BR112021004356A2 - marcadores úteis em estratégias de enriquecimento para o tratamento de osteoartrite - Google Patents

Abstract

MARCADORES ÚTEIS EM ESTRATÉGIAS DE ENRIQUECIMENTO PARA O TRATAMENTO DE OSTEOARTRITE. A presente invenção refere-se à farmacogenética, mais especificamente a estratégias que envolvem biomarcadores associados com a resposta clínica a um composto antes ou durante o tratamento de uma doença da cartilagem, como osteoartrite. A presente invenção refere-se mais particularmente à combinação de medidas de JSW e nível de proteínas específicas presentes no sangue, soro, líquido sinovial ou na urina, que pode ser usada em estratégias como enriquecimento de pacientes em ensaios clínicos, estratégia para seleção de pacientes antes ou durante o tratamento ou para adaptar o tratamento de um paciente na estrutura de tratamentos para doença da cartilagem, como osteoartrite.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "MARCADORES ÚTEIS EM ESTRATÉGIAS DE ENRIQUECIMENTO PARA O TRATAMENTO DE OSTEOARTRITE". Campo da invenção

[0001] A presente invenção refere-se à farmacogenética, mais especificamente a estratégias que envolvem marcadores associados com a resposta clínica a um composto antes ou durante o tratamento de uma doença da cartilagem, como osteoartrite, com o dito composto. A presente invenção refere-se mais particularmente à combinação de medidas da largura do espaço articular (Joint Space Width, JSW) e nível de proteínas específicas presentes no sangue, soro, líquido sinovial ou na urina, que pode ser usada em estratégias como enriquecimento de pacientes em ensaios clínicos, estratégias de seleção de pacientes antes ou durante o tratamento ou para adaptar o tratamento de um paciente na estrutura de tratamentos para doença da cartilagem, como osteoartrite.

[0002] A invenção descreve ainda ferramentas e kits diagnósticos tendo por base a combinação de medidas de JSW e nível de biomarcadores específicos. Desse modo, a invenção pode ser utilizada para prever a resposta a um composto para o tratamento de uma doença da cartilagem, antes de iniciar o tratamento com o dito composto ou durante o tratamento. A estratégia poderia ser empregada para a seleção/identificação de indivíduos a serem tratados por administração intra-articular de um composto ativo para tratar uma doença da cartilagem e na estratégia para enriquecimento de pacientes. O uso dessa estratégia, no diagnóstico, por exemplo, poderia resultar em benefício aumentado e risco reduzido em indivíduos. Antecedente da invenção

[0003] Doenças da cartilagem referem-se em amplo sentido a doenças caracterizadas pela degeneração de anormalidades metabólicas no tecido conjuntivo que se manifestam por dor, rigidez e limitação dos movimentos nas partes afetadas do corpo.

Essas doenças podem ser decorrentes de patologia ou podem ser resultantes de trauma ou lesão.

Entre outras, as doenças da cartilagem incluem osteoartrite (OA), lesão da cartilagem (inclusive lesões da cartilagem e articulação causadas por esportes e lesões cirúrgicas como microfratura(s)). A cartilagem madura dispõe de capacidade limitada para autorrepararão, notadamente porque os condrócitos maduros possuem pequeno potencial para proliferação e devido à ausência de vasos sanguíneos.

Além disso, a cartilagem não é bem nitrificada e possui baixa pressão de oxigênio.

A substituição da cartilagem danificada, em particular da cartilagem articular, causada por lesão ou doença representa um desafio importante para os médicos, e os procedimentos para tratamento cirúrgico são considerados não completamente previsíveis e eficazes por somente um período limitado.

Portanto, a maioria dos indivíduo’s mais jovens não busca tratamento ou é aconselhado a adiar o tratamento pelo maior tempo possível.

Quando há necessidade de tratamento, o procedimento padrão depende da idade e varia entre substituição articular total, transplante de pedaços de cartilagem ou uma técnica que estimula a medula (como microfratura). A microfratura é um procedimento comum que envolve a penetração do osso subcondral para estimular o depósito de cartilagem por células-tronco derivadas da medula óssea.

No entanto, foi demonstrado que essa técnica não repara suficientemente o defeito condral e a nova cartilagem formada é principalmente fibrocartilagem, resultando em função e biomecânica inadequadas ou alteradas.

De fato, a fibrocartilagem não tem a mesma durabilidade e pode não aderir corretamente à cartilagem hialina em volta.

Por esse motivo, a fibrocartilagem recém-sintetizada pode quebrar-se mais facilmente (prazo previsto: 5-10 anos).

[0004] Para indivíduos com osteoartrite, o tratamento não cirúrgico consiste nomeadamente em fisioterapia, modificação no estilo de vida (por exemplo, aumentar a atividade física), dispositivos de apoio, fármacos orais e injetados (por exemplo, fármacos anti-inflamatórios não esteroides), dispositivos auxiliares para marcha e controle de sintomas clínicos. Quando esses tratamentos falham, a cirurgia, como a substituição articular, é a principal opção para esses indivíduos. Osteotomias da tíbia ou fêmur (corte do osso para a correção de desgaste articular) podem reduzir sintomas, ajudar a manter um estilo de vida ativo e postergar a necessidade para substituição total da articulação. A substituição total da articulação pode proporcionar alívio dos sintomas de osteoartrite avançada, mas geralmente requer uma mudança no estilo de vida e/ou no nível de atividade do indivíduo.

[0005] Nessa altura, os tratamentos medicamentosos no mercado são dirigidos principalmente para o alívio de dor. não há ainda tratamento disponível comercialmente que restaure ou adie os danos à cartilagem (ver Lotz, 2010).

[0006] Fator de crescimento de fibroblastos 18 (FGF-18) faz parte da família FGF de proteínas, intimamente relacionado ao FGF-8 e FGF-

17. Foi demonstrado que FGF-18 é um agente proliferativo para condrócitos e osteoblastos (Ellsworth et al., 2002; Shimoaka et al., 2002; Gigout et al., 2017). FGF-18 foi proposto para o tratamento de doença da cartilagem, como osteoartrite, e lesão da cartilagem quer isoladamente (WO2008/023063) ou em combinação com ácido hialurônico (WO2004/032849).

[0007] Esprifermina, uma forma truncada do FGF-18 humano, está sendo investigada em ensaios clínicos para o tratamento de osteoartrite e de lesão da cartilagem (ver, por exemplo, NCT01033994, NCT00911469 e NCT01066871). O esquema atual de administração de esprifermina é uma vez por semana por 3 semanas (um ciclo de tratamento), sendo o fármaco administrado via injeções intra-articulares. Esse ciclo de tratamento pode ser repetido. Esse regime de dosagem foi descrito em WO2008/023063.

[0008] Nesse momento, os tratamentos para OA e lesão da cartilagem com FGF-18, durante ensaios clínicos, são fornecidos a indivíduos sem informações preditivas sobre a resposta (Lohmander et al., 2014; Dahlberg et al., 2016), ou seja, sem conhecimento sobre se o tratamento provavelmente será altamente eficaz, moderadamente eficaz ou se mostrará somente pouco ou nenhum efeito. Atualmente, inúmeras populações de indivíduos tratados exibem uma resposta intermediária/alta ao tratamento de acordo com a espessura da cartilagem, conforme medida pela técnica de IRM e as pontuações WOMAC com esprifermina depois de pelo menos um ciclo de tratamento, no entanto, alguns outros não respondem ao dito tratamento (ou seja, sem aumento ou limitado na espessura da cartilagem medida por IRM) ou respondem enquanto apresentando pontuação WOMAC maior em comparação ao controle.

[0009] WO2014/023703 descreve marcadores genéticos (combinação de SNPs IL-1RN rs9005 e IL-1RN rs315952) que estão associados com a qualidade da resposta clínica ao tratamento de doença da cartilagem como OA, lesão da cartilagem ou microfratura(s) com FGF-18. Tais marcadores são úteis para identificar, através do rastreamento genético antes do tratamento, subgrupos de indivíduos mais propensos a exibir uma resposta em particular ao tratamento com FGF-18, tal como uma resposta clínica muito boa ao tratamento com FGF-18 ou, ao contrário, aqueles para quem a terapia pode falhar.

[0010] O conhecimento sobre o tipo de resposta clínica de um indivíduo ao tratamento pode ser usado para selecionar ou estratificar pacientes para ensaios clínicos, selecionar uma terapia, otimizar uma terapia, como selecionar o tratamento com um composto como uma terapia de primeira linha ou adaptar o regime de dosagem. Tais informações serão clinicamente úteis para o manejo de ensaios clínicos ou para o manejo clínico de doença da cartilagem, como de OA e/ou lesão da cartilagem, em indivíduos. Além disso, tais informações preditivas podem também ser clinicamente úteis para orientar decisões sobre o regime de dosagem.

[0011] Há necessidade de serem identificados mais marcadores para ajudar a prever a resposta a placebo, ajudar no manejo de ensaios clínicos, otimizar a terapia ou selecionar uma terapia, a fim de proporcionar uma gama completa de soluções para o indivíduo a ser tratado ou para o médico que busca a melhor terapia para seu paciente. Sumário da invenção

[0012] Tal como aqui descrito, biomarcadores metabólicos, como proC2 ou CTX-II, combinados com o marcador físico JSW (largura do espaço articular) podem ser usados na detecção, estratificação, diagnóstico e/ou tratamento de pacientes com osteoartrite ou doenças da cartilagem. Os níveis de expressão (ou quantidade) de pelo menos um desses biomarcadores (ou combinações dos mesmos) combinados com o marcador físico JSW podem ser usados, por exemplo, para classificar melhor o paciente ou para detectar pacientes a serem incluídos ou, ao contrário, excluídos de uma terapia específica.

[0013] A presente invenção é direcionada a um método para reduzir o risco (derisking) em um ensaio clínico ou para determinar efeito placebo em um ensaio clínico (em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo) ou durante o tratamento com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, b) prever, a partir do resultado da etapa a), o risco de efeito placebo.

[0014] De acordo com o dito método, a presença de uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo. Ao contrário, a presença de uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de nenhum efeito placebo ou de reduzido.

[0015] A presente invenção é direcionada também a um método para reduzir o risco em um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, c) prever, a partir do resultado da etapas a) e b), a sensibilidade do dito indivíduo ao tratamento com o dito composto ativo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

[0016] De acordo com o dito método, a presença de CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de baixa ou nenhuma sensibilidade ao tratamento com um composto ativo. Ao contrário, a presença de 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, 2) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm é preditivo de sensibilidade ao tratamento com um composto ativo.

[0017] Além disso, é descrito um método para selecionar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem para inclusão em ou exclusão do tratamento, ou ensaio clínico, com um composto ativo, com base na probabilidade da sua sensibilidade ao dito tratamento, em que o método compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo; em que a quantidade de pelo menos uma dessas proteínas e a largura JSW são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja sensível ou não sensível ao dito tratamento e b) selecionar os indivíduos sensíveis como adequados para o dito tratamento ou ensaio clínico.

[0018] De acordo com o dito método, a presença de CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW superior a 3,5 ± 2DP mm leva preferivelmente à exclusão do dito indivíduo do tratamento com um composto ativo. Ao contrário, a presença de 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, 2) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm leva à inclusão do dito indivíduo no tratamento com um composto ativo.

[0019] Além disso, é descrito um kit que compreende meios para realizar o método de acordo com a invenção e instruções para uso.

[0020] Além disso, é abrangido um composto ativo para uso no tratamento de um indivíduo com uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta 1), CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, 2) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

[0021] A presente invenção é direcionada também a um método para tratar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem com um composto ativo, em que o método compreende as etapas seguintes: a) Determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja sensível a um tratamento com o dito composto ativo b) Selecionar o indivíduo com: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, ii. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou iii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm. c) administrar o dito composto ativo por via intra-articular ao dito indivíduo selecionado.

[0022] Em modalidades especiais da presente invenção como um todo, ou seja, em qualquer um dos métodos ou usos aqui mencionados, o indivíduo é portador de uma doença da cartilagem selecionada a partir do grupo que consiste em osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular (por exemplo, Microfratura) e o composto ativo pode ser selecionado, por exemplo, a partir do grupo que consiste em composto FGF-18, BMP-2, BMP-7, GDF-5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti- MMP13, inibidores anti-ADAMTS5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteínas de fusão dos mesmos.

