KR20200051706A

KR20200051706A - 비알콜성 지방간염 (nash)을 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (fgf-21)

Info

Publication number: KR20200051706A
Application number: KR1020207009713A
Authority: KR
Inventors: 에드가 데이비드슨 3세 찰스; 로즈 씨. 크리스티안; 이 뤄
Original assignee: 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니
Priority date: 2017-09-08
Filing date: 2018-09-06
Publication date: 2020-05-13
Also published as: BR112020004136A2; EP3678686A1; US20210106653A1; MX2020002206A; SG11202001379WA; JP2020533304A; WO2019051073A1; AU2018329850A1; US11642395B2; CA3072903A1; IL272976A; JP2024037767A; CN111050786A; US20230414717A1

Abstract

NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 혈청 프로-C3의 특정한 역치 수준 (예를 들어, 10 ng/ML 초과)을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자에게 투여함으로써 상기 환자를 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 또한, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것인 방법이 제공된다.

Description

비알콜성 지방간염 (NASH)을 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)

관련 출원

본 출원은 미국 가출원 번호 62/556,179 (2017년 9월 8일에 출원됨), 62/571,960 (2017년 10월 13일에 출원됨) 및 62/640,211 (2018년 3월 8일에 출원됨)의 우선권의 이익을 주장한다. 상기 언급된 출원의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2018년 8월 21일에 생성된 상기 ASCII 카피는 파일명이 MXI-609PC_SL.txt이고 크기가 3,971 바이트이다.

비알콜성 지방간 질환 (NAFLD)은 국가와 세계를 괴롭히는 주요 질환 중 하나가 되었다. 미국에서, NAFLD는 만성 간 질환의 75% 초과에 상당하는 간 질환의 가장 흔한 원인이다 (예를 들어, 문헌 [Younossi ZM, et al., Clin. Gastroenterol. Hepatol., 2011;9:524-530] 참조). 또한, 이는 간 이식에 대한 가장 흔한 적응증 중 하나이고, 국가의 이환율 및 사망률 둘 다에 큰 부담을 준다.

NAFLD의 스펙트럼은 단순 지방증부터 비알콜성 지방간염 (NASH) 및 최종적으로 간경변에 이르는 연속체이다. 상기 질환의 결정적인 특징은 남성의 경우 > 20 g/d 및 여성의 경우 > 10 g/d로 정의된 과도한 알콜 소비가 없는 상태에서 간 내에 정상적인 지질 침착보다 더 큰 지질 침착의 존재이다. 지방증은 간세포의 세포질 내 지질의 존재이며, 그에 대한 기준은 건강한 개체에 대한 제95 백분위수 초과의 간 지질 수준이거나 (약 >55 mg/g 간) (문헌 [Cohen JC, et al., Science. 2011;332:1519-1523] 참조), 간의 중량의 5% 초과이거나 (문헌 [Kareem Hassan, et al., World J. Gastroenterol. 2014 Sep 14; 20(34): 12082-12101] 참조), 또는 조직학적으로 5% 초과의 간세포에서 발견되는 것으로 (문헌 [Neuschwander-Tetri BA, Am. J. Med. Sci. 2005;330:326-335] 참조) 문헌에서 정의된다.

지방증의 NASH로의 진행은 환자에 대한 더 나쁜 결과와 연관하여 종종 발생하는 임상 시나리오이다. NASH의 핵심적 결정적인 특색은 염증 및 후속의 섬유증의 존재이다. 구체적으로, NASH는 간세포 손상, 염증 및/또는 후속의 흉터 형성 및 조직의 유형 I 콜라겐으로의 대체가 존재하는 지방증으로 정의된다. NASH를 갖는 환자의 대략 10%-29%는 10년의 기간 내에 간경변을 발병할 것이다 (Argo CK, et al., Clin. Liver Dis. 2009;13:511-531). 또한, NASH는 간암으로 이어질 수 있다. 현재, NASH 치료에 대해 승인된 약리 요법은 없다 (문헌 [Susanne Schuster and Ariel E. Feldstein, Nature Reviews Gastroenterology & Hepatology 14, 329-330 (05 April 2017] 참조).

따라서, 하기 개시내용은 변형된 FGF-21을 사용하여 NASH를 치료하는 신규한 방법, 치료의 최적화를 허용하는 기준, 및 NASH의 진행 및 경감을 모니터링하는 방법을 제공한다.

NASH를 갖는 환자가 바이오마커인 프로-C3의 특정한 혈청 역치 수준 (예를 들어, 10 ng/ML, 15 ng/ML 또는 20 ng/ML 초과)을 갖는 경우에 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여함으로써 상기 환자를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

한 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하기 전에 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 변형된 FGF-21로 치료하는 방법으로서, 여기서 환자는 치료 전 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 가지며, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 방법은 (1) 환자로부터의 혈액 샘플을 수득하거나 또는 수득했고, (2) 10 ng/ML 초과인 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하거나 또는 결정했고, (3) 혈청 프로-C3 수준이 결정된 후에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

또한, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것인 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, NASH를 갖는 환자는 변형된 FGF-21로의 치료를 보증하는 프로-C3의 특정한 역치 수준을 갖는 것으로 결정되었거나 또는 갖는 것으로 결정된다. 한 실시양태에서, 환자는 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 11 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 12 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 13 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 14 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 15 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 16 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 17 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 18 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 19 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 21 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 22 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 23 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 24 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 한 실시양태에서, 환자는 25 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 환자는 10 ng/ML 내지 25 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 10 ng/ML 내지 20 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 10 ng/ML 내지 15 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 12 ng/ML 내지 20 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 12 ng/ML 내지 15 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 15 ng/ML 내지 25 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 환자는 15 ng/ML 내지 20 ng/ML의 혈청 프로-C3 수준을 갖는다.

프로-C3의 발현 수준은 임의의 적합한 기술을 사용하여 환자로부터의 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 혈액 분획) 중 단백질 및/또는 RNA 수준의 정량화에 의해 측정될 수 있다. 한 실시양태에서, 발현 수준은 면역검정, 면역화학 검정, 면역조직화학 검정, 뉴클레오프로브 검정, 계내 혼성화, 형광 RNA 프로브, RT-PCR, 마이크로어레이 전사 검정 및/또는 RNA 전사 검정 중 적어도 하나를 사용하여 단백질 및/또는 RNA 수준의 정량화에 의해 측정된다. 또 다른 실시양태에서, 발현 수준은 면역검정 (예를 들어, 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 방사성면역검정 (RIA)), 예를 들어, 문헌 [Nielsen et al., Am J Transl Res 2013;5(3):303-315]에 기재된 ELISA를 사용하여 측정된다. 프로-C3 수준 또는 수준들은 FDA-승인 테스트에 의해 측정될 수 있다.

임의의 적합한 변형된 FGF-21이 본원에 기재된 방법에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호(SEQ ID NO):1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 옥심 연결을 통해 상기 중합체에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 변형된 FGF-21의 환자에게의 투여 전 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과 (예를 들어, 약 11 ng/ML, 약 12 ng/ML, 약 13 ng/ML, 약 14 ng/ML, 약 15 ng/ML, 약 16 ng/ML, 약 17 ng/ML, 약 18 ng/ML, 약 19 ng/ML, 약 20 ng/ML, 약 21 ng/ML, 약 22 ng/ML, 약 23 ng/ML, 약 24 ng/ML 또는 약 25 ng/ML 초과)인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 변형된 FGF-21의 환자에게의 투여 전 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과 (예를 들어, 약 11 ng/ML, 약 12 ng/ML, 약 13 ng/ML, 약 14 ng/ML, 약 15 ng/ML, 약 16 ng/ML, 약 17 ng/ML, 약 18 ng/ML, 약 19 ng/ML, 약 20 ng/ML, 약 21 ng/ML, 약 22 ng/ML, 약 23 ng/ML, 약 24 ng/ML 또는 약 25 ng/ML 초과)인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 변형된 FGF-21의 환자에게의 투여 전 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과 (예를 들어, 약 11 ng/ML, 약 12 ng/ML, 약 13 ng/ML, 약 14 ng/ML, 약 15 ng/ML, 약 16 ng/ML, 약 17 ng/ML, 약 18 ng/ML, 약 19 ng/ML, 약 20 ng/ML, 약 21 ng/ML, 약 22 ng/ML, 약 23 ng/ML, 약 24 ng/ML 또는 약 25 ng/ML 초과)인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다.

본원에 기재된 일부 실시양태에서, NASH를 갖는 환자는 약 11 ng/ML, 약 12 ng/ML, 약 13 ng/ML, 약 14 ng/ML, 약 15 ng/ML, 약 16 ng/ML, 약 17 ng/ML, 약 18 ng/ML, 약 19 ng/ML, 약 20 ng/ML, 약 21 ng/ML, 약 22 ng/ML, 약 23 ng/ML, 약 24 ng/ML 또는 약 25 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정되었다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것이며, 여기서 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것이며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것이며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 일부 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는다.

한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 1일 또는 1주 용량으로 투여된다.

한 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기 위해 변형된 FGF-21을 1일 1회 10 mg으로 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

한 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기 위해 변형된 FGF-21을 1주 1회 20 mg으로 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 10 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 11 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 12 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 13 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 14 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 15 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 16 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 17 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 18 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 19 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 20 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 21 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 22 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 23 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 24 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 25 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 26 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 27 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 28 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 29 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 30 mg의 용량으로 투여된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 1일 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 5 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 10 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 11 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 12 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 13 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 14 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 15 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 16 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 17 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 18 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 19 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 20 mg의 용량으로 투여된다.

변형된 FGF-21은 본원에 기재된 방법에 따라 단독으로 또는 1종 이상의 추가 치료제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가 치료제는 항섬유화제, N-카드헤린 길항제, 항-N 카드헤린 항체, 소분자 N-카드헤린 길항제, 길항작용 N-카드헤린 단편, 항염증제, 간보호제, 레닌-안지오텐신 시스템 (RAS) 저해 시스템, 프로바이오틱스 및 다불포화 지방산 (PUFA)으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항섬유화제는 닌테다닙, 피르페니돈, LPA1 길항제, LPA1 수용체 길항제, GLP1 유사체, 트랄로키누맙 (IL-13, 아스트라제네카(AstraZeneca)), 비스모데깁 (헤지호그 길항제, 로슈(Roche)), PRM-151 (펜트락신-2, TGF 베타-1, 프로메디올(Promedior)), SAR-156597 (이중특이적 Mab IL-4&IL-13, 사노피(Sanofi)), 심투주맙 (항-리실 옥시다제-유사 2 (항-LOXL2) 항체, 길리어드(Gilead)), CKD-942, PTL-202 (PDE 억제제/펜톡시필린/NAC 경구 제어 방출, 퍼시픽 테르.(Pacific Ther.)), 오미팔리십 (경구 PI3K/mTOR 억제제, GSK), IW-001 (경구 용액 소 유형 V 콜라겐 조정제, 이뮨워크스(ImmuneWorks)), STX-100 (인테그린 알파 V/베타-6 ant, 스트로메딕스(Stromedix)/바이오젠(Biogen)), 액티뮨 (IFN 감마), PC-SOD (미디스마제; 흡입제, LTT 바이오-파마(LTT Bio-Pharma)/CDK 팜(CKD Pharm)), 레브리키주맙 (항-IL-13 SC 인간화 mAb, 로슈), AQX-1125 (SHIP1 활성화제, 아퀴녹스(Aquinox)), CC-539 (JNK 억제제, 셀진(Celgene)), FG-3019 (피브로젠(FibroGen)) 및 SAR-100842 (사노피)로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 간보호제는 우르소데옥시콜산 (UDCA) 또는 오베티콜산 (OCA 또는 INT-747, 인터셉트(Intercept))일 수 있다.

한 실시양태에서, 변형된 FGF-21이 첫 번째로 투여되고, 1종 이상의 추가 활성 작용제가 두 번째로 투여된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가 활성 작용제가 첫 번째로 투여되고, 변형된 FGF-21이 두 번째로 투여된다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 프로-C3 수준에서의 저하를 초래한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 프로-C3의 정상 수준을 향한 이동을 생성한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 자기 공명 탄성영상 (MRE)에 의해 평가되는 바와 같이 환자에서 간 경직도에서의 감소를 초래한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 15% 이상 (예를 들어, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 그 초과)의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가된다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 간 지방 분율에서의 감소를 초래한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율은 자기 공명 영상화-추정 양성자 밀도 지방 분율 (MRI-PDFF)에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 30% 이상 (예를 들어, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49% 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 그 초과)의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율은 MRI-PDFF에 의해 평가된다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 간 경직도에서의 감소, 간 지방 분율에서의 감소 및/또는 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래한다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소 및 치료 전 환자의 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 환자에서 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가되고, 여기서 환자는 변형된 FGF-21로의 치료 전 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정되었다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 피로, 권태, 체중 감소 및/또는 우상 사분역 복부 불쾌감의 감소 또는 중단으로 이루어진 군으로부터 선택된 환자에서의 적어도 하나의 치료 효과를 생성한다.

또한, 본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 환자에서 NASH를 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타낸다.

최종적으로, 변형된 FGF-21로의 치료에 적합한 NASH를 갖는 환자를 확인하는 방법이 제공되며, 여기서 방법은 시험관내 검정을 사용하여 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준은 10, 15 또는 20 ng/ML 초과이다. 상기 치료 방법의 다른 특색 및 이점은 하기 설명, 실시예 및 청구범위로부터 명백해질 것이다. 본원에 언급된 모든 공개, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.

도 1은 시험을 위한 환자 배치를 제시하는 개략도이다.
도 2a-2c는 제16주에 MRI-PDFF에 의해 측정된 간 지방 분율에서의 변화를 도시한다. 도 2a는 기준선으로부터 제16주까지 환자에서 간 분율에서의 절대 변화를 도시한다. 도 2b는 BMS-986036 치료 후 간 지방 분율에서의 감소를 경험한 환자의 MRI-PDFF 측정을 제시한다. 도 2c는 간 지방 분율에서의 ≥30%, ≥20% 또는 ≥10% 상대 감소를 갖는 환자의 퍼센트를 도시한다.
도 3a-3b는 제16주에 환자에서 간 경직도에서의 변화를 도시한다. 도 3a는 기준선으로부터 제16주까지 간 경직도 (MRE)에서의 절대 변화를 제시하고, 도 3b는 제16주에 간 경직도 (MRE)에서의 ≥15% 상대 감소를 갖는 환자의 퍼센트를 제시한다.
도 4는 20 mg QW BMS-986036로 치료된 환자로부터의 MRE 영상이다.
도 5는 기준선으로부터 제16주까지 아디포넥틴의 퍼센트 변화를 제시한다.
도 6a-6b는 BMS-986036-치료된 환자에서의 기준선 프로-C3 분포를 제시한다. 도 6a는 BMS-986036으로 치료된 개체에 대한 프로-C3 수준을 제시한다. 도 6b는 프로-C3 수준의 빈도를 제시한다.
도 7a-7b는 제16주에 혈청 프로-C3에서의 감소를 제시한다. 도 7a는 제16주에 기준선 프로-C3 수준으로부터의 퍼센트 변화를 제시한다. 도 7b는 제16주에 프로-C3에서의 ≥15% 상대 감소를 갖는 환자의 퍼센트를 제시한다. 경시적 반복 측정 모델 분석을 사용하여 사후 추론 통계 분석을 수행하였다. ^a혈청 프로-C3에 대한 샘플 크기는 기준선에서 일부 비-사정가능한 샘플로 인해 MRI-PDFF보다 더 작았다.
도 8a-8b는 치료 종료 시 간 손상의 마커에서의 변화를 제시한다. 도 8a는 기준선으로부터 제16주까지의 ALT에서의 퍼센트 변화를 제시한다. 도 8b는 기준선으로부터 제16주까지의 AST에서의 퍼센트 변화를 제시한다. BMS-986036 QD 및 QW 치료는 간 손상의 바이오마커의 기준선으로부터의 개선과 연관이 있었다 (n은 치료 종료 시 (EOT) ALT/AST 데이터를 갖는 환자의 수를 나타냄).
도 9a-9c는 기준선으로부터 제16주까지의 LDL 콜레스테롤 (도 9a), HDL 콜레스테롤 (도 9b) 및 트리글리세리드 (도 9c)에서의 변화를 제시한다.
도 10a-10c는 대퇴골 (도 10a), 고관절 (도 10b) 및 척추 (도 10c)에서 제16주 (D112) 및 치료후 6개월 (D292)에 DXA에 의해 측정된 골 무기질 밀도를 제시한다.
도 11a-11b는 기준선 프로-C3에 의해 층화된 환자 (>=20 ng/ML 및 <20 ng/ML)에서 제16주에 MRE (도 11a) 및 프로-C3 (도 11b)에서의 변화를 제시한다.
도 12a-12d는 간 지방 분율에서의 감소에 의해 층화된 환자에서 제16주에 프로-C3 (도 12a), ALT (도 12b), AST (도 12c) 및 CK-18 (도 12d)에서의 변화를 제시한다.
도 13a-13c는 간 경직도에서의 감소에 의해 층화된 환자에서 제16주에 프로-C3 (도 13a), HA (도 13b) 및 HDL (도 13c)에서의 변화를 제시한다.

