CN106890314B - 珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的药物、保健品和化妆品中的应用 - Google Patents
珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的药物、保健品和化妆品中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种珍珠提取物的应用。本发明通过利用多种提取方式获取珍珠有效成分，实验结果表明，珍珠提取物具备明显的抑制成纤维细胞合成早衰素的能力，相比对照降低近40%。珍珠提取物的提取与抑制早衰素合成的发现，为药品、化妆品和保健食品提供了一类有效并有据的活性添加成分。
Description
技术领域
本发明涉及一种珍珠提取物的应用。
背景技术
抗衰老是美容护肤最重要的课题，在国内外研究衰老过程中发现，与衰老肌肤相关的明显病理包括哈坎森‐吉尔福特早衰综合症(HGPS)。这种罕见疾病以加速衰老和过早死亡为主要特征。出现这种疾病的细胞内核纤层蛋白A通常都是以碎片状蛋白形式存在。这种碎片状的核纤蛋白A，被称为早衰素。2006年，有研究学者发现在正常的衰老过程中，即使没有任何病理或基因突变，早衰素也会在肌肤细胞中蓄积。并且研究证明，老年人群的细胞核中存在与早衰综合症病人相似的后天缺陷。更重要的是，抑制引起哈坎森‐吉尔福特早衰综合症(HGPS)的核纤层蛋白A的断裂位点这一行为将能够逆转衰老引起的核缺陷。继而证明，核纤层蛋白A和早衰素的正常衰老过程中的关键作用。抑制早衰素形成势必为抗衰老研究领域打开一个新领域。
目前，珍珠粉的应用过程中，曾相继遇到颗粒大小安全隐患、流动性差、不溶水以及功效成分难以释放等诸多问题，这些直接影响珍珠粉的应用领域。为能解决以上问题，业内已经向水溶性珍珠粉以及珍珠水解液发展，然而，在此过程中，我们只是简单的进行原有成分的复配或者粗放型的水解，未能研究其中各个成分的功效，很少进行精细分离纯化。
中国发明专利(申请号：01139157.X申请日：2001‐12‐19)公开了一种珍珠粉的生物酶解制备方法,其关键是以乳酸水溶液为溶剂,将珍珠溶解,并调整溶液的pH值至近中性再用酸回调至偏酸性,再放入适量生物活性酶催化分解其蛋白质,得到酶解珍珠胶液,再采用喷雾干燥将酶解珍珠胶液快速干燥,固化造粒,制得超细酶解珍珠粉。所制备的珍珠粉保留了珍珠中的多种氨基酸、微量元素等有效成份,并使珍珠中的碳酸钙转化为人体易吸收的活性钙,胃酸不溶解的角质蛋白酶解成易吸收的游离氨基酸。
中国发明专利(申请号：200710141569.X申请日：2007‐08‐07)公开了一种制备珍珠活性肽的方法,它从新活的珍珠贝里取出珍珠粒,水洗干净,将珍珠粒与去离子水混合后,用磷酸盐缓冲溶液将混合液的PH值调至中性偏酸,然后用沙雷肽酶与珍珠粒进行酶水解反应；用滤网过滤分离得珍珠粒和澄清液,然后将反应液水煮灭酶；再将所得的溶液经喷雾干燥即得珍珠活性肽。
中国发明专利(申请号：200910114409.5申请日：2009‐09‐18)公开了珍珠水解液的制备方法，其步骤如下：1)取珍珠粉置于盐酸水溶液中，搅拌，直至反应完全，用氨水调节该混合液的pH值至中性，离心，得沉淀A；2)沉淀A用纯净水溶解，再以氨水调节其pH值为7.5～8.5，离心，得沉淀B；3)沉淀B用纯净水溶解，加入酶进行酶解，酶解液离心，得上清液和沉淀C；所述的酶为蜗牛蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的0.3～1.05％；4)将沉淀C用纯净水溶解加酶进行二次酶解，离心，收集上清液；酶为胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶的混合物，加入量为沉淀B重量的0.2～0.45％；5)合并两次上清液，煮沸，用孔径为1～3nm的纳滤膜过滤，即得。
申请人申请的中国发明专利(申请号：2015100203725申请日：2015‐01‐15)公开了一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白，该方法包括以下的步骤：
1)将珍珠研磨成纳米级珍珠粉；
2)用去离子水浴纳米珍珠粉超高压均质，40～80℃下均质0.2～1h，低温0～8℃离心获取水溶性珍珠提取物a和沉淀，并将沉淀用乙醇溶液清洗上边，随后进行下一步操作；
3)以上获得的沉淀用弱酸在30～50℃温度下溶解，低速搅拌80‐120rpm下反应0.5～3h；低温0～8℃离心取上清液，为酸溶性珍珠提取物b；
4)将水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b分别进行脱盐；
