CN113286896A - 治疗骨关节炎的富集策略中有用的标志物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及遗传药理学，更具体地涉及牵涉生物标志物的策略，该生物标志物与在治疗诸如骨关节炎的软骨疾病之前或期间对于化合物的临床响应相关。本发明尤其涉及JSW测量值与血液、血清、滑液或尿液中存在的特定蛋白水平的组合，其可以用于在诸如骨关节炎的软骨疾病的治疗框架内的策略，诸如临床试验中的患者富集、在治疗之前或期间的患者选择策略、或用于适应患者的治疗的策略。

Description

治疗骨关节炎的富集策略中有用的标志物
技术领域
本发明涉及遗传药理学，更具体地涉及牵涉标志物的策略，该标志物与在利用化合物治疗诸如骨关节炎的软骨疾病之前或期间对于该化合物的临床响应相关。本发明尤其涉及关节间隙宽度(JSW)测量值与血液、血清、滑液或尿液中存在的特定蛋白水平的组合，其可以用于在诸如骨关节炎的软骨疾病的治疗框架内的策略，诸如临床试验中的患者富集、在治疗之前或期间的患者选择策略、或用于适应患者的治疗的策略。
本发明还公开了基于JSW测量值与特定生物标志物水平的组合的诊断工具和试剂盒。因此，本发明可用于在开始利用化合物治疗之前或在治疗期间为软骨疾病的治疗预测对于该化合物的响应。策略可以用于选择/鉴别要通过关节内施用治疗软骨疾病的活性化合物来治疗的对象，以及用于患者富集策略。这些策略在例如诊断中的应用能使对象增加获益并降低风险。
背景技术
软骨疾病广义上指以结缔组织代谢异常退化为特征的疾病，其表现为受影响身体部位的疼痛、僵硬和运动受限。这些疾病可能是由于病变或可能是创伤或损伤的结果。软骨疾病包括但不限于骨关节炎(OA)、软骨损伤(包括软骨和关节的运动损伤，以及诸如微骨折的手术损伤)。成熟的软骨自我修复的能力有限，这主要是因为成熟的软骨细胞由于没有血管而几乎没有增殖能力。此外，软骨营养不良，并且氧压力低。由损伤或疾病引起的受损软骨特别是关节软骨的置换是医师的一大难题，现有外科治疗方法被认为结果难以估测，且仅在有限的时间内有效。所以，大多较年轻的数患者要么不求医，要么被建议尽可能推迟治疗。必需治疗时，标准程序因年龄而不同，可以是全关节置换，软骨切片移植或骨髓刺激技术(诸如微骨折)。微骨折是一种常用的方法，涉及软骨下骨的穿刺以刺激骨髓衍生干细胞的软骨沉积。然而，已经表明，该技术不能充分修复软骨缺损，并且形成的新软骨主要是纤维软骨，导致功能和生物力学的不足或改变。实际上，纤维软骨不具有相同的耐久性，并且可能无法正确粘附至周围的透明软骨。因此，新合成的纤维软骨可能更容易破损(预期时限：5-10年)。
对于患有骨关节炎的对象，非手术治疗主要包括物理疗法、改变生活方式(例如增加体育锻炼)、支持装置、口服和注射药物(例如非甾体抗炎药)、助行器和医学症状管理。一旦这些治疗失败，诸如关节置换的手术将成为对象的主要选择。胫骨或股骨截骨术(切开骨头以重新平衡关节磨损)可以减轻症状，帮助维持积极的生活方式，并延迟全关节置换的需要。全关节置换可以缓解晚期骨关节炎的症状，但通常需要患者的生活方式和/或活动水平的改变。
当前，市场上的药物治疗主要是针对镇痛。目前还没有可以通过商业途径获得的治疗方法可以修复或延缓软骨损伤(参见Lotz，2010)。
成纤维细胞生长因子18(FGF-18)是FGF家族的成员，与FGF-8和FGF-17关系较近。已知FGF-18是软骨细胞和成骨细胞的增殖剂(Ellsworth等，2002；Shimoaka等，2002；Gigout等，2017)。已经提出FGF-18可单独(WO2008023063)或与透明质酸联合(WO2004032849)用于治疗软骨疾病，诸如骨关节炎和软骨损伤。
斯非福明(sprifermin)是人FGF-18的截短形式，其正处于骨关节炎和软骨损伤两者的治疗的临床试验中(参见例如NCT01033994、NCT00911469和NCT01066871)。目前，斯非福明的给药方案为每周一次、持续3周(一个治疗周期)，该药物通过关节内注射施用。该治疗周期可以重复。该给药方案记载于WO2008/023063。
当时，临床试验期间向对象提供利用FGF-18进行的OA和软骨损伤治疗，但没有关于响应的预测性信息(Lohmander等，2014；Dahlberg等，2016)，即不知道该治疗是否可能是高效的、中等有效的、或仅显示很低的效果或无效。当前，许多接受治疗的对象群体在使用斯非福明至少一个治疗周期后，根据例如MRI技术测量的软骨厚度和WOMAC评分，对治疗表现出中度/高度响应，但是，另一些对象对该治疗无响应(即MRI测得的软骨厚度没有增加或增加有限)，或者虽有响应但表现出高于对照的WOMAC评分。
WO2014/023703描述了与利用FGF-18治疗软骨疾病(诸如OA、软骨损伤或微骨折)的临床响应质量有关的遗传标志物(SNP IL-1RN rs9005和IL-1RN rs315952的组合)。这些标志物可用于通过治疗前的遗传筛选来鉴别更可能对FGF-18治疗表现出特定响应(诸如对FGF-18治疗表现出非常良好的临床响应)的对象亚组，或者正相反地，鉴别治疗可能对他们无效的对象。
关于对象对治疗的临床响应类型的知识可用于为临床试验选择患者或对患者分层、选择疗法、优化疗法，诸如选择利用化合物的治疗作为一线疗法或调整给药方案。此类信息在临床上对于临床试验管理或者对象的软骨疾病(诸如OA和/或软骨损伤)的医疗管理将是有用的。此外，此类预测性信息在临床上还可用于指导给药方案决策。
需要鉴别有助于预测安慰剂响应、帮助临床试验管理、优化治疗或选择治疗的更多标志物，以便为需要治疗的对象或为患者寻找最佳疗法的医生提供全面解决方案。
发明内容
如本文所述，代谢生物标志物(诸如proC2或CTX-II)与物理标志物JSW(关节间隙宽度)相组合，可用于检测、分层、诊断和/或治疗骨关节炎或软骨疾病患者。这些生物标志物(或其组合)中的至少一种的表达水平(或量)与物理标志物JSW的组合可以用于，例如，更好地分离患者或者检测要纳入或相反被排除在特定疗法之外的患者，
本发明涉及一种降低临床试验风险或在临床试验中(其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关)或利用活性化合物治疗期间确定安慰剂效应的方法，所述方法包含以下步骤：
a)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，
b)根据步骤a)的结果预测安慰剂效应的风险。
根据所述方法，高于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着安慰剂效应。相反地，低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着无安慰剂效应或低安慰剂效应。
本发明还涉及一种降低临床试验风险的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，
c)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象对于利用所述化合物的治疗的敏感性，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
根据所述方法，高于350±2SD ng/mmol的CTX-II或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着对于利用活性化合物的治疗的低敏感性或无敏感性。相反地，1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW、2)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SDng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着对于利用活性化合物的治疗的敏感性。
还记载了一种选择患有软骨疾病的对象以纳入利用活性化合物的治疗或临床试验中或排除在其外的方法，所述选择基于对象对于所述治疗的敏感性的可能性，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)；其中这些蛋白质的至少一种的量和JSW的宽度预示着对象对于所述治疗敏感或不敏感的风险，以及
b)选择敏感的对象作为适合所述治疗或临床试验的对象。
根据所述方法，高于350±2SD ng/mmol的CTX-II或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，优选导致将所述对象从利用活性化合物的治疗中排除。相反地，1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW、2)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW的存在，导致将所述对象纳入利用活性化合物的治疗中。
还描述了一种试剂盒，其包含用于实施根据本发明的方法的工具(means)和使用说明书。
还涵盖了一种活性化合物，其用于治疗患有软骨疾病的对象，其特征在于所述对象呈现1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW、2)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
本发明还涉及一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗敏感的风险；
b)选择具有以下情况的对象
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，
ii.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
iii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
c)对所述选择的对象关节内施用所述活性化合物。
在作为整体的本发明的特定实施方式中，即本文中提及的任何方法或用途中，所述对象患有软骨疾病，所述软骨疾病选自由骨关节炎、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术(例如微骨折)所组成的组，所述活性化合物可以选自例如由FGF-18化合物、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白所组成的组。
应当理解，在本文中提及的任何方法或用途中，在确定至少一种蛋白质的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或测试样品)。此外，还应理解，本文中提及的任何方法或用途均在体外(in vitro)进行而不是在动物或人体上进行。
定义
-本文中所用的术语“FGF-18化合物”或“FGF-18”意指保留了野生型人FGF-18蛋白的至少一种生物活性(例如，增加成骨细胞活性，参见WO98/1664，或增加软骨形成，参见WO2008/023063)的蛋白质。FGF-18可以是原生的(SEQ ID NO:1)、其成熟形式(对应于SEQID NO:1的氨基酸序列的残基28(Glu)至残基207(Ala))或其截短形式诸如斯非福明(如SEQID NO:2所示；其中SEQ ID NO:2的氨基酸残基2至170对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基28至196)。术语“FGF-18化合物”还包括FGF-18的原生形式、成熟形式或截短形式的变体或突变体，以及包含与异源蛋白或化合物(例如EP17192467.3专利家族中公开的化合物)偶联的(生物)活性FGF-18部分的融合蛋白。在这样的融合蛋白中，FGF-18部分可以是FGF-18蛋白的原生形式、成熟形式或截短形式，或其变体或突变体。
-本文中所用的术语“BMP-2”是一种蛋白质，其诱导基质合成并促进软骨修复，并且在将骨祖细胞分化为成骨细胞中起关键作用，从而促进骨骼和软骨形成(Deng等，2018)。人BMP-2的全长原生形式在SEQ ID NO.6中示出。BMP-2蛋白的一种重组形式称为地波特明α(Dibotermin alfa)。该术语“BMP-2”还包括其变体或包含BMP-2部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“BMP-7”是一种蛋白质，其已知具有成骨特性，表现为通过刺激软骨基质成分的合成并增加蛋白聚糖和胶原蛋白的合成，对软骨具有强大的合成代谢作用(Deng等，2018)。人BMP7的全长原生形式在SEQ ID NO.7中示出。BMP-2蛋白的一种重组形式称为艾托特明α(eptotermin alfa)。该术语还包括其变体或包含BMP-7部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“GDF-5”，也称为LAP-4或雷多特明(radotermin)，是一种蛋白质，除其他外，其对来自健康对象和OA患者两者的在体外培养的人关节软骨细胞中的基质合成具有刺激作用(Parrish等，2017)。人GDF-5的全长原生形式在SEQ ID NO.8中示出。该术语还包括其变体或包含GDF-5部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“FGFβ”或“FGF-2”是在软骨修复中已知的蛋白质。它也被证明可以刺激未成熟兔子的软骨细胞增殖(Ameye和Young，2006)。人FGF-2的全长原生形式在SEQ ID NO.9中示出。FGFβ蛋白的一种重组形式称为曲弗明(trafermin)。该术语还包括其变体或包含FGFβ部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“FGF-9”是已知在OA对象中延迟关节软骨降解，同时对骨赘形成具有相当负面影响的蛋白质(Zhou等，2016)。人FGF-9的全长原生形式在SEQ ID NO.10中示出。该术语还包括其变体或包含FGF-9部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“TGF-β”是属于TGF-β家族的蛋白质TGF-β，其在软骨维持中具有关键作用。TGF-β已被证明为软骨增强剂(Wang 2014)。该术语还包括其变体或包含TGF-β部分的融合蛋白。