NASH를 갖는 환자가 변형된 FGF-21의 환자에게의 투여 전 프로-C3의 특정한 혈청 역치 수준 (예를 들어, 약 10 ng/ML 초과, 15 ng/ML 초과, 또는 약 17 ng/ML 초과, 또는 약 20 ng/ML 초과)을 갖는 것으로 결정된 경우에 변형된 FGF-21을 환자에게 투여함으로써 상기 환자를 치료하는 방법, 뿐만 아니라 프로-C3의 혈청 수준에 기반하여 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법이 본원에 제공된다.

I. 정의:

본 설명이 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 상세한 설명 전반에 걸쳐 추가 정의가 기재되어 있다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가지며, 면역학, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 통상적인 방법이 이용된다.

본원에 사용된 바와 같은 단수 형태는 문맥에서 명확하게 달리 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. "또는" 또는 "및"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 또한, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라 다른 형태, 예컨대 "포함하다", "포함한다" 및 "포함된다"의 사용은 제한하는 것이 아니다.

측정가능한 값, 예컨대 양, 시간적 지속기간 등을 언급할 때 본원에 사용된 바와 같은 용어 "약"은 특정된 값으로부터 ± 10%까지의 변동을 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 성분, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등의 양을 표현하는 모든 숫자는 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다.

용어 "개체" 또는 "대상체"를 수식하는데 사용될 때 본원에 사용된 바와 같은 용어 "정상"은 특정한 질환 또는 상태 (예를 들어, NASH)를 갖지 않은 개체 또는 개체들의 군을 지칭하고, 또한 질환 또는 상태를 발병할 위험을 갖거나 또는 위험이 있는 것으로 의심되지 않는다. 용어 "정상"은 또한 정상적인 또는 건강한 개체 또는 대상체 (또는 이러한 대상체들의 군)로부터 단리된 생물학적 시료 또는 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 그의 분획)을 수식하기 위해 본원에 사용된다 (예를 들어, "정상 대조군 샘플" 또는 "정상 대조군 생물학적 유체").

"폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 상호교환적으로 사용되고, 길이 또는 번역후 변형에 관계없이 아미노산의 임의의 펩티드-연결 쇄를 의미한다. 본원에 기재된 단백질은 야생형 단백질을 함유하거나 또는 야생형 단백질일 수 있거나, 50개 이하 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20, 25, 30, 35, 40 또는 50개 이하)의 보존적 아미노산 치환을 갖는 변이체일 수 있다. 보존적 치환은 하기 기 내에 치환을 전형적으로 포함한다: 글리신 및 알라닌; 발린, 이소류신 및 류신; 아스파르트산 및 글루탐산; 아스파라긴, 글루타민, 세린 및 트레오닌; 리신, 히스티딘 및 아르기닌; 및 페닐알라닌 및 티로신.

본원에 사용된 바와 같은 퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성은 서열을 정렬하고 갭을 도입한 후, 필요하다면, 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 기준 서열 중 아미노산과 동일한 후보 서열 중 아미노산의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 서열 동일성을 결정하는 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 기술 내에 있는 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 입수가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 비교될 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함한, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터는 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.

용어 "제약 제형" 또는 "제약 조성물"은, 유효 성분의 생물학적 활성이 명백히 효과적이 되도록 하는 형태로 존재하며, 제형이 투여될 대상체에게 상당히 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.

본원에 사용된 바와 같은 "수성" 제약 조성물은 제약 용도에 적합한 조성물이며, 여기서 수성 담체는 물이다. 제약 용도에 적합한 조성물은 멸균, 균질 및/또는 등장성일 수 있다. 수성 제약 조성물은 수성 형태로 직접 제조될 수 있고/거나 또는 동결건조물로부터 재구성될 수 있다.

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속한 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 바람직한 방법 및 재료는 하기 기재되어 있으나, 본원에 기재된 것과 유사한 또는 동등한 방법 및 재료가 또한 본 개시된 방법 및 조성물의 실시 또는 테스팅에 사용될 수 있다. 본원에 언급된 모든 공개, 특허 출원, 특허 및 다른 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.

본 개시내용, 예를 들어, 대상체에서 NASH를 치료하는 방법의 다른 특색 및 이점은 하기 설명, 실시예 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.

1. 프로-C3

특정한 역치 수준 초과의 프로-C3 수준 (예를 들어, 약 10 ng/ML 초과, 15 ng/ML 초과, 또는 20 ng/ML 초과)은, NASH를 갖는 환자가 변형된 FGF-21 (예컨대, BMS-986036)에 의한 치료에 대한 반응성이 있는지 여부를 사정하고/거나 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응을 모니터링하기 위한 지표로서 사용될 수 있다.

프로-C3 (또한 "트루 콜라겐 유형 III 형성"이라고도 공지됨)은 트루 유형 III 콜라겐 형성의 마커이다. 유형 I 콜라겐과 함께, 유형 III 콜라겐은 인체에서 주요 구조 단백질을 구성하며, 여기서 유형 III 콜라겐은 유형 I 콜라겐으로 거의 독점적으로 이루어진 골을 제외하고는, 유형 I 콜라겐 원섬유형성에 중대하다 (문헌 [Bao X, et al., J Genet Genomics. 2007;34:223-228]; [Jensen LT, et al., Cardiovasc Res. 1997;33:535-539]; 및 [Nielsen et al., Am J Transl Res. 2013; 5(3): 303-315] 참조). 원섬유 어셈블리 동안, 유형 III 콜라겐의 N-말단 프로펩티드는 세포외 매트릭스 (ECM)에 성숙 콜라겐의 혼입 전에 특이적 N-프로테아제에 의해 절단되어, ECM에서 및 순환으로 방출된다. 프로펩티드 분자는 42 kDa의 총 분자량을 갖는 3개의 동일한 α-쇄로 이루어진다. 프로-C3 (콜라겐 α-1 (III) 쇄)의 단백질 및 유전자 서열에 대한 진뱅크(GenBank) (미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)(NCBI)) 참조 번호는 각각 NP_000081.1 (UniProt P02461) 및 NM_000090.3이며, 이들의 서열은 명백히 본원에 참조로 포함된다. α1 쇄 프로-C3 중 단백질의 단편, 예를 들어, N-말단 프로펩티드, 예컨대 아미노산 서열 144 -CPTGPQNYSP- 153 (서열식별번호:3)은 면역검정 (예를 들어, ELISA)을 위한 항체를 생성하는데 사용될 수 있다. 문헌 [Nielsen et al., Am J Transl Res. 2013; 5(3): 303-315].

생물학적 샘플 중 바이오마커, 예컨대 프로-C3의 단백질 수준을 측정하거나 또는 결정하는 것은 임의의 적합한 방법에 의해 수행될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane (1988) "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory: Cold Spring Harbor, NY] 참조).

일반적으로, 단백질 수준은 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플을 바이오마커 단백질 중 하나 이상에 대한 결합 작용제와 접촉시키고; 생물학적 샘플에서, 결합 작용제에 결합하는 바이오마커 단백질 중 하나 이상의 발현 수준 (예를 들어, 수준들)을 검출하고; 샘플 중 바이오마커 단백질 중 하나 이상의 수준을 대조군 샘플 (예를 들어, 정상 샘플) 중 상응하는 단백질 바이오마커의 수준과 비교함으로써 결정된다.

적합한 결합 작용제는 또한 본원에 기재된 바이오마커 단백질 (예를 들어, 프로-C3)에 대해 특이적인 항체를 포함한다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적합한 항체는 모노클로날 및 폴리클로날 항체 및 항체의 항원-결합 단편 (예를 들어, Fab 단편 또는 scFv)을 포함한다. 모노클로날 및 폴리클로날 항체, 단편 및 키메라를 포함한 항체는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Kohler and Milstein (1975) Nature 256:495-497]; [Kozbor et al. (1985) J Immunol Methods 81:31-42]; [Cote et al. (1983) Proc Natl Acad Sci USA 80:2026-203]; 및 [Zhang et al. (2002) J Biol Chem 277:39379-39387] 참조). 예시적인 항체는 α1 쇄 프로-C3에서 N-말단 프로펩티드, 예컨대 아미노산 서열 144 -CPTGPQNYSP- 153 (서열식별번호:3)에 결합하는 항체 또는 그의 단편을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Nielsen et al., Am J Transl Res. 2013; 5(3): 303-315]에 기재된 바와 같은 항체 NB61N-62). 본 발명의 방법에 사용되는 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 정제될 수 있다. 항체는 또한 상업적 공급원으로부터 수득될 수 있다.

특정 실시양태에서, 결합 작용제는 검출가능한 모이어티로 직접적으로 또는 간접적으로 표지된다. 검출가능한 작용제의 역할은 단백질 마커 (또는 그의 단편)에의 결합 작용제의 결합에 의해 형성된 복합체의 가시화를 허용함으로써 진단 방법의 검출 단계를 용이하게 하는 것이다. 검출가능한 작용제는 측정될 수 있고 강도가 분석될 샘플에 존재하는 단백질 마커의 양과 (바람직하게는 비례적) 관련이 있는 신호를 생성하도록 선택될 수 있다. 생물학적 분자, 예컨대 폴리펩티드 및 항체를 표지하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 매우 다양한 검출가능한 작용제 중 임의의 것이 본 발명의 실시에 사용될 수 있다. 적합한 검출가능한 작용제는 다양한 리간드, 방사성 핵종, 형광 염료, 화학발광제, 마이크로입자 (예를 들어, 양자점, 나노결정, 인광체 등과 같음), 효소 (예를 들어, ELISA에 사용되는 효소, 즉 호스래디시 퍼옥시다제, 베타-갈락토시다제, 루시페라제, 알칼리 포스파타제), 비색 표지, 자성 표지 및 비오틴, 디곡시게닌, 또는 항혈청 또는 모노클로날 항체가 입수가능한 다른 합텐 및 단백질을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

특정 실시양태에서, 결합 작용제 (예를 들어, 항체)는 담체 또는 지지체 (예를 들어, 비드, 자성 입자, 라텍스 입자, 마이크로타이터 플레이트 웰, 큐벳, 또는 다른 반응 용기) 상에 고정될 수 있다. 적합한 담체 또는 지지체 재료의 예는 아가로스, 셀룰로스, 니트로셀룰로스, 덱스트란, 세파덱스(Sephadex)®, 세파로스(Sepharose)®, 리포솜, 카르복시메틸 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 폴리스티렌, 가브로, 필터 페이퍼, 마그네타이트, 이온-교환 수지, 플라스틱 필름, 플라스틱 튜브, 유리, 폴리아민-메틸 비닐-에테르-말레산 공중합체, 아미노산 공중합체, 에틸렌-말레산 공중합체, 나일론, 실크 등을 포함한다. 결합 작용제는 제1 결합 작용제에 대해 특이적인 제2 결합 작용제를 사용하여 간접적으로 고정될 수 있다 (예를 들어, 단백질 마커에 대해 특이적인 마우스 항체는 담체 또는 지지체 상에 코팅된 양 항-마우스 IgG Fc 단편 특이적 항체를 사용하여 고정될 수 있음).

생물학적 샘플 중 단백질 발현 수준은 면역검정을 사용하여 결정될 수 있다. 이러한 검정의 예는 시간 분해 형광 면역검정 (TR-FIA), 방사성면역검정, 효소 면역검정 (예를 들어, ELISA), 면역형광 면역침전, 라텍스 응집, 적혈구응집, 웨스턴 블롯, 및 조직화학적 테스트이며, 이들은 관련 기술분야에 널리 공지된 통상적인 방법이다. 단백질 마커와 결합 작용제의 결합에 의해 형성된 복합체에 의해 생성된 신호의 검출 및 정량화 방법은 검정의 성질 및 검출가능한 모이어티 (예를 들어, 형광 모이어티)의 성질에 좌우될 것이다. 예시적인 프로-C3 ELISA는 문헌 [Nielson et al., Am J Transl Res 2013;5(3):303-315]에 기재되어 있으며, 이는 본원에 참조로 포함된다.

한 예에서, 유전자의 단백질 발현 (예를 들어, 바이오마커, 예컨대 프로-C3)의 존재 또는 양은 웨스턴 블롯팅 기술을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 용해물은 생물학적 샘플로부터 제조될 수 있거나, 또는 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 그의 분획) 그 자체는 램리 완충액과 접촉되고, 나트륨-도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)으로 처리될 수 있다. 그 후, 크기에 의해 분리된 SDS-PAGE-분해된 단백질은 필터 멤브레인 (예를 들어, 니트로셀룰로스)로 이동되고 관심있는 단백질에 대해 특이적인 검출가능하게-표지된 항체를 사용하는 면역블롯팅 기술로 처리될 수 있다. 결합된 검출가능하게-표지된 항체의 존재 또는 양은 생물학적 샘플 중 단백질의 존재 또는 양을 나타낸다.

또 다른 예에서, 면역검정이 바이오마커 단백질, 예컨대 프로-C3의 단백질 발현을 검출하고/거나 측정하는데 사용될 수 있다. 상기와 같이, 검출의 목적을 위해, 면역검정은 검출 모이어티 (예를 들어, 형광 작용제 또는 효소)를 보유하는 항체로 수행될 수 있다. 생물학적 샘플로부터의 단백질은 고체상 매트릭스 (예를 들어, 멀티-웰 검정 플레이트, 니트로셀룰로스, 아가로스, 세파로스®, 코딩된 입자, 또는 자성 비드)에 직접적으로 접합될 수 있거나, 또는 특이적 결합 쌍의 제2 구성원 (예를 들어, 스트렙타비딘 또는 비오틴)에 결합 시 고체상 매트릭스에 부착하는 특이적 결합 쌍의 제1 구성원 (예를 들어, 비오틴 또는 스트렙타비딘)에 접합될 수 있다. 고체상 매트릭스에 대한 이러한 부착은 단백질이 검출 항체와 접촉하기 전에 생물학적 샘플의 다른 간섭 또는 관련없는 성분으로부터 정제되게 하고, 또한 비결합된 항체의 후속 세척을 허용한다. 여기서, 상기와 같이, 결합된 검출가능하게-표지된 항체의 존재 또는 양은 생물학적 샘플 중 단백질의 존재 또는 양을 나타낸다.

