JP2018506966A - エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体 - Google Patents

エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体 Download PDF

Info

Publication number
JP2018506966A
JP2018506966A JP2017536549A JP2017536549A JP2018506966A JP 2018506966 A JP2018506966 A JP 2018506966A JP 2017536549 A JP2017536549 A JP 2017536549A JP 2017536549 A JP2017536549 A JP 2017536549A JP 2018506966 A JP2018506966 A JP 2018506966A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
amino acid
ebov
acid sequence
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2017536549A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2018506966A5 (ja
JP6829199B2 (ja
Inventor
クリストス カラツオス，
クリストス カラツオス，
ウィリアム オルソン，
ウィリアム オルソン，
ピーター メイソン，
ピーター メイソン，
ニール スタール，
ニール スタール，
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Regeneron Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Regeneron Pharmaceuticals Inc filed Critical Regeneron Pharmaceuticals Inc
Publication of JP2018506966A publication Critical patent/JP2018506966A/ja
Publication of JP2018506966A5 publication Critical patent/JP2018506966A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP6829199B2 publication Critical patent/JP6829199B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片、該抗体を含む医薬組成物および使用方法を提供する。本発明の抗体は、エボラウイルス活性を阻害または中和し、したがって、ヒトにおけるエボラウイルス感染を処置または防止する手段をもたらすために有用である。一部の実施形態では、本発明は、ウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入を防止するための、エボラウイルスに結合する１つまたは複数の抗体の使用を提供する。本発明の抗体は、予防的にまたは治療的に使用することができ、また、単独で使用することも１つもしくは複数の他の抗ウイルス剤またはワクチンと組み合わせて使用することもできる。