-本文中所用的术语“SOX-9”增强剂意指增强SOX产生的化合物。实际上，SOX9是一种转录因子，被证明对软骨细胞外基质(ECM)的形成至关重要。
-本文中所用的术语“降钙素”更特别地是鲑鱼降钙素类，一种32个氨基酸的肽(SEQ ID NO.5)，其被证明对骨骼和软骨两者具有保护活性。
-本文中所用的术语“Wnt抑制剂”意指干扰WNT通路的化合物。
-本文中所用的术语“抗MMP13抑制剂”意指抑制基质金属蛋白酶13(MMP13)活性的化合物。MMP13是关键的胶原蛋白II型降解酶之一。
-本文中所用的术语“抗ADAMTS4或5抑制剂”意指抑制具有血小板反应蛋白基序4或5的去整合蛋白和金属蛋白酶(ADAMTS4或ADAMTS5)的酶活性的化合物。
-术语“生物标志物”或“蛋白标志物”可互换使用。在本发明的上下文中它们是肽或蛋白质。“预后生物标志物”提供有关对象状况的信息，包括但不限于疾病进展、疾病严重程度或疾病结局，无论使用哪种疗法。“预测性生物标志物”提供有关所接受的治疗的效果的信息，包括但不限于疗效和安全性结果。预后和预测的定义不是互相排斥的，因此一个生物标志物可以既是预后性的也是预测性的。生物标志物的量或生物标志物的表达水平在本文中表示为给定蛋白的nmol、μmol、mmol、ng、μg、mg或g。所述量或水平可表示为绝对值(例如，10ng或2μg)或浓度(例如，10ng/mL、2μg/mL、10ng/mmol或2μg/mmol)。
-术语“代谢生物标志物”指代诸如但不限于CTX-II、ProC2、PIIANP、C2M、ARGS和AGNx1的生物标志物。更具体地，术语“代谢生物标志物”指代软骨代谢生物标志物，即胶原蛋白和聚集蛋白聚糖(aggrecan)更新(turnover)，诸如软骨基质成分的降解和/或合成。已经记载了不同的胶原和聚集蛋白聚糖生物标志物(Karsdal等，2016)。
-术语“CTX-II”或“CTXII”指II型胶原蛋白的C端端肽。参见SEQ ID NO.1。它是胶原蛋白II型降解的生物标志物，是骨关节炎的一部分(参见例如Duclos等，2010)。
-术语proC2指代胶原蛋白II型合成期间产生的胶原蛋白II型的新表位，具有proC2检测中被识别为表位的序列QDVRQP；ProC2是软骨形成(II型胶原蛋白形成)检测的生物标志物。参见SEQ ID NO.2。ProC2与修复能力相关联，并且可能是鉴别患有软骨驱动性疾病的患者的有价值的工具。ProC2已在临床前研究临床样品中接受过生物标志物测试(参见例如Gudmann等，2016；Munk等，2016；Gudmann等，2014)。
-术语PIIANP指代胶原蛋白II型的前肽：IIA型前胶原包含N端的69个氨基酸，由胶原蛋白II型基因的外显子2编码的富含半胱氨酸的球形结构域。已发现IIA型前胶原是由病变软骨中的骨关节炎软骨细胞合成的，并且可以作为特异性关节炎生物标志物来反映软骨细胞试图修复病变软骨(Valdes等，2014)。
-术语C2M指代与软骨降解有关的血清学II型胶原蛋白降解新表位。C2M是由MMP生成的II型胶原蛋白的螺旋间片段。该生物标志物被认为与药物响应、疼痛量度和放射成像严重性有关(Valdes等，2014)。
-术语ARGS指代聚集蛋白聚糖降解期间产生的新表位。该测试检测血清和滑液中的聚集蛋白聚糖降解产物。ARGS水平与软骨疾病的进展相关(Struglics等，2011；Struglics等，2015)。
-术语AGNx1涉及一种检测聚集蛋白聚糖降解期间产生的另一种新表位的检测。
-与生物标志物关联的术语“量”或“表达水平”可以互换使用。
在本发明的上下文中，术语“物理标志物”指代关节间隙宽度(JSW)及其评估。
-术语“SD”意指标准偏差，并且与任何验证检测/系统的常规偏差相关。
-本文中所用的术语“软骨疾病”涵盖由于损伤(诸如创伤性损伤、软骨病变或关节炎)造成的破坏所引起的疾病。可通过本文中所述的化合物的施用来治疗的软骨疾病的实例包括但不限于关节炎(诸如骨关节炎)、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术(例如微骨折)。软骨或关节的退行性疾病/病症，诸如软骨钙化病、多发性软骨炎、复发性多发性软骨炎、强直性脊柱炎或肋软骨炎也由此表述所涵盖。国际软骨修复学会提出了一种关节镜检分级系统，用以评估软骨缺陷的严重程度：0级：(正常)健康软骨；1级：软骨有软斑或空泡；2级：软骨中可见轻微撕裂；3级：病变处有深裂隙(超过软骨层的50％)以及4级：软骨撕裂暴露出下面的(软骨下)骨骼(参见例如http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdf，第13页)。
-所用的术语“骨关节炎”意指关节炎的最常见形式。术语“骨关节炎”涵盖原发性骨关节炎和继发性骨关节炎两者(参见例如《默克手册》，第17版，第449页)。对骨关节炎进行分类/分级的最常见方法是使用Kellgren-Lawrence放射成像分级量表(参见下文表格)。骨关节炎可能是由软骨的解体引起的。少量的软骨可能会脱落，从而造成骨骼之间的关节中的疼痛和肿胀。随着时间推移，软骨损耗殆尽，骨骼将会相互摩擦。骨关节炎会影响各种关节，但通常涉及手和承重关节，诸如髋、膝盖，脚和脊柱。在一个优选的实例中，骨关节炎可以是膝骨关节炎或髋骨关节炎。骨关节炎是可通过根据本发明施用化合物来治疗的优选的软骨疾病之一。
骨关节炎Kellgren-Lawrence放射成像分级量表(KL)如下所示：
Figure BDA0003055658200000091
1级和2级可被认为是疾病的不太严重的形式，而3级和4级则被认为是疾病的重度形式。
-本文中所用的术语“软骨损伤”是主要由创伤造成的软骨疾病或软骨损伤。在创伤性机械破坏之后，尤其是在意外事故或手术(例如微骨折手术)之后，可能会明显发生软骨损伤。术语“软骨损伤”还包括软骨或骨软骨骨折、半月板损伤以及术语微骨折。该定义中还考虑运动相关损伤或运动相关的关节组织磨损。
-“WOMAC总分”或“WOMAC评分”(“WOMAC”即“西安大略和麦克马斯特大学关节炎指数”)测量疼痛(WOMAC疼痛评分)、机能(WOMAC机能评分)和僵硬度(WOMAC僵硬度评分)。当应用于评估域软骨损伤相关疼痛和功能障碍时，它由一个包含24项条目的问卷组成，该问卷分为3个分量表(疼痛5项、僵硬度2项、身体机能17项)(参见Bellamy等，1988；Wolfe，1999)。这是一种众所周知的工具，尤其是在评估OA严重性方面广泛使用。
-为了评价软骨修复，通过磁共振成像(MRI)测量值进行软骨体积测量，所述测量值包括软骨外侧体积(又称为LFTC)、软骨内侧体积(又称为MFTC)、软骨总体积(又称为LFTC+MFTC)以及新的总平均软骨厚度。
-术语“薄”软骨指代具有低于或等于3.5±2SD mm的JSW的软骨。
-术语“厚”软骨指代具有高于3.5±2SD mm的JSW的软骨。
-术语“基线”意指治疗之前(即进入研究时)。它尤指临床变量，诸如但不限于一个给定对象在进入研究时(即利用活性化合物或安慰剂治疗之前)的软骨体积和WOMAC总分。
-术语“对象”或“患者”指代人类和非人类动物。术语非人类包含哺乳动物，诸如啮齿动物(包括小鼠)、兔、猫、狗、马、牛、羊或灵长类。
-“敏感者”是对利用活性化合物的软骨疾病治疗表现出响应的对象。优选地，敏感对象(或对治疗表现出/可能表现出敏感性/响应的对象)展现出明显高于利用安慰剂治疗的对象的总软骨厚度和/或软骨体积的增加，即他们表现出软骨修复。此外，敏感对象展现出与安慰剂组至少相似的WOMAC总分改善。术语“敏感”(包括“良好敏感”或“中度敏感”两者)和“不敏感”(包括“低敏感”)指代不同的对象组，尤其取决于在利用活性化合物治疗后的软骨体积的增加。良好敏感的对象展示对于利用活性化合物的治疗的高响应(即高度的软骨修复)，中度敏感者展示对于利用所述活性化合物的治疗的中度响应(即中度的软骨修复)，不敏感者展示对于利用所述活性化合物的治疗的无响应或低响应。良好敏感的对象优选具有与安慰剂组相似的WOMAC总分改善。相反，无响应者具有与安慰剂组相比明显更小的WOMAC总分改善。
更具体地，术语“中度敏感者”、“良好敏感者”、“不敏感者”、“中度响应者”、“良好响应者”和“无响应者”(包括低响应者)涉及不同的对象组，取决于在利用活性化合物治疗后的软骨体积的增加和WOMAC总分的改善。
所提出的用于评估敏感性/响应的标准可以选自(但不限于)下列的一种以上：
1.与基线相比，软骨增加为正，
2.软骨增加的改变显著高于安慰剂组的改变(例如，利用针对BMI、KL级别、性别和年龄进行调整的线性模型并利用α＝5％进行测试)，
3.WOMAC评分相比基线有所改善，即降低(例如，降低了5分以上)，
4.WOMAC评分的改变不显著高于安慰剂组的改变(例如，利用针对BMI、KL级别、性别和年龄进行调整的线性模型并利用α＝5％进行测试)。
-对于活性化合物治疗的“响应”或“敏感性”应当理解为在首次注射后至少1年、2年更好，测得：1)软骨体积增加，例如据MRI或X射线测定，2)WOMAC总分降低，或3)WOMAC总分改变不显著高于安慰剂组(也参见“敏感”的定义)。
-本文中所用的术语“安慰剂效应”应当理解为由安慰剂自身(例如，滑液中炎性成分的稀释)、由于情境影响(例如，由医生进行关节内注射的过程)和由患者的期待导致的相比于基线的改变。术语“低安慰剂效应”指代响应幅度与基线的响应幅度相比在评估方法的标准偏差内。
-本文中所用的术语“存储装置”意在包括被配置成或适用于存储数据或信息的任何合适的计算或处理设备或其他装置。适用于本发明的电子设备的实例包括独立计算设备、数据电信网络(包括局域网(LAN)、广域网(WAN)、因特网(Internet)、内联网(Intranet)和外联网(Extranet))以及本地和分布式计算机处理系统。存储装置包括但不限于：磁存储介质，诸如软盘、硬盘存储介质、磁带；光存储介质，诸如CD-ROM、DVD；电子存储介质，诸如RAM、ROM、EPROM、EEPROM等；普通硬盘，以及这些类别的组合，诸如磁/光存储介质。
-本文中所用的术语“存储”指代将信息编码在存储装置上的过程。本领域技术人员可方便地采用任何目前已知的在已知介质上记录信息的方法来生成包含表达水平信息的制品。
具体实施方式
需要1)预测在患有软骨疾病的对象中的安慰剂响应，以及2)预测活性化合物治疗用于治疗患有软骨疾病的对象的临床效果(特别是软骨修复)，所述软骨疾病诸如骨关节炎、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术(例如微骨折)。为了优化临床试验的管理或优化所述对象的治疗，重要的是鉴别标志物，所述标志物可用于预测1)安慰剂响应和/或2)给定对象对于活性化合物治疗的响应，特别是在软骨修复方面。此类预测性生物标志物可用于鉴别1)有呈现安慰剂效应的风险的对象群体和/或2)对治疗较不敏感或者正相反地敏感(例如中度或良好敏感)甚至高度敏感的高风险群体。例如，如果已知患有骨关节炎的一个对象对治疗的中度响应(或中度敏感)为高风险，医师可决定调整剂量方案，从而例如升高对所述对象施用活性化合物的剂量，和/或从而在更长的时间段施用药物。这样的预测性信息可临床用于指导医疗决策，特别是关于待应用于一名患者的给药方案或治疗的长度，或者关于当需要时进行关节置换手术的时机(例如，如果预测活性化合物治疗效率较差)。
本发明的出人意料的发现是基于旨在鉴别与不同活性化合物给药相关的潜在生物标志物的不同研究。这些研究中所使用的生物标志物由多种蛋白质生物标志物组成。物理标志物为JSW测量值。对蛋白质标志物和/或物理标志物与临床响应变量之间的关联性进行了评估。此类分析背后的基本原理是鉴别可以为待使用活性化合物治疗的对象预测1)安慰剂响应和/或2)临床结局(特别是关于软骨修复)的标志物的组合，所述活性化合物诸如FGF-18化合物、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS4或5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白。特别地，出人意料的发现1)JSW测量值可以用于预测安慰剂效应，以及2)蛋白质生物标志物与JSW测量值一起可以用于分层和靶向特定受试者群体。
通过采用高值和低值标准，不同的生物标志物表现出对于活性化合物治疗的响应的改变，或显示结果的改变(即软骨厚度或体积、WOMAC评分)。实例为C1M、C3M和hs-CRP。发明人出人意料地发现了与某些代谢蛋白与物理标志物的组合的关联和结果(例如软骨修复)。特别引人注意的是蛋白质CTX-II和ProC2。需要注意的是，尽管本文中仅具体描述了CTX-II和/或ProC2，但也可使用其他代谢生物标志物，诸如PIIANP、C2M、ARGS或AGNx1。基于本发明的教导，本领域技术人员能够常规地确定这些生物标志物各自的阈值。这些蛋白质曾在文献中被描述为可能与骨关节炎相关。例如，CTX-II和ProC2可被视为代谢生物标志物(Bay-Jensen，2016)。
