KR20170098951A - 진주단백질 제조방법 및 이 제조방법에 의해 얻은 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질 - Google Patents

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리화 장
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오스문 바이오로지컬 씨오.,엘티디.
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Abstract

본 발명은 진주단백질의 제조방법 및 해당 방법으로 제조하여 얻은 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 개시하였다. 진주단백질의 제조방법의 절차는 다음과 같다: 1)진주를 진주분말로 연마하는 단계; 2) 탈이온수욕을 사용하여 나노 진주분말을 초고압 균질화하고 저온 원심분리를 통해 수용성 진주추출물 a 및 침전물을 얻고, 그것을 알코올용액으로 2 내지 4번 세척한다. 3) 이상의 절차를 통해 얻은 침전물을 약산성을 이용해 일정한 온도에서 용해시키고, 저속 교반 반응을 진행한다. 저온 원심분리를 통해 얻은 상청액은 산 용해성 진주 추출물b이다. 4）수용성 진주추출물a 및 산 용해성 진주추출물b를 각각 탈염한다. 5) 탈염 이후 수용성 진주추출물a 및 산 용해성 진주추출물b를 동결 건조하여 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻는다.

Description

진주단백질 제조방법 및 이 제조방법에 의해 얻은 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질
본 발명은 진주추출물 생산분야에 관련된 것으로 구체적으로는 진주단백질(conchiolin) 제조방법 및 해당 제조방법에 의해 얻어진 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질에 관한 것이다.
현재 진주분말의 응용과정 중에서, 잇달아 입자크기 안전 방면의 폐해, 좋지 않은 유동성, 물에 용해되지 않고 효능성분을 방출하기 어렵다는 등의 많은 문제에 부딪쳤다. 이러한 문제는 진주분말의 응용분야에 직접적으로 영향을 준다. 상기 문제를 해결하기 위해 업계 내에서는 이미 수용성 진주분말 및 진주 가수분해액 방면으로 발전하고 있으나, 이러한 과정에서 우리는 간단히 원래 성분의 기존 성분에 대한 복합배합(
Figure pct00001
)이나 조방형(
Figure pct00002
) 가수분해를 진행하고 있을 뿐, 각종 성분의 효능에 대해 연구하지 못했고, 정밀 분리 정제를 거의 하고 있지 않다.
현재의 진주추출물은 모두 일반적으로 효소성 분해방식으로 생산하고 있다. 예컨대 중국 발명특허(출원번호: 01139157.X 출원일:2001-12-19)는 진주분말의 생물효소성 분해 제조방법을 개시했다. 그 핵심은 유산 수용액을 용제로 하여, 진주를 용해시키고, 용액의 pH값을 중성에 가깝게 조절했다가 다시 산으로 약간 산성을 띠게 조절하였고, 그 다음 적정한 양의 생물 활성 효소를 넣고 해당 단백질을 촉매 분해하여 효소성 분해 진주 겔 용액을 얻는다. 그 다음 분무 건조를 이용해 효소성 분해 진주 겔 용액에 대해 빠르게 건조시켜 응고하여 과립화한 후, 초미세 효소성 분해 진주분말을 제조한다. 이렇게 제조된 진주분말은 진주 중의 여러 가지 아미노산, 미량 원소 등 유효한 성분을 보존했고 진주 중의 탄산칼슘이 인체가 쉽게 흡수할 수 있는 활성 칼슘으로 전환시켜, 위산이 용해할 수 없는 각질 단백질을 쉽게 흡수할 수 있는 유리 아미노산으로 효소성 분해하였다.
중국발명특허(출원번호:200710141569.X 출원일：2007-08-07)는 진주 활성 펩타이드의 제조 방법을 개시했다. 이 방법은 살아 있는 진주조개에서 진주알을 꺼낸 후, 물로 깨끗이 씻은 뒤, 진주알과 탈이온수와 혼합시킨 다음, 인산염 완충용액으로 혼합용액의 pH값을 중성과 가까운 약간의 산성을 띠게 조절시킨다. 그 다음 중성 프로테이나제와 진주입자를 사용하여 효소 가수분해반응을 진행한다. 여과망으로 여과 분리하여 진주입자와 맑은 용액을 얻은 후, 반응액을 끓여 효소를 소멸한다. 그 다음 얻은 용액에 대해 분무건조를 시키면 바로 진주 활성 펩타이드를 얻는다.
