KR20180008557A

KR20180008557A - 칠엽담으로부터 분리된 지페노사이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20180008557A
Application number: KR1020177035546A
Authority: KR
Inventors: 박영준; 유기원; 김재훈; 김연숙; 이승기; 임주혁; 김종묵; 최치호; 김주연; 김정윤; 문성호
Original assignee: (주)셀트리온
Priority date: 2015-06-11
Filing date: 2016-06-10
Publication date: 2018-01-24
Also published as: US20190110980A1; EP3308768A1; KR102229247B1; EP3308768A4; WO2016200190A1; JP6828228B2; US11007136B2; JP2020055852A; KR101642660B1; JP2018517725A; EP3308768B1

Abstract

본 발명은 본 발명은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지페노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

칠엽담으로부터 분리된 지페노사이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물

본 발명은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

콜라겐은 섬유아세포(fibroblast)에서 만들어져 세포 밖으로 분비되는 세포 외 기질(extracellular matrix, ECM) 중 대부분을 차지하고 건조 피부 중량의 약 75%, 진피 섬유성분의 약 90%를 차지하며, 세포 간 매트릭스 역할, 구조적 지지체 기능 및 피부의 인장 강도 제공 등의 중요한 기능을 하면서 피부의 탄력을 유지한다. 생체 내에서 이러한 콜라겐의 합성과 분해는 적절하게 조절되지만 노화가 진행되면서 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 MMPs(matrix metalloproteinase)의 발현이 증가하여 주름이 생기게 된다.

주름의 종류로는 여러가지가 있다. 주름의 특성에 따라 정적주름, 동적주름으로 나뉘기도 하며, 주름의 위치에 따라서 눈가주름, 팔자주름 등으로 나뉘기도 한다. 또한, 겉으로 보이지는 않지만 피부 내부에서 진행되는 주름인 투명주름 등이 있다.

이러한 주름 형성을 억제하기 위해서는 콜라겐의 생성을 촉진시키거나, 콜라겐을 분해하는 콜라게나아제(collagenase), 엘라스틴을 분해하는 엘라스타아제(elastase) 또는 다양한 기질 단백질 분해 효소인 MMPs의 발현이나 활성을 저해하는 것이 주름생성을 억제하는 효과적인 방법이 될 수 있으며 이 중 콜라겐 생성을 촉진시키기 위한 물질을 이용하는 방법에 대해서 다양한 연구가 진행되고 있다.

콜라겐 생성을 촉진시켜 피부의 주름을 개선하기 위한 물질로는 아스코르빈산, 알파-토코페롤, 레티놀, SOD(super oxide dismutase) 등이 이용되어 왔지만, 물리적 화학적 안정성이 현저히 떨어지거나, 그 가격이 고가인 이유로 피부 주름 개선의 실질적인 효과를 나타낼 만큼의 유효량을 사용하지 못하여 주름 개선에 대한 진정한 효과를 보기 어려웠던 것이 현실이다. 이에 따라, 비교적 가격이 저렴하고 높은 안정성을 갖는 천연 식물소재를 주름 개선 기능성 화장품 원료로서 이용하는 개발 및 연구가 지속되어 왔으며, 노니열매추출물(등록특허 10-0844275), 연교추출물(등록특허 10-0825450), 녹차추출물(등록특허 10-0757175) 등의 식물소재 유래 주름 개선 화장품 원료들이 개발되어 왔다. 그러나 기존의 천연 식물소재 추출물들은 색이 진하거나, 향이 강하고 화장료 조성물로 제조 시 변색이나 변취가 일어나기도 하여 실제적으로 화장품에 적용하기 어려운 문제점이 있다.

한편, 칠엽담(gynostemma pentaphyllum)은 돌외 또는 교고람이라고도 불리며, 우리나라 남부지역과 제주도, 울릉도 등의 섬과 중국·일본 등에서 자생하는 박과(cucurbitaceae)에 속하는 여러해살이 덩굴식물로 산이나 들의 숲 속에서 자라며 뿌리줄기는 옆으로 뻗고 마디에 흰털이 있고 엉키면서 자라지만 덩굴손으로 기어 올라가기도 한다. 칠엽담 잎을 말려 만든 차는 주로 덩굴차라고도 하며 장기들의 기능을 회복시키고 항스트레스, 항산화효과를 나타내며 천식, 기관지염, 궤양 등에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 더불어 칠엽담은 피부미용 효과에 대해서도 많이 알려져 있으며, 예전부터 중국과 북한의 여인들은 건강한 피부를 유지하기 위해 돌외차를 마셔온 것으로 알려져 왔다.

이에 본 발명자들은 종래 천연 식물소재들의 문제점을 해결하고자 예의 연구를 수행한 결과, 종래에 주름 개선용도가 알려지지 않은 칠엽담 지페노사이드 분획물에서 우수한 주름 개선 효과를 확인하였다. 특히, 일반적인 주름뿐만 아니라, 눈에 보이지 않는 투명주름에도 탁월한 개선 효과를 확인하고 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 해결하려는 과제는 칠엽담 지페노사이드 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 해결하려는 다른 과제는 하기 화학식 I로 표시되는 하나 이상의 지페노사이드를 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 해결하려는 다른 과제는 상기 화장료 조성물을 사용하여 주름을 개선하는 방법을 제공하는 것이다.

상기 과제를 해결하고자 본 발명은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 하기 정의된 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지페노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다:

상기에서,

지페노사이드 UL1은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1-엔-3-O-[α아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-α-L-arabinopyranoside);

지페노사이드 UL2는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1실엔-3-O-[β아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[β-D-glucopyranosyl (1→3)]-α-L-arabinopyranoside);

지페노사이드 UL3은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)][β-D-xylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);

지페노사이드 UL4는 ((23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoxylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);

지페노사이드 UL5는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoglucopyranosyl (1copyranLarabinopyranoside);

지페노사이드 UL6은 3β,20S,21-트리히드록시-19-옥소-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S,21-trihydroxy-19-oxo-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside); 및

지페노사이드 UL7은 3β,20S-디히드록시-21-카르복실-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S-dihydroxy-21-carboxyl-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside)를 의미한다.

상기 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7의 구조식은 도 1에 도시된 바와 같다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함될 수 있다. 보다 구체적으로 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 총 조성물의 중량 대비 0.01 중량% 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.

상기 분획물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 주름 개선 효과가 나타나지 않으며, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 주름 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 주름은 투명주름인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물일 수 있다.

