위 배정되었다. 대상체들은 SRC의 권고에 따라 0.6mg/kg CSL324를 투여받았다. 대상은 126 일까지 추적되었다.

안전성, 약동학 (PK) 및 약력학 (PD) 평가

모든 연구 파트에서 안전성 평가에는 이상 반응(adverse events ;AE), 기립 성 도전을 포함한 활력 징후(vital signs including orthostatic challenge), 신체 및 신경 학적 검사(physical and neurological examination), 12-리드 심전도(12-lead electrocardiogram;ECG), ECG 원격 측정을 사용한 심장 모니터링, 임상 실험실 테스트 (혈액학, 혈액 화학, 응고, 및 소변 분석), 시각적 아날로그 척도로 측정 된 피로(fatigue measured on a visual analogue scale) 및 CSL324 면역 원성(CSL324 immunogenicity)을 포함한다.

CSL324는 혈청 (모든 코호트) 및 뇌척수액 (Cohort A5만 해당)에서 측정되었습니다.

PD 평가에는 호중구 기능적 속성(식세포 활성, 산화 버스트 활성(oxidative burst activity), G-CSF 수용체 인산 신호 변환기(G-CSF receptor phospho-signal transducer) 및 전사-3 신호 전달 활성화[pSTAT-3] [파트A 만 해당] 및 과립구 대 식세포 콜로니 자극 인자 [GM-CSF] 수용체 pSTAT-3 신호 전달 [파트A 및 C 만 해당]); 호중구 G-CSF 수용체 점유/포화 (파트A 및 C 만); 및 혈청 G-CSF, 사이토카인 및 케모카인을 포함한다.

포함물을 위한 진단 및 주요기준(Diagnosis and main criteria for inclusion)

건강한 남성 또는 여성 대상체는 체질량 지수(body mass index )가 18.5~32.0kg/m2(포함)이고 체중이 50kg 이상 100kg 미만인 18세 내지 55세의 서면 동의를 제공 한 사람이다. 여성 대상체는 비 출산 가능성이 있어야 했다; 남성 대상체와 그들의 여성 배우자/출산 가능성 파트너는 스크리닝에서 최종 IV 주입 후 90일까지 2가지 형태의 매우 효과적인 피임법을 사용해야 했다.

임상적으로 유의한 심혈관(cardiovascular), 위장(gastrointestinal), 내분비(endocrine), 혈액학(hematologic), 간(hepatic), 면역학적(immunologic), 대사(metabolic), 비뇨기과(urologic), 폐(pulmonary), 신경학(neurologic), 피부과(dermatologic), 정신과(psychiatric), 신장(renal) 및/또는 다른 주요 질병의 과거력이나 증거가 있는 경우, 조사자가 판단한 대로 정맥 혈전증(venous thrombosis), 적혈구 증가증(polycythemia) 또는 혈전 성애의 병력(thrombophilia); 자가 면역 질환의 병력(autoimmune disease); 순환 호중구 감소증(cyclic neutropenia) 또는 스크리닝 절대 호중구 수(Screening absolute neutrophil count;ANC) <2.0×109/L; 스크리닝 또는 현장 입원에서 확인된 임상적으로 중요한 이상; 맥박수 <40 또는> 100분당 박동, 평균 수축기 혈압> 14mmHg, 또는 스크리닝 또는 입원시 평균 확장기 혈압> 90 mmHg; 스크리닝에서 Fridericia의 공식> 450 msec를 사용하여 수정된 QT 간격; 또는 때때로 파라세타몰(paracetamol)을 사용하는 경우를 제외하고 (최대 2g/일) IV 주입 전 10일 이내에 처방되거나 처방되지 않은 약물을 사용한 대상체는 제외된다. 파트 A 및 B의 경우에만 문신이 있거나 피부 건강이 손상되었거나 켈로이드(keloid) 형성, 비대성 흉터(hypertrophic scarring) 또는 림프관 염(lymphangitis) 이력이 있는 대상체가 제외되었다.

CSL324 항체 용량 및 투여 방식

CSL324는 10mL 바이알(vials)에 주입하기 위한 멸균 용액으로 제공되었다. CSL324는 1일째에 대상체의 체중 및 코호트 용량에 의해 결정된 부피로 IV 투여되었다.

0.9% 염화나트륨 위약(Placebo)을 1일차에 대상의 체중과 코호트 용량에 따라 CSL324와 동등한 부피로 IV 투여했다.

모든 CSL324 주입은 주사기 펌프(용량≤ 1.0 mg/kg)를 사용하여 팔뚝 정맥(forearm vein)에서 60±5분 이상 제공되었다.

치료 기간

파트 A 또는 B의 피험자는 1일에 단일 용량으로 CSL324 또는 위약을 받고 85일까지 추적했다. 파트 C의 피험자는 1, 22, 43일에 21일 간격으로 CSL324 또는 위약을 3회 투여 받았다. 그리고 126일까지 추적되었다.

평가 기준 :

1차 종료점 : 연구 중 AE의 발생률, 인과 관계 및 심각도. 2차 종료점 :

혈청 내 CSL324의 약동학적 매개 변수(parameters) :

파트 A 및 B :

AUC₀ _- _inf _-시간 0에서 시간 무한대로 외삽 된 농도-시간 곡선 아래 영역

AUC₀ _-t - 시간 0에서 수집 시간 t까지의 농도-시간 곡선 아래 영역

C_max _-최대 농도

CL_tot _-IV 투여 후 전체 전신 청소율(Total systemic clearance after IV dosing)

t_max _-최대 농도 시간

t_{½ -}터미널 제거 반감기(Terminal elimination half-life)

V_z _-터미널 제거 단계 동안 IV 투여 후 분포 부피

파트 C :

AUC₀ _-tau - 시간 0에서 수집 시간 t까지의 농도-시간 곡선 아래 영역

AUC₀ _-tau - 정상 상태에서 투여 간격 동안 농도-시간 곡선 아래 영역

C_min,ss _- 정상 상태에서 최소 (최저) 농도

C_max,ss _-정상 상태에서 최대 농도

t_max,ss - 정상 상태에서 최대 농도 시간

t_½,ss - 정상 상태에서 터미널 제거 반감기

CL_tot,ss - IV 투여 후 정상 상태에서 전체 전신 청소율

V_z,ss - 터미널 제거 단계 동안 IV 투여 후 정상 상태에서의 분포 부피

뇌척수액(cerebrospinal fluid) 내 CSL324 및 G-CSF 농도(Cohort A5 만 해당).

혈청에 항-CSL324 항체의 존재.

CSL324 이후 G-CSF 챌린지 후, 1일째부터 ANC의 최대 효과(maximum effect;Emax) 및 ANC (AUEC0-24, ANC)에 대한 시간 0시간 내지 24시간의 효과 곡선 아래 영역을 포함한 ANC에 대한 비 구획 PD 매개 변수(Non-compartmental PD parameters) 또는 위약 투여(파트 B 만 해당).

통계적 방법

집단 분석

전체 분석 세트(Full Analysis Set;FAS)는 서면 동의를 제공하고 스크리닝 후 연구에 포함될 자격이 있는 모든 대상체로 구성되어 있다. FAS는 인구 통계, 기준 특성 및 면역 원성(immunogenicity)에 사용되었다. 안전 집단은 최소 1회 용량의 CSL324를 받은 모든 대상체로 구성되었으며,받은 용량과 약물에 따라 분석되었으며 모든 안전 분석에 사용되었다.

PK 집단은 적어도 1회 용량의 CSL324를 받고 적어도 1회 측정된 PK 농도를 갖고 모든 PK 분석에 사용된 모든 대상체로 구성되었다.

PD 집단은 적어도 1회 용량의 CSL324를 받고 PD 데이터가 CSL324 주입 전 및 CSL324 주입 후 적어도 1 시점 동안 이용 가능한 모든 대상체로 구성되었다. PD 집단은 모든 PD 분석에 사용되었다.

일반적인 고려사항

모든 데이터는 대상체별로 나열되었다. 기술 통계를 사용하여 요약 통계를 제공했다. 모든 통계 테스트는 양면으로 이루어졌으며 달리 명시되지 않는 한 5% 유의 수준에서 수행되다.

약동학( Pharmacokinetic;PK ) 분석

PK 매개 변수는 실제 샘플링 시간을 사용한 표준 비 구획 분석에 의해 혈청 CSL324 농도에서 파생되었다. 용량 비례성( Dose proportionality)은 파트 A와 파트 B에서 개별적으로 단일 용량 코호트에 대한 PK 매개 변수 C_max, AUC₀ _-t 및 AUC₀ _- _inf에 대해 평가되었다. 용량 비례성은 로그 변환된 체중 조정 용량 수준을 독립 변수로 포함하는 power 모델을 사용하여 분석되었다. 90% 신뢰 구간(confidence interval;CI)이 0.85 내지 1.15의 임계 구간(critical interval) 내에 있는 경우 PK 매개 변수와 용량 사이의 선형 비례성(Linear proportionality)을 선언 할 수 있다. PK 매개 변수 C_max, AUC₀ _-t 및 AUC₀ _- _inf와 총 용량(mg) 및 체중 조정 용량 (mg/kg)의 상관 관계는 Pearson 상관 분석을 사용하여 파트 A 및 파트 B에 대해 조사되었습니다.