Description

発明の分野
本発明は、エボラウイルス糖タンパク質に結合する抗体、これらの抗体を含む医薬組成物、およびその使用方法に関する。
背景
エボラウイルス（ＥＢＯＶ）および関連するフィロウイルスは、ヒトおよび非ヒト霊長類において重症ウイルス性出血熱を引き起こし、ヒトアウトブレイクにおける致死率は約９０％に至る（Murin, C.D.ら、（２０１４年）、Proc Natl Acad Sci USA、１１１巻（４８号）：１７１８２〜１７１８７頁）。保護を媒介する免疫機構は調査中であるが、現在まで、ヒトでの使用に関して承認された処置は存在しない。
エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）は、ウイルスの表面上および感染細胞上に存在する唯一のタンパク質である。ＧＰは、ウイルスと宿主細胞の結合および融合に関与すると推定される。ＧＰは、いくつかの形態で存在する。これらのＧＰは、２つのオープンリーディングフレーム内にコードされる。編集されていないＧＰ ｍＲＮＡからは、感染経過の初期に合成される、非構造的な分泌型の可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）が産生される（Volchkovaら、（１９９５年）、Virology、２１４巻：４２１〜４３０頁；Volchkova, VAら、（１９９８年）、Virology、２５０巻：４０８〜４１４頁；Sanchezら、（１９９６年）、Proc Natl Acad Sci USA、９３巻：３６０２〜３６０７頁；Sanchezら、（１９９９年）J. Infect. Dis. １７９巻（補遺１、Ｓ１６４））。ｓＧＰは、二量体を形成し（Volchkovaら、（１９９５年）、Virology、２１４巻：４２１〜４３０頁；Falzarano, D.ら、Chembiochem（２００６年）、７巻：１６０５〜１６１１頁）、また、患者および実験的に感染させた動物の血液中に高量で検出される（Sanchezら、（１９９６年）、Proc Natl Acad Sci USA、９３巻：３６０２〜３６０７頁；Dolnik, O.ら、（２００４年）、EMBO J、２３巻：２１７５〜２１８４頁）。
感染の後期に、第２のオープンリーディングフレームからのコード能力を獲得している編集されたｍＲＮＡが生成される。この編集されたｍＲＮＡは、膜貫通（ＴＭ）ドメインを含有する形態のＧＰをコードし、それにより、この形態のＧＰは細胞の原形質膜につなぎとめられ、ビリオンに組み入れられ、そこで機能的な宿主細胞受容体結合性タンパク質／融合タンパク質としての機能を果たすことが可能になる。この形態のＧＰの生合成の間に、タンパク質は、タンパク質分解によってプロセシングされて、ジスルフィド結合によって互いにつながった２つの産物になる。アミノ末端産物はＧＰ１（１４０ｋＤａ）と称され、カルボキシ末端切断産物はＧＰ２（２６ｋＤａ）と称される（Sanchezら、（１９９８年）、J. Virol.、７２巻：６４４２〜６４４７頁）。
エボラウイルスＧＰ（ＥＢＯＶ ＧＰ）は、防御抗体の標的になり得るが、耐病性に関する抗体の役割は議論の的になっている。回復期の患者の中和抗体の血清力価がごくわずかなものであることから、動物への免疫血清の実験的な移行を用いた保護の実現における相反する結果と共に、感染からの回復における中和抗体の役割に関する推測がもたらされている（Peters, CJおよびLeDuc, JW、（１９９９年）、J. Infect. Dis.、１７９巻、補遺１；Mikhailov, VV、（１９９４年）、Vopr. Virusol.、３９巻：８２頁；Xu, L.ら、（１９９８年）、Nature Med.、４巻：３７頁）。しかし、ごく最近のエボラウイルスのアウトブレイクでは、疾患にかかり、ウイルスＧＰに特異的なモノクローナル抗体のカクテル（ＺＭａｐｐ）を用いた処置を受けた少人数の患者が疾患から回復した。さらに、これらの患者由来の血清および感染が生じた後に生存した他の患者由来の血清を用いた処置を受けた他の患者も正の転帰を有した。
エボラウイルスＧＰに結合するいくつかの抗体が報告されている（例えば、米国特許第６６３０１４４号、同第６８７５４３３号、同第７３３５３５６号および同第８５１３３９１号を参照されたい。ＥＰ１５３９２３８、ＥＰ２３５０２７０およびＥＰ８５１３３９１も参照されたい）。
技術の進歩により、改善されたエボラウイルス抗原（複数可）ワクチン組成物を作製する能力は改善されてはいるが、依然として、エボラウイルスの新興株に対処するための追加的な保護の供給源をもたらすことが必要とされている。曝露後ワクチン（Feldman, Hら、（２００７年）、PLos Pathog、３巻（１号）：ｅ２頁）、小分子阻害剤（Cote, M.ら（２０１１年）、Nature、４７７巻（７３６４号）：３４４〜３４８頁；Johansen, LMら、（２０１３年）、Sci Transl Med、５巻（１９０号）：１９０ｒａ１７９頁；Warren, TKら、（２０１４年）、Nature、５０８巻（７４９６号）：４０２〜４０５頁）、ｓｉＲＮＡに基づく治療薬（Geisbert, TWら、（２００６年）、J. Infect Dis.、１９３巻（１２号）：１６５０〜１６５７頁；Geisbert, TWら、（２０１０年）、Lancet、３７５巻（９７２９号）：１８９６〜１９０５頁）、およびモノクローナル抗体（Saphire, EO、（２０１３年）、Immunotherapy、５巻（１１号）：１２２１〜１２３３頁；Wong, G.ら（２０１４年）、Trends Microbiol.、２２巻（８号）：４５６〜４６３頁；Qiu, Xら、（２０１４年）、Hum. Vaccin. Immunother.、１０巻（４号）：９６４〜９６７頁）を含めた、エボラウイルスに対するいくつかの候補治療薬が現在評価中である。非ヒト霊長類への抗体の受動的投与が効果的であることが証明されている（Dye, JM.ら、（２０１２年）、Proc Natl Acad Sci USA、１０９巻（１３号）：５０３４〜５０３９頁）。つい最近では、３つの抗体のカクテル（ＺＭａｐｐ）が現在タバコ植物において産生されており、ヒトへの使用のために開発中である（Qiu, X.ら、（２０１４年）、Nature、５１４巻（７５２０号）：４７〜５３頁）。
患者において中和抗体を生成させるための目的の抗原（例えば、ＧＰ）を含むワクチン組成物の観念は一般に良好な手法であると考えられているが、体がワクチン組成物に応答するのには数週間かかると思われるので、これは、ウイルスにすでに曝露している患者における使用においては有利ではない可能性がある。その時点までに、利用可能な医療および緩和療法のレベルに応じて、患者がすでにウイルス感染に屈している可能性がある。これらの患者、または有効な抗体応答を開始することができないあらゆる患者では、ＥＢＯＶの特定の株、または多種多様な株に共通するエピトープを標的とし得る防御抗体をすでに含有する組成物を提供することがより有益であり得る。
したがって、エボラウイルス感染を防止または処置するために使用することができる新しい抗体を同定することが当技術分野において依然として必要とされている。
米国特許第６６３０１４４号明細書 米国特許第６８７５４３３号明細書 米国特許第７３３５３５６号明細書 米国特許第８５１３３９１号明細書 欧州特許出願公開第１５３９２３８号明細書 欧州特許出願公開第２３５０２７０号明細書 欧州特許出願公開第８５１３３９１号明細書
Murin, C.D.ら、（２０１４年）、Proc Natl Acad Sci USA、１１１巻（４８号）：１７１８２〜１７１８７頁 Volchkovaら、（１９９５年）、Virology、２１４巻：４２１〜４３０頁 Volchkova, VAら、（１９９８年）、Virology、２５０巻：４０８〜４１４頁 Sanchezら、（１９９６年）、Proc Natl Acad Sci USA、９３巻：３６０２〜３６０７頁 Sanchezら、（１９９９年）J. Infect. Dis. １７９巻（補遺１、Ｓ１６４） Falzarano, D.ら、Chembiochem（２００６年）、７巻：１６０５〜１６１１頁 Dolnik, O.ら、（２００４年）、EMBO J、２３巻：２１７５〜２１８４頁 Sanchezら、（１９９８年）、J. Virol.、７２巻：６４４２〜６４４７頁 Peters, CJおよびLeDuc, JW、（１９９９年）、J. Infect. Dis.、１７９巻、補遺１ Mikhailov, VV、（１９９４年）、Vopr. Virusol.、３９巻：８２頁 Xu, L.ら、（１９９８年）、Nature Med.、４巻：３７頁Feldman, Hら、（２００７年）、PLos Pathog、３巻（１号）：ｅ２頁 Cote, M.ら（２０１１年）、Nature、４７７巻（７３６４号）：３４４〜３４８頁 Johansen, LMら、（２０１３年）、Sci Transl Med、５巻（１９０号）：１９０ｒａ１７９頁 Warren, TKら、（２０１４年）、Nature、５０８巻（７４９６号）：４０２〜４０５頁 Geisbert, TWら、（２００６年）、J. Infect Dis.、１９３巻（１２号）：１６５０〜１６５７頁 Geisbert, TWら、（２０１０年）、Lancet、３７５巻（９７２９号）：１８９６〜１９０５頁 Saphire, EO、（２０１３年）、Immunotherapy、５巻（１１号）：１２２１〜１２３３頁 Wong, G.ら（２０１４年）、Trends Microbiol.、２２巻（８号）：４５６〜４６３頁 Qiu, Xら、（２０１４年）、Hum. Vaccin. Immunother.、１０巻（４号）：９６４〜９６７頁 Dye, JM.ら、（２０１２年）、Proc Natl Acad Sci USA、１０９巻（１３号）：５０３４〜５０３９頁 Qiu, X.ら、（２０１４年）、Nature、５１４巻（７５２０号）：４７〜５３頁
本発明の概要
本発明は、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）糖タンパク質（ＧＰ）に結合する抗体およびその抗原結合断片を提供する。本発明の抗体は、エボラウイルスの活性を阻害または中和するために有用である。一部の実施形態では、抗体は、エボラウイルスの宿主細胞への付着を遮断するため、および／またはエボラウイルスの宿主細胞への侵入を防止するために有用である。一部の実施形態では、抗体は、ウイルスの細胞間伝達を阻害することによって、またはエボラウイルス感染細胞を殺傷することによって機能し、病原性ウイルスの産生を低減する。ある特定の実施形態では、抗体は、被験体におけるエボラウイルス感染の少なくとも１つの症状を防止する、処置する、または好転させることにおいて有用である。ある特定の実施形態では、抗体は、エボラウイルス感染を有する、またはそれが生じるリスクがある被験体に、予防的にまたは治療的に投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、ワクチンが禁忌である患者、またはワクチンの効果が少ない被験体、例えば、高齢患者、若年患者、ワクチンの任意の１つもしくは複数の構成成分に対するアレルギーを有する可能性がある患者、またはワクチン中の免疫原に反応しない可能性がある免疫無防備状態の患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、エボラウイルスのアウトブレイク中に、医療スタッフ、入院患者または養護施設の入所者または他のリスクが高い患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の少なくとも１つの抗体を含有する組成物は、エボラウイルスにすでに暴露された患者に第一選択処置として投与することができる。
本発明の抗体は、全長（例えば、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗体）であってもよく、抗原結合性部分のみを含んでもよく（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２またはｓｃＦｖ断片）、また、機能性に影響を及ぼすため、例えば、宿主における持続を増大させるため、または残留するエフェクター機能を排除するために改変することができる（Reddyら、２０００年、J. Immunol.、１６４巻：１９２５〜１９３３頁）。ある特定の実施形態では、抗体は二重特異性であってよい。
第１の態様では、本発明は、ＥＢＯＶ ＧＰに特異的に結合する単離された組換えモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、エボラウイルス（ＥＢＯＶ）および／またはエボラウイルス糖タンパク質（ＥＢＯＶ−ＧＰ）に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合断片であって、以下の特性：
（ａ）配列番号１８、６６、１４６、２、３４、５０、８２、９８、１１４、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０および３０６からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１つに含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２６、７４、１５４、１０、４２、５８、９０、１０６、１２２、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２および２９８からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含むこと；
（ｂ）完全ヒトモノクローナル抗体であること；
（ｃ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合、ＥＢＯＶ、またはＥＢＯＶ−ＧＰを発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に、１０−７Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）で結合すること；
（ｄ）ｐＨ５またはｐＨ６において、ｐＨ７．４と比較して少なくとも３倍の解離半減期（ｔ１／２）を示すこと；
（ｅ）約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０でのザイールエボラウイルスの中和を示すこと；
（ｆ）該ＥＢＯＶ−ＧＰを発現する細胞への結合が抗体依存性細胞傷害を誘発することを示すこと；
（ｇ）ザイール２０１４、ザイール１９９５、スーダン、ブンディブギョおよびコートジボワールからなる群から選択される１つまたは複数のＥＢＯＶの株と交差反応すること；
（ｈ）可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）に結合すること；
（ｉ）表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合すること
のうちの１つまたは複数を有する、単離された組換え抗体またはその抗原結合断片を提供する。
一実施形態では、本発明は、ＥＢＯＶおよび／またはエボラウイルス糖タンパク質（ＥＢＯＶ−ＧＰ）に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合断片であって、以下の特性：
（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること；
（ｂ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合、ＥＢＯＶ、またはＥＢＯＶ−ＧＰを発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に、１０−７Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）で結合すること；
（ｃ）ｐＨ５またはｐＨ６において、ｐＨ７．４と比較して少なくとも３倍の解離半減期（ｔ１／２）を示すこと；
（ｄ）約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０でのザイールエボラウイルスの中和を示すこと；
（ｅ）該ＥＢＯＶ ＧＰを発現する細胞への結合が抗体依存性細胞傷害を誘発することを示すこと；
（ｆ）ザイール２０１４、ザイール１９９５、スーダン、ブンディブギョおよびコートジボワールからなる群から選択される１つまたは複数のＥＢＯＶの株と交差反応すること；
（ｇ）可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）に結合すること；
（ｈ）表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合すること
のうちの２つまたはそれ超を有する、単離された組換え抗体またはその抗原結合断片を提供する。
例示的な本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体が本明細書の表１および２に列挙されている。表１は、例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を示す。表２は、例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子を示す。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含むＨＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含むＬＣＶＲを含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかの対を含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかに含有されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。
一実施形態では、単離された抗体または抗原結合断片は、配列番号１８／２６、６６／７４、１４６／１５４、２／１０、３４／４２、５０／５８、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一実施形態では、単離された抗体または抗原結合断片は、
（ａ）配列番号２０、６８、１４８、４、３６、５２、８４、１００、１１６、１３２、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２および３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｂ）配列番号２２、７０、１５０、６、３８、５４、８６、１０２、１１８、１３４、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４および３１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｃ）配列番号２４、７２、１５２、８、４０、５６、８８、１０４、１２０、１３６、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６および３１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｄ）配列番号２８、７６、１５６、１２、４４、６０、９２、１０８、１２４、１４０、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｅ）配列番号３０、７８、１５８、１４、４６、６２、９４、１１０、１２６、１４２、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｆ）配列番号３２、８０、１６０、１６、４８、６４、９６、１１２、１２８、１４４、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
ある特定の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号１８／２６（Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ）、６６／７４（Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ）および１４６／１５４（Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ）からなる群から選択される。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するその実質的に類似した配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかの対を含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態によると、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかに含有されるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号２４／３２（例えば、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ）、７２／８０（例えば、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ）および１５２／１６０（例えば、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ）からなる群から選択される。
本発明は、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかに含有される６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）のセットを含む抗体またはその抗原結合断片も提供する。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、配列番号２０−２２−２４−２８−３０−３２（例えば、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ）、６８−７０−７２−７６−７８−８０（例えば、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ）；および１４８−１５０−１５２−１５６−１５８−１６０（例えば、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ）からなる群から選択される。
関連する実施形態では、本発明は、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有される６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）のセットを含む抗体またはその抗原結合断片を提供する。例えば、本発明は、配列番号１８／２６（例えば、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ）、６６／７４（例えば、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ）；および１４６／１５４（例えば、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ）からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対に含有されるＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３−ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む抗体またはその抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技法が当技術分野で周知であり、それを使用して、本明細書に開示されている指定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用することができる例示的な慣例としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。一般に述べると、Ｋａｂａｔ定義は配列の変動性に基づき、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造的なループ領域の位置に基づき、ＡｂＭ定義は、Ｋａｂａｔ手法とＣｈｏｔｈｉａ手法の折衷である。例えば、Kabat、「Sequences of Proteins of Immunological Interest」、National Institutes of Health、Bethesda、Md.（１９９１年）；Al-Lazikaniら、J. Mol. Biol.、２７３巻：９２７〜９４８頁（１９９７年）；およびMartinら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、８６巻：９２６８〜９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。公共のデータベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
本発明は、グリコシル化パターンが改変された抗エボラウイルス抗体を含む。一部の実施形態では、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を増大させるために、望ましくないグリコシル化部位を除去するための改変、または、オリゴ糖鎖上に存在するフコース部分を欠く抗体が有用であり得る（Shieldら、（２００２年）JBC、２７７巻：２６７３３頁を参照されたい）。他の適用では、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために、ガラクトシル化の改変を行うことができる。
本発明は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含み、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲが、それぞれ表１に列挙されているＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する抗体またはその抗原結合断片と、エボラウイルスへの特異的な結合について競合する抗体およびその抗原結合断片も提供する。
本発明は、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含み、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲが、それぞれ表１に列挙されているＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する、参照抗体またはその抗原結合断片と、エボラウイルスへの結合について交差競合する抗体およびその抗原結合断片も提供する。
本発明は、エボラウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入を遮断する単離された抗体およびその抗原結合断片も提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、エボラウイルスの第１のエピトープに対する第１の結合特異性およびエボラウイルスの第２のエピトープに対する第２の結合特異性を含む二重特異性であり、ここで、第１のエピトープと第２のエピトープは、別個のものであり、重複していない。ある特定の実施形態では、二重特異性は、ウイルス糖タンパク質のエピトープに結合する第１のアームおよび異なるウイルス抗原のエピトープに結合する第２のアームを含み得る。
第２の態様では、本発明は、抗エボラウイルス抗体またはその一部をコードする核酸分子を提供する。例えば、本発明は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列を含む。
本発明は、３つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３）のセットを含むＨＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＨＣＤＲ１−ＨＣＤＲ２−ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかによって定義される通りである核酸分子も提供する。
本発明は、３つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３）のセットを含むＬＣＶＲをコードする核酸分子であって、ＬＣＤＲ１−ＬＣＤＲ２−ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットが、表１に列挙されている例示的な抗エボラウイルスＧＰ抗体のいずれかによって定義される通りである核酸分子も提供する。
本発明は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子であって、ＨＣＶＲが、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含み、ＬＣＶＲが、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含む核酸分子も提供する。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に列挙されているＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列と、表２に列挙されているＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、または、その配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する実質的に類似した配列とを含む。ある特定の実施形態では、本発明のこの態様によると、核酸分子は、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはどちらも、表１に列挙されている、同じ抗エボラウイルスＧＰ抗体に由来する。
本発明は、表１に列挙されている重鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子を提供する。本発明は、表１に列挙されている軽鎖アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も提供する。
関連する態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体の重鎖または軽鎖可変領域を含むポリペプチドを発現させることが可能な組換え発現ベクターを提供する。例えば、本発明は、上記の核酸分子のいずれか、すなわち、表１に記載されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを含む。そのようなベクターが導入された宿主細胞、ならびに宿主細胞を抗体または抗体断片の産生を可能にする条件下で培養することによって抗体またはその一部を産生させ、したがって産生した抗体および抗体断片を回収する方法も本発明の範囲内に含まれる。
第３の態様では、本発明は、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する１種または複数種の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。１種または複数種の単離された抗体は、表１に列挙されているＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。一実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号１８／２６、６６／７４、１４６／１５４、２／１０、３４／４２、５０／５８、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択される。一実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４からなる群から選択される。
関連する態様では、本発明は、少なくとも２つの本発明の抗体と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤の組合せである組成物を特徴とする。
関連する態様では、本発明は、少なくとも３つの本発明の抗体と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤の組合せ／カクテルである組成物を特徴とする。
一実施形態では、医薬組成物は、（ａ）表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはその抗原結合断片を含む第１の抗エボラウイルス抗体；（ｂ）表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはその抗原結合断片を含む第２の抗エボラウイルス抗体；および（ｃ）表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはその抗原結合断片を含む第３の抗エボラウイルス抗体（ここで、第１の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の第１のエピトープに結合するかまたはそれと相互作用し、第２の抗体および／または第３の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の異なるエピトープに結合するかまたはそれと相互作用する）、ならびに（ｄ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む。
別の関連する態様では、本発明は、抗エボラウイルスＧＰ抗体および第２の治療剤の組合せである組成物を特徴とする。
一実施形態では、第２の治療剤は、抗エボラウイルスＧＰ抗体と有利に組み合わせられる任意の薬剤である。抗エボラウイルス抗体と有利に組み合わせられる例示的な薬剤としては、限定することなく、エボラウイルスに結合し、かつ／もしくはその活性を阻害する他の薬剤（他の抗体またはその抗原結合断片などを含める）および／または、エボラウイルスに直接結合はしないが、それにもかかわらず宿主細胞への感染力を含むウイルスの活性を阻害する薬剤が挙げられる。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはその抗原結合断片を含む第１の抗エボラウイルス抗体；（ｂ）表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対、またはその抗原結合断片を含む第２の抗エボラウイルス抗体（ここで、第１の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の第１のエピトープに結合し、第２の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の第２のエピトープに結合し、第１のエピトープと第２のエピトープが別個のものであり、重複していない）；および（ｃ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片（ここで、第１の抗体と第２の抗体がエボラウイルスへの結合について交差競合しない）；および（ｃ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）異なるエボラウイルス抗原と相互作用する第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片（ここで、第１の抗体が、エボラウイルスＧＰ上のエピトープに結合し、第２の抗体が、異なるエボラウイルス抗原上のエピトープに結合する）；および（ｃ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｃ）第３の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片（ここで、第１の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の第１のエピトープに結合し、第２の抗体および／または第３の抗体が、エボラウイルスＧＰ上の異なるエピトープに結合し、第１のエピトープ、第２のエピトープおよび第３のエピトープが別個のものであり、重複していない）；および（ｄ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｃ）第３の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片（ここで、第１の抗体が、第２のおよび／または第３の抗体とエボラウイルスへの結合について交差競合してもしなくてもよい）；および（ｄ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、（ａ）第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）異なるエボラウイルス抗原と相互作用する第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片および／または第３の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片（ここで、第１の抗体が、エボラウイルス上のエピトープに結合し、第２の抗体および／または第３の抗体が、異なるエボラウイルス抗原上のエピトープに結合する）；ならびに（ｃ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物を提供する。
一実施形態では、医薬組成物は、エボラウイルスの１つの株上の１つのエピトープに結合するかまたはそれと相互作用する第１の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片、ならびにエボラウイルスの同じ株または異なる株上の第２のエピトープおよび／または第３のエピトープに結合するかまたはそれと相互作用する第２の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片および／または第３の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片を含む。本発明の抗体と相互作用するエボラウイルス株は、ザイール２０１４（Ｚａｉｒｅ．２０１４）株、ザイール１９９５（Ｚａｉｒｅ．１９９５）株、スーダン（Ｓｕｄａｎ）株、ブンディブギョ（Ｂｕｎｄｉｂｕｇｙｏ）株、およびコートジボワール（Ｃｏｔｅ ｄ’Ｉｖｏｉｒｅ）株、またはそのバリアントからなる群から選択することができる。
関連する態様では、本発明は、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する第１の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号２０のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号２４のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号２８のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む第１の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する第２の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をさらに含み得、前記第２の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、配列番号６８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号７２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号７６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。この医薬組成物は、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する第３の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をさらに含み得、前記第３の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１４８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号１５２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号１５６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む。
ある特定の実施形態では、各抗体は、別々の製剤として製剤化することができ、最大の治療有効性を実現するために１つ超の抗体が必要であることが決定された場合、抗体製剤のそれぞれを必要に応じて共投与することができる（同時に、または逐次的に）。あるいは、抗体カクテルを共製剤化することができる。