상기의 투명주름은 눈가에 주름이 관찰되지 않는 20대 ~ 30대 초반 연령대에서 발견되는 주름으로, 육안으로는 피부 주름이 관찰되지 않으나, 진피층 내부의 진피치밀도가 감소된 것을 투명주름이라고 한다. 투명주름은 육안으로 나타나는 피부주름으로 빠르게 진행될 수 있어, 투명주름에 대한 관리가 중요해지고 있다.

본 발명의 다른 일 구체예에서, 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 총 분획물의 중량 대비 20 내지 30 중량%로 포함할 수 있다. 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물 내의 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 총 분획물의 중량 대비 20 중량% 미만 포함하는 경우에는 피부 주름 개선 효과가 나타나지 않으며, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 주름 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.

또한 상기 과제를 해결하고자 본 발명은 하기 화학식 I로 표시되는 하나 이상의 지페노사이드를 유효성분으로 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다:

<화학식 I>

상기식에서,

R₁은 람노오스, 자일로스, 글루코오스 및 아라비노오스 이루어진 군으로부터 선택된 동일하거나 상이한 당이 글리코시드 결합된 다당류이고,

R₂는 메틸(CH₃) 또는 알데히드(CHO)이며,

R₃는

,

,

,

,

,

또는

이다.

상기 다당류(Polysaccharide)는 2개 이상의 단당류가 글리코시드결합을 통해 하나의 분자를 이룬 당류를 통틀어 일컫는 말로 분자량은 수천에서 수백만으로 다양하며, 녹말이나 글리코겐과 같은 저장성 다당류와 셀룰로스나 키틴과 같은 구조성 다당류 등이 여기에 포함될 수 있으며 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 단당류는 람노오스, 퓨코오스, 아라비노오스, 자일로스, 만노오스, 갈락토오스 및 글루코오스와 같이 산(acid), 염기(base), 효소(enzyme) 등으로 더 이상 가수분해되지 않는 가장 간단한 구조를 가진 탄수화물의 기본 단위체 등이 여기에 포함 될 수 있으며 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 글리코시드결합(glycosidic linkage)은 1개의 당분자와 또 다른 1개의 당분자의 탄소 사이 연결이 산소원자에 의해 연계되는 화학적 결합을 말한다. 알데히드 또는 케톤을 포함한 당은 분자내 환상 헤미아세탈 혹은 헤미케탈구조를 형성하고 있는데, 이 구조의 형성으로 새롭게 출현한 히드록시기를 아노머히드록시기라고 하며, 이 아노머히드록시기를 치환하면서 생기는 결합이 글리코시드결합이다. 알데히드 유래의 글리코시드결합을 알도시드결합, 케톤 유래의 글리코시드결합을 케토시드결합이라고 한다.

상기 지페노사이드는 칠엽담로부터 추출 또는 분리된 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구체예에서, 상기 지페노사이드는 하기 정의된 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다:

상기에서,

본 발명의 다른 일 구체예에서, 상기 조성물은 총 조성물 중량 대비 상기 지페노사이드를 0.0001 내지 30 중량%로 포함할 수 있다. 상기 지페노사이드가 총 조성물 중량 대비 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부 주름 개선 효과가 나타나지 않으며, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 주름 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.

본 발명의 다른 일 구체예에서, 상기 조성물은 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 총 조성물의 중량 대비 0.0002 내지 9 중량%로 포함할 수 있다. 상기 지페노사이드가 UL4 및 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 총 조성물 중량 대비 0.0002 중량% 미만인 경우에는 피부 주름 개선 효과가 나타나지 않으며, 9 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 주름 개선 효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.

또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 사용하여 주름을 개선하는 방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.

상기의 지페노사이드는 담마란계(dammarane type) 사포닌, 트리터펜(triterpene) 사포닌, 지노사포닌(gynosaponin)등으로 다르게 지칭될 수 있으며, 당 업계에 통상적으로 사용되는 지페노사이드의 다른 명칭도 본 발명의 범위에 포함된다.

상기의 칠엽담 지페노사이드 분획물은,

(i) 칠엽담에 용매를 가하여 추출한 후 여과한 칠엽담 조추출물 수득하는 단계; 및

(ii) 상기 칠엽담 조추출물을 흡착제를 이용하여 용출시킨 후 건조시켜 칠엽담 지페노사이드 분획물을 얻는 단계를 포함하여 제조할 수 있다.

상기의 단계 (i)에서는 건조/절단된 칠엽담 지상부위(잎과 줄기)의 질량대 부피비 5~20배에 해당하는 정제수와 에탄올의 혼합용매를 가하여 50~80℃에서 교반추출한 후 여과하는 방법으로 칠엽담 조추출물을 수득할 수 있다.

상기 단계 (ii)에서는 상기에서 얻은 에탄올 조추출물을 다공성 폴리머 합성흡착수지가 충진된 칼럼에 흡착시킨 후, 정제수와 에탄올 혼합용매로 세척하고 용출시켜 얻어진 용출액을 건조시켜 칠엽담 지페노사이드 분획물을 수득할 수 있다.

상기의 단계 (i)에서의 추출용매와 단계 (ii)에서의 세척, 용출용매는, 정제수, 주정, C₁내지 C₄의 저급 알코올, 에칠아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜 중 하나 또는 두 가지 이상을 사용할 수 있다.

상기의 단계 (ii)에서의 다공성 폴리머 합성흡착수지로는 다이아이온(Diaion) HP20, HP21 또는 HP2MG 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 또는 2종 이상을 사용할 수 있다.

상기의 칼럼을 통해 용출된 칠엽담 지페노사이드 분획물은 감압농축하여 용매를 증발시킨 후 동결건조하여 분말의 형태로 수득하거나 고형분의 함량이 일정하게 유지된 형태의 수용액으로 수득하여 화장료 조성물의 제조에 이용될 수 있다.

그러나 본 발명에 따른 지페노사이드를 제조하는 방법은 이에 제한되는 것은 아니며, 상기 지페노사이드는 칠엽담 이외의 다른 식물로부터 추출할 수도 있으며, 또한 일반적인 화학적 합성 방법에 의해서 합성할 수도 있다.

