KR20170102328A

KR20170102328A - 에볼라 바이러스 당단백질에 대한 인간 항체

Info

Publication number: KR20170102328A
Application number: KR1020177021579A
Authority: KR
Inventors: 크리스토스 키라트소우스; 윌리암 올슨; 피터 메이슨; 니일 스탈
Original assignee: 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드
Priority date: 2015-01-26
Filing date: 2016-01-25
Publication date: 2017-09-08
Also published as: JP2018506966A; US20200148751A1; IL253358A0; MY180045A; CN113354732B; EA038993B1; US10081670B2; CN113354732A; CL2017001920A1; US20160215040A1; KR102641731B1; CN107667115B; US20210024617A1; JP2020120683A; CN107667115A; MX2021015687A; TW201639883A; BR112017015845A2; SG11201705681YA; CA2974899A1

Abstract

본 발명은 에볼라 바이러스 당단백질에 결합하는 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 그 항체를 포함하는 제약학적 조성물 및 사용 방법을 제공한다. 발명의 항체는 에볼라 바이러스 활성을 억제 또는 중화시키는 데 유용하고, 그로써 인간에서 에볼라 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 수단을 제공한다. 일부 구체예에서, 발명은 숙주 세포에의 바이러스 부착 및/또는 안으로의 유입을 방지하기 위한 에볼라 바이러스에 결합하는 하나 이상의 항체의 용도를 제공한다. 발명의 항체들은 예방적으로 또는 치료적으로 사용될 수 있고 단독으로 또는 하나 이상의 다른 항-바이러스제 또는 백신과 조합되어 사용될 수 있다.

Description

에볼라 바이러스 당단백질에 대한 인간 항체

본 발명은 에볼라 바이러스 당단백질에 결합하는 항체, 이들 항체를 포함하는 제약학적 조성물 및 그것의 사용 방법에 관한 것이다.

에볼라 바이러스 (EBOV) 및 관련된 필로바이러스는 인간 및 비-인간 영장류에서 심각한 바이러스성 출혈열을 유발하는데, 인간 발생시 약 90%까지의 사망률을 보인다 (Murin, C.D. et al., (2014), Proc Natl Acad Sci USA, 111(48):17182-17187). 보호를 중재하는 면역 메커니즘에 대한 연구가 진행중이지만, 지금까지 인간에서 사용할 수 있도록 승인된 치료는 없었다.

에볼라 바이러스 당단백질 (GP)은 바이러스 표면 및 감염된 세포에 존재하는 유일한 단백질이다. 그것이 숙주 세포와 바이러스의 결합 및 융합에 기여하는 것으로 추정된다. GP은 여러 형태로 존재한다. 이들 GP는 두 개의 오픈 리딩 프레임에 코드화된다. 무편집 (unedited) GP mRNA는 감염 초기에 합성되는 비-구조적 분비된, 가용성 GP (sGP)이다 (Volchkova, et al. (1995), Virology 214:421-430; Volchkova, VA et al., (1998), Virology 250:408-414; Sanchez, et al. (1996), Proc Natl Acad Sci USA, 93:3602-3607; Sanchez, et al. (1999) J. Infect. Dis. 179 (suppl. 1, S164)). sGP는 이량체를 형성하고 (Volchkova, et al. (1995), Virology 214:421-430; Falzarano, D. et al., Chembiochem (2006), 7:1605-1611) 환자 및 실험적으로 감염된 동물의 혈액에서 다량으로 검출된다 (Sanchez, et al. (1996), Proc Natl Acad Sci USA, 93:3602-3607; Dolnik, O. et al., (2004), EMBO J 23:2175-2184).

감염 후기에, 편집된 mRNA가 생성되고, 제2 오픈 리딩 프레임으로부터 코딩 능력을 획득한다. 이 편집된 mRNA는 이런 GP 형태가 세포의 원형질막에 묶이고, 비리온 안으로 통합되어 그 안에서 기능적 숙주 세포 수용체-결합 단백질/융합 단백질로서 작용하는 것을 허용하는 경막 (TM) 도메인을 함유하는 GP의 형태를 코드화한다. 이 형태의 GP의 생합성 중에, 단백질은 이황화 결합에 의해 유지되는 두 개의 생성물로 단백질 가수분해가 진행된다. 아미노 말단 생성물은 GP1 (140 kDa)로서 언급되고 카르복시-말단 절단 생성물은 GP2 (26 kDa)로서 언급된다 (Sanchez, et al. (1998), J. Virol. 72:6442-6447).

에볼라 바이러스 GP (EBOV GP)는 보호 항체의 표적이 될 수 있지만, 질환 내성에서 항체들의 역할은 논란이 되어 왔다. 요양 중인 환자들의 중화 항체의 무시할 정도의 혈청 역가는 면역 혈청의 동물로의 실험적 전달을 사용하여 보호를 이루는 데 있어 모순된 결과와 함께 감염으로부터의 회복에서 중화 항체의 역할에 관한 추측을 유발하였다 (Peters, CJ and LeDuc, JW, (1999), J. Infect. Dis. 179 Suppl 1; Mikhailov, VV, (1994), Vopr. Virusol. 39:82; Xu, L. et al., (1998), Nature Med. 4: 37). 그러나, 보다 최근의 에볼라 바이러스의 발생에서, 질환에 걸렸고 바이러스 GP에 특이적인 단클론성 항체들 (ZMapp)의 칵테일로 치료받은 소수의 환자들이 질환으로부터 회복되었다. 더욱이, 이들 환자로부터 및 감염에 걸렸던 후 생존한 다른 환자들로부터의 혈청으로 치료받은 다른 환자들 또한 양성의 결과를 나타냈다.

에볼라 바이러스 GP에 결합하는 여러 항체들이 기술되어 있다 (예를 들면 미국 특허 제 6630144호, 6875433호, 7335356호 및 8513391호. 또한 EP1539238, EP2350270 및 EP8513391 참조).

기술적 진보가 향상된 에볼라 바이러스 항원(들) 백신 조성물을 제조하는 능력을 향상시켰지만, 에볼라 바이러스의 출현 스트레인을 설명하기 위해 추가의 보호 공급원을 제공할 필요가 남아 있다. 노출 후 백신 (Feldman, H, et al. (2007), PLos Pathog 3(1):e2), 작은 분자 억제제 (Cote, M. et al. (2011), Nature, 477(7364):344-348; Johansen, LM, et al. (2013), Sci Transl Med 5(190):190ra179; Warren, TK, et al., (2014), Nature, 508(7496):402-405), siRNA-기반 치료제 (Geisbert, TW, et al., (2006), J. Infect Dis. 193(12):1650-1657; Geisbert, TW et al., (2010), Lancet 375(9729):1896-1905) 및 단클론성 항체 (Saphire, EO, (2013), Immunotherapy 5(11):1221-1233; Wong, G. et al. (2014), Trends Microbiol. 22(8):456-463; Qiu, X et al., (2014), Hum. Vaccin. Immunother. 10(4):964-967)를 포함하여, 에볼라 바이러스에 대한 여러 후보 치료제가 현재 심사 중에 있다. 비-인간 영장류에 대한 항체의 수동 투여가 효과적인 것으로 증명되었다 (Dye, JM., et al., (2012), Proc Natl Acad Sci USA 109(13):5034-5039). 보다 최근에, 3개의 항체 (ZMapp)의 칵테일이 담배 식물에서 제조되고 있고 인간 사용에 대해 개발 중에 있다 (Qiu, X. et al., (2014), Nature 514(7520):47-53).

환자에서 중화 항체를 생성하기 위해 관심의 항원 (예컨대 GP)을 포함하는 백신 조성물의 개념이 대체로 좋은 접근법인 것으로 여겨지는 한편, 이미 바이러스에 노출된 환자들에서는 사용하는 것이 유리하지 않을 수 있는데, 왜냐하면 신체가 백신 조성물에 반응을 보이기까지 여러 주가 걸릴 것이기 때문에다. 그 시점까지 환자는 이미 이용할 수 있는 돌봄 및 완화 요법의 수준에 따라 바이러스 감염으로 쓰러질 수 있다. 이들 환자에서, 또는 효과적인 항체 반응을 시작할 수 없는 모든 환자에서, EBOV의 특정 스트레인에 대해 또는 다양한 스트레인에 대해 공통되는 에피토프를 표적으로 할 수 있는 보호 항체들을 이미 함유하는 조성물을 제공하는 것이 유할 수 있다.

따라서, 기술분야에는 여전히 에볼라 바이러스 감염을 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있는 새로운 항체를 확인할 필요가 있다.

발명의 간단한 요약

본 발명은 에볼라 바이러스 (EBOV) 당단백질 (GP)에 결합하는 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 본 발명의 항체는 에볼라 바이러스의 활성을 억제 또는 중화시키는 데 유용하다. 일부 구체예에서, 항체는 에볼라 바이러스의 숙주 세포에의 부착을 차단하고 및/또는 에볼라 바이러스의 숙주 세포 안으로의 유입을 방지하는 데 유용하다. 일부 구체예에서, 바이러스의 세포-대-세포 전파의 억제 또는 에볼라 바이러스-감염 세포의 사멸에 의한 항체 기능은 병원체 바이러스의 생성을 감소시킨다. 특정 구체예에서, 항체는 대상체에서 에볼라 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상을 예방, 치료 또는 개선하는 데 유용하다. 특정 구체예에서, 항체는 에볼라 바이러스로 감염되었거나, 또는 감염의 위험이 있는 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 발명의 항체를 함유하는 조성물은 백신 사용이 금지되었거나, 또는 백신이 덜 효과적인 대상체, 예를 들면 고령의 환자, 아주 어린 환자, 백신의 임의의 하나 이상의 성분에 대해 알레르기가 있을 수 있는 환자, 또는 백신의 면역원에 대해 비-반응성일 수 있는 면역손상된 환자에게 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 발명의 항체를 함유하는 조성물이 에볼라 바이러스 발생 중에 의료 스탭, 입원 중인 환자 또는 가정에 거주하면서 간호를 받고 있거나 다른 고위험군 환자들에게 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 적어도 하나의 발명의 항체를 함유하고 있는 조성물이 이미 에볼라 바이러스에 노출된 환자들에게 제1 선 치료로서 투여될 수 있다.

발명의 항체는 전-길이이거나 (예를 들면 IgG1 또는 IgG4 항체) 또는 항원-결합 부분 (예를 들면 Fab, F(ab')₂ 또는 scFv 단편) 만을 포함할 수 있고, 기능성에 영향을 미치기 위해, 예컨대 숙주에서의 지속성을 증가시키거나 잔류 이펙터 기능을 제거하기 위해 변형될 수 있다 (Reddy et al., 2000, J. Immunol. 164:1925-1933). 특정 구체예에서, 항체는 이중특이적일 수 있다.

제1 측면으로, 본 발명은 EBOV GP에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

한 구체예에서, 본 발명은 에볼라 바이러스 (EBOV) 및/또는 에볼라 바이러스 당단백질 (EBOV-GP)에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공하며, 이때 항체는:

(a) SEQ ID NO: 18, 66, 146, 2, 34, 50, 82, 98, 114, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290 및 306으로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열들 중 어느 하나에 함유된 세 개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 26, 74, 154, 10, 42, 58, 90, 106, 122, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282 및 298로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열들 중 어느 하나에 함유된 세 개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다;

(b) 전체 인간 단클론성 항체이다;

(c) 표면 플라즈몬 공명 분석으로 측정되는 바, 10^-7M 미만의 해리 상수 (K_D)로 EBOV, 또는 EBOV-GP를 발현하는 바이러스 유사 입자 (VLP)에 결합한다;

(d) pH 7.4에 관련하여 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3배 증가를 보인다;

(e) 약 10 ^- ¹¹ M 내지 약 10^- ⁹M의 범위의 IC50으로 자이르 에볼라 바이러스의 중화를 보인다;

(f) 항체-의존성 세포의 세포독성을 촉발하는 EBOV-GP를 발현하는 세포에 대한 결합을 보인다;

(g) 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르로 구성되는 군으로부터 선택된 EBOV의 하나 이상의 스트레인과 교차 반응한다;

(h) 가용성 GP (sGP)에 결합한다;

(i) 기준 항체 (reference antibody)와 교차-경합하고, 여기서 기준 항체는 표 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열을 포함한다는 특징들 중 하나 이상을 가진다.

한 구체예에서, 본 발명은 EBOV 및/또는 에볼라 바이러스 당단백질 (EBOV GP)에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공하며, 이때 항체는:

(a) 전체 인간 단클론성 항체이다;

(b) 표면 플라즈몬 공명 분석으로 측정되는 바, 10^-7M 미만의 해리 상수 (K_D)로 EBOV, 또는 EBOV GP를 발현하는 바이러스 유사 입자 (VLP)에 결합한다;

(c) pH 7.4에 관련하여 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3배 증가를 보인다;

(d) 약 10 ^- ¹¹ M 내지 약 10^- ⁹M의 범위의 IC₅₀으로 자이르 에볼라 바이러스의 중화를 보인다;

(e) 항체-의존성 세포의 세포독성을 촉발하는 EBOV-GP를 발현하는 세포에 대한 결합을 보이고;

(f) 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르로 구성되는 군으로부터 선택된 EBOV의 하나 이상의 스트레인과 교차 반응한다;

(g) 가용성 GP (sGP)에 결합한다;

(h) 기준 항체와 교차-경합하며, 여기서 기준 항체는 표 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열을 포함한다는 특징들 중 둘 이상을 가진다.

본 발명의 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체는 본원의 표 1 및 2에 열거된다. 표 1은 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들의 중쇄 가변 영역 (HCVR), 경쇄 가변 영역 (LCVR), 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2 및 HCDR3), 및 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)의 아미노산 서열 식별자들을 나타낸다. 표 2는 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들의 HCVR, LCVR, HCDR1, HCDR2 HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3의 핵산 서열 식별자들을 나타낸다.

본 발명은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 HCVR을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 LCVR을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것과 쌍을 이룬 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열 중 어느 것을 포함하는 HCVR과 LCVR 아미노산 서열쌍 (HCVR/LCVR)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 구체예에 따르면, 본 발명은 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 함유된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

한 구체예에서, 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74, 146/154, 2/10, 34/42, 50/58, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함한다.

한 구체예에서, 분리된 항체 또는 항원-결합 단편은:

(a) SEQ ID NO: 20, 68, 148, 4, 36, 52, 84, 100, 116, 132, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292 및 308로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;

(b) SEQ ID NO: 22, 70, 150, 6, 38, 54, 86, 102, 118, 134, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294 및 310으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;

(c) SEQ ID NO: 24, 72, 152, 8, 40, 56, 88, 104, 120, 136, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296 및 312로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인;

(d) SEQ ID NO: 28, 76, 156, 12, 44, 60, 92, 108, 124, 140, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284 및 300으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인;

(e) SEQ ID NO: 30, 78, 158, 14, 46, 62, 94, 110, 126, 142, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인;

(f) SEQ ID NO: 32, 80, 160, 16, 48, 64, 96, 112, 128, 144, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288 및 304로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인을 포함한다.

특정 구체예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 18/26 (H1H17139P), 66/74 (H1H17161P) 및 146/154 (H1H17203P)로 구성되는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR1 (HCDR1)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR2 (HCDR2)를 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 중쇄 CDR3 (HCDR3)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR1 (LCDR1)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR2 (LCDR2)를 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 아미노산 서열 또는 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함하는 경쇄 CDR3 (LCDR3)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것과 쌍을 이룬 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것을 포함하는 HCDR3과 LCDR3 아미노산 서열 쌍 (HCDR3/LCDR3)을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 구체예에 따르면, 본 발명은 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 함유된 HCDR3/LCDR3 아미노산 서열쌍을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 구체예에서, HCDR3/LCDR3 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 24/32 (예컨대 H1H17139P), 72/80 (예컨대 H1H17161P), 및 152/160 (예컨대 H1H17203P)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 함유된 6개의 CDR 세트 (즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 특정 구체예에서, HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 SEQ ID NO: 20-22-24-28-30-32 (예컨대 H1H17139P), 68-70-72-76-78-80 (예컨대 H1H17161P); 및 148-150-152-156-158-160 (예컨대 H1H17203P)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

관련된 구체예에서, 본 발명은 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 의해 정의된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍 내에 함유된 6개의 CDR 세트 (즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 SEQ ID NOs: 18/26 (예컨대 H1H17139P), 66/74 (예컨대 H1H17161P); 및 146/154 (예컨대 H1H17203P)로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍 내에 함유된 HCDR1-HCDR2-HCDR3-LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트를 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다. HCVR 및 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 확인하기 위한 방법 및 기술들은 기술분야에 잘 알려져 있고 본원에서 개시된 명시된 HCVR 및/또는 LCVR 아미노산 서열 내의 CDR을 확인하기 위해 사용될 수 있다. CDR의 경계를 확인하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 관례는 예컨대 Kabat 정의, Chothia 정의 및 AbM 정의를 포함한다. 일반적으로 말하면, Kabat 정의는 서열 가변성을 기반으로 하고, Chothia 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 하며, AbM 정의는 Kabat과 Chothia 접근법의 절충안이다. 예컨대 Kabat, "Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol . Biol . 273:927-948 (1997); 및 Martin et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA 86:9268-9272 (1989) 참조. 공용 데이터베이스가 또한 항체 내의 CDR 서열들을 확인하기 위해 이용될 수 있다.

본 발명은 변형된 글리코실화 패턴을 가지는 항-에볼라 바이러스 항체를 포함한다. 일부 구체예에서, 바람직하지 못한 글리코실화 부위를 제거하기 위한 변형이 유용할 수 있고, 또는 예를 들면 항체 의존성 세포의 세포독성 (ADCC) 기능을 증가시키기 위하여 올리고당 사슬에 존재하는 푸코오스 부분이 결핍된 항체가 유용할 수 있다 (Shield et al. (2002) JBC 277:26733 참조). 다른 적용에서, 갈락토실화의 변형이 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 변형시키기 위해 만들어질 수 있다.

본 발명은 또한 HCVR의 CDR 및 LCVR의 CDR을 포함하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로 에볼라 바이러스에 대한 특이적 결합을 경합하는 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 제공하며, 이때 HCVR 및 LCVR은 각각 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열들로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.

본 발명은 또한 HCVR의 CDR 및 LCVR의 CDR을 포함하는 기준 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로 에볼라 바이러스에 대한 결합에 대해 교차-경합하는 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 제공하며, 이때 HCVR 및 LCVR은 각각 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열들로부터 선택된 아미노산 서열을 가진다.

본 발명은 또한 숙주 세포에 대한 에볼라 바이러스 부착 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입을 차단하는 분리된 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 제공한다.

특정 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 에볼라 바이러스의 제1 에피토프에 대한 제1 결합 특이성 및 에볼라 바이러스의 제2 에피토프에 대한 제2 결합 특이성을 포함하는 이중특이적이고, 이때 제1 및 제2 에피토프는 구별되고 중복되지 않는다. 특정 구체예에서 이중특이적은 바이러스 당단백질의 에피토프에 결합하는 제1 아암 (arm) 및 상이한 바이러스 항원의 에피토프에 결합하는 제2 아암을 포함할 수 있다.

제2 측면으로, 본 발명은 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 부분들을 코드화하는 핵산 분자를 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCVR 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCVR 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR1 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR2 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 HCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCDR3 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR1 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR1 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR2 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR2 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 표 1에 열거된 LCDR3 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공하며; 특정 구체예에서 핵산 분자는 표 2에 열거된 LCDR3 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다.

본 발명은 또한 HCVR을 코드화하는 핵산 분자를 제공하는데, HCVR은 세 개의 CDR 세트 (즉 HCDR1-HCDR2-HCDR3)를 포함하고, HCDR1-HCDR2-HCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 의해 정의된 것과 같다.

본 발명은 또한 LCVR을 코드화하는 핵산 분자를 제공하는데, LCVR은 세 개의 CDR 세트 (즉 LCDR1-LCDR2-LCDR3)를 포함하고, LCDR1-LCDR2-LCDR3 아미노산 서열 세트는 표 1에 열거된 예시적인 항-에볼라 바이러스 GP 항체들 중 어느 것에 의해 정의된 것과 같다.

본 발명은 또한 HCVR 및 LCVR 둘 다를 코드화하는 핵산 분자를 제공하는데, HCVR은 표 1에 열거된 HCVR 아미노산 서열들 중 어느 것의 아미노산 서열을 포함하고, LCVR은 표 1에 열거된 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, 핵산 분자는 표 2에 열거된 HCVR 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열, 및 표 2에 열거된 LCVR 핵산 서열들 중 어느 것으로부터 선택된 폴리뉴클레오티드 서열, 또는 그것에 대해 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 가지는 그것의 실질적으로 유사한 서열을 포함한다. 발명의 이 측면에 따르는 특정 구체예에서, 핵산 분자는 HCVR 및 LCVR을 코드화하고, HCVR 및 LCVR은 둘 다 표 1에 열거된 동일한 항-에볼라 바이러스 GP 항체로부터 유도된다.

본 발명은 표 1에 열거된 중쇄 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공한다. 본 발명은 또한 표 1에 열거된 경쇄 아미노산 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자를 제공한다.

관련된 측면으로, 본 발명은 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 발현할 수 있는 재조합 발현 벡터를 제공한다. 예를 들어, 본 발명은 상기 언급된 핵산 분자들 중 어느 것, 즉 표 1에 나타낸 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 서열들 중 어느 것을 코드화하는 핵산 분자들을 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함한다. 또한 본 발명의 범주 내에는 그런 벡터 안에 도입되어 있는 숙주 세포, 뿐만 아니라 그 숙주 세포를 항체 또는 항체 단편들의 생성을 허용하는 조건하에서 배양함으로써 항체 또는 그것의 부분들을 생성하고, 그렇게 생성된 항체 및 항체 단편들을 회수하는 방법이 포함된다.

제3 측면으로, 발명은 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다. 하나 이상의 분리된 항체는 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함한다. 한 구체예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74, 146/154, 2/10, 34/42, 50/58, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택된다. 한 구체예에서, HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154로 구성되는 군으로부터 선택된다.

관련된 측면으로, 발명은 발명의 적어도 두 개의 항체 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제의 조합인 조성물을 특징으로 한다.

관련된 측면으로, 발명은 발명의 적어도 세 개의 항체 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제의 조합/칵테일인 조성물을 특징으로 한다.

한 구체예에서, 제약학적 조성물은 (a) 표 1에 기술된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 표 1에 기술된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; 및 (c) 표 1에 기술된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 제3 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 제1 에피토프에 결합하거나, 또는 그것과 상호작용하고 제2 및/또는 제3 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 상이한 에피토프에 결합하거나, 또는 그것과 상호작용하며, 및 (d) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함한다.

다른 관련된 측면으로, 발명은 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 제2 치료제의 조합인 조성물을 특징으로 한다.

한 구체예에서, 제2 치료제는 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 유리하게 조합된 임의의 제제이다. 항-에볼라 바이러스 항체와 유리하게 조합될 수 있는 예시적인 제제들로는, 제한 없이, 에볼라 바이러스 활성에 결합 및/또는 활성을 억제하는 다른 제제 (다른 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 등을 포함함) 및/또는 직접적으로 에볼라 바이러스에 결합하지는 않지만 그럼에도 불구하고 숙주 세포의 감염성을 포함하여 바이러스 활성을 억제하는 제제들을 포함한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 표 1에 기술된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 표 1에 기술된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 제1 에피토프에 결합하고 제2 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 제2 에피토프에 결합하며, 이때 제1 및 제2 에피토프는 구별되고 중복되지 않으며; 및 (c) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스에 대한 결합에 대해 제2 항체와 교차-경합하지 않으며; 및 (c) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 상이한 에볼라 바이러스 항원과 상호작용하는 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 에피토프에 결합하고 제2 항체는 상이한 에볼라 바이러스 항원 상의 에피토프에 결합하며; 및 (c) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (c) a 제3 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 에피토프에 결합하고 제2 및/또는 제3 항체는 에볼라 바이러스 GP 상의 상이한 에피토프에 결합하며, 이때 제1, 제2 및 제3 에피토프는 구별되고 중복되지 않으며; 및 (c) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (c) 제3 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스에 대한 결합에 대해 제2 및/또는 제3 항체와 교차-경합하거나 그렇지 않을 수 있고; 및 (d) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

특정 구체예에서, 발명은 (a) 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 상이한 에볼라 바이러스 항원과 상호작용하는 제2 및/또는 제3 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 여기서 제1 항체는 에볼라 바이러스 상의 에피토프에 결합하고 제2 및/또는 제3 항체는 상이한 에볼라 바이러스 항원 상의 에피토프에 결합하며; 및 (c) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공한다.

한 구체예에서, 제약학적 조성물은 에볼라 바이러스의 한 스트레인 상의 한 에피토프에 결합하거나, 또는 그것과 상호작용하는 제1 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 및 에볼라 바이러스의 동일한 스트레인 또는 상이한 스트레인 상의 제2 및/또는 제3 에피토프에 결합하거나, 또는 그것과 상호작용하는 제2 및/또는 제3 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다. 발명의 항체와 상호작용하는 에볼라 바이러스 스트레인들은 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르 스트레인들 또는 그것들의 변이체로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

관련된 측면으로, 발명은 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 제1 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물을 제공하고, 여기서 제1 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 20의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 22의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 24의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 28의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 30의 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다. 제약학적 조성물은 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 제2 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 더 포함할 수 있고, 여기서 제2 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 68의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 70의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 72의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 76의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 78의 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 80의 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다. 제약학적 조성물은 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 제3 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 더 포함할 수 있고, 여기서 제3 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 148의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 150의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 152의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 156의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 158의 LCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 및 160의 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.