[0023] Deve-se entender que, em qualquer um dos métodos ou usos aqui mencionados, antes de determinar a quantidade de pelo menos uma das proteínas, é preciso obter uma amostra (ou uma amostra de teste) do dito indivíduo, através de, por exemplo, a coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Além do mais, deve-se igualmente entender que qualquer um dos métodos ou usos aqui mencionados são realizados in vitro e no animal ou corpo humano. Definições

[0024] - O termo "composto de FGF-18" ou "FGF-18", neste relatório descritivo, destina-se a ser uma proteína que mantém pelo menos uma atividade biológica (por exemplo, aumento na atividade osteoblástica, ver WO98/1664, ou na formação de cartilagem, ver WO2008/023063) da proteína FGF-18 humana do tipo selvagem. FGF- 18 pode ser nativa (SEQ ID NO: 1), estar em sua forma madura (correspondendo à sequência de aminoácidos do resíduo 28(Glu) ao resíduo 207(Ala) de SEQ ID NO: 1) ou uma forma truncada da mesma como esprifermina (conforme mostrada na SEQ ID NO:2; com os resíduos de aminoácido resíduo 2 ao 170 da SEQ ID NO:2 correspondendo aos resíduos de aminoácido 28 ao 196 da SEQ ID NO:1). O termo "composto de FGF-18" também inclui variantes ou mutantes da forma madura nativa ou formas truncadas de FGF-18, bem como proteínas de fusão compreendendo uma porção FG-18 ativa (biologicamente) acoplada uma proteína heteróloga ou um composto químico (tal como aqueles revelados na família da patente EP17192467.3). Em tais proteínas de fusão, a porção FGF-18 pode ser a forma madura nativa ou formas truncadas da proteína FGF-18 ou variantes ou mutantes da mesma.

[0025] - O termo "BMP-2", neste relatório descritivo, é uma proteína que induz a síntese de matriz e promove o reparo de cartilagens, bem como desempenha um papel fundamental na diferenciação de células osteoprogenitoras em osteoblastos, promovendo, assim, a formação óssea e de cartilagem (Deng et al., 2018). A forma nativa completa da BMP-2 humana está representada na SEQ ID NO.6. Uma das formas recombinantes da proteína BMP-2 é conhecida como Dibotermina alfa. Esse termo "BMP-2" também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção BMP-2.

[0026] - O termo "BMP-7", neste relatório descritivo, é uma proteína conhecida por suas propriedades osteogênicas, que demonstra ter um forte efeito anabólico sobre cartilagem ao estimular a de componentes da matriz cartilaginosa e aumentar a síntese de proteoglicanos e colágeno (Deng et al., 2018). A forma nativa completa da BMP7 humana é representada na SEQ ID NO.7. Uma das formas recombinantes da proteína BMP-2 é conhecida como eptotermina alfa. Esse termo também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção BMP-7.

[0027] - O termo "GDF-5", também conhecida como LAP-4 ou radotermina, neste relatório descritivo, é uma proteína, tendo, entre outros, efeitos estimuladores sobre a síntese da matriz de condrócitos articulares humanos cultivados in vitro, de indivíduos sadios e também de pacientes com OA (Parrish et al., 2017). A forma nativa completa da GDF-5 humana é representada na SEQ ID NO.8. Esse termo também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção GDF-5.

[0028] - O termo "FGFβ" ou "FGF-2", neste relatório descritivo, é uma proteína conhecida no reparo de cartilagens. É também conhecida por estimular a proliferação de condrócitos em coelhos imaturos (Ameye e Young, 2006). A forma nativa completa da FGF-2 humana é representada na SEQ ID NO.9. Uma das formas recombinantes da proteína FGFβ é conhecida como trafermina. Esse termo também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção FGFβ.

[0029] - O termo "FGF-9", neste relatório descritivo, é uma proteína conhecida por retardar a degradação de cartilagem articular em um indivíduo com AO, enquanto exercendo um impacto bem negativo sobre a formação de osteófitos (Zhou et al., 2016). A forma nativa completa da FGF-9 humana é representada na SEQ ID NO.10. Esse termo também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção FGF-9.

[0030] - O termo "TGF-β", neste relatório descritivo, é uma proteína TGF-beta pertencente à família TGF-beta que desempenha um papel fundamental na manutenção da cartilagem. TGF-beta demonstrou ser um reforçador da cartilagem (Wang 2014). Esse termo também inclui variantes da mesma ou proteínas de fusão compreendendo uma porção TGF-β.

[0031] - O termo "reforçadores de SOX-9", neste relatório descritivo, destina-se a ser um composto que reforça a produção de SOX9. Na verdade, SOX9 é um fator de transcrição que demonstrou ser essencial para a formação de da matriz extracelular da cartilagem (ECM).

[0032] - O termo "calcitonina" neste relatório descritivo, é mais especialmente o tipo calcitonina de salmão, um peptídeo com 32 aminoácidos (SEQ ID NO.5), que demonstrou ter atividade protetora no osso e na cartilagem.

[0033] - O termo "inibidores de Wnt", neste relatório descritivo, destina-se a ser um composto que interfere com a via WNT.

[0034] - O termo "inibidores anti-MMP13", neste relatório descritivo destina-se a ser um composto que inibe a atividade da metaloproteinase

13 da matriz (MMP13). MMP13 é uma das principais enzimas que degradam colágeno tipo II.

[0035] - O termo "inibidores de anti-ADAMTS4 ou 5", neste relatório descritivo, destina-se a ser um composto que inibe a atividade enzimática de uma disintegrina e metaloproteinase com os motivos 4 ou 5 de trombospondina (ADAMTS4 ou ADAMTS5).

[0036] - Os termos "biomarcador" ou "marcador proteico" são usados alternadamente. No contexto da presente invenção, eles são peptídeos ou proteínas. Um "biomarcador prognóstico" é informativo sobre a condição do indivíduo, incluindo, entre outros, sobre a evolução da doença, gravidade da doença ou desfecho da doença, independentemente de qualquer terapia. Um "biomarcador preditivo" é informativo sobre o efeito de uma terapia recebida, incluindo, entre outros, sobre o resultado de eficácia e segurança. As definições de prognóstico e preditivo não são mutuamente exclusivas, portanto, um biomarcador pode ser ambos, prognóstico e preditivo. Neste relatório descritivo, a quantidade de biomarcador ou o nível de expressão do biomarcador é expresso em nmol, µmol, mmol, ng, µg, mg ou g de uma da proteína. A dita quantidade ou nível pode ser expresso em valor absoluto (por exemplo, 10 ng ou 2 µg) ou concentração (por exemplo, 10 ng/mL, 2 µg/mL, 10 ng/mmol ou 2 µg/mmol).

[0037] - O termo "biomarcador metabólico" refere-se a biomarcadores como, entre outros, CTX-II, ProC2, PIIANP, C2M, ARGS e AGNx1. Mais especificamente, o termo "biomarcador metabólico" refere-se a biomarcadores do metabolismo de cartilagem, ou seja, o turnover (renovação) do colágeno e agregados, como a degradação e/ou síntese de componentes da matriz cartilaginosa. Diferentes biomarcadores do colágeno e agrecanos foram descritos (Karsdal et al., 2016).

[0038] - O termo "CTX-II" ou "CTXII" refere-se ao telopeptídeo C-

terminal do colágeno tipo II. Ver SEQ ID NO.1. É biomarcador da degradação do colágeno tipo II que faz parte da osteoartrite (ver, por exemplo, Duclos et al., 2010).

[0039] - O termo proC2 refere-se a um neoepitopo de Colágeno tipo II gerado durante a síntese de colágeno tipo II, com a sequência QDVRQP reconhecida como epitopo no ensaio de proC2: ProC2 é um biomarcador no ensaio da formação de cartilagem (formação de colágeno tipo II). Ver SEQ ID NO.2. ProC2 é associado com a capacidade para reparo e poder uma ferramenta valiosa para identificar pacientes com doenças orientadas por cartilagem. ProC2 foi testado como o biomarcador em estudos pré-clínicos para amostras clínicas (ver, por exemplo, Gudmann et al., 2016; Munk et al., 2016; Gudmann et al., 2014).

[0040] - O termo PIIANP refere-se a um pró-peptídeo de colágeno tipo II: O pró-colágeno tipo IIA contém um domínio globular rico em cisteína N-terminal com 69 aminoácidos que é codificado pelo exon 2 do gene de colágeno tipo II. O pró-colágeno tipo IIA demonstrou ser sintetizado por condrócitos osteoartríticos na cartilagem doente e pode servir como um biomarcador específico de artrite que reflete uma tentativa pelos condrócitos para reparar a cartilagem doente (Valdes et al, 2014).

[0041] - O termo C2M refere-se a um neoepitopo para degradação do colágeno tipo II sorológico vinculado à degradação de cartilagem. C2M é um fragmento inter-helicoidal de colágeno tipo II gerado por MMP. O biomarcador foi descrito como associado com resposta ao fármaco, medidas da dor e gravidade radiográfica (Valdes et al. 2014).

[0042] - O termo ARGS refere-se a um neoepitopo gerado durante a degradação de agrecanos. O ensaio detecta produtos de degradação de agrecanos no soro e no líquido sinovial. Os níveis de ARGS estão vinculados à progressão em doenças da cartilagem (Struglics et al.,

2011; Struglics et al., 2015).

[0043] - O termo AGNx1 refere-se a um ensaio que detecta outro neoepitopo gerado durante a degradação de agrecanos.

[0044] - Em relação aos biomarcadores, os termos "quantidade" ou "nível de expressão" podem ser usados alternadamente.

[0045] O termo "marcador físico" refere-se à largura do espaço articular (JSW) e sua avaliação no contexto da presente invenção.

[0046] - o termo "DP" significa desvio padrão e está ligado aos desvios habituais de quaisquer ensaios/sistemas de validação.

[0047] - "Doença da cartilagem", neste relatório descritivo, abrange doenças resultantes de danos decorrentes de lesão, como lesão traumática, condropatia ou artrite. Os exemplos de doenças da cartilagem que podem ser tratadas pela administração dos compostos aqui descritos incluem, entre outros, artrite, como osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular (por exemplo, Microfratura). Doenças/transtornos degenerativos da cartilagem ou da articulação, como condrocalcinose, policondrite, policondrite recidivante, espondilite anquilosante ou costocondrite são também abrangidos por essa redação. A International Cartilage Repair Society propôs um Sistema de classificação artroscópica para avaliar a gravidade do defeito da cartilagem: grau 0: (normal) cartilagem sadia, grau 1: cartilagem com um ponto amolecido ou bolhas, grau 2: fissuras mínimas visíveis na cartilagem, grau 3: lesões com fendas profundas (mais de 50% da camada cartilaginosa) e grau 4: fissura na cartilagem expõe o osso subjacente (subcondral) (ver, por exemplo, página 13 de http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.p df).

[0048] - O termo "osteoartrite" é usado para indicar a forma mais comum de artrite. O termo "osteoartrite" abrange tanto a osteoartrite primária como a osteoartrite secundária (ver, por exemplo, The Merck Manual, 17a edição, página 449). O modo mais comum de classificação/graduação da osteoartrite é o uso da escala de classificação radiográfica de Kellgren-Lawrence (ver tabela abaixo). A osteoartrite pode ser causada pela quebra da cartilagem. Pedaços de cartilagem podem quebrar-se e causar dor e inchaço na articulação entre os ossos. Com o tempo, a cartilagem pode desgastar-se inteiramente, e ocorrerá fricção entre os ossos. A osteoartrite pode afetar qualquer articulação, mas normalmente acomete mãos e ossos que suportam peso como quadris, joelhos, pés e coluna vertebral. Em um exemplo preferido, a osteoartrite pode osteoartrite de joelho ou osteoartrite de quadril. A osteoartrite é uma das doenças cartilaginosas preferidas que podem ser tratadas pela administração dos compostos de acordo com a presente invenção.