대안적으로, 단백질 발현 수준은 단백질의 검출에 대해 관련 기술분야에 공지된 질량 분광법 기반 방법 또는 영상-기반 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 다른 적합한 방법은 2D-겔 전기영동, 프로테오믹스-기반 방법, 예컨대 겔로부터 회수된 개별 단백질의 확인 (예를 들어, 질량 분광법 또는 N-말단 시퀀싱에 의한) 및/또는 생물정보학을 포함한다.

단백질 발현을 검출하거나 또는 측정하는 방법은 다중 샘플의 신속한 제조, 프로세싱 및 분석을 허용하는 형식으로 임의로 수행될 수 있다. 이는 예를 들어, 멀티-웰 검정 플레이트 (예를 들어, 96 웰 또는 386 웰) 또는 어레이 (예를 들어, 단백질 칩)에서 수행될 수 있다. 다양한 시약에 대한 스톡 용액은 수동으로 또는 로봇으로 제공될 수 있고, 후속의 샘플 제조, 피펫팅, 희석, 혼합, 분배, 세척, 인큐베이션 (예를 들어, 혼성화), 샘플 판독, 데이터 수집 (광학 데이터) 및/또는 분석 (컴퓨터 보조 영상 분석)은 검정으로부터 생성된 신호를 검출할 수 있는 시판되는 분석 소프트웨어, 로봇공학 및 검출 기기를 사용하여 로봇으로 수행될 수 있다. 이러한 검출기의 예는 분광광도계, 발광측정기, 형광측정기, 및 방사성동위원소 붕괴를 측정하는 디바이스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 고처리량 세포-기반 검정 (예를 들어, 세포 중 표적 단백질의 존재 또는 수준을 검출함)은 어레이스캔(ArrayScan)® VTI HCS 판독기 또는 키네틱스캔(KineticScan)® HCS 판독기 기술 (셀로믹스 인크.(Cellomics Inc.), 펜실베니아주 피츠버그)을 사용할 수 있다.

바이오마커의 발현은 또한 핵산 수준에서 (예를 들어, RNA 수준에 기반하여) 검출될 수 있다. 한 실시양태에서, RNA는 RNA-ISH 검정을 사용하여 검출된다. 샘플 중 RNA의 수준을 결정하기 위한 또 다른 방법은, 예를 들어, RT-PCR에 의한 균질화된 조직으로부터의 핵산 증폭 과정 (RNA를 역전사시킨 다음, PCR 또는 임의의 다른 핵산 증폭 방법을 이용하여 생성된 cDNA를 증폭시킨 다음, 증폭된 분자를 검출함)을 수반한다. 또 다른 실시양태에서, RNA 발현은 정량적인 형광성 RT-PCR (qPCR)에 의해 평가된다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 바이오마커 단백질, 예컨대 프로-C3의 측정된 발현 수준 또는 활성 (환자로부터 수득된 생물학적 샘플에서 측정됨)을 대조군 샘플과 비교하는 것을 수반한다. 일부 실시양태에서, 대조군 샘플은 변형된 FGF-21 (예를 들어, BMS-986036)을 환자에게 투여하기 전에 환자로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 대조군 샘플은 예를 들어, 변형된 FGF-21을 투여받지 않은 1명 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35 또는 40명 또는 그 초과)의 건강한 개체로부터 수득된 샘플의 수집일 수 있다 (또는 이에 기반할 수 있음). 일부 실시양태에서, 대조군 샘플은 예를 들어, 2명 이상 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35 또는 40명 또는 그 초과)의 개체로부터 수득된 풀링된 샘플일 수 있다 (또는 이에 기반할 수 있음). 본원에 기재된 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 풀링된 샘플은 건강한 개체, 또는 적어도 NASH를 갖지 않거나 또는 NASH를 갖는 것으로 의심되지 않는 개체로부터 유래될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 바이오마커, 예컨대 프로-C3의 발현 수준 또는 활성, 또는 간 지방 분율이 변형된 FGF-21로의 치료 후에 저하되는지 여부를 결정하는 것은 치료 전 환자로부터 수득된 생물학적 샘플 중 바이오마커의 발현 수준 또는 활성을, 변형된 FGF-21로의 치료 후 (예를 들어, 치료 후 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 6주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월)에 환자로부터 수득된 동일한 생물학적 유형의 샘플 중 바이오마커의 발현 수준과 비교하는 것을 수반할 수 있다.

일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21이 인간에서 목적 효과 (예를 들어, 혈청 프로-C3 수준 (예를 들어, 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40 또는 50%만큼) 및/또는 간 경직도에서의 감소)를 생성하였는지 여부를 결정하는 것은 바이오마커 (예를 들어, 프로-C3)의 치료후 발현 수준이 인간에 의한 변형된 FGF-21에 대한 반응성을 나타내는 미리 결정된 범위 내에 있는지 여부를 질의함으로써 수행될 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21이 인간에서 목적 효과를 생성하였는지 여부를 결정하는 것은 바이오마커 (예를 들어, 프로-C3)의 치료후 발현 수준 또는 활성이 미리 결정된 컷-오프 값 초과 또는 미만에 있는지 여부를 질의하는 것을 포함할 수 있다. 컷-오프 값은 전형적으로 특정 표현형, 예를 들어, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성을 나타내는 것으로 간주되는 것의 초과 또는 미만인 주어진 생물학적 샘플 중 주어진 바이오마커의 발현 수준 또는 활성이다.

본원에 기재된 방법 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 동일한 전문인은 바이오마커 (예를 들어, 프로-C3)의 발현 수준 또는 활성의 변화가 발생했는지 여부를 결정하기 전에 변형된 FGF-21을 환자에게 투여할 수 있는 반면, 일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 전문인은 환자에서 반응이 발생했는지 여부를 결정하는 전문인과 상이하다. 일부 실시양태에서, 전문인은 변형된 FGF-21의 투여 전에 환자로부터 생물학적 샘플을 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, 전문인은 변형된 FGF-21을 환자에게 투여한 후에 환자로부터 생물학적 샘플을 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료후 샘플은 변형된 FGF-21을 환자에게 투여한 후 48시간 미만 (예를 들어, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2시간 미만 또는 심지어 1시간 미만)에 환자로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료후 샘플은 변형된 FGF-21을 환자에게 투여한 후 20일(들) 미만 (예를 들어, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1일 미만)에 환자로부터 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 변형된 FGF-21을 환자에게 투여한 후 20일 이하 (예를 들어, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1일 이하)에 환자로부터 수득된다.

일부 실시양태에서, 프로-C3의 혈청 수준은 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 5% (예를 들어, 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70%)만큼 저하된다. 일부 실시양태에서, 프로-C3의 혈청 수준은 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 15%만큼 저하된다. 일부 실시양태에서, 프로-C3의 혈청 수준은 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 20%만큼 저하된다.

일부 실시양태에서, 프로-C3의 혈청 수준은 변형된 FGF-21의 투여 후 프로-C3의 정상 혈청 수준의 90% (예를 들어, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 또는 30%) 이내로 저하된다.

일부 실시양태에서, 프로-C3의 혈청 수준은 변형된 FGF-21의 투여 후 프로-C3의 치료전 (치료 이전) 기준선 혈청 수준의 90% (예를 들어, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 또는 30%) 이내로 저하된다.

2. 변형된 FGF-21 폴리펩티드

미국 특허 번호 9,434,778 (그의 내용은 그 전문이 명백히 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이, 섬유모세포 성장 인자는 다중 생리적 기능에서 중대한 역할을 하는 (McKeehan et al., Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 59:135-176, 1998; Burgess, W. H. et al., Annu. Rev. Biochem. 58:575-606 (1989)) 발달 및 성인 조직에서 광범위하게 발현되는 폴리펩티드이다 (Baird et al., Cancer Cells, 3:239-243, 1991). 문헌에 따르면, FGF 패밀리는 적어도 22개의 구성원으로 이루어진다 (Reuss et al., Cell Tissue Res. 313:139-157 (2003)).

섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)은 문헌 (Nishimura et al., Biochimica et Biophysica Acta, 1492:203-206 (2000); WO 01/36640; 및 WO 01/18172, 및 미국 특허 공개 번호 20040259780 (이들 각각은 그 전문이 명백히 본원에 참조로 포함됨))에 기재된 바 있다. 다른 FGF와 달리, FGF-21은 증식성 및 종양발생 효과를 갖지 않는 것으로 보고된 바 있다 (Ornitz and Itoh, Genome Biology 2001, 2(3):reviews 3005.1-3005.12).

특정 FGF-21 폴리펩티드 및 그의 용도는 미국 특허 공개 번호 20010012628, 미국 특허 번호 6,716,626, 미국 특허 공개 번호 2004/0259780, WO 03/011213, 문헌 [Kharitonenkov et al. J Clin Invest. 2005 June; 115(6):1627-35], WO 03/059270, 미국 특허 공개 번호 2005/0176631, WO 2005/091944, WO 2007/0293430, 미국 특허 공개 번호 2007/0293430, WO/2008/121563, 미국 특허 번호 4,904,584, WO 99/67291, WO 99/03887, WO 00/26354, 및 미국 특허 번호 5,218,092에 기재되어 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.

본원에 사용된 바와 같은 "변형된 FGF-21 폴리펩티드", "변형된 섬유모세포 성장 인자 21" 또는 "변형된 FGF-21" 및 그의 하이픈이 없는 형태는 상호교환적으로 사용되고, 야생형 FGF-21 (예를 들어, 서열식별번호:1의 야생형 인간 FGF-21)과 상이한 폴리펩티드 및 단백질을 포함하고, 섬유모세포 성장 인자 21, 뿐만 아니라 그의 FGF-21 유사체, FGF-21 이소형, FGF-21 모방체, FGF-21 단편, 하이브리드 FGF-21 단백질, 융합 단백질, 올리고머 및 다량체, 동족체, 글리코실화 패턴 변이체, 변이체, 스플라이스 변이체, 및 뮤테인의 적어도 하나의 생물학적 활성을 전형적으로 가질 수 있다 (그의 생물학적 활성에 관계없이). 용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드" 및 "변형된 FGF-21"은 하나 이상의 아미노산 치환, 첨가 또는 결실을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 변형된 FGF-21 폴리펩티드는 임의로 하나 이상의 천연 아미노산에 의한 변형과 함께 하나 이상의 비천연 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 제약 안정성을 조정하는 치환, FGF-21 폴리펩티드의 생물학적 활성 중 하나 이상을 조정하는 치환, 예컨대 효능제 활성을 증가시키거나, 폴리펩티드의 용해성을 증가시키거나, 프로테아제 감수성을 저하시키거나, 탈아미드화를 저하시키거나, 폴리펩티드를 길항제로 전환시키거나, 면역원성 또는 독성을 감소시키거나, 또는 정제 또는 제조가능성을 용이하게 하는 등의 치환 (이에 제한되지는 않음)을 포함하나 이에 제한되지는 않는, FGF-21 폴리펩티드에서의 매우 다양한 아미노산 위치에서의 예시적인 치환, 삽입 또는 결실 (본원에 기재된 것들 및 다른 것들을 포함함)이 용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"에 포함된다.

일부 실시양태에서, "변형된 FGF-21"은 하나 이상의 비-천연적으로 코딩된 아미노산 치환 또는 첨가를 포함하는 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, "변형된 FGF-21"은 하나 이상의 비-천연적으로 코딩된 아미노산 치환을 포함하는 FGF-21 폴리펩티드를 포함한다.

일부 경우에, 비-천연적으로 코딩된 아미노산 치환(들)은 또 다른 FGF-21 폴리펩티드에 비해 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 다른 생물학적 형질에 영향을 미치도록 변형된 FGF-21 폴리펩티드 내의 다른 첨가, 치환 또는 결실과 조합될 수 있다.

일부 경우에, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 안정성 (단백질분해성 분해에 대한 내성을 포함하나 이에 제한되지는 않음)을 증가시키거나, 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 그의 수용체에 대한 친화성을 증가시킬 수 있다. 일부 경우에, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 제약 안정성을 증가시킬 수 있다. 일부 경우에, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 용해성 (이. 콜라이(E. coli) 또는 다른 숙주 세포에서 발현되는 경우를 포함하나 이에 제한되지는 않음)을 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 다른 첨가, 치환 또는 결실은 변형된 FGF-21 폴리펩티드의 그의 수용체, 결합 단백질 또는 연관된 리간드에 대한 친화성을 조정하거나, 그의 수용체에의 결합 후 신호 형질도입을 조정하거나, 순환 반감기를 조정하거나, 방출 또는 생체이용률을 조정하거나, 정제를 용이하게 하거나, 특정한 투여 경로를 개선시키거나 또는 변경할 수 있다. 일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21 폴리펩티드는 화학적 또는 효소 절단 서열, 프로테아제 절단 서열, 반응성 기, 항체-결합 도메인 (FLAG 또는 폴리-His를 포함하나 이에 제한되지는 않음) 또는 다른 친화성 기반 서열 (FLAG, 폴리-His, GST 등을 포함하나 이에 제한되지는 않음) 또는 검출 (GFP를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 정제, 조직 또는 세포 막을 통한 수송, 또는 폴리펩티드의 다른 형질을 개선시키는 연결된 분자 (비오틴을 포함하나 이에 제한되지는 않음)를 포함할 수 있다.

FGF-21의 다중 다형성이 확인되어 있다. 류신 또는 프롤린은 미국 특허 공개 번호 20010012628 및 미국 특허 번호 6,716,626에 동일한 위치에 기재되어 있다. 1개의 아미노산 (류신)만큼 상이한 N-말단 리더 또는 신호 서열은 미국 특허 번호 6,716,626 및 미국 특허 공개 번호 20040259780에 제시되어 있다. FGF-21 폴리펩티드 변이체 또는 돌연변이체는 미국 특허 번호 6,716,626; 미국 특허 공개 번호 2005/0176631, 2005/0037457, 2004/0185494, 2004/0259780, 2002/0164713 및 2001/0012628; WO 01/36640; WO 03/011213; WO 03/059270; WO 04/110472; WO 05/061712; WO 05/072769; WO 05/091944; WO 05/113606; WO 06/028595; WO 06/028714; WO 06/050247; WO 06/065582; WO 06/078463; WO01/018172; WO09/149171; WO10/042747; WO12/066075; WO11/154349; WO13/052311; WO13/188181 (이들은 그 전문이 명백히 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 것들을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"는 또한 천연 발생 FGF-21의 생물학적으로 활성인 단편, 생물학적으로 활성인 변이체 및 입체이성질체, 뿐만 아니라 천연 발생 FGF-21의 효능제, 모방체 및 길항제 변이체 및 그의 폴리펩티드 융합체를 포함한다. 아미노 말단, 카르복실 말단 또는 둘 다에서 추가 아미노산을 포함하는 융합체는 용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"에 포함된다. 예시적인 융합체는 예를 들어, 메티오닌이 리더 또는 신호 펩티드 또는 그의 부분이 없는 FGF-21의 성숙 형태의 재조합 발현으로부터 생성되는 FGF-21의 N-말단에 연결된 메티오닐 FGF-21 (메티오닌은, 예를 들어, 이. 콜라이에서 재조합 발현으로부터 생성되는 FGF-21의 N-말단에 연결됨), 정제의 목적을 위한 융합체 (폴리-히스티딘 또는 친화성 에피토프를 포함하나 이에 제한되지는 않음), 혈청 알부민 결합 펩티드, 예컨대 PK 연장 (PKE) 애드넥틴과의 융합체, 및 혈청 단백질, 예컨대 혈청 알부민과의 융합체, 및 FGF-21 및 혈청 알부민, Fc 도메인, 이뮤노글로불린 불변 영역, 비구조 폴리펩티드 및 애드넥틴, 및 그의 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는 하나 이상의 다른 분자 ("융합 파트너")를 포함하는 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 임의의 이러한 단편은 단백질로부터 표준 생화학적 방법에 의해 또는 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 발현함으로써 제조될 수 있다.