本发明人出人意料地发现，对于呈现高于3.5±2SD mm的JSW的给定对象(患有软骨疾病)，无论生物标志物的水平如何，安慰剂响应都为高：在这些对象中有很强的安慰剂效应，可能会使临床试验的结果产生偏差，随后可能会因为掩盖了给定活性化合物的实际缺乏效果而可能使治疗产生偏差。还出人意料地发现，在遭受软骨损伤的对象中，当诸如CTX-II和/或ProC2的代谢生物标志物的量减少并且JSW低于一定限度时，该组合与对利用活性化合物的治疗的更好的响应相关联，所述活性化合物诸如FGF-18化合物、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS4或5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白。这样的对象称为良好敏感者(或良好响应者)。相反地，发明人还出人意料地发现，在遭受软骨损伤的对象中，当CTX-II和/或ProC2的量增加并且JSW高于一定限度时，其与利用所述活性化合物的治疗的无响应或低响应相关联(即对利用所述活性化合物的治疗的低敏感性或无敏感性)。这样的对象称为不敏感者(或无响应者)。或者，1)当诸如CTX-II和/或ProC2的代谢生物标志物的量减少，并且JSW高于某个限度时，或2)当诸如CTX-II和/或ProC2的代谢生物标志物的量增加，并且JSW低于某个限度时，这可能与中度响应相关联，即对象将是中度敏感者(或中度响应者)。
因此，本发明发现，诸如CTX-II和/或ProC2的代谢生物标志物与物理标志物JSW的组合可以用作一个对象对于活性化合物治疗的响应性的预测性标志物，所述活性化合物诸如FGF-18化合物、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS4或5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白。优选地，所述对象患有软骨疾病，诸如骨关节炎、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术(例如微骨折)。在一个具体实施方式中，如果CTX-II的量高于350±2SD ng/mmol CTX-II(>正常均值的240-260％)和/或ProC2的量高于4.2±2SD ng/mL(>正常均值的120-280％)并且JSW高于3.5±2SD mm，则可预测该对象对活性化合物治疗不敏感。相反地，如果CTX-II的量低于350±2SD ng/mmol和/或ProC2的量低于4.2±2SD ng/mL并且JSW低于或等于3.5±2SD mm，则可预测该对象对活性化合物治疗良好敏感。如果1)CTX-II的量低于350±2SDng/mmol和/或ProC2的量低于4.2±2SD ng/mL并且JSW高于3.5±2SD mm，或者2)CTX-II的量高于350±2SD ng/mmol和/或ProC2的量高于4.2±2SD ng/mL并且JSW低于3.5±2SD mm，则可预测该对象对活性化合物治疗中度敏感。
因此，本发明涉及一种降低临床试验风险或在临床试验中(其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关)或利用活性化合物治疗期间确定安慰剂效应的方法，所述方法包含以下步骤：
a)测量一个对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
b)根据步骤a)的结果预测所述对象的安慰剂效应的风险。
根据所述方法，高于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着安慰剂效应。相反地，低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着无安慰剂效应或低安慰剂效应。根据所述预测：
-对于临床试验，临床医生可以根据对象是否呈现安慰剂效应的可能性简单地对所述对象进行分类。
-对于软骨疾病的治疗，医生可以简单地确定对象是否可能是对于给定活性化合物治疗的敏感者(包括中度敏感者和高度敏感者两者)。
或者，本发明涉及一种降低临床试验风险或在临床试验中(其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关)或利用活性化合物治疗期间确定对象的安慰剂效应的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
c)根据步骤a)和b)的结果预测安慰剂效应的风险，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。因此，本发明涉及一种在临床试验中(其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关)或利用活性化合物治疗期间确定对象的安慰剂效应的方法，所述方法包含以下步骤：
a)从所述患者获取样品，并且由所述样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
c)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象的安慰剂效应的风险，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
根据所述方法，高于350±2SD ng/mmol的CTX-II(>正常均值的240-260％)和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2(>正常均值的120-280％)并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着安慰剂效应。类似地，1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SDng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着安慰剂效应。相反地，低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，预示着无安慰剂效应或低安慰剂效应。
根据所述预测：
-对于临床试验，临床医生可以根据对象是否呈现安慰剂效应的可能性简单地对所述对象进行分类。
-对于软骨疾病的治疗，医生可以简单地确定对象是否可能是对于给定活性化合物治疗的敏感者(包括中度敏感者和高度敏感者两者)。
本发明还涉及一种降低临床试验风险的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
c)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
d)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
e)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象对于利用所述化合物的治疗的响应，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。因此，本发明涉及一种降低临床试验风险的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
a)从所述患者获取样品，并且由所述样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
c)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象对于利用所述化合物的治疗的响应，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
根据所述方法，高于350±2SD ng/mmol的CTX-II(>正常均值的240-260％)和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2(>正常均值的120-280％)并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着对于利用活性化合物的治疗无响应或低响应(即无敏感性或低敏感性)。由此可预测对象为不敏感者(或无响应者)。相反地，低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，预示着对于利用活性化合物的治疗的良好响应(即良好敏感性)。由此可预测对象对于利用所述活性化合物的治疗为良好敏感者(即他将是良好响应者)。1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SDng/mL的ProC2以及高于3.5±2SD mm的JSW，或者2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2以及低于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着对于利用活性化合物的治疗的中度响应(即中度敏感性)。由此可预测对象对于利用所述活性化合物的治疗为中度敏感者(即他将是中度响应者)。根据所述预测，医生可以简单地仅选择对于给定活性化合物治疗预测为敏感者(包括中度敏感者和良好敏感者两者)的那些对象。
本申请还涵盖一种选择患有软骨疾病的对象以纳入利用活性化合物的治疗或临床试验中或排除在其外的方法，所述选择基于对象对于所述治疗的敏感性的可能性，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)；其中这些蛋白质的至少一种的量和JSW的宽度预示着对象对于所述治疗敏感或不敏感的风险，以及
b)选择中度敏感和/或良好敏感的对象作为适合所述治疗或临床试验的对象。
在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。因此，本发明涉及一种选择患有软骨疾病的对象以纳入利用活性化合物的治疗或临床试验中或排除在其外的方法，所述选择基于对象对于所述治疗的敏感性的可能性，所述方法包含以下步骤：
a)从所述患者获取样品，并且由所述样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)；其中这些蛋白质的至少一种的量和JSW的宽度预示着对象对于所述治疗敏感或不敏感的风险，以及
b)选择中度敏感和/或良好敏感的对象作为适合所述治疗或临床试验的对象。
根据所述方法，呈现高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的对象，将优选被排除在利用活性化合物的治疗之外。相反地，呈现低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，将优选被纳入利用活性化合物的治疗之内(即将被优选地选择)。呈现1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2以及高于3.5±2SD mm的JSW，或者2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2以及低于3.5±2SD mm的JSW，将优选被纳入利用活性化合物的治疗之内，可能采用替代的给药方案，根据该方案，活性化合物的剂量增加和/或活性化合物施用更长的治疗时间段。
或者，本文中描述了一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗良好敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象：
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，
ii.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
iii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)对所述选择的对象施用所述活性化合物。
在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。因此，本发明涉及一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)从所述患者获取样品，并且由所述样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗良好敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象：
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，
ii.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
iii.于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)对所述选择的对象施用所述活性化合物。
尽管中度敏感的对象(具有1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW)可以通过与良好敏感的患者(低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW)相同的给药方案进行治疗，这些对象可能更好地获益于替代的给药方案。
因此，本文中还描述了一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗中度敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象：
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
