JP2017522368A - グルカゴン受容体アンタゴニスト抗体を使用する１型糖尿病の治療方法 - Google Patents

グルカゴン受容体アンタゴニスト抗体を使用する１型糖尿病の治療方法 Download PDF

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Abstract

本開示はグルカゴン受容体遮断薬を使用して１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）を治療するための方法に関する。より具体的には、本開示はかなり低めの用量のインスリン補充を使用してＴ１Ｄを治療するための方法、またはインスリン補充が無いときでも抗原結合性拮抗タンパク質、例えば、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合し、その機能を弱める完全ヒト抗体を使用してＴ１Ｄを治療するための方法に関する。【選択図】図３

Description

関連特許出願
本願は、それぞれ参照によりその全体が本明細書に援用される２０１４年６月８日に出願された米国特許仮出願第６２／００９３２８号と２０１４年１２月３日に出願された米国特許仮出願第６２／０８７１８２号の利益を主張する。
技術分野
糖尿病は世界中の疾患による主要死因のうちの１つである。１型糖尿病（Ｔ１Ｄ；「１型真性糖尿病」、「若年発症型糖尿病」および「免疫介在型糖尿病」としても知られる）は最も高い罹患率と死亡率を有する最も重篤な疾患である。Ｔ１Ｄの正確な原因は完全には理解されていないが、Ｔ１Ｄは膵島中のインスリン産生性β細胞が自己反応性Ｔ細胞によって破壊される多因子性自己免疫疾患であると考えられている。その結果生じるインスリン欠乏により血糖と尿糖が増加することになる。他の点では、Ｔ１Ｄに冒されている大半の人々は発症したときには健康であり、健康体重を有するが、比較的に短時間のうちに診断されなければ急激に、且つ、危険なほどに体重を失うことがあり得る。食事と運動だけではＴ１Ｄから回復する、またはＴ１Ｄを予防することができない。現在のところＴ１Ｄに対してとることができる予防手段は無い。Ｔ１Ｄは短期と長期の両方で多数の重篤な合併症を引き起こす場合があり得、例えば、短期では未治療のＴ１Ｄは糖尿病性ケトアシドーシスを引き起こす場合があり得、長期では眼の損傷、内臓損傷等を引き起こす場合があり得る。失われたホルモンが外因性インスリン注射によって補われるか、または破壊された膵臓β細胞の機能置換が行われる（例えば、膵臓移植または膵島細胞移植）ことがない限り、Ｔ１Ｄは致死的であり得る。
インスリン療法はＴ１Ｄの主要な治療介入である。しかしながら、狭い生理的範囲内に血糖レベルを維持するために必要であるグルコース応答性の身体の要求に合うように外因性インスリンを管理することが困難である点、例えば、外因性インスリンだけではグルカゴンの合成と放出を抑制するためにα細胞に届く傍分泌レベルのインスリン分泌を達成することができない点でインスリンは良薬ではない。外因性インスリンだけで糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）を正常化させることができるが、重篤な医原性高インスリン血症の発生を対価にしていることが多い。そして、不運なことに、インスリン療法は一生にわたって続けられなくてはならず、それによって重大な懸念のままである長期の悪影響が与えられる。例えば、重篤で慢性的な高インスリン血症は脂肪毒性の誘導、心血管罹病、および生命に関わる低血糖症と関連付けられている。Ｔ１Ｄの人はインスリン注射または注入によって生き永らえることができるが、それらはその疾患を治すこともなければ、腎不全、失明、神経損傷、心臓発作、脳卒中、および妊娠合併症を含み得るその疾患の重篤な副次的影響の可能性を必ずしも抑止することもない。Ｔ１Ｄの発症を予防または遅延化する代替方法を発見することを目標とする様々な進行中の治験があるが、恒久的に成功が示されたものはこれまでに無く、糖尿病の患者または糖尿病の発症リスクがある患者を治療するより好適な方法の高い必要性が残されている。
グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）はＧタンパク質共役受容体セクレチンサブファミリー（ファミリーＢ）のメンバーである。ＧＣＧＲは主に肝臓で発現し、それは肝臓では肝臓でのグルコース産生を調節し、腎臓では糖新生におけるその役割を反映し、膵島のβ細胞ではβ細胞に対して傍分泌効果を有し、隣接するα細胞から分泌されるグルカゴンの役割を示唆する。高めの基底グルカゴンレベルと食後のグルカゴン分泌の抑制欠如がヒトにおいて糖尿病状態に寄与することが研究から示されている（Ｍｕｌｌｅｒら著、Ｎ Ｅｎｇ Ｊ Ｍｅｄ誌、第２８３巻：１０９〜１１５頁（１９７０年））。ヒトＧＣＧＲに特異的に結合し、その機能を弱める単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を使用してグルカゴンの産生または機能を標的とすることによって２型糖尿病モデルにおける血糖の制御および低下と耐糖能の改善が可能になることが示されている（例えば、米国特許第７９４７８０９号明細書（Ｙａｎら）を参照されたい）。Ｔ１Ｄの患者またはＴ１Ｄの発症リスクがある患者を効果的に治療するそのようなアンタゴニスト性抗原結合タンパク質の能力はまだ充分に評価されていない。
本開示は、Ｔ１Ｄに対する改善型の効果的な治療法がヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離抗原結合性拮抗タンパク質によって提供され得るという本発明者らのユニークな洞察に部分的に基づく。本発明者らは、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の投与によってもたらされる有益な効果、すなわち、グルカゴン受容体の遮断によるグルカゴン作用の弱化によってインスリン補充の効果が補強および贈呈されてインスリン補充量が標準的なインスリン１日投与量よりもかなり少なくなること、あるいは、インスリン補充を必要とせずにＴ１Ｄの治療が可能になり、それによってより良好な糖尿病管理が達成され、一方で低血糖症、高インスリン血症および高脂血症をはじめとするインスリン単独療法に伴う合併症およびその関連のアテローム硬化性心血管合併症が著しく緩和されることを提唱する。
したがって、１つの態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療するための方法であって、前記患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法に関する。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
様々な実施形態において、前記患者は自己免疫型Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は化学誘導性Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は様々な医学的状態下で医薬または外科手術によって機能不全になった膵臓、または膵臓の除去のために生じたＴ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は次の発見、すなわち（ａ）低インスリン血症と併せた高血糖症、（ｂ）膵臓β細胞の喪失の証拠と併せた高血糖症、（ｃ）インスリンに対する正常な血糖応答と併せた高血糖症、（ｄ）ケトアシドーシスと併せた高血糖症、（ｅ）インスリン依存性と併せた高血糖症、または（ｆ）高グルカゴン血症と併せた高血糖症の内の１つ以上の発見に基づいてＴ１Ｄであると診断されている。様々な実施形態において、「生理学的に不適当な量」が１型糖尿病の表現型を減弱化、阻止、抑制、低減、または軽減するには不充分である量として本明細書において規定される場合、前記患者は「生理学的に不適当な量」のインスリンを有し得る、または示し得る。したがって、そのような患者は非糖尿病患者から、および／または例えばインスリン抵抗性およびインスリン非感受性を特徴とする２型糖尿病の臨床症状を有する、または示す患者から区別される。
別の態様では本開示はＴ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、それらの１つ以上の症状は、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、多尿症（頻尿）、または疲労から選択される。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療するための方法であって、前記患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法に関する。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示はＴ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、それらの１つ以上の症状は、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、疲労、多尿症（頻尿）、または腎臓透析から選択される。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示はＴ１Ｄの発症リスクがある患者（例えば、平均よりも高いＴ１Ｄの発症リスクを有する患者）または初発のＴ１Ｄを有し、且つ、低残留性インスリン産生を有する患者を治療するための方法を提供する。これらの治療方法は、（ａ）Ｔ１Ｄの発症リスクがある（例えば、上昇したリスクがある）患者を特定すること、および（ｂ）前記患者にインスリン補充を行うことなく（ｉ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することによって実行され得る。様々な実施形態において、前記方法は（ｉｉ）インスリン補充をさらに含む。Ｔ１Ｄの発症リスクがあると特定されたその患者は、例えば、臨床的に明らかな耐糖能障害があるか、またはそれがないＴ１Ｄの家族歴を有していること、または耐糖能障害、および膵臓β細胞の喪失もしくは機能不全の証拠があることに基づいて診断された患者であり得る。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者において高血糖症を元に戻すための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、前記方法は（ｉｉ）インスリン補充をさらに含む。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者において膵島β細胞のインスリン分泌機能を増強するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、前記方法は（ｉｉ）インスリン補充をさらに含む。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
様々な実施形態において、前記単離抗体または抗原結合性抗体断片は少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する。
様々な実施形態において、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、静脈内注射または注入、筋肉内注射または注入、皮下注射または注入、腹膜内注射または注入、経皮注射または注入、動脈内注射または注入、胸骨内注射または注入、髄腔内注射または注入、脳室内注射または注入、尿道内注射または注入、頭蓋内注射または注入、滑膜内注射または注入を介して前記患者に全身投与され得る医薬組成物を形成するために薬学的に許容可能な担体と混合される。
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された動物についての体重（ｇ）に対するインビボ効果であって、１２週間にわたってその抗体の効力について評価されたそのインビボ効果を示す折れ線グラフである。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された動物についての摂食量（ｇ／日）に対するインビボ効果であって、１２週間にわたってその抗体の効力について評価されたそのインビボ効果を示す折れ線グラフである。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体の空腹時血糖（ｍｍｏｌ／Ｌ）レベルに対するインビボ効果であって、１２週間にわたってその抗体の効力について評価されたそのインビボ効果を示す折れ線グラフである。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における抗ＧＣＧＲ抗体の様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）での（処置から１２週間後に測定された）血中ＨｂＡ１ｃ（％）レベルに対するインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かってベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのＨｂＡ１ｃレベル（％）を表す。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体の（それぞれ処置から１２週間後に測定された）アルブミン（ＡＬＢ）（ｇ／Ｌ）レベルと全タンパク質（ＴＰ）（ｇ／Ｌ）レベルに対するインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かってベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についての血中ＡＬＢ（ｇ／Ｌ）レベル、ならびにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についての血中ＴＰ（ｇ／Ｌ）レベルを表す。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体の（処置前（基線）および処置から１２週間後に測定された）インスリン（ｎｇ／ｍＬ）レベルに対するインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かってベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についての基線インスリン（ｎｇ／ｍＬ）レベル、ならびにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についての第１２週インスリン（ｎｇ／ｍＬ）レベルを表す。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体の（それぞれ処置から１２週間後に測定された）Ｃ−ペプチド（ｐｇ／ｍＬ）レベルとグルカゴン（ｐｇ／ｍＬ）レベルに対するインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かってベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのＣ−ペプチド（ｐｇ／ｍＬ）レベル、ならびにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのグルカゴン（ｐｇ／ｍＬ）レベルを表す。
ＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体の（それぞれ処置から１２週間後に測定された）ＧＬＰ−１（ｐｍｏｌ／Ｌ）レベル、アセト酢酸（ＡｃＡｃ）（ｍＭ）レベルおよびβ−ヒドロキシ酪酸（ＢＯＨ）（ｍＭ）レベルに対するインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かってベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのＧＬＰ−１（ｐｍｏｌ／Ｌ）レベル、ベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのＡｃＡｃ（ｍＭ）レベル、ならびにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのＢＯＨ（ｍＭ）レベルを表す。
様々な用量の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後の数匹のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスに由来する様々な膵臓切片の組織学的ＨＥ染色の結果を示す図である。
１２週間にわたって抗ＧＣＧＲ抗体で処置されたＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスに由来する膵臓切片に対して抗インスリン抗体と抗グルカゴン抗体を用いた免疫組織化学二重染色の結果を示す図である。ＡＢＣ−ＨＲＰ方法を用いてアルファ（α）細胞を染色した。そして、ＤＡＢ基質によって濃褐色（矢印）として陽性細胞を再調査した。抗インスリン抗体特異的膵臓ベータ（β）細胞をＡＢＣ−ＡＰキットで染色し、インスリンの分泌に関するβ細胞の回復についての陽性の証拠を示した。アルカリホスファターゼ基質を用いて赤色（矢印）に見られるように陽性標識細胞を再調査した。
様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後の数匹のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスに由来する膵臓組織切片中の膵臓面積を示す棒グラフである。 様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後の数匹のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスに由来する前記膵臓組織切片中の膵島面積を示す棒グラフである。 様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後の数匹のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスに由来する前記膵臓組織切片中の膵島のパーセンテージを示す棒グラフである。
様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスの各々における膵島の数を示す棒グラフである。 様々な用量（０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇ）の抗ＧＣＧＲ抗体で処置された処置から１２週間後のＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスの各々におけるインスリン面積とグルカゴン面積を示す棒グラフである。図１２Ｂについて、棒は左から右へ向かって処置から１２週間後の時点でのベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのインスリン面積、ならびにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、および７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体についてのグルカゴン面積を表す。
８日間にわたって緩衝液（ｎ＝５）または５ｍｇ／ｋｇの抗グルカゴン受容体抗体ＲＥＭＤ−４７７（ｎ＝６）で処置されたＴ１Ｄのモデルであるアロキサン誘導糖尿病マウスにおける血糖（ｍｇ／ｄｌ）レベルを示す図である。
非糖尿病マウスおよびアロキサン誘導糖尿病マウスにおけるリン酸化ＣＲＥＢ（Ｐ−ＣＲＥＢ）レベルを示す棒グラフである。 非糖尿病マウスおよびアロキサン誘導糖尿病マウスにおけるＰＥＰＣＫ発現レベルを示す棒グラフである。
緩衝液で処置された非糖尿病マウス、緩衝液で処置されたアロキサン誘導糖尿病マウス、および５ｍｇの抗グルカゴン受容体抗体ＲＥＭＤ−４７７で処置された糖尿病マウスにおけるｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（Ｐ−ＣＲＥＢ）レベルを示す棒グラフである。 緩衝液で処置された非糖尿病マウス、緩衝液で処置されたアロキサン誘導糖尿病マウス、および５ｍｇの抗グルカゴン受容体抗体ＲＥＭＤ−４７７で処置された糖尿病マウスにおけるホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼＰＥＰＣＫ発現レベルを示す棒グラフである。
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導Ｔ１Ｄマウス試験における様々なＧＣＧＲ抗体（毎週７．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与）の空腹時血糖（ｍｍｏｌ／Ｌ）レベルに対するインビボ効果であって、処置後１３日間にわたってその抗体の効力について評価されたそのインビボ効果を示す棒グラフである。棒は左から右へ向かって１０日目（処置日）におけるベヒクル、ＲＥＭＤ２．５９拮抗作用性抗体、ＲＥＭＤ２．４５非拮抗作用性抗体およびＲＥＭＤ２．１０拮抗作用性抗体についての空腹時血糖（ｍｍｏｌ／Ｌ）レベル、１７日目（処置後７日目）におけるベヒクル、ＲＥＭＤ２．５９抗体、ＲＥＭＤ２．４５抗体およびＲＥＭＤ２．１０抗体についての空腹時血糖（ｍｍｏｌ／Ｌ）レベル、および２２日目（処置後１２日目）におけるベヒクル、ＲＥＭＤ２．５９抗体、ＲＥＭＤ２．４５抗体およびＲＥＭＤ２．１０抗体についての空腹時血糖（ｍｍｏｌ／Ｌ）レベルを表す。
本明細書において別途定義されない限り、本開示と関連して使用される科学用語および技術用語は当業者によって一般的に理解される意味を持つものとする。さらに、文脈から特に必要とされない限り、単数形の用語は複数のものを含むものとし、複数形の用語は単数のものを含むものとする。概して、本明細書に記載される細胞と組織の培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学、およびタンパク質と核酸の化学、およびハイブリダイゼーションと関連して使用される命名法およびそれらの技術は当技術分野において一般的に使用され、且つ、よく知られているものである。概して、本開示の方法および技術は別段の指示が無い限り当技術分野においてよく知られている従来法に従って、ならびに本明細書を通して引用および議論される様々な一般的参照文献およびより特定的な参照文献に記載されているように実施される。例えば、参照により本明細書に援用されるＳａｍｂｒｏｏｋら著、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版局、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク州（１９８９年）、およびＡｕｓｕｂｅｌら著、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、グリーン・パブリッシング・アソシエーツ（１９９２年）、ならびにＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ著、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、コールド・スプリング・ハーバー研究所出版局、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク州（１９９０年）を参照されたい。酵素反応および精製技術は製造業者の仕様書に従って、当技術分野において一般的に遂行されるように、または本明細書に記載されるように実施される。本明細書に記載される分析化学、有機合成化学、および医薬化学と関連して使用される命名法ならびにそれらの実験技法および実験技術は当技術分野において一般的に使用され、且つ、よく知られているものである。化学合成、化学分析、医薬調製、製剤、および送達、および患者の治療には標準的技術が使用される。
定義
「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語はそれぞれペプチド結合によって相互に結合した２個以上のアミノ酸残基を含む分子を指す。これらの用語は、例えば、あるタンパク質配列の天然タンパク質と人工タンパク質、タンパク質断片およびポリペプチド類似体（改変タンパク質、変異体、および融合タンパク質等）ならびに翻訳後に改変されたか、または他の場合では共有結合または非共有結合によって改変されたタンパク質を包含する。ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質は単量体でも多量体でもあり得る。ある特定の実施形態において、「ペプチド」、「ポリペプチド」、および「タンパク質」はペプチド結合を介して連結しているα炭素を有するアミノ酸鎖である。したがって、その鎖の一方の末端（アミノ末端）の末端アミノ酸は遊離アミノ基を有し、その鎖の他方の末端（カルボキシ末端）の末端アミノ酸は遊離カルボキシル基を有する。本明細書において使用される場合、「アミノ末端」（Ｎ末端と略される）という用語はペプチドのアミノ末端のアミノ酸上の遊離α−アミノ基、またはそのペプチド内の他のいずれかの位置にあるアミノ酸のα−アミノ基（ペプチド結合に関与しているときはイミノ基）を指す。同様に、「カルボキシ末端」という用語はペプチドのカルボキシ末端上の遊離カルボキシル基、またはそのペプチド内の他のいずれかの位置にあるアミノ酸のカルボキシル基を指す。ペプチドにはまた、アミド結合と対照的にエーテル結合によって結合したアミノ酸などのペプチド模倣物を含むがこれらに限定されないあらゆるポリアミノ酸が基本的に含まれる。
ポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列は標準的な１文字または３文字の略記を用いて表示される。別段の指示が無い限り、ポリペプチド配列はそれらのアミノ末端を左側に有し、且つ、それらのカルボキシ末端を右側に有し、一本鎖核酸配列と二本鎖核酸配列のトップストランドはそれらの５’末端を左側に有し、且つ、それらの３’末端を右側に有する。ポリペプチドの特定の区域はアミノ酸８０〜１１９のようにアミノ酸残基番号によるか、またはＳｅｒ８０〜Ｓｅｒ１１９のようにその部位の実際の残基によって指定され得る。特定のポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列はどのくらいその配列が基準配列と異なっているか説明することによっても記載され得る。
本開示のポリペプチドにはあらゆる理由のために、例えば、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるため、（２）酸化に対する感受性を低下させるため、（３）タンパク質複合体形成向けに結合親和性を変化させるため、（４）結合親和性を変化させるため、および（５）他の物理化学的特性または機能的特性を付与または改変するために多少なりとも改変されているポリペプチドが含まれる。例えば、単一アミノ酸置換または多重アミノ酸置換（例えば、保存的アミノ酸置換）が天然配列の中に（例えば、分子間接触部を形成するドメインの外側にあるポリペプチド部分の中に）起きて良い。「保存的アミノ酸置換」は機能的に類似のアミノ酸によるアミノ酸のポリペプチド中での置換を指す。次の６群は相互に保存的置換物であるアミノ酸をそれぞれ含む。
アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、およびトレオニン（Ｔ）
アスパラギン酸（Ｄ）およびグルタミン酸（Ｅ）
アスパラギン（Ｎ）およびグルタミン（Ｑ）
アルギニン（Ｒ）およびリシン（Ｋ）
イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、およびバリン（Ｖ）
フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、およびトリプトファン（Ｗ）
「非保存的アミノ酸置換」はこれらのクラスのうちの１つのクラスのメンバーによる別のクラスのメンバーに対する置換を指す。ある特定の実施形態によると、そのような変更を行うときにアミノ酸の疎水性親水性指標を考慮して良い。それぞれのアミノ酸にはその疎水性特性と電荷特性に基づいて疎水性親水性指標が割り当てられている。疎水性親水性指標はイソロイシン（＋４．５）、バリン（＋４．２）、ロイシン（＋３．８）、フェニルアラニン（＋２．８）、システイン／シスチン（＋２．５）、メチオニン（＋１．９）、アラニン（＋１．８）、グリシン（−０．４）、トレオニン（−０．７）、セリン（−０．８）、トリプトファン（−０．９）、チロシン（−１．３）、プロリン（−１．６）、ヒスチジン（−３．２）、グルタミン酸（−３．５）、グルタミン（−３．５）、アスパラギン酸（−３．５）、アスパラギン（−３．５）、リシン（−３．９）、およびアルギニン（−４．５）である。
相互作用性生物学的機能をタンパク質に付与する際の疎水性親水性アミノ酸指標の重要性が当技術分野において理解されている（例えば、Ｋｙｔｅら著、１９８２年、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．誌、第１５７巻：１０５〜１３１頁を参照されたい）。ある特定のアミノ酸を類似の疎水性親水性指標またはスコアを有する他のアミノ酸に対して置換して良く、それでもなお類似の生物活性が保持されることが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変更を行う際に±２以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。±１以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±０．５以内の疎水性親水性指標を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。
類似のアミノ酸の置換は、特にそれによって作製された生物学的に機能的なタンパク質またはペプチドを本明細書において開示されるように免疫学的実施形態に使用するつもりである場合、親水性に基づいて効果的に行われ得ることも当技術分野において理解されている。ある特定の実施形態において、タンパク質の最大局所的平均親水性はその隣接するアミノ酸の親水性によって影響され、そのタンパク質の免疫原性と抗原性、すなわちそのタンパク質の生物学的特性と相関する。
次の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）、リシン（＋３．０）、アスパラギン酸（＋３．０±１）、グルタミン酸（＋３．０±１）、セリン（＋０．３）、アスパラギン（＋０．２）、グルタミン（＋０．２）、グリシン（０）、トレオニン（−０．４）、プロリン（−０．５±１）、アラニン（−０．５）、ヒスチジン（−０．５）、システイン（−１．０）、メチオニン（−１．３）、バリン（−１．５）、ロイシン（−１．８）、イソロイシン（−１．８）、チロシン（−２．３）、フェニルアラニン（−２．５）およびトリプトファン（−３．４）。類似の親水性値に基づいて変更を行う際に±２以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±１以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれ、±０．５以内の親水性値を有するアミノ酸の置換がある特定の実施形態に含まれる。例となるアミノ酸置換が表１に示されている。
Figure 2017522368
当業者はよく知られている技術を用いて本明細書において明記されるポリペプチドの適切な変異体を決定することができる。ある特定の実施形態において、当業者は、活性にとって重要であると考えられていない領域を標的とすることによって活性を損なうことなく変更することができる分子の適切な領域を特定することができる。他の実施形態において、当業者は類似のポリペプチドの間で保存されているそれらの分子の残基および部分を特定することができる。追加の実施形態において、生物活性または構造にとって重要であり得る領域ですら、生物活性を損なうことがない、またはポリペプチド構造に悪影響を与えることがない保存的アミノ酸置換の対象とされ得る。
加えて、当業者は類似のポリペプチド中の残基であって、活性または構造にとって重要であるそれらの残基を特定する構造機能研究を再検討することができる。そのような比較を考慮すると、当業者はあるポリペプチド中のアミノ酸残基であって、類似のポリペプチドにおける活性または構造にとって重要なアミノ酸残基に対応するそれらアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者はそのような予測された重要なアミノ酸残基に対する化学的に類似のアミノ酸置換を選択することができる。
当業者は三次元構造およびアミノ酸配列を類似のポリペプチド中のその構造と関連して分析することもできる。そのような情報を考慮すると、当業者はポリペプチドのアミノ酸残基の整列をその三次元構造に関して予測することができる。ある特定の実施形態において、そのポリペプチドの表面上にあると予測されるアミノ酸残基は他の分子との重要な相互作用に関与し得るので、当業者はそのような残基に対して極端な変更を行わないことを選択することができる。また、当業者はそれぞれの所望のアミノ酸残基の位置に単一のアミノ酸置換を有する検査変異体を作製することができる。次に、当業者に知られている活性アッセイ法を用いてそれらの変異体をスクリーニングすることができる。適切な変異体についての情報を集めるためにそのような変異体を使用することが可能である。例えば、特定のアミノ酸残基に対する変更が活性の棄損、活性の望ましくない低下、または不適切な活性を引き起こすことが分かった場合、そのような変更を有する変異体を回避することができる。言い換えると、当業者は、さらなる置換が単独で、または他の突然変異と組み合わせて回避されるべき位置にあるアミノ酸をそのような日常の実験から集められた情報に基づいて容易に決定することができる。
本明細書において使用される「ポリペプチド断片」および「短縮型ポリペプチド」という用語は、対応する完全長タンパク質と比較してアミノ末端欠失および／またはカルボキシ末端欠失を有するポリペプチドを指す。ある特定の実施形態において、断片は、例えば、少なくとも５アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長、少なくとも２５アミノ酸長、少なくとも５０アミノ酸長、少なくとも１００アミノ酸長、少なくとも１５０アミノ酸長、少なくとも２００アミノ酸長、少なくとも２５０アミノ酸長、少なくとも３００アミノ酸長、少なくとも３５０アミノ酸長、少なくとも４００アミノ酸長、少なくとも４５０アミノ酸長、少なくとも５００アミノ酸長、少なくとも６００アミノ酸長、少なくとも７００アミノ酸長、少なくとも８００アミノ酸長、少なくとも９００アミノ酸長、または少なくとも１０００アミノ酸長であり得る。ある特定の実施形態において、断片は、例えば、多くとも１０００アミノ酸長、多くとも９００アミノ酸長、多くとも８００アミノ酸長、多くとも７００アミノ酸長、多くとも６００アミノ酸長、多くとも５００アミノ酸長、多くとも４５０アミノ酸長、多くとも４００アミノ酸長、多くとも３５０アミノ酸長、多くとも３００アミノ酸長、多くとも２５０アミノ酸長、多くとも２００アミノ酸長、多くとも１５０アミノ酸長、多くとも１００アミノ酸長、多くとも５０アミノ酸長、多くとも２５アミノ酸長、多くとも１０アミノ酸長、または多くとも５アミノ酸長でもあり得る。断片はその末端のうちの一方または両方のどちらかに１個以上の追加アミノ酸、例えば、異なる天然タンパク質に由来するアミノ酸の配列（例えば、Ｆｃドメインまたはロイシンジッパードメイン）または人工アミノ酸配列（例えば、人工リンカー配列）をさらに含み得る。
本明細書において使用される「ポリペプチド変異体」および「ポリペプチド突然変異体」という用語は、あるアミノ酸配列を備え、別のポリペプチド配列との関連で１個以上のアミノ酸残基がそのアミノ酸配列に挿入され、そのアミノ酸配列から欠失され、および／またはそのアミノ酸配列に置換されているポリペプチドを指す。ある特定の実施形態において、挿入、欠失、または置換されるアミノ酸残基の数は、例えば、少なくとも１アミノ酸長、少なくとも２アミノ酸長、少なくとも３アミノ酸長、少なくとも４アミノ酸長、少なくとも５アミノ酸長、少なくとも１０アミノ酸長、少なくとも２５アミノ酸長、少なくとも５０アミノ酸長、少なくとも７５アミノ酸長、少なくとも１００アミノ酸長、少なくとも１２５アミノ酸長、少なくとも１５０アミノ酸長、少なくとも１７５アミノ酸長、少なくとも２００アミノ酸長、少なくとも２２５アミノ酸長、少なくとも２５０アミノ酸長、少なくとも２７５アミノ酸長、少なくとも３００アミノ酸長、少なくとも３５０アミノ酸長、少なくとも４００アミノ酸長、少なくとも４５０アミノ酸長、または少なくとも５００アミノ酸長であり得る。本開示の変異体には融合タンパク質が含まれる。
ポリペプチドの「誘導体」は化学的に改変されているポリペプチド、例えば、別の化学部分への結合、例えばポリエチレングリコールへの結合、アルブミン（例えばヒト血清アルブミン）への結合、リン酸化、およびグリコシル化があるポリペプチドである。
「％配列同一性」という用語は本明細書において「％同一性」という用語と互換的に使用され、配列アラインメントプログラムを使用して整列させたときの２つ以上のペプチド配列の間のアミノ酸配列同一性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列の間のヌクレオチド配列同一性のレベルを指す。例えば、本明細書において使用される場合、８０％の同一性は規定のアルゴリズムによって決定される８０％配列同一性と同じ事を意味し、所与の配列が別の長さの別の配列に対して少なくとも８０％同一であることを意味する。ある特定の実施形態において、その％同一性は、例えば、所与の配列に対する少なくとも６０％の、少なくとも６５％の、少なくとも７０％の、少なくとも７５％の、少なくとも８０％の、少なくとも８５％の、少なくとも９０％の、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の、またはそれよりも高い配列同一性から選択される。ある特定の実施形態において、その％同一性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内にある。
「％配列相同性」という用語は本明細書において「％相同性」という用語と互換的に使用され、配列アラインメントプログラムを使用して整列させたときの２つ以上のペプチド配列の間のアミノ酸配列相同性のレベル、または２つ以上のヌクレオチド配列の間のヌクレオチド配列相同性のレベルを指す。例えば、本明細書において使用される場合、８０％の相同性は規定のアルゴリズムによって決定される８０％配列相同性と同じ事を意味し、したがって所与の配列のホモログがその所与の配列のある長さにわたって８０％を超える配列相同性を有することを意味する。ある特定の実施形態において、その％相同性は、例えば、所与の配列に対する少なくとも６０％の、少なくとも６５％の、少なくとも７０％の、少なくとも７５％の、少なくとも８０％の、少なくとも８５％の、少なくとも９０％の、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の、またはそれより高い配列相同性から選択される。ある特定の実施形態において、その％相同性は、例えば、約６０％〜約７０％、約７０％〜約８０％、約８０％〜約８５％、約８５％〜約９０％、約９０％〜約９５％、または約９５％〜約９９％の範囲内にある。
２つの配列間の同一性を決定するために使用され得る例となるコンピュータープログラムにはＮＣＢＩウェッブサイトにおいてインターネット上で公開されているＢＬＡＳＴプログラム、例えば、ＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮからなるパッケージが含まれるがこれらに限定されない。Ａｌｔｓｃｈｕｌら著、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第２１５巻：４０３〜１０頁（公表された初期設定、すなわちｗ＝４、ｔ＝１７のパラメーターに特に関連して）およびＡｌｔｓｃｈｕｌら著、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．誌、第２５巻：３３８９〜３４０２頁も参照されたい。配列検索は、所与のアミノ酸配列をＧｅｎＢａｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓおよび他の公開データベースの中のアミノ酸配列と比較して評価するときにＢＬＡＳＴＰプログラムを使用して実行されることが典型的である。ＢＬＡＳＴＸプログラムは全てのリーディングフレームで翻訳された核酸配列をＧｅｎＢａｎｋ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓおよび他の公開データベースの中のアミノ酸配列に対して検索することにとって好ましい。ＢＬＡＳＴＰとＢＬＡＳＴＸの両方は１１．０のオープンギャップペナルティ―と１．０の伸長ギャップペナルティ―という初期パラメーターを使用して実行され、且つ、ＢＬＯＳＵＭ−６２マトリックスを利用する。同文献を参照されたい。
パーセント配列同一性の算出に加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムは２つの配列間の類似性の統計分析も実施する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第９０巻：５８７３〜５７８７頁（１９９３年）を参照されたい）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される類似性の１つの基準は最小和確率（Ｐ（Ｎ））であり、それは２つのヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の間の整合が偶然に起こる確率の指標を提供する。例えば、基準核酸に対する検査核酸の比較における最小和確率が例えば約０．１未満、約０．０１未満、または約０．００１未満である場合にその核酸はその基準配列に対して類似していると考えらえる。
「単離分子」という用語は（その分子が例えばポリペプチド、ポリヌクレオチド、または抗体である場合に）その起源または誘導源によって（１）その分子の天然状態ではその分子に付随する天然結合成分と結合していない分子、（２）同じ種に由来する他の分子を実質的に含まない分子、（３）異なる種に由来する細胞によって発現される分子、または（４）自然界では生じない分子である。したがって、化学合成される分子、または自然界で起源となる細胞とは異なる細胞系で発現される分子は、その分子の天然結合成分から「単離」される。分子は、当技術分野においてよく知られている精製技術を用いて単離されることによって天然結合成分を実質的に含まないようにされても良い。分子の純度または均質性は当技術分野においてよく知られている多数の手段によってアッセイされ得る。例えば、ポリペプチド試料の純度は、当技術分野においてよく知られている技術を用いるポリアクリルアミドゲル電気泳動およびそのポリペプチドを可視化するためのそのゲルの染色を用いてアッセイされ得る。ある特定の目的のためにＨＰＬＣまたは当技術分野においてよく知られている精製のための他の手段を用いることでより高い解像度が提供され得る。
タンパク質またはポリペプチドは、試料の少なくとも約６０％〜７５％が単一種のポリペプチドを示すときに「実質的に純粋」であり、「実質的に均質」であり、または「実質的に精製」されている。実質的に純粋なポリペプチドまたはタンパク質はタンパク質試料の約５０％（重量／重量）、６０％（重量／重量）、７０％（重量／重量）、８０％（重量／重量）、または９０％（重量／重量）を構成することが典型的であり、約９５％を構成することがより一般的であり、例えば、それは９９％を超える。タンパク質の純度または均質性は、タンパク質試料のポリアクリルアミドゲル電気泳動とそれに続く当技術分野においてよく知られている染色液によるそのゲルの染色時の単一ポリペプチドバンドの視覚化などの当技術分野においてよく知られている多数の手段によって示され得る。ある特定の目的のためにＨＰＬＣまたは当技術分野においてよく知られている精製のための他の手段を用いることでより高い解像度が提供され得る。
「グルカゴン阻害剤」、「グルカゴン抑制剤」および「グルカゴンアンタゴニスト」という用語は互換的に使用される。各々がグルカゴンの作用またはシグナル伝達を検出可能なほど阻害する分子である。阻害剤によって引き起こされる阻害は、当技術分野においてグルカゴンシグナル伝達阻害を定量するものと認識および理解されているアッセイを用いてその阻害が検出可能である限りは完璧である必要がない。
「抗原結合性拮抗タンパク質」は、抗原に結合する部分を含み、且つ、その抗原へのその単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の結合を促進する構造をその抗原結合部分に採らせるスキャフォルドまたはフレームワーク部分を含んでも良いタンパク質である。抗原結合性拮抗タンパク質の例には抗体、抗体断片（例えば、抗体の抗原結合部分）、抗体誘導体、および抗体類似体が挙げられる。その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、移入されたＣＤＲまたはＣＤＲ派生物を有する代替的タンパク質スキャフォルドまたは人工スキャフォルドを含み得る。そのようなスキャフォルドには、例えば前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の三次元構造を安定化するために導入された突然変異を含む抗体由来スキャフォルド、ならびに例えば生体適合性重合体を含む完全合成スキャフォルドが含まれるがこれらに限定されない。例えば、Ｋｏｒｎｄｏｒｆｅｒら著、２００３年、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ誌、第５３巻、第１号：１２１〜１２９頁（２００３年）、Ｒｏｑｕｅら著、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．誌、第２０巻：６３９〜６５４頁（２００４年）を参照されたい。加えて、ペプチド抗体模倣物（「ＰＡＭ」）ならびにスキャフォルドとしてフィブロネクション成分を利用する抗体模倣物に基づくスキャフォルドを使用することができる。
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、天然免疫グロブリンの構造を有し得る。「免疫グロブリン」は四量体分子である。天然免疫グロブリンではそれぞれの四量体が二対の同一のポリペプチド鎖から構成され、それぞれのペアが１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に対して最終的な責任がある約１００アミノ酸〜１１０アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸からなる可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分はエフェクター機能に対して最終的な責任がある定常領域を規定する。ヒト軽鎖はカッパ軽鎖とラムダ軽鎖に分類される。重鎖はミュー、デルタ、ガンマ、アルファ、またはイプシロンとして分類され、その抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして規定する。軽鎖と重鎖の内部では可変領域と定常領域が約１２個以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はさらに約１０個多いアミノ酸からなる「Ｄ」領域も含む。Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、レイブン・プレス、ニューヨーク（１９８９年））を全般的に参照されたい（全ての目的のために参照によりその全体が援用される）。完全な免疫グロブリンが２つの結合部位を有するように各軽鎖／重鎖対の可変領域が抗体結合部位を形成する。
「抗体」は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片によって実質的または部分的にコードされ、且つ、腫瘍抗原に対する特異性または病理状態で過剰発現された分子に対する特異性を有する１つ以上のポリペプチドを含むタンパク質を指す。広く認められている免疫グロブリン遺伝子にはカッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロン、およびミューの定常領域遺伝子、ならびにこれらの遺伝子のサブタイプおよび多種多様な免疫グロブリン可変領域遺伝子が含まれる。軽鎖（ＬＣ）はカッパまたはラムダのどちらかとして分類される。重鎖（ＨＣ）はガンマ、ミュー、アルファ、デアルタ、またはイプシロンとして分類され、それらは次にそれぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥの免疫グロブリンクラスを規定する。典型的な免疫グロブリン（例えば抗体）構造単位は四量体を含む。各四量体は二対の同一のポリペプチド鎖から構成され、それぞれのペアが１本の「軽」鎖（約２５ｋＤ）と１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤ）を有する。各鎖のＮ末端は抗原認識に対して最終的な責任がある約１００アミノ酸〜１１０アミノ酸、またはそれより多くのアミノ酸からなる可変領域を規定する。
完全長抗体では各重鎖は重鎖可変領域（本明細書においてＨＣＶＲまたはＶＨと略記される）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域はＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３の３ドメイン（および幾つかの例ではＣＨ４）から構成される。各軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書においてＬＣＶＲまたはＶＬと略記される）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域はＣＬの１ドメインから構成される。ＶＨ領域とＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的な領域が散在する相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性領域にさらに細かく分割され得る。ＶＨとＶＬのそれぞれがアミノ末端からカルボキシ末端に向かって次の順序、すなわちＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成される。フレームワーク領域とＣＤＲの範囲が規定されている。様々な軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列がヒトなどの種の内部で比較的に保存されている。抗体のフレームワーク領域、すなわち構成要素である軽鎖と重鎖のフレームワーク領域複合体は三次元空間内でＣＤＲを配置および配列するように働く。免疫グロブリン分子はいずれかのタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスの分子であり得る。
抗体は完全な免疫グロブリンとして、または多数のよく特徴づけられた断片として存在する。そのような断片には標的抗原に結合するＦａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ２、Ｆ（ａｂ）’２断片、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、およびジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）が含まれる。ｓｃＦｖタンパク質は免疫グロブリンの軽鎖可変領域と免疫グロブリンの重鎖可変領域がリンカーによって結合している融合タンパク質であり、一方でｄｓＦｖではそれらの鎖の結合を安定化させるためにそれらの鎖に突然変異が形成されてジスルフィド結合が導入されている。様々な抗体断片が完全抗体の消化との関連で規定されており、当業者は化学的に、または組換えＤＮＡ法を利用することでそのような断片を新規に合成し得ることを理解する。したがって、本明細書において使用される場合、抗体という用語は、例えば、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル抗体、少なくとも２つの完全抗体から形成される多重特異性抗体（例えば、二特異性抗体）、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、単ドメイン抗体、ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、所望の生物活性を示す抗体断片、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、および上記のいずれかのエピトープ結合断片または抗原結合断片を包含する。
Ｆａｂ断片はＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインを有する一価断片であり、Ｆ（ａｂ’）２断片はヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を有する二価断片であり、Ｆｄ断片はＶＨドメインとＣＨ１ドメインを有し、Ｆｖ断片はある抗体の単腕のＶＬドメインとＶＨドメインを有し、ｄＡｂ断片はＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはＶＨドメインもしくはＶＬドメインの抗原結合断片を有する（米国特許第６８４６６３４号明細書、第６６９６２４５号明細書、米国特許出願公開第０５／０２０２５１２号明細書、第０４／０２０２９９５号明細書、第０４／００３８２９１号明細書、第０４／０００９５０７号明細書、第０３／００３９９５８号明細書、Ｗａｒｄら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３４１巻：５４４〜５４６頁（１９８９年））。