용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"는 중합체, 예컨대 PEG에 접합된 폴리펩티드를 포함하고, 시스테인, 리신 또는 다른 잔기의 하나 이상의 추가 유도체화를 임의로 포함할 수 있다. 예를 들어, 변형된 FGF-21 폴리펩티드는 링커 또는 중합체에 접합될 수 있으며, 여기서 링커 또는 중합체는 본 개시내용에 따른 변형된 FGF-21 폴리펩티드에서의 비천연 아미노산에 접합될 수 있거나, 관련 기술분야에 공지된 기술, 예컨대 리신 또는 시스테인에의 커플링을 사용하여 천연적으로 코딩된 아미노산에 접합될 수 있다. 예시적인 링커는 작은 유기 화합물, 다양한 길이의 수용성 중합체, 예컨대 폴리(에틸렌 글리콜) 또는 폴리덱스트란, 또는 다양한 길이의 펩티드 또는 폴리펩티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"는 또한 글리코실화된 변형된 FGF-21, 예컨대 임의의 아미노산 위치에서 글리코실화된 폴리펩티드, 폴리펩티드의 N-연결된 또는 O-연결된 글리코실화된 형태 (이에 제한되지는 않음)를 포함한다. 단일 뉴클레오티드 변화를 함유하는 변이체는 또한 FGF-21 폴리펩티드의 생물학적으로 활성인 변이체로서 간주된다. 또한, 스플라이스 변이체도 포함된다. 용어 "변형된 FGF-21 폴리펩티드"는 또한 임의의 하나 이상의 비변형된 또는 변형된 FGF-21 폴리펩티드 또는 임의의 다른 폴리펩티드, 단백질, 탄수화물, 중합체, 소분자, 링커, 리간드, 또는 화학적 수단에 의해 연결된 또는 융합 단백질로서 발현된 임의의 유형의 다른 생물학적으로 활성인 분자의 FGF-21 폴리펩티드 이종이량체, 동종이량체, 이종다량체 또는 동종다량체를 포함하며, 뿐만 아니라 예를 들어, 특이적 결실 또는 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드 유사체는 생물학적 활성을 아직 유지한다.

"비-천연적으로 코딩된 아미노산"은 20종의 통상적인 아미노산 또는 피롤리신 또는 셀레노시스테인 중 하나가 아닌 아미노산을 지칭한다. 용어 "비-천연적으로 코딩된 아미노산"과 동의어로 사용될 수 있는 다른 용어는 "비-천연 아미노산", "비천연 아미노산", "비천연 발생 아미노산", 및 그의 다양한 하이픈 및 비-하이픈 버전이다. 용어 "비-천연적으로 코딩된 아미노산"은 또한 천연적으로 코딩된 아미노산 (20종의 통상적인 아미노산 또는 피롤리신 및 셀레노시스테인을 포함하나 이에 제한되지는 않음)의 변형 (예를 들어, 번역후 변형)에 의해 발생하나 그 자체가 번역 복합체에 의해 성장하는 폴리펩티드 쇄에 천연적으로 혼입되지 않는 아미노산을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 비-천연적으로 코딩된 아미노산의 예는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

"아미노 말단 변형 기"는 폴리펩티드의 아미노 말단에 부착될 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 유사하게, "카르복시 말단 변형 기"는 폴리펩티드의 카르복시 말단에 부착될 수 있는 임의의 분자를 지칭한다. 말단 변형 기는 다양한 수용성 중합체, 메티오닌, 펩티드 또는 단백질, 예컨대 혈청 알부민, Fc 도메인, 이뮤노글로불린 불변 영역, 비구조 폴리펩티드, 애드넥틴, 또는 그의 단편, 또는 펩티드의 혈청 (생체내) 반감기를 증가시키는 다른 모이어티를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

용어 "관능기", "활성 모이어티", "활성화 기", "이탈기", "반응성 부위", "화학적 반응성 기" 및 "화학적 반응성 모이어티"는 관련 기술분야에서 사용되고, 본원에서 분자의 별개의 정의가능한 부분 또는 단위를 지칭한다. 상기 용어들은 화학 분야에서 어느 정도 동의어이고, 본원에서 일부 기능 또는 활성을 수행하고 다른 분자와 반응성인 분자의 부분을 나타내는데 사용된다.

용어 "연결"은 본원에서 화학적 반응의 결과로서 통상적으로 형성되고 전형적으로 공유 연결인 기 또는 결합을 지칭하는데 사용된다. 가수분해적으로 안정한 연결은 연결이 물에서 실질적으로 안정하고 연장된 기간 동안, 아마도 심지어 무기한으로 생리학적 조건 하에서를 포함하나 이에 제한되지는 않는 유용한 pH 값에서 물과 반응하지 않는 것을 의미한다. 가수분해적으로 불안정한 또는 분해가능한 연결은 연결이 물 또는 예를 들어, 혈액을 포함한 수성 용액에서 분해가능하다는 것을 의미한다. 효소적으로 불안정한 또는 분해가능한 연결은 연결이 하나 이상의 효소에 의해 분해될 수 있다는 것을 의미한다. 관련 기술분야에서 이해되는 바와 같이, PEG 및 관련 중합체는 중합체 백본에 또는 중합체 백본과 폴리펩티드 분자의 말단 관능기 중 하나 이상 사이의 링커 기에 분해가능한 연결을 포함할 수 있다. 예를 들어, 생물학적 활성 작용제 상의 알콜 기와 PEG 카르복실산 또는 활성화된 PEG 카르복실산의 반응에 의해 형성된 에스테르 연결은 생리학적 조건 하에서 일반적으로 가수분해하여, 작용제를 방출한다. 다른 가수분해적으로 분해가능한 연결은 카르보네이트 연결; 아민 및 알데히드의 반응으로부터 생성된 이민 연결; 알콜을 포스페이트 기와 반응시킴으로써 형성된 포스페이트 에스테르 연결; 히드라지드 및 알데히드의 반응 생성물인 히드라존 연결; 알데히드 및 알콜의 반응 생성물인 아세탈 연결; 포르메이트 및 알콜의 반응 생성물인 오르토에스테르 연결; 중합체, 예컨대 PEG의 말단에 (이를 포함하나 이에 제한되지는 않음) 아민 기 및 펩티드의 카르복실 기에 의해 형성된 펩티드 연결; 및 중합체의 말단에 (이를 포함하나 이에 제한되지는 않음) 포스포르아미다이트 기 및 올리고뉴클레오티드의 5' 히드록실 기에 의해 형성된 올리고뉴클레오티드 연결을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 연결은 또한 카르보닐 기 및 아미노옥시 기의 반응으로부터 생성된 옥심 연결을 포함한다.

본 발명에 사용하기에 적합한 변형된 FGF-21 폴리펩티드는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 대안적으로, 관련 기술분야에서 인식된 변형된 FGF-21 폴리펩티드가 사용될 수 있다. 예를 들어, 변형된 FGF-21 폴리펩티드는 미국 특허 번호 9,079,971 및 미국 특허 번호 9,434,778에 기재되어 있으며, 그의 내용은 그 전문이 명백히 본원에 참조로 포함된다.

예시적인 변형된 FGF-21은 인간 FGF-21의 페길화 유사체일 수 있다. 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 한 실시양태에서, 폴리(에틸렌 글리콜)은 약 30 kDa의 평균 분자량을 가질 수 있다.

또 다른 실시양태에서, 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 옥심 연결을 통해 상기 중합체에 연결된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2를 포함한다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2를 포함하며, 여기서 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2를 포함하며, 여기서 서열식별번호:2 중 파라-아세틸 페닐알라닌은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 BMS-986036일 수 있다.

본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 환자에서 NASH를 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타낸다.

3. 샘플 및 수집

본원에 기재된 방법에 사용하기에 적합한 생물학적 샘플은 전혈 (또는 그의 분획)을 포함한다. 생물학적 샘플은 원하는 경우 관심있는 특정한 분석물질 (예를 들어, 단백질)을 함유하는 분획으로 추가로 분획화될 수 있다. 예를 들어, 전혈 샘플은 혈청으로 또는 특정한 유형의 단백질을 함유하는 분획으로 분획화될 수 있다.

생물학적 샘플은 대상체, 예를 들어, NASH를 갖고 있거나, NASH를 갖는 것으로 의심되거나, 또는 NASH를 발병할 위험이 있는 환자로부터 수득될 수 있다. 생물학적 샘플을 수득하기 위한 임의의 적합한 방법이 이용될 수 있다.

일부 실시양태에서, 단백질 추출물은 생물학적 샘플로부터 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단백질 추출물은 총 단백질 함량을 함유한다. 단백질 추출 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Roe (2001) "Protein Purification Techniques: A Practical Approach", 2nd Edition, Oxford University Press]을 참조한다. 수많은 상이한 다용도의 키트가 체액 및 조직으로부터 단백질을 추출하는데 사용될 수 있고, 예를 들어, 바이오라드 래보러토리즈(BioRad Laboratories) (캘리포니아주 허큘리스), 비디 바이오사이언시스 클론테크(BD Biosciences Clontech) (캘리포니아주 마운틴뷰), 케미콘 인터내셔날, 인크.(Chemicon International, Inc.) (캘리포니아주 테메큘라), 칼바이오켐(Calbiochem) (캘리포니아주 샌디에고), 피어스 바이오테크놀로지(Pierce Biotechnology) (일리노이주 록퍼드), 및 인비트로젠 코포레이션(Invitrogen Corp.) (캘리포니아주 칼스배드)으로부터 시판된다.

생물학적 샘플에서 세포의 활성 또는 완전성을 보존하는 샘플을 수득하고/거나 저장하는 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 생물학적 샘플은 1종 이상의 추가 작용제, 예컨대 적절한 완충제 및/또는 프로테아제 억제제를 포함한 억제제와 추가로 접촉될 수 있으며, 여기서 작용제는 단백질 구조의 변화 (예를 들어, 삼투성 또는 pH의 변화)를 최소화하거나 또는 보존하는 것을 의미한다. 이러한 억제제는 예를 들어, 킬레이트제, 예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 에틸렌 글리콜 테트라아세트산 (EGTA), 프로테아제 억제제, 예컨대 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF), 아프로티닌 및 류펩틴을 포함한다. 전세포를 저장하거나 또는 달리 조작하기에 적절한 완충제 및 조건은, 예를 들어, 문헌 [Pollard and Walker (1997), "Basic Cell Culture Protocols," volume 75 of Methods in molecular biology, Humana Press]; [Masters (2000) "Animal cell culture: a practical approach," volume 232 of Practical approach series, Oxford University Press]; 및 [Jones (1996) "Human cell culture protocols," volume 2 of Methods in molecular medicine, Humana Press]에 기재되어 있다.

샘플은 또한 간섭 성분의 존재를 제거하거나 또는 최소화하도록 프로세싱될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 샘플은 관심없는 하나 이상의 재료 (예를 들어, 세포)를 제거하도록 분획화되거나 또는 정제될 수 있다. 생물학적 샘플을 분획화거나 또는 정제하는 방법은 유동 세포계측법, 형광 활성화 세포 분류법 및 침강법을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

4. 치료 방법

또한, NASH를 갖는 환자가 프로-C3의 특정한 혈청 역치 수준 (예를 들어, 약 10 ng/ML, 11 ng/ML, 12 ng/ML, 13 ng/ML, 14 ng/ML, 15 ng/ML, 16 ng/ML, 17 ng/ML, 18 ng/ML, 19 ng/ML, 20 ng/ML, 22 ng/ML, 23 ng/ML 초과)을 갖는 것으로 결정된 경우에 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여함으로써 상기 환자를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.

본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본원에 기재된 치료적 조치를 지칭한다. 치료 방법은 질환 또는 장애 또는 재발성 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 치유하거나, 지연시키거나, 그의 중증도를 감소시키거나, 경감시키기 위해, 또는 이러한 치료의 부재 하에 예상되는 것 이상으로 환자의 생존을 연장시키기 위해 본원에 개시된 조합물을 환자 (예컨대, 인간)에게 투여하는 것을 이용한다.

용어 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 상호교환적으로 사용되고, 질환 또는 장애 (예를 들어, NASH)의 하나 이상의 증상(들)을 완화시키거나 또는 경감시키거나, 또는 치료될 환자의 생존을 연장시키기에 효과적인 제형의 양을 지칭한다. 치료 유효량의 결정은 특히 본원에 제공된 상세한 개시내용에 비추어 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 내에 있다. 치료 유효 투여량은 시험관내 및 생체내 방법을 사용하여 결정될 수 있다.

한 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 변형된 FGF-21의 환자에게의 투여 전 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 변형된 FGF-21로 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 환자는 치료 전 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 가지며, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 실시양태에서, NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 방법은 (1) 환자로부터의 혈액 샘플을 수득하거나 또는 수득했고, (2) 10 ng/ML 초과인 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하거나 또는 결정했고, (3) 혈청 프로-C3 수준이 결정된 후에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함한다.

또 다른 실시양태에서 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, (a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고, (b) 혈청 프로-C3 수준이 약 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하며, 여기서 서열식별번호:2 중 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 환자에서 NASH를 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된다.

변형된 FGF-21은 투여 경로에 따라 부분적으로 달라지는 다양한 방법을 사용하여 대상체, 예를 들어, 인간 환자에게 투여될 수 있다. 경로는 예를 들어, 정맥내 주사 또는 주입 (IV), 피하 주사 (SC), 복강내 (IP) 주사, 또는 근육내 주사일 수 있다.

투여는 예를 들어, 국소 주입, 주사 또는 임플란트에 의해 달성될 수 있다. 임플란트는 막, 예컨대 시알라스틱 막 또는 섬유를 포함한 다공성, 비다공성 또는 젤라틴성 재료일 수 있다. 임플란트는 환자에게 조성물을 지속적으로 또는 주기적으로 방출하도록 구성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 20080241223; 미국 특허 번호 5,501,856; 4,863,457; 및 3,710,795; 및 유럽 특허 번호 EP488401 및 EP430539를 참조하며, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 조성물은, 예를 들어, 확산성, 부식성 또는 대류성 시스템에 기반한 이식가능한 디바이스, 예를 들어, 삼투 펌프, 생분해성 임플란트, 전기확산 시스템, 전기삼투 시스템, 증기압 펌프, 전해 펌프, 발포 펌프, 압전 펌프, 부식-기반 시스템, 또는 전기기계 시스템에 의해 환자에게 전달될 수 있다.

환자에서 NASH를 치료할 수 있는 변형된 FGF-21의 적합한 용량은, 예를 들어, 치료될 환자의 연령, 성별 및 체중을 포함한 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 환자에게 투여되는 용량에 영향을 미치는 다른 인자는, 예를 들어, 질환의 중증도를 포함한다. 다른 인자는, 예를 들어, 환자에게 공동으로 또는 이전에 영향을 미치는 다른 의학적 장애, 환자의 전반적인 건강, 환자의 유전적 성향, 식이, 투여 시간, 배설률, 약물 조합물, 및 환자에게 투여되는 임의의 다른 추가 치료제를 포함할 수 있다. 또한, 임의의 특정한 환자를 위한 특정 투여량 및 치료 레지멘은 치료하는 의학적 전문인 (예를 들어, 의사 또는 간호사)의 판단에 따라 달라질 것으로 이해되어야 한다.

한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 용량으로 투여된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "고정된 용량", "균일용량", 및 "균일-고정된 용량"은 상호교환적으로 사용되고, 환자의 체중 또는 체표면적 (BSA)에 관계없이 환자에게 투여되는 용량을 지칭한다. 그러므로, 고정된 또는 균일 용량은 mg/kg 용량으로 제공되지 않고 작용제의 절대량으로서 제공된다.