특정 구체예에서, 각 항체는 별도의 제형으로서 제형될 수 있고 최대 치료 효능을 이루기 위해 하나 이상의 항체가 필요한 것으로 결정된다면, 각 항체 제형은 필요에 따라 공동-투여될 수 있다 (동시에, 또는 순차적으로). 다르게는, 항체 칵테일이 공동-제형될 수 있다.

특정 구체예에서, 둘 이상의 항체가 하나의 제약학적 조성물에 함께 조합될 때, 그것들은 에볼라 바이러스 단백질 상의 동일하거나 중복되는 에피토프에 결합하거나 결합하지 않을 수 있다. 본 발명의 항-에볼라 바이러스 항체를 포함하는 추가의 조합 치료법 및 공동-제형은 본원의 다른 곳에서 개시된다.

제4 측면으로, 발명은 에볼라 바이러스와 관련된 질환 또는 장애 (예컨대 대상체의 바이러스 감염), 또는 바이러스 감염과 관련된 적어도 하나의 증상 또는 EBOV 감염과 관련된 적어도 하나의 증상의 빈도 또는 심각성을, 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 또는 항체의 항원-결합 부분, 또는 발명의 적어도 둘 이상의 항체의 칵테일을 사용하여 치료하기 위한 치료 방법을 제공하며, 여기서 치료 방법은 발명의 적어도 둘 이상의 항체 또는 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 방법은 발명의 적어도 세 개의 항체의 조합 (칵테일)을 투여하는 것을 포함한다. 한 구체예에서, 항체 칵테일은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154에 나타낸 아미노산 서열쌍을 가지는 세 개의 항-EBOV 항체를 포함한다. 치료된 장애는 에볼라 바이러스 활성의 억제에 의해 향상된, 개선된, 억제된 또는 예방된 임의의 질환 또는 상태이다. 특정 구체예에서, 발명은 에볼라 바이러스 감염의 적어도 한 증상을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 방법을 제공하며, 방법은 발명의 적어도 하나 이상의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

관련된 측면으로, 발명은 발명은 감염성 EBOV의 중화 방법을 제공하며, 그 방법은 EBOV로 감염된 세포를 하나 이상의 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물에 노출시키는 단계를 포함하며, 여기서 노출은 바이러스 감염, 또는 세포 사멸로부터 세포의 증대된 증식을 초래한다. 특정 구체예에서, 노출은 시험관 내에서 또는 생체 내에서 있을 수 있다. 한 구체예에서, 방법은 발명의 하나 이상의 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 방법은 발명의 적어도 세 개의 항체의 조합 (칵테일)을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 항체 칵테일은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154에 나타낸 아미노산 서열쌍을 가지는 세 개의 항-EBOV 항체를 포함한다.

일부 구체예에서, 본 발명은 발명의 하나 이상의 항-에볼라 바이러스 GP 항체를 투여함으로써 대상체에서 에볼라 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상을 개선시키거나 증상의 심각성, 기간 또는 발생 빈도를 감소시키는 방법을 제공하며, 여기서 적어도 하나의 증상은 열, 두통, 피로, 식욕 상실, 근육통, 설사, 구토, 복통, 탈수 및 설명되지 않는 출혈로 구성되는 군으로부터 선택된다.

특정 구체예에서, 발명은 대상체에서 바이러스 로드 (load)을 감소시키는 방법을 제공하는데, 그 방법은 에볼라 바이러스 GP에 결합하고 에볼라 바이러스 결합 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입을 차단하는 발명의 하나 이상의 항체 또는 그것의 단편의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

관련된 측면으로, 발명은 EBOV로 감염된 대상체, 또는 EBOV에 노출되었거나, 또는 EBOV에 노출되거나 EBOV를 획득할 위험이 있는 대상체의 생존, 또는 생존 가능성을 증가시키는 방법을 제공하는데, 그 방법은 발명의 적어도 하나의 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 발명의 적어도 하나의 항체를 포함하는 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.

한 구체예에서, 발명은 EBOV로 감염된 대상체, 또는 EBOV에 노출되었거나, 또는 EBOV에 노출되거나 EBOV를 획득할 위험이 있는 대상체의 생존, 또는 생존 가능성을 증가시키는 방법을 제공하는데, 그 방법은 발명의 적어도 두 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 방법은 발명의 적어도 세 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 투여되는 항체 칵테일은 발명의 적어도 세 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하고, 여기서 적어도 세 개의 항체는 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154에 나타낸 것과 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함한다.

한 구체예에서, 필요로 하는 대상체는 에볼라 바이러스 감염에 노출되거나, 에볼라 바이러스를 획득할 위험이 있는 대상체로, 대상체는 면역손상된 개인, 의료계 종사자, 에볼라 바이러스를 잠복시키고 있는 사람에게 노출된 적이 있는 것으로 추정되는 사람, 감염된 개인와 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접한 사람, 병원 직원, 제약 연구원, 에볼라 환자가 치료받았던 병원 시설 또는 기관을 청소하는 데 종사하는 유지 요원, 에볼라 바이러스가 발생한 것으로 알려졌거나 발생한 것으로 의심되는 지역 또는 나라를 방문하였거나 방문할 계획이 있는 개인들 및 항공사 단골 고객으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

한 구체예에서, 그럴 필요가 있는 대상체에게는 발명의 적어도 하나의 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 발명의 적어도 하나의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제2 치료제와 함께 포함하는 제약학적 조성물이 투여될 수 있다. 제2 치료제는 항-바이러스 약물, 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증 약물), EBOV에 대한 상이한 항체, EBOV용 백신, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

한 구체예에서, 제약학적 조성물은 피하고, 정맥 내로, 피부 내로, 근육 내로, 비강 내로 또는 경구로 투여될 수 있다.

관련된 구체예에서, 증대된 보호는 EBOV에 노출된 또는 EBOV로 감염된 포유류에서 포유류가 적어도 세 개의 발명의 항체를 포함하는 항체 칵테일을 포함하는 제약학적 조성물로 치료될 때 관찰될 수 있다.

한 구체예에서, 관찰된 증대된 보호는 EBOV 감염과 관련된 적어도 한 가지 즈상의 심각성 또는 빈도의 감소에 의해, 바이러스 로드의 감소에 의해 또는 EBOV로 감염된 포유류의 생존률의 증가에 의해 측정될 수 있다. 적어도 한 가지 증상은 열, 두통, 피로, 식욕 상실, 근육통, 설사, 구토, 복통, 탈수 및 설명되지 않는 출혈로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

증대된 보호는 항체가 단독으로 사용될 때, 또는 하나 이상의 추가의 치료제 또는 항-EBOV 치료 양식과 조합되어 사용될 때 관찰될 수 있다.

하나 이상의 추가의 치료제는 항-바이러스 약물, 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증성 약물), 에볼라 바이러스에 대한 상이한 항체, 에볼라 바이러스용 백신, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다.

한 구체예에서, 하나 이상의 추가의 치료제는 하나 이상의 항-EBOV 항체를 포함한다.

한 구체예에서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열을 포함한다.

관련된 구체예에서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열쌍을 포함한다.

관련된 다른 구체예에서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열쌍을 포함한다.

특정 구체예에서, 하나 이상의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 에볼라 바이러스로 감염되었거나, 감염될 위험이 있거나, 또는 에볼라 바이러스 감염을 발달시킬 성향이 있는 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여될 수 있다. 위험한 대상체는, 한정하는 것은 아니지만, 면역손상된 사람, 예를 들면 자가면역 질환으로 인해 면역손상된 사람, 또는 면역억제 치료법을 받은 사람들 (예를 들면 장기 이식 후), 또는 백혈구를 고갈시키거나 파괴하는 빈혈의 특정 형태인 인간 면역결핍 증후군 (HIV) 또는 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)으로 고통받는 사람들, 방사선 또는 화학요법을 받은 사람들 또는 염증성 장애로 고생하는 사람들을 포함한다. 에볼라 바이러스 감염을 획득할 위험이 있는 다른 대상체는 의료계 종사자, 또는 감염된 개인와 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접하게 되거나, 또는 감염된 개인로부터의 체액 또는 조직에 노출되고, 또한 에볼라 바이러스 감염이 발생할 위험이 증가된 임의의 사람을 포함한다. 더욱이, 대상체는 질환의 발생과의 근접성으로 인해, 예컨대 인구-조밀 도시에 또는 에볼라 바이러스 감염이 확인되었거나 추정되는 대상체와 매우 가까운 곳에 거주하는 대상체, 또는 선택된 직업으로 인해, 예컨대 에볼라 환자가 치료받은 병원 시설 또는 기관을 청소하는 데 종사하는 유지 요원, 병원 종사자, 제약 연구원, 에볼라 바이러스가 발생한 것으로 알려졌거나 의심되는 지역 또는 나라를 방문하였거나 방문할 계획이 있는 개인들 또는 항공사 단골 고객이 에볼라 바이러스 감염에 걸릴 위험이 있다.

특정 구체예에서, 발명의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 제2 치료제와 함께 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 제2 치료제는 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증성 약물), 항-감염제, 항-바이러스 약물, 에볼라 바이러스에 대한 상이한 항체, 에볼라 바이러스용 백신, ZMapp 치료법, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머), 인터페론, 식이 보조제, 예컨대 항-산화제 및 에볼라 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상을 개선시키거나, 또는 환자의 바이러스 로드를 감소시키는 데 유용한 것으로 기술분야에 공지되어 있는 임의의 다른 약물 또는 치료법으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 특정 구체예에서, 제2 치료제는 발명의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편과 관련된 임의의 가능한 부작용(들)이 발생해야만 한다면, 그런 부작용(들)을 대응하거나 감소시키는 것을 돕는 제제일 수 있다. 항체 또는 그것의 단편은 피하로, 정맥 내로, 피부 내로, 복강 내로, 경구로, 비강 내로, 근육 내로 또는 두개 내로 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 항체는 대상체의 혈청 중의 항체의 최대 농도에 대한 단일 정맥 내 투입으로서 투여될 수 있다. 항체 또는 그것의 단편은 대상체의 체중 kg당 약 0.1 mg 내지 약 100 mg의 용량으로 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항체는 50 mg 내지 600 mg을 포함하는 1회 이상의 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명은 또한 EBOV를 가졌거나, 가진 것으로 추정되거나, 또는 EBOV에 노출된 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한, 또는 에볼라 바이러스 결합 및/또는 활성의 봉쇄로부터 유리할 수 있을 질환 또는 장애의 치료를 위한 의약의 제조에 사용하기 위한, 발명의 항-에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다.

다른 구체예들은 이어지는 상세한 설명의 리뷰로부터 드러나게 될 것이다.

도 1: H1H17161P는 생 (live) EBOV를 강력하게 중화시킨다.
도 2: 세 가지 항-EBOV 항체와 에볼라 GP 또는 에볼라 가용성 GP (sGP)와의 상호작용을 도시한다.

본 발명의 방법을 기술하기 전에, 본 발명은 특정 방법, 기술된 실험 조건들이 달라질 수 있기 때문에 그것들에 제한되지 않는 것이 인지되어야 한다. 또한 본원에서 사용되는 용어가 단지 특정 구체예들을 기술할 목적이고, 본 발명의 범주가 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것이기 때문에, 제한하려는 의도가 아니라는 것이 인지되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술적이고 과학적인 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상적인 지식을 가진 사람에 의해 통상적으로 이해되는 것과 같은 의미를 가진다. 비록 본원에 기술된 것들과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 실험에 사용될 수 있긴 하지만, 바람직한 방법 및 물질을 이제 기술하기로 한다.

정의

"에볼라 바이러스" 또는 "EBOV"는 심각하고 급속히 진행되는 출혈열을 유발하는 것으로 알려져 있는 필로비리다에 (Filoviridae) 과 (family)의 속이다. 뉴클레오티드 서열 및 발생 위치, 예를 들면 자이르, 타이 숲 (이전에는 코트디부아르 또는 아이보리코스트로 알려졌음), 수단, 레스톤 및 분디부교를 기반으로 한 상이한 에볼라 바이러스 종 및 스트레인들이 많이 있다. 가장 치명적인 형태의 바이러스는 자이르 및 수단 스트레인들이다. 레스톤 스트레인은 비-인간 영장류만을 감염시키는 것으로 알려져 있는 유일한 스트레인이다. 용어 "에볼라 바이러스"는 또한 상이한 에볼라 바이러스 분리물로부터 분리된 에볼라 바이러스의 변종들을 포함한다.

본원에서 "EBOV GP" 또는 "에볼라 바이러스 GP"로 표시된 전-길이 에볼라 바이러스 당단백질의 아미노산 서열은 승인 번호 AHX24649.1 (또한 SEQ ID NO: 314 참조) 및 AHX24649.2 (또한 SEQ ID NO: 315 참조)로서 GenBank에서 발견된 아미노산 서열들에 의해 예시된다. 이 용어는 또한 예를 들면 히스티딘 태그에 결합된 (예컨대 데카히스티딘 태그를 가진 승인 번호 AHX24649.1 (SEQ ID NO: 318) 참조), 마우스 또는 인간 Fc 또는 신호 서열에 결합된 에볼라 바이러스 GP 또는 그것의 단편을 포함한다. "가용성 GP" 또는 "sGP"의 아미노산 서열을 승인 번호 AHX24650으로 및 SEQ ID NO 316 (신호 서열을 가짐)으로서 및 또한 SEQ ID NO: 317 (신호 서열은 없지만 myc-myc-헥사히스티딘 태그를 가짐)로서 제시된다. "GP1"의 아미노산 서열은 잔기 1에서 전 길이 GP의 아미노 말단 단부에 시작하고 SEQ ID NO: 315의 잔기 501에서 끝난다. "GP2"의 아미노산 서열은 SEQ ID NO: 315로서 나타낸 전 길이 GP의 잔기 502부터 676까지에 걸쳐 있다.

본원에서 사용된 용어 "에볼라 바이러스 감염" 또는 "EBOV 감염"은 그 바이러스에, 또는 감염된 동물에, 또는 감염된 인간 환자에 대한 노출, 또는 에볼라 바이러스로 감염된 동물 또는 인간 환자로부터의 체액 또는 조직과의 접촉으로부터 유발되는 심각한 출혈열을 나타낸다. "에볼라 바이러스 감염과 관련된 증상"은 열, 두통, 피로, 식욕 상실, 근육통, 설사, 구토, 복통, 탈수 및 설명되지 않는 출혈을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 네 개의 폴리펩티드 사슬, 이황화 결합에 의해 상호-연결된 2개의 중쇄 (H) 및 두 개의 경쇄 (L)로 구성된 면역글로불린 분자 (즉 "전체 항체 분자"), 뿐만 아니라 그것의 다량체 (예컨대 IgM) 또는 그것의 항원-결합 단편을 나타낸다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역 ("HCVR" 또는 "V_H") 및 중쇄 불변 영역 (도메인 C_H1, C_H2 및 C_H3으로 구성됨)으로 구성된다. 각 경쇄는 경쇄 가변 영역 ("LCVR 또는 "V_L") 및 경쇄 불변 영역 (C_L)으로 구성된다. V_H 및 V_L 영역은 추가로, 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 더 보존된 영역들이 사이사이 배치되어 있는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로 불리는 초가변성 영역들로 하위분할될 수 있다. 각각의 V_H 및 V_L은 다음 순서: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4로 아미노-말단으로부터 카르복시-말단쪽으로 배열된 세 개의 CDR 및 네 개의 FR로 구성된다. 발명의 특정 구체예에서, 항체 (또는 그것의 항원 결합 단편)의 FR은 인간 생식선 서열들과 동일하거나, 또는 자연적으로 또는 인공적으로 변형될 수 있다. 아미노산 공통 서열은 둘 이상의 CDR의 나란한 분석을 기반으로 정의될 수 있다.

하나 이상의 CDR 잔기의 치환 또는 하나 이상의 CDR의 생략 또한 가능하다. 항체는 과학 문헌에 기술되었는데, 문헌에는 하나 또는 두 개의 CDR이 결합을 위해 제공될 수 있다. Padlan 등 (1995 FASEB J. 9:133-139)은 항체와 그것들의 항원 사이의 접촉 영역을 공개된 결정 구조를 기반으로 분석하였고, 단지 약 1/5 내지 1/3의 CDR 잔기가 실제로 항원과 접촉한다고 결론내렸다. Padlan은 또한 하나 또는 두 개의 CDR이 항원과 접촉하는 아미노산을 갖지 않은 많은 항체를 발견하였다 (또한 Vajdos et al. 2002 J Mol Biol 320:415-428 참조).

항원과 접촉하지 않는 CDR 잔기들은 이전의 연구를 기반으로, Chothia CDR 외부에 놓여 있는 Kabat CDR의 영역으로부터, 분자 모델링에 의해 및/또는 실험적으로 확인될 수 있다. 만약 CDR 또는 그것의 잔기(들)이 생략된다면, 그것은 보통 다른 인간 항체 서열의 상응하는 또는 그런 서열들에 공통되는 위치를 차지하는 아미노산으로 치환된다. 치환하기 위하여 CDR 및 아미노산 내의 치환을 위한 위치들은 또한 실험적으로 선택될 수 있다. 실험적 치환은 보존성이거나 비-보존성 치환일 수 있다.

본원에 개시된 전체 인간 항-에볼라 바이러스 단클론성 항체는 상응하는 생식선 서열들과 비교하여 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 프레임워크 및/또는 CDR 영역에 하나 이상의 아미노산 치환, 삽입 및/또는 결실을 포함할 수 있다. 그런 돌연변이들은 본원에 개시된 아미노산 서열들을 예를 들면 공개된 항체 서열 데이터베이스로부터 이용 가능한 생식선 서열들에 비교함으로써 쉽게 확인될 수 있다. 본 발명은 본원에 개시된 아미노산 서열들 중 어느 것으로부터 유도된 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 포함하며, 여기서 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내의 하나 이상의 아미노산이 그것으로부터 항체가 유도되는 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)에 대해, 또는 다른 인간 생식선 서열의 상응하는 잔기(들)에 대해, 또는 상응하는 생식선 잔기(들)의 보존성 아미노산 치환에 대해 돌연변이된다 (그런 서열 변화들은 본원에서 포괄적으로 "생식선 돌연변이"로서 언급된다). 기술분야의 숙련된 사람은, 본원에 개시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역들로 시작하여, 하나 이상의 개별적인 생식선 돌연변이들 또는 그것들의 조합을 포함하는 수많은 항체 및 항원-결합 단편을 쉽게 제조할 수 있다. 특정 구체예에서, V _H 및/또는 V _L 도메인 내의 모든 프레임워크 및/또는 CDR은 그것으로부터 항체가 유도된 원래의 생식선 서열에서 발견된 잔기들로 복귀 돌연변이된다. 다른 구체예에서는, 단지 특정 잔기들만이, 예컨대 FR1의 처음 8개의 아미노산 내에서 또는 FR4의 마지막 8개의 아미노산 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기들만이, 또는 CDR1, CDR2 또는 CDR3 내에서 발견되는 돌연변이된 잔기들만이 원래의 생식선 서열로 복귀 돌연변이된다. 다른 구체예에서, 하나 이상의 프레임워크 및/또는 CDR 잔기(들)이 상이한 생식선 서열 (즉 항체가 원래 유도된 생식선 서열과 상이한 생식선 서열)의 상응하는 잔기(들)로 돌연변이된다. 나아가, 본 발명의 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에서 둘 이상의 생식선 돌연변이들의 임의의 조합을 함유할 수 있는데, 예컨대 특정 개별 잔기들이 특별한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되는 한편 원래의 생식선 서열과 상이한 특정한 다른 잔기들이 유지되거나 또는 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 뿐만 아니라, 본 발명의 항체는 프레임워크 및/또는 CDR 영역 내에 둘 이상의 생식선 돌연변이의 조합을 함유할 수 있다. 예컨대 특정 개별 잔기들이 특별한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이되는 한편 원래의 생식선 서열과 상이한 특정한 다른 잔기들이 유지되거나 상이한 생식선 서열의 상응하는 잔기로 돌연변이된다. 일단 얻어지면, 하나 이상의 생식선 돌연변이를 함유하는 항체 및 항원-결합 단편은 하나 이상의 원하는 특성, 예컨대 향상된 결합 특이성, 증가된 결합 친화성, 향상된 또는 증대된 길항체 또는 아고니스트 생물학적 특성 (경우에 따라), 감소된 면역원성 등에 대해 쉽게 시험될 수 있다. 이런 일반적 방식으로 얻어진 항체 및 항원-결합 단편은 본 발명에 포함된다.

본 발명은 또한 하나 이상의 보존성 치환을 가진 본원에 개시된 HCVR, LCVR, 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 어느 것의 변이체를 포함하는 전체 인간 항-에볼라 바이러스 단클론성 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 본원에 개시된 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열들 중 어느 것과 관련하여 예컨대 10개 이하, 8개 이하, 6개 이하, 4개 이하 등의 보존성 아미노산 치환을 포함한 HCVR, LCVR 및/또는 CDR 아미노산 서열들을 가지는 항-에볼라 바이러스 항체를 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식선 면역글로불린 서열들로부터 유도된 가변 및 불변 영역을 가지는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 발명의 인간 mAb는 인간 생식선 면역글로불린 서열들에 의해 코드화되지 않은 아미노산 잔기들 (예컨대 시험관 내에서 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이생성에 의해 또는 생체 내에서 체세포성 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이들)을, 예를 들면 CDR에, 특히 CDR3에 포함할 수 있다. 그러나, 본원에 사용되는 용어 "인간 항체"는 다른 포유류 종 (예컨대 마우스)의 생식선으로부터 유도된 CDR 서열들이 인간 FR 서열들 위로 그라프팅되어 있는 mAb를 포함하는 것으로 의도되지는 않는다. 이 용어는 비-인간 포유류에서, 또는 비-인간 포유류의 세포에서 재조합적으로 제조된 항체를 포함한다. 이 용어는 인간 대상체로부터 분리된 또는 인간 대상체에서 생성된 항체를 포함하는 것을 의도하지 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "재조합체"는 예컨대 DNA 스플라이싱 및 유전자 도입 발현을 포함하는 재조합 DNA 기술로서 기술분야에 공지되어 있는 기술 또는 방법에 의해 생성된, 발현된, 분리된 또는 얻어진 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 나타낸다. 이 용어는 비-인간 포유류 (유전자 도입 비-인간 포유류, 예컨대 유전자 도입 마우스를 포함함)에서, 또는 세포 (예컨대 CHO 세포) 발현 시스템에서 발현된 또는 재조합 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체를 나타낸다.

용어 "특이적으로 결합하는" 또는 "~에 특이적으로 결합하는" 등은 항체 또는 그것의 항원-결합 단편이 상대적으로 생리적 조건하에서 안정한 항원과의 복합체를 형성하는 것을 의미한다. 특이적 결합은 적어도 약 1x10^-7 M 이하의 평행 해리 상수로 특성화될 수 있다 (예컨대 더 작은 K_D는 더 타이트한 결합을 나타낸다). 두 분자가 특이적으로 결합하는지의 여부를 측정하는 방법은 기술분야에 잘 알려져 있고, 예를 들면 평형 투석, 표면 플라즈몬 공명 등을 포함한다. 본원에서 기술되는 것과 같이, 항체는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대 에볼라 바이러스에 특이적으로 결합하는 BIACORE^TM에 의해 확인되었다. 더욱이, 에볼라 바이러스의 한 도메인 및 하나 이상의 추가 항원에 결합하는 다중-특이적 항체 또는 에볼라 바이러스의 두 개의 상이한 영역에 결합하는 이중-특이적 항체가, 그럼에도 불구하고 본원에서 사용되는 것과 같은, "특이적으로 결합하는" 항체로 여겨진다.

용어 "고친화성" 항체는 표면 플라즈몬 공명, 예컨대 BIACORE^TM 또는 용액-친화성 ELISA에 의해 측정되는바, 적어도 10^-7 M; 바람직하게는 10^-8M; 더 바람직하게는 10^-9M, 더욱 더 바람직하게는 10^-10 M, 더욱 더 바람직하게는 10^-11 M, 더욱 더 바람직하게는 10^-12 M의 K_D로서 표시되는, 에볼라 바이러스에 대한 결합 친화성을 가지는 mAb를 나타낸다.

용어 "느린 오프 속도", "Koff" 또는 "kd"는 에볼라 바이러스, 또는 에볼라 바이러스 GP를 발현하는 바이러스 유사 입자로부터 표면 플라즈몬 공명, 예컨대 BIACORE^TM에 의해 측정되는바, 1 x 10^-3 s^-1 이하, 바람직하게는 1 x 10^-4s^-1 이하의 속도 상수로 해리되는 항체를 의미한다.

본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소적으로 얻을 수 있는, 합성 또는 유전적으로 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 단편" 또는 "항체 단편"은 에볼라 바이러스에 대한 결합 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 나타낸다.

특정 구체예에서, 발명의 항체 또는 항체 단편은 그런 리간드와 같은 모이어티 또는 치료 모이어티 ("면역콘쥬게이트"), 예컨대 항-바이러스 약물, 제2 항-에볼라 바이러스 항체 또는 에볼라 바이러스에 의해 유발된 감염을 치료하기에 유용한 임의의 다른 치료 모이어티에 콘쥬게이트될 수 있다.

본원에서 사용되는 "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 가지는 다른 항체 (Ab)가 실질적으로 없는 항체를 나타낸다 (예컨대 에볼라 바이러스 또는 그것의 단편에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 에볼라 바이러스 이외의 항원들에 특이적으로 결합하는 Ab가 실질적으로 없다).