単鎖抗体（ｓｃＦｖ）は、そのタンパク質鎖が自身の上に折り重なり、且つ、一価抗原結合部位を形成することを可能にするほど充分に長いリンカー（例えば、アミノ酸残基の合成配列）を介して連続的なタンパク質鎖を形成するためにＶＬ領域とＶＨ領域が連結されている抗体である（例えば、Ｂｉｒｄら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４２巻：４２３〜２６頁（１９８８年）およびＨｕｓｔｏｎら著、１９８８年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第８５巻：５８７９〜８３頁（１９８８年）を参照されたい）。ディアボディは、２本のポリペプチド鎖を含み、同じ鎖の上にある２つのドメインの間で対合させるにはあまりに短いリンカーによって連結されたＶＨドメインとＶＬドメインをそれぞれのポリペプチド鎖が含み、そうして各ドメインが別のポリペプチド鎖上にある相補的なドメインと対合するようになっている二価抗体である（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら著、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌、第９０巻：６４４４〜４８頁（１９９３年）、およびＰｏｌｊａｋら著、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ誌、第２巻：１１２１〜２３頁（１９９４年）を参照されたい）。ディアボディのそれら２本のポリペプチド鎖が同一である場合、それらの対合により生じるディアボディは２か所の同一の抗原結合部位を有することになる。２つの異なる抗原結合部位を有するディアボディを作製するために異なる配列を有するポリペプチド鎖が使用され得る。同様に、トリボディおよびテトラボディは、それぞれ３本および４本のポリペプチド鎖を含み、且つ、それぞれ同じでも異なっていても良い３か所および４か所の抗原結合部位を形成する抗体である。
単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は１か所以上の結合部位を有し得る。１か所より多くの結合部位が存在する場合、それらの結合部位は相互に同一であっても異なっていても良い。例えば、天然ヒト免疫グロブリンは２か所の同一な結合部位を有していることが典型的であり、一方で「二特異性」または「二官能性」抗体は２か所の異なる結合部位を有する。
「ヒト抗体」という用語にはヒト免疫グロブリン配列に由来する１つ以上の可変領域と定常領域を有する全ての抗体が含まれる。１つの実施形態において、それら可変ドメインと定常ドメインの全てがヒト免疫グロブリン配列に由来する（完全ヒト抗体）。これらの抗体は様々な方法で調製されて良く、それらの方法の例が下で説明されており、それらにはヒト重鎖および／または軽鎖コード遺伝子に由来する抗体を発現するように遺伝的に改変されているマウスの目的の抗原による免疫を介した方法が含まれる。
「ヒト化抗体」は、そのヒト化抗体がヒト患者に投与されたときにその抗体が非ヒト種抗体と比較して免疫応答を誘導する可能性が低くなるように、および／または程度が低い免疫応答を誘導するように、その非ヒト種に由来する抗体の配列と１か所以上のアミノ酸置換、欠失、および／または付加によって異なる配列を有する。１つの実施形態において、ヒト化抗体を作製するために非ヒト種抗体の重鎖および／または軽鎖のフレームワークドメインと定常ドメインの中のある特定のアミノ酸に突然変異が形成される。別の実施形態において、ヒト抗体の定常ドメインが非ヒト種の可変ドメインに融合される。別の実施形態において、非ヒト抗体がヒト患者に投与されたときのその抗体のあり得る免疫原性を減少させるためにその非ヒト抗体の１つ以上のＣＤＲ配列中の１個以上のアミノ酸残基が変更されるが、そのヒト化抗体の抗原への結合がその非ヒト抗体の抗原への結合よりもあまり悪くならないようにそれらの変更されるアミノ酸残基はその抗体の抗原への免疫特異的結合にとって重要ではないか、またはそのアミノ酸配列へ変更が保存的変更で行われるかのどちらかである。ヒト化抗体の作製法の例を米国特許第６０５４２９７号明細書、第５８８６１５２号明細書および第５８７７２９３号明細書に見ることができる。
抗体を含む本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、１０−７Ｍまたはそれより低い解離定数（以下で定義されるＫｄ、または対応するＫｂ）値によって判定される高い結合親和性でヒトグルカゴン受容体などの抗原に結合する場合、その抗原に「特異的に結合」する。ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は他の種に由来するグルカゴン受容体にも同じ親和性、または異なる親和性で結合して良い。
「エピトープ」は単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質（例えば、抗体）が結合する分子のその部分である。エピトープはその分子の非連続的な部分（例えば、ポリペプチドの場合、そのポリペプチドの一次配列では連続していないが、そのポリペプチドの三次構造および四次構造の状況では抗原結合性拮抗タンパク質が結合するほど充分に相互に近傍にあるアミノ酸残基）を含み得る。
「医薬組成物」は動物またはヒトにおける製薬学的用途にとって適切な組成物を指す。医薬組成物は薬理学的有効量および／または治療有効量の活性薬剤と薬学的に許容可能な担体を含む。「薬学的に許容可能な担体」は、動物またはヒトに投与されたときに有害反応、アレルギー反応、または他の不都合な反応を引き起こすことがない組成物を指す。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」は標準的な医薬担体、ベヒクル、緩衝剤、およびリン酸緩衝生理食塩水溶液、５％ブドウ糖水溶液のような担体、および水中油型乳剤または油中水型乳剤のような乳剤、および様々な種類の湿潤剤、および／またはアジュバントのうちのいずれをも指す。適切な医薬担体と製剤はＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第２１版、２００５年、マック・パブリッシング社、イーストンの中に記載されている。「薬学的に許容可能な塩」は製薬学的用途のために化合物の中に製剤することができる、例えば、金属塩（ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、等）およびアンモニアまたは有機アミンの塩をはじめとする塩である。
本明細書において使用される場合、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の「治療有効量」は、本開示の方法および本請求の方法に準じて患者に与えられると次の生物学的活性のうちの１つを達成する、すなわち、１型糖尿病を治療する、または過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多尿症（頻尿）、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、もしくは疲労から選択されるＴ１Ｄの１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するそのようなタンパク質の量を指す。ある特定の実施形態において、そのような治療有効量は内在性インスリンを基本的に欠いている患者においてそのような活性を達成する。他の実施形態において、そのような治療有効量は外因性インスリンの供与が無い状態で患者においてそのような活性を達成する。
「治療する」、「治療すること」および「治療」という用語は生物学的障害および／またはその随伴症状のうちの少なくとも１つを緩和または抑止する方法を指す。本明細書において使用される場合、疾患、障害または病気を「緩和」することは疾患、障害、または病気の症状の重症度および／または発生頻度を低減することを意味する。さらに、本明細書における「治療」への言及には治療的処置、対症的処置、および予防的処置への言及が含まれる。
本明細書および添付されている特許請求の範囲において使用される場合、単数形の「ａ」、「ｏｒ」、および「ｔｈｅ」は文脈から明確にそうではないことが示されていない限り複数の指示物を含む。本明細書に記載される本開示の態様とその変形例にはある態様と変形例から「なる」こと、および／または「基本的になる」ことが含まれることが理解される。
本明細書中の「約」が付いた値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする変量を含む（および、その変量を説明する）。例えば、「約Ｘ」を参照する説明は「Ｘ」の説明を含む。
１型糖尿病
糖尿病は、体によるインスリンの不適切な産生、または体によるインスリンに対する不適切な応答のどちらか、またはそれら両方に起因する持続性の可変的高血糖症を特徴とする障害である。１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）（「１型真性糖尿病」および「免疫介在型糖尿病」としても知られており、以前は「若年発症型糖尿病」または「インスリン依存型糖尿病」として知られていた）は、感受性が高い個体では小児期に発症することが典型的である自己免疫障害である。自己免疫機構による大半のインスリン産生性膵臓β細胞の破壊がＴ１Ｄ発病の根底にある。手短に言うと、その生物がインスリン産生を担当する膵臓β細胞に対する免疫寛容を失い、且つ、自己抗体の産生に関連した主に細胞介在性の免疫応答を誘導し、それによってβ細胞の自己破壊が引き起こされる。
現在のところ数百万人の人々がＴ１Ｄを患っており、全体の発生率は大半の集団で毎年約３〜５％上昇している。Ｔ１Ｄの背景リスクの約５０％が環境因子に起因すると考えられているが、その残りはその障害に対する感受性に影響を与える最大で２０種類の様々な遺伝子に関する遺伝的原因に起因する。その遺伝的影響のうち、約５０％がヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩＩアレルＨＬＡ−ＤＲおよびＨＬＡ−ＤＱ内の遺伝的変異を伴うようである。
現在のところＴ１Ｄの治療法は存在しないが、早期検出によって長期合併症の可能性を低下させることができ、それによってクオリティ・オブ・ライフの改善、および入院を繰り返すことにより生じる費用の軽減の両方が可能になる。例えば、自己抗体陽性であると以前に特定された子供では診断時に入院率がかなり低く（３．３％対４４％）、１か月後の平均糖化ヘモグロビンがより低く、且つ、１年後の平均インスリン用量がより低いことが示されている。したがって、予測的検査は診断時の罹患率と医療費を減少させるようであり、且つ、診断後の早い時期に代謝機能をより好適なものにする可能性がある。
未治療の１型糖尿病は、例えば、糖尿病性ケトアシドーシス、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、および糖尿病性網膜症を引き起こし得る。失われたホルモンが注射による外因性インスリンを用いる治療によって補われるか、または破壊された膵臓β細胞の機能置換が行われる（例えば、膵臓移植または膵島細胞移植）ことがない限り、Ｔ１Ｄは致死的である。
Ｔ１Ｄは食事の管理および血糖レベルの綿密なモニタリングと共に典型的には注射またはインスリンポンプを介するインスリン補充療法によって治療される。現在のところ、インスリン療法は一生にわたって続けられなくてはならない。不運なことに、インスリン療法には短期的な欠点と長期的な欠点の両方が存在する。インスリン単独療法についての主な短期的問題は、インスリンの末梢注射によって得られる毎日のグルコースプロファイルの不安定性である。最適に管理された患者でさえも毎日の高血糖の急激な上昇と時折の低血糖の下落があり、それは筋肉および脂肪などの遠位標的のインスリン要求をはるかに超えることがなければα細胞および肝細胞などの近位標的の高いインスリン要求を満足させることができないという末梢に注射されたインスリンの多大な解剖学的欠点に起因する可能性がある。正常な膵島においてα細胞に流れる内在性インスリンの膵島内濃度は末梢注射によって生じるレベルの２０倍よりも高いと推定されており、肝臓に流れる内在性インスリンの濃度は４倍から５倍高いと推定されている。このことは、末梢血漿中の高濃度の外因性インスリンですらこれらの２つの近位インスリン標的に流れる内在性グルコース産生を制御する内在性インスリンの生理的レベルに近づくことができないことを意味している。生涯にわたるインスリン単独療法の主な長期的問題は、１型糖尿病のよく特徴づけられた一要素であるインスリン抵抗性、脂肪毒性の誘導および高脂血症の発生と関連付けられている重篤で慢性的な医原性高インスリン血症、低血糖症の発生率と重症度の上昇、およびインスリンの脂質合成作用に起因する、冠動脈疾患などの心血管障害および脳卒中を引き起こすそのアテローム硬化性合併症である。Ｔ１Ｄの人はインスリン注射または注入によって生き永らえることができるが、それらはその疾患を治すこともなければ、その疾患の重篤な副次的影響の可能性を必ずしも抑止することもない。
ある特定の極端な事例では、膵臓移植または膵島細胞移植が適正なグルコース制御の回復に役立ち、一時的な治癒として機能する場合があり得る。膵臓移植は腎臓移植も必要な場合に推奨されることが一般的である。新しい腎臓を導入することはどのみち免疫抑制剤の服用を必要とし、これによってあらゆる追加の免疫抑制治療を行うことなく糖尿病の患者に新しい機能する膵臓を導入することができることがこの理由である。膵島細胞移植では患者の肝臓に膵島細胞が注入され、そこで膵島細胞が定着し、インスリンの産生を開始する。肝臓は膵臓よりも利用しやすく、膵島細胞はその環境でインスリンを充分に産生するようなので肝臓は最も合理的な選択肢であると期待されている。しかしながら、それらの新しい細胞はちょうど他のあらゆる外来性組織の導入と同じように患者の体によって扱われる。それらの細胞は細菌の感染または皮膚移植片であるかのように免疫系によって攻撃される。したがって、患者は免疫系の活性を低下させる免疫抑制剤を伴う治療を受ける必要もある。
マウスにおける実験的化学誘導性糖尿病の受け入れられているモデルは低用量のストレプトゾトシン（ＬＤＳＴまたはＳＴＺ）の反復注射による糖尿病の誘導である（Ｌｉｋｅら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第１９３巻：４１５〜４１７頁、１９７６年；Ｏ’Ｂｒｉｅｎ、ら著、Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．誌、第１７８巻：１７６〜１８頁、１９９６年）。ストレプトゾトシンは直接的なβ細胞への細胞毒性ならびにβ細胞に対する細胞介在性自己免疫反応の開始によって糖尿病を引き起こす（Ｐａｉｋら著、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ誌、第７７巻：６１２９〜６１３３頁、１９８０年）。ＬＤＳＴ処理マウスに由来する活性化脾臓細胞の養子移入によって未処理の健康なマウスにおいて糖尿病が誘導されることが開示されている（同文献）。化学誘導性糖尿病の別の受け入れられているモデルはアロキサンの反復注射による糖尿病の誘導である（Ｓ．Ｌｅｎｚｅｎ著、Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ誌、第５１巻（第２号）：２１６〜２２６頁、２００８年）。自己免疫性Ｔ１Ｄの追加の受け入れられており、且つ、広く使用されているモデルは非肥満糖尿病（ＮＯＤ）マウスであり、そのマウスはヒトＴ１Ｄと同様に様々な期間の膵島炎の後に突然に糖尿病を発症する。ＮＯＤマウスは４〜５週齢より膵島炎を示し、様々な期間の慢性炎症の後、約１０〜２０週間後に糖尿病が発症し、大半のメスが３０週齢までに糖尿病になる（Ｄｅｌｏｖｉｔｃｈら著、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ誌、第７巻：７２７〜７３８頁、１９９７年；Ｋｉｋｕｔａｎｉら著、Ａｄｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第５１巻：２８５〜３２２頁、１９９２年）。
グルカゴン受容体および抗原結合性拮抗タンパク質
グルカゴンは、プロホルモンとプロニューロペプチドの細胞内成熟に関与する神経内分泌特異的プロテアーゼであるプロホルモン転換酵素２（ＰＣ２）の細胞特異的発現によって膵臓α細胞においてそのプレプロ型をプロセッシングして作られる２９アミノ酸ホルモンである（Ｆｕｒｕｔａら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌、第２７６巻：２７１９７〜２７２０２頁（２００１年））。生体内ではグルカゴンはインスリン作用に対する主要な逆調節性ホルモンである。空腹時にグルコースレベルの低下に応じてグルカゴン分泌が増加する。増加したグルカゴン分泌により、肝臓のグリコーゲン分解と糖新生の促進によるグルコース産生が刺激される（ＤｕｎｎｉｎｇおよびＧｅｒｉｃｈ著、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ誌、第２８巻：２５３〜２８３頁（２００７年））。したがって、グルカゴンは動物における正常なグルコースレベルの維持においてインスリンの効果を相殺する。
グルカゴンの生物学的効果には特異的な細胞表面受容体であるグルカゴン受容体への結合とその後の活性化が介在する。グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）はＧタンパク質共役受容体セクレチンサブファミリー（ファミリーＢ）のメンバーである。ヒトＧＣＧＲは４７７アミノ酸配列ＧＰＣＲであり、ＧＣＧＲのアミノ酸配列は種を越えてよく保存されている（Ｍａｙｏら著、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖ．誌、第５５巻：１６７〜１９４頁、（２００３年））。グルカゴン受容体は主に肝臓で発現し、それは肝臓では肝臓でのグルコース産生を調節し、腎臓および膵島β細胞では糖新生におけるその役割を反映する。肝臓におけるグルカゴン受容体の活性化によりアデニルシクラーゼの活性およびホスホイノシトール代謝回転が刺激され、それが引き続いてホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）、フルクトース−１，６−ビスホスファターゼ（ＦＢＰａｓｅ−１）、およびグルコース−６−ホスファターゼ（Ｇ−６−Ｐａｓｅ）を含む糖新生酵素の発現増加を引き起こす。加えて、グルカゴンシグナル伝達によってグリコーゲンホスホリラーゼが活性化され、グリコーゲンシンターゼが抑制される。高めの基底グルカゴンレベルと食後のグルカゴン分泌の抑制欠如がヒトにおいて糖尿病状態に寄与することが研究から示されている（Ｍｕｌｌｅｒら著、Ｎ Ｅｎｇ Ｊ Ｍｅｄ誌、第２８３巻：１０９〜１１５頁（１９７０年））。したがって、ＧＣＧＲアンタゴニストを使用してグルカゴンの産生または機能を標的とすることによって血糖を制御し、低下させる方法が探索されている。
様々な実施形態において、本開示の抗原結合性拮抗タンパク質は、細胞上に発現される膜結合型グルカゴン受容体に結合し、グルカゴン受容体を介するグルカゴンシグナル伝達を阻害または遮断するように選択され得る。様々な実施形態において、本開示の抗原結合性拮抗タンパク質はヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する。様々な実施形態において、ヒトグルカゴン受容体に結合する本抗原結合性拮抗タンパク質は他の種のグルカゴン受容体に結合しても良い。幾つかの種のグルカゴン受容体のポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列（例えば、マウスグルカゴン受容体（受託番号ＡＡＨ５７９８８）またはラットグルカゴン受容体（ＮＭ １７２０９２））が知られている（例えば、ヒト、ラット、マウスおよびカニクイザルのグルカゴン受容体のポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列についてのその具体的な教示のために参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第７９４７８０９号明細書を参照されたい）。本開示の様々な実施形態において、本抗原結合性拮抗タンパク質は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有するヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する。
ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）グルカゴン受容体アミノ酸配列
（受託番号ＡＡＩ０４８５５）
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＥＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ（配列番号１）
様々な実施形態において、それら引用された参照文献に記載されるグルカゴン受容体に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の（当技術分野において知られており、且つ、本明細書に記載される方法を用いて計算される）同一性を有するグルカゴン受容体に特異的に結合する本開示の抗原結合性拮抗タンパク質も本開示に含まれる。
ヒトグルカゴン受容体などの抗原に結合する抗体の作製方法が当業者に知られている。例えば、標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を作製するための方法は、検出可能な免疫応答を刺激するために有効である量の、その標的抗原ポリペプチドを含む免疫原性組成物をマウスに投与すること、そのマウスから抗体産生細胞（例えば、脾臓由来細胞）を入手し、それらの抗体産生細胞を骨髄腫細胞と融合して抗体産生性ハイブリドーマを得ること、およびそれらの抗体産生性ハイブリドーマを検査してその標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマを特定することを含み得る。一旦ハイブリドーマが獲得されると、細胞培養物の中で、所望によりハイブリドーマ由来細胞が標的抗原ポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する培養条件下でそのハイブリドーマを増殖させることができる。そのモノクローナル抗体はその細胞培養物から精製され得る。そこで、特に望ましい抗体を特定するために多種多様な技術が抗原／抗体相互作用の試験に利用可能である。
例えば、ライブラリーから組換え抗体を選択する方法、または全レパートリーのヒト抗体を産生することが可能な遺伝子導入動物（例えば、マウス）の免疫に依存する方法をはじめとした、必要な特異性を有する抗体を作製または単離する他の適切な方法を使用することができる。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第９０巻：２５５１〜２５５５頁、１９９３年；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３６２巻：２５５〜２５８頁、１９９３年；Ｌｏｎｂｅｒｇら、米国特許第５５４５８０６号明細書、およびＳｕｒａｎｉら、米国特許第５５４５８０７号明細書を参照されたい。
種々の方法で抗体を改変することができる。それらの抗体は単鎖抗体（小型モジュール免疫薬剤、すなわちＳＭＩＰ（商標）を含む）、ＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片等として作製され得る。抗体はヒト化され得る、キメラ化され得る、脱免疫化され得る、または完全ヒト型であり得る。多数の刊行物が多種多様な抗体とそのような抗体の作製方法について説明している。例えば、米国特許第６３５５２４５号明細書、第６１８０３７０号明細書、第５６９３７６２号明細書、第６４０７２１３号明細書、第６５４８６４０号明細書、第５５６５３３２号明細書、第５２２５５３９号明細書、第６１０３８８９号明細書、および第５２６０２０３号明細書を参照されたい。
キメラ抗体は当技術分野において知られている組換えＤＮＡ技術によって作製され得る。例えば、マウス（または他の種）モノクローナル抗体分子のＦｃ定常領域をコードしている遺伝子を制限酵素で消化してマウスＦｃをコードする領域を取り外し、そしてヒトＦｃ定常領域をコードしている遺伝子の同等の部分を置換する（Ｒｏｂｉｎｓｏｎら、国際特許出願公開ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９号明細書；Ａｋｉｒａら、欧州特許出願公開第１８４１８７号明細書；Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ，Ｍ．、欧州特許出願公開第１７１４９６号明細書；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、欧州特許出願公開第１７３４９４号明細書；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、国際出願公開第８６／０１５３３号パンフレット、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４８１６５６７号明細書；Ｃａｂｉｌｌｙら、欧州特許出願公開第１２５０２３号明細書；Ｂｅｔｔｅｒら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４０巻：１０４１〜１０４３頁、１９８８年；Ｌｉｕら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８４巻：３４３９〜３４４３頁、１９８７年；Ｌｉｕら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１３９巻：３５２１〜３５２６頁、１９８７年；Ｓｕｎら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８４巻：２１４〜２１８頁、１９８７年；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら著、Ｃａｎｃ．Ｒｅｓ．誌、第４７巻：９９９〜１００５頁、１９８７年；Ｗｏｏｄら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３１４巻：４４６〜４４９頁、１９８５年、およびＳｈａｗら著、Ｊ．Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．誌、第８０巻：１５５３〜１５５９頁、１９８８年を参照されたい）。
抗体をヒト化するための方法が当技術分野において説明されている。幾つかの実施形態において、ヒト化抗体は非ヒトＣＤＲに加えてヒトではない起源から導入された１個以上のアミノ酸残基を有する。ヒト化は基本的にＷｉｎｔｅｒと共同研究者の方法に従い、超可変領域配列をヒト抗体の対応配列に対して置換することにより実施され得る（Ｊｏｎｅｓら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３２１巻：５２２〜５２５頁、１９８６年；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３３２巻：３２３〜３２７頁、１９８８年；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２３９巻：１５３４〜１５３６頁、１９８８年）。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、完全なヒト可変領域よりもかなり小さな領域が非ヒト種に由来する対応配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号明細書）。実際にはヒト化抗体は、数個の超可変領域残基と可能であれば数個のフレームワーク領域残基がげっ歯類抗体中の類似の部位の残基によって置換されているヒト抗体であることが典型的である。