G-CSF의 병용(파트 A) 및 병용(파트 B)의 CSL324의 상대적 생체 이용률(relative bioavailability)은 혼합 효과 모델(고정 효과로 처리하고 대상을 무작위 효과로 처리함) 및 로그-변환된 PK 매개 변수 C_max, AUC₀ _-t 및 AUC₀ _- _inf를 사용하여 평가했다. (파트 A) 및 G-CSF의 공동 투여(파트 B)와 함께 CSL324의 투여는 기하 평균 비율(geometric mean ratio)에 대한 90% CI가 비교에서 80%와 125% 사이인 경우 동등한 것으로 간주 되었다.

최소 최저 농도(minimum trough concentration;Cmin)의 분산 분석(analysis of variance;ANOVA)을 반복 측정하여 21일마다 CSL324 (파트 C) 3회 투여 후 정상 상태 달성을 평가했다. 첫 번째 중요하지 않은 비교는 정상 상태에 도달 한 투여 간격이다.

약력학(Pharmacodynamic;PD)분석

PD 매개 변수는 표준 비 구획 분석을 사용하여 도출되었다. 혈청 사이토카인 및 케모카인 농도, 호중구 식세포 및 산화적 파열 활성, G-CSF 수용체 점유 및 파트 A에 대한 pSTAT-3 신호에 대한 PD 매개 변수를 파트 A의 각 CSL324 용량과 파트 A의 풀링(pooled)된 위약 그룹간에 ANOVA를 통해 비교했다.

PD 매개 변수와 CSL324 총 용량(mg) 및 체중 조정 용량(mg/kg)의 상관 관계는 Pearson 상관 분석을 사용하여 조사되었다.

안정성 분석

치료 응급 AE(Treatment-emergent AEs;TEAE)는 규제 활동을 위한 의료 사전 (MedDRA, 버전 20.1)을 사용하여 부호화 되었다. 각 TEAE의 심각도는 Club Phase 1 기준을 사용하여 등급이 매겨진 비정상 ANC 값의 TEAE를 제외하고 국립 암 연구소 이상 반응 버전 4에 대한 공통 용어 기준을 사용하여 조사자가 평가했다. CSL324 클리어런스(CLtot 또는 CLtot, ss) 및 선택된 PD 매개 변수(ANC 및 G-CSF 농도)에 대해 누적 양성 및 음성 면역 원성 결과를 가진 대상 간의 박스 플롯(Box plot) 비교를 수행했다.

결과

대상체 배치

총 58명의 대상체가 사전 동의를 제공하고 연구에 무작위로 배정되었다. 파트 A(n=30)에서 4명의 대상체는 CSL324를, 2명의 대상체는 5개의 코호트(코호트 A1 ~ A5) 각각 에서 위약을 받았다. 파트 B (n=18)에서, 3명의 대상체는 CSL324를, 1명의 대상체는 각 코호트 B1 ~ B3에서 위약을, 4명의 대상체는 CSL324를, 2명의 대상체는 코호트 B4에서 위약을 받았다. 파트 C (n=10)에서 6명의 대상체는 CSL324를, 4명의 대상체는 위약을 받았다.

전체적으로 55명의 대상체(94.8%)가 연구를 완료했다; 동의 철회로 인해 위약 치료 대상체 1명은 파트 A (Cohort A5)에서 중단되었고, 다른 이유로 파트 C에서 3회 용량을 완료한 후 2명의 대상체(CSL324 치료 1명, 위약 치료 1명)가 중단되었다. 연구의 파트 C를 완료한 두 대상체는 SRC의 권고에 따라 CSL324 Dose 3을 받지 못했다.

인구통계(Demographics)

연구 대상은 남성(100%)이었고 주로 백인 (65.5%)이었으며 평균 연령은 30.3세(범위:19세 내지 54세)였다. 파트 A, B 또는 C에서 대상체간에 인구 통계 학적 특성에는 큰 차이가 없었다. 전반적으로, 대상체의 의료 및 수술 이력은 건강한 지원자 집단과 일치했다.

약동학

CSL324의 단일 IV 투여 후, 평균 혈청 CSL324 농도는 주입이 끝날 때 정점에 이르렀으며 C_max는 CSL324 투여량에 대한 선형 비례를 나타낸다(도 1). AUC₀ _-t 및 AUC_0-inf로 측정 된 CSL324에 대한 노출은 더 높은 CSL324 선량으로 증가했지만 두 매개 변수에 대한 신뢰 한계가 0.85 내지 1.15 임계 간격을 벗어났기 때문에 선량 선형성을 입증하지 못했다(추정 기울기 1.68 [90% CI : 1.58 AUC₀ _-t의 경우 1.79] 및 AUC_0-inf의 경우 1.67 [90% CI : 1.56 ~ 1.78]). CSL324의 평균 CLtot는 시험된 용량 범위에서 일정하지 않았으며 CSL324 용량이 10배 증가하면 80% 감소했다.

단일 IV 투여 후 평균 t_½는 0.1 mg/kg CSL324의 경우 40.5시간에서 1.0 mg/kg CSL324의 경우 206시간 범위였다. 0.6mg/kg CSL324를 21일 간격으로 3회 투여한 후 평균 t_½는 251시간이었다.

CSL324 주입 전후에 G-CSF의 투여는 AUC₀ _- _inf 및 AUC₀ _-t로 측정된 단일 CSL324 용량의 상대적 생체 이용률을 낮추고 C_max에 최소한의 영향을 미쳤다. G-CSF에 의한 CSL324 노출의 감소는 CSL324 투여 후와 비교하여 CSL324 투여 전후에 G-CSF를 투여했을 때 더 컸다.

최저 농도를 기준으로 21일 간격으로 0.6mg/kg CSL324를 3회 투여한 후에도 정상 상태가 달성되지 않았다. 최고 평균 혈청 CSL324 농도는 Dose 1 및 Dose 3 이후 유사했다.

CSL324는 단일 0.8mg/kg CSL324 투여 후 뇌척수액에서 검출되지 않았다.

약력학

평균 ANC는 위약과 비교할 때 G-CSF 챌린지 없이 투여된 단일 및 반복 CSL324 투여 후 감소했다. 단일 CSL324 용량에 걸쳐 평균 ANC 최소 효과(minimum effect;Emin)는 1.0mg/kg CSL324 용량(1.3×109/L)에서 가장 낮았고 위약(2.49×109/L)에서 가장 높았다. 평균 ANC Emin은 반복 CSL324 투여 후 1×109/L로 감소했으며, Emin은 Dose 3(약 48일) 후에 발생했다.

더 높은 용량의 CSL324(0.3 및 0.8mg/kg)는 상승된 ANC의 G-CSF 매개 자극을 억제했다; G-CSF 챌린지에 대한 ANC 반응은 0.1mg/kg CSL324 및 위약과 유사했다. ANC는 AUC_0-t를 기준으로 CSL324 용량 및 CSL324 노출과 음의 상관관계가 있었다.

CSL324는 호중구 식세포 및 산화적 파열 활성으로 생체 외에서 측정했을 때 호중구 기능에 명백한 영향을 미치지 않았다. 더 높은 단일 용량의 CSL324(0.3 내지 1.0 mg/kg)는 위약과 비교하여 호중구 pSTAT-3 신호 전달의 생체 외 자극에 대해 G-CSF 절반-최대 유효 농도(half-maximal effective concentration;EC50)를 증가 시켰다; 그러나 분석 데이터는 큰 가변성을 보여 해석을 제한했다. 자극된 GM-CSF 대 자극되지 않은 호중구 pSTAT-3 신호 전달의 비율에 대한 CSL324의 일관된 효과는 관찰되지 않았다.

호중구 G-CSF 수용체 포화는 0.1 내지 1.0mg/kg의 단일 CSL324 용량으로 빠르게 달성되었다. 약 100% 수용체 점유 기간은 CSL324 용량이 증가함에 따라 증가했으며, 0.1mg/kg CSL324의 경우 3일, 0.8 및 1.0mg/kg CSL324의 경우 29일까지 지속되었다(도 2).

단일 CSL324 용량은 위약에 비해 최고 혈청 G-CSF 농도 및 노출을 증가시켰으며, G-CSF AUEC₀ _-t 및 AUEC₀ _-24 는 CSL324 전신 노출 및 용량과 양의 상관관계를 나타냈다. CSL324를 반복 투여하면 혈청 G-CSF가 지속적으로 증가했으며 최대 농도는 각 투여 후 2일에 발생했다. G-CSF는 단일 0.8mg/kg CSL324 투여 후 뇌척수액에서 검출되지 않았다.

사이토카인 및 케모카인의 혈청 농도는 위약과 비교하여 CSL324 투여 후 시간이 지남에 따라 명확한 패턴을 보이지 않았다. 혈청 인터루킨(interleukin;IL) -8 농도는 CSL324 및 위약에서 약간의 증가를 보였으며, 이는 IV 주입의 효과를 시사한다. 혈청 IL-1 수용체 길항제(Serum IL-1 receptor antagonist;IL-1RA) 수준은 G-CSF 챌린지 후 증가한 다음 더 높은 CSL324 용량 (0.3 내지 1.0mg/kg) 투여 후 감소했다.

안정성

전반적으로 TEAE의 빈도는 CSL324 (82.1%) 및 위약 (94.7%)과 유사했다. 치료 관련 TEAE는 전체 CSL324 그룹에서 64.1%, 위약 그룹에서 57.9%에서 발생했다. 위약보다 CSL324에서 더 빈번하게 발생한 TEAE는 호중구 감소증(19.2% 대 대상체 없음), 주입 부위 통증(7.7% 대 대상체 없음) 및 코울혈(Nasal congestion)(7.7 % 대 대상체 없음)이었다. TEAE는 심각하거나 치명적이지 않았다. 2명의 대상체는 SRC의 권고에 따라 Dose 3을 받지 않았다.