본원에서 사용되는 "차단 항체" 또는 "중화 항체" (또는 "에볼라 바이러스 활성을 중화시키는 항체" 또는 "길항 항체")는 에볼라 바이러스에 대한 결합이 에볼라 바이러스의 적어도 하나의 생물학적 활성의 억제를 초래하는 항체를 나타내고자 의도된다. 예를 들어, 발명의 항체는 숙주 세포에 대한 에볼라 바이러스 부착 또는 세포 안으로의 유입을 방지 또는 차단할 수 있다. 또한, "중화 항체"는 숙주에서 감염을 개시 및/또는 영속시키는 병원체의 능력을 중화시킬 수 있는, 즉 방지, 억제, 감소, 지연 또는 간섭할 수 있는 것이다. 용어 "중화 항체" 및 "중화시키는 항체" 또는 "중화시키는 항체들"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이들 항체는 단독으로 또는 조합하여, 적절한 제형시 다른 항-바이러스제와 함께 예방제로서 또는 치료제로서, 또는 능동적 예방접종과 함께, 또는 진단 도구로서 사용될 수 있다.

"항체-의존성 세포-중재 세포독성" 또는 "ADCC"는 세포-중재된 면역 방어의 메커니즘으로 그것으로 인해 면역체계의 이펙터 세포가 표적 세포를 활발하게 용해시키고, 그것의 막-표면 항원이 특이적인 항체, 예컨대 본원에 기술된 것들에 의해 결합되는 메커니즘이다. 그로써, 그것은 그것을 통해 예를 들면 바이러스 특이적 항체가 감염의 확산을 제한시키는 작용을 할 수 있는 한 메커니즘이다. 고전적인 ADCC는 천연 킬러 세포 (NK 세포), 대식세포, 호중구 및 특정 경우에는 호산성 세포에 의해 중재된다.

본원에서 사용되는 용어 "표면 플라즈몬 공명"은 바이오센서 매트릭스 내의 단백질 농도의 변화를, 예를 들면 시스템 BIACORE^TM (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.)을 사용하여 검출함으로써 실시간 생체분자 상호작용의 분석을 허용하는 광학 현상을 나타낸다.

본원에서 사용되는 용어 "K_D"는 특별한 항체-항원 상호작용의 평형 해리 상수를 나타낸다.

용어 "에피토프"는 파라토프 (paratope)로서 알려져 있는 항체 분자의 가변 영역의 특이적인 항원-결합 부위와 상호작용하는 항원 결정기를 나타낸다. 단일 항원은 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 그러므로 상이한 항체는 한 항원의 상이한 구역에 결합할 수 있고 상이한 생물학적 효과를 가질 수 있다. 용어 "에피토프"는 또한 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원상의 부위를 나타낸다. 그것은 또한 항체에 의해 결합되는 항원의 영역을 나타낸다. 에피토프는 구조적 또는 기능적인 것으로 정의될 수 있다. 기능적 에피토프는 일반적으로 구조적 에피토프의 하위세트이고 감염의 친화성에 직접적으로 기여하는 그런 잔기들을 가진다. 에피토프는 또한 형태적일 수 있다, 즉 비-선형 아미노산들로 구성될 수 있다. 특정 구체예에서, 에피토프는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴기 또는 설포닐기와 같은 분자들의 화학적으로 활성인 표면 기인 결정기를 포함하 수 있고, 어떤 구체예에서는 특이적인 3-차원 구조적 특성 및/또는 특이적인 전하 특성을 가질 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "교차-경합"은 항원에 결합하고 다른 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 결합을 억제 또는 차단하는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 의미한다. 이 용어는 또한 양 방향으로, 즉 제1 항체가 결합하고 제2 항체의 결합을 차단하며 그 역으로도 가능한 두 항체 사이의 경합을 포함한다. 특정 구체예에서, 제1 항체 및 제2 항체는 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 다르게는, 제1 항체 및 제2 항체는 상이한, 그러나 중복되는 에피토프에 결합할 수 있어서 하나의 결합이 제2 항체의 결합을, 예컨대 입체 방해를 통해 억제 또는 차단할 수 있다. 항체들 사이의 교차-경합은 기술분야에 공지되어 있는 방법들, 예를 들면 실시간, 표지-유리 (label-free) 생체막 간섭굴절 분석에 의해 측정될 수 있다. 시험 항체가 발명의 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 교차-경합하는 지를 측정하기 위하여, 기준 항체는 포화 조건 하에서 에볼라 바이러스 GP 또는 펩티드에 대한 결합을 허용한다. 다음에, 시험 항체가 에볼라 바이러스 GP에 결합하는 능력이 평가된다. 만약 시험 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와의 포화 결합 후에 에볼라 바이러스 GP에 결합할 수 있다면, 시험 항체는 참조 항-에볼라 바이러스 항체와는 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결론내릴 수 있다. 다른 한편으로, 만약 시험 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와의 포화 결합 후에 에볼라 바이러스 GP에 결합할 수 없다면, 시험 항체는 발명의 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.

핵산 또는 그것의 단편을 언급할 때 용어 "실질적인 동일성" 또는 "실질적으로 동일한"은 다른 핵산 (또는 그것의 상보 가닥)과 적절한 뉴클레오티드 삽입 또는 결실을 사용하여 최적으로 배열될 때, 서열 동일성의 임의의 잘 알려져 있는 알고리즘, 예컨대 아래에서 논의되는 것과 같은 FASTA, BLAST 또는 GAP에 의해 측정되는 바, 뉴클레오티드 염기의 적어도 약 90%, 더 바람직하게는 적어도 약 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%에서 뉴클레오티드 서열 동일성이 있는 것을 가리킨다. 참조 핵산 분자에 대해 실질적인 동일성을 가지는 핵산 분자는, 특정 경우에, 참조 핵산 분자에 의해 코드화된 폴리펩티드와 동일한 또는 실질적으로 유사한 아미노산 서열을 가지는 폴리펩티드를 코드화할 수 있다.

폴리펩티드에 대해 적용되는 바, 용어 "실질적인 유사성" 또는 "실질적으로 유사한"은 두 개의 펩티드 서열이, 예컨대 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 디폴트 갭 중량을 사용하여 최적으로 배열될 때, 적어도 90%의 서열 동일성, 더욱 더 바람직하게는 적어도 95%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 공유하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 동일하지 않은 잔기 위치들은 보존성 아미노산 치환에 의해 상이하다. "보존성 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 화학적 특성 (예컨대 전하 또는 소수성)을 가진 측쇄 (R 기)를 가지는 다른 아미노산 잔기에 의해 치환된다. 일반적으로, 보존성 아미노산 치환은 단백질의 기능적 특성을 실질적으로 변화시키지 않을 것이다. 둘 이상의 아미노산 서열들이 보존성 치환에 의해 서로 상이한 경우에, 유사성의 퍼센트 또는 정도는 치환의 보존성 성질을 정정하기 위해 상향 조정될 수 있다. 이런 조정을 만들기 위한 수단은 기술분야의 숙련자들에게 잘 알려져 있다 (예컨대 Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24:307-331 참조). 유사한 화학적 특성을 가진 측쇄를 가지는 아미노산의 그룹의 실례는 다음을 포함한다: 1) 지방족 측쇄: 글리신, 알라닌, 발린, 류신 및 아이소류신; 2) 지방족-하이드록실 측쇄: 세린 및 트레오닌; 3) 아미드-함유 측쇄: 아스파라긴 및 글루타민; 4) 방향족 측쇄: 페닐알라닌, 티로신 및 트립토판; 5) 염기성 측쇄: 리신, 아르기닌 및 히스티딘; 6) 산성 측쇄: 아스파테이트 및 글루타메이트 및 7) 황-함유 측쇄: 시스테인 및 메티오닌. 바람직한 보존성 아미노산 치환기는 발린-류신-아이소류신, 페닐알라닌-티로신, 리신-아르기닌, 알라닌-발린, 글루타메이트-아스파테이트 및 아스파라긴-글루타민이다. 다르게는, 보존성 대체는 Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443 45에 개시된 PAM250 로그-확률 매트릭스에서 포지티브 값을 가지는 임의의 변화이다. "적당히 보존성" 대체는 PAM250 로그-확률 매트릭스에서 네거티브가 아닌 값을 가지는 임의의 변화이다.

폴리펩티드에 대한 서열 유사성은 전형적으로 서열 분석 소프트웨어를 사용하여 측정된다. 단백질 분석 소프트웨어는 보존성 아미노산 치환을 포함하여, 다양한 치환, 결실 및 다른 변형에 대해 배정된 유사성의 척도를 사용하여 유사한 서열들을 매치시킨다. 예를 들어, GCG 소프트웨어는 밀접하게 관련된 폴리펩티드, 예컨대 상이한 유기체 종으로부터의 상동성 폴리펩티드 사이의 또는 야생형 단백질과 그것의 뮤테인 (mutein, 돌연변이한 단백질) 사이의 서열 상동성 또는 서열 동일성을 측정하기 위하여 디폴트 매개변수와 함께 사용될 수 있는 GAP 및 BESTFIT과 같은 프로그램을 함유한다. 예컨대 GCG 버전 6.1 참조. 폴리펩티드 서열들은 또한 디폴트 또는 권장 매개변수들을 포함한 FASTA를 사용하여 비교될 수 있다; GCG 버전 6.1의 프로그램. FASTA (예컨대 FASTA2 및 FASTA3)는 의문의 서열과 연구 서열들 사이의 최상의 중복 영역들의 배열 및 퍼센트 서열 동일성을 제공한다 (Pearson (2000) 상기 동일). 발명의 서열을 상이한 유기체로부터의 대다수의 서열들을 함유하는 데이터베이스와 비교할 때 또 다른 바람직한 알고리즘은 디폴트 매개변수들을 사용하는 컴퓨터 프로그램 BLAST, 특히 BLASTP 또는 TBLASTN이다. 예컨대 Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 및 (1997) Nuclic Acids Res. 25:3389-3402 참조.

구절 "치료적 유효량"은 투여되어 원하는 효과를 생성하는 양을 의미한다. 정확한 양은 치료 목적에 따라 좌우될 것이고, 공지된 기법들을 사용하여 기술분야의 숙련자에 의해 확인될 수 있을 것이다 (예를 들면 Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding 참조).

본원에서 사용되는 용어 "대상체"는 바이러스 감염과 같은 질환 또는 장애의 개선, 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 동물, 바람직하게는 포유류, 더 바람직하게는 인간을 나타낸다. 대상체는 에볼라 바이러스 감염을 가질 수 있거나 에볼라 바이러스 감염을 발생시킬 것으로 예상된다. "에볼라 바이러스 감염을 발생시킬 것으로 예상된" 대상체, 또는 "에볼라 바이러스 감염에 걸릴 고위험군일 수 있는" 대상체는 자가면역 질환으로 인해 면역 체계가 손상된 대상체들, 면역억제 치료법을 받은 사람들 (예를 들면 조직 이식 후), 백혈구를 고갈시키는 또는 파괴하는 빈혈의 특정 형태인 인간 면역결핍 증후군 (HIV) 또는 후천성 면역 결핍 증후군 (AIDS)에 걸린 사람들, 방사선 또는 화학요법을 받은 사람들 또는 염증성 장애에 걸린 사람들이다. 추가로, 매우 어리거나 고령자인 대상체들은 고위험군이다. 감염된 동물 또는 인간 환자와 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접성이 있는, 또는 감염된 동물 또는 인간 환자로부터의 체액 또는 조직에 노출된 임의의 사람은 에볼라 바이러스 감염을 발생시킬 위험이 증가된다. 더욱이, 대상체는 질환의 발병과의 근접성으로 인해 에볼라 바이러스 감염의 발생 위험이 있다, 예컨대 인구-조밀 도시에 또는 에볼라 바이러스의 감염이 확인되었거나 의심되는 대상체들과 매우 근접한 곳에 거주하는 대상체, 또는 선택된 직업, 예컨대 병원 직원, 제약 연구원, 에볼라 바이러스가 발병한 것으로 알려진 또는 의심되는 지역 또는 나라를 방문한 적이 있거나 방문할 계획이 있는 개인, 또는 항공사 단골 고객들이 위험하다.

본원에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 그것을 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 항체와 같은 치료제의 투여로 인해 에볼라 바이러스 감염의 적어도 하나의 증상 또는 표식의 심각성이 감소 또는 개선되는 것을 나타낸다. 이 용어는 질환의 진행 또는 감염의 악화의 억제를 포함한다. 이 용어는 또한 질환의 포지티브 진단을 포함한다, 즉 대상체는 감염이 없을 수 있거나 본 발명의 항체와 같은 치료제의 투여시 바이러스 역가가 감소되거나 없을 수 있다. 치료제는 대상체에게 치료 용량으로 투여될 수 있다.

용어 "예방하다", "예방하는" 또는 "예방"은 본 발명의 항체의 투여시 에볼라 바이러스 감염의 징후 또는 에볼라 바이러스 감염의 임의의 증상 또는 표시의 억제를 나타낸다. 이 용어는 바이러스에 노출되었거나 에볼라 바이러스 감염의 위험이 있는 대상체에서 감염의 확산을 예방하는 것을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "항-바이러스 약물"은 화학적 모이어티이거나 생물학적 치료법이거나 간에 대상체에서 바이러스 감염을 치료, 예방 또는 개선시키기 위해 사용되는 임의의 항-감염제 또는 치료법을 나타낸다. 예를 들어, 본 발명에서 항-바이러스 약물은, 한정하는 것은 아니지만 에볼라 바이러스에 대한 항체 (한 구체예에서 에볼라 바이러스에 대한 항체는 본원에 기술된 것과 상이할 수 있다), 에볼라 바이러스용 백신, ZMapp 치료법, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론을 포함할 수 있다. 본 발명에서, 치료되는 감염은 에볼라 바이러스에 의해 유발된다.

일반적 설명

에볼라 바이러스 질환은 필로비리다에 과의 구성원인 사상 (filamentous) 바이러스 입자들에 의해 유발된 심각한, 때로 치명적인 질환이다. 인간에서 질환을 유발할 수 있는 에볼라 바이러스 속에는 알려진 종이 여럿 있다. 이것들은 자이르, 수단, 타이숲 (이전에는 아이보리 코스트) 및 분디부교를 포함한다. 바이러스에 대한 천연 저장고는 알려져 있지 않으며 지금까지 승인된 치료법 또는 백신은 없다.

바이러스 게놈은 길이가 대략 19 kb인 네거티브 센스 RNA의 단일 가닥으로 구성된다. 에볼라 비리온은 7개의 단백질을 함유한다: 표면 당단백질 (GP), 핵단백질 (NP), 4개의 비리온 구조 단백질 (VP40, VP35, VP30 및 VP24) 및 RNA-의존성 RNA 중합효소 (L). (Feldman, et al. (1992) Virus Res. 24, 1-19).

바이러스의 표면에 존재하는 유일한 단백질은 당단백질이다. RNA 편집으로 인해, GP 유전자의 전사는 비-구조적 가용성 GP (sGP) 및 표면 비리온 GP를 포함하여 바이러스 GP를 코딩하는 여러 GP 유전자 특이적 mRNA의 합성을 초래한다 (Volchkova, VA et al., (1998), Virology 250:408-414). 두 GP는 모두 세포내 프로세싱 중에 세포의 프로테아제 퓨린에 의해 단백질 가수분해적으로 절단되는 전구체 분자로서 합성된다 (Volchkov, VE, et al., ((1998), Proc Natl Acad Sci USA 95:5762-5767). sGP는 이량체를 형성하는 반면, 절단된 카르복시-말단 단편은 단량체이다. 바이러스 표면 스파이크는 이황화 결합에 의해 연결되는 두 개의 하위유닛 GP1 및 GP2로 구성되는 GP_1,2의 삼량체로서 형성된다 (Volchkova, VA et al., (1998), Virology 250:408-414; Falzarano, D. et al., (2006), Chembiochem 7:1605-1611). GP1은 숙주 세포에 대한 바이러스 부착을 중재하는 것으로 알려져 있고 GP2는 막 융합에 포함된다 (Sanchez, A. et al., (1996), Proc Natl Acad Sci USA 93:3602-3607; Alazard-Dany, N., et al. (2006), J. Gen. Virol. 87:1247-1257).

EBOV로의 감염 중에, 상당한 양의 가용성 당단백질 (sGP)이 바이러스-감염된 세포로부터 방출된다. 이런 형태의 GP는 표면 또는 비리온 GP에 대해 지시된 바이러스-중화 항체에 결합하고 그것을 격리시키는 것으로 밝혀졌다 (Dolnik, O. et al., (2004), EMBO J 23:2175-2184). 이런 항체-봉쇄 이외에, 바이러스 복제 및/또는 병원성의 관점에서 가용성 GP의 역할은 잘 정의되어 있지 않다. Escudero-Perez 등에 의한 보다 최근의 연구는 sGP가 비-감염 수지상 세포 및 대식세포에 결합하여 그것들을 활성화시킬 수 있고 전- 및 항-염증성 사이토카인들의 분비를 유도할 수 있음을 밝혔다. 또한, 그들은 sGP가 내피 세포 기능에 영향을 미치고 혈관 투과성에도 영향을 미칠 수 있음을 증명하였다 (Escudero-Perez, et al., (2014), PLOS Pathogens, Vol. 10, Issue 11:1-17). 이것은 감염 후에 이상조절된 염증성 숙주 반응을 설명해줄 수 있고 바이러스 병원성에 기여할 수 있다.

감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 수동 면역치료법은 한 세기 이상, 보통 고역가의 중화 항체를 함유하는 회복기 인간 혈청의 형태로 사용되어 왔다 (Good et al., (1991); Cancer 68:1415-1421). 오늘날, 다수의 정제된 단클론성 항체가 현재 항-미생물제로서 사용하기 위해 전임상 및 임상 개발 중에 있다 (Marasco et al 2007; Nature Biotechnology 25:1421-1434). 에볼라 바이러스 당단백질에 결합하는 특정 항체들이 기술되었다 (예컨대 Audet et. al. (2014), Scientific Reports 4:6881; Chen, et.al. (2014), ACS Chem Biol. Oct. 17; 9(10):2263-73; Koellhoffer JF, et.al., (2012), Chembiochem Nov. 26; 13(17):2549-57; Qiu, X., et. al., Nature (2014) Oct 2;514(7520):47-53 참조).

발명자들은 본원에서 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하고 에볼라 바이러스와 이들 세포의 상호작용을 조절하는 전체 인간 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 기술하였다. 항-에볼라 바이러스 GP 항체는 고친화성으로 에볼라 바이러스에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항체들은 차단 항체로, 항체는 에볼라 바이러스 GP에 결합하여 바이러스의 숙주 세포에의 부착 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입을 차단할 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체들은 에볼라 바이러스의 세포에의 결합을 차단할 수 있고 그로써 숙주 세포의 바이러스 감염을 억제 또는 중화할 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체들은 항체 의존성 세포-중재된 세포독성 (ADCC)을 중재할 수 있고 그로써, 바이러스를 은닉하는 세포를 파괴하는 데 도움을 줄 수 있다. 특정 구체예에서, 항체들은 두 방식으로 작용할 수 있는데, 예컨대 항체들은 바이러스 감염성을 중화할 수 있고 ADCC를 중재할 수 있다. 일부 구체예에서, 항체들은 에볼라 바이러스 감염으로 고생하는 대상체를 치료하는데 유용할 수 있다. 항체는 필요로 하는 대상체에게 투여될 때 대상체에서 에볼라 바이러스와 같은 바이러스에 의한 감염을 감소시킬 수 있다. 항체들은 대상체에서 바이러스 로드를 감소시키기 위해 사용될 수 있다. 항체들은 단독으로 또는 바이러스 감염을 치료하기 위해 기술분야에 공지되어 있는 다른 치료 모이어티 또는 양상과 함께 부속물 치료법으로서 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 이들 항체는 에볼라 바이러스 GP의 아미노 말단의 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 이들 항체는 에볼라 바이러스 GP의 카르복시 말단의 에피토프에 결합할 수 있다. 나아가, 확인된 항체는 감염으로부터 포유류를 보호하기 위해 예방적으로 (감염 전에) 사용되거나, 또는 이전에 수립된 감염을 개선시키기 위해 치료적으로 (감염이 수립된 후에) 또는 감염과 관련된 적어도 하나의 증상을 개선시키기 위해 사용될 수 있다.

예시적인 에볼라 바이러스 GP의 전체-길이 아미노산 서열은 승인 번호 AHX24649.1 및 AHX24649.2로서 및 또한 각각 SEQ ID NO: 314 및 315로 GenBank에서 제시된다. GP1은 SEQ ID NO: 314 또는 SEQ ID NO: 315에 제시된 전체 길이 GP의 아미노산 잔기 1 내지 501에 걸쳐 있고 GP2는 아미노산 잔기 502부터 676에 걸쳐 있다. 또한 승인 번호 AHX24649.1로 제시된 전체 길이 EBOV GP는 SEQ ID NO: 318에 나타낸 것과 같이 데카히스티딘 태그에 커플링될 수 있다. 가용성 GP (sGP)는 GenBank 승인 번호 AHX24650.1로서 및 또한 SEQ ID NO: 316 (신호 서열이 부착되어 있음)로서 및 또한 SEQ ID NO: 317 (신호 서열은 없지만, myc-myc-his 태그를 함유함)로서 제시된다.

특정 구체예에서, 발명의 항체들은 일차 면역원, 예컨대 전체-길이 에볼라 바이러스 GP로, 또는 에볼라 바이러스 GP의 재조합 형태 또는 그것의 단편으로 면역되고 이어서 이차 면역원으로, 또는 에볼라 바이러스 GP의 면역원적으로 활성인 단편으로 면역된 마우스들로부터 얻어진다. 특정 구체예에서, 항체들은 전체-길이 에볼라 바이러스 GP를 코드화하는 DNA로 면역된 마우스들로부터 얻어진다 (Zaire.2014, GenBank KJ660346.2 참조; 또한 SEQ ID NO: 313). 면역원은 에볼라 바이러스 GP 또는 그것의 활성 단편을 코드화하는 DNA의 생물학적으로 활성인 및/또는 면역원성 단편일 수 있다. 단편은 아미노-말단 단편 (예컨대 GP1) 또는 카르복시-말단 단편 (예컨대 GP2)을 포함하여, 바이러스 GP의 임의의 영역으로부터 유도될 수 있다. 펩티드는 담체 분자, 예컨대 KLH에 태깅하기 위한 또는 콘쥬게이팅하기 위한 특정 잔기들의 첨가 또는 치환을 포함하기 위해 변형될 수 있다. 예를 들어, 시스테인은 팹티드의 N 말단 또는 C 말단 단부에서 첨가될 수 있고, 또는 링커 서열이은 예를 들면 면역화를 위해 KLH에 컨쥬게이팅하기 위한 펩티드를 제조하기 위해 첨가될 수 있다.

본 발명의 특정 항-에볼라 바이러스 항체는 시험관 내 및 생체 내 분석에 의해 측정되는 바, 에볼라 바이러스에 결합하고 그것의 활성을 중화할 수 있다. 발명의 항체의 에볼라 바이러스에 결합하고 그것의 활성을 중화하는 능력 및 그로써 바이러스의 숙주 세포에의 부착 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입 및 이어서 결과적으로 일어나는 바이러스 감염은 본원에서 기술되는 것과 같이, 결합 분석 또는 활성 분석을 포함하여, 기술분야의 숙련자들에게 알려져 있는 임의의 표준 방법을 사용하여 측정될 수 있다.

결합 활성을 측정하기 위한 비-제한적인, 예시적인 시험관 내 분석은 본원의 실시예 3에서 예시된다. 실시예 3에서, 에볼라 바이러스에 대한 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 결합 친화성 및 해리 상수는 Biacore에 의해 측정되었다. 실시예 4 및 7에서, 중화 분석이 에볼라 바이러스의 다양한 스트레인들의 감염성을 측정하기 위해 사용되었다.

에볼라 바이러스 GP에 특이적인 항체들은 추가의 표지 또는 모이어티를 함유하지 않거나, 또는 N-말단 또는 C-말단 표지 또는 모이어티를 함유할 수 있다. 한 구체예에서, 표지 또는 모이어티는 비오틴이다. 결합 분석에서, 표지 (있다면)의 위치는 펩티드가 결합되는 표면에 대한 펩티드의 배향을 결정할 수 있다. 예를 들어, 만약 표면이 아비딘으로 코팅된다면, N-말단 비오틴을 함유하는 펩티드는 펩티드의 C-말단 부분이 표면에서 먼 쪽에 있도록 배향될 것이다. 한 구체예에서, 표지는 방사성 핵종, 형광 염료 또는 MRI-검출 가능한 표지일 수 있다. 특정 구체예에서, 그렇게 표지된 항체는 영상화 분석을 포함하여 진단 분석에서 사용될 수 있다.

항체의 항원-결합 단편

특별히 다르게 표시되지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 "항체"는 두 개의 면역글로불린 중쇄 및 두 개의 면역글로불린 경쇄 (즉 "전체 항체 분자")를 포함하는 항체 분자뿐 아니라 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 것으로 인지되어야 할 것이다. 본원에서 사용되는 용어들인 항체의 "항원-결합 부분", 항체의 "항원-결합 단편" 등은 항원에 특이적으로 결합하여 복합체를 형성하는 임의의 자연적으로 발생하는, 효소적으로 얻을 수 있는, 합성 또는 유전자 조작된 폴리펩티드 또는 당단백질을 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 항체의 "항원-결합 단편" 또는 "항체 단편"은 에볼라 바이러스에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 나타낸다. 항체 단편은 Fab 단편, F(ab')₂ 단편, Fv 단편, dAb 단편, CDR을 함유하는 단편 또는 분리된 CDR을 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 용어 "항원-결합 단편"은 다중-특이적 항원-결합 분자의 폴리펩티드 단편을 나타낸다. 항체의 항원-결합 단편은 단백질 가수분해성 소화 또는 항체 가변 및 (선택적으로) 불변 도메임을 코드화하는 DNA의 조작 및 발현을 포함하는 재조합 유전자 조작 기법과 같은 임의의 적합한 표준 기법을 사용하여 예컨대 전체 항체 분자로부터 유도될 수 있다. 그런 DNA는 공지되어 있고 및/또는 예컨대 상업적 공급원, DNA 라이브러리 (이를테면, 예컨대 파지-항체 라이브러리)로부터 쉽게 입수 가능하거나, 또는 합성될 수 있다. DNA는 예를 들면 하나 이상의 가변 및/또는 불변 도메인을 적합한 형태로 배열하거나, 또는 코돈을 도입하고, 시스테인 잔기를 생성하며, 아미노산을 변형, 첨가 또는 결실시키고, 기타의 것들을 위하여 화학적으로 또는 분자 생물학 기법을 사용함으로써 서열결정되고 조작될 수 있다.