한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 1주 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 10 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 11 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 12 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 13 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 14 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 15 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 16 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 17 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 18 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 19 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 20 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 21 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 22 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 23 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 24 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 25 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 26 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 27 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 28 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 29 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 30 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 35 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1주 1회 약 40 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 고정된 1일 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 5 mg, 1일 1회 약 6 mg, 1일 1회 약 7 mg, 1일 1회 약 8 mg, 1일 1회 약 9 mg, 1일 1회 약 10 mg, 1일 1회 약 11 mg, 1일 1회 약 12 mg, 1일 1회 약 13 mg, 1일 1회 약 14 mg, 1일 1회 약 15 mg, 1일 1회 약 16 mg, 1일 1회 약 17 mg, 1일 1회 약 18 mg, 1일 1회 약 19 mg, 1일 1회 약 20 mg, 1일 1회 약 25 mg, 또는 1일 1회 약 30 mg의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 10 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 15 mg의 용량으로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1일 1회 약 20 mg의 용량으로 투여된다.

일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월 동안 고정된 용량으로 투여된다.

제약 조성물은 변형된 FGF-21 (예를 들어, 예컨대 BMS-986036)의 치료 유효량을 포함할 수 있다. 이러한 유효량은 변형된 FGF-21의 효과, 또는 1종 초과의 작용제가 사용되는 경우에 변형된 FGF-21 및 1종 이상의 추가 활성 작용제의 조합 효과에 부분적으로 기반하여 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 변형된 FGF-21의 치료 유효량은 또한 인자, 예컨대 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적 반응을 이끌어내는 변형된 FGF-21 (및 1종 이상의 추가 활성 작용제)의 능력, 예를 들어, 적어도 하나의 상태 파라미터의 경감, 예를 들어, NASH의 적어도 하나의 증상의 경감에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 변형된 FGF-21의 치료 유효량은 NASH의 증상 중 임의의 하나를 억제할 수 있다 (그의 중증도를 줄이거나 또는 그의 발생을 제거할 수 있음). 치료 유효량은 또한 조성물의 임의의 독성 또는 유해한 효과보다 치료적으로 유익한 효과가 더 큰 양이다.

변형된 FGF-21의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서 공지된 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. 이들 절차는, 예를 들어, LD₅₀ (집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED₅₀ (집단의 50%에서 치료적으로 효과적인 용량)을 결정하는데 사용될 수 있다. 독성과 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이고, 이는 LD₅₀/ED₅₀ 비로서 표현될 수 있다. 높은 치료 지수를 나타내는 조성물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 조성물이 사용될 수 있지만, 이러한 화합물을 영향을 받는 조직의 부위로 표적화하고 정상 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화하여 부작용을 감소시키는 전달 시스템을 설계하도록 주의를 기울여야 한다.

5. 반응성을 모니터링하는 방법

변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것인 방법이 또한 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것이며, 여기서 변형된 FGF-21은 서열식별번호:2로 이루어지거나 또는 그를 포함하는 것인 방법이 제공된다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21이 제공되며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타낸다.

한 실시양태에서, 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 5% (예를 들어, 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70%)만큼 프로-C3의 혈청 수준에서의 저하는 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타낸다.

또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21의 하나 이상의 용량의 투여 후 프로-C3의 기준선 혈청 수준의 90% (예를 들어, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 또는 30%) 내로 프로-C3의 혈청 수준에서의 저하는 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타낸다.

6. 반응자를 확인하는 방법

변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자 중 반응자를 확인하는 방법이 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 환자가 치료 전에 수득된 혈액 샘플 중 약 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정하고, 환자를 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응자로서 확인하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21은, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산은 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료에 적합한 NASH를 갖는 환자를 확인하는 방법이 제공되며, 여기서 방법은 시험관내 검정을 사용하여 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준은 10, 15 또는 20 ng/ML 초과이다. 일부 실시양태에서, 방법은 환자가 치료 전 환자로부터 수득된 혈액 샘플 중 약 11 ng/ML, 12 ng/ML, 13 ng/ML, 14 ng/ML, 15 ng/ML, 16 ng/ML, 17 ng/ML, 18 ng/ML, 19 ng/ML, 20 ng/ML, 21 ng/ML, 또는 22 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정하는 것을 포함한다.

7. 추가 작용제/요법

일부 실시양태에서, 변형된 FGF-21은 단독요법으로서 환자에게 투여될 수 있다. 대안적으로, 상기 기재된 바와 같이, 변형된 FGF-21은 또 다른 치료와의 조합 요법으로서 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 조합 요법은 NASH를 갖는 환자에게 치료적 이점을 제공하는 1종 이상의 추가 작용제를 환자 (예를 들어, 인간 환자)에게 투여하는 것을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21이 첫 번째로 투여되고, 1종 이상의 추가 활성 작용제가 두 번째로 투여된다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가 활성 작용제가 첫 번째로 투여되고, 변형된 FGF-21이 두 번째로 투여된다.

일부 실시양태에서, 1종 이상의 추가 치료제는 항섬유화제, N-카드헤린 길항제, 항-N 카드헤린 항체, 소분자 N-카드헤린 길항제, 길항작용 N-카드헤린 단편, 항염증제, 간보호제, 레닌-안지오텐신 시스템 (RAS) 저해 시스템, 프로바이오틱스 및 다불포화 지방산 (PUFA)으로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항섬유화제는 닌테다닙, 피르페니돈, LPA1 길항제, LPA1 수용체 길항제, GLP1 유사체, 트랄로키누맙 (IL-13, 아스트라제네카), 비스모데깁 (헤지호그 길항제, 로슈), PRM-151 (펜트락신-2, TGF 베타-1, 프로메디올), SAR-156597 (이중특이적 Mab IL-4&IL-13, 사노피), 심투주맙 (항-리실 옥시다제-유사 2 (항-LOXL2) 항체, 길리어드), CKD-942, PTL-202 (PDE 억제제/펜톡시필린/NAC 경구 제어 방출, 퍼시픽 테르.), 오미팔리십 (경구 PI3K/mTOR 억제제, GSK), IW-001 (경구 용액 소 유형 V 콜라겐 조정제, 이뮨워크스), STX-100 (인테그린 알파 V/베타-6 ant, 스트로메딕스/바이오젠), 액티뮨 (IFN 감마), PC-SOD (미디스마제; 흡입제, LTT 바이오-파마/CDK 팜), 레브리키주맙 (항-IL-13 SC 인간화 mAb, 로슈), AQX-1125 (SHIP1 활성화제, 아퀴녹스), CC-539 (JNK 억제제, 셀진), FG-3019 (피브로젠) 및 SAR-100842 (사노피)로부터 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, 간보호제는 우르소데옥시콜산 (UDCA) 또는 오베티콜산 (OCA 또는 INT-747, 인터셉트)일 수 있다.

8. 성과

본원에 개시된 방법에 따라 치료된 환자는 바람직하게는 NASH의 적어도 하나의 징후에서의 개선을 경험한다.

한 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 치료전 프로-C3 수준과 비교하여 프로-C3 수준에서의 저하 (예를 들어, 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70%)를 초래한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 프로-C3 수준에서의 저하 (예를 들어, 치료전 프로-C3 수준과 비교하여 적어도 약 1.5배, 2배, 2.5배 또는 3배만큼)를 초래한다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 프로-C3의 정상 수준을 향한 이동 (예를 들어, 프로-C3의 정상 혈청 수준보다 50% (예를 들어, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1%) 내로 높은 수준)을 생성한다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 자기 공명 탄성영상 (MRE)에 의해 평가되는 바와 같이 환자에서 간 경직도에서의 감소를 초래한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 15% 이상 (예를 들어, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 그 초과)의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가된다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 간 지방 분율에서의 감소를 초래한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율은 자기 공명 영상화-추정 양성자 밀도 지방 분율 (MRI-PDFF)에 의해 평가되는 바와 같다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 30% 이상 (예를 들어, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49% 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 65%, 70%, 75% 또는 그 초과)의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율은 MRI-PDFF에 의해 평가된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 간 지방 분율은 MRI-PDFF에 의해 평가되는 바와 같이 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에게 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 5% (예를 들어, 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70%)만큼 저하된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 간 지방 분율은 MRI-PDFF에 의해 평가되는 바와 같이 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에게 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 20%만큼 저하된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 간 지방 분율은 MRI-PDFF에 의해 평가되는 바와 같이 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에게 변형된 FGF-21의 투여 후 적어도 30%만큼 저하된다. 또 다른 실시양태에서, 환자의 간 지방 분율은 변형된 FGF-21의 투여 후 간 지방 분율의 환자의 치료전 (치료 이전) 기준선 혈청 수준의 90% (예를 들어, 85, 80, 75, 70, 65, 60, 55, 50, 45, 40, 35 또는 30%) 내로 저하된다.

또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 간 경직도에서의 감소, 간 지방 분율에서의 감소, 및/또는 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래한다. 또 다른 실시양태에서, 변형된 FGF-21로의 치료는 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소, 및 치료 전 환자의 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 환자에서 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래하며, 여기서 간 경직도는 MRE에 의해 평가되고, 여기서 환자는 변형된 FGF-21로의 치료 전 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정되었다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 치료 방법은 환자에서 피로, 권태, 체중 감소 및/또는 우상 사분역 복부 불쾌감의 감소 또는 중단으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 치료 효과를 생성한다.

9. 키트

본원에 기재된 방법을 수행하는데 유용한 다양한 시약 및 재료를 포함하는 키트가 또한 제공된다. 본원에 기재된 측정, 진단, 사정 및/또는 평가 절차는 진단 연구소, 실험 연구소 또는 개별 전문인에 의해 수행될 수 있다. 본 발명은 임의의 또는 모든 이들 설정에서 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 키트는 그 중에서도, 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액)을 특징화 또는 프로세싱하고, 프로-C3 바이오마커 수준 (예를 들어, 단백질 또는 핵산 수준)을 측정하고, 본원에 제공된 방법에 따라 환자에서 치료 반응을 모니터링하기 위한 재료 및 시약을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키트는 프로-C3의 혈청 단백질 수준을 특이적으로 검출하는 적어도 1종 이상의 시약, 및 임의로, 키트 사용에 대한 지침서를 포함한다.

일부 실시양태에서, 키트는 적합한 대조군 샘플 (예를 들어, 정상의 건강한 개체로부터의 생물학적 샘플 또는 관심있는 특정한 분석물질, 예컨대 프로-C3의 공지된 대조군 양을 포함하는 용액)을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 키트는 본원에 기재된 하나 이상의 방법에 따른 키트 사용에 대한 지침서를 포함할 수 있고, 환자로부터 수득된 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액)의 프로세싱 및/또는 테스트의 수행에 대한 지침서 또는 결과 해석에 대한 지침서를 포함할 수 있다.

본 개시내용은 그의 특정 실시양태를 참조하여 기재되어 있으나, 본 개시내용의 진정한 취지 및 범주를 벗어나지 않으면서 다양한 변화가 이루어질 수 있고 등가물이 대체될 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되어야 한다. 또한, 특정한 상황, 재료, 물질의 조성, 프로세스 또는 프로세스 단계 또는 단계들을 본 개시내용의 목적, 취지 및 범주에 적응시키기 위해 많은 변형이 이루어질 수 있다. 모든 이러한 변형은 본 개시내용의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.

하기 실시예는 본 발명을 제한하려는 것이 아니라 본 발명을 예시하려는 것으로 의도된다.

실시예

실시예 1: 비알콜성 지방간염 (NASH)을 갖는 성인에서 BMS-986036의 안전성, 약동학적 및 약력학적 효과를 사정하기 위한 무작위화, 이중-맹검, 위약-대조군, 병렬 군, 다중 용량 연구

이 연구의 목적은 NASH를 갖는 환자에서 안전성, 내약성 및 MRI에 의한 간 지방 분율 (%)에서의 변화에 대한 BMS-986036 (pAF가 30 kD PEG에 연결되는 것인 서열식별번호:2의 아미노산 서열을 포함하는 변형된 FGF21)의 1일 또는 1주 용량의 16주의 효과를 평가하고, NASH를 갖는 환자에서 BMS-986036의 약동학 및 면역원성을 평가하는 것이었다. 목적은 또한 16주에 MRE에 의한 간 경직도, 이중-에너지 X-선 흡수계측법 (DXA)에 의한 신체 조성, BMS-986036 요중 농도, 체중 및 허리 둘레, ALT (알라닌 아미노트랜스퍼라제) 및 AST (아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제) 수준, 글루코스 항상성 및 인슐린 민감성, 공복 지질, 골 항상성, 질환 진행 및 합병증의 위험과 연관된 탐색적 바이오마커, 및 NASH와 관련된 계산된 지수에 대한 BMS-986036의 매일 또는 매주 용량의 효과를 평가하는 것을 포함한다.

A. 방법

대상체는 무작위화 전 42일 내에 적격성을 결정하기 위해 스크리닝 사정을 받았다. 적격 대상체는 3개의 병렬 치료군 중 1개로 무작위화하고, 16주 동안 1일 1회 또는 1주 1회 이중-맹검 치료를 자가-투여받았다. NASH CRN 섬유증 1-3기 및 자기 공명 영상화-양성자 밀도 지방 분율 (MRI-PDFF)에 의한 간 지방 분율 (%) ≥10%를 갖는 NASH의 문서화된 결과와 스크리닝 1년 내에 (또는 스크리닝과 리드-인 사이) 간 생검이 수행된 ≥ 25 kg/㎡의 BMI를 갖는 21 내지 75세 연령의 남성 및 여성 대상체를 연구에 포함시켰다. 환자가 NASH 이외의 만성 간 질환에 기여하는 의학적 상태의 증거, 간경변, 비대상성 간 질환, 당화 헤모글로빈 (Hb_A1c) ≥9·5%, 최근 약물 또는 알콜 남용 또는 심각한 알콜 소비, 스크리닝 8주 이내에 골 외상, 골절 또는 골 수술의 증거, 또는 표적 환자 집단과 일치하는 것 이상의 신체 검사 또는 임상 실험실 결정에서 정상으로부터의 임의의 임상적으로 유의한 편차를 갖는 경우에 환자를 배제하였다.

대화형 음성 응답 시스템 (IVRS: Interactive Voice Response System)을 사용하여 제1일에 다음 군 중 하나로 적격 환자를 무작위화하였다 (1:1:1): BMS-986036 10 mg QD, BMS-986036 20 mg QW 또는 위약 QD. 현재 미국 당뇨병 협회 기준 (문헌 [American Diabetes Association, "Classification and diagnosis of diabetes", Sec. 2. Diabetes Care 2015; 38(Suppl 1): S8] 참조)에 기반하여 T2DM 상태의 진단에 의해 환자를 층화하였다. 외래 환자 환경에서 투여를 위한 번호가 매겨진 키트에 맹검 치료를 공급하였다. 연구 약물을 조제할 때 모든 연구 방문에서, 환자 각각에게 IVRS에 의해 키트 번호를 무작위로 할당하였다. 키트 번호는 연구 약물을 함유하는 패키지 및 키트 상에 인쇄된 번호에 상응하였다. 키트 각각은 1주의 투약을 지원하기 위해 8개의 바이알을 함유하였다. 제1일에 2개의 바이알을 지정하고, 제2일-제7일 각각에 1개의 바이알을 제공하였다.

안전성, PK 및 PD 측정을 수집하기 위해 초기에는 대략 2주마다 그리고 그 후에는 1개월마다 클리닉 방문을 예정하였다 (표 1).