용량 코호트 전반에 걸쳐 전체 TEAE 빈도에서 CSL324 용량 의존 경향이 없었다. 모든 피험자(100%)는 CSL324 또는 위약을 반복 투여한 후 TEAE를 경험했다.

대부분의 TEAE는 1등급 또는 2등급 이었다. CSL324 치료 후 모든 치료 관련 TEAE는 진행중인 2등급 홍반의 한 TEAE를 제외하고 안전 후속 방문(Safety Follow-up Visit)으로 해결되었다.

CSL324는 용량 의존적 방식으로 ANC를 감소시켰으며, 3등급 중증도까지 호중구 감소증을 특징으로 했으며, 이는 다음날 자발적으로 해결되었다(도 5 및 도 6). 1명의 대상체는 1.0 mg/kg CSL324의 단일 용량 후 4일째에 3등급 호중구 감소증의 TEAE를 가졌고(도 5), 4명의 대상체는 반복 0.6 mg/kg CSL324 용량과 함께 7개의 3등급 호중구 감소증을 가졌다(도 6). 3등급 호중구 감소증의 1개 이상의 사건을 경험 한 2명의 피험자는 이용 가능한 안전성, 내약성, PK 및 선택된 PD 데이터를 검토한 후 SRC의 권고에 따라 파트 C에서 CSL324 Dose 3을 받지 못했다. 3등급 호중구 감소증의 모든 TEAE는 다음날까지 치료없이 자발적으로 해결되었다.

호중구 감소증 2등급 또는 3등급에 대한 기준을 충족하는 ANC는 단일 CSL324 용량으로 치료받은 20명의 대상체 중 6명이 경험했으며, CSL324 투여 후 1일 내지 4일 이내에 발생하는 경향이 있었다. 반복적인 CSL324 용량을 받은 6명의 대상체 중 5명이 2등급 또는 3등급 호중구 감소증 기준을 충족하는 ANC를 가졌으며, 이는 Dose 3 이후에 발생하는 경향이 있었다.

주입 반응(infusion reactions)이나 국소 내성 반응(local tolerability reactions)은 관찰되지 않았다. 주입 부위 통증( infusion site pain), 천자 부위 홍반(puncture site erythema) 및 천자 부위 통증(puncture site pain)은 CSL324 치료 대상자의 ≤5% 였으며 위약 치료 대상은 없었다.

실험실 매개 변수, 기립성 챌린지(orthostatic challenge), ECG, 신체적 발견 또는 피로 점수(fatigue scores)를 포함한 활력 징후에서 안전 신호가 확인되지 않았다.

단일 및 반복 IV 투여 후 항-CSL324 항체를 개발한 대상체는 없었다.

결론

CSL324는 최대 0.8mg/kg의 단일 용량으로 또는 21일 간격으로 0.6mg/kg의 반복 용량으로 투여될 때 안전하고 잘 견뎌냈다. CSL324는 용량 의존적 방식으로 ANC 수준을 감소시켰으며, 중증도 3등급까지 호중구 감소증에 의해 특징되어 지며 다음날 치료없이 자발적으로 해결되었다. 전신 CSL324 노출은 용량 증가에 따라 증가했으며, C_max는 CSL324 용량에 대한 선형 비례를 나타낸다. 더 높은 CSL324 용량은 t_1/ ₂ 가 더 길고 CL_tot가 더 느렸다. CSL324는 빠른 G-CSF 수용체 포화를 나타내었고 염증 매개체에 대한 최소한의 영향으로 더 높은 용량에서 ANC의 G-CSF 매개 자극을 억제했다.

실시예 2 - G- CSFR에 결합하는 항체인 CSL324로 호중구 피부병 치료.

연구 설계

HS 및 PPP를 가진 피험자에게 정맥으로 투여된 CSL324의 반복 용량의 안전성 및 PK를 조사하기 위해 다기관, 공개 라벨 2 요법 반복 투여 연구(open-label two regimen repeat-dose study)가 사용된다. 이 연구는 또한 HS 및 PPP 환자에서 CSL324의 예비적인 효능을 조사한다.

이 연구는 28일 스크리닝 기간, 15주 치료 기간 및 9주 추적 기간으로 구성된다. 이 연구에는 2개의 코호트가 있다. 각 코호트는 HS(n=10) 또는 PPP(n=10)를 가진 20명의 대상체로 구성된다(도 3). CSL324는 1일, 22일, 43일, 64일 및 85일에 21일 간격으로 0.3 mg/kg CSL324의 60분 IV 주입으로 코호트 # 1에 등록된 피험자에게 초기에 투여된다. CSL324는 코호트 # 1에서 CSL324를 투여받은 처음 5명의 대상체가 15주 치료 기간을 완료할 때 코호트 # 2의 대상체에게 투여된다. 코호트 # 2에 대한 가장 안전한 CSL324 용량 (≥0.1 및 ≤0.6 mg/kg)은 PK/ANC 시뮬레이션 모델링(PK/ANC simulation modelling)에 의해 결정되며, 이는 15주 치료기간을 완료하기 위해 처음 5명의 코호트 # 1 대상체의 PK 및 ANC 데이터로 업데이트 된다(도 4).

투여 당일, 대상체는 PK, 혈액학, 생화학 및 사이토카인/케모카인 농도 및 기타 선별된 혈청 내 바이오마커(biomarkers)에 대한 안전성 관찰 및 혈액 채취을 위해 주입 종료 후 3시간 이상 연구 센터에 남아 있어야 한다. 치료 기간 및 추적 기간 동안 임상 효능을 평가하고 조직 생검(tissue biopsies)을 시작(CSL324 투여 전 1일) 및 치료 기간 종료(CSL324 5회 용량을 모두 투여 한경우 105일 또는 조기 치료 중단을 위한 최종 복용량 3주 후)에 수집한다.

CSL324 항체

항체 용량, 투약 요법 및 투여

물질명	CSL324
활성물질	재조합 항 G-CSF 수용체 단일클론항체
투약 형태	10 mL 바이알(vials)에 주입하기위한 멸균 용액.
용량	코호트 # 1 - 0.3 mg/kg 코호트 # 2 - 0.1-≤0.6mg/kg
투약 요법	CSL324의 5회 용량은 1일, 22일, 43일, 64일 및 85일에 21일마다 투여된다
투여 방법	정맥 주입
투여의 해부학적 위치	팔

투약 요법의 정의(Dosing regimen justification)

잠재적인 PK/PD(ANC) 관계를 조사하기 위해 HS 또는 PPP 환자에게 두 가지 용량을 투여한다. 코호트 # 1에서 이 연구에서 테스트 할 시작 투약 요법은 총 5회 용량에 대해 21일마다 0.3mg/kg이다. 이 시작 투약 요법은 실시예 1 에 기술된 1 상 연구에서 얻은 안전성, PK 및 PD 데이터를 기반으로 선택된다. 사이노몰구스 원숭이의 전 임상 결과도 21일마다 총 5회 투여를 지원하는 것으로 간주되었다.

실시예 1의 결과는 CSL324가 최대 0.8mg/kg의 단일 용량으로 또는 21일 간격으로 0.6mg/kg의 반복 용량으로 투여될 때 안전하고 잘 견딘다는 것을 보여 주었다. 0.6 mg/kg의 3회 다중 투여 후 CSL324의 최소 축적이 관찰되었으며, 평균 (SD) 터미널 반감기는 251(55.2) 시간이었다.

0.3 및 0.8mg/kg의 단일 CSL324 용량은 G-CSF에 의한 ANC 수준의 자극을 억제하는 작용 메커니즘을 확인했다; 0.1mg/kg CSL324 용량에서 최소 효과가 나타났다. CSL324의 단일 또는 다중 용량 후, G-CSF 수용체 점유 (receptor occupancy;RO)가 빠르게 발생하여 테스트 된 최저 용량 (0.1 mg/kg)에서도 ~ 100% 점유에 도달했다, 그리고 복용량이 증가함에 따라 이 수준에서 더 오랜 기간 동안 지속되었다. 또한, 0.6 mg/kg의 세 번째 용량을 투여한 후 최대 27일 동안 수용체 점유율은 ~ 100%였으며, 이는 세 번의 용량 후 21일의 투약 간격 동안 완전한 수용체 점유율을 나타낸다.

CSL324는 안전하고 잘 견디지만, 1mg/kg의 단일 투여 후 1명의 대상체(1건)와 0.6mg/kg의 3회 반복 투여 후 4명의 대상체(7건)에서 일시적인 3등급 호중구 감소증이 관찰되었다. 코호트 # 2에 대한 가장 안전한 CSL324 용량(≥ 0.1 및 ≤ 0.6 mg/kg)은 PK/ANC 시뮬레이션 모델링에 의해 결정되며 사이노몰구스 원숭이의 GLP 독성 연구와 비교하여 노출 안전 한계가 뒷받침된다. GLP 독성 연구(APQ0045)에서 CSL324는 12주 동안 느린 볼루스 주입( slow bolus infusion)으로 매주 1회 투여되었다. CSL324는 사이노몰구스 원숭이(수컷 및 암컷 모두)에서 잘 견디었으며 시험 된 물품 관련 독성학적 발견이 관찰되지 않았으며, 그 결과 사용된 최고 용량 인 100mg/kg의 NOAEL이 발생했습니다. 현재 연구에서 제안된 투약 요법에 대한 안전 한계는 AUC 및 Cmax에 대해 각각 약 122 및 231이었다.

