BR112021010920A2 - Método de tratamento de condições neutrofílicas - Google Patents

Abstract

método de tratamento de condições neutrofílicas. a presente divulgação se refere a um método para reduzir os neutrófilos circulantes em um indivíduo sem causar neutropenia prolongada de grau 3 ou 4. a presente divulgação também se refere a métodos para tratar condições neutrofílicas com um anticorpo que inibe a sinalização de g-csf. em particular, a presente divulgação se refere a métodos de tratamento de dermatoses neutrofílicas, tais como hidradenite supurativa (hs) e pustulose palmoplantar (ppp).

Description

“MÉTODO DE TRATAMENTO DE CONDIÇÕES NEUTROFÍLICAS” Dados de Pedidos Relacionados

[001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido de Patente U.S. No. 62/774,974, depositado em 4 de dezembro de 2018, e intitulado “Method of treating neutrophilic conditions”, Pedido de Patente U.S. No. 62/885,373, depositado em 12 de agosto de 2019, e intitulado “Method of treating neutrophilic conditions”, e o Pedido de Patente U.S. No. 62/897,487, depositado em 9 de setembro de 2019, e intitulado “Method of treating neutrophilic conditions”. Os conteúdos completos desses pedidos do conteúdo destes aplicação são incorporados aqui por referência.

Campo da Invenção

[002] A presente divulgação se refere a um método para tratar uma condição neutrofílica com um anticorpo que se liga ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR).

Descrição do Estado da Técnica

[003] O fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) é um importante regulador da produção de granulócitos. O G-CSF é produzido por células estromais da medula óssea, células endoteliais, macrófagos e fibroblastos, e a produção é induzida por estímulos inflamatórios. O G-CSF atua através do receptor G-CSF (G-CSFR), que é expresso em progenitores mieloides precoces, neutrófilos maduros, monócitos/macrófagos, linfócitos T e B e células endoteliais. Camundongos deficientes em G-CSF ou G-CSFR exibem neutropenia acentuada, demonstrando a importância do G-CSF na granulopoiese em estado estável. O G-CSF aumenta a produção e liberação de neutrófilos, mobiliza células-tronco hematopoiéticas e progenitoras e modula a diferenciação, expectativa de vida e funções efetoras dos neutrófilos maduros.

O G-CSF também pode exercer efeitos sobre os macrófagos, incluindo a expansão do número de monócitos/macrófagos, aumento da função fagocítica e regulação da produção de citocinas e quimiocinas inflamatórias. O G-CSF também demonstrou mobilizar células progenitoras endoteliais e induzir ou promover a angiogênese.

[004] Embora o G-CSF seja usado terapeuticamente, por exemplo, para tratar a neutropenia e/ou mobilizar células-tronco hematopoiéticas, ele também tem ações negativas em algumas condições, por exemplo, em condições inflamatórias e/ou câncer. Por exemplo, a administração de G-CSF exacerba a artrite reumatoide (RA), artrite murina induzida por colágeno (CIA) e um modelo de transferência passiva de CIA em ratos. O G-CSF foi encontrado no soro e no líquido sinovial de pacientes com AR. Além disso, a interleucina (IL)-1 e o fator de necrose tumoral α (TNFα), que são encontrados em níveis aumentados em pacientes que sofrem de AR, induzem a produção de G-CSF por fibroblastos sinoviais humanos e condrócitos. Os camundongos deficientes em G-CSF são resistentes à indução de artrite inflamatória aguda e crônica.

[005] Demonstrou-se também que o G-CSF desempenha um papel na esclerose múltipla (EM). Por exemplo, o G-CSF aumenta a adesão de um modelo de linhagem de células T autorreativas de EM à matriz extracelular tão eficazmente quanto o interferon γ e TNFα, que são conhecidos por exacerbar os sintomas da EM. Além disso, os camundongos deficientes em G-CSF são resistentes ao desenvolvimento de encefalomielite autoimune experimental (EAE).

[006] O G-CSF e G-CSFR também foram associados ao câncer, onde estudos mostram que esta via de sinalização contribui para a resistência à quimioterapia, crescimento, sobrevivência, invasividade e metástase de vários tipos de câncer. Além disso, foi demonstrado que o G-CSF induz a angiogênese, um processo importante no desenvolvimento de tumores sólidos.

[007] A remoção de células mieloides, incluindo neutrófilos e monócitos /macrófagos, usando aférese de granulócitos e monócitos adsortivos (GMA)

também se mostrou útil no tratamento de várias condições. A GMA é um tratamento extracorpóreo no qual o sangue de um indivíduo é bombeado através de uma coluna de grânulos de acetato de celulose e as células mieloides são removidas. Atualmente, a GMA é aprovada no Japão para o tratamento da colite ulcerosa, doença de Crohn e psoríase pustulosa. A eficácia clínica também tem sido relatada para as doenças dermatológicas (por exemplo, pioderma gangrenoso, doença de Behcet, psoríase pustulosa generalizada, psoríase, doença de Still, doença de Sweet, vasculite alérgica cutânea e lúpus eritematoso sistêmico) e outras condições como artrite e artrite psoriática (vide, por exemplo, Kanekura, J. Dermatol., 45: 943-950, 2018). Uma desvantagem da GMA é que um indivíduo deve comparecer a um ambiente hospitalar no qual se submete a uma sessão de leucaférese uma ou duas vezes por semana, cinco a dez vezes, com a duração de cada sessão de cerca de uma hora. Tal tratamento é demorado, desconfortável para o paciente e requer equipamento especializado e pessoal treinado para administrá-lo.

[008] Dado o acima exposto, ficará claro para um técnico no assunto que existe uma necessidade na arte por métodos que reduzam a sinalização do G- CSF através do G-CSFR, sem induzir neutropenia.

Descrição Resumida da Invenção

[009] No trabalho que conduziu à presente divulgação, os inventores procuraram identificar uma dosagem de um anticorpo anti-G-CSFR que fosse capaz de reduzir o número de neutrófilos circulantes em um indivíduo sem induzir neutropenia grave ou sem induzir neutropenia grave por um período prolongado. Ao reduzir o número de neutrófilos circulantes, os inventores são capazes de tratar condições mediadas por neutrófilos. No entanto, os inventores também reconheceram a importância de não induzir neutropenia grave por um período prolongado para evitar colocar um indivíduo em risco de, por exemplo, uma infecção. Os inventores identificaram uma dose de um anticorpo que reduz o número de neutrófilos circulantes, mas não causa neutropenia grave em um indivíduo por um período prolongado.

[0010] Com base nas conclusões dos inventores, a divulgação proporciona um método para reduzir os neutrófilos circulantes em um indivíduo sem causar neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) por mais de dois dias consecutivos, o método compreendendo administrar ao indivíduo uma dose compreendida entre 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg de um composto que inibe a sinalização de G-CSF, por exemplo, um inibidor baseado em proteína, tal como uma proteína compreendendo uma região Fc de um anticorpo, por exemplo, um anticorpo que se liga a G-CSFR e inibe a sinalização de G-CSF.

[0011] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de três dias consecutivos.

[0012] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de quatro ou cinco ou seis dias consecutivos.

[0013] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de sete dias consecutivos.

[0014] Em um exemplo, a divulgação proporciona um método para reduzir neutrófilos circulantes em um indivíduo humano sem causar neutropenia prolongada de grau 3 ou grau 4 por mais de sete dias consecutivos, o método compreendendo administrar ao indivíduo de uma dose entre 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg de um anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

[0015] Em um exemplo, o composto é um anticorpo que se liga a G-CSF e inibe a sinalização de G-CSF. Em um exemplo, o composto é um anticorpo que se liga a G-CSFR e inibe a sinalização de G-CSF. Por exemplo, o anticorpo se liga a ou se liga especificamente a G-CSFR e inibe competitivamente a ligação do anticorpo C1.2G (também referido como CSL324 neste documento), que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência apresentada em SEQ ID NO: 4 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 5, ao G-CSFR.

[0016] Em um exemplo, o indivíduo sofre de uma condição mediada por neutrófilos. Por conseguinte, a invenção também proporciona um método para o tratamento de uma condição mediada por neutrófilos, o método compreendendo administrar a um indivíduo que sofra da condição mediada por neutrófilos uma dose compreendida entre 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg de um composto que inibe a sinalização de G-CSF (como discutido acima e aqui), por exemplo, um anticorpo que se liga a G-CSF ou G-CSFR e inibe a sinalização de G-CSF. Em um exemplo, o anticorpo se liga a ou se liga especificamente a G-CSFR e inibe competitivamente a ligação do anticorpo C1.2G que compreende uma VH compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma região variável de cadeia leve VL compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 5 ao G-CSFR.

[0017] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de dois dias consecutivos.

[0018] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de três dias consecutivos.

[0019] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de quatro ou cinco ou seis dias consecutivos.

[0020] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia de grau 3 ou neutropenia de grau 4 (ou neutropenia grave) no indivíduo por mais de sete dias consecutivos.

[0021] Em um exemplo, a administração do anticorpo não causa neutropenia prolongada de grau 3 ou grau 4 no indivíduo por mais de sete dias consecutivos.

[0022] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não induz neutropenia de grau 4. Em outro exemplo, a administração do composto ou anticorpo induz neutropenia de grau 4 por mais de 3 dias consecutivos em menos de 10% de uma população de indivíduos à qual é administrado.

[0023] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não está associada a uma infecção, por exemplo, uma infecção grave, como uma infecção por tuberculose.

[0024] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não induz neutropenia ou induz neutropenia de grau 2 ou grau 3 por menos de dois dias consecutivos. Por exemplo, a administração do anticorpo induz neutropenia de grau 2 ou grau 3 por 36 horas ou menos, por exemplo, por 24 horas ou menos.

[0025] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não induz neutropenia. Assim, em um exemplo, a contagem de neutrófilo absoluta do indivíduo (ANC) continua acima de cerca de 2 x 109/L durante o tratamento com o composto ou o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

[0026] Em um exemplo, a neutropenia não está associada à febre.

[0027] Em um exemplo, a neutropenia é resolvida sem tratamento.

[0028] Em um exemplo, a neutropenia não está associada a uma infecção, por exemplo, uma infecção grave, como uma infecção por tuberculose.

[0029] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não induz neutropenia de grau 4 após uma única administração. Em outro exemplo, a administração do composto de anticorpo não induz neutropenia de grau 4 após múltiplas administrações, por exemplo, duas administrações ou três administrações ou quatro administrações ou cinco administrações ou seis administrações. Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo não induz neutropenia de grau 4 após pelo menos três administrações.

[0030] Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo induz neutropenia de grau 2 ou grau 3 por menos de dois dias consecutivos após uma única administração. Em outro exemplo, a administração do composto ou anticorpo induz neutropenia de grau 2 ou grau 3 por menos de dois dias consecutivos após administrações múltiplas, por exemplo, duas ou três administrações ou quatro administrações ou cinco administrações ou seis administrações. Em um exemplo, a administração do composto ou anticorpo induz neutropenia de grau 2 ou grau 3 por menos de dois dias consecutivos após pelo menos três administrações.

[0031] Em um exemplo, o composto ou o anticorpo é administrado a uma dose de entre 0,1 mg/kg e 1 mg/kg. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado a uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,9 mg/kg, por exemplo, entre 0,1 mg/kg e 0,8 mg/kg, por exemplo, entre 0,1 mg/kg e 0,8 mg/kg. Em um exemplo, o composto ou o anticorpo é administrado a uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,6 mg/kg. Em um exemplo, o composto ou o anticorpo é administrado a uma dose entre 0,3 mg/kg e 0,6 mg/kg.

[0032] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,1 mg/kg.

[0033] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,3 mg/kg.

[0034] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,6 mg/kg.

[0035] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado várias vezes. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado uma vez a cada 7 a 35 dias. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado a cada 14 a 28 dias. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado a cada 20 a 25 dias. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado várias vezes, em que o composto ou anticorpo é administrado uma vez a cada 21 dias. Neste sentido, o técnico no assunto entenderá que “a cada 21 dias” (ou qualquer outro número) significa que a administração subsequente é realizada no 21º dia após a administração imediatamente anterior.

[0036] O composto ou anticorpo pode ser administrado cronicamente, por exemplo, por meses ou anos e a presente divulgação não está limitada a um período de tempo específico, a menos que indicado de outra forma.

[0037] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado até que a condição ou os sintomas da condição sejam resolvidos ou gerenciados.

[0038] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado para induzir a remissão de uma condição. Em outro exemplo, o composto é administrado para manter a remissão de uma condição.

[0039] Em um exemplo, uma ou mais doses de carga/ataque do composto são administradas seguidas por uma ou mais doses de manutenção. Geralmente, as doses de carga serão maiores ou administradas com um período de tempo mais curto entre elas do que as doses de manutenção.

[0040] Em um exemplo, o composto ou anticorpo se liga a um epítopo compreendendo resíduos em uma ou duas ou três ou quatro regiões selecionadas dentre 111-115, 170-176, 218-234 e/ou 286-300 da SEQ ID NO: 1.

[0041] Em um exemplo, o anticorpo compreende: (i) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 5; (ii) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 3; (iii) uma VH compreendendo três CDRs de uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma VL compreendendo três CDRs de uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 5; ou (iv) uma VH compreendendo três CDRs de uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2 e uma VL compreendendo três CDRs de uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 3.

[0042] Em um exemplo, o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou

(ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0043] Em um exemplo, o anticorpo compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e duas cadeias leves compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0044] Em um exemplo, o anticorpo é administrado em uma composição que compreende uma mistura dos seguintes anticorpos: (i) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; (ii) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; e (iii) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e duas cadeias leves compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0045] Em alguns exemplos, a condição mediada por neutrófilos é uma doença autoimune, uma doença inflamatória, câncer ou lesão de isquemia- reperfusão.

[0046] Exemplos de condições autoimunes incluem os distúrbios intestinais autoimunes (como doença de Crohn e colite ulcerativa), artrite (como artrite reumatoide, artrite psoriática e/ou artrite idiopática, por exemplo, artrite idiopática juvenil) ou psoríase.

[0047] Exemplos de condições inflamatórias incluem condições neurológicas inflamatórias (por exemplo, doença de Devic, uma infecção viral no cérebro, esclerose múltipla e neuromielite óptica), uma doença pulmonar inflamatória (por exemplo, doença pulmonar obstrutiva crônica [DPOC] ou asma) ou uma condição inflamatória ocular (por exemplo, uveíte).

[0048] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilo é a lesão de isquemia-reperfusão. Por exemplo, a lesão de isquemia-reperfusão é devida ou está associada ao transplante de tecido ou órgão (por exemplo, transplante de rim). Por exemplo, o anticorpo é administrado a um receptor de tecido ou órgão transplantado, por exemplo, antes da coleta do órgão e/ou a um tecido ou órgão antes do transplante ou é administrado a um tecido ou órgão coletado ex vivo.

[0049] Em alguns exemplos, a condição mediada por neutrófilos é a psoríase. Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a psoríase em placas (também conhecida na arte como “psoríase vulgar” ou “psoríase comum”).

[0050] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é uma dermatose neutrofílica ou uma lesão neutrofílica da pele. Por exemplo, a dermatose neutrofílica é uma psoríase pustulosa.

[0051] Em um exemplo, a dermatose neutrofílica é selecionada do grupo que consiste em na pustulose amicrobiana das dobras (APF); psoríase em placas; Psoríase pustulosa mediada por CARD14 (CAMPS); síndromes periódicas associadas à criopirina (CAPS); deficiência do receptor de interleucina-1 (DIRA); deficiência do antagonista do receptor da interleucina-36 (DIRTA); hidradenite supurativa (HS); pustulose palmoplantar; artrite piogênica; pioderma gangrenoso e acne (PAPA); pioderma gangrenoso, acne e hidradenite supurativa (PASH); pioderma gangrenoso (PG); lesões cutâneas da doença de Behçet; Doença de Still; Síndrome de Sweet; pustulose subcórnea (Sneddon-Wilkinson); psoríase pustulosa; pustulose palmoplantar; pustulose exantemática generalizada aguda; acropustulose infantil; sinovite, acne, pustulose; síndrome de hiperostose e osteíte (SAPHO); síndrome da dermatose-artrite associada ao intestino (BADAS); dermatose neutrofílica do dorso das mãos; hidradenite écrina neutrofílica; eritema elevatum diutinum; e pioderma gangrenoso. Em um exemplo, a dermatose neutrofílica é hidradenite supurativa (HS) ou pustulose palmoplantar (PPP).

[0052] Em um exemplo, a dermatose neutrofílica é a hidradenite supurativa (HS). Como mostrado nos Exemplos, descobriu-se que a inibição da sinalização de G-CSF reduziu significativamente a migração neutrofílica associada ao CXCR1, que é um receptor de quimiocina migratório, cuja expressão está correlacionada com a gravidade da doença HS.

[0053] Em um exemplo, a dermatose neutrofílica é a pustulose palmoplantar (PPP). Como mostrado no Exemplo 5, verificou-se que o tratamento da PPP com um anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF é seguro e eficaz.

[0054] A eficácia do tratamento da PPP pode ser determinada usando qualquer medida conhecida na arte. Por exemplo, em alguns exemplos, a administração de um anticorpo, conforme divulgado neste documento, reduz uma pontuação de ppPASI. O ppPASI é uma ferramenta de avaliação baseada no Índice de Gravidade da Psoríase por Área amplamente usada para avaliar a gravidade da psoríase crônica em placas. Os parâmetros incluindo gravidade, eritema, número total de pústulas e descamação são pontuados em uma escala de 1-4, depois corrigidos para a área e local envolvidos (palma ou sola do pé). A soma dos quatro valores produz o ppPASI final que varia entre 0 (sem PPP) e 72 (a PPP mais grave). O ppPASI pode ser avaliado na triagem, antes, durante e/ou após a administração de um anticorpo divulgado aqui para avaliar a eficácia do tratamento. Por exemplo, uma pontuação de ppPASI mais baixa após a administração do anticorpo, em relação a antes da administração, é uma evidência de tratamento eficaz da PPP.

[0055] Outra medida para avaliar a eficácia do tratamento da PPP é a Avaliação Global da Atividade da Doença na Sola-Palma pelo Médico (Palm- Sole Physician Global Assesment – PGA). Em um exemplo, a administração de um anticorpo conforme divulgado neste documento reduz a pontuação da Avaliação Global da Atividade da Doença na Sola-Palma pelo Médico (PGA). A PGA é uma avaliação média de todas as lesões psoriáticas com base no eritema, escama e endurecimento. A PGA pode ser avaliada na triagem, antes, durante e/ou após a administração de um anticorpo aqui divulgado para avaliar a eficácia do tratamento. Por exemplo, uma pontuação de PGA mais baixa após a administração do anticorpo, em relação a antes da administração, é evidência de tratamento eficaz de PPP. Outras medidas adequadas para avaliar a eficácia do tratamento das dermatoses neutrofílicas, como PPP, são aqui descritas.

[0056] Em alguns exemplos, o indivíduo foi diagnosticado com PPP pelo menos 1 ano, ou pelo menos 2 anos, ou pelo menos 3 anos, ou pelo menos 4 anos antes do tratamento com o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

[0057] Em alguns exemplos, o indivíduo com PPP foi tratado anteriormente para PPP. Em alguns exemplos, o indivíduo foi tratado anteriormente com qualquer uma ou mais das seguintes terapias: (i) metotrexato; (ii) acitretina; (iii) tacrolimus; (iv) corticosteroides; e (v) vitamina D e corticosteroides.

[0058] Em alguns exemplos, o indivíduo com PPP tem um Índice de Gravidade da Psoríase Pustulosa Palmoplantar por Área (ppPASI) de pelo menos 1 1, ou pelo menos 1 6, ou pelo menos 2 1, ou pelo menos 2 6, ou pelo menos 3 1, antes do tratamento com o anticorpo que inibe a sinalização de G- CSF. Assim, em alguns exemplos, a PPP é PPP moderada ou grave. Em alguns exemplos, a PPP é PPP grave (ou seja, um ppPASI de pelo menos 16).

[0059] Em alguns exemplos, o indivíduo com PPP tem uma pontuação da PPP-Avaliação Global da Atividade da Doença pelo Médico (PPP-PGA) de 3 (ou seja, “moderada”) ou 4 (ou seja, “grave”), antes do tratamento com o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

[0060] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para tratar uma dermatose neutrofílica, o método compreendendo administrar a um indivíduo que sofre de uma dermatose neutrofílica uma dose de 0,1 a 1 mg/kg de um anticorpo que se liga a ou se liga especificamente a um receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes uma vez a cada 21 dias e em que o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0061] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para tratar uma dermatose neutrofílica, o método compreendendo administrar a um indivíduo que sofre de uma dermatose neutrofílica uma dose de 0,1 a 1 mg/kg de um anticorpo que se liga a ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes uma vez a cada 21 dias e em que o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0062] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para tratar HS, o método compreendendo administrar a um indivíduo que sofre de dermatose neutrofílica uma dose de 0,1 a 1 mg/kg de um anticorpo que se liga a ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes uma vez a cada 21 dias e em que o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou

(ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0063] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para o tratamento de PPP, o método compreendendo administrar a um indivíduo que sofre de dermatose neutrofílica uma dose de 0,1 a 1 mg/kg de um anticorpo que se liga a ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes uma vez a cada 21 dias e em que o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[0064] A presente divulgação proporciona também um kit contendo um anticorpo, conforme descrito neste documento, embalado com instruções para uso em um método descrito neste documento.

Breve Descrição dos Desenhos

[0065] A Figura 1 é um gráfico que ilustra a concentração sérica média de CSL324 ao longo do tempo em indivíduos saudáveis aos quais foi administrada uma dose única de 0,1, 0,3, 0,6, 0,8 e 1,0 mg/kg C1.2G, conforme descrito no Exemplo 1.

[0066] A Figura 2 é um gráfico que ilustra a porcentagem do receptor alvo ocupado (G-CSFR) ao longo do tempo em indivíduos saudáveis aos quais foi administrada uma dose única de 0,1, 0,3, 0,6, 0,8 e 1,0 mg/kg de CSL324, conforme descrito no Exemplo 1.

[0067] A Figura 3 é uma ilustração esquemática que detalha os períodos de triagem, tratamento e acompanhamento para cada coorte de indivíduos administrada com CSL324 para o tratamento de dermatoses neutrofílica, como descrito no Exemplo 2.

[0068] A Figura 4 é um esquema que detalha a entrada da Coorte #1 e o início tardio da Coorte #2 para os indivíduos administrados com CSL324 para o tratamento da dermatose neutrofílica, como descrito no Exemplo 2.

[0069] A Figura 5 é um mapa térmico que indica a contagem absoluta de neutrófilos (ANC) de acordo com o grau de toxicidade da neutropenia (ou seja, graus 1, 2, 3, e 4) em indivíduos saudáveis que receberam uma dose única de 0,1, 0,3, 0,6, 0,8, e 1,0 mg/kg de CSL324, como descrito no Exemplo 1.

[0070] A Figura 6 é um mapa térmico que indica a contagem absoluta de neutrófilos (ANC) de acordo com o grau de toxicidade da neutropenia (ou seja, graus 1, 2, 3 e 4) em indivíduos saudáveis administrados com três doses de 0,6 mg/kg de CSL324, como descrito no Exemplo 1.

[0071] A Figura 7 mostra os gráficos que ilustram a expressão do CXCR1, um receptor de quimiocina associado à migração celular, em neutrófilos de pacientes HS. A Figura 7A mostra que a expressão de CXCR1 foi significativamente maior nos neutrófilos de amostra de pacientes HS, em comparação com os controles saudáveis. A Figura 7B mostra a correlação entre a contagem de nódulos e abscessos de pacientes HS e a expressão de CXCR1 nos neutrófilos de pacientes HS.

[0072] A Figura 8 mostra gráficos que ilustram o efeito de CSL324 sobre a expressão de CXCR1 (Figura 8A) e CXCR2 (Figura 8B) induzida por G-CSF em neutrófilos. O CSL324 (cinza) não alterou a expressão do CXCR1 ou CXCR2 em comparação com o meio apenas, na ausência de G-CSF. A cultura de neutrófilos na presença de G-CSF sozinho (preto) aumentou a expressão de CXCR1 e CXCR2 na superfície celular em comparação com o meio apenas. A pré- incubação com CSL324 (cinza) foi capaz de reduzir a expressão de CXCR1 e CXCR2 induzida por G-CSF.