ある特定の実施形態では、２つまたはそれ超の抗体を一緒に組み合わせて１つの医薬組成物にする場合、それらは、エボラウイルスタンパク質上の同じエピトープまたは重複するエピトープに結合してもしなくてもよい。本発明の抗エボラウイルス抗体を伴う追加的な併用療法および共製剤が本明細書の他の箇所に開示されている。
第４の態様では、本発明は、エボラウイルスに関連する疾患もしくは障害（例えば、被験体におけるウイルス感染など）、またはウイルス感染に関連する少なくとも１つの症状、またはＥＢＯＶ感染に関連する少なくとも１つの症状の頻度もしくは重症度を、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体もしくは抗体の抗原結合性部分、または少なくとも２つもしくはそれ超の本発明の抗体のカクテルを使用して処置するための治療方法であって、少なくとも２つまたはそれ超の本発明の抗体または抗原結合断片を、それを必要とする被験体に治療有効量で投与するステップを含む治療方法を提供する。一実施形態では、方法は、少なくとも３つの本発明の抗体の組合せ（カクテル）を投与するステップを含む。一実施形態では、抗体カクテルは、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４に記載されているアミノ酸配列対を有する３つの抗ＥＢＯＶ抗体を含む。処置される障害は、エボラウイルス活性の阻害によって改善される、好転する、阻害される、または防止される任意の疾患または状態である。ある特定の実施形態では、本発明は、エボラウイルス感染の少なくとも１つの症状を防止する、処置する、または好転させる方法であって、少なくとも１種または複数種の本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体またはその抗原結合断片を、それを必要とする被験体に治療有効量で投与するステップを含む方法を提供する。
関連する態様では、本発明は、感染性ＥＢＯＶを中和する方法であって、ＥＢＯＶに感染した細胞を、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片を含む組成物に曝露するステップを含み、曝露するステップにより、ウイルス感染または細胞死からの細胞の保護の増強がもたらされる、方法を提供する。ある特定の実施形態では、曝露するステップは、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおけるものであり得る。一実施形態では、方法は、１種または複数種の本発明の抗体を投与するステップを含む。一実施形態では、方法は、少なくとも３つの本発明の抗体の組合せ（カクテル）を投与するステップを含む。一実施形態では、抗体カクテルは、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４に記載されているアミノ酸配列対を有する３つの抗ＥＢＯＶ抗体を含む。
一部の実施形態では、本発明は、被験体におけるエボラウイルス感染の少なくとも１つの症状の重症度、持続時間、または出現の頻度を、１種または複数種の本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を投与することによって好転させるまたは低減する方法であって、少なくとも１つの症状が、発熱、頭痛、疲労、食欲不振、筋痛、下痢、嘔吐、腹痛、脱水および原因不明の出血からなる群から選択される、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明は、被験体におけるウイルス負荷量を減少させる方法であって、被験体に、エボラウイルスＧＰに結合し、エボラウイルスの宿主細胞への結合および／または侵入を遮断する１種または複数種の本発明の抗体またはその断片を有効量で投与するステップを含む方法を提供する。
関連する態様では、本発明は、ＥＢＯＶに感染している被験体、またはＥＢＯＶに曝露された、もしくはＥＢＯＶへの曝露のリスクもしくはＥＢＯＶに感染するリスクがある被験体の生存、または生存の可能性を増加させる方法であって、少なくとも１つの本発明の抗体または抗原結合断片、または少なくとも１つの本発明の抗体を含む医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法を提供する。
一実施形態では、本発明は、ＥＢＯＶに感染している被験体、またはＥＢＯＶに曝露された、もしくはＥＢＯＶへの曝露のリスクもしくはＥＢＯＶに感染するリスクがある被験体の生存、または生存の可能性を増加させる方法であって、少なくとも２つの本発明の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、方法は、少なくとも３種の本発明の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む。一実施形態では、投与される抗体カクテルは、少なくとも３種の本発明の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含み、少なくとも３種の抗体は、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一実施形態では、それを必要とする前記被験体は、エボラウイルスに曝露するリスクもしくはエボラウイルスを得るリスクがある被験体であり、前記被験体は、免疫無防備状態の個体、医療従事者、エボラウイルスを有する人に曝露された疑いがある人、感染した個体と物理的に接触するまたは物理的に近接する人、病院職員、医薬品研究者、エボラ患者が処置されている病院設備もしくは施設の清掃を担当する保守要員、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが分かっているまたは有する疑いがある地域もしくは国を訪れたことがあるまたは訪れる予定がある個体および頻繁に渡航する人からなる群から選択される。
一実施形態では、それを必要とする被験体に、少なくとも１つの本発明の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片、または少なくとも１つの本発明の抗体またはその抗原結合断片と第２の治療剤を組み合わせて含む医薬組成物を投与することができる。第２の治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、ＥＢＯＶに対する異なる抗体、ＥＢＯＶに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンからなる群から選択することができる。
一実施形態では、医薬組成物を、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、または経口的に投与することができる。
関連する実施形態では、保護の増強は、ＥＢＯＶに曝露されたまたは感染した哺乳動物において、哺乳動物を少なくとも３つの本発明の抗体を含む抗体カクテルを含む医薬組成物を用いて処置した場合に観察され得る。
一実施形態では、観察される保護の増強は、ＥＢＯＶ感染に関連する少なくとも１つの症状の重症度または頻度の低下によって、ウイルス負荷量の減少によって、または、ＥＢＯＶに感染した哺乳動物の生存の増加によって測定することができる。少なくとも１つの症状は、発熱、頭痛、疲労、食欲不振、筋痛、下痢、嘔吐、腹痛、脱水および原因不明の出血からなる群から選択することができる。
保護の増強は、抗体を単独で使用する場合、あるいは抗体を１種または複数種の追加的な治療剤または抗ＥＢＯＶ処置モダリティと組み合わせて使用した場合に観察され得る。
１種または複数種の追加的な治療剤は、抗ウイルス薬、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、エボラウイルスに対する異なる抗体、エボラウイルスに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンからなる群から選択することができる。
一実施形態では、１種または複数種の追加的な治療剤は、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体を含む。
一実施形態では、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体は、表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む。
関連する実施形態では、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含む。
別の関連する実施形態では、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体は、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含む。
ある実施形態では、１種または複数種の抗体またはその抗原結合断片は、エボラウイルス感染を有する、またはそれを有するリスクがある、またはそれが発生する素因がある被験体に、予防的にまたは治療的に投与することができる。リスクがある被験体としては、これだけに限定されないが、免疫無防備状態の人、例えば、自己免疫疾患が原因で免疫無防備状態の人、または免疫抑制療法を受けている人（例えば、臓器移植後）、またはヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、白血球が枯渇するもしくは破壊される特定の形態の貧血を患っている人、放射線療法もしくは化学療法を受けている人、または炎症性障害を患っている人が挙げられる。エボラウイルス感染が生じるリスクがある他の被験体としては、医療従事者、または感染した個体と物理的に接触するまたは物理的に近接する、または感染した個体に由来する体液または組織に曝露される、さらにエボラウイルス感染が発生するリスクが上昇しているあらゆる人が挙げられる。さらに、例えば、人口密度の高い都市、もしくはエボラウイルスへの感染症が確認されたまたは疑わしい被験体の極めて近傍に住んでいる被験体は、疾患のアウトブレイクの近傍にあることに起因して、または例えば、エボラ患者が処置されている病院設備もしくは施設の清掃を担当する保守要員、病院職員、医薬品研究者、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが分かっているまたは有する疑いがある地域もしくは国を訪れたことがあるまたは訪れる予定がある個体、または頻繁に渡航する人は、職業選択に起因して、エボラウイルス感染にかかるリスクがある。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片を第２の治療剤と組み合わせて、それを必要とする被験体に投与する。第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、抗感染薬、抗ウイルス薬、エボラウイルスに対する異なる抗体、エボラウイルスに対するワクチン、ＺＭａｐｐ療法、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）、インターフェロン、抗酸化剤および任意の他の薬物などの栄養補助食品、または、エボラウイルス感染の少なくとも１つの症状を好転させるため、もしくは患者におけるウイルス負荷量を減少させるために有用な当技術分野で公知の療法からなる群から選択することができる。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本発明の抗体またはその抗原結合断片に関連する副作用（複数可）が起こるのであれば、そのようなあらゆる可能性のある副作用（複数可）に対して反作用するまたはそれを低下させる助けとなる薬剤であってよい。抗体またはその断片は、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口的、鼻腔内、筋肉内、または頭蓋内に投与することができる。一実施形態では、抗体は、被験体の血清中の抗体の最大の濃度のために単回静脈内注入として投与することができる。抗体またはその断片は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、５０ｍｇから６００ｍｇまでの間で構成される１つまたは複数の用量で投与することができる。
本発明は、ＥＢＯＶを有する、またはＥＢＯＶを有する疑いがある、またはＥＢＯＶに曝露している被験体の処置において使用するため、またはエボラウイルスの結合および／または活性を遮断することが有益であると思われる疾患または障害を処置するための医薬の製造において使用するための、本発明の抗エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片も包含する。
他の実施形態は、続く発明の詳細な説明を精査すれば明らかになろう。
Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐは、生ＥＢＯＶを強力に中和する。
３種の抗ＥＢＯＶ抗体とエボラＧＰまたはエボラ可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）との相互作用を示す。
詳細な説明
本方法を記載する前に、特定の方法および記載されている実験条件は変動しうるので、本発明はそのような方法および条件に限定されないことが理解されるべきである。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるので、本明細書において使用される用語法は、特定の実施形態を説明するためだけのものであり、限定的なものではないことも理解される。
別段の定義のない限り、本明細書において使用される全ての科学技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者に一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載されている方法および材料と類似した、またはそれと等しい任意の方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料がここに記載されている。
定義
「エボラウイルス」または「ＥＢＯＶ」は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ科の属であり、重症の急速に進行する出血熱を引き起こすことが公知である。ヌクレオチド配列およびアウトブレイクの場所に基づいて、多くの異なるエボラウイルス種および株、例えば、ザイール（Ｚａｉｒｅ）、タイフォレスト（Ｔａｉ Ｆｏｒｅｓｔ）（以前はコートジボワールまたはアイボリーコースト（Ｉｖｏｒｙ Ｃｏａｓｔ）として公知であった）、スーダン、レストン（Ｒｅｓｔｏｎ）、およびブンディブギョが存在する。このウイルスの最も致死的な形態は、ザイール株およびスーダン株である。レストン株は、非ヒト霊長類にのみ感染することが分かっている唯一の株である。「エボラウイルス」という用語は、異なるエボラウイルス分離株から単離されたエボラウイルスのバリアントも包含する。
本明細書では「ＥＢＯＶ ＧＰ」または「エボラウイルスＧＰ」と示される全長エボラウイルス糖タンパク質のアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号ＡＨＸ２４６４９．１（配列番号３１４も参照されたい）およびＡＨＸ２４６４９．２（配列番号３１５も参照されたい）として見いだされるアミノ酸配列によって例示される。この用語は、例えば、ヒスチジンタグ（例えば、デカヒスチジンタグを伴う受託番号ＡＨＸ２４６４９．１（配列番号３１８）を参照されたい）、マウスＦｃもしくはヒトＦｃ、またはシグナル配列とカップリングしたエボラウイルスＧＰまたはその断片も包含する。「可溶性ＧＰ」または「ｓＧＰ」のアミノ酸配列は、受託番号ＡＨＸ２４６５０に、かつ配列番号３１６（シグナル配列を伴う）として示され、配列番号３１７（シグナル配列を有さないがｍｙｃ−ｍｙｃ−ヘキサヒスチジンタグを有する）にも示されている。「ＧＰ１」のアミノ酸配列は、全長ＧＰのアミノ末端の残基１から始まり、配列番号３１５の残基５０１で終了する。「ＧＰ２」のアミノ酸配列は、配列番号３１５として示されている全長ＧＰの残基５０２から残基６７６までにわたる。
「エボラウイルス感染」、または「ＥＢＯＶ感染」という用語は、本明細書で使用される場合、ウイルス、もしくは感染した動物、もしくは感染したヒト患者への曝露、またはエボラウイルス感染を有する動物もしくはヒト患者に由来する体液もしくは組織への接触の結果生じる重症の出血熱を指す。「エボラウイルス感染に関連する症状」としては、発熱、頭痛、疲労、食欲不振、筋痛、下痢、嘔吐、腹痛、脱水および原因不明の出血が挙げられる。
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ジスルフィド結合によって相互接続した２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖で構成される免疫グロブリン分子（すなわち、「抗体分子全体」）、ならびにその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合断片を指すものとする。各重鎖は、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）と重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３で構成される）とで構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）と軽鎖定常領域（ＣＬ）とで構成される。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域と、点在する、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より保存された領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端まで以下の順序で配置された３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。本発明のある特定の実施形態では、抗体（またはその抗原結合断片）のＦＲは、ヒト生殖細胞系列配列と同一のものであってもよく、天然にまたは人工的に改変されたものであってもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれ超のＣＤＲの並列分析に基づいて定義することができる。
１つまたは複数のＣＤＲ残基の置換または１つまたは複数のＣＤＲの省略も可能である。１つまたは２つのＣＤＲを結合のために分配することができる抗体が科学文献に記載されている。Padlanら（１９９５年、FASEB J.、９巻：１３３〜１３９頁）は、公開された結晶構造に基づいて抗体とそれらの抗原の間の接触領域を解析し、ＣＤＲ残基の約５分の１〜３分の１のみが実際に抗原と接触すると結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原と接触するアミノ酸を有さない抗体も多く見出した（Vajdosら、２００２年、J Mol Biol、３２０巻：４１５〜４２８頁も参照されたい）。
抗原と接触しないＣＤＲ残基は、以前の試験に基づいて、分子モデリングによって、および／または経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から同定することができる（例えば、ＣＤＲＨ２の残基Ｈ６０〜Ｈ６５は、多くの場合に、必要でない）。ＣＤＲまたはその残基（複数可）を省略し、通常、別のヒト抗体配列またはそのような配列のコンセンサス内の対応する位置を占有するアミノ酸で置換する。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸も経験的に選択することができる。経験的な置換は保存的置換であっても非保存的置換であってもよい。
本明細書に開示されている完全ヒト抗エボラウイルスモノクローナル抗体は、対応する生殖細胞系列配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含み得る。そのような変異は、本明細書に開示されているアミノ酸配列を、例えば公共の抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系列配列と比較することによって容易に突きとめることができる。本発明は、本明細書に開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体およびその抗原結合断片であって、１つまたは複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸が、抗体が由来する生殖細胞系列配列の対応する残基（複数可）、または別のヒト生殖細胞系列配列の対応する残基（複数可）、または対応する生殖細胞系列残基（複数可）の保存的アミノ酸置換に変異した（そのような配列変化を本明細書では集合的に「生殖細胞系列変異」と称する）、抗体およびその抗原結合断片を含む。当業者は、本明細書に開示されている重鎖可変領域および軽鎖可変領域配列から開始して、１つまたは複数の個々の生殖細胞系列変異またはこれらの組合せを含む多数の抗体および抗原結合断片を容易に作製することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全てが、抗体が由来する元の生殖細胞系列配列に見いだされる残基に復帰変異している。他の実施形態では、ある特定の残基のみが、元の生殖細胞系列配列に復帰変異している、例えば、ＦＲ１の最初の８アミノ酸の範囲内もしくはＦＲ４の最後の８アミノ酸の範囲内にのみ変異した残基が見いだされるか、または、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３の範囲内にのみ変異した残基が見いだされる。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基（複数可）のうちの１つまたは複数が、異なる生殖細胞系列配列（すなわち、抗体が元々由来する生殖細胞系列配列とは異なる生殖細胞系列配列）の対応する残基（複数可）に変異している。さらに、本発明の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つまたはそれ超の生殖細胞系列変異の任意の組合せを含有し得る、例えば、ある特定の個々の残基は特定の生殖細胞系列配列の対応する残基に変異しており、元の生殖細胞系列配列とは異なるある特定の他の残基は維持されているかまたは異なる生殖細胞系列配列の対応する残基に変異している。１つまたは複数の生殖細胞系列変異を含有する抗体および抗原結合断片が得られたら、それを、例えば、改善された結合特異性、増大した結合親和性、改善されたまたは増強されたアンタゴニスト性またはアゴニスト性の生物学的性質（場合によっては）、低下した免疫原性などの１つまたは複数の所望の性質について容易に試験することができる。この一般的な様式で得られる抗体および抗原結合断片は本発明の範囲に包含される。
本発明は、１つまたは複数の保存的置換を有する本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む完全ヒト抗エボラウイルスモノクローナル抗体も包含する。例えば、本発明は、本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比較して保存的アミノ酸置換を、例えば１０カ所またはそれ未満、８カ所またはそれ未満、６カ所またはそれ未満、４カ所またはそれ未満伴うＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲアミノ酸配列を有する抗エボラウイルス抗体を含む。
「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むものとする。本発明のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３に、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるランダム変異誘発もしくは部位特異的変異誘発によって、またはｉｎ ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって変異が導入されたもの）を含み得る。しかし、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の哺乳動物種（例えば、マウス）の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列がヒトＦＲ配列に移植されたｍＡｂを含むことは意図されない。この用語は、非ヒト哺乳動物において、または非ヒト哺乳動物の細胞において組換えにより産生された抗体を包含する。この用語は、ヒト被験体から単離されたまたはヒト被験体において生成された抗体を含むことは意図されない。
「組換え」という用語は、本明細書で使用される場合、例えばＤＮＡスプライシングおよびトランスジェニック発現を含む、組換えＤＮＡ技術として当技術分野で公知の技術または方法によって創出されたか、発現されたか、単離されたか、または得られる、本発明の抗体またはその抗原結合断片を指す。この用語は、非ヒト哺乳動物（トランスジェニック非ヒト哺乳動物、例えば、トランスジェニックマウスを含む）もしくは細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）発現系において発現された、または組換えコンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体を指す。
「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ）」または「に特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔｏ）」などの用語は、抗体またはその抗原結合断片が、抗原と、生理的条件下で比較的安定な複合体を形成することを意味する。特異的な結合は、平衡解離定数が少なくとも約１×１０−７Ｍまたはそれ未満であることによって特徴付けられ得る（例えば、ＫＤが小さいほど、結合が緊密であるこが示される）。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、当技術分野で周知であり、それらとして、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などが挙げられる。本明細書に記載されている通り、エボラウイルスに特異的に結合する抗体が、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）により同定されている。さらに、エボラウイルスの１つのドメイン、および１種もしくは複数種の追加的な抗原に結合する多重特異性抗体、またはエボラウイルスの２つの異なる領域に結合する二重特異性もなお、本明細書で使用される「特異的に結合する」抗体とみなされる。
「高親和性」抗体という用語は、エボラウイルスに対して、表面プラズモン共鳴、例えばＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって、または溶液親和性ＥＬＩＳＡによって測定して、少なくとも１０−７Ｍ；好ましくは１０−８Ｍ；より好ましくは１０−９Ｍ、なおより好ましくは１０−１０Ｍ、なおより好ましくは１０−１１Ｍ、なおより好ましくは１０−１２ＭのＫＤで表される結合親和性を有するｍＡｂを指す。
「遅い解離速度（ｓｌｏｗ ｏｆｆ ｒａｔｅ）」、「Ｋｏｆｆ」または「ｋｄ」という用語は、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって決定した場合、抗体がエボラウイルスまたはエボラウイルスＧＰを発現するウイルス様粒子から１×１０−３ｓ−１またはそれ未満、好ましくは１×１０−４ｓ−１またはそれ未満の速度定数で解離することを意味する。
抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合断片」などという用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在するものであるか、酵素によって得られたものであるか、合成されたものであるか、または遺伝子操作されたものであるポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書で使用される場合、エボラウイルスに結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片を指す。
特定の実施形態では、本発明の抗体または抗体断片は、エボラウイルスによって引き起こされる感染を治療するために有用な抗ウイルス薬、第２の抗エボラウイルス抗体または任意の他の治療用部分などのリガンドまたは治療用部分などの部分とコンジュゲートすることができる（「免疫コンジュゲート」）。
「単離された抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、エボラウイルスに特異的に結合する単離された抗体、またはその断片は、エボラウイルス以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
「遮断抗体」または「中和抗体」（または「エボラウイルス活性を中和する抗体」または「アンタゴニスト抗体」）とは、本明細書で使用される場合、エボラウイルスに結合することにより、エボラウイルスの少なくとも１つの生物学的活性の阻害をもたらす抗体を指すことが意図される。例えば、本発明の抗体は、エボラウイルスの宿主細胞への付着または侵入を防止または遮断する。さらに、「中和抗体」とは、病原体の、宿主における感染を開始し、かつ／または永続する能力を中和することができる、すなわち、防止する、阻害する、低下させる、妨害するまたは干渉することができる抗体である。「中和抗体」および「中和する抗体（ａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｓ）」または「中和する抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」という用語は、本明細書では互換的に使用される。これらの抗体は、単独でまたは他の抗ウイルス剤と組み合わせて、適切な製剤化の際に、もしくは能動的なワクチン接種に関連して予防剤もしくは治療剤として、または診断ツールとして使用することができる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、免疫系のエフェクター細胞により、膜表面抗原に本明細書に記載のものなどの特異的抗体が結合した標的細胞が積極的に溶解される、細胞媒介性免疫防御の機構である。そのように、これは、例えば、ウイルス特異的抗体が感染の拡散を制限するように作用することができる１つの機構である。古典的ＡＤＣＣは、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、マクロファージ、好中球、および特定の例では好酸球によって媒介される。
「表面プラズモン共鳴」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変更を検出することによってリアルタイム生体分子相互作用を分析することを可能にする光学現象を指す。
「ＫＤ」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図される。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域内の特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原性決定因子を指す。単一の抗原は、１つ超のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合し得、また、異なる生物学的効果を有し得る。「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位も指す。エピトープとは、抗体が結合する抗原の領域も指す。エピトープは、構造にまたは機能的に定義することができる。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープは、直鎖状ではないアミノ酸で構成されるコンフォメーショナルなものでもあり得る。ある特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、もしくはスルホニル基などの、分子化学的に活性な表面の群分けである決定因子を含み得、また、ある特定の実施形態では、特定の３次元の構造特性および／または特定の電荷特性を有し得る。
「交差競合する」という用語は、本明細書で使用される場合、抗原に結合し、かつ別の抗体またはその抗原結合断片の結合を阻害または遮断する抗体またはその抗原結合断片を意味する。この用語は、２つの抗体の間の両方向の競合、すなわち、第１の抗体が結合し、第２の抗体の結合を遮断すること、およびその逆も包含する。ある特定の実施形態では、第１の抗体および第２の抗体は、同じエピトープに結合し得る。あるいは、第１の抗体および第２の抗体は、異なるが、重複するエピトープに結合し得、したがって、一方の結合により、例えば立体的な障害によって第２の抗体の結合が阻害または遮断される。抗体間の交差競合は、当技術分野で公知の方法によって、例えば、リアルタイム無標識バイオレイヤー干渉アッセイによって測定することができる。試験抗体が本発明の参照抗エボラウイルスＧＰ抗体と交差競合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和条件下でエボラウイルスＧＰまたはペプチドに結合させる。次に、試験抗体のエボラウイルスＧＰに結合する能力を評価する。試験抗体が参照抗エボラウイルスＧＰ抗体による飽和結合後にエボラウイルスＧＰに結合することができれば、試験抗体が参照抗エボラウイルス抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方では、試験抗体が参照抗エボラウイルスＧＰ抗体による飽和結合後にエボラウイルスＧＰに結合することができなければ、試験抗体は、本発明の参照抗エボラウイルスＧＰ抗体が結合したエピトープと同じエピトープに結合し得る。
「実質的な同一性」または「実質的に同一の」という用語は、核酸またはその断片について言及する場合に、別の核酸（またはその相補鎖）と、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適にアラインメントした時に、以下に考察する通りＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰなどの任意の周知の配列同一性のアルゴリズムによって測定して、ヌクレオチド配列同一性が、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９０％、およびより好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％であることを示す。特定の例では、参照核酸分子と実質的な同一性を有する核酸分子は、参照核酸分子によりコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードし得る。
ポリペプチドに適用される通り、「実質的な類似性」または「実質的に類似した」という用語は、２つのペプチド配列が、例えばプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴにより、初期値のギャップ重みづけ（ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）を使用して最適にアラインメントした時に、少なくとも９０％の配列同一性、なおより好ましくは少なくとも９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。同一でない残基の位置は、保存的アミノ酸置換により異なることが好ましい。「保存的アミノ酸置換」とは、アミノ酸残基が、化学的性質（例えば、電荷または疎水性）が同様の側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されるものである。一般に、保存的アミノ酸置換ではタンパク質の機能的性質は実質的に変化しない。２つまたはそれ超のアミノ酸配列が保存的置換によって互いと異なる場合には、類似性のパーセントまたは程度を上向きに調整して置換の保存性を補正することができる。この調整を行うための手段は当業者には周知である（例えば、Pearson（１９９４年）Methods Mol. Biol.、２４巻：３０７〜３３１頁を参照されたい）。側鎖の化学的性質が同様であるアミノ酸の群の例としては、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；３）アミドを含有する側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニン、およびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸塩、および７）硫黄を含有する側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。好ましい保存的アミノ酸置換基は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リシン−アルギニン、アラニン−バリン、グルタミン酸塩−アスパラギン酸、およびアスパラギン−グルタミンである。あるいは、保存的置き換えは、Gonnetら、（１９９２年）Science、２５６巻：１４４３〜４５頁に開示されているＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中程度に保存的」な置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負ではない値を有する任意の変化である。
ポリペプチドの配列類似性は、一般には、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアでは、保存的アミノ酸置換を含む様々な置換、欠失および他の改変に割り当てられる類似性の評価基準を使用して、同様の配列をマッチさせる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、初期パラメータを用いて使用して、異なる種の生物体に由来する相同なポリペプチドなどの密接に関連するポリペプチド間、または野生型タンパク質とその変異タンパク質の間の配列相同性または配列同一性を決定することができるＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどのプログラムを含有する。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１中のプログラムであるＦＡＳＴＡを使用し、初期値または推奨されるパラメータを用いて比較することもできる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）により、クエリ配列と検索配列の間で最も良く重複する領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性がもたらされる（Pearson（２０００年）上記）。本発明の配列を、異なる生物体に由来する多数の配列を含有するデータベースと比較する際の別の好ましいアルゴリズムは、初期パラメータを使用した、コンピュータプログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Altschulら、（１９９０年）J. Mol. Biol.、２１５巻：４０３〜４１０頁、および（１９９７年）Nucleic Acids Res.、２５巻：３３８９〜３４０２頁を参照されたい。
「治療有効量」という句は、投与に対して所望の効果が生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に左右され、当業者が公知の技法を使用して確認することができる（例えば、Lloyd（１９９９年）The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compoundingを参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「被験体」という用語は、ウイルス感染などの疾患または障害の好転、防止および／または処置を必要とする動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを指す。被験体は、エボラウイルス感染を有する可能性がある、またはエボラウイルス感染が発生する素因がある。「エボラウイルス感染が発生する素因がある」被験体、または「エボラウイルス感染にかかるリスクが上昇している可能性がある」被験体とは、自己免疫疾患に起因して免疫系が損なわれている被験体、免疫抑制療法を受けている人（例えば、臓器移植後）、ヒト免疫不全症候群（ＨＩＶ）もしくは後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、白血球が枯渇するもしくは破壊される特定の形態の貧血を患っている人、放射線療法もしくは化学療法を受けている人、または炎症性障害を患っている人である。さらに、非常に若いかまたは高齢である被験体はリスクが上昇している。感染した動物もしくはヒト患者と物理的に接触するまたは物理的に近接するかまたは感染した動物もしくはヒト患者由来の体液もしくは組織に曝露されるあらゆる人は、エボラウイルス感染にかかるリスクが上昇している。さらに、例えば、人口密度の高い都市、もしくはエボラウイルスへの感染が確認されたもしくは疑わしい被験体の極めて近傍に住んでいる被験体は、疾患のアウトブレイクの近傍にあることに起因して、または、例えば、病院職員、医薬品研究者、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが既知であるかもしくは有することが疑わしい地域もしくは国を訪れたかまたは訪れる予定がある個体、または頻繁に渡航する人は、職業選択に起因して、エボラウイルスに感染するリスクがある。