ii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)根据替代的给药方案对所述选择的对象施用所述活性化合物，根据所述替代的给药方案，与所述活性化合物的常用给药方案相比，活性化合物的剂量增加和/或活性化合物施用更长的治疗时间段。
在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。因此，本发明涉及一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)从所述患者获取样品，并且由所述样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗中度敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象：
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
ii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)根据替代的给药方案对所述选择的对象施用所述活性化合物，根据所述替代的给药方案，与所述活性化合物的常用给药方案相比，活性化合物的剂量增加和/或活性化合物施用更长的治疗时间段。
如果需要，可以将样品中的一种以上生物标志物的量(或表达水平)与参照样品的参照量(或者参照表达水平、基线量或基线表达水平)进行比较。所述参照水平可以从健康对象获得，或在所述治疗之前或治疗期间从待诊断或治疗的同一位患者获得。如果需要，对象的关节间隙的宽度可以与参照关节间隙宽度(或基线关节间隙宽度)进行比较。所述参照宽度可以从健康对象获得，或在所述治疗之前或治疗期间从待诊断或治疗的同一位患者获得。
本发明进一步涵盖一种活性化合物，其用于治疗患有软骨疾病的对象，其特征在于所述对象具有1)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW、2)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。尽管中度敏感的对象可以通过与良好敏感的对象相同的给药方案来治疗，这些对象可能更好地获益于替代的给药方案。
因此，本发明还涵盖一种活性化合物，其用于根据替代的给药方案(例如，活性化合物的增加的剂量和/或更长的治疗时间段)治疗患有软骨疾病的对象，其特征在于所述对象具有1)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。由此，不满足这些标准的对象优选从所述活性化合物治疗中排除。
本发明还涉及一种用于确定对于活性化合物治疗的敏感性或确定利用给定活性化合物的治疗方案的检测，所述检测包含：(a)对诊断为患有软骨疾病的人类对象的测试样品进行至少一项检测，所述检测确定CTX-II和/或ProC2的至少一种的量，(b)确定CTX-II和/或ProC2的至少一种的量，以及(c)由步骤b)的结果并且考虑关节间隙宽度测量值，确定所述对象对于利用所述活性化合物的治疗的敏感性或无敏感性。根据所述检测，高于350ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着对于利用活性化合物的治疗的无敏感性。相反地，低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，预示着良好敏感性。或者，1)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着中度敏感性。根据所述检测的结果，医生可以简单地仅选择对于活性化合物治疗预测为敏感者(包括中度敏感者和良好敏感者两者)的那些对象。在确定生物标志物的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得所述对象的样品(或生物样品或测试样品)。
本发明还涉及一种用于为患有软骨疾病的人类对象选择治疗方案的检测，所述检测包含：(a)对诊断为患有软骨疾病的人类对象的测试样品进行至少一项检测，所述检测确定CTX-II和/或ProC2的至少一种的量，(b)根据步骤a)并且考虑关节间隙宽度测量值，确定所述对象对于活性化合物治疗为中度敏感或良好敏感的可能性，以及(c)由步骤b)的结果确定对所述对象合适的治疗方案。一旦进行了该检测，当所述对象具有低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW时，基于所述量/宽度与对于所述化合物的良好响应相关联的认知，可以选择所述对象并且利用包含有效量的活性化合物的合适的治疗方案治疗，或者当所述对象具有1)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW时，或2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW时，基于所述量/宽度与对于所述化合物的中度响应相关联的认知，可以选择所述对象并且利用包含有效量的活性化合物的合适的治疗方案治疗；以及当所述对象具有高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW时，基于所述量/宽度与对于所述化合物的响应不足相关联的认知，可以将所述对象从利用活性化合物的治疗排除。尽管中度敏感的对象可以通过与良好敏感的对象相同的给药方案来治疗，这些对象可能更好地获益于替代的给药方案。因此，可替代地，可以选择所述中度敏感的对象并且通过活性化合物的替代的给药方案(例如，活性化合物的增加的剂量和/或更长的治疗时间段)治疗。
还公开了一种治疗患有软骨疾病的人类对象的方法，所述方法包含以下步骤：(a)对诊断为患有软骨疾病的对象的生物样品检测选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；(b)测量关节间隙宽度，以及(c)如果对象具有1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW、2)低于350ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，向对象施用包含组合物的治疗方案，所述组合物包含有效量的活性化合物。尽管中度敏感的对象可以通过与良好敏感的对象相同的给药方案来治疗，这些对象可以更好地获益于替代的给药方案。因此，可替代地，公开了一种治疗患有软骨疾病的人类对象的方法，所述方法包含以下步骤：(a)对诊断为患有软骨疾病的对象的生物样品检测选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；(b)测量关节间隙宽度，以及(c)如果对象具有1)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且如果JSW高于3.5±2SD mm，或者2)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且JSW低于3.5±2SD mm，向对象施用包含组合物的替代的治疗方案(例如，活性化合物的增加的剂量和/或更长的治疗时间段)，所述组合物包含活性化合物。
在整个本发明的上下文中，CTX-II和/或ProC2被证明是安慰剂响应和对象对于治疗软骨疾病的活性化合物的响应的有用的预测性生物标志物。因此，可将它们视为预测性生物标志物。其他的代谢生物标志物可以替代地使用，诸如C2M、ARGS或AGNx1。
在整个本发明的上下文中，优选的软骨疾病选自骨关节炎、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术(诸如微骨折)。
在整个本发明的上下文中，例如在根据本发明的任何一种方法、用途、检测或试剂盒的上下文中，优选的活性化合物可以选自FGF-18化合物(包括截短的FGF-18化合物，诸如斯非福明)、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS4或5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白。
作为给药计划(schedule)的实例，如果根据整个本发明的活性化合物是FGF-18化合物，所述FGF-18化合物通常以每次注射100mcg、每周一次、每个治疗周期3周的剂量关节内施用于对象(优选为良好敏感的对象)。对预测为高度敏感者的对象的建议的给药方案是以每次注射100mcg、每周一次、每个治疗周期3周的剂量关节内施用FGF-18化合物。应当理解，尽管当时优选的剂量是每次注射100mcg，对于高度敏感者可以降低到每次注射30mcg，但是本发明不限于上述剂量。因此，可以按照每次注射50至300mcg之间、优选60至250mcg之间、更优选100至200mcg之间的剂量关节内施用FGF-18化合物。对于超敏感对象，可将所述剂量降低至例如1/2或约1/2或1/3或约1/3。例如，如果常规剂量为每次注射50mcg，则降低后的剂量可以是每次注射16至25mcg之间。FGF-18化合物通常施用至少一个治疗周期。优选地，所述周期重复至少一次，例如在第一个治疗周期开始后6个月(或约26周)。2年内多至四个治疗周期已经展现了令人鼓舞的效果(参见图1)。显然，如果预测对象对于活性化合物是中度敏感的，则替代的给药方案可以由额外的治疗周期组成。
作为给药计划的另一个实例，如果根据整个本发明的活性化合物是降钙素化合物，所述降钙素化合物通常以每日两次0.8mcg的剂量口服施用多至24个月或者如果需要的话更长时间，或者施用所述化合物的任何典型给药方案。如果需要，可以使口服剂量和治疗长度适应对象对于所述治疗的响应或响应的可能性，以使中度响应者获益于所述降钙素治疗。
在给药计划的又另一个实例中，如果根据整个本发明的活性化合物是BMP-7化合物，所述BMP-7化合物通常以每次注射月0.03mcg/ml至0.3mcg/ml的剂量关节内施用，诸如每次注射0.3、0.1或0.3mcg/ml，可以重复。或者施用所述化合物的任何典型给药方案。如果需要，可以使口服剂量和治疗长度适应对象对于所述治疗的响应或响应的可能性。
在整个本发明的上下文中，可以在治疗之前或治疗期间进行本发明的生物标志物的至少一种的检测或其他测定。事实上，在治疗期间，给药方案还可以根据新的标志物情况进行适应性调整。
在整个本发明的上下文中，对于在CTX-II为350±2SD ng/mmol或ProC2为4.2±2SD ng/mL的范围内的患者，建议采用其他代谢生物标志物来完成诊断或生物标志物测试。例如，假设CTX-II水平为350±2SD ng/mmol，则可考虑ProC2水平。少数情况下，患者会呈现350±2SD ng/mmol的CTX-II和4.2±2SD ng/mL的ProC2，那么建议采用另一类生物标志物完成诊断或生物标志物检测，所述另一类生物标志物诸如炎性生物标志物或SNP生物标志物，诸如WO2014023703中公开的那些。
在整个本发明的上下文中，关节间隙的宽度优选通过X射线放射成像或MRI技术来确定。显然，技术人员可以根据他的喜好使用替代的技术。
在本发明的另一个实施方式中，还提供了用于获取数据的系统(以及用于引导计算机系统的计算机可读介质)。所述数据可用于评估临床试验的适合性，或对象对于利用活性化合物的治疗的适合性，或监测活性化合物对给定对象的治疗效果，或仅监测疾病进展。当必须考虑利用活性化合物治疗软骨疾病的治疗时，或利用所述化合物的治疗已经在进行时，可以在临床试验期间使用所述系统。
因此，在本发明一个实施方式中，包括计算机系统，该计算机系统用于从获取自患有软骨疾病的至少一个对象的至少一个测试样品获取数据以及与所述患者的JSW相关的数据，所述系统包含：(a)至少一个确定模块，所述确定模块被配置为接收与一个患者的JSW相关的数据以及所述患者的至少一个测试样品，并对所述至少一个测试样品进行至少一项分析以确定根据本发明的生物标志物的至少一种的量；(b)至少一个存储装置，所述装置被配置为存储从所述确定模块输出的数据；(c)至少一个显示模块，用于部分地基于从所述确定模块输出的数据来显示内容，其中所述内容包含提示存在这些条件中的至少一项的信号，以及可选的提示不存在这些条件中的任何一项的信号。
计算机可读介质可以具有记录在其上的计算机可读指令，以定义用于在计算机上执行方法的软件模块。在此情况下，所述计算机可读介质可以包含：(a)用于将存储在存储装置上的数据与参照数据进行比较以提供比较结果的指令，其中所述比较基于根据本发明的生物标志物的至少一种的量以及基于关节间隙的宽度；(b)用于部分地基于所述确定模块输出的数据来显示内容的指令，其中所述内容包含提示存在这些条件中的至少一项的信号，以及可选的提示不存在这些条件中的一项以上的信号。
计算机可读存储介质可以是可通过计算机访问的任何可用的有形介质。计算机可读存储介质包括以用于存储诸如计算机可读指令、数据结构、程序模块或其他数据的信息的任何方法或技术实施的易失性和非易失性、可移动和不可移动有形介质。计算机可读存储介质包括但不限于RAM(随机存取存储器)、ROM(只读存储器)、EPROM(可擦除可编程只读存储器)、EEPROM(电可擦除可编程只读存储器)、闪存或其他存储器技术、CD-ROM(光盘只读存储器)、DVD(数字多功能磁盘)或其他光学存储介质，盒式磁带、磁带、磁盘存储或其他磁性存储介质，其他类型的易失性和非易失性存储器，以及可用于存储所需信息并可由计算机访问的任何其他有形介质，包括以上所述的任何适当的组合。
体现在一个或多个计算机可读介质上的计算机可读数据可以定义指令，例如，作为一个或多个程序的一部分，作为由计算机执行的结果，指示计算机执行一项或多项本文中所述的功能和/或其各种实施方式、改变和组合。这样的指令可以用多种编程语言中的任何一种来编写，例如Java、J#、Visual Basic、C、C#、C++、Fortran、Pascal、Eiffel、Basic、COBOL汇编语言等，或其任意多种的组合。体现有这样的指令的计算机可读介质可以驻留在系统的一个或多个组件上，或者本文所述的计算机可读存储介质可以分布在一个或多个这样的组件上。