[0049] A Escala de Classificação Radiográfica de Kellgren- Lawrence (KL) de osteoartrite é descrita como segue: Grau de Descrição osteoartrite 0 - Nenhum Ausência de achados radiográficos de osteoartrite 1 - Duvidoso Estreitamento duvidoso do espaço articular e possíveis osteófitos na borda 2 - Mínimo Osteófitos definidos, estreitamento definido do espaço articular 3 - Moderado Múltiplos osteófitos moderados, estreitamento de espaços articulares definido, alguma esclerose e possível deformidade do contorno ósseo 4 - Grave Grandes osteófitos, estreitamento acentuado do espaço articular, esclerose grave e deformidade definida do contorno ósseo

[0050] Os graus 1 e 2 podem ser considerados formas menos graves da doença, enquanto os graus 3 e 4 podem ser considerados formas mais graves da doença.

[0051] - O termo "lesão da cartilagem", neste relatório descritivo, é uma doença da cartilagem ou dano à cartilagem resultante notavelmente de um trauma. As lesões da cartilagem podem ocorrer notavelmente após destruição mecânica traumática, nomeadamente na sequência de um acidente ou cirurgia (por exemplo, cirurgia de microfraturas). Esse termo "lesão da cartilagem" também inclui fratura condral ou osteocondral, dano ao menisco e o termo microfratura. Além disso, é também considerada nessa definição a leão relacionada a esportes ou o desgaste de tecidos da articulação relacionado a esportes.

[0052] - As "pontuações WOMAC totais" ou "Pontuações WOMAC" ("WOMAC" para o índice do questionário de qualidade de vida específico para osteoartrite "Western Ontario and McMaster Universities Osteoarthritis Index") medem dor (pontuação WOMAC de dor), função (pontuação WOMAC de função) e rigidez (pontuação WOMAC de rigidez). Quando aplicado na avaliação de dor e disfunção associadas com lesão da cartilagem, consiste em um questionário contendo 24 itens divididos em 3 subescalas (5 itens para dor, 2 itens para Rigidez e 17 itens para Função Física) (ver Bellamy et al., 1988; Wolfe, 1999). é um instrumento bem conhecido, amplamente utilizado de modo notável na avaliação de gravidade da OA.

[0053] - A fim de avaliar o reparo da cartilagem, medidas do volume da cartilagem foram realizados através de medidas da imagem por ressonância magnética (IRM), incluindo volume Lateral da cartilagem (também referido como LFTC), volume Medial da cartilagem (também referido como MFTC), volume Total da cartilagem (também referido como LFTC + MFTC) e nova espessura total média da cartilagem.

[0054] - O termo cartilagem "fina" refere-se a uma cartilagem com JSW menor ou igual a 3,5 ± 2DP mm.

[0055] - O termo cartilagem "grossa" refere-se a uma cartilagem com JSW maior do que 3,5 ± 2DP mm.

[0056] - O termo "basal" significa antes do tratamento (ou seja, na entrada do estudo). Refere-se notavelmente a variáveis clínicas, tais como, entre outros, o volume da cartilagem e pontuação WOMAC total de um dado indivíduo ao ser admitido no estudo (ou seja, antes do tratamento com o composto ativo ou placebo).

[0057] - O termo "indivíduo" ou "paciente" refere-se a humanos e animais não humanos. O termo não humano compreende mamíferos como roedores (incluindo camundongos), coelhos, gatos, cães, cavalos, vacas, ovelhas ou primatas.

[0058] - "Sensíveis" são indivíduos que exibem uma resposta ao tratamento de uma doença da cartilagem com um composto ativo. De preferência, os indivíduos sensíveis (ou indivíduos mostrando/propensos a mostrar sensibilidade/resposta ao tratamento) exibem notavelmente um aumento maior na espessura total da cartilagem e/ou volume da cartilagem do que indivíduos tratados com placebo, ou seja, eles mostram reparo da cartilagem. Além disso, os indivíduos sensíveis exibem pelo menos melhora semelhante nas pontuações WOMAC totais do que placebos. Os termos "sensível" (incluindo tanto de "boa sensibilidade" e de "sensibilidade intermediária") e "não sensível" (incluindo "sem sensibilidade") refere- se aos diferentes grupos de indivíduos, dependendo notavelmente no aumento do volume da cartilagem após o tratamento com um composto ativo. Os indivíduos de boa sensibilidade exibem uma alta resposta (ou seja, alto reparo da cartilagem) ao tratamento com um composto ativo, de sensibilidade intermediária exibem uma resposta intermediária (ou seja, reparo intermediário da cartilagem) ao tratamento com o dito composto ativo e os não sensíveis exibem nenhuma ou baixa resposta ao tratamento com o dito composto ativo. Os indivíduos com boa sensibilidade apresentam preferivelmente uma melhora semelhante na pontuação WOMAC total do que placebo. Por outro lado, não respondedores apresentam uma melhora significativamente menor na pontuação WOMAC total do que placebo.

[0059] Mais particularmente, os termos de "sensibilidade intermediária", "boa sensibilidade", "sem sensibilidade", "respondedores intermediários", "bons respondedores" e "não respondedores" (incluindo pouco respondedores) referem-se aos diferentes grupos de indivíduos dependendo do aumento do volume da cartilagem e da melhora da pontuação WOMAC total, após o tratamento com um composto ativo.

[0060] Os critérios propostos para avaliar a sensibilidade/resposta podem ser selecionados dentre um ou mais dos seguintes (entre outros):

1. Positivo para aumento da cartilagem em comparação ao basal,

2. Alteração no aumento da cartilagem significativamente superior a um aumento com placebo (por exemplo, conforme testado com um modelo linear com ajuste para índice da massa corporal (IMC), grau KL, sexo e idade e com alfa = 5%),

3. Melhora da pontuação WOMAC, ou seja, diminuição, (por exemplo, redução de mais de 5 pontos) em comparação ao basal,

4. Alteração na pontuação WOMAC não significativamente superior a uma alteração com placebo (por exemplo, conforme testado com um modelo linear com ajuste para IMC, grau KL, sexo e idade e com alfa = 5%).

[0061] - A "resposta" ou "sensibilidade" ao tratamento com um composto ativo para uma doença da cartilagem deve ser entendida como pelo menos em 1 ano ou mesmo melhor 2 anos depois da primeira injeção e medida como 1) aumento do volume da cartilagem, medida graças à IRM ou RX, por exemplo, 2) diminuição de pontuações WOMAC totais ou 3) alterações em pontuações WOMAC totais não significativamente superiores àqueles com placebos (referem-se também à definição de "sensível").

[0062] - O termo "efeito placebo", neste relatório descritivo, deve ser entendido como alterações, em comparação ao basal, pelo próprio placebo (por exemplo, diluição de componentes inflamatório no líquido sinovial), decorrentes das influências contextuais (por exemplo, o procedimento de uma injeção intra-articular por um médico) e por expectativas dos pacientes. O termo "baixo efeito placebo" refere-se a uma magnitude de resposta comparável àquela no basal, dentro do desvio padrão do método de avaliação.

[0063] - O termo "dispositivo de armazenamento", neste relatório descritivo, destina-se a incluir qualquer aparelho adequado de computação ou processamento ou outro dispositivo configurado ou adaptado para armazenar dados ou informações. Os exemplos de aparelho eletrônico adequado para uso com a presente invenção incluem aparelho de computação independente, redes de telecomunicações de dados, incluindo redes de área local (LAN), redes de área ampla (WAN), Internet, Intranet e Extranet, e sistemas locais e distribuídos de processamento por computador. Os dispositivos de armazenamento também incluem, entre outros: mídia de armazenamento magnético, tais como disquetes, mídia de armazenamento em disco rígido, fita magnética, mídia de armazenamento óptico como CD-ROM, DVD, mídia de armazenamento eletrônico como RAM, ROM, EPROM, EEPROM e similares, discos rígidos em geral e híbridos dessas categorias como mídias de armazenamento magnético/óptico.

[0064] - Neste relatório descritivo, o termo "armazenado" refere-se a um processo para codificar informações no dispositivo de armazenamento. Os técnicos no assunto podem adotar rapidamente qualquer um dos métodos atualmente conhecidos para registrar informações na mídia conhecida para gerar manufaturados compreendendo informações sobre nível de expressão. Descrição detalhada da invenção

[0065] Há necessidade de 1) prever a resposta a placebo em indivíduos com doença da cartilagem, bem como 2) prever a eficácia clínica (nomeadamente em relação ao reparo de cartilagem) do tratamento com um composto ativo para tratar indivíduos com uma doença da cartilagem, como osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular (por exemplo, Microfratura). Para otimizar o manejo de ensaios clínicos ou para otimizar o tratamento dos ditos indivíduos, é importante identificar marcadores que poderiam ser usados como preditores de 1) a resposta a placebo e/ou 2) a resposta de um dado indivíduo ao tratamento com o composto ativo, nomeadamente em relação ao reparo de cartilagem. Tais biomarcadores preditivos podem ser usados para identificar 1) grupos de indivíduos em risco de apresentar efeito placebo e/ou 2) grupos de alto risco quer por serem menos sensíveis ou ao contrário sensíveis (por exemplo, de sensibilidade intermediária ou boa) ou mesmo altamente sensíveis ao tratamento. Por exemplo, se sabido que um indivíduo com osteoartrite tem alto risco de resposta intermediária (ou ser de sensibilidade intermediária) ao tratamento, o médico pode decidir adaptar o esquema da dose para, por exemplo, aumentar a dose do composto ativo a ser administrada ao dito indivíduo e/ou a fim de administrar o fármaco por um período mais longo. Tais informações preditivas podem ser clinicamente úteis para orientar decisões médicas, nomeadamente sobre o regime de dosagem ou o período de um tratamento a ser aplicado a um paciente ou sobre o momento para a cirurgia de substituição articular quando necessária (por exemplo, se a previsão para o tratamento com um composto ativo for de menos eficiência).

[0066] O achado surpreendente da presente invenção baseia-se em diferentes estudos que visaram identificar potenciais marcadores associados com a administração de compostos ativos diferentes. Os biomarcadores usados nesses estudos eram compostos por inúmeros biomarcadores proteicos. O marcador físico era a medição da JSW. A associação entre os marcadores proteicos e/ou o marcador físico e as variáveis da resposta clínica foi avaliada. A justificativa por trás desse tipo de análise era identificar uma combinação de marcadores que pudesse ser preditiva de 1) resposta a placebo e/ou 2) o resultado clínico (nomeadamente em relação ao reparo de cartilagem), para um indivíduo a ser tratado com um composto ativo como um composto FGF- 18, BMP-2, BMP-7, GDF-5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti-MMP13, inibidores anti- ADMTS4 ou 5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteínas de fusão dos mesmos. Em particular, foi surpreendentemente verificado que 1) medidas de JSW poderiam ser usadas para prever efeito placebo e 2) biomarcadores proteicos juntamente com a medição de JSW poderiam ser usados para estratificar e atingir populações de indivíduos específicos.

[0067] Diferentes marcadores demonstraram alteração na resposta a terapias com o composto ativo ou mostraram alterações no resultado (ou seja, espessura ou volume da cartilagem, pontuações WOMAC) aplicando critérios para valores altos e baixos. Os exemplos são C1M, C3M e hs-CRP. Os inventores verificaram surpreendentemente uma associação com certas proteínas metabólicas em combinação com um marcador físico e resultado (por exemplo, reparo de cartilagem). As proteínas CTX-II e ProC2 são de interesse especial. Note-se que embora apenas CTX-II e/ou ProC2 sejam aqui especificamente descritos, outros biomarcadores metabólicos como PIIANP, C2M,

ARGS ou AGNx1 poderiam ser utilizados. Tendo por base o ensinamento da presente invenção, seria, então, matéria de rotina para o técnico no assunto descobrir os limites para cada uma desses biomarcadores. Essas proteínas foram descritas na literatura como possivelmente relacionadas à osteoartrite. Por exemplo, CTX-II e ProC2 poderiam ser considerados biomarcadores metabólicos (Bay-Jensen, 2016).