Ｑｕｅｅｎらの米国特許第５６９３７６１号は抗体のヒト化についてのＷｉｎｔｅｒらの方法に対する改良点を開示しており、ＣＤＲが折り畳まれてマウス抗体中に見出される結合可能構造になることを立体構造的または他の化学的不適合性のために妨げるそのヒト化フレームワーク中の構造的モチーフ内の問題に結合力喪失の原因があるとする前提に基づいている。この問題に対処するため、Ｑｕｅｅｎはヒト化されるマウス抗体のフレームワーク配列に対して直鎖ペプチド配列の状態で非常に相同的なヒトフレームワーク配列を使用することを教示している。したがって、Ｑｕｅｅｎの方法は種間でフレームワーク配列を比較することに焦点を当てている。典型的には、全ての利用可能なヒト可変領域配列を特定のマウス配列と比較し、対応するフレームワーク残基間のパーセンテージ同一性を算出する。それらのフレームワーク配列をヒト化プロジェクトに提供するために最も高いパーセンテージを有するヒト可変領域を選択する。ＱｕｅｅｎはＣＤＲを結合可能構造の中に支持ために重要なマウスフレームワーク由来のある特定のアミノ酸残基をヒト化フレームワークの中に保持することが重要であることも教示している。潜在的な重要度は分子モデルから評価される。保持される候補残基は典型的には直鎖配列の状態でＣＤＲに隣接する残基、またはどのＣＤＲ残基からでも物理的にその６Å以内にある残基である。
他のアプローチでは、特定のフレームワークアミノ酸残基の重要性は、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら著、１９８８年によって記載されるように低結合力ヒト化コンストラクトが一旦得られると個々の残基をマウス配列のものに戻し、抗原結合をアッセイすることによって実験的に決定される。フレームワーク配列中の重要なアミノ酸を特定するための別の例となるアプローチはＣａｒｔｅｒらの米国特許第５８２１３３７号およびＡｄａｉｒらの米国特許第５８５９２０５号によって開示されている。これらの参照文献は、フレームワーク内の特異的なＫａｂａｔ残基位置であって、ヒト化抗体中では結合力を維持するために対応するマウスのアミノ酸による置換を必要とし得る前記残基位置を開示している。
抗体をヒト化する「フレームワークシャッフリング」と呼ばれる別の方法は、個々のヒト生殖系列フレームワークをまとめたものにインフレームで融合された非ヒトＣＤＲ可変領域を含むコンビナトリアルライブラリーの作製に依存する（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら著、Ｍｅｔｈｏｄｓ誌、第３６巻：４３頁、２００５年）。次に良好な結合を保持するヒト化抗体をコードするクローンを特定するためにそれらのライブラリーがスクリーニングされる。
ヒト化抗体の作製の際に使用される軽鎖と重鎖の両方のヒト可変領域の選択が抗原性を低下させるために非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法によると、げっ歯類抗体の可変領域の配列が公知のヒト可変ドメイン配列からなる全ライブラリーに対してスクリーニングされる。そして、そのげっ歯類抗体の可変領域の配列に最も近いヒト配列がヒト化抗体用のヒトフレームワーク領域（フレームワーク領域）として受け入れられる（Ｓｉｍｓら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１５１巻：２２９６頁、１９９３年；Ｃｈｏｔｈｉａら著、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第１９６巻：９０１頁、１９８７年）。別の方法は、特定のサブグループの軽鎖可変領域または重鎖可変領域を有する全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定のフレームワーク領域を使用する。同じフレームワークを幾つかの異なるヒト化抗体に使用することができる（Ｃａｒｔｅｒら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８９巻：４２８５頁、１９９２年；Ｐｒｅｓｔａら著、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．誌、第１５１巻：２６２３頁、１９９３年）。
ヒト可変領域の中に置換される非ヒト残基の選択は様々な因子によって影響を受け得る。これらの因子には、例えば、特定の位置にあるアミノ酸の希少性、ＣＤＲまたは抗原のどちらかとの相互作用の確率、および軽鎖可変ドメイン接触面と重鎖可変ドメイン接触面との間の接触面に参加する確率が含まれる（例えば、米国特許第５６９３７６１号明細書、第６６３２９２７号明細書、および第６６３９０５５号明細書を参照されたい）。これらの因子を分析するための１つの方法は非ヒト配列とヒト化配列の三次元モデルの使用を介したものである。三次元免疫グロブリンモデルは一般的に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列のありそうな三次元立体配座構造を例示および提示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらの提示物の調査により、候補免疫グロブリン配列の機能におけるそれらの残基のあり得る役割についての分析、例えば、候補免疫グロブリンの抗原への結合能力に影響を与える残基の分析が可能になる。標的抗原への増加した親和性などの所望の抗体特性を達成するために、このようにして非ヒト残基を選択し、ヒト可変領域残基に置換することができる。
完全ヒト抗体を作製するための方法が当技術分野において説明されている。例として、抗ＧＣＧＲ抗体またはその抗原結合性抗体断片を作製するための方法は、ファージ上でヒト抗体のライブラリーを合成するステップ、ＧＣＧＲまたはその抗体結合部分を用いてライブラリーをスクリーニングするステップ、ＧＣＧＲに結合するファージを単離するステップ、およびそのファージから抗体を獲得するステップを含む。別の例として、ファージディスプレイ技術に使用される抗体ライブラリーを調製するための１つの方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を備える非ヒト動物をＧＣＧＲまたはその抗原性部分で免疫して免疫応答を生じさせるステップ、その免疫された動物から抗体産生細胞を取り出すステップ、それらの取り出された細胞から本開示の抗体の重鎖と軽鎖をコードするＲＮＡを単離するステップ、そのＲＮＡを逆転写してｃＤＮＡを作製するステップ、プライマーを使用してｃＤＮＡを増幅するステップ、およびファージディスプレイベクターにそのｃＤＮＡを挿入して抗体をファージ上に発現させるステップを含む。本開示の組換え抗ＧＣＧＲ抗体はこのようにして獲得され得る。
また、例として、本開示の組換えヒト抗ＧＣＧＲ抗体は、組換えコンビナトリアル抗体ライブラリーをスクリーニングすることによっても単離され得る。そのライブラリーは、Ｂ細胞から単離されたｍＲＮＡより調製されたヒトＶＬ ｃＤＮＡとＶＨ ｃＤＮＡを使用して作製されたｓｃＦｖファージディスプレイライブラリーであることが好ましい。そのようなライブラリーを調製し、そしてスクリーニングするための方法が当技術分野において知られている。ファージディスプレイライブラリーを作製するためのキットが市販されている（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａリコンビナント・アンティボディ・システム、カタログ番号２７−９４００−０１；およびＳｔｒａｔａｇｅｎｅ ＳｕｒｆＺＡＰ（商標）ファージディスプレイキット、カタログ番号２４０６１２）。抗体ディスプレイライブラリーの作製およびスクリーニングにおいて使用され得る他の方法および試薬も存在する（例えば、全ての参照により本明細書に援用される米国特許第５２２３４０９号明細書、ＰＣＴ国際公開第９２／１８６１９号パンフレット、第９１／１７２７１号パンフレット、第９２／２０７９１号パンフレット、第９２／１５６７９号パンフレット、第９３／０１２８８号パンフレット、第９２／０１０４７号パンフレット、第９２／０９６９０号パンフレット、Ｆｕｃｈｓら著、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ誌、第９巻：１３７０〜１３７２頁（１９９１年）；Ｈａｙら著、Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ誌、第３巻：８１〜８５頁、１９９２年；Ｈｕｓｅら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ誌、第２４６巻：１２７５〜１２８１頁、１９８９；ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３４８巻：５５２〜５５４頁、１９９０年；Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら著、ＥＭＢＯ Ｊ．誌、１２巻：７２５〜７３４頁、１９９３年；Ｈａｗｋｉｎｓら著、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第２２６巻：８８９〜８９６頁、１９９２年；Ｃｌａｃｋｓｏｎら著、Ｎａｔｕｒｅ誌、第３５２巻：６２４〜６２８頁、１９９１年；Ｇｒａｍら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８９巻：３５７６〜３５８０頁、１９９２年；Ｇａｒｒａｄら著、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ誌、第９巻：１３７３〜１３７７頁、１９９１年；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．誌、第１９巻：４１３３〜４１３７頁、１９９１年；およびＢａｒｂａｓら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）誌、第８８巻：７９７８〜７９８２頁、１９９１年）を参照されたい）。
ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座および軽鎖遺伝子座の幾つか、または全てをゲノム内に含む非ヒト遺伝子導入動物、例えばＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）動物（Ａｂｇｅｎｉｘ社／Ａｍｇｅｎ社、フリーモント、カリフォルニア州）をヒトＩｇＥ抗原で免疫することによっても作製される。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座と軽鎖遺伝子座の大きな断片を含み、且つ、マウス抗体の産生が欠損している遺伝子改変マウス株である。例えば、Ｇｒｅｅｎら著、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ誌、第７巻：１３〜２１頁、１９９４年および米国特許第５９１６７７１号明細書、第５９３９５９８号明細書、第５９８５６１５号明細書、第５９９８２０９号明細書、第６０７５１８１号明細書、６０９１００１号明細書、第６１１４５９８号明細書、第６１３０３６４号明細書、第６１６２９６３号明細書、および第６１５０５８４号明細書を参照されたい。ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは成体様ヒトレパートリーの完全ヒト抗体を産生し、抗原特異的ヒト抗体を生成する。幾つかの実施形態において、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスは酵母人工染色体（ＹＡＣ）中のヒト重鎖遺伝子座とカッパ軽鎖遺伝子座のメガベースサイズの生殖系列構成断片の導入を介してヒト抗体Ｖ遺伝子レパートリーの約８０％を含む。他の実施形態において、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（商標）マウスはヒトラムダ軽鎖遺伝子座のほぼ全てをさらに含む。Ｍｅｎｄｅｚら著、Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ誌、第１５巻：１４６〜１５６頁、１９９７年；ＧｒｅｅｎおよびＪａｋｏｂｏｖｉｔｓ著、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．誌、第１８８巻：４８３〜４９５頁、１９９８年；および国際公開第９８／２４８９３号パンフレットを参照されたい。
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体またはその抗原結合断片、組換え抗体、ディアボディ、キメラ化もしくはキメラ抗体またはその抗原結合断片、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、完全ヒト抗体またはその抗原結合断片、ＣＤＲ移植抗体またはその抗原結合断片、単鎖抗体、Ｆｖ、Ｆｄ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、またはＦ（ａｂ’）２、および合成もしくは半合成抗体である抗体またはその抗原結合性抗体断片を利用している。
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）で免疫チェックポイントタンパク質抗原に結合する抗体または抗原結合断片を利用している。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、少なくとも約１×１０−７Ｍから少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍから少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍから少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍから少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１１Ｍから少なくとも約１×１０−１２Ｍの範囲の解離定数（ＫＤ）で免疫チェックポイントタンパク質抗原に結合する抗体または抗原結合断片を利用している。
グルカゴン受容体に対する抗体は、例えば、米国特許第５７７０４４５号明細書および第７９４７８０９号明細書、欧州特許出願公開第２０７４１４９（Ａ２）号明細書、欧州特許第０６５８２００（Ｂ１）号明細書、米国特許出願公開第２００９／００４１７８４号明細書、第２００９／０２５２７２７号明細書、第２０１３／０３４４５３８号明細書および第２０１４／０３３５０９１号明細書、およびＰＣＴ出願国際公開第２００８／０３６３４１号パンフレットに記載されている。本発明の様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、例えば、様々な抗ＧＣＧＲ抗体または抗原結合断片のポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列についてのその具体的な教示のために各々参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許第７９４７８０９号明細書および第８１５８７５９号明細書に明記されているポリヌクレオチド配列とポリペプチド配列を備える抗ＧＣＧＲ（「アンタゴニスト性」）抗体または抗原結合断片である。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号２に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号２に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号２）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号３に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号３に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号３に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号３）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号２または３の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号４に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号４に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号４）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号５に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号５に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号５に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号５）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号４または５の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６に示される重鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号６に示される重鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号６に示される重鎖可変領域配列、すなわち
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号６）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号７に示される軽鎖可変領域配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号７に示される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号７に示される軽鎖可変領域配列、すなわち
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号７）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号６または７の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備えるキメラ抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号８に示される重鎖配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８に示される重鎖配列、すなわち
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＬＲＧＶＱＣＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号８）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備えるキメラ抗体のものと同等以上の抗原結合親和性を有する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗体と同じエピトープに結合する抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗体と競合する抗ＧＣＧＲ抗体である。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号９に示される軽鎖配列の少なくとも１つ（例えば、２つ、または３つの）ＣＤＲを含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号９に示される軽鎖配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は配列番号９に示される軽鎖配列、すなわち
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（配列番号９）
を含む抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。
様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号８または９の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
本開示の様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、および配列番号２８から選択される重鎖可変領域配列と配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、および配列番号４７から選択される軽鎖可変領域配列を備える抗ＧＣＧＲ抗体であり得る。様々な実施形態において、前記抗体は、配列番号１０〜２８または配列番号２９〜４７の配列と、例えば、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％の観察された相同性を共有するアミノ酸配列を含む。
Figure 2017522368
本開示の単離抗ＧＣＧＲ抗体、本開示の抗体断片、または本開示の抗体誘導体は当技術分野において知られているあらゆる定常領域を含み得る。その軽鎖定常領域は、例えば、カッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域、例えばヒトカッパまたはラムダタイプの軽鎖定常領域であり得る。その重鎖定常領域は、例えば、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュータイプの重鎖定常領域、例えば、ヒトアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、またはミュータイプの重鎖定常領域であり得る。様々な実施形態において、前記軽鎖定常領域または重鎖定常領域は天然定常領域の断片、誘導体、変異体、または改変タンパク質である。
目的の抗体から異なるサブクラスまたはアイソタイプの抗体を誘導するための技術、すなわち、サブクラススイッチングが知られている。したがって、ＩｇＧ抗体が例えばＩｇＭ抗体に由来することも、その反対もあり得る。そのような技術により、所与の抗体（親抗体）の抗原結合特性を持つが、親抗体のものと異なる抗体アイソタイプまたはサブクラスに関連する生物学的特性も持つ新しい抗体の調製が可能になる。組換えＤＮＡ技術を用いても良い。特定の抗体ポリペプチドをコードするクローン化ＤＮＡ、例えば、所望のアイソタイプの抗体の定常ドメインをコードするＤＮＡをそのような技法に用いても良い。Ｌａｎｉｔｔｏら著、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．誌、第１７８巻：３０３〜１６頁（２００２年）も参照されたい。
様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号４８に示されるカッパ軽鎖定常領域またはその断片を含む。様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号４９に示されるラムダ軽鎖定常領域またはその断片を含む。様々な実施形態において、本開示の単離抗原結合タンパク質は配列番号５０に示されているＩｇＧ２重鎖定常領域またはその断片を含む。
様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は配列番号５１に示される重鎖配列を備え、且つ、番号５２に示される軽鎖配列を備える。
本開示の様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質はヘミボディである。「ヘミボディ」は、完全な重鎖、完全な軽鎖、およびその完全な重鎖のＦｃ領域と対合した２つ目の重鎖Ｆｃ領域を含む免疫学的に機能的な免疫グロブリン構築物である。その重鎖Ｆｃ領域とその第２重鎖Ｆｃ領域を連結するためにリンカーを用いることができるが、リンカーが必要なわけでもない。様々な実施形態において、前記ヘミボディは（ｉ）完全軽鎖と（ｉｉ）Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ２ Ｆｃ領域）に融合した重鎖を含む一価抗原結合タンパク質である。ヘミボディを調製するための方法は、例えば、そのようなヘミボディの調製を教示する目的で本明細書における参照によりその全体が本明細書に援用される米国特許出願公開第２０１２／０１９５８７９号明細書に記載されている。
医薬組成物
別の態様では本開示は１種類以上の薬学的に許容可能な担体と共に本明細書に記載される単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む医薬組成物を提供する。本明細書に記載されるそれらの医薬組成物および使用方法は、下で詳細に説明されるように他の活性薬剤との併用（共投与）実施形態も包含する。
概して、本開示の前記アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は１種類以上の薬学的に許容可能な担体と合同した製剤として投与されるのに適している。「担体」という用語は、本開示の化合物以外のあらゆる成分を記述するために本明細書において使用される。担体の選択は特定の投与モード、溶解性と安定性に対する担体の効果、および剤形の性質などの因子に大いに依存することになる。本明細書において使用される場合、「薬学的に許容可能な担体」には生理学的に適合するありとあらゆる溶媒、分散媒、被覆材、抗菌剤と抗真菌剤、等張化剤、および吸収遅延化剤などが含まれる。薬学的に許容可能な担体の幾つかの例は水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ブドウ糖、グリセロール、エタノールなど、ならびにそれらの組合せである。多くの事例において、前記組成物はその組成物の中に等張化剤、例えば糖類、マンニトール、ソルビトールなどのポリアルコール類、または塩化ナトリウムを含む。薬学的に許容可能な物質の追加例は湿潤剤、または湿潤もしくは乳化剤、保存剤、もしくは緩衝剤などの少量の補助物質であり、それらは前記抗体の有効期間または有効性を向上させる。本開示の医薬組成物およびそれらの調製方法は容易に当業者に明らかになる。そのような組成物およびそれらの調製方法は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１９版、（マック・パブリッシング社、１９９５年）内に見出すことができる。概して、前記医薬組成物は、無菌であり、実質的に等張であり、且つ、米国食品医薬品局の全てのＧＭＰ規制を全面順守したものとして製剤される。