计算机可读介质可以是可移动的，使得可以将存储在其上的指令加载到任何计算机资源上，以实现本文所讨论的本发明的各方面。
在确定模块中确定的信息可以由存储装置读取。存储装置适于或配置为在其上记录表达水平或蛋白质水平信息。这样的信息可以以数字形式提供，所述数字形式可以以电子方式发送和读取，例如通过互联网、软盘上、通过USB(通用串行总线)或通过任何其他合适的通信模式。
应当理解，在整个本发明的上下文中，例如在根据本发明的任何一种方法、用途、检测、计算机可读介质或试剂盒中，在确定本发明所述的生物标志物(例如CTX-II和/或ProC2)的至少一种的量之前，需要通过例如采集血液、血清、滑液或尿液获得一个对象的样品(或生物样品或测试样品)。也可以从细胞、组织、软骨或滑液获得样品，对此没有限制。
在遭受软骨损伤并且根据本文中所述的任何一种方法、用途、检测、计算机可读介质或试剂盒待被检测、检测和/或治疗的个体是人类对象，所述人类对象是利用活性化合物治疗所述软骨疾病的治疗的候选人。在一个优选的实施方式中，所述个体已被诊断为患有软骨疾病或表现出软骨疾病的症状。
在另一个实施方式中，本发明涵盖一种试剂盒，所述试剂盒包含用于实施上述方法的工具和使用说明书。优选地，试剂盒包含用于检测根据本发明的生物标志物(例如CTX-II和/或ProC2)的至少一种的存在并对其进行定量的工具。试剂盒可以包含用于检测根据本发明的生物标志物的至少两种的存在并对其进行定量的工具。由试剂盒获得的结果必须与JSW的测量结果组合，以得出任何结论。
根据本发明的方法和试剂盒对于临床诊断应用是有用的。然而，本文中使用的术语“诊断”不限于临床或医学用途，并且本文中所要求保护的本发明的诊断方法和试剂盒也在需要检测本文中描述的任何标志物在对象中是否存在的任何研究性应用以及临床试验期间也是有用的。
在本发明的上下文中，可以通过技术人员本身已知的任何技术(包括ELISA)来检测根据本发明的生物标志物(例如CTX-II和/或ProC2)的至少一种的存在及其定量。
通过参考本文中所公开的本发明的说明书或实践，在本文权利要求书的范围内的本发明的其他实施方式对于本领域技术人员将是显而易见的。说明书和实施例仅应被认为是示例性的，本发明的范围和精神由实施例后附的权利要求书所指明。
附图说明
图1：FORWARD研究中用于FGF-18化合物的给药方案的设计。
图2：FDA草案指南“用于支持人类药物和生物制品批准的临床试验的富集策略”(“Enrichment Strategies for Clinical Trials to Support Approval of HumanDrugs and Biological Products”，FDA，2012年)中提出的富集策略。
图3：通过总WOMAC评分强调的在KL2和KL3患者中的安慰剂响应(即安慰剂效应相对于JSW的函数)。A)KL2和KL3组中总WOMAC从基线的变化相对于第一次IA注射后经过时间的函数，组均值相对于经过时间的函数(数据为均值+/-SD)。B)KL2和KL3组中的总WOMAC评分相对于第一次IA注射后经过时间的函数，组均值相对于经过时间的函数(数据为中位数)。
图4：通过总WOMAC评分强调的安慰剂响应相对于生物标志物水平的函数。A)基于CTX-II水平的组内总WOMAC变化相对于经过时间的函数(组1：≤350ng/mmol，组2：>350ng/mmol)(数据为均值+/-SD)。B)基于ProC2水平的组内总WOMAC变化相对于经过时间的函数(组1：≤4.2ng/mmol，组2：>4.2ng/mmol)(数据为均值+/-SD)。
图5：通过总WOMAC评分强调的组合JSW测量值和CTX-II水平两者的安慰剂响应，表示为组均值相对于经过时间(月)的函数。数据取自FORWARD研究的安慰剂组。
图6：A)活性剂组与安慰剂组的差异相对于患者KL级别的函数，以及相对于第一次IA注射后经过时间的函数，以总WOMAC评分表示。B)活性剂组与安慰剂组的差异相对于患者CTX-II水平的函数，以及相对于第一次IA注射后经过时间的函数，以总WOMAC评分表示。C)活性剂组与安慰剂组的差异相对于患者KL级别的函数，以及相对于第一次IA注射后经过时间的函数，以软骨厚度水平表示。B)活性剂组与安慰剂组的差异相对于患者CTX-II水平的函数，以及相对于第一次IA注射后经过时间的函数，以软骨厚度水平表示。在图6A-D中，将来自FORWARD研究的各组接受治疗的患者(组2至5)与安慰剂组(组1)进行比较(基于与安慰剂的差异进行比较)。数据为组中位数。
图7：通过总WOMAC疼痛评分的变化强调的组合JSW(表示为KL2和KL3)和CTX-II水平两者的安慰剂响应，表示为组均值(SEM)相对于经过时间(月)的函数。各个亚组中的患者数量如下：n≈380(KL2并且低CTX-II)，n≈90(KL2并且高CTX-II)，n≈40(KL3并且低CTX-II)以及n≈20(KL3并且高CTX-II)。
图8：基于2012年的FDA草案指南所提出的用于骨关节炎的任何临床试验的富集策略。
序列说明：
SEQ ID NO.1：生物标志物CTX-II的氨基酸序列。
SEQ ID NO.2：生物标志物PROC2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.3：原生人FGF-18的氨基酸序列。
SEQ ID NO.4：重组截短FGF-18(trFGF-18)的氨基酸序列。
SEQ ID NO.5：鲑鱼降钙素的氨基酸序列。
SEQ ID NO.6：人BMP-2的氨基酸序列。
SEQ ID NO.7：人BMP-7的氨基酸序列。
SEQ ID NO.8：人GDP-5的氨基酸序列。
SEQ ID NO.9：人FGFβ的氨基酸序列。
SEQ ID NO.10：人FGF-9的氨基酸序列。
实施例
统计方法
通过对从基线的绝对变化的重复测量方差分析(ANOVA，在SAS中使用PROCMIXED)，包括作为因素的基线值、治疗组、时间和地区(country)，以及作为交互效应的治疗乘时间点(treatment-by-time point)，通过剂量范围评估主要终点的治疗效果。主要疗效分析由2年的线性剂量关系和总体治疗效果检测构成。两项检测的显著性水平均设为双侧5％。在此建模框架的范围内进行了成对比较(斯非福明对比安慰剂，以及斯非福明剂量与方案组之间比较)。对于每个成对比较，给出治疗之间的差异及相应的95％置信区间(CI)和p值。在各个时间点并且随着时间进展，使用与主要终点所用相同的ANOVA模型来评估连续次要终点的治疗效果，次要终点诸如MRI终点、WOMAC终点(总分、疼痛评分、机能评分和僵硬度评分)和X射线终点。使用逻辑回归评估二元疗效终点的治疗效果，二元疗效终点诸如OMERACT-OARSI响应率。提供每对比较的点估值及相应的95％CI和p值。
疼痛和机能评价
WOMAC是一种得到验证的用于评估临床OA研究中症状改变的工具。该临床评分开发于1981年，并且临床研究人员和监管机构均视其为有效手段。WOMAC广泛用于髋OA和膝OA的临床研究中并已得到广泛的验证。
对象必须自己回答所有24个问题(即5个关于疼痛、2个关于僵硬度、17个关于身体机能评估)，在实施例1中使用参照过去48小时的11格NRS评估(以0到10的类别)，或者在实施例2中使用参照过去24小时的100mm VAS(视觉模拟评分；每个问题给予0至100的评分)。左右膝有不同的问卷表：为了减少对侧膝症状对WOMAC响应的混淆，对象使用针对靶标膝的WOMAC问卷。
对实施例1和2两者，问卷管理均遵循WOMAC 3.1索引的说明。
用于评估疼痛和机能的其他工具为KOOS(膝伤与骨关节炎结果评分(Knee injuryand Osteoarthritis Outcome Score)，Collins等，2016)。
JSW的X射线评估
通过X射线测量的JSW变化是欧洲药品管理局和美国食品和药物管理局认可的用于OA疗效研究的公认终点。使用标准化技术测量JSW。在实施例2中，X射线也用于评估KL级别。
qMRI评估
DBPC治疗阶段的主要终点是mITT中2年时通过qMRI评价的全股胫关节软骨厚度从基线的变化。全股胫关节软骨厚度用以下两种方法计算：
1.平均软骨厚度(总体积除以总表面积)，
2.总软骨厚度(内侧室和外侧室的软骨厚度总和)。
通过对从基线的绝对变化的重复测量方差分析(ANOVA)，包括作为固定因素的治疗组、时间点和(合并的)地区，作为协变量的基线值，以及作为交互效应的治疗乘时间点，通过剂量范围评估主要终点的治疗效果。使用“非结构化”的协方差模式，将随着时间进展的重复测量也考虑在内。
在上述建模框架的范围内进行了软骨厚度从基线的绝对变化的成对比较(化合物治疗组对比安慰剂)。对于每个成对比较，给出治疗之间的差异及相应的95％置信区间(CI)和p值。报道了原“总体”模型中所有协变量的P值(对应于固定效应的3类检测)，包括所有时间点的组合(即基线值、治疗、时间点、治疗乘时间点交互效应、地区)以及所有时间点。对于(i)剂量关系(线性趋势)和(ii)剂量水平与安慰剂之间的各对比较，给出总体以及各时间点的估测系数、p值和95％CI。
为了评价主要效果的稳健性，使用PP分析集重复进行线性剂量关系和总体治疗效果的测试。对于mITT分析集，对全股胫关节中软骨厚度的有序数据进行了非参数分析，以此作为主要分析的替代方法。按照DBPC治疗阶段内2年的从基线的绝对变化的幅度使用等秩变换进行数据排序。
生物标志物测量
评价了骨和关节组织更新以及滑膜炎症的血清学和尿液生化标志物。软骨代谢的潜在生物标志物包括但不限于：胶原蛋白II型原肽的新表位(proC2)和II型胶原蛋白的C-端肽交联(CTX-II)。在以下时间点采集血液和尿液样品以进行系统性生物标志物评估：第0周(第一次注射斯非福明之前)，第26周，第54周，第80周和第104周。对于还施用了注射的时间点，在注射前采集样品。在时间点采集滑液样品。这些样品是刚好在注射前采集的，作为关节内注射程序的一部分，并且使用与注射所用相同的针头。对于尿液采集，获取次日早晨的排空样品(void sample)。
进行以下评估作为探索性终点：
-与化合物施用相关联的血清和尿液生物标志物从基线的变化。
-与治疗响应或疾病进展(通过MRI和/或问卷调查评估的响应)相关联的基线蛋白标志物。
实施例1.在利用FGF-18化合物治疗的对象中的安慰剂响应和临床效果
本实施例中用作治疗的FGF-18化合物是斯非福明(如“定义”部分中所定义)。研究采用了两种规格的斯非福明：30μg和100μg。所供应的斯非福明为装在3-mL玻璃瓶中的白色无菌冻干粉末。每瓶含有31.5μg或105μg斯非福明活性物质；这些量包括5％的余量，允许在用0.9％w/v氯化钠注射液(本文中称为“盐水溶液”)复溶后分别提取30μg或100μg的斯非福明活性物质。制剂的赋形剂是磷酸钠缓冲液(pH 7.2)、氢氧化钠、O-磷酸、蔗糖和泊洛沙姆188。对于所有治疗组，给药体积都是2mL。
本项研究是基于FORWARD研究(参见研究EMR700692-006)，其中研究了五组患者：
·第1组(4个周期的安慰剂；后文称之为安慰剂或PBO)：108名对象。
·第2组(2个周期的斯非福明30μg/注射与2个周期的安慰剂交替；后文称之为斯非福明/安慰剂30μg)：110名对象。
·第3组(4个周期的斯非福明30μg/注射；后文称之为斯非福明30μg)：111名对象。
·第4组(2个周期的斯非福明100μg/注射与2个周期的安慰剂交替；后文称之为斯非福明/安慰剂100μg)：110名对象。
·第5组(4个周期的斯非福明100μg/注射；后文称之为斯非福明100μg)：110名对象。
根据FORWARD研究，患者以6个月的区间接受4个周期的治疗(每个周期由连续3周共3个每周一次关节内注射组成)(参见图1)。所有注射皆为关节内注射(在关节内完成)。
主要疗效终点是2年时用MRI评价的全股胫关节软骨厚度从基线的变化。探索性终点包括与治疗响应或疾病进展(通过MRI和/或问卷调查评估的响应)相关联的基线蛋白标志物。
研究招募两性成年对象，所述对象根据美国风湿病学会(ACR)的临床和放射成像标准患有原发性股胫OA，且Kellgren Lawrence级别(KLG)为2或3级，内侧隔室中的最小关节间隙宽度(JSW)≥2.5mm。对象必须是前一个月内多数日子有靶标膝疼痛且/或在多数日子必需扑热息痛(对乙酰氨基酚)、全身性非甾体类消炎药(NSAID，包括COX抑制剂(COXibs))或曲马多的膝痛对症治疗，并且必须同时具备以下两项条件：1)靶标膝至少6个月由于OA的疼痛史，以及2)在在筛选时和在至少5个半衰期的镇痛药(对乙酰氨基酚、局部或口服全身性NSAID、COXibs、阿片类药物和/或曲马多)清除之后的基线处，靶标膝根据西安大略和麦克马斯特大学关节炎指数(WOMAC)疼痛指数问题1(“平地行走时[过去48小时内靶标膝关节]有多痛？”)的疼痛评分为4至9分。有生育能力的妇女必须在整个研究过程中避孕，失败率低于每年1％。
主要排除标准包括靶标膝股胫轴错位>5度，靶标膝中临床发炎的表征(即发红)，筛选前6个月内任一侧膝接受过皮质类固醇或透明质酸关节内给药，未来2年内有膝部手术计划(靶标膝或对侧膝)，被认为与加入研究不相容的伴随情况或治疗，MRI扫描禁忌(包括无法进入扫描仪或膝上线圈)，怀孕或哺乳，过去30天内参与另一项临床研究，以及法律上无行为能力或限制行为能力。
在任何与研究相关的活动之前都必须已获得书面知情同意。
仅基于JSW的安慰剂效应：如图3(A和B)所示，KL2患者(JSW>3.5mm)与KL3患者(JSW≤3.5mm)的安慰剂效应非常重要。不证自明，它在总WOMAC评分中起着重要作用，在KL2患者中，简单注射安慰剂(PBO)(即盐)足以在很长一段时间内大幅降低WOMAC评分，而在KL3患者中，尽管有注射，WOMAC评分持续增加。