[0068] Foi surpreendentemente verificado pelos presente que, para um dado indivíduo (portador de uma doença da cartilagem) com JSW maior do que 3,5 ± 2DP mm, independentemente do nível de biomarcadores, a resposta a placebo foi alta: não houve um efeito placebo forte entre esses indivíduo, possivelmente influenciando os resultados de ensaios clínicos e, mais tarde, possivelmente influenciando o tratamento ao ocultar a verdadeira falta de efeito de um dado composto ativo. Foi também verificado surpreendentemente que, quando a quantidade de biomarcadores metabólicos, como CTX-II e/ou ProC2, está/estão diminuída/s, e a JSW é abaixo de certo limite, essa combinação foi associada com uma resposta melhor ao tratamento com um composto ativo, como um composto de FGF-18, BMP-2, BMP-7, GDF-5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti-MMP13, inibidores anti-ADMTS4 ou 5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteína de fusão dos mesmos, em indivíduos acometidos por uma lesão da cartilagem. Tal indivíduo é indicado como de boa sensibilidade (ou é bom respondedor). No sentido oposto, foi também verificado surpreendentemente pelos presentes inventores que, quando a quantidade de CTX-II e/ou ProC2 e/estão aumentada/s, e a JSW está acima de certo limite, isso foi associado com ausência ou baixa resposta ao tratamento com um composto ativo (ou seja, pouco sensível ou não sensível tratamento com o dito composto ativo) em indivíduos acometidos por uma doença da cartilagem. Tal indivíduo é indicado como não sensível (ou não respondedor). Somente 1) quando a quantidade de biomarcadores metabólicos, como CTX-II e/ou ProC2, está/estão diminuídas, e a JSW está acima de certo limite ou 2) quando a quantidade de biomarcadores metabólicos, como CTX-II e/ou ProC2, está/estão aumenta/s, e a JSW está abaixo de certo limite, isso pode ser associado com resposta intermediária, ou seja, o indivíduo será de sensibilidade intermediária (ou respondedor intermediário).

[0069] Portanto, é um achado da presente invenção que biomarcadores metabólicos, como CTX-II e/ou ProC2, em combinação com o marcador físico JSW podem ser usados como marcadores preditivos da capacidade de resposta de um indivíduo ao tratamento com um composto ativo, como composto FGF-18, BMP-2, BMP-7, GDF- 5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti-MMP13, inibidores anti-ADMTS4 ou 5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteína de fusão dos mesmos. De preferência, o indivíduo é portador de uma doença da cartilagem, como osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular (por exemplo, Microfratura). Em uma modalidade em particular, a previsão para o indivíduo será de sem sensibilidade ao tratamento com um composto ativo se a quantidade de CTX-II for superior a 350 ± 2DP ng/mmol CTX-II (>240-260% da média normal) e/ou a quantidade de ProC2 for superior a 4,2 ± 2DP ng/mL (>120-280% da média normal) e se a JSW for superior a 3,5 ± 2DP mm. Ao contrário, a previsão para o indivíduo será de boa sensibilidade ao tratamento com um composto ativo se a quantidade de CTX-II for inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou a quantidade de ProC2 for inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e se a JSW for inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm. A previsão para o indivíduo será de sensibilidade intermediária ao tratamento com um composto ativo se 1) a quantidade de CTX-II for inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou a quantidade de ProC2 for inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e a JSW for superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) se a quantidade de CTX-II for superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou a quantidade de ProC2 for superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e a JSW for inferior a 3,5 ± 2DP mm.

[0070] A presente invenção é, portanto, direcionada a um método para reduzir o risco em um ensaio clínico ou para determinar efeito placebo em um ensaio clínico (em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo) ou durante o tratamento com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho de um indivíduo e b) prever, a partir do resultado da etapa a), o risco de efeito placebo para o dito indivíduo.

[0071] De acordo com o dito método, a presença de uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo. Ao contrário, a presença de uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de nenhum efeito placebo ou de reduzido. A partir da dita previsão: - Para ensaio clínico, o médico pode classificar facilmente a indivíduos dependendo da sua probabilidade de apresentar um efeito placebo ou não. - Para tratamento de doença da cartilagem, o médico pode determinar facilmente se é provável que um indivíduo seja sensível ao tratamento com um dado composto ativo (incluindo de sensibilidade intermediária ou alta sensibilidade).

[0072] Alternativamente, a presente invenção é direcionada a um método para reduzir o risco em um ensaio clínico ou para determinar efeito placebo em um indivíduo em um ensaio clínico (em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo) ou durante o tratamento com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo e c) prever, a partir do resultado da etapas a) e b), o risco de efeito placebo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

[0073] Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou amostra de teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Desse modo, a presente invenção é direcionada a um método para determinar efeito placebo em um indivíduo em um ensaio clínico (em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo) ou durante o tratamento com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) obter uma amostra do dito paciente e determinar, a partir da dita amostra, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo e c) prever, a partir do resultado da etapas a) e b), o risco de efeito placebo para o dito indivíduo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

[0074] De acordo com o dito método, a presença de CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol (>240-260% da média normal) e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL (>120-280% da média normal) juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo.

Do mesmo modo, a presença de qualquer um 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo. Ao contrário, a presença de CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de nenhum efeito placebo ou de reduzido.

[0075] A partir da dita previsão: - Para ensaio clínico, o médico pode classificar facilmente a indivíduos dependendo da sua probabilidade de apresentar um efeito placebo ou não. - Para tratamento de doença da cartilagem o médico pode determinar facilmente se é provável que um indivíduo seja sensível a um dado tratamento com um composto ativo (incluindo de sensibilidade intermediária e alta sensibilidade).

[0076] A presente invenção é direcionada também a um método para reduzir o risco em um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2, b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo e c) prever, a partir do resultado da etapas a) e b), a resposta do dito indivíduo ao tratamento com o dito composto ativo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

[0077] Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou amostra de teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Desse modo, a presente invenção é direcionada a um método para reduzir o risco em um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, em que o método compreende as etapas de: a) obter uma amostra do dito paciente e determinar, a partir da dita amostra, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2, b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo e c) prever, a partir do resultado da etapas a) e b), a resposta do dito indivíduo ao tratamento com o dito composto ativo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

[0078] De acordo com o dito método, a presença de CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol (>240-260% da média normal) e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL (>120-280% da média normal) juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditivo de nenhuma ou resposta reduzida (ou seja, nenhuma ou baixa sensibilidade) ao tratamento com um composto ativo. A previsão, portanto, para o indivíduo será de não sensibilidade (ou não respondedor). Ao contrário, a presença de CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditivo de boa resposta (ou seja, de boa sensibilidade) ao tratamento com um composto ativo. A previsão, portanto, para o indivíduo será de boa sensibilidade ao tratamento com o dito composto ativo (ou seja, ele será um bom respondedor). A presença de qualquer um 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de resposta intermediária (ou seja, sensibilidade intermediária) ao tratamento com um composto ativo. A previsão, portanto, para o indivíduo será de sensibilidade intermediária ao tratamento com o dito composto ativo (ou seja, ele será um respondedor intermediário). A partir da dita previsão, o médico pode selecionar facilmente apenas aqueles indivíduos para quem se prevê sensibilidade a um dado tratamento com composto ativo, incluindo tantos os de sensibilidade intermediária como os de boa sensibilidade.

[0079] O presente pedido de patente também abrange um método para selecionar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem para inclusão em ou exclusão do tratamento, ou ensaio clínico, com um composto ativo, com base na probabilidade da sua sensibilidade ao dito tratamento, em que o método compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo; em que a quantidade de pelo menos uma dessas proteínas e a largura JSW são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja sensível ou não sensível ao dito tratamento e b) selecionar os indivíduos de sensibilidade intermediária e/ou de boa sensibilidade como adequados para o dito tratamento ou ensaio clínico.

[0080] Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou amostra de teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Desse modo, a presente invenção é direcionada a um método para selecionar um indivíduo com uma doença da cartilagem para inclusão em ou exclusão do tratamento, ou ensaio clínico, com um composto ativo, com base na probabilidade da sua sensibilidade ao dito tratamento, em que o método compreende as etapas de: a) obter uma amostra do dito paciente e determinar, a partir da dita amostra, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo; em que a quantidade de pelo menos uma dessas proteínas e a largura JSW são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja sensível ou não sensível ao dito tratamento e b) selecionar os indivíduos de sensibilidade intermediária e/ou de boa sensibilidade como adequados para o dito tratamento ou ensaio clínico.

[0081] De acordo com o dito método, o indivíduo que apresenta CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm será preferivelmente excluído do tratamento com um composto ativo. Ao contrário, o indivíduo que apresenta CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm será preferivelmente incluído (ou seja, serão preferivelmente selecionados) para o tratamento com um composto ativo. O indivíduo que apresenta qualquer um 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm será também preferivelmente incluído para o tratamento com um composto ativo, possivelmente com um regime de dosagem alternativo de acordo com o qual a dose do composto ativo é aumentada e/ou o composto ativo é administrado por um período mais longo de tratamento.

[0082] Alternativamente, é aqui descrito um método para tratar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem com um composto ativo, em que o método compreende as etapas seguintes: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja bem sensível ao tratamento com o dito composto ativo, b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, ii. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou iii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm, e c) Administrar o dito composto ativo ao dito indivíduo selecionado.

[0083] Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou amostra de teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Desse modo, a presente invenção é direcionada a um método para tratar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem com um composto ativo, em que o método compreende as etapas seguintes: a) obter uma amostra do dito paciente e determinar, a partir da dita amostra, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja de boa sensibilidade ao tratamento com o dito composto ativo,

b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, ii. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou iii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm e c) administrar o dito composto ativo ao dito indivíduo selecionado.

[0084] Embora os indivíduos de sensibilidade intermediária (apresentando qualquer um 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm) possam ser tratados com o mesmo regime de dosagem que os indivíduos com boa sensibilidade (apresentando CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm), esses indivíduos podem se beneficiar mais com um regime de dosagem alternativo.

[0085] Portanto, é também aqui descrito um método para tratar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem com um composto ativo, em que o método compreende as etapas seguintes: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja de sensibilidade intermediária ao tratamento com o dito composto ativo, b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ±

2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou ii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm e c) administrar o dito composto ativo ao dito indivíduo selecionado de acordo com um regime de dosagem alternativo de acordo com o qual a dose do composto ativo é aumentada, e/ou o composto ativo é administrado por um período mais longo de tratamento em comparação ao regime de dosagem habitual para o dito composto ativo.

[0086] Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou amostra de teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Desse modo, a presente invenção é direcionada a um método para tratar um indivíduo portador de uma doença da cartilagem com um composto ativo, em que o método compreende as etapas seguintes: a) obter uma amostra do dito paciente e determinar, a partir da dita amostra, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja de sensibilidade intermediária ao tratamento com o dito composto ativo, b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou ii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm e c) administrar o dito composto ativo ao dito indivíduo selecionado de acordo com um regime de dosagem alternativo de acordo com o qual a dose do composto ativo é aumentada, e/ou o composto ativo é administrado por um período mais longo de tratamento em comparação ao regime de dosagem habitual para o dito composto ativo.

[0087] A quantidade (ou o nível de expressão) de um ou mais biomarcadores em uma amostra pode ser comparada, se necessário, a uma quantidade de referência (alternativamente nível de expressão de referência, quantidade basal ou nível de expressão basal) a partir de uma amostra de referência. O dito nível de referência pode ser obtido de um indivíduo sadio, ou do mesmo paciente a ser diagnosticado ou tratado antes ou durante o dito tratamento. A largura do espaço articular de um indivíduo pode ser comparada, se necessário a uma largura do espaço articular de referência (ou uma largura do espaço articular basal). A dita largura de referência pode ser obtida de um indivíduo sadio, ou do mesmo paciente a ser diagnosticado ou tratado antes ou durante o dito tratamento.

[0088] A presente invenção abrange ainda um composto ativo para uso no tratamento de um indivíduo portador de uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta 1) CTX- II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL e uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, 2) CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL e uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm. Embora os indivíduos de sensibilidade intermediária possam ser tratados com o mesmo regime de dosagem que indivíduos com boa sensibilidade, esses indivíduos podem se beneficiar mais com um regime de dosagem alternativo.

[0089] Portanto, a presente invenção também abrange um composto ativo para uso de acordo com um regime de dosagem alternativo (por exemplo, dose aumentada de composto ativo e/ou período mais longo de tratamento) no tratamento de um indivíduo portador de uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta 1) CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL e uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm. Segue-se que um indivíduo que não atende esses critérios é preferivelmente excluído do dito composto ativo tratamento.