표 1: 연구 설계 개략도

QD = 1일 1회; QW = 1주 1회; D = 일

무작위화 전에, 적격 환자는 매일 위약 주사로 이루어진 7-일 연구 기술 리드-인 기간 (제-7일 내지 제-1일)을 완료하였다. 주사를 복부에 피하로 자가-투여하고, 환자는 배꼽에 대해 주사 부위를 회전시키도록 훈련받았다. 제1일에 무작위화 후, 환자는 표 2에 기재된 바와 같이 16주 동안 1일 1회 이중-맹검 치료를 피하로 자가-투여하였다. 모든 치료에 대해, 각각의 치료 주의 1일차에 2개의 1-mL 주사를 공동으로 투여하고, 제2일 내지 제7일에 1개의 1-mL 주사를 투여하였다. BMS-986036 10 mg QD 군의 경우, 제1일에 2개의 주사는 매일 치료군과 매주 치료군 사이에 맹검을 유지하기 위해 1개의 활성 용량 및 1개의 위약으로 이루어졌다. BMS-986036 20 mg QW 군의 경우, 제2일-제7일에 매일 주사는 매일 치료군과 매주 치료군 사이에 맹검을 유지하기 위해 위약이었다.

표 2: 치료 투여

치료중 클리닉 방문을 제1일, 제15일, 제29일, 제43일, 제57일, 제86일 및 제112일에 예정하였다. 연구 후 추적 방문을 제142일 및 제292일에 예정하였다. 스크리닝, 각각의 치료 방문 및 제142일 추적 방문에 신체 검사, 활력 징후 측정, 및 임상 실험실 사정을 수행하였다. 12-리드 심전도 (ECG)를 스크리닝, 제1일, 제112일에 및 추적 시에 수행하였다. 마우스 모델에서 관찰된 FGF21 및 골 소실의 연관성으로 인해 (예를 들어, 문헌 [Wei W, et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2012; 109(8): 3143-8] 참조), 스크리닝, 치료 종료, 및 치료 종료 후 6개월에 골 무기질 밀도 (BMD) 및 신체 조성을 모니터링하기 위해 이중 방출 X-선 흡수계측법 (DXA)을 수행하였다. 스크리닝 및 제57일 및 치료 종료에 MRI-PDFF를 수행하였다. 적절한 하드웨어 및 소프트웨어를 갖춘 시설의 서브세트에서, 스크리닝 및 치료 종료에 자기 공명 탄성영상 (MRE)을 수행하였다. 공복 지질 (랩코르프(LabCorp), 노스캐롤라이나주 벌링턴), 아디포넥틴 (미리어드 알비엠(Myriad RBM), 텍사스주 오스틴) 및 인슐린 (랩코르프) 수준을 제1일, 제29일, 제57일, 제86일, 제112일 및 제142일에 평가하였다. 프로-C3 수준을 제1일, 제57일 및 제112일에 평가하였다 (노르딕 바이오사이언스(Nordic Bioscience), 덴마크 헬레브). 연구 전반에 걸쳐 모든 시점에 및 추적 방문에 유해 사건 (AE) 데이터를 수집하였다. 제-7일부터 연구후 추적 방문 종료까지 주사 부위 반응에 대해 환자를 모니터링하였다. 주사 부위 AE의 보고에 대한 지침으로서 홍반 및 부종에 대한 드레이즈(Draize) 척도를 사용하였다 (문헌 [Haschek W, et al. "Evaluation of Cutaneous Toxicity" In: Fundamentals of Toxicologic Pathology. Second ed. Academic Press; 2009. p.156] 참조). 용량전 및 제15일, 제29일, 제57일, 제86일, 제112일, 제142일 및 제292일에 연구 약물 및 내인성 FGF21에 대한 면역원성을 평가하였다. 추가로, 제142일 및 제292일 사이에 대략 6-8주마다 또는 제142일 후 12개월까지 면역원성 평가를 또한 수행하였다.

1차 종결점은 BMS-986036의 QD 또는 QW 용량의 16주로 치료된 NASH 환자에서 안전성, 내약성, 및 MRI-PDFF에 의한 간 지방 분율에서의 절대 변화였다. 2차 종결점은 약동학 및 면역원성을 포함하였다. 탐색적 종결점은 16주에 MRE에 의해 측정된 바와 같은 간 경직도에서의 변화, DXA에 의한 신체 조성, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) 및 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST) 수준, 아디포넥틴, 공복 지질, 및 프로-C3을 포함하였다. 사후 종결점은 MRI-PDFF에 의해 측정된 간 지방 분율, MRE에 의해 측정된 간 경직도, 및 프로-C3에서의 상대적 개선을 포함하였다.

1차 종결점을 위해, 기준선 후 측정을 수행한 치료군당 27명의 환자로, 0·05의 단측 유의성 수준에서 BMS-986036의 2개의 용량 각각 및 위약 사이의 간 지방 분율에서의 제16주에 기준선으로부터의 평균 변화에서의 5% 차이를 검출하는 82% 검정력이 존재하는 것으로 추정되었다. 이들 계산은 기준선으로부터의 간 지방 분율 변화가 유사한 집단에서 보고된 데이터로부터 추정된 바와 같이 7% 이하의 표준 편차로 정상적으로 분포된다고 가정하였다 (문헌 [Le TA, et al., Hepatology 2012; 56(3): 922-32] 및 [Patel NS, et al., Clin Gastroenterol Hepatol 2015; 13(3): 561-8] 참조). 환자의 약 10%가 중도탈락할 수 있도록, 치료군당 대략 30명의 환자를 무작위화하는 것을 계획하였다.

1차 종결점을 사정하기 위해, 기준선 및 적어도 하나의 기준선 후 측정 둘 다를 갖는 치료된 환자에서 기준선으로부터 제16주에 간 지방 분율에서의 변화를 분석하기 위해 경시적 반복 측정 분석을 사용하였다. 모델은 주요 효과로서 치료군, 주 및 주별 치료 상호작용, 및 공변량으로서 기준선 간 지방 분율 (%) 및 기준선 당뇨병 상태를 포함하였다. 각 대상체 내에서 반복 측정의 상관관계를 나타내기 위해 비구조 공분산 행렬을 사용하였다. 모델은 치료 내에서 및 치료 사이에 기준선으로부터의 평균 변화에 대한 포인트 추정치, 표준 오차 및 양측 90% 신뢰 구간을 제공하였다. 탐색적 종결점을 위해, 치료 및 연구 일에 의해 기술 통계가 제공된다. 사후 분석은 피셔의 정확 검정을 사용하여 수행하였으며, 다중 비교를 위해 조정하지 않았다. 모든 기록된 유해 사건을 열거하고, 기관계 분류, 바람직한 용어 및 치료군 별로 표로 작성하였다. 임의의 유의한 신체 검사 소견 및 임상 실험실 결과를 열거하였다. 대략 60명의 환자가 8주의 치료를 완료한 후, 미리 특정된 중간 분석을 수행하였다. 위약과 비교하여 간 지방 분율에서의 기준선으로부터의 평균 변화가 적어도 -4·5%이면, 등록을 정지시켰다. 분석은 개별 환자의 치료 할당을 밝히지 않고 입수가능한 데이터의 요약으로 이루어졌다. 분석 결과는 미리 특정된 인원의 패널에 의해 검토되었으며, 다른 연구 인원에게는 공개되지 않았다. 무작위화되고 연구 약물을 투여받은 모든 환자를 1차 분석에 포함시켰다.

BMS-986036 (전체 및 C-말단 무손상)의 C최저치 농도는 혈청 농도 대 시간 데이터로부터 도출하였다. 간 경직도의 잠재적 변화를 사정하기 위해 특정 시점에 MRE를 수행하였다. 신체 조성의 잠재적 변화를 사정하기 위해 특정 시점에 DXA를 수행하였다. 프로-C3을 포함한 탐색적 바이오마커 분석을 위해 혈액 및 소변을 수집하였다.

안전성 평가는 유해 사건 (AE), 심각한 유해 사건 (SAE) 및 실험실 이상을 포함하였고, AE 보고의 의학적 검토 및 활력 징후 측정, ECG, 신체 검사 및 임상 실험실 테스트의 결과를 기반으로 하였다.

B. 결과

NASH를 갖는 184명의 과체중 또는 비만 환자가 연구에 등록하였으며, 80명의 환자가 리드-인 단계에 진입하였다. 도 1에 제시된 바와 같이, 리드-인 단계에 진입한 80명의 환자 중에서, 75명의 대상체를 무작위화하고, BMS-986036 10 mg 매일 (25명의 대상체), BMS-986036 20 mg 매주 (24명의 대상체) 또는 위약 매일 (26명의 대상체)로 치료하였다.

계획된 샘플 크기는 군당 30명의 환자였다. 그러나, 치료 제8주에 미리 계획된 중간 분석 동안 1차 종결점에 대해 관찰된 BMS-986036의 유의한 효과로 인해 등록을 조기에 종료하였다. 75명의 환자 중 총 71명 (95%)이 16-주 치료 기간을 완료하였다.

기준선 인구통계 및 질환 특징은 하기 표 3에 제시된 바와 같이 치료군 간에 일반적으로 비교가능하였다. 전반적으로, 환자의 96% (72/75)는 백인이었고, 64% (48/75)는 여성이었고, 37% (28/75)는 T2DM을 가졌고, 20% (15/75)는 NASH CRN 기준에 의해 평가된 바와 같은 3기 섬유증을 가졌다. 환자군 전체에 걸쳐, MRI-PDFF에 의해 측정된 기준선 평균 간 지방 분율은 18% 내지 21%의 범위였고, MRE에 평가된 기준선 평균 간 경직도는 3·1 내지 3·5 kPa의 범위였고, 기준선 평균 NAS는 4·0 내지 4·4의 범위였다.

표 3: 기준선 인구통계 및 질환 특징

간 지방 분율: 치료 16주 후, 평균 간 지방 분율은 위약과 비교하여 10 mg QD BMS-986036 (p=0·0004) 또는 20 mg QW BMS-986036 (p=0·008)을 투여받은 환자에서 유의하게 감소하였다 (도 2a 참조). 제16주에 간 지방 분율에서의 평균 절대 감소는 10 mg QD 용량 패널의 경우 -6.8% (P= 0.0004), 20 mg QW 용량 패널의 경우 -5.2% (P=0.008), 및 위약 패널의 경우 -1.3%였다. 제8주에 간 지방 분율에서의 평균 절대 변화는 10 mg QD 레지멘, 20 mg QW 레지멘 및 위약 레지멘의 경우에 각각 -8.4%, -6.5% 및 -1.3%였다. 총 68명의 대상체는 기준선 및 제16주 둘 다에 MRI-PDFF 데이터를 가졌다. 도 2b는 BMS-986036 치료 후 간 지방 분율에서의 감소를 경험한 환자의 MRI-PDFF 측정을 제시한다. 사후 분석은 위약-치료된 환자와 비교하여 BMS-986036 10 mg QD (p=0·03) 또는 20 mg QW (p=0·02)로 치료된 유의하게 더 많은 환자가 간 지방 분율에서의 ≥30% 상대 감소를 가졌다는 것을 제시하였다 (도 2c). 위약과 비교하여 BMS-986036 10 mg QD 또는 20 mg QW로 치료된 환자의 더 큰 비율이 간 지방 분율에서의 ≥20% 또는 ≥10% 상대 감소를 가졌다. 표 4는 간 지방 분율에 대해 기준선으로부터 제16주까지 >=30% 상대 감소를 갖는 환자의 백분율을 나타낸다 (10 mg QD 레지멘, 20 mg QW 레지멘 및 위약 레지멘의 경우 각각 56.5%, 54.5% 및 24.0%).

표 4: 제16주에 기준선으로부터의 변화 - 간 지방 분율

1. 기준선은 연구 약제의 제1 활성 용량의 날짜-시간보다 적은 수집 날짜-시간을 갖는 마지막 비-결측 결과로서 정의된다.

2. 이러한 분석을 위해 피셔의 정확 검정이 수행된다.

PK: BMS-986036 10 mg 매일 및 BMS-986036 20 mg 매주의 BMS-986036 치료군 각각에 대해, 데이터는 정상 상태 농도가 C-말단 무손상 BMS-986036의 경우 치료의 제1주에 의해 및 총 BMS-986036 군의 경우 제4주에 의해 달성되었음을 입증하였다. C최저치는 10 mg QD 및 20 mg QW 투약 군에서 치료 기간 동안 일정하게 유지되었다.

MRE: 간 경직도: 적절한 하드웨어 및 소프트웨어가 입수가능한 영상화 시설의 서브세트에서 간 경직도를 평가하기 위해 MRE를 수행하였다. 그러므로, 간 경직도 (MRE) 분석을 위한 샘플 크기는 다른 종결점을 위한 샘플 크기보다 더 작았다. MRE에 의해 측정된 바와 같은 평균 간 경직도는 모든 군에서 저하되었다 (도 3a 참조). 위약과 비교하여 BMS-986036 10 mg QD 및 20 mg QW 군은 간 경직도에서의 ≥15% 저하를 갖는 환자의 더 큰 백분율을 가졌다 (도 3b 참조). ≥ 15% 상대 감소를 갖는 대상체의 백분율은 BMS-986036 10 mg QD 레지멘, BMS986036 20 mg QW 레지멘 및 위약 레지멘의 경우에 각각 36%, 33% 및 7%였다. BMS-986036 치료 후 간 경직도에서의 감소를 경험한 환자로부터의 MRE 영상은 도 4에 제시되어 있다.

아디포넥틴: 더 높은 아디포넥틴 수준은 지방증, 염증 및 섬유증에서의 개선과 연관된다. 위약과 비교하여 BMS-986036 10 mg QD (p=0·003) 및 20 mg QW (p=0·003)에 의한 치료 후 아디포넥틴에서의 유의한 증가가 관찰되었으며 (도 5 참조), 제29일에 평균 수준이 피크에 도달한 후 기준선을 향한 하향 추세였다. 제112일에, 기준선으로부터의 아디포넥틴 평균 퍼센트 변화는 위약군의 경우 -1.1%와 비교하여 BMS-986036 20 mg QW 및 10 mg QD 치료군의 경우 각각 19% 및 20%였으며, 이는 유의한 치료 차이를 초래하였다 (BMS-986036 10 QD의 경우 p=0.0071, BMS-986036 20 QW의 경우 0.0072).

프로-C3: 기준선에서, 평균 혈청 프로-C3 수준은 표 3에 제시된 바와 같이 치료군에 걸쳐 비교가능하였다. 대부분의 환자 (67% [28/42]는 도 6a-6b에 제시된 바와 같이 < 20 ng/mL의 기준선 프로-C3 수준을 가졌다. BMS-986036 10 mg QD 및 20 mg QW로 치료된 환자는 기준선으로부터 제112일에 위약과 비교하여 유의하게 감소된 혈청 프로-C3 수준을 가졌다 (각각 p<0·0001 및 p=0·0093)(도 7a 참조). BMS-986036 10 mg QD 군의 경우 제57일에 최대 저하가 얻어졌으며, 치료 기간의 나머지 동안 지속되었다. 제112일에 BMS-986036 20 mg QW 군 및 BMS-986036 10 mg QD 군 사이의 퍼센트 변화에서의 유의한 차이가 없었다. 또한, 위약과 비교하여 BMS-986036 10 mg QD 군 및 20 mg QW 군은 혈청 프로-C3 수준에서의 ≥15% 상대 감소를 갖는 환자의 유의하게 더 큰 백분율을 가졌다 (QD: p=0·0025; QW: p=0·0063) (도 7b 참조). 검정의 정밀도에 기반하여 15%를 선택하였다. ≥ 15% 상대 감소를 갖는 대상체의 백분율은 BMS-986036 10 mg QD 레지멘, BMS-986036 20 mg QW 레지멘 및 위약 레지멘의 경우 각각 64%, 60% 및 18%였다 (표 5). 치료에 대한 프로-C3 반응의 차이는 기준선 섬유증 병기에 의해 관찰되지 않았다.