基于CTX-II或ProC2水平的安慰剂效应：图4强调了具有高代谢生物标志物水平(诸如CTX-II高于350ng/mmol(图4A)或ProC2高于4.2ng/mL(图4B))的患者对于安慰剂注射呈现较高的安慰剂效应。
基于JSW+CTX-II水平的组合的安慰剂效应：如图5所示，基线处CTX-II水平的不同分布影响如MRI和WOMAC的结果测量指标。鉴于该结果，薄软骨(JSW≤3.5mm)和低代谢标志物水平(例如，CTX-II低于或等于350ng/mmol)似乎是进行临床试验以减轻升高的安慰剂应响应的正确研究人群。
在利用FGF18治疗之后：如图6A和6B明显可见，一旦考虑了安慰剂效应，对于利用各种剂量的斯非福明治疗的KL2患者和KL3患者两者，根据总WOMAC评分的响应形状急剧改变。在考虑了CTX-2水平时也是如此。
如图6C和6D明显可见，一旦考虑了安慰剂效应，对于利用各种剂量的斯非福明治疗的KL2患者和KL3患者两者，根据软骨厚度的响应形状也强烈改变。在考虑了CTX-2水平时也是如此。
根据本实施例清楚可见，分层可以降低临床试验的风险，否则临床试验会由于一些患者亚组的安慰剂效应而产生偏差。
实施例2.在化合物X的研究中利用安慰剂治疗的对象的安慰剂响应
此研究是评估化合物X的双盲、随机、设安慰剂对照和多中心的临床试验。这项研究的安慰剂组(placebo arm)招募了约600名患者。招募了年龄在50-80岁之间且至少有一个膝盖的OA疼痛的患者，但这些患者的身体状况良好。化合物X为口服药物，安慰剂以相同包装供应。为了被纳入研究，患者必须符合OA诊断的ACR标准。在研究过程中评估双侧膝，但在随机分组之前鉴别靶标膝以评估主要疗效终点。前一个月内多数日子有靶标膝疼痛。此外，患者必须满足以下条件的至少一项：年龄超过50岁，早晨僵硬持续时间少于30分钟，或膝捻发音(crepitus)。X射线测量的靶标膝内侧胫股骨关节的JSW≥2.0mm，KL评分为2或3。在WOMAC上，患者疼痛评分≥150mm和/或机能评分≥510mm。如果双侧膝均符合标准，则满足KL评分为2的膝盖定义为靶标膝。如果双侧膝的KL评分均为2，则选择具有最高疼痛VAS的膝盖(只要其小于80mm)。
排除标准包括疾病(除OA之外)和影响骨或软骨代谢的药物治疗。允许止痛药物治疗，只要其在研究药物之后至少30分钟服用即可。在研究期间和随机分组之前的3个月内，禁止在靶标膝进行皮质类固醇或透明质酸的关节内注射。
中心对随机分组进行分层，并确保治疗分配对患者和研究人员是无偏见且隐蔽的。试验依据《赫尔辛基宣言》进行。该协议已获得独立道德委员会或机构审查委员会(IEC/IRB)的批准。所有对象或法定代表人均知情同意参与其中。
基于KL+CTX-II水平的组合的安慰剂效应：如图7所示，基线处KL2和KL3亚组的CTX-II水平的不同分布影响如WOMAC的结果测量指标。鉴于该结果，薄软骨(JSW≤3.5mm)和低代谢标志物水平(例如，CTX-II低于或等于350ng/mmol)似乎是进行临床试验以减轻升高的安慰剂应响应的正确研究人群。
总体结论
这些实施例清楚地强调了，KL3富集且CTX-II平衡的设计使得可以检测到长达至少3年的症状获益(见图8)。因此，薄软骨(低于或等于3.5±2SD mm)和低CTX-II(低于或等于350±2SD ng/mmol)似乎是进行临床试验以减轻升高的安慰剂应响应的最佳研究人群。值得注意的是，显然可以使用Allcomer数据，即无患者流失：这只是分层、患者管理的问题。类似地，根据实施例部分的结果，可以使用ProC2水平0代替CTX-II水平。在这种情况下，薄软骨和低ProC2(低于或等于4.2±2SD ng/ml)将是进行临床试验以减轻升高的安慰剂应响应的同样合适的研究人群。
由于这些发现，证明了对于两项非常不同的临床试验，其中涉及两种非常不同的活性化合物，它们通过不同的途径施用(一种通过关节内注射，另一种通过口服施用)，并且对于这种建议的分层方法，因为有可能选择具有结构和症状获益的正确患者人群，所以对于任何针对OA的药物，可以降低安慰剂响应，避免治疗组之间的失衡，以及降低临床试验风险。
参考文献
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缩写
BMI＝身体质量指数
CI＝置信区间
DBPC＝双盲设安慰剂对照
CTX-II＝II型胶原蛋白的C端端肽
DBPC＝双盲设安慰剂对照
ICOAP＝间歇性和持续性骨关节炎疼痛的量度
ITT＝意向性治疗JSW＝关节间隙宽度
KOOS症状指数＝膝伤与骨关节炎结果评分症状指数分量表
KOOS QOL＝膝伤与骨关节炎结果评分生活质量分量表
LOCF＝末次观测结转
LFTC＝股胫骨外侧室
MFTC＝股胫骨内侧室
mITT＝改良意向性治疗
MOS SF-36＝医学成果研究简表-36一般健康调查
MRI＝核磁共振成像
NRS疼痛评分＝数值量表疼痛评分
OA＝骨关节炎
PGA＝患者整体评估
PGIC＝患者对变化的整体印象化
PROC2＝胶原蛋白II型原肽的新表位
WOMAC＝西安大略和麦克马斯特大学关节炎指数
W＝周
序列表
<110> 默克专利有限公司（MERCK PATENT GMBH）
<120> 治疗骨关节炎的富集策略中有用的标志物
<130> P 18/139
<150> EP18193351.6
<151> 10.09.2018
<160> 10
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 6
<212> PRT
<213> 重组
<220>
<223> 标志物CTX-II
<400> 1
Glu Lys Gly Pro Asp Pro
1 5
<210> 2
<211> 10
<212> PRT
<213> 重组
<220>
<223> 标志物ProC2
<400> 2
Gln Asp Val Arg Gln Pro Gly Pro Lys Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 207
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<220>
<223> 原生人FGF-18
<400> 3
Met Tyr Ser Ala Pro Ser Ala Cys Thr Cys Leu Cys Leu His Phe Leu
1 5 10 15
Leu Leu Cys Phe Gln Val Gln Val Leu Val Ala Glu Glu Asn Val Asp
20 25 30
Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg Ala Arg Asp Asp Val Ser
35 40 45
Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Tyr Ser Arg Thr Ser Gly Lys
50 55 60
His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg Ile Ser Ala Arg Gly Glu Asp Gly
65 70 75 80
Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val Glu Thr Asp Thr Phe Gly Ser Gln
85 90 95
Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr Glu Phe Tyr Leu Cys Met Asn Arg
100 105 110
Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro Asp Gly Thr Ser Lys Glu Cys Val
115 120 125
Phe Ile Glu Lys Val Leu Glu Asn Asn Tyr Thr Ala Leu Met Ser Ala
130 135 140
Lys Tyr Ser Gly Trp Tyr Val Gly Phe Thr Lys Lys Gly Arg Pro Arg
145 150 155 160
Lys Gly Pro Lys Thr Arg Glu Asn Gln Gln Asp Val His Phe Met Lys
165 170 175
Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln Lys Pro Phe Lys Tyr Thr
180 185 190
Thr Val Thr Lys Arg Ser Arg Arg Ile Arg Pro Thr His Pro Ala
195 200 205
<210> 4
<211> 170
<212> PRT
<213> 重组
<220>
<223> 截短的FGF-18（斯非福明）
<400> 4
Met Glu Glu Asn Val Asp Phe Arg Ile His Val Glu Asn Gln Thr Arg
1 5 10 15
Ala Arg Asp Asp Val Ser Arg Lys Gln Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Tyr
20 25 30
Ser Arg Thr Ser Gly Lys His Ile Gln Val Leu Gly Arg Arg Ile Ser
35 40 45
Ala Arg Gly Glu Asp Gly Asp Lys Tyr Ala Gln Leu Leu Val Glu Thr
50 55 60
Asp Thr Phe Gly Ser Gln Val Arg Ile Lys Gly Lys Glu Thr Glu Phe
65 70 75 80
Tyr Leu Cys Met Asn Arg Lys Gly Lys Leu Val Gly Lys Pro Asp Gly
85 90 95
Thr Ser Lys Glu Cys Val Phe Ile Glu Lys Val Leu Glu Asn Asn Tyr
100 105 110
Thr Ala Leu Met Ser Ala Lys Tyr Ser Gly Trp Tyr Val Gly Phe Thr
115 120 125
Lys Lys Gly Arg Pro Arg Lys Gly Pro Lys Thr Arg Glu Asn Gln Gln
130 135 140
Asp Val His Phe Met Lys Arg Tyr Pro Lys Gly Gln Pro Glu Leu Gln
145 150 155 160
Lys Pro Phe Lys Tyr Thr Thr Val Thr Lys
165 170
<210> 5
<211> 32
<212> PRT
<213> 重组
<220>
<223> 降钙素（鲑鱼降钙素）
<400> 5
Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu
1 5 10 15
His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro
20 25 30
<210> 6
<211> 396
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<220>
<223> 人BMP-2
<400> 6
Met Val Ala Gly Thr Arg Cys Leu Leu Ala Leu Leu Leu Pro Gln Val
1 5 10 15
Leu Leu Gly Gly Ala Ala Gly Leu Val Pro Glu Leu Gly Arg Arg Lys
20 25 30
Phe Ala Ala Ala Ser Ser Gly Arg Pro Ser Ser Gln Pro Ser Asp Glu
35 40 45
Val Leu Ser Glu Phe Glu Leu Arg Leu Leu Ser Met Phe Gly Leu Lys
50 55 60
Gln Arg Pro Thr Pro Ser Arg Asp Ala Val Val Pro Pro Tyr Met Leu
65 70 75 80
Asp Leu Tyr Arg Arg His Ser Gly Gln Pro Gly Ser Pro Ala Pro Asp
85 90 95
His Arg Leu Glu Arg Ala Ala Ser Arg Ala Asn Thr Val Arg Ser Phe
100 105 110
His His Glu Glu Ser Leu Glu Glu Leu Pro Glu Thr Ser Gly Lys Thr
115 120 125
Thr Arg Arg Phe Phe Phe Asn Leu Ser Ser Ile Pro Thr Glu Glu Phe
130 135 140
Ile Thr Ser Ala Glu Leu Gln Val Phe Arg Glu Gln Met Gln Asp Ala
145 150 155 160
Leu Gly Asn Asn Ser Ser Phe His His Arg Ile Asn Ile Tyr Glu Ile
165 170 175
Ile Lys Pro Ala Thr Ala Asn Ser Lys Phe Pro Val Thr Arg Leu Leu
180 185 190
Asp Thr Arg Leu Val Asn Gln Asn Ala Ser Arg Trp Glu Ser Phe Asp
195 200 205