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、または「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、それを必要とする被験体に本発明の抗体などの治療剤を投与することによりエボラウイルス感染の少なくとも１つの症状または兆候の重症度を低下または好転させることを指す。この用語は、疾患の進行または感染の悪化の阻害を包含する。この用語は、疾患の正の予後、すなわち、本発明の抗体などの治療剤を投与すると、被験体が感染を免れる可能性がある、またはウイルス力価が低下するもしくはなくなる可能性があることも包含する。治療剤は、治療用量で被験体に投与することができる。
「防止する（ｐｒｅｖｅｎｔ）」、「防止すること（ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」または「防止（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」という用語は、本発明の抗体の投与でエボラウイルス感染の顕在化またはエボラウイルス感染のあらゆる症状もしくは兆候を阻害することを指す。この用語は、ウイルスに曝露した被験体またはエボラウイルス感染を有するリスクがある被験体における感染の拡散の防止を包含する。
本明細書で使用される場合、「抗ウイルス薬」という用語は、それが化学的部分であるか生物学的療法であるかにかかわらず、被験体におけるウイルス感染を処置する、防止する、または好転させるために使用される任意の抗感染剤または療法を指す。例えば、本発明では、抗ウイルス薬としては、これだけに限定されないが、エボラウイルスに対する抗体（一実施形態では、エボラウイルスに対する抗体は、本明細書に記載のものとは異なり得る）、エボラウイルスに対するワクチン、ＺＭａｐｐ療法、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンを挙げることができる。本発明では、処置される感染は、エボラウイルスによって引き起こされるものである。
一般的な説明
エボラウイルス疾患は、Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ科のメンバーである繊維状ウイルス粒子によって引き起こされる、重症の、多くの場合に致死的な疾患である。ヒトにおける疾患を引き起こすことが可能なエボラウイルス属の種がいくつか公知である。これらとしては、ザイール、スーダン、タイフォレスト（以前はアイボリーコースト）およびブンディブギョが挙げられる。このウイルスの天然のレザバーは分かっておらず、現在まで、承認された療法またはワクチンは存在しない。
このウイルスのゲノムは、長さおよそ１９ｋｂのネガティブセンスＲＮＡの単一鎖からなる。エボラビリオンは、７つのタンパク質：表面糖タンパク質（ＧＰ）、核タンパク質（ＮＰ）、４つのビリオン構造タンパク質（ＶＰ４０、ＶＰ３５、ＶＰ３０、およびＶＰ２４）、およびＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（Ｌ）を含有する（Feldmanら、（１９９２年）Virus Res.、２４巻、１〜１９頁）。
ウイルスの表面上に存在する唯一のタンパク質は糖タンパク質である。ＲＮＡ編集に起因して、ＧＰ遺伝子の転写により、非構造的な可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）および表面ビリオンＧＰを含めたウイルスＧＰをコードするいくつかのＧＰ遺伝子特異的ｍＲＮＡの合成がもたらされる（Volchkova, VAら、（１９９８年）、Virology、２５０巻：４０８〜４１４頁）。どちらのＧＰも、細胞内プロセシングの間に細胞プロテアーゼフューリンによってタンパク質分解的に切断される前駆体分子として合成される（Volchkov, VEら、（（１９９８年）、Proc Natl Acad Sci USA、９５巻：５７６２〜５７６７頁）。ｓＧＰは二量体を形成するが、切断されたカルボキシ末端断片は単量体である。ウイルス表面スパイクは、ジスルフィド結合によって連結された２つのサブユニットＧＰ１およびＧＰ２で構成されるＧＰ１，２の三量体として形成される（Volchkova, VAら、（１９９８年）、Virology、２５０巻：４０８〜４１４頁；Falzarano, D.ら、（２００６年）、Chembiochem、７巻：１６０５〜１６１１頁）。ＧＰ１は、宿主細胞へのウイルスの付着を媒介することが公知であり、ＧＰ２は、膜融合に関与する（Sanchez, A.ら、（１９９６年）、Proc Natl Acad Sci USA、９３巻：３６０２〜３６０７頁；Alazard-Dany, N.ら、（２００６年）、J. Gen. Virol.、８７巻：１２４７〜１２５７頁）。
ＥＢＯＶ感染の間、著しい量の可溶性糖タンパク質（ｓＧＰ）がウイルスに感染した細胞から放出される。この形態のＧＰは、表面ＧＰまたはビリオンＧＰを対象とするウイルス中和抗体に結合し、隔離することが示されている（Dolnik, O.ら、（２００４年）、EMBO J、２３巻：２１７５〜２１８４頁）。この抗体遮断以外に、ウイルス複製および／または病原性に関する可溶性ＧＰの役割は明確に定義されていない。Ｅｓｃｕｄｅｒｏ−Ｐｅｒｅｚらによるごく最近の試験では、ｓＧＰが、感染していない樹状細胞およびマクロファージに結合し、それを活性化し、炎症性サイトカインおよび抗炎症性サイトカインの分泌を誘導し得ることが示されている。さらに、Ｅｓｃｕｄｅｒｏ−Ｐｅｒｅｚらは、ｓＧＰが内皮細胞機能に影響を及ぼし、血管透過性に影響を及ぼし得ることを実証した。（Escudero-Perezら、（２０１４年）、PLOS Pathogens、１０巻、１１号：１〜１７頁）。これは、感染後の調節不全の炎症性宿主反応を説明し得、また、ウイルス病原性の一因となり得る。
感染症を予防または処置するための受動免疫療法が、通常は高力価の中和抗体を含有する回復期ヒト血清の形態で、１世紀超にわたって使用されてきた（Goodら（１９９１年）Cancer、６８巻：１４１５〜１４２１頁）。現在では、多数の精製モノクローナル抗体が、抗微生物薬として使用するために目下前臨床開発および臨床開発中である（Marascoら、２００７年；Nature Biotechnology、２５巻：１４２１〜１４３４頁）。ある特定の抗体は、エボラウイルス糖タンパク質に結合することが記載されている。(例えば、Audetら(2014年)Scientific Reports 4:6881;Chenら (2014年)ACS Chem Biol. 10月17日;9巻(10号):2263〜73頁;Koellhoffer JFら(2012年), Chembiochem. 11月26日;13巻(17号):2549〜57頁;Qiu, X.ら、Nature(2014年)10月2日;514(7520):47〜53頁参照)。
本発明者らは、エボラウイルスＧＰに特異的に結合し、エボラウイルスとこれらの細胞の相互作用を調節する完全ヒト抗体およびその抗原結合断片について本明細書に記載している。抗エボラウイルスＧＰ抗体は、エボラウイルスに高親和性で結合することが可能である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、エボラウイルスＧＰに結合し、ウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入を遮断することが可能な遮断抗体である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、エボラウイルスの細胞への結合を遮断することが可能であり、したがって、宿主細胞へのウイルス感染を阻害または中和することが可能である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することが可能であり、したがって、ウイルスを有する細胞の破壊に役立ち得る。ある特定の実施形態では、抗体は、両方の様式で作用することが可能であり、例えば、ウイルス感染力を中和することが可能であり、かつ、ＡＤＣＣを媒介することが可能である。一部の実施形態では、抗体は、エボラウイルス感染に罹患している被験体を処置するために有用であり得る。抗体は、それを必要とする被験体に投与されると、被験体におけるエボラウイルスなどのウイルスによる感染を低下させることが可能である。抗体は、被験体におけるウイルス負荷量を減少させるために使用することができる。抗体は、単独で使用することもでき、補助療法として、ウイルス感染を処置するための当技術分野で公知の他の治療用部分またはモダリティと共に使用することもできる。ある特定の実施形態では、これらの抗体は、エボラウイルスＧＰのアミノ末端内のエピトープに結合することが可能である。ある特定の実施形態では、これらの抗体は、エボラウイルスＧＰのカルボキシ末端内のエピトープに結合することが可能である。さらに、同定された抗体は、哺乳動物を感染から保護するために予防的に（感染前に）使用することもでき、以前に確立された感染を好転させるため、または感染に関連する少なくとも１つの症状を好転させるために治療的に（感染が確立された後に）使用することもできる。
例示的なエボラウイルスＧＰの全長アミノ酸配列は、それぞれＧｅｎＢａｎｋにおいて受託番号ＡＨＸ２４６４９．１およびＡＨＸ２４６４９．２として、および配列番号３１４および３１５にも示されている。ＧＰ１は配列番号３１４または配列番号３１５に示されている全長ＧＰのアミノ酸残基１〜５０１にわたり、ＧＰ２は該全長ＧＰのアミノ酸残基５０２から６７６までにわたる。受託番号ＡＨＸ２４６４９．１でも示される全長ＥＢＯＶ ＧＰは、配列番号３１８に示されているものなど、デカヒスチジンタグとカップリングしたものであってよい。可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＨＸ２４６５０．１として示され、配列番号３１６として（シグナル配列が結合している）も、および配列番号３１７として（シグナル配列を有さないが、ｍｙｃ−ｍｙｃ−ｈｉｓタグを含有する）も示される。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、全長エボラウイルスＧＰなどの一次免疫原を用いて、または組換え型のエボラウイルスＧＰまたはその断片を用いて免疫し、その後、二次免疫原を用いて、またはエボラウイルスＧＰの免疫原性的に活性な断片を用いて免疫したマウスから得られる。ある特定の実施形態では、抗体は、全長エボラウイルスＧＰ（ザイール２０１４、ＧｅｎＢａｎｋ ＫＪ６６０３４６．２参照；配列番号３１３も参照）をコードするＤＮＡを用いて免疫したマウスから得られる。免疫原は、エボラウイルスＧＰの生物学的に活性な断片および／もしくは免疫原性断片、またはエボラウイルスＧＰの活性断片をコードするＤＮＡであり得る。断片は、アミノ末端断片（例えば、ＧＰ１）、またはカルボキシ末端断片（例えば、ＧＰ２）を含めた、ウイルスＧＰの任意の領域に由来するものであってよい。ペプチドは、タグ付けまたはＫＬＨなどのキャリア分子とのコンジュゲーションのために、ある特定の残基の付加または置換を含むように改変することができる。例えば、ペプチドのＮ末端またはＣ末端のいずれかにシステインを付加することもでき、リンカー配列を付加して、免疫のために例えばＫＬＨとのコンジュゲーションのためにペプチドを調製することもできる。
本発明のある特定の抗エボラウイルス抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイによって決定される通り、エボラウイルスに結合し、その活性を中和することが可能である。本発明の抗体の、エボラウイルスに結合し、その活性、したがって、ウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入、その後に続くウイルス感染を中和する能力は、本明細書に記載されている結合アッセイ、または活性アッセイを含む当業者に公知の任意の標準方法を使用して測定することができる。
結合活性を測定するための非限定的な、例示的なｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが本明細書の実施例３に例示されている。実施例３では、エボラウイルスに対する抗エボラウイルスＧＰ抗体の結合親和性および解離定数をＢｉａｃｏｒｅによって決定した。実施例４および７では、中和アッセイを使用して、エボラウイルスの多様な株の感染力を決定した。
エボラウイルスＧＰに特異的な抗体は、追加的な標識または部分を含有しなくてもよく、Ｎ末端またはＣ末端の標識または部分を含有してもよい。一実施形態では、標識または部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識（もしあれば）の位置により、ペプチドを結合させる表面に対するペプチドの方向を決定することができる。例えば、表面がアビジンでコーティングされている場合、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面から遠位になるように向き付けられる。一実施形態では、標識は、放射性核種、蛍光色素またはＭＲＩにより検出可能な標識であってよい。ある特定の実施形態では、そのような標識された抗体を、イメージングアッセイを含む診断アッセイにおいて使用することができる。
抗体の抗原結合断片
特に他の指示がなければ、「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、免疫グロブリン重鎖２本と免疫グロブリン軽鎖２本で構成される抗体分子（すなわち、「抗体分子全体」）、ならびにその抗原結合断片を包含すると理解されるものとする。抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合断片」などの用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然に存在するものであるか、酵素によって得られたものであるか、合成されたものであるか、または遺伝子操作されたものであるポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の「抗原結合断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書で使用される場合、エボラウイルスに特異的に結合する能力を保持する抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体断片とは、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲを含有する断片、または単離されたＣＤＲを含み得る。ある特定の実施形態では、「抗原結合断片」という用語は、多重特異性抗原結合性分子のポリペプチド断片を指す。抗体の抗原結合断片は、例えば、抗体分子全体から、タンパク質消化または抗体可変ドメインおよび（任意選択で）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子工学技法などの任意の適切な標準技法を使用して引き出すことができる。そのようなＤＮＡは公知であり、かつ／または、例えば商業的な供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ−抗体ライブラリーを含む）から容易に入手可能である、もしくは合成することができる。ＤＮＡは、配列決定し、例えば、１つまたは複数の可変ドメインおよび／または定常ドメインを適切なコンフィギュレーションに配置するため、またはコドンを導入するため、システイン残基を創出するため、アミノ酸を修飾する、付加するもしくは欠失させるためになど、化学的にまたは分子生物学的技法を使用することによって操作することができる。
抗原結合断片の非限定的な例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または制約されたＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４ペプチドを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位が挙げられる。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲ移植抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｙ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫薬（ｓｍａｌｌ ｍｏｄｕｌａｒ ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の工学的に操作された分子も、本明細書で使用される「抗原結合断片」という表現に包含される。
抗体の抗原結合断片は、一般には、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成のものであってよく、一般に、１つまたは複数のフレームワーク配列と隣接しているかまたはインフレームである少なくとも１つのＣＤＲを含む。ＶＨドメインとＶＬドメインが会合した抗原結合断片では、ＶＨドメインとＶＬドメインは、互いに対して任意の適切な配置に位置し得る。例えば、可変領域は、二量体であり得、ＶＨ−ＶＨ二量体、ＶＨ−ＶＬ二量体またはＶＬ−ＶＬ二量体を含有する。あるいは、抗体の抗原結合断片は、単量体ＶＨドメインまたはＶＬドメインを含有し得る。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインと共有結合により連結した少なくとも１つの可変ドメインを含有し得る。本発明の抗体の抗原結合断片内に見出すことができる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な、例示的なコンフィギュレーションとしては、（ｉ）ＶＨ−ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ−ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ−ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ−ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ−ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ−ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ−ＣＨ１−ＣＨ２−ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ−ＣＨ２−ＣＨ３；、および（ｘｉｖ）ＶＬ−ＣＬが挙げられる。上に列挙されている例示的なコンフィギュレーションのいずれかを含む、可変ドメインおよび定常ドメインのコンフィギュレーションのいずれにおいても、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いと直接連結していてもよく、完全なまたは部分的なヒンジまたはリンカー領域によって連結されていてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５個、１０個、１５個、２０個、４０個、６０個またはそれ超）のアミノ酸からなってよく、単一のポリペプチド分子内の隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメインの間に柔軟または半柔軟な連結をもたらす。さらに、本発明の抗体の抗原結合断片は、互いと、かつ／または１つまたは複数の単量体ＶＨまたはＶＬドメインと非共有結合により会合した（例えば、ジスルフィド結合（複数可）による）、上に列挙されている可変ドメインおよび定常ドメインコンフィギュレーションのいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または他の多量体）を含んでよい。
抗体分子全体と同様に、抗原結合断片は、単一特異性であっても多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。多重特異性抗体の抗原結合断片は、一般には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含み、各可変ドメインが、別々の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書に開示されている例示的な二重特異性抗体形式を含む多重特異性抗体形式はいずれも、当技術分野において利用可能な常套的な技法を使用して、本発明の抗体の抗原結合断片に関する使用に適応させることができる。
ヒト抗体の調製
トランスジェニックマウスにおいてヒト抗体を生成するための方法は、当技術分野で公知である。任意のそのような公知の方法を本発明に関して使用して、エボラウイルスＧＰに特異的に結合するヒト抗体を作出することができる。以下の任意の１つを含む免疫原を使用して、エボラウイルスに対する抗体を生成することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、全長のネイティブなエボラウイルスＧＰ（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＨＸ２４６４９．１（配列番号３１４）およびＡＨＸ２４６４９．２（配列番号３１５を参照されたい）を用いて、または糖タンパク質またはその断片をコードするＤＮＡを用いて免疫したマウスから得られる。あるいは、エボラウイルスＧＰまたはその断片は、標準の生化学的技法を使用して作製し、改変し、免疫原として使用することができる。一実施形態では、免疫原は、組換えによって産生されたエボラウイルスＧＰまたはその断片である。本発明のある特定の実施形態では、免疫原は、市販のエボラウイルスＧＰであってよい。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の追加免疫注射剤を投与することができる。ある特定の実施形態では、追加免疫注射剤は、１種または複数種の市販のエボラウイルスＧＰを含んでよい。ある特定の実施形態では、免疫原は、Ｅ．ｃｏｌｉにおいて、またはチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞などの任意の他の真核細胞または哺乳動物細胞において発現させた組換えエボラウイルスＧＰであってよい。
ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術（例えば、ＵＳ６，５９６，５４１参照、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標））またはモノクローナル抗体を生成するための任意の他の公知の方法を使用して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を有する、エボラウイルスＧＰに対する高親和性キメラ抗体を最初に単離する。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）技術は、内在性マウス定常領域遺伝子座に作動可能に連結したヒト重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスの生成を伴い、したがって、マウスは、抗原刺激に応答して、ヒト可変領域およびマウス定常領域を含む抗体を産生する。抗体の重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、ヒト重鎖および軽鎖定常領域をコードするＤＮＡに作動可能に連結する。次いで、ＤＮＡを、完全ヒト抗体を発現することが可能な細胞において発現させる。
一般に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスを目的の抗原を用いて攻撃し、抗体を発現するマウスからリンパ細胞（例えば、Ｂ細胞など）を回収する。リンパ細胞を骨髄腫細胞株と融合して不死ハイブリドーマ細胞株を調製することができ、そのようなハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択して、目的の抗原に特異的な抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を同定する。重鎖および軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを単離し、望ましいアイソタイプの重鎖および軽鎖の定常領域と連結することができる。そのような抗体タンパク質は、ＣＨＯ細胞などの細胞において産生させることができる。あるいは、抗原特異的キメラ抗体または軽鎖および重鎖の可変ドメインをコードするＤＮＡを抗原特異的リンパ球から直接単離することができる。
最初に、ヒト可変領域とマウス定常領域とを有する高親和性キメラ抗体を単離する。下の実験の節と同様に、抗体を特徴付け、親和性、選択性、エピトープなどを含む望ましい特性について選択する。マウス定常領域を所望のヒト定常領域で置き換えて、本発明の完全ヒト抗体、例えば、野生型または改変ＩｇＧ１またはＩｇＧ４を生成する。選択される定常領域は特定の使用に応じて変動し得るが、可変領域には高親和性の抗原結合性および標的特異性の特徴が備わっている。
生物学的同等性
本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体および抗体断片は、記載されている抗体のアミノ酸配列とは異なるが、エボラウイルスに結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。そのようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比較して、１つまたは複数のアミノ酸の付加、欠失、または置換を含むが、記載されている抗体と本質的に同等の生物学的活性を示す。同様に、本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示されている配列と比較して１つまたは複数のヌクレオチドの付加、欠失、または置換を含むが、本発明の抗体または抗体断片と本質的に生物学的同等である抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。
２つの抗原結合性タンパク質、または抗体は、例えば、それらが、同じモル濃度の用量で、同様の実験条件下、単回用量または複数回用量のいずれかで投与した場合に、吸収の速度および程度に有意差が示されない医薬等価物または医薬代替物であれば、生物学的同等であるとみなされる。一部の抗体は、それらの吸収の程度が等価であるが、それらの吸収速度は等価でなく、それでも、そのような吸収速度の差が意図的なものであり、標識に反映され、例えば長期使用に関して有効な体内薬物濃度を実現するために必須ではなく、試験される特定の薬品に関して医学的に重要でないことが理由で生物学的同等性とみなすことができれば、等価物または医薬代替物とみなされる。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、それらの安全性、純度、または効力に臨床的に意味のある差異がなければ、生物学的同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、患者が、参照製品と生物学的製剤の１回または複数回の切り替えを、そのような切り換えを行わずに継続される治療と比較して、免疫原性の臨床的に有意な変化を含む有害作用のリスクの上昇、または効果の減弱の予測を伴わずに行うことができれば、生物学的同等である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、その両方が、使用される条件（複数可）に関して、共通の作用機構（複数可）によって作用するものであれば、そのような機構が分かっている限りでは、生物学的同等である。
生物学的同等性は、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏにおける方法によって実証することができる。生物学的同等性の評価基準としては、例えば、（ａ）血液、血漿、血清、または他の生体液中の抗体またはその代謝産物の濃度を時間の関数として測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ試験；（ｂ）ヒトｉｎ ｖｉｖｏ生物学的利用能データと相関し、それが合理的に予測される、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験；（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的効果を時間の関数として測定する、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ試験；および（ｄ）抗体の安全性、有効性、または生物学的利用能または生物学的同等性を確立する、良好に管理された臨床試験が挙げられる。
本発明の抗体の生物学的同等性バリアントは、例えば、残基もしくは配列の様々な置換を行うこと、または、生物学的活性に必要ではない末端もしくは内部の残基もしくは配列を欠失させることによって構築することができる。例えば、生物学的活性に必須ではないシステイン残基を、欠失させるか、または他のアミノ酸で置き換えて、復元時の不必要なまたは正しくない分子内ジスルフィド架橋の形成を防止することができる。他の状況では、生物学的同等な抗体とは、抗体のグリコシル化特性を改変するアミノ酸の変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体バリアントを含み得る。
Ｆｃバリアントを含む抗エボラウイルス抗体
本発明のある特定の実施形態によると、例えば、酸性ｐＨにおいて中性ｐＨと比較してＦｃＲｎ受容体への抗体結合を増強するまたは減弱させる、１つまたは複数の変異を含むＦｃドメインを含む抗エボラウイルス抗体が提供される。例えば、本発明は、ＦｃドメインのＣＨ２領域またはＣＨ３領域に変異を含み、この変異（複数可）により、酸性環境（例えば、約５．５から約６．０までのｐＨ範囲であるエンドソーム内）におけるＦｃドメインのＦｃＲｎへの親和性が増大している、抗エボラウイルスＧＰ抗体を包含する。そのような変異により、動物に投与した際の抗体の血清中半減期の増大をもたらすことができる。そのようなＦｃ改変の非限定的な例としては、例えば、２５０位における改変（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位における改変（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位における改変（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷもしくはＴ）、２５４位における改変（例えば、ＳもしくはＴ）、および２５６位における改変（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤもしくはＴ）；または４２８位および／もしくは４３３位における改変（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱもしくはＫ）および／もしくは４３４位における改変（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、ＦもしくはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４ＦもしくはＮ４３４Ｙ］）；または２５０位および／もしくは４２８位における改変；または３０７位もしくは３０８位における改変（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）、および４３４位における改変が挙げられる。一実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）の改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）の改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）の改変；２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）の改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌの改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８の改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、改変は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）の改変を含む。
例えば、本発明は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される１つまたは複数の変異の対または群を含むＦｃドメインを含む抗エボラウイルス抗体を包含する。本明細書に開示されている抗体可変ドメイン内の全ての可能性のある前述のＦｃドメイン変異および他の変異の組合せが本発明の範囲内に入るものと企図される。
本発明は、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含み、キメラＣＨ領域が、１つ超の免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む抗エボラウイルス抗体も包含する。例えば、本発明の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部または全部を含むキメラＣＨ領域と、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部または全部の組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態によると、本発明の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「ヒンジ上部」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けに従ってアミノ酸残基２１６〜２２７位）と、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「ヒンジ下部」配列（ＥＵ番号付けに従ってアミノ酸残基２２８〜２３６位）の組み合わせを含み得る。ある特定の実施形態によると、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４ヒンジ上部に由来するアミノ酸残基およびヒトＩｇＧ２ヒンジ下部に由来するアミノ酸残基を含む。本明細書に記載されているキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある特定の実施形態では、抗体の治療的または薬物動態的性質に悪影響を及ぼすことなく、改変されたＦｃエフェクター機能を示す（例えば、２０１３年２月１日出願の米国仮出願第６１／７５９，５７８号を参照されたい）。
抗体の生物学的特性
一般に、本発明の抗体は、エボラウイルスＧＰに結合することによって機能する。例えば、本発明は、エボラウイルスＧＰに（例えば、２５℃または３７℃で）、表面プラズモン共鳴によって、例えば、本明細書に記載のアッセイフォーマットを使用して測定して、１０−７Ｍ未満のＫＤで結合する抗体および抗体の抗原結合性断を含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、表面プラズモン共鳴によって、例えば、本明細書に記載のアッセイフォーマット、または実質的に類似したアッセイを使用して測定して、エボラウイルスＧＰに、約１０ｎＭ未満、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、または１００ｐＭ未満のＫＤで結合する。
本発明は、本明細書で定義されているアッセイフォーマット、または実質的に類似したアッセイを使用して、解離半減期（ｔ１／２）が、例えば、２５℃で表面プラズモン共鳴によって測定して約３分超である、または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して約１分超であり、ｐＨ５またはｐＨ６では解離半減期（ｔ１／２）が少なくとも３倍である、エボラウイルスに結合する抗体およびその抗原結合断片も包含する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体または抗原結合断片は、エボラウイルスに、例えば本明細書で定義されているアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ−捕捉または抗原−捕捉フォーマット）、または実質的に類似したアッセイを使用して、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定して、約１０分超、約３０分超、約６０分超、約１００分超、約２００分超、約３００分超、約４００分超、約５００分超、約６００分超、約７００分超、約８００分超、約９００分超、または約１０００分超のｔ１／２で結合する。
本発明は、エボラウイルスのその宿主細胞に対する感染力を中和する抗体またはその抗原結合断片も包含する。一部の実施形態では、抗体は、ザイール２０１４ ＶＬＰに対して、約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０で中和効力を示す。本発明の抗体はまた、ザイール１９９５、ザイール２０１４、エボラスーダン、ブンディブギョおよびコートジボワール（アイボリーコースト）を含めた様々なＥＢＯＶの株に由来するＧＰを含有するエボラウイルスＶＬＰとも交差反応する。本発明の抗体はまた、実施例５に示されている通り、ＡＤＣＣも媒介する。さらに、本発明の抗体は、実施例６に示されている通り、ＥＢＯＶ ＧＰに結合する他の抗体と交差競合する。
一実施形態では、本発明は、エボラウイルスＧＰに特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合断片であって、以下の特性：（ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること；（ｂ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合、ＥＢＯＶ、またはエボラウイルス糖タンパク質を発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に、１０−７Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）で結合すること；（ｃ）ｐＨ５またはｐＨ６において、ｐＨ７．４と比較して少なくとも３倍の解離半減期（ｔ１／２）を示すこと；（ｄ）約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０でのザイールエボラウイルスの中和を示すこと；（ｅ）エボラウイルス感染細胞の抗体依存性細胞傷害を示すこと；（ｆ）ザイール２０１４、ザイール１９９５、スーダン、ブンディブギョおよびコートジボワールからなる群から選択されるエボラウイルスＶＬＰの１種または複数種の株と交差反応すること；（ｇ）表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合することのうちの１つまたは複数を示す、単離された組換え抗体またはその抗原結合断片を提供する。
本発明の抗体は、上述の生物学的特性の１つまたは複数、またはそれらの任意の組合せを有し得る。本発明の抗体のある特定の性質が以下に要約されている。本発明の抗体の他の生物学的特性は、本明細書の実施例を含む本開示についての総説から当業者には明らかになろう。
エピトープマッピングおよび関連する技術
本発明は、エボラウイルスのＧＰ内に見いだされる１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する抗エボラウイルス抗体を包含する。抗体が結合するエピトープは、エボラウイルスＧＰ分子内に位置する３個またはそれ超（例えば、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個またはそれ超）のアミノ酸の単一の連続した配列からなり得る（例えば、ドメイン内の直鎖状エピトープ）。あるいは、エピトープは、エボラウイルスＧＰ分子内に位置する複数の連続していないアミノ酸（またはアミノ酸配列）からなり得る（例えば、コンフォメーショナルエピトープ）。