중국발명특허(출원번호:200910114409.5 출원일:2009-09-18)는 진주 수용액 제조방법을 개시했다. 그 절차는 다음과 같다: 1) 진주분말을 취하여 염산 수용액 중에 넣은 후, 완전히 반응할 때까지 교반한다. 암모니아수로 해당 혼합용액의 pH값을 중성으로 조절시킨 다음, 원심분리를 한 후, 침전물A를 얻는다. 2) 침전물A를 정제수로 용해한 후, 다시 암모니아수로 pH값을 7.5 내지 8.5로 조절시킨 다음, 원심분리를 한 후 침전물B를 얻는다. 3) 침전물 B를 정제수로 용해한 후 효소를 넣어 효소성 분해를 진행하고, 효소성 분해액에 대해 원심분리를 한 후, 상청액과 침전물C를 얻는다. 상기 효소는 달팽이 단백질 효소와 파파인(papain)의 혼합물이고, 투입량은 침전물 B중량의 0.3 내지 1.05％이다. 4) 침전물C를 정제수로 용해한 후 2차 효소성 분해를 진행한 다음, 원심분리를 한 후 상청액을 회수한다. 효소는 트립신, 파파인과 중성 단백질 효소의 혼합물이고 투입량은 침전물B의 중량의 0.2 내지 0.45％이다. 5) 두 번 얻은 상청액을 한데 모은 후, 비등할 때까지 끓이고, 구멍직경이 1 내지 3nm인 나노 여과막으로 여과하면 바로 얻게 된다.
상기 방법은 효소성 분해 방법을 이용하여 저분자량의 아미노산과 폴리펩타이드를 얻을 수 있으나 더불어 효소성 분해가 일부 활성이 있는 단백질 물질을 파괴하여, 활성 물질의 유실을 초래한다.
중국발명 특허출원(출원번호 201410055730.1，출원일 2014.02.19)은 나노 진주단백질의 제조방법을 개시했다. 이 방법은 진주를 평균 입자직경이 1 내지 4미크론인 진주 미세분말로 분쇄한 후 산 가수분해, 여과를 한다. 여과 잔여물을 정제수로 깨끗이 씻으면 바로 조 진주단백질이다. 조 진주단백질 중에 분산제를 넣어 연마한다. 그 기간에 초음진동을 한다. 연마한 후의 액체는 막농축을 한 다음 가열, 살균, 보존하여 나노 진주단백질을 얻게 된다. 해당 방법에 투입하는 분산제 물질은 후속 처리공정에서 제거하기 어려워 제품 응용을 제한한다.
상기 기술문제를 해결하기 위해, 본 발명은 진주단백질 제조방법을 제공하는 것으로 본 방법은 나노급 진주분말을 이용하여 가수분해와 산 가수분해를 한 후 탈염을 하여, 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻어, 진주 스킨케어제품과 보건품을 위해 원료를 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적으로 실현하기 위해, 본 발명은 아래 기술방안을 이용했다:
진주단백질 제조방법으로, 해당 방법은 아래 절차를 포함한다.
1) 진주를 나노급 진주분말로 연마한다.
2) 탈이온수욕（
Figure pct00003
）을 사용하여 나노 진주분말을 초고압 균질화하고, 40 내지 80℃하에서 0.2 내지 1h 균질화하고, 저온 0 내지 8℃ 원심분리로 수용성 진주추출물 a와 침전물을 얻은 후, 침전물을 알코올 용액으로 위를 세척한다. 그 다음 아래와 같은 절차를 행한다.
3) 상기 침전물을 약산으로 30 내지 50℃ 온도하에서 용해시키고, 80 내지 120rpm으로 저속 교반하면서 0.5 내지 3h반응시키고, 저온 0 내지 8℃원심분리로 상청액으로 산 용해성 진주 추출물b를 얻는다.
4) 수용성 진주 추출물a와 산 용해성 진주 추출물 b에 대해 각각 탈염한다.
5) 탈염한 후 수용성 진주 추출물a와 산 용해성 진주 추출물 b를 동결 건조하여, 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻는다.
바람직하게는, 상기 나노급 진주분말의 입도는 10 내지 100nm이다.
바람직하게는, 상기 약산은 식용초산, 구연산 또는 탄산이다.