Val Thr Pro Ala Val Met Arg Trp Thr Ala Gln Gly His Ala Asn His
210 215 220
Gly Phe Val Val Glu Val Ala His Leu Glu Glu Lys Gln Gly Val Ser
225 230 235 240
Lys Arg His Val Arg Ile Ser Arg Ser Leu His Gln Asp Glu His Ser
245 250 255
Trp Ser Gln Ile Arg Pro Leu Leu Val Thr Phe Gly His Asp Gly Lys
260 265 270
Gly His Pro Leu His Lys Arg Glu Lys Arg Gln Ala Lys His Lys Gln
275 280 285
Arg Lys Arg Leu Lys Ser Ser Cys Lys Arg His Pro Leu Tyr Val Asp
290 295 300
Phe Ser Asp Val Gly Trp Asn Asp Trp Ile Val Ala Pro Pro Gly Tyr
305 310 315 320
His Ala Phe Tyr Cys His Gly Glu Cys Pro Phe Pro Leu Ala Asp His
325 330 335
Leu Asn Ser Thr Asn His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val Asn Ser Val
340 345 350
Asn Ser Lys Ile Pro Lys Ala Cys Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser Ala
355 360 365
Ile Ser Met Leu Tyr Leu Asp Glu Asn Glu Lys Val Val Leu Lys Asn
370 375 380
Tyr Gln Asp Met Val Val Glu Gly Cys Gly Cys Arg
385 390 395
<210> 7
<211> 431
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<220>
<223> 人BMP-7
<400> 7
Met His Val Arg Ser Leu Arg Ala Ala Ala Pro His Ser Phe Val Ala
1 5 10 15
Leu Trp Ala Pro Leu Phe Leu Leu Arg Ser Ala Leu Ala Asp Phe Ser
20 25 30
Leu Asp Asn Glu Val His Ser Ser Phe Ile His Arg Arg Leu Arg Ser
35 40 45
Gln Glu Arg Arg Glu Met Gln Arg Glu Ile Leu Ser Ile Leu Gly Leu
50 55 60
Pro His Arg Pro Arg Pro His Leu Gln Gly Lys His Asn Ser Ala Pro
65 70 75 80
Met Phe Met Leu Asp Leu Tyr Asn Ala Met Ala Val Glu Glu Gly Gly
85 90 95
Gly Pro Gly Gly Gln Gly Phe Ser Tyr Pro Tyr Lys Ala Val Phe Ser
100 105 110
Thr Gln Gly Pro Pro Leu Ala Ser Leu Gln Asp Ser His Phe Leu Thr
115 120 125
Asp Ala Asp Met Val Met Ser Phe Val Asn Leu Val Glu His Asp Lys
130 135 140
Glu Phe Phe His Pro Arg Tyr His His Arg Glu Phe Arg Phe Asp Leu
145 150 155 160
Ser Lys Ile Pro Glu Gly Glu Ala Val Thr Ala Ala Glu Phe Arg Ile
165 170 175
Tyr Lys Asp Tyr Ile Arg Glu Arg Phe Asp Asn Glu Thr Phe Arg Ile
180 185 190
Ser Val Tyr Gln Val Leu Gln Glu His Leu Gly Arg Glu Ser Asp Leu
195 200 205
Phe Leu Leu Asp Ser Arg Thr Leu Trp Ala Ser Glu Glu Gly Trp Leu
210 215 220
Val Phe Asp Ile Thr Ala Thr Ser Asn His Trp Val Val Asn Pro Arg
225 230 235 240
His Asn Leu Gly Leu Gln Leu Ser Val Glu Thr Leu Asp Gly Gln Ser
245 250 255
Ile Asn Pro Lys Leu Ala Gly Leu Ile Gly Arg His Gly Pro Gln Asn
260 265 270
Lys Gln Pro Phe Met Val Ala Phe Phe Lys Ala Thr Glu Val His Phe
275 280 285
Arg Ser Ile Arg Ser Thr Gly Ser Lys Gln Arg Ser Gln Asn Arg Ser
290 295 300
Lys Thr Pro Lys Asn Gln Glu Ala Leu Arg Met Ala Asn Val Ala Glu
305 310 315 320
Asn Ser Ser Ser Asp Gln Arg Gln Ala Cys Lys Lys His Glu Leu Tyr
325 330 335
Val Ser Phe Arg Asp Leu Gly Trp Gln Asp Trp Ile Ile Ala Pro Glu
340 345 350
Gly Tyr Ala Ala Tyr Tyr Cys Glu Gly Glu Cys Ala Phe Pro Leu Asn
355 360 365
Ser Tyr Met Asn Ala Thr Asn His Ala Ile Val Gln Thr Leu Val His
370 375 380
Phe Ile Asn Pro Glu Thr Val Pro Lys Pro Cys Cys Ala Pro Thr Gln
385 390 395 400
Leu Asn Ala Ile Ser Val Leu Tyr Phe Asp Asp Ser Ser Asn Val Ile
405 410 415
Leu Lys Lys Tyr Arg Asn Met Val Val Arg Ala Cys Gly Cys His
420 425 430
<210> 8
<211> 501
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<220>
<223> 人GDF-5
<400> 8
Met Arg Leu Pro Lys Leu Leu Thr Phe Leu Leu Trp Tyr Leu Ala Trp
1 5 10 15
Leu Asp Leu Glu Phe Ile Cys Thr Val Leu Gly Ala Pro Asp Leu Gly
20 25 30
Gln Arg Pro Gln Gly Thr Arg Pro Gly Leu Ala Lys Ala Glu Ala Lys
35 40 45
Glu Arg Pro Pro Leu Ala Arg Asn Val Phe Arg Pro Gly Gly His Ser
50 55 60
Tyr Gly Gly Gly Ala Thr Asn Ala Asn Ala Arg Ala Lys Gly Gly Thr
65 70 75 80
Gly Gln Thr Gly Gly Leu Thr Gln Pro Lys Lys Asp Glu Pro Lys Lys
85 90 95
Leu Pro Pro Arg Pro Gly Gly Pro Glu Pro Lys Pro Gly His Pro Pro
100 105 110
Gln Thr Arg Gln Ala Thr Ala Arg Thr Val Thr Pro Lys Gly Gln Leu
115 120 125
Pro Gly Gly Lys Ala Pro Pro Lys Ala Gly Ser Val Pro Ser Ser Phe
130 135 140
Leu Leu Lys Lys Ala Arg Glu Pro Gly Pro Pro Arg Glu Pro Lys Glu
145 150 155 160
Pro Phe Arg Pro Pro Pro Ile Thr Pro His Glu Tyr Met Leu Ser Leu
165 170 175
Tyr Arg Thr Leu Ser Asp Ala Asp Arg Lys Gly Gly Asn Ser Ser Val
180 185 190
Lys Leu Glu Ala Gly Leu Ala Asn Thr Ile Thr Ser Phe Ile Asp Lys
195 200 205
Gly Gln Asp Asp Arg Gly Pro Val Val Arg Lys Gln Arg Tyr Val Phe
210 215 220
Asp Ile Ser Ala Leu Glu Lys Asp Gly Leu Leu Gly Ala Glu Leu Arg
225 230 235 240
Ile Leu Arg Lys Lys Pro Ser Asp Thr Ala Lys Pro Ala Ala Pro Gly
245 250 255
Gly Gly Arg Ala Ala Gln Leu Lys Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gly Arg
260 265 270
Gln Pro Ala Ser Leu Leu Asp Val Arg Ser Val Pro Gly Leu Asp Gly
275 280 285
Ser Gly Trp Glu Val Phe Asp Ile Trp Lys Leu Phe Arg Asn Phe Lys
290 295 300
Asn Ser Ala Gln Leu Cys Leu Glu Leu Glu Ala Trp Glu Arg Gly Arg
305 310 315 320
Ala Val Asp Leu Arg Gly Leu Gly Phe Asp Arg Ala Ala Arg Gln Val
325 330 335
His Glu Lys Ala Leu Phe Leu Val Phe Gly Arg Thr Lys Lys Arg Asp
340 345 350
Leu Phe Phe Asn Glu Ile Lys Ala Arg Ser Gly Gln Asp Asp Lys Thr
355 360 365
Val Tyr Glu Tyr Leu Phe Ser Gln Arg Arg Lys Arg Arg Ala Pro Leu
370 375 380
Ala Thr Arg Gln Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala Arg Cys
385 390 395 400
Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp Asp Asp
405 410 415
Trp Ile Ile Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu Gly Leu
420 425 430
Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His Ala Val
435 440 445
Ile Gln Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro Pro Thr
450 455 460
Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro Ile Ser Ile Leu Phe Ile Asp
465 470 475 480
Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gln Tyr Glu Asp Met Val Val Glu
485 490 495
Ser Cys Gly Cys Arg
500
<210> 9
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<220>
<223> 人FGF-beta
<400> 9
Met Val Gly Val Gly Gly Gly Asp Val Glu Asp Val Thr Pro Arg Pro
1 5 10 15
Gly Gly Cys Gln Ile Ser Gly Arg Gly Ala Arg Gly Cys Asn Gly Ile
20 25 30
Pro Gly Ala Ala Ala Trp Glu Ala Ala Leu Pro Arg Arg Arg Pro Arg
35 40 45