항원-결합 단편의 비-제한적 실례는 다음을 포함한다: (i) Fab 단편; (ii) 　F(ab')2 단편; (iii) Fd 단편; (iv) Fv 단편; (v) 　단일-사슬 Fv (scFv) 분자; (vi) dAb 단편; 및 (vii) 항체의 초가변 영역을 모방하는 아미노산 잔기들로 구성되는 최소 인지 단위 (예컨대 CDR3 펩티드와 같은 분리된 상보성 결정 영역 (CDR)) 또는 제한된 FR3-CDR3-FR4 펩티드. 다른 조작된 분자들, 예컨대 도메인-특이적 항체, 단일 도메인 항체, 도메인-결실된 항체, 키메라 항체, CDR-그라프트된 항체, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 미니바디, 나노바디 (예컨대 단일가 나노바디, 이가 나노바디 등), 작은 모듈의 면역약제들 (SMIP) 및 상어 가변성 IgNAR 도메인이 또한 본원에서 사용되는 "항원-결합 단편"이란 표현에 포함된다.

항체의 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 하나의 가변 도메인을 포함할 것이다. 가변 도메인은 임의의 크기 또는 아미노산 조성의 것일 수 있고 일반적으로 하나 이상의 프레임워크 서열들에 인접한 또는 그것들과 한 프레임에 있는 적어도 하나의 CDR을 포함할 것이다. V_L 도메인과 관련된 V_H 도메인을 가지는 항원-결합 단편에서, V_H 및 V_L 도메인은 임의의 적합한 배열에서 서로에 관련하여 위치할 수 있다. 예를 들어, 가변 영역은 이량체일 수 있고 V_H - V_H, V_H - V_L 또는 V_L - V_L 이량체를 함유한다. 다르게는, 항체의 항원-결합 단편은 단량체 V_H 또는 V_L 도메인을 함유할 수 있다.

특정 구체예에서, 항체의 항원-결합 단편은 적어도 하나의 불변 도메인에 공유적으로 연결된 적어도 하나의 가변 도메인을 함유할 수 있다. 본 발명의 항체의 항원-결합 단편 내에서 발견될 수 있는 가변 및 불변 도메인의 비-제한적인, 예시적인 형태는 다음을 포함한다: (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3; 및 (xiv) V_L -C_L. 상기 열거된 예시적인 형태들 중 어느 것을 포함하여, 가변 및 불변 도메인의 임의의 형태에서, 가변 및 불변 도메인은 서로에 직접 연결되거나 또는 전체 또는 부분적인 힌지 또는 링커 영역에 의해 연결될 수 있다. 힌지 영역은 적어도 2 (예컨대 5, 10, 15, 20, 40, 60 이상) 아미노산으로 구성될 수 있고, 그것은 단일 폴리펩티드 분자에서 인접한 가변 및/또는 불변 도메인 사이의 가요성 또는 반 (semi)-가요성 연쇄를 초래한다. 더욱이, 본 발명의 항체의 항원-결합 단편은 서로와 및/또는 하나 이상의 단량체 V_H 또는 V_L 도메인과 (예컨대 이황화 결합(들)에 의해) 비-공유 회합으로 상기 열거된 가변 및 불변 도메인들 중 어느 것의 단일-이량체 또는 이종-이량체 (또는 다른 다량체)를 포함할 수 있다.

전체 항체 분자와 같이, 항원-결합 단편은 단일-특이적이거나 다중-특이적 (예컨대 이중-특이적)일 수 있다. 항체의 다중-특이적 항원-결합 단편은 전형적으로 적어도 두 개의 상이한 가변 도메인을 포함할 것이고, 이때 각 가변 도메인은 별도의 항원에 또는 동일한 항원 상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 본원에 개시된 예시적인 이중-특이적 항체 포맷을 포함하여, 임의의 다중-특이적 항체 포맷은 기술분야에서 이용 가능한 기본적인 기법들을 사용하여 본 발명의 항체의 항원-결합 단편의 맥락에서 사용하기 위해 적응될 수 있다.

인간 항체의 제조

유전자 도입 마우스에서 인간 항체를 생성하는 방법은 기술분야에 알려져 있다. 그런 임의의 공지된 방법들이 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 인간 항체를 제조하기 위한 본 발명의 맥락에 사용될 수 있다. 다음 중 임의의 한 가지를 포함하는 면역원이 에볼라 바이러스에 대한 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체들은 전체-길이, 천연 에볼라 바이러스 GP (예를 들면 GenBank 승인 번호 AHX24649.1 (SEQ ID NO: 314) 및 AHX24649.2 (SEQ ID NO: 315)로 또는 당단백질 또는 그것의 단편을 코드화하는 DNA로 면역된 마우스들로부터 얻어진다. 다르게는, 에볼라 바이러스 GP 또는 그것의 단편은 표준 생화학적 기법들을 사용하여 제조되고 변형되고 면역원으로서 사용될 수 있다. 한 구체예에서, 면역원은 재조합적으로 제조된 에볼라 바이러스 GP 또는 그것의 단편이다. 발명의 특정 구체예에서, 면역언은 상업적으로 입수 가능한 에볼라 바이러스 GP이다. 특정 구체예에서, 하나 이상의 보조 (booster) 주사가 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 보조 주사는 하나 이상의 상업적으로 입수 가능한 에볼라 바이러스 GP를 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 면역원은 대장균에서 또는 임의의 다른 진핵 또는 포유류 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포에서 발현되는 재조합 에볼라 바이러스 GP일 수 있다.

VELOCIMMUNE® 기술 (예를 들면 US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals, VELOCIMMUNE® 참조) 또는 단클론성 항체를 생성하기 위한 임의의 다른 공지된 방법을 사용하여, 에볼라 바이러스 GP에 대한 고친화성 키메라 항체는 처음에 인간 가변 영역과 마우스 불변 영역을 가지는 것이 분리된다. VELOCIMMUNE® 기술은 내인성 마우스 불변 영역 유전자좌에 작동가능하게 연결된 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 게놈을 가짐으로써 마우스가 항원 자극에 대한 반응으로 인간 가변 영역과 마우스 불변 영역을 포함하는 항체를 생성하는, 유전자 도입 마우스의 생성을 포함한다. 항체의 중쇄 및 경쇄들의 가변 영역들을 코드화하는 DNA는 분리되고 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역들을 코드화하는 DNA에 작동가능하게 연결된다. 다음에 DNA는 전체 인간 항체를 발현할 수 있는 세포에서 발현된다.

일반적으로, VELOCIMMUNE® 마우스는 관심의 항원으로 도전되고, 림프 세포 (예컨대 B-세포)가 항체를 발현하는 마우스로부터 회수된다. 림프 세포는 불멸의 하이브리도마 세포주를 제조하기 위하여 골수종 세포주와 융합될 수 있고, 그런 하이브리도마 세포주는 관심의 항원에 특이적인 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 확인하기 위해 스크리닝되고 선택된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역들을 코드화하는 DNA는 분리되고 중쇄 및 경쇄의 바람직한 아이소타입 불변 영역들에 연결될 수 있다. 그런 항체 단백질은 세포, 예컨대 CHO 세포에서 생성될 수 있다. 다르게는, 항원-특이적 키메라 항체 또는 경쇄 및 중쇄의 가변 도메인들을 코드화하는 DNA가 항원-특이적 림프구로부터 직접 분리될 수 있다.

처음에, 인간 가변 영역과 마우스 불변 영역을 가지는 고친화성 키메라 항체가 분리된다. 아래의 실험 단락에서와 같이, 항체들은 친화성, 선택성, 에피토프 등을 포함하여, 원하는 특성에 대해 특성확인되고 선택된다. 마우스 불변 영역들은 원하는 인간 불변 영역으로 대체되어 발명의 전체 인간 항체, 예를 들면 야생형 또는 변형된 IgG1 또는 IgG4가 생성된다. 선택된 불변 영역이 특수한 용도에 따라 달라질 수 있는 한편, 고친화성 항원-결합 및 표적 특이성 특성들은 가변 영역에 있다.

생물학적 동등물

본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 항체 단편은 기술된 항체의 아미노산 서열들과 다르지만, 에볼라 바이러스에 결합하는 능력을 보유하고 있는 아미노산 서열들을 가지는 단백질을 포함한다. 그런 변이체 항체 및 항체 단편은 원래의 서열과 비교할 때 아미노산의 하나 이상의 첨가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 기술된 항체의 생물학적 활성과 본질적으로 동등한 생물학적 활성을 나타낸다. 마찬가지로, 본 발명의 항체-코드화 DNA 서열들은 개시된 서열과 비교할 때 뉴클레오티드의 하나 이상의 첨가, 결실 또는 치환을 포함하지만, 발명의 항체 또는 항체 단편과 본질적으로 생물학적으로 동등물인 항체 또는 항체 단편을 코드화하는 서열들을 포함한다.

두 개의 항원-결합 단백질 또는 항체는 만약, 예를 들어 그것들이 유사한 실험 조건, 단일 용량 또는 다중 용량 하에 동일한 몰 용량으로 투여될 때 흡수율 및 정도에서 유의미한 차이를 나타내지 않는 제약학적 동등물 또는 제약학적 대체물이라면, 생물학적 동등물로서 여겨진다. 일부 항체는 만약 그것들이 흡수 정도에서는 동등하지만 흡수율에서는 그렇지 않다면 동등하거나 제약학적으로 대체물로 여겨지겠지만, 흡수율에서의 그런 차이가 의도적이고 표지화를 반영하는 것이며, 예컨대 만성 사용시 효과적인 체내 약물 농도의 달성에는 필수적이지 않고, 연구되는 특정 약물 제품에 대해 의학적으로 대수롭지 않은 것으로 간주되기 때문에 생물학적으로 동등한 것으로 여겨지지 않을 수 있다.

한 구체예에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 만약 그것들이 안전성, 순도 또는 효능에서 임상적으로 의미있는 차이가 없다면 생물학적 동등물이다.

한 구체예에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 만약 환자가 스위칭 (switching) 없는 연속적인 치료법과 비교하여, 면역원성의 임상적으로 유의미한 변화 또는 감소된 유효성을 포함하여, 부작용의 위험의 예상된 증가 없이 참조 제품과 생물학적 제품 사이에서 1회 이상 스위칭될 수 있다면 생물학적 동등물이다.

한 구체예에서, 두 개의 항원-결합 단백질은 만약 그것들이 상태 또는 사용 조건에 대해 공통 작용 메커니즘 또는 메커니즘들에 의해, 그런 메커니즘이 알려져 있는 정도로, 둘 다 작용한다면 생물학적 동등물이다.

생물학적 동등성은 생체 내 및/또는 시험관 내 방법들에 의해 증명될 수 있다. 생물학적 동등성 척도는 예컨대 (a) 항체 또는 그것의 대사물의 농도가 혈액, 혈장, 혈청 또는 다른 생물학적 유체에서 시간의 함수로서 측정되는, 인간 또는 다른 포유류에서의 생체 내 시험; (b) 인간 생체 내 생체이용률 데이터와 관련된 및 타당하게 예견되는 시험돤 내 시험; (c) 항체 (또는 그것의 표적)의 적절한 급성 약물학적 효과가 시간의 함수로서 측정되는, 인간 또는 다른 포유류에서의 생체 내 시험; 및 (d) 항체의 안전성, 효능 또는 생체이용률 또는 생물학적 동등성을 수립하는 잘-조절된 임상 실험을 포함한다.

발명의 항체들의 생물학적으로 동등한 변이체들은 예를 들면 생물학적 활성에 필요하지 않은 잔기들 또는 서열들의 다양한 치환 또는 말단 또는 내부 잔기들 또는 서열들의 결실을 만듦으로써 구성될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 활성에 필수적이지 않은 시스테인 잔기는 결실되거나 다른 아미노산으로 대체되어 복원시 불필요한 또는 부정확한 분자내 이황화 가교의 형성이 방지될 수 있다. 다른 맥락으로, 생물학적으로 동등한 항체들은 항체의 글리코실화 특성을 변형시키는 아미노산 변화들, 예컨대 글리코실화를 제거하거나 없애는 돌연변이를 포함하는 항체 변이체들을 포함할 수 있다.

Fc 변이체를 포함하는 항-에볼라 바이러스 항체

본 발명의 특정 구체예에 따르면, 예컨대 중성 pH에 비교하여 산성 pH에서 FcRn 수용체에 대한 항체 결합을 증대시키거나 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-에볼라 바이러스 항체가 제공된다. 예를 들어, 본 발명은 Fc 도메인의 C_H2 또는 C_H3 영역에 돌연변이를 포함하는 항-에볼라 바이러스 GP 항체를 포함하는데, 이때 돌연변이(들)은 산성 환경에서 FcRn에 대한 Fc 도메인의 친화성을 증가시킨다 (예컨대 pH 범위가 약 5.5 내지 약 6.0인 엔도솜에서). 그런 돌연변이들은 동물에게 투여될 때 항체의 혈청 반감기의 증가를 초래할 수 있다. 그런 Fc 변형의 비-제한적 실례는 예컨대 위치 250 (예컨대 E 또는 Q); 250 및 428 (예컨대 L 또는 F); 252 (예컨대 L/Y/F/W 또는 T), 254 (예컨대 S 또는 T) 및 256 (예컨대 S/R/Q/E/D 또는 T)에서의 변형; 또는 위치 428 및/또는 433 (예컨대 H/L/R/S/P/Q 또는 K) 및/또는 434 (예컨대 A, W, H, F 또는 Y [N434A, N434W, N434H, N434F 또는 N434Y])에서의 변형; 또는 위치 250 및/또는 428에서의 변형; 또는 위치 307 또는 308 (예컨대 308F, V308F) 및 434에서의 변형을 포함한다. 한 구체예에서, 변형은 428L (예컨대 M428L) 및 434S (예컨대 N434S) 변형; 428L, 259I (예컨대 V259I), 및 308F (예컨대 V308F) 변형; 433K (예컨대 H433K) 및 434 (예컨대 434Y) 변형; 252, 254, 및 256 (예컨대 252Y, 254T, 및 256E) 변형; 250Q 및 428L 변형 (예컨대 T250Q 및 M428L); 및 307 및/또는 308 변형 (예컨대 308F 또는 308P)을 포함한다. 또 다른 구체예에서, 변형은 265A (예컨대 D265A) 및/또는 297A (예컨대 N297A) 변형을 포함한다.

예를 들어, 본 발명은 250Q 및 248L (예컨대 T250Q 및 M248L); 252Y, 254T 및 256E (예컨대 M252Y, S254T 및 T256E); 428L 및 434S (예컨대 M428L 및 N434S); 257I 및 311I (예컨대 P257I 및 Q311I); 257I 및 434H (예컨대 P257I 및 N434H); 376V 및 434H (예컨대 D376V 및 N434H); 307A, 380A 및 434A (예컨대 T307A, E380A 및 N434A); 및 433K 및 434F (예컨대 H433K 및 N434F)로 구성되는 군으로부터 선택된 돌연변이들의 하나 이상의 쌍 또는 그룹을 포함하는 Fc 도메인을 포함하는 항-에볼라 바이러스 항체를 포함한다. 전술한 Fc 도메인 돌연변이들 및 본원에 개시된 항체 가변 도메인들 내의 다른 돌연변이들의 모든 가능한 조합은 본 발명의 범주 내에서 고려된다.

본 발명은 또한 키메라 중쇄 불변 (C_H) 영역을 포함하는 항-에볼라 바이러스 항체를 포함하는데, 여기서 키메라 C_H 영역은 하나 이상의 면역글로불린 아이소타입의 C_H 영역들로부터 유도된 분절을 포함한다. 예를 들어, 발명의 항체는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유도된 C_H3 도메인의 일부 또는 전부와 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 분자로부터 유도된 C_H2 도메인의 일부 또는 전부를 포함하는 키메라 C_H 영역을 포함할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 발명의 항체는 키메라 힌지 영역을 가지는 키메라 C_H 영역을 포함한다. 예를 들어, 키메라 힌지는 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유도된 "하부 힌지" 서열 (EU 넘버링에 따라 위치 228부터 236까지의 아미노산 잔기)과 조합된, 인간 IgG1, 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 힌지 영역으로부터 유도된 "상부 힌지" 아미노산 서열 (EU 넘버링에 따라 위치 216부터 227까지의 아미노산 잔기)을 포함할 수 있다. 특정 구체예에 따르면, 키메라 힌지 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 상부 힌지로부터 유도된 아미노산 잔기 및 인간 IgG2 하부 힌지로부터 유도된 아미노산 잔기들을 포함한다. 본원에서 기술된 것과 같이 키메라 C_H 영역을 포함하는 항체는, 특정 구체예에서, 항체의 치료적 또는 약물동역학적 특성에 불리하게 영향을 미치지 않으면서 변형된 Fc 이펙터 기능을 나타낸다 (예컨대 2013년 2월 1일에 출원된, 미국 임시 출원 번호 61/759,578 참조).

항체의 생물학적 특징들

일반적으로, 본 발명의 항체는 에볼라 바이러스 GP에의 결합에 의해 기능한다. 예를 들어, 본 발명은 에볼라 바이러스 GP에 (예컨대 25℃에서 또는 37℃에서), 표면 플라즈몬 공명에 의해, 예컨대 본원에 기술된 것과 같은 분석 포맷을 사용하여 측정되는 바, 10^-7M 미만의 K_D로 결합하는 항체 및 항체의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 구체예에서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 에볼라 바이러스 GP에, 표면 플라즈몬 공명에 의해, 예컨대 본원에 기술된 것과 같은 분석 포맷, 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여 측정되는 바, 약 10 nM 미만, 약 5 nM 미만, 약 1 nM 미만, 약 500 pM 미만, 250 pM 미만 또는 100 pM 미만의 K_D로 결합한다.

본 발명은 또한, 본원에 정의된 것과 같은 분석, 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여, 25℃에서 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바 약 3분보다 큰, 또는 37℃에서 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바 약 1분보다 큰 해리성 반감기 (t½), 및 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3-배 증가로 에볼라 바이러스에 결합하는 항체 및 그것의 항원-결합 단편을 포함한다. 특정 구체예에서, 본 발명의 항체 또는 항원-결합 단편은 예컨대 본원에 정의된 것과 같은 분석 (예컨대 mAb 포획 또는 항원-포획 포맷), 또는 실질적으로 유사한 분석을 사용하여, 25℃에서 또는 37℃에서 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 바, 약 10분보다 큰, 약 30분보다 큰, 약 60분보다 큰, 약 100분보다 큰, 약 200분보다 큰, 약 300분보다 큰, 약 400분보다 큰, 약 500분보다 큰, 약 600분보다 큰, 약 700분보다 큰, 약 800분보다 큰, 약 900분보다 큰 또는 약 1000분보다 큰 t½로 에볼라 바이러스에 결합한다.

본 발명은 또한 에볼라 바이러스의 그것의 숙주 세포에 대한 감염성을 중화시키는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 약 10 ^-11 M 내지 약 10^-9M의 범위의 IC₅₀으로 자이르.2014 VLP에 대한 중화 효능을 나타낸다. 발명의 항체는 또한 자이르.1995, 자이르.2014, 에볼라 수단, 분디부교 및 코트디부아르 (아이보리 코스트)를 포함하여, EBOV의 다양한 스트레인으로부터의 GP를 함유하는 에볼라 바이러스 VLP와 교차반응한다. 발명의 항체는 또한 실시예 5에서 알 수 있는 것과 같이 ADCC를 중재한다. 나아가, 발명의 항체는 실시예 6에서 알 수 있는 것과 같이, EBOV GP에 결합하는 다른 항체와 교차-경합한다.

한 구체예에서, 발명은 에볼라 바이러스 GP에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 제공하며, 여기서 항체 또는 그것의 단편은 다음의 특징들 중 한 가지 이상을 나타낸다: (a) 전체 인간 단클론성 항체이다; (b) EBOV 또는 에볼라 바이러스 당단백질을 발현하는 바이러스 유사 입자 (VLP)에, 표면 플라즈몬 공명 분석으로 측정되는 바, 10^-7M 미만의 해리 상수 (K_D)로 결합한다; (c) pH 7.4와 관련하여 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3배의 증가를 나타낸다; (d) 약 10 ^-11 M 내지 약 10^-9M의 범위의 IC₅₀으로 자이르 에볼라 바이러스의 중화를 나타낸다; (e) 에볼라 바이러스 감염된 세포의 항체 의존성 세포의 세포독성을 나타낸다; (f) 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르로 구성되는 군으로부터 선택된 에볼라 바이러스 VLP의 하나 이상의 스트레인과 교차 반응한다; (g) 기준 항체와 교차-경합한다, 이때 기준 항체는 표 1의 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열을 포함한다.

본 발명의 항체는 상기 언급된 생물학적 특성들 중 하나 이상, 또는 그것들의 임의의 조합을 가질 수 있다. 발명의 항체들의 특정 특성들을 아래에 요약한다. 본 발명의 항체들의 다른 생물학적 특성들은 본원의 작업 실시예를 포함하는 본 개시의 검토로부터 기술분야의 숙련자에게 명백해질 것이다.

에피토프 MAP 작성 및 관련 기술

본 발명은 에볼라 바이러스의 GP 내에서 발견된 하나 이상의 아미노산들과 상호작용하는 항-에볼라 바이러스 항체를 포함한다. 항체가 결합하는 에피토프는 에볼라 바이러스 GP 분자 내에 위치한 3개 이상 (예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 그 이상)의 아미노산의 단일한 연속 서열로 구성될 수 있다 (예컨대 도메인의 선형 에피토프). 다르게는, 에피토프는 에볼라 바이러스 GP 내에 위치한 복수의 비-연속 아미노산들 (또는 아미노산 서열들)로 구성될 수 있다 (예컨대 입체적 에피토프).

기술분야의 숙련자들에게 알려져 있는 다양한 기법들이 항체가 폴리펩티드 또는 단백질 내의 "하나 이상의 아미노산과 상호작용"하는지의 여부를 측정하기 위해 사용될 수 있다. 예시적인 기법으로는, 예를 들면 기본적인 교차-결합 분석, 예컨대 Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY)에 기술된 것들을 포함한다. 다른 방법은 알라닌 주사 돌연변이 분석, 펩티드 블롯 분석 (Reineke (2004) Methods Mol. Biol. 248:443-63), 펩티드 절단 분석 결정학적 연구 및 NMR 분석을 포함한다. 또한, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법들이 사용될 수 있다 (Tomer (2000) Prot. Sci. 9:487-496). 항체와 상호작용하는 폴리펩티드 내의 아미노산들을 확인하기 위해 사용될 수 있는 다른 방법은 질량 분광학에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적인 표현으로, 수소/중수소 교환 방법은 관심의 단백질을 중수소-표지화하는 단계, 이어서 항체를 중수소-표지된 단백질에 결합시키는 단계를 포함한다. 다음에, 단백질/항체 복합체는 물로 전달되고 항체 복합체에 의해 보호된 아미노산들 내의 교환 가능한 양자들이 계면의 일부가 아닌 아미노산들 내의 교환 가능한 양자들보다 느린 속도로 중수소-대-수소 백 (back)-교환을 진행한다. 그 결과로서, 단백질/항체 계면의 일부를 형성하는 아미노산들은 중수소를 보유할 수 있고, 따라서 계면에 포함되지 않은 아미노산들과 비교하여 상대적으로 높은 질량을 나타낸다. 항체를 분리시킨 후, 표적 단백질에 대해 프로테아제 절단 및 질량 분광 분석이 수행되고, 그로써 항체가 상호작용하는 특이적인 아미노산들에 상응하는 중수소-표지된 잔기들이 드러난다. 예컨대 Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267:252-259; Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A 참조.

용어 "에피토프"는 B 및/또는 T 세포가 반응하는 항원 상의 부위를 나타낸다. B-세포 에피토프들은 단백질의 연속적인 아미노산들 또는 삼차 접힘에 의해 바로 옆에 인접한 비연속 아미노산들로부터 형성될 수 있다. 연속적인 아미노산들로부터 형성된 에피토프들은 전형적으로 변성 용매에 노출될 때 보유되는 반면, 삼차 접힘에 의해 형성된 에피토프들은 전형적으로 변성 용매로 처리될 때 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 형태로 적어도 3, 보다 통상적으로는 적어도 5 또는 8 내지 10개의 아미노산들을 포함한다.

항원 구조-기반 항체 프로파일링 (ASAP)으로도 알려져 있는 변형-보조된 프로파일링 (Profiling)(MAP)은 동일한 항원에 대해 지시된 대다수의 단클론성 항체 (mAb)를 각 항체의 결합 프로파일의 유사성에 따라 화학적으로 또는 효소적으로 변형된 항원 표면으로 분류하는 방법이다 (US 2004/0101920 참조). 각 범주는 다른 범주에 의해 표시되는 에피토프와 분명하게 상이하거나 부분적으로 중복하는 독특한 에피토프를 반영할 수 있다. 이 기술은 유전학적으로 동일한 항체의 신속한 거르기를 허용하여서, 특성확인이 유전학적으로 구별되는 항체에 집중될 수 있다. 하이브리도마 스크리닝에 적용될 때, MAP는 원하는 특징들을 가지는 mAB를 생성하는 희귀한 하이브리도마 클론들의 확인을 용이하게 해줄 수 있다. MAP는 발명의 항체들을 상이한 에피토프들에 결합하는 항체들의 그룹으로 분류하기 위해 사용될 수 있다.

