EA028067B1 - Способы контроля или предотвращения кровотечения или эпизодов кровотечения - Google Patents

Способы контроля или предотвращения кровотечения или эпизодов кровотечения Download PDF

Info

Publication number
EA028067B1
EA028067B1 EA201291480A EA201291480A EA028067B1 EA 028067 B1 EA028067 B1 EA 028067B1 EA 201291480 A EA201291480 A EA 201291480A EA 201291480 A EA201291480 A EA 201291480A EA 028067 B1 EA028067 B1 EA 028067B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
dose
activity
factor
days
bleeding
Prior art date
Application number
EA201291480A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201291480A1 (ru
Inventor
Гленн Пирс
Саманта Трюкс
Роберт Т. Питерс
Хайянь Цзян
Original Assignee
Байоджен Хемофилия Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45441870&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA028067(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Байоджен Хемофилия Инк. filed Critical Байоджен Хемофилия Инк.
Publication of EA201291480A1 publication Critical patent/EA201291480A1/ru
Publication of EA028067B1 publication Critical patent/EA028067B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/38—Albumins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
    • C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
    • C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение предоставляет способы контроля или предотвращения кровотечения, включающие введение фактора IX.

Description

Настоящее изобретение относится в целом к области терапии гемостатических болезней.
Уровень техники
Гемофилия В (также известная как болезнь Кристмаса) - одна из наиболее распространенных наследуемых болезней крови в мире. Она приводит к уменьшению ίη νίνο и ίη νίίτο свертываемости крови и требует постоянного медицинского наблюдения в течение жизни больного. Если отсутствуют внешние повреждения, больные подвержены спонтанному кровотечению в суставах, которое приводит к сильной боли и вредному для здоровья отсутствию подвижности; кровотечению в мышцах, приводящему к аккумуляции крови в этих тканях; спонтанному кровотечению в горле и шее, которое может стать причиной асфиксии при отсутствии немедленного лечения; почечному кровотечению; распространены также тяжелые кровотечения после хирургического вмешательства, незначительных случайных повреждений или удаления зубов.
Нормальная коагуляция крови ίη νίνο требует как минимум сериновых протеаз факторов II (протромбин), VII, IX, X и XI (растворимых белков плазмы); кофакторов, включающих трансмембранный белковый тканевой фактор и плазматические белковые факторы V и VIII; фибриноген, трансглютаминазу фактор XIII, фосфолипид (включая активированные тромбоциты) и кальций. Дополнительные белки, включающие калликреин, кининоген высокого молекулярного веса и фактор XII требуются в некоторых из тестов свертываемости ίη νίίτο, и могут играть роль ίη νίνο при патологических нарушениях. При гемофилии свертывание крови нарушается из-за отсутствия определенных плазматических факторов свертывания крови. Причиной гемофилии В является дефицит фактора IX, что может быть результатом как уменьшения синтеза белка фактора IX, так и дефективной молекулой со сниженной активностью. Лечение гемофилии производится путем замещения отсутствующего фактора свертывания экзогенными концентратами фактора, высоко обогащенными фактором IX. Однако производство такого концентрата из крови связано с множеством технических трудностей, как описано ниже.
При очистке фактора IX из плазмы (полученный из плазмы фактор IX; рйРК) почти исключительно получается активный фактор IX. Однако такая очистка фактора IX из плазмы очень трудна, поскольку фактор IX представлен в плазме только в низкой концентрации (5 мкг/мл, Άηάβτδδοη, ΤЬ^οтЬοδ^δ КезсагеН 7: 451-459 (1975)). Кроме того, очистка из крови требует удаления или инактивации инфекционных агентов, таких как ВИЧ и вирус гепатита С. Более того, рбРК имеет короткий период полувыведения и, следовательно, требует частого дозирования. Рекомбинантный фактор IX (тРК) также доступен, но имеет такой же короткий период полувыведения и требует такого же частого дозирования (например, 2-3 раза в неделю для профилактики), как и рбРБХ тЕК также обладает более низким увеличением концентрации (К значением) по сравнению с рбЕК, что делает необходимым использование более высоких доз тРК, чем в случае рбРБХ Снижение смертности, предотвращение повреждения суставов и улучшенное качество жизни стали важным достижением вследствие разработки полученного из плазмы и рекомбинантного фактора IX. Пролонгированная защита от кровотечения станет другим значительным прогрессом в лечении пациентов с гемофилией В. Однако на настоящее время не разработано продуктов, которые давали бы пролонгированную защиту. Следовательно, остается потребность в усовершенствованных способах лечения гемофилии, возникшей вследствие недостатка фактора IX, которые были бы более переносимы и более эффективны, чем существующие терапевтические способы.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение предоставляет способы лечения кровотечения или эпизодов кровотечения у человека, включающие введение фактора IX с использованием химерных полипептидов, содержащих фактор IX, и гибридов таких химерных полипептидов; полинуклеотидов, кодирующих такие химерные и гибридные полипептиды; клеток, содержащих такие полинуклеотиды; и способы производства таких химерных и гибридных полипептидов с использованием таких клеток. В некоторых вариантах воплощения фактор IX химерный полипептид представляет собой фактор IX РсКп связывающий партнер (ВР) химерный полипептид, такой как фактор IX Рс химерный полипептид. В других вариантах воплощения фактор IX химерный полипептид представляет собой фактор IX-XΤΕN полипептид.
Настоящее изобретение предоставляет способ лечения кровотечения или эпизодов кровотечения у человека, включающий введение фактора IX нуждающемуся в этом пациенту, включая введение пациенту дозы не менее чем около 20 или не менее чем около 25 МЕ/кг фактора IX РсКп ВР химерного полипептида, например фактора Κ-Рс химерного полипептида или фактора IX-XΤΕN химерного полипептида, с интервалом дозирования примерно один раз в неделю или реже. В некоторых вариантах воплощения концентрация в плазме крови химерного полипептида достигает среднего минимального значения не менее чем около 1 МЕ/дл после не менее чем около 6 дней у не менее чем около 70%, не менее чем около 80%, не менее чем около 90% или около 100% популяции пациентов, или достигает у пациента минимального значения не менее чем около 1, 2, 3, 4 или 5 МЕ/дл после не менее чем около 6 дней. В некоторых вариантах воплощения уровень в плазме вышеупомянутого химерного полипептида достигает среднего минимального значения около 1-5 или 1-3 МЕ/дл. Такое минимальное или среднее минимальное значение может быть достигнуто после около 6, около 7, около 8, около 9, около 10, около 11, около 12,
- 1 028067 около 13, около 14, около 15, около 16, около 17, около 18, около 19, около 20, около 21, около 22, около 23, около 24, около 25, около 26, около 27, около 28, около 29, около 30, около 31, около 32, около 33, около 34, около 35, около 36, около 37, около 38, около 39 или около 40 дней. В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид имеет сильно редуцированную фосфорилизацию и сульфатацию по сравнению с полученным из плазмы фактором IX. В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид менее чем на 25% фосфорилирован и менее чем на 25% сульфатирован, например, менее чем на 25% полностью фосфорилирован и сульфатирован. В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид менее чем на около 10% фосфорилирован и менее чем на около 9% сульфатирован. В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид имеет паттерн/распределение гамма карбоксилирования, содержание гамма карбоксилирования, паттерн/распределение сиалирования, и/или содержание сиалирования, сходное (т.е. в пределах 10%) или равное тому же у фактора IX Ре химерного полипептида в примерах 5-6. В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид имеет увеличение концентрации более чем 0,7 или более чем 0,75 мкг/мл (антиген). В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид имеет среднее увеличение концентрации (К-значение) (активность; наблюдаемое) не менее чем около 0,8, не менее чем около 0,9 или не менее чем около 1 МЕ/дл на МЕ/кг.
В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид демонстрирует один или более фармакокинетических параметров, у указанной популяции пациентов или у указанного пациента, выбранного из группы, состоящей из:
(a) средний клиренс (СЬ) (активность) у указанной популяции пациентов около 3,36±0,93 мл/ч/кг; клиренс (СЬ) (активность) у указанного пациента около 1,84-4,58 мл/ч/кг;
(b) среднее время удержания (МКТ) (активность) у указанной популяции пациентов не менее чем около 68,05±11,16 ч; среднее время удержания (МКТ) (активность) у указанного пациента около 53,185,8 ч;
(е) средняя У88 (активность) у указанной популяции пациентов около 226±67,76 (скорректированное до 69,8) мл/кг; У88 (активность) у указанного пациента около 145-365 мл/кг;
(ί) средняя АиС/доза (активность) у указанной популяции пациентов около 32,44±10,75 МЕ-ч/дл на МЕ/кг; АиС/доза у указанного пациента около 21,80-54,30 МЕ-ч/дл на МЕ/кг.
В некоторых вариантах воплощения доза химерного полипептида содержит значительно более низкую (в 10-100 раз) концентрацию (0,01-0,001%) активированного Р1Х (Р1Ха), чем в производимых в настоящее время продуктах фактора IX, таких как ΜΟΝΟΝΙΝΕ™ (ράΡΙΧ; С8Ь Вейппд) или ΒΕΝΕΡΙΧ™ (^уе!й; гР1Х) (0,1%). Такая концентрация может быть в 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 или 100 раз ниже, чем производимых в настоящее время продуктов, или 0,01, 0,05, 0,0033, 0,0025, 0,002, 0,00167, 0,00142, 0,00125, 0,00111 или 0,001%.
В некоторых вариантах воплощения интервал дозирования составляет 6-18, 6-10, 9-18, не менее чем 6, не менее чем 7, не менее чем 8, не менее чем 9, не менее чем 10, не менее чем 11, не менее чем 12, не менее чем 13, не менее чем 14, не менее чем 15, не менее чем 16, не менее чем 17 или не менее чем 18 дней, еженедельно, два раза в месяц или один раз в месяц. Интервал дозирования может быть профилактическим интервалом дозирования, фиксированным профилактическим интервалом дозирования или индивидуализированным профилактическим интервалом дозирования.
Способы изобретения применяются к пациенту, нуждающемуся в контроле или предотвращении кровотечения или эпизодов кровотечения, нуждающемуся в интермиттирующей терапии, нуждающемуся в профилактическом лечении или нуждающемуся в лечении при необходимости.
Терапевтические дозы, которые могут быть использованы в способах изобретения, составляют около 25-180, около 20-180, около 20-50, около 20-100, около 10-180, около 10-50, около 10-30 или около 50100 МЕ/кг. Доза может быть фиксированной дозой или индивидуализированной дозой.
В некоторых вариантах воплощения химерный полипептид вводится внутривенно или подкожно.
Пациентом в способах изобретения может быть человек или не являющееся человеком млекопитающее. Не являющиеся людьми млекопитающие включают мышей, собак, приматов, обезьян, кошек, лошадей, коров, свиней и других домашних животных и маленьких животных.
Химерный полипептид может быть в форме гибрида, содержащего второй полипептид в соединении с указанным химерным полипептидом, при этом указанный второй полипептид содержит или состоит преимущественно из РсКп ВР, например, Рс. Химерный полипептид может быть не менее чем на 90%, не менее чем на 95 или 100% идентичен последовательности фактора IX, последовательности Рс или как последовательности фактора IX, так и последовательности Рс в табл. 2А (8Εφ ГО ΝΟ: 2) и/или 2В (8Εφ ГО ΝΟ: 4), с или без сигнальной последовательностью(ями) и полипептидом.
Химерный полипептид или гибрид может вводиться как часть фармацевтического состава, содержащего не менее чем одно вспомогательное вещество.
Изобретение также предоставляет сами вышеописанные химерные и гибридные полипептиды, полинуклеотиды, их кодирующие, культивируемые человеческие эмбриональные клетки, содержащие полинуклеотиды, и способы производства таких химерных и гибридных полипептидов, и полипептиды, производимые такими способами.
- 2 028067
Краткое описание рисунков/фигур
Фиг. 1. Схема одного типа фактора IX химерного полипептида, фактора 1Х-Рс гибрида.
Фиг. 2. Групповая средняя концентрация Р1ХРс по сравнению с временными профилями; сравнение номинальной дозы.
Фиг. 3. Групповая средняя активность Р1ХРс по сравнению с временными профилями; сравнение номинальной дозы.
Фиг. 4. Дерево решений вычитания базового уровня.
Фиг. 5. Дозопропорциональное возрастание Стах и ЛИС для ΡΙΧ активности.
Фиг. 6. Оцененная терапевтическая продолжительность гР1ХРс при 50 (А) и 100 (В) МЕ/кг.
Фиг. 7. Дозопропорциональное возрастание Стах и АИС для ΡΙΧ антигена.
Фиг. 8. Фармакокинетические оценки для гР1ХРс антигена при 50 (А) и 100 (В) МЕ/кг номинальных дозах.
Фиг. 9. Точная корреляция между гР1ХРс активностью и уровнями антигена. Следует заметить, что вследствие перерасчета РК активности, как обсуждается в примере 11, К2=0,946.
Фиг. 10. гР1Х-Рс доменная структура и пострансляционные модификации. РКО: пропептид, расщепленный процессирующим ферментом. ОЬА: содержит 12 γ-карбоксилированных остатков глутаминовой кислоты (О1а). АСТ РЕР: активационный пептид расщепляется для получения активной протеазы. Другие модификации: Ν- и О-гликозилирование, А§р(64) β-гидроксилирование, Туг сульфатация, Бег фосфорилирование.
Фиг. 11. δΌδ-РАОЕ гель очистки промежуточных продуктов и очищенного Р1ХРс мономера. Пробы с различных этапов очистки Р1ХРс анализировалась с помощью невосстановительного δΌδ-РАОЕ. Дорожка 1: маркеры δееΒ1ие плюс молекулярного веса (1пуйгодеи). Дорожка 2: пустая дорожка. Дорожка 3: белок А загружен. Дорожка 4: белок А элюат. Дорожка 5: фрактогель ΌΕΛΕ элюат. Дорожка 6: О δерЬ РР элюат. Дорожка 7: конечный объем Р1ХРс. Дорожка 8: пустая дорожка. Дорожка 9: конечный объем редуцированного Р1ХРс.
Фиг. 12. Функциональная активность Р1ХРс у дефицитных по Р1Х мышей. Дефицитным по Р1Х мышам была введена внутривенно доза 219 МЕ/кг Р1ХРс (3 или 4 на группу, 6 групп, и=23) или 200 МЕ/кг гР1Х (3 или 4 на группу, 5 групп, и=23) на времени=0. Пробы крови были собраны в различное время после дозировки (от 0,25 до 96 ч) и проанализированы на активность свертывания с использованием анализа Р1Х активности. * гР1Х активность не определялась у всех мышей на временных точках после 48 ч после дозирования.
Фиг. 13. Время свертывания цельной крови Р1ХРс по сравнению с рекомбинантным Р1Х у дефицитных по Р1Х мышей. Дефицитные по Р1Х мыши (6 на группу) получили внутривенно дозу 50 МЕ/кг Р1ХРс или 50 МЕ/кг гР1Х. Пробы крови были собраны перед дозированием и на различных временах после дозирования. Пробы крови инкубировались при 37°С и визуально проверялись на присутствие сгустков крови один раз в минуту. Время, необходимое для формирования сгустков крови, отмечалось, и когда активность свертывания возвращалась к базовому уровню (т.е. сгустки не формировались), дополнительные пробы не получали (пробы собирались от 15 мин до 144 ч для Р1ХРс или от 15 мин до 72 ч для гР1Х).
Фиг. 14. Фармакодинамика Р1ХРс у дефицитных по Р1Х мышей. Дефицитным по Р1Х мышам была введена доза 219 МЕ/кг Р1ХРс (5 на группу, 6 групп, и=30) или 200 МЕ/кг гР1Х (4 или 5 на группу, 6 групп, и=28) на день 0, 4 и 8. Пробы плазмы крови были собраны путем пункции сердца на 15 мин и 96 ч после каждой дозы и активность свертывания измерялась с использованием анализа Р1Х активности. Плазма была также собрана из крови хвоста на 8, 24, 48 и 72 ч после каждой дозы. Уровни Р1ХРс были подсчитаны во всех пробах с использованием ЕЬКА, специфичного на Р1ХРс. (А) Измеренная ν. Рассчитанная активность. Активность свертывания для Р1ХРс рассчитывалась с использованием анализа Р1Х активности на 15 мин и 96 ч после трех доз. Было определено, что активность свертывания ίη νίίτο для Р1ХРс составляла 43,8±5,4 МЕ/мг. Основываясь на этой активности (МЕ/мг) и измеренных уровнях белка, рассчитанный уровень активности свертывания был определен на временных точках 15 мин, 8, 24, 48, 72 и 96 ч после каждой дозы. (В) У дефицитных по Р1Х мышей, обработанных тремя дозами 200 МЕ/кг гР1Х, уровни Р1Х были рассчитаны с использованием Р1Х-специфичного ЕЬ1БА. С использованием измеренных специфичных активностей Р1ХРс и гР1Х, стало возможно сравнить рассчитанную активность свертывания для всех проб, анализированных с помощью ЕЬ1БА.
Фиг. 15. Фармакокинетика и фармакодинамика Р1ХРс у дефицитных по Р1Х собаках. Двум собакам с гемофилией В внутривенно влили 140 МЕ/кг Р1ХРс. Пробы крови были собраны на 5, 15 и 30 мин, и на 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 27, 30, 48, 51, 54, 72, 80, 96, 126, 144 и 168 ч. (А) Метод сэндвича ЕЬ1БА с использованием Р1Х иммобилизированного антитела и Рс-НРР идентифицирующего антитела был использован для измерения концентрации интактного Р1ХРс в пробах крови собак с гемофилией В. (В) Р1Х активность свертывания измерялась на всех временных точках по отношению к стандартной кривой, сделанной с Р1ХРс. (С) Кровь, собранная у животных, немедленно анализировалась на время свертывания цельной крови. Пробы крови инкубировались при 28°С и визуально проверялись на присутствие сгустков крови
- 3 028067 один раз в минуту, и отмечалось время, за которое формировался сгусток.
Фиг. 16. Фармакокинетика ИХРе у яванских макак. Макакам была введена однократная доза (0,5, 2 и 10 мг/кг, соответствующая приблизительно 25, 100 или 500 МЕ/кг) Р1ХРе (п=2, 3 и 3, соответственно). Пробы крови были собраны на 0,25, 0,5, 1, 8, 24, 48, 72, 96, 120, 144 и 168 ч после дозы и плазма была подготовлена для анализа концентрации белка с помощью Р1ХРс-специфичного ΕΕΙ8Α.
Фиг. 17. тР1ХРе и ΒΕΝΕΡΙΧ™ показывают сравнимую активность и дозозависимую реакцию в цельной крови из НетВ мышей. (Α) ΚΟΤΕΜ® Параметры. τΡΙΧ или ΒΕΝΕΡΙΧ™ были впрыснуты в кровь НетВ мышей и параметры свертывания измерялись по ΚΟΤΕΜ®. (Β)-(Ό) Дозозависимый ответ, измерение (В) СТ, (С) СрТ и (Ό) Альфа-угол.
Фиг. 18. Определение эффективности в неотложных случаях в модели отсечения хвоста у мышей с гемофилией.
Фиг. 19. (А) Потеря крови после отрезания хвоста у отдельных НетВ мышей, обработанных гР1ХРс или ΒΕΝΕΡΚ™. (В) Дозозависимая реакция на гР1ХРс и ΒΕΝΕΡΚ™ по медианной потере крови после отрезания хвоста у НетΒ мышей.
Фиг. 20. Модель кровотечения при рассечении хвостовой вены (ТУТ) у НетΒ мышей: модель для характеристики венозного кровотечения у пациентов с тяжелой гемофилией.
Фиг. 21. Пролонгированная активность гР1ХРс по сравнению с ΒΕΝΕΡΚ™ в опытных НетΒ мышах по цельной крови ΚΟΤΕΜ®. (А) СТ, (В) СРТ, (С) Альфа-угол, и (Ό) частичная корреляция между активностью свертывания цельной крови (СТ) по ΚΟΤΕΜ® по сравнению с плазматической активность по аРТТ.
Фиг. 22. Пролонгированная эффективность Р1ХРс по сравнению с ΒΕΝΕΡΚ™ в модели кровотечения при рассечении хвостовой вены (ΤνΤ) у НетΒ мышей. (А) Выживаемость: степени выживаемости сравнивались у мышей, получавших ΒΕΝΕΡΚ™ за 24 ч перед ΤνΤ, и у мышей, получавших тИХЕс за 72 ч перед ΤνΤ. (В) Остановка кровотечения: степени кровотечения сравнивались у мышей, получавших ΒΕΝΕΡΚ™ за 24 ч перед ΤνΤ, и у мышей, получавших гПХГс за 72 ч перед ΤνΤ.
Фиг. 23. Корреляция между повышением концентрации активного τΡ^ΤΥ по отношению к весу тела у 12 пациентов, которые получали однократную дозу 12,5-100 МЕ/кг гПХГс.
Фиг. 24. Моделирование по методу Монте-Карло с использованием структурной РК модели гПХГс активности для создания профилей активность-время для достижения минимального уровня 1 МЕ/дл выше базового уровня после еженедельного (А), каждые 10 дней (В) или каждые две недели режима дозирования (С). Медианные РК параметры популяции и релевантные вариации между пациентами и у одного пациента были взяты из фазы 1/2а клинического исследования. 1000 пациентов вошли в моделирование на дозовый режим с 14-16 точками взятия проб для каждого пациента, и среднее+δΌ профилей активность-время 1000 пациентов было сконструировано графически для различных дозовых режимов.
Фиг. 25. Моделирование по методу Монте-Карло для гПХГс доз для достижения минимального уровня 1 МЕ/дл (1%), основанное на пересчитанных фармакокинетических данных. (А) один раз в неделю, (В) каждые 10 дней и (С) каждые две недели.
Детальное описание изобретения
Настоящее изобретение предоставляет способ лечения недостатка фактора 1Х, например, гемофилии В, фактором 1Х, с использованием более длинного интервала дозирования и/или улучшенных фармакокинетических параметров, чем это возможно с известными в настоящее время продуктами с фактором 1Х. Настоящее изобретение также предоставляет улучшенные фактор 1Х химерные полипептиды, фактор 1Х химерные полинуклеотиды и способы производства. Введение при использовании здесь, означает дать фармацевтически приемлемый фактор 1Х полипептид изобретения пациенту фармацевтически приемлемым способом. Предпочитаемые способы введения являются внутривенными, например, внутривенная инъекция и внутривенное вливание, например, посредством центрального венозного доступа. Дополнительные способы введения включают подкожное, внутримышечное, пероральное, назальное и пульмонарное введение, предпочтительно подкожное. Фактор 1Х химерные полипептиды и гибридные белки могут быть введены как часть фармацевтического состава, содержащего не менее чем одно вспомогательное вещество. Преимущества настоящего изобретения включают: улучшенное соблюдение режима; снижение повреждений из-за кровотечения; повышенную защиту суставов от кровотечений; профилактику повреждения суставов; сниженную болезненность; сниженную смертность; пролонгированную защиту от кровотечения; снижение тромботических случаев; и улучшенное качество жизни.
Химерный полипептид при использовании здесь, означает полипептид, который включает в себя не менее чем два полипептида (или их части, такие как субпоследовательности или пептиды) из различных источников. Химерные полипептиды могут включать два, три, четыре, пять, шесть, семь или более полипептидов или их частей из различных источников, таких как различные гены, различные кДНК или различные животные или другие виды. Химерные полипептиды могут включать один или более линкеров, связывающих различные полипептиды или их части. Таким образом, полипептиды или их части могут быть соединены прямо или они могут быть соединены непрямо, посредством линкеров, или обоими способами, с одним химерным полипептидом. Химерные полипептиды могут включать дополнительные
- 4 028067 пептиды, такие как сигнальные последовательности и такие последовательности как 6Ηίκ и РЬЛО, что способствует очистке или детекции белка. Кроме того, химерные полипептиды могут иметь аминокислотные или пептидные добавки на Ν- и/или С-конце. примерами химерных полипептидов изобретения являются фактор ΙΧ-РсКп ВР химерные полипептиды, например, фактор ΙΧ-Рс химерные полипептиды, такие как Р1ХРс на фиг. 1, БЕС ГО N0: 2 (табл. 2) и примеров 1-4, с или без своей сигнальной последовательности и пропептида. Другие примеры химерных полипептидов изобретения включают, не ограничиваясь тем самым, фактор ΙΧ-ΧΤΕΝ химерные полипептиды. Фактор IX может быть гибридизирован или с Ν-концом, или с С-концом ΧΤΕΝ. Химерный полипептид может содержать последовательность, не менее чем на 90% или не менее чем на 95 или 100% идентичную фактору ΙΧ и РсКи ВР, например, Рс аминокислотную последовательность, показанную в табл. 2А без сигнальной последовательности и пропептидной последовательности (аминокислоты с 1 по 642 из БЕС ГО N0: 2), или альтернативно, с пропептидной последовательностью, или альтернативно с сигнальной последовательностью и пропептидной последовательностью.
Культура, культивировать и культивирование при использовании здесь, означает инкубировать клетки в условиях ίη νίΐτο, которые дают клеткам возможность расти или делиться или поддерживают клетки в живом состоянии. Культивируемые клетки при использовании здесь означает клетки, которые размножаются ίη νίΐτο.
Фактор ΙΧ и ΡΙΧ при использовании здесь означает функциональный фактор ΙΧ полипептид в своей нормальной роли в коагуляции, если не указано иное. Таким образом, термин фактор ΙΧ включает различные полипептиды, которые являются функциональными, и полинуклеотиды, которые кодируют такие функциональные варианты полипептидов. Предпочитаемые фактор ΙΧ полипептиды представляют собой человеческие, бычьи, свиные, собачьи, кошачьи и мышиные фактор ΙΧ полипептиды. Известны полной длины полипептид и полинуклеотидные последовательности фактора ΙΧ, а также многие функциональные варианты, например, фрагменты, мутанты и модифицированные версии. Фактор ΙΧ полипептиды включают полной длины фактор ΙΧ, полной длины фактор ΙΧ без Μеΐ на Ν-конце, полной длины фактор ΙΧ без сигнальной последовательности, зрелый фактор ΙΧ (без сигнальной последовательности и пропептида), и зрелый фактор ΙΧ с добавочным Μеΐ на Ν-конце. Фактор ΙΧ предпочтительно производится рекомбинантными методами (рекомбинантный фактор ΙΧ или τΡΙΧ), т.е. он не является природным или полученным из плазмы крови.
Известно очень много функциональных вариантов фактора ΙΧ. Международная публикация номер \У0 02/040544 А3, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает мутанты, которые демонстрируют повышенную устойчивость к ингибированию гепарином, на странице 4, строчки 9-30, и на странице 15, строчки 6-31. Международная публикация номер \У0 03/020764 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает мутанты фактора ΙΧ с редуцированной иммуногенностью Т-клеток в табл. 2 и 3 (на с. 14-24), и на с. 12, строчки 1-27. Международная публикация номер \У0 2007/149406 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает функциональный мутант фактора ΙΧ молекул, который демонстрирует повышенную белковую стабильность, повышенный период полувыведения ίη νίνο и ίη νίΐτο и повышенную устойчивость к протеазам от с. 4, строчка 1 до с. 19, строчка 11. \У0 2007/149406 А2 также раскрывает химерный и другой вариант фактора ΙΧ молекул от с. 19, строчка 12 до с. 20, строчка 9. Международная публикация номер \У0 08/118507 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает мутанты фактора ΙΧ, которые демонстрируют повышенную активность свертывания крови, от с. 5, строчка 14 до с. 6, строчка 5. Международная публикация номер \У0 09/051717 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает мутанты фактора ΙΧ, имеющие повышенное число Ν-связанных и/или О-связанных сайтов гликозилирования, которое приводит к возросшему периоду полувыведения и/или удержания от с. 9, строчка 11 до с. 20, строчка 2. Международная публикация номер \У0 09/137254 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, также раскрывает мутанты фактора ΙΧ с повышенным числом сайтов гликозилирования от с. 2, параграф [006] до с. 5, параграф [011] и от с. 16, параграф [044] до с. 24, параграф [057]. Международная публикация номер \У0 09/130198 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает функциональный мутант фактора ΙΧ молекул, который имеет повышенное число сайтов гликозилирования, что приводит к возрастанию периода полувыведения, от с. 4, строчка 26, до с. 12, строчка 6. Международная публикация номер \У0 09/140015 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, раскрывает функциональные фактор ΙΧ мутанты, которые имеют повышенное количество Сук остатков, что может быть использовано для полимерной (например, РЕО) конъюгации, от с. 11, параграф [0043] до с. 13, параграф [0053].
Кроме того, сотни нефункциональных мутаций по фактору ΙΧ идентифицированы у пациентов с гемофилией, многие из которых раскрыты в табл. 1, на с. 11-14 Международной публикации номер \У0
09/137254 А2, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Такие нефункциональные мутации не включены в изобретение, но предоставляют дополнительное руководством к тому, какие мутации с большей или меньшей вероятностью приведут к получению функцио- 5 028067 нального фактор IX полипептида.
Фактор IX (или фактор IX часть химерного полипептида) может быть не менее чем на 90% или не менее чем на 95% или не менее чем на 100% идентичен фактора IX аминокислотной последовательности, показанной в табл. 2А без сигнальной последовательности и пропептидной последовательности (аминокислоты с 1 по 415 из 8ЕО ГО N0: 2), или альтернативно, с пропептидной последовательностью, или с пропептидной и сигнальной последовательностью (полной длины фактор IX).
Фактора IX коагуляционная активностью выражается в международных единицах (МЕ). Одна МЕ активности фактора IX соответствует приблизительно количеству фактора IX в одном миллилитре нормальной плазмы крови человека. Несколько исследований подходят для измерения активности фактора IX, включая одностадийное исследование свертываемости крови (активированное частичное тромбопластиновое время; аРТТ), время образования тромбина (ТОА) и ротационная тромбоэластография (КОТЕМ®). См., например, пример 3.
РсКп связывающий партнер или РсКп ВР при использовании здесь, означает связывающие партнеры функционального неонатального Рс рецептора (РсКп), если не указано другое. РсКп связывающий партнер является любой молекулой, которая может специфично связываться с РсКп рецептором с последующим активным транспортом РсКп рецептором РсКп связывающего партнера. Таким образом, термин РсКп ВР включает любые варианты ^О Рс, которые являются функциональными. Например, область Рс части ΥΟ. которая связывается с РсКп рецептором, описана на основе рентгеноструктурной кристаллографии (Вигте15!ег е! а1. 1994, №Лигс 372:379, включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки). Главный контактный участок Рс с РсКп находится рядом с соединением СН2 и СН3 доменов. Рс-РсКп контакты все находятся внутри одной Υ тяжелой цепи. РсКп ВРк включает целый γΟ, Рс фрагмент ^О, и другие фрагменты ^О, которые включают полный связывающий регион РсКп. Главные контактные сайты включают аминокислотные остатки 248, 250-257, 272, 285, 288, 290291, 308-311 и 314 СН2 домена и аминокислотные остатки 385-387, 428 и 433-436 СН3 домена. Все упоминания аминокислотной нумерации иммуноглобулинов или фрагментов иммуноглобулинов, или участков, основаны на КаЬа! е! а1. 1991, 8ецпепсе5 оГ РгсЛеиъ оГ Пптшкйощса! ГОетек!, и. 8. Перайтеп! оГ РиЬйс НеаНй, ВеШекба; МИ, включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки (РсКп рецептор выделен из нескольких видов млекопитающих, включая человека. Известны последовательности человеческих РсКп, крысиных РсКп и мышиных РсКп (81оту е! а1. 1994, I. Ехр. Меб. 180: 2377), включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки). РсКп ВР может содержать СН2 и СН3 домены иммуноглобулинов, имеющие или не имеющие петлевые участки иммуноглобулина. Приведенные в качестве примера РсКп ВР варианты предоставлены в ХО 2004/101740 и ХО 2006/074199, которые включены в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
РсКп ВР также включает альбумин и его фрагменты, которые связываются с РсКп. Предпочтительно альбумин представляет собой альбумин человека. Фактор IX может быть соединен или с Ν-концом альбумина или с С-концом альбумина, при условии, что фактора IX компонент фактор К-альбумин гибридного белка может процессироваться ферментативно активной пропротеинконвертазой для получения процессированного фактор К-содержащего полипептида. Примеры альбумина, например, его фрагменты, которые можно использовать в настоящем изобретении, известны, например, патент США № 7592010; патент США № 6686179; и 8сйи1!е, ТйтотЬо515 Кек. 124 8ирр1. 2:86-88 (2009), каждый из которых включен в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
РсКп ВР (или участок РсКп ВР в химерном полипептиде) может содержать одну или более мутаций и комбинаций мутаций.
РсКп ВР (или участок РсКп ВР в химерном полипептиде) может содержать мутации, дающие увеличенный период полураспада, такие как М252У, 8254Т, Т256Е и их комбинации, как раскрыто у Одапекуап е! а1., Мо1. Тттипо1. 46:1750 (2009), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; Н433К, Ν434Ε и их комбинации, как раскрыто у Уассато е! а1., ΝηΙ. Вю!есйпо1. 23:1283 (2005), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; мутанты раскрыты на страницах 1-2, параграф [0012], и в примерах 9 и 10 США 2009/0264627 А1, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; и мутанты раскрыты на странице 2, параграфы с [0014] по [0021] из США 20090163699 А1, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