연구 포함 및 제외 기준

연구 포함 기준

포함 기준 이론적 해석
1. 화농성 한선염의 경우: a. HS의 확진 된 임상 진단 b. IHS4 지침에 따라 중등도에서 중증 HS로 진 단 됨 (IHS4 ≥ 4) c. 대상체는 연구 방문이 끝날 때까지 1일 전 적어도 2)주 동안 매일 살균 세척 (클로르 헥시딘(Chlorhexidine) 4%)을 사용하는 데 동의한다.	a. HS가 확인 된 환자가 연구에 등록하도록 보 장하기 위해 b. 치료 효과 평가를 최적화하기 위해 중등도에 서 중증 HS의 질병 중증도 강화 c. 가능한 2 차 감염과 관련된 염증 조절
2. 손바닥 발바닥 농포 성 건선의 경우: a. 다른 형태의 농포증 또는 건선과 구별되는 확진된 PPP 진단 b. ppPASI 점수≥12	a. PPP가 확인된 환자가 연구에 등록하도록 보 장하기 위해 b. 치료 효과 평가를 최적화하기위한 ppPASI> 12 의 질병 심각도 강화
3. 18세에서 75세 사이의 남성 또는 여성.	ND 집단의 안전성을 평가하기 위한 최초의 임상 연구; 모든 질병은 남성과 여성 모두에게 영향 을 미친다; 삶의 모든단계에서 발생할 수 있다.

연구 제외 기준

제외 기준	이론적 해석
1. 병용 약물 및 치료에 '허용되지 않음'으로 표시된 모든 약물 및 치료를 사용한 치료.	연구 약물 평가에 대한 간섭을 제한하기 위해
2. 골수 증식성 질환(myeloproliferative disease)의 역사	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
3. 악성 종양의 동시 진단(피부의 기저 세포(basal cell) 또는 편평 세포 암종(squamous cell carcinoma) 이외의 2년 이전에 재발 또는 전이 없음)	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
4. 조사자 및/ 또는 후원자에 의해 결정된 바와 같이 중증, 진행성 및/또는 조절되지 않는 신 장, 간, 혈액, 내분비, 폐 또는 심장 질환의 현재 또는 최근 임상적으로 유의미한 병력이있 는 대상체.	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
5. 면역 억제 조건이 있는 대상체.	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
6. 금지 약물 섹션에 설명 된대로 면역 억제 또는 면역 조절 요법을 받고있는 대상체	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
7. 활동성 감염 및/또는 1일 전7 일 이내에 38 °C 이상의 발열의 임상 징후. 조사자 및/또 는 후원자 재량에 따라 그러한 개인에 대한 연구 시작이 연기 될 수 있습니다.	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
8. HIV, B 형 또는 C 형 간염 감염이 확인 된 대 상체	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
9. 아스파르테이트 아미노트랜스퍼 라제(aspartate aminotransferase) 또는 알라 닌 아미노 트랜스퍼 라제(alanine aminotransferase)> 2 x 정상 또는 호중구 감 소증의 상한선 (ANC <2 x 109 / L로 정의 됨) 을 포함하여 임상적으로 중요한 실험실 이상 이있는 대상체	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
10. 지난 1년 이내에 만성 알코올 또는 약물 남 용 이력	대상체의 안전을 고려하고 연구 약물 평가 및 만족스러운 연구 수행에 대한 간섭을 제한한다.
11. 임신, 모유 수유 중이거나 연구 기간 동안 또는 EOSV 후 30일 이내에 임신할 계획이있 는 여성 대상체 또는 연구 기간 동안 허용되 는 피임 방법을 사용하지 않으려는 임신 가 능성이 있는 여성 대상체.	비 임상 생식 연구가 수행되지 않았다.
12. 연구 기간 동안 또는 EOSV 후 30일 이내에 임신을 계획중인 파트너가 있는 남성 대상체 또는 연구 기간 동안 허용되는 피임 방법을 사용할 의사가 없을 가능성이 있는 출산 파 트너가 있는 남성.	비 임상 생식 연구가 수행되지 않았다.
손바닥 발바닥 농포증의 경우: 13. 심상성 건선(psoriasis vulgaris)의 동시 배 경.	다양한 종류의 건선으로 인해 동시 심상성 건선(concurrent psoriasis vulgaris)을 제외하 면 명확한 PPP 집단이 연구에 등록될 수 있다.
손바닥 발바닥 농포증의 경우: 14. 20 개 이상의 배수 누공이있는 피험자	심각하고 치료 불가능한 질병이 있는 환자를 피 하라

안정성 평가

본 연구에서 수행된 안전성 평가와 관련된 임상 절차는 아래 표 4에 나와있다.

안정성 평가

평가	설명
임신 / FSH 테스트	융모 성선 자극 호르몬 베타(Choriogonadotropin Beta)(베타-인간 융모 성선 자극 호르몬 [β-hCG])에 대한 혈청 검사를 통한 임신 테스트
신체 검사	사이트의 표준 절차에 따라
12 리드 ECG (12-lead ECG)	심박수 PR 간격 QRS 기간 QT 간격 QTcB 간격 QTcF 간격 통역 (조사자의 전반적인 해석)
부작용	모든 이상 반응의 평가(예:인과 관계/관련성, 심각성, 심각성) 특별한 관심의 이상 반 : o Gr3 (심각)/Gr4(생명을 위협) 호중구 감소증 o 감염
활력 징후	혈압 (수축기 및 이완기) 온도 호흡수 신장 맥박수 무게
소변 검사(딥스틱) (Urinalysis (dipstick)	비중 아질산염 단백질 pH 케톤 포도당 백혈구 에스터레이즈 빌리루빈 (Leukocyte Esterase) (Bilirubin) 오컬트 블러드 우로 빌리 노겐 (Occult Blood) (Urobilinogen)
혈액학	백혈구 (백혈구 [White blood cell;WBC] 수) 헤모글로빈 (Hemoglobin;HGB) 헤마토크릿 (Hematocrit;HCT) 적혈구 (적혈구 [Red Blood Cell;RBC] 수) 적혈구 지수 : 평균 체적 (Mean Corpuscular Volume;MCV); 평균 소체 헤모글로빈 (Mean Corpuscular Hemoglobin; MCH); 평균 체내 헤모글로빈 농도 (Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration;MCHC); 적혈구 분포 폭 (Erythrocyte Distribution Width;RDW) 혈소판(Platelets) 백분율 차이 및 절대:호중구; 호중구 밴드 형태; 림프구; 단핵구; 호산구; 호염기구;망상 적혈구
생화학	나트륨(Na) 아스파르트 산 아미노 전이 효소 (Aspartate Aminotransferase;AST) 칼륨(K) 젖산 탈수소 효소 (Lactate ;DehydrogenaseLDH) 염소(Cl) 감마-글루 타밀 전이 효소 (Gamma-Glutamyl Transferase;GGT) 중탄산염(HCO3) 빌리루빈-총(Bilirubin-total) 이산화탄소-총(CO2) 직접 빌리루빈(Direct Bilirubin) 칼슘(Ca) 마그네슘(Mg) 요소 질소(Urea Nitrogen;BUN) 인산염(PO4) 요소 C 반응성 단백질(C Reactive Protein;CRP) 크레아티닌(Creatinine) 콜레스테롤-총(Cholesterol-total) 포도당 트리글리세리드(Triglycerides) 단백질-총 HDL 콜레스테롤 알부민(Albumin) LDL 콜레스테롤 알칼리성 인산 분해 효소 요 산염(요산)(Urate (Uric Acid)) (Alkaline Phosphatase) 알라닌 아미노 전이 효소(ALT) 크레아틴 키나아제 (CK; CPK) (Alanine Aminotransferase) (Creatinine Kinase)
면역원성 (Immunogenicity)	CSL324에 대한 결합 항체의 존재에 대해 분석된 혈청

절대 호중구 수(Absolute neutrophil count;ANC ) 및 체온 모니터링

각 대상체의 ANC는 예정된 시점에 연구를 통하여 모니터링 된다.

대상체가 용량 투여 전날에 3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 기록한 경우, 반복 ANC 평가가 24시간 이내에 수행되고 CSL324의 투여량을 허용하기 위해 2개의 ANC 값의 평균이 ≥800/mm3이어야 한다. 2개의 ANC 값의 평균이 <800/mm3이면 대상체는 추가 투여를 받지 않는다. 투여 전날 3등급 또는 4등급 호중구 감소증에 대한 반응으로 반복 ANC 측정을 수행하기 위해, 허용되는 투여 기간(+3일) 내에서 용량은 지연될 수 있다.

대상체가 투약 전날이 아닌 다른 날에 3등급 (Gr3) 호중구 감소증을 기록하는 경우, 이 단일 Gr3 ANC 값이> 38.3 ° C 또는> 38.0 ° C의 단일 고실 온도(tympanic temperature)와 1시간 이상 지속 및/또는 임상적으로 중요한 감염 징후 또는 증상과 결합되지 않는 한, 대상체는 연구를 계속할 수 있다. 대상체가 치료 또는 추적기간 동안 다른 시간에 3등급 호중구 감소증을 앓고 있는 경우, 가능한 한 가깝게 대상체의 ANC 수준을 모니터링하기 위해 예정되지 않은 ANC 측정을 수행 할 수 있다.

대상체가 투여 전날이 아닌 다른 날에 4등급 호중구 감소증을 기록하는 경우, 반복 ANC 평가를 24시간 이내에 수행해야 하며 반복 ANC 값이 ≥500/mm3이면 연구를 계속할 수 있다. 반복 ANC 값이 <500/mm3이면 대상체는 추가 투여를 받지 않는다.