[0073] A Figura 9 mostra gráficos que ilustram o efeito de CSL324 sobre a migração neutrofílica induzida por G-CSF. A pré-incubação na presença de G-

CSF apenas induziu a migração de neutrófilos a MIP-2 (Figura 9A; barras pretas), que foi reduzida aos mesmos níveis que o controle de meio apenas por CSL324 (Figura 9A; barras cinzas). A pré-incubação com G-CSF resultou no aumento da regulação de CXCR1 e CXCR2 que se correlacionou com o aumento da migração de neutrófilos a MIP-2 (Figura 9B e 9C).

[0074] A Figura 10 mostra gráficos que ilustram a contagem de neutrófilos e expressão de marcadores de migração celular, CXCR1 e CXCR2, em pacientes com psoríase. A contagem de neutrófilos (Figura 10A) foi significativamente aumentada no sangue periférico de pessoas com psoríase em comparação com os controles não afetados. A estratificação baseada na gravidade da psoríase avaliada pela pontuação PASI mostrou que a contagem de neutrófilos foi significativamente elevada em indivíduos com uma pontuação PASI de 10 ou maior. A proporção neutrófilos: linfócitos (NLR) foi significativamente elevada em indivíduos com uma pontuação de PASI de 10 ou maior em comparação com indivíduos com uma pontuação de PASI inferior a 10 (Figura 10B). A expressão de CXCR2 foi significativamente elevada na superfície dos neutrófilos tanto na psoríase leve (PASI < 10) quanto na grave (PASI > 10) (Figura 10C). Nenhuma alteração estatisticamente significativa nos níveis do receptor de quimiocina CXCR1 foi detectada (Figura 10D).

[0075] A Figura 11 é um gráfico que ilustra o Índice de Gravidade da Psoríase Pustulosa Palmoplantar por Área (ppPASI) de um indivíduo humano com pustulose palmoplantar (PPP) tratado com cinco infusões IV de CSL324 a cada 21 dias.

[0076] A Figura 12 é um gráfico que ilustra a contagem absoluta de neutrófilos (ANC) de um indivíduo humano com pustulose palmoplantar (PPP) tratado com cinco infusões IV de CSL324 a cada 21 dias. As linhas pontilhadas verticais indicam as dosagens de CSL324. O limite inferior e o limite superior da faixa normal de ANC são indicados por “LLN” e “ULN” respectivamente.

Chave para a Lista de Sequências

[0077] SEQ ID NO: 1 - aminoácidos 25-335 de G-CSFR de Homo sapiens (hG-CSFR) com um marcador de poli-histidina C-terminal

[0078] SEQ ID NO: 2 - VH de C1.2

[0079] SEQ ID NO: 3 - VL de C1.2

[0080] SEQ ID NO: 4 - VH de C1.2G

[0081] SEQ ID NO: 5 - VL de C1.2G

[0082] SEQ ID NO: 6 - HCDR1 de C1.2

[0083] SEQ ID NO: 7 - HCDR2 de C1.2

[0084] SEQ ID NO: 8 - HCDR3 de C1.2

[0085] SEQ ID NO: 9 - LCDR1 de C1.2

[0086] SEQ ID NO: 10 - LCDR2 de C1.2

[0087] SEQ ID NO: 11 - LCDR3 de C1.2

[0088] SEQ ID NO: 12 - sequência consenso de HCDR3 de C1.2

[0089] SEQ ID NO: 13 - sequência consenso de LCDR3 de C1.2

[0090] SEQ ID NO: 14 - Cadeia pesada de C1.2G com região constante de IgG4 estabilizada

[0091] SEQ ID NO: 15 - Cadeia leve de C1.2G com região constante kappa

[0092] SEQ ID NO: 16 - Cadeia pesada de C1.2G com região constante de IgG4 estabilizada e sem lisina C-terminal.

Descrição das Concretizações Geral

[0093] Ao longo deste relatório descritivo, a menos que especificamente indicado de outra forma ou o contexto exija de outra forma, a referência a uma única etapa, composição de matéria, grupo de etapas ou grupo de composições de matéria deve ser considerada como abrangendo uma e uma pluralidade (ou seja, um ou mais) daquelas etapas, composições de matéria, grupos de etapas ou grupos de composições de matéria.

[0094] Aqueles técnicos no assunto compreenderão que a presente divulgação é suscetível a variações e modificações além daquelas especificamente descritas. Deve ser entendido que a divulgação inclui todas essas variações e modificações. A divulgação também inclui todas as etapas, características, composições e compostos referidos ou indicados neste relatório descritivo, individual ou coletivamente, e quaisquer e todas as combinações ou quaisquer duas ou mais das referidas etapas ou características.

[0095] A presente divulgação não deve ser limitada em escopo pelos exemplos específicos descritos neste documento, que se destinam apenas para fins de exemplificação. Produtos, composições e métodos funcionalmente equivalentes estão claramente dentro do escopo da presente divulgação.

[0096] Qualquer exemplo da presente divulgação neste documento deve ser considerado como aplicável mutatis mutandis a qualquer outro exemplo da divulgação, a menos que especificamente indicado de outra forma.

[0097] A menos que especificamente definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento devem ser considerados como tendo o mesmo significado como comumente entendido por um técnico no assunto (por exemplo, em cultura de células, genética molecular, imunologia, imuno-histoquímica, química de proteínas e bioquímica).

[0098] A menos que indicado de outra forma, a proteína recombinante, cultura de células e técnicas imunológicas utilizadas na presente divulgação são procedimentos padrão, bem conhecidos por aqueles técnicos no assunto. Tais técnicas são descritas e explicadas ao longo da literatura em fontes como J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), TA Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 e 2, IRL Press (1991), DM Glover e BD Hames (editores), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 e 1996) e FM Ausubel et al. (editores), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates e Wiley-Interscience (1988, incluindo todas as atualizações até o momento), Ed Harlow e David Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988) e JE Coligan et al. (editores) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (incluindo todas as atualizações até o momento).

[0099] A descrição e as definições das regiões variáveis e suas porções, imunoglobulinas, anticorpos e fragmentos dos mesmos podem ser esclarecidos pela discussão em Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 e 1991, Bork et al., J Mol. Biol. 242, 309-320, 1994, Chothia e Lesk, J. Mol Biol. 196: 901 -917, 1987, Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989 e/ou Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273, 927-948,

1997.

[00100] O termo “e/ou”, por exemplo, “X e/ou Y” deve ser entendido como significando “X e Y” ou “X ou Y” e deve ser interpretado no sentido de fornecer apoio explícito para ambos os significados ou para qualquer um dos significados.

[00101] Ao longo deste relatório descritivo, a palavra “compreende”, ou variações como “compreender” ou “compreendendo”, serão entendidas como implicando a inclusão de um elemento declarado, número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas.

[00102] Conforme usado neste documento, o termo “derivado de” deve ser entendido como indicando que um número inteiro especificado pode ser obtido de uma fonte particular, embora não necessariamente diretamente dessa fonte. Definições Selecionadas

[00103] A referência aqui ao “fator estimulador de colônias de granulócitos” (G-CSF) inclui as formas nativas de G-CSF, formas mutantes das mesmas, por exemplo, filgrastim e formas peguiladas de G-CSF ou filgrastim. Este termo também abrange as formas mutantes de atividade de retenção de G-CSF para se ligar a G-CSFR (por exemplo, G-CSFR humano) e induzir a sinalização.

[00104] O G-CSF é um importante regulador da produção de granulócitos. O G-CSF é produzido pelas células estromais da medula óssea, células endoteliais, macrófagos e fibroblastos, e a produção é induzida por estímulos inflamatórios. O G-CSF atua através do receptor G-CSF (G-CSFR), que é expresso em progenitores mieloides precoces, neutrófilos maduros, monócitos/macrófagos, linfócitos T e B e células endoteliais.

[00105] Para efeitos de nomenclatura apenas e não de limitação, um exemplo de sequência de um G-CSFR humano é apresentada na Sequência de Referência do NCBI: NP_000751.1 (e apresentada na SEQ ID NO: 16). A sequência de G-CSFR de outras espécies pode ser determinada usando sequências fornecidas neste documento e/ou em bancos de dados disponíveis publicamente e/ou determinada usando técnicas padrão (por exemplo, conforme descrito em Ausubel et al., (Editores), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates e Wiley-Interscience (1988, incluindo todas as atualizações até o momento) ou Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)). A referência a G-CSFR humano pode ser abreviada para hG-CSFR e a referência a G-CSFR de macaco cynomolgus pode ser abreviada para cynoG-CSFR. A referência a G-CSFR solúvel refere-se a polipeptídeos que compreendem a região de ligação ao ligante de G-CSFR. Os domínios Ig e CRH de G-CSFR estão envolvidos na ligação do ligante e na dimerização do receptor (Layton et al., J. Biol Chem, 272: 29735-29741, 1997 e Fukunaga et al., EMBO J. 10: 2855-2865, 1991). As formas solúveis de G-CSFR compreendendo essas porções do receptor foram utilizadas em vários estudos do receptor e a mutação das cisteínas livres nas posições 78, 163 e 228 do receptor auxilia na expressão e isolamento do polipeptídeo receptor solúvel (Mine et al., Biochem., 4: 2458-2464 2004) sem afetar a ligação ao ligante.

[00106] Tal como aqui utilizado, o termo “condição mediada por neutrófilos” será entendido como abrangendo qualquer condição adversa ou doença que é causada pela atividade dos neutrófilos ou para a qual o benefício terapêutico é alcançado pela remoção ou redução do número de neutrófilos circulantes.

[00107] Conforme usado neste documento, o termo “neutropenia” é usado para se referir a uma contagem absoluta de neutrófilos (ANC) abaixo do limite inferior da faixa normal, por exemplo, um ANC de menos de 2000 células/μL de sangue, ou menos de 1500 células/μL de sangue, ou menos de 1000 células/μL de sangue, por exemplo, menos de 500 células/μL de sangue (vide Sibille et al. 2010 Br J Clin Pharmacol 70 (5): 736–748). Em alguns exemplos, o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF é administrado em uma quantidade que não causa neutropenia grave. Conforme usado neste documento, o termo “neutropenia grave” é usado para se referir a uma contagem absoluta de neutrófilos (ANC) de menos de 1000 células/μL de sangue. Para os fins da presente divulgação, o seguinte será usado para definir os graus de neutropenia - Grau 1: < 2,0 x 109/L (< 2000/mm3) e > 1,1 x 109/L (> 1500/mm3) - Grau 2: < 1,5 x 109/L (< 1500/mm3) e > 1,0 x 109/L (> 1000/mm3) - Grau 3: < 1,0 x 109/L (< 1000/mm3) e > 0,5 x 109/L (> 500/mm3) - Grau 4: < 0,5 x 109/L (< 500/mm3).

[00108] Tal como aqui utilizado, os termos “prevenindo”, “prevenir” ou “prevenção” incluem a administração de um anticorpo da divulgação para, assim, parar ou impedir o desenvolvimento de pelo menos um sintoma de uma condição. Este termo também abrange o tratamento de um indivíduo em remissão para prevenir ou impedir a recaída. Por exemplo, um indivíduo que sofre de esclerose múltipla recorrente-remitente é tratado durante a remissão para prevenir uma recaída.

[00109] Tal como aqui utilizado, os termos “tratando”, “tratar” ou “tratamento” incluem a administração de um anticorpo aqui descrito para, assim, reduzir ou eliminar pelo menos um sintoma de uma doença ou condição especificada.

[00110] Conforme usado neste documento, o termo “indivíduo” deve ser entendido como qualquer animal, incluindo humanos, por exemplo, um mamífero. Exemplos de indivíduos incluem, mas não estão limitados a humanos e primatas não humanos. Por exemplo, o indivíduo é um humano.

[00111] O técnico no assunto estará ciente de que um “anticorpo” é geralmente considerado um anticorpo que compreende uma região variável constituído por uma pluralidade de cadeias polipeptídicas, por exemplo, um polipeptídeo compreendendo uma VL e um polipeptídeo compreendendo uma VH. Um anticorpo geralmente compreende também domínios constantes, alguns dos quais podem ser arranjados em uma região constante, que inclui um fragmento constante ou fragmento cristalizável (Fc), no caso de uma cadeia pesada. A VH e uma VL interagem para formar um Fv compreendendo uma região de ligação ao antígeno que é capaz de se ligar especificamente a um ou alguns antígenos intimamente relacionados. Geralmente, uma cadeia leve de mamíferos é uma cadeia leve κ ou uma cadeia leve λ e uma cadeia pesada de mamíferos é α, δ, ε, γ ou μ. Os anticorpos podem ser de qualquer tipo (por exemplo, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA e IgY), classe (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 e IgA2) ou subclasse. O termo “anticorpo” também abrange anticorpos humanizados, anticorpos primatizados, anticorpos humanos e anticorpos quiméricos.

[00112] Os termos “anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” ou “anticorpo inteiro” são usados indistintamente para se referir a um anticorpo em sua forma substancialmente intacta, em oposição a um fragmento de ligação ao antígeno de um anticorpo. Especificamente, anticorpos inteiros incluem aqueles com cadeias pesadas e leves, incluindo uma região Fc. Os domínios constantes podem ser domínios constantes de sequência de tipo selvagem (por exemplo, domínios constantes de sequência de tipo selvagem humano) ou variantes de sequência de aminoácidos dos mesmos.

[00113] Tal como aqui utilizado, a “região variável” refere-se às porções das cadeias leves e/ou pesadas de um anticorpo, conforme definido neste documento e que é capaz de se ligar especificamente a um antígeno e inclui as sequências de aminoácidos das regiões determinantes de complementaridade (CDRs); ou seja, CDR1, CDR2 e CDR3 e regiões estruturais (FRs). Exemplos de regiões variáveis compreendem três ou quatro FRs (por exemplo, FR1, FR2,

FR3 e opcionalmente FR4) juntamente com três CDRs. A VH refere-se à região variável da cadeia pesada. VL refere-se à região variável da cadeia leve.

[00114] Tal como aqui utilizado, o termo “regiões determinantes de complementaridade” (sin. CDRs; ou seja, CDR1, CDR2 e CDR3) refere-se aos resíduos de aminoácidos de uma região variável de anticorpo cuja presença é necessária para a ligação ao antígeno. Cada região variável tipicamente tem três regiões CDRs identificadas como CDR1, CDR2 e CDR3. As posições dos aminoácidos atribuídas às CDRs e FRs podem ser definidas de acordo com Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987 e 1991 ou outra numeração sistemas no desempenho desta divulgação, por exemplo, o sistema de numeração canônico de Chothia e Lesk J. Mol Biol. 196: 901-917, 1987; Chothia et al. Nature 342, 877-883, 1989; e/ou Al-Lazikani et al., J Mol Biol 273: 927-948, 1997; o sistema de numeração IMGT de Lefranc et al., Devel. And Compar. Immunol., 27: 55-77, 2003; ou o sistema de numeração AHO de Honnegher e Plükthun J. Mol. Biol., 309: 657-670, 2001. Por exemplo, de acordo com o sistema de numeração de Kabat, as regiões estruturais (FRs) e as CDRs de VH são posicionados da seguinte forma: resíduos 1-30 (FR1), 31-35 (CDR1), 36-49 (FR2), 50-65 (CDR2), 66-94 (FR3), 95-102 (CDR3) e 103-113 (FR4). De acordo com o sistema de numeração de Kabat, as FRs e CDRs de VL são posicionadas da seguinte forma: resíduos 1-23 (FR1), 24-34 (CDR1), 35-49 (FR2), 50-56 (CDR2), 57-88 (FR3), 89-97 (CDR3) e 98-107 (FR4). A presente divulgação não está limitada às FRs e CDRs definidas pelo sistema de numeração de Kabat, mas inclui todos os sistemas de numeração, incluindo aqueles discutidos acima. Em um exemplo, a referência aqui a uma CDR (ou FR) é em relação a essas regiões de acordo com o sistema de numeração de Kabat.

[00115] Tal como aqui utilizado, o termo “se liga” em referência à interação de um anticorpo ou um sítio de ligação ao antígeno do mesmo com um antígeno significa que a interação é dependente da presença de uma estrutura particular (por exemplo, um determinante antigênico ou epítopo) no antígeno. Por exemplo,

um anticorpo reconhece e se liga a uma estrutura específica de proteína em vez de proteínas em geral. Se um anticorpo se liga ao epítopo “A”, a presença de uma molécula contendo o epítopo “A” (ou livre, “A” não marcado), em uma reação contendo “A” marcado e a proteína, reduzirá a quantidade de “A” marcado ligado ao anticorpo.

[00116] Tal como aqui utilizado, deve-se entender pelo termo “se liga(r)” ou “se liga(r) especificamente” que um anticorpo da divulgação reage ou se associa mais frequentemente, mais rapidamente, com maior duração e/ou com maior afinidade a um antígeno ou célula particular que expressa o mesmo do que a células ou antígenos alternativos. Por exemplo, um anticorpo se liga a G-CSFR (por exemplo, hG-CSFR) com afinidade materialmente maior (por exemplo, 20 vezes ou 40 vezes ou 60 vezes ou 80 vezes a 100 vezes ou 150 vezes ou 200 vezes) do que a outro receptor de citocina ou a antígenos comumente reconhecidos por anticorpos naturais polirreativos (isto é, por anticorpos de ocorrência natural conhecidos por se ligarem a uma variedade de antígenos encontrados naturalmente em humanos). Geralmente, mas não necessariamente, a referência à ligação significa ligação específica, e cada termo deve ser entendido como fornecendo suporte explícito para o outro termo.

[00117] Tal como aqui utilizado, deve-se se entender pelo termo “epítopo” (sin. “determinante antigênico”) como uma região de hG-CSFR à qual um anticorpo se liga. Este termo não está necessariamente limitado aos resíduos específicos ou estrutura com a qual o anticorpo entra em contato. Por exemplo, este termo inclui a região que abrange os aminoácidos em contato com a proteína e/ou 5- 10 ou 2-5 ou 1-3 aminoácidos fora desta região. Em alguns exemplos, o epítopo compreende uma série de aminoácidos descontínuos que são posicionados próximos um do outro quando o hG-CSFR é dobrado, ou seja, um “epítopo conformacional”. Por exemplo, um epítopo conformacional compreende aminoácidos em um ou mais ou dois ou mais ou todas as regiões correspondentes a 111-115, 170-176, 218-234 e/ou 286-300 de SEQ ID NO: 1. O técnico no assunto também estará ciente de que o termo “epítopo” não está limitado a peptídeos ou polipeptídeos. Por exemplo, o termo “epítopo” inclui agrupamentos de moléculas de superfície quimicamente ativas, como as cadeias laterais de açúcar, cadeias laterais de fosforil ou cadeias laterais de sulfonil e, em certos exemplos, podem ter características estruturais tridimensionais específicas e/ou características de carga específicas.

[00118] Deve-se entender pelo termo “inibe competitivamente” que um anticorpo da divulgação (ou um sítio de ligação ao antígeno do mesmo) reduz ou evita a ligação de um outro anticorpo a G-CSFR, por exemplo, a hG-CSFR. Isto pode ser devido ao anticorpo (ou sítio de ligação ao antígeno) e ao outro anticorpo se ligar ao mesmo epítopo ou a um sobreposto. Pelo exposto, será evidente que o anticorpo não precisa inibir completamente a ligação do outro anticorpo, em vez disso, ele precisa apenas reduzir a ligação a uma quantidade estatisticamente significativa, por exemplo, em pelo menos cerca de 10% ou 20% ou 30% ou 40% ou 50% ou 60% ou 70% ou 80% ou 90% ou 95%. Preferencialmente, o anticorpo reduz a ligação do anticorpo em pelo menos cerca de 30%, mais preferencialmente em pelo menos cerca de 50%, mais preferencialmente em pelo menos cerca de 70%, ainda mais preferencialmente em pelo menos cerca de 75%, ainda mais preferencialmente em pelo menos cerca de 80% ou 85% e prioritariamente em pelo menos cerca de 90%. Os métodos para determinar a inibição competitiva da ligação são conhecidos na arte e/ou descritos neste documento. Por exemplo, o anticorpo é exposto a G- CSFR na presença ou ausência do anticorpo. Se menos anticorpo se liga na presença do anticorpo do que na ausência do anticorpo, o anticorpo é considerado por inibir competitivamente a ligação do anticorpo. Em um exemplo, a inibição competitiva não é devida ao impedimento estérico.

[00119] Deve-se entender por “sobreposição”, dentro do contexto de dois epítopos, que dois epítopos compartilham um número suficiente de resíduos de aminoácidos que permitem um anticorpo (ou sítio de ligação ao antígeno do mesmo) se ligar a um epítopo para inibir competitivamente a ligação de um anticorpo (ou sítio de ligação ao antígeno) que se liga ao outro epítopo. Por exemplo, os epítopos “sobrepostos” compartilham pelo menos 1 ou 2 ou 3 ou 4 ou 5 ou 6 ou 7 ou 8 ou 9 ou 20 aminoácidos.

[00120] Conforme usado neste documento, deve-se entender pelo termo “neutralizar” que um anticorpo é capaz de bloquear, reduzir ou prevenir a sinalização mediada por G-CSF em uma célula através do G-CSFR. Os métodos para determinar a neutralização são conhecidos na arte e/ou descritos neste documento. Tratamento das Condições Mediadas por Neutrófilos

[00121] Em alguns exemplos, a condição mediada por neutrófilos é uma doença autoimune, uma doença inflamatória, câncer ou lesão de isquemia- reperfusão.

[00122] Exemplos de condições autoimunes incluem os distúrbios intestinais autoimunes (como doença de Crohn e colite ulcerosa), artrite (como artrite reumatoide, artrite psoriática e/ou artrite idiopática, por exemplo, artrite idiopática juvenil) ou psoríase.

[00123] Exemplos de condições inflamatórias incluem as condições neurológicas inflamatórias (por exemplo, doença de Devic, uma infecção viral no cérebro, esclerose múltipla e neuromielite óptica), uma doença pulmonar inflamatória (por exemplo, doença pulmonar obstrutiva crônica [DPOC] ou asma) ou uma condição inflamatória ocular (por exemplo, uveíte).

[00124] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a lesão de isquemia-reperfusão. Por exemplo, a lesão de isquemia-reperfusão é devida ou está associada ao transplante de tecido ou órgão (por exemplo, transplante de rim). Por exemplo, o anticorpo é administrado a um receptor do tecido ou órgão transplantado, por exemplo, antes da coleta do órgão e/ou a um tecido ou órgão antes do transplante ou é administrado a um tecido ou órgão coletado ex vivo.

[00125] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é uma dermatose neutrofílica ou uma lesão neutrofílica da pele.

Exemplos de Condições Autoimunes

[00126] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a artrite reumatoide (AR). Certos subtipos de AR podem ser tratados de acordo com a presente divulgação. Em um caso, a AR moderada a grave é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, o indivíduo teve a confirmação de uma AR moderada a grave, por exemplo, AR poliarticular.

[00127] A presente divulgação também proporciona um método para tratar certas subpopulações de pacientes com AR que podem ser particularmente difíceis de se tratar. Por exemplo, em um caso, a presente divulgação proporciona um método para o tratamento de pacientes que têm uma resposta subterapêutica a uma terapia, como aqueles que não responderam ou foram intolerantes ao metotrexato ou a um inibidor do fator de necrose tumoral para o tratamento de sua AR.

[00128] A presente divulgação também proporciona métodos para melhorar os sintomas da AR em um indivíduo com base nos índices usados para medir o estado da doença. O tratamento da AR que utiliza um anticorpo aqui divulgado também pode ser determinado através de medidas conhecidas na arte.