РсКп ВР (или участок РсКп ВР в химерном полипептиде) также может включать следующие мутации: Рс регион ^О может быть модифицирован в соответствии с хорошо известными процедурами, такими как сайт-направленный мутагенез и тому подобными для получения модифицированных ^С или Рс фрагментов или их частей, которые будут связываться с РсКп. Такие модификации включают модификации, далекие от контактирующих с РсКп сайтов, а также модификации внутри контактирующих сайтов, которые сохраняют или даже усиливают связывание с РсКп. Например, следующие одиночные аминокислотные остатки в человеческом ТдО1 Рс (Рсу1) могут быть замещены без значительной потери Рс связывающей аффинности к РсКп: Р238А, 8239А, К246А, К248А, Ό249Α, М252А, Т256А, Е258А, Т260А, Ό265Α, 8267А, Н268А, Е269А, Ό270Α, Е272А, Ь274А, Ν276Α, Υ278Α, Ό280Α, У282А, Е283А, Н285А, Ν286Α, Т289А, К290А, К292А, Е293А, Е294А, Р295А, Υ296Р, Ν297Α, 8298А, Υ300Р, К301А,
- 6 028067
У303А, У305А, Т307А, Ь309А, р311А, Ό312Α, Ν315Α, К317А, Е318А, К320А, К322А, 8324А, К326А,
А327Р, Р329А, А330Р, А3308, Р331А, Р3318, Е333А, К334А, Т335А, 8337А, К338А, К340А, Р342А,
К344А, Е345А, Р347А, К355А, Е356А, М358А, Т359А, К360А, N361^ Р362А, У373А, 8375А П376А,
А378Р, Е380А, Е382А, 8383А, N384^ Р386А, Е388А, N389^ N390^ Υ391Ρ, К392А, Ь398А, 8400А,
О401А, О413А, К414А, К416А, Р418А, Р419А, Ж21А, У422А, 8424А, Е430А, Ж34А, Т437А, Р438А,
К439А, 8440А, 8444А и К447А, где, например, Р238А представляет дикий тип пролина, замещенный аланином в позиции номер 238. В добавление к аланину, другие аминокислоты могут быть замещены диким типом аминокислот в позициях, обозначенных выше. Мутации могут быть внедрены однократно в Ее, давая начало более чем одной сотне ЕсКп связывающих партнеров, отличающихся от нативного Ее. Кроме того, комбинации двух, трех или более из этих индивидуальных мутаций могут быть введены вместе, давая начало еще сотням ЕсКп связывающих партнеров. Некоторые из этих мутаций могут давать новую функциональность относительно ЕсКп связывающего партнера. Например, один вариант воплощения включает Ш97А. удаляя высококонсервативный сайт ^гликозилирования. Действие этой мутации уменьшает иммуногенность, тем самым усиливая циркулирующий полупериод ЕсКп связывающего партнера, и возмещая неспособность ЕсКп связывающего партнера связываться с ЕсуК1, ЕсуКПА, ЕсуК11В и ЕсуКША, без мешающей аффинности к ЕсКп (КоиЙебде е! а1. 1995, Ттап8р1ап1а1юп 60:847, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; Епепб е! а1. 1999, Ттап8р1ап1айоп 68:1632, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; §Ые1Й8 е! а1. 1995, 1. Вю1. Сйет. 276:6591, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки). Кроме того, не менее чем три человеческих Ес гамма-рецептора, повидимому, распознают сайт связывания 1дС внутри нижнего петлевого участка, обычно аминокислоты 234-237. Следовательно, другой пример новой функциональности и потенциально сниженной иммуногенности может стать результатом мутаций в этом участке, как, например, путем замещения аминокислот 233-236 человеческого 1дС1 ЕЕЬО на соответствующую последовательность из 1дС2 РУА (с одной аминокислотной делецией). Показано, что ЕсуК1, ЕсуКП и ЕсуКШ, которые опосредуют различные эффекторные функции, не будут связываться с 1дС1, если интродуцированы такие мутации (^атб апб Сйейе 1995, Тйетареийс 1ттипо1о§у 2:77, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки; и Агтоиг е! а1. 1999, Еиг. 1. 1ттипо1. 29:2613, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки). Как дальнейший пример новой функциональности, возникающей вследствие мутаций, описанных выше, аффинность к ЕсКп может быть повышена более чем у дикого типа в некоторых случаях. Эта повышенная аффинность может отражать повышенную степень включения, сниженную степень выключения или как повышенную степень включения, так и пониженную степень выключения. Считается, что мутации придают повышенную аффинность ЕсКп, включая Т256А, Т307А, Е380А и Ж34А (§Ые1б8 е! а1. 2001, I. Вю1. Сйет. 276:6591, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки).
Тйе ЕсКп ВР (или участок ЕсКп ВР в химерном полипептиде) может быть не менее чем на 90%, или не менее чем на 95%, или на 100% идентичен Ес аминокислотной последовательности, показанной в табл. 2А или В без сигнальной последовательности (аминокислоты от 1 до 227 из 8ЕС ГО N0: 2), или альтернативно, с сигнальной последовательностью.
Гибридные полипептиды и белки, при использовании здесь, означает комбинацию химерного полипептида со вторым полипептидом. Химерный полипептид и второй полипептид в гибриде могут быть связаны друг с другом посредством нековалентных взаимодействий белок-белок, таких как цепь-цепь или гидрофобные взаимодействия. Химерный полипептид и второй полипептид в гибриде могут быть связаны друг с другом через ковалентную связь(и), такие как дисульфидные связи. Химерный полипептид и второй полипептид в гибриде могут быть связаны друг с другом посредством более чем одного типа связи, таких как нековалентные и дисульфидные связи. Гибриды описаны в \У0 2004/101740, \У0 2005/001025, И8 патенты № 7404956, 7348004 и \У0 2006/074199, каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Второй полипептид может быть второй копией того же химерного полипептида или может быть неидентичным химерным полипептидом. В предпочитаемых вариантах воплощения второй полипептид представляет собой полипептид, содержащий ЕсКп ВР, например, Ес. В предпочитаемых вариантах воплощения химерный полипептид представляет собой фактор ΙΧ-ЕсКп ВР, например, фактор ΙΧ-Ес химерный полипептид, а второй полипептид состоит полностью из Ес. См., например, фиг. 1, примеры 1-3 и табл. 2 (8ЕС ГО N0: 2 и 4). См., например, И8 7404956, которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
Второй полипептид в гибриде содержит или полностью состоит из последовательности, не менее чем на 90% или не менее чем на 95 или 100% идентичной аминокислотной последовательности, показанной в табл. 2В без сигнальной последовательности (аминокислоты с 1 по 227 из 8ЕС ГО N0: 4), или альтернативно, с сигнальной последовательностью.
Полипептид настоящего изобретения также включает фактор ΙΧ, гибридизированный с одним или более XТЕN полипептидами. 8сйе11епЬиг§ег е! а1., №л. Вю1есй. 27:1186-90 (2009), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Фактор IX может быть гибридизирован или с ^концом XТЕN полипептида, или с С-концом XТЕN полипептида. XТЕN полипептиды включают, но
- 7 028067 не ограничиваясь тем самым, полипептиды, раскрытые в \УО 2009/023270, \νϋ 2010/091122, \νϋ 2007/103515, И8 2010/0189682 и И8 2009/0092582, каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
Интервал дозирования при использовании здесь означает количество времени, которое проходит между повторными дозами, вводимыми пациенту. Интервал дозирования в способах изобретения, использующих химерный ΡΙΧ-РеКи ВР, например, химерный Р1Х-Рс, может быть не менее чем от полутора до восьми раз длиннее, чем интервал дозирования, требуемый для эквивалентного количества (в МЕ/кг) указанного фактора IX без РсКп ВР, например, Рс части (т.е. полипептида, состоящего из указанного ΡΙΧ). Интервал дозирования при введении, например, фактора ΙΧ-Рс химерного полипептида (или гибрида) изобретения может быть не менее чем в полтора раза длиннее, чем интервал дозирования, требуемый для эквивалентного количества указанного фактора IX без РсКп ВР, например, Рс, ротйои (т.е. полипептида, состоящего из указанного фактора IX). Интервал дозирования может быть не менее чем от полутора до восьми раз длиннее, чем интервал дозирования, требуемый для эквивалентного количества указанного фактора IX без, например, Рс части (или полипептида, состоящего из указанного фактора IX).
В некоторых вариантах воплощения интервал дозирования составляет 6-18, 6-10, 9-18, не менее чем 6, не менее чем 7, не менее чем 8, не менее чем 9, не менее чем 10, не менее чем 11, не менее чем 12, не менее чем 13, не менее чем 14, не менее чем 15, не менее чем 16, не менее чем 17 или не менее чем 18 дней. Интервал дозирования может быть не менее чем около одного раза в неделю и может составлять 610 дней, например около 7-10, около 7-9, около 7-8, около 8-10, около 9-10, около 6-7, около 8-9, около 6, около 7, около 8, около 9 или около 10 дней. Интервал дозирования может составлять 9-18 дней, например около 9-17, около 9-16, около 9-15, около 9-14, около 9-13, около 9-12, около 9-11, около 9-10 дней, около 10-18, около 11-18, около 12-18, около 13-18, около 14-18, около 15-18, около 16-18, около 17-18 дней, около 10-11, около 11-12, около 12-13, около 13-14, около 14-15, около 15-16 и около 16-17 дней, около 9, около 10, около 11, около 12, около 13, около 14, около 15, около 16, около 17 или около 18 дней. Интервал дозирования может составлять около 10-14 дней. Интервал дозирования может составлять примерно каждые две недели или два раза в месяц. Интервал дозирования может составлять более чем 18 дней, например около 19, около 20, около 21, около 22, около 23, около 24, около 25, около 26, около 27, около 28, около 29, около 30, около 31, около 32, около 33, около 34, около 35, около 36, около 37, около 38, около 3 или около 40 дней. Интервал дозирования может быть фиксированным интервалом, например, 7 дней для 25-50 МЕ/кг, 10-13 дней для 50-100 МЕ/кг или 14 дней для 100-150 МЕ/кг. Фиксированный интервал и доза определяются так, что комбинация интервала и дозы будут приводить к минимальному уровню не менее чем около 1-5, или не менее чем около 1-3, или не менее чем около 1, не менее чем около 2, или не менее чем около 3 МЕ/дл РIX активности в популяции пациентов или у отдельного пациента. Фиксированный интервал дозирования может также составлять 7 дней для 20-50 МЕ/кг, 10-14 дней для 50-100 МЕ/кг, 14-16 дней для 100-150 МЕ/кг, 7 дней для 10-50 МЕ/кг, 10-13 дней для 15-100 МЕ/кг, или 14-15 дней для 50-150 МЕ/кг. Фиксированный интервал дозирования может также составлять 7 дней для 10-30 МЕ/кг, 10 дней для 15-50 МЕ/кг, 11 дней для 20-70 МЕ/кг, 12 дней для 25-85 МЕ/кг, 13 дней для от 30 до 100 МЕ/кг, 14 дней для от 40 до 125 МЕ/кг и 15 дней для 50-150 МЕ/кг.
В предпочитаемых вариантах воплощения интервал дозирования составляет 20 МЕ/кг один раз в неделю, 40 МЕ/кг каждые 10 дней или 100 МЕ/кг каждые две недели (два раза в месяц).
Интервал дозирования может, альтернативно, быть индивидуализированным интервалом, который определен для каждого пациента на основании фармакокинетических данных или другой информации об этом пациенте. Комбинация индивидуализированной дозы/интервала дозирования может быть такой же, как для заданных интервальных режимов в предшествующих параграфах, или может отличаться, как проиллюстрировано в примерах. Режим может первоначально быть с фиксированным интервалом дозирования, и потом может измениться на индивидуализированный интервал дозирования.
Лечение по необходимости при использовании здесь означает лечение, которое предназначено для применения в течение короткого времени и соответствует существующему состоянию, такому как эпизод кровотечения, или выявленная кратковременная необходимость, такая как планируемое хирургическое вмешательство. Состояния, которые могут требовать лечения по необходимости, включают эпизод кровотечения, гемартроз, мышечное кровотечение, ротовое кровотечение, геморрагию, кровоизлияние в мышцу, ротовое кровоизлияние, травму, травму головы, желудочно-кишечное кровотечение, внутричерепное кровоизлияние, внутрибрюшинное кровоизлияние, внутригрудное кровоизлияние, перелом кости, кровотечение центральной нервной системы, кровотечение в заглоточном пространстве, кровотечение в забрюшинном пространстве или кровотечение во влагалище подвздошно-поясничной мышцы. Прочие эпизоды кровотечения также включены. Пациент может нуждаться в оперативной профилактике, периоперативном уходе или подготовке к операции. Такие операции включают малое хирургическое вмешательство, большое хирургическое вмешательство, удаление зуба, тонзиллэктомию, другие стоматологические/грудные и лицевые операции, сечение паховой грыжи, синовэктомию, полную замену коленного сустава, замену других суставов, краниотомию, остеосинтез, травматическую хирургию, внутричерепные операции, внутрибрюшные операции, внутригрудные операции. Прочие операции также включены. Дополнительные состояния, которые могут требовать лечения по необходимости, включают
- 8 028067 перечисленные в табл. 26.
Дополнительные состояния, которые могут требовать лечения по необходимости, включают малое кровоизлияние, гемартроз, поверхностное мышечное кровоизлияние, кровоизлияние в мягкие ткани, среднее кровоизлияние, внутримышечное кровоизлияние или кровоизлияние в мягкие ткани с расслоением, кровоизлияние в слизистые, гематурию, сильное кровоизлияние, глоточное кровоизлияние, заглоточное кровоизлияние, забрюшинное кровоизлияние, кровоизлияние центральной нервной системы, ушибы, порезы, царапины, суставное кровоизлияние, носовое кровотечение, ротовое кровотечение, кровотечение из десен, внутричерепное кровотечение, внутрибрюшинное кровотечение, малое спонтанное кровоизлияние, кровотечение после серьезной травмы, средний кожный кровоподтек или спонтанное кровоизлияние в суставы, мышцы, внутренние органы либо в мозг. Дополнительные причины для лечения по необходимости включают необходимость в периоперативном уходе при хирургическом вмешательстве или удалении зуба, большое хирургическое вмешательство, обширные операции в полости рта, урологические операции, операции на грыже, ортопедические операции, такие как замена коленного, тазобедренного или любого другого основного сустава.
Аббревиатуры:
АРСА.. - площадь под кривой концентрация - время от нуля до бесконечности;
АиСа - площадь под кривой концентрация - время над фазой распределения;
ΛυΟβ - площадь под кривой концентрация - время над фазой выведения;
Альфа НЬ - полупериод фазы распределения;
Бета НЬ - полупериод фазы выведения; также обозначается как ΐ1/2;
С168 - оцененная Р1ХРс активность выше базовой через примерно 168 ч после дозы;
Стах - максимальная концентрация, присутствующая на Ттах;
СУ% - процент коэффициента вариации;
С1 - клиренс;
ΐνκ - ίη νίνο увеличение концентрации (%);
К-значение - увеличение концентрации;
МКТ - среднее время удержания;
N - номер;
N0' - не рассчитывалось;
ΝΚ - не сообщалось;
8Ό - стандартное отклонение;
8Е - стандартная ошибка;
ТВЬР1 - модель - прогнозированное время после дозы, когда Р1ХРс активность уменьшается до примерно 1 МЕ/дл выше базового уровня;
ТВЬРЗ - модель - прогнозированное время после дозы, когда ИХРс активность уменьшается до примерно 3 МЕ/дл выше базового уровня;
ТВЬР5 - модель - прогнозированное время после дозы, когда Р1ХРс активность уменьшается до примерно 5 МЕ/дл выше базового уровня;
У88 - объем распределения на стационарной фазе; ν1 - объем распределения в центральном компартменте.
Фармакокинетические (РК) параметры включают вышеуказанные термины и следующие термины, которые имеют свое обычное значение в данной области техники, если не указано иное. Некоторые из терминов более детально объясняются в примерах. РК параметры могут основываться на уровне Р1Х антигена (часто обозначенном в настоящем изобретении в скобках как антиген) или уровень Р1Х активности (часто обозначенном в настоящем изобретении в скобках как активность). В литературе РК параметры часто основываются на уровне Р1Х активности из-за присутствия в плазме некоторых пациентов эндогенных неактивных Р1Х, которые служат помехой возможности оценить введенный (т.е. экзогенный) Р1Х, используя антитело к Р1Х. Однако когда Р1Х вводится как часть гибридного белка, содержащего гетерологичный пептид, такой как РсКп ВР, вводимый (т.е. экзогенный) Р1Х антиген может быть точно измерен с использованием антитела к гетерологичному полипептиду. Кроме того, определенные РК параметры могут быть основаны на прогнозируемых данных (часто обозначаемых в настоящем изобретении в скобках как модель-прогнозируемые) или на наблюдаемых данных (часто обозначаемых в настоящем изобретении в скобках как наблюдаемое), и предпочтительно основанные на наблюдаемых данных.
Базовый при использовании здесь означает самый низкий подсчитанный уровень фактора 1Х в плазме крови у пациента перед введением дозы. В впервые проведенном на человеке исследовании, описанном в примере 1, уровни фактора 1Х в плазме были подсчитаны на двух временных точках перед дозированием: на скрининговом визите и непосредственно перед дозированием. Предозовые времена рассматривались как ноль (базовый уровень) для целей вычислений, т.е. для получения данных с вычетом базового уровня. См., например, фиг. 4. Альтернативно, (а) базовый уровень у пациентов, чья Р1Х активность <1%, которые не имеют детектируемый Р1Х антиген и имеют нонсенс генотипы, определяется
- 9 028067 как 0%, (Ь) базовый уровень у пациентов с ИХ активностью перед лечением <1%, которые имеют детектируемый ИХ антиген, установлен на 0,5%, (с) базовый уровень у пациентов, чья ИХ активность перед лечением между 1-2% Стш (самая низкая активность в ходе РК исследования), и (ά) базовый уровень у пациентов, чья ИХ активность перед лечением >2-2%. Активность выше базового уровня перед дозированием рассматривается как остаточное лекарство от предыдущего лечения и сводится к базовому уровню и вычитается из РК данных после гИГХИс дозирования. См. пример 11.
Площадь под кривой плазматическая концентрация по отношению к времени (ЛИС), которая, при использовании здесь, основывается на скорости и протяженности элиминации фактора 1Х после введения. ЛИС определяется на определенном временном периоде, таком как 12, 18, 24, 36, 48 или 72 ч, или для бесконечности с использованием экстраполяции, основанной на угле наклона кривой. Если здесь не указано иное, АИС определяется для бесконечности (АИСвдИ). АИС также может быть подсчитано на основании дозы. Как со многими другими РК параметрами, определение АИС может быть проведено на одном пациенте или на популяции пациентов, по которой подсчитано среднее. В примере 1 среднее АИС/доза в популяции пациентов было 32,44 МЕ-ч/дл на МЕ/кг и диапазон для отдельных пациентов составлял 21,80-54,30 МЕ-ч/дл на МЕ/кг (см. табл. 13 для средней АИС/доза, основанной на активности). Следовательно, среднее АИС/доза в популяции пациентов может быть около 26-40, около 26, около 27, около 28, около 29, около 30, около 31, около 32, около 33, около 34, около 35, около 36, около 37, около 38, около 39 или около 40 МЕ-ч/для МЕ/кг. См. табл. 14 для АИС/дозы и других АИС параметров, основанных на антигене. Ιη νίνο увеличение концентрации (ГУК) представлено нарастающим увеличением концентрации (К-значение), которое означает наблюдаемый пик активности минус предозовый уровень, разделенные на дозу. ГУК также может быть рассчитано на основе процентов, как описано в примерах. Для ясности, в настоящем изобретении используются единицы (К-значение или МЕ/дл на МЕ/кг по отношению к %). Среднее ГУК можно определить в популяции пациентов, или индивидуальное 1УР можно определить у отдельного пациента. И1ХИс, использованное в впервые проведенном на человеке исследовании, описанном в примере 1, выражало среднее 1УР около 0,93 МЕ/дл на МЕ/кг в популяции пациентов; и 1УК у каждого пациента, которое варьировало от 0,62 до 1,17 МЕ/дл на МЕ/кг (табл. 13). Следовательно, химерный полипептид изобретения выражает среднее 1УК в популяции пациентов 0,851,15 (например, около 0,85, около 0,86, около 0,87, около 0,88, около 0,89, около 0,90, около 0,91, около 0,92, около 0,93, около 0,94, около 0,95, около 0,96, около 0,97, около 0,98, около 0,99, около 1,0, около 1,05, около 1,10, около 1,15) и ГУК у пациента не менее чем около 0,6, около 0,7, 0,8, около 0,9, около 1,0, около 1,1 или около 1,2 МЕ/дл на МЕ/кг.
Скорость клиренса (СЬ) при использовании здесь означает оценку способности организма элиминировать лекарство, и выражается как объем плазмы, свободной от лекарства, по прошествии времени. ИГХИс, использованный в исследовании, описанном в примере 1, демонстрировал средний СЬ около 3,36 мл/ч/кг (см. табл. 13), который в около 2,5 раза ниже, чем СЬ (8,2 мл/ч/кг) полипептида, состоящего из фактора 1Х (ВЕИЕИГХ™); диапазон СЬ значений у отдельных пациентов составлял 1,84-4,58 мл/ч/кг. Следовательно, химерный полипептид изобретения демонстрирует средний СЬ в популяции 3,0-3,72, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7 или 3,72 мл/ч/кг. Для СЬ, основанного на антигене, см. табл. 14. Среднее время выведения (МКТ) при использовании здесь означает измерение среднего времени существования лекарственных молекул в организме. ИГХИс, использованный в исследовании, описанном в примере 1, демонстрировал средний МКТ около 68,05 ч (см. табл. 13); диапазон МКТ значений составлял 53,185,8 ч у отдельных пациентов. Следовательно, химерный полипептид изобретения демонстрирует среднее МКТ в популяции 60-78, около 60, около 62, около 64, около 66, около 68, около 70, около 72, около 74, около 76, или около 78 ч и МКТ у пациента не менее чем около 50, около 55, около 60, около 65, около 70, около 75, около 80, около 85 или около 90 ч. Для МКТ, основанной на антигене, см. табл. 14.
ΐ1/2β или 11/2Ье4а или Вс1а ИЬ, при использовании здесь, означает полупериод, связанный с фазой элиминации, 11/2в=(1п2)/константа скорости элиминации, связанная с терминальной фазой. В исследовании, описанном в примере 1, использованный ИГХИс показывал среднее ί1/2ζ в популяции пациентов, которое составляло около 52,5 ч (см. табл. 13) и диапазон ΐ1/2β значений у отдельных пациентов составлял 47-60 ч. Следовательно, химерный полипептид изобретения выражает среднее ΐ1/2β более чем около 47, около 48, около 49, около 50, около 51, около 52, около 53, около 54, около 55, около 56, около 57, около 58, около 59 или около 60 ч. Для ί1/2β основанного на антигене, см. табл. 14. Минимальный уровень при использовании здесь означает самый низкий уровень активности фактора ГХ в плазме, достигнутый после введения дозы химерного полипептида изобретения или другой молекулы фактора ГХ и до введения следующей дозы, если оно будет. Минимальный уровень в настоящем изобретении используется взаимозаменяемо с пороговой величиной. Базовые уровни фактора ГХ вычитаются из измеренных уровней фактора ГХ для расчета минимального уровня. В некоторых вариантах воплощения минимальный уровень составляет 1-5 или 1-3 МЕ/дл после около 6, около 7, около 8, около 9, около 10, около 11, около 12, около 13 или около 14 дней. В некоторых вариантах воплощения уровень химерного полипептида в плазме достигает среднего минимального уровня не менее чем около 1 МЕ/дл после не менее чем около 6 дней у не менее чем около 70%, не менее чем около 80%, не менее чем около 90% или около 100% по- 10 028067 пуляции пациентов или достигает минимального уровня не менее чем около 1, 2, 3, 4 или 5 МЕ/дл после не менее чем около 6 дней у пациента. В некоторых вариантах воплощения уровень вышеупомянутого химерного полипептида в плазме достигает среднего минимального уровня около 1-5 или 1-3 МЕ/дл. Такой минимальный уровень или средний минимальный уровень может быть достигнут после около 6, около 7, около 8, около 9, около 10, около 11, около 12, около 13, около 14, около 15, около 16, около 17, около 18, около 19, около 20, около 21, около 22, около 23, около 24, около 25, около 26, около 27, около 28, около 29, около 30, около 31, около 32, около 33, около 34, около 35, около 36, около 37, около 38, около 39 или около 40 дней. Объем распределения на стационарной фазе (У88) при использовании здесь обозначает видимое пространство (объем), в котором распределяется лекарство. У88=количество лекарства в теле разделенное на концентрацию в плазме на стационарной фазе. В примере 1 средний У88, обнаруженный в популяции, составлял около 226 мл/кг, и диапазон у пациентов составлял около 145-365 мл/кг (см. табл. 13). Таким образом, средний У88 у популяции пациентов может составлять 200-300, около 200, около 210, около 220, около 230, около 240, около 250, около 260, около 270, около 280, около 290 или около 300 мл/кг. У88 у отдельных пациентов может составлять около 145, около 150, около 160, около 170, около 180, около 190, около 200, около 210, около 220, около 230, около 240, около 250, около 260, около 270, около 280, около 290, около 300, около 310, около 320, около 330, около 340, около 350, около 360 или около 370 мл/кг. У88, основанный на антигене, см. в табл. 14.
Полипептид, пептид и белок используются взаимозаменяемо и относятся к полимерному соединению, содержащему ковалентно связанные аминокислотные остатки.
Полинуклеотид и нуклеиновая кислота используются взаимозаменяемо и относятся к полимерному соединению, содержащему ковалентно связанные нуклеотидные остатки. Полинуклеотиды могут быть ДНК, кДНК, РНК, однонитевыми или двунитевыми векторами, плазмидами, фагами или вирусами. Полинуклеотиды включают указанные в табл. 1, которые кодируют полипептиды табл. 2 (см. табл. 1). Полинуклеотиды также включают фрагменты полинуклеотидов табл. 1, например, те, которые кодируют фрагменты полипептидов из табл. 2, такие как фактор IX, Ее, сигнальную последовательность, пропептид, 6ΗΪ8 и другие фрагменты полипептидов табл. 2. Профилактическое лечение при использовании здесь означает введение фактора IX полипептида в многократных дозах пациенту временными курсами для повышения уровня активности фактора IX в плазме крови пациента. Предпочтительно, возросший уровень достаточен для снижения частоты случаев спонтанного кровотечения или предотвращения кровотечения в случае неожиданного повреждения. Профилактическое лечение уменьшает или предотвращает эпизоды кровотечения, например, те, которые описаны ниже при лечении по необходимости. Профилактическое лечение может быть заданным или может быть индивидуализированным, как обсуждается ниже при интервале дозирования, например, для компенсации вариабельности между пациентами. Пациент при использовании здесь означает человека или не являющееся человеком млекопитающее. Не являющиеся человеком млекопитающие включают мышей, собак, приматов, обезьян, кошек, лошадей, коров, свиней и других домашних животных и мелких животных. Пациенты также включают педиатрических пациентов, являющихся людьми. Педиатрические пациенты, являющиеся людьми, имеют возраст до 20 лет, предпочтительно до 18 лет, до 16 лет, до 15 лет, до 12 лет, до 11 лет, до 6 лет, до 5 лет, до 2 лет и от 2 до 11 лет. Способы изобретения могут практиковаться на пациенте, нуждающемся в контроле или предотвращении кровотечения или эпизодов кровотечения. Такие пациенты включают тех, которые нуждаются в контроле или предотвращении кровотечения при малом кровоизлиянии, гемартрозе, поверхностном мышечном кровоизлиянии, среднем кровоизлиянии, внутримышечном кровоизлиянии или кровоизлиянии в мягкие ткани с расслоением, кровоизлиянии в слизистые, гематурии, сильном кровоизлиянии, глоточном кровоизлиянии, заглоточном кровоизлиянии, забрюшинном кровоизлиянии, кровоизлиянии центральной нервной системы, ушибах, порезах, царапинах, суставном кровоизлиянии, носовом кровотечении, ротовом кровотечении, кровотечении из десен, внутричерепном кровотечении, внутрибрюшинном кровотечении, малом спонтанном кровоизлиянии, кровотечении после серьезной травмы, среднем кожном кровоподтеке или спонтанном кровоизлиянии в суставы, мышцы, внутренние органы либо в мозг. Такие пациенты также включают тех, которые нуждаются в периоперативном уходе, таком как уход при кровотечении, связанном с хирургической операцией или удалением зуба. Терапевтическая доза при использовании здесь означает дозу, посредством которой достигается терапевтическая цель, как описано здесь. Расчет требуемой дозировки полученного из плазмы крови фактора IX (ράΕΙΧ) основывается на эмпирических наблюдениях, что, в среднем, 1 ΜΕ рДРК на 1 кг веса тела повышает активность плазматического фактора IX приблизительно на 1 МЕ/дл (1%). На этой основе требуемая дозировка определяется с использованием следующей формулы:
Требуемые единицы=вес тела (кг)хжелаемое повышение фактора IX (МЕ/дл или % от нормы) х 1 (МЕ/кг на МЕ/дл)
Поскольку ЕКЕс, например, как описано в примерах и на фиг. 1, имеет повышение концентрации такое же, как у ρДЕIX (отличающееся от такового у ΒΕNΕЕIX™), требуемая доза определяется по формуле выше или слегка подгоняется. См. также в табл. 26 особые рекомендованные дозы для различных вариантов лечения по требованию. Для педиатрических пациентов, использующих рДРК, руководство
- 11 028067 по дозировке такое же, как для взрослых. Однако педиатрические пациенты могут иметь более долгое повышение концентрации, и следовательно, дозировку может быть необходимо в соответствии с этим изменять. Терапевтические дозы, которые могут быть использованы в способах изобретения, составляют 10-180, 20-180 или 25-180 МЕ/кг, более определенно, предпочитаемые дозы для 6-10-дневного интервала дозирования являются следующими: около 25-110, около 30-110, около 40-110, около 50-110, около 60110, около 70-110, около 80-110, около 90-110 и около 100-110; около 30-100, около 30-90, около 30-80, около 30-70, около 30-60, около 30-50, около 30-40 МЕ/кг; около 40-110, около 50-100, около 60-90 и около 70-80 МЕ/кг; около 40-50, около 50-60, около 60-70, около 70-80, около 80-90, около 90-100 и около 100-110 МЕ/кг; около 25, около 30, около 35, около 40, около 45, около 50, около 55, около 60, около 65, около 70, около 75, около 80, около 85, около 90, около 95, около 100, около 105 и около 110 МЕ/кг. 6-10-дневный интервал дозирования включает недельный интервал дозирования. Дополнительные терапевтические дозы для 6-10-дневного, например недельного интервала дозирования, включают 20-50, 20100 и 20-180 МЕ/кг, более определенно, предпочитаемые дозы для 6-10-дневного, например недельного, интервала дозирования являются следующими: около 20-110, около 20-100, около 20-90, около 20-80, около 20-70, около 20-60, около 20-50, около 20-40, около 20-30, около 20-40 и около 20 МЕ/кг. См. также примеры 10 и 11. Дозы могут быть ниже чем 20 МЕ/кг, если это эффективно для данного пациента, например, около 10, около 11, около 12, около 13, около 14, около 15, около 16, около 17, около 18 или около 19 МЕ/кг.
Предпочитаемые терапевтические дозы для 9-18-дневного, например, два раза в месяц, интервала дозирования являются следующими: около 50-180, около 60-180, около 70-180, около 80-180, около 90180, около 100-180, около 110-180, около 120-180, около 130-180, около 140-180, около 150-180, около 160-180 и около 170-180 МЕ/кг; около 90-170, около 90-160, около 90-150, около 90-140, около 90-130, около 90-120, около 90-110 и около 90-100 МЕ/кг; около 100-170, около 110-160, около 120-150, и около 130-140 МЕ/кг; около 90-100, около 100-110, около 110-120, около 120-130, около 130-140, около 140150, около 150-160 и около 160-170 МЕ/кг; около 60, около 70, около 80, около 90, около 95, около 100, около 105, около 110, около 115, около 120, около 125, около 130, около 135, около 140, около 145, около 150, около 155, около 160, около 165, около 170, около 175 и около 180 МЕ/кг. См. также примеры 10 и 11.
Предпочитаемые терапевтические дозы составляют 10-50, 15-100, 20-100, 20-50, 50-100, 10, 20, 40, 50 и 100 МЕ/кг.
Терапевтическая доза может составлять около 20-50, около 20-100, около 20-180, 25-110, около 30110, около 40-110, около 50-110, около 60-110, около 70-110, около 80-110, около 90-110, около 100-110, около 30-100, около 30-90, около 30-80, около 30-70, около 30-60, около 30-50, около 30-40 МЕ/кг, около 40-110, около 50-100, около 60-90, около 70-80 МЕ/кг, около 40-50, около 50-60, около 60-70, около 7080, около 80-90, около 90-100, около 100-110 МЕ/кг, около 20, около 25, около 30, около 35, около 40, около 45, около 50, около 55, около 60, около 65, около 70, около 75, около 80, около 85, около 90, около 95, около 100, около 105 и около 110 МЕ/кг. Такие дозы предпочтительны для интервалов дозирования около 6-10, около 7-10, около 7-9, около 7-8, около 8-10, около 9-10, около 6-7, около 8-9, около 6, около 7, около 8, около 9 и около 10 дней и один раз в неделю.