3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 가진 대상체는 체온 상승을 포함하여 감염의 징후 및/또는 증상을 경계하고 즉시 보고해야 한다. 모든 연구 대상에게는 체온계가 제공되며 매일 일정한 시간에 구강 온도를 모니터링하도록 요청받는다. 대상체는 구강 온도 측정값이 37.2 °C를 초과하는 경우 즉시 해당 사이트에 연락하도록 요청하고 임상 평가를 위해 예정되지 않은 방문에 참석하도록 요청 받는다.

효능 평가

화농성 한 선염 ( Hidradenitis suppurativa )

총 농양 및 염증성 결절 수(Total abscess and inflammatory nodule count;AN 수): 결절(염증성 결절)은 직경이 10mm를 초과하는 융기된 3차원, 원형, 침윤 병변(infiltrated lesion)이다. 농양은 부드럽지만 직경이 10mm 이상인 변동하는 질량으로서, 홍반 부위(erythematous area)로 둘러싸여 있다; 농양 중간에 고름이 있다. 배수 터널/누공(draining tunnel/fistula)은 융기되고 부드럽지만 가변적인 길이와 깊이의 변동하는 세로 질량(longitudinal mass)으로서, 피부 표면에서 끝나고 때때로 흘러나오는 액체이다 (Lipsker et al. 2016, Dermatology 232 : 137-42). 배수 터널/누공의 평가와 결합 된 AN 계수는 1, 22, 43, 64 및 85일뿐 만 아니라 105, 126, 147 및 168일(EOSV)에 투여하기 전에 스크리닝에서 평가되며, 다음을 포함한 HS의 동적 변화를 평가하기 위한 다양한 점수이다:

화농성 한 선염 임상 반응( Hidradenitis Suppurativa Clinical Response;HiSCR): HiSCR은 감도, 측정 일관성 및 사용 편의성을 개선하기 위해 2014 년에 개발 및 검증 되었다(Kimball et al. 2014, Br J Dermatol 171 : 1434-42). HiSCR은 임상 연구 및 일상 진료에 적용할 수 있는 HS의 염증 발현에 대한 유효하고 반응이 높으며 의미있는 임상 종점이다. 농양이나 배액 누공수의 증가없이 총 AN 수에서 기준선에서 50% 감소로 정의된다. 이 측정은 여러 단계 HS 2상 연구(kimball, Sobell, et al. 2016, J Eur Acad Dermatol Venereol 30 : 989-94; Kanni et al. 2018, J Invest Dermatol 138 : 795-801; Tzanetakou et al. . 2016, N Engl J Med 320 : 365-76) 및 PIONEER HS 3 상 임상 연구(Kimball, Okun, et al. 2016, N Engl J Med 375 : 422-34)에 사용되었다.

국제 화농성 한 선염 중증도 점수 시스템(International Hidradenitis Suppurativa Severity Score System;IHS4 ): IHS4는 HS(Zouboulis et al. 2017, Br J Dermatol 177:1401-09)의 동적 중증도 평가를 위한 검증된 도구이며 질병 중증도 단면보다는 치료 반응을 평가하도록 설계 되었기 때문에 HiSCR 평가를 개선합니다(Kimball et al. 2014, Br J Dermatol 171 : 1434-42). IHS4 점수(점)=(결절의 수에 1을 곱한 값)+(농양의 수에 2를 곱한 값)+[배액 터널 (누공/부비동)의 수에 4를 곱한 값]이다. 3점 이하는 경증 HS, 4-10 점은 중등도 HS, 11점 이상은 심한 HS를 의미한다(Zouboulis et al. 2017, Br J Dermatol 177:1401-09).

화농성 한 선염 의사 글로벌 평가( Hidradenitis Suppurativa Physician Global Assessment;HS -PGA): 6점 HS-PGA는 염증성 결절, 농양 및 배수 누공의 임상 적 개선을 측정하기 위한 임상 시험에 사용된다. 깨끗함(점수0)에서 매우 심각(점수5)까지 다양하다. 질병 중증도 점수에 대한 명확한 지침이 있으며 비교적 사용하기 쉽다(Kimball et al. 2014, Br J Dermatol 171:1434-42). HS-PGA는 투여일(1, 22, 43, 64 및 85일), 105, 126, 147 및 168일(EOSV)에 투여 전 평가 될 것이다.

손바닥 발바닥 농포증 ( Palmoplantar pustulosis )

손바닥 발바닥 농포성 건선 지역 중증도 지수( Palmoplantar Pustulosis Psoriasis Area Severity Index;ppPASI ): ppPASI는 만성 플라크 건선의 중증도를 평가하는 데 널리 사용되는 건선 영역 및 심각도 지수를 기반으로 하는 평가 도구이다. 중증도, 홍반, 농포의 총 수 및 박리를 포함한 매개 변수는 1 내지 4의 척도로 점수를 매긴 다음 관련 영역 및 부위(손바닥 또는 단독)에 대해 수정한다. 4개의 값의 합은 0 (PPP 없음)에서 72 (가장 심각한 PPP) 범위의 최종 ppPASI를 생성합니다(Bhushan et al. 2001, Br J Dermatol 145:546-53). ppPASI는 1, 22, 43, 64 및 85일 및 105, 126, 147 및 168일(EOSV)에 투여하기 전에 스크리닝에서 평가된다.

손바닥 단독 의사 글로벌 평가(Palm-Sole Physician Global Assessment ;PGA)점수: PGA는 홍반(erythema), 비늘(scale) 및 경결(induration)을 기반으로 한 모든 건선 병변(psoriatic lesions)의 평균 평가이다(Robinson, 2011). PGA는 투약일(1, 22, 43, 64 및 85일), 105, 126, 147 및 168일(EOSV)에 투약 전 평가된다.

약동학(Pharmacokinetic;PK) 평가

첫 번째 및 마지막 주입 후, CSL324의 혈청 농도 결정을 위한 PK 샘플은 각 주입 전 및 주입 종료시 및 주입 종료 후 3시간, 4일, 1주, 2주 및 3주에 정맥 천자(vein puncture)에 의한 반대쪽 팔(주입을 위한 i.v. 라인과 관련하여)에서 수집된다. 마지막 투여 후 6주, 9주 및 12주에 추가 PK 샘플을 수집한다. 혈청 농도는 시점별로 나열되고 설명적으로 요약된다. 비 구획 방법에 의해 유도된 반복 용량 투여 후 CSL324 PK 매개 변수의 그래픽 표시는 용량 코호트 및 표시 그룹별로 설명적으로 요약된다.

약력학 ( Pharmacodynamic;PD ) 평가

다양한 평가를 위해 혈액 및 조직 샘플을 수집한다. 혈액 평가에는 연속 ANC 측정, 혈청 사이토카인 및 케모카인(예:G-CSF, GM-CSF), 질병 관련 전 염증 마커( pro-inflammatory markers)(예:CRP, ESR, C3a, C5a), 염증성 유전자 시그니처(들)( inflammatory gene signature(s))(예:호중구/G-CSF 시그니처) 및 말초 혈액 도말(peripheral blood smears)에 기반한 호중구 프로필 이동(neutrophil profile shift )이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 연구 분석을 위한 추가 채혈은 수집에 필요한 특정 승인과 함께 사전 동의 양식(informed consent form;ICF)에 명시되어 있다.

피부 생검 수집(Skin biopsy collection)

펀치 생검(punch biopsies)을 통해 조직 샘플은 세포 침투를 평가하기 위해 기준선과 최종 투여 후 3주에 수집되며, 호중구 침투를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 이 분석은 조직학(면역조직화학(Immunohistochemisty), H & E) 및 RNA 평가에 의해 수행된다. 2x3mm 생검은 각각 1일 (기준) 및 치료 기간 종료시(CSL324의 5회 용량이 모두 투여되는 경우 105일, 조기 치료 중단의 경우 최종 용량 3주 후) 수집된다. 생검은 투약 및 혈액 수집 전, 그리고 활력 징후, 온도 및 임상 종말점 평가 후에 수집된다. 연구 종료 치료 생검은 병변이 부분적으로 또는 완전히 제거 되더라도 1일 생검 부위에 가능한 한 가깝게 수행됩니다. HS의 경우, 가능한 경우 결절의 중심을 피하면서 1cm 이상의 결절(가능한 가장 큰 결절)에서 직접 기준 생검을 수집한다. PPP의 경우, 기본 생검은 농포를 포함하지 않고 손바닥 또는 발바닥 근처의 염증이 있는 피부 영역에서 수집된다.

보고된 환자의 결과 평가

모든 질병

피부과 삶의 질 지수 설문지 (Dermatology Quality of Life Index questionnaire;DLQI)점수: DLQI는 80개 이상의 국가에서 40개가 넘는 다양한 피부 상태에서 사용되었으며 90개 이상의 언어로 제공되는 간단한 10개의 질문으로 검증 된 설문지이다. 그 사용은 많은 다국적 연구를 포함하여 1000개가 넘는 출판물에 설명되어 있다. 각 질문은 0(전혀 아님)에서 3(매우 많이)까지 점수가 매겨지며, 회상 기간은 1주이다. 총 30점은 최대 점수이며 0 내지 1은 효과 없음, 2 내지 5는 작음, 6 내지 10은 보통, 11 내지 20은 매우 크며 21 내지 30은 환자의 삶에 매우 큰 영향을 준다(Hongbo et al. 2005, J Invest Dermatol 125:659-64). DLQI는 1, 22, 43, 64 및 85일뿐만 아니라 105, 126, 147 및 168일(EOSV) 투약 전에 평가된다.