[00129] Os métodos para medir a gravidade da AR serão evidentes para o técnico no assunto. Por exemplo, comparar o número de articulações doloridas/sensíveis e inchadas entre o ponto de referência e dos vários pontos de tempo durante o tratamento é uma maneira típica de se avaliar o estado das articulações e a resposta ao tratamento. Na contagem de articulações do American College of Rheumatology (ACR) para AR (Felson et al. Arthritis & Rheumatology 38: 727-735, 1995), 68 articulações são avaliadas quanto a dor/sensibilidade e 66 quanto ao inchaço (o quadril não é avaliado para inchaço). No Disease Activity Score (DAS) empregado principalmente na Europa, uma contagem de 44 ou 28 articulações é usada na AR. Além da contagem de articulações, os critérios de avaliação do ACR incluem os seguintes elementos para compor uma pontuação composta: avaliação global pelo paciente (em uma escala visual analógica [VAS]), dor do paciente, avaliação global pelo médico,

Questionário de Avaliação de Saúde (HAQ; uma medida de função), e um reagente de fase aguda (proteína C reativa ou taxa de sedimentação). Uma resposta ACR 20 constituiria uma melhora de 20% na contagem de articulações doloridas e inchadas e uma melhora de 20% em pelo menos 3 dos outros 5 elementos nos critérios compostos. As respostas ACR 50 e 70 representam pelo menos 50% e 70% de melhora desses elementos. O sistema ACR representa apenas mudança, enquanto o sistema DAS representa o estado atual de atividade e mudança da doença. O sistema de pontuação DAS usa uma fórmula matemática ponderada, derivada de ensaios clínicos na AR. Por exemplo, o DAS 28 é 0,56 (T28) + 0,28 (SW28) +0,70 (Ln ESR) +0,014 GH em que T representa o número de articulações doloridas, SW é o número de articulações inchadas, ESR é a taxa de sedimentação de eritrócitos e GH é a saúde global. Vários valores do DAS representam alta ou baixa atividade da doença, bem como remissão, e a mudança e a pontuação do desfecho resultam em uma categorização do paciente por grau de resposta (nenhuma, moderada, boa).

[00130] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a psoríase. Conforme usado neste documento, o termo “psoríase” abrange todos os subtipos de psoríase, incluindo placa, gutata, invertida, pustulosa e eritrodérmica. Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a psoríase em placas (também conhecida na arte como “psoríase vulgar” ou “psoríase comum”). Certos subtipos de psoríase podem ser tratados de acordo com a presente divulgação. Em um caso, a psoríase moderada a grave é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, o indivíduo teve a confirmação de uma psoríase moderada a grave, por exemplo, psoríase crônica moderada a grave.

[00131] A presente divulgação também proporciona um método para tratar certas subpopulações de pacientes com psoríase que podem ser particularmente difíceis de se tratar. Por exemplo, em um caso, a presente divulgação proporciona um método para tratar pacientes que têm uma resposta subterapêutica a uma terapia, como aqueles que não respondem ou são intolerantes a corticosteroides tópicos ou um inibidor do fator de necrose tumoral para o tratamento de sua psoríase.

[00132] A presente divulgação também proporciona métodos para melhorar os sintomas da psoríase em um indivíduo com base nos índices usados para medir o estado da doença. O tratamento da psoríase que utiliza um anticorpo aqui divulgado também pode ser determinado através de medidas conhecidas na arte.

[00133] Os métodos para medir a gravidade da psoríase serão evidentes para o técnico no assunto. Por exemplo, o Índice de Gravidade da Psoríase por Área (PASI) é usado por dermatologistas para avaliar a intensidade da doença psoríase. Esse índice é baseado na avaliação quantitativa de três sinais típicos de lesões psoriáticas: eritema, infiltração e descamação, associados ao comprometimento da superfície cutânea. Desde o seu desenvolvimento em 1978, este instrumento tem sido usado em todo o mundo por investigadores clínicos (Fredriksson T, Petersson U: Dermatologica 1978; 157: 238-41). O PASI é indicado como PASI 50 (uma melhora de 50 por cento no PASI a partir do ponto de referência), PASI 75 (uma melhora de 75 por cento no PASI a partir do ponto de referência), PASI 90 (uma melhora de 90 por cento no PASI a partir do ponto de referência) e PASI 100 (uma melhora de 100 por cento no PASI a partir do ponto de referência).

[00134] A Avaliação Global da Atividade da Doença pelo Médico (PGA) é usada para avaliar a atividade da psoríase e acompanhar a resposta clínica ao tratamento. É uma pontuação de seis pontos que resume a qualidade geral (eritema, escamação e espessura) e a extensão das placas em relação à avaliação inicial. A resposta de um paciente é classificada como muito ruim, ruim (0-24%), regular (25-49%), bom (50-74%), ótimo (75-99%) ou sem lesões (100%) (van der Kerkhof P. Br J Dermatol 137: 661-662, 1997). Outras medidas de melhoras no estado de doença de um indivíduo com psoríase incluem respostas clínicas, como o Índice de Qualidade de Vida em Dermatologia (DLQI) e a

Diferença Mínima Clinicamente Importante (MCID), descritos em mais detalhes abaixo. Asma

[00135] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a asma, por exemplo, a asma grave. No contexto da asma, o termo “tratar” ou “tratando” refere-se à administração de um anticorpo aqui descrito para reduzir, eliminar ou prevenir uma ocorrência ou exacerbação de pelo menos um sintoma. Por exemplo, um anticorpo aqui descrito pode ser administrado a fim de prevenir um ataque de asma. De forma alternativa ou adicional, o anticorpo pode ser administrado para aliviar os sintomas da asma, como respiração ofegante, falta de ar, aperto no peito e/ou tosse.

[00136] Em um exemplo, a asma é a asma alérgica. Conforme usado neste documento, o termo “asma alérgica” (também referida como “asma aguda”) refere-se à asma desencadeada por alérgenos (por exemplo, ácaro ou pólen) que ativam os mastócitos localizados abaixo da mucosa das vias aéreas inferiores do trato respiratório. A ativação dos mastócitos desencadeia a liberação de grânulos que estimulam o epitélio nasal a produzir muco e a subsequente contração do músculo liso dentro das vias aéreas. Essa contração do músculo liso constringe as vias aéreas, causando os sintomas asmáticos.

[00137] Em um exemplo, a asma é a asma neutrofílica. Conforme usado neste documento, o termo “asma neutrofílica” refere-se a um subconjunto de asma que é caracterizado por um aumento na quantidade de neutrófilos nas vias aéreas de um indivíduo. A asma neutrofílica pode ser categorizada por contagens elevadas de neutrófilos na expectoração, por exemplo, superior a 40% ou superior a 60% das células da expectoração. A resposta ao tratamento da asma neutrofílica com corticosteroides é muitas vezes considerada ineficaz, em comparação com pacientes com asma eosinofílica. A asma neutrofílica também está associada à expressão regulada positivamente de IL-8, IL-17 e IFN- γ nas vias aéreas. Ao contrário, a “asma eosinofílica”, que é caracterizada por um aumento nos níveis de eosinófilos nas vias aéreas, está associada a um aumento na expressão de IL-5 e uma resposta inflamatória Th2 dominante.

[00138] Em um exemplo, a asma é a asma granulocítica mista. Conforme usado neste documento, o termo “asma granulocítica mista” refere-se à asma que é caracterizada por um aumento na quantidade de neutrófilos e eosinófilos nas vias aéreas de um indivíduo.

[00139] Em um exemplo, a asma é a asma grave. Tal como aqui utilizado, o termo “asma grave” refere-se à asma para a qual os sintomas são apenas parcialmente controlados ou mesmo não controlados, apesar do tratamento intensivo com terapias padrão. A asma grave pode ser definida de acordo com as diretrizes internacionais da ERS/ATS sobre definição, avaliação e tratamento da asma grave (Chung et al., Eur Respir J. 2014; 43 (2): 343-73). De acordo com os diretrizes da ERS/ATS, a asma grave é definida como a asma que exigiria um tratamento com doses elevadas de corticosteroides inalados (ICS), mais um segundo controlador (por exemplo, um agonista de longa duração β2, montelucaste ou teofilina) e/ou o tratamento sistêmico com corticosteroides para impedir que se torne incontrolável ou que permaneça descontrolada, apesar do tratamento.

[00140] Em um exemplo, a asma é a asma moderada. Em um exemplo, a asma é a asma moderada ou grave. A asma é classificada como “moderada” se os sintomas ocorrem diariamente, os sintomas se agravam com frequência e geralmente duram vários dias. Tosse e respiração ofegante podem interromper as atividades diárias normais e dificultar o sono. As exacerbações dos sintomas noturnos ocorrem mais de uma vez por semana. Na asma moderada, a função pulmonar está aproximadamente entre 60% e 80% do normal, sem tratamento. As diretrizes da Iniciativa Global para Asma (Global Initiative for Asthma – GINA) podem ser usadas para classificar a gravidade da asma, incluindo a asma moderada.

[00141] Em um exemplo, a asma é a asma mal controlada ou não controlada. O nível de controle da asma, em oposição à gravidade, pode ser determinado usando, por exemplo, um Questionário de Controle da Asma (ACQ), conforme descrito em Juniper et al., (1999) Eur Respir J 14: 902–907, Juniper et al., Respiratory Medicine (2006) 100: 616–621, e Juniper et al., Respiratory Medicine (2005) 99: 553–558.

[00142] Em um exemplo, a asma é a asma refratária. Tal como aqui utilizado, o termo “asma refratária” inclui pacientes com asma “fatal” ou “quase fatal”, bem como os subgrupos de asma, como “asma grave” e “asma dependente de e/ou resistente a esteroides”, “asma difícil de controlar”, “asma mal controlada”, “asma frágil” ou “asma irreversível”. A asma refratária pode ser definida de acordo com as diretrizes da American Thoracic Society quando um ou ambos os critérios principais e dois critérios secundários, descritos a seguir, são atendidos. Os critérios principais são: Para alcançar o controle de um nível de asma persistente leve a moderada: (1) Tratamento contínuo ou quase contínuo com corticosteroides orais (≥ 50% do ano); (2) Necessidade de tratamento com corticosteroides inalatórios em altas doses. Os critérios secundários são: (1) Necessidade de tratamento diário com um medicamento controlador além de corticosteroides inalatórios, por exemplo, LABA, antagonista de teofilina ou leucotrieno; (2) Sintomas de asma que requerem o uso de β-agonista de curta ação diariamente ou quase diariamente; (3) Obstrução persistente das vias aéreas (VEF1 < 80% previsto; variabilidade diurna do pico de fluxo expiratório (PFE) > 20%); (4) Uma ou mais consultas de urgência para asma por ano; (5) Três ou mais “disparos” de esteroides orais por ano; (6) Deterioração imediata com ≤ 25% de redução na dose de corticosteroide oral ou inalado e (7) evento de asma quase fatal no passado. Para efeitos de definição da asma refratária, o medicamento (μg/d) e a dose (inalações/d) são as seguintes: (a) Dipropionato de beclometasona > 1260 > 40 inalações (42 μg/inalação) > 20 inalações (84 μg) /inalação); (b) Budesonida > 1200 > 6 inalações; (c) Flunisolida > 2000 > 8 inalações; (d) Propionato de fluticasona > 880 > 8 inalações (110 μg), > 4 inalações (220 μg); (e) Triancinolona acetonida > 2000 > 20 inalações.

[00143] A “asma crônica” não é causada por alérgenos, mas sim o resultado da inflamação obtida na asma aguda. Uma asma aguda provoca uma inflamação crônica, que faz com que o epitélio da mucosa se torne hipersensível às respostas ambientais. Assim, agentes ambientais simples, como a fumaça, podem estimular o epitélio hipersensível a produzir grandes quantidades de muco e constringir.

[00144] Em um exemplo, o anticorpo é administrado em uma quantidade suficiente para aumentar a função pulmonar. A função pulmonar pode ser avaliada, por exemplo, por espirometria. Em um exemplo, o anticorpo é administrado em uma quantidade suficiente para aumentar o VEF 1 (volume expiratório forçado em um segundo). Em um exemplo, o anticorpo é administrado em uma quantidade suficiente para aumentar a CVF (capacidade vital forçada). O VEF1 é o volume expirado no primeiro segundo da expiração máxima iniciada na inspiração completa e é uma medida da função pulmonar. CVF é o volume máximo de ar que pode ser expirado durante o teste.

[00145] Em um exemplo, o anticorpo é administrado em uma quantidade suficiente para reduzir ou impedir a hiperresposta das vias aéreas (AHR). A AHR refere-se um aumento da sensibilidade das vias aéreas a um agonista constritor inalado, uma inclinação mais acentuada da curva dose-resposta e uma maior resposta máxima ao agonista. A AHR está geralmente associada a diminuição da função pulmonar e sintomas asmáticos. A AHR pode ser avaliada, por exemplo, com uma prova de broncoprovocação. Esta utiliza, na maioria das vezes, agonistas constritores, como a metacolina ou histamina. Esses produtos químicos desencadeiam broncoespasmo em indivíduos com asma também, mas indivíduos com AHR têm um limiar de resposta mais baixo aos agonistas constritores. Métodos adequados encontram-se descritos em (FitzPatrick et al., Sci Rep, 2016 6: 22751). Exemplos de Dermatoses Neutrofílicas

[00146] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a HS. A HS é uma doença cutânea das glândulas apócrinas (glândulas sudoríparas encontradas em certas partes do corpo) e folículos capilares, onde lesões ou caroços inchados, doloridos e inflamados se desenvolvem na virilha e, às vezes, nas axilas e inframamária. A HS ocorre quando as saídas das glândulas apócrinas ficam bloqueadas pela transpiração ou são incapazes de drenar normalmente devido ao desenvolvimento incompleto da glândula. As secreções aprisionadas nas glândulas forçam a transpiração e as bactérias para o tecido circundante, causando endurecimento subcutâneo, inflamação e infecção. A HS está confinada a áreas do corpo que contêm glândulas apócrinas. Estas áreas são as axilas, aréola do mamilo, virilha, períneo, regiões perianais e periumbilicais.

[00147] Certos subtipos de HS podem ser tratados de acordo com a presente divulgação. Em um caso, a HS moderada a grave é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, a HS crônica, por exemplo, HS crônica moderada a grave, é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, o indivíduo teve a confirmação de uma HS moderada a grave, por exemplo, uma HS crônica moderada a grave confirmada.

[00148] A presente divulgação também proporciona um método para tratar certas subpopulações de pacientes com HS que podem ser particularmente difíceis de se tratar. Por exemplo, em um caso, a presente divulgação proporciona um método tratar pacientes que têm uma resposta subterapêutica a uma terapia, como aqueles que não respondem ou são intolerantes a antibióticos orais para o tratamento de sua HS.

[00149] A presente divulgação também proporciona métodos para melhorar os sintomas da HS em um indivíduo com base nos índices usados para medir o estado da doença.

[00150] O tratamento da HS que utiliza um anticorpo aqui divulgado também pode ser determinado através de medidas conhecidas na arte. O tratamento da HS pode ser determinado usando qualquer uma das medidas conhecidas na arte, por exemplo, melhora na escala de Hurley Staging ou na Sartorius, ou qualquer medida conhecida pelos técnicos no assunto.

[00151] Por exemplo, em um caso, uma melhora no estágio de Hurley do indivíduo com HS, ou qualquer uma das medidas aqui descritas, é evidência de tratamento eficaz para HS. Em um caso, a gravidade da HS é determinada de acordo com o sistema de estadiamento de Hurley. O estadiamento de Hurley é baseado na atribuição de um dos três diferentes “estágios” ao indivíduo com HS, dependendo do nível da doença. Mais especificamente, o Estágio I se refere à formação de abscesso, único ou múltiplos, sem tratos sinusais e cicatrização; Estágio II se refere a abcessos recorrentes com formação de trato e cicatrização, simples ou múltiplos, lesões amplamente separadas; e Estágio III se refere ao envolvimento difuso ou quase difuso, ou múltiplos tratos interconectados e abscessos em toda a área. O Estágio III de Hurley é a forma mais grave. Em um caso, o indivíduo com HS tem lesões de HS que estão presentes em pelo menos duas áreas anatômicas distintas (por exemplo, axila esquerda e axila direita; ou axila esquerda e prega inguinal-crural esquerda), uma das quais é pelo menos Estágio II de Hurley. Em outro caso, o indivíduo a ser tratado tem pelo menos uma lesão que é pelo menos um Estágio II de Hurley.

[00152] Em um exemplo, o tratamento da HS com um anticorpo divulgado neste documento é determinado por uma pontuação de Hurley melhorada em relação a um determinado ponto de referência, por exemplo, o estágio de Hurley do indivíduo antes do tratamento com o inibidor de TNFα. Em um exemplo, a melhora em uma pontuação de Hurley indica que a pontuação de Hurley do indivíduo melhorou ou foi mantida após o tratamento com um anticorpo.

[00153] A gravidade da HS pode ser determinada de acordo com as definições clínicas padrão. Vide, por exemplo, estagiamento de Hurley {III vs. (I ou II)} para HS (Poli F, Jemec GBE, Revuz J., Clinical Presentation. In: Jemec GBE, Revuz J, Leyden JJ, editores. Hidradenitis Suppurativa. Springer, New York, 2006, pp 11-24). A doença do estágio III de Hurley é o estágio mais grave da hidradenite supurativa, refletindo o envolvimento difuso ou quase difuso das áreas afetadas.

[00154] Em um exemplo, a escala de Sartorius pode ser usada como um índice para medir a eficácia de um anticorpo. A escala de Sartorius é descrita por Sartorius et al. em British Journal of Dermatology, 149: 211-213. Resumidamente, as seguintes variáveis de resultado são explicitamente mencionadas nos relatórios baseados na escala de Sartorius: (1) região anatômica envolvida (axila, virilha, glúteo ou outra região ou região inframamária esquerda e/ou direita: 3 pontos por região envolvida); (2) número e pontuação das lesões (abscessos, nódulos, fístulas, cicatrizes: pontos por lesão de todas as regiões envolvidas: nódulos 2; fístulas 4; cicatrizes 1; outros 1); (3) a maior distância entre duas lesões relevantes, ou seja, nódulos e fístulas, em cada região, ou tamanho se apenas uma lesão (< 5 cm, 2; < 10 cm, 4; > 10 cm, 8); e (4) todas as lesões estão claramente separadas por pele normal? Em cada região (sim 0/não 6). Ao atribuir pontuações numéricas a essas variáveis, a intensidade da doença pode ser quantificada de uma forma mais clinicamente significativa em uma escala aberta. Uma pontuação total, bem como pontuações de regiões selecionadas escolhidas para intervenção cirúrgica ou outra intervenção podem ser calculados e acompanhados ao longo do tempo.

[00155] Em um exemplo, o tratamento da HS com um anticorpo aqui descrito é determinado de acordo com uma realização de um HiSCR (resposta clínica da hidradenite supurativa) do paciente a ser tratado. A HisSCR é definida como uma redução de pelo menos 50% na contagem de lesões inflamatórias totais (abscesso e nódulo inflamatório) (contagem de AN) em um indivíduo em relação ao ponto de referência, sem aumento na contagem de abscessos e sem aumento na contagem de fístulas de drenagem. Em um caso, o tratamento da HS em um indivíduo é definido como uma redução de pelo menos 50% na contagem de lesões inflamatórias (abcesso e nódulo). O sistema de pontuação HiSCR foi projetado para avaliar a atividade da hidradenite supurativa em um indivíduo afetado antes e depois de um tratamento.

[00156] Em outro exemplo, o tratamento da HS com um anticorpo divulgado neste documento é definido como a obtenção de uma pontuação da Avaliação

Global da Atividade da Doença pelo Médico (PGA), conforme definido abaixo, de: sem lesão (0), mínimo (1) ou leve (2), com uma melhora (isto é, redução) em relação à pontuação de PGA de referência de pelo menos 1 grau ou 2 graus, opcionalmente, no final de um período de tratamento (como na semana 16). A pontuação de PGA de referência é a pontuação de PGA medida imediatamente antes do início do tratamento, ao qual a pontuação de PGA obtida após um período de tratamento é comparada. Tabela 1: Pontuação de PGA Pontuação Avaliação Descrição 0 Sem lesões Sem abscessos, sem fístulas de drenagem, sem nódulos 1 Mínimo Sem abscessos, sem fístulas de drenagem, sem nódulos inflamatórios, presença de nódulos não inflamatórios 2 Leve Sem abcessos ou fistulas de drenagem, e menos de 5 nódulos inflamatórios, ou abcesso único ou fístula de drenagem, e sem nódulos inflamatórios 3 Moderado Sem abcessos ou fistulas de drenagem, e, pelo menos, 5 nódulos inflamatórios, ou abcesso único ou fístula de drenagem na presença de nódulos inflamatórios, ou entre 2 e 5 abcessos ou fistulas de drenagem com ou sem nódulos inflamatórios, até 10 4 Grave Entre 2 e 5 abscessos e fístulas de drenagem com ou sem nódulos inflamatórios superiores a 10 5 Muito Grave Mais de 5 abscessos ou fístulas de drenagem

[00157] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para melhorar a pontuação DLQI de um indivíduo que sofre de HS. Em um caso, a melhora na pontuação DLQI é determinada pela obtenção de uma pontuação,

por exemplo, uma pontuação estatisticamente significativa, correlacionada com um “sem” ou “impacto pequeno” do estado da doença no indivíduo.

[00158] Em outro exemplo, o tratamento da HS com um anticorpo aqui divulgado é definido considerando o Sistema Internacional de Pontuação da Hidradenite Suppurativa (International Hidradenitis Suppurativa Severity Score System – IHS4). O IHS4 é uma ferramenta validada para a avaliação dinâmica da gravidade da HS (Zouboulis, et al., Br J Dermatol, 177: 1401-09, 2017) e da melhora após a avaliação de HiSCR, pois foi projetado para avaliar a resposta ao tratamento em vez da gravidade da doença em termos de transversalidade (Kimball et al, Br J. Dermatol, 171: 1434-1442, 2014). A pontuação IHS4 (pontos) = (número de nódulos multiplicado por 1) + (número de abscessos multiplicado por 2) + [número de túneis de drenagem (fístulas/tratos sinusais) multiplicado por 4]. Uma pontuação de 3 ou menos significa HS leve, uma pontuação de 4–10 significa HS moderada e uma pontuação de 11 ou mais significa HS grave (Zouboulis, et al., Br J Dermatol, 177: 1401-09, 2017). Em um exemplo, o indivíduo tem uma pontuação IHS4 ≥ 4 antes do tratamento.

[00159] Em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para diminuir o número de lesões inflamatórias (contagem de AN) em um indivíduo com HS, o referido método compreendendo administrar sistematicamente um anticorpo aqui divulgado ao indivíduo, de modo que a contagem de AN seja diminuída. A diminuição na contagem de AN pode ser qualquer coisa maior que 10%, por exemplo, a contagem de AN pode ser reduzida em pelo menos uma redução de 50% no indivíduo em relação à contagem de AN de referência. O indivíduo pode apresentar também outras melhoras na HS após o tratamento com um anticorpo aqui descrito, por exemplo, o indivíduo pode apresentar nenhum aumento na contagem de um abcesso e/ou nenhum aumento na contagem de fístulas de drenagem após a administração com o anticorpo.

[00160] Em um exemplo, a condição mediada por neutrófilos é a PPP. A PPP é uma condição pustulosa crônica que afeta as mãos e/ou a sola dos pés. A PPP pode ocorrer com psoríase ou sem qualquer doença de pele. A PPP afeta as glândulas sudoríparas écrinas, que são mais comuns nas palmas das mãos e plantas dos pés. A PPP se apresenta como uma formação de pústulas doloridas ou com prurido nas palmas das mãos e/ou sola dos pés. A PPP pode ocorrer em uma ou ambas as mãos e/ou pés. Manchas vermelhas escamosas também podem ser vistas em associação com as pústulas. Nos estágios mais crônicos da doença, a pele pode ficar seca e espessada com fissuras profundas (rachaduras na pele). Geralmente, há uma demarcação nítida entre as áreas da pele normal e afetada. A PPP varia em gravidade e pode persistir por muitos anos. O desconforto pode ser considerável, interferindo no trabalho e afetando a qualidade de vida. Uma forma de PPP que afeta as pontas dos dedos é chamada de acrodermatite contínua de Hallopeau ou acropustulose. Pode levar à destruição da unha dos dedos afetados.

[00161] Certos subtipos de PPP podem ser tratados de acordo com a presente divulgação. Em um exemplo, a PPP moderada a grave é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, a PPP crônica, por exemplo, PPP crônica moderada a grave, é tratada pela administração de um anticorpo aqui divulgado. Em um exemplo, o indivíduo teve a confirmação de uma PPP moderada a grave, por exemplo, a PPP crônica moderada a grave confirmada.

[00162] A presente divulgação também proporciona um método para tratar certas subpopulações de pacientes com PPP que podem ser particularmente difíceis de se tratar. Por exemplo, em um exemplo, a presente divulgação proporciona um método para tratar pacientes que têm uma resposta subterapêutica a uma terapia, como aqueles que não responderam aos corticosteroides tópicos, análogos da vitamina D3, etretinato e fototerapia para o tratamento de sua PPP.