바람직하게는, 상기 탈염은 투석 탈염을 이용한다: 2 내지 10℃환경하에서 3000 내지 5000Da분자량의 투석필터로 3 내지 5일간 투석하여 염을 제거하고, 1 부피의 샘플은 10 내지 20부피의 증류수에 대응되며, 매일 1 내지 2회 물을 갈아준다.
바람직하게는, 상기 탈염으로 크로마토그래피 탈염을 이용한다 : 덱스트란겔G-15으로 패킹을 하고, 처음 탈염하고 샘플을 투입한 후 바로 회수한다. 1 내지 2분마다 1번 회수하고, 여러 개 샘플을 회수한다. 각각 소량의 황산암모늄을 투입하여, 침전물 발생 여부를 측정한다. 몇 번째 샘플부터 염이 석출되는지 검증한다. 이 시점 이전에회수한 용액이 탈염 후의 단백질용액이다.
본 발명에 따른 방법으로 제조한 수용성 진주단백질은, 해당 수용성 진주단백질의 주요 분자량이 15kd 미만으로 분포된다. 본 발명에서 “주로”는 진주단백질 중의 90%이상의 물질을 표시한다.
본 발명에 따른 방법으로 제조한 산 용해성 진주단백질은, 해당 산 용해성 진주단백질의 주요 분자량이 14kd 내지 50kd로 분포된다. 본 발명에서 “주로” 는 진주단백질 중의 90%이상의 물질을 표시한다.
본 발명은 상기 기술수단을 사용하였기에, 나노급 진주분말을 이용하여, 가수분해와 산 가수분해를 한 다음 탈염을 하여, 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻어, 진주 스킨케어제품과 보건품을 위해 원료를 제공한다. 그 중에 산 용해성 진주단백질 항산화능력이 강하고, 섬유아세포의 성장을 촉진할 수 있는 동시에 콜라겐 분비에 유리하고, 상처가 아무는데 유리하며, 리페어 화장품 분야에서 강한 잠재력을 가지고 있다. 반면 진주 수용성 진주단백질은 미백, 수분 공급 등 방면에서 양호한 효과를 얻을 수 있다.
도 1은 산 용해성 진주단백질의 분자량 분포도이다.
도 2는 수용성 진주단백질의 분자량 분포도이다.
도 3은 각기 다른 진주단백질의 섬유아세포 성장에 대한 영향 도표이다.
도 4는 각기 다른 진주단백질의 DPPH자유기 제거율에 대한 영향 도표이다.
도 5는 섬유아세포가 콜라겐을 분비하는데 대한 산 용해성 진주단백질의 영향 도표이다.
실시예1
진주단백질 제조방법으로, 해당 방법은 아래 절차를 포함한다.
1) 진주를 나노급 진주분말(10 내지 100nm)으로 연마한다.
2) 10배 질량인 탈이온수욕을 사용하여 나노진주분말을 초고압 균질화하고, 60℃하에서 0.5h 균질화한다. 저온 4℃원심분리로 수용성 진주추출물 a 및 침전물을 얻는다. 침전물을 알코올 용액으로 3번 세척하고, 그 다음 아래와 같은 절차를 행한다.
3) 위에서 얻은 침전물을 약산 중온 진공(40℃,101325 내지 1333pa)에서 용해시키고, 저속 교반(100rpm)하에 2h 반응시킨다. 저온 4℃원심분리를 이용해 상청액을 취하면 산 용해성 진주 추출물b를 얻는다.
4) 진주 추출물a와 b는 아래 2가지 방법으로 탈염할 수 있다.
①투석탈염:4 내지 7℃환경에서 3500Da분자량의 투석필터로 4일간 투석하여 탈염하고, 1 부피의 샘플은 10 내지 15부피의 증류수에 대응되며, 매일 1회 물을 갈아준다.
또는 ②크로마토그래피 탈염:덱스트란겔G-15으로 패킹을 하고, 처음 탈염하여 샘플을 투입한 후 바로 회수를 시작한다. 1분마다 1번 회수하고, 15개 샘플을 회수한다. 각각 소량의 황산암모늄을 투입하여, 침전물 발생 여부를 측정한다. 이러한 절차를 통해 몇 번째 샘플부터 염이 석출되는지 검증한다. 이 시점 이전에 회수한 용액이 탈염 후의 단백질용액이다. 결국 수용성 진주단백질a와 산 용해성 진주단백질b를 얻는다.
5) a,b용액을 각각 진공 냉동 동결 건조 회수하여, 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻는다.