[0090] A presente invenção também se refere a um ensaio para determinar a sensibilidade ao tratamento com um composto ativo ou para determinar um esquema de tratamento com um dado composto ativo, em que o ensaio compreende: (a) submeter uma amostra de teste de um paciente humano, diagnosticado como portador de uma doença da cartilagem, a pelo menos um ensaio que determina a quantidade de pelo menos um dentre CTX-II e/ou ProC2, (b) determinar a quantidade de pelo menos um dentre CTX-II e/ou ProC2 e (c) determinar, a partir do resultado da etapa b), tendo em vista da medida da largura do espaço articular, a sensibilidade ou não sensibilidade do dito indivíduo ao tratamento com o dito composto ativo. De acordo com o dito ensaio, a presença de CTX-II superior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditivo de não sensibilidade ao tratamento com um composto ativo. Ao contrário, a presença de CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditivo de boa sensibilidade. Alternativamente, a presença de qualquer um 1) CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm, ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de sensibilidade intermediária. A partir do resultado do dito ensaio, o médico pode selecionar facilmente apenas aqueles indivíduos para quem se prevê sensibilidade ao tratamento com um composto ativo, incluindo os de sensibilidade intermediária e os de boa sensibilidade. Antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores, nos ensaios revelados acima, é necessário obter uma amostra do biomarcador (ou teste) do dito indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina.

[0091] A presente invenção é direcionada também a um ensaio para selecionar um esquema de tratamento para um paciente humano com uma doença da cartilagem, em que o ensaio compreende: (a) submeter uma amostra de teste de um paciente humano, diagnosticado como portador de uma doença da cartilagem, a pelo menos um ensaio que determina a quantidade de pelo menos um dentre CTX-II e/ou ProC2, (b) determinar, a partir da etapa a), tendo em vista a medida da largura do espaço articular, a probabilidade de que o dito indivíduo seja de sensibilidade intermediária ou boa sensibilidade ao tratamento com um composto ativo e (c) determinar, a partir do resultado da etapa b), o esquema de tratamento adequado para o dito indivíduo. Uma vez realizado o ensaio, o dito indivíduo pode ser selecionado para e tratado com um regime de dosagem adequado compreendendo uma quantidade eficaz de um composto ativo quando o indivíduo apresentar CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, com base no reconhecimento de que as ditas quantidades/largura estão associadas com uma boa resposta ao dito composto, ou quando o indivíduo apresentar 1) CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm, com base no reconhecimento de que as ditas quantidades/largura estão associadas com uma resposta intermediária ao dito composto; e excluir o indivíduo do tratamento com um composto ativo quando o indivíduo apresentar CTX-II superior a 350

± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm com base no reconhecimento de que as ditas quantidades estão associadas com resposta inadequada ao tratamento com o dito composto. embora indivíduos de sensibilidade intermediária possam ser tratados com o mesmo regime de dosagem que os indivíduos de boa sensibilidade, esses indivíduos podem se beneficiar mais com um regime de dosagem alternativo. Portanto, alternativamente, os ditos indivíduos de sensibilidade intermediária podem ser selecionados para e tratados com um regime de dosagem alternativo (por exemplo, dose aumentada do composto ativo e/ou período mais longo de tratamento) com um composto ativo.

[0092] É descrito ainda um método para tratar um paciente humano com uma doença da cartilagem, em que o método compreende as etapas de: (a) analisar uma amostra biológica de um indivíduo, que é diagnosticado como portador da doença da cartilagem, para detectar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; (b) medir uma largura do espaço articular e (c) administrar um esquema de tratamento que compreende uma composição incluindo uma quantidade eficaz de um composto ativo ao indivíduo se o indivíduo apresentar 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e a JSW for inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, 2) CTX-II inferior a 350 ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ng/mL juntamente com uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm. Embora os indivíduos de sensibilidade intermediária possam ser tratados com o mesmo regime de dosagem que os indivíduos de boa sensibilidade, esses indivíduos se beneficiariam mais com um regime de dosagem alternativo. Portanto, alternativamente, é descrito uma método para tratar um paciente humano com uma doença da cartilagem, em que o método compreende as etapas de: (a) analisar uma amostra biológica de um indivíduo, que é diagnosticado como portador da doença da cartilagem, para detectar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; (b) medir uma largura do espaço articular e (c) administrar um esquema de tratamento alternativo (por exemplo, dose aumentada do composto ativo e/ou período mais longo de tratamento) que compreende uma composição incluindo um composto ativo ao indivíduo se o indivíduo apresentar 1) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW for superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

[0093] No contexto da presente invenção como um todo, CTX-II e/ou ProC2 demonstraram ser biomarcadores úteis preditivos da resposta a placebo e da resposta de um indivíduo a um composto ativo para tratar uma doença da cartilagem. Assim, eles são considerados biomarcadores preditivos. Outros biomarcadores metabólicos poderiam ser utilizados alternativamente, como C2M, ARGS ou AGNx1.

[0094] No contexto da presente invenção como um todo, a doença da cartilagem preferida é selecionada a partir do grupo que consiste em osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular, como microfratura.

[0095] No contexto da presente invenção como um todo, por exemplo, no contexto de qualquer um dos métodos, usos, ensaios ou kits de acordo com a presente invenção, os compostos ativos preferidos podem ser selecionados dentre um composto FGF-18 (incluindo composto FGF-18 truncado como esprifermina), BMP-2, BMP-7, GDF- 5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti-MMP13, inibidores anti-ADMTS4 ou 5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteína de fusão dos mesmos.

[0096] Como exemplos do regime de dosagem, se o composto ativo de acordo com a presente invenção como um todo for um composto FGF-18, o dito composto FGF-18 deverá ser normalmente administrado por via intra-articular a um indivíduo (de preferência um indivíduo de boa sensibilidade) em uma dose de 100 mcg por injeção, uma vez semanalmente por 3 semanas por ciclo de tratamento. Um regime de dosagem proposto para esses indivíduos preditos como altamente sensíveis é a administração intra-articular do composto FGF-18 em uma dose de 30 mcg por injeção, uma vez semanalmente por 3 semanas por ciclo de tratamento. Deverá ser entendido que, embora nesse momento, a dose preferida seja 100 mcg por injeção, possivelmente reduzida para 30 mcg por injeção para os super sensíveis, a presente invenção não se limita às ditas posologias. Portando, o composto FGF-18 pode ser administrado por via intra-articular em uma dose incluída entre 50 e 300 mcg por injeção, de preferência entre 60 e 250 mcg ou mesmo preferivelmente entre 100 e 200 mcg. Para indivíduos super sensíveis, a dita dose poderia ser reduzida para ou para próxima de 1/2 ou para ou para próxima de 1/3, por exemplo. Por exemplo, caso a dose normal seja 50 mcg por injeção, a dose reduzida poderia estar incluída entre 16 e 25 mcg por injeção. O composto FGF-18 deverá ser normalmente administrado por pelo menos um ciclo de tratamento. De preferência, o dito ciclo é repetido pelo menos uma vez, por exemplo, 6 meses (ou aproximadamente 26 semanas) depois do início do primeiro ciclo de tratamento. Até quatro ciclos de tratamento em 2 anos demonstraram resultados promissores (ver Figura 1). Evidentemente, caso a previsão para o indivíduo seja de sensibilidade intermediária a um composto ativo, um regime de dosagem alternativo poderia consistir em ciclos adicionais de tratamento.

[0097] Como outro exemplo de regime de dosagem, se o composto ativo de acordo com a presente invenção como um todo for um composto calcitonina, o dito composto calcitonina deverá ser normalmente administrado por via oral em uma dose de duas vezes ao dia de 0,8 mg por até 24 meses ou mais, se necessário, ou qualquer regime de dosagem típico administrado para o dito composto. Caso seja necessário, a dose oral e o período do tratamento podem ser adaptados à resposta ou probabilidade de resposta do indivíduo ao dito tratamento para que um respondedor intermediário se beneficie do dito tratamento com calcitonina.

[0098] Em ainda outro exemplo de regime de dosagem, se o composto ativo de acordo com a presente invenção como um todo for um composto BMP-7, o dito composto BMP-7 deverá ser normalmente administrado por via intra-articular em uma dose de aproximadamente 0,03 mcg/mL a 0,3 mcg/mL, como 0,3; 0,1 ou 0,3 mcg/mL por injeção, possivelmente repetida, ou qualquer regime de dosagem típico administrado para o dito composto. Caso seja necessário, a dose oral e o período do tratamento podem ser adaptados à resposta ou probabilidade de resposta do indivíduo ao dito tratamento.

[0099] No contexto da presente invenção como um todo, os ensaios ou outra determinação da quantidade de pelo menos um dos biomarcadores da invenção podem ser realizados antes do tratamento ou durante o tratamento. Na verdade, também durante o tratamento, o regime de dosagem pode precisar ser adaptado para a situação de novos marcadores.

[0100] No contexto da invenção como um todo, para os pacientes que se situam na faixa de CTX-II igual a 350 ± 2DP ng/mmol ou ProC2 igual a 4,2 ± 2DP ng/mL, é recomendável que os testes diagnósticos ou do biomarcador sejam completados com outro biomarcador metabólico. Por exemplo, caso o nível de CTX-II situa-se na faixa de 350 ± 2DP ng/mmol, então o(s) nível(is) de ProC2 deve(m) ser considerado(s). No caso raro em que o paciente venha a apresentar faixas para CTX-II de 350 ± 2DP ng/mmol e para ProC2 de 4,2 ± 2DP ng/mL, então será recomendável que os testes diagnósticos ou dos biomarcadores sejam completados com outro tipo de biomarcador como um biomarcador inflamatório ou biomarcadores de SNP como aqueles descritos em WO2014023703.

[0101] No contexto da invenção como um todo, a largura de um espaço articular é determinada preferivelmente por radiografia com raios-X ou a técnica de IRM. Evidentemente, o técnico no assunto pode utilizar técnicas alternativas caso prefira.

[0102] Em outra modalidade da invenção, são providos também sistemas (e mídias passíveis de leitura por computador para sistemas informáticos) para obter dados. Os ditos dados podem ser usados notavelmente para avaliar a adequação para um ensaio clínico ou se adequado um tratamento com um composto ativo para um indivíduo ou monitorar a eficácia de tratamento de um composto ativo para um dado indivíduo ou simplesmente monitorar a progressão da doença. Os ditos sistemas podem ser usados durante ensaios clínicos, quando um tratamento com um composto ativo para tratar uma doença da cartilagem tiver que ser considerado ou quando um tratamento com o dito composto já estiver em andamento.

[0103] Portanto, uma modalidade da presente invenção inclui um sistema informático para obter dados a partir de pelo menos uma amostra de teste obtida de pelo menos um indivíduo com uma doença da cartilagem juntamente com os dados relacionados à JSW para o dito indivíduo, em que o sistema compreende: (a) pelo menos um módulo de determinação configurado para receber os dados relacionados à JSW de um paciente juntamente com pelo menos uma amostra de teste do dito indivíduo e para realizar pelo menos uma análise na dita pelo menos uma amostra de teste e determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores de acordo com a invenção; (b) pelo menos um dispositivo de armazenamento configurado para armazenar dados produzidos pelo dito módulo de determinação; e (c) pelo menos um módulo de exibição para exibir um conteúdo baseado em parte nos dados produzidos pelo dito módulo de determinação, em que o conteúdo compreende um sinal indicativo da presença de pelo menos uma dessas condições e, opcionalmente, a ausência de qualquer uma dessas condições.

[0104] A mídia passível de leitura por computador pode ter instruções para leitura por computador ali registradas para definir módulos de software na implantação de um método em um computador. Em tal caso, a dita mídia de armazenamento passível de leitura por computador pode compreender: (a) instruções para comparar os dados armazenados em um dispositivo de armazenamento com dados de referência para fornecer um resultado da comparação, em que a comparação baseia-se na quantidade de pelo menos um dos biomarcadores e na largura de um espaço articular de acordo com a invenção; e (b) instruções para exibir um conteúdo baseado em parte nos dados produzidos pelo dito módulo de determinação, em que o conteúdo compreende um sinal indicativo da presença de pelo menos uma das condições e, opcionalmente, a ausência de uma ou mais das condições.