상기의 칠엽담 지페노사이드 분획물을 얻기 위한 칠엽담 원재료는 경상북도 울릉군에서 재배되는 것을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일 예로 계면활성제, pH조절제, 색소, 향료, 안료, 보존제, 살균제, 점증제, 항산화제, 안정화제, 용해화제, 금속이온 봉쇄제, 청량화제, 방취제, 유화제, 가용화제 등의 각종 첨가물 이외에, 보습제, 자외선 흡수제, 자외선 산란제, 비타민류, 식물 추출물, 피부 수렴제, 항염증제, 세포 부활제, 혈관 확장제, 혈행 촉진제, 및 피부기능 항진제와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체 등을 포함할 수 있으며, 그 제형 및 첨가성분이 상기 내용에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

상기 계면활성제의 예로는, 이에 제한되는 것은 아니나, 고급 지방산 비누, 알킬 황산 에스테르염, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 황산염, 알킬 에테르 인산 에스테르염, N-아실아미노산염, 아실 N-메틸타우린염 등의 음이온 계면활성제; 염화 알킬트리메틸 암모늄, 염화 디알킬디메틸 암모늄 등의 양이온 계면활성제; 알킬 디메틸아미노아세트산 베타인, 알킬 아미도디메틸아미노아세트산 베타인, 2-알킬-N-카복시-N-하이드록시이미다졸리늄 베타인 등의 양성 계면활성제; 폴리옥시에틸렌형, 다가 알콜 에스테르형, 에틸렌옥사이드·프로필렌옥사이드 블럭 공중합체 등의 비이온 계면활성제 등을 들 수 있다. 또한, 특별하게 제한됨 없이 고분자 계면활성제나 천연 계면활성제에 속하는 계면활성제도 사용할 수 있다.

상기 점증제로는 예를 들면 히드록시메틸셀룰로오스(Hydroxymethylcellulose), 히드록시에틸셀룰로오스(Hydroxyethylcellulose), 히드록시프로필셀룰로오스(Hydroxypropylcellulose), 카르복시비닐 폴리머(Carboxyvinylpolymer), 알킬 변성 카르복시비닐 폴리머, 폴리아크릴아미드(Polyacrylamide), 아르긴산 나트륨(Sodium Alginate), 아르긴산 프로필렌글리콜(Propylene Glycol Alginate), 한천, 폴리아크릴산 나트륨(Sodium Polyacrylate), 숙시노글루칸(Succinoglucan), 덱스트란(Dextran), 만난(mannan), 펙틴(Pectin), 젤란검(Gellan Gum), 카라기난(Carrageenan), 히알루론산(Hyaluronic acid), 폴리비닐알콜(polyvinyl alcohol), 벤토나이트(Bentonite), 규산 알루미늄(Aluminum Silicate), 규산 마그네슘(Magnesium Silicate), 라포나이트(Laponite), 헥토라이트(hectorite), 무수 규산(Silicic acid Anhydride) 등을 예시할 수 있다.

상기 보존제로는 예를 들면 파라옥시 안식향산 에틸, 살리실산, 및 소르빈산 등을 예시할 수 있다.

상기 보습제로서는 예를 들면히알루론산, 콘드로이틴 황산, 피롤리돈카르복실산염, 폴리옥시에틸렌메틸글루코시드, 폴리옥시프로필렌메틸글루코시드, 레시틴, 포스파티딜콜린, 포스파티딜세린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜이노시톨 및 스핑고인지질 등을 예시할 수 있다.

상기 금속이온 봉쇄제로서는 예를 들면 에틸렌디아민 사초산 이나트륨, 에데트산, 에데트산나트륨염 등의 에데트산염 등을 예시할 수 있다.

상기 유화제로는 예를 들면 스쿠알렌, 유동 파라핀, 바셀린, 고형 파라핀 등의 탄화수소； 올리브유, 아몬드유, 카카오지방, 피마자유 등의 유지； 밀납, 라놀린, 호호바유 등의 납； 스테아린산, 올레인산, 팔미틴산 등의 지방산, 세타놀, 스테아릴알코올 등의 고급 알코올； IPM, 글리세린트리에스텔, 펜타에리스리톨테트라 에스테르 등의 에스테르； 및 폴리실록산류 등의 실리콘유 등을 예시 할 수 있다.

상기 가용화제로는 예를 들면 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, 및 모노스테아린산프로필렌 글리콜 등의 프로필렌글리콜지방산에스테르류, 글리세린, 디글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 1, 3－부틸렌글리콜 등의 다가(多價)알코올 등을 들 수 있다.

상기 향료의 예로는, 이에 제한되는 것은 아니나, 꽃, 잎, 가지, 과피 등으로부터 분리한 식물성 향료; 머스크, 시빗 등의 동물성 향료; 모노테르펜 등의 탄화수소류; 지방족 알코올, 방향족 알코올 등의 알코올류; 테르펜알데히드, 방향족 알데히드 등의 알데히드류; 지환식 케톤 등의 케톤류; 테르펜계 에스테르 등의 에스테르류; 락톤류; 페놀류; 옥시드류; 질소 함유 화합물류; 아세탈류 등을 들 수 있다. 또한, 특별하게 제한됨 없이 상기 예시된 것 이외의 천연향료나 합성향료도 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 일 구체예로 고점도 유화제형, 저점도 유화제형 및 가용화 제형으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니며, 제조하고자 하는 제형에 따라 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 화장료 조성물 배합 성분을 포함할 수 있다. 일 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 베이스, 비비크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. 있고, 제조하고자 하는 제형에 따라 추가로 수상성분, 유상성분, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 증점제, 킬레이트제, 방부제, 향료 등을 선택하여 배합 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 일 예로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라가칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 있어서, 계면활성제 함유된 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형 또는 비누일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 일 예로, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함하여, 우수한 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 진피치밀도 개선 효과를 가진다.

보다 구체적으로, 본 발명의 칠엽담 지페노사이드 분획물은 프로콜라겐 생성을 촉진하여 우수한 주름 개선, 피부 탄력 증진 및 피부 진피치밀도 개선 효과를 나타냄을 확인하였다.

상기의 칠엽담 지페노사이드 분획물은 피부에 부작용을 초래하지 않고 자극이 없이 안전하며 여러 가지 보관조건에서 유효성분의 안정성이 우수하다.

상기의 칠엽담 지페노사이드 분획물은 고온 또는 일광 하에서 장기간 보관하여도 변색되지 않고 유효성분의 함량이 일정하게 유지된다.

본 발명의 칠엽담 지페노사이드 분획물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물은 우수한 주름 개선 효과를 갖는다.