Терапевтическая доза может составлять около 90-180, около 100-180, около 110-180, около 120-180, около 130-180, около 140-180, около 150-180, около 160-180 и около 170-180 МЕ/кг. Доза может составлять около 90-170, около 90-160, около 90-150, около 90-140, около 90-130, около 90-120, около 90-110 и около 90-100 МЕ/кг. Доза может составлять около 100-170, около 110-160, около 120-150 и около 130140 МЕ/кг. Доза может составлять около 90-100, около 100-110, около 110-120, около 120-130, около 130140, около 140-150, около 150-160 и около 160-170 МЕ/кг. Доза может составлять около 90, около 95, около 100, около 105, около 110, около 115, около 120, около 125, около 130, около 135, около 140, около 145, около 150, около 155, около 160, около 165, около 170, около 175 и около 180 МЕ/кг. Такие дозы предпочтительны для интервала дозирования около 9-18, около 9-17, около 9-16, около 9-15, около 9-14, около 9-13, около 9-12, около 9-11, около 9-10, около 10-18, около 11-18, около 12-18, около 13-18, около 14-18, около 15-18, около 16-18, около 17-18, около 10-11, около 11-12, около 12-13, около 13-14, около 14-15, около 15-16 и около 16-17 дней, около 9, около 10, около 11, около 12, около 13, около 14, около 15, около 16, около 17 и около 18 дней, один раз в месяц и два раза в месяц (каждые две недели).
Предпочитаемая терапевтическая доза и интервалы дозирования являются следующими: 20 МЕ/кг один раз в неделю, 40 МЕ/кг каждые 10 дней и 100 МЕ/кг каждые две недели (дважды в месяц). Дополнительные комбинации дозы и дозового интервала включают: дозу не менее чем около 50 МЕ/кг и интервал дозирования не менее чем около 7 дней, дозу не менее чем около 100 МЕ/кг и интервал дозирования не менее чем около 9 дней, дозу не менее чем около 100 МЕ/кг и интервал дозирования не менее чем около 12 дней, дозу не менее чем около 150 МЕ/кг и интервал дозирования не менее чем около 14 дней, 20-50 или 20-100 МЕ/кг и указанный интервал дозирования представляет собой один раз в неделю, доза 20-50 МЕ/кг и интервал дозирования 7 дней, доза 50-100 МЕ/кг и интервал дозирования 10-14 дней или доза 100-150 МЕ/кг и интервал дозирования 14-16 дней. Предпочитаемые комбинации интервала дозирования и дозы также включают 10-50 МЕ/кг для 7 дней, 15-100 МЕ/кг для 10-13 дней, 50-150 МЕ/кг для
- 12 028067
14-15 дней, 10-30 МЕ/кг для 7 дней, 15-50 МЕ/кг для 10 дней, 20-70 МЕ/кг для 11 дней, 25-85 МЕ/кг для 12 дней, от 30 до 100 МЕ/кг для 13 дней, от 40 до 125 МЕ/кг для 14 дней и 50-150 МЕ/кг для 15 дней.
Вариант при использовании здесь означает полинуклеотид или полипептид, отличный от исходного полинуклеотида или полипептида, но сохраняющий его основные свойства, например, коагулирующую активность фактора IX или Рс (РсКп-связывающую) активность. Обычно варианты в целом сходны и на многих участках идентичны исходным полинуклеотидам или полипептидам. Варианты включают фрагменты полинуклеотидов и полипептидов, делеции, вставки и модифицированные версии исходных полипептидов.
Вариантные полинуклеотиды могут содержать или же, альтернативно, состоять из последовательности нуклеотидов, не менее чем на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичной, например, кодирующей последовательности нуклеотидов в §Еф ГО N0: 1 или 3 (участок фактора IX, участок Рс, по отдельности или вместе) или соответствующей ей комплементарной нити, последовательности нуклеотидов, кодирующей известные мутантные и рекомбинантные фактор IX или Рс, как то раскрытые в процитированных здесь публикациях и патентах, или соответствующей ей комплементарной нити, последовательности нуклеотидов, кодирующей полипептид §Еф ГО N0: 2 или 4 (участок фактора IX, участок Рс, по отдельности или вместе), и/или полинуклеотидным фрагментам любой из этих нуклеиновых кислот (например, их фрагментам, описанным здесь). Полинуклеотиды, которые гибридизируются с этими молекулами нуклеиновых кислот при строгих условиях гибридизации или в менее строгих условиях, также включаются как варианты, равно как и полипептиды, кодируемые этими полинуклеотидами в случае их функциональности.
Вариантные полипептиды могут содержать, или, альтернативно, состоять из последовательности аминокислот, не менее чем на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичной, например, последовательности полипептидов, показанной в §Еф ГО N0: 2 или 4 (участок фактора IX, участок Рс, по отдельности или вместе), и/или полипептидным фрагментам любого из этих полипептидов (например, описанным здесь фрагментам).
Под нуклеиновой кислотой, содержащей последовательность нуклеотидов, идентичную эталонной последовательности нуклеотидов не менее чем, например, на 95%, подразумевается, что последовательность нуклеотидов в нуклеиновой кислоте идентична эталонной последовательности, за тем исключением, что эта последовательность нуклеотидов может включать до пяти точковых мутаций на каждые 100 нуклеотидов эталонной последовательности нуклеотидов. Другими словами, чтобы получить нуклеиновую кислоту, содержащую последовательность нуклеотидов, не менее чем на 95% идентичную эталонной последовательности нуклеотидов, до 5% нуклеотидов в эталонной последовательности могут быть удалены или заменены другими нуклеотидами, либо нуклеотиды в количестве до 5% от общего числа нуклеотидов в эталонной последовательности могут быть вставлены в эталонную последовательность. Запрашиваемой последовательностью может быть, например, целая последовательность, показанная в §Еф ГО N0: 1 или 3, ОКЕ (открытая рамка считывания) или любой фрагмент, определенный, как описанный здесь.
На практике, является ли любая конкретная молекула нуклеиновой кислоты или полипептида не менее чем на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичной последовательности нуклеотидов или полипептиду настоящего изобретения, можно установить конвенциональным путем с использованием известных компьютерных программ. Предпочтительный способ установления лучшего общего совпадения между запрашиваемой последовательностью (эталонной или исходной последовательностью) и исследуемой последовательностью, также известный как глобальное выравнивание последовательностей, может быть выбран при помощи компьютерной программы РЛЗТОВ. основанной на алгоритме ВтиИад е! а1. (Сотр. Арр. Вю8И. (1990), 6:237-245), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. В выравнивании последовательностей как запрашиваемая, так и исследуемая последовательности являются последовательностями ДНК. Последовательность РНК может быть сравнена путем конвертации и в Т. Результат вышеозначенного глобального выравнивания последовательностей дается в процентном соотношении. Предпочтительные параметры, применяемые в выравнивании последовательностей ДНК при помощи РЛЗТЭВ для вычисления процентного соотношения: матрица=единичная, ккратный=4, поправочный коэффициент за несогласованней, поправочный коэффициент за сшивание=30, длина группы рандомизации=0, порог=1, поправочный коэффициент за гэп=5, поправочный коэффициент размера гэпа 0,05, размер окна=500 либо длине исследуемой последовательности нуклеотидов, если она короче.
Если исследуемая последовательность короче запрашиваемой последовательности вследствие делеций 5' или 3', но не вследствие внутренних делеций, результаты должны быть откорректированы вручную. Это потому, что программа РЛЗТЭВ не учитывает усечения 5' и 3' исследуемой последовательности при вычислении процентного соотношения. Для исследуемых последовательностей, усеченных на окончаниях 5' или 3' относительно запрашиваемой последовательности, процентное соотношение корректируется путем вычисления количества оснований в запрашиваемой последовательности, которые являются 5' и 3' в исследуемой последовательности, и которые не совпадают/выровнены, в процентах от общего числа оснований в запрашиваемой последовательности. Совпадает/выровнен ли нуклеотид, оп- 13 028067 ределяется по результатам выравнивания последовательностей ΡΆδΤΌΒ. Этот процент затем вычитается из процентного соотношения, вычисленного вышеупомянутой программой ΡΆδΤΌΒ с использованием установленных параметров, для получения итогового значения процентного соотношения. Это откорректированное значение и используется для целей настоящего изобретения. Только основания, расположенные вне оснований 5' и 3' исследуемой последовательности, согласно показаниям выравнивания ΡΆδΤΌ, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой последовательностью, учитываются в целях ручной правки значения процентного соотношения. Например, исследуемая последовательность из 90 оснований выровнена с запрашиваемой последовательностью из 100 оснований для определения процентного соотношения. Делеции присутствуют на окончании 5' исследуемой последовательности, и следовательно, выравнивание ΡΆδΤΌΒ не показывает совпадения/выравнивания первых 10 оснований на окончании 5'. Эти 10 непарных оснований представляют собой 10% последовательности (число несовпавших оснований на окончаниях 5' и З'/общее число оснований в запрашиваемой последовательности), следовательно, 10% вычитаются из значения процентного соотношения, вычисленного программой ΡΆδΤΌΒ. Если остальные 90 оснований совпадают идеально, итоговое процентное соотношение будет 90%. В другом примере исследуемая последовательность из 90 оснований сравнивается с запрашиваемой последовательностью из 100 оснований. На этот раз делеции являются внутренними делециями, так что отсутствуют основания на 5' или 3' исследуемой последовательности, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой. В таком случае, процентное соотношение, вычисленное ΡΆδΤΌΒ, вручную не корректируется. Только для оснований 5' и 3' исследуемой последовательности, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой последовательностью, выполняется ручная коррекция. Никакие другие ручные коррекции не требуются для целей настоящего изобретения.
Под полипептидом, содержащим последовательность аминокислот, идентичную запрашиваемой последовательности аминокислот настоящего изобретения не менее чем, например, на 95%, подразумевается, что последовательность аминокислот исследуемого полипептида идентична запрашиваемой последовательности, за тем исключением, что исследуемая последовательность полипептидов может включать до пяти изменений аминокислот на каждые 100 аминокислот запрашиваемой последовательности аминокислот. Другими словами, чтобы получить полипептид, содержащий последовательность аминокислот, не менее чем на 95% идентичную запрашиваемой последовательности аминокислот, до 5% аминокислотных остатков в исследуемой последовательности могут быть вставлены, удалены или заменены другими аминокислотами. Такие изменения в эталонной последовательности могут присутствовать на амино- или карбокси-терминальных позициях эталонной последовательности аминокислот либо где угодно между этими терминальными позициями, поодиночке среди остатков в эталонной последовательности или в виде одной или более слитных групп в пределах эталонной последовательности. На практике, является ли любой конкретный полипептид не менее чем на 85, 90, 95, 96, 97, 98 или 99% идентичным, например, последовательности аминокислот в δΕΟ ΙΌ N0: 2 (участок фактора IX, участок Рс, по отдельности или вместе) или 4, либо известной полипептидной последовательности фактора IX или Рс, можно установить конвенциональным путем с использованием известных компьютерных программ. Предпочтительный способ установления лучшего общего совпадения между запрашиваемой последовательностью (эталонной или исходной последовательностью) и исследуемой последовательностью, также известный как глобальное выравнивание последовательностей, может быть выбран при помощи компьютерной программы ΡΆδΤΌΒ, основанной на алгоритме Βπιΐΐαβ с1 а1. (Сотр. Арр. Βίοκα. (1990), 6:237-245), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. В выравнивании последовательностей как запрашиваемая, так и исследуемая последовательности являются последовательностями нуклеотидов, либо как запрашиваемая, так и исследуемая последовательности являются последовательностями аминокислот. Результат вышеозначенного глобального выравнивания последовательностей дается в процентном соотношении. Предпочтительные параметры, применяемые в выравнивании аминокислот при помощи ΡΆδΤΌΒ для вычисления процентного соотношения: матрица=РАМ 0, к-кратный=2, поправочный коэффициент за несогласование=1, поправочный коэффициент за сшивание=20, длина группы рандомизации=0, порог=1, размер окна=длина последовательности, поправочный коэффициент за гэп=5, поправочный коэффициент размера гэпа 0,05, размер окна=500 либо длине исследуемой последовательности нуклеотидов, если она короче. Если исследуемая последовательность короче запрашиваемой последовательности вследствие Ν- или С-концевых делеций, но не вследствие внутренних делеций, результаты должны быть откорректированы вручную. Это потому, что программа ΡΆδΤΌΒ не учитывает Ν- и С-концевые усечения исследуемой последовательности при вычислении итогового процентного соотношения. Для исследуемых последовательностей, усеченных на Ν- и С-концах относительно запрашиваемой последовательности, процентное соотношение корректируется путем вычисления количества остатков в запрашиваемой последовательности, которые являются Ν- и Сконцевыми в исследуемой последовательности, и которые не совпадают/выровнены с соответствующими исследуемыми остатками, в процентах от общего числа оснований в запрашиваемой последовательности. Совпадает/выровнен ли остаток, определяется по результатам выравнивания последовательностей ΡΆδΤΌΒ. Этот процент затем вычитается из процентного соотношения, вычисленного вышеупомянутой программой ΡΆδΤΌΒ с использованием установленных параметров, для получения итогового значения
- 14 028067 процентного соотношения. Это откорректированное значение и используется для целей настоящего изобретения. Только остатки на Ν- и С-концах исследуемой последовательности, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой последовательностью, учитываются в целях ручной правки значения процентного соотношения. Иными словами, только позиции остатков в запрашиваемой последовательности, расположенные за пределами наиболее удаленных Ν- и С-терминальных остатков исследуемой последовательности.
Например, исследуемая последовательность из 90 аминокислотных остатков выровнена с запрашиваемой последовательностью из 100 аминокислотных остатков для определения процентного соотношения. Делеции присутствуют на Ν-конце исследуемой последовательности, и следовательно, выравнивание ΡΑ8ΤΌΒ не показывает совпадения/выравнивания первых 10 остатков на Ν-конце. Эти 10 непарных остатков представляют собой 10% последовательности (число не совпавших остатков на Ν- и Сконцах/общее число остатков в запрашиваемой последовательности), следовательно, 10% вычитаются из значения процентного соотношения, вычисленного программой ΡΑ8ΤΌΒ. Если остальные 90 остатков совпадают идеально, итоговое процентное соотношение будет 90%. В другом примере, исследуемая последовательность из 90 остатков сравнивается с запрашиваемой последовательностью из 100 остатков. На этот раз делеции являются внутренними делециями, так что отсутствуют основания на Ν- и С-концах исследуемой последовательности, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой. В таком случае, процентное соотношение, вычисленное ΡΑ8ΤΌΒ, вручную не корректируется. Только для позиций остатков, расположенных за пределами Ν- и С-концов исследуемой последовательности, согласно показаниям выравнивания ΡΑ8ΤΌΒ, которые не совпадают/выровнены с запрашиваемой последовательностью, выполняется ручная коррекция. Никакие другие ручные коррекции не требуются для целей настоящего изобретения.
Варианты полинуклеотида могут содержать изменения в кодирующих участках, некодирующих участках или и там, и там. Наиболее предпочтительны варианты полинуклеотида, содержащие изменения, которые производят молчащие замены, вставки или делеции, но не изменяют свойства и активность кодируемого полипептида. Предпочтительны варианты нуклеотида, произведенные посредством молчащей замены вследствие дегенерации генетического кода. Помимо того, предпочтительны варианты, в которых 5-10, 1-5 или 1-2 аминокислоты заменены, удалены или вставлены в любом сочетании. Варианты полинуклеотида могут быть произведены с различными целями, например, для оптимизации экспрессии кодонов в конкретном носителе (заменить кодоны в человеческой иРНК на предпочтительные для бактериального носителя, такого как Е.соЬ).
Природные варианты называются аллельные варианты и относятся к одной из нескольких различных форм гена, занимающих данный локус на хромосоме организма (Сепек II, Ьедап, В., ей., 1оЬп \УПеу & 8опк, №\ν Уогк (1985)). Эти аллельные варианты могут различаться на уровне полинуклеотидов и/или на уровне полипептидов и включаются в настоящее изобретение. Альтернативно, неприродные варианты могут быть произведены при помощи техник мутагенеза или прямым синтезом.
Используя известные способы белковой инженерии и рекомбинантной ДНК-технологии, можно производить варианты с целью улучшить или изменить характеристики полипептидов. Например, одна или более аминокислот могут быть удалены с Ν-конца или С-конца выделенного белка без значительных потерь в биологической функции. Авторы Коп е! а1., I. Βώΐ. СЬет. 268: 2984-2988 (1993), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки, отмечали, что варианты белка КСР сохраняли гепарин-связывающую активность даже после удаления 3, 8 или 27 аминотерминальных аминокислотных остатков. Подобным же образом, гамма-интерферон демонстрировал повышенную до 10 раз активность после удаления 8-10 аминокислотных остатков с карбокси-конца этого белка (ИоЬеЬ е! а1., I. 7:199-216 (1988), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки).
Более того, существует достаточное количество данных, которые демонстрируют, что варианты нередко сохраняют биологическую активность, подобную активности природного белка. Например, Сау1е и сотрудники (I. Βωΐ. СЬет. 268:22105-22111 (1993), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки) провели расширенный мутационный анализ человеческого цитокина ГЕ-1а. Они использовали неспецифический мутагенез для генерации более 3,500 независимых мутантов ГЕ-1а, которые в среднем содержали по 2,5 изменения аминокислот на вариант по всей длине молекулы. Множественные мутации были рассмотрены на каждой из возможных аминокислотных позиций. Исследователи обнаружили, что большая часть молекулы может быть изменена без особого влияния на связывающую или биологическую активность) (см. аЬз1гас1). В действительности, только 23 уникальные последовательности аминокислот из более 3,500 исследованных последовательностей нуклеотидов производили белок, значительно отличавшийся по своей активности от дикого типа. Как указано выше, варианты полипептидов включают модифицированные полипептиды. Модификации включают ацетилирование, ацилирование, АДФ-рибозилирование, амидирование, ковалентное присоединение флавина, ковалентное присоединение гемовой группы, ковалентное присоединение нуклеотида или производной нуклеотида, ковалентное присоединение липида или производной липида, ковалентное присоединение фосфотидилинозитола, перекрёстное сшивание, циклизацию, формирование дисульфидных связей, демети- 15 028067 лирование, формирование ковалентных сшивок, формирование цистеина, формирование пироглютамата, формилирование, гамма-карбоксилирование, гликозилирование, формирование гликозилфосфатидилинозитола, гидроксилирование, йодирование, метилирование, миристиолирование, окисление, пегилирование, протеолитический процессинг, фосфорилирование, пренилирование, рацемизацию, селеноилирование, сульфатирование, тРНК-опосредованная вставка аминокислот в белки, как то аргинилирование и убиквитинирование.
Термин около применяется здесь в значении приблизительно, округленно, примерно или в районе. Когда термин около используется в сочетании с областью числовых значений, он модифицирует эту область путем расширения ее пределов выше и ниже указанных числовых значений. В целом термин около используется здесь для модификации числового значения на величину в 10%, как вверх, так и вниз (больше или меньше).
Теперь, когда авторы описали настоящее изобретение детально, все то же можно полнее уяснить посредством отсылки к нижеследующим примерам, которые включены сюда только в целях иллюстрации и не ограничивают это изобретение. Все приведенные здесь патенты и публикации включены полностью посредством ссылки.
Пример 1.
Исследование, впервые поставленное на человеке, было открытым, с эскалацией дозы, фаза 1/2 исследованием для определения безопасности, переносимости и фармакокинетических (ФК) параметров ΡΚΡο (рекомбинантный гибридный белок человеческого коагуляции фактора 1Х). ΡIXΡс представляет собой рекомбинантный гибридный белок, содержащий человеческий свертывания фактор 1Х, соединенный с Ρс доменом из человеческого Ι§01. Гибридный белок экспрессируется в человеческих эмбриональных почечных клетках (ΗΕΚ 293). См. пример 3.
ΡIXΡс разработан для контроля и предотвращения геморрагических случаев у пациентов с гемофилией В (врожденный дефицит фактора 1Х или болезнь Кристмаса), включая контроль и предотвращение кровотечения при хирургических вмешательствах.
ΡIXΡс представляет собой рекомбинантный гибридный белок, содержащий коагуляции фактора 1Х Ж1Х) и Ρс домена человеческого антитела (Ι§01 изотип). Молекула ΡΚΡο представляет собой гетеродимер с одной цепью ΡΚΡο (ΡIXΡс-8с) и одной цепью Ρс (Ρ^8^, связанными вместе посредством двух дисульфидных связей в петлевом участке Гс. См. фиг. 1 и табл. 2.
γΡΚΡο лекарственный продукт представляет собой прозрачный бесцветный раствор, предназначенный для внутривенного (ВВ) введения. тИХТс поставляется как 1000 ΜΕ на объем 5 мл в 10-мл ампуле одноразового использования. Лекарственный Продукт упаковывается в И8Р тип I стеклянные ампулы с бромбутиловыми пробками и отрывными простыми алюминиевыми дополнительными укупорочными средствами. гПХГс лекарственный продукт содержит 200 МЕ/мл в 10мМ натрий-фосфатном буфере рН 7.0 с добавлением 145 мМ ИаС1 и 0.1% полисорбата 20. Раствор гПХГс не следует растворять.
Дизайн исследования. Пациенты общим числом 14, ранее подвергавшиеся лечению, с тяжелой гемофилией В, были включены в исследование и обработаны ΡIXΡс путем внутривенного (ВВ) вливания в течение приблизительно 10 мин. В исследовании оценивалось шесть дозовых уровней, 1; 5; 12,5; 25; 50 и 100 МЕ/кг. Один пациент на дозовый уровень был включен в исследование дозовых уровней 1; 5; 12,5 и 25 МЕ/кг, и по меньшей мере три подлежащих оценке пациента на дозовый уровень были включены в исследование 50 и 100 МЕ/кг.
После скрининга (назначенного в течение 14 дней ΡIXΡс дозы) начался период лечения пациентов. Период лечения для каждого дозового уровня включал одну дозу ΡIXΡс (день 1) до завершения 72часового периода наблюдения безопасности (3 дня) для дозовых уровней 1 и 5 МЕ/кг или до момента взятия последней пробы РК для пациентов в случае дозовых уровней от 12,5 до 100 МЕ/кг (приблизительно 10 дней). Пациенты, обработанные 1; 5; 12,5 или 25 МЕ/кг, были включены в исследование и обработаны последовательным образом, начиная с 1 МЕ/кг. Пациенты, получившие 50 МЕ/кг, не получали больше лечения в тот же день, и по меньшей мере один день разделял дозирование. После лечения пациентов 50 МЕ/кг, начиналось лечение пациентов 100 МЕ/кг.
Период после лечения был 30-дневным периодом наблюдения за безопасностью, начинавшимся со дня, когда пациент получал дозу ΡIXΡс, и частично совпадавшим с периодом лечения с того момента, когда пациенты подвергались требуемым оценочным исследованиям, таким как взятие проб РК, в течение этого времени.
У пациентов, которым были назначены дозовые уровни от 12,5 до 100 МЕ/кг, брались образцы крови для оценки ΡΚ активности и ΡIXΡс концентрации. Образцы крови брались непосредственно перед введением ΡΚΡ^ через 15 мин после конца вливания; и на 1, 3, 6, 9, 24, 48, 72, 96, 120, 168 и 240 ч после конца вливания или до того как были достигнуты базовые уровни ΡΚ. Если у пациента продолжали наблюдаться уровни ΡΚ выше базового на 240-часовой временной точке (день 11 исследования), образцы брались на 288 ч (день 13 исследования) и снова на 336 ч (день 15 исследования), если уровень ΡΚ был выше базового на день 13 исследования.
Пациент 10 получил ΒΕΝΕΡΚ™ лечение кровотечения перед назначенным взятием ΡIXΡс образца на 216 ч после дозирования. Следовательно, ΡIXΡс активность и данные по антигену на 216 ч и на после- 16 028067 дующих временных точках были исключены из анализа. Не произошло дополнительных отклонений, которые, как считается, повлияли бы на предварительные результаты анализа в этом исследовании.
Для фактора 1Х антигена фармакокинетические анализы были проведены на отдельном пациенте, наблюдалась концентрация Р1ХРс в соответствии с временными данными после ВВ вливания Р1ХРс. Первичный анализ был проведен с использованием модель-зависимой методологии. Данные по концентрации Р1ХРс были компьютерным образом обработаны для двухкомпартментной открытой модели с элиминацией из центрального компартмента с использованием определенных пользователем оценок первичного параметра для расчета значений исходного параметра. νίηΝοηΙίη оцененные константы микроскопической степени были выработаны и данные по Р1ХРс концентрации были оценены по функции 1/(У-11' * У-1'1'). Наблюдаемые данные для двух пациентов (например, пациенты 5 и 6) были недостаточно описаны двухкомпартментой моделью. Поэтому для этих двух пациентов был проведен модельнезависимый анализ с использованием νίηΝοηΙίη некомпарментного анализа ВВ-вливания модели входа (линейное правило трапеций для АИС расчета). Для некомпарментного анализа полупериод был рассчитан по бета фазе с использованием точек данных, которые описывают терминальное логарифмическилинейное снижение регрессии. Минимум три точки использовались для описания фазы элиминации. Это произошло приблизительно между 4 и 14 днями. Для РК анализа антигена были использованы мг/кг дозовые эквиваленты. Эти значения были определены на основе специфической активности Р1ХРс 60,2 МЕ/мг. Фактические временные точки взятия проб, дозы и продолжительности вливания были использованы для расчетов. Номинальные временные точки взятия проб и дозы были использованы для создания таблиц и фигур концентрация-время. Представлены индивидуальные и средние РК параметры и описательная статистика. Формальный статистический анализ не был проведен, поскольку дозовый диапазон и число пациентов в каждой когорте были слишком маленькими для пердметного анализа.
Для активности фактора 1Х способ вычитания базового уровня был примерен к активности по сравнению с временным профилем в соответствии с деревом решений вычитания базового уровня (фиг. 4). Значения активности < 1% были определены при 1 МЕ/дл для затухания к базовому уровню. Предозовые временные точки считались нулем для целей расчетов. Кроме того, скорректированные по базовому уровню данные активности были округлены по временным точкам, что представляло возвращение к базовым уровням. Фармакокинетический анализ был проведен на Р1Х-активности с вычетом базового уровня по сравнению с временными точками, полученными после введения Р1ХРс путем ВВ вливания. Модель-зависимая оценка была использована для анализа ВВ-вливания дозовых групп. Данные с вычетом базового уровня были компьютерным образом обработаны для двухкомпартментной открытой модели с элиминацией из центрального компартмента с использованием νίηΝοηΙίη-определенных границ параметров для расчета значений исходного параметра. νίηΝοηΙίη оцененные константы микроскопической степени были выработаны, и данные по Р1ХРс концентрации были оценены по функции 1/(У-11' * У-1'1'). Фактические временные точки взятия проб, дозы и продолжительности вливания были использованы для расчетов. Номинальные временные точки взятия проб и дозы были использованы для создания таблиц и фигур концентрация-время.
Если не имелось фактических данных по ним, активность на 168 ч после дозирования (С168) и время при 1 МЕ/дл выше базового уровня (ТВЬР1) гР1ХРс были получены с использованием νίηΝοηΙίη произведенных констант микроскопической степени для моделирования уровня активности Р1ХРс по сравнению с временными данными. Индивидуальные и средние РК параметры и описательная статистика представлены в этом примере. Формальный статистический анализ не был проведен, поскольку дозовый диапазон и число пациентов в каждой когорте были слишком маленькими для предметного анализа.
Результаты фармакокинетики Р1ХРс антигена показали, что концентрации Р1ХРс в плазме крови резко возрастали после быстрого ВВ вливания Р1ХРс, со средними (±δΌ) Стах значениями 1670 (η=1), 2730 (η=1), 7510±2480 и 15400±3960 нг/мл для 12,5; 25; 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней, соответственно, и были достигнуты в течение первого получаса для всех пациентов. Все Р1ХРсобработанные пациенты имели дозозависимое возрастание системного Р1ХРс экспонирования в плазме (как оценивалось по Стах и АиС1нР). Хотя и ограниченное одним оцененным пациентом при 12,5 и 25 МЕ/кг номинальной дозе, наблюдаемое увеличение как Стах, так и АиСвдР было достаточно пропорционально дозе в оцененном дозовом диапазоне (табл. 3 показывает среднюю Р1ХРс антигена концентрацию для отдельных пациентов и групп в сопоставлении с временными данными; рассортировано по номинальной дозе, фактической дозе, длительности вливания и номеру пациента; табл. 4 показывает средние Р1ХРс антигена РК суммарные данные, отдельных пациентов и групповые, рассортированные по номинальной дозе, фактической дозе, мг/кг эквивалентной дозе и номеру пациента, показывает средние Р1ХРс антигена РК суммарные данные, отдельных пациентов и групповые, рассортированные по номинальной дозе, фактической дозе, мг/кг эквивалентной дозе и номеру пациента, и см. табл. 11).
Концентрации Р1ХРс в плазме крови снижались по биэкспоненте после короткого ВВ вливания. Периоды полувыведения как значений распределения (альфа), так и элиминации (бета), по видимости, являлись дозонезависимыми в интервале доз, оцененных по периодам полувыведения альфа и бета у отдельного пациента в интервале от 9,79 до 21,2 ч и от 71,0 до 140 ч соответственно. Средние периоды по- 17 028067 лувыведения альфа (+8Ό) для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 13,1+4,77 и 12,1+2,33 ч соответственно. Средние периоды полувыведения бета (+8Ό) для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 110±26,5 и 95,8±11,1 ч соответственно. Кроме того, были определены первичные значения параметра РК для С1, Укк и МКГ и в целом все, по видимости, являлись дозонезависимыми в интервале получивших оценку доз. Как показано, эта оценка ограничена данными по одному пациенту на 12,5 и 25 МЕ/кг номинальных дозовых уровней (табл. 12 и фиг. 2, 7 и 8).
Кроме того, средние С1 значения составляли 2,28+0,374 и 2,11+0,464 мл/ч/кг для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней соответственно. Средние Укк значения составляли 259+78,5 и 238+52,2 мл/кг для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней соответственно. Кроме того, средние МКТ значения составляли 112+21,5 и 114+17,1 ч для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней.
Результаты для скорректированной по базовому уровню фармакокинетической активности ΡΙΧΡο показали, что ΡΙΧΡο активность резко возросла после короткого ВВ вливания ΡΙΧΡο, со средними (+8Ό) модель-прогнозируемыми Стах значениями 11,9 (η=1), 19,9 (η=1), 41,6+8,97 и 98,2+8,21 МЕ/дл для 12,5, 25, 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней, соответственно, и была достигнута в течение первого получаса для всех пациентов (в табл. 5 показана средняя скорректированная по базовому уровню ΡΙΧΡο активность в сопоставлении с временными данными; распределены по номинальной дозе, фактической дозе, продолжительности вливания и номеру пациента. В табл. 6 показаны РК суммарные данные средней ΡΙΧΡο активности отдельных пациентов и группы; распределены по номинальной дозе, фактической дозе, мг/кг эквивалентной дозе и номеру пациента).
Все ΡIXΡс-обработанные пациенты имели дозозависимое возрастание ΡΙΧ активности (по сравнению с базовым ответом перед дозой). Хотя ограниченное тем, что оценивался только один пациент на номинальных дозовых уровнях 12,5 и 25 МЕ/кг, наблюдаемое возрастание как Стах, так и АИС^ было достаточно пропорционально дозе внутри оцениваемого дозового диапазона (табл. 6, 9 и 13 и фиг. 3 и 5).