특정 구체예에서, 에볼라 바이러스 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 천연 형태 또는 재조합적으로 제조된 에볼라 바이러스 GP의 예시된 임의의 하나 이상의 영역 내의 에피토프, 또는 그것의 단편에 결합한다.

본 발명은 동일한 에피토프 또는 에피토프의 일부분에 결합하는 항-에볼라 바이러스 GP 항체 를 포함한다. 마찬가지로, 본 발명은 또한 본원에 기술된 특이적인 예시적 항체들 중 어느 것과 에볼라 바이러스 GP 또는 그것의 단편에 대한 결합에 대해 경합하는 항-에볼라 바이러스 GP 항체를 포함한다. 예를 들어, 본 발명은 표 1 및 2에 기술된 항체들로부터 얻어진 하나 이상의 항체와 에볼라 바이러스에 대한 결합에 대해 교차-경합하는 항-에볼라 바이러스 GPP 항체들을 포함한다.

당업자는 기술분야에 공지되어 있는 기본적인 방법들을 사용함으로써 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지, 또는 결합에 대해 경합하는지를 쉽게 측정할 수 있다. 예를 들어, 시험 항체가 발명의 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 동일한 에피토프에 결합하는지를 측정하기 위하여, 기준 항체는 포화 조건하에서 에볼라 바이러스 GP 또는 펩티드에 대해 결합하는 것이 허용된다. 다음에, 시험 항체의 에볼라 바이러스 GP에 결합하는 능력이 평가된다. 만약 시험 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와의 포화 결합 후에 에볼라 바이러스 GP에 결합할 수 있다면, 시험 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 항체와 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결론지을 수 있다. 다른 한편으로, 시험 항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와의 포화 결합 후에 에볼라 바이러스 GP에 결합할 수 없다면, 시험 항체는 발명의 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체에 의해 결합된 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.

항체가 참조 항-에볼라 바이러스 GP 항체와의 결합에 대해 경합하는지를 측정하기 위해, 상기-기술된 결합 방법론이 두 방향으로 수행된다: 제1 방향으로는, 기준 항체가 포화 조건하에서 에볼라 바이러스 GP에 결합하는 것이 허용되고 이어서 시험 항체의 에볼라 바이러스 GP에 대한 결합이 평가된다. 제2 방향으로는, 시험 항체가 포화 조건하에서 에볼라 바이러스 GP에 결합하는 것이 허용되고 이어서 기준 항체의 에볼라 바이러스 GP에 대한 결합이 평가된다. 만약, 두 방향에서, 단지 제1 (포화) 항체만이 에볼라 바이러스 GP에 결합할 수 있다면, 시험 항체 및 기준 항체가 에볼라 바이러스 GP에 대한 결합에 대해 경합하는 것으로 결론내려진다. 기술분야의 숙련자에 의해 인지될 것과 같이, 참보 항체와 결합에 대해 경합하는 항체는 본질적으로 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 없지만, 중복하는 또는 인접한 에피토프에 결합함으로써 기준 항체의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다.

두 항체가 각각 항원에 대한 다른 항체의 결합을 경합적으로 억제 (차단)한다면 두 항체는 동일한 또는 중복하는 에피토프에 결합한다. 즉, 1-, 5-, 10-, 20- 또는 100-배 과잉의 한 항체는 경합 결합 분석으로 측정되는 바 적어도 50%, 그러나 바람직하게는 75%, 90% 또는 심지어 99%만큼 다른 항체의 결합을 억제한다 (예컨대 Junghans et al., Cancer Res. 1990 50:1495-1502 참조). 다르게는, 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 항원의 본질적으로 모든 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 두 항체는 동일한 에피토프를 가진다. 만약 한 항체의 결합을 감소 또는 제거하는 일부 아미노산 돌연변이가 다른 항체의 결합을 감소 또는 제거한다면 두 항체는 중복하는 에피토프를 가진다.

추가의 기본적인 실험 (예컨대 펩티드 돌연변이 및 결합 분석)이 다음에 시험 항체의 결합의 관찰된 결핍이 실제로 기준 항체와 동일한 에피토프에 대한 결합으로 인한 것인지의 여부 또는 입체적 차단 (또는 다른 현상)이 관찰된 결합의 결핍의 원인인지를 확인하기 위하여 수행될 수 있다. 이런 종류의 실험은 ELISA, RIA, 표면 플라즈몬 공명, 유동 세포분석 또는 기술분야에서 이용 가능한 임의의 다른 정량적 또는 정성적 항체-결합 분석을 사용하여 수행될 수 있다.

면역콘쥬게이트

발명은 치료제 모이어티, 예컨대 에볼라 바이러스 감염을 치료하기 위한 항-바이러스 약물에 콘쥬게이트된 인간 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체 ("면역콘쥬게이트")를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "면역콘쥬게이트"는 방사성 활성제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드 또는 단백질 또는 치료제에 화학적으로 또는 생물학적으로 결합된 항체를 나타낸다. 항체는 분자가 그것의 표적에 결합할 수 있는 한 임의의 위치에서 방사성 활성제, 사이토카인, 인터페론, 표적 또는 리포터 모이어티, 효소, 펩티드 또는 치료제에 결합될 수 있다. 면역콘쥬게이트의 실례는 항체 약물 콘쥬게이트와 항체-독소 융합 단백질의 포함한다. 한 구체예에서, 제제는 에볼라 바이러스 또는 에볼라 바이러스 GP에 대한 제2 상이한 항체일 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 바이러스로 감염된 세포에 특이적인 제제에 콘쥬게이트될 수 있다. 항-에볼라 바이러스 항체에 콘쥬게이트될 수 있는 치료제 모이어티의 유형은 치료되는 상태 및 이루고자 하는 바람직한 치료 효과를 고려하게 될 것이다. 면역콘쥬게이트를 형성하기 위한 적합한 제제의 실례는 기술분야에 알려져 있다; 예를 들면 WO 05/103081 참조.

다중-특이적 항체

본 발명의 항체는 단일-특이적, 이중-특이적 또는 다중-특이적일 수 있다. 다중-특이적 항체는 하나의 표적 폴리펩티드의 상이한 에피토프들에 특이적이거나 하나 이상의 표적 폴리펩티드에 특이적인 항원-결합 도메인들을 함유할 수 있다. 예컨대 Tutt et al., 1991, J. Immunol. 147:60-69; Kufer et al., 2004, Trends Biotechnol. 22:238-244 참조.

발명의 다중-특이적 항원-결합 분자들 중 어느 것, 또는 그것의 변이체들은 기술분야의 통상적인 지식을 가진 사람에게 알려지는 것처럼, 표준 분자 생물학 기법들 (예컨대 재조합 DNA 및 단백질 발현 기술)을 사용하여 구성될 수 있다.

일부 구체예에서, 에볼라 바이러스-특이적 항체들은 에볼라 바이러스의 구별되는 도메인들에 결합하는 가변 영역들이 함께 결합되어 단일 결합 분자 내에서 이중-도메인 특이성을 제공하게 되는 이중-특이적 포맷 ("이중-특이적")으로 생성된다. 적절하게 디자인된 이중-특이성은 특이성 및 결합 능력 둘 다의 증가를 통해 전체적인 에볼라 바이러스-단백질 억제 효능을 증대시킬 수 있다. 개별적인 도메인들 (예컨대 N-말단 도메인의 분절)에 대한 특이성을 가진, 또는 한 도메인 내의 상이한 영역들에 결합할 수 있는 가변 영역들은 각 영역이 동시에 별개의 에피토프에 또는 한 도메인 내의 상이한 영역들에 결합하는 것을 허용하는 구조적 스캐폴드로 쌍을 이룬다. 이중-특이성에 대한 한 실례로, 한 도메인에 대한 특이성을 가진 결합자로부터의 중쇄 가변 영역들 (V_H)이 제2 도메인에 대한 특이성을 가진 일련의 결합자들로부터의 경쇄 가변 영역들 (V_L)과 재조합되어 그 V_H에 대한 원래의 특이성을 파괴시키지 않으면서 원래의 V_H와 쌍을 이룰 수 있는 비-동족 V_L 파트너를 확인할 수 있다. 이런 방식으로, 단일 V_L 분절 (예컨대 V_L1)이 두 개의 상이한 V_H 도메인들 (예컨대 V_H1 및 V_H2)과 조합되어 두 개의 결합 "아암" (V_H1- V_L1 및 V_H2- V_L1)으로 구성된 이중-특이성이 생성될 수 있다. 단일 V_L 분절의 사용은 시스템의 복잡성을 감소시키고 그로써 이중-특이성을 생성하기 위해 사용된 클로닝, 발현 및 정제 과정들을 단순화시키고 효율을 증가시킨다 (예를 들면 USSN13/022759 및 US2010/0331527 참조).

다르게는, 하나 이상의 도메인 및 제2 표적, 예컨대 한정하는 것은 아니지만, 예를 들어 제2 상이한 항-에볼라 바이러스 항체와 결합하는 항체는 본원에 기술된 기법들 또는 기술분야의 숙련자들에게 알려져 있는 다른 기법들을 사용하여 이중-특이성 포맷으로 제조될 수 있다. 별개의 영역들에 결합하는 항체 가변 영역들은 예를 들면 에볼라 바이러스 상의 관련 부위들에 결합하는 가변 영역들과 함께 결합되어서 단일 결합 분자 내의 이중-항원 특이성을 부여하게 된다. 이런 성질을 가지는 적절하게 디자인된 이중-특이성은 이중 기능을 제공한다. 세포외 도메인에 대한 특이성을 가지는 가변 영역들은 세포외 도메인의 외부에 대한 특이성을 가지는 가변 영역과 조합되고 각 가변 영역이 별도의 항원들에 결합하는 것을 허용하는 구조적 스캐폴드 상에서 쌍을 이룬다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 예시적인 이중-특이적 항체 포맷은 제1 면역글로불린 (Ig) C_H3 도메인 및 제2 Ig C_H3 도메인의 사용을 포함하고, 이때 제1 및 제2 Ig C_H3 도메인은 적어도 하나의 아미노산만큼 서로 상이하고, 적어도 하나의 아미노산 차이는 아미노산 차이가 없는 이중-특이적 항체와 비교하여 단백질 A에 대한 이중-특이적 항체의 결합을 감소시킨다. 한 구체예에서, 제1 Ig C_H3 도메인은 단백질 A에 결합하고 제2 Ig C_H3 도메인은 H95R 변형 (IMGT 엑손 넘버링에 의해; EU 넘버링에 의하면 H435R)과 같은 단백질 A 결합을 감소시키거나 없애는 돌연변이를 함유한다. 제2 C_H3은 추가로 Y96F 변형 (IMGT에 의함; EU에 의하면 Y436F)을 포함할 수 있다. 제2 C_H3 내에서 발견될 수 있는 추가의 변형들은 다음을 포함한다: IgG1 항체의 경우에 D16E, L18M, N44S, K52N, V57M 및 V82I (IMGT에 의함; EU에 의하면 D356E, L358M, N384S, K392N, V397M 및 V422I); IgG2 항체의 경우에 N44S, K52N 및 V82I (IMGT에 의함; EU에 의하면 N384S, K392N 및 V422I); 및 IgG4 항체의 경우에 Q15R, N44S, K52N, V57M, R69K, E79Q 및 V82I (IMGT에 의함; EU에 의하면 Q355R, N384S, K392N, V397M, R409K, E419Q 및 V422I). 상기 기술된 이중-특이적 항체 포맷에 대한 변이는 본 발명의 범주 내에서 고려된다.

본 발명의 맥락에서 사용될 수 있는 다른 예시적인 이중특이적 포맷은, 제한 없이, 예컨대 scFv-기반의 또는 다이아바디 이중특이적 포맷, IgG-scFv 융합, 이중 가변 도메인 (DVD)-Ig, 콰드로마 (Quadroma), 놉스-인투-홀스 (knobs-into-holes), 공통 경쇄 (예컨대 놉스-인투-홀스를 가진 공통 경쇄 등), CrossMab, CrossFab, (SEED)바디, 류신 지퍼, 듀오바디, IgG1/IgG2, 이중 작용성 Fab (DAF)-IgG, 및 Mab² 이중특이적 포맷 (전술한 포맷들의 검토를 위해 예컨대 Klein et al. 2012, mAbs 4:6, 1-11 및 이 문헌에서 인용된 참고문헌들 참조)을 포함한다. 이중특이적 항체가 또한 펩티드/핵산 콘쥬게이션을 사용하여 구성될 수 있고, 이때 예컨대 직교하는 (orthogonal) 화학적 반응성을 가진 비천연 아미노산들이 다음에, 정의된 조성, 원자가 및 기하학적 구조를 가지는 다중체 복합체로 자체-조립되는 부위-특이적 항체-올리고뉴클레오티드 콘쥬게이트를 생성하기 위해 사용된다. (예컨대 Kazane et al., J. Am. Chem. Soc. [Epub: Dec. 4, 2012] 참조).

치료 투여 및 제형

발명은 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 치료 조성물을 제공한다. 발명에 따르는 치료 조성물은 적합한 담체, 부형제, 및 향상된 수송, 전달, 내성 등을 제공하기 위하여 제형 안에 통합되는 다른 제제들과 함께 투여될 것이다. 수많은 적절한 제형이 모든 약사에게 알려져 있는 처방서에서 찾아볼 수 있다: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. 이들 제형은, 예를 들면 분말, 페이스트, 연구, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 지질 (양이온 또는 음이온) 함유 소포 (예컨대 LIPOFECTIN^TM), DNA 콘쥬게이트, 무수 흡수 페이스트, 수-중-유 및 유-중-수 에멀션, 에멀션 카보왁스 (다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반-고체 겔 및 카보왁스를 함유한 반-고체 혼합물을 포함한다. 또한 Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311 참조.

항체의 용량은 투여되는 대상체의 연령 및 크기, 표적 질환, 상태, 투여 경로 등에 따라 다를 수 있다. 본 발명의 항체가 성인 환자에서 질환 또는 장애를 치료하기 위해 또는 그런 질환을 예방하기 위해 사용될 때, 본 발명의 항체는 보통 약 0.1 내지 약 60 mg/kg 체중, 더 바람직하게는 약 5 내지 약 60, 약 10 내지 약 50 또는 약 20 내지 약 50 mg/kg 체중의 단일 용량으로 투여되는 것이 유리하다. 상태의 심각성에 따라, 치료 빈도 및 기간이 조정될 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 적어도 약 0.1 mg 내지 약 800 mg, 약 1 내지 약 500 mg, 약 5 내지 약 300 mg, 또는 약 10 내지 약 200 mg, 내지 약 100 mg, 또는 내지 약 50 mg의 초기 용량으로서 투여될 수 있다. 특정 구체예에서, 초기 용량은 초기 용량의 양과 대략적으로 동일하거나 더 적을 수 있는 양으로 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 제2 또는 복수의 후속적인 용량의 투여가 이어질 수 있고, 이때 후속적인 용량은 적어도 1 일 내지 3 일당; 적어도 1주, 적어도 2주; 적어도 3주; 적어도 4주; 적어도 5주; 적어도 6주; 적어도 7주; 적어도 8주; 적어도 9주; 적어도 10주; 적어도 12주; 또는 적어도 14주 후에 투여된다.

다양한 전달 시스템, 예컨대 리포솜에의 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, 돌연변이 바이러스를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체 중재된 엔도사이토시스가 알려져 있고 발명의 제약학적 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다 (예컨대 Wu et al. (1987) J. Biol. Chem. 262:4429-4432 참조). 도입 방법은, 제한되는 것은 아니지만, 피내, 경피, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외 및 경구 경로를 포함한다. 조성물은 임의의 편리한 경로에 의해, 예를 들면 투입 또는 볼루스 주사에 의해, 상피 또는 점막성 라이닝 (예컨대 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고 다른 생물학적 활성 제제들과 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신성이거나 국소적일 수 있다. 제약학적 조성물은 또한 소포, 특히 리포솜으로 전달될 수 있다 (예를 들어 Langer (1990) Science 249:1527-1533 참조).

본 발명의 항체를 전달하기 위한 나노입자들의 사용 또한 본원에서 고려된다. 항체-콘쥬게이트된 나노입자들은 치료 및 진단 용도 둘 다에 사용될 수 있다. 항체-콘쥬게이트된 나노입자들 및 제조 및 사용 방법은 Arruebo, M. 등에 의해 문헌에 상세하게 기술되어 있다 (2009, "Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications" in J. Nanomat. Volume 2009, Article ID 439389, 24 pages, doi: 10.1155/2009/439389). 나노입자들은 개발되고 바이러스로 감염된 세포를 표적으로 하기 위해 제약학적 조성물에 함유된 항체에 콘쥬게이트될 수 있다. 약물 전달을 위한 나노입자들은 또한 예를 들면 US 8257740 또는 US 8246995에 기술되어 있다.

특정 상황에서, 제약학적 조성물은 제어된 방출 시스템으로 전달될 수 있다. 한 구체예에서, 펌프가 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 중합체 물질이 사용될 수있다. 또 다른 구체예에서, 제어된 방출 시스템은 조성물의 표적과 근접하여 배치됨으로써 단지 전신성 용량의 분율만이 필요하다.

주사 가능한 제제는 정맥 내, 피하, 피내, 두개 내, 복강 내 및 근육 내 주사, 점적 주입 등을 위한 단위용량 형태를 포함할 수 있다. 이들 주사 가능한 제제는 대중적으로 알려져 있는 방법들에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사 가능한 제제는 상기 기술된 항체 또는 그것의 염을 종래적으로 주사용으로 사용된 멸균 수성 매질에 또는 유성 매질에 예컨대 용해, 현탁 또는 유화시킴으로서 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로서는, 예를 들면 생리 식염수, 글루코옷, 및 다른 보조제를 함유하는 등장성 용액 등이 있고, 그것들은 알코올 (예컨대 에탄올), 폴리알코올 (예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제 [예컨대 폴리소르베이트 80, HCO-50 (수소화된 캐스터유의 폴리옥시에틸렌 (50 mol) 부가물)] 등과 같은 적절한 가용화제와 조합될 수 있다. 유성 매질로서는, 예컨대 참기름, 대두듀 등이 사용되고, 그것은 벤질 벤조에이트, 벤질 알코올 등과 같은 가용화제와 조합하여 사용될 수 있다. 그렇게 제조된 주사액은 바람직하게는 적절한 앰플에 채워진다.

본 발명의 제약학적 조성물은 표준 바늘 및 주사기로 피하로 또는 정맥 내로 전달될 수 있다. 또한, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치는 쉽게 본 발명의 제약학적 조성물을 전달하는 데서 용도를 가진다. 그런 펜 전달 장치는 재사용하거나 일회용일 수 있다. 재사용할 수 있는 펜 전달 장치는 일반적으로 제약학적 조성물을 함유하는 교체 가능한 카트리지를 이용한다. 일단 카트리지 내의 모든 제약학적 조성물이 투여되고 카트리지가 비워지면, 빈 카트리지는 쉽게 버려지고 제약학적 조성물을 함유한 새로운 카트리지로 교체된다. 펜 전달 장치는 다음에 재사용될 수 있다. 일회용 펜 전달 장치에서, 교체 가능한 카트리지는 없다. 오히려, 일회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 보유된 제약학적 조성물로 사전에 채워진다. 일단 저장소가 제약학적 조성물이 비워지면, 전체 장치는 버려진다.

수많은 재사용 가능한 펜 및 자동주사기 전달 장치가 본 발명의 제약학적 조성물의 피하 전달에 사용되었다. 실례로, 반드시 그것들에 제한되지는 않지만, 지금까지 알려진 몇몇으로 AUTOPEN^TM (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DISETRONIC^TM 펜 (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25^TM 펜, HUMALOG^TM 펜, HUMALIN 70/30^TM 펜 (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN^TM I, II 및 III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR^TM (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD^TM 펜 (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN^TM, OPTIPEN PRO^TM, OPTIPEN STARLET^TM 및 OPTICLIK^TM (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany)을 포함한다. 본 발명의 제약학적 조성물의 피하 전달에 사용되고 있는 일회용 펜 전달 장치의 실례로는, 반드시 그것들에 제한되지는 않지만, 지금까지 알려진 몇몇으로, SOLOSTAR^TM 펜 (Sanofi-Aventis), FLEXPEN^TM (Novo Nordisk), 및 KWIKPEN^TM (Eli Lilly), SURECLICK^TM 자동주사기 (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET^TM(Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.) 및 HUMIRA^TM 펜 (Abbott Labs, Abbott Park, IL)을 포함한다.

유리하게도, 상기 기술된 경구 또는 비경구 사용을 위한 제약학적 조성물은 활성 성분들의 용량을 맞추기 위해 어울리는 단위 용량의 단위용량 형태로 제조된다. 단위 용량의 그런 단위용량 형태는 예를 들면, 정제, 환, 캡슐, 주사액 (앰플), 좌제 등을 포함한다. 함유된 항체의 양은 일반적으로 단위 용량의 단위용량 형태; 특히 주사액 형태당 약 5 내지 약 500 mg이고, 항체는 약 5 내지 약 100 mg으로 및 다른 단위용량 형태에 대해서는 약 10 내지 약 250 mg으로 함유되는 것이 바람직하다.

항체의 치료 용도

본 발명의 항체는 에볼라 바이러스 감염과 관련된 질환 또는 장애 또는 상태의 치료 및/또는 예방을 위해 및/또는 그런 질환, 장애 또는 상태와 관련된 적어도 하나의 증상을 개선시키기는 데 유용하다.

특정 구체예에서, 발명의 항체들은 에볼라 바이러스에 의해 유발된 심각하고 급성인 호흡기 감염으로 고생하는 대상체들을 치료하기에 유용하다. 일부 구체예에서, 발명의 항체는 숙주의 바이러스 역가를 감소시키거나 바이러스 로드를 줄이는데 유용하다. 한 구체예에서, 발명의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 에볼라 바이러스 감염된 환자에게 치료 용량으로 투여될 수 있다.

본 발명의 하나 이상의 항체는 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상 또는 상태의 심각성을 개선 또는 예방 또는 감소시키기 위해 투여될 수 있다. 항체는 한정하는 것은 아니지만 열, 두통, 피로, 식욕 상실, 근육통, 설사, 구토, 복통, 탈수 및 설명되지 않는 출혈을 포함하는 에볼라 바이러스 감염의 적어도 한 가지 증상의 심각성을 개선 또는 감소시키기 위해 사용될 수 있다.

또한 본원에서는 본 발명의 하나 이상의 항체를 면역손상된 개인, 의료계 종사자, 에볼라 바이러스를 잠복시키고 있는 사람에게 노출된 적이 있는 것으로 추정되는 사람, 감염된 개인과 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접한 사람, 병원 직원, 제약 연구원, 에볼라 환자가 치료받았던 병원 시설 또는 기관을 청소하는 데 종사하는 유지 요원, 에볼라 바이러스가 발생한 것으로 알려졌거나 발생한 것으로 의심되는 지역 또는 나라를 방문하였거나 방문할 계획이 있는 개인들 및 항공사 단골 고객과 같은 에볼라 바이러스 감염이 발생될 위험이 있는 대상체들에게 예방학적으로 사용되는 것이 고려된다.

발명의 추가의 구체예에서 본 항체는 에볼라 바이러스 감염으로 고생하는 환자들을 치료하기 위한 제약학적 조성물의 제조에 사용된다. 발명의 다른 구체예에서, 본 항체는 에볼라 바이러스 감염을 치료 또는 개선시키는 데 유용한 기술분야에 숙련된 사람들에게 알려져 있는 임의의 다른 제제 또는 임의의 다른 치료법과 함께 부가 치료법으로서 사용된다.

조합 치료법

조합 치료법은 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 발명의 항체와 함께, 또는 발명의 항체의 생물학적 활성 단편과 함께 유리하게 조합될 수 있는 임의의 추가의 치료제를 포함할 수 있다. 본 발명의 항체는 에볼라 바이러스 감염을 치료하기 위해 사용된 하나 이상의 약물 또는 제제와 상조적으로 조합될 수 있다.

예를 들어, 바이러스 감염을 치료하기 위한 예시적인 제제는, 예컨대 항-바이러스 약물, 항-염증 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증 약물), 에볼라 바이러스에 대한 상이한 항체, 에볼라 바이러스용 백신, ZMapp 치료법, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머), 인터페론 또는 에볼라 바이러스 감염을 치료하기 위한 임의의 다른 완화 요법을 포함할 수 있다.

일부 구체예에서, 발명의 항체는 에볼라 바이러스 감염에 걸린 환자의 바이러스 로드를 감소시키기 위하여, 또는 감염의 하나 이상의 증상을 개선시키기 위하여 제2 치료제와 조합될 수 있다.

특정 구체예에서, 제2 치료제는 또 다른 상이한 항체 또는 에볼라 바이러스 GP에 특이적인 항체 칵테일인데, 여기서 상이한 항체 또는 칵테일 내의 항체는 본 발명의 항체와 동일한 에피토프 또는 중복하는 에피토프에 결합할 수 있거나 결합하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 제2 치료제는 상이한 에볼라 바이러스 단백질에 대한 항체이다. 제2 항체는 바이러스의 상이한 스트레인들과 상이한 하나 이상의 에볼라 바이러스 단백질에 대해 특이적일 수 있다. 본원에서는 에볼라 바이러스에 대한 중화 또는 억제 활성을 가지는 발명의 항체의 조합 ("칵테일")을 사용하는 것이 고려된다. 일부 구체예에서, 비-경합 항체가 조합될 수 있고 , 돌연변이로 인한 에볼라 바이러스의 탈피 능력을 감소시키기 위해 필요로 하는 대상체에게투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 조합을 포함하는 항체는 GP 상의 구별되는 비-중복성 에피토프들에 결합한다. 조합을 포함하는 항체는 숙주 세포에의 바이러스 부착 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입 및/또는 숙주 세포와의 융합을 차단할 수 있다. 항체는 자이르, 수단, 분디부교 또는 코트디부아르로부터 선택된 EBOV의 스트레인으로부터의 GP와 상호작용할 수 있고, 단독으로 또는 상기 주지된 제제들 중 임의의 하나 이상의 제제와 조합하여 사용될 때, 주지된 에볼라 바이러스 스트레인들 중 임의의 하나 이상의 스트레인을 중화시킬 수 있다.