[00163] A presente divulgação também proporciona métodos para melhorar os sintomas da PPP em um indivíduo com base nos índices usados para medir o estado da doença.

[00164] O tratamento da PPP que utiliza um anticorpo aqui divulgado também pode ser determinado usando medidas conhecidas na arte. O tratamento da PPP pode ser determinado usando qualquer uma das medidas conhecidas na arte, por exemplo, melhora no ppPASI, ou qualquer medida conhecida pelos técnicos no assunto.

[00165] O ppPASI é uma ferramenta de avaliação baseada no Índice de Gravidade da Psoríase por Área amplamente usada para avaliar a gravidade da psoríase crônica em placas. Os parâmetros incluindo gravidade, eritema, número total de pústulas e descamação são pontuados em uma escala de 1-4, depois corrigidos para a área e local envolvidos (palma ou sola do pé). A soma dos quatro valores produz o ppPASI final que varia entre 0 (sem PPP) e 72 (a PPP mais grave) (Bhushan, et al., Br J Dermatol, 145: 546-53, 2001). O ppPASI pode ser avaliado na triagem, antes da administração. Em um exemplo, a administração de um anticorpo conforme divulgado neste documento reduz uma pontuação de ppPASI. Em um exemplo, um indivíduo tem uma pontuação ppPASI ≥ 12 antes de iniciar o tratamento, conforme descrito neste documento. Em um exemplo, um indivíduo tem uma pontuação ppPASI < 12 após o tratamento, conforme descrito neste documento.

[00166] Em um exemplo, a administração de um anticorpo conforme divulgado neste documento reduz a pontuação da Avaliação Global da Atividade da Doença na Sola-Palma pelo Médico (PGA) em um indivíduo que sofre de PPP. A PGA é uma avaliação média de todas as lesões psoriáticas com base em eritema, escamação e endurecimento (Robinson, 2011). A PGA pode ser avaliada antes da administração do anticorpo.

[00167] Outros índices de resposta para PPP incluem: o sistema de pontuação PASI, Avaliação Global da Atividade da Doença pelo Investigador mod. 2011 (IGA mod 2011), Índice de Qualidade de Vida em Dermatologia (DLQI) e Avaliação Global da Atividade da Doença pelo Indivíduo (SGA), Questionário de Incapacidade de Atividades e Produtividade no Trabalho pela

Psoríase (WPAI-PSO), Índice de Qualidade de Vida Palmar-Pustular (ppQoL- Index). Anticorpos

[00168] Exemplos de anticorpos que se ligam a G-CSFR e inibem a sinalização de G-CSF. Esses anticorpos encontram-se descritos no documento WO2012/171057.

[00169] Exemplos de Anticorpos que se ligam a G-CSF e inibem a sinalização de G-CSF. Esses anticorpos encontram-se descritos no documento WO2018/145206.

[00170] Os métodos para gerar anticorpos são conhecidos na arte e/ou descritos em Harlow e Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988). Geralmente, em tais métodos, G-CSFR ou G- CSF (por exemplo, hG-CSFR ou hG-CSF) ou uma região do mesmo (por exemplo, um domínio extracelular) ou fragmento imunogênico ou epítopo do mesmo ou uma célula que expressa e exibe o mesmo (ou seja, um imunógeno), opcionalmente formulado com qualquer transportador, adjuvante ou excipiente farmaceuticamente aceitável adequado ou desejado, é administrado a um animal não humano, por exemplo, um camundongo, galinha, rato, coelho, porquinho- da-índia, cachorro, cavalo, vaca, cabra ou porco. O imunógeno pode ser administrado por via intranasal, intramuscular, subcutânea, intravenosa, intradérmica, intraperitoneal ou por outra via conhecida.

[00171] Os anticorpos monoclonais são um exemplo de forma de um anticorpo contemplado pela presente divulgação. O termo “anticorpo monoclonal” ou “mAb” refere-se a uma população homogênea de anticorpos capaz de se ligar ao(s) mesmo(s) antígeno(s), por exemplo, ao mesmo epítopo dentro do antígeno. Este termo não se destina a ser limitado no que diz respeito à fonte do anticorpo ou a maneira como é feito.

[00172] Para a produção de mAbs, qualquer uma de uma série de técnicas conhecidas pode ser usada, tal como, por exemplo, o procedimento exemplificado no documento US4196265 ou Harlow e Lane (1988), supra.

[00173] De forma alternativa, a tecnologia ABL-MYC (NeoClone, Madison WI 53713, EUA) é usada para produzir linhagens celulares secretoras de MAbs (por exemplo, como descrito em Largaespada et al, J. Immunol. Methods. 197: 85-95, 1996).

[00174] Os anticorpos também podem ser produzidos ou isolados por rastreio de uma biblioteca de exibição, por exemplo, uma biblioteca de exibição de fagos ou phage display, por exemplo, como descrito nos documentos US6300064 e/ou US5885793. Por exemplo, os presentes inventores isolaram anticorpos totalmente humanos de uma biblioteca de exibição de fagos.

[00175] O anticorpo da presente divulgação pode ser um anticorpo sintético. Por exemplo, o anticorpo é um anticorpo quimérico, um anticorpo humanizado, um anticorpo humano ou um anticorpo desimunizado.

[00176] Em um exemplo, um anticorpo aqui descrito é um anticorpo quimérico. O termo “anticorpo quimérico” refere-se a anticorpos nos quais uma porção da cadeia pesada e/ou leve é idêntica ou homóloga às sequências correspondentes em anticorpos derivados de uma espécie em particular (por exemplo, murino, como camundongo) ou pertencente a uma determinada classe ou subclasse de anticorpo, enquanto o restante da(s) cadeia(s) é idêntico ou homólogo às sequências correspondentes em anticorpos derivados de outra espécie (por exemplo, primata, como humano) ou pertencente a outra classe ou subclasse de anticorpo. Os métodos para a produção de anticorpos quiméricos encontram-se descritos, por exemplo, nos documentos US4816567 e US5807715.

[00177] Os anticorpos da presente divulgação podem ser humanizados ou humanos.

[00178] Deve-se entender pelo termo “anticorpo humanizado” como uma referência a uma subclasse de anticorpos quiméricos tendo um sítio de ligação ao antígeno ou região variável derivada de um anticorpo de uma espécie não humana e a estrutura do anticorpo restante, baseada na estrutura e/ou sequência de um anticorpo humano. Em um anticorpo humanizado, o sítio de ligação ao antígeno geralmente compreende as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) do anticorpo não humano enxertadas em FRs apropriadas nas regiões variáveis de um anticorpo humano e as regiões restantes de um anticorpo humano. Os sítios de ligação ao antígeno podem ser do tipo selvagem (ou seja, idênticos aos do anticorpo não humano) ou modificados por uma ou mais substituições de aminoácidos. Em alguns casos, os resíduos de FR do anticorpo humano são substituídos pelos resíduos não humanos correspondentes.

[00179] Métodos para humanizar anticorpos não humanos ou partes dos mesmos (por exemplo, regiões variáveis) são conhecidos na arte. A humanização pode ser realizada seguindo o método do documento US5225539 ou US5585089. Outros métodos para humanizar um anticorpo não estão excluídos. Exemplos de anticorpos humanizados que se ligam a G-CSF e inibem a sinalização de G-CSF encontram-se descritos no documento WO2018/145206.

[00180] O termo “anticorpo humano”, tal como aqui utilizado, refere-se a anticorpos com regiões variáveis (por exemplo, VH, VL) e, opcionalmente, regiões constantes derivadas de ou correspondentes às sequências encontradas em humanos, por exemplo, na linhagem germinativa humana ou células somáticas.

[00181] Exemplos de anticorpos humanos são descritos neste documento e incluem C1.2 e C1.2G e/ou suas regiões variáveis. Estes anticorpos humanos fornecem uma vantagem de imunogenicidade reduzida em um humano em comparação com os anticorpos não humanos. Exemplos de anticorpos são descritos no documento WO2012/171057, que é aqui incorporado por referência. Compostos Adicionais que Inibem a Sinalização de G-CSF

[00182] Em um exemplo, o composto que inibe a sinalização de G-CSF se liga a G-CSF ou a G-CSFR. Em um exemplo, o composto que inibe a sinalização de G-CSF se liga a G-CSF. Em um exemplo, o composto que inibe a sinalização de G-CSF se liga a G-CSFR.

[00183] Em um exemplo, o composto que inibe a sinalização de G-CSF é uma proteína.

[00184] Em um exemplo, o composto que inibe a sinalização de G-CSF é uma proteína que compreende uma região variável de anticorpo que se liga a ou se liga especificamente a G-CSFR e neutraliza a sinalização de G-CSF. A referência aqui a uma proteína ou anticorpo que “se liga a” G-CSFR fornece suporte literal para uma proteína ou anticorpo que “se liga especificamente a” G- CSFR.

[00185] Em alguns exemplos, o composto que inibe a sinalização de G-CSF é uma proteína que compreende um Fv. Em alguns exemplos, a proteína é selecionada do grupo que consiste em: (i) um fragmento Fv de cadeia simples (scFv); (ii) um scFv dimérico (di-scFv); ou (iv) um diacorpo; (v) um triacorpo; (vi) um tetracorpo; (vii) um Fab; (viii) um F(ab')2; (ix) um Fv; (x) um de (i) a (ix) ligado a uma região constante de um anticorpo, Fc ou um domínio constante de cadeia pesada (CH) 2 e/ou CH3; ou (xi) um de (i) a (ix) ligado a albumina, fragmentos funcionais ou variantes dos mesmos ou uma proteína (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo) que se liga à albumina;

[00186] Em um exemplo, um composto que inibe a sinalização de G-CSF é uma proteína que compreende uma região Fc de um anticorpo.

[00187] Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que se liga a hG-CSFR expresso na superfície de uma célula com uma afinidade de pelo menos cerca de 5 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que se liga a hG-CSFR expresso na superfície de uma célula com uma afinidade de pelo menos cerca de 4 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que se liga a hG-CSFR expresso na superfície de uma célula com uma afinidade de pelo menos cerca de 3 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que se liga a hG-CSFR expresso na superfície de uma célula com uma afinidade de pelo menos cerca de 2 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que se liga a hG-CSFR expresso na superfície de uma célula com uma afinidade de pelo menos cerca de 1 nM.

[00188] Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG-CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 5 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG- CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 4 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG-CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 3 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG-CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 2 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG-CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 1 nM. Em um exemplo, a proteína é um anticorpo que inibe a proliferação induzida por G-CSF de uma célula BaF3 que expressa hG- CSFR com um IC50 de pelo menos cerca de 0,5 nM. Anticorpos de Domínio Único

[00189] Em alguns exemplos, um composto da divulgação é uma proteína que é ou compreende um anticorpo de domínio único (que é usado indistintamente com o termo “anticorpo de domínio” ou “dAb”). Um anticorpo de domínio único é uma cadeia polipeptídica única que compreende a totalidade ou uma parte da região variável da cadeia pesada de um anticorpo. Em certos exemplos, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (Domantis, Inc., Waltham, MA; vide, por exemplo, o documento US6248516). Diacorpos, Triacorpos, Tetracorpos

[00190] Em alguns exemplos, uma proteína da divulgação é ou compreende um diacorpo, triacorpo, tetracorpo ou complexo de proteína de ordem superior, tal como aqueles descritos nos documentos WO98/044001 e/ou WO94/007921. Fv de Cadeia Única (scFv)

[00191] O técnico no assunto estará ciente de que os scFvs compreendem as regiões VH e VL em uma única cadeia polipeptídica e um ligante polipeptídico entre a VH e VL que permite que o scFv forme a estrutura desejada para a ligação ao antígeno (ou seja, para que a VH e VL da cadeia polipeptídica única se associem entre si para formar um Fv). Por exemplo, o ligante compreende mais de 12 resíduos de aminoácidos com (Gly 4Ser)3 sendo um dos ligantes mais favoráveis para um scFv. Anticorpos de Cadeia Pesada

[00192] Os anticorpos de cadeia pesada diferem estruturalmente de muitas outras formas de anticorpos, na medida em que compreendem uma cadeia pesada, mas não compreendem uma cadeia leve. Consequentemente, esses anticorpos também são referidos como “anticorpos apenas de cadeia pesada”. Os anticorpos de cadeia pesada são encontrados, por exemplo, em camelídeos e peixes cartilaginosos (também chamados de IgNAR).

[00193] Uma descrição geral dos anticorpos de cadeia pesada de camelídeos e suas regiões variáveis e métodos para a sua produção e/ou isolamento e/ou uso é encontrada inter alia nas seguintes referências WO94/04678, WO97/49805 e WO97/49805.

[00194] Uma descrição geral de anticorpos de cadeia pesada de peixes cartilaginosos e suas regiões variáveis e métodos para a sua produção e/ou isolamento e/ou uso é encontrada inter alia no documento WO2005/118629. Outros Anticorpos e Fragmentos de Anticorpos

[00195] A presente divulgação também contempla outros anticorpos e fragmentos de anticorpos, tais como: (i) proteínas biespecíficas de “key and hole” conforme descrito no documento US 5,731,168;

(ii) proteínas heteroconjugadas, por exemplo, conforme descrito no documento US 4,676,980; (iii) proteínas heteroconjugadas produzidas usando um ligante químico, por exemplo, como descrito no documento US 4,676,980; e (iv) Fab3 (por exemplo, como descrito no documento EP19930302894). Proteínas do Tipo V

[00196] Um exemplo de um composto da divulgação é um receptor de células T. Os receptores de células T têm dois domínios V que se combinam em uma estrutura semelhante ao módulo Fv de um anticorpo. Novotny et al., Proc Natl Acad Sci USA 88: 8646-8650, 1991 descreve como os dois domínios V do receptor de células T (denominados alfa e beta) podem ser fundidos e expressos como um polipeptídeo de cadeia única e, ainda, como alterar resíduos de superfície para reduzir a hidrofobicidade diretamente análoga a um scFv de anticorpo. Outras publicações que descrevem a produção de receptores de células T de cadeia única ou receptores de células T multiméricos compreendendo dois domínios V-alfa e V-beta incluem o documento WO1999/045110 ou WO2011/107595.

[00197] Outras proteínas não-anticorpo compreendendo domínios de ligação ao antígeno incluem proteínas com domínios do tipo V, que são geralmente monoméricos. Exemplos de proteínas que compreendem tais domínios do tipo V incluem CTLA-4, CD28 e ICOS. A divulgação adicional de proteínas compreendendo tais domínios do tipo V está incluída no documento WO1999/045110. Adnectinas

[00198] Em um exemplo, um composto da divulgação é uma adnectina. As adnectinas são baseadas no décimo domínio de fibronectina tipo III (10Fn3) da fibronectina humana, em que as regiões de alça são alteradas para conferir ligação ao antígeno. Por exemplo, três alças em uma extremidade do sanduíche 10 β do domínio Fn3 podem ser manipuladas de modo a permitir que uma

Adnectina reconheça especificamente um antígeno. Para obter mais detalhes, consulte o documento US20080139791 ou WO2005/056764. Anticalinas

[00199] Em outro exemplo, um composto da divulgação é uma anticalina. As anticalinas são derivadas de lipocalinas, que são uma família de proteínas extracelulares que transportam pequenas moléculas hidrofóbicas, como esteroides, bilinas, retinoides e lipídeos. As lipocalinas têm uma estrutura secundária de folha β rígida com uma pluralidade de alças na extremidade aberta da estrutura cônica que pode ser desenvolvida para se ligar a um antígeno. Essas lipocalinas desenvolvidas são conhecidas como anticalinas. Para obter mais descrições a respeito das anticalinas, consulte o documento US7250297B1 ou US20070224633. Aficorpos

[00200] Em outro exemplo, um composto da divulgação é um aficorpo. Um aficorpo é um arcabouço derivado do domínio Z (domínio de ligação ao antígeno) da Proteína A de Staphylococcus aureus que pode ser desenvolvido para se ligar ao antígeno. O domínio Z consiste em um feixe tri-helicoidal de aproximadamente 58 aminoácidos. Bibliotecas foram geradas por randomização de resíduos de superfície. Para obter mais detalhes, consulte o documento EP1641818. Avímeros

[00201] Em outro exemplo, um composto da divulgação é um Avímero. Avímeros são proteínas de múltiplos domínios derivadas da família de arcabouço do domínio A. Os domínios nativos de aproximadamente 35 aminoácidos adotam uma estrutura definida com ligações dissulfeto. A diversidade é gerada pelo embaralhamento da variação natural exibida pela família de domínios A. Para obter mais detalhes, consulte o documento WO2002088171. DARPins

[00202] Em outro exemplo, um composto da divulgação é uma proteína artificial de repetição de anquirina (DARPin). Os DARPins são derivados da anquirina, que é uma família de proteínas que medeiam a ligação de proteínas integrais de membrana ao citoesqueleto. Uma única repetição de anquirina é um motivo de 33 resíduos que consiste em duas hélices α e uma volta β. Eles podem ser desenvolvidos para se ligarem a diferentes antígenos alvo ao randomizar os resíduos na primeira hélice α e uma volta β de cada repetição. Sua interface de ligação pode ser aumentada pelo aumento do número de módulos (um método de maturação de afinidade). Para obter mais detalhes, consulte o documento US20040132028. G-CSFR Solúvel

[00203] A presente divulgação também contempla uma forma solúvel do G- CSFR que compete com o G-CSFR associado à membrana de ocorrência natural pela interação ao G-CSF. Os técnicos no assunto podem preparar prontamente formas solúveis do receptor, vide, por exemplo, a Patente No. 5,589,456 e Honjo et al, Acta Crystallograph Sect F Struct Biol Cryst Commun. 61 (Pt 8): 788-790, 2005. Regiões Constantes

[00204] Sequências de regiões constantes úteis em compostos e anticorpos da presente divulgação podem ser obtidas a partir de uma série de fontes diferentes. Em alguns exemplos, a região constante ou porção da mesma do anticorpo é derivada de um anticorpo humano. A região constante ou porção da mesma pode ser derivada de qualquer classe de anticorpo, incluindo IgM, IgG, IgD, IgA e IgE, e qualquer isotipo de anticorpo, incluindo IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4. Em um exemplo, a região constante é o isotipo IgG4 humano ou uma região constante de IgG4 estabilizada.

[00205] Em um exemplo, a região Fc da região constante tem uma capacidade reduzida de induzir função efetora, por exemplo, em comparação com uma região Fc de IgG1 ou IgG3 humana nativa ou de tipo selvagem. Em um exemplo, a função efetora é a citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC) e/ou fagocitose mediada por células dependente de anticorpos (ADCP) e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC).

Métodos para avaliar o nível da função efetora de uma região Fc contendo proteína são conhecidos na arte e/ou descritos neste documento.

[00206] Em um exemplo, a região Fc é uma região Fc de IgG4 (isto é, de uma região constante de IgG4), por exemplo, uma região Fc de IgG4 humana. As sequências de regiões Fc de IgG4 adequadas serão evidentes para o técnico no assunto e/ou estarão disponíveis nas bases de dados disponíveis publicamente (por exemplo, disponíveis no National Center for Biotechnology Information).

[00207] Em um exemplo, a região constante é uma região constante de IgG4 estabilizada. Deve-se entender pelo termo “região constante de IgG4 estabilizada” como uma região constante de IgG4 que foi modificada para reduzir a troca de braço Fab ou a propensão a sofrer troca de braço Fab ou formação de um semianticorpo ou uma propensão para formar um semianticorpo. “Troca de braço Fab” refere-se a um tipo de modificação de proteína para IgG4 humana, em que uma cadeia pesada de IgG4 e uma cadeia leve fixada (meia molécula) são trocadas por um par de cadeia pesada-leve de outra molécula de IgG4. Assim, as moléculas de IgG4 podem adquirir dois braços Fab distintos que reconhecem dois antígenos distintos (resultando em moléculas biespecíficas). A troca de braço Fab ocorre naturalmente in vivo e pode ser induzida in vitro por células sanguíneas purificadas ou agentes redutores, como glutationa reduzida. Um “semianticorpo” se forma quando um anticorpo IgG4 se dissocia para formar duas moléculas, cada uma contendo uma única cadeia pesada e uma única cadeia leve.

[00208] Em um exemplo, uma região constante de IgG4 estabilizada compreende uma prolina na posição 241 da região de dobradiça de acordo com o sistema de Kabat (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Washington DC, United States Department of Health and Human Services, 1987 e/ou 1991). Esta posição corresponde à posição 228 da região de dobradiça de acordo com o sistema de numeração EU (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Washington DC, United States Department of Health and Human Services, 2001 e Edelman et al., Proc. Natl.

Acad. USA, 63, 78-85, 1969). Na IgG4 humana, este resíduo é geralmente uma serina. Após a substituição da serina por prolina, a região de dobradiça de IgG4 compreende uma sequência CPPC. A este respeito, o técnico no assunto estará ciente de que a “região de dobradiça” é uma porção rica em prolina de uma região constante da cadeia pesada do anticorpo que liga as regiões Fc e Fab e confere mobilidade nos dois braços Fab de um anticorpo. A região de dobradiça inclui resíduos de cisteína que estão envolvidos nas ligações dissulfeto entre as cadeias pesadas. É geralmente definido como estendendo-se de Glu226 a Pro243 da IgG1 humana de acordo com o sistema de numeração de Kabat. As regiões de dobradiça de outros isotipos de IgG podem ser alinhadas com a sequência de IgG1, colocando o primeiro e o último resíduos de cisteína formando ligações dissulfeto (S-S) entre as cadeias pesadas nas mesmas posições (vide, por exemplo, o documento WO2010/080538).

[00209] Exemplos adicionais de anticorpos IgG4 estabilizados são anticorpos em que a arginina na posição 409 em uma região constante da cadeia pesada de IgG4 humana (de acordo com o sistema de numeração EU) é substituída por lisina, treonina, metionina ou leucina (por exemplo, conforme descrito no documento WO2006/033386). A região Fc da região constante pode compreender, de forma adicional ou alternativa, um resíduo selecionado do grupo que consiste em: alanina, valina, glicina, isoleucina e leucina na posição correspondente a 405 (de acordo com o sistema de numeração EU). Opcionalmente, a região de dobradiça compreende uma prolina na posição 241 (isto é, uma sequência CPPC) (como descrito acima).

[00210] Em outro exemplo, a região Fc é uma região modificada para ter função efetora reduzida, ou seja, uma “região Fc não imunoestimuladora”. Por exemplo, a região Fc é uma região Fc de IgG1 compreendendo uma substituição em uma ou mais posições selecionadas do grupo que consiste em 268, 309, 330 e 331. Em outro exemplo, a região Fc é uma região Fc de IgG1 compreendendo uma ou mais de as seguintes alterações E233P, L234V, L235A e exclusão de G236 e/ou uma ou mais das seguintes alterações A327G, A330S e P331S

(Armor et al., Eur J Immunol. 29: 2613-2624, 1999; Shields et al., J Biol Chem. 276 (9): 6591-604, 2001). Exemplos adicionais de regiões Fc não imunoestimuladoras são descritos, por exemplo, em Dall'Acqua et al., J Immunol. 177: 1129-1138 2006; e/ou Hezareh J Virol; 75: 12161-12168, 2001).

[00211] Em outro exemplo, a região Fc é uma região Fc quimérica, por exemplo, compreendendo pelo menos um domínio C H2 de um anticorpo IgG4 e pelo menos um domínio CH3 de um anticorpo IgG1, em que a região Fc compreende uma substituição em uma ou mais posições de aminoácidos selecionadas do grupo que consiste em 240, 262, 264, 266, 297, 299, 307, 309, 323, 399, 409 e 427 (numeração EU) (por exemplo, como descrito no documento WO2010/085682). Exemplos de substituições incluem 240F, 262L, 264T, 266F, 297Q, 299A, 299K, 307P, 309K, 309M, 309P, 323F, 399S e 427F. Produção de Proteína

[00212] Em um exemplo, um anticorpo aqui descrito de acordo com qualquer exemplo é recombinante.