当業者に公知の様々な技法を使用して、抗体が、ポリペプチドまたはタンパク質内の「１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する」かどうかを決定することができる。例示的な技法としては、例えば、Antibodies、HarlowおよびLane（Cold Spring Harbor Press、Cold Spring Harbor、NY）に記載されているものなどの常套的な交差遮断アッセイ（ｃｒｏｓｓ−ｂｌｏｃｋｉｎｇ ａｓｓａｙ）が挙げられる。他の方法としては、アラニンスキャニング変異性分析、ペプチドブロット分析（Reineke（２００４年）Methods Mol. Biol.、２４８巻：４４３〜６３頁）、ペプチド切断分析結晶学的試験およびＮＭＲ分析が挙げられる。さらに、エピトープ切り出し、エピトープ抽出および抗原の化学修飾などの方法を使用することができる（Tomer（２０００年）Prot. Sci.、９巻：４８７〜４９６頁）。抗体が相互作用する、ポリペプチド内のアミノ酸を同定するために使用することができる別の方法は、質量分析によって検出される水素／重水素交換である。一般に述べると、水素／重水素交換方法は、目的のタンパク質を重水素で標識し、その後、重水素で標識したタンパク質に抗体を結合させることを伴う。次に、タンパク質／抗体複合体を水に移し、抗体複合体により保護されているアミノ酸内の交換可能なプロトンは、重水素から水素への逆交換を、界面の一部ではないアミノ酸内の交換可能なプロトンよりも遅い速度で受ける。結果として、タンパク質／抗体界面の一部を形成するアミノ酸は重水素を保持することができ、したがって、界面に含まれないアミノ酸と比較して高い質量を示す。抗体を解離させた後、標的タンパク質をプロテアーゼによる切断および質量分析に供し、それにより、抗体が相互作用する特異的なアミノ酸に対応する、重水素で標識された残基を明らかにする。例えば、Ehring（１９９９年）Analytical Biochemistry、２６７巻：２５２〜２５９頁；EngenおよびSmith（２００１年）Anal. Chem.、７３巻：２５６Ａ〜２６５Ａ頁を参照されたい。
「エピトープ」という用語は、Ｂ細胞および／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。Ｂ細胞エピトープは、連続したアミノ酸、または、タンパク質の三次フォールディングによって並んだ連続していないアミノ酸のどちらからも形成され得る。連続したアミノ酸から形成されるエピトープは、一般には、変性溶媒に曝露しても保持されるが、三次フォールディングによって形成されるエピトープは、一般には、変性溶媒を用いた処理で失われる。エピトープは、一般には、少なくとも３個、通常は少なくとも５個または８〜１０個のアミノ酸を独特の空間的コンフォメーションで含む。
抗原構造に基づく抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＡＳＡＰ）としても公知の修飾補助プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ）（ＭＡＰ）は、同じ抗原を対象とする多数のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）を、化学的にまたは酵素によって修飾した抗原表面への各抗体の結合プロファイルの類似性に応じてカテゴリーに分ける方法である（ＵＳ２００４／０１０１９２０を参照されたい）。各カテゴリーは、別のカテゴリーによって表されるエピトープとは明瞭に異なるかまたは部分的に重複する独特のエピトープを反映し得る。この技術により、遺伝的に同一の抗体を迅速にフィルタリングすることが可能になり、したがって、特徴付けの焦点を遺伝的に別個の抗体に合わせることができる。ハイブリドーマスクリーニングに適用する場合には、ＭＡＰにより、所望の特性を有するｍＡｂを産生する希少なハイブリドーマクローンの同定を容易にすることができる。ＭＡＰを使用して、本発明の抗体を異なるエピトープに結合する抗体の群に分別することができる。
ある特定の実施形態では、エボラウイルス抗体またはその抗原結合断片は、天然の形態もしくは組換えによって産生された、エボラウイルスＧＰにおいて例示された領域の任意の１つまたは複数内のエピトープ、またはその断片に結合する。
本発明は、同じエピトープ、またはそのエピトープの一部に結合する抗エボラウイルスＧＰ抗体を包含する。同様に、本発明は、本明細書に記載されている特定の例示的な抗体のいずれかと、エボラウイルスＧＰまたはその断片への結合について競合する抗エボラウイルスＧＰ抗体も包含する。例えば、本発明は、表１および２に記載されている抗体から得られる１つまたは複数の抗体と、エボラウイルスへの結合について交差競合する抗エボラウイルスＧＰＰ抗体を包含する。
抗体が参照抗エボラウイルスＧＰ抗体と同じエピトープに結合するかどうか、または結合について競合するかどうかは、当技術分野で公知の常套的な方法を使用することによって容易に決定することができる。例えば、試験抗体が本発明の参照抗エボラウイルスＧＰ抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和条件下でエボラウイルスＧＰまたはペプチドに結合させる。次に、試験抗体の、エボラウイルスＧＰ分子に結合する能力を評価する。参照抗エボラウイルスＧＰ抗体による飽和結合後に試験抗体がエボラウイルスＧＰに結合することができれば、試験抗体が参照抗エボラウイルス抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。他方では、参照抗エボラウイルスＧＰ抗体による飽和結合後に試験抗体エボラウイルスＧＰに結合することができなければ、試験抗体は、本発明の参照抗エボラウイルスＧＰ抗体が結合したエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。
抗体が参照抗エボラウイルスＧＰ抗体と結合について競合するかどうかを決定するために、上記の結合方法を２つの方向で実施する：第１の方向では、参照抗体を飽和条件下でエボラウイルスＧＰに結合させ、その後、試験抗体のエボラウイルスＧＰへの結合を評価する。第２の方向では、試験抗体を飽和条件下でエボラウイルスＧＰに結合させ、その後、参照抗体のエボラウイルスＧＰへの結合を評価する。どちらの方向でも第１の（飽和）抗体のみがエボラウイルスＧＰに結合することができた場合、試験抗体と参照抗体がエボラウイルスＧＰへの結合について競合すると結論付けられる。当業者には理解される通り、参照抗体と結合について競合する抗体は、必ずしも参照抗体と同一のエピトープに結合するのではない可能性があり、重複または隣接するエピトープに結合することによって参照抗体の結合を立体的に遮断する可能性もある。
２つの抗体は、それぞれが他方の抗体の抗原への結合を競合的に阻害（遮断）する場合、同じまたは重複するエピトープに結合する。すなわち、１倍、５倍、１０倍、２０倍または１００倍過剰の一方の抗体により、他方の結合が、競合結合アッセイで測定した場合、少なくとも５０％であるが好ましくは７５％、９０％またはさらには９９％阻害される（例えば、Junghansら、Cancer Res. １９９０年、５０巻：１４９５〜１５０２頁を参照されたい）。あるいは、２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるまたは排除する抗原のアミノ酸変異の本質的に全てにより他方の結合も低下するまたは排除される場合、同じエピトープを有する。２つの抗体は、一方の抗体の結合を低下させるまたは排除するアミノ酸変異の一部により他方の結合も低下するまたは排除される場合、重複するエピトープを有する。
次いで、追加的な常套的な実験（例えば、ペプチド変異および結合分析）を実施して、観察された試験抗体の結合の欠如が実際に参照抗体と同じエピトープに結合することに起因するものであるか、または観察された結合の欠如の原因が立体的遮断（もしくは別の現象）であるかどうかを確認することができる。この種の実験は、当技術分野において利用可能なＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリーまたは任意の他の定量的または定性的抗体結合アッセイを使用して実施することができる。
免疫コンジュゲート
本発明は、エボラウイルス感染を処置するために抗ウイルス薬などの治療用部分とコンジュゲートしたヒト抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体（「免疫コンジュゲート」）を包含する。本明細書で使用される場合、「免疫コンジュゲート」という用語は、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、ペプチドまたはタンパク質または治療剤と化学的にまたは生物学的に連結した抗体を指す。抗体は、その標的と結合することが可能な限りは分子に沿った任意の位置で、放射性薬剤、サイトカイン、インターフェロン、標的またはレポーター部分、酵素、ペプチドまたは治療剤と連結することができる。免疫コンジュゲートの例としては、抗体薬物コンジュゲートおよび抗体−毒素融合タンパク質が挙げられる。一実施形態では、薬剤は、エボラウイルスまたはエボラウイルスＧＰに対する第２の異なる抗体であってよい。ある特定の実施形態では、抗体は、ウイルス感染細胞に特異的な薬剤とコンジュゲートすることができる。抗エボラウイルスＧＰ抗体とコンジュゲートすることができる治療用部分の型は、処置される状態および実現したい所望の治療効果を考慮にいれる。免疫コンジュゲートを形成
するための適切な薬剤の例は当技術分野で公知である；例えば、ＷＯ０５／１０３０８１を参照されたい。
多重特異性抗体
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、または多重特異性であってよい。多重特異性抗体は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的なものであってもよく、１つ超の標的ポリペプチドに特異的な抗原結合性ドメインを含有するものであってもよい。例えば、Tuttら、１９９１年、J. Immunol.、１４７巻：６０〜６９頁；Kuferら、２００４年、Trends Biotechnol.、２２巻：２３８〜２４４頁を参照されたい。
本発明の多重特異性抗原結合性分子またはそのバリアントはいずれも、当業者には分かるであろう標準の分子生物学的技法（例えば、組換えＤＮＡおよびタンパク質の発現技術）を使用して構築することができる。
一部の実施形態では、エボラウイルス特異的抗体を、エボラウイルスの別個のドメインに結合する可変領域が連結して単一の結合性分子内に二重ドメイン特異性が付与された二重特異性形式（「二重特異性」）で生成する。適切に設計された二重特異性体は、特異性および結合活性の両方が増大することにより、全体的なエボラウイルス−タンパク質阻害有効性を増強し得る。個々のドメイン（例えば、Ｎ末端ドメインのセグメント）に対する特異性を有する可変領域、または１つのドメイン内の異なる領域に結合することが可能な可変領域を、各領域が別々のエピトープまたは１つのドメイン内の異なる領域に同時に結合することを可能にする構造的足場上で対合させる。一実施例では、二重特異性体のために、１つのドメインに対する特異性を有する結合体由来の重鎖可変領域（ＶＨ）を、第２のドメインに対する特異性を有する一連の結合体由来の軽鎖可変領域（ＶＬ）で組み換えて、元のＶＨと、そのＶＨについての元の特異性を乱さずに対合させることが可能な非コグネイトＶＬパートナーを同定する。このように、単一のＶＬセグメント（例えば、ＶＬ１）を２つの異なるＶＨドメイン（例えば、ＶＨ１およびＶＨ２）と組み合わせて、２つの結合「アーム」（ＶＨ１−ＶＬ１およびＶＨ２−ＶＬ１）で構成される二重特異性体を生成することができる。単一のＶＬセグメントの使用により、二重特異性体を生成するために使用されるクローニング、発現、および精製プロセスにおける系の複雑さが低下し、それにより、単純化され、かつ効率が上昇する（例えば、ＵＳＳＮ１３／０２２７５９およびＵＳ２０１０／０３３１５２７を参照されたい）。
あるいは、１つ超のドメイン、および、これだけに限定されないが、例えば、第２の種々の抗エボラウイルス抗体などの第２の標的に結合する抗体を、本明細書に記載されている技法または当業者に公知の他の技法を使用して二重特異性形式に調製することができる。別個の領域に結合する抗体可変領域を、例えばエボラウイルス上の関連する部位に結合する可変領域と連結して、単一の結合性分子内に二重抗原特異性を付与することができる。この性質の適切に設計された二重特異性体は二重の機能を果たす。細胞外ドメインに対する特異性を有する可変領域を、細胞外ドメインの外部に対する特異性を有する可変領域と組み合わせ、各可変領域が別々の抗原に結合することを可能にすることを可能にする構造的足場上で対合させる。
本発明に関して使用することができる例示的な二重特異性抗体形式は、第１の免疫グロブリン（Ｉｇ）ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインの使用を伴い、ここで、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインおよび第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、少なくとも１つのアミノ酸により互いと異なり、少なくとも１つのアミノ酸の差異により、二重特異性抗体のプロテインＡへの結合が、アミノ酸の差異がない二重特異性抗体と比較して低減する。一実施形態では、第１のＩｇ ＣＨ３ドメインは、プロテインＡに結合し、第２のＩｇ ＣＨ３ドメインは、Ｈ９５Ｒの改変（ＩＭＧＴエクソン番号付けによる；ＥＵ番号付けによるとＨ４３５Ｒ）などの、プロテインＡへの結合を低減または消滅させる変異を含有する。第２のＣＨ３は、Ｙ９６Ｆの改変（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＹ４３６Ｆ）をさらに含んでよい。第２のＣＨ３に見いだすことができるさらなる改変としては、ＩｇＧ１抗体の場合では、Ｄ１６Ｅ、Ｌ１８Ｍ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＤ３５６Ｅ、Ｌ３５８Ｍ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、およびＶ４２２Ｉ）；ＩｇＧ２抗体の場合では、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴ；ＥＵによるとＮ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、およびＶ４２２Ｉ）；ならびに、ＩｇＧ４抗体の場合では、Ｑ１５Ｒ、Ｎ４４Ｓ、Ｋ５２Ｎ、Ｖ５７Ｍ、Ｒ６９Ｋ、Ｅ７９Ｑ、およびＶ８２Ｉ（ＩＭＧＴによる；ＥＵによるとＱ３５５Ｒ、Ｎ３８４Ｓ、Ｋ３９２Ｎ、Ｖ３９７Ｍ、Ｒ４０９Ｋ、Ｅ４１９Ｑ、およびＶ４２２Ｉ）が挙げられる。上記の二重特異性抗体形式の変形は本発明の範囲内に入るものと企図される。
本発明に関して使用することができる他の例示的な二重特異性形式としては、限定することなく、例えば、ｓｃＦｖに基づくまたはダイアボディ二重特異性形式、ＩｇＧ−ｓｃＦｖ融合物、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）−Ｉｇ、クアドローマ、ノブイントゥホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）、共通軽鎖（例えば、ノブイントゥホールを有する共通軽鎖など）、ＣｒｏｓｓＭａｂ、ＣｒｏｓｓＦａｂ、（ＳＥＥＤ）ボディ、ロイシンジッパー、デュオボディ（Ｄｕｏｂｏｄｙ）、ＩｇＧ１／ＩｇＧ２、二重作用性Ｆａｂ（ＤＡＦ）−ＩｇＧ、およびＭａｂ２二重特異性形式が挙げられる（前述の形式の概説については、例えば、Kleinら、２０１２年、mAbs、４巻：６号、１〜１１頁、およびそこに引用されている参考文献を参照されたい）。二重特異性抗体は、例えば、既定の組成、結合価および幾何学的形状を有する多量体複合体に自己集合する部位特異的な抗体−オリゴヌクレオチドコンジュゲートを生成するために直交性の化学反応性を有する非天然アミノ酸を使用する場合には、ペプチド／核酸コンジュゲーションを使用して構築することもできる（例えば、Kazaneら、J. Am. Chem. Soc.［Epub:２０１２年１２月４日］を参照
されたい）。
治療的投与および製剤
本発明は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体またはその抗原結合断片を含む治療用組成物を提供する。本発明による治療用組成物は、移行、送達、耐容性などの改善をもたらすために製剤に組み入れられた適切なキャリア、賦形剤、および他の薬剤と共に投与する。多数の適切な製剤は、全ての薬剤学者に公知の処方集：Remington's Pharmaceutical Sciences、Mack Publishing Company、Easton、PAにおいて見いだすことができる。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト剤、軟膏剤、ゼリー剤、ワックス剤、油剤、脂質、小胞を含有する脂質（陽イオン性または陰イオン性）（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）など）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト剤、水中油型および油中水型乳剤、カーボワックス乳剤（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル剤、ならびにカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Powellら、「Compendium of excipients for parenteral formulations」、PDA（１９９８年）J Pharm Sci Technol、５２巻：２３８〜３１１頁も参照されたい。
抗体の用量は、投与を受ける被験体の年齢およびサイズ、標的疾患、状態、投与経路などに応じて変動し得る。本発明の抗体を、成体患者における疾患または障害を処置するため、またはそのような疾患を防止するために使用する場合、本発明の抗体を、通常は体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、より好ましくは体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ〜約６０ｍｇ、約１０ｍｇ〜約５０ｍｇ、または約２０ｍｇ〜約５０ｍｇの単回用量で投与することが有利である。状態の重症度に応じて、処置の頻度および持続時間を調整することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、少なくとも約０．１ｍｇ〜約８００ｍｇ、約１〜約５００ｍｇ、約５〜約３００ｍｇ、または約１０〜約２００ｍｇ、〜約１００ｍｇ、または〜約５０ｍｇの初回用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、初回用量の後に、第２のまたは複数のその後の抗体またはその抗原結合断片の用量を、初回用量とほぼ同じかまたはそれ未満であってよい量で投与することができ、ここで、その後の用量は、少なくとも１日〜３日；少なくとも１週間、少なくとも２週間；少なくとも３週間；少なくとも４週間；少なくとも５週間；少なくとも６週間；少なくとも７週間；少なくとも８週間；少なくとも９週間；少なくとも１０週間；少なくとも１２週間；または少なくとも１４週間の間をあける。
様々な送達系が公知であり、それらを使用して本発明の医薬組成物を投与することができる。例えば、リポソーム、微小粒子、マイクロカプセルへの封入、ウイルス変異体を発現させることが可能な組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシス（例えば、Wuら、（１９８７年）J. Biol. Chem.、２６２巻：４４２９〜４４３２頁を参照されたい）。導入の方法としては、これだけに限定されないが、皮内経路、経皮経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が挙げられる。組成物は、任意の都合のよい経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜の内層（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を通じた吸収によって投与することができ、また、他の生物学的に活性な薬剤と一緒に投与することができる。投与は、全身的なものであっても局所的なものであってもよい。医薬組成物は、小胞、特にリポソームとして送達することもできる（例えば、Langer（１９９０年）Science、２４９巻：１５２７〜１５３３頁を参照されたい）。
本発明の抗体を送達するためのナノ粒子の使用も本明細書において企図される。抗体とコンジュゲートしたナノ粒子は治療への適用および診断への適用のどちらにも使用することができる。抗体とコンジュゲートしたナノ粒子ならびに調製および使用の方法は、Arruebo, M.ら、２００９年（「Antibody-conjugated nanoparticles for biomedical applications」、J. Nanomat.２００９巻、文献番号４３９３８９、２４頁、doi: 10.1155/2009/439389）により詳細に記載されている。ウイルス感染細胞を標的とするために、ナノ粒子を開発し、医薬組成物中に含有される抗体とコンジュゲートすることができる。薬物送達用のナノ粒子は、例えば、ＵＳ８２５７７４０、またはＵＳ８２４６９９５にも記載されている。
ある特定の状況では、医薬組成物を制御放出系で送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、制御放出系を組成物の標的の近傍に置くことができ、したがって、全身用量のほんの一部のみが必要になる。
注射用調製物は、静脈内、皮下、皮内、頭蓋内、腹腔内および筋肉内への注射、点滴注入などのための剤形を含み得る。これらの注射用調製物は、公知の方法によって調製することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、上記の抗体またはその塩を、注射用に従来使用される滅菌水性媒体または油性媒体中に溶解させるか、懸濁させるか、または乳化することによって調製することができる。注射用の水性媒体としては、例えば、生理的食塩水、グルコースおよび他の補助剤を含有する等張性溶液などがあり、これらは、例えばアルコール（例えば、エタノール）、多価アルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、ＨＣＯ−５０（硬化ヒマシ油のポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加生成物）］などの適切な可溶化剤と組み合わせて使用することができる。油性媒体としては、例えば、ゴマ油、ダイズ油などが使用されており、これらは、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールなどの可溶化剤と組み合わせて使用することができる。したがって調製された注射剤は、適切なアンプル中に充填することが好ましい。
本発明の医薬組成物は、標準の針およびシリンジを用いて皮下または静脈内に送達することができる。さらに、皮下送達に関しては、ペン型送達デバイスが本発明の医薬組成物の送達において容易に適用される。そのようなペン型送達デバイスは、再使用可能であっても使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達デバイスでは、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジが利用される。カートリッジ中の医薬組成物が全て投与され、カートリッジが空になったら、空のカートリッジを容易に廃棄し、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達デバイスを再使用することができる。使い捨てペン型送達デバイスでは、交換可能なカートリッジは用いられない。その代わりに、使い捨てペン型送達デバイスにはデバイス内のレザバー中に保持された医薬組成物が充填される。レザバー中の医薬組成物が無くなったら、デバイス全体を廃棄する。
多数の再使用可能なペン型送達デバイスおよび自動注射器型送達デバイスが本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される。例としては、これらに確実には限定されないが、ほんの一部挙げると、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ，Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、ＵＫ）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ペン（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｕｒｇｈｄｏｒｆ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ペン、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ペン（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）、ＢＤ（商標）ペン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、ＮＪ）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、およびＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）がある。本発明の医薬組成物の皮下送達に適用される使い捨てペン型送達デバイスの例としては、これらに確実には限定されないが、ほんの一部挙げると、ＳＯＬＯＳＴＡＲ（商標）ペン（Ｓａｎｏｆｉ−Ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）自動注射器（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、ＣＡ）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ， Ｌ．Ｐ．）およびＨＵＭＩＲＡ（商標）ペン（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）がある。
上記の経口使用または非経口使用のための医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形に調製することが有利である。そのような単位用量の剤形としては、例えば、錠剤、ピル剤、カプセル剤、注射（アンプル）、坐剤などが挙げられる。含有される抗体の量は、一般に、単位用量中、剤形当たり約５〜約５００ｍｇである。抗体は、特に注射の形態では約５〜約１００ｍｇ含有されることが好ましく、他の剤形に関しては約１０〜約２５０ｍｇ含有されることが好ましい。
抗体の治療的使用
本発明の抗体は、エボラウイルス感染に関連する疾患または障害または状態を治療および／もしくは防止するため、ならびに／または、そのような疾患、障害または状態に関連する少なくとも１つの症状を好転させるために有用である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、エボラウイルスによって引き起こされる重症かつ急性の呼吸器感染に罹患している被験体を処置するために有用である。一部の実施形態では、本発明の抗体は、宿主におけるウイルス力価を低下させることまたはウイルス負荷量を減少させることにおいて有用である。一実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片は、エボラウイルスに感染している患者に、治療用量で投与することができる。
本発明の１種または複数種の抗体は、疾患または障害の症状または状態の１つまたは複数を軽減もしくは防止するため、またはその重症度を低下させるために投与することができる。抗体は、これだけに限定されないが、発熱、頭痛、疲労、食欲不振、筋痛、下痢、嘔吐、腹痛、脱水および原因不明の出血を含めたエボラウイルス感染の少なくとも１つの症状の重症度を好転または低下させるために使用することができる。
本明細書では、１種または複数種の本発明の抗体を、エボラウイルス感染が発生するリスクがある被験体、例えば、免疫無防備状態の個体、医療従事者、エボラウイルスを有する人に曝露された疑いがある人、感染した個体と物理的に接触するまたは物理的に近接する人、病院職員、医薬品研究者、エボラ患者が処置されている病院設備もしくは施設の清掃を担当する保守要員、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが分かっているまたは有する疑いがある地域もしくは国を訪れたことがあるまたは訪れる予定がある個体または頻繁に渡航する人に対して予防的に使用することも企図される。
本発明のさらなる実施形態では、本抗体を、エボラウイルス感染に罹患している患者を処置するための医薬組成物を調製するために使用する。本発明の別の実施形態では、本抗体を、エボラウイルス感染を処置するまたは好転させるために有用な当業者に公知の任意の他の薬剤または任意の他の治療と共に、補助治療として使用する。
組み合わせ治療
組み合わせ治療は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体、および、本発明の抗体または発明の抗体の生物学的に活性な断片と有利に組み合わせられる任意の追加的な治療剤を含む。本発明の抗体は、エボラウイルス感染の処置に使用される１種または複数種の薬物または薬剤と相乗的に組み合わせることができる。
例えば、ウイルス感染を処置するための例示的な薬剤としては、例えば、抗ウイルス薬、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、エボラウイルスに対する異なる抗体、エボラウイルスに対するワクチン、ＺＭａｐｐ療法、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）、インターフェロン、またはエボラウイルス感染を処置するための任意の他の緩和療法を挙げることができる。
一部の実施形態では、本発明の抗体は、エボラウイルスに感染している患者におけるウイルス負荷量を減少させるため、または感染の１つまたは複数の症状を好転させるために、第２の治療剤と組み合わせることができる。
ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、エボラウイルスＧＰに特異的な別の異なる抗体または抗体カクテルであり、異なる抗体またはカクテル内の抗体は、本発明の抗体と同じエピトープまたは重複するエピトープに結合するものであってもそうでなくてもよい。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は異なるエボラウイルスタンパク質に対する抗体である。第２の抗体は、ウイルスの異なる株に由来する１種または複数種の異なるエボラウイルスタンパク質に特異的なものであってよい。本明細書では、エボラウイルスに対する中和活性または阻害活性を有する本発明の抗体の組合せ（「カクテル」）の使用が企図される。一部の実施形態では、競合しない抗体を、それを必要とする被験体に、変異に起因してエスケープするエボラウイルスの能力を低下させるために、組み合わせて投与することができる。一部の実施形態では、組合せを構成する抗体は、ＧＰ上の別個の重複しないエピトープに結合する。組合せを構成する抗体は、ウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入および／または宿主細胞との融合を遮断し得る。抗体は、ザイール、スーダン、ブンディブギョ、またはコートジボワールから選択されるＥＢＯＶの株に由来するＧＰと相互作用し得、単独で使用する場合、または上記の薬剤の任意の１つまたは複数と組み合わせて使用する場合、記載されているエボラウイルス株の任意の１つまたは複数を中和し得る。
本明細書では、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体の組合せの使用も企図されており、ここで、組合せは、交差競合しない１種または複数種の抗体を含む。ある特定の実施形態では、組合せは、少なくとも３種の本発明の抗体の混合物で構成されるカクテルを含む。カクテル内の抗体は、ウイルスもしくはウイルス感染細胞を中和する能力、または、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する能力、または、ＥＢＯＶ可溶性糖タンパク質（ｓＧＰ）に結合する能力が異なるものであってよい。
本明細書で使用される場合、「組み合わせて」という用語は、少なくとも１つの本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体、または本発明の抗体の１種または複数種で構成されるカクテルを投与する前、それと同時に、またはその後に、追加的な治療的に活性な構成成分（複数可）を投与することができることを意味する。「組み合わせて」という用語は、抗エボラウイルスＧＰ抗体および第２の治療剤の逐次的投与または同時的投与も包含する。
追加的な治療的に活性な構成成分（複数可）は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を投与する前に被験体に投与することができる。例えば、第１の構成成分を、第２の構成成分の１週間前、７２時間前、６０時間前、４８時間前、３６時間前、２４時間前、１２時間前、６時間前、５時間前、４時間前、３時間前、２時間前、１時間前、３０分前、１５分前、１０分前、５分前、または１分未満前に投与に投与する場合、第１の構成成分が第２の構成成分「の前に」投与されるとみなすことができる。他の実施形態では、追加的な治療的に活性な構成成分（複数可）は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を投与した後に被験体に投与することができる。例えば、第１の構成成分を、第２の構成成分を投与した１分後、５分後、１０分後、１５分後、３０分後、１時間後、２時間後、３時間後、４時間後、５時間後、６時間後、１２時間後、２４時間後、３６時間後、４８時間後、６０時間後、７２時間後に投与する場合、第１の構成成分は、第２の構成成分「の後に」投与されるとみなされる。さらに他の実施形態では、追加的な治療的に活性な構成成分（複数可）は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体を投与するのと同時に被験体に投与することができる。「同時に」投与するとは、本発明の目的に関して、例えば、抗エボラウイルスＧＰ抗体および追加的な治療的に活性な構成成分を、単一の剤形として被験体に投与すること、または、別々の剤形として互いから約３０分またはそれ未満以内に被験体に投与することを含む。別々の剤形として投与する場合、各剤形は、同じ経路で投与することができる（例えば、抗エボラウイルスＧＰ抗体と追加的な治療的に活性な構成成分の両方を静脈内に投与することができるなど）。あるいは、各剤形は、異なる経路によって投与することができる（例えば、抗エボラウイルスＧＰ抗体を静脈内に投与することができ、追加的な治療的に活性な構成成分を経口的に投与することができる）。いずれにしても、構成成分を単一の剤形として同じ経路によって投与すること、別々の剤形として同じ経路によって投与すること、または、別々の剤形として異なる経路によって投与することは、全て、本開示の目的に関して、「同時に投与すること」とみなされる。本開示の目的に関して、抗エボラウイルスＧＰ抗体を追加的な治療的に活性な構成成分を投与した「前に」、それと「同時に」またはその「後に」（これらの用語は本明細書において上で定義されている）投与することは、抗エボラウイルスＧＰ抗体を、追加的な治療的に活性な構成成分「と組み合わせて」投与することとみなされる。
本発明は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体と、本明細書の他の箇所に記載の追加的な治療的に活性な構成成分（複数可）のうちの１つまたは複数を共に製剤化した医薬組成物を包含する。
投与レジメン
ある特定の実施形態によると、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体（または抗エボラウイルスＧＰ抗体と本明細書で言及されている追加的な治療的に活性な薬剤のいずれかとの組合せを含む医薬組成物）の単回用量を、それを必要とする被験体に投与することができる。本発明のある特定の実施形態によると、抗エボラウイルスＧＰ抗体（または抗エボラウイルスＧＰ抗体と本明細書で言及されている追加的な治療的に活性な薬剤のいずれかとの組合せを含む医薬組成物）の複数回用量を、被験体に既定の時間経過にわたり投与することができる。本発明のこの態様による方法は、被験体に本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体の複数回用量を逐次的に投与することを含む。本明細書で使用される場合、「逐次的に投与すること」とは、抗エボラウイルスＧＰ抗体の各用量を、被験体に、異なる時点で、例えば、所定の間隔（例えば、数時間、数日、数週間または数カ月）を空けた異なる日に投与することを意味する。本発明は、患者に、抗エボラウイルスＧＰ抗体の単一の初回用量、その後に、抗エボラウイルスＧＰ抗体の１種または複数種の二次用量、および任意選択で、その後に抗エボラウイルスＧＰ抗体の１種または複数種の三次用量を逐次的に投与することを含む方法を包含する。
「初回用量」、「二次用量」および「三次用量」という用語は、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体の投与の時間的な順序を指す。したがって、「初回用量」とは、処置レジメンの開始時に投与される用量であり（「ベースライン用量」とも称される）、「二次用量」とは、初回用量の後に投与される用量であり、「三次用量」とは、二次用量の後に投与される用量である。初回用量、二次用量、および三次用量は全て、同じ量の抗エボラウイルスＧＰ抗体を含有し得るが、一般には、投与の頻度に関して互いと異なり得る。しかし、ある特定の実施形態では、初回用量、二次用量および／または三次用量に含有される抗エボラウイルスＧＰ抗体の量は、処置の過程中、互いに変動する（例えば、必要に応じて上方または下方に調整する）。ある特定の実施形態では、２つまたはそれ超（例えば、２つ、３つ、４つ、または５つ）の用量を処置レジメンの開始時に「ローディング用量」として投与し、続いて、その後の用量をより低い頻度で投与する（例えば、「維持用量」）。
本発明のある特定の例示的な実施形態では、二次用量および／または三次用量のそれぞれを、直前の用量の１〜４８時間後（例えば、１時間後、１時間半後、２時間後、２時間半後、３時間後、３時間半後、４時間後、４時間半後、５時間後、５時間半後、６時間後、６時間半後、７時間後、７時間半後、８時間後、８時間半後、９時間後、９時間半後、１０時間後、１０時間半後、１１時間後、１１時間半後、１２時間後、１２時間半後、１３時間後、１３時間半後、１４時間後、１４時間半後、１５時間後、１５時間半後、１６時間後、１６時間半後、１７時間後、１７時間半後、１８時間後、１８時間半後、１９時間後、１９時間半後、２０時間後、２０時間半後、２１時間後、２１時間半後、２２時間後、２２時間半後、２３時間後、２３時間半後、２４時間後、２４時間半後、２５時間後、２５時間半後、２６時間後、２６時間半後、またはそれ超）に投与する。「直前の用量」という句は、本明細書で使用される場合、多数回の投与の連続において、連続内の、間に用量を挟まずすぐ次の用量の投与前に患者に投与される抗エボラウイルスＧＰ抗体の用量を意味する。
本発明のこの態様による方法は、患者に、抗エボラウイルスＧＰ抗体の二次用量および／または三次用量を任意の数で投与することを含み得る。例えば、ある特定の実施形態では、単一の二次用量のみを患者に投与する。他の実施形態では、２またはそれ超（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ超）の二次用量を患者に投与する。同様に、ある特定の実施形態では、単一の三次用量のみを患者に投与する。他の実施形態では、２またはそれ超の（例えば、２、３、４、５、６、７、８、またはそれ超）の三次用量を患者に投与する。
本発明のある特定の実施形態では、二次用量および／または三次用量を患者に投与する頻度は、処置レジメンの経過にわたって変動し得る。投与の頻度は、処置の過程中に、臨床検査後に個々の患者の必要性に応じて医師が調整することもできる。
抗体の診断への使用