표 5: 제16주에 기준선으로부터의 변화 - 프로-C3

*기준선은 연구 약제의 제1 활성 용량의 날짜-시간보다 적은 수집 날짜-시간을 갖는 마지막 비-결측 결과로서 정의된다. 이러한 분석을 위해 피셔의 정확 검정이 수행된다.

ALT/AST: ALT 및 AST는 간 손상의 바이오마커이다. 기준선 및 제16주에 ALT 및 AST의 평균 절대 값은 표 6에 기재되어 있다.

표 6: 기준선 및 제16주에 ALT 및 AST의 평균 절대 값

제29일로부터 시작하여 BMS-986036 용량 군 둘 다의 경우 ALT 및 AST의 로버스트 저하가 관찰되었다 (도 8a-8b 참조). 10 mg QD 군의 경우 제43일에 및 20 mg QW 군의 경우 제57일에 최대 저하가 관찰되었다. 20 mg QW 군과 비교하여 10 mg QD 군에서 보다 저하하는 추세가 관찰되었다 (도 8a-8b 참조). 치료군 둘 다에서 제15일에 아미노트랜스퍼라제 저하가 관찰되었고, 제57일에 안정한 최저점에 도달되었으며; 이러한 최저점은 치료 종료까지 계속되었다. 위약군에서, ALT 및 AST는 기준선으로부터 실질적으로 변화하지 않았다.

공복 지질: NASH는 이상지질혈증과 종종 연관된다. 10 mg QD 및 20 mg QW에서 BMS 986036은 TG 및 HDL에서의 개선을 초래하였다. HDL 수준은 20 mg QW 및 10 mg QD 군 둘 다의 경우 기준선으로부터 증가되었으나, 위약의 경우 HDL에서의 변화는 없었다 (도 9b 참조). 일반적으로, 공복 트리글리세리드 수준은 표준 편차가 큰 높은 변동을 갖는다. 그러나, 공복 트리글리세리드 수준은 기준선과 비교하여 BMS-986036 용량 군 둘 다에서 저하되었으며, 여기서 제29일 내지 제86일에 평균 수준이 저하된 후, 수준은 제112일에 기준선을 향한 상향 추세였다 (도 9c 참조). 또한, 10 mg QD 군의 경우 LDL에서의 저하가 관찰되었으나, 20 mg QW 군 및 위약군의 경우 LDL에서의 유의한 저하가 관찰되지 않았다 (도 9a 참조). NASH와 관련된 계산된 지수: 피브로슈어(Fibrosure) 섬유증 스코어는 BMS-986036 군에서 기준선으로부터 감소하였으나, 위약군에서 감소가 관찰되지 않았다.

BMS-986036은 일반적으로 내약성이 우수하였다. 표 7에 기재된 바와 같이 유해 사건으로 인한 사망 또는 중지는 없었다.

표 7: 안전성 요약

가장 종종 보고된 AE는 설사 (13%, [BMS-986036의 용량으로 치료된 8/49명의 환자 및 위약을 투여받은 2/26명의 환자]) 및 오심 (12%, [BMS-986036의 용량으로 치료된 7/49명의 환자 및 위약을 투여받은 2/26명의 환자])이었다. 2건의 심각한 유해 사건이 있었다: BMS-986036 10 mg QD 군 중 1명의 환자가 우울증 악화 및 자살 시도를 경험하였고, 위약군으로 무작위화된 1명의 환자가 위약 리드-인 기간 동안 잘못된 연구 약물을 투여받았다. 하기 복합 위장 AE 중에서 28건의 유해 사건이 있었다: 설사, 오심, 빈번한 배변, 상복부 통증 및 구토. 이들 28건의 사건 중에서, 11건은 치료-관련된 것으로 간주되었다. 위장 유해 사건의 빈도는 위약을 투여받은 환자와 비교하여 BMS-986036으로 치료된 환자에서 더 높았다. 그러나, AE 빈도 및 BMS-986036 용량 사이의 명확한 연관성은 없었다. 모든 위장 사건은 경증 또는 중등도로 간주되었다. 치료-관련 위장 AE 중에서, 오직 1/11명만이 해결을 위한 치료를 필요로 하였다 (빈번한 배변을 경험한 1명의 환자는 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis)로 치료되었음). 주사 부위 타박상, 홍반 또는 반응은 각각 모든 환자의 5%, 4% 및 3%에서 보고되었다. 이들 사건은 대부분 경증이고 일시적이었으며, 치료를 필요로 하지 않았다. 총 75명의 환자 중 5명 (7%)은 치료-응급 등급 3 실험실 이상을 경험하였다. 등급 3 높은 글루코스의 1건의 사건 (BMS-986036 20 mg QW로 치료된 T2DM을 갖는 환자에서 기준선에 등급 2로부터의 증가) 및 등급 3 ALT 상승의 4건의 사건 (BMS-986036 20 mg QW로 치료된 환자에서 기준선에 등급 1로부터의 증가 1건, 위약을 투여받은 2명의 환자 및 BMS-986036 10 mg QD를 투여받은 1명의 환자에서 기준선에 등급 2로부터의 증가 3건)이 있었으며, 이는 계속된 투약에도 불구하고 개선되었다. 등급 4 실험실 이상이 관찰되지 않았다. BMS-986036에 의한 치료 후 ECG 간격 또는 활력 징후의 임상적으로 관련된 변화는 관찰되지 않았다. DXA에 의해 측정된 바와 같은 대퇴골 (도 10a), 고관절 (도 10b) 및 척추 (도 10c)의 평균 BMD는 제16주 또는 치료 종료 후 6개월에 위약과 비교하여 BMS-986036 용량 군에서 유의하게 상이하지는 않았다.

제142일에 연구 배출까지의 시점에, 항-BMS-986036 및 항-FGF21 항체는 BMS-986036 20 mg QW로 치료된 환자의 62.5% (15/24) 및 BMS-986036 10 mg QD로 치료된 환자의 92% (23/25)에서 검출되었다. 항체 역가는 일반적으로 낮았고 (대부분은 <64이었음), 면역-관련 유해 사건, 주사 부위 반응, 또는 약동학적 또는 약력학적 프로파일의 변화와 연관이 없었다. 치료 종료 후 6개월에 수행한 연구후 추적 방문시, 환자의 <50%가 항-BMS-986036 및/또는 항-FGF21 항체에 대한 양성 역가를 가졌고, 오직 1명의 환자만이 항체 역가 >64를 가졌다.

C. 논의

위약과 비교하여, 10 mg QD 또는 20 mg QW BMS-986036으로 치료된 NASH를 갖는 환자는 유의하게 저하된 절대 간 지방 분율 및 아디포넥틴의 유의하게 증가된 수준을 가졌다. 평균 지질 값 및 간 손상의 마커 (ALT 및 AST)는 기준선 값과 비교하여 10 mg QD 및 20 mg QW 군에서 저하되었다. 평균 간 경직도는 모든 치료군에서 저하되었다. 10 mg QD 및 20 mg QW 군 둘 다에서, 환자는 위약과 비교하여 프로-C3 (섬유증의 바이오마커)의 유의하게 저하된 수준을 가졌다. 전반적으로, 매일 및 매주 투약의 효과는 유사한 것으로 보였고, BMS-986036 용량에 의한 치료는 일반적으로 내약성이 우수하였다.

BMS-986036 치료군 둘 다에서, 환자는 MRI-PDFF에 의해 측정된 바와 같이 간 지방 분율에서의 유의한 절대 감소를 달성하였고, 환자의 절반 초과는 ≥30% 상대 감소를 달성하였다. 이전 연구에서, 조직학적 반응 (NAS에서 ≥2-포인트 감소)은 MRI-PDFF에 의해 측정된 바와 같이 29%의 간 지방 분율에서의 평균 상대 감소와 연관이 있었다 (문헌 [Patel J, et al. Therap. Adv. Gastroenterol. 2016; 9(5): 692-701] 참조). 이들 데이터는 미래 조직학-기반 분석과 함께 NASH 환자에서 지방증을 사정하는 비침습적 방법으로서 MRI-PDFF의 임상적 유용성을 추가로 뒷받침한다.

BMS-986036의 용량에 의한 치료는 T2DM을 갖는 환자의 경우 다른 FGF21 유사체의 시험에서 이전에 보고된 것과 일치하는 아디포넥틴에서의 유의한 개선과 연관이 있었다 (문헌 [Gaich G, et al., Cell. Metab. 2013; 18(3): 333-40] 및 [Talukdar S, et al., Cell Metab 2016; 23(3): 427-40] 참조). NASH를 갖는 환자에서, 아디포넥틴 수준은 건강한 개체에서보다 적어도 50% 더 낮을 수 있으며 (문헌 [Pagano C, et al., Eur. J. Endocrinol. 2005; 152(1): 113-8] 참조), 이는 아디포넥틴이 NASH에 대한 보호적인 중요한 간 효과를 갖는다는 것을 제안한다. 고지방 식이에 위치된 아디포넥틴 녹아웃 마우스는 증가된 간내 트리글리세리드, 간세포 팽창 및 섬유증을 갖고, 아디포넥틴 투여는 지방증을 감소시키고 염증을 감소시키고 지질 대사에 대한 유익한 효과를 갖는다 (문헌 [Asano T, et al., J Gastroenterol Hepatol 2009; 24(10): 1669-76] 및 [Xu A, et al., J. Clin. Invest. 2003; 112(1): 91-100] 참조). 또한, 아디포넥틴은 섬유생성에 중요한 과정인 간 성상 세포 활성화를 길항작용하고, TGF-베타-자극된 섬유모세포에서 및 CCl₄-유도 간 섬유증을 갖는 마우스에서 항섬유화 효과를 갖는다 (문헌 [Shafiei MS et al., Am J Pathol 2011; 178(6): 2690-9]; [Fang F, et al., Arthritis Res Ther 2012; 14(5): R229]; 및 [Kumar P, et al., PLoS One 2014; 9(10): e110405] 참조).

10 mg QD 및 20 mg QW 군에서 환자의 대략 1/3은 비침습적 영상화 기술인 MRE에 의해 측정된 바와 같이 간 경직도에서의 ≥15% 상대 감소를 달성하였다. MRE에 의해 측정된 간 경직도의 15% 상대 감소는 섬유증의 혈청 마커에서의 유의한 감소와 연관이 있었다 (문헌 [Loomba R, et al., J Hepatol 2017; 66(Suppl 1): S671] 참조). 작은 샘플 크기는 이들 결과의 해석가능성을 제한하지만, 이러한 역치가 상대적으로 짧은 치료 기간으로 도달될 수 있다는 것은 고무적인 일이다. MRE는 섬유증의 유망한 영상화 바이오마커이다. 이는 재현가능하고, 높은 비율의 기술적 성공을 갖는다.

제16주에, BMS-986036-치료된 환자는 또한 위약과 비교하여 유형 III 콜라겐 형성의 척도인 프로-C3의 유의하게 감소된 수준을 가졌다. NASH를 갖는 환자에서, 프로-C3의 수준은 NASH 질환 활성 및 섬유증 병기와 연관이 있었다 (문헌 [Leeming DJ, et al., J Hepatol 2017; 66(Suppl 1): S154] 및 [Leeming DJ, et al., Plasma collagen III type III (프로-C3) levels associate with severity of histological features of non-alcoholic steatohepatitis and fibrosis within the screening population from the CENTAUR study. NASH Biomarkers Workshop 2017 2017; Presented on Saturday, May 5, 2017] 참조). 만성 C형 간염 바이러스 감염을 갖는 환자에서, 프로-C3은 간 섬유증의 중증도와 상관관계가 있는 것으로 제시된 바 있고, 높은 기준선 프로-C3 수준은 증가된 섬유증 질환 진행과 연관된 바 있다 (문헌 [Nielsen MJ, PLoS One 2015; 10(9): e0137302] 참조). 혈청 프로-C3 검정은 항섬유화 치료 반응을 확인하기 위한 정확한 비침습적 방법을 제공한다 (문헌 [Karsdal MA, et al., Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2016; 311(6): G1009-17] 참조). 또한, 프로-C3에서의 경시적 저하는 생검에 의해 평가된 바와 같이 간 섬유증에서의 개선과 상관관계가 있었다 (문헌 [Luo Y., et al., J Hepatol 2017; 66(Suppl 1): S676] 참조). 상기를 감안할 때, BMS-986036-치료된 환자에서 관찰된 프로-C3에서의 감소는 항섬유화 치료 효과의 지표인 것으로 보인다.

본 연구에서, BMS-986036에 의한 16-주 치료 후 NASH를 갖는 환자에서 체중에서의 실질적인 변화는 관찰되지 않았다. FGF21-유도된 체중 감소가 동물 연구에서 제시된 바 있으나, 인간에서 체중 감소의 부재는 T2DM을 갖는 비만 환자에서 BMS-986036의 이전 시험으로부터의 관찰과 일치한다 (문헌 [Kharitonenkov A, et al., Endocrinology 2007; 148(2): 774-81]; [Coskun T, et al., Endocrinology 2008; 149(12): 6018-27]; [Xu J, et al., Am J Physiol Endocrinol Metab 2009; 297(5): E1105-14]; [Charles E, et al., Hepatology 2016; 64(Suppl 1): 17A] 참조). 동물 연구 대 임상 시험에서 체중 감소에서의 차이에 대한 이유는 불확실하다. 그러나, 인간 대 설치류 및 비-인간 영장류의 FGF21 생리학에서의 별개의 차이가 존재할 수 있다.

전반적으로, BMS-986036의 1일 또는 1주 용량은 일반적으로 안전하고 내약성이 우수하였으며, 사망, 치료-관련 심각한 유해 사건, 또는 주사 부담 또는 AE로 인한 중지는 없었다. 가장 종종 보고된 유해 사건은 사실상 위장 (설사 및 오심)이었으며, 이는 FGF21 유사체의 다른 연구에서 이전 관찰과 일치한다 (문헌 [Talukdar S, et al., Cell Metab 2016; 23(3): 427-40] 및 [Fang F, et al., Arthritis Res Ther 2012; 14(5): R229] 참조). 이들 유해 사건은 일반적으로 경증이었으며, 치료를 필요로 하지 않았다. 유사하게, 주사 부위 반응은 대부분 경증이고 일시적이었으며, 치료를 필요로 하지 않았다. 정맥내로 투여되는 장시간-작용 FGF21 유사체의 최근 연구와는 대조적으로, BMS-986036 치료로 심박수 또는 혈압에서의 명백한 변화가 관찰되지 않았으며; 이는 이들 파라미터를 집중적으로 모니터링한 BMS-986036 인간 최초의 연구로부터의 결과와 일치한다 (문헌 [Kim AM, Somayaji VR, Dong JQ, et al., Diabetes Obes Metab 2017; 19(12): 1762-72] 및 [Charles E, et al., Hepatology 2016; 64(Suppl 1): 546A] 참조). 동물 모델에서, FGF21 투여는 BMD에서의 변화와 연관이 있었다 (문헌 [Wei W, et al., Proc Natl Acad Sci USA 2012; 109(8): 3143-8] 참조). 그러나, 이러한 연구에서, 평균 BMD (DXA에 의해 결정됨)는 기준선으로부터 치료 종료까지, 또는 6개월의 추적에 걸쳐 위약과 비교하여 BMS-986036 치료군의 경우 유의하게 변화하지 않았다.