또한 본원에서는 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체들의 조합을 사용하는 것이 고려되는데, 그 조합은 교차-경합하지 않는 하나 이상의 항체를 포함한다. 특정 구체예에서, 조합은 발명의 적어도 세 개의 항체의 혼합물을 포함하는 칵테일을 포함한다. 칵테일 내의 항체는 바이러스 또는 바이러스 감염된 세포를 중화하는 능력에 있어서, 또는 항체-의존성 세포의 세포독성 (ADCC)을 중재하는 능력에 있어서, 또는 EBOV 가용성 당단백질 (sGP)에 결합하는 능력에 있어서 다를 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "~와 조합하여"는 추가의 치료적 활성 성분(들)이 발명의 적어도 하나의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 또는 본 발명의 하나 이상의 항체를 포함하는 칵테일의 투여 전에, 동시에 또는 후에 투여될 수 있다. 용어 "~와 조합하여"는 또한 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 제2 치료제의 순차적인 또는 동시의 투여를 포함한다.

추가의 치료 활성 성분(들)은 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여 전에 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 제1 성분은 만약에 제1 성분이 제2 성분의 투여 전 1주 전, 72시간 전, 60시간 전, 48시간 전, 36시간 전, 24시간 전, 12시간 전, 6시간 전, 5시간 전, 4시간 전, 3시간 전, 2시간 전, 1시간 전, 30분 전, 15분 전, 10분 전, 5분 전 또는 1분 미만 전에 투여된다면, 제2 성분 "전에" 투여되는 것으로 보일 수 있다. 다른 구체예에서, 추가의 치료적 활성 성분(들)은 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여 후에 대상체에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 제1 성분은 만약 제1 성분이 제2 성분의 투여 후 1분 후, 5분 후, 10분 후, 15분 후, 30분 후, 1시간 후, 2시간 후, 3시간 후, 4시간 후, 5시간 후, 6시간 후, 12시간 후, 24시간 후, 36시간 후, 48시간 후, 60시간 후, 72시간 후에 투여된다면 제2 성분 "후에" 투여되는 것으로 보일 수 있다. 또 다른 구체예에서, 추가의 치료 활성 성분(들)은 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여와 동시에 대상체에게 투여될 수 있다. "동시" 투여는, 본 발명의 목적에 대해, 예컨대 서로 30분 이하의 시간 내에 대상체에게 투여된 단일한 단위용량 형태의, 또는 별도의 단위용량 형태의 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 추가의 치료적 활성 성분의 투여를 포함한다. 만약 별도의 단위용량 형태로 투여된다면, 각각의 단위용량 형태는 동일한 경로를 통해 투여될 수 있고 (예컨대 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 추가의 치료적 활성 성분은 둘 다 정맥 내로 투여될 수 있다, 등등); 다르게는, 각각의 단위용량 형태는 상이한 경로를 통해 투여될 수 있다 (예컨대 항-에볼라 바이러스 GP 항체는 정맥 내로 투여될 수 있고, 추가의 치료적 활성 성분은 경구로 투여될 수 있다). 어느 경우든지, 단일한 단위용량 형태로, 동일한 경로에 의한 별도의 단위용량 형태로, 또는 상이한 경로에 의한 별도의 단위용량 형태로 투여하는 것은 모두 본 개시의 목적에 대해 "동시 투여"로 간주된다. 본 개시의 목적에 대해, 추가의 치료적 활성 성분의 투여 "전에", "동시에" 또는 "후에" (상기에서 정의된 대로) 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여는 추가의 치료적 활성 성분"과 조합된" 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여로 간주된다.

본 발명은 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체가 본원의 다른 곳에서 기술된 것과 같은 추가의 하나 이상의 치료적 활성 성분(들)과 공-제형되는 제약학적 조성물을 포함한다.

투여 양생법

특정 구체예들에 따르면, 발명의 단일 용량의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 (또는 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 본원에서 언급된 추가의 치료적 활성 제제들 중 어느 것의 조합을 포함하는 제약학적 조성물)는 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 특정 구체예들에 따르면, 다중 용량의 항-에볼라 바이러스 GP 항체 (또는 항-에볼라 바이러스 GP 항체 및 본원에서 언급된 추가의 치료적 활성 제제들 중 어느 것의 조합을 포함하는 제약학적 조성물)는 규정된 시간 과정에 걸쳐 대상체에게 투여될 수 있다. 발명의 이 측면에 따르는 방법들은 다중 용량의 본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체를 대상체에게 순차적으로 투여하는 단계를 포함한다. 본원에서 사용되는, "순차적으로 투여하는"은 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 각 용량이 상이한 시점에, 예컨대 예정된 간격 (예컨대 시간, 일, 주 또는 개월)으로 분리된 상이한 날들에 대상체에게 투여되는 것을 의미한다. 본 발명은 단일한 초기 용량의 항-에볼라 바이러스 GP 항체가 환자에게 투여되고, 이어서 하나 이상의 이차 용량의 항-에볼라 바이러스 GP 항체, 및 선택적으로 이어서 하나 이상의 삼차 용량의 항-에볼라 바이러스 GP 항체가 순차적으로 투여되는 것을 포함하는 방법을 포함한다.

용어 "초기 용량", "이차 용량" 및 "삼차 용량"은 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 투여의 시간적인 순서를 나타낸다. 그러므로, "초기 용량"은 치료 양생법이 시작될 때 투여되는 용량이고 (또한 "기준선 용량"으로서 언급됨); "이차 용량"은 초기 용량 후 투여되는 용량이며; "삼차 용량"은 이차 용량 후 투여되는 용량이다. 초기, 이차 및 삼차 용량은 모두 동일한 양의 항-에볼라 바이러스 GP 항체를 함유할 수 있지만, 일반적으로 투여 빈도의 관점에서는 서로 상이할 수 있다. 그러나 특정 구체예에서, 초기, 이차 및/또는 삼차 용량에 함유된 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 양은 치료 과정 중에 서로 다르다 (예컨대 필요에 따라 상향 또는 하향 조정된다). 특정 구체예에서, 둘 이상 (예컨대 2, 3, 4 또는 5)의 용량은 "로딩 용량"으로서 치료 양생법을 시작할 때 투여되고, 덜 빈번한 기준으로 투여되는 후속 용량이 이어진다.

본 발명의 예시적인 특정 구체예에서, 각각의 이차 및/또는 삼차 용량이 직전의 용량 후 1 내지 48시간 (예컨대 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½ 또는 그 이상) 후에 투여된다. 본원에서 사용되는 구절 "직전 용량"은 다중 투여의 순서에서, 중간에 끼어든 용량이 없이 순서상 바로 다음 용량의 투여 전에 환자에게 투여되는 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 용량을 의미한다.

발명의 이 측면에 따르는 방법들은 임의의 횟수의 항-에볼라 바이러스 GP 항체의 이차 및/또는 삼차 용량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 예를 들면, 단지 1회의 이차 용량이 환자에게 투여된다. 다른 구체예에서는 둘 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상)의 이차 용량이 환자에게 투여된다. 마찬가지로, 특정 구체예에서, 단지 1회의 삼차 용량이 환자에게 투여된다. 다른 구체예에서는 둘 이상 (예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 그 이상)의 삼차 용량이 환자에게 투여된다.

발명의 특정 구체예에서, 이차 및/또는 삼차 용량이 환자에게 투여되는 빈도는 치료 양생법의 과정에 걸쳐 다를 수 있다. 투여의 빈도는 또한 임상 조사 후 개별적인 환자의 필요에 따라 의사에 의해 치료 과정 중에 조정될 수 있다.

항체의 진단적 용도

본 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체는 샘플 중의 에볼라 바이러스를 검출 및/또는 측정하기 위해, 예컨대 진단 목적으로 사용될 수 있다. 일부 구체예는 바이러스 감염과 같은 질환 또는 장애를 검출하기 위한 분석에서 본 발명의 하나 이상의 항체의 사용을 고려한다. 에볼라 바이러스에 대한 예시적인 진단 분석은, 예컨대 환자로부터 얻어진 샘플을 발명의 항-에볼라 바이러스 GP 항체와 접촉시키는 단계를 포함할 수 있고, 여기서 항-에볼라 바이러스 GP 항체는 환자 샘플로부터 에볼라 바이러스를 선택적으로 분리하기 위한 포획 리간드로서 사용된 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자로 표지된다. 다르게는, 미표지 항-에볼라 바이러스 GP 항체가 자체가 검출 가능하게 표지된 이차 항체와 조합하여 진단 용도에서 사용될 수 있다. 검출 가능한 표지 또는 리포터 분자는 방사성 핵종, 예컨대 ³H, ¹⁴C, ³²P, ³⁵S 또는 ¹²⁵I; 형광 또는 화학발광 모이어티, 예컨대 플루오레세인 아이소티오시아네이트 또는 로다민; 또는 효소, 예컨대 알칼리 포스파타제, β-갈락토시다제, 양고추냉이 과산화효소 또는 루시페라제일 수 있다. 샘플 중의 에볼라 바이러스를 검출 또는 측정하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 특정 분석은 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 방사성 면역분석 (RIA) 및 형광-활성화 세포 분류 (FACS)를 포함한다.

본 발명에 따라 에볼라 바이러스 진단 분석에 사용될 수 있는 샘플들은 환자로부터 얻을 수 있는 임의의 조직 또는 유체 샘플을 포함하고, 그것은 정상적인 또는 병리적인 조선 하에서 에볼라 바이러스 또는 그것의 단편의 검출 가능한 양을 함유한다. 일반적으로, 건강한 환자 (예컨대 에볼라 바이러스와 관련된 질환으로 영향을 받지 않은 환자)로부터 얻어진 특정 샘플 중의 에볼라 바이러스의 수준은 기준선, 또는 표준 수준의 에볼라 바이러스를 초기에 수립하는 것으로 측정될 것이다. 이런 기준선 수준의 에볼라 바이러스는 다음에 에볼라 바이러스-관련 상태, 또는 그런 상태와 관련된 증상을 가진 것으로 추정되는 개인들로부터 얻어진 샘플 중에서 측정된 에볼라 바이러스의 수준에 대해 비교될 수 있다.

에볼라 바이러스에 특이적인 항체는 추가의 표지 또는 모이어티를 함유하지 않거나, 또는 N-말단 또는 C-말단 표지 또는 모이어티를 함유할 수 있다. 한 구체예에서, 표지 또는 모이어티는 비오틴이다. 결합 분석에서, 표지 (있다면)의 위치는 펩티드가 결합되는 표면에 관련하여 펩티드의 배향을 결정할 수 있다. 예를 들어, 만약 표면이 아비딘으로 코팅된다면, N-말단 비오틴을 함유하는 펩티드는 펩티드의 C-말단이 표면으로부터 멀어지게 되도록 배향될 것이다.

실시예

다음의 실시예들은 발명의 방법 및 조성물의 제조 및 사용 방법의 완전한 개시 및 설명을 기술분야에 통상의 지식을 가진 사람들에게 제공하기 위해 제시되고, 발명자들이 그들의 발명으로서 간주한 것의 범주를 제한하려고 의도한 것은 아니다. 사용된 수치 (예컨대 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위한 노력들이 기울여졌지만 일부 실험적 에러와 편차는 설명될 것이다. 다르게 표시되지 않는 한, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이며, 온도는 섭씨 온도이고, 실온은 약 25℃이며, 압력은 대기압이거나 거의 대기압이다.

실시예 1: 에볼라 바이러스에 대한 인간 항체의 생성

에볼라 바이러스에 대한 인간 항체를 인간 면역글로불린 중쇄 및 카파 경쇄 가변 영역들을 코드화하는 DNA를 포함하는 마우스에서 생성하였다. 한 구체예에서, 에볼라 바이러스에 대한 인간 항체를 VELOCIMMUNE^® 마우스에서 생성하였다. 한 구체예에서, VelocImmune® (VI) 마우스들을 전체-길이 에볼라 바이러스 GP [자이르 에볼라바이러스 2014 (GenBank: KJ660346.2)]를 코드화하는 DNA로 면역시켰다. 항체를 2주 간격으로 분리된 2회의 면역화를 포함하는 가속 양생법을 따라 생성하였다. 항체 면역 반응을 에볼라 바이러스 GP-특이적 면역분석에 의해 모니터링하였다. 예를 들면, 혈청을 정제된 전체-길이 EBOV GP, 하위유닛 GP 단백질 (GP1 및 GP2), 및 EBOV GP를 발현하는 바이러스-유사 입자들 (VLP)에 대한 특이적인 항체 역가에 대해 분석하였다. 항체-생성 클론들을 B-세포 분류 기술 (BST) 및 하이브리도마 방법 둘 다를 사용하여 분리하였다. 예를 들어, 원하는 면역 반응이 이루어졌을 때, 비장세포를 수득하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜서 그것들의 생존을 보존하였고 하이브리도마 세포주를 형성하였다. 하이브리도마 세포주를 스크리닝하고 선택하에볼라 바이러스 GP-특이적 항체를 생성하는 세포주를 확인하였다. 이 기법, 및 상기 기술된 다양한 면역원들을 사용하여, 여러 키메라 항체 (즉 인간 가변 도메인과 마우스 불변 도메인을 가진 항체)를 얻었다; 이 방식으로 생성된 예시적인 항체들을 H1M17354N, H2aM17356N, H1M17357N, H2aM17358N, H2aM17359N 및 H2aM17360N로서 표시하였다.

항-에볼라 바이러스 항체들을 또한 미국 특허 7582298호에 기술된 것과 같이, 골수종 세포에의 융합 없이 직접 항원-포지티브 마우스 B 세포로부터 분리하였다. 이 방법을 사용하여, 여러 전체 인간 항-에볼라 바이러스 GP 항체 (즉 인간 가변 도메인과 인간 불변 도메인을 가진 항체)를 얻었다; 이 방식으로 생성된 예시적인 항체들을 H1H17134P, H1H17139P, H1H17142P, H1H17151P, H1H17161P, H1H17162P, H1H17193P, H1H17196P, H1H17199P, H1H17203P, H1H17214P, H1H17219P, H1H17223P 및 H1H17228P로서 표시하였다.

이 실시예의 방법에 따라 생성된 예시적인 항체들의 생물학적 특성을 아래에 나타낸 실시예들에서 상세하게 기술한다.

실시예 2: 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 및 뉴클레오티드 서열들

표 1은 발명의 선택된 항-에볼라 바이러스 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역들 및 CDR들의 아미노산 서열 식별자들을 나타낸다. 상응하는 핵산 서열 식별자들은 표 2에 나타낸다.

아미노산 서열 식별자

	SEQ ID NO:
항체 표시	HCVR	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCVR	LCDR1	LCDR2	LCDR3
H1H17134P	2	4	6	8	10	12	14	16
H1H17139P	18	20	22	24	26	28	30	32
H1H17142P	34	36	38	40	42	44	46	48
H1H17151P	50	52	54	56	58	60	62	64
H1H17161P	66	68	70	72	74	76	78	80
H1H17162P	82	84	86	88	90	92	94	96
H1H17193P	98	100	102	104	106	108	110	112
H1H17196P	114	116	118	120	122	124	126	128
H1H17199P	130	132	134	136	138	140	142	144
H1H17203P	146	148	150	152	154	156	158	160
H1H17214P	162	164	166	168	170	172	174	176
H1H17219P	178	180	182	184	186	188	190	192
H1H17223P	194	196	198	200	202	204	206	208
H1H17228P	210	212	214	216	218	220	222	224
H1H17354N	226	228	230	232	234	236	238	240
H1H17356N	242	244	246	248	250	252	254	256
H1H17357N	258	260	262	264	266	268	270	272
H1H17358N2	274	276	278	280	282	284	286	288
H1H17359N	290	292	294	296	298	300	302	304
H1H17360N	306	308	310	312	282	284	286	288
H1M17354N	226	228	230	232	234	236	238	240
H2aM17356N	242	244	246	248	250	252	254	256
H1M17357N	258	260	262	264	266	268	270	272
H2aM17358N	274	276	278	280	282	284	286	288
H2aM17359N	290	292	294	296	298	300	302	304
H2aM17360N	306	308	310	312	282	284	286	288

핵산 서열 식별자

	SEQ ID NO:
항체 표시	HCVR	HCDR1	HCDR2	HCDR3	LCVR	LCDR1	LCDR2	LCDR3
H1H17134P	1	3	5	7	9	11	13	15
H1H17139P	17	19	21	23	25	27	29	31
H1H17142P	33	35	37	39	41	43	45	47
H1H17151P	49	51	53	55	57	59	61	63
H1H17161P	65	67	69	71	73	75	77	79
H1H17162P	81	83	85	87	89	91	93	95
H1H17193P	97	99	101	103	105	107	109	111
H1H17196P	113	115	117	119	121	123	125	127
H1H17199P	129	131	133	135	137	139	141	143
H1H17203P	145	147	149	151	153	155	157	159
H1H17214P	161	163	165	167	169	171	173	175
H1H17219P	177	179	181	183	185	187	189	191
H1H17223P	193	195	197	199	201	203	205	207
H1H17228P	209	211	213	215	217	219	221	223
H1H17354N	225	227	229	231	233	235	237	239
H1H17356N	241	243	245	247	249	251	253	255
H1H17357N	257	259	261	263	265	267	269	271
H1H17358N2	273	275	277	279	281	283	285	287
H1H17359N	289	291	293	295	297	299	301	303
H1H17360N	305	307	309	311	281	283	285	287
H1M17354N	225	227	229	231	233	235	237	239
H2aM17356N	241	243	245	247	249	251	253	255
H1M17357N	257	259	261	263	265	267	269	271
H2aM17358N	273	275	277	279	281	283	285	287
H2aM17359N	289	291	293	295	297	299	301	303
H2aM17360N	305	307	309	311	281	283	285	287

항체는 본원에서 전형적으로 다음의 명명법을 따라 언급된다: Fc 접두사 (예컨대 "H1H", "H2M" 등), 이어서 숫자 식별자 (예컨대 "17139" "17161" 등, 표 1 또는 2에 나타낸 것과 같음), 이어서 "P", "P2", "N", N2 또는 "B" 접미사. 본원에서 사용된 항체 표시에 대해 H1H 및 H2M 접두사는 항체의 특별한 Fc 영역 아이소타입을 나타낸다. 그러므로, 이 명명법에 따르면, 항체는 본원에서 예컨대 "H1H17359N", "H2aM17359N" 등으로서 언급될 수 있다. 예를 들어, "H1M" 항체는 마우스 IgG1 Fc를 가지며, "H2M" 항체는 마우스 IgG2 Fc를 가진다 (a 또는 b 아이소타입) (모든 가변 영역은 항체 표시에서 제1 'H'에 의해 표시되는 바와 같이 전체 인간이다). 기술분야에 숙련된 사람에 의해 인지될 것과 같이, 특정 Fc 아이소타입을 가지는 항체는 상이한 Fc 아이소타입을 가지는 항체로 전환될 수 있지만 (예컨대 마우스 IgG1 Fc를 가지는 항체는 인간 IgG4를 가지는 항체 등으로 전환될 수 있다), 어떤 경우든 가변 도메인 (CDR을 포함하여) - 표 1 또는 2에 제시된 숫자 식별자에 의해 표시됨) -은 동일하게 유지될 것이고, 항원에 대한 결합 특성은 Fc 도메인의 성질과 관계없이 동일하거나 실질적으로 유사할 것으로 예상된다.

실시예 3: 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정되는 에볼라 바이러스 GP에 대한 항체 결합

A. 37℃에서의 pH 의존성 해리 상수

37℃에서 정제된 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체에 대한 에볼라 바이러스 GP 결합에 대한 결합 해리 속도 상수 (k _d) 및 해리 반감기 (t½)를 Biacore T200 기기 상에서 실시간 표면 플라즈몬 공명 바이오센서 분석을 사용하여 측정하였다. CM4 Biacore 센서 표면을 단클론성 마우스 항-인간 Fc 항체 (GE, # BR-1008-39) 또는 단클론성 염소 항-마우스 Fc 항체 (GE, # BR-1008-38)와의 아민 커플링에 의해 유도체화하여 정제된 항-에볼라 바이러스 GP mAb를 포획하였다. 실시예 3A에서 모든 Biacore 결합 연구는 pH 7.4, 6.0 및 5.0에서 0.01M Na₂HPO₄/NaH₂PO₄, 0.15M NaCl, 0.05% v/v 계면활성제 P20으로 구성된 완충액 (PBS-P 작동 완충액)에서 수행하였다. 낮은 pH 추적을 항체가 낮은 pH에서 결합을 유지하는 지를 평가하기 위하여 수행하였다. 이것은 바이러스가 엔도솜의 산성화 시에, 막 융합 중에 조우하게 될 조건을 모방할 것이다. PBS-P 작동 완충액 (90 nM 내지 11.1 nM 범위, 3-배 희석) 중에 제조된 C-말단 폴리히스티딘 태그 (EbolaGP.his; Sino Biologicals, 카탈로그 # 40442-V08B1)를 가지는, 상이한 농도의 에볼라 바이러스 GP를 항-에볼라 바이러스 GP mAb 포획된 표면 위로 25μL/분의 유량으로 주입하였다. 에볼라 바이러스 GP의 포획된 단클론성 항체에의 회합을 5분 동안 모니터링하고 PBS-P 작동 완충액 중의 에볼라 바이러스 GP의 해리를 6분 동안 모니터링하였다. 모든 해리 속도 상수 실험을 37℃에서 수행하였다. 동역학적 해리 (k _d) 속도 상수를 실시간 센소그램을 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 측정하였다. 해리성 반감기 (t½)를 다음과 같이 동역학적 속도 상수로부터 계산하였다:

.

37℃에서 정제된 항-에볼라 바이러스 GP mAb에 대한 에볼라 바이러스 GP 결합에 대한 해리 속도 매개변수들을 표 3에 나타낸다.

NB - 시험된 분석 조건하에서 검출 가능한 결합이 없음

B. 25℃ 및 37℃에서의 결합 친화성 및 동역학

정제된 항-에볼라 바이러스 GP mAb에 대한 에볼라 바이러스 GP 결합에 대한 평형 해리 상수 (K _D 값)를 Biacore 4000 기기를 사용하는 실시간 표면 플라주몬 공명 바이오센서를 사용하여 측정하였다. CM4 Biacore 센서 표면을 단클론성 마우스 항-인간 Fc 항체 (GE, # BR-1008-39) 또는 단클론성 염소 항-마우스 Fc 항체 (GE, # BR-1008-38)와의 아민 커플링에 의해 유도체화하여 정제된 항-에볼라 바이러스 GP mAb를 포획하였다. 실시예 3B에서 모든 Biacore 결합 연구는 0.01M HEPES pH 7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20으로 구성된 완충액 (HBS-ET 작동 완충액)에서 수행하였다. HBS-ET 작동 완충액 (90 nM 내지 3.3 nM 범위, 3-배 희석) 중에 제조된 C-말단 폴리히스티딘 태그 (Sino Biologicals, 카탈로그 # 40442-V08B1)를 가지는, 상이한 농도의 에볼라 바이러스 GP를 항-에볼라 바이러스 GP mAb 포획된 표면 위로 30μL/분의 유량으로 주입하였다. 에볼라 바이러스 GP의 포획된 단클론성 항체에의 회합을 5분 동안 모니터링하고 HBS-ET 작동 완충액 중의 에볼라 바이러스 GP의 해리를 10분 동안 모니터링하였다. 모든 결합 동역학 실험을 25℃ 및 37℃에서 수행하였다. 동역학적 결합 (k _a) 및 해리 (k _d) 속도 상수를 실시간 센소그램을 Scrubber 2.0c 곡선 피팅 소프트웨어를 사용하여 1:1 결합 모델에 맞춤으로써 측정하였다. 결합 해리 평형 상수 (K _D) 및 해리성 반감기 (t½)를 다음과 같이 동역학적 속도 상수로부터 계산하였다:

.

25℃ 및 37℃에서 정제된 항-에볼라 바이러스 GP mAb에 대한 에볼라 바이러스 GP 결합에 대한 결합 동역학적 매개변수들을 표 4A 및 4B에 나타낸다.

결과

상기 표 4A 및 4B에서 알 수 있는 것과 같이, 항체는 25℃에서 934 pM 내지 1890 nM 범위 및 37℃에서 227 pM 내지 2310 nM 범위의 K_D 값으로 에볼라 바이러스 GP에 결합하였다. pH 7.4에서, 항체는 25℃에서 3.0분 내지 1155분보다 큰 범위 및 37℃에서 2.0분 내지 1155분보다 큰 범위의 해리성 반감기 (t½)를 나타냈다. 낮은 pH에서 결합의 손실은 관찰되지 않았다. 여러 항체는 pH 7.4와 관련하여 낮은 pH에서 증가된 해리성 반감기 (t½)를 나타냈다. pH 5 및/또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½) 값에서 3-배 이상의 증가를 나타낸 항체들은 H1H17162P, H1H17177P, H1H17150P, H1H17151P, H1H17160P, H1H17161P, H1H17141P, H1H17139P, H1H17210P, H1H17203P, H1H17199P, H1M17348N, H1M17350N, H2aM17360N 및 H2aM17361N을 포함한다.