실시예2
각기 다른 진주단백질분자량을 측정한다. 시험방법: SDS-PAGE측정법.
a) 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 1배 희석한 후 각각 20┢l를 취한다. 각각 5배 농축샘플 완충용액5㎕를 투입한다. 80℃수욕케틀(water bath kettle)에서 5min 끓인다.
b) 상기 배합제 SDS-PAGE겔에 따라, 전기영동장치를 설치하고, 조(痘) 내에 전극완충용액을 투입한다.
c) 일정한 순서에 따라 샘플 투입 구멍을 통해 샘플을 투입한다. SDS-PAGE전기영동유리판 간격두께에 따라, 샘플투입량을 선택한다. 일반적으로 0.75mm간격 15구멍의 샘플투입량은 <10uL/구멍이고 1mm간격 10구멍의 샘플투입량은 <20uL/구멍이다. 샘플투입량은 실제 경험에 근거하여 스스로 정한다.
d) 전원을 켜고 전압을 80v(일반적으로 15min정도)로 조절한다. 샘플이 압축 겔보다 빨라진 후 샘플 전기영동이 겔 밑부분까지 도착할 때까지 전압을 120V로 조절한다.
e) 겔을 조심스럽게 취하여 용기에 넣고, 염색액을 투입하여, 진동기에 넣어 2 내지 3h 흔든다.
f) 스트립이 뚜렷해진 후 염색액을 부어버린 다음, 탈색액을 투입한 후 밤을 새운다.
g) 탈색액을 따라낸 후 퀄리티 원(Quality One)이나, 상응하는 이미징 시스템으로 촬영, 분석하여 단백질농도를 추산한다.
실험결과
도 1은 산 용해성 진주단백질이며, 분자량은 14.4, 31과 43kd 범위 내에 분포하고, 대분자 단백질에 속한다. 도 2는 수용성 진주단백질 분자량 측정도이며, 분자량은 주로 14.4에 집중된다. 심지어는 더 작은 분자량 범위 내이고 작은 분자량 단백질에 속한다.
실시예3
1.각기 다른 진주단백질이 섬유아세포 성장에 미치는 영향에 대한 연구
a) 시험방법
세포성장 곡선도 시험
각기 다른 진주단백질이 섬유아세포 증식에 대해 미치는 영향은 8일간 배양과정에서 세포수량 측정을 통해 반영된다. 산 용해성 진주단백질과 수용성 진주단백질을 각각 15.6㎍/ml배양기로 계열희석한 후, 1% 송아지혈청을 넣는다. 1%송아지혈청 배양기를 공 대조군으로 한다. 격일마다 세포계산판을 통해 계산한다.
b)실험결과
도 3에서 나타나듯이, 산 용해성 진주단백질은 세포성장을 촉진시킬 수 있고, 1% 송아지혈청만을 포함하는 공 대조군과 비교하여 현저한 차이가 있다. 이와 동시에, 수용성 진주단백질도 마찬가지로 섬유아세포의 유효한 성장수량을 현저히 제고하는 작용을 한다. 그러나 산 용해성 단백질보다는 작용 시간이 약간 지체된다. 결론적으로, 양자는 모두 섬유아세포 성장속도를 제고하는 작용을 갖는다.
2.각기 다른 진주단백질의 DPPH자유기제거능력에 대한 연구
a) 시험방법
DPPH자유기 억제능력
실험절차: 농도 2×10-4mol/L의 DPPH95%알코올용액을 배합하여, 빛이 들지 않는 곳에 보관한다. 2ml DPPH용액을 취하여, 2ml각기 다른 농도의 산 용해성 진주단백질 또는 수용성 진주단백질용액을 각각 넣어, 충분히 혼합한 다음, 25℃에서 30min 반응시킨 다음 517nm(최대 흡수파장)에서 그 흡수값을 측정하고, 제거율을 계산한다. 대조하기 위한 것이다.
DPPH자유기 활성 계산식：P=[（1-（Ai-Aj）/Ac）] ×100%
식 중: Ai=2mlDPPH용액+2ml샘플용액의 흡광도이다.
식 중: Aj=2ml샘플용액+2ml용제의 흡광도이다.
Ac=2ml DPPH용액+2ml용제의 흡광도이다.
b)실험결과
도 4에서 나타나듯이, 산 용해성 진주단백질은 수용성 진주단백질의 DPPH자유기제거능력보다 현저히 높으며, 이는 또한 산 용해성 진주단백질은 비교적 강한 항산화 능력을 가지고 있다는 것을 설명한다.