本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体は、例えば、診断目的で、試料中のエボラウイルスを検出および／または測定するために使用することができる。一部の実施形態では、ウイルス感染などの疾患または障害を検出するためのアッセイにおける、本発明の１種または複数種の抗体の使用が企図される。エボラウイルスの例示的な診断アッセイは、例えば、患者から得た試料を、本発明の抗エボラウイルスＧＰ抗体と接触させることを含み、ここで、抗エボラウイルスＧＰ抗体は、検出可能な標識もしくはレポーター分子で標識するか、または、エボラウイルスを患者試料から選択的に単離するための捕捉用リガンドとして使用する。あるいは、標識されていない抗エボラウイルスＧＰ抗体を、それ自体が検出可能に標識された二次抗体と組み合わせて診断への適用に使用することができる。検出可能な標識またはレポーター分子は、３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３５Ｓ、もしくは１２５Ｉなどの放射性同位元素；フルオレセインイソチオシアネート、もしくはローダミンなどの蛍光もしくは化学発光部分；またはアルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、もしくはルシフェラーゼなどの酵素であってよい。試料中のエボラウイルスを検出または測定するために使用することができる特定の例示的なアッセイとしては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、および蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）が挙げられる。
本発明によるエボラウイルス診断アッセイにおいて使用することができる試料としては、正常な状態または病態の下にある、患者から得られる、エボラウイルスまたはその断片を検出可能な分量で含有する任意の組織または流体試料が挙げられる。一般に、ベースラインまたは標準のエボラウイルスのレベルを最初に確立するために、健康な患者（例えば、エボラウイルスに関連する疾患を患っていない患者）から得られる特定の試料中のエボラウイルスのレベルを測定する。次いで、このベースラインのエボラウイルスのレベルを、エボラウイルスに関連する状態、またはそのような状態に関連する症状を有する疑いがある個体から得られる試料で測定されたエボラウイルスのレベルと比較することができる。
エボラウイルスに特異的な抗体は、追加的な標識または部分を含有しなくてもよく、Ｎ末端またはＣ末端の標識または部分を含有してもよい。一実施形態では、標識または部分はビオチンである。結合アッセイでは、標識（もしあれば）の位置により、ペプチドを結合させる表面に対するペプチドの方向を決定することができる。例えば、表面がアビジンでコーティングされている場合には、Ｎ末端ビオチンを含有するペプチドは、ペプチドのＣ末端部分が表面から遠位になるように向き付けられる。
以下の実施例は、当業者に本発明の方法および組成物の実施および使用の仕方についての完全な開示および記載を提供するために提示するものであり、発明者らが自身の発明とみなすものの範囲を限定するものではない。使用される数字（例えば、量、温度など）に関しては正確さを確実にするための試みが行われているが、いくらかの実験的な誤差および偏差が考慮されるべきである。別段の指定のない限り、部は重量部であり、分子量は平均分子量であり、温度は摂氏度であり、室温は約２５℃であり、圧力は大気または大気付近の圧力である。
（実施例１）
エボラウイルスに対するヒト抗体の生成
ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域およびカッパ軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを含むマウスにおいて、エボラウイルスに対するヒト抗体を生成した。一実施形態では、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスにおいてエボラウイルスに対するヒト抗体を生成した。一実施形態では、ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）（ＶＩ）マウスを、全長エボラウイルスＧＰ［ザイールエボラウイルス２０１４（ＧｅｎＢａｎｋ：ＫＪ６６０３４６．２）］をコードするＤＮＡを用いて免疫した。２週間離した２回の免疫で構成される促進レジメン（accelerated regimen）に従って抗体を生成した。抗体免疫応答をエボラウイルスＧＰ特異的イムノアッセイによってモニターした。例えば、血清を、精製された全長ＥＢＯＶ ＧＰ、サブユニットＧＰタンパク質（ＧＰ１およびＧＰ２）、ならびにＥＢＯＶ ＧＰを発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に対する特異的な抗体力価についてアッセイした。抗体産生クローンを、Ｂ細胞選別技術（ＢＳＴ）およびハイブリドーマ法の両方を使用して単離した。例えば、所望の免疫応答が実現された場合、脾細胞を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合してそれらの生存能力を保存し、ハイブリドーマ細胞株を形成した。ハイブリドーマ細胞株をスクリーニングし、選択してエボラウイルスＧＰ特異的抗体を産生する細胞株を同定した。この技法および上記の様々な免疫原を使用して、いくつかのキメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインとマウス定常ドメインを有する抗体）を得た。このように生成した例示的な抗体を、Ｈ１Ｍ１７３５４Ｎ、Ｈ２ａＭ１７３５６Ｎ、Ｈ１Ｍ１７３５７Ｎ、Ｈ２ａＭ１７３５８Ｎ、Ｈ２ａＭ１７３５９ＮおよびＨ２ａＭ１７３６０Ｎと名付けた。
抗エボラウイルス抗体はまた、米国特許第７５８２２９８号に記載の通り、抗原陽性マウスＢ細胞から、骨髄腫細胞との融合を行わずに直接にも単離した。この方法を使用して、いくつかの完全ヒト抗エボラウイルスＧＰ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体）を得た。このように生成した例示的な抗体を、Ｈ１Ｈ１７１３４Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１４２Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１５１Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６２Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１９３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１９６Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１９９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２１４Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２１９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２２３ＰおよびＨ１Ｈ１７２２８Ｐと名付けた。
この実施例の方法に従って生成した例示的な抗体の生物学的性質を下記の実施例に詳細に記載する。
（実施例２）
重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
表１は、本発明の選択された抗エボラウイルス抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子を表２に記載する。
本明細書では、抗体は、一般に以下の命名法に従って称される：Ｆｃ接頭辞（例えば、「Ｈ１Ｈ」、「Ｈ２Ｍ」など）、その後に数字の識別子（例えば、表１または２に示されている通り、「１７１３９」、「１７１６１」など）、その後に「Ｐ」、「Ｐ２」、「Ｎ」、Ｎ２、または「Ｂ」の接尾辞。本明細書で使用される抗体の名称におけるＨ１ＨおよびＨ２Ｍ接頭辞は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。したがって、この命名法に従って、本明細書では、抗体を、例えば、「Ｈ１Ｈ１７３５９Ｎ」、「Ｈ２ａＭ１７３５９Ｎ」などと称することができる。
例えば、「Ｈ１Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ１ Ｆｃを有し、「Ｈ２Ｍ」抗体はマウスＩｇＧ２ Ｆｃ（ａまたはｂアイソタイプ）を有する（抗体の名称の最初の「Ｈ」によって示される通り、可変領域は全て完全にヒト可変領域である）。当業者には理解される通り、特定のＦｃアイソタイプを有する抗体を、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体に変換することができるが（例えば、マウスＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗体を、ヒトＩｇＧ４を有する抗体に変換することができる、など）、いずれにしても、表１または２に示されている数字の識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含める）は同じままになり、抗原に対する結合特性は、Ｆｃドメインの性質にかかわらず同一であるかまたは実質的に類似したものになることが予測される。
（実施例３）
表面プラズモン共鳴によって決定される、エボラウイルスＧＰに対する抗体結合
Ａ．３７℃におけるｐＨ依存性解離速度定数
３７℃における精製された抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体に対するエボラウイルスＧＰ結合についての結合解離速度定数（ｋｄ）および解離半減期（ｔ１／２）を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００計器でリアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーアッセイを使用して決定した。ＣＭ４ Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面をモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）またはモノクローナルヤギ抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３８）とのアミンカップリングによって誘導体化して、精製された抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂを捕捉した。実施例３ＡにおけるＢｉａｃｏｒｅ結合試験は全て、０．０１ＭのＮａ２ＨＰＯ４／ＮａＨ２ＰＯ４、０．１５ＭのＮａＣｌ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０（ＰＢＳ−Ｐランニング緩衝液）で構成される緩衝液、ｐＨ７．４、ｐＨ６．０およびｐＨ５．０中で実施した。低ｐＨ追跡（low pH chase）を実施して、抗体の結合が低ｐＨで維持されるかどうかを評価した。これにより、エンドソームの酸性化による膜融合の間にウイルスが遭遇する条件が模倣される。ＰＢＳ−Ｐランニング緩衝液中に調製した種々の濃度のＣ末端ポリヒスチジンタグを有するエボラウイルスＧＰ（ＥｂｏｌａＧＰ．ｈｉｓ；Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号４０４４２−Ｖ０８Ｂ１）（９０ｎＭから１１．１ｎＭまでにわたる、３倍段階希釈物）を、抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂが捕捉された表面上に毎分２５μＬの流速で注射した。エボラウイルスＧＰと捕捉されたモノクローナル抗体との会合を５分間モニターし、ＰＢＳ−Ｐランニング緩衝液中でのエボラウイルスＧＰの解離を６分間モニターした。解離速度定数実験は全て３７℃で実施した。速度論的な解離（ｋｄ）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線あてはめソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルにあてはめることによって決定した。解離半減期（ｔ１／２）を反応速度定数から以下の通り算出した：
３７℃における精製された抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂに対するエボラウイルスＧＰ結合についての解離速度パラメータを表３に示す。
Ｂ．２５℃および３７℃における結合親和性および速度論
精製された抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂに対するエボラウイルスＧＰ結合についての平衡解離定数（ＫＤ値）を、Ｂｉａｃｏｒｅ ４０００計器を使用し、リアルタイム表面プラズモン共鳴バイオセンサーを使用して決定した。ＣＭ４ Ｂｉａｃｏｒｅセンサー表面をモノクローナルマウス抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３９）またはモノクローナルヤギ抗マウスＦｃ抗体（ＧＥ、＃ＢＲ−１００８−３８）とのアミンカップリングによって誘導体化して、精製された抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂを捕捉した。実施例３ＢにおけるＢｉａｃｏｒｅ結合試験は全て、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０で構成される緩衝液（ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液）中で実施した。ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中に調製した種々の濃度のＣ末端ポリヒスチジンタグを有するエボラウイルスＧＰ（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号４０４４２−Ｖ０８Ｂ１）（９０ｎＭから３．３ｎＭまでにわたる、３倍段階希釈物）を、抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂを捕捉した表面上に毎分３０μＬの流速で注射した。エボラウイルスＧＰと捕捉されたモノクローナル抗体との会合を５分間モニターし、ＨＢＳ−ＥＴランニング緩衝液中でのエボラウイルスＧＰの解離を１０分間モニターした。結合速度論実験は全て２５℃および３７℃で実施した。速度論的な会合（ｋａ）速度定数および解離（ｋｄ）速度定数を、Ｓｃｒｕｂｂｅｒ ２．０ｃ曲線あてはめソフトウェアを使用してリアルタイムセンサーグラムを１：１結合モデルにあてはめることによって決定した。結合解離平衡定数（ＫＤ）および解離半減期（ｔ１／２）を反応速度定数から以下の通り算出した：
２５℃および３７℃における精製された抗エボラウイルスＧＰ ｍＡｂに対するエボラウイルスＧＰ結合の結合速度論パラメータを表４Ａおよび４Ｂに示す。
結果
上記の表４Ａおよび４Ｂに示されている通り、抗体は、エボラウイルスＧＰに、２５℃では９３４ｐＭから１８９０ｎＭまでのＫＤ値、３７℃では２２７ｐＭから２３１０ｎＭまでのＫＤ値で結合した。ｐＨ７．４において、抗体の解離半減期（ｔ１／２）値は、２５℃では３．０分から１１５５分超までにわたり、３７℃では２．０分から１１５５分超までにわたった。低ｐＨにおいて結合の減少は観察されなかった。いくつかの抗体では、低ｐＨにおいてｐＨ７．４と比較して解離半減期（ｔ１／２）値が増大した。ｐＨ５および／またはｐＨ６で解離半減期（ｔ１／２）値が３倍またはそれ超に増大する抗体には、Ｈ１Ｈ１７１６２Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１７７Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１５０Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１５１Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６０Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１４１Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２１０Ｐ、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１９９Ｐ、Ｈ１Ｍ１７３４８Ｎ、Ｈ１Ｍ１７３５０Ｎ、Ｈ２ａＭ１７３６０ＮおよびＨ２ａＭ１７３６１Ｎが含まれる。
（実施例４）
エボラウイルス偽粒子（ｐｓｅｕｄｏｐａｒｔｉｃｌｅ）の生成および中和試験
エボラウイルス偽粒子（ウイルス様粒子、またはＶＬＰとも称される）を、２９３Ｔ細胞にエボラウイルスＧＰ、ＨＩＶ ｇａｇ−ｐｏｌを発現するプラスミド構築物、およびホタルルシフェラーゼをコードするＨＩＶプロウイルスベクターの混合物を共トランスフェクトすることによって生成した。トランスフェクション後４８時間の時点でエボラウイルス偽粒子を含有する上清を収集し、遠心分離を使用して清澄化し、分注し、−８０℃で凍結させた。対照偽粒子を、エボラウイルスＧＰを発現するプラスミドと水疱性口内炎ウイルス糖タンパク質（ＶＳＶｇ）をコードするプラスミドに置き換えることによって生成した。
エボラ偽粒子に基づく中和アッセイ
上記の通り生成した偽粒子を中和アッセイにおいて試験した。具体的には、抗体の希釈物を、エボラウイルス偽粒子と共に室温で１時間インキュベートした。Ｈｕｈ７細胞を０．０２ＭのＥＤＴＡを使用して脱離させ、洗浄し、抗体／偽粒子混合物と共に７２時間インキュベートした。感染効率を、ＢｒｉｇｈｔＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いたルシフェラーゼ検出およびＶｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｘ３プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）での光産生の読み取りによって定量した。
上記の表５に示されているデータから、本明細書に記載の実験計画を使用して、本発明の抗エボラウイルス抗体２０種のうち１４種が、約１０−１１Ｍから約１０−９Ｍまでに及ぶＩＣ５０で感染力を強力に中和することが示される。
（実施例５）
抗エボラウイルス抗体による抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を、抗体の、ＣＤ１６に基づくレポーター系（Ｐｒｏｍｅｇａ ＡＤＣＣレポーターバイオアッセイコアキット、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を介して信号を送る能力によって試験した。エボラウイルスＧＰを発現する２９３細胞を播種した。１日後、希釈した、ｆｕｃ−細胞株において産生された抗体（米国特許第８４０９８３８号を参照されたい）およびエフェクター細胞（エフェクター対標的比１．５：１）を添加し、一晩インキュベートした。ＢｉｏＧｌｏ（登録商標）ルシフェラーゼアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ、ＣＡ、ＵＳＡ）を用いてレポーター活性を測定し、Ｖｉｃｔｏｒ（登録商標）Ｘ３プレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）で光産生を読み取った。
抗体のＡＤＣＣを媒介する能力を、アイソタイプ（陰性）対照と比較した活性に基づいて算出した。陰性対照の５倍を超える全ての値を陽性とみなした。上記の表６のデータから、抗エボラウイルス抗体２０種のうち１７種がＡＤＣＣを媒介したことが示される。
（実施例６）
Ｏｃｔｅｔ交差競合
エボラウイルスＧＰに結合することが予め決定された抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体間の結合競合を、Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、Ａ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイを使用して決定した。可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）、ＧＰ１、またはＧＰ２についての関連性のある対照の結合を同じアッセイフォーマットで測定し、その応答を、試験した各ｍＡｂについて目的のエボラウイルスＧＰ試薬から差し引いた。実験全体を２５℃、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０、１．０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡで構成される緩衝液（Ｏｃｔｅｔ ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液）中、プレートを１０００ｒｐｍのスピードで振とうしながら実施した。２種の抗体が、Ｃ末端ポリヒスチジンタグを伴って発現されるエボラウイルスＧＰ（エボラウイルスＧＰ．ｈ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．、ＧｅｎＢａｎｋ ＡＨＸ２４６４９．１および配列番号３１４も参照されたい）上のそれらのそれぞれのエピトープへの結合について互いと競合することができるかどうかを評価するために、まず、およそ約１．０ｎｍのエボラウイルスＧＰを抗ペンタ−Ｈｉｓ抗体をコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、＃１８−５０７９）上に、バイオセンサーをエボラウイルスＧＰの２０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に３分間浸すことによって捕捉した。次いで、抗原が捕捉されたバイオセンサーを、第１の抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体（以後ｍＡｂ−１と称する）で、ｍＡｂ−１の５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に５分間浸漬することによって、飽和させた。その後、バイオセンサーを、第２の抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体（以後ｍＡｂ−２と称する）の５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に３分間浸した。全てのバイオセンサーを実験の各ステップの間にＯｃｔｅｔ ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液で洗浄した。実験の経過中リアルタイム結合応答をモニターし、全てのステップの終了時に結合応答を記録した。ｍＡｂ−１と予め複合体を形成したエボラウイルスＧＰに対するｍＡｂ−２結合の応答を比較し、異なる抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体の競合／非競合挙動を、５０％阻害閾値を使用して決定した。表７に、結合の順序とは関係なく両方向に競合する抗体の関係を明確に定義する。
表７に示されている通り、左側の欄はＡＨＣ Ｏｃｔｅｔバイオセンサーを使用して捕捉されるｍＡｂ１抗体を示し、右側の欄はｍＡｂ１抗体と交差競合する抗体（ｍＡｂ２）を示す。
（実施例７）
Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９ＰおよびＨ１Ｈ１７１６１Ｐのエボラウイルス糖タンパク質への逐次的結合
交差競合実験から得られた情報を用い、３種の個々の候補抗体が可溶性エボラウイルス糖タンパク質（ＧＰ）に同時に結合することができるかどうかを決定し、それにより、エボラウイルスＧＰ上の結合部位が各モノクローナル抗体に対して独立したものであることを確認するために、逐次的結合試験を行った。そうであれば、この情報により、これらの抗体の治療用カクテルにおける使用が支持される。
したがって、エボラウイルスＧＰに対する３種の抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９ＰおよびＨ１Ｈ１７１６１Ｐについての逐次的結合実験では、エボラウイルスＧＰへの独立かつ非競合的な結合について試験した。この実験は、Ｏｃｔｅｔ ＲＥＤバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、Ａ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイを使用して行った。実験全体を２５℃、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０、１．０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡで構成される緩衝液（Ｏｃｔｅｔ ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液）中、プレートを１０００ｒｐｍのスピードで振とうしながら実施した。３種の抗体が、捕捉された、Ｃ末端ポリヒスチジンタグを伴って発現させた抗原エボラウイルスＧＰ（エボラウイルスＧＰ．ｈｉｓ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）に同時に結合することができるかどうかを評価するために、まず、およそ約０．６ｎｍのエボラウイルスＧＰ．ｈを、抗ペンタ−Ｈｉｓ抗体をコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、＃１８−５０７９）上に、エボラウイルスＧＰ．ｈの２０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中にバイオセンサーを３分間浸すことによって捕捉した。次いで、抗原が捕捉されたバイオセンサーを、第１の抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体（以後Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐと称する）で、ＲＥＧＮ Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐの５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に５分間浸漬することによって、飽和させた。その後、バイオセンサーを、第２の抗エボラウイルスＧＰモノクローナル抗体（以後Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐと称する）５０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中に５分間浸した。最後に、５０μｇ／ｍＬの第３の抗体（以後Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐと称する）を５分間、飽和に達するまで注射した。実験の経過中リアルタイム結合応答をモニターし、全てのステップの終了時に結合応答を記録した。
結果
試験した３種の候補モノクローナル抗体は、エボラウイルスＧＰに同時に結合することができ、これにより、各抗体が、試験した他の抗体のエボラウイルスＧＰの結合部位に干渉しないことが示され、これにより、各抗体が、それぞれ異なるエピトープに結合するかまたはそれと相互作用することが示唆される。これにより、これらの３種の抗体の治療用抗体カクテルにおける使用の役割が支持される。
（実施例８）
抗エボラ抗体の異なるエボラウイルス様粒子（ＶＬＰ）株への結合
抗エボラウイルスＧＰ抗体が他のエボラウイルス株に由来するＧＰを含有するウイルス様粒子（ＶＬＰ）と反応するかどうかを決定するための試験を行った。この試験には、ブンディブギョＮＣ＿０１４３７３、コートジボワールＦＪ２１７１６２、スーダンＮＣ＿００６４３２、ザイール１９９５、ザイール２０１４ ＡＹ３５４４５８に由来するＧＰを含有するＶＬＰ、および陰性対照、ＶＳＶ糖タンパク質（ＶＳＶｇ）を含めた。試験は、炭素表面へのエボラ株ＶＬＰ（エボラ糖タンパク質／ウイルス表面タンパク質を発現するもの）の結合／固定を可能にする技術である「ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」（ＭＳＤ）、その後、ＥＬＩＳＡ型結合アッセイを使用して行った。目的は、様々なエボラ株に関してｍＡｂの結合プロファイルを同定することであった。
アッセイは、９６ウェルポリプロピレンマイクロウェルプレートにおいて、まずウェルごとに様々なＶＬＰ由来の上清の１：１０希釈物を調製し（以下の表に記載の通り）、希釈物をＰＢＳ（５０μｌ／ウェル）に添加し、４℃で一晩インキュベートすることによって実施した。
ウェル中の液体を廃棄し、その後、１５０μｌ／ウェルのＰＢＳ＋２％ＢＳＡを用いてブロッキングし、室温で１時間インキュベートした。次いで、各ウェルの内容物を廃棄し、ウェルを、ＭＳＤ用に指定されたＡｑｕａＭａｘ２０００プレート洗浄器を使用してＰＢＳで洗浄した。一次抗体５０マイクロリットルをＰＢＳ＋１％ＢＳＡで希釈し、中間のスピード（５）で振とうしながら室温でインキュベートした。次いで、ウェルの内容物を廃棄し、プレートをＰＢＳで洗浄した。スルホ−ＴＡＧ検出試薬（ヒトまたはマウスＦｃ）５０マイクロリットルをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ中１μｇ／ｍｌの濃度で各ウェルに添加し、室温で１時間、中間のスピード（５）で振とうしながらインキュベートした。ウェルの内容物を廃棄し、プレートをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡで洗浄した。各ウェルに、界面活性剤なしの１×Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒを１５０μｌ添加し、プレートをＳＥＣＴＯＲＩｍａｇｅｒ６０００でバーコードから読み取った。
以下の表８に示す結果から、試験した抗エボラウイルスＧＰ抗体の全てが、ザイール２０１４ＧＰを含有するＶＬＰおよびザイール１９９５ＧＰを含有するＶＬＰに結合することが実証される。試験した抗体のうちある特定の抗体は、表８に示されている２つのザイール株への結合に加えて、他のエボラウイルス株に由来するＧＰを含有するＶＬＰに結合する。詳細には、ザイール２０１４に由来するＧＰを含有するＶＬＰおよびザイール１９９５に由来するＧＰを含有するＶＬＰへの結合に加えて、Ｈ１Ｈ１７１６１ＰおよびＨ１Ｈ１７１６２Ｐと称される抗エボラウイルス抗体は、スーダン株に由来するＧＰを含有するＶＬＰおよびブンディブギョ株に由来するＧＰを含有するＶＬＰに結合し、一方、Ｈ２ａＭ１７３５６ＮおよびＨ１Ｈ１７１４２Ｐと称される抗エボラウイルス抗体は、ブンディブギョ株およびコートジボワール株に結合する。
（実施例９）
生／感染性エボラウイルス（ＥＢＯＶ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ中和
Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９ＰおよびＨ１Ｈ１７１６１Ｐと称される抗体を、Ｖｅｒｏ細胞において感染性ＥＢＯＶを中和する能力について分析した。Ｖｅｒｏ細胞を３８４ウェルプレートのＤＭＥＭ−１０％ＦＢＳ中にプレーティングし、３７℃でおよそ７５％コンフルエンスまで成長させた。Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９ＰおよびＨ１Ｈ１７１６１Ｐを示されている通り希釈した。ＥＢＯＶ株（Ｍａｙｉｎｇａ、Ｋｉｋｗｉｔ、Ｍａｋｏｎａ、およびモルモット適合Ｍａｙｉｎｇａ）を解凍し、０．０１〜０．１のＭＯＩまで適切に希釈した。ＫＺ５２と称される市販の抗ＥＢＯＶ抗体を陽性対照として使用した（Maruyama, T.ら、J Virol ７３巻、６０２４〜６０３０頁（１９９９年）を参照されたい。抗体をウイルスと共に３７℃で１時間インキュベートした。次いで、抗体／ウイルス混合物を予めプレーティングした細胞に添加し、プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。インキュベーション期間後、プレートをインキュベーターから取り出し、１０％中性緩衝ホルマリンに浸漬することによって不活性化し、ヒートシールした袋に入れ、ＢＳＬ−４中で、４℃、一晩保管した。プレートを１×ＰＢＳで３回洗浄し、細胞を室温で（ＲＴ）１×ＰＢＳ中０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を２５μｌ用いて１５〜２０分にわたって透過処理した。Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘを廃棄し、プレートを１×ＰＢＳ中３．５％ＢＳＡを用いてＲＴで１時間ブロッキングした。プレートを、１×ＰＢＳ中１：１５００希釈した抗ＥＢＯＶ ＧＰ一次抗体４Ｆ３（マウス抗ＥＢＯＶ ＧＰモノクローナル抗体４Ｆ３、カタログ番号０２０１−０２０についてＩＢＴ ＢＩＯＳＥＲＶＩＣＥＳを参照されたい）を用いて４℃で一晩処理した。プレートを１×ＰＢＳで１０〜１５分にわたって洗浄し、これを２回繰り返した。細胞を、Ａｌｅｘａ−ｆｌｕｏｒ−４８８とコンジュゲートした抗マウス二次抗体と共に１時間インキュベートした。二次抗体を廃棄し、プレートを１×ＰＢＳで１０〜１５分にわたって洗浄し、これを２回繰り返した。プレートを、２５μｌ／ウェルのＨｏｅｃｈｓｔ（１×−ＰＢＳ中１：５０，０００）と共にＲＴで３０分インキュベートした。プレートを、青色および緑色蛍光チャネルを使用して蛍光顕微鏡法で画像化した。
結果
図１に示されている結果から、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐ抗体は生ウイルスを中和し、陽性対照抗体ＫＺ５２よりも強力であることが実証されたが、Ｈ１Ｈ１７２０３ＰおよびＨ１Ｈ１７１３９Ｐと称される抗体は中和剤として働かなかった。
（実施例１０）
抗エボラ抗体の可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）への結合
ＥＢＯＶゲノム内の第４の遺伝子は、ｓＧＰと称される非構造的な二量体の分泌型糖タンパク質、および三量体のビリオン付着型エンベロープ糖タンパク質（ＧＰ）の２つの独特のタンパク質をコードする。これらの２つのＧＰは、最初の２９５アミノ酸を共有するが、独特のＣ末端を有する。ＲｅｇｅｎｅｒｏｎのリードｍＡｂがｓＧＰに結合するかどうかを決定するために、組換えｓＧＰ．ｍｍｈタンパク質を社内で作製した（配列番号３１７）。干渉法に基づくバイオセンサーＯｃｔｅｔ ＨＴＸを使用して、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐモノクローナル抗体がエボラｓＧＰ．ｍｍｈタンパク質に結合することができるかどうかを決定した。アッセイのフォーマットは、Ｈ１Ｈ１７２０３Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１３９Ｐ、Ｈ１Ｈ１７１６１Ｐを抗ｈＦｃセンサー先端上で捕捉し、その後、エボラＧＰ．１０×ｈｉｓ（配列番号３１８）、ｓＧＰ．ｍｍｈ（配列番号３１７）、またはｈＣＮＴＦＲ（毛様体神経栄養因子受容体．ｍｍｈ、陰性対照タンパク質である）の３００ｎＭ溶液に浸すことを伴った。各ｍＡｂを０．９４〜１．３６ｎｍのレベルで捕捉した。
図２に示されている通り、全てのｍＡｂでエボラＧＰ．１０×ｈｉｓへの特異的な結合が示され、陰性対照タンパク質への結合は示されなかった；一方、Ｈ１Ｈ１７１３９のみで、エボラｓＧＰ．ｍｍｈへの特異的な結合が実証された。この所見により、Ｈ１Ｈ１７１３９の結合エピトープが、ｓＧＰおよびＧＰの両方の最初の２９５アミノ酸内の共通領域に位置するようであることが示唆される；一方、他のｍＡｂは、おそらく、エボラＧＰのＣ末端のみを認識する。
（実施例１１）
追加的な抗ＥＢＯＶ ＧＰ抗体の、エボラＧＰ．ｈ、エボラＧＰ可溶性．ｍｍｈおよびｈＣＮＴＦＲ．ｍｍｈへの結合
本発明の追加的な抗ＥＢＯＶ ＧＰ抗体の結合特性を決定するためにさらなる試験を行った。詳細には、これらの追加的な抗体の可溶性ＧＰおよびＧＰに結合する能力を決定するための試験を行った。この試験は、Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｃｏｒｐ．、Ａ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）においてリアルタイム無標識バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）アッセイを使用して行った。実験全体を２５℃、０．０１ＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．１５ＭのＮａＣｌ、３ｍＭのＥＤＴＡ、０．０５％ｖ／ｖの界面活性剤Ｐ２０、１．０ｍｇ／ｍＬのＢＳＡで構成される緩衝液（Ｏｃｔｅｔ ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液）中、プレートを１０００ｒｐｍのスピードで振とうしながら実施した。抗体がエボラｓＧＰまたは他のエボラＧＰ試薬に結合することができるかどうかを評価するために、およそ約１．０ｎｍの抗エボラＧＰ ｍＡｂを、抗ヒトＦｃ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ、＃１８−５０６４）抗体をコーティングしたＯｃｔｅｔバイオセンサー上に、ｍＡｂの２０μｇ／ｍＬ溶液を含有するウェル中にバイオセンサーを３分間浸すことによって捕捉した。ｍＡｂが捕捉されたバイオセンサーを、選択されたタンパク質試薬への結合について、エボラＧＰタンパク質または無関連の対照の３００ｎＭ溶液を含有するウェル中に５分間浸漬することによって試験した。全てのバイオセンサーを実験の各ステップの間にＯｃｔｅｔ ＨＢＳ−ＥＴ緩衝液で洗浄した。実験の経過中リアルタイム結合応答をモニターし、全てのステップの終了時に結合応答を記録した。
結果
表９に示されている通り、０．１０ｎｍを下回る全ての値を非結合抗体であると決定した。現在までの結果に基づいて、試験した抗体の１種（Ｈ１Ｈ１７３６０Ｎ）を除いて全てでＥＢＯＶ全長ＧＰへの結合が示され、試験した２０種の抗体のうち１３種で可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）への結合が示された。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合断片を第２の治療剤と組み合わせて、それを必要とする被験体に投与する。第２の治療剤は、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、抗感染薬、抗ウイルス薬、エボラウイルスに対する異なる抗体、エボラウイルスに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）、インターフェロン、抗酸化剤および任意の他の薬物などの栄養補助食品、または、エボラウイルス感染の少なくとも１つの症状を好転させるため、もしくは患者におけるウイルス負荷量を減少させるために有用な当技術分野で公知の療法からなる群から選択することができる。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、本発明の抗体またはその抗原結合断片に関連する副作用（複数可）が起こるのであれば、そのようなあらゆる可能性のある副作用（複数可）に対して反作用するまたはそれを低下させる助けとなる薬剤であってよい。抗体またはその断片は、皮下、静脈内、皮内、腹腔内、経口的、鼻腔内、筋肉内、または頭蓋内に投与することができる。一実施形態では、抗体は、被験体の血清中の抗体の最大の濃度のために単回静脈内注入として投与することができる。抗体またはその断片は、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇの用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、５０ｍｇから６００ｍｇまでの間で構成される１つまたは複数の用量で投与することができる。
本明細書で使用される場合、「抗ウイルス薬」という用語は、それが化学的部分であるか生物学的療法であるかにかかわらず、被験体におけるウイルス感染を処置する、防止する、または好転させるために使用される任意の抗感染剤または療法を指す。例えば、本発明では、抗ウイルス薬としては、これだけに限定されないが、エボラウイルスに対する抗体（一実施形態では、エボラウイルスに対する抗体は、本明細書に記載のものとは異なり得る）、エボラウイルスに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンを挙げることができる。本発明では、処置される感染は、エボラウイルスによって引き起こされるものである。
例えば、ウイルス感染を処置するための例示的な薬剤としては、例えば、抗ウイルス薬、抗炎症薬（コルチコステロイド、および非ステロイド性抗炎症薬など）、エボラウイルスに対する異なる抗体、エボラウイルスに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）、インターフェロン、またはエボラウイルス感染を処置するための任意の他の緩和療法を挙げることができる。