После окончания вливания снижение скорректированной по базовому уровню ΡΙΧ активности демонстрировало биэкспоненциальный спад; характеризовалось быстрой фазой распределения (альфа), за которой следовала линейная логарифмическая фаза элиминации (бета). Во время альфа-фазы степень уменьшения ΡΙΧΡο активности варьировала со значениями полупериода альфа у отдельных пациентов от 0,140 до 16,6 ч. Видимое дозозависимое возрастание средних значений полупериода альфа было сбито у одного пациента при 12,5 и 25 МЕ/кг номинальных дозовых уровнях. Напротив, значения полупериода элиминации (бета), по-видимому, являются дозонезависимыми при дозовом диапазоне со значениями бета полупериода у отдельных пациентов в диапазоне от 42,1 до 67,4 ч при дозовом диапазоне от 25 до 100 МЕ/кг. Хотя получивший оценку и описанный, полупериод элиминации у пациента 1, получившего лечение 12,5 МЕ/кг τΡΙΧΡο, не вошел в суммарную оценку из-за того, что уровни ΡΙΧ у этого пациента детектировались только в течение периода до 96 ч из-за укороченной терминальной фазы и способствовали недооценке терминального полупериода элиминации. Средние периоды полувыведения бета (+8Ό) для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 52,1+10,4 и 52,5+10,1 ч, соответственно, и 52,5+9,2 (диапазон 40-67,4) ч для комбинированных 25, 50 и 100 МЕ/кг номинальных доз (табл. 6, 8 и 13).
Кроме того, были определены первичные значения параметра РК для С1, VI, Укк и МКТ и в целом все, по-видимому, были дозонезависимыми в оцененном диапазоне доз.
Кроме того, средние значения С1 составляли 3,77+1,12 и 2,89+0,615 мл/ч/кг для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней, соответственно, и 3,36+0,928 мл/ч/кг для комбинированных 25, 50 и 100 МЕ/кг номинальных доз (табл. 6, 8 и 13).
Средние значения νκκ составляли 264+77,6 и 179+31,1 мл/кг для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней, соответственно, и 226+69,8 мл/кг для комбинированных 25, 50, и 100 МЕ/кг номинальных доз (табл. 6, 8 и 13). Кроме того, средние значения МКТ составляли 71,7+13,0 и 62,8+8,82 ч для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней, соответственно, и 68,05+11,16 ч для комбинированных 25, 50 и 100 МЕ/кг номинальных доз (табл. 6, 8 и 13).
В дополнение к первичным РК параметрам, вторичные РК параметры (например, С168, К-значения, ΙνΚ и т.д.) были определены для оценки ΡΙΧΡο продолжительности эффекта. Как ожидалось, наблюдалось дозозависимое возрастание С168, ТВЬР1, ТВЬР3 и ТВЬР5 значений. Напротив, К-значения и ΙνΚ значения, по видимости, были дозонезависимыми в оцененном диапазоне доз. В полном дозовом диапазоне модель-прогнозируемые и наблюдаемые К-значения отдельных пациентов находились в диапазоне от 0,61 до 1,02 и от 0,62 до 1,17 МЕ/дл на МЕ/кг соответственно. Средние модель-прогнозируемые Кзначения для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 0,76 и 0,90 МЕ/дл на МЕ/кг, соответственно, и 0,821+0,1387 (диапазон 0,61-1,02) МЕ/дл на 1 МЕ/кг для комбинированных 25, 50 и 100 МЕ/кг номинальных доз. Средние модель-прогнозируемые ΙνΚ значения для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 34,5 и 35,1% соответственно. Средние наблюдаемые К-значения для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 0,86 и 1,02 МЕ/дл на МЕ/кг, соответственно, и 0,926+0,1787 (диапазон 0,97-1,17) МЕ/дл на 1 МЕ/кг для комбинированных 25, 50 и 100 МЕ/кг номи- 18 028067 нальных доз. Средние наблюдаемые ΐνκ значения для 50 и 100 МЕ/кг номинальных дозовых уровней составляли 39,2 и 39,8% соответственно (табл. 6, 7, 8 и 13). Табл. 7А-7В шоу7 показывает вторичные РК суммарные данные активности Р1ХРс у отдельных пациентов и групповое среднее; сортировано по номинальной дозе, фактической дозе и номеру пациента.
Каждый 1 МЕ/кг влитого гР1ХРс повышал активность Р1Х в плазме крови на 0,93±0,18 МЕ/дл в среднем, и это увеличение концентрации (К значение) показывало слабую положительную корреляцию с весом тела (К2=0,336, р=0,048) (фиг. 23). Фармакокинетические оценки Р1ХРс активности согласовывались с оценками гР1ХРс антигена (например, сравните табл. 13 и 14). Кроме того, наблюдалась превосходная корреляция между активностью гР1ХРс и уровнями антигена, показывающая сохранение активности гР1ХРс ίη νίνο (фиг. 9). Кроме того, по сравнению с накопленными данными по ВЕ№Р1Х™ (\Ууе11т)„ гР1ХРс демонстрировал (табл. 8) следующее:
дозовая линейность от 25-100 МЕ/кг;
3-кратное возрастание 11/2Ьега;
3-кратное возрастание среднего времени удержания;
24% повышенное увеличение концентрации; в 2,5 раза пониженный клиренс.
Р1ХРс представляет собой рекомбинантный гибридный белок, состоящий из Р1Х, прикрепленного к Рс домену человеческого 1§О1. Р1ХРс разработан как версия Р1Х с продленным действием. Доклинические исследования с Р1ХРс показали удлинение периода полувыведения активности Р1Х по сравнению с ВЕ№Р1Х™, имеющимся в продаже рекомбинантным Р1Х продуктом. Обоснованием для этого исследования была оценка безопасности и РК Р1ХРс у пациентов с тяжелой гемофилией В. Для этого исследования 12 подлежащих оценке пациентов в возрасте от 18 до 76 лет подходили для оценки РК. Каждый пациент получил одно введение Р1ХРс в номинальной дозе 12,5, 25, 50 или 100 МЕ/кг веса тела путем внутривенного вливания в течение примерно 10 мин. Образцы плазмы крови для оценки РК как на активность Р1ХРс, так и на концентрации антигена, наблюдались перед вливанием, а также на протяжении периода времени до 14 дней после дозировки. РК как Р1ХРс антигена, так и активности были независимо охарактеризованы в этом исследовании с использованием модель-зависимых и модель-независимых способов.
Р1ХРс хорошо переносился после введения единичных ВВ доз 12,5; 25; 50 и 100 МЕ/кг веса тела. В этом исследовании не было доказательств серьезных лекарственно зависимых побочных эффектов. Ни у одного пациента не определялись нейтрализующие или связывающие антитела к гР1ХРс. Аппроксимированное дозопропорциональное возрастание Стах и АиСЮР наблюдалось как для Р1ХРс антигена, так и для активности после введения доз от 12,5 до 100 МЕ/кг, но V и С1 были одинаковыми при всех дозах. Эти результаты показывают, что Р1ХРс антиген и активность демонстрировали линейный РК на протяжении оцененного дозового диапазона. Сравнительно маленькие значения ν параметра могут показывать, что Р1ХРс входит во внутритканевую жидкость, но не проникает через клеточную мембрану во внутриклеточные жидкости. Пиковые концентрации в плазме крови Р1ХРс антигена и активности наблюдались в течение 0,5 ч после окончания вливания и оставались детектируемыми в течение нескольких дней после дозирования. Свидетельства сниженного клиренса и пролонгированного периода полувыведения наблюдались как для Р1ХРс антигена, так и для активности.
Средний клиренс и конечные значения полупериода элиминации, связанные с концентрациями Р1ХРс антигена в дозовых уровнях 50 и 100 МЕ/кг, составляли 2,28 и 2,11 мл/ч/кг и 110 и 95,8 ч соответственно. Подобным образом, средний клиренс и конечные значения полупериода элиминации, связанные с уровнями активности Р1ХРс в том же дозовом диапазоне, составляли 3,77 и 2,89 мл/ч/кг и 52,1 и 52,5 ч соответственно. Сравнение РК результатов Р1ХРс активности, наблюдаемых в настоящем исследовании, с сообщенными РК для ВЕ№Р1Х™ активности (Зиттагу οί Ргойий СНагасЮгРОсх οί ВЕNЕРIX™; 18 ноября, 2009) показало приблизительно 3-кратное уменьшение Р1ХРс клиренса и приблизительно 3кратное увеличение как Р1ХРс полупериода конечной элиминации, так и среднего времени нахождения в организме по сравнению с ВЕ№Р1Х™. С наблюдаемыми улучшениями РК, Р1ХРс предоставит пролонгированную защиту от кровотечений, позволяя снизить частоту инъекций индивидуумам с Гемофилией В. Основываясь на результатах этого исследования, гР1ХРс может дозироваться каждые две недели или дважды в месяц с использованием доз 100 МЕ/кг и по меньшей мере раз в неделю с использованием более низких доз. Такой режим требует более редких инъекций. Кроме того, использование гР1ХРс будет иметь другие потенциальные клинические влияния, такие как: доступ к центральным венам; улучшенную схему приема лекарства; снижение повреждений из-за кровотечений; и повышенную защиту суставов от кровотечений.
Пример 2. В-протяженная фаза 1/2/3 исследования.
Это будет открытое, мультицентровое исследование безопасности, фармакокинетики и эффективности рекомбинантного, долгодействующего коагулянта фактора 1Х Рс гибрида (гР1ХРс) в профилактике и лечении кровотечения у ранее подвергавшихся лечению пациентов с тяжелой гемофилией В. Лечение Р1Х продуктами, имеющимися в настоящее время в продаже, требует дозировки 2-3 раза в неделю. Про- 19 028067 дукт с прологнированным периодом полувыведения, у которого требуемый интервал дозирования продлен до одного раза в неделю или более, медицинское сообщество сочло бы значимым улучшением в лечении пациентов с тяжелой гемофилией.
Дозовые уровни широко варьируют в клинических профилактических исследованиях гРК продуктов: сообщаемые дозы варьируют от 10 до 171 МЕ/кг (Ко!Н е! а1., В1оой 98:3600 (2001)) или от 40 до 100 МЕ/кг (МА8АС Кесоштеийайои 177, ЧаЕопа1 НеторЫНа РоипйаНоп (Ос!. 2006)). Кроме того, минимальные уровни РК активности во время профилактического лечения у пациентов без клинических признаков кровотечения прогнозируются в диапазоне между 0,2 и 3,8 МЕ/дл (Сагккои е! а1., НеторЫНа 4:83 (1998)). Принимая во внимание индивидуальную вариабельность у пациента, индивидуализированные дозовые режимы на основании клинического статуса пациента являются общепринятой практикой. Результаты фазы 1/2а исследования (пример 1), оценивающей безопасность и фармакокинетику однократной дозы замороженной липидной лекарственной формы гРКРс продемонстрировали, что лекарство хорошо переносимо в дозах в диапазоне от 1 до 100 МЕ/кг и характеризация РК подтверждает несколько преимуществ по сравнению с доступными в настоящее время способами лечения, а именно период полувыведения и МКТ в 3 раза длиннее, чем те, о которых ранее сообщалось для ВЕЧЕРК™ (61 ч по сравнению с 19 ч). Целью этого исследования было определить параметр РК дальнейшей оценки лиофилизированного гРКРс у людей, сравнить его с ВЕЧЕРК™ РК параметром оценок у людей, и продемонстрировать эффективность лиофилизированного гРКРс для предотвращения и лечения кровотечения и безопасности его повторяющегося дозирования у предварительно подвергавшихся лечению пациентов с тяжелой гемофилией В.
В исследование вошло четыре группы: низкодозовый профилактический режим лечения (п=25), высокодозовый профилактический режим лечения (п=25), режим лечения по необходимости (п=20) и режим лечения при серьезных хирургических вмешательствах (п=5). Группа низкодозового режима включила РК подгруппу (п=16), получившую дозу ВЕЧЕРК™, после чего последовало лечение гРКРс. Первостепенные цели исследования следующие: оценить безопасность и переносимость гРКРс во всех лечебных группах; оценить эффективность гРКРс во всех лечебных группах; и оценить эффективность профилактики при терапии по необходимости (сравнение годового числа эпизодов кровотечения между Группами 1 и 2 по отношению к режиму по требованию группы 3).
Второстепенные цели исследования следующие: сравнить оценки параметра РК у гРКРс и ВЕЧЕРК™; оценить эффективность гРКРс в группе лечения по необходимости и хирургической группе; оценить и сравнить оценки параметра РК у гРКРс базовые и на неделе 26 (±1 неделя) в подгруппе РК; оценить реакцию пациентов на лечение во всех группах; и оценить потребление гРКРс во всех группах.
Основные критерии включения:
мужской пол, 12 лет и старше, вес по меньшей мере 40 кг;
диагностирована гемофилия В (базовый уровень фактора IX менее чем или эквивалентен 2%); в анамнезе по меньшей мере 100 дней воздействия любым продуктом с фактором IX; число тромбоцитов > 100000 клеток/мкл;
РЧК (международное нормализованное соотношение) < 1,40, как определено по тестируемому лабораторному нормальному диапазону;
ί'Ό4 число > 200 клеток/мкл.
Основные критерии исключения: ингибиторы фактора IX в анамнезе; дисфункция почек или печени;
диагностирован другой дефект коагуляции, отличный от гемофилии В;
в анамнезе были случаи анафилаксии, связанной с каким-либо ВВ ведением РК или иммуноглобулина;
прием системных иммуносупрессорных лекарств (например, системные кортикостероиды; однако, НААКТ (высокоактивная антиретровирусная терапия) разрешена).
Пример 3. РКРс производство в НЕК293 клетках.
РКРс был произведен в стабильно трансфицированных НЕК293 клетках, содержащих экспрессионную кассету для РКРс (нативный РК, соединенный прямо с Рс участком) и экспрессионную кассету для одного Рс. В клетки также была трансфицирована экспрессионная кассета РС5, которая представляет собой процессирующийся энзим, который дает возможность полному процессингу РК пропептида. Трансфицированные клетки росли в бессывороточной суспензионной среде, содержащей витамин К, и они секретировали три белка: РКРс димер, РКРс мономер (одна цепь РКРс и одна цепь Рс) и Рс димер. РКРс мономер (РКРс) был очищен путем колоночной хроматографии (белок А, фрактогель ОЕАЕ и О Сефароза псевдоаффинное элюирование с низкой ионной силой СаС12), и вирус был инактивирован и профильтрован для введения пациентам, являющимся людьми.
Также см. Ре!ег§ е! а1., В1оой. 2010 Маг 11;115(10):2057-64 (ЕриЬ 2010 Ын 7); и патент США № 7566565; каждый из которых включен в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
Коагулирующая активность РКРс была оценена путем подсчета его способности восстанавливать
- 20 028067 активность свертывания дефицитной по РК плазмы крови с использованием МЬА Е1ес!га 1600С (Меб1са1 ЬаЬога!огу АиЮтайопЛпкйитеп! ЬаЬк, Р1еакап1уШе, ΝΥ). Результаты сравнивались с калибровочной кривой, сгенерированной с использованием серийных разведений РК стандарта Всемирной организации здравоохранения.
Предполагают, что фосфорилирование серина и сульфатация тирозина фактора IX важны для возрастания концентрации ш νί\Ό. Сообщалось, что ΜОNОNINЕ™ (очищенный из плазмы фактор IX (рбРК), продающийся С8Ь ВегЫпд) обладает лучшим возрастанием концентрации ш νί\Ό, чем ВЕ№РК™ (рекомбинантный РК (гРК), продающийся Хуе!й) из-за более высокого уровня фосфорилирования/сульфатации ΜОNОNINЕ™ (>90%/>90% в сравнении с <10%/5%). Однако РКРс, вырабатываемый в НЕК293 клетках, почти не имеет фосфорилирования/сульфатации (<10%/4%, что очень сходно с ВЕЖРК™), и показывает лучший IVК (1.0 МЕ/дл на МЕ/кг), чем ВЕЖРК™ (0,7). Кроме того, РКРс, произведенный, как описано выше, имел значительно более низкий (в 10-100 раз) уровень (0,01-0,001%) активированного РК (РКа), связанной с продуктом примеси, чем ΜОNОNINЕ™ (рбРК) или ВЕ№РК™ (гР^) (0,1%). Получившийся в результате РКРс будет реже давать нежелательные случаи тромбообразования после введения, чем ΜОNОNINЕ™ или ВЕЖРК™.
Пример 4. Педиатрические исследования: экстраполяция и взаимосвязь между разработкой у взрослой и педиатрической выборок.
Характеристики пациентов, которые показывают взаимосвязь с РК фармакокинетикой, включают возраст-зависимые физиологические изменения (В_)бгктап апб Вет!огр, Сйп. Рйагтасокшейск 40:815-32 (2001); апб В_)огктап, НеторйШа 9(кирр1 1): 101-10 (2003)) и размер и сложение тела (8йар1го, НеторйШа 11:571-82 (2005)). Таким образом, обычно обнаруживалось, что приведенный в соответствие с весом клиренс (СЬ) РК уменьшается с возрастом и/или весом тела во время роста от младенческого периода к взрослому состоянию, с соответствующим повышением терминального полупериода (ΐ1/2). Для гРК продукта (ВЕ№ЪК™) СЬ и объем распределения в стационарной фазе (Укк) возрастают у детей и затем остаются постоянными во взрослом состоянии; таким образом, эти параметры будут тщательно мониториться в педиатрических исследованиях.
Пиковые уровни РК прокоагулянтной активности (РК:С) зависят от первичного объема распределения РК:С после однократных и/или повторных доз РК. Первоначальное распределение РК быстрое. Однако показано, что ш νί\Ό возрастание концентрации (среднее нарастающее возрастание концентрации) для ВЕNЕРIX™ было обычно на 30% ниже, чем у фактора коагуляции, полученного из плазмы и очищенного моноклональным антителом (рбРК) (КоШ е! а1., В1ооб 98:3600-3606 (2001)). Кроме того, исследования с рбРК показали, что пациенты в возрасте 15 лет и моложе имеют значительно более низкое возрастание концентрации, чем пациенты более старшего возраста (Хййе е! а1., ТйготЬ. Наеток!. 73:779-84 (1995)). Поэтому в педиатрических исследованиях будет также проводиться мониторинг минимальных и пиковых уровней.
Поскольку исследования показали, что дети могут реагировать по-другому по сравнению со взрослыми, фармакокинетические оценки при базовом уровне 50 МЕ/кг гРКРс будут проведены на детях с сокращенным фармакокинетическим взятием проб.
Фаза 1/2а исследования (8ΥN-РIXРс-07-001), оценивающая безопасность и фармакокинетический профиль однократного внутривенного введения гРКРс в РТРк в возрасте 18 лет и старше с серьезной гемофилией В, была завершена недавно. Предварительные результаты этого первичного исследования на людях демонстрируют приблизительно 3-кратное повышение фармакокинетических параметров (средний терминальный полупериод, МКТ и АИС) гРКРс в сравнении с тем, что сообщалось в литературе для ВЕЖРК™ (см. выше). Кроме того, гРКРс хорошо переносился и не было признаков реакций в месте инъекции, а также не вырабатывались ингибиторы. Взятые вместе, эти результаты по безопасности и фармакокинетике говорят в пользу начала фазы 1/2/3 регистрационного исследования (998НВ102 Исследование (В-^ОNС), см. выше), оценивающего безопасность, фармакокинетику и эффективность гРКРс в предотвращении и лечении кровотечения у 104 РТРк (с по меньшей мере 100 лечебных ЕЭк предыдущих продуктов) 12 лет и старше с тяжелой гемофилией В (<2%). Когда достаточное количество данных по безопасности будет доступно после регистрационного исследования, будет начата педиатрическая программа для дальнейшего исследования безопасности и эффективности гРКРс у детей.
Демонстрация прологнированного полупериода гРК у взрослых будет означать, что для профилактики и лечения кровотечений у индивидуумов с гемофилией В будут требоваться более редкие инъекции.
Фаза 2/3 педиатрическое РТРк исследование ранее подвергавшихся лечению детей (возраст< 12 лет).
Когда будут доступны данные по 10 РТРк (>12 лет) для 26 ЕЭк из регистрационного исследования (Исследование 998НВ 102), будет начато педиатрическое исследование, фаза 3. Эта фаза 2/3 педиатрического исследования, относительно РТРк, которые имели по меньшей мере 50 ЕЭк к РК продуктам до включения в исследование, будет проведена глобально примерно по 25 клиническим сайтам. Приблизительно 25 РТРк (для того чтобы гарантировать 20 подходящих для оценки пациентов), в возрасте 2-11 лет
- 21 028067 с тяжелой гемофилией В (<2 МЕ/дл [<2%] эндогенный ΡΙΧ), будут скринированы и отобраны в соответствии с определенными заранее критериями. Все получившие оценку пациенты войдут в фармакокинетическую часть исследования (РК с предисследуемым ΡΙΧ продуктом и затем РК с гР1ХРс) и будут получать еженедельно дозу гР1ХРс на протяжении 52 недель. В этом исследовании будет фиксироваться постепенное повышение концентрации, период полувыведения ίη νίνο, АИС, и клиренс гР1ХРс. Все пациенты подвергнутся фармакокинетической оценке базового уровня с ΡΙΧ и гР1ХРс перед исследованием, и продолжительность исследования для каждого пациента будет приблизительно составлять 69 недель, включая скрининг и последующее наблюдение.
Каждый пациент получит 50 МЕ/кг гР1ХРс при первом визите для фармакокинетической оценки, после чего последуют повторяющиеся еженедельные дозы 50-60 МЕ/кг гР1ХРс. С учетом соблюдения режима пациентом, фармакокинетические пробы для предисследования продукта и для гР1ХРс будут браться по сокращенной программе, а именно: перед дозой, конец инъекции, 30±10 мин, 3±1 ч, 24±3 (день 1), 72±3 (день 3), 120±3 (день 5) и 168±3 ч (день 7) после окончания инъекции. Для того чтобы исследовать иммуногенность, все пациенты получат гР1ХРс еженедельно минимум 50 ΕΌ8. Параметры безопасности будут включены для немедленной оценки безопасности и переносимости, такие как: (а) основные показатели состояния организма (пульс, давление крови, частота дыхания, температура) перед инъекцией гР1ХРс и через 30 мин после инъекции; (Ь) параметры гематологии и коагуляции; (с) клиническая химия; (ά) частые определения Р1Х ингибитора с использованием модифицированного по Неймегену Бетезда-анализа (непосредственно перед первым воздействием, ΕΌ4 [неделя 4], ΕΌ12, ΕΌ24, ΕΌ36 и ΕΌ50); и (е) нежелательные явления.
Эффективность будет оцениваться по оценке числа эпизодов кровотечения, интервалов между кровотечениями и числу лечений и потребления Р1Х в оцениваемый год и на случай, требующий лечения.
Фаза 2/3 педиатрическое РИР8 исследование ранее не получавших лечение детей (возраст 0-11 лет).
Когда данные по 10 ранее получившим лечение детям (2-11 лет) с полной фармакокинетикой и 50 ΕΌδ будут доступны в предшествующем исследовании, будет начата фаза 2/3 педиатрического РИР8 исследования. Это исследование будет проведено глобально примерно на 60 клинических сайтах. До 30 РИР8 (для обеспечения 20 пригодных для оценки пациентов) в возрасте 0 лет и старше с серьезной гемофилией В (<2 МЕ/дл [<2%] эндогенный Р1Х) будут скринированы и отобраны в соответствии с предварительно определенными критериями. Участие в исследовании будет варьировать, поскольку при начале лечения может использоваться гР1ХРс как модифицированный профилактический режим. Ожидается, что участие пациента в исследовании будет продолжаться примерно четыре года, включая скрининг и наблюдение за отдаленными результатами. Ожидается, что в течение этого времени большинство пациентов достигнут 50 ΕΌ8 до гР1ХРс. Для того чтобы исследовать иммуногенность, все пациенты будут подвергнуты лечению приблизительно 50 ΕΌ8 гР1ХРс или в течение периода времени до 4 лет. Параметры безопасности будут включены для немедленной оценки безопасности и переносимости: (а) частые определения Р1Х ингибитора с использованием модифицированного по Неймегену Бетезда-анализа; и (Ь) нежелательные явления.
Эффективность будет оцениваться по оценке числа эпизодов кровотечения, интервалов между кровотечениями и числа лечений и потребления Р1Х на анализируемый год и на случай, требующий лечения.
Пример 5. Биохимическая характеристика, активность и анализ РК у животных, не являющихся человеком.
гР1ХРс, произведенный в примере 3, был охарактеризован по своей посттрансляционной модификации, и были получены следующие результаты (см. табл. 15 и фиг. 11). Пропептид гР1ХРс был должным образом процессирован во время производства. Паттерн гР1ХРс'8 гамма-карбоксилирования был подобен паттерну гР1Х. Кроме того, общее О1а/молекула (11,2±0,7) гР1ХРс было сравнимо с гР1Х. Поскольку гамма-карбоксилирование определенных остатков необходимо для активности Р1Х, эти результаты являются важными. Кроме того, Бет 158 фосфорилирование и Туг 155 сульфатирование гР1ХРс были сравнимы с гР1Х. Ν-связанные гликаны в Р1Х не полностью сиалированы, так же как у гР1Х. гР1ХРс О-связанное гликозилирование первого ΕΟΡ домена было таким же, как у Р1Х, хотя и в различных сравнительных соотношениях. А8р 64 из гР1ХРс имел более высокую степень бета-гидроксилирования, чем гР1Х, или полученный из плазмы Р1Х (рбР1Х). Активированный Р1Х присутствовал в намного более низкой концентрации в препарате гР1ХРс, чем в гР1Х или рбР1Х препаратах, как описано детально в примере.
Кроме того, гР1ХРс был введен различным видам животных для определения его активности и параметров РК. Результаты показаны в табл. 16 и на фиг. 12-16.
Пример 6. Гамма-карбоксилирование.
Целями этого исследования было проанализировать и охарактеризовать γ-карбоксилирование глутаминовых кислот (О1а) в доклинической партии Р1ХРс материала и имеющихся в продаже Р1Х продуктах, охарактеризовать содержание О1а в обогащенной пиковой фракции и высокосолевого элюирования стрип фракции, первоначально полученной на этапе псевдоаффинной ион-обменной хроматографии, и в дальнейшем разделить на обогащенную пиковую и на высокосолевого элюирования стрип
- 22 028067 фракцию путем анион-обменной ВЭЖХ, а затем охарактеризовать различные образцы.
Для достижения этих целей было разработано множество дополнительных аналитических способов. Они включают аминокислотный анализ (ААА) с использованием щелочного гидролиза для определения (общего) содержания О1а, пептидную карту (ЬС/Μδ) с использованием Ьуз-С пептидов для определения распределения О1а, аналитическую анионобменную ВЭЖХ интактных молекул для разделения изоформ, и активированное частичное тромбопластиновое время (аРТТ) для определения биологической активности. Два О1а (Е) содержащих пептида представляют собой:
-К1К2: ΥΧδΟΚΤ7£8ΡΤνθΟΧΤ15ΡΚ17£ΟΜ2θ£21ΕΚ •[М+Н]+6О1а = 2953,9 •[М+Н]+5 О1а = 2909,9
-КЗ: Τ3Ρ26£2ΈΑΚ30£νΡ33£ΝΤ36£ΚΤΤ40£Ρ\ν К •[М+Н]+6О1а = 2959,9 •[М+Н]+5 О1а = 2915,9 •[М+Н]+4 О1а = 2871,9 мкг образца (полученного из обогащенной пиковой фракции, высокосолевой стрип-фракции, и каждый образец из аналитической анионобменной ВЭЖХ) был денатурирован, восстановлен, алкилирован и обработан Ьуз-С (1:20, Ε:δ). Реакция была остановлена 2% ТРА, и обработанный продукт был введен в РирЬег С18 (2,0x250 мм) РЬепотепех колонку. Разделение было осуществлено Адбеп! 1100 системой. Колонка была установлена на 25°С и пептиды были элюированы по многоступенчатому ацетонитриловому градиенту. Масс-спектрометрия (ТЬегто-Р1зЬег ЬСР) была проведена по Тпр1е Р1ау способу. Для анализа и характеристики содержания О1а и распределения доклинического гР1ХРс материала были разработаны дополнительные способы. γ-карбоксилирование доли глутаминовых кислот (О1а) и распределение доклинической партии гР1ХРс (обогащенная пиковая фракция) было проведено и сравнено с имеющимися в продаже продуктами. Анализ продемонстрировал такое же содержание и распределение О1а, как и у имеющихся в продаже продуктов. Высокосолевого элюирования стрип фракция была проанализирована и сравнена с обогащенной пиковой фракцией. Анализ показал пониженный уровень γкарбоксилирования.
Р1ХРс (обогащенная пиковая фракция) была выделена на ион-обменном этапе псевдоаффинной хроматографии и затем разделена на 3 изоформы путем аналитической анионобменной ВЭЖХ. Загруженные в АЕХ колонку и разделенные образцы были высоко γ-карбоксилированы (загрузка АЕХ колонки представляет собой стрип фракцию, собранную во время этапа высокосолевого элюирования из этапа псевдоаффинной ион-обменной хроматографии). Загруженные в АЕХ колонку и разделенные образцы были биологически активными. Содержание и распределение О1а было подобно гР1Х. Пептидная карта показала распределение 4/5/6 О1а'з у КЗ пептида. Пептидная карта показывает высокое количество 6 О1а'з в К1К2 пептиде и следовые количества 5 О1а'з.
Р1ХРс (стрип пиковая фракция) была выделена на ионобменном этапе псевдоаффинной хроматографии и затем разделена на 2 изоформы путем аналитической анионобменной ВЭЖХ. Загруженные в АЕХ колонку и разделенные образцы имели сниженный уровень γ-карбоксилирования. Наблюдалось уменьшенное содержание О1а по сравнению с обогащенной Р1ХРс пиковой фракцией. Наблюдался пониженный уровень биологической активности. Пептидная карта показывает повышенное количество 5 О1а'з в К1К2 по сравнению с обогащенной пиковой фракцией, что может подтверждать влияние биологической активности.
Ссылки (каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки): Оитоп! ТА., е! а1., Мопотепс Рс Ризюп Мо1еси1ез ίη ТЬегареиЬс АЬз-Ргот ВепсЬ !о СЬтс, СЬ. 33, р. 779-795; ОЬЬз δ, е! а1., Рго!ет δс^еηсе (1997), 6:185; \\;Ьпе ОС, е! а1., Т ТЬготЬоз1з апб Наетоз!аз1з (1997), 78:261; Напззоп К, апб δ^ηί^ Т, 1оигпа! ТЬготЬоз1з апб Наетоз!аз1з (2005), 3:2633; апб Ре!егз К.Т., е! а1., В1ооб (2010), 115:2057.
Пример 7. Оценка гРЕХРс про-коагулянтной активности в моделях кровотечений у НетВ мышей.
Сравнительный потенциал гЕ1ХЕс и ВЕХЕР1Х™ был продемонстрирован у НетВ мышей по анализу цельной крови КОТЕМ т уйго и у НетВ мышей модели кровотечения при отсечении хвоста т У1уо.
Способность гР1ХРс формировать прочные и стабильные сгустки была оценена по ротационной тромбоэластометрии (КОТЕМ®, Реп!арЬагт ОтЬН, МитсЬ, Оегтапу) с хлоридом кальция как активатором (ХАТЕМ). Совокупная цельная кровь, собранная из полой вены НетВ мышей, была разделена на семь аликвот, в которые был впрыснут гРЕХРс до конечной концентрации 7,4, 0,74 и 0,074% нормальной плазматической Р1Х активности или ВЕХЕР1Х™ до 10, 1, 0,1% от нормы. В качестве негативного контроля, в пробу крови был впрыснут буфер РЕХ состава. Пулы общим числом 10 от 5 НетВ мышей были созданы для завершения исследования. Реакция ХАТЕМ была инициирована добавлением СаС12. Исследовались параметры коагуляции, включая время свертывания (СТ), время формирования сгустков (СРТ)
- 23 028067 и альфа угол. Среднее и 8Ό от СТ, СРТ и альфа угол суммированы в табл. 17. Дозовые ответы для трех параметров нанесены на график на фиг. 17. Все три параметра сравнивались между гРКРс и ΒΕΝΕΡΚ™ в тестируемом дозовом диапазоне (р>0,05 по однофакторному ΑΝΟνΑ (Крускал-Уоллис) анализу).
Эффективность в неотложном случае гРКРс была также оценена в модели кровотечения при отсечении хвоста у НетВ мышей (фиг. 18). Самцы НетВ мышей были стратифицированы для эквивалентной презентации веса тела и возраста в различных экспериментальных группах. Перед отсечением хвоста мыши были анестезированы смесью 50мг/кг кетамина и 0,5 мг/кг дексмедетомидина и помещены на подогреваемую подушку для подержания температуры тела. Хвосты мышей были затем погружены в 37°С воду на 10 мин для расширения латеральной вены. После расширения латеральной вены гРИРс, ΒΕΝΕΡΚ™ или раствор-наполнитель были введены путем инъекции в хвостовую вену и через 5 мин дистальные 4 мм хвоста были отсечены с использованием #11 скальпеля с прямым лезвием. Изливавшаяся кровь собиралась в 13 мл теплого солевого раствора в течение 30 мин и потеря крови была подсчитана гравиметрически. Тестировались шесть гР^Рс экспериментальных групп (720, 360, 240, 120, 80, 40 МЕ/кг, п=15) и три ΒΕΝΕΡΚ™ экспериментальные группы (360, 120, 40 МЕ/кг, η=15). Объем потери крови отдельного животного и кривая дозового ответа медианной потери крови показаны на фиг. 19(А), и медианный объем потери крови каждой экспериментальной группы суммирован в табл. 18. Дозовые ответы по медианному объему потери крови для гР^Рс и ΒΕΝΕΡΚ™ сравнимы (р=0,9315 по непарному ί критерию с коррекцией Уэлча).
Для определения того, является ли трехкратное увеличение продолжительности периода полувыведения гРКРс по сравнению с ΒΕΝΕΡΚ™ результатом пролонгированной эффективности гР^Рс. изобретатели настоящего изобретения оценили эффективность гР^Рс и ΒΕΝΕΡΚ™ как в ех νίνο КОТИМ® анализе, так и в модели кровотечения при рассечении хвостовой вены (ТУТ) у НетБ мышей, фиг. 20.
Для ех νίνο ΚΟΤΕΜ®, самцы НетБ мышей получили 50 МЕ/кг гР^Рс или 100 МЕ/кг ΒΕΝΕΡΚ™ путем внутривенной инъекции. Цельная кровь была собрана из полой вены обработанных животных на 5 мин, 24, 72, 96, 120, 168 и 216 ч после гРИРс дозирования (п=8 мышей на каждую временную точку) или на 5 мин, 24, 48, 72 и 96 ч после ΒΕΝΕΡΚ™ дозирования (п=4 мыши/временная точка). Пробы крови анализировались с помощью ΝΑΤΕΜ. Среднее и 8Ό для СТ, СРТ и альфа угол показаны в табл. 19, и СТ, СРТ и альфа угол по сравнению с временными кривыми показаны на фиг. 21. В сравнении с ΒΕΝΕΡΚ™, гРИРс показал сравнимый СТ, СРТ и альфа угол на 5 мин, но достоверно повышенный СТ, СРТ и альфа угол после 72 ч несмотря на дозу в 2 раза ниже по сравнению с ΒΕΝΕΡΚ™. Для оценки профилактической эффективности гР^Рс и ΒΕΝΕΡΚ™, самцы Нетб мышей были стратифицированы для эквивалентной репрезентации веса тела и возраста в 9 различных опытных группах. гРИРс был введен путем вв инъекции в дозе 4, 13, 40 и 120 МЕ/кг на 72 ч перед рассечением хвостовой вены, тогда как те же дозы ΒΕΝΕΡΚ™ были введены на 24 ч перед травмой. Перед рассечением хвостовой вены мыши были анестезированы смесью 50 мг/кг кетамин/0,125 мг/кг дексмедетомидин/0,1 мг/кг бупренекс. Для того чтобы дать возможность мышам поддерживать нормальную активность после рассечения хвостовой вены, 1 мг/кг раствора атипамезола было дано для того чтобы обратить действие Дексмедетомидина, за чем немедленно последовало рассечение латеральной хвостовой вены хирургическим скальпелем номер 11 с плоским лезвием в области, где диаметр хвоста приблизительно равняется 3 мм. Льющаяся кровь смывалась теплым солевым раствором для обеспечения четкой видимости раны, и мышь была затем помещена отдельно в чистую клетку с белой бумажной подкладкой на следующие 24 ч. Остановка кровотечения и физическая активность наблюдались и фиксировались ежечасно в течение периода времени до 12 ч после травмы. Умирающие мыши были немедленно подвергнуты эфтаназии после идентификации, и полный осмотр для завершения исследования был проведен через 24 ч после травмы. Кривая Каплана-Мейера для времени эвтаназии и карта степеней выживаемости через 24 ч после ТУТ показаны на фиг. 22. Логарифмический ранговый критерий определил, что все экспериментальные группы с дозой выше чем 4 МЕ/кг достоверно лучше, чем группа, обработанная раствором-наполнителем (р<0,001). Кроме того, выживаемость сравнивалась между мышами, которые получили одинаковую дозу гРИРс на 72 ч перед травмой и ΒΕΝΕΡΚ™ на 24 ч перед травмой (р=0,4886; 0,9268; 0,7279 и 0,5209 для 4, 13, 40 и 120 МЕ/кг дозовых групп соответственно). Степени выживаемости на 24 ч после ТУГ были нанесены на график и ΕΌ50 значение для каждой молекулы было экстраполировано из кривой, ΕΌ50 для двух обработок одинаковы при 17,8 МЕ/кг для гР^Рс и 15,4 МЕ/кг для гРК. Следовательно, гР^Рс предоставлял в 3 раза большую продолжительность защиты у Нетб мышей по сравнению со сравнимой дозой ΒΕΝΕΡΚ™, как оценивалось по выживаемости и повторному кровотечению после травмы рассечения хвостовой вены. Следовательно, гРИРс предоставлял в 3 раза большую продолжительность защиты у Нетб мышей по сравнению со сравнимой дозой ΒΕΝΕΡΚ™, как оценивалось по выживаемости и повторному кровотечению после травмы рассечения хвостовой вены.