화농성 한 선염 ( Hidradenitis suppurativa ):

수치 평가 척도(Numerical Rating Scale;NRS)통증 점수: 통증에 대한 NRS는 피부과 질환과 관련된 만성 통증이 있는 성인을 포함하여 성인의 통증 강도를 일차원적으로 측정한 것이다(Kimball, Okun, et al. 2016, N Engl J Med, 375:422-34). NRS는 응답자가 지난 24시간 동안 통증의 강도를 가장 잘 반영하는 점수(0 내지 10 정수)를 선택하는 시각 아날로그 척도(visual analog scale;VAS)의 분할된 숫자 버전이다(Rodriguez 2001, Pain Manag Nurs, 2:38-46). 일반적인 형식은 수평 막대 또는 선이며 극한의 통증 중증도를 설명하는 용어로 고정된다(Hawker et al. 2011, Arthritis Care Res (Hoboken), 63 Suppl 11:S240-52). NRS 통증 점수는 전자 일기를 사용하여 매일 수집되며 주간 평균이 도출된다.

다른 평가

시간 경과에 따른 병변 변화(lesion changes)를 캡처한 사진은 대상체가 참여할 수 있는 선택적 평가이다. 이 사진은 CSL324 치료(3주, 6주, 9주, 12주, 15주 및 후속 조치)로 병변을 캡처하기 위해 연구 과정 동안 여러 번 기준선에서 촬영된다. 이러한 사진은 내부 및 외부 프레젠테이션, 보고서 및 출판물을 포함한 다양한 설정 및 문서에서 사용할 수 있다.

중지 규칙(Stopping rules)

연구 중단 기준

다음과 같은 경우 연구가 즉시 중단된다:

한 대상체가 사망을 초래하고 조사자 및/또는 후원자가 CSL324 투여와 관련이 있다고 간주하는 심각한AE(seriousAE;SAE)를 발생한다. 연구 중에 다음 이벤트 중 하나가 발생하고 이러한 이벤트가 CSL324 투여와 관련된 것으로 간주되는 경우, 모집을 중지하고 해당 이벤트를 조사하여 연구를 다시 시작하기 전에 프로토콜을 수정하거나 연구 중지 권장 여부를 결정한다:

저용량 코호트에서 코호트 중지 기준 중 하나라도 충족되는 경우

연구에서 다른 대상체에게 허용 할 수 없는 위험을 초래하는 것으로 간주되는 다른 이벤트를 하나 또는 이 이상의 대상체가 발생하는 경우.

코호트 (Cohort) 중지 기준

이 연구 동안 모든 징후에 대한 안전 관련 코호트 중지 기준이 마련되어 있다. 고용량 코호트에서 코호트 중단 기준이 충족되면 SRC가 연구 중단을 권장하지 않는 한 저용량 코호트를 계속할 수 있다.

다음과 같은 경우 개별 코호트의 모든 대상체에 대한 투여가 즉시 중단된다:

한 코호트 내의 3명의 대상체가 CSL324 투여와 관련된 4등급 호중구 감소증의 단일 사건을 앓고 있다(약 24시간 후 반복 측정에서 확인된 단일 측정으로 정의됨).

다음 사건 중 하나가 한 코호트 내의 대상체에서 연구 중에 발생하고 이러한 사건이 CSL324의 투여와 관련된 것으로 간주되는 경우 해당 사건을 조사하여 영향을 받은 코호트에 대한 추가 투여 및 모집을 허용하기 위한 권장 사항을 제공한다. 또한, 아래 기준을 충족하지 않고 치료 기간 중 일부인 동일한 코호트 내에서 연구 대상체의 투여를 계속할지 또는 전체 코호트에 대한 CSL324의 모든 투여를 중단하고 모든 코호트 대상체가 치료 종료 및 후속 평가를 받고 임상 치료/SoC로 돌아가도록 할지 여부도 결정된다.

한 대상체는 감염의 임상 징후 또는 증상이 있는 상태에서 4등급 호중구 감소증 (약 24시간 후 반복 측정으로 확인됨)의 단일 사건을 가지고 있다.

한 대상체에서 IV 항생제가 필요한 호중구 감소성 패혈증(neutropenic sepsis)을 확인하였다(패혈증 TBD를 정의하는 기준).

코호트의 다른 대상체에게 용인할 수 없는 위험을 제기하는 것으로 간주되는 기타 모든 사건.

대상체 중단 기준

연구 중에 모든 징후에 대해 안전 관련 대상체 중단 기준이 마련되어 있다. 대상체가 연구 중에 다음 사건 중 하나를 발생시키고 사건(들)이 CSL324와 관련된 것으로 간주되는 경우, 대상체는 남은 용량의 CSL324를 투여받지 않는다.

심각한 이상 반응(serious adverse event;SAE).

대상체가 주입 속도 저하 및/또는 경구 항히스타민제(oral anti-histamines) 투여를 포함한 관리에도 불구하고 3등급 또는 4등급 주입 반응(per CTCAE grading)의 장기간 증상을 경험하는 경우.

임상적으로 유의한 것으로 간주되는 심각하지 않은 중증 AE (감염 포함)

대상체는 연구의 치료 기간 동안 임의의 단계에서 4등급 호중구 감소증 (약 24시간 후 반복 측정에서 확인됨)의 단일 사건을 경험한다.

대상체가 용량 투여 전날에 3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 기록하고 평균 <800/mm3의 반복 ANC 평가(약 24시간 후 반복 측정에서 확인됨)를 기록한다.

CTCAE에 따른 3등급 호중구 감소증과 함께> 38.3 °C 또는> 38.0 °C의 단일 고실 온도가> 1시간 동안 및/또는 임상적으로 중요한 감염 징후 또는 증상이 지속된다.

피험자가 CSL324의 완전한 전체 투약 요법을 받지 못하는 경우, 임상 치료로 돌아가 치료 평가 종료(마지막 투약 후 3주) 및 후속 평가를 받는다.

실시예 3 - CSL324는 HS 환자에서 상향 조절되는 마커인 CXCR1 발현과 관련된 호중구 이동을 감소시킨다.

HS 환자에서 CXCR1 발현

화농성 한 선염(Hidradenitis suppurativa;HS; n=15) 환자의 천체 혈액 샘플을 사용하여 연령 및 성별에 맞는 건강한 대조군 전체 혈액 샘플의 호중구와 비교 한 유세포 분석(flow cytometry)을 통하여 호중구 표면에서 세포 이동 마커인 CXCR1의 수준을 평가했다(고 측방 산란 (SSC), CD11b+CD49-로 정의됨).

도 7A에 나타낸 바와 같이, CXCR1 발현은 건강한 대조군에 비해 HS 환자 샘플 호중구에서 유의하게 더 높았다(n=15). 추가 분석은 HS 환자 농양과 결절 수, 질병 활동 평가의 한 형태, HS 환자(n=14)에서 호중구에 대한 CXCR1 발현 사이의 상관 관계가 관찰되었다(도 7B; r2=0.3532, p=0.0250).

CSL324는 G- CSF에 의해 유도 된 CXCR1 및 CXCR2 발현을 감소시킨다.

건강한 인간 공여자로부터 얻은 전체 혈액 샘플을 사용하여 호중구에 대한 케모카인 수용체 CXCR1 및 CXCR2의 발현을 평가하고 이러한 이동성 수용체 수준에 대한 G-CSF의 존재 또는 부존재에서 CSL324의 효과를 평가했다. 샘플은 재조합 인간 G-CSF (30ng/mL; n=11) 또는 재조합 인간 GM-CSF (30ng/mL; n=4))로 세포를 자극하기 전에 30 분 동안 1mg/mL의 CSL324와 함께 사전 배양되었으며 37 ° C, 5% CO2에서 20시간 동안 배양한다. 호중구는 SSC(high side scatter) 및 CD11b+CD49d-표현형으로 확인되었다. CXCR1 또는 CXCR2에 대한 접합 된 항체의 평균 형광 강도는 배지 단독에서 배양 된 세포에 비해 표준화되었다.

도 8에 나타난 바와 같이, G-CSF 단독(검은색)으로 한 호중구의 배양은 배지 단독에 비해 CXCR1 및 CXCR2의 세포 표면 발현을 증가시켰다. CSL324(회색)를 사용한 사전 배양은 CXCR1 및 CXCR2의 G-CSF 유도 상향 조절을 감소시켰으며, CXCR1 또는 CXCR2 염색의 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity;MFI)는 호중구가 세포 배양 배지에서 단독으로 배양되었을 때 보이는 것과 비슷하다. GM-CSF의 존재 하에서 세포의 배양은 표면 마커의 수준을 크게 변경하지 않았으며, 또한 CSL324와 함께 샘플을 사전 배양하여도 변경되지 않았다.

CSL324는 G- CSF에 의해 유도 된 세포 이동을 감소시킵니다.

세포 이동 분석은 MIP-2 로의 G-CSF 매개 호중구 이동을 억제하는 CSL324의 능력을 평가하기 위해 사용되었다. 구체적으로, 정제된 호중구는 분리(> 95% 순도)되었고 30ng/mL 인간 G-CSF 또는 30ng/mL 인간 GM-CSF로 밤새 자극하기 전에 30분 동안 1μg/mL CSL324와 함께 또는 없이 사전 배양했다. MIP-2(500ng/mL)에 대한 주화성(Chemotaxis)은 트랜스웰 삽입물(transwell inserts, 5μm기공)을 사용하여 측정되었다.