[0105] A mídia de armazenamento passível de leitura por computador pode ser qualquer mídia tangível disponível que possa ser acessada por um computador. A mídia de armazenamento passível de leitura por computador inclui mídia tangível volátil e non volátil, removível e não removível implementada em qualquer método ou tecnologia para armazenamento de informações, tal como instruções passíveis de leitura por computador, estruturas de dados, módulos de programa ou outros dados. A mídia de armazenamento passível de leitura por computador inclui, entre outros, RAM (memória de acesso aleatório), ROM (memória somente de leitura), EPROM (memória somente de leitura programável apagável), EEPROM (memória somente de leitura programável eletronicamente apagável), memória flash ou outra tecnologia de memória, CD-ROM (Disco compacto - memória somente de leitura), DVDs (discos digitais versáteis) ou outra mídia de armazenamento óptico, cassetes magnéticos, fita magnética, armazenamento em disco magnético ou outra mídia de armazenamento magnético, outros tipos de memória volátil e não volátil e qualquer outra mídia tangível que possa ser usada para armazenar as informações desejadas e que possa ser acessada por um computador incluindo qualquer combinação adequada dos anteriores.

[0106] Dados passíveis de leitura por computador incorporados em uma ou mais mídias passíveis de leitura por computador podem definir instruções, por exemplo, como parte de um ou mais programas que, como resultado de serem executados por um computador, instruem o computador para executar uma ou mais das funções aqui descritas e/ou várias modalidades, variações e combinações das mesmas. Tais instruções podem estar redigidas em qualquer uma de uma pluralidade de linguagens de programação, por exemplo, as linguagens de montagem Java, J#, Visual Basic, C, C#, C++, Fortran, Pascal, Eiffel, Basic, COBOL e semelhantes, e qualquer uma de uma variedade de combinações das mesmas. A mídia passível de leitura por computador na qual tais instruções são incorporadas pode residir em um ou mais dos componentes de qualquer um dentre um sistema ou uma mídia de armazenamento passível de leitura por computador aqui descrita, pode ser distribuída por um ou mais de tais componentes.

[0107] A mídia passível de leitura por computador pode ser transportável, tal que as instruções ali armazenadas podem ser carregadas em qualquer recurso informático para implementar os aspectos da presente invenção aqui discutidos. As informações determinadas no módulo de determinação podem ser lidas pelo dispositivo de armazenamento. O dispositivo de armazenamento é adaptado ou configurado por ter registrado no mesmo as informações sobre nível de expressão ou nível de proteínas. Tais informações podem ser fornecidas em forma digital que de ser transmitida e lida eletronicamente, por exemplo, através da Internet, em um disquete, através de USB (universal serial bus) ou através de qualquer outro modo de comunicação adequado. Deverá ser entendido que, no contexto da presente invenção como um todo, por exemplo, de qualquer um dos métodos, usos, ensaios, sistema informático ou kits de acordo com a presente invenção, antes de determinar a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores da invenção (por exemplo, CTX-II e/ou ProC2), é preciso obter uma amostra (ou amostra biológica ou uma amostra de teste) de um indivíduo, por exemplo, pela coleta de sangue, soro, líquido sinovial ou urina. Ela pode ser também obtida, sem qualquer limitação, de uma célula, cartilagem ou líquido sinovial.

[0108] Um indivíduo acometido por uma doença da cartilagem e a ser testado, testado e/ou tratado de acordo com qualquer um dos métodos, usos, ensaios, kits e outros sistemas informáticos aqui descritos é um humano que é candidato ao tratamento com um composto ativo para o tratamento da dita doença da cartilagem. Em uma modalidade preferida, o indivíduo foi diagnosticado com doença da cartilagem, ou exibe um sintoma da doença da cartilagem.

[0109] Em uma modalidade adicional, a presente invenção abrange um kit que compreende meios para realizar o métodos descrito acima e instruções para uso. De preferência, o kit compreende meios para detectar a presença de pelo menos um dos biomarcadores de acordo com a invenção (por exemplo, CTX-II e/ou ProC2) e para quantificá-los. O kit pode compreender meios para detectar a presença de pelo menos dois dos biomarcadores de acordo com a invenção e para quantificá- los. Os resultados obtidos do kit deverão ser combinados com o resultado da medição de JSW antes de ser atingida qualquer conclusão.

[0110] O métodos e kits de acordo com a presente invenção são úteis em aplicações de diagnóstico clínico. No entanto, neste relatório descritivo, o termo "diagnóstico" não se limita a usos clínicos ou médicos, e os métodos diagnósticos e kits da invenção aqui reivindicados são úteis também em qualquer aplicação de pesquisa e durante ensaios clínicos, para os quais é desejável testar um indivíduo quanto à presença ou ausência de qualquer marcador aqui descrito.

[0111] No contexto da invenção, a presença de pelo menos um dos biomarcadores de acordo com a invenção (por exemplo, CTX-II e/ou ProC2) e a sua quantificação pode ser detectada por qualquer técnica conhecida por si só pelo técnico no assunto, incluindo ELISA.

[0112] Outras modalidades da invenção abrangidas pelo âmbito das reivindicações será evidentes para o técnico no assunto, tendo em conta o relatório descritivo ou a prática da invenção como aqui revelada. A intenção é que o relatório descritivo, juntamente com os exemplos sejam considerados somente exemplares, sendo o âmbito e o espírito da invenção indicados pelas reivindicações que se seguem aos exemplos. Descrição das figuras

[0113] Figura 1: Esquema para a programação de administrações usada para o composto FGF-18 no estudo FORWARD.

[0114] Figura 2: Estratégia proposta para o enriquecimento de um memorando de orientação da FDA "Estratégias de enriquecimento para ensaios clínicos para apoio da aprovação de fármacos e produtos biológicos para uso em humanos" (FDA, 2012).

[0115] Figura 3: Resposta a placebos em pacientes KL2 e KL3 (ou seja, efeito placebo em função da JSW) ressaltada através da pontuação WOMAC total. A) Alteração em WOMAC total em relação ao basal nos grupos KL2 e KL3 em função do tempo transcorrido no grupo depois da primeira injeção IA, médias em função do tempo transcorrido (os dados são médias +/- DP). B) Pontuação WOMAC total nos grupos KL2 e KL3 em função do tempo transcorrido no grupo depois da primeira injeção IA, médias em função do tempo transcorrido (os dados são medianas).

[0116] Figura 4: Resposta a placebos em função do nível dos biomarcadores ressaltada através da pontuação WOMAC total. A) Alteração em WOMAC total no grupo em função do tempo transcorrido, com base no nível de CTX-II (grupo 1: ≤350 ng/mmol e grupo 2: >350 ng/mmol) (os dados são médias +/- DP). B) Alteração em WOMAC total no grupo em função do tempo transcorrido, com base no nível de ProC2 (grupo 1: ≤4,2 ng/mmol e grupo 2: >4,2 ng/mmol) (os dados são médias +/- DP).

[0117] Figura 5: Resposta a placebos combinando medidas de JSW e nível de CTX-II ressaltada através da pontuação WOMAC total no grupo, médias em função do tempo transcorrido (meses). Os dados são retirados do braço placebo do estudo FORWARD.

[0118] Figura 6: A) Diferença entre braços de ativos e o braço do placebo em função do grau KL dos pacientes e em função do tempo transcorrido depois da primeira injeção IA, demonstrada com pontuação WOMAC total. B) Diferença entre braços de ativos e o braço do placebo em função do nível de CTX-II dos pacientes e em função do tempo transcorrido depois da primeira injeção IA, demonstrada com pontuação WOMAC total. C) Diferença entre braços de ativos e o braço do placebo em função do grau KL dos pacientes e em função do tempo transcorrido depois da primeira injeção IA, demonstrada com nível de espessura da cartilagem. B) Diferença entre braços de ativos e o braço do placebo em função do nível de CTX-II nível dos pacientes e em função do tempo transcorrido depois da primeira injeção IA, demonstrada com nível de espessura da cartilagem. Nas Figuras 6 A-D, cada grupo de pacientes tratados (grupos 2 a 5) do estudo FORWARD foi comparado com o grupo placebo (grupo 1) (comparação baseada na diferença em relação ao placebo). Os dados são as medianas dos grupos.

[0119] Figura 7: Resposta a placebos combinando JSW (expressa como KL2 e KL3) e nível de CTX-II ressaltada através de alteração na pontuação WOMAC de dor na média de cada grupo (SEM) em função do tempo transcorrido (meses). O número de pacientes em cada subgrupo são como segue, n≈ 380 (KL2 com CTX-II baixo), n≈90 (KL2 com CTX-II algo), n≈40 (KL3 com CTX-II baixo) e n≈20 (KL3 com CTX- II alto).

[0120] Figura 8: Estratégia proposta de enriquecimento para quaisquer ensaios clínicos sobre Osteoartrite, com base no memorando de orientação da FDA de 2012. Descrição das sequências SEQ ID NO.1: Sequência de aminoácidos do biomarcador CTX-II. SEQ ID NO.2: Sequência de aminoácidos do biomarcador PROC2. SEQ ID NO.3: Sequência de aminoácidos do FGF-18 humano nativo. SEQ ID NO.4: Sequência de aminoácidos do FGF-18 recombinante truncado (trFGF-18). SEQ ID NO.5: Sequência de aminoácidos da calcitonina de salmão. SEQ ID NO.6: Sequência de aminoácidos da BMP-2 humana. SEQ ID NO.7: Sequência de aminoácidos da BMP-7 humana SEQ ID NO.8: Sequência de aminoácidos da GDF-5 humana. SEQ ID NO.9: Sequência de aminoácidos do FGFβ humano. SEQ ID NO.10: Sequência de aminoácidos do FGF-9 humano. Exemplos Métodos estatísticos

[0121] O efeito do tratamento sobre o desfecho primário foi avaliado através da variação de doses usando uma análise de variância para medidas repetidas (ANOVA, usando PROC MIXED no SAS) na alteração absoluta em relação ao Basal, incluindo o valor basal, o grupo de tratamento, o tempo time, e o país como fatores e tratamento por momento como interação. A análise de eficácia primária consistiu em testar a relação linear para a dose e o efeito de tratamento global em 2 anos. O nível de significância foi definido em 5% bilateral para ambos os testes. Comparações pareadas (esprifermina versus placebo e entre dose de esprifermina e grupos de esquema) foram realizadas dentro do contexto dessa estrutura de modelamento. Para cada comparação pareada, são apresentados a diferença entre tratamentos e o intervalo de confiança (IC) de 95% correspondente e valor p. O mesmo modelo de ANOVA usado para o desfecho primário foi empregado para avaliar o efeito do tratamento sobre desfechos secundários contínuos como desfechos IRM, desfechos WOMAC (pontuações total, dor, função e rigidez) e desfechos RX em cada momento e ao longo do tempo. Usou- se regressão logística para avaliar o efeito do tratamento sobre desfechos binários de eficácia como a taxa de respondedores OMERACT-OARSI. São fornecidas estimativas pontuais para cada comparação pareada e os ICs 95% correspondentes e valores p. Avaliações de dor e função

[0122] O WOMAC é um instrumento validado usado para avaliar a modificação de sintomas em estudos clínicos de AO. Essa pontuação clínica foi desenvolvida em 1981 e é considerada um instrumento válido por pesquisadores clínicos e autoridades reguladoras. O WOMAC é amplamente utilizado em estudos clínicos na OE de quadril e joelho e tem sido extensamente validado.

[0123] Os indivíduos deveriam responder todas as 24 perguntas por si mesmos (ou seja, 5 para avaliação de dor, 2 para rigidez e 17 para função física), usando a avaliação NRS de 11 caixas (com categorias de 0 a 10) tendo como referência as últimas 48 horas, por exemplo, VAS de 1 ou 100 mm (escalas visuais analógicas; fornecendo a cada pergunta uma pontuação de 0 a 100) tendo como referência as últimas 24 horas, por exemplo. 2. Existem formas diferentes do questionário para o joelho direito e o esquerdo: a fim de reduzir o confundimento de respostas por sintomas do WOMAC no joelho contralateral, os indivíduos usaram o questionário WOMAC específico para o joelho alvo.