[00213] No caso de um anticorpo recombinante, o ácido nucleico que codifica o mesmo pode ser clonado em construções ou vetores de expressão, que são então transfectados em células hospedeiras, como células de E. coli, células de levedura, células de inseto ou células de mamífero, como células COS de símio, células de ovário de hamster chinês (CHO), células de rim embrionário humano (HEK) ou células de mieloma que não produzem o anticorpo de outra forma. Exemplos de células usadas para expressar um anticorpo são as células CHO, células de mieloma ou células HEK. As técnicas de clonagem molecular para atingir estes fins são conhecidas na arte e descritas, por exemplo, em Ausubel et al., (Editores), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, incluindo todas as atualizações até o momento) ou Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989). Uma grande variedade de métodos de clonagem e amplificação in vitro são adequados para a construção de ácidos nucleicos recombinantes. Os métodos de produção de anticorpos recombinantes também são conhecidos na arte, vide, por exemplo, o documento US4816567 ou US5530101.

[00214] Após o isolamento, o ácido nucleico é inserido operacionalmente ligado a um promotor em uma construção de expressão ou vetor de expressão para posterior clonagem (amplificação do DNA) ou para expressão em um sistema livre de células ou em células.

[00215] Conforme usado neste documento, o termo “promotor” deve ser considerado em seu contexto mais amplo e inclui as sequências reguladoras de transcrição de um gene genômico, incluindo a o TATA box ou elemento iniciador, que é necessário para o início preciso da transcrição, com ou sem elementos reguladores adicionais (por exemplo, sequências de ativação a montante, sítios de ligação de fatores de transcrição, intensificadores e silenciadores) que alteram a expressão de um ácido nucleico, por exemplo, em resposta a um estímulo de desenvolvimento e/ou externo, ou de uma maneira tecido-específica. No presente contexto, o termo “promotor” também é usado para descrever um ácido nucleico recombinante, sintético ou de fusão, ou derivado que confere, ativa ou aumenta a expressão de um ácido nucleico ao qual está operacionalmente ligado. Exemplos de promotores podem conter cópias adicionais de um ou mais elementos reguladores específicos para aumentar ainda mais a expressão e/ou alterar a expressão espacial e/ou a expressão temporal do referido ácido nucleico.

[00216] Conforme usado neste documento, o termo “operacionalmente ligado a” significa posicionar um promotor em relação a um ácido nucleico de modo que a expressão do ácido nucleico seja controlada pelo promotor.

[00217] Muitos vetores para expressão em células estão disponíveis. Os componentes do vetor geralmente incluem, mas não estão limitados a um ou mais dos seguintes: uma sequência sinal, uma sequência que codifica um anticorpo (por exemplo, derivada da informação apresentada neste documento), um elemento intensificador, um promotor e uma sequência de término de transcrição. O técnico no assunto estará ciente das sequências adequadas para a expressão de um anticorpo. Exemplos de sequências sinal incluem os sinais de secreção procariótica (por exemplo, pelB, fosfatase alcalina, penicilinase, Ipp ou enterotoxina estável ao calor II), sinais de secreção de levedura (por exemplo, líder de invertase, líder de fator α ou líder de fosfatase ácida) ou sinais de secreção de mamíferos (por exemplo, sinal gD de herpes simplex).

[00218] Exemplos de promotores ativos em células de mamífero incluem o promotor precoce imediato de citomegalovírus (CMV-IE), o promotor do fator de alongamento humano 1-α (EF1), promotores de pequenos RNAs nucleares (U1A e U1B), promotor da cadeia pesada da α-miosina, promotor do vírus símio 40 (SV40), promotor do vírus do sarcoma de Rous (RSV), promotor tardio principal do adenovírus, promotor da β-actina; elemento regulador híbrido compreendendo um intensificador de CMV/promotor da β-actina ou um promotor de imunoglobulina ou fragmento ativo do mesmo. Exemplos de linhagens de células hospedeiras de mamífero úteis são a linhagem CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linhagem de rim embrionário humano (células 293 ou 293 subclonadas para crescimento em cultura em suspensão; células de rim de hamster bebê (BHK, ATCC CCL 10); ou células de ovário de hamster chinês (CHO).

[00219] Promotores típicos adequados para expressão em células de levedura, como, por exemplo, uma célula de levedura selecionada do grupo que compreende Pichia pastoris, Saccharomyces cerevisiae e S. pombe, incluem, mas não estão limitados a, o promotor ADH1, o promotor GAL1, o promotor GAL4, o promotor CUP1, o promotor PHO5, o promotor nmt, o promotor RPR1 ou o promotor TEF1.

[00220] Os meios para introduzir o ácido nucleico isolado ou a construção de expressão compreendendo o mesmo em uma célula para expressão são conhecidos pelos técnicos no assunto. A técnica usada para uma determinada célula depende das técnicas bem-sucedidas conhecidas. Os meios para a introdução do DNA recombinante nas células incluem microinjeção, transfecção mediada por DEAE-dextran, transfecção mediada por lipossomas, tal como usando lipofectamina (Gibco, MD, EUA) e/ou cellfectin (Gibco, MD, EUA), absorção de DNA mediada por PEG, eletroporação e bombardeio de micropartículas, como por partículas de tungstênio ou ouro revestidas com DNA (Agracetus Inc., WI, EUA), entre outros.

[00221] As células hospedeiras usadas para produzir o anticorpo podem ser cultivadas em uma variedade de meios, dependendo do tipo de célula usado. Os meios comercialmente disponíveis, tais como Ham's F10 (Sigma), Meio Essencial Mínimo ((MEM), (Sigma), RPMl-1640 (Sigma) e Meio Eagle Modificado por Dulbecco ((DMEM), Sigma) são adequados para a cultura de células de mamíferos. Meios para a cultura de outros tipos de células aqui discutidos são conhecidos na arte. Isolamento de Proteínas

[00222] Os métodos para isolar um anticorpo são conhecidos na técnica e/ou descritos aqui.

[00223] Quando um anticorpo é secretado no meio de cultura, os sobrenadantes de tais sistemas de expressão podem ser primeiramente concentrados usando um filtro de concentração de proteína disponível comercialmente, por exemplo, uma unidade de ultrafiltração Amicon ou Millipore Pellicon. Um inibidor de protease, como PMSF, pode ser incluído em qualquer uma das etapas anteriores para inibir a proteólise e antibióticos podem ser incluídos para prevenir o crescimento de possíveis contaminantes. De forma alternativa ou adicional, os sobrenadantes podem ser filtrados e/ou separados das células que expressam o anticorpo, por exemplo, por centrifugação contínua.

[00224] O anticorpo preparado a partir das células pode ser purificado usando, por exemplo, troca iônica, cromatografia de hidroxiapatita, cromatografia de interação hidrofóbica, eletroforese em gel, diálise, cromatografia de afinidade (por exemplo, cromatografia de afinidade por proteína A ou cromatografia por proteína G), ou qualquer combinação dos anteriores. Estes métodos são conhecidos na arte e descritos, por exemplo, nos documentos WO99/57134 ou

Ed Harlow e David Lane (editores) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988). Atividade de Avaliação de um Anticorpo Ligação a G-CSFR e Seus Mutantes

[00225] Será evidente para o técnico no assunto a partir da divulgação aqui que os compostos ou anticorpos da presente divulgação se ligam ao domínio de ligação ao ligante do hG-CSFR e às formas mutantes específicas do domínio de ligação ao ligante do hG-CSFR (por exemplo, SEQ ID NO: 1 sem ou com certas mutações pontuais) e/ou se ligam a G-CSFR humano e de macaco cinomolgo. Os métodos para avaliar a ligação a um composto ou anticorpo são conhecidos na arte, por exemplo, como descrito em Scopes (In: Protein purification: principles and practice, terceira edição, Springer Verlag, 1994). Tal método geralmente envolve marcar o composto ou anticorpo e colocá-lo em contato com G-CSFR imobilizado. Após a lavagem para remover o composto ou anticorpo não ligado especificamente, detecta-se a quantidade de marcador e, como consequência, o composto ou anticorpo ligado. Obviamente, o composto ou anticorpo pode ser imobilizado e marcado para sinalização de G-CSFR. Ensaios do tipo panning também podem ser usados. De forma alternativa ou adicional, ensaios de ressonância de plasmon de superfície podem ser usados.

[00226] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela lisina na posição 167 de SEQ ID NO: 1 e/ou em que uma alanina é substituída pela histidina na posição 168 de SEQ ID NO: 1 substancialmente no mesmo nível (por exemplo, dentro de 10% ou 5% ou 1%), que se liga à SEQ ID NO: 1.

[00227] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela arginina na posição 287 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 100 vezes ou 150 vezes ou 160 vezes ou 200 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela arginina na posição 287 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 160 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00228] Em um exemplo, um composto ou anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela histidina na posição 237 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 20 vezes ou 40 vezes ou 50 vezes ou 60 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela histidina na posição 237 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 50 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00229] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela metionina na posição 198 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 20 vezes ou 40 vezes ou 60 vezes ou 70 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela metionina na posição 198 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 40 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00230] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela tirosina na posição 172 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 20 vezes ou 30 vezes ou 40 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela tirosina na posição 172 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 40 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00231] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela leucina na posição 171 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 100 vezes ou 120 vezes ou 130 vezes ou 140 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela leucina na posição 171 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 140 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00232] Em um exemplo, um composto ou anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela leucina em uma posição 111 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 20 vezes ou 40 vezes ou 60 vezes ou 70 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1. Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela leucina na posição 111 da SEQ ID NO: 1, em um nível pelo menos cerca de 60 vezes menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00233] Em um exemplo, um composto ou anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela histidina na posição 168 da SEQ ID NO: 1, em um nível não superior a 5 vezes ou 4 vezes ou 3 vezes ou 2 vezes ou 1 vez menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00234] Em um exemplo, um composto ou um anticorpo da presente divulgação se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1, no qual uma alanina é substituída pela lisina na posição 167 da SEQ ID NO: 1, em um nível não superior a 5 vezes ou 4 vezes ou 3 vezes ou 2 vezes ou 1 vez menor do que se liga a um polipeptídeo de SEQ ID NO: 1.

[00235] O nível de ligação é convenientemente determinado utilizando um biossensor.

[00236] A presente divulgação contempla qualquer combinação das características anteriores. Em um exemplo, um anticorpo aqui descrito tem todas as características de ligação estabelecidas nos sete parágrafos anteriores. Mapeamento de Epítopos

[00237] Em outro exemplo, o epítopo ligado por um composto ou um anticorpo aqui descrito é mapeado. Os métodos de mapeamento de epítopos serão evidentes para o técnico no assunto. Por exemplo, uma série de peptídeos sobrepostos abrangendo a sequência de hG-CSFR ou uma região desta compreendendo um epítopo de interesse, por exemplo, peptídeos compreendendo 10-15 aminoácidos são produzidos. O composto ou anticorpo entra em contato então com cada peptídeo e o(s) peptídeo(s) aos quais se liga é determinado. Isto permite a determinação do(s) peptídeo(s) compreendendo o epítopo ao qual o anticorpo se liga. Se vários peptídeos não contíguos forem ligados pela proteína, o anticorpo pode se ligar a um epítopo conformacional.

[00238] De forma alternativa ou adicional, os resíduos de aminoácidos dentro de hG-CFR são mutados, por exemplo, por mutagênese de varredura de alanina, e mutações que reduzem ou evitam a ligação de proteínas são determinadas. Qualquer mutação que reduza ou impeça a ligação do composto ou anticorpo está provavelmente dentro do epítopo ligado pela proteína.

[00239] Um outro método é aqui exemplificado e envolve a ligação de hG- CSFR ou uma região do mesmo a um composto ou anticorpo imobilizado da presente divulgação e digestão do complexo resultante com proteases. Os peptídeos que permanecem ligados à proteína imobilizada são então isolados e analisados, por exemplo, usando espectrometria de massa, para determinar sua sequência. Determinação da Ligação Competitiva

[00240] Os ensaios para determinar um composto ou anticorpo que inibe competitivamente a ligação do anticorpo monoclonal C1.2 ou C1.2G serão evidentes para o técnico no assunto. Por exemplo, C1.2 ou C1.2G é conjugado a um marcador detectável, por exemplo, um marcador fluorescente ou um marcador radioativo. O anticorpo marcado e o composto ou anticorpo de teste são então misturados e colocados em contato com hG-CSFR ou uma região deste (por exemplo, um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO: 1) ou uma célula que o expressa. O nível de C1.2 ou C1.2G marcado é então determinado e comparado com o nível determinado quando o composto ou anticorpo marcado entra em contato com o hG-CSFR, região ou células na ausência do anticorpo de teste. Se o nível de C1.2 ou C1.2G marcado for reduzido na presença do composto ou anticorpo de teste em comparação com a ausência do anticorpo, o anticorpo é considerado por inibir competitivamente a ligação de C1.2 ou C1.2G a hG-CSFR.

[00241] Opcionalmente, o composto ou anticorpo de teste é conjugado a um marcador diferente para C1.2 ou C1.2G. Esta marcação alternativa permite a detecção do nível de ligação do anticorpo de teste a hG-CSFR ou a região do mesmo ou a célula.

[00242] Em outro exemplo, o composto ou anticorpo pode se ligar a hG-CSFR ou uma região do mesmo (por exemplo, um polipeptídeo compreendendo SEQ ID NO: 1) ou uma célula que expressa o mesmo antes de colocar em contato o hG-CSFR, região ou célula com C1.2 ou C1.2G. Uma redução na quantidade de C1.2 ou C1.2G ligado na presença do composto ou anticorpo em comparação com a ausência do composto ou anticorpo indica que a proteína inibe competitivamente a ligação de C1.2 ou C1.2G a hG-CSFR. Um ensaio recíproco também pode ser realizado usando composto ou anticorpo marcado e primeiro permitindo que C1.2 ou C1.2G se ligue a G-CSFR. Neste caso, uma quantidade reduzida de composto marcado ou anticorpo ligado a hG-CSFR na presença de C1.2 ou C1.2G em comparação com a ausência de C1.2 ou C1.2G indica que o composto ou anticorpo inibe competitivamente a ligação de C1.2 ou C1.2G a hG- CSFR.

[00243] Qualquer um dos ensaios anteriores pode ser realizado com uma forma mutante de hG-CSFR e/ou SEQ ID NO: 1 e/ou uma região de ligação ao ligante de hG-CSFR à qual C1.2 ou C1.2G se liga, por exemplo, como descrito aqui. Determinação da Neutralização

[00244] Em alguns exemplos da presente divulgação, um composto ou um anticorpo é capaz de neutralizar a sinalização de hG-CSFR.

[00245] Vários ensaios são conhecidos na arte para avaliar a capacidade de um composto ou um anticorpo em neutralizar a sinalização de um ligante através de um receptor.

[00246] Em um exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF reduz ou impede a ligação de G-CSF ao hG-CSFR. Estes ensaios podem ser realizados como um ensaio de ligação competitiva conforme aqui descrito usando G-CSF marcado e/ou proteína marcada.

[00247] Em outro exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF reduz a formação de CFU-G quando células de medula óssea CD34 + são cultivadas na presença de G-CSF. Em tais ensaios, as células de medula óssea CD34+ são cultivadas em um meio de cultura de células semissólidas na presença de G-CSF (por exemplo, cerca de 10 ng/mL de meio de cultura de células) e, opcionalmente, fator de células-tronco (por exemplo, cerca de 10 ng/mL de meio de cultura de células) na presença ou ausência de um composto de teste. Após um tempo suficiente para a formação de clones de granulócitos (CFU-G), o número de clones ou colônias é determinado. Uma redução no número de colônias na presença do anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF em comparação com a ausência do composto ou o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF indica que o composto ou o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF neutraliza a sinalização de G-CSF. Ao testar concentrações múltiplas do anticorpo que inibem a sinalização de G-CSF, uma IC50 é determinada, ou seja, uma concentração na qual 50% da inibição máxima de formação de CFU-G ocorre. Em um exemplo, a IC50 é 0,2 nM ou menos, tal como 0,1 nM ou menos, por exemplo, 0,09 nM ou menos, ou 0,08 nM ou menos, ou 0,07 nM ou menos, ou 0,06 nM ou menos, ou 0,05 nM ou menos. Em um exemplo, a IC50 é 0,04 nM ou menos. Em outro exemplo, a IC 50 é 0,02 nM ou menos. As IC50s anteriores referem-se a qualquer ensaio de CFU-G descrito aqui.

[00248] Em outro exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF reduz a proliferação de células (por exemplo, células BaF3) que expressam hG-CSF que são cultivadas na presença de G-CSF. As células são cultivadas na presença de G-CSF (por exemplo, 0,5 ng/mL) e na presença ou ausência de um composto ou anticorpo de teste. Os métodos para avaliar a proliferação celular são conhecidos na arte e incluem, por exemplo, a redução de MTT e incorporação de timidina. Considera-se que um composto ou anticorpo que reduz o nível de proliferação em comparação com o nível observado na ausência do composto ou anticorpo neutraliza a sinalização de G-CSF. Ao testar concentrações múltiplas do composto ou anticorpo, uma IC 50 é determinada, ou seja, uma concentração na qual 50% da inibição máxima de proliferação celular ocorre. Em um exemplo, a IC50 é de 6 nM ou menos, como 5,9 nM ou menos. Em outro exemplo, a IC50 é 2 nM ou menos ou 1 nM ou menos ou 0,7 nM ou menos ou 0,6 nM ou menos ou 0,5 nM ou menos. As IC50s anteriores referem- se a qualquer ensaio de proliferação celular descrito aqui.

[00249] Em outro exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF reduz a mobilização de células-tronco hematopoiéticas e/ou células progenitoras endoteliais in vivo após a administração de G-CSF e/ou reduz o número de neutrófilos in vivo, por exemplo, após a administração de G-CSF (no entanto, isso não é essencial). Por exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF é administrado opcionalmente antes, no momento ou após a administração de G-CSF ou uma forma modificada do mesmo (por exemplo, G-CSF PEGuilado ou filgrastim). O número de células-tronco hematopoiéticas (por exemplo, que expressam CD34 e/ou Thy1) e/ou de células progenitoras endoteliais (por exemplo, que expressam CD34 e VEGFR2) e/ou de neutrófilos (identificados morfologicamente e/ou que expressam, por exemplo,

CD10, CD14, CD31 e/ou CD88) é avaliado. Um composto ou anticorpo que reduz o nível da(s) célula(s) em comparação com o nível observado na ausência do anticorpo é considerado como neutralizador da sinalização de G-CSF. Em um exemplo, o composto ou anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF reduz o número de neutrófilos sem induzir neutropenia.

[00250] Outros métodos para avaliar a neutralização da sinalização de G-CSF estão contemplados pela presente divulgação. Composições

[00251] As composições de um composto ou um anticorpo da presente divulgação é/são administradas por via intravenosa ou por via subcutânea. Em um exemplo, o anticorpo/composição é administrado por via intravenosa.

[00252] Métodos para preparar um composto ou anticorpo em uma forma adequada para administração (por exemplo, uma composição farmacêutica) são conhecidos na arte e incluem, por exemplo, os métodos descritos em Remington's Pharmaceutical Sciences (18ª ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990) e US Pharmacopeia: National Formulary (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1984).

[00253] As composições farmacêuticas desta divulgação são particularmente úteis para administração parenteral, tal como administração intravenosa ou administração subcutânea. As composições para administração geralmente compreenderão uma solução do anticorpo dissolvido em um carreador farmaceuticamente aceitável, por exemplo, um veículo aquoso. Uma variedade de veículos aquosos pode ser usada, por exemplo, solução tampão salino e semelhantes. As composições podem conter substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis, quando necessário, para aproximar às condições fisiológicas, tais como agentes de ajuste de pH e tamponantes, agentes de ajuste de toxicidade e semelhantes, por exemplo, acetato de sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de cálcio, lactato de sódio e semelhantes. A concentração do composto da presente divulgação nestas formulações pode variar amplamente e será selecionada principalmente com base nos volumes de fluido, viscosidades, peso corporal e semelhantes de acordo com o modo particular de administração selecionado e as necessidades do paciente. Exemplos de carreadores incluem a água, solução salina, solução de Ringer, solução de dextrose. Veículos não aquosos, tais como aditivos que aumentam a isotonicidade e estabilidade química, por exemplo, tampões e conservantes podem ser usados. Terapias de Combinação

[00254] Em um exemplo, um composto ou anticorpo da presente divulgação é administrado em combinação com outro composto útil para o tratamento de uma doença ou condição aqui descrita, seja como etapas de tratamento combinadas ou adicionais ou como componentes adicionais de uma formulação terapêutica.

[00255] Por exemplo, o outro composto é um composto anti-inflamatório, por exemplo, metotrexato ou um composto anti-inflamatório não esteroide. De forma alternativa ou adicional, o outro composto é um imunossupressor. De forma alternativa ou adicional, o outro composto é um corticosteroide, como prednisona e/ou prednisolona. No exemplo, o outro composto é o metotrexato. De forma alternativa ou adicional, o outro composto é ciclofosfamida.

[00256] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado simultaneamente com o outro composto. Em um exemplo, o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF é administrado antes do outro composto. Em um exemplo, o anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF é administrado após o outro composto.

[00257] Em alguns exemplos, o composto ou anticorpo é administrado em combinação com uma célula. Em alguns exemplos, a célula é uma célula-tronco, como uma célula-tronco mesenquimal.

[00258] Em alguns exemplos, o composto ou anticorpo é administrado em combinação com uma terapia genética.

[00259] Em alguns exemplos, o composto ou anticorpo é administrado em combinação com uma intervenção não farmacêutica, por exemplo, aférese, tal como plasmaférese, citaférese, leucaférese, aférese de granulócitos e/ou monócitos. Neste contexto, o composto ou anticorpo pode ser administrado durante o período de tempo em que a intervenção não farmacêutica está sendo realizada e será considerado “em combinação com” a intervenção não farmacêutica. Por exemplo, a intervenção não farmacêutica pode ser aférese de granulócitos e/ou monócitos, que é realizada uma vez por semana durante cinco semanas e o anticorpo ou composto pode ser administrado durante este período de tempo. Em um exemplo, o anticorpo ou composto é administrado antes da intervenção não farmacêutica. Em um exemplo, o anticorpo ou composto é administrado após a intervenção não farmacêutica.

[00260] Outra intervenção não farmacêutica é a fototerapia. A fototerapia é usada para tratar algumas dermatoses neutrofílicas. Dosagem

[00261] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 1 mg/kg. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,9 mg/kg.

[00262] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,8 mg/kg.

[00263] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,6 mg/kg.

[00264] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,3 mg/kg e 0,6 mg/kg.

[00265] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,3 mg/kg.

[00266] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,1 mg/kg. Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de 0,1 mg/kg.

[00267] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,3 mg/kg. Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de 0,3 mg/kg.

[00268] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de cerca de 0,6 mg/kg. Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado em uma dose de 0,6 mg/kg.

[00269] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado várias vezes. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado uma vez a cada 5 a 40 dias. Em alguns exemplos, o composto ou anticorpo não é administrado em dias consecutivos ou na mesma semana.

[00270] Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado a cada 14 a 28 dias. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado a cada 20 a 25 dias.

[00271] Por exemplo, o composto é administrado a cada 7 dias ou 8 dias ou 9 dias ou 10 dias ou 11 dias ou 12 dias ou 13 dias ou 14 dias ou 15 dias ou 16 dias ou 17 dias ou 18 dias ou 19 dias ou 20 dias ou 21 dias ou 22 dias ou 23 dias ou 24 dias ou 25 dias ou 26 dias ou 27 dias ou 28 dias.

[00272] Em um exemplo, o composto é administrado quinzenal ou trimestralmente ou a cada 4 semanas.

[00273] Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado várias vezes, em que o composto ou anticorpo é administrado uma vez a cada 21 dias. Neste sentido, o técnico no assunto entenderá que “a cada 21 dias” (ou qualquer outro número) significa que a administração subsequente é realizada no 21º dia após a administração imediatamente anterior.

[00274] Em um exemplo, um método da divulgação compreende a administração de um anticorpo que se liga ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes a cada 21 dias e em que o anticorpo compreende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[00275] Em um exemplo, um método da divulgação compreende a administração de uma composição compreendendo um anticorpo que se liga ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes a cada 21 dias e em que a composição compreende pelo menos dois ou todos os três dos seguintes: (i) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; (ii) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; e/ou (iii) um anticorpo que compreende uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e duas cadeias leves compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

[00276] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado por um determinado período ou número de doses. Por exemplo, o composto ou anticorpo é administrado por 1 mês ou 3 meses ou 6 meses ou 12 meses. Em outro exemplo, cinco ou 10 ou 15 ou 20 doses de anticorpo ou composto são administradas.