도 9에서 볼 수 있듯이 G-CSF를 사용한 사전 배양은 호중구의 MIP-2 로의 이동을 증가시켰으며, 이는 CSL324로 사전 배양하여 배지 단독 조건과 동일한 수준으로 감소되었다(도 9A;회색 막대). GM-CSF의 이동 촉진 효과(pro-migratory effects)는 CSL324와의 사전 배양에 의해 억제되지 않았으며, 이는 G-CSF 수용체에 관여하는 효과에 대한 특이성을 나타낸다. G-CSF와의 사전 배양은 호중구의 MIP-2 로의 증가된 이동과 관련이 있는 CXCR1 및 CXCR2의 상향 조절을 초래했다(도 9B 및 9C).

이러한 데이터는 다음을 함께 보여준다:

CXCR1은 건강한 개인에 비해 HS 환자의 호중구에서 훨씬 더 높은 수준으로 발현된다(도 7A);

CXCR1 발현은 HS 질환의 중증도와 양의 상관관계가 있다(농양 및 결절 수로 측정됨; 도 7B);

CXCR1(및 CXCR2) 발현은 호중구 이동과 양의 상관관계가 있다(도 9B 및 9C);

CSL324는 호중구에서 G-CSF로 유도된 CXCR1(및 CXCR2) 발현(도 8A 및 8B)과 G-CSF로 유도된 호중구 이동(도 9A)을 억제한다.

실시예 4 - 건선 환자(psoriasis patients)에서 호중구 수 및 이동 마커 (migration marker) 발현이 상향 조절됨

G-CSFR에 결합하는 항체로 치료 가능성을 평가하기 위해 건선 환자는 전체 혈액 및 발현 세포 이동 마커 CXCR1 및 CXCR2에서 호중구 수에 대해 평가되었다.

플라크 건선(plaque psoriasis) ("심상 성 건선(psoriasis vulgaris)"또는 "일반 건선(common psoriasis)"이라고도 함)을 앓고 있는 총 21명의 개인과 21세 및 성별 일치에 영향을 받지 않는 개인이 혈액 및 피부 조직 샘플 수집을 위해 모집되었다. 신선한 전체 혈액 샘플의 호중구는 유세포 분석(flow cytometry)을 사용하여 표현형화 되었다.

도 10에 나타난 바와 같이, 호중구 수(도 10A)는 영향을 받지 않은 대조군에 비해 건선 환자의 말초 혈액(peripheral blood)에서 유의하게 증가했다. PASI 점수로 평가 한 건선의 중증도를 기반으로 한 층화(Stratification)는 PASI 점수가 10 이상인 개인에서 호중구 수가 유의하게 증가했음을 보여주었다. 또한, 호중구:림프구 비율(neutrophil:lymphocyte ratio;NLR)은 PASI 점수가 10 미만인 개인에 비해 PASI 점수가 10 이상인 개인에서 유의하게 상승했다(도 10B).

활성화 및 이동의 세포 표면 마커인 CXCR1 및 CXCR2의 발현은 유세포 분석에 의해 영향을 받지 않는 대조군과 비교하여 건선 환자의 말초 혈액 호중구에서 평가되었다. 케모카인 수용체 CXCR2는 경증(PASI <10) 및 중증(PASI> 10) 건선 모두에서 호중구 표면에서 유의하게 상승했다(도 10C). 케모카인 수용체 CXCR1 수준의 유의 한 변화는 감지되지 않았다(도 10D). G-CSFR에 결합하는 항체, CSL324가 호중구 수(실시예 1 참조) 및 CXCR1 및 CXCR2의 발현(실시예 3 참조)을 감소시키는 것으로 여기에서 입증되었으므로, 이러한 데이터는 그러한 항체가 건선 치료를 위한 실행 가능한 치료 옵션이 될 수 있다는 증거를 제공한다.

실시예 5 - CSL324를 사용한 손바닥 발바닥 농포증 ( palmoplantar pustulosis;PPP )의 치료는 안전하고 효과적이다.

대상체 00360098-0001

대상체는 4년 이상 손바닥 발바닥 농포증(PPP), 비만(129kg), 흡연(30년 이상)의 병력을 가진 52세 백인 남성이었다. 그는 이전에 다음 약물로 PPP 치료를 받았다:

약 1년 동안 매주 메토트렉세이트(Methotrexate)10mg;

약 4개월 동안 매일 아시트레틴(Acitretin) 50mg;

약 3년 동안 타크로리무스(Tacrolimus)(국소);

약 3년 동안 코르티코스테로이드(Corticosteroid)(국소); 및

약 3년.동안 비타민 D +코르티코스테로이드 (국소).

대상체는 실시예 2에 설명된 연구 CSL324_1002에 등록되었다. 그리고 1일차에 0.3mg/kg의 용량으로 CSL324를 처음으로 주입한 다음 22일, 43일, 64일 및 85일에 21일마다 4번의 후속 주입을 받았다.

효능 결과(Efficacy results)

손바닥 발바닥 농포성 건선 지역 중증도 지수(Palmoplantar Pustular Psoriasis Area Severity Index;ppPASI)로 측정한 대상체의 기준 PPP 중증도는 스크리닝시 34.2(심각)였고 CSL324를 처음 투여하기 전 26.9(심각)였다. 또한 CSL324를 처음 투여하기 전에 PPP 의사의 글로벌 평가(PPP-Physician 's Global Assessment;PPP-PGA)가 심각했다. 126일까지의 효능 측정 결과는 표 5 및 도 11에 나와 있다.

대상체 00360098-0001에 대한 ppPASI 및 PPP-PGA 점수

	스크리닝 ( Screeing )	0일	22일	43일	64일	85일	105일	126일
ppPASI	34.2	26.9	11.8	14.2	10.2	7.2	6	13.6
PPP-PGA		심각	보통	보통	보통	경미	경미	보통

표 5 및 도 11에 제시된 데이터는 ppPASI 또는 PPP-PGA로 측정한 바와 같이 CSL324를 사용한 치료가 PPP의 중증도를 성공적으로 감소시켰음을 보여준다. 아래 표 6은 결과 해석을 위한 지침을 제공한다.

CSL324 효능 평가의 해석

ppPASI
ppPASI < 7	경미
ppPASI = 7-15	보통
ppPASI >15(up to 72)	심각
PPP-PGA
0	투명
1	거의 투명
2	경미
3	보통
4	심각

안정성 결과

부작용

대상체는 모두 심각하지 않고 CSL324와 관련이 없는 것으로 간주되는 3개의 부작용을 경험했다. 첫 번째 AE인 허리 통증은 67일에 발생했으며 NSAID로 치료되었고 1일 만에 해결되었다. 두 번째 AE인 진성 당뇨병(diabetes mellitus)은 CSL324의 최종 투여 일에 연구 스크리닝 이래로 식이요법 변경에도 불구하고 변함없는 포도당 증가 후에 진단되었다. 고혈당증(Hyperglycemia)은 CSL324로 치료하는 동안 악화되지 않았다. 마지막 AE인, 무기력(lethargy)은 최종 투여 다음날 발생했고 같은 날 해결되었다.

절대 호중구 수

대상체는 CSL324를 처음 투여하기 전에 4.9x109/L 및 6.3x109/L의 절대 호중구 수(absolute neutrophil count;ANC)를 가졌다. ANC는 아래의 도 12 및 표 7에 나와있는 것처럼 연구 내내 정상 범위를 유지했다.