В заключение, как показывают данные, несмотря на то, что 15,4 МЕ/кг ΒΕΝΕΡΚ™ приводило к 50% выживаемости Нетб мышей при рассечении хвостовой вены на 24 ч после дозирования, 50% выживаемости у животных, получивших 17,8 МЕ/кг гРИРс, было достигнуто при травме на 72 ч после дозирования. Следовательно, гР^Рс демонстрирует в 3 раза более длительную профилактическую эффек- 24 028067 тивность в корреляции с продлением его периода полувыведения в сравнении с ΒΕΝΕΕΚ™. Результаты по моделям кровотечения в дальнейшем были подтверждены ех νίνο ΚΟΤΕΜ® анализом цельной крови из НетВ мышей, обработанных или 100 МЕ/кг ΒΕNΕЕIX™, или 50 МЕ/кг ^ЕIXЕс. На 5 мин после дозирования, сравнимые улучшения в образовании сгустка наблюдались в обеих экспериментальных группах. Однако большинство ΚΟΤΕΜ® параметров, таких как время свертывания, время образования сгустка и альфа-угол были достоверно лучше у тЕКЕс-обработанных мышей от 72 до 216 ч после дозирования, несмотря на в 2 раза более низкую дозу гЕКЕс по сравнению с ΒΕNΕЕIX™.
Подводя итог, потенциал тЕКЕс в неотложном случае сравним с таковым у ΒΕΝΕΕΚ™, как показано и на ΚΌΤΕΜ® цельной крови ίη νίΐτο, и на модели кровотечения при отсечении хвоста у НетВ мышей. Пролонгированная профилактическая эффективность ^ЕIXЕс была показана на ех νίνο ΚΟΤΕΜ® цельной крови у обработанных НетВ мышей и была определена как приблизительно в 3 раза более длинная в сравнении с ΒΕNΕЕIX™ в модели кровотечения при рассечении хвостовой вены у НетВ мышей. Пролонгированная эффективность гЕКЕс хорошо коррелирует с в 3 раза более длинным Τ1/2 ^ЕIXЕс по сравнению с ΒΕNΕЕIX™, ранее демонстрировавшимся в фармакокинетическом исследовании у НетВ мышей. Следовательно, тЕКЕс полностью активен для лечения по требованию, поскольку достигается достоверно пролонгированная профилактическая защита с потенциалом уменьшения частоты дозирования, что является объектом изучения в фазе 3 исследования.
Пример 8. Анализ фармакокинетики и фаркакодинамики ^ЕIXЕс и ΒΕNΕЕIX™ после однократной подкожной дозы дефицитным по ЕК мышам.
Фармакокинетические (РК) и фармакодинамические (ΡΌ) профили рекомбинантного фактора К-Ес (тЕКЕс) и ΒΕNΕЕIX™ (тЕК) были определены после однократной внутривенной или подкожной инъекции 200 или 400 МЕ/кг у дефицитных по ЕК мышей. Цельная кровь была собрана из полой вены (η=4 мыши/временная точка/обработка). Концентрации тЕКЕс и ΒΕNΕЕIX™ в плазме крови были определены с использованием специфичного на человеческий ЕК анализа ИФА. Активность тЕКЕс и ΒΕNΕЕК™ определялась с использованием анализа активированного частичного времени тромбопластина. РК анализы были проведены с использованием модель-зависимой методологии, использующей ^ίηΝοηΚη. Результаты показаны в табл. 22 и 23.
Для ЕКЕс, биодоступность у дефицитных по ЕК мышей составляла 38% для дозы 200 МЕ/кг и 3846% для комбинированной дозы (антиген ИФА) и 29% для дозы 200 МЕ/кг и 29-39% для комбинированной дозы (исследование аРТТ активности) по сравнению с тЕК, 23% и 19% соответственно. тЕКЕс имел в 1,5-1,7 раза (доза 200 МЕ/кг) и в 1,5-2,5 раза (комбинированные дозы) повышенную биодоступность по сравнению с ΒΕNΕЕIX™.
Для тЕКЕс терминальный полупериод (антиген ИФА) составлял 62 ч для дозы 200 МЕ/кг и 51-62 ч для комбинированных доз и терминальный полупериод (исследование аРТТ активности) составлял 42 ч для дозы 200 МЕ/кг и 40-42 ч для комбинированных доз, тогда как для ΒΕNΕЕIX™ терминальный полупериод составлял 24 ч (антиген ИФА) для дозы 200 МЕ/кг и 17 ч (исследование аРТТ активности) для дозы 200 МЕ/кг. Это указывает на 2,5-2,6-кратное (доза 200 МЕ/кг и комбинированная доза) повышение полупериода с тЕКЕс.
Кроме того, как показано в табл. 22 и 23, тЕКЕс имел 4,5-5,6-кратное возрастание ЛИС/доза и 1,93,7-кратное возрастание Стах/доза по сравнению с ΒΕNΕЕIX™.
Рекомбинантный фактор IX Ес гибридный (тЕКЕс) белок является долгодействующей формой рекомбинантного ЕК (тЕК), что даст возможность менее частого дозирования тЕК при лечении гемофилии В. У мышей и нечеловекообразных приматов и пациентов с гемофилией В тЕКЕс имеет приблизительно в 3 раза более длинный период полувыведения по сравнению с тЕК (ΒΕNΕЕIX™). Для профилактического лечения внутривенное введение тЕК остается сложным способом доставки, особенно у детей и пациентов с трудно доступными венами. Подкожное введение тЕК представляется более привлекательным путем доставки, менее травматичным и с менее частым дозированием. Таким образом, подкожное введение тЕКЕс причинит меньше боли и дискомфорта чем внутривенное введение, и приведет к улучшенному соблюдению режима лечения, поскольку введение более легкое и занимает меньше времени, чем в случае внутривенного введения. Профилактический режим также улучшит качество жизни, и клинические последствия будут включать сниженные случаи кровотечения.
Концентрация тЕКЕс в плазме мышей была подсчитана с использованием ЕК-специфичного человеческого ИФА, по которому оценивалась ЕК часть молекулы и мг/кг номинальная доза использовалась в анализе. Суммарные РК параметры для тЕКЕс и ΒΕNΕЕIX™ показаны в табл. 20 (антиген ИФА) и табл. 21 (исследование активности аРТТ) для п=4/группа. Оба анализа антигена и активности показали, что Стах и ЛИС в случае тЕКЕс были достоверно улучшены по сравнению с ΒΕNΕЕIX™. При использовании антигена ИФА, биодоступность (Е %) составляла 38% для тЕКЕс по сравнению с 23% для ΒΕNΕЕК™. Подобным образом, при использовании исследования активности аРТТ биодоступность составляла 29% для тЕКРс по сравнению с 19% для ΒΕNΕЕIX™. Таким образом, тЕКЕс по сравнению с ΒΕNΕЕК™ демонстрировал повышение биодоступности в 1,5-1,6 раза. Оценки полупериода элиминации по- 25 028067 казали, что гРКРс заметно повышал полупериод, как было подсчитано по анализам антигена (гРКРс 62 ч по сравнению с ВЕМЕРК™ 24 ч) или активности (гРКРс 42 ч по сравнению с ВЕМЕРК™ 17 ч). Эти данные показывают, что гРКРс имел полупериод, удлиненный по сравнению с ВЕМЕРК™ в 2,6-2,5 раза.
гРКРс, даваемый подкожно дефицитным по РК мышам, демонстрировал РК и ΡΌ профиль с возрастаниями в Стах и ЛИС для гРКРс по сравнению с ВЕМЕРК™. В целом биодоступность для гРКРс находилась в диапазоне от 29% (активность) до 38% (антиген) с полупериодом от 42 ч (активность) до 62 ч (антиген) по сравнению с ВЕNЕЕIX™, который имел биодоступность от 19-23% и полупериод от 1724% соответственно. Таким образом, полупериод для гРКРс, введенного подкожно дефицитным по РК мышам, продемонстрировал возрастание в от около 2,2 (антиген) раза до 3,3 (активность) раза по сравнению с имеющимися в продаже тРК продуктами, даваемыми внутривенно. В целом эти данные подтверждают, что замечание, что гРКРс, доставляемый подкожно, будет иметь клиническое преимущество для профилактического лечения пациентов с гемофилией В.
Пример 9. Фармакокинетический анализ гРКРс после однократной подкожной дозы яванским макакам.
Фармакокинетический профиль (РК) рекомбинантного фактора К-Рс (гРКРс) был исследован после однократной подкожной дозы 50 МЕ/кг, 100 МЕ/кг или 200 МЕ/кг яванским макакам. Концентрация гРКРс в плазме крови была подсчитана с использованием РК-специфичного ИФА. Первичный анализ был проведен с использованием модель-зависимой методологии с использованием ХУнКопРиг См. табл. 22-25.
Фармакокинетический анализ концентрации в плазме по сравнению с временными данными (подсчитан по РК-специфичной ИФА) продемонстрировал, что биодоступность и терминальный полупериод были одинаковыми при различных дозах. Биодоступность гРКРс составляла 40% (50 МЕ/кг), 34% (100 МЕ/кг), 36% (200 МЕ/кг) и 36-45% (комбинированные дозы). Терминальные полупериоды для гРКРс составляли 61 ч (50 МЕ/кг), 45 ч (100 МЕ/кг), 49 ч (200 МЕ/кг) и 44-58 ч (комбинированные дозы).
Концентрация гРКРс в плазме крови обезьян была подсчитана с использованием РКспецифичного ИФА, который измерял РК часть молекулы, и мг/кг номинальная доза была использована в анализе. Анализы выброса и повышения концентрации продемонстрировали точность этого РКспецифичного ИФА анализа для детекции гРКРс в диапазоне оцениваемых плазматических концентраций. Сводки РК параметров для гРКРс показаны в табл. 22 (50 МЕ/кг), табл. 23 (100 МЕ/кг) и табл. 24 (200 МЕ/кг) для п=3/группа. Для гРКРс §С геометрические средние и СУ% геометрического среднего для Стах составляли 860+22 (50 МЕ/кг), 1630+97 (100 МЕ/кг) и 3,750+26 (200 МЕ/кг), соответственно указывая на дозозависимое возрастание. Подобные возрастания наблюдались для АИС. Геометрические средние для биодоступности (Р %) составляли 40+16 (50 МЕ/кг), 30+75 (100 МЕ/кг) и 36+27 (200 МЕ/кг), демонстрируя, что биодоступность была одинакова при разных дозах. Измерения терминального полупериода показали, что полупериод был одинаков в диапазоне доз 58+39 ч (50 МЕ/кг), 45+13 ч (100 МЕ/кг) и 46+44 ч (200 МЕ/кг).
гРКРс, даваемый подкожно яванским макакам, демонстрировал РК профиль с дозозависимым возрастанием Стах и АИС. В целом биоактивность находилась в диапазоне 30-40% с полупериодом 45-58 ч. Таким образом, полупериод для гРКРс, введенного подкожно макакам, демонстрировал примерно 2,8кратное возрастание по сравнению с имеющимися в продаже тРК продуктами, даваемыми внутривенно. В целом эти данные поддерживают представление, что гРКРс, вводимый подкожно, будет имеет клиническое преимущество для профилактического лечения пациентов с гемофилией В.
Пример 10. Рекомендуемые профилактические дозовые режимы.
По сравнению со стандартными рекомендованными дозовыми режимами от 25 до 40 МЕ/кг РК дважды или три раза в неделю, медианная гРКРс активность РК, полученная в ходе фазы 1/2а исследования, описанного выше, подтверждает, что дозирование гРКРс около одного раза в неделю около 22,5 МЕ/кг, или примерно каждые 10 дней около 45 МЕ/кг, или примерно каждые 2 недели около 120 МЕ/кг достаточно для поддержания минимального уровня 1% выше базового уровня (фиг. 24). Эти модельсимулированные оценки валидированы по доступным данным из фазы 1/2а исследования, которое полностью попадает в 95% доверительный интервал моделированной кривой активность по отношению ко времени. Эти режимы часто будут служить для начала терапии. Принимая во внимание гетерогенность сообщаемых клинических случаев прорывного кровотечения по отношению к минимальному уровню плазматической РК активности, поддерживающие дозы необходимо будет рассчитывать индивидуально.
После перерасчета РК результатов фазы 1/2 исследования (см. пример 11), новый расчетный дозовый режим, например, для профилактики, составляет 20 МЕ/кг один раз в неделю, 40 МЕ/кг каждые 10 дней или 100 МЕ/кг каждые две недели (два раза в месяц). См. также табл. 27 и фиг. 25.
- 26 028067
Пример 11. Перерасчет фармакокинетических данных впервые проведенного на человеке (ΡίΗ) исследования (пример 1).
Пациенты с различными генотипами гемофилии В, такими как стоп кодон/нонсенс и мисенсмутациями, были включены в ΡίΗ исследование, обсуждаемое в примере 1. Несколько пациентов имели заметно сниженные эндогенные уровни ΡΙΧ антигена, что коррелировало с заметно сниженной ΡΙΧ активностью, тогда как у нескольких пациентов с миссенс-генотипами было больше антигена, чем подсчитанной активности, что указывает на дисфункциональный циркулирующий белок. ΡΙΧ активность до лечения у 2 пациентов превышала 2 МЕ/дл, вероятно, вследствие неполного вымывания после последнего вливания ΡΙΧ концентрата на основе тестирования в анамнезе и фенотипа болезни. Основываясь на этой информации, РК данные из примера 1 были перерасчитаны без вычитания базового уровня, как детально описано ниже. См. табл. 27.
В отличие от РК расчетов (на основании активности) в примере 1, если γΡΙΧΡο активность РК моделировалась без вычитания базового уровня, как недавно сообщалось для РК анализа гликопегилированного γΡΙΧ (№дпег е! а1., Βίοοά Ό0Ι 10.1182/ЫооН 2011 02 335596 (2011), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки), получившиеся в результате оценки полупериода элиминации и ΜΚΤ намного длиннее, чем оценки в примере 1, на 82,2±21,6 и 96,8±22,0 ч (среднее+δΌ) соответственно. Однако, зная, что не все пациенты с тяжелой гемофилией В имеют 0% эндогенной ΡΙΧ активности, и принимая во внимание генотип пациента и эндогенный уровень ΡΙΧ антигена, изобретатели настоящего изобретения адаптировали способ анализа с вычитанием базового уровня в своем РК моделировании. Более точно, (а) базовый уровень у двух пациентов был определен как 0%, поскольку их ΡΙΧ активность перед лечением составляла <1%, они не имели определяемого ΡΙΧ антигена и имели нонсенс-генотипы, (Ь) базовый уровень у трех пациентов был установлен как 0,5%, поскольку их ΡΙΧ активность перед лечением была <1% и они имели детектируемый ΡΙΧ антиген, (с) для пациентов, чья ΡΙΧ активность перед лечением была между 1-2%, Стт (самая низкая активность в ходе РК исследования) определялась как базовый уровень, и (ά) для пациентов, чья ΡΙΧ активность перед лечением была >2%, 2% (что было выше пограничного значения для вхождения в исследование) было базовым уровнем. Активность выше базового уровня перед дозой рассматривалась как остаточное действие лекарства от предыдущего лечения, и была сведена к базовому уровню и вычтена из РК данных после γΡΙΧΡο дозирования.
Получившийся в результате средний терминальный полупериод (56,7±10,9 ч, диапазон 42,4-74,5 ч) и ΜΚΤ (71,8±10 ч, диапазон 53,2-85,9 ч) γΡΙΧΡο приблизительно в 3 раза длиннее, чем сообщаемые для γΡΙΧ. Сообщаемый терминальный полупериод γΡΙΧ составляет 19,3±4,97 ч (диапазон 11,1-36,4 ч) и ΜΚΤ 26,0±6,07 ч (диапазон 15,8-46,1 ч). Ροϊΐι е! а1., Βίοοά 98:3600-3606 (2001); и δитта^у о£ Ргопис! СНагасЮг1811С8 ίοτ ΒΕΝΕΡΙΧ™, Е1ес1гошс Ме01С1ие8 СотреиФит (2010) (1Шр://\γ\γ\γ.теά^с^ηе8.ο^8.ик/етс/теά^с^ηе/20376/δРС.УΒΕNΕΡIXτ™/#РΗАΒΜАСΟ^ ΥNΑΜIС_РΚΌРδ), каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Таким образом, диапазоны для γΡΙΧΡο не перекрывают диапазоны для γΡΙΧ. Подобным образом, среднее СЬ γΡΙΧΡο активности (3,18±0,78 мл/ч/кг, диапазон 2,05-4,18 мл/ч/кг) приблизительно в 2,6 раза меньше чем сообщаемое для γΡΙΧ (8,40±2,01 мл/ч/кг, диапазон 4,66-13,64 мл/ч/кг), тогда как У88 обоих белков сравнимы при 4-5-кратном объеме плазмы.
Хотя та же тенденция улучшения показателей наблюдалась при γΡΙΧΡο антигене РК, и Τ1/2α, и Τ1/2β γΡΙΧΡο антигена были достоверно длиннее, чем исходит из подсчетов ΡΙΧ активности. Τ1/2α, оцененный для γΡΙΧΡο антигена, определенно отклоняется от того, который в норме связан с ΡΙΧ (2-3 ч). Кроме того, возможное недостаточное вымывание от заместительной терапии до исследования перед вливанием γΡΙΧΡο иногда приводило к более высокому базовому значению, которое в свою очередь могло приводить к недооценке γΡΙΧΡο Τ1/2β, как подсчитано по ΡΙΧ активности. Многие пациенты имели аРТТ активность до 3 МЕ/дл, что значительно превышает предельное количество (1 МЕ/дл) для аРТТ анализа, на последних временных точках 336 ч (14 дней) после дозы. Однако эти временные точки были исключены из оценки терминального полупериода, поскольку эти значения или находились на базовых уровнях, или были лишь слегка выше их, что рассматривалось как возвращение к базовому уровню. Напротив, низкие, но детектируемые терминальные уровни γΡΙΧΡο могут быть обнаружены путем специфичного и высокочувствительного γΡΙΧΡο антиген ИФА, который детектирует 0,1 МЕ/дл, в сравнении с самым нижним лимитом для аРТТ в 1,0 МЕ/дл. Оставшиеся РК параметры (активность) изменялись незначительно в соответствии с полупериодом элиминации и ΜΚΤ. См. табл. 27(В). Дозопропорциональное линейное повышение ΡΙΧ активности наблюдалось на основе Стах, возникающего сразу же после вливания и АИСмр (табл. 4). ΡΙΧ активность демонстрировала биэкспоненциальное затухание после вливания γΡΙΧΡο и характеризовалась быстрой фазой распределения (альфа), за которой следовала линейнологарифмическая фаза элиминации (бета). Средний полупериод распределения (Τ1/2α) был высоко вариабелен у отдельных пациентов (среднее 3,4 и 10,3 ч для двух групп с более высокими дозами) (табл. 27(В)). Средний полупериод элиминации (Τ1/2β) был дозонезависимым в тестируемом терапевтическом дозовом диапазоне, т.е., 53,5 ч, 57,5±8,2 ч и 56,5±14,1 ч при 25 МЕ/кг, 50 МЕ/кг и 100 МЕ/кг соответст- 27 028067 венно. Время 1% (1 МЕ/дл) выше базовой линии, при оценке гРКРс активности, показало дозопропорциональное возрастание. Это составляло 7,3; 10,1±1,5 и 12,3±2,5 дней для доз 25, 50 и 100 МЕ/кг соответственно. На 168 ч (1 неделя) после дозы плазматическая РК активность установилась как 1,1 МЕ/дл, 2,5±0,9 МЕ/дл и 4,6±1,7 МЕ/дл выше базового уровня для 25, 50 и 100 МЕ/кг дозовых групп соответственно. Также дозонезависимыми были МКТ, СЬ и Укк в пределах дозового диапазона от 25 до 100 МЕ/кг. Кроме того, каждый 1 МЕ/кг влитого гРКРс поднимал плазматическую РК активность в среднем на 0,93±0,18 МЕ/дл (табл. 27(В)), и это увеличение концентрации (К) показало слабую позитивную корреляцию с весом тела (К2=0,336, ρ=0,048).
Долговременный эмпирический клинический опыт подтверждает, что постоянной активности фактора в плазме на уровне 1-2 МЕ/дл будет достаточно для предотвращения спонтанных случаев кровотечения у пациентов с тяжелой гемофилией А и В, (№1ккоп е! а1., I. Ш!егп. Мей. 232:25-32 (1992), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки), и учащенные случаи кровотечения связаны с количеством времени ниже 1% от нормальной РУШ активности. СоШпк е! а1., ТЬготЬ Наеток! 7:413-420 (2009), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Таким образом, РК анализы предоставляют средства для оптимизации профилактического лечения с индивидуализированным моделированием дозы для достижения постоянных минимальных уровней выше 1% (1 МЕ/дл ) от базового уровня, уменьшения вариабельности пик/минимум и улучшения соотношения стоимость/эффективность лечения. Сагккоп е! а1., НаеторЬШа 4:83-88 (1998); К1ккег е! а1., НаеторЬШа 9:279-284 (2003), каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки.
Для создания профилей концентрация-время, соответствующих различным режимам дозирования, был проведено моделирование по способу Монте-Карло с использованием популяционной РК модели гРКРс. Средние оценки параметров модели (СЬ, объем распределения, внутри-компартментный клиренс и объем второго компартмента) в тестируемой популяции, вариабельность между отдельными индивидуумами, и остаточная вариабельность были адаптированы для этой фазы 1/2а исследования. ^ап§ е! а1., I. С.’1йп. РЬагтасо1. 49:1012-1024 (2009), которая включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки. Одна тысяча пациентов была смоделирована на дозовый режим с 14-16 точками взятия проб для каждого пациента. Было 14 точек взятия проб для еженедельного дозирования, 15 для дозирования каждые 10 дней, и 16 для дозирования раз в 2 недели. Вес тела (Β^ν) был смоделирован в соответствии с опубликованным способом, \ν;·ιπ§ е! а1. (2009), т.е. на основостепенного уравнения Ζ=Βν-0,5. Медианный Βν у 1000 пациентов был предположен как 75 кг. На основе моделированных профилей концентрация-время, среднее±стандартное отклонение (8Ό) лекарственных профилей концентрациявремя у 1000 пациентов было сконструировано графически для различных режимов дозирования; фиг. 25.
В сравнении со стандартным рекомендованным дозовым режимом от 25 до 40 МЕ/кг РК дважды в неделю, моделирующие результаты медианной гРКРс активности РК из этого исследования показывают, что дозирование один раз в неделю гРКРс при 20 МЕ/кг, или каждые 10 дней при 40 МЕ/кг, или каждые 2 недели при 100 МЕ/кг достаточно для поддержания минимального уровня 1% выше базового уровня, фиг. 25. Эти модель-прогнозируемые оценки подтверждены доступными данными этой фазы 1/2а исследования, которые полностью попадают в 95% доверительный интервал моделированной кривой активность по отношению ко времени. Однако, принимая во внимание гетерогенность сообщаемых клинических случаев прорывного кровотечения по отношению к минимальному уровню плазматической РК активности (Б|огктап. НаеторЬШа, 9:101-110 (2003); АЬпк!гот е! а1. НаеторЬШа, 10:689-697 (2004), каждая из которых включена в настоящее изобретение во всей полноте посредством ссылки), поддерживающая доза скорее всего будет требовать индивидуального подбора.
- 28 028067
Таблица 1
Полинуклеотидные последовательности: Е1Х-Ес А. Е1Х-Ес цепи ДНК последовательность (8ЕР ГО N0: 1, которая кодирует 8ЕС) ГО N0: 2).
ρ5ΥΝ-ΓΙΧ-030 Нуклеотидная последовательность (η5 1 до 7583) :
ΡΙΧ экзон 1 (сигнальный пептид, 1-я аминокислота пропептида): п5 690-777 ИХ мини интрон: п5 778-1076
ИХ пропептидная последовательность : п5 1077-1126 Зрелая ИХ последовательность : п5 1127-2371 Гс : п5 2372-3052
50505055553035533553555305355535533535533+03355305555503553555035350003535355 дад55ссдсд55аса5аас55асдд5ааа5ддсссдсс5ддс5дассзсссаасдасссссдссса55дасд5саа5 аа5дасд5а5д55ссса5ад5аасдссаа5адддас555сса55дасд5саа5ддд5ддад5а555асдд5ааас5д сссас55ддсад5аса5саад5д5а5са5а5дссаад5асдссссс5а55дасд5саа5дасдд5ааа5ддсссдсс
5ддса55а5дсссад5аса5дасс55а5дддас555сс5ас55ддсад5аса5с5асд5а55ад5са5сдс5а55ас са5дд5да5дсдд5555ддсад5аса5саа5дддсд5дда5адсдд555дас5сасдддда555ссаад5с5ссасс сса55дасд5саа5дддад555д5555ддсассаааа5саасдддас555ссаааа5д5сд5аасаас5ссдсссса
55дасдсааа5дддсдд5аддсд5д5асдд5дддадд5с5а5а5аадсададс5с5с5ддс5аас5ададаасссас
5дс55ас5ддс55а5сдааа55аа5асдас5сас5а5адддадасссаадс55сдсдасд5асддссдссасса5дс адсдсд5дааса5да5са5ддсадаа5сассаддсс5са5сасса5с5дсс5555адда5а5с5ас5сад5дс5даа
5д5асадд555д555сс555555аааа5аса55дад5а5дс55дсс5555ада5а5адааа5а5с5да5дс5д5с55 с55сас5ааа5555да55аса5да555дасадсаа5а55даадад5с5аасадссадсасдсадд55дд5аад5ас5 д5дддааса5сасада5555ддс5сса5дссс5ааададааа55ддс555сада55а555дда55ааааасааадас
555с55аадада5д5аааа5555са5да5д5555с555555дс5аааас5ааадаа55а55с5555аса555сад55
555с55да5са5даааасдссаасаааа55с5даа5сддссааададд5а5аа55садд5ааа55ддаадад555д5
- 29 028067 бсаадддаабсбададададаабдбабддаадаааадбдбадббббдаадаадсасдадаадбббббдаааасасбд ааадаасаасбдааббббддаадсадбабдббдабддадабсадбдбдадбссаабссабдбббааабддсддсадб бдсааддабдасаббааббссбабдаабдббддбдбсссбббддабббдааддааадаасбдбдааббадабдбаас абдбаасаббаадаабддсадабдсдадсадббббдбааааабадбдсбдабаасааддбддбббдсбссбдбасбд адддабабсдасббдсадаааассадаадбссбдбдаассадсадбдссабббссабдбддаададбббсбдбббса сааасббсбаадсбсасссдбдсбдадасбдбббббссбдабдбддасбабдбаааббсбасбдаадсбдааассаб 666ддабаасабсасбсааадсасссаабсабббаабдасббсасбсдддббдббддбддадаадабдссаааосад дбсааббсссббддсаддббдббббдаабддбааадббдабдсаббсбдбддаддсбсбабсдббаабдааааабдд аббдбаасбдсбдсссасбдбдббдааасбддбдббааааббасадббдбсдсаддбдаасабаабаббдаддадас адаасабасададсаааадсдааабдбдаббсдааббаббссбсассасаасбасаабдсадсбаббаабаадбаса ассабдасаббдсссббсбддаасбддасдаасссббадбдсбааасадсбасдббасассбабббдсаббдсбдас ааддаабасасдаасабсббссбсааабббддабсбддсбабдбаадбддсбддддаададбсббссасааадддад абсадсбббадббсббсадбассббададббссасббдббдассдадссасабдбсббсдабсбасааадббсасса бсбабаасаасабдббсбдбдсбддсббссабдааддаддбададаббсабдбсааддадабадбдддддассссаб дббасбдаадбддаадддассадбббсббаасбддааббаббадсбддддбдаададбдбдсаабдаааддсаааба бддаабабабассааддбдбсссддбабдбсаасбддаббааддаааааасааадсбсасбдасаааасбсасасаб дсссассдбдсссадсбссддаасбссбдддсддассдбсадбсббссбсббссссссаааасссааддасасссбс абдабсбсссддассссбдаддбсасабдсдбддбддбддасдбдадссасдаадасссбдаддбсаадббсаасбд дбасдбддасддсдбддаддбдсабаабдссаадасааадссдсдддаддадсадбасаасадсасдбассдбдбдд бсадсдбссбсассдбссбдсассаддасбддсбдаабддсааддадбасаадбдсааддбсбссаасааадсссбс ссадсссссабсдадаааассабсбссааадссааадддсадссссдадаассасаддбдбасасссбдсссссабс ссдддабдадсбдассаадаассаддбсадссбдассбдссбддбсаааддсббсбабсссадсдасабсдссдбдд адбдддададсаабдддсадссддадаасаасбасаадассасдссбсссдбдббддасбссдасддсбссббсббс сбсбасадсаадсбсассдбддасаададсаддбддсадсаддддаасдбсббсбсабдсбссдбдабдсабдаддс бобдсасаассасбасасдсадаададссбсбсссбдбсбссдддбааабдадааббсадасабдабаадабасабб дабдадбббддасааассасаасбадаабдсадбдааааааабдсбббабббдбдааабббдбдабдсбаббдсббб абббдбаассаббабаадсбдсаабааасаадббддддбдддсдаадаасбссадсабдадабссссдсдсбддадд абсабссадссддсдбсссддаааасдаббссдаадсссаассбббсабадааддсддсддбддаабсдааабобед бадсасдбдбсадбссбдсбссбсддссасдаадбдсасдсадббдссддссдддбсдсдсадддсдаасбсссдсс сссасддсбдсбсдссдабсбсддбсабддссддсссддаддсдбсссддаадббсдбддасасдассбссдассас бсддсдбасадсбсдбссаддссдсдсасссасасссаддссадддбдббдбссддсассассбддбссбддассдс дсбдабдаасадддбсасдбсдбсссддассасассддсдаадбсдбссбссасдаадбсссдддадаасссдадсс ддбсддбссадаасбсдассдсбссддсдасдбсдсдсдсддбдадсассддаасддсасбддбсаасббддссабд дбббадббссбсассббдбсдбаббабасбабдссдабабасбабдссдабдаббааббдбсаасасдбдсбдабса дабссдаааабддабабасаадсбсссдддадсбббббдсаааадссбаддссбссаааааадссбссбсасбасбб сбддаабадсбсададдсададдсддссбсддссбсбдсабааабааааааааббадбсадссабддддсддадааб дддсддаасбдддсддадббаддддсдддабдддсддадббаддддсдддасбабддббдсбдасбааббдадабдс абдсбббдсабасббсбдссбдсбддддадссбддддасбббссасассбддббдсбдасбааббдадабдсабдсб ббдсабасббсбдссбдсбддддадссбддддасбббссасаособсдбсдадсбадсббсдбдаддсбссддбдсс сдбсадбдддсададсдсасабсдсссасадбссссдадаадббддддддаддддбсддсааббдаассддбдссба дадааддбддсдсддддбааасбдддааадбдабдбсдбдбасбддсбссдссбббббсссдадддбдддддадаас сдбабабаадбдсадбадбсдссдбдаасдббсбббббсдсаасдддбббдссдссадаасасаддбаадбдссдбд бдбддббсссдсдддссбддссбсбббасдддббабддсссббдсдбдссббдааббасббссассбддсбссадба сдбдаббсббдабсссдадсбддадссаддддсдддссббдсдсбббаддадссссббсдссбсдбдсббдадббда ддссбддссбдддсдсбддддссдссдсдбдсдаабсбддбддсассббсдсдссбдбсбсдсбдсбббсдабаадб сбсбадссабббаааабббббдабдассбдсбдсдасдсбббббббсбддсаадабадбсббдбааабдсдддссад дабсбдсасасбддбабббсддбббббддддссдсдддсддсдасддддсссдбдсдбсссадсдсасабдббсддс даддсддддссбдсдадсдсддссассдадаабсддасдддддбадбсбсаадсбддссддссбдсбсбддбдссбд дссбсдсдссдссдбдбабсдссссдсссбдддсддсааддсбддсссддбсддсассадббдсдбдадсддааада бддссдсббсссддсссбдсбссадддддсбсаааабддаддасдсддсдсбсдддададсдддсдддбдадбсасс сасасаааддаааддддссбббссдбссбсадссдбсдсббсабдбдасбссасддадбассдддсдссдбссаддс ассбсдаббадббсбддадсббббддадбасдбсдбсбббаддббддддддаддддббббабдсдабддадбббссс сасасбдадбдддбддадасбдаадббаддссадсббддсасббдабдбааббсбссббддаабббдсссбббббда дбббддабсббддббсаббсбсаадссбсадасадбддббсааадбббббббсббссабббсаддбдбсдбдаасас дбддбсдсддссдсдссдссассабддадасадасасасбссбдсбабдддбасбдсбдсбсбдддббссаддббсс асбддбдасаааасбсасасабдсссассдбдсссадсассбдаасбссбдддаддассдбсадбсббссбсббссс сссаааасссааддасасссбсабдабсбсссддассссбдаддбсасабдсдбддбддбддасдбдадссасдаад асссбдаддбсаадббсаасбддбасдбддасддсдбддаддбдсабаабдссаадасааадссдсдддаддадсад басаасадсасдбассдбдбддбсадсдбссбсассдбссбдсассаддасбддсбдаабддсааддадбасаадбд сааддбсбссаасааадсссбсссадсссссабсдадаааассабсбссааадссааадддсадссссдадаассас аддбдбасасссбдсссссабсссдсдабдадсбдассаадаассаддбсадссбдассбдссбддбсаааддсббс бабсссадсдасабсдссдбддадбдддададсаабдддсадссддадаасаасбасаадассасдссбсссдбдбб ддасбседаеддебссббеббссбобасадсаадсбсассдбддасаададсаддбддсадсаддддаасдбсббсб сабдсбссдбдабдсабдаддсбсбдсасаассасбасасдсадаададссбсбсссбдбсбссдддбааабдасбс
- 30 028067 дададаТсТддссддсКдддсссд-ЬКТсдаадд-Ьаадсс-ЬаТссс-ЬаасссТсТссТсдд-ЬсТсдаККс-Ьасдсд-Ьа ссддЪсаЪсаЪсассаЪсассаЪЪдадЪЪЪааасссдсЪдаЪсадссЪсдасЪдЪдссЪЪсЪадЪЪдссадссаЪсЪ д'Ь'Ьд'Ь'Ь'Ьдсссс'ЬсссссдСдсс'Ь'Ьсс'ЬСдасссСддаадд'Ьдссас'Ьсссас'ЬдСссС'Ь'Ьсс'Ьаа'Ьаааа'Ьдадда ааТТдсаКсдсаТКдТсТдад-ЬаддКд-Ьса-ЬКс-ЬаТКсТдддддд-ЬддддТддддсаддасадсаадддддадда-ЬК дддаадасааЪадсаддсаЪдсЪддддаЪдсддСдддсЪсЪакддсЪЪсЪдаддсддааадаассадЪддсддЪааЪ асдд'Ь'ЬаКссасадааКсадддда'Ьаасдсаддааадааса'ЬдКдадсааааддссадсааааддссаддаассд'Ьа ааааддссдсдТТдсТддсдТ'ЬКТ'ЬссаКаддс'ЬссдссссссКдасдадсаКсасаааааКсдасдсТсаадКсад адд'ЬддсдааасссдасаддасЪа'Ьааада'Ьассаддсд'ЬЪЪсссссЪадаадс'ЬсссЪсдЪдсдс'Ьс'Ьсс'ЬдЪ'Ьсс дассс'Ьдссдс'Ь'ЬассддаСасс'ЬдСссдссС'Ь'Ьс'Ьссс'ЬСсдддаадсд'Ьддсдс'Ь'ЬСс'Ьса'ЬадсСсасдсСд'Ьа ддТаКсТсадКТсддТдТадд'Ьсд'ЬКсдсТссаадс'ЬдддсТдКд'Ьдсасдаассссссд'ЬКсадсссдассдсТдс дсс'Ь'Ьа'Ьссдд'Ьаас'Ьа'Ьсд'ЬсЬ'Ьдад'ЬссаасссддЬаадасасдас'ЬЬа'ЬсдссасЬддсадсадссас'Ьдд'Ьаа садда-Ь-ЬадсададсдаддСа-Ьд-Ьаддсдд-Ьдс-ЬасададС-ЬсС-ЬдаадСддСддсс-ЬаасСасддсСасас-Ьадаа даасадТаТТКддКаТсТдсдсКс-Ьдс-Ьдаадссад-ЬКассТКсддааааададТКддКадсТсКТдаТссддсааа сааассассдсТддТадсддТддТ’ЬКТ'ЬКТдКТ'ЬдсаадсадсадаКТасдсдсадааааааадда'ЬсТсаадаада
Ьсс'Ь'ЬЪдаЪсЪЪ'ЬЪс'ЬасддддЪс'Ьдасдс'ЬсадЪддаасдаааасЪсасд'Ь'ЬаадддаЪ'ЬЪЪддЪса'ЬдасаЪ'Ьаа сс-Ьа-ЬаааааСаддсдСа-Ьсасдаддссс-Ь-ЬСсдСс-ЬсдсдсдС-Ь-ЬсддСдаСдасддСдаааасс-Ьс-Ьдасаса-Ьд садсКсссддадасддКсасадсТ-ЬдТсКдКаадсддаТдссдддадсадасаадсссдТсадддсдсд-Ьсадсддд
ЪдЪЪддсдддЪдЪсддддсЪддсЪЪаасЪаЪдсддсаЪсададсадаЪЪдЪасЪдададЪдсассаЪаЪаЪдсддЪд
ЬдаааЪассдсасадаЪдсдЪааддадааааЪассдсаЪсаддсдсса'ЬЪсдссаЪЪсаддсЪдсдсаасЪд'ЬЪддд аадддсда-Ьсдд-Ьдсдддсс-ЬсС-Ьсдс-Ьа-Ь-Ьасдсса
В. Тс ДНК последовательность (мышиный 1дк сигнальный пептид подчеркнут) (δΕφ ΙΌ ΝΟ: 3, которая кодирует δΕΟ ΙΌ ΝΟ: 4). Это Тс кассета из ρδΥN-ΡIX-ϋ3ϋ. Кроме того, существует раздельная Тс экспрессионная кассета, которая трансфицируется в клеточную линию в плазмидную ρδΥΝ-ΡΧ-015, которая кодирует ту же самую аминокислотную последовательность, но содержит несколько некодирующих цепей. Вторая копия Вс кодирующей последовательности запускает в работу больший мономер: димер соотношение.
аЩйайасайасасас^ссЩсШЩййШсЩсШс^сЩйййссаййЦссасЩйШасаааас^сасасаЩсс сассК8ссса£сасс1£аас1сс1£££а££асс£1са£1сйсс1сйссссссаааасссаа££асассс1;са1;£а
1с1ссс££асссс1£а££1саса1£сК88188Ш£ас£1;£а£ссас£аа£ассс1;£а££1;саа£1;1саас1;££1ас
Кёёасёёс^ёёаёКёса1аа^ссааёасаааёссёСёёёаёёаёса^асааса§сас^ассКё1ёё1с а£с£1сс1сасс£1сс1£сасса££ас1££с1£аа1££саа££а£1асаа£1;8саа££1:с1;ссаасааа£ссс1;ссс а£ссссса1с£а£аааасса1с1ссааа£ссааа£££са£сссс£а£аассаса££1;£1асассс1;£ссссса1;сс с§с§а1§а§с1§ассаа§аасс১1са§сс1§асс1;§сс1;§§1;саа১с1;1;с1а1;ссса§с§аса1;с§сс§1;§§а
К888а£а£саа1£££са£сс££а£аасаас1асаа£ассас£сс1;ссс£1;8й88ас1;сс£ас££с1;сс1;1;с1;1;сс
1с1аса£саа£с1сасс£1££асаа£а£са££1££са£са££££аас£1сйс1са1£с1;сс£1;£а1;£са1;£а££с1 с1£сасаассас1асас£са£аа£а£сс1с1ссс1;§1;с1;сс£££1ааа
- 31 028067
Таблица 2
Полипептидные последовательности
Р1Х-Рс Мономер гибрид: создан коэкспрессией Р1Х-Рс и Рс цепей.
А. Р1Х-Рс цепь (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 2): (28-аминокислотная сигнальная последовательность подчеркнута, 18-аминокислотный пропептид подчеркнут двойной линией, Рс участок выделен курсивом). Стерминальный лизин не представлен ни в одной субъединице; этот процессинг часто наблюдается в рекомбинантных белках, вырабатываемых в культуре клеток млекопитающих, а также в белках, полученных из плазмы крови.
ПХГС-ЗС СУБЪЕДИНИЦА:
ИХ Сигнальный пептид : -4 6 ΜςΚΥΝΜΙΜΑΕ 5РСЫТ1СЬЬ СУЬЬЗАЕС
ИХ Пропептид : -18 ΤνΓΣΡΗΕΝΑΝ ΚΙΣΝΚΡΚΚ
1 УЫЗСКЬЕЕГУ ςΟΝΣΕΕΕΟΜΕ ЕКСЗГЕЕАЕЕ νΓΕΝΤΕΚΤΤΕ ΓΝκςγνϋΟϋς
51 СЕЗЫРСЬЫСС 30ΚϋϋΙΝ3ΥΕ СТССРГСГЕСК ΝΟΕΣϋνΤΟΝΙ ΚΝσκοΕςροκ
101 Ν3ΑΟΝΚννΌ3 СТЕСУКЬАЕИ <2КЗСЕРАУРГ РССКУЗУЗ<2Т ЗКЬТКАЕТУТ
151 ΡϋνϋΥνΝ3ΤΕ ΑΕΤΙΣΌΝΙΤς 3τς3ΓΝϋΓτκ УУССЕЬАКРС ςρρΝςννΣΝΟ
201 КУОАГССС31 νΝΕΚϊΫΐνΤΑΑ ΗονΕτσνκιτ ννΑΟΕΗΝΙΕΕ ΤΕΗΤΕςΚΕΝν
251 ΙΚΙΙΡΗΗΝΥΝ ΑΑΙΝΚΥΝΗϋΙ АЬЬЕЬОЕРЬУ ΣΝ3ΥνΤΡΙ0Ι ΑΟΚΕΥΤΝΙΠ
301 кгсзсуузстс СКУГНКСКЗА ЬУЬ<2УЬКУРЬ УОКАТСЬКЗТ ΚΓΤΙΥΝΝΜΓΟ
351 АСГНЕССЕОЗ СОСОЗССРНУ ТЕУЕСТЗГЬТ С115ГССЕЕСА МКСКУС1УТК
401 ν3ΚΥνΝΝΙΚΕ кткьтпкгнг СРРСРАРЕЪР ССРЗУЕЬЕРР ΚΡΚΌΤΤΜΙ3Ρ
451 ΤΡΕνΤΟνννΌ νΞΗΕΌΡΕνΚΕ ΝΚΥνΌΖνΕνΗ ΝΑΚΤΚΡΡΕΕ<2 ΥΝ3ΤΥΚνν3ν
501 1ΤνΐΗ<2ΏΝ1Ν ΟΚΕΥΚΟΚνΕΝ ΚΑ1ΡΑΡΙΕΚΤ Ι5ΚΑΚ&2ΡΡΕ Ρζ2νΥΤ1ΡΡ3Ρ
551 ΌΕ1ΤΚΝθν31 талтксрурз ΌΙΑνΕΚΕΞΝα ΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡ ΡνΡΌ3Ό33ΕΕ