本開示の医薬組成物は典型的には非経口投与に適切である。本明細書において使用される場合、医薬組成物の「非経口投与」には患者組織の物理的裂傷形成とその組織のその裂傷を介した医薬組成物の投与を特徴とし、したがって一般的には血流、筋肉、または内臓へ直接的に投与することになるあらゆる投与経路が含まれる。したがって、非経口投与には医薬組成物の注射によるその組成物の投与、外科的切開を介したその組成物の塗布によるその組成物の投与、組織貫通性非外科的創傷を介したその組成物の塗布によるその組成物の投与などが含まれるがこれらに限定されない。具体的に、非経口投与は皮下注射または注入、腹膜内注射または注入、筋肉内注射または注入、胸骨内注射または注入、静脈内注射または注入、動脈内注射または注入、髄腔内注射または注入、脳室内注射または注入、尿道内注射または注入、頭蓋内注射または注入、滑膜内注射または注入、または腎臓透析注入技術を含むと考えられているがこれらに限定されない。
非経口投与に適切な医薬組成物製剤は典型的には無菌水または無菌等張生理食塩水などの薬学的に許容可能な担体と混合されて有効成分を含むことが一般的である。そのような製剤はボーラス投与または連続投与に適切な形態で調製、包装、または販売されて良い。注射可能製剤は、保存剤を含むアンプルまたは複数回投与用容器などの単位剤形の状態で調製、包装、または販売されて良い。非経口投与用製剤には懸濁剤、水剤、油性ベヒクルまたは水性ベヒクル中の乳剤、ペースト剤などが含まれるがこれらに限定されない。そのような製剤は、懸濁化剤、安定化剤または分散化剤を含むがこれらに限定されない１種類以上の追加の成分をさらに含んで良い。非経口投与用製剤の１つの実施形態において、前記有効成分は、再構成された組成物の非経口投与前に適切なベヒクル（例えば無菌発熱性物質非含有水）と共に再構成されるように乾燥形状（すなわち、粉末形状または顆粒形状）で提供される。非経口製剤には塩、炭水化物および緩衝剤（好ましくは３から９までのｐＨ）などの担体を含み得る水剤も含まれるが、幾つかの用途について非経口製剤は無菌非水性溶液として、または無菌発熱性物質非含有水などの適切なベヒクルと併せて使用される乾燥体としてより適切に製剤され得る。例となる非経口投与剤形には無菌水溶液、例えばプロピレングリコール水溶液またはブドウ糖水溶液中の水剤または懸濁剤が含まれる。そのような剤形は所望により適切に緩衝化され得る。有用な他の非経口投与可能製剤には有効成分を微晶質形状またはリポソーマル調製物形状で含むものが含まれる。非経口投与用製剤は即時放出および／または調節放出されるように製剤され得る。放出調節製剤には遅延放出、持続性放出、パルス放出、制御放出、標的放出、およびプログラム放出が含まれる。
例えば、１つの態様では無菌注射溶液は、必要に応じて上に列記した成分のうちの１つ、またはそれらの成分の組合せを含む適切な溶媒の中に必要な量の前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を包含し、その後にそれをフィルター滅菌することで調製され得る。概して、分散剤は、基礎分散媒と上で列挙した成分の中の必要とされる他の成分を含む無菌ベヒクルの中に前記活性化合物を包含することにより調製される。無菌注射溶液の調製用の無菌粉剤の場合では、以前に無菌濾過されたその溶液から真空乾燥および凍結乾燥などの調製方法によって追加のあらゆる所望の成分と前記有効成分からなる粉末が産生される。溶液の適正な流動性は、例えば、レシチンなどの被覆材の使用によって、分散剤の場合は要求される粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。注射可能組成物の長期吸収は吸収を遅らせる薬剤、例えばモノステアリン酸塩およびゼラチンを前記組成物の中に含むことによって可能になる。様々な実施形態において、それら注射可能組成物は市販の使い捨て注射用器具を使用して投与される。
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を鼻腔内経路で投与することができ、または吸入により、典型的には乾燥粉剤吸入器からの（単独での、混合物としての、または、例えば、適切な薬学的に許容可能な担体と混合された混合成分粒子としての）乾燥粉剤の形状での吸入により投与することができ、適切な噴射剤の使用を含む、または含まない加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器（好ましくは細かい霧を作製するために電気流体力学を使用する噴霧器）、またはネブライザからのエアロゾルスプレーとして投与することができ、または点鼻薬として投与することができる。
概して、その加圧容器、ポンプ、スプレー、噴霧器、またはネブライザは、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の溶液または懸濁液であって、例えば、前記活性薬剤の分散、溶解、またはその放出の長期化にとって適切な薬剤である噴射剤を溶媒として含む前記溶液または懸濁液を含有する
乾燥粉剤製剤または懸濁剤製剤の使用前に前記医薬製品は概して吸入による送達に適切なサイズ（典型的には５マイクロン未満）にまで微粉にされる。これはスパイラルジェットミリング、流動床ジェットミリング、ナノ粒子を形成するための超臨界流体プロセッシング、高圧ホモジナイゼーション、またはスプレー乾燥などのあらゆる適切な粉砕方法によって達成され得る。
吸入器または散布器の中に使用するためのカプセル、ブリスターおよびカートリッジは、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、適切な粉末基材、および性能調節剤からなる粉末混合物を含むように製剤され得る。
メントールおよびレボメントールなどの適切な着香料、またはサッカリンもしくはサッカリンナトリウムなどの甘味料を吸入／鼻腔内投与用の本開示の製剤に添加して良い。
吸入／鼻腔内投与用の製剤は即時放出および／または調節放出されるように製剤され得る。放出調節製剤には遅延放出、持続性放出、パルス放出、制御放出、標的放出、およびプログラム放出が含まれる。
乾燥粉剤吸入器およびエアロゾル剤の事例では投薬単位は計量された量を送達する弁によって決定される。本開示に準拠する単位は、計量された用量または「一吹き」の本開示の抗体を投与するように用意されていることが典型的である。全体的な１日用量は単回投与で投与されることが典型的であり、より一般的には一日を通して複数に分割された用量として投与される。
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は経口投与用に製剤されても良い。経口投与はその化合物が胃腸管に入ることになる飲み込み、および／またはその化合物が口から直接的に血流に入るバッカル投与、舌投与、または舌下投与を含み得る。経口投与に適切な製剤には、錠剤、多粒子またはナノ粒子を含む軟質カプセル剤または硬質カプセル剤、液剤、または粉剤、ロゼンジ剤（液体充填型を含む）、チューイング剤、ゲル剤、急速分散剤形、フィルム剤、膣坐剤、スプレー剤、およびバッカル／粘膜付着パッチなどの固形系、半固形系、および液体系が含まれる。
経口用の医薬組成物は医薬組成物の製造についての技術分野に知られているあらゆる方法に従って調製されて良く、薬学的に洗練されており、且つ、口当たりが良い調製物を提供するためにそのような組成物は甘味剤からなる群より選択される１種類以上の薬剤を含んで良い。例えば、経口送達用錠剤を調製するために前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が少なくとも１種類の医薬担体と混合され、そしてその固形製剤が胃腸管への送達用に公知の方法に従って圧縮されて錠剤に成形される。その錠剤組成物は添加物、例えばサッカリド担体またはセルロース担体、デンプンペーストまたはメチルセルロースなどの結合剤、充填剤、崩壊剤、または医薬調製物の製造に通常は使用されることが典型的である他の添加物と共に製剤されることが典型的である。経口送達用カプセル剤を調製するためにＤＨＥＡが少なくとも１種類の医薬担体と混合され、そしてその固形製剤が胃腸管への送達に適切なカプセル容器の中に入れられる。単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む組成物は、参照により本明細書に援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、１９９０年（マック・パブリッシング社、イーストン、ペンシルバニア州１８０４２）の第８９章に概ね記載されているように調製され得る。
様々な実施形態において、前記医薬組成物は、錠剤の製造にとって適切である無毒の薬学的に許容可能な担体と混合して単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を含む経口送達用錠剤として製剤される。これらの担体は炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤、顆粒化剤および崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ゼラチンまたはアカシアガム、および滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルクであり得る。それらの錠剤は被覆されていなくても良く、または胃腸路における崩壊と吸収を遅らせることによってより長い期間にわたって持続性作用を提供するために公知の技術で被覆されても良い。例えば、モノステアリン酸グリセリルもしくはジノステアリン酸グリセリル単独またはワックスとそれらなどの時間遅延物質を用いて良い。
様々な実施形態において、前記医薬組成物は、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が不活性固形希釈剤、例えば炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合している硬質ゼラチンカプセル剤として、または前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が水性媒体または油性媒体、例えばラッカセイ油、ピーナッツ油、液体パラフィン、またはオリーブ油と混合している軟質ゼラチンカプセル剤として製剤される。
液体製剤には懸濁剤、水剤、シロップ剤、およびエリキシル剤が含まれる。そのような製剤は（例えば、ゼラチンまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースから作製された）軟質カプセル剤または硬質カプセル剤の中で充填剤として使用されて良く、典型的には担体、例えば水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油と１種類以上の乳化剤および／または懸濁化剤を含む。液体製剤は例えばサシェの固形物の再構成によっても調製され得る。
当技術分野において受け入れられているペプチド、タンパク質または抗体のあらゆる投与方法が本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を投与するために適切に用いられ得る。
治療方法
本開示の１つの態様では過剰レベルのグルカゴンおよび／または血糖を特徴とする障害または病気と診断された患者を治療するための方法であって、ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を前記患者に投与することを含む前記方法が提供される。本明細書において使用される場合、「患者」という用語はヒトを含む哺乳類動物を指し、「患者」という用語と互換的に使用される。「治療」という用語は障害の少なくとも１つの症状または他の態様の緩和または予防、または疾患重症度の軽減化などを包含する。アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、具体的には本開示に従うヒト抗体は実現可能な治療薬を構成するために完治を達成する必要は無く、または疾患の全ての症状または兆候を根絶する必要は無い。関連の分野において理解されているように、治療薬として使用される薬品は所与の疾患状態の重症度を軽減化し得るが、有用な治療薬として見なされるためにその疾患の全ての兆候を消失させる必要は無い。同様に、予防的に行われる治療は実現可能な予防薬を構成するために病気の発症の予防において完全に有効である必要は無い。疾患の影響を（例えば、その症状の数または重症度を減少させることにより、または別の治療の有効性を増強することにより、または別の有益な効果をもたらすことにより）単純に軽減化すること、または患者において疾患が発生または悪化する可能性を低下させることで充分である。本開示の１つの実施形態は、その特定の障害の重症度を反映する指標の基線よりも上の持続的な改善を誘導するのに充分な量および期間でヒト抗体などの単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を患者に投与することを含む方法に関する。
したがって、１つの態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療するための方法であって、前記患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法に関する。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
様々な実施形態において、前記患者は自己免疫型Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は化学誘導性Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は様々な医学的状態下で医薬または外科手術によって機能不全になった膵臓、または膵臓の除去のために生じたＴ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は次の発見、すなわち（ａ）低インスリン血症と併せた高血糖症、（ｂ）膵臓β細胞の喪失の証拠と併せた高血糖症、（ｃ）インスリンに対する正常な血糖応答と併せた高血糖症、（ｄ）ケトアシドーシスと併せた高血糖症、（ｅ）インスリン依存性と併せた高血糖症、または（ｆ）高グルカゴン血症と併せた高血糖症の内の１つ以上の発見に基づいてＴ１Ｄであると診断されている。様々な実施形態において、「生理学的に不適当な量」が１型糖尿病の表現型を減弱化、阻止、抑制、低減、または軽減するには不充分である量として本明細書において規定される場合、前記患者は「生理学的に不適当な量」のインスリンを有し得る、または示し得る。したがって、そのような患者は非糖尿病患者から、および／または例えばインスリン抵抗性およびインスリン非感受性を特徴とする２型糖尿病の臨床症状を有する、または示す患者から区別される。
別の態様では本開示はＴ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、それらの１つ以上の症状は、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、疲労、多尿症（頻尿）、または腎臓透析から選択される。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示はＴ１Ｄの発症リスクがある患者（例えば、平均よりも高いＴ１Ｄの発症リスクを有する患者）または初発のＴ１Ｄを有し、且つ、低残留性インスリン産生を有する患者を治療するための方法を提供する。これらの治療方法は、（ａ）Ｔ１Ｄの発症リスクがある（例えば、上昇したリスクがある）患者を特定すること、および（ｂ）前記患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することによって実行され得る。Ｔ１Ｄの発症リスクがあると特定されたその患者は、例えば、臨床的に明らかな耐糖能障害があるか、またはそれがないＴ１Ｄの家族歴を有していること、または耐糖能障害、および膵臓β細胞の喪失もしくは機能不全の証拠があることに基づいて診断された患者であり得る。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者において高血糖症を元に戻すための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者において膵島β細胞のインスリン分泌機能を増強するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。
ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質、具体的には本開示の完全ヒト抗体は一定の期間にわたって定期的な間隔で例えば１回、または１回よりも多く投与されて良い。様々な実施形態において、完全ヒト抗体は一定の期間にわたって少なくとも１カ月以上につき一回、例えば１カ月につき一回、２か月につき一回、または３か月につき一回、または不確定の頻度でも投与される。慢性の病気の治療については長期治療が非常に有効であることが一般的である。しかしながら、急性の病気の治療についてはより短い期間の投与、例えば、１〜６週間までの投与で充分であり得る。概して、前記完全ヒト抗体は、患者が選択された指標または選択された複数の指標について基線よりも上の医学的に適切な程度の改善を示すまで投与される。
本明細書において提供される治療計画の一例は、血糖レベルが関与する病気を治療するために適切な投与量で単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質を週に一度、または２週間に一度皮下注射することを含む。単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の週に一度、２週間に一度、または月に一度の投与は所望の結果が達成されるまで、例えば、患者の症状が治まるまで継続されることになる。治療は必要に応じて再開されて良く、あるいは維持用量が投与されて良い。
患者の血糖レベルは、あるとすれば幾らかでもそれらのレベルの変化を検出するためにヒト抗体などの単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前、治療中、および／または治療後にモニターされて良い。幾つかの障害について、血糖上昇の発生率は疾患ステージなどの因子に従って変化し得る。グルコースレベルを測定するために公知の技術が用いられて良い。グルカゴンレベルも公知の技術、例えばＥＬＩＳＡを用いて患者の血液の中で測定されて良い。
治療的に有効な用量は、ＩＣ５０を決定することによって細胞培養アッセイから最初に推定され得る。その後、用量は、細胞培養において決定されるＩＣ５０を含む循環血漿中濃度範囲を達成するために動物モデルにおいて定式化され得る。そのような情報はヒトにおける有用な用量をより精密に決定するために使用され得る。血漿中のレベルは、例えば、ＨＰＬＣまたはその治療薬に特異的な抗イディオタイプ抗体を使用する免疫アッセイによって測定され得る。患者の病気を診る個々の医師によって正確な組成物、投与経路、および投与量が選択され得る。
投与計画を調節して最適な所望の応答（例えば、治療的応答または予防的応答）をもたらすことができる。例えば、単回ボーラスを投与することができ、一定の期間にわたって数回に分割された用量（複数回用量または反復用量または維持用量）を投与することができ、そして急迫した治療状況によって示されるように比例的にその用量を減少または増加することができる。投与を簡単にし、且つ、投与量を均一にするために投薬単位剤形で非経口組成物を製剤することが特に有利である。本明細書において使用される投薬単位剤形は治療を受ける哺乳類対象への統一的な投与量として適切な物理的に別々の単位を指し、各単位は必要とされる医薬担体と共に所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性化合物を含む。本開示の投薬単位剤形の仕様は主に前記抗体に独特の特性、および達成されるべき特定の治療効果または予防効果によって決定づけられる。
したがって、当業者は本明細書において提供される開示に基づいて治療技術分野においてよく知られている方法に準拠して用量と投与計画が調節されることを理解することになる。すなわち、最大忍容用量を容易に確定することができ、検出可能な治療利益を患者に提供するための各薬剤を投与する時間的要求事項を決定できるように検出可能な治療利益をその患者に対して提供する有効量を決定することもできる。したがって、ある特定の用量と投与計画が本明細書において例示されるが、これらの例は本開示の実施に際して患者に提供され得る用量と投与計画を決して限定しない。
投与量の値は緩和されるべき病気の種類と重症度によって変化する場合があり得、それらは単回用量または複数回用量を含み得ることが特筆されるべきである。どの特定の患者についても具体的な投与計画は、その個人の要求と前記組成物の投与を行い、またはその投与を指揮する人物の専門的な判断に応じて時間と共に調節されるべきであること、および本明細書において明記される投与量範囲はただの例示であり、本請求の構成要素の範囲または実施を制限することを意図したものではないことがさらに理解されるべきである。さらに、本開示の組成物を用いる投与計画は疾患の種類、患者の年齢、体重、性別、医療状態、病気の重症度、投与経路、および使用される特定の抗体をはじめとする様々な因子に基づいて良い。したがって、投与計画は大幅に変化する場合があり得るが、それは標準的方法を用いて日常的に決定され得る。例えば、用量は薬物動態パラメーターまたは薬力学パラメーターに基づいて調節されて良く、それらのパラメーターは毒性効果および／または検査室値などの臨床効果を含み得る。したがって、本開示は当業者によって決定される患者内用量増加を包含する。適切な投与量および投与計画の決定は関連の技術分野においてよく知られており、本明細書において開示される教示が一旦提供されるとそのような決定が包含されることが当業者によって理解されることになる。
本開示の医薬組成物の毒性および治療指数は、例えばＬＤ５０（集団の５０％にとって致死的である用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）のための細胞培養物または実験動物における標準的薬学的手法によって決定され得る。有毒な用量と治療的に有効な用量との間の用量の比率が治療指数であり、それは比率ＬＤ５０／ＥＤ５０として表され得る。大きい治療指数を示す組成物が一般的に好ましい。
様々な実施形態において、前記医薬組成物の単回投与または複数回投与が、患者が必要とし、且つ、患者によって認容される投与量および投与頻度に応じて行われる。あらゆる事象において、前記組成物は患者を効果的に治療するために本明細書において開示される単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質のうちの少なくとも１つを充分な量で提供するべきである。その投与量を一度投与することができるが、治療成果が達成されるまでか、または副作用のために治療の中断が許されるまでのどちらかで、その投与量を定期的に適用してよい。
前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質医薬組成物の投与の投与頻度はその治療の性質と治療されている特定の疾患に依存する。患者は所望の治療成果が達成されるまで一週間毎、二週間毎、または一月毎などの定期的な間隔で治療され得る。例となる投与頻度には休薬期間無しで週に一回；週に一回、隔週；２週間に一回；３週間に一回；２週間にわたって休薬期間無しで毎週、その後で毎月；３週間にわたって休薬期間無しで毎週、その後で毎月；毎月；一月おきに一回；３か月に一回；４か月に一回；５か月に一回；６か月に一回；７か月に一回；８か月に一回；９か月に一回；１０か月に一回；１１か月に一回；または毎年が含まれるがこれらに限定されない。
ヒト患者への投与について、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の毎月の総用量は、当然投与モードに応じて患者当たり０．５〜１２００ｍｇ、患者当たり０．５〜１１００ｍｇ、患者当たり０．５〜１０００ｍｇ、患者当たり０．５〜９００ｍｇ、患者当たり０．５〜８００ｍｇ、患者当たり０．５〜７００ｍｇ、患者当たり０．５〜６００ｍｇ、患者当たり０．５〜５００ｍｇ、患者当たり０．５〜４００ｍｇ、患者当たり０．５〜３００ｍｇ、患者当たり０．５〜２００ｍｇ、患者当たり０．５〜１００ｍｇ、患者当たり０．５〜５０ｍｇ、患者当たり１〜１２００ｍｇ、患者当たり１〜１１００ｍｇ、患者当たり１〜１０００ｍｇ、患者当たり１〜９００ｍｇ、患者当たり１〜８００ｍｇ、患者当たり１〜７００ｍｇ、患者当たり１〜６００ｍｇ、患者当たり１〜５００ｍｇ、患者当たり１〜４００ｍｇ、患者当たり１〜３００ｍｇ、患者当たり１〜２００ｍｇ、患者当たり１〜１００ｍｇ、または患者当たり１〜５０ｍｇの範囲内にあり得る。例えば、毎月の静脈内用量は患者当たり約１〜１０００ｍｇを必要とし得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜５００ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜４００ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜３００ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜２００ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜１５０ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜１００ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。様々な実施形態において、本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は患者当たり約１〜５０ｍｇの毎月の静脈内用量で投与され得る。その毎月の総用量は単回用量または分割用量で投与されてよく、医師の裁量で本明細書において示された典型的な範囲から外れてよい。