[0124] Para administração do questionário, foram seguidas as instruções do Índice WOMAC 3.1 para os Exemplos 1 e 2.

[0125] Outros instrumentos para avaliação de dor e função são o KOOS (Knee injury and Osteoarthritis Outcome Score, Collins et al. 2016). Avaliação por radiografia (raio X) de JSW

[0126] A alteração em JSW, conforme medida por raio X, é um desfecho reconhecido aceito pela European Medicines Agency (Agência Europeia de Medicamentos) e a agência Food e Drug Administration dos Estados Unidos para uso em estudos de eficácia em OA. A JSW foi medida usando uma técnica padronizada. A radiografia foi usada também para avaliar o grau KL no Exemplo 2. Avaliação por qIRM

[0127] O desfecho primário para a fase de tratamento DBPC foi a alteração em relação ao Basal na espessura da cartilagem na articulação femorotibial total conforme avaliada por qIRM em 2 anos na mITT. A espessura da cartilagem da articulação femorotibial total foi calculada de 2 maneiras:

1. Espessura média da cartilagem (Volume total dividido por área de superfície total),

2. Espessura total da cartilagem (soma da espessura da cartilagem no compartimento medial e lateral).

[0128] O efeito do tratamento sobre o desfecho primário foi avaliado através da variação da dose usando uma análise da variância de medidas repetidas (ANOVA) sobre a alteração absoluta desde o Basal, incluindo o grupo de tratamento, o momento e o país (agrupado) como fatores fixos e o valor basal como covariada e tratamento por momento como interação. As medidas repetidas ao longo do tempo foram representadas utilizando um padrão de covariância "não estruturada".

[0129] As comparações pareadas de alteração absoluta em relação ao Basal na espessura da cartilagem (grupos de tratamento com composto versus placebo) foram realizadas no contexto da estrutura de modelamento descrita acima. Para cada comparação pareada, foram apresentados a diferença tratamentos e o intervalo de confiança (IC) de 95% e o valor p correspondentes. Os valores p (correspondendo a testes do Tipo 3 de efeitos fixos) são relatados para todas as covariadas no modelo original "Global" para todos os momentos combinados (ou seja, valor basal, tratamento, momento, interação tratamento por momento, país) e para todos os momentos. Coeficientes estimados, valores p e ICs 95% são apresentados no global e em cada momento para (i) a relação com a dose (tendência linear) e (ii) cada comparação pareada entre nível de dose e placebo.

[0130] A fim de avaliar a robustez dos resultados primários, os testes para relação linear com a dose e para o efeito do tratamento global foram repetidos usando o Conjunto PP de Análise. Para o Conjunto mITT de Análise, foi conduzida uma análise não paramétrica para os dados ordenados de espessura da cartilagem na articulação femorotibial total como um método alternativo para a análise primária. Os dados foram ordenados pela magnitude de alteração absoluta em relação ao Basal ao longo de 2 anos durante a fase DBPC de tratamento usando transformação de postos. Medição de biomarcadores

[0131] Marcadores bioquímicos sorológicos e na urina do turnover do tecido ósseo e articular, bem como de inflamação sinovial foram avaliados. Os biomarcadores potenciais do metabolismo de cartilagem incluíam, entre outros: neoepitopo do pró-peptídeo de colágeno tipo II (proC2) e telopeptídeo C interligador de colágeno tipo II (CTX-II). Amostras de sangue e urina foram coletadas para avaliação de biomarcadores sistêmicos foram coletadas nos seguintes momentos: semana 0 (antes da primeira injeção de esprifermina), semana 26, semana 54, semana 80 e semana 104. Para os momentos em que também eram administradas injeções, as amostras foram coletadas antes da injeção. Amostras do líquido sinovial foram coletadas nos momentos. Essas amostras foram retiradas um pouco antes da injeção, como parte do procedimento da injeção intra-articular e usando a mesma agulha que a usada para a injeção. Para a coleta de urina, foram obtidas amostras do segundo jato matinal.

[0132] A avaliações a seguir foram realizadas como desfechos exploratórios: - Alteração em relação ao Basal em biomarcadores no soro e na urina associados com administração do composto. - Níveis basais de marcadores proteicos associados com resposta ao tratamento ou progressão da doença (resposta avaliada por IRM e/ou questionário). Exemplo 1. Resposta a placebo e a eficácia clínica em indivíduos tratados com um composto FGF-18

[0133] O composto FGF-18 usado como tratamento nos presentes exemplos é esprifermina (como definida na seção "Definições"). Duas concentrações de esprifermina foram fornecidas para o estudo: 30 µg e 100 µg. Esprifermina foi fornecida como um pó branco, estéril, liofilizado em frascos de vidro de 3 mL. Cada frasco continha quer 31,5 µg ou 105 µg da substância ativa esprifermina; essas quantidades incluíam um excedente de 5%, permitindo a extração de respectivamente 30 µg ou 100 µg de substância ativa esprifermina após a reconstituição com

Cloreto de Sódio Injetável 0,9% p/v (aqui referido como "solução salina"). Os excipientes da formulação eram tampão fosfato de sódio (pH 7,2), hidróxido de sódio, ácido O-fosfórico, sacarose e poloxâmero

188. Para todos os grupos de tratamento, o volume administrado foi 2 mL.

[0134] O presente estudo teve por base o estudo FORWARD (ver estudo EMR700692-006), onde cinco grupos de pacientes foram estudados: ● Grupo 1 (4 ciclos de placebo; a seguir referido como placebo ou PBO): 108 indivíduos. ● Grupo 2 (2 ciclos de esprifermina 30 µg/injeção alternando com 2 ciclos de placebo; a seguir referido como esprifermina/placebo 30 µg): 110 indivíduos. ● Grupo 3 (4 ciclos de esprifermina 30 µg/injeção; a seguir referido como esprifermina 30 µg): 111 indivíduos. ● Grupo 4 (2 ciclos de esprifermina 100 µg/injeção alternando com 2 ciclos de placebo; a seguir referido como esprifermina/placebo 100 µg): 110 indivíduos. ● Grupo 5 (4 ciclos de esprifermina 100 µg/injeção; a seguir referido como esprifermina 100 µg): 110 indivíduos.

[0135] De acordo com o estudo FORWARD, os pacientes receberam 4 ciclos de tratamento (cada um deles consistindo em 3 injeções intra-articulares, uma vez por semana, durante 3 semanas consecutivas) em intervalos de 6 meses (ver Figura 1). Todas as injeções foram intra-articulares (por via intra-articular).

[0136] O desfecho primário de eficácia foi a alteração em relação ao Basal na espessura da cartilagem na articulação femorotibial total conforme avaliada por IRM em 2 anos. Os desfechos exploratórios incluíam níveis basais de marcadores proteicos associados com resposta ao tratamento ou progressão da doença (resposta avaliada por

IRM e/ou questionário).

[0137] O estudo incluiu indivíduos adultos de qualquer sexo com AO femorotibial primária de acordo com os critérios clínicos e radiográficos do American College of Rheumatology (ACR) que tivessem graus Kellgren-Lawrence (KLG) 2 ou 3 e uma largura mínima do espaço articular (JSW) ≥ 2,5 mm no compartimento medial. Os indivíduos deveriam ter sentindo dor no joelho alvo na maioria dos dias e/ou requer tratamento sintomático para dor no joelho com paracetamol (acetaminofeno), fármacos anti-inflamatórios não esteroides sistêmicos (NSAIDs) incluindo inibidores de COX (COXibs) ou tramadol na maioria dos dias do mês anterior e deveriam ter apresentado ambos: 1) Uma história de dor decorrente de OA no joelho alvo por pelo menos 6 meses e 2) pontuação de dor para o joelho alvo de 4 a 9 pontos em resposta à Pergunta 1 do índice de dor do Western Ontario e McMaster Universities Osteoarthritis Index (WOMAC) ("qual a intensidade da dor que você teve [no joelho alvo durante as últimas 48 horas] ao caminhar em uma superfície plana?") na seleção e Basal, após washout de pelo menos 5 meias-vidas do(s) medicamento(s) analgésico(s): acetaminofeno, NSAIDS sistêmicos tópicos ou orais, COXibs, opioides e/ou tramadol. Mulheres em idade fértil deveriam ter feito uso uma forma de contracepção com uma taxa de falha inferior a 1% ao ano por todo o estudo.

[0138] Os principais critérios de exclusão incluíam mau alinhamento de > 5 graus no eixo femorotibial do joelho alvo, sinais clínicos de inflamação (ou seja, vermelhidão) no joelho alvo, administração intra- articular de corticosteroides ou ácido hialurônico no joelho nos 6 meses antes da seleção, qualquer plano para cirurgia do joelho (afetando quer o joelho alvo ou o contralateral) nos 2 anos seguintes, condições concomitantes ou tratamentos considerados incompatíveis com a participação no estudo, contraindicações para exame por IRM (incluindo incapacidade para acomodar-se no aparelho ou bobina de joelho), gravidez ou amamentação, participação em outro estudo clínico nos últimos 30 últimos e incapacidade legal ou capacidade legal limitada.

[0139] O consentimento livre e esclarecido por escrito deveria ter sido obtido antes de qualquer atividade relacionada ao estudo.

[0140] Efeito placebo baseado apenas em JSW: Como mostrado na Figura 3 (ambas, A e B), o efeito placebo em pacientes KL2 (com JSW >3,5 mm) versus pacientes KL3 (com JSW ≤3,5 mm) é muito importante. Como evidente por si mesmo, ele desempenha um papel importante na pontuação WOMAC total, em que a simples injeção de um placebo (PBO) (ou seja, um sal) é suficiente para reduzir drasticamente a pontuação WOMAC por um período muito longo em pacientes KL2, enquanto a dita pontuação WOMAC aumenta continuamente em pacientes KL3, apesar da injeção.

[0141] Efeito placebo baseado em níveis de CTX-II ou ProC2: A Figura 4 ressalta que os pacientes com nível elevado do biomarcador metabólico, como CTX-II acima de 350 ng/mmol (Figura 4A) ou ProC2 acima de 4,2 ng/mL (Figura 4B), apresentam um efeito placebo maior à injeção de um placebo.

[0142] Efeito placebo baseado em uma combinação de JSW + nível de CTX-II: Como mostrado na Figura 5, a distribuição diferente de níveis de CTX-II no basal influencia medidas de resultado como IRM e WOMAC. Em vista dos resultados, cartilagem fina (JSW ≤3,5 mm) e nível baixo de biomarcadores metabólicos (por exemplo, CTX-II abaixo ou igual a 350 ng/mmol) parecem a população de estudo certa de um ensaio clínico para atenuar a resposta elevada a placebos.

[0143] Após tratamento com FGF18: Como evidenciado nas Figuras 6A e 6B, uma vez o efeito placebo é levado em consideração, a forma da resposta em termos de pontuação WOMAC total, para pacientes KL2 e para pacientes KL3 tratados com várias doses de esprifermina, muda drasticamente. O mesmo é verdadeiro quando os níveis de CTX-2 são levados em consideração.

[0144] Como evidenciado nas Figuras 6C e 6D, uma vez o efeito placebo é levado em consideração, a forma da resposta em termos de espessura da cartilagem também muda profundamente, tanto para pacientes KL2 como pacientes KL3 tratados com várias doses de esprifermina. O mesmo é verdadeiro quando os níveis de CTX-2 são levados em consideração.

[0145] A partir desse exemplo, é claro que a estratificação pode reduzir o risco do ensaio clínico quando sofrem, do contrário, viés pelo efeito placebo de alguns subgrupos de pacientes. Exemplo 2. Resposta a placebo em indivíduos tratados com placebo de um estudo com o composto X

[0146] O estudo foi um ensaio clínico duplo-cego, randomizado, placebo-controlado e multicêntrico para a avalição do composto X. Havia cerca de 600 pacientes incluídos no braço de placebo desse estudo. Foram recrutados pacientes com 50–80 anos de idade e OA dolorosa em pelo menos joelho, mas que do contrário apresentavam boa saúde em geral. O composto X sendo um fármaco oral, o placebo foi fornecido em embalagem idêntica. Para serem incluídos, os pacientes precisavam atender aos critérios ACR para diagnóstico de OA. Os dois joelhos foram avaliados durante o estudo, mas um joelho alvo foi identificado antes da randomização para avaliação do desfecho primário de eficácia. O joelho alvo deveria ter sido doloroso na maioria dos dias do mês anterior. Além disso, o paciente tinha de satisfazer a pelo menos um dos seguintes critérios: idade acima de 50 anos, rigidez matinal sentida por menos de 30 minutos ou crepitação no joelho. O joelho alvo tinha que apresentar JSW ≥2,0 mm na articulação tibiofemoral medial conforme medida em raio X e escore KL igual a 2 ou

3. No WOMAC, os pacientes deveriam ter pontuação ≥150 mm para dor e/ou ≥510 mm para função. Se os dois joelhos satisfizessem os critérios, o joelho alvo era definido como o joelho que atende ao escore KL de 2. Se os dois joelhos tivessem escores KL de 2, o joelho com a maior dor na VAS era selecionado (desde que estivesse abaixo de 80 mm).