도 1은 지페노사이드 UL1 내지 UL7의 구조식을 나타낸 것이다.
도 2는 칠엽담 지페노사이드 분획물을 HPLC-UVD로 분석한 크로마토그램이다.
도 3은 칠엽담 지페노사이드 분획물과 이로부터 분리한 지페노사이드 UL4 및 UL5, 및 양성대조군인 N-acetyl glucosamine (NAG)의 프로콜라겐 생성효과에 대한 실험결과를 나타낸 것이다.
도 4는 칠엽담 지페노사이드 분획물의 안전성을 알아보기 위한 세포독성 실험결과를 나타낸 것이다.
도 5는 칠엽담 지페노사이드 분획물의 눈가주름 억제효과를 나타내는 임상시험 결과 그래프이다.
도 6은 칠엽담 지페노사이드 분획물의 도포여부에 따른 눈가주름 변화량을 나타낸 그래프이다.
도 7은 칠엽담 지페노사이드 분획물의 피부 탄력 개선효과를 나타내는 임상시험 결과 그래프이다.
도 8은 칠엽담 지페노사이드 분획물의 도포여부에 따른 피부 탄력 변화량을 나타낸 그래프이다.
도 9는 칠엽담 지페노사이드 분획물의 피부진피치밀도 개선효과를 나타내는 임상시험 결과 그래프이다.
도 10은 칠엽담 지페노사이드 분획물의 도포여부에 따른 피부 진피치밀도 변화량을 나타낸 그래프이다.

이하, 실시예, 비교예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 하기의 실시예 및 실험예는 단지 본 발명의 예시적인 기재일 뿐으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.

실시예 1. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 제조

1) 칠엽담 에탄올 조추출물의 제조

건조된 칠엽담의 지상부위(잎과 줄기) 1.0kg을 절단/분쇄한 뒤, 정제수와 에탄올의 부피비 6:4로 혼합한 40% 에탄올을 14L 가하여 80℃에서 4시간 동안 교반하며 추출한 후 추출액을 유출시켜 1차 추출액을 얻는다. 추출 잔사가 남아 있는 추출기에 다시 동일 용매 11L를 가하여 동일 온도에서 2시간 동안 추출하고 추출액을 유출시켜 2차 추출액을 얻고 1차 추출액과 합한다. 1, 2차 추출액을 여과 및 농축하여 칠엽담 에탄올 조추출물을 얻었다.

2) 칠엽담 지페노사이드 분획물의 제조

칼럼에 다공성 합성흡착제인 HP-20을 충진시킨 후 40% 에탄올을 가하여 평형화 시킨 다음 실시예 1-1)에서 얻어진 칠엽담 에탄올 조추출물을 40% 에탄올에 희석시켜 서서히 로딩(loading)한다. 이어서 45% 에탄올을 충분히 가하여 불순물을 제거한 후, 80% 에탄올로 용출하여 칠엽담 지페노사이드 분획물을 얻는다. 용출액을 감압농축하여 에탄올을 증발시킨 후 동결건조하여 분말 형태의 칠엽담 지페노사이드 분획물 약 30g을 획득하였다.

실시예 2. 칠엽담 지페노사이드 분획물에서의 유효성분 분리 및 확인

실시예 1에서 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물로부터 유효성분의 분리를 다음과 같이 수행하였다. 실시예 1에서 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물 21 g을 취하여, 실리카겔 323 g을 사용한 칼럼(직경 4.6 cm x 높이 31 cm)에 넣은 후, 클로로포름 : 메탄올의 혼합 비율이 각각 8 : 1 혼합용매 (v/v) 2 L, 5 : 1 혼합용매 (v/v) 3 L, 3 : 1 혼합용매 (v/v) 2 L, 1 : 1 혼합용매 (v/v) 3 L를 순차적으로 사용하면서 크로마토그래피를 실시하였다. 상기 네 종류의 혼합용매를 통해 얻어진 Fr. A(1.56 g)(8 : 1 혼합용매), Fr. B(5.99 g)(5 : 1 혼합용매), Fr. C(3.12 g)(3 : 1 혼합용매), Fr. D(8.15 g)(1 : 1 혼합용매) 분획을 수득하였다. 각 분획을 MCI-gel에서 아세토니트릴의 수용액 농도를 5, 10, 15, 20, 25%로 점차 올려 가면서 크로마토그래피를 실시하여, Fr. A로부터 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2을 얻고, Fr. B로부터 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4를 얻었으며, Fr. C로부터 지페노사이드 UL5, Fr. D로부터 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7을 수득하였다.

실시예 3. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 크로마토그램 분석

실시예 1을 통해 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물을 HPLC로 분석하였다. 상기 실시예 2를 통해 확인한 지페노사이드 UL1 내지 지페노사이드 UL7을 HPLC 크로마토그램에 표시하여 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5가 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7과 달리 고함량 및 고순도로 분리될 수 있음을 확인하였다.

실시예 4. 칠엽담 지페노사이드 분획물에서 지페노사이드 UL4 및 UL5 함량의 확인

실시예 1을 통해 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물을 아세토니트릴, 증류수의 농도구배 조건에서 지름 4.6mm, 길이 25cm의 C18 칼럼을 이용해 HPLC-UVD 203nm에서 분석한 결과, 실시예 1을 통해 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물은 분말 1g당 지페노사이드 UL4 121mg과 지페노사이드 UL5 95.6mg이 포함되어 있는 것으로 분석되었다.

실험예 1. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 콜라겐 합성 촉진효과

사람의 정상 섬유아세포(Human dermal fibroblast neonatal, Cascade Co.)를 10%의 우태아 혈청이 보충된 DMEM 배지를 이용하여 24-웰 마이크로 플레이트에 접종하고 (5×10⁴세포/웰), 37℃, 5% CO₂조건에서 24시간 동안 배양하였다. 혈청이 들어 있지 않은 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 배양한 후, 각 시험 화합물의 최종 농도가 1㎍/㎖, 5 ㎍/㎖가 되도록 적정량의 시료액을 처리하였다. 48시간 배양 후 세포배양액을 채취한 후 타카라사(Takara Shuzo Co., Ltd)의 콜라겐 측정키트를 사용하여 프로콜라겐 양을 측정하였다. 먼저 1차 콜라겐 항체가 균일하게 도포된 96-웰 마이크로 플레이트에 채취한 세포배양액을 넣고 37 ℃에서 3시간 동안 항원-항체 반응이 일어나도록 하였다. 웰 내의 세포배양액을 제거하고 PBS로 4회 세척하였다. 각 웰에 발색유발물질을 넣고 상온에서 15분간 반응시킨 후, 1 N 황산용액을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 분광광도계로 파장 450nm에서의 흡광도를 측정하였다. 표준용액을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 상기의 방법으로 얻은 흡광도를 표준곡선에 대입하여 각 시험 화합물이 첨가된 세포배양액의 프로콜라겐 생성량을 산출하였다.