S : 스크리닝 날

회색 컬럼 : CSL324 투여일

<110> CSL Innovation Pty Ltd <120> Method of treating neutrophilic conditions <130> Pi21-B101 <150> US 62/774,974 <151> 2018-12-04 <150> US 62/885,373 <151> 2019-08-12 <150> US 62/897,487 <151> 2019-09-09 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 319 <212> PRT <213> artificial <220> <223> amino acids 25-335 of Homo sapiens G-CSFR (hG-CSFR) with a C-terminal polyhistidine tag <400> 1 Glu Cys Gly His Ile Ser Val Ser Ala Pro Ile Val His Leu Gly Asp 1 5 10 15 Pro Ile Thr Ala Ser Cys Ile Ile Lys Gln Asn Cys Ser His Leu Asp 20 25 30 Pro Glu Pro Gln Ile Leu Trp Arg Leu Gly Ala Glu Leu Gln Pro Gly 35 40 45 Gly Arg Gln Gln Arg Leu Ser Asp Gly Thr Gln Glu Ser Ile Ile Thr 50 55 60 Leu Pro His Leu Asn His Thr Gln Ala Phe Leu Ser Cys Ala Leu Asn 65 70 75 80 Trp Gly Asn Ser Leu Gln Ile Leu Asp Gln Val Glu Leu Arg Ala Gly 85 90 95 Tyr Pro Pro Ala Ile Pro His Asn Leu Ser Cys Leu Met Asn Leu Thr 100 105 110 Thr Ser Ser Leu Ile Cys Gln Trp Glu Pro Gly Pro Glu Thr His Leu 115 120 125 Pro Thr Ser Phe Thr Leu Lys Ser Phe Lys Ser Arg Gly Asn Cys Gln 130 135 140 Thr Gln Gly Asp Ser Ile Leu Asp Cys Val Pro Lys Asp Gly Gln Ser 145 150 155 160 His Cys Ser Ile Pro Arg Lys His Leu Leu Leu Tyr Gln Asn Met Gly 165 170 175 Ile Trp Val Gln Ala Glu Asn Ala Leu Gly Thr Ser Met Ser Pro Gln 180 185 190 Leu Cys Leu Asp Pro Met Asp Val Val Lys Leu Glu Pro Pro Met Leu 195 200 205 Arg Thr Met Asp Pro Ser Pro Glu Ala Ala Pro Pro Gln Ala Gly Cys 210 215 220 Leu Gln Leu Ser Trp Glu Pro Trp Gln Pro Gly Leu His Ile Asn Gln 225 230 235 240 Lys Cys Glu Leu Arg His Lys Pro Gln Arg Gly Glu Ala Ser Trp Ala 245 250 255 Leu Val Gly Pro Leu Pro Leu Glu Ala Leu Gln Tyr Glu Leu Cys Gly 260 265 270 Leu Leu Pro Ala Thr Ala Tyr Thr Leu Gln Ile Arg Cys Ile Arg Trp 275 280 285 Pro Leu Pro Gly His Trp Ser Asp Trp Ser Pro Ser Leu Glu Leu Arg 290 295 300 Thr Thr Glu Arg Ala Pro Thr His His His His His His His His 305 310 315 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> artificial <220> <223> VH of C1.2 <400> 2 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Met Leu Gly Glu Leu Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213> artificial <220> <223> VL of C1.2 <400> 3 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ala Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Gln Asn Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Arg 100 105 <210> 4 <211> 118 <212> PRT <213> artificial <220> <223> VH of C1.2G <400> 4 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Glu Leu Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 5 <211> 107 <212> PRT <213> artificial <220> <223> VL of C1.2G <400> 5 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> artificial <220> <223> HCDR1 of C1.2 <400> 6 Leu Tyr Trp Met Gly 1 5 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2 HCDR2 <400> 7 Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2 HCDR3 <400> 8 Leu Gly Glu Leu Gly Trp Phe Asp Pro 1 5 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2 LCDR1 <400> 9 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2 LCDR2 <400> 10 Ala Ser Asn Leu Gln Asn 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2 LCDR3 <400> 11 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 12 <211> 8 <212> PRT <213> artificial <220> <223> consensus sequence of HCDR3 of C1.2 <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of tryptophan, glutamine, methionine, serine, phenylalanine, glutamic acid and histidine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> X iis an amino acid selected from the group consisting of phenylalanine, tyrosine, methionine, serine, glycine and isoleucine <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of aspartic acid, methionine, glutamine, serine, leucine, valine, arginine and histidine <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of proline gltuamic acid, alanine, leucine, phenylalanine, tyronis, threonine, asparagine, aspartic acid, serine , glycine, arginine, lysine <400> 12 Leu Gly Glu Leu Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> artificial <220> <223> consensus sequence of LCDR3 of C1.2 <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of glutamine, glutamic acid, histidine, alanine or serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of glutamine, valine, phenylalanine, asparagine and glutamic acid <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> X ian amino acid selected from the group consisting of serine or glycine <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of tryptophan, methionine, phenylalanine, tyrosine, isoleucine and leucine <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of glutamic acid, methionine, glutamine, tryptophan, serine, valine, asparagine, glycine, alanine, arganine, histidine, tyrosine, lysine or threonine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of tyrosine, methionine, isoleucine or threonine <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of proline, alanine, histidine, glycine and lysine <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of leucine, glutamine, methionine, alanine, phenylalanine, isoleucine, lysine, histidine and glycine <220> <221> VARIANT <222> (9)..(9) <223> X is an amino acid selected from the group consisting of threonine, phenylalanine, tyrosine, methionine, lysine, serine, histidine, proline, tryptophan, isoleucine, glutamine, glycine and valine <400> 13 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 14 <211> 445 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2G heavy chain IgG4 with S241P mutation <400> 14 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Glu Leu Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 435 440 445 <210> 15 <211> 214 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2G with kappa light chain <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Leu Gln Asn Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 16 <211> 444 <212> PRT <213> artificial <220> <223> C1.2G heavy chain IgG4 with S241P mutation and lacking C-terminal lysine residue <400> 16 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Leu Tyr 20 25 30 Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Val Thr Pro Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Leu Gly Glu Leu Gly Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 195 200 205 Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly 435 440

Claims

연속 7일 이상 동안 3등급 또는 4등급 호중구 감소증(neutropenia)을 유발하지 않고 인간 대상체에서 순환 호중구(circulating neutrophils)를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체를 0.1mg/kg 내지 1.0mg/kg 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제1항에 있어서, 상기 대상체는 호중구 매개 질환(neutrophil-mediated condition)을 앓고 있는 방법.
호중구 매개 질환을 앓고 있는 대상체에게 G-CSF 신호 전달을 억제하는 항체를 0.1mg/kg 내지 1.0mg/kg 용량으로 투여하는 단계를 포함하는 호중구 매개 질환 치료 방법.
제3항에 있어서, 상기 항체의 투여는 연속 7일 이상 동안 대상체에서 3등급 또는 4등급 호중구 감소증을 유발하지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 항체의 투여는 4등급 호중구 감소증을 유발하지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 항체의 투여는 호중구 감소증을 유발하지 않거나 연속 2일 또는 그 이하 동안 2등급 또는 3등급 호중구 감소증을 유발하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 항체의 투여는 연속 2일 이상 또는 1일 이상 동안 호중구 감소증을 유발하지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 또는 제4항에 있어서, 상기 호중구 감소증은 발열(fever)과 관련이 없는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 0.1mg/kg 내지 0.6mg/kg의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서. 상기 항체는 0.1mg/kg, 0.3mg/kg 또는 0.6mg/kg의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 수회 투여되고, 14일 내지 28일 마다 1회 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 수회 투여되고, 21일 마다 1회 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 G-CSFR에 결합하고 G-CSF 신호 전달을 억제하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 과립구 콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하고 서열번호 4로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(heavy chain variable region;VH) 및 서열번호 5로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(light chain variable region;VL)을 포함하는 항체 C1.2G의 결합을 경쟁적으로 억제하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 1의 111-115, 170-176, 218-234 및/또는 286-300으로부터 선택된 1개 또는 2개 또는 3개 또는 4개의 영역 내 잔기를 포함하는 에피토프(epitope)에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
(i) 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변영역(VH) 및 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변영역(VL);
(ii) 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH 및 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL;
(iii) 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH의 3 개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3 개의 CDR을 포함하는 VL; 또는
(iv) 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VH의 3 개의 CDR을 포함하는 VH 및 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 포함하는 VL의 3 개의 CDR을 포함하는 VL.
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
(i) 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(ii) 서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.
제2항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 호중구 매개 질환은 자가 면역 질환(autoimmune disease), 염증성 질환(inflammatory disease), 암 또는 허혈-재관류 손상(ischemia-reperfusion injury)인 것을 특징으로 하는 방법.
제18항에 있어서, 자가 면역 질환 또는 염증성 질환은 관절염(arthritis), 포도막염(uveitis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 폐 염증(pulmonary inflammation), 만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease), 건선(psoriasis) 또는 중증 천식(severe asthma)인 것을 특징으로 하는 방법.
제2항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 호중구 매개 질환은 호중구 피부병(neutrophilic dermatosis) 또는 호중구 피부 병변(neutrophilic skin lesion)인 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서. 상기 호중구 피부병은 주름의 무균성 농포증(amicrobial pustulosis of the folds;APF); 판상형 건선(plaque psoriasis); CARD14 매개 농포성 건선 (CARD14-mediated pustular psoriasis;CAMPS); 크라이오피린 관련 주기적 증후군(cryopyrin associated periodic syndromes;CAPS); 인터루킨-1 수용체 결핍(deficiency of interleukin-1 receptor;DIRA); 인터루킨-36 수용체 길항제 결핍(deficiency of interleukin-36 receptor antagonist;DIRTA); 화농성 한선 염 (hidradenitis suppurativa;HS); 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis); 화농성 관절염(pyogenic arthritis); (괴저농피증(pyoderma gangrenosum) 및 여드름(acne)(PAPA)); 괴저농피증, 여드름 및 화농성 한선 염(PASH); 괴저농피증(pyoderma gangrenosum;PG); 베체트병의 피부 병변(skin lesions of Behcet's disease); 스틸병(Still's disease); 스위트 증후군(Sweet syndrome); 각막 하 농포증(subcorneal pustulosis;Sneddon-Wilkinson); 농포성 건선(pustular psoriasis); 손바닥 발바닥 농포 증; 급성 전신성 발 진성 농포증(acute generalized exanthematic pustulosis); 유아 말단 농포증(infantile acropustulosis); 활막염(synovitis), 여드름, 농포증(pustulosis); 골비대증 및 골염 (hyperostosis and osteitis;SAPHO) 증후군; 장 관련 피부병-관절염 증후군(bowel-associated dermatosis-arthritis syndrome;BADAS); 등쪽 손의 호중구 피부병(neutrophilic dermatosis of the dorsal hands); 호중구 에크린 한선 염(neutrophilic eccrine hidradenitis); 지속융기홍반(erythema elevatum diutinum); 및 괴저농피증
으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제20항에 있어서, 상기 호중구 피부병은 화농성 한선 염(hidradenitis suppurativa;HS) 또는 손바닥 발바닥 농포증(palmoplantar pustulosis;PPP)인 것을 특징으로 하는 방법.
호중구 피부병을 앓고 있는 대상체에게 0.1mg/kg 내지 1mg/kg의 항체 용량으로 투여하는 단계를 포함하고, 과립구 콜로니 자극 인자 수용체(G-CSFR)에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체는 21일마다 1회씩 수회 투여되며, 상기 항체는 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 호중구 피부병 치료방법:
(i) 서열번호 14로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄; 또는
(ii) 서열번호 16으로 표시되는 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 15로 표시되는 서열을 포함하는 경쇄.