601 ΣΥΕΚΣΤνΌΚΕ РК<2<2С1:Е/Р8С ЗУМНЕАЫЯГН УТОКЗЪЗЪЗР СК
В. Рс цепь (8Е^ ΙΌ ΝΟ: 4)
20-аминокислотный сигнальный пептид легкой цепи гетерологичного мышиного Ι§κ (подчеркнуто): -20 метртьылу у шлуурсзто
Зрелая Рс последовательность (в соответствии с нумерацией человеческого Ι§Ο1 аминокислот с 221 по 447, нумерация ЕЙ)
1 РКТНТСРРСР АРЕЬЪССРЗУ ЕЬЕРРКРКРТ ЬШЗКТРЕУТ САЛЛ/ТЛ/ЗНЕР
51 ΡΕνΚΓΝΪΛΓΥνΌ СУЕУНЦАКТК ΡΕΕΕ0ΥΝ3ΤΥ НУУЗУЪТУЪН ОРКЫГСКЕУК
101 СКУЗЫКАЬРА ΡΙΕΚΤΙ3ΚΑΚ ΟΟΡΚΕΡΟνΥΤ ЪРРЗКЪЕЪТК ЫОУЗЬТСЬУК
151 ΟΓΥΡΞϋΙΑνΕ №Ε3Ν3αΡΕΝΝ УКТТРРУЬРЗ ЪСЗЕЕЬУЗКЪ туркзккоас
201 ЫУЕЗСЗУМНЕ Α]1ΗΝΗΥΤζ)Κ5 ЪЗЬЗРСК
- 32 028067
Концентрация антигена Р1ХРс у отдельного пациента в соответствии с временными данными. Рассортировано по поминальной дозе, фактической дозе, продолжительности вливания и номеру пациента
Таблица 3
Фактичес Концентра Фактичес Концентра Фактичес Концентра Фактичес Концентра
кое время ция (нг/мл) кое время ция (нг/мл) кое время ция (нг/мл) кое время ция (нг/мл)
(ч) (Ч) (ч) (ч)
Пациент 1 Пациент 2 Пациент 3 Пациент 4
-0,50 0,0 -1,23 0,0 -0,18 0,0 -0,18 0,0
0,17 2325,3 0,17 3352,1 0,28 5915,3 . 0,17 8166,5
0,42 1632,4 0,40 3017,3 0,42 6574,3 0,42 7362,3
1,17 1497,7 1,15 2280,7 1,17 5764,7 1,17 6723,4
3,18 1466,4 3,15 2077,5 3,17 4204,8 3,17 5291,4
6,13 1268,2 6,15 2054,7 6,17 3956,2 6,18 4673,1
9,12 1100,7 9,15 1700,4 9,17 3567,7 9,17 3954,6
24,12 805,0 24,23 1417,3 24,17 2805,6 24,17 3327,6
48,03 544,5 48,40 766,0 48,98 1727,7 48,20 2148,7
72,23 377,7 70,73 719,0 72,40 1165,8 72,17 1632,2
96,75 215,3 92,57 480,2 96,98 917,1 96,17 1234,4 .
120,13 192,6 119,98 326,3 121,23 673,9 ' 120,13 894,0
141,95 128,6 141,10 241,1 168,65 568,2 144,18 645,2
169,45 112,4 167,98 194,6 240,15 265,4 168,22 564,1
192,37 93,6 192,85 160,1 290,97 286,4 - 192,20 509,2
216,28 76,1 216,98 149,0 337,98 238,5 216,23 474,5
237,30 76,4 238,65 125,7 240,23 446,1
Пациент 5 ' Пациент 6 Пациент 7 Пациент 8
-0,18 0,0 -0,07 0,0 -1,27 0,0 -1,37 0,0
0,17 7520,2 0,17 11671,7 0,22 7055,9 0,25 27413,4
0,43 7233,9 0,42 8654,5 0,42 6215,7 0,47 23640,8
1,20 6752,1 1,17 8880,4 1,17 5498,6 1,35 18505,6
3,15 5873,1 3,17 8509,3 3,17 4477,7 3,22 15708,1
6,23 5919,2 6,17 7618,7 6,17 4084,8 6,17 14915,6
9,20 5332,9 9,17 6584,2 9,17 3888,9 9,17 16486,4
24,17 4215,9 48,17 3217,7 24,17 2849,4 24,72 9937,8
48,15 2986,6 72,17 1651,6 48,82 1630,6 48,90 6383,5
72,15 1933,3 96,17 1580,1 72,57 1295,7 72,38 4190,6
96,03 1249,0 120,17 722,7 96,57 1150,7 96,40 3774,7
120,13 401,4 240,17 329,5 121,15 954,9 120,30 2514,9
144,03 482,3 288,17 292,7 144,10 780,6 168,77 1626,0
168,17 478,0 336,17 252,7 168,82 447,6 240,27 924,7
192,12 433,7 192,77 446,5 288,83 682,4
216,15 368,9 240,57 427,8 337,03 586,4
240,07 264,0
Пациент 9 Пациент 10 Пациент 11 Пациент 12
-0,82 0,0 -0,48 0,0 -0,15 0,0 -1,12 0,0
0,28 15027,1 0,25 16760,0 0,23 19641,7 0,17 15194,5
0,63 13374,1 0,50 11529,0 0,47 17267,2 0,42 12255,7
1,17 12395,6 1,22 10566,3 1,22 15902,2 1,17 11171,3
3,20 10808,4 3,22 9889,0 3,22 13708,9 3,17 9835,4
6,22 9640,2 6,22 8290,2 6,25 12469,4 6,17 8513,2
9,15 10505,5 9,22 7114,7 9,22 12029,8 9,17 8413,0
23,15 6487,3 24,22 5877,0 24,22 8083,3 24,17 5538,2
46,62 5324,8 48,22 3980,4 47,72 4431,0 48,20 3885,5
70,10 2895,5 72,22 2455,6 71,88 2162,6 72,13 2959,9
94,15 3208,3 96,12 2052,6 191,72 1468,7 95,17 2215,4
118,13 2610,6 120,22 1302,5 263,72 428,6 119,17 1799,7
166,10 2007,2 144,22 1349,3 167,38 1339,7
238,15 1086,2 168,22 1221,0 239,50 892,4
286,15 942,8 192,18 910,2 287,25 646,9
335,57 621,3 216,22 136,2
Суммарные данные по фармакокинетике ΡΙΧΡο антигена отдельные пациенты и среднее групповое значение
Таблица 4
Номина льная доза (МЕ/кг) Фактичес кая доза (МЕ/кг) Эквивалент дозы (мг/кг) Паци- ент Стах (НГ/МЛ) ΑυϋΐΝΡ (ч*нг/мл) СГ (мл/ч/кг) ν55* (мл/кг) МКТ* (ч) Альфа Н1_* (ч) Бета Н1_* (ч)
12,5 13,714 0,228 1 1670 91300 2,50 245 98,2 21,2 107
N 1 1 1 1 1 1 1
25 27,250 | 0,453 | 2 2730 144000 3,14 273 87,1 11,3 71,0
N 1 1 1 1 1 1 1
50 54,5 0,905 3 5470 356000 2,54 366 144 18,6 138
54,5 0,905 4 6910 389000 2,32 244 105 10,6 85,3
54,5 0,905 5 7520 416000 2,17 184 84,5 Л/С 94,3
54,513 0,906 6 11700 531000 1,71 190 112 Л/С 140
55,878 0,928 7 5950 348000 2,67 310 116 10,1 93,9
N 5 5 5 5 5 3 5
Среднее 7510 408000 2,28 259 112 13,1 110
δϋ 2480 73900 0,374 78,5 21,5 4,77 26,5
8Е 1110 33100 0,167 35,1 9,60 2,75 11,8
Среднее геометрическое 7230 403000 2,26 250 111 12,6 108
С\/% среднее геометрическое 30,3 17,1 17,6 30,8 19,4 34,9 23,8
100 109 1,81 10 12500 667000 2,72 263 96,8 9,79 78,0
109 1,81 8 21600 1200000 1,51 156 103 15,7 94,3
109 1,81 9 13400 998000 1,81 248 137 11,5 107
109,176 1,81 11 17200 844000 2,15 226 105 13,0 97,1
109,441 1,82 12 12500 778000 2,34 295 126 10,6 102
N 5 5 5 5 5 5 5
Среднее 15400 897000 2,11 238 114 12,1 95,8
δϋ 3960 2060003 0,464ь 52,2е 17,1 2,33 11,1
δΕ 1770 92000 0,208 23,3 7,64 1,04 4,96
Среднее геометрическое 15100 878000 2,06 232 113 11,9 95,2
С\/% среднее геометрическое 24,5 22,9 22,9 24,7 14,8 118,7 12,2
* СЬ, νδδ, МКТ, Т1/2а и Τ1/2β для комбинированных 12,5-100 МЕ/кг доз составляют 2,30+0,46 (1,51-2,72); 250+58,2 (156-366); 110+18,5 (84,5-144); 12,0+4,0 (10,1-18,6, не включая двух пациентов, чьи РК параметры были определены по некомпартментному анализу); и 101+20,9 (78-140) соответственно. Вследствие коррекции округления или других ошибок, (а) должно быть 207000, (Ь) должно быть 0,468, (с) должно быть 52,1.
Таблица 5
Средняя активность ΡΙΧΡο у отдельных пациентов и групповая и скорректированная по базовому уровню ΡΙΧΡο активность по сравнению с временными данными. Распределено по номинальной дозе, фактической дозе, п юдолжительности введения и номеру пациента
Фактичес кое время (ч) Резуль тат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл) Фактичес кое время (ч) Резуль- тат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл) Фактиче ское время (ч) Результат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл)
Пациент 1 Пациент 2 Пациент 3
-309,80 2 ΝΟ -310,60 3 ΝΟ -524,08 < 1,0 ΝΟ
-0,50 3 0,0 -1,23 2 0,0 -0,18 2 0,0
0,17 16 13,0 0,17 23 21,0 0,28 44 42,0
0,42 11 8,1 0,40 19 17,0 0,42 31 29,0
1,17 10 7,1 1,15 15 13,0 1,17 27 25,1
3,18 12 9,4 3,15 13 п,о 3,17 22 20,2
6,13 9 6,6 6,15 11 9,0 6,17 18 16,4
9,12 10 7,9 9,15 13 п,о 9,17 17 15,6
24,12 7 5,0 24,23 8 6,0 24,17 12 п,о
48,03 6 4,0 48,40 6 4,0 48,98 7 6,0
72,23 4 2,0 70,73 6 4,0 72,40 6 5,0
96,75 3 1,0 92,57 4 2,0 96,98 6 5,0
120,13 3 1,0 119,98 4 2,0 121,23 5 4,0
141,95 3 1,0 141,10 4 2,0 168,65 3 2,0
169,45 2 0,0 167,98 3 1,0 240,15 1 0,0
192,37 3 1,0 192,85 2 0,0 290,97 1 0,0
216,28 3 1,0 216,98 3 1,0 337,98 1 0,0
237,30 3 1,0 238,65 3 1,0 675,22 2 1,0
746,22 3 1,0 891,90 2 0,0
- 34 028067
Таблица 5 (продолжение)
Фактичес кое время (ч) Резуль тат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл) Фактичес кое время (ч) Резуль тат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл) Фактиче ское время (ч) Результат (МЕ/дл) Скорректирован ный по базовому уровню результат (МЕ/дл)
Пациент 4 Пациент 5 Пациент 6
-285,52 1 ΝΟ -104,18 < 1,0 ΝΟ -503,20 3 ΝΟ
-0,18 < 1,0 0,0 -0,18 < 1,0 0,0 -0,07 3 0,0
0,17 59 58,0 0,17 35 34,0 0,17 3 0,0
0,42 45 44,0 0,43 30 29,0 0,42 64 61,0
1Д7 40 39,0 1,20 25 24,0 1,17 57 54,1
3,17 30 29,0 3,15 21 20,0 3,17 54 51,3
6,18 26 25,0 6,23 19 18,0 6,17 42 39,6
9,17 22 21,0 9,20 ΝΚ ΝΚ 9,17 43 40,9
24,17 14 13,0 24,17 13 12,0 24,17 26 24,0
48,20 9 8,0 48,15 9 8,0 48,17 17 15,0
72,17 8 7,0 72,15 7 6,0 72,17 13 п,о
96,17 5 4,0 96,03 5 4,0 96,17 10 8,0
120,13 4 з,о 120,13 4 з,о 120,17 9 7,0
144,18 4 з,о 144,03 3 2,0 168,17 6 4,0
168,22 3 2,0 168,17 2 1,0 240,17 4 2,0
192,20 3 2,0 192,12 2 1,0 288,17 3 1,0
216,23 2 1,0 216,15 2 1,0 336,17 4 2,0
240,23 2 1,0 240,07 2 1,0 504,17 3 1,0
720,73 < 1,0 0,0 547,07 < 1,0 0,0
Пациент 7 Пациент 8 Пациент 9
-438,43 < 1,0 ΝΟ -120,42 < 1,0 ΝΟ -193,05 8 ΝΟ
-1,27 4 0,0 -1,37 < 1,0 0,0 -0,82 3 0,0
0,22 46 42,0 0,25 129 128,0 0,28 100 97,0
0,42 38 34,1 0,47 117 116,0 0,63 93 90,1
1,17 30 26,2 1,35 102 101,0 1,17 94 91,1
3,17 28 24,5 3,22 98 97,0 3,20 80 77,3
6,17 24 20,8 6,17 80 79,0 6,22 69 66,6
9,17 22 19,2 9,17 72 71,0 9,15 64 61,9
24,17 14 12,4 24,72 53 52,0 23,15 47 45,0
48,82 10 9,0 48,90 30 29,0 46,62 25 23,0
72,57 6 5,0 72,38 19 18,0 70,10 17 15,0
96,57 5 4,0 96,40 14 13,0 94,15 13 п,о
121,15 4 з,о 120,30 9 8,0 118,13 9 7,0
144,10 3 2,0 168,77 6 5,0 166,10 5 з,о
168,82 2 1,0 240,27 3 2,0 238,15 3 1,0
192,77 2 1,0 288,83 2 1,0 286,15 2 0,0
240,57 2 1,0 337,03 2 1,0 335,57 2 0,0
744,57 3 2,0 840,28 <1,0 0,0 741,77 3 1,0
- 35 028067
Таблица 5 (продолжение)
Фактиче Результ Скорректирова Фактич Результ Скорректирова Фактич Результ Скорректирован
ское ат нный по еское ат нный по еское ат ный по
время (МЕ/дл) базовому время (МЕ/дл) базовому время (МЕ/дл) базовому
(ч) уровню (ч) уровню (ч) уровню
результат результат результат
(МЕ/дл) (МЕ/дл) (МЕ/дл)
Пациент 10 Пациент 11 Пациент 12
-334,63 1 ΝΟ -912,28 2 ΝΟ -342,58 2 ΝΟ
-0,48 2 0,0 -0,15 2 0,0 -1,12 2 0,0
0,25 120 118,0 0,23 по 108,0 0,17 108 106,0
0,50 104 102,0 0,47 106 104,0 0,42 90 88,0
1,22 84 82,1 1,22 96 94,0 1,17 70 68,0
3,22 75 73,2 3,22 92 90,0 3,17 69 67,0
6,22 60 58,4 6,25 81 79,0 6,17 55 53,0
9,22 56 54,6 9,22 70 68,0 9,17 55 53,0
24,22 36 35,0 24,22 53 51,0 24,17 37 35,0
48,22 21 20,0 47,72 33 31,0 48,20 25 23,0
72,22 14 13,0 71,88 25 23,0 72,13 14 12,0
96,12 11 10,0 167,72 8 6,0 95,17 10 8,0
120,22 7 6,0 191,72 8 6,0 119,17 7 5,0
144,22 6 5,0 263,72 4 2,0 167,38 6 4,0
168,22 6 5,0 359,72 3 1,0 239,50 3 1,0
192,18 4 з,о 383,97 3 1,0 287,25 2 0,0
216,22 85 84,0 890,97 14 12,0 526,42 4 2,0
744,95 2 1,0
Примечание: данные, выделенные полужирным шрифтом, представляют возврат к базовому уровню и были исключены из анализа.
Таблица 6
Фармакокинетические суммарные данные по средней активности РIXРс у отдельных пациентов и групповой. Распределено по номинальной дозе, фактической дозе и номеру пациента
Номинал ьная доза (МЕ/кг) Фактическая доза (МЕ/кг) Пациен т Стах (МЕ/д л) Аис,мр (ч*МЕ/дл ) Аиса (%) Αυοβ (%) А11С/Доза (МЕ*ч/дл на МЕ/кг) С1 (мл/ч/кг) VI (мл/кг) νδ5 (мл/кг) МКТ (ч) Альф а Н1_ (ч) Бета Н1_ (ч)
12,5 13,714 1 11,9 418 0,231 99,8 30,5 3,28 102 157 48,0 0,140 33,3
N 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
25 27,25 | 2 19,9 753 2,50 97,8 27,6 3,62 134 275 76,0 1,20 54,0
N 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
50 54,5 3 34,5 1280 5,7 94,5 23,5 4,26 155 365 85,8 2,32 62,9
54,5 4 48,5 1450 12,4 87,7 26,6 3,76 111 282 75,1 3,64 58,9
54,5 5 33,0 1190 1,5 98,3 21,8 4,58 160 274 59,9 0,840 42,1
54,513 6 53,5 2960 1,0 99,1 54,3 1,84 100 149 81,1 1,07 56,7
55,878 7 38,6 1270 2,2 97,9 22,7 4,41 141 248 56,4 1,07 40,0
N 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
Среднее 41,6 1630 4,56 95,5 29,8 3,77 133 264 71,7 1,79 52,1
8,97а 750 4,75 4,70 13,8 1,12 26,7 77,6 13,0 1,19 10,4
5Е 4,01 335 2,13 2,10 6,18 0,501 11,9 34,7 5,79 0,531 4,65
Среднее геометрическое 40,9 1530 2,98 95,4 27,9 3,59 131 254 70,7 1,52 51,3
С\/% среднее геометрическое 21,4 39,1 136,5 5,0 39,4 39,4 21,1 33,8 18,8 68,6 21,0
100 109 10 98,9 3330 18,5 81,3 30,6 3,28 109 216 65,9 6,53 54,6
109 8 111 4580 28,9 71,1 42,0 2,38 98,0 145 61,1 13,2 54,2
109 9 92,1 3540 17,0 82,9 32,5 3,08 118 163 53,1 9,43 42,4 е1
109,176 11 99,1 5150 28,6 71,3 47,2 2,12 110 162 76,2 16,6 67,4
109,441 12 89,9 3060 9,2 90,8 28,0 3,58 121 207 57,9 4,19 43,8
N 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5
Среднее 98,2 3930 20,4 79,5 36,1 2,89 111 179 62,8 9,99 52,5
5ϋ 8,21ь 893е 8,37 8,37 8,17 0,615 8,98 31,1 8,82 4,99 10,1
5Е 3,67 399 3,74 3,74 3,65 0,275 4,02 13,9 3,95 2,23 4,51
Среднее геометрическое 97,9 3860 18,9 79,1 35,4 2,83 111 177 62,4 8,92 51,7
СУ% Среднее геометрическое 8,2 22,4 49,7 10,5 22,4 22,5 8,2 17,4 13,8 59,4 19,0
Вследствие коррекции округления и других ошибок, (а) должно быть 8,98, (Ь) должно быть 8,23, (с) должно быть 892 и (й) должно быть 42,2.
- 36 028067
Табл. 7А,7В. Вторичные фармакокинетические суммарные данные по средней активности Р1ХРс у отдельных пациентов и групповой. Распределено по номинальной дозе, фактической дозе и номеру пациента.
Таблицы 7А
Номинал ьная доза (МЕ/кг) Факти ческая доза (МЕ/кг ) Пацие нт С168а (МЕ/дл) ТВЬР1ь (День) ТВЬРЗ С (День) ТВЕР5Й (День) К значение6 (МЕ/дл на МЕ/кг) К значениег (МЕ/дл на МЕ/кг) Ιη νίνο повышени е концентра ции8 (%) Ιη νίνο Повышен ие концентр ации*1 (%)
12,5 13,714 1 0,264 4,34 2,13 1,11 0,87 0,95 30,8 33,6
N 1 1 1 1 1 1 1 1
25 27,25 |2 1,09 7,28 3,72 2,06 0,73 0,77 31,8 33,5
N 1 1 1 1 1 1 1 1
50 54,5 3 2,09 9,79 5,64 3,70 0,63 0,77 33,0 40,2
54,5 4 2,08 9,58 5,69 3,89 0,89 1,06 37,8 45,2
54,5 5 1,22 7,50 4,72 3,42 0,61 0,62 33,6 34,6
54,513 6 4,61 12,2 8,47 6,72 0,98 1,12 38,2 43,6
55,878 7 1,17 7,37 4,74 3,51 0,69 0,75 29,9 32,6
N 5 5 5 5 5 5 5 5
Среднее 2,23 9,29 5,85 4,25 0,76 0,86 34,5 39,2
8ϋ 1,40 1,98 1,54 1,39 0,17 0,22 3,5 5,5
8Е 0,627 0,886 0,687 0,623 0,074 0,0963 1,6 2,5
Среднее геометрическо е 1,96 9,12 5,71 4,10 0,75 0,84 34,4 38,9
СУ% среднее геометрическо е 60,0 21,2 24,1 28,6 21,5 25,4 10,2 14,4
а С168 = Оцененная Р1Х активность выше базового уровня приблизительно 168 ч после дозы. Значение, выделенное курсивом, было оценено по стимуляции, осуществленной с использованием однокомпартментной модели и констант микроскопической степени пациента.
Ь ТВРР1 = Модель-прогнозируемое время после дозы, когда Р1Х активность уменьшается до приблизительно 1 МЕ/дл выше базового уровня. Значения, выделенные курсивом, были оценены по стимуляции, проведенной с использованием однокомпартментной модели и констант микроскопической степени пациента.
с ТВЬРЭ = Модель-прогнозируемое время после дозы, когда Р1Х активность уменьшается до приблизительно 3 МЕ/дл выше базового уровня.
ά ТВРР5 = Модель-прогнозируемое время после дозы, когда Р1Х активность уменьшается до приблизительно 5 МЕ/дл выше базового уровня.
е К-значение было рассчитано с использованием модель-прогнозируемого Стах значения, сгенерированного по результатом с вычетом исходных вычтенных результатов, разделенных на дозу.
г К-значение было рассчитано с использованием наблюдаемого максимального после дозы результата пробы; К-значение=(с вычетом базового уровня Стах наблюдаемый)/Доза).
8 Ιη νίνο повышение концентрации=100х(модель-прогнозируемое Стах из данных с вычетом базового уровня/Доза)хобъем плазмы (дл)/Доза в ΜΕ; где объем плазмы в мл=(23,7хИ1 в с\1р(9,()х\\'1 в кг)1709.
ь Ιη νίνο Иесоуегу 100х(с вычетом базового уровня наблюдаемый Стах)хобъем плазмы (дл)/Доза в ΜΕ; где объем плазмы в мл=(23,7хИ1 в см)+(9,0хЖ в кг)-1709.
- 37 028067
Таблица 7В
Номинал ьная доза (МЕ/кг) Фактиче ская доза (МЕ/кг) Пациен т С168а (МЕ/дл) ТВЬР1ь (День) ТВЬРЗ6 (День) ТВЕР5Й (День) К значение6 (МЕ/дл на МЕ/кг) К значение] г (МЕ/дл на МЕ/кг) Ιη νίνο повышен ие концентр ации8 (%) Ιη νίνο повышени е концентра цииь (%)
100 10 4,08 11,6 8,01 6,34 0,91 1,08 43,4 51,8
109 8 4,88 12,1 8,57 6,92 1,02 1,17 28,7 33,1
109 9 3,09 9,87 7,07 5,78 0,84 0,89 39,7 41,8
109,176 11 6,77 14,7 10,3 8,21 0,91 0,99 27,8 30,3
109,441 12 3,09 9,96 7,07 5,72 0,82 0,97 35,8 42,2
N 5 5 5 5 5 5 5 5
Среднее 4,38 П,6 8,20 6,59 0,90 1,02 35,1 39,8
δϋ 1,53 1,97 1,34 1,03 0,0784 о,п 6,8 8,5
ЗЕ 0,685 0,881 0,597 0,459 0,0351 0,0482 з,о 3,8
Среднее геометрическое 4,19 П,5 8,12 6,53 0,90 1,02 34,5 39,1
СУ% среднее геометрическое 34,1 16,5 15,7 15,0 8,6 10,5 19,8 21,6
Таблица 8
Исследование фазы 1/2а: сравнение РК параметров для гЕКЕс и ΒΕNΕРIX™
Параметры *гР1ХРс [Среднее±8О (тт тах)] [N=11] ^ΒΕΝΕΡΙΧ™ [Среднее±8О (тт -тах)] [N=11]
ίι/2 (часы) 52,5 ±9,2 (40 - 67,4) 19,3 ±4,97 (11,1 -36,4)
МКТ (часы) 68,05 ±11,16 (53,1 -85,8) 26,0 ±6,07 (15,81 -46,09)
СЬ (мл/час/кг) 3,36 ±0,93 (1,84-4,58) 8,4 ±2,01 (4,66- 13,64)
Постепенное повышение концентрации (МЕ/дл на МЕ/кг) 0,93 ±0,18 (0,62-1,17)а 0,75 ±0,23 (0,34- 1,38)
Стах (МЕ/дл на МЕ/кг) 24 ч после инъекции
АИС 48 ч после инъекции
* Оценки по 2-компартментному анализу ЕК активности при номинальных дозах 25, 50 и 100МЕ/кг (п=11).
ι Суммарные характеристики продукта ΒΕNΕРIX™ (18 ноября, 2009). Медиана и вариационный размах (п=56).
а Диапазон, скорректированный из-за округления или других ошибок как 0,63-1,18. По сравнению с данными в анамнезе по ΒΕNΕРIX™, гЕК-Ес демонстрировал:
3-разовое возрастание периода полувыведения и среднего времени удержания,
24% улучшенное сравнительное постепенное повышение концентрации,
2,5х уменьшенный клиренс.
Таблица 9
Фаза 1/2а исследования: дозопропорциональное возрастание Стах и ЛИС гЕКЕс (активность)
Доза (МЕ/кг) #пациентов Стах (МЕ/дл) [Среднее±8О (тт тах)] АиС (ч*МЕ/дл) [Среднее±ЗО (тт тах)]
25 1 19,9 753
50 5 41,6 ±8,97 (33,053,5) 1630 ±750 (1190-2960)
100 5 98,2 ±8,21 (89,9111,0) 3930 ±893 (3060-5150)
Также см. фиг. 5.
- 38 028067
Табл. 10А, 10В. Оцененная терапевтическая продолжительность гРКРс в дозах 50 и 100 МЕ/кг.
Таблица 10А
Параметр Г еометрическая медиана
Р1Х:С на День 7 2,0 МЕ/дл (выше базового уровня)
Время при 1 МЕ/дл выше базового уровня 9,1 дней
Время при 3 МЕ/дл выше базового уровня 5,7 дней
Таблица 10В
Параметр Г еометрическая медиана
Р1Х:С на День 7 4,2 МЕ/дл (выше базового уровня)
Время при 1 МЕ/дл выше базового уровня 11,5 дней
Время при 3 МЕ/дл выше базового уровня 8,1 дней
См. также фиг. 6А-6В.
Таблица 11
Дозопропорциональное возрастание Стах и АИС для гРКРс антигена
Доза (МЕ/кг) #пациентов Стах (нг/мл) [Среднее ±δϋ] Аис (ч*нг/мл) [Среднее ±δϋ]
25 1 2730 144000
50 5 7510 ±2480 408000 ± 73900
100 5 15400 ±3960 897000 ± 206000
См. также фиг. 7.
- 39 028067
Таблица 12
Фармакокинетические оценки для гРКРс антигена
Параметры 50 МЕ/кг [Среднее ±8И] (N=5) 100 МЕ/кг [Среднее ±8И] (N=5)
СЬ (мл/час/кг) 2,28 ±0,37 2,11 ±0,46
Узз (мл/кг) 259 ±78,5 238 ± 52,2
МКТ (часы) 112 ± 21,5 114 ± 17,1
Ц/2 (часы) 110 ±26,5 95,8 ± 11,1
См. также фиг. 8А, 8В.
Таблица 13
Средние значения РК на основании активности
Стах (МЕ/дл) Аисшг (ч*МЕ/дл ) АиСа (%) лись (%) АиС/Доза (МЕ*ч/дл на МЕ/кг) С1 (мл/кг) VI (мл/ч/кг) У88 (мл/кг) МКТ (ч) 11/2« (ч) 11/2β (ч)
η 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11 11
Средне е 65,364 2596,636 11,591 88,427 32,436 3,555 123,364 226,000 68,045 5,463 52,455
Ст, откл 32,9708 1497,1234 10,4490 10,5210 10,7506 0,9257 21,2804 69,7582 11,1637 9,1674
5,4197
%СУ 50,4420 57,6563 90,1479 11,8980 33,1435 27,5890 17,2501 30,8664 16,4063 17,4768
99,2128
Медиана 53,500 2960,000 9,200 90,800 28,000 3,580 118,000 216,000 65,900 3,640 54,200
Мини мум 19,90 753,00 1,00 71,10 21,80 1,84 98,00 145,00 53,10 0,84 40,00
Макси мум 111,00 5150,00 28,90 99,10 54,30 4,58 160,00 365,00 85,80 16,60 67,40
Геом. среднее 56,951 2181,294 6,781 87,826 31,020 3,226 121,767 216,533 67,218 3,326 51,715
С168 [1] (МЕ/дл) ΤΒΙ.Ρ1 [2] (День) ТВЬРЗ [3] (День) ΤΒΙ.Ρ5 [4] (День) Постепенное повышение концентрации [5] (МЕ/дл на МЕ/кг) Постепенное повышение концентрации [6] (МЕ/дл на МЕ/кг) Ιη νίνο повышение концентрации [7] (%) Ιη νίνο повышение концентрации [8] (%)
п 11 11 11 11 11 11 11 11
Среднее 3,106 10,177 6,727 5,115 0,821 0,926 34,518 38,991
Ст, откл 1,8231 2,3315 2,0089 1,8975 0,1387 0,1787 4,9250 6,6636
%СУ 58,6897 22,9088 29,8623 37,0944 16,8921 19,2940 14,2678 17,0900
Медиана 3,090 9,870 7,070 5,720 0,840 0,970 33,600 40,200
Минимум 1,09 7,28 3,72 2,06 0,61 0,62 27,80 30,30
Максиму м 6,77 14,70 10,30 8,21 1,02 1Д7 43,40 51,80
Геом, среднее 2,621 9,938 6,447 4,761 0,810 0,910 34,202 38,486
Примечание.
Значения РК параметра были определены по 2-компартментному способу.
Геом. Среднее = геометрическое среднее.
[1] С168 = РК активность выше базового уровня на 168 ч после дозы.
[2] ТВЬР1 = Оцененное время после дозы, когда РК активность уменьшилась до 1 МЕ/дл выше базового уровня.
[3] ТВЕР3 = Оцененное время после дозы, когда РК активность уменьшилась до 3 МЕ/дл выше базового уровня.
- 40 028067 [4] ΤΒ^Р5 = Оцененное время после дозы, когда ΡΚ активность уменьшилась до 5 МЕ/дл выше базового уровня.
[5] Нарастающее повышение концентрации было рассчитано с использованием модельпрогнозируемого Стах значения, сгенерированного из исходных вычтенных результатов, разделенных на дозу.
[6] Нарастающее повышение концентрации было рассчитано с использованием наблюдаемого максимального результата последозовой пробы; Повышение концентрации = (с вычетом базового уровня наблюдаемое Стах)/Доза.
[7] νίνο повышение концентрации=100х(Модель-прогнозируемое Стах из с вычетом базового уровня данных/Доза)хОбъем плазмы (дл)/Доза в ΜΕ; где объем плазмы в мл=(23,7хН в ст)+(9,0хШ1 в кг)-1709.
[8] νίνο повышение концентрации=100х(с вычетом базового уровня наблюдаемое Стах)хОбъем плазмы (дл)/Доза в ΜΕ; где объем плазмы в мл=(23,7хН в см)+(9,0хШ1 в кг)-1709.
Таблица 14
Средние значения РК на основе уровня антигена
Номинальная доза (МЕ/кг) Фактическая доза (МЕ/кг) Эквивалентная доза (мг/кг) Пациент Стах (нг/мл) АиСшг (ч*нг/мл) С1 (мл/ч/кг) ν88 (мл/кг) МКТ (ч) Альфа НЬ Бетаа НЬ
(ч) (ч)
12,5 13,714 0,228 1 1670 91300 2,5 245 98,2 21,2 107
25 27,25 0,453 2 2730 144000 3,14 273 87,1 п,з 71
50 54,5 0,905 3 5470 356000 2,54 366 144 18,6 138
54,5 0,905 4 6910 389000 2,32 244 105 10,6 85,3
54,5 0,905 5 7520 416000 2,17 184 84,5 АС 94,3
54,513 0,906 6 11700 531000 1,71 190 112 АС 140
55,878 0,928 7 5950 348000 2,67 310 116 10,1 93,9
100 109 1,81 10 12500 667000 2,72 263 96,8 9,79 78
109 1,81 8 21600 1200000 1,51 156 103 15,7 94,3
109 1,81 9 13400 998000 1,81 248 137 П,5 107
109,176 1,81 11 17200 844000 2,15 226 105 13 97,1
109,441 1,82 12 12500 778000 2,34 295 126 10,6 102
N 12 12 12 12 12 12 12
Среднее 9929,0 563525,0 2,3 250,0 109,6ъ 13,2е 100,7е
8Ό 5940,0 339925,0 0,5а 58,2 18,5 4,0а 20,9
8Е 1715,0 98128,0 ОД 16,8 5,3 1,3 6,0
Геометрическое Среднее 8014,0 452356,0 2,3 243,7 108,2 12,8 98,8
Таблица 15
Вследствие коррекции округления или других ошибок, (а) должно быть 0,46, (Ь) должно быть 110, (с) должно быть 12,0, (ά) должно быть 3,95 и (е) должно быть 101
Биохимическая характеристика фактора IX
Г амма-карбоксил ирование ИХРс гИХ ράΡΙΧ
аа 1-23 % 6 О1а 97,8 96,9 99,6
(К1К2 пептид) о/о 5 о1а 2,2 3,1 0,4
% 4 (31а 0 0 0
аа 24-43 % 6 О1а 61,3 63,7 98,9
(КЗ пептид) о/о 5 о1а 26,3 30,9 1,1
% 4 (31а 12,5 5,4 0
Общее Сг1а/то1, пептидная П,5 П,6 12,0
карта Общее С1а/гао1, ААА 11,3 ±0,3 11,5 ±0,3 (12)
Содержание пропептидов не обнаружено не обнаружено не обнаружено
β-гидроксилирование А8р 64 70% 49% 37%
Сульфатация Туг 155 4% 5% (>90%)
Фосфорилирование 8ег 158 <10% <10% (>90%)
А1а 148/ТЬг 148 0/100% 100/0% 30/70%
Активированный ИХ <0,0125% 0,109 +/0,00185% 0,21 +/- 0,010%
РХ1а активация 94,8 +/- 2,4% 96,6 ±/- 1,8% Не сделано
- 41 028067
Сводка терминальных полупериодов Р1ХРс и ВЕNЕРIX™ после однократной внутривенной дозы
Таблица 16
Виды ΒΕΝΕΡΙΧ™ ИХРс
Нормальные мыши 12,3 ч 47,2 ± 4,8 ч
Дефицитные по ИХ мыши 13,2 ч 46,2 ± 10,1 ч
РсΚΝ КО мыши 16,5 ± 3,0 ч 16,9 ±2,1 ч
КсКХ Т§32Ь мыши 14,2 ± 2,9 ч 53,0 ± 6,6 ч
Крысы 5,8 ч 34,8 ± 5,3 ч
Дефицитные по ИХ собаки 14-18ч * 47,5 ч
Обезьяна 12,7 ч 47,3±9,1 ч
* В^^ηкйοиδ е! а1., ΠΙοοώ 1996; 88: 2603-2610.
МсСаПНу е! а1., 2002, ТйготЬ Наетοδί, 2002; 87: 824-830.
Таблица 17
Сводка ίη νΐΐΓο КОТЕМ® параметров для гР1ХРс и ВЕNЕРIX™ впрыснутых в пулы цельной крови НетВ мышей
% нормальной активности СТ (сек) (Среднее ± δϋ) СРТ (сек) (Среднее ± δϋ) Альфа Угол (”) (Среднее ± δϋ)
гПХРс (п=10 пулов) 0,074 2263 ± 209 1152± 170 24 ±5
0,74 1371± 82 459 ± 45 34 ±5
7,4 790,8 ± 30 226 ± 20 52 ±2
ΒΕΝΕΡΙΧ™ (п=10 пулов) ОД 2019± 178 732 ± 123 30 ±3
1 1090 ± 38 324 ± 33 43 ±3
10 551,1 ± 38 127 ± 10 67 ±2
Медианная потеря крови после отрезания хвоста у НетВ мышей, обработанных гР1ХРс или ВЕNЕРIX™
Таблица 18
Доза (МЕ/кг) Медийная потеря крови (мл)
гИХРс (п=15/доза) ΒΕΝΕΡΙΧ™ (п=15/доза) Наполнитель (п=18)
720 0,101
360 0,651 0,218
240 0,298
120 0,4567 0,564
80 0,8474
40 1,0097 0,918
0 1,1586
Таблица 19
Ех , νίνο КОТЕМ® параметр у НетВ мышей, обработанных гР1ХРс и ВЕNЕРIX™
Время (час) СТ (вес) (Среднее ± 8ϋ) СРТ (вес) (Среднее ± 8ϋ) Альфа угол (степень) (Среднее ± 8ϋ)
100 МЕ/кг ΒΕΝΕΡΙΧ™ (п=4 мыши/време иную точку) 0,083 599 ± 23 174 ± 16 58 ±2
24 682 ± 49 184 ± 34 57 ±5
48 897 ± 114 310 ± 89 45 ± 7
72 1141± 155 508 ± 123 32 ±7
96 1613± 181 605 ± 92 27 ±3
50 МЕ/кг гИХРс (п=8 мышей/време иную точку) 0,083 700 ± 18 213 ±9 53 ± 1
24 836 ± 31 261 ± 15 47 ±2
72 845 ± 38 285 ± 17 45 ±2
96 957 ± 30 296 ± 26 43 ±2
120 1014 ±83 342 ± 50 42 ±4
168 1139 ±65 408 ± 41 36 ±3
216 1366 ± 96 453 ± 48 34 ±3
- 42 028067
Таблица 20А
РК параметры гРКРс и ВЕЧЕРК™ (200 МЕ/кг) после подкожной инъекции однократной дозы дефицитным по РIX мышам (антиген ИФА)
Соединен не Доза нг/кг ν/ρ мл/кг Т1аи ч Лиам, Ч*иг/ мл Абсорбция НЬ Ч Элими нация НЬЧ СЬ/Р мл/Ч/кг Ттах Чг Стах нг/мл лис/д оза Ч .кг/мл: Стах/Д оза г/мл Р%
ΒΕΝΕΡΙ X 727273 3920 2,86 6397 1,96 23,9 114 10,6 148 0,00880 0,204 23,3
гПХРс 327868 9 2071 0,896 14137 0 7,67 61,9 23,2 27,3 1178 0,0431 0,359 38,1
Таблица 20В
РК параметры ^РIXРс и ВЕNЕРIX™ (200 МЕ/кг) после подкожной инъекции однократной дозы дефицитным по РК мышам (антиген ИФА) (анализ аРТТ активности)
Соединен не Доза нг/кг ν/Ρ мл/кг Т1а§ ч Аис,м. Ч*нг/ мл Абсорбция НЬ Ч Элими нация НЬЧ СЬ/Р мл/Ч/кг Ттах Чг Стах нг/мл лис/д оза Ч. кг/мл: Стах/Д оза г/мл Р%
ΒΕΝΕΡΙΧ 207 54,8 0,631 93,9 7,01 17,2 2,20 16,0 2,04 0,454 9,86 18,9
гПХРс 172 25,1 2,32 418 6,84 42,4 0,411 23,8 4,82 2,43 28,0 29,1
Таблица 21
РК и РО анализы гРКРс и ВЕЧЕРК™ после однократной подкожной дозы дефицитным по РК мышам
Анализ АиС/Доза (Ч*кг/мл) ЭЛИМ. полуперио Д(Ч) С1_/Е (мл/Ч/кг)/% Ттах (Ч) Стах/Доза (кг/мл) Р (%)
гПХРс 200 МЕ/кг Антиген 0,041 61,9 23,2 27,3 0,00035 38,1
ΒΕΝΕΡΙΧ™ 200 МЕ/кг Антиген 0,0073 23,9 114 10,6 0,00017 23,3
Соотношение (гПХРс/ΒΕΝΕΡΙΧ™) Антиге н 5,62 2,59 0,20 2,58 2,05 1,63
гР1ХРс 400 МЕ/кг Антиген 0,042 50,9 23,7 18,3 0,00045 45,6
ΒΕΝΕΡΙΧ™ 400 МЕ/кг Антиген 0,0089 20,2 113 8,13 0,00024 20,2
Соотношение (гПХРс/ΒΕΝΕΡΙΧ™) Антиге н 4,72 2,52 0,21 2,25 1,91 2,26
АиС/Доза (Ч*кг/мл) ЭЛИМ. полуперио Д(Нг) сир (мл/Ч/кг)/% Ттах (ч) Стах/Доза (кг/мл) ρ (%)
гР1ХРс 200 МЕ/кг Активно сть 0,021 42,4 41,1 23,8 0,00024 29,1
ΒΕΝΕΡΙΧ™ 200 МЕ/кг Активно сть 0,0047 17,2 220 16,0 0,00010 18,9
Соотношение (гПХРс/ΒΕΝΕΡΙΧ™) Активн ость 4,47 2,46 0,19 1,49 2,40 1,54
гР1ХРс 400 МЕ/кг Активно сть 0,028 40,3 35,6 15,9 0,00037 39,2
ΒΕΝΕΡΙΧ™ 400 МЕ/кг Активно сть 0,0052 15,6 193 18,1 0,00010 15,5
Соотношение (гПХРс/ΒΕΝΕΡΙΧ™) Активн ость 5,38 2,58 0,18 0,88 3,70 2,53
- 43 028067
РК параметры гРЕКТе (50 МЕ/кг) после подкожной инъекции однократной дозы яванским макакам
Таблица 22
Групп а ЖивотноеГО ν/ρ (мл/кг) лис (Ч'нг/мл) Абсорбц ия НЬ (Ч) Конечн ый НЬ (Ч) СЬ/Р (мл/Ч/кг) Ттах (Ч) Стах (нг/мл) А11СГО (Ч*кг/мл Р(%)
50 МЕ/кг τΡΙΧΡ с 5С4 545 109000 8,42 50,2 7,53 26,1 1050 0,133 43,7
С37716 975 108000 6,4 89 7,6 26,2 685 0,132 43,3
С41440 622 82500 8,54 43,4 9,93 24,9 885 0,101 33,1
N 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Среднее 714 99800 7,79 60,9 8,35 25,7 873 0,122 40,1
δϋ 229 14900 1,2 24,6 1,37 0,685 182 0,0183 6,03
δΕ 132 8630 0,695 14,2 0,79 0,396 105 0,0106 3,48
Г еометрическое среднее 691 99000 7,72 57,9 8,28 25,7 860 0,121 39,7
СУ% Г еометриче ское среднее 31,2 15,8 16,4 39,4 15,8 2,68 21,7 15,9 15,9
РК параметры ^РIXРе (100 МЕ/кг) после подкожной инъекции однократной дозы яванским макакам
Таблица 23
Групп а ЖивотноеГО ν/ρ (мл/кг) лис (Ч'нг/мл) Абсорбц ия НЬ (Ч) Конечн ый НЬ (Ч) СЬ/Р (мл/Ч/кг) Ттах (Ч) Стах (нг/мл) Аисго (Ч*кг/мл Р(%)
100 МЕ/кг τΡΙΧΡ с 29109 1630 69800 П,4 48,1 23,5 31 644 0,0426 14,0
605097 561 207000 5,12 49,2 7,9 18,6 2250 0,126 41,5
С35785 387 238000 6,37 39 6,89 19,9 2970 0,145 47,8
N 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Среднее 858 172000 7,62 45,4 12,8 23,2 1950 0,105 34,4
δϋ 671 89600 3,31 5,58 9,3 6,79 1190 0,0546 18,0
δΕ 388 51700 1,91 3,22 5,37 3,92 687 0,0315 10,4
Г еометрическое среднее 707 151000 7,18 45,2 10,9 22,6 1630 0,0921 30,3
СУ% Г еометриче ское среднее 86.2 75.5 43,1 12,8 75,5 28,2 96,9 75,5 75,5
Таблица 24
РК параметры ^РIXРе (200 МЕ/кг) после подкожной инъекции однократной дозы яванским макакам
Групп а Животное ГО ν/ρ (мл/кг) Аис (Ч'нг/мл) Абсорбц ия НЬ (Ч) Конечн ый НЬ (Ч) СЬ/Р (мл/Ч/кг) Ттах (Ч) Стах (нг/мл) Аисго (Ч*кг/мл Р(%)
100 МЕ/кг τΡΙΧΡ с 50883 855 408000 3,36 73,7 8,03 15,7 3310 0,124 40,9
С31129 461 415000 6,42 40,4 7,91 20,2 5030 0,127 41,6
С41410 147 262000 11,5 32,6 3,12 26,7 3160 0,0799 26,3
N 3 3 3 3 3 3 3 3 3
Среднее 487 362000 7,08 48,9 6,36 20,9 3830 0,110 36,3
δϋ 354 86100 4,08 21,8 2,8 5,51 1040 0,0263 8,67
δΕ 205 49700 2,36 12,6 1,62 3,18 598 0,0152 5,00
Г еометрическое среднее 387 354000 6,27 46 5,83 20,4 3750 0,108 35,5
СУ% Геометриче ское среднее по 26,4 67,6 44,2 58,3 27 25,9 26,5 26,5
- 44 028067
Таблица 25
РК анализ γΡΙΧΡο после однократной подкожной дозы яванским макакам
гР1ХРс (МЕ/кг ) лис (4* нг/мл ) Абс. полупер иод (4) Элим, полупер иод (Нг) СР/Р (мл/Ч/кг )/% Ттах (Ч) Стах (нг/мл) Р(%)
50 Геом. среди ее 99000 7,72 57,9 8,28 25,7 860 39,7
СУ% Оео. Мп 15,8 16,4 39,4 15,8 2,68 21,7 15,9
100 Геом. среди ее 221959 5,71 43,8 7,38 19,2 2585 44,5
СУ% Оео. Мп 9,89 15,5 16,5 9,70 4,78 19,8 10,0
200 Геом. среди ее 354000 6,27 46 5,83 20,4 3750 35,5
СУ% Геом. сР. 26,4 67,6 44,2 58,3 27 25,9 26,5
Биодоступность в диапазоне от 35,5 до 44,5% для γΡΙΧΡο.
Полупериод элиминации в диапазоне от 43,8 до 57,9 ч для γΡΙΧΡο.
Таблица 26
Рекомендации по дозировке для γΡΙΧΡο терапии гемофилии В
Требуемая концентрация Частота фактора IX дозировки
Тип кровотечения (%) (часы)
Слабое
Носовое кровотечение
Гемартрозы, неосложненные 20-30 48
Поверхностное мышечное 20-30 48
Поверхностное мягкой ткани 20-30 48
Среднее
Носовое кровотечение
Внутримышечное с рассечением 25-50 48
Мягкая ткань с рассечением 25-50 48
Слизистые мембраны 25-50 48
Удаление зуба 25-50 48
Г ематурия 25-50 48
Гемартрозы, с ограниченной подвижностью 40-80 48
Сильное
Носовое кровотечение 50-100 24-48
Г лоточное 50-100 24-48
Заглоточное 50-100 24-48
Забрюшинное 50-100 24-48
Хирургия 50-100 24-48
ΟΝ8 50-100 24-48
Пациент должен консультироваться со своим лечащим врачом, но должен принимать только 1 следующую дозу по меньшей мере через 24-48 ч после первой дозы.
- 45 028067
Табл. 27А и 27В. Сравнение данных с использованием расчетов в (А) примере 1 и (В) примере 11.
Таблица 27А
Доза (МЕ/к г) Параметр (среднее±8П)
п Стах (МЕ/дл) АиС|м· (ч· МЕ/дл) СЬ (мл/ч/кг) λ/δδ (мл/кг) МКТ (ч) Т1/2а(ч) Τ1/2β (ч) Постепенное увеличение концентрации (МЕ/дл на МЕ/кг)* С168Н (МЕ/дл)! Время при 1% выше базового уровня (День)!
25 1 19,9 753 3,62 275 76,0 1,20 54,0 0,77 1,09 7,28
50 5 41,6±8,97 /8,98 1630±750 3,77±1,12 264±77,6 71,7±13,0 1,79±1,19 52,1±10,4 0,86±0,22 2,23±1,40 9,29±1,98
100 5 98,2±8,21 /8,23 3930±893 2,89±0,615 179±31,1 62,8±8,82 9,99±4,99 52,5±10,1 1,02=1=0,11 4,38±1,53 11,6±1,97
25-100 11 ΝΑ§ ΝΑ§ ΝΓ) ΝΓ) ΝΓ) ΝΓ) ΝΓ) ΝΓ) ΝΑ§ ΝΑ§
Таблица 27В
Доза Параметр (среднее±8О) (Диапазон)
(МЕ/к г) п Стах (МЕ/дл) АиС|м· (ч· МЕ/дл) СЬ (мл/ч/кг) У88 (мл/кг) МКТ(ч) Т1/2а(ч) Τ1/2β (ч) Постепенно е увеличение концентрац ни (МЕ/дл рег МЕ/кг)* С16811 (МЕ/дл)/ Время при 1% выше базового уровня (День)/
25 1 20,4 766 3,56 271 76,2 0,61 53,5 0,77 1,11 7,3
50 5 47,5±12,8 (33,0- 61,1) 1700±550 (1300- 2660) 3,44±0,84 (2,05-4,18) 262±55,4 (163-296) 76,8±6,7 (67,9-85,9) 3,4±3,4 (0,13- 8,72) 57,5±8,2 (47,9-67,2) 0,87±0,21 (0,63-1,12) 2,46 ± 0,89 (1,63-3,92) 10,1 ± 1,5 (8,4-12,3)
100 5 98,5±7,9 (90,8- 110) 4020±986 (3090- 5130) 2,84±0,66 (2,13-3,55) 183±27,9 (162-221) 65,9±10,3 (53,2-76,5) 10,3±5,6 (3,97- 16,6) 56,5±14,1 (42,4-74,5) 1,02±0,11 (0,89-1,18) 4,65 ± 1,73 (3,08-6,85) 12,3 ±2,5 (9,9-15,0)
25-100 11 ΝΑ§ ΝΑ§ 3,18 ±0,78 (2,05-4,18) 227 ± 58,6 (162-296) 71,8 ± 10,0 (53,2-85,9) ΝΑ§ 56,7 ± 10,9 (42,4-74,5) 0,93 ±0,18 (0,63-1,18) ΝΑ§ ΝΑ§
Представленные результаты являются средним±8Э с диапазоном, указанным в скобках.
Стах показывает максимальную концентрацию; АИС^ - область под кривой (нулевое время, экстраполированное к времени на бесконечности); СЬ - клиренс; Узз - объем распределения в стабильном состоянии; МКТ - среднее время удержания; Т1/2 α - полупериод распределения; Т1/2 β - полупериод элиминации; ХА - не применимо.
* Повышение концентрации было рассчитано с использованием наблюдаемого Стах с вычетом значения базового уровня перед лечением и разделенного на дозу.
ΐ Плазматическая РЕХ активность выше базового уровня при 168 ч (7 дней) после дозы. ί Модель - прогнозируемое время после дозы, когда ΡΙΧ активность уменьшается до 1 МЕ/дл выше базового уровня пациента.
§ Данные не применимы, поскольку параметры не являются дозонезависимыми, таким образом, среднее и δΐ) значения не были рассчитаны по различным дозовым группам.