실시예 1에서 얻어진 칠엽담 지페노사이드 분획물과 이로부터 분리한 지페노사이드 UL4 및 UL5, 및 피부 주름 개선 효과를 갖는 것으로 알려져 있는 양성대조군인 N-acetyl glucosamine(이하, NAG)의 프로콜라겐 생성효과에 대한 실험결과를 도 3에 나타내었다.

도 3에서 나타난 바와 같이, 칠엽담 지페노사이드 분획물과 이로부터 분리한 지페노사이드 UL4 및 UL5의 프로콜라겐 생성효과를 양성대조군인 NAG의 프로콜라겐 생성효과와 비교하였을 때, 동일한 농도에서 동일하거나 더 많은 양의 프로콜라겐을 생성함에 따라 동등하거나 우수함을 확인하였다.

실험예 2. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 안전성 (Safety)

1) 세포 독성 테스트

사람의 정상 섬유아세포 (Human dermal fibroblast neonatal, Cascade Co.)를 10%의 우태아 혈청이 보충된 DMEM(Dulbeco's Modified Eagle's Medium) 배지를 이용하여 24-웰 마이크로 플레이트에 접종하고 (5×10⁴세포/웰), 37℃, 5% CO₂ 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 혈청이 들어 있지 않은 DMEM 배지로 교체하여 24시간 동안 배양한 후, 실시예 1에서 얻어진 칠엽담 지페노사이드 분획물과 이로부터 분리한 지페노사이드 UL4 및 UL5을 각각 처리하였다. 48시간 배양한 후 MTT solution을 첨가하여 4시간 동안 배양하였다. 배지를 제거하고 DMSO를 첨가하여 MTT formazan을 용해하였다. DMSO에 용해된 MTT formazan을 취하여 570 nm에서 흡광도를 측정하여 시료를 처리하지 않는 군과 비교하여 % control로 표기하였다.

하기 표 1과 도 4에 나타난 바와 같이, 칠엽담 지페노사이드 분획물과 이로부터 분리한 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5는 프로콜라겐 합성촉진 효과를 나타내는 농도에서 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.

시료	처리 농도 (ug/ml)	HDFn Viability (%)
칠엽담 지페노사이드 분획물	1	98
	5	99
	10	100
	20	112
지페노사이드 UL4	5	98
	10	100
	50	106
지페노사이드 UL5	5	100
	10	102
	50	113

2) 피부 자극 테스트

칠엽담 지페노사이드 분획물의 피부 자극성을 확인하기 위하여 인체 피부에 대한 자극시험을 수행하였다. 구체적으로, 성인 30명을 대상으로 등 부위에 5×20 cm 크기로 칠엽담 지페노사이드 분획물을 0.2, 0.4, 1.0% 함유하는 수용액 일정량(20 ㎕)을 24시간 동안 첩포한 후 제거하고, 1일, 2일, 6일 후 육안으로 피부상태 변화를 판독하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다. 이때, 피부상태의 변화 정도는 하기의 피부상태 평가 기준에 따라 분류하여 평가하였다.

하기 표 2에서 나타난 바와 같이, 칠엽담 지페노사이드 분획물은 0.2, 0.4, 1.0% 농도에서 피부에 자극을 주지 않음을 확인하였다.

<피부 상태 평가 기준>

- : 비 자극성

± : 약한 자극성

＋ : 중증 자극성

++ : 강한 자극성

번호	나이	성별	0.2%			0.4%			1.0%
			1일	2일	6일	1일	2일	6일	1일	2일	6일
1	31	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
2	49	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
3	49	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
4	55	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
5	43	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
6	33	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
7	55	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
8	43	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
9	43	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
10	50	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
11	24	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
12	54	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
13	42	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
14	42	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
15	45	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
16	53	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
17	48	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
18	51	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
19	51	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
20	26	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
21	46	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
22	55	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
23	51	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
24	54	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
25	35	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
26	39	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
27	36	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
28	34	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
29	28	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
30	39	여	-	-	-	-	-	-	-	-	-
Mean score			0.00			0.00			0.00
판정			자극 무			자극 무			자극 무

실험예 3. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 안정성 (Stability)

칠엽담 지페노사이드 분획물의 원료 상태에서의 안정성을 확인하기 위해 프로필렌글리콜, 글리세린, 정제수의 5 : 3 : 2의 혼합용매 100mL에 칠엽담 지페노사이드 분획물 분말을 4%의 농도로 용해시킨 용액을 사용하였다. 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관하면서 정량화를 위한 칠엽담 지페노사이드 지표성분인 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5에 대한 경시 변화(초기 함량 대비 %)를 HPLC 분석을 통해 관찰하여 이에 대한 결과를 표 3에 나타내었다.

하기 표 3에서 나타난 바와 같이, 일광 및 고온 조건에서 12주 동안 90% 이상의 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5 역가를 유지하는 것으로 칠엽담 지페노사이드 분획물의 원료 안정성은 우수함을 확인하였다.

경과시간	칠엽담 지페노사이드 분획물의 원료 용액 (%)
	지페노사이드 UL4				지페노사이드 UL5
	4℃	30℃	45℃	일광	4℃	30℃	45℃	일광
1주	100.2	102.8	97.1	97.6	98.8	101.8	97.6	101.1
2주	98.1	99.9	96.3	96.6	101.3	98.2	97.5	98.4
4주	96.9	98.7	102.7	96.6	97	99	96.9	98.8
8주	98.3	96.5	97.5	98.1	97.9	101.2	99.2	97.2
12주	96.1	96.6	102.4	97.1	98.1	102.9	103.8	97.8
결과	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정

제조예: 칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함하는 화장료 조성물

상기의 실험예를 근거로 하여, 하기 표 4 내지 6에서 기재된 조성대로 실시예 1에서 수득한 칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함하는 여러 제형의 화장료 조성물을 제조하였다. 하기 제형예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 예시로, 본 발명이 하기 예시에만 한정되는 것은 아니다.

제형예 1. 고점도 유화 제형의 제조

칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함한 고점도 유화 제형의 처방은 표 4와 같다.