실시예 4: 에볼라 바이러스 위입자의 생성 및 중화 연구

에볼라 바이러스 위입자 (또한 바이러스 유사 입자, 또는 VLP로도 언급됨)를, 293T 세포를 에볼라 바이러스 GP를 발현하는 플라스미드 구성물, HIV 개그-pol 및 반딧불이 루시페라제를 코드화하는 HIV 프로바이러스 벡터의 혼합물로 공-트랜스펙션함으로써 생성하였다. 에볼라 바이러스 위입자를 함유하는 상층액을 트랜스팩션 후 48시간에 수득하고, 원심분리를 사용하여 정화한 후, 부분표본화하여 -80℃에서 냉동하였다. 대조 위입자를 에볼라 바이러스 GP를 발현하는 플라스미드를 수포성 구내염 바이러스 당단백질 (VSVg)을 코드화하는 플라스미드로 대체함으로써 생성하였다.

에볼라 위입자 -기반 중화 분석

상기 기술한 것과 같이 생성된 위입자를 중화 분석으로 시험하였다. 구체적으로, 항체의 희석을 에볼라 바이러스 위입자와 함께 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. Huh7 세포를 0.02M EDTA를 사용하여 분리시키고, 세척하고 항체/위입자 혼합물과 함께 72시간 동안 인큐베이션하였다. 감염 효율을 BrightGlo^® 루시페라제 분석 (Promega, San Luis Obispo, CA, USA)으로의 루시페라제 검출 및 광 생성에 대한 Victor^® X3 플레이트 판독기 (Perkin Elmer, Waltham, MA, USA)에서의 판독에 의해 정량하였다.

자이르 2014 VLP 중화

AB ID	상응하는 하이브리도마 Ab ID	자이르 2014 VLP의 중화제	IC50 (M)
H1H17134P		-	-
H1H17139P		-	-
H1H17142P		+	1.59E-09
H1H17151P		+	1.51E-09
H1H17161P		+	2.55E-10
H1H17162P		+	2.86E-10
H1H17193P		-	-
H1H17196P		+	1.68E-09
H1H17199P		-	-
H1H17203P		+	8.68E-10
H1H17214P		+	8.99E-10
H1H17219P		+	6.95E-10
H1H17223P		+	1.58E-09
H1H17228P		+	3.26E-09
H1M17354N	H1M17354N	-	-
H2aM17356N	H2aM17356N	+	4.77E-09
H1M17357N	H1M17357N	-	-
H2aM17358N	H2aM17358N	+	4.68E-09
H2aM17359N	H2aM17359N	+	3.36E-09
H2aM17360N	H2aM17360N	+	3.75E-09

상기 표 5에 나타낸 데이터는 본 발명의 20개의 항-에볼라 바이러스 항체 중 14개가, 본원에 기술된 실험 디자인을 사용하여, 약 10 ^- ¹¹ M 내지 약 10^- ⁹M 범위의 IC₅₀으로 감염성을 강력하게 중화하는 것을 보여준다.

실시예 5: 항-에볼라 바이러스 항체에 의한 항체-의존성 세포- 중재된 세포독성 (ADCC)

항체-의존성 세포-중재된 세포독성 (ADCC)을, 항체의 CD16 기반 리포터 시스템을 경유하여 신호하는 능력에 의해 시험하였다 (Promega ADCC 리포터 생체분석 코어 키트, San Luis Obispo, CA, USA). 에볼라 바이러스 GP-발현 293 세포를 시딩하였다. 하루 후에, fuc^- 세포주 (미국 특허 제 8409838호 참조)에서 생성된 희석된 항체 및 이펙터 세포 (1.5:1 이펙터 대 표적 비율)를 첨가하고 밤새 인큐베이션하였다. 리포터 활성을 BioGlo^® 루시페라제 분석 (Promega, San Luis Obispo, CA, USA) 및 광 생성에 대한 Victor^® X3 플레이트 판독기 (Perkin Elmer, Waltham, MA, USA)에서의 판독으로 측정하였다.

ADCC 결과

	ADCC 리포터 생체분석
Ab ID	클론ID	ADCC 활성
H1H17134P		+
H1H17139P		+
H1H17142P		+
H1H17151P		+
H1H17161P		-
H1H17162P		-
H1H17193P		+
H1H17196P		+
H1H17199P		+
H1H17203P		+
H1H17214P		+
H1H17219P		-
H1H17223P		+
H1H17228P		+
H1M17354N	HCAF05C08-22	+
H2aM17356N	HCAF08C07-09	+
H1M17357N	HCAF09D11-13	+
H2aM17358N	HCAF12C05-14	+
H2aM17359N	HCAF12C06-26	+
H2aM17360N	HCAF12G09-07	+

ADCC를 중재하는 항체의 능력을 아이소타입 (네거티브) 대조표준과 비교한 활성을 기준으로 계산하였다. 네거티브 대조표준보다 5배 더 큰 임의의 값을 포지티브로 간주하였다. 상기 표 6의 데이터는 20개의 항-에볼라 바이러스 항체 중재된 ADCC 중 17개를 나타낸다.

실시예 6: 옥텟 교차-경합

이전에 에볼라 바이러스 GP에 결합된 것으로 측정된 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체들 사이의 결합 경합을 옥텟 HTX 바이오센서 (ForteBio Corp., A Division of Pall Life Sciences) 상에서 실시간, 표지-유리 생체막 간섭측정 (BLI) 분석을 사용하여 측정하였다. 가용성 GP (sGP), GP1 또는 GP2에 대한 관련 대조표준의 결합을 동일한 분석 포맷으로 측정하였고 그것의 반응을 각각의 시험된 mAb에 대한 관심의 에볼라 바이러스 GP 시약으로부터 뺐다. 전체 실험을 25℃에서 0.01M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20, 1.0mg/mL BSA (Octet HBS-ET 완충액)로 구성된 완충액에서 1000 rpm의 속도로 플레이트를 흔들면서 수행하였다. 두 항체가 C-말단 폴리히스티딘 태그 (에볼라 바이러스 GP.h, Sino Biologicals Inc., 또한 GenBank AHX24649.1 및 SEQ ID NO: 314 참조)와 함께 발현된 에볼라 바이러스 GP 상에서 그들의 각각의 에피토프에 대한 결합에 대해 서로와 경합할 수 있는지를 평가하기 위하여, 대략 ~1.0 nm의 에볼라 바이러스 GP를, 먼저 바이오센서를 3분 동안 20 μg/mL의 에볼라 바이러스 GP 용액을 함유하는 웰에 침지함으로써 항-펜타-His 항체 코팅된 옥텟 바이오센서 (Fortebio Inc, # 18-5079) 상에 포획하였다. 다음에 항원-포획된 바이오센서를 50 μg/mL의 mAb01의 용액을 함유하고 있는 웰에 5분 동안 담금으로써 제1 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체 (계속해서 mAb-1로서 언급됨)로 포화시켰다. 다음에 바이오센서를 계속해서 50 μg/mL의 제2 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체 (계속해서 mAb-2로서 언급됨)를 함유하는 웰에 3분 동안 침지시켰다. 모든 바이오센서를 실험의 각 단계 사이에서 옥텟 HBS-ET 완충액으로 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험 과정 동안 모니터링하였고 매 단계가 끝날때 결합 반응을 기록하였다. mAb-1과 사전-복합체를 형성한 에볼라 바이러스 GP에 결합하는 mAb-2의 반응을 비교하였고 상이한 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체들의 경합/비-경합 행동방식을 50% 억제 한계값을 사용하여 측정하였다. 표 7은 결합 순서와 무관하게 양 방향으로 경합하는 항체의 관계를 명백하게 규정한다.

표 7에서 알 수 있는 것과 같이, 좌측 열은 AHC 옥텟 바이오센서를 사용하여 포획된 mAb1 항체를 나타내고 우측 열은 mAb1 항체와 교차-경합하는 항체 (mAb2)를 나타낸다.

에볼라 바이러스 GP에 대한 결합에 대한 항-에볼라 바이러스 GP 항체들의 교차-경합

AHC 옥텟 바이오센서를 사용하여 포획된 제1 mAb (mAb-1)	mAb-1과 경합하는 것으로 나타난 mAb-2 항체들
H1H17160P	H1H17160P, H1M17354N, H1M17357N, H1H17228P, H1H17203P
H1H17160P
H1M17354N
H1M17354N	H1H17160P, H1M17354N, H1M17357N, H1H17228P, H1H17203P
H1M17357N	H1H17160P, H1M17354N, H1M17357N, H1H17228P, H1H17203P
H1H17228P	H1H17160P, H1M17354N, H1M17357N, H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N
H1H17203P	H1H17160P, H1M17354N, H1M17357N, H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N
H1H17151P	H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17353N, H1H17223P, H1H17196P, H1H17193P
H1H17142P	H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1M17353N, H1H17223P, H1H17196P, H1H17193P
H1H17177P	H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17359N	H1H17228P, H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, 1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17141P, H1H17223P H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H1H17214P	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N H1H17141P, H1H17223P, H1H17139P H1H17193P, H1M17350N
H1H17199P	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17141P, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17358N	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17360N	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N H1M17353N, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H1M17352N	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17356N	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N H1M17353N, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17361N	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17139P, H1H17193P, H1M17350N
H2aM17355N	H1H17203P, H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N H1M17353N, H1H17193P, H1M17350N
H1H17211P	H1H17151P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N H1H17193P, H1M17350N
H1M17348N	H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17193P H1M17350N
H1M17353N	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P, H1H17193P
H1H17141P	H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H1M17353N H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P
H1H17223P	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1M17353N H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P
H1H17196P	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H1M17353N, H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P
H1H17139P	H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H1M17353N H1H17141P, H1H17223P, H1H17196P, H1H17139P
H1H17193P	H1H17151P, H1H17142P, H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N H2aM17355N, H1H17211P, H1M17348N, H1M17353N, H1H17193P, H1M17350N
H1M17350N	H1H17177P, H2aM17359N, H1H17214P, H1H17199P, H2aM17358N, H2aM17360N, H1M17352N, H2aM17356N, H2aM17361N, H2aM17355N H1H17211P, H1M17348N, H1H17193P, H1M17350N
H1H17219P	H1H17219P, H1H17150P, H1H17161P
H1H17150P	H1H17219P, H1H17150P, H1H17161P
H1H17161P	H1H17219P, H1H17150P, H1H17161P
H1M17349N	H1M17349N
H1H17134P	H1H17134P
H1H17162P	H1H17162P
H1H17210P	H1H17210P

실시예 7: 에볼라 바이러스 당단백질에 대한 H1H17203P , H1H17139P 및 H1H17161P의 순차적인 결합

교차-경합 실험으로부터 얻어진 정보를 고려하여, 순차적인 결합 연구를 실시하여 3개의 개별적인 후보 항체가 가용성 에볼라 바이러스 당단백질 (GP)에 동시에 결합할 수 있는지를 측정하였고, 그로써 에볼라 바이러스 GP 상의 결합 부위들이 각각의 단클론성 항체와 무관한 것을 확인하였다. 만약 그렇다면, 이 정보는 이들 항체의 치료용 칵테일에의 사용을 지지할 것이다.

따라서, 에볼라 바이러스 GP에 대한 3개의 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체, H1H17203P, H1H17139P 및 H1H17161P에 대한 순차적인 결합 실험을 에볼라 바이러스 GP에 대해 독립적으로 및 비-경합적으로 결합에 대해 시험하였다. 이 실험을 실시간, 표지-유리 생체막 간섭측정 (BLI) 분석을 사용하여 옥텟 RED 바이오센서 (ForteBio Corp., A Division of Pall Life Sciences) 상에서 실시하였다. 전체 실험을 25℃에서 0.01M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20, 1.0mg/mL BSA (Octet HBS-ET 완충액)로 구성된 완충액 중에서 플레이트를 1000 rpm의 속도에서 흔들면서 수행하였다. 세 개의 항체가 동시에 C-말단 폴리히스티딘 태그와 함께 발현된 포획된 항원 에볼라 바이러스 GP (에볼라 바이러스 GP.his, Sino Biologicals)에 동시에 결합할 수 있는지를 평가하기 위하여, 대략 ~0.6 nm의 에볼라 바이러스 GP.h를 먼저, 바이오센서를 3분 동안 20 μg/mL의 에볼라 바이러스 GP.h의 용액을 함유하고 있는 웰에 침지함으로써 항-펜타-His 항체 코팅된 옥텟 바이오센서 (Fortebio Inc, # 18-5079) 상에 포획하였다. 다음에 항원-포획된 바이오센서를, 50 μg/mL의 REGN H1H17161P의 용액을 함유하고 있는 웰에 5분 동안 담금으로써 제1 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체 (계속해서 H1H17161P로 언급됨)로 포화시켰다. 다음에 바이오센서를 50 μg/mL의 제2 항-에볼라 바이러스 GP 단클론성 항체 (계속해서 H1H17139P로 언급됨)의 용액을 함유하고 있는 웰에 5분 동안 침지하였다. 마지막으로, 50 μg/mL의 제3 항체 (계속해서 H1H17161P로 언급됨)를 5분 동안 주입하여 포화에 이르도록 하였다. 실시간 결합 반응을 실험 과정 동안 모니터링하였고 매 단계가 끝날때 결합 반응을 기록하였다.

결과

시험한 세 개의 후보 단클론성 항체는 에볼라 바이러스 GP에 동시에 결합할 수 있었고, 그것은 각 항체가 시험된 다른 항체의 에볼라 바이러스 GP 상의 결합 부위를 간섭하지 않는 것을 가리키고, 그것들이 각각 상이한 에피토프에 결합하거나 상호작용한 것을 시사한다. 이것은 이들 세 개의 항체의 치료용 항체 칵테일에서의 사용에 대한 역할을 지지한다.

실시예 8: 상이한 에볼라 바이러스 유사 입자 ( VLP ) 스트레인에 대한 항-에볼라 항체의 결합

항-에볼라 바이러스 GP 항체가 다른 에볼라 바이러스 스트레인들로부터의 GP를 함유하는 바이러스 유사 입자들 (VLP)과 반응할 수 있는지를 측정하기 위하여 연구를 수행하였다. 이 연구에는 분디부교 NC_014373, 코트디부아르 FJ217162, 수단 NC_006432, 자이르.1995, 자이르.2014 AY354458 및 네거티브 대조표준인 VSV 당단백질 (VSVg)로부터의 GP를 함유하는 VLP들이 포함되었다. 연구를 에볼라 스트레인 VLP들 (에볼라 당단백질/바이러스 표면 단백질을 발현함)의 탄소 표면에의 결합/고정을 허용하는 기술인 "MesoScale Discovery" (MSD)와 이어서 ELISA-형 결합 분석을 사용하여 시행하였다. 목적은 다양한 에볼라 스트레인들과 관련하여 mAb의 결합 프로파일을 확인하는 것이었다.

분석을 96 웰 폴리프로필렌 미세웰 플레이트에서 다양한 VLP/웰로부터의 상층액의 1:10 희석을 준비하고 (다음 표에서 나타냄) 그 희석을 PBS (50 μl/웰)에 첨가하고 4℃에서 밤새 인큐베이션함으로써 수행하였다.

웰 중의 액체를 버린 후 PBS + 2% BSA로 150 μl/웰로 차단하고 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 다음에 각 웰의 내용물을 버리고 웰을 MSD에 대해 표시된 AquaMax2000 플레이트 세척기를 사용하여 PBS로 세척하였다. 50 마이크로리터의 일차 항체를 PBS + 1% BSA에 희석하고 실온에서 중간 속도로 흔들면서 인큐베이션하였다 (5). 다음에 웰의 내용물을 버리고 플레이트를 PBS로 세척하였다. 각 웰에 PBS + 0.5% BSA 중의 1 μg/ml 농도의 50 마이크로리터의 설포-TAG 검출 시약 (인간 또는 마우스 Fc)을 첨가하고 실온에서 1시간 동안 중간 속도로 흔들면서 인큐베이션하였다 (5). 웰의 내용물을 버리고 플레이트를 PBS + 0.5% BSA로 세척하였다. 각 웰에 계면활성제가 없는 150 μl의 1X 판독 완충액을 첨가하고 플레이트를 바코드로부터 SECTORImager6000 상에서 판독하였다.

아래의 표 8에 나타낸 결과는, 시험한 항-에볼라 바이러스 GP 항체가 모두 자이르 2014 및 자이르 1995 GP를 함유한 VLP에 결합했음을 나타냈다. 시험한 항체 중 어떤 것은 표 8에서 표시된 두 개의 자이르 스트레인에 결합하는 것에 더불어, 다른 에볼라 바이러스 스트레인으로부터의 GP를 함유하는 VLP에 결합하였다. 특히, 자이르 2014 및 자이르 1995로부터의 GP를 함유하는 VLP에 결합하는 것에 더불어, H1H17161P 및 H1H17162P로 표시된 항-에볼라 바이러스 항체들은 수단 및 분디부교 스트레인들로부터의 GP를 함유한 VLP에 결합한 한편, H2aM17356N 및 H1H17142P로서 표시된 항-에볼라 바이러스 항체들은 분디부교 및 코트디부아르 스트레인들에 결합하였다.

	다양한 에볼라 바이러스 스트레인으로부터의 GP를 함유하는 VLP에 대한 항-에볼라 바이러스 항체 결합
AbPID	수단	분디부교	코트디부아르	자이르 2014	자이르 1995
H1H17161P	+	+	-	+	+
H1H17139P	-	-	-	+	+
H1H17203P	-	-	-	+	+
H1H17219P	-	-	-	+	+
H1H17162P	+	+	-	+	+
H1H17199P	-	-	-	+	+
H1H17193P	-	-	-	+	+
H1M17354N	-	-	-	+	+
H1M17457N	-	-	-	+	+
H1H17134P	-	-	-	+	+
H1H17360N	-	-	-	+	+
H1H17358N2	-	-	-	+	+
H2aM17356N	-	+	+	+	+
H1H17223P	-	-	-	+	+
H1H17196P	-	-	-	+	+
H1H17151P	-	-	-	+	+
H1H17142P	-	+	+	+	+
H1H17214P	-	-	-	+	+
H1H17228P	-	-	-	+	+
H2aM17359N	-	-	-	+	+

실시예 9. 생/감염성 에볼라 바이러스 ( EBOV )의 시험관 내 중화

H1H17203P, H1H17139P 및 H1H17161P로서 표시된 항체들을 베로 세포에서 감염성 EBOV를 중화시키는 능력에 대해 분석하였다. 베로 세포를 384-웰 플레이트에 DMEM-10% FBS 중에 플레이팅하고 37℃에서 대략 75%의 집밀도로 성장시켰다. H1H17203P, H1H17139P 및 H1H17161P를 표시된 것과 같이 희석하였다. EBOV 스트레인들 (마이잉가 (Mayinga), 키크위트 (Kikwit), 마코나 (Makona) 및 기니아 피그-적응된 마이잉가)을 해동하고 대FIR 0.01 내지 0.1 사이의 MOI로 희석하였다. KZ52로 표시된 상업적으로 입수 가능한 항-EBOV 항체를 포지티브 대조표준으로서 사용하였다 (Maruyama, T. et al., J Virol 73, 6024-6030 (1999) 참조). 항체를 바이러스와 함께 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 다음에 항체/바이러스 혼합물을 사전-플레이팅된 세포에 첨가하고 플레이트를 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간이 지난 후, 플레이트를 인큐베이터에서 제거하고 10%의 중성 완충된 포르말린에 담금으로써 비활성화하고, 열 밀봉된 주머니에 넣고 4℃에서 밤새 BSL-4에서 보관하였다. 플레이트를 1X-PBS에서 3회 세척하고 세포를 실온 (RT)에서 25 μl의 1X-PBS 중의 0.1% 트리톤 X-100으로 15 내지 20분 동안 투과성으로 만들었다. 트리톤-X를 버리고 플레이트를 1X-PBS 중의 3.5% BSA로 1시간 동안 RT에서 차단시켰다. 플레이트를 밤새 4℃에서 1X-PBS에 1:1500으로 희석된 항-EBOV GP 일차 항체 4F3 (IBT BIOSERVICES, 마우스 항-EBOV GP 단클론성 항체 4F3에 대해, 카탈로그 번호 0201-020 참조)으로 처리하였다. 플레이트를 1X-PBS로 10 내지 15분 동안 세척하고 2회 반복하였다. 세포를 1시간 동안 Alexa-플루오르-488 콘쥬게이트된 항-마우스 이차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 이차 항체를 버리고 플레이트를 1X-PBS로 10 내지 15분 동안 세척하고 2회 반복하였다. 플레이트를 25 μl/웰의 Hoechst (1X-PBS 중에 1:50,000)와 함께 30분 동안 RT에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 형광 현미경에 의해 청색 및 녹색 형광 채널을 사용하여 영상화하였다.

결과

도 1에 나타낸 결과는, H1H17161P 항체가 생 바이러스를 중화시켰고 포지티브 대조표준 항체 KZ52보다 더 강력하였지만, H1H17203P 및 H1H17139P로 표시된 항체들은 중화제로서 작용하지 못하였음을 나타냈다.

실시예 10: 가용성 GP ( sGP )에 대한 항-에볼라 항체의 결합

EBOV 게놈의 네 번째 유전자는 두 개의 독특한 단백질, sGP로 명명된 비-구조적, 이량체 분비된 당단백질과, 삼량체, 비리온-부착된, 엔벨로프 당단백질 (GP)을 코드화한다. 이들 두 개의 GP는 처음 295 아미노산을 공유하지만, 독특한 C 말단을 가진다. 리제네론 리드 mAb가 sGP에 결합하는지를 측정하기 위하여, 재조합 sGP.mmh 단백질을 내부적으로 (in-house) 제조하였다 (SEQ ID NO: 317). 간섭측정 기반 바이오센서 옥텟 HTX를 사용하여 H1H17203P, H1H17139P, H1H17161P 단클론성 항체가 에볼라 sGP.mmh 단백질에 결합할 수 있는지를 측정하였다. 분석 포맷은 H1H17203P, H1H17139P, H1H17161P를 항-hFc 센서 팁 상에 포획하고, 이어서 300 nM 용액의 에볼라 GP.10xhis (SEQ ID NO: 318), sGP.mmh (SEQ ID NO: 317) 또는 hCNTFR (모양체 호중구 인자 수용체.mmh, 네거티브 대조 단백질임)에 침지하였다. 각 mAb를 0.94 내지 1.36 nm의 수준에서 포획하였다.

도 2에서 알 수 있는 것과 같이, 모든 mAb는 에볼라 GP.10xhis에 대한 특이적 결합을 나타냈고 네거티브 대조 단백질에 대해서는 결합하지 않았다; 반면, 단지 H1H17139만이 에볼라 sGP.mmh에 대해 특이적인 결합을 나타냈다. 이런 발견은 H1H17139의 결합 에피토프가 sGP 및 GP 둘다의 처음 295 아미노산 내의 공통 영역에 위치하고; 반면 다른 mAb는 아마도 에볼라 GP의 C-말단을 인지할 뿐인 것으로 보인다.

실시예 11: 에볼라 GP .h, 에볼라 GP 가용성.mmh 및 hCNTFR . mmh에 대한 추가의 항-EBOV GP 항체들의 결합

발명의 추가의 항-EBOV GP 항체의 결합 특성을 측정하기 위하여 추가의 연구를 시행하였다: 특히, 연구를 이들 추가의 항체가 가용성 GP 및 GP에 결합하는 능력을 측정하기 위해 시행하였다. 이 연구를 실시간, 표지-유리 생체막 간섭측정 (BLI) 분석을 사용하여 옥텟 HTX 바이오센서 (ForteBio Corp., A Division of Pall Life Sciences) 상에서 시행하였다. 전체 실험을 25℃에서 0.01M HEPES pH7.4, 0.15M NaCl, 3mM EDTA, 0.05% v/v 계면활성제 P20, 1.0mg/mL BSA (Octet HBS-ET 완충액)로 구성된 완충액 중에서 1000 rpm의 속도로 플레이트를 흔들면서 수행하였다. 항체가 에볼라 sGP 또는 다른 에볼라 GP 시약에 결합할 수 있는지를 평가하기 위하여, 대략 ~1.0 nm의 항-에볼라 GP mAb를, 20 μg/mL의 mAb 용액을 함유하고 있는 웰에 3분 동안 바이오센서를 침지함으로써 항-인간 Fc (Fortebio Inc, # 18-5064) 항체 코팅된 옥텟 바이어센서 상에 포획하였다. mAb-포획된 바이오센서를 300 nM 용액의 에볼라 GP 단백질 또는 무관한 대조표준을 함유하고 있는 웰에 5분 동안 침지함으로써 선택된 단백질 시약에 대한 결합에 대해 시험하였다. 모든 바이오센서를 실험의 각 단계 사이에 옥텟 HBS-ET 완충액으로 세척하였다. 실시간 결합 반응을 실험 과정 중에 모니터링하였고 매 단계가 끝날 때 결합 반응을 기록하였다.

결과

표 9에서 알 수 있는 것과 같이, 1.10 nm 아래의 임의의 값을 비-결합 항체인 것으로 측정하였다. 지금까지의 결과를 기반으로, 시험한 항체 중 하나 ()를 제외한 모든 항체는 EBOV 전체 길이 GP에 대한 결합을 나타냈고, 시험한 20개 항체 중 13개가 가용성 GP (sGP)에 대한 결합을 나타냈다.