本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量または予防有効量についての例となる非限定的な毎週または二週間毎の投与範囲は、体重に対して０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜９０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜８０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜７０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜６０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜４ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜３ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜５０ｍｇ／ｋｇ、１〜４０ｍｇ／ｋｇ、１〜３０ｍｇ／ｋｇ、１〜２５ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、１〜１５ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、１〜７．５ｍｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜４ｍｇ／ｋｇ、１〜３ｍｇ／ｋｇ、１〜２ｍｇ／ｋｇであり得、または体重に対して１ｍｇ／ｋｇであり得る。投与量の値は緩和されるべき病気の種類と重症度によって変化する場合があり得ることが特筆されるべきである。どの特定の患者についても具体的な投与計画は、その個人の要求と前記組成物の投与を行い、またはその投与を指揮する人物の専門的な判断に応じて時間と共に調節されるべきであること、および本明細書において明記される投与量範囲はただの例示であり、本請求の構成要素の範囲または実施を制限することを意図したものではないことがさらに理解されるべきである。
様々な実施形態において、投与された総用量は、例えば、約１〜１０００μｇ／ｍｌ、約１〜７５０μｇ／ｍｌ、約１〜５００μｇ／ｍｌ、約１〜２５０μｇ／ｍｌ、約１０〜１０００μｇ／ｍｌ、約１０〜７５０μｇ／ｍｌ、約１０〜５００μｇ／ｍｌ、約１０〜２５０μｇ／ｍｌ、約２０〜１０００μｇ／ｍｌ、約２０〜７５０μｇ／ｍｌ、約２０〜５００μｇ／ｍｌ、約２０〜２５０μｇ／ｍｌ、約３０〜１０００μｇ／ｍｌ、約３０〜７５０μｇ／ｍｌ、約３０〜５００μｇ／ｍｌ、約３０〜２５０μｇ／ｍｌの範囲内の血漿中抗体濃度を達成する。
様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は、単剤療法またはインスリン補充と併用のどちらかで体重に対して０．０１ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．０２５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．０５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．０７５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．１ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．２５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して０．７５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して１ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して１．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して２ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して２．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して３ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して３．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して４ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して４．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して５．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して６ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して６．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して７ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して７．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して８ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して８．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して９ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して９．５ｍｇ／ｋｇになる。様々な実施形態において、治療有効量の本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質に適した毎週または二週間毎の用量は体重に対して１０ｍｇ／ｋｇになる。
インスリン補充
Ｔ１Ｄでは膵臓がもはやインスリンを産生しないので、Ｔ１Ｄの患者はその膵臓のインスリン産生不能を補うためにインスリン注射を受けるか、またはインスリンポンプを使用する必要がある。ＴＤ１向けのインスリンの正常な１日投与量は一日当たり９０〜１２０単位、または一日当たり６０〜９０単位、または一日当たり３０〜６０単位である。様々な実施形態において、本開示の方法はインスリン補充を企図しているが、より低いレベル、例えばインスリンの正常な１日投与量の９０％より下の約８０％と９０％の間、８０％より下の約７０％と８０％の間、７０％より下の約６０％と７０％の間、６０％より下の約５０％と６０％の間、５０％より下の約４０％と５０％の間、４０％より下の約３０％と４０％の間、３０％より下の約２０％と３０％の間、２０％より下の約１０％と２０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であるレベルでのインスリン補充を企図している。本開示の方法によって所与の患者はヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の開始後にインスリン投与量を漸進的に緩やかに減少させて良く、幾つかの例ではもはやインスリン補充を必要としなくて良くなると考えられている。
様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と共投与されるインスリンは、例えば、即効性（リスプロ［ヒューマログ（登録商標）］、アスパルト［ノボログ（登録商標）］、グルリジン［アピドラ（登録商標）］）、短期作用性（レギュラー）、中間時間作用性（ＮＰＨ）、および長期作用性（グラルギン［ランタス（登録商標）］、デテミル［レベミル（登録商標）］）から選択される。インスリン作用（それがピークを迎える時、またはそれが最も強い時、およびどれくらいそれが継続するか）は人それぞれ異なって良い。
注射によるインスリン補充を用いる典型的な「単剤療法」向けの投与計画、投与スケジュール、注射方法、および他の全般的指針はよく知られており、且つ、当業者によって理解されており、各患者向けに特異的に調整される。個々の患者の目下の臨床状況に応じてインスリン療法は単回注射法、２回注射法、または頻回注射法を含み得る。様々な実施形態において、本開示の方法は、例えば、朝食の２０〜３０分前に受ける１日当たり体重に対して０．５〜１．０単位／ｋｇの単回注射を含む。様々な実施形態において、本開示の方法は１回の注射が朝食の前にあり、残りの注射が夕食の２０〜３０分前にある２回注射法を含む。様々な実施形態において、本開示の方法は「ボーラスインスリン」を投与するために１回の注射を主要なそれぞれの食事（朝食、昼食および夕食）の２０〜３０分前に受け、且つ、「基底インスリン」のために中間時間作用性インスリンを一日に一回または二回投与する頻回注射法を含む。通常、ボーラスインスリンは総用量の６０％を構成し、基底インスリンは残りの４０％を構成する。これらのインスリン単独療法計画の各々は幾らか有効であるが、それらの全体的な有効性を限定する欠点を有していることが当業者によって理解されている。
産生された内在性インスリンのレベルは（コネクティング・ペプチドの）Ｃ−ペプチドと呼ばれるタンパク質のレベルによって反映される。インスリンの産生過程において、体は最初にプロインスリンを産生し、その後でそれがインスリンとＣ−ペプチドに切断される。したがって、２型糖尿病の患者から１型糖尿病の患者を区別しようとするとき、医師はＣ−ペプチドを評価することができる。１型糖尿病に見られるように、低インスリン血症は循環血液中のＣ−ペプチドのレベル低下によって反映される。
併用療法
本明細書において使用される場合、「共投与」、「共投与された」および「との併用で」という用語は本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質および１つ以上の他の治療薬に関して次のこと、すなわち、治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの同時投与であって、そのような成分を実質的に同時に前記患者へ放出する単一の剤形に前記成分が一緒に製剤されるときの前記同時投与；治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの実質的な同時投与であって、前記患者によって実質的に同時に取り込まれるとそのような成分を実質的に同時に前記患者へ放出する別々の剤形に前記成分が相互に離間して製剤されるときの前記実質的な同時投与；治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの連続投与であって、各投与の間にかなりの時間間隔をあけて前記患者によって連続的に取り込まれるとそのような成分を実質的に異なる時間で前記患者へ放出する別々の剤形に前記成分が相互に離間して製剤されるときの前記連続投与；および治療を必要とする患者への本開示の単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質と治療薬のそのような組合せの連続投与であって、各部分が同じ経路または異なる経路のどちらで投与されても良い場合にそのような成分が制御放出されると前記成分を同時および／または異なる時間で前記患者へ同時に、連続的に、および／または重複的に放出する単一の剤形に前記成分が一緒に製剤されるときの前記連続投与を意味するものとし、且つ、そのような投与を指し、且つ、そのような投与を含む。
別の態様では本開示は１型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療するための方法であって、前記患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法に関する。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
様々な実施形態において、前記患者は自己免疫型Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は化学誘導性Ｔ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は様々な医学的状態下で医薬または外科手術によって機能不全になった膵臓、または膵臓の除去のために生じたＴ１Ｄを患っていて良い。様々な実施形態において、前記患者は次の発見、すなわち（ａ）低インスリン血症と併せた高血糖症、（ｂ）膵臓β細胞の喪失の証拠と併せた高血糖症、（ｃ）インスリンに対する正常な血糖応答と併せた高血糖症、（ｄ）ケトアシドーシスと併せた高血糖症、（ｅ）インスリン依存性と併せた高血糖症、または（ｆ）高グルカゴン血症と併せた高血糖症の内の１つ以上の発見に基づいてＴ１Ｄであると診断されている。様々な実施形態において、「生理学的に不適当な量」が１型糖尿病の表現型を減弱化、阻止、抑制、低減、または軽減するには不充分である量として本明細書において規定される場合、前記患者は「生理学的に不適当な量」のインスリンを有し得る、または示し得る。したがって、そのような患者は非糖尿病患者から、および／または例えばインスリン抵抗性およびインスリン非感受性を特徴とする２型糖尿病の臨床症状を有する、または示す患者から区別される。
別の態様では本開示はＴ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、それらの１つ以上の症状は、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、多尿症（頻尿）、または疲労から選択される。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
別の態様では本開示は、Ｔ１Ｄの発症リスクがある患者（例えば、平均よりも高いＴ１Ｄの発症リスクを有する患者）または初発のＴ１Ｄを有し、且つ、低残留性インスリン産生を有する患者を治療するための方法であって、前記患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法を提供する。Ｔ１Ｄの発症リスクがあると特定されたその患者は、例えば、臨床的に明らかな耐糖能障害があるか、またはそれがないＴ１Ｄの家族歴を有していること、または耐糖能障害、および膵臓β細胞の喪失もしくは機能不全の証拠があることに基づいて診断された患者であり得る。様々な実施形態において、その単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質は、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、またはディアボディから選択される抗体を含む。様々な実施形態において、その抗体は完全ヒトモノクローナル抗体である。様々な実施形態において、そのインスリン補充は、インスリンの正常な１日投与量の約７０％〜９０％の間、約５０％〜７０％の間、約３０％〜５０％の間、約１５％〜３０％の間、約１０〜１５％の間、約５〜１０％の間、および４％、３．５％、３％、２．５％、２％、１．５％、１％、０．５％、０．４％、０．３％、０．２％、または０．１％を含む０％と５％の間であり得るインスリン用量を投与することを含む。
様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に７０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に６０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に５０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に４０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に３０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に２０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に１５％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に１０％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に９％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に８％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に７％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に６％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に５％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に４％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に３％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に２％まで徐々に減少する。様々な実施形態において、患者のインスリンの１日投与量は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質による治療の前に一日当たり約３０〜２００単位の間になり、治療後に１％まで徐々に減少する。
様々な実施形態において、インスリンの前記投与は食事の前に行われ得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事の１２時間よりも前、１１時間よりも前、１０時間よりも前、９時間よりも前、８時間よりも前、７時間よりも前、６時間よりも前、５時間よりも前、４時間よりも前、３時間よりも前、２時間よりも前、１時間よりも前、５０分よりも前、４０分よりも前、３０分よりも前、２０分よりも前、１０分よりも前、５分よりも前、または１分よりも前に投与され得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事よりも１２時間未満、１１時間未満、１０時間未満、９時間未満、８時間未満、７時間未満、６時間未満、５時間未満、４時間未満、３時間未満、２時間未満、１時間未満、５０分未満、４０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、または１分未満の前に投与され得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事よりも約１分〜約１０分の間、約５分〜約３０分の間、約２０分〜約６０分の間、約１時間〜約３時間の間、約２時間〜約１０時間の間、または約５時間〜約１２時間の間の前に投与され得る。
様々な実施形態において、インスリンの前記投与は食事の後に行われ得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事の１２時間よりも後、１１時間よりも後、１０時間よりも後、９時間よりも後、８時間よりも後、７時間よりも後、６時間よりも後、５時間よりも後、４時間よりも後、３時間よりも後、２時間よりも後、１時間よりも後、５０分よりも後、４０分よりも後、３０分よりも後、２０分よりも後、１０分よりも後、５分よりも後、または１分よりも後に投与され得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事から１２時間未満、１１時間未満、１０時間未満、９時間未満、８時間未満、７時間未満、６時間未満、５時間未満、４時間未満、３時間未満、２時間未満、１時間未満、５０分未満、４０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、または１分未満の後に投与され得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事よりも１２時間未満、１１時間未満、１０時間未満、９時間未満、８時間未満、７時間未満、６時間未満、５時間未満、４時間未満、３時間未満、２時間未満、１時間未満、５０分未満、４０分未満、３０分未満、２０分未満、１０分未満、５分未満、または１分未満の前に投与され得る。様々な実施形態において、そのインスリンは食事から約１分〜約１０分の間、約５分〜約３０分の間、約２０分〜約６０分の間、約１時間〜約３時間の間、約２時間〜約１０時間の間、または約５時間〜約１２時間の間の後に投与され得る。
別の態様では本開示は、Ｔ１Ｄと診断された患者を治療するための方法であって、（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量、および（ｂ）インスリンではない血糖降下薬を前記患者に投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、その血糖降下薬はビグアニド類、スルホニル尿素類、メグリチニド類、チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）類、α−グルコシダーゼ阻害剤、ＤＰＰ−４阻害剤、胆汁酸捕捉剤、ドーパミン−２アゴニスト、ＳＧＬＴ２阻害剤（例えば、カナグリフロジン、ダパグリフロジン、およびエンパグリフロジン）、ＧＬＰ−１アゴニスト、ＧＬＰ−１Ｒアゴニスト、およびアミリン模倣物から選択される。
別の態様では本開示は、Ｔ１Ｄと診断された患者を治療するための方法であって、（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量、および（ｂ）抗肥満薬を前記患者に投与することを含む前記方法を含む。様々な実施形態において、その抗肥満薬は腸管選択的ＭＴＰ阻害剤、ＣＣＫａアゴニスト、５ＨＴ２ｃアゴニスト、ＭＣＲ４アゴニスト、リパーゼ阻害剤、オピオイドアンタゴニスト、オレオイル−エストロン、オビネピチド、プラムリンチド（ＳＹＭＬＩＮ（登録商標））、テソフェンシン、レプチン、ブロモクリプチン、オルリスタット、ＡＯＤ−９６０４、およびシブトラミンから選択される。
様々な実施形態において、前記併用療法は同じ医薬組成物または別々の医薬組成物のどちらかの中にある前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物を同時に投与することを含む。様々な実施形態において、単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物は連続的に投与される、すなわち、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物は前記第２薬剤組成物の投与の前または後のどちらかに投与される。
様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与は同時である、すなわち、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与期間が相互に重なり合う。
様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物と前記第２薬剤組成物の投与は同時ではない。例えば、様々な実施形態において、前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物の投与は前記第２薬剤組成物が投与される前に終了する。様々な実施形態において、前記第２薬剤組成物の投与は前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質組成物が投与される前に終了する。
本発明を説明してきたが、次の実施例は例示として提供され、限定として提供されるわけではない。
３ｍｇ／ｋｇの抗ＧＣＧＲ抗体の単回注射によって１２週齢のオスｏｂ／ｏｂ処理マウスにおいて８日間にわたって血糖レベルを効果的に低下させることが可能であることが以前に示された（米国特許第７９４７８０９号明細書を参照されたい）。本実施例ではキメラ抗ＧＣＧＲ抗体（本明細書においてＲＥＭＤ２．５９Ｃと呼ぶ）のインビボ活性をストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導Ｔ１Ｄマウス試験において評価する。ＲＥＭＤ２．５９Ｃは配列番号８に示されている重鎖配列と配列番号９に示されている軽鎖配列を備える。
健康なＢａｌｂ／ｃマウス（オス、８〜１０週齢、２０〜２２ｇ）を一晩にわたって絶食させた。ＳＴＺ注射（６０ｍｇ／ｋｇ／日）を１日目から５日目まで５日間にわたって連続的に全ての動物に対して実施した。１４日間の（最後のＳＴＺの投与後の）安定化期間の後にその動物の体重と空腹時血糖値に基づき、コンピューター生成ランダム化法を用いてマウスを無作為にそれぞれの群に割り当てた。その後、それらのマウスにベヒクル、０．３ｍｇ／ｋｇ（低用量）、１．５ｍｇ／ｋｇ（中用量）、または７．５ｍｇ／ｋｇ（高用量）のＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体のいずれかを皮下注射によって毎週投与した。ベヒクルは１０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、および０．００４％ポリソルベート２０を含んだ。１．８ｍＬのＲＥＭＤ２．５９Ｃストック溶液（２．３７ｍｇ／ｍＬ）を３．８８７ｍＬのベヒクル（ｐＨ５．２）に混合することにより検査試料を調製した。溶液の終濃度は０．７５ｍｇ／ｍＬであった。この製剤は高用量処置群（７．５ｍｇ／ｋｇ）用であった。中用量製剤と低用量製剤はベヒクルを使用した高用量製剤の５倍希釈または２５倍希釈により作製された。それらの試験群および群当たりの動物の数が表１に示されている。
Figure 2017522368
１２週間の試験期間にわたって、例えば、（ｉ）体重（週に一回）、（ｉｉ）週毎の摂食量（食物摂取／食物排出）、（ｉｉｉ）グルコース定量（検査前に６時間にわたってマウスを絶食させ、アキュチェックアビバシステム（登録商標）を使用して尾静脈を介して空腹時血糖レベルを測定する）、（ｉｖ）ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量（安楽死前に心臓穿刺を介して抗凝血剤を含むチューブに血液試料を採取し、ＴＯＳＨＩＢＡ ＴＢＡ−４０ＦＲ自動化生化学分析機を使用することでＨｂＡ１ｃを測定する）、（ｖ）インスリン定量、（ｖｉ）Ｃ−ペプチド定量、（ｖｉｉ）ＧＬＰ−１定量、（ｖｉｉｉ）グルカゴン定量、（ｉｖ）アセト酢酸（ＡｃＡｃ）定量、および（ｘ）β−ヒドロキシ酪酸（ＢＯＨ））定量をはじめとする様々なパラメーターを測定する。項目（ｖ）〜（ｘ）について、投与前および試験終了時に抗凝血剤を全く含まないチューブに血液試料を採取し、直ちに遠心分離し、そしてＥＬＩＳＡ法による評価のために血清を別の試験管に移す。
体重
試験期間にわたって全ての動物の体重を毎週測定した。
結果が図１および表２に示されており、中用量と高用量のＲＥＭＤ２．５９Ｃで処置された動物は初期の体重減少を示し、各用量はわずかに異なるパターンを示した。
Figure 2017522368
摂食量
試験期間にわたって全ての試験群の全ての動物について摂食量（食物摂取／食物排出）を毎週記録した。
図２および表３および４に示されているように、ＲＥＭＤ２．５９Ｃ処置動物では摂食量が用量依存的に少なくなり、摂食量当たりの体重の平均値の増加によって反映された（表４の右の列）。

Figure 2017522368

Figure 2017522368
血糖
午前９時から午後３時まで血糖検査前の６時間にわたってマウスを絶食させ、アキュチェックアビバシステムを使用して週毎に尾静脈を介して空腹時血糖レベルを測定した。
図３および下の表５に示されているように、６ｍｍｏｌ／Ｌ（または１０８ｍｇ／ｄｌ）より下の正常なレベルと対照的に１７．３〜２２．９ｍｍｏｌ／Ｌの範囲（または３１１〜４１２ｍｇ／ｄｌの範囲）に達した空腹時血糖レベルの上昇によってそれらのマウスにおけるＴ１Ｄが確認される。
Figure 2017522368