[00277] Em outro exemplo, o composto ou anticorpo é administrado cronicamente ou em uma base contínua, por exemplo, por meses ou anos e a presente divulgação não é limitada a um período de tempo específico, a menos que indicado de outra forma.

[00278] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado até que a condição ou os sintomas da condição sejam resolvidos ou gerenciados. Por exemplo, no caso de uma forma “ativa” de uma condição, o composto ou anticorpo é administrado até que a condição não seja mais considerada ativa.

[00279] No caso de HS ou PPP, o composto ou anticorpo é administrado até que o indivíduo não tenha mais lesões ou pústulas visíveis.

[00280] Em um exemplo, o composto ou anticorpo é administrado para induzir a remissão de uma condição. Em outro exemplo, o composto é administrado para manter a remissão de uma condição.

[00281] Em um exemplo, uma ou mais doses de carga do composto são administradas seguidas por uma ou mais doses de manutenção. Geralmente, as doses de carga serão maiores ou administradas com um período de tempo mais curto entre elas do que as doses de manutenção.

[00282] Por exemplo, uma ou duas ou três ou mais doses de carga do anticorpo ou composto são administradas ao indivíduo, por exemplo, para induzir a remissão, seguido por doses de manutenção contínuas. Estas doses de manutenção podem continuar indefinidamente ou até que o indivíduo sofra uma reação adversa ou até que a condição retorne ou piore, após a qual uma ou mais doses de carga podem ser necessárias.

[00283] Em alguns exemplos, a dose de carga é 1,5 vezes ou duas ou três vezes maior do que a dose de manutenção. Como exemplo, a dose de carga pode ser de 0,9 mg/kg e a dose de manutenção pode ser de 0,3 mg/kg ou a dose de carga pode ser de 0,3 mg/kg e a dose de manutenção pode ser de 0,1 mg/kg ou a dose de carga pode ser de 0,6 mg/kg e a dose de manutenção pode ser de 0,1mg/kg.

[00284] Em alguns exemplos, a dose de carga é administrada com mais frequência do que a dose de manutenção. Por exemplo, a dose de carga é administrada semanal ou quinzenalmente e a dose de manutenção é administrada a cada 21 dias. Nesse caso, as dosagens de carga e manutenção podem ser iguais ou diferentes.

[00285] No caso de um indivíduo que não está respondendo adequadamente ao tratamento, doses mais frequentes ou mais altas podem ser administradas.

[00286] Em outro exemplo, para indivíduos que sofrem uma reação adversa, uma dose pode ser dividida em vários dias em uma semana ou em vários dias consecutivos.

[00287] Em um exemplo, para indivíduos que sofrem neutropenia como uma reação adversa, um profissional de saúde pode ser instruído a interromper o tratamento. Por exemplo, se o indivíduo apresentar neutropenia por mais de 2 dias consecutivos ou 3 dias consecutivos, o tratamento pode ser interrompido.

[00288] Em um exemplo, para indivíduos que sofrem neutropenia como uma reação adversa, um profissional de saúde pode ser instruído a pular a próxima dose. Por exemplo, se o indivíduo apresentar neutropenia por mais de 2 dias consecutivos ou 3 dias consecutivos, a próxima dose pode ser ignorada.

[00289] Opcionalmente, o indivíduo que sofre de neutropenia pode ser tratado com G-CSF ou GM-CSF para tratar a neutropenia.

[00290] Os técnicos no assunto compreenderão que numerosas variações e/ou modificações podem ser realizadas nas concretizações descritas acima, sem se afastar do amplo escopo geral da presente divulgação. As presentes concretizações devem, portanto, ser consideradas em todos os aspectos como ilustrativas e não restritivas. Exemplo 1 - Segurança, farmacocinética (PK) e farmacodinâmica (PD) de C1.2G, um anticorpo que se liga a G-CSFR, administrado a indivíduos adultos saudáveis

[00291] Um ensaio clínico de Fase 1 foi conduzido para avaliar a segurança e tolerabilidade de dose única ascendente (Partes A e B) e infusões intravenosas (IV) repetidas (Parte C) de CSL324 (também referido como C1.2G neste documento) em indivíduos saudáveis. Método

[00292] O ensaio foi um estudo pioneiro em humanos, de centro único, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo que avaliou a segurança, tolerabilidade, PK e farmacodinâmica (PD) de doses únicas ascendentes e doses repetidas de CSL324 IV em indivíduos humanos saudáveis. O estudo consistiu em 3 partes: Partes A, B e C. A revisão cega regular dos dados de segurança, tolerabilidade, PK e PD selecionados foi conduzida pelo Comitê de Revisão em Segurança (Safety Review Committee (SRC)) para orientar a seleção da dose. Este ensaio é descrito no Registro de Ensaios Clínicos da Nova Zelândia e Austrália (Australian New Zealand Clinical Trials Registry (ANZCTR)) sob o número de registro ACTRN12616000846426, sob o título: “Dose escalation, placebo-controlled phase 1 study to assess the safety and tolerability of CSL324 in healthy adults”. Parte A: Dose Única Ascendente

[00293] A Parte A avaliou doses únicas ascendentes de CSL324 administradas a 5 coortes sequenciais (Coortes A1 a A5). Cada coorte foi composta por 6 indivíduos randomizados para receber CSL324 (n = 4) ou placebo (n = 2) no Dia 1. Doses únicas ascendentes de 0,1, 0,3, 1,0, 3,0 e 10 mg/kg de CSL324 foram planejadas para os 5 coortes sequenciais. Por recomendação do SRC, a dose mais alta administrada foi 1,0 mg/kg de CSL324 (Coorte A3); as coortes A4 e A5 receberam doses intermediárias de 0,6 e 0,8 mg/kg de CSL324, respectivamente. Os indivíduos foram acompanhados até o Dia 85. Parte B - Dose Única Ascendente com Desafio de G-CSF

[00294] A Parte B avaliou doses únicas de CSL324 durante um desafio com G-CSF. As coortes B1, B2 e B3 eram compostas, cada uma, por 4 indivíduos randomizados para receber CSL324 (n = 3) ou placebo (n = 1) no Dia 1. A coorte B1 recebeu 0,1 mg/kg de CSL324 e as coortes B2 e B3 receberam 0,3 e 0,8 mg/kg de CSL324, respectivamente, por recomendação do SRC. Os indivíduos receberam um desafio de G-CSF (5 μg/kg de filgrastim) antes e depois de CSL324 (nos Dias -3, -2, -1, 1, 2 e 3). A coorte B4 compreendeu 6 indivíduos randomizados para receber CSL324 (n = 4) ou placebo (n = 2) no Dia 1. Os indivíduos receberam 0,8 mg/kg de CSL324 e foram administrados com um desafio de G-CSF (5 μg/kg de filgrastim) após CSL324 apenas (nos Dias 2, 3 e 4). Os indivíduos foram acompanhados até o Dia 85.

Parte C - Dose de Repetição

[00295] A Parte C avaliou 3 doses repetidas de CSL324 administradas em intervalos de 21 dias (Dias 1, 22 e 43). Dez indivíduos foram distribuídos aleatoriamente para receber CSL324 (n = 6) ou placebo (n = 4). Os indivíduos receberam 0,6 mg/kg de CSL324 por recomendação do SRC. Os indivíduos foram acompanhados até o Dia 126. Avaliações de Segurança, Farmacocinética (PK) e Farmacodinâmica (PD)

[00296] Em todas as partes do estudo, as avaliações de segurança incluíram eventos adversos (EAs), sinais vitais, incluindo desafio ortostático, exame físico e neurológico, eletrocardiograma de 12 derivações (ECG), monitoramento da telemetria cardíaca por ECG, testes de laboratório clínico (hematologia, química do sangue, coagulação e urinálise), fadiga medida em uma escala visual analógica e imunogenicidade de CSL324.

[00297] CSL324 foi medido no soro (todas as coortes) e líquido cefalorraquidiano (apenas Coorte A5).

[00298] As avaliações de PD incluíram atributos funcionais dos neutrófilos (atividade fagocítica, atividade de explosão oxidativa, transdutor de fosfo-sinal do receptor G-CSF e ativador de sinalização de transcrição-3 [pSTAT-3] [apenas Parte A] e sinalização de pSTAT-3 do receptor fator estimulador de colônias de granulócitos e macrófagos [GM-CSF] [apenas Partes A e C]); ocupação/saturação do receptor G-CSF de neutrófilo (apenas Partes A e C); e G-CSF sérico, citocinas e quimiocinas. Diagnóstico e Principais Critérios de Inclusão

[00299] Indivíduos saudáveis do sexo masculino ou feminino, de 18 a 55 anos de idade, com índice de massa corporal de 18,5 a 32,0 kg/m2 (inclusive) e peso ≥ 50 kg e < 100 kg, que forneceram consentimento informado por escrito. As mulheres não deveriam ter potencial para engravidar; indivíduos do sexo masculino e suas esposas/parceiras com potencial para engravidar deviam usar 2 formas de controle de natalidade altamente eficaz, desde a triagem até 90 dias após a infusão IV final.

[00300] Os indivíduos foram excluídos se tivessem um histórico ou evidência de qualquer doença cardiovascular, gastrointestinal, endócrina, hematológica, hepática, imunológica, metabólica, urológica, pulmonar, neurológica, dermatológica, psiquiátrica, renal e/ou outra doença importante ou malignidade clinicamente significativa, conforme julgado pelo investigador; um histórico de trombose venosa, policitemia ou trombofilia; um histórico de doença autoimune; neutropenia cíclica ou contagem absoluta de neutrófilos (ANC) < 2,0 × 109/L na triagem; qualquer anormalidade clinicamente significativa identificada na triagem ou admissão no local; frequência de pulso < 40 ou > 100 batimentos por minuto, pressão arterial sistólica média > 145 mmHg ou pressão arterial diastólica média > 90 mmHg na triagem ou admissão no local; intervalo QT corrigido médio usando a fórmula de Fridericia > 450 ms na triagem; ou uso de qualquer medicamento prescrito ou não prescrito nos 10 dias anteriores à infusão IV, exceto o uso ocasional de paracetamol (até 2 g/dia). Para as Partes A e B apenas, os indivíduos foram excluídos se tivessem qualquer tatuagem ou saúde cutânea comprometida, ou um histórico de formação de queloide, cicatriz hipertrófica ou linfangite. Dose do Anticorpo CSL324 e Modo de Administração

[00301] O CSL324 foi fornecido como uma solução injetável estéril em frascos de 10 mL. CSL324 foi administrado IV em um volume determinado de acordo com o peso do indivíduo no Dia 1 e a dose da coorte.

[00302] O placebo, cloreto de sódio a 0,9%, foi administrado IV em um volume equivalente a CSL324 de acordo com o peso do indivíduo no Dia 1 e a dose da coorte.

[00303] Todas as infusões de CSL324 deveriam ser administradas ao longo de 60 ± 5 minutos na veia do antebraço usando uma bomba de seringa (doses ≤ 1,0 mg/kg). Duração do Tratamento

[00304] Os indivíduos nas Partes A ou B receberam CSL324 ou placebo como uma dose única no Dia 1 e foram acompanhados até o Dia 85. Os indivíduos na Parte C receberam 3 doses de CSL324 ou placebo em intervalos de 21 dias nos Dias 1, 22 e 43, e foram acompanhados até o dia 126. Critérios para Avaliação:

[00305] Desfecho primário: Incidência, causalidade e gravidade de EAs durante o estudo.

[00306] Desfechos secundários:

[00307] Parâmetros farmacocinéticos de CSL324 no soro:

[00308] Partes A e B: AUC0-inf - Área sob a curva de concentração-tempo a partir do tempo 0 extrapolado ao infinito AUC0-t - Área sob a curva de concentração-tempo a partir do tempo 0 ao tempo de coleta t Cmax - concentração máxima CLtot - Eliminação sistêmica total após dosagem IV tmax - Tempo de concentração máxima t½ - Meia-vida de eliminação terminal Vz - Volume de distribuição após a dosagem IV durante a fase de eliminação terminal

[00309] Parte C: AUC0-t - Área sob a curva de concentração-tempo a partir do tempo 0 ao tempo de coleta t AUC0-tau - Área sob a curva de concentração-tempo durante o intervalo de dosagem no estado estacionário Cmin,ss - Concentração mínima (vale) no estado estacionário Cmax,ss - Concentração máxima no estado estacionário tmax,ss - Tempo de concentração máxima no estado estacionário t½,ss - Meia-vida de eliminação terminal no estado estacionário CLtot,ss - Eliminação sistêmica total no estado estacionário após a dosagem IV Vz,ss - Volume de distribuição no estado estacionário após a dosagem IV durante a fase de eliminação terminal

[00310] Concentrações de CSL324 e de G-CSF no líquido cefalorraquidiano (apenas Coorte A5).

[00311] Presença de anticorpos anti-CSL324 no soro.

[00312] Parâmetros de PD não compartimentais para ANC, incluindo o efeito máximo (Emax) de ANC a partir do Dia 1 e a área sob a curva de efeito a partir do tempo 0 a 24 horas para ANC (AUEC0-24, ANC), após o desafio com G-CSF após a dosagem de CSL324 ou placebo (apenas Parte B). Métodos Estatísticos Populações de Análise

[00313] O Conjunto de Análise Completa (FAS) compreendeu todos os indivíduos que forneceram consentimento informado por escrito e que eram elegíveis para inclusão no estudo após a triagem. O FAS foi usado para dados demográficos, características basais e imunogenicidade.

[00314] A população de segurança compreendeu todos os indivíduos que receberam pelo menos 1 dose de CSL324, analisada de acordo com a dose e a medicação recebida, e foi usada para todas as análises de segurança.

[00315] A população de PK compreendeu todos os indivíduos que receberam pelo menos 1 dose de CSL324 e tiveram pelo menos 1 concentração de PK medida, e foi usada para todas as análises de PK.

[00316] A população de PD compreendeu todos os indivíduos que receberam pelo menos 1 dose de CSL324 e para os quais os dados de PD estavam disponíveis antes da infusão de CSL324 e para pelo menos 1 ponto no tempo após a infusão de CSL324. A população de PD foi usada para todas as análises de PD. Considerações Gerais

[00317] Todos os dados foram listados por indivíduo. As estatísticas resumidas foram apresentadas por meio de estatísticas descritivas. Todos os testes estatísticos foram bilaterais e realizados com nível de significância de 5%, a menos que indicado de outra forma.

Análises Farmacocinéticas (PK)

[00318] Os parâmetros de PK foram derivados das concentrações séricas de CSL324 por análise não compartimental padrão usando tempos de amostragem reais. A proporcionalidade da dose foi avaliada para os parâmetros PK Cmax, AUC0-t e AUC0-inf para as coortes de dose única na Parte A e na Parte B separadamente. A proporcionalidade da dose foi analisada usando um modelo de potência que incluiu o nível de dose ajustado ao peso corporal transformado em loge como uma variável independente. A proporcionalidade linear entre o parâmetro PK e a dose poderia ser declarada se o intervalo de confiança (IC) de 90% estivesse dentro do intervalo crítico de 0,85 a 1,15. A correlação dos parâmetros PK Cmax, AUC0-t e AUC0-inf com a dose total (mg) e a dose ajustada ao peso corporal (mg/kg) foi investigada para a Parte A e Parte B usando análise de correlação de Pearson.

[00319] A biodisponibilidade relativa de CSL324 sem coadministração (Parte A) e com coadministração (Parte B) de G-CSF foi avaliada por um modelo de efeito misto (com tratamento, como efeito fixo e indivíduo, como efeito aleatório) e os parâmetros PK transformados em loge Cmax, AUC0-t e AUC0-inf. A administração de CSL324 sem a coadministração (Parte A) e com coadministração (Parte B) de G-CSF foi considerada equivalente se a IC de 90% para a razão média geométrica estivesse entre 80% e 125% para qualquer comparação.

[00320] A obtenção do estado estacionário após 3 doses de CSL324 a cada 21 dias (Parte C) foi avaliada pela análise de variância das medidas repetidas (ANOVA) da concentração mínima (Cmin). A primeira comparação não significativa foi o intervalo de dosagem em que o estado estacionário foi atingido. Análises Farmacodinâmicas (PD)

[00321] Os parâmetros de PD foram derivados usando análise não compartimental padrão. Os parâmetros de PD para as concentrações séricas de citocinas e quimiocinas, atividade fagocítica e de explosão oxidativa dos neutrófilos, ocupação do receptor G-CSF e sinalização de pSTAT-3 para a Parte

A foram comparados entre cada dose de CSL324 na Parte A e o grupo placebo agrupado para a Parte A por ANOVA.

[00322] A correlação dos parâmetros de PD com a dose total de CSL324 (mg) e a dose ajustada ao peso corporal (mg/kg) foi investigada usando a análise de correlação de Pearson. Análises de Segurança

[00323] Os EAs emergentes do tratamento (TEAEs) foram codificados usando o Dicionário Médico para Atividades Regulatórias (MedDRA; Versão

20.1). A gravidade de cada TEAE foi avaliada pelo investigador usando os Critérios de Terminologia Comum para Eventos Adversos do National Cancer Institute Versão 4, exceto para TEAEs de valores de ANC anormais que foram classificados usando os critérios de Club Fase 1. As comparações por Box Plot entre indivíduos com resultados de imunogenicidade positivos e negativos acumulados foram feitas para eliminação ou clearance de CSL324 (CLtot ou CLtot,ss) e parâmetros PD selecionados (ANC e concentração de G-CSF). Resultados Disposição do Indivíduo

[00324] Um total de 58 indivíduos forneceram consentimento informado e foram randomizados para o estudo. Na Parte A (n = 30), 4 indivíduos receberam CSL324 e 2 indivíduos receberam placebo em cada uma das 5 coortes (Coortes A1 a A5). Na Parte B (n = 18), 3 indivíduos receberam CSL324 e 1 indivíduo recebeu placebo em cada uma das Coortes B1 a B3, e 4 indivíduos receberam CSL324 e 2 indivíduos receberam placebo na Coorte B4. Na Parte C (n = 10), 6 indivíduos receberam CSL324 e 4 indivíduos receberam placebo.

[00325] No geral, 55 indivíduos (94,8%) completaram o estudo; 1 indivíduo tratado com placebo foi retirado da Parte A (Coorte A5) devido à revogação do consentimento, e 2 indivíduos (1 tratado com CSL324 e 1 tratado com placebo) foram retirados após completar as 3 doses na Parte C devido a outras razões. Dois indivíduos que completaram a Parte C do estudo não receberam a Dose 3 de CSL324 por recomendação do SRC.

Demografia

[00326] Os indivíduos do estudo eram do sexo masculino (100%) e predominantemente brancos (65,5%), com média de idade de 30,3 anos (variação: 19 a 54 anos). Não houve grandes diferenças nas características demográficas entre os indivíduos nas Partes A, B ou C. No geral, os históricos médicos e cirúrgicos dos indivíduos eram consistentes com uma população de voluntários saudáveis. Farmacocinética (PK)

[00327] Após doses IV únicas de CSL324, as concentrações séricas médias de CSL324 atingiram o pico no final da infusão, com C max mostrando proporcionalidade linear à dose de CSL324 (Figura 1). A exposição a CSL324, medida como AUC0-t e AUC0-inf, aumentou mediante a doses mais altas de CSL324, mas não demonstrou linearidade de dose, pois os limites de confiança para ambos os parâmetros estavam fora do intervalo crítico de 0,85 a 1,15 (inclinação estimada 1,68 [90% CI: 1,58 a 1,79] para AUC0-t e 1,67 [90% CI: 1,56 a 1,78] para AUC0-inf). A média CLtot de CSL324 não foi constante em toda a faixa de doses testada, diminuindo em 80% com um aumento de 10 vezes na dose de CSL324.

[00328] Após doses IV únicas, o t1/2 médio variou de 40,5 horas com 0,1 mg/kg de CSL324 a 206 horas com 1,0 mg/kg de CSL324. Após 3 doses de 0,6 mg/kg de CSL324, administradas em intervalos de 21 dias, o t 1/2 médio foi de 251 horas.

[00329] A administração de G-CSF antes e depois da infusão de CSL324 reduziu a biodisponibilidade relativa das doses únicas de CSL324, medida como AUC0-inf e AUC0-t, e teve efeito mínimo na Cmax. A redução na exposição de CSL324 por G-CSF foi maior quando G-CSF foi administrado antes e após a dosagem de CSL324 em comparação com após a dosagem de CSL324 apenas.

[00330] O estado estacionário não foi alcançado após 3 doses de 0,6 mg/kg de CSL324 administradas em intervalos de 21 dias com base nas concentrações mínimas. As concentrações séricas médias de pico de CSL324 foram semelhantes após a Dose 1 e a Dose 3.

[00331] CSL324 não foi detectado no líquido cefalorraquidiano após uma dose única de 0,8 mg/kg de CSL324. Farmacodinâmica

[00332] A ANC média diminuiu após doses únicas e repetidas de CSL324, administradas sem desafio com G-CSF, quando comparada com o placebo. Nas doses únicas de CSL324, o efeito mínimo de ANC médio (Emin) foi menor com a dose de 1,0 mg/kg de CSL324 (1,3 × 109/L) e maior com placebo (2,49 × 109/L). O Emin de ANC médio diminuiu para 1 x 109/L após repetição da dosagem de CSL324, com Emin ocorrendo após a Dose 3 (aproximadamente no Dia 48).

[00333] Doses mais altas de CSL324 (0,3 e 0,8 mg/kg) inibiram a estimulação mediada por G-CSF de ANC elevada; a resposta de ANC ao desafio de G-CSF foi semelhante com 0,1 mg/kg de CSL324 e placebo. As ANCs foram negativamente correlacionadas com a dose de CSL324 e exposição a CSL324, com base em AUC0-t.

[00334] O CSL324 não teve efeitos aparentes na função dos neutrófilos quando medido ex vivo em relação à atividade de explosão oxidativa e fagocitária de neutrófilos. Doses únicas mais altas de CSL324 (0,3 a 1,0 mg/kg) aumentaram a concentração média efetiva máxima de G-CSF (EC50) para a estimulação ex vivo da sinalização de pSTAT-3 de neutrófilo em comparação com o placebo; no entanto, os dados do ensaio mostraram grande variabilidade, o que limitou a interpretação. Nenhum efeito consistente de CSL324 foi observado sobre a proporção de sinalização de pSTAT-3 de neutrófilos estimulada por GM-CSF versus a não estimulada.

[00335] A saturação do receptor de G-CSF de neutrófilos foi alcançada rapidamente com doses únicas de CSL324 de 0,1 a 1,0 mg/kg. A duração da ocupação do receptor de aproximadamente 100% aumentou com o aumento da dose de CSL324, durando até o Dia 3 com 0,1 mg/kg de CSL324 e até o Dia 29 com 0,8 e 1,0 mg/kg de CSL324 (Figura 2).

[00336] Doses únicas de CSL324 aumentaram a exposição e pico de concentração sérica de G-CSF, em comparação com o placebo, com o G-CSF

AUEC0-t e AUEC0-24 mostrando uma correlação positiva com dose e exposição sistêmica de CSL324. Doses repetidas de CSL324 produziram um aumento sustentado no G-CSF sérico, com picos de concentração ocorrendo 2 dias após cada dose. O G-CSF não foi detectado no líquido cefalorraquidiano após uma dose única de 0,8 mg/kg de CSL324.

[00337] As concentrações séricas de citocinas e quimiocinas não mostraram padrões claros ao longo do tempo após a dosagem de CSL324 em comparação com o placebo. As concentrações de interleucina (IL)-8 no soro mostraram pequenos aumentos com CSL324 e placebo, sugerindo um efeito da infusão IV. Os níveis séricos do antagonista do receptor de IL-1 (IL-1RA) aumentaram após o desafio com G-CSF e, em seguida, diminuíram após a administração das doses mais elevadas de CSL324 (0,3 a 1,0 mg/kg). Segurança

[00338] No geral, a frequência de TEAEs foi semelhante com CSL324 (82,1%) e placebo (94,7%). TEAEs relacionados ao tratamento ocorreram em 64,1% dos indivíduos no grupo de CSL324 geral e 57,9% no grupo placebo. TEAEs que ocorreram mais frequentemente com CSL324 do que com placebo foram Neutropenia (19,2% versus nenhum indivíduo), Dor no local da infusão (7,7% versus nenhum indivíduo) e Congestão nasal (7,7% versus nenhum indivíduo). Nenhum TEAE foi sério ou fatal. Dois indivíduos não receberam a Dose 3 por recomendação do SRC.