5)脱盐之后将水溶性珍珠提取物a和酸溶性珍珠提取物b冻干，分别获得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白。
该方法利用纳米级珍珠粉，进行水解和酸解然后进行脱盐，分别获得水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白，为珍珠护肤品和保健品提供原料。其中，酸溶性珍珠蛋白抗氧化能力强，并能促进成纤维细胞的生长，同时有利于胶原蛋白的分泌，有利于伤口的愈合，在化妆品修护领域具有强劲的潜力。而珍珠水溶性珍珠蛋白可以在美白、补水等方面获得良好的效果。
申请人申请的中国发明专利(申请号：2015100203725申请日：2015‐01‐15)公开了一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法，该方法包括以下的步骤：
1)将珍珠粉碎至纳米级，然后加入5～10份的去离子水，通过压力0.5～20MPa和温度30～60℃的协同，将珍珠粉进行微乳化；
2)然后将珍珠粉乳液进行电渗析，电渗析选择压力为30～40V，流速60～80L/h，浓水池装去离子水，淡水池装珍珠粉乳液，去离子水与珍珠粉乳液的体积比为1：15～1：2，进行循环脱钙1～3h，分离获得含钙盐溶液和珍珠蛋白溶液；
3)钙获得含钙盐溶液作为可溶食用钙或可溶食用钙原料；
4)将获得的珍珠蛋白溶液中加入5～20倍pH值6.5～7.5的磷酸盐缓冲液，匀质；
5)首先进入100～120℃、0.15～0.2MPa环境下预处理20～60分钟处理，然后将混合液置于反应锅中，加入体系质量0.5％～2％的中性蛋白酶，在40～70℃温度中进行酶催化反应4～8小时，反应结束后在沸水浴灭酶5～15min，离心，去上清液，即为珍珠复合美白因子溶液。
该方法将珍珠粉中功效成分进行分离，并将机械化学原理应用于制备方法中。机械方法能在不破坏珍珠粉成分活性的基础下，进行珍珠粉重要成分的分离提取，珍珠粉中蛋白的获得，并纯化后酶解，能够更为有效发挥珍珠粉美白的作用。
上述的各个专利中珍珠提取物主要在美白、补水等方面得到了应用，珍珠素来就有美容养颜，永葆青春的好口碑，千百年来得以颂扬。然而珍珠抗衰的原理研究并未得到有效的数据支撑，珍珠抗衰老研究亟待发展。
发明内容
本发明的第一个目的提供了珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的药物中的应用。
作为优选，所述的珍珠提取物为水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高压珍珠蛋白和超临界珍珠蛋白中的一种或多种混合。
作为再优选，所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为小于15kd；酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd～50kd。
本发明的第二个目的提供珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的保健品中的应用。
作为优选，所述的珍珠提取物为水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高压珍珠蛋白和超临界珍珠蛋白中的一种或多种混合。
作为再优选，所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为小于15kd；酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd～50kd。
本发明的第三个目的提供珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的化妆品中的应用。
作为优选，所述的珍珠提取物为水溶性珍珠蛋白、酸溶性珍珠蛋白、超高压珍珠蛋白和超临界珍珠蛋白中的一种或多种混合。
作为再优选，所述的水溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为小于15kd；酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd～50kd。
本发明通过利用多种提取方式获取珍珠有效成分，实验结果表明，珍珠提取物具备明显的抑制成纤维细胞合成早衰素的能力，相比对照降低近40％。珍珠提取物的提取与抑制早衰素合成的发现，为药品、化妆品和保健食品提供了一类有效并有据的活性添加成分。
附图说明
图1为活性成分“珍珠提取物”在人类正常真皮成纤维母细胞模型中合成早衰素的功效；**:表示与“空白”有显著不同。
具体实施方式
实施例1