Claims (52)

  1. エボラウイルス（ＥＢＯＶ）および／またはエボラウイルス糖タンパク質（ＥＢＯＶ−ＧＰ）に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合断片であって、以下の特性：
    （ａ）配列番号１８、６６、１４６、２、３４、５０、８２、９８、１１４、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０および３０６からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１つに含有される３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）と、配列番号２６、７４、１５４、１０、４２、５８、９０、１０６、１２２、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２および２９８からなる群から選択される軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１つに含有される３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）とを含むこと；
    （ｂ）完全ヒトモノクローナル抗体であること；
    （ｃ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合、ＥＢＯＶ、またはＥＢＯＶ−ＧＰを発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に、１０−７Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）で結合すること；
    （ｄ）ｐＨ５またはｐＨ６において、ｐＨ７．４と比較して少なくとも３倍の解離半減期（ｔ１／２）を示すこと；
    （ｅ）約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０でのザイールエボラウイルスの中和を示すこと；
    （ｆ）該ＥＢＯＶ−ＧＰを発現する細胞への結合が抗体依存性細胞傷害を誘発することを示すこと；
    （ｇ）ザイール２０１４、ザイール１９９５、スーダン、ブンディブギョおよびコートジボワールからなる群から選択される１つまたは複数のＥＢＯＶの株と交差反応すること；
    （ｈ）可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）に結合すること；
    （ｉ）表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合すること
    のうちの１つまたは複数を有する、単離された組換え抗体またはその抗原結合断片。
  2. エボラウイルス（ＥＢＯＶ）および／またはエボラウイルス糖タンパク質（ＥＢＯＶ−ＧＰ）に特異的に結合する単離された組換え抗体またはその抗原結合断片であって、以下の特性：
    （ａ）完全ヒトモノクローナル抗体であること；
    （ｂ）表面プラズモン共鳴アッセイで測定した場合、ＥＢＯＶ、またはＥＢＯＶ−ＧＰを発現するウイルス様粒子（ＶＬＰ）に、１０−７Ｍ未満の解離定数（ＫＤ）で結合すること；
    （ｃ）ｐＨ５またはｐＨ６において、ｐＨ７．４と比較して少なくとも３倍の解離半減期（ｔ１／２）を示すこと；
    （ｄ）約１０−１１Ｍから約１０−９ＭまでにわたるＩＣ５０でのザイールエボラウイルスの中和を示すこと；
    （ｅ）該ＥＢＯＶ−ＧＰを発現する細胞への結合が抗体依存性細胞傷害を誘発することを示すこと；
    （ｆ）ザイール２０１４、ザイール１９９５、スーダン、ブンディブギョおよびコートジボワールからなる群から選択される１つまたは複数のＥＢＯＶの株と交差反応すること；
    （ｇ）可溶性ＧＰ（ｓＧＰ）に結合すること；
    （ｈ）表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む参照抗体と交差競合すること
    のうちの２つまたはそれ超を有する、単離された組換え抗体またはその抗原結合断片。
  3. 配列番号１８、６６、１４６、２、３４、５０、８２、９８、１１４、１３０、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０および３０６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む、請求項１または２のいずれかに記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  4. 配列番号２６、７４、１５４、１０、４２、５８、９０、１０６、１２２、１３８、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２および２９８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  5. （ａ）配列番号２０、６８、１４８、４、３６、５２、８４、１００、１１６、１３２、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２および３０８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；
    （ｂ）配列番号２２、７０、１５０、６、３８、５４、８６、１０２、１１８、１３４、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４および３１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；
    （ｃ）配列番号２４、７２、１５２、８、４０、５６、８８、１０４、１２０、１３６、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６および３１２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；
    （ｄ）配列番号２８、７６、１５６、１２、４４、６０、９２、１０８、１２４、１４０、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４および３００からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；
    （ｅ）配列番号３０、７８、１５８、１４、４６、６２、９４、１１０、１２６、１４２、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６および３０２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン；
    （ｆ）配列番号３２、８０、１６０、１６、４８、６４、９６、１１２、１２８、１４４、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８および３０４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
    を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  6. 配列番号１８／２６、６６／７４、１４６／１５４、２／１０、３４／４２、５０／５８、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の単離された抗体または抗原結合断片。
  7. 配列番号２０のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号２４のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号２８のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  8. 配列番号６８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号７２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号７６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  9. 配列番号１４８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号１５２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号１５６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
  10. 表１に列挙されているＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ；および表１に列挙されているＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体または抗原結合断片と、ＥＢＯＶおよび／またはＥＢＯＶ ＧＰへの結合について競合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  11. 表１に列挙されているＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＶＲのＣＤＲ；および表１に列挙されているＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体または抗原結合断片と同じＥＢＯＶおよび／またはＥＢＯＶ ＧＰ上のエピトープに結合する、単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片。
  12. エボラウイルスの宿主細胞への付着および／または侵入を防止する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の単離された抗体。
  13. 感染性ＥＢＯＶを中和する方法であって、ＥＢＯＶに感染した細胞を、請求項１から１２のいずれか一項に記載の１つまたは複数の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片を含む組成物に曝露するステップを含み、該曝露するステップにより、ウイルス感染または細胞死からの該細胞の保護の増強がもたらされる、方法。
  14. 前記感染性ＥＢＯＶをｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏで中和する、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記保護の増強が、前記抗体を単独で使用する場合、あるいは前記抗体を１種または複数種の追加的な治療剤または抗ＥＢＯＶ処置モダリティと組み合わせて使用する場合に観察される、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記１種または複数種の追加的な治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬）、ＥＢＯＶに対する異なる抗体、ＥＢＯＶに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（ＥＢＯＶ ＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンからなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記１種または複数種の追加的な治療剤が、１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体を含む、請求項１５に記載の方法。
  18. 前記１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体が、表１の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列のいずれかからなる群から選択されるＨＣＶＲアミノ酸配列およびＬＣＶＲアミノ酸配列を含む、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含む、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記１種または複数種の抗ＥＢＯＶ抗体が、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）および軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配列対を含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 請求項１から１２のいずれか一項に記載の、ＥＢＯＶに特異的に結合する１種または複数種の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物。
  22. 前記１種または複数種の単離された抗体が、表１に列挙されているＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対が、配列番号１８／２６、６６／７４、１４６／１５４、２／１０、３４／４２、５０／５８、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８および３０６／２８２からなる群から選択される、請求項２２に記載の医薬組成物。
  24. 前記ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対が、配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４からなる群から選択される、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 請求項１から１２のいずれか一項に記載の、（ａ）第１の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片；（ｂ）第２の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片；および（ｃ）第３の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片（該第１の抗体が、ＥＢＯＶ上の第１のエピトープに結合するかまたはそれと相互作用し、該第２の抗体および／または第３の抗体が、ＥＢＯＶ上の異なるエピトープに結合するかまたはそれと相互作用する）、ならびに（ｄ）薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤を含む医薬組成物。
  26. 前記第１の抗ＥＢＯＶ抗体、第２の抗ＥＢＯＶ抗体および第３の抗ＥＢＯＶ抗体が、表１に列挙されているＨＣＶＲ配列およびＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、請求項２５に記載の医薬組成物。
  27. 前記第１の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片、第２の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片および／または第３の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片と結合するかまたは相互作用する前記エピトープが、別個のものであり、重複していない、請求項２５に記載の医薬組成物。
  28. 前記第１の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片が、ＥＢＯＶの１つの株の１つのエピトープに結合するかまたはそれと相互作用し、前記第２の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片および／または第３の抗ＥＢＯＶ抗体またはその抗原結合断片が、ＥＢＯＶの同じ株上または異なる株上の第２のエピトープおよび／または第３のエピトープに結合するかまたはそれと相互作用する、請求項２５に記載の医薬組成物。
  29. 前記ＥＢＯＶ株が、ザイール２０１４株、ザイール１９９５株、スーダン株、ブンディブギョ株、およびコートジボワール株からなる群から選択される、請求項２８に記載の医薬組成物。
  30. ＥＢＯＶに特異的に結合する第１の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片であって、配列番号２０のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号２２のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号２４のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号２８のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号３０のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号３２のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む該第１の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤とを含む医薬組成物。
  31. ＥＢＯＶに特異的に結合する第２の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をさらに含み、該第２の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、配列番号６８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号７２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号７６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号７８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号８０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項３０に記載の医薬組成物。
  32. ＥＢＯＶに特異的に結合する第３の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片をさらに含み、該第３の単離されたモノクローナル抗体またはその抗原結合断片が、配列番号１４８のＨＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５０のＨＣＤＲ２アミノ酸配列；配列番号１５２のＨＣＤＲ３アミノ酸配列；配列番号１５６のＬＣＤＲ１アミノ酸配列；配列番号１５８のＬＣＤＲ２アミノ酸配列および配列番号１６０のＬＣＤＲ３アミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. 請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲをコードするポリヌクレオチド配列を含む単離されたポリヌクレオチド分子。
  34. 請求項３３に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。
  35. 請求項３４に記載のベクターを発現する細胞。
  36. ＥＢＯＶ感染の少なくとも１つの症状を防止する、処置する、もしくは好転させる、またはＥＢＯＶ感染の少なくとも１つの症状の頻度または重症度を低減する方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体もしくは抗原結合断片または請求項２１から３１に記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法。
  37. 少なくとも２種の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む、請求項３６に記載の方法。
  38. 配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む３種の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む、請求項３６または３７のいずれかに記載の方法。
  39. 前記少なくとも１つの症状が、発熱、頭痛、疲労、食欲不振、筋痛、下痢、嘔吐、腹痛、脱水および原因不明の出血からなる群から選択される、請求項３６に記載の方法。
  40. 前記医薬組成物を、それを必要とする前記被験体に予防的にまたは治療的に投与する、請求項３６に記載の方法。
  41. それを必要とする前記被験体が、ＥＢＯＶに感染している被験体、またはＥＢＯＶに曝露された、もしくはＥＢＯＶに曝露するもしくはＥＢＯＶに感染するリスクがある被験体であり、該被験体が、免疫無防備状態の個体、医療従事者、エボラウイルスを有する人に曝露された疑いがある人、感染した個体と物理的に接触するまたは物理的に近接する人、病院職員、医薬品研究者、エボラ患者が処置されている病院設備もしくは施設の清掃を担当する保守要員、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが分かっているまたは有する疑いがある地域もしくは国を訪れたことがあるまたは訪れる予定がある個体および頻繁に渡航する人からなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記抗体もしくはその抗原結合断片、または該抗体もしくはその抗原結合断片を含む前記医薬組成物を第２の治療剤と組み合わせて投与する、請求項３６から４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬）、ＥＢＯＶに対する異なる抗体、ＥＢＯＶに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンからなる群から選択される、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記医薬組成物を、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、または経口的に投与する、請求項３６から４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. ＥＢＯＶに感染している被験体、またはＥＢＯＶに曝露された、もしくはＥＢＯＶへの曝露のリスクもしくはＥＢＯＶに感染するリスクがある被験体の生存、または生存の可能性を増加させる方法であって、請求項１から１２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体もしくは抗原結合断片、または請求項２１から３１のいずれかに記載の医薬組成物を、それを必要とする被験体に投与するステップを含む方法。
  46. 少なくとも２種の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む、請求項４５に記載の方法。
  47. 配列番号１８／２６、６６／７４および１４６／１５４に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む３種の抗ＥＢＯＶ抗体の混合物を含む抗体カクテルを投与するステップを含む、請求項４５または４６のいずれかに記載の方法。
  48. 前記抗体もしくはその抗原結合断片、または該抗体もしくはその抗原結合断片を含む前記医薬組成物、または前記抗体カクテルを、それを必要とする前記被験体に予防的にまたは治療的に投与する、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法。
  49. ＥＢＯＶへの曝露のリスクまたはＥＢＯＶに感染するリスクのある、それを必要とする前記被験体が、免疫無防備状態の個体、医療従事者、エボラウイルスを有する人に曝露された疑いがある人、感染した個体と物理的に接触するまたは物理的に近接する人、病院職員、医薬品研究者、エボラ患者が処置されている病院設備もしくは施設の清掃を担当する保守要員、エボラウイルスのアウトブレイクを有することが分かっているまたは有する疑いがある地域もしくは国を訪れたことがあるまたは訪れる予定がある個体および頻繁に渡航する人からなる群から選択される、請求項４５から４８のいずれか一項に記載の方法。
  50. 前記抗体もしくはその抗原結合断片、または該抗体もしくはその抗原結合断片を含む前記医薬組成物、または前記抗体カクテルを第２の治療剤と組み合わせて投与する、請求項４５から４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. 前記第２の治療剤が、抗ウイルス薬、抗炎症薬（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド性抗炎症薬）、ＥＢＯＶに対する異なる抗体、ＥＢＯＶに対するワクチン、ＴＫＭエボラ（ウイルスＲＮＡポリメラーゼを標的とする低分子干渉ＲＮＡ）ブリンシドフォビル（ＣＭＸ−００１）、ファビピラビル（Ｔ−７０５）、ＢＣＸ−４４３０、ＡＶＩ−７５３７（エボラウイルスＶＰ２４遺伝子を標的とするアンチセンスホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー）およびインターフェロンからなる群から選択される、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記医薬組成物を、皮下、静脈内、皮内、筋肉内、鼻腔内、または経口的に投与する、請求項４５から５１のいずれか一項に記載の方法。
JP2017536549A 2015-01-26 2016-01-25 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体 Active JP6829199B2 (ja)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562107581P 2015-01-26 2015-01-26
US62/107,581 2015-01-26
US201562161356P 2015-05-14 2015-05-14
US62/161,356 2015-05-14
US201562245703P 2015-10-23 2015-10-23
US62/245,703 2015-10-23
PCT/US2016/014720 WO2016123019A1 (en) 2015-01-26 2016-01-25 Human antibodies to ebola virus glycoprotein