[00339] Não houve tendência dose-dependente de CSL324 na frequência global de TEAE nas coortes de dose. Todos os indivíduos (100%) sofreram TEAEs após repetir a dosagem com CSL324 ou placebo.

[00340] A maioria dos TEAEs foram de Grau 1 ou 2. Todos os TEAEs relacionados ao tratamento após o tratamento com CSL324 foram resolvidos na Visita de Acompanhamento de Segurança, exceto para um TEAE de Eritema de Grau 2 que estava em andamento.

[00341] CSL324 reduziu ANC de uma maneira dose-dependente, caracterizada por neutropenia até a gravidade de Grau 3, que se resolveu espontaneamente no dia seguinte (Figura 5 e Figura 6).

[00342] Um indivíduo teve um TEAE de Neutropenia de Grau 3 no Dia 4 após uma dose única de 1,0 mg/kg de CSL324 (Figura 5) e 4 indivíduos tiveram 7 TEAEs de Neutropenia de Grau 3 com doses repetidas de 0,6 mg/kg de CSL324 (Figura 6). Dois indivíduos que sofreram mais de 1 evento de Neutropenia de Grau 3 não receberam a Dose 3 de CSL324 na Parte C por recomendação do SRC após revisão dos dados disponíveis de segurança, tolerabilidade, PK e PD selecionados. Todos os TEAEs de Neutropenia de Grau 3 resolveram-se espontaneamente sem tratamento no dia seguinte.

[00343] As ANCs que atendem aos critérios de neutropenia de Grau 2 ou 3 estiveram presentes em 6 dos 20 indivíduos tratados com uma única dose de CSL324, com tendência de aparecer em 1 a 4 dias após a dosagem de CSL324. Cinco dos 6 indivíduos que receberam doses repetidas de CSL324 apresentaram ANCs que atendiam aos critérios de neutropenia de Grau 2 ou 3, com tendência de ocorrer após a Dose 3.

[00344] Não foram observadas reações à infusão ou reações de tolerabilidade local. TEAEs de dor no local de infusão, eritema no local de punção e dor no local de punção foram sentidos por ≤ 5% dos indivíduos tratados com CSL324 e não por indivíduos tratados com placebo.

[00345] Nenhum sinal de segurança foi identificado a partir dos parâmetros laboratoriais, sinais vitais, incluindo desafio ortostático, ECG, achados físicos ou pontuações de fadiga.

[00346] Nenhum indivíduo desenvolveu anticorpos anti-CSL324 após uma dose IV única e repetida. Conclusões

[00347] O CSL324 foi seguro e bem tolerado quando administrado como uma dose única de até 0,8 mg/kg ou como doses repetidas de 0,6 mg/kg em intervalos de 21 dias. CSL324 reduziu os níveis de ANC de uma maneira dose-dependente,

caracterizada por neutropenia até a gravidade de Grau 3, que se resolveu espontaneamente sem tratamento no dia seguinte. A exposição sistêmica de CSL324 aumentou com o aumento da dose, com C max mostrando proporcionalidade linear à dose de CSL324. Doses mais altas de CSL324 tiveram um t1/2 mais longo e um CLtot mais lenta. CSL324 mostrou rápida saturação do receptor de G-CSF e inibiu a estimulação de ANC mediada por G- CSF em doses mais altas, com efeitos mínimos sobre os mediadores inflamatórios. Exemplo 2 - Tratamento da dermatose neutrofílica com CSL324, um anticorpo que se liga a G-CSFR. Desenho de Estudo

[00348] Um estudo multicêntrico e aberto de dois regimes de dose repetida é usado para investigar a segurança e a farmacocinética de doses repetidas de CSL324 administradas por via intravenosa em indivíduos com HS e PPP. O estudo também investiga a eficácia preliminar de CSL324 em indivíduos com HS e PPP.

[00349] O estudo consiste em um período de triagem de 28 dias, um período de tratamento de 15 semanas e um período de acompanhamento de 9 semanas. O estudo possui 2 coortes. Cada coorte é composta por 20 indivíduos com HS (n = 10) ou PPP (n = 10) (Figura 3). CSL324 é administrado inicialmente nos indivíduos inscritos na Coorte #1 como uma infusão IV de 60 minutos de 0,3 mg/kg de CSL324 em intervalos de 21 dias nos Dias 1, 22, 43, 64 e 85. CSL324 é administrado nos indivíduos na Coorte #2 quando os primeiros 5 indivíduos administrados com CSL324 na Coorte #1 completam o período de tratamento de 15 semanas. A dose mais segura de CSL324 (≥ 0,1 e ≤ 0,6 mg/kg) para a Coorte #2 é determinada por modelagem de simulação PK/ANC, que é atualizada com os dados de PK e ANC dos primeiros 5 indivíduos da Coorte #1 para completar o período de tratamento de 15 semanas (Figura 4).

[00350] No dia da dosagem, os indivíduos permanecem no centro de estudo por pelo menos 3 horas após o final da infusão para observações de segurança e coleta de sangue para PK, hematologia, bioquímica e concentração de citocinas/quimiocinas e outros biomarcadores selecionados no soro. A eficácia clínica é avaliada ao longo do período de tratamento e do período de acompanhamento e as biópsias de tecido são coletadas no início (Dia 1 antes da administração de CSL324) e no final do período de tratamento (Dia 105 se todas as 5 doses de CSL324 forem administradas ou 3 semanas após a dose final por interrupção prematura do tratamento). Anticorpo CSL324 TABELA 1 - Dose de anticorpo, regime de dosagem e administração Nome da substância CSL324 Substância ativa Anticorpo Monoclonal Anti-Receptor de G- CSF Recombinante Forma de dosagem Solução injetável estéril em frascos de 10 mL. Dose Coorte #1 - 0,3 mg/kg Coorte #2 - ≥ 0,1 - ≤ 0,6 mg/kg Regime de dosagem Cinco doses de CSL324 serão administradas a cada 21 dias nos Dias 1, 22, 43, 64 e 85 Modo de administração Infusão intravenosa Localização anatômica de Braço administração Fundamentação do Regime de Dosagem

[00351] Duas doses são administradas a pacientes com HS ou PPP para explorar a relação potencial PK/PD (ANC). O regime de dose inicial a ser testado neste estudo na Coorte #1 é de 0,3 mg/kg a cada 21 dias para um total de 5 doses. Este regime de dose inicial é selecionado com base nos dados de segurança, PK e PD obtidos no estudo de Fase 1 descrito no Exemplo 1. Os resultados pré-clínicos em macacos cinomolgo também foram considerados para sustentar um total de 5 doses administradas a cada 21 dias.

[00352] Os resultados do Exemplo 1 mostraram que CSL324 foi seguro e bem tolerado quando administrado como uma dose única de até 0,8 mg/kg ou como doses repetidas de 0,6 mg/kg em intervalos de 21 dias. O acúmulo mínimo de CSL324 foi observado após 3 doses múltiplas de 0,6 mg/kg, com uma meia-vida terminal média (SD) de 251 (55,2) horas.

[00353] Doses únicas de CSL324 de 0,3 e 0,8 mg/kg inibiram a estimulação dos níveis de ANC por G-CSF, o que confirma o mecanismo de ação; efeito mínimo foi observado com a dose de CSL324 de 0,1 mg/kg. Após doses únicas ou múltiplas de CSL324, a ocupação do receptor de G-CSF (RO) ocorreu rapidamente e atingiu ~ 100% de ocupação mesmo na dose mais baixa testada (0,1 mg/kg), e foi mantida neste nível por períodos mais longos de tempo conforme a dose aumentava. Além disso, a ocupação do receptor foi de ~ 100%, por até 27 dias após a administração da terceira dose de 0,6 mg/kg, indicando a ocupação total do receptor para o intervalo de dosagem de 21 dias após três doses.

[00354] Embora CSL324 fosse seguro e bem tolerado, a neutropenia transitória de Grau 3 foi observada em 1 indivíduo (1 evento) após uma dose única de 1 mg/kg, e 4 indivíduos (7 eventos) após três doses repetidas de 0,6 mg/kg. A dose mais segura de CSL324 (≥ 0,1 e ≤ 0,6 mg/kg) para a Coorte #2 é determinada por modelagem de simulação PK/ANC e é apoiada por margens de segurança de exposição em comparação com o estudo de toxicologia de BPL em macacos cinomolgo. No estudo de toxicologia GLP (APQ0045), CSL324 foi administrado uma vez por semana por infusão de bólus lenta durante 12 semanas. O CSL324 foi bem tolerado no macaco cinomolgo (macho e fêmea), e nenhum achado toxicológico relacionado ao artigo testado foi observado, resultando em um NOAEL da dose mais alta usada, 100 mg/kg. A margem de segurança para o regime posológico proposto no estudo atual foi de aproximadamente 122 e 231 para AUC e Cmax, respectivamente.

Critérios de Inclusão e Exclusão do Estudo TABELA 2 - Critérios de inclusão do estudo Critério de inclusão Justificativa

1. Para hidradenite supurativa: a. Um diagnóstico clínico confirmado a. Para garantir que os pacientes com de HS HS confirmada se inscrevam no b. Diagnosticado com HS moderada a estudo grave de acordo com as diretrizes b. Enriquecimento da gravidade da IHS4 (IHS4 ≥ 4) doença de HS moderada a grave para c. O indivíduo concorda em usar otimizar a avaliação do efeito do lavagem antisséptica (clorexidina 4%) tratamento diariamente pelo menos 2 semanas c. Para controlar a inflamação antes do Dia 1 até a visita de Final de associada a possíveis infecções Estudo secundárias

2. Para psoríase pustulosa palmoplantar: a. Diagnóstico confirmado de PPP, a. Para garantir que os pacientes com diferenciada de outras formas de PPP confirmada se inscrevam no pustulose ou psoríase estudo b. Pontuação ppPASI ≥12 b. Enriquecimento da gravidade da doença de ppPASI > 12 para otimizar a avaliação do efeito do tratamento

3. Masculino ou feminino entre 18 Primeiro estudo clínico para avaliar a e 75 anos de idade, inclusive. segurança na população ND; todas as doenças afetam homens e mulheres; pode ocorrer em qualquer fase da vida TABELA 3 - Critérios de exclusão do estudo

Critérios de Exclusão Justificativa

1. Tratamento com quaisquer Para limitar a interferência com a medicamentos e tratamentos listados avaliação do medicamento em como 'Não Permitido' em estudo Medicamentos e Tratamentos Concomitantes.

2. História de doença Para considerar a segurança dos mieloproliferativa. indivíduos, bem como limitar a interferência com a avaliação do medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

3. Diagnóstico simultâneo de neoplasia Para considerar a segurança dos (exceto carcinoma basocelular ou indivíduos, bem como limitar a espinocelular da pele, sem recorrência interferência com a avaliação do ou metástases por mais de 2 anos). medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

4. Indivíduos com um histórico atual ou Para considerar a segurança dos recente clinicamente significativo de indivíduos, bem como limitar a doença renal, hepática, hematológica, interferência com a avaliação do endócrina, pulmonar ou cardíaca medicamento do estudo e condução grave, progressiva e/ou não controlada, satisfatória do estudo conforme determinado pelo Investigador e/ou Patrocinador.

5. Indivíduos com condições Para considerar a segurança dos imunossupressoras. indivíduos, bem como limitar a interferência com a avaliação do medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

Critérios de Exclusão Justificativa

6. Indivíduos que estão sob terapia Para considerar a segurança dos imunossupressora ou indivíduos, bem como limitar a imunomoduladora, tal como descrito na interferência com a avaliação do seção de medicação proibida medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

7. Sinais clínicos de infecção ativa e/ou Para considerar a segurança dos febre > 38°C nos 7 dias anteriores ao indivíduos, bem como limitar a Dia 1. A entrada no estudo pode ser interferência com a avaliação do adiada para tais indivíduos a critério do medicamento do estudo e condução Investigador e/ou do Patrocinador. satisfatória do estudo

8. Indivíduos com infecção por HIV, Para considerar a segurança dos hepatite B ou C confirmada indivíduos, bem como limitar a interferência com a avaliação do medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

9. Indivíduos com anormalidades Para considerar a segurança dos laboratoriais clinicamente indivíduos, bem como limitar a significativas, incluindo aspartato interferência com a avaliação do aminotransferase ou alanina medicamento do estudo e condução aminotransferase > 2 x limite superior satisfatória do estudo do normal ou neutropenia (definida como ANC < 2 x 109/L)

10. História de uso crônico de álcool ou Para considerar a segurança dos drogas no último ano indivíduos, bem como limitar a interferência com a avaliação do medicamento do estudo e condução satisfatória do estudo

11. Participantes do sexo feminino que Não foram realizados estudos estão grávidas, amamentando, reprodutivos não clínicos

Critérios de Exclusão Justificativa planejam engravidar durante o estudo ou dentro de 30 dias após a EOSV, ou aquelas com potencial para engravidar que não desejam usar uma forma aceitável de contracepção durante o estudo.

12. Indivíduos do sexo masculino com Não foram realizados estudos parceiras que planejam engravidar reprodutivos não clínicos durante o estudo ou dentro de 30 dias após a EOSV, ou aqueles cujas parceiras apresentam potencial para engravidar que não desejam usar uma forma aceitável de contracepção durante o estudo. Para pustulose palmoplantar:

13. Antecedentes simultâneos de Devido às muitas variedades de psoríase vulgar. psoríase, a exclusão de psoríase vulgar simultânea permite que uma população PPP clara seja incluída no estudo Para hidradenite supurativa:

14. Indivíduos com > 20 fístulas de Evitar pacientes com doenças drenagem graves, possivelmente intratáveis Avaliações de Segurança

[00355] Os procedimentos clínicos conduzidos durante este estudo relacionados à avaliação de segurança são fornecidos na Tabela 4 abaixo.

TABELA 4 - Avaliações de segurança Avaliação Descrição Teste de Teste sérico para Coriogonadotropina Beta (beta-gonadotrofina coriônica gravidez/FSH humana [β-hCG]) para testar a gravidez Hormônio folículo estimulante (FSH) para confirmar a menopausa Exame físico De acordo com o procedimento padrão do local ECG de 12 Frequência cardíaca Intervalo PR Duração QRS derivações Intervalo QT Intervalo QTcB Intervalo QTcF Interpretação (interpretação geral do investigador) Eventos adversos Avaliação de todos os eventos adversos (por exemplo, causalidade/relação, gravidade, seriedade) Eventos adversos de interesse especial: o Neutropenia Gr3 (grave)/Gr4 (risco de morte) o Infecções Sinais vitais Pressão Arterial (sistólica e diastólica) Temperatura Frequência respiratória Altura Frequência de pulso Peso Urinálise (dispstick) Gravidade Específica Nitrito Proteína pH Cetonas Glicose Leucócito esterase Bilirrubina Sangue oculto Urobilinogênio Hematologia Leucócitos (contagem de leucócitos [WBC]) Hemoglobina (HGB) Hematócrito (HCT) Eritrócitos (contagem de glóbulos vermelhos [RBC]) Índices de glóbulos vermelhos: Volume Corpuscular Médio (MCV); Hemoglobina Corpuscular Média (MCH); Concentração de Hemoglobina Corpuscular Média (MCHC); Amplitude de distribuição dos eritrócitos (RDW) Plaquetas Diferencial - percentual e absoluto: Neutrófilos; Formas de bandas de neutrófilos; Linfócitos; Monócitos; Eosinófilos; Basófilos Reticulócitos Bioquímica Sódio (Na) Aspartato Aminotransferase (AST) Potássio (K) Lactato desidrogenase (LDH)

Avaliação Descrição Cloreto (Cl) Gama-Glutamil Transferase (GGT) Bicarbonato (HCO3) Bilirrubina - total Dióxido de carbono - (CO2) total Bilirrubina direta Cálcio (Ca) Magnésio (Mg) Nitrogênio ureico (BUN) Fosfato (PO4) Ureia Proteína C Reativa (PCR) Creatinina Colesterol - total Glicose Triglicerídeos Proteína - total Colesterol HDL Albumina Colesterol LDL Fosfatase Alcalina Urato (ácido úrico) Alanina Aminotransferase (ALT) Creatinina quinase (CK; CPK) Imunogenicidade Soro analisado quanto à presença de anticorpos de ligação a CSL324 Contagem Absoluta de Neutrófilos (ANC) e Monitoramento da Temperatura Corporal

[00356] A ANC de cada indivíduo é monitorada ao longo do estudo em momentos programados.

[00357] Se um indivíduo registrar neutropenia de Grau 3 ou 4 na véspera da administração da dose, uma repetição da avaliação de ANC é realizada em 24 horas e a média dos 2 valores de ANC deve ser ≥ 800/mm3 para permitir que a dose de CSL324 seja administrada. Se a média dos 2 valores de ANC for < 800/mm3, o indivíduo não receberá nenhuma dosagem adicional. A fim de permitir que a repetição da medida de ANC seja realizada em resposta à neutropenia de Grau 3 ou 4 no dia anterior à dosagem, uma dose pode ser adiada dentro da janela de dosagem permitida (+3 dias).

[00358] Se um indivíduo registrar uma neutropenia de Grau 3 (Gr3) em qualquer outro dia diferente do dia anterior à dosagem, o indivíduo pode continuar no estudo, a menos que este único valor de ANC de Gr3 esteja ligado a uma única temperatura timpânica de > 38,3°C ou > 38,0°C mantida por > 1 hora e/ou sinais ou sintomas de infecção clinicamente significativos. Se um indivíduo tiver neutropenia de Grau 3 em qualquer outro momento durante os períodos de Tratamento ou Acompanhamento, as medidas de ANC não programadas podem ser realizadas para monitorar, o mais próximo possível, os níveis de ANC do indivíduo.

[00359] Se um indivíduo registrar uma neutropenia de Grau 4 em qualquer outro dia diferente do dia anterior à dosagem, uma repetição da avaliação de ANC deve ser realizada em 24 horas e o indivíduo pode continuar no estudo se seu valor de ANC de repetição for ≥ 500/mm3. Se o valor de ANC de repetição for < 500/mm3, o indivíduo não receberá nenhuma dosagem adicional.

[00360] Os indivíduos com neutropenia de Grau 3 ou 4 devem estar vigilantes e relatar imediatamente quaisquer sinais e/ou sintomas de infecção, incluindo temperatura corporal elevada. Todos os participantes do estudo recebem um termômetro e são solicitados a monitorar diariamente a temperatura oral em um horário consistente. Os participantes devem entrar em contato com o local imediatamente se a medição da temperatura oral exceder 37,2°C e são solicitados a comparecer a uma visita não programada para avaliação clínica. Avaliações de Eficácia Hidradenite supurativa

[00361] Contagem Total de Abcesso e Nódulos Inflamatórios (contagem AN): Um nódulo (nódulo inflamatório) é uma lesão elevada, tridimensional, redonda, infiltrada com um diâmetro > 10 mm. Um abscesso é uma massa macia, mas flutuante, com diâmetro > 10 mm, circundada por uma área eritematosa; o meio de um abscesso contém pus. Um túnel/fístula de drenagem é uma massa longitudinal elevada, macia, mas flutuante, de comprimento e profundidade variáveis, terminando na superfície da pele e, às vezes, escorrendo líquido (Lipsker et al. 2016, Dermatology 232: 137-42). A contagem de AN, juntamente com uma avaliação de túneis/fístulas de drenagem, é avaliada na triagem, antes da dosagem nos Dias 1, 22, 43, 64 e 85, bem como nos Dias 105, 126, 147 e

168 (EOSV), para pontuações diferentes a fim de avaliar as mudanças dinâmicas na HS, incluindo:

[00362] Resposta Clínica à Hidradenite Supurativa (HiSCR): A HiSCR foi desenvolvida e validada em 2014 para melhorar a sensibilidade, a consistência de medição e facilidade de utilização (Kimball et al., 2014., Br J Dermatol 171: 1434-1442). A HiSCR é um desfecho clínico válido, responsivo e significativo das manifestações inflamatórias da HS que pode ser adaptado à pesquisa clínica e à prática diária. É definida como uma redução de 50% a partir do ponto de referência na contagem total de AN, sem aumento na contagem de abscessos ou fístula de drenagem. Esta medida foi usada em vários estudos de HS de Fase 2 (Kimball, Sobell, et al. 2016, J Eur Acad Dermatol Venereol 30: 989-94; Kanni et al. 2018, J Invest Dermatol 138: 795-801; Tzanetakou et al. 2016, N Engl J Med 320: 365-76) e os estudos clínicos PIONEER de HS de Fase 3 (Kimball, Okun, et al. 2016, N Engl J Med 375: 422-34).

[00363] Sistema Internacional de Pontuação de Gravidade de Hidradenite Supurativa (IHS4): O IHS4 é uma ferramenta validada para a avaliação dinâmica da gravidade de HS (Zouboulis et al., 2017., Br J Dermatol 177: 1401-1409) e melhora a avaliação de HiSCR, uma vez que foi concebido para avaliar a resposta ao tratamento e não a transversalidade da gravidade da doença (Kimball et al.,2014., Br J Dermatol 171: 1434-1442). A pontuação do IHS4 (pontos) = (número de nódulos multiplicado por 1) + (número de abscessos multiplicado por 2) + [número de túneis (fístulas/seios) de drenagem multiplicado por 4]. Uma pontuação de 3 ou menos significa HS leve, uma pontuação de 4– 10 significa HS moderada e uma pontuação de 11 ou mais significa HS grave (Zouboulis et al. 2017, Br J Dermatol 177: 1401-09).

[00364] Avaliação Global da Atividade de Hidradenite Supurativa pelo Médico (HS-PGA): O HS-PGA de seis pontos é usado em ensaios clínicos para medir a melhora clínica dos nódulos inflamatórios, abscessos e fístulas de drenagem. Ele varia de sem lesões (pontuação 0) a muito grave (pontuação 5). Ele tem uma orientação clara para a pontuação da gravidade da doença e é relativamente fácil de usar (Kimball et al. 2014, Br J Dermatol 171: 1434-42). HS- PGA será avaliado antes da dose no dia da dosagem (Dias 1, 22, 43, 64 e 85), Dia 105, 126, 147 e 168 (EOSV). Pustulose palmoplantar

[00365] Índice de Gravidade da Psoríase Pustulosa Palmoplantar por Área (ppPASI): O ppPASI é uma ferramenta de avaliação baseada no Índice de Gravidade da Psoríase por Área amplamente usada para avaliar a gravidade da psoríase crônica em placas. Os parâmetros incluindo gravidade, eritema, número total de pústulas e descamação são pontuados em uma escala de 1-4, depois corrigidos para a área e local envolvidos (palma ou sola do pé). A soma dos quatro valores produz o ppPASI final que varia entre 0 (sem PPP) e 72 (a PPP mais grave) (Bhushan et al. 2001, Br J Dermatol 145: 546-53). O ppPASI é avaliado na triagem, antes da dosagem nos Dias 1, 22, 43, 64 e 85, bem como nos Dias 105, 126, 147 e 168 (EOSV).

[00366] Avaliação Global da Atividade da Doença na Sola-Palma pelo Médico (PGA): A PGA é uma avaliação média de todas as lesões psoriáticas com base no eritema, descamação e endurecimento (Robinson, 2011). A PGA é avaliada antes da dose no Dia da dosagem (Dias 1, 22, 43, 64 e 85), Dia 105, 126, 147 e 168 (EOSV). Avaliações Farmacocinéticas (PK)

[00367] Após a primeira e a última infusões, as amostras de PK para determinação das concentrações séricas de CSL324 são coletadas de um braço contralateral (em relação à linha IV para infusão) por punção venosa antes de cada infusão e ao final da infusão, e às 3 horas, 4 dias, 1 semana, 2 semanas e 3 semanas após o final da infusão. Amostras farmacocinéticas adicionais são coletadas em 6 semanas, 9 semanas e 12 semanas após a última dose.