Claims (22)

1. Способ контроля или предотвращения кровотечения или эпизода кровотечения у человека, включающий введение химерного полипептида, содержащего фактор 1Х (Р1Х) и РсКп связывающего партнера (РсКпВР), указанному человеку в дозе от 20 до 50 МЕ/кг с интервалом введения по меньшей мере 7 дней.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что доза составляет от 20 до 30 МЕ/кг.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что доза составляет от 30 до 40 МЕ/кг.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что доза составляет от 40 до 50 МЕ/кг.
5. Способ контроля или предотвращения кровотечения или эпизода кровотечения у человека, включающий введение химерного полипептида, содержащего Р1Х и РсКп связывающий партнер (РсКпВР), человеку в дозе от 50 до 100 МЕ/кг с интервалом введения от 10 до 14 дней.
6. Способ по п.5, отличающийся тем, что доза составляет от 50 до 60 МЕ/кг.
7. Способ по п.5, отличающийся тем, что доза составляет от 60 до 70 МЕ/кг.
8. Способ по п.5, отличающийся тем, что доза составляет от 70 до 80 МЕ/кг.
9. Способ по п.5, отличающийся тем, что доза составляет от 80 до 90 МЕ/кг.
10. Способ по п.5, отличающийся тем, что доза составляет от 90 до 100 МЕ/кг.
11. Способ по любому из пп.1-10, который предназначен для профилактики гемофилии В у челове- 46 028067 ка.
12. Способ по любому из пп.5-11, отличающийся тем, что указанный интервал введения составляет
10 дней.
13. Способ по любому из пп.5-11, отличающийся тем, что указанный интервал введения составляет
11 дней.
14. Способ по любому из пп.5-11, отличающийся тем, что указанный интервал введения составляет
12 дней.
15. Способ по любому из пп.5-11, отличающийся тем, что указанный интервал введения составляет
13 дней.
16. Способ по любому из пп.5-11, отличающийся тем, что указанный интервал введения составляет
14 дней.
17. Способ по любому из пп.1-16, отличающийся тем, что указанный химерный полипептид демонстрирует один или более фармакокинетических параметров, выбранных из группы, состоящей из:
a) клиренс (СЬ) (активность) примерно 1,84-4,58 мл/ч/кг;
b) среднее время удержания (МКТ) (активность) примерно 53,1-85,8 ч;
c) ν§δ (активность) примерно 145-365 мл/кг;
ά) АиС/доза примерно 21,80-54,30 МЕ-ч/дл на МЕ/кг.
18. Способ по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что указанный ΡοΗη связывающий партнер ^сКлЕР) представляет собой Ρο или альбумин.
19. Способ по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что указанный химерный полипептид дополнительно содержит линкер, связывающий указанный ΡΙΧ и указанный ГсКпВР.
20. Способ по любому из пп.1-19, отличающийся тем, что указанный химерный полипептид содержит второй полипептид, который содержит дополнительный ΡсΚηВР, связанный с первым ΡсΚηВР.
21. Способ по любому из пп.1-20, отличающийся тем, что указанный химерный полипептид вводят в виде фармацевтического состава, содержащего по меньшей мере одно вспомогательное вещество.
22. Способ по любому из пп.1-21, отличающийся тем, что указанную дозу вводят внутривенно или подкожно.
EA201291480A 2010-07-09 2011-07-11 Способы контроля или предотвращения кровотечения или эпизодов кровотечения EA028067B1 (ru)