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020081768A Division JP2020120683A (ja) 2015-01-26 2020-05-07 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2018506966A true JP2018506966A (ja) 2018-03-15
JP2018506966A5 JP2018506966A5 (ja) 2019-02-28
JP6829199B2 JP6829199B2 (ja) 2021-02-10

Family

ID=55300806

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2017536549A Active JP6829199B2 (ja) 2015-01-26 2016-01-25 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体
JP2020081768A Pending JP2020120683A (ja) 2015-01-26 2020-05-07 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体
JP2023034449A Pending JP2023065648A (ja) 2015-01-26 2023-03-07 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2020081768A Pending JP2020120683A (ja) 2015-01-26 2020-05-07 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体
JP2023034449A Pending JP2023065648A (ja) 2015-01-26 2023-03-07 エボラウイルス糖タンパク質に対するヒト抗体

Country Status (20)

Country Link
US (6) US9771414B2 (ja)
EP (1) EP3250591A1 (ja)
JP (3) JP6829199B2 (ja)
KR (1) KR102641731B1 (ja)
CN (2) CN113354732B (ja)
AU (2) AU2016211783B2 (ja)
BR (1) BR112017015845A2 (ja)
CA (1) CA2974899A1 (ja)
CL (3) CL2017001920A1 (ja)
CO (1) CO2017007619A2 (ja)
EA (1) EA038993B1 (ja)
IL (1) IL253358B (ja)
MA (1) MA41421A (ja)
MX (2) MX2017009716A (ja)
MY (3) MY196224A (ja)
PH (1) PH12017501277A1 (ja)
SG (2) SG10202007835QA (ja)
TW (1) TWI710573B (ja)
UY (1) UY36538A (ja)
WO (1) WO2016123019A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021095703A1 (ja) * 2019-11-11 2021-05-20 株式会社Ｇｓｐエンタープライズ 抗ヒトＣｒｉｐｔｏ－１抗体

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10130697B2 (en) 2010-03-23 2018-11-20 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Vaccines comprising mutant attenuated influenza viruses
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
US10053671B2 (en) 2014-06-20 2018-08-21 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses
TW201628649A (zh) 2014-10-09 2016-08-16 再生元醫藥公司 減少醫藥調配物中微可見顆粒之方法
TWI710573B (zh) 2015-01-26 2020-11-21 美商再生元醫藥公司 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體
TW202340452A (zh) 2015-08-04 2023-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
WO2018017964A2 (en) * 2016-07-21 2018-01-25 Emory University Ebola virus antibodies and binding agents derived therefrom
IL264631B2 (en) 2016-08-16 2024-05-01 Regeneron Pharma A method for quantifying individual antibodies from a mixture
EP3504328A1 (en) 2016-08-24 2019-07-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Host cell protein modification
SG11201902667UA (en) 2016-10-25 2019-05-30 Regeneron Pharma Methods and systems for chromatography data analysis
CN108570106B (zh) * 2017-03-10 2021-07-16 北京天广实生物技术股份有限公司 抗埃博拉病毒单克隆抗体、其制备方法及用途
SG11201912548XA (en) 2017-07-06 2020-01-30 Regeneron Pharma Cell culture process for making a glycoprotein
US20200216519A1 (en) * 2017-09-15 2020-07-09 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Dna antibody constructs for use against ebola virus
SG11202001564QA (en) 2017-09-19 2020-04-29 Regeneron Pharma Methods of reducing particle formation and compositions formed thereby
BR112020010615A2 (pt) 2017-12-22 2020-10-27 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. produto farmacêutico proteico, método e sistema para caracterizar impurezas de produto farmacêutico proteico e de fármaco de baixo peso molecular, método para produzir um anticorpo, anticorpo, e, usos do método e do sistema
RU2686630C1 (ru) * 2017-12-22 2019-04-29 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации Штаммы гибридных клеток животных Mus. Musculus - продуценты моноклональных антител к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire) и моноклональные антитела к белку GP вируса Эбола (subtype Zaire)
WO2019136029A1 (en) * 2018-01-02 2019-07-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Neutralizing antibodies to ebola virus glycoprotein and their use
MX2020008095A (es) 2018-01-31 2020-09-24 Regeneron Pharma Sistemas y métodos para caracterizar variantes de tamaño y carga de impurezas de productos farmacológicos.
US20210047388A1 (en) * 2018-01-31 2021-02-18 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Nucleic acid antibody constructs for use against ebola virus
TWI786265B (zh) 2018-02-02 2022-12-11 美商再生元醫藥公司 用於表徵蛋白質二聚合之系統及方法
BR112020013426A2 (pt) 2018-02-28 2020-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. métodos para identificação de um vírus em uma amostra e para detecção de ácidos nucleicos virais em uma amostra de cultura de células
CN108373500A (zh) * 2018-03-12 2018-08-07 中国科学院微生物研究所 一种热稳定性埃博拉治疗性抗体的制备及应用
BR112020015291B1 (pt) 2018-03-19 2023-09-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc Tampão de amostra de eletroforese aquoso, método para identificar contaminantes ou impurezas em uma amostra de fármaco proteico, e, kit
KR20200135435A (ko) * 2018-03-26 2020-12-02 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-PfRH5 항체 및 이의 항원 결합 단편
TW202016125A (zh) 2018-05-10 2020-05-01 美商再生元醫藥公司 用於定量及調節蛋白質黏度之系統與方法
US11884698B2 (en) 2018-07-02 2024-01-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for preparing a polypeptide from a mixture
WO2020014443A1 (en) * 2018-07-12 2020-01-16 Vanderbilt University Pan-ebolavirus neutralizing human antibodies and methods of use therefor
SG11202011970TA (en) 2018-08-27 2020-12-30 Regeneron Pharma Use of raman spectroscopy in downstream purification
MX2021002281A (es) 2018-08-30 2021-05-27 Regeneron Pharma Metodos para caracterizar complejos proteicos.
CN111138531B (zh) * 2018-11-06 2021-07-30 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 特异结合于ebov的gp1亚基的单克隆抗体8f9及应用
CN111138527B (zh) * 2018-11-06 2021-07-30 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 抗埃博拉病毒糖蛋白gp1亚基的单克隆抗体4f1及应用
CN111138526B (zh) * 2018-11-06 2021-07-30 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 一种抗埃博拉病毒糖蛋白gp2亚基的单克隆抗体2g1及应用
CN111138528B (zh) * 2018-11-06 2021-07-30 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 特异性结合于埃博拉病毒糖蛋白聚糖帽的单克隆抗体5a8
CN113272651B (zh) 2019-01-16 2023-06-16 瑞泽恩制药公司 鉴别蛋白质中的游离巯基的方法
EP3921413A1 (en) 2019-02-08 2021-12-15 Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) Humanized cell line
JP7541534B2 (ja) 2019-05-13 2024-08-28 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 改善された競合的リガンド結合アッセイ
US11807872B2 (en) 2019-08-27 2023-11-07 Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) Recombinant influenza viruses with stabilized HA for replication in eggs
IL293112A (en) 2019-11-25 2022-07-01 Regeneron Pharma Sustained release formulations using non-aqueous emulsions
GB201917480D0 (en) * 2019-11-29 2020-01-15 Univ Oxford Innovation Ltd Antibodies
CA3165060C (en) 2020-01-21 2023-06-20 Yiming Zhao Deglycosylation methods for electrophoresis of glycosylated proteins
IL294375A (en) * 2020-01-24 2022-08-01 Regeneron Pharma Stable antibody formulation
KR20210095781A (ko) 2020-01-24 2021-08-03 주식회사 에이프릴바이오 항원결합 단편 및 생리활성 이펙터 모이어티로 구성된 융합 컨스트럭트를 포함하는 다중결합항체 및 이를 포함하는 약학조성물
AU2021227687B2 (en) 2020-02-26 2023-02-23 Vir Biotechnology, Inc. Antibodies against SARS-CoV-2 and methods of using the same
KR20230058094A (ko) 2020-08-31 2023-05-02 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 세포 배양 성능을 개선하고 아스파라긴 서열 변이체를 완화하기 위한 아스파라긴 공급 전략
WO2022074630A1 (en) * 2020-10-09 2022-04-14 Auxilla Pharmaceuticals And Research Llp Liquid oral suspension of favipiravir
AU2021385363A1 (en) 2020-11-25 2023-06-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulations using non-aqueous membrane emulsification
MX2023007225A (es) 2020-12-17 2023-06-27 Regeneron Pharma Fabricacion de microgeles encapsuladores de proteina.
EP4281542A1 (en) 2021-01-20 2023-11-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of improving protein titer in cell culture
AU2022230987A1 (en) 2021-03-03 2023-08-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for quantifying and modifying protein viscosity
AU2022286340A1 (en) 2021-06-01 2024-01-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Microchip capillary electrophoresis assays and reagents
WO2023039457A1 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A high-throughput and mass-spectrometry-based method for quantitating antibodies and other fc-containing proteins
EP4405390A1 (en) 2021-09-20 2024-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of controlling antibody heterogeneity
CN118076894A (zh) 2021-10-07 2024-05-24 里珍纳龙药品有限公司 pH建模和控制的系统及方法
EP4413359A1 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ph meter calibration and correction
EP4423018A1 (en) 2021-10-26 2024-09-04 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Systems and methods for generating laboratory water and distributing laboratory water at different temperatures
US20230277682A1 (en) 2022-01-14 2023-09-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Verrucarin a derivatives and antibody drug conjugates thereof
US20240245779A1 (en) 2023-01-25 2024-07-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modeling liquid protein composition stability
WO2024158961A1 (en) 2023-01-25 2024-08-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mass spectrometry-based characterization of antibodies co-expressed in vivo
WO2024163708A1 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Asymmetrical flow field-flow fractionation with mass spectrometry for biomacromolecule analysis
WO2024178213A2 (en) 2023-02-22 2024-08-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. System suitability parameters and column aging

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU7089600A (en) 1999-08-30 2001-03-26 U.S. Army Medical Research Institute Of Infectious Diseases Monoclonal antibodies and vaccines against epitopes on the ebola virus glycoprotein
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US6875433B2 (en) 2002-08-23 2005-04-05 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army Monoclonal antibodies and complementarity-determining regions binding to Ebola glycoprotein
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
WO2005103081A2 (en) 2004-04-20 2005-11-03 Genmab A/S Human monoclonal antibodies against cd20
US8257740B1 (en) 2011-08-15 2012-09-04 Gp Medical, Inc. Pharmaceutical composition of nanoparticles
US8246995B2 (en) 2005-05-10 2012-08-21 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Hydrophobic nanotubes and nanoparticles as transporters for the delivery of drugs into cells
PL2041177T3 (pl) 2006-06-02 2012-09-28 Regeneron Pharma Przeciwciała o wysokim powinowactwie przeciw ludzkiemu receptorowi IL 6
ES2728095T3 (es) * 2008-02-01 2019-10-22 Her Majesty The Queen In Right Of Canada As Represented By The Mini Of Health Anticuerpos monoclonales para los virus del Ebola y Marburgo
CA2741523C (en) 2008-10-24 2022-06-21 Jonathan S. Towner Human ebola virus species and compositions and methods thereof
HUE038596T2 (hu) 2009-06-02 2018-10-29 Regeneron Pharma Fukoziláció-hiányos sejtek
EP3916011A1 (en) 2009-06-26 2021-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Readily isolated bispecific antibodies with native immunoglobulin format
EP2473525A4 (en) 2009-09-02 2013-08-21 Us Army MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST GLYCOPROTEIN OF EBOLA SUDAN BONIFACE VIRUS
US9346875B2 (en) 2013-06-03 2016-05-24 Albert Einstein College Of Medicine, Inc. Therapy for filovirus infection
AU2015218905A1 (en) 2014-02-19 2016-08-04 Emergent Biosolutions Canada Inc. Ebola monoclonal antibodies
CN103864904B (zh) * 2014-03-04 2016-01-20 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 基于埃博拉病毒包膜蛋白的抗原片段、截短体及应用
US20170158753A1 (en) 2014-06-25 2017-06-08 Integrated Biotherapeutics, Inc. Monoclonal antibodies directed against envelope glycoproteins from multiple filovirus species
US10435461B2 (en) 2014-08-20 2019-10-08 Albert Einstein College Of Medicine Therapy for filovirus infection
SG11201702606TA (en) 2014-10-03 2017-04-27 Massachusetts Inst Technology Antibodies that bind ebola glycoprotein and uses thereof
US10640549B2 (en) 2014-10-17 2020-05-05 University Of Virginia Patent Foundation Recombinant antibodies that recognize the C-terminal domains of Ebola virus nucleoprotein
TWI710573B (zh) 2015-01-26 2020-11-21 美商再生元醫藥公司 抗伊波拉病毒醣蛋白之人類抗體

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
TOSHIAKI MARUYAMA ET AL., JOURNAL OF VIROLOGY, vol. 73, no. 7, JPN6020004353, 1999, pages 6024 - 6030, ISSN: 0004207818 *
XIANGGUO QIU ET AL., CLINICAL IMMUNOLOGY, vol. 141, JPN6020004354, 2011, pages 218 - 227, ISSN: 0004207819 *
関根 進: "抗体医薬の現状と課題", 科学技術動向, JPN6019014029, October 2009 (2009-10-01), pages 2 - 13, ISSN: 0004207820 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021095703A1 (ja) * 2019-11-11 2021-05-20 株式会社Ｇｓｐエンタープライズ 抗ヒトＣｒｉｐｔｏ－１抗体
JP2021073927A (ja) * 2019-11-11 2021-05-20 株式会社Ｇｓｐエンタープライズ 抗ヒトＣｒｉｐｔｏ−１抗体

Also Published As

Publication number Publication date
US20200148751A1 (en) 2020-05-14
IL253358A0 (en) 2017-09-28
MY180045A (en) 2020-11-20
CN113354732B (zh) 2024-07-09
EA038993B1 (ru) 2021-11-18
KR20170102328A (ko) 2017-09-08
US10081670B2 (en) 2018-09-25
CN113354732A (zh) 2021-09-07
CL2017001920A1 (es) 2018-03-02
US20160215040A1 (en) 2016-07-28
KR102641731B1 (ko) 2024-02-29
CN107667115B (zh) 2021-12-21
US20210024617A1 (en) 2021-01-28
JP2020120683A (ja) 2020-08-13
CN107667115A (zh) 2018-02-06
MX2021015687A (es) 2022-02-03
TW201639883A (zh) 2016-11-16
BR112017015845A2 (pt) 2018-03-27
SG11201705681YA (en) 2017-08-30
CA2974899A1 (en) 2016-08-04
MY196224A (en) 2023-03-23
US20190048066A1 (en) 2019-02-14
CO2017007619A2 (es) 2017-10-20
US10501526B2 (en) 2019-12-10
TWI710573B (zh) 2020-11-21
US20240327501A1 (en) 2024-10-03
US9771414B2 (en) 2017-09-26
MY189452A (en) 2022-02-14
EA201791675A1 (ru) 2017-12-29
EP3250591A1 (en) 2017-12-06
US20170355751A1 (en) 2017-12-14
CL2022003763A1 (es) 2023-06-30
US10829544B2 (en) 2020-11-10
MA41421A (fr) 2017-12-05
SG10202007835QA (en) 2020-09-29
AU2016211783A1 (en) 2017-07-27
MX2017009716A (es) 2018-04-24
US11530255B2 (en) 2022-12-20
IL253358B (en) 2021-07-29
JP2023065648A (ja) 2023-05-12
AU2021202839A1 (en) 2021-06-03
UY36538A (es) 2016-08-31
CL2020000498A1 (es) 2020-11-13
PH12017501277A1 (en) 2018-01-29
WO2016123019A1 (en) 2016-08-04
JP6829199B2 (ja) 2021-02-10
AU2016211783B2 (en) 2021-07-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11530255B2 (en) Human antibodies to Ebola virus glycoprotein
US11117955B2 (en) Anti-Zika virus antibodies and methods of use
US10406222B2 (en) Human antibodies to Middle East Respiratory Syndrome—coronavirus spike protein
JP6711828B2 (ja) インフルエンザ赤血球凝集素に対するヒト抗体
CN111670195B (zh) 针对流感血凝素的人抗体
OA18324A (en) Human antibodies to Ebola virus glycoprotein.
JP2022553703A (ja) 抗血球凝集素抗体およびその使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
A529 Written submission of copy of amendment under article 34 pct

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A529

Effective date: 20170818

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20190116

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20190116

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20200205

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20200507

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20201012

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20201216

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20210105

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20210121

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 6829199

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

R250 Receipt of annual fees

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250