[0147] Os critérios de exclusão incluíam doenças (além de OA) e medicamentos que afetassem o metabolismo ósseo ou de cartilagem. Medicamentos para alívio da dor eram permitidos, desde que tivessem sido tomados pelo menos 30 minutos depois do medicamento do estudo. Injeção intra-articular de corticosteroides ou ácido hialurônico no joelho alvo era proibido durante o estudo e 3 meses antes da randomização.

[0148] A randomização foi estratificada por centro e assegurou que a designação do tratamento não sofresse viés e ocultada de pacientes e da equipe do investigador. O ensaio foi conduzido de acordo com a Declaração de Helsinque. O protocolo foi aprovado pelos comitês de ética em pesquisa independentes ou comissões de revisão institucional (CEP/IRB). Todos os indivíduos ou representantes legais forneceram o consentimento livre e esclarecido para participarem.

[0149] Efeito placebo baseado em uma combinação KL + nível de CTX-II: Como mostrado na Figura 7, a distribuição diferente de níveis de CTX-II em subgrupos de pacientes KL2 e KL3 no basal influencia as medidas de resultado como dor no WOMAC. Em vista dos resultados, cartilagem fina (JSW ≤3,5 mm) e nível baixo de biomarcadores metabólicos (por exemplo, CTX-II abaixo ou igual a 350 ng/mmol) parecem a população do estudo certa de um ensaio clínico para atenuar resposta elevada a placebos. Conclusão global

[0150] Os exemplos ressaltaram claramente que o desenho de KL3 enriquecido e CTX-II equilibrado seria capaz de detectar benefício sintomático até pelo menos o 3o ano (ver Figura 8). Portanto, cartilagem fina (abaixo ou igual a 3,5 ± 2DP mm) e CTX-II baixo (abaixo ou igual a 350 ± 2DP ng/mmol) parecem ser a melhor população de estudo de um ensaio clínico para atenuar resposta elevada a placebos. Cabe ressaltar que é obviamente possível usar dados de Allcomer, ou seja, nenhuma perda de pacientes: é apenas uma questão de estratificação, de manejo dos pacientes. Do mesmo modo, tendo por base os resultados da seção de exemplos, o nível de ProC2 poderia ser utilizado em vez do nível de CTX-II. Em tal caso, cartilagem fina e ProC2 baixo (abaixo ou igual a 4,2 ± 2DP ng/ml) seriam igualmente uma população adequada de um ensaio clínico para atenuar resposta elevada a placebos.

[0151] Graças a esses achados, demonstrados para dois ensaios clínicos muito diferentes envolvendo dois compostos ativos muito diferentes, administrados por vias diferentes (um injetado por via intra- articular e outro por via oral), e a essa estratificação proposta, é possível diminuir a resposta a placebos, evitar o desequilíbrio entre os grupos de tratamento e reduzir o risco do ensaio clínico para quaisquer fármacos direcionados à osteoartrite devido à possiblidade para selecionar a população certa de pacientes com benefício estrutural e sintomático. Referências 1) WO2008/023063 2) WO2004/032849 3) WO2014/023703 4) http://www.cartilage.org/_files/contentmanagement/ICRS_evaluation.pdf 5) Lotz, 2010, Arthritis research therapy, 12:211 6) Ellsworth et al., 2002, Osteoarthritis and Cartilage, 10: 308-320 7) Shimoaka et al., 2002, J. Bio. Chem. 277(9):7493-7500 8) Gigout et al., 2017, Osteoarthritis and Cartilage, publicado on-line em 18.08.2018 (https://doi.org/10.1016/j.joca.2017.08.004) 9) Lohmander et al., 2014, Arthritis Rheumatol., Jul;66(7):1820-31 10) Dahlberg et al., 2016, Clin Exp Rheumatol., May-Jun;34(3):445-50

11) Deng et al. 2018, Osteoarthritis and Cartilage, no prelo: 1-9 12) Parrish et al., 2017, Osteoartrite Cartilage., Apr;25(4):554-560 13) Ameye e Young 2006. Curr Opin Rheumatol 18:537–547. 14) Zhou et al., 2016, Osteoartrite Cartilage., Dec;24(12):2181-2192 15) Wang et al. 2014. Birth defects Res C embryo today 102: 37-51 16) Karsdal et al., 2016, Osteoarthritis and Cartilage, 24(12): 2013- 2021 17) Duclos et al.,2010, Osteoarthritis Cartilage. 2010 Nov;18(11):1467-

76. 18) Gudmann et al., 2016, Artrite Res Ther., 18(1):141. 19) Munk et al., 2016, Rheumatol Int. 36(4):541-9. 20) Gudmann et al., 2014, Int J Mol Sci. ,15(10):18789-18803. 21) Valdes et al., 2014, Osteoarthritis Cartilage., May;22(5):683-9 22) Struglics et al., 2011, Osteoarthritis Cartilage., Aug;19(8):1047-57 23) Struglics et al., 2015, Artrite Rheumatol., Jul;67(7):1816-25 24) The Merck Manual, 17a edição, página 449 25) Bellamy et al., 1988, J. Rheumatology, 15:1833-1840 26) Wolfe, 1999, Rheumatology, 38:355-361 27) Bay-Jensen et al., 2016, Osteoarthritis Cartilage. 24(1):9-20 28) Collins et al. 2016. Osteoarthritis Cartilage 24: 1317 Abreviações IMC = Índice de massa corporal; IC = intervalo de confiança, DBPC = duplo-cego, placebo-controlado CTX-II = C-telopeptídeo interligador de colágeno tipo II, DBPC = duplo-cego, placebo-controlado ICOAP = Medida de dor intermitente e constante da osteoartrite ITT = intenção de tratamento; JSW = Largura do espaço articular Índice de sintomas KOOS = Subescala do índice de sintomas da pontuação de lesão do joelho e resultado da osteoartrite KOOS QOL = Subescala de qualidade de vida da pontuação de lesão do joelho e resultado da osteoartrite LOCF = última observação levada adiante LFTC = compartimento femorotibial lateral MFTC = compartimento femorotibial medial mITT = intenção de tratamento modificada MOS SF-36 = Formulário abreviado 36 - Pesquisa de Saúde Geral para Resultados Médicos de Estudos IRM = imagem por ressonância magnética pontuação de dor NRS = pontuação de dor na escala de classificação numérica OA = Osteoartrite PGA = Avaliação global do paciente PGIC = Impressão de mudança global do paciente PROC2 = neoepitopo do pró-peptídeo de colágeno tipo II WOMAC = índice de Osteoartrite Western Ontario e McMaster Universities S = Semana

Claims (16)

REIVINDICAÇÕES

1. Método para reduzir o risco de um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2, b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo e c) prever, a partir do resultado das etapas a) e b), sensibilidade alta, intermediária, baixa ou nenhuma do dito indivíduo ao tratamento com o dito composto ativo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de prever baixa ou nenhuma sensibilidade ao tratamento com um composto ativo a partir da presença de CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de prever: i. Boa sensibilidade ao tratamento com um composto ativo a partir da presença de CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm ou ii. Sensibilidade intermediária ao tratamento com um composto ativo a partir da presença de: a) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou de ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou b) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

4. Método para selecionar um indivíduo que tem uma doença da cartilagem para inclusão em ou exclusão do tratamento, ou ensaio clínico, com um composto ativo, com base na probabilidade da sua sensibilidade ao dito tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo; em que a quantidade de pelo menos uma dessas proteínas e a largura se JSW são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja sensível ou não sensível ao dito tratamento e b) selecionar os indivíduos sensíveis como sendo adequados para o dito tratamento ou ensaio clínico.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de excluir do tratamento com um composto ativo o indivíduo que apresenta CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm.

6. Método de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de incluir para o tratamento com um composto ativo o indivíduo que apresenta: a) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, b) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou c) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

7. Método, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de incluir para o tratamento com um composto ativo, de acordo com um regime de dosagem alternativo, o indivíduo que apresenta: a) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou b) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

8. Método para tratar um indivíduo com um composto ativo que tem uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas seguintes: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja de boa sensibilidade ao tratamento com o dito composto ativo, b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm, ii. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou iii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm e c) administrar o dito composto ativo por via intra-articular ao dito indivíduo selecionado.

9. Método para tratar um indivíduo com um composto ativo que tem uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas seguintes: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2 e medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, em que as ditas quantidades e larguras são preditivas sobre o risco de que o indivíduo seja de sensibilidade intermediária a um tratamento com o dito composto ativo, b) selecionar o indivíduo que apresenta: i. CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou ii. CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm e c) administrar o dito composto ativo por via intra-articular ao dito indivíduo selecionado de acordo com um regime de dosagem alternativo de acordo com o qual a dose do composto ativo é aumentada, e/ou o composto ativo é administrado por um período mais longo de tratamento em comparação ao regime de dosagem habitual para o dito composto ativo.

10. Método para reduzir o risco de um ensaio clínico ou para determinar efeito placebo em um indivíduo em um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, b) prever, a partir do resultado da etapa a), o risco de efeito placebo para o dito indivíduo, em que a presença de uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo e a presença de uma JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de nenhum efeito placebo ou de reduzido.

11. Método para reduzir o risco de um ensaio clínico ou para determinar efeito placebo em um indivíduo em um ensaio clínico, em que o dito ensaio clínico é relacionado ao tratamento de uma doença da cartilagem em um indivíduo com um composto ativo, caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) determinar, a partir de uma amostra do dito indivíduo, a quantidade de pelo menos um dos biomarcadores selecionados a partir do grupo que consiste em CTX-II e/ou ProC2; b) medir a largura do espaço articular (JSW) em pelo menos um joelho do dito indivíduo, c) prever, a partir do resultado das etapas a) e b), o risco de efeito placebo para o dito indivíduo, em que as etapas a) e b) são realizadas em qualquer ordem.

12.Método, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a presença de 1) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol (>240-260% da média normal) e/ou de ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL (>120-280% da média normal) e uma JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 2), CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou 3), CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de efeito placebo, enquanto que a presença de CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm é preditiva de nenhum efeito placebo ou de reduzido.

13. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende meios para realizar o método, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, e instruções para uso.

14. Composto ativo para uso no tratamento de um indivíduo que tem uma doença da cartilagem, caracterizado pelo fato de que o indivíduo apresenta: a) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a

4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior ou igual a 3,5 ± 2DP mm ou b) CTX-II inferior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 inferior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW superior a 3,5 ± 2DP mm ou c) CTX-II superior a 350 ± 2DP ng/mmol e/ou ProC2 superior a 4,2 ± 2DP ng/mL e JSW inferior a 3,5 ± 2DP mm.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, kit, de acordo com a reivindicação 13, ou composto ativo para uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o composto ativo é selecionado a partir do grupo que consiste em composto FGF-18, BMP-2, BMP-7, GDF-5, FGFβ, FGF-9, reforçadores de SOX-9, TGFβ, inibidores de Wnt, inibidores anti-MMP13, inibidores anti-ADAMTS4 ou 5, calcitonina e quaisquer variantes ou proteínas de fusão dos mesmos.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, kit, de acordo com a reivindicação 13, ou composto ativo para uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que a doença da cartilagem é selecionada a partir do grupo que consiste em osteoartrite, lesão da cartilagem, fraturas que afetam a cartilagem articular ou procedimentos cirúrgicos com impacto sobre a cartilagem articular, como microfratura.