BMS-986036이 페길화 인간 FGF21 모방체라는 점에서, 일부 환자에서 면역원성 반응을 이끌어낼 수 있는 잠재성이 존재한다. 면역원성 연구는 항-BMS-986036 및 항-FGF21 항체가 BMS-986036 20 mg QW로 치료된 환자의 절반 초과에서 및 BMS-986036 10 mg QD로 치료된 환자의 90% 초과에서 검출가능하였다는 것을 제시하였다. 이들 항체 역가는 일반적으로 낮았고, 면역-관련 유해 사건 또는 주사 부위 반응과 연관이 없었고, 추적 방문까지 많은 환자에서 감소되고 있었다. 내인성 FGF21 항체에 대한 역가가 치료 중지 후 저하되었기 때문에, 내인성 FGF21에 대한 면역 관용성의 파괴를 제안하는 증거는 없었다. 함께, 이들 데이터는 BMS-986036이 16-주 기간에 걸쳐 QD 또는 QW 투여되는 경우 임상적으로 유의한 면역원성을 이끌어내지 않는다는 것을 제안한다.

이 연구의 주요 발견은 비만 T2DM 환자 (MB130-002)에서 BMS-986036의 초기 12-주, 2상 시험에서 얻은 지식을 추가로 확대시킨다 (문헌 [Charles E, Neuschwander-Tetri B, et al., Hepatology 2016; 64(Suppl 1): 17A] 참조). 비만 및 T2DM은 NASH를 포함한 NAFLD의 발병에 대한 두 가지 주요 위험 인자이다. MB130-002에서, 대부분의 환자는 근본적 NAFLD를 가질 가능성이 있었다. 환자의 97%는 지방간의 존재를 나타내는 컷오프인 지방간 지수 (FLI) ≥60을 가졌다 (문헌 [Bedogni G, et al., BMC Gastroenterol 2006; 6: 33] 참조). 이들 환자에서, BMS-986036은 또한 지질, 아디포넥틴 및 프로-C3 수준을 개선시켰다. 중요하게는, BMS-986036의 안전성 프로파일은 MB130-002 및 본 연구에서 비교가능하였고, 이는 16-주 기간에 걸쳐 주로 경증인 위장 증상의 증가된 빈도, 약물-유도된 간 손상 사례 없음, ECG 또는 활력 징후의 임상적으로 유의한 변화 없음, 및 골 밀도 (DXA에 의해 측정된 바와 같음)에 대한 명백한 효과 없음을 특징으로 하였다. 함께 고려할 때, 데이터는 BMS-986036 치료가 내약성이 우수하고, NASH를 갖는 환자에서 뿐만 아니라 NASH에 대한 위험 인자를 갖는 환자에서 간 및 대사 파라미터에 대한 양성 효과를 갖는다는 것을 제안한다. 요약하면, BMS-986036은 NASH 대상체에서 16주 동안 BMS-986036 20 mg QW 또는 BMS-986036 10 mg QD의 용량으로 SC 주사에 의해 투여되는 경우 일반적으로 안전하고 내약성이 우수하였다. 결과는 BMS-986036이 NASH에서 지방증, 간 손상 및 섬유증에 대한 유익한 효과를 갖는다는 것을 제안한다: BMS-986036 10 mg QD 및 BMS-986036 20 mg QW 레지멘 둘 다는 위약과 비교하여 제16주에 간 지방 분율을 유의하게 감소시켰다. 위약에 비해, BMS-986036 QD 및 QW는 섬유증의 바이오마커 (MRE 및 프로-C3), 대사 파라미터 (아디포넥틴 및 지질), 및 간 손상의 마커 (ALT 및 AST)에서의 개선과 연관이 있었다. MRI-PDFF, 프로-C3, LDL, ALT 및 AST에서의 개선은 용량-의존성을 나타내었다. 각각의 마커 (LDL 제외)의 경우, 최대로 관찰된 치료 효과 차이의 대부분은 BMS-986036 20 mg QW로 달성되었다. BMS-986036의 C최저치 (C-말단 무손상 및 전체)는 20 mg QW에 비해 10 mg QD의 경우 더 높았다. C최저치 수준은 정상 상태가 달성된 후 안정적으로 유지되었다.

실시예 2: 기준선 혈청 프로-C3은 BMS-986036에 대한 반응을 예측한다: NASH에서 다기관 임상 시험의 2차 분석

실시예 1로부터의 임상 시험의 본 사후 분석의 목적은 BMS-986036에 대한 치료 반응의 기준선 예측인자를 평가하는 것이었다.

사후 분석은 기준선 특징 및 대사, 지방증, 간 손상 및 섬유증의 마커에서의 변화 사이의 관계를 평가하였다. 사정은 제2형 당뇨병 (T2DM) 상태, 간 생검 등급 (NAFLD 활성 스코어 [NAS]) 및 섬유증 병기 (NASH CRN 기준) 및 혈청 프로-C3 수준 (≥20 vs <20 ng/mL)을 포함하였다. 간 및 대사 마커는 기준선 및 제16주에 사정되었으며, 간 지방 (MRI-PDFF), 간 경직도 (MRE) 및 혈청 바이오마커: 프로-C3, ALT, AST, 아디포넥틴, LDL, HDL, 히알루론산 (HA), PAI-1, 및 CK-18 (시토케라틴-18)을 포함하였다. 이러한 분석의 목적을 위해, BMS-986036 군 (20 mg QW [n=23] vs 10 mg QD [n=25])을 합하고, 위약군 (n=26)을 별도로 분석하였다. 크루스칼-왈리스 검정을 사용하여 통계적 비교를 수행하였다.

평균 기준선 프로-C3 수준은 일반적으로 BMS-986036 치료군에 걸쳐 일관적이었고, 여기서 대부분의 환자 (67%, [28/42])는 <20 ng/mL의 기준선 프로-C3 수준을 가졌다. BMS-986036-치료된 환자 (n=48)에서, 기준선 혈청 프로-C3 수준 ≥20 ng/mL는 <20 ng/mL와 비교하여 MRE에서의 더 큰 감소 (중앙값 % 변화: -16.4% vs 6.0%, P=.0198) 및 프로-C3 수준의 더 큰 저하 (중앙값 % 변화: -34.9% vs -23.1%, P=.08)와 연관이 있었다 (도 11a-11b). 기준선 프로-C3 수준은 다른 간 또는 대사 바이오마커를 통해 평가된 BMS-986036-치료 반응을 예측하지 않았다. T2DM 상태, NAS 또는 섬유증 병기를 포함한 다른 기준선 특징은 BMS-986036-치료된 환자에서 바이오마커 반응에 명확하게 영향을 미치지 않았다. 위약군에서, 프로-C3 수준을 포함한 기준선 특징은 사정된 바이오마커 반응에서의 차이와 명확하게 연관이 없었다.

NASH에서의 이러한 2상 임상 시험에서, 높은 기준선 프로-C3 수준은 BMS-986036-치료된 환자에서 섬유증 및 간 경직도의 바이오마커 (프로-C3 및 MRE)에서의 개선과 연관이 있었다. 역으로, 섬유증 중증도를 포함한 다른 기준선 특징은 BMS-986036 치료에 대한 반응을 예측하는 것으로 보이지 않았다. 이들 결과는 BMS-986036에 대한 치료 반응에 대한 예측인자로서의 및 치료를 위한 이상적인 NASH 환자를 확인하기 위한 잠재적 대용 마커로서의 혈청 프로-C3의 용도를 뒷받침한다.

한편, 간 지방 분율에서의 ≥30% 감소를 갖는 환자는 <30%를 갖는 환자에 비해 프로-C3, ALT, AST 및 CK-18에서의 유의하게 더 큰 저하를 가졌다 (도 12a-12d). 또한, ≥15%의 간 경직도에서의 감소는 감소 <15%와 비교하여 프로-C3, HA에서의 저하 및 HDL에서의 증가와 연관이 있었다 (도 13a-13c).

SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY <120> METHODS FOR TREATING NONALCOHOLIC STEATOHEPATITIS (NASH) USING A MODIFIED FIBROBLAST GROWTH FACTOR 21 (FGF-21) <130> MXI-609PC <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/640,211 <151> 2018-03-08 <150> 62/571,960 <151> 2017-10-13 <150> 62/556,179 <151> 2017-09-08 <160> 3 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 181 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln Val 1 5 10 15 Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala His 20 25 30 Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln Ser 35 40 45 Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile Gln 50 55 60 Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp Gly 65 70 75 80 Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe Arg 85 90 95 Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Gln Ser Glu Ala His 100 105 110 Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp Pro 115 120 125 Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro Pro 130 135 140 Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp Val 145 150 155 160 Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg Ser 165 170 175 Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 2 <211> 182 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <220> <221> MOD_RES <222> (109)..(109) <223> Para-acetyl phenylalanine <400> 2 Met His Pro Ile Pro Asp Ser Ser Pro Leu Leu Gln Phe Gly Gly Gln 1 5 10 15 Val Arg Gln Arg Tyr Leu Tyr Thr Asp Asp Ala Gln Gln Thr Glu Ala 20 25 30 His Leu Glu Ile Arg Glu Asp Gly Thr Val Gly Gly Ala Ala Asp Gln 35 40 45 Ser Pro Glu Ser Leu Leu Gln Leu Lys Ala Leu Lys Pro Gly Val Ile 50 55 60 Gln Ile Leu Gly Val Lys Thr Ser Arg Phe Leu Cys Gln Arg Pro Asp 65 70 75 80 Gly Ala Leu Tyr Gly Ser Leu His Phe Asp Pro Glu Ala Cys Ser Phe 85 90 95 Arg Glu Leu Leu Leu Glu Asp Gly Tyr Asn Val Tyr Xaa Ser Glu Ala 100 105 110 His Gly Leu Pro Leu His Leu Pro Gly Asn Lys Ser Pro His Arg Asp 115 120 125 Pro Ala Pro Arg Gly Pro Ala Arg Phe Leu Pro Leu Pro Gly Leu Pro 130 135 140 Pro Ala Pro Pro Glu Pro Pro Gly Ile Leu Ala Pro Gln Pro Pro Asp 145 150 155 160 Val Gly Ser Ser Asp Pro Leu Ser Met Val Gly Pro Ser Gln Gly Arg 165 170 175 Ser Pro Ser Tyr Ala Ser 180 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Cys Pro Thr Gly Pro Gln Asn Tyr Ser Pro 1 5 10

Claims

비알콜성 지방간염 (NASH)을 갖는 환자를 치료하는 방법으로서,
(a) 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하고,
(b) 혈청 프로-C3 수준이 10 ng/ML 초과인 경우에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여하는 것
을 포함하는 방법.
10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
NASH를 갖는 환자를 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)로 치료하는 방법으로서, 여기서 환자는 치료 전 10 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 가지며, NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 FGF-21을 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
NASH를 갖는 환자를 치료하는 방법으로서,
(1) 환자로부터의 혈액 샘플을 수득하거나 또는 수득했고,
(2) 10 ng/ML 초과인 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하거나 또는 결정했고,
(3) 혈청 프로-C3 수준이 결정된 후에 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여하는 것
을 포함하는 방법.
변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법으로서, 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것인 방법.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)의 환자에게의 투여 전 혈청 프로-C3 수준이 약 11 ng/ML, 12 ng/ML, 13 ng/ML, 14 ng/ML, 15 ng/ML, 16 ng/ML, 17 ng/ML, 18 ng/ML, 19 ng/ML, 20 ng/ML, 21 ng/ML, 22 ng/ML, 23 ng/ML, 24 ng/ML 또는 25 ng/ML 초과인 방법.
제6항에 있어서, 혈청 프로-C3 수준이 약 15 ng/ML 초과인 방법.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 프로-C3 수준 또는 수준들이 FDA-승인 테스트에 의해 측정되는 것인 방법.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 프로-C3 수준 또는 수준들이 면역검정, 면역화학, 면역조직화학 검정, 뉴클레오프로브 검정, 계내 혼성화, 형광 RNA 프로브, RT-PCR, 마이크로어레이 전사 검정, 또는 RNA 전사 검정을 사용하여 측정되는 것인 방법.
제9항에 있어서, 면역검정이 효소-연결 면역흡착 검정 (ELISA) 또는 방사성면역검정 (RIA)인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21이, 폴리펩티드 중 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 서열식별번호:1의 잔기 108에 상응하는 위치에 있고; (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결된 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21이, 서열식별번호:1의 위치 108에서의 아미노산이 비-천연적으로 코딩된 아미노산에 의해 치환된 것을 제외하고는, 서열식별번호:1의 폴리펩티드를 포함하며, 여기서 (a) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 파라-아세틸 페닐알라닌을 포함하고, (b) 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 중합체에 연결되는 것인 방법.
제11항에 있어서, 상기 폴리(에틸렌 글리콜)이 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 비-천연적으로 코딩된 아미노산이 옥심 연결을 통해 상기 중합체에 연결되는 것인 방법.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21이 서열식별번호:2를 포함하는 것인 방법.
제15항에 있어서, 변형된 FGF-21이 약 30 kDa의 평균 분자량을 갖는 폴리(에틸렌 글리콜)을 포함하는 것인 방법.
제16항에 있어서, 폴리(에틸렌 글리콜)이 파라-아세틸 페닐알라닌에 연결되는 것인 방법.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21이 20 mg의 1주 1회 용량 또는 10 mg의 1일 1회 용량으로 투여되는 것인 방법.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제의 투여를 포함하는 방법.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래하는 것인 방법.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 환자에서 프로-C3의 정상 혈청 수준을 향한 이동을 생성하는 것인 방법.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21로의 치료가 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도가 자기 공명 탄성영상 (MRE)에 의해 평가되는 것인 방법.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21로의 치료가 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 15% 이상의 감소를 초래하며, 여기서 간 경직도가 MRE에 의해 평가되는 것인 방법.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21로의 치료가 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율이 자기 공명 영상화-추정 양성자 밀도 지방 분율 (MRI-PDFF)에 의해 평가되는 것인 방법.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21로의 치료가 치료 전 환자의 간 지방 분율과 비교하여 환자에서 간 지방 분율에서의 30% 이상의 감소를 초래하며, 여기서 간 지방 분율이 MRI-PDFF에 의해 평가되는 것인 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 변형된 FGF-21로의 치료가 치료 전 환자의 간 경직도와 비교하여 환자에서 간 경직도에서의 감소 및 치료 전 환자의 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 환자에서 혈청 프로-C3 수준에서의 저하를 초래하며, 여기서 간 경직도가 자기 공명 탄성영상 (MRE)에 의해 평가되며, 여기서 환자가 변형된 FGF-21로의 치료 전 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 것인 방법.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 치료가 피로, 권태, 체중 감소 및/또는 우상 사분역 복부 불쾌감의 감소 또는 중단으로 이루어진 군으로부터 선택된 환자에서의 적어도 하나의 치료 효과를 생성하는 것인 방법.
환자에서 NASH를 치료하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21로서, 여기서 방법은 NASH를 치료하기에 충분한 양 및 빈도로 변형된 섬유모세포 성장 인자 21 (FGF-21)을 환자에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 10, 15 또는 20 ng/ML 초과의 혈청 프로-C3 수준을 갖는 것으로 결정된 것인 변형된 FGF-21.
변형된 FGF-21로의 치료에 대한 NASH를 갖는 환자의 반응성을 모니터링하는 방법에 사용하기 위한 변형된 FGF-21로서, 여기서 변형된 FGF-21로의 치료 전에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준과 비교하여 치료 동안 또는 후에 수득된 환자로부터의 혈액 샘플 중 저하된 혈청 프로-C3 수준은 환자가 변형된 FGF-21로의 치료에 대한 반응성이 있음을 나타내는 것인 변형된 FGF-21.
변형된 FGF-21로의 치료에 적합한 비알콜성 지방간염 (NASH)을 갖는 환자를 확인하는 방법으로서, 시험관내 검정을 사용하여 환자로부터의 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 혈액 샘플 중 혈청 프로-C3 수준은 10, 15 또는 20 ng/ML 초과인 방법.