에볼라 GP.h., 에볼라 GP 가용성.mmh 및 hCNTFR.mmh에 대한 항-에볼라 항체의 결합

항체 번호	sGP에 대한 결합	300 nM 에볼라 sGP (F2) 결합 (nm)	300 nM 에볼라 GP.h 결합 (nm)	300 nM hCNTFR . mmh (네거티브 대조표준 결합 ( nm)
H1H17161P	아니오	0.00	0.55	-0.01
H1H17139P	예	0.19	0.55	0.01
H1H17203P	아니오	0.02	0.61	0.01
H1H17219P	아니오	0.01	0.68	0.01
H1H17162P	아니오	0.03	0.49	0.02
H1H17199P	예	0.33	0.38	0.00
H1H17193P	예	0.26	0.33	0.02
H1M17354N	예	0.18	0.71	0.02
H1M17357N	아니오	0.10	0.56	0.01
H1H17134P	아니오	0.01	0.70	-0.01
H1H17360N	아니오	0.09	0.09	0.03
H1H17358N2	예	0.30	0.35	0.01
H1H17356N	예	0.22	0.23	0.02
H1H17223P	예	0.31	0.61	0.02
H1H17196P	예	0.25	0.62	0.01
H1H17151P	예	0.33	0.43	-0.02
H1H17142P	예	0.28	0.34	0.01
H1H17214P	예	0.38	0.52	0.01
H1H17228P	예	0.35	0.58	0.00
H1H17359N	예	0.39	0.51	0.00

SEQUENCE LISTING <110> Regeneron Pharmaceuticals, Inc. <120> Human Antibodies to Ebola Virus Glycoprotein <130> 10139WO01 <150> 62/107,581 <151> 2015-01-26 <150> 62/161,356 <151> 2015-05-14 <150> 62/245,703 <151> 2015-10-23 <160> 318 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 342 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 1 cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc agtagtagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggagtatct attatgatgg ggacacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaggc tgagctctgt gaccgccgca gacacggcag tgtattactg tgcgagacag 300 tttgactact ggggccaggg aaccctggtc accgtctcct ca 342 <210> 2 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 2 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser 20 25 30 Ser Tyr Tyr 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gtctggagtg ggtctcagct attggtactg ctggtgacac atactatcca 180 ggctccgtga agggccgatt caccatctcc agagaaaatg ccaaaaactc cttgtatctt 240 caaatgaaca gcctgagagc cggggacacg gctgtgtatt actgtgcaag aacatggttc 300 ggggagcttt actttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 18 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 18 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Thr Trp Phe Gly Glu Leu Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic <400> 19 ggattcacct 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665 670 Lys Phe Val Phe 675 <210> 315 <211> 676 <212> PRT <213> Ebola virus <400> 315 Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15 Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser 20 25 30 Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val 35 40 45 Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg 50 55 60 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 65 70 75 80 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95 Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 115 120 125 Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 130 135 140 Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 145 150 155 160 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 165 170 175 Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp 180 185 190 Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 195 200 205 Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 225 230 235 240 Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu 245 250 255 Asn Glu Thr Ile Tyr Ala Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys 260 265 270 Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 275 280 285 Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Asn Leu Thr Arg Lys Ile Arg Ser Glu 290 295 300 Glu Leu Ser Phe Thr Ala Val Ser Asn Gly Pro Lys Asn Ile Ser Gly 305 310 315 320 Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Glu Thr Asn Thr Thr Asn 325 330 335 Glu Asp His Lys Ile Met Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala Met Val Gln 340 345 350 Val His Ser Gln Gly Arg Lys Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu 355 360 365 Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gln Pro Pro Thr Thr Lys Thr Gly Pro 370 375 380 Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu 385 390 395 400 Ala Thr Gln Val Gly Gln His His Arg Arg Ala Asp Asn Asp Ser Thr 405 410 415 Ala Ser Asp Thr Pro Pro Ala Thr Thr Ala Ala Gly Pro Leu Lys Ala 420 425 430 Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Ala Asp Ser Leu Asp Leu Ala Thr 435 440 445 Thr Thr Ser Pro Gln Asn Tyr Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr 450 455 460 His His Gln Asp Thr Gly Glu Glu Ser Ala Ser Ser Gly Lys Leu Gly 465 470 475 480 Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly 485 490 495 Arg Arg Thr Arg Arg Glu Val Ile Val Asn Ala Gln Pro Lys Cys Asn 500 505 510 Pro Asn Leu His Tyr Trp Thr Thr Gln Asp Glu Gly Ala Ala Ile Gly 515 520 525 Leu Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ile Tyr Thr 530 535 540 Glu Gly Leu Met His Asn Gln Asp Gly Leu Ile Cys Gly Leu Arg Gln 545 550 555 560 Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr 565 570 575 Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe 580 585 590 Leu Leu Gln Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys 595 600 605 Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp 610 615 620 Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp 625 630 635 640 Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln Trp Ile Pro Ala Gly Ile 645 650 655 Gly Val Thr Gly Val Ile Ile Ala Val Ile Ala Leu Phe Cys Ile Cys 660 665 670 Lys Phe Val Phe 675 <210> 316 <211> 364 <212> PRT <213> Ebola virus <400> 316 Met Gly Val Thr Gly Ile Leu Gln Leu Pro Arg Asp Arg Phe Lys Arg 1 5 10 15 Thr Ser Phe Phe Leu Trp Val Ile Ile Leu Phe Gln Arg Thr Phe Ser 20 25 30 Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val 35 40 45 Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg 50 55 60 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 65 70 75 80 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 85 90 95 Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 100 105 110 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 115 120 125 Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 130 135 140 Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 145 150 155 160 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 165 170 175 Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp 180 185 190 Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 195 200 205 Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly 210 215 220 Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 225 230 235 240 Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu 245 250 255 Asn Glu Thr Ile Tyr Ala Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys 260 265 270 Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 275 280 285 Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Thr Ser Leu Glu Lys Phe Ala Val Lys 290 295 300 Ser Cys Leu Ser Gln Leu Tyr Gln Thr Asp Pro Lys Thr Ser Val Val 305 310 315 320 Arg Val Arg Arg Glu Leu Leu Pro Thr Gln Arg Pro Thr Gln Gln Met 325 330 335 Lys Thr Thr Lys Ser Trp Leu Gln Lys Ile Pro Leu Gln Trp Phe Lys 340 345 350 Cys Thr Val Lys Glu Gly Lys Leu Gln Cys Arg Ile 355 360 <210> 317 <211> 360 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aa 1-332: Zaire_Ebola_GP aa 33 through 364 of AHX24650 aa 333-360: myc-myc-hexahistidine tag <400> 317 Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val 1 5 10 15 Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg 20 25 30 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 35 40 45 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 50 55 60 Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 65 70 75 80 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 85 90 95 Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 100 105 110 Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 115 120 125 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 130 135 140 Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp 145 150 155 160 Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 165 170 175 Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly 180 185 190 Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 195 200 205 Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu 210 215 220 Asn Glu Thr Ile Tyr Ala Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys 225 230 235 240 Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 245 250 255 Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Thr Ser Leu Glu Lys Phe Ala Val Lys 260 265 270 Ser Cys Leu Ser Gln Leu Tyr Gln Thr Asp Pro Lys Thr Ser Val Val 275 280 285 Arg Val Arg Arg Glu Leu Leu Pro Thr Gln Arg Pro Thr Gln Gln Met 290 295 300 Lys Thr Thr Lys Ser Trp Leu Gln Lys Ile Pro Leu Gln Trp Phe Lys 305 310 315 320 Cys Thr Val Lys Glu Gly Lys Leu Gln Cys Arg Ile Glu Gln Lys Leu 325 330 335 Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu 340 345 350 Asp Leu His His His His His His 355 360 <210> 318 <211> 628 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> aa 1-618: Zaire ebolavirus (strain H.sapiens-wt/GIN/2014/Kissidougou-C15) GP (aa 33 through 650 (AHX24649.1)) aa 619-628: decahistidine tag <400> 318 Ile Pro Leu Gly Val Ile His Asn Ser Thr Leu Gln Val Ser Asp Val 1 5 10 15 Asp Lys Leu Val Cys Arg Asp Lys Leu Ser Ser Thr Asn Gln Leu Arg 20 25 30 Ser Val Gly Leu Asn Leu Glu Gly Asn Gly Val Ala Thr Asp Val Pro 35 40 45 Ser Ala Thr Lys Arg Trp Gly Phe Arg Ser Gly Val Pro Pro Lys Val 50 55 60 Val Asn Tyr Glu Ala Gly Glu Trp Ala Glu Asn Cys Tyr Asn Leu Glu 65 70 75 80 Ile Lys Lys Pro Asp Gly Ser Glu Cys Leu Pro Ala Ala Pro Asp Gly 85 90 95 Ile Arg Gly Phe Pro Arg Cys Arg Tyr Val His Lys Val Ser Gly Thr 100 105 110 Gly Pro Cys Ala Gly Asp Phe Ala Phe His Lys Glu Gly Ala Phe Phe 115 120 125 Leu Tyr Asp Arg Leu Ala Ser Thr Val Ile Tyr Arg Gly Thr Thr Phe 130 135 140 Ala Glu Gly Val Val Ala Phe Leu Ile Leu Pro Gln Ala Lys Lys Asp 145 150 155 160 Phe Phe Ser Ser His Pro Leu Arg Glu Pro Val Asn Ala Thr Glu Asp 165 170 175 Pro Ser Ser Gly Tyr Tyr Ser Thr Thr Ile Arg Tyr Gln Ala Thr Gly 180 185 190 Phe Gly Thr Asn Glu Thr Glu Tyr Leu Phe Glu Val Asp Asn Leu Thr 195 200 205 Tyr Val Gln Leu Glu Ser Arg Phe Thr Pro Gln Phe Leu Leu Gln Leu 210 215 220 Asn Glu Thr Ile Tyr Thr Ser Gly Lys Arg Ser Asn Thr Thr Gly Lys 225 230 235 240 Leu Ile Trp Lys Val Asn Pro Glu Ile Asp Thr Thr Ile Gly Glu Trp 245 250 255 Ala Phe Trp Glu Thr Lys Lys Asn Leu Thr Arg Lys Ile Arg Ser Glu 260 265 270 Glu Leu Ser Phe Thr Val Val Ser Asn Gly Ala Lys Asn Ile Ser Gly 275 280 285 Gln Ser Pro Ala Arg Thr Ser Ser Asp Pro Gly Thr Asn Thr Thr Thr 290 295 300 Glu Asp His Lys Ile Met Ala Ser Glu Asn Ser Ser Ala Met Val Gln 305 310 315 320 Val His Ser Gln Gly Arg Glu Ala Ala Val Ser His Leu Thr Thr Leu 325 330 335 Ala Thr Ile Ser Thr Ser Pro Gln Ser Leu Thr Thr Lys Pro Gly Pro 340 345 350 Asp Asn Ser Thr His Asn Thr Pro Val Tyr Lys Leu Asp Ile Ser Glu 355 360 365 Ala Thr Gln Val Glu Gln His His Arg Arg Thr Asp Asn Asp Ser Thr 370 375 380 Ala Ser Asp Thr Pro Ser Ala Thr Thr Ala Ala Gly Pro Pro Lys Ala 385 390 395 400 Glu Asn Thr Asn Thr Ser Lys Ser Thr Asp Phe Leu Asp Pro Ala Thr 405 410 415 Thr Thr Ser Pro Gln Asn His Ser Glu Thr Ala Gly Asn Asn Asn Thr 420 425 430 His His Gln Asp Thr Gly Glu Glu Ser Ala Ser Ser Gly Lys Leu Gly 435 440 445 Leu Ile Thr Asn Thr Ile Ala Gly Val Ala Gly Leu Ile Thr Gly Gly 450 455 460 Arg Arg Thr Arg Arg Glu Ala Ile Val Asn Ala Gln Pro Lys Cys Asn 465 470 475 480 Pro Asn Leu His Tyr Trp Thr Thr Gln Asp Glu Gly Ala Ala Ile Gly 485 490 495 Leu Ala Trp Ile Pro Tyr Phe Gly Pro Ala Ala Glu Gly Ile Tyr Ile 500 505 510 Glu Gly Leu Met His Asn Gln Asp Gly Leu Ile Cys Gly Leu Arg Gln 515 520 525 Leu Ala Asn Glu Thr Thr Gln Ala Leu Gln Leu Phe Leu Arg Ala Thr 530 535 540 Thr Glu Leu Arg Thr Phe Ser Ile Leu Asn Arg Lys Ala Ile Asp Phe 545 550 555 560 Leu Leu Gln Arg Trp Gly Gly Thr Cys His Ile Leu Gly Pro Asp Cys 565 570 575 Cys Ile Glu Pro His Asp Trp Thr Lys Asn Ile Thr Asp Lys Ile Asp 580 585 590 Gln Ile Ile His Asp Phe Val Asp Lys Thr Leu Pro Asp Gln Gly Asp 595 600 605 Asn Asp Asn Trp Trp Thr Gly Trp Arg Gln His His His His His His 610 615 620 His His His His 625

Claims

에볼라 바이러스 (EBOV) 및/또는 에볼라 바이러스 당단백질 (EBOV-GP)에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, 항체는:
(a) SEQ ID NO: 18, 66, 146, 2, 34, 50, 82, 98, 114, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290 및 306으로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 서열들 중 어느 하나에 함유된 세 개의 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR)(HCDR1, HCDR2 및 HCDR3); 및 SEQ ID NO: 26, 74, 154, 10, 42, 58, 90, 106, 122, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282 및 298로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 (LCVR) 서열들 중 어느 하나에 함유된 세 개의 경쇄 CDR (LCDR1, LCDR2 및 LCDR3)을 포함한다;
(b) 전체 인간 단클론성 항체이다;
(c) 표면 플라즈몬 공명 분석으로 측정되는 바, 10^-7M 미만의 해리 상수 (K_D)로 EBOV, 또는 EBOV-GP를 발현하는 바이러스 유사 입자 (VLP)에 결합한다;
(d) pH 7.4에 관련하여 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3배 증가를 보인다;
(e) 약 10 ^- ¹¹ M 내지 약 10^- ⁹M의 범위의 IC50으로 자이르 에볼라 바이러스의 중화를 보인다;
(f) 항체-의존성 세포의 세포독성을 촉발하는 EBOV-GP를 발현하는 세포에 대한 결합을 보인다;
(g) 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르로 구성되는 군으로부터 선택된 EBOV의 하나 이상의 스트레인과 교차 반응한다;
(h) 가용성 GP (sGP)에 결합한다;
(i) 기준 항체와 교차-경합하고, 여기서 기준 항체는 표 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열을 포함한다는 특징들 중 하나 이상을 가지는, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
에볼라 바이러스 (EBOV) 및/또는 에볼라 바이러스 당단백질 (EBOV-GP)에 특이적으로 결합하는 분리된 재조합 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, 항체는:
(a) 전체 인간 단클론성 항체이다;
(b) 표면 플라즈몬 공명 분석으로 측정되는 바, 10^-7M 미만의 해리 상수 (K_D)로 EBOV, 또는 EBOV-GP를 발현하는 바이러스 유사 입자 (VLP)에 결합한다;
(c) pH 7.4에 관련하여 pH 5 또는 pH 6에서 해리성 반감기 (t½)의 적어도 3배 증가를 보인다;
(d) 약 10 ^- ¹¹ M 내지 약 10^- ⁹M의 범위의 IC50으로 자이르 에볼라 바이러스의 중화를 보인다;
(e) 항체-의존성 세포의 세포독성을 촉발하는 EBOV-GP를 발현하는 세포에 대한 결합을 보인다;
(f) 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르로 구성되는 군으로부터 선택된 EBOV의 하나 이상의 스트레인과 교차 반응한다;
(g) 가용성 GP (sGP)에 결합한다;
(h) 기준 항체와 교차-경합하며, 여기서 기준 항체는 표 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열을 포함한다는 특징들 중 둘 이상을 가지는, 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 또는 제2 항에 있어서, SEQ ID NO: 18, 66, 146, 2, 34, 50, 82, 98, 114, 130, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290 및 306으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제3 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 26, 74, 154, 10, 42, 58, 90, 106, 122, 138, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282 및 298로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCVR을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제4 항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) SEQ ID NO: 20, 68, 148, 4, 36, 52, 84, 100, 116, 132, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292 및 308로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR1 도메인;
(b) SEQ ID NO: 22, 70, 150, 6, 38, 54, 86, 102, 118, 134, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294 및 310으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR2 도메인;
(c) SEQ ID NO: 24, 72, 152, 8, 40, 56, 88, 104, 120, 136, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296 및 312로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 HCDR3 도메인;
(d) SEQ ID NO: 28, 76, 156, 12, 44, 60, 92, 108, 124, 140, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284 및 300으로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR1 도메인;
(e) SEQ ID NO: 30, 78, 158, 14, 46, 62, 94, 110, 126, 142, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286 및 302로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR2 도메인;
(f) SEQ ID NO: 32, 80, 160, 16, 48, 64, 96, 112, 128, 144, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288 및 304로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지는 LCDR3 도메인
을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 18/26, 66/74, 146/154, 2/10, 34/42, 50/58, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 20의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 22의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 24의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 28의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 30의 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 68의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 70의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 72의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 76의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 78의 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 80의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ ID NO: 148의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 150의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 152의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 156의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 158의 LCDR2 아미노산 서열; 및 SEQ ID NO: 160의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
EBOV 및/또는 EBOV GP에 대한 결합에 대해 HCVR의 CDR들, 및 LCVR의 CDR들을 포함하는 기준 항체 또는 항원-결합 단편과 경합하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, HCVR은 표 1에 열거된 HCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 가지고; LCVR은 표 1에 열거된 LCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
HCVR의 CDR들, 및 LCVR의 CDR들을 포함하는 기준 항체 또는 항원-결합 단편과 동일한 EBOV 및/또는 EBOV GP 상의 에피토프에 결합하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편으로서, HCVR은 표 1에 열거된 HCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고; LCVR은 표 1에 열거된 LCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편.
제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체는 에볼라 바이러스의 숙주 세포에의 부착 및/또는 숙주 세포 안으로의 유입을 방지하는 것을 특징으로 하는 분리된 항체.
감염성 EBOV를 중화시키는 방법으로서,
EBOV로 감염된 세포를 제1 항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따르는 하나 이상의 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물에 노출시키는 단계를 포함하고,
노출은 바이러스 감염으로부터 또는 세포 사멸로부터 세포의 증대된 보호를 초래하는 방법.
제13 항에 있어서, 감염성 EBOV는 시험관 내에서 또는 생체 내에서 중화되는 것을 특징으로 하는 방법.
제13 항에 있어서, 증대된 보호는 항체가 단독으로 사용될 때, 또는 하나 이상의 추가의 치료제 또는 항-EBOV 치료 양식과 조합되어 사용될 때 관찰되는 것을 특징으로 하는 방법.
제15 항에 있어서, 하나 이상의 추가의 치료제는 항-바이러스 약물, 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증성 약물), EBOV에 대한 상이한 항체, EBOV용 백신, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (EBOV VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제15 항에 있어서, 하나 이상의 추가의 치료제는 하나 이상의 항-EBOV 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제17 항에 있어서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 표 1의 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열들 중 어느 것으로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR 및 LCVR 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제18 항에 있어서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제19 항에 있어서, 하나 이상의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역 (HCVR) 및 경쇄 가변 영역 (LCVR) 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 따르는 EBOV에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물.
제21 항에 있어서, 하나 이상의 분리된 항체는 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제22 항에 있어서, HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74, 146/154, 2/10, 34/42, 50/58, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298 및 306/282로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제23 항에 있어서, HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍은 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 따르는, (a) 제1 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; (b) 제2 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편; 및 (c) 제3 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 및 (d) 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물로서, 제1 항체는 EBOV 상의 제1 에피토프에 결합하거나 상호작용하며, 제2 및/또는 제3 항체는 EBOV 상의 상이한 에피토프에 결합하거나 상호작용하는, 제약학적 조성물.
제25 항에 있어서, 제1, 제2 및 제3 항-EBOV 항체는 표 1에 열거된 HCVR 및 LCVR 서열들로 구성되는 군으로부터 선택된 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제25 항에 있어서, 제1, 제2 및/또는 제3 항-EBOV 항체 또는 그것들의 항원-결합 단편에 결합하는 또는 상호작용하는 에피토프는 구별되고 중복되지 않는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제25 항에 있어서, 제1 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 EBOV의 한 스트레인 상의 한 에피토프에 결합하거나 상호작용하고 제2 및/또는 제3 항-EBOV 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 EBOV의 동일한 스트레인 또는 상이한 스트레인 상의 제2 및/또는 제3 에피토프에 결합하거나 상호작용하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제28 항에 있어서, EBOV 스트레인은 자이르.2014, 자이르.1995, 수단, 분디부교 및 코트디부아르 스트레인으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
EBOV에 특이적으로 결합하는 제1 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 및 제약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 포함하는 제약학적 조성물로서, 제1 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 20의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 22의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 24의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 28의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 30의 LCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 32의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는, 제약학적 조성물.
제30 항에 있어서, EBOV에 특이적으로 결합하는 제2 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 더 포함하고, 제2 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 68의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 70의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 72의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 76의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 78의 LCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 80의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제31 항에 있어서, EBOV에 특이적으로 결합하는 제3 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 더 포함하고, 제3 분리된 단클론성 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 148의 HCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 150의 HCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 152의 HCDR3 아미노산 서열; SEQ ID NO: 156의 LCDR1 아미노산 서열; SEQ ID NO: 158의 LCDR2 아미노산 서열; SEQ ID NO: 160의 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.
제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 기술된 항체의 HCVR, 및/또는 LCVR을 코드화하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오티드 분자.
제33 항의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 벡터.
제34 항의 벡터를 발현하는 세포.
EBOV 감염의 적어도 하나의 증상을 예방, 치료 또는 개선시키거나, 또는 EBOV 감염의 적어도 하나의 증상의 빈도 또는 심각성을 감소시키는 방법으로서, 제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 또는 제21 항 내지 제31 항 중 어느 한 항의 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제36 항에 있어서, 적어도 두 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제36 항 또는 제37 항에 있어서, 세 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함하고, 세 개의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154에 나타낸 것과 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제36 항에 있어서, 적어도 하나의 증상은 열, 두통, 피로, 식욕 상실, 근육통, 설사, 구토, 복통, 탈수 및 설명되지 않는 출혈로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제36 항에 있어서, 제약학적 조성물은 그것을 필요로 하는 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제40 항에 있어서, 필요로 하는 대상체는 EBOV로 감염된 대상체, 또는 EBOV에 노출되었거나, 노출 위험이 있거나, EBOV 감염을 획득할 위험이 있는 대상체이고, 대상체는 면역손상된 개인, 의료계 종사자, 에볼라 바이러스를 잠복시키고 있는 사람에게 노출된 적이 있는 것으로 추정되는 사람, 감염된 개인과 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접한 사람, 병원 직원, 제약 연구원, 에볼라 환자가 치료받았던 병원 시설 또는 기관을 청소하는 데 종사하는 유지 요원, EBOV가 발생한 것으로 알려졌거나 발생한 것으로 의심되는 지역 또는 나라를 방문하였거나 방문할 계획이 있는 개인들 및 항공사 단골 고객으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제36 항 내지 제41 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 그 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 제약학적 조성물이 제2 치료제와 조합되어 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제42 항에 있어서, 제2 치료제는 항-바이러스 약물, 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증성 약물), EBOV에 대한 상이한 항체, EBOV용 백신, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제36 항 내지 제43 항 중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물은 피하로, 정맥 내로, 피내로, 근육 내로, 비강 내로 또는 경구로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
EBOV로 감염된 대상체, EBOV에 노출된, 또는 노출 위험이 있는, 또는 EBOV를 획득할 위험이 있는 대상체의 생존 또는 생존 가능성을 증가시키는 방법으로서, 제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 항체 또는 항원-결합 단편 또는 제21 항 내지 제31 항 중 어느 한 항의 제약학적 조성물을 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
제45 항에 있어서, 적어도 두 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제45 항 또는 제46 항에 있어서, 세 개의 항-EBOV 항체의 혼합물을 포함하는 항체 칵테일을 투여하는 단계를 포함하고, 세 개의 항-EBOV 항체는 SEQ ID NO: 18/26, 66/74 및 146/154에 나타낸 것과 같은 HCVR/LCVR 아미노산 서열쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제45 항 내지 제47 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 그 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 제약학적 조성물, 또는 항체 칵테일은 그것을 필요로 하는 대상체에게 예방적으로 또는 치료적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제45 항 내지 제48 항 중 어느 한 항에 있어서, EBOV 감염에 노출될 위험이 있거나, 획득할 위험이 있는, 필요로 하는 대상체는 면역손상된 개인, 의료계 종사자, 에볼라 바이러스를 잠복시키고 있는 사람에게 노출된 적이 있는 것으로 추정되는 사람, 감염된 개인과 신체적으로 접촉하게 되거나 신체적으로 밀접하게 근접한 사람, 병원 직원, 제약 연구원, 에볼라 환자가 치료받았던 병원 시설 또는 기관을 청소하는 데 종사하는 유지 요원, 에볼라 바이러스가 발생한 것으로 알려졌거나 발생한 것으로 의심되는 지역 또는 나라를 방문하였거나 방문할 계획이 있는 개인들 및 항공사 단골 고객으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제45 항 내지 제49 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 그 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 제약학적 조성물, 또는 항체 칵테일이 제2 치료제와 조합되어 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제50 항에 있어서, 제2 치료제는 항-바이러스 약물, 항-염증성 약물 (예컨대 코르티코스테로이드류 및 비-스테로이드성 항-염증성 약물), EBOV에 대한 상이한 항체, EBOV용 백신, TKM 에볼라 (바이러스 RNA 중합효소를 표적으로 하는 작은 간섭 RNA) 브린시도포비어 (CMX-001), 파비피라비어 (T-705), BCX-4430, AVI-7537 (에볼라 바이러스 VP24 유전자를 표적으로 하는 안티센스 포스포로다이아미데이트 모르폴리노 올리고머) 및 인터페론으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제45 항 내지 제51 항 중 어느 한 항에 있어서, 제약학적 조성물은 피하로, 정맥 내로, 피내로, 근육 내로, 비강 내로 또는 경구로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.