상	성분	함량 (%)
수상	정제수	To 100
	보습성분	10 ~ 25
	점증제	적량
	금속이온 봉쇄제	적량
유상	피이지-100스테아레이트	0.1 ~ 2
	글리세릴스테아레이트	0.1 ~ 2
	폴리소르베이트 60	0.1 ~ 2
	스테아릭애씨드	0.1 ~ 2
	세테아릴알코올	0.1 ~ 2
	카프릭카프릴릭트리글리세라이드	10 ~ 30
	토코페릴아세테이트	0.1 ~ 0.5
첨가 I	칠엽담 지페노사이드 분획물	0.20
첨가 II	향	적량
	보존제	적량
	기타 첨가제	적량

<고점도 유화 제형의 제조방법>

① 수상과 유상을 가온 하여 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.

② 75℃에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 가용화시켰다

③ 첨가상 I은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 용해시킨 상으로 50℃에서 투입하고 혼합시킨 후 첨가상 II를 혼합하였다.

제형예 2. 저점도 유화 제형의 제조

칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함한 저점도 유화 제형의 처방은 표 5와 같다.

상	성분	함량 (%)
수상	정제수	To 100
	세테아리스-6올리베이트	0.1 ~ 3
	보습성분	10 ~ 25
	점증제	적량
	금속이온 봉쇄제	적량
유상	피이지-100스테아레이트	0.1 ~ 1
	글리세릴스테아레이트	0.1 ~ 1
	폴리소르베이트 60	0.1 ~ 1
	세틸알코올	0.1 ~ 1
	베헤닐알코올	0.1 ~ 1
	스쿠알란	5 ~ 20
	토코페릴아세테이트	0.1 ~ 0.5
첨가상 I	칠엽담 지페노사이드 분획물	0.20
첨가상 II	향	적량
	보존제	적량
	기타 첨가제	적량

<저점도 유화 제형의 제조방법>

② 75℃에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 가용화시켰다

제형예 3. 가용화 제형의 제조

칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함한 가용화 제형의 처방은 표 6과 같다.

상	성분	함량 (%)
수상	정제수	To 100
	보습성분	10 ~ 25
	점증제	적량
	금속이온 봉쇄제	적량
가용화상	피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일	0 ~ 2
	피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일	0 ~ 2
	다가알코올	0 ~ 10
	향료	적량
	에탄올	0 ~ 20
첨가 I	칠엽담 지페노사이드 분획물	0.20
첨가 II	보존제	적량
첨가 II	기타 첨가제	적량

< 가용화 제형의 제조방법>

① 수상과 가용화상을 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.

② 수상에 가용화상을 넣고 혼합시켜 수중유형 유화를 얻었다.

③ 첨가 I은 칠엽담 지페노사이드 분획물을 용해시킨 상으로 가용화 한 후 투입하여 혼합시킨 후 첨가 II를 혼합하여 완료하였다.

실험예 4. 화장료 조성물의 제형 안정성(Stability)

상기 제형예 1, 2 및 3의 화장료 조성물을 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관하며, 육안평가와 관능평가를 통해 제형의 색, 취, 성상 변화를 관찰하여 표 7 내지 9에 나타내었다.

표 7 내지 9에 나타난 바와 같이, 칠엽담 지페노사이드 분획물은 고점도 유화 제형, 저점도 유화 제형, 가용화 제형의 화장료 조성물 상태에서 고온 및 일광 조건에서 장기간 보관하여도 변색, 변취 및 성상 변화가 나타나지 않는 우수한 안정성을 확인하였다.

<안정성 평가 기준>

변화 무: ○

약간의 변화: △

유의적 변화: X

경과시간

고점도 유화 제형

취 변화

색 변화

제형 변화

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

1주

○

2주

○

4주

○

8주

○

12주

○

결과

안정

경과시간

저점도 유화 제형

취 변화

색 변화

제형 변화

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

1주

○

2주

○

4주

○

8주

○

12주

○

결과

안정

결과

안정

경과시간

가용화 제형

취 변화

색 변화

제형 변화

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

4℃

30℃

45℃

일광

1주

○

2주

○

4주

○

8주

○

12주

○

결과

안정

실험예 5. 칠엽담 지페노사이드 분획물의 화장료 조성물의 제형 내 역가안정성

제형예 1, 2 및 3과 같이 칠엽담 지페노사이드 분획물을 0.2% 포함하는 고점도 유화 제형, 저점도 유화 제형, 가용화 제형의 화장료 조성물을 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관하며, 칠엽담 지페노사이드 성분 중 정량화를 위한 지표성분인 지페노사이드 UL4와 지페노사이드 UL5에 대한 경시 변화(초기 함량 대비 %)를 HPLC 분석을 통해 관찰하여 이에 대한 결과를 표 10 내지 12에 나타내었다.

표 10 내지 12에서 나타난 바와 같이, 정량화를 위한 지표성분인 지페노사이드 UL4와 지페노사이드 UL5의 함량 변화를 실험적으로 확인하여, 칠엽담 지페노사이드 분획물은 고점도 유화 제형, 저점도 유화 제형, 가용화 제형의 화장료 조성물 상태에서 고온 및 일광 조건에서 장기간 보관하여도 함량이 감소하지 않는 우수한 안정성을 확인하였다.

경과시간	고점도 유화 제형 (%)
	지페노사이드 UL4				지페노사이드 UL5
	4℃	30℃	45℃	일광	4℃	30℃	45℃	일광
1주	101.9	105.2	105.3	102.4	100.6	103.8	102.6	101.8
2주	95.9	103.1	108.2	99.8	95.1	105.7	104.6	99.2
4주	102	104.4	107.6	101.2	104.4	108.2	102.1	103
8주	101.4	105.7	108.1	99.4	104.2	103.4	101.8	101.1
12주	104.1	108.2	107.1	103.6	106.9	104.1	103.1	104.9
결과	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정

경과시간	저점도 유화 제형 (%)
	지페노사이드 UL4				지페노사이드 UL5
	4℃	30℃	45℃	일광	4℃	30℃	45℃	일광
1주	100.1	105.0	101.9	96.3	98.8	103.3	103.5	94.4
2주	102.4	101.8	106.2	99.5	100.4	103.9	102	98.1
4주	101.2	101.6	105.9	100.5	102.8	102.2	104.8	101.6
8주	94.9	104.1	95.6	99.8	100.2	105.6	94.2	101
12주	94.1	105.2	99.3	102	95.2	105	98.3	102.6
결과	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정