3. 세포가 콜라겐 생성하는 것에 대한 각기 다른 진주단백질이 미치는 영향
a) 시험방법
히드록시프롤린실험
섬유아세포의 콜라겐 생성물은 히드록시프롤린(hydroxyproline)함량을 정량화하는 방식으로 평가할 수 있다. 섬유아세포를 24오리피스 플레이트에 이식시키고, 산 용해성 진주단백질 농도15.6㎍/ml조건 하에 72시간 작용시킨다. 1%의 송아지혈청배양기와 10%의 송아지혈청배양기를 각각 공 대조군과 양성 대조군으로 한다. 클로라민T법으로 히드록시프롤린 함량을 측정한다. 데이터는 106개 세포 중 콜라겐의 마이크로그램 양(microgram quantity)을 표시하고, 콜라겐 중에 13.5%의 히드록시프롤린을 함유한다고 가정한다.
b)실험결과
도 5 에서 나타나듯이, 공 대조군 및 송아지혈청함량이 비교적 높은 대조군과 비교할 경우, 산 용해성 진주단백질은 현저히 콜라겐 분비를 제고하는 것이 매우 분명하다. 그러나 공 대조군과 비교할 경우, 수용성 진주단백질은 콜라겐 분비를 현저히 촉진할 수 있으나, 10% 송아지혈청의 작용보다 낮다. 따라서 산 용해성 진주단백질이 섬유아세포 촉진 작용상 더욱 우위를 가지고 있다는 것을 알 수 있다.

Claims (7)

1) 진주를 나노급 진주분말로 연마하는 단계;
2) 탈이온수욕（彊棹）을 사용하여 나노 진주분말을 초고압 균질하고 40 내지 80℃하에서 0.2 내지 1h 균질화하고, 저온 0 내지 8℃ 원심분리로 수용성 진주추출물 a와 침전물을 얻은 후, 침전물을 알코올 용액으로 2 내지 4번 세척하는 단계;
3) 상기 침전물을 약산으로 30 내지 50℃ 온도하에서 진공 용해시키고, 80 내지 120rpm으로 저속 교반하면서 0.5 내지 3h 반응시키고, 저온 0 내지 8℃ 원심분리로 상청액으로 산 용해성 진주 추출물b를 얻는 단계;
4) 수용성 진주 추출물a 및 산 용해성 진주 추출물 b에 대해 각각 탈염하는 단계;
5) 탈염한 후 수용성 진주 추출물a와 산 용해성 진주 추출물 b를 동결 건조하여, 각각 수용성 진주단백질과 산 용해성 진주단백질을 얻는 단계
를 포함하는 것을 특징으로 하는 진주단백질(conchiolin) 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 나노급 진주분말의 입도는 10 내지 100nm인 것을 특징으로 하는 진주단백질 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 약산은 식용초산, 구연산 또는 탄산을 사용하는 것을 특징으로 하는 진주단백질 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 탈염으로 2 내지 10℃ 환경하에서 3000 내지 5000Da분자량의 투석필터로 3 내지 5일간 투석하여 염을 제거하고, 1 부피의 샘플은 10 내지 20부피의 증류수에 대응하며, 매일 1 내지 2회 물을 갈아주는 투석 탈염을 이용하는 것을 특징으로 하는 진주단백질 제조방법.