前記試験はＲＥＭＤ２．５９Ｃが空腹時血糖レベルの低下に対して顕著な効果を用量依存的に有すること、および高用量のＲＥＭＤ２．５９Ｃによる処置によってインスリン無しで早くも第１週で血中濃度が正常に戻り、且つ、１２週間にわたって正常なレベルが維持されることが可能であったことを示している。
血液生化学
予定された試験終了の前に心臓穿刺を介して抗凝血剤を含むチューブと含まないチューブに血液試料を採取した。抗凝血剤を含まない試験管内のそれらの試料をすぐに４℃、８０００ｒｐｍで１５分間にわたって遠心分離し、そして血清を別の試料管に移した。ＴＯＳＨＩＢＡ ＴＢＡ−４０ＦＲ自動化生化学分析機を使用することでＨｂＡ１ｃ、アルブミン（ＡＬＢ）および全タンパク質（ＴＰ）を測定した。全ての試験群の血液化学のパラメーターが表６および図４および５に示されている。
Figure 2017522368
高用量のＲＥＭＤ２．５９Ｃで処置された糖尿病マウスではＨｂＡ１ｃレベルは処置から１２週間後の時点で正常であり（４±１％）、一方でベヒクル処置された糖尿病管理マウスのＨｂＡ１ｃは平均で１１±１％であった（図４）。この試験は外因性インスリン療法が無くてもＳＴＺ誘導Ｔ１ＤマウスにおいてＲＥＭＤ２．５９ＣがＨｂＡ１ｃレベルの低下および正常化に対して顕著な効果を用量依存的に有することを示している。このことは６％より低いＨｂＡ１ｃレベルがＴ１Ｄ患者において稀であるという点で有意である。高用量ＲＥＭＤ２．５９Ｃ処置糖尿病マウスにおけるアルブミンの顕著な増加と全タンパク質レベルの上昇傾向という追加の発見はタンパク質同化の改善および／またはタンパク質異化の低下を示唆している（表６）。このことはグルカゴン作用を阻止する薬剤がヒトにおいてＴ１Ｄを効果的に治療し得ることを示唆している。
ＲＥＭＤ２．５９Ｃの安全性と効力を評価するために様々な追加の手法およびパラメーターを検査した。
血清インスリン／Ｃ−ペプチド／ＧＬＰ−１／ＡｃＡｃ／ＢＯＨ／グルカゴン定量
Ｃ−ペプチド、ＧＬＰ−１、ＡｃＡｃ、ＢＯＨ、インスリンおよびグルカゴンの血清レベルの分析にも全血試料を使用し、処置から１２週間後の時点でそれらのレベルの各々をＥＬＩＳＡ法により測定した。データが図６〜８に示されている
全般的に、ＲＥＭＤ２．５９Ｃはその時点で検査された条件ではＣ−ペプチドレベル、ＧＬＰ−１レベル、ケトン体（ＡｃＡｃ、ＢＯＨ）レベルおよびインスリンレベルに対して統計学的に有意な効果を有しない。ＲＥＭＤ２．５９Ｃ処置動物では血清グルカゴンレベルの上昇が用量依存的に存在した。高用量ＲＥＭＤ２．５９Ｃ処置動物では血清グルカゴンが有意により高い（図７を参照されたい）。
巨視的測定と分析
死体の解剖に続いて全ての試験動物の膵臓を固定し、処理し、そして将来の組織学的ＨＥ染色のためにパラフィンブロックステージにした。抗インスリン抗体と抗グルカゴン抗体を用いるＩＨＣを膵臓組織試料に対して実施した。
本実施例では実施例１に記載されるように調製された膵臓組織試料に組織学的ＨＥ染色と抗インスリン抗体および抗グルカゴン抗体を用いる免疫組織化学を行った。
試料リストが表７に示されている。
Figure 2017522368
組織学的ＨＥ染色の結果が図９に示されている。
３μｍの厚みの組織切片をＩＨＣ用に調製した。Ａｂｃａｍ（登録商標）間接抗原抗体標識方法と製造業者の指示による染色プロトコルを用い、且つ、次の試薬、すなわち、（ａ）一次抗体：抗グルカゴン抗体＝ウサギポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ１８４６１）および抗インスリン抗体＝モルモットポリクローナル抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ７８４２）、（ｂ）二次抗体：ビオチン化ヤギ抗ウサギＩｇＧ−Ｈ＆Ｌ（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ９７０４９）およびビオチン化ヤギ抗モルモットＩｇＧ−Ｈ＆Ｌ（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ６９０７）、（ｃ）検出試薬＝ＡＢＣ−ＨＲＰキット（ベクター・ラボラトリーズ、カタログ番号ｐｋ−４０００）およびＡＢＣ−ＡＰキット（ベクター・ラボラトリーズ、カタログ番号ａｋ−５０００）、（ｅ）ＤＡＢペルオキシダーゼ基質キット（ベクター・ラボラトリーズ、カタログ番号ｓｋ−４１００）、および（ｅ）レッド・アルカリホスファターゼ・基質キットＩＩＩ（ベクター・ラボラトリーズ、カタログ番号ｓｋ−５１００）を使用してＩＨＣを実施した。
抗グルカゴン抗体特異的膵臓アルファ（α）細胞をＡＢＣ−ＨＲＰ方法によって染色した。そして、ＤＡＢ基質（３，３−ジアミノベンジジン）染色によって濃褐色（矢印）として陽性細胞を視覚化した。抗インスリン抗体特異的膵臓ベータ（β）細胞をＡＢＣ−ＡＰキットで染色した。アルカリホスファターゼ基質を用いて赤色（矢印）に見られるように陽性標識細胞を視覚化した。膵島におけるグルカゴンとインスリンの二重染色が図１０に示されており、その図は膵島β細胞からのインスリン分泌の回復を示している。
定量および統計分析
追加の分析のために試験動物の半分の膵臓切片に由来する全ての染色画像を４０倍の倍率でキャプチャーし、膵臓組織内の全ての膵島を２００倍の倍率でキャプチャーした。膵島と膵臓組織全体の面積の合計をそれぞれ計測することによって定量的標識を実施した。そのデータを膵臓組織当たりの膵島の面積の合計として表した。膵臓組織内の膵島を２００倍の倍率でキャプチャーし、全ての膵島内の陽性標識細胞を評価した。境界が明確な膵島の面積を測定し、且つ、これらの領域内の各マーカーについての個々の染色細胞の面積を計測することで定量的陽性標識を実施した。そのデータを膵島の面積の総和で除算しているインスリンまたはグルカゴンについての陽性細胞の面積として表した。
α細胞またはβ細胞のパーセンテージ＝グルカゴンまたはインスリンの陽性細胞の面積／全膵島の面積×１００％
それらの群の間で一元分散分析（ＡＮＯＶＡ）検定（ＳＰＳＳ１７．０）を適用した。ｐ＜０．０５を有意であるとした。
前記動物膵臓組織における膵島のパーセンテージが図１１Ａ〜Ｃに示されている。膵島の数、膵島におけるインスリン面積、グルカゴン面積、およびインスリンとグルカゴンの陽性細胞のパーセンテージが表８および図１２Ａ〜Ｂに示されている。
Figure 2017522368
検査化合物ＲＥＭＤ２．５９Ｃ（７．５ｍｇ／ｋｇ）はＳＴＺ誘導性１型糖尿病のマウスに由来する膵臓組織切片上のβ細胞の数の増加に対して有意な効果を有する。加えて、そのデータはこれらの細胞の全てがインスリンの産生と分泌のために機能的でもあることを示している。ＲＥＭＤ２．５９Ｃはα細胞におけるグルカゴン染色の副次的増強も誘導した。これらの観察結果は抗インスリン抗体および抗グルカゴン抗体を用いるＩＨＣ二重標識と顕微鏡画像定量分析により確認された。その組織学定量データはベヒクル対照群との比較において膵島の面積とパーセンテージ膵島面積が高用量（７．５ｍｇ／ｋｇ）のＲＥＭＤ２．５９Ｃで処置されたマウスの膵臓切片において有意に増加することを示した。顕著なことに、α細胞の数はβ細胞よりも多いようであり、そのことはＥＬＩＳＡ法により分析された血清グルカゴンのレベルについてのデータと相関し、ＲＥＭＤ２．５９Ｃによってグルカゴン受容体の効果的な遮断が起きている中で処置動物に対して臨床的な害が無いはずであるグルカゴン分泌の副次的増加を示している。
実施例１および２のデータはインスリン無しでＳＴＺ誘導Ｔ１Ｄマウスにおいて化合物ＲＥＭＤ２．５９Ｃによって体重減少を達成することができ、血糖レベルを低下させることができ、血液Ｈｂ１Ａｃを減少させることができ、且つ、膵臓内分泌細胞の機能を回復させることができることを示している。
本実施例では配列番号２の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号３の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備える完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体（本明細書においてＲＥＭＤ−４７７と呼ぶ）をアロキサン誘導糖尿病マウス試験において評価した。
アロキサン誘導糖尿病マウスに緩衝液（対照、ｎ＝５）または５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ−４７７モノクローナル抗体を含む緩衝液（ｎ＝６）を皮下注射し、８日間にわたって血糖濃度を毎日モニターした。ＲＥＭＤ−４７７で処置されたマウスでは毎日の血糖測定値が平均で８５±５ｍｇ／ｄｌであり、８日間にわたって正常血糖のままであり続けた（図１３）。その時点で肝臓を収集した。対照的に、ベヒクル（緩衝液）処置マウスは試験期間にわたって高血糖（血糖＞５００ｍｇ／ｄｌ）のままであり続けた。
このデータはヒト抗ＧＣＧＲ抗体であるＲＥＭＤ−４７７も血糖を１００ｍｇ／ｄｌよりも下に低下させ、維持することができることを示している。
本実施例ではアロキサン誘導糖尿病マウスにおける高血糖症を元に戻すＲＥＭＤ−４７７の能力を評価した。グルカゴンシグナルのトランスデューサ―であるｃＡＭＰ応答配列結合タンパク質（ＣＲＥＢ）および糖新生性グルカゴン標的であるホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）は肝臓におけるグルカゴン作用の重要なマーカーである。ＣＲＥＢのリン酸化およびＰＥＰＣＫの発現をアロキサン誘導糖尿病マウスと非糖尿病マウスにおいて測定した。ＲＥＭＤ−４７７の治療を受けたマウスまたは受けていないマウスの肝臓組織から調製された全タンパク質抽出物をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離し、ニトロセルロース膜（Ｂｉｏ−Ｒａｄラボラトリーズ、ハーキュリーズ、カリフォルニア州、米国）に転写した。０．１％ツイーンおよび５％乾燥脱脂粉乳を含む１×ＴＢＳ（ＴＢＳＴ−ＭＬＫ）の中でそのブロットされた膜を穏やかに定速で撹拌しながら１時間にわたって室温でブロックした。新しく調製したＴＢＳＴ−ＭＬＫ中の抗ホスホＣＲＥＢ一次抗体、抗ＣＲＥＢ一次抗体、または抗ＰＥＰＣＫ一次抗体（セル・シグナリング・テクノロジーズ、ビバリー、マサチューセッツ州、米国）、または抗γ−チューブリン一次抗体（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ミズーリ州）との４℃で一晩にわたる撹拌を含むインキュベーションの後にその膜をＴＢＳＴ緩衝液で２回洗浄した。
非糖尿病性肝臓と比較してアロキサン誘導糖尿病マウスの肝臓ではリン酸化ＣＲＥＢの３．５倍の増加とＰＥＰＣＫ発現の２．５倍の増加があった（図１４Ａ〜Ｂ）。これらの差異にグルカゴンが介在しているか評価するため、５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ−４７７を用いてアロキサン誘導糖尿病マウスを処置した。ＲＥＭＤ−４７７処置肝臓では、リン酸化ＣＲＥＢタンパク質が非糖尿病性レベルまで減少し、ＰＥＰＣＫタンパク質発現が非糖尿病マウスのその発現の下まで減少した（図１５Ａ〜Ｂ）。このデータはＴ１Ｄマウスにおける肝臓糖新生の活性化はそれらのマウスの高グルカゴン血症の結果であることを示している。これはＴ１Ｄについての新しくて重要な発見である。そして、より重要なことに、そのデータはＲＥＭＤ−４７７によってもアロキサン誘導糖尿病マウスにおいて高血糖症を元に戻すことができることを示している。
本実施例ではＲＥＭＤ２．５９Ｃのインビボ活性をストレプトゾトシン（ＳＴＺ）誘導Ｔ１Ｄマウス試験において配列番号２８の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号４７の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備える完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体（本明細書においてＲＭＥＤ２．１０と呼ぶ）の活性、およびＧＣＧＲに結合するが、拮抗性ではない完全ヒトＧＣＧＲ抗体（本明細書においてと呼ぶＲＥＭＤ２．４５）の活性と比較する。
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（バイタル・リバー・ラボラトリー・アニマル・テクノロジー社）（オス、８〜１０週齢、２０〜２２ｇ）を一晩にわたって絶食させた。単回ＳＴＺ注射（１７５ｍｇ／ｋｇ）を全ての動物に対して実施した。１０日間の（ＳＴＺの投与後の）安定化期間の後にその動物の体重と空腹時血糖値に基づき、コンピューター生成ランダム化法を用いてマウスを無作為にそれぞれの群（１０匹／群）に割り当てた。その後、それらのマウスにベヒクルまたは７．５ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ２．５９Ｃ抗体、ＲＥＭＤ２．１０抗体、またはＲＥＭＤ２．４５抗体のいずれかを皮下注射によって毎週投与した。ベヒクルは１０ｍＭ酢酸ナトリウム、５％ソルビトール、および０．００４％ポリソルベート２０を含んだ。検査試料用の溶液の終濃度は０．７５ｍｇ／ｍＬであった。処置期間は１３日であった。
血糖定量
試験期間にわたって血糖定量を行った。午前９時から午後３時まで血糖検査前の６時間にわたってマウスを絶食させ、アキュチェックアビバシステムを使用して週毎に尾静脈を介して空腹時血糖レベルを測定した。
図１６および下の表９に示されているように、６ｍｍｏｌ／Ｌ（または１０８ｍｇ／ｄｌ）より下の正常なレベルと対照的に１７．３〜２２．９ｍｍｏｌ／Ｌの範囲（または３１１〜４１２ｍｇ／ｄｌの範囲）に達した空腹時血糖レベルの上昇によってそれらのマウスにおけるＴ１Ｄが確認される。
Figure 2017522368

前記試験はＲＥＭＤ２．５９Ｃのように完全ヒトＲＥＭＤ２．１０抗体が空腹時血糖レベルの低下に対して顕著な効果を有し、且つ、インスリン無しで２週間以内に血中濃度が正常に近いレベルまで戻ることが可能であることを示している。前記試験は（拮抗性ＧＣＧＲ抗体ではない）ＲＥＭＤ２．４５抗体が空腹時血糖レベルの低下に対して効果を有しないことも示している。
本実施例は、Ｔ１Ｄと診断されたことがある患者を治療するための本明細書に記載される方法の１つの例となる使用法について説明する。年齢が１８〜６０歳であり、且つ、その時点でインスリン補充療法を受けている２０人のＴ１Ｄ患者（男性および女性）が５日間の単回投与試験に参加するために特定される。処置群にはプラセボ群と体重に対して１ｍｇ／ｋｇのＲＥＭＤ−４７７で処置される群が含まれる。この試験はＲＥＭＤ−４７７の単回皮下注射後の基線期間から処置後期間までの２４時間のインスリン要求性の変化を評価および比較する。ＲＥＭＤ−４７７による処置は、同標的正常グルコースレベルを維持しつつ、プラセボ対照群と比較して２４時間のインスリン投与要求性を著しく低下させると予期される。
本実施例は、Ｔ１Ｄと診断されたことがある患者を治療するための本明細書に記載される方法の追加の例となる使用法について説明する。インスリン単独療法の長期化に伴う合併症を著しく緩和し、患者の長期の予後および健康状態の改善に役立つことになるインスリン補充の必要性の排除、あるいは、インスリンの正常な１日投与量よりもかなり少ない投与法でのインスリン補充の提供によって、より低いグルコースレベルおよび低下したＨｂＡ１ｃレベルにより判定されるより良好な糖尿病管理を達成することが臨床目標である。
Ｔ１Ｄと診断された個体、またはＴ１Ｄを発症する高いリスクがあると判断された個体を特定し、無作為に処置群に割り当てる。処置群にはプラセボ群と様々な投与量のＲＥＭＤ−４７７およびインスリン補充で処置される処置群が含まれる。非プラセボ処置群の例には、例えば、週当たり０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＲＥＭＤ−４７７の注射を受ける患者、および二週間に０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０２５ｍｇ／ｋｇ、０．０５ｍｇ／ｋｇ、０．０７５ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、０．７５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇのいずれかのＲＥＭＤ−４７７の注射を受ける患者が含まれることになる。様々な処置群において、患者は一日当たり９０〜１２０単位、一日当たり６０〜９０単位、一日当たり３０〜６０単位、または一日当たり１５〜３０単位、または一日当たり１０〜１５単位、または一日当たり５〜１０単位、または一日当たり１〜５単位のインスリン注射（単回注射または反復注射）も受けることになる。
本明細書において開示および請求された物品および方法の全てが本開示を踏まえて過度の実験を行うことなく作製および実行され得る。好ましい実施形態の点から本開示の物品および方法を説明してきたが、本開示の主旨と範囲から逸脱することなくそれらの物品および方法に対して変更を加えてよいことが当業者に明らかになる。当業者にとって明らかである全てのそのような変更および均等物は、現存するものであれ、後に開発されるものであれ、添付されている特許請求の範囲によって規定される本開示の主旨と範囲の内にあると見なされる。本明細書において言及された全ての特許、特許出願、および刊行物は本開示が関係する分野の当業者のレベルを表している。全ての特許、特許出願、および刊行物は全ての目的のために、且つ、ありとあらゆる目的のために参照によりその全体が援用されると各々個々の刊行物が具体的および個別に示された場合と同じ程度で参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。適切なことに本明細書において例示的に記載される本開示は本明細書において具体的に開示されていないどの要素が存在しない状態でも実施され得る。したがって、例えば、本明細書中の各例において、「含む」、「から基本的になる」、および「からなる」という用語のいずれかをその他の２つの用語のうちのいずれかで置き換えることができる。使用されてきた用語および表現は説明的であって、限定的ではない用語として使用されており、そのような用語および表現の使用には提示および記載された特徴またはそれらの特徴の一部のあらゆる同等の特徴を排除する意図が無く、請求されている本開示の範囲内で様々な改変が可能であることが理解される。したがって、本開示は好ましい実施形態と選択的な特徴によって具体的に開示されているが、当業者は本明細書において開示された考えの改変および変更を区分し直してよいこと、およびそのような改変と変更は添付されている特許請求の範囲によって規定される本開示の範囲の内にあると考えられることが理解されるべきである。
配列表
添付されている配列表に挙げられているアミノ酸配列は米国特許法施行規則第１．８２２条において規定されるアミノ酸の標準的３文字コードを使用して示されている。
配列番号１はヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）分子のアミノ酸配列である（受託番号ＡＡＩ０４８５５）。
配列番号２は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号３は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
配列番号４は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号５は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
配列番号６は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。配列番号７は完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
配列番号８はキメラ抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号９はキメラ抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
配列番号１０〜２８は様々な完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
配列番号２９〜４７は様々な完全ヒト抗ＧＣＧＲ抗体の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列である。
配列番号４８はカッパ軽鎖定常領域をコードするアミノ配列である。配列番号４９はラムダ軽鎖定常領域をコードするアミノ配列である。
配列番号５０はＩｇＧ２重鎖定常領域をコードするアミノ配列である。
配列番号５１はヒト抗ＧＣＧＲ抗体（ＲＥＭＤ−４７７）の重鎖をコードするアミノ酸配列である。配列番号５２はヒト抗ＧＣＧＲ抗体（ＲＥＭＤ−４７７）の軽鎖をコードするアミノ酸配列である。
［配列表］
配列番号１ ‐ ヒトグルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）分子のアミノ酸配列
ＭＰＰＣＱＰＱＲＰＬＬＬＬＬＬＬＬＡＣＱＰＱＶＰＳＡＱＶＭＤＦＬＦＥＫＷＫＬＹＧＤＱＣＨＨＮＬＳＬＬＰＰＰＴＥＬＶＣＮＲＴＦＤＫＹＳＣＷＰＤＴＰＡＮＴＴＡＮＩＳＣＰＷＹＬＰＷＨＨＫＶＱＨＲＦＶＦＫＲＣＧＰＤＧＱＷＶＲＧＰＲＧＱＰＷＲＤＡＳＱＣＱＭＤＧＥＥＩＥＶＱＫＥＶＡＫＭＹＳＳＦＱＶＭＹＴＶＧＹＳＬＳＬＧＡＬＬＬＡＬＡＩＬＧＧＬＳＫＬＨＣＴＲＮＡＩＨＡＮＬＦＡＳＦＶＬＫＡＳＳＶＬＶＩＤＧＬＬＲＴＲＹＳＱＫＩＧＤＤＬＳＶＳＴＷＬＳＤＧＡＶＡＧＣＲＶＡＡＶＦＭＱＹＧＩＶＡＮＹＣＷＬＬＶＥＧＬＹＬＨＮＬＬＧＬＡＴＬＰＥＲＳＦＦＳＬＹＬＧＩＧＷＧＡＰＭＬＦＶＶＰＷＡＶＶＫＣＬＦＥＮＶＱＣＷＴＳＮＤＮＭＧＦＷＷＩＬＲＦＰＶＦＬＡＩＬＩＮＦＦＩＦＶＲＩＶＱＬＬＶＡＫＬＲＡＲＱＭＨＨＴＤＹＫＦＲＬＡＫＳＴＬＴＬＩＰＬＬＧＶＨＥＶＶＦＡＦＶＴＤＥＨＡＱＧＴＬＲＳＡＫＬＦＦＤＬＦＬＳＳＦＱＧＬＬＶＡＶＬＹＣＦＬＮＫＥＶＱＳＥＬＲＲＲＷＨＲＷＲＬＧＫＶＬＷＥＥＲＮＴＳＮＨＲＡＳＳＳＰＧＨＧＰＰＳＫＥＬＱＦＧＲＧＧＧＳＱＤＳＳＡＥＴＰＬＡＧＧＬＰＲＬＡＥＳＰＦ
配列番号２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号３ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号４ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号５ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号６ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号７ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号８ ‐ ＧＣＧＲに結合するキメラ抗体の重鎖のアミノ酸配列
ＭＥＦＧＬＳＷＶＦＬＶＡＬＬＲＧＶＱＣＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＫＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ
配列番号９ ‐ ＧＣＧＲに結合するキメラ抗体の軽鎖のアミノ酸配列
ＭＤＭＲＶＰＡＱＬＬＧＬＬＬＬＷＦＰＧＡＲＣＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ
配列番号１０ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＬＳＤＧＲＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＹＥＩＬＴＧＹＧＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１１ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＬＮＤＧＲＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＤＹＥＩＬＴＧＹＧＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＴＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＳＶＳＳＮＧＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＹＤＹＡＧＳＶＫＳＲＩＮＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＶＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲＤＲＳＳＧＷＮＥＧＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１３ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＬＳＳＤＧＮＮＫＹＣＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＥＶＹＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１４ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＴＹＦＷＴＷＩＲＱＦＰＧＫＧＬＥＷＩＧＹＩＦＹＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＹＹＤＩＬＴＧＥＤＹＳＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１５ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＧＬＶＫＰＳＱＩＬＳＬＴＣＡＩＳＧＤＲＶＳＳＮＧＡＡＷＮＷＩＲＱＳＰＳＲＧＬＥＷＬＧＲＴＹＹＲＳＫＷＹＹＤＹＡＧＳＶＫＳＲＩＮＩＮＰＤＴＳＫＮＱＦＳＬＱＶＮＳＶＴＰＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＲＳＳＧＷＮＥＧＹＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１６ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＳＴＹＦＷＴＷＩＲＱＦＰＧＥＧＬＥＷＩＧＹＩＦＹＳＧＮＴＮＹＮＰＳＬＴＳＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＧＹＹＤＩＬＴＧＥＤＹＳＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１７ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＮＤＧＳＮＫＹＹＡＤＦＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＤＹＤＩＬＴＧＮＧＶＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１８ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＧＳＳＳＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＨＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＲＹＮＷＮＤＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号１９ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＡＦＳＳＹＧＩＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＧＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＶＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＦＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号２０ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＩＦＳＳＹＴＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＳＳＳＬＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＤＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＳＤＹＹＧＳＧＳＹＹＫＧＮＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２１ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＩＩＷＳＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＮＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＧＬＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＴＩＩＷＳＤＧＩＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＮＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＲＧＬＹＤＩＬＴＧＹＹＤＹＹＧＩＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２３ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＲＳＹＳＭＮＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＳＳＳＳＹＩＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＲＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２４ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＳＴＦＲＳＹＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＳＹＤＧＳＮＫＹＹＧＤＳＶＫＧＲＬＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＹＤＩＬＴＧＹＳＳＤＡＦＤＩＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ
配列番号２５ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＲＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＩＷＹＤＧＳＨＫＹＹＥＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＤＤＴＧＶＹＹＣＡＲＶＧＹＧＳＧＷＹＥＹＹＹＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２６ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２７ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ
配列番号２８ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＩＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＳＩＷＹＤＧＳＮＫＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＦＲＤＮＳＫＫＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＧＧＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号２９ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＫＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＶＶＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＨＹＰＬＴＦＧＧＧＴＲＶＥＩＫＲ
配列番号３０ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＤＩＳＮＹＬＡＷＦＱＱＲＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＶＶＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＬＱＰＥＤＦＡＴＹＦＣＱＱＹＮＨＹＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３１ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＦＬＮＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＦＣＱＱＹＤＤＬＰＬＴＦＧＧＧＴＲＶＤＩＫＲ
配列番号３２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３３ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＱＮＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＶＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＶＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＮＳＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３４ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＦＰＳＳＬＳＡＳＩＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＦＬＮＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＤＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＡＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＶＡＴＹＦＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３５ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＥＮＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＦＧＶＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＧＮＳＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号３６ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＤＭＹＬＡＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＳＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＫＦＳＧＳＧＦＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＮＩＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＶＫＲ
配列番号３７ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３８ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＫＩＶＭＴＱＴＰＬＡＬＰＶＩＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＤＳＤＤＧＤＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＶＬＩＨＲＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＨＲＩＥＦＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号３９ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＲＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＬＱＨＮＳＹＰＷＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４０ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＧＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＥＡＬＱＴＭＣＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ
配列番号４１ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＧＩＶＬＴＱＳＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＨＳＮＧＹＮＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＬＧＳＮＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＥＡＬＱＴＭＳＳＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫＲ
配列番号４２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＦＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＴＬＬＤＳＤＤＧＮＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＲＬＩＹＴＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＩＹＹＣＭＱＨＩＥＦＰＳＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ
配列番号４３ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＳＴＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＴＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧ
配列番号４４ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＮＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＮＹＬＦＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＥＶＳＹＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＮＩＱＰＰＬＴＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫＲ
配列番号４５ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４６ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＥＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲ
配列番号４７ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣＶＲのアミノ酸配列
ＤＩＶＬＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＰＧＥＰＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＬＤＲＤＤＧＤＴＹＬＤＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＱＬＬＩＹＴＬＳＹＲＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＲＩＥＦＰＦＴＦＧＰＧＴＫＶＤＩＫＲ
配列番号４８ ‐ カッパ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号４９ ‐ ラムダ軽鎖定常領域のアミノ酸配列
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
配列番号５０ ‐ ＩｇＧ２重鎖定常領域のアミノ配列
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５１ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＨＣのアミノ酸配列
ＱＶＱＬＶＥＳＧＧＧＶＶＱＰＧＲＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＧＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＷＹＤＧＳＮＫＤＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＲＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＥＫＤＨＹＤＩＬＴＧＹＮＹＹＹＧＬＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号５２ ‐ ＧＣＧＲに結合するヒト抗体のＬＣのアミノ酸配列
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＧＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＶＱＰＥＤＦＶＴＹＹＣＬＱＨＮＳＮＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ

Claims (32)

  1. １型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療する方法であって、前記患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法。
  2. Ｔ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止する方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者に（ａ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｂ）インスリン補充を行うことを含む前記方法。
  3. 前記１つ以上の症状が、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、多尿症（頻尿）、および疲労からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
  4. Ｔ１Ｄの発症リスクがある患者を治療する方法であって、（ａ）Ｔ１Ｄの発症リスクがある患者を特定すること、および（ｂ）前記患者に（ｉ）ヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与すること、および（ｉｉ）インスリン補充を行うことを含む前記方法。
  5. Ｔ１Ｄの発症リスクがある前記患者が耐糖能障害および膵臓β細胞の喪失または機能不全の証拠を有するものとして特定される、請求項４に記載の方法。
  6. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の９０％〜７０％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  7. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の７０％〜５０％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の５０％〜３０％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の３０％〜１５％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  10. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の１５％〜１０％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  11. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の１０％〜５％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の５％〜１％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  13. 前記インスリン補充がインスリン補充の正常な１日投与量の１％〜０．１％を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
  14. １型糖尿病（Ｔ１Ｄ）と診断された患者を治療するための方法であって、前記患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法。
  15. Ｔ１Ｄに関連する１つ以上の症状を軽減、抑制、減弱化、または阻止するための方法であって、Ｔ１Ｄと診断された患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法。
  16. 前記１つ以上の症状が、過剰糖新生、過剰グリコーゲン分解、高血糖症、高グルカゴン血症、ケトン症、糖尿病性ケトアシドーシス、高トリグリセリド血症、血漿中遊離脂肪酸濃度上昇、体重減少、異化作用不全症候群、末期疾患、高血圧症、糖尿病性腎症、腎機能不全、腎不全、過食症、筋肉消耗、糖尿病性神経障害、糖尿病性網膜症、または糖尿病性昏睡、過剰ＨｂＡ１ｃレベル、多飲症（口渇感増長）、口内乾燥症（ドライマウス）、過食症（空腹感増長）、多尿症（頻尿）、および疲労からなる群より選択される、請求項１４に記載の方法。
  17. Ｔ１Ｄの発症リスクがある患者を治療する方法であって、（ａ）Ｔ１Ｄの発症リスクがある患者を特定すること、および（ｂ）前記患者にインスリン補充を行うことなくヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の治療有効量を投与することを含む前記方法。
  18. Ｔ１Ｄの発症リスクがある前記患者が耐糖能障害および膵臓β細胞の喪失または機能不全の証拠を有するものとして特定される、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組換え抗体、抗原結合性抗体断片、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ２、Ｆａｂ’２、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ｓｃＦｖ、ｄｓＦｖ、ｄＡｂ、ナノボディ、ユニボディ、ディアボディ、およびヘミボディからなる群より選択される単離抗体を含む、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
  20. 前記単離アンタゴニスト抗体または抗原結合性抗体断片が少なくとも約１×１０−７Ｍ、少なくとも約１×１０−８Ｍ、少なくとも約１×１０−９Ｍ、少なくとも約１×１０−１０Ｍ、少なくとも約１×１０−１１Ｍ、または少なくとも約１×１０−１２Ｍの解離定数（ＫＤ）でヒトグルカゴン受容体に特異的に結合する、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記単離アンタゴニスト抗体が完全ヒト抗体である、請求項１９に記載の方法。
  22. 前記完全ヒト抗体が配列番号２の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号３の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  23. 前記完全ヒト抗体が配列番号４の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号５の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  24. 前記完全ヒト抗体が配列番号６の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号７の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  25. 前記完全ヒト抗体が配列番号２８の重鎖可変領域をコードするアミノ酸配列と配列番号４７の軽鎖可変領域をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  26. 前記キメラ抗体が配列番号８の重鎖をコードするアミノ酸配列と配列番号９の軽鎖をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  27. 前記キメラ抗体が配列番号５１の重鎖をコードするアミノ酸配列および配列番号５２の軽鎖をコードするアミノ酸配列を備えるヒト抗ＧＣＧＲ抗体を含む、請求項１９に記載の方法。
  28. 前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の前記治療有効量が一週間当たり体重に対して０．００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜９０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜８０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜７０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜６０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．００１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜５ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜４ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜３ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜２ｍｇ／ｋｇ、０．０１０〜１ｍｇ／ｋｇ、０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、０．１〜４ｍｇ／ｋｇ、０．１〜３ｍｇ／ｋｇ、０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ、０．５〜４０ｍｇ／ｋｇ、０．５〜３０ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１０ｍｇ／ｋｇ、０．５〜５ｍｇ／ｋｇ、０．５〜４ｍｇ／ｋｇ、０．５〜３ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１ｍｇ／ｋｇ、１〜５０ｍｇ／ｋｇ、１〜４０ｍｇ／ｋｇ、１〜３０ｍｇ／ｋｇ、１〜２０ｍｇ／ｋｇ、１〜１０ｍｇ／ｋｇ、１〜５ｍｇ／ｋｇ、１〜４ｍｇ／ｋｇ、１〜３ｍｇ／ｋｇ、１〜２ｍｇ／ｋｇ、および０．１ｍｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇからなる群より選択される、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の前記治療有効量が一週間当たり体重に対して０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質の前記治療有効量が二週間当たり体重に対して０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇである、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記患者への全身投与用の医薬組成物を形成するために前記単離アンタゴニスト性抗原結合タンパク質が薬学的に許容可能な担体と混合される、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記全身投与が静脈内注射または注入、筋肉内注射または注入、皮下注射または注入、腹膜内注射または注入、経皮注射または注入、動脈内注射または注入、胸骨内注射または注入、髄腔内注射または注入、脳室内注射または注入、尿道内注射または注入、頭蓋内注射または注入、滑膜内注射または注入から選択される、請求項３１に記載の方法。
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