珍珠提取物提取工艺步骤：选取欧诗漫纳米珍珠粉为原料，以弱酸溶液为提取液，在30～50条件下进行真空溶解，低速搅拌80‐120rpm下反应0.5～3h小时，8000‐12000rpm高速0～8℃低温离心过滤，取上清液，并将上清液灌装于透析袋除盐：2～10℃环境下用3000～5000Da分子量的透析袋除盐3～5天，1体积的样品对应10～20体积的蒸馏水，每天换水1～2次。后冻干成粉，即为珍珠提取物。
实施例2
珍珠提取物提取工艺步骤：
1)将珍珠研磨成纳米级珍珠粉(10～100nm)；
2)用10倍质量的去离子水浴纳米珍珠粉超高压均质，300MPa、60℃下均质0.5h。低温4℃离心获取超高压珍珠提取物和沉淀。并将沉淀用乙醇溶液清洗3遍，随后进行下一步操作；
3)以上获得的沉淀用超临界设备提取珍珠活性成分，萃取压力为25MPa，CO2流量25KG/h，萃取时间60min，为超临界珍珠提取物；
4)超高压珍珠提取物和超临界珍珠提取物
分别真空冷冻冻干收集，获得超高压珍珠蛋白和超临界珍珠蛋白。
试验例
一、对实施例1制备的珍珠提取物具体实验如下：
I.研究目标
研究目标是评估活性成分“珍珠提取物”在人类正常真皮成纤维母细胞模型中合成早衰素的功效。
II.使用材料和方法
II.1‐受测样品
活性成分“珍珠提取物”冻干粉用无菌纯水稀释20倍为初始样品溶液，放在+4℃温度条件下直到研究正式开始。
II.2–研究模型
通过培养68岁人类细胞，获得人类正常真皮成纤维母细胞的融合单细胞。
II.3‐参考样品
由于胰岛素能够调控影响早衰素合成的酶的活性，因此，我们推断在我们的评估模型中，胰岛素同样能够调控早衰素的合成。
在这次的研究中，10纳摩尔的胰岛素被用作为实验参考样品。
II.4‐培养方法
在37℃的温度条件下培养融合单细胞96小时，培养基中分别不含受测样品(空白)或加入参考样品，或按照以下添加比例不断地增加受测样品的添加浓度：
珍珠提取物:0.1；0.5和1％(体积/体积)
准备样品：珍珠提取物被直接加入到培养基中。
II.5‐评估方法
II.5.1早衰素检测
培养结束后，在细胞滤液中利用EPHYSCIENCE团队开发的特殊的酶联免疫吸附测定法量化早衰素。
II.5.2蛋白检测
培养结束后，在细胞滤液中利用分光比色法(Bradford法)量化蛋白。
II.6–统计数据
实验结果将以每纳克(μg)蛋白中所含多少皮克(pg)早衰素的方式表达(平均值±标准偏差)。
利用Student t分析法评估“空白”与“参考样品”间的显著性水平(*:p<0.05)。
利用Student t分析法评估“空白”与“受测样品”间的显著性水平(**:p<0.01)。
III.实验结果
III.1‐珍珠提取物
III.2‐参考样品
在特定的实验条件下，胰岛素被用作为参考样品。它不降低成纤维母细胞合成早衰素的能力。
IV.结论
在特定的实验条件下：
活性成分“珍珠提取物”能够显著地降低成纤维母细胞合成早衰素的能力。
珍珠提取物0.1％,体积/体积→‐24.6％(p<0.01)
珍珠提取物0.5％,体积/体积→‐22.9％(p>0.05)
珍珠提取物1％,体积/体积→‐38.6％(p<0.01)
成纤维母细胞合成早衰素
珍珠提取物
**:表示与“空白”有显著不同(p<0.01)
媒介物和参考样品
二、对实施2制备的超高压珍珠蛋白和超临界珍珠蛋白以及中国发明专利(申请号：2015100203725申请日：2015‐01‐15)公开的一种珍珠蛋白的制备方法及该方法制备得到的水溶性珍珠蛋白和酸溶性珍珠蛋白进行相同的试验测试，也能够显著地降低成纤维母细胞合成早衰素的能力。
Claims (6)
1.珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的药物中的应用,其中，所述的珍珠提取物为酸溶性珍珠蛋白。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd~50kd。
3.珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的保健品中的应用，其中，所述的珍珠提取物为酸溶性珍珠蛋白。
4.根据权利要求3 所述的应用，其特征在于，酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd~50kd。
5.珍珠提取物在制备抑制早衰素生成的化妆品中的应用，其中，所述的珍珠提取物为酸溶性珍珠蛋白。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，酸溶性珍珠蛋白的主要分子量分布为14kd~50kd。
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