[00368] As concentrações séricas são listadas por ponto no tempo e resumidas descritivamente. As exibições gráficas dos parâmetros de PK do CSL324 após administração de dose repetida, derivadas por método não compartimental, são resumidas descritivamente por coorte de dose e grupo de indicação. Avaliações Farmacodinâmicas (PD)

[00369] Amostras de sangue e tecido são coletadas para várias avaliações. As avaliações de sangue incluem, mas não estão limitadas ao seguinte: Medições seriadas de ANC, citocinas e quimiocinas séricas (por exemplo, G- CSF, GM-CSF), marcadores pró-inflamatórios associados a doenças (por exemplo, PCR, ESR, C3a, C5a), assinatura(s) de gene(s) inflamatório(s) (por exemplo, assinatura de neutrófilos/G-CSF) e mudança de perfil de neutrófilos com base em esfregaços de sangue periférico. Coletas extras de sangue para análise de pesquisa são claramente mencionadas no Termo de Consentimento Informado (TCI) com aprovação específica necessária para sua coleta. Coleta de Biópsia de Pele

[00370] Amostras de tecido, por meio de biópsias de punção, são coletadas no ponto de referência e 3 semanas após a dose final para avaliar a infiltração celular, incluindo, mas não se limitando a infiltração de neutrófilos. Esta análise é realizada por histologia (imunohistoquímica, H&E) e avaliação de RNA.

[00371] Duas biópsias de 3 mm são coletadas cada uma no Dia 1 (ponto de referência) e no final do período de tratamento (Dia 105, se todas as 5 doses de CSL324 forem administradas ou 3 semanas após a dose final por interrupção prematura do tratamento). As biópsias são coletadas antes da dosagem e coleta de sangue, e após avaliações de sinais vitais, temperatura e parâmetros clínicos. As biópsias de tratamento de final de estudo são realizadas o mais próximo possível do local da biópsia do Dia 1, mesmo se a lesão tiver desaparecido parcial ou completamente. Para a HS, as biópsias de referência são coletadas diretamente a partir de um nódulo > 1 centímetro (maior nódulo possível) evitando a centro do nódulo se possível. Para a PPP, as biópsias de referência são coletadas de uma área de pele inflamada na palma da mão ou na sola dos pés próxima a, mas não incluindo, uma pústula.

Avaliações dos Resultados Relatados pelos Pacientes Todas as Doenças:

[00372] Pontuação do Questionário do Índice de Qualidade de Vida em Dermatologia (DLQI): O DLQI é um questionário simples validado de 10 perguntas que foi usado em mais de 40 doenças de pele diferentes em mais de 80 países e está disponível em mais de 90 idiomas. Seu uso foi descrito em mais de 1000 publicações, incluindo muitos estudos multinacionais. Cada pergunta é pontuada de 0 (nada) a 3 (muito) com o período de retorno sendo de 1 semana. Um total de 30 pontos é a pontuação máxima, onde 0-1 é considerado como sem impacto, 2-5 pequeno, 6-10 moderado, 11-20 muito grande e 21-30 como um impacto extremamente grande sobre a vida do paciente (Hongbo et al. 2005, J Invest Dermatol 125: 659-64). DLQI é avaliado antes da dosagem nos Dias 1, 22, 43, 64 e 85, bem como nos Dias 105, 126, 147 e 168 (EOSV). Hidradenite supurativa

[00373] Pontuação de Dor da Escala de Classificação Numérica (NRS): A NRS para a dor é uma medida unidimensional da intensidade da dor em adultos, incluindo aqueles com dor crônica associada a condições dermatológicas (Kimball, Okun, et al. 2016, N Engl J Med, 375: 422-34). O NRS é uma versão numérica segmentada da escala visual analógica (VAS) em que um entrevistado seleciona um número inteiro (0 a 10) que melhor reflete a intensidade de sua dor nas últimas 24 horas (Rodriguez 2001, Pain Manag Nurs, 2: 38-46). O formato comum é uma barra ou linha horizontal e é fundamentado por termos que descrevem os extremos da gravidade da dor (Hawker et al. 2011, Arthritis Care Res (Hoboken), 63 Suppl 11: S240-52). A pontuação de dor da NRS é coletada diariamente por meio de um diário eletrônico, com médias semanais derivadas. Outras Avaliações

[00374] As fotografias que capturam as alterações da lesão ao longo do tempo são uma avaliação opcional para os indivíduos participarem. Essas fotografias são tiradas no Ponto de Referência, bem como várias vezes ao longo do estudo para capturar a lesão com o tratamento com CSL324 (Semana 3, 6,

9, 12, 15 e acompanhamento). Essas fotografias podem ser usadas em vários ambientes e documentos, incluindo apresentações internas e externas, relatórios e publicações. Regras de Interrupção Critérios de Interrupção do Estudo

[00375] O estudo é interrompido imediatamente se: · Um indivíduo desenvolve um EA grave (SAE) que resulta em óbito e é considerado pelo Investigador e/ou Patrocinador como relacionado à administração de CSL324. Se qualquer um dos seguintes eventos ocorrer durante o estudo e estes eventos forem considerados como estando relacionados à administração de CSL324, o recrutamento é interrompido e o evento é investigado para determinar a recomendação de interromper o estudo, modificar o protocolo antes de reiniciar o estudo, ou reiniciar o estudo: · Se algum dos critérios de interrupção de coorte for atendido na coorte de dose mais baixa · Um ou mais participantes desenvolve qualquer outro evento que seja considerado um risco inaceitável para outros participantes do estudo. Critérios de Interrupção de Coorte

[00376] Durante este estudo, os critérios de interrupção de coorte relacionados à segurança são adotados para todas as indicações. Se os critérios de interrupção da coorte forem atendidos na coorte de dosagem mais alta, a coorte de dosagem mais baixa pode ser continuada, a menos que o SRC recomende a interrupção do estudo.

[00377] A dosagem de todos os indivíduos em uma coorte individual é interrompida imediatamente se: · Três (3) indivíduos dentro de uma coorte apresentam um único evento de neutropenia de Grau 4 relacionada à administração de CSL324 (definida como uma única medição confirmada na repetição da medição aproximadamente 24 horas depois).

· Se qualquer um dos seguintes eventos ocorrer durante o estudo em indivíduos dentro de uma coorte e estes eventos forem considerados como estando relacionados à administração de CSL324, o evento é investigado para determinar uma recomendação para permitir a dosagem e o recrutamento posteriores para a coorte afetada. Também se decide se a dosagem dos participantes do estudo dentro da mesma coorte, os quais não atenderam aos critérios abaixo e que estão no meio do seu período de tratamento, deve continuar ou interromper todas as dosagens de CSL324 para toda a coorte e fazer com que todos os participantes da coorte passem por avaliações de fim de tratamento e acompanhamento e retornem ao atendimento clínico/SoC. · Um indivíduo tem um único evento de neutropenia de Grau 4 (confirmada na repetição da medição aproximadamente 24 horas depois) na presença de quaisquer sinais ou sintomas clínicos de infecção. · Um indivíduo teve a confirmação de sepse neutropênica, necessitando de antibióticos IV (Critérios para definir sepse TBD). · Qualquer outro evento que seja considerado um risco inaceitável para outros participantes da coorte. Critérios de Interrupção dos Participantes

[00378] Durante o estudo, os critérios de interrupção dos participantes relacionados à segurança são adotados para todas as indicações. Se um indivíduo desenvolver qualquer um dos eventos a seguir durante o estudo e o(s) evento(s) for(em) considerado(s) relacionado(s) à CSL324, o indivíduo não receberá nenhuma dose restante de CSL324. · Um evento adverso sério (SAE). · Se o indivíduo apresentar sintomas prolongados de reação à infusão de Grau 3 ou 4 (pela classificação CTCAE), apesar do manejo, incluindo redução da taxa de infusão e/ou administração de anti-histamínicos orais. · Um EA grave não sério (incluindo infecções) que é considerado clinicamente significativo.

· O indivíduo sofre um único evento de neutropenia de Grau 4 (confirmada na repetição da medição aproximadamente 24 horas depois) em qualquer estágio durante o período de tratamento do estudo. · Se o indivíduo registrar uma neutropenia de Grau 3 ou 4 no dia anterior a uma administração da dose e com uma repetição da avaliação de ANC (confirmada na repetição da medição aproximadamente 24 horas depois) apresentando uma média < 800/mm3. · Neutropenia de Grau 3 de acordo com CTCAE associada a uma única temperatura timpânica de > 38,3°C ou > 38,0°C mantida por > 1 hora e/ou sinais ou sintomas de infecção clinicamente significativos.

[00379] No caso de um indivíduo não receber seu regime de dosagem completo de CSL324, ele retorna ao tratamento clínico e é submetido à avaliação de final de tratamento (3 semanas após a última dose) e à avaliação de acompanhamento. Exemplo 3 - CSL324 reduz a migração de neutrófilos associada à expressão de CXCR1, que é um marcador que é regulado positivamente em pacientes com HS. Expressão de CXCR1 em Pacientes com HS

[00380] Amostras de sangue total de pacientes com Hidradenite supurativa (HS; n = 15) foram usadas para avaliar os níveis de CXCR1, um marcador de migração celular, na superfície de neutrófilos (definido por alta dispersão lateral (SSC), CD11b+CD49-) por citometria de fluxo em comparação com neutrófilos de amostras de sangue total de controle saudáveis pareados por idade e sexo.

[00381] Conforme mostrado na Figura 7A, a expressão de CXCR1 foi significativamente maior em neutrófilos das amostras de pacientes com HS em comparação com os controles saudáveis (n = 15). Análises posteriores demonstraram que uma correlação entre o abscesso dos pacientes com HS e a contagem de nódulos, uma forma de avaliação da atividade da doença, e a expressão de CXCR1 nos neutrófilos de pacientes com HS (n = 14) foi observada (Figura 7B; r2 = 0,3532, p = 0,0250).

CSL324 Reduz a Expressão de CXCR1 e CXCR 2 Induzida por G-CSF

[00382] Amostras de sangue total obtidas de doadores humanos saudáveis foram usadas para avaliar a expressão dos receptores de quimiocina CXCR1 e CXCR2 em neutrófilos e para avaliar os efeitos de CSL324 na presença ou ausência de G-CSF sobre os níveis desses receptores migratórios. As amostras foram pré-incubadas com 1 mg/mL de CSL324 por 30 minutos antes da estimulação das células com G-CSF humano recombinante (30 ng/mL; n = 11) ou GM-CSF humano recombinante (30 ng/mL; n = 4) e cultivadas durante 20 horas a 37°C, 5% de CO2. Os neutrófilos foram identificados por dispersão lateral de luz (SSC) e pelo fenótipo CD11b+CD49-. A intensidade média de fluorescência dos anticorpos conjugados para CXCR1 ou CXCR2 foi normalizada em relação às células cultivadas em meio apenas.

[00383] Como mostrado na Figura 8, a cultura de neutrófilos apenas com G- CSF (preto) aumentou a expressão de superfície celular de CXCR1 e CXCR2 em comparação com meio apenas. A pré-incubação com CSL324 (cinza) levou a uma redução da regulação positiva de CXCR1 e CXCR2 induzida por G-CSF, com a intensidade média de fluorescência (IMF) de CXCR1 ou CXCR2 sendo comparável à observada quando os neutrófilos foram incubados em meios de cultura de células apenas. A cultura de células na presença de GM-CSF não alterou significativamente os níveis dos marcadores de superfície e, além disso, não foi alterada pela pré-incubação das amostras com CSL324. CSL324 Reduz a Migração Celular Induzida por G-CSF

[00384] Um ensaio de migração celular foi usado para avaliar a capacidade de CSL324 em inibir a migração de neutrófilos mediada por G-CSF a MIP-2. Especificamente, os neutrófilos purificados foram isolados (> 95% de pureza) e pré-cultivados com ou sem 1 μg/mL de CSL324 por 30 minutos antes de serem estimulados com 30 ng/mL de G-CSF humano ou 30 ng/mL de GM-CSF humano durante a noite. A quimiotaxia para MIP-2 (500 ng/mL) foi medida por inserções transwell (poros de 5 μm).

[00385] Conforme mostrado na Figura 9, a pré-incubação com G-CSF resultou no aumento da migração de neutrófilos para MIP-2, que foi reduzida aos mesmos níveis que a condição de meio apenas através da pré-incubação com CSL324 (Figura 9A; barras cinzas) Os efeitos pró-migratórios do GM-CSF não foram inibidos pela pré-incubação com CSL324, indicando especificidade para os efeitos do envolvimento do receptor de G-CSF. A pré-incubação com G-CSF resultou na regulação positiva de CXCR1 e CXCR,2 que se correlacionou com o aumento da migração de neutrófilos para MIP-2 (Figuras 9B e 9C).

[00386] Juntos, esses dados demonstram que: · CXCR1 é expresso em níveis significativamente mais elevados em neutrófilos de pacientes com HS em relação a indivíduos saudáveis (Figura 7A); · A expressão de CXCR1 está positivamente correlacionada com a gravidade da doença de HS (medida pela e contagem de nódulos e abscessos; Figura 7B); · A expressão de CXCR1 (e CXCR2) está positivamente correlacionada com a migração de neutrófilos (Figuras 9B e 9C); · CSL324 inibe a expressão de CXCR1 (e CXCR2) induzida por G-CSF em neutrófilos (Figuras 8A e 8B), bem como a migração de neutrófilos induzida por G-CSF (Figura 9A). Exemplo 4 - Números de neutrófilos e expressão do marcador de migração são regulados positivamente em pacientes com psoríase

[00387] Para avaliar o potencial de tratamento com um anticorpo que se liga ao G-CSFR, os pacientes com psoríase foram avaliados quanto ao número de neutrófilos no sangue total e à expressão de marcadores de migração celular – CXCR1 e CXCR2.

[00388] Um total de 21 indivíduos com psoríase em placas (também conhecida como “psoríase vulgar” ou “psoríase comum”) e 21 indivíduos não afetados de mesma idade e sexo foram recrutados para coleta de amostras de sangue e tecido cutâneo. Os neutrófilos em amostras frescas de sangue total foram fenotipados por citometria de fluxo.

[00389] Conforme mostrado na Figura 10, as contagens de neutrófilos (Figura 10A) aumentaram significativamente no sangue periférico de pessoas com psoríase em comparação com os controles não afetados. A estratificação com base na gravidade da psoríase avaliada pela pontuação PASI mostrou que a contagem de neutrófilos foi significativamente alta em indivíduos com uma pontuação PASI de 10 ou superior. Além disso, a proporção neutrófilos: linfócitos (NLR) foi significativamente alta em indivíduos com uma pontuação PASI de 10 ou superior em comparação com indivíduos com uma pontuação PASI inferior a 10 (Figura 10B).

[00390] A expressão dos marcadores de superfície celular de ativação e migração, CXCR1 e CXCR2, foi avaliada em neutrófilos de sangue periférico em pessoas com psoríase em comparação com os controles não afetados por citometria de fluxo. O receptor de quimiocina CXCR2 estava significativamente elevado na superfície dos neutrófilos na psoríase leve (PASI < 10) e grave (PASI > 10) (Figura 10C). Nenhuma alteração significativa nos níveis do receptor de quimiocina CXCR1 foi detectada (Figura 10D). Tendo em vista que foi demonstrado que um anticorpo que se liga a G-CSFR, CSL324, reduz a contagem de neutrófilos (vide Exemplo 1) e a expressão de CXCR1 e CXCR2 (vide Exemplo 3), estes dados fornecem evidências de que tal anticorpo pode ser uma opção terapêutica viável para o tratamento da psoríase. Exemplo 5 - O tratamento da pustulose palmoplantar (PPP) com CSL324 é seguro e eficaz Indivíduo 00360098-0001

[00391] O referido indivíduo é um homem caucasiano de 52 anos de idade com histórico de pustulose palmoplantar (PPP) por mais de quatro anos, obeso (129 kg), e fumante (mais de 30 anos). Ele foi tratado anteriormente para PPP com os seguintes medicamentos: · Metotrexato, 10 mg semanalmente por aproximadamente um ano; · Acitretina, 50 mg por dia por aproximadamente quatro meses; · Tacrolimus (tópico) por aproximadamente três anos;

· Corticosteroide (tópico) por aproximadamente três anos; e · Vitamina D + corticosteroides (tópicos) por aproximadamente três anos.

[00392] O indivíduo foi inscrito no Estudo CSL324_1002 descrito no Exemplo 2 e recebeu a sua primeira infusão de CSL324 a uma dose de 0,3 mg/kg no dia 1 e, em seguida, recebeu 4 infusões subsequentes a cada 21 dias nos Dias 22, 43, 64, e 85. Resultados de Eficácia

[00393] A gravidade de referência da PPP do indivíduo, medida pelo Índice de Gravidade da Psoríase Pustulosa Palmoplantar por Área (ppPASI), foi de 34,2 (grave) na triagem e 26,9 (grave) antes da primeira administração de CSL324. Além disso, antes da primeira administração de CSL324, a Avaliação Global da Atividade da PPP pelo Médico (PPP-PGA) foi grave. Os resultados das medidas de eficácia até o dia 126 são apresentados na Tabela 5 e na Figura 11.

TABELA 5 - Pontuações ppPASI e PPP-PGA para o Indivíduo 00360098-0001 Dia Dia Dia Dia Dia Dia Dia Triagem 0 22 43 64 85 105 126 ppPASI 34,2 26,9 11,8 14,2 10,2 7,2 6 13,6 PPP- grave moderado moderado moderado leve leve moderado

PGA

[00394] Os dados apresentados na Tabela 5 e na Figura 11 demonstram que o tratamento com CSL324 reduz com sucesso a gravidade da PPP, conforme a medição por ppPASI ou PPP-PGA. A Tabela 6 abaixo fornece uma orientação para a interpretação dos resultados. TABELA 6 - Interpretação da avaliação de eficácia de CSL324 ppPASI ppPASI < 7 Leve ppPASI = 7-15 Moderado ppPASI > 15 (até 72) Grave

PPP-PGA 0 Sem lesões 1 Quase sem lesões 2 Leve 3 Moderado 4 Grave Resultados de Segurança Eventos Adversos

[00395] O indivíduo sofreu 3 eventos adversos, todos sem gravidade e considerados não relacionados com o CSL324. O primeiro EA, dor lombar, ocorreu no dia 67, foi tratado com um AINE e resolvido em 1 dia. O segundo EA, diabetes mellitus, foi diagnosticado no dia da dose final de CSL324, depois de ter apresentado glicose elevada desde a triagem do estudo, que não se alterou apesar das modificações na dieta. A hiperglicemia não piorou durante o tratamento com CSL324. O EA final, letargia, ocorreu no dia seguinte à dose final e foi resolvido no mesmo dia. Contagem Absoluta de Neutrófilos

[00396] O indivíduo apresentou uma contagem absoluta de neutrófilo (ANC) de 4,9 x 109/L e 6,3 x 109/L antes da primeira administração de CSL324. A ANC permaneceu na faixa normal ao longo do estudo, conforme ilustrado pela Figura 12 e pela Tabela 7 abaixo.

TABELA 7 - Contagens absolutas de neutrófilos para o indivíduo 00360098- 0001 Dia de S -1 1 3 7 14 21 22 24 28 35 42 43 estudo

ANC 4,9 6,3 5,1 2,2 2,7 4,9 5,3 4,6 3,1 2,9 2,9 4,6 5,4 (x109/L)

Dia de 45 49 56 63 64 66 70 77 84 85 87 91 98 105 126 estudo

ANC 3,6 3,1 3,4 5,1 4,4 2,6 3,3 3,6 6,4 4,8 2,8 3,3 3,3 6,5 5,8 (x109/L) S: dia de triagem Colunas cinza: dia de dosagem de CSL324

Claims (23)

Reivindicações

1. MÉTODO PARA REDUZIR NEUTRÓFILOS CIRCULANTES EM UM

INDIVÍDUO HUMANO SEM CAUSAR NEUTROPENIA PROLONGADA DE GRAU 3 OU 4 POR MAIS DE SETE DIAS CONSECUTIVOS, o método caracterizado por compreender administrar ao indivíduo uma dose entre 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg de um anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

2. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo indivíduo sofrer de uma condição mediada por neutrófilos.

3. MÉTODO PARA TRATAR UMA CONDIÇÃO MEDIADA POR NEUTRÓFILOS, o método caracterizado por compreender administrar a um indivíduo que sofre da condição mediada por neutrófilos uma dose entre 0,1 mg/kg e 1,0 mg/kg de um anticorpo que inibe a sinalização de G-CSF.

4. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pela administração do anticorpo não causar neutropenia prolongada de grau 3 ou 4 no indivíduo por mais de sete dias consecutivos.

5. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pela administração do anticorpo não induzir neutropenia de grau 4.

6. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pela administração do anticorpo não induzir neutropenia ou pelo anticorpo induzir neutropenia de grau 2 ou grau 3 por dois dias consecutivos ou menos.

7. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pela administração do anticorpo não induzir neutropenia por mais de 2 dias consecutivos ou mais de 1 dia.

8. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 1 ou 4, caracterizado pela neutropenia não estar associada à febre.

9. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo anticorpo ser administrado em uma dose entre 0,1 mg/kg e 0,6 mg/kg.

10. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo anticorpo ser administrado em uma dose de 0,1 mg/kg ou 0,3 mg/kg ou 0,6 mg/kg.

11. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo anticorpo ser administrado várias vezes, em que o anticorpo é administrado uma vez a cada 14 a 28 dias.

12. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo anticorpo ser administrado várias vezes, em que o anticorpo é administrado uma vez a cada 21 dias.

13. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo anticorpo se ligar ao G-CSFR e inibir a sinalização do G-CSF.

14. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo anticorpo se ligar ou se ligar especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR) e inibir competitivamente a ligação do anticorpo C1.2G, que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 5, ao G-CSFR.

15. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo anticorpo se ligar a um epítopo compreendendo resíduos dentro de uma ou duas ou três ou quatro regiões selecionadas dentre 111-115, 170-176, 218-234 e/ou 286-300 da SEQ ID NO: 1.

16. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo anticorpo compreender: (i) uma região variável de cadeia pesada (VH) compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma região variável de cadeia leve (VL) compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 5;

(ii) uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2 e uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 3; (iii) uma VH compreendendo três CDRs de uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 4 e uma VL compreendendo três CDRs de uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 5; ou (iv) uma VH compreendendo três CDRs de uma VH compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 2 e uma VL compreendendo três CDRs de uma VL compreendendo uma sequência de aminoácidos apresentada na SEQ ID NO: 3.

17. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo anticorpo compreender: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.

18. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 17, caracterizado pela condição mediada por neutrófilos ser uma doença autoimune, uma doença inflamatória, câncer ou lesão de isquemia-reperfusão.

19. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pela doença autoimune ou a doença inflamatória ser a artrite, uveíte, esclerose múltipla, inflamação pulmonar, doença pulmonar obstrutiva crônica, psoríase ou asma grave.

20. MÉTODO, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 18, caracterizado pela condição mediada por neutrófilos ser uma dermatose neutrofílica ou uma lesão neutrofílica de pele.

21. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pela dermatose neutrofílica ser selecionada do grupo que consiste na pustulose amicrobiana das dobras (APF); psoríase em placas; Psoríase pustulosa mediada por CARD14 (CAMPS); síndromes periódicas associadas à criopirina (CAPS); deficiência do receptor de interleucina-1 (DIRA); deficiência do antagonista do receptor da interleucina-36 (DIRTA); hidradenite supurativa (HS); pustulose palmoplantar; artrite piogênica; pioderma gangrenoso e acne (PAPA); pioderma gangrenoso, acne e hidradenite supurativa (PASH); pioderma gangrenoso (PG); lesões cutâneas da doença de Behçet; Doença de Still; Síndrome de Sweet; pustulose subcórnea (Sneddon-Wilkinson); psoríase pustulosa; pustulose palmoplantar; pustulose exantemática generalizada aguda; acropustulose infantil; sinovite, acne, pustulose; síndrome de hiperostose e osteíte (SAPHO); síndrome da dermatose-artrite associada ao intestino (BADAS); dermatose neutrofílica do dorso das mãos; hidradenite écrina neutrofílica; eritema elevatum diutinum; e pioderma gangrenoso.

22. MÉTODO, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pela dermatose neutrofílica ser hidradenite supurativa (HS) ou pustulose palmoplantar (PPP).

23. MÉTODO para tratar uma dermatose neutrofílica, o método caracterizado por compreender administrar a um indivíduo que sofre de uma dermatose neutrofílica uma dose entre 0,1 mg/kg e 1 mg/kg de um anticorpo que se liga ou se liga especificamente ao receptor do fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSFR), em que o anticorpo é administrado várias vezes uma vez a cada 21 dias e em que o anticorpo compreeende: (i) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 14 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15; ou (ii) uma cadeia pesada compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 16 e uma cadeia leve compreendendo uma sequência apresentada na SEQ ID NO: 15.