Arg His Pro Ser Val Asn Pro Arg Ser Arg Ala Ala Gly Ser Pro Arg
50 55 60
Thr Arg Gly Arg Arg Thr Glu Glu Arg Pro Ser Gly Ser Arg Leu Gly
65 70 75 80
Asp Arg Gly Arg Gly Arg Ala Leu Pro Gly Gly Arg Leu Gly Gly Arg
85 90 95
Gly Arg Gly Arg Ala Pro Glu Arg Val Gly Gly Arg Gly Arg Gly Arg
100 105 110
Gly Thr Ala Ala Pro Arg Ala Ala Pro Ala Ala Arg Gly Ser Arg Pro
115 120 125
Gly Pro Ala Gly Thr Met Ala Ala Gly Ser Ile Thr Thr Leu Pro Ala
130 135 140
Leu Pro Glu Asp Gly Gly Ser Gly Ala Phe Pro Pro Gly His Phe Lys
145 150 155 160
Asp Pro Lys Arg Leu Tyr Cys Lys Asn Gly Gly Phe Phe Leu Arg Ile
165 170 175
His Pro Asp Gly Arg Val Asp Gly Val Arg Glu Lys Ser Asp Pro His
180 185 190
Ile Lys Leu Gln Leu Gln Ala Glu Glu Arg Gly Val Val Ser Ile Lys
195 200 205
Gly Val Cys Ala Asn Arg Tyr Leu Ala Met Lys Glu Asp Gly Arg Leu
210 215 220
Leu Ala Ser Lys Cys Val Thr Asp Glu Cys Phe Phe Phe Glu Arg Leu
225 230 235 240
Glu Ser Asn Asn Tyr Asn Thr Tyr Arg Ser Arg Lys Tyr Thr Ser Trp
245 250 255
Tyr Val Ala Leu Lys Arg Thr Gly Gln Tyr Lys Leu Gly Ser Lys Thr
260 265 270
Gly Pro Gly Gln Lys Ala Ile Leu Phe Leu Pro Met Ser Ala Lys Ser
275 280 285
<210> 10
<211> 208
<212> PRT
<213> 智人（Homo Sapiens）
<220>
<223> 人FGF-9
<400> 10
Met Ala Pro Leu Gly Glu Val Gly Asn Tyr Phe Gly Val Gln Asp Ala
1 5 10 15
Val Pro Phe Gly Asn Val Pro Val Leu Pro Val Asp Ser Pro Val Leu
20 25 30
Leu Ser Asp His Leu Gly Gln Ser Glu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Gly
35 40 45
Pro Ala Val Thr Asp Leu Asp His Leu Lys Gly Ile Leu Arg Arg Arg
50 55 60
Gln Leu Tyr Cys Arg Thr Gly Phe His Leu Glu Ile Phe Pro Asn Gly
65 70 75 80
Thr Ile Gln Gly Thr Arg Lys Asp His Ser Arg Phe Gly Ile Leu Glu
85 90 95
Phe Ile Ser Ile Ala Val Gly Leu Val Ser Ile Arg Gly Val Asp Ser
100 105 110
Gly Leu Tyr Leu Gly Met Asn Glu Lys Gly Glu Leu Tyr Gly Ser Glu
115 120 125
Lys Leu Thr Gln Glu Cys Val Phe Arg Glu Gln Phe Glu Glu Asn Trp
130 135 140
Tyr Asn Thr Tyr Ser Ser Asn Leu Tyr Lys His Val Asp Thr Gly Arg
145 150 155 160
Arg Tyr Tyr Val Ala Leu Asn Lys Asp Gly Thr Pro Arg Glu Gly Thr
165 170 175
Arg Thr Lys Arg His Gln Lys Phe Thr His Phe Leu Pro Arg Pro Val
180 185 190
Asp Pro Asp Lys Val Pro Glu Leu Tyr Lys Asp Ile Leu Ser Gln Ser
195 200 205

Claims (16)

1.一种降低临床试验风险的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量，
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，以及
c)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象对于利用所述化合物的治疗的高度敏感性、中度敏感性、低敏感性或无敏感性，
其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
2.根据权利要求1所述的方法，包含以下步骤：根据高于350±2SD ng/mmol的CTX-II或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的存在，预测对于利用活性化合物的治疗的低敏感性或无敏感性。
3.根据权利要求1所述的方法，包含以下步骤：
i.根据低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在，预测对于利用活性化合物的治疗的良好敏感性，或者
ii.根据以下情况的存在，预测对于利用活性化合物的治疗的中度敏感性：
a)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
b)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
4.一种选择患有软骨疾病的对象以纳入利用活性化合物的治疗或临床试验中或排除在其外的方法，所述选择基于对象对于所述治疗的敏感性的可能性，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)；其中这些蛋白质的至少一种的量和JSW的宽度预示着对象对于所述治疗敏感或不敏感的风险，以及
b)选择敏感的对象作为适合所述治疗或临床试验的对象。
5.根据权利要求4所述的方法，包含以下步骤：将存在高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW的对象从利用活性化合物的治疗中排除。
6.根据权利要求5所述的方法，包含以下步骤：将存在以下情况的患者纳入利用活性化合物的治疗中：
a)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，
b)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
c)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
7.根据权利要求6所述的方法，包含以下步骤：将存在以下情况的患者纳入根据替代的给药方案利用活性化合物的治疗中：
a)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
b)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
8.一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗良好敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象：
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，
ii.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
iii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)对所述选择的对象关节内施用所述活性化合物。
9.一种利用活性化合物治疗患有软骨疾病的对象的方法，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量并且测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，其中所述量和宽度预示着所述对象对于利用所述活性化合物的治疗中度敏感的风险，
b)选择具有以下情况的对象
i.低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
ii.高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW，并且
c)根据替代的给药方案对所述选择的对象关节内施用所述活性化合物，根据所述替代的给药方案，与所述活性化合物的常用给药方案相比，活性化合物的剂量增加和/或活性化合物施用更长的治疗时间段。
10.一种降低临床试验风险或在临床试验中确定对象的安慰剂效应的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
a)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，
b)根据步骤a)的结果预测所述对象的安慰剂效应的风险，
其中，高于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着安慰剂效应，并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在预示着无安慰剂效应或低安慰剂效应。
11.一种降低临床试验风险或在临床试验中确定对象的安慰剂效应的方法，其中所述临床试验与利用活性化合物治疗对象的软骨疾病有关，所述方法包含以下步骤：
a)由所述对象的样品确定选自由CTX-II和/或ProC2所组成的组的生物标志物中的至少一种的量；
b)测量所述对象的至少一个膝盖的关节间隙宽度(JSW)，
c)根据步骤a)和b)的结果预测所述对象的安慰剂效应的风险，其中步骤a)和b)以任一顺序进行。
12.根据权利要求11所述的方法，其中1)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II(>正常均值的240-260％)和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2(>正常均值的120-280％)并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者2)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW、或者3)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SDng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着安慰剂效应，而低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW的存在，预示着无安慰剂效应或低安慰剂效应。
13.一种试剂盒，其包含用于实施根据权利要求1至12的任意一项所述的方法的工具和使用说明书。
14.一种活性化合物，其用于治疗患有软骨疾病的对象，其特征在于，所述对象存在：
a)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于或等于3.5±2SD mm的JSW，或者
b)低于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或低于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且高于3.5±2SD mm的JSW，或者
c)高于350±2SD ng/mmol的CTX-II和/或高于4.2±2SD ng/mL的ProC2并且低于3.5±2SD mm的JSW。
15.根据权利要求1至12的任意一项所述的方法，根据权利要求13所述的试剂盒，或者根据权利要求14所述用途的活性化合物，其中所述活性化合物选自由FGF-18化合物、BMP-2、BMP-7、GDF-5、FGFβ、FGF-9、SOX-9增强剂、TGFβ、Wnt抑制剂、抗MMP13抑制剂、抗ADAMTS4或5抑制剂、降钙素及其任何变体或融合蛋白所组成的组。
16.根据权利要求1至12的任意一项所述的方法，根据权利要求13的任意一项所述的试剂盒，或者根据权利要求14的任意一项所述用途的活性化合物，其中所述软骨疾病选自由骨关节炎、软骨损伤、影响关节软骨的骨折或对关节软骨有影响的外科手术诸如微骨折所组成的组。
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