경과시간	가용화 제형 (%)
	지페노사이드 UL4				지페노사이드 UL5
	4℃	30℃	45℃	일광	4℃	30℃	45℃	일광
1주	98.8	100.0	102.8	98.8	98.8	100	100.3	97.9
2주	91.9	103.2	101.6	94.8	95.7	105.1	101.4	95.9
4주	98.7	102.7	94.2	98.4	105.1	108.6	97.2	104.9
8주	97.6	98.5	97.2	98	102.8	103.7	102.1	103.5
12주	99.5	104.5	94.9	94.6	102.3	104.9	95.6	103.3
결과	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정	안정

실험예 6. 칠엽담 지페노사이드 분획물 함유 크림의 주름 개선 효과 (임상시험)

칠엽담 지페노사이드 분획물 함유 크림의 주름 개선 효과를 관찰하기 위하여, 칠엽담 지페노사이드 분획물을 0.4% 함유하는 크림을 제조하였으며, 그 제조 구성은 하기 표 13과 같다.

상	성분	함량 (%)
수상	정제수	To 100
	보습성분	10 ~ 25
	점증제	적량
	금속이온 봉쇄제	적량
유상	피이지-100스테아레이트	0.1 ~ 2
	글리세릴스테아레이트	0.1 ~ 2
	폴리소르베이트 60	0.1 ~ 2
	스테아릭애씨드	0.1 ~ 2
	세테아릴알코올	0.1 ~ 2
	카프릭카프릴릭트리글리세라이드	10 ~ 30
	토코페릴아세테이트	0.1 ~ 0.5
첨가 I	칠엽담 지페노사이드 분획물	0.40
첨가 II	향	적량
	보존제	적량
	기타 첨가제	적량

상기 표 13의 구성으로 제조한 칠엽담 지페노사이드 분획물을 함유하는 화장료(고점도 유화제형)의 눈가주름 개선효과, 피부 탄력 증진효과, 피부 진피치밀도 개선효과를 알아보기 위해 실제 사용테스트를 통하여 평가하였다. 만 30~60세의 눈가주름이 있는 여성 20명을 대상으로 시험제품 (제형예 1)과 대조제품 (칠엽담 지페노사이드 분획물이 포함되지 않은 제품)을 1일 2회 (아침/저녁) 세안 후 안면부 왼쪽과 오른쪽에 각각 사용하도록 하였다. 시험제품과 대조제품에 대한 눈가림을 실시하였고 12주간 사용하도록 하였으며, 사용 전, 사용 4주 후, 사용 8주 후, 사용 12주 후에 각각의 효과에 대한 측정을 진행하였다.

1) 눈가주름 개선효과

얼굴을 반쪽으로 나누어 눈꼬리에서 2 cm 떨어진 지점을 부위로 오른쪽과 왼쪽을 측정하였다. 측정 기기로는 Visiometer SV600(Courage-Khazaka electronic GmbH, Germany)를 사용하여 주름정도 파라미터 중 R2 (Maximum roughness)를 측정하였고, 주름 개선효과에 대한 결과를 도 5 및 도 6으로 나타내었다. 12주간 칠엽담 지페노사이드 분획물을 함유하는 크림을 사용한 결과, 대조제품을 사용한 부위는 사용 전에 비해 눈가주름 개선효과가 나타나지 않았으나, 시험제품을 사용한 부위의 눈가주름은 69.10에서 43.97로 개선된 것을 확인하였다(p<0.05).

2) 피부 탄력 증진효과

피부 탄력은 Cutometer®(Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)을 사용하여 측정하였고, 측정은 1회씩 양쪽 눈가의 동일한 부위에 실시하여 R2(피부의 재변형력)값을 피부 탄력도 평가자료로 사용하였다. R2값은 총체적인 탄성으로 1에 가까운 값일수록 피부가 더욱 탄력적임을 의미한다. 칠엽담 지페노사이드 분획물을 함유하는 크림의 사용에 의한 피부 탄력을 측정한 결과를 도 7 및 도 8로 나타내었다. 시험제품 사용부위의 피부 탄력은 사용 전 0.58에 비해 사용 12주 후 0.66까지 증가하는 것을 확인하였으며, 대조제품 사용부위의 피부 탄력에 비해 유의적으로 (p<0.05)피부 탄력이 증가하는 것을 확인하였다..

3) 피부 진피치밀도 개선효과

피부 진피치밀도는 Skin Scanner High Resolution Ultrasound(taberna pro medicum, Germany)로 양쪽 눈가 부위를 촬영하고 측정된 화상을 이용하여 제품 사용 전후의 피부 진피치밀도를 분석하였다. 피부 진피치밀도의 측정 단위는 %로, 측정값이 높아질수록 진피치밀도가 개선되었음을 나타낸다. 칠엽담 지페노사이드 분획물을 함유하는 크림의 사용에 의한 피부 진피치밀도 개선효과를 측정한 결과를 도 9 및 도 10으로 나타내었다. 대조제품을 사용한 부위의 피부 진피치밀도는 사용 12주 후 유의적 수준에서 개선되지 않았으나, 시험제품을 사용한 부위의 피부 진피치밀도는 사용 12주 후 (20.78%) 사용전 (16.53%)에 비해 유의적으로 개선된 것을 확인하였다.

실험예 7. 투명주름 개선 효과

칠엽담 지페노사이드 분획물의 투명주름 개선효과를 확인하기 위하여 인체 피부에 대한 임상시험을 수행하였다.

투명주름이란 눈가에 주름이 가시적으로 형성되기 전에 연령이 증가할수록 피부 내부에서 피부의 노화의 징후가 관찰되는 것을 의미하며, 투명주름은 진피치밀도를 통해 확인 가능하다.

본 임상시험에서는 투명주름을 보유한 것으로 판단되는 성인 여성 10명(눈가주름이 Global photodamage score에 근거하여 0에 해당하고 낮은 진피치밀도를 지닌 자)을 연구 대상자로 선정하였으며 선정 기준은 표 14에 나타내었다.

Severity (중증도)	Wrinkle grading (주름 등급)
0	None (없음)
1	none / mild (없거나 약한 주름)
2	Mild (약한 주름)
3	mild / moderate (약하거나 중간 주름)
4	Moderate (중간 주름)
5	moderate / severe (중간이나 심한 주름)
6	Severe (심한 주름)
7	very severe (매우 심한 주름)

(출처 Br J Dermatol. 2010;162(3):497-502)

투명주름 개선 효과를 관찰하기 위하여, 칠엽담 지페노사이드 분획물을 0.4% 함유하는 크림을 제조하였으며, 그 제조 구성은 하기 표 15와 같다.