Applications Claiming Priority (13)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US36306410P 2010-07-09 2010-07-09
US61/363,064 2010-07-09
US201061424555P 2010-12-17 2010-12-17
US61/424,555 2010-12-17
US201161430819P 2011-01-07 2011-01-07
US61/430,819 2011-01-07
US201161438572P 2011-02-01 2011-02-01
US61/438,572 2011-02-01
US201161442079P 2011-02-11 2011-02-11
US61/442,079 2011-02-11
US201161470951P 2011-04-01 2011-04-01
US61/470,951 2011-04-01
PCT/US2011/043569 WO2012006624A2 (en) 2010-07-09 2011-07-11 Factor ix polypeptides and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201291480A1 EA201291480A1 (ru) 2013-09-30
EA028067B1 true EA028067B1 (ru) 2017-10-31

Family

ID=45441870

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201291480A EA028067B1 (ru) 2010-07-09 2011-07-11 Способы контроля или предотвращения кровотечения или эпизодов кровотечения
EA201790876A EA037095B1 (ru) 2010-07-09 2011-07-11 Способ лечения гемофилии в и эпизодов кровотечения

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790876A EA037095B1 (ru) 2010-07-09 2011-07-11 Способ лечения гемофилии в и эпизодов кровотечения

Country Status (17)

Country Link
US (13) US9670475B2 (ru)
EP (2) EP2590668A4 (ru)
JP (5) JP2013534426A (ru)
KR (5) KR20230156435A (ru)
CN (1) CN103140237A (ru)
AU (5) AU2011274414B2 (ru)
BR (1) BR112013000650A8 (ru)
CA (1) CA2804274A1 (ru)
CL (1) CL2013000058A1 (ru)
EA (2) EA028067B1 (ru)
IL (3) IL223990B (ru)
MX (2) MX356527B (ru)
MY (2) MY192639A (ru)
NZ (1) NZ605348A (ru)
SG (3) SG186856A1 (ru)
UA (2) UA126265C2 (ru)
WO (1) WO2012006624A2 (ru)

Families Citing this family (77)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
MX362028B (es) 2009-02-03 2019-01-04 Amunix Pharmaceuticals Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
CA2772051C (en) 2009-08-24 2020-08-18 Amunix Operating Inc. Coagulation factor ix compositions and methods of making and using same
WO2012006633A1 (en) 2010-07-09 2012-01-12 Biogen Idec Hemophilia Inc. Chimeric clotting factors
MY192639A (en) 2010-07-09 2022-08-29 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
CA2807552A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
BR112013007862A2 (pt) 2010-10-01 2019-09-24 Moderna Therapeutics Inc ácidos nucleicos manipulados e métodos de uso dos mesmos.
AU2012236099A1 (en) 2011-03-31 2013-10-03 Moderna Therapeutics, Inc. Delivery and formulation of engineered nucleic acids
WO2013016454A1 (en) 2011-07-25 2013-01-31 Biogen Idec Hemophilia Inc. Assays to monitor bleeding disorders
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
HUE057725T2 (hu) 2011-10-03 2022-06-28 Modernatx Inc Módosított nukleozidok, nukleotidok és nukleinsavak és ezek felhasználása
PT2791160T (pt) 2011-12-16 2022-07-04 Modernatx Inc Composições arnm modificado
CN104254614A (zh) * 2012-01-12 2014-12-31 比奥根艾迪克Ma公司 降低经受因子viii疗法的个体中针对因子viii的免疫原性的方法
NZ628014A (en) 2012-02-15 2016-09-30 Biogen Ma Inc Recombinant factor viii proteins
EA201491470A1 (ru) 2012-02-15 2015-01-30 Амуникс Оперэйтинг Инк. Композиции фактора viii и способы получения и использования подобных
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
JP6189415B2 (ja) 2012-04-02 2017-08-30 モデルナティエックス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａＴＸ，Ｉｎｃ． 細胞質および細胞骨格タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
US10317376B2 (en) 2012-04-11 2019-06-11 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of detecting glycosaminoglycans
CA2875246A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Biogen Idec Ma Inc. Procoagulant compounds
JP2015525222A (ja) 2012-06-08 2015-09-03 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． キメラ性凝固因子
EP2877202A4 (en) 2012-07-25 2016-06-01 Biogen Ma Inc BLOOD FACTOR MONITORING TEST AND USES THEREOF
TWI810729B (zh) * 2012-09-25 2023-08-01 美商百歐維拉提夫治療公司 Ｆｉｘ多肽的應用
AU2013331000B2 (en) * 2012-10-18 2018-04-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
WO2014081831A1 (en) * 2012-11-20 2014-05-30 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and compositions for modified factor ix proteins
LT2922554T (lt) 2012-11-26 2022-06-27 Modernatx, Inc. Terminaliai modifikuota rnr
US10717965B2 (en) 2013-01-10 2020-07-21 Gloriana Therapeutics, Inc. Mammalian cell culture-produced neublastin antibodies
RS61387B2 (sr) 2013-02-15 2024-06-28 Bioverativ Therapeutics Inc Gen optimizovanog faktora viii
AU2014228938B2 (en) * 2013-03-15 2019-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2017180807A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 Baxalta Incorporated Method and apparatus for providing a pharmacokinetic drug dosing regiment
TWI667255B (zh) 2013-08-14 2019-08-01 美商生物化學醫療公司 因子ｖｉｉｉ－ｘｔｅｎ融合物及其用途
EP3048899B1 (en) 2013-09-25 2021-09-08 Bioverativ Therapeutics Inc. On-column viral inactivation methods
MX2016004249A (es) 2013-10-03 2016-11-08 Moderna Therapeutics Inc Polinulcleotidos que codifican el receptor de lipoproteina de baja densidad.
EP3082848B1 (en) 2013-12-06 2023-10-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Population pharmacokinetics tools and uses thereof
EP3083933A1 (en) 2013-12-20 2016-10-26 Biogen MA Inc. Use of perfusion seed cultures to improve biopharmaceutical fed-batch production capacity and product quality
BR112016013577A2 (pt) * 2013-12-23 2017-10-03 Csl Ltd Proteínas de fusão, seu uso e composição farmacêutica
NZ722391A (en) 2014-02-04 2022-12-23 Biogen Ma Inc Use of cation-exchange chromatography in the flow-through mode to enrich post-translational modifications
EA038573B1 (ru) 2014-03-24 2021-09-16 Биовератив Терапьютикс Инк. Лиофилизированный состав, содержащий фактор ix, для предупреждения приступов кровотечения
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
MA40864A (fr) 2014-10-31 2017-09-05 Biogen Ma Inc Hypotaurine, gaba, bêta-alanine et choline pour la régulation de l'accumulation de sous-produits résiduaires dans des procédés de culture de cellules mammifères
AU2016301303B2 (en) * 2015-08-03 2021-10-07 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX fusion proteins and methods of making and using same
ES2926585T3 (es) 2016-02-01 2022-10-27 Bioverativ Therapeutics Inc Genes de Factor VIII optimizados
TW201739448A (zh) * 2016-05-06 2017-11-16 安成生物科技股份有限公司 用於治療及/或預防血液相關疾病之方法及配方
KR102446476B1 (ko) 2016-07-08 2022-10-19 체에스엘 베링 렝나우 아게 사람에서의 장기-작용성 인자 ix의 피하 투여
CN106317226B (zh) * 2016-08-19 2017-09-05 安源医药科技（上海）有限公司 用于构建融合蛋白的连接肽
US11123438B2 (en) 2016-08-19 2021-09-21 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Linker peptide for constructing fusion protein
CN106279437B (zh) 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
MA46967A (fr) 2016-12-02 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc Méthodes de traitement de l'arthropathie hémophilique à l'aide de facteurs de coagulation chimériques
US10896749B2 (en) 2017-01-27 2021-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Drug monitoring tool
MX2019009063A (es) 2017-01-31 2019-10-21 Bioverativ Therapeutics Inc Proteinas de fusion del factor ix y procedimientos de preparacion y utilizacion de las mismas.
US10813589B2 (en) 2017-06-03 2020-10-27 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring uterine contraction pressure
US10799131B2 (en) 2017-06-03 2020-10-13 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intrauterine pressure to protect the fallopian tubes
US11045128B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter for monitoring intra-abdominal pressure
US11185245B2 (en) 2017-06-03 2021-11-30 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure for muscle compartment syndrome
US11045143B2 (en) 2017-06-03 2021-06-29 Sentinel Medical Technologies, LLC Catheter with connectable hub for monitoring pressure
US20200115436A1 (en) 2017-06-29 2020-04-16 CSL Behring Lengnau AG 21-day dosing regimen for fusion proteins comprising factor ix and human albumin for prophylactic treatment of hemophilia and methods thereof
US20210163986A1 (en) 2017-08-09 2021-06-03 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof
EP3687580A1 (en) 2017-09-27 2020-08-05 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising active cells
WO2019195056A1 (en) 2018-04-04 2019-10-10 Sigilon Therapeutics, Inc. Methods, compositions, and implantable elements comprising stem cells
AU2019248516A1 (en) 2018-04-04 2020-10-15 Sigilon Therapeutics, Inc. Implantable particles and related methods
MA52630A (fr) 2018-05-18 2021-05-26 Bioverativ Therapeutics Inc Procédés de traitement de l'hémophilie a
CN113227385A (zh) 2018-08-09 2021-08-06 比奥维拉迪维治疗股份有限公司 核酸分子及其用于非病毒基因疗法的用途
UY38389A (es) 2018-09-27 2020-04-30 Sigilon Therapeutics Inc Dispositivos implantables para terapia celular y métodos relacionados
US11672457B2 (en) 2018-11-24 2023-06-13 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11779263B2 (en) 2019-02-08 2023-10-10 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring intra-abdominal pressure for assessing preeclampsia
CN117603949A (zh) 2019-03-19 2024-02-27 杰特创新股份有限公司 因子ix变体及其在治疗中的用途
SG11202111290WA (en) 2019-04-17 2021-11-29 Codiak Biosciences Inc Compositions of exosomes and aav
CN112175088B (zh) * 2019-07-02 2023-03-28 江苏晟斯生物制药有限公司 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用
EP4009860B1 (en) 2019-08-08 2024-07-24 Sentinel Medical Technologies, LLC Cable for use with pressure monitoring catheters
US11617543B2 (en) 2019-12-30 2023-04-04 Sentinel Medical Technologies, Llc. Catheter for monitoring pressure
US11981718B2 (en) 2020-05-27 2024-05-14 Ampsource Biopharma Shanghai Inc. Dual-function protein for lipid and blood glucose regulation
WO2023275024A1 (en) * 2021-07-01 2023-01-05 CSL Behring Lengnau AG Factor ix subcutaneous administration with enhanced safety
WO2024081309A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease
WO2024081310A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Sigilon Therapeutics, Inc. Engineered cells and implantable elements for treatment of disease

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4786726A (en) * 1986-01-06 1988-11-22 Blood Systems, Inc. Factor IX therapeutic blood product, means and methods of preparing same
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5336603A (en) 1987-10-02 1994-08-09 Genentech, Inc. CD4 adheson variants
KR900005995A (ko) 1988-10-31 1990-05-07 우메모또 요시마사 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법
US6406697B1 (en) 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
EP0394827A1 (en) 1989-04-26 1990-10-31 F. Hoffmann-La Roche Ag Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides
ATE92107T1 (de) 1989-04-29 1993-08-15 Delta Biotechnology Ltd N-terminale fragmente von menschliches serumalbumin enthaltenden fusionsproteinen.
US5766883A (en) 1989-04-29 1998-06-16 Delta Biotechnology Limited Polypeptides
US5112946A (en) 1989-07-06 1992-05-12 Repligen Corporation Modified pf4 compositions and methods of use
EP0417563B1 (de) 1989-09-12 2000-07-05 F. Hoffmann-La Roche Ag TNF-bindende Proteine
WO1991006570A1 (en) 1989-10-25 1991-05-16 The University Of Melbourne HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES
US5349053A (en) 1990-06-01 1994-09-20 Protein Design Labs, Inc. Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses
ES2096749T3 (es) 1990-12-14 1997-03-16 Cell Genesys Inc Cadenas quimericas para vias de transduccion de señal asociada a un receptor.
US5844095A (en) 1991-06-27 1998-12-01 Bristol-Myers Squibb Company CTLA4 Ig fusion proteins
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
US6037452A (en) 1992-04-10 2000-03-14 Alpha Therapeutic Corporation Poly(alkylene oxide)-Factor VIII or Factor IX conjugate
WO1993024135A1 (en) 1992-05-26 1993-12-09 Immunex Corporation Novel cytokine that binds cd30
US6277975B1 (en) 1992-10-23 2001-08-21 Genetics Institute, Inc. Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same
US5621039A (en) 1993-06-08 1997-04-15 Hallahan; Terrence W. Factor IX- polymeric conjugates
CA2182498A1 (en) 1994-02-01 1995-08-10 William J. Larochelle Fusion proteins that include antibody and nonantibody portions
GB9415379D0 (en) 1994-07-29 1994-09-21 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
CZ25697A3 (en) 1994-07-29 1997-09-17 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
JP4026848B2 (ja) 1995-01-17 2007-12-26 ブリガーム・アンド・ウーメンズ・ホスピタル・インコーポレーテッド 免疫原の受容体特異的経上皮輸送
US6030613A (en) 1995-01-17 2000-02-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Receptor specific transepithelial transport of therapeutics
US5723125A (en) 1995-12-28 1998-03-03 Tanox Biosystems, Inc. Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide
ATE279947T1 (de) 1996-03-18 2004-11-15 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
ATE455552T1 (de) 1997-02-14 2010-02-15 American Nat Red Cross Expression des active human factor ix im brustdrüsengewebe transgener tiere
AU8679298A (en) 1998-07-31 2000-02-21 Wallace E. Carroll Method and apparatus for determining anticoagulant therapy factors
US20010031721A1 (en) 1999-05-05 2001-10-18 Chandra Webb Highly concentrated, lyophilized, and liquid factor IX formulations
US20030096355A1 (en) * 1999-07-09 2003-05-22 Ke Zhang Isolation, identification and characterization of ymkz5, a novel member of the TNF-receptor supergene family
WO2001058957A2 (en) 2000-02-11 2001-08-16 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
EP1278544A4 (en) 2000-04-12 2004-08-18 Human Genome Sciences Inc ALBUMIN FUSION PROTEINS
ES2282247T3 (es) 2000-04-28 2007-10-16 Inflazyme Pharmaceuticals, Ltd. Esteroides 3-nitrogeno-6,7-dioxigenados y usos relacionados con ellos.
US7125841B2 (en) 2000-11-14 2006-10-24 The University Of Texas Systems Mutant human factor IX with an increased resistance to inhibition by heparin
US20030203845A1 (en) 2001-02-05 2003-10-30 Knudsen Jens Bjerre Combined use of factor VII polypeptides and factor IX polypeptides
HUP0401534A3 (en) 2001-09-04 2006-01-30 Merck Patent Gmbh Modified factor ix
AU2002360264B2 (en) 2001-10-10 2009-03-19 Novo Nordisk A/S Remodeling and glycoconjugation of peptides
AU2002364587A1 (en) 2001-12-21 2003-07-30 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
WO2003060071A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
RU2364626C2 (ru) * 2003-03-18 2009-08-20 Ново Нордиск Хелт Кэр Аг Способ получения, способ очистки и способ стабилизации полипептидов фактора vii, ix и x
EP1617799A2 (en) 2003-04-09 2006-01-25 Wyeth Hemophilia treatment by inhalation of coagulation factors
AU2004239244C1 (en) 2003-05-06 2015-04-23 Bioverativ Therapeutics Inc. Clotting factor-Fc chimeric proteins to treat hemophilia
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7212798B1 (en) * 2003-07-17 2007-05-01 Cisco Technology, Inc. Adaptive AGC in a wireless network receiver
WO2005014049A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Novo Nordisk A/S Synthesis and application of new structural well defined branched polymers as conjugating agents for peptides
JP2007531707A (ja) * 2003-10-15 2007-11-08 ピーディーエル バイオファーマ， インコーポレイテッド ＩＧの重鎖定常領域の位置２５０、３１４および／または４２８の変異誘発によるＦｃ融合タンパク質血清半減期の改変
CA2549413A1 (en) 2003-12-03 2005-06-23 Neose Technologies, Inc. Glycopegylated factor ix
PL1781782T3 (pl) 2004-08-17 2010-10-29 Csl Behring Gmbh Zmodyfikowane polipeptydy zależne od witaminy K
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
JP2008523837A (ja) 2004-12-21 2008-07-10 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト ガンマ―カルボキシル化に欠陥のある宿主系におけるガンマ―カルボキシル化ポリペプチドの発現
US20060162552A1 (en) 2005-01-26 2006-07-27 Mohawk Valley Energy Solutions, Inc. Systems and methods for controlling room air quality
US20080255026A1 (en) 2005-05-25 2008-10-16 Glycopegylated Factor 1X Glycopegylated Factor Ix
US7855279B2 (en) 2005-09-27 2010-12-21 Amunix Operating, Inc. Unstructured recombinant polymers and uses thereof
ES2627684T5 (es) 2005-11-01 2024-04-29 Wyeth Llc Solución de cloruro sódico para la reconstitución o la dilución de fármacos
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1816201A1 (en) 2006-02-06 2007-08-08 CSL Behring GmbH Modified coagulation factor VIIa with extended half-life
SI2402754T2 (sl) 2006-03-06 2023-09-29 Amunix Operating Inc. Nestrukturirani rekombinantni polimeri in njihove uporabe
WO2007112005A2 (en) 2006-03-24 2007-10-04 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Pc5 as a factor ix propeptide processing enzyme
EP2263696A1 (en) * 2006-04-11 2010-12-22 CSL Behring GmbH Method of increasing the in vivo recovery of therapeutic polypeptides
WO2007135182A2 (en) 2006-05-24 2007-11-29 Novo Nordisk Health Care Ag Factor ix analogues having prolonged in vivo half life
US7939632B2 (en) 2006-06-14 2011-05-10 Csl Behring Gmbh Proteolytically cleavable fusion proteins with high molar specific activity
PL3896090T3 (pl) * 2006-06-14 2022-05-02 Csl Behring Gmbh Rozszczepialne proteolitycznie białko fuzyjne zawierające czynnik krzepnięcia krwi
EP2423306A1 (en) 2006-06-19 2012-02-29 Catalyst Biosciences, Inc. Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment
WO2008009635A2 (en) 2006-07-17 2008-01-24 Novo Nordisk Health Care Ag Factor viia analogues with increased activity for treating thrombocytopenia
WO2008022151A1 (en) 2006-08-15 2008-02-21 Inspiration Biopharmaceuticals, Inc. Prophylactic treatment of hemophilia
WO2008028977A2 (en) * 2006-09-08 2008-03-13 Ablynx N.V. Serum albumin binding proteins with long half-lives
US7700734B2 (en) 2007-01-09 2010-04-20 Shu-Wha Lin Recombinant human factor IX and use thereof
WO2008119815A1 (en) 2007-04-02 2008-10-09 Novo Nordisk A/S Subcutaneous administration of coagulation factor ix
BRPI0815416A2 (pt) 2007-08-15 2014-10-21 Amunix Inc Composições e métodos para modificar propriedades de polipeptídeos biologicamente ativos
WO2009051717A2 (en) 2007-10-15 2009-04-23 The University Of North Carolina At Chapel Hill Human factor ix variants with an extended half life
JP2011517950A (ja) 2008-04-16 2011-06-23 バイエル・ヘルスケア・エルエルシー 第ｉｘ因子の部位特異的修飾
MX2010011345A (es) 2008-04-16 2011-02-23 Bayer Healthcare Llc Polipeptidos modificados del factor ix y usos de los mismos.
JP5665733B2 (ja) 2008-04-21 2015-02-04 ノボ ノルディスク ヘルス ケア アーゲー 高度にグリコシル化されたヒト凝固第ｉｘ因子
RU2496521C2 (ru) * 2008-04-24 2013-10-27 Кантаб Байофармасьютикалз Патентс Лимитед Конъюгаты фактора ix с увеличенным временем полужизни
US20090282865A1 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Ortloff Engineers, Ltd. Liquefied Natural Gas and Hydrocarbon Gas Processing
RU2011110459A (ru) * 2008-08-21 2012-09-27 Октафарма АГ (CH) Рекомбинантно полученный человеческий фактор viii и ix
CN102164943A (zh) 2008-09-24 2011-08-24 稳定技术有限公司 使用糖和聚乙烯亚胺保存多肽的方法
MX362028B (es) 2009-02-03 2019-01-04 Amunix Pharmaceuticals Inc Polipeptidos recombinantes extendidos y composiciones que comprenden los mismos.
SG172789A1 (en) 2009-02-11 2011-08-29 Novozymes Biopharma Dk As Albumin variants and conjugates
WO2011030641A1 (ja) 2009-09-08 2011-03-17 コニカミノルタホールディングス株式会社 身体用装具
EP2493921B1 (en) 2009-10-30 2018-09-26 Albumedix Ltd Albumin variants
EP2353588B1 (en) 2010-01-21 2015-04-15 Agricultural Technology Research Institute A sustained release preparation of factor IX
KR20130070576A (ko) 2010-04-09 2013-06-27 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 알부민 유도체 및 변이체
MY192639A (en) 2010-07-09 2022-08-29 Bioverativ Therapeutics Inc Factor ix polypeptides and methods of use thereof
CN110272484A (zh) 2011-05-05 2019-09-24 阿尔布梅迪克斯医疗有限公司 白蛋白变体
US20140315817A1 (en) 2011-11-18 2014-10-23 Eleven Biotherapeutics, Inc. Variant serum albumin with improved half-life and other properties
TWI810729B (zh) 2012-09-25 2023-08-01 美商百歐維拉提夫治療公司 Ｆｉｘ多肽的應用
KR20150118123A (ko) 2013-02-16 2015-10-21 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 약동학적 동물 모델
AU2014228938B2 (en) 2013-03-15 2019-05-02 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
BR112016013577A2 (pt) 2013-12-23 2017-10-03 Csl Ltd Proteínas de fusão, seu uso e composição farmacêutica

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Peters et al. Prolonged activity of factor IX as a monomeric Fc fusion protein. Thrombosis and Hemostasis March 2010, 115(10): 2057-2064; Fig 5, 6 (page 2057, col. 2, para 1; page 2061, col. 2, para 4; page 2063, col. 2, para 4) *
Schellenberger et al. A recombinant polypeptide extends the in vivo half-life of peptides and proteins ina tunable manner. Nature Biotechnology 2009, 27(12):1186-1190; abstract *
Shaw et al. Dose translation from animal to human studies revisited. FASEB Journal 2007, 22:659-661; Fig. 1, Table 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
MX2020009702A (es) 2020-10-07
UA126265C2 (uk) 2022-09-14
IL277432A (en) 2020-11-30
JP2022044828A (ja) 2022-03-17
AU2020200118B2 (en) 2022-04-07
AU2017268650B2 (en) 2019-10-10
US9675676B2 (en) 2017-06-13
US9867873B2 (en) 2018-01-16
AU2011274414B2 (en) 2016-10-06
WO2012006624A3 (en) 2012-08-02
SG10201913700SA (en) 2020-03-30
US20210023185A1 (en) 2021-01-28
MY166954A (en) 2018-07-25
US20130171175A1 (en) 2013-07-04
BR112013000650A8 (pt) 2017-10-17
US20160346365A1 (en) 2016-12-01
US20160166657A1 (en) 2016-06-16
IL284368A (en) 2021-07-29
MY192639A (en) 2022-08-29
EP3552619A1 (en) 2019-10-16
US20210008178A1 (en) 2021-01-14
US10561714B2 (en) 2020-02-18
US9629903B2 (en) 2017-04-25
US20190192640A1 (en) 2019-06-27
SG10201505218YA (en) 2015-08-28
KR20190104442A (ko) 2019-09-09
IL223990B (en) 2020-10-29
BR112013000650A2 (pt) 2016-05-31
AU2016228243A1 (en) 2016-10-06
AU2022204643A1 (en) 2022-07-21
EP2590668A4 (en) 2014-04-02
US20180228878A1 (en) 2018-08-16
US20160257943A1 (en) 2016-09-08
MX356527B (es) 2018-06-01
JP2013534426A (ja) 2013-09-05
JP2019023242A (ja) 2019-02-14
EA037095B1 (ru) 2021-02-05
AU2011274414A1 (en) 2013-01-24
MX2013000281A (es) 2013-03-22
US9623091B2 (en) 2017-04-18
NZ605348A (en) 2015-01-30
US20190192641A1 (en) 2019-06-27
CA2804274A1 (en) 2012-01-12
SG186856A1 (en) 2013-02-28
US20160243206A1 (en) 2016-08-25
KR20220097518A (ko) 2022-07-07
KR20180118808A (ko) 2018-10-31
US20180228879A1 (en) 2018-08-16
US9670475B2 (en) 2017-06-06
IL277432B (en) 2021-07-29
KR20140017480A (ko) 2014-02-11
JP2016034973A (ja) 2016-03-17
AU2016228243B2 (en) 2017-08-31
CN103140237A (zh) 2013-06-05
EA201291480A1 (ru) 2013-09-30
JP2017036328A (ja) 2017-02-16
EP2590668A2 (en) 2013-05-15
US10548954B2 (en) 2020-02-04
US9233145B2 (en) 2016-01-12
US20180207244A1 (en) 2018-07-26
WO2012006624A2 (en) 2012-01-12
CL2013000058A1 (es) 2014-03-28
US10898554B1 (en) 2021-01-26
US10568943B2 (en) 2020-02-25
AU2017268650A1 (en) 2017-12-21
US20130202595A1 (en) 2013-08-08
EA201790876A1 (ru) 2017-12-29
AU2020200118A1 (en) 2020-01-30
KR20230156435A (ko) 2023-11-14
UA115120C2 (uk) 2017-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA028067B1 (ru) Способы контроля или предотвращения кровотечения или эпизодов кровотечения
TWI750197B (zh) Ｆｉｘ多肽的應用
CN103796670A (zh) 因子viii嵌合和杂合多肽及其使用方法
TW202003018A (zh) 因子ｉｘ多肽調配物

Legal Events

Date Code Title Description
TC4A Change in name of a patent proprietor in a eurasian patent