제1항에 있어서,
상기 탈염으로 덱스트란겔G-15으로 패킹을 하고, 처음 탈염한 후 샘플을 투입한 후 바로 회수를 시작하며, 1 내지 2분마다 1회 수집하고, 여러 개 샘플을 회수하고, 각각 소량의 황산암모늄을 투입하여 침전물 존재 여부를 측정하고, 몇 번째 샘플부터 염이 석출되는지 검증하여 이 시점 이전에 회수한 용액이 탈염 후의 단백질용액인 것인 크로마토그래피 탈염을 이용하는 것을 특징으로 하는 진주단백질의 제조방법.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조한 수용성 진주단백질로서, 상기 수용성 진주단백질의 주요 분자량은 15kd 미만으로 분포되는 수용성 진주단백질.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조한 산 용해성 진주단백질이며, 상기 산 용해성 진주단백질의 주요 분자량은14kd 내지 50kd로 분포되는 산 용해성 진주단백질.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104558137A (zh) * 2015-01-15 2015-04-29 浙江欧诗漫生物股份有限公司 一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白
CN105168257A (zh) * 2015-09-09 2015-12-23 陈贵卿 珍珠液、珍珠人参液和人体易吸收珍珠粉加工方法
CN106866807A (zh) * 2015-12-14 2017-06-20 中国科学院上海药物研究所 珍珠蛋白的制备方法、由该方法制备的珍珠蛋白及其应用
CN106890314B (zh) * 2015-12-17 2020-06-16 欧诗漫生物股份有限公司 珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的药物、保健品和化妆品中的应用
CN106366156A (zh) * 2016-08-27 2017-02-01 广东澳珍药业有限公司 一种超临界co2萃取珍珠蛋白液的方法
CN108007996B (zh) * 2017-11-02 2020-06-30 金华职业技术学院 一种珍珠活力成分的鉴定
CN111850073B (zh) * 2019-04-29 2024-02-13 欧诗漫生物股份有限公司 珍珠贝美白因子、其制备方法及用途
CN110638836A (zh) * 2019-08-30 2020-01-03 广东海洋大学 一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用
CN112569172A (zh) * 2019-09-29 2021-03-30 欧诗漫生物股份有限公司 珍珠制备品及其制备方法和用途
CN111184744B (zh) * 2020-01-16 2022-11-22 广西中医药大学 一种具有抑菌作用的合浦珍珠提取物及其制备方法
CN111363003A (zh) * 2020-04-02 2020-07-03 浙江长生鸟健康科技股份有限公司 采用co2超临界流体技术提取珍珠蛋白的方法
CN111455010A (zh) * 2020-04-22 2020-07-28 广东丸美生物技术股份有限公司 珍珠蛋白及其制备方法和应用以及包含其的化妆品
CN112176441B (zh) * 2020-09-15 2023-04-14 立肯诺(上海)新材料科技有限公司 一种珍珠蛋白纤维的制备方法
CN112294744A (zh) * 2020-10-28 2021-02-02 湖州欧利生物科技有限公司 酶解珍珠冻干粉的制备工艺
CN112390848A (zh) * 2020-11-10 2021-02-23 浙江长生鸟健康科技股份有限公司 一种具有抗氧化作用的珍珠粉多肽类提取物及其制备方法
CN114886830B (zh) * 2022-03-11 2024-06-04 广州澳谷化妆品制造有限公司 以海水珍珠为原料的头皮/头发/皮肤修护组合物、制备方法及其应用
CN115429849B (zh) * 2022-08-23 2023-07-21 江西大自然制药有限公司 一种固本延龄丸的制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1063490C (zh) * 1996-10-25 2001-03-21 边春起 全成分珍珠原液或珍珠粉制备工艺
CN1526326A (zh) * 2003-03-08 2004-09-08 林其溪 水解珍珠的方法及用该方法获取的珍珠果蔬蜂蜜液
CN1279888C (zh) * 2003-08-22 2006-10-18 浙江山下湖珍珠有限公司 水溶性珍珠液的制备方法
CN101104001A (zh) * 2006-07-12 2008-01-16 海南京润珍珠生物技术有限公司 水溶珍珠粉的制造方法
CN101288679B (zh) * 2008-05-23 2011-04-06 海南京润珍珠生物技术股份有限公司 一种纳米珍珠粉的溶解还原生成法
CN101611862A (zh) * 2008-06-26 2009-12-30 威海清华紫光科技开发有限公司 水溶性珍珠粉的制备及软胶囊生产方法
CN101381400B (zh) * 2008-10-14 2011-06-15 晶旺生物科技股份有限公司 纳米珍珠有机基质萃取与分子量分级的方法
CN104161773A (zh) * 2013-05-16 2014-11-26 北海市弘健科技发展有限公司 一种全活性成分纳米珍珠粉的制备方法
CN103333222B (zh) * 2013-07-10 2014-12-17 浙江长生鸟珍珠生物科技有限公司 一种具有美白功效的珍珠天然活性肽及其提取方法和应用
CN103804468A (zh) * 2014-02-19 2014-05-21 海南京润珍珠生物技术股份有限公司 一种纳米珍珠蛋白的制备方法
CN104558137A (zh) * 2015-01-15 2015-04-29 浙江欧诗漫生物股份有限公司 一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白

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