선정된 연구대상자의 안면부에 칠엽담 지페노사이드 분획물을 0.4% 함유하는 크림을 아침/저녁으로 하루 2번 도포하고 도포 전 및 도포 4주 후 연구 대상자의 양쪽 눈가 부위를 Skin Scanner Heigh Resolution Ultrasound (taberna pro medicum, Germany)로 진피치밀도의 변화를 측정한 결과를 표 15에 나타내었다. 이때, 진피치밀도의 변화율은 하기의 변화율 공식에 따라 계산하였다.

하기 표 16에서 나타난 바와 같이, 칠엽담 지페노사이드 분획물이 포함된 크림을 도포하였을 때와, 도포하지 않았을 때의 진피치밀도 변화율을 계산하여 투명주름 개선 여부를 확인하였다.

<진피치밀도 변화율>

번호	나이	성별	위치	진피치밀도 (%)
				도포 전	도포 4주 후
1	29	여	좌	11.72	16.79
			우	12.93	14.21
2	26	여	좌	16.81	14.63
			우	15.51	14.31
3	25	여	좌	13.70	15.49
			우	11.91	16.82
4	34	여	좌	18.41	20.29
			우	17.61	19.27
5	28	여	좌	9.38	13.02
			우	9.45	10.02
6	33	여	좌	17.52	18.05
			우	15.86	17.46
7	32	여	좌	14.77	16.58
			우	18.41	20.25
8	30	여	좌	9.23	9.49
			우	10.64	15.82
9	26	여	좌	15.63	17.22
			우	16.88	19.56
10	25	여	좌	15.36	17.79
			우	16.56	17.89
평균값				14.41	16.25
표준편차				3.09	2.99
변화율 (%)					12.77 (%)

그 결과, 칠엽담 지페노사이드 분획물을 함유하는 크림을 사용한 후 피부 진피치밀도가 전체적으로 증가하는 경향을 보였으며 평균적으로 12.8%의 진피치밀도 개선율을 보임으로써, 20대 ~ 30대 초반의 연령대에서 발견되나 육안으로 보이지 않는 주름인 투명주름이 전체적으로 개선되는 것을 확인할 수 있었다.

Claims

칠엽담 지페노사이드 분획물을 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 하기 정의된 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지페노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물:
상기에서,
지페노사이드 UL1은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1-엔-3-O-[α아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-α-L-arabinopyranoside);
지페노사이드 UL2는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1실엔-3-O-[β아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[β-D-glucopyranosyl (1→3)]-α-L-arabinopyranoside);
지페노사이드 UL3은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)][β-D-xylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL4는 ((23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoxylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL5는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoglucopyranosyl (1copyranLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL6은 3β,20S,21-트리히드록시-19-옥소-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S,21-trihydroxy-19-oxo-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside);
지페노사이드 UL7은 3β,20S-디히드록시-21-카르복실-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S-dihydroxy-21-carboxyl-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside)를 의미한다.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 2항에 있어서, 상기 칠엽담 지페노사이드 분획물은 지페노사이드 UL4 및 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 총 분획물의 중량 대비 20 내지 30 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 주름은 투명주름인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
하기 화학식 I로 표시되는 하나 이상의 지페노사이드를 포함하는 주름 개선용 화장료 조성물:
<화학식 I>

상기식에서,
R₁은 람노오스, 자일로스, 글루코오스 및 아라비노오스 이루어진 군으로부터 선택된 동일하거나 상이한 당이 글리코시드 결합된 다당류이고,
R₂는 메틸(CH₃) 또는 알데히드(CHO)이며,
R₃는
,
,
,
,
,
또는
이다.
제 6항에 있어서, 상기 조성물은 하기 정의된 지페노사이드 UL1, 지페노사이드 UL2, 지페노사이드 UL3, 지페노사이드 UL4, 지페노사이드 UL5, 지페노사이드 UL6 및 지페노사이드 UL7으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 지페노사이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물:
상기에서,
지페노사이드 UL1은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1-엔-3-O-[α아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]-α-L-arabinopyranoside);
지페노사이드 UL2는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 (1실엔-3-O-[β아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[β-D-glucopyranosyl (1→3)]-α-L-arabinopyranoside);
지페노사이드 UL3은 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-21,23-epoxy-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)][β-D-xylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL4는 ((23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-크실로피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoxylopyranosyl (1opyranoLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL5는 (23ξ)-3β,20β,21α-트리히드록시-19-옥소-21,23-에폭시-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]-α-L-아라비노피라노사이드 ((23ξ)-3β,20β,21α-trihydroxy-19-oxo-21,23-epoxy- dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1mnopyranoglucopyranosyl (1copyranLarabinopyranoside);
지페노사이드 UL6은 3β,20S,21-트리히드록시-19-옥소-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S,21-trihydroxy-19-oxo-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside);
지페노사이드 UL7은 3β,20S-디히드록시-21-카르복실-담마르-24-엔-3-O-[α-L-람노피라노실 (1→2)]{[β-D-크실로피라노실 (1→6)][β-D-글루코피라노실 (1→3)]}-α-L-아라비노피라노사이드-21-O-β-D-글루코피라노사이드 (3β,20S-dihydroxy-21-carboxyl-dammar-24-ene-3-O-[α-L-rhamnopyranosyl (1→2)]{[β-D-xylopyranosyl (1→6)][β-D-glucopyranosyl (1→3)]}-α-L-arabinopyranoside-21-O-β-D-glucopyranoside)를 의미한다.
제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 지페노사이드는 칠엽담으로부터 분리된 것임을 특징으로 하는 주름 개선용 조성물.
제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 조성물은 총 조성물의 중량 대비 상기 지페노사이드를 0.0001 내지 30 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 7항에 있어서, 상기 조성물은 총 조성물의 중량 대비 상기 지페노사이드 UL4 및 상기 지페노사이드 UL5 중 하나 이상을 0.0002 내지 9 중량%로 포함하는 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 6항 또는 제 7항에 있어서, 상기 주름은 투명주름인 것을 특징으로 하는 주름 개선용 화장료 조성물.
제 1항 내지 제 11항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 사용하여 주